Ｄ−スレオニンアルドラーゼの製造法
【課題】Ｄ−スレオニンアルドラーゼ産生微生物はアリスロバクター（Ａｒｔｈｒｏｂａｃｔｅｒ）属細菌、シュードモナス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）属細菌、アルカリゲネス（Ａｌｃａｌｉｇｅｎｅｓ）属細菌、キサントモナス（Ｘａｎｔｈｏｍｏｎａｓ）属以外知られておらず、新たなＤ−スレオニンアルドラーゼ産生微生物によるＤ−スレオニンアルドラーゼの製造方法が必要である。
【解決手段】ゴルドニア（Ｇｏｒｄｏｎｉａ）属、バリオボラックス（Ｖａｒｉｏｂｏｒａｘ）属、又はクリセオバクテリウム（Ｃｈｒｙｓｅｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ）属に属するＤ−スレオニンアルドラーゼを産生しうる微生物を栄養培地に培養し、培養物からＤ−スレオニンアルドラーゼを採取することを特徴とするＤ−スレオニンアルドラーゼの製造方法。
【解決手段】ゴルドニア（Ｇｏｒｄｏｎｉａ）属、バリオボラックス（Ｖａｒｉｏｂｏｒａｘ）属、又はクリセオバクテリウム（Ｃｈｒｙｓｅｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ）属に属するＤ−スレオニンアルドラーゼを産生しうる微生物を栄養培地に培養し、培養物からＤ−スレオニンアルドラーゼを採取することを特徴とするＤ−スレオニンアルドラーゼの製造方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ゴルドニア（Ｇｏｒｄｏｎｉａ）属、バリオボラックス（Ｖａｒｉｏｂｏｒａｘ）属又はクリセオバクテリウム（Ｃｈｒｙｓｅｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ）属に属し、Ｄ−スレオニンアルドラーゼを産生しうる微生物を栄養培地に培養し、培養物からＤ−スレオニンアルドラーゼを採取することを特徴とするＤ−スレオニンアルドラーゼの新規製造方法に関する。
Ｄ−スレオニンアルドラーゼはＤ−スレオニンをグリシンとアセトアルデヒドに可逆的に分解する酵素であり、ＤＬ−β−ヒドロキシアミノ酸の光学分割、逆反応を利用したグリシンとアルデヒドからのＤ−β−ヒドロキシアミノ酸類の製造に用いる事が出来る。
【背景技術】
【０００２】
Ｄ−スレオニンアルドラーゼを産生しうる微生物としては、アリスロバクター（Ａｒｔｈｒｏｂａｃｔｅｒ）属細菌、シュードモナス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）属細菌、アルカリゲネス（Ａｌｃａｌｉｇｅｎｅｓ）属細菌（以上、特許文献１参照）、キサントモナス（Ｘａｎｔｈｏｍｏｎａｓ）属細菌（特許文献２参照）が知られている。Ｄ−スレオニンアルドラーゼを採取する方法に関しては非特許文献３にアリスロバクターエスピー（Ａｒｔｈｒｏｂａｃｔｅｒ ｓｐ．）ＤＫ−３８からのＤ−スレオニンアルドラーゼの精製方法が記載されている。
【０００３】
また、天然にＤ−スレオニンアルドラーゼを産生しうる前記微生物からＤ−スレオニンアルドラーゼ遺伝子を取り出し、大腸菌等へ形質転換体したものを用いる事も可能である。特許文献３にはキサントモナス（Ｘａｎｔｈｏｍｏｎａｓ）属細菌のＤ−スレオニンアルドラーゼ遺伝子とその利用方法が記載されている。特許文献４にはキサントモナス（Ｘａｎｔｈｏｍｏｎａｓ）属細菌のＤ−スレオニンアルドラーゼ遺伝子の塩基配列とその利用法が記載されている。非特許文献１にはアリスロバクター・エスピー（Ａｒｔｈｒｏｂａｃｔｅｒ ｓｐ．）ＤＫ−３８のＤ−スレオニンアルドラーゼ遺伝子の取得方法、組換え大腸菌の作成方法、及び組み換え大腸菌からのＤ−スレオニンアルドラーゼ取得方法が記載されてる。非特許文献２ではアルカリゲネス キシロソキシダンス（Ａｌｃａｌｉｇｅｎｅｓ ｘｙｌｏｓｏｘｉｄａｎｓ）からのＤ−スレオニンアルドラーゼ遺伝子の取得方法、組換え大腸菌の作成方法、及び組み換え大腸菌からのＤ−スレオニンアルドラーゼ取得方法が記載されてる。
【０００４】
Ｄ−スレオニンアルドラーゼを利用したＤＬ−β−ヒドロキシアミノ酸の光学分割法としては、特許文献５にＤＬ−スレオニンにＤ−スレオニンアルドラーゼを作用させＬ−スレオニンを得る方法（スレオニンの分割方法）が開示されている。特許文献６にはＤ−スレオニンアルドラーゼとＬ−アロスレオニンアルドラーゼをラセミ−３−（３，４−ジヒドロキシフェニル）セリン誘導体に作用させＬ−スレオ−ラセミ−３−（３，４−ジヒドロキシフェニル）セリン誘導体を得る方法が開示されている。特許文献７にはＤ−スレオニンアルドラーゼをラセミ−３−（３，４−ジヒドロキシフェニル）セリン誘導体に作用させＬ−３−（３，４−ジヒドロキシフェニル）セリン誘導体を得る方法が開示されている。特許文献８にはラセミ−β−ヒドロキシアミノ酸にＤ−スレオニンアルドラーゼを作用させＬ−β−ヒドロキシアミノ酸を得る方法が開示されている。特許文献９にはラセミ−β−ヒドロキシアミノ酸にＤ−スレオニンアルドラーゼとＬ−アロスレオニンアルドラーゼを作用させＬ−スレオ−β−ヒドロキシアミノ酸を得る方法が開示されている。
【０００５】
Ｄ−スレオニンアルドラーゼの逆反応を利用したＤ−β−ヒドロキシアミノ酸の製造法については、特許文献１０にはグリシンと、ホルムアルデヒド又は飽和アルキルアルデヒドをＤ−スレオニンアルドラーゼの存在下反応させＤ−β−ヒドロキシアミノ酸を得る方法が開示されている。特許文献１１にはグリシンと、置換脂肪族アルデヒド、脂環式アルデヒド、芳香族アルデヒド、又は複素環式アルデヒドをＤ−スレオニンアルドラーゼの存在下反応させＤ−β−ヒドロキシアミノ酸を得る方法が開示されている。特許文献１２ではグリシン金属錯体とアルデヒドをＤ−スレオニンアルドラーゼの存在下反応させＤ−β−ヒドロキシアミノ酸を得る方法が開示されている。
【０００６】
【特許文献１】特公昭６４−０１１２７９号公報
【特許文献２】特公平６−７５５０５号公報
【特許文献３】特許第２９２３６５４号明細書
【特許文献４】特許第３１７４３５５号明細書
【特許文献５】特開昭５８−２１６６９１号公報
【特許文献６】特許第３０７８５９７号明細書
【特許文献７】特許第３０７８５９９号明細書
【特許文献８】特開平６−１２５７８６号公報
【特許文献９】特許第３２４００１１号明細書
【特許文献１０】特公平２−２５７号公報
【特許文献１１】特許第３００６６１５号明細書
【特許文献１２】特許第２７２１５３６号明細書
【非特許文献１】ジャーナル オブ バイオロジカル ケミストリー １９９８年 ２７３巻 ２７号 １６６７８〜１６６８５項
【非特許文献２】アプライド マイクロバイオロジー アンド バイオテクノロジー ２０００年 ５４巻 ４４〜５１項
【非特許文献３】ヨーロピアン ジャーナル オブ バイオケミストリー １９９７年 ２４８巻 ３８５〜３９３項
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
Ｄ−スレオニンアルドラーゼ産生微生物としては、アリスロバクター（Ａｒｔｈｒｏｂａｃｔｅｒ）属細菌、シュードモナス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）属細菌、アルカリゲネス（Ａｌｃａｌｉｇｅｎｅｓ）属細菌、キサントモナス（Ｘａｎｔｈｏｍｏｎａｓ）属以外知られておらず、新たなＤ−スレオニンアルドラーゼ産生微生物によるＤ−スレオニンアルドラーゼの製造方法が必要である。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
本発明者等は前記課題を解決すべく鋭意研究の結果、新たにゴルドニア（Ｇｏｒｄｏｎｉａ）属、バリオボラックス（Ｖａｒｉｏｂｏｒａｘ）属、又はクリセオバクテリウム（Ｃｈｒｙｓｅｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ）属に属する微生物がＤ−スレオニンアルドラーゼを産生することを見出し、本発明を完成させるに至った。
即ち、本発明は、
【０００９】
（１）ゴルドニア（Ｇｏｒｄｏｎｉａ）属に属し、Ｄ−スレオニンアルドラーゼを産生しうる微生物を栄養培地に培養し、培養物からＤ−スレオニンアルドラーゼを採取することを特徴とするＤ−スレオニンアルドラーゼの製造方法、
（２）バリオボラックス（Ｖａｒｉｏｂｏｒａｘ）属に属し、Ｄ−スレオニンアルドラーゼを産生しうる微生物を栄養培地に培養し、培養物からＤ−スレオニンアルドラーゼを採取することを特徴とするＤ−スレオニンアルドラーゼの製造方法、
（３）クリセオバクテリウム（Ｃｈｒｙｓｅｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ）属に属し、Ｄ−スレオニンアルドラーゼを産生しうる微生物を栄養培地に培養し、培養物からＤ−スレオニンアルドラーゼを採取することを特徴とするＤ−スレオニンアルドラーゼの製造方法、
（４）ゴルドニア・エスピーＮＫ−４２０（Ｇｏｒｄｏｎｉａ ｓｐ．ＮＫ−４２０、独立行政法人産業総合研究所特許生物寄託センター寄託ＦＥＲＭ Ｐ−２００１０）株又はその変異株、
（５）バリオボラックス・エスピーＮＫ−９１０（Ｖａｒｉｏｂｏｒａｘ ｓｐ．ＮＫ−９１０、独立行政法人産業総合研究所特許生物寄託センター寄託ＦＥＲＭ Ｐ−２００１１）株又はその変異株、
（６）クリセオバクテリウム・エスピーＮＫ−１６２０（Ｃｈｒｙｓｅｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｓｐ．ＮＫ−１６２０、独立行政法人産業総合研究所特許生物寄託センター寄託ＦＥＲＭ Ｐ−２００１２）株又はその変異株、
に関する。
【発明の効果】
【００１０】
本発明の製造方法によれば、新たなＤ−スレオニンアルドラーゼ産生微生物による大量且つ安価に簡便な方法でＤ−スレオニンアルドラーゼを製造する事が出来る。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１１】
本発明において使用される微生物としては、ゴルドニア（Ｇｏｒｄｏｎｉａ）属、バリオボラックス（Ｖａｒｉｏｂｏｒａｘ）属、又はクリセオバクテリウム（Ｃｈｒｙｓｅｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ）属に属し、Ｄ−スレオニンアルドラーゼを産生しうる微生物であれば特に限定されないが、例えばゴルドニア・エスピー（Ｇｏｒｄｏｎｉａ ｓｐ．）ＮＫ−４２０（ＦＥＲＭ Ｐ−２００１０）、バリオボラックス・エスピー（Ｖａｒｉｏｂｏｒａｘ ｓｐ．）ＮＫ−９１０（ＦＥＲＭ Ｐ−２００１１）、クリセオバクテリウム・エスピー（Ｃｈｒｙｓｅｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｓｐ．）ＮＫ−１６２０（ＦＥＲＭ Ｐ−２００１２）があげられる。尚、これらの微生物は独立行政法人産業総合研究所特許生物寄託センターへ寄託されている。
【００１２】
ゴルドニア・エスピー（Ｇｏｒｄｏｎｉａ ｓｐ．）ＮＫ−４２０（ＦＥＲＭ Ｐ−２００１０）、バリオボラックス・エスピー（Ｖａｒｉｏｂｏｒａｘ ｓｐ．）ＮＫ−９１０（ＦＥＲＭ Ｐ−２００１１）、クリセオバクテリウム・エスピー（Ｃｈｒｙｓｅｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｓｐ．）ＮＫ−１６２０（ＦＥＲＭ Ｐ−２００１２）の菌学的諸性質を表１に示す。
【００１３】
【００１４】
【００１５】
上記の菌学的諸性質を下記の文献、特に文献２）を参考に検討した結果、ＮＫ−４２０株：coryneform bacteria、ＮＫ−９１０株：グラム陰性桿菌、ＮＫ−１６２０株：Flavobacteriaと同定された。
【００１６】
１）ＢＡＲＲＯＷ，ａｎｄ ＦＥＬＴＨＡＭ：Ｃｏｗａｎ ａｎｄ Ｓｔｅｅｌ’ｓ Ｍａｎｕａｌ ｆｏｒ ｔｈｅ Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｂａｃｔｅｒｉａ．３ｒｄ ｅｄｉｔｏｎ．１９９３，Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｐｒｅｓｓ．
２）ＨＯＬＴ，ＫＲＩＥＧ，ＳＮＥＡＴＨ，ＳＴＡＬＥＹ ａｎｄ ＷＩＬＬＩＡＭＳ：Ｂｅｒｇｅｙ’ｓ ｍａｎｕａｌ ｏｆ Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｖｅ Ｂａｃｔｅｒｉｏｌｏｇｙ．９ ｅｄｉｔｏｎ．１９９４．Ｂａｌｔｉｏｍｏｒｅ：Ｗｉｌｌｉａｍｓ ａｎｄ Ｗｉｌｋｉｎｓ．
３）Ｇｏｒｄｏｎｉａ属の参考文献：ＬＩＯＮＳ，ＳＴＥＩＮＢＵＣＨＥＬ，ＳＰＲＯＲ，ａｎｄ ＫＲＯＰＰＥＮＳＴＥＤＴ：Ｇｏｒｄｏｎｉａ ｐｏｌｙｉｓｏｐｒｅｎｉｖｏｒａｎｓ ｓｐ． ｎｏｖ．，ａ ｒｕｂｂｅｒ−ｄｅｇｒａｄｉｎｇ ａｃｔｉｎｏｍｙｃｅｔｅ ｉｓｏｌａｔｅｄ ｆｒｏｍ ａｎ ａｕｔｏｍｏｂｉｌｅ ｔｙｒｅ． Ｉｎｔ．Ｊ．Ｓｙｓｔ．Ｂａｃｔｅｒｉｏｌ．，１９９９，４９，１７８５−１７９１．
４）Ｖａｒｉｏｖｏｒａｘ属の参考文献：ＷＩＬＬＩＡＭＳ，ＤＥＬＥＹ，ＧＵＬＬＩＳ，ａｎｄ ＫＥＲＳＴＥＲＳ：Ｃｏｍａｍｏｎａｄａｃｅａｅ，ａ
ｎｅｗ ｆａｍｉｌｉｙ ｅｎｃｏｍｐａｓｓｉｎｇ ｔｈｅ ａｃｉｄｏｖｏｒａｎｓ ｒＲＮＡ ｃｏｍｐｌｅｘ，ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ Ｖａｒｉｏｖｏｒａｘ ｐａｒａｄｏｘｕｓ ｇｅｎ．ｎｏｖ．ｃｏｍｂ．ｎｏｖ．，ｆｏｒ Ａｌｃａｌｉｇｅｎｅｓ ｐａｒａｄｏｘｕｓ（Ｄａｖｉｓ）１９６９，Ｉｎｔ．Ｊ．Ｓｙｓｔ．Ｂａｔｅｒｉｏｌ．１９９１，４１，４４５−４５０．
５）Ｃｈｒｙｓｅｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ属の参考文献：ＶＡＮＤＡＭＭＥ，ＢＥＲＮＡＲＤＥＴ，ＳＥＧＥＲＳ，ＫＥＲＳＴＥＲＳ，ａｎｄ ＨＯＬＭＥＳ：Ｎｅｗ ｐｅｒｓｐｅｃｔｉｖｅｓ ｉｎ ｔｈｅ ｃｌａｓｓｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ｆｌａｖｏｂａｃｅｔｒｉａ：ｄｅｓｃｒｉｐｔｉｏｎ ｏｆ Ｃｈｒｙｓｅｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｇｅｎ．ｎｏｖ．，Ｂｅｒｇｅｙｅｌｌａ ｇｅｎ．ｎｏｖ．，ａｎｄ Ｅｍｐｅｄｏｂａｃｔｅｒ ｎｏｍ．ｒｅｖ． Ｉｎｔ．Ｊ．Ｓｙｓｔ．Ｂａｃｔｅｒｉｏｌ．，１９９４，４４，８２７−８３１．
【００１７】
また、本発明の菌株について、１６ＳリボソーマルＲＮＡの塩基配列相同性を配列解析（GenBank/EMBL/DDBJでの相同性検索）により検討したところ、ＮＫ−４２０株はゴルドニア ポリイソプレニボランズ（Ｇｏｒｄｏｎｉａ ｐｏｌｙｉｓｏｐｒｅｎｉｖｏｒａｎｓ）に最も高い相同性９８．３％を示した。ＮＫ−９１０株はバリオボラックス パラドキサス（Ｖａｒｉｏｖｏｒａｘ ｐａｒａｄｏｘｕｓ）に最も高い相同性９８．９％を示した。ＮＫ−１６２０株はクリセオバクテリウム グレウム（Ｃｈｒｙｓｅｏｂａｃｔｅｒｕｍ ｇｌｅｕｍ）に最も高い相同性９７．３％を示した。
【００１８】
従って、菌学的性質及び１６ＳリボソーマルＲＮＡの塩基配列解析結果から、それぞれＮＫ−４２０株はゴルドニア・エスピー（Ｇｏｒｄｏｎｉａ ｓｐ．）、ＮＫ−９１０株はバリオボラックス・エスピー（Ｖａｒｉｏｂｏｒａｘ ｓｐ．）、ＮＫ−１６２０株はクリセオバクテリウム・エスピー（Ｃｈｒｙｓｅｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｓｐ．）と同定された。
【００１９】
本発明に用いられるゴルドニア（Ｇｏｒｄｏｎｉａ）属、バリオボラックス（Ｖａｒｉｏｂｏｒａｘ）属、又はクリセオバクテリウム（Ｃｈｒｙｓｅｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ）属に属する菌株は、他のゴルドニア（Ｇｏｒｄｏｎｉａ）属、バリオボラックス（Ｖａｒｉｏｂｏｒａｘ）属、又はクリセオバクテリウム（Ｃｈｒｙｓｅｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ）属の菌株と同様、その性状が変化しやすい。例えば、紫外線、エックス線及び薬品などを用いる人工的な変異手段で容易に変異しうるものである。このように得られたどのような変異株であっても本発明の対象とするＤ−スレオニンアルドラーゼ生産能を有するものは、全て本発明に使用することが出来る。
【００２０】
これらの微生物の培養方法は増殖可能なら特に限定されないが一般的な細菌の培養方法を用いればよい。例えば、炭素源として、グルコース、フラクトース、ラクトース、マルトース、シュークロース等の糖類、グルタミン酸、スレオニン等のアミノ酸類、或いはフマル酸、リンゴ酸、コハク酸等の有機酸、もしくはグリセリン、窒素源として硫酸アンモニウム、塩化アンモニウム、尿素など、有機栄養源として酵母エキス、トリプトン、肉エキス、コーンスティープリカー、麦芽エキスなど、そして無機塩として塩化ナトリウム、硫酸マグネシウム、リン酸水素カリウムなどを含み、ｐＨ４から１０に調整した培地に微生物を接種し、２０〜６０℃で１〜３日間好気的に培養すればよい。
【００２１】
これらの微生物においてＤ−スレオニンアルドラーゼは主に菌体内に生成蓄積されるので、酵素源として利用する場合は培養物として、或いは湿菌体、又は乾燥菌体として利用する事が出来る。また、菌体より酵素を取り出し精製して利用しても良い。この場合は、物理的方法又は生化学的方法などの公知の方法により菌体を破壊して得られる無細胞抽出液から、硫安などの塩析、アセトンなどの溶媒沈殿、ＤＥＡＥセファデックスなどのイオン交換体やヒドロキシアパタイトなどの吸着剤などを用いた種々のクロマトグラフィーなどを適宜組み合わせて精製する事が出来る。
【００２２】
Ｄ−スレオニンアルドラーゼは、Ｄ−スレオニンをグリシンとアセトアルデヒドに分解する性質があり、これをＤＬ−スレオニンの分割反応に利用する事により、高価な分割剤を利用しない安価なＬ−スレオニン製造法を提供しうる。
また、Ｄ−スレオニンアルドラーゼは、Ｄ−スレオニン以外のＤ−β−ヒドロキシアミノ酸に対する活性を有する場合もあり、Ｄ−スレオニン以外のＤ−β−ヒドロキシアミノ酸の分割反応にも有用である。また、Ｄ−スレオニンアルドラーゼの反応は可逆反応であるので逆反応を利用する事によりグリシンとアセトアルデヒドからＤ−スレオニンを合成する事が可能であり、更にはグリシンと各種アルデヒドの組み合わせによりＤ−β−ヒドロキシアミノ酸の合成にも有用である。
【実施例】
【００２３】
以下、実施例により本発明を更に詳細に説明する。実施例において％は重量％を意味する。
【００２４】
実施例１
ゴルドニア・エスピー（Ｇｏｒｄｏｎｉａ ｓｐ．）ＮＫ−４２０（ＦＥＲＭ Ｐ−２００１０）を、トリプトン１％、酵母エキス０．５％、塩化ナトリウム１％からなるｐＨ７．０の培地５ｍＬにそれぞれ接種し、３０℃で２４時間振とう培養した。培養液から遠心分離により菌体を集め、生理食塩水で３回洗浄後、Ｄ−スレオニン１８ｍＭ含む１００ｍＭリン酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ７．５）２ｍＬにそれぞれ懸濁し、３０℃で６時間反応させた。反応液から遠心分離により菌体を除いたのち、その一部をＨＰＬＣ分析し生成したグリシンを定量した。その結果、反応液中に１．３ｍＭのグリシンが生成していた事からＤ−スレオニンアルドラーゼ活性が確認された。
【００２５】
実施例２
バリオボラックス・エスピー（Ｖａｒｉｏｂｏｒａｘ ｓｐ．）ＮＫ−９１０（ＦＥＲＭ Ｐ−２００１１）を実施例１と同様の方法で培養し、培養液から遠心分離により菌体を集め、生理食塩水で３回洗浄後、Ｄ−スレオニン１８ｍＭ含む１００ｍＭリン酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ７．５）２ｍＬにそれぞれ懸濁し、３０℃で６時間反応させた。反応液から遠心分離により菌体を除いたのち、その一部をＨＰＬＣ分析し生成したグリシンを定量した。その結果、反応液中に１２．９ｍＭのグリシンが生成していた事からＤ−スレオニンアルドラーゼ活性が確認された。
【００２６】
実施例３
クリセオバクテリウム・エスピー（Ｃｈｒｙｓｅｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｓｐ．）ＮＫ−１６２０（ＦＥＲＭ Ｐ−２００１２）を実施例１と同様の方法で培養し、培養液から遠心分離により菌体を集め、生理食塩水で３回洗浄後、Ｄ−スレオニン１８ｍＭ含む１００ｍＭリン酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ７．５）２ｍＬにそれぞれ懸濁し、３０℃で６時間反応させた。反応液から遠心分離により菌体を除いたのち、その一部をＨＰＬＣ分析し生成したグリシンを定量した。その結果、反応液中に０．２ｍＭのグリシンが生成していた事からＤ−スレオニンアルドラーゼ活性が確認された。
【産業上の利用可能性】
【００２７】
ＤＬ−β−ヒドロキシアミノ酸の光学分割、逆反応を利用したＤ−β−ヒドロキシアミノ酸類の製造に用いる事が出来る。
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ゴルドニア（Ｇｏｒｄｏｎｉａ）属、バリオボラックス（Ｖａｒｉｏｂｏｒａｘ）属又はクリセオバクテリウム（Ｃｈｒｙｓｅｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ）属に属し、Ｄ−スレオニンアルドラーゼを産生しうる微生物を栄養培地に培養し、培養物からＤ−スレオニンアルドラーゼを採取することを特徴とするＤ−スレオニンアルドラーゼの新規製造方法に関する。
Ｄ−スレオニンアルドラーゼはＤ−スレオニンをグリシンとアセトアルデヒドに可逆的に分解する酵素であり、ＤＬ−β−ヒドロキシアミノ酸の光学分割、逆反応を利用したグリシンとアルデヒドからのＤ−β−ヒドロキシアミノ酸類の製造に用いる事が出来る。
【背景技術】
【０００２】
Ｄ−スレオニンアルドラーゼを産生しうる微生物としては、アリスロバクター（Ａｒｔｈｒｏｂａｃｔｅｒ）属細菌、シュードモナス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）属細菌、アルカリゲネス（Ａｌｃａｌｉｇｅｎｅｓ）属細菌（以上、特許文献１参照）、キサントモナス（Ｘａｎｔｈｏｍｏｎａｓ）属細菌（特許文献２参照）が知られている。Ｄ−スレオニンアルドラーゼを採取する方法に関しては非特許文献３にアリスロバクターエスピー（Ａｒｔｈｒｏｂａｃｔｅｒ ｓｐ．）ＤＫ−３８からのＤ−スレオニンアルドラーゼの精製方法が記載されている。
【０００３】
また、天然にＤ−スレオニンアルドラーゼを産生しうる前記微生物からＤ−スレオニンアルドラーゼ遺伝子を取り出し、大腸菌等へ形質転換体したものを用いる事も可能である。特許文献３にはキサントモナス（Ｘａｎｔｈｏｍｏｎａｓ）属細菌のＤ−スレオニンアルドラーゼ遺伝子とその利用方法が記載されている。特許文献４にはキサントモナス（Ｘａｎｔｈｏｍｏｎａｓ）属細菌のＤ−スレオニンアルドラーゼ遺伝子の塩基配列とその利用法が記載されている。非特許文献１にはアリスロバクター・エスピー（Ａｒｔｈｒｏｂａｃｔｅｒ ｓｐ．）ＤＫ−３８のＤ−スレオニンアルドラーゼ遺伝子の取得方法、組換え大腸菌の作成方法、及び組み換え大腸菌からのＤ−スレオニンアルドラーゼ取得方法が記載されてる。非特許文献２ではアルカリゲネス キシロソキシダンス（Ａｌｃａｌｉｇｅｎｅｓ ｘｙｌｏｓｏｘｉｄａｎｓ）からのＤ−スレオニンアルドラーゼ遺伝子の取得方法、組換え大腸菌の作成方法、及び組み換え大腸菌からのＤ−スレオニンアルドラーゼ取得方法が記載されてる。
【０００４】
Ｄ−スレオニンアルドラーゼを利用したＤＬ−β−ヒドロキシアミノ酸の光学分割法としては、特許文献５にＤＬ−スレオニンにＤ−スレオニンアルドラーゼを作用させＬ−スレオニンを得る方法（スレオニンの分割方法）が開示されている。特許文献６にはＤ−スレオニンアルドラーゼとＬ−アロスレオニンアルドラーゼをラセミ−３−（３，４−ジヒドロキシフェニル）セリン誘導体に作用させＬ−スレオ−ラセミ−３−（３，４−ジヒドロキシフェニル）セリン誘導体を得る方法が開示されている。特許文献７にはＤ−スレオニンアルドラーゼをラセミ−３−（３，４−ジヒドロキシフェニル）セリン誘導体に作用させＬ−３−（３，４−ジヒドロキシフェニル）セリン誘導体を得る方法が開示されている。特許文献８にはラセミ−β−ヒドロキシアミノ酸にＤ−スレオニンアルドラーゼを作用させＬ−β−ヒドロキシアミノ酸を得る方法が開示されている。特許文献９にはラセミ−β−ヒドロキシアミノ酸にＤ−スレオニンアルドラーゼとＬ−アロスレオニンアルドラーゼを作用させＬ−スレオ−β−ヒドロキシアミノ酸を得る方法が開示されている。
【０００５】
Ｄ−スレオニンアルドラーゼの逆反応を利用したＤ−β−ヒドロキシアミノ酸の製造法については、特許文献１０にはグリシンと、ホルムアルデヒド又は飽和アルキルアルデヒドをＤ−スレオニンアルドラーゼの存在下反応させＤ−β−ヒドロキシアミノ酸を得る方法が開示されている。特許文献１１にはグリシンと、置換脂肪族アルデヒド、脂環式アルデヒド、芳香族アルデヒド、又は複素環式アルデヒドをＤ−スレオニンアルドラーゼの存在下反応させＤ−β−ヒドロキシアミノ酸を得る方法が開示されている。特許文献１２ではグリシン金属錯体とアルデヒドをＤ−スレオニンアルドラーゼの存在下反応させＤ−β−ヒドロキシアミノ酸を得る方法が開示されている。
【０００６】
【特許文献１】特公昭６４−０１１２７９号公報
【特許文献２】特公平６−７５５０５号公報
【特許文献３】特許第２９２３６５４号明細書
【特許文献４】特許第３１７４３５５号明細書
【特許文献５】特開昭５８−２１６６９１号公報
【特許文献６】特許第３０７８５９７号明細書
【特許文献７】特許第３０７８５９９号明細書
【特許文献８】特開平６−１２５７８６号公報
【特許文献９】特許第３２４００１１号明細書
【特許文献１０】特公平２−２５７号公報
【特許文献１１】特許第３００６６１５号明細書
【特許文献１２】特許第２７２１５３６号明細書
【非特許文献１】ジャーナル オブ バイオロジカル ケミストリー １９９８年 ２７３巻 ２７号 １６６７８〜１６６８５項
【非特許文献２】アプライド マイクロバイオロジー アンド バイオテクノロジー ２０００年 ５４巻 ４４〜５１項
【非特許文献３】ヨーロピアン ジャーナル オブ バイオケミストリー １９９７年 ２４８巻 ３８５〜３９３項
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
Ｄ−スレオニンアルドラーゼ産生微生物としては、アリスロバクター（Ａｒｔｈｒｏｂａｃｔｅｒ）属細菌、シュードモナス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）属細菌、アルカリゲネス（Ａｌｃａｌｉｇｅｎｅｓ）属細菌、キサントモナス（Ｘａｎｔｈｏｍｏｎａｓ）属以外知られておらず、新たなＤ−スレオニンアルドラーゼ産生微生物によるＤ−スレオニンアルドラーゼの製造方法が必要である。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
本発明者等は前記課題を解決すべく鋭意研究の結果、新たにゴルドニア（Ｇｏｒｄｏｎｉａ）属、バリオボラックス（Ｖａｒｉｏｂｏｒａｘ）属、又はクリセオバクテリウム（Ｃｈｒｙｓｅｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ）属に属する微生物がＤ−スレオニンアルドラーゼを産生することを見出し、本発明を完成させるに至った。
即ち、本発明は、
【０００９】
（１）ゴルドニア（Ｇｏｒｄｏｎｉａ）属に属し、Ｄ−スレオニンアルドラーゼを産生しうる微生物を栄養培地に培養し、培養物からＤ−スレオニンアルドラーゼを採取することを特徴とするＤ−スレオニンアルドラーゼの製造方法、
（２）バリオボラックス（Ｖａｒｉｏｂｏｒａｘ）属に属し、Ｄ−スレオニンアルドラーゼを産生しうる微生物を栄養培地に培養し、培養物からＤ−スレオニンアルドラーゼを採取することを特徴とするＤ−スレオニンアルドラーゼの製造方法、
（３）クリセオバクテリウム（Ｃｈｒｙｓｅｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ）属に属し、Ｄ−スレオニンアルドラーゼを産生しうる微生物を栄養培地に培養し、培養物からＤ−スレオニンアルドラーゼを採取することを特徴とするＤ−スレオニンアルドラーゼの製造方法、
（４）ゴルドニア・エスピーＮＫ−４２０（Ｇｏｒｄｏｎｉａ ｓｐ．ＮＫ−４２０、独立行政法人産業総合研究所特許生物寄託センター寄託ＦＥＲＭ Ｐ−２００１０）株又はその変異株、
（５）バリオボラックス・エスピーＮＫ−９１０（Ｖａｒｉｏｂｏｒａｘ ｓｐ．ＮＫ−９１０、独立行政法人産業総合研究所特許生物寄託センター寄託ＦＥＲＭ Ｐ−２００１１）株又はその変異株、
（６）クリセオバクテリウム・エスピーＮＫ−１６２０（Ｃｈｒｙｓｅｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｓｐ．ＮＫ−１６２０、独立行政法人産業総合研究所特許生物寄託センター寄託ＦＥＲＭ Ｐ−２００１２）株又はその変異株、
に関する。
【発明の効果】
【００１０】
本発明の製造方法によれば、新たなＤ−スレオニンアルドラーゼ産生微生物による大量且つ安価に簡便な方法でＤ−スレオニンアルドラーゼを製造する事が出来る。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１１】
本発明において使用される微生物としては、ゴルドニア（Ｇｏｒｄｏｎｉａ）属、バリオボラックス（Ｖａｒｉｏｂｏｒａｘ）属、又はクリセオバクテリウム（Ｃｈｒｙｓｅｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ）属に属し、Ｄ−スレオニンアルドラーゼを産生しうる微生物であれば特に限定されないが、例えばゴルドニア・エスピー（Ｇｏｒｄｏｎｉａ ｓｐ．）ＮＫ−４２０（ＦＥＲＭ Ｐ−２００１０）、バリオボラックス・エスピー（Ｖａｒｉｏｂｏｒａｘ ｓｐ．）ＮＫ−９１０（ＦＥＲＭ Ｐ−２００１１）、クリセオバクテリウム・エスピー（Ｃｈｒｙｓｅｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｓｐ．）ＮＫ−１６２０（ＦＥＲＭ Ｐ−２００１２）があげられる。尚、これらの微生物は独立行政法人産業総合研究所特許生物寄託センターへ寄託されている。
【００１２】
ゴルドニア・エスピー（Ｇｏｒｄｏｎｉａ ｓｐ．）ＮＫ−４２０（ＦＥＲＭ Ｐ−２００１０）、バリオボラックス・エスピー（Ｖａｒｉｏｂｏｒａｘ ｓｐ．）ＮＫ−９１０（ＦＥＲＭ Ｐ−２００１１）、クリセオバクテリウム・エスピー（Ｃｈｒｙｓｅｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｓｐ．）ＮＫ−１６２０（ＦＥＲＭ Ｐ−２００１２）の菌学的諸性質を表１に示す。
【００１３】
【００１４】
【００１５】
上記の菌学的諸性質を下記の文献、特に文献２）を参考に検討した結果、ＮＫ−４２０株：coryneform bacteria、ＮＫ−９１０株：グラム陰性桿菌、ＮＫ−１６２０株：Flavobacteriaと同定された。
【００１６】
１）ＢＡＲＲＯＷ，ａｎｄ ＦＥＬＴＨＡＭ：Ｃｏｗａｎ ａｎｄ Ｓｔｅｅｌ’ｓ Ｍａｎｕａｌ ｆｏｒ ｔｈｅ Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｂａｃｔｅｒｉａ．３ｒｄ ｅｄｉｔｏｎ．１９９３，Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｐｒｅｓｓ．
２）ＨＯＬＴ，ＫＲＩＥＧ，ＳＮＥＡＴＨ，ＳＴＡＬＥＹ ａｎｄ ＷＩＬＬＩＡＭＳ：Ｂｅｒｇｅｙ’ｓ ｍａｎｕａｌ ｏｆ Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｖｅ Ｂａｃｔｅｒｉｏｌｏｇｙ．９ ｅｄｉｔｏｎ．１９９４．Ｂａｌｔｉｏｍｏｒｅ：Ｗｉｌｌｉａｍｓ ａｎｄ Ｗｉｌｋｉｎｓ．
３）Ｇｏｒｄｏｎｉａ属の参考文献：ＬＩＯＮＳ，ＳＴＥＩＮＢＵＣＨＥＬ，ＳＰＲＯＲ，ａｎｄ ＫＲＯＰＰＥＮＳＴＥＤＴ：Ｇｏｒｄｏｎｉａ ｐｏｌｙｉｓｏｐｒｅｎｉｖｏｒａｎｓ ｓｐ． ｎｏｖ．，ａ ｒｕｂｂｅｒ−ｄｅｇｒａｄｉｎｇ ａｃｔｉｎｏｍｙｃｅｔｅ ｉｓｏｌａｔｅｄ ｆｒｏｍ ａｎ ａｕｔｏｍｏｂｉｌｅ ｔｙｒｅ． Ｉｎｔ．Ｊ．Ｓｙｓｔ．Ｂａｃｔｅｒｉｏｌ．，１９９９，４９，１７８５−１７９１．
４）Ｖａｒｉｏｖｏｒａｘ属の参考文献：ＷＩＬＬＩＡＭＳ，ＤＥＬＥＹ，ＧＵＬＬＩＳ，ａｎｄ ＫＥＲＳＴＥＲＳ：Ｃｏｍａｍｏｎａｄａｃｅａｅ，ａ
ｎｅｗ ｆａｍｉｌｉｙ ｅｎｃｏｍｐａｓｓｉｎｇ ｔｈｅ ａｃｉｄｏｖｏｒａｎｓ ｒＲＮＡ ｃｏｍｐｌｅｘ，ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ Ｖａｒｉｏｖｏｒａｘ ｐａｒａｄｏｘｕｓ ｇｅｎ．ｎｏｖ．ｃｏｍｂ．ｎｏｖ．，ｆｏｒ Ａｌｃａｌｉｇｅｎｅｓ ｐａｒａｄｏｘｕｓ（Ｄａｖｉｓ）１９６９，Ｉｎｔ．Ｊ．Ｓｙｓｔ．Ｂａｔｅｒｉｏｌ．１９９１，４１，４４５−４５０．
５）Ｃｈｒｙｓｅｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ属の参考文献：ＶＡＮＤＡＭＭＥ，ＢＥＲＮＡＲＤＥＴ，ＳＥＧＥＲＳ，ＫＥＲＳＴＥＲＳ，ａｎｄ ＨＯＬＭＥＳ：Ｎｅｗ ｐｅｒｓｐｅｃｔｉｖｅｓ ｉｎ ｔｈｅ ｃｌａｓｓｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ｆｌａｖｏｂａｃｅｔｒｉａ：ｄｅｓｃｒｉｐｔｉｏｎ ｏｆ Ｃｈｒｙｓｅｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｇｅｎ．ｎｏｖ．，Ｂｅｒｇｅｙｅｌｌａ ｇｅｎ．ｎｏｖ．，ａｎｄ Ｅｍｐｅｄｏｂａｃｔｅｒ ｎｏｍ．ｒｅｖ． Ｉｎｔ．Ｊ．Ｓｙｓｔ．Ｂａｃｔｅｒｉｏｌ．，１９９４，４４，８２７−８３１．
【００１７】
また、本発明の菌株について、１６ＳリボソーマルＲＮＡの塩基配列相同性を配列解析（GenBank/EMBL/DDBJでの相同性検索）により検討したところ、ＮＫ−４２０株はゴルドニア ポリイソプレニボランズ（Ｇｏｒｄｏｎｉａ ｐｏｌｙｉｓｏｐｒｅｎｉｖｏｒａｎｓ）に最も高い相同性９８．３％を示した。ＮＫ−９１０株はバリオボラックス パラドキサス（Ｖａｒｉｏｖｏｒａｘ ｐａｒａｄｏｘｕｓ）に最も高い相同性９８．９％を示した。ＮＫ−１６２０株はクリセオバクテリウム グレウム（Ｃｈｒｙｓｅｏｂａｃｔｅｒｕｍ ｇｌｅｕｍ）に最も高い相同性９７．３％を示した。
【００１８】
従って、菌学的性質及び１６ＳリボソーマルＲＮＡの塩基配列解析結果から、それぞれＮＫ−４２０株はゴルドニア・エスピー（Ｇｏｒｄｏｎｉａ ｓｐ．）、ＮＫ−９１０株はバリオボラックス・エスピー（Ｖａｒｉｏｂｏｒａｘ ｓｐ．）、ＮＫ−１６２０株はクリセオバクテリウム・エスピー（Ｃｈｒｙｓｅｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｓｐ．）と同定された。
【００１９】
本発明に用いられるゴルドニア（Ｇｏｒｄｏｎｉａ）属、バリオボラックス（Ｖａｒｉｏｂｏｒａｘ）属、又はクリセオバクテリウム（Ｃｈｒｙｓｅｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ）属に属する菌株は、他のゴルドニア（Ｇｏｒｄｏｎｉａ）属、バリオボラックス（Ｖａｒｉｏｂｏｒａｘ）属、又はクリセオバクテリウム（Ｃｈｒｙｓｅｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ）属の菌株と同様、その性状が変化しやすい。例えば、紫外線、エックス線及び薬品などを用いる人工的な変異手段で容易に変異しうるものである。このように得られたどのような変異株であっても本発明の対象とするＤ−スレオニンアルドラーゼ生産能を有するものは、全て本発明に使用することが出来る。
【００２０】
これらの微生物の培養方法は増殖可能なら特に限定されないが一般的な細菌の培養方法を用いればよい。例えば、炭素源として、グルコース、フラクトース、ラクトース、マルトース、シュークロース等の糖類、グルタミン酸、スレオニン等のアミノ酸類、或いはフマル酸、リンゴ酸、コハク酸等の有機酸、もしくはグリセリン、窒素源として硫酸アンモニウム、塩化アンモニウム、尿素など、有機栄養源として酵母エキス、トリプトン、肉エキス、コーンスティープリカー、麦芽エキスなど、そして無機塩として塩化ナトリウム、硫酸マグネシウム、リン酸水素カリウムなどを含み、ｐＨ４から１０に調整した培地に微生物を接種し、２０〜６０℃で１〜３日間好気的に培養すればよい。
【００２１】
これらの微生物においてＤ−スレオニンアルドラーゼは主に菌体内に生成蓄積されるので、酵素源として利用する場合は培養物として、或いは湿菌体、又は乾燥菌体として利用する事が出来る。また、菌体より酵素を取り出し精製して利用しても良い。この場合は、物理的方法又は生化学的方法などの公知の方法により菌体を破壊して得られる無細胞抽出液から、硫安などの塩析、アセトンなどの溶媒沈殿、ＤＥＡＥセファデックスなどのイオン交換体やヒドロキシアパタイトなどの吸着剤などを用いた種々のクロマトグラフィーなどを適宜組み合わせて精製する事が出来る。
【００２２】
Ｄ−スレオニンアルドラーゼは、Ｄ−スレオニンをグリシンとアセトアルデヒドに分解する性質があり、これをＤＬ−スレオニンの分割反応に利用する事により、高価な分割剤を利用しない安価なＬ−スレオニン製造法を提供しうる。
また、Ｄ−スレオニンアルドラーゼは、Ｄ−スレオニン以外のＤ−β−ヒドロキシアミノ酸に対する活性を有する場合もあり、Ｄ−スレオニン以外のＤ−β−ヒドロキシアミノ酸の分割反応にも有用である。また、Ｄ−スレオニンアルドラーゼの反応は可逆反応であるので逆反応を利用する事によりグリシンとアセトアルデヒドからＤ−スレオニンを合成する事が可能であり、更にはグリシンと各種アルデヒドの組み合わせによりＤ−β−ヒドロキシアミノ酸の合成にも有用である。
【実施例】
【００２３】
以下、実施例により本発明を更に詳細に説明する。実施例において％は重量％を意味する。
【００２４】
実施例１
ゴルドニア・エスピー（Ｇｏｒｄｏｎｉａ ｓｐ．）ＮＫ−４２０（ＦＥＲＭ Ｐ−２００１０）を、トリプトン１％、酵母エキス０．５％、塩化ナトリウム１％からなるｐＨ７．０の培地５ｍＬにそれぞれ接種し、３０℃で２４時間振とう培養した。培養液から遠心分離により菌体を集め、生理食塩水で３回洗浄後、Ｄ−スレオニン１８ｍＭ含む１００ｍＭリン酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ７．５）２ｍＬにそれぞれ懸濁し、３０℃で６時間反応させた。反応液から遠心分離により菌体を除いたのち、その一部をＨＰＬＣ分析し生成したグリシンを定量した。その結果、反応液中に１．３ｍＭのグリシンが生成していた事からＤ−スレオニンアルドラーゼ活性が確認された。
【００２５】
実施例２
バリオボラックス・エスピー（Ｖａｒｉｏｂｏｒａｘ ｓｐ．）ＮＫ−９１０（ＦＥＲＭ Ｐ−２００１１）を実施例１と同様の方法で培養し、培養液から遠心分離により菌体を集め、生理食塩水で３回洗浄後、Ｄ−スレオニン１８ｍＭ含む１００ｍＭリン酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ７．５）２ｍＬにそれぞれ懸濁し、３０℃で６時間反応させた。反応液から遠心分離により菌体を除いたのち、その一部をＨＰＬＣ分析し生成したグリシンを定量した。その結果、反応液中に１２．９ｍＭのグリシンが生成していた事からＤ−スレオニンアルドラーゼ活性が確認された。
【００２６】
実施例３
クリセオバクテリウム・エスピー（Ｃｈｒｙｓｅｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｓｐ．）ＮＫ−１６２０（ＦＥＲＭ Ｐ−２００１２）を実施例１と同様の方法で培養し、培養液から遠心分離により菌体を集め、生理食塩水で３回洗浄後、Ｄ−スレオニン１８ｍＭ含む１００ｍＭリン酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ７．５）２ｍＬにそれぞれ懸濁し、３０℃で６時間反応させた。反応液から遠心分離により菌体を除いたのち、その一部をＨＰＬＣ分析し生成したグリシンを定量した。その結果、反応液中に０．２ｍＭのグリシンが生成していた事からＤ−スレオニンアルドラーゼ活性が確認された。
【産業上の利用可能性】
【００２７】
ＤＬ−β−ヒドロキシアミノ酸の光学分割、逆反応を利用したＤ−β−ヒドロキシアミノ酸類の製造に用いる事が出来る。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ゴルドニア（Ｇｏｒｄｏｎｉａ）属に属し、Ｄ−スレオニンアルドラーゼを産生しうる微生物を栄養培地に培養し、培養物からＤ−スレオニンアルドラーゼを採取することを特徴とするＤ−スレオニンアルドラーゼの製造方法。
【請求項２】
バリオボラックス（Ｖａｒｉｏｂｏｒａｘ）属に属し、Ｄ−スレオニンアルドラーゼを産生しうる微生物を栄養培地に培養し、培養物からＤ−スレオニンアルドラーゼを採取することを特徴とするＤ−スレオニンアルドラーゼの製造方法。
【請求項３】
クリセオバクテリウム（Ｃｈｒｙｓｅｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ）属に属し、Ｄ−スレオニンアルドラーゼを産生しうる微生物を栄養培地に培養し、培養物からＤ−スレオニンアルドラーゼを採取することを特徴とするＤ−スレオニンアルドラーゼの製造方法。
【請求項４】
ゴルドニア・エスピーＮＫ−４２０（Ｇｏｒｄｏｎｉａ ｓｐ．ＮＫ−４２０、独立行政法人産業総合研究所特許生物寄託センター寄託ＦＥＲＭ Ｐ−２００１０）株又はその変異株。
【請求項５】
バリオボラックス・エスピーＮＫ−９１０（Ｖａｒｉｏｂｏｒａｘ ｓｐ．ＮＫ−９１０、独立行政法人産業総合研究所特許生物寄託センター寄託ＦＥＲＭ Ｐ−２００１１）株又はその変異株。
【請求項６】
クリセオバクテリウム・エスピーＮＫ−１６２０（Ｃｈｒｙｓｅｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｓｐ．ＮＫ−１６２０、独立行政法人産業総合研究所特許生物寄託センター寄託ＦＥＲＭ Ｐ−２００１２）株又はその変異株。
【請求項１】
ゴルドニア（Ｇｏｒｄｏｎｉａ）属に属し、Ｄ−スレオニンアルドラーゼを産生しうる微生物を栄養培地に培養し、培養物からＤ−スレオニンアルドラーゼを採取することを特徴とするＤ−スレオニンアルドラーゼの製造方法。
【請求項２】
バリオボラックス（Ｖａｒｉｏｂｏｒａｘ）属に属し、Ｄ−スレオニンアルドラーゼを産生しうる微生物を栄養培地に培養し、培養物からＤ−スレオニンアルドラーゼを採取することを特徴とするＤ−スレオニンアルドラーゼの製造方法。
【請求項３】
クリセオバクテリウム（Ｃｈｒｙｓｅｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ）属に属し、Ｄ−スレオニンアルドラーゼを産生しうる微生物を栄養培地に培養し、培養物からＤ−スレオニンアルドラーゼを採取することを特徴とするＤ−スレオニンアルドラーゼの製造方法。
【請求項４】
ゴルドニア・エスピーＮＫ−４２０（Ｇｏｒｄｏｎｉａ ｓｐ．ＮＫ−４２０、独立行政法人産業総合研究所特許生物寄託センター寄託ＦＥＲＭ Ｐ−２００１０）株又はその変異株。
【請求項５】
バリオボラックス・エスピーＮＫ−９１０（Ｖａｒｉｏｂｏｒａｘ ｓｐ．ＮＫ−９１０、独立行政法人産業総合研究所特許生物寄託センター寄託ＦＥＲＭ Ｐ−２００１１）株又はその変異株。
【請求項６】
クリセオバクテリウム・エスピーＮＫ−１６２０（Ｃｈｒｙｓｅｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｓｐ．ＮＫ−１６２０、独立行政法人産業総合研究所特許生物寄託センター寄託ＦＥＲＭ Ｐ−２００１２）株又はその変異株。
【公開番号】特開２００６−２５６４４（Ｐ２００６−２５６４４Ａ）
【公開日】平成１８年２月２日（２００６．２．２）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００４−２０６３６６（Ｐ２００４−２０６３６６）
【出願日】平成１６年７月１３日（２００４．７．１３）
【出願人】（０００００４０８６）日本化薬株式会社 (921)
【Ｆターム（参考）】
【公開日】平成１８年２月２日（２００６．２．２）
【国際特許分類】
【出願日】平成１６年７月１３日（２００４．７．１３）
【出願人】（０００００４０８６）日本化薬株式会社 (921)
【Ｆターム（参考）】
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