ガングリオシドＧＭ２に特異的に結合する抗体組成物
エフェクター機能が増強された医薬品として有用な抗ガングリオシドＧＭ２抗体組成物が求められている。ガングリオシドＧＭ２に特異的に結合し、Ｎ−グリコシド結合複合型糖鎖をＦｃ領域に有する抗体分子からなる組成物であって、Ｎ−グリコシド結合複合型糖鎖が該糖鎖の還元末端のＮ−アセチルグルコサミンにフコースが結合していない糖鎖である抗体組成物、該抗体組成物を生産する形質転換体、該抗体組成物の製造方法および該抗体組成物を含有する医薬を提供する。
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
ガングリオシドＧＭ２に特異的に結合し、Ｎ−グリコシド結合複合型糖鎖をＦｃ領域に有する遺伝子組換え抗体分子からなる組成物であって、Ｎ−グリコシド結合複合型糖鎖が該糖鎖の還元末端のＮ−アセチルグルコサミンにフコースが結合していない糖鎖である抗体組成物。
【請求項２】
Ｎ−グリコシド結合複合型糖鎖が、該糖鎖の還元末端のＮ−アセチルグルコサミンの６位にフコースの１位がα結合していない糖鎖である、請求の範囲１に記載の抗体組成物。
【請求項３】
ガングリオシドＧＭ２発現細胞に特異的に結合する請求の範囲１または２に記載の抗体組成物。
【請求項４】
ガングリオシドＧＭ２発現細胞に対し細胞傷害活性を示す請求の範囲１〜３のいずれか１項に記載の抗体組成物。
【請求項５】
ガングリオシドＧＭ２発現細胞に対し、非ヒト動物由来ハイブリドーマが生産するモノクローナル抗体よりも高い細胞傷害活性を示す請求の範囲１〜４のいずれか１項に記載の抗体組成物。
【請求項６】
細胞傷害活性が抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）活性である請求の範囲４または５に記載の抗体組成物。
【請求項７】
細胞傷害活性が補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）活性である請求の範囲４または５に記載の抗体組成物。
【請求項８】
それぞれ配列番号１４、１５および１６で示されるアミノ酸配列からなる抗体分子重鎖（Ｈ鎖）可変領域（Ｖ領域）の相補性決定領域（ＣＤＲ）１、ＣＤＲ２、ＣＤＲ３を含む、請求の範囲１〜７のいずれか１項に記載の抗体組成物。
【請求項９】
それぞれ配列番号１７、１８および１９で示されるアミノ酸配列からなる抗体分子軽鎖（Ｌ鎖）可変領域（Ｖ領域）の相補性決定領域（ＣＤＲ）１、ＣＤＲ２、ＣＤＲ３を含む、請求の範囲１〜７のいずれか１項に記載の抗体組成物。
【請求項１０】
それぞれ配列番号１４、１５および１６で示されるアミノ酸配列からなる抗体分子重鎖（Ｈ鎖）可変領域（Ｖ領域）の相補性決定領域（ＣＤＲ）１、ＣＤＲ２、ＣＤＲ３、およびそれぞれ配列番号１７、１８および１９で示されるアミノ酸配列からなる抗体軽鎖（Ｌ鎖）Ｖ領域の相補性決定領域（ＣＤＲ）１、ＣＤＲ２、ＣＤＲ３を含む、請求の範囲１〜９のいずれか１項に記載の抗体組成物。
【請求項１１】
遺伝子組換え抗体がヒト型キメラ抗体またはヒト型ＣＤＲ移植抗体である請求の範囲１〜１０のいずれか１項に記載の抗体組成物。
【請求項１２】
ヒト型キメラ抗体がガングリオシドＧＭ２に特異的に結合するモノクローナル抗体の重鎖（Ｈ鎖）可変領域（Ｖ領域）および軽鎖（Ｌ鎖）Ｖ領域の相補性決定領域（ＣＤＲ）を含む、請求の範囲１１に記載の抗体組成物。
【請求項１３】
抗体分子の重鎖（Ｈ鎖）可変領域（Ｖ領域）が、配列番号２０で示されるアミノ酸配列を含む請求の範囲１２に記載の抗体組成物。
【請求項１４】
抗体分子の軽鎖（Ｌ鎖）可変領域（Ｖ領域）が、配列番号２１で示されるアミノ酸配列を含む請求の範囲１２に記載の抗体組成物。
【請求項１５】
抗体分子の重鎖（Ｈ鎖）可変領域（Ｖ領域）が、配列番号２０で示されるアミノ酸配列を含み、かつ、抗体分子の軽鎖（Ｌ鎖）Ｖ領域が、配列番号２１で示されるアミノ酸配列を含む請求の範囲１２〜１４のいずれか１項に記載のヒト型キメラ抗体組成物。
【請求項１６】
ヒト型ＣＤＲ移植抗体がガングリオシドＧＭ２に特異的に結合するモノクローナル抗体の重鎖（Ｈ鎖）可変領域（Ｖ領域）および軽鎖（Ｌ鎖）Ｖ領域の相補性決定領域（ＣＤＲ）を含む、請求の範囲１１に記載の抗体組成物。
【請求項１７】
ガングリオシドＧＭ２に特異的に結合するモノクローナル抗体の重鎖（Ｈ鎖）可変領域（Ｖ領域）および軽鎖（Ｌ鎖）Ｖ領域の相補性決定領域（ＣＤＲ）とヒト抗体のＨ鎖Ｖ領域およびＬ鎖Ｖ領域のフレームワーク領域（ＦＲ）を含む、請求の範囲１６に記載の抗体組成物。
【請求項１８】
ガングリオシドＧＭ２に特異的に結合するモノクローナル抗体の重鎖（Ｈ鎖）可変領域（Ｖ領域）および軽鎖（Ｌ鎖）Ｖ領域の相補性決定領域（ＣＤＲ）とヒト抗体のＨ鎖Ｖ領域およびＬ鎖Ｖ領域のフレームワーク領域（ＦＲ）、ならびにヒト抗体のＨ鎖定常領域（Ｃ領域）およびＬ鎖Ｃ領域を含む、請求の範囲１６または１７に記載の抗体組成物。
【請求項１９】
抗体分子の重鎖（Ｈ鎖）可変領域（Ｖ領域）が、配列番号２２で示されるアミノ酸配列、または配列番号２２で示されるアミノ酸配列のうち、３８番目のＡｒｇ、４０番目のＡｌａ、４３番目のＧｌｎおよび４４番目のＧｌｙのうち少なくとも１つのアミノ酸残基が他のアミノ酸残基に置換されたアミノ酸配列を含む、請求の範囲１６〜１８のいずれか１項に記載の抗体組成物。
【請求項２０】
抗体分子の重鎖（Ｈ鎖）可変領域（Ｖ領域）が、配列番号２３で示されるアミノ酸配列、または配列番号２３で示されるアミノ酸配列のうち、６７番目のＡｒｇ、７２番目のＡｌａ、８４番目のＳｅｒおよび９８番目のＡｒｇのうち少なくとも１つのアミノ酸残基が他のアミノ酸残基に置換されたアミノ酸配列を含む、請求の範囲１６〜１８のいずれか１項に記載の抗体組成物。
【請求項２１】
抗体分子の軽鎖（Ｌ鎖）可変領域（Ｖ領域）が、配列番号２４で示されるアミノ酸配列、または配列番号２４で示されるアミノ酸配列のうち、１５番目のＶａｌ、３５番目のＴｙｒ、４６番目のＬｅｕ、５９番目のＳｅｒ、６９番目のＡｓｐ、７０番目のＰｈｅ、７１番目のＴｈｒ、７２番目のＰｈｅおよび７６番目のＳｅｒから選ばれる少なくとも１つのアミノ酸残基が他のアミノ酸残基に置換されたアミノ酸配列を含む、請求の範囲１６〜１８のいずれか１項に記載の抗体組成物。
【請求項２２】
抗体分子の軽鎖（Ｌ鎖）可変領域（Ｖ領域）が、配列番号２５で示されるアミノ酸配列、または配列番号２５で示されるアミノ酸配列のうち、４番目のＭｅｔ、１１番目のＬｅｕ、１５番目のＶａｌ、３５番目のＴｙｒ、４２番目のＡｌａ、４６番目のＬｅｕ、６９番目のＡｓｐ、７０番目のＰｈｅ、７１番目のＴｈｒ、７７番目のＬｅｕおよび１０３番目のＶａｌから選ばれる少なくとも１つのアミノ酸残基が他のアミノ酸残基に置換されたアミノ酸配列を含む、請求の範囲１６〜１８のいずれか１項に記載の抗体組成物。
【請求項２３】
抗体分子の重鎖（Ｈ鎖）可変領域（Ｖ領域）が、配列番号２２で示されるアミノ酸配列、または配列番号２２で示されるアミノ酸配列のうち、３８番目のＡｒｇ、４０番目のＡｌａ、４３番目のＧｌｎおよび４４番目のＧｌｙから選ばれる少なくとも１つのアミノ酸残基が他のアミノ酸残基に置換されたアミノ酸配列を含み、かつ、抗体分子の軽鎖（Ｌ鎖）Ｖ領域が、配列番号２４で示されるアミノ酸配列、または配列番号２４で示されるアミノ酸配列のうち、１５番目のＶａｌ、３５番目のＴｙｒ、４８番目のＬｅｕ、５９番目のＳｅｒ、６９番目のＡｓｐ、７０番目のＰｈｅ、７１番目のＴｈｒ、７２番目のＰｈｅおよび７６番目のＳｅｒから選ばれる少なくとも１つのアミノ酸残基が他のアミノ酸残基に置換されたアミノ酸配列を含む、請求の範囲１６〜１９または２１に記載の抗体組成物。
【請求項２４】
抗体分子の重鎖（Ｈ鎖）可変領域（Ｖ領域）が、配列番号２３で示されるアミノ酸配列、または配列番号２３で示されるアミノ酸配列のうち、６７番目のＡｒｇ、７２番目のＡｌａ、８４番目のＳｅｒおよび９８番目のＡｒｇから選ばれる少なくとも１つのアミノ酸残基が他のアミノ酸残基に置換されたアミノ酸配列を含み、かつ、抗体分子の軽鎖（Ｌ鎖）Ｖ領域が、配列番号２４で示されるアミノ酸配列、または配列番号２４で示されるアミノ酸配列のうち、１５番目のｖａｌ、３５番目のＴｙｒ、４６番目のＬｅｕ、５９番目のＳｅｒ、６９番目のＡｓｐ、７０番目のＰｈｅ、７１番目のＴｈｒ、７２番目のＰｈｅおよび７６番目のＳｅｒから選ばれる少なくとも１つのアミノ酸残基が他のアミノ酸残基に置換されたアミノ酸配列を含む、請求の範囲１６〜１８、２０または２１に記載の抗体組成物。
【請求項２５】
抗体分子の重鎖（Ｈ鎖）可変領域（Ｖ領域）が、配列番号２３で示されるアミノ酸配列、または配列番号２３で示されるアミノ酸配列のうち、６７番目のＡｒｇ、７２番目のＡｌａ、８４番目のＳｅｒおよび９８番目のＡｒｇから選ばれる少なくとも１つのアミノ酸残基が他のアミノ酸残基に置換されたアミノ酸配列を含み、かつ、抗体分子の軽鎖（Ｌ鎖）Ｖ領域が、配列番号２５で示されるアミノ酸配列、または配列番号２５で示されるアミノ酸配列のうち、４番目のＭｅｔ、１１番目のＬｅｕ、１５番目のＶａｌ、３５番目のＴｙｒ、４２番目のＡｌａ、４６番目のＬｅｕ、６９番目のＡｓｐ、７０番目のＰｈｅ、７１番目のＴｈｒ、７７番目のＬｅｕおよび１０３番目のＶａｌから選ばれる少なくとも１つのアミノ酸残基が他のアミノ酸残基に置換されたアミノ酸配列を含む、請求の範囲１６〜１８、２０または２２のいずれか１項に記載の抗体組成物。
【請求項２６】
抗体分子の重鎖（Ｈ鎖）可変領域（Ｖ領域）が、それぞれ配列番号２２、２６、２７、２８、２９および３０で示されるアミノ酸配列から選ばれるアミノ酸配列を含む、請求の範囲１６〜２０、２３〜２５のいずれか１項に記載の抗体組成物。
【請求項２７】
抗体分子の軽鎖（Ｌ鎖）可変領域（Ｖ領域）が、それぞれ配列番号３１、３２、３３、３４および３５で示されるアミノ酸配列から選ばれるアミノ酸配列を含む請求の範囲１６〜１８、２１〜２５のいずれか１項に記載の抗体組成物。
【請求項２８】
抗体分子の重鎖（Ｈ鎖）可変領域（Ｖ領域）が、配列番号２２、２６、２７、２８、２９、３０で示されるから選ばれるアミノ酸配列から選ばれるアミノ酸配列を含み、抗体分子の軽鎖（Ｌ鎖）Ｖ領域が、配列番号３１、３２、３３、３４および３５で示されるアミノ酸配列から選ばれる少なくとも１つのアミノ酸残基が他のアミノ酸残基に置換されたアミノ酸配列から選ばれるアミノ酸配列を含む請求の範囲１６〜２７のいずれか１項に記載の抗体組成物。
【請求項２９】
抗体分子の重鎖（Ｈ鎖）可変領域（Ｖ領域）が、配列番号２６で示されるアミノ酸配列を含み、かつ、抗体分子の軽鎖（Ｌ鎖）Ｖ領域が配列番号３１または３２で示されるアミノ酸配列を含む請求の範囲１６〜１９、２１、２３、２６〜２８のいずれか１項に記載の抗体組成物。
【請求項３０】
抗体分子の重鎖（Ｈ鎖）可変領域（Ｖ領域）が、配列番号２２で示されるアミノ酸配列を含み、かつ、抗体分子の軽鎖（Ｌ鎖）Ｖ領域が配列番号３２または３５で示されるアミノ酸配列を含む請求の範囲１６〜１９、２１〜２３、２６〜２８のいずれか１項に記載の抗体組成物。
【請求項３１】
ガングリオシドＧＭ２に特異的に結合する抗体分子をコードするＤＮＡを宿主細胞に導入して得られる、請求の範囲１〜３０のいずれか１項に記載の抗体組成物を生産する形質転換体。
【請求項３２】
宿主細胞が、細胞内糖ヌクレオチドＧＤＰ−フコースの合成に関与する酵素、またはＮ−グリコシド結合複合型糖鎖還元末端のＮ−アセチルグルコサミンの６位にフコースの１位がα結合する糖鎖修飾に関与する酵素を失活するようにゲノムが改変された細胞である、請求の範囲３１に記載の形質転換体。
【請求項３３】
宿主細胞が、細胞内糖ヌクレオチドＧＤＰ−フコースの合成に関与する酵素、またはＮ−グリコシド結合複合型糖鎖還元末端のＮ−アセチルグルコサミンの６位にフコースの１位がα結合する糖鎖修飾に関与する酵素のゲノム上の対立遺伝子のすべてがノックアウトされた細胞である、請求の範囲３１に記載の形質転換体。
【請求項３４】
細胞内糖ヌクレオチドＧＤＰ−フコースの合成に関与する酵素が、ＧＤＰ−マンノース４，６−デヒドラターゼ（ＧＭＤ）またはＧＤＰ−４−ケト−６−デオキシ−Ｄ−マンノース−３，５−エピメラーゼ（Ｆｘ）から選ばれる酵素である、請求の範囲３２または３３に記載の形質転換体。
【請求項３５】
ＧＤＰ−マンノース４，６−デヒドラターゼが、以下の（ａ）および（ｂ）からなる群から選ばれるＤＮＡがコードする蛋白質である、請求の範囲３４に記載の形質転換体。
（ａ）配列番号１で表される塩基配列からなるＤＮＡ；
（ｂ）配列番号１で表される塩基配列からなるＤＮＡとストリンジェントな条件でハイブリダイズし、かつＧＤＰ−マンノース４，６−デヒドラターゼ活性を有する蛋白質をコードするＤＮＡ。
【請求項３６】
ＧＤＰ−マンノース４，６−デヒドラターゼが、以下の（ａ）〜（ｃ）からなる群から選ばれる蛋白質である、請求の範囲３４に記載の形質転換体。
（ａ）配列番号２で表されるアミノ酸配列からなる蛋白質；
（ｂ）配列番号２で表されるアミノ酸配列において、１以上のアミノ酸が欠失、置換、挿入および／または付加されたアミノ酸配列からなり、かつＧＤＰ−マンノース４，６−デヒドラターゼ活性を有する蛋白質；
（ｃ）配列番号２で表されるアミノ酸配列と８０％以上の相同性を有するアミノ酸配列からなり、かつＧＤＰ−マンノース４，６−デヒドラターゼ活性を有する蛋白質。
【請求項３７】
ＧＤＰ−４−ケト−６−デオキシ−Ｄ−マンノース−３，５−エピメラーゼが、以下の（ａ）および（ｂ）からなる群から選ばれるＤＮＡがコードする蛋白質である、請求の範囲３４に記載の形質転換体。
（ａ）配列番号３で表される塩基配列からなるＤＮＡ；
（ｂ）配列番号３で表される塩基配列からなるＤＮＡとストリンジェントな条件でハイブリダイズし、かつＧＤＰ−４−ケト−６−デオキシ−Ｄ−マンノース−３，５−エピメラーゼ活性を有する蛋白質をコードするＤＮＡ。
【請求項３８】
ＧＤＰ−４−ケト−６−デオキシ−Ｄ−マンノース−３，５−エピメラーゼが、以下の（ａ）〜（ｃ）からなる群から選ばれる蛋白質である、請求の範囲３４に記載の形質転換体。
（ａ）配列番号４で表されるアミノ酸配列からなる蛋白質；
（ｂ）配列番号４で表されるアミノ酸配列において、１以上のアミノ酸が欠失、置換、挿入および／または付加されたアミノ酸配列からなり、かつＧＤＰ−４−ケト−６−デオキシ−Ｄ−マンノース−３，５−エピメラーゼ活性を有する蛋白質；
（ｃ）配列番号４で表されるアミノ酸配列と８０％以上の相同性を有するアミノ酸配列からなり、かつＧＤＰ−４−ケト−６−デオキシ−Ｄ−マンノース−３，５−エピメラーゼ活性を有する蛋白質。
【請求項３９】
Ｎ−グリコシド結合複合型糖鎖還元末端のＮ−アセチルグルコサミンの６位にフコースの１位がα結合する糖鎖修飾に関与する酵素がα１，６−フコシルトランスフェラーゼである請求の範囲３２または３３に記載の形質転換体。
【請求項４０】
α１，６−フコシルトランスフェラーゼが、以下の（ａ）〜（ｄ）からなる群から選ばれるＤＮＡがコードする蛋白質である、請求の範囲３９に記載の形質転換体。
（ａ）配列番号５で表される塩基配列からなるＤＮＡ；
（ｂ）配列番号６で表される塩基配列からなるＤＮＡ；
（ｃ）配列番号５で表される塩基配列からなるＤＮＡとストリンジェントな条件でハイブリダイズし、かつα１，６−フコシルトランスフェラーゼ活性を有する蛋白質をコードするＤＮＡ；
（ｄ）配列番号６で表される塩基配列からなるＤＮＡとストリンジェントな条件でハイブリダイズし、かつα１，６−フコシルトランスフェラーゼ活性を有する蛋白質をコードするＤＮＡ。
【請求項４１】
α１，６−フコシルトランスフェラーゼが、以下の（ａ）〜（ｆ）からなる群から選ばれる蛋白質である、請求の範囲３９に記載の形質転換体。
（ａ）配列番号７で表されるアミノ酸配列からなる蛋白質；
（ｂ）配列番号８で表されるアミノ酸配列からなる蛋白質；
（ｃ）配列番号７で表されるアミノ酸配列において、１以上のアミノ酸が欠失、置換、挿入および／または付加されたアミノ酸配列からなり、かつα１，６−フコシルトランスフェラーゼ活性を有する蛋白質；
（ｄ）配列番号８で表されるアミノ酸配列において、１以上のアミノ酸が欠失、置換、挿入および／または付加されたアミノ酸配列からなり、かつα１，６−フコシルトランスフェラーゼ活性を有する蛋白質；
（ｅ）配列番号７で表されるアミノ酸配列と８０％以上の相同性を有するアミノ酸配列からなり、かつα１，６−フコシルトランスフェラーゼ活性を有する蛋白質；
（ｆ）配列番号８で表されるアミノ酸配列と８０％以上の相同性を有するアミノ酸配列からなり、かつα１，６−フコシルトランスフェラーゼ活性を有する蛋白質。
【請求項４２】
形質転換体がＦＥＲＭ ＢＰ−８４７０である請求の範囲４１に記載の形質転換体。
【請求項４３】
宿主細胞が、下記の（ａ）〜（ｉ）からなる群から選ばれる細胞である請求の範囲３１〜４２のいずれか１項に記載の形質転換体。
（ａ）チャイニーズハムスター卵巣組織由来ＣＨＯ細胞；
（ｂ）ラットミエローマ細胞株ＹＢ２／３ＨＬ．Ｐ２．Ｇ１１．１６Ａｇ．２０細胞；
（ｃ）マウスミエローマ細胞株ＮＳＯ細胞；
（ｄ）マウスミエローマ細胞株ＳＰ２／０−Ａｇｌ４細胞；
（ｅ）シリアンハムスター腎臓組織由来ＢＨＫ細胞；
（ｆ）抗体を産生するハイブリドーマ細胞；
（ｇ）ヒト白血病細胞株ナマルバ細胞；
（ｈ）胚性幹細胞；
（ｉ）受精卵細胞。
【請求項４４】
請求の範囲３１〜４３のいずれか１項に記載の形質転換体を培地に培養し、培養物中に抗体組成物を生成蓄積させ、該抗体組成物を採取し、精製する、請求の範囲１〜３０のいずれか１項に記載の抗体組成物の製造方法。
【請求項４５】
請求の範囲４４に記載の製造方法により得られる、請求の範囲１〜３２のいずれか１項に記載の抗体組成物。
【請求項４６】
請求の範囲１〜３０および４５のいずれか１項に記載の抗体組成物を有効成分として含有する医薬。
【請求項４７】
請求の範囲１〜３０および４５のいずれか１項に記載の抗体組成物を有効成分として含有するガングリオシドＧＭ２関連疾患の治療薬。
【請求項４８】
ガングリオシドＧＭ２関連疾患が癌である請求の範囲４７に記載の治療薬。
【請求項１】
ガングリオシドＧＭ２に特異的に結合し、Ｎ−グリコシド結合複合型糖鎖をＦｃ領域に有する遺伝子組換え抗体分子からなる組成物であって、Ｎ−グリコシド結合複合型糖鎖が該糖鎖の還元末端のＮ−アセチルグルコサミンにフコースが結合していない糖鎖である抗体組成物。
【請求項２】
Ｎ−グリコシド結合複合型糖鎖が、該糖鎖の還元末端のＮ−アセチルグルコサミンの６位にフコースの１位がα結合していない糖鎖である、請求の範囲１に記載の抗体組成物。
【請求項３】
ガングリオシドＧＭ２発現細胞に特異的に結合する請求の範囲１または２に記載の抗体組成物。
【請求項４】
ガングリオシドＧＭ２発現細胞に対し細胞傷害活性を示す請求の範囲１〜３のいずれか１項に記載の抗体組成物。
【請求項５】
ガングリオシドＧＭ２発現細胞に対し、非ヒト動物由来ハイブリドーマが生産するモノクローナル抗体よりも高い細胞傷害活性を示す請求の範囲１〜４のいずれか１項に記載の抗体組成物。
【請求項６】
細胞傷害活性が抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）活性である請求の範囲４または５に記載の抗体組成物。
【請求項７】
細胞傷害活性が補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）活性である請求の範囲４または５に記載の抗体組成物。
【請求項８】
それぞれ配列番号１４、１５および１６で示されるアミノ酸配列からなる抗体分子重鎖（Ｈ鎖）可変領域（Ｖ領域）の相補性決定領域（ＣＤＲ）１、ＣＤＲ２、ＣＤＲ３を含む、請求の範囲１〜７のいずれか１項に記載の抗体組成物。
【請求項９】
それぞれ配列番号１７、１８および１９で示されるアミノ酸配列からなる抗体分子軽鎖（Ｌ鎖）可変領域（Ｖ領域）の相補性決定領域（ＣＤＲ）１、ＣＤＲ２、ＣＤＲ３を含む、請求の範囲１〜７のいずれか１項に記載の抗体組成物。
【請求項１０】
それぞれ配列番号１４、１５および１６で示されるアミノ酸配列からなる抗体分子重鎖（Ｈ鎖）可変領域（Ｖ領域）の相補性決定領域（ＣＤＲ）１、ＣＤＲ２、ＣＤＲ３、およびそれぞれ配列番号１７、１８および１９で示されるアミノ酸配列からなる抗体軽鎖（Ｌ鎖）Ｖ領域の相補性決定領域（ＣＤＲ）１、ＣＤＲ２、ＣＤＲ３を含む、請求の範囲１〜９のいずれか１項に記載の抗体組成物。
【請求項１１】
遺伝子組換え抗体がヒト型キメラ抗体またはヒト型ＣＤＲ移植抗体である請求の範囲１〜１０のいずれか１項に記載の抗体組成物。
【請求項１２】
ヒト型キメラ抗体がガングリオシドＧＭ２に特異的に結合するモノクローナル抗体の重鎖（Ｈ鎖）可変領域（Ｖ領域）および軽鎖（Ｌ鎖）Ｖ領域の相補性決定領域（ＣＤＲ）を含む、請求の範囲１１に記載の抗体組成物。
【請求項１３】
抗体分子の重鎖（Ｈ鎖）可変領域（Ｖ領域）が、配列番号２０で示されるアミノ酸配列を含む請求の範囲１２に記載の抗体組成物。
【請求項１４】
抗体分子の軽鎖（Ｌ鎖）可変領域（Ｖ領域）が、配列番号２１で示されるアミノ酸配列を含む請求の範囲１２に記載の抗体組成物。
【請求項１５】
抗体分子の重鎖（Ｈ鎖）可変領域（Ｖ領域）が、配列番号２０で示されるアミノ酸配列を含み、かつ、抗体分子の軽鎖（Ｌ鎖）Ｖ領域が、配列番号２１で示されるアミノ酸配列を含む請求の範囲１２〜１４のいずれか１項に記載のヒト型キメラ抗体組成物。
【請求項１６】
ヒト型ＣＤＲ移植抗体がガングリオシドＧＭ２に特異的に結合するモノクローナル抗体の重鎖（Ｈ鎖）可変領域（Ｖ領域）および軽鎖（Ｌ鎖）Ｖ領域の相補性決定領域（ＣＤＲ）を含む、請求の範囲１１に記載の抗体組成物。
【請求項１７】
ガングリオシドＧＭ２に特異的に結合するモノクローナル抗体の重鎖（Ｈ鎖）可変領域（Ｖ領域）および軽鎖（Ｌ鎖）Ｖ領域の相補性決定領域（ＣＤＲ）とヒト抗体のＨ鎖Ｖ領域およびＬ鎖Ｖ領域のフレームワーク領域（ＦＲ）を含む、請求の範囲１６に記載の抗体組成物。
【請求項１８】
ガングリオシドＧＭ２に特異的に結合するモノクローナル抗体の重鎖（Ｈ鎖）可変領域（Ｖ領域）および軽鎖（Ｌ鎖）Ｖ領域の相補性決定領域（ＣＤＲ）とヒト抗体のＨ鎖Ｖ領域およびＬ鎖Ｖ領域のフレームワーク領域（ＦＲ）、ならびにヒト抗体のＨ鎖定常領域（Ｃ領域）およびＬ鎖Ｃ領域を含む、請求の範囲１６または１７に記載の抗体組成物。
【請求項１９】
抗体分子の重鎖（Ｈ鎖）可変領域（Ｖ領域）が、配列番号２２で示されるアミノ酸配列、または配列番号２２で示されるアミノ酸配列のうち、３８番目のＡｒｇ、４０番目のＡｌａ、４３番目のＧｌｎおよび４４番目のＧｌｙのうち少なくとも１つのアミノ酸残基が他のアミノ酸残基に置換されたアミノ酸配列を含む、請求の範囲１６〜１８のいずれか１項に記載の抗体組成物。
【請求項２０】
抗体分子の重鎖（Ｈ鎖）可変領域（Ｖ領域）が、配列番号２３で示されるアミノ酸配列、または配列番号２３で示されるアミノ酸配列のうち、６７番目のＡｒｇ、７２番目のＡｌａ、８４番目のＳｅｒおよび９８番目のＡｒｇのうち少なくとも１つのアミノ酸残基が他のアミノ酸残基に置換されたアミノ酸配列を含む、請求の範囲１６〜１８のいずれか１項に記載の抗体組成物。
【請求項２１】
抗体分子の軽鎖（Ｌ鎖）可変領域（Ｖ領域）が、配列番号２４で示されるアミノ酸配列、または配列番号２４で示されるアミノ酸配列のうち、１５番目のＶａｌ、３５番目のＴｙｒ、４６番目のＬｅｕ、５９番目のＳｅｒ、６９番目のＡｓｐ、７０番目のＰｈｅ、７１番目のＴｈｒ、７２番目のＰｈｅおよび７６番目のＳｅｒから選ばれる少なくとも１つのアミノ酸残基が他のアミノ酸残基に置換されたアミノ酸配列を含む、請求の範囲１６〜１８のいずれか１項に記載の抗体組成物。
【請求項２２】
抗体分子の軽鎖（Ｌ鎖）可変領域（Ｖ領域）が、配列番号２５で示されるアミノ酸配列、または配列番号２５で示されるアミノ酸配列のうち、４番目のＭｅｔ、１１番目のＬｅｕ、１５番目のＶａｌ、３５番目のＴｙｒ、４２番目のＡｌａ、４６番目のＬｅｕ、６９番目のＡｓｐ、７０番目のＰｈｅ、７１番目のＴｈｒ、７７番目のＬｅｕおよび１０３番目のＶａｌから選ばれる少なくとも１つのアミノ酸残基が他のアミノ酸残基に置換されたアミノ酸配列を含む、請求の範囲１６〜１８のいずれか１項に記載の抗体組成物。
【請求項２３】
抗体分子の重鎖（Ｈ鎖）可変領域（Ｖ領域）が、配列番号２２で示されるアミノ酸配列、または配列番号２２で示されるアミノ酸配列のうち、３８番目のＡｒｇ、４０番目のＡｌａ、４３番目のＧｌｎおよび４４番目のＧｌｙから選ばれる少なくとも１つのアミノ酸残基が他のアミノ酸残基に置換されたアミノ酸配列を含み、かつ、抗体分子の軽鎖（Ｌ鎖）Ｖ領域が、配列番号２４で示されるアミノ酸配列、または配列番号２４で示されるアミノ酸配列のうち、１５番目のＶａｌ、３５番目のＴｙｒ、４８番目のＬｅｕ、５９番目のＳｅｒ、６９番目のＡｓｐ、７０番目のＰｈｅ、７１番目のＴｈｒ、７２番目のＰｈｅおよび７６番目のＳｅｒから選ばれる少なくとも１つのアミノ酸残基が他のアミノ酸残基に置換されたアミノ酸配列を含む、請求の範囲１６〜１９または２１に記載の抗体組成物。
【請求項２４】
抗体分子の重鎖（Ｈ鎖）可変領域（Ｖ領域）が、配列番号２３で示されるアミノ酸配列、または配列番号２３で示されるアミノ酸配列のうち、６７番目のＡｒｇ、７２番目のＡｌａ、８４番目のＳｅｒおよび９８番目のＡｒｇから選ばれる少なくとも１つのアミノ酸残基が他のアミノ酸残基に置換されたアミノ酸配列を含み、かつ、抗体分子の軽鎖（Ｌ鎖）Ｖ領域が、配列番号２４で示されるアミノ酸配列、または配列番号２４で示されるアミノ酸配列のうち、１５番目のｖａｌ、３５番目のＴｙｒ、４６番目のＬｅｕ、５９番目のＳｅｒ、６９番目のＡｓｐ、７０番目のＰｈｅ、７１番目のＴｈｒ、７２番目のＰｈｅおよび７６番目のＳｅｒから選ばれる少なくとも１つのアミノ酸残基が他のアミノ酸残基に置換されたアミノ酸配列を含む、請求の範囲１６〜１８、２０または２１に記載の抗体組成物。
【請求項２５】
抗体分子の重鎖（Ｈ鎖）可変領域（Ｖ領域）が、配列番号２３で示されるアミノ酸配列、または配列番号２３で示されるアミノ酸配列のうち、６７番目のＡｒｇ、７２番目のＡｌａ、８４番目のＳｅｒおよび９８番目のＡｒｇから選ばれる少なくとも１つのアミノ酸残基が他のアミノ酸残基に置換されたアミノ酸配列を含み、かつ、抗体分子の軽鎖（Ｌ鎖）Ｖ領域が、配列番号２５で示されるアミノ酸配列、または配列番号２５で示されるアミノ酸配列のうち、４番目のＭｅｔ、１１番目のＬｅｕ、１５番目のＶａｌ、３５番目のＴｙｒ、４２番目のＡｌａ、４６番目のＬｅｕ、６９番目のＡｓｐ、７０番目のＰｈｅ、７１番目のＴｈｒ、７７番目のＬｅｕおよび１０３番目のＶａｌから選ばれる少なくとも１つのアミノ酸残基が他のアミノ酸残基に置換されたアミノ酸配列を含む、請求の範囲１６〜１８、２０または２２のいずれか１項に記載の抗体組成物。
【請求項２６】
抗体分子の重鎖（Ｈ鎖）可変領域（Ｖ領域）が、それぞれ配列番号２２、２６、２７、２８、２９および３０で示されるアミノ酸配列から選ばれるアミノ酸配列を含む、請求の範囲１６〜２０、２３〜２５のいずれか１項に記載の抗体組成物。
【請求項２７】
抗体分子の軽鎖（Ｌ鎖）可変領域（Ｖ領域）が、それぞれ配列番号３１、３２、３３、３４および３５で示されるアミノ酸配列から選ばれるアミノ酸配列を含む請求の範囲１６〜１８、２１〜２５のいずれか１項に記載の抗体組成物。
【請求項２８】
抗体分子の重鎖（Ｈ鎖）可変領域（Ｖ領域）が、配列番号２２、２６、２７、２８、２９、３０で示されるから選ばれるアミノ酸配列から選ばれるアミノ酸配列を含み、抗体分子の軽鎖（Ｌ鎖）Ｖ領域が、配列番号３１、３２、３３、３４および３５で示されるアミノ酸配列から選ばれる少なくとも１つのアミノ酸残基が他のアミノ酸残基に置換されたアミノ酸配列から選ばれるアミノ酸配列を含む請求の範囲１６〜２７のいずれか１項に記載の抗体組成物。
【請求項２９】
抗体分子の重鎖（Ｈ鎖）可変領域（Ｖ領域）が、配列番号２６で示されるアミノ酸配列を含み、かつ、抗体分子の軽鎖（Ｌ鎖）Ｖ領域が配列番号３１または３２で示されるアミノ酸配列を含む請求の範囲１６〜１９、２１、２３、２６〜２８のいずれか１項に記載の抗体組成物。
【請求項３０】
抗体分子の重鎖（Ｈ鎖）可変領域（Ｖ領域）が、配列番号２２で示されるアミノ酸配列を含み、かつ、抗体分子の軽鎖（Ｌ鎖）Ｖ領域が配列番号３２または３５で示されるアミノ酸配列を含む請求の範囲１６〜１９、２１〜２３、２６〜２８のいずれか１項に記載の抗体組成物。
【請求項３１】
ガングリオシドＧＭ２に特異的に結合する抗体分子をコードするＤＮＡを宿主細胞に導入して得られる、請求の範囲１〜３０のいずれか１項に記載の抗体組成物を生産する形質転換体。
【請求項３２】
宿主細胞が、細胞内糖ヌクレオチドＧＤＰ−フコースの合成に関与する酵素、またはＮ−グリコシド結合複合型糖鎖還元末端のＮ−アセチルグルコサミンの６位にフコースの１位がα結合する糖鎖修飾に関与する酵素を失活するようにゲノムが改変された細胞である、請求の範囲３１に記載の形質転換体。
【請求項３３】
宿主細胞が、細胞内糖ヌクレオチドＧＤＰ−フコースの合成に関与する酵素、またはＮ−グリコシド結合複合型糖鎖還元末端のＮ−アセチルグルコサミンの６位にフコースの１位がα結合する糖鎖修飾に関与する酵素のゲノム上の対立遺伝子のすべてがノックアウトされた細胞である、請求の範囲３１に記載の形質転換体。
【請求項３４】
細胞内糖ヌクレオチドＧＤＰ−フコースの合成に関与する酵素が、ＧＤＰ−マンノース４，６−デヒドラターゼ（ＧＭＤ）またはＧＤＰ−４−ケト−６−デオキシ−Ｄ−マンノース−３，５−エピメラーゼ（Ｆｘ）から選ばれる酵素である、請求の範囲３２または３３に記載の形質転換体。
【請求項３５】
ＧＤＰ−マンノース４，６−デヒドラターゼが、以下の（ａ）および（ｂ）からなる群から選ばれるＤＮＡがコードする蛋白質である、請求の範囲３４に記載の形質転換体。
（ａ）配列番号１で表される塩基配列からなるＤＮＡ；
（ｂ）配列番号１で表される塩基配列からなるＤＮＡとストリンジェントな条件でハイブリダイズし、かつＧＤＰ−マンノース４，６−デヒドラターゼ活性を有する蛋白質をコードするＤＮＡ。
【請求項３６】
ＧＤＰ−マンノース４，６−デヒドラターゼが、以下の（ａ）〜（ｃ）からなる群から選ばれる蛋白質である、請求の範囲３４に記載の形質転換体。
（ａ）配列番号２で表されるアミノ酸配列からなる蛋白質；
（ｂ）配列番号２で表されるアミノ酸配列において、１以上のアミノ酸が欠失、置換、挿入および／または付加されたアミノ酸配列からなり、かつＧＤＰ−マンノース４，６−デヒドラターゼ活性を有する蛋白質；
（ｃ）配列番号２で表されるアミノ酸配列と８０％以上の相同性を有するアミノ酸配列からなり、かつＧＤＰ−マンノース４，６−デヒドラターゼ活性を有する蛋白質。
【請求項３７】
ＧＤＰ−４−ケト−６−デオキシ−Ｄ−マンノース−３，５−エピメラーゼが、以下の（ａ）および（ｂ）からなる群から選ばれるＤＮＡがコードする蛋白質である、請求の範囲３４に記載の形質転換体。
（ａ）配列番号３で表される塩基配列からなるＤＮＡ；
（ｂ）配列番号３で表される塩基配列からなるＤＮＡとストリンジェントな条件でハイブリダイズし、かつＧＤＰ−４−ケト−６−デオキシ−Ｄ−マンノース−３，５−エピメラーゼ活性を有する蛋白質をコードするＤＮＡ。
【請求項３８】
ＧＤＰ−４−ケト−６−デオキシ−Ｄ−マンノース−３，５−エピメラーゼが、以下の（ａ）〜（ｃ）からなる群から選ばれる蛋白質である、請求の範囲３４に記載の形質転換体。
（ａ）配列番号４で表されるアミノ酸配列からなる蛋白質；
（ｂ）配列番号４で表されるアミノ酸配列において、１以上のアミノ酸が欠失、置換、挿入および／または付加されたアミノ酸配列からなり、かつＧＤＰ−４−ケト−６−デオキシ−Ｄ−マンノース−３，５−エピメラーゼ活性を有する蛋白質；
（ｃ）配列番号４で表されるアミノ酸配列と８０％以上の相同性を有するアミノ酸配列からなり、かつＧＤＰ−４−ケト−６−デオキシ−Ｄ−マンノース−３，５−エピメラーゼ活性を有する蛋白質。
【請求項３９】
Ｎ−グリコシド結合複合型糖鎖還元末端のＮ−アセチルグルコサミンの６位にフコースの１位がα結合する糖鎖修飾に関与する酵素がα１，６−フコシルトランスフェラーゼである請求の範囲３２または３３に記載の形質転換体。
【請求項４０】
α１，６−フコシルトランスフェラーゼが、以下の（ａ）〜（ｄ）からなる群から選ばれるＤＮＡがコードする蛋白質である、請求の範囲３９に記載の形質転換体。
（ａ）配列番号５で表される塩基配列からなるＤＮＡ；
（ｂ）配列番号６で表される塩基配列からなるＤＮＡ；
（ｃ）配列番号５で表される塩基配列からなるＤＮＡとストリンジェントな条件でハイブリダイズし、かつα１，６−フコシルトランスフェラーゼ活性を有する蛋白質をコードするＤＮＡ；
（ｄ）配列番号６で表される塩基配列からなるＤＮＡとストリンジェントな条件でハイブリダイズし、かつα１，６−フコシルトランスフェラーゼ活性を有する蛋白質をコードするＤＮＡ。
【請求項４１】
α１，６−フコシルトランスフェラーゼが、以下の（ａ）〜（ｆ）からなる群から選ばれる蛋白質である、請求の範囲３９に記載の形質転換体。
（ａ）配列番号７で表されるアミノ酸配列からなる蛋白質；
（ｂ）配列番号８で表されるアミノ酸配列からなる蛋白質；
（ｃ）配列番号７で表されるアミノ酸配列において、１以上のアミノ酸が欠失、置換、挿入および／または付加されたアミノ酸配列からなり、かつα１，６−フコシルトランスフェラーゼ活性を有する蛋白質；
（ｄ）配列番号８で表されるアミノ酸配列において、１以上のアミノ酸が欠失、置換、挿入および／または付加されたアミノ酸配列からなり、かつα１，６−フコシルトランスフェラーゼ活性を有する蛋白質；
（ｅ）配列番号７で表されるアミノ酸配列と８０％以上の相同性を有するアミノ酸配列からなり、かつα１，６−フコシルトランスフェラーゼ活性を有する蛋白質；
（ｆ）配列番号８で表されるアミノ酸配列と８０％以上の相同性を有するアミノ酸配列からなり、かつα１，６−フコシルトランスフェラーゼ活性を有する蛋白質。
【請求項４２】
形質転換体がＦＥＲＭ ＢＰ−８４７０である請求の範囲４１に記載の形質転換体。
【請求項４３】
宿主細胞が、下記の（ａ）〜（ｉ）からなる群から選ばれる細胞である請求の範囲３１〜４２のいずれか１項に記載の形質転換体。
（ａ）チャイニーズハムスター卵巣組織由来ＣＨＯ細胞；
（ｂ）ラットミエローマ細胞株ＹＢ２／３ＨＬ．Ｐ２．Ｇ１１．１６Ａｇ．２０細胞；
（ｃ）マウスミエローマ細胞株ＮＳＯ細胞；
（ｄ）マウスミエローマ細胞株ＳＰ２／０−Ａｇｌ４細胞；
（ｅ）シリアンハムスター腎臓組織由来ＢＨＫ細胞；
（ｆ）抗体を産生するハイブリドーマ細胞；
（ｇ）ヒト白血病細胞株ナマルバ細胞；
（ｈ）胚性幹細胞；
（ｉ）受精卵細胞。
【請求項４４】
請求の範囲３１〜４３のいずれか１項に記載の形質転換体を培地に培養し、培養物中に抗体組成物を生成蓄積させ、該抗体組成物を採取し、精製する、請求の範囲１〜３０のいずれか１項に記載の抗体組成物の製造方法。
【請求項４５】
請求の範囲４４に記載の製造方法により得られる、請求の範囲１〜３２のいずれか１項に記載の抗体組成物。
【請求項４６】
請求の範囲１〜３０および４５のいずれか１項に記載の抗体組成物を有効成分として含有する医薬。
【請求項４７】
請求の範囲１〜３０および４５のいずれか１項に記載の抗体組成物を有効成分として含有するガングリオシドＧＭ２関連疾患の治療薬。
【請求項４８】
ガングリオシドＧＭ２関連疾患が癌である請求の範囲４７に記載の治療薬。
【国際公開番号】ＷＯ２００５／０３５５７８
【国際公開日】平成１７年４月２１日（２００５．４．２１）
【発行日】平成１９年１１月２２日（２００７．１１．２２）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００５−５１４６６９（Ｐ２００５−５１４６６９）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＪＰ２００４／０１５３１７
【国際出願日】平成１６年１０月８日（２００４．１０．８）
【出願人】（０００００１０２９）協和醗酵工業株式会社 (276)
【Ｆターム（参考）】
【国際公開日】平成１７年４月２１日（２００５．４．２１）
【発行日】平成１９年１１月２２日（２００７．１１．２２）
【国際特許分類】
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＪＰ２００４／０１５３１７
【国際出願日】平成１６年１０月８日（２００４．１０．８）
【出願人】（０００００１０２９）協和醗酵工業株式会社 (276)
【Ｆターム（参考）】
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