アリールオキシアニリドイメージング剤
本発明は、インビボイメージングのために適した新規放射性標識アリールオキシアニリン誘導体を提供する。既知のアリールオキシアニリン誘導体系インビボイメージング剤に比べて、本発明のインビボイメージング剤はインビボイメージングのために一層良好な性質を有する。本発明のインビボイメージング剤は、被験体への投与後における良好な脳内取込み及びインビボ動力学と共に、末梢ベンゾジアゼピンレセプター（ＰＢＲ）に対する良好な結合性を示す。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、インビボイメージング、特に末梢ベンゾジアゼピンレセプター（ＰＢＲ）のインビボイメージングに関する。ナノモル親和性をもってＰＢＲに結合し、投与後には脳内への良好な取込みを示し、ＰＢＲへの良好な選択的結合を示すアリールオキシアニリド系インビボイメージング剤が提供される。本発明はまた、本発明のインビボイメージング剤の合成において有用な前駆体化合物、並びに前記前駆体化合物の使用を含む前記インビボイメージング剤の合成方法及び前記方法を実施するためのキットも提供する。インビボイメージング剤の自動化合成のためのカセットも提供される。加えて本発明は、本発明のインビボイメージング剤を含む放射性医薬組成物並びに前記インビボイメージング剤の使用方法も提供する。
【背景技術】
【０００２】
末梢ベンゾジアゼピンレセプター（ＰＢＲ）は、主として末梢組織及びグリア細胞に局在することが知られているが、その生理学的機能はまだ明確に解明されていない。細胞レベル以下では、ＰＢＲはミトコンドリア外膜上に局在することが知られていて、これはミトコンドリア機能の調節及び免疫系において役割を果たす可能性を表している。さらに、ＰＢＲが細胞増殖、ステロイド生成、カルシウム流れ及び細胞呼吸に関係することも仮定されてきた。ＰＢＲは、急性及び慢性ストレス、不安、うつ病、パーキンソン病、アルツハイマー病、脳損傷、癌（Ｇａｖｉｓｈ ｅｔ ａｌ， Ｐｈａｒｍ Ｒｅｖ １９９９；５１：６２９）、ハンチントン病（Ｍｅｓｓｍｅｒ ａｎｄ Ｒｅｙｎｏｌｄｓ， Ｎｅｕｒｏｓｃｉ Ｌｅｔｔ １９９８；２４１：５３−６）、喘息（Ｐｅｌａｉａ ｅｔ ａｌ， Ｇｅｎ Ｐｈａｒｍａｃｏｌ １９９７；２８（４）：４９５−８）、慢性関節リウマチ（Ｂｒｉｂｅｓ ｅｔ ａｌ， Ｅｕｒ Ｊ Ｐｈａｒｍａｃｏｌ ２００２；４５２（１）：１１１−２２）、アテローム性動脈硬化症（Ｄａｖｉｅｓ ｅｔ ａｌ， Ｊ Ｎｕｃｌ Ｍｅｄ ２００４；４５：１８９８−１９０７）及び多発性硬化症（Ｂａｎａｔｉ ｅｔ ａｌ， Ｂｒａｉｎ ２０００；１２３：２３２１）を始めとする各種の状態と関連していた。ＰＢＲはニューロパシー性疼痛にも関連する可能性があり、Ｔｓｕｄａ ｅｔ ａｌはニューロパシー性疼痛をもった被験者で小グリア細胞の活性化を観察している（ＴＩＮＳ ２００５；２８（２）：１０１−７）。
【０００３】
ＰＢＲ選択性リガンド（Ｒ）−［11Ｃ］ＰＫ１１１９５を用いる陽電子放出断層撮影（ＰＥＴ）イメージングは、中枢神経系（ＣＮＳ）炎症の包括的指標を提供する。（Ｒ）−［11Ｃ］ＰＫ１１１９５の使用の成功にもかかわらず、それには制約がある。それは、高いタンパク質結合性及び低特異的乃至非特異的結合性を有することが知られている。その放射性標識代謝産物の役割は知られておらず、結合の定量化には複雑なモデル化が要求される。ＰＢＲに対して高い親和性及び選択性を有することでＣＮＳにおけるＰＢＲ測定の向上を可能にする化合物を得るための努力が行われてきた。
【０００４】
ＰＢＲに対する高い親和性並びに中枢ベンゾジアゼピンレセプター（ＣＢＲ）に比べてＰＢＲに対する高い選択性を有するアリールオキシアニリン誘導体が提唱された（Ｃｈａｋｉ ｅｔ ａｌ， Ｅｕｒ Ｊ Ｐｈａｒｍａｃｏｌ １９９９；３７１：１９７−２０４）。［11Ｃ］−ＤＡＡ１１０６及び［18Ｆ］−ＦＥ−ＤＡＡ１１０６は、これらのアリールオキシアニリン化合物に基づくＰＥＴ放射性リガンドである。これらのＰＥＴ放射性リガンドは米国特許第６８７００６９号に教示され、ヒトにおいて研究されてきた（Ｉｋｏｍｏ ｅｔ ａｌ， Ｊ Ｃｅｒｅｂ Ｂｌｏｏｄ Ｆｌｏｗ Ｍｅｔａｂ ２００７；２７：１７３−８４及びＦｕｊｉｍｕｒａ ｅｔ ａｌ， Ｊ Ｎｕｃ Ｍｅｄ ２００６；４７：４３−５０）。別の放射性フッ素化ＤＡＡ１１０６誘導体は国際公開第２００７／０７４３８３号に教示されている。別の11Ｃ標識ＤＡＡ１１０６誘導体は国際公開第２００７／０３６７８５号に教示されている。放射性ヨウ素化ＤＡＡ１１０６は、欧州特許出願公開第１８５４７８１号に記載され、またＺｈａｎｇ ｅｔ ａｌ（Ｊ Ｍｅｄ Ｃｈｅｍ ２００７；５０：８４８−５５）によって記載されている。［11Ｃ］−ＤＡＡ１１０６、［18Ｆ］−ＦＥ−ＤＡＡ１１０６及び［123Ｉ］−ＤＡＡ１１０６の化学構造は下記の通りである。
【０００５】
【化１】
しかし、これらの化合物の動力学的性質はインビボイメージングのために理想的でない結果、定量的研究に対するその適用は制限されると考えられる。
【０００６】
さらに最近に至り、ＰＢＲ０６として知られる化合物が、上述の化合物に比べてインビボイメージングのために改善された性質を有することが報告された。この化合物の構造は下記の通りである。
【０００７】
【化２】
末梢において極めて急速に代謝されるものの、ＰＢＲ０６の代謝産物は血液脳関門を通過しない（Ｂｒｉａｒｄ ｅｔ ａｌ， Ｊ Ｍｅｄ Ｃｈｅｍ ２００９；５２：６８８−６９９）。以前の化合物とは対照的に、脳から生じる信号のほぼ全部がインタクトなＰＢＲ０６に由来している。これは、脳内におけるＰＢＲの濃度を正確に測定することを可能にする。したがって、ＰＢＲ０６は有望なインビボイメージング剤と見なされる。
【０００８】
しかし、本明細書中に示されるように、バックグラウンド組織（即ち、線条体）と比較した、相対的に高いＰＢＲ発現を有する組織（即ち、嗅球）中へのＰＢＲ０６取込み量の比はインビボイメージングのために最適とはいえない。また、脳内におけるインタクトな化合物の割合を向上させる余地も存在している。
【０００９】
したがって、ＰＢＲ０６に比べてインビボイメージングのために改善された性質（即ち、ＰＢＲ発現組織における高い特異的取込み及び／又は脳内におけるインタクトな化合物の高い割合）を有する代替インビボイメージング剤に対するニーズが存在している。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００１０】
【特許文献１】米国特許第６８７００６９号
【特許文献２】欧州特許出願公開第１８５４７８１号
【特許文献３】国際公開第２００７／０７４３８３号
【特許文献４】国際公開第２００７／０３６７８５号
【非特許文献】
【００１１】
【非特許文献１】Chaki et al, Eur J Pharmacol 1999; 371: 197-204
【非特許文献２】Ikomo et al, J Cereb Blood Flow Metab 2007; 27: 173-84
【非特許文献３】Fujimura et al, J Nuc Med 2006; 47: 43-50
【非特許文献４】Zhang et al, J Med Chem 2007; 50: 848-55
【非特許文献５】Briard et al, J Med Chem 2009; 52: 688-699
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【００１２】
本発明は、インビボイメージングのために適した新規放射性標識アリールオキシアニリン誘導体を提供する。既知のアリールオキシアニリン誘導体系インビボイメージング剤に比べて、本発明のインビボイメージング剤はインビボイメージングのために一層良好な性質を有する。本発明のインビボイメージング剤は、良好な脳内取込み及び好ましいインビボ動力学を有すると共に、末梢ベンゾジアゼピンレセプター（ＰＢＲ）に対する改善された特異的結合を示す。
【図面の簡単な説明】
【００１３】
【図１】図１は、嗅球（ＯＢ）へのＰＢＲ０６及びインビボイメージング剤１の取込み比を線条体への取込み比と比較して示している。
【図２】図２は、嗅球（ＯＢ）へのＰＢＲ０６及びインビボイメージング剤２の取込み比を線条体への取込み比と比較して示している。
【図３】図３は、嗅球（ＯＢ）へのＰＢＲ０６及びインビボイメージング剤３の取込み比を線条体への取込み比と比較して示している。
【発明を実施するための形態】
【００１４】
イメージング剤
一態様では、本発明は次の式Ｉのインビボイメージング剤を提供する。
【００１５】
【化３】
式中、
Ａ1は−ＣＲ1Ｒ2−（ＣＨ2）n−（式中、Ｒ1及びＲ2は水素、フルオロ及びＣ1-3アルキルから独立に選択され、ｎは０、１又は２である。）であり、
Ａ2は−ＣＨ2−、−Ｏ−又は−Ｏ−ＣＨ2−であり、或いは
−Ａ1−Ａ2は−ＣＨ＝ＣＨ−である。
【００１６】
本発明の文脈中における「インビボイメージング剤」とは、インビボイメージングのために適した放射性標識化合物をいう。本明細書中で使用する「インビボイメージング」という用語は、被験体の内部構造の全部又は一部の画像を非侵襲的に生成する技法をいう。かかるインビボイメージング方法の例は、単光子放出コンピューター断層撮影法（ＳＰＥＣＴ）及び陽電子放出断層撮影法（ＰＥＴ）である。
【００１７】
特記しない限り、単独で又は組み合わせて使用される「アルキル」という用語は、好ましくは１〜３の炭素原子を含む直鎖又は枝分れアルキル基を意味する。かかる基の例には、メチル、エチル及びプロピルがある。
【００１８】
本発明のインビボイメージング剤の例を幾つか挙げると下記の通りである。
【００１９】
【化４】
式ＩのＡ1は、好ましくは−ＣＲ1Ｒ2−（ＣＨ2）n−であり、最も好ましくは−（ＣＨ2）m−（式中、ｍは１、２又は３であり、特に好ましくは１又は２である。）である。式ＩのＡ2は、好ましくは−ＣＨ2−又は−Ｏ−である。特に好ましくは、−Ａ1−Ａ2は−ＣＨ2−ＣＨ2−、−ＣＨ2−Ｏ−及び−ＣＨ2−ＣＨ2−Ｏ−から選択される。本発明の好ましいインビボイメージング剤はインビボイメージング剤１〜４であり、最も好ましくはインビボイメージング剤１〜３であり、特に好ましくはインビボイメージング剤１及び２であり、最も特に好ましくはインビボイメージング剤１である。
【００２０】
実施例１１は、本発明のインビボイメージング剤をＰＢＲ０６と比較するために使用したラット体内分布モデルを記載している。ＯＢ：線条体取込み量をＰＢＲ０６と比較して評価したところ、インビボイメージング剤１は線条体に比べてＯＢ中に比較的多く取り込まれ（本件の図１参照）、インビボイメージング剤２及び３はＰＢＲ０６と同等である（図２及び図３参照）ことが明らかになった。ＯＢはラット脳の他の領域に比べて高いレベルのＰＢＲを発現することが知られているので（“Ｈａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ Ｓｕｂｓｔａｎｃｅ Ａｂｕｓｅ”ｂｙ Ｔａｒｔｅｒ， Ａｍｍｅｒｍａｎ ａｎｄ Ｏｔｔ；Ｓｐｒｉｎｇｅｒ １９９８：３９８−９９を参照されたい）、ＯＢ：線条体比は試験化合物取込みの特異性の尺度である。
【００２１】
実施例１２は、注射から６０分後におけるラット脳内のインタクトな試験インビボイメージング剤の量を評価するために使用したアッセイを記載している。インビボイメージング剤１〜４は、ＰＢＲ０６と同じ好ましい代謝プロファイルを示した。即ち、注射から６０分後における脳内の高率の放射能はインタクトな試験化合物であることがわかった。インビボイメージング剤１及び２は、ＰＢＲ０６に比べ、注射から６０分後において脳内に一層高率のインタクトな化合物を有することがわかった。
【００２２】
本発明のインビボイメージング剤は、既知のかかる薬剤に比べて、ＰＢＲのインビボイメージングのための優れた性質を有することが本明細書中に示される。
【００２３】
製造方法
さらに別の態様では、本発明は、本明細書中に記載したインビボイメージング剤の製造方法であって、18Ｆの適当な供給源を次の式ＩＩの前駆体化合物と反応させる段階を含む方法を提供する。
【００２４】
【化５】
式中、Ａ1及びＡ2は式Ｉのインビボイメージング剤に関して本明細書中に好適なもの及び好ましいものとして定義した通りであり、ＬＧは脱離基である。
【００２５】
「前駆体化合物」は、好都合な化学形態の18Ｆとの化学反応が部位特異的に起こり、最小数の段階（理想的にはただ１つの段階）で反応を実施でき、かつ格別の精製の必要なしに（理想的にはいかなる追加の精製も必要なしに）所望のインビボイメージング剤が得られるように設計された、インビボイメージング剤の非放射性誘導体からなる。かかる前駆体化合物は合成品であり、良好な化学純度で簡便に得ることができる。
【００２６】
「18Ｆの適当な供給源」という用語は、18Ｆが共有結合することで所望のインビボイメージング剤を生成するようにして前駆体化合物の置換基と反応し得る化学形態の18Ｆを意味する。
【００２７】
概して言えば、前駆体化合物を前記18Ｆの適当な供給源と「反応」させる段階は、できるだけ高い放射化学収率（ＲＣＹ）で所望のインビボイメージング剤を生成するのに適した反応条件下で２種の反応体を合わせることを含んでいる。幾つかの一層詳細な経路を以下の実験セクションに示す。
【００２８】
「脱離基」という用語は、ヘテロリティック結合開裂において１対の電子と共に分子から脱離し、通常は求核基で置き換えられる原子又は原子団をいう。脱離基は陰イオン又は中性分子であり得る。好ましい脱離基（ＬＧ）は下記に記載する。
【００２９】
Ｏｋｕｂｏ ｅｔ ａｌ（２００４ Ｂｉｏｏｒｇ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．；１２：４２３−３８）は、非放射性アリールオキシアニリド化合物を得るための方法を記載している。アリールオキシアニリド化合物を得るための合成スキームはまた、Ｂｒｉａｒｄ ｅｔ ａｌ（Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．２００８；５１：１７−３１）、Ｗｉｌｓｏｎ ｅｔ ａｌ（Ｎｕｃ．Ｍｅｄ．Ｂｉｏｌ．２００８；３５：３０５−１４）、及びＺｈａｎｇ ｅｔ ａｌ（Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．２００７；５０：８４８−５５）によっても記載されている。これらの先行技術方法は、式ＩＩの前駆体化合物を得るために容易に適合させることができる。
【００３０】
下記のスキーム１は、非放射性標準、及び本発明のインビボイメージング剤を製造するのに適した前駆体化合物を得るための一般反応スキームである。
【００３１】
【化６】
上記反応スキーム中、ＬＧは本明細書中で定義される脱離基であり、Ｒ*は上記式Ｉ及び式ＩＩの両方に含まれるようなＡ環を含む縮合二環式環構造を表している。商業的に入手可能な２−ニトロビフェニルエーテル（ａ）中のニトロ基を水素化によって還元することで、対応するアニリン（ｂ）が得られる。芳香族アルデヒド（ｃ）での還元アルキル化によってベンジルアミン（ｄ）が得られる。適当なアセチル（ｅ）と反応させれば、所望の非放射性標準及び前駆体化合物が得られる。
【００３２】
18Ｆによる標識は、式ＩＩの前駆体化合物からの脱離基ＬＧの求核置換によって達成できる。好ましい脱離基（ＬＧ）には、クロリド、ブロミド、ヨージド、トシレート、メシレート及びトリフレートがあり、ブロミド及びトシレートが最も好ましい。式ＩＩの前駆体化合物は、18Ｆの適当な供給源を［18Ｆ］−フッ化物イオンとする一段階で標識できる。放射性フッ素化反応用の［18Ｆ］−フッ化物イオン（18Ｆ-）は、通常は核反応18Ｏ（ｐ，ｎ）18Ｆから水溶液として得られ、次いでカチオン対イオンの添加及びそれに続く水の除去によって反応性にされる。好適なカチオン性対イオンは、無水反応溶媒中において、18Ｆ-の溶解性を維持するのに十分な溶解度を有するべきである。したがって、使用されてきた対イオンには、ルビジウム又はセシウムのような大きいが軟らかい金属イオン、Ｋｒｙｐｔｏｆｉｘ（商標）のようなクリプタンドと錯体化したカリウム、或いはテトラアルキルアンモニウム塩がある。好ましい対イオンは、無水溶媒中での溶解性が良く、18Ｆ-の反応性を向上させることから、Ｋｒｙｐｔｏｆｉｘ（商標）のようなクリプタンドと錯体化したカリウムである。好ましい対イオンは、無水溶媒中での溶解性が良く、18Ｆ-の反応性を向上させることから、Ｋｒｙｐｔｏｆｉｘ（商標）のようなクリプタンドと錯体化したカリウムである。
【００３３】
放射性フッ素化が特定の部位で起こることを保証するため、前駆体化合物は選択的に化学保護することが必要となる場合がある。保護基は上記に記載されている。
【００３４】
前駆体化合物は、理想的には無菌で非発熱性の形態で供給される。したがってそれは、インビボイメージング剤を哺乳動物への投与に適した生体適合性キャリヤーと共に含む医薬組成物の製造のために使用できる。前駆体化合物はまた、かかる医薬組成物を製造するためのキット中に一成分として含めるためにも適している。
【００３５】
好ましい実施形態では、前駆体化合物はキット又は自動化合成装置で使用するように設計されたカセットの一部として溶液状態で供給される。これらの態様は、本発明の追加の態様に関連して以下に一層詳しく論議される。
【００３６】
別の好ましい実施形態では、前駆体化合物は固相に結合されている。前駆体化合物は、好ましくは固体担体マトリックスに共有結合した状態で供給される。このようにすれば、所望の生成物は溶液状態で生成される一方、出発原料及び不純物は固相に結合したままに保たれる。かかる系の例としては、18Ｆ−フッ化物による固相求電子フッ素化用の前駆体化合物が国際公開第０３／００２４８９号に記載されており、18Ｆ−フッ化物による固相求核フッ素化用の前駆体化合物が国際公開第０３／００２１５７号に記載されている。
【００３７】
好ましくは、本発明の方法は実施の容易性のために自動化される。
【００３８】
前駆体化合物
本発明の方法に関連して上記に好適なもの及び好ましいものとして記載された前駆体化合物は、それ自体が本発明の追加の態様をなしている。
【００３９】
放射性医薬組成物
さらに別の態様では、本発明は「放射性医薬組成物」を提供し、これは本発明のインビボイメージング剤を哺乳動物への投与に適した形態の生体適合性キャリヤーと共に含んでいる。
【００４０】
「生体適合性キャリヤー」は、放射性医薬組成物が生理学的に認容され得るようにして（即ち、毒性又は過度の不快感なしに哺乳動物体に投与できるようにして）インビボイメージング剤を懸濁又は溶解するための流体（特に液体）である。生体適合性キャリヤーは、好適には、無菌のパイロジェンフリー注射用水、（有利には注射用の最終生成物が等張性又は非低張性になるように平衡させ得る）食塩水のような水溶液、或いは１種以上の張度調整物質（例えば、血漿陽イオンと生体適合性対イオンとの塩）、糖（例えば、グルコース又はスクロース）、糖アルコール（例えば、ソルビトール又はマンニトール）、グリコール（例えば、グリセロール）又は他の非イオン性ポリオール物質（例えば、ポリエチレングリコール、プロピレングリコールなど）の水溶液のような注射可能なキャリヤー液体である。生体適合性キャリヤーはまた、エタノールのような生体適合性有機溶媒を含んでいてもよい。かかる有機溶媒は、親油性の高い化合物又は配合物を可溶化するために有用である。好ましくは、生体適合性キャリヤーはパイロジェンフリー注射用水、等張食塩水又はエタノール水溶液である。静脈内注射用生体適合性キャリヤーのｐＨは好適には４．０〜１０．５の範囲内にある。
【００４１】
本発明の放射性医薬組成物中に含まれる場合におけるインビボイメージング剤の好適な実施形態及び好ましい実施形態は、上記に記載した通りである。
【００４２】
かかる放射性医薬組成物は非経口的に（即ち、注射によって）投与でき、最も好ましくは水溶液である。かかる組成物は、緩衝剤、薬学的に許容される可溶化剤（例えば、シクロデキストリン或いはＰｌｕｒｏｎｉｃ、Ｔｗｅｅｎ又はリン脂質のような界面活性剤）、薬学的に許容される安定剤又は酸化防止剤（例えば、アスコルビン酸、ゲンチジン酸又はｐ−アミノ安息香酸）のような追加成分を任意に含み得る。本発明のインビボイメージング剤が放射性医薬組成物として提供される場合、前記インビボイメージング剤の製造方法はさらに、放射性医薬組成物を得るために必要な段階（例えば、有機溶媒の除去、生体適合性緩衝剤及び任意の追加成分の添加）を含むことができる。
非経口的投与のためには、放射性医薬組成物が無菌性かつ無発熱原性であることを保証するための手段を講じることも必要である。
【００４３】
キット及びカセット
好ましい実施形態では、本発明のインビボイメージング剤の製造方法は、キット又は自動化合成装置に挿入し得るカセットを用いて実施できる。これらのキット及びカセットはまた、本発明の追加の態様をなしており、本明細書中に定義された本発明の放射性医薬組成物の製造のため特に好都合である。
【００４４】
本発明のキットは、本発明の前駆体化合物を密封容器内に含んでいる。「密封容器」は、好ましくは、注射器による溶液の追加及び抜取りを許しながら、無菌保全性及び／又は放射能安全性の維持、さらに任意には不活性ヘッドスペースガス（例えば、窒素又はアルゴン）の維持を可能にする。好ましい密封容器は、気密クロージャーを（通例はアルミニウムからなる）オーバーシールと共にクリンプ加工した隔壁密封バイアルである。かかる密封容器は、例えばヘッドスペースガスの変更又は溶液のガス抜きのために所望される場合、クロージャーが真空に耐え得るという追加の利点を有している。
【００４５】
本発明のキット中に使用する場合、前駆体化合物の好適な実施形態及び好ましい実施形態は、本明細書中に既に記載した通りである。
【００４６】
キット中に使用するための前駆体化合物を無菌製造条件下で使用すれば、所望の無菌で非発熱性の材料を得ることができる。別法として、前駆体化合物を非無菌条件下で使用し、続いて例えばγ線照射、オートクレーブ処理、乾熱又は（例えば、エチレンオキシドによる）化学処理を用いる終末滅菌を施すこともできる。好ましくは、前駆体化合物は無菌で非発熱性の形態で供給される。最も好ましくは、無菌で非発熱性の前駆体化合物は上述のような密封容器に入れて供給される。
【００４７】
好ましくは、試験間での汚染の可能性を最小限に抑えると共に無菌性及び品質保証を確実にするため、キットのすべての構成要素が使い捨てである。
【００４８】
別の態様では、本発明は、本発明のインビボイメージング剤を合成するため適宜に改造された自動化合成装置に挿入し得るカセットを提供する。現在、特に［18Ｆ］−ラジオトレーサーはしばしば自動化放射合成装置で簡便に製造されている。かかる装置には、Ｔｒａｃｅｒｌａｂ（商標）及びＦａｓｔｌａｂ（商標）（いずれもＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ社から入手可能）を始めとするいくつかの市販例が存在している。放射化学は、カセットを装置に取り付けることにより、自動化合成装置上で実施される。普通、カセットは流体通路、反応器、及び試薬バイアル並びに放射合成後の清掃段階で使用される任意の固相抽出カートリッジを受け入れるためのポートを含んでいる。
【００４９】
本発明のインビボイメージング剤の自動化合成のためのカセットは、
（ｉ）本明細書中に定義した前駆体化合物を含む容器、及び
（ｉｉ）本明細書中に定義したような18Ｆの適当な供給源を用いて容器を溶出するための手段
を含んでいる。
【００５０】
かかるカセットはさらに、
（ｉｉｉ）過剰の18Ｆを除去するためのイオン交換カートリッジ、及び任意には
（ｉｖ）得られた放射性標識生成物を脱保護して本明細書中に定義したインビボイメージング剤を生成するためのカートリッジ
を含むことができる。
【００５１】
自動化合成のために必要な試薬、溶媒及び他の消耗品もまた、濃度、体積、送出時間などに関する最終ユーザーの要求条件を満たすように自動化合成装置を運転させるソフトウェアを保持したコンパクトディスクのようなデータ媒体と共に含めることができる。
【００５２】
使用方法
さらに別の態様では、本発明は、被験体におけるＰＢＲ発現の分布及び／又は程度を決定するためのインビボイメージング方法であって、
（ｉ）本明細書中に定義したインビボイメージング剤を前記被験体に投与する段階、
（ｉｉ）前記インビボイメージング剤を前記被験体内のＰＢＲに結合させる段階、
（ｉｉｉ）前記インビボイメージング剤の18Ｆから放出される信号をインビボイメージング技法によって検出する段階、
（ｉｖ）前記信号の位置及び／又は量を表す画像を生成する段階、並びに
（ｖ）前記被験体におけるＰＢＲ発現の分布及び程度を決定する段階であって、前記発現は前記18Ｆから放出される前記信号と直接に相関している段階
を含むインビボイメージング方法を提供する。
【００５３】
本発明のインビボイメージング方法に関しては、インビボイメージング剤の好適な態様及び好ましい態様は本明細書中において前記に定義した通りである。
【００５４】
インビボイメージング剤を「投与する」段階は、好ましくは非経口的に実施され、最も好ましくは静脈内に実施される。静脈内経路は、インビボイメージング剤を被験体の身体全域に送達するため、したがって血液脳関門（ＢＢＢ）を横切って前記被験体で発現されたＰＢＲに接触させるための最も効率的な方法である。本発明のインビボイメージング剤は、好ましくは本明細書中に定義された本発明の医薬組成物として投与される。別の実施形態では、投与段階はインビボイメージング方法自体に先立って実施される予備段階としても理解できる結果、段階（ｉ）はインビボイメージング剤を予め投与した被験体を用意する段階として定義できる。
【００５５】
投与段階後かつ検出段階前に、インビボイメージング剤をＰＢＲに結合させる。例えば、被験体がインタクトな哺乳動物である場合、インビボイメージング剤は哺乳動物の身体を通って動的に移動し、体内の様々な組織に接触する。ひとたびインビボイメージング剤がＰＢＲに接触すれば、特異的な相互作用が起こる結果、ＰＢＲをもった組織からのインビボイメージング剤のクリアランスは、ＰＢＲをもたない組織又はＰＢＲの少ない組織よりも長い時間がかかる。一定の時点に達すれば、ＰＢＲをもった組織に結合したインビボイメージング剤とＰＢＲをもたない組織又はＰＢＲの少ない組織に結合したインビボイメージング剤との比の結果として、ＰＢＲに特異的に結合したインビボイメージング剤の検出が可能となる。理想的には、この比は２：１以上である。
【００５６】
本発明の方法の「検出」段階は、18Ｆから放出される信号を、陽電子放出断層撮影（ＰＥＴ）検出器によって検出することを含んでいる。この検出段階はまた、信号データの取得として理解することもできる。
【００５７】
本発明の方法の「生成」段階は、取得された信号データに再構築アルゴリズムを適用してデータセットを得るコンピューターによって実施される。次いで、このデータセットを操作することで、前記18Ｆから放出される信号の位置及び／又は量を示す画像が生成される。放出される信号はＰＢＲの発現と直接に相関する結果、生成された画像を評価することで「決定」段階を行うことができる。
【００５８】
本発明の「被験体」は、任意のヒト又は動物被験体であり得る。好ましくは、本発明の被験体は哺乳動物である。最も好ましくは、前記被験体はインタクトな哺乳動物生体である。特に好ましい実施形態では、本発明の被験体はヒトである。本インビボイメージング方法は、健常被験体或いはＰＢＲの異常発現に関連する病的状態（「ＰＢＲ状態」）を有することが知られ又は疑われる被験体においてＰＢＲを検査するために使用できる。本発明のインビボイメージング剤は、中枢神経系（ＣＮＳ）におけるＰＢＲ発現のインビボイメージングに特に適している。
【００５９】
別の実施形態では、本発明のインビボイメージング方法は前記被験体に関する治療計画の進行中に繰り返して実施することができ、前記計画はＰＢＲ状態と戦うための薬物の投与を含んでいる。例えば、本発明のインビボイメージング方法は、ＰＢＲ状態と戦うための薬物による治療前、治療中及び治療後に実施できる。このようにすれば、前記治療の効果を経時的にモニターすることができる。この実施形態のためにはＰＥＴイメージングが特に適している。ＰＥＴは優れた感度及び分解能を有する結果、病変部における比較的小さい変化でも経時的に観察でき、これは治療モニタリングのために有利である。ＰＥＴスキャナーは、日常的にピコモル範囲内の放射能濃度を測定している。現在、マイクロＰＥＴスキャナーは約１ｍｍの空間分解能に接近しているが、臨床スキャナーは約４〜５ｍｍである。
【００６０】
好ましくは、前記方法はＰＢＲ状態を有することが知られ又は疑われる被験体のインビボイメージングに関し、したがって前記状態の診断方法の一部として有用である。したがって、本発明のインビボイメージング方法は、前記被験体がＰＢＲ状態に罹患しているか否かを診断するためにＰＢＲ発現の分布及び程度を帰因させる追加段階（ｖｉ）を含み得る。インビボイメージングが役に立つかかるＰＢＲ状態の例には、神経炎症が存在するパーキンソン病、多発性硬化症、アルツハイマー病及びハンチントン病のような神経疾患がある。本発明の化合物によるイメージングが有用であり得る他のＰＢＲ状態には、ニューロパシー性疼痛、関節炎、喘息、アテローム性動脈硬化症、特に限定されないが結腸直腸癌及び乳癌を含む一連の悪性疾患、並びに特に限定されないが双極性障害、統合失調症、不安及び外傷後ストレス障害を含む一連の気分障害がある。
【００６１】
別の態様では、本発明は、本明細書中に好適なもの及び好ましいものとして定義したインビボイメージング方法で使用するための、本明細書中に定義したインビボイメージング剤を提供する。
【００６２】
さらに別の態様では、本発明は、本明細書中に好適なもの及び好ましいものとして定義したインビボイメージング方法で使用するための本明細書中に定義した放射性医薬組成物を製造するための、本明細書中に定義したインビボイメージング剤を提供する。
【実施例】
【００６３】
以下、一連の非限定的な実施例によって本発明を例示する。
【００６４】
実施例の簡単な説明
実施例１は、インビボイメージング剤１用の直接標識前駆体化合物の合成法を記載している。
【００６５】
実施例２は、インビボイメージング剤２用の直接標識前駆体化合物の合成法を記載している。
【００６６】
実施例３は、インビボイメージング剤３用の直接標識前駆体化合物の合成法を記載している。
【００６７】
実施例４は、インビボイメージング剤４用の直接標識前駆体化合物の合成法を記載している。
【００６８】
実施例５は、インビボイメージング剤１〜４を得るために使用した放射性フッ素化方法を記載している。
【００６９】
実施例６は、インビボイメージング剤１に対する非放射性標準の合成法を記載している。
【００７０】
実施例７は、インビボイメージング剤２に対する非放射性標準の合成法を記載している。
【００７１】
実施例８は、インビボイメージング剤３に対する非放射性標準の合成法を記載している。
【００７２】
実施例９は、インビボイメージング剤４に対する非放射性標準の合成法を記載している。
【００７３】
実施例１０は、ＰＢＲに対する本発明のイメージング剤の非放射性標準の親和性を評価するために使用したインビトロアッセイを記載している。
【００７４】
実施例１１は、静脈内投与後における本発明のイメージング剤の体内分布を測定するために使用した動物モデルを記載している。
【００７５】
実施例１２は、静脈内投与後における本発明のイメージング剤の代謝を評価するために使用したアッセイを記載している。
【００７６】
実施例中で使用される略語のリスト
℃ 摂氏度
ａｑ 水性
ＢＧＯ ゲルマニウム酸ビスマス
ＤＣＭ ジクロロメタン
ＤＭＦ ジメチルホルムアミド
ＤＭＳＯ ジメチルスルホキシド
ＥｔＯＡｃ 酢酸エチル
ｇ グラム
ｈ 時間
Ｋi 半最大阻害のために必要な化合物の濃度
ＭＢｑ メガベクレル
ｍｇ ミリグラム
ｍｉｎ 分
ｍｌ ミリリットル
ｍＭ ミリモル濃度
ｍｍｏｌ ミリモル
ｎ 実験回数
ＮＭＲ 核磁気共鳴
ＰＢＲ 末梢ベンゾジアゼピンレセプター
ｒｐｍ 毎分回転数
ＴＥＡ トリエチルアミン
ＴＬＣ 薄層クロマトグラフィー
Ｔｒｉｓ トリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン
ＵＶ 紫外
実施例１：インビボイメージング剤１用の直接標識前駆体の合成
実施例１（ｉ）：２−アミノジフェニルエーテル
【００７７】
【化７】
メタノール（２５０ｍｌ）中の２−ニトロジフェニルエーテル（１６ｇ、７４ｍｍｏｌ）を木炭上のパラジウム（１．６ｇ）と共に水素雰囲気下で２０〜５０℃で３０分間振盪した。急速な水素の吸収があり、２０〜５０℃の検出可能な発熱の結果として温度が急速に上昇し、次いで低下した。温度が５０℃を超えて上昇するのを抑えるため、振盪を短時間停止した。次いで、反応物をセライトで濾過し、高真空中で濃縮することで、２−アミノジフェニルエーテルを油状物（１３．５ｇ、７２．９ｍｍｏｌ、９８％）として得たが、これは静置後に結晶化して淡黄色の固体を与えた。
【００７８】
1Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3）３００ＭＨｚ δ３．８２（２Ｈ，ｂｒｍ，ＮＨ2），６．７−７．１（７Ｈ，ｍ，ＡｒＨ）７．３３（２Ｈ，ｍ，ＡｒＨ）。
【００７９】
13Ｃ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3）７５ＭＨｚ δ１１６．４１，１１７．０３，１１８．７０（２Ｃ），１２０．２２，１２２．５７，１２４．８５，１２９．６５（２Ｃ），１３８．７０，１４２．９７，１５７．４３。
【００８０】
実施例１（ｉｉ）：Ｎ−（２，３−ジヒドロベンゾフラン−７−イルメチル）−Ｎ−（２−フェノキシフェニル）アミン
【００８１】
【化８】
２−アミノジフェニルエーテル（１ｇ、５．４ｍｍｏｌ）を２，３−ジヒドロベンゾフラン−７−カルバルデヒド（１ｇ、７．０２ｍｍｏｌ）及びトルエン（１０ｍｌ）で処理し、激しく撹拌しながら窒素雰囲気下で４時間加熱還流した。溶液は黄色で均質になった。次いで、反応物を真空中で濃縮してトルエンを除去し、０℃に冷却し、メタノール（１５ｍｌ）で希釈、水素化ホウ素ナトリウム（６１２ｍｇ、１６ｍｍｏｌ）を少量ずつ２０分かけて添加して処理した。次いで、反応物を室温まで放温し、さらに３０分間撹拌した。２Ｎ塩酸（５ｍｌ）を添加し、反応物をさらに３０分間撹拌した。次いで、反応物を真空中で濃縮してガム状物にし、１０％炭酸カリウム水溶液（５０ｍｌ）を添加した。次いで、酢酸エチル（５０ｍｌ）中への抽出によって生成物を回収し、抽出液を硫酸マグネシウム上で乾燥し、真空中で濃縮してガム状物にした。ガム状物を、ペトロール中１０〜３０％酢酸エチルの勾配を用いて１２０ｇのシリカカラム上でクロマトグラフィー処理した。主たる急速流出画分であるＮ−（２，３−ジヒドロベンゾフラン−７−イルメチル）−Ｎ−（２−フェノキシフェニル）アミンをガム状物（１．２８２４ｇ、４．０４ｍｍｏｌ、７４．９％）として集めたが、これは静置後に結晶化した。
【００８２】
1Ｈ ＮＭＲ ＣＤＣｌ3 ３００ＭＨｚ，δ３．１９（２Ｈ，ｔ，ＣＨ2Ｐｈ），４．３５（２Ｈ，ｓ，ＣＨ2Ｎ）４．５１（２Ｈ，ｔ，ＣＨ2Ｏ）４．８７（１Ｈ，ｂｒｓ，ＮＨ），６．６，−７．３１（１２Ｈ，ｍＡｒＨ）。
【００８３】
13Ｃ ＮＭＲ ＣＤＣｌ3，７５ＭＨｚ δ２９．６９，４２．６３，７１．１１，１１２．０１，１１６．８２，１１７．２７，１１９．３４，１２０．３１，１２２．４８，１２３．６４，１２６．９６，１２９．５５，１４０．５０，１４３．０７，１５７．７１，１５７．８３。
【００８４】
実施例１（ｉｉｉ）：２−ブロモ−Ｎ−（２，３−ジヒドロフラン−７−イルメチル）−Ｎ−（２−フェノキシフェニル）アセトアミド
【００８５】
【化９】
ジクロロメタン（１０ｍｌ）中のＮ−（２，３−ジヒドロベンゾフラン−７−イルメチル）−Ｎ−（２−フェノキシフェニル）アミン（０．５ｇ、１．５７ｍｍｏｌ）を０℃に冷却し、ブロモアセチルクロリド（２７２ｍｇ、１．７３ｍｍｏｌ）及びトリエチルアミン（１７５ｍｇ、１．７３ｍｍｏｌ）で処理し、窒素雰囲気下で１時間撹拌した。反応物をジクロロメタン（５０ｍｌ）で希釈し、５Ｎ塩酸（２０ｍｌ）で洗浄してトリエチルアミンを除去し、炭酸カリウム水溶液（２０ｍｌ）で洗浄して過剰のブロモアセチルクロリドを除去した。有機層を分離し、硫酸マグネシウム上で乾燥し、高真空中で濃縮して２−ブロモ−Ｎ−（２，３−ジヒドロフラン−７−イルメチル）−Ｎ−（２−フェノキシフェニル）アセトアミド（６６１ｍｇ、１．５１ｍｍｏｌ、９６％）を得た。
【００８６】
1Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3）３００ＭＨｚ，δ３．０６（２Ｈ，ｍ，ＣＨ2Ｐｈ），３．８（２Ｈ，ｄ，ｄＣＨ2Ｏ），４．２−４．４（２Ｈ，ｄ，ｑ，ＣＨ2Ｂｒ）４．７，（１Ｈ，ｄ，ＣＨＮ），５．１２，（１Ｈ，ｄ，ＣＨＮ），６．６２−７．３２（１２Ｈ，ｍ，ＡｒＨ）。
【００８７】
13Ｃ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3）７５ＭＨｚ δ２７．８１，２９．６８，４６．７８，７０．８９，１１８．０４，１１９．３６，１２０．２６，１２３．０６，１２４．１３，１２４．１７，１２９．８２，１５３．４８，１５５．５９，１５８．５５，１６６．６４。
【００８８】
実施例２：インビボイメージング剤２用の直接標識前駆体の合成
実施例２（ｉ）：Ｎ−（ベンゾ［１，３］ジオキソール−４−イルメチル）−Ｎ−（２−フェニルオキシ−フェニル）アミン
【００８９】
【化１０】
２−フェノキシ−フェニルアミン（４１０ｍｇ、２．２２ｍｍｏｌ）と２，３−（メチレンジオキシ）ベンズアルデヒド（５００ｍｇ、３．３３ｍｍｏｌ）との混合物を窒素下において９０℃で２時間加熱した。反応物を０℃に冷却し、ＭｅＯＨ（４ｍＬ）を添加し、続いてＮａＢＨ4（２５３ｍｇ、６．７０ｍｍｏｌ）を少量ずつ２０分かけて添加した。混合物を室温で２４時間撹拌した。ギ酸（０．４ｍＬ）を添加し、混合物を１５分間撹拌した。溶媒を真空中で除去し、残留物を飽和ＮａＨＣＯ3水溶液（５０ｍＬ）で奪活し、ＤＣＭ（２×３０ｍＬ）で抽出し、ＭｇＳＯ4上で乾燥し、濾過し、真空中で溶媒を除去した。粗物質を石油スピリット（Ａ）及び酢酸エチル（Ｂ）で溶出するシリカゲルクロマトグラフィー（５％Ｂ、８０ｇ、４．０ＣＶ、６０ｍＬ／分）によって精製することで、３６０ｍｇ（５１％）のＮ−（ベンゾ［１，３］ジオキソール−４−イルメチル）−Ｎ−（２−フェニルオキシ−フェニル）アミンを白色固体として得た。
【００９０】
1Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ3）δ４．３５（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝５．２Ｈｚ，ＡｒＣＨ2），４．６６（１Ｈ，ｓ，ＮＨ），５．８８（２Ｈ，ｓ，ＯＣＨ2Ｏ），６．６０−７．１０（１０Ｈ，ｍ，ＡｒＨ），７．２４−７．３４（２Ｈ，ｍ，ＡｒＨ）。
【００９１】
実施例２（ｉｉ）：Ｎ−（ベンゾ［１，３］ジオキソール−４−イルメチル）−２−ブロモ−Ｎ−（２−フェニルオキシ−フェニル）アセトアミド
【００９２】
【化１１】
Ｎ−（ベンゾ［１，３］ジオキソール−４−イルメチル）−Ｎ−（２−フェニルオキシ−フェニル）アミン（０．１８ｇ、０．５８ｍｍｏｌ）をＤＣＭ（４ｍＬ）に溶解した溶液に、トリエチルアミン（０．２４ｇ、２．３２ｍｍｏｌ、０．３２ｍＬ）を添加した。反応物を０℃に冷却し、ブロモアセチルクロリド（０．１８ｇ、１．１６ｍｍｏｌ、０．１０ｍＬ）を添加した。混合物を室温で２時間撹拌した。ＬＣ−ＭＳは、出発原料及び生成物（１：１）を示した。さらに、トリエチルアミン（０．２４ｇ、２．３２ｍｍｏｌ、０．３２ｍＬ）及びブロモアセチルクロリド（０．１８ｇ、１．１６ｍｍｏｌ、０．１０ｍＬ）を添加し、室温で２時間撹拌した。溶媒を真空中で除去し、残留物を水（１０ｍＬ）で奪活し、ＤＣＭ（２×２０ｍＬ）で抽出し、ＭｇＳＯ4上で乾燥し、濾過し、真空中で溶媒を除去した。粗物質をＤＣＭ（Ａ）及びＭｅＯＨ（Ｂ）で溶出するシリカゲルクロマトグラフィー（１％Ｂ、８０ｇ、２ＣＶ、６０ｍＬ／分）によって精製した。不純な生成物をＤＣＭ（Ａ）及びＥｔＯＡｃ（Ｂ）で溶出するシリカゲルクロマトグラフィー（１〜５％Ｂ、８０ｇ、４．５ＣＶ、６０ｍＬ／分）によってさらに精製することで、１２０ｍｇ（４７％）のＮ−（ベンゾ［１，３］ジオキソール−４−イルメチル）−２−ブロモ−Ｎ−（２−フェニルオキシ−フェニル）アセトアミドを無色油状物として得た。
【００９３】
1Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ3）δ３．７６（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１１Ｈｚ，ＢｒＣＨ），３．８２（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１１Ｈｚ，ＢｒＣＨ），４．７２（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１４Ｈｚ，ＡｒＣＨ），５．１３（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１４Ｈｚ，ＡｒＣＨ），５．６３（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１Ｈｚ，ＯＣＨＯ），５．７９（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１Ｈｚ，ＯＣＨＯ），６．６５−７．４０（１２Ｈ，ｍ，ＡｒＨ）。
【００９４】
ＬＣ−ＭＳ：Ｃ22Ｈ18ＢｒＮＯ4に関するｍ／ｚ計算値，４４０．３；実測値，４４１．９（Ｍ＋Ｈ）＋。
【００９５】
実施例３：インビボイメージング剤３用の直接標識前駆体の合成
実施例３（ｉ）：Ｎ−（２，３−ジヒドロベンゾ［１，４］ジオキシニル−５−イルメチル）−Ｎ−（２−フェノキシフェニル）アミン
【００９６】
【化１２】
２−アミノジフェニルエーテル（１ｇ、５．４ｍｍｏｌ）を２，３−ジヒドロベンゾ［１，４］ジオキシニル−５−アルデヒド（８８５ｍｇ、５．４ｍｍｏｌ）及びトルエン（１０ｍｌ）で処理し、激しく撹拌しながら窒素雰囲気下で４時間加熱還流した。溶液は黄色で均質になった。次いで、反応物を真空中で濃縮してトルエンを除去し、０℃に冷却し、メタノール（２５ｍｌ）で希釈、絶えず撹拌しながら水素化ホウ素ナトリウム（１ｇ、ペレット）で処理した。次いで、反応物を一晩かけて室温まで放温したところ、白色の結晶質固体が析出した。濾過によって集めた固体は、Ｎ−（２，３−ジヒドロベンゾ［１，４］ジオキシニル−５−イルメチル）−Ｎ−（２−フェノキシフェニル）アミン（１．１２８ｇ、３．５６ｍｍｏｌ、６６％）であった。
【００９７】
1Ｈ ＮＭ ＲＣＤＣｌ3 ３００ＭＨｚ，δ４．１６，（４Ｈ，ｓ，ＣＨ2−Ｏｘ２），４．３５（２Ｈ，ｄ，ＣＨ2Ｎ），４．６８（１Ｈ，ｔ，ＮＨ），６．６−７．１（１０Ｈ，ｍＡｒＨ），７．２９，（２Ｈ，ｔ，ＡｒＨ）。
【００９８】
13Ｃ ＮＭＲ ＣＤＣｌ3，７５ＭＨｚ，δ４２．６，６４．０６，６４．２１，１１２．１８，１１６．２５，１１７．０９，１１９．５７，１２０．６２，１２０．７９，１２４．９７，１２８．００，１２９．５８，１４０．５５，１４１．００，１４２．９７，１４３．３３，１５７．７８。
【００９９】
実施例３（ｉｉ）：Ｎ−（２，３−ジヒドロベンゾ［１，４］ジオキシニル−５−イルメチル）−２−ブロモ−Ｎ−（２−フェノキシフェニル）アセトアミド
【０１００】
【化１３】
ジクロロメタン（２０ｍｌ）中のＮ−（２，３−ジヒドロベンゾ［１，４］ジオキシン−５−イルメチル）−Ｎ−（２−フェノキシフェニル）アミン（純粋）（０．５ｇ、１．５ｍｍｏｌ）を、ブロモアセチルクロリド（２５９ｍｇ、１．６５ｍｍｏｌ）及びトリエチルアミン（１６８ｍｇ、１．６５ｍｍｏｌ）により０℃で１時間処理した。次いで、反応物をジクロロメタン（５０ｍｌ）で希釈し、２Ｎ塩酸（２０ｍｌ）で洗浄してトリエチルアミンを除去し、１０％炭酸カリウム水溶液で洗浄して過剰のブロモアセチルクロリドを除去した。有機層を分離し、硫酸マグネシウム上で乾燥し、高真空中で濃縮して２−ブロモ−Ｎ−（２，３−ジヒドロベンゾ［１，４］ジオキシニル−５−イルメチル）−Ｎ−（２−フェノキシフェニル）アセトアミド（６３７ｍｇ、１．４０ｍｍｏｌ、９３％）を得た。
【０１０１】
1Ｈ ＮＭＲ ＣＤＣｌ3，３００ＭＨｚ，δ３．７７（２Ｈ，ｄｄ，ＣＨ2Ｂｒ），３．８５−４．２（４Ｈ，ｍ，ＣＨ2０ｘ２），４．７５ ａｎｄ ５．１５（１Ｈ，ｄ，ｔｏｇｅｔｈｅｒ ＣＨ2Ｎ），６．６５−７．４（１２Ｈ，ｍ，ＡｒＨ）。
【０１０２】
13Ｃ ＮＭＲ ＣＤＣｌ3 ７５ＭＨｚ，δ２７．７７，４６．０８，６３．９５，６４．０２，１１６．６８，１１９．３９，１２０．６６，１２２．９７，１２３．００，１２４．７８，１２４．２８，１２４．７０，１２９．５０，１２９．９０，１３０．４０，１３１．００１４１．９８，１４３．１６，１５３．５８，１５５．５０，１６６．５３。
【０１０３】
実施例４：インビボイメージング剤４用の直接標識前駆体の合成
実施例４（ｉ）：Ｎ−（２，２−ジメチル−２，３−ジヒドロベンゾフラン−７−イルメチル）−Ｎ−（２−フェノキシフェニル）アミン
【０１０４】
【化１４】
２−フェノキシ−フェニルアミン（３５０ｍｇ、１．８９ｍｍｏｌ）と２，２−ジメチル−２，３−ジヒドロ−１−ベンゾフラン−７−カルバルデヒド（５００ｍｇ、２．８３ｍｍｏｌ）との混合物を窒素下において９０℃で２時間加熱した。反応物を０℃に冷却し、ＭｅＯＨ（４ｍＬ）を添加し、続いてＮａＢＨ4（２１６ｍｇ、５．７０ｍｍｏｌ）を少量ずつ２０分かけて添加した。混合物を室温で２４時間撹拌した。ギ酸（０．４ｍＬ）を添加し、混合物を１５分間撹拌した。溶媒を真空中で除去し、残留物を飽和ＮａＨＣＯ3水溶液（５０ｍＬ）で奪活し、ＤＣＭ（２×３０ｍＬ）で抽出し、ＭｇＳＯ4上で乾燥し、濾過し、真空中で溶媒を除去した。粗物質を石油スピリット（Ａ）及び酢酸エチル（Ｂ）で溶出するシリカゲルクロマトグラフィー（５〜１０％Ｂ、８０ｇ、３ＣＶ、６０ｍＬ／分）によって精製することで、５６０ｍｇ（８６％）のＮ−（２，２−ジメチル−２，３−ジヒドロベンゾフラン−７−イルメチル）−Ｎ−（２−フェノキシフェニル）アミンを無色油状物として得た。
【０１０５】
1Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ3）δ１．４３（６Ｈ，ｓ，Ｃ（ＣＨ3）2），２．９８（２Ｈ，ｓ，ＡｒＣＨ2），４．３２（２Ｈ，ｓ，ＮＣＨ2），４．７９（１Ｈ，ｓ，ＮＨ），６．６０−７．１０（１０Ｈ，ｍ，ＡｒＨ），７．３０（２Ｈ，ｍ，ＡｒＨ）。
【０１０６】
実施例４（ｉｉ）：２−ブロモ−Ｎ−（２，２−ジメチル−２，３−ジヒドロベンゾフラン−７−イルメチル）−Ｎ−（２−フェノキシフェニル）アセトアミド
【０１０７】
【化１５】
Ｎ−（２，２−ジメチル−２，３−ジヒドロベンゾフラン−７−イルメチル）−Ｎ−（２−フェノキシフェニル）アミン（０．２０ｇ、０．５８ｍｍｏｌ）をＤＣＭ（２ｍＬ）に溶解した溶液に、トリエチルアミン（０．２４ｇ、２．３２ｍｍｏｌ、０．３２ｍＬ）を添加した。反応物を０℃に冷却し、ブロモアセチルクロリド（０．１８ｇ、１．１６ｍｍｏｌ、０．１０ｍＬ）を添加した。混合物を室温で２時間撹拌した。ＬＣ−ＭＳは、出発原料及び生成物（１：１）を示した。さらに、トリエチルアミン（０．２４ｇ、２．３２ｍｍｏｌ、０．３２ｍＬ）及びブロモアセチルクロリド（０．１８ｇ、１．１６ｍｍｏｌ、０．１０ｍＬ）を添加し、室温で２時間撹拌した。溶媒を真空中で除去し、残留物を水（１０ｍＬ）で奪活し、ＤＣＭ（２×２０ｍＬ）で抽出し、ＭｇＳＯ4上で乾燥し、濾過し、真空中で溶媒を除去した。粗物質を石油スピリット（Ａ）及びＥｔＯＡｃ（Ｂ）で溶出するシリカゲルクロマトグラフィー（３０％Ｂ、８０ｇ、２．５ＣＶ、６０ｍＬ／分）によって精製した。不純な生成物をＤＣＭ（Ａ）及びＥｔＯＡｃ（Ｂ）で溶出するシリカゲルクロマトグラフィー（１〜５％Ｂ、８０ｇ、５ＣＶ、６０ｍＬ／分）によってさらに精製することで、１７０ｍｇ（６３％）の２−ブロモ−Ｎ−（２，２−ジメチル−２，３−ジヒドロベンゾフラン−７−イルメチル）−Ｎ−（２−フェノキシフェニル）アセトアミドを無色油状物として得た。
【０１０８】
1Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ3）δ１．１４（３Ｈ，ｓ，ＣＨ3），１．３１（３Ｈ，ｓ，ＣＨ3），２．８３（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１５Ｈｚ，ＡｒＣＨ），２．９０（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１５Ｈｚ，ＡｒＣＨ），３．７４（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１１Ｈｚ，ＢｒＣＨ），３．８０（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１１Ｈｚ，ＢｒＣＨ），４．５９（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１４Ｈｚ，ＮＣＨ），５．２２（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１４Ｈｚ，ＮＣＨ），６．６５−７．４０（１２Ｈ，ｍ，ＡｒＨ）。
【０１０９】
ＬＣ−ＭＳ：Ｃ25Ｈ24ＢｒＮＯ3に関するｍ／ｚ計算値，４６６．４；実測値，４６７．９（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０１１０】
実施例５：インビボイメージング剤１〜４を得るための実施例１〜４の前駆体化合物の放射性フッ素化
５（ｉ）：［18Ｆ］フッ化物イオンの乾燥
１５μｌの水中に供給された18Ｆ−フッ化物イオンに、さらに２００μｌの水を添加し、ＣＯＣ容器内にフッ化物イオンを吸引した。０．５ｍｌのアセトニトリル及び０．１Ｍ炭酸水素カリウム溶液（５０μｌ、５×１０-6モル）に溶解したＫｒｙｐｔｏｆｉｘ（２ｍｇ、５．３×１０-6モル）の存在下で、18Ｆ−フッ化物イオンを窒素流下において１１０℃で３０分間乾燥した（長いタップを開いた場合には、０．３Ｌ／分で約２０分間、続いて０．１Ｌ／分で乾燥した）。スプラッシングの危険がもはや無くなったら流量を０．５Ｌ／分に高め（約１０分間）、次いで室温に冷却した。
【０１１１】
５（ｉｉ）：放射性フッ素化
段階５（ｉ）で得られた乾燥残留物に、１ｍｌのアセトニトリルに溶解した０．７ｍｇの特定前駆体化合物を添加し、反応物を密封系中において１００℃で１０分間加熱した。冷却後、反応混合物をＮ４６バイアルに移し、ＣＯＣバイアルを１．５ｍｌの水で洗浄した。洗液を同じガラスバイアルに移した。（全量が約２．５ｍｌである）調製物を分取ＨＰＬＣ上に引き取り、ＨＰＬＣカットを約１５ｍｌの水で希釈した後、（２．５ｍｌのエタノール及び５ｍｌの水でプレコンディショニングを施した）Ｓｅｐ−Ｐａｋ ｔＣ１８ ｌｉｇｈｔ上に装填した。次いで、Ｓｅｐ−Ｐａｋを０．５ｍｌのエタノールで溶出し（Ｐ６バイアル中に集めた）、続いて４．６ｍｌのダルベッコリン酸緩衝食塩水で溶出した（同じＰ６バイアル中に集めた）。ＨＰＬＣによってＲＣＰを測定した。
【０１１２】
実施例６：インビボイメージング剤１に対する非放射性標準の合成
実施例６（ｉ）：Ｎ−（２，３−ジヒドロベンゾフラン−７−イルメチル）−２−フルオロ−Ｎ−（２−フェノキシフェニル）アセトアミド
【０１１３】
【化１６】
ＤＣＭ（２０ｍｌ）中のＮ−（２，３−ジヒドロベンゾフラン−７−イルメチル）−Ｎ−（２−フェノキシフェニル）アミン（０．５ｇ、１．７８ｍｍｏｌ）を、フルオロアセチルクロリド（１９９ｍｇ、１．９６ｍｍｏｌ）及びＴＥＡ（１９９ｍｇ、１．９６ｍｍｏｌ）により０℃で１時間処理した。次いで、反応物をＤＣＭ（５０ｍｌ）で希釈し、２Ｎ塩酸（２０ｍｌ）で洗浄してＴＥＡを除去し、１０％炭酸カリウム水溶液で洗浄してフルオロアセチルクロリドを除去した。有機層を分離し、硫酸マグネシウム上で乾燥し、高真空中で濃縮してＮ−（２，３−ジヒドロベンゾフラン−７−イルメチル）−２−フルオロ−Ｎ−（２−フェノキシフェニル）アセトアミド（４５５ｍｇ、１．６１ｍｍｏｌ、９１％）を得た。
【０１１４】
1Ｈ ＮＭＲ ＣＤＣｌ3中，３００ｍＨｚ，δ２．９−３．１３（２Ｈ，ｍ，ＣＨ2Ｐｈ），４．２２ ａｎｄ ４．３８（１Ｈ，ｑ，ｔｏｇｅｔｈｅｒ ＣＨ2Ｏ），４．７ ａｎｄ ４．９（１Ｈ，ｑ，ｔｏｇｅｔｈｅｒ ＣＨ2Ｆ），４．８ ａｎｄ ５．１（１Ｈ，ｄ，ｔｏｇｅｔｈｅｒ ＣＨ2Ｎ），６．６３−７．５（１２Ｈ，ｍ，ＡｒＨ）。
【０１１５】
13Ｃ ＮＭＲ ＣＤＣｌ3中，７５ＭＨｚ，δ２６．７３，４３，３１，６８．０３，７７．００，１１４．００，１１５．００１１６．３９，１１７．３２，１２０．２３，１２１．３４，１２４．００，１２６．３６，１２６．９４，１２７．４５，１５０．８４，１５２．５８，１５５．７６，１６４．１１，１６４．３８。
【０１１６】
実施例７：インビボイメージング剤２に対する非放射性標準の合成
実施例７（ｉ）：Ｎ−（ベンゾ［１，３］ジオキソール−４−イルメチル）−２−フルオロ−Ｎ−（２−フェニルオキシ−フェニル）アセトアミド
【０１１７】
【化１７】
Ｎ−（ベンゾ［１，３］ジオキソール−４−イルメチル）−Ｎ−（２−フェニルオキシ−フェニル）アミン（０．１６ｇ、０．５０ｍｍｏｌ）をＤＣＭ（２ｍＬ）に溶解した溶液に、ＴＥＡ（０．２０ｇ、２．００ｍｍｏｌ、０．２８ｍＬ）を添加した。反応物を０℃に冷却し、フルオロアセチルクロリド（０．１０ｇ、１．００ｍｍｏｌ、０．０７ｍＬ）を添加した。混合物を室温で１時間撹拌した。溶媒を真空中で除去し、残留物を水（１０ｍＬ）で奪活し、ＤＣＭ（２×２０ｍＬ）で抽出し、ＭｇＳＯ4上で乾燥し、濾過し、真空中で溶媒を除去した。粗物質をＤＣＭ（Ａ）及びＭｅＯＨ（Ｂ）で溶出するシリカゲルクロマトグラフィー（１〜５％Ｂ、８０ｇ、４．０ＣＶ、６０ｍＬ／分）によって精製することで、１２０ｍｇ（４７％）のＮ−（ベンゾ［１，３］ジオキソール−４−イルメチル）−２−フルオロ−Ｎ−（２−フェニルオキシ−フェニル）アセトアミドを黄色油状物として得た。構造は下記のＮＭＲによって確認された。
【０１１８】
1Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ3）δ４．６７（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝２Ｈｚ，ＦＣＨ），４．８３（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝２Ｈｚ，ＦＣＨ），４．７４（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１４Ｈｚ，ＡｒＣＨ），５．１２（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１４Ｈｚ，ＡｒＣＨ），５．６３（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１Ｈｚ，ＯＣＨＯ），５．７９（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１Ｈｚ，ＯＣＨＯ），６．６６−６．８８（６Ｈ，ｍ，ＡｒＨ），６．９６−７．０６（２Ｈ，ｍ，ＡｒＨ），７．１２−７．３８（４Ｈ，ｍ，ＡｒＨ）。
【０１１９】
19Ｆ ＮＭＲ（２８２ＭＨｚ，ＣＤＣｌ3）δ−２２６．８，−２２７．０，−２２７．２。
【０１２０】
ＬＣ−ＭＳ：Ｃ22Ｈ18ＦＮＯ4に関するｍ／ｚ計算値，３７９．４；実測値，３８０．１（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０１２１】
実施例８：インビボイメージング剤３に対する非放射性標準の合成
実施例８（ｉ）：２−フルオロ−Ｎ−（２，３−ジヒドロベンゾ［１，４］ジオキシニル−５−イルメチル）−Ｎ−（２−フェノキシフェニル）アセトアミド
【０１２２】
【化１８】
ＤＣＭ（２０ｍｌ）中のＮ−（２，３−ジヒドロベンゾ［１，４］ジオキシニル−５−イルメチル）−Ｎ−（２−フェノキシフェニル）アミン（０．５ｇ、１．５ｍｍｏｌ）を、フルオロアセチルクロリド（１６８ｍｇ、１．６５ｍｍｏｌ）及びＴＥＡ（１６８ｍｇ、１．６５ｍｍｏｌ）により０℃で１時間処理した。次いで、反応物をＤＣＭ（５０ｍｌ）で希釈し、２Ｎ塩酸（２０ｍｌ）及び１０％炭酸カリウム水溶液で洗浄した。有機層を分離し、硫酸マグネシウム上で乾燥し、高真空中で濃縮してガム状物にした。ガム状物を、ペトロール中１５〜４０％酢酸エチルの勾配を用いて１２０ｇのシリカカラム上でクロマトグラフィー処理した。主画分を集めることで、２−フルオロ−Ｎ−（２，３−ジヒドロベンゾ［１，４］ジオキシニル−５−イルメチル）−Ｎ−（２−フェノキシフェニル）アセトアミド（０．５３８ｇ、１．４３ｍｍｏｌ、９５％）を得た。
【０１２３】
1Ｈ ＮＭＲ ＣＤＣｌ3中，３００ＭＨｚ，δ３．８−４．１（４Ｈ，Ｍ，ＣＨ2Ｏｘ２），４．６５ ａｎｄ ４．８１（１Ｈ，ｄ，ｄ，ｔｏｇｅｔｈｅｒ ＣＨ2Ｆ），４．８ ａｎｄ ５．１（１Ｈ，ｄ，ｄ，ｔｏｇｅｔｈｅｒ ＣＨ2Ｎ），６．６−７．４，（１２Ｈｍ，ＡｒＨ）。
【０１２４】
13Ｃ ＮＭＲ ＣＤＣｌ3中，７５ＭＨｚ，δ４５．２，６３．７２，６３．８３，７７．４１，７９．７５，１１６．５８，１１９．１６，１２０．４１，１２２．９８，１２３．００，１２４．１６，１２４．３０，１２９．００，１２９．７４，１３０．００，１４１．９１，１４３．０５，１５３．７１，１５５．２３，１６６．４９，１６６．７５。
【０１２５】
実施例９：インビボイメージング剤４に対する非放射性標準の合成
実施例９（ｉ）：Ｎ−（２，２−ジメチル−２，３−ジヒドロベンゾフラン−７−イルメチル）−２−フルオロ−Ｎ−（２−フェノキシフェニル）アセトアミド
【０１２６】
【化１９】
Ｎ−（２，２−ジメチル−２，３−ジヒドロベンゾフラン−７−イルメチル）−Ｎ−（２−フェノキシフェニル）アミン（０．２０ｇ、０．５８ｍｍｏｌ）をＤＣＭ（２ｍＬ）に溶解した溶液に、ＴＥＡ（０．２４ｇ、２．３２ｍｍｏｌ、０．３２ｍＬ）を添加した。反応物を０℃に冷却し、フルオロアセチルクロリド（０．１１ｇ、１．１６ｍｍｏｌ、０．０８ｍＬ）を添加した。混合物を室温で１時間撹拌した。溶媒を真空中で除去し、残留物を水（１０ｍＬ）で奪活し、ＤＣＭ（２×２０ｍＬ）で抽出し、ＭｇＳＯ4上で乾燥し、濾過し、真空中で溶媒を除去した。粗物質をＤＣＭ（Ａ）及びＭｅＯＨ（Ｂ）で溶出するシリカゲルクロマトグラフィー（１％Ｂ、８０ｇ、２ＣＶ、６０ｍＬ／分）によって精製することで、１７０ｍｇ（７２％）のＮ−（２，２−ジメチル−２，３−ジヒドロベンゾフラン−７−イルメチル）−２−フルオロ−Ｎ−（２−フェノキシフェニル）アセトアミドを淡黄色油状物として得た。
1Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ3）δ１．１２（３Ｈ，ｓ，ＣＨ3），１．３０（３Ｈ，ｓ，ＣＨ3），２．８３（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１５Ｈｚ，ＡｒＣＨ），２．９０（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１５Ｈｚ，ＡｒＣＨ），４．５８（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１４Ｈｚ，ＮＣＨ），４．６５（１Ｈ，ｓ，ＦＣＨ），４．８１（１Ｈ，ｓ，ＦＣＨ），５．２２（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１４Ｈｚ，ＮＣＨ），６．６５−７．４０（１２Ｈ，ｍ，ＡｒＨ）。
【０１２７】
19Ｆ ＮＭＲ（２８２ＭＨｚ，ＣＤＣｌ3）δ−２２６．６，−２２６．８，−２２７．０。
【０１２８】
ＬＣ−ＭＳ：Ｃ25Ｈ24ＦＮＯ3に関するｍ／ｚ計算値，４０５．５；実測値，４０６．１（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０１２９】
実施例１０：インビトロ効力アッセイ
Ｌｅ Ｆｕｒ ｅｔ ａｌ（Ｌｉｆｅ Ｓｃｉ．１９８３；ＵＳＡ ３３：４４９−５７）の方法を改変した方法を用いて、ＰＢＲに対する親和性のスクリーニングを行った。試験した化合物は、ＰＢＲ０６及びインビボイメージング剤１〜４であった。
【０１３０】
（１％ＤＭＳＯを含む５０ｍＭトリス−ＨＣｌ、ｐＨ７．４、１０ｍＭ ＭｇＣｌ2に溶解した）各試験化合物を、ウィスター系ラットの心臓ＰＢＲとの結合に関して０．３ｎＭ［3Ｈ］ＰＫ−１１１９５と競合させた。反応は５０ｍＭトリス−ＨＣｌ、ｐＨ７．４、１０ｍＭ ＭｇＣｌ2中において２５℃で１５分間実施した。
【０１３１】
各試験化合物のスクリーニングは、推定Ｋiの周辺の３００倍の濃度範囲にわたる６種の濃度で行った。ＰＢＲ０６及びインビボイメージング剤１〜４に関するＫi値は、それぞれ０．２８ｎＭ、０．３１ｎＭ、２．０３ｎＭ、１．１４ｎＭ及び２．６６ｎＭであることが判明した。
【０１３２】
実施例１１：インビボ体内分布方法
（Ｂｒｉａｒｄ ｅｔ ａｌ，Ｊ Ｍｅｄ Ｃｈｅｍ ２００９；５２：６８８−６９９に従って合成した）ＰＢＲ０６及びインビボイメージング剤１〜３をインビボ体内分布モデルで試験し、それぞれの体内分布を比較した。
【０１３３】
成体雄ウィスター系ラット（２００〜３００ｇ）に、側尾静脈を通して１〜３ＭＢｑの試験化合物を注射した。注射から２分後、１０分後、３０分後又は６０分後（ｎ＝３）に、ラットを安楽死させ、γ線カウンター上での放射能測定のために組織又は体液の試料を採取した。
【０１３４】
図１〜３は、ＯＢへのＰＢＲ０６及びそれぞれインビボイメージング剤１〜３の取込み比を線条体への取込み比と比較して示している。
【０１３５】
実施例１２：代謝アッセイ
試験インビボイメージング剤の注射から６０分後に、成体雄ウィスター系ラット（２００〜３００ｇ）から脳組織試料を採取した。次いで、これらの試料を溶剤抽出（下記参照）によって処理することで、ＨＰＬＣへの導入前に18Ｆ標識母体を18Ｆ標識代謝産物と共に抽出した。
【０１３６】
（小脳＋橋・延髄を除いた）脳を１０ｍｌの氷冷アセトニトリルと共に（５０００ｒｐｍで５分間）ホモジナイズすることで、すべての18Ｆ標識化学種を抽出した。次いで、得られた上澄み液を（４０℃での回転蒸発によって）蒸発乾固し、２．５ｍｌの移動相中に濃縮し、濾過し、１ｍｌをＨＰＬＣに注入した。
【０１３７】
18Ｆ分析用のＨＰＬＣ装置を二重ＢＧＯ放射線＆ＵＶ検出器に連結した。７．８×３００ｍｍ、１０μｍ、１２５Åの寸法を有するμＢｏｎｄａｐａｋ Ｃ１８分取カラムを使用した。３０〜４０％の水及び６０〜７０％のアセトニトリルを用いるイソクラティック溶出系を使用した。流量は３ｍｌ／分であった。各試験インビボイメージング剤ごとに水性相／有機相比を変化させることで、１０分±２分又はその付近の保持時間で母体ピークを得た。
【０１３８】
注射から６０分後において、インタクトな試験化合物を表す脳内放射能の百分率は、ＰＢＲ０６及びインタクトイメージング剤１〜３についてそれぞれ９０％、９３％、９２％及び８２％であった。
【技術分野】
【０００１】
本発明は、インビボイメージング、特に末梢ベンゾジアゼピンレセプター（ＰＢＲ）のインビボイメージングに関する。ナノモル親和性をもってＰＢＲに結合し、投与後には脳内への良好な取込みを示し、ＰＢＲへの良好な選択的結合を示すアリールオキシアニリド系インビボイメージング剤が提供される。本発明はまた、本発明のインビボイメージング剤の合成において有用な前駆体化合物、並びに前記前駆体化合物の使用を含む前記インビボイメージング剤の合成方法及び前記方法を実施するためのキットも提供する。インビボイメージング剤の自動化合成のためのカセットも提供される。加えて本発明は、本発明のインビボイメージング剤を含む放射性医薬組成物並びに前記インビボイメージング剤の使用方法も提供する。
【背景技術】
【０００２】
末梢ベンゾジアゼピンレセプター（ＰＢＲ）は、主として末梢組織及びグリア細胞に局在することが知られているが、その生理学的機能はまだ明確に解明されていない。細胞レベル以下では、ＰＢＲはミトコンドリア外膜上に局在することが知られていて、これはミトコンドリア機能の調節及び免疫系において役割を果たす可能性を表している。さらに、ＰＢＲが細胞増殖、ステロイド生成、カルシウム流れ及び細胞呼吸に関係することも仮定されてきた。ＰＢＲは、急性及び慢性ストレス、不安、うつ病、パーキンソン病、アルツハイマー病、脳損傷、癌（Ｇａｖｉｓｈ ｅｔ ａｌ， Ｐｈａｒｍ Ｒｅｖ １９９９；５１：６２９）、ハンチントン病（Ｍｅｓｓｍｅｒ ａｎｄ Ｒｅｙｎｏｌｄｓ， Ｎｅｕｒｏｓｃｉ Ｌｅｔｔ １９９８；２４１：５３−６）、喘息（Ｐｅｌａｉａ ｅｔ ａｌ， Ｇｅｎ Ｐｈａｒｍａｃｏｌ １９９７；２８（４）：４９５−８）、慢性関節リウマチ（Ｂｒｉｂｅｓ ｅｔ ａｌ， Ｅｕｒ Ｊ Ｐｈａｒｍａｃｏｌ ２００２；４５２（１）：１１１−２２）、アテローム性動脈硬化症（Ｄａｖｉｅｓ ｅｔ ａｌ， Ｊ Ｎｕｃｌ Ｍｅｄ ２００４；４５：１８９８−１９０７）及び多発性硬化症（Ｂａｎａｔｉ ｅｔ ａｌ， Ｂｒａｉｎ ２０００；１２３：２３２１）を始めとする各種の状態と関連していた。ＰＢＲはニューロパシー性疼痛にも関連する可能性があり、Ｔｓｕｄａ ｅｔ ａｌはニューロパシー性疼痛をもった被験者で小グリア細胞の活性化を観察している（ＴＩＮＳ ２００５；２８（２）：１０１−７）。
【０００３】
ＰＢＲ選択性リガンド（Ｒ）−［11Ｃ］ＰＫ１１１９５を用いる陽電子放出断層撮影（ＰＥＴ）イメージングは、中枢神経系（ＣＮＳ）炎症の包括的指標を提供する。（Ｒ）−［11Ｃ］ＰＫ１１１９５の使用の成功にもかかわらず、それには制約がある。それは、高いタンパク質結合性及び低特異的乃至非特異的結合性を有することが知られている。その放射性標識代謝産物の役割は知られておらず、結合の定量化には複雑なモデル化が要求される。ＰＢＲに対して高い親和性及び選択性を有することでＣＮＳにおけるＰＢＲ測定の向上を可能にする化合物を得るための努力が行われてきた。
【０００４】
ＰＢＲに対する高い親和性並びに中枢ベンゾジアゼピンレセプター（ＣＢＲ）に比べてＰＢＲに対する高い選択性を有するアリールオキシアニリン誘導体が提唱された（Ｃｈａｋｉ ｅｔ ａｌ， Ｅｕｒ Ｊ Ｐｈａｒｍａｃｏｌ １９９９；３７１：１９７−２０４）。［11Ｃ］−ＤＡＡ１１０６及び［18Ｆ］−ＦＥ−ＤＡＡ１１０６は、これらのアリールオキシアニリン化合物に基づくＰＥＴ放射性リガンドである。これらのＰＥＴ放射性リガンドは米国特許第６８７００６９号に教示され、ヒトにおいて研究されてきた（Ｉｋｏｍｏ ｅｔ ａｌ， Ｊ Ｃｅｒｅｂ Ｂｌｏｏｄ Ｆｌｏｗ Ｍｅｔａｂ ２００７；２７：１７３−８４及びＦｕｊｉｍｕｒａ ｅｔ ａｌ， Ｊ Ｎｕｃ Ｍｅｄ ２００６；４７：４３−５０）。別の放射性フッ素化ＤＡＡ１１０６誘導体は国際公開第２００７／０７４３８３号に教示されている。別の11Ｃ標識ＤＡＡ１１０６誘導体は国際公開第２００７／０３６７８５号に教示されている。放射性ヨウ素化ＤＡＡ１１０６は、欧州特許出願公開第１８５４７８１号に記載され、またＺｈａｎｇ ｅｔ ａｌ（Ｊ Ｍｅｄ Ｃｈｅｍ ２００７；５０：８４８−５５）によって記載されている。［11Ｃ］−ＤＡＡ１１０６、［18Ｆ］−ＦＥ−ＤＡＡ１１０６及び［123Ｉ］−ＤＡＡ１１０６の化学構造は下記の通りである。
【０００５】
【化１】
しかし、これらの化合物の動力学的性質はインビボイメージングのために理想的でない結果、定量的研究に対するその適用は制限されると考えられる。
【０００６】
さらに最近に至り、ＰＢＲ０６として知られる化合物が、上述の化合物に比べてインビボイメージングのために改善された性質を有することが報告された。この化合物の構造は下記の通りである。
【０００７】
【化２】
末梢において極めて急速に代謝されるものの、ＰＢＲ０６の代謝産物は血液脳関門を通過しない（Ｂｒｉａｒｄ ｅｔ ａｌ， Ｊ Ｍｅｄ Ｃｈｅｍ ２００９；５２：６８８−６９９）。以前の化合物とは対照的に、脳から生じる信号のほぼ全部がインタクトなＰＢＲ０６に由来している。これは、脳内におけるＰＢＲの濃度を正確に測定することを可能にする。したがって、ＰＢＲ０６は有望なインビボイメージング剤と見なされる。
【０００８】
しかし、本明細書中に示されるように、バックグラウンド組織（即ち、線条体）と比較した、相対的に高いＰＢＲ発現を有する組織（即ち、嗅球）中へのＰＢＲ０６取込み量の比はインビボイメージングのために最適とはいえない。また、脳内におけるインタクトな化合物の割合を向上させる余地も存在している。
【０００９】
したがって、ＰＢＲ０６に比べてインビボイメージングのために改善された性質（即ち、ＰＢＲ発現組織における高い特異的取込み及び／又は脳内におけるインタクトな化合物の高い割合）を有する代替インビボイメージング剤に対するニーズが存在している。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００１０】
【特許文献１】米国特許第６８７００６９号
【特許文献２】欧州特許出願公開第１８５４７８１号
【特許文献３】国際公開第２００７／０７４３８３号
【特許文献４】国際公開第２００７／０３６７８５号
【非特許文献】
【００１１】
【非特許文献１】Chaki et al, Eur J Pharmacol 1999; 371: 197-204
【非特許文献２】Ikomo et al, J Cereb Blood Flow Metab 2007; 27: 173-84
【非特許文献３】Fujimura et al, J Nuc Med 2006; 47: 43-50
【非特許文献４】Zhang et al, J Med Chem 2007; 50: 848-55
【非特許文献５】Briard et al, J Med Chem 2009; 52: 688-699
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【００１２】
本発明は、インビボイメージングのために適した新規放射性標識アリールオキシアニリン誘導体を提供する。既知のアリールオキシアニリン誘導体系インビボイメージング剤に比べて、本発明のインビボイメージング剤はインビボイメージングのために一層良好な性質を有する。本発明のインビボイメージング剤は、良好な脳内取込み及び好ましいインビボ動力学を有すると共に、末梢ベンゾジアゼピンレセプター（ＰＢＲ）に対する改善された特異的結合を示す。
【図面の簡単な説明】
【００１３】
【図１】図１は、嗅球（ＯＢ）へのＰＢＲ０６及びインビボイメージング剤１の取込み比を線条体への取込み比と比較して示している。
【図２】図２は、嗅球（ＯＢ）へのＰＢＲ０６及びインビボイメージング剤２の取込み比を線条体への取込み比と比較して示している。
【図３】図３は、嗅球（ＯＢ）へのＰＢＲ０６及びインビボイメージング剤３の取込み比を線条体への取込み比と比較して示している。
【発明を実施するための形態】
【００１４】
イメージング剤
一態様では、本発明は次の式Ｉのインビボイメージング剤を提供する。
【００１５】
【化３】
式中、
Ａ1は−ＣＲ1Ｒ2−（ＣＨ2）n−（式中、Ｒ1及びＲ2は水素、フルオロ及びＣ1-3アルキルから独立に選択され、ｎは０、１又は２である。）であり、
Ａ2は−ＣＨ2−、−Ｏ−又は−Ｏ−ＣＨ2−であり、或いは
−Ａ1−Ａ2は−ＣＨ＝ＣＨ−である。
【００１６】
本発明の文脈中における「インビボイメージング剤」とは、インビボイメージングのために適した放射性標識化合物をいう。本明細書中で使用する「インビボイメージング」という用語は、被験体の内部構造の全部又は一部の画像を非侵襲的に生成する技法をいう。かかるインビボイメージング方法の例は、単光子放出コンピューター断層撮影法（ＳＰＥＣＴ）及び陽電子放出断層撮影法（ＰＥＴ）である。
【００１７】
特記しない限り、単独で又は組み合わせて使用される「アルキル」という用語は、好ましくは１〜３の炭素原子を含む直鎖又は枝分れアルキル基を意味する。かかる基の例には、メチル、エチル及びプロピルがある。
【００１８】
本発明のインビボイメージング剤の例を幾つか挙げると下記の通りである。
【００１９】
【化４】
式ＩのＡ1は、好ましくは−ＣＲ1Ｒ2−（ＣＨ2）n−であり、最も好ましくは−（ＣＨ2）m−（式中、ｍは１、２又は３であり、特に好ましくは１又は２である。）である。式ＩのＡ2は、好ましくは−ＣＨ2−又は−Ｏ−である。特に好ましくは、−Ａ1−Ａ2は−ＣＨ2−ＣＨ2−、−ＣＨ2−Ｏ−及び−ＣＨ2−ＣＨ2−Ｏ−から選択される。本発明の好ましいインビボイメージング剤はインビボイメージング剤１〜４であり、最も好ましくはインビボイメージング剤１〜３であり、特に好ましくはインビボイメージング剤１及び２であり、最も特に好ましくはインビボイメージング剤１である。
【００２０】
実施例１１は、本発明のインビボイメージング剤をＰＢＲ０６と比較するために使用したラット体内分布モデルを記載している。ＯＢ：線条体取込み量をＰＢＲ０６と比較して評価したところ、インビボイメージング剤１は線条体に比べてＯＢ中に比較的多く取り込まれ（本件の図１参照）、インビボイメージング剤２及び３はＰＢＲ０６と同等である（図２及び図３参照）ことが明らかになった。ＯＢはラット脳の他の領域に比べて高いレベルのＰＢＲを発現することが知られているので（“Ｈａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ Ｓｕｂｓｔａｎｃｅ Ａｂｕｓｅ”ｂｙ Ｔａｒｔｅｒ， Ａｍｍｅｒｍａｎ ａｎｄ Ｏｔｔ；Ｓｐｒｉｎｇｅｒ １９９８：３９８−９９を参照されたい）、ＯＢ：線条体比は試験化合物取込みの特異性の尺度である。
【００２１】
実施例１２は、注射から６０分後におけるラット脳内のインタクトな試験インビボイメージング剤の量を評価するために使用したアッセイを記載している。インビボイメージング剤１〜４は、ＰＢＲ０６と同じ好ましい代謝プロファイルを示した。即ち、注射から６０分後における脳内の高率の放射能はインタクトな試験化合物であることがわかった。インビボイメージング剤１及び２は、ＰＢＲ０６に比べ、注射から６０分後において脳内に一層高率のインタクトな化合物を有することがわかった。
【００２２】
本発明のインビボイメージング剤は、既知のかかる薬剤に比べて、ＰＢＲのインビボイメージングのための優れた性質を有することが本明細書中に示される。
【００２３】
製造方法
さらに別の態様では、本発明は、本明細書中に記載したインビボイメージング剤の製造方法であって、18Ｆの適当な供給源を次の式ＩＩの前駆体化合物と反応させる段階を含む方法を提供する。
【００２４】
【化５】
式中、Ａ1及びＡ2は式Ｉのインビボイメージング剤に関して本明細書中に好適なもの及び好ましいものとして定義した通りであり、ＬＧは脱離基である。
【００２５】
「前駆体化合物」は、好都合な化学形態の18Ｆとの化学反応が部位特異的に起こり、最小数の段階（理想的にはただ１つの段階）で反応を実施でき、かつ格別の精製の必要なしに（理想的にはいかなる追加の精製も必要なしに）所望のインビボイメージング剤が得られるように設計された、インビボイメージング剤の非放射性誘導体からなる。かかる前駆体化合物は合成品であり、良好な化学純度で簡便に得ることができる。
【００２６】
「18Ｆの適当な供給源」という用語は、18Ｆが共有結合することで所望のインビボイメージング剤を生成するようにして前駆体化合物の置換基と反応し得る化学形態の18Ｆを意味する。
【００２７】
概して言えば、前駆体化合物を前記18Ｆの適当な供給源と「反応」させる段階は、できるだけ高い放射化学収率（ＲＣＹ）で所望のインビボイメージング剤を生成するのに適した反応条件下で２種の反応体を合わせることを含んでいる。幾つかの一層詳細な経路を以下の実験セクションに示す。
【００２８】
「脱離基」という用語は、ヘテロリティック結合開裂において１対の電子と共に分子から脱離し、通常は求核基で置き換えられる原子又は原子団をいう。脱離基は陰イオン又は中性分子であり得る。好ましい脱離基（ＬＧ）は下記に記載する。
【００２９】
Ｏｋｕｂｏ ｅｔ ａｌ（２００４ Ｂｉｏｏｒｇ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．；１２：４２３−３８）は、非放射性アリールオキシアニリド化合物を得るための方法を記載している。アリールオキシアニリド化合物を得るための合成スキームはまた、Ｂｒｉａｒｄ ｅｔ ａｌ（Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．２００８；５１：１７−３１）、Ｗｉｌｓｏｎ ｅｔ ａｌ（Ｎｕｃ．Ｍｅｄ．Ｂｉｏｌ．２００８；３５：３０５−１４）、及びＺｈａｎｇ ｅｔ ａｌ（Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．２００７；５０：８４８−５５）によっても記載されている。これらの先行技術方法は、式ＩＩの前駆体化合物を得るために容易に適合させることができる。
【００３０】
下記のスキーム１は、非放射性標準、及び本発明のインビボイメージング剤を製造するのに適した前駆体化合物を得るための一般反応スキームである。
【００３１】
【化６】
上記反応スキーム中、ＬＧは本明細書中で定義される脱離基であり、Ｒ*は上記式Ｉ及び式ＩＩの両方に含まれるようなＡ環を含む縮合二環式環構造を表している。商業的に入手可能な２−ニトロビフェニルエーテル（ａ）中のニトロ基を水素化によって還元することで、対応するアニリン（ｂ）が得られる。芳香族アルデヒド（ｃ）での還元アルキル化によってベンジルアミン（ｄ）が得られる。適当なアセチル（ｅ）と反応させれば、所望の非放射性標準及び前駆体化合物が得られる。
【００３２】
18Ｆによる標識は、式ＩＩの前駆体化合物からの脱離基ＬＧの求核置換によって達成できる。好ましい脱離基（ＬＧ）には、クロリド、ブロミド、ヨージド、トシレート、メシレート及びトリフレートがあり、ブロミド及びトシレートが最も好ましい。式ＩＩの前駆体化合物は、18Ｆの適当な供給源を［18Ｆ］−フッ化物イオンとする一段階で標識できる。放射性フッ素化反応用の［18Ｆ］−フッ化物イオン（18Ｆ-）は、通常は核反応18Ｏ（ｐ，ｎ）18Ｆから水溶液として得られ、次いでカチオン対イオンの添加及びそれに続く水の除去によって反応性にされる。好適なカチオン性対イオンは、無水反応溶媒中において、18Ｆ-の溶解性を維持するのに十分な溶解度を有するべきである。したがって、使用されてきた対イオンには、ルビジウム又はセシウムのような大きいが軟らかい金属イオン、Ｋｒｙｐｔｏｆｉｘ（商標）のようなクリプタンドと錯体化したカリウム、或いはテトラアルキルアンモニウム塩がある。好ましい対イオンは、無水溶媒中での溶解性が良く、18Ｆ-の反応性を向上させることから、Ｋｒｙｐｔｏｆｉｘ（商標）のようなクリプタンドと錯体化したカリウムである。好ましい対イオンは、無水溶媒中での溶解性が良く、18Ｆ-の反応性を向上させることから、Ｋｒｙｐｔｏｆｉｘ（商標）のようなクリプタンドと錯体化したカリウムである。
【００３３】
放射性フッ素化が特定の部位で起こることを保証するため、前駆体化合物は選択的に化学保護することが必要となる場合がある。保護基は上記に記載されている。
【００３４】
前駆体化合物は、理想的には無菌で非発熱性の形態で供給される。したがってそれは、インビボイメージング剤を哺乳動物への投与に適した生体適合性キャリヤーと共に含む医薬組成物の製造のために使用できる。前駆体化合物はまた、かかる医薬組成物を製造するためのキット中に一成分として含めるためにも適している。
【００３５】
好ましい実施形態では、前駆体化合物はキット又は自動化合成装置で使用するように設計されたカセットの一部として溶液状態で供給される。これらの態様は、本発明の追加の態様に関連して以下に一層詳しく論議される。
【００３６】
別の好ましい実施形態では、前駆体化合物は固相に結合されている。前駆体化合物は、好ましくは固体担体マトリックスに共有結合した状態で供給される。このようにすれば、所望の生成物は溶液状態で生成される一方、出発原料及び不純物は固相に結合したままに保たれる。かかる系の例としては、18Ｆ−フッ化物による固相求電子フッ素化用の前駆体化合物が国際公開第０３／００２４８９号に記載されており、18Ｆ−フッ化物による固相求核フッ素化用の前駆体化合物が国際公開第０３／００２１５７号に記載されている。
【００３７】
好ましくは、本発明の方法は実施の容易性のために自動化される。
【００３８】
前駆体化合物
本発明の方法に関連して上記に好適なもの及び好ましいものとして記載された前駆体化合物は、それ自体が本発明の追加の態様をなしている。
【００３９】
放射性医薬組成物
さらに別の態様では、本発明は「放射性医薬組成物」を提供し、これは本発明のインビボイメージング剤を哺乳動物への投与に適した形態の生体適合性キャリヤーと共に含んでいる。
【００４０】
「生体適合性キャリヤー」は、放射性医薬組成物が生理学的に認容され得るようにして（即ち、毒性又は過度の不快感なしに哺乳動物体に投与できるようにして）インビボイメージング剤を懸濁又は溶解するための流体（特に液体）である。生体適合性キャリヤーは、好適には、無菌のパイロジェンフリー注射用水、（有利には注射用の最終生成物が等張性又は非低張性になるように平衡させ得る）食塩水のような水溶液、或いは１種以上の張度調整物質（例えば、血漿陽イオンと生体適合性対イオンとの塩）、糖（例えば、グルコース又はスクロース）、糖アルコール（例えば、ソルビトール又はマンニトール）、グリコール（例えば、グリセロール）又は他の非イオン性ポリオール物質（例えば、ポリエチレングリコール、プロピレングリコールなど）の水溶液のような注射可能なキャリヤー液体である。生体適合性キャリヤーはまた、エタノールのような生体適合性有機溶媒を含んでいてもよい。かかる有機溶媒は、親油性の高い化合物又は配合物を可溶化するために有用である。好ましくは、生体適合性キャリヤーはパイロジェンフリー注射用水、等張食塩水又はエタノール水溶液である。静脈内注射用生体適合性キャリヤーのｐＨは好適には４．０〜１０．５の範囲内にある。
【００４１】
本発明の放射性医薬組成物中に含まれる場合におけるインビボイメージング剤の好適な実施形態及び好ましい実施形態は、上記に記載した通りである。
【００４２】
かかる放射性医薬組成物は非経口的に（即ち、注射によって）投与でき、最も好ましくは水溶液である。かかる組成物は、緩衝剤、薬学的に許容される可溶化剤（例えば、シクロデキストリン或いはＰｌｕｒｏｎｉｃ、Ｔｗｅｅｎ又はリン脂質のような界面活性剤）、薬学的に許容される安定剤又は酸化防止剤（例えば、アスコルビン酸、ゲンチジン酸又はｐ−アミノ安息香酸）のような追加成分を任意に含み得る。本発明のインビボイメージング剤が放射性医薬組成物として提供される場合、前記インビボイメージング剤の製造方法はさらに、放射性医薬組成物を得るために必要な段階（例えば、有機溶媒の除去、生体適合性緩衝剤及び任意の追加成分の添加）を含むことができる。
非経口的投与のためには、放射性医薬組成物が無菌性かつ無発熱原性であることを保証するための手段を講じることも必要である。
【００４３】
キット及びカセット
好ましい実施形態では、本発明のインビボイメージング剤の製造方法は、キット又は自動化合成装置に挿入し得るカセットを用いて実施できる。これらのキット及びカセットはまた、本発明の追加の態様をなしており、本明細書中に定義された本発明の放射性医薬組成物の製造のため特に好都合である。
【００４４】
本発明のキットは、本発明の前駆体化合物を密封容器内に含んでいる。「密封容器」は、好ましくは、注射器による溶液の追加及び抜取りを許しながら、無菌保全性及び／又は放射能安全性の維持、さらに任意には不活性ヘッドスペースガス（例えば、窒素又はアルゴン）の維持を可能にする。好ましい密封容器は、気密クロージャーを（通例はアルミニウムからなる）オーバーシールと共にクリンプ加工した隔壁密封バイアルである。かかる密封容器は、例えばヘッドスペースガスの変更又は溶液のガス抜きのために所望される場合、クロージャーが真空に耐え得るという追加の利点を有している。
【００４５】
本発明のキット中に使用する場合、前駆体化合物の好適な実施形態及び好ましい実施形態は、本明細書中に既に記載した通りである。
【００４６】
キット中に使用するための前駆体化合物を無菌製造条件下で使用すれば、所望の無菌で非発熱性の材料を得ることができる。別法として、前駆体化合物を非無菌条件下で使用し、続いて例えばγ線照射、オートクレーブ処理、乾熱又は（例えば、エチレンオキシドによる）化学処理を用いる終末滅菌を施すこともできる。好ましくは、前駆体化合物は無菌で非発熱性の形態で供給される。最も好ましくは、無菌で非発熱性の前駆体化合物は上述のような密封容器に入れて供給される。
【００４７】
好ましくは、試験間での汚染の可能性を最小限に抑えると共に無菌性及び品質保証を確実にするため、キットのすべての構成要素が使い捨てである。
【００４８】
別の態様では、本発明は、本発明のインビボイメージング剤を合成するため適宜に改造された自動化合成装置に挿入し得るカセットを提供する。現在、特に［18Ｆ］−ラジオトレーサーはしばしば自動化放射合成装置で簡便に製造されている。かかる装置には、Ｔｒａｃｅｒｌａｂ（商標）及びＦａｓｔｌａｂ（商標）（いずれもＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ社から入手可能）を始めとするいくつかの市販例が存在している。放射化学は、カセットを装置に取り付けることにより、自動化合成装置上で実施される。普通、カセットは流体通路、反応器、及び試薬バイアル並びに放射合成後の清掃段階で使用される任意の固相抽出カートリッジを受け入れるためのポートを含んでいる。
【００４９】
本発明のインビボイメージング剤の自動化合成のためのカセットは、
（ｉ）本明細書中に定義した前駆体化合物を含む容器、及び
（ｉｉ）本明細書中に定義したような18Ｆの適当な供給源を用いて容器を溶出するための手段
を含んでいる。
【００５０】
かかるカセットはさらに、
（ｉｉｉ）過剰の18Ｆを除去するためのイオン交換カートリッジ、及び任意には
（ｉｖ）得られた放射性標識生成物を脱保護して本明細書中に定義したインビボイメージング剤を生成するためのカートリッジ
を含むことができる。
【００５１】
自動化合成のために必要な試薬、溶媒及び他の消耗品もまた、濃度、体積、送出時間などに関する最終ユーザーの要求条件を満たすように自動化合成装置を運転させるソフトウェアを保持したコンパクトディスクのようなデータ媒体と共に含めることができる。
【００５２】
使用方法
さらに別の態様では、本発明は、被験体におけるＰＢＲ発現の分布及び／又は程度を決定するためのインビボイメージング方法であって、
（ｉ）本明細書中に定義したインビボイメージング剤を前記被験体に投与する段階、
（ｉｉ）前記インビボイメージング剤を前記被験体内のＰＢＲに結合させる段階、
（ｉｉｉ）前記インビボイメージング剤の18Ｆから放出される信号をインビボイメージング技法によって検出する段階、
（ｉｖ）前記信号の位置及び／又は量を表す画像を生成する段階、並びに
（ｖ）前記被験体におけるＰＢＲ発現の分布及び程度を決定する段階であって、前記発現は前記18Ｆから放出される前記信号と直接に相関している段階
を含むインビボイメージング方法を提供する。
【００５３】
本発明のインビボイメージング方法に関しては、インビボイメージング剤の好適な態様及び好ましい態様は本明細書中において前記に定義した通りである。
【００５４】
インビボイメージング剤を「投与する」段階は、好ましくは非経口的に実施され、最も好ましくは静脈内に実施される。静脈内経路は、インビボイメージング剤を被験体の身体全域に送達するため、したがって血液脳関門（ＢＢＢ）を横切って前記被験体で発現されたＰＢＲに接触させるための最も効率的な方法である。本発明のインビボイメージング剤は、好ましくは本明細書中に定義された本発明の医薬組成物として投与される。別の実施形態では、投与段階はインビボイメージング方法自体に先立って実施される予備段階としても理解できる結果、段階（ｉ）はインビボイメージング剤を予め投与した被験体を用意する段階として定義できる。
【００５５】
投与段階後かつ検出段階前に、インビボイメージング剤をＰＢＲに結合させる。例えば、被験体がインタクトな哺乳動物である場合、インビボイメージング剤は哺乳動物の身体を通って動的に移動し、体内の様々な組織に接触する。ひとたびインビボイメージング剤がＰＢＲに接触すれば、特異的な相互作用が起こる結果、ＰＢＲをもった組織からのインビボイメージング剤のクリアランスは、ＰＢＲをもたない組織又はＰＢＲの少ない組織よりも長い時間がかかる。一定の時点に達すれば、ＰＢＲをもった組織に結合したインビボイメージング剤とＰＢＲをもたない組織又はＰＢＲの少ない組織に結合したインビボイメージング剤との比の結果として、ＰＢＲに特異的に結合したインビボイメージング剤の検出が可能となる。理想的には、この比は２：１以上である。
【００５６】
本発明の方法の「検出」段階は、18Ｆから放出される信号を、陽電子放出断層撮影（ＰＥＴ）検出器によって検出することを含んでいる。この検出段階はまた、信号データの取得として理解することもできる。
【００５７】
本発明の方法の「生成」段階は、取得された信号データに再構築アルゴリズムを適用してデータセットを得るコンピューターによって実施される。次いで、このデータセットを操作することで、前記18Ｆから放出される信号の位置及び／又は量を示す画像が生成される。放出される信号はＰＢＲの発現と直接に相関する結果、生成された画像を評価することで「決定」段階を行うことができる。
【００５８】
本発明の「被験体」は、任意のヒト又は動物被験体であり得る。好ましくは、本発明の被験体は哺乳動物である。最も好ましくは、前記被験体はインタクトな哺乳動物生体である。特に好ましい実施形態では、本発明の被験体はヒトである。本インビボイメージング方法は、健常被験体或いはＰＢＲの異常発現に関連する病的状態（「ＰＢＲ状態」）を有することが知られ又は疑われる被験体においてＰＢＲを検査するために使用できる。本発明のインビボイメージング剤は、中枢神経系（ＣＮＳ）におけるＰＢＲ発現のインビボイメージングに特に適している。
【００５９】
別の実施形態では、本発明のインビボイメージング方法は前記被験体に関する治療計画の進行中に繰り返して実施することができ、前記計画はＰＢＲ状態と戦うための薬物の投与を含んでいる。例えば、本発明のインビボイメージング方法は、ＰＢＲ状態と戦うための薬物による治療前、治療中及び治療後に実施できる。このようにすれば、前記治療の効果を経時的にモニターすることができる。この実施形態のためにはＰＥＴイメージングが特に適している。ＰＥＴは優れた感度及び分解能を有する結果、病変部における比較的小さい変化でも経時的に観察でき、これは治療モニタリングのために有利である。ＰＥＴスキャナーは、日常的にピコモル範囲内の放射能濃度を測定している。現在、マイクロＰＥＴスキャナーは約１ｍｍの空間分解能に接近しているが、臨床スキャナーは約４〜５ｍｍである。
【００６０】
好ましくは、前記方法はＰＢＲ状態を有することが知られ又は疑われる被験体のインビボイメージングに関し、したがって前記状態の診断方法の一部として有用である。したがって、本発明のインビボイメージング方法は、前記被験体がＰＢＲ状態に罹患しているか否かを診断するためにＰＢＲ発現の分布及び程度を帰因させる追加段階（ｖｉ）を含み得る。インビボイメージングが役に立つかかるＰＢＲ状態の例には、神経炎症が存在するパーキンソン病、多発性硬化症、アルツハイマー病及びハンチントン病のような神経疾患がある。本発明の化合物によるイメージングが有用であり得る他のＰＢＲ状態には、ニューロパシー性疼痛、関節炎、喘息、アテローム性動脈硬化症、特に限定されないが結腸直腸癌及び乳癌を含む一連の悪性疾患、並びに特に限定されないが双極性障害、統合失調症、不安及び外傷後ストレス障害を含む一連の気分障害がある。
【００６１】
別の態様では、本発明は、本明細書中に好適なもの及び好ましいものとして定義したインビボイメージング方法で使用するための、本明細書中に定義したインビボイメージング剤を提供する。
【００６２】
さらに別の態様では、本発明は、本明細書中に好適なもの及び好ましいものとして定義したインビボイメージング方法で使用するための本明細書中に定義した放射性医薬組成物を製造するための、本明細書中に定義したインビボイメージング剤を提供する。
【実施例】
【００６３】
以下、一連の非限定的な実施例によって本発明を例示する。
【００６４】
実施例の簡単な説明
実施例１は、インビボイメージング剤１用の直接標識前駆体化合物の合成法を記載している。
【００６５】
実施例２は、インビボイメージング剤２用の直接標識前駆体化合物の合成法を記載している。
【００６６】
実施例３は、インビボイメージング剤３用の直接標識前駆体化合物の合成法を記載している。
【００６７】
実施例４は、インビボイメージング剤４用の直接標識前駆体化合物の合成法を記載している。
【００６８】
実施例５は、インビボイメージング剤１〜４を得るために使用した放射性フッ素化方法を記載している。
【００６９】
実施例６は、インビボイメージング剤１に対する非放射性標準の合成法を記載している。
【００７０】
実施例７は、インビボイメージング剤２に対する非放射性標準の合成法を記載している。
【００７１】
実施例８は、インビボイメージング剤３に対する非放射性標準の合成法を記載している。
【００７２】
実施例９は、インビボイメージング剤４に対する非放射性標準の合成法を記載している。
【００７３】
実施例１０は、ＰＢＲに対する本発明のイメージング剤の非放射性標準の親和性を評価するために使用したインビトロアッセイを記載している。
【００７４】
実施例１１は、静脈内投与後における本発明のイメージング剤の体内分布を測定するために使用した動物モデルを記載している。
【００７５】
実施例１２は、静脈内投与後における本発明のイメージング剤の代謝を評価するために使用したアッセイを記載している。
【００７６】
実施例中で使用される略語のリスト
℃ 摂氏度
ａｑ 水性
ＢＧＯ ゲルマニウム酸ビスマス
ＤＣＭ ジクロロメタン
ＤＭＦ ジメチルホルムアミド
ＤＭＳＯ ジメチルスルホキシド
ＥｔＯＡｃ 酢酸エチル
ｇ グラム
ｈ 時間
Ｋi 半最大阻害のために必要な化合物の濃度
ＭＢｑ メガベクレル
ｍｇ ミリグラム
ｍｉｎ 分
ｍｌ ミリリットル
ｍＭ ミリモル濃度
ｍｍｏｌ ミリモル
ｎ 実験回数
ＮＭＲ 核磁気共鳴
ＰＢＲ 末梢ベンゾジアゼピンレセプター
ｒｐｍ 毎分回転数
ＴＥＡ トリエチルアミン
ＴＬＣ 薄層クロマトグラフィー
Ｔｒｉｓ トリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン
ＵＶ 紫外
実施例１：インビボイメージング剤１用の直接標識前駆体の合成
実施例１（ｉ）：２−アミノジフェニルエーテル
【００７７】
【化７】
メタノール（２５０ｍｌ）中の２−ニトロジフェニルエーテル（１６ｇ、７４ｍｍｏｌ）を木炭上のパラジウム（１．６ｇ）と共に水素雰囲気下で２０〜５０℃で３０分間振盪した。急速な水素の吸収があり、２０〜５０℃の検出可能な発熱の結果として温度が急速に上昇し、次いで低下した。温度が５０℃を超えて上昇するのを抑えるため、振盪を短時間停止した。次いで、反応物をセライトで濾過し、高真空中で濃縮することで、２−アミノジフェニルエーテルを油状物（１３．５ｇ、７２．９ｍｍｏｌ、９８％）として得たが、これは静置後に結晶化して淡黄色の固体を与えた。
【００７８】
1Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3）３００ＭＨｚ δ３．８２（２Ｈ，ｂｒｍ，ＮＨ2），６．７−７．１（７Ｈ，ｍ，ＡｒＨ）７．３３（２Ｈ，ｍ，ＡｒＨ）。
【００７９】
13Ｃ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3）７５ＭＨｚ δ１１６．４１，１１７．０３，１１８．７０（２Ｃ），１２０．２２，１２２．５７，１２４．８５，１２９．６５（２Ｃ），１３８．７０，１４２．９７，１５７．４３。
【００８０】
実施例１（ｉｉ）：Ｎ−（２，３−ジヒドロベンゾフラン−７−イルメチル）−Ｎ−（２−フェノキシフェニル）アミン
【００８１】
【化８】
２−アミノジフェニルエーテル（１ｇ、５．４ｍｍｏｌ）を２，３−ジヒドロベンゾフラン−７−カルバルデヒド（１ｇ、７．０２ｍｍｏｌ）及びトルエン（１０ｍｌ）で処理し、激しく撹拌しながら窒素雰囲気下で４時間加熱還流した。溶液は黄色で均質になった。次いで、反応物を真空中で濃縮してトルエンを除去し、０℃に冷却し、メタノール（１５ｍｌ）で希釈、水素化ホウ素ナトリウム（６１２ｍｇ、１６ｍｍｏｌ）を少量ずつ２０分かけて添加して処理した。次いで、反応物を室温まで放温し、さらに３０分間撹拌した。２Ｎ塩酸（５ｍｌ）を添加し、反応物をさらに３０分間撹拌した。次いで、反応物を真空中で濃縮してガム状物にし、１０％炭酸カリウム水溶液（５０ｍｌ）を添加した。次いで、酢酸エチル（５０ｍｌ）中への抽出によって生成物を回収し、抽出液を硫酸マグネシウム上で乾燥し、真空中で濃縮してガム状物にした。ガム状物を、ペトロール中１０〜３０％酢酸エチルの勾配を用いて１２０ｇのシリカカラム上でクロマトグラフィー処理した。主たる急速流出画分であるＮ−（２，３−ジヒドロベンゾフラン−７−イルメチル）−Ｎ−（２−フェノキシフェニル）アミンをガム状物（１．２８２４ｇ、４．０４ｍｍｏｌ、７４．９％）として集めたが、これは静置後に結晶化した。
【００８２】
1Ｈ ＮＭＲ ＣＤＣｌ3 ３００ＭＨｚ，δ３．１９（２Ｈ，ｔ，ＣＨ2Ｐｈ），４．３５（２Ｈ，ｓ，ＣＨ2Ｎ）４．５１（２Ｈ，ｔ，ＣＨ2Ｏ）４．８７（１Ｈ，ｂｒｓ，ＮＨ），６．６，−７．３１（１２Ｈ，ｍＡｒＨ）。
【００８３】
13Ｃ ＮＭＲ ＣＤＣｌ3，７５ＭＨｚ δ２９．６９，４２．６３，７１．１１，１１２．０１，１１６．８２，１１７．２７，１１９．３４，１２０．３１，１２２．４８，１２３．６４，１２６．９６，１２９．５５，１４０．５０，１４３．０７，１５７．７１，１５７．８３。
【００８４】
実施例１（ｉｉｉ）：２−ブロモ−Ｎ−（２，３−ジヒドロフラン−７−イルメチル）−Ｎ−（２−フェノキシフェニル）アセトアミド
【００８５】
【化９】
ジクロロメタン（１０ｍｌ）中のＮ−（２，３−ジヒドロベンゾフラン−７−イルメチル）−Ｎ−（２−フェノキシフェニル）アミン（０．５ｇ、１．５７ｍｍｏｌ）を０℃に冷却し、ブロモアセチルクロリド（２７２ｍｇ、１．７３ｍｍｏｌ）及びトリエチルアミン（１７５ｍｇ、１．７３ｍｍｏｌ）で処理し、窒素雰囲気下で１時間撹拌した。反応物をジクロロメタン（５０ｍｌ）で希釈し、５Ｎ塩酸（２０ｍｌ）で洗浄してトリエチルアミンを除去し、炭酸カリウム水溶液（２０ｍｌ）で洗浄して過剰のブロモアセチルクロリドを除去した。有機層を分離し、硫酸マグネシウム上で乾燥し、高真空中で濃縮して２−ブロモ−Ｎ−（２，３−ジヒドロフラン−７−イルメチル）−Ｎ−（２−フェノキシフェニル）アセトアミド（６６１ｍｇ、１．５１ｍｍｏｌ、９６％）を得た。
【００８６】
1Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3）３００ＭＨｚ，δ３．０６（２Ｈ，ｍ，ＣＨ2Ｐｈ），３．８（２Ｈ，ｄ，ｄＣＨ2Ｏ），４．２−４．４（２Ｈ，ｄ，ｑ，ＣＨ2Ｂｒ）４．７，（１Ｈ，ｄ，ＣＨＮ），５．１２，（１Ｈ，ｄ，ＣＨＮ），６．６２−７．３２（１２Ｈ，ｍ，ＡｒＨ）。
【００８７】
13Ｃ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3）７５ＭＨｚ δ２７．８１，２９．６８，４６．７８，７０．８９，１１８．０４，１１９．３６，１２０．２６，１２３．０６，１２４．１３，１２４．１７，１２９．８２，１５３．４８，１５５．５９，１５８．５５，１６６．６４。
【００８８】
実施例２：インビボイメージング剤２用の直接標識前駆体の合成
実施例２（ｉ）：Ｎ−（ベンゾ［１，３］ジオキソール−４−イルメチル）−Ｎ−（２−フェニルオキシ−フェニル）アミン
【００８９】
【化１０】
２−フェノキシ−フェニルアミン（４１０ｍｇ、２．２２ｍｍｏｌ）と２，３−（メチレンジオキシ）ベンズアルデヒド（５００ｍｇ、３．３３ｍｍｏｌ）との混合物を窒素下において９０℃で２時間加熱した。反応物を０℃に冷却し、ＭｅＯＨ（４ｍＬ）を添加し、続いてＮａＢＨ4（２５３ｍｇ、６．７０ｍｍｏｌ）を少量ずつ２０分かけて添加した。混合物を室温で２４時間撹拌した。ギ酸（０．４ｍＬ）を添加し、混合物を１５分間撹拌した。溶媒を真空中で除去し、残留物を飽和ＮａＨＣＯ3水溶液（５０ｍＬ）で奪活し、ＤＣＭ（２×３０ｍＬ）で抽出し、ＭｇＳＯ4上で乾燥し、濾過し、真空中で溶媒を除去した。粗物質を石油スピリット（Ａ）及び酢酸エチル（Ｂ）で溶出するシリカゲルクロマトグラフィー（５％Ｂ、８０ｇ、４．０ＣＶ、６０ｍＬ／分）によって精製することで、３６０ｍｇ（５１％）のＮ−（ベンゾ［１，３］ジオキソール−４−イルメチル）−Ｎ−（２−フェニルオキシ−フェニル）アミンを白色固体として得た。
【００９０】
1Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ3）δ４．３５（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝５．２Ｈｚ，ＡｒＣＨ2），４．６６（１Ｈ，ｓ，ＮＨ），５．８８（２Ｈ，ｓ，ＯＣＨ2Ｏ），６．６０−７．１０（１０Ｈ，ｍ，ＡｒＨ），７．２４−７．３４（２Ｈ，ｍ，ＡｒＨ）。
【００９１】
実施例２（ｉｉ）：Ｎ−（ベンゾ［１，３］ジオキソール−４−イルメチル）−２−ブロモ−Ｎ−（２−フェニルオキシ−フェニル）アセトアミド
【００９２】
【化１１】
Ｎ−（ベンゾ［１，３］ジオキソール−４−イルメチル）−Ｎ−（２−フェニルオキシ−フェニル）アミン（０．１８ｇ、０．５８ｍｍｏｌ）をＤＣＭ（４ｍＬ）に溶解した溶液に、トリエチルアミン（０．２４ｇ、２．３２ｍｍｏｌ、０．３２ｍＬ）を添加した。反応物を０℃に冷却し、ブロモアセチルクロリド（０．１８ｇ、１．１６ｍｍｏｌ、０．１０ｍＬ）を添加した。混合物を室温で２時間撹拌した。ＬＣ−ＭＳは、出発原料及び生成物（１：１）を示した。さらに、トリエチルアミン（０．２４ｇ、２．３２ｍｍｏｌ、０．３２ｍＬ）及びブロモアセチルクロリド（０．１８ｇ、１．１６ｍｍｏｌ、０．１０ｍＬ）を添加し、室温で２時間撹拌した。溶媒を真空中で除去し、残留物を水（１０ｍＬ）で奪活し、ＤＣＭ（２×２０ｍＬ）で抽出し、ＭｇＳＯ4上で乾燥し、濾過し、真空中で溶媒を除去した。粗物質をＤＣＭ（Ａ）及びＭｅＯＨ（Ｂ）で溶出するシリカゲルクロマトグラフィー（１％Ｂ、８０ｇ、２ＣＶ、６０ｍＬ／分）によって精製した。不純な生成物をＤＣＭ（Ａ）及びＥｔＯＡｃ（Ｂ）で溶出するシリカゲルクロマトグラフィー（１〜５％Ｂ、８０ｇ、４．５ＣＶ、６０ｍＬ／分）によってさらに精製することで、１２０ｍｇ（４７％）のＮ−（ベンゾ［１，３］ジオキソール−４−イルメチル）−２−ブロモ−Ｎ−（２−フェニルオキシ−フェニル）アセトアミドを無色油状物として得た。
【００９３】
1Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ3）δ３．７６（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１１Ｈｚ，ＢｒＣＨ），３．８２（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１１Ｈｚ，ＢｒＣＨ），４．７２（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１４Ｈｚ，ＡｒＣＨ），５．１３（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１４Ｈｚ，ＡｒＣＨ），５．６３（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１Ｈｚ，ＯＣＨＯ），５．７９（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１Ｈｚ，ＯＣＨＯ），６．６５−７．４０（１２Ｈ，ｍ，ＡｒＨ）。
【００９４】
ＬＣ−ＭＳ：Ｃ22Ｈ18ＢｒＮＯ4に関するｍ／ｚ計算値，４４０．３；実測値，４４１．９（Ｍ＋Ｈ）＋。
【００９５】
実施例３：インビボイメージング剤３用の直接標識前駆体の合成
実施例３（ｉ）：Ｎ−（２，３−ジヒドロベンゾ［１，４］ジオキシニル−５−イルメチル）−Ｎ−（２−フェノキシフェニル）アミン
【００９６】
【化１２】
２−アミノジフェニルエーテル（１ｇ、５．４ｍｍｏｌ）を２，３−ジヒドロベンゾ［１，４］ジオキシニル−５−アルデヒド（８８５ｍｇ、５．４ｍｍｏｌ）及びトルエン（１０ｍｌ）で処理し、激しく撹拌しながら窒素雰囲気下で４時間加熱還流した。溶液は黄色で均質になった。次いで、反応物を真空中で濃縮してトルエンを除去し、０℃に冷却し、メタノール（２５ｍｌ）で希釈、絶えず撹拌しながら水素化ホウ素ナトリウム（１ｇ、ペレット）で処理した。次いで、反応物を一晩かけて室温まで放温したところ、白色の結晶質固体が析出した。濾過によって集めた固体は、Ｎ−（２，３−ジヒドロベンゾ［１，４］ジオキシニル−５−イルメチル）−Ｎ−（２−フェノキシフェニル）アミン（１．１２８ｇ、３．５６ｍｍｏｌ、６６％）であった。
【００９７】
1Ｈ ＮＭ ＲＣＤＣｌ3 ３００ＭＨｚ，δ４．１６，（４Ｈ，ｓ，ＣＨ2−Ｏｘ２），４．３５（２Ｈ，ｄ，ＣＨ2Ｎ），４．６８（１Ｈ，ｔ，ＮＨ），６．６−７．１（１０Ｈ，ｍＡｒＨ），７．２９，（２Ｈ，ｔ，ＡｒＨ）。
【００９８】
13Ｃ ＮＭＲ ＣＤＣｌ3，７５ＭＨｚ，δ４２．６，６４．０６，６４．２１，１１２．１８，１１６．２５，１１７．０９，１１９．５７，１２０．６２，１２０．７９，１２４．９７，１２８．００，１２９．５８，１４０．５５，１４１．００，１４２．９７，１４３．３３，１５７．７８。
【００９９】
実施例３（ｉｉ）：Ｎ−（２，３−ジヒドロベンゾ［１，４］ジオキシニル−５−イルメチル）−２−ブロモ−Ｎ−（２−フェノキシフェニル）アセトアミド
【０１００】
【化１３】
ジクロロメタン（２０ｍｌ）中のＮ−（２，３−ジヒドロベンゾ［１，４］ジオキシン−５−イルメチル）−Ｎ−（２−フェノキシフェニル）アミン（純粋）（０．５ｇ、１．５ｍｍｏｌ）を、ブロモアセチルクロリド（２５９ｍｇ、１．６５ｍｍｏｌ）及びトリエチルアミン（１６８ｍｇ、１．６５ｍｍｏｌ）により０℃で１時間処理した。次いで、反応物をジクロロメタン（５０ｍｌ）で希釈し、２Ｎ塩酸（２０ｍｌ）で洗浄してトリエチルアミンを除去し、１０％炭酸カリウム水溶液で洗浄して過剰のブロモアセチルクロリドを除去した。有機層を分離し、硫酸マグネシウム上で乾燥し、高真空中で濃縮して２−ブロモ−Ｎ−（２，３−ジヒドロベンゾ［１，４］ジオキシニル−５−イルメチル）−Ｎ−（２−フェノキシフェニル）アセトアミド（６３７ｍｇ、１．４０ｍｍｏｌ、９３％）を得た。
【０１０１】
1Ｈ ＮＭＲ ＣＤＣｌ3，３００ＭＨｚ，δ３．７７（２Ｈ，ｄｄ，ＣＨ2Ｂｒ），３．８５−４．２（４Ｈ，ｍ，ＣＨ2０ｘ２），４．７５ ａｎｄ ５．１５（１Ｈ，ｄ，ｔｏｇｅｔｈｅｒ ＣＨ2Ｎ），６．６５−７．４（１２Ｈ，ｍ，ＡｒＨ）。
【０１０２】
13Ｃ ＮＭＲ ＣＤＣｌ3 ７５ＭＨｚ，δ２７．７７，４６．０８，６３．９５，６４．０２，１１６．６８，１１９．３９，１２０．６６，１２２．９７，１２３．００，１２４．７８，１２４．２８，１２４．７０，１２９．５０，１２９．９０，１３０．４０，１３１．００１４１．９８，１４３．１６，１５３．５８，１５５．５０，１６６．５３。
【０１０３】
実施例４：インビボイメージング剤４用の直接標識前駆体の合成
実施例４（ｉ）：Ｎ−（２，２−ジメチル−２，３−ジヒドロベンゾフラン−７−イルメチル）−Ｎ−（２−フェノキシフェニル）アミン
【０１０４】
【化１４】
２−フェノキシ−フェニルアミン（３５０ｍｇ、１．８９ｍｍｏｌ）と２，２−ジメチル−２，３−ジヒドロ−１−ベンゾフラン−７−カルバルデヒド（５００ｍｇ、２．８３ｍｍｏｌ）との混合物を窒素下において９０℃で２時間加熱した。反応物を０℃に冷却し、ＭｅＯＨ（４ｍＬ）を添加し、続いてＮａＢＨ4（２１６ｍｇ、５．７０ｍｍｏｌ）を少量ずつ２０分かけて添加した。混合物を室温で２４時間撹拌した。ギ酸（０．４ｍＬ）を添加し、混合物を１５分間撹拌した。溶媒を真空中で除去し、残留物を飽和ＮａＨＣＯ3水溶液（５０ｍＬ）で奪活し、ＤＣＭ（２×３０ｍＬ）で抽出し、ＭｇＳＯ4上で乾燥し、濾過し、真空中で溶媒を除去した。粗物質を石油スピリット（Ａ）及び酢酸エチル（Ｂ）で溶出するシリカゲルクロマトグラフィー（５〜１０％Ｂ、８０ｇ、３ＣＶ、６０ｍＬ／分）によって精製することで、５６０ｍｇ（８６％）のＮ−（２，２−ジメチル−２，３−ジヒドロベンゾフラン−７−イルメチル）−Ｎ−（２−フェノキシフェニル）アミンを無色油状物として得た。
【０１０５】
1Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ3）δ１．４３（６Ｈ，ｓ，Ｃ（ＣＨ3）2），２．９８（２Ｈ，ｓ，ＡｒＣＨ2），４．３２（２Ｈ，ｓ，ＮＣＨ2），４．７９（１Ｈ，ｓ，ＮＨ），６．６０−７．１０（１０Ｈ，ｍ，ＡｒＨ），７．３０（２Ｈ，ｍ，ＡｒＨ）。
【０１０６】
実施例４（ｉｉ）：２−ブロモ−Ｎ−（２，２−ジメチル−２，３−ジヒドロベンゾフラン−７−イルメチル）−Ｎ−（２−フェノキシフェニル）アセトアミド
【０１０７】
【化１５】
Ｎ−（２，２−ジメチル−２，３−ジヒドロベンゾフラン−７−イルメチル）−Ｎ−（２−フェノキシフェニル）アミン（０．２０ｇ、０．５８ｍｍｏｌ）をＤＣＭ（２ｍＬ）に溶解した溶液に、トリエチルアミン（０．２４ｇ、２．３２ｍｍｏｌ、０．３２ｍＬ）を添加した。反応物を０℃に冷却し、ブロモアセチルクロリド（０．１８ｇ、１．１６ｍｍｏｌ、０．１０ｍＬ）を添加した。混合物を室温で２時間撹拌した。ＬＣ−ＭＳは、出発原料及び生成物（１：１）を示した。さらに、トリエチルアミン（０．２４ｇ、２．３２ｍｍｏｌ、０．３２ｍＬ）及びブロモアセチルクロリド（０．１８ｇ、１．１６ｍｍｏｌ、０．１０ｍＬ）を添加し、室温で２時間撹拌した。溶媒を真空中で除去し、残留物を水（１０ｍＬ）で奪活し、ＤＣＭ（２×２０ｍＬ）で抽出し、ＭｇＳＯ4上で乾燥し、濾過し、真空中で溶媒を除去した。粗物質を石油スピリット（Ａ）及びＥｔＯＡｃ（Ｂ）で溶出するシリカゲルクロマトグラフィー（３０％Ｂ、８０ｇ、２．５ＣＶ、６０ｍＬ／分）によって精製した。不純な生成物をＤＣＭ（Ａ）及びＥｔＯＡｃ（Ｂ）で溶出するシリカゲルクロマトグラフィー（１〜５％Ｂ、８０ｇ、５ＣＶ、６０ｍＬ／分）によってさらに精製することで、１７０ｍｇ（６３％）の２−ブロモ−Ｎ−（２，２−ジメチル−２，３−ジヒドロベンゾフラン−７−イルメチル）−Ｎ−（２−フェノキシフェニル）アセトアミドを無色油状物として得た。
【０１０８】
1Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ3）δ１．１４（３Ｈ，ｓ，ＣＨ3），１．３１（３Ｈ，ｓ，ＣＨ3），２．８３（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１５Ｈｚ，ＡｒＣＨ），２．９０（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１５Ｈｚ，ＡｒＣＨ），３．７４（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１１Ｈｚ，ＢｒＣＨ），３．８０（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１１Ｈｚ，ＢｒＣＨ），４．５９（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１４Ｈｚ，ＮＣＨ），５．２２（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１４Ｈｚ，ＮＣＨ），６．６５−７．４０（１２Ｈ，ｍ，ＡｒＨ）。
【０１０９】
ＬＣ−ＭＳ：Ｃ25Ｈ24ＢｒＮＯ3に関するｍ／ｚ計算値，４６６．４；実測値，４６７．９（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０１１０】
実施例５：インビボイメージング剤１〜４を得るための実施例１〜４の前駆体化合物の放射性フッ素化
５（ｉ）：［18Ｆ］フッ化物イオンの乾燥
１５μｌの水中に供給された18Ｆ−フッ化物イオンに、さらに２００μｌの水を添加し、ＣＯＣ容器内にフッ化物イオンを吸引した。０．５ｍｌのアセトニトリル及び０．１Ｍ炭酸水素カリウム溶液（５０μｌ、５×１０-6モル）に溶解したＫｒｙｐｔｏｆｉｘ（２ｍｇ、５．３×１０-6モル）の存在下で、18Ｆ−フッ化物イオンを窒素流下において１１０℃で３０分間乾燥した（長いタップを開いた場合には、０．３Ｌ／分で約２０分間、続いて０．１Ｌ／分で乾燥した）。スプラッシングの危険がもはや無くなったら流量を０．５Ｌ／分に高め（約１０分間）、次いで室温に冷却した。
【０１１１】
５（ｉｉ）：放射性フッ素化
段階５（ｉ）で得られた乾燥残留物に、１ｍｌのアセトニトリルに溶解した０．７ｍｇの特定前駆体化合物を添加し、反応物を密封系中において１００℃で１０分間加熱した。冷却後、反応混合物をＮ４６バイアルに移し、ＣＯＣバイアルを１．５ｍｌの水で洗浄した。洗液を同じガラスバイアルに移した。（全量が約２．５ｍｌである）調製物を分取ＨＰＬＣ上に引き取り、ＨＰＬＣカットを約１５ｍｌの水で希釈した後、（２．５ｍｌのエタノール及び５ｍｌの水でプレコンディショニングを施した）Ｓｅｐ−Ｐａｋ ｔＣ１８ ｌｉｇｈｔ上に装填した。次いで、Ｓｅｐ−Ｐａｋを０．５ｍｌのエタノールで溶出し（Ｐ６バイアル中に集めた）、続いて４．６ｍｌのダルベッコリン酸緩衝食塩水で溶出した（同じＰ６バイアル中に集めた）。ＨＰＬＣによってＲＣＰを測定した。
【０１１２】
実施例６：インビボイメージング剤１に対する非放射性標準の合成
実施例６（ｉ）：Ｎ−（２，３−ジヒドロベンゾフラン−７−イルメチル）−２−フルオロ−Ｎ−（２−フェノキシフェニル）アセトアミド
【０１１３】
【化１６】
ＤＣＭ（２０ｍｌ）中のＮ−（２，３−ジヒドロベンゾフラン−７−イルメチル）−Ｎ−（２−フェノキシフェニル）アミン（０．５ｇ、１．７８ｍｍｏｌ）を、フルオロアセチルクロリド（１９９ｍｇ、１．９６ｍｍｏｌ）及びＴＥＡ（１９９ｍｇ、１．９６ｍｍｏｌ）により０℃で１時間処理した。次いで、反応物をＤＣＭ（５０ｍｌ）で希釈し、２Ｎ塩酸（２０ｍｌ）で洗浄してＴＥＡを除去し、１０％炭酸カリウム水溶液で洗浄してフルオロアセチルクロリドを除去した。有機層を分離し、硫酸マグネシウム上で乾燥し、高真空中で濃縮してＮ−（２，３−ジヒドロベンゾフラン−７−イルメチル）−２−フルオロ−Ｎ−（２−フェノキシフェニル）アセトアミド（４５５ｍｇ、１．６１ｍｍｏｌ、９１％）を得た。
【０１１４】
1Ｈ ＮＭＲ ＣＤＣｌ3中，３００ｍＨｚ，δ２．９−３．１３（２Ｈ，ｍ，ＣＨ2Ｐｈ），４．２２ ａｎｄ ４．３８（１Ｈ，ｑ，ｔｏｇｅｔｈｅｒ ＣＨ2Ｏ），４．７ ａｎｄ ４．９（１Ｈ，ｑ，ｔｏｇｅｔｈｅｒ ＣＨ2Ｆ），４．８ ａｎｄ ５．１（１Ｈ，ｄ，ｔｏｇｅｔｈｅｒ ＣＨ2Ｎ），６．６３−７．５（１２Ｈ，ｍ，ＡｒＨ）。
【０１１５】
13Ｃ ＮＭＲ ＣＤＣｌ3中，７５ＭＨｚ，δ２６．７３，４３，３１，６８．０３，７７．００，１１４．００，１１５．００１１６．３９，１１７．３２，１２０．２３，１２１．３４，１２４．００，１２６．３６，１２６．９４，１２７．４５，１５０．８４，１５２．５８，１５５．７６，１６４．１１，１６４．３８。
【０１１６】
実施例７：インビボイメージング剤２に対する非放射性標準の合成
実施例７（ｉ）：Ｎ−（ベンゾ［１，３］ジオキソール−４−イルメチル）−２−フルオロ−Ｎ−（２−フェニルオキシ−フェニル）アセトアミド
【０１１７】
【化１７】
Ｎ−（ベンゾ［１，３］ジオキソール−４−イルメチル）−Ｎ−（２−フェニルオキシ−フェニル）アミン（０．１６ｇ、０．５０ｍｍｏｌ）をＤＣＭ（２ｍＬ）に溶解した溶液に、ＴＥＡ（０．２０ｇ、２．００ｍｍｏｌ、０．２８ｍＬ）を添加した。反応物を０℃に冷却し、フルオロアセチルクロリド（０．１０ｇ、１．００ｍｍｏｌ、０．０７ｍＬ）を添加した。混合物を室温で１時間撹拌した。溶媒を真空中で除去し、残留物を水（１０ｍＬ）で奪活し、ＤＣＭ（２×２０ｍＬ）で抽出し、ＭｇＳＯ4上で乾燥し、濾過し、真空中で溶媒を除去した。粗物質をＤＣＭ（Ａ）及びＭｅＯＨ（Ｂ）で溶出するシリカゲルクロマトグラフィー（１〜５％Ｂ、８０ｇ、４．０ＣＶ、６０ｍＬ／分）によって精製することで、１２０ｍｇ（４７％）のＮ−（ベンゾ［１，３］ジオキソール−４−イルメチル）−２−フルオロ−Ｎ−（２−フェニルオキシ−フェニル）アセトアミドを黄色油状物として得た。構造は下記のＮＭＲによって確認された。
【０１１８】
1Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ3）δ４．６７（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝２Ｈｚ，ＦＣＨ），４．８３（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝２Ｈｚ，ＦＣＨ），４．７４（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１４Ｈｚ，ＡｒＣＨ），５．１２（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１４Ｈｚ，ＡｒＣＨ），５．６３（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１Ｈｚ，ＯＣＨＯ），５．７９（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１Ｈｚ，ＯＣＨＯ），６．６６−６．８８（６Ｈ，ｍ，ＡｒＨ），６．９６−７．０６（２Ｈ，ｍ，ＡｒＨ），７．１２−７．３８（４Ｈ，ｍ，ＡｒＨ）。
【０１１９】
19Ｆ ＮＭＲ（２８２ＭＨｚ，ＣＤＣｌ3）δ−２２６．８，−２２７．０，−２２７．２。
【０１２０】
ＬＣ−ＭＳ：Ｃ22Ｈ18ＦＮＯ4に関するｍ／ｚ計算値，３７９．４；実測値，３８０．１（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０１２１】
実施例８：インビボイメージング剤３に対する非放射性標準の合成
実施例８（ｉ）：２−フルオロ−Ｎ−（２，３−ジヒドロベンゾ［１，４］ジオキシニル−５−イルメチル）−Ｎ−（２−フェノキシフェニル）アセトアミド
【０１２２】
【化１８】
ＤＣＭ（２０ｍｌ）中のＮ−（２，３−ジヒドロベンゾ［１，４］ジオキシニル−５−イルメチル）−Ｎ−（２−フェノキシフェニル）アミン（０．５ｇ、１．５ｍｍｏｌ）を、フルオロアセチルクロリド（１６８ｍｇ、１．６５ｍｍｏｌ）及びＴＥＡ（１６８ｍｇ、１．６５ｍｍｏｌ）により０℃で１時間処理した。次いで、反応物をＤＣＭ（５０ｍｌ）で希釈し、２Ｎ塩酸（２０ｍｌ）及び１０％炭酸カリウム水溶液で洗浄した。有機層を分離し、硫酸マグネシウム上で乾燥し、高真空中で濃縮してガム状物にした。ガム状物を、ペトロール中１５〜４０％酢酸エチルの勾配を用いて１２０ｇのシリカカラム上でクロマトグラフィー処理した。主画分を集めることで、２−フルオロ−Ｎ−（２，３−ジヒドロベンゾ［１，４］ジオキシニル−５−イルメチル）−Ｎ−（２−フェノキシフェニル）アセトアミド（０．５３８ｇ、１．４３ｍｍｏｌ、９５％）を得た。
【０１２３】
1Ｈ ＮＭＲ ＣＤＣｌ3中，３００ＭＨｚ，δ３．８−４．１（４Ｈ，Ｍ，ＣＨ2Ｏｘ２），４．６５ ａｎｄ ４．８１（１Ｈ，ｄ，ｄ，ｔｏｇｅｔｈｅｒ ＣＨ2Ｆ），４．８ ａｎｄ ５．１（１Ｈ，ｄ，ｄ，ｔｏｇｅｔｈｅｒ ＣＨ2Ｎ），６．６−７．４，（１２Ｈｍ，ＡｒＨ）。
【０１２４】
13Ｃ ＮＭＲ ＣＤＣｌ3中，７５ＭＨｚ，δ４５．２，６３．７２，６３．８３，７７．４１，７９．７５，１１６．５８，１１９．１６，１２０．４１，１２２．９８，１２３．００，１２４．１６，１２４．３０，１２９．００，１２９．７４，１３０．００，１４１．９１，１４３．０５，１５３．７１，１５５．２３，１６６．４９，１６６．７５。
【０１２５】
実施例９：インビボイメージング剤４に対する非放射性標準の合成
実施例９（ｉ）：Ｎ−（２，２−ジメチル−２，３−ジヒドロベンゾフラン−７−イルメチル）−２−フルオロ−Ｎ−（２−フェノキシフェニル）アセトアミド
【０１２６】
【化１９】
Ｎ−（２，２−ジメチル−２，３−ジヒドロベンゾフラン−７−イルメチル）−Ｎ−（２−フェノキシフェニル）アミン（０．２０ｇ、０．５８ｍｍｏｌ）をＤＣＭ（２ｍＬ）に溶解した溶液に、ＴＥＡ（０．２４ｇ、２．３２ｍｍｏｌ、０．３２ｍＬ）を添加した。反応物を０℃に冷却し、フルオロアセチルクロリド（０．１１ｇ、１．１６ｍｍｏｌ、０．０８ｍＬ）を添加した。混合物を室温で１時間撹拌した。溶媒を真空中で除去し、残留物を水（１０ｍＬ）で奪活し、ＤＣＭ（２×２０ｍＬ）で抽出し、ＭｇＳＯ4上で乾燥し、濾過し、真空中で溶媒を除去した。粗物質をＤＣＭ（Ａ）及びＭｅＯＨ（Ｂ）で溶出するシリカゲルクロマトグラフィー（１％Ｂ、８０ｇ、２ＣＶ、６０ｍＬ／分）によって精製することで、１７０ｍｇ（７２％）のＮ−（２，２−ジメチル−２，３−ジヒドロベンゾフラン−７−イルメチル）−２−フルオロ−Ｎ−（２−フェノキシフェニル）アセトアミドを淡黄色油状物として得た。
1Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ3）δ１．１２（３Ｈ，ｓ，ＣＨ3），１．３０（３Ｈ，ｓ，ＣＨ3），２．８３（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１５Ｈｚ，ＡｒＣＨ），２．９０（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１５Ｈｚ，ＡｒＣＨ），４．５８（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１４Ｈｚ，ＮＣＨ），４．６５（１Ｈ，ｓ，ＦＣＨ），４．８１（１Ｈ，ｓ，ＦＣＨ），５．２２（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１４Ｈｚ，ＮＣＨ），６．６５−７．４０（１２Ｈ，ｍ，ＡｒＨ）。
【０１２７】
19Ｆ ＮＭＲ（２８２ＭＨｚ，ＣＤＣｌ3）δ−２２６．６，−２２６．８，−２２７．０。
【０１２８】
ＬＣ−ＭＳ：Ｃ25Ｈ24ＦＮＯ3に関するｍ／ｚ計算値，４０５．５；実測値，４０６．１（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０１２９】
実施例１０：インビトロ効力アッセイ
Ｌｅ Ｆｕｒ ｅｔ ａｌ（Ｌｉｆｅ Ｓｃｉ．１９８３；ＵＳＡ ３３：４４９−５７）の方法を改変した方法を用いて、ＰＢＲに対する親和性のスクリーニングを行った。試験した化合物は、ＰＢＲ０６及びインビボイメージング剤１〜４であった。
【０１３０】
（１％ＤＭＳＯを含む５０ｍＭトリス−ＨＣｌ、ｐＨ７．４、１０ｍＭ ＭｇＣｌ2に溶解した）各試験化合物を、ウィスター系ラットの心臓ＰＢＲとの結合に関して０．３ｎＭ［3Ｈ］ＰＫ−１１１９５と競合させた。反応は５０ｍＭトリス−ＨＣｌ、ｐＨ７．４、１０ｍＭ ＭｇＣｌ2中において２５℃で１５分間実施した。
【０１３１】
各試験化合物のスクリーニングは、推定Ｋiの周辺の３００倍の濃度範囲にわたる６種の濃度で行った。ＰＢＲ０６及びインビボイメージング剤１〜４に関するＫi値は、それぞれ０．２８ｎＭ、０．３１ｎＭ、２．０３ｎＭ、１．１４ｎＭ及び２．６６ｎＭであることが判明した。
【０１３２】
実施例１１：インビボ体内分布方法
（Ｂｒｉａｒｄ ｅｔ ａｌ，Ｊ Ｍｅｄ Ｃｈｅｍ ２００９；５２：６８８−６９９に従って合成した）ＰＢＲ０６及びインビボイメージング剤１〜３をインビボ体内分布モデルで試験し、それぞれの体内分布を比較した。
【０１３３】
成体雄ウィスター系ラット（２００〜３００ｇ）に、側尾静脈を通して１〜３ＭＢｑの試験化合物を注射した。注射から２分後、１０分後、３０分後又は６０分後（ｎ＝３）に、ラットを安楽死させ、γ線カウンター上での放射能測定のために組織又は体液の試料を採取した。
【０１３４】
図１〜３は、ＯＢへのＰＢＲ０６及びそれぞれインビボイメージング剤１〜３の取込み比を線条体への取込み比と比較して示している。
【０１３５】
実施例１２：代謝アッセイ
試験インビボイメージング剤の注射から６０分後に、成体雄ウィスター系ラット（２００〜３００ｇ）から脳組織試料を採取した。次いで、これらの試料を溶剤抽出（下記参照）によって処理することで、ＨＰＬＣへの導入前に18Ｆ標識母体を18Ｆ標識代謝産物と共に抽出した。
【０１３６】
（小脳＋橋・延髄を除いた）脳を１０ｍｌの氷冷アセトニトリルと共に（５０００ｒｐｍで５分間）ホモジナイズすることで、すべての18Ｆ標識化学種を抽出した。次いで、得られた上澄み液を（４０℃での回転蒸発によって）蒸発乾固し、２．５ｍｌの移動相中に濃縮し、濾過し、１ｍｌをＨＰＬＣに注入した。
【０１３７】
18Ｆ分析用のＨＰＬＣ装置を二重ＢＧＯ放射線＆ＵＶ検出器に連結した。７．８×３００ｍｍ、１０μｍ、１２５Åの寸法を有するμＢｏｎｄａｐａｋ Ｃ１８分取カラムを使用した。３０〜４０％の水及び６０〜７０％のアセトニトリルを用いるイソクラティック溶出系を使用した。流量は３ｍｌ／分であった。各試験インビボイメージング剤ごとに水性相／有機相比を変化させることで、１０分±２分又はその付近の保持時間で母体ピークを得た。
【０１３８】
注射から６０分後において、インタクトな試験化合物を表す脳内放射能の百分率は、ＰＢＲ０６及びインタクトイメージング剤１〜３についてそれぞれ９０％、９３％、９２％及び８２％であった。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
次の式Ｉのインビボイメージング剤。
【化１】
式中、
Ａ1は−ＣＲ1Ｒ2−（ＣＨ2）n−（式中、Ｒ1及びＲ2は水素、フルオロ及びＣ1-3アルキルから独立に選択され、ｎは０、１又は２である。）であって、
Ａ2は−ＣＨ2−、−Ｏ−又は−Ｏ−ＣＨ2−であるか、或いは
−Ａ1−Ａ2は−ＣＨ＝ＣＨ−である。
【請求項２】
Ａ1が−ＣＲ1Ｒ2−（ＣＨ2）n−である、請求項１記載のインビボイメージング剤。
【請求項３】
Ａ1が−（ＣＨ2）m−（式中、ｍは１、２又は３である。）である、請求項２記載のインビボイメージング剤。
【請求項４】
ｍが１又は２である、請求項３記載のインビボイメージング剤。
【請求項５】
Ａ2が−ＣＨ2−又は−Ｏ−である、請求項１乃至請求項４のいずれか１項記載のインビボイメージング剤。
【請求項６】
請求項１乃至請求項５のいずれか１項記載のインビボイメージング剤の製造方法であって、18Ｆの適当な供給源を次の式ＩＩの前駆体化合物と反応させる段階を含む方法。
【化２】
式中、Ａ1及びＡ2は請求項１乃至請求項５の式Ｉのインビボイメージング剤に関して定義した通りであり、ＬＧは脱離基である。
【請求項７】
ＬＧがクロリド、ブロミド、ヨージド、トシレート、メシレート及びトリフレートから選択される、請求項６記載の方法。
【請求項８】
前記18Ｆの適当な供給源が［18Ｆ］フッ化物である、請求項６又は請求項７記載の方法。
【請求項９】
当該方法が自動化される、請求項６乃至請求項８のいずれか１項記載の方法。
【請求項１０】
請求項６乃至請求項９のいずれか１項記載の方法で定義される前駆体化合物。
【請求項１１】
請求項１乃至請求項５のいずれか１項記載のインビボイメージング剤を、哺乳動物への投与に適した形態の生体適合性キャリヤーと共に含む放射性医薬組成物。
【請求項１２】
請求項６乃至請求項９のいずれか１項記載の方法を実施するためのキットであって、密封容器内に請求項１０記載の前駆体化合物を含むキット。
【請求項１３】
請求項９記載の方法を実施するためのカセットであって、
（ｉ）請求項１０記載の前駆体化合物を含む容器と、
（ｉｉ）請求項６又は請求項８に記載された18Ｆの適当な供給源を用いて容器を溶出するための手段と
を備えるカセット。
【請求項１４】
さらに、
（ｉｉｉ）過剰の18Ｆを除去するためのイオン交換カートリッジ
を備える、請求項１３記載のカセット。
【請求項１５】
被験体におけるＰＢＲ発現の分布及び／又は程度を決定するためのインビボイメージング方法であって、
（ｉ）請求項１乃至請求項５のいずれか１項記載のインビボイメージング剤を予め投与しておいた被験体を用意する段階、
（ｉｉ）前記インビボイメージング剤を前記被験体内のＰＢＲに結合させる段階、
（ｉｉｉ）前記インビボイメージング剤の18Ｆから放出される信号をインビボイメージング技法によって検出する段階、
（ｉｖ）前記信号の位置及び／又は量を表す画像を生成する段階、並びに
（ｖ）前記被験体におけるＰＢＲ発現の分布及び程度を決定する段階であって、前記発現は前記インビボイメージング剤から放出される前記信号と直接に相関している段階
を含むインビボイメージング方法。
【請求項１６】
前記被験体に関する治療計画の進行中に繰り返して実施される請求項１５記載のインビボイメージング方法であって、前記計画がＰＢＲ状態と戦うための薬物の投与を含むインビボイメージング方法。
【請求項１７】
前記被験体がＰＢＲ状態に罹患しているか否かを診断するためにＰＢＲ発現の分布及び程度を帰因させる追加段階（ｖｉ）を含む、請求項１５記載のインビボイメージング方法。
【請求項１８】
請求項１７記載のインビボイメージング方法で使用するための、請求項１乃至請求項５のいずれか１項記載のインビボイメージング剤。
【請求項１９】
請求項１５乃至請求項１８のいずれか１項記載のインビボイメージング方法で使用するための請求項１１記載の放射性医薬組成物を製造するための、請求項１乃至請求項５のいずれか１項記載のインビボイメージング剤。
【請求項１】
次の式Ｉのインビボイメージング剤。
【化１】
式中、
Ａ1は−ＣＲ1Ｒ2−（ＣＨ2）n−（式中、Ｒ1及びＲ2は水素、フルオロ及びＣ1-3アルキルから独立に選択され、ｎは０、１又は２である。）であって、
Ａ2は−ＣＨ2−、−Ｏ−又は−Ｏ−ＣＨ2−であるか、或いは
−Ａ1−Ａ2は−ＣＨ＝ＣＨ−である。
【請求項２】
Ａ1が−ＣＲ1Ｒ2−（ＣＨ2）n−である、請求項１記載のインビボイメージング剤。
【請求項３】
Ａ1が−（ＣＨ2）m−（式中、ｍは１、２又は３である。）である、請求項２記載のインビボイメージング剤。
【請求項４】
ｍが１又は２である、請求項３記載のインビボイメージング剤。
【請求項５】
Ａ2が−ＣＨ2−又は−Ｏ−である、請求項１乃至請求項４のいずれか１項記載のインビボイメージング剤。
【請求項６】
請求項１乃至請求項５のいずれか１項記載のインビボイメージング剤の製造方法であって、18Ｆの適当な供給源を次の式ＩＩの前駆体化合物と反応させる段階を含む方法。
【化２】
式中、Ａ1及びＡ2は請求項１乃至請求項５の式Ｉのインビボイメージング剤に関して定義した通りであり、ＬＧは脱離基である。
【請求項７】
ＬＧがクロリド、ブロミド、ヨージド、トシレート、メシレート及びトリフレートから選択される、請求項６記載の方法。
【請求項８】
前記18Ｆの適当な供給源が［18Ｆ］フッ化物である、請求項６又は請求項７記載の方法。
【請求項９】
当該方法が自動化される、請求項６乃至請求項８のいずれか１項記載の方法。
【請求項１０】
請求項６乃至請求項９のいずれか１項記載の方法で定義される前駆体化合物。
【請求項１１】
請求項１乃至請求項５のいずれか１項記載のインビボイメージング剤を、哺乳動物への投与に適した形態の生体適合性キャリヤーと共に含む放射性医薬組成物。
【請求項１２】
請求項６乃至請求項９のいずれか１項記載の方法を実施するためのキットであって、密封容器内に請求項１０記載の前駆体化合物を含むキット。
【請求項１３】
請求項９記載の方法を実施するためのカセットであって、
（ｉ）請求項１０記載の前駆体化合物を含む容器と、
（ｉｉ）請求項６又は請求項８に記載された18Ｆの適当な供給源を用いて容器を溶出するための手段と
を備えるカセット。
【請求項１４】
さらに、
（ｉｉｉ）過剰の18Ｆを除去するためのイオン交換カートリッジ
を備える、請求項１３記載のカセット。
【請求項１５】
被験体におけるＰＢＲ発現の分布及び／又は程度を決定するためのインビボイメージング方法であって、
（ｉ）請求項１乃至請求項５のいずれか１項記載のインビボイメージング剤を予め投与しておいた被験体を用意する段階、
（ｉｉ）前記インビボイメージング剤を前記被験体内のＰＢＲに結合させる段階、
（ｉｉｉ）前記インビボイメージング剤の18Ｆから放出される信号をインビボイメージング技法によって検出する段階、
（ｉｖ）前記信号の位置及び／又は量を表す画像を生成する段階、並びに
（ｖ）前記被験体におけるＰＢＲ発現の分布及び程度を決定する段階であって、前記発現は前記インビボイメージング剤から放出される前記信号と直接に相関している段階
を含むインビボイメージング方法。
【請求項１６】
前記被験体に関する治療計画の進行中に繰り返して実施される請求項１５記載のインビボイメージング方法であって、前記計画がＰＢＲ状態と戦うための薬物の投与を含むインビボイメージング方法。
【請求項１７】
前記被験体がＰＢＲ状態に罹患しているか否かを診断するためにＰＢＲ発現の分布及び程度を帰因させる追加段階（ｖｉ）を含む、請求項１５記載のインビボイメージング方法。
【請求項１８】
請求項１７記載のインビボイメージング方法で使用するための、請求項１乃至請求項５のいずれか１項記載のインビボイメージング剤。
【請求項１９】
請求項１５乃至請求項１８のいずれか１項記載のインビボイメージング方法で使用するための請求項１１記載の放射性医薬組成物を製造するための、請求項１乃至請求項５のいずれか１項記載のインビボイメージング剤。
【図３】
【図１】
【図２】
【図１】
【図２】
【公表番号】特表２０１３−５１４３１９（Ｐ２０１３−５１４３１９Ａ）
【公表日】平成２５年４月２５日（２０１３．４．２５）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２０１２−５４３７４２（Ｐ２０１２−５４３７４２）
【出願日】平成２２年１２月１６日（２０１０．１２．１６）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＥＰ２０１０／０６９８６６
【国際公開番号】ＷＯ２０１１／０７３３０４
【国際公開日】平成２３年６月２３日（２０１１．６．２３）
【出願人】（３０５０４０７１０）ジーイー・ヘルスケア・リミテッド (99)
【Ｆターム（参考）】
【公表日】平成２５年４月２５日（２０１３．４．２５）
【国際特許分類】
【出願日】平成２２年１２月１６日（２０１０．１２．１６）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＥＰ２０１０／０６９８６６
【国際公開番号】ＷＯ２０１１／０７３３０４
【国際公開日】平成２３年６月２３日（２０１１．６．２３）
【出願人】（３０５０４０７１０）ジーイー・ヘルスケア・リミテッド (99)
【Ｆターム（参考）】
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