安定性が強化された免疫原性ＨＢｃキメラ粒子
【課題】本発明は、ホスト細胞中で発現後、自己会合して粒子を形成するリコンビナントヘパドナウイルスヌクレオカプシドタンパク質、すなわちＢ型肝炎コアキメラタンパク質を目的とする。
【解決手段】自己会合粒子の安定性強化および免疫原性エピトープの提示の両方を目的として操作を施した、カルボキシ末端が切断されたキメラＢ型肝炎ウイルスヌクレオカプシドタンパク質（ＨＢｃ）が開示される。前記免疫原性エピトープの提示は、ＨＢｃの免疫原性ループで実施され、一方、自己会合粒子の安定性の強化は、キメラ分子のカルボキシ末端近くに少なくとも１つの異種システイン残基を存在させることによって得られる。前記キメラの製造方法および使用方法もまた開示される。
【解決手段】自己会合粒子の安定性強化および免疫原性エピトープの提示の両方を目的として操作を施した、カルボキシ末端が切断されたキメラＢ型肝炎ウイルスヌクレオカプシドタンパク質（ＨＢｃ）が開示される。前記免疫原性エピトープの提示は、ＨＢｃの免疫原性ループで実施され、一方、自己会合粒子の安定性の強化は、キメラ分子のカルボキシ末端近くに少なくとも１つの異種システイン残基を存在させることによって得られる。前記キメラの製造方法および使用方法もまた開示される。
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
Ｎ−末端からドメインＩ、ＩＩ、ＩＩＩおよびＩＶと称される４つのペプチド結合アミノ酸残基配列ドメインを含む、長さが約１３５から約５１５のアミノ酸残基のリコンビナントＢ型肝炎ウイルスコア（ＨＢｃ）タンパク質キメラ分子であって、 （ａ）ドメインＩは約７１から約１００アミノ酸残基を含み、前記アミノ酸残基の配列は少なくともＨＢｃの５位から７５位の残基配列を含み、さらに場合によってＨＢｃ残基１−４の１つとペプチド結合した約３０までのアミノ酸残基を含む異種エピトープを含み；
（ｂ）ドメインＩＩはドメインＩのＨＢｃ残基７５とペプチド結合した約５から約２５０のアミノ酸残基を含み、ここで、（ｉ）ＨＢｃの７６位から８５位の配列中の０から全ての残基がＨＢｃにとって異種である１つから約２４５アミノ酸残基とペプチド結合して存在し、異種エピトープまたは共役エピトープのための異種リンカー残基を構成するか、または（ｉｉ）７６位から８５位のＨＢｃの配列は異種残基とは結合せずに存在するか、または（ｉｉｉ）残基７６から８５の１つまたは２つ以上が存在せず；
（ｃ）ドメインＩＩＩはドメインＩＩの残基８５とペプチド結合した８６位から１３５位のＨＢｃ配列であり；さらに、
（ｄ）ドメインＩＶは、（ｉ）ドメインＩＩＩの１３５位の残基とペプチド結合した１３６位から１４９位のＨＢｃアミノ酸残基配列の５から１４残基、（ｉｉ）キメラ分子のＣ−末端から約３０残基以内に１つから１０のシステイン残基（Ｃ−末端システイン残基）、および（ｉｉｉ）１５０位からＣ−末端のＨＢｃにとって異種である配列中に０から約１００アミノ酸残基を含み、ここで、ドメインＩＶは前記（ｉｉ）の１つから１０のシステイン残基を含む少なくとも６つのアミノ酸残基を含むことを条件とし、
前記キメラはホスト細胞内で発現されるとき自己会合して粒子を生成し、前記粒子は実質的に核酸と結合せず、さらに前記のＣ−末端システイン残基を欠くか、またはキメラ分子内に存在するＣ−末端システイン残基が別の残基に置換されてあるがその他の点では同一のＨＢｃキメラから生成される粒子よりも安定であり、さらに、配列番号：２４７の１位から１４９位の配列と比較して、前記キメラのＨＢｃ配列でそのアミノ酸残基の約５％以下が保存的置換されてあるアミノ酸残基配列を有する、前記リコンビナントＢ型肝炎ウイルスコアタンパク質キメラ分子。
【請求項２】
前記ペプチド結合異種エピトープまたは共役エピトープのための異種リンカー残基が異種Ｂ細胞エピトープである、請求項１に記載のリコンビナントＨＢｃキメラタンパク質分子。
【請求項３】
前記Ｂ細胞エピトープが、アミノ酸残基７６と８５との間のＨＢｃ配列内のある位置でペプチド結合し、さらに７６位から８５位のＨＢｃ配列の少なくとも５残基が存在する、請求項２に記載のリコンビナントＨＢｃキメラタンパク質分子。
【請求項４】
さらにペプチド結合異種Ｔ細胞エピトープを含む、請求項２に記載のリコンビナントＨＢｃキメラタンパク質分子。
【請求項５】
前記Ｃ−末端システイン残基が、ＨＢｃキメラタンパク質分子のＣ−末端の５アミノ酸残基内に存在する、請求項４に記載のリコンビナントＨＢｃキメラタンパク質分子。
【請求項６】
前記キメラが、中断されていない１位から少なくとも１４０位のＨＢｃアミノ酸残基配列、およびＨＢｃキメラタンパク質分子のＣ−末端にシステイン残基を含む、請求項１に記載のリコンビナントＨＢｃキメラタンパク質分子。
【請求項７】
前記キメラが、共役エピトープのための異種リンカー残基を含み、前記共役エピトープのための異種リンカー残基が、アミノ酸残基７６と８５との間のＨＢｃ配列内のある位置でペプチド結合し、さらに７６位から８５位のＨＢｃ配列の少なくとも４残基が存在する、請求項１に記載のリコンビナントＨＢｃキメラタンパク質分子。
【請求項８】
１位から少なくとも１４０位の前記ＨＢｃアミノ酸残基配列、およびＣ−末端にただ１つのシステイン残基を含む、請求項７に記載のリコンビナントＨＢｃキメラタンパク質分子。
【請求項９】
ドメインＩおよびＩＩ、ＩＩおよびＩＶ、またはＩおよびＩＶに存在する２つの異種エピトープを含む、請求項１に記載のリコンビナントＨＢｃキメラタンパク質分子。
【請求項１０】
前記２つの異種エピトープの１つがＢ細胞エピトープである、請求項９に記載のリコンビナントＨＢｃキメラタンパク質分子。
【請求項１１】
前記２つの異種エピトープの１つがＴ細胞エピトープである、請求項９に記載のリコンビナントＨＢｃキメラタンパク質分子。
【請求項１２】
ドメインＩＩの前記異種エピトープがＢ細胞エピトープである、請求項９に記載のリコンビナントＨＢｃキメラタンパク質分子。
【請求項１３】
１５０位からＣ−末端のＨＢｃにとって異種である前記配列が、ＨＢｃ残基１４０−１４９の１つとペプチド結合したＴ細胞エピトープである、請求項１に記載のリコンビナントＨＢｃキメラタンパク質分子。
【請求項１４】
共役エピトープまたは異種エピトープのための前記異種リンカー残基が異種エピトープである、請求項１に記載のリコンビナントＨＢｃキメラタンパク質分子。
【請求項１５】
前記異種エピトープが６から約５０アミノ酸残基を含む、請求項１４に記載のリコンビナントＨＢｃキメラタンパク質分子。
【請求項１６】
前記ドメインＩＶが、キメラ分子のＣ−末端から約３０残基内に１つから約５つのシステイン残基を含む、請求項１４に記載のリコンビナントＨＢｃキメラタンパク質分子。
【請求項１７】
前記Ｃ−末端システイン残基が、前記キメラタンパク質分子のＣ−末端の約５つのアミノ酸残基内に位置する、請求項１に記載のリコンビナントＨＢｃキメラタンパク質分子。
【請求項１８】
共役エピトープまたは異種エピトープのための前記異種リンカー残基が、リジン、アスパラギン酸、グルタミン酸、システインおよびチロシン残基から成る群から選択される共役エピトープのための異種リンカー残基である、請求項１に記載のリコンビナントＨＢｃキメラタンパク質分子。
【請求項１９】
前記キメラが、１位から少なくとも１４０位まで中断されないＨＢｃアミノ酸残基配列を含む、請求項１に記載のリコンビナントＨＢｃキメラタンパク質分子。
【請求項２０】
前記非中断ＨＢｃアミノ酸残基配列が残基１４９を含む、請求項１９に記載のリコンビナントＨＢｃキメラタンパク質分子。
【請求項２１】
前記共役エピトープのための異種リンカー残基がハプテンに共役される、請求項１に記載のリコンビナントＨＢｃキメラタンパク質分子。
【請求項２２】
前記ハプテンがオリゴ糖である、請求項２１に記載のリコンビナントＨＢｃキメラタンパク質分子。
【請求項２３】
Ｎ−末端からドメインＩ、ＩＩ、ＩＩＩおよびＩＶと称される４つのペプチド結合アミノ酸残基配列ドメインを含む、約１７５から約２４０アミノ酸残基の長さを有する、請求項１に記載のリコンビナントＢ型肝炎ウイルスコア（ＨＢｃ）タンパク質キメラ分子であって、
（ａ）ドメインＩが、ＨＢｃの１位から７５位の残基配列を含み；
（ｂ）ドメインＩＩがドメインＩのＨＢｃ残基７５とペプチド結合した約５から約５５のアミノ酸残基を含み、ここでＨＢｃの７６位から８５位の配列中の少なくとも４つの残基がＨＢｃにとって異種である６から約５０アミノ酸残基とペプチド結合して存在し、異種エピトープを構成し；
（ｃ）ドメインＩＩＩはドメインＩＩの残基８５とペプチド結合した８６位から１３５位のＨＢｃ配列であり；さらに、
（ｄ）ドメインＩＶは、（ｉ）ドメインＩＩＩの１３５位の残基とペプチド結合した１３６位から１４９位のＨＢｃアミノ酸残基配列の５から１４残基、（ｉｉ）キメラ分子のＣ−末端から約３０残基以内に１つのシステイン残基（Ｃ−末端システイン残基）、および（ｉｉｉ）１５０位からＣ−末端のＨＢｃにとって異種である配列内に０から約５０アミノ酸残基を含み、
前記キメラはホスト細胞内で発現されるとき自己会合して粒子を生成し、前記粒子は、２８０ｎｍ対２６０ｎｍ吸収比が約１．２から約１．６を示し、さらに前記のＣ−末端システイン残基を欠くか、またはキメラ分子内に存在するＣ−末端システイン残基が別の残基に置換されてあるがその他の点では同一のＨＢｃキメラから生成される粒子よりも安定であり、さらに、配列番号：２４７の１位から１４９位の配列と比較して、前記キメラのＨＢｃ配列で約５％以下のアミノ酸残基が保存的置換されてあるアミノ酸残基配列を有する、前記リコンビナントＢ型肝炎ウイルスコアタンパク質キメラ分子。
【請求項２４】
ドメインＩＩの前記異種エピトープがＢ細胞エピトープである、請求項２３に記載のリコンビナントＨＢｃキメラタンパク質分子。
【請求項２５】
アミノ酸残基７６から８５の間のＨＢｃ配列は存在するが、前記異種Ｂ細胞エピトープで中断される、請求項２４に記載のリコンビナントＨＢｃキメラタンパク質分子。
【請求項２６】
前記Ｂ細胞エピトープが下記から成る群から選択される病原体に存在するアミノ酸配列である、請求項２４に記載のリコンビナントＨＢｃキメラタンパク質分子：肺炎連鎖球菌（Streptococcus pneumonia）、クリプトスポリジウム・パルブム（Cryptosporidium parvum）、ＨＩＶ、口蹄疫ウイルス、インフルエンザウイルス、ペスト菌（Yersinia pestis）、インフルエンザ菌（Haemophilus influenzae）、モラクセラ・カタラーリス（Moraxella catarrhalis）、ポルフィロモナス・ギンギバリス（Porphyromonas gingivalis）、クルーズトリパノソーマ（Trypanosoma cruzi）、熱帯熱マラリア原虫（Plasmodium falciparum）、三日熱マラリア原虫（Plasmodium vivax）、げっ歯類住血胞子虫（Plasmodium berghi）、プラスモジウム・ヨエリー（Plasmodium yoelli）、ストレプトコッカス・ソブリヌス（Streptococcus sobrinus）、フレキシナー菌（Shigella flexneri）、ＲＳＶ、プラスモジウム・エントアメーバ・ヒストリティカ（Plasmodium Entamoeba histolytica）、日本住血吸虫（Schistosoma japonicum）、マンソニ住血吸虫（Schistosoma mansoni）、およびエボラウイルス。
【請求項２７】
前記１５０位からＣ−末端までのＨＢｃにとって異種の配列がＨＢｃ残基１４０−１４９の１つとペプチド結合したＴ細胞エピトープである、請求項２３に記載のリコンビナントＨＢｃキメラタンパク質分子。
【請求項２８】
前記Ｔ細胞エピトープが、目的のキメラを免疫原として用いようとしている対象生物に由来する、請求項２７に記載のリコンビナントＨＢｃキメラタンパク質分子。
【請求項２９】
前記Ｃ−末端システイン残基が、前記キメラタンパク質分子のＣ−末端の約５つのアミノ酸残基内に位置する、請求項２３に記載のリコンビナントＨＢｃキメラタンパク質分子。
【請求項３０】
更に、Ｎ−末端に免疫原性エピトープを提示する、請求項２３に記載のリコンビナントＨＢｃキメラタンパク質分子。
【請求項３１】
更に、Ｃ−末端に免疫原性エピトープを提示する、請求項２３に記載のリコンビナントＨＢｃキメラタンパク質分子。
【請求項３２】
免疫原性粒子として存在する請求項１〜３１のいずれか１項に記載のリコンビナントＨＢｃキメラタンパク質分子であって、
前記粒子は実質的に核酸と結合せず、さらに前記粒子は、前記Ｃ−末端システイン残基を欠くか、またはキメラ分子内に存在するＣ−末端システイン残基が別の残基に置換されてあるがその他の点では同一のＨＢｃキメラから生成される粒子よりも安定である、前記免疫原性粒子として存在するリコンビナントＨＢｃキメラタンパク質分子。
【請求項３３】
約１．２から約１．７の２８０／２６０吸収比を示す請求項３２に記載の免疫原性粒子として存在するリコンビナントＨＢｃキメラタンパク質分子。
【請求項３４】
前記リコンビナントキメラＨＢｃタンパク質分子の長さが約４３５までのアミノ酸残基である請求項３２に記載の免疫原性粒子として存在するリコンビナントＨＢｃキメラタンパク質分子。
【請求項３５】
前記リコンビナントキメラＨＢｃタンパク質分子の長さが約１７５から約２４０アミノ酸残基である請求項３２に記載の免疫原性粒子として存在するリコンビナントＨＢｃキメラタンパク質分子。
【請求項３６】
医薬として許容できる希釈剤に溶解または分散された免疫誘発に有効な量の請求項３２に記載の免疫原性粒子として存在するリコンビナントＨＢｃキメラタンパク質分子を含むワクチンまたは接種物。
【請求項３７】
前記リコンビナントキメラＨＢｃタンパク質分子が、約１７５から約２４０のアミノ酸残基の長さを有し、かつ、前記免疫原性粒子が、約１．４から約１．６の２８０ｎｍ対２６０ｎｍ吸収比を示す、請求項３６に記載のワクチンまたは接種物。
【請求項３８】
非経口投与用に適用させた請求項３６に記載のワクチンまたは接種物。
【請求項３９】
粘膜免疫用に適用させた請求項３６に記載のワクチンまたは接種物。
【請求項４０】
前記リコンビナントキメラＨＢｃタンパク質分子粒子が植物組織に存在する、請求項３６に記載のワクチンまたは接種物。
【請求項４１】
前記リコンビナントキメラＨＢｃタンパク質分子粒子が、腸チフス菌（S. typhi）、ネズミチフス菌（S. typhimurium）またはネズミチフス菌−大腸菌ハイブリッドの弱毒株に存在する、請求項３６に記載のワクチンまたは接種物。
【請求項４２】
さらにアジュバントを含む請求項３６に記載のワクチンまたは接種物。
【請求項４３】
前記アジュバントがミョウバンである請求項４２に記載のワクチンまたは接種物。
【請求項４４】
前記アジュバントが、ムラミルジペプチド、７−置換−８−オキソ−もしくは８−スルホ−グアノシン誘導体、モノホスホリル脂質Ａ、アルミニウムもしくはカルシウム塩から成る群から選択される小分子である、請求項４２に記載のワクチンまたは接種物。
【請求項４５】
前記アジュバントが、前記免疫原性粒子および前記医薬として許容できる希釈剤とともに乳化されて水相および油相を有する乳液を提供する油である、請求項４２に記載のワクチンまたは接種物。
【請求項４６】
前記乳液の油相がスクァレン又はスクァランを含む、請求項４５に記載のワクチンまたは接種物。
【請求項４７】
前記乳液の水相および油相が、ソルビタンまたはマンニッドＣ12−Ｃ24脂肪酸エステルである乳化剤によって乳化される、請求項４５に記載のワクチンまたは接種物。
【請求項４８】
請求項１〜３１のいずれか１項に記載のリコンビナントＨＢｃタンパク質分子をコードする核酸セグメント、またはその変種、類似体もしくは相補物。
【請求項４９】
請求項１〜３１のいずれか１項に記載のリコンビナントＨＢｃタンパク質分子をコードする核酸セグメント、またはその変種、類似体もしくは相補物に機能できるように連結されたベクター、および適合ホスト生物中で前記遺伝子の発現を駆動させるために適したプロモーターを含むリコンビナント核酸分子。
【請求項５０】
請求項４９に記載のリコンビナント核酸分子で形質転換されたホスト細胞。
【請求項５１】
前記ホスト細胞が、ＣＨＯ、ＶＥＲＯもしくはＣＯＳ細胞、大腸菌、ビール酵母菌、ピキア・パストリス・ティフィー（Pichia pastoris typhi）、ネズミチフス菌およびネズミチフス菌−大腸菌ハイブリッドから成る群から選択される、請求項５０に記載の形質転換ホスト細胞。
【請求項５２】
ホスト動物で免疫反応を誘発するための請求項３６に記載のワクチンまたは接種物の製造のための、免疫誘発に有効な量の請求項３２に記載の免疫原性粒子として存在するリコンビナントＨＢｃキメラタンパク質分子の使用。
【請求項５３】
ホスト動物で免疫反応を誘発するための請求項３７に記載のワクチンまたは接種物の製造のための、免疫誘発に有効な量の請求項３２に記載の免疫原性粒子として存在するリコンビナントＨＢｃキメラタンパク質分子の使用。
【請求項５４】
ホスト動物で免疫反応を誘発するための請求項４２に記載のワクチンまたは接種物の製造のための、免疫誘発に有効な量の請求項３２に記載の免疫原性粒子として存在するリコンビナントＨＢｃキメラタンパク質分子の使用。
【請求項５５】
ホスト動物で免疫反応を誘発するための請求項４３に記載のワクチンまたは接種物の製造のための、免疫誘発に有効な量の請求項３２に記載の免疫原性粒子として存在するリコンビナントＨＢｃキメラタンパク質分子の使用。
【請求項１】
Ｎ−末端からドメインＩ、ＩＩ、ＩＩＩおよびＩＶと称される４つのペプチド結合アミノ酸残基配列ドメインを含む、長さが約１３５から約５１５のアミノ酸残基のリコンビナントＢ型肝炎ウイルスコア（ＨＢｃ）タンパク質キメラ分子であって、 （ａ）ドメインＩは約７１から約１００アミノ酸残基を含み、前記アミノ酸残基の配列は少なくともＨＢｃの５位から７５位の残基配列を含み、さらに場合によってＨＢｃ残基１−４の１つとペプチド結合した約３０までのアミノ酸残基を含む異種エピトープを含み；
（ｂ）ドメインＩＩはドメインＩのＨＢｃ残基７５とペプチド結合した約５から約２５０のアミノ酸残基を含み、ここで、（ｉ）ＨＢｃの７６位から８５位の配列中の０から全ての残基がＨＢｃにとって異種である１つから約２４５アミノ酸残基とペプチド結合して存在し、異種エピトープまたは共役エピトープのための異種リンカー残基を構成するか、または（ｉｉ）７６位から８５位のＨＢｃの配列は異種残基とは結合せずに存在するか、または（ｉｉｉ）残基７６から８５の１つまたは２つ以上が存在せず；
（ｃ）ドメインＩＩＩはドメインＩＩの残基８５とペプチド結合した８６位から１３５位のＨＢｃ配列であり；さらに、
（ｄ）ドメインＩＶは、（ｉ）ドメインＩＩＩの１３５位の残基とペプチド結合した１３６位から１４９位のＨＢｃアミノ酸残基配列の５から１４残基、（ｉｉ）キメラ分子のＣ−末端から約３０残基以内に１つから１０のシステイン残基（Ｃ−末端システイン残基）、および（ｉｉｉ）１５０位からＣ−末端のＨＢｃにとって異種である配列中に０から約１００アミノ酸残基を含み、ここで、ドメインＩＶは前記（ｉｉ）の１つから１０のシステイン残基を含む少なくとも６つのアミノ酸残基を含むことを条件とし、
前記キメラはホスト細胞内で発現されるとき自己会合して粒子を生成し、前記粒子は実質的に核酸と結合せず、さらに前記のＣ−末端システイン残基を欠くか、またはキメラ分子内に存在するＣ−末端システイン残基が別の残基に置換されてあるがその他の点では同一のＨＢｃキメラから生成される粒子よりも安定であり、さらに、配列番号：２４７の１位から１４９位の配列と比較して、前記キメラのＨＢｃ配列でそのアミノ酸残基の約５％以下が保存的置換されてあるアミノ酸残基配列を有する、前記リコンビナントＢ型肝炎ウイルスコアタンパク質キメラ分子。
【請求項２】
前記ペプチド結合異種エピトープまたは共役エピトープのための異種リンカー残基が異種Ｂ細胞エピトープである、請求項１に記載のリコンビナントＨＢｃキメラタンパク質分子。
【請求項３】
前記Ｂ細胞エピトープが、アミノ酸残基７６と８５との間のＨＢｃ配列内のある位置でペプチド結合し、さらに７６位から８５位のＨＢｃ配列の少なくとも５残基が存在する、請求項２に記載のリコンビナントＨＢｃキメラタンパク質分子。
【請求項４】
さらにペプチド結合異種Ｔ細胞エピトープを含む、請求項２に記載のリコンビナントＨＢｃキメラタンパク質分子。
【請求項５】
前記Ｃ−末端システイン残基が、ＨＢｃキメラタンパク質分子のＣ−末端の５アミノ酸残基内に存在する、請求項４に記載のリコンビナントＨＢｃキメラタンパク質分子。
【請求項６】
前記キメラが、中断されていない１位から少なくとも１４０位のＨＢｃアミノ酸残基配列、およびＨＢｃキメラタンパク質分子のＣ−末端にシステイン残基を含む、請求項１に記載のリコンビナントＨＢｃキメラタンパク質分子。
【請求項７】
前記キメラが、共役エピトープのための異種リンカー残基を含み、前記共役エピトープのための異種リンカー残基が、アミノ酸残基７６と８５との間のＨＢｃ配列内のある位置でペプチド結合し、さらに７６位から８５位のＨＢｃ配列の少なくとも４残基が存在する、請求項１に記載のリコンビナントＨＢｃキメラタンパク質分子。
【請求項８】
１位から少なくとも１４０位の前記ＨＢｃアミノ酸残基配列、およびＣ−末端にただ１つのシステイン残基を含む、請求項７に記載のリコンビナントＨＢｃキメラタンパク質分子。
【請求項９】
ドメインＩおよびＩＩ、ＩＩおよびＩＶ、またはＩおよびＩＶに存在する２つの異種エピトープを含む、請求項１に記載のリコンビナントＨＢｃキメラタンパク質分子。
【請求項１０】
前記２つの異種エピトープの１つがＢ細胞エピトープである、請求項９に記載のリコンビナントＨＢｃキメラタンパク質分子。
【請求項１１】
前記２つの異種エピトープの１つがＴ細胞エピトープである、請求項９に記載のリコンビナントＨＢｃキメラタンパク質分子。
【請求項１２】
ドメインＩＩの前記異種エピトープがＢ細胞エピトープである、請求項９に記載のリコンビナントＨＢｃキメラタンパク質分子。
【請求項１３】
１５０位からＣ−末端のＨＢｃにとって異種である前記配列が、ＨＢｃ残基１４０−１４９の１つとペプチド結合したＴ細胞エピトープである、請求項１に記載のリコンビナントＨＢｃキメラタンパク質分子。
【請求項１４】
共役エピトープまたは異種エピトープのための前記異種リンカー残基が異種エピトープである、請求項１に記載のリコンビナントＨＢｃキメラタンパク質分子。
【請求項１５】
前記異種エピトープが６から約５０アミノ酸残基を含む、請求項１４に記載のリコンビナントＨＢｃキメラタンパク質分子。
【請求項１６】
前記ドメインＩＶが、キメラ分子のＣ−末端から約３０残基内に１つから約５つのシステイン残基を含む、請求項１４に記載のリコンビナントＨＢｃキメラタンパク質分子。
【請求項１７】
前記Ｃ−末端システイン残基が、前記キメラタンパク質分子のＣ−末端の約５つのアミノ酸残基内に位置する、請求項１に記載のリコンビナントＨＢｃキメラタンパク質分子。
【請求項１８】
共役エピトープまたは異種エピトープのための前記異種リンカー残基が、リジン、アスパラギン酸、グルタミン酸、システインおよびチロシン残基から成る群から選択される共役エピトープのための異種リンカー残基である、請求項１に記載のリコンビナントＨＢｃキメラタンパク質分子。
【請求項１９】
前記キメラが、１位から少なくとも１４０位まで中断されないＨＢｃアミノ酸残基配列を含む、請求項１に記載のリコンビナントＨＢｃキメラタンパク質分子。
【請求項２０】
前記非中断ＨＢｃアミノ酸残基配列が残基１４９を含む、請求項１９に記載のリコンビナントＨＢｃキメラタンパク質分子。
【請求項２１】
前記共役エピトープのための異種リンカー残基がハプテンに共役される、請求項１に記載のリコンビナントＨＢｃキメラタンパク質分子。
【請求項２２】
前記ハプテンがオリゴ糖である、請求項２１に記載のリコンビナントＨＢｃキメラタンパク質分子。
【請求項２３】
Ｎ−末端からドメインＩ、ＩＩ、ＩＩＩおよびＩＶと称される４つのペプチド結合アミノ酸残基配列ドメインを含む、約１７５から約２４０アミノ酸残基の長さを有する、請求項１に記載のリコンビナントＢ型肝炎ウイルスコア（ＨＢｃ）タンパク質キメラ分子であって、
（ａ）ドメインＩが、ＨＢｃの１位から７５位の残基配列を含み；
（ｂ）ドメインＩＩがドメインＩのＨＢｃ残基７５とペプチド結合した約５から約５５のアミノ酸残基を含み、ここでＨＢｃの７６位から８５位の配列中の少なくとも４つの残基がＨＢｃにとって異種である６から約５０アミノ酸残基とペプチド結合して存在し、異種エピトープを構成し；
（ｃ）ドメインＩＩＩはドメインＩＩの残基８５とペプチド結合した８６位から１３５位のＨＢｃ配列であり；さらに、
（ｄ）ドメインＩＶは、（ｉ）ドメインＩＩＩの１３５位の残基とペプチド結合した１３６位から１４９位のＨＢｃアミノ酸残基配列の５から１４残基、（ｉｉ）キメラ分子のＣ−末端から約３０残基以内に１つのシステイン残基（Ｃ−末端システイン残基）、および（ｉｉｉ）１５０位からＣ−末端のＨＢｃにとって異種である配列内に０から約５０アミノ酸残基を含み、
前記キメラはホスト細胞内で発現されるとき自己会合して粒子を生成し、前記粒子は、２８０ｎｍ対２６０ｎｍ吸収比が約１．２から約１．６を示し、さらに前記のＣ−末端システイン残基を欠くか、またはキメラ分子内に存在するＣ−末端システイン残基が別の残基に置換されてあるがその他の点では同一のＨＢｃキメラから生成される粒子よりも安定であり、さらに、配列番号：２４７の１位から１４９位の配列と比較して、前記キメラのＨＢｃ配列で約５％以下のアミノ酸残基が保存的置換されてあるアミノ酸残基配列を有する、前記リコンビナントＢ型肝炎ウイルスコアタンパク質キメラ分子。
【請求項２４】
ドメインＩＩの前記異種エピトープがＢ細胞エピトープである、請求項２３に記載のリコンビナントＨＢｃキメラタンパク質分子。
【請求項２５】
アミノ酸残基７６から８５の間のＨＢｃ配列は存在するが、前記異種Ｂ細胞エピトープで中断される、請求項２４に記載のリコンビナントＨＢｃキメラタンパク質分子。
【請求項２６】
前記Ｂ細胞エピトープが下記から成る群から選択される病原体に存在するアミノ酸配列である、請求項２４に記載のリコンビナントＨＢｃキメラタンパク質分子：肺炎連鎖球菌（Streptococcus pneumonia）、クリプトスポリジウム・パルブム（Cryptosporidium parvum）、ＨＩＶ、口蹄疫ウイルス、インフルエンザウイルス、ペスト菌（Yersinia pestis）、インフルエンザ菌（Haemophilus influenzae）、モラクセラ・カタラーリス（Moraxella catarrhalis）、ポルフィロモナス・ギンギバリス（Porphyromonas gingivalis）、クルーズトリパノソーマ（Trypanosoma cruzi）、熱帯熱マラリア原虫（Plasmodium falciparum）、三日熱マラリア原虫（Plasmodium vivax）、げっ歯類住血胞子虫（Plasmodium berghi）、プラスモジウム・ヨエリー（Plasmodium yoelli）、ストレプトコッカス・ソブリヌス（Streptococcus sobrinus）、フレキシナー菌（Shigella flexneri）、ＲＳＶ、プラスモジウム・エントアメーバ・ヒストリティカ（Plasmodium Entamoeba histolytica）、日本住血吸虫（Schistosoma japonicum）、マンソニ住血吸虫（Schistosoma mansoni）、およびエボラウイルス。
【請求項２７】
前記１５０位からＣ−末端までのＨＢｃにとって異種の配列がＨＢｃ残基１４０−１４９の１つとペプチド結合したＴ細胞エピトープである、請求項２３に記載のリコンビナントＨＢｃキメラタンパク質分子。
【請求項２８】
前記Ｔ細胞エピトープが、目的のキメラを免疫原として用いようとしている対象生物に由来する、請求項２７に記載のリコンビナントＨＢｃキメラタンパク質分子。
【請求項２９】
前記Ｃ−末端システイン残基が、前記キメラタンパク質分子のＣ−末端の約５つのアミノ酸残基内に位置する、請求項２３に記載のリコンビナントＨＢｃキメラタンパク質分子。
【請求項３０】
更に、Ｎ−末端に免疫原性エピトープを提示する、請求項２３に記載のリコンビナントＨＢｃキメラタンパク質分子。
【請求項３１】
更に、Ｃ−末端に免疫原性エピトープを提示する、請求項２３に記載のリコンビナントＨＢｃキメラタンパク質分子。
【請求項３２】
免疫原性粒子として存在する請求項１〜３１のいずれか１項に記載のリコンビナントＨＢｃキメラタンパク質分子であって、
前記粒子は実質的に核酸と結合せず、さらに前記粒子は、前記Ｃ−末端システイン残基を欠くか、またはキメラ分子内に存在するＣ−末端システイン残基が別の残基に置換されてあるがその他の点では同一のＨＢｃキメラから生成される粒子よりも安定である、前記免疫原性粒子として存在するリコンビナントＨＢｃキメラタンパク質分子。
【請求項３３】
約１．２から約１．７の２８０／２６０吸収比を示す請求項３２に記載の免疫原性粒子として存在するリコンビナントＨＢｃキメラタンパク質分子。
【請求項３４】
前記リコンビナントキメラＨＢｃタンパク質分子の長さが約４３５までのアミノ酸残基である請求項３２に記載の免疫原性粒子として存在するリコンビナントＨＢｃキメラタンパク質分子。
【請求項３５】
前記リコンビナントキメラＨＢｃタンパク質分子の長さが約１７５から約２４０アミノ酸残基である請求項３２に記載の免疫原性粒子として存在するリコンビナントＨＢｃキメラタンパク質分子。
【請求項３６】
医薬として許容できる希釈剤に溶解または分散された免疫誘発に有効な量の請求項３２に記載の免疫原性粒子として存在するリコンビナントＨＢｃキメラタンパク質分子を含むワクチンまたは接種物。
【請求項３７】
前記リコンビナントキメラＨＢｃタンパク質分子が、約１７５から約２４０のアミノ酸残基の長さを有し、かつ、前記免疫原性粒子が、約１．４から約１．６の２８０ｎｍ対２６０ｎｍ吸収比を示す、請求項３６に記載のワクチンまたは接種物。
【請求項３８】
非経口投与用に適用させた請求項３６に記載のワクチンまたは接種物。
【請求項３９】
粘膜免疫用に適用させた請求項３６に記載のワクチンまたは接種物。
【請求項４０】
前記リコンビナントキメラＨＢｃタンパク質分子粒子が植物組織に存在する、請求項３６に記載のワクチンまたは接種物。
【請求項４１】
前記リコンビナントキメラＨＢｃタンパク質分子粒子が、腸チフス菌（S. typhi）、ネズミチフス菌（S. typhimurium）またはネズミチフス菌−大腸菌ハイブリッドの弱毒株に存在する、請求項３６に記載のワクチンまたは接種物。
【請求項４２】
さらにアジュバントを含む請求項３６に記載のワクチンまたは接種物。
【請求項４３】
前記アジュバントがミョウバンである請求項４２に記載のワクチンまたは接種物。
【請求項４４】
前記アジュバントが、ムラミルジペプチド、７−置換−８−オキソ−もしくは８−スルホ−グアノシン誘導体、モノホスホリル脂質Ａ、アルミニウムもしくはカルシウム塩から成る群から選択される小分子である、請求項４２に記載のワクチンまたは接種物。
【請求項４５】
前記アジュバントが、前記免疫原性粒子および前記医薬として許容できる希釈剤とともに乳化されて水相および油相を有する乳液を提供する油である、請求項４２に記載のワクチンまたは接種物。
【請求項４６】
前記乳液の油相がスクァレン又はスクァランを含む、請求項４５に記載のワクチンまたは接種物。
【請求項４７】
前記乳液の水相および油相が、ソルビタンまたはマンニッドＣ12−Ｃ24脂肪酸エステルである乳化剤によって乳化される、請求項４５に記載のワクチンまたは接種物。
【請求項４８】
請求項１〜３１のいずれか１項に記載のリコンビナントＨＢｃタンパク質分子をコードする核酸セグメント、またはその変種、類似体もしくは相補物。
【請求項４９】
請求項１〜３１のいずれか１項に記載のリコンビナントＨＢｃタンパク質分子をコードする核酸セグメント、またはその変種、類似体もしくは相補物に機能できるように連結されたベクター、および適合ホスト生物中で前記遺伝子の発現を駆動させるために適したプロモーターを含むリコンビナント核酸分子。
【請求項５０】
請求項４９に記載のリコンビナント核酸分子で形質転換されたホスト細胞。
【請求項５１】
前記ホスト細胞が、ＣＨＯ、ＶＥＲＯもしくはＣＯＳ細胞、大腸菌、ビール酵母菌、ピキア・パストリス・ティフィー（Pichia pastoris typhi）、ネズミチフス菌およびネズミチフス菌−大腸菌ハイブリッドから成る群から選択される、請求項５０に記載の形質転換ホスト細胞。
【請求項５２】
ホスト動物で免疫反応を誘発するための請求項３６に記載のワクチンまたは接種物の製造のための、免疫誘発に有効な量の請求項３２に記載の免疫原性粒子として存在するリコンビナントＨＢｃキメラタンパク質分子の使用。
【請求項５３】
ホスト動物で免疫反応を誘発するための請求項３７に記載のワクチンまたは接種物の製造のための、免疫誘発に有効な量の請求項３２に記載の免疫原性粒子として存在するリコンビナントＨＢｃキメラタンパク質分子の使用。
【請求項５４】
ホスト動物で免疫反応を誘発するための請求項４２に記載のワクチンまたは接種物の製造のための、免疫誘発に有効な量の請求項３２に記載の免疫原性粒子として存在するリコンビナントＨＢｃキメラタンパク質分子の使用。
【請求項５５】
ホスト動物で免疫反応を誘発するための請求項４３に記載のワクチンまたは接種物の製造のための、免疫誘発に有効な量の請求項３２に記載の免疫原性粒子として存在するリコンビナントＨＢｃキメラタンパク質分子の使用。
【図１】
【図２Ａ】
【図２Ｂ】
【図２Ｃ】
【図３】
【図４】
【図５】
【図６】
【図７Ａ】
【図７Ｂ】
【図８】
【図９】
【図２Ａ】
【図２Ｂ】
【図２Ｃ】
【図３】
【図４】
【図５】
【図６】
【図７Ａ】
【図７Ｂ】
【図８】
【図９】
【公開番号】特開２０１２−１３９２３７（Ｐ２０１２−１３９２３７Ａ）
【公開日】平成２４年７月２６日（２０１２．７．２６）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２０１２−８８６７９（Ｐ２０１２−８８６７９）
【出願日】平成２４年４月９日（２０１２．４．９）
【分割の表示】特願２００２−５１９６０６（Ｐ２００２−５１９６０６）の分割
【原出願日】平成１３年８月１６日（２００１．８．１６）
【出願人】（５０６３４３３９１）セルデックス セラピューティックス リミテッド (2)
【Ｆターム（参考）】
【公開日】平成２４年７月２６日（２０１２．７．２６）
【国際特許分類】
【出願日】平成２４年４月９日（２０１２．４．９）
【分割の表示】特願２００２−５１９６０６（Ｐ２００２−５１９６０６）の分割
【原出願日】平成１３年８月１６日（２００１．８．１６）
【出願人】（５０６３４３３９１）セルデックス セラピューティックス リミテッド (2)
【Ｆターム（参考）】
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