βアミロイドタンパク質を減少させるための方法
【課題】アミロイドβタンパク質の産生を減少する診断薬および薬剤を提供し、それによって、ＡＤを発症しそうな状態を予防または減少すること。
【解決手段】血中コレステロールレベルは、Ａβの産生と相関付けられ、そしてＡＤを発症する危険がある集団の予測因子である。血中コレステロールレベルを減少させる方法を使用してＡβの産生を減少し得、それによりＡＤを発症する危険を減少させる。同じ方法および組成物がまた、ＡＤと診断された個体を処置するために使用され得る。方法としては、肝臓によるコレステロール取り込みを増加させる化合物（例えば、ＨＭＧ ＣｏＡレダクターゼインヒビター）の投与、コレステロールの内因性産生をブロックする化合物（例えば、ＨＭＧ ＣｏＡレダクターゼインヒビター）の投与、食餌コレステロールの取り込みを防止する組成物の投与、血中コレステロールレベルの低下に有効なこれらの任意の組合せの投与が挙げられる。
【解決手段】血中コレステロールレベルは、Ａβの産生と相関付けられ、そしてＡＤを発症する危険がある集団の予測因子である。血中コレステロールレベルを減少させる方法を使用してＡβの産生を減少し得、それによりＡＤを発症する危険を減少させる。同じ方法および組成物がまた、ＡＤと診断された個体を処置するために使用され得る。方法としては、肝臓によるコレステロール取り込みを増加させる化合物（例えば、ＨＭＧ ＣｏＡレダクターゼインヒビター）の投与、コレステロールの内因性産生をブロックする化合物（例えば、ＨＭＧ ＣｏＡレダクターゼインヒビター）の投与、食餌コレステロールの取り込みを防止する組成物の投与、血中コレステロールレベルの低下に有効なこれらの任意の組合せの投与が挙げられる。
【発明の詳細な説明】
【背景技術】
【０００１】
（発明の背景）
合衆国政府は、Ｂｒｕｃｅ Ａ．Ｙａｎｋｎｅｒに対する国立衛生院助成金番号ＲＯ１ＮＳ３３３２５によって、本発明に一定の権利を有する。
【０００２】
アルツハイマー病（ＡＤ）は、高齢の集団において最も一般的な痴呆の原因である。４０〜４２アミノ酸のアミロイドβタンパク質（Ａβ）を含有する大多数の老人性斑の蓄積は、ＡＤの古典的な病理学的特徴である。遺伝的および細胞生物学的の両方の知見は、脳におけるＡβの蓄積は、ＡＤの原因のようであることを示唆する（Ｙａｎｋｎｅｒ、Ｂ．Ａ．（１９９６）Ｎｅｕｒｏｎ １６、９２１〜９３２．；Ｓｅｌｋｏｅ、Ｄ．Ｊ．Ｓｃｉｅｎｃｅ ２７５、６３０〜６３１（１９９７））。Ａβの病理学的役割を支持する強力な遺伝学的証拠は、アミロイド前駆タンパク質において変異を遺伝する個体が、ほとんど若年において、必ずＡＤを発症するという観察から生じた。これらの変異は、脳における老人性斑を形成するＡβペプチドの長い改変体の産生を増加する（Ｇｏａｔｅら、（１９９１）Ｎａｔｕｒｅ ３４９、７０４〜７０６）。ＡＤを生じる、他の遺伝子における変異および対立遺伝子改変体（プレセニリンおよびアポリポタンパク質Ｅを含む）もまた、Ａβペプチドの産生および沈着の増加を生じる。Ｒｅｉｍａｎら（１９９６）Ｎ．Ｅ．Ｊ．Ｍｅｄ．３３４、７５２〜７５８は、中年（５０代前半〜中盤）において、ＡｐｏＥ４遺伝子のホモ接合型を有する個体がアルツハイマー病の患者と同一の脳の領域において、減少したグルコース代謝を有することを報告した。これらの知見は、この遺伝子に関連する脳における生理学的変化が早期に開始することを示唆する。さらに、ダウン症候群を有する個体は、アミロイド前駆タンパク質を過剰発現し、若年において脳にＡβ沈着を発症し、そして若年においてアルツハイマー病を発症する。最後に、Ａβタンパク質は、神経細胞に対して高度に毒性であることが実証されている。従って、脳におけるＡβのレベルを減少する薬物は、アルツハイマー病を防止すると広く考えられている。
【０００３】
公知のＡＤの遺伝的原因は、ＡＤの症例の全体数のうち、ほんの小さな集団を説明し得るにすぎない。ＡＤのほとんどの症例は、散発性であり、そして高齢の集団において生じる。研究の主な目的は、治療的尺度を受け入れ得るＡＤの素因となる環境因子の同定である。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
従って、本発明の目的は、ＡＤを発症する危険性のある集団を予測する方法を提供することである。
【０００５】
本発明の別の目的は、アミロイドβタンパク質（Ａβ）の産生を減少する診断薬および薬剤を提供し、それによって、ＡＤを発症しそうな状態を予防または減少することである。
【０００６】
本発明のさらなる目的は、ＡＤの神経精神病学的または診断的判定基準を有する患者においてＡＤを処置するための薬学的処置を提供することである。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
（発明の要旨）
血中コレステロールレベルは、アミロイドβタンパク質（Ａβ）の産生と相関し、そしてＡＤ発症の危険性を有する集団の予測因子である。血中コレステロールレベルを低下させる方法を使用して、Ａβの産生を減少し得、それにより、ＡＤを発症する危険性を減少し得る。同一の方法および組成物を、ＡＤと診断された個体を処置するためにもまた使用し得る。方法は、肝臓によるコレステロールの取り込みを上昇する化合物の投与（例えば、ＨＭＧ ＣｏＡレダクターゼインヒビターの投与）、コレステロールの内因性産生をブロックする化合物の投与（例えば、ＨＭＧ ＣｏＡレダクターゼインヒビターの投与）、食餌コレステロールの取り込みを予防する組成物の投与、および血中コレステロールレベルを低下させるのに効果的な任意のこれらの組み合わせの投与を包含する。方法はまた、Ａβ産生におけるコレステロールの役割に基づき、危険性を有する集団を予測するために、開発された。例えば、２００ｍｇ／ｄｌを超える血中コレステロールレベルとして規定されるＡｐｏＥ４および高コレステロールを有する個体、高コレステロールレベルを有する閉経期後の女性（特にエストロゲンを摂取していない女性）、または肥満ではない高血中コレステロールレベルを有する個体は全て、血中コレステロールレベルが減少しない場合、ＡＤ発症の危険性を有する。好ましい実施態様において、これらの危険性因子を有する個体は、臨床診療において受け入れられた神経精神病学的および診断的判定基準に基づき、ＡＤに起因する任意の精神障害を発症する以前に、血中コレステロールレベルを低下させるために処置される。処置は、少なくとも１０％血中コレステロールレベルを低下させるのに効果的な１つ以上の組成物の投与に基づき、この処置は、Ａβの産生の減少に充分であると考えられる。
【０００８】
これらの危険因子の発見に基づく診断キットは、コレステロール、総リポタンパク質、および／またはＡｐｏＥ４の測定のための試薬を含む。
本発明はまた、以下の項目を提供する。
（項目１） Ａβの産生を減少させるための方法であって、アルツハイマー病の危険がある、またはその症状を示す、コレステロールのレベル上昇を伴う個人に対して、血中コレステロールレベルを減少させる組成物を投与する工程を包含する、方法。
（項目２） 前記組成物が、ＨＭＧ ＣｏＡレダクターゼインヒビターである、項目１に記載の方法。
（項目３） 前記組成物が、ロバスタチン、シンバスタチン、フルバスタチニン、プラバスタチン、アトルバスタチン、セリバスタチンおよびコンパクチンからなる群より選択される、項目２に記載の方法。
（項目４） 前記組成物が，食餌コレステロールの取り込みを阻害する、項目１に記載の方法。
（項目５） 前記組成物が、コレステロールの内因性産生をブロックするかまたは減少させる、項目１に記載の方法。
（項目６） 前記組成物が、コレステロール代謝またはクリアランスを増大させる、項目１に記載の方法。
（項目７） 前記個人が、アポリポタンパク質Ｅ４遺伝子を有する、項目１に記載の方法。
（項目８） 前記個人が、トリソミー２１（ダウン症候群）を有する、項目１に記載の方法。
（項目９） 前記個人が、アミロイドβタンパク質、アミロイド前駆体タンパク質、プレセニリン−１またはプレセニリン−２をコードする遺伝子において１以上の変異を有する、項目１に記載の方法。
（項目１０） 前記個人が、アルツハイマー病または痴呆性疾患の家族歴を有する、項目１に記載の方法。
（項目１１） 前記個人が、高コレステロールを伴う閉経後女性である、項目１に記載の方法。
（項目１２） 前記個人が、高血中コレステロールレベルを有し、肥満ではない、項目１に記載の方法。
（項目１３） 前記個人が、４８〜６５歳の間の年齢である、項目１に記載の方法。
（項目１４） 個人がアルツハイマー病を発症する危険にあるか否かを予測するための方法であって、該個人の血中コレステロールレベルが上昇しているか否かを決定する工程を包含する、方法。
（項目１５） 前記レベルが２００ｍｇ／ｄｌ以上である、項目１４に記載の方法。
（項目１６） 前記個人がアポリポタンパク質Ｅ４遺伝子を有するか否かを決定する工程をさらに包含する、項目１４に記載の方法。
（項目１７） 前記個人が、トリソミー２１（ダウン症候群）を有するか否かを決定する工程をさらに包含する、項目１４に記載の方法。
（項目１８） 前記個人が、アミロイドβタンパク質、アミロイド前駆体タンパク質、プレセニリン−１またはプレセニリン−２をコードする遺伝子において１以上の変異を有するか否かを決定する工程をさらに包含する、項目１４に記載の方法。
（項目１９） 前記個人が、アルツハイマー病または痴呆性疾患の家族歴を有するか否かを決定する工程をさらに包含する、項目１４に記載の方法。
（項目２０） 前記個人が、高コレステロールを伴う閉経後女性であるか否かを決定する工程をさらに包含する、項目１４に記載の方法。
（項目２１） 個人が、アルツハイマー病を発祥する危険にあるか否かを決定するためのキットであって、血中コレステロールレベルが、２００ｍｇ／ｄｌを超えるか否かを決定するための試薬を備える、キット。
（項目２２） アポリポタンパク質Ｅ４遺伝子、アポリポタンパク質Ｅ４遺伝子産物、アミロイドβタンパク質、アミロイド前駆体タンパク質、プレセニリン−１およびプレセニリン−２からなる群より選択される少なくとも１つの因子を決定するための試薬をさらに備える、項目２１に記載のキット。
（項目２３） 血中コレステロールレベルを減少させる化合物の有効量を含む、Ａβの産生を減少するための組成物。
（項目２４） ＨＭＧ ＣｏＡレダクターゼインヒビターを含む、項目２３に記載の組成物。
（項目２５） 前記インヒビターが、ロバスタチン、シンバスタチン、フルバスタチニン、プラバスタチン、アトルバスタチン、セリバスタチンおよびコンパクチンからなる群より選択される、項目２４に記載の組成物。
（項目２６） 食餌コレステロールの取り込みを阻害する化合物を含む、項目２３に記載の組成物。
（項目２７） 項目２３に記載の組成物であって、該組成物は、コレステロールの内因性産生をブロックするかまたは減少させる、組成物。
（項目２８） 項目２７に記載の組成物であって、該組成物は、２，３−オキシドスクアレンシクラーゼ、スクアレンシンターゼ、および７−デヒドロコレステロールレダクターゼからなる群より選択されるコレステロール生合成酵素のインヒビターを含む、組成物。
（項目２９） 項目２３に記載の組成物であって、該組成物は、フィブレート、胆汁酸結合樹脂、プロブコール、ニコチン酸、ニンニク、ニンニク誘導体および車前子からなる群より選択される、組成物。
【０００９】
実施例は、ＨＭＧ ＣｏＡレダクターゼインヒビターのアルツハイマー病の処置のための使用を実証する。高コレステロール食餌を受けたラットは、脳におけるアルツハイマー病Ａβタンパク質の増加したレベルを示す。コレステロールは、培養物中のヒトニューロンにおけるＡβの量を増加することが示されている。ＨＭＧ ＣｏＡレダクターゼインヒビターは、コレステロール産生を減少する。いくつかの異なるＨＭＧ ＣｏＡレダクターゼインヒビター（ロバスタチン、シンバスタチン、フルバスタチニン（ｆｌｕｖａｓｔａｔｉｎ）、プラバスタチン、およびコンパクチン（ｃｏｍｐａｃｔｉｎ）を含む）は、ヒトニューロン培養物中のＡβ産生のレベルを有意に阻害する。
【発明を実施するための形態】
【００１０】
（発明の詳細な説明）
（Ｉ．ＡＤの危険性のある集団を予測するための方法）
Ａβ蓄積病およびアルツハイマー病の危険性の増加した個体は、アポリポタンパク質Ｅ４遺伝子のコピーを保有する個体（Ｓｔｒｉｔｔｍａｔｔｅｒら（１９９３）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．９０，１９７７−１９８１）、三染色体性２１（ダウン症）を有する個体（ＭａｎｎおよびＥｓｉｒｉ、（１９８９）Ｊ．Ｎｅｕｒｏｌ．Ｓｃｉ．８９，１６９−１７９）、およびアミロイド前駆体タンパク質であるプレセニリン（ｐｒｅｓｅｎｉｌｉｎ）−１またはプレセニリン−２をコードする遺伝子の１つにおいて変異を保有する個体（Ｙａｎｋｎｅｒ，１９９６に概説される）である。さらに、アルツハイマー病の家族歴を有する個体は、アルツハイマー病の危険性が増加していることが見出されており（Ｆａｒｒｅｒら（１９８９）Ａｎｎ．Ｎｅｕｒｏｌ．２５，４８５−４９２；ｖａｎ Ｄｕｉｊｎら（１９９１）Ｉｎｔ．Ｊ．Ｅｐｉｄｅｍｉｏｌ．２０（補遺２）、Ｓ１３−Ｓ２０）、それゆえ、ＨＭＧ ＣｏＡレダクターゼインヒビターを用いる予防処置によって便益を受け得る。
【００１１】
Ａβの産生におけるコレステロールの役割に基づいて、危険性のある集団を予測する方法もまた、開発されてきた。ＡＤを発症するためのいくつかの危険因子が同定されている。これらの因子としては、以下が挙げられる：
（１）２００ｍｇ／ｄｌを超える血中コレステロールレベルとして規定される、Ａｐｏ Ｅ４および高コレステロールを有する個体、
（２）高コレステロールを有する閉経後の女性、特にエストロゲンを摂取しない女性、
（３）肥満ではない、高血中コレステロールレベルを有する若い個体（４８〜６５歳）、
（４）ＡＤの家族歴を有する、高血中コレステロールレベルを有する個体、
（５）ＡＤの家族歴を有する高血中コレステロールレベルを有する個体、および
（６）ダウン症候群を有する全ての成人個体。
【００１２】
これらの個体は全て、血中コレステロールレベルが減少しない場合に、ＡＤを発症する危険性がある。好ましい実施態様において、これらの危険因子を有する個体は、ＡＤに起因する任意の精神的欠陥を発症する前に、推定アルツハイマー病について認められる神経精神医学的基準および診断基準を使用して、血中コレステロールレベルをより低くするために処置される（ＭｃＫｈａｈｎら（１９８４）Ｎｅｕｒｏｌｏｇｙ３４：９３９−９４４）。
【００１３】
個体は、コレステロール、ＡｐｏＥ４、および／または総リポタンパク質レベルについての標準的な血液試験を使用して、ならびに医療歴および家族歴を得ることによってスクリーニングされ得る。さらに、追加してカウンター免疫アッセイ試験が、危険性があり得る個体によって使用され得、その結果個体は、さらなる医療アドバイスを探索し得る。これらの免疫アッセイキットは、上昇したコレステロール、総リポタンパク質、およびＡｐｏＥ４について定性的および／または定量的であり得る。
【００１４】
（ＩＩ．Ａβの産生を減少させる処置の方法）
血中コレステロールレベルを低下させるための方法を使用して、Ａβの産生を減少させ得、それによりＡＤを発症する危険性を減少させる。また、同じ方法を使用して、ＡＤを有すると既に診断されている患者を処置し得る。方法は、肝臓によるコレステロールの取り込みを増加する化合物の投与（例えば、ＨＭＧ ＣｏＡレダクターゼインヒビターの投与）、コレステロールの内因性産生をブロックする化合物の投与（例えば、ＨＭＧ ＣｏＡレダクターゼインヒビターの投与）、食餌コレステロールの取り込みを防止する組成物の投与、および血中コレステロールレベルを低下させるに有効なこれらの任意の組み合わせの投与を含む。
【００１５】
実施例は、いくつかの異なるＨＭＧ ＣｏＡレダクターゼインヒビターがＡβの産生を減少させることを示す。ＨＭＧ ＣｏＡレダクターゼインヒビターは、いくつかの異なるレベルでコレステロールを低下させるように作用し得る。例えば、ＨＭＧ ＣｏＡレダクターゼインヒビターは、肝臓におけるリポタンパク質クリアランスレセプターをアップレギュレートすることによって血中コレステロールレベルを低下させることが示されている（ＢｒｏｗｎおよびＧｏｌｄｓｔｅｉｎ、（１９８６）Ｓｃｉｅｎｃｅ２３２，３４−４７）。さらに、ＨＭＧ ＣｏＡレダクターゼインヒビターは、ニューロンにおけるコレステロール合成を直接阻害する。試験されたあらゆるＨＭＧ ＣｏＡレダクターゼインヒビターは、Ａβ産生を減少するので、このクラスの薬物の新たなメンバーもまた、Ａβ産生を阻害すると想到される。さらに、増加した食餌コレステロールは、脳におけるＡβを増加するので、他の機構を介してコレステロールを減少するように作用する薬物もまた、Ａβ産生を阻害する。
【００１６】
例示的なＣｏＡレダクターゼインヒビターとしては、ロバスタチン、シンバスタチン、コンパクチン、フルバスタチニン、アトロバスタチン（ａｔｏｒｖａｓｔａｔｉｎ）、セリバスタチン（ｃｅｒｉｖａｓｔａｔｉｎ）、およびプラバスチンを含むスタチンが挙げられる。これらは、代表的には、経口投与される。
【００１７】
コレステロール生合成酵素（２，３−オキシドスクアレンシクラーゼ、スクアレンシンターゼ、および７−デヒドロコレステロールレダクターゼを含む）を阻害する化合物もまた使用され得る。
【００１８】
食餌コレステロールの取り込みを減少させる例示的な組成物としては、胆汁酸結合樹脂（コレステリルアミンおよびコレスチポール（ｃｏｌｅｓｔｉｐｏｌ））およびフィブレート（ｆｉｂｒａｔｅ）（クロフィブレート（ｃｌｏｆｉｂｒａｔｅ））が挙げられる。プロブコール、ニコチン酸、ニンニクおよびニンニク誘導体、ならびに車前子もまた、血中コレステロールレベルを低下させるために使用される。プロブコールおよびそのフィブレートは、コレステロール含有リポタンパク質の代謝を増加させる。コレステロールを低下させるニコチン酸の機構は、理解されていない。
【００１９】
ＨＭＧ ＣｏＡレダクターゼインヒビターの投与の優先経路は経口であるが、この薬物はまた、静脈内、皮下または筋肉内経路によって投与され得る。いくつかの場合において、大脳脊髄液（ｃｅｒｅｂｒｏｓｐｉｎａｌ ｆｌｕｉｄ）への直接投与が効果的であり得る。
【実施例】
【００２０】
（ＩＩＩ．実施例）
以下の実施例に記載される研究の前に、脳におけるコレステロールレベルとＡβレベルとの関係は、未知であった。１つの研究において、高コレステロール食を摂食したウサギは、Ａβに対する抗体を用いて脳ニューロンの免疫組織化学的染色の増加を示した。しかし、この抗体は、Ａβに特異的ではなく、そしてアミロイド前駆タンパク質の他の代謝産物と交差反応し得た（Ｓｐａｒｋｓ，Ｄ．Ｌ．（１９９６）Ｎｅｕｒｏｂｉｏｌｏｇｙ ｏｆ Ａｇｉｎｇ．１７、２９１〜２９９）。以下の実施例における研究は、以下を実証する：高コレステロール食を摂食したラットが、脳におけるアルツハイマー病Ａβタンパク質のレベルの増加を示すこと；コレステロールが、培養中のヒトニューロンにおいてＡβの量を増加させること；ＨＭＧ ＣｏＡレダクターゼインヒビターが、コレステロール産物を低減させること；およびいくつかの異なるＨＭＧ ＣｏＡレダクターゼインヒビター（ロバスタチン、シンバスタチン、フルバスタチニン、プラバスタチンおよびコンパクチンを含む）が、ヒトニューロン培養物中のＡβ産生のレベルを有意に阻害すること。
【００２１】
（実施例１：コレステロールは、ヒトニューロン培養物中のＡβのレベルを増加させる）
Ｂｕｓｃｉｇｌｉｏら（１９９３）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．９０、２０９２〜２０９６は、培養中のヒト皮質ニューロンによるＡβの産生を記載した。コレステロールがＡβの産生に影響を及ぼし得るか否かを決定するために、ヒト脳初代培養物を、１６〜２０週の胎児の流産児の皮質から樹立し、そしてニューロンを、ヒト血漿から単離された超低密度リポタンパク質（ＶＬＤＬ）粒子、低密度リポタンパク質（ＬＤＬ）粒子もしくは高密度リポタンパク質（ＨＤＬ）粒子の非存在下または存在下でインキュベートした。これらのリポタンパク質粒子は、細胞へのコレステロールの輸送のための生理学的ビヒクルである。ヒト皮質培養物中のＡβレベルに対する異なるリポタンパク質粒子の効果を、決定した。このヒト皮質培養物を、Ｎ２補充物（ニューロンの生存を支持する無血清補充物）を有する無血清Ｄｕｌｂｅｃｃｏ改変Ｅａｇｌｅ培地（ＤＭＥＭ）中で維持した。次いで、この培地を、同じ培地（コントロール）またはＶＬＤＬ粒子、ＬＤＬ粒子、もしくはＨＤＬ粒子を補充した培地に変更した。４８〜７２時間のインキュベーション後、Ａβを、Ａβに対するポリクローナル抗体（Ｂ１２）を用いて培養培地の免疫沈降によって、続いて、Ａβに対するモノクローナル抗体（６Ｅ１０）を用いてウエスタンブロッティングによって測定した。このウェスタンブロットを、増強させた化学発光方法によってか、または123Ｉ標識化二次抗体の添加およびホスホルイメージャー（ｐｈｏｓｐｈｏｒｉｍａｇｅｒ）スキャンニングによってのいずれかで発色させた。Ａβの４０アミノ酸形態および４２アミノ酸形態に対応するバンドを、コンピュータソフトウェアプログラムを用いて定量的に分析した。コントロールのヒト皮質培養物は、基底レベルのＡβを産生した。ヒト皮質培養物の、ＶＬＤＬ粒子、ＬＤＬ粒子またはＨＤＬ粒子への曝露は、Ａβの４０アミノ酸形態および４２アミノ酸形態の両方のレベルを増大させた。これらの結果は、コレステロール含有リポタンパク質の主要なクラスは全て、ヒトニューロンにおいてＡβの産生を増大させるように作用することを示唆する。
【００２２】
次いで、アポリポタンパク質Ｅまたはアポリポタンパク質Ａ１を含むリポタンパク質粒子がＡβ産生を増大し得るか否かを実証した。この問いに答えるために、これらのタンパク質を含む合成リポタンパク質粒子を作製した。アポリポタンパク質Ｅまたはアポリポタンパク質Ａ１のいずれかを含む粒子は、ヒト皮質培養物中のＡβのレベルを増大させた。
【００２３】
これらの結果は、種々の異なるコレステロールを保有するリポタンパク質粒子が、ヒトニューロン初代培養物中のＡβの産生を増大し得ることを示す。
【００２４】
（実施例２：食餌コレステロールは脳におけるＡβレベルを増加させる）
コレステロール保有リポタンパク質粒子がヒトのニューロンの培養物中のＡβを増加させることを確立した後、食餌コレステロールがインビボで脳中のＡβのレベルを増加させるかどうかを決定した。コレステロールの増加した食餌摂取によりリポタンパク質粒子の循環レベルが増加することが公知であり、このことは次に、コレステロールの細胞への送達を増加させる。これらの実験を、２０ヶ月齢のラットに対して行った。これらのラットに低コレステロール食（０．１％コレステロール）かまたは高コレステロール食（５％コレステロール）を給餌した。１０週間後、これらの動物を屠殺し、そしてその皮質をＡβレベルの測定のために取り出した。Ａβ抗体Ｂ１２を用いて皮質ホモジネートを免疫沈降し、次いで市販のＡβモノクローナル抗体４Ｇ８を用いてウェスタンブロットを行うことにより、Ａβをアッセイした。
【００２５】
ラット大脳皮質から単離されたＡβをゲル上の電気泳動によって分離して、低コレステロール食を給餌されたラット群と比較して高コレステロール食を給餌されたラット群で約５０％Ａβレベルが有意に増加したことが示された。これらの発見は、食餌コレステロールが脳中のＡβの量を増加させることを示す。高コレステロール食により誘導された脳中のＡβの約５０％の増加は、ダウン症候群で生じるＡβの増加と類似していることは注目すべきである。ダウン症候群は、アルツハイマー病が発症しやすいことが公知である。
【００２６】
（実施例３：ＨＭＧ ＣｏＡレダクターゼインヒビターはヒトニューロンによるＡβの産生を阻害する）
ＨＭＧ ＣｏＡレダクターゼインヒビターは、心臓疾患に罹患する危険がある患者における血漿中のコレステロールレベルを減少させるために、ヒトにおいて使用されてきた。コレステロールが脳中のＡβの量を増加させるという発見により、ＨＭＧ ＣｏＡレダクターゼインヒビターがＡβの産生を阻害することによりアルツハイマー病について治療上効果があり得るかどうかを決定するこの調査が行われた。ヒトの皮質性ニューロンの培養物を、上記のような妊娠１８週の正常な胎児の皮質組織から樹立し、そしてＮ２サプリメントを含むＤＭＥＭから構成される培養培地にて維持した。１週間後、この培養培地をＤＭＥＭ＋Ｎ２サプリメント（コントロール）か、あるいはＤＭＥＭ＋Ｎ２サプリメントに１００μＭロバスタチン、１００μＭシンバスタチン、１００μＭコンパクチン、１００μＭフルバスタチニン、または１ｍＭプラバスタチンのいずれかのいずれかを加えたものに変更し、４８時間のインキュベーション後、この培養細胞を収集し、そして上記のようにＡβのレベルをアッセイした。
【００２７】
Ａβを、ヒト皮質性ニューロン培養物由来の培養培地から単離し、そしてゲルにおける電気泳動により分離した。これらの結果は、ロバスタチン、シンバスタチン、コンパクチン、フルバスタチニンまたはプラバスタチンのいずれかで処理したヒトのニューロンは、コントロールと比較して有意に減少したＡβレベルを有するということを実証する。これらの結果により、ＨＭＧ ＣｏＡレダクターゼインヒビターがヒトニューロンによるＡβの産生を減少させることが示される。
【００２８】
ＨＭＧ ＣｏＡレダクターゼインヒビターがヒトの皮質細胞によるＡβ産生を阻害するという発見により、アルツハイマー病に罹患している個体またはアルツハイマー病を発症する危険がある個体におけるＡβのレベルを減少させるために、この種類の薬物を使用することが支持される。
【背景技術】
【０００１】
（発明の背景）
合衆国政府は、Ｂｒｕｃｅ Ａ．Ｙａｎｋｎｅｒに対する国立衛生院助成金番号ＲＯ１ＮＳ３３３２５によって、本発明に一定の権利を有する。
【０００２】
アルツハイマー病（ＡＤ）は、高齢の集団において最も一般的な痴呆の原因である。４０〜４２アミノ酸のアミロイドβタンパク質（Ａβ）を含有する大多数の老人性斑の蓄積は、ＡＤの古典的な病理学的特徴である。遺伝的および細胞生物学的の両方の知見は、脳におけるＡβの蓄積は、ＡＤの原因のようであることを示唆する（Ｙａｎｋｎｅｒ、Ｂ．Ａ．（１９９６）Ｎｅｕｒｏｎ １６、９２１〜９３２．；Ｓｅｌｋｏｅ、Ｄ．Ｊ．Ｓｃｉｅｎｃｅ ２７５、６３０〜６３１（１９９７））。Ａβの病理学的役割を支持する強力な遺伝学的証拠は、アミロイド前駆タンパク質において変異を遺伝する個体が、ほとんど若年において、必ずＡＤを発症するという観察から生じた。これらの変異は、脳における老人性斑を形成するＡβペプチドの長い改変体の産生を増加する（Ｇｏａｔｅら、（１９９１）Ｎａｔｕｒｅ ３４９、７０４〜７０６）。ＡＤを生じる、他の遺伝子における変異および対立遺伝子改変体（プレセニリンおよびアポリポタンパク質Ｅを含む）もまた、Ａβペプチドの産生および沈着の増加を生じる。Ｒｅｉｍａｎら（１９９６）Ｎ．Ｅ．Ｊ．Ｍｅｄ．３３４、７５２〜７５８は、中年（５０代前半〜中盤）において、ＡｐｏＥ４遺伝子のホモ接合型を有する個体がアルツハイマー病の患者と同一の脳の領域において、減少したグルコース代謝を有することを報告した。これらの知見は、この遺伝子に関連する脳における生理学的変化が早期に開始することを示唆する。さらに、ダウン症候群を有する個体は、アミロイド前駆タンパク質を過剰発現し、若年において脳にＡβ沈着を発症し、そして若年においてアルツハイマー病を発症する。最後に、Ａβタンパク質は、神経細胞に対して高度に毒性であることが実証されている。従って、脳におけるＡβのレベルを減少する薬物は、アルツハイマー病を防止すると広く考えられている。
【０００３】
公知のＡＤの遺伝的原因は、ＡＤの症例の全体数のうち、ほんの小さな集団を説明し得るにすぎない。ＡＤのほとんどの症例は、散発性であり、そして高齢の集団において生じる。研究の主な目的は、治療的尺度を受け入れ得るＡＤの素因となる環境因子の同定である。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
従って、本発明の目的は、ＡＤを発症する危険性のある集団を予測する方法を提供することである。
【０００５】
本発明の別の目的は、アミロイドβタンパク質（Ａβ）の産生を減少する診断薬および薬剤を提供し、それによって、ＡＤを発症しそうな状態を予防または減少することである。
【０００６】
本発明のさらなる目的は、ＡＤの神経精神病学的または診断的判定基準を有する患者においてＡＤを処置するための薬学的処置を提供することである。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
（発明の要旨）
血中コレステロールレベルは、アミロイドβタンパク質（Ａβ）の産生と相関し、そしてＡＤ発症の危険性を有する集団の予測因子である。血中コレステロールレベルを低下させる方法を使用して、Ａβの産生を減少し得、それにより、ＡＤを発症する危険性を減少し得る。同一の方法および組成物を、ＡＤと診断された個体を処置するためにもまた使用し得る。方法は、肝臓によるコレステロールの取り込みを上昇する化合物の投与（例えば、ＨＭＧ ＣｏＡレダクターゼインヒビターの投与）、コレステロールの内因性産生をブロックする化合物の投与（例えば、ＨＭＧ ＣｏＡレダクターゼインヒビターの投与）、食餌コレステロールの取り込みを予防する組成物の投与、および血中コレステロールレベルを低下させるのに効果的な任意のこれらの組み合わせの投与を包含する。方法はまた、Ａβ産生におけるコレステロールの役割に基づき、危険性を有する集団を予測するために、開発された。例えば、２００ｍｇ／ｄｌを超える血中コレステロールレベルとして規定されるＡｐｏＥ４および高コレステロールを有する個体、高コレステロールレベルを有する閉経期後の女性（特にエストロゲンを摂取していない女性）、または肥満ではない高血中コレステロールレベルを有する個体は全て、血中コレステロールレベルが減少しない場合、ＡＤ発症の危険性を有する。好ましい実施態様において、これらの危険性因子を有する個体は、臨床診療において受け入れられた神経精神病学的および診断的判定基準に基づき、ＡＤに起因する任意の精神障害を発症する以前に、血中コレステロールレベルを低下させるために処置される。処置は、少なくとも１０％血中コレステロールレベルを低下させるのに効果的な１つ以上の組成物の投与に基づき、この処置は、Ａβの産生の減少に充分であると考えられる。
【０００８】
これらの危険因子の発見に基づく診断キットは、コレステロール、総リポタンパク質、および／またはＡｐｏＥ４の測定のための試薬を含む。
本発明はまた、以下の項目を提供する。
（項目１） Ａβの産生を減少させるための方法であって、アルツハイマー病の危険がある、またはその症状を示す、コレステロールのレベル上昇を伴う個人に対して、血中コレステロールレベルを減少させる組成物を投与する工程を包含する、方法。
（項目２） 前記組成物が、ＨＭＧ ＣｏＡレダクターゼインヒビターである、項目１に記載の方法。
（項目３） 前記組成物が、ロバスタチン、シンバスタチン、フルバスタチニン、プラバスタチン、アトルバスタチン、セリバスタチンおよびコンパクチンからなる群より選択される、項目２に記載の方法。
（項目４） 前記組成物が，食餌コレステロールの取り込みを阻害する、項目１に記載の方法。
（項目５） 前記組成物が、コレステロールの内因性産生をブロックするかまたは減少させる、項目１に記載の方法。
（項目６） 前記組成物が、コレステロール代謝またはクリアランスを増大させる、項目１に記載の方法。
（項目７） 前記個人が、アポリポタンパク質Ｅ４遺伝子を有する、項目１に記載の方法。
（項目８） 前記個人が、トリソミー２１（ダウン症候群）を有する、項目１に記載の方法。
（項目９） 前記個人が、アミロイドβタンパク質、アミロイド前駆体タンパク質、プレセニリン−１またはプレセニリン−２をコードする遺伝子において１以上の変異を有する、項目１に記載の方法。
（項目１０） 前記個人が、アルツハイマー病または痴呆性疾患の家族歴を有する、項目１に記載の方法。
（項目１１） 前記個人が、高コレステロールを伴う閉経後女性である、項目１に記載の方法。
（項目１２） 前記個人が、高血中コレステロールレベルを有し、肥満ではない、項目１に記載の方法。
（項目１３） 前記個人が、４８〜６５歳の間の年齢である、項目１に記載の方法。
（項目１４） 個人がアルツハイマー病を発症する危険にあるか否かを予測するための方法であって、該個人の血中コレステロールレベルが上昇しているか否かを決定する工程を包含する、方法。
（項目１５） 前記レベルが２００ｍｇ／ｄｌ以上である、項目１４に記載の方法。
（項目１６） 前記個人がアポリポタンパク質Ｅ４遺伝子を有するか否かを決定する工程をさらに包含する、項目１４に記載の方法。
（項目１７） 前記個人が、トリソミー２１（ダウン症候群）を有するか否かを決定する工程をさらに包含する、項目１４に記載の方法。
（項目１８） 前記個人が、アミロイドβタンパク質、アミロイド前駆体タンパク質、プレセニリン−１またはプレセニリン−２をコードする遺伝子において１以上の変異を有するか否かを決定する工程をさらに包含する、項目１４に記載の方法。
（項目１９） 前記個人が、アルツハイマー病または痴呆性疾患の家族歴を有するか否かを決定する工程をさらに包含する、項目１４に記載の方法。
（項目２０） 前記個人が、高コレステロールを伴う閉経後女性であるか否かを決定する工程をさらに包含する、項目１４に記載の方法。
（項目２１） 個人が、アルツハイマー病を発祥する危険にあるか否かを決定するためのキットであって、血中コレステロールレベルが、２００ｍｇ／ｄｌを超えるか否かを決定するための試薬を備える、キット。
（項目２２） アポリポタンパク質Ｅ４遺伝子、アポリポタンパク質Ｅ４遺伝子産物、アミロイドβタンパク質、アミロイド前駆体タンパク質、プレセニリン−１およびプレセニリン−２からなる群より選択される少なくとも１つの因子を決定するための試薬をさらに備える、項目２１に記載のキット。
（項目２３） 血中コレステロールレベルを減少させる化合物の有効量を含む、Ａβの産生を減少するための組成物。
（項目２４） ＨＭＧ ＣｏＡレダクターゼインヒビターを含む、項目２３に記載の組成物。
（項目２５） 前記インヒビターが、ロバスタチン、シンバスタチン、フルバスタチニン、プラバスタチン、アトルバスタチン、セリバスタチンおよびコンパクチンからなる群より選択される、項目２４に記載の組成物。
（項目２６） 食餌コレステロールの取り込みを阻害する化合物を含む、項目２３に記載の組成物。
（項目２７） 項目２３に記載の組成物であって、該組成物は、コレステロールの内因性産生をブロックするかまたは減少させる、組成物。
（項目２８） 項目２７に記載の組成物であって、該組成物は、２，３−オキシドスクアレンシクラーゼ、スクアレンシンターゼ、および７−デヒドロコレステロールレダクターゼからなる群より選択されるコレステロール生合成酵素のインヒビターを含む、組成物。
（項目２９） 項目２３に記載の組成物であって、該組成物は、フィブレート、胆汁酸結合樹脂、プロブコール、ニコチン酸、ニンニク、ニンニク誘導体および車前子からなる群より選択される、組成物。
【０００９】
実施例は、ＨＭＧ ＣｏＡレダクターゼインヒビターのアルツハイマー病の処置のための使用を実証する。高コレステロール食餌を受けたラットは、脳におけるアルツハイマー病Ａβタンパク質の増加したレベルを示す。コレステロールは、培養物中のヒトニューロンにおけるＡβの量を増加することが示されている。ＨＭＧ ＣｏＡレダクターゼインヒビターは、コレステロール産生を減少する。いくつかの異なるＨＭＧ ＣｏＡレダクターゼインヒビター（ロバスタチン、シンバスタチン、フルバスタチニン（ｆｌｕｖａｓｔａｔｉｎ）、プラバスタチン、およびコンパクチン（ｃｏｍｐａｃｔｉｎ）を含む）は、ヒトニューロン培養物中のＡβ産生のレベルを有意に阻害する。
【発明を実施するための形態】
【００１０】
（発明の詳細な説明）
（Ｉ．ＡＤの危険性のある集団を予測するための方法）
Ａβ蓄積病およびアルツハイマー病の危険性の増加した個体は、アポリポタンパク質Ｅ４遺伝子のコピーを保有する個体（Ｓｔｒｉｔｔｍａｔｔｅｒら（１９９３）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．９０，１９７７−１９８１）、三染色体性２１（ダウン症）を有する個体（ＭａｎｎおよびＥｓｉｒｉ、（１９８９）Ｊ．Ｎｅｕｒｏｌ．Ｓｃｉ．８９，１６９−１７９）、およびアミロイド前駆体タンパク質であるプレセニリン（ｐｒｅｓｅｎｉｌｉｎ）−１またはプレセニリン−２をコードする遺伝子の１つにおいて変異を保有する個体（Ｙａｎｋｎｅｒ，１９９６に概説される）である。さらに、アルツハイマー病の家族歴を有する個体は、アルツハイマー病の危険性が増加していることが見出されており（Ｆａｒｒｅｒら（１９８９）Ａｎｎ．Ｎｅｕｒｏｌ．２５，４８５−４９２；ｖａｎ Ｄｕｉｊｎら（１９９１）Ｉｎｔ．Ｊ．Ｅｐｉｄｅｍｉｏｌ．２０（補遺２）、Ｓ１３−Ｓ２０）、それゆえ、ＨＭＧ ＣｏＡレダクターゼインヒビターを用いる予防処置によって便益を受け得る。
【００１１】
Ａβの産生におけるコレステロールの役割に基づいて、危険性のある集団を予測する方法もまた、開発されてきた。ＡＤを発症するためのいくつかの危険因子が同定されている。これらの因子としては、以下が挙げられる：
（１）２００ｍｇ／ｄｌを超える血中コレステロールレベルとして規定される、Ａｐｏ Ｅ４および高コレステロールを有する個体、
（２）高コレステロールを有する閉経後の女性、特にエストロゲンを摂取しない女性、
（３）肥満ではない、高血中コレステロールレベルを有する若い個体（４８〜６５歳）、
（４）ＡＤの家族歴を有する、高血中コレステロールレベルを有する個体、
（５）ＡＤの家族歴を有する高血中コレステロールレベルを有する個体、および
（６）ダウン症候群を有する全ての成人個体。
【００１２】
これらの個体は全て、血中コレステロールレベルが減少しない場合に、ＡＤを発症する危険性がある。好ましい実施態様において、これらの危険因子を有する個体は、ＡＤに起因する任意の精神的欠陥を発症する前に、推定アルツハイマー病について認められる神経精神医学的基準および診断基準を使用して、血中コレステロールレベルをより低くするために処置される（ＭｃＫｈａｈｎら（１９８４）Ｎｅｕｒｏｌｏｇｙ３４：９３９−９４４）。
【００１３】
個体は、コレステロール、ＡｐｏＥ４、および／または総リポタンパク質レベルについての標準的な血液試験を使用して、ならびに医療歴および家族歴を得ることによってスクリーニングされ得る。さらに、追加してカウンター免疫アッセイ試験が、危険性があり得る個体によって使用され得、その結果個体は、さらなる医療アドバイスを探索し得る。これらの免疫アッセイキットは、上昇したコレステロール、総リポタンパク質、およびＡｐｏＥ４について定性的および／または定量的であり得る。
【００１４】
（ＩＩ．Ａβの産生を減少させる処置の方法）
血中コレステロールレベルを低下させるための方法を使用して、Ａβの産生を減少させ得、それによりＡＤを発症する危険性を減少させる。また、同じ方法を使用して、ＡＤを有すると既に診断されている患者を処置し得る。方法は、肝臓によるコレステロールの取り込みを増加する化合物の投与（例えば、ＨＭＧ ＣｏＡレダクターゼインヒビターの投与）、コレステロールの内因性産生をブロックする化合物の投与（例えば、ＨＭＧ ＣｏＡレダクターゼインヒビターの投与）、食餌コレステロールの取り込みを防止する組成物の投与、および血中コレステロールレベルを低下させるに有効なこれらの任意の組み合わせの投与を含む。
【００１５】
実施例は、いくつかの異なるＨＭＧ ＣｏＡレダクターゼインヒビターがＡβの産生を減少させることを示す。ＨＭＧ ＣｏＡレダクターゼインヒビターは、いくつかの異なるレベルでコレステロールを低下させるように作用し得る。例えば、ＨＭＧ ＣｏＡレダクターゼインヒビターは、肝臓におけるリポタンパク質クリアランスレセプターをアップレギュレートすることによって血中コレステロールレベルを低下させることが示されている（ＢｒｏｗｎおよびＧｏｌｄｓｔｅｉｎ、（１９８６）Ｓｃｉｅｎｃｅ２３２，３４−４７）。さらに、ＨＭＧ ＣｏＡレダクターゼインヒビターは、ニューロンにおけるコレステロール合成を直接阻害する。試験されたあらゆるＨＭＧ ＣｏＡレダクターゼインヒビターは、Ａβ産生を減少するので、このクラスの薬物の新たなメンバーもまた、Ａβ産生を阻害すると想到される。さらに、増加した食餌コレステロールは、脳におけるＡβを増加するので、他の機構を介してコレステロールを減少するように作用する薬物もまた、Ａβ産生を阻害する。
【００１６】
例示的なＣｏＡレダクターゼインヒビターとしては、ロバスタチン、シンバスタチン、コンパクチン、フルバスタチニン、アトロバスタチン（ａｔｏｒｖａｓｔａｔｉｎ）、セリバスタチン（ｃｅｒｉｖａｓｔａｔｉｎ）、およびプラバスチンを含むスタチンが挙げられる。これらは、代表的には、経口投与される。
【００１７】
コレステロール生合成酵素（２，３−オキシドスクアレンシクラーゼ、スクアレンシンターゼ、および７−デヒドロコレステロールレダクターゼを含む）を阻害する化合物もまた使用され得る。
【００１８】
食餌コレステロールの取り込みを減少させる例示的な組成物としては、胆汁酸結合樹脂（コレステリルアミンおよびコレスチポール（ｃｏｌｅｓｔｉｐｏｌ））およびフィブレート（ｆｉｂｒａｔｅ）（クロフィブレート（ｃｌｏｆｉｂｒａｔｅ））が挙げられる。プロブコール、ニコチン酸、ニンニクおよびニンニク誘導体、ならびに車前子もまた、血中コレステロールレベルを低下させるために使用される。プロブコールおよびそのフィブレートは、コレステロール含有リポタンパク質の代謝を増加させる。コレステロールを低下させるニコチン酸の機構は、理解されていない。
【００１９】
ＨＭＧ ＣｏＡレダクターゼインヒビターの投与の優先経路は経口であるが、この薬物はまた、静脈内、皮下または筋肉内経路によって投与され得る。いくつかの場合において、大脳脊髄液（ｃｅｒｅｂｒｏｓｐｉｎａｌ ｆｌｕｉｄ）への直接投与が効果的であり得る。
【実施例】
【００２０】
（ＩＩＩ．実施例）
以下の実施例に記載される研究の前に、脳におけるコレステロールレベルとＡβレベルとの関係は、未知であった。１つの研究において、高コレステロール食を摂食したウサギは、Ａβに対する抗体を用いて脳ニューロンの免疫組織化学的染色の増加を示した。しかし、この抗体は、Ａβに特異的ではなく、そしてアミロイド前駆タンパク質の他の代謝産物と交差反応し得た（Ｓｐａｒｋｓ，Ｄ．Ｌ．（１９９６）Ｎｅｕｒｏｂｉｏｌｏｇｙ ｏｆ Ａｇｉｎｇ．１７、２９１〜２９９）。以下の実施例における研究は、以下を実証する：高コレステロール食を摂食したラットが、脳におけるアルツハイマー病Ａβタンパク質のレベルの増加を示すこと；コレステロールが、培養中のヒトニューロンにおいてＡβの量を増加させること；ＨＭＧ ＣｏＡレダクターゼインヒビターが、コレステロール産物を低減させること；およびいくつかの異なるＨＭＧ ＣｏＡレダクターゼインヒビター（ロバスタチン、シンバスタチン、フルバスタチニン、プラバスタチンおよびコンパクチンを含む）が、ヒトニューロン培養物中のＡβ産生のレベルを有意に阻害すること。
【００２１】
（実施例１：コレステロールは、ヒトニューロン培養物中のＡβのレベルを増加させる）
Ｂｕｓｃｉｇｌｉｏら（１９９３）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．９０、２０９２〜２０９６は、培養中のヒト皮質ニューロンによるＡβの産生を記載した。コレステロールがＡβの産生に影響を及ぼし得るか否かを決定するために、ヒト脳初代培養物を、１６〜２０週の胎児の流産児の皮質から樹立し、そしてニューロンを、ヒト血漿から単離された超低密度リポタンパク質（ＶＬＤＬ）粒子、低密度リポタンパク質（ＬＤＬ）粒子もしくは高密度リポタンパク質（ＨＤＬ）粒子の非存在下または存在下でインキュベートした。これらのリポタンパク質粒子は、細胞へのコレステロールの輸送のための生理学的ビヒクルである。ヒト皮質培養物中のＡβレベルに対する異なるリポタンパク質粒子の効果を、決定した。このヒト皮質培養物を、Ｎ２補充物（ニューロンの生存を支持する無血清補充物）を有する無血清Ｄｕｌｂｅｃｃｏ改変Ｅａｇｌｅ培地（ＤＭＥＭ）中で維持した。次いで、この培地を、同じ培地（コントロール）またはＶＬＤＬ粒子、ＬＤＬ粒子、もしくはＨＤＬ粒子を補充した培地に変更した。４８〜７２時間のインキュベーション後、Ａβを、Ａβに対するポリクローナル抗体（Ｂ１２）を用いて培養培地の免疫沈降によって、続いて、Ａβに対するモノクローナル抗体（６Ｅ１０）を用いてウエスタンブロッティングによって測定した。このウェスタンブロットを、増強させた化学発光方法によってか、または123Ｉ標識化二次抗体の添加およびホスホルイメージャー（ｐｈｏｓｐｈｏｒｉｍａｇｅｒ）スキャンニングによってのいずれかで発色させた。Ａβの４０アミノ酸形態および４２アミノ酸形態に対応するバンドを、コンピュータソフトウェアプログラムを用いて定量的に分析した。コントロールのヒト皮質培養物は、基底レベルのＡβを産生した。ヒト皮質培養物の、ＶＬＤＬ粒子、ＬＤＬ粒子またはＨＤＬ粒子への曝露は、Ａβの４０アミノ酸形態および４２アミノ酸形態の両方のレベルを増大させた。これらの結果は、コレステロール含有リポタンパク質の主要なクラスは全て、ヒトニューロンにおいてＡβの産生を増大させるように作用することを示唆する。
【００２２】
次いで、アポリポタンパク質Ｅまたはアポリポタンパク質Ａ１を含むリポタンパク質粒子がＡβ産生を増大し得るか否かを実証した。この問いに答えるために、これらのタンパク質を含む合成リポタンパク質粒子を作製した。アポリポタンパク質Ｅまたはアポリポタンパク質Ａ１のいずれかを含む粒子は、ヒト皮質培養物中のＡβのレベルを増大させた。
【００２３】
これらの結果は、種々の異なるコレステロールを保有するリポタンパク質粒子が、ヒトニューロン初代培養物中のＡβの産生を増大し得ることを示す。
【００２４】
（実施例２：食餌コレステロールは脳におけるＡβレベルを増加させる）
コレステロール保有リポタンパク質粒子がヒトのニューロンの培養物中のＡβを増加させることを確立した後、食餌コレステロールがインビボで脳中のＡβのレベルを増加させるかどうかを決定した。コレステロールの増加した食餌摂取によりリポタンパク質粒子の循環レベルが増加することが公知であり、このことは次に、コレステロールの細胞への送達を増加させる。これらの実験を、２０ヶ月齢のラットに対して行った。これらのラットに低コレステロール食（０．１％コレステロール）かまたは高コレステロール食（５％コレステロール）を給餌した。１０週間後、これらの動物を屠殺し、そしてその皮質をＡβレベルの測定のために取り出した。Ａβ抗体Ｂ１２を用いて皮質ホモジネートを免疫沈降し、次いで市販のＡβモノクローナル抗体４Ｇ８を用いてウェスタンブロットを行うことにより、Ａβをアッセイした。
【００２５】
ラット大脳皮質から単離されたＡβをゲル上の電気泳動によって分離して、低コレステロール食を給餌されたラット群と比較して高コレステロール食を給餌されたラット群で約５０％Ａβレベルが有意に増加したことが示された。これらの発見は、食餌コレステロールが脳中のＡβの量を増加させることを示す。高コレステロール食により誘導された脳中のＡβの約５０％の増加は、ダウン症候群で生じるＡβの増加と類似していることは注目すべきである。ダウン症候群は、アルツハイマー病が発症しやすいことが公知である。
【００２６】
（実施例３：ＨＭＧ ＣｏＡレダクターゼインヒビターはヒトニューロンによるＡβの産生を阻害する）
ＨＭＧ ＣｏＡレダクターゼインヒビターは、心臓疾患に罹患する危険がある患者における血漿中のコレステロールレベルを減少させるために、ヒトにおいて使用されてきた。コレステロールが脳中のＡβの量を増加させるという発見により、ＨＭＧ ＣｏＡレダクターゼインヒビターがＡβの産生を阻害することによりアルツハイマー病について治療上効果があり得るかどうかを決定するこの調査が行われた。ヒトの皮質性ニューロンの培養物を、上記のような妊娠１８週の正常な胎児の皮質組織から樹立し、そしてＮ２サプリメントを含むＤＭＥＭから構成される培養培地にて維持した。１週間後、この培養培地をＤＭＥＭ＋Ｎ２サプリメント（コントロール）か、あるいはＤＭＥＭ＋Ｎ２サプリメントに１００μＭロバスタチン、１００μＭシンバスタチン、１００μＭコンパクチン、１００μＭフルバスタチニン、または１ｍＭプラバスタチンのいずれかのいずれかを加えたものに変更し、４８時間のインキュベーション後、この培養細胞を収集し、そして上記のようにＡβのレベルをアッセイした。
【００２７】
Ａβを、ヒト皮質性ニューロン培養物由来の培養培地から単離し、そしてゲルにおける電気泳動により分離した。これらの結果は、ロバスタチン、シンバスタチン、コンパクチン、フルバスタチニンまたはプラバスタチンのいずれかで処理したヒトのニューロンは、コントロールと比較して有意に減少したＡβレベルを有するということを実証する。これらの結果により、ＨＭＧ ＣｏＡレダクターゼインヒビターがヒトニューロンによるＡβの産生を減少させることが示される。
【００２８】
ＨＭＧ ＣｏＡレダクターゼインヒビターがヒトの皮質細胞によるＡβ産生を阻害するという発見により、アルツハイマー病に罹患している個体またはアルツハイマー病を発症する危険がある個体におけるＡβのレベルを減少させるために、この種類の薬物を使用することが支持される。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
本明細書中に記載の発明。
【請求項１】
本明細書中に記載の発明。
【公開番号】特開２０１０−４７６１６（Ｐ２０１０−４７６１６Ａ）
【公開日】平成２２年３月４日（２０１０．３．４）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００９−２７４９９９（Ｐ２００９−２７４９９９）
【出願日】平成２１年１２月２日（２００９．１２．２）
【分割の表示】特願２０００−５３７５３８（Ｐ２０００−５３７５３８）の分割
【原出願日】平成１１年３月２３日（１９９９．３．２３）
【出願人】（５９６１１５６８７）チルドレンズ メディカル センター コーポレーション (25)
【Ｆターム（参考）】
【公開日】平成２２年３月４日（２０１０．３．４）
【国際特許分類】
【出願日】平成２１年１２月２日（２００９．１２．２）
【分割の表示】特願２０００−５３７５３８（Ｐ２０００−５３７５３８）の分割
【原出願日】平成１１年３月２３日（１９９９．３．２３）
【出願人】（５９６１１５６８７）チルドレンズ メディカル センター コーポレーション (25)
【Ｆターム（参考）】
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