α−グリコシルヘスペリジンを含有する経口投与・摂取用の、メラニン低下剤、皮膚明度低下抑制剤、皮膚粘弾性低下抑制剤、皮脂量低下抑制剤、ＳＣＦ産生抑制剤、およびかゆみ抑制剤
【課題】α−グリコシルヘスペリジンを利用して、飲食品、経口剤として用いる、メラニン低下剤、皮膚明度低下抑制剤、皮膚粘弾性低下抑制剤、皮脂量低下抑制剤、ＳＣＦ産生抑制剤、およびかゆみ抑制剤を提供する。
【解決手段】α−グリコシルヘスペリジンを有効成分として含有するメラニン低下剤、皮膚明度低下抑制剤、皮膚粘弾性低下抑制剤、および皮脂量低下抑制剤、並びに、α−グリコシルヘスペリジンおよび／またはヘスペレチンからなるＳＣＦ産生抑制剤、かゆみ抑制剤。各剤は飲食品または経口剤（例えば、清涼飲料、錠菓、キャンディー、サプリメント等）として用いる。
【解決手段】α−グリコシルヘスペリジンを有効成分として含有するメラニン低下剤、皮膚明度低下抑制剤、皮膚粘弾性低下抑制剤、および皮脂量低下抑制剤、並びに、α−グリコシルヘスペリジンおよび／またはヘスペレチンからなるＳＣＦ産生抑制剤、かゆみ抑制剤。各剤は飲食品または経口剤（例えば、清涼飲料、錠菓、キャンディー、サプリメント等）として用いる。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、α−グリコシルヘスペリジンを有効成分として含有する経口投与・摂取用の、メラニン低下剤、皮膚明度低下抑制剤、皮膚粘弾性低下抑制剤、皮脂量低下抑制剤、ＳＣＦ産生抑制剤、およびかゆみ抑制剤に関する。本発明は飲食品または経口剤に適用される。
【背景技術】
【０００２】
柑橘類の皮に主成分として含まれるヘスペリジンにはビタミンＰ作用が知られているが、水に難溶性であることから、その使用用途は限定されていた。
【０００３】
これに対し、糖転移酵素を用いてヘスペリジンにＤ−グルコース等の糖を等モル以上α結合させて水溶性としたα−グリコシルヘスペリジンを製造し、このα−グリコシルヘスペリジンを利用した飲食物、化粧品、医薬組成物等が種々提案されている（例えば、特許文献１〜３参照）。そして、特許文献１には、チアミン、リボフラビン、ビタミンＣおよびビタミンＥのいずれか１種以上と、α−グルコシルヘスペリジン（＝ヘスペリジンに糖としてＤ−グルコース残基を等モル以上α結合）をビタミンＰ強化剤、黄色着色剤、酸化防止剤、安定剤、品質改良剤または紫外線吸収剤として含有する飲食物が記載され、特許文献２には、α−グルコシルヘスペリジンをビタミンＰ強化剤、黄色着色剤、酸化防止剤、安定剤、品質改良剤、紫外線吸収剤、美肌剤または色白剤として含有し、所望によりさらにビタミンＥを含有する化粧品が記載され、特許文献３には、α−グルコシルヘスペリジンを有効成分とし、所望によりさらにチアミン、リボフラビン等を含有する、ウィルス性疾患、細菌性疾患、外傷性疾患、免疫疾患、リューマチ、糖尿病、循環器疾患または悪性腫瘍のための予防剤または治療剤が記載されている。
【０００４】
しかしながら、α−グリコシルヘスペリジンにメラニン低下効果、皮膚明度低下抑制効果、皮膚粘弾性低下抑制効果、皮脂量低下抑制効果、ＳＣＦ産生抑制効果、かゆみ抑制効果があることを見出し、α−グリコシルヘスペリジンをメラニン低下剤、皮膚明度低下抑制剤、皮膚粘弾性低下抑制剤、皮脂量低下抑制剤、ＳＣＦ産生抑制剤、かゆみ抑制剤として飲食品または経口剤に利用することは、これまで具体的に提案されていなかった。
【０００５】
なお「食品と科学」（非特許文献１）には、酵素処理ヘスペリジン（＝α−グルコシルヘスペリジン）がチロシナーゼの阻害作用を有しており、メラニンの生成を抑制するとの記載があるが、効果の確認を示す実験データ等が具体的に示されていない。本発明者らは、ヘスペレチン（α−グルコシルヘスペリジンのアグリコン。血清中ではα−グルコシルヘスペリジンはヘスペレチンとして存在する）のメラニン低下作用がチロシナーゼ依存でないことを後掲の実施例において確認した。また該文献には、α−グルコシルヘスペリジンとケラチノサイトにおけるＳＣＦ産生抑制との関係については記載も示唆もない。
【０００６】
【特許文献１】特許第３０６０２２７号公報
【特許文献２】特許第３５４９４３６号公報
【特許文献３】特開２００４−１２３７５３号公報
【非特許文献１】湯本隆、「酵素処理ヘスペリジンの特性と利用」、食品と科学、食品と科学社、１９９９年２月号、ｐ．９０−９４
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
本発明はα−グリコシルヘスペリジンを利用して、飲食品または経口剤として用いる、メラニン低下剤、皮膚明度低下抑制剤、皮膚粘弾性低下抑制剤、皮脂量低下抑制剤、ＳＣＦ産生抑制剤、およびかゆみ抑制剤を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
上記課題を解決するために本発明は、飲食品または経口剤として用いる、α−グリコシルヘスペリジンを有効成分として含有するメラニン低下剤を提供する。
【０００９】
また本発明は、飲食品または経口剤として用いる、α−グリコシルヘスペリジンを有効成分として含有する皮膚明度低下抑制剤を提供する。
【００１０】
また本発明は、飲食品または経口剤として用いる、α−グリコシルヘスペリジンを有効成分として含有する皮膚粘弾性低下抑制剤を提供する。
【００１１】
また本発明は、飲食品または経口剤として用いる、α−グリコシルヘスペリジンを有効成分として含有する皮脂量低下抑制剤を提供する。
【００１２】
また本発明は、飲食品または経口剤として用いる、α−グリコシルヘスペリジンおよび／またはヘスペレチンからなるＳＣＦ産生抑制剤を提供する。
【００１３】
また本発明は、飲食品または経口剤として用いる、α−グリコシルヘスペリジンおよび／またはヘスペレチンからなるかゆみ抑制剤を提供する。
【００１４】
また本発明は、α−グリコシルヘスペリジンおよび／またはヘスペレチンからなる、メラニン抑制作用およびかゆみ抑制作用をともに有する経口剤を提供する。
【発明の効果】
【００１５】
本発明によれば、α−グリコシルヘスペリジンを利用した経口投与・摂取用の、メラニン低下剤、皮膚明度低下抑制剤、皮膚粘弾性低下抑制剤、皮脂量低下抑制剤、ＳＣＦ産生抑制剤、およびかゆみ抑制剤が提供される。本発明各剤は飲食品または経口剤として用いられる。本発明経口投与・摂取剤は、メラニン低下効果、皮膚明度低下抑制効果、皮膚粘弾性低下抑制効果、皮脂量低下抑制効果、ＳＣＦ産生抑制効果、およびかゆみ抑制効果を併せもつことができる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１６】
以下、本発明について詳述する。
【００１７】
本発明に用いられるα−グリコシルヘスペリジンは、上記先行技術文献に記載のように公知の物質で、ヘスペリジンに糖（例えば、Ｄ−グルコース、Ｄ−フルクトース、Ｄ−ガラクトース等）が等モル以上α結合しているもので、水溶性化され、実質的に無味、無臭で、毒性の懸念がなく、生体内で容易にヘスペリジンと糖に加水分解され、ヘスペリジン本来の生理活性を有する。α−グリコシルヘスペリジンの代表例である、糖としてＤ−グルコースを用いたα−グルコシルヘスペリジン（以下、「α−Ｇヘスペリジン」と記す）は、下記（I）に示される化合物であり、該α−Ｇヘスペリジンのアグリコンであるヘスペリジンは下記式（II）に示される化合物である。また該ヘスペリジンのアグリコンが式（III）に示されるヘスペレチンである。
【００１８】
【００１９】
【００２０】
【００２１】
α−Ｇヘスペリジンは、例えば「酵素処理ヘスペリジン」（（株）林原商事）等として市販され、ヘスペリジンは、例えば「Hesperidin」（和光純薬工業（株）。和光一級、型番：088-07341）等として市販され、ヘスペレチンは、例えば「4’-methoxy-3',5,7-trihydroxyflavuanone,97%」（名称：ヘスペレチン；Hesperetin）（Alfa Aesar社）等として市販され、これらを好適に用いることができる。ただしこれら例示に限定されるものでない。
【００２２】
α−Ｇヘスペリジンは、体内において小腸α−グルコシダーゼによりルチン、ヘスペリジン等に分解され、これらはさらにβ−グルコシダーゼによりケルセチン、ヘスペレチン等に分解される。そしてケルセチン、ヘスペレチン等が消化管吸収され、抱合化されて、数種の活性異性体（一部メチル化）となる。すなわちα−Ｇヘスペリジンは、血中ではヘスペレチンとして血清タンパク質と結合した形で存在する。本発明者らは今回、後掲の実施例で示すように、この代謝されたヘスペレチンがケラチノサイトにおいてＳＣＦ産生抑制作用を示すことを初めて確認した。
【００２３】
皮膚の表皮にはケラチノサイト以外に、メラニン色素を産生するメラノサイトが存在する。メラノサイトは基底層に沿って基底細胞間のところどころに点在する。
【００２４】
メラノサイトでのメラニン色素産生は、出発物質であるチロシンが酸化されてドーパとなり、これがさらに酸化されてドーパキノンが生成され、この段階でチロシナーゼが関与し、次いでドーパクローム等を経て最終的にメラニン色素が産生されるが、チロシナーゼの存在でメラニン色素産生がより加速されることも知られている。したがって、メラノサイトにおけるチロシナーゼ作用を阻害することでメラニン低下を図ることができる。メラノサイトで産生されたメラニン色素は、メラノサイトの樹枝状突起を通して隣接する周囲のケラチノサイトに移行する。
【００２５】
他方、ケラチノサイトでは、紫外線（ＵＶ）照射等によりメラノサイト刺激因子の生成が惹起されることが知られている。メラノサイト刺激因子はメラノサイトの増殖作用を示す。したがって、ケラチノサイトにおけるメラノサイト刺激因子の生成抑制を図ることでメラニン低下を図ることができる。メラノサイト刺激因子としては、α−メラノサイト刺激ホルモン（α−ＭＳＨ：α-melanocyte stimulating hormone）、幹細胞増殖因子（ＳＣＦ：stem cell factor）、ＥＴ−１（endothelin-1）等が挙げられる。
【００２６】
上記因子の中でＳＣＦ（別名：kit ligand [KL]またはmast cell growth factor[MCF]）は、皮膚のしみ部位等において発現が亢進していること、ＵＶ照射によりＳＣＦの発現が亢進することが知られている（L. H. Kligman et al., Photochem. Photobiol. Vol.63, No.2 (1996) pp.123-127）。ＳＣＦはケラチノサイト、線維芽細胞、血管内皮細胞等において産生されるタンパク質である。ＳＣＦの作用としては、未分化造血幹細胞の増殖、生殖細胞の分化促進、肥満細胞の増殖促進、色素細胞の増殖促進作用等がある（Bio Science 用語ライブラリー サイトイカイン・増殖因子 羊土社(1995) 宮園浩平、菅村和夫編）。ＳＣＦには膜結合型（ＳＣＦ−２）と、タンパク質分解酵素の作用により切断された膜から遊離する分泌型（ＳＣＦ−１）があることが知られている。ＳＣＦ−２はケラチノサイトなどに結合したまま色素細胞のＳＣＦレセプターに結合して色素細胞の増殖を活性化し、またＳＣＦ−１はその切断部位において切断されて細胞膜から遊離し、色素細胞や肥満細胞のＳＣＦレセプターに結合し、色素細胞の増殖を活性化し、また肥満細胞の増殖活性化および脱顆粒化をもたらす（T. Kunisada et al., J. Exp. Med., Vol.187, No.10, (1998) pp.1565-1573)。ＳＣＦの異常産生は色素細胞の異常増殖につながり、メラニン産生を亢進させ、しみ、そばかす、くすみ等の原因となる。また、肥満細胞の異常増殖、異常脱顆粒化にもつながり、ヒスタミン、セロトニン、ＬＴＢ４等のケミカルメディエーターの遊離を亢進させ（J. Grabbe et el., Arch Dermatol Res (1984) 287:78-84)、掻痒、肌荒れ、敏感肌等の原因となる。したがって、ＳＣＦの抑制は、上記の現象や症状を抑制するということができる。
【００２７】
本発明は、α−グリコシルヘスペリジンを有効成分として含有する経口投与・摂取用の、メラニン低下剤、皮膚明度低下抑制剤、皮膚粘弾性低下抑制剤、皮脂量低下抑制剤、ＳＣＦ産生抑制剤、あるいはかゆみ抑制剤であり、これら各剤は、飲食品または経口剤である。本発明では、α−グリコシルへスペリジンとしてα−Ｇヘスペリジンが好適に用いられる。
【００２８】
本発明の飲食品または経口剤は、例えば飲料、食品、健康食品、栄養機能食品、保健機能食品、特定保健用食品、美容食品等として用いることができる。
【００２９】
α−グリコシルヘスペリジンは、ヘスペリジンと比較して水溶性が極めて大きい。また実質的に無味、無臭なので自由に調味、調香することができる。
【００３０】
本発明の飲食品の形態としては、例えば、顆粒状、粒状、ペースト状、ゲル状、固形状、または、液体状に任意に成形することができる。これらには、食品中に含有することが認められている当業者に公知の各種物質、例えば、結合剤、崩壊剤、増粘剤、分散剤、吸収促進剤、矯味剤、緩衝剤、界面活性剤、溶解補助剤、保存剤、乳化剤、等張化剤、安定化剤やｐＨ調製剤などの賦形剤を適宜含有させることができる。飲食品の具体例として、例えば、清涼飲料、グミ、キャンディー、錠菓等が挙げられる。ただしこれら例示に限定されるものでない。
【００３１】
また経口剤としては、錠剤、硬カプセル剤、軟カプセル剤、粒剤若しくは丸剤等の固形製剤や、溶液、エマルジョン若しくはサスペンジョンなどの液剤の形態等で投与することができる。これらの製剤の調製にあたっては製剤化のために許容される添加剤、例えば賦形剤、安定剤、防腐剤、湿潤剤、乳化剤、滑沢剤、甘味料、着色料、香料、等張化剤、緩衝剤、酸化防止剤、ｐＨ調整剤等を併用して製剤化することができる。
【００３２】
α−グリコシルヘスペリジンがメラニン低下効果、皮膚明度低下抑制効果、皮膚粘弾性低下抑制効果、皮脂量低下抑制効果、ＳＣＦ産生抑制効果、かゆみ抑制効果を有することは、後掲の実施例で具体的に説明する。
【００３３】
投与・摂取量は、含量、投与・摂取経路、投与・摂取頻度などによって、適宜調節することができる。通常、α−Ｇヘスペリジンとして、成人１日あたり、約０．００１〜１０．０ｇの範囲が好適である。
【実施例】
【００３４】
以下、本発明を実施例に基づきさらに詳細に説明するが、本発明は以下の実施例に限定されるものではない。なお、以下の実施例において、α−Ｇヘスペリジンは「酵素処理ヘスペリジン」（（株）林原商事）を、ヘスペリジンは「Hesperidin」（和光純薬工業（株）。和光一級、型番：088-07341）を、ヘスペレチンは「4’-methoxy-3',5,7-trihydroxyflavuanone,97%」（名称：ヘスペレチン；Hesperetin）（Alfa Aesar社）を、それぞれ用いた。配合量はすべて質量％で示す。
【００３５】
実施例１
下記の方法でα−Ｇヘスペリジンの効果確認試験（小規模ヒト効果試験）を行った。
１．群構成（被験者群）
被験者（ｎ＝２５名）を、アクティブ群（α−Ｇヘスペリジン投与群。ｎ＝１３名）と、プラセボ群（対照群。ｎ＝１２名）の２群に分けた。
２．試験試料
試験品： アクティブ群投与試料。錠菓（α−Ｇヘスペリジン１００ｍｇ含有／１錠）。１日量５錠（＝１日のα−Ｇヘスペリジン摂取量５００ｍｇ）。
対照品： プラセボ群投与試料。上記試験品からα−Ｇヘスペリジンを抜去したもの。１日量５錠。
３．試験試料摂取方法
被験者は、摂取開始日より試験品または対照品を１日１回、朝食後に５錠を、１２週間にわたり経口摂取した。
４．試験実施スケジュール
試験試料摂取開始時に測定を行い、開始から６週間後に中間測定、さらに６週間後（＝摂取開始から１２週間後）に最終測定を行った。
５．皮膚測定方法
測定時（摂取開始時、開始から６週間後、１２週間後）のいずれにおいても、一定時間恒温恒湿条件下で皮膚を馴化させた後に測定を行った。
【００３６】
［皮膚色〔Ｌ＊（明度）、メラニン量〕］
頬部の一定部位の皮膚色を分光測色計ＣＭ−２６００ｄ（コニカミノルタホールディング（株）製）にて測定し、Ｌ＊を計測した。
また同時に得られる皮膚反射スペクトルからＬａｍｂｅｒｔ−Ｂｅｅｒの式を用いて皮膚の吸光スペクトルを算出し、その吸光スペクトルが皮膚の主要な吸光成分であるメラニン、ヘモグロビンの吸光スペクトルの和で表せると仮定し、５００〜７００ｎｍの範囲の１０ｎｍおきの２１個の反射スペクトルを用いて重回帰分析することでメラニン量を算出した（特許第３７２７８０７号公報参照）。
【００３７】
Ｌ＊変化量（Δ）（０週、６週、１２週）の結果を図１に示す。図１の結果から明らかなように、アクティブ群のほうが、プラセボ群よりもＬ＊低下が抑制された。
またメラニン量変化量（Δ）（０週、６週、１２週）の結果を図２に示す。図２の結果から明らかなように、メラニン量低下について、６週間、１２週間とも、アクティブ群のほうが、プラセボ群よりもメラニン量が減少し、６週では統計学的な有意差が認められた。
【００３８】
［皮脂量］
頬部の一定部位の皮脂量をセブメーター（Courage+Khazaka Electronic GmbH）を用いて測定した。皮脂量の変化量（Δ）（０週、６週、１２週）の結果を図３に示す。図３の結果から明らかなように、アクティブ群のほうが、プラセボ群よりも皮脂量の低下が抑制された。
【００３９】
［皮膚粘弾性］
頬部の一定部位の皮膚粘弾性を衝撃波測定装置・レビスコメーター（Courage+Khazaka Electronic GmbH）を用いて測定した。１３５度における粘弾性低下の変化量（Δ）（０週、６週、１２週）結果を図４に示す。図４の結果から明らかなように、アクティブ群のほうが、プラセボ群に比べて、皮膚の粘弾性の低下が抑制された。
【００４０】
上記実施例１の結果から、本発明品がメラニン低下効果、皮膚明度低下抑制効果、皮膚粘弾性低下抑制効果、皮脂量低下抑制効果を有することが確認された。本発明経口投与・摂取剤は、メラニン低下効果、皮膚明度低下抑制効果、皮膚粘弾性低下抑制効果、皮脂量低下抑制効果を併せもつことができる。
【００４１】
実施例２
上記実施例１では、α−Ｇヘスペリジンを含む錠菓投与というヒト有効性試験により、メラニン低下効果等を有することが確認されたが、メラニン低下効果の作用機序についての確認はされていなかった。
そこで本実施例２では、α−Ｇヘスペリジンのメラニン低下効果の作用機序を解明するために、以下の実験を行った。
【００４２】
１．Ｂ１６メラノーマ細胞からのメラニン生成に対する作用の検討：
正常なメラノサイトおよびメラノーマ細胞に特異的に存在する酵素であるチロシナーゼは、Ｌ−チロシンをメラニン色素へと生成転換する。そこでα−Ｇヘスペリジンのメラニン低下効果の作用機序がチロシナーゼ依存性であるかどうかを調べた。
まず、Ｂ１６メラノーマ細胞からのメラニン生成に対する作用を下記試験方法により検討した。
マウス由来Ｂ１６メラノーマ細胞を５×１０４ｃｅｌｌｓ／ｗｅｌｌの細胞密度で１０％ＦＢＳ−ＤＭＥＭ培地を用いて２４穴プレートに播種し、１日間プレ培養した後、α−Ｇヘスペリジンのアグリコンであるヘスペリジン（質量分子量：６１０．５６）および該ヘスペリジンのアグリコンであるヘスペレチン（質量分子量：３０２．３０）をそれぞれ１μｇ／ｍＬ、３μｇ／ｍＬ、１０μｇ／ｍＬ、３０μｇ／ｍＬの濃度となるよう添加した（終濃度０．５％ＤＭＳＯ含有培地に溶解して添加）。３日間培養した後、培地を除去し、ＰＢＳ洗浄後、各ｗｅｌｌに２Ｎ−ＮａＯＨを加えて細胞を溶解し、この細胞溶解液の吸光度測定（測定波長：４０５ｎｍ、参照波長：６９０ｎｍ）により、細胞内のメラニン量を測定した。
その結果、ヘスペリジンを添加したものでは、３０μｇ／ｍＬの濃度までメラニン生成抑制作用は認められなかった。また、ヘスペレチンを添加したものでは、濃度依存的にメラニンの生成が促進され、３０μｇ／ｍＬでは対照の約３倍のメラニン量であった。
【００４３】
以上のように、ヘスペリジン、ヘスペレチンにＢ１６メラノーマ細胞からのメラニン生成抑制作用が認められなかったことから、実施例１のヒト有効性試験によって認められたα−Ｇヘスペリジンのメラニン低下作用、明度低下作用は、チロシナーゼ依存性によるものではなく、別の機序によると考えられた。
【００４４】
２．ケラチノサイト由来メラノサイト刺激因子の生成に対する作用の検討：
そこで、培養ヒトケラチノサイトにＵＶ照射することで惹起されるメラノサイト刺激因子の生成に対するヘスペリジン、ヘスペレチンの作用を検討した。メラノサイト刺激因子はメラノサイトの増殖作用を示すことから、メラノサイト刺激因子の生成を抑制することによりメラニン生成を抑制することができる。本実施例では、メラノサイト刺激因子としてＳＣＦを用いた。
（試験方法）
包皮由来正常ヒトケラチノサイト；ＮＨＥＫ（Ｆ）（Cascade Biologics,Inc.）を、細胞培養皿に播種してサブコンフルエントになるまで培養した（ｎ＝３）。
次いでＵＶＢ ２０ｍＪ／ｃｍ2を照射した直後、薬剤（ヘスペリジンおよびヘスペレチン。美白成分として公知のトラネキサム酸も参考薬剤として用いた）を添加し、２日間経過後の培養上清中のＳＣＦ量をＳＣＦ定量キット（Quantikine(R) Human SCF Kit、R&D Systems）を用いて定量した。
薬剤の細胞毒性によってＳＣＦ産生量が低下する可能性も考えられる。そこで薬剤を添加した場合の生細胞の数も併せて計測した。結果を図５に示す。図５中、最左側の棒グラフはＵＶＢ照射をせず、薬剤の添加がない場合の生細胞数を示し、最左側から２番目の棒グラフは薬剤添加がないが、ＵＶＢ照射を行った場合の生細胞数を示す。図５に示す結果から明らかなように、ヘスペリジン、ヘスペレチン、トラネキサム酸のいずれにも、このような細胞毒性が認められなかったことから、ＳＣＦ抑制作用が生体においてもある程度特異的に作用するといえる。
【００４５】
図６に細胞数１０６個あたりのＳＣＦ値を示す。図６中、最左側の棒グラフはＵＶＢ照射をせず、薬剤の添加がない場合の上清中のＳＣＦ値を示し、最左側から２番目の棒グラフは薬剤添加がないが、ＵＶＢ照射を行った場合の上清中のＳＣＦ値を示す。
【００４６】
図６の結果から明らかなように、ヘスペレチンを添加した場合、特に１０μｇ／ｍＬ程度以上添加した場合、ＳＣＦ値が低下しているのがわかる。また美白成分として公知のトラネキサム酸（ＴＡ）に比べ、ＳＣＦ値は格段に低下し、用量依存的かつ１００μｇ／ｍＬで統計学的に有意である。
【００４７】
すなわち、α−Ｇヘスペリジンの添加により、体内にて存在するヘスペレチンのＳＣＦ抑制効果が認められたことから、α−ＧヘスペリジンはＳＣＦ抑制作用によりメラニン低下作用を示すことが確認された。またＳＣＦ抑制効果が示されたことから、ＳＣＦ産生亢進による掻痒、肌荒れ、敏感肌などの肌トラブルも抑制されるものと考えられる。
【００４８】
以下に処方例を示す。
【００４９】
処方例１：サプリメント（錠剤）
（配 合 成 分） （質量％）
ビタミンＣ ３３．０
還元麦芽糖水飴粉末 ２５．７
α−Ｇヘスペリジン １７．０
結晶セルロース １０．０
澱粉分解物 １０．０
ショ糖脂肪酸エステル ２．０
フラバンジェノール １．３
アラビアゴム ０．５
二酸化チタン ０．５
（摂取例）
１錠５００ｍｇを１日６錠摂取する。
【００５０】
処方例２：サプリメント（ハードカプセル）
（配 合 成 分） （質量％）
α−Ｇヘスペリジン ９０．０
澱粉 １０．０
（摂取例）
１カプセル２８０ｍｇを１日４カプセル摂取する。
【００５１】
処方例３ ：サプリメント（顆粒剤）
（配 合 成 分） （質量％）
粉糖 ３５．０
澱粉 ３１．０
α−Ｇヘスペリジン ２１．０
ビタミンＣ １０．０
ビタミンＥ ２．５
香料 ０．５
（摂取例）
１日１パック（１．２ｇ）を摂取する。
【００５２】
処方例４：清涼飲料
（配 合 成 分） （質量％）
果糖ブドウ糖液糖 ３０．０
α−Ｇヘスペリジン １．０
クエン酸 ０．５
香料 適 量
精製水 残 余
【００５３】
処方例５：グミ
（配 合 成 分） （質量％）
還元水飴 ４０．０
グラニュー糖 ２０．０
ブドウ糖 １９．０
水 ９．３
ゼラチン ５．０
α−Ｇヘスペリジン ５．０
クエン酸 １．０
香料 ０．６
色素 ０．１
【００５４】
処方例６：錠菓
（配 合 成 分） （質量％）
ブドウ糖 ４０．０
乳糖 ３０．０
グラニュー糖 １９．０
デンプン ５．０
ショ糖脂肪酸エステル ２．０
クエン酸 １．５
α−Ｇヘスペリジン １．０
セルロース １．０
香料 ０．５
【００５５】
処方例７：キャンディー
（配 合 成 分） （質量％）
砂糖 ５０．０
水飴 ４７．５
クエン酸 １．５
α−Ｇヘスペリジン ０．５
香料 ０．５
【図面の簡単な説明】
【００５６】
【図１】実施例１における、α−Ｇヘスペリジン投与群（アクティブ群）とプラセボ群の、頬のＬ＊変化量（Δ）（０週、６週、１２週）を示すグラフである。
【図２】実施例１における、α−Ｇヘスペリジン投与群（アクティブ群）とプラセボ群の、頬のメラニン量変化量（Δ）（０週、６週、１２週）を示すグラフである。
【図３】実施例１における、α−Ｇヘスペリジン投与群（アクティブ群）とプラセボ群の、頬の皮脂量変化量（Δ）（０週、６週、１２週）を示すグラフである。
【図４】実施例１における、α−Ｇヘスペリジン投与群（アクティブ群）とプラセボ群の、頬（１３５度）における皮膚粘弾性低下変化量（Δ）（０週、６週、１２週）を示すグラフである。
【図５】実施例２における、ＵＶ照射されたケラチノサイトに対するヘスペリジン、ヘスペレチン添加の影響（生細胞数）を示すグラフである。
【図６】実施例２における、ＵＶ照射されたケラチノサイトに対するヘスペリジン、ヘスペレチン添加の影響（ＳＣＦ抑制効果）を示すグラフである。
【技術分野】
【０００１】
本発明は、α−グリコシルヘスペリジンを有効成分として含有する経口投与・摂取用の、メラニン低下剤、皮膚明度低下抑制剤、皮膚粘弾性低下抑制剤、皮脂量低下抑制剤、ＳＣＦ産生抑制剤、およびかゆみ抑制剤に関する。本発明は飲食品または経口剤に適用される。
【背景技術】
【０００２】
柑橘類の皮に主成分として含まれるヘスペリジンにはビタミンＰ作用が知られているが、水に難溶性であることから、その使用用途は限定されていた。
【０００３】
これに対し、糖転移酵素を用いてヘスペリジンにＤ−グルコース等の糖を等モル以上α結合させて水溶性としたα−グリコシルヘスペリジンを製造し、このα−グリコシルヘスペリジンを利用した飲食物、化粧品、医薬組成物等が種々提案されている（例えば、特許文献１〜３参照）。そして、特許文献１には、チアミン、リボフラビン、ビタミンＣおよびビタミンＥのいずれか１種以上と、α−グルコシルヘスペリジン（＝ヘスペリジンに糖としてＤ−グルコース残基を等モル以上α結合）をビタミンＰ強化剤、黄色着色剤、酸化防止剤、安定剤、品質改良剤または紫外線吸収剤として含有する飲食物が記載され、特許文献２には、α−グルコシルヘスペリジンをビタミンＰ強化剤、黄色着色剤、酸化防止剤、安定剤、品質改良剤、紫外線吸収剤、美肌剤または色白剤として含有し、所望によりさらにビタミンＥを含有する化粧品が記載され、特許文献３には、α−グルコシルヘスペリジンを有効成分とし、所望によりさらにチアミン、リボフラビン等を含有する、ウィルス性疾患、細菌性疾患、外傷性疾患、免疫疾患、リューマチ、糖尿病、循環器疾患または悪性腫瘍のための予防剤または治療剤が記載されている。
【０００４】
しかしながら、α−グリコシルヘスペリジンにメラニン低下効果、皮膚明度低下抑制効果、皮膚粘弾性低下抑制効果、皮脂量低下抑制効果、ＳＣＦ産生抑制効果、かゆみ抑制効果があることを見出し、α−グリコシルヘスペリジンをメラニン低下剤、皮膚明度低下抑制剤、皮膚粘弾性低下抑制剤、皮脂量低下抑制剤、ＳＣＦ産生抑制剤、かゆみ抑制剤として飲食品または経口剤に利用することは、これまで具体的に提案されていなかった。
【０００５】
なお「食品と科学」（非特許文献１）には、酵素処理ヘスペリジン（＝α−グルコシルヘスペリジン）がチロシナーゼの阻害作用を有しており、メラニンの生成を抑制するとの記載があるが、効果の確認を示す実験データ等が具体的に示されていない。本発明者らは、ヘスペレチン（α−グルコシルヘスペリジンのアグリコン。血清中ではα−グルコシルヘスペリジンはヘスペレチンとして存在する）のメラニン低下作用がチロシナーゼ依存でないことを後掲の実施例において確認した。また該文献には、α−グルコシルヘスペリジンとケラチノサイトにおけるＳＣＦ産生抑制との関係については記載も示唆もない。
【０００６】
【特許文献１】特許第３０６０２２７号公報
【特許文献２】特許第３５４９４３６号公報
【特許文献３】特開２００４−１２３７５３号公報
【非特許文献１】湯本隆、「酵素処理ヘスペリジンの特性と利用」、食品と科学、食品と科学社、１９９９年２月号、ｐ．９０−９４
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
本発明はα−グリコシルヘスペリジンを利用して、飲食品または経口剤として用いる、メラニン低下剤、皮膚明度低下抑制剤、皮膚粘弾性低下抑制剤、皮脂量低下抑制剤、ＳＣＦ産生抑制剤、およびかゆみ抑制剤を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
上記課題を解決するために本発明は、飲食品または経口剤として用いる、α−グリコシルヘスペリジンを有効成分として含有するメラニン低下剤を提供する。
【０００９】
また本発明は、飲食品または経口剤として用いる、α−グリコシルヘスペリジンを有効成分として含有する皮膚明度低下抑制剤を提供する。
【００１０】
また本発明は、飲食品または経口剤として用いる、α−グリコシルヘスペリジンを有効成分として含有する皮膚粘弾性低下抑制剤を提供する。
【００１１】
また本発明は、飲食品または経口剤として用いる、α−グリコシルヘスペリジンを有効成分として含有する皮脂量低下抑制剤を提供する。
【００１２】
また本発明は、飲食品または経口剤として用いる、α−グリコシルヘスペリジンおよび／またはヘスペレチンからなるＳＣＦ産生抑制剤を提供する。
【００１３】
また本発明は、飲食品または経口剤として用いる、α−グリコシルヘスペリジンおよび／またはヘスペレチンからなるかゆみ抑制剤を提供する。
【００１４】
また本発明は、α−グリコシルヘスペリジンおよび／またはヘスペレチンからなる、メラニン抑制作用およびかゆみ抑制作用をともに有する経口剤を提供する。
【発明の効果】
【００１５】
本発明によれば、α−グリコシルヘスペリジンを利用した経口投与・摂取用の、メラニン低下剤、皮膚明度低下抑制剤、皮膚粘弾性低下抑制剤、皮脂量低下抑制剤、ＳＣＦ産生抑制剤、およびかゆみ抑制剤が提供される。本発明各剤は飲食品または経口剤として用いられる。本発明経口投与・摂取剤は、メラニン低下効果、皮膚明度低下抑制効果、皮膚粘弾性低下抑制効果、皮脂量低下抑制効果、ＳＣＦ産生抑制効果、およびかゆみ抑制効果を併せもつことができる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１６】
以下、本発明について詳述する。
【００１７】
本発明に用いられるα−グリコシルヘスペリジンは、上記先行技術文献に記載のように公知の物質で、ヘスペリジンに糖（例えば、Ｄ−グルコース、Ｄ−フルクトース、Ｄ−ガラクトース等）が等モル以上α結合しているもので、水溶性化され、実質的に無味、無臭で、毒性の懸念がなく、生体内で容易にヘスペリジンと糖に加水分解され、ヘスペリジン本来の生理活性を有する。α−グリコシルヘスペリジンの代表例である、糖としてＤ−グルコースを用いたα−グルコシルヘスペリジン（以下、「α−Ｇヘスペリジン」と記す）は、下記（I）に示される化合物であり、該α−Ｇヘスペリジンのアグリコンであるヘスペリジンは下記式（II）に示される化合物である。また該ヘスペリジンのアグリコンが式（III）に示されるヘスペレチンである。
【００１８】
【００１９】
【００２０】
【００２１】
α−Ｇヘスペリジンは、例えば「酵素処理ヘスペリジン」（（株）林原商事）等として市販され、ヘスペリジンは、例えば「Hesperidin」（和光純薬工業（株）。和光一級、型番：088-07341）等として市販され、ヘスペレチンは、例えば「4’-methoxy-3',5,7-trihydroxyflavuanone,97%」（名称：ヘスペレチン；Hesperetin）（Alfa Aesar社）等として市販され、これらを好適に用いることができる。ただしこれら例示に限定されるものでない。
【００２２】
α−Ｇヘスペリジンは、体内において小腸α−グルコシダーゼによりルチン、ヘスペリジン等に分解され、これらはさらにβ−グルコシダーゼによりケルセチン、ヘスペレチン等に分解される。そしてケルセチン、ヘスペレチン等が消化管吸収され、抱合化されて、数種の活性異性体（一部メチル化）となる。すなわちα−Ｇヘスペリジンは、血中ではヘスペレチンとして血清タンパク質と結合した形で存在する。本発明者らは今回、後掲の実施例で示すように、この代謝されたヘスペレチンがケラチノサイトにおいてＳＣＦ産生抑制作用を示すことを初めて確認した。
【００２３】
皮膚の表皮にはケラチノサイト以外に、メラニン色素を産生するメラノサイトが存在する。メラノサイトは基底層に沿って基底細胞間のところどころに点在する。
【００２４】
メラノサイトでのメラニン色素産生は、出発物質であるチロシンが酸化されてドーパとなり、これがさらに酸化されてドーパキノンが生成され、この段階でチロシナーゼが関与し、次いでドーパクローム等を経て最終的にメラニン色素が産生されるが、チロシナーゼの存在でメラニン色素産生がより加速されることも知られている。したがって、メラノサイトにおけるチロシナーゼ作用を阻害することでメラニン低下を図ることができる。メラノサイトで産生されたメラニン色素は、メラノサイトの樹枝状突起を通して隣接する周囲のケラチノサイトに移行する。
【００２５】
他方、ケラチノサイトでは、紫外線（ＵＶ）照射等によりメラノサイト刺激因子の生成が惹起されることが知られている。メラノサイト刺激因子はメラノサイトの増殖作用を示す。したがって、ケラチノサイトにおけるメラノサイト刺激因子の生成抑制を図ることでメラニン低下を図ることができる。メラノサイト刺激因子としては、α−メラノサイト刺激ホルモン（α−ＭＳＨ：α-melanocyte stimulating hormone）、幹細胞増殖因子（ＳＣＦ：stem cell factor）、ＥＴ−１（endothelin-1）等が挙げられる。
【００２６】
上記因子の中でＳＣＦ（別名：kit ligand [KL]またはmast cell growth factor[MCF]）は、皮膚のしみ部位等において発現が亢進していること、ＵＶ照射によりＳＣＦの発現が亢進することが知られている（L. H. Kligman et al., Photochem. Photobiol. Vol.63, No.2 (1996) pp.123-127）。ＳＣＦはケラチノサイト、線維芽細胞、血管内皮細胞等において産生されるタンパク質である。ＳＣＦの作用としては、未分化造血幹細胞の増殖、生殖細胞の分化促進、肥満細胞の増殖促進、色素細胞の増殖促進作用等がある（Bio Science 用語ライブラリー サイトイカイン・増殖因子 羊土社(1995) 宮園浩平、菅村和夫編）。ＳＣＦには膜結合型（ＳＣＦ−２）と、タンパク質分解酵素の作用により切断された膜から遊離する分泌型（ＳＣＦ−１）があることが知られている。ＳＣＦ−２はケラチノサイトなどに結合したまま色素細胞のＳＣＦレセプターに結合して色素細胞の増殖を活性化し、またＳＣＦ−１はその切断部位において切断されて細胞膜から遊離し、色素細胞や肥満細胞のＳＣＦレセプターに結合し、色素細胞の増殖を活性化し、また肥満細胞の増殖活性化および脱顆粒化をもたらす（T. Kunisada et al., J. Exp. Med., Vol.187, No.10, (1998) pp.1565-1573)。ＳＣＦの異常産生は色素細胞の異常増殖につながり、メラニン産生を亢進させ、しみ、そばかす、くすみ等の原因となる。また、肥満細胞の異常増殖、異常脱顆粒化にもつながり、ヒスタミン、セロトニン、ＬＴＢ４等のケミカルメディエーターの遊離を亢進させ（J. Grabbe et el., Arch Dermatol Res (1984) 287:78-84)、掻痒、肌荒れ、敏感肌等の原因となる。したがって、ＳＣＦの抑制は、上記の現象や症状を抑制するということができる。
【００２７】
本発明は、α−グリコシルヘスペリジンを有効成分として含有する経口投与・摂取用の、メラニン低下剤、皮膚明度低下抑制剤、皮膚粘弾性低下抑制剤、皮脂量低下抑制剤、ＳＣＦ産生抑制剤、あるいはかゆみ抑制剤であり、これら各剤は、飲食品または経口剤である。本発明では、α−グリコシルへスペリジンとしてα−Ｇヘスペリジンが好適に用いられる。
【００２８】
本発明の飲食品または経口剤は、例えば飲料、食品、健康食品、栄養機能食品、保健機能食品、特定保健用食品、美容食品等として用いることができる。
【００２９】
α−グリコシルヘスペリジンは、ヘスペリジンと比較して水溶性が極めて大きい。また実質的に無味、無臭なので自由に調味、調香することができる。
【００３０】
本発明の飲食品の形態としては、例えば、顆粒状、粒状、ペースト状、ゲル状、固形状、または、液体状に任意に成形することができる。これらには、食品中に含有することが認められている当業者に公知の各種物質、例えば、結合剤、崩壊剤、増粘剤、分散剤、吸収促進剤、矯味剤、緩衝剤、界面活性剤、溶解補助剤、保存剤、乳化剤、等張化剤、安定化剤やｐＨ調製剤などの賦形剤を適宜含有させることができる。飲食品の具体例として、例えば、清涼飲料、グミ、キャンディー、錠菓等が挙げられる。ただしこれら例示に限定されるものでない。
【００３１】
また経口剤としては、錠剤、硬カプセル剤、軟カプセル剤、粒剤若しくは丸剤等の固形製剤や、溶液、エマルジョン若しくはサスペンジョンなどの液剤の形態等で投与することができる。これらの製剤の調製にあたっては製剤化のために許容される添加剤、例えば賦形剤、安定剤、防腐剤、湿潤剤、乳化剤、滑沢剤、甘味料、着色料、香料、等張化剤、緩衝剤、酸化防止剤、ｐＨ調整剤等を併用して製剤化することができる。
【００３２】
α−グリコシルヘスペリジンがメラニン低下効果、皮膚明度低下抑制効果、皮膚粘弾性低下抑制効果、皮脂量低下抑制効果、ＳＣＦ産生抑制効果、かゆみ抑制効果を有することは、後掲の実施例で具体的に説明する。
【００３３】
投与・摂取量は、含量、投与・摂取経路、投与・摂取頻度などによって、適宜調節することができる。通常、α−Ｇヘスペリジンとして、成人１日あたり、約０．００１〜１０．０ｇの範囲が好適である。
【実施例】
【００３４】
以下、本発明を実施例に基づきさらに詳細に説明するが、本発明は以下の実施例に限定されるものではない。なお、以下の実施例において、α−Ｇヘスペリジンは「酵素処理ヘスペリジン」（（株）林原商事）を、ヘスペリジンは「Hesperidin」（和光純薬工業（株）。和光一級、型番：088-07341）を、ヘスペレチンは「4’-methoxy-3',5,7-trihydroxyflavuanone,97%」（名称：ヘスペレチン；Hesperetin）（Alfa Aesar社）を、それぞれ用いた。配合量はすべて質量％で示す。
【００３５】
実施例１
下記の方法でα−Ｇヘスペリジンの効果確認試験（小規模ヒト効果試験）を行った。
１．群構成（被験者群）
被験者（ｎ＝２５名）を、アクティブ群（α−Ｇヘスペリジン投与群。ｎ＝１３名）と、プラセボ群（対照群。ｎ＝１２名）の２群に分けた。
２．試験試料
試験品： アクティブ群投与試料。錠菓（α−Ｇヘスペリジン１００ｍｇ含有／１錠）。１日量５錠（＝１日のα−Ｇヘスペリジン摂取量５００ｍｇ）。
対照品： プラセボ群投与試料。上記試験品からα−Ｇヘスペリジンを抜去したもの。１日量５錠。
３．試験試料摂取方法
被験者は、摂取開始日より試験品または対照品を１日１回、朝食後に５錠を、１２週間にわたり経口摂取した。
４．試験実施スケジュール
試験試料摂取開始時に測定を行い、開始から６週間後に中間測定、さらに６週間後（＝摂取開始から１２週間後）に最終測定を行った。
５．皮膚測定方法
測定時（摂取開始時、開始から６週間後、１２週間後）のいずれにおいても、一定時間恒温恒湿条件下で皮膚を馴化させた後に測定を行った。
【００３６】
［皮膚色〔Ｌ＊（明度）、メラニン量〕］
頬部の一定部位の皮膚色を分光測色計ＣＭ−２６００ｄ（コニカミノルタホールディング（株）製）にて測定し、Ｌ＊を計測した。
また同時に得られる皮膚反射スペクトルからＬａｍｂｅｒｔ−Ｂｅｅｒの式を用いて皮膚の吸光スペクトルを算出し、その吸光スペクトルが皮膚の主要な吸光成分であるメラニン、ヘモグロビンの吸光スペクトルの和で表せると仮定し、５００〜７００ｎｍの範囲の１０ｎｍおきの２１個の反射スペクトルを用いて重回帰分析することでメラニン量を算出した（特許第３７２７８０７号公報参照）。
【００３７】
Ｌ＊変化量（Δ）（０週、６週、１２週）の結果を図１に示す。図１の結果から明らかなように、アクティブ群のほうが、プラセボ群よりもＬ＊低下が抑制された。
またメラニン量変化量（Δ）（０週、６週、１２週）の結果を図２に示す。図２の結果から明らかなように、メラニン量低下について、６週間、１２週間とも、アクティブ群のほうが、プラセボ群よりもメラニン量が減少し、６週では統計学的な有意差が認められた。
【００３８】
［皮脂量］
頬部の一定部位の皮脂量をセブメーター（Courage+Khazaka Electronic GmbH）を用いて測定した。皮脂量の変化量（Δ）（０週、６週、１２週）の結果を図３に示す。図３の結果から明らかなように、アクティブ群のほうが、プラセボ群よりも皮脂量の低下が抑制された。
【００３９】
［皮膚粘弾性］
頬部の一定部位の皮膚粘弾性を衝撃波測定装置・レビスコメーター（Courage+Khazaka Electronic GmbH）を用いて測定した。１３５度における粘弾性低下の変化量（Δ）（０週、６週、１２週）結果を図４に示す。図４の結果から明らかなように、アクティブ群のほうが、プラセボ群に比べて、皮膚の粘弾性の低下が抑制された。
【００４０】
上記実施例１の結果から、本発明品がメラニン低下効果、皮膚明度低下抑制効果、皮膚粘弾性低下抑制効果、皮脂量低下抑制効果を有することが確認された。本発明経口投与・摂取剤は、メラニン低下効果、皮膚明度低下抑制効果、皮膚粘弾性低下抑制効果、皮脂量低下抑制効果を併せもつことができる。
【００４１】
実施例２
上記実施例１では、α−Ｇヘスペリジンを含む錠菓投与というヒト有効性試験により、メラニン低下効果等を有することが確認されたが、メラニン低下効果の作用機序についての確認はされていなかった。
そこで本実施例２では、α−Ｇヘスペリジンのメラニン低下効果の作用機序を解明するために、以下の実験を行った。
【００４２】
１．Ｂ１６メラノーマ細胞からのメラニン生成に対する作用の検討：
正常なメラノサイトおよびメラノーマ細胞に特異的に存在する酵素であるチロシナーゼは、Ｌ−チロシンをメラニン色素へと生成転換する。そこでα−Ｇヘスペリジンのメラニン低下効果の作用機序がチロシナーゼ依存性であるかどうかを調べた。
まず、Ｂ１６メラノーマ細胞からのメラニン生成に対する作用を下記試験方法により検討した。
マウス由来Ｂ１６メラノーマ細胞を５×１０４ｃｅｌｌｓ／ｗｅｌｌの細胞密度で１０％ＦＢＳ−ＤＭＥＭ培地を用いて２４穴プレートに播種し、１日間プレ培養した後、α−Ｇヘスペリジンのアグリコンであるヘスペリジン（質量分子量：６１０．５６）および該ヘスペリジンのアグリコンであるヘスペレチン（質量分子量：３０２．３０）をそれぞれ１μｇ／ｍＬ、３μｇ／ｍＬ、１０μｇ／ｍＬ、３０μｇ／ｍＬの濃度となるよう添加した（終濃度０．５％ＤＭＳＯ含有培地に溶解して添加）。３日間培養した後、培地を除去し、ＰＢＳ洗浄後、各ｗｅｌｌに２Ｎ−ＮａＯＨを加えて細胞を溶解し、この細胞溶解液の吸光度測定（測定波長：４０５ｎｍ、参照波長：６９０ｎｍ）により、細胞内のメラニン量を測定した。
その結果、ヘスペリジンを添加したものでは、３０μｇ／ｍＬの濃度までメラニン生成抑制作用は認められなかった。また、ヘスペレチンを添加したものでは、濃度依存的にメラニンの生成が促進され、３０μｇ／ｍＬでは対照の約３倍のメラニン量であった。
【００４３】
以上のように、ヘスペリジン、ヘスペレチンにＢ１６メラノーマ細胞からのメラニン生成抑制作用が認められなかったことから、実施例１のヒト有効性試験によって認められたα−Ｇヘスペリジンのメラニン低下作用、明度低下作用は、チロシナーゼ依存性によるものではなく、別の機序によると考えられた。
【００４４】
２．ケラチノサイト由来メラノサイト刺激因子の生成に対する作用の検討：
そこで、培養ヒトケラチノサイトにＵＶ照射することで惹起されるメラノサイト刺激因子の生成に対するヘスペリジン、ヘスペレチンの作用を検討した。メラノサイト刺激因子はメラノサイトの増殖作用を示すことから、メラノサイト刺激因子の生成を抑制することによりメラニン生成を抑制することができる。本実施例では、メラノサイト刺激因子としてＳＣＦを用いた。
（試験方法）
包皮由来正常ヒトケラチノサイト；ＮＨＥＫ（Ｆ）（Cascade Biologics,Inc.）を、細胞培養皿に播種してサブコンフルエントになるまで培養した（ｎ＝３）。
次いでＵＶＢ ２０ｍＪ／ｃｍ2を照射した直後、薬剤（ヘスペリジンおよびヘスペレチン。美白成分として公知のトラネキサム酸も参考薬剤として用いた）を添加し、２日間経過後の培養上清中のＳＣＦ量をＳＣＦ定量キット（Quantikine(R) Human SCF Kit、R&D Systems）を用いて定量した。
薬剤の細胞毒性によってＳＣＦ産生量が低下する可能性も考えられる。そこで薬剤を添加した場合の生細胞の数も併せて計測した。結果を図５に示す。図５中、最左側の棒グラフはＵＶＢ照射をせず、薬剤の添加がない場合の生細胞数を示し、最左側から２番目の棒グラフは薬剤添加がないが、ＵＶＢ照射を行った場合の生細胞数を示す。図５に示す結果から明らかなように、ヘスペリジン、ヘスペレチン、トラネキサム酸のいずれにも、このような細胞毒性が認められなかったことから、ＳＣＦ抑制作用が生体においてもある程度特異的に作用するといえる。
【００４５】
図６に細胞数１０６個あたりのＳＣＦ値を示す。図６中、最左側の棒グラフはＵＶＢ照射をせず、薬剤の添加がない場合の上清中のＳＣＦ値を示し、最左側から２番目の棒グラフは薬剤添加がないが、ＵＶＢ照射を行った場合の上清中のＳＣＦ値を示す。
【００４６】
図６の結果から明らかなように、ヘスペレチンを添加した場合、特に１０μｇ／ｍＬ程度以上添加した場合、ＳＣＦ値が低下しているのがわかる。また美白成分として公知のトラネキサム酸（ＴＡ）に比べ、ＳＣＦ値は格段に低下し、用量依存的かつ１００μｇ／ｍＬで統計学的に有意である。
【００４７】
すなわち、α−Ｇヘスペリジンの添加により、体内にて存在するヘスペレチンのＳＣＦ抑制効果が認められたことから、α−ＧヘスペリジンはＳＣＦ抑制作用によりメラニン低下作用を示すことが確認された。またＳＣＦ抑制効果が示されたことから、ＳＣＦ産生亢進による掻痒、肌荒れ、敏感肌などの肌トラブルも抑制されるものと考えられる。
【００４８】
以下に処方例を示す。
【００４９】
処方例１：サプリメント（錠剤）
（配 合 成 分） （質量％）
ビタミンＣ ３３．０
還元麦芽糖水飴粉末 ２５．７
α−Ｇヘスペリジン １７．０
結晶セルロース １０．０
澱粉分解物 １０．０
ショ糖脂肪酸エステル ２．０
フラバンジェノール １．３
アラビアゴム ０．５
二酸化チタン ０．５
（摂取例）
１錠５００ｍｇを１日６錠摂取する。
【００５０】
処方例２：サプリメント（ハードカプセル）
（配 合 成 分） （質量％）
α−Ｇヘスペリジン ９０．０
澱粉 １０．０
（摂取例）
１カプセル２８０ｍｇを１日４カプセル摂取する。
【００５１】
処方例３ ：サプリメント（顆粒剤）
（配 合 成 分） （質量％）
粉糖 ３５．０
澱粉 ３１．０
α−Ｇヘスペリジン ２１．０
ビタミンＣ １０．０
ビタミンＥ ２．５
香料 ０．５
（摂取例）
１日１パック（１．２ｇ）を摂取する。
【００５２】
処方例４：清涼飲料
（配 合 成 分） （質量％）
果糖ブドウ糖液糖 ３０．０
α−Ｇヘスペリジン １．０
クエン酸 ０．５
香料 適 量
精製水 残 余
【００５３】
処方例５：グミ
（配 合 成 分） （質量％）
還元水飴 ４０．０
グラニュー糖 ２０．０
ブドウ糖 １９．０
水 ９．３
ゼラチン ５．０
α−Ｇヘスペリジン ５．０
クエン酸 １．０
香料 ０．６
色素 ０．１
【００５４】
処方例６：錠菓
（配 合 成 分） （質量％）
ブドウ糖 ４０．０
乳糖 ３０．０
グラニュー糖 １９．０
デンプン ５．０
ショ糖脂肪酸エステル ２．０
クエン酸 １．５
α−Ｇヘスペリジン １．０
セルロース １．０
香料 ０．５
【００５５】
処方例７：キャンディー
（配 合 成 分） （質量％）
砂糖 ５０．０
水飴 ４７．５
クエン酸 １．５
α−Ｇヘスペリジン ０．５
香料 ０．５
【図面の簡単な説明】
【００５６】
【図１】実施例１における、α−Ｇヘスペリジン投与群（アクティブ群）とプラセボ群の、頬のＬ＊変化量（Δ）（０週、６週、１２週）を示すグラフである。
【図２】実施例１における、α−Ｇヘスペリジン投与群（アクティブ群）とプラセボ群の、頬のメラニン量変化量（Δ）（０週、６週、１２週）を示すグラフである。
【図３】実施例１における、α−Ｇヘスペリジン投与群（アクティブ群）とプラセボ群の、頬の皮脂量変化量（Δ）（０週、６週、１２週）を示すグラフである。
【図４】実施例１における、α−Ｇヘスペリジン投与群（アクティブ群）とプラセボ群の、頬（１３５度）における皮膚粘弾性低下変化量（Δ）（０週、６週、１２週）を示すグラフである。
【図５】実施例２における、ＵＶ照射されたケラチノサイトに対するヘスペリジン、ヘスペレチン添加の影響（生細胞数）を示すグラフである。
【図６】実施例２における、ＵＶ照射されたケラチノサイトに対するヘスペリジン、ヘスペレチン添加の影響（ＳＣＦ抑制効果）を示すグラフである。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
飲食品または経口剤として用いる、α−グリコシルヘスペリジンを有効成分として含有するメラニン低下剤。
【請求項２】
飲食品または経口剤として用いる、α−グリコシルヘスペリジンを有効成分として含有する皮膚明度低下抑制剤。
【請求項３】
飲食品または経口剤として用いる、α−グリコシルヘスペリジンを有効成分として含有する皮膚粘弾性低下抑制剤。
【請求項４】
飲食品または経口剤として用いる、α−グリコシルヘスペリジンを有効成分として含有する皮脂量低下抑制剤。
【請求項５】
飲食品または経口剤として用いる、α−グリコシルヘスペリジンおよび／またはヘスペレチンからなるＳＣＦ産生抑制剤。
【請求項６】
飲食品または経口剤として用いる、α−グリコシルヘスペリジンおよび／またはヘスペレチンからなるかゆみ抑制剤。
【請求項７】
α−グリコシルヘスペリジンおよび／またはヘスペレチンからなる、メラニン抑制作用およびかゆみ抑制作用をともに有する経口剤。
【請求項１】
飲食品または経口剤として用いる、α−グリコシルヘスペリジンを有効成分として含有するメラニン低下剤。
【請求項２】
飲食品または経口剤として用いる、α−グリコシルヘスペリジンを有効成分として含有する皮膚明度低下抑制剤。
【請求項３】
飲食品または経口剤として用いる、α−グリコシルヘスペリジンを有効成分として含有する皮膚粘弾性低下抑制剤。
【請求項４】
飲食品または経口剤として用いる、α−グリコシルヘスペリジンを有効成分として含有する皮脂量低下抑制剤。
【請求項５】
飲食品または経口剤として用いる、α−グリコシルヘスペリジンおよび／またはヘスペレチンからなるＳＣＦ産生抑制剤。
【請求項６】
飲食品または経口剤として用いる、α−グリコシルヘスペリジンおよび／またはヘスペレチンからなるかゆみ抑制剤。
【請求項７】
α−グリコシルヘスペリジンおよび／またはヘスペレチンからなる、メラニン抑制作用およびかゆみ抑制作用をともに有する経口剤。
【図１】
【図２】
【図３】
【図４】
【図５】
【図６】
【図２】
【図３】
【図４】
【図５】
【図６】
【公開番号】特開２００９−７３３６（Ｐ２００９−７３３６Ａ）
【公開日】平成２１年１月１５日（２００９．１．１５）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００８−１３３７７８（Ｐ２００８−１３３７７８）
【出願日】平成２０年５月２２日（２００８．５．２２）
【出願人】（０００００１９５９）株式会社資生堂 (1,748)
【出願人】（０００１５５９０８）株式会社林原生物化学研究所 (168)
【Ｆターム（参考）】
【公開日】平成２１年１月１５日（２００９．１．１５）
【国際特許分類】
【出願日】平成２０年５月２２日（２００８．５．２２）
【出願人】（０００００１９５９）株式会社資生堂 (1,748)
【出願人】（０００１５５９０８）株式会社林原生物化学研究所 (168)
【Ｆターム（参考）】
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