ショウガの種類の判別方法
【課題】本発明は、たとえ乾燥粉末となった状態でも、ショウガの種類を判別できる方法を提供することを目的とする。また、本発明は、当該方法で用いることができるプライマーセットを提供することも目的とする。
【解決手段】本発明に係るショウガの種類の判別方法は、試料からショウガの全ＤＮＡを得る工程；得られた全ＤＮＡを鋳型とし、ショウガレトロトランスポゾンの両方の末端部配列の相同ＤＮＡまたは当該末端部配列とストリンジェントな条件でハイブリダイズするＤＮＡをプライマーセットとするＰＣＲ反応を行う工程；および、ＰＣＲ反応液を電気泳動により解析する工程を含むことを特徴とする。
【解決手段】本発明に係るショウガの種類の判別方法は、試料からショウガの全ＤＮＡを得る工程；得られた全ＤＮＡを鋳型とし、ショウガレトロトランスポゾンの両方の末端部配列の相同ＤＮＡまたは当該末端部配列とストリンジェントな条件でハイブリダイズするＤＮＡをプライマーセットとするＰＣＲ反応を行う工程；および、ＰＣＲ反応液を電気泳動により解析する工程を含むことを特徴とする。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ショウガの種類を判別するための方法と、当該方法で用いることができるプライマーセットに関するものである。
【背景技術】
【０００２】
ショウガは古来より香辛料や食材として用いられている他、発汗作用や健胃作用を有するものとして、風邪の初期症状の緩和や胃腸機能の回復のための生薬としても利用されてきた。実際、ショウガに含まれるジンゲロールやショウガオールなどは血行促進作用や抗菌作用を示すことが知られている。
【０００３】
しかし、ショウガには様々な種類があり、上記の薬効などが同一であるとは限らない。例えば、ショウガはその塊茎の大きさにより大ショウガ、中ショウガ、小ショウガに分類され、一般に市販されているもののほとんどは大ショウガであるが、ジンゲロールなどの含有量は小ショウガなどに比べて低い。近年、国内では収量が多く生産効率の良い大ショウガが主に生産されており、労働に対して収量の少ない小ショウガは、ジンゲロールなどの有効成分は多いもののほとんど生産されていない。
【０００４】
また、本発明者は、種類の違いによるショウガの薬効の違いに着目し、研究を行ってきた。例えば特許文献１のとおり、小ショウガに属し、現在の日本ではほとんど栽培されていない金時ショウガが、他のショウガに比べて体温上昇効果に極めて優れることを見出した。かかる研究結果などに基づいて、本発明者は、金時ショウガを用いた健康食品の商品化に協力している。
【０００５】
しかし、ショウガを健康食品自体やその成分とする場合には、乾燥粉末とするのが一般的であるところ、収穫したばかりのショウガであればいざしらず、乾燥粉末の状態では、その外観からはいかなる種類のショウガが原料として用いられているか判別できない。よって、安価ではあるが薬効に乏しい大ショウガが原料として用いられていたり或いは混合されているなど、品質の低いショウガ健康食品が出回っていることに本発明者は心を痛めていた。実際、小ショウガの国内生産量と輸入量の合計に対して、健康食品に含まれているショウガの使用量は明らかに上回っており、かなりの量の大ショウガが健康食品の原料として用いられているのが現状である。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００６】
【特許文献１】特許第３４６２８３９号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
上述したように、古来よりショウガには様々な効能が知られていたが、現在流通しているショウガ健康食品には、薬効の低い大ショウガが使われている場合がある。このような健康食品は、薬効に劣るといえる。しかし、乾燥粉末となったショウガは、外観でその種類を特定するのは難しい。
【０００８】
そこで本発明の目的は、たとえ乾燥粉末となった状態でも、ショウガの種類を判別できる方法を提供することにある。また、本発明は、当該方法で用いることができるプライマーセットを提供することも目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００９】
本発明者は、上記課題を解決すべく、ゲノム解析によりショウガの種類を判別することを考えた。ところが、ショウガゲノムの塩基配列に関する情報はほとんど無く、唯一、ショウガゲノム中に普遍的且つ繰り返し認められるレトロトランスポゾンの塩基配列が知られているのみである。かかる状況下、本発明者は、レトロトランスポゾンに挟まれる領域のサイズがショウガの種類により異なり、その情報からショウガの種類を判別できることを見出して、本発明を完成した。
【００１０】
本発明に係るショウガの種類の判別方法は、試料からショウガの全ＤＮＡを得る工程；得られた全ＤＮＡを鋳型とし、ショウガレトロトランスポゾンの両方の末端部配列の相同ＤＮＡまたは当該末端部配列とストリンジェントな条件でハイブリダイズするＤＮＡをプライマーセットとするＰＣＲ反応を行う工程；および、ＰＣＲ反応液を電気泳動により解析する工程を含むことを特徴とする。
【００１１】
本発明方法によれば、電気泳動による解析工程において、１８０ｂｐ以上、２００ｂｐ以下にバンドが見られず、１５０ｂｐ以上、１７０ｂｐ以下にバンドが見られる場合、試料に含まれるショウガを大ショウガであると判断することができる。
【００１２】
本発明方法では、さらに、ショウガの全ＤＮＡを制限酵素により処理する工程を行うことが好ましい。制限酵素を用いることによって、ショウガの種類をより高精度で判別することが可能になる。
【００１３】
例えば、制限酵素としてＨｈａＩとＸｓｐＩを用い、且つ、電気泳動による解析工程において、４００ｂｐ以上、５００ｂｐ以下に２本のバンドが見られる場合、試料に含まれるショウガを白金時ショウガであると判断し、１本のバンドのみが見られる場合、試料に含まれるショウガを金時ショウガであると判断できる。
【００１４】
また、制限酵素としてＨｈａＩとＸｓｐＩを用い、且つ、電気泳動による解析工程において、１９００ｂｐ以上、２１００ｂｐ以下に２本のバンドが見られる場合、試料に含まれるショウガを白金時ショウガであると判断し、１本のバンドのみが見られる場合、試料に含まれるショウガを金時ショウガであると判断できる。
【００１５】
本発明方法で用い得るプライマーセットとしては、配列番号２のＤＮＡの相同ＤＮＡまたは配列番号２のＤＮＡの相補鎖にストリンジェントな条件でハイブリダイズするＤＮＡ、および配列番号３のＤＮＡの相同ＤＮＡまたは配列番号３のＤＮＡの相補鎖にストリンジェントな条件でハイブリダイズするＤＮＡのセットがある。
【発明の効果】
【００１６】
ショウガを有効成分として含む健康食品では、通常、ショウガは乾燥粉末の形で配合されている。生薬として用いられる場合も、一般的に、ショウガは塊茎をそのまま或いは蒸した上で乾燥され、粉末化されている。このような状態では、用いられているショウガの種類を外観から判断することは不可能である。よって、これらの品質を評価するには、従来は動物実験などに頼らざるを得ず、非常に手間や費用がかかっていた。その一方で、ショウガはその種類により薬効が異なるため、ショウガの種類の判別は重要である。
【００１７】
本発明によれば、たとえ試料が乾燥粉末の状態であっても、それに含まれているショウガの種類を簡便に特定することができる。従って本発明は、ショウガ健康食品や、ショウガ生薬である生姜や乾姜の品質を評価できるものとして、非常に有用である。
【図面の簡単な説明】
【００１８】
【図１】図１は、各種ショウガの全ＤＮＡを制限酵素処理することなく鋳型として本発明に係るＰＣＲ反応を行った電気泳動結果である。
【図２】図２は、各種ショウガの全ＤＮＡを制限酵素で処理したものを鋳型として本発明に係るＰＣＲ反応を行った電気泳動結果である。
【図３】図３は、近縁種である金時ショウガと白金時ショウガの全ＤＮＡを制限酵素で処理したものを鋳型として本発明に係るＰＣＲ反応を行った電気泳動結果のうち４００ｂｐ付近である。
【図４】図４は、近縁種である金時ショウガと白金時ショウガの全ＤＮＡを制限酵素で処理したものを鋳型として本発明に係るＰＣＲ反応を行った電気泳動結果のうち１５００ｂｐ付近である。
【発明を実施するための形態】
【００１９】
以下、本発明方法を、実施の順番に従って説明する。
【００２０】
１． 全ＤＮＡの取得工程
ショウガは学名をZingiber officinale Roseといい、主に塊茎の大きさによって、土佐大ショウガ、お多福ショウガ、インドショウガ、近江ショウガなどの大ショウガ；房州ショウガやラクダショウガなどの中ショウガ；金時ショウガ、白金時ショウガ、三州ショウガ、ラオス小ショウガ、谷中ショウガなどの小ショウガに分類される。これらショウガの種類により、主な薬効成分であるジンゲロールやショウガオールなどの含量が異なり、薬効が大きく相違する場合がある。
【００２１】
本発明方法によりショウガの種類を判別できる対象試料は、全ＤＮＡを含むものであれば特に制限されない。例えば、ショウガの葉、塊茎、根、およびこれらの乾燥物や乾燥粉末などの処理物などを対象試料として挙げることができる。なお、未処理の塊茎であれば大ショウガと小ショウガなどは判別できるが、小ショウガ同士などでは、塊茎などのみを比較しても判別が難しい場合がある。
【００２２】
本工程では、試料から全ＤＮＡを取得する。その方法としては常法を用いればよい。全ＤＮＡの取得方法としては様々なものがあるが、例えば、最も一般的な、セチルトリメチルアンモニウムブロマイドを用いるＣＴＡＢ法を行えばよい。
【００２３】
２． 制限酵素処理工程
本発明方法では、上記で得られたショウガの全ＤＮＡを、任意で制限酵素により処理してもよい。例えば、試料から得られた全ＤＮＡに何の処理を行わないまま鋳型とし、後述するＰＣＲ反応を行う場合、十分にショウガの種類の判別ができない場合がある。そのような場合には全ＤＮＡを制限酵素で処理し、得られたＰＣＲ反応液のみの解析結果、或いは当該解析結果と未処理全ＤＮＡのＰＣＲ反応液の解析結果とを合わせて考慮すれば、より正確にショウガの種類を判別することが可能になり得る。
【００２４】
制限酵素の種類は特に制限されないが、例えば、特定種のショウガの試料を用いた予備実験などで適切な結果が得られたものを決定すればよい。例えば、本発明者による実験的知見によれば、制限酵素としてＨｈａＩとＸｓｐＩを用いると、近縁種である金時ショウガと白金時ショウガとの識別が可能となる。
【００２５】
制限酵素による処理の条件は、使用する制限酵素に応じた一般的なものを採用すればよい。
【００２６】
３． ＰＣＲ反応工程
次に、試料から得られたショウガの全ＤＮＡ、および／または当該全ＤＮＡの制限酵素処理物を鋳型として、ＰＣＲ反応を行なう。かかるＰＣＲ反応の条件は一般的なものとすればよいが、本工程では、プライマーとして、ショウガレトロトランスポゾンの末端部配列の相同ＤＮＡまたは当該末端部配列とストリンジェントな条件でハイブリダイズするＤＮＡをプライマーとして用いる。
【００２７】
「ショウガレトロトランスポゾンの末端部配列」は、配列番号１に示す塩基配列の１〜２２および１７１〜２１１をいうものとする。
【００２８】
「ショウガレトロトランスポゾンの末端部配列の相同ＤＮＡ」とは、上記ショウガレトロトランスポゾンの末端部配列の全部または一部と同一、または当該末端部配列の全部または一部との相同性が７０％以上、より好ましくは８０％以上、さらに好ましくは９０％以上、特に好ましくは９５％以上のＤＮＡ、より具体的には、常法により測定された相同性が当該範囲にあるものや、当該末端部配列の全部または一部の相補鎖に対して、ストリンジェントな条件でハイブリダイズするＤＮＡをいうものとする。但し、通常のプライマーの長さは１５〜４０ｂｐ程度であることから、当該ＤＮＡの長さは１５ｂｐ以上とする。
【００２９】
なお、本発明において「ストリンジェントな条件」とは、ショウガレトロトランスポゾンの末端部配列の全部または一部の相補鎖を固定化したフィルタを使用し、０．７〜１．０Ｍ塩化ナトリウム存在下、６５℃でハイブリダイゼーションを行った後、０．１〜２×ＳＳＣ溶液（１５０ｍＭ塩化ナトリウムと１５ｍＭクエン酸ナトリウムを含む）を使用し、６５℃の条件下でフィルタを洗浄することをいうものとする。
【００３０】
また、「ショウガレトロトランスポゾンの末端部配列とストリンジェントな条件でハイブリダイズするＤＮＡ」とは、当該末端部配列と、上述したストリンジェントな条件でハイブリダイズするＤＮＡをいう。
【００３１】
４． 解析工程
次に、上記ＰＣＲ反応後の反応液を、電気泳動により解析する。
【００３２】
電気泳動は、常法を用いればよい。但し、本発明者による実験的知見によれば、ポリアクリルアミドゲルと銀染色との組み合わせで良好な結果が得られているので、かかる組み合わせを用いることが好ましい。
【００３３】
本工程から、電気泳動の結果より、試料に含まれるショウガの種類を特定する。電気泳動の結果とショウガの種類との関係は、予備実験などにより事前に明らかにしておけばよい。
【００３４】
例えば、全ＤＮＡを制限酵素により処理せずＰＣＲを行い、１８０ｂｐ以上、２００ｂｐ以下にバンドが見られず、１５０ｂｐ以上、１７０ｂｐ以下にバンドが見られる場合には、試料に含まれるショウガが大ショウガであると判断することができる。
【００３５】
一方、全ＤＮＡを制限酵素により処理せずＰＣＲを行い、１８０ｂｐ以上、２００ｂｐ以下と、１５０ｂｐ以上、１７０ｂｐ以下との両方にバンドが見られる場合には、三州ショウガまたはラオス小ショウガであり、両方にバンドが見られない場合には、金時ショウガまたは白金時ショウガであると判断できる。
【００３６】
また、１３００ｂｐ以上、１５００ｂｐ以下と、１９００ｂｐ以上、２１００以下との両方にバンドが見られない場合には、三州ショウガであると判断することができる。
【００３７】
全ＤＮＡをＨｈａＩとＸｓｐＩで処理した上でＰＣＲを行い、４００ｂｐ以上、５００ｂｐ以下に２本のバンドが見られる場合、および／または１９００ｂｐ以上、２１００ｂｐ以下に２本のバンドが見られる場合、試料に含まれるショウガを白金時ショウガであると判断し、前記領域に１本のバンドのみが見られる場合、試料に含まれるショウガを金時ショウガであると判断することができる。
【００３８】
また、全ＤＮＡをＨｈａＩとＸｓｐＩで処理した上でＰＣＲを行い、５５０ｂｐ以上、６５０ｂｐ以下にバンドが見られない場合には金時ショウガであると判断でき、見られる場合には、三州ショウガ、土佐大ショウガ、お多福ショウガ、ラオス小ショウガまたは白金時ショウガである可能性が高い。
【００３９】
さらに、８５ｂｐ以上、９５ｂｐ以下にバンドが見られる場合、および１６０ｂｐ以上、１８０ｂｐ以下にバンドが見られない場合は、三州ショウガであると判断できる。
【００４０】
今後、さらに実験データが蓄積すれば、より多くの種類のショウガをより高精度で判別できるようになると予想できる。そのようなデータの蓄積は、当業者であれば当然に実施可能である。
【００４１】
以上で説明した本発明方法によれば、たとえ乾燥粉末試料であっても、それに含まれるショウガの種類を判別することができ、動物実験などを行わなくとも、ショウガを含む健康食品などの製品の品質を評価することが可能になる。
【実施例】
【００４２】
以下、実施例を挙げて本発明をより具体的に説明するが、本発明はもとより下記実施例によって制限を受けるものではなく、前・後記の趣旨に適合し得る範囲で適当に変更を加えて実施することも勿論可能であり、それらはいずれも本発明の技術的範囲に包含される。
【００４３】
実施例１
（１） 全ＤＮＡの抽出
小ショウガである金時ショウガ、白金時ショウガ、三州ショウガとラオス小ショウガ、並びに大ショウガである土佐大ショウガとお多福ショウガのそれぞれの葉（約１ｇ）を液体窒素に加え、破砕した。別途、セチルトリメチルアンモニウムブロマイドを１．５ｗ／ｖ％、Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ（ｐＨ８）を７５ｍＭ、ＥＤＴＡを１５ｍＭ、塩化ナトリウムを１．０５Ｍ含む溶液（以下、「１．５×ＣＴＡＢ液」という）と、セチルトリメチルアンモニウムブロマイドを１．０ｗ／ｖ％、Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ（ｐＨ８）を５０ｍＭ、ＥＤＴＡを１０ｍＭ含む溶液（以下、「沈殿バッファ」という）を調製した。チューブに破砕した各葉を移し、１．５×ＣＴＡＢ液（０．７ｍＬ）を加え、５５℃で３０分間処理した。さらにクロロホルム（０．５ｍＬ）を加えて混和した後、１５０００ｒｐｍ、室温で３０分間遠心分離した。水層を別のチューブに移し、クロロホルム（０．５ｍＬ）を加え、１５０００ｒｐｍ、室温で１０分間遠心分離した。水層を別のチューブに移し、沈殿バッファ（０．５ｍＬ）を加え、５５℃で３０分間処理した後、１５０００ｒｐｍ、室温で３０分間遠心分離した。上清を除いた後、１Ｍ塩化ナトリウム／ＴＥ（塩化ナトリウム、Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ（ｐＨ８）とＥＤＴＡの混液）と１０ｍｇ／ｍＬ ＲＮａｓｅＡ（０．４ｍＬ）を加え、５５℃で２時間以上反応させることにより沈殿を溶解した。イソプロパノール（０．８ｍＬ）を加えて混和した後、生じた不溶成分を、１５０００ｒｐｍ、室温で３０分間遠心分離した。得られた不溶成分を７０％エタノール（０．５ｍＬ）で洗浄した後、Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ（ｐＨ８）とＥＤＴＡの混液で溶解した。
【００４４】
（２） ＰＣＲ反応１
ショウガゲノムの塩基配列に関する情報はほとんど無く、唯一、いずれのショウガゲノムに複数含まれる反復配列であるレトロトランスポゾン領域の塩基配列のみが公表されている。本発明者らは、レトロトランスポゾン領域に挟まれる領域のサイズがショウガの種類により異なるのではないかと考え、実験を行った。
【００４５】
先ず、特に性質が類似している金時ショウガと白金時ショウガの全ＤＮＡを試料とし、公知のショウガレトロトランスポゾンの両末端付近の塩基配列、具体的には配列番号１の塩基配列中、１〜２２および１８７〜２１１の配列を有するポリヌクレオチドを合成してプライマーとし、ＰＣＲ反応を行った。ＰＣＲ反応の条件は、９５℃で７分間反応させた後、９５℃で１分間、５２℃で１分間、７２℃で１分間のサイクルを３５回繰り返し、最後に７２℃で５分間反応させるものとした。
【００４６】
得られたＰＣＲ産物を電気泳動により解析したところ、２００ｂｐ付近に極めて強く発色するバンドが認められた。金時ショウガと白金時ショウガの両方において、当該２００ｂｐ付近のバンドの塩基配列を決定したところ、全く同一であった。当該塩基配列を、配列番号１として示す。なお、配列番号１中、１〜２２と１７１〜２１１の配列は、それぞれレトロトランスポゾンの末端配列である。
【００４７】
（３） 制限酵素処理
上記実施例１（２）のとおり、特に性質が類似している金時ショウガと白金時ショウガでは、レトロトランスポゾンに挟まれている２００ｂｐ付近の塩基配列は全く同一であったが、他のショウガでは異なる可能性があると考え、当該塩基配列を選択的に切断できる制限酵素であるＨｈａＩとＸｓｐＩを用い、上記実施例１（１）で得た各ショウガの全ＤＮＡを切断した。ＨｈａＩは、ＧＣＧＣ配列を認識して粘着末端状に切断し、ＸｓｐＩは、ＣＴＡＧ配列を認識して切断する。
【００４８】
具体的には、先ず上記実施例１（１）の各全ショウガＤＮＡ溶液（０．１６ｎｇ）へＨｈａＩ（Ｔａｋａｒａ社製，２〜６ｕｎｉｔ）を加え、３７℃で１６時間反応させた。続いてＸｓｐＩ（Ｔａｋａｒａ社製，２〜６ｕｎｉｔ）を加え、３７℃で６時間反応させた。
【００４９】
（４） ＰＣＲ反応２
上記実施例１（１）で得た各ショウガの全ＤＮＡ、または上記実施例１（３）で得たその制限酵素処理物を鋳型とし、上記実施例１（２）に示す条件でＰＣＲ反応を行った。
【００５０】
（５） 電気泳動による分析
上記実施例１（４）のＰＣＲ反応後の反応液（各１０μＬ）を４％ポリアクリルアミドゲルにアプライし、電気泳動を行った。電気泳動後のゲルを銀染色した。制限酵素による処理を行わなかった場合のゲルを図１に、制限酵素処理を行った場合のゲルを図２に示す。
【００５１】
図１のとおり、制限酵素処理を行わない場合、三州ショウガとラオス小ショウガのゲノム中には、約１９０ｂｐと約１６０ｂｐの両方のバンドが見られたのに対し、土佐大ショウガとお多福ショウガでは約１６０ｂｐのバンドのみが見られ、金時ショウガと白金時ショウガではこの近辺にバンドは見られなかった。また、土佐大ショウガ、お多福ショウガ、ラオス小ショウガ、金時ショウガおよび白金時ショウガでは約１４００ｂｐと約２０００ｂｐの両方のバンドが見られたのに対し、三州ショウガではこの近辺にバンドは見られなかった。以上の結果より、以下のショウガまたはショウガ群を区別することができる。
・ 三州ショウガ
・ 土佐大ショウガ − お多福ショウガ
・ ラオス小ショウガ
・ 金時ショウガ − 白金時ショウガ
【００５２】
また、以上の結果により、約１６０ｂｐにバンドを有する一方で約１９０ｂｐにはバンドを有さないものは、大ショウガであることが予測される。
【００５３】
さらに、図２のとおり、ＨｈａＩとＸｓｐＩでゲノムを選択的に切断した場合、三州ショウガ、土佐大ショウガ、お多福ショウガ、ラオス小ショウガおよび白金時ショウガでは約６２０ｂｐのバンドが見られるのに対して、金時ショウガではこの近辺のバンドは見られない。
【００５４】
よって、制限酵素ＨｈａＩおよびＸｓｐＩを用いる場合の結果により、さらに金時ショウガと白金時ショウガを区別することができる。
【００５５】
また、約９０ｂｐにバンドが見られる場合、および約１７０ｂｐにバンドが見られない場合は、三州ショウガであると判断できる。
【００５６】
なお、上記の実験では、ショウガの生葉から全ＤＮＡを得たが、全ＤＮＡは乾燥粉末からも取得できるので、同様の結果が乾燥粉末試料からでも得られると考えられる。
【００５７】
実施例２
上記実施例において、金時ショウガと白金時ショウガをより明確に区別するために、金時ショウガと白金時ショウガの全ＤＮＡを用い、ＨｈａＩによる反応を３７℃で１５時間、ＸｓｐＩによる反応を３７℃で５時間に変更した以外は同様にして、上記実施例１と同様に実験を行った、４００〜５００ｂｐ付近の電気泳動ゲルの写真を図３に、１５００ｂｐ付近の電気泳動ゲルの写真を図４に示す。
【００５８】
図３のとおり、白金時ショウガの場合、４００〜５００ｂｐ付近に２本のバンドが見られるのに対して、金時ショウガでは１本のバンドのみが見られる。また、図４のとおり、白金時ショウガの場合、約２０００ｂｐ付近に２本のバンドが見られるのに対して、金時ショウガでは１本のバンドのみが見られる。
【００５９】
よって、４００〜５００ｂｐ付近と約２０００ｂｐ付近のバンドを比較することにより、近縁種である金時ショウガと白金時ショウガを区別できることが明らかとなった。
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ショウガの種類を判別するための方法と、当該方法で用いることができるプライマーセットに関するものである。
【背景技術】
【０００２】
ショウガは古来より香辛料や食材として用いられている他、発汗作用や健胃作用を有するものとして、風邪の初期症状の緩和や胃腸機能の回復のための生薬としても利用されてきた。実際、ショウガに含まれるジンゲロールやショウガオールなどは血行促進作用や抗菌作用を示すことが知られている。
【０００３】
しかし、ショウガには様々な種類があり、上記の薬効などが同一であるとは限らない。例えば、ショウガはその塊茎の大きさにより大ショウガ、中ショウガ、小ショウガに分類され、一般に市販されているもののほとんどは大ショウガであるが、ジンゲロールなどの含有量は小ショウガなどに比べて低い。近年、国内では収量が多く生産効率の良い大ショウガが主に生産されており、労働に対して収量の少ない小ショウガは、ジンゲロールなどの有効成分は多いもののほとんど生産されていない。
【０００４】
また、本発明者は、種類の違いによるショウガの薬効の違いに着目し、研究を行ってきた。例えば特許文献１のとおり、小ショウガに属し、現在の日本ではほとんど栽培されていない金時ショウガが、他のショウガに比べて体温上昇効果に極めて優れることを見出した。かかる研究結果などに基づいて、本発明者は、金時ショウガを用いた健康食品の商品化に協力している。
【０００５】
しかし、ショウガを健康食品自体やその成分とする場合には、乾燥粉末とするのが一般的であるところ、収穫したばかりのショウガであればいざしらず、乾燥粉末の状態では、その外観からはいかなる種類のショウガが原料として用いられているか判別できない。よって、安価ではあるが薬効に乏しい大ショウガが原料として用いられていたり或いは混合されているなど、品質の低いショウガ健康食品が出回っていることに本発明者は心を痛めていた。実際、小ショウガの国内生産量と輸入量の合計に対して、健康食品に含まれているショウガの使用量は明らかに上回っており、かなりの量の大ショウガが健康食品の原料として用いられているのが現状である。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００６】
【特許文献１】特許第３４６２８３９号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
上述したように、古来よりショウガには様々な効能が知られていたが、現在流通しているショウガ健康食品には、薬効の低い大ショウガが使われている場合がある。このような健康食品は、薬効に劣るといえる。しかし、乾燥粉末となったショウガは、外観でその種類を特定するのは難しい。
【０００８】
そこで本発明の目的は、たとえ乾燥粉末となった状態でも、ショウガの種類を判別できる方法を提供することにある。また、本発明は、当該方法で用いることができるプライマーセットを提供することも目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００９】
本発明者は、上記課題を解決すべく、ゲノム解析によりショウガの種類を判別することを考えた。ところが、ショウガゲノムの塩基配列に関する情報はほとんど無く、唯一、ショウガゲノム中に普遍的且つ繰り返し認められるレトロトランスポゾンの塩基配列が知られているのみである。かかる状況下、本発明者は、レトロトランスポゾンに挟まれる領域のサイズがショウガの種類により異なり、その情報からショウガの種類を判別できることを見出して、本発明を完成した。
【００１０】
本発明に係るショウガの種類の判別方法は、試料からショウガの全ＤＮＡを得る工程；得られた全ＤＮＡを鋳型とし、ショウガレトロトランスポゾンの両方の末端部配列の相同ＤＮＡまたは当該末端部配列とストリンジェントな条件でハイブリダイズするＤＮＡをプライマーセットとするＰＣＲ反応を行う工程；および、ＰＣＲ反応液を電気泳動により解析する工程を含むことを特徴とする。
【００１１】
本発明方法によれば、電気泳動による解析工程において、１８０ｂｐ以上、２００ｂｐ以下にバンドが見られず、１５０ｂｐ以上、１７０ｂｐ以下にバンドが見られる場合、試料に含まれるショウガを大ショウガであると判断することができる。
【００１２】
本発明方法では、さらに、ショウガの全ＤＮＡを制限酵素により処理する工程を行うことが好ましい。制限酵素を用いることによって、ショウガの種類をより高精度で判別することが可能になる。
【００１３】
例えば、制限酵素としてＨｈａＩとＸｓｐＩを用い、且つ、電気泳動による解析工程において、４００ｂｐ以上、５００ｂｐ以下に２本のバンドが見られる場合、試料に含まれるショウガを白金時ショウガであると判断し、１本のバンドのみが見られる場合、試料に含まれるショウガを金時ショウガであると判断できる。
【００１４】
また、制限酵素としてＨｈａＩとＸｓｐＩを用い、且つ、電気泳動による解析工程において、１９００ｂｐ以上、２１００ｂｐ以下に２本のバンドが見られる場合、試料に含まれるショウガを白金時ショウガであると判断し、１本のバンドのみが見られる場合、試料に含まれるショウガを金時ショウガであると判断できる。
【００１５】
本発明方法で用い得るプライマーセットとしては、配列番号２のＤＮＡの相同ＤＮＡまたは配列番号２のＤＮＡの相補鎖にストリンジェントな条件でハイブリダイズするＤＮＡ、および配列番号３のＤＮＡの相同ＤＮＡまたは配列番号３のＤＮＡの相補鎖にストリンジェントな条件でハイブリダイズするＤＮＡのセットがある。
【発明の効果】
【００１６】
ショウガを有効成分として含む健康食品では、通常、ショウガは乾燥粉末の形で配合されている。生薬として用いられる場合も、一般的に、ショウガは塊茎をそのまま或いは蒸した上で乾燥され、粉末化されている。このような状態では、用いられているショウガの種類を外観から判断することは不可能である。よって、これらの品質を評価するには、従来は動物実験などに頼らざるを得ず、非常に手間や費用がかかっていた。その一方で、ショウガはその種類により薬効が異なるため、ショウガの種類の判別は重要である。
【００１７】
本発明によれば、たとえ試料が乾燥粉末の状態であっても、それに含まれているショウガの種類を簡便に特定することができる。従って本発明は、ショウガ健康食品や、ショウガ生薬である生姜や乾姜の品質を評価できるものとして、非常に有用である。
【図面の簡単な説明】
【００１８】
【図１】図１は、各種ショウガの全ＤＮＡを制限酵素処理することなく鋳型として本発明に係るＰＣＲ反応を行った電気泳動結果である。
【図２】図２は、各種ショウガの全ＤＮＡを制限酵素で処理したものを鋳型として本発明に係るＰＣＲ反応を行った電気泳動結果である。
【図３】図３は、近縁種である金時ショウガと白金時ショウガの全ＤＮＡを制限酵素で処理したものを鋳型として本発明に係るＰＣＲ反応を行った電気泳動結果のうち４００ｂｐ付近である。
【図４】図４は、近縁種である金時ショウガと白金時ショウガの全ＤＮＡを制限酵素で処理したものを鋳型として本発明に係るＰＣＲ反応を行った電気泳動結果のうち１５００ｂｐ付近である。
【発明を実施するための形態】
【００１９】
以下、本発明方法を、実施の順番に従って説明する。
【００２０】
１． 全ＤＮＡの取得工程
ショウガは学名をZingiber officinale Roseといい、主に塊茎の大きさによって、土佐大ショウガ、お多福ショウガ、インドショウガ、近江ショウガなどの大ショウガ；房州ショウガやラクダショウガなどの中ショウガ；金時ショウガ、白金時ショウガ、三州ショウガ、ラオス小ショウガ、谷中ショウガなどの小ショウガに分類される。これらショウガの種類により、主な薬効成分であるジンゲロールやショウガオールなどの含量が異なり、薬効が大きく相違する場合がある。
【００２１】
本発明方法によりショウガの種類を判別できる対象試料は、全ＤＮＡを含むものであれば特に制限されない。例えば、ショウガの葉、塊茎、根、およびこれらの乾燥物や乾燥粉末などの処理物などを対象試料として挙げることができる。なお、未処理の塊茎であれば大ショウガと小ショウガなどは判別できるが、小ショウガ同士などでは、塊茎などのみを比較しても判別が難しい場合がある。
【００２２】
本工程では、試料から全ＤＮＡを取得する。その方法としては常法を用いればよい。全ＤＮＡの取得方法としては様々なものがあるが、例えば、最も一般的な、セチルトリメチルアンモニウムブロマイドを用いるＣＴＡＢ法を行えばよい。
【００２３】
２． 制限酵素処理工程
本発明方法では、上記で得られたショウガの全ＤＮＡを、任意で制限酵素により処理してもよい。例えば、試料から得られた全ＤＮＡに何の処理を行わないまま鋳型とし、後述するＰＣＲ反応を行う場合、十分にショウガの種類の判別ができない場合がある。そのような場合には全ＤＮＡを制限酵素で処理し、得られたＰＣＲ反応液のみの解析結果、或いは当該解析結果と未処理全ＤＮＡのＰＣＲ反応液の解析結果とを合わせて考慮すれば、より正確にショウガの種類を判別することが可能になり得る。
【００２４】
制限酵素の種類は特に制限されないが、例えば、特定種のショウガの試料を用いた予備実験などで適切な結果が得られたものを決定すればよい。例えば、本発明者による実験的知見によれば、制限酵素としてＨｈａＩとＸｓｐＩを用いると、近縁種である金時ショウガと白金時ショウガとの識別が可能となる。
【００２５】
制限酵素による処理の条件は、使用する制限酵素に応じた一般的なものを採用すればよい。
【００２６】
３． ＰＣＲ反応工程
次に、試料から得られたショウガの全ＤＮＡ、および／または当該全ＤＮＡの制限酵素処理物を鋳型として、ＰＣＲ反応を行なう。かかるＰＣＲ反応の条件は一般的なものとすればよいが、本工程では、プライマーとして、ショウガレトロトランスポゾンの末端部配列の相同ＤＮＡまたは当該末端部配列とストリンジェントな条件でハイブリダイズするＤＮＡをプライマーとして用いる。
【００２７】
「ショウガレトロトランスポゾンの末端部配列」は、配列番号１に示す塩基配列の１〜２２および１７１〜２１１をいうものとする。
【００２８】
「ショウガレトロトランスポゾンの末端部配列の相同ＤＮＡ」とは、上記ショウガレトロトランスポゾンの末端部配列の全部または一部と同一、または当該末端部配列の全部または一部との相同性が７０％以上、より好ましくは８０％以上、さらに好ましくは９０％以上、特に好ましくは９５％以上のＤＮＡ、より具体的には、常法により測定された相同性が当該範囲にあるものや、当該末端部配列の全部または一部の相補鎖に対して、ストリンジェントな条件でハイブリダイズするＤＮＡをいうものとする。但し、通常のプライマーの長さは１５〜４０ｂｐ程度であることから、当該ＤＮＡの長さは１５ｂｐ以上とする。
【００２９】
なお、本発明において「ストリンジェントな条件」とは、ショウガレトロトランスポゾンの末端部配列の全部または一部の相補鎖を固定化したフィルタを使用し、０．７〜１．０Ｍ塩化ナトリウム存在下、６５℃でハイブリダイゼーションを行った後、０．１〜２×ＳＳＣ溶液（１５０ｍＭ塩化ナトリウムと１５ｍＭクエン酸ナトリウムを含む）を使用し、６５℃の条件下でフィルタを洗浄することをいうものとする。
【００３０】
また、「ショウガレトロトランスポゾンの末端部配列とストリンジェントな条件でハイブリダイズするＤＮＡ」とは、当該末端部配列と、上述したストリンジェントな条件でハイブリダイズするＤＮＡをいう。
【００３１】
４． 解析工程
次に、上記ＰＣＲ反応後の反応液を、電気泳動により解析する。
【００３２】
電気泳動は、常法を用いればよい。但し、本発明者による実験的知見によれば、ポリアクリルアミドゲルと銀染色との組み合わせで良好な結果が得られているので、かかる組み合わせを用いることが好ましい。
【００３３】
本工程から、電気泳動の結果より、試料に含まれるショウガの種類を特定する。電気泳動の結果とショウガの種類との関係は、予備実験などにより事前に明らかにしておけばよい。
【００３４】
例えば、全ＤＮＡを制限酵素により処理せずＰＣＲを行い、１８０ｂｐ以上、２００ｂｐ以下にバンドが見られず、１５０ｂｐ以上、１７０ｂｐ以下にバンドが見られる場合には、試料に含まれるショウガが大ショウガであると判断することができる。
【００３５】
一方、全ＤＮＡを制限酵素により処理せずＰＣＲを行い、１８０ｂｐ以上、２００ｂｐ以下と、１５０ｂｐ以上、１７０ｂｐ以下との両方にバンドが見られる場合には、三州ショウガまたはラオス小ショウガであり、両方にバンドが見られない場合には、金時ショウガまたは白金時ショウガであると判断できる。
【００３６】
また、１３００ｂｐ以上、１５００ｂｐ以下と、１９００ｂｐ以上、２１００以下との両方にバンドが見られない場合には、三州ショウガであると判断することができる。
【００３７】
全ＤＮＡをＨｈａＩとＸｓｐＩで処理した上でＰＣＲを行い、４００ｂｐ以上、５００ｂｐ以下に２本のバンドが見られる場合、および／または１９００ｂｐ以上、２１００ｂｐ以下に２本のバンドが見られる場合、試料に含まれるショウガを白金時ショウガであると判断し、前記領域に１本のバンドのみが見られる場合、試料に含まれるショウガを金時ショウガであると判断することができる。
【００３８】
また、全ＤＮＡをＨｈａＩとＸｓｐＩで処理した上でＰＣＲを行い、５５０ｂｐ以上、６５０ｂｐ以下にバンドが見られない場合には金時ショウガであると判断でき、見られる場合には、三州ショウガ、土佐大ショウガ、お多福ショウガ、ラオス小ショウガまたは白金時ショウガである可能性が高い。
【００３９】
さらに、８５ｂｐ以上、９５ｂｐ以下にバンドが見られる場合、および１６０ｂｐ以上、１８０ｂｐ以下にバンドが見られない場合は、三州ショウガであると判断できる。
【００４０】
今後、さらに実験データが蓄積すれば、より多くの種類のショウガをより高精度で判別できるようになると予想できる。そのようなデータの蓄積は、当業者であれば当然に実施可能である。
【００４１】
以上で説明した本発明方法によれば、たとえ乾燥粉末試料であっても、それに含まれるショウガの種類を判別することができ、動物実験などを行わなくとも、ショウガを含む健康食品などの製品の品質を評価することが可能になる。
【実施例】
【００４２】
以下、実施例を挙げて本発明をより具体的に説明するが、本発明はもとより下記実施例によって制限を受けるものではなく、前・後記の趣旨に適合し得る範囲で適当に変更を加えて実施することも勿論可能であり、それらはいずれも本発明の技術的範囲に包含される。
【００４３】
実施例１
（１） 全ＤＮＡの抽出
小ショウガである金時ショウガ、白金時ショウガ、三州ショウガとラオス小ショウガ、並びに大ショウガである土佐大ショウガとお多福ショウガのそれぞれの葉（約１ｇ）を液体窒素に加え、破砕した。別途、セチルトリメチルアンモニウムブロマイドを１．５ｗ／ｖ％、Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ（ｐＨ８）を７５ｍＭ、ＥＤＴＡを１５ｍＭ、塩化ナトリウムを１．０５Ｍ含む溶液（以下、「１．５×ＣＴＡＢ液」という）と、セチルトリメチルアンモニウムブロマイドを１．０ｗ／ｖ％、Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ（ｐＨ８）を５０ｍＭ、ＥＤＴＡを１０ｍＭ含む溶液（以下、「沈殿バッファ」という）を調製した。チューブに破砕した各葉を移し、１．５×ＣＴＡＢ液（０．７ｍＬ）を加え、５５℃で３０分間処理した。さらにクロロホルム（０．５ｍＬ）を加えて混和した後、１５０００ｒｐｍ、室温で３０分間遠心分離した。水層を別のチューブに移し、クロロホルム（０．５ｍＬ）を加え、１５０００ｒｐｍ、室温で１０分間遠心分離した。水層を別のチューブに移し、沈殿バッファ（０．５ｍＬ）を加え、５５℃で３０分間処理した後、１５０００ｒｐｍ、室温で３０分間遠心分離した。上清を除いた後、１Ｍ塩化ナトリウム／ＴＥ（塩化ナトリウム、Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ（ｐＨ８）とＥＤＴＡの混液）と１０ｍｇ／ｍＬ ＲＮａｓｅＡ（０．４ｍＬ）を加え、５５℃で２時間以上反応させることにより沈殿を溶解した。イソプロパノール（０．８ｍＬ）を加えて混和した後、生じた不溶成分を、１５０００ｒｐｍ、室温で３０分間遠心分離した。得られた不溶成分を７０％エタノール（０．５ｍＬ）で洗浄した後、Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ（ｐＨ８）とＥＤＴＡの混液で溶解した。
【００４４】
（２） ＰＣＲ反応１
ショウガゲノムの塩基配列に関する情報はほとんど無く、唯一、いずれのショウガゲノムに複数含まれる反復配列であるレトロトランスポゾン領域の塩基配列のみが公表されている。本発明者らは、レトロトランスポゾン領域に挟まれる領域のサイズがショウガの種類により異なるのではないかと考え、実験を行った。
【００４５】
先ず、特に性質が類似している金時ショウガと白金時ショウガの全ＤＮＡを試料とし、公知のショウガレトロトランスポゾンの両末端付近の塩基配列、具体的には配列番号１の塩基配列中、１〜２２および１８７〜２１１の配列を有するポリヌクレオチドを合成してプライマーとし、ＰＣＲ反応を行った。ＰＣＲ反応の条件は、９５℃で７分間反応させた後、９５℃で１分間、５２℃で１分間、７２℃で１分間のサイクルを３５回繰り返し、最後に７２℃で５分間反応させるものとした。
【００４６】
得られたＰＣＲ産物を電気泳動により解析したところ、２００ｂｐ付近に極めて強く発色するバンドが認められた。金時ショウガと白金時ショウガの両方において、当該２００ｂｐ付近のバンドの塩基配列を決定したところ、全く同一であった。当該塩基配列を、配列番号１として示す。なお、配列番号１中、１〜２２と１７１〜２１１の配列は、それぞれレトロトランスポゾンの末端配列である。
【００４７】
（３） 制限酵素処理
上記実施例１（２）のとおり、特に性質が類似している金時ショウガと白金時ショウガでは、レトロトランスポゾンに挟まれている２００ｂｐ付近の塩基配列は全く同一であったが、他のショウガでは異なる可能性があると考え、当該塩基配列を選択的に切断できる制限酵素であるＨｈａＩとＸｓｐＩを用い、上記実施例１（１）で得た各ショウガの全ＤＮＡを切断した。ＨｈａＩは、ＧＣＧＣ配列を認識して粘着末端状に切断し、ＸｓｐＩは、ＣＴＡＧ配列を認識して切断する。
【００４８】
具体的には、先ず上記実施例１（１）の各全ショウガＤＮＡ溶液（０．１６ｎｇ）へＨｈａＩ（Ｔａｋａｒａ社製，２〜６ｕｎｉｔ）を加え、３７℃で１６時間反応させた。続いてＸｓｐＩ（Ｔａｋａｒａ社製，２〜６ｕｎｉｔ）を加え、３７℃で６時間反応させた。
【００４９】
（４） ＰＣＲ反応２
上記実施例１（１）で得た各ショウガの全ＤＮＡ、または上記実施例１（３）で得たその制限酵素処理物を鋳型とし、上記実施例１（２）に示す条件でＰＣＲ反応を行った。
【００５０】
（５） 電気泳動による分析
上記実施例１（４）のＰＣＲ反応後の反応液（各１０μＬ）を４％ポリアクリルアミドゲルにアプライし、電気泳動を行った。電気泳動後のゲルを銀染色した。制限酵素による処理を行わなかった場合のゲルを図１に、制限酵素処理を行った場合のゲルを図２に示す。
【００５１】
図１のとおり、制限酵素処理を行わない場合、三州ショウガとラオス小ショウガのゲノム中には、約１９０ｂｐと約１６０ｂｐの両方のバンドが見られたのに対し、土佐大ショウガとお多福ショウガでは約１６０ｂｐのバンドのみが見られ、金時ショウガと白金時ショウガではこの近辺にバンドは見られなかった。また、土佐大ショウガ、お多福ショウガ、ラオス小ショウガ、金時ショウガおよび白金時ショウガでは約１４００ｂｐと約２０００ｂｐの両方のバンドが見られたのに対し、三州ショウガではこの近辺にバンドは見られなかった。以上の結果より、以下のショウガまたはショウガ群を区別することができる。
・ 三州ショウガ
・ 土佐大ショウガ − お多福ショウガ
・ ラオス小ショウガ
・ 金時ショウガ − 白金時ショウガ
【００５２】
また、以上の結果により、約１６０ｂｐにバンドを有する一方で約１９０ｂｐにはバンドを有さないものは、大ショウガであることが予測される。
【００５３】
さらに、図２のとおり、ＨｈａＩとＸｓｐＩでゲノムを選択的に切断した場合、三州ショウガ、土佐大ショウガ、お多福ショウガ、ラオス小ショウガおよび白金時ショウガでは約６２０ｂｐのバンドが見られるのに対して、金時ショウガではこの近辺のバンドは見られない。
【００５４】
よって、制限酵素ＨｈａＩおよびＸｓｐＩを用いる場合の結果により、さらに金時ショウガと白金時ショウガを区別することができる。
【００５５】
また、約９０ｂｐにバンドが見られる場合、および約１７０ｂｐにバンドが見られない場合は、三州ショウガであると判断できる。
【００５６】
なお、上記の実験では、ショウガの生葉から全ＤＮＡを得たが、全ＤＮＡは乾燥粉末からも取得できるので、同様の結果が乾燥粉末試料からでも得られると考えられる。
【００５７】
実施例２
上記実施例において、金時ショウガと白金時ショウガをより明確に区別するために、金時ショウガと白金時ショウガの全ＤＮＡを用い、ＨｈａＩによる反応を３７℃で１５時間、ＸｓｐＩによる反応を３７℃で５時間に変更した以外は同様にして、上記実施例１と同様に実験を行った、４００〜５００ｂｐ付近の電気泳動ゲルの写真を図３に、１５００ｂｐ付近の電気泳動ゲルの写真を図４に示す。
【００５８】
図３のとおり、白金時ショウガの場合、４００〜５００ｂｐ付近に２本のバンドが見られるのに対して、金時ショウガでは１本のバンドのみが見られる。また、図４のとおり、白金時ショウガの場合、約２０００ｂｐ付近に２本のバンドが見られるのに対して、金時ショウガでは１本のバンドのみが見られる。
【００５９】
よって、４００〜５００ｂｐ付近と約２０００ｂｐ付近のバンドを比較することにより、近縁種である金時ショウガと白金時ショウガを区別できることが明らかとなった。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ショウガの種類を判別する方法であって、
試料からショウガの全ＤＮＡを得る工程；
得られた全ＤＮＡを鋳型とし、ショウガレトロトランスポゾンの両方の末端部配列の相同ＤＮＡまたは当該末端部配列とストリンジェントな条件でハイブリダイズするＤＮＡをプライマーセットとするＰＣＲ反応を行う工程；
ＰＣＲ反応液を電気泳動により解析する工程；
を含むことを特徴とする方法。
【請求項２】
電気泳動による解析工程において、１８０ｂｐ以上、２００ｂｐ以下にバンドが見られず、１５０ｂｐ以上、１７０ｂｐ以下にバンドが見られる場合、試料に含まれるショウガを大ショウガであると判断する、請求項１に記載のショウガの種類の判別方法。
【請求項３】
さらに、ショウガの全ＤＮＡを制限酵素により処理する工程を含む請求項１に記載のショウガの種類の判別方法。
【請求項４】
制限酵素としてＨｈａＩとＸｓｐＩを用い、且つ、電気泳動による解析工程において、４００ｂｐ以上、５００ｂｐ以下に２本のバンドが見られる場合、試料に含まれるショウガを白金時ショウガであると判断し、１本のバンドのみが見られる場合、試料に含まれるショウガを金時ショウガであると判断する、請求項３に記載のショウガの種類の判別方法。
【請求項５】
制限酵素としてＨｈａＩとＸｓｐＩを用い、且つ、電気泳動による解析工程において、１９００ｂｐ以上、２１００ｂｐ以下に２本のバンドが見られる場合、試料に含まれるショウガを白金時ショウガであると判断し、１本のバンドのみが見られる場合、試料に含まれるショウガを金時ショウガであると判断する、請求項３に記載のショウガの種類の判別方法。
【請求項６】
プライマーセットとして、配列番号２のＤＮＡの相同ＤＮＡまたは配列番号２のＤＮＡの相補鎖にストリンジェントな条件でハイブリダイズするＤＮＡ、および配列番号３のＤＮＡの相同ＤＮＡまたは配列番号３のＤＮＡの相補鎖にストリンジェントな条件でハイブリダイズするＤＮＡを用いる請求項１〜５のいずれかに記載のショウガの種類の判別方法。
【請求項７】
配列番号２のＤＮＡの相同ＤＮＡまたは配列番号２のＤＮＡの相補鎖にストリンジェントな条件でハイブリダイズするＤＮＡ、および配列番号３のＤＮＡの相同ＤＮＡまたは配列番号３のＤＮＡの相補鎖にストリンジェントな条件でハイブリダイズするＤＮＡからなるプライマーセット。
【請求項１】
ショウガの種類を判別する方法であって、
試料からショウガの全ＤＮＡを得る工程；
得られた全ＤＮＡを鋳型とし、ショウガレトロトランスポゾンの両方の末端部配列の相同ＤＮＡまたは当該末端部配列とストリンジェントな条件でハイブリダイズするＤＮＡをプライマーセットとするＰＣＲ反応を行う工程；
ＰＣＲ反応液を電気泳動により解析する工程；
を含むことを特徴とする方法。
【請求項２】
電気泳動による解析工程において、１８０ｂｐ以上、２００ｂｐ以下にバンドが見られず、１５０ｂｐ以上、１７０ｂｐ以下にバンドが見られる場合、試料に含まれるショウガを大ショウガであると判断する、請求項１に記載のショウガの種類の判別方法。
【請求項３】
さらに、ショウガの全ＤＮＡを制限酵素により処理する工程を含む請求項１に記載のショウガの種類の判別方法。
【請求項４】
制限酵素としてＨｈａＩとＸｓｐＩを用い、且つ、電気泳動による解析工程において、４００ｂｐ以上、５００ｂｐ以下に２本のバンドが見られる場合、試料に含まれるショウガを白金時ショウガであると判断し、１本のバンドのみが見られる場合、試料に含まれるショウガを金時ショウガであると判断する、請求項３に記載のショウガの種類の判別方法。
【請求項５】
制限酵素としてＨｈａＩとＸｓｐＩを用い、且つ、電気泳動による解析工程において、１９００ｂｐ以上、２１００ｂｐ以下に２本のバンドが見られる場合、試料に含まれるショウガを白金時ショウガであると判断し、１本のバンドのみが見られる場合、試料に含まれるショウガを金時ショウガであると判断する、請求項３に記載のショウガの種類の判別方法。
【請求項６】
プライマーセットとして、配列番号２のＤＮＡの相同ＤＮＡまたは配列番号２のＤＮＡの相補鎖にストリンジェントな条件でハイブリダイズするＤＮＡ、および配列番号３のＤＮＡの相同ＤＮＡまたは配列番号３のＤＮＡの相補鎖にストリンジェントな条件でハイブリダイズするＤＮＡを用いる請求項１〜５のいずれかに記載のショウガの種類の判別方法。
【請求項７】
配列番号２のＤＮＡの相同ＤＮＡまたは配列番号２のＤＮＡの相補鎖にストリンジェントな条件でハイブリダイズするＤＮＡ、および配列番号３のＤＮＡの相同ＤＮＡまたは配列番号３のＤＮＡの相補鎖にストリンジェントな条件でハイブリダイズするＤＮＡからなるプライマーセット。
【図１】
【図２】
【図３】
【図４】
【図２】
【図３】
【図４】
【公開番号】特開２０１１−１０３８２８（Ｐ２０１１−１０３８２８Ａ）
【公開日】平成２３年６月２日（２０１１．６．２）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００９−２６４０３３（Ｐ２００９−２６４０３３）
【出願日】平成２１年１１月１９日（２００９．１１．１９）
【出願人】（５９８０９２２７０）有限会社 坂本薬草園 (11)
【出願人】（５９９０００２１２）香栄興業株式会社 (33)
【Ｆターム（参考）】
【公開日】平成２３年６月２日（２０１１．６．２）
【国際特許分類】
【出願日】平成２１年１１月１９日（２００９．１１．１９）
【出願人】（５９８０９２２７０）有限会社 坂本薬草園 (11)
【出願人】（５９９０００２１２）香栄興業株式会社 (33)
【Ｆターム（参考）】
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