合成胆汁酸組成物、その方法およびその調製
【課題】胆汁酸組成物、方法および調製を提供すること
【解決手段】
定義された医薬組成物として十分な量の適切な胆汁酸およびその合成方法がここで提供される。そのように提供される胆汁酸組成物および方法は、胆汁酸を自然に産生する哺乳動物または微生物生命体から単離されるものではない。一態様において、動物起源のおよび哺乳動物および／または細菌パイロジェンのすべての部分がない特定のデオキシコール酸医薬組成物ならびに生成および使用のための関連方法が提供される。別の態様において、定義された医薬組成物として十分な量の適切なデオキシコール酸が提供され、これは、関連組成物、製造方法および使用方法とともに、局所的な脂肪除去のための注射用医薬組成物として使用できる。
【解決手段】
定義された医薬組成物として十分な量の適切な胆汁酸およびその合成方法がここで提供される。そのように提供される胆汁酸組成物および方法は、胆汁酸を自然に産生する哺乳動物または微生物生命体から単離されるものではない。一態様において、動物起源のおよび哺乳動物および／または細菌パイロジェンのすべての部分がない特定のデオキシコール酸医薬組成物ならびに生成および使用のための関連方法が提供される。別の態様において、定義された医薬組成物として十分な量の適切なデオキシコール酸が提供され、これは、関連組成物、製造方法および使用方法とともに、局所的な脂肪除去のための注射用医薬組成物として使用できる。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
（関連出願への相互参照）
本出願は、２００７年６月１９日に出願された米国仮特許出願第６０／９４５，０３５号および２００７年８月２０日に出願された同第６０／９５６，８７５号；２００８年２月２１日に出願された米国通常特許出願第１２／０３５，３３９号および２００８年５月１６日に出願された同第１２／１５３，４４６号；ならびに２００８年４月２５日に出願された英国特許出願第０８０７６１５．０号に対する優先権を主張し、これらの各々は、その全体を本明細書において参考として援用される。
【０００２】
（発明の分野）
本発明は、広く胆汁酸ならびに関連組成物および方法に関する。一態様において、本発明は、デオキシコール酸および関連組成物、有用な中間体ならびにその合成方法に関する。別の態様において、本発明は、本組成物および方法の、医薬組成物およびその製造方法としての使用に関する。重要なことに、本発明の胆汁酸は、これらの酸を自然に産生する哺乳動物および微生物生命体から単離されるものではなく、故に、そのような生命体に関連するいかなる毒素および汚染物質もない。別の態様において、本発明は、デオキシコール酸ならびに薬学的に許容されるその塩および中間体の合成に関する。
【背景技術】
【０００３】
（発明の背景）
コラノロジー（Ｃｈｏｌａｎｏｌｏｇｙ）という胆汁酸の研究、特に胆汁酸化学は、世紀の大半にわたって関心を集めてきた。多くは既知であるが、胆汁酸化学には、多くが驚くべき特性を有する多種多様な化学的実体が関与する。総説は、例えば、参照により本明細書に組み込まれる、Ｍｕｋｈｏｐａｄｈｙａｙ， Ｓ．およびＵ． Ｍａｉｔｒａ．、Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｓｃｉｅｎｃｅ、８７巻：１６６６〜１６８３頁（２００４年）（「Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ａｎｄ ｂｉｏｌｏｇｙ ｏｆ ｂｉｌｅ ａｃｉｄｓ」）を参照されたい。
【０００４】
胆汁酸は、２つの連結ユニット、剛性のステロイド核および短い脂肪族側鎖を特徴とする（本出願の図１を参照）。Ｈｏｆｍａｎｎ， Ａ． Ｆ．らを参照。提案された胆汁酸の命名法については、Ｊ． Ｌｉｐｉｄ Ｒｅｓ．、３３巻：５９９〜６０４頁（１９９２年）を参照されたい。核および側鎖はいずれも、多数の可能な立体配置を有する。核は、個々の環の拡張または収縮によって変化させることができ、側鎖は、短縮または伸長できる。加えて、胆汁酸分子の両部分は、多数の可能な極性置換基を有する。イオン化基は、核または側鎖上に存在し得る。最後に、共役基は、核上（例えば、サルフェート、グルクロネート、ホスフェート）または側鎖上（グリシンもしくはタウリンまたは他のアミノ酸、さらには糖類）に存在し得る。側鎖構造は、化合物（胆汁酸または胆汁塩）のクラスを決定する。
【０００５】
胆汁酸は、両親媒性（ａｍｐｈｉｐｈｉｌｉｃ）および両親媒性（ａｍｐｈｉｐａｔｈｉｃ）の「面」の両方を有する両親媒性物質：
【０００６】
【化１】
である。Ｈｏｆｍａｎ， Ａ．Ｆ．、Ｎｅｗｓ Ｐｈｙｓｉｏｌ． Ｓｃｉ．、１４巻：２４〜２９頁（１９９９年）（「Ｂｉｌｅ Ａｃｉｄｓ： Ｔｈｅ ｇｏｏｄ， ｔｈｅ
Ｂａｄ， ａｎｄ ｔｈｅ Ｕｇｌｙ」、２５頁、図１）。
【０００７】
慣例により、疎水性表面は「β面」と呼ばれ、親水性表面は「α面」と呼ばれる。概して、β面は脂溶性であり、α面は比較的極性である。疎水面上および親水面上に極性基（自然発生的な胆汁酸中のヒドロキシル基）を有するもの、例えばウルソデオキシコール酸等の胆汁酸がある。分子の両親媒性の性質は、ホスファチジルコリン等、両親媒性であるが不水溶性の脂質との混合ミセルの形成を司る。胆汁酸は、胆汁酸が、臨界ミセル化濃度と称される臨界濃度を超えない限り、混合ミセルの形態の食物中の脂質を可溶化しない。
【０００８】
ヒトにおいて最大の割合で見られる胆汁酸は、ケノデオキシコール酸およびデオキシコール酸である。デオキシコール酸は、デオキシコレート、コラン酸および３α，１２α−ジヒドロキシ−５β−コラネート（ｃｈｏｌａｎａｔｅ）としても知られている。ヒト体内において、デオキシコール酸は、腸管において吸収のための脂肪の乳化に使用される。研究において、デオキシコール酸は、膜結合タンパク質単離のための低刺激洗浄剤として使用される。実質的に純粋である場合、デオキシコール酸は白色〜オフホワイトの結晶性粉末形態である。デオキシコール酸は、肝臓によって産生される４つの主な酸の１つである。これは、アルコールおよび酢酸に可溶である。デオキシコール酸のＣＡＳ番号は［８３−４４−３］である。
【０００９】
体脂肪の迅速な除去は長年の理想であり、多くの物質がそのような結果を達成すると主張されてきたが、結果を示したものはわずかである。「メソセラピー」、つまり脂肪の除去のための注射剤の使用は、１９５０年代からホメオパシーおよび美容学的主張が為されているが、安全性および有効性の懸念により、医療従事者の間で広く受け入れられていない。メソセラピーは、元来、局所的な医学的および美容学的状態の治療のために化合物の混合物を含有する皮膚注射を利用する方法として欧州で想到された。メソセラピーは、疼痛緩和のために伝統的に用いられていたが、最近ではその美容学的用途、特に脂肪およびセルライトの除去が米国で注目を集めている。局所的な脂肪減少のための１つのそのような報告されている治療は、ブラジルにおいて普及し、ホスファチジルコリンの注射を使用するものであり、メソセラピーと同義であると誤ってみなされてきた。「脂肪を溶解する」とされている注射としてのその魅力にもかかわらず、これらの美容学的治療の安全性および有効性は、ほとんどの患者および医師にとって曖昧なままである。Ｒｏｔｕｎｄａ，
Ａ．Ｍ．およびＭ． Ｋｏｌｏｄｎｅｙ、Ｄｅｒｍａｔｏｌｏｇｉｃ Ｓｕｒｇｅｒｙ、３２巻：４６５〜４８０頁（２００６年）（「Ｍｅｓｏｔｈｅｒａｐｙ ａｎｄ Ｐｈｏｓｐｈａｔｉｄｙｌｃｈｏｌｉｎｅ Ｉｎｊｅｃｔｉｏｎｓ： Ｈｉｓｔｏｒｉｃａｌ
Ｃｌａｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ ａｎｄ Ｒｅｖｉｅｗ」）を参照されたい。
【００１０】
国際公開第２００６／１３３１６０号（参照により図面を含むその全体が本明細書に組み込まれる）は、リポモデリング（ｌｉｐｏｍｏｄｅｌｉｎｇ）のための方法、例えば、神経ペプチドＹ受容体アンタゴニストを脂肪貯蔵部位に投与することによる脂肪貯蔵物の減少を記載している。Ｋｏｌｏｎｉｎ Ｍ． Ｇ．ら、Ｎａｔ． Ｍｅｄ．、６月、１０巻（６号）：６２５〜３２頁（２００４年）は、強力な脂肪細胞死滅効果を有する脂肪選択的プロアポトーシスペプチドを記載している。記載されているプロアポトーシスペプチドは、死滅させるためには血管系にアクセスする必要がある。
【００１１】
最近刊行された文献は、デオキシコール酸がインビボで脂肪性沈着物に注射される場合、脂肪除去特性を有することを報告している。すべて参照により図面を含むその全体が本明細書に組み込まれる、特許文献１および特許文献２、ならびに特許文献３、特許文献４、特許文献５および特許文献６を参照されたい。脂肪組織中に注射されたデオキシコレートは、１）細胞傷害機序によって脂肪細胞を死滅させる、２）皮膚引き締めを引き起こすという２つの効果を有する。これらの効果はいずれも、所望の審美的修正（すなわち、体形矯正）を媒介するために必要である。脂肪中に注射されたデオキシコレートは、タンパク質への曝露によって迅速に不活性化され、その後、迅速に腸の内容物中に戻るため、その効果は空間的に封じ込められる。臨床的安全性を与えるこの減弱作用の結果として、脂肪除去療法は、典型的に４〜６セッションを必要とする。外科手術を必要としないこの局所的な脂肪除去は、病理学的な局所的脂肪沈着物に関する治療的処置（例えば、ＨＩＶの治療における医学的介入に伴う脂質異常症）だけでなく、外科手術に固有の付帯リスクがない美容学的脂肪除去（例えば、脂肪吸引術）にも有益である。いずれも参照により本明細書に組み込まれる、Ｒｏｔｕｎｄａら、Ｄｅｒｍａｔｏｌ． Ｓｕｒｇｅｒｙ、３０巻：１００１〜１００８頁（２００４年）（「Ｄｅｔｅｒｇｅｎｔ ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ
ｓｏｄｉｕｍ ｄｅｏｘｙｃｈｏｌａｔｅ ａｒｅ ａ ｍａｊｏｒ ｆｅａｔｕｒｅ
ｏｆ ａｎ ｉｎｊｅｃｔａｂｌｅ ｐｈｏｓｐｈａｔｉｄｙｌｃｈｏｌｉｎｅ ｆｏｒｍｕｌａｔｉｏｎ ｕｓｅｄ ｆｏｒ ｌｏｃａｌｉｚｅｄ ｆａｔ ｄｉｓｓｏｌｕｔｉｏｎ」）およびＲｏｔｕｎｄａら、Ｊ． Ａｍ． Ａｃａｄ． Ｄｅｒｍａｔｏｌ．、２００５年：９７３〜９７８頁（「Ｌｉｐｏｍａｓ ｔｒｅａｔｅｄ ｗｉｔｈ ｓｕｂｃｕｔａｎｅｏｕｓ ｄｅｏｘｙｃｈｏｌａｔｅ ｉｎｊｅｃｔｉｏｎｓ」）を参照されたい。
【００１２】
医薬品等級の胆汁酸製剤は、比較的低価格で市販されている。この低価格は、胆汁酸が、動物の死体、特に雌ウシおよびヒツジ等の大型動物から得られることによるものである。重要なことに、動物源由来のすべての薬剤と同様に、動物由来胆汁酸製品は、動物病原体、ならびにパイロジェン等の細菌毒素を含む動物または微生物代謝産物および毒素等、他の有害作用物質を含有し得るという懸念がある。
【００１３】
そのような動物病原体は、プリオン病を引き起こし得る感染性病原タンパク質の一種であると考えられているプリオンを含み得る。プリオン病は、神経系の変性障害である。１つのそのような疾患である「狂牛」病（クロイツフェルト・ヤコブ病（ＣＪＤ）の変異型であると考えられている）は、罹患した雌ウシ由来の食用牛肉中に存在するプリオンによって引き起こされると考えられている。ほとんどの場合は未知の伝染様式による散発性なものであり、いくつかの場合は遺伝的なものであり、少数が医療処置によって伝染したものである。感染材料の消費によるヒトプリオン病の蔓延は、歴史的にはクールーに、また最近では変異型ＣＪＤに関与するとされている。他の動物プリオン病（ヒツジのスクレピー、伝染性ミンク脳症、シカの慢性消耗病および牛海綿状脳症）はすべて、感染動物との接触によってまたは感染飼料の消費によって横方向に伝染するようである。プリオン病に関するリスク評価および未来事象の予測は、異なる伝染様式、予測不可能な種の障壁、組織中における感染力の可変分布およびいくつかの疾患において見られる系統変動により、解明することが困難である。
【００１４】
概して、動物性製品は、パイロジェン（発熱物質）を産生する微生物生命体に曝露され得る。食物および／または医薬品の細菌汚染物質も、腸管出血性Ｅ．ｃｏｌｉによる食料品の汚染によって証明されている通り、重要課題である。雌ウシに由来する食肉等の製品およびリンゴ、ホウレンソウ等の農産物は、そのような汚染に関与するとされている。そのような場合、ヒトにおいて有害作用を発生させるのは、（細菌自体よりもむしろ）細菌によって産生される毒素である。そのような有害作用は、重度の下痢、腎不全および極限状況では死を含む。パイロジェンの一種である細菌内毒素は、すべての医薬組成物から実質的に排除されなくてはならない。
【００１５】
動物性製品は、一般に排除過程によって精製される、すなわち、混合から最終産物を選択するのではなく、最終産物は不純物の排除後に残っている材料である。また、病原体等の潜在的な動物部分に加えて、動物源からの精製の別のアーチファクトは、最終産物が１つまたは複数の胆汁酸の混合物であることである。例えば、デオキシコール酸の市販製剤は、若干のケノデオキシコール酸、ならびに哺乳動物の胆汁酸合成においてデオキシコール酸およびケノデオキシコール酸の両方の前駆体であるコール酸を含有する。デオキシ／ケノ／コールの正確な割合は事前選択されないため、これは、多量の胆汁酸の製造を企図する場合にロット間変動をもたらし得る。そのようなロット間変動は、問題のあるものとなり得、規制当局の承認または品質管理を獲得する際、特に医薬組成物を生成するための取り組みにおいて、追加ステップを生じさせる場合がある。生産者は明らかに、胆汁酸医薬組成物の製造においてロット間予測可能性を望むであろう。
【００１６】
現在、動物病原体および他の有害作用物質を含有する動物由来製品に関する懸念は、隔離および検査された動物から調達することによって対処されている。例えば、ニュージーランドの動物に由来するデオキシコール酸は、動物が隔離される等で観察可能な病原体がないままであり続ける限り、米国の規制制度下でヒト使用のための胆汁酸の源である。
【００１７】
暗黙的に、そのような政府により管理される規制制度のために必要なのは、動物由来の薬剤が注射される場合における動物病原体の伝染の内在的リスクの認識である。非動物性薬剤代替物が利用可能になれば、政府による規制制度はもはや必要ない。そのような代替物（動物由来の薬剤に置き換わる非動物性薬剤）および関連する利点の例は、ヒト使用のためのインスリンである。米国でのウシインスリンの製造は１９９８年に中止され、ヒト使用のためのブタインスリンは２００６年１月に中止された。動物インスリンはＢＳＥを引き起こす因子または他の病原因子に曝露されていないと分かっている群から得ることができるが、製造施設または過程は、動物性原料を、病原体に曝露された動物に曝露し得る。病原因子のヒトへの伝染のリスクは、組換え的にまたは合成的に製造されるインスリンの使用によって解消することができる。消費者にとって、インスリンの状況はためになるものであり、合成材料が自由に利用可能であれば、動物病原体の伝染のリスクは理論上は解消される。生産者にとって、動物病原体の材料が実質的にない純粋な化学的実体を生成するための能力は、安全性、品質および規制の目的に有利である。さらに、合成過程は、典型的に、生物源に由来するものよりも再現性の高い製品を提供する。
【００１８】
現在、動物の死体由来の胆汁酸が比較的豊富であることにより、業界は、胆汁酸を完全に化学的に合成すること、または植物ステロールもしくは微生物出発材料を使用して胆汁酸を調製することのいずれにも踏み出していない。また、胆汁酸誘導体は合成されたが、動物性材料の低価格および入手しやすさにより、この作業には当初、ステロイド化学のための出発材料として、やはり動物由来胆汁酸が関与していた。植物ステロール研究における歴史的に活発な取り組みにもかかわらず、容易に商業的に入手可能な植物ステロール由来の胆汁酸医薬品グレード組成物はない。例えば、非特許文献１を参照されたい（１９８１年の参考文献、非特許文献２（「Ｆｉｒｓｔ Ｔｏｔａｌ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ ｏｆ （＋）−Ｃｈｅｎｏｄｅｏｘｙｃｈｏｌｉｃ Ａｃｉｄ」）を前提として、いかなる胆汁酸の全合成も実施されなかったということに注目されたい）。細菌等の微生物によって産生された胆汁酸は、細菌産物として、例えば海洋での油流出の浄化のためにインシチュで使用されてきた。非特許文献３（「Ｂｉｌｅ ａｃｉｄｓ ａｒｅ ｎｅｗ ｐｒｏｄｕｃｔｓ ｏｆ ａ ｍａｒｉｅｎｅ ｂａｃｔｅｒｉｕｍ， Ｍｙｒｏｉｄｅｓ ｓｐ． Ｓｔｒａｉｎ ＳＭ１」）を参照されたい。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００１９】
【特許文献１】国際公開第２００５／１１７９００号パンフレット
【特許文献２】国際公開第２００５／１１２９４２号パンフレット
【特許文献３】米国特許第２００５／０２６１２５８号明細書
【特許文献４】米国特許第２００５／０２６７０８０号明細書
【特許文献５】米国特許第２００６／１２７４６８号明細書
【特許文献６】米国特許第２００６／０１５４９０６号明細書
【非特許文献】
【００２０】
【非特許文献１】Ｍｕｋｈｏｐａｄｈｙａｙ， Ｓ．およびＵ． Ｍａｉｔｒａ．、Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｓｃｉｅｎｃｅ、８７巻：１６６６〜１６８３、１６７０頁（２００４年）
【非特許文献２】Ｋａｍｅｔａｎｉら、Ｊ． Ａｍ． Ｃｈｅｍ． Ｓｏｃ．、１０３巻：２８９０頁（１９８１年）
【非特許文献３】Ｍａｎｅｅｒａｔら、Ａｐｐｌ． Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ． Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．、７６巻：６７９〜６８３頁（２００４年）
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００２１】
脂肪除去のためのデオキシコール酸の全潜在能力を現実化するために、動物由来製品の使用に対する懸念にさらに対処することが必須である。明らかに、動物起源の部分（または、動物、特に哺乳動物において作用し得、ヒト使用の場合にはヒトに悪影響を及ぼし得る病原部分）および動物または微生物代謝産物、パイロジェン等の細菌毒素を含む毒素等の他の有害作用物質がないことが冒頭から分かる、ヒトにおいて薬剤として使用するための、適量の有効な胆汁酸およびデオキシコール酸等の関連組成物が必要である。本発明は、動物病原体および他の有害作用物質の潜在的リスクがない合成的に調製された胆汁酸組成物を提供することにより、この懸念に対処するものである。開示されている胆汁酸組成物は、脂肪分解（ａｄｉｐｏｌｙｔｉｃ）療法において使用でき、局所的な脂肪除去の領域における研究および開発努力をさらに進める役割を果たす。
【課題を解決するための手段】
【００２２】
（発明の要旨）
本明細書では、定義された医薬組成物として十分な量の適切な胆汁酸およびその合成方法が提供される。そのように提供される胆汁酸組成物および方法は、胆汁酸を自然に産生する哺乳動物または微生物生命体から単離されるものではない。一態様において、動物起源のおよび哺乳動物および／または細菌パイロジェンのすべての部分がない特定のデオキシコール酸医薬組成物ならびに生成および使用のための関連方法が提供される。別の態様において、定義された医薬組成物として十分な量の適切なデオキシコール酸が提供され、これは、関連組成物、製造方法および使用方法とともに、局所的な脂肪除去のための注射用医薬組成物として使用できる。本発明の定義されたデオキシコレート注射液を、直交機序（ｏｒｔｈｏｇｏｎａｌ ｍｅｃｈａｎｉｓｍ）によって脂肪を消滅させる分子、例えばＮＰＹアンタゴニストおよび／または脂肪選択的プロアポトーシスペプチドと組み合わせ、より少ない治療セッションでの体形矯正を媒介するためのより強力な手段を作成するために使用される作用物質を提供することができる。別の態様において、本発明は、デオキシコール酸および薬学的に許容されるその塩の合成に関する方法および中間体を提供する。合成的に調製されたデオキシコール酸は、脂肪除去のための脂肪分解療法において使用できる。
【図面の簡単な説明】
【００２３】
【図１】胆汁酸骨格の炭素のナンバリングシステムを含む、胆汁酸の構造を表す図である。
【図２】ウシ由来デオキシコール酸ナトリウム（Ｓｉｇｍａ）と比較した、本発明の合成デオキシコール酸ナトリウムによる処理時の初代ヒト脂肪細胞の細胞生存の用量依存的な減少における類似性を示す図である。
【発明を実施するための形態】
【００２４】
（参照による組み込み）
本明細書中で言及されるすべての刊行物および特許出願は、各個々の刊行物または特許出願が参照により組み込まれることを具体的かつ個別に指示されている場合と同程度まで、参照により本明細書に組み込まれる。
【００２５】
（発明の詳細な説明）
定義
本開示全体を通して、種々の刊行物、特許および公開された特許明細書は、識別引用によって参照される。これらの刊行物、特許および公開された特許明細書の開示は、参照により本開示に組み込まれ、本発明が属する分野の状況をより詳細に記載する。
【００２６】
本明細書において使用される場合、いくつかの用語は、下記に定義される意味を有する。本明細書および請求項において使用される場合、単数形「ａ」、「ａｎ」および「ｔｈｅ」は、文脈上明らかに別段の定めをした場合を除き、単数および複数の参照物を含む。
【００２７】
別段の指示がない限り、本明細書および請求項において使用される原料、反応条件等の数量を表現するすべての数は、すべての場合において用語「約」により修飾されるものとして理解すべきである。したがって、反対の指示がない限り、下記の明細書および添付の請求項において説明される数値パラメーターは近似値である。各数値パラメーターは、少なくとも、報告された有効桁の数を考慮し、通常の丸め技術を適用することによって解釈されるべきである。
【００２８】
用語「アセチル化試薬」は、アセチル基ＣＨ３Ｃ（Ｏ）−を分子に添加することができる試薬を指す。
【００２９】
用語「酸」は、プロトン供与体を指し、有機および無機酸の両方を含む。
【００３０】
用語「アルキル」は、１〜１０個の炭素原子、好ましくは１〜６個の炭素原子を有する一価の飽和脂肪族ヒドロカルビル基を指す。この用語は、例として、メチル（ＣＨ３−）、エチル（ＣＨ３ＣＨ２−）、ｎ−プロピル（ＣＨ３ＣＨ２ＣＨ２−）、イソプロピル（（ＣＨ３）２ＣＨ−）、ｎ−ブチル（ＣＨ３ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−）、イソブチル（（ＣＨ３）２ＣＨＣＨ２−）、ｓｅｃ−ブチル（（ＣＨ３）（ＣＨ３ＣＨ２）ＣＨ−）、ｔ−ブチル（（ＣＨ３）３Ｃ−）、ｎ−ペンチル（ＣＨ３ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−）およびネオペンチル（（ＣＨ３）３ＣＣＨ２−）等の直鎖および分岐鎖のヒドロカルビル基を含む。
【００３１】
用語「アリール」は、単環（例えば、フェニル）または多重縮合環（例えば、ナフチル）を有する６〜１２個の炭素原子の一価の芳香族炭素環基を指す。
【００３２】
用語「動物起源」は、多細胞生命体および単細胞生命体を含む生物の界（動物界）のいずれかに起因していることを指す。
【００３３】
用語「脱水試薬」は、水と反応することができる試薬を指す。一態様において、脱水試薬は、分子から除去される水と反応することができる。
【００３４】
用語「脱硫試薬」は、硫化物と反応することができる試薬を指す。一態様において、脱硫試薬は、硫化物含有分子と反応して、分子からスルフィド基を除去することができる。
【００３５】
用語「エタンジチオールまたはジチアン前駆体」は、カルボニル基との反応によって、エタンジチオールまたはジチアン基を形成する試薬を指す。
【００３６】
用語「求電子性アセチル基」は、求電子としてのアセチル基であって、電子に引き付けられ、電子を受け取る傾向がある基を指す。
【００３７】
用語「水素化試薬」は、水素を分子に付与することができる試薬を指す。
【００３８】
用語「ルイス酸」は、電子対受容体を指す。ルイス酸は、アルキルアルミニウムハライド（例えば、Ｅｔ２ＡｌＣｌおよびＭｅＡｌＣｌ２）等の有機金属試薬を含む。
【００３９】
用語「哺乳動物起源」は、任意の哺乳類の生命体に起因していることを指す。用語「哺乳類の生命体」は、乳腺によって分泌される乳でその幼体に栄養を与え、通常は程度の差はあるが体毛で覆われた皮膚を有し、ヒトを含む、温血高等脊椎動物の綱（哺乳綱）（有胎盤類、有袋類または単孔類等）を指す。
【００４０】
用語「微生物起源」は、任意の微生物生命体に起因していることを指す。用語「微生物生命体」は、細胞壁を欠いてよいかまたは細胞壁を有する場合にはグラム陽性もしくはグラム陰性であり、多くの場合コロニーに凝集されるかまたは鞭毛を用いて運動性となり、典型的には、土壌、水、有機物中または植物および動物の体内に生息し、通常は、栄養上、独立栄養性、腐生性または寄生性であり、その生化学的作用および病原性で有名な、原核生物の円状、らせん状または棒状の単細胞微生物のドメイン（細菌）を指す。
【００４１】
用語「オレフィン化試薬」は、ケトンと反応して、対応するオレフィンを形成する試薬を指す。用語「オレフィン形成条件」は、そのような転換を行うのに適した条件を指す。そのような試薬の例は、ウィッティヒ試薬およびウィッティヒオレフィン化条件を含む。
【００４２】
用語「酸化剤」は、酸化還元反応において電子を受け取ることができる試薬を指す。このようにして、ハロゲンまたは酸素を分子に添加することができ、または水素を分子から除去することができる。
【００４３】
用語「病原体」は、疾患の特異的な原因因子を指す。
【００４４】
「薬学的に許容される塩」は、当該技術分野において既知である多様な有機および無機対イオンに由来する薬学的に許容される塩を指し、ほんの一例として、ナトリウム、カリウム、リチウム、カルシウム、マグネシウム、アンモニウムおよびテトラアルキルアンモニウムを含む。適切な塩は、Ｐ． Ｈｅｉｎｒｉｃｈ Ｓｔａｈｌ、Ｃａｍｉｌｌｅ Ｇ． Ｗｅｒｍｕｔｈ（編）、Ｈａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓａｌｔｓ Ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ， Ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ， ａｎｄ Ｕｓｅ、２００２年に記載されているものを含む。これらの薬学的に許容される塩は、ＤＣＡを適切な塩基と反応させることによって調製できる。例示を目的として、そのような塩基の例は、水酸化ナトリウム、水酸化カリウムまたは水酸化リチウムを含む。代替として、塩は、塩基によるＤＣＡのエステルの加水分解によって、ＤＣＡを導き得る任意の酸性ワークアップを省略して調製できる。
【００４５】
用語「還元剤」は、酸化還元反応において電子を付与することができる試薬を指す。このようにして、ハロゲンまたは酸素を分子から除去することができ、または水素を分子に添加することができる。
【００４６】
組成物および使用方法
本明細書に記載されている種々の態様において、本発明は、薬学的使用のための組成物（および有用な中間体）、その合成方法および本医薬組成物の使用方法を提供する。
【００４７】
重要なことに、本胆汁酸組成物は、動物性出発材料から得られた材料に固有のリスクがなく、したがって、動物由来材料の詳細な検査および規定を必要としない。故に、一態様において、本発明は、哺乳動物病原体等の動物起源の材料を含まず、パイロジェン等の細菌起源の毒素を実質的に含まない、胆汁酸医薬組成物を目的としている。
【００４８】
デオキシコール酸ナトリウムは、消化管において食物中の脂質を可溶化する、自然に産生される胆汁塩である。これは、コレステロールを出発材料として利用し、ヒトおよび細菌酵素の両方が関与する複合生合成経路を介して、インビボで産生される。デオキシコレートの主要機能は、吸収を容易にするために食物中の脂質を可溶化することによって、消化過程を支援することである。体内において、デオキシコレート生合成は、肝臓内のコレステロールの酵素的酸化、異性化および還元から始まり、そのコレステロール親と構造的に類似した胆汁酸であるコール酸を形成する（Ｓｔｒｙｅｒ Ｌ、２７章：Ｂｉｏｓｙｎｔｈｅｓｉｓ ｏｆ Ｍｅｍｂｒａｎｅ Ｌｉｐｉｄｓ ａｎｄ Ｓｔｅｒｏｉｄｓ、Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、１９９５年、Ｗ． Ｈ． Ｆｒｅｅｍａｎ ａｎｄ Ｃｏｍｐａｎｙ： Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ、６９１〜７０７頁）。その後、肝臓内において、コール酸は２つのアミノ酸（タウリンまたはグリシン）の１つと化学的に結合し、「共役」コール酸（すなわち、Ｌ−グリココレートおよびタウロコレート）を形成する。その後、これらの共役コール酸は、食物消費まで胆嚢中に保存される。食物消費後、胆汁液は、胆嚢から腸管内に放出され、ここで共役コール酸分子は、腸管微生物叢によって産生された酵素によって媒介される２つの追加の化学修飾に付される（Ｒｉｄｌｏｎ Ｊ．Ｍ．、Ｋａｎｇ
Ｄ．Ｊ．およびＨｙｌｅｍｏｎ Ｐ．Ｂ．、Ｂｉｌｅ ｓａｌｔ ｂｉｏｔｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎｓ ｂｙ ｈｕｍａｎ ｉｎｔｅｓｔｉｎａｌ ｂａｃｔｅｒｉａ、Ｊ． Ｌｉｐｉｄ Ｒｅｓ．、４７巻（２号）：２４１〜５９頁（２００６年））。最初に、共役コール酸は脱ヒドロキシル化されて共役デオキシコレートを形成する。その後、共役デオキシコレートは脱共役されて遊離デオキシコレートを形成し、これが、他の胆汁酸とともに食物中の脂質の可溶化に関与する。デオキシコレートはコール酸合成より下流にあるため、コール酸はデオキシコレートの自然源中に存在する不純物であり得る。
【００４９】
デオキシコレートは、３３３ｍｇ／ｍＬまで水に可溶であり、アルコールに難溶であり、アセトンおよび氷酢酸にさらに難溶である。ミセルの可逆的形成は、約２．４ｍｇ／ｍＬの臨界ミセル濃度を超過するデオキシコール酸ナトリウム濃度および中性ｐＨで発生し得る（Ｍａｔｓｕｏｋａ Ｋ， Ｍ．Ｙ．、Ｍｉｃｅｌｌｅ ｆｏｒｍａｔｉｏｎ ｏｆ
ｓｏｄｉｕｍ ｄｅｏｘｙｃｈｏｌａｔｅ ａｎｄ ｓｏｄｉｕｍ ｕｒｓｏｄｅｏｘｙｃｈｏｌａｔｅ （１部）、Ｂｉｏｃｈｉｍ． Ｂｉｏｐｈｙｓ． Ａｃｔａ．、１５８０巻（２〜３号）：１８９〜９９頁（２００２年））。２．４ｍｇ／ｍＬの臨界ミセル濃度を超過する濃度において、デオキシコレートはミセルを形成し、細胞、脂質およびタンパク質を可溶化する能力を有する。０．４ｍｇ／ｍＬ（絶食状態に相当する）等のより低濃度において、デオキシコレートは、２６ｍｇ／ｍＬのアルブミン（３５〜５０ｍｇ／ｍＬの血清生理学的濃度に近い）の存在下、アルブミンに９８％結合する（Ｒｏｄａ Ａ．ら、Ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅ ａｓｐｅｃｔｓ ｏｆ ｔｈｅ ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎ ｏｆ ｂｉｌｅ ａｃｉｄｓ ｗｉｔｈ ｈｕｍａｎ ｓｅｒｕｍ ａｌｂｕｍｉｎ、Ｊ． Ｌｉｐｉｄ Ｒｅｓ．、２３巻（３号）：４９０〜５頁（１９８２年））。
【００５０】
好ましい実施形態は、デオキシコール酸（ＤＣＡ）もしくはそのプロドラッグ、または前記化合物または前記プロドラッグの薬学的に許容される塩、ならびに関連組成物および方法を目的としており、ここで、デオキシコール酸（ＤＣＡ）は、
【００５１】
【化２】
であり、ここで、前記化合物は、ＤＣＡを自然に産生する哺乳動物または微生物生命体から単離されるものではない。
【００５２】
他の好ましい実施形態は、ＤＣＡおよび薬学的に許容されるその塩の立体異性体、ＤＣＡならびにその立体異性体および塩の合成における中間体、ならびに関連組成物および方法も目的としている。
【００５３】
本胆汁酸医薬組成物は、場合によって塩形態であり、さらに場合によって、薬学的に許容される希釈剤、賦形剤または担体を含有する。一態様において、本発明は、デオキシコール酸（ＤＣＡ）を自然に産生する哺乳動物または微生物生命体から単離されるものではない、ＤＣＡである化合物もしくはそのプロドラッグ、または前記化合物もしくは前記プロドラッグの薬学的に許容される塩：
【００５４】
【化３】
および薬学的に許容される賦形剤を目的としている。
【００５５】
塩調製のための好ましいカチオンは、ナトリウム（Ｎａ＋）、カリウム（Ｋ＋）、リチウム（Ｌｉ＋）、マグネシウム（Ｍｇ２＋）、カルシウム（Ｃａ２＋）、バリウム（Ｂａ２＋）、ストロンチウム（Ｓｒ２＋）およびアンモニウム（ＮＨ４＋）からなる群から選択できる。塩は、アルカリ金属またはアルカリ土類金属から調製することもできる。アルカリ金属は、ナトリウム（Ｎａ＋）、カリウム（Ｋ＋）およびリチウム（Ｌｉ＋）の中から選択できる。アルカリ土類金属は、マグネシウム（Ｍｇ２＋）、カルシウム（Ｃａ２＋）、バリウム（Ｂａ２＋）およびストロンチウム（Ｓｒ２＋）からなる群から選択できる。脂肪の局所的除去のための医薬組成物としての使用には、胆汁塩がデオキシコール酸ナトリウムであることが好ましい。
【００５６】
本実施形態の化合物のプロドラッグも企図されている。プロドラッグは、患者へのプロドラッグの投与後、加水分解、代謝等のインビボ生理的作用によって本実施形態の化合物に化学的に修飾される活性または不活性化合物である。例えば、本デオキシコール酸またはその誘導体のＣ１〜Ｃ１０エステルまたはアミドを調製することができ、その結果、細胞膜の破壊およびエステラーゼの放出により、デオキシコール酸またはその誘導体の放出が誘発される。エステラーゼの放出によってエステル保護基が開裂されるため、デオキシコール酸活性型またはその誘導体がインシチュの所望の位置に存在する。そのようなＣ１〜Ｃ１０エステルは、酸素、硫黄または窒素から選択される１〜４個のヘテロ原子；酸素、硫黄または窒素から選択される１〜４個のヘテロ原子を場合によって有するメチル、エチル、イソプロピル、ブチル、ヘキシル等のアルキル基；任意の許容される置換点に１〜４個のヘテロ原子を場合によって有するベンジルまたはエチルフェニル基等、合計最大１０個の炭素原子を有するアルキルフェニル基；ならびにフェニル基等のアリール基を場合によって含み得る。アミドの例は、ヒドロキサメートを含むがこれに限定されない。エステルを含むプロドラッグの一般的議論については、参照により全体が本明細書に組み込まれる、ＳｖｅｎｓｓｏｎおよびＴｕｎｅｋ、Ｄｒｕｇ Ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ Ｒｅｖｉｅｗｓ、１６５巻（１９８８年）ならびにＢｕｎｄｇａａｒｄ Ｄｅｓｉｇｎ ｏｆ Ｐｒｏｄｒｕｇｓ、Ｅｌｓｅｖｉｅｒ（１９８５年）を参照されたい。デオキシコール酸のＣ１〜Ｃ１０エステルまたはアミドの合成は、当該技術分野において既知である。例えば、エステルは、エステル化反応において、鉱酸の存在下でデオキシコール酸のアルコールとの反応によって合成できる。
【００５７】
デオキシコール酸およびケノデオキシコール酸の自然構造は、以下のように示される。４つの環（Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ）およびＤ環から伸展するカルボン酸側鎖が示されている。
【００５８】
【化４】
【００５９】
【化５】
限定されないが、デオキシコール酸およびケノデオキシコール酸（ＣＤＣＡ）またはその誘導体のエステル、ヒドロキサメートおよびヒドロキシアミドの例のいくつかは、以下のように記載される。Ｄ環側鎖上のカルボキシル基のエステル化により、異なる官能基がデオキシコール酸またはケノデオキシコール酸に結合してプロドラッグを生成し得る。限定されないが、これらのＤ環側鎖エステルのいくつかの例が表１に示されている。
【００６０】
【表１】
デオキシコール酸またはケノデオキシコール酸およびその誘導体の放出は、細胞膜の破壊およびエステラーゼの放出によって誘発され得る。エステラーゼの放出によってエステル保護基が開裂され得るため、デオキシコール酸のもしくはケノデオキシコール酸の活性型またはその誘導体がインシチュの所望の位置に存在する。
【００６１】
デオキシコール酸、ケノデオキシコール酸およびそれらの誘導体のプロドラッグは、自然分子と反対の立体化学を有し得るエピマーも含む。これらのエピマー分子の例は、表２に示されている。
【００６２】
【表２】
本実施形態の胆汁酸組成物の注射時に局所刺激がある場合があり、故に、局所麻酔薬を同時または順次に投与することが望ましい場合がある。例えば、リドカインは、ヒトにおいて頻繁に使用され、同時製剤（同じ容器中で同時に注射される）または同時注射（異なる容器から注射される）のいずれとして投与してもよい。リドカイン等の麻酔薬は、パッチまたは軟膏等の局所製剤によって投与してよい。
【００６３】
深部組織の場合、麻酔薬を対象組織中により深く注射するか、または全身的に投与してよい（例えば、全身麻酔、硬膜外または他の既知の方法）。
【００６４】
本発明の溶液中の胆汁酸（複数可）または胆汁塩（複数可）は、約０．００１〜１０、０．０１〜５または０．１〜２％ｗ／ｗ、ｗ／ｖまたはｖ／ｖの濃度であってよい。好ましくは、上記溶液中の胆汁酸（複数可）または胆汁塩（複数可）は、約０．１〜５％ｗ／ｗまたはより好ましくは約１％ｗ／ｗの濃度であってよい。いくつかの実施形態において、脂肪溶解液は、最大１００、５０、２０、１０、５、２、１、０．５、０．２、０．０５、０．０２または０．０１グラムの１つまたは複数の洗浄剤、胆汁酸および／または胆汁塩、例えば、デオキシコール酸もしくはその塩またはデオキシコール酸ナトリウムを含む。
【００６５】
好ましい実施形態において、本明細書における溶液は、脂質、リン脂質またはホスファチジルコリンを含まない。いくつかの実施形態において、本明細書における溶液は、最大５％ｗ／ｗ、ｗ／ｖまたはｖ／ｖの脂質、リン脂質またはホスファチジルコリンを含む。
【００６６】
いくつかの実施形態において、上記溶液は、抗菌剤、血管収縮薬、抗血栓剤、抗凝固剤、発泡抑制剤（ｓｕｄｓ−ｄｅｐｒｅｓｓａｎｔ）、抗炎症剤、鎮痛剤、分散剤、抗分散剤、浸透促進剤、ステロイド、精神安定薬、筋弛緩薬および下痢止め剤からなる群から選択される第２の治療剤をさらに含み得る。いくつかの実施形態において、溶液は、最大５００ｍＬの溶液を収納する容器内にあってよい。そのような容器は、シリンジまたはシリンジ充填可能な容器であってよい。
【００６７】
いくつかの実施形態において、組成物および方法は、直交機序によって脂肪を消滅させることが知られている分子をさらに含む。そのような分子は、ＢＩＢＰ−３２２６（Ａｍｇｅｎ）、ＢＩＢＯ−３３０４（Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ Ｉｎｇｌｅｈｅｉｍ）、ＢＭＳ−１９２５４８およびＡＲ−Ｈ０４０９２２（Ｂｒｉｓｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓ Ｓｑｕｉｂｂ）、ＬＹ−３５７８９７（Ｅｌｉ Ｌｉｌｌｙ）、１２２９Ｕ９１およびＧＷ４３８０１４Ｓ（ＧｌａｘｏＳｍｉｔｈＫｌｉｎｅ）、ＪＮＪ−５２０７７８７（Ｊｏｈｎｓｏｎ＆Ｊｏｈｎｓｏｎ）、Ｌｕ−ＡＡ−４４６０８（Ｌｕｎｄｂｅｃｋ）、ＭＫ−０５５７（Ｍｅｒｃｋ ＮＰＹ）、ＮＧＤ−９５−１（Ｎｅｕｒｇｏｇｅｎ）、ＮＬＸ−Ｅ２０１（Ｎｅｕｒｏｌｏｇｉｘ）、ＣＧＰ−７１６８３（Ｎｏｖａｒｔｉｓ）、ＰＤ−１６０１７０（Ｐｆｉｚｅｒ）、ＳＲ−１２０８１９Ａ、ＢＩＩＥ０２４６およびＳ．Ａ．０２０４（Ｓａｎｏｆｉ Ａｖｅｎｔｉｓ）、Ｓ−２３６７（ｓｈｉｏｎｇｌｉ）等のＮＰＹ受容体アンタゴニスト、ＮＰＹ受容体アンタゴニストであるジヒドロピリジンおよびジヒドロピリジン誘導体、ＮＰＹ受容体アンタゴニストである二環化合物、カルバゾール系ＮＰＹ受容体アンタゴニストならびにＮＰＹ受容体アンタゴニストである三環化合物を含むがこれらに限定されない神経ペプチドＹ（ＮＰＹ）受容体アンタゴニストを含む。例えば、国際公開第２００６／１３３１６０号および米国特許第６，３１３，１２８号（参照により図面を含むその全体が本明細書に組み込まれる）を参照されたい。白色脂肪血管系にあるＣＫＧＧＲＡＫＤＣペプチド等の脂肪選択的プロアポトーシスペプチドも企図されている。Ｋｏｌｏｎｉｎ Ｍ．Ｇ．ら、Ｎａｔ． Ｍｅｄ．、６月、１０巻（６号）：６２５〜３２頁（２００４年）を参照されたい。
【００６８】
一態様において、本発明は、対象における皮下脂肪沈着物を減少させる方法に関する。そのような方法は、（ｉ）脂肪溶解有効量の１つまたは複数の薬理学的に活性な洗浄剤または胆汁酸（複数可）および／もしくは胆汁塩（複数可）またはデオキシコール酸もしくはその塩またはデオキシコール酸ナトリウム；（ｉｉ）薬学的、獣医学的または美容学的賦形剤；ならびに（ｉｉｉ）場合によって脂質を含み、ここで、脂質と胆汁酸または胆汁塩との比率が最大１％ｗ／ｗである組成物であって、リパーゼもコリパーゼも含まない組成物を、対象における皮下脂肪沈着物に局所的に投与するステップを含む。いくつかの実施形態において、脂肪沈着物は、肥満、脂肪再分布症候群、眼瞼脂肪ヘルニア、脂肪腫、ダーカム病、脂肪異栄養症、野牛肩脂肪異栄養症、後頸部（ｄｏｒｓｏｃｅｒｖｉｃａｌ）脂肪、内臓脂肪症、乳房肥大、脂肪過剰症、体幹および腕周囲に散在する体脂肪およびセルライトを伴う脂肪沈着物からなる群から選択される状態に関連する。好ましい実施形態において、上記方法は、前記対象に対して外科手術を実施するステップを含まない。
【００６９】
一態様において、本発明は、哺乳動物における選択された位置からの脂肪沈着物の除去方法であって、それを必要とする哺乳動物に、治療有効量のＤＣＡもしくはそのプロドラッグ、またはＤＣＡもしくはプロドラッグの薬学的に許容される塩：
【００７０】
【化６】
であり、ＤＣＡを自然に産生する哺乳動物または微生物生命体から単離されるものではない前記化合物を投与するステップを含む方法を目的としている。
【００７１】
一実施形態において、本発明の方法は、哺乳動物に、神経ペプチドＹ（ＮＰＹ）受容体アンタゴニストおよび脂肪選択的プロアポトーシスペプチドからなる群から選択される少なくとも１つの追加の活性成分を投与するステップをさらに含み得る。一実施形態において、神経ペプチドＹ（ＮＰＹ）受容体アンタゴニストは、ＢＩＢＰ−３２２６、神経ペプチドＹ５アンタゴニスト（ＡｍｇｅｎのＮＰＹ受容体アンタゴニスト）、ＢＩＢＯ−３３０４（Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ ＩｎｇｌｅｈｅｉｍのＮＰＹ受容体アンタゴニスト）、ＢＭＳ−１９２５４８（Ｂｒｉｓｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓ ＳｑｕｉｂｂのＮＰＹ受容体アンタゴニスト）、ＡＲ−Ｈ０４０９２２（Ｂｒｉｓｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓ ＳｑｕｉｂｂのＮＰＹ受容体アンタゴニスト）、ＬＹ−３５７８９７（Ｅｌｉ ＬｉｌｌｙのＮＰＹ受容体アンタゴニスト）、Ｅｓｔｅｖｅ ＮＰＹ−Ｙ５受容体アンタゴニスト、１２２９Ｕ９１（ＧｌａｘｏＳｍｉｔｈＫｌｉｎｅのＮＰＹ受容体アンタゴニスト）、ＧＷ４３８０１４Ｓ（ＧｌａｘｏＳｍｉｔｈＫｌｉｎｅのＮＰＹ受容体アンタゴニスト）、ＪＮＪ−５２０７７８７（Ｊｏｈｎｓｏｎ＆ＪｏｈｎｓｏｎのＮＰＹ受容体アンタゴニスト）、Ｌｕ−ＡＡ−４４６０８（ＬｕｎｄｂｅｃｋのＮＰＹ受容体アンタゴニスト）、ＭＫ−０５５７（ＭｅｒｃｋのＮＰＹ受容体アンタゴニスト）、ＮＧＤ−９５−１（ＮｅｕｒｇｏｇｅｎのＮＰＹ受容体アンタゴニスト）、ＮＬＸ−Ｅ２０１（ＮｅｕｒｏｌｏｇｉｘのＮＰＹ受容体アンタゴニスト）、ＣＧＰ−７１６８３（ＮｏｖａｒｔｉｓのＮＰＹ受容体アンタゴニスト）、ＰＤ−１６０１７０（ＰｆｉｚｅｒのＮＰＹ受容体アンタゴニスト）、ＳＲ−１２０８１９Ａ（Ｓａｎｏｆｉ ＡｖｅｎｔｉｓのＮＰＹ受容体アンタゴニスト）、ＢＩＩＥ０２４６（Ｓａｎｏｆｉ ＡｖｅｎｔｉｓのＮＰＹ受容体アンタゴニスト）、Ｓ．Ａ．０２０４（Ｓａｎｏｆｉ ＡｖｅｎｔｉｓのＮＰＹ受容体アンタゴニスト）、Ｓ−２３６７（ＳｈｉｏｎｇｌｉのＮＰＹ受容体アンタゴニスト）、ＮＰＹ受容体アンタゴニストであるジヒドロピリジン、ＮＰＹ受容体アンタゴニストであるジヒドロピリジン誘導体、ＮＰＹ受容体アンタゴニストである二環化合物、カルバゾール系ＮＰＹ受容体アンタゴニストならびにＮＰＹ受容体アンタゴニストである三環化合物からなる群から選択される。例えば、国際公開第２００６／１３３１６０号および米国特許第６，３１３，１２８号（参照により図面を含むその全体が本明細書に組み込まれる）を参照されたい。一実施形態において、脂肪選択的プロアポトーシスペプチドは、白色脂肪血管系にあるＣＫＧＧＲＡＫＤＣペプチドである。Ｋｏｌｏｎｉｎ Ｍ．Ｇ．ら、Ｎａｔ． Ｍｅｄ．、６月、１０巻（６号）：６２５〜３２頁（２００４年）を参照されたい。
【００７２】
一態様において、本発明は、対象の皮膚領域における皮膚状態の出現を減少させるための方法に関する。そのような方法は、（ｉ）皮膚引き締め有効量の１つまたは複数の薬理学的に活性な洗浄剤または胆汁酸（複数可）および／もしくは胆汁塩（複数可）またはデオキシコール酸もしくはその塩またはデオキシコール酸ナトリウム；（ｉｉ）薬学的、獣医学的または美容学的賦形剤；ならびに（ｉｉｉ）場合によって脂質を含む組成物を、前記皮膚領域に局所的に投与するステップを含む。いくつかの実施形態において、投与するステップは、本明細書における組成物を皮下または経皮注射によって送達することを含む。いくつかの実施形態において、治療または改善される皮膚状態は、弛緩性皮膚、皮膚の老化、皮膚の凹凸およびシワからなる群から選択される。いくつかの実施形態において、治療される皮膚の領域は、目の下、顎の下、腋の下、臀部、頬、額、ふくらはぎ、背部、大腿、足首または腹である。
【００７３】
いくつかの実施形態において、皮膚領域における皮膚状態の出現を減少させるために使用される組成物は、皮膚引き締め溶液への製剤である。そのような皮膚引き締め溶液は、抗菌剤、血管収縮薬、抗血栓剤、抗凝固剤、発泡抑制剤、抗炎症剤、鎮痛剤、分散剤、抗分散剤、浸透促進剤、ステロイド、精神安定薬、筋弛緩薬および下痢止め剤からなる群から選択される第２の治療剤をさらに含み得る。
【００７４】
好ましい実施形態において、洗浄剤は、デオキシコール酸、コール酸、ケノデオキシコール酸、７−アルファ−デヒドロキシレート（ｄｅｈｙｄｒｏｘｙｌａｔｅ）ケノデオキシコール酸、リトコール酸、ウルソデオキシコール酸、ジヒドロキシタウリン酸、トリヒドロキシタウリン酸および上記のいずれかのグリシン共役物からなる群から選択される胆汁酸を含む。いくつかの実施形態において、洗浄剤は、ナトリウム（Ｎａ＋）、カリウム（Ｋ＋）、リチウム（Ｌｉ＋）、マグネシウム（Ｍｇ２＋）、カルシウム（Ｃａ２＋）、バリウム（Ｂａ２＋）、ストロンチウム（Ｓｒ２＋）およびアンモニウム（ＮＨ４＋）からなる群から選択されるカチオンを含む胆汁塩を含む。いくつかの実施形態において、洗浄剤は、アルカリ金属またはアルカリ土類金属であるカチオンとの胆汁塩を含む。好ましくは、アルカリ金属は、ナトリウム（Ｎａ＋）、カリウム（Ｋ＋）またはリチウム（Ｌｉ＋）であり、アルカリ土類金属は、マグネシウム（Ｍｇ２＋）、カルシウム（Ｃａ２＋）、バリウム（Ｂａ２＋）またはストロンチウム（Ｓｒ２＋）である。より好ましくは、胆汁塩はデオキシコール酸ナトリウムである。
【００７５】
別の実施形態は、哺乳動物において脂肪を乳化する方法であって、それを必要とする哺乳動物に、治療有効量のＤＣＡである化合物もしくはそのプロドラッグ、またはＤＣＡもしくはプロドラッグの薬学的に許容される塩：
【００７６】
【化７】
を投与するステップを含む方法であり、前記化合物はＤＣＡを自然に産生する哺乳動物または微生物生命体から単離されるものではない方法を提供する。
【００７７】
別の実施形態は、ホスファチジルコリンを可溶化する方法であって、ホスファチジルコリンと、有効量のＤＣＡである化合物もしくはそのプロドラッグ、またはＤＣＡもしくはプロドラッグの薬学的に許容される塩：
【００７８】
【化８】
であり、ＤＣＡを自然に産生する哺乳動物または微生物生命体から単離されるものではない前記化合物とを混合するステップを提供する。
【００７９】
本発明の別の態様は、デオキシコール酸（ＤＣＡ）等の脂肪切除胆汁酸を、脂肪細胞を死滅させる作用物質と混合することに関する。一態様において、本発明は、直交機序によって脂肪を消滅させる分子をデオキシコレート注射液中に混合することにより、デオキシコレート注射の審美的作用を増強するための手段を企図している。そのような候補分子の例は、本明細書に記載されている通り、神経ペプチドＹ（ＮＰＹ）アンタゴニストおよび脂肪選択的プロアポトーシスペプチドを含むがこれらに限定されない。脂肪細胞死滅および皮膚引き締めはいずれも、所望の作用を媒介するために必要となり得るため、脂肪死滅能力および強力な皮膚引き締め作用を有する作用物質（デオキシコレート等）の作用は、強力な脂肪細胞死滅効果を有する分子の添加によって増強できる。加えて、死滅させるために血管系にアクセスする必要がある分子（毛細血管の腔側に発現したタンパク質と結合するいくつかのプロアポトーシスペプチド等）は、デオキシコレートが血管漏出を引き起こし得るため、これらのタンパク質へのアクセスを得ることができる。故に、そのような作用物質は、デオキシコレートと相乗して、より少ない治療セッションでの体形矯正を媒介するためのより強力な手段を潜在的に作成することができる。
【００８０】
合成方法
他の実施形態において、本発明は、ＤＣＡの化合物、塩およびプロドラッグならびにそれらの関連中間体の合成方法を提供する。
【００８１】
本明細書において使用される場合、ステロイド骨格のナンバリングは、図１に示されている通りの一般的慣例に従う。
【００８２】
したがって、提供されるのは、デオキシコール酸（ＤＣＡ）もしくはそのエステルまたは薬学的に許容されるその塩：
【００８３】
【化９】
を調製するための方法であって、
（ａ）９α−ヒドロキシアンドロスタ−４−エン−３，１７−ジオン１を、水素化条件下、Ｈ２と反応させて、化合物２
【００８４】
【化１０】
を形成するステップと、
（ｂ）化合物２を酸と反応させて、化合物３
【００８５】
【化１１】
を形成するステップと、
（ｃ）化合物３を還元剤と反応させて、化合物４を４および５
【００８６】
【化１２】
の混合物として形成するステップと、
（ｄ）化合物４をオレフィン形成条件下で二炭素オレフィン化試薬と反応させて、化合物６
【００８７】
【化１３】
を形成するステップと、
（ｅ）化合物６を、式７の化合物［式中、Ｐは保護基である］
【００８８】
【化１４】
に変換するステップと、
（ｆ）式７の化合物をルイス酸の存在下でアルキルプロピオレートＣＨ２ＣＨ２Ｃ（Ｏ）ＯＲまたはアルキルアクリレートＣＨ２＝ＣＨＣ（Ｏ）ＯＲ［式中、Ｒはアルキルである］と反応させて、式８の化合物［式中、Ｐは保護基であり、Ｒはアルキルであり、破線
【００８９】
【化１５−１】
は単結合または二重結合である］
【００９０】
【化１５−２】
を形成するステップと、
（ｇ）式８の化合物を水素化条件下でＨ２と反応させて、式９の化合物［式中、Ｐは保護基であり、Ｒはアルキルである］
【００９１】
【化１６】
を形成するステップと、
（ｈ）式９の化合物を酸化剤と反応させて、式１０の化合物［式中、Ｐは保護基であり、Ｒはアルキルである］
【００９２】
【化１７】
を形成するステップと、
（ｉ）式１０の化合物を水素化条件下でＨ２と反応させて、式１１の化合物［式中、Ｐは保護基であり、Ｒはアルキルである］
【００９３】
【化１８】
を形成するステップと、
（ｊ）式１１の化合物を還元剤と反応させて、式１２の化合物［式中、Ｐは保護基であり、Ｒはアルキルである］
【００９４】
【化１９】
を形成するステップと、
（ｋ）式１２の化合物を脱保護条件に曝露してそのエステルを形成し、場合によって、適切な加水分解条件に曝露して、デオキシコール酸または薬学的に許容されるその塩を形成するステップと
を含む方法である。
【００９５】
本発明は、以下のスキーム１に示される下記中間体［式中、ＰおよびＲは上記で定義された通りである］も提供する。
【００９６】
スキーム１．デオキシコール酸（ＤＣＡ）の合成
【００９７】
【化２０】
一実施形態において、パート（ａ）の水素化条件はＰｄ／Ｃ触媒を含む。
【００９８】
一実施形態において、パート（ｂ）の酸は鉱酸である。いくつかの態様において、鉱酸はＨ２ＳＯ４である。
【００９９】
一実施形態において、パート（ｃ）の還元剤はＬｉＡｌ（ＯｔＢｕ）３Ｈである。
【０１００】
一実施形態において、パート（ｄ）の二炭素オレフィン化試薬はＰｈ３ＰＣＨ２ＣＨ３＋Ｂｒ−等のウィッティヒ剤である。
【０１０１】
一実施形態において、化合物７〜１２の保護基Ｐは−Ｃ（Ｏ）ＣＨ３である。いくつかの態様において、化合物６は、無水酢酸、ならびにＥｔ３Ｎ、ピリジンおよび／またはジメチルアミノピリジン等の有機塩基による６の処理等により、アシル化条件に曝露されて７ａを形成する。
【０１０２】
一実施形態において、パート（ｆ）のルイス酸はＥｔＡｌＣｌ２である。
【０１０３】
一実施形態において、パート（ｆ）のアルキルプロピオレートはメチルプロピオレートである。
【０１０４】
一実施形態において、パート（ｆ）のアルキルアクリレートはメチルアクリレートである。
【０１０５】
一実施形態において、パート（ｇ）の水素化条件はＰｔＯ２またはＰｄ／Ｃ触媒を含む。
【０１０６】
一実施形態において、パート（ｈ）の酸化剤はＣｒＯ３である。
【０１０７】
一実施形態において、パート（ｉ）の水素化条件はＰｄ／Ｃ触媒を含む。
【０１０８】
一実施形態において、パート（ｊ）の還元剤はＬｉＡｌ（ＯｔＢｕ）３Ｈである。
【０１０９】
一実施形態において、Ｐが−Ｃ（Ｏ）ＣＨ３である場合、パート（ｋ）の脱保護および加水分解条件は、化合物１２を、アルカリ土類金属水酸化物、アルカリ土類金属アルコキシドまたは両方の混合物と反応させることを含む。いくつかの態様において、加水分解条件は、デオキシコール酸を得るための酸性ワークアップを含む。他の態様において、酸性ワークアップは、対応する塩を得るために省略される。
【０１１０】
一実施形態において、アルカリ土類金属アルコキシドはＬｉＯＨである。
【０１１１】
一実施形態において、デオキシコール酸の塩は、アルカリ土類金属アルコキシドまたは水酸化物との反応によって調製できる。デオキシコール酸の塩は、ナトリウム（Ｎａ＋）、カリウム（Ｋ＋）およびリチウム（Ｌｉ＋）塩を含む。
【０１１２】
一実施形態において、提供されるのは、
９α−ヒドロキシ−５β−アンドロスタン−３，１７−ジオン（２）；
５β−アンドロスタ−９（１１）−エン−３，１７−ジオン（３）；
（Ｚ）−３α−ヒドロキシ−５β−プレグナ−９（１１），１７（２０）−ジエン（６）；
（Ｚ）−３α−アセトキシ−５β−プレグナ−９（１１），１７（２０）−ジエン（７ａ）；
（Ｅ）−メチル３α−アセトキシ−５β−コール−９（１１），１６，２２−トリエン−２４−オエート（８ａ）；
メチル３α−アセトキシ−５β−コール−９（１１），１６−ジエン−２４−オエート（８ｂ）；
メチル３α−ヒドロキシ−５β−コール−９（１１）−エン−１２−オン−２４−オエート（１０ａ）；および
メチル３α−アセトキシ−５β−コラン−１２−オン−２４−オエート（１１ａ）
からなる群から選択される中間化合物である。
【０１１３】
医薬組成物および投与様式
組成物は、開示されている化合物を、少なくとも１つの薬学的に許容される賦形剤と組み合わせて構成され得る。許容される賦形剤は、非毒性であり、投与を補助し、開示されている化合物の治療的有用性に悪影響を及ぼさない。そのような賦形剤は、任意の固体、液体、半固体であってよく、またはエアロゾル組成物の場合、当業者に一般に利用可能なガス状賦形剤であってよい。
【０１１４】
固体医薬品賦形剤は、デンプン、セルロース、タルク、グルコース、ラクトース、スクロース、ゼラチン、麦芽、米、小麦粉、石粉、シリカゲル、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸ナトリウム、グリセロールモノステアレート、塩化ナトリウム、乾燥脱脂粉乳等を含む。液体および半固体賦形剤は、グリセロール、プロピレングリコール、水、エタノール、ならびに石油、植物または合成起源のもの、例えば、ピーナッツ油、大豆油、鉱油、ゴマ油等を含む種々の油から選択できる。好ましい液体担体は、特に注射用液の場合、水、生理食塩水、ブドウ糖水溶液およびグリコールを含む。
【０１１５】
概して、好ましい実施形態の化合物は、類似の効用を果たす作用物質の許容されている投与様式のいずれかによって治療有効量で投与される。好ましい実施形態の化合物、すなわち活性成分の実際の量は、治療される疾患の重症度、対象の年齢および相対的健康、使用される化合物の効力、投与の経路および形態ならびに他の要因等の数々の要因によって決まる。薬物は、１日当たり複数回、好ましくは１日当たり１回または２回投与され得る。これらの要因のすべては、担当臨床医の技量の範囲内である。
【０１１６】
製剤中の化合物の量は、当業者によって用いられる全範囲内で変動し得る。本明細書に記載されている通りの種々の態様における本組成物が調製でき、ここで、デオキシコール酸部分は、水１体積当たりの重量に基づいてまたは水の密度を前提としたｗ／ｗ（すなわち、重量と体積との１対１対応）に基づいて約０．５％〜１０％の範囲である。別の態様において、本実施形態は、最大で希釈剤の飽和点の濃度である現在記載されている医薬組成物に関する。濃度およびｐＨ等の条件に基づき、チキソトロピー粘度を選択することができる。例えば、Ｍｕｋｈｏｐａｄｈｙａｙ， Ｓ．およびＵ． Ｍａｉｔｒａ、Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｓｃｉｅｎｃｅ、８７巻：１６６６〜１６８３頁（２００４年）の１６８０頁を参照されたい。
【０１１７】
いくつかの実施形態において、投与するステップは、本明細書における組成物を、皮膚パッチ、ポンプまたは真皮下デポー剤によって送達することを含む。いくつかの実施形態において、投与するステップは、本明細書における組成物を局所的にまたは皮下に送達することを含む。特定の実施形態において、投与するステップは、前記対象の目の下、顎の下、腋の下、臀部、ふくらはぎ、背部、大腿または腹の領域に局所的に（例えば、皮下または真皮下に）投与することを含む。投与は、皮下または経皮注射によって為され得る。
【０１１８】
合成スキーム
胆汁酸医薬組成物の完全な化学合成方法および有用な中間体の他の例が以下に提供される。
【０１１９】
これらの下記の記述および例は、本化合物を自然に産生する哺乳動物または微生物生命体からのＤＣＡの抽出の代替を提供する。合成経路１〜６は、本発明におけるデオキシコール酸（ＤＣＡ）を合成するための使用が企図されている。合成経路１Ｂおよび実施例１〜１１は、ヒドロコルチゾンからのＤＣＡの合成を示す。
【０１２０】
１．アドレノステロンからの９（１１）−エンまたは１１，１２−エンを介する合成経路＃１Ａ
スキーム１Ａ（以下）のコルチゾン（化合物１．１）は、完全な合成材料として広く利用可能である。クロロクロム酸ピリジニウム（ＰＣＣ）を使用してこれを効率的に開裂し、Ｃ１７ケトン化合物を形成することができる。このアドレノステロン（化合物１．２）への開裂は、ＨＩＯ４またはビスマス酸ナトリウム（ＮａＢｉＯ３）を使用して実施することもできる。化合物１．２を化合物１．３に変換する反応は、既知の化学的プロセスである。化合物１．３の化合物１．４への変換には、モノケタール化が関与する。後続ステップは、３−ケト−４−エンの再生、Ｃ５β配置を得るための４，５−エン（Ｈ２／Ｐｔ／ＤＭＦ）の選択的還元および化合物１．５を得るためのＣ３カルボニル基の所望の３α配置への選択的還元である。化合物１．５を化合物１．６に変換する際における保護基の添加およびそれに続く生成物の還元により、Ｃ１１β−オール（アキシャル配置）、すなわち化合物１．７が得られ、これは、主要な９（１１）−エンへの位置選択的脱離（すなわち、化合物１．７の化合物１．８への変換）に適している。
【０１２１】
ここで、合成スキームは、化合物１．７が化合物１．８または化合物１．９のいずれへの変換のための出発材料として使用され得るかという点で分岐する。Ｃ１１ヒドロキシル基とＣ９水素原子との間のトランスジアキシャルの関係により、化合物１．７を化合物１．８に変換するために使用される脱離反応は位置選択的である。化合物１．９の異性体Ｃ１１−Ｃ１２オレフィンを得るための脱離の代替様式は、シス−熱脱離（すなわち、化合物１．７の化合物１．９への変換）を含み、同様に位置選択的である。
【０１２２】
スキーム１Ａ．ＤＣＡのＣ１２ヒドロキシル基の２つのＣ環前駆体の合成
【０１２３】
【化２１】
化合物１．８のアリル酸化（ＣｒＯ３および３，５ジメチルピラゾールによる処理を介する）により、エノン含有化合物１．１０が得られる。化合物１．９の過酸酸化は、ステロイドのアルファ面から立体選択的に進み、Ｃ１１−１２エポキシド化合物１．１１が得られる（上記スキーム１Ａを参照）。これらの化学転換により、Ｃ１２ヒドロキシル基官能性の２つの主要な前駆体、すなわち、化合物１．１０および化合物２．１が得られる（スキーム１Ａおよび２）。
【０１２４】
当業者であれば、上記コルチゾン経路は、代わりに、同じ炭素骨格および同じ酸素原子の相対的配置を有するヒドロコルチゾンから始まるように変更してよく、ヒドロコルチゾンは、炭素原子を有するＣ−１１酸素の酸化状態のみがコルチゾンと異なっていることを理解するであろう。ヒドロコルチゾンは市販されており、全化学合成（Ｗｏｏｄｗａｒｄ
Ｒ． Ｂ．ら、Ｊ． Ａｍ． Ｃｈｅｍ． Ｓｏｃ．、７４巻：４２２３頁（１９５２年））を含むこの化合物の種々の合成が既知である（Ｓｚｃｚｅｂａｒａら、Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、２１巻：１４３〜１４９頁（２００３年２月））。ケトン１．１３は、α，β−不飽和二重結合の水素化分解によってヒドロコルチゾン１．１２（スキーム１Ｂ）から開始して合成され、続いて、ＮａＩＯ４を使用する１，２−ジオール開裂を可能にするための水素化ホウ素ナトリウムを使用して完全なケトン還元を行い、それにより、ステロイド環系のＤ環上にＣ１７ケトンを形成する。それに続くクロロクロム酸ピリジニウム（ＰＣＣ）による酸化により、１．１３が得られる。Ｋ−ｓｅｌｅｃｔｒｉｄｅ（登録商標）による１．１３の処理、続いて無水酢酸／ピリジンによるアセチル化により、保護されたアルコール１．１５が得られる。それに続くウィッティヒ試薬による１．１５のオレフィン化によってアルケン１．１６を得て、その後、これをメチルプロピオレートおよびエチルアルミニウムジクロリドで処理し、ジエン１．１７を形成する。両方の二重結合の水素化に続いて、ケトン１．１８を還元し、得られたアルコール中間体をピリジン中のＳＯＣｌ２による処理により脱離し、アルケン１．１９を得る。ＣｒＯ３によるアルケン１．１９のアリル酸化および水素化条件下での二重結合の還元により、ケトン１．２１が得られる。アセテート保護基の除去および得られたアルコールの酸化により、ジケトン１．２２が得られる。ＬｉＡｌＨ（Ｏ−ｔＢｕ）３による１．２２の還元およびメチルエステルの加水分解により、ＤＣＡが得られる。
【０１２５】
スキーム１Ｂ．ヒドロコルチゾンからのＤＣＡの合成
【０１２６】
【化２２】
化合物１．１０および２．１のさらなる転換は、スキーム２に示されている。最初に、化合物１．１０を、ＤＣＡのものと同一の適切に官能基化されたＣ環系を含有するように修飾する（スキーム２）。Ｃ１２カルボニル基の立体選択的還元により化合物２．１が得られ、化合物２．１中に存在する９（１１）二重結合の触媒水素化により化合物２．２が得られる。
【０１２７】
スキーム２．アリル酸化経路を使用するＣ１２ヒドロキシル基の導入
【０１２８】
【化２３】
スキーム３は、エポキシド含有化合物１．１１の、スキーム２の類似体Ｃ１２α−ヒドロキシステロイド化合物２．２への転換を提示する。
【０１２９】
スキーム３．Ｃ１１−Ｃ１２エポキシドの立体選択的還元
【０１３０】
【化２４】
これらの経路の両方において上述した通り、共通の中間化合物２．２が形成される。
【０１３１】
ＤＣＡの合成における次のステップは、ＤＣＡのカルボキシル側鎖置換Ｄ環を含有するような化合物２．２中に存在するＤ環の修飾である（スキーム４およびスキーム５）。
【０１３２】
スキーム４．脱保護およびウィッティヒ反応
【０１３３】
【化２５】
最初に、化合物２．２のＣ１７ケタールおよびＣ３シリルエーテル基を加水分解する。その後、ウィッティヒ反応を実施し、化合物４．２を得る。化合物４．２の化合物５．１への変換がエン反応によって行われる。それに続く化合物５．１の触媒還元およびエステルの加水分解により、ＤＣＡが得られる（スキーム５）。
【０１３４】
スキーム５．ＤＣＡ側鎖の導入のためのエン反応および触媒還元
【０１３５】
【化２６】
２．コルチゾンからのアドレノステロン（ｉ−ステロイド、３，５−シクロステロール経路）を介する合成経路＃２
Ｃ１７におけるアドレノステロン（化合物１．２、スキーム６）の選択的ケタール化、ホウ化水素還元、メシル化および緩衝化された加水分解により、ｉ−ステロイド（３，５−シクロステロール）含有化合物６．１が得られる。化合物６．１に、９（１１）−エン形成（化合物６．１の化合物６．２への変換、スキーム６）およびアリル酸化（化合物６．２の化合物６．３への変換、スキーム６）、続いてカルボニル基還元を受けさせ、化合物６．４を得る。ｉ−ステロールの加水分解および水素化により化合物６．５が得られ、合成経路＃１において上記で提示した合成方法によってこれをＤＣＡに変換することができる。
【０１３６】
スキーム６．ｉ−ステロイド（すなわち、３，５−シクロステロール）の形成によるＡ−Ｂ−環系の保護
【０１３７】
【化２７】
３．ヘコゲニンからの合成経路＃３
ヘコゲニン（化合物７．１、スキーム７）は、メキシカンヤムおよびＡｇａｖｅ種の他の植物において豊富に見られる植物ステロールである。ＤＣＡ合成のための出発材料としてのヘコゲニンの主な利点は、ＤＣＡに存在するＣ１２酸素官能基をそのまま有することである。
【０１３８】
ヘコゲニンから開始する合成経路における最初のステップは、ヘコゲニン（化合物７．１）中のＣ１２カルボニル基の、必須のＣ１２−α配置への立体選択的還元（化合物７．１の化合物７．２への変換）である。その後、３−β−オール、５α−ＡＢ環系は、３α−オール、５β−ＡＢ環系に変換（化合物７．１の、化合物７．２へ、化合物７．３への変換）される（スキーム７）。よく知られているマーカー分解（Ｍａｒｋｅｒ， Ｒ．Ｅ．、Ｒｏｈｒｍａｎｎ， Ｅ．、Ｓｔｅｒｏｌｓ． ＬＸＩＸ． Ｏｘｉｄａｔｉｏｎ Ｐｒｏｄｕｃｔｓ ｏｆ Ｓａｒｓａｓａｐｏｇｅｎｉｎ． Ｓａｒｓａｓａｐｏｇｅｎｏｉｃ Ａｃｉｄ ａｎｄ Ｒｅｌａｔｅｄ Ｓｕｂｓｔａｎｃｅｓ、Ｊ． Ａｍ． Ｃｈｅｍ． Ｓｏｃ．、６１巻（８号）：２０７２〜２０７７頁（１９３９年））を、化合物７．２の化合物７．３への変換に続いて行い、化合物７．４を得る。Ｄ環側鎖（スキーム８）の化合物８．２への導入は、スキーム４および５に示されている方法によって実現される。化合物８．２中の必須のＣ１７ケトンは、化合物８．１の酢酸エノールのオゾン分解によって形成される（スキーム８）。その後、オレフィン化およびエン反応順序を使用するスキーム５と類似の方式で、８．２からＤＣＡが調製される。ヘコゲニンから開始する代替経路は、スキーム９および１０に示されている。
【０１３９】
スキーム７．Ｃ１２−ヒドロキシル基導入、ＡＢ環修飾および側鎖開裂
【０１４０】
【化２８】
スキーム８．側鎖導入
【０１４１】
【化２９】
スキーム９．３−ケト−４−エンへのジチオエタン経路
【０１４２】
【化３０】
スキーム１０Ａ．３−ケト−４−エンを介するＤＣＡ形成
【０１４３】
【化３１】
４．サポゲニンからの合成経路＃４
サポゲニンは、サポニン（すなわち、ステロイド配糖体）のＣ３ヒドロキシル基に結合している単糖類および二糖類の加水分解に由来する。これらは広く発生する植物生成物である。サポニンは、本来、以下に示される通りのスピロケタール構造として発生する。化合物１０．３を、チゴゲニン、ジオスゲニン、クロロゲニン、スミラゲニンおよびヘコゲニン（化合物７．１）から形成することもできる。我々は、ＤＣＡが、これらの、すなわち、チゴゲニン、ジオスゲニン、クロロゲニン、スミラゲニンおよびヘコゲニン（化合物７．１）のそれぞれから合成され得ると考えている（Ｙ． Ｍａｚｕｒ、Ｎ． ＤａｎｉｅｌｉおよびＦｒａｎｚ Ｓｏｎｄｈｅｉｍｅｒ、Ｊ． Ａｍ． Ｃｈｅｍ． Ｓｏｃ．；８２巻、５８０９頁（１９６０年））。
【０１４４】
我々は、ヘコゲニンからＤＣＡを合成できたため、上記サポゲニンのいずれも、同様にＤＣＡ合成のための出発材料としての役割を果たし得ると認識している。
【０１４５】
スキーム１０Ｂ．サポニンからの合成経路
【０１４６】
【化３２】
５．スチグマステロールからの合成経路＃５
スチグマステロール（化合物１１．１）は、広く利用可能な植物ステロールである。これは、ＤＣＡ合成のための出発材料として、官能基化されたＡＢ環系および容易に開裂可能な側鎖部分を含有するという利点を有する。スチグマステロールは、ＤＣＡ合成に不可欠の、Ｃ環において必要な官能性を欠くという不利点を有する。
【０１４７】
この合成経路において、スチグマステロール（化合物１１．１）ＡＢ環は、ｉ−ステロイド形成によって保護され、続いてオゾン分解によってＣ１７に導入された側鎖が得られ、それはマスクされた形態のカルボキシル基としてのＣ２４−オールに還元される（スキーム１１）。後続ステップは、Ｃ１２にアリル位を生成する（スキーム１２）。Ｂ環ジエン形成および酢酸第二水銀酸化は既知の過程であり、Ｂ環系の触媒還元により、上述した先の経路と共通の中間体が得られる。しかしながら、他の経路とは対照的に、側鎖が既に存在する。アリル酸化（化合物１２．４の化合物１．２０への変換）および立体選択的還元（化合物１．２０の化合物１．２１への変換）、続いて前述のステップにより生成物が得られ、これをＤＣＡに変換する。
【０１４８】
スキーム１１．ｉ−ステロイドのオゾン分解および側鎖還元
【０１４９】
【化３３】
スキーム１２．トリエン形成およびアリル酸化
【０１５０】
【化３４】
スチグマステロール経路の変形形態では、Ｂ環ジエンのディールス・アルダー保護を使用する。これは、９（１１）二重結合を単離してアリル酸化ステップ中の考えられる干渉を防止するため、有利である（スキーム１３）。
【０１５１】
スキーム１３．トリエン形成および環Ｂジエンのディールス・アルダー保護
【０１５２】
【化３５】
６．エルゴステロールからの合成経路＃６
エルゴステロール（化合物１４．１）は、容易に利用可能な出発材料であり、本明細書で説明されている手順を適合することによってＤＣＡを調製するために使用できる。アリル酸化は、Ｃ１２酸素官能性への簡易経路を提供する（スキーム１４）。この経路は、環Ｂジエンから開始するという利点を有する。これはスチグマステロール経路と収束する。
【０１５３】
スキーム１４．エルゴステロールからのトリエン形成
【０１５４】
【化３６】
好ましい実施形態の化合物は、下記の一般的方法および手順を使用して、容易に利用可能な出発材料から調製できる。典型的なまたは好ましい処理条件（すなわち、反応温度、時間、反応物質のモル比、溶媒、圧力等）が与えられている場合、特に明記しない限り、他の処理条件を使用してもよいことが理解される。最適反応条件は、使用される特定の反応物質または溶媒によって異なり得るが、そのような条件は、当業者が日常的な最適化手順によって決定できる。
【０１５５】
加えて、当業者には明らかなように、いくつかの官能基が望ましくない反応を受けるのを防止するために、従来の保護基が必要となり得る。種々の官能基に適切な保護基ならびに特定の官能基を保護および脱保護するための適切な条件は、当該技術分野において既知である。例えば、数々の保護基は、Ｔ． Ｗ． ＧｒｅｅｎｅおよびＧ． Ｍ． Ｗｕｔｓ、Ｐｒｏｔｅｃｔｉｎｇ Ｇｒｏｕｐｓ ｉｎ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ、第３版、Ｗｉｌｅｙ、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ、１９９９年ならびにその中で引用されている参考文献に記載されている。
【０１５６】
本明細書に記載されている反応のための出発材料および試薬は、概して既知の化合物であるか、または既知の手順もしくはその明白な修正形態によって調製できる。例えば、出発材料および試薬の多くは、Ａｌｄｒｉｃｈ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃｏ．（Ｍｉｌｗａｕｋｅｅ、Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ、ＵＳＡ）、Ｂａｃｈｅｍ（Ｔｏｒｒａｎｃｅ、Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ、ＵＳＡ）、Ｅｍｋａ−ＣｈｅｍまたはＳｉｇｍａ（Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ、Ｍｉｓｓｏｕｒｉ、ＵＳＡ）等の商業的供給業者から入手可能である。その他は、ＦｉｅｓｅｒおよびＦｉｅｓｅｒのＲｅａｇｅｎｔｓ ｆｏｒ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ、１〜１５巻（Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ａｎｄ Ｓｏｎｓ、１９９１年）、ＲｏｄｄのＣｈｅｍｉｓｔｒｙ ｏｆ Ｃａｒｂｏｎ Ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ、１〜５巻および補足（Ｅｌｓｅｖｉｅｒ Ｓｃｉｅｎｃｅ Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ、１９８９年）、Ｏｒｇａｎｉｃ Ｒｅａｃｔｉｏｎｓ、１〜４０巻（Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ａｎｄ Ｓｏｎｓ、１９９１年）、ＭａｒｃｈのＡｄｖａｎｃｅｄ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ（Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ａｎｄ Ｓｏｎｓ、第４版）ならびにＬａｒｏｃｋのＣｏｍｐｒｅｈｅｎｓｉｖｅ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｔｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎｓ（ＶＣＨ Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ Ｉｎｃ．、１９８９年）等の標準的な参考教科書に記載されている手順またはその明白な修正形態によって調製できる。
【実施例】
【０１５７】
好ましい実施形態の種々の出発材料、中間体および化合物は、適切な場合、沈殿、ろ過、結晶化、蒸発、蒸留およびクロマトグラフィー等の従来の技術を使用して単離および精製できる。これらの化合物の特徴付けは、融点、質量スペクトル、核磁気共鳴および種々の他の分光分析によって等、従来の方法を使用して実施できる。
【０１５８】
合成経路＃１、スキーム１Ｂにおける生成物の合成を実施するためのステップの例示的な実施形態は、以下でさらに詳細に記載される。表３は、下記の実施例におよび本明細書全体を通して記載されている例示的な反応スキームおよび合成経路において種々の化合物／部分／装置／手順／特性を表現するために使用される略語を記載している。
【０１５９】
【表３−１】
【０１６０】
【表３−２】
概要：酸素および水分感受性材料の操作は、アルゴン雰囲気下、二口フレームドライフラスコで行う。カラムクロマトグラフィーは、ＳＥ−Ｍａｋｅシリカゲル（６０〜１２０メッシュ）、Ｓｐｅｃｔｒｏｃｈｅｍシリカゲル（２３０〜４００メッシュ）または酸化アルミニウム９０中性（ＳＤ−Ｆｉｎｅ Ｃｈｅｍ．Ｌｔｄ．、Ｉｎｄｉａ）を使用して実施する。分析用薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）は、Ｍｅｒｃｋ Ｋｉｅｓｅｌｇｅｌ ６０Ｆ２５４（０．２５ｍｍ）プレート（Ｍｅｒｃｋ＆Ｃｏ．、Ｗｈｉｔｅｈｏｕｓｅ Ｓｔａｔｉｏｎ、ＮＪ）で実施した。スポットの可視化は、ＵＶ光（２５４ｎｍ）ランプによってまたはエタノール中の硫酸（５％）およびｐ−アニスアルデヒド（３％）溶液で炭化させることによってのいずれかで検出した。
【０１６１】
装置：本明細書に記載されている反応スキームおよび合成経路の化合物および生成物の分析は、以下に記載される装置および設備で実行できる。
【０１６２】
核磁気共鳴（ＮＭＲ）
プロトンおよび炭素の核磁気共鳴スペクトル（１Ｈ ＮＭＲおよび１３Ｃ ＮＭＲ）は、内部標準として溶媒共鳴（１Ｈ ＮＭＲ、７．２６ｐｐｍのＣＨＣｌ３または２．５ｐｐｍのＤＭＳＯおよび３．３３ｐｐｍのＤＭＳＯ−Ｈ２Ｏ；１３Ｃ ＮＭＲ、７７．０ｐｐｍのＣＤＣｌ３または３９．５ｐｐｍのＤＭＳＯ）を用い、Ｖａｒｉａｎ Ｍｅｒｃｕｒｙ−Ｇｅｍｉｎｉ２００（１Ｈ ＮＭＲ、２００ＭＨｚ；１３Ｃ ＮＭＲ、５０ＭＨｚ）またはＶａｒｉａｎ Ｍｅｒｃｕｒｙ−Ｉｎｏｖａ５００（１Ｈ ＮＭＲ、５００ＭＨｚ；１３Ｃ ＮＭＲ、１２５ＭＨｚ）（Ｖａｒｉａｎ，Ｉｎｃ．、Ｐａｌｏ Ａｌｔｏ、ＣＡ）分光計で記録される。１Ｈ ＮＭＲデータは、下記の通りに報告される：化学シフト（δ、ｐｐｍ）、多重度（ｓ＝一重項、ｄ＝二重項、ｔ＝三重項、ｑ＝四重項、ｂｒ＝広幅、ｍ＝多重項）、カップリング定数（Ｈｚ）および積分。
【０１６３】
赤外線分光法
赤外線スペクトル（ＦＴ−ＩＲ）は、ＪＡＳＣＯ−４６０＋モデル（Ｊａｓｃｏ，Ｉｎｃ．、Ｅａｓｔｏｎ、ＭＤ）で動作させる。質量スペクトルは、Ｐｅｒｋｉｎ ＥｌｍｅｒのＡＰＩ−２０００分光計（Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ，Ｉｎｃ．、Ｗａｌｔｈａｍ、ＭＡ）でＥＳ＋モードを使用して得られる。
【０１６４】
融点
融点は、ＬＡＢ−ＩＮＤＩＡ融点計測装置（Ｌａｂｉｎｄｉａ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ Ｐｖｔ．Ｌｔｄ．、Ｉｎｄｉａ）を使用して測定したものであり、訂正されない。
【０１６５】
高圧液体クロマトグラフィー
ＨＰＬＣクロマトグラムは、ＰＤＡ検出器を有するＳＨＩＭＡＤＺＵ−２０１０モデル（株式会社島津製作所、日本）を使用して記録した。
【０１６６】
光学活性
比旋光度（［α］Ｄ）は、５８９ｎｍのＪＡＳＣＯ−１０２０（Ｊａｓｃｏ，Ｉｎｃ．、Ｅａｓｔｏｎ、ＭＤ）を用いて測定し、訂正されない。
【０１６７】
化学物質：特に断りのない限り、市販の試薬を精製することなく使用する。ジエチルエーテルおよびＴＨＦは、ナトリウム／ベンゾフェノンケチルから蒸留される。無水ＤＭＦ、ＤＣＭ、ペンタンおよびヘキサンは、ＣａＨ２からの蒸留によって得られる。
【０１６８】
（実施例１）
アンドロスタン−３，１１，１７−トリオン（１．１３）の調製
１０％のＰｄ／Ｃ（２．５ｇ、５ｗｔ％）を、ＤＭＦ（２５０ｍＬ）中のヒドロコルチゾン（化合物１．１２）（５０．０ｇ、１３８．１２ｍｍｏｌ）の溶液に添加する。得られたスラリーをＰａｒｒ装置（５０ｐｓｉ）内で１２時間水素化する。ＴＬＣによって証明される通り、出発材料の完全消失時に、粗反応混合物をセライトの小型プラグに通してろ過し、溶媒を真空下で除去する。粗生成物（４８．０ｇ）が無色固体として得られる。
【０１６９】
ＮａＢＨ４（２．１ｇ、５５．３ｍｍｏｌ）を、ＥｔＯＨ（５００ｍＬ）およびＣＨ２Ｃｌ２（５００ｍＬ）中の上記粗生成物（４８．０ｇ、１３１．８６ｍｍｏｌ）の溶液に添加する。１時間後、アセトン（５０ｍＬ）および水（１５０ｍＬ）、続いてＮａＩＯ４（７０．５ｇ、３２９．６ｍｍｏｌ）を添加する。混合物を室温で終夜撹拌する。
【０１７０】
蒸留水（５００ｍＬ）を添加し、混合物を酢酸エチル（３×２５０ｍＬ）で抽出する。酢酸エチル層をシリカゲルプラグに通して洗い流し、溶媒を蒸発させて３８ｇを無色固体として得る。粗生成物を精製することなくさらに酸化させる。
【０１７１】
ＰＣＣ（４０．４ｇ、１８７．５ｍｍｏｌ）を、ＣＨ２Ｃｌ２（４００ｍＬ）中の上記粗生成物の溶液に３等分ずつ３０分間かけて添加する。得られた反応混合物を室温で約３〜４時間撹拌する。ＴＬＣによってモニターされる通り、反応の完了時に、粗反応混合物をセライトおよびシリカゲルのパッドに通して連続的にろ過し、粗材料を、酢酸エチル／ヘキサン（３：１０）［５０ｍＬ画分、１０ｍＬ／分溶離、ｐ−アニスアルデヒド炭化を用いるＴＬＣによってモニターする；ＥｔＯＡｃ／ヘキサン（１：１）中、化合物１．１３のＲｆ＝０．３７および化合物１．１２のＲｆ＝０．０５］で溶離するカラムクロマトグラフィー［５９（Ｗ）×７００（Ｌ）ｍｍ、６０〜１２０メッシュシリカ、１５０ｇ］によって精製し、ジアステレオマー化合物１．１３（３３．０ｇ、７９％収率）を無色固体として得る。
【０１７２】
得られた粗材料を、Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｌｕｎｏｖ Ｃ１８カラム（２５０×３０．０ｍｍ、１０μ）を使用する分取ＨＰＬＣおよびＣＨ３ＣＮ：Ｈ２Ｏ（１２：１３）による定組成溶離によって、１５ｍＬの画分中、２５ｍＬ／分流速で精製する。分取ＨＰＬＣは、精製にのみ使用し、分析には使用しない。表４は、生成物の計測された特性を記載している。
【０１７３】
【表４】
（実施例２）
３β−ヒドロキシ−アンドロスタン−１１，１７−ジオン（１．１４）
Ｋ−ｓｅｌｅｃｔｒｉｄｅ（登録商標）（９８．３９ｍＬ、９８．０１ｍｍｏｌ、ＴＨＦ中１Ｍ溶液）を、ＴＨＦ（３３０ｍＬ）中の化合物１．１３（３３．０ｇ、１０９．２７ｍｍｏｌ）の溶液に、不活性雰囲気下、−７８℃で１５分間かけて添加し、−７８℃で約３〜４時間撹拌する。反応混合物をＮａＯＨ水溶液（２Ｍ、７０ｍＬ）でクエンチする。粗反応混合物を酢酸エチル（５００ｍＬ）で希釈し、有機層を水（３×７５ｍＬ）および飽和ブライン溶液（１００ｍＬ）で洗浄し、ＭｇＳＯ４（７５ｇ）で乾燥させる。溶媒を真空下で除去し、３３ｇの粗材料を得る。粗生成物を精製することなくアセチル化に付す。
【０１７４】
粗材料の精製
粗材料を、酢酸エチル／ヘキサン（１：４）［２５ｍＬ画分、５ｍＬ／分溶離、ｐ−アニスアルデヒド炭化を用いるＴＬＣによってモニターする；ＥｔＯＡｃ／ヘキサン（１：１）中、化合物１．１４のＲｆ＝０．３および化合物１．１３のＲｆ＝０．３７］で溶離するカラムクロマトグラフィー［２９（Ｗ）×６００（Ｌ）ｍｍ、２３０〜４００メッシュシリカ、２００ｇ］によって精製し、化合物１．１４を得る。表５は、生成物の計測された特性を記載している。
【０１７５】
【表５】
（実施例３）
３β−ヒドロキシアンドロスタン−１１，１７−ジオンアセテート（１．１５）
無水酢酸（１６．６ｇ、１６２．８ｍｍｏｌ）を、ピリジン（１５０ｍＬ）中の化合物１．１４（３３．０ｇ、１０８．５５ｍｍｏｌ）の溶液に、不活性雰囲気下、０℃で添加する。得られた反応混合物を周囲温度で終夜撹拌する。ＴＬＣによって証明される通り、反応の完了時に、ピリジンおよび残っている無水酢酸を真空下で除去する。粗残留物を酢酸エチル（５００ｍＬ）で希釈し、水（３×１５０ｍＬ）、飽和ブライン溶液（１００ｍＬ）で洗浄し、ＭｇＳＯ４（７５ｇ）で乾燥させる。溶媒を真空蒸発させ、粗材料を、酢酸エチル／ヘキサン（１：１０）［２５ｍＬ画分、１０ｍＬ／分溶離、ｐ−アニスアルデヒド炭化を用いるＴＬＣによってモニターする；ＥｔＯＡｃ／ヘキサン（３：７）中、化合物１．１５のＲｆ＝０．３８および化合物１．１４のＲｆ＝０．１］で溶離するカラムクロマトグラフィー［５９（Ｗ）×８００（Ｌ）ｍｍ、６０〜１２０メッシュシリカ、１５０ｇ］によって精製し、化合物１．１５（１９．０ｇ、６６．４％収率）を無色固体として得る。表６は、生成物の計測された特性を記載している。
【０１７６】
【表６】
（実施例４）
（Ｚ）−３β−ヒドロキシ−５β−プレグ−１７（２０）−エン−１１−オンアセテート（１．１６）
カリウムｔｅｒｔ−ブトキシド（１５９．２８ｍＬ、１５９．２ｍｍｏｌ、ＴＨＦ中１Ｍ溶液）を、ＴＨＦ（１５０ｍＬ）中のエチルトリフェニルホスホニウムブロミド（６１．１６ｇ、１６４．８ｍｍｏｌ）の溶液に、不活性雰囲気下、−５℃で１時間かけて滴下添加する。得られた濃桃色の反応混合物を１０〜１５℃まで加温し、同じ温度でさらに１時間撹拌する。ＴＨＦ（５０ｍＬ）中の化合物５５（１９．０ｇ、５４．９ｍｍｏｌ）の溶液を、上記ウィッティヒイリド懸濁液に−５℃でゆっくり導入する。溶液をさらに１０〜２０分間撹拌し、反応混合物を周囲温度までゆっくり加温する。撹拌を約３〜４時間続ける。ＴＬＣによって証明される通り、出発材料の完全消失時に、反応混合物を飽和ＮＨ４Ｃｌ水溶液（７５ｍＬ）でクエンチする。水層をＥｔＯＡｃ（２×１５０ｍＬ）で抽出し、合わせた有機抽出物を飽和ブライン溶液（１００ｍＬ）で洗浄し、ＭｇＳＯ４（７５ｇ）で乾燥させる。溶媒を真空下で除去し、粗材料を、酢酸エチル／ヘキサン（１：２０）［２５ｍＬ画分、１０ｍＬ／分溶離、ｐ−アニスアルデヒド炭化を用いるＴＬＣによってモニターする；ＥｔＯＡｃ／ヘキサン（１：６）中、化合物１．１６のＲｆ＝０．５４および化合物１．１５のＲｆ＝０．０６］で溶離するカラムクロマトグラフィー［４９（Ｗ）×６００（Ｌ）ｍｍ、６０〜１２０メッシュシリカ、３００ｇ］によって精製し、化合物１．１６（１５．５ｇ、７８．８％収率）を濃厚な無色液体として得て、これを１〜２日後、０℃でゆっくり凝固させる。表７は、生成物の計測された特性を記載している。
【０１７７】
【表７】
（実施例５）
メチル（Ｅ）−３β−ヒドロキシ−５β−コーラ−１６（１７），２２（２３）−ジエン−２４−オエートアセテート（１．１７）
メチルプロピオレート（９．６８ｇ、１１４．９５ｍｍｏｌ）を、０℃のＣＨ２Ｃｌ２（２２０ｍＬ）中の化合物１．１６（１６．５ｇ、４６ｍｍｏｌ）の溶液に添加する。反応混合物を周囲温度まで加温し、不活性雰囲気下、１時間撹拌する。エチルアルミニウムジクロリド（１７．５ｇ、１３７．８ｍｍｏｌ）を、０℃の上記混合物に滴下導入し、得られた反応塊を再度周囲温度まで加温し、終夜撹拌する。ＴＬＣによって証明される通り、反応の完了時に、粗反応混合物を氷水（１００ｍＬ）でクエンチし、水層をＥｔＯＡｃ（３×１５０ｍＬ）で抽出する。合わせた有機層を飽和ブライン溶液（１００ｍＬ）で洗浄し、ＭｇＳＯ４（５０ｇ）で乾燥させる。溶媒を真空下で除去し、粗材料を酢酸エチル／ヘキサン（１：７）［１５ｍＬ画分、１０ｍＬ／分溶離、ＴＬＣによってモニターし、ＵＶ光（２５４ｎｍ）ランプまたはｐ−アニスアルデヒド炭化のいずれかによって検出する；ＥｔＯＡｃ／ヘキサン（１：６）中、化合物１．１７のＲｆ＝０．３６および化合物１．１６のＲｆ＝０．５４］で溶離するカラムクロマトグラフィー［４９（Ｗ）×６００（Ｌ）ｍｍ、６０〜１２０メッシュシリカ、３００ｇ］によって精製し、化合物１．１７（１６ｇ、７９％収率）を無色半固体として得る。表８は、生成物の計測された特性を記載している。
【０１７８】
【表８】
（実施例６）
メチル３β−ヒドロキシ−５β−コラン−１１−オン−２４−オエートアセテート（１．１８）
１０％Ｐｄ／Ｃ（２．９ｇ、２０ｗｔ％）を、ＥｔＯＡｃ（１５０ｍＬ）中の化合物１．１７（１４．５ｇ、３２．８ｍｍｏｌ）の溶液に添加する。得られたスラリーをＰａｒｒ装置（５０ｐｓｉ）内で１２時間水素化する。ＴＬＣ［ＥｔＯＡｃ／ヘキサン（１：３）中、化合物１．１８のＲｆ＝０．４３および化合物１．１７のＲｆ＝０．４３；しかしながら、化合物１．１７だけは共役エステル発色団によりＵＶ活性である］によって証明される通り、出発材料の完全消失時に、粗反応混合物をセライトの小型プラグに通してろ過し、溶媒を真空下で除去し、化合物１．１８（１４ｇ、９５．７％収率）を無色固体として得る。表９は、生成物の計測された特性を記載している。
【０１７９】
【表９】
（実施例７）
メチル３β−ヒドロキシ−５β−コール−９（１１）−エン−２４−オエートアセテート（１．１９）
ＰｔＯ２（５．０ｇ、１００ｗｔ％）を、触媒量のＡｃＯＨ（２．０ｍＬ）の存在下、ＥｔＯＡｃ（７５ｍＬ）中の１．１８（５．０ｇ、１１．２ｍｍｏｌ）の溶液に添加する。得られたスラリーをＰａｒｒ装置（７０ｐｓｉ）内で約１４〜１６時間水素化する。反応の完了時に、粗混合物をセライトの小型プラグに通してろ過し、溶媒を真空下で除去する。粗生成物をさらに精製することなく脱離反応に使用する。
【０１８０】
ＳＯＣｌ２（１．９８ｇ、１６．７８ｍｍｏｌ）を、ピリジン（１００ｍＬ）中の上記粗混合物の溶液に、０℃で滴下導入する。得られた反応混合物を周囲温度まで加温し、約１時間撹拌する。ＴＬＣによって証明される通り、反応の完了時に、ピリジンを真空下で除去する。粗残留物を酢酸エチル（１００ｍＬ）で希釈し、水（２×５０ｍＬ）、飽和ブライン溶液（１００ｍＬ）で洗浄し、ＭｇＳＯ４（４０ｇ）で乾燥させる。溶媒を真空蒸発させ、粗材料を、酢酸エチル／ヘキサン（１：１０）［１０ｍＬ画分、５ｍＬ／分溶離、ｐ−アニスアルデヒド炭化を用いるＴＬＣによってモニターする；ＥｔＯＡｃ／ヘキサン（１：６）中、化合物１．１９のＲｆ＝０．５１および化合物１．１８のＲｆ＝０．２２］で溶離するカラムクロマトグラフィー［４９（Ｗ）×６００（Ｌ）ｍｍ、６０〜１２０メッシュシリカ、１２０ｇ］によって精製し、化合物１．１９（４．１ｇ、８５．４％収率）を無色固体として得る。表１０は、生成物の計測された特性を記載している。
【０１８１】
【表１０】
（実施例８）
メチル３β−ヒドロキシ−５β−コール−９（１１）−エン−１２−オン−２４−オエートアセテート（１．２０）
ＣｒＯ３（８．０ｇ、１００ｗｔ％、８０．０ｍｍｏｌ）を、ＡｃＯＨ（１５０ｍＬ）中の化合物１．１９（８．０ｇ、１８．６ｍｍｏｌ）の溶液に添加する。得られた反応混合物を６０℃で約２４〜３６時間加熱する。前駆体の完全消失時に、酢酸を真空蒸発させ、粗材料をジエチルエーテル（４００ｍＬ）に溶解する。有機層を水（２×１００ｍＬ）、飽和ブライン溶液（１００ｍＬ）で洗浄し、ＭｇＳＯ４（４０ｇ）で乾燥させる。溶媒を真空下で除去し、粗材料を、酢酸エチル／ヘキサン（１：５）［１０ｍＬ画分、３ｍＬ／分溶離、ＴＬＣによってモニターし、ＵＶ光（２５４ｎｍ）ランプによって検出する；ＥｔＯＡｃ／ヘキサン（１：４）中、化合物１．２０のＲｆ＝０．２８および化合物１．１９のＲｆ＝０．６１］で溶離するカラムクロマトグラフィー［４９（Ｗ）×６００（Ｌ）ｍｍ、６０〜１２０メッシュシリカ、１２０ｇ］によって精製し、化合物１．２０（５ｇ、６０．５％収率）を無色固体として得る。表１１は、生成物の計測された特性を記載している。
【０１８２】
【表１１】
（実施例９）
メチル３β−ヒドロキシ−５β−コラン−１２−オン−２４−オエートアセテート（１．２１）
１０％Ｐｄ／Ｃ（３０ｍｇ、１０ｗｔ％）を、ＥｔＯＡｃ（３０ｍＬ）中の化合物１．２０（３００ｍｇ、０．６７５ｍｍｏｌ）の溶液に添加する。得られたスラリーをＰａｒｒ装置（５０ｐｓｉ）内で約１６時間水素化する。ＴＬＣ［ＥｔＯＡｃ／ヘキサン（３：７）中、化合物１．２１のＲｆ＝０．４４および化合物１．２０のＲｆ＝０．４４；しかしながら、化合物１．２０だけはそのエノン発色団によりＵＶ活性であり；加えて、化合物１．２０の炭化は不鮮明であるが化合物１．２１は鮮明である］による出発材料の完全消失時に、粗反応混合物をセライトの小型プラグに通してろ過し、溶媒を真空下で除去し、化合物１．２１（２７０ｍｇ、９０％収率）を無色固体として得る。表１２は、生成物の計測された特性を記載している。
【０１８３】
【表１２】
（実施例１０）
メチル５β−コーラ−３，１２−ジオン−２４−オエート（１．２２）
ＮａＯＨ（７３ｍｇ、１．８ｍｍｏｌ）を、ＭｅＯＨ（１０ｍＬ）中の化合物１．２１（２７０ｍｇ、０．６ｍｍｏｌ）の溶液に添加する。得られた反応混合物を周囲温度で約２時間撹拌する。ＴＬＣによって証明される通り、反応の完了時に、ＭｅＯＨを真空下で除去し、粗生成物を酢酸エチル（２０ｍＬ）で希釈する。有機層を飽和ブライン溶液（１０ｍＬ）で洗浄し、ＭｇＳＯ４（５．０ｇ）で乾燥させる。溶媒を真空下で除去し、粗材料を精製することなくエステル化反応において使用する。
【０１８４】
ＳＯＣｌ２（０．１ｍＬ、１．３５ｍｍｏｌ）を、０℃のＭｅＯＨ（１０ｍＬ）中の上記粗材料の溶液に滴下添加する。得られた反応混合物を周囲温度で約１時間撹拌する。反応の完了時に、ＭｅＯＨを真空下で除去する。粗反応混合物をＥｔＯＡｃ（３０ｍＬ）で希釈し、有機層を水（３×１０ｍＬ）、飽和ブライン溶液（１５ｍＬ）で洗浄し、ＭｇＳＯ４（５ｇ）で乾燥させる。溶媒を真空蒸発させ、粗生成物を精製することなく酸化反応に使用する。
【０１８５】
ＰＣＣ（１．０ｇ、４．６ｍｍｏｌ）を、ＣＨ２Ｃｌ２（２５ｍＬ）中の得られたエステルの溶液に３等分ずつ約５分間かけて導入する。得られた反応混合物を周囲温度で約３〜４時間撹拌する。ＴＬＣによって証明される通り、反応の完了時に、粗反応混合物をセライトのパッドに通してろ過する。溶媒を真空下で除去し、粗材料を、酢酸エチル／ヘキサン（１：６）［１０ｍＬ画分、５ｍＬ／分溶離、ｐ−アニスアルデヒド炭化を用いるＴＬＣによってモニターする；ＥｔＯＡｃ／ヘキサン（２：３）中、化合物１．２２のＲｆ＝０．５７および化合物１．２１のＲｆ＝０．７１］で溶離するカラムクロマトグラフィー［１９（Ｗ）×４００（Ｌ）ｍｍ、６０〜１２０メッシュシリカ、４５ｇ］によって精製し、化合物１．２２（１７０ｍｇ、７０．８％収率）を無色固体として得る。表１３は、生成物の計測された特性を記載している。
【０１８６】
【表１３】
（実施例１１）
デオキシコール酸メチル（１．２２−エステル）
ＬｉＡｌＨ（Ｏ−ｔＢｕ）（３３２ｍｇ、１．３ｍｍｏｌ）を、ＴＨＦ（１０ｍＬ）中の化合物１．２２（１５０ｍｇ、０．３７ｍｍｏｌ）の溶液に、不活性雰囲気下、周囲温度で滴下導入する。約４〜５時間撹拌した後、反応混合物をＨＣｌ水溶液（２ｍＬ、１Ｎ）でクエンチし、粗混合物をＥｔＯＡｃ（３０ｍＬ）で希釈し、水（１５ｍＬ）、飽和ブライン溶液（１０ｍＬ）で洗浄し、ＭｇＳＯ４（３ｇ）で乾燥させる。溶媒を真空下で除去し、粗塊を、ＭｅＯＨ／ＣＨ２Ｃｌ２（１：２０）［５ｍＬ画分、３ｍＬ／分溶離、ｐ−アニスアルデヒド炭化を用いるＴＬＣによってモニターする；ＭｅＯＨ／ＣＨ２Ｃｌ２（１：９）中、化合物１．２２−エステルのＲｆ＝０．４２および化合物１．２２のＲｆ＝０．８５］で溶離するカラムクロマトグラフィー［２９（Ｗ）×５００（Ｌ）ｍｍ、２３０〜４００メッシュシリカ、５０ｇ］によって精製し、デオキシコール酸メチル（化合物１．２２−エステル）（１１０ｍｇ、７２．８％収率）を無色固体として得る。表１４は、生成物の計測された特性を記載している。
【０１８７】
【表１４】
（実施例１１）
デオキシコール酸
Ｈ２Ｏ（２．０ｍＬ）中のＬｉＯＨ（２３ｍｇ、０．５５ｍｍｏｌ）の溶液を、ＴＨＦ（４ｍＬ）中の１．２２−エステル（１１０ｍｇ、０．２７ｍｍｏｌ）の溶液に添加する。得られた反応混合物を周囲温度で約２〜３時間撹拌する。ＴＬＣ［ＭｅＯＨ／ＣＨ２Ｃｌ２（１：９）中、化合物ＤＣＡのＲｆ＝０．３５および化合物１．２２−エステルのＲｆ＝０．４２］によるエステルの消失時に、粗反応混合物を酢酸エチル（１０ｍＬ）で希釈し、飽和ブライン溶液で粉砕し、有機層を完全に分離させる。有機層を飽和ＮＨ４Ｃｌ溶液（１０ｍＬ）で洗浄し、ＭｇＳＯ４（３．０ｇ）で乾燥させる。溶媒を真空下で除去し、トルエン（３×５ｍＬ）と共沸させることによっていかなる微量の水も除去し、デオキシコール酸（ＤＣＡ）（１００ｍｇ、９４．３％収率）を無色固体として得る。表１５は、生成物の計測された特性を記載している。
【０１８８】
【表１５】
実施例１〜１１に記載されている例示的な過程の生成物の収率は、表１６に記載されている。
【０１８９】
【表１６】
（実施例１２）
９α−ヒドロキシ−５β−アンドロスタン−３，１７−ジオン（２）
【０１９０】
【化３７】
ＤＭＦ（１５０ｍＬ）中の９α−ヒドロキシアンドロスタ−４−エン−３，１７−ジオン１（３０．０ｇ、９９．３ｍｏｌ）の溶液に、１０％のＰｄ／Ｃ（２．１ｇ）を添加し、得られたスラリーをＰａｒｒ装置（６０ｐｓｉ）内で１２時間水素化した。ＴＬＣによって証明される通り、出発材料の完全消失時に、粗反応混合物をＣｅｌｉｔｅ（登録商標）の小型パッドに通してろ過し、溶媒を真空下で除去し、無色固体（３０．０ｇ）を得た。この固体を０℃のアセトン（９０ｍＬ）と合わせ、得られたスラリーを１時間撹拌した。その後、これをろ過し、冷却（０℃）アセトン（３０ｍＬ）で洗浄し、真空下、同じろ過漏斗中、室温で乾燥させ、化合物２（２６．０ｇ、８６％）を得た。表１７は、生成物の計測された特性を記載している。
【０１９１】
【表１７】
（実施例１３）
５β−アンドロスタ−９（１１）−エン−３，１７−ジオン（３）
【０１９２】
【化３８】
ＤＣＭ（５２０ｍＬ）中の化合物２（２６．０ｇ、８５．４ｍｍｏｌ）の溶液に、濃硫酸（７．５３ｇ、７６．８ｍｍｏｌ）を、不活性雰囲気下、１０℃で１５分間かけて添加した。温度を２５℃まで上昇させ、得られた溶液を２時間撹拌した。この時点で、ＴＬＣによって証明される通り、出発材料は残っていなかった。反応物を１０％ＮａＨＣＯ３水溶液（２００ｍＬ）の添加によってクエンチした。層を分離し、水層をＤＣＭ（２×１００ｍＬ）で２回抽出した。有機層を合わせ、水（１００ｍＬ）および飽和ブライン溶液（１００ｍＬ）で連続的に洗浄した。その後、有機相をＮａ２ＳＯ４（７５ｇ）で乾燥させ、ろ過した。ろ液を真空蒸発させ、化合物３（２３．０ｇ、９４％）をオフホワイトの固体として得た。この生成物をさらに精製することなく次のステップにおいて「そのまま」使用した。表１８は、生成物の計測された特性を記載している。
【０１９３】
【表１８】
（実施例１４）
３α−ヒドロキシ−５β−アンドロスタ−９（１１）−エン−１７−オン（４）
【０１９４】
【化３９】
リチウムトリ−ｔｅｒｔ−ブトキシアルミニウムヒドリドのＴＨＦ溶液（１．０Ｍ、８４．４ｍＬ、８４．４ｍｍｏｌ）を、不活性雰囲気下、ＴＨＦ（２３０ｍＬ）中の化合物３（２３．０ｇ、８０．４ｍｍｏｌ）の冷（−４０℃）溶液に添加した。得られた反応混合物を２時間撹拌した。この時点で、ＴＬＣによって証明される通り、反応は完了したと決定され、１Ｎ ＨＣｌ（２００ｍＬ）および酢酸エチル（２３０ｍＬ）の混合物を添加することにより、反応混合物をクエンチした。得られた二相混合物を分離し、水層を酢酸エチル（２×１００ｍＬ）で２回抽出した。有機相を合わせ、水（１５０ｍＬ）および飽和ブライン溶液（１００ｍＬ）で連続的に洗浄した。その後、有機相をＮａ２ＳＯ４（７５ｇ）で乾燥させ、ろ過した。ろ過を真空蒸発させ、化合物４（２３．０ｇ）をオフホワイトの固体として得た。上記粗生成物を精製することなく次のステップにおいて「そのまま」使用した。表１９は、生成物の計測された特性を記載している。
【０１９５】
【表１９】
（実施例１５）
（Ｚ）−３α−ヒドロキシ−５β−プレグナ−９（１１），１７（２０）−ジエン（６）
【０１９６】
【化４０】
ＴＨＦ中のカリウムｔｅｒｔ−ブトキシドの溶液（１Ｍ、２３０ｍＬ、２３１ｍｍｏｌ）を、ＴＨＦ（１５０ｍＬ）中のエチルトリフェニルホスホニウムブロミド（８８．７ｇ、２３９ｍｍｏｌ）の懸濁液に、２５℃で１時間かけて滴下添加した。得られた暗赤色混合物を２５℃でさらに１時間撹拌した。ＴＨＦ（２３０ｍＬ）中の化合物４（２３．０ｇ、７９．７ｍｍｏｌ）の溶液を、赤色混合物に２５℃でゆっくり添加した。得られた混合物を３〜４時間撹拌し、この時点で、ＴＬＣにより完了したと決定された。飽和ＮＨ４Ｃｌ水溶液（７５ｍＬ）を添加することにより、反応物をクエンチした。相を分離し、水層をＥｔＯＡｃ（３×１５０ｍＬ）で３回抽出した。有機画分を合わせ、飽和ブライン溶液（１００ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４（７５ｇ）で乾燥させ、ろ過した。ろ液を真空濃縮し、粗固体を、酢酸エチル／ヘキサン（１：９）で溶離するカラムクロマトグラフィー［４９ｍｍ（Ｗ）×６００ｍｍ（Ｌ）、６０〜１２０メッシュシリカ、３００ｇ］によって精製した。生成物を含有する画分を合わせ、濃縮し、化合物６（１９．１ｇ、８０．０％）を白色固体として得た。表２０は、生成物の計測された特性を記載している。
【０１９７】
【表２０】
（実施例１６）
（Ｚ）−３α−アセトキシ−５β−プレグナ−９（１１），１７（２０）−ジエン（７ａ）
【０１９８】
【化４１】
化合物６（１９．０ｇ、６３ｍｍｏｌ）をＣＨ２Ｃｌ２（３８０ｍＬ）に溶解した。トリエチルアミン（１７．６ｍＬ、１２６．６ｍｍｏｌ）、ＤＭＡＰ（０．７７２ｇ、６ｍｍｏｌ）および無水酢酸（８．９８ｍＬ、９４ｍｍｏｌ）を、窒素雰囲気下、２５℃で連続的に添加した。得られた溶液を２５℃で２時間撹拌し、この時点で、ＴＬＣによって反応は完了したと決定された。氷水（１００ｍＬ）の添加によって反応物をクエンチし、相を分離した。水層をＤＣＭ（３×１５０ｍＬ）で３回抽出した。有機画分を合わせ、飽和ブライン溶液（１００ｍＬ）で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４（５０ｇ）で乾燥させ、ろ過した。ろ液を真空濃縮し、化合物７ａ（２２．０ｇ、９５％収率）をオフホワイトの固体として得た。表２１は、生成物の計測された特性を記載している。
【０１９９】
【表２１】
（実施例１７）
（Ｅ）−メチル３α−アセトキシ−５β−コール−９（１１），１６，２２−トリエン−２４−オエート（８ａ）
【０２００】
【化４２】
エチルアルミニウムジクロリド（１０４．５ｍＬ、１９２ｍｍｏｌ、トルエン中１．８Ｍ）を、不活性雰囲気下、０℃でＤＣＭ（１００ｍＬ）中のメチルプロピオレート（１３．５８ｍＬ、１５３ｍｍｏｌ）の溶液に添加した。得られた溶液を１５分間撹拌し、その後、化合物７ａ（２２ｇ、６４．３ｍｍｏｌ）を添加した。０℃でさらに２０分間撹拌後、温度を２５℃まで上昇させ、そこでさらに１８時間維持した。この時点で、ＴＬＣによって反応は完了したと決定され、混合物を冷（０℃）水（２００ｍＬ）中に注いだ。相を分離し、水層をＤＣＭ（１５０ｍＬ）で抽出した。有機層を合わせ、水（２００ｍＬ）および飽和ブライン溶液（１００ｍＬ）で連続的に洗浄した。その後、これを無水Ｎａ２ＳＯ４（４０ｇ）で乾燥させ、ろ過した。ろ液を真空濃縮し、得られた固体をメタノール（２８０ｍＬ）中でスラリー化することによって精製し、化合物８ａ（１７．５ｇ、６８％）を白色固体として得た。表２２は、生成物の計測された特性を記載している。
【０２０１】
【表２２】
（実施例１８）
メチル３α−アセトキシ−５β−コール−９（１１）−エン−２４−オエート（９ａ）
【０２０２】
【化４３】
ＥｔＯＡｃ（３５０ｍＬ）中の化合物８ａ（１７．５ｇ、４１ｍｍｏｌ）の溶液にＰｔＯ２（４．３７ｇ）を添加し、得られたスラリーをＰａｒｒ装置（７０ｐｓｉ）内で１４〜１６時間水素化した。この時点で、ＴＬＣによって反応は完了したと決定された。混合物をＣｅｌｉｔｅ（登録商標）の小型プラグに通してろ過し、溶媒を真空下で除去し、化合物９ａ（１７．０ｇ、９６．０％）を白色固体として得た。上記生成物をさらに精製することなく次のステップにおいて使用した。表２３は、生成物の計測された特性を記載している。
【０２０３】
【表２３】
（実施例１９）
メチル３α−アセトキシ−５β−コール−９（１１），１６−ジエン−２４−オエート（８ｂ）
【０２０４】
【化４４】
エチルアルミニウムジクロリド（１４．２ｍＬ、２５ｍｍｏｌ、トルエン中１．８Ｍ）を、不活性雰囲気下、０℃でＤＣＭ（６０ｍＬ）中のメチルアクリレート（１．８９ｍＬ、２０ｍｍｏｌ）の溶液に添加した。得られた溶液を１５分間撹拌し、その後、化合物７ａ（３ｇ、８．７ｍｍｏｌ）を添加した。０℃でさらに２０分間撹拌後、温度を２５℃まで上昇させ、そこでさらに１８時間維持した。この時点で、ＴＬＣによって反応は完了したと決定され、その後、混合物を冷（０℃）水（６０ｍＬ）中に注いだ。相を分離し、水層をＤＣＭ（６０ｍＬ）で抽出した。有機層を合わせ、水（５０ｍＬ）および飽和ブライン溶液（１００ｍＬ）で連続的に洗浄した。その後、これを無水Ｎａ２ＳＯ４（５ｇ）で乾燥させ、ろ過した。ろ液を真空濃縮し、化合物８ｂ（２．６ｇ、７０％）を得た。表２４は、生成物の計測された特性を記載している。
【０２０５】
【表２４】
（実施例２０）
メチル３α−アセトキシ−５β−コール−９（１１）−エン−２４−オエート（９ａ）
【０２０６】
【化４５】
ＥｔＯＡｃ（６０ｍＬ）中の化合物８ａ（３ｇ、７ｍｍｏｌ）の溶液に１０％Ｐｄ／Ｃ（３００ｍｇ、１０％ｗｔ／ｗｔ）を添加し、得られたスラリーをＰａｒｒ装置（７０ｐｓｉ）内で１４〜１６時間水素化した。この時点で、ＴＬＣ（ヘキサン中１０％酢酸エチル）によって反応は完了したと決定された。混合物をＣｅｌｉｔｅ（登録商標）の小型プラグに通してろ過し、溶媒を真空下で除去し、化合物９ａ（２．６ｇ、８６％）を白色固体として得た。表２５は、生成物の計測された特性を記載している。
【０２０７】
【表２５】
（実施例２１）
メチル３α−ヒドロキシ−５β−コール−９（１１）−エン−１２−オン−２４−オエート（１０ａ）
【０２０８】
【化４６】
ＣｒＯ３（１７．０ｇ、１７０ｍｍｏｌ）を、ＡｃＯＨ（２７０ｍＬ）中の化合物９ａ（１７ｇ、３９．５ｍｍｏｌ）の溶液に添加した。得られた混合物を５０℃で２４〜３６時間加熱した。ＴＬＣによる出発材料の完全消失時に、溶媒を真空蒸発させ、粗材料を酢酸エチル（４００ｍＬ）および水（２００ｍＬ）に溶解した。２つの相を分離し、有機層を、水（２×１００ｍＬ）で２回、その後、飽和ブライン溶液（１００ｍＬ）で１回洗浄した。有機相を無水Ｎａ２ＳＯ４（４０ｇ）で乾燥させ、ろ過した。ろ液を真空濃縮し、得られた固体を、酢酸エチル／ヘキサン（１：５）［１０ｍＬ画分、３ｍＬ／分溶離、ＴＬＣによってモニターし、ＵＶ光（２５４ｎｍ）ランプによって検出する］で溶離するカラムクロマトグラフィー［４９ｍｍ（Ｗ）×６００ｍｍ（Ｌ）、６０〜１２０メッシュシリカ、１２０ｇ］によって精製した。生成物含有画分を合わせ、真空濃縮し、化合物１０ａ（８．８ｇ、５０％収率）を白色固体として得た。表２６は、生成物の計測された特性を記載している。
【０２０９】
【表２６】
（実施例２２）
メチル３α−アセトキシ−５β−コラン−１２−オン−２４−オエート（１１ａ）
【０２１０】
【化４７】
１０％Ｐｄ／Ｃ（９００ｍｇ）を、ＥｔＯＡｃ（１５０ｍＬ）中の化合物１０ａ（２．０ｇ、４．５ｍｍｏｌ）の溶液に添加し、得られたスラリーをＰａｒｒ装置（５０ｐｓｉ）内、５０℃で１６時間水素化した。この時点で、ＴＬＣによって反応は完了したと決定された。混合物をＣｅｌｉｔｅ（登録商標）の小型プラグに通してろ過し、溶媒を真空下で除去し、化合物１１ａ（１．６ｇ、８０％収率）を白色固体として得た。表２７は、生成物の計測された特性を記載している。
【０２１１】
【表２７】
（実施例２３）
メチル３α−アセトキシ−１２α−ヒドロキシ−５β−コラン−２４−オエート（１２ａ）
【０２１２】
【化４８】
リチウムトリ−ｔｅｒｔ−ブトキシアルミニウムヒドリドのＴＨＦ溶液（１Ｍ、２２．４ｍＬ、２２．４ｍｍｏｌ）を、周囲温度でＴＨＦ（２５ｍＬ）中の化合物１１ａ（２．５ｇ、５．６ｍｍｏｌ）の溶液に滴下添加した。さらに４〜５時間撹拌後、ＴＬＣによって反応は完了したと決定された。ＨＣｌ水溶液（１Ｍ、１０ｍＬ）を添加することによって反応物をクエンチし、混合物をＥｔＯＡｃ（３０ｍＬ）で希釈した。相を分離し、有機相を水（１５ｍＬ）および飽和ブライン溶液（１０ｍＬ）で連続的に洗浄した。その後、有機相を無水Ｎａ２ＳＯ４（３ｇ）で乾燥させ、ろ過した。ろ液を真空濃縮し、得られた固体を、ＥｔＯＡｃ／ヘキサン（２：８）［５ｍＬ画分、ｐ−アニスアルデヒド炭化を用いるＴＬＣによってモニターする］で溶離するカラムクロマトグラフィー［２９ｍｍ（Ｗ）×５００ｍｍ（Ｌ）、６０〜１２０メッシュシリカ、５０ｇ］によって精製した。生成物を含有する画分を合わせ、真空濃縮し、化合物１２ａ（２．３ｇ、９１％）を白色固体として得た。表２８は、生成物の計測された特性を記載している。
【０２１３】
【表２８】
（実施例２４）
デオキシコール酸（ＤＣＡ）
【０２１４】
【化４９】
Ｈ２Ｏ（２．０ｍＬ）中のＬｉＯＨ（１８７ｍｇ、４．４ｍｍｏｌ）の溶液を、ＴＨＦ（８ｍＬ）およびＭｅＯＨ（８ｍＬ）中の化合物１２ａ（５００ｍｇ、１．１１ｍｍｏｌ）の溶液に添加した。得られた混合物を５０℃で３〜４時間撹拌した。ＴＬＣによる出発材料の完全消失時に、反応混合物を真空濃縮した。水（１０ｍＬ）および３Ｎ ＨＣｌ（１ｍＬ）の混合物を合わせ、０℃まで冷却し、その後、粗生成物に添加した。０℃で１時間撹拌後、沈殿した固体をろ過し、その後、水（１０ｍＬ）およびヘキサン（２０ｍＬ）で洗浄した。室温での真空乾燥により、デオキシコール酸（ＤＣＡ、４００ｍｇ、９１％収率）を白色固体として得た。表２９は、生成物の計測された特性を記載している。
【０２１５】
【表２９】
（実施例２５）
初代ヒト脂肪細胞を、出発材料として９−ＨＡＤを使用して合成された様々な濃度の合成デオキシコール酸ナトリウムまたは以下に記載される通りのＳｉｇｍａから得られたウシ由来デオキシコール酸ナトリウムとともにインキュベートした。
【０２１６】
材料
脂肪細胞（Ｚｅｎ−Ｂｉｏカタログ番号ＳＡ−１０９６）
９６ウェルプレート（ＵＳ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃカタログ番号セルスター６５５１８０番）
無血清ＲＰＭＩ培地（Ｍｅｄｉａｔｅｃｈカタログ番号１７−１０５−ＣＶ）
デオキシコール酸ナトリウム（ＤＣ）（Ｓｉｇｍａカタログ番号Ｄ６７５０）
合成グリコデオキシコール酸ナトリウム（Ｋｙｔｈｅｒａ）
ＰＢＳ（１×）
ＭＴＳアッセイキット（Ｐｒｏｍｅｇａカタログ番号Ｇ３５８０）
到着した脂肪細胞は分化しており、９６ウェルプレート中、１ウェル当たり１３，０００細胞の密度であった。２枚のプレートを入手し、それぞれ同じ試料で処理した。細胞を、３７℃、５％ＣＯ２で２４時間インキュベートした。２０ｍｇを２ｍＬ培地（無血清）に溶解して各胆汁酸（合成および非合成ＤＣＡ）の１％原液を作製した。この１％原液を使用して、希釈により下記の１１種の溶液を調製した：０．００５％、０．０１％、０．０１５％、０．０２％、０．０２５％、０．０３％、０．０３５％、０．０４％、０．０５％、０．０６％および０．１％、ならびに０％（培地のみ）。
【０２１７】
細胞を１５０μＬの室温１×ＰＢＳ（リン酸緩衝生理食塩水）で２回洗浄した。プレートを上下逆にし、液体を容器にデカントすることにより、培地、その後ＰＢＳを９６ウェルプレート中のウェルから除去した。最後のＰＢＳ洗浄後、１ウェル当たり８０μＬの試料を添加した。各濃度の特定の胆汁酸を８つのウェルに添加し、３７℃、５％ＣＯ２で１時間インキュベートした。その後、プレートをインキュベーターから取り出し、溶液をデカントした。希釈した（１ｍＬのＲＰＭＩ中４０μＬ）ＭＴＳ試薬（３−（４，５−ジメチルチアゾール−２−イル）−５−（３−カルボキシメトキシフェニル）−２−（４−スルホフェニル）−２Ｈ−テトラゾリウム、内塩）の１００μＬ溶液を、各ウェルに直接添加した。対照（胆汁酸なし）ウェルが橙褐色に変色するまで、プレートを３７℃、５％ＣＯ２でインキュベートし、その後、９６ウェルプレートを分析する分光光度計に充填した。試料は、４９０ｎｍ波長設定で操作した。
【０２１８】
細胞の生存は、Ｐｒｏｍｅｇａ製の比色分析アッセイ（ＭＴＳ）キットを使用して評価した。結果は、合成ＮａＤＣまたはＳｉｇｍａ製ＮａＤＣのいずれも処理時における、細胞生存の用量依存的な減少を示す（図２を参照）。両分子は、本実験において類似の細胞溶解挙動を実証し、合成ＮａＤＣおよびウシ由来のＳｉｇｍａ製ＮａＤＣが脂肪細胞を死滅させるそれらの能力に関して、機能的に同一であることを示している。
【０２１９】
上述した実施形態および実施例は、本発明を限定することを意図するものではない。本発明の原理に従って、数々の修正形態および変形形態が可能であることを理解すべきである。
本発明の好ましい実施形態においては、以下が提供される。
（項目１）
デオキシコール酸（ＤＣＡ）を自然に産生する哺乳動物または微生物生命体から単離されるものではない、ＤＣＡである化合物もしくはそのプロドラッグ、または前記化合物もしくは前記プロドラッグの薬学的に許容される塩：
【化５０】
。
（項目２）
項目１に記載の化合物および薬学的に許容される賦形剤を含む、組成物。
（項目３）
神経ペプチドＹ（ＮＰＹ）受容体アンタゴニストおよび脂肪選択的プロアポトーシスペプチドからなる群から選択される少なくとも１つの追加の活性成分をさらに含む、項目２に記載の組成物。
（項目４）
前記神経ペプチドＹ（ＮＰＹ）受容体アンタゴニストが、ＢＩＢＰ−３２２６、神経ペプチドＹ５アンタゴニスト（ＡｍｇｅｎのＮＰＹ受容体アンタゴニスト）、ＢＩＢＯ−３３０４（Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ ＩｎｇｌｅｈｅｉｍのＮＰＹ受容体アンタゴニスト）、ＢＭＳ−１９２５４８（Ｂｒｉｓｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓ ＳｑｕｉｂｂのＮＰＹ受容体アンタゴニスト）、ＡＲ−Ｈ０４０９２２（Ｂｒｉｓｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓ ＳｑｕｉｂｂのＮＰＹ受容体アンタゴニスト）、ＬＹ−３５７８９７（Ｅｌｉ ＬｉｌｌｙのＮＰＹ受容体アンタゴニスト）、Ｅｓｔｅｖｅ ＮＰＹ−Ｙ５受容体アンタゴニスト、１２２９Ｕ９１（ＧｌａｘｏＳｍｉｔｈＫｌｉｎｅのＮＰＹ受容体アンタゴニスト）、ＧＷ４３８０１４Ｓ（ＧｌａｘｏＳｍｉｔｈＫｌｉｎｅのＮＰＹ受容体アンタゴニスト）、ＪＮＪ−５２０７７８７（Ｊｏｈｎｓｏｎ＆ＪｏｈｎｓｏｎのＮＰＹ受容体アンタゴニスト）、Ｌｕ−ＡＡ−４４６０８（ＬｕｎｄｂｅｃｋのＮＰＹ受容体アンタゴニスト）、ＭＫ−０５５７（ＭｅｒｃｋのＮＰＹ受容体アンタゴニスト）、ＮＧＤ−９５−１（ＮｅｕｒｇｏｇｅｎのＮＰＹ受容体アンタゴニスト）、ＮＬＸ−Ｅ２０１（ＮｅｕｒｏｌｏｇｉｘのＮＰＹ受容体アンタゴニスト）、ＣＧＰ−７１６８３（ＮｏｖａｒｔｉｓのＮＰＹ受容体アンタゴニスト）、ＰＤ−１６０１７０（ＰｆｉｚｅｒのＮＰＹ受容体アンタゴニスト）、ＳＲ−１２０８１９Ａ（Ｓａｎｏｆｉ ＡｖｅｎｔｉｓのＮＰＹ受容体アンタゴニスト）、ＢＩＩＥ０２４６（Ｓａｎｏｆｉ ＡｖｅｎｔｉｓのＮＰＹ受容体アンタゴニスト）、Ｓ．Ａ．０２０４（Ｓａｎｏｆｉ ＡｖｅｎｔｉｓのＮＰＹ受容体アンタゴニスト）、Ｓ−２３６７（ＳｈｉｏｎｇｌｉのＮＰＹ受容体アンタゴニスト）、ジヒドロピリジン系ＮＰＹ受容体アンタゴニスト、ジヒドロピリジン誘導体ＮＰＹ受容体アンタゴニスト、二環化合物ＮＰＹ受容体アンタゴニスト、カルバゾール系ＮＰＹ受容体アンタゴニストおよび三環化合物ＮＰＹ受容体アンタゴニストからなる群から選択される、項目３に記載の組成物。
（項目５）
前記脂肪選択的プロアポトーシスペプチドが、白色脂肪血管系にあるＣＫＧＧＲＡＫＤＣペプチドである、項目３に記載の組成物。
（項目６）
哺乳動物において選択した位置から脂肪沈着物を除去する方法であって、それを必要とする前記哺乳動物に、治療有効量のＤＣＡもしくはそのプロドラッグ、または前記ＤＣＡもしくは前記プロドラッグの薬学的に許容される塩：
【化５１】
を投与するステップを含む方法であり、前記化合物はＤＣＡを自然に産生する哺乳動物または微生物生命体から単離されるものではない方法。
（項目７）
前記哺乳動物に、神経ペプチドＹ（ＮＰＹ）受容体アンタゴニストおよび脂肪選択的プロアポトーシスペプチドからなる群から選択される少なくとも１つの追加の活性成分を投与するステップをさらに含む、項目６に記載の方法。
（項目８）
前記神経ペプチドＹ（ＮＰＹ）受容体アンタゴニストが、ＢＩＢＰ−３２２６、神経ペプチドＹ５アンタゴニスト（ＡｍｇｅｎのＮＰＹ受容体アンタゴニスト）、ＢＩＢＯ−３３０４（Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ ＩｎｇｌｅｈｅｉｍのＮＰＹ受容体アンタゴニスト）、ＢＭＳ−１９２５４８（Ｂｒｉｓｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓ ＳｑｕｉｂｂのＮＰＹ受容体アンタゴニスト）、ＡＲ−Ｈ０４０９２２（Ｂｒｉｓｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓ ＳｑｕｉｂｂのＮＰＹ受容体アンタゴニスト）、ＬＹ−３５７８９７（Ｅｌｉ ＬｉｌｌｙのＮＰＹ受容体アンタゴニスト）、Ｅｓｔｅｖｅ ＮＰＹ−Ｙ５受容体アンタゴニスト、１２２９Ｕ９１（ＧｌａｘｏＳｍｉｔｈＫｌｉｎｅのＮＰＹ受容体アンタゴニスト）、ＧＷ４３８０１４Ｓ（ＧｌａｘｏＳｍｉｔｈＫｌｉｎｅのＮＰＹ受容体アンタゴニスト）、ＪＮＪ−５２０７７８７（Ｊｏｈｎｓｏｎ＆ＪｏｈｎｓｏｎのＮＰＹ受容体アンタゴニスト）、Ｌｕ−ＡＡ−４４６０８（ＬｕｎｄｂｅｃｋのＮＰＹ受容体アンタゴニスト）、ＭＫ−０５５７（ＭｅｒｃｋのＮＰＹ受容体アンタゴニスト）、ＮＧＤ−９５−１（ＮｅｕｒｇｏｇｅｎのＮＰＹ受容体アンタゴニスト）、ＮＬＸ−Ｅ２０１（ＮｅｕｒｏｌｏｇｉｘのＮＰＹ受容体アンタゴニスト）、ＣＧＰ−７１６８３（ＮｏｖａｒｔｉｓのＮＰＹ受容体アンタゴニスト）、ＰＤ−１６０１７０（ＰｆｉｚｅｒのＮＰＹ受容体アンタゴニスト）、ＳＲ−１２０８１９Ａ（Ｓａｎｏｆｉ ＡｖｅｎｔｉｓのＮＰＹ受容体アンタゴニスト）、ＢＩＩＥ０２４６（Ｓａｎｏｆｉ ＡｖｅｎｔｉｓのＮＰＹ受容体アンタゴニスト）、Ｓ．Ａ．０２０４（Ｓａｎｏｆｉ ＡｖｅｎｔｉｓのＮＰＹ受容体アンタゴニスト）、Ｓ−２３６７（ＳｈｉｏｎｇｌｉのＮＰＹ受容体アンタゴニスト）、ジヒドロピリジン系ＮＰＹ受容体アンタゴニスト、ジヒドロピリジン誘導体ＮＰＹ受容体アンタゴニスト、二環化合物ＮＰＹ受容体アンタゴニスト、カルバゾール系ＮＰＹ受容体アンタゴニストおよび三環化合物ＮＰＹ受容体アンタゴニストからなる群から選択される、項目７に記載の方法。
（項目９）
脂肪選択的プロアポトーシスペプチドが、白色脂肪血管系にあるＣＫＧＧＲＡＫＤＣペプチドである、項目７に記載の方法。
（項目１０）
デオキシコール酸（ＤＣＡ）もしくはそのエステル、または薬学的に許容されるその塩：
【化５２】
を調製するための方法であって、
（ａ）９α−ヒドロキシアンドロスタ−４−エン−３，１７−ジオン１を、水素化条件下、Ｈ２と反応させて、化合物２
【化５３】
を形成するステップと、
（ｂ）化合物２を酸と反応させて、化合物３
【化５４】
を形成するステップと、
（ｃ）化合物３を還元剤と反応させて、化合物４を４および５
【化５５】
の混合物として形成するステップと、
（ｄ）化合物４をオレフィン形成条件下で二炭素オレフィン化試薬と反応させて、化合物６
【化５６】
を形成するステップと、
（ｅ）化合物６を、式７の化合物［式中、Ｐは保護基である］
【化５７】
に変換するステップと、
（ｆ）式７の化合物をルイス酸の存在下でアルキルプロピオレートＣＨ２ＣＨ２Ｃ（Ｏ）ＯＲまたはアルキルアクリレートＣＨ２＝ＣＨＣ（Ｏ）ＯＲ［式中、Ｒはアルキルである］と反応させて、式８の化合物［式中、Ｐは保護基であり、Ｒはアルキルであり、破線
【化５８−１】
は単結合または二重結合である］
【化５８−２】
を形成するステップと、
（ｇ）式８の化合物を水素化条件下でＨ２と反応させて、式９の化合物［式中、Ｐは保護基であり、Ｒはアルキルである］
【化５９】
を形成するステップと、
（ｈ）式９の化合物を酸化剤と反応させて、式１０の化合物［式中、Ｐは保護基であり、Ｒはアルキルである］
【化６０】
を形成するステップと、
（ｉ）式１０の化合物を水素化条件下でＨ２と反応させて、式１１の化合物［式中、Ｐは保護基であり、Ｒはアルキルである］
【化６１】
を形成するステップと、
（ｊ）式１１の化合物を還元剤と反応させて、式１２の化合物［式中、Ｐは保護基であり、Ｒはアルキルである］
【化６２】
を形成するステップと、
（ｋ）式１２の化合物を脱保護条件に曝露してそのエステルを形成し、場合によって、適切な加水分解条件に曝露して、デオキシコール酸または薬学的に許容されるその塩を形成するステップと
を含む方法。
（項目１１）
パート（ａ）の前記水素化条件がＰｄ／Ｃ触媒を含む、項目１０に記載の方法。
（項目１２）
パート（ｂ）の前記酸が鉱酸である、項目１０に記載の方法。
（項目１３）
前記鉱酸がＨ２ＳＯ４である、項目１２に記載の方法。
（項目１４）
パート（ｃ）の前記還元剤がＬｉＡｌ（ＯｔＢｕ）３Ｈである、項目１０に記載の方法。
（項目１５）
パート（ｄ）の前記二炭素オレフィン化試薬がＰｈ３ＰＣＨ２ＣＨ３＋Ｂｒ−である、項目１０に記載の方法。
（項目１６）
化合物７〜１２の前記保護基Ｐが−Ｃ（Ｏ）ＣＨ３である、項目１０に記載の方法。
（項目１７）
パート（ｆ）の前記ルイス酸がＥｔＡｌＣｌ２である、項目１０に記載の方法。
（項目１８）
前記アルキルプロピオレートまたはアルキルアクリレートがメチルプロピオレートまたはメチルアクリレートである、項目１０に記載の方法。
（項目１９）
パート（ｇ）の前記水素化条件がＰｔＯ２触媒を含む、項目１０に記載の方法。
（項目２０）
パート（ｈ）の前記酸化剤がＣｒＯ３である、項目１０に記載の方法。
（項目２１）
パート（ｉ）の前記水素化条件がＰｄ／Ｃ触媒を含む、項目１０に記載の方法。
（項目２２）
パート（ｊ）の前記還元剤がＬｉＡｌ（ＯｔＢｕ）３Ｈである、項目１０に記載の方法。
（項目２３）
Ｐが−Ｃ（Ｏ）ＣＨ３である場合、パート（ｋ）の前記脱保護および加水分解条件が、化合物１２を、アルカリ土類水酸化物、アルカリ土類金属アルコキシドまたは両方の混合物と反応させることを含む、項目１０に記載の方法。
（項目２４）
前記アルカリ土類金属アルコキシドがＬｉＯＨである、項目２３に記載の方法。
（項目２５）
９α−ヒドロキシ−５β−アンドロスタン−３，１７−ジオン（２）；
５β−アンドロスタ−９（１１）−エン−３，１７−ジオン（３）；
（Ｚ）−３α−ヒドロキシ−５β−プレグナ−９（１１），１７（２０）−ジエン（６）；
（Ｚ）−３α−アセトキシ−５β−プレグナ−９（１１），１７（２０）−ジエン（７ａ）；
（Ｅ）−メチル３α−アセトキシ−５β−コール−９（１１），１６，２２−トリエン−２４−オエート（８ａ）；
メチル３α−アセトキシ−５β−コール−９（１１），１６−ジエン−２４−オエート（８ｂ）；
メチル３α−ヒドロキシ−５β−コール−９（１１）−エン−１２−オン−２４−オエート（１０ａ）；および
メチル３α−アセトキシ−５β−コラン−１２−オン−２４−オエート（１１ａ）
からなる群から選択される、中間化合物。
【技術分野】
【０００１】
（関連出願への相互参照）
本出願は、２００７年６月１９日に出願された米国仮特許出願第６０／９４５，０３５号および２００７年８月２０日に出願された同第６０／９５６，８７５号；２００８年２月２１日に出願された米国通常特許出願第１２／０３５，３３９号および２００８年５月１６日に出願された同第１２／１５３，４４６号；ならびに２００８年４月２５日に出願された英国特許出願第０８０７６１５．０号に対する優先権を主張し、これらの各々は、その全体を本明細書において参考として援用される。
【０００２】
（発明の分野）
本発明は、広く胆汁酸ならびに関連組成物および方法に関する。一態様において、本発明は、デオキシコール酸および関連組成物、有用な中間体ならびにその合成方法に関する。別の態様において、本発明は、本組成物および方法の、医薬組成物およびその製造方法としての使用に関する。重要なことに、本発明の胆汁酸は、これらの酸を自然に産生する哺乳動物および微生物生命体から単離されるものではなく、故に、そのような生命体に関連するいかなる毒素および汚染物質もない。別の態様において、本発明は、デオキシコール酸ならびに薬学的に許容されるその塩および中間体の合成に関する。
【背景技術】
【０００３】
（発明の背景）
コラノロジー（Ｃｈｏｌａｎｏｌｏｇｙ）という胆汁酸の研究、特に胆汁酸化学は、世紀の大半にわたって関心を集めてきた。多くは既知であるが、胆汁酸化学には、多くが驚くべき特性を有する多種多様な化学的実体が関与する。総説は、例えば、参照により本明細書に組み込まれる、Ｍｕｋｈｏｐａｄｈｙａｙ， Ｓ．およびＵ． Ｍａｉｔｒａ．、Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｓｃｉｅｎｃｅ、８７巻：１６６６〜１６８３頁（２００４年）（「Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ａｎｄ ｂｉｏｌｏｇｙ ｏｆ ｂｉｌｅ ａｃｉｄｓ」）を参照されたい。
【０００４】
胆汁酸は、２つの連結ユニット、剛性のステロイド核および短い脂肪族側鎖を特徴とする（本出願の図１を参照）。Ｈｏｆｍａｎｎ， Ａ． Ｆ．らを参照。提案された胆汁酸の命名法については、Ｊ． Ｌｉｐｉｄ Ｒｅｓ．、３３巻：５９９〜６０４頁（１９９２年）を参照されたい。核および側鎖はいずれも、多数の可能な立体配置を有する。核は、個々の環の拡張または収縮によって変化させることができ、側鎖は、短縮または伸長できる。加えて、胆汁酸分子の両部分は、多数の可能な極性置換基を有する。イオン化基は、核または側鎖上に存在し得る。最後に、共役基は、核上（例えば、サルフェート、グルクロネート、ホスフェート）または側鎖上（グリシンもしくはタウリンまたは他のアミノ酸、さらには糖類）に存在し得る。側鎖構造は、化合物（胆汁酸または胆汁塩）のクラスを決定する。
【０００５】
胆汁酸は、両親媒性（ａｍｐｈｉｐｈｉｌｉｃ）および両親媒性（ａｍｐｈｉｐａｔｈｉｃ）の「面」の両方を有する両親媒性物質：
【０００６】
【化１】
である。Ｈｏｆｍａｎ， Ａ．Ｆ．、Ｎｅｗｓ Ｐｈｙｓｉｏｌ． Ｓｃｉ．、１４巻：２４〜２９頁（１９９９年）（「Ｂｉｌｅ Ａｃｉｄｓ： Ｔｈｅ ｇｏｏｄ， ｔｈｅ
Ｂａｄ， ａｎｄ ｔｈｅ Ｕｇｌｙ」、２５頁、図１）。
【０００７】
慣例により、疎水性表面は「β面」と呼ばれ、親水性表面は「α面」と呼ばれる。概して、β面は脂溶性であり、α面は比較的極性である。疎水面上および親水面上に極性基（自然発生的な胆汁酸中のヒドロキシル基）を有するもの、例えばウルソデオキシコール酸等の胆汁酸がある。分子の両親媒性の性質は、ホスファチジルコリン等、両親媒性であるが不水溶性の脂質との混合ミセルの形成を司る。胆汁酸は、胆汁酸が、臨界ミセル化濃度と称される臨界濃度を超えない限り、混合ミセルの形態の食物中の脂質を可溶化しない。
【０００８】
ヒトにおいて最大の割合で見られる胆汁酸は、ケノデオキシコール酸およびデオキシコール酸である。デオキシコール酸は、デオキシコレート、コラン酸および３α，１２α−ジヒドロキシ−５β−コラネート（ｃｈｏｌａｎａｔｅ）としても知られている。ヒト体内において、デオキシコール酸は、腸管において吸収のための脂肪の乳化に使用される。研究において、デオキシコール酸は、膜結合タンパク質単離のための低刺激洗浄剤として使用される。実質的に純粋である場合、デオキシコール酸は白色〜オフホワイトの結晶性粉末形態である。デオキシコール酸は、肝臓によって産生される４つの主な酸の１つである。これは、アルコールおよび酢酸に可溶である。デオキシコール酸のＣＡＳ番号は［８３−４４−３］である。
【０００９】
体脂肪の迅速な除去は長年の理想であり、多くの物質がそのような結果を達成すると主張されてきたが、結果を示したものはわずかである。「メソセラピー」、つまり脂肪の除去のための注射剤の使用は、１９５０年代からホメオパシーおよび美容学的主張が為されているが、安全性および有効性の懸念により、医療従事者の間で広く受け入れられていない。メソセラピーは、元来、局所的な医学的および美容学的状態の治療のために化合物の混合物を含有する皮膚注射を利用する方法として欧州で想到された。メソセラピーは、疼痛緩和のために伝統的に用いられていたが、最近ではその美容学的用途、特に脂肪およびセルライトの除去が米国で注目を集めている。局所的な脂肪減少のための１つのそのような報告されている治療は、ブラジルにおいて普及し、ホスファチジルコリンの注射を使用するものであり、メソセラピーと同義であると誤ってみなされてきた。「脂肪を溶解する」とされている注射としてのその魅力にもかかわらず、これらの美容学的治療の安全性および有効性は、ほとんどの患者および医師にとって曖昧なままである。Ｒｏｔｕｎｄａ，
Ａ．Ｍ．およびＭ． Ｋｏｌｏｄｎｅｙ、Ｄｅｒｍａｔｏｌｏｇｉｃ Ｓｕｒｇｅｒｙ、３２巻：４６５〜４８０頁（２００６年）（「Ｍｅｓｏｔｈｅｒａｐｙ ａｎｄ Ｐｈｏｓｐｈａｔｉｄｙｌｃｈｏｌｉｎｅ Ｉｎｊｅｃｔｉｏｎｓ： Ｈｉｓｔｏｒｉｃａｌ
Ｃｌａｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ ａｎｄ Ｒｅｖｉｅｗ」）を参照されたい。
【００１０】
国際公開第２００６／１３３１６０号（参照により図面を含むその全体が本明細書に組み込まれる）は、リポモデリング（ｌｉｐｏｍｏｄｅｌｉｎｇ）のための方法、例えば、神経ペプチドＹ受容体アンタゴニストを脂肪貯蔵部位に投与することによる脂肪貯蔵物の減少を記載している。Ｋｏｌｏｎｉｎ Ｍ． Ｇ．ら、Ｎａｔ． Ｍｅｄ．、６月、１０巻（６号）：６２５〜３２頁（２００４年）は、強力な脂肪細胞死滅効果を有する脂肪選択的プロアポトーシスペプチドを記載している。記載されているプロアポトーシスペプチドは、死滅させるためには血管系にアクセスする必要がある。
【００１１】
最近刊行された文献は、デオキシコール酸がインビボで脂肪性沈着物に注射される場合、脂肪除去特性を有することを報告している。すべて参照により図面を含むその全体が本明細書に組み込まれる、特許文献１および特許文献２、ならびに特許文献３、特許文献４、特許文献５および特許文献６を参照されたい。脂肪組織中に注射されたデオキシコレートは、１）細胞傷害機序によって脂肪細胞を死滅させる、２）皮膚引き締めを引き起こすという２つの効果を有する。これらの効果はいずれも、所望の審美的修正（すなわち、体形矯正）を媒介するために必要である。脂肪中に注射されたデオキシコレートは、タンパク質への曝露によって迅速に不活性化され、その後、迅速に腸の内容物中に戻るため、その効果は空間的に封じ込められる。臨床的安全性を与えるこの減弱作用の結果として、脂肪除去療法は、典型的に４〜６セッションを必要とする。外科手術を必要としないこの局所的な脂肪除去は、病理学的な局所的脂肪沈着物に関する治療的処置（例えば、ＨＩＶの治療における医学的介入に伴う脂質異常症）だけでなく、外科手術に固有の付帯リスクがない美容学的脂肪除去（例えば、脂肪吸引術）にも有益である。いずれも参照により本明細書に組み込まれる、Ｒｏｔｕｎｄａら、Ｄｅｒｍａｔｏｌ． Ｓｕｒｇｅｒｙ、３０巻：１００１〜１００８頁（２００４年）（「Ｄｅｔｅｒｇｅｎｔ ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ
ｓｏｄｉｕｍ ｄｅｏｘｙｃｈｏｌａｔｅ ａｒｅ ａ ｍａｊｏｒ ｆｅａｔｕｒｅ
ｏｆ ａｎ ｉｎｊｅｃｔａｂｌｅ ｐｈｏｓｐｈａｔｉｄｙｌｃｈｏｌｉｎｅ ｆｏｒｍｕｌａｔｉｏｎ ｕｓｅｄ ｆｏｒ ｌｏｃａｌｉｚｅｄ ｆａｔ ｄｉｓｓｏｌｕｔｉｏｎ」）およびＲｏｔｕｎｄａら、Ｊ． Ａｍ． Ａｃａｄ． Ｄｅｒｍａｔｏｌ．、２００５年：９７３〜９７８頁（「Ｌｉｐｏｍａｓ ｔｒｅａｔｅｄ ｗｉｔｈ ｓｕｂｃｕｔａｎｅｏｕｓ ｄｅｏｘｙｃｈｏｌａｔｅ ｉｎｊｅｃｔｉｏｎｓ」）を参照されたい。
【００１２】
医薬品等級の胆汁酸製剤は、比較的低価格で市販されている。この低価格は、胆汁酸が、動物の死体、特に雌ウシおよびヒツジ等の大型動物から得られることによるものである。重要なことに、動物源由来のすべての薬剤と同様に、動物由来胆汁酸製品は、動物病原体、ならびにパイロジェン等の細菌毒素を含む動物または微生物代謝産物および毒素等、他の有害作用物質を含有し得るという懸念がある。
【００１３】
そのような動物病原体は、プリオン病を引き起こし得る感染性病原タンパク質の一種であると考えられているプリオンを含み得る。プリオン病は、神経系の変性障害である。１つのそのような疾患である「狂牛」病（クロイツフェルト・ヤコブ病（ＣＪＤ）の変異型であると考えられている）は、罹患した雌ウシ由来の食用牛肉中に存在するプリオンによって引き起こされると考えられている。ほとんどの場合は未知の伝染様式による散発性なものであり、いくつかの場合は遺伝的なものであり、少数が医療処置によって伝染したものである。感染材料の消費によるヒトプリオン病の蔓延は、歴史的にはクールーに、また最近では変異型ＣＪＤに関与するとされている。他の動物プリオン病（ヒツジのスクレピー、伝染性ミンク脳症、シカの慢性消耗病および牛海綿状脳症）はすべて、感染動物との接触によってまたは感染飼料の消費によって横方向に伝染するようである。プリオン病に関するリスク評価および未来事象の予測は、異なる伝染様式、予測不可能な種の障壁、組織中における感染力の可変分布およびいくつかの疾患において見られる系統変動により、解明することが困難である。
【００１４】
概して、動物性製品は、パイロジェン（発熱物質）を産生する微生物生命体に曝露され得る。食物および／または医薬品の細菌汚染物質も、腸管出血性Ｅ．ｃｏｌｉによる食料品の汚染によって証明されている通り、重要課題である。雌ウシに由来する食肉等の製品およびリンゴ、ホウレンソウ等の農産物は、そのような汚染に関与するとされている。そのような場合、ヒトにおいて有害作用を発生させるのは、（細菌自体よりもむしろ）細菌によって産生される毒素である。そのような有害作用は、重度の下痢、腎不全および極限状況では死を含む。パイロジェンの一種である細菌内毒素は、すべての医薬組成物から実質的に排除されなくてはならない。
【００１５】
動物性製品は、一般に排除過程によって精製される、すなわち、混合から最終産物を選択するのではなく、最終産物は不純物の排除後に残っている材料である。また、病原体等の潜在的な動物部分に加えて、動物源からの精製の別のアーチファクトは、最終産物が１つまたは複数の胆汁酸の混合物であることである。例えば、デオキシコール酸の市販製剤は、若干のケノデオキシコール酸、ならびに哺乳動物の胆汁酸合成においてデオキシコール酸およびケノデオキシコール酸の両方の前駆体であるコール酸を含有する。デオキシ／ケノ／コールの正確な割合は事前選択されないため、これは、多量の胆汁酸の製造を企図する場合にロット間変動をもたらし得る。そのようなロット間変動は、問題のあるものとなり得、規制当局の承認または品質管理を獲得する際、特に医薬組成物を生成するための取り組みにおいて、追加ステップを生じさせる場合がある。生産者は明らかに、胆汁酸医薬組成物の製造においてロット間予測可能性を望むであろう。
【００１６】
現在、動物病原体および他の有害作用物質を含有する動物由来製品に関する懸念は、隔離および検査された動物から調達することによって対処されている。例えば、ニュージーランドの動物に由来するデオキシコール酸は、動物が隔離される等で観察可能な病原体がないままであり続ける限り、米国の規制制度下でヒト使用のための胆汁酸の源である。
【００１７】
暗黙的に、そのような政府により管理される規制制度のために必要なのは、動物由来の薬剤が注射される場合における動物病原体の伝染の内在的リスクの認識である。非動物性薬剤代替物が利用可能になれば、政府による規制制度はもはや必要ない。そのような代替物（動物由来の薬剤に置き換わる非動物性薬剤）および関連する利点の例は、ヒト使用のためのインスリンである。米国でのウシインスリンの製造は１９９８年に中止され、ヒト使用のためのブタインスリンは２００６年１月に中止された。動物インスリンはＢＳＥを引き起こす因子または他の病原因子に曝露されていないと分かっている群から得ることができるが、製造施設または過程は、動物性原料を、病原体に曝露された動物に曝露し得る。病原因子のヒトへの伝染のリスクは、組換え的にまたは合成的に製造されるインスリンの使用によって解消することができる。消費者にとって、インスリンの状況はためになるものであり、合成材料が自由に利用可能であれば、動物病原体の伝染のリスクは理論上は解消される。生産者にとって、動物病原体の材料が実質的にない純粋な化学的実体を生成するための能力は、安全性、品質および規制の目的に有利である。さらに、合成過程は、典型的に、生物源に由来するものよりも再現性の高い製品を提供する。
【００１８】
現在、動物の死体由来の胆汁酸が比較的豊富であることにより、業界は、胆汁酸を完全に化学的に合成すること、または植物ステロールもしくは微生物出発材料を使用して胆汁酸を調製することのいずれにも踏み出していない。また、胆汁酸誘導体は合成されたが、動物性材料の低価格および入手しやすさにより、この作業には当初、ステロイド化学のための出発材料として、やはり動物由来胆汁酸が関与していた。植物ステロール研究における歴史的に活発な取り組みにもかかわらず、容易に商業的に入手可能な植物ステロール由来の胆汁酸医薬品グレード組成物はない。例えば、非特許文献１を参照されたい（１９８１年の参考文献、非特許文献２（「Ｆｉｒｓｔ Ｔｏｔａｌ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ ｏｆ （＋）−Ｃｈｅｎｏｄｅｏｘｙｃｈｏｌｉｃ Ａｃｉｄ」）を前提として、いかなる胆汁酸の全合成も実施されなかったということに注目されたい）。細菌等の微生物によって産生された胆汁酸は、細菌産物として、例えば海洋での油流出の浄化のためにインシチュで使用されてきた。非特許文献３（「Ｂｉｌｅ ａｃｉｄｓ ａｒｅ ｎｅｗ ｐｒｏｄｕｃｔｓ ｏｆ ａ ｍａｒｉｅｎｅ ｂａｃｔｅｒｉｕｍ， Ｍｙｒｏｉｄｅｓ ｓｐ． Ｓｔｒａｉｎ ＳＭ１」）を参照されたい。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００１９】
【特許文献１】国際公開第２００５／１１７９００号パンフレット
【特許文献２】国際公開第２００５／１１２９４２号パンフレット
【特許文献３】米国特許第２００５／０２６１２５８号明細書
【特許文献４】米国特許第２００５／０２６７０８０号明細書
【特許文献５】米国特許第２００６／１２７４６８号明細書
【特許文献６】米国特許第２００６／０１５４９０６号明細書
【非特許文献】
【００２０】
【非特許文献１】Ｍｕｋｈｏｐａｄｈｙａｙ， Ｓ．およびＵ． Ｍａｉｔｒａ．、Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｓｃｉｅｎｃｅ、８７巻：１６６６〜１６８３、１６７０頁（２００４年）
【非特許文献２】Ｋａｍｅｔａｎｉら、Ｊ． Ａｍ． Ｃｈｅｍ． Ｓｏｃ．、１０３巻：２８９０頁（１９８１年）
【非特許文献３】Ｍａｎｅｅｒａｔら、Ａｐｐｌ． Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ． Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．、７６巻：６７９〜６８３頁（２００４年）
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００２１】
脂肪除去のためのデオキシコール酸の全潜在能力を現実化するために、動物由来製品の使用に対する懸念にさらに対処することが必須である。明らかに、動物起源の部分（または、動物、特に哺乳動物において作用し得、ヒト使用の場合にはヒトに悪影響を及ぼし得る病原部分）および動物または微生物代謝産物、パイロジェン等の細菌毒素を含む毒素等の他の有害作用物質がないことが冒頭から分かる、ヒトにおいて薬剤として使用するための、適量の有効な胆汁酸およびデオキシコール酸等の関連組成物が必要である。本発明は、動物病原体および他の有害作用物質の潜在的リスクがない合成的に調製された胆汁酸組成物を提供することにより、この懸念に対処するものである。開示されている胆汁酸組成物は、脂肪分解（ａｄｉｐｏｌｙｔｉｃ）療法において使用でき、局所的な脂肪除去の領域における研究および開発努力をさらに進める役割を果たす。
【課題を解決するための手段】
【００２２】
（発明の要旨）
本明細書では、定義された医薬組成物として十分な量の適切な胆汁酸およびその合成方法が提供される。そのように提供される胆汁酸組成物および方法は、胆汁酸を自然に産生する哺乳動物または微生物生命体から単離されるものではない。一態様において、動物起源のおよび哺乳動物および／または細菌パイロジェンのすべての部分がない特定のデオキシコール酸医薬組成物ならびに生成および使用のための関連方法が提供される。別の態様において、定義された医薬組成物として十分な量の適切なデオキシコール酸が提供され、これは、関連組成物、製造方法および使用方法とともに、局所的な脂肪除去のための注射用医薬組成物として使用できる。本発明の定義されたデオキシコレート注射液を、直交機序（ｏｒｔｈｏｇｏｎａｌ ｍｅｃｈａｎｉｓｍ）によって脂肪を消滅させる分子、例えばＮＰＹアンタゴニストおよび／または脂肪選択的プロアポトーシスペプチドと組み合わせ、より少ない治療セッションでの体形矯正を媒介するためのより強力な手段を作成するために使用される作用物質を提供することができる。別の態様において、本発明は、デオキシコール酸および薬学的に許容されるその塩の合成に関する方法および中間体を提供する。合成的に調製されたデオキシコール酸は、脂肪除去のための脂肪分解療法において使用できる。
【図面の簡単な説明】
【００２３】
【図１】胆汁酸骨格の炭素のナンバリングシステムを含む、胆汁酸の構造を表す図である。
【図２】ウシ由来デオキシコール酸ナトリウム（Ｓｉｇｍａ）と比較した、本発明の合成デオキシコール酸ナトリウムによる処理時の初代ヒト脂肪細胞の細胞生存の用量依存的な減少における類似性を示す図である。
【発明を実施するための形態】
【００２４】
（参照による組み込み）
本明細書中で言及されるすべての刊行物および特許出願は、各個々の刊行物または特許出願が参照により組み込まれることを具体的かつ個別に指示されている場合と同程度まで、参照により本明細書に組み込まれる。
【００２５】
（発明の詳細な説明）
定義
本開示全体を通して、種々の刊行物、特許および公開された特許明細書は、識別引用によって参照される。これらの刊行物、特許および公開された特許明細書の開示は、参照により本開示に組み込まれ、本発明が属する分野の状況をより詳細に記載する。
【００２６】
本明細書において使用される場合、いくつかの用語は、下記に定義される意味を有する。本明細書および請求項において使用される場合、単数形「ａ」、「ａｎ」および「ｔｈｅ」は、文脈上明らかに別段の定めをした場合を除き、単数および複数の参照物を含む。
【００２７】
別段の指示がない限り、本明細書および請求項において使用される原料、反応条件等の数量を表現するすべての数は、すべての場合において用語「約」により修飾されるものとして理解すべきである。したがって、反対の指示がない限り、下記の明細書および添付の請求項において説明される数値パラメーターは近似値である。各数値パラメーターは、少なくとも、報告された有効桁の数を考慮し、通常の丸め技術を適用することによって解釈されるべきである。
【００２８】
用語「アセチル化試薬」は、アセチル基ＣＨ３Ｃ（Ｏ）−を分子に添加することができる試薬を指す。
【００２９】
用語「酸」は、プロトン供与体を指し、有機および無機酸の両方を含む。
【００３０】
用語「アルキル」は、１〜１０個の炭素原子、好ましくは１〜６個の炭素原子を有する一価の飽和脂肪族ヒドロカルビル基を指す。この用語は、例として、メチル（ＣＨ３−）、エチル（ＣＨ３ＣＨ２−）、ｎ−プロピル（ＣＨ３ＣＨ２ＣＨ２−）、イソプロピル（（ＣＨ３）２ＣＨ−）、ｎ−ブチル（ＣＨ３ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−）、イソブチル（（ＣＨ３）２ＣＨＣＨ２−）、ｓｅｃ−ブチル（（ＣＨ３）（ＣＨ３ＣＨ２）ＣＨ−）、ｔ−ブチル（（ＣＨ３）３Ｃ−）、ｎ−ペンチル（ＣＨ３ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−）およびネオペンチル（（ＣＨ３）３ＣＣＨ２−）等の直鎖および分岐鎖のヒドロカルビル基を含む。
【００３１】
用語「アリール」は、単環（例えば、フェニル）または多重縮合環（例えば、ナフチル）を有する６〜１２個の炭素原子の一価の芳香族炭素環基を指す。
【００３２】
用語「動物起源」は、多細胞生命体および単細胞生命体を含む生物の界（動物界）のいずれかに起因していることを指す。
【００３３】
用語「脱水試薬」は、水と反応することができる試薬を指す。一態様において、脱水試薬は、分子から除去される水と反応することができる。
【００３４】
用語「脱硫試薬」は、硫化物と反応することができる試薬を指す。一態様において、脱硫試薬は、硫化物含有分子と反応して、分子からスルフィド基を除去することができる。
【００３５】
用語「エタンジチオールまたはジチアン前駆体」は、カルボニル基との反応によって、エタンジチオールまたはジチアン基を形成する試薬を指す。
【００３６】
用語「求電子性アセチル基」は、求電子としてのアセチル基であって、電子に引き付けられ、電子を受け取る傾向がある基を指す。
【００３７】
用語「水素化試薬」は、水素を分子に付与することができる試薬を指す。
【００３８】
用語「ルイス酸」は、電子対受容体を指す。ルイス酸は、アルキルアルミニウムハライド（例えば、Ｅｔ２ＡｌＣｌおよびＭｅＡｌＣｌ２）等の有機金属試薬を含む。
【００３９】
用語「哺乳動物起源」は、任意の哺乳類の生命体に起因していることを指す。用語「哺乳類の生命体」は、乳腺によって分泌される乳でその幼体に栄養を与え、通常は程度の差はあるが体毛で覆われた皮膚を有し、ヒトを含む、温血高等脊椎動物の綱（哺乳綱）（有胎盤類、有袋類または単孔類等）を指す。
【００４０】
用語「微生物起源」は、任意の微生物生命体に起因していることを指す。用語「微生物生命体」は、細胞壁を欠いてよいかまたは細胞壁を有する場合にはグラム陽性もしくはグラム陰性であり、多くの場合コロニーに凝集されるかまたは鞭毛を用いて運動性となり、典型的には、土壌、水、有機物中または植物および動物の体内に生息し、通常は、栄養上、独立栄養性、腐生性または寄生性であり、その生化学的作用および病原性で有名な、原核生物の円状、らせん状または棒状の単細胞微生物のドメイン（細菌）を指す。
【００４１】
用語「オレフィン化試薬」は、ケトンと反応して、対応するオレフィンを形成する試薬を指す。用語「オレフィン形成条件」は、そのような転換を行うのに適した条件を指す。そのような試薬の例は、ウィッティヒ試薬およびウィッティヒオレフィン化条件を含む。
【００４２】
用語「酸化剤」は、酸化還元反応において電子を受け取ることができる試薬を指す。このようにして、ハロゲンまたは酸素を分子に添加することができ、または水素を分子から除去することができる。
【００４３】
用語「病原体」は、疾患の特異的な原因因子を指す。
【００４４】
「薬学的に許容される塩」は、当該技術分野において既知である多様な有機および無機対イオンに由来する薬学的に許容される塩を指し、ほんの一例として、ナトリウム、カリウム、リチウム、カルシウム、マグネシウム、アンモニウムおよびテトラアルキルアンモニウムを含む。適切な塩は、Ｐ． Ｈｅｉｎｒｉｃｈ Ｓｔａｈｌ、Ｃａｍｉｌｌｅ Ｇ． Ｗｅｒｍｕｔｈ（編）、Ｈａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓａｌｔｓ Ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ， Ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ， ａｎｄ Ｕｓｅ、２００２年に記載されているものを含む。これらの薬学的に許容される塩は、ＤＣＡを適切な塩基と反応させることによって調製できる。例示を目的として、そのような塩基の例は、水酸化ナトリウム、水酸化カリウムまたは水酸化リチウムを含む。代替として、塩は、塩基によるＤＣＡのエステルの加水分解によって、ＤＣＡを導き得る任意の酸性ワークアップを省略して調製できる。
【００４５】
用語「還元剤」は、酸化還元反応において電子を付与することができる試薬を指す。このようにして、ハロゲンまたは酸素を分子から除去することができ、または水素を分子に添加することができる。
【００４６】
組成物および使用方法
本明細書に記載されている種々の態様において、本発明は、薬学的使用のための組成物（および有用な中間体）、その合成方法および本医薬組成物の使用方法を提供する。
【００４７】
重要なことに、本胆汁酸組成物は、動物性出発材料から得られた材料に固有のリスクがなく、したがって、動物由来材料の詳細な検査および規定を必要としない。故に、一態様において、本発明は、哺乳動物病原体等の動物起源の材料を含まず、パイロジェン等の細菌起源の毒素を実質的に含まない、胆汁酸医薬組成物を目的としている。
【００４８】
デオキシコール酸ナトリウムは、消化管において食物中の脂質を可溶化する、自然に産生される胆汁塩である。これは、コレステロールを出発材料として利用し、ヒトおよび細菌酵素の両方が関与する複合生合成経路を介して、インビボで産生される。デオキシコレートの主要機能は、吸収を容易にするために食物中の脂質を可溶化することによって、消化過程を支援することである。体内において、デオキシコレート生合成は、肝臓内のコレステロールの酵素的酸化、異性化および還元から始まり、そのコレステロール親と構造的に類似した胆汁酸であるコール酸を形成する（Ｓｔｒｙｅｒ Ｌ、２７章：Ｂｉｏｓｙｎｔｈｅｓｉｓ ｏｆ Ｍｅｍｂｒａｎｅ Ｌｉｐｉｄｓ ａｎｄ Ｓｔｅｒｏｉｄｓ、Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、１９９５年、Ｗ． Ｈ． Ｆｒｅｅｍａｎ ａｎｄ Ｃｏｍｐａｎｙ： Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ、６９１〜７０７頁）。その後、肝臓内において、コール酸は２つのアミノ酸（タウリンまたはグリシン）の１つと化学的に結合し、「共役」コール酸（すなわち、Ｌ−グリココレートおよびタウロコレート）を形成する。その後、これらの共役コール酸は、食物消費まで胆嚢中に保存される。食物消費後、胆汁液は、胆嚢から腸管内に放出され、ここで共役コール酸分子は、腸管微生物叢によって産生された酵素によって媒介される２つの追加の化学修飾に付される（Ｒｉｄｌｏｎ Ｊ．Ｍ．、Ｋａｎｇ
Ｄ．Ｊ．およびＨｙｌｅｍｏｎ Ｐ．Ｂ．、Ｂｉｌｅ ｓａｌｔ ｂｉｏｔｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎｓ ｂｙ ｈｕｍａｎ ｉｎｔｅｓｔｉｎａｌ ｂａｃｔｅｒｉａ、Ｊ． Ｌｉｐｉｄ Ｒｅｓ．、４７巻（２号）：２４１〜５９頁（２００６年））。最初に、共役コール酸は脱ヒドロキシル化されて共役デオキシコレートを形成する。その後、共役デオキシコレートは脱共役されて遊離デオキシコレートを形成し、これが、他の胆汁酸とともに食物中の脂質の可溶化に関与する。デオキシコレートはコール酸合成より下流にあるため、コール酸はデオキシコレートの自然源中に存在する不純物であり得る。
【００４９】
デオキシコレートは、３３３ｍｇ／ｍＬまで水に可溶であり、アルコールに難溶であり、アセトンおよび氷酢酸にさらに難溶である。ミセルの可逆的形成は、約２．４ｍｇ／ｍＬの臨界ミセル濃度を超過するデオキシコール酸ナトリウム濃度および中性ｐＨで発生し得る（Ｍａｔｓｕｏｋａ Ｋ， Ｍ．Ｙ．、Ｍｉｃｅｌｌｅ ｆｏｒｍａｔｉｏｎ ｏｆ
ｓｏｄｉｕｍ ｄｅｏｘｙｃｈｏｌａｔｅ ａｎｄ ｓｏｄｉｕｍ ｕｒｓｏｄｅｏｘｙｃｈｏｌａｔｅ （１部）、Ｂｉｏｃｈｉｍ． Ｂｉｏｐｈｙｓ． Ａｃｔａ．、１５８０巻（２〜３号）：１８９〜９９頁（２００２年））。２．４ｍｇ／ｍＬの臨界ミセル濃度を超過する濃度において、デオキシコレートはミセルを形成し、細胞、脂質およびタンパク質を可溶化する能力を有する。０．４ｍｇ／ｍＬ（絶食状態に相当する）等のより低濃度において、デオキシコレートは、２６ｍｇ／ｍＬのアルブミン（３５〜５０ｍｇ／ｍＬの血清生理学的濃度に近い）の存在下、アルブミンに９８％結合する（Ｒｏｄａ Ａ．ら、Ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅ ａｓｐｅｃｔｓ ｏｆ ｔｈｅ ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎ ｏｆ ｂｉｌｅ ａｃｉｄｓ ｗｉｔｈ ｈｕｍａｎ ｓｅｒｕｍ ａｌｂｕｍｉｎ、Ｊ． Ｌｉｐｉｄ Ｒｅｓ．、２３巻（３号）：４９０〜５頁（１９８２年））。
【００５０】
好ましい実施形態は、デオキシコール酸（ＤＣＡ）もしくはそのプロドラッグ、または前記化合物または前記プロドラッグの薬学的に許容される塩、ならびに関連組成物および方法を目的としており、ここで、デオキシコール酸（ＤＣＡ）は、
【００５１】
【化２】
であり、ここで、前記化合物は、ＤＣＡを自然に産生する哺乳動物または微生物生命体から単離されるものではない。
【００５２】
他の好ましい実施形態は、ＤＣＡおよび薬学的に許容されるその塩の立体異性体、ＤＣＡならびにその立体異性体および塩の合成における中間体、ならびに関連組成物および方法も目的としている。
【００５３】
本胆汁酸医薬組成物は、場合によって塩形態であり、さらに場合によって、薬学的に許容される希釈剤、賦形剤または担体を含有する。一態様において、本発明は、デオキシコール酸（ＤＣＡ）を自然に産生する哺乳動物または微生物生命体から単離されるものではない、ＤＣＡである化合物もしくはそのプロドラッグ、または前記化合物もしくは前記プロドラッグの薬学的に許容される塩：
【００５４】
【化３】
および薬学的に許容される賦形剤を目的としている。
【００５５】
塩調製のための好ましいカチオンは、ナトリウム（Ｎａ＋）、カリウム（Ｋ＋）、リチウム（Ｌｉ＋）、マグネシウム（Ｍｇ２＋）、カルシウム（Ｃａ２＋）、バリウム（Ｂａ２＋）、ストロンチウム（Ｓｒ２＋）およびアンモニウム（ＮＨ４＋）からなる群から選択できる。塩は、アルカリ金属またはアルカリ土類金属から調製することもできる。アルカリ金属は、ナトリウム（Ｎａ＋）、カリウム（Ｋ＋）およびリチウム（Ｌｉ＋）の中から選択できる。アルカリ土類金属は、マグネシウム（Ｍｇ２＋）、カルシウム（Ｃａ２＋）、バリウム（Ｂａ２＋）およびストロンチウム（Ｓｒ２＋）からなる群から選択できる。脂肪の局所的除去のための医薬組成物としての使用には、胆汁塩がデオキシコール酸ナトリウムであることが好ましい。
【００５６】
本実施形態の化合物のプロドラッグも企図されている。プロドラッグは、患者へのプロドラッグの投与後、加水分解、代謝等のインビボ生理的作用によって本実施形態の化合物に化学的に修飾される活性または不活性化合物である。例えば、本デオキシコール酸またはその誘導体のＣ１〜Ｃ１０エステルまたはアミドを調製することができ、その結果、細胞膜の破壊およびエステラーゼの放出により、デオキシコール酸またはその誘導体の放出が誘発される。エステラーゼの放出によってエステル保護基が開裂されるため、デオキシコール酸活性型またはその誘導体がインシチュの所望の位置に存在する。そのようなＣ１〜Ｃ１０エステルは、酸素、硫黄または窒素から選択される１〜４個のヘテロ原子；酸素、硫黄または窒素から選択される１〜４個のヘテロ原子を場合によって有するメチル、エチル、イソプロピル、ブチル、ヘキシル等のアルキル基；任意の許容される置換点に１〜４個のヘテロ原子を場合によって有するベンジルまたはエチルフェニル基等、合計最大１０個の炭素原子を有するアルキルフェニル基；ならびにフェニル基等のアリール基を場合によって含み得る。アミドの例は、ヒドロキサメートを含むがこれに限定されない。エステルを含むプロドラッグの一般的議論については、参照により全体が本明細書に組み込まれる、ＳｖｅｎｓｓｏｎおよびＴｕｎｅｋ、Ｄｒｕｇ Ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ Ｒｅｖｉｅｗｓ、１６５巻（１９８８年）ならびにＢｕｎｄｇａａｒｄ Ｄｅｓｉｇｎ ｏｆ Ｐｒｏｄｒｕｇｓ、Ｅｌｓｅｖｉｅｒ（１９８５年）を参照されたい。デオキシコール酸のＣ１〜Ｃ１０エステルまたはアミドの合成は、当該技術分野において既知である。例えば、エステルは、エステル化反応において、鉱酸の存在下でデオキシコール酸のアルコールとの反応によって合成できる。
【００５７】
デオキシコール酸およびケノデオキシコール酸の自然構造は、以下のように示される。４つの環（Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ）およびＤ環から伸展するカルボン酸側鎖が示されている。
【００５８】
【化４】
【００５９】
【化５】
限定されないが、デオキシコール酸およびケノデオキシコール酸（ＣＤＣＡ）またはその誘導体のエステル、ヒドロキサメートおよびヒドロキシアミドの例のいくつかは、以下のように記載される。Ｄ環側鎖上のカルボキシル基のエステル化により、異なる官能基がデオキシコール酸またはケノデオキシコール酸に結合してプロドラッグを生成し得る。限定されないが、これらのＤ環側鎖エステルのいくつかの例が表１に示されている。
【００６０】
【表１】
デオキシコール酸またはケノデオキシコール酸およびその誘導体の放出は、細胞膜の破壊およびエステラーゼの放出によって誘発され得る。エステラーゼの放出によってエステル保護基が開裂され得るため、デオキシコール酸のもしくはケノデオキシコール酸の活性型またはその誘導体がインシチュの所望の位置に存在する。
【００６１】
デオキシコール酸、ケノデオキシコール酸およびそれらの誘導体のプロドラッグは、自然分子と反対の立体化学を有し得るエピマーも含む。これらのエピマー分子の例は、表２に示されている。
【００６２】
【表２】
本実施形態の胆汁酸組成物の注射時に局所刺激がある場合があり、故に、局所麻酔薬を同時または順次に投与することが望ましい場合がある。例えば、リドカインは、ヒトにおいて頻繁に使用され、同時製剤（同じ容器中で同時に注射される）または同時注射（異なる容器から注射される）のいずれとして投与してもよい。リドカイン等の麻酔薬は、パッチまたは軟膏等の局所製剤によって投与してよい。
【００６３】
深部組織の場合、麻酔薬を対象組織中により深く注射するか、または全身的に投与してよい（例えば、全身麻酔、硬膜外または他の既知の方法）。
【００６４】
本発明の溶液中の胆汁酸（複数可）または胆汁塩（複数可）は、約０．００１〜１０、０．０１〜５または０．１〜２％ｗ／ｗ、ｗ／ｖまたはｖ／ｖの濃度であってよい。好ましくは、上記溶液中の胆汁酸（複数可）または胆汁塩（複数可）は、約０．１〜５％ｗ／ｗまたはより好ましくは約１％ｗ／ｗの濃度であってよい。いくつかの実施形態において、脂肪溶解液は、最大１００、５０、２０、１０、５、２、１、０．５、０．２、０．０５、０．０２または０．０１グラムの１つまたは複数の洗浄剤、胆汁酸および／または胆汁塩、例えば、デオキシコール酸もしくはその塩またはデオキシコール酸ナトリウムを含む。
【００６５】
好ましい実施形態において、本明細書における溶液は、脂質、リン脂質またはホスファチジルコリンを含まない。いくつかの実施形態において、本明細書における溶液は、最大５％ｗ／ｗ、ｗ／ｖまたはｖ／ｖの脂質、リン脂質またはホスファチジルコリンを含む。
【００６６】
いくつかの実施形態において、上記溶液は、抗菌剤、血管収縮薬、抗血栓剤、抗凝固剤、発泡抑制剤（ｓｕｄｓ−ｄｅｐｒｅｓｓａｎｔ）、抗炎症剤、鎮痛剤、分散剤、抗分散剤、浸透促進剤、ステロイド、精神安定薬、筋弛緩薬および下痢止め剤からなる群から選択される第２の治療剤をさらに含み得る。いくつかの実施形態において、溶液は、最大５００ｍＬの溶液を収納する容器内にあってよい。そのような容器は、シリンジまたはシリンジ充填可能な容器であってよい。
【００６７】
いくつかの実施形態において、組成物および方法は、直交機序によって脂肪を消滅させることが知られている分子をさらに含む。そのような分子は、ＢＩＢＰ−３２２６（Ａｍｇｅｎ）、ＢＩＢＯ−３３０４（Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ Ｉｎｇｌｅｈｅｉｍ）、ＢＭＳ−１９２５４８およびＡＲ−Ｈ０４０９２２（Ｂｒｉｓｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓ Ｓｑｕｉｂｂ）、ＬＹ−３５７８９７（Ｅｌｉ Ｌｉｌｌｙ）、１２２９Ｕ９１およびＧＷ４３８０１４Ｓ（ＧｌａｘｏＳｍｉｔｈＫｌｉｎｅ）、ＪＮＪ−５２０７７８７（Ｊｏｈｎｓｏｎ＆Ｊｏｈｎｓｏｎ）、Ｌｕ−ＡＡ−４４６０８（Ｌｕｎｄｂｅｃｋ）、ＭＫ−０５５７（Ｍｅｒｃｋ ＮＰＹ）、ＮＧＤ−９５−１（Ｎｅｕｒｇｏｇｅｎ）、ＮＬＸ−Ｅ２０１（Ｎｅｕｒｏｌｏｇｉｘ）、ＣＧＰ−７１６８３（Ｎｏｖａｒｔｉｓ）、ＰＤ−１６０１７０（Ｐｆｉｚｅｒ）、ＳＲ−１２０８１９Ａ、ＢＩＩＥ０２４６およびＳ．Ａ．０２０４（Ｓａｎｏｆｉ Ａｖｅｎｔｉｓ）、Ｓ−２３６７（ｓｈｉｏｎｇｌｉ）等のＮＰＹ受容体アンタゴニスト、ＮＰＹ受容体アンタゴニストであるジヒドロピリジンおよびジヒドロピリジン誘導体、ＮＰＹ受容体アンタゴニストである二環化合物、カルバゾール系ＮＰＹ受容体アンタゴニストならびにＮＰＹ受容体アンタゴニストである三環化合物を含むがこれらに限定されない神経ペプチドＹ（ＮＰＹ）受容体アンタゴニストを含む。例えば、国際公開第２００６／１３３１６０号および米国特許第６，３１３，１２８号（参照により図面を含むその全体が本明細書に組み込まれる）を参照されたい。白色脂肪血管系にあるＣＫＧＧＲＡＫＤＣペプチド等の脂肪選択的プロアポトーシスペプチドも企図されている。Ｋｏｌｏｎｉｎ Ｍ．Ｇ．ら、Ｎａｔ． Ｍｅｄ．、６月、１０巻（６号）：６２５〜３２頁（２００４年）を参照されたい。
【００６８】
一態様において、本発明は、対象における皮下脂肪沈着物を減少させる方法に関する。そのような方法は、（ｉ）脂肪溶解有効量の１つまたは複数の薬理学的に活性な洗浄剤または胆汁酸（複数可）および／もしくは胆汁塩（複数可）またはデオキシコール酸もしくはその塩またはデオキシコール酸ナトリウム；（ｉｉ）薬学的、獣医学的または美容学的賦形剤；ならびに（ｉｉｉ）場合によって脂質を含み、ここで、脂質と胆汁酸または胆汁塩との比率が最大１％ｗ／ｗである組成物であって、リパーゼもコリパーゼも含まない組成物を、対象における皮下脂肪沈着物に局所的に投与するステップを含む。いくつかの実施形態において、脂肪沈着物は、肥満、脂肪再分布症候群、眼瞼脂肪ヘルニア、脂肪腫、ダーカム病、脂肪異栄養症、野牛肩脂肪異栄養症、後頸部（ｄｏｒｓｏｃｅｒｖｉｃａｌ）脂肪、内臓脂肪症、乳房肥大、脂肪過剰症、体幹および腕周囲に散在する体脂肪およびセルライトを伴う脂肪沈着物からなる群から選択される状態に関連する。好ましい実施形態において、上記方法は、前記対象に対して外科手術を実施するステップを含まない。
【００６９】
一態様において、本発明は、哺乳動物における選択された位置からの脂肪沈着物の除去方法であって、それを必要とする哺乳動物に、治療有効量のＤＣＡもしくはそのプロドラッグ、またはＤＣＡもしくはプロドラッグの薬学的に許容される塩：
【００７０】
【化６】
であり、ＤＣＡを自然に産生する哺乳動物または微生物生命体から単離されるものではない前記化合物を投与するステップを含む方法を目的としている。
【００７１】
一実施形態において、本発明の方法は、哺乳動物に、神経ペプチドＹ（ＮＰＹ）受容体アンタゴニストおよび脂肪選択的プロアポトーシスペプチドからなる群から選択される少なくとも１つの追加の活性成分を投与するステップをさらに含み得る。一実施形態において、神経ペプチドＹ（ＮＰＹ）受容体アンタゴニストは、ＢＩＢＰ−３２２６、神経ペプチドＹ５アンタゴニスト（ＡｍｇｅｎのＮＰＹ受容体アンタゴニスト）、ＢＩＢＯ−３３０４（Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ ＩｎｇｌｅｈｅｉｍのＮＰＹ受容体アンタゴニスト）、ＢＭＳ−１９２５４８（Ｂｒｉｓｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓ ＳｑｕｉｂｂのＮＰＹ受容体アンタゴニスト）、ＡＲ−Ｈ０４０９２２（Ｂｒｉｓｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓ ＳｑｕｉｂｂのＮＰＹ受容体アンタゴニスト）、ＬＹ−３５７８９７（Ｅｌｉ ＬｉｌｌｙのＮＰＹ受容体アンタゴニスト）、Ｅｓｔｅｖｅ ＮＰＹ−Ｙ５受容体アンタゴニスト、１２２９Ｕ９１（ＧｌａｘｏＳｍｉｔｈＫｌｉｎｅのＮＰＹ受容体アンタゴニスト）、ＧＷ４３８０１４Ｓ（ＧｌａｘｏＳｍｉｔｈＫｌｉｎｅのＮＰＹ受容体アンタゴニスト）、ＪＮＪ−５２０７７８７（Ｊｏｈｎｓｏｎ＆ＪｏｈｎｓｏｎのＮＰＹ受容体アンタゴニスト）、Ｌｕ−ＡＡ−４４６０８（ＬｕｎｄｂｅｃｋのＮＰＹ受容体アンタゴニスト）、ＭＫ−０５５７（ＭｅｒｃｋのＮＰＹ受容体アンタゴニスト）、ＮＧＤ−９５−１（ＮｅｕｒｇｏｇｅｎのＮＰＹ受容体アンタゴニスト）、ＮＬＸ−Ｅ２０１（ＮｅｕｒｏｌｏｇｉｘのＮＰＹ受容体アンタゴニスト）、ＣＧＰ−７１６８３（ＮｏｖａｒｔｉｓのＮＰＹ受容体アンタゴニスト）、ＰＤ−１６０１７０（ＰｆｉｚｅｒのＮＰＹ受容体アンタゴニスト）、ＳＲ−１２０８１９Ａ（Ｓａｎｏｆｉ ＡｖｅｎｔｉｓのＮＰＹ受容体アンタゴニスト）、ＢＩＩＥ０２４６（Ｓａｎｏｆｉ ＡｖｅｎｔｉｓのＮＰＹ受容体アンタゴニスト）、Ｓ．Ａ．０２０４（Ｓａｎｏｆｉ ＡｖｅｎｔｉｓのＮＰＹ受容体アンタゴニスト）、Ｓ−２３６７（ＳｈｉｏｎｇｌｉのＮＰＹ受容体アンタゴニスト）、ＮＰＹ受容体アンタゴニストであるジヒドロピリジン、ＮＰＹ受容体アンタゴニストであるジヒドロピリジン誘導体、ＮＰＹ受容体アンタゴニストである二環化合物、カルバゾール系ＮＰＹ受容体アンタゴニストならびにＮＰＹ受容体アンタゴニストである三環化合物からなる群から選択される。例えば、国際公開第２００６／１３３１６０号および米国特許第６，３１３，１２８号（参照により図面を含むその全体が本明細書に組み込まれる）を参照されたい。一実施形態において、脂肪選択的プロアポトーシスペプチドは、白色脂肪血管系にあるＣＫＧＧＲＡＫＤＣペプチドである。Ｋｏｌｏｎｉｎ Ｍ．Ｇ．ら、Ｎａｔ． Ｍｅｄ．、６月、１０巻（６号）：６２５〜３２頁（２００４年）を参照されたい。
【００７２】
一態様において、本発明は、対象の皮膚領域における皮膚状態の出現を減少させるための方法に関する。そのような方法は、（ｉ）皮膚引き締め有効量の１つまたは複数の薬理学的に活性な洗浄剤または胆汁酸（複数可）および／もしくは胆汁塩（複数可）またはデオキシコール酸もしくはその塩またはデオキシコール酸ナトリウム；（ｉｉ）薬学的、獣医学的または美容学的賦形剤；ならびに（ｉｉｉ）場合によって脂質を含む組成物を、前記皮膚領域に局所的に投与するステップを含む。いくつかの実施形態において、投与するステップは、本明細書における組成物を皮下または経皮注射によって送達することを含む。いくつかの実施形態において、治療または改善される皮膚状態は、弛緩性皮膚、皮膚の老化、皮膚の凹凸およびシワからなる群から選択される。いくつかの実施形態において、治療される皮膚の領域は、目の下、顎の下、腋の下、臀部、頬、額、ふくらはぎ、背部、大腿、足首または腹である。
【００７３】
いくつかの実施形態において、皮膚領域における皮膚状態の出現を減少させるために使用される組成物は、皮膚引き締め溶液への製剤である。そのような皮膚引き締め溶液は、抗菌剤、血管収縮薬、抗血栓剤、抗凝固剤、発泡抑制剤、抗炎症剤、鎮痛剤、分散剤、抗分散剤、浸透促進剤、ステロイド、精神安定薬、筋弛緩薬および下痢止め剤からなる群から選択される第２の治療剤をさらに含み得る。
【００７４】
好ましい実施形態において、洗浄剤は、デオキシコール酸、コール酸、ケノデオキシコール酸、７−アルファ−デヒドロキシレート（ｄｅｈｙｄｒｏｘｙｌａｔｅ）ケノデオキシコール酸、リトコール酸、ウルソデオキシコール酸、ジヒドロキシタウリン酸、トリヒドロキシタウリン酸および上記のいずれかのグリシン共役物からなる群から選択される胆汁酸を含む。いくつかの実施形態において、洗浄剤は、ナトリウム（Ｎａ＋）、カリウム（Ｋ＋）、リチウム（Ｌｉ＋）、マグネシウム（Ｍｇ２＋）、カルシウム（Ｃａ２＋）、バリウム（Ｂａ２＋）、ストロンチウム（Ｓｒ２＋）およびアンモニウム（ＮＨ４＋）からなる群から選択されるカチオンを含む胆汁塩を含む。いくつかの実施形態において、洗浄剤は、アルカリ金属またはアルカリ土類金属であるカチオンとの胆汁塩を含む。好ましくは、アルカリ金属は、ナトリウム（Ｎａ＋）、カリウム（Ｋ＋）またはリチウム（Ｌｉ＋）であり、アルカリ土類金属は、マグネシウム（Ｍｇ２＋）、カルシウム（Ｃａ２＋）、バリウム（Ｂａ２＋）またはストロンチウム（Ｓｒ２＋）である。より好ましくは、胆汁塩はデオキシコール酸ナトリウムである。
【００７５】
別の実施形態は、哺乳動物において脂肪を乳化する方法であって、それを必要とする哺乳動物に、治療有効量のＤＣＡである化合物もしくはそのプロドラッグ、またはＤＣＡもしくはプロドラッグの薬学的に許容される塩：
【００７６】
【化７】
を投与するステップを含む方法であり、前記化合物はＤＣＡを自然に産生する哺乳動物または微生物生命体から単離されるものではない方法を提供する。
【００７７】
別の実施形態は、ホスファチジルコリンを可溶化する方法であって、ホスファチジルコリンと、有効量のＤＣＡである化合物もしくはそのプロドラッグ、またはＤＣＡもしくはプロドラッグの薬学的に許容される塩：
【００７８】
【化８】
であり、ＤＣＡを自然に産生する哺乳動物または微生物生命体から単離されるものではない前記化合物とを混合するステップを提供する。
【００７９】
本発明の別の態様は、デオキシコール酸（ＤＣＡ）等の脂肪切除胆汁酸を、脂肪細胞を死滅させる作用物質と混合することに関する。一態様において、本発明は、直交機序によって脂肪を消滅させる分子をデオキシコレート注射液中に混合することにより、デオキシコレート注射の審美的作用を増強するための手段を企図している。そのような候補分子の例は、本明細書に記載されている通り、神経ペプチドＹ（ＮＰＹ）アンタゴニストおよび脂肪選択的プロアポトーシスペプチドを含むがこれらに限定されない。脂肪細胞死滅および皮膚引き締めはいずれも、所望の作用を媒介するために必要となり得るため、脂肪死滅能力および強力な皮膚引き締め作用を有する作用物質（デオキシコレート等）の作用は、強力な脂肪細胞死滅効果を有する分子の添加によって増強できる。加えて、死滅させるために血管系にアクセスする必要がある分子（毛細血管の腔側に発現したタンパク質と結合するいくつかのプロアポトーシスペプチド等）は、デオキシコレートが血管漏出を引き起こし得るため、これらのタンパク質へのアクセスを得ることができる。故に、そのような作用物質は、デオキシコレートと相乗して、より少ない治療セッションでの体形矯正を媒介するためのより強力な手段を潜在的に作成することができる。
【００８０】
合成方法
他の実施形態において、本発明は、ＤＣＡの化合物、塩およびプロドラッグならびにそれらの関連中間体の合成方法を提供する。
【００８１】
本明細書において使用される場合、ステロイド骨格のナンバリングは、図１に示されている通りの一般的慣例に従う。
【００８２】
したがって、提供されるのは、デオキシコール酸（ＤＣＡ）もしくはそのエステルまたは薬学的に許容されるその塩：
【００８３】
【化９】
を調製するための方法であって、
（ａ）９α−ヒドロキシアンドロスタ−４−エン−３，１７−ジオン１を、水素化条件下、Ｈ２と反応させて、化合物２
【００８４】
【化１０】
を形成するステップと、
（ｂ）化合物２を酸と反応させて、化合物３
【００８５】
【化１１】
を形成するステップと、
（ｃ）化合物３を還元剤と反応させて、化合物４を４および５
【００８６】
【化１２】
の混合物として形成するステップと、
（ｄ）化合物４をオレフィン形成条件下で二炭素オレフィン化試薬と反応させて、化合物６
【００８７】
【化１３】
を形成するステップと、
（ｅ）化合物６を、式７の化合物［式中、Ｐは保護基である］
【００８８】
【化１４】
に変換するステップと、
（ｆ）式７の化合物をルイス酸の存在下でアルキルプロピオレートＣＨ２ＣＨ２Ｃ（Ｏ）ＯＲまたはアルキルアクリレートＣＨ２＝ＣＨＣ（Ｏ）ＯＲ［式中、Ｒはアルキルである］と反応させて、式８の化合物［式中、Ｐは保護基であり、Ｒはアルキルであり、破線
【００８９】
【化１５−１】
は単結合または二重結合である］
【００９０】
【化１５−２】
を形成するステップと、
（ｇ）式８の化合物を水素化条件下でＨ２と反応させて、式９の化合物［式中、Ｐは保護基であり、Ｒはアルキルである］
【００９１】
【化１６】
を形成するステップと、
（ｈ）式９の化合物を酸化剤と反応させて、式１０の化合物［式中、Ｐは保護基であり、Ｒはアルキルである］
【００９２】
【化１７】
を形成するステップと、
（ｉ）式１０の化合物を水素化条件下でＨ２と反応させて、式１１の化合物［式中、Ｐは保護基であり、Ｒはアルキルである］
【００９３】
【化１８】
を形成するステップと、
（ｊ）式１１の化合物を還元剤と反応させて、式１２の化合物［式中、Ｐは保護基であり、Ｒはアルキルである］
【００９４】
【化１９】
を形成するステップと、
（ｋ）式１２の化合物を脱保護条件に曝露してそのエステルを形成し、場合によって、適切な加水分解条件に曝露して、デオキシコール酸または薬学的に許容されるその塩を形成するステップと
を含む方法である。
【００９５】
本発明は、以下のスキーム１に示される下記中間体［式中、ＰおよびＲは上記で定義された通りである］も提供する。
【００９６】
スキーム１．デオキシコール酸（ＤＣＡ）の合成
【００９７】
【化２０】
一実施形態において、パート（ａ）の水素化条件はＰｄ／Ｃ触媒を含む。
【００９８】
一実施形態において、パート（ｂ）の酸は鉱酸である。いくつかの態様において、鉱酸はＨ２ＳＯ４である。
【００９９】
一実施形態において、パート（ｃ）の還元剤はＬｉＡｌ（ＯｔＢｕ）３Ｈである。
【０１００】
一実施形態において、パート（ｄ）の二炭素オレフィン化試薬はＰｈ３ＰＣＨ２ＣＨ３＋Ｂｒ−等のウィッティヒ剤である。
【０１０１】
一実施形態において、化合物７〜１２の保護基Ｐは−Ｃ（Ｏ）ＣＨ３である。いくつかの態様において、化合物６は、無水酢酸、ならびにＥｔ３Ｎ、ピリジンおよび／またはジメチルアミノピリジン等の有機塩基による６の処理等により、アシル化条件に曝露されて７ａを形成する。
【０１０２】
一実施形態において、パート（ｆ）のルイス酸はＥｔＡｌＣｌ２である。
【０１０３】
一実施形態において、パート（ｆ）のアルキルプロピオレートはメチルプロピオレートである。
【０１０４】
一実施形態において、パート（ｆ）のアルキルアクリレートはメチルアクリレートである。
【０１０５】
一実施形態において、パート（ｇ）の水素化条件はＰｔＯ２またはＰｄ／Ｃ触媒を含む。
【０１０６】
一実施形態において、パート（ｈ）の酸化剤はＣｒＯ３である。
【０１０７】
一実施形態において、パート（ｉ）の水素化条件はＰｄ／Ｃ触媒を含む。
【０１０８】
一実施形態において、パート（ｊ）の還元剤はＬｉＡｌ（ＯｔＢｕ）３Ｈである。
【０１０９】
一実施形態において、Ｐが−Ｃ（Ｏ）ＣＨ３である場合、パート（ｋ）の脱保護および加水分解条件は、化合物１２を、アルカリ土類金属水酸化物、アルカリ土類金属アルコキシドまたは両方の混合物と反応させることを含む。いくつかの態様において、加水分解条件は、デオキシコール酸を得るための酸性ワークアップを含む。他の態様において、酸性ワークアップは、対応する塩を得るために省略される。
【０１１０】
一実施形態において、アルカリ土類金属アルコキシドはＬｉＯＨである。
【０１１１】
一実施形態において、デオキシコール酸の塩は、アルカリ土類金属アルコキシドまたは水酸化物との反応によって調製できる。デオキシコール酸の塩は、ナトリウム（Ｎａ＋）、カリウム（Ｋ＋）およびリチウム（Ｌｉ＋）塩を含む。
【０１１２】
一実施形態において、提供されるのは、
９α−ヒドロキシ−５β−アンドロスタン−３，１７−ジオン（２）；
５β−アンドロスタ−９（１１）−エン−３，１７−ジオン（３）；
（Ｚ）−３α−ヒドロキシ−５β−プレグナ−９（１１），１７（２０）−ジエン（６）；
（Ｚ）−３α−アセトキシ−５β−プレグナ−９（１１），１７（２０）−ジエン（７ａ）；
（Ｅ）−メチル３α−アセトキシ−５β−コール−９（１１），１６，２２−トリエン−２４−オエート（８ａ）；
メチル３α−アセトキシ−５β−コール−９（１１），１６−ジエン−２４−オエート（８ｂ）；
メチル３α−ヒドロキシ−５β−コール−９（１１）−エン−１２−オン−２４−オエート（１０ａ）；および
メチル３α−アセトキシ−５β−コラン−１２−オン−２４−オエート（１１ａ）
からなる群から選択される中間化合物である。
【０１１３】
医薬組成物および投与様式
組成物は、開示されている化合物を、少なくとも１つの薬学的に許容される賦形剤と組み合わせて構成され得る。許容される賦形剤は、非毒性であり、投与を補助し、開示されている化合物の治療的有用性に悪影響を及ぼさない。そのような賦形剤は、任意の固体、液体、半固体であってよく、またはエアロゾル組成物の場合、当業者に一般に利用可能なガス状賦形剤であってよい。
【０１１４】
固体医薬品賦形剤は、デンプン、セルロース、タルク、グルコース、ラクトース、スクロース、ゼラチン、麦芽、米、小麦粉、石粉、シリカゲル、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸ナトリウム、グリセロールモノステアレート、塩化ナトリウム、乾燥脱脂粉乳等を含む。液体および半固体賦形剤は、グリセロール、プロピレングリコール、水、エタノール、ならびに石油、植物または合成起源のもの、例えば、ピーナッツ油、大豆油、鉱油、ゴマ油等を含む種々の油から選択できる。好ましい液体担体は、特に注射用液の場合、水、生理食塩水、ブドウ糖水溶液およびグリコールを含む。
【０１１５】
概して、好ましい実施形態の化合物は、類似の効用を果たす作用物質の許容されている投与様式のいずれかによって治療有効量で投与される。好ましい実施形態の化合物、すなわち活性成分の実際の量は、治療される疾患の重症度、対象の年齢および相対的健康、使用される化合物の効力、投与の経路および形態ならびに他の要因等の数々の要因によって決まる。薬物は、１日当たり複数回、好ましくは１日当たり１回または２回投与され得る。これらの要因のすべては、担当臨床医の技量の範囲内である。
【０１１６】
製剤中の化合物の量は、当業者によって用いられる全範囲内で変動し得る。本明細書に記載されている通りの種々の態様における本組成物が調製でき、ここで、デオキシコール酸部分は、水１体積当たりの重量に基づいてまたは水の密度を前提としたｗ／ｗ（すなわち、重量と体積との１対１対応）に基づいて約０．５％〜１０％の範囲である。別の態様において、本実施形態は、最大で希釈剤の飽和点の濃度である現在記載されている医薬組成物に関する。濃度およびｐＨ等の条件に基づき、チキソトロピー粘度を選択することができる。例えば、Ｍｕｋｈｏｐａｄｈｙａｙ， Ｓ．およびＵ． Ｍａｉｔｒａ、Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｓｃｉｅｎｃｅ、８７巻：１６６６〜１６８３頁（２００４年）の１６８０頁を参照されたい。
【０１１７】
いくつかの実施形態において、投与するステップは、本明細書における組成物を、皮膚パッチ、ポンプまたは真皮下デポー剤によって送達することを含む。いくつかの実施形態において、投与するステップは、本明細書における組成物を局所的にまたは皮下に送達することを含む。特定の実施形態において、投与するステップは、前記対象の目の下、顎の下、腋の下、臀部、ふくらはぎ、背部、大腿または腹の領域に局所的に（例えば、皮下または真皮下に）投与することを含む。投与は、皮下または経皮注射によって為され得る。
【０１１８】
合成スキーム
胆汁酸医薬組成物の完全な化学合成方法および有用な中間体の他の例が以下に提供される。
【０１１９】
これらの下記の記述および例は、本化合物を自然に産生する哺乳動物または微生物生命体からのＤＣＡの抽出の代替を提供する。合成経路１〜６は、本発明におけるデオキシコール酸（ＤＣＡ）を合成するための使用が企図されている。合成経路１Ｂおよび実施例１〜１１は、ヒドロコルチゾンからのＤＣＡの合成を示す。
【０１２０】
１．アドレノステロンからの９（１１）−エンまたは１１，１２−エンを介する合成経路＃１Ａ
スキーム１Ａ（以下）のコルチゾン（化合物１．１）は、完全な合成材料として広く利用可能である。クロロクロム酸ピリジニウム（ＰＣＣ）を使用してこれを効率的に開裂し、Ｃ１７ケトン化合物を形成することができる。このアドレノステロン（化合物１．２）への開裂は、ＨＩＯ４またはビスマス酸ナトリウム（ＮａＢｉＯ３）を使用して実施することもできる。化合物１．２を化合物１．３に変換する反応は、既知の化学的プロセスである。化合物１．３の化合物１．４への変換には、モノケタール化が関与する。後続ステップは、３−ケト−４−エンの再生、Ｃ５β配置を得るための４，５−エン（Ｈ２／Ｐｔ／ＤＭＦ）の選択的還元および化合物１．５を得るためのＣ３カルボニル基の所望の３α配置への選択的還元である。化合物１．５を化合物１．６に変換する際における保護基の添加およびそれに続く生成物の還元により、Ｃ１１β−オール（アキシャル配置）、すなわち化合物１．７が得られ、これは、主要な９（１１）−エンへの位置選択的脱離（すなわち、化合物１．７の化合物１．８への変換）に適している。
【０１２１】
ここで、合成スキームは、化合物１．７が化合物１．８または化合物１．９のいずれへの変換のための出発材料として使用され得るかという点で分岐する。Ｃ１１ヒドロキシル基とＣ９水素原子との間のトランスジアキシャルの関係により、化合物１．７を化合物１．８に変換するために使用される脱離反応は位置選択的である。化合物１．９の異性体Ｃ１１−Ｃ１２オレフィンを得るための脱離の代替様式は、シス−熱脱離（すなわち、化合物１．７の化合物１．９への変換）を含み、同様に位置選択的である。
【０１２２】
スキーム１Ａ．ＤＣＡのＣ１２ヒドロキシル基の２つのＣ環前駆体の合成
【０１２３】
【化２１】
化合物１．８のアリル酸化（ＣｒＯ３および３，５ジメチルピラゾールによる処理を介する）により、エノン含有化合物１．１０が得られる。化合物１．９の過酸酸化は、ステロイドのアルファ面から立体選択的に進み、Ｃ１１−１２エポキシド化合物１．１１が得られる（上記スキーム１Ａを参照）。これらの化学転換により、Ｃ１２ヒドロキシル基官能性の２つの主要な前駆体、すなわち、化合物１．１０および化合物２．１が得られる（スキーム１Ａおよび２）。
【０１２４】
当業者であれば、上記コルチゾン経路は、代わりに、同じ炭素骨格および同じ酸素原子の相対的配置を有するヒドロコルチゾンから始まるように変更してよく、ヒドロコルチゾンは、炭素原子を有するＣ−１１酸素の酸化状態のみがコルチゾンと異なっていることを理解するであろう。ヒドロコルチゾンは市販されており、全化学合成（Ｗｏｏｄｗａｒｄ
Ｒ． Ｂ．ら、Ｊ． Ａｍ． Ｃｈｅｍ． Ｓｏｃ．、７４巻：４２２３頁（１９５２年））を含むこの化合物の種々の合成が既知である（Ｓｚｃｚｅｂａｒａら、Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、２１巻：１４３〜１４９頁（２００３年２月））。ケトン１．１３は、α，β−不飽和二重結合の水素化分解によってヒドロコルチゾン１．１２（スキーム１Ｂ）から開始して合成され、続いて、ＮａＩＯ４を使用する１，２−ジオール開裂を可能にするための水素化ホウ素ナトリウムを使用して完全なケトン還元を行い、それにより、ステロイド環系のＤ環上にＣ１７ケトンを形成する。それに続くクロロクロム酸ピリジニウム（ＰＣＣ）による酸化により、１．１３が得られる。Ｋ−ｓｅｌｅｃｔｒｉｄｅ（登録商標）による１．１３の処理、続いて無水酢酸／ピリジンによるアセチル化により、保護されたアルコール１．１５が得られる。それに続くウィッティヒ試薬による１．１５のオレフィン化によってアルケン１．１６を得て、その後、これをメチルプロピオレートおよびエチルアルミニウムジクロリドで処理し、ジエン１．１７を形成する。両方の二重結合の水素化に続いて、ケトン１．１８を還元し、得られたアルコール中間体をピリジン中のＳＯＣｌ２による処理により脱離し、アルケン１．１９を得る。ＣｒＯ３によるアルケン１．１９のアリル酸化および水素化条件下での二重結合の還元により、ケトン１．２１が得られる。アセテート保護基の除去および得られたアルコールの酸化により、ジケトン１．２２が得られる。ＬｉＡｌＨ（Ｏ−ｔＢｕ）３による１．２２の還元およびメチルエステルの加水分解により、ＤＣＡが得られる。
【０１２５】
スキーム１Ｂ．ヒドロコルチゾンからのＤＣＡの合成
【０１２６】
【化２２】
化合物１．１０および２．１のさらなる転換は、スキーム２に示されている。最初に、化合物１．１０を、ＤＣＡのものと同一の適切に官能基化されたＣ環系を含有するように修飾する（スキーム２）。Ｃ１２カルボニル基の立体選択的還元により化合物２．１が得られ、化合物２．１中に存在する９（１１）二重結合の触媒水素化により化合物２．２が得られる。
【０１２７】
スキーム２．アリル酸化経路を使用するＣ１２ヒドロキシル基の導入
【０１２８】
【化２３】
スキーム３は、エポキシド含有化合物１．１１の、スキーム２の類似体Ｃ１２α−ヒドロキシステロイド化合物２．２への転換を提示する。
【０１２９】
スキーム３．Ｃ１１−Ｃ１２エポキシドの立体選択的還元
【０１３０】
【化２４】
これらの経路の両方において上述した通り、共通の中間化合物２．２が形成される。
【０１３１】
ＤＣＡの合成における次のステップは、ＤＣＡのカルボキシル側鎖置換Ｄ環を含有するような化合物２．２中に存在するＤ環の修飾である（スキーム４およびスキーム５）。
【０１３２】
スキーム４．脱保護およびウィッティヒ反応
【０１３３】
【化２５】
最初に、化合物２．２のＣ１７ケタールおよびＣ３シリルエーテル基を加水分解する。その後、ウィッティヒ反応を実施し、化合物４．２を得る。化合物４．２の化合物５．１への変換がエン反応によって行われる。それに続く化合物５．１の触媒還元およびエステルの加水分解により、ＤＣＡが得られる（スキーム５）。
【０１３４】
スキーム５．ＤＣＡ側鎖の導入のためのエン反応および触媒還元
【０１３５】
【化２６】
２．コルチゾンからのアドレノステロン（ｉ−ステロイド、３，５−シクロステロール経路）を介する合成経路＃２
Ｃ１７におけるアドレノステロン（化合物１．２、スキーム６）の選択的ケタール化、ホウ化水素還元、メシル化および緩衝化された加水分解により、ｉ−ステロイド（３，５−シクロステロール）含有化合物６．１が得られる。化合物６．１に、９（１１）−エン形成（化合物６．１の化合物６．２への変換、スキーム６）およびアリル酸化（化合物６．２の化合物６．３への変換、スキーム６）、続いてカルボニル基還元を受けさせ、化合物６．４を得る。ｉ−ステロールの加水分解および水素化により化合物６．５が得られ、合成経路＃１において上記で提示した合成方法によってこれをＤＣＡに変換することができる。
【０１３６】
スキーム６．ｉ−ステロイド（すなわち、３，５−シクロステロール）の形成によるＡ−Ｂ−環系の保護
【０１３７】
【化２７】
３．ヘコゲニンからの合成経路＃３
ヘコゲニン（化合物７．１、スキーム７）は、メキシカンヤムおよびＡｇａｖｅ種の他の植物において豊富に見られる植物ステロールである。ＤＣＡ合成のための出発材料としてのヘコゲニンの主な利点は、ＤＣＡに存在するＣ１２酸素官能基をそのまま有することである。
【０１３８】
ヘコゲニンから開始する合成経路における最初のステップは、ヘコゲニン（化合物７．１）中のＣ１２カルボニル基の、必須のＣ１２−α配置への立体選択的還元（化合物７．１の化合物７．２への変換）である。その後、３−β−オール、５α−ＡＢ環系は、３α−オール、５β−ＡＢ環系に変換（化合物７．１の、化合物７．２へ、化合物７．３への変換）される（スキーム７）。よく知られているマーカー分解（Ｍａｒｋｅｒ， Ｒ．Ｅ．、Ｒｏｈｒｍａｎｎ， Ｅ．、Ｓｔｅｒｏｌｓ． ＬＸＩＸ． Ｏｘｉｄａｔｉｏｎ Ｐｒｏｄｕｃｔｓ ｏｆ Ｓａｒｓａｓａｐｏｇｅｎｉｎ． Ｓａｒｓａｓａｐｏｇｅｎｏｉｃ Ａｃｉｄ ａｎｄ Ｒｅｌａｔｅｄ Ｓｕｂｓｔａｎｃｅｓ、Ｊ． Ａｍ． Ｃｈｅｍ． Ｓｏｃ．、６１巻（８号）：２０７２〜２０７７頁（１９３９年））を、化合物７．２の化合物７．３への変換に続いて行い、化合物７．４を得る。Ｄ環側鎖（スキーム８）の化合物８．２への導入は、スキーム４および５に示されている方法によって実現される。化合物８．２中の必須のＣ１７ケトンは、化合物８．１の酢酸エノールのオゾン分解によって形成される（スキーム８）。その後、オレフィン化およびエン反応順序を使用するスキーム５と類似の方式で、８．２からＤＣＡが調製される。ヘコゲニンから開始する代替経路は、スキーム９および１０に示されている。
【０１３９】
スキーム７．Ｃ１２−ヒドロキシル基導入、ＡＢ環修飾および側鎖開裂
【０１４０】
【化２８】
スキーム８．側鎖導入
【０１４１】
【化２９】
スキーム９．３−ケト−４−エンへのジチオエタン経路
【０１４２】
【化３０】
スキーム１０Ａ．３−ケト−４−エンを介するＤＣＡ形成
【０１４３】
【化３１】
４．サポゲニンからの合成経路＃４
サポゲニンは、サポニン（すなわち、ステロイド配糖体）のＣ３ヒドロキシル基に結合している単糖類および二糖類の加水分解に由来する。これらは広く発生する植物生成物である。サポニンは、本来、以下に示される通りのスピロケタール構造として発生する。化合物１０．３を、チゴゲニン、ジオスゲニン、クロロゲニン、スミラゲニンおよびヘコゲニン（化合物７．１）から形成することもできる。我々は、ＤＣＡが、これらの、すなわち、チゴゲニン、ジオスゲニン、クロロゲニン、スミラゲニンおよびヘコゲニン（化合物７．１）のそれぞれから合成され得ると考えている（Ｙ． Ｍａｚｕｒ、Ｎ． ＤａｎｉｅｌｉおよびＦｒａｎｚ Ｓｏｎｄｈｅｉｍｅｒ、Ｊ． Ａｍ． Ｃｈｅｍ． Ｓｏｃ．；８２巻、５８０９頁（１９６０年））。
【０１４４】
我々は、ヘコゲニンからＤＣＡを合成できたため、上記サポゲニンのいずれも、同様にＤＣＡ合成のための出発材料としての役割を果たし得ると認識している。
【０１４５】
スキーム１０Ｂ．サポニンからの合成経路
【０１４６】
【化３２】
５．スチグマステロールからの合成経路＃５
スチグマステロール（化合物１１．１）は、広く利用可能な植物ステロールである。これは、ＤＣＡ合成のための出発材料として、官能基化されたＡＢ環系および容易に開裂可能な側鎖部分を含有するという利点を有する。スチグマステロールは、ＤＣＡ合成に不可欠の、Ｃ環において必要な官能性を欠くという不利点を有する。
【０１４７】
この合成経路において、スチグマステロール（化合物１１．１）ＡＢ環は、ｉ−ステロイド形成によって保護され、続いてオゾン分解によってＣ１７に導入された側鎖が得られ、それはマスクされた形態のカルボキシル基としてのＣ２４−オールに還元される（スキーム１１）。後続ステップは、Ｃ１２にアリル位を生成する（スキーム１２）。Ｂ環ジエン形成および酢酸第二水銀酸化は既知の過程であり、Ｂ環系の触媒還元により、上述した先の経路と共通の中間体が得られる。しかしながら、他の経路とは対照的に、側鎖が既に存在する。アリル酸化（化合物１２．４の化合物１．２０への変換）および立体選択的還元（化合物１．２０の化合物１．２１への変換）、続いて前述のステップにより生成物が得られ、これをＤＣＡに変換する。
【０１４８】
スキーム１１．ｉ−ステロイドのオゾン分解および側鎖還元
【０１４９】
【化３３】
スキーム１２．トリエン形成およびアリル酸化
【０１５０】
【化３４】
スチグマステロール経路の変形形態では、Ｂ環ジエンのディールス・アルダー保護を使用する。これは、９（１１）二重結合を単離してアリル酸化ステップ中の考えられる干渉を防止するため、有利である（スキーム１３）。
【０１５１】
スキーム１３．トリエン形成および環Ｂジエンのディールス・アルダー保護
【０１５２】
【化３５】
６．エルゴステロールからの合成経路＃６
エルゴステロール（化合物１４．１）は、容易に利用可能な出発材料であり、本明細書で説明されている手順を適合することによってＤＣＡを調製するために使用できる。アリル酸化は、Ｃ１２酸素官能性への簡易経路を提供する（スキーム１４）。この経路は、環Ｂジエンから開始するという利点を有する。これはスチグマステロール経路と収束する。
【０１５３】
スキーム１４．エルゴステロールからのトリエン形成
【０１５４】
【化３６】
好ましい実施形態の化合物は、下記の一般的方法および手順を使用して、容易に利用可能な出発材料から調製できる。典型的なまたは好ましい処理条件（すなわち、反応温度、時間、反応物質のモル比、溶媒、圧力等）が与えられている場合、特に明記しない限り、他の処理条件を使用してもよいことが理解される。最適反応条件は、使用される特定の反応物質または溶媒によって異なり得るが、そのような条件は、当業者が日常的な最適化手順によって決定できる。
【０１５５】
加えて、当業者には明らかなように、いくつかの官能基が望ましくない反応を受けるのを防止するために、従来の保護基が必要となり得る。種々の官能基に適切な保護基ならびに特定の官能基を保護および脱保護するための適切な条件は、当該技術分野において既知である。例えば、数々の保護基は、Ｔ． Ｗ． ＧｒｅｅｎｅおよびＧ． Ｍ． Ｗｕｔｓ、Ｐｒｏｔｅｃｔｉｎｇ Ｇｒｏｕｐｓ ｉｎ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ、第３版、Ｗｉｌｅｙ、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ、１９９９年ならびにその中で引用されている参考文献に記載されている。
【０１５６】
本明細書に記載されている反応のための出発材料および試薬は、概して既知の化合物であるか、または既知の手順もしくはその明白な修正形態によって調製できる。例えば、出発材料および試薬の多くは、Ａｌｄｒｉｃｈ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃｏ．（Ｍｉｌｗａｕｋｅｅ、Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ、ＵＳＡ）、Ｂａｃｈｅｍ（Ｔｏｒｒａｎｃｅ、Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ、ＵＳＡ）、Ｅｍｋａ−ＣｈｅｍまたはＳｉｇｍａ（Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ、Ｍｉｓｓｏｕｒｉ、ＵＳＡ）等の商業的供給業者から入手可能である。その他は、ＦｉｅｓｅｒおよびＦｉｅｓｅｒのＲｅａｇｅｎｔｓ ｆｏｒ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ、１〜１５巻（Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ａｎｄ Ｓｏｎｓ、１９９１年）、ＲｏｄｄのＣｈｅｍｉｓｔｒｙ ｏｆ Ｃａｒｂｏｎ Ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ、１〜５巻および補足（Ｅｌｓｅｖｉｅｒ Ｓｃｉｅｎｃｅ Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ、１９８９年）、Ｏｒｇａｎｉｃ Ｒｅａｃｔｉｏｎｓ、１〜４０巻（Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ａｎｄ Ｓｏｎｓ、１９９１年）、ＭａｒｃｈのＡｄｖａｎｃｅｄ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ（Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ａｎｄ Ｓｏｎｓ、第４版）ならびにＬａｒｏｃｋのＣｏｍｐｒｅｈｅｎｓｉｖｅ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｔｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎｓ（ＶＣＨ Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ Ｉｎｃ．、１９８９年）等の標準的な参考教科書に記載されている手順またはその明白な修正形態によって調製できる。
【実施例】
【０１５７】
好ましい実施形態の種々の出発材料、中間体および化合物は、適切な場合、沈殿、ろ過、結晶化、蒸発、蒸留およびクロマトグラフィー等の従来の技術を使用して単離および精製できる。これらの化合物の特徴付けは、融点、質量スペクトル、核磁気共鳴および種々の他の分光分析によって等、従来の方法を使用して実施できる。
【０１５８】
合成経路＃１、スキーム１Ｂにおける生成物の合成を実施するためのステップの例示的な実施形態は、以下でさらに詳細に記載される。表３は、下記の実施例におよび本明細書全体を通して記載されている例示的な反応スキームおよび合成経路において種々の化合物／部分／装置／手順／特性を表現するために使用される略語を記載している。
【０１５９】
【表３−１】
【０１６０】
【表３−２】
概要：酸素および水分感受性材料の操作は、アルゴン雰囲気下、二口フレームドライフラスコで行う。カラムクロマトグラフィーは、ＳＥ−Ｍａｋｅシリカゲル（６０〜１２０メッシュ）、Ｓｐｅｃｔｒｏｃｈｅｍシリカゲル（２３０〜４００メッシュ）または酸化アルミニウム９０中性（ＳＤ−Ｆｉｎｅ Ｃｈｅｍ．Ｌｔｄ．、Ｉｎｄｉａ）を使用して実施する。分析用薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）は、Ｍｅｒｃｋ Ｋｉｅｓｅｌｇｅｌ ６０Ｆ２５４（０．２５ｍｍ）プレート（Ｍｅｒｃｋ＆Ｃｏ．、Ｗｈｉｔｅｈｏｕｓｅ Ｓｔａｔｉｏｎ、ＮＪ）で実施した。スポットの可視化は、ＵＶ光（２５４ｎｍ）ランプによってまたはエタノール中の硫酸（５％）およびｐ−アニスアルデヒド（３％）溶液で炭化させることによってのいずれかで検出した。
【０１６１】
装置：本明細書に記載されている反応スキームおよび合成経路の化合物および生成物の分析は、以下に記載される装置および設備で実行できる。
【０１６２】
核磁気共鳴（ＮＭＲ）
プロトンおよび炭素の核磁気共鳴スペクトル（１Ｈ ＮＭＲおよび１３Ｃ ＮＭＲ）は、内部標準として溶媒共鳴（１Ｈ ＮＭＲ、７．２６ｐｐｍのＣＨＣｌ３または２．５ｐｐｍのＤＭＳＯおよび３．３３ｐｐｍのＤＭＳＯ−Ｈ２Ｏ；１３Ｃ ＮＭＲ、７７．０ｐｐｍのＣＤＣｌ３または３９．５ｐｐｍのＤＭＳＯ）を用い、Ｖａｒｉａｎ Ｍｅｒｃｕｒｙ−Ｇｅｍｉｎｉ２００（１Ｈ ＮＭＲ、２００ＭＨｚ；１３Ｃ ＮＭＲ、５０ＭＨｚ）またはＶａｒｉａｎ Ｍｅｒｃｕｒｙ−Ｉｎｏｖａ５００（１Ｈ ＮＭＲ、５００ＭＨｚ；１３Ｃ ＮＭＲ、１２５ＭＨｚ）（Ｖａｒｉａｎ，Ｉｎｃ．、Ｐａｌｏ Ａｌｔｏ、ＣＡ）分光計で記録される。１Ｈ ＮＭＲデータは、下記の通りに報告される：化学シフト（δ、ｐｐｍ）、多重度（ｓ＝一重項、ｄ＝二重項、ｔ＝三重項、ｑ＝四重項、ｂｒ＝広幅、ｍ＝多重項）、カップリング定数（Ｈｚ）および積分。
【０１６３】
赤外線分光法
赤外線スペクトル（ＦＴ−ＩＲ）は、ＪＡＳＣＯ−４６０＋モデル（Ｊａｓｃｏ，Ｉｎｃ．、Ｅａｓｔｏｎ、ＭＤ）で動作させる。質量スペクトルは、Ｐｅｒｋｉｎ ＥｌｍｅｒのＡＰＩ−２０００分光計（Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ，Ｉｎｃ．、Ｗａｌｔｈａｍ、ＭＡ）でＥＳ＋モードを使用して得られる。
【０１６４】
融点
融点は、ＬＡＢ−ＩＮＤＩＡ融点計測装置（Ｌａｂｉｎｄｉａ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ Ｐｖｔ．Ｌｔｄ．、Ｉｎｄｉａ）を使用して測定したものであり、訂正されない。
【０１６５】
高圧液体クロマトグラフィー
ＨＰＬＣクロマトグラムは、ＰＤＡ検出器を有するＳＨＩＭＡＤＺＵ−２０１０モデル（株式会社島津製作所、日本）を使用して記録した。
【０１６６】
光学活性
比旋光度（［α］Ｄ）は、５８９ｎｍのＪＡＳＣＯ−１０２０（Ｊａｓｃｏ，Ｉｎｃ．、Ｅａｓｔｏｎ、ＭＤ）を用いて測定し、訂正されない。
【０１６７】
化学物質：特に断りのない限り、市販の試薬を精製することなく使用する。ジエチルエーテルおよびＴＨＦは、ナトリウム／ベンゾフェノンケチルから蒸留される。無水ＤＭＦ、ＤＣＭ、ペンタンおよびヘキサンは、ＣａＨ２からの蒸留によって得られる。
【０１６８】
（実施例１）
アンドロスタン−３，１１，１７−トリオン（１．１３）の調製
１０％のＰｄ／Ｃ（２．５ｇ、５ｗｔ％）を、ＤＭＦ（２５０ｍＬ）中のヒドロコルチゾン（化合物１．１２）（５０．０ｇ、１３８．１２ｍｍｏｌ）の溶液に添加する。得られたスラリーをＰａｒｒ装置（５０ｐｓｉ）内で１２時間水素化する。ＴＬＣによって証明される通り、出発材料の完全消失時に、粗反応混合物をセライトの小型プラグに通してろ過し、溶媒を真空下で除去する。粗生成物（４８．０ｇ）が無色固体として得られる。
【０１６９】
ＮａＢＨ４（２．１ｇ、５５．３ｍｍｏｌ）を、ＥｔＯＨ（５００ｍＬ）およびＣＨ２Ｃｌ２（５００ｍＬ）中の上記粗生成物（４８．０ｇ、１３１．８６ｍｍｏｌ）の溶液に添加する。１時間後、アセトン（５０ｍＬ）および水（１５０ｍＬ）、続いてＮａＩＯ４（７０．５ｇ、３２９．６ｍｍｏｌ）を添加する。混合物を室温で終夜撹拌する。
【０１７０】
蒸留水（５００ｍＬ）を添加し、混合物を酢酸エチル（３×２５０ｍＬ）で抽出する。酢酸エチル層をシリカゲルプラグに通して洗い流し、溶媒を蒸発させて３８ｇを無色固体として得る。粗生成物を精製することなくさらに酸化させる。
【０１７１】
ＰＣＣ（４０．４ｇ、１８７．５ｍｍｏｌ）を、ＣＨ２Ｃｌ２（４００ｍＬ）中の上記粗生成物の溶液に３等分ずつ３０分間かけて添加する。得られた反応混合物を室温で約３〜４時間撹拌する。ＴＬＣによってモニターされる通り、反応の完了時に、粗反応混合物をセライトおよびシリカゲルのパッドに通して連続的にろ過し、粗材料を、酢酸エチル／ヘキサン（３：１０）［５０ｍＬ画分、１０ｍＬ／分溶離、ｐ−アニスアルデヒド炭化を用いるＴＬＣによってモニターする；ＥｔＯＡｃ／ヘキサン（１：１）中、化合物１．１３のＲｆ＝０．３７および化合物１．１２のＲｆ＝０．０５］で溶離するカラムクロマトグラフィー［５９（Ｗ）×７００（Ｌ）ｍｍ、６０〜１２０メッシュシリカ、１５０ｇ］によって精製し、ジアステレオマー化合物１．１３（３３．０ｇ、７９％収率）を無色固体として得る。
【０１７２】
得られた粗材料を、Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｌｕｎｏｖ Ｃ１８カラム（２５０×３０．０ｍｍ、１０μ）を使用する分取ＨＰＬＣおよびＣＨ３ＣＮ：Ｈ２Ｏ（１２：１３）による定組成溶離によって、１５ｍＬの画分中、２５ｍＬ／分流速で精製する。分取ＨＰＬＣは、精製にのみ使用し、分析には使用しない。表４は、生成物の計測された特性を記載している。
【０１７３】
【表４】
（実施例２）
３β−ヒドロキシ−アンドロスタン−１１，１７−ジオン（１．１４）
Ｋ−ｓｅｌｅｃｔｒｉｄｅ（登録商標）（９８．３９ｍＬ、９８．０１ｍｍｏｌ、ＴＨＦ中１Ｍ溶液）を、ＴＨＦ（３３０ｍＬ）中の化合物１．１３（３３．０ｇ、１０９．２７ｍｍｏｌ）の溶液に、不活性雰囲気下、−７８℃で１５分間かけて添加し、−７８℃で約３〜４時間撹拌する。反応混合物をＮａＯＨ水溶液（２Ｍ、７０ｍＬ）でクエンチする。粗反応混合物を酢酸エチル（５００ｍＬ）で希釈し、有機層を水（３×７５ｍＬ）および飽和ブライン溶液（１００ｍＬ）で洗浄し、ＭｇＳＯ４（７５ｇ）で乾燥させる。溶媒を真空下で除去し、３３ｇの粗材料を得る。粗生成物を精製することなくアセチル化に付す。
【０１７４】
粗材料の精製
粗材料を、酢酸エチル／ヘキサン（１：４）［２５ｍＬ画分、５ｍＬ／分溶離、ｐ−アニスアルデヒド炭化を用いるＴＬＣによってモニターする；ＥｔＯＡｃ／ヘキサン（１：１）中、化合物１．１４のＲｆ＝０．３および化合物１．１３のＲｆ＝０．３７］で溶離するカラムクロマトグラフィー［２９（Ｗ）×６００（Ｌ）ｍｍ、２３０〜４００メッシュシリカ、２００ｇ］によって精製し、化合物１．１４を得る。表５は、生成物の計測された特性を記載している。
【０１７５】
【表５】
（実施例３）
３β−ヒドロキシアンドロスタン−１１，１７−ジオンアセテート（１．１５）
無水酢酸（１６．６ｇ、１６２．８ｍｍｏｌ）を、ピリジン（１５０ｍＬ）中の化合物１．１４（３３．０ｇ、１０８．５５ｍｍｏｌ）の溶液に、不活性雰囲気下、０℃で添加する。得られた反応混合物を周囲温度で終夜撹拌する。ＴＬＣによって証明される通り、反応の完了時に、ピリジンおよび残っている無水酢酸を真空下で除去する。粗残留物を酢酸エチル（５００ｍＬ）で希釈し、水（３×１５０ｍＬ）、飽和ブライン溶液（１００ｍＬ）で洗浄し、ＭｇＳＯ４（７５ｇ）で乾燥させる。溶媒を真空蒸発させ、粗材料を、酢酸エチル／ヘキサン（１：１０）［２５ｍＬ画分、１０ｍＬ／分溶離、ｐ−アニスアルデヒド炭化を用いるＴＬＣによってモニターする；ＥｔＯＡｃ／ヘキサン（３：７）中、化合物１．１５のＲｆ＝０．３８および化合物１．１４のＲｆ＝０．１］で溶離するカラムクロマトグラフィー［５９（Ｗ）×８００（Ｌ）ｍｍ、６０〜１２０メッシュシリカ、１５０ｇ］によって精製し、化合物１．１５（１９．０ｇ、６６．４％収率）を無色固体として得る。表６は、生成物の計測された特性を記載している。
【０１７６】
【表６】
（実施例４）
（Ｚ）−３β−ヒドロキシ−５β−プレグ−１７（２０）−エン−１１−オンアセテート（１．１６）
カリウムｔｅｒｔ−ブトキシド（１５９．２８ｍＬ、１５９．２ｍｍｏｌ、ＴＨＦ中１Ｍ溶液）を、ＴＨＦ（１５０ｍＬ）中のエチルトリフェニルホスホニウムブロミド（６１．１６ｇ、１６４．８ｍｍｏｌ）の溶液に、不活性雰囲気下、−５℃で１時間かけて滴下添加する。得られた濃桃色の反応混合物を１０〜１５℃まで加温し、同じ温度でさらに１時間撹拌する。ＴＨＦ（５０ｍＬ）中の化合物５５（１９．０ｇ、５４．９ｍｍｏｌ）の溶液を、上記ウィッティヒイリド懸濁液に−５℃でゆっくり導入する。溶液をさらに１０〜２０分間撹拌し、反応混合物を周囲温度までゆっくり加温する。撹拌を約３〜４時間続ける。ＴＬＣによって証明される通り、出発材料の完全消失時に、反応混合物を飽和ＮＨ４Ｃｌ水溶液（７５ｍＬ）でクエンチする。水層をＥｔＯＡｃ（２×１５０ｍＬ）で抽出し、合わせた有機抽出物を飽和ブライン溶液（１００ｍＬ）で洗浄し、ＭｇＳＯ４（７５ｇ）で乾燥させる。溶媒を真空下で除去し、粗材料を、酢酸エチル／ヘキサン（１：２０）［２５ｍＬ画分、１０ｍＬ／分溶離、ｐ−アニスアルデヒド炭化を用いるＴＬＣによってモニターする；ＥｔＯＡｃ／ヘキサン（１：６）中、化合物１．１６のＲｆ＝０．５４および化合物１．１５のＲｆ＝０．０６］で溶離するカラムクロマトグラフィー［４９（Ｗ）×６００（Ｌ）ｍｍ、６０〜１２０メッシュシリカ、３００ｇ］によって精製し、化合物１．１６（１５．５ｇ、７８．８％収率）を濃厚な無色液体として得て、これを１〜２日後、０℃でゆっくり凝固させる。表７は、生成物の計測された特性を記載している。
【０１７７】
【表７】
（実施例５）
メチル（Ｅ）−３β−ヒドロキシ−５β−コーラ−１６（１７），２２（２３）−ジエン−２４−オエートアセテート（１．１７）
メチルプロピオレート（９．６８ｇ、１１４．９５ｍｍｏｌ）を、０℃のＣＨ２Ｃｌ２（２２０ｍＬ）中の化合物１．１６（１６．５ｇ、４６ｍｍｏｌ）の溶液に添加する。反応混合物を周囲温度まで加温し、不活性雰囲気下、１時間撹拌する。エチルアルミニウムジクロリド（１７．５ｇ、１３７．８ｍｍｏｌ）を、０℃の上記混合物に滴下導入し、得られた反応塊を再度周囲温度まで加温し、終夜撹拌する。ＴＬＣによって証明される通り、反応の完了時に、粗反応混合物を氷水（１００ｍＬ）でクエンチし、水層をＥｔＯＡｃ（３×１５０ｍＬ）で抽出する。合わせた有機層を飽和ブライン溶液（１００ｍＬ）で洗浄し、ＭｇＳＯ４（５０ｇ）で乾燥させる。溶媒を真空下で除去し、粗材料を酢酸エチル／ヘキサン（１：７）［１５ｍＬ画分、１０ｍＬ／分溶離、ＴＬＣによってモニターし、ＵＶ光（２５４ｎｍ）ランプまたはｐ−アニスアルデヒド炭化のいずれかによって検出する；ＥｔＯＡｃ／ヘキサン（１：６）中、化合物１．１７のＲｆ＝０．３６および化合物１．１６のＲｆ＝０．５４］で溶離するカラムクロマトグラフィー［４９（Ｗ）×６００（Ｌ）ｍｍ、６０〜１２０メッシュシリカ、３００ｇ］によって精製し、化合物１．１７（１６ｇ、７９％収率）を無色半固体として得る。表８は、生成物の計測された特性を記載している。
【０１７８】
【表８】
（実施例６）
メチル３β−ヒドロキシ−５β−コラン−１１−オン−２４−オエートアセテート（１．１８）
１０％Ｐｄ／Ｃ（２．９ｇ、２０ｗｔ％）を、ＥｔＯＡｃ（１５０ｍＬ）中の化合物１．１７（１４．５ｇ、３２．８ｍｍｏｌ）の溶液に添加する。得られたスラリーをＰａｒｒ装置（５０ｐｓｉ）内で１２時間水素化する。ＴＬＣ［ＥｔＯＡｃ／ヘキサン（１：３）中、化合物１．１８のＲｆ＝０．４３および化合物１．１７のＲｆ＝０．４３；しかしながら、化合物１．１７だけは共役エステル発色団によりＵＶ活性である］によって証明される通り、出発材料の完全消失時に、粗反応混合物をセライトの小型プラグに通してろ過し、溶媒を真空下で除去し、化合物１．１８（１４ｇ、９５．７％収率）を無色固体として得る。表９は、生成物の計測された特性を記載している。
【０１７９】
【表９】
（実施例７）
メチル３β−ヒドロキシ−５β−コール−９（１１）−エン−２４−オエートアセテート（１．１９）
ＰｔＯ２（５．０ｇ、１００ｗｔ％）を、触媒量のＡｃＯＨ（２．０ｍＬ）の存在下、ＥｔＯＡｃ（７５ｍＬ）中の１．１８（５．０ｇ、１１．２ｍｍｏｌ）の溶液に添加する。得られたスラリーをＰａｒｒ装置（７０ｐｓｉ）内で約１４〜１６時間水素化する。反応の完了時に、粗混合物をセライトの小型プラグに通してろ過し、溶媒を真空下で除去する。粗生成物をさらに精製することなく脱離反応に使用する。
【０１８０】
ＳＯＣｌ２（１．９８ｇ、１６．７８ｍｍｏｌ）を、ピリジン（１００ｍＬ）中の上記粗混合物の溶液に、０℃で滴下導入する。得られた反応混合物を周囲温度まで加温し、約１時間撹拌する。ＴＬＣによって証明される通り、反応の完了時に、ピリジンを真空下で除去する。粗残留物を酢酸エチル（１００ｍＬ）で希釈し、水（２×５０ｍＬ）、飽和ブライン溶液（１００ｍＬ）で洗浄し、ＭｇＳＯ４（４０ｇ）で乾燥させる。溶媒を真空蒸発させ、粗材料を、酢酸エチル／ヘキサン（１：１０）［１０ｍＬ画分、５ｍＬ／分溶離、ｐ−アニスアルデヒド炭化を用いるＴＬＣによってモニターする；ＥｔＯＡｃ／ヘキサン（１：６）中、化合物１．１９のＲｆ＝０．５１および化合物１．１８のＲｆ＝０．２２］で溶離するカラムクロマトグラフィー［４９（Ｗ）×６００（Ｌ）ｍｍ、６０〜１２０メッシュシリカ、１２０ｇ］によって精製し、化合物１．１９（４．１ｇ、８５．４％収率）を無色固体として得る。表１０は、生成物の計測された特性を記載している。
【０１８１】
【表１０】
（実施例８）
メチル３β−ヒドロキシ−５β−コール−９（１１）−エン−１２−オン−２４−オエートアセテート（１．２０）
ＣｒＯ３（８．０ｇ、１００ｗｔ％、８０．０ｍｍｏｌ）を、ＡｃＯＨ（１５０ｍＬ）中の化合物１．１９（８．０ｇ、１８．６ｍｍｏｌ）の溶液に添加する。得られた反応混合物を６０℃で約２４〜３６時間加熱する。前駆体の完全消失時に、酢酸を真空蒸発させ、粗材料をジエチルエーテル（４００ｍＬ）に溶解する。有機層を水（２×１００ｍＬ）、飽和ブライン溶液（１００ｍＬ）で洗浄し、ＭｇＳＯ４（４０ｇ）で乾燥させる。溶媒を真空下で除去し、粗材料を、酢酸エチル／ヘキサン（１：５）［１０ｍＬ画分、３ｍＬ／分溶離、ＴＬＣによってモニターし、ＵＶ光（２５４ｎｍ）ランプによって検出する；ＥｔＯＡｃ／ヘキサン（１：４）中、化合物１．２０のＲｆ＝０．２８および化合物１．１９のＲｆ＝０．６１］で溶離するカラムクロマトグラフィー［４９（Ｗ）×６００（Ｌ）ｍｍ、６０〜１２０メッシュシリカ、１２０ｇ］によって精製し、化合物１．２０（５ｇ、６０．５％収率）を無色固体として得る。表１１は、生成物の計測された特性を記載している。
【０１８２】
【表１１】
（実施例９）
メチル３β−ヒドロキシ−５β−コラン−１２−オン−２４−オエートアセテート（１．２１）
１０％Ｐｄ／Ｃ（３０ｍｇ、１０ｗｔ％）を、ＥｔＯＡｃ（３０ｍＬ）中の化合物１．２０（３００ｍｇ、０．６７５ｍｍｏｌ）の溶液に添加する。得られたスラリーをＰａｒｒ装置（５０ｐｓｉ）内で約１６時間水素化する。ＴＬＣ［ＥｔＯＡｃ／ヘキサン（３：７）中、化合物１．２１のＲｆ＝０．４４および化合物１．２０のＲｆ＝０．４４；しかしながら、化合物１．２０だけはそのエノン発色団によりＵＶ活性であり；加えて、化合物１．２０の炭化は不鮮明であるが化合物１．２１は鮮明である］による出発材料の完全消失時に、粗反応混合物をセライトの小型プラグに通してろ過し、溶媒を真空下で除去し、化合物１．２１（２７０ｍｇ、９０％収率）を無色固体として得る。表１２は、生成物の計測された特性を記載している。
【０１８３】
【表１２】
（実施例１０）
メチル５β−コーラ−３，１２−ジオン−２４−オエート（１．２２）
ＮａＯＨ（７３ｍｇ、１．８ｍｍｏｌ）を、ＭｅＯＨ（１０ｍＬ）中の化合物１．２１（２７０ｍｇ、０．６ｍｍｏｌ）の溶液に添加する。得られた反応混合物を周囲温度で約２時間撹拌する。ＴＬＣによって証明される通り、反応の完了時に、ＭｅＯＨを真空下で除去し、粗生成物を酢酸エチル（２０ｍＬ）で希釈する。有機層を飽和ブライン溶液（１０ｍＬ）で洗浄し、ＭｇＳＯ４（５．０ｇ）で乾燥させる。溶媒を真空下で除去し、粗材料を精製することなくエステル化反応において使用する。
【０１８４】
ＳＯＣｌ２（０．１ｍＬ、１．３５ｍｍｏｌ）を、０℃のＭｅＯＨ（１０ｍＬ）中の上記粗材料の溶液に滴下添加する。得られた反応混合物を周囲温度で約１時間撹拌する。反応の完了時に、ＭｅＯＨを真空下で除去する。粗反応混合物をＥｔＯＡｃ（３０ｍＬ）で希釈し、有機層を水（３×１０ｍＬ）、飽和ブライン溶液（１５ｍＬ）で洗浄し、ＭｇＳＯ４（５ｇ）で乾燥させる。溶媒を真空蒸発させ、粗生成物を精製することなく酸化反応に使用する。
【０１８５】
ＰＣＣ（１．０ｇ、４．６ｍｍｏｌ）を、ＣＨ２Ｃｌ２（２５ｍＬ）中の得られたエステルの溶液に３等分ずつ約５分間かけて導入する。得られた反応混合物を周囲温度で約３〜４時間撹拌する。ＴＬＣによって証明される通り、反応の完了時に、粗反応混合物をセライトのパッドに通してろ過する。溶媒を真空下で除去し、粗材料を、酢酸エチル／ヘキサン（１：６）［１０ｍＬ画分、５ｍＬ／分溶離、ｐ−アニスアルデヒド炭化を用いるＴＬＣによってモニターする；ＥｔＯＡｃ／ヘキサン（２：３）中、化合物１．２２のＲｆ＝０．５７および化合物１．２１のＲｆ＝０．７１］で溶離するカラムクロマトグラフィー［１９（Ｗ）×４００（Ｌ）ｍｍ、６０〜１２０メッシュシリカ、４５ｇ］によって精製し、化合物１．２２（１７０ｍｇ、７０．８％収率）を無色固体として得る。表１３は、生成物の計測された特性を記載している。
【０１８６】
【表１３】
（実施例１１）
デオキシコール酸メチル（１．２２−エステル）
ＬｉＡｌＨ（Ｏ−ｔＢｕ）（３３２ｍｇ、１．３ｍｍｏｌ）を、ＴＨＦ（１０ｍＬ）中の化合物１．２２（１５０ｍｇ、０．３７ｍｍｏｌ）の溶液に、不活性雰囲気下、周囲温度で滴下導入する。約４〜５時間撹拌した後、反応混合物をＨＣｌ水溶液（２ｍＬ、１Ｎ）でクエンチし、粗混合物をＥｔＯＡｃ（３０ｍＬ）で希釈し、水（１５ｍＬ）、飽和ブライン溶液（１０ｍＬ）で洗浄し、ＭｇＳＯ４（３ｇ）で乾燥させる。溶媒を真空下で除去し、粗塊を、ＭｅＯＨ／ＣＨ２Ｃｌ２（１：２０）［５ｍＬ画分、３ｍＬ／分溶離、ｐ−アニスアルデヒド炭化を用いるＴＬＣによってモニターする；ＭｅＯＨ／ＣＨ２Ｃｌ２（１：９）中、化合物１．２２−エステルのＲｆ＝０．４２および化合物１．２２のＲｆ＝０．８５］で溶離するカラムクロマトグラフィー［２９（Ｗ）×５００（Ｌ）ｍｍ、２３０〜４００メッシュシリカ、５０ｇ］によって精製し、デオキシコール酸メチル（化合物１．２２−エステル）（１１０ｍｇ、７２．８％収率）を無色固体として得る。表１４は、生成物の計測された特性を記載している。
【０１８７】
【表１４】
（実施例１１）
デオキシコール酸
Ｈ２Ｏ（２．０ｍＬ）中のＬｉＯＨ（２３ｍｇ、０．５５ｍｍｏｌ）の溶液を、ＴＨＦ（４ｍＬ）中の１．２２−エステル（１１０ｍｇ、０．２７ｍｍｏｌ）の溶液に添加する。得られた反応混合物を周囲温度で約２〜３時間撹拌する。ＴＬＣ［ＭｅＯＨ／ＣＨ２Ｃｌ２（１：９）中、化合物ＤＣＡのＲｆ＝０．３５および化合物１．２２−エステルのＲｆ＝０．４２］によるエステルの消失時に、粗反応混合物を酢酸エチル（１０ｍＬ）で希釈し、飽和ブライン溶液で粉砕し、有機層を完全に分離させる。有機層を飽和ＮＨ４Ｃｌ溶液（１０ｍＬ）で洗浄し、ＭｇＳＯ４（３．０ｇ）で乾燥させる。溶媒を真空下で除去し、トルエン（３×５ｍＬ）と共沸させることによっていかなる微量の水も除去し、デオキシコール酸（ＤＣＡ）（１００ｍｇ、９４．３％収率）を無色固体として得る。表１５は、生成物の計測された特性を記載している。
【０１８８】
【表１５】
実施例１〜１１に記載されている例示的な過程の生成物の収率は、表１６に記載されている。
【０１８９】
【表１６】
（実施例１２）
９α−ヒドロキシ−５β−アンドロスタン−３，１７−ジオン（２）
【０１９０】
【化３７】
ＤＭＦ（１５０ｍＬ）中の９α−ヒドロキシアンドロスタ−４−エン−３，１７−ジオン１（３０．０ｇ、９９．３ｍｏｌ）の溶液に、１０％のＰｄ／Ｃ（２．１ｇ）を添加し、得られたスラリーをＰａｒｒ装置（６０ｐｓｉ）内で１２時間水素化した。ＴＬＣによって証明される通り、出発材料の完全消失時に、粗反応混合物をＣｅｌｉｔｅ（登録商標）の小型パッドに通してろ過し、溶媒を真空下で除去し、無色固体（３０．０ｇ）を得た。この固体を０℃のアセトン（９０ｍＬ）と合わせ、得られたスラリーを１時間撹拌した。その後、これをろ過し、冷却（０℃）アセトン（３０ｍＬ）で洗浄し、真空下、同じろ過漏斗中、室温で乾燥させ、化合物２（２６．０ｇ、８６％）を得た。表１７は、生成物の計測された特性を記載している。
【０１９１】
【表１７】
（実施例１３）
５β−アンドロスタ−９（１１）−エン−３，１７−ジオン（３）
【０１９２】
【化３８】
ＤＣＭ（５２０ｍＬ）中の化合物２（２６．０ｇ、８５．４ｍｍｏｌ）の溶液に、濃硫酸（７．５３ｇ、７６．８ｍｍｏｌ）を、不活性雰囲気下、１０℃で１５分間かけて添加した。温度を２５℃まで上昇させ、得られた溶液を２時間撹拌した。この時点で、ＴＬＣによって証明される通り、出発材料は残っていなかった。反応物を１０％ＮａＨＣＯ３水溶液（２００ｍＬ）の添加によってクエンチした。層を分離し、水層をＤＣＭ（２×１００ｍＬ）で２回抽出した。有機層を合わせ、水（１００ｍＬ）および飽和ブライン溶液（１００ｍＬ）で連続的に洗浄した。その後、有機相をＮａ２ＳＯ４（７５ｇ）で乾燥させ、ろ過した。ろ液を真空蒸発させ、化合物３（２３．０ｇ、９４％）をオフホワイトの固体として得た。この生成物をさらに精製することなく次のステップにおいて「そのまま」使用した。表１８は、生成物の計測された特性を記載している。
【０１９３】
【表１８】
（実施例１４）
３α−ヒドロキシ−５β−アンドロスタ−９（１１）−エン−１７−オン（４）
【０１９４】
【化３９】
リチウムトリ−ｔｅｒｔ−ブトキシアルミニウムヒドリドのＴＨＦ溶液（１．０Ｍ、８４．４ｍＬ、８４．４ｍｍｏｌ）を、不活性雰囲気下、ＴＨＦ（２３０ｍＬ）中の化合物３（２３．０ｇ、８０．４ｍｍｏｌ）の冷（−４０℃）溶液に添加した。得られた反応混合物を２時間撹拌した。この時点で、ＴＬＣによって証明される通り、反応は完了したと決定され、１Ｎ ＨＣｌ（２００ｍＬ）および酢酸エチル（２３０ｍＬ）の混合物を添加することにより、反応混合物をクエンチした。得られた二相混合物を分離し、水層を酢酸エチル（２×１００ｍＬ）で２回抽出した。有機相を合わせ、水（１５０ｍＬ）および飽和ブライン溶液（１００ｍＬ）で連続的に洗浄した。その後、有機相をＮａ２ＳＯ４（７５ｇ）で乾燥させ、ろ過した。ろ過を真空蒸発させ、化合物４（２３．０ｇ）をオフホワイトの固体として得た。上記粗生成物を精製することなく次のステップにおいて「そのまま」使用した。表１９は、生成物の計測された特性を記載している。
【０１９５】
【表１９】
（実施例１５）
（Ｚ）−３α−ヒドロキシ−５β−プレグナ−９（１１），１７（２０）−ジエン（６）
【０１９６】
【化４０】
ＴＨＦ中のカリウムｔｅｒｔ−ブトキシドの溶液（１Ｍ、２３０ｍＬ、２３１ｍｍｏｌ）を、ＴＨＦ（１５０ｍＬ）中のエチルトリフェニルホスホニウムブロミド（８８．７ｇ、２３９ｍｍｏｌ）の懸濁液に、２５℃で１時間かけて滴下添加した。得られた暗赤色混合物を２５℃でさらに１時間撹拌した。ＴＨＦ（２３０ｍＬ）中の化合物４（２３．０ｇ、７９．７ｍｍｏｌ）の溶液を、赤色混合物に２５℃でゆっくり添加した。得られた混合物を３〜４時間撹拌し、この時点で、ＴＬＣにより完了したと決定された。飽和ＮＨ４Ｃｌ水溶液（７５ｍＬ）を添加することにより、反応物をクエンチした。相を分離し、水層をＥｔＯＡｃ（３×１５０ｍＬ）で３回抽出した。有機画分を合わせ、飽和ブライン溶液（１００ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４（７５ｇ）で乾燥させ、ろ過した。ろ液を真空濃縮し、粗固体を、酢酸エチル／ヘキサン（１：９）で溶離するカラムクロマトグラフィー［４９ｍｍ（Ｗ）×６００ｍｍ（Ｌ）、６０〜１２０メッシュシリカ、３００ｇ］によって精製した。生成物を含有する画分を合わせ、濃縮し、化合物６（１９．１ｇ、８０．０％）を白色固体として得た。表２０は、生成物の計測された特性を記載している。
【０１９７】
【表２０】
（実施例１６）
（Ｚ）−３α−アセトキシ−５β−プレグナ−９（１１），１７（２０）−ジエン（７ａ）
【０１９８】
【化４１】
化合物６（１９．０ｇ、６３ｍｍｏｌ）をＣＨ２Ｃｌ２（３８０ｍＬ）に溶解した。トリエチルアミン（１７．６ｍＬ、１２６．６ｍｍｏｌ）、ＤＭＡＰ（０．７７２ｇ、６ｍｍｏｌ）および無水酢酸（８．９８ｍＬ、９４ｍｍｏｌ）を、窒素雰囲気下、２５℃で連続的に添加した。得られた溶液を２５℃で２時間撹拌し、この時点で、ＴＬＣによって反応は完了したと決定された。氷水（１００ｍＬ）の添加によって反応物をクエンチし、相を分離した。水層をＤＣＭ（３×１５０ｍＬ）で３回抽出した。有機画分を合わせ、飽和ブライン溶液（１００ｍＬ）で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４（５０ｇ）で乾燥させ、ろ過した。ろ液を真空濃縮し、化合物７ａ（２２．０ｇ、９５％収率）をオフホワイトの固体として得た。表２１は、生成物の計測された特性を記載している。
【０１９９】
【表２１】
（実施例１７）
（Ｅ）−メチル３α−アセトキシ−５β−コール−９（１１），１６，２２−トリエン−２４−オエート（８ａ）
【０２００】
【化４２】
エチルアルミニウムジクロリド（１０４．５ｍＬ、１９２ｍｍｏｌ、トルエン中１．８Ｍ）を、不活性雰囲気下、０℃でＤＣＭ（１００ｍＬ）中のメチルプロピオレート（１３．５８ｍＬ、１５３ｍｍｏｌ）の溶液に添加した。得られた溶液を１５分間撹拌し、その後、化合物７ａ（２２ｇ、６４．３ｍｍｏｌ）を添加した。０℃でさらに２０分間撹拌後、温度を２５℃まで上昇させ、そこでさらに１８時間維持した。この時点で、ＴＬＣによって反応は完了したと決定され、混合物を冷（０℃）水（２００ｍＬ）中に注いだ。相を分離し、水層をＤＣＭ（１５０ｍＬ）で抽出した。有機層を合わせ、水（２００ｍＬ）および飽和ブライン溶液（１００ｍＬ）で連続的に洗浄した。その後、これを無水Ｎａ２ＳＯ４（４０ｇ）で乾燥させ、ろ過した。ろ液を真空濃縮し、得られた固体をメタノール（２８０ｍＬ）中でスラリー化することによって精製し、化合物８ａ（１７．５ｇ、６８％）を白色固体として得た。表２２は、生成物の計測された特性を記載している。
【０２０１】
【表２２】
（実施例１８）
メチル３α−アセトキシ−５β−コール−９（１１）−エン−２４−オエート（９ａ）
【０２０２】
【化４３】
ＥｔＯＡｃ（３５０ｍＬ）中の化合物８ａ（１７．５ｇ、４１ｍｍｏｌ）の溶液にＰｔＯ２（４．３７ｇ）を添加し、得られたスラリーをＰａｒｒ装置（７０ｐｓｉ）内で１４〜１６時間水素化した。この時点で、ＴＬＣによって反応は完了したと決定された。混合物をＣｅｌｉｔｅ（登録商標）の小型プラグに通してろ過し、溶媒を真空下で除去し、化合物９ａ（１７．０ｇ、９６．０％）を白色固体として得た。上記生成物をさらに精製することなく次のステップにおいて使用した。表２３は、生成物の計測された特性を記載している。
【０２０３】
【表２３】
（実施例１９）
メチル３α−アセトキシ−５β−コール−９（１１），１６−ジエン−２４−オエート（８ｂ）
【０２０４】
【化４４】
エチルアルミニウムジクロリド（１４．２ｍＬ、２５ｍｍｏｌ、トルエン中１．８Ｍ）を、不活性雰囲気下、０℃でＤＣＭ（６０ｍＬ）中のメチルアクリレート（１．８９ｍＬ、２０ｍｍｏｌ）の溶液に添加した。得られた溶液を１５分間撹拌し、その後、化合物７ａ（３ｇ、８．７ｍｍｏｌ）を添加した。０℃でさらに２０分間撹拌後、温度を２５℃まで上昇させ、そこでさらに１８時間維持した。この時点で、ＴＬＣによって反応は完了したと決定され、その後、混合物を冷（０℃）水（６０ｍＬ）中に注いだ。相を分離し、水層をＤＣＭ（６０ｍＬ）で抽出した。有機層を合わせ、水（５０ｍＬ）および飽和ブライン溶液（１００ｍＬ）で連続的に洗浄した。その後、これを無水Ｎａ２ＳＯ４（５ｇ）で乾燥させ、ろ過した。ろ液を真空濃縮し、化合物８ｂ（２．６ｇ、７０％）を得た。表２４は、生成物の計測された特性を記載している。
【０２０５】
【表２４】
（実施例２０）
メチル３α−アセトキシ−５β−コール−９（１１）−エン−２４−オエート（９ａ）
【０２０６】
【化４５】
ＥｔＯＡｃ（６０ｍＬ）中の化合物８ａ（３ｇ、７ｍｍｏｌ）の溶液に１０％Ｐｄ／Ｃ（３００ｍｇ、１０％ｗｔ／ｗｔ）を添加し、得られたスラリーをＰａｒｒ装置（７０ｐｓｉ）内で１４〜１６時間水素化した。この時点で、ＴＬＣ（ヘキサン中１０％酢酸エチル）によって反応は完了したと決定された。混合物をＣｅｌｉｔｅ（登録商標）の小型プラグに通してろ過し、溶媒を真空下で除去し、化合物９ａ（２．６ｇ、８６％）を白色固体として得た。表２５は、生成物の計測された特性を記載している。
【０２０７】
【表２５】
（実施例２１）
メチル３α−ヒドロキシ−５β−コール−９（１１）−エン−１２−オン−２４−オエート（１０ａ）
【０２０８】
【化４６】
ＣｒＯ３（１７．０ｇ、１７０ｍｍｏｌ）を、ＡｃＯＨ（２７０ｍＬ）中の化合物９ａ（１７ｇ、３９．５ｍｍｏｌ）の溶液に添加した。得られた混合物を５０℃で２４〜３６時間加熱した。ＴＬＣによる出発材料の完全消失時に、溶媒を真空蒸発させ、粗材料を酢酸エチル（４００ｍＬ）および水（２００ｍＬ）に溶解した。２つの相を分離し、有機層を、水（２×１００ｍＬ）で２回、その後、飽和ブライン溶液（１００ｍＬ）で１回洗浄した。有機相を無水Ｎａ２ＳＯ４（４０ｇ）で乾燥させ、ろ過した。ろ液を真空濃縮し、得られた固体を、酢酸エチル／ヘキサン（１：５）［１０ｍＬ画分、３ｍＬ／分溶離、ＴＬＣによってモニターし、ＵＶ光（２５４ｎｍ）ランプによって検出する］で溶離するカラムクロマトグラフィー［４９ｍｍ（Ｗ）×６００ｍｍ（Ｌ）、６０〜１２０メッシュシリカ、１２０ｇ］によって精製した。生成物含有画分を合わせ、真空濃縮し、化合物１０ａ（８．８ｇ、５０％収率）を白色固体として得た。表２６は、生成物の計測された特性を記載している。
【０２０９】
【表２６】
（実施例２２）
メチル３α−アセトキシ−５β−コラン−１２−オン−２４−オエート（１１ａ）
【０２１０】
【化４７】
１０％Ｐｄ／Ｃ（９００ｍｇ）を、ＥｔＯＡｃ（１５０ｍＬ）中の化合物１０ａ（２．０ｇ、４．５ｍｍｏｌ）の溶液に添加し、得られたスラリーをＰａｒｒ装置（５０ｐｓｉ）内、５０℃で１６時間水素化した。この時点で、ＴＬＣによって反応は完了したと決定された。混合物をＣｅｌｉｔｅ（登録商標）の小型プラグに通してろ過し、溶媒を真空下で除去し、化合物１１ａ（１．６ｇ、８０％収率）を白色固体として得た。表２７は、生成物の計測された特性を記載している。
【０２１１】
【表２７】
（実施例２３）
メチル３α−アセトキシ−１２α−ヒドロキシ−５β−コラン−２４−オエート（１２ａ）
【０２１２】
【化４８】
リチウムトリ−ｔｅｒｔ−ブトキシアルミニウムヒドリドのＴＨＦ溶液（１Ｍ、２２．４ｍＬ、２２．４ｍｍｏｌ）を、周囲温度でＴＨＦ（２５ｍＬ）中の化合物１１ａ（２．５ｇ、５．６ｍｍｏｌ）の溶液に滴下添加した。さらに４〜５時間撹拌後、ＴＬＣによって反応は完了したと決定された。ＨＣｌ水溶液（１Ｍ、１０ｍＬ）を添加することによって反応物をクエンチし、混合物をＥｔＯＡｃ（３０ｍＬ）で希釈した。相を分離し、有機相を水（１５ｍＬ）および飽和ブライン溶液（１０ｍＬ）で連続的に洗浄した。その後、有機相を無水Ｎａ２ＳＯ４（３ｇ）で乾燥させ、ろ過した。ろ液を真空濃縮し、得られた固体を、ＥｔＯＡｃ／ヘキサン（２：８）［５ｍＬ画分、ｐ−アニスアルデヒド炭化を用いるＴＬＣによってモニターする］で溶離するカラムクロマトグラフィー［２９ｍｍ（Ｗ）×５００ｍｍ（Ｌ）、６０〜１２０メッシュシリカ、５０ｇ］によって精製した。生成物を含有する画分を合わせ、真空濃縮し、化合物１２ａ（２．３ｇ、９１％）を白色固体として得た。表２８は、生成物の計測された特性を記載している。
【０２１３】
【表２８】
（実施例２４）
デオキシコール酸（ＤＣＡ）
【０２１４】
【化４９】
Ｈ２Ｏ（２．０ｍＬ）中のＬｉＯＨ（１８７ｍｇ、４．４ｍｍｏｌ）の溶液を、ＴＨＦ（８ｍＬ）およびＭｅＯＨ（８ｍＬ）中の化合物１２ａ（５００ｍｇ、１．１１ｍｍｏｌ）の溶液に添加した。得られた混合物を５０℃で３〜４時間撹拌した。ＴＬＣによる出発材料の完全消失時に、反応混合物を真空濃縮した。水（１０ｍＬ）および３Ｎ ＨＣｌ（１ｍＬ）の混合物を合わせ、０℃まで冷却し、その後、粗生成物に添加した。０℃で１時間撹拌後、沈殿した固体をろ過し、その後、水（１０ｍＬ）およびヘキサン（２０ｍＬ）で洗浄した。室温での真空乾燥により、デオキシコール酸（ＤＣＡ、４００ｍｇ、９１％収率）を白色固体として得た。表２９は、生成物の計測された特性を記載している。
【０２１５】
【表２９】
（実施例２５）
初代ヒト脂肪細胞を、出発材料として９−ＨＡＤを使用して合成された様々な濃度の合成デオキシコール酸ナトリウムまたは以下に記載される通りのＳｉｇｍａから得られたウシ由来デオキシコール酸ナトリウムとともにインキュベートした。
【０２１６】
材料
脂肪細胞（Ｚｅｎ−Ｂｉｏカタログ番号ＳＡ−１０９６）
９６ウェルプレート（ＵＳ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃカタログ番号セルスター６５５１８０番）
無血清ＲＰＭＩ培地（Ｍｅｄｉａｔｅｃｈカタログ番号１７−１０５−ＣＶ）
デオキシコール酸ナトリウム（ＤＣ）（Ｓｉｇｍａカタログ番号Ｄ６７５０）
合成グリコデオキシコール酸ナトリウム（Ｋｙｔｈｅｒａ）
ＰＢＳ（１×）
ＭＴＳアッセイキット（Ｐｒｏｍｅｇａカタログ番号Ｇ３５８０）
到着した脂肪細胞は分化しており、９６ウェルプレート中、１ウェル当たり１３，０００細胞の密度であった。２枚のプレートを入手し、それぞれ同じ試料で処理した。細胞を、３７℃、５％ＣＯ２で２４時間インキュベートした。２０ｍｇを２ｍＬ培地（無血清）に溶解して各胆汁酸（合成および非合成ＤＣＡ）の１％原液を作製した。この１％原液を使用して、希釈により下記の１１種の溶液を調製した：０．００５％、０．０１％、０．０１５％、０．０２％、０．０２５％、０．０３％、０．０３５％、０．０４％、０．０５％、０．０６％および０．１％、ならびに０％（培地のみ）。
【０２１７】
細胞を１５０μＬの室温１×ＰＢＳ（リン酸緩衝生理食塩水）で２回洗浄した。プレートを上下逆にし、液体を容器にデカントすることにより、培地、その後ＰＢＳを９６ウェルプレート中のウェルから除去した。最後のＰＢＳ洗浄後、１ウェル当たり８０μＬの試料を添加した。各濃度の特定の胆汁酸を８つのウェルに添加し、３７℃、５％ＣＯ２で１時間インキュベートした。その後、プレートをインキュベーターから取り出し、溶液をデカントした。希釈した（１ｍＬのＲＰＭＩ中４０μＬ）ＭＴＳ試薬（３−（４，５−ジメチルチアゾール−２−イル）−５−（３−カルボキシメトキシフェニル）−２−（４−スルホフェニル）−２Ｈ−テトラゾリウム、内塩）の１００μＬ溶液を、各ウェルに直接添加した。対照（胆汁酸なし）ウェルが橙褐色に変色するまで、プレートを３７℃、５％ＣＯ２でインキュベートし、その後、９６ウェルプレートを分析する分光光度計に充填した。試料は、４９０ｎｍ波長設定で操作した。
【０２１８】
細胞の生存は、Ｐｒｏｍｅｇａ製の比色分析アッセイ（ＭＴＳ）キットを使用して評価した。結果は、合成ＮａＤＣまたはＳｉｇｍａ製ＮａＤＣのいずれも処理時における、細胞生存の用量依存的な減少を示す（図２を参照）。両分子は、本実験において類似の細胞溶解挙動を実証し、合成ＮａＤＣおよびウシ由来のＳｉｇｍａ製ＮａＤＣが脂肪細胞を死滅させるそれらの能力に関して、機能的に同一であることを示している。
【０２１９】
上述した実施形態および実施例は、本発明を限定することを意図するものではない。本発明の原理に従って、数々の修正形態および変形形態が可能であることを理解すべきである。
本発明の好ましい実施形態においては、以下が提供される。
（項目１）
デオキシコール酸（ＤＣＡ）を自然に産生する哺乳動物または微生物生命体から単離されるものではない、ＤＣＡである化合物もしくはそのプロドラッグ、または前記化合物もしくは前記プロドラッグの薬学的に許容される塩：
【化５０】
。
（項目２）
項目１に記載の化合物および薬学的に許容される賦形剤を含む、組成物。
（項目３）
神経ペプチドＹ（ＮＰＹ）受容体アンタゴニストおよび脂肪選択的プロアポトーシスペプチドからなる群から選択される少なくとも１つの追加の活性成分をさらに含む、項目２に記載の組成物。
（項目４）
前記神経ペプチドＹ（ＮＰＹ）受容体アンタゴニストが、ＢＩＢＰ−３２２６、神経ペプチドＹ５アンタゴニスト（ＡｍｇｅｎのＮＰＹ受容体アンタゴニスト）、ＢＩＢＯ−３３０４（Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ ＩｎｇｌｅｈｅｉｍのＮＰＹ受容体アンタゴニスト）、ＢＭＳ−１９２５４８（Ｂｒｉｓｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓ ＳｑｕｉｂｂのＮＰＹ受容体アンタゴニスト）、ＡＲ−Ｈ０４０９２２（Ｂｒｉｓｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓ ＳｑｕｉｂｂのＮＰＹ受容体アンタゴニスト）、ＬＹ−３５７８９７（Ｅｌｉ ＬｉｌｌｙのＮＰＹ受容体アンタゴニスト）、Ｅｓｔｅｖｅ ＮＰＹ−Ｙ５受容体アンタゴニスト、１２２９Ｕ９１（ＧｌａｘｏＳｍｉｔｈＫｌｉｎｅのＮＰＹ受容体アンタゴニスト）、ＧＷ４３８０１４Ｓ（ＧｌａｘｏＳｍｉｔｈＫｌｉｎｅのＮＰＹ受容体アンタゴニスト）、ＪＮＪ−５２０７７８７（Ｊｏｈｎｓｏｎ＆ＪｏｈｎｓｏｎのＮＰＹ受容体アンタゴニスト）、Ｌｕ−ＡＡ−４４６０８（ＬｕｎｄｂｅｃｋのＮＰＹ受容体アンタゴニスト）、ＭＫ−０５５７（ＭｅｒｃｋのＮＰＹ受容体アンタゴニスト）、ＮＧＤ−９５−１（ＮｅｕｒｇｏｇｅｎのＮＰＹ受容体アンタゴニスト）、ＮＬＸ−Ｅ２０１（ＮｅｕｒｏｌｏｇｉｘのＮＰＹ受容体アンタゴニスト）、ＣＧＰ−７１６８３（ＮｏｖａｒｔｉｓのＮＰＹ受容体アンタゴニスト）、ＰＤ−１６０１７０（ＰｆｉｚｅｒのＮＰＹ受容体アンタゴニスト）、ＳＲ−１２０８１９Ａ（Ｓａｎｏｆｉ ＡｖｅｎｔｉｓのＮＰＹ受容体アンタゴニスト）、ＢＩＩＥ０２４６（Ｓａｎｏｆｉ ＡｖｅｎｔｉｓのＮＰＹ受容体アンタゴニスト）、Ｓ．Ａ．０２０４（Ｓａｎｏｆｉ ＡｖｅｎｔｉｓのＮＰＹ受容体アンタゴニスト）、Ｓ−２３６７（ＳｈｉｏｎｇｌｉのＮＰＹ受容体アンタゴニスト）、ジヒドロピリジン系ＮＰＹ受容体アンタゴニスト、ジヒドロピリジン誘導体ＮＰＹ受容体アンタゴニスト、二環化合物ＮＰＹ受容体アンタゴニスト、カルバゾール系ＮＰＹ受容体アンタゴニストおよび三環化合物ＮＰＹ受容体アンタゴニストからなる群から選択される、項目３に記載の組成物。
（項目５）
前記脂肪選択的プロアポトーシスペプチドが、白色脂肪血管系にあるＣＫＧＧＲＡＫＤＣペプチドである、項目３に記載の組成物。
（項目６）
哺乳動物において選択した位置から脂肪沈着物を除去する方法であって、それを必要とする前記哺乳動物に、治療有効量のＤＣＡもしくはそのプロドラッグ、または前記ＤＣＡもしくは前記プロドラッグの薬学的に許容される塩：
【化５１】
を投与するステップを含む方法であり、前記化合物はＤＣＡを自然に産生する哺乳動物または微生物生命体から単離されるものではない方法。
（項目７）
前記哺乳動物に、神経ペプチドＹ（ＮＰＹ）受容体アンタゴニストおよび脂肪選択的プロアポトーシスペプチドからなる群から選択される少なくとも１つの追加の活性成分を投与するステップをさらに含む、項目６に記載の方法。
（項目８）
前記神経ペプチドＹ（ＮＰＹ）受容体アンタゴニストが、ＢＩＢＰ−３２２６、神経ペプチドＹ５アンタゴニスト（ＡｍｇｅｎのＮＰＹ受容体アンタゴニスト）、ＢＩＢＯ−３３０４（Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ ＩｎｇｌｅｈｅｉｍのＮＰＹ受容体アンタゴニスト）、ＢＭＳ−１９２５４８（Ｂｒｉｓｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓ ＳｑｕｉｂｂのＮＰＹ受容体アンタゴニスト）、ＡＲ−Ｈ０４０９２２（Ｂｒｉｓｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓ ＳｑｕｉｂｂのＮＰＹ受容体アンタゴニスト）、ＬＹ−３５７８９７（Ｅｌｉ ＬｉｌｌｙのＮＰＹ受容体アンタゴニスト）、Ｅｓｔｅｖｅ ＮＰＹ−Ｙ５受容体アンタゴニスト、１２２９Ｕ９１（ＧｌａｘｏＳｍｉｔｈＫｌｉｎｅのＮＰＹ受容体アンタゴニスト）、ＧＷ４３８０１４Ｓ（ＧｌａｘｏＳｍｉｔｈＫｌｉｎｅのＮＰＹ受容体アンタゴニスト）、ＪＮＪ−５２０７７８７（Ｊｏｈｎｓｏｎ＆ＪｏｈｎｓｏｎのＮＰＹ受容体アンタゴニスト）、Ｌｕ−ＡＡ−４４６０８（ＬｕｎｄｂｅｃｋのＮＰＹ受容体アンタゴニスト）、ＭＫ−０５５７（ＭｅｒｃｋのＮＰＹ受容体アンタゴニスト）、ＮＧＤ−９５−１（ＮｅｕｒｇｏｇｅｎのＮＰＹ受容体アンタゴニスト）、ＮＬＸ−Ｅ２０１（ＮｅｕｒｏｌｏｇｉｘのＮＰＹ受容体アンタゴニスト）、ＣＧＰ−７１６８３（ＮｏｖａｒｔｉｓのＮＰＹ受容体アンタゴニスト）、ＰＤ−１６０１７０（ＰｆｉｚｅｒのＮＰＹ受容体アンタゴニスト）、ＳＲ−１２０８１９Ａ（Ｓａｎｏｆｉ ＡｖｅｎｔｉｓのＮＰＹ受容体アンタゴニスト）、ＢＩＩＥ０２４６（Ｓａｎｏｆｉ ＡｖｅｎｔｉｓのＮＰＹ受容体アンタゴニスト）、Ｓ．Ａ．０２０４（Ｓａｎｏｆｉ ＡｖｅｎｔｉｓのＮＰＹ受容体アンタゴニスト）、Ｓ−２３６７（ＳｈｉｏｎｇｌｉのＮＰＹ受容体アンタゴニスト）、ジヒドロピリジン系ＮＰＹ受容体アンタゴニスト、ジヒドロピリジン誘導体ＮＰＹ受容体アンタゴニスト、二環化合物ＮＰＹ受容体アンタゴニスト、カルバゾール系ＮＰＹ受容体アンタゴニストおよび三環化合物ＮＰＹ受容体アンタゴニストからなる群から選択される、項目７に記載の方法。
（項目９）
脂肪選択的プロアポトーシスペプチドが、白色脂肪血管系にあるＣＫＧＧＲＡＫＤＣペプチドである、項目７に記載の方法。
（項目１０）
デオキシコール酸（ＤＣＡ）もしくはそのエステル、または薬学的に許容されるその塩：
【化５２】
を調製するための方法であって、
（ａ）９α−ヒドロキシアンドロスタ−４−エン−３，１７−ジオン１を、水素化条件下、Ｈ２と反応させて、化合物２
【化５３】
を形成するステップと、
（ｂ）化合物２を酸と反応させて、化合物３
【化５４】
を形成するステップと、
（ｃ）化合物３を還元剤と反応させて、化合物４を４および５
【化５５】
の混合物として形成するステップと、
（ｄ）化合物４をオレフィン形成条件下で二炭素オレフィン化試薬と反応させて、化合物６
【化５６】
を形成するステップと、
（ｅ）化合物６を、式７の化合物［式中、Ｐは保護基である］
【化５７】
に変換するステップと、
（ｆ）式７の化合物をルイス酸の存在下でアルキルプロピオレートＣＨ２ＣＨ２Ｃ（Ｏ）ＯＲまたはアルキルアクリレートＣＨ２＝ＣＨＣ（Ｏ）ＯＲ［式中、Ｒはアルキルである］と反応させて、式８の化合物［式中、Ｐは保護基であり、Ｒはアルキルであり、破線
【化５８−１】
は単結合または二重結合である］
【化５８−２】
を形成するステップと、
（ｇ）式８の化合物を水素化条件下でＨ２と反応させて、式９の化合物［式中、Ｐは保護基であり、Ｒはアルキルである］
【化５９】
を形成するステップと、
（ｈ）式９の化合物を酸化剤と反応させて、式１０の化合物［式中、Ｐは保護基であり、Ｒはアルキルである］
【化６０】
を形成するステップと、
（ｉ）式１０の化合物を水素化条件下でＨ２と反応させて、式１１の化合物［式中、Ｐは保護基であり、Ｒはアルキルである］
【化６１】
を形成するステップと、
（ｊ）式１１の化合物を還元剤と反応させて、式１２の化合物［式中、Ｐは保護基であり、Ｒはアルキルである］
【化６２】
を形成するステップと、
（ｋ）式１２の化合物を脱保護条件に曝露してそのエステルを形成し、場合によって、適切な加水分解条件に曝露して、デオキシコール酸または薬学的に許容されるその塩を形成するステップと
を含む方法。
（項目１１）
パート（ａ）の前記水素化条件がＰｄ／Ｃ触媒を含む、項目１０に記載の方法。
（項目１２）
パート（ｂ）の前記酸が鉱酸である、項目１０に記載の方法。
（項目１３）
前記鉱酸がＨ２ＳＯ４である、項目１２に記載の方法。
（項目１４）
パート（ｃ）の前記還元剤がＬｉＡｌ（ＯｔＢｕ）３Ｈである、項目１０に記載の方法。
（項目１５）
パート（ｄ）の前記二炭素オレフィン化試薬がＰｈ３ＰＣＨ２ＣＨ３＋Ｂｒ−である、項目１０に記載の方法。
（項目１６）
化合物７〜１２の前記保護基Ｐが−Ｃ（Ｏ）ＣＨ３である、項目１０に記載の方法。
（項目１７）
パート（ｆ）の前記ルイス酸がＥｔＡｌＣｌ２である、項目１０に記載の方法。
（項目１８）
前記アルキルプロピオレートまたはアルキルアクリレートがメチルプロピオレートまたはメチルアクリレートである、項目１０に記載の方法。
（項目１９）
パート（ｇ）の前記水素化条件がＰｔＯ２触媒を含む、項目１０に記載の方法。
（項目２０）
パート（ｈ）の前記酸化剤がＣｒＯ３である、項目１０に記載の方法。
（項目２１）
パート（ｉ）の前記水素化条件がＰｄ／Ｃ触媒を含む、項目１０に記載の方法。
（項目２２）
パート（ｊ）の前記還元剤がＬｉＡｌ（ＯｔＢｕ）３Ｈである、項目１０に記載の方法。
（項目２３）
Ｐが−Ｃ（Ｏ）ＣＨ３である場合、パート（ｋ）の前記脱保護および加水分解条件が、化合物１２を、アルカリ土類水酸化物、アルカリ土類金属アルコキシドまたは両方の混合物と反応させることを含む、項目１０に記載の方法。
（項目２４）
前記アルカリ土類金属アルコキシドがＬｉＯＨである、項目２３に記載の方法。
（項目２５）
９α−ヒドロキシ−５β−アンドロスタン−３，１７−ジオン（２）；
５β−アンドロスタ−９（１１）−エン−３，１７−ジオン（３）；
（Ｚ）−３α−ヒドロキシ−５β−プレグナ−９（１１），１７（２０）−ジエン（６）；
（Ｚ）−３α−アセトキシ−５β−プレグナ−９（１１），１７（２０）−ジエン（７ａ）；
（Ｅ）−メチル３α−アセトキシ−５β−コール−９（１１），１６，２２−トリエン−２４−オエート（８ａ）；
メチル３α−アセトキシ−５β−コール−９（１１），１６−ジエン−２４−オエート（８ｂ）；
メチル３α−ヒドロキシ−５β−コール−９（１１）−エン−１２−オン−２４−オエート（１０ａ）；および
メチル３α−アセトキシ−５β−コラン−１２−オン−２４−オエート（１１ａ）
からなる群から選択される、中間化合物。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
本願明細書または図面に記載の発明。
【請求項１】
本願明細書または図面に記載の発明。
【図１】
【図２】
【図２】
【公開番号】特開２０１３−７５９１８（Ｐ２０１３−７５９１８Ａ）
【公開日】平成２５年４月２５日（２０１３．４．２５）
【国際特許分類】
【外国語出願】
【出願番号】特願２０１３−７５２１（Ｐ２０１３−７５２１）
【出願日】平成２５年１月１８日（２０１３．１．１８）
【分割の表示】特願２０１０−５１３３８７（Ｐ２０１０−５１３３８７）の分割
【原出願日】平成２０年６月１８日（２００８．６．１８）
【出願人】（５０８２７６４１９）カイセラ バイオファーマシューティカルズ， インコーポレイテッド (4)
【Ｆターム（参考）】
【公開日】平成２５年４月２５日（２０１３．４．２５）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２０１３−７５２１（Ｐ２０１３−７５２１）
【出願日】平成２５年１月１８日（２０１３．１．１８）
【分割の表示】特願２０１０−５１３３８７（Ｐ２０１０−５１３３８７）の分割
【原出願日】平成２０年６月１８日（２００８．６．１８）
【出願人】（５０８２７６４１９）カイセラ バイオファーマシューティカルズ， インコーポレイテッド (4)
【Ｆターム（参考）】
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