ＲＳＶＦタンパク質組成物およびそれを作製するための方法
本発明は、ＲＳＶ Ｆタンパク質を含む免疫原性組成物、ＲＳＶ Ｆタンパク質のエクトドメインポリペプチドを含む組成物の調製方法、ならびに特定の遺伝子操作型ＲＳＶ Ｆタンパク質および該遺伝子操作型ＲＳＶ Ｆタンパク質をコードする核酸に関する。該方法を用いて調製される組成物は、ＲＳＶ Ｆタンパク質のエクトドメインポリペプチドを、主要な、または単一の所望の形態およびコンフォメーションで含むものであり得る。また、本発明はＲＳＶ Ｆに対する免疫応答の誘導方法に関する。
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
アミノ酸１００〜１５０が配列番号９、配列番号１２、配列番号３、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７；配列番号８、配列番号１０、配列番号１１、配列番号１３、配列番号９１または配列番号９２のアミノ酸配列で置き換えられている１つ以上のＲＳウイルスＦ（ＲＳＶ Ｆ）ポリペプチドを含む免疫原性組成物。
【請求項２】
前記ＲＳＶ Ｆのアミノ酸１００〜１５０が配列番号１２のアミノ酸配列で置き換えられている、請求項１に記載の免疫原性組成物。
【請求項３】
前記ＲＳＶ Ｆのアミノ酸１００〜１５０が、配列番号９、配列番号３、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７；配列番号８、配列番号１０、配列番号１１、配列番号１３または配列番号９２のアミノ酸配列で置き換えられている、請求項１に記載の免疫原性組成物。
【請求項４】
アミノ酸１００〜１５０が配列番号９のアミノ酸配列で置き換えられている、請求項１に記載の免疫原性組成物。
【請求項５】
前記ＲＳＶ Ｆが単量体、三量体、または単量体と三量体の組合せの形態である、請求項１または請求項２に記載の免疫原性組成物。
【請求項６】
ＲＳＶ Ｆが単量体、三量体、ロゼットまたはその任意の組合せの形態である、請求項３または４に記載の免疫原性組成物。
【請求項７】
前記ＲＳＶ Ｆポリペプチドが、ＲＳＶ−Ｆエクトドメインを含む可溶性ポリペプチドである、請求項１〜６のいずれか１項に記載の免疫原性組成物。
【請求項８】
前記ＲＳＶ Ｆが、配列番号１または配列番号２のアミノ酸２３〜９９および１５１〜５２４を含む、請求項１〜６のいずれか１項に記載の免疫原性組成物。
【請求項９】
配列番号４９、配列番号６８、配列番号７１、配列番号２５、配列番号２７、配列番号２８、配列番号２９、配列番号３１、配列番号３３、配列番号３５、配列番号３７、配列番号４１、配列番号４２、配列番号４３、配列番号４４、配列番号４５、配列番号４６、配列番号４８、配列番号５０、配列番号５１、配列番号５２、配列番号５３、配列番号５４、配列番号５５、配列番号５７、配列番号５８、配列番号５９、配列番号６０、配列番号６１、配列番号６２、配列番号６３、配列番号６４、配列番号６５、配列番号６６、配列番号６７、配列番号６９、配列番号７０、配列番号８５、配列番号８６、配列番号８７、配列番号８８、配列番号８９、配列番号９３、シグナルペプチドおよび／またはＨＩＳタグが削除されている前述のいずれかの配列、ならびにその組合せからなる群より選択されるポリペプチドを含む免疫原性組成物。
【請求項１０】
前記ポリペプチドが、シグナルペプチドおよび任意選択でＨＩＳタグが削除されている配列番号６８または配列番号６８である、請求項９に記載の免疫原性組成物。
【請求項１１】
前記ポリペプチドが、配列番号４９、配列番号７１、ならびにシグナルペプチドおよび任意選択でＨＩＳタグが削除されている前述のいずれかの配列からなる群より選択される、請求項９に記載の免疫原性組成物。
【請求項１２】
アジュバントをさらに含む、請求項１〜１１のいずれか１項に記載の免疫原性組成物。
【請求項１３】
前記アジュバントが、アルミニウム塩、水中スクアレン型エマルジョン、ベンゾナフチリジン化合物、リン脂質化合物、小分子免疫増強物質および前述のものの任意の組合せからなる群より選択される、請求項１２に記載の免疫原性組成物。
【請求項１４】
アミノ酸１００〜１５０が、配列番号９、配列番号１２、配列番号３、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、配列番号１０、配列番号１１、配列番号１３、配列番号９１または配列番号９２のアミノ酸配列で置き換えられている、組換えＲＳウイルスＦポリペプチド（ＲＳＶ Ｆ）。
【請求項１５】
前記ＲＳＶ Ｆのアミノ酸１００〜１５０が配列番号１２のアミノ酸配列で置き換えられている、請求項１４に記載の組換えＲＳＶ Ｆ。
【請求項１６】
前記ＲＳＶ Ｆのアミノ酸１００〜１５０が、配列番号９、配列番号３、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７；配列番号８、配列番号１０、配列番号１１、配列番号１３または配列番号９２のアミノ酸配列で置き換えられている、請求項１５に記載の組換えＲＳＶ Ｆ。
【請求項１７】
アミノ酸１００〜１５０が配列番号９のアミノ酸配列で置き換えられている、請求項１４に記載の組換えＲＳＶ Ｆ。
【請求項１８】
単量体、三量体、または単量体と三量体の組合せの形態である、請求項１４または１５に記載の組換えＲＳＶ Ｆ。
【請求項１９】
単量体、三量体、三量体のロゼットまたはその組合せの形態である、請求項１６または１７に記載の組換えＲＳＶ Ｆ。
【請求項２０】
配列番号４９、配列番号６８、配列番号７１、配列番号２５、配列番号２７、配列番号２８、配列番号２９、配列番号３１、配列番号３３、配列番号３５、配列番号３７、配列番号４１、配列番号４２、配列番号４３、配列番号４４、配列番号４５、配列番号４６、配列番号４７、配列番号４８、配列番号５０、配列番号５１、配列番号５２、配列番号５３、配列番号５４、配列番号５５、配列番号５７、配列番号５８、配列番号５９、配列番号６０、配列番号６１、配列番号６２、配列番号６３、配列番号６４、配列番号６５、配列番号６６、配列番号６７、配列番号６９、配列番号７０、配列番号８５、配列番号８６、配列番号８７、配列番号８８、配列番号８９、配列番号９３、シグナルペプチドおよび／またはＨＩＳタグが削除されている前述のいずれかの配列、ならびにその組合せからなる群より選択される組換えポリペプチド。
【請求項２１】
異種オリゴマー化ドメイン、エピトープ、またはシグナルペプチドをさらに含む、請求項１４〜２０のいずれか１項に記載の組換えポリペプチド。
【請求項２２】
前記異種オリゴマー化ドメインが、インフルエンザ血球凝集素由来の三量体化ドメイン、ＳＡＲＳスパイク由来の三量体化ドメイン、またはＨＩＶ ｇｐ４１、ＮａｄＡ、修飾ＧＣＮ４もしくはＡＴＣａｓｅ由来の三量体化ドメインを含む群から選択される、請求項２１に記載の組換えポリペプチド。
【請求項２３】
請求項１４〜２１のいずれかに記載のポリペプチドをコードする単離された核酸。
【請求項２４】
自己複製ＲＮＡ分子である、請求項２３に記載の単離された核酸。
【請求項２５】
請求項２４に記載の自己複製ＲＮＡ分子を含む免疫原性組成物。
【請求項２６】
送達系をさらに含む、請求項２５に記載の免疫原性組成物。
【請求項２７】
請求項１〜１４のいずれか１項に記載の免疫原性組成物を被験体に投与する工程を含む、被験体においてＲＳＶ Ｆに対する免疫応答を誘導する方法。
【請求項２８】
請求項２５に記載の免疫原性組成物を被験体に投与する工程を含む、被験体においてＲＳＶ Ｆに対する免疫応答を誘導する方法。
【請求項２９】
切断型ＲＳＶ Ｆタンパク質のエクトドメインポリペプチドを含む組成物を作製するための方法であって、
ａ）切断されるとＦ１およびＦ２サブユニットが生成されるプロテアーゼ切断部位を含む非切断型のＲＳＶ Ｆタンパク質のエクトドメインポリペプチドを準備する工程であって、該非切断型の可溶性のＲＳＶ Ｆタンパク質のエクトドメインポリペプチドのアミノ酸配列は、改変型フリン切断部位を１０６〜１０９位および１３３〜１３６位に含み、該非切断型の可溶性のＲＳＶ Ｆタンパク質のエクトドメインポリペプチドは、該ポリペプチドを非切断型で産生する細胞から得られる、工程；ならびに
ｂ）準備した該可溶性のＲＳＶ Ｆタンパク質のエクトドメインポリペプチドを、該プロテアーゼ切断部位で切断するプロテアーゼで切断し、それにより、切断型の可溶性のＲＳＶ Ｆタンパク質のエクトドメインポリペプチドを含む組成物を生成させる工程
を含む、方法。
【請求項３０】
工程ｂ）において、準備した前記非切断型のＲＳＶ Ｆタンパク質のエクトドメインポリペプチドを、１０１位付近〜１６１位付近の１つ以上の位置で切断する、請求項２９に記載の方法。
【請求項３１】
準備した前記非切断型のＲＳＶ Ｆタンパク質のエクトドメインポリペプチドを、１０６位付近〜１４２位付近の１つ以上の位置で切断する、請求項３０に記載の方法。
【請求項３２】
ａ）において準備する前記非切断型のＲＳＶ Ｆタンパク質のエクトドメインポリペプチドを精製する、請求項２９〜３２のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３３】
ａ）において準備する前記非切断型のＲＳＶ Ｆタンパク質のエクトドメインポリペプチドがインタクトな融合ペプチドを含むものである、請求項２９〜３２のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３４】
工程ｂ）での切断により、三量体のロゼットの形成がもたらされる、請求項３３に記載の方法。
【請求項３５】
ｃ）前記三量体のロゼットを精製する工程をさらに含む、請求項３４に記載の方法。
【請求項３６】
前記三量体のロゼットの精製がサイズ排除クロマトグラフィーを含む、請求項３５に記載の方法。
【請求項３７】
ａ）において準備する前記非切断型のＲＳＶ Ｆタンパク質のエクトドメインポリペプチドが改変型融合ペプチドを含むものである、請求項２９〜３２のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３８】
前記融合ペプチドの少なくとも一部分が、前記非切断型のＲＳＶ Ｆタンパク質のエクトドメインポリペプチドにおいて欠失している、請求項３７に記載の方法。
【請求項３９】
アミノ酸１３７〜１５３、アミノ酸１３７〜１４６、アミノ酸１３７〜１４５、またはアミノ酸１３７〜１４２が前記融合ペプチドから欠失している、請求項３７に記載の方法。
【請求項４０】
工程ｂ）での切断により、三量体の形成がもたらされる、請求項３７〜３９のいずれか１項に記載の方法。
【請求項４１】
ｃ）前記三量体を精製する工程をさらに含む、請求項４０に記載の方法。
【請求項４２】
前記三量体の精製がサイズ排除クロマトグラフィーを含む、請求項４１に記載の方法。
【請求項４３】
ａ）において準備する前記非切断型のＲＳＶ Ｆタンパク質のエクトドメインポリペプチドを、昆虫細胞、哺乳動物細胞、鳥類細胞、酵母細胞、テトラヒメナ細胞またはその組合せにおいて発現させる、請求項２９〜４２のいずれか１項に記載の方法。
【請求項４４】
ａ）において準備する前記非切断型のＲＳＶ Ｆタンパク質のエクトドメインポリペプチドを細胞馴化培養培地中で準備する、請求項２９〜４３に記載の方法。
【請求項４５】
前記細胞馴化培養培地が、昆虫細胞馴化培養培地、哺乳動物細胞馴化培養培地およびその組合せからなる群より選択される、請求項４４に記載の方法。
【請求項４６】
前記三量体のロゼットが、ＦｕｒｄｅｌおよびＤｅｌｐ２３ ｆｕｒｄｅｌからなる群より選択される少なくとも１つのポリペプチドのＦ１およびＦ２断片を含む、請求項２９〜３６および４１のいずれか１項に記載の方法。
【請求項４７】
前記切断型ＲＳＶ Ｆタンパク質のエクトドメインポリペプチドに実質的に脂質とリポタンパク質が含まれていない、請求項２９〜４６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項４８】
請求項２９〜４７のいずれか１項に記載の方法を用いて作製された切断型ＲＳＶ Ｆタンパク質のエクトドメインポリペプチドを含む組成物。
【請求項４９】
免疫原性組成物である、請求項４８に記載の組成物。
【請求項５０】
非切断型のＲＳＶ Ｆタンパク質のエクトドメインポリペプチドの単量体、三量体または単量体と三量体の組合せを含む組成物を作製するための方法であって、
ａ）非切断型のＲＳＶ Ｆタンパク質のエクトドメインポリペプチドを含む生物学的材料を準備する工程であって、該非切断型の可溶性のＲＳＶ Ｆタンパク質のエクトドメインポリペプチドのアミノ酸配列は改変型フリン切断部位を１０６〜１０９位および１３３〜１３６位に含み、該非切断型の可溶性のＲＳＶ Ｆタンパク質のエクトドメインポリペプチドは該ポリペプチドを非切断型で産生する細胞から分泌される、工程；ならびに
ｂ）非切断型のＲＳＶ Ｆタンパク質のエクトドメインポリペプチドの単量体または三量体を該生物学的材料から精製し、それにより該組成物を生成させる工程
を含む、方法。
【請求項５１】
前記生物学的材料が、昆虫細胞の馴化培養培地または細胞溶解物、哺乳動物細胞の馴化培養培地または細胞溶解物、鳥類細胞の馴化培養培地または細胞溶解物、酵母細胞の馴化培地または細胞溶解物、テトラヒメナ細胞の馴化培養培地または細胞溶解物、およびその組合せからなる群より選択される、請求項５０に記載の方法。
【請求項５２】
ｂ）において、非切断型のＲＳＶ Ｆタンパク質のエクトドメインポリペプチド三量体を精製する、請求項５０または５１に記載の方法。
【請求項５３】
ｂ）において、非切断型のＲＳＶ Ｆタンパク質のエクトドメインポリペプチド単量体を精製する、請求項５０または５１に記載の方法。
【請求項５４】
ｂ）での精製がサイズ排除クロマトグラフィーを含む、請求項５０に記載の方法。
【請求項５５】
前記非切断型のＲＳＶ Ｆタンパク質のエクトドメインポリペプチドが、改変型融合ペプチドをさらに含むものである、請求項５０〜５４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項５６】
前記可溶性の非切断型のＲＳＶ Ｆタンパク質のエクトドメインポリペプチドが、ｆｕｒｍｔ、ｆｕｒｄｅｌ、Ｄｅｌｐ２１ ｆｕｒｘ、Ｄｅｌｐ２３ ｆｕｒｘ、Ｄｅｌｐ２１ ｆｕｒｄｅｌ、Ｄｅｌｐ２３ ｆｕｒｄｅｌ、および第Ｘａ因子構築物からなる群より選択される少なくとも１つのポリペプチドを含む、請求項５０に記載の方法。
【請求項５７】
非切断型のＲＳＶ Ｆタンパク質のエクトドメインポリペプチドを含む前記組成物に実質的に脂質とリポタンパク質が含まれていない、請求項５０〜５６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項５８】
請求項５０〜５７のいずれか１項に記載の方法を用いて作製された可溶性の非切断型のＲＳＶ Ｆタンパク質のエクトドメインポリペプチドの単量体または三量体を含む組成物。
【請求項５９】
免疫原性組成物である、請求項５８に記載の組成物。
【請求項６０】
非切断型のＲＳＶ Ｆタンパク質のエクトドメインポリペプチドの単量体、三量体または単量体と三量体の組合せを含む組成物を作製するための方法であって、
ａ）非切断型のＲＳＶ Ｆタンパク質のエクトドメインポリペプチドを含む生物学的材料を準備する工程であって、該非切断型のＲＳＶ Ｆタンパク質のエクトドメインポリペプチドのアミノ酸配列は改変型フリン切断部位を含み、１０１位付近と１６１位付近との間に存在するリジン残基とアルギニン残基は欠失しているか、あるいはリジンもしくはアルギニンではないアミノ酸で置き換えられており、該ＲＳＶ Ｆタンパク質のエクトドメインポリペプチドは、該ポリペプチドを１０１位付近と１６１位付近との間を非切断の状態で産生する宿主細胞から得られ、該ＲＳＶ Ｆタンパク質のエクトドメインポリペプチドは１０１位付近と１６１位付近との間が切断されていない、工程；ならびに
ｂ）非切断型のＲＳＶ Ｆタンパク質のエクトドメインポリペプチドの単量体、三量体または単量体と三量体の組合せを、該生物学的材料から精製する工程
を含む、方法。
【請求項６１】
前記生物学的材料が、昆虫細胞の馴化培養培地または細胞溶解物、哺乳動物細胞の馴化培養培地または細胞溶解物、鳥類細胞の馴化培養培地または細胞溶解物、酵母細胞の馴化培地または細胞溶解物、テトラヒメナ細胞の馴化培養培地または細胞溶解物、およびその組合せからなる群より選択される、請求項６０に記載の方法。
【請求項６２】
ｂ）において、非切断型のＲＳＶ Ｆタンパク質のエクトドメインポリペプチド三量体を精製する、請求項６０または６１に記載の方法。
【請求項６３】
ｂ）において、非切断型のＲＳＶ Ｆタンパク質のエクトドメインポリペプチド単量体を精製する、請求項６０または６１に記載の方法。
【請求項６４】
ｂ）において、非切断型のＲＳＶ Ｆタンパク質のエクトドメインポリペプチド単量体と非切断型のＲＳＶ Ｆタンパク質のエクトドメインポリペプチド三量体を精製する、請求項６０または６１に記載の方法。
【請求項６５】
ｂ）での精製がサイズ排除クロマトグラフィーを含む、請求項６０〜６４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項６６】
前記非切断型のＲＳＶ Ｆタンパク質のエクトドメインポリペプチドが、改変型融合ペプチドをさらに含むものである、請求項６０〜６４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項６７】
前記非切断型のＲＳＶ Ｆタンパク質のエクトドメインポリペプチドが、Ｆｕｒｘ、Ｆｕｒｘ Ｒ１１３Ｑ Ｋ１２３Ｎ Ｋ１２４Ｎ、Ｄｅｌｐ２１ ｆｕｒｘおよびＤｅｌｐ２３ ｆｕｒｘからなる群より選択される少なくとも１つのポリペプチドを含む、請求項６０に記載の方法。
【請求項６８】
非切断型のＲＳＶ Ｆタンパク質のエクトドメインポリペプチドを含む前記組成物に実質的に脂質とリポタンパク質が含まれていない、請求項６０〜６７のいずれか１項に記載の方法。
【請求項６９】
請求項６０〜６８のいずれか１項に記載の方法を用いて作製された可溶性の非切断型のＲＳＶ Ｆタンパク質のエクトドメインポリペプチドを含む組成物。
【請求項７０】
免疫原性組成物である、請求項６９に記載の組成物。
【請求項７１】
切断型ＲＳＶ Ｆタンパク質のエクトドメインポリペプチドの単量体、三量体または単量体と三量体の組合せを含む組成物を作製するための方法であって、
ａ）改変型融合ペプチドを含む切断型ＲＳＶ Ｆタンパク質のエクトドメインポリペプチドを含む生物学的材料を準備する工程；および
ｂ）切断型ＲＳＶ Ｆタンパク質のエクトドメインポリペプチドを該生物学的材料から精製する工程
を含む、方法。
【請求項７２】
前記ＲＳＶ Ｆタンパク質のエクトドメインポリペプチドが、アミノ酸１３７〜１５２付近が欠失しているか、アミノ酸１３７〜１５３付近が欠失しているか、アミノ酸１３７〜１４５付近が欠失しているか、アミノ酸１３７〜１４６付近が欠失しているか、またはアミノ酸１３７〜１４２付近が欠失しているアミノ酸配列を含む、請求項７１に記載の方法。
【請求項７３】
前記生物学的材料が、昆虫細胞の馴化培養培地または細胞溶解物、哺乳動物細胞の馴化培養培地または細胞溶解物、鳥類細胞の馴化培養培地または細胞溶解物、酵母細胞の馴化培地または細胞溶解物、テトラヒメナ細胞の馴化培養培地または細胞溶解物、およびその組合せからなる群より選択される、請求項７１または７２に記載の方法。
【請求項７４】
ｂ）において、切断型ＲＳＶ Ｆタンパク質のエクトドメインポリペプチド三量体を精製する、請求項７１〜７３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項７５】
ｂ）において、切断型ＲＳＶ Ｆタンパク質のエクトドメインポリペプチド単量体を精製する、請求項７１〜７３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項７６】
ｂ）において、切断型ＲＳＶ Ｆタンパク質のエクトドメインポリペプチド単量体と切断型ＲＳＶ Ｆタンパク質のエクトドメインポリペプチド三量体を精製する、請求項７１〜７３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項７７】
ｂ）での精製がサイズ排除クロマトグラフィーを含む、請求項７１〜７３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項７８】
前記非切断型のＲＳＶ Ｆタンパク質のエクトドメインポリペプチドが、少なくとも融合ペプチド欠失ポリペプチドを含むものである、請求項７１に記載の方法。
【請求項７９】
非切断型のＲＳＶ Ｆタンパク質のエクトドメインポリペプチドを含む前記組成物に実質的に脂質とリポタンパク質が含まれていない、請求項７１〜７８のいずれか１項に記載の方法。
【請求項８０】
請求項７１〜７９のいずれか１項に記載の方法を用いて作製された可溶性の非切断型のＲＳＶ Ｆタンパク質のエクトドメインポリペプチドを含む組成物。
【請求項８１】
免疫原性組成物である、請求項８０に記載の組成物。
【請求項８２】
ＲＳＶ Ｆタンパク質のエクトドメインポリペプチドを含む組成物を作製するための方法であって、
ａ）改変型フリン切断部位を１３３〜１３６位に含むＲＳＶ Ｆタンパク質のエクトドメインポリペプチドを準備する工程であって、該可溶性のＲＳＶ Ｆタンパク質のエクトドメインポリペプチドは、該ペプチドを、１３６／１３７位が切断されていないがＦ１を含むサブユニットと会合しているＦ２断片の形態で産生する細胞から分泌される、工程；ならびに
ｂ）準備した該ＲＳＶ Ｆタンパク質のエクトドメインポリペプチドを、ＲＳＶ Ｆタンパク質のエクトドメインを１０１位と１６１位との間の部位で切断するプロテアーゼで切断し、それにより該組成物を生成させる工程
を含む、方法。
【請求項８３】
ａ）において準備する前記ＲＳＶ Ｆタンパク質のエクトドメインポリペプチドを精製する、請求項８２に記載の方法。
【請求項８４】
ａ）において準備する前記ＲＳＶ Ｆタンパク質のエクトドメインポリペプチドを、昆虫細胞、哺乳動物細胞、鳥類細胞、酵母細胞、テトラヒメナ細胞またはその組合せにおいて発現させる、請求項８２または８３に記載の方法。
【請求項８５】
ａ）において準備する前記ＲＳＶ Ｆタンパク質のエクトドメインポリペプチドを、細胞馴化培養培地、細胞抽出物またはその組合せにおいて準備する、請求項８２〜８４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項８６】
前記ＲＳＶ Ｆタンパク質のエクトドメインポリペプチドを、昆虫細胞馴化培養培地、哺乳動物細胞馴化培養培地、鳥類細胞馴化培養培地、酵母細胞馴化培養培地、テトラヒメナ細胞馴化培養培地およびその組合せからなる群より選択される細胞馴化培養培地において準備する、請求項８５に記載の方法。
【請求項８７】
前記ＲＳＶ Ｆタンパク質のエクトドメインポリペプチドが少なくともＣ末端フリンポリペプチドを含む、請求項８２〜８６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項８８】
ｂ）において作製される前記切断型ＲＳＶ Ｆタンパク質のエクトドメインポリペプチドに実質的に脂質とリポタンパク質が含まれていない、請求項８２〜８７のいずれか１項に記載の方法。
【請求項８９】
請求項８２〜８８のいずれか１項に記載の方法を用いて作製された切断型ＲＳＶ Ｆタンパク質のエクトドメインポリペプチドを含む組成物。
【請求項９０】
免疫原性組成物である、請求項８９に記載の組成物。
【請求項９１】
ＲＳＶ Ｆタンパク質のエクトドメインポリペプチドを含む組成物を作製するための方法であって、
ａ）改変型フリン切断部位を１３３〜１３６位に含むＲＳＶ Ｆタンパク質のエクトドメインポリペプチドを含む生物学的材料を準備する工程であって、該可溶性のＲＳＶ Ｆタンパク質のエクトドメインポリペプチドは、該ペプチドを、１３６／１３７位が切断されていないがＦ１を含むサブユニットと会合しているＦ２断片の形態で産生する細胞から分泌され、ただし、該改変型フリン切断部位はアミノ酸１３１〜１３４の欠失ではないものとする、工程；ならびに
ｂ）該ＲＳＶ Ｆタンパク質のエクトドメインポリペプチドを該生物学的材料から精製し、それにより該組成物を生成させる工程
を含む、方法。
【請求項９２】
前記生物学的材料が、昆虫細胞の馴化培養培地または細胞溶解物、哺乳動物細胞の馴化培養培地または細胞溶解物、鳥類細胞の馴化培養培地または細胞溶解物、酵母細胞の馴化培地または細胞溶解物、テトラヒメナ細胞の馴化培養培地または細胞溶解物、およびその組合せからなる群より選択される、請求項９１に記載の方法。
【請求項９３】
ｂ）において、ＲＳＶ Ｆタンパク質のエクトドメインポリペプチドの単量体、三量体または単量体と三量体の組合せを精製する、請求項９１または９２に記載の方法。
【請求項９４】
ｂ）での精製がサイズ排除クロマトグラフィーを含む、請求項９３に記載の方法。
【請求項９５】
該ＲＳＶ Ｆタンパク質のエクトドメインポリペプチドが少なくともＣ末端フリンポリペプチドを含む、請求項９１〜９４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項９６】
ＲＳＶ Ｆタンパク質のエクトドメインポリペプチドを含む前記組成物に実質的に脂質とリポタンパク質が含まれていない、請求項９１〜９５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項９７】
請求項９２〜９６のいずれか１項に記載の方法を用いて作製されたＲＳＶ Ｆタンパク質のエクトドメインポリペプチドを含む組成物。
【請求項９８】
免疫原性組成物である、請求項９７に記載の組成物。
【請求項１】
アミノ酸１００〜１５０が配列番号９、配列番号１２、配列番号３、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７；配列番号８、配列番号１０、配列番号１１、配列番号１３、配列番号９１または配列番号９２のアミノ酸配列で置き換えられている１つ以上のＲＳウイルスＦ（ＲＳＶ Ｆ）ポリペプチドを含む免疫原性組成物。
【請求項２】
前記ＲＳＶ Ｆのアミノ酸１００〜１５０が配列番号１２のアミノ酸配列で置き換えられている、請求項１に記載の免疫原性組成物。
【請求項３】
前記ＲＳＶ Ｆのアミノ酸１００〜１５０が、配列番号９、配列番号３、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７；配列番号８、配列番号１０、配列番号１１、配列番号１３または配列番号９２のアミノ酸配列で置き換えられている、請求項１に記載の免疫原性組成物。
【請求項４】
アミノ酸１００〜１５０が配列番号９のアミノ酸配列で置き換えられている、請求項１に記載の免疫原性組成物。
【請求項５】
前記ＲＳＶ Ｆが単量体、三量体、または単量体と三量体の組合せの形態である、請求項１または請求項２に記載の免疫原性組成物。
【請求項６】
ＲＳＶ Ｆが単量体、三量体、ロゼットまたはその任意の組合せの形態である、請求項３または４に記載の免疫原性組成物。
【請求項７】
前記ＲＳＶ Ｆポリペプチドが、ＲＳＶ−Ｆエクトドメインを含む可溶性ポリペプチドである、請求項１〜６のいずれか１項に記載の免疫原性組成物。
【請求項８】
前記ＲＳＶ Ｆが、配列番号１または配列番号２のアミノ酸２３〜９９および１５１〜５２４を含む、請求項１〜６のいずれか１項に記載の免疫原性組成物。
【請求項９】
配列番号４９、配列番号６８、配列番号７１、配列番号２５、配列番号２７、配列番号２８、配列番号２９、配列番号３１、配列番号３３、配列番号３５、配列番号３７、配列番号４１、配列番号４２、配列番号４３、配列番号４４、配列番号４５、配列番号４６、配列番号４８、配列番号５０、配列番号５１、配列番号５２、配列番号５３、配列番号５４、配列番号５５、配列番号５７、配列番号５８、配列番号５９、配列番号６０、配列番号６１、配列番号６２、配列番号６３、配列番号６４、配列番号６５、配列番号６６、配列番号６７、配列番号６９、配列番号７０、配列番号８５、配列番号８６、配列番号８７、配列番号８８、配列番号８９、配列番号９３、シグナルペプチドおよび／またはＨＩＳタグが削除されている前述のいずれかの配列、ならびにその組合せからなる群より選択されるポリペプチドを含む免疫原性組成物。
【請求項１０】
前記ポリペプチドが、シグナルペプチドおよび任意選択でＨＩＳタグが削除されている配列番号６８または配列番号６８である、請求項９に記載の免疫原性組成物。
【請求項１１】
前記ポリペプチドが、配列番号４９、配列番号７１、ならびにシグナルペプチドおよび任意選択でＨＩＳタグが削除されている前述のいずれかの配列からなる群より選択される、請求項９に記載の免疫原性組成物。
【請求項１２】
アジュバントをさらに含む、請求項１〜１１のいずれか１項に記載の免疫原性組成物。
【請求項１３】
前記アジュバントが、アルミニウム塩、水中スクアレン型エマルジョン、ベンゾナフチリジン化合物、リン脂質化合物、小分子免疫増強物質および前述のものの任意の組合せからなる群より選択される、請求項１２に記載の免疫原性組成物。
【請求項１４】
アミノ酸１００〜１５０が、配列番号９、配列番号１２、配列番号３、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、配列番号１０、配列番号１１、配列番号１３、配列番号９１または配列番号９２のアミノ酸配列で置き換えられている、組換えＲＳウイルスＦポリペプチド（ＲＳＶ Ｆ）。
【請求項１５】
前記ＲＳＶ Ｆのアミノ酸１００〜１５０が配列番号１２のアミノ酸配列で置き換えられている、請求項１４に記載の組換えＲＳＶ Ｆ。
【請求項１６】
前記ＲＳＶ Ｆのアミノ酸１００〜１５０が、配列番号９、配列番号３、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７；配列番号８、配列番号１０、配列番号１１、配列番号１３または配列番号９２のアミノ酸配列で置き換えられている、請求項１５に記載の組換えＲＳＶ Ｆ。
【請求項１７】
アミノ酸１００〜１５０が配列番号９のアミノ酸配列で置き換えられている、請求項１４に記載の組換えＲＳＶ Ｆ。
【請求項１８】
単量体、三量体、または単量体と三量体の組合せの形態である、請求項１４または１５に記載の組換えＲＳＶ Ｆ。
【請求項１９】
単量体、三量体、三量体のロゼットまたはその組合せの形態である、請求項１６または１７に記載の組換えＲＳＶ Ｆ。
【請求項２０】
配列番号４９、配列番号６８、配列番号７１、配列番号２５、配列番号２７、配列番号２８、配列番号２９、配列番号３１、配列番号３３、配列番号３５、配列番号３７、配列番号４１、配列番号４２、配列番号４３、配列番号４４、配列番号４５、配列番号４６、配列番号４７、配列番号４８、配列番号５０、配列番号５１、配列番号５２、配列番号５３、配列番号５４、配列番号５５、配列番号５７、配列番号５８、配列番号５９、配列番号６０、配列番号６１、配列番号６２、配列番号６３、配列番号６４、配列番号６５、配列番号６６、配列番号６７、配列番号６９、配列番号７０、配列番号８５、配列番号８６、配列番号８７、配列番号８８、配列番号８９、配列番号９３、シグナルペプチドおよび／またはＨＩＳタグが削除されている前述のいずれかの配列、ならびにその組合せからなる群より選択される組換えポリペプチド。
【請求項２１】
異種オリゴマー化ドメイン、エピトープ、またはシグナルペプチドをさらに含む、請求項１４〜２０のいずれか１項に記載の組換えポリペプチド。
【請求項２２】
前記異種オリゴマー化ドメインが、インフルエンザ血球凝集素由来の三量体化ドメイン、ＳＡＲＳスパイク由来の三量体化ドメイン、またはＨＩＶ ｇｐ４１、ＮａｄＡ、修飾ＧＣＮ４もしくはＡＴＣａｓｅ由来の三量体化ドメインを含む群から選択される、請求項２１に記載の組換えポリペプチド。
【請求項２３】
請求項１４〜２１のいずれかに記載のポリペプチドをコードする単離された核酸。
【請求項２４】
自己複製ＲＮＡ分子である、請求項２３に記載の単離された核酸。
【請求項２５】
請求項２４に記載の自己複製ＲＮＡ分子を含む免疫原性組成物。
【請求項２６】
送達系をさらに含む、請求項２５に記載の免疫原性組成物。
【請求項２７】
請求項１〜１４のいずれか１項に記載の免疫原性組成物を被験体に投与する工程を含む、被験体においてＲＳＶ Ｆに対する免疫応答を誘導する方法。
【請求項２８】
請求項２５に記載の免疫原性組成物を被験体に投与する工程を含む、被験体においてＲＳＶ Ｆに対する免疫応答を誘導する方法。
【請求項２９】
切断型ＲＳＶ Ｆタンパク質のエクトドメインポリペプチドを含む組成物を作製するための方法であって、
ａ）切断されるとＦ１およびＦ２サブユニットが生成されるプロテアーゼ切断部位を含む非切断型のＲＳＶ Ｆタンパク質のエクトドメインポリペプチドを準備する工程であって、該非切断型の可溶性のＲＳＶ Ｆタンパク質のエクトドメインポリペプチドのアミノ酸配列は、改変型フリン切断部位を１０６〜１０９位および１３３〜１３６位に含み、該非切断型の可溶性のＲＳＶ Ｆタンパク質のエクトドメインポリペプチドは、該ポリペプチドを非切断型で産生する細胞から得られる、工程；ならびに
ｂ）準備した該可溶性のＲＳＶ Ｆタンパク質のエクトドメインポリペプチドを、該プロテアーゼ切断部位で切断するプロテアーゼで切断し、それにより、切断型の可溶性のＲＳＶ Ｆタンパク質のエクトドメインポリペプチドを含む組成物を生成させる工程
を含む、方法。
【請求項３０】
工程ｂ）において、準備した前記非切断型のＲＳＶ Ｆタンパク質のエクトドメインポリペプチドを、１０１位付近〜１６１位付近の１つ以上の位置で切断する、請求項２９に記載の方法。
【請求項３１】
準備した前記非切断型のＲＳＶ Ｆタンパク質のエクトドメインポリペプチドを、１０６位付近〜１４２位付近の１つ以上の位置で切断する、請求項３０に記載の方法。
【請求項３２】
ａ）において準備する前記非切断型のＲＳＶ Ｆタンパク質のエクトドメインポリペプチドを精製する、請求項２９〜３２のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３３】
ａ）において準備する前記非切断型のＲＳＶ Ｆタンパク質のエクトドメインポリペプチドがインタクトな融合ペプチドを含むものである、請求項２９〜３２のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３４】
工程ｂ）での切断により、三量体のロゼットの形成がもたらされる、請求項３３に記載の方法。
【請求項３５】
ｃ）前記三量体のロゼットを精製する工程をさらに含む、請求項３４に記載の方法。
【請求項３６】
前記三量体のロゼットの精製がサイズ排除クロマトグラフィーを含む、請求項３５に記載の方法。
【請求項３７】
ａ）において準備する前記非切断型のＲＳＶ Ｆタンパク質のエクトドメインポリペプチドが改変型融合ペプチドを含むものである、請求項２９〜３２のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３８】
前記融合ペプチドの少なくとも一部分が、前記非切断型のＲＳＶ Ｆタンパク質のエクトドメインポリペプチドにおいて欠失している、請求項３７に記載の方法。
【請求項３９】
アミノ酸１３７〜１５３、アミノ酸１３７〜１４６、アミノ酸１３７〜１４５、またはアミノ酸１３７〜１４２が前記融合ペプチドから欠失している、請求項３７に記載の方法。
【請求項４０】
工程ｂ）での切断により、三量体の形成がもたらされる、請求項３７〜３９のいずれか１項に記載の方法。
【請求項４１】
ｃ）前記三量体を精製する工程をさらに含む、請求項４０に記載の方法。
【請求項４２】
前記三量体の精製がサイズ排除クロマトグラフィーを含む、請求項４１に記載の方法。
【請求項４３】
ａ）において準備する前記非切断型のＲＳＶ Ｆタンパク質のエクトドメインポリペプチドを、昆虫細胞、哺乳動物細胞、鳥類細胞、酵母細胞、テトラヒメナ細胞またはその組合せにおいて発現させる、請求項２９〜４２のいずれか１項に記載の方法。
【請求項４４】
ａ）において準備する前記非切断型のＲＳＶ Ｆタンパク質のエクトドメインポリペプチドを細胞馴化培養培地中で準備する、請求項２９〜４３に記載の方法。
【請求項４５】
前記細胞馴化培養培地が、昆虫細胞馴化培養培地、哺乳動物細胞馴化培養培地およびその組合せからなる群より選択される、請求項４４に記載の方法。
【請求項４６】
前記三量体のロゼットが、ＦｕｒｄｅｌおよびＤｅｌｐ２３ ｆｕｒｄｅｌからなる群より選択される少なくとも１つのポリペプチドのＦ１およびＦ２断片を含む、請求項２９〜３６および４１のいずれか１項に記載の方法。
【請求項４７】
前記切断型ＲＳＶ Ｆタンパク質のエクトドメインポリペプチドに実質的に脂質とリポタンパク質が含まれていない、請求項２９〜４６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項４８】
請求項２９〜４７のいずれか１項に記載の方法を用いて作製された切断型ＲＳＶ Ｆタンパク質のエクトドメインポリペプチドを含む組成物。
【請求項４９】
免疫原性組成物である、請求項４８に記載の組成物。
【請求項５０】
非切断型のＲＳＶ Ｆタンパク質のエクトドメインポリペプチドの単量体、三量体または単量体と三量体の組合せを含む組成物を作製するための方法であって、
ａ）非切断型のＲＳＶ Ｆタンパク質のエクトドメインポリペプチドを含む生物学的材料を準備する工程であって、該非切断型の可溶性のＲＳＶ Ｆタンパク質のエクトドメインポリペプチドのアミノ酸配列は改変型フリン切断部位を１０６〜１０９位および１３３〜１３６位に含み、該非切断型の可溶性のＲＳＶ Ｆタンパク質のエクトドメインポリペプチドは該ポリペプチドを非切断型で産生する細胞から分泌される、工程；ならびに
ｂ）非切断型のＲＳＶ Ｆタンパク質のエクトドメインポリペプチドの単量体または三量体を該生物学的材料から精製し、それにより該組成物を生成させる工程
を含む、方法。
【請求項５１】
前記生物学的材料が、昆虫細胞の馴化培養培地または細胞溶解物、哺乳動物細胞の馴化培養培地または細胞溶解物、鳥類細胞の馴化培養培地または細胞溶解物、酵母細胞の馴化培地または細胞溶解物、テトラヒメナ細胞の馴化培養培地または細胞溶解物、およびその組合せからなる群より選択される、請求項５０に記載の方法。
【請求項５２】
ｂ）において、非切断型のＲＳＶ Ｆタンパク質のエクトドメインポリペプチド三量体を精製する、請求項５０または５１に記載の方法。
【請求項５３】
ｂ）において、非切断型のＲＳＶ Ｆタンパク質のエクトドメインポリペプチド単量体を精製する、請求項５０または５１に記載の方法。
【請求項５４】
ｂ）での精製がサイズ排除クロマトグラフィーを含む、請求項５０に記載の方法。
【請求項５５】
前記非切断型のＲＳＶ Ｆタンパク質のエクトドメインポリペプチドが、改変型融合ペプチドをさらに含むものである、請求項５０〜５４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項５６】
前記可溶性の非切断型のＲＳＶ Ｆタンパク質のエクトドメインポリペプチドが、ｆｕｒｍｔ、ｆｕｒｄｅｌ、Ｄｅｌｐ２１ ｆｕｒｘ、Ｄｅｌｐ２３ ｆｕｒｘ、Ｄｅｌｐ２１ ｆｕｒｄｅｌ、Ｄｅｌｐ２３ ｆｕｒｄｅｌ、および第Ｘａ因子構築物からなる群より選択される少なくとも１つのポリペプチドを含む、請求項５０に記載の方法。
【請求項５７】
非切断型のＲＳＶ Ｆタンパク質のエクトドメインポリペプチドを含む前記組成物に実質的に脂質とリポタンパク質が含まれていない、請求項５０〜５６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項５８】
請求項５０〜５７のいずれか１項に記載の方法を用いて作製された可溶性の非切断型のＲＳＶ Ｆタンパク質のエクトドメインポリペプチドの単量体または三量体を含む組成物。
【請求項５９】
免疫原性組成物である、請求項５８に記載の組成物。
【請求項６０】
非切断型のＲＳＶ Ｆタンパク質のエクトドメインポリペプチドの単量体、三量体または単量体と三量体の組合せを含む組成物を作製するための方法であって、
ａ）非切断型のＲＳＶ Ｆタンパク質のエクトドメインポリペプチドを含む生物学的材料を準備する工程であって、該非切断型のＲＳＶ Ｆタンパク質のエクトドメインポリペプチドのアミノ酸配列は改変型フリン切断部位を含み、１０１位付近と１６１位付近との間に存在するリジン残基とアルギニン残基は欠失しているか、あるいはリジンもしくはアルギニンではないアミノ酸で置き換えられており、該ＲＳＶ Ｆタンパク質のエクトドメインポリペプチドは、該ポリペプチドを１０１位付近と１６１位付近との間を非切断の状態で産生する宿主細胞から得られ、該ＲＳＶ Ｆタンパク質のエクトドメインポリペプチドは１０１位付近と１６１位付近との間が切断されていない、工程；ならびに
ｂ）非切断型のＲＳＶ Ｆタンパク質のエクトドメインポリペプチドの単量体、三量体または単量体と三量体の組合せを、該生物学的材料から精製する工程
を含む、方法。
【請求項６１】
前記生物学的材料が、昆虫細胞の馴化培養培地または細胞溶解物、哺乳動物細胞の馴化培養培地または細胞溶解物、鳥類細胞の馴化培養培地または細胞溶解物、酵母細胞の馴化培地または細胞溶解物、テトラヒメナ細胞の馴化培養培地または細胞溶解物、およびその組合せからなる群より選択される、請求項６０に記載の方法。
【請求項６２】
ｂ）において、非切断型のＲＳＶ Ｆタンパク質のエクトドメインポリペプチド三量体を精製する、請求項６０または６１に記載の方法。
【請求項６３】
ｂ）において、非切断型のＲＳＶ Ｆタンパク質のエクトドメインポリペプチド単量体を精製する、請求項６０または６１に記載の方法。
【請求項６４】
ｂ）において、非切断型のＲＳＶ Ｆタンパク質のエクトドメインポリペプチド単量体と非切断型のＲＳＶ Ｆタンパク質のエクトドメインポリペプチド三量体を精製する、請求項６０または６１に記載の方法。
【請求項６５】
ｂ）での精製がサイズ排除クロマトグラフィーを含む、請求項６０〜６４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項６６】
前記非切断型のＲＳＶ Ｆタンパク質のエクトドメインポリペプチドが、改変型融合ペプチドをさらに含むものである、請求項６０〜６４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項６７】
前記非切断型のＲＳＶ Ｆタンパク質のエクトドメインポリペプチドが、Ｆｕｒｘ、Ｆｕｒｘ Ｒ１１３Ｑ Ｋ１２３Ｎ Ｋ１２４Ｎ、Ｄｅｌｐ２１ ｆｕｒｘおよびＤｅｌｐ２３ ｆｕｒｘからなる群より選択される少なくとも１つのポリペプチドを含む、請求項６０に記載の方法。
【請求項６８】
非切断型のＲＳＶ Ｆタンパク質のエクトドメインポリペプチドを含む前記組成物に実質的に脂質とリポタンパク質が含まれていない、請求項６０〜６７のいずれか１項に記載の方法。
【請求項６９】
請求項６０〜６８のいずれか１項に記載の方法を用いて作製された可溶性の非切断型のＲＳＶ Ｆタンパク質のエクトドメインポリペプチドを含む組成物。
【請求項７０】
免疫原性組成物である、請求項６９に記載の組成物。
【請求項７１】
切断型ＲＳＶ Ｆタンパク質のエクトドメインポリペプチドの単量体、三量体または単量体と三量体の組合せを含む組成物を作製するための方法であって、
ａ）改変型融合ペプチドを含む切断型ＲＳＶ Ｆタンパク質のエクトドメインポリペプチドを含む生物学的材料を準備する工程；および
ｂ）切断型ＲＳＶ Ｆタンパク質のエクトドメインポリペプチドを該生物学的材料から精製する工程
を含む、方法。
【請求項７２】
前記ＲＳＶ Ｆタンパク質のエクトドメインポリペプチドが、アミノ酸１３７〜１５２付近が欠失しているか、アミノ酸１３７〜１５３付近が欠失しているか、アミノ酸１３７〜１４５付近が欠失しているか、アミノ酸１３７〜１４６付近が欠失しているか、またはアミノ酸１３７〜１４２付近が欠失しているアミノ酸配列を含む、請求項７１に記載の方法。
【請求項７３】
前記生物学的材料が、昆虫細胞の馴化培養培地または細胞溶解物、哺乳動物細胞の馴化培養培地または細胞溶解物、鳥類細胞の馴化培養培地または細胞溶解物、酵母細胞の馴化培地または細胞溶解物、テトラヒメナ細胞の馴化培養培地または細胞溶解物、およびその組合せからなる群より選択される、請求項７１または７２に記載の方法。
【請求項７４】
ｂ）において、切断型ＲＳＶ Ｆタンパク質のエクトドメインポリペプチド三量体を精製する、請求項７１〜７３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項７５】
ｂ）において、切断型ＲＳＶ Ｆタンパク質のエクトドメインポリペプチド単量体を精製する、請求項７１〜７３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項７６】
ｂ）において、切断型ＲＳＶ Ｆタンパク質のエクトドメインポリペプチド単量体と切断型ＲＳＶ Ｆタンパク質のエクトドメインポリペプチド三量体を精製する、請求項７１〜７３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項７７】
ｂ）での精製がサイズ排除クロマトグラフィーを含む、請求項７１〜７３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項７８】
前記非切断型のＲＳＶ Ｆタンパク質のエクトドメインポリペプチドが、少なくとも融合ペプチド欠失ポリペプチドを含むものである、請求項７１に記載の方法。
【請求項７９】
非切断型のＲＳＶ Ｆタンパク質のエクトドメインポリペプチドを含む前記組成物に実質的に脂質とリポタンパク質が含まれていない、請求項７１〜７８のいずれか１項に記載の方法。
【請求項８０】
請求項７１〜７９のいずれか１項に記載の方法を用いて作製された可溶性の非切断型のＲＳＶ Ｆタンパク質のエクトドメインポリペプチドを含む組成物。
【請求項８１】
免疫原性組成物である、請求項８０に記載の組成物。
【請求項８２】
ＲＳＶ Ｆタンパク質のエクトドメインポリペプチドを含む組成物を作製するための方法であって、
ａ）改変型フリン切断部位を１３３〜１３６位に含むＲＳＶ Ｆタンパク質のエクトドメインポリペプチドを準備する工程であって、該可溶性のＲＳＶ Ｆタンパク質のエクトドメインポリペプチドは、該ペプチドを、１３６／１３７位が切断されていないがＦ１を含むサブユニットと会合しているＦ２断片の形態で産生する細胞から分泌される、工程；ならびに
ｂ）準備した該ＲＳＶ Ｆタンパク質のエクトドメインポリペプチドを、ＲＳＶ Ｆタンパク質のエクトドメインを１０１位と１６１位との間の部位で切断するプロテアーゼで切断し、それにより該組成物を生成させる工程
を含む、方法。
【請求項８３】
ａ）において準備する前記ＲＳＶ Ｆタンパク質のエクトドメインポリペプチドを精製する、請求項８２に記載の方法。
【請求項８４】
ａ）において準備する前記ＲＳＶ Ｆタンパク質のエクトドメインポリペプチドを、昆虫細胞、哺乳動物細胞、鳥類細胞、酵母細胞、テトラヒメナ細胞またはその組合せにおいて発現させる、請求項８２または８３に記載の方法。
【請求項８５】
ａ）において準備する前記ＲＳＶ Ｆタンパク質のエクトドメインポリペプチドを、細胞馴化培養培地、細胞抽出物またはその組合せにおいて準備する、請求項８２〜８４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項８６】
前記ＲＳＶ Ｆタンパク質のエクトドメインポリペプチドを、昆虫細胞馴化培養培地、哺乳動物細胞馴化培養培地、鳥類細胞馴化培養培地、酵母細胞馴化培養培地、テトラヒメナ細胞馴化培養培地およびその組合せからなる群より選択される細胞馴化培養培地において準備する、請求項８５に記載の方法。
【請求項８７】
前記ＲＳＶ Ｆタンパク質のエクトドメインポリペプチドが少なくともＣ末端フリンポリペプチドを含む、請求項８２〜８６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項８８】
ｂ）において作製される前記切断型ＲＳＶ Ｆタンパク質のエクトドメインポリペプチドに実質的に脂質とリポタンパク質が含まれていない、請求項８２〜８７のいずれか１項に記載の方法。
【請求項８９】
請求項８２〜８８のいずれか１項に記載の方法を用いて作製された切断型ＲＳＶ Ｆタンパク質のエクトドメインポリペプチドを含む組成物。
【請求項９０】
免疫原性組成物である、請求項８９に記載の組成物。
【請求項９１】
ＲＳＶ Ｆタンパク質のエクトドメインポリペプチドを含む組成物を作製するための方法であって、
ａ）改変型フリン切断部位を１３３〜１３６位に含むＲＳＶ Ｆタンパク質のエクトドメインポリペプチドを含む生物学的材料を準備する工程であって、該可溶性のＲＳＶ Ｆタンパク質のエクトドメインポリペプチドは、該ペプチドを、１３６／１３７位が切断されていないがＦ１を含むサブユニットと会合しているＦ２断片の形態で産生する細胞から分泌され、ただし、該改変型フリン切断部位はアミノ酸１３１〜１３４の欠失ではないものとする、工程；ならびに
ｂ）該ＲＳＶ Ｆタンパク質のエクトドメインポリペプチドを該生物学的材料から精製し、それにより該組成物を生成させる工程
を含む、方法。
【請求項９２】
前記生物学的材料が、昆虫細胞の馴化培養培地または細胞溶解物、哺乳動物細胞の馴化培養培地または細胞溶解物、鳥類細胞の馴化培養培地または細胞溶解物、酵母細胞の馴化培地または細胞溶解物、テトラヒメナ細胞の馴化培養培地または細胞溶解物、およびその組合せからなる群より選択される、請求項９１に記載の方法。
【請求項９３】
ｂ）において、ＲＳＶ Ｆタンパク質のエクトドメインポリペプチドの単量体、三量体または単量体と三量体の組合せを精製する、請求項９１または９２に記載の方法。
【請求項９４】
ｂ）での精製がサイズ排除クロマトグラフィーを含む、請求項９３に記載の方法。
【請求項９５】
該ＲＳＶ Ｆタンパク質のエクトドメインポリペプチドが少なくともＣ末端フリンポリペプチドを含む、請求項９１〜９４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項９６】
ＲＳＶ Ｆタンパク質のエクトドメインポリペプチドを含む前記組成物に実質的に脂質とリポタンパク質が含まれていない、請求項９１〜９５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項９７】
請求項９２〜９６のいずれか１項に記載の方法を用いて作製されたＲＳＶ Ｆタンパク質のエクトドメインポリペプチドを含む組成物。
【請求項９８】
免疫原性組成物である、請求項９７に記載の組成物。
【図１】
【図２】
【図３】
【図４Ａ】
【図４Ｂ】
【図４Ｃ】
【図４Ｄ】
【図４Ｅ】
【図４Ｆ】
【図５】
【図６】
【図８】
【図７】
【図２】
【図３】
【図４Ａ】
【図４Ｂ】
【図４Ｃ】
【図４Ｄ】
【図４Ｅ】
【図４Ｆ】
【図５】
【図６】
【図８】
【図７】
【公表番号】特表２０１２−５３３５５８（Ｐ２０１２−５３３５５８Ａ）
【公表日】平成２４年１２月２７日（２０１２．１２．２７）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２０１２−５２０７８９（Ｐ２０１２−５２０７８９）
【出願日】平成２２年７月１５日（２０１０．７．１５）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＵＳ２０１０／０４２１６１
【国際公開番号】ＷＯ２０１１／００８９７４
【国際公開日】平成２３年１月２０日（２０１１．１．２０）
【出願人】（５０４３８９９９１）ノバルティス アーゲー (806)
【Ｆターム（参考）】
【公表日】平成２４年１２月２７日（２０１２．１２．２７）
【国際特許分類】
【出願日】平成２２年７月１５日（２０１０．７．１５）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＵＳ２０１０／０４２１６１
【国際公開番号】ＷＯ２０１１／００８９７４
【国際公開日】平成２３年１月２０日（２０１１．１．２０）
【出願人】（５０４３８９９９１）ノバルティス アーゲー (806)
【Ｆターム（参考）】
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