がん、例えば、膀胱癌、乳癌、胆管細胞癌、ＣＭＬ、食道癌、ＨＣＣ、ＮＳＣＬＣ、ＳＣＬＣ、骨肉腫、膵癌、前立腺癌、腎細胞癌、軟部組織腫瘍、およびリンパ腫を発症する素因を診断するための、本発明の目的とする方法が、本明細書に記載される。ある態様において、この診断法は、ＷＨＳＣ１またはＷＨＳＣ１Ｌ１遺伝子の発現レベルを測定する段階を含む。本発明は、がん、例えば、膀胱癌、乳癌、胆管細胞癌、ＣＭＬ、食道癌、ＨＣＣ、ＮＳＣＬＣ、ＳＣＬＣ、骨肉腫、膵癌、前立腺癌、腎細胞癌、軟部組織腫瘍、およびリンパ腫のような、ＷＨＳＣ１またはＷＨＳＣ１Ｌ１に関連した疾患の治療において有用な治療剤をスクリーニングする方法をさらに提供する。本発明は、細胞増殖の阻害、およびＷＨＳＣ１またはＷＨＳＣ１Ｌ１に関連した疾患の症状の治療または軽減の方法をさらに提供する。本発明は、二本鎖分子およびそれらをコードするベクターを含む生成物、ならびにそれらを含む組成物も特徴とする。さらに、ＷＨＳＣ１もしくはＷＨＳＣ１Ｌ１遺伝子の発現、またはＷＨＳＣ１もしくはＷＨＳＣ１Ｌ１ポリペプチドの生物学的活性に対する効果を指標として使用して、肺癌の治療および／または予防のための物質を同定する方法も開示される。

【特許請求の範囲】
【請求項１】
対象由来の生物学的試料におけるＷＨＳＣ１遺伝子の発現レベルまたはＷＨＳＣ１Ｌ１遺伝子の発現レベルのいずれかまたは両方を決定する段階を含む、対象においてがんを検出または診断する方法であって、
該遺伝子の正常対照レベルと比較した該レベルの増加が、該対象ががんに罹患しているかまたはがんを発症するリスクを有することを示し、
該発現レベルが、以下からなる群より選択される方法によって決定される、前記方法：
（ａ）ＷＨＳＣ１のｍＲＮＡまたはＷＨＳＣ１Ｌ１のｍＲＮＡのいずれかまたは両方を検出する方法；
（ｂ）ＷＨＳＣ１遺伝子によってコードされるタンパク質またはＷＨＳＣ１Ｌ１遺伝子によってコードされるタンパク質のいずれかまたは両方を検出する方法；および
（ｃ）ＷＨＳＣ１によってコードされるタンパク質の生物学的活性またはＷＨＳＣ１Ｌ１遺伝子によってコードされるタンパク質の生物学的活性のいずれかまたは両方を検出する方法。
【請求項２】
前記増加が正常対照レベルより少なくとも１０％高い、請求項１記載の方法。
【請求項３】
対象由来の生物学的試料が生検試料または血液試料である、請求項１記載の方法。
【請求項４】
以下からなる群より選択される試薬を少なくとも１つ含む、がんを診断するためのキット：
（ａ）ＷＨＳＣ１またはＷＨＳＣ１Ｌ１のｍＲＮＡを検出するための試薬；
（ｂ）ＷＨＳＣ１またはＷＨＳＣ１Ｌ１遺伝子によってコードされるタンパク質を検出するための試薬；および
（ｃ）ＷＨＳＣ１またはＷＨＳＣ１Ｌ１遺伝子によってコードされるタンパク質の生物学的活性を検出するための試薬。
【請求項５】
試薬が、以下からなる群より選択される、請求項４記載のキット：
（ａ）ＷＨＳＣ１またはＷＨＳＣ１Ｌ１のｍＲＮＡに対するプローブ；および
（ｂ）ＷＨＳＣ１またはＷＨＳＣ１Ｌ１遺伝子によってコードされるタンパク質に対する抗体。
【請求項６】
以下を含む、がんの治療もしくは予防、またはがん細胞増殖の阻害のための候補物質をスクリーニングする方法：
（ａ）試験物質を、ＷＨＳＣ１またはＷＨＳＣ１Ｌ１遺伝子によってコードされるポリペプチドと接触させる段階；
（ｂ）該ポリペプチドと該試験物質との間の結合活性を検出する段階；および
（ｃ）該ポリペプチドに結合する試験物質を選択する段階。
【請求項７】
以下を含む、がんの治療もしくは予防、またはがん細胞増殖の阻害のための候補物質をスクリーニングする方法：
（ａ）試験物質を、ＷＨＳＣ１およびＷＨＳＣ１Ｌ１遺伝子のいずれかまたは両方を発現している細胞と接触させる段階；
（ｂ）ＷＨＳＣ１の発現レベルまたはＷＨＳＣ１Ｌ１遺伝子の発現レベルのいずれかまたは両方を検出する段階；および
（ｂ）試験物質の非存在下で検出される発現レベルと比較して、ＷＨＳＣ１遺伝子の発現レベルまたはＷＨＳＣ１Ｌ１遺伝子の発現レベルのいずれかまたは両方を低下させる試験物質を選択する段階。
【請求項８】
以下を含む、がんの治療もしくは予防、またはがん細胞増殖の阻害のための候補物質をスクリーニングする方法：
（ａ）試験物質を、ＷＨＳＣ１またはＷＨＳＣ１Ｌ１遺伝子によってコードされるポリペプチドと接触させる段階；
（ｂ）段階（ａ）のポリペプチドの生物学的活性を検出する段階；および
（ｃ）試験物質の非存在下で検出される生物学的活性と比較して、該ポリペプチドの生物学的活性を抑制する試験物質を選択する段階。
【請求項９】
生物学的活性が、細胞増殖活性、メチルトランスフェラーゼ活性、またはＩＱＧＡＰ１ポリペプチド、ＴＩＡＭ１ポリペプチド、ＡＫＴ２ポリペプチド、もしくはβカテニンポリペプチドに対する結合活性である、請求項８記載の方法。
【請求項１０】
以下を含む、がんの治療もしくは予防、またはがん細胞増殖の阻害のための候補物質をスクリーニングする方法：
（ａ）ＷＨＳＣ１またはＷＨＳＣ１Ｌ１遺伝子の転写調節領域と、該転写調節領域の制御下で発現されるレポーター遺伝子とを含むベクターが導入されている細胞と、試験物質を接触させる段階；
（ｂ）該レポーター遺伝子の発現または活性を測定する段階；および
（ｃ）試験物質の非存在下での発現または活性と比較して、該レポーター遺伝子の発現または活性を低下させる試験物質を選択する段階。
【請求項１１】
以下を含む、がんの治療もしくは予防、またはがん細胞増殖の阻害のための候補物質をスクリーニングする方法：
（ａ）試験物質の存在下で、ＩＱＧＡＰ１ポリペプチド、ＴＩＡＭ１ポリペプチド、ＡＫＴ２ポリペプチド、およびβカテニンポリペプチドからなる群より選択されるポリペプチドのうちの少なくとも１つまたはその機能的等価物を、ＷＨＳＣ１ポリペプチドまたはその機能的等価物と接触させる段階；
（ｂ）段階（ａ）の、ＩＱＧＡＰ１ポリペプチド、ＴＩＡＭ１ポリペプチド、ＡＫＴ２ポリペプチド、およびβカテニンポリペプチドからなる群より選択されるポリペプチドのうちの少なくとも１つと、ＷＨＳＣ１ポリペプチドとの間の結合を検出する段階；ならびに
（ｃ）試験物質の非存在下で検出される結合と比較して、ＩＱＧＡＰ１ポリペプチド、ＴＩＡＭ１ポリペプチド、ＡＫＴ２ポリペプチド、およびβカテニンポリペプチドからなる群より選択されるポリペプチドのうちの少なくとも１つと、ＷＨＳＣ１ポリペプチドとの間の結合を阻害する試験物質を選択する段階。
【請求項１２】
センス鎖とアンチセンス鎖とを含み、かつＷＨＳＣ１またはＷＨＳＣ１Ｌ１遺伝子を発現している細胞に導入された場合に該遺伝子の発現を阻害する二本鎖分子であって、
前記センス鎖が配列番号：２９、３２、３５、および３８からなる群より選択される標的配列に対応するヌクレオチド配列を含み、前記アンチセンス鎖が該標的配列に相補的なヌクレオチド配列を含み、該センス鎖およびアンチセンス鎖が互いにハイブリダイズすることで二本鎖分子を形成する、前記二本鎖分子。
【請求項１３】
約１９〜約２５ヌクレオチド長である、請求項１２記載の二本鎖分子。
【請求項１４】
一本鎖ヌクレオチド配列を介して連結されたセンス鎖およびアンチセンス鎖を含む単一のポリヌクレオチド分子である、請求項１２または１３記載の二本鎖分子。
【請求項１５】
前記ポリヌクレオチドが、以下の一般式を有する、請求項１４記載の二本鎖分子：
５'−［Ａ］−［Ｂ］−［Ａ'］−３'
式中、［Ａ］は配列番号：２９、３２、３５、および３８からなる群より選択される標的配列に対応するヌクレオチド配列を含むセンス鎖であり；［Ｂ］は約３〜約２３ヌクレオチドからなるヌクレオチド配列であり；かつ［Ａ'］は前記標的配列に相補的なヌクレオチド配列を含むアンチセンス鎖である。
【請求項１６】
請求項１２〜１５のいずれか一項記載の二本鎖分子をコードするベクター。
【請求項１７】
センス鎖核酸およびアンチセンス鎖核酸を含むポリヌクレオチドの組み合わせの各々を含み、かつ標的遺伝子の発現を阻害するベクターであって、
前記センス鎖核酸が配列番号：２９、３２、３５、および３８からなる群より選択されるヌクレオチド配列を含み、前記アンチセンス鎖核酸が該センス鎖に相補的な配列からなり、該センス鎖およびアンチセンス鎖の転写物が互いにハイブリダイズすることで二本鎖分子を形成する、前記ベクター。
【請求項１８】
ＷＨＳＣ１もしくはＷＨＳＣ１Ｌ１遺伝子に対する薬学的に有効な量の二本鎖分子または該二本鎖分子をコードするベクターと、薬学的に許容される担体とを対象に投与する段階を含む、対象においてがんを治療または予防する方法であって、
前記二本鎖分子が、ＷＨＳＣ１またはＷＨＳＣ１Ｌ１遺伝子を発現している細胞へ導入された場合に、細胞増殖およびＷＨＳＣ１またはＷＨＳＣ１Ｌ１遺伝子の発現を阻害する、前記方法。
【請求項１９】
二本鎖分子が請求項１２〜１５のいずれか一項記載の二本鎖分子である、請求項１８記載の方法。
【請求項２０】
ベクターが請求項１６または１７記載のベクターである、請求項１８記載の方法。
【請求項２１】
ＷＨＳＣ１もしくはＷＨＳＣ１Ｌ１遺伝子に対する薬学的に有効な量の二本鎖分子または該二本鎖分子をコードするベクターと、薬学的に許容される担体とを含む、がんの治療または予防のための組成物であって、
前記二本鎖分子が、ＷＨＳＣ１またはＷＨＳＣ１Ｌ１遺伝子を発現している細胞へ導入された場合に、細胞増殖およびＷＨＳＣ１またはＷＨＳＣ１Ｌ１遺伝子の発現を阻害する、前記組成物。
【請求項２２】
二本鎖分子が請求項１２または１５のいずれか一項記載の二本鎖分子である、請求項２１記載の組成物。
【請求項２３】
ベクターが請求項１６または１７記載のベクターである、請求項２１記載の組成物。
【請求項２４】
以下を含む、ＷＨＳＣ１ポリペプチドまたはその機能的等価物と、ＩＱＧＡＰ１ポリペプチド、ＴＩＡＭ１ポリペプチド、ＡＫＴ２ポリペプチド、およびβカテニンポリペプチドからなる群より選択されるポリペプチドのうちの少なくとも１つまたはその機能的等価物との間の結合を阻害するための物質をスクリーニングする方法：
（ａ）試験物質の存在下で、ＩＱＧＡＰ１ポリペプチド、ＴＩＡＭ１ポリペプチド、ＡＫＴ２ポリペプチド、およびβカテニンポリペプチドのうちの少なくとも１つまたはその機能的等価物を、ＷＨＳＣ１ポリペプチドまたはその機能的等価物と接触させる段階；
（ｂ）段階（ａ）の、ＩＱＧＡＰ１ポリペプチド、ＴＩＡＭ１ポリペプチド、ＡＫＴ２ポリペプチド、およびβカテニンポリペプチドからなる群より選択されるポリペプチドのうちの少なくとも１つまたはその機能的等価物と、ＷＨＳＣ１ポリペプチドまたはその機能的等価物との間の結合を検出する段階；ならびに
（ｃ）ＩＱＧＡＰ１ポリペプチド、ＴＩＡＭ１ポリペプチド、ＡＫＴ２ポリペプチド、およびβカテニンポリペプチドからなる群より選択されるポリペプチドのうちの少なくとも１つまたはその機能的等価物と、ＷＨＳＣ１ポリペプチドまたはその機能的等価物との間の結合を阻害する試験物質を選択する段階。

【図１−１】

【図１−２】

【図２】

【図３Ａ】

【図３Ｂ】

【図３Ｃ】

【図３Ｄ】

【図４Ａ】

【図４Ｂ】

【図４Ｃ】

【図５−１】

【図５−２】

【図５−３】

【図６】

【図７】

【図８】

【図９】

【図１０】

【図１１】

【図１２】

【図１３】

【図１４】

【公表番号】特表２０１３−５１８５６０（Ｐ２０１３−５１８５６０Ａ）
【公表日】平成２５年５月２３日（２０１３．５．２３）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２０１２−５３５２８０（Ｐ２０１２−５３５２８０）
【出願日】平成２３年２月２日（２０１１．２．２）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＪＰ２０１１／０００５８５
【国際公開番号】ＷＯ２０１１／０９６２１１
【国際公開日】平成２３年８月１１日（２０１１．８．１１）
【公序良俗違反の表示】
（特許庁注：以下のものは登録商標）
１．ＷＩＮＤＯＷＳ
【出願人】（５０２２４０１１３）オンコセラピー・サイエンス株式会社 (142)
【Ｆターム（参考）】