本発明は、ＬＧＮ／ＧＰＳＭ２遺伝子の発現レベルの決定を含む、がんを検出および診断するための方法を提供する。さらに、本発明は、がんの治療または予防において有用な治療剤をスクリーニングする方法、および乳がんを治療するための方法を提供する。さらに、本発明は、がんの治療または予防において有用な、ＬＧＮ／ＧＰＳＭ２遺伝子を標的化するｓｉＲＮＡを提供する。

【特許請求の範囲】
【請求項１】
対象由来の生物試料におけるＬＧＮ／ＧＰＳＭ２遺伝子の発現レベルを決定する段階を含む、対象におけるがんまたはがん発症の素因を診断するための方法であって、
前記遺伝子の正常対照レベルと比べた前記発現レベルの増大が、前記対象ががんに罹患しているかまたはがんを発症するリスクがあることを示唆する、方法。
【請求項２】
発現レベルが正常対照レベルよりも少なくとも１０％大きい、請求項１記載の方法。
【請求項３】
発現レベルが
（ａ）ＬＧＮ／ＧＰＳＭ２遺伝子のｍＲＮＡを検出すること；
（ｂ）ＬＧＮ／ＧＰＳＭ２遺伝子によってコードされるタンパク質を検出すること；および
（ｃ）ＬＧＮ／ＧＰＳＭ２遺伝子によってコードされるタンパク質の生物活性を検出すること
からなる群より選択される方法のいずれかによって決定される、請求項１記載の方法。
【請求項４】
対象由来の生物試料が生検材料である、請求項１記載の方法。
【請求項５】
がんが乳がんである、請求項１記載の方法。
【請求項６】
ＬＧＮ／ＧＰＳＭ２遺伝子の転写産物または翻訳産物に結合する検出試薬を含む、がんを診断または検出するためのキット。
【請求項７】
がんが乳がんである、請求項６記載のキット。
【請求項８】
（ａ）ＬＧＮ／ＧＰＳＭ２ポリペプチドまたはその断片と試験化合物とを接触させる段階；
（ｂ）前記ポリペプチドまたは断片と試験化合物との間の結合を検出する段階；および
（ｃ）前記ポリペプチドまたは断片に結合する試験化合物を、がんを治療または予防するための候補化合物として選択する段階
を含む、がんを治療または予防するための候補化合物をスクリーニングする方法。
【請求項９】
（ａ）ＬＧＮ／ＧＰＳＭ２ポリペプチドまたはその断片と試験化合物とを接触させる段階；
（ｂ）前記ポリペプチドまたは断片の生物活性を検出する段階；
（ｃ）前記ポリペプチドまたは断片の生物活性を、試験化合物の非存在下で検出された生物活性と比較する段階；および
（ｄ）前記ポリペプチドの生物活性を抑制する試験化合物を、がんを治療または予防するための候補化合物として選択する段階
を含む、がんを治療または予防するための候補化合物をスクリーニングする方法。
【請求項１０】
生物活性が細胞増殖活性またはＤＮＡ合成増強活性である、請求項９記載の方法。
【請求項１１】
（ａ）ＬＧＮ／ＧＰＳＭ２遺伝子を発現する細胞と試験化合物とを接触させる段階；
（ｂ）ＬＧＮ／ＧＰＳＭ２遺伝子の発現レベルを検出する段階；
（ｃ）前記発現レベルを、試験化合物の非存在下で検出された発現レベルと比較する段階；および
（ｄ）前記発現レベルを低減する試験化合物を、がんを治療または予防するための候補化合物として選択する段階
を含む、がんを治療または予防するための候補化合物をスクリーニングする方法。
【請求項１２】
（ａ）ＬＧＮ／ＧＰＳＭ２遺伝子の転写調節領域と該転写調節領域の制御下で発現されるレポーター遺伝子とを含むベクターを導入した細胞に、試験化合物を接触させる段階；
（ｂ）前記レポーター遺伝子の発現レベルまたは活性を測定する段階；
（ｃ）前記発現レベルまたは活性を、試験化合物の非存在下で検出された発現レベルまたは活性と比較する段階；ならびに
（ｄ）前記発現レベルまたは活性を低減する試験化合物を、がんを治療または予防するための候補化合物として選択する段階
を含む、がんを治療または予防するための候補化合物をスクリーニングする方法。
【請求項１３】
（ａ）試験化合物の存在下で、ＴＲＩＯＢＰ／ｔａｒａポリペプチドのＬＧＮ／ＧＰＳＭ２結合ドメインを含むポリペプチドとＬＧＮ／ＧＰＳＭ２ポリペプチドのＴＲＩＯＢＰ／ｔａｒａ結合ドメインを含むポリペプチドとを接触させる段階；
（ｂ）前記ポリペプチド間の結合を検出する段階；および
（ｃ）前記ポリペプチド間の結合を阻害する試験化合物を、がんを治療または予防するための候補化合物として選択する段階
を含む、がんを治療または予防するための候補化合物をスクリーニングする方法。
【請求項１４】
ＴＲＩＯＢＰ／ｔａｒａ結合ドメインを含むポリペプチドが、ＬＧＮ／ＧＰＳＭ２ポリペプチドを含む、請求項１３記載の方法。
【請求項１５】
ＬＧＮ／ＧＰＳＭ２結合ドメインを含むポリペプチドが、ＴＲＩＯＢＰ／ｔａｒａポリペプチドを含む、請求項１３記載の方法。
【請求項１６】
（ａ）試験化合物の存在下で、ＰＢＫ／ＴＯＰＫポリペプチドのＬＧＮ／ＧＰＳＭ２結合ドメインを含むポリペプチドとＬＧＮ／ＧＰＳＭ２ポリペプチドのＰＢＫ／ＴＯＰＫ結合ドメインを含むポリペプチドとを接触させる段階；
（ｂ）前記ポリペプチド間の結合またはＬＧＮ／ＧＰＳＭ２ポリペプチドのＰＢＫ／ＴＯＰＫ結合ドメインを含むポリペプチドのリン酸化レベルを検出する段階；および
（ｃ）前記ポリペプチド間の結合またはＬＧＮ／ＧＰＳＭ２のリン酸化レベルを阻害する試験化合物を、がんを治療または予防するための候補化合物として選択する段階
を含む、がんを治療または予防するための候補化合物をスクリーニングする方法。
【請求項１７】
ＰＢＫ／ＴＯＰＫ結合ドメインを含むポリペプチドが、ＬＧＮ／ＧＰＳＭ２ポリペプチドを含む、請求項１６記載の方法。
【請求項１８】
ＬＧＮ／ＧＰＳＭ２結合ドメインを含むポリペプチドが、ＰＢＫ／ＴＯＰＫポリペプチドを含む、請求項１６記載の方法。
【請求項１９】
（ａ）リン酸化に適した条件の下、試験化合物の存在下でタンパク質キナーゼとＬＧＮ／ＧＰＳＭ２ポリペプチドまたはその機能的等価物とを接触させる段階；
（ｂ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５３のアミノ酸配列中のＳｅｒ４０１、Ｔｈｒ５１９、および／またはＳｅｒ５５８に対応する一つまたは二つのセリン残基および／またはトレオニン残基での、ＬＧＮ／ＧＰＳＭ２ポリペプチドまたはその機能的等価物のリン酸化レベルを検出する段階；
（ｃ）前記リン酸化レベルを、試験化合物の非存在下で検出された発現レベルまたは活性と比較する段階；ならびに
（ｄ）前記リン酸化レベルを低減する試験化合物を、がんを治療または予防するための候補化合物として選択する段階
を含む、がんを治療または予防するための候補化合物をスクリーニングする方法。
【請求項２０】
がんが乳がんである、請求項８、９、１１、１２、１３、１６、または１９のいずれか一項記載の方法。
【請求項２１】
センス鎖およびアンチセンス鎖を含む二本鎖分子であって、センス鎖がＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２０または２１からなる標的配列に対応するヌクレオチド配列を含み、かつアンチセンス鎖が該センス鎖に相補的なヌクレオチド配列を含み、かつ前記二本鎖分子が、ＬＧＮ／ＧＰＳＭ２遺伝子を発現する細胞に導入された場合に、該遺伝子の発現を阻害する、二本鎖分子。
【請求項２２】
センス鎖が標的配列の位置でアンチセンス鎖とハイブリダイズして、１９〜２５ヌクレオチド対の長さを有する二本鎖分子を形成する、請求項２１記載の二本鎖分子。
【請求項２３】
一本鎖ヌクレオチド配列を介して連結されたセンス鎖およびアンチセンス鎖を含む単一のオリゴヌクレオチドである、請求項２１記載の二本鎖分子。
【請求項２４】
ポリヌクレオチドが一般式５’−［Ａ］−［Ｂ］−［Ａ’］−３’を有し、
式中［Ａ］が、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２０または２１を含むヌクレオチド配列であり；［Ｂ］が、約３〜約２３ヌクレオチドからなるヌクレオチド配列であり；かつ［Ａ’］が［Ａ］に相補的なヌクレオチド配列である、
請求項２１記載の二本鎖分子。
【請求項２５】
センス鎖核酸およびアンチセンス鎖核酸を含むポリヌクレオチドの組み合わせの各々または両方を含むベクターであって、センス鎖核酸がＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２０または２１のヌクレオチド配列を含み、かつアンチセンス鎖が該センス鎖に相補的なヌクレオチド配列を含み、該センス鎖および該アンチセンス鎖の転写産物が互いとハイブリダイズして二本鎖分子を形成し、かつ前記ベクターが、ＬＧＮ／ＧＰＳＭ２遺伝子を発現する細胞に導入された場合に、該遺伝子の発現を阻害する、ベクター。
【請求項２６】
センス鎖核酸およびアンチセンス鎖核酸を含むポリヌクレオチドの組み合わせの各々を含むベクターであって、センス鎖核酸がＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２０または２１のヌクレオチド配列を含み、かつアンチセンス鎖核酸がセンス鎖に相補的な配列からなり、該センス鎖および該アンチセンス鎖の転写産物が互いとハイブリダイズして二本鎖分子を形成し、かつ前記ベクターが、ＬＧＮ／ＧＰＳＭ２遺伝子を発現する細胞に導入された場合に、該遺伝子の発現を阻害する、ベクター。
【請求項２７】
ポリヌクレオチドが、約１９〜２５ヌクレオチドの長さのオリゴヌクレオチドである、請求項２５または２６記載のベクター。
【請求項２８】
二本鎖分子が、一本鎖ヌクレオチド配列を介して連結されたセンス鎖およびアンチセンス鎖を含む単一のヌクレオチド転写産物である、請求項２５記載のベクター。
【請求項２９】
ポリヌクレオチドが一般式５’−［Ａ］−［Ｂ］−［Ａ’］−３’を有し、
式中［Ａ］が、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２０または２１を含むヌクレオチド配列であり；［Ｂ］が、約３〜約２３ヌクレオチドからなるヌクレオチド配列であり；かつ［Ａ’］が［Ａ］に相補的なヌクレオチド配列である、
請求項２８記載のベクター。
【請求項３０】
ＬＧＮ／ＧＰＳＭ２遺伝子に対する二本鎖分子またはそれをコードするベクターの薬学的有効量、および薬学的に許容される担体を対象に投与する段階を含む、対象においてＬＧＮ／ＧＰＳＭ２を発現しているがんを治療または予防する方法であって、前記二本鎖分子が、ＬＧＮ／ＧＰＳＭ２遺伝子の発現のみならずＬＧＮ／ＧＰＳＭ２遺伝子を発現している細胞との接触により細胞増殖も阻害する、方法。
【請求項３１】
二本鎖分子が請求項２１記載の二本鎖分子であり、かつベクターが請求項２５または２６記載のベクターである、請求項３０記載の方法。
【請求項３２】
ＬＧＮ／ＧＰＳＭ２を発現するがんが乳がんまたは肝細胞がんである、請求項３０記載の方法。
【請求項３３】
ＬＧＮ／ＧＰＳＭ２遺伝子に対する二本鎖分子またはそれをコードするベクターの薬学的有効量、および薬学的に許容される担体を含む、がんを治療または予防するための組成物であって、前記二本鎖分子が、ＬＧＮ／ＧＰＳＭ２遺伝子の発現のみならずＬＧＮ／ＧＰＳＭ２遺伝子を発現している細胞との接触により細胞増殖も阻害する、組成物。
【請求項３４】
二本鎖分子が請求項２１記載の二本鎖分子であり、かつベクターが請求項２５または２６記載のベクターである、請求項３３記載の組成物。
【請求項３５】
がんが乳がんである、請求項３３記載の組成物。
【請求項３６】
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３９のヌクレオチド配列を含む単離された核酸。

【図１】

【図２】

【図３Ａ】

【図３Ｂ】

【図３Ｃ】

【図３Ｄ】

【図３Ｅ】

【図４】

【図５】

【図６】

【図７】

【図８】

【図９Ａ】

【図９Ｂ】

【図９Ｃ】

【図９Ｄ】

【図９Ｅ】

【図９Ｆ】

【図１０】

【図１１】

【公表番号】特表２０１２−５０１１６９（Ｐ２０１２−５０１１６９Ａ）
【公表日】平成２４年１月１９日（２０１２．１．１９）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２０１１−５０９３４５（Ｐ２０１１−５０９３４５）
【出願日】平成２１年８月２１日（２００９．８．２１）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＪＰ２００９／００４０１７
【国際公開番号】ＷＯ２０１０／０２３８５４
【国際公開日】平成２２年３月４日（２０１０．３．４）
【出願人】（５０２２４０１１３）オンコセラピー・サイエンス株式会社 (142)
【Ｆターム（参考）】