自動化放射合成
本発明は、ＧＡＢＡA受容体のインビボイメージングのために有用な放射性フッ素化化合物を得るための方法を提供する。本発明の方法は高い収率を与え、Ｆａｓｔｌａｂ（商標）のような自動化合成装置上で簡便に実施例できる。本発明のさらに別の態様は、本発明の自動化合成方法を実施するのに適したカセットである。本発明の方法で有用な新規前駆体化合物もまた、本発明の方法によって得られる若干の新規化合物と共に提供される。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、インビボイメージング、特に中枢神経系（ＣＮＳ）のγ−アミノ酪酸（ＧＡＢＡ）受容体のインビボイメージングに関する。本発明は、放射性フッ素化ＧＡＢＡ受容体アンタゴニスト化合物の自動化合成に適した方法を提供する。
【背景技術】
【０００２】
γ−アミノ酪酸（ＧＡＢＡ）は、ヒトの脳における最も重要な抑制性神経伝達物質である。ＧＡＢＡ受容体は膜貫通受容体であり、２つの主なタイプ、即ちＧＡＢＡA受容体及びＧＡＢＡB受容体に分けられる。ＧＡＢＡA受容体は、これまで薬理学的開発の主要な対象となってきた。多くのＧＡＢＡA受容体サブタイプが発見され、これらのサブタイプに対して選択的な新規化学構造が開発されている。ＧＡＢＡA受容体が正常に活性化されれば、塩化物イオンがその細孔を選択的に通過する。この塩化物イオンチャンネルゲーティングは、膜電位を静止レベル付近に安定化することにより、ニューロンに対して一般に抑制的である。
【０００３】
ＧＡＢＡA受容体神経伝達の欠陥は、ＧＡＢＡA受容体の減少或いは例えばＧＡＢＡA受容体遺伝子の遺伝的突然変異、外傷性脳損傷又は薬学的傷害に原因するＧＡＢＡA受容体の機能欠陥によって引き起こされることがあり、てんかん、不安障害、パーキンソン病及び慢性疼痛をはじめとする若干の神経学的及び精神医学的障害に関係している。したがって、ＧＡＢＡA受容体に対して選択的な放射性リガンドの開発は、生きているヒト患者、特にＧＡＢＡA受容体神経伝達の欠陥に関連する障害に罹患している患者における脳イメージング検査に関して価値がある。
【０００４】
（フルマゼピルとしても知られる）フルマゼニル（コード名Ｒｏ １５−１７８８、商品名Ａｎｅｘａｔｅ、Ｌａｎｅｘａｔ、Ｍａｚｉｃｏｎ、Ｒｏｍａｚｉｃｏｎ）はイミダゾ［１，５−ａ］［１，４］ベンゾジアゼピンであって、これはＣＮＳにおけるＧＡＢＡA受容体の中和性アロステリックモジュレーターである（Ｊｏｈｎｓｔｏｎ １９９６ Ｐｈａｒｍａｃｏｌ Ｔｈｅｒ；６９（３）：１７３−１９８）。これまで、フルマゼニルの最も普通の用途は、ベンゾジアゼピンの過量に対する解毒剤としてのものであった。これは、フルマゼニルがＧＡＢＡA受容体のベンゾジアゼピン結合部位における競合阻害によってベンゾジアゼピンの効果を逆転させるからである。その上、フルマゼニルはアゴニスト活性をほとんど又は全く有しないので、その放射性標識バージョンが陽電子放出断層撮影（ＰＥＴ）ラジオトレーサーとして開発されてきた。
【０００５】
［18Ｆ］ＦＭＺは、ニトロ前駆体の直接放射性フッ素化によって18Ｆが導入されている点を除き、フルマゼニルと同じ化学式を有している。
【０００６】
【化１】
【０００７】
［18Ｆ］ＦＭＺは、高い親和性（Ｋi＝約０．５ｎＭ）及び選択性をもってＧＡＢＡA受容体に結合する。Ｒｙｚｈｉｋｏｖ ｅｔ ａｌ（２００５ Ｎｕｃ Ｍｅｄ Ｂｉｏｌ；３２：１０９−１１６）は、ニトロ前駆体化合物からの［18Ｆ］ＦＭＺの製法を記載している。しかし、本発明者らによれば、この合成法は２．７〜７．７％という最適と言えない合成終了時（ＥＯＳ）収率を有することがわかった（本明細書中に比較例として記載されている）。これらのＥＯＳ収率は、Ｏｄａｎｏ ｅｔ ａｌ（Ｎｅｕｒｏｉｍａｇｅ ２００９ ４５（３）８９１−９０２）によって報告されたものと同等である。
【０００８】
本発明は、高い親和性をもってＧＡＢＡA受容体に結合する放射性フッ素化薬剤を得るための方法であって、先行技術の方法に比べて改善された収率で該薬剤を得るための方法を探求するものである。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００９】
国際公開第２００５／０９７７１３号パンフレット
【発明の概要】
【００１０】
本発明は、ＧＡＢＡA受容体のインビボイメージングのために有用な放射性フッ素化化合物を得るための方法を提供する。本発明の方法は、先行技術の方法に比べて高い収率を与える。本発明のさらに別の態様は、本発明の自動化合成方法を実施するのに適したカセットである。本発明の方法で有用な新規前駆体化合物もまた、本発明の方法によって得られる特定の新規放射性フッ素化化合物と共に提供される。
【発明を実施するための形態】
【００１１】
一態様では、本発明は、次の式Ｉの化合物を得るための方法であって、
【００１２】
【化２】
【００１３】
（式中、
Ｒ1及びＲ2の一方は18Ｆであって、他方は水素であり、
Ｒ3はＣ3-5複素環であるか、或いはＲ3はＣ（＝Ｏ）−Ｏ−Ｒ4（式中、Ｒ4は水素又は直鎖若しくは枝分れＣ1-4アルキルである。）である。）
（ｉ）次の式Ｉａの前駆体化合物を用意する段階、及び
【００１４】
【化３】
【００１５】
（式中、
Ｒ11及びＲ12の一方は脱離基であって、他方は水素であり、
Ｒ11が前記脱離基である場合、それはトリ−Ｃ1-3アルキルアンモニウム及び−Ｉ+−Ａｒ（式中、Ａｒは１以上のＲ*基で置換されたフェニルであり、Ｒ*は水素、ニトロ、シアノ、ハロゲン、Ｃ1-10ヒドロキシアルキル、Ｃ2-10カルボキシアルキル、Ｃ1-10アルキル、Ｃ2-10アルコキシアルキル、Ｃ1-10ヒドロキシアルキル、Ｃ1-10アミノアルキル、Ｃ1-10ハロアルキル、Ｃ6-14アリール、Ｃ3-12ヘテロアリール、Ｃ3-20アルキルアリール、Ｃ2-10アルケニル及びＣ2-10アルキニルから選択される。）から選択され、
Ｒ12が前記脱離基である場合、それはニトロ、トリ−Ｃ1-3アルキルアンモニウム及び−Ｉ+−Ａｒ（式中、ＡｒはＲ11に関して上記に定義した通りである。）から選択され、
Ｒ13は式ＩのＲ3に関して定義した通りである。）
（ｉｉ）前記前駆体化合物を適当な［18Ｆ］フッ化物イオン源と反応させる段階
を含んでなる方法を提供する。
【００１６】
「前駆体化合物」は、検出可能なラベルの好都合な化学形態との化学反応が部位特異的に起こり、最小数の段階（理想的にはただ１つの段階）で反応を実施でき、かつ格別の精製の必要なしに（理想的にはいかなる追加の精製も必要なしに）所望のインビボイメージング剤が得られるように設計された、放射性標識化合物の非放射性誘導体からなる。かかる前駆体化合物は合成品であり、良好な化学純度で簡便に得ることができる。前駆体化合物は、任意には前駆体化合物のある種の官能基に関して保護基を含むことができる。
【００１７】
「脱離基」は、上記に定義した前駆体化合物の置換基であって、前駆体化合物が適当な［18Ｆ］フッ化物イオン源と反応した場合に18Ｆで置き換えられ、それにより18Ｆを部位特異的に組み込んで式Ｉの所望放射性フッ素化化合物の生成を可能にするものである。
【００１８】
「保護基」という用語は、望ましくない化学反応を阻止又は抑制するが、分子の残部を変質させない十分に温和な条件下で問題の官能基から脱離させ得るのに十分な反応性を有するように設計された基を意味する。脱保護後には所望の生成物が得られる。保護基は当業者にとって公知であり、アミン基に関してはＢｏｃ（ここでＢｏｃはｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニルである。）、Ｆｍｏｃ（ここでＦｍｏｃはフルオレニルメトキシカルボニルである。）、トリフルオロアセチル、アリルオキシカルボニル、Ｄｄｅ［即ち、１−（４，４−ジメチル−２，６−ジオキソシクロヘキシリデン）エチル］及びＮｐｙｓ（即ち、３−ニトロ−２−ピリジンスルフェニル）から適宜に選択され、カルボキシル基に関してはメチルエステル、ｔｅｒｔ−ブチルエステル及びベンジルエステルから適宜に選択される。ヒドロキシル基に関しては、好適な保護基は、メチル、エチル又はｔｅｒｔ−ブチル、アルコキシメチル又はアルコキシエチル、ベンジル、アセチル、ベンゾイル、トリチル（Ｔｒｔ）、又はテトラブチルジメチルシリルのようなトリアルキルシリルである。さらに他の保護基の使用は、‘Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ Ｇｒｏｕｐｓ ｉｎ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ’，Ｔｈｅｏｒｏｄｏｒａ Ｗ．Ｇｒｅｅｎｅ ａｎｄ Ｐｅｔｅｒ Ｇ．Ｍ．Ｗｕｔｓ（Ｔｈｉｒｄ Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ，１９９９）に記載されている。
【００１９】
単独で又は別の基の一部として使用される「アルキル」という用語は、本明細書中では、任意の直鎖、枝分れ又は環状の飽和若しくは不飽和ＣnＨ2n+1基として定義される。
【００２０】
単独で又は別の基の一部として使用される「アリール」という用語は、本明細書中では、単環式又は多環式芳香族炭化水素或いは単環式又は多環式ヘテロ芳香族炭化水素から導かれる任意のＣ6-14分子断片又は基として定義される。
【００２１】
「ハロゲン」という用語は、フッ素、塩素、臭素及びヨウ素から選択される基を意味する。
【００２２】
「ニトロ」という用語は−ＮＯ2基をいう。
【００２３】
「シアノ」という用語は−ＣＮ基をいう。
【００２４】
「カルボキシアルキル」という用語は、上記に定義したアルキル基が１以上の−ＣＯＯＨで置換されたものをいう。
【００２５】
「アルコキシアルキル」という用語はアルキルエーテル基をいい、ここでアルキルという用語は上記に定義した通りである。
【００２６】
「ヒドロキシアルキル」という用語は、上記に定義したアルキル基において、１以上の水素原子が−ＯＨ基で置き換えられたものをいう。
【００２７】
「アミノアルキル」という用語は、上記に定義したアルキル基において、１以上の水素原子が−ＮＨ2基で置き換えられたものをいう。
【００２８】
「ハロアルキル」という用語は、上記に定義したアルキル基において、１以上の水素原子が本明細書中に提供したハロゲンで置き換えられたものをいう。
【００２９】
「ヘテロアリール」という用語は、上記に定義したアリール基において、１以上の炭素原子がＯ、Ｎ及びＳから選択されたヘテロ原子で置き換えられたものをいう。
【００３０】
「アルキルアリール」という用語は、上記に定義したアルキル基において、１以上の水素原子が上記に定義したアリール基で置き換えられたものをいう。
【００３１】
「複素環」という用語は、脂肪族又は芳香族環式基において、環が窒素、酸素及び硫黄から選択された１以上のヘテロ原子を含むものをいう。
【００３２】
「アルケニル」という用語は、１以上の二重結合を有する直鎖又は枝分れ炭化水素基を意味する。
【００３３】
「アルキニル」という用語は、１以上の三重結合を有する直鎖又は枝分れ炭化水素基を意味する。
【００３４】
Ｒ1が18Ｆである本発明の方法の好ましい実施形態では、Ｒ11はトリメチルアンモニウム又は−Ｉ+−Ａｒである。
【００３５】
本発明の方法の最も好ましい実施形態では、Ｒ2が18Ｆである。Ｒ2が18Ｆである場合、Ｒ12はニトロ、トリメチルアンモニウム又は−Ｉ+−Ａｒであることが好ましい。Ｒ2が18Ｆである場合、Ｒ12はニトロであることが最も好ましい。
【００３６】
式ＩのＲ3及び式ＩａのＲ13は同一てあり、好ましくはＣ（＝Ｏ）−Ｏ−Ｒ4である。式中、Ｒ4は直鎖又は枝分れＣ1-4アルキルであり、好ましくはメチル、エチル、イソプロピル又はｔｅｒｔ−ブチルであり、特に好ましくはエチルである。
【００３７】
Ｙａｎｇ ｅｔ ａｌ（２００９ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ；６：１０３６−１０４０）によって開示された反応スキームを改変することで、Ｒ11が脱離基である式Ｉａの前駆体化合物を得ることができる。スキーム１は、いかにして前駆体化合物が得られるかを示している。
【００３８】
【化４】
【００３９】
スキーム１では、Ｒ11がトリアルキルアンモニウムである場合にＲ21はＮＯ2であり、Ｒ11がヨードニウム塩である場合にＲ21は臭素である。Ｒ13は式Ｉａに関して定義した通りである。後の段階で所望の脱離基を導入するために必要な化学反応を実行するように準備された適当なアミノ安息香酸化合物ａをトリホスゲンと反応させることで、ベンゾキサジン−２，４−ジオン中間体ｂを得る。ＤＭＳＯ中におけるｂとサルコシンとの反応はベンゾジアゼピンｃを生じる。この時点において、Ｒ11がトリアルキルアンモニウムである場合、化合物ｃのＲ21は段階（ｉ）でトリアルキルアンモニウムに転化され、次いで段階（ｉｉ）を実施することで化合物ｄが得られる。Ｒ11がヨードニウム塩である場合、Ｒ21は段階（ｉｉ）を実施した後の段階（ｉｉｉ）でヨードニウム塩に転化される。
【００４０】
Ｒ12が脱離基である場合には、スキーム２を用いて前駆体化合物を得ることができる。
【００４１】
【化５】
【００４２】
Ｒ22は上記スキーム１でＲ21に関して定義した通りである。化合物ｅは、標準的な化学変換により、商業的に入手可能な２，６−ジニトロ安息香酸出発原料から得られる。化合物ｅをスキーム１の化合物ａに関して記載したように処理することでベンゾジアゼピン中間体ｇが得られ、次いでこれが所望の脱離基を導入する前（即ち（ｉｉ）、次いで（ｉｉｉ）により）又は導入した後（即ち（ｉ）、次いで（ｉｉ）により）に所望のイミダゾベンゾジアゼピンに変換される。段階（ｉ）〜（ｉｉｉ）はスキーム１に関して上記に記載した通りである。
【００４３】
［18Ｆ］フッ化物イオンは、通例、［18Ｏ］水ターゲットの放射線照射の生成物である水溶液として得られる。広く行われているやり方では、［18Ｆ］フッ化物イオンが求核性放射標識反応での使用に適するように、［18Ｆ］フッ化物イオンを反応性求核試薬に転化するための様々な段階が実施される。これらの段階は、［18Ｆ］フッ化物イオンから水を除去すること及び適当な対イオンを供給することを含んでいる（Ｈａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ Ｒａｄｉｏｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ ２００３ Ｗｅｌｃｈ ＆ Ｒｅｄｖａｎｌｙ ｅｄｓ．ｃｈ．６ １９５−２２７）。次いで、無水溶媒を用いて求核性放射性フッ素化反応が実施される（Ａｉｇｂｉｒｈｉｏ ｅｔ ａｌ １９９５ Ｊ Ｆｌｕｏｒ Ｃｈｅｍ；７０：２７９−８７）。フッ化物イオンの反応性を高めると共に、水の存在に起因するヒドロキシル化副生物の生成を回避するため、通例は反応に先立って［18Ｆ］フッ化物イオンから水が除去され、放射性フッ素化反応は無水反応溶媒を用いて実施される（Ａｉｇｂｉｒｈｉｏ ｅｔ ａｌ １９９５ Ｊ Ｆｌｕｏｒ Ｃｈｅｍ；７０：２７９−８７）。［18Ｆ］フッ化物イオンからの水の除去は、［18Ｆ］フッ化物イオンを「裸」にするといわれる。これは、求核フッ化物に関する先行技術では、フッ化物イオンの反応性を高めると共に水の存在に起因するヒドロキシル化副生成物の生成を回避するために必要な段階と見なされている（Ｍｏｕｇｈａｍｉｒ ｅｔ ａｌ １９９８ Ｔｅｔｔ Ｌｅｔｔｓ；３９：７３０５−６）。
【００４４】
放射性フッ素化反応に関して［18Ｆ］フッ化物イオンの反応性を向上させるために使用される追加の段階は、水の除去に先立ってカチオン性対イオンを添加することである。対イオンは、無水反応溶媒中において、フッ化物イオンの溶解性を維持するのに十分な溶解度を有するべきである。使用されてきた対イオンには、ルビジウムやセシウムのような大きいが軟らかい金属イオン、Ｋｒｙｐｔｏｆｉｘ（商標）のようなクリプタンドと錯体化されたカリウム、又はテトラアルキルアンモニウム塩がある。本発明の方法で使用するのに好ましい適当な［18Ｆ］フッ化物イオン源は、［18Ｆ］フッ化カリウム及び［18Ｆ］フッ化セシウムから選択される。［18Ｆ］フッ化カリウムが最も好ましく、Ｋｒｙｐｔｏｆｉｘ（商標）のようなクリプタンドと錯体化された場合に特に好ましい。これは、無水溶媒中におけるそれの溶解性が良く、フッ化物イオンの反応性を高めるからである。
【００４５】
好ましい実施形態では、本発明の方法はさらに、
（ｉｉｉ）過剰の［18Ｆ］フッ化物イオンを除去する段階、及び／又は
（ｉｖ）存在する場合には保護基を除去する段階、及び／又は
（ｖ）有機溶媒を除去する段階、及び／又は
（ｖｉ）得られた化合物を生体適合性キャリヤーと共に製剤化して、哺乳動物への投与に適した放射性医薬組成物を得る段階
を含み得る。
【００４６】
「生体適合性キャリヤー」は、放射性医薬組成物が生理学的に認容され得るようにして（即ち、毒性又は過度の不快感なしに哺乳動物体に投与できるようにして）放射性フッ素化化合物を懸濁又は溶解するための流体（特に液体）である。生体適合性キャリヤーは、好適には、無菌のパイロジェンフリー注射用水、（有利には注射用の最終生成物が等張性又は非低張性になるように平衡させ得る）食塩水のような水溶液、或いは１種以上の張度調整物質（例えば、血漿陽イオンと生体適合性対イオンとの塩）、糖（例えば、グルコース又はスクロース）、糖アルコール（例えば、ソルビトール又はマンニトール）、グリコール（例えば、グリセロール）又は他の非イオン性ポリオール物質（例えば、ポリエチレングリコール、プロピレングリコールなど）の水溶液のような注射可能なキャリヤー液体である。生体適合性キャリヤーはまた、エタノールのような生体適合性有機溶媒を含んでいてもよい。かかる有機溶媒は、親油性の高い化合物又は配合物を可溶化するために有用である。好ましくは、生体適合性キャリヤーはパイロジェンフリー注射用水、等張食塩水又はエタノール水溶液である。静脈内注射用生体適合性キャリヤーのｐＨは、好適には４．０〜１０．５の範囲内にある。
【００４７】
現在、特にＰＥＴトレーサーとして使用するための18Ｆ標識化合物の合成は、例えばＴｒａｃｅｒｌａｂ（商標）及びＦａｓｔｌａｂ（商標）（いずれもＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ社製）のような自動化放射合成装置によって最も簡便に実施されている。しかし、先行技術の方法は自動化に適していない。本明細書中の比較例１では、ニトロマゼニルの放射性フッ素化がＦａｓｔｌａｂ上での［18Ｆ］ＦＭＺの自動化合成にとって理想的なアプローチでないことが実証されている。これは、低い収率、及び［18Ｆ］フッ化物イオンの効果的な組込みを達成するために必要な温度のためである。現存するＦａｓｔｌａｂ反応器は、１３０℃以下の温度で使用できるシクロオレフィンコポリマー（ＣＯＣ）で作製されている。ニトロ前駆体から［18Ｆ］ＦＭＺを製造するために使用される先行技術の方法は、およそ１６０℃の温度を必要とする。これらの温度では、ＣＯＣ反応器は収納性を失う。
【００４８】
下記の実験例で実証されるように、ニトロマゼニル上の脱離基をニトロからトリメチルアンモニウムに変更すれば、７％のＥＯＳ収率を維持しながら反応温度を１３０℃に低下させることができた。ニトロ脱離基をアミドカルボニルに対するメタ位からアミドカルボニルに対するオルト位に移動すれば、やはり反応温度を低下させながらＥＯＳ収率を２．７〜７．７％から１８〜２３％に向上させることができた。
【００４９】
特に好ましい実施形態では、本発明の方法は自動化される。放射化学は、「カセット」を装置に取り付けることにより、自動化合成装置上で実施される。通常、かかるカセットは流体通路、反応器、及び試薬バイアル並びに放射合成後の清掃段階で使用される任意の固相抽出カートリッジを受け入れるためのポートを含んでいる。
【００５０】
本発明のさらに別の態様では、本発明の自動化方法を実施するためのカセットであって、
（ｉ）上記に好適なもの及び好ましいものとして定義した前駆体化合物を含む容器、及び
（ｉｉ）上記に好適なもの及び好ましいものとして定義した適当な［18Ｆ］フッ化物イオン源を用いて容器を溶出するための手段
を含んでなるカセットが提供される。
【００５１】
かかるカセットはまた、過剰の18Ｆを除去するためのイオン交換カートリッジも含み得る。自動化合成のために必要な試薬、溶媒及び他の消耗品もまた、濃度、容量、送出時間などに関する最終ユーザーの要求条件を満たすように自動化合成装置を運転させるソフトウェアを保持したコンパクトディスクのようなデータ媒体と共に含めることができる。
【００５２】
別の態様では、本発明は、本発明の方法で定義された式Ｉの化合物であって、Ｒ1が水素であり、Ｒ2が［18Ｆ］であり、Ｒ4がエチル、イソプロピル又はｔｅｒｔ−ブチル、最も好ましくはエチルである式Ｉの化合物を提供する。
【００５３】
さらに別の態様では、本発明は、上記に定義された式Ｉａの前駆体化合物であって、Ｒ11及びＲ12の一方がトリメチルアンモニウム又は−Ｉ+−Ａｒであり、他方が水素である式Ｉａの前駆体化合物を提供する。好ましくは、Ｒ11及びＲ12の一方がトリメチルアンモニウムであり、他方が水素である。最も好ましくは、Ｒ12がニトロ、トリメチルアンモニウム又は−Ｉ+−Ａｒであり、最も特に好ましくは、Ｒ12がニトロである。Ｒ13は、好ましくはＣ（＝Ｏ）−Ｏ−Ｒ4（式中、Ｒ4はエチル、イソプロピル又はｔｅｒｔ−ブチルであり、好ましくはエチルである。）である。
【実施例】
【００５４】
実施例の簡単な説明
比較例１は、ニトロ前駆体化合物からの［18Ｆ］フルマゼニルの製法を記載している。
【００５５】
実施例２は、トリメチルアンモニウム前駆体化合物からの［18Ｆ］フルマゼニルの製法を記載している。
【００５６】
実施例３は、［18Ｆ］フルマゼニルに対するヨードニウム塩前駆体化合物の製法を記載している。
【００５７】
実施例４は、ニトロ前駆体化合物からのｏ−［18Ｆ］フルマゼニルの製法を記載している。
【００５８】
実施例５は、ニトロ前駆体化合物からのｏ−［18Ｆ］フルマゼニルｔｅｒｔ−ブチルエステルの製法を記載している。
【００５９】
実施例６は、ニトロ前駆体化合物からのｏ−［18Ｆ］フルマゼニルイソプロピルエステルの製法を記載している。
【００６０】
実施例７は、ｏ−［18Ｆ］フルマゼニルのインビボ体内分布を評価するための方法を記載している。
【００６１】
実施例中で使用される略語のリスト
ａｑ 水性
ＣＩＰ ２−クロロ−２，３−ジメチルイミダゾリジウムヘキサフルオロホスフェ ート
ＤＣＭ ジクロロメタン
ＤＩＰＥＡ Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン
ＤＭＦ ジメチルホルムアミド
ＤＭＳＯ ジメチルスルホキシド
ＥＯＳ 合成終了時
Ｅｔ エチル
ｇ グラム
ｈ 時間
ＨＰＬＣ 高速液体クロマトグラフィー
ＬＣＭＳ 液体クロマトグラフィー質量分析法
ＭｅＣＮ アセトニトリル
ｍｉｎ 分
ｍＬ ミリリットル
ｍＭ ミリモル濃度
ｍｍｏｌ ミリモル
ｍｏｌ モル
ＱＭＡ 第四級メチルアンモニウム
Ｒｆ 保持因子
ｒｔ 室温
ＳＰＥ 固相抽出
ＴＢＡ テトラブチルアンモニウム
ＴＥＡ トリエチルアミン
ＴＨＦ テトラヒドロフラン
ＴＬＣ 薄層クロマトグラフィー
ＵＶ 紫外
比較例１：ニトロマゼニルからの［18Ｆ］フルマゼニル（［18Ｆ］ＦＭＺ）の製法
比較例１（ｉ）：４−メチル−７−ニトロ−３，４−ジヒドロ−１Ｈ−ベンゾ［ｅ］［１，４］ジアゼピン−２，５−ジオン（１）の合成
【００６２】
【化６】
【００６３】
フラスコを撹拌しながらゆっくりと１４０℃に加熱することで、商業的に入手可能な５−ニトロイサト酸無水物（４０ｇ、０．１９２ｍｏｌ）をＤＭＳＯ（５０ｍＬ）に溶解した。溶液にサルコシン（１７．１ｇ、０．１９２ｍｏｌ）を少しずつゆっくりと添加した。添加後、１４０℃で溶液は泡立ち始めた（ＣＯ2の生成）。混合物を２．５時間撹拌し続けた。混合物を放冷し、ビーカー内の氷冷水中にゆっくりと注ぎ込んだ。溶液をガラス棒で撹拌したところ、黄色の固体が析出した。固体を濾過によって分離し、水で数回洗浄し、次いで４０℃の真空オーブン内で一晩乾燥した。単離された黄色の固体は、収率７８％の所望生成物１であることが確認された。
【００６４】
1Ｈ ＮＭＲ（Ｄ6−ＤＭＳＯ）：δ ３．１４（３Ｈ，ｓ，ＮＣＨ3）、３．９７（２Ｈ，ｓ，ＮＣＨ2ＣＯ）、７．３０（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝９Ｈｚ，ＨＮＣＣＨＣＨ）、８．３３（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝９ ａｎｄ ３Ｈｚ，ＣＨＣＨＣＮＯ2ＣＨ）、８．３３（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝３Ｈｚ，ＯＣ−ＣＣＨ）、１１．０５（１Ｈ，ｓ，ＮＨ）。
【００６５】
比較例１（ｉｉ）：ニトロマゼニル（２）の製造
【００６６】
【化７】
【００６７】
中間体１（１ｇ、４．３ｍｍｏｌ）をＴＨＦ（１０ｍＬ）及びＤＭＦ（２ｍＬ）に溶解した溶液に、窒素下０℃でカリウムｔｅｒｔ−ブトキシド（０．６ｇ、５ｍｍｏｌ）を添加した。３０分後、反応物を０℃に冷却し、ジエチルクロロホスフェート（０．７ｍＬ、５ｍｍｏｌ）の滴下で処理し、３０分間撹拌した。他方、エチルイソシアノアセテート（０．６ｍＬ、５ｍｍｏｌ）をＴＨＦ（１０ｍＬ）に溶解した撹拌溶液に、窒素下０℃でカリウムｔｅｒｔ−ブトキシド（０．６ｇ、５ｍｍｏｌ）を添加し、１５分間撹拌した。次いで、これを中間体１の混合物に０℃でゆっくりと添加した。これを０℃で０．５時間撹拌し、次いで室温でさらに２時間撹拌した。ＴＬＣ（酢酸エチル）は、ＵＶ及びＫＭｎＯ4により、出発原料（Ｒｆ ０．４）及び新しいスポット（Ｒｆ ０．２）を示した。
【００６８】
反応物を酢酸で奪活し、一晩撹拌し続けた。反応混合物を氷水中に注ぎ込んだ。これを酢酸エチルで抽出し、有機層を水及びブラインで洗浄し、乾燥し、濃縮して濃暗色の濃厚油状物を得た。これを、下記の条件を用いたクロマトグラフィーによって数回処理した。
１）ＤＣＭ／酢酸エチルを用いたＣｏｍｐａｎｉｏｎ（２回）
２）ベトロール／酢酸エチルを用いたＣｏｍｐａｎｉｏｎ（２回）
５０ｍｇの純物質２を無色の固体（収率４％）として得た。
【００６９】
1Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3）：δ １．３９（３Ｈ，ｔ，Ｊ＝７Ｈｚ，ＣＨ3）、３．２８（３Ｈ，ｓ，ＡｒＣＯＮＣＨ3）、４．３７（２Ｈ，ｑ，Ｊ＝７Ｈｚ，ＯＣＨ2）、４．４０（１Ｈ，ｂｒ ｓ，ＣＨ2）、５．２６（１Ｈ，ｂｒ ｓ，ＣＨ2）、７．６０（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．９Ｈｚ，ＡｒＣＨＣＨＣＮＯ2）、７．９４（１Ｈ，ｓ，ＮＣＨＮ）、８．４５（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝８．９ ａｎｄ ２．８Ｈｚ，ＡｒＣＨＣＨＣＮＯ2）、８．９５（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝２．５Ｈｚ，ＡｒＣＨＣＮＯ2）。
【００７０】
比較例１（ｉｉｉ）：［18Ｆ］フルマゼニル（［18Ｆ］ＦＭＺ）を得るためのニトロマゼニル（２）の放射性フッ素化
【００７１】
【化８】
【００７２】
ＴＲＡＣＥＲｌａｂ自動化合成モジュール（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ社）上で18Ｆ標識を行った。プレコンディショニング済みのＱＭＡカートリッジ上に［18Ｆ］フッ化物イオンを捕捉し、次いでテトラ−ｎ−ブチルアンモニウム重炭酸塩をＭｅＣＮ／水に溶解した溶液（ＭｅＣＮ １４００μＬ、水１００μＬ、ＴＢＡ・ＨＣＯ3 ２７ｍｇ）を用いてバイアル１から反応器に移した。窒素＋真空フローを使用しながら、溶液を１００℃で１０分間、次いで１２０℃で２０分間乾燥し、次いで５０℃に冷却した。
【００７３】
乾燥した［18Ｆ］フッ化物イオンに、ＤＭＦ（１ｍＬ）中のニトロマゼニル（１８．８ｍｇ）をバイアル３から添加した。反応混合物を１６０℃で３０分間加熱し、次いで５０℃に冷却した。反応混合物をバイアル５からの１０ｍＭリン酸（２．５ｍＬ）で希釈し、粗生成物管に移した。
【００７４】
次いで、粗生成物を分取ＨＰＬＣループに手動で移した。分取ＨＰＬＣは１７．５分の保持時間を有するピークを与えたが、これを水（１２ｍＬ）の入ったＴＲＡＣＥＲｌａｂの丸底フラスコ内にカットした。分取ＨＰＬＣシステムは液体フローシンチレーションカウンターを備えていた。
【００７５】
【表１】
【００７６】
丸底フラスコ内の混合物を、（１ｍＬのエタノール、次いで２ｍＬの水でプレコンディショニングを施した）ｔＣ１８ ｐｌｕｓ ｌｉｔｅ ＳＰＥカートリッジ上に捕捉した。ＳＰＥカートリッジを水（３ｍＬ）で洗浄し、ＥｔＯＨ（０．３ｍＬ）及び水（４．５ｍＬ）を用いて粗生成物をＰ６バイアル中に溶出した。
【００７７】
【表２】
【００７８】
実施例２：トリメチルアンモニウム前駆体化合物からの［18Ｆ］フルマゼニル（［18Ｆ］ＦＭＺ）の製法
実施例２（ｉ）：４−メチル−７−アミノ−３，４−ジヒドロ−１Ｈ−ベンゾ［ｅ］［１，４］ジアゼピン−２，５−ジオン（３）の合成
【００７９】
【化９】
【００８０】
ＴＨＦ／エタノールの１：１溶液１２０ｍＬ中に中間体１（３．４８ｇ、１５ｍｍｏｌ、製法は比較例１に記載）を懸濁した。懸濁液を窒素で処理し、次いで真空で処理した後、エタノール中に懸濁したＰｄ／Ｃ １０％（０．７ｇ）を添加した。次いで、反応器をＰａｒｒハイドロジェネーターに取り付け、水素圧（２０ｐｓｉ）下で撹拌しながら約３時間放置した。真空を用いて過剰の水素ガスを除去し、次いで溶液中に窒素をパージした。セライトを用いて触媒を濾別し、濾液を極小量のエタノールまで蒸発させた。白色の沈殿が生じたが、これを濾過によって分離し、真空下で乾燥することで、９１８ｍｇの所望物質３を３０％の収率で得た。
【００８１】
1Ｈ ＮＭＲ（ＤＭＳＯ）：δ ３．０７（３Ｈ，ｓ，ＮＣＨ3）、３．７４（２Ｈ，ｓ，ＮＣＨ2ＣＯ）、５．１９（２Ｈ，ｓ，ＮＨ2）、６．６９（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝８．６ ａｎｄ ２．５Ｈｚ，ＡｒＣＨＣＮＨ2）、６．７７（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．６Ｈｚ，ＡｒＣＨＣＮＨＣＯ）、６．９０（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝２．５Ｈｚ，ＣＯＣＣＨＣＮＨ2）、９．９７（１Ｈ，ｓ，ＮＨ）。
【００８２】
実施例２（ｉｉ）：４−メチル−７−ジメチルアミノ−３，４−ジヒドロ−１Ｈ−ベンゾ［ｅ］［１，４］ジアゼピン−２，５−ジオン（４）の合成
【００８３】
【化１０】
【００８４】
中間体３（３．０ｇ、１３ｍｍｏｌ）及び３７％ホルムアルデヒド水溶液（２１ｍＬ、０．２６ｍｏｌ）をアセトニトリルに溶解した０℃の溶液に、ＮａＢＨ３ＣＮ（４．８ｇ、７７ｍｍｏｌ）を少しずつ添加した。反応混合物を０℃で２時間撹拌し、次いで室温で１時間撹拌した。次いで、酢酸（１．４ｍＬ）を添加し、反応混合物をさらに２時間撹拌した。反応混合物をエチルエーテル中に注ぎ込み、２Ｎ ＫＯＨで洗浄し、塩基層を酢酸エチルで数回抽出した。有機相を集め、乾燥し、真空中で溶媒を除去することで、非晶質の帯黄色固体を得た。
【００８５】
注記：酢酸を添加すると、ガスの発生が認められ、反応は強く発熱性であった。
【００８６】
得られた固体を酢酸エチルでトリチュレートし、濾過によって単離し、ジエチルエーテルで洗浄することで、淡黄色の綿毛状固体を得た。プロトンＮＭＲにより、この物質は中間体４（２．９７ｇ、９８％）であることが確認された。
【００８７】
1Ｈ ＮＭＲ（ＤＭＳＯ）：δ ３．０９（３Ｈ，ｓ，ＮＣＨ3）、３．７７（２Ｈ，ｓ，ＮＣＨ2ＣＯ）、６．９２−６．９８（３Ｈ，ｍ，ＡｒＣＨＣＮ（ＣＨ3）2，ＡｒＣＨＣＮＨＣＯ，ＣＯＣＣＨＣＮ（ＣＨ3）2）、１０．０９（１Ｈ，ｓ，ＮＨ）。
【００８８】
実施例２（ｉｉｉ）：トリメチル（４−メチル−２，５−ジオキソ−２，３，４，５−テトラヒドロ−１Ｈ−ベンゾ［ｅ］［１，４］ジアゼピン−７−イル）アンモニウム（５）の合成
【００８９】
【化１１】
【００９０】
中間体４（２．９７ｇ、１３ｍｍｏｌ）をＤＣＭ（７５ｍＬ）に溶解し、窒素流下においてメチルトリフレート（１．６７ｍＬ、１５ｍｍｏｌ）を室温で滴下した。１分以内に、溶液から固体がクラッシュし始めた。１０分後、ＴＬＣ分析（酢酸エチル）はＳＭが消失したことを示した。したがって、反応は停止した。ジエチルエーテル（２０ｍＬ）を添加し、濾過により固体を白色の粘着性物質として単離した。反応は中間体５を定量的収率で与えた。
【００９１】
1Ｈ ＮＭＲ（ＤＭＳＯ）：δ ３．１５（３Ｈ，ｓ，ＣＯＮＣＨ3）、３．６１（９Ｈ，ｓ，Ｎ+（ＣＨ3）3）、３．９１（２Ｈ，ｓ，ＮＣＨ2ＣＯ）、７．２８（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝９．１９Ｈｚ，ＡｒＣＨＣＮＨＣＯ）、８．１０（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝３．０６ ａｎｄ ９．１９Ｈｚ，ＡｒＣＨＣＮ+（ＣＨ3）3）、８．２５（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝３．０６Ｈｚ，ＣＯＣＣＨＣＮ+（ＣＨ3）3）、１０．７３（１Ｈ，ｓ，ＮＨ）。
【００９２】
実施例２（ｉｖ）：トリメチルアンモニウム前駆体化合物（６）の合成
【００９３】
【化１２】
【００９４】
中間体５（２ｇ、５ｍｍｏｌ）をＴＨＦ（１５ｍＬ）及びＤＭＦ（１０ｍＬ）に溶解した溶液に、窒素下室温で水素化ナトリウム（鉱油中６０％分散液２４０ｍｇ、６ｍｍｏｌ）を添加した。４０分後、反応物を０℃に冷却し、ジエチルクロロホスフェート（１．０８ｍＬ、７．５ｍｍｏｌ）の滴下で処理し、３０分間撹拌した。他方、エチルイソシアノアセテート（０．６５６ｍＬ、６ｍｍｏｌ）をＤＭＦ（６ｍＬ）に溶解した撹拌溶液に、窒素下０℃で水素化ナトリウム（鉱油中６０％分散液２８０ｍｇ、７ｍｍｏｌ）を添加し、１５分間撹拌した。次いで、これを中間体５の混合物に０℃でゆっくりと添加した。これを０℃で０．５時間撹拌し、次いで室温で３０分間撹拌した。この時間後における粗生成物のＬＣＭＳ分析は所望質量の存在を示した。反応物を酢酸で奪活し、後処理した。
【００９５】
反応混合物を氷水中に注ぎ込んだ。これを酢酸エチルで抽出し、次いでＤＣＭで抽出した。有機層及び水のＬＣＭＳ分析は、所望物質が水層中に存在することを示唆した。したがって、（回転蒸発を用いて）これを乾固させ、次いで半分取ＨＰＬＣによって粗生成物を分析した。所望生成物６が２５％の収率で単離された。
【００９６】
ＨＰＬＣ条件：３０分間にわたる５〜９５％メタノール／水勾配、Ｌｕｎａ １０μ Ｃ１８（２）２５０ｘ５０ｍｍカラム。
【００９７】
1Ｈ ＮＭＲ（Ｄ2Ｏ）：δ １．３７（３Ｈ，ｔ，Ｊ＝７．１Ｈｚ，ＣＯＯＣＨ2ＣＨ3）、３．２２（３Ｈ，ｓ，ＮＣＨ3）、３．７３（９Ｈ，ｓ，Ｎ（ＣＨ3）3）、４．４１（２Ｈ，ｍ，ＣＯＯＣＨ2ＣＨ3）、４．（１Ｈ，ｂｒｄ，Ｊ＝１５．３Ｈｚ，ＮＣＨ2）、５．１３（１Ｈ，ｂｒｄ，Ｊ＝１５．３Ｈｚ，ＮＣＨ2）、７．９３（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝９．２Ｈｚ，ＡｒＣＨＣＮＨＣＯ）、８．２５（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝９．２ ａｎｄ ３．１Ｈｚ，ＡｒＣＨＣＮ+（ＣＨ3）3）、８．２７（１Ｈ，ｓ，ＡｒＮＣＨＮ）、８．４０（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝３．１Ｈｚ，ＣＯＣＣＨＣＮ+（ＣＨ3）3）。
【００９８】
実施例２（ｖ）：［18Ｆ］フルマゼニル（［18Ｆ］ＦＭＺ）を得るためのトリメチルアンモニウム前駆体化合物（６）の放射性フッ素化
【００９９】
【化１３】
【０１００】
［18Ｆ］フッ化物イオンをホイートンバイアルに移し、これにＴＢＡ・ＨＣＯ3（４００μＬ）を添加した。溶液をＮ2流（約０．５Ｌ／分）下において１１０℃で３０分間乾燥し、次いで室温に冷却した。
【０１０１】
乾燥した［18Ｆ］フッ化物イオンに、ＤＭＳＯ（１ｍＬ）中のトリメチルアンモニウム前駆体化合物（３１ｍｇ）を添加した。反応混合物を１３０℃で２５分間加熱し、次いで室温に冷却した。反応混合物をホイートンバイアルからＰ６バイアルに移した。ホイートンバイアルを水（１ｍＬ）ですすいでＰ６バイアルに移し、さらに３ｍＬの酢酸アンモニウム（５０ｍＭ）を添加した。反応混合物を精製用の分取ＨＰＬＣ（Ｈｉｃｈｒｏｍ ＡＣＥ Ｃ５ １０ｘ１００ｍｍカラム、溶媒Ａ＝５０ｍＭ酢酸アンモニウム，溶媒Ｂ＝ＭｅＣＮ、４ｍｌ／分、ＵＶ ２５４ｎｍ）上に装填した。
【０１０２】
分析ＨＰＬＣ（Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｌｕｎａ Ｃ１８（２）５０ｘ２ｍｍカラム、溶媒Ａ＝５０ｍＭ酢酸アンモニウム，溶媒Ｂ＝ＭｅＣＮ、０．４ｍＬ／分、ＵＶ ２５４ｎｍ）により、［18Ｆ］フルマゼニルが９５％の放射化学純度で得られたことが確認された。この方法を用いた［18Ｆ］フルマゼニル合成終了時収率は６％であった。
【０１０３】
実施例３：［18Ｆ］フルマゼニル（［18Ｆ］ＦＭＺ）用のヨードニウム塩前駆体化合物の製法
【０１０４】
【化１４】
【０１０５】
商業的に入手可能な５−ブロモイサト酸無水物（７）をサルコシンと共にＤＭＳＯ中において１５０℃で加熱した。これは中間体８を７５％の収率で与えた。反応スキーム中に示した条件を用いる環化により、中間体９が３０％の収率で得られた。中間体９及びヘキサメチル二スズ／Ｐｄ（ＰＰｈ3）4をマイクロ波中において１３０℃で１５分間加熱することで、スタンナン中間体１０を３５％の収率で得た。ヨードニウム転化は中間体１０及び（ジアセトキシヨード）ベンゼンを１：５の比で使用することで達成され、ＲＴで２４時間後に反応は完了した。所望のヨードニウム塩前駆体化合物１１は２１％の収率で得られた。
【０１０６】
実施例４：ｏ−ニトロマゼニルからのｏ−［18Ｆ］フルマゼニルの製法
【０１０７】
【化１５】
【０１０８】
実施例４（ｉ）：２−フルオロ−６−ニトロ安息香酸エチルエステル（１２）の製造
窒素流下０℃で２−フルオロ−６−ニトロ安息香酸（１．５ｇ、８ｍｍｏｌ）をＤＣＭ（３０ｍＬ）中に懸濁した。塩化オキサリル（１．５ｇ、１．０６ｍＬ、１２ｍｍｏｌ）をゆっくりと添加し、反応物を一晩撹拌し続けた。塩化アシルの生成はＴＬＣ（酢酸エチル）によって追跡できた。溶媒を真空中で除去し、残留物をＤＣＭ（２０ｍＬ）に再溶解した。エタノール（０．４ｇ、０．５ｍＬ、８ｍｍｏｌ）をＴＥＡ（０．８ｇ、１．１ｍＬ、８ｍｍｏｌ）と共に０℃で添加し、反応物を室温で３時間撹拌し続けた。この時間後、少量の混合物を1Ｈ及び19Ｆ ＮＭＲによって分析することで、１２の定量的生成が示された。
【０１０９】
反応混合物をＤＣＭ（２０ｍＬ）で希釈し、水（２×５０ｍＬ）で洗浄した。有機層を分離し、ＭｇＳＯ4上で乾燥し、濾過した。溶媒を除去乾固して褐色の油状物を得たが、これはやがて１２の白色結晶（１．５ｇ、８８％）を与えた。
【０１１０】
1Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ3）：δH １．３９（３Ｈ，ｔ，Ｊ＝７．１Ｈｚ，ＣＯＯＣＨ2ＣＨ3）、４．４７（２Ｈ，ｑ，Ｊ＝７．１Ｈｚ，ＣＯＯＣＨ2ＣＨ3）、７．４７（１Ｈ，ｔｄ，Ｊ＝８．３ ａｎｄ １．２Ｈｚ，ＮＯ2ＣＣＨＣＨＣＨＣＦ）、７．５９（１Ｈ，ｔｄ，Ｊ＝８．３ ａｎｄ ５．２Ｈｚ，ＮＯ2ＣＣＨＣＨＣＨＣＦ）、７．９８（１Ｈ，ｄｔ，Ｊ＝８．３ ａｎｄ ０．９Ｈｚ，ＮＯ2ＣＣＨＣＨＣＨＣＦ）；19ＦＮＭＲ（２８２ＭＨｚ，ＣＤＣｌ3）：δF −１１２．４。
【０１１１】
実施例４（ｉｉ）：中間体１３の製造
１２（３ｇ、０．０１４ｍｏｌ）及びエチル４−メチル−５−イミダゾールカルボキシレート（１．９６ｇ、０．０１３ｍｏｌ）を３０ｍＬのＤＭＳＯに溶解した。炭酸セシウム（４．８ｇ、０．０１４ｍｏｌ）を添加し、混合物を室温で３日間撹拌した。
【０１１２】
粗生成物を、３分間にわたる５〜９５％アセトニトリル／水勾配を用いたＬＣＭＳによって分析した。これは、正イオンとして３４８．０３の質量を有する新しい化学種を示した。
【０１１３】
ＴＬＣ（酢酸エチル）は、０．４のｒｆを有する新しいスポットを示した。
【０１１４】
反応混合物を氷水中に注ぎ込み、酢酸エチル（×１）で抽出し、次いでＤＣＭ（×３）で抽出した。有機層を合わせて濃縮し、フラッシュクロマトグラフィー（詳細は次頁に示す）用のシリカカラム上に液体装填した。生成物１３を７２％の収率（３．５ｇ）で単離した。
【０１１５】
1Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3）：δ １．１９（６Ｈ，ｔ，Ｊ＝７．０５Ｈｚ，ＣＯＯＯＣＨ2ＣＨ3）、１．４２（３Ｈ，ｔ，Ｊ＝７．０５Ｈｚ，ＣＯＯＣＨ2ＣＨ3）、２．３７（３Ｈ，ｓ，ＮＣＣＨ3）、４．２１（２Ｈ，ｑ，Ｊ＝７．０５Ｈｚ，ＣＯＯＣＨ2ＣＨ3）、４．４１（２Ｈ，ｑ，Ｊ＝７．０５Ｈｚ，ＣＯＯＣＨ2ＣＨ3）、７．４９（１Ｈ，ｓ，ＮＣＨＮ）、７．６２（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝７．９７Ｈｚ，ＣＣＨＣＨＣＨＣＮＯ2）、７．７７（１Ｈ，ｔ，Ｊ＝７．９７＆８．２７Ｈｚ，ＣＣＨＣＨＣＨＣＮＯ2）、８．３７（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝８．２７Ｈｚ，ＣＣＨＣＨＣＨＣＮＯ2）。
【０１１６】
実施例４（ｉｉｉ）：ｏ−ニトロマゼニル（１４）の製造
臭化物（４．２５ｇ、０．０１０ｍｏｌ）を５０ｍＬのメタノールに溶解した撹拌溶液に、ＤＩＰＥＡ（２．８４ｇ、３．８ｍＬ、０．０２２ｍｏｌ）及びメチルアミン（２Ｍメタノール溶液６．５ｍＬ、０．０１３ｍｏｌ）をメタノール（５０ｍＬ）に溶解した溶液をゆっくりと添加した。反応物を一晩還流した。酢酸エチルを用いたＴＬＣ分析は、出発原料１３から２つの主要新スポット（ｒｆ ０．５及び０．３）への定量的転化を示した。３分間にわたる５〜９５％アセトニトリル／水勾配を用いたＬＣＭＳによって粗生成物を分析した。これは、正イオンとして３３１．０３の質量を有する新しい化学種及び２つの他の主ピークを示した。溶媒を除去乾固し、粗生成物をＤＣＭ／酢酸エチル／１％メタノールを用いるフラッシュクロマトグラフィー用のカラム上に液体装填した。２つの主画分を合わせてＬＣＭＳに付したところ、２種の他の生成物との混合物中に所望の物質が示された。
【０１１７】
各画分を、ＤＣＭ／酢酸エチルを用いる第２の精製に付した。次いで、エタノールを用いて生成物１４を両画分から再結晶した。所望の物質が１５％の収率で純粋に単離された。
【０１１８】
1Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3）δ １．４３（３Ｈ，ｓ，ＣＨ3）、３．２０（３Ｈ，ｓ，ＮＣＨ3）、４．３２−４．５０（２Ｈ，ｍ，ＯＣＨ2）、４．５４（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１６Ｈｚ，ＮＣＨ）、５．３０（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１６Ｈｚ，ＮＣＨ’）、７．６６（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝８Ｈｚ ａｎｄ １Ｈｚ，ＮＣＣＨ）、７．７０（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝８ ａｎｄ ８Ｈｚ，ＣＨＣＨＣＨ）、７．９４（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝８ ａｎｄ １Ｈｚ，ＣＨＣＮＯ2）、７．９７（１Ｈ，ｓ，ＮＣＨＮ）。
【０１１９】
実施例４（ｉｖ）：ｏ−［18Ｆ］フルマゼニルを得るためのｏ−ニトロマゼニルの放射性フッ素化
ＦＡＳＴｌａｂ自動化合成モジュール（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ社）上で放射性フッ素化を行った。
【０１２０】
次のようにして構成部品からカセットを組み立てた。２０．５ｍｇのＫ２２２、１４０μｌのＫ2ＣＯ3（水中２．９ｍｇ）及び１．０６ｍｌのＭｅＣＮを含む１１ｍｍｏｌバイアル、１．３ｍｌの前駆体溶液（１．３ｍｌの乾燥ＤＭＦに溶解した６．５ｍｇの前駆体１４）を含む第２の１１ｍｍｏｌバイアル、リン酸（２．６ｍＬ、１０ｍＭ）を含む１３ｍｍバイアル、食塩水（０．９％、２．４ｍＬ）を含む１３ｍｍバイアル、並びにエタノール（４ｍＬ）を含む１３ｍｍバイアルをカセット中に挿入した。予熱したＱＭＡカートリッジを取り付け、ｔＣ１８＋カートリッジを取り付けた。
【０１２１】
所要の動作シーケンスファイルを制御ＰＣからＦＡＳＴｌａｂの内部メモリ中にアップロードした。カセットをＦＡＳＴｌａｂ合成装置上に装着した。ＦＡＳＴｌａｂ上のフッ化物イオン入口へのラインに連結された注射針を用いて［18Ｆ］フッ化物イオンバイアルを穿刺した。０．９％食塩水（７ｍＬ）を予め充填した清浄な空の生成物収集バイアルを連結した。次いで、合成シーケンスを開始し、ＦＡＳＴｌａｂハードウェア試験段階を完了した。フッ化物イオンをＱＭＡカートリッジ上に捕捉し、反応器内で乾燥した。前駆体１４の溶液を添加し、１３０℃で３０分間加熱した。反応混合物をリン酸（１０ｍＭ、２．２ｍＬ）で希釈した。粗生成物をＨＰＬＣループに移した後、ＨＰＬＣ運転を開始した（分取ＨＰＬＣ条件の詳細については下記参照）。
【０１２２】
【表３】
【０１２３】
分取ＨＰＬＣ上に生成物を注入した後、手動で約１分間にわたってカット（保持時間約１３．７分）を実施し、約１３ｍｌの水を含むバイアル中に回収した。分析用のホットセルから生成物の試料をサブ分配してポストした。
【０１２４】
【表４】
【０１２５】
合成終了時から２時間後において、放射化学純度は＞９９％であった。
【０１２６】
測定された総コールドリガンドは、体積１０ｍＬ当たり３μｇであった。これは、非放射性参照化合物を較正標準としながら分析ＨＰＬＣのＵＶピーク面積を用いて計算される。
【０１２７】
この自動化合成方法によれば、約１μｇの非放射性不純物総量を有する放射性標識物質が製造された。この自動化プロセスはまた、一定範囲の出発放射能レベルにわたって一貫した収率を与えた。４回の連続した合成例から得られた結果を下記に示す。
【０１２８】
【表５】
【０１２９】
実施例５：ｏ−ニトロマゼニルｔｅｒｔ−ブチルエステル（１７）からのｏ−［18Ｆ］フルマゼニルｔｅｒｔ−ブチルエステルの製法
【０１３０】
【化１６】
【０１３１】
実施例５（ｉ）：ニトロイサト酸（１５）の製造
エタノール（５ｍＬ）中の２，６−ジニトロ安息香酸（０．５ｇ、２．３６ｍｍｏｌ）を８０℃に加熱した。次いで、硫化アンモニウム（水中４０〜４８％）（０．３６ｍＬ、２．３６ｍｍｏｌ）を添加し（黄色の溶液が鮮橙色の懸濁液になった）、混合物を０．５時間加熱還流した。ＴＬＣ（ＤＭＦ ８０％、ＭｅＯＨ ２０％）は、出発原料の下方にかすかなスポットを示した。硫化アンモニウム（３．６ｍＬ、２０．４ｍｍｏｌ）を添加したところ、混合物は一層濃い橙色になった。次いで、この混合物を１時間加熱還流した後、ＴＬＣは反応が完了したことを示した。溶媒を減圧下で除去し、次いで残留物をメタノールで洗浄した。メタノール溶液をデカントして分離し、蒸発乾固することで、２−ニトロ−６−アミノ安息香酸を橙色の固体として得た。次いでこれを、フラッシュクロマトグラフィー（６０ＣＶにわたりＤＭＦ ９０％／ＭｅＯＨ １０％→２０％ＭｅＯＨ）を用いて精製することで、所望の物質（０．２ｇ、４６％）を得た。
【０１３２】
1Ｈ ＮＭＲ（Ｄ6−ＤＭＳＯ）δ ３．１６（２Ｈ，ｓ，ＮＨ2）、６．８０（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝８ ａｎｄ １Ｈｚ，Ｈ2ＮＣＣＨ）、６．９３（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝８ ａｎｄ １Ｈｚ，ＣＨＣＮＯ2）、７．２２（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝８ ａｎｄ ８Ｈｚ，ＣＨＣＨＣＨ）。
【０１３３】
２−ニトロ−６−アミノ安息香酸（２．８ｇ、１５．４ｍｍｏｌ）をジオキサン（２０ｍＬ）に溶解した。トリホスゲン（１．５２ｇ、５．１ｍｍｏｌ）を添加した。次いで、混合物を１時間加熱還流した。次いで、混合物を放冷した。次いで、沈殿を濾過によって集めることで、イサト酸無水物を定量的収率で得た。
【０１３４】
1Ｈ ＮＭＲ（Ｄ6−ＤＭＳＯ）δ ７．３３（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝８ ａｎｄ １Ｈｚ，ＡｒＣＨ）、７．５９（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝８ ａｎｄ １Ｈｚ，ＡｒＣＨ）、７．８９（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝８Ｈｚ，ＡｒＣＨ）、１２．２（１Ｈ，ｂｒ ｓ，ＮＨ）。
【０１３５】
実施例５（ｉｉ）：４−メチル−６−ニトロ−３，４−ジヒドロ−１Ｈ−ベンゾ［ｅ］［１，４］ジアゼピン−２，５−ジオン（１６）の製造
ニトロイサト酸無水物（１５）（３．５ｇ、１６．８ｍｍｏｌ）及びサルコシン（１．５０ｇ、１６．８ｍｍｏｌ）をＤＭＳＯ（８ｍＬ）に溶解した。次いで、混合物を１５０℃に予熱された加熱マントル内に配置した。次いで、混合物をこの温度で約３０分間加熱した後、反応混合物を水（５０ｍＬ）中に注ぎ込んだ。得られた褐色の沈殿を濾過によって集め、酢酸エチルでトリチュレートすることで、淡褐色の粉末（０．９ｇ、１１％）を得た。
【０１３６】
1Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ6）：δH ３．０８（３Ｈ，ｓ，ＮＣＨ3）、４．１６（２Ｈ，ｂｒ ｓ，ＣＨ2）、７．３９（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝８．０ ａｎｄ ２．０Ｈｚ，ＨＮＣＣＨ）、７．６６（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝８．０ ａｎｄ ８．０Ｈｚ，ＣＨＣＨＣＨ）、７．７２（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝８．０ ａｎｄ ２．０Ｈｚ，ＣＨＣＮＯ2）ａｎｄ １０．８０（１Ｈ，ｂｒ ｓ，ＮＨ）；13ＣＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ6）：δC ３４．９（ＮＣＨ3）、５１．８（ＮＣＨ2）、１１９．９（ＣＨＣＨＣＮＨ）、１２１．０（Ｃ−ＣＯ）、１２５．１（ＣＨＣＨＣＮＯ2）、１３８．３（ＣＮＨ）、１５１．０（Ｃ−ＮＯ2）、１６３．２（Ｃ＝Ｏ）ａｎｄ １６９．７（Ｃ＝Ｏ）。
【０１３７】
実施例５（ｉｉｉ）：ｏ−ニトロマゼニルｔｅｒｔ−ブチルエステル（１７）の製造
ＴＨＦ（５６ｍＬ）中の中間体１６（０．７ｇ、２．９８ｍｍｏｌ）に、０℃でカリウムｔｅｒｔ−ブトキシド（０．３７ｇ、３．２７ｍｍｏｌ）を添加した。次に、混合物を０℃で２０分間撹拌し（その間に鮮黄色の沈殿が認められた）、次いで−３５℃に冷却した。ジエチルクロロホスフェート（０．６７ｇ、３．８８ｍｍｏｌ、０．５６ｍＬ）をゆっくりと添加した。反応物を０℃で３０分間撹拌し、その間に混合物はわずかに黄色味を増した。反応フラスコを−３５℃に冷却し、ｔｅｒｔ−ブチルイソシアノアセテートの溶液（０．４６ｇ、３．２６ｍｍｏｌ、０．４８ｍＬ）を添加し、次いでカリウムｔｅｒｔ−ブトキシド（０．３７ｇ、３．２７ｍｍｏｌ）を添加した。次いで、懸濁液を室温で一晩撹拌し続けた。反応物をＮａＨＣＯ3水溶液（５０ｍＬ）で奪活し、ＥｔＯＡｃ（３×５０ｍＬ）で抽出した。有機層を合わせ、ＭｇＳＯ4上で乾燥し、濃縮して褐色の油状物を得た。粗物質を、酢酸エチル（Ａ）：メタノール（Ｂ）（０〜１％Ｂ、１００ｇ、４０ｍＬ／分）で溶出するシリカゲルクロマトグラフィーによって精製した。１７を淡黄色の固体（９ｍｇ、１％）として得た。
【０１３８】
1Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ3）：δH １．６４（９Ｈ，ｓ，Ｃ（ＣＨ3）3）、３．１９（３Ｈ，ｓ，ＮＣＨ3）、４．５２（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１５．０Ｈｚ，ＣＯＮＣＨ3ＣＨaＨb）、５．４５（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１５Ｈｚ，ＣＯＮＣＨ3ＣＨaＨb）、７．６４（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝９．０ ａｎｄ ３．０Ｈｚ，ＮＣＣＨＣＨ）、７．７３（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝９．０ ａｎｄ ９．０Ｈｚ，ＮＣＣＨＣＨ）、７．９３（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝９．０ ａｎｄ ３．０Ｈｚ，Ｏ2ＮＣＣＨＣＨＣＨ）ａｎｄ ７．９４（１Ｈ，ｓ，ＮＣＨＮ）。
【０１３９】
実施例５（ｉｖ）：ｏ−［18Ｆ］フルマゼニルｔｅｒｔ−ブチルエステルを得るためのｏ−ニトロマゼニルｔｅｒｔ−ブチルエステル（１７）の放射性フッ素化
ＴＲＡＣＥＲｌａｂ自動化合成モジュール（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ社）上で放射性フッ素化を行った。プレコンディショニング済みのＱＭＡカートリッジ上に［18Ｆ］フッ化物イオンを捕捉し、次いでＫｒｙｐｔｏｆｉｘ ２．２．２（１１ｍｇ）をＭｅＣＮ（２０００μＬ）及びＫ2ＣＯ3（８０μＬの水中、１．７ｍｇ）に溶解した溶液を用いてバイアル１から反応器に移した。窒素＋真空フローを使用しながら、溶液を１００℃で１０分間、次いで１２０℃で２０分間乾燥し、次いで５０℃に冷却した。
【０１４０】
乾燥した［18Ｆ］フッ化物イオンに、ＤＭＦ（１ｍＬ）中のｏ−ニトロマゼニルｔｅｒｔ−ブチルエステル（１７、５ｍｇ）をバイアル３から添加した。反応混合物を１３０℃で３０分間加熱し、次いで５０℃に冷却した。反応混合物をバイアル５からの１０ｍＭリン酸（２．５ｍＬ）で希釈し、粗生成物管に移した。
【０１４１】
次いで、粗生成物を分取ＨＰＬＣループに手動で移した。分取ＨＰＬＣは１７．５分の保持時間を有するピークを与えたが、これを水（１２ｍＬ）の入ったＴＲＡＣＥＲｌａｂの丸底フラスコ内にカットした。分取ＨＰＬＣシステムは液体フローシンチレーションカウンターを備えていた。
【０１４２】
【表６】
【０１４３】
丸底フラスコ内の混合物を、（１ｍＬのエタノール、次いで２ｍＬの水でプレコンディショニングを施した）Ｃ１８ ｌｉｔｅ ＳＰＥ上に捕捉した。ＳＰＥを水（３ｍＬ）で洗浄し、ＥｔＯＨ（０．５ｍＬ）及びリン酸緩衝食塩水（４．５ｍＬ）を用いて粗生成物をＰ６バイアル中に溶出した。リン酸緩衝食塩水を用いて生成物をさらに希釈することで、１０ｍＬの最終体積を得た。
【０１４４】
【表７】
【０１４５】
合成終了時から２時間後において、放射化学純度は＞９９％であった。
【０１４６】
測定された総コールドリガンドは、（非放射性参照化合物を較正標準としながら分析ＨＰＬＣのＵＶピーク面積を用いて計算して）体積１０ｍＬ当たり６μｇであった。
【０１４７】
実施例６：ｏ−［18Ｆ］フルマゼニルイソプロピルエステルを得るためのｏ−ニトロマゼニルイソプロピルエステル（１８）の放射性フッ素化
【０１４８】
【化１７】
【０１４９】
実施例６（ｉ）：ｏ−ニトロマゼニルイソプロピルエステル（１８）の製造
マイクロ波容器内において、１４（製法は実施例４（ｉｉｉ）に記載、２０ｍｇ、０．０６ｍｍｏｌ）を２ｍＬのイソプロパノールに溶解し、５０μｌのチタン（ＩＶ）イソプロポキシドを添加した。マイクロ波条件は、温度：８５℃、時間：６０分であった。ＬＣＭＳにより、出発原料から所望生成物への定量的転化が確認された。これはまた、酢酸エチルを用いるＴＬＣによっても確認された。過剰のイソプロパノールを除去乾固し、粗混合物を溶離剤としてペトロール及び酢酸エチルを用いるフラッシュクロマトグラフィー用のカラム上に液体装填した。ＤＣＭ／メタノールを用いて該物質を再び精製した。１８（１５ｍｇ）が純粋に得られた（７３％）。
【０１５０】
1Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3）δ １．４３（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．１Ｈｚ，ＣＨ3）、１．４５（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．１Ｈｚ，ＣＨ3）、３．２０（３Ｈ，ｓ，ＮＣＨ3）、４．５３（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１６Ｈｚ，ＣＨ）、５．２８（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１６Ｈｚ，ＣＨ’）、５．３３（１Ｈ，ｍ，ＣＯＯＣＨ（ＣＨ3）2）、７．６６（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝０．９２，８．２７Ｈｚ，ＣＨＣＨＣＨＣＮＯ2）、７．７５（１Ｈ，ｔ，Ｊ＝８．３Ｈｚ，ＣＨＣＨＣＨＣＮＯ2）、７．９４（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝０．９２，８．２７Ｈｚ，ＣＨＣＨＣＨＣＮＯ2）、７．９７（１Ｈ，ｓ，ＮＣＨＮ）。
【０１５１】
実施例６（ｉｉ）：ｏ−［18Ｆ］フルマゼニルイソプロピルエステルを得るためのｏ−ニトロマゼニルイソプロピルエステル（１８）の放射性フッ素化
ＴＲＡＣＥＲｌａｂ自動化合成モジュール（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ社）上で放射性フッ素化を行った。プレコンディショニング済みのＱＭＡカートリッジ上に［18Ｆ］フッ化物イオンを捕捉し、次いでＫｒｙｐｔｏｆｉｘ ２．２．２（１１ｍｇ）をＭｅＣＮ（２０００μＬ）及びＫ2ＣＯ3（８０μＬの水中、１．７ｍｇ）に溶解した溶液を用いてバイアル１から反応器に移した。窒素＋真空フローを使用しながら、溶液を１００℃で１０分間、次いで１２０℃で２０分間乾燥し、次いで５０℃に冷却した。
【０１５２】
乾燥した［18Ｆ］フッ化物イオンに、ＤＭＦ（１ｍＬ）中のｏ−ニトロマゼニルｔｅｒｔ−ブチルエステル（２．５ｍｇ）をバイアル３から添加した。反応混合物を１３０℃で３０分間加熱し、次いで５０℃に冷却した。反応混合物をバイアル５からの１０ｍＭリン酸（２．５ｍＬ）で希釈し、粗生成物管に移した。
【０１５３】
次いで、粗生成物を分取ＨＰＬＣループに手動で移した。分取ＨＰＬＣは２３分の保持時間を有するピークを与えたが、これを水（１５ｍＬ）の入ったＴＲＡＣＥＲｌａｂの丸底フラスコ内にカットした。分取ＨＰＬＣシステムは液体フローシンチレーションカウンターを備えていた。
【０１５４】
【表８】
【０１５５】
丸底フラスコ内の混合物を、（１ｍＬのエタノール、次いで２ｍＬの水でプレコンディショニングを施した）Ｃ１８ ｌｉｔｅ ＳＰＥ上に捕捉した。ＳＰＥを水（３ｍＬ）で洗浄し、ＥｔＯＨ（０．８ｍＬ）及びリン酸緩衝食塩水（７．２ｍＬ）を用いて粗生成物をＰ６バイアル中に溶出した。
【０１５６】
【表９】
【０１５７】
合成終了時から３時間後において、放射化学純度は＞９９％であった。
【０１５８】
測定された総コールドリガンドは、（非放射性参照化合物を較正標準としながら分析ＨＰＬＣのＵＶピーク面積を用いて計算して）体積８ｍＬ当たり６μｇであった。総非放射性不純物は約２μｇであった。
【０１５９】
実施例７：ｏ−［18Ｆ］フルマゼニルのインビボ体内分布
成体雄Ｓｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙラット（体重２０２±３７ｇ、平均±ＳＤ）に、側尾静脈を通して１〜５ＭＢｑのｏ−［18Ｆ］フルマゼニルを注射した。いずれの動物も意識があったが、注射中は軽く拘束し、次いで短期代謝ケージ内に収容した。特定の時点、即ち注射後（ｐｉ）３０秒、２分、１０分、３０分及び６０分（各時点についてｎ＝３）に、動物を頸部脱臼によって屠殺した。剖検後、脳及び末梢の組織又は体液を試料採取した。Ｗａｌｌａｃガンマカウンターを用いて脳試料中の放射能を測定した。アッセイ後、放射性崩壊に関する自動補正を含む双晶ガンマカウンターシステム（ＢＡＳＩＬ社）を用いて脳組織を残りの器官又は組織試料と共にアッセイした。下記表は、脳領域において得られたデータを示している。データは平均（±ＳＤ）として表され、すべてがｎ＝３である。アステリスク（*）で示されたデータは％ｉｄ／ｇである。
【０１６０】
【表１０】
【０１６１】
脳内への放射能の初期取込みは注射後３０秒で１．４±０．８％ｉｄであり、注射後２分で１．８±０．５％ｉｄのピークに達した。注射後２分では放射能レベルの着実な減少が見られ、注射後３０分での０．９±０．２％ｉｄは注射後６０分までに０．３±０．１％ｉｄに低下した。
【０１６２】
早い時点で最高の放射能レベルを有する領域は、前前頭皮質（注射後１０分で１．３９±０．０６％ｉｄ）であった。ＧＡＢＡリッチ領域とＧＡＢＡプア領域との間における良好な領域差別化が注射後３０分まで存在していた。
【技術分野】
【０００１】
本発明は、インビボイメージング、特に中枢神経系（ＣＮＳ）のγ−アミノ酪酸（ＧＡＢＡ）受容体のインビボイメージングに関する。本発明は、放射性フッ素化ＧＡＢＡ受容体アンタゴニスト化合物の自動化合成に適した方法を提供する。
【背景技術】
【０００２】
γ−アミノ酪酸（ＧＡＢＡ）は、ヒトの脳における最も重要な抑制性神経伝達物質である。ＧＡＢＡ受容体は膜貫通受容体であり、２つの主なタイプ、即ちＧＡＢＡA受容体及びＧＡＢＡB受容体に分けられる。ＧＡＢＡA受容体は、これまで薬理学的開発の主要な対象となってきた。多くのＧＡＢＡA受容体サブタイプが発見され、これらのサブタイプに対して選択的な新規化学構造が開発されている。ＧＡＢＡA受容体が正常に活性化されれば、塩化物イオンがその細孔を選択的に通過する。この塩化物イオンチャンネルゲーティングは、膜電位を静止レベル付近に安定化することにより、ニューロンに対して一般に抑制的である。
【０００３】
ＧＡＢＡA受容体神経伝達の欠陥は、ＧＡＢＡA受容体の減少或いは例えばＧＡＢＡA受容体遺伝子の遺伝的突然変異、外傷性脳損傷又は薬学的傷害に原因するＧＡＢＡA受容体の機能欠陥によって引き起こされることがあり、てんかん、不安障害、パーキンソン病及び慢性疼痛をはじめとする若干の神経学的及び精神医学的障害に関係している。したがって、ＧＡＢＡA受容体に対して選択的な放射性リガンドの開発は、生きているヒト患者、特にＧＡＢＡA受容体神経伝達の欠陥に関連する障害に罹患している患者における脳イメージング検査に関して価値がある。
【０００４】
（フルマゼピルとしても知られる）フルマゼニル（コード名Ｒｏ １５−１７８８、商品名Ａｎｅｘａｔｅ、Ｌａｎｅｘａｔ、Ｍａｚｉｃｏｎ、Ｒｏｍａｚｉｃｏｎ）はイミダゾ［１，５−ａ］［１，４］ベンゾジアゼピンであって、これはＣＮＳにおけるＧＡＢＡA受容体の中和性アロステリックモジュレーターである（Ｊｏｈｎｓｔｏｎ １９９６ Ｐｈａｒｍａｃｏｌ Ｔｈｅｒ；６９（３）：１７３−１９８）。これまで、フルマゼニルの最も普通の用途は、ベンゾジアゼピンの過量に対する解毒剤としてのものであった。これは、フルマゼニルがＧＡＢＡA受容体のベンゾジアゼピン結合部位における競合阻害によってベンゾジアゼピンの効果を逆転させるからである。その上、フルマゼニルはアゴニスト活性をほとんど又は全く有しないので、その放射性標識バージョンが陽電子放出断層撮影（ＰＥＴ）ラジオトレーサーとして開発されてきた。
【０００５】
［18Ｆ］ＦＭＺは、ニトロ前駆体の直接放射性フッ素化によって18Ｆが導入されている点を除き、フルマゼニルと同じ化学式を有している。
【０００６】
【化１】
【０００７】
［18Ｆ］ＦＭＺは、高い親和性（Ｋi＝約０．５ｎＭ）及び選択性をもってＧＡＢＡA受容体に結合する。Ｒｙｚｈｉｋｏｖ ｅｔ ａｌ（２００５ Ｎｕｃ Ｍｅｄ Ｂｉｏｌ；３２：１０９−１１６）は、ニトロ前駆体化合物からの［18Ｆ］ＦＭＺの製法を記載している。しかし、本発明者らによれば、この合成法は２．７〜７．７％という最適と言えない合成終了時（ＥＯＳ）収率を有することがわかった（本明細書中に比較例として記載されている）。これらのＥＯＳ収率は、Ｏｄａｎｏ ｅｔ ａｌ（Ｎｅｕｒｏｉｍａｇｅ ２００９ ４５（３）８９１−９０２）によって報告されたものと同等である。
【０００８】
本発明は、高い親和性をもってＧＡＢＡA受容体に結合する放射性フッ素化薬剤を得るための方法であって、先行技術の方法に比べて改善された収率で該薬剤を得るための方法を探求するものである。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００９】
国際公開第２００５／０９７７１３号パンフレット
【発明の概要】
【００１０】
本発明は、ＧＡＢＡA受容体のインビボイメージングのために有用な放射性フッ素化化合物を得るための方法を提供する。本発明の方法は、先行技術の方法に比べて高い収率を与える。本発明のさらに別の態様は、本発明の自動化合成方法を実施するのに適したカセットである。本発明の方法で有用な新規前駆体化合物もまた、本発明の方法によって得られる特定の新規放射性フッ素化化合物と共に提供される。
【発明を実施するための形態】
【００１１】
一態様では、本発明は、次の式Ｉの化合物を得るための方法であって、
【００１２】
【化２】
【００１３】
（式中、
Ｒ1及びＲ2の一方は18Ｆであって、他方は水素であり、
Ｒ3はＣ3-5複素環であるか、或いはＲ3はＣ（＝Ｏ）−Ｏ−Ｒ4（式中、Ｒ4は水素又は直鎖若しくは枝分れＣ1-4アルキルである。）である。）
（ｉ）次の式Ｉａの前駆体化合物を用意する段階、及び
【００１４】
【化３】
【００１５】
（式中、
Ｒ11及びＲ12の一方は脱離基であって、他方は水素であり、
Ｒ11が前記脱離基である場合、それはトリ−Ｃ1-3アルキルアンモニウム及び−Ｉ+−Ａｒ（式中、Ａｒは１以上のＲ*基で置換されたフェニルであり、Ｒ*は水素、ニトロ、シアノ、ハロゲン、Ｃ1-10ヒドロキシアルキル、Ｃ2-10カルボキシアルキル、Ｃ1-10アルキル、Ｃ2-10アルコキシアルキル、Ｃ1-10ヒドロキシアルキル、Ｃ1-10アミノアルキル、Ｃ1-10ハロアルキル、Ｃ6-14アリール、Ｃ3-12ヘテロアリール、Ｃ3-20アルキルアリール、Ｃ2-10アルケニル及びＣ2-10アルキニルから選択される。）から選択され、
Ｒ12が前記脱離基である場合、それはニトロ、トリ−Ｃ1-3アルキルアンモニウム及び−Ｉ+−Ａｒ（式中、ＡｒはＲ11に関して上記に定義した通りである。）から選択され、
Ｒ13は式ＩのＲ3に関して定義した通りである。）
（ｉｉ）前記前駆体化合物を適当な［18Ｆ］フッ化物イオン源と反応させる段階
を含んでなる方法を提供する。
【００１６】
「前駆体化合物」は、検出可能なラベルの好都合な化学形態との化学反応が部位特異的に起こり、最小数の段階（理想的にはただ１つの段階）で反応を実施でき、かつ格別の精製の必要なしに（理想的にはいかなる追加の精製も必要なしに）所望のインビボイメージング剤が得られるように設計された、放射性標識化合物の非放射性誘導体からなる。かかる前駆体化合物は合成品であり、良好な化学純度で簡便に得ることができる。前駆体化合物は、任意には前駆体化合物のある種の官能基に関して保護基を含むことができる。
【００１７】
「脱離基」は、上記に定義した前駆体化合物の置換基であって、前駆体化合物が適当な［18Ｆ］フッ化物イオン源と反応した場合に18Ｆで置き換えられ、それにより18Ｆを部位特異的に組み込んで式Ｉの所望放射性フッ素化化合物の生成を可能にするものである。
【００１８】
「保護基」という用語は、望ましくない化学反応を阻止又は抑制するが、分子の残部を変質させない十分に温和な条件下で問題の官能基から脱離させ得るのに十分な反応性を有するように設計された基を意味する。脱保護後には所望の生成物が得られる。保護基は当業者にとって公知であり、アミン基に関してはＢｏｃ（ここでＢｏｃはｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニルである。）、Ｆｍｏｃ（ここでＦｍｏｃはフルオレニルメトキシカルボニルである。）、トリフルオロアセチル、アリルオキシカルボニル、Ｄｄｅ［即ち、１−（４，４−ジメチル−２，６−ジオキソシクロヘキシリデン）エチル］及びＮｐｙｓ（即ち、３−ニトロ−２−ピリジンスルフェニル）から適宜に選択され、カルボキシル基に関してはメチルエステル、ｔｅｒｔ−ブチルエステル及びベンジルエステルから適宜に選択される。ヒドロキシル基に関しては、好適な保護基は、メチル、エチル又はｔｅｒｔ−ブチル、アルコキシメチル又はアルコキシエチル、ベンジル、アセチル、ベンゾイル、トリチル（Ｔｒｔ）、又はテトラブチルジメチルシリルのようなトリアルキルシリルである。さらに他の保護基の使用は、‘Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ Ｇｒｏｕｐｓ ｉｎ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ’，Ｔｈｅｏｒｏｄｏｒａ Ｗ．Ｇｒｅｅｎｅ ａｎｄ Ｐｅｔｅｒ Ｇ．Ｍ．Ｗｕｔｓ（Ｔｈｉｒｄ Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ，１９９９）に記載されている。
【００１９】
単独で又は別の基の一部として使用される「アルキル」という用語は、本明細書中では、任意の直鎖、枝分れ又は環状の飽和若しくは不飽和ＣnＨ2n+1基として定義される。
【００２０】
単独で又は別の基の一部として使用される「アリール」という用語は、本明細書中では、単環式又は多環式芳香族炭化水素或いは単環式又は多環式ヘテロ芳香族炭化水素から導かれる任意のＣ6-14分子断片又は基として定義される。
【００２１】
「ハロゲン」という用語は、フッ素、塩素、臭素及びヨウ素から選択される基を意味する。
【００２２】
「ニトロ」という用語は−ＮＯ2基をいう。
【００２３】
「シアノ」という用語は−ＣＮ基をいう。
【００２４】
「カルボキシアルキル」という用語は、上記に定義したアルキル基が１以上の−ＣＯＯＨで置換されたものをいう。
【００２５】
「アルコキシアルキル」という用語はアルキルエーテル基をいい、ここでアルキルという用語は上記に定義した通りである。
【００２６】
「ヒドロキシアルキル」という用語は、上記に定義したアルキル基において、１以上の水素原子が−ＯＨ基で置き換えられたものをいう。
【００２７】
「アミノアルキル」という用語は、上記に定義したアルキル基において、１以上の水素原子が−ＮＨ2基で置き換えられたものをいう。
【００２８】
「ハロアルキル」という用語は、上記に定義したアルキル基において、１以上の水素原子が本明細書中に提供したハロゲンで置き換えられたものをいう。
【００２９】
「ヘテロアリール」という用語は、上記に定義したアリール基において、１以上の炭素原子がＯ、Ｎ及びＳから選択されたヘテロ原子で置き換えられたものをいう。
【００３０】
「アルキルアリール」という用語は、上記に定義したアルキル基において、１以上の水素原子が上記に定義したアリール基で置き換えられたものをいう。
【００３１】
「複素環」という用語は、脂肪族又は芳香族環式基において、環が窒素、酸素及び硫黄から選択された１以上のヘテロ原子を含むものをいう。
【００３２】
「アルケニル」という用語は、１以上の二重結合を有する直鎖又は枝分れ炭化水素基を意味する。
【００３３】
「アルキニル」という用語は、１以上の三重結合を有する直鎖又は枝分れ炭化水素基を意味する。
【００３４】
Ｒ1が18Ｆである本発明の方法の好ましい実施形態では、Ｒ11はトリメチルアンモニウム又は−Ｉ+−Ａｒである。
【００３５】
本発明の方法の最も好ましい実施形態では、Ｒ2が18Ｆである。Ｒ2が18Ｆである場合、Ｒ12はニトロ、トリメチルアンモニウム又は−Ｉ+−Ａｒであることが好ましい。Ｒ2が18Ｆである場合、Ｒ12はニトロであることが最も好ましい。
【００３６】
式ＩのＲ3及び式ＩａのＲ13は同一てあり、好ましくはＣ（＝Ｏ）−Ｏ−Ｒ4である。式中、Ｒ4は直鎖又は枝分れＣ1-4アルキルであり、好ましくはメチル、エチル、イソプロピル又はｔｅｒｔ−ブチルであり、特に好ましくはエチルである。
【００３７】
Ｙａｎｇ ｅｔ ａｌ（２００９ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ；６：１０３６−１０４０）によって開示された反応スキームを改変することで、Ｒ11が脱離基である式Ｉａの前駆体化合物を得ることができる。スキーム１は、いかにして前駆体化合物が得られるかを示している。
【００３８】
【化４】
【００３９】
スキーム１では、Ｒ11がトリアルキルアンモニウムである場合にＲ21はＮＯ2であり、Ｒ11がヨードニウム塩である場合にＲ21は臭素である。Ｒ13は式Ｉａに関して定義した通りである。後の段階で所望の脱離基を導入するために必要な化学反応を実行するように準備された適当なアミノ安息香酸化合物ａをトリホスゲンと反応させることで、ベンゾキサジン−２，４−ジオン中間体ｂを得る。ＤＭＳＯ中におけるｂとサルコシンとの反応はベンゾジアゼピンｃを生じる。この時点において、Ｒ11がトリアルキルアンモニウムである場合、化合物ｃのＲ21は段階（ｉ）でトリアルキルアンモニウムに転化され、次いで段階（ｉｉ）を実施することで化合物ｄが得られる。Ｒ11がヨードニウム塩である場合、Ｒ21は段階（ｉｉ）を実施した後の段階（ｉｉｉ）でヨードニウム塩に転化される。
【００４０】
Ｒ12が脱離基である場合には、スキーム２を用いて前駆体化合物を得ることができる。
【００４１】
【化５】
【００４２】
Ｒ22は上記スキーム１でＲ21に関して定義した通りである。化合物ｅは、標準的な化学変換により、商業的に入手可能な２，６−ジニトロ安息香酸出発原料から得られる。化合物ｅをスキーム１の化合物ａに関して記載したように処理することでベンゾジアゼピン中間体ｇが得られ、次いでこれが所望の脱離基を導入する前（即ち（ｉｉ）、次いで（ｉｉｉ）により）又は導入した後（即ち（ｉ）、次いで（ｉｉ）により）に所望のイミダゾベンゾジアゼピンに変換される。段階（ｉ）〜（ｉｉｉ）はスキーム１に関して上記に記載した通りである。
【００４３】
［18Ｆ］フッ化物イオンは、通例、［18Ｏ］水ターゲットの放射線照射の生成物である水溶液として得られる。広く行われているやり方では、［18Ｆ］フッ化物イオンが求核性放射標識反応での使用に適するように、［18Ｆ］フッ化物イオンを反応性求核試薬に転化するための様々な段階が実施される。これらの段階は、［18Ｆ］フッ化物イオンから水を除去すること及び適当な対イオンを供給することを含んでいる（Ｈａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ Ｒａｄｉｏｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ ２００３ Ｗｅｌｃｈ ＆ Ｒｅｄｖａｎｌｙ ｅｄｓ．ｃｈ．６ １９５−２２７）。次いで、無水溶媒を用いて求核性放射性フッ素化反応が実施される（Ａｉｇｂｉｒｈｉｏ ｅｔ ａｌ １９９５ Ｊ Ｆｌｕｏｒ Ｃｈｅｍ；７０：２７９−８７）。フッ化物イオンの反応性を高めると共に、水の存在に起因するヒドロキシル化副生物の生成を回避するため、通例は反応に先立って［18Ｆ］フッ化物イオンから水が除去され、放射性フッ素化反応は無水反応溶媒を用いて実施される（Ａｉｇｂｉｒｈｉｏ ｅｔ ａｌ １９９５ Ｊ Ｆｌｕｏｒ Ｃｈｅｍ；７０：２７９−８７）。［18Ｆ］フッ化物イオンからの水の除去は、［18Ｆ］フッ化物イオンを「裸」にするといわれる。これは、求核フッ化物に関する先行技術では、フッ化物イオンの反応性を高めると共に水の存在に起因するヒドロキシル化副生成物の生成を回避するために必要な段階と見なされている（Ｍｏｕｇｈａｍｉｒ ｅｔ ａｌ １９９８ Ｔｅｔｔ Ｌｅｔｔｓ；３９：７３０５−６）。
【００４４】
放射性フッ素化反応に関して［18Ｆ］フッ化物イオンの反応性を向上させるために使用される追加の段階は、水の除去に先立ってカチオン性対イオンを添加することである。対イオンは、無水反応溶媒中において、フッ化物イオンの溶解性を維持するのに十分な溶解度を有するべきである。使用されてきた対イオンには、ルビジウムやセシウムのような大きいが軟らかい金属イオン、Ｋｒｙｐｔｏｆｉｘ（商標）のようなクリプタンドと錯体化されたカリウム、又はテトラアルキルアンモニウム塩がある。本発明の方法で使用するのに好ましい適当な［18Ｆ］フッ化物イオン源は、［18Ｆ］フッ化カリウム及び［18Ｆ］フッ化セシウムから選択される。［18Ｆ］フッ化カリウムが最も好ましく、Ｋｒｙｐｔｏｆｉｘ（商標）のようなクリプタンドと錯体化された場合に特に好ましい。これは、無水溶媒中におけるそれの溶解性が良く、フッ化物イオンの反応性を高めるからである。
【００４５】
好ましい実施形態では、本発明の方法はさらに、
（ｉｉｉ）過剰の［18Ｆ］フッ化物イオンを除去する段階、及び／又は
（ｉｖ）存在する場合には保護基を除去する段階、及び／又は
（ｖ）有機溶媒を除去する段階、及び／又は
（ｖｉ）得られた化合物を生体適合性キャリヤーと共に製剤化して、哺乳動物への投与に適した放射性医薬組成物を得る段階
を含み得る。
【００４６】
「生体適合性キャリヤー」は、放射性医薬組成物が生理学的に認容され得るようにして（即ち、毒性又は過度の不快感なしに哺乳動物体に投与できるようにして）放射性フッ素化化合物を懸濁又は溶解するための流体（特に液体）である。生体適合性キャリヤーは、好適には、無菌のパイロジェンフリー注射用水、（有利には注射用の最終生成物が等張性又は非低張性になるように平衡させ得る）食塩水のような水溶液、或いは１種以上の張度調整物質（例えば、血漿陽イオンと生体適合性対イオンとの塩）、糖（例えば、グルコース又はスクロース）、糖アルコール（例えば、ソルビトール又はマンニトール）、グリコール（例えば、グリセロール）又は他の非イオン性ポリオール物質（例えば、ポリエチレングリコール、プロピレングリコールなど）の水溶液のような注射可能なキャリヤー液体である。生体適合性キャリヤーはまた、エタノールのような生体適合性有機溶媒を含んでいてもよい。かかる有機溶媒は、親油性の高い化合物又は配合物を可溶化するために有用である。好ましくは、生体適合性キャリヤーはパイロジェンフリー注射用水、等張食塩水又はエタノール水溶液である。静脈内注射用生体適合性キャリヤーのｐＨは、好適には４．０〜１０．５の範囲内にある。
【００４７】
現在、特にＰＥＴトレーサーとして使用するための18Ｆ標識化合物の合成は、例えばＴｒａｃｅｒｌａｂ（商標）及びＦａｓｔｌａｂ（商標）（いずれもＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ社製）のような自動化放射合成装置によって最も簡便に実施されている。しかし、先行技術の方法は自動化に適していない。本明細書中の比較例１では、ニトロマゼニルの放射性フッ素化がＦａｓｔｌａｂ上での［18Ｆ］ＦＭＺの自動化合成にとって理想的なアプローチでないことが実証されている。これは、低い収率、及び［18Ｆ］フッ化物イオンの効果的な組込みを達成するために必要な温度のためである。現存するＦａｓｔｌａｂ反応器は、１３０℃以下の温度で使用できるシクロオレフィンコポリマー（ＣＯＣ）で作製されている。ニトロ前駆体から［18Ｆ］ＦＭＺを製造するために使用される先行技術の方法は、およそ１６０℃の温度を必要とする。これらの温度では、ＣＯＣ反応器は収納性を失う。
【００４８】
下記の実験例で実証されるように、ニトロマゼニル上の脱離基をニトロからトリメチルアンモニウムに変更すれば、７％のＥＯＳ収率を維持しながら反応温度を１３０℃に低下させることができた。ニトロ脱離基をアミドカルボニルに対するメタ位からアミドカルボニルに対するオルト位に移動すれば、やはり反応温度を低下させながらＥＯＳ収率を２．７〜７．７％から１８〜２３％に向上させることができた。
【００４９】
特に好ましい実施形態では、本発明の方法は自動化される。放射化学は、「カセット」を装置に取り付けることにより、自動化合成装置上で実施される。通常、かかるカセットは流体通路、反応器、及び試薬バイアル並びに放射合成後の清掃段階で使用される任意の固相抽出カートリッジを受け入れるためのポートを含んでいる。
【００５０】
本発明のさらに別の態様では、本発明の自動化方法を実施するためのカセットであって、
（ｉ）上記に好適なもの及び好ましいものとして定義した前駆体化合物を含む容器、及び
（ｉｉ）上記に好適なもの及び好ましいものとして定義した適当な［18Ｆ］フッ化物イオン源を用いて容器を溶出するための手段
を含んでなるカセットが提供される。
【００５１】
かかるカセットはまた、過剰の18Ｆを除去するためのイオン交換カートリッジも含み得る。自動化合成のために必要な試薬、溶媒及び他の消耗品もまた、濃度、容量、送出時間などに関する最終ユーザーの要求条件を満たすように自動化合成装置を運転させるソフトウェアを保持したコンパクトディスクのようなデータ媒体と共に含めることができる。
【００５２】
別の態様では、本発明は、本発明の方法で定義された式Ｉの化合物であって、Ｒ1が水素であり、Ｒ2が［18Ｆ］であり、Ｒ4がエチル、イソプロピル又はｔｅｒｔ−ブチル、最も好ましくはエチルである式Ｉの化合物を提供する。
【００５３】
さらに別の態様では、本発明は、上記に定義された式Ｉａの前駆体化合物であって、Ｒ11及びＲ12の一方がトリメチルアンモニウム又は−Ｉ+−Ａｒであり、他方が水素である式Ｉａの前駆体化合物を提供する。好ましくは、Ｒ11及びＲ12の一方がトリメチルアンモニウムであり、他方が水素である。最も好ましくは、Ｒ12がニトロ、トリメチルアンモニウム又は−Ｉ+−Ａｒであり、最も特に好ましくは、Ｒ12がニトロである。Ｒ13は、好ましくはＣ（＝Ｏ）−Ｏ−Ｒ4（式中、Ｒ4はエチル、イソプロピル又はｔｅｒｔ−ブチルであり、好ましくはエチルである。）である。
【実施例】
【００５４】
実施例の簡単な説明
比較例１は、ニトロ前駆体化合物からの［18Ｆ］フルマゼニルの製法を記載している。
【００５５】
実施例２は、トリメチルアンモニウム前駆体化合物からの［18Ｆ］フルマゼニルの製法を記載している。
【００５６】
実施例３は、［18Ｆ］フルマゼニルに対するヨードニウム塩前駆体化合物の製法を記載している。
【００５７】
実施例４は、ニトロ前駆体化合物からのｏ−［18Ｆ］フルマゼニルの製法を記載している。
【００５８】
実施例５は、ニトロ前駆体化合物からのｏ−［18Ｆ］フルマゼニルｔｅｒｔ−ブチルエステルの製法を記載している。
【００５９】
実施例６は、ニトロ前駆体化合物からのｏ−［18Ｆ］フルマゼニルイソプロピルエステルの製法を記載している。
【００６０】
実施例７は、ｏ−［18Ｆ］フルマゼニルのインビボ体内分布を評価するための方法を記載している。
【００６１】
実施例中で使用される略語のリスト
ａｑ 水性
ＣＩＰ ２−クロロ−２，３−ジメチルイミダゾリジウムヘキサフルオロホスフェ ート
ＤＣＭ ジクロロメタン
ＤＩＰＥＡ Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン
ＤＭＦ ジメチルホルムアミド
ＤＭＳＯ ジメチルスルホキシド
ＥＯＳ 合成終了時
Ｅｔ エチル
ｇ グラム
ｈ 時間
ＨＰＬＣ 高速液体クロマトグラフィー
ＬＣＭＳ 液体クロマトグラフィー質量分析法
ＭｅＣＮ アセトニトリル
ｍｉｎ 分
ｍＬ ミリリットル
ｍＭ ミリモル濃度
ｍｍｏｌ ミリモル
ｍｏｌ モル
ＱＭＡ 第四級メチルアンモニウム
Ｒｆ 保持因子
ｒｔ 室温
ＳＰＥ 固相抽出
ＴＢＡ テトラブチルアンモニウム
ＴＥＡ トリエチルアミン
ＴＨＦ テトラヒドロフラン
ＴＬＣ 薄層クロマトグラフィー
ＵＶ 紫外
比較例１：ニトロマゼニルからの［18Ｆ］フルマゼニル（［18Ｆ］ＦＭＺ）の製法
比較例１（ｉ）：４−メチル−７−ニトロ−３，４−ジヒドロ−１Ｈ−ベンゾ［ｅ］［１，４］ジアゼピン−２，５−ジオン（１）の合成
【００６２】
【化６】
【００６３】
フラスコを撹拌しながらゆっくりと１４０℃に加熱することで、商業的に入手可能な５−ニトロイサト酸無水物（４０ｇ、０．１９２ｍｏｌ）をＤＭＳＯ（５０ｍＬ）に溶解した。溶液にサルコシン（１７．１ｇ、０．１９２ｍｏｌ）を少しずつゆっくりと添加した。添加後、１４０℃で溶液は泡立ち始めた（ＣＯ2の生成）。混合物を２．５時間撹拌し続けた。混合物を放冷し、ビーカー内の氷冷水中にゆっくりと注ぎ込んだ。溶液をガラス棒で撹拌したところ、黄色の固体が析出した。固体を濾過によって分離し、水で数回洗浄し、次いで４０℃の真空オーブン内で一晩乾燥した。単離された黄色の固体は、収率７８％の所望生成物１であることが確認された。
【００６４】
1Ｈ ＮＭＲ（Ｄ6−ＤＭＳＯ）：δ ３．１４（３Ｈ，ｓ，ＮＣＨ3）、３．９７（２Ｈ，ｓ，ＮＣＨ2ＣＯ）、７．３０（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝９Ｈｚ，ＨＮＣＣＨＣＨ）、８．３３（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝９ ａｎｄ ３Ｈｚ，ＣＨＣＨＣＮＯ2ＣＨ）、８．３３（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝３Ｈｚ，ＯＣ−ＣＣＨ）、１１．０５（１Ｈ，ｓ，ＮＨ）。
【００６５】
比較例１（ｉｉ）：ニトロマゼニル（２）の製造
【００６６】
【化７】
【００６７】
中間体１（１ｇ、４．３ｍｍｏｌ）をＴＨＦ（１０ｍＬ）及びＤＭＦ（２ｍＬ）に溶解した溶液に、窒素下０℃でカリウムｔｅｒｔ−ブトキシド（０．６ｇ、５ｍｍｏｌ）を添加した。３０分後、反応物を０℃に冷却し、ジエチルクロロホスフェート（０．７ｍＬ、５ｍｍｏｌ）の滴下で処理し、３０分間撹拌した。他方、エチルイソシアノアセテート（０．６ｍＬ、５ｍｍｏｌ）をＴＨＦ（１０ｍＬ）に溶解した撹拌溶液に、窒素下０℃でカリウムｔｅｒｔ−ブトキシド（０．６ｇ、５ｍｍｏｌ）を添加し、１５分間撹拌した。次いで、これを中間体１の混合物に０℃でゆっくりと添加した。これを０℃で０．５時間撹拌し、次いで室温でさらに２時間撹拌した。ＴＬＣ（酢酸エチル）は、ＵＶ及びＫＭｎＯ4により、出発原料（Ｒｆ ０．４）及び新しいスポット（Ｒｆ ０．２）を示した。
【００６８】
反応物を酢酸で奪活し、一晩撹拌し続けた。反応混合物を氷水中に注ぎ込んだ。これを酢酸エチルで抽出し、有機層を水及びブラインで洗浄し、乾燥し、濃縮して濃暗色の濃厚油状物を得た。これを、下記の条件を用いたクロマトグラフィーによって数回処理した。
１）ＤＣＭ／酢酸エチルを用いたＣｏｍｐａｎｉｏｎ（２回）
２）ベトロール／酢酸エチルを用いたＣｏｍｐａｎｉｏｎ（２回）
５０ｍｇの純物質２を無色の固体（収率４％）として得た。
【００６９】
1Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3）：δ １．３９（３Ｈ，ｔ，Ｊ＝７Ｈｚ，ＣＨ3）、３．２８（３Ｈ，ｓ，ＡｒＣＯＮＣＨ3）、４．３７（２Ｈ，ｑ，Ｊ＝７Ｈｚ，ＯＣＨ2）、４．４０（１Ｈ，ｂｒ ｓ，ＣＨ2）、５．２６（１Ｈ，ｂｒ ｓ，ＣＨ2）、７．６０（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．９Ｈｚ，ＡｒＣＨＣＨＣＮＯ2）、７．９４（１Ｈ，ｓ，ＮＣＨＮ）、８．４５（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝８．９ ａｎｄ ２．８Ｈｚ，ＡｒＣＨＣＨＣＮＯ2）、８．９５（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝２．５Ｈｚ，ＡｒＣＨＣＮＯ2）。
【００７０】
比較例１（ｉｉｉ）：［18Ｆ］フルマゼニル（［18Ｆ］ＦＭＺ）を得るためのニトロマゼニル（２）の放射性フッ素化
【００７１】
【化８】
【００７２】
ＴＲＡＣＥＲｌａｂ自動化合成モジュール（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ社）上で18Ｆ標識を行った。プレコンディショニング済みのＱＭＡカートリッジ上に［18Ｆ］フッ化物イオンを捕捉し、次いでテトラ−ｎ−ブチルアンモニウム重炭酸塩をＭｅＣＮ／水に溶解した溶液（ＭｅＣＮ １４００μＬ、水１００μＬ、ＴＢＡ・ＨＣＯ3 ２７ｍｇ）を用いてバイアル１から反応器に移した。窒素＋真空フローを使用しながら、溶液を１００℃で１０分間、次いで１２０℃で２０分間乾燥し、次いで５０℃に冷却した。
【００７３】
乾燥した［18Ｆ］フッ化物イオンに、ＤＭＦ（１ｍＬ）中のニトロマゼニル（１８．８ｍｇ）をバイアル３から添加した。反応混合物を１６０℃で３０分間加熱し、次いで５０℃に冷却した。反応混合物をバイアル５からの１０ｍＭリン酸（２．５ｍＬ）で希釈し、粗生成物管に移した。
【００７４】
次いで、粗生成物を分取ＨＰＬＣループに手動で移した。分取ＨＰＬＣは１７．５分の保持時間を有するピークを与えたが、これを水（１２ｍＬ）の入ったＴＲＡＣＥＲｌａｂの丸底フラスコ内にカットした。分取ＨＰＬＣシステムは液体フローシンチレーションカウンターを備えていた。
【００７５】
【表１】
【００７６】
丸底フラスコ内の混合物を、（１ｍＬのエタノール、次いで２ｍＬの水でプレコンディショニングを施した）ｔＣ１８ ｐｌｕｓ ｌｉｔｅ ＳＰＥカートリッジ上に捕捉した。ＳＰＥカートリッジを水（３ｍＬ）で洗浄し、ＥｔＯＨ（０．３ｍＬ）及び水（４．５ｍＬ）を用いて粗生成物をＰ６バイアル中に溶出した。
【００７７】
【表２】
【００７８】
実施例２：トリメチルアンモニウム前駆体化合物からの［18Ｆ］フルマゼニル（［18Ｆ］ＦＭＺ）の製法
実施例２（ｉ）：４−メチル−７−アミノ−３，４−ジヒドロ−１Ｈ−ベンゾ［ｅ］［１，４］ジアゼピン−２，５−ジオン（３）の合成
【００７９】
【化９】
【００８０】
ＴＨＦ／エタノールの１：１溶液１２０ｍＬ中に中間体１（３．４８ｇ、１５ｍｍｏｌ、製法は比較例１に記載）を懸濁した。懸濁液を窒素で処理し、次いで真空で処理した後、エタノール中に懸濁したＰｄ／Ｃ １０％（０．７ｇ）を添加した。次いで、反応器をＰａｒｒハイドロジェネーターに取り付け、水素圧（２０ｐｓｉ）下で撹拌しながら約３時間放置した。真空を用いて過剰の水素ガスを除去し、次いで溶液中に窒素をパージした。セライトを用いて触媒を濾別し、濾液を極小量のエタノールまで蒸発させた。白色の沈殿が生じたが、これを濾過によって分離し、真空下で乾燥することで、９１８ｍｇの所望物質３を３０％の収率で得た。
【００８１】
1Ｈ ＮＭＲ（ＤＭＳＯ）：δ ３．０７（３Ｈ，ｓ，ＮＣＨ3）、３．７４（２Ｈ，ｓ，ＮＣＨ2ＣＯ）、５．１９（２Ｈ，ｓ，ＮＨ2）、６．６９（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝８．６ ａｎｄ ２．５Ｈｚ，ＡｒＣＨＣＮＨ2）、６．７７（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．６Ｈｚ，ＡｒＣＨＣＮＨＣＯ）、６．９０（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝２．５Ｈｚ，ＣＯＣＣＨＣＮＨ2）、９．９７（１Ｈ，ｓ，ＮＨ）。
【００８２】
実施例２（ｉｉ）：４−メチル−７−ジメチルアミノ−３，４−ジヒドロ−１Ｈ−ベンゾ［ｅ］［１，４］ジアゼピン−２，５−ジオン（４）の合成
【００８３】
【化１０】
【００８４】
中間体３（３．０ｇ、１３ｍｍｏｌ）及び３７％ホルムアルデヒド水溶液（２１ｍＬ、０．２６ｍｏｌ）をアセトニトリルに溶解した０℃の溶液に、ＮａＢＨ３ＣＮ（４．８ｇ、７７ｍｍｏｌ）を少しずつ添加した。反応混合物を０℃で２時間撹拌し、次いで室温で１時間撹拌した。次いで、酢酸（１．４ｍＬ）を添加し、反応混合物をさらに２時間撹拌した。反応混合物をエチルエーテル中に注ぎ込み、２Ｎ ＫＯＨで洗浄し、塩基層を酢酸エチルで数回抽出した。有機相を集め、乾燥し、真空中で溶媒を除去することで、非晶質の帯黄色固体を得た。
【００８５】
注記：酢酸を添加すると、ガスの発生が認められ、反応は強く発熱性であった。
【００８６】
得られた固体を酢酸エチルでトリチュレートし、濾過によって単離し、ジエチルエーテルで洗浄することで、淡黄色の綿毛状固体を得た。プロトンＮＭＲにより、この物質は中間体４（２．９７ｇ、９８％）であることが確認された。
【００８７】
1Ｈ ＮＭＲ（ＤＭＳＯ）：δ ３．０９（３Ｈ，ｓ，ＮＣＨ3）、３．７７（２Ｈ，ｓ，ＮＣＨ2ＣＯ）、６．９２−６．９８（３Ｈ，ｍ，ＡｒＣＨＣＮ（ＣＨ3）2，ＡｒＣＨＣＮＨＣＯ，ＣＯＣＣＨＣＮ（ＣＨ3）2）、１０．０９（１Ｈ，ｓ，ＮＨ）。
【００８８】
実施例２（ｉｉｉ）：トリメチル（４−メチル−２，５−ジオキソ−２，３，４，５−テトラヒドロ−１Ｈ−ベンゾ［ｅ］［１，４］ジアゼピン−７−イル）アンモニウム（５）の合成
【００８９】
【化１１】
【００９０】
中間体４（２．９７ｇ、１３ｍｍｏｌ）をＤＣＭ（７５ｍＬ）に溶解し、窒素流下においてメチルトリフレート（１．６７ｍＬ、１５ｍｍｏｌ）を室温で滴下した。１分以内に、溶液から固体がクラッシュし始めた。１０分後、ＴＬＣ分析（酢酸エチル）はＳＭが消失したことを示した。したがって、反応は停止した。ジエチルエーテル（２０ｍＬ）を添加し、濾過により固体を白色の粘着性物質として単離した。反応は中間体５を定量的収率で与えた。
【００９１】
1Ｈ ＮＭＲ（ＤＭＳＯ）：δ ３．１５（３Ｈ，ｓ，ＣＯＮＣＨ3）、３．６１（９Ｈ，ｓ，Ｎ+（ＣＨ3）3）、３．９１（２Ｈ，ｓ，ＮＣＨ2ＣＯ）、７．２８（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝９．１９Ｈｚ，ＡｒＣＨＣＮＨＣＯ）、８．１０（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝３．０６ ａｎｄ ９．１９Ｈｚ，ＡｒＣＨＣＮ+（ＣＨ3）3）、８．２５（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝３．０６Ｈｚ，ＣＯＣＣＨＣＮ+（ＣＨ3）3）、１０．７３（１Ｈ，ｓ，ＮＨ）。
【００９２】
実施例２（ｉｖ）：トリメチルアンモニウム前駆体化合物（６）の合成
【００９３】
【化１２】
【００９４】
中間体５（２ｇ、５ｍｍｏｌ）をＴＨＦ（１５ｍＬ）及びＤＭＦ（１０ｍＬ）に溶解した溶液に、窒素下室温で水素化ナトリウム（鉱油中６０％分散液２４０ｍｇ、６ｍｍｏｌ）を添加した。４０分後、反応物を０℃に冷却し、ジエチルクロロホスフェート（１．０８ｍＬ、７．５ｍｍｏｌ）の滴下で処理し、３０分間撹拌した。他方、エチルイソシアノアセテート（０．６５６ｍＬ、６ｍｍｏｌ）をＤＭＦ（６ｍＬ）に溶解した撹拌溶液に、窒素下０℃で水素化ナトリウム（鉱油中６０％分散液２８０ｍｇ、７ｍｍｏｌ）を添加し、１５分間撹拌した。次いで、これを中間体５の混合物に０℃でゆっくりと添加した。これを０℃で０．５時間撹拌し、次いで室温で３０分間撹拌した。この時間後における粗生成物のＬＣＭＳ分析は所望質量の存在を示した。反応物を酢酸で奪活し、後処理した。
【００９５】
反応混合物を氷水中に注ぎ込んだ。これを酢酸エチルで抽出し、次いでＤＣＭで抽出した。有機層及び水のＬＣＭＳ分析は、所望物質が水層中に存在することを示唆した。したがって、（回転蒸発を用いて）これを乾固させ、次いで半分取ＨＰＬＣによって粗生成物を分析した。所望生成物６が２５％の収率で単離された。
【００９６】
ＨＰＬＣ条件：３０分間にわたる５〜９５％メタノール／水勾配、Ｌｕｎａ １０μ Ｃ１８（２）２５０ｘ５０ｍｍカラム。
【００９７】
1Ｈ ＮＭＲ（Ｄ2Ｏ）：δ １．３７（３Ｈ，ｔ，Ｊ＝７．１Ｈｚ，ＣＯＯＣＨ2ＣＨ3）、３．２２（３Ｈ，ｓ，ＮＣＨ3）、３．７３（９Ｈ，ｓ，Ｎ（ＣＨ3）3）、４．４１（２Ｈ，ｍ，ＣＯＯＣＨ2ＣＨ3）、４．（１Ｈ，ｂｒｄ，Ｊ＝１５．３Ｈｚ，ＮＣＨ2）、５．１３（１Ｈ，ｂｒｄ，Ｊ＝１５．３Ｈｚ，ＮＣＨ2）、７．９３（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝９．２Ｈｚ，ＡｒＣＨＣＮＨＣＯ）、８．２５（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝９．２ ａｎｄ ３．１Ｈｚ，ＡｒＣＨＣＮ+（ＣＨ3）3）、８．２７（１Ｈ，ｓ，ＡｒＮＣＨＮ）、８．４０（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝３．１Ｈｚ，ＣＯＣＣＨＣＮ+（ＣＨ3）3）。
【００９８】
実施例２（ｖ）：［18Ｆ］フルマゼニル（［18Ｆ］ＦＭＺ）を得るためのトリメチルアンモニウム前駆体化合物（６）の放射性フッ素化
【００９９】
【化１３】
【０１００】
［18Ｆ］フッ化物イオンをホイートンバイアルに移し、これにＴＢＡ・ＨＣＯ3（４００μＬ）を添加した。溶液をＮ2流（約０．５Ｌ／分）下において１１０℃で３０分間乾燥し、次いで室温に冷却した。
【０１０１】
乾燥した［18Ｆ］フッ化物イオンに、ＤＭＳＯ（１ｍＬ）中のトリメチルアンモニウム前駆体化合物（３１ｍｇ）を添加した。反応混合物を１３０℃で２５分間加熱し、次いで室温に冷却した。反応混合物をホイートンバイアルからＰ６バイアルに移した。ホイートンバイアルを水（１ｍＬ）ですすいでＰ６バイアルに移し、さらに３ｍＬの酢酸アンモニウム（５０ｍＭ）を添加した。反応混合物を精製用の分取ＨＰＬＣ（Ｈｉｃｈｒｏｍ ＡＣＥ Ｃ５ １０ｘ１００ｍｍカラム、溶媒Ａ＝５０ｍＭ酢酸アンモニウム，溶媒Ｂ＝ＭｅＣＮ、４ｍｌ／分、ＵＶ ２５４ｎｍ）上に装填した。
【０１０２】
分析ＨＰＬＣ（Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｌｕｎａ Ｃ１８（２）５０ｘ２ｍｍカラム、溶媒Ａ＝５０ｍＭ酢酸アンモニウム，溶媒Ｂ＝ＭｅＣＮ、０．４ｍＬ／分、ＵＶ ２５４ｎｍ）により、［18Ｆ］フルマゼニルが９５％の放射化学純度で得られたことが確認された。この方法を用いた［18Ｆ］フルマゼニル合成終了時収率は６％であった。
【０１０３】
実施例３：［18Ｆ］フルマゼニル（［18Ｆ］ＦＭＺ）用のヨードニウム塩前駆体化合物の製法
【０１０４】
【化１４】
【０１０５】
商業的に入手可能な５−ブロモイサト酸無水物（７）をサルコシンと共にＤＭＳＯ中において１５０℃で加熱した。これは中間体８を７５％の収率で与えた。反応スキーム中に示した条件を用いる環化により、中間体９が３０％の収率で得られた。中間体９及びヘキサメチル二スズ／Ｐｄ（ＰＰｈ3）4をマイクロ波中において１３０℃で１５分間加熱することで、スタンナン中間体１０を３５％の収率で得た。ヨードニウム転化は中間体１０及び（ジアセトキシヨード）ベンゼンを１：５の比で使用することで達成され、ＲＴで２４時間後に反応は完了した。所望のヨードニウム塩前駆体化合物１１は２１％の収率で得られた。
【０１０６】
実施例４：ｏ−ニトロマゼニルからのｏ−［18Ｆ］フルマゼニルの製法
【０１０７】
【化１５】
【０１０８】
実施例４（ｉ）：２−フルオロ−６−ニトロ安息香酸エチルエステル（１２）の製造
窒素流下０℃で２−フルオロ−６−ニトロ安息香酸（１．５ｇ、８ｍｍｏｌ）をＤＣＭ（３０ｍＬ）中に懸濁した。塩化オキサリル（１．５ｇ、１．０６ｍＬ、１２ｍｍｏｌ）をゆっくりと添加し、反応物を一晩撹拌し続けた。塩化アシルの生成はＴＬＣ（酢酸エチル）によって追跡できた。溶媒を真空中で除去し、残留物をＤＣＭ（２０ｍＬ）に再溶解した。エタノール（０．４ｇ、０．５ｍＬ、８ｍｍｏｌ）をＴＥＡ（０．８ｇ、１．１ｍＬ、８ｍｍｏｌ）と共に０℃で添加し、反応物を室温で３時間撹拌し続けた。この時間後、少量の混合物を1Ｈ及び19Ｆ ＮＭＲによって分析することで、１２の定量的生成が示された。
【０１０９】
反応混合物をＤＣＭ（２０ｍＬ）で希釈し、水（２×５０ｍＬ）で洗浄した。有機層を分離し、ＭｇＳＯ4上で乾燥し、濾過した。溶媒を除去乾固して褐色の油状物を得たが、これはやがて１２の白色結晶（１．５ｇ、８８％）を与えた。
【０１１０】
1Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ3）：δH １．３９（３Ｈ，ｔ，Ｊ＝７．１Ｈｚ，ＣＯＯＣＨ2ＣＨ3）、４．４７（２Ｈ，ｑ，Ｊ＝７．１Ｈｚ，ＣＯＯＣＨ2ＣＨ3）、７．４７（１Ｈ，ｔｄ，Ｊ＝８．３ ａｎｄ １．２Ｈｚ，ＮＯ2ＣＣＨＣＨＣＨＣＦ）、７．５９（１Ｈ，ｔｄ，Ｊ＝８．３ ａｎｄ ５．２Ｈｚ，ＮＯ2ＣＣＨＣＨＣＨＣＦ）、７．９８（１Ｈ，ｄｔ，Ｊ＝８．３ ａｎｄ ０．９Ｈｚ，ＮＯ2ＣＣＨＣＨＣＨＣＦ）；19ＦＮＭＲ（２８２ＭＨｚ，ＣＤＣｌ3）：δF −１１２．４。
【０１１１】
実施例４（ｉｉ）：中間体１３の製造
１２（３ｇ、０．０１４ｍｏｌ）及びエチル４−メチル−５−イミダゾールカルボキシレート（１．９６ｇ、０．０１３ｍｏｌ）を３０ｍＬのＤＭＳＯに溶解した。炭酸セシウム（４．８ｇ、０．０１４ｍｏｌ）を添加し、混合物を室温で３日間撹拌した。
【０１１２】
粗生成物を、３分間にわたる５〜９５％アセトニトリル／水勾配を用いたＬＣＭＳによって分析した。これは、正イオンとして３４８．０３の質量を有する新しい化学種を示した。
【０１１３】
ＴＬＣ（酢酸エチル）は、０．４のｒｆを有する新しいスポットを示した。
【０１１４】
反応混合物を氷水中に注ぎ込み、酢酸エチル（×１）で抽出し、次いでＤＣＭ（×３）で抽出した。有機層を合わせて濃縮し、フラッシュクロマトグラフィー（詳細は次頁に示す）用のシリカカラム上に液体装填した。生成物１３を７２％の収率（３．５ｇ）で単離した。
【０１１５】
1Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3）：δ １．１９（６Ｈ，ｔ，Ｊ＝７．０５Ｈｚ，ＣＯＯＯＣＨ2ＣＨ3）、１．４２（３Ｈ，ｔ，Ｊ＝７．０５Ｈｚ，ＣＯＯＣＨ2ＣＨ3）、２．３７（３Ｈ，ｓ，ＮＣＣＨ3）、４．２１（２Ｈ，ｑ，Ｊ＝７．０５Ｈｚ，ＣＯＯＣＨ2ＣＨ3）、４．４１（２Ｈ，ｑ，Ｊ＝７．０５Ｈｚ，ＣＯＯＣＨ2ＣＨ3）、７．４９（１Ｈ，ｓ，ＮＣＨＮ）、７．６２（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝７．９７Ｈｚ，ＣＣＨＣＨＣＨＣＮＯ2）、７．７７（１Ｈ，ｔ，Ｊ＝７．９７＆８．２７Ｈｚ，ＣＣＨＣＨＣＨＣＮＯ2）、８．３７（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝８．２７Ｈｚ，ＣＣＨＣＨＣＨＣＮＯ2）。
【０１１６】
実施例４（ｉｉｉ）：ｏ−ニトロマゼニル（１４）の製造
臭化物（４．２５ｇ、０．０１０ｍｏｌ）を５０ｍＬのメタノールに溶解した撹拌溶液に、ＤＩＰＥＡ（２．８４ｇ、３．８ｍＬ、０．０２２ｍｏｌ）及びメチルアミン（２Ｍメタノール溶液６．５ｍＬ、０．０１３ｍｏｌ）をメタノール（５０ｍＬ）に溶解した溶液をゆっくりと添加した。反応物を一晩還流した。酢酸エチルを用いたＴＬＣ分析は、出発原料１３から２つの主要新スポット（ｒｆ ０．５及び０．３）への定量的転化を示した。３分間にわたる５〜９５％アセトニトリル／水勾配を用いたＬＣＭＳによって粗生成物を分析した。これは、正イオンとして３３１．０３の質量を有する新しい化学種及び２つの他の主ピークを示した。溶媒を除去乾固し、粗生成物をＤＣＭ／酢酸エチル／１％メタノールを用いるフラッシュクロマトグラフィー用のカラム上に液体装填した。２つの主画分を合わせてＬＣＭＳに付したところ、２種の他の生成物との混合物中に所望の物質が示された。
【０１１７】
各画分を、ＤＣＭ／酢酸エチルを用いる第２の精製に付した。次いで、エタノールを用いて生成物１４を両画分から再結晶した。所望の物質が１５％の収率で純粋に単離された。
【０１１８】
1Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3）δ １．４３（３Ｈ，ｓ，ＣＨ3）、３．２０（３Ｈ，ｓ，ＮＣＨ3）、４．３２−４．５０（２Ｈ，ｍ，ＯＣＨ2）、４．５４（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１６Ｈｚ，ＮＣＨ）、５．３０（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１６Ｈｚ，ＮＣＨ’）、７．６６（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝８Ｈｚ ａｎｄ １Ｈｚ，ＮＣＣＨ）、７．７０（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝８ ａｎｄ ８Ｈｚ，ＣＨＣＨＣＨ）、７．９４（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝８ ａｎｄ １Ｈｚ，ＣＨＣＮＯ2）、７．９７（１Ｈ，ｓ，ＮＣＨＮ）。
【０１１９】
実施例４（ｉｖ）：ｏ−［18Ｆ］フルマゼニルを得るためのｏ−ニトロマゼニルの放射性フッ素化
ＦＡＳＴｌａｂ自動化合成モジュール（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ社）上で放射性フッ素化を行った。
【０１２０】
次のようにして構成部品からカセットを組み立てた。２０．５ｍｇのＫ２２２、１４０μｌのＫ2ＣＯ3（水中２．９ｍｇ）及び１．０６ｍｌのＭｅＣＮを含む１１ｍｍｏｌバイアル、１．３ｍｌの前駆体溶液（１．３ｍｌの乾燥ＤＭＦに溶解した６．５ｍｇの前駆体１４）を含む第２の１１ｍｍｏｌバイアル、リン酸（２．６ｍＬ、１０ｍＭ）を含む１３ｍｍバイアル、食塩水（０．９％、２．４ｍＬ）を含む１３ｍｍバイアル、並びにエタノール（４ｍＬ）を含む１３ｍｍバイアルをカセット中に挿入した。予熱したＱＭＡカートリッジを取り付け、ｔＣ１８＋カートリッジを取り付けた。
【０１２１】
所要の動作シーケンスファイルを制御ＰＣからＦＡＳＴｌａｂの内部メモリ中にアップロードした。カセットをＦＡＳＴｌａｂ合成装置上に装着した。ＦＡＳＴｌａｂ上のフッ化物イオン入口へのラインに連結された注射針を用いて［18Ｆ］フッ化物イオンバイアルを穿刺した。０．９％食塩水（７ｍＬ）を予め充填した清浄な空の生成物収集バイアルを連結した。次いで、合成シーケンスを開始し、ＦＡＳＴｌａｂハードウェア試験段階を完了した。フッ化物イオンをＱＭＡカートリッジ上に捕捉し、反応器内で乾燥した。前駆体１４の溶液を添加し、１３０℃で３０分間加熱した。反応混合物をリン酸（１０ｍＭ、２．２ｍＬ）で希釈した。粗生成物をＨＰＬＣループに移した後、ＨＰＬＣ運転を開始した（分取ＨＰＬＣ条件の詳細については下記参照）。
【０１２２】
【表３】
【０１２３】
分取ＨＰＬＣ上に生成物を注入した後、手動で約１分間にわたってカット（保持時間約１３．７分）を実施し、約１３ｍｌの水を含むバイアル中に回収した。分析用のホットセルから生成物の試料をサブ分配してポストした。
【０１２４】
【表４】
【０１２５】
合成終了時から２時間後において、放射化学純度は＞９９％であった。
【０１２６】
測定された総コールドリガンドは、体積１０ｍＬ当たり３μｇであった。これは、非放射性参照化合物を較正標準としながら分析ＨＰＬＣのＵＶピーク面積を用いて計算される。
【０１２７】
この自動化合成方法によれば、約１μｇの非放射性不純物総量を有する放射性標識物質が製造された。この自動化プロセスはまた、一定範囲の出発放射能レベルにわたって一貫した収率を与えた。４回の連続した合成例から得られた結果を下記に示す。
【０１２８】
【表５】
【０１２９】
実施例５：ｏ−ニトロマゼニルｔｅｒｔ−ブチルエステル（１７）からのｏ−［18Ｆ］フルマゼニルｔｅｒｔ−ブチルエステルの製法
【０１３０】
【化１６】
【０１３１】
実施例５（ｉ）：ニトロイサト酸（１５）の製造
エタノール（５ｍＬ）中の２，６−ジニトロ安息香酸（０．５ｇ、２．３６ｍｍｏｌ）を８０℃に加熱した。次いで、硫化アンモニウム（水中４０〜４８％）（０．３６ｍＬ、２．３６ｍｍｏｌ）を添加し（黄色の溶液が鮮橙色の懸濁液になった）、混合物を０．５時間加熱還流した。ＴＬＣ（ＤＭＦ ８０％、ＭｅＯＨ ２０％）は、出発原料の下方にかすかなスポットを示した。硫化アンモニウム（３．６ｍＬ、２０．４ｍｍｏｌ）を添加したところ、混合物は一層濃い橙色になった。次いで、この混合物を１時間加熱還流した後、ＴＬＣは反応が完了したことを示した。溶媒を減圧下で除去し、次いで残留物をメタノールで洗浄した。メタノール溶液をデカントして分離し、蒸発乾固することで、２−ニトロ−６−アミノ安息香酸を橙色の固体として得た。次いでこれを、フラッシュクロマトグラフィー（６０ＣＶにわたりＤＭＦ ９０％／ＭｅＯＨ １０％→２０％ＭｅＯＨ）を用いて精製することで、所望の物質（０．２ｇ、４６％）を得た。
【０１３２】
1Ｈ ＮＭＲ（Ｄ6−ＤＭＳＯ）δ ３．１６（２Ｈ，ｓ，ＮＨ2）、６．８０（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝８ ａｎｄ １Ｈｚ，Ｈ2ＮＣＣＨ）、６．９３（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝８ ａｎｄ １Ｈｚ，ＣＨＣＮＯ2）、７．２２（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝８ ａｎｄ ８Ｈｚ，ＣＨＣＨＣＨ）。
【０１３３】
２−ニトロ−６−アミノ安息香酸（２．８ｇ、１５．４ｍｍｏｌ）をジオキサン（２０ｍＬ）に溶解した。トリホスゲン（１．５２ｇ、５．１ｍｍｏｌ）を添加した。次いで、混合物を１時間加熱還流した。次いで、混合物を放冷した。次いで、沈殿を濾過によって集めることで、イサト酸無水物を定量的収率で得た。
【０１３４】
1Ｈ ＮＭＲ（Ｄ6−ＤＭＳＯ）δ ７．３３（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝８ ａｎｄ １Ｈｚ，ＡｒＣＨ）、７．５９（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝８ ａｎｄ １Ｈｚ，ＡｒＣＨ）、７．８９（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝８Ｈｚ，ＡｒＣＨ）、１２．２（１Ｈ，ｂｒ ｓ，ＮＨ）。
【０１３５】
実施例５（ｉｉ）：４−メチル−６−ニトロ−３，４−ジヒドロ−１Ｈ−ベンゾ［ｅ］［１，４］ジアゼピン−２，５−ジオン（１６）の製造
ニトロイサト酸無水物（１５）（３．５ｇ、１６．８ｍｍｏｌ）及びサルコシン（１．５０ｇ、１６．８ｍｍｏｌ）をＤＭＳＯ（８ｍＬ）に溶解した。次いで、混合物を１５０℃に予熱された加熱マントル内に配置した。次いで、混合物をこの温度で約３０分間加熱した後、反応混合物を水（５０ｍＬ）中に注ぎ込んだ。得られた褐色の沈殿を濾過によって集め、酢酸エチルでトリチュレートすることで、淡褐色の粉末（０．９ｇ、１１％）を得た。
【０１３６】
1Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ6）：δH ３．０８（３Ｈ，ｓ，ＮＣＨ3）、４．１６（２Ｈ，ｂｒ ｓ，ＣＨ2）、７．３９（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝８．０ ａｎｄ ２．０Ｈｚ，ＨＮＣＣＨ）、７．６６（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝８．０ ａｎｄ ８．０Ｈｚ，ＣＨＣＨＣＨ）、７．７２（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝８．０ ａｎｄ ２．０Ｈｚ，ＣＨＣＮＯ2）ａｎｄ １０．８０（１Ｈ，ｂｒ ｓ，ＮＨ）；13ＣＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ6）：δC ３４．９（ＮＣＨ3）、５１．８（ＮＣＨ2）、１１９．９（ＣＨＣＨＣＮＨ）、１２１．０（Ｃ−ＣＯ）、１２５．１（ＣＨＣＨＣＮＯ2）、１３８．３（ＣＮＨ）、１５１．０（Ｃ−ＮＯ2）、１６３．２（Ｃ＝Ｏ）ａｎｄ １６９．７（Ｃ＝Ｏ）。
【０１３７】
実施例５（ｉｉｉ）：ｏ−ニトロマゼニルｔｅｒｔ−ブチルエステル（１７）の製造
ＴＨＦ（５６ｍＬ）中の中間体１６（０．７ｇ、２．９８ｍｍｏｌ）に、０℃でカリウムｔｅｒｔ−ブトキシド（０．３７ｇ、３．２７ｍｍｏｌ）を添加した。次に、混合物を０℃で２０分間撹拌し（その間に鮮黄色の沈殿が認められた）、次いで−３５℃に冷却した。ジエチルクロロホスフェート（０．６７ｇ、３．８８ｍｍｏｌ、０．５６ｍＬ）をゆっくりと添加した。反応物を０℃で３０分間撹拌し、その間に混合物はわずかに黄色味を増した。反応フラスコを−３５℃に冷却し、ｔｅｒｔ−ブチルイソシアノアセテートの溶液（０．４６ｇ、３．２６ｍｍｏｌ、０．４８ｍＬ）を添加し、次いでカリウムｔｅｒｔ−ブトキシド（０．３７ｇ、３．２７ｍｍｏｌ）を添加した。次いで、懸濁液を室温で一晩撹拌し続けた。反応物をＮａＨＣＯ3水溶液（５０ｍＬ）で奪活し、ＥｔＯＡｃ（３×５０ｍＬ）で抽出した。有機層を合わせ、ＭｇＳＯ4上で乾燥し、濃縮して褐色の油状物を得た。粗物質を、酢酸エチル（Ａ）：メタノール（Ｂ）（０〜１％Ｂ、１００ｇ、４０ｍＬ／分）で溶出するシリカゲルクロマトグラフィーによって精製した。１７を淡黄色の固体（９ｍｇ、１％）として得た。
【０１３８】
1Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ3）：δH １．６４（９Ｈ，ｓ，Ｃ（ＣＨ3）3）、３．１９（３Ｈ，ｓ，ＮＣＨ3）、４．５２（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１５．０Ｈｚ，ＣＯＮＣＨ3ＣＨaＨb）、５．４５（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１５Ｈｚ，ＣＯＮＣＨ3ＣＨaＨb）、７．６４（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝９．０ ａｎｄ ３．０Ｈｚ，ＮＣＣＨＣＨ）、７．７３（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝９．０ ａｎｄ ９．０Ｈｚ，ＮＣＣＨＣＨ）、７．９３（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝９．０ ａｎｄ ３．０Ｈｚ，Ｏ2ＮＣＣＨＣＨＣＨ）ａｎｄ ７．９４（１Ｈ，ｓ，ＮＣＨＮ）。
【０１３９】
実施例５（ｉｖ）：ｏ−［18Ｆ］フルマゼニルｔｅｒｔ−ブチルエステルを得るためのｏ−ニトロマゼニルｔｅｒｔ−ブチルエステル（１７）の放射性フッ素化
ＴＲＡＣＥＲｌａｂ自動化合成モジュール（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ社）上で放射性フッ素化を行った。プレコンディショニング済みのＱＭＡカートリッジ上に［18Ｆ］フッ化物イオンを捕捉し、次いでＫｒｙｐｔｏｆｉｘ ２．２．２（１１ｍｇ）をＭｅＣＮ（２０００μＬ）及びＫ2ＣＯ3（８０μＬの水中、１．７ｍｇ）に溶解した溶液を用いてバイアル１から反応器に移した。窒素＋真空フローを使用しながら、溶液を１００℃で１０分間、次いで１２０℃で２０分間乾燥し、次いで５０℃に冷却した。
【０１４０】
乾燥した［18Ｆ］フッ化物イオンに、ＤＭＦ（１ｍＬ）中のｏ−ニトロマゼニルｔｅｒｔ−ブチルエステル（１７、５ｍｇ）をバイアル３から添加した。反応混合物を１３０℃で３０分間加熱し、次いで５０℃に冷却した。反応混合物をバイアル５からの１０ｍＭリン酸（２．５ｍＬ）で希釈し、粗生成物管に移した。
【０１４１】
次いで、粗生成物を分取ＨＰＬＣループに手動で移した。分取ＨＰＬＣは１７．５分の保持時間を有するピークを与えたが、これを水（１２ｍＬ）の入ったＴＲＡＣＥＲｌａｂの丸底フラスコ内にカットした。分取ＨＰＬＣシステムは液体フローシンチレーションカウンターを備えていた。
【０１４２】
【表６】
【０１４３】
丸底フラスコ内の混合物を、（１ｍＬのエタノール、次いで２ｍＬの水でプレコンディショニングを施した）Ｃ１８ ｌｉｔｅ ＳＰＥ上に捕捉した。ＳＰＥを水（３ｍＬ）で洗浄し、ＥｔＯＨ（０．５ｍＬ）及びリン酸緩衝食塩水（４．５ｍＬ）を用いて粗生成物をＰ６バイアル中に溶出した。リン酸緩衝食塩水を用いて生成物をさらに希釈することで、１０ｍＬの最終体積を得た。
【０１４４】
【表７】
【０１４５】
合成終了時から２時間後において、放射化学純度は＞９９％であった。
【０１４６】
測定された総コールドリガンドは、（非放射性参照化合物を較正標準としながら分析ＨＰＬＣのＵＶピーク面積を用いて計算して）体積１０ｍＬ当たり６μｇであった。
【０１４７】
実施例６：ｏ−［18Ｆ］フルマゼニルイソプロピルエステルを得るためのｏ−ニトロマゼニルイソプロピルエステル（１８）の放射性フッ素化
【０１４８】
【化１７】
【０１４９】
実施例６（ｉ）：ｏ−ニトロマゼニルイソプロピルエステル（１８）の製造
マイクロ波容器内において、１４（製法は実施例４（ｉｉｉ）に記載、２０ｍｇ、０．０６ｍｍｏｌ）を２ｍＬのイソプロパノールに溶解し、５０μｌのチタン（ＩＶ）イソプロポキシドを添加した。マイクロ波条件は、温度：８５℃、時間：６０分であった。ＬＣＭＳにより、出発原料から所望生成物への定量的転化が確認された。これはまた、酢酸エチルを用いるＴＬＣによっても確認された。過剰のイソプロパノールを除去乾固し、粗混合物を溶離剤としてペトロール及び酢酸エチルを用いるフラッシュクロマトグラフィー用のカラム上に液体装填した。ＤＣＭ／メタノールを用いて該物質を再び精製した。１８（１５ｍｇ）が純粋に得られた（７３％）。
【０１５０】
1Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3）δ １．４３（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．１Ｈｚ，ＣＨ3）、１．４５（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．１Ｈｚ，ＣＨ3）、３．２０（３Ｈ，ｓ，ＮＣＨ3）、４．５３（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１６Ｈｚ，ＣＨ）、５．２８（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１６Ｈｚ，ＣＨ’）、５．３３（１Ｈ，ｍ，ＣＯＯＣＨ（ＣＨ3）2）、７．６６（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝０．９２，８．２７Ｈｚ，ＣＨＣＨＣＨＣＮＯ2）、７．７５（１Ｈ，ｔ，Ｊ＝８．３Ｈｚ，ＣＨＣＨＣＨＣＮＯ2）、７．９４（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝０．９２，８．２７Ｈｚ，ＣＨＣＨＣＨＣＮＯ2）、７．９７（１Ｈ，ｓ，ＮＣＨＮ）。
【０１５１】
実施例６（ｉｉ）：ｏ−［18Ｆ］フルマゼニルイソプロピルエステルを得るためのｏ−ニトロマゼニルイソプロピルエステル（１８）の放射性フッ素化
ＴＲＡＣＥＲｌａｂ自動化合成モジュール（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ社）上で放射性フッ素化を行った。プレコンディショニング済みのＱＭＡカートリッジ上に［18Ｆ］フッ化物イオンを捕捉し、次いでＫｒｙｐｔｏｆｉｘ ２．２．２（１１ｍｇ）をＭｅＣＮ（２０００μＬ）及びＫ2ＣＯ3（８０μＬの水中、１．７ｍｇ）に溶解した溶液を用いてバイアル１から反応器に移した。窒素＋真空フローを使用しながら、溶液を１００℃で１０分間、次いで１２０℃で２０分間乾燥し、次いで５０℃に冷却した。
【０１５２】
乾燥した［18Ｆ］フッ化物イオンに、ＤＭＦ（１ｍＬ）中のｏ−ニトロマゼニルｔｅｒｔ−ブチルエステル（２．５ｍｇ）をバイアル３から添加した。反応混合物を１３０℃で３０分間加熱し、次いで５０℃に冷却した。反応混合物をバイアル５からの１０ｍＭリン酸（２．５ｍＬ）で希釈し、粗生成物管に移した。
【０１５３】
次いで、粗生成物を分取ＨＰＬＣループに手動で移した。分取ＨＰＬＣは２３分の保持時間を有するピークを与えたが、これを水（１５ｍＬ）の入ったＴＲＡＣＥＲｌａｂの丸底フラスコ内にカットした。分取ＨＰＬＣシステムは液体フローシンチレーションカウンターを備えていた。
【０１５４】
【表８】
【０１５５】
丸底フラスコ内の混合物を、（１ｍＬのエタノール、次いで２ｍＬの水でプレコンディショニングを施した）Ｃ１８ ｌｉｔｅ ＳＰＥ上に捕捉した。ＳＰＥを水（３ｍＬ）で洗浄し、ＥｔＯＨ（０．８ｍＬ）及びリン酸緩衝食塩水（７．２ｍＬ）を用いて粗生成物をＰ６バイアル中に溶出した。
【０１５６】
【表９】
【０１５７】
合成終了時から３時間後において、放射化学純度は＞９９％であった。
【０１５８】
測定された総コールドリガンドは、（非放射性参照化合物を較正標準としながら分析ＨＰＬＣのＵＶピーク面積を用いて計算して）体積８ｍＬ当たり６μｇであった。総非放射性不純物は約２μｇであった。
【０１５９】
実施例７：ｏ−［18Ｆ］フルマゼニルのインビボ体内分布
成体雄Ｓｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙラット（体重２０２±３７ｇ、平均±ＳＤ）に、側尾静脈を通して１〜５ＭＢｑのｏ−［18Ｆ］フルマゼニルを注射した。いずれの動物も意識があったが、注射中は軽く拘束し、次いで短期代謝ケージ内に収容した。特定の時点、即ち注射後（ｐｉ）３０秒、２分、１０分、３０分及び６０分（各時点についてｎ＝３）に、動物を頸部脱臼によって屠殺した。剖検後、脳及び末梢の組織又は体液を試料採取した。Ｗａｌｌａｃガンマカウンターを用いて脳試料中の放射能を測定した。アッセイ後、放射性崩壊に関する自動補正を含む双晶ガンマカウンターシステム（ＢＡＳＩＬ社）を用いて脳組織を残りの器官又は組織試料と共にアッセイした。下記表は、脳領域において得られたデータを示している。データは平均（±ＳＤ）として表され、すべてがｎ＝３である。アステリスク（*）で示されたデータは％ｉｄ／ｇである。
【０１６０】
【表１０】
【０１６１】
脳内への放射能の初期取込みは注射後３０秒で１．４±０．８％ｉｄであり、注射後２分で１．８±０．５％ｉｄのピークに達した。注射後２分では放射能レベルの着実な減少が見られ、注射後３０分での０．９±０．２％ｉｄは注射後６０分までに０．３±０．１％ｉｄに低下した。
【０１６２】
早い時点で最高の放射能レベルを有する領域は、前前頭皮質（注射後１０分で１．３９±０．０６％ｉｄ）であった。ＧＡＢＡリッチ領域とＧＡＢＡプア領域との間における良好な領域差別化が注射後３０分まで存在していた。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
次の式Ｉの化合物を得るための方法であって、
【化１】
（式中、
Ｒ1及びＲ2の一方は18Ｆであって、他方は水素であり、
Ｒ3はＣ3-5複素環であるか、或いはＲ3はＣ（＝Ｏ）−Ｏ−Ｒ4（式中、Ｒ4は水素又は直鎖若しくは枝分れＣ1-4アルキルである。）である。）
（ｉ）次の式Ｉａの前駆体化合物を用意する段階、及び
【化２】
（式中、
Ｒ11及びＲ12の一方は脱離基であって、他方は水素であり、
Ｒ11が前記脱離基である場合、それはトリ−Ｃ1-3アルキルアンモニウム及び−Ｉ+−Ａｒ（式中、Ａｒは１以上のＲ*基で置換されたフェニルであり、Ｒ*は水素、ニトロ、シアノ、ハロゲン、Ｃ1-10ヒドロキシアルキル、Ｃ2-10カルボキシアルキル、Ｃ1-10アルキル、Ｃ2-10アルコキシアルキル、Ｃ1-10ヒドロキシアルキル、Ｃ1-10アミノアルキル、Ｃ1-10ハロアルキル、Ｃ6-14アリール、Ｃ3-12ヘテロアリール、Ｃ3-20アルキルアリール、Ｃ2-10アルケニル及びＣ2-10アルキニルから選択される。）から選択され、
Ｒ12が前記脱離基である場合、それはニトロ、トリ−Ｃ1-3アルキルアンモニウム及び−Ｉ+−Ａｒ（式中、ＡｒはＲ11に関して上記に定義した通りである。）から選択され、
Ｒ13は式ＩのＲ3に関して定義した通りである。）
（ｉｉ）前記前駆体化合物を適当な［18Ｆ］フッ化物イオン源と反応させる段階
を含んでなる方法。
【請求項２】
Ｒ1が18Ｆである、請求項１記載の方法。
【請求項３】
Ｒ11がトリメチルアンモニウムである、請求項２記載の方法。
【請求項４】
Ｒ11が−Ｉ+−Ａｒである、請求項２記載の方法。
【請求項５】
Ｒ2が18Ｆである、請求項１記載の方法。
【請求項６】
Ｒ12がトリメチルアンモニウムである、請求項５記載の方法。
【請求項７】
Ｒ12が−Ｉ+−Ａｒである、請求項５記載の方法。
【請求項８】
Ｒ12がニトロである、請求項５記載の方法。
【請求項９】
Ｒ3及びＲ13が独立にＣ（＝Ｏ）−Ｏ−Ｒ4（式中、Ｒ4は直鎖又は枝分れＣ1-4アルキルである。）である、請求項１乃至請求項８のいずれか１項記載の方法。
【請求項１０】
Ｒ4がエチル、イソプロピル又はｔｅｒｔ−ブチルである、請求項９記載の方法。
【請求項１１】
前記適当な［18Ｆ］フッ化物イオン源が［18Ｆ］フッ化カリウム及び［18Ｆ］フッ化セシウムから選択される、請求項１乃至請求項１０のいずれか１項記載の方法。
【請求項１２】
前記適当な［18Ｆ］フッ化物イオン源が［18Ｆ］フッ化カリウムであり、Ｋｒｙｐｔｏｆｉｘ（商標）を用いてフッ化物イオンが活性化される、請求項１１記載の方法。
【請求項１３】
さらに、
（ｉｉｉ）過剰の［18Ｆ］フッ化物イオンを除去する段階、及び／又は
（ｉｖ）存在する場合には保護基を除去する段階、及び／又は
（ｖ）有機溶媒を除去する段階、及び／又は
（ｖｉ）得られた化合物を生体適合性キャリヤーと共に製剤化して、哺乳動物への投与に適した放射性医薬組成物を得る段階
を含む、請求項１乃至請求項１２のいずれか１項記載の方法。
【請求項１４】
当該方法が自動化される、請求項１乃至請求項１３のいずれか１項記載の方法。
【請求項１５】
請求項１４記載の方法を実施するためのカセットであって、
（ｉ）請求項１、請求項３、請求項４及び請求項６乃至請求項１０のいずれか１項記載の方法で定義された前駆体化合物を含む容器、並びに
（ｉｉ）請求項１、請求項１１及び請求項１２のいずれか１項で定義された適当な［18Ｆ］フッ化物イオン源を用いて容器を溶出するための手段
を含んでなるカセット。
【請求項１６】
さらに、過剰の［18Ｆ］フッ化物イオンを除去するためのイオン交換カートリッジを含む、請求項１５記載のカセット。
【請求項１７】
請求項１記載の方法で定義された式Ｉの化合物であって、Ｒ1が水素であり、Ｒ2が18Ｆであり、Ｒ4がエチル、イソプロピル又はｔｅｒｔ−ブチルである、式Ｉの化合物。
【請求項１８】
請求項１記載の方法で定義された式Ｉａの前駆体化合物であって、Ｒ11及びＲ12の一方がトリメチルアンモニウム又は−Ｉ+−Ａｒであり、他方が水素である、式Ｉａの前駆体化合物。
【請求項１９】
Ｒ11及びＲ12の一方がトリメチルアンモニウムであり、他方が水素である、請求項１８記載の前駆体化合物。
【請求項２０】
請求項１記載の方法で定義された式Ｉａの前駆体化合物であって、Ｒ12がニトロ、トリメチルアンモニウム又は−Ｉ+−Ａｒである、式Ｉａの前駆体化合物。
【請求項２１】
Ｒ12がニトロである、請求項２０記載の前駆体化合物。
【請求項２２】
Ｒ13がＣ（＝Ｏ）−Ｏ−Ｒ4（式中、Ｒ4はエチル、イソプロピル又はｔｅｒｔ−ブチルである。）である、請求項１８乃至請求項２１のいずれか１項記載の前駆体化合物。
【請求項１】
次の式Ｉの化合物を得るための方法であって、
【化１】
（式中、
Ｒ1及びＲ2の一方は18Ｆであって、他方は水素であり、
Ｒ3はＣ3-5複素環であるか、或いはＲ3はＣ（＝Ｏ）−Ｏ−Ｒ4（式中、Ｒ4は水素又は直鎖若しくは枝分れＣ1-4アルキルである。）である。）
（ｉ）次の式Ｉａの前駆体化合物を用意する段階、及び
【化２】
（式中、
Ｒ11及びＲ12の一方は脱離基であって、他方は水素であり、
Ｒ11が前記脱離基である場合、それはトリ−Ｃ1-3アルキルアンモニウム及び−Ｉ+−Ａｒ（式中、Ａｒは１以上のＲ*基で置換されたフェニルであり、Ｒ*は水素、ニトロ、シアノ、ハロゲン、Ｃ1-10ヒドロキシアルキル、Ｃ2-10カルボキシアルキル、Ｃ1-10アルキル、Ｃ2-10アルコキシアルキル、Ｃ1-10ヒドロキシアルキル、Ｃ1-10アミノアルキル、Ｃ1-10ハロアルキル、Ｃ6-14アリール、Ｃ3-12ヘテロアリール、Ｃ3-20アルキルアリール、Ｃ2-10アルケニル及びＣ2-10アルキニルから選択される。）から選択され、
Ｒ12が前記脱離基である場合、それはニトロ、トリ−Ｃ1-3アルキルアンモニウム及び−Ｉ+−Ａｒ（式中、ＡｒはＲ11に関して上記に定義した通りである。）から選択され、
Ｒ13は式ＩのＲ3に関して定義した通りである。）
（ｉｉ）前記前駆体化合物を適当な［18Ｆ］フッ化物イオン源と反応させる段階
を含んでなる方法。
【請求項２】
Ｒ1が18Ｆである、請求項１記載の方法。
【請求項３】
Ｒ11がトリメチルアンモニウムである、請求項２記載の方法。
【請求項４】
Ｒ11が−Ｉ+−Ａｒである、請求項２記載の方法。
【請求項５】
Ｒ2が18Ｆである、請求項１記載の方法。
【請求項６】
Ｒ12がトリメチルアンモニウムである、請求項５記載の方法。
【請求項７】
Ｒ12が−Ｉ+−Ａｒである、請求項５記載の方法。
【請求項８】
Ｒ12がニトロである、請求項５記載の方法。
【請求項９】
Ｒ3及びＲ13が独立にＣ（＝Ｏ）−Ｏ−Ｒ4（式中、Ｒ4は直鎖又は枝分れＣ1-4アルキルである。）である、請求項１乃至請求項８のいずれか１項記載の方法。
【請求項１０】
Ｒ4がエチル、イソプロピル又はｔｅｒｔ−ブチルである、請求項９記載の方法。
【請求項１１】
前記適当な［18Ｆ］フッ化物イオン源が［18Ｆ］フッ化カリウム及び［18Ｆ］フッ化セシウムから選択される、請求項１乃至請求項１０のいずれか１項記載の方法。
【請求項１２】
前記適当な［18Ｆ］フッ化物イオン源が［18Ｆ］フッ化カリウムであり、Ｋｒｙｐｔｏｆｉｘ（商標）を用いてフッ化物イオンが活性化される、請求項１１記載の方法。
【請求項１３】
さらに、
（ｉｉｉ）過剰の［18Ｆ］フッ化物イオンを除去する段階、及び／又は
（ｉｖ）存在する場合には保護基を除去する段階、及び／又は
（ｖ）有機溶媒を除去する段階、及び／又は
（ｖｉ）得られた化合物を生体適合性キャリヤーと共に製剤化して、哺乳動物への投与に適した放射性医薬組成物を得る段階
を含む、請求項１乃至請求項１２のいずれか１項記載の方法。
【請求項１４】
当該方法が自動化される、請求項１乃至請求項１３のいずれか１項記載の方法。
【請求項１５】
請求項１４記載の方法を実施するためのカセットであって、
（ｉ）請求項１、請求項３、請求項４及び請求項６乃至請求項１０のいずれか１項記載の方法で定義された前駆体化合物を含む容器、並びに
（ｉｉ）請求項１、請求項１１及び請求項１２のいずれか１項で定義された適当な［18Ｆ］フッ化物イオン源を用いて容器を溶出するための手段
を含んでなるカセット。
【請求項１６】
さらに、過剰の［18Ｆ］フッ化物イオンを除去するためのイオン交換カートリッジを含む、請求項１５記載のカセット。
【請求項１７】
請求項１記載の方法で定義された式Ｉの化合物であって、Ｒ1が水素であり、Ｒ2が18Ｆであり、Ｒ4がエチル、イソプロピル又はｔｅｒｔ−ブチルである、式Ｉの化合物。
【請求項１８】
請求項１記載の方法で定義された式Ｉａの前駆体化合物であって、Ｒ11及びＲ12の一方がトリメチルアンモニウム又は−Ｉ+−Ａｒであり、他方が水素である、式Ｉａの前駆体化合物。
【請求項１９】
Ｒ11及びＲ12の一方がトリメチルアンモニウムであり、他方が水素である、請求項１８記載の前駆体化合物。
【請求項２０】
請求項１記載の方法で定義された式Ｉａの前駆体化合物であって、Ｒ12がニトロ、トリメチルアンモニウム又は−Ｉ+−Ａｒである、式Ｉａの前駆体化合物。
【請求項２１】
Ｒ12がニトロである、請求項２０記載の前駆体化合物。
【請求項２２】
Ｒ13がＣ（＝Ｏ）−Ｏ−Ｒ4（式中、Ｒ4はエチル、イソプロピル又はｔｅｒｔ−ブチルである。）である、請求項１８乃至請求項２１のいずれか１項記載の前駆体化合物。
【公表番号】特表２０１３−５０７３４３（Ｐ２０１３−５０７３４３Ａ）
【公表日】平成２５年３月４日（２０１３．３．４）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２０１２−５３２６１１（Ｐ２０１２−５３２６１１）
【出願日】平成２２年１０月８日（２０１０．１０．８）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＥＰ２０１０／０６５０７７
【国際公開番号】ＷＯ２０１１／０４２５２９
【国際公開日】平成２３年４月１４日（２０１１．４．１４）
【出願人】（３０５０４０７１０）ジーイー・ヘルスケア・リミテッド (99)
【Ｆターム（参考）】
【公表日】平成２５年３月４日（２０１３．３．４）
【国際特許分類】
【出願日】平成２２年１０月８日（２０１０．１０．８）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＥＰ２０１０／０６５０７７
【国際公開番号】ＷＯ２０１１／０４２５２９
【国際公開日】平成２３年４月１４日（２０１１．４．１４）
【出願人】（３０５０４０７１０）ジーイー・ヘルスケア・リミテッド (99)
【Ｆターム（参考）】
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