血液検査における検体粒子の洗浄方法及び装置
【課題】 遠心分離法以外の方法により、検体粒子の回収率の低下を伴わずに検体中に存在する不純物を効率的に除去可能にすることにより自動化を可能にする検体粒子の洗浄方法及び装置を提供する。
【解決手段】 検体と試薬とを免疫学的に反応させた反応液を洗浄液と共に精密フィルタ２からなる濾過部を備えた容器１に入れ、該濾過部の吐出側に減圧を負荷して洗浄液を濾過する操作と該容器１へ新たに洗浄液を補給する操作とを反復繰り返すようにする。好ましくは、濾過操作の途中で精密フィルタ２の濾過面を間欠的または連続的に更新する操作を行う。
【解決手段】 検体と試薬とを免疫学的に反応させた反応液を洗浄液と共に精密フィルタ２からなる濾過部を備えた容器１に入れ、該濾過部の吐出側に減圧を負荷して洗浄液を濾過する操作と該容器１へ新たに洗浄液を補給する操作とを反復繰り返すようにする。好ましくは、濾過操作の途中で精密フィルタ２の濾過面を間欠的または連続的に更新する操作を行う。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は、血液検査における検体粒子の洗浄方法及び装置に関し、さらに詳しくは遠心分離法によらない洗浄により洗浄の自動化を可能にした検体粒子の洗浄方法及び装置に関する。
【０００２】
【従来の技術】血液検査には、血液型検査、梅毒検査、ウィルス検査、血球計数検査などがある。このうち血液型検査は、ＡＢＯ式血液型判定検査、Ｒｈ式血液型判定検査、その他の血液型判定の抗体スクリーニング検査などがある。これらの血液検査のなかで、抗体スクリーニング検査は不規則抗体スクリーニングと呼ばれ、規則抗体（抗Ａ抗体，抗Ｂ抗体）以外の抗体で、なんらかの抗原刺激により産生された抗体を検出する方法であって、検出しようとする抗体の種類により生理食塩水法、ブロメリン法、アルブミン法、間接抗グロブリン試験（クームス試験）などがある。しかし、このうちのクームス試験だけが未だに全自動化されていないのが実情である。
【０００３】クームス試験は、検体中の赤血球に対するＩｇＧ抗体を検出するために行われるが、ＩｇＧ抗体のみでは赤血球の凝集が起こらないので、検体と赤血球との反応後にクームス血清（抗ヒトＩｇＧ抗体）を加えて凝集させ、その凝集パターンにより判定を行うようにしている。そのため、検体と赤血球を反応させたのち、検体中に多量に存在する他のＩｇＧ抗体を出来るだけ除く必要がある。
【０００４】しかしながら、現行の用法によるクームス試験では、遠心分離による洗浄方法が採用されているため操作が煩雑になることが避けられず、洗浄の自動化を含めたクームス試験の全自動化の実現が望まれている。また、現在、洗浄工程のみを自動化した遠心分離法による装置は販売されているが、この装置では洗浄効率を上げるために洗浄回数を増やすと、赤血球の回収率が低下してしまうなどの問題があった。
【０００５】
【発明が解決しようとする課題】本発明の目的は、検体と試薬との免疫学的凝集反応を原理とする血液検査における検体粒子の洗浄において、遠心分離法以外の方法により検体粒子の回収率の低下を伴わずに検体中に存在する不純物を効率的に除去可能にすることにより自動化を可能にした洗浄方法及び装置を提供することにある。
【０００６】
【課題を解決するための手段】上記目的を達成する本発明の血液検査における検体粒子の洗浄方法は、検体と試薬とを免疫学的に反応させた反応液を洗浄液と共に精密フィルタからなる濾過部を備えた容器に入れ、該濾過部の吐出側に減圧を負荷して前記洗浄液を濾過する操作と該容器へ新たに洗浄液を補給する操作とを反復繰り返すようにすることを特徴とするものである。さらに好ましくは、前記減圧濾過の工程途中で、前記精密フィルタの濾過面を更新する操作を組合せるようにしたものである。
【０００７】このように精密フィルタからなる濾過部を備えた容器を利用し、その中に反応液と洗浄液とを入れて、濾過部の吐出側に減圧を負荷しながら洗浄液を濾過する操作と、その容器に新たな洗浄液を補給する操作とを反復繰り返すことにより、反応液（検体）中の不純物を効率的に除去することが可能になる。さらに精密フィルタの濾過面を随時更新することにより、一層検体中の不純物の除去を効率的にすることができる。
【０００８】また、上記目的を達成する本発明の血液検査における検体粒子の洗浄装置は、精密フィルタからなる濾過部を備え、検体と試薬とを免疫学的に反応させた反応液を洗浄液と共に保持する容器と、該濾過部の吐出側に減圧を負荷する手段と、前記容器へ洗浄液を補給する手段とから構成されてなるものである。このように構成された洗浄装置によれば、上述の血液検査における検体粒子の洗浄方法を実施することが可能になる。
【０００９】
【発明の実施の形態】図１は、本発明による検体粒子の洗浄方法のフローチャートの一例を示す。このフローチャートにおいて、工程Ａ〜Ｅは本発明の洗浄方法に使用する精密フィルタ付き容器自体を洗浄する予備工程を示す。この予備工程は本発明において必ずしも必要とするものではない。
【００１０】本発明による検体粒子の洗浄方法は、上記予備工程に続いて工程Ｆ〜Ｍにより、次のように実施される。まず、検体血清と試薬血球とを免疫学的に反応させることにより感作血球を含む反応液を作る。次いで、この反応液の一定量を、精密フィルタが底部に取り付けられた容器に分注し（工程Ｆ）、さらにこの反応液に対して、洗浄回数に応じた量の洗浄液を加える（工程Ｇ）。或いは、この工程Ｆ，Ｇとしては、別の試験管で一定量の反応液と洗浄液とを混合した混合液を予め作っておき、それを上記精密フィルタ付き容器に分注するようにしてもよい。
【００１１】精密フィルタ付き容器に一定量の混合液が充填されたら、精密フィルタ（濾過部）の吐出側（下流側）を減圧し、容器内の洗浄液を吸引・排出して濾過を行う（工程Ｈ）。この減圧濾過を一定時間継続すると、やがて精密フィルタの濾過面に細胞が徐々に蓄積されて濾過面が目詰まり閉塞するようになる。このような閉塞状態が生じたら、濾過面の更新操作によって細胞を再浮遊させ、濾過面を更新するようにするとよい（工程Ｉ）。
【００１２】濾過面更新操作は、ノズル或いはピペットにより洗浄液を供給する操作、或いは容器中に補給された洗浄液を吸引・排水する反復操作、或いは洗浄液の供給と吸引・排水との組合せ操作などによって行うことが好ましく、これらの操作により発生する水流の運動エネルギを利用する。この濾過面更新操作としては、好ましくは濾過部の洗浄液の吸引・排出の繰り返しを、減圧濾過中に１ステップで連続的に行うとか、或いは吸引・排出を数ステップ、好ましくは５ステップ以下の頻度で間欠的に行い、減圧濾過終了後に洗浄液の追加供給を行うようにするものであってもよく、また、減圧濾過を行いながら洗浄液の追加供給を１ステップで連続的に行うか、或いは数ステップ、好ましくは５ステップ以下で間欠的に行うようにしてもよく、後者の場合には、さらに効率的な濾過面更新および洗浄を可能にする。
【００１３】洗浄液の追加供給は、減圧濾過中に液面を常に感知しながら連続的に供給するようにするか、或いは予め定めた一定のレベルまで液面が低下したことを感知したら予め定めた量を供給するようにするか、或いは一定時間間隔ごと（好ましくは１０秒以下）供給するようにするとよい。さらには、上記洗浄液の追加供給を一定時間間隔（好ましくは１０秒以下）ごとに行う場合、洗浄液の追加停止の間に、濾過部の洗浄液の吸引・排出の繰り返しを１ステップで連続的に行うか、或いは吸引・排出を数ステップ、好ましくは５ステップ以下で間欠的に行うようにするとよい。また、上記洗浄液の追加供給を数ステップ、好ましくは５ステップ以下で間欠的に行い、洗浄液の排出を減圧濾過により数ステップ、好ましくは５ステップ以下で間欠的に行うようにして、減圧濾過と濾過面更新操作とを同時に行うようにしてもよい。
【００１４】上記濾過面更新操作は、工程Ｈの減圧濾過の継続時間を予め一定時間に設定し、その一定時間を経過した時点で定期的に実施するようにすればよい。また、この濾過面更新操作に当たっては、減圧濾過を停止すると共に、精密フィルタ（濾過部）の吐出側を加圧することにより加圧力を濾過面に作用させるか、或いは精密フィルタ（濾過部）の吐出側に液体、好ましくは０．８５〜０．９％の塩化ナトリウム水溶液を満たし、重力による自然濾過を止めた状態ですることが望ましい。
【００１５】上記減圧濾過操作と濾過面更新操作とを繰り返すことにより、洗浄液は精密フィルタ付き容器から次第に排出されていくため、容器内の液面は次第に低下していき、元の反応液だけが残る状態になる。このように容器内の液面が元の反応液だけの量に相当するレベルまで低下したら、再び計算量の洗浄液を補給し、上記減圧濾過と濾過面更新操作を再び液面が元の反応液だけの量に相当するレベルになるまで繰り返す。このような洗浄液の減圧濾過と新たな洗浄液の補給の操作を所期の洗浄効率が達成されるまで繰り返す（工程Ｋ，Ｌ）。
【００１６】上記のような減圧濾過操作を繰り返すことによって、反応液中の検体粒子をほぼ完全に近い状態に洗浄することができる。勿論、必要により上記減圧濾過操作を更に繰り返すことは差し支えない。このように洗浄を終わった反応液は精密フィルタ付き容器から回収し（工程Ｍ）、それをマイクロタイタウェルまたは試験管に分注し（工程Ｎ）、クームス検査に供するものとする。
【００１７】洗浄済みの反応液を回収した後は、容器を取外したり（工程Ｏ）、容器や精密フィルタ等の洗浄を行ったりすることにより（工程Ｐ）、洗浄工程を終了する。本発明の洗浄方法において、減圧濾過のために濾過部の吐出側に負荷する減圧度としては、０〜７０ｍｍＨｇの範囲、さらに好ましくは２０〜７０ｍｍＨｇの範囲にすることが好ましい。このような範囲の減圧度にすることにより、血球細胞が精密フィルタを通過しないようにし、かつ血球細胞の破壊を防止することができるので、所望の洗浄効果を上げることができる。
【００１８】また、本発明において使用する精密フィルタは、孔径が５００Å〜１０μｍ、より好ましくは０．１〜１０μｍ、さらに好ましくは０．３〜５μｍ、特に好ましくは０．６〜３μｍの範囲の細孔集合体を使用するのがよい。このような細孔集合体の材質としては、タンパク質などの非特異的な吸着が少なく、血球細胞への毒性もなく、血球細胞の吸着がない物質が望ましい。例えば、ポリスルホン、ポリカーボネイト、硝酸セルロース、酢酸セルロース、ポリ弗化ビニリデンなどの多孔体、或いは天然繊維や合成繊維などの不織布や編織物を使用することができる。
【００１９】また、本発明の洗浄方法において、精密フィルタ付き容器に入れた反応液に対して加える洗浄液の量としては、容器の容量と必要とする洗浄効率（２０００倍以上）により決められる。しかし、洗浄効率を非常に高くしても洗浄効果はほぼ飽和状態に達し、洗浄時間が長くなるだけであって効率的でなくなる。また、濾過部に負荷する検体粒子の濃度（即ち、洗浄する検体の実質の容積（希釈液を除いた）を濾過面積で割った量）としては、１２μｌ／ｃｍ2 以下、さらに望ましくは９μｌ／ｃｍ2 以下にするのがよい。
【００２０】本発明において減圧濾過操作すると、血球細胞は精密フィルタの濾過面に集積され、濾過面を次第に閉塞するようになるが、この濾過閉塞は減圧濾過を連続的または随時停止し、濾過更新操作により細胞を浮遊させて解除することができる。この濾過面更新操作は洗浄液を吸排するノズルを濾過面の近傍に配置すれば、容易に実施することができる。
【００２１】また、この濾過面更新操作を行うときは、減圧濾過操作を停止し、精密フィルタの吐出側から濾過とは逆方向に弱い加圧力を作用させるようにするとよい。このような加圧力の負荷によって、重力による自然濾過を防ぐことができるので、このような状態で濾過面更新操作を行うと、濾過面の更新を一層効果的にすることができる。
【００２２】図２は、本発明の洗浄方法を実施するための装置の一例を示す。この装置の使用によって、前述した図１の洗浄操作を円滑に行うことができる。図２において、１は反応液と洗浄液との混合液を入れるための容器であり、フレーム１０上に固定具１１によって着脱自在に固定されている。容器１の底部には、精密フィルタ２が焼結ガラスフィルタ３により下側から支えられるように継手１２により着脱自在に固定されている。
【００２３】容器１の内側には、保持台６に支持された洗浄液供給ノズル４と濾過面更新用ノズル５とが下向きに挿入されている。保持台６はケーブル１５の駆動によって上下動し、この保持台６の上下動により上記洗浄液供給ノズル４とフィルタ表面更新用ノズル５とが、容器１の内外に出し入れされるようになっている。洗浄液供給ノズル４には、三方弁７を介して洗浄液供給ポンプ８と洗浄液タンク９とが連結されている。洗浄液供給ポンプ８は、ピストン８ａを上方へストロークすることにより、洗浄液タンク９から一定量の洗浄液を三方弁７を介してポンプ８内に吸引し、次いでピストン８ａを下方にストロークすることにより、その洗浄液を三方弁７を介して容器１へ供給するようになっている。
【００２４】濾過面更新用ノズル５には、吸排用ポンプ１６が連結されている。この吸排用ポンプ１６は、ピストン１６ａを図の右側にストロークすることにより、濾過面更新用ノズル５の先端から洗浄液をポンプ内に吸引し、次いで左側にストロークすると上記吸い込んだ洗浄液を精密フィルタ２の濾過面に向けて噴射し、濾過面上部を攪拌して濾過面の更新を行うようにしている。また、濾過面更新用ノズル５の上端には駆動モータ１７が連結され、その駆動モータ１７の回転駆動によって濾過面更新用ノズル５をノズル軸を中心に回転させ、攪拌効果を上げるようにしている。
【００２５】精密フィルタ２，焼結フィルタ３が取り付けられた容器１の底部にはポンプヘッド１８が取り付けられ、そのポンプヘッド１８はリフト２２の上下動により着脱自在になっている。また、ポンプヘッド１８には三方弁１９を介して吸引ポンプ２０と大気開放弁２１とが連結されており、リフト２２には廃液タンク２３が連結され、その底部に廃液弁２４が取り付けられている。
【００２６】三方弁１９は、吸引ポンプ２０のピストン２０ａが吸気側（図の右側）にストロークするときと、吐出側（図の左側）にストロークするときとで、その連通先を大気開放弁２１側とポンプヘッド１８とに交互に切り替えるように構成されている。そして、この三方弁１９が、吸引ポンプ２０がピストン２０ａを図の右側にストロークするときポンプヘッド１８側に連通し、かつ左側にストロークするとき大気開放弁２１側に連通するように交互に作用すると、上記吸引ポンプ２０の作動によって精密フィルタ２（焼結フィルタ３）の吐出側を減圧し、容器１内の洗浄液を減圧濾過するようになっている。
【００２７】他方、上記三方弁１９が、吸引ポンプ２０がピストン２０ａを図の右側にストロークするとき大気開放弁２１側に連通し、かつ左側にストロークするときポンプヘッド１８側に連通するように交互に作用すると、上記吸引ポンプ２０の作動によって精密フィルタ２（焼結フィルタ３）の吐出側を加圧し、その加圧力を精密フィルタ２の濾過面に作用させて自然濾過を阻止し、それによって濾過面更新操作に際しての濾過面の更新作用を促進するようになっている。
【００２８】濾過面更新操作に使用される濾過面更新用ノズル５は、洗浄液を吸排するとともに、排出時の噴射力によって濾過面を閉塞する血球細胞を浮遊させる作用を有するものであれば特に限定されない。例えば、図３〜図７に示すようなものを例示することができる。いずれの濾過面更新用ノズル５も、洗浄液の噴射によって濾過面上の攪拌効果を上げるように工夫されている。
【００２９】図３(A),(B) 〜図４(A),(B) に示す濾過面更新用ノズル５は、それぞれ先端に複数の細孔５ａを設け、その噴射方向をいずれも斜めに傾斜させるようにしたもので、外周側位置の細孔５ａは中心側に向け、また中心側位置の細孔５ａは外周側に向けるようになっている。また、図５(A),(B) 〜図６(A),(B) に示す濾過面更新用ノズル５は、それぞれ先端に複数の細孔５ａを設け、そのうち外周側に配置した細孔５ａを、それぞれ更にノズルの斜め外側に向けて傾斜するようにしている。図７(A),(B) に示す濾過面更新用ノズル５は、中心の細孔５ａは下側に向いているが、その外周側に設けた細孔５ａは、噴射流が周方向に旋回するように設けられている。
【００３０】図９は、本発明の洗浄装置の他の実施態様を示すものである。図９において、底面に精密フィルタを備えた精密フィルタ付容器３０は、回転可能に設置された円盤状のターンテーブル３１の複数の開口部３１ａ〜３１ｄに嵌まるように搭載され、押さえ具３２によってターンテーブル３１上に着脱自在に固定される。ターンテーブル３１の開口部３１ａにおいて、精密フィルタ付容器３０の内側には、洗浄液を供給すると共に濾過面を更新するための洗浄液供給・濾過面更新用ノズル３３と液面センサ３４とが下向きに挿入されており、これらが一体的に容器３０の内外に出し入れされるようになっている。
【００３１】洗浄液供給・濾過面更新用ノズル３３は、洗浄液供給・濾過面更新用ポンプ３５に直接連結されていると共に、電磁弁３６を介して洗浄液タンク３７に連結されている。また、洗浄液タンク３７は加圧ポンプ３８に連結されている。加圧ポンプ３８により加圧された洗浄液タンク３７内の洗浄液は、電磁弁３６の開閉により洗浄液供給・濾過面更新用ポンプ３５と洗浄液供給・濾過面更新用ノズル３３との間に導かれ、この洗浄液供給・濾過面更新用ポンプ３５の圧力によって精密フィルタ付容器３０内に濾過面に向けて噴射される。
【００３２】ターンテーブル３１の開口部３１ａにセットされた精密フィルタ付容器３０の底部には、上下方向に着脱自在のチャンバ３９が配置されている。このチャンバ３９の上部と精密フィルタ付容器３０の下部とはパッキン等の介在によりシールされる。チャンバ３９は圧力センサ４０を備えていると共に、加減圧ポンプ４１に連結されている。圧力センサ４０の測定値は加減圧ポンプ４１を制御するコントローラ４２に入力され、この圧力センサ４０の測定値に基づいてチャンバ３９内の圧力が制御される。また、チャンバ３９は廃液タンク４３に連結され、その底部の排水バルブ４４から廃液を排出するようになっている。
【００３３】一方、ターンテーブル３１の開口部３１ｂにセットされた精密フィルタ付容器３０の底部には、上下方向に着脱自在の加圧水槽４５が配置されている。この加圧水槽４５は電磁弁４６を介して加圧ポンプ３８に連結されている。ターンテーブル３１の開口部３１ｄの外側には、複数の試験管４７を並列に格納する試験管ラック４８が配置されている。試験管ラック４８とターンテーブル３１の開口部３１ｄとの間には、分注ポンプ５０に連結された分注ノズル４９が両者間を移動可能に設置されている。この分注ノズル４９は、試験管４７内の反応液を採取し、これを精密フィルタ付容器３０内に注入する。
【００３４】一方、ターンテーブル３１の開口部３１ｂの外側には、複数の試験管５１を並列に格納する試験管ラック５２が配置されている。試験管ラック５２とターンテーブル３１の開口部３１ｂとの間には、移液ポンプ５４に連結された移液ノズル５３が両者間を移動可能に設置されている。この移液ノズル５３は、精密フィルタ付容器３０内の反応液を採取し、これを試験管５１内に注入する。
【００３５】また、分注ノズル４９及び移液ノズル５３の下方には、それぞれノズル洗浄槽５５，５６が設けられている。ノズル洗浄槽５５，５６はそれぞれポンプ５７，５８及び電磁弁５９，６０を介して洗浄液タンク６１から洗浄液が供給されるようになっている。上述のように構成された洗浄装置を使用して検体粒子の洗浄を行う場合、試験管４７内に、検体血清と試薬血球とを免疫学的に反応させることにより作った感作血球を含む反応液を保持し、その一定量を分注ノズル４９によってターンテーブル３１に開口部３１ｄに位置する精密フィルタ付容器３０に分注する（工程Ｆ）。分注後、ターンテーブル３１を所定の角度だけ回転させ、反応液を分注した精密フィルタ付容器３０をチャンバ３９の上方に移動させる。このとき、押さえ具３２が下降し、かつチャンバ３９が上昇して精密フィルタ付容器３０を固定する。
【００３６】次に、洗浄液タンク３７から供給された洗浄液を洗浄液供給・濾過面更新用ノズル３３を介してある一定量だけ精密フィルタ付容器３０内に分注する（工程Ｇ）。その際、洗浄液供給・濾過面更新用ノズル３３は、精密フィルタ付容器３０内のある定められた深さまで、好ましくは、反応液の一定量をＱ（ｍｍ3 ）、濾過面の面積をＳ（ｍｍ2 ）とすると、濾過面からＱ／Ｓ（ｍｍ）以内に降下し、洗浄が終了するまでその位置に留まる。
【００３７】次に、精密フィルタ付容器３０の吐出側であるチャンバ３９を加減圧ポンプで減圧し、容器内の洗浄液を濾過する（工程Ｈ）。そして、圧力センサ４０で常にチャンバ３９に負荷する減圧を検知しながら圧力を制御する。チャンバ３９に負荷する減圧は、好ましくは０〜７０ｍｍＨｇ、さらに好ましくは２０〜７０ｍｍＨｇの範囲にするとよい。
【００３８】本実施態様からなる装置では、洗浄液の追加供給は、減圧濾過中に液面を常に感知しながら連続的に行うようにしている。減圧濾過を一定時間継続すると精密フィルタの濾過面に細胞が徐々に蓄積されて濾過面が目詰まりによって閉塞するようになる。このような閉塞状態が生じたら、洗浄液供給・濾過面更新用ポンプ３５を駆動源にして、洗浄液供給・濾過面更新用ポンプ３３から洗浄液を吸排して濾過面の更新操作を行い、細胞を再浮遊させる。この濾過面更新操作に当たっては、減圧濾過を停止すると共に、チャンバ３９を加減圧ポンプ４１により加圧することにより濾過面に加圧力を作用させ、重力による自然濾過を強制的に止めた状態にする。
【００３９】上記減圧濾過操作と濾過面更新操作とを予め定めた回数繰り返した後、液面センサ３４により液面を検知し、液面がもとの反応液の量に相当するレベルになったところで減圧濾過を停止する。洗浄終了後、押さえ具３２を上昇させ、かつチャンバ３９を下降させて精密フィルタ付容器３０を解放する。次に、ターンテーブル３１を所定の角度だけ回転させ、加圧水槽４５の上方まで移動させると、押さえ具３２が下降し、かつ加圧水槽４５が上昇して精密フィルタ付容器３０が固定される。そして、加圧ポンプ３８で水圧による加圧力を濾過面に作用させ、濾過面に付着した細胞を再浮遊させる。
【００４０】次に、上記のように細胞を再浮遊させた反応液を移液ポンプ５４及び移液ノズル５３を使用して試験管５１に移液する。なお、試験管５１の替わりにマイクロプレートを使用してもよい。また、使用済みの精密フィルタ付容器３０は、押さえ具３２を上昇させ、かつ加圧水槽４５を下降させた後、手で廃棄するか、或いは機械的にターンテーブル３１から取り外して廃棄する。
【００４１】一方、使用した分注ノズル４９は分注直後に、移液ノズル５３は移液直後にそれぞれノズル洗浄槽５５，５６において洗浄し、検体による汚染を防止する。また、濾過によって廃液タンク４３に溜まった廃液は排水バルブ４４から排出する。上述の実施態様では、精密フィルタ付容器３０の移送手段としてターンテーブル３１を使用しているが、この移送手段は特に限定されるものではない。
【００４２】図１０は精密フィルタ付容器３０の移送手段の他の態様を示すものである。図１０において、プラスチック製のプレート７０は、上面に多数の開口部を有し、これら開口部に多数の精密フィルタ付容器３０が嵌まるように搭載される。このプレート７０はベルト、爪等の機械的な駆動源によって二次元方向に移動可能となっており、所定の精密フィルタ付容器３０を分注部、チャンバ部、移液部まで移送するようになっている。プレート７０における精密フィルタ付容器３０の配列は、Ｘ軸方向に１〜２４個、さらに好ましくは２〜１２個とし、Ｙ軸方向に１〜１０個とすることが好ましい。このような範囲で精密フィルタ付容器３０を配列させることにより洗浄作業を効率良く行うことができる。
【００４３】
【実施例】図８に示す実験装置を洗浄装置として使用し、下記手順によって洗浄実験を行った。なお、実験装置の精密フィルタ１としては、孔径０．８μｍ，０．２μｍ，０．４５μｍの硝酸セルロース膜を使用する場合、孔径０．８μｍのポリスルホン膜を使用する場合、孔径０．６５μｍのポリ弗化ビニリデン膜を使用する場合の５通りを使用した。
【００４４】（１）生理食塩水で２％に希釈したＯ型スクリーニング血球と、予め抗Ｅ抗体の存在が確認されている血清とを１：２の割合で総量３００μｌに混合した混合液を試験管に分注する。
（２）次いで、上記混合液を３７℃で６０分感作させる。
（３）上記感作血球を容器１に移す。
【００４５】（４）上記容器１に洗浄液として生理食塩水５．７ｃｃを加え、攪拌後に真空ポンプ２０により元圧６０ｍｍＨｇで減圧しながら濾過し、液量が４００μｌになるまで濃縮する。すなわち、容器１に予め４００μｌの位置に印を付けておき、この印まで液面レベルが低下するまで減圧濾過を行う。
（５）上記（４）の操作を再度２回繰り返す。
【００４６】（６）容器１内に残された被洗浄液をよく攪拌した後、９０μｌを試験管に分注する。
（７）試験管にクームス血清を２滴添加して、３４００回転，１５秒遠心して凝集の有無を確認する。
（８）ＡＢ血清（陰性血清）についても、上記（１）〜（７）の手順で実験を行い、非特異凝集のないことを確認する。
【００４７】一方、上記本発明の洗浄方法の比較方法として、上記と同一検体で、血球３０μｌ、血清６０μｌを分注し、感作した感作血球を用い、市販の遠心分離式の血球洗浄器を使用して洗浄を行ったのち、クームス血清を２滴添加して、３４００回転，１５秒遠心して凝集の有無を確認した。上記各実験の結果は、本発明の方法で洗浄した抗Ｅ抗体感作血球は、各種の精密フィルタで実施したいずれ実験の場合も、凝集を確認することができた。また、陰性血清については凝集せず、非特異凝集の可能性がないことを確認することができた。特に、孔径０．８μｍの硝酸セルロース膜、孔径０．８μｍのポリスルホン膜は洗浄速度が早く優れていた。
【００４８】他方、市販の遠心分離式洗浄器で洗浄した検体も同様の結果が得られ、遠心分離法を使用しない本発明による洗浄方法の有効性を確認することができた。
【００４９】
【発明の効果】上述したように、本発明の洗浄方法及び装置によれば、遠心分離法によらずに検体中の不純物を効率的に除去することができる。さらに精密フィルタの濾過面更新操作をしながら行うようにすれば、本発明による検体中の不純物除去効果を一層効率的にすることができる。
【図面の簡単な説明】
【図１】本発明を実施するフローチャートの一例を示す図である。
【図２】本発明の洗浄方法を実施する装置の概略図である。
【図３】（Ａ），（Ｂ）は、それぞれ本発明に使用される濾過面更新用ノズルの横断面図と、（Ａ）図におけるＡ−Ａ矢視断面図である。
【図４】（Ａ），（Ｂ）は、それぞれ本発明に使用される他の実施態様からなる濾過面更新用ノズルの横断面図及び（Ａ）図におけるＡ−Ａ矢視断面図である。
【図５】（Ａ），（Ｂ）は、それぞれ本発明に使用される更に他の実施態様からなる濾過面更新用ノズルの横断面図及び（Ａ）図におけるＡ−Ａ矢視断面図である。
【図６】（Ａ），（Ｂ）は、それぞれ本発明に使用される更に他の実施態様からなる濾過面更新用ノズルの横断面図及び（Ａ）図におけるＡ−Ａ矢視断面図である。
【図７】（Ａ），（Ｂ）は、それぞれ本発明に使用される更に他の実施態様からなる濾過面更新用ノズルの横断面図及び（Ａ）図におけるＡ−Ａ矢視断面図である。
【図８】本発明の実施例で使用した実験装置の概略図である。
【図９】（Ａ），（Ｂ）は、それぞれ本発明の洗浄装置の他の実施形態を示す概略図及び（Ａ）図におけるＡ−Ａ矢視断面図である。
【図１０】（Ａ），（Ｂ）は、それぞれ本発明の洗浄装置に使用する精密フィルタ付容器の保持プレートの平面図及び（Ａ）図の側面図である。
【符号の説明】
１ 容器
２ 精密フィルタ
３ 焼結ガラスフィルタ
４ 洗浄液供給ノズル
５ 濾過面更新用ノズル
１２ 継手
１８ ポンプヘッド
２０ 吸引ポンプ
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は、血液検査における検体粒子の洗浄方法及び装置に関し、さらに詳しくは遠心分離法によらない洗浄により洗浄の自動化を可能にした検体粒子の洗浄方法及び装置に関する。
【０００２】
【従来の技術】血液検査には、血液型検査、梅毒検査、ウィルス検査、血球計数検査などがある。このうち血液型検査は、ＡＢＯ式血液型判定検査、Ｒｈ式血液型判定検査、その他の血液型判定の抗体スクリーニング検査などがある。これらの血液検査のなかで、抗体スクリーニング検査は不規則抗体スクリーニングと呼ばれ、規則抗体（抗Ａ抗体，抗Ｂ抗体）以外の抗体で、なんらかの抗原刺激により産生された抗体を検出する方法であって、検出しようとする抗体の種類により生理食塩水法、ブロメリン法、アルブミン法、間接抗グロブリン試験（クームス試験）などがある。しかし、このうちのクームス試験だけが未だに全自動化されていないのが実情である。
【０００３】クームス試験は、検体中の赤血球に対するＩｇＧ抗体を検出するために行われるが、ＩｇＧ抗体のみでは赤血球の凝集が起こらないので、検体と赤血球との反応後にクームス血清（抗ヒトＩｇＧ抗体）を加えて凝集させ、その凝集パターンにより判定を行うようにしている。そのため、検体と赤血球を反応させたのち、検体中に多量に存在する他のＩｇＧ抗体を出来るだけ除く必要がある。
【０００４】しかしながら、現行の用法によるクームス試験では、遠心分離による洗浄方法が採用されているため操作が煩雑になることが避けられず、洗浄の自動化を含めたクームス試験の全自動化の実現が望まれている。また、現在、洗浄工程のみを自動化した遠心分離法による装置は販売されているが、この装置では洗浄効率を上げるために洗浄回数を増やすと、赤血球の回収率が低下してしまうなどの問題があった。
【０００５】
【発明が解決しようとする課題】本発明の目的は、検体と試薬との免疫学的凝集反応を原理とする血液検査における検体粒子の洗浄において、遠心分離法以外の方法により検体粒子の回収率の低下を伴わずに検体中に存在する不純物を効率的に除去可能にすることにより自動化を可能にした洗浄方法及び装置を提供することにある。
【０００６】
【課題を解決するための手段】上記目的を達成する本発明の血液検査における検体粒子の洗浄方法は、検体と試薬とを免疫学的に反応させた反応液を洗浄液と共に精密フィルタからなる濾過部を備えた容器に入れ、該濾過部の吐出側に減圧を負荷して前記洗浄液を濾過する操作と該容器へ新たに洗浄液を補給する操作とを反復繰り返すようにすることを特徴とするものである。さらに好ましくは、前記減圧濾過の工程途中で、前記精密フィルタの濾過面を更新する操作を組合せるようにしたものである。
【０００７】このように精密フィルタからなる濾過部を備えた容器を利用し、その中に反応液と洗浄液とを入れて、濾過部の吐出側に減圧を負荷しながら洗浄液を濾過する操作と、その容器に新たな洗浄液を補給する操作とを反復繰り返すことにより、反応液（検体）中の不純物を効率的に除去することが可能になる。さらに精密フィルタの濾過面を随時更新することにより、一層検体中の不純物の除去を効率的にすることができる。
【０００８】また、上記目的を達成する本発明の血液検査における検体粒子の洗浄装置は、精密フィルタからなる濾過部を備え、検体と試薬とを免疫学的に反応させた反応液を洗浄液と共に保持する容器と、該濾過部の吐出側に減圧を負荷する手段と、前記容器へ洗浄液を補給する手段とから構成されてなるものである。このように構成された洗浄装置によれば、上述の血液検査における検体粒子の洗浄方法を実施することが可能になる。
【０００９】
【発明の実施の形態】図１は、本発明による検体粒子の洗浄方法のフローチャートの一例を示す。このフローチャートにおいて、工程Ａ〜Ｅは本発明の洗浄方法に使用する精密フィルタ付き容器自体を洗浄する予備工程を示す。この予備工程は本発明において必ずしも必要とするものではない。
【００１０】本発明による検体粒子の洗浄方法は、上記予備工程に続いて工程Ｆ〜Ｍにより、次のように実施される。まず、検体血清と試薬血球とを免疫学的に反応させることにより感作血球を含む反応液を作る。次いで、この反応液の一定量を、精密フィルタが底部に取り付けられた容器に分注し（工程Ｆ）、さらにこの反応液に対して、洗浄回数に応じた量の洗浄液を加える（工程Ｇ）。或いは、この工程Ｆ，Ｇとしては、別の試験管で一定量の反応液と洗浄液とを混合した混合液を予め作っておき、それを上記精密フィルタ付き容器に分注するようにしてもよい。
【００１１】精密フィルタ付き容器に一定量の混合液が充填されたら、精密フィルタ（濾過部）の吐出側（下流側）を減圧し、容器内の洗浄液を吸引・排出して濾過を行う（工程Ｈ）。この減圧濾過を一定時間継続すると、やがて精密フィルタの濾過面に細胞が徐々に蓄積されて濾過面が目詰まり閉塞するようになる。このような閉塞状態が生じたら、濾過面の更新操作によって細胞を再浮遊させ、濾過面を更新するようにするとよい（工程Ｉ）。
【００１２】濾過面更新操作は、ノズル或いはピペットにより洗浄液を供給する操作、或いは容器中に補給された洗浄液を吸引・排水する反復操作、或いは洗浄液の供給と吸引・排水との組合せ操作などによって行うことが好ましく、これらの操作により発生する水流の運動エネルギを利用する。この濾過面更新操作としては、好ましくは濾過部の洗浄液の吸引・排出の繰り返しを、減圧濾過中に１ステップで連続的に行うとか、或いは吸引・排出を数ステップ、好ましくは５ステップ以下の頻度で間欠的に行い、減圧濾過終了後に洗浄液の追加供給を行うようにするものであってもよく、また、減圧濾過を行いながら洗浄液の追加供給を１ステップで連続的に行うか、或いは数ステップ、好ましくは５ステップ以下で間欠的に行うようにしてもよく、後者の場合には、さらに効率的な濾過面更新および洗浄を可能にする。
【００１３】洗浄液の追加供給は、減圧濾過中に液面を常に感知しながら連続的に供給するようにするか、或いは予め定めた一定のレベルまで液面が低下したことを感知したら予め定めた量を供給するようにするか、或いは一定時間間隔ごと（好ましくは１０秒以下）供給するようにするとよい。さらには、上記洗浄液の追加供給を一定時間間隔（好ましくは１０秒以下）ごとに行う場合、洗浄液の追加停止の間に、濾過部の洗浄液の吸引・排出の繰り返しを１ステップで連続的に行うか、或いは吸引・排出を数ステップ、好ましくは５ステップ以下で間欠的に行うようにするとよい。また、上記洗浄液の追加供給を数ステップ、好ましくは５ステップ以下で間欠的に行い、洗浄液の排出を減圧濾過により数ステップ、好ましくは５ステップ以下で間欠的に行うようにして、減圧濾過と濾過面更新操作とを同時に行うようにしてもよい。
【００１４】上記濾過面更新操作は、工程Ｈの減圧濾過の継続時間を予め一定時間に設定し、その一定時間を経過した時点で定期的に実施するようにすればよい。また、この濾過面更新操作に当たっては、減圧濾過を停止すると共に、精密フィルタ（濾過部）の吐出側を加圧することにより加圧力を濾過面に作用させるか、或いは精密フィルタ（濾過部）の吐出側に液体、好ましくは０．８５〜０．９％の塩化ナトリウム水溶液を満たし、重力による自然濾過を止めた状態ですることが望ましい。
【００１５】上記減圧濾過操作と濾過面更新操作とを繰り返すことにより、洗浄液は精密フィルタ付き容器から次第に排出されていくため、容器内の液面は次第に低下していき、元の反応液だけが残る状態になる。このように容器内の液面が元の反応液だけの量に相当するレベルまで低下したら、再び計算量の洗浄液を補給し、上記減圧濾過と濾過面更新操作を再び液面が元の反応液だけの量に相当するレベルになるまで繰り返す。このような洗浄液の減圧濾過と新たな洗浄液の補給の操作を所期の洗浄効率が達成されるまで繰り返す（工程Ｋ，Ｌ）。
【００１６】上記のような減圧濾過操作を繰り返すことによって、反応液中の検体粒子をほぼ完全に近い状態に洗浄することができる。勿論、必要により上記減圧濾過操作を更に繰り返すことは差し支えない。このように洗浄を終わった反応液は精密フィルタ付き容器から回収し（工程Ｍ）、それをマイクロタイタウェルまたは試験管に分注し（工程Ｎ）、クームス検査に供するものとする。
【００１７】洗浄済みの反応液を回収した後は、容器を取外したり（工程Ｏ）、容器や精密フィルタ等の洗浄を行ったりすることにより（工程Ｐ）、洗浄工程を終了する。本発明の洗浄方法において、減圧濾過のために濾過部の吐出側に負荷する減圧度としては、０〜７０ｍｍＨｇの範囲、さらに好ましくは２０〜７０ｍｍＨｇの範囲にすることが好ましい。このような範囲の減圧度にすることにより、血球細胞が精密フィルタを通過しないようにし、かつ血球細胞の破壊を防止することができるので、所望の洗浄効果を上げることができる。
【００１８】また、本発明において使用する精密フィルタは、孔径が５００Å〜１０μｍ、より好ましくは０．１〜１０μｍ、さらに好ましくは０．３〜５μｍ、特に好ましくは０．６〜３μｍの範囲の細孔集合体を使用するのがよい。このような細孔集合体の材質としては、タンパク質などの非特異的な吸着が少なく、血球細胞への毒性もなく、血球細胞の吸着がない物質が望ましい。例えば、ポリスルホン、ポリカーボネイト、硝酸セルロース、酢酸セルロース、ポリ弗化ビニリデンなどの多孔体、或いは天然繊維や合成繊維などの不織布や編織物を使用することができる。
【００１９】また、本発明の洗浄方法において、精密フィルタ付き容器に入れた反応液に対して加える洗浄液の量としては、容器の容量と必要とする洗浄効率（２０００倍以上）により決められる。しかし、洗浄効率を非常に高くしても洗浄効果はほぼ飽和状態に達し、洗浄時間が長くなるだけであって効率的でなくなる。また、濾過部に負荷する検体粒子の濃度（即ち、洗浄する検体の実質の容積（希釈液を除いた）を濾過面積で割った量）としては、１２μｌ／ｃｍ2 以下、さらに望ましくは９μｌ／ｃｍ2 以下にするのがよい。
【００２０】本発明において減圧濾過操作すると、血球細胞は精密フィルタの濾過面に集積され、濾過面を次第に閉塞するようになるが、この濾過閉塞は減圧濾過を連続的または随時停止し、濾過更新操作により細胞を浮遊させて解除することができる。この濾過面更新操作は洗浄液を吸排するノズルを濾過面の近傍に配置すれば、容易に実施することができる。
【００２１】また、この濾過面更新操作を行うときは、減圧濾過操作を停止し、精密フィルタの吐出側から濾過とは逆方向に弱い加圧力を作用させるようにするとよい。このような加圧力の負荷によって、重力による自然濾過を防ぐことができるので、このような状態で濾過面更新操作を行うと、濾過面の更新を一層効果的にすることができる。
【００２２】図２は、本発明の洗浄方法を実施するための装置の一例を示す。この装置の使用によって、前述した図１の洗浄操作を円滑に行うことができる。図２において、１は反応液と洗浄液との混合液を入れるための容器であり、フレーム１０上に固定具１１によって着脱自在に固定されている。容器１の底部には、精密フィルタ２が焼結ガラスフィルタ３により下側から支えられるように継手１２により着脱自在に固定されている。
【００２３】容器１の内側には、保持台６に支持された洗浄液供給ノズル４と濾過面更新用ノズル５とが下向きに挿入されている。保持台６はケーブル１５の駆動によって上下動し、この保持台６の上下動により上記洗浄液供給ノズル４とフィルタ表面更新用ノズル５とが、容器１の内外に出し入れされるようになっている。洗浄液供給ノズル４には、三方弁７を介して洗浄液供給ポンプ８と洗浄液タンク９とが連結されている。洗浄液供給ポンプ８は、ピストン８ａを上方へストロークすることにより、洗浄液タンク９から一定量の洗浄液を三方弁７を介してポンプ８内に吸引し、次いでピストン８ａを下方にストロークすることにより、その洗浄液を三方弁７を介して容器１へ供給するようになっている。
【００２４】濾過面更新用ノズル５には、吸排用ポンプ１６が連結されている。この吸排用ポンプ１６は、ピストン１６ａを図の右側にストロークすることにより、濾過面更新用ノズル５の先端から洗浄液をポンプ内に吸引し、次いで左側にストロークすると上記吸い込んだ洗浄液を精密フィルタ２の濾過面に向けて噴射し、濾過面上部を攪拌して濾過面の更新を行うようにしている。また、濾過面更新用ノズル５の上端には駆動モータ１７が連結され、その駆動モータ１７の回転駆動によって濾過面更新用ノズル５をノズル軸を中心に回転させ、攪拌効果を上げるようにしている。
【００２５】精密フィルタ２，焼結フィルタ３が取り付けられた容器１の底部にはポンプヘッド１８が取り付けられ、そのポンプヘッド１８はリフト２２の上下動により着脱自在になっている。また、ポンプヘッド１８には三方弁１９を介して吸引ポンプ２０と大気開放弁２１とが連結されており、リフト２２には廃液タンク２３が連結され、その底部に廃液弁２４が取り付けられている。
【００２６】三方弁１９は、吸引ポンプ２０のピストン２０ａが吸気側（図の右側）にストロークするときと、吐出側（図の左側）にストロークするときとで、その連通先を大気開放弁２１側とポンプヘッド１８とに交互に切り替えるように構成されている。そして、この三方弁１９が、吸引ポンプ２０がピストン２０ａを図の右側にストロークするときポンプヘッド１８側に連通し、かつ左側にストロークするとき大気開放弁２１側に連通するように交互に作用すると、上記吸引ポンプ２０の作動によって精密フィルタ２（焼結フィルタ３）の吐出側を減圧し、容器１内の洗浄液を減圧濾過するようになっている。
【００２７】他方、上記三方弁１９が、吸引ポンプ２０がピストン２０ａを図の右側にストロークするとき大気開放弁２１側に連通し、かつ左側にストロークするときポンプヘッド１８側に連通するように交互に作用すると、上記吸引ポンプ２０の作動によって精密フィルタ２（焼結フィルタ３）の吐出側を加圧し、その加圧力を精密フィルタ２の濾過面に作用させて自然濾過を阻止し、それによって濾過面更新操作に際しての濾過面の更新作用を促進するようになっている。
【００２８】濾過面更新操作に使用される濾過面更新用ノズル５は、洗浄液を吸排するとともに、排出時の噴射力によって濾過面を閉塞する血球細胞を浮遊させる作用を有するものであれば特に限定されない。例えば、図３〜図７に示すようなものを例示することができる。いずれの濾過面更新用ノズル５も、洗浄液の噴射によって濾過面上の攪拌効果を上げるように工夫されている。
【００２９】図３(A),(B) 〜図４(A),(B) に示す濾過面更新用ノズル５は、それぞれ先端に複数の細孔５ａを設け、その噴射方向をいずれも斜めに傾斜させるようにしたもので、外周側位置の細孔５ａは中心側に向け、また中心側位置の細孔５ａは外周側に向けるようになっている。また、図５(A),(B) 〜図６(A),(B) に示す濾過面更新用ノズル５は、それぞれ先端に複数の細孔５ａを設け、そのうち外周側に配置した細孔５ａを、それぞれ更にノズルの斜め外側に向けて傾斜するようにしている。図７(A),(B) に示す濾過面更新用ノズル５は、中心の細孔５ａは下側に向いているが、その外周側に設けた細孔５ａは、噴射流が周方向に旋回するように設けられている。
【００３０】図９は、本発明の洗浄装置の他の実施態様を示すものである。図９において、底面に精密フィルタを備えた精密フィルタ付容器３０は、回転可能に設置された円盤状のターンテーブル３１の複数の開口部３１ａ〜３１ｄに嵌まるように搭載され、押さえ具３２によってターンテーブル３１上に着脱自在に固定される。ターンテーブル３１の開口部３１ａにおいて、精密フィルタ付容器３０の内側には、洗浄液を供給すると共に濾過面を更新するための洗浄液供給・濾過面更新用ノズル３３と液面センサ３４とが下向きに挿入されており、これらが一体的に容器３０の内外に出し入れされるようになっている。
【００３１】洗浄液供給・濾過面更新用ノズル３３は、洗浄液供給・濾過面更新用ポンプ３５に直接連結されていると共に、電磁弁３６を介して洗浄液タンク３７に連結されている。また、洗浄液タンク３７は加圧ポンプ３８に連結されている。加圧ポンプ３８により加圧された洗浄液タンク３７内の洗浄液は、電磁弁３６の開閉により洗浄液供給・濾過面更新用ポンプ３５と洗浄液供給・濾過面更新用ノズル３３との間に導かれ、この洗浄液供給・濾過面更新用ポンプ３５の圧力によって精密フィルタ付容器３０内に濾過面に向けて噴射される。
【００３２】ターンテーブル３１の開口部３１ａにセットされた精密フィルタ付容器３０の底部には、上下方向に着脱自在のチャンバ３９が配置されている。このチャンバ３９の上部と精密フィルタ付容器３０の下部とはパッキン等の介在によりシールされる。チャンバ３９は圧力センサ４０を備えていると共に、加減圧ポンプ４１に連結されている。圧力センサ４０の測定値は加減圧ポンプ４１を制御するコントローラ４２に入力され、この圧力センサ４０の測定値に基づいてチャンバ３９内の圧力が制御される。また、チャンバ３９は廃液タンク４３に連結され、その底部の排水バルブ４４から廃液を排出するようになっている。
【００３３】一方、ターンテーブル３１の開口部３１ｂにセットされた精密フィルタ付容器３０の底部には、上下方向に着脱自在の加圧水槽４５が配置されている。この加圧水槽４５は電磁弁４６を介して加圧ポンプ３８に連結されている。ターンテーブル３１の開口部３１ｄの外側には、複数の試験管４７を並列に格納する試験管ラック４８が配置されている。試験管ラック４８とターンテーブル３１の開口部３１ｄとの間には、分注ポンプ５０に連結された分注ノズル４９が両者間を移動可能に設置されている。この分注ノズル４９は、試験管４７内の反応液を採取し、これを精密フィルタ付容器３０内に注入する。
【００３４】一方、ターンテーブル３１の開口部３１ｂの外側には、複数の試験管５１を並列に格納する試験管ラック５２が配置されている。試験管ラック５２とターンテーブル３１の開口部３１ｂとの間には、移液ポンプ５４に連結された移液ノズル５３が両者間を移動可能に設置されている。この移液ノズル５３は、精密フィルタ付容器３０内の反応液を採取し、これを試験管５１内に注入する。
【００３５】また、分注ノズル４９及び移液ノズル５３の下方には、それぞれノズル洗浄槽５５，５６が設けられている。ノズル洗浄槽５５，５６はそれぞれポンプ５７，５８及び電磁弁５９，６０を介して洗浄液タンク６１から洗浄液が供給されるようになっている。上述のように構成された洗浄装置を使用して検体粒子の洗浄を行う場合、試験管４７内に、検体血清と試薬血球とを免疫学的に反応させることにより作った感作血球を含む反応液を保持し、その一定量を分注ノズル４９によってターンテーブル３１に開口部３１ｄに位置する精密フィルタ付容器３０に分注する（工程Ｆ）。分注後、ターンテーブル３１を所定の角度だけ回転させ、反応液を分注した精密フィルタ付容器３０をチャンバ３９の上方に移動させる。このとき、押さえ具３２が下降し、かつチャンバ３９が上昇して精密フィルタ付容器３０を固定する。
【００３６】次に、洗浄液タンク３７から供給された洗浄液を洗浄液供給・濾過面更新用ノズル３３を介してある一定量だけ精密フィルタ付容器３０内に分注する（工程Ｇ）。その際、洗浄液供給・濾過面更新用ノズル３３は、精密フィルタ付容器３０内のある定められた深さまで、好ましくは、反応液の一定量をＱ（ｍｍ3 ）、濾過面の面積をＳ（ｍｍ2 ）とすると、濾過面からＱ／Ｓ（ｍｍ）以内に降下し、洗浄が終了するまでその位置に留まる。
【００３７】次に、精密フィルタ付容器３０の吐出側であるチャンバ３９を加減圧ポンプで減圧し、容器内の洗浄液を濾過する（工程Ｈ）。そして、圧力センサ４０で常にチャンバ３９に負荷する減圧を検知しながら圧力を制御する。チャンバ３９に負荷する減圧は、好ましくは０〜７０ｍｍＨｇ、さらに好ましくは２０〜７０ｍｍＨｇの範囲にするとよい。
【００３８】本実施態様からなる装置では、洗浄液の追加供給は、減圧濾過中に液面を常に感知しながら連続的に行うようにしている。減圧濾過を一定時間継続すると精密フィルタの濾過面に細胞が徐々に蓄積されて濾過面が目詰まりによって閉塞するようになる。このような閉塞状態が生じたら、洗浄液供給・濾過面更新用ポンプ３５を駆動源にして、洗浄液供給・濾過面更新用ポンプ３３から洗浄液を吸排して濾過面の更新操作を行い、細胞を再浮遊させる。この濾過面更新操作に当たっては、減圧濾過を停止すると共に、チャンバ３９を加減圧ポンプ４１により加圧することにより濾過面に加圧力を作用させ、重力による自然濾過を強制的に止めた状態にする。
【００３９】上記減圧濾過操作と濾過面更新操作とを予め定めた回数繰り返した後、液面センサ３４により液面を検知し、液面がもとの反応液の量に相当するレベルになったところで減圧濾過を停止する。洗浄終了後、押さえ具３２を上昇させ、かつチャンバ３９を下降させて精密フィルタ付容器３０を解放する。次に、ターンテーブル３１を所定の角度だけ回転させ、加圧水槽４５の上方まで移動させると、押さえ具３２が下降し、かつ加圧水槽４５が上昇して精密フィルタ付容器３０が固定される。そして、加圧ポンプ３８で水圧による加圧力を濾過面に作用させ、濾過面に付着した細胞を再浮遊させる。
【００４０】次に、上記のように細胞を再浮遊させた反応液を移液ポンプ５４及び移液ノズル５３を使用して試験管５１に移液する。なお、試験管５１の替わりにマイクロプレートを使用してもよい。また、使用済みの精密フィルタ付容器３０は、押さえ具３２を上昇させ、かつ加圧水槽４５を下降させた後、手で廃棄するか、或いは機械的にターンテーブル３１から取り外して廃棄する。
【００４１】一方、使用した分注ノズル４９は分注直後に、移液ノズル５３は移液直後にそれぞれノズル洗浄槽５５，５６において洗浄し、検体による汚染を防止する。また、濾過によって廃液タンク４３に溜まった廃液は排水バルブ４４から排出する。上述の実施態様では、精密フィルタ付容器３０の移送手段としてターンテーブル３１を使用しているが、この移送手段は特に限定されるものではない。
【００４２】図１０は精密フィルタ付容器３０の移送手段の他の態様を示すものである。図１０において、プラスチック製のプレート７０は、上面に多数の開口部を有し、これら開口部に多数の精密フィルタ付容器３０が嵌まるように搭載される。このプレート７０はベルト、爪等の機械的な駆動源によって二次元方向に移動可能となっており、所定の精密フィルタ付容器３０を分注部、チャンバ部、移液部まで移送するようになっている。プレート７０における精密フィルタ付容器３０の配列は、Ｘ軸方向に１〜２４個、さらに好ましくは２〜１２個とし、Ｙ軸方向に１〜１０個とすることが好ましい。このような範囲で精密フィルタ付容器３０を配列させることにより洗浄作業を効率良く行うことができる。
【００４３】
【実施例】図８に示す実験装置を洗浄装置として使用し、下記手順によって洗浄実験を行った。なお、実験装置の精密フィルタ１としては、孔径０．８μｍ，０．２μｍ，０．４５μｍの硝酸セルロース膜を使用する場合、孔径０．８μｍのポリスルホン膜を使用する場合、孔径０．６５μｍのポリ弗化ビニリデン膜を使用する場合の５通りを使用した。
【００４４】（１）生理食塩水で２％に希釈したＯ型スクリーニング血球と、予め抗Ｅ抗体の存在が確認されている血清とを１：２の割合で総量３００μｌに混合した混合液を試験管に分注する。
（２）次いで、上記混合液を３７℃で６０分感作させる。
（３）上記感作血球を容器１に移す。
【００４５】（４）上記容器１に洗浄液として生理食塩水５．７ｃｃを加え、攪拌後に真空ポンプ２０により元圧６０ｍｍＨｇで減圧しながら濾過し、液量が４００μｌになるまで濃縮する。すなわち、容器１に予め４００μｌの位置に印を付けておき、この印まで液面レベルが低下するまで減圧濾過を行う。
（５）上記（４）の操作を再度２回繰り返す。
【００４６】（６）容器１内に残された被洗浄液をよく攪拌した後、９０μｌを試験管に分注する。
（７）試験管にクームス血清を２滴添加して、３４００回転，１５秒遠心して凝集の有無を確認する。
（８）ＡＢ血清（陰性血清）についても、上記（１）〜（７）の手順で実験を行い、非特異凝集のないことを確認する。
【００４７】一方、上記本発明の洗浄方法の比較方法として、上記と同一検体で、血球３０μｌ、血清６０μｌを分注し、感作した感作血球を用い、市販の遠心分離式の血球洗浄器を使用して洗浄を行ったのち、クームス血清を２滴添加して、３４００回転，１５秒遠心して凝集の有無を確認した。上記各実験の結果は、本発明の方法で洗浄した抗Ｅ抗体感作血球は、各種の精密フィルタで実施したいずれ実験の場合も、凝集を確認することができた。また、陰性血清については凝集せず、非特異凝集の可能性がないことを確認することができた。特に、孔径０．８μｍの硝酸セルロース膜、孔径０．８μｍのポリスルホン膜は洗浄速度が早く優れていた。
【００４８】他方、市販の遠心分離式洗浄器で洗浄した検体も同様の結果が得られ、遠心分離法を使用しない本発明による洗浄方法の有効性を確認することができた。
【００４９】
【発明の効果】上述したように、本発明の洗浄方法及び装置によれば、遠心分離法によらずに検体中の不純物を効率的に除去することができる。さらに精密フィルタの濾過面更新操作をしながら行うようにすれば、本発明による検体中の不純物除去効果を一層効率的にすることができる。
【図面の簡単な説明】
【図１】本発明を実施するフローチャートの一例を示す図である。
【図２】本発明の洗浄方法を実施する装置の概略図である。
【図３】（Ａ），（Ｂ）は、それぞれ本発明に使用される濾過面更新用ノズルの横断面図と、（Ａ）図におけるＡ−Ａ矢視断面図である。
【図４】（Ａ），（Ｂ）は、それぞれ本発明に使用される他の実施態様からなる濾過面更新用ノズルの横断面図及び（Ａ）図におけるＡ−Ａ矢視断面図である。
【図５】（Ａ），（Ｂ）は、それぞれ本発明に使用される更に他の実施態様からなる濾過面更新用ノズルの横断面図及び（Ａ）図におけるＡ−Ａ矢視断面図である。
【図６】（Ａ），（Ｂ）は、それぞれ本発明に使用される更に他の実施態様からなる濾過面更新用ノズルの横断面図及び（Ａ）図におけるＡ−Ａ矢視断面図である。
【図７】（Ａ），（Ｂ）は、それぞれ本発明に使用される更に他の実施態様からなる濾過面更新用ノズルの横断面図及び（Ａ）図におけるＡ−Ａ矢視断面図である。
【図８】本発明の実施例で使用した実験装置の概略図である。
【図９】（Ａ），（Ｂ）は、それぞれ本発明の洗浄装置の他の実施形態を示す概略図及び（Ａ）図におけるＡ−Ａ矢視断面図である。
【図１０】（Ａ），（Ｂ）は、それぞれ本発明の洗浄装置に使用する精密フィルタ付容器の保持プレートの平面図及び（Ａ）図の側面図である。
【符号の説明】
１ 容器
２ 精密フィルタ
３ 焼結ガラスフィルタ
４ 洗浄液供給ノズル
５ 濾過面更新用ノズル
１２ 継手
１８ ポンプヘッド
２０ 吸引ポンプ
【特許請求の範囲】
【請求項１】 検体と試薬とを免疫学的に反応させた反応液を洗浄液と共に精密フィルタからなる濾過部を備えた容器に入れ、該濾過部の吐出側に減圧を負荷して前記洗浄液を濾過する操作と該容器へ新たに洗浄液を補給する操作とを反復繰り返すようにする血液検査における検体粒子の洗浄方法。
【請求項２】 前記洗浄液の濾過操作の途中で前記精密フィルタの濾過面を間欠的または連続的に更新する操作を行う請求項１に記載の血液検査における検体粒子の洗浄方法。
【請求項３】 前記濾過面の更新操作をノズルまたはピペットで行う請求項２に記載の血液検査における検体粒子の洗浄方法。
【請求項４】 前記精密フィルタの孔径が５００Å〜１０μｍである請求項１〜３のいずれか１項に記載の血液検査における検体粒子の洗浄方法。
【請求項５】 前記減圧の負荷が０〜７０ｍｍＨｇである請求項１〜４のいずれか１項に記載の血液検査における検体粒子の洗浄方法。
【請求項６】 前記濾過面の更新操作に際し、前記精密フィルタの吐出側から濾過面に向けて加圧力を作用させるか、または吐出側を液体で満たすようにする請求項２〜５のいずれか１項に記載の血液検査における検体粒子の洗浄方法。
【請求項７】 前記濾過面に負荷する検体粒子の濃度が単位面積当たり１２μｌ／cm2 以下である請求項１〜６のいずれか１項に記載の血液検査における検体粒子の洗浄方法。
【請求項８】 精密フィルタからなる濾過部を備え、検体と試薬とを免疫学的に反応させた反応液を洗浄液と共に保持する容器と、該濾過部の吐出側に減圧を負荷する手段と、前記容器へ洗浄液を補給する手段とから構成されてなる血液検査における検体粒子の洗浄装置。
【請求項９】 前記容器内における前記洗浄液の液面レベルを検知・制御する手段と、前記濾過部の吐出側に負荷する減圧の減圧度を検知・制御する手段とを有する請求項８に記載の血液検査における検体粒子の洗浄装置。
【請求項１０】 前記精密フィルタの孔径が５００Å〜１０μｍである請求項８又は９のいずれか１項に記載の血液検査における検体粒子の洗浄装置。
【請求項１１】 前記精密フィルタの濾過面を更新する手段を有する請求項８〜１０のいずれか１項に記載の血液検査における検体粒子の洗浄装置。
【請求項１】 検体と試薬とを免疫学的に反応させた反応液を洗浄液と共に精密フィルタからなる濾過部を備えた容器に入れ、該濾過部の吐出側に減圧を負荷して前記洗浄液を濾過する操作と該容器へ新たに洗浄液を補給する操作とを反復繰り返すようにする血液検査における検体粒子の洗浄方法。
【請求項２】 前記洗浄液の濾過操作の途中で前記精密フィルタの濾過面を間欠的または連続的に更新する操作を行う請求項１に記載の血液検査における検体粒子の洗浄方法。
【請求項３】 前記濾過面の更新操作をノズルまたはピペットで行う請求項２に記載の血液検査における検体粒子の洗浄方法。
【請求項４】 前記精密フィルタの孔径が５００Å〜１０μｍである請求項１〜３のいずれか１項に記載の血液検査における検体粒子の洗浄方法。
【請求項５】 前記減圧の負荷が０〜７０ｍｍＨｇである請求項１〜４のいずれか１項に記載の血液検査における検体粒子の洗浄方法。
【請求項６】 前記濾過面の更新操作に際し、前記精密フィルタの吐出側から濾過面に向けて加圧力を作用させるか、または吐出側を液体で満たすようにする請求項２〜５のいずれか１項に記載の血液検査における検体粒子の洗浄方法。
【請求項７】 前記濾過面に負荷する検体粒子の濃度が単位面積当たり１２μｌ／cm2 以下である請求項１〜６のいずれか１項に記載の血液検査における検体粒子の洗浄方法。
【請求項８】 精密フィルタからなる濾過部を備え、検体と試薬とを免疫学的に反応させた反応液を洗浄液と共に保持する容器と、該濾過部の吐出側に減圧を負荷する手段と、前記容器へ洗浄液を補給する手段とから構成されてなる血液検査における検体粒子の洗浄装置。
【請求項９】 前記容器内における前記洗浄液の液面レベルを検知・制御する手段と、前記濾過部の吐出側に負荷する減圧の減圧度を検知・制御する手段とを有する請求項８に記載の血液検査における検体粒子の洗浄装置。
【請求項１０】 前記精密フィルタの孔径が５００Å〜１０μｍである請求項８又は９のいずれか１項に記載の血液検査における検体粒子の洗浄装置。
【請求項１１】 前記精密フィルタの濾過面を更新する手段を有する請求項８〜１０のいずれか１項に記載の血液検査における検体粒子の洗浄装置。
【図２】
【図３】
【図４】
【図６】
【図７】
【図１】
【図５】
【図８】
【図９】
【図１０】
【図３】
【図４】
【図６】
【図７】
【図１】
【図５】
【図８】
【図９】
【図１０】
【公開番号】特開平９−１８９６９９
【公開日】平成９年（１９９７）７月２２日
【国際特許分類】
【出願番号】特願平８−２９２９３３
【出願日】平成８年（１９９６）１１月５日
【出願人】（０００００３１５９）東レ株式会社 (7,677)
【公開日】平成９年（１９９７）７月２２日
【国際特許分類】
【出願日】平成８年（１９９６）１１月５日
【出願人】（０００００３１５９）東レ株式会社 (7,677)
[ Back to top ]