アクチノマデュラ・ナミビエンシス由来の高度に架橋したペプチド
本発明は、微生物株アクチノマデュラ・ナミビエンシス（Ａｃｔｉｎｏｍａｄｕｒａ ｎａｍｉｂｉｅｎｓｉｓ）（ＤＳＭ６３１３）から得ることができる、式（Ｉ）：
【化１】
［式中、｛Ａ｝、｛Ｂ｝、｛Ｃ｝、Ｒ1−Ｒ6、ｍおよびｎは本明細書中で定義されるとおりである］のいわゆるラビリントペプチン誘導体、細菌感染、ウイルス感染および／または疼痛の治療のためのその使用、それを含む薬学的組成物、プレプロ−ラビリントペプチン、プロ−ラビリントペプチン、ならびにプレプロ−ラビリントペプチンおよびプロ−ラビリントペプチンをコードするＤＮＡに関する。
【化１】
［式中、｛Ａ｝、｛Ｂ｝、｛Ｃ｝、Ｒ1−Ｒ6、ｍおよびｎは本明細書中で定義されるとおりである］のいわゆるラビリントペプチン誘導体、細菌感染、ウイルス感染および／または疼痛の治療のためのその使用、それを含む薬学的組成物、プレプロ−ラビリントペプチン、プロ−ラビリントペプチン、ならびにプレプロ−ラビリントペプチンおよびプロ−ラビリントペプチンをコードするＤＮＡに関する。
【発明の詳細な説明】
【背景技術】
【０００１】
いくつかの高度に架橋したペプチド、例えばイモガイ（ｃｏｎｅ ｓｎａｉｌ）から単離されたコノペプチド（ｃｏｎｏｐｅｐｔｉｄｅｓ：概説については、例えば非特許文献１を参照のこと）又はグラム陽性菌源由来のいわゆるランチビオティクス（非特許文献２）が、文献において公知である。該ペプチドは様々な有用性を有する。例えば、ランチビオティックスのナイシンは、食品防腐剤として長年使用されている。
【０００２】
コノペプチドは、例えば疼痛、糖尿病、多発性硬化症及び心臓血管疾患の治療に有用であり、現在、前臨床又は臨床開発に至っている。コノペプチドの例は、α−ＧＩ（配列：ＥＣＣＮＰＡＣＧＲＨＹＳＣ*、*アミド化、連結性：１−３、２−４）及びα−ＧＩＤ（配列：ＩＲγＣＣＳＮＰＡＣＲＶＮＮＯＨＶＣ、連結性：１−３、２−４）であり、ここで、Ｏ／Ｈｙｐは、ヒドロキシプロリンであり、連結性は、各々特定のジスルフィド結合に関与するシステインの位置、例えばα−ＧＩＤにおけるように第１−第３及び第２−第４を示す：
【化１】
【０００３】
ラビリントペプチンと呼ばれる高度に架橋されたペプチドの新しいグループが近年発見された（特許文献１）。このいわゆるラビリントペプチン類は、以下の式の化合物によって示されるようにそのペプチド鎖にまたがる独特な架橋モチーフを示す：
【化２】
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００４】
【特許文献１】欧州特許出願ＥＰ０６０２０９８０．６
【非特許文献】
【０００５】
【非特許文献１】Ｔｅｒｌａｕ＆Ｏｌｉｖｅｒａ，Ｐｈｙｓｉｏｌ．Ｒｅｖ．２００４，８４，４１−６８
【非特許文献２】Ｃｈａｔｔｅｒｊｅｅ ｅｔ ａｌ．，Ｃｈｅｍ．Ｒｅｖ．２００５，１０５，６３３−６８３
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００６】
ここで、さらにラビリントペプチン類のさらに高度に架橋されたペプチドが、微生物株アクチノマデュラ・ナミビエンシス（ＤＳＭ ６３１３）から単離され得ることを発見した。これらの化合物は、特許出願ＥＰ０６０２０９８０．６に記載したラビリントペプチン誘導体とは明確に異なるものである。
【発明を実施するための形態】
【０００７】
本発明のある態様は、任意の立体化学形態にある、又は任意の立体化学形態の任意の比率の混合物である、式（Ｉ）：
【化３】
【０００８】
〔式中、
｛Ａ｝は、以下から選択される基であり；
【化４】
｛Ｂ｝は、以下から選択される基であり；
【化５】
｛Ｃ｝は、以下から選択される基であり；
【化６】
【０００９】
Ｒ1は、Ｒ1’基または以下
【化７】
［式中、Ｒ1’は、Ｈ、Ｃ（Ｏ）−（Ｃ1−Ｃ6）アルキルまたはＣ（Ｏ）−Ｏ−（Ｃ1−Ｃ6）アルキルである］の基であり；
Ｒ2は、ＯＨ、ＮＨ2、ＮＨ−（Ｃ1−Ｃ6）アルキル、ＮＨ−（Ｃ1−Ｃ4）アルキレン−フェニルまたはＮＨ−（Ｃ1−Ｃ4）アルキレン−ピリジルであり；
Ｒ3およびＲ4は、互いに独立してＨ、（Ｃ1−Ｃ6）アルキル、（Ｃ1−Ｃ6）アルキレン−Ｃ（Ｏ）ＮＨ2、（Ｃ1−Ｃ6）アルキレン−Ｃ（Ｏ）ＮＨ（Ｃ1−Ｃ4）アルキルもしくは（Ｃ1−Ｃ6）アルキレン−Ｃ（Ｏ）Ｎ［（Ｃ1−Ｃ4）アルキル］2であるか、
またはＲ3およびＲ4は、それらが結合するＳ原子と一緒になってジスルフィド基Ｓ−Ｓを形成し；
Ｒ5およびＲ6は、互いに独立してＨもしくはＯＨであるか、またはＲ5およびＲ6は一緒になって＝Ｏであり；
ｍおよびｎは、互いに独立して０、１または２である；
ただし、
【００１０】
｛Ａ｝が
【化８】
｛Ｂ｝が
【化９】
で、かつ
｛Ｃ｝が
【化１０】
である場合は、
Ｒ3およびＲ4は、それらが結合するＳ原子と一緒になってジスルフィド基Ｓ−Ｓを形成しない〕
の化合物、またはその生理学的に許容される塩である。
【００１１】
好ましくは、
｛Ａ｝は、
【化１１】
｛Ｂ｝は、
【化１２】
｛Ｃ｝は、
【化１３】
である。
【００１２】
さらに好ましくは、
｛Ａ｝は、
【化１４】
｛Ｂ｝は、
【化１５】
｛Ｃ｝は、
【化１６】
であり、そして
Ｒ1は好ましくはＲ1’基である。
【００１３】
Ｒ1’は、好ましくはＨである。
【００１４】
Ｒ2は、好ましくはＯＨである。
【００１５】
Ｒ3およびＲ4は、好ましくは互いに独立してＨ、（Ｃ1−Ｃ6）アルキル、（Ｃ1−Ｃ6）アルキレン−Ｃ（Ｏ）ＮＨ2であるか、またはそれらが結合するＳ原子と一緒になってジスルフィド基Ｓ−Ｓを形成する。より好ましくは、Ｒ3およびＲ4がＨであるか、またはそれらが結合するＳ原子と一緒になってジスルフィド基Ｓ−Ｓを形成する。最も好ましくはＲ3およびＲ4が、それらが結合するＳ原子と一緒になってジスルフィド基Ｓ−Ｓを形成する。
【００１６】
Ｒ5およびＲ6は、好ましくはＨまたはＯＨであり、Ｒ5がＯＨである場合はＲ6がＨであり、およびＲ5がＨである場合はＲ6がＯＨであるか、またはＲ5およびＲ6が一緒になって＝Ｏである。より好ましくは、Ｒ5がＯＨでありＲ6がＨであるか、またはＲ5がＨでありＲ6がＯＨである。
【００１７】
好ましくは、化合物（Ｉ）は、以下の式（ＩＩ）：
【化１７】
〔式中、
Ｒ1はＲ1’または以下：
【化１８】
［式中、Ｒ1’はＨ、Ｃ（Ｏ）−（Ｃ1−Ｃ6）アルキルまたはＣ（Ｏ）−Ｏ−（Ｃ1−Ｃ6）アルキル、好ましくはＨである］の基である〕
を特徴とする。
【００１８】
さらに好ましくは、化合物（Ｉ）は、以下の式（ＩＩＩ）：
【化１９】
〔式中、
Ｒ1は、Ｒ1’または以下：
【化２０】
［式中、
Ｒ1’はＨ、Ｃ（Ｏ）−（Ｃ1−Ｃ6）アルキルまたはＣ（Ｏ）−Ｏ−（Ｃ1−Ｃ6）アルキル、好ましくはＨである］の基であり；
Ｒ2はＯＨ、ＮＨ2、ＮＨ−（Ｃ1−Ｃ6）−アルキル、Ｎ［（Ｃ1−Ｃ6）−アルキル］2、ＮＨ−（Ｃ1−Ｃ4）−アルキレン−フェニルまたはＮＨ（Ｃ1−Ｃ4）−アルキレン−ピリジル、好ましくはＲ2はＨであり；そして
Ｒ3およびＲ4は互いに独立してＨ、（Ｃ1−Ｃ6）アルキルまたは（Ｃ1−Ｃ4）−アルキレン−Ｃ（Ｏ）ＮＨ2である〕
を特徴とする。
【００１９】
Ｒ1がＲ1’である式（ＩＩ）および（ＩＩＩ）の化合物は、後にラビリントペプチンＡ１と名付けた。
【００２０】
Ｒ1が以下の基：
【化２１】
である式（ＩＩ）および（ＩＩＩ）の化合物は、後にラビリントペプチンＡ３と名付けた。
【００２１】
さらに好ましくは、化合物（Ｉ）は、以下の式（ＩＶ）：
【化２２】
〔式中、
Ｒ1はＨ、Ｃ（Ｏ）−（Ｃ1−Ｃ6）アルキルまたはＣ（Ｏ）−Ｏ−（Ｃ1−Ｃ6）アルキルであり、
Ｒ2はＯＨ、ＮＨ2、ＮＨ−（Ｃ1−Ｃ6）−アルキル、Ｎ［（Ｃ1−Ｃ6）−アルキル］2、ＮＨ−（Ｃ1−Ｃ4）−アルキレン−フェニルまたはＮＨ（Ｃ1−Ｃ4）−アルキレン−ピリジルであり、そして
Ｒ3およびＲ4は互いに独立してＨ、（Ｃ1−Ｃ6）アルキルまたは（Ｃ1−Ｃ4）−アルキレン−Ｃ（Ｏ）ＮＨ2である〕
を特徴とする。
【００２２】
この式（ＩＶ）の化合物は、ラビリントペプチンＡ２と名付けた。
【００２３】
好ましくは、この式（Ｉ）の化合物は、ｍおよびｎが０であるか、またはｍおよびｎが２であるか、またはｍが０でありかつｎが２であるか、またはｍが２でありかつｎが０である。最も好ましくは、ｍおよびｎが０である。
【００２４】
本発明は、さらに、本発明に従う式（Ｉ）の化合物の全ての自明な化学的均等物に関する。これらの均等物は、ほんの僅かな化学的差異を示しかつ同一の薬理学的効果を有する化合物、又は穏やかな条件下で本発明に従う化合物へ変換される化合物である。前記均等物はまた、例えば式（Ｉ）の化合物の塩、還元生成物、酸化生成物、部分加水分解処理エステル、エーテル、アセタール又はアミド、並びに当業者が標準的な方法を使用して製造し得る均等物、並びにこれに加えて、全ての光学的対掌体及びジアステレオマー及び全ての立体異性形態を含む。
【００２５】
特に記載しない限り、式（Ｉ）の化合物のキラル中心は、Ｒ立体配置又はＳ立体配置で存在し得る。本発明は、光学的に純粋な化合物、並びに立体異性体混合物（例えばエナンチオマー混合物及びジアステレオマー混合物）の両方に関する。
【００２６】
式（Ｉ）の化合物の生理学的に許容される塩は、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ（１７ｔｈ ｅｄｉｔｉｏｎ，ｐａｇｅ １４１８（１９８５））に記載されるように、それらの有機塩及びそれらの無機塩の両方であると理解される。それらの物理的及び化学的安定性並びにそれらの溶解性のために、ナトリウム、カリウム、カルシウム及びアンモニウム塩が、特に酸性基について好ましく；塩酸、硫酸若しくはリン酸、又はカルボン酸若しくはスルホン酸、例えば酢酸、クエン酸、安息香酸、マレイン酸、フマル酸、酒石酸及びｐ−トルエンスルホン酸の塩が、特に塩基性基について好ましい。
【００２７】
より好ましくは、式（Ｉ）〜（ＩＶ）の化合物は、式（Ｖ）
【化２３】
の化合物について示される立体化学を特徴とする、すなわち式（Ｉ）［式中、
｛Ａ｝が、
【化２４】
｛Ｂ｝が、
【化２５】
および
｛Ｃ｝が、
【化２６】
Ｒ1は、
【化２７】
（式中、Ｒ1’はＨである）の基であり、
Ｒ2はＯＨであり；
Ｒ3およびＲ4は、それらが結合するＳ原子と一緒になってジスルフィド基Ｓ−Ｓを形成し；
Ｒ5はＨであり；
Ｒ6はＯＨであり；かつ
ｍおよびｎは０である］
の化合物であり：
【００２８】
最も好ましくは、式（ＶＩ）
【化２８】
に記載されるとおりである。
【００２９】
本発明のさらなる態様は、式（ＶＩＩ）：
【化２９】
【００３０】
好ましくは式（ＶＩＩＩ）：
【化３０】
を特徴とする式（Ｉ）の化合物であって、式（Ｖ）および（ＶＩ）は、ラビリントペプチンＡ３と呼び、式（ＶＩＩ）および（ＶＩＩＩ）をラビリントペプチンＡ１と呼ぶ。
【００３１】
本発明の化合物のさらなるキャラクタライゼーションのために、ペプチド残基を、リボソームペプチド合成由来のそれらの可能性の高い前駆体へ変換し戻した。残基４及び１３におけるα，α二置換アミノ酸は、文献に先行記載されていない。前記アミノ酸は、式（ＩＩ）および（ＩＩＩ）の化合物について下記に示すように、β位でヒドロキシル基が置換されたＳｅｒ残基として記載され得る：
【化３１】
【００３２】
前出のラビリントペプチンＡ２に関する欧州特許出願（ＥＰ０６０２０９８０．６）において、以下のリボソーム前駆体は、生合成における知識がないと想定された：
【化３２】
【００３３】
ラビリントペプチン（以下を参照）の生合成における新しい見識に基づいて、式（ＩＶ）の化合物の生合成前駆体は、以下のとおりに記載される：
【化３３】
【００３４】
本発明はまた、請求項１に記載の式（Ｉ）の化合物の製造方法であって、
ａ）培地において、アクチノマデュラ・ナミビエンシス株（ＤＳＭ ６３１３）、又はその変異体及び／若しくは突然変異体の１つを、適した条件下、式（Ｉ）の化合物の１つ又はそれ以上が培地に生じるまで、発酵させること、
ｂ）式（Ｉ）の化合物を培地から単離すること、並びに
ｃ）必要に応じて、工程ｂ）で単離された化合物を誘導体化し、および／または必要に応じて、工程ｂ）で単離された化合物もしくは工程ｂ）で単離された化合物の誘導体を生理学的に許容される塩へ変換すること
を含む方法に関する。
【００３５】
好ましくは、工程ｂ）において単離された化合物は、
ｍおよびｎが０であり、
Ｒ1はＲ1’または以下：
【化３４】
（式中、Ｒ1’はＨである）の基であり、
Ｒ2がＯＨである、式（ＩＩ）
を特徴とする。
【００３６】
さらに好ましくは、工程ｂ）において単離された化合物は、その後工程ｃ）において式（ＩＶ）：
〔式中、
ｍおよびｎが両方とも０であり、
Ｒ1はＨであり、
Ｒ2はＯＨであり、かつ
Ｒ3およびＲ4は、互いに独立してＨ、（Ｃ1−Ｃ6）アルキル、（Ｃ1−Ｃ6）アルキレン−Ｃ（Ｏ）ＮＨ2、（Ｃ1−Ｃ6）アルキレン−Ｃ（Ｏ）ＮＨ（Ｃ1−Ｃ4）アルキルまたは（Ｃ1−Ｃ6）アルキレン−Ｃ（Ｏ）Ｎ［（Ｃ1−Ｃ4）アルキル］2である〕の化合物に誘導体化される、ラビリントペプチンＡ２である。
【００３７】
培地は、少なくとも１つの通常の炭素源及び少なくとも１つの窒素源並びに１又はそれ以上の通常の無機塩を含有する栄養溶液又は固形培地である。
【００３８】
本発明の方法は、実験室規模（ミリリットル〜リットル規模）での発酵及び工業規模（立方メートル規模）での発酵に使用され得る。
【００３９】
発酵のための好適な炭素源は、同化可能な炭水化物及び糖アルコール、例えばグルコース、ラクトース、スクロース又はＤ−マンニトール、並びに炭水化物含有天然物、例えば麦芽エキス又は酵母エキスである。窒素含有栄養素の例は、アミノ酸；ペプチド及びタンパク質並びにまたそれらの分解産物、例えばカゼイン、ペプトン又はトリプトン；肉エキス；酵母エキス；グルテン；例えばトウモロコシ、小麦、豆、大豆又はワタ由来の、粉砕した種子；製造アルコールからの蒸留残滓；肉粉；酵母エキス；アンモニウム塩；ニトレートである。好ましくは、窒素源は、合成的に又は生合成的に得られている１つ又はそれ以上のペプチドである。無機塩の例は、アルカリ金属、アルカリ土類金属、鉄、亜鉛、コバルト及びマンガンの、塩化物、炭酸塩、硫酸塩又はリン酸塩である。微量元素の例は、コバルト及びマンガンである。
【００４０】
本発明のラビリントペプチンを形成するために特に好適である条件は、以下の通りである：０．０５〜５％、好ましくは０．１〜２．５％、酵母エキス；０．２〜５．０％、好ましくは０．１〜２％、カジトン（ｃａｓｉｔｏｎｅ）；０．０２〜１．０％、好ましくは０．０５〜０．５％、ＣａＣｌ2×２Ｈ2Ｏ；０．０２〜１．５％、好ましくは０．０５〜０．７％、ＭｇＳＯ4×７Ｈ2Ｏ、及び０．００００１％〜０．００１％シアノコバラミン。与えられるパーセンテージ値は、各場合において、栄養溶液全体の質量に基づく。
【００４１】
前記微生物を、好気的に、即ち例えば必要に応じて空気又は酸素を通気させながら、振盪又は撹拌しながら振盪フラスコ又は発酵槽の液中、又は固形培地上において、培養する。微生物は、約１８〜３５℃、好ましくは約２０〜３２℃、特に２７〜３０℃の温度範囲で培養し得る。ｐＨ範囲は、４〜１０、好ましくは６．５〜７．５とした方が良い。微生物を、一般的に、これらの条件下で、２〜１０日間、好ましくは７２〜１６８時間、培養する。有利には、数工程で微生物を培養する。即ち、最初に１つ又はそれ以上の予備培養物を液体栄養培地に調製し、次いでこれらの予備培養物を例えば１：１０〜１：１００の体積比で、実際の生産培地（即ち本培養）に接種する。予備培養物は、例えば前記株を栄養細胞又は胞子の形態で栄養溶液中に接種し、そしてそれを約２０〜１２０時間、好ましくは４８〜９６時間増殖させることによって得られる。栄養細胞及び／又は胞子は、例えば前記株を約１〜１５日間、好ましくは４〜１０日間、固形又は液体栄養培地、例えば酵母寒天上において増殖させることによって、得ることができる。
【００４２】
ラビリントペプチン誘導体は、公知の方法を使用し、かつ、該天然物質の化学的、物理的及び生物学的特性を考慮して、培養培地から単離しそして精製し得る。培地における又は個々の単離工程におけるそれぞれのラビリントペプチン誘導体の濃度を試験するためにＨＰＬＣを使用し、形成された物質の量を較正溶液と便宜的に比較した。
【００４３】
単離のために、培養ブロス、又は固形培地と一緒の培養物を、場合により凍結乾燥し、そして有機溶媒、又は好ましくは有機溶媒を５０〜９０％含有する水と有機溶媒との混合液を使用して、ラビリントペプチン誘導体を凍結乾燥物から抽出する。有機溶媒の例は、メタノール及び２−プロパノールである。有機溶媒相は、本発明に従う天然物質を含有し；それは、必要に応じて真空で濃縮され、そしてさらなる精製に供される。
【００４４】
本発明の１つ又はそれ以上の化合物のさらなる精製は、好適な材料、好ましくは例えばモレキュラーシーブ、シリカゲル、酸化アルミニウム、イオン交換体又は吸着樹脂又は逆相（ＲＰ）の、クロマトグラフィーによって行われる。このクロマトグラフィーは、ラビリントペプチン誘導体を分離するために使用される。ラビリントペプチン誘導体は、緩衝化された、塩基性又は酸性の水溶液又は水溶液と有機溶液との混合液を使用して、クロマトグラフィーに供される。
【００４５】
水溶液又は有機溶液の混合液は、５〜９９％有機溶媒、好ましくは５〜５０％有機溶媒の濃度での、全ての水混和性有機溶媒、好ましくはメタノール、２−プロパノール若しくはアセトニトリル、又は有機溶媒と混和性である全ての緩衝化された水溶液であると理解される。使用される緩衝剤は、上記で挙げたものと同一である。
【００４６】
ラビリントペプチン誘導体は、それらの異なる極性に基づいて、例えばＭＣＩ（吸着樹脂、三菱、日本）若しくはＡｍｂｅｒｌｉｔｅ ＸＡＤ（ＴＯＳＯＨＡＡＳ）の、又は他の疎水性材料、例えばＲＰ−８若しくはＲＰ−１８相の、逆相クロマトグラフィーによって分離される。さらに、分離は、例えばシリカゲル、酸化アルミニウムなどの、順相クロマトグラフィーによって行われ得る。
【００４７】
緩衝化された、塩基性又は酸性水溶液は、例えば０．５Ｍまでの濃度での水、リン酸緩衝液、酢酸アンモニウム及びクエン酸緩衝液、並びに好ましくは１％までの濃度での、ギ酸、酢酸、トリフルオロ酢酸、アンモニア及びトリエチルアミン、又は当業者に公知の全ての市販の酸及び塩基であると理解される。緩衝水溶液の場合、０．１％酢酸アンモニウムが、特に好ましい。
【００４８】
クロマトグラフィーは、１００％水から開始しそして１００％有機溶媒で終了する勾配を使用して行うことができ；クロマトグラフィーは、好ましくは５から９５％へのアセトニトリルの線形勾配で行った。
【００４９】
あるいは、疎水性相のクロマトグラフィー又はゲルクロマトグラフィーを行うことも可能である。ゲルクロマトグラフィーは、例えばポリアクリルアミドゲル又はコポリマーゲルで行なうことができる。上述のクロマトグラフィー工程の順序は、逆にされ得る。
【００５０】
ラビリントペプチンが立体異性体として存在する場合、それらは、公知の方法を使用して、例えばキラルカラムを使用する分離によって、分離され得る。
【００５１】
ＯＨ基のエステル又はエーテル誘導体への誘導体化は、自体公知の方法（Ｊ．Ｍａｒｃｈ，Ａｄｖａｎｃｅｄ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ，４ｔｈ ｅｄｉｔｉｏｎ，１９９２）を使用して、例えば酸無水物との反応、又は炭酸ジアルキル若しくは硫酸ジアルキルとの反応によって、行われる。ＣＯＯＨ基のエステル又はアミド誘導体への誘導体化は、自体公知の方法（Ｊ．Ｍａｒｃｈ，Ａｄｖａｎｃｅｄ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ，４ｔｈ ｅｄｉｔｉｏｎ，１９９２）を使用して、例えばアンモニアとのそれぞれのＣＯＮＨ2基への反応、又は場合により活性化されたアルキル化合物とのそれぞれのアルキルエステルへの反応によって、行われる。−ＣＨ2−Ｓ−ＣＨ2−基の−ＣＨ2−Ｓ（Ｏ）−ＣＨ2−又は−ＣＨ2−Ｓ（Ｏ）2−ＣＨ2−基への酸化は、それぞれのラビリントペプチン誘導体を酸素又は空気へ曝露することで達成され得る。ジスルフィドの還元（必要に応じて引き続くＳＨ基のアルキル化）は、それ自体公知の方法（Ａ．Ｈｅｎｓｃｈｅｎ，Ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ｃｙｓｔ（ｅ）ｉｎｅ ｒｅｓｉｄｕｅｓ，ｄｉｓｕｌｆｉｄｅ ｂｒｉｄｇｅｓ，ａｎｄ ｓｕｌｆｈｙｄｒｙｌ ｇｒｏｕｐｓ ｉｎ ｐｒｏｔｅｉｎｓ：Ｂ．Ｗｉｔｔｍａｎｎ−Ｌｉｅｂｏｌｄ，Ｊ．Ｓａｌｎｉｋｏｖ，Ｖ．Ａ．Ｅｒｄｍａｎ（Ｅｄｓ．），Ａｄｖａｎｃｅｄ Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｍｉｃｒｏｓｅｑｕｅｎｃｅ Ａｎａｌｙｓｉｓ，Ｓｐｒｉｎｇｅｒ，Ｂｅｒｌｉｎ，１９８６，ｐｐ．２４４−２５５）を用いて、例えば、ジチオスレイトール還元法、およびヨウ化アルキルを用いるアルキル化によって実施される。Ｒ3およびＲ4がＨ、（Ｃ1−Ｃ6）アルキル、（Ｃ1−Ｃ6）アルキレン−Ｃ（Ｏ）ＮＨ2、（Ｃ1−Ｃ6）アルキレン−Ｃ（Ｏ）ＮＨ（Ｃ1−Ｃ4）アルキルまたは（Ｃ1−Ｃ6）アルキレン−Ｃ（Ｏ）Ｎ［（Ｃ1−Ｃ4）アルキル］2である式（Ｉ）の化合物へのスルフィド還元は、Ｒ3およびＲ4が、それらが結合するＳ原子と一緒になってジスルフィド基Ｓ−Ｓを形成している式（Ｉ）の化合物と、（Ｃ1−Ｃ6）アルキル−ハロゲン化物またはハロゲン−（Ｃ1−Ｃ6）アルキレン−Ｃ（Ｏ）ＮＨ2、ハロゲン−（Ｃ1−Ｃ6）アルキレン−Ｃ（Ｏ）ＮＨ（Ｃ1−Ｃ4）アルキルまたはハロゲン−（Ｃ1−Ｃ6）アルキレン−Ｃ（Ｏ）Ｎ［（Ｃ1−Ｃ4）アルキル］2とを、ジチオスレイトールの存在下で反応させることによって達成され得る（一般的な文献）。ハロゲンとは、Ｆ、Ｃｌ、ＢｒまたはＩである。
【００５２】
微生物株アクチノマデュラ・ナミビエンシスの分離株は、番号：ＤＳＭ ６３１３で、１９９１年１月２３日に、ブダペスト条約の規則に従って、Ｄｅｕｔｓｃｈｅ Ｓａｍｍｌｕｎｇ ｖｏｎ Ｍｉｋｒｏｏｒｇａｎｉｓｍｅｎ ｕｎｄ Ｚｅｌｌｋｕｌｔｕｒｅｎ［Ｇｅｒｍａｎ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ ｏｆ Ｍｉｃｒｏｏｒｇａｎｉｓｍｓ ａｎｄ Ｃｅｌｌ Ｃｕｌｔｕｒｅｓ］ＧｍｂＨ（ＤＳＭＺ），Ｍａｓｃｈｅｒｏｄｅｒ Ｗｅｇ １Ｂ，３８１２４ Ｂｒａｕｎｓｃｈｗｅｉｇ，Ｇｅｒｍａｎｙに識別リファレンスＦＨ−Ａ １１９８でＨｏｅｓｔ ＡＧ，Ｆｒａｎｋｆｕｒｔ，Ｇｅｒｍａｎｙによって寄託された。微生物株アクチノマデュラ・ナミビエンシスは、Ｗｉｎｋ ｅｔ ａｌ．，Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｓｙｓｔｅｍａｔｉｃ ａｎｄ Ｅｖｏｌｕｔｉｏｎａｒｙ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ ２００３，５３，７２１−７２４にさらに記載されている。
【００５３】
アクチノマデュラ・ナミビエンシス株（ＤＳＭ ６３１３）の代わりに、本発明の１つ又はそれ以上の化合物を合成するその突然変異体及び／又は変異体を使用することも可能である。
【００５４】
突然変異体は、本発明化合物を産生する前記生物の能力の原因である遺伝子は機能性かつ遺伝性のまま、ゲノム中の１つ又はそれ以上の遺伝子で修飾されている微生物である。
【００５５】
このような突然変異体は、物理的手段、例えば紫外線若しくはＸ線での照射、又は化学的突然変異原、例えばメタンスルホン酸エチル（ＥＭＳ）；２−ヒドロキシ−４−メトキシベンゾフェノン（ＭＯＢ）若しくはＮ−メチル−Ｎ’−ニトロ−Ｎ−ニトロソグアニジン（ＭＮＮＧ）を使用して、自体公知の様式で、又はＢｒｏｃｋ ｅｔ ａｌ．，“Ｂｉｏｌｏｇｙ ｏｆ Ｍｉｃｒｏｏｒｇａｎｉｓｍｓ”，Ｐｒｅｎｔｉｃｅ Ｈａｌｌ，ｐａｇｅｓ ２３８−２４７（１９８４）に記載されるように、生産することができる。
【００５６】
変異体は、前記微生物の表現型である。微生物は、それらの環境に適応する能力を有し、従って高度に発達した生理学的適応性を示す。微生物の全ての細胞は、表現型適応に関与し、変化の性質は、遺伝的に条件付けされず、変更された条件下で可逆性である（Ｈ．Ｓｔｏｌｐ，Ｍｉｃｒｏｂｉａｌ ｅｃｏｌｏｇｙ：ｏｒｇａｎｉｓｍ，ｈａｂｉｔａｔｓ，ａｃｔｉｖｉｔｉｅｓ．Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｐｒｅｓｓ，Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ，ＧＢ，ｐａｇｅ １８０，１９８８）。
【００５７】
本発明の１つ又はそれ以上の化合物を合成する突然変異体及び／又は変異体のスクリーニングは、場合により発酵培地を凍結乾燥し、そして凍結乾燥物又は発酵ブロスを上述の有機溶媒又は水と有機溶媒との混合液で抽出し、そしてＨＰＬＣ若しくはＴＬＣにより分析することにより、又は生物学的活性を試験することにより、達成される。
【００５８】
前記発酵条件は、アクチノマデュラ・ナミビエンシス（ＤＳＭ ６３１３）並びにその突然変異体及び／又は変異体に適用され得る。
【００５９】
本発明のさらなる態様は、細菌感染、特にグラム陽性菌によって引き起こされる細菌感染の治療、ウイルス感染の治療及び／又は疼痛、特に神経因性疼痛若しくは炎症誘発疼痛の治療のための、上述の、式（Ｉ）の化合物の使用である。
【００６０】
上述の薬剤（薬剤又は薬学的組成物ともいう）は、上述の、任意の立体化学形態、又は任意の比率の任意の立体化学形態の混合物の、有効量の少なくとも１つの式（Ｉ）の化合物、又はそれらの生理学的に許容される塩若しくは化学的均等物と、少なくとも１つの薬学的に許容される担体、好ましくは１つ又はそれ以上の薬学的に許容される担体物質（又はビヒクル）及び／又は添加物（又は添加剤）とを含有する。
【００６１】
薬剤は、例えば丸剤、錠剤、ラッカー錠剤（ｌａｃｑｕｅｒｅｄ ｔａｂｌｅｔ）、コーティング錠剤、顆粒剤、ゼラチン硬及び軟カプセル剤、液剤、シロップ剤、乳剤、懸濁剤又はエアゾール混合物の形態で、経口投与され得る。しかし、投与はまた、例えば坐剤の形態で、直腸投与で、又は非経口的に、例えば注射用液剤若しくは注入液剤、マイクロカプセル剤、インプラント剤若しくはロッド剤（ｒｏｄｓ）の形態で、静脈内に、筋肉内に若しくは皮下に、又は例えば軟膏剤、液剤若しくはチンキ剤の形態で、経皮的に若しくは局所的に、又は例えばエアゾール剤若しくは鼻スプレー剤の形態で、他の様式で、行われ得る。
【００６２】
本発明の薬剤は、自体公知でかつ当業者によく知られている様式で調製され、薬学的に許容される不活性無機及び／又は有機担体物質及び／又は添加物が、上述の、任意の立体化学形態、又は任意の比率の任意の立体化学形態の混合物の、式（Ｉ）の化合物、又はそれらの生理学的に許容される塩若しくは化学的均等物に加えて使用される。丸剤、錠剤、コーティング錠剤及びゼラチン硬カプセル剤の作製には、例えば、ラクトース、トウモロコシデンプン又はその誘導体、タルク、ステアリン酸又はその塩などを使用することが可能である。ゼラチン軟カプセル剤及び坐剤用の担体物質は、例えば、脂肪、ワックス、半固体及び液体ポリオール、天然又は硬化油などである。液剤（例えば、注射用液剤）又は乳剤若しくはシロップ剤の作製用の好適な担体物質は、例えば、水、生理食塩水、アルコール、グリセリン、ポリオール、スクロース、転化糖、グルコース、植物油などである。マイクロカプセル剤、インプラント剤又はロッド剤用の好適な担体物質は、例えばグリコール酸と乳酸とのコポリマーである。製剤は、通常、式（Ｉ）の化合物及び／又はそれらの生理学的に許容される塩及び／又はそれらのプロドラッグを約０．５〜約９０質量％含有する。薬剤中における、上述の、任意の立体化学形態、又は任意の比率の任意の立体化学形態の混合物の、式（Ｉ）の有効成分、又はそれらの生理学的に許容される塩若しくは化学的均等物の量は、通常、約０．５〜約１０００ｍｇ、好ましくは約１〜約５００ｍｇである。
【００６３】
上述の、任意の立体化学形態、又は任意の比率の任意の立体化学形態の混合物の、式（Ｉ）の有効成分、又はそれらの生理学的に許容される塩若しくは化学的均等物、並びに担体物質に加えて、製剤は、１つ又はそれ以上の添加物、例えば賦形剤、崩壊剤、結合剤、滑沢剤、湿潤剤、安定剤、乳化剤、保存剤、甘味剤、着色剤、着香剤、芳香剤、増粘剤、希釈剤、緩衝剤物質、溶剤、可溶化剤、デポー効果を達成するための薬剤、浸透圧を変化させるための塩、コーティング剤又は抗酸化剤を含有し得る。それらはまた、任意の立体化学形態、又は任意の比率の任意の立体化学形態の混合物の、２つ若しくはそれ以上の式（Ｉ）の化合物、又はそれらの生理学的に許容される塩若しくは化学的均等物を含有し得る。製剤が式（Ｉ）の化合物を２つ又はそれ以上含有する場合、個々の化合物の選択は、製剤の特定の全体的な薬理学的プロフィールを目標とし得る。例えば、短い作用持続期間を有する非常に強力な化合物は、より低い効力の長く作用する化合物と組み合わせられ得る。式（Ｉ）の化合物中における置換基の選択に関して許されるフレキシビリティーのために、化合物の生物学的及び物理化学的特性の多くの制御が可能となり、従って、このような所望の化合物の選択が可能となる。さらに、少なくとも１つの式（Ｉ）の化合物に加えて、製剤はまた、１つ又はそれ以上の他の治療的又は予防的有効成分を含有し得る。
【００６４】
式（Ｉ）の化合物を使用する場合、用量は、広い限度範囲内で変動し得、通例でありかつ医師に公知であるように、各個体の症例における個体の状態に適合すべきである。それは、例えば使用される特定の化合物、治療しようとする疾患の性質及び重症度、投与の様式及びスケジュール、又は急性若しくは慢性の状態を治療するかどうか、又は予防を行なうのかどうかに依存する。好適な用量は、医学の分野においてよく知られた臨床的アプローチを使用して確立し得る。一般的に、体重約７５ｋｇの成人において所望の結果を達成するための一日用量は、約０．０１〜約１００ｍｇ／ｋｇ、好ましくは約０．１〜約５０ｍｇ／ｋｇ、特に約０．１〜約１０ｍｇ／ｋｇ（各場合において、体重１ｋｇ当たりのｍｇ）である。一日用量は、特に比較的多量の投与の場合に、いくつかの、例えば２、３又は４つの部分の投与へ分割し得る。通常であるように、個体の反応に依存して、示した一日用量から上方又は下方へ外す必要があり得る。
【実施例】
【００６５】
実施例１：アクチノマデュラ・ナミビエンシス（ＤＳＭ ６３１３）のクライオ培養物（ｃｒｙｏｃｕｌｔｕｒｅ）の調製
滅菌５００ｍｌ エルレンマイヤーフラスコ中培地１００ｍｌ（デンプン１０ｇ、酵母エキス２ｇ、グルコース１０ｇ、グリセリン１０ｇ、コーンスティープ粉末２．５ｇ、ペプトン２ｇ、ＮａＣｌ １ｇ、水道水１ｌ中ＣａＣＯ3３ｇ、滅菌前ｐＨ７．２）に、アクチノマデュラ・ナミビエンシス株（ＤＳＭ ６３１３）を播種し、そして振盪器において１２０ｒｐｍで２７℃にて７２時間インキュベートした。引き続いて、培養物１ｍｌ及び滅菌保存溶液１ｍｌ（グリセリン２０ｇ、サッカロース１０ｇ、脱イオン水７０ｍｌ）を混合し、そして−８０℃で保存した。代替として、寒天上の十分に増殖させた培養物の小片を、５０％滅菌グリセリン溶液１．５ｍｌを含むＣｒｙｏｔｕｂｅｓ（登録商標）（Ｖａｎｇａｒｄ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ）に移し、そして液体窒素で−１９６℃で保存した。
【００６６】
実施例２：ラビリントペプチンの調製
実施例１に記載の培地１００ｍｌを含有する滅菌５００ｍｌ エルレンマイヤーフラスコに、寒天プレート上で増殖させたアクチノマデュラ・ナミビエンシス（ＤＳＭ ６３１３）の培養物を播種し、そして振盪器において１２０ｒｐｍで２７℃にてインキュベートした。７２時間後、同一量の同一培地を含有するさらなるエルレンマイヤーフラスコに、各々、この前培養物２ｍｌを播種し、そして同一条件下で１６８時間インキュベートした。代替として、実施例１に記載の培地１００ｍｌを含有する３００ｍｌ エルレンマイヤーフラスコに、アクチノマデュラ・ナミビエンシス（ＤＳＭ ６３１３）の培養物を播種し、そして１８０ｒｐｍで２５℃にてインキュベートした。７２時間後、同一量の同一培地を含有するさらなるエルレンマイヤーフラスコに、各々、この前培養物５ｍｌを播種し、そして同一条件下で１６８時間インキュベートした。
【００６７】
実施例３：ラビリントペプチンの固相抽出
４０Ｌのアクチノマデュラ・ナミビエンシス（ＤＳＭ６３１３）の発酵が完了した後、その培養ブロスを濾過した。培養濾過液（約３０Ｌ）を約３ＬのＣＨＰ−２０Ｐ物質を充填したカラム（寸法：１６０×２００ｍｍ）にローディングした。化合物を、５％〜９５％へのイソプロパノール水溶液の勾配を使用して２５０ｍｌ／分の流量で溶離した。フラクションを４５分間にわたり４分ごとに集めた。ラビリントペプチン含有フラクションをプールし、凍結乾燥した（フラクション８：ＭＷ＝２１９０Ｄａ；フラクション９：ＭＷ＝２１９０および２０７４Ｄａ；フラクション１０−１２：ＭＷ＝２０７４Ｄａ）。
【００６８】
実施例４：ＲＰ−１８クロマトグラフィーを用いたラビリントペプチンＡ１の前精製
実施例３からのフラクション１０−１２（６７０ｍｇ）を５００ｍｌのメタノールに溶解し、Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｌｕｎａ（登録商標）１０μ Ｃ１８（２）プレカラム（寸法２１．２ｍｍ×６０ｍｍ）を備えるＰｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｌｕｎａ（登録商標）１０μ Ｃ１８（２）カラム（寸法５０ｍｍ×２５０ｍｍ）にローディングした。化合物を、１９０ｍｌ／分の流量で４０分間かけて５％から７５％へのアセトニトリル水溶液の勾配で溶離した（緩衝液：０．１％酢酸アンモニウム、ｐＨ９．０、３０％のアンモニア水溶液を用いて調整）。フラクションを１分ごとに集めた。フラクション２１−２２は、所望のラビリントペプチン（ＭＷ＝２０７４Ｄａ）を含有していた。凍結乾燥後、３２２ｍｇの粗生産物を得た。
【００６９】
実施例５：ラビリントペプチンＡ１の最終精製
実施例４からのフラクション２１−２２（６０ｍｇ）を５０ｍｌのメタノールに溶解し、Ｗａｔｅｒｓ ＸＴｅｒｒａ（登録商標） Ｐｒｅｐ ＭＳ Ｃ１８ １０μプレカラム（寸法１９×１０ｍｍ）を備えるＰｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｌｕｎａ（登録商標）５μ Ｃ１８（２）Ａｘｉａカラム（寸法３０ｍｍ×１００ｍｍ）にローディングした。化合物を、７０ｍｌ／分の流量で４０分間かけて５％から７５％へのアセトニトリル水溶液の勾配で溶離した（緩衝液：０．１％酢酸アンモニウム、ｐＨ４．６、酢酸水溶液を使用して調整）。溶離物をＵＶトリガリングを使用して１０ｍｌのフラクションに集めた。ラビリントペプチン含有フラクション（フラクション９−１２）をプールした。凍結乾燥後、１７ｍｇのラビリントペプチンＡ１を得た。
【００７０】
実施例６：ＲＰ−１８クロマトグラフィーを用いたラビリントペプチンＡ３の前精製
実施例３からのフラクション８（約８５０ｍｇ）を５００ｍｌのメタノールに溶解し、Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｌｕｎａ（登録商標）１０μ Ｃ１８（２）プレカラム（寸法２１．２ｍｍ×６０ｍｍ）を備えるＰｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｌｕｎａ（登録商標）１０μ Ｃ１８（２）カラム（寸法５０ｍｍ×２５０ｍｍ）にローディングした。化合物を、１９０ｍｌ／分の流量で４０分間かけて５％から７５％へのアセトニトリル水溶液の勾配で溶離した（緩衝液：０．１％酢酸アンモニウム、ｐＨ７．０）。フラクションを１分ごとに集めた。フラクション１９は、所望のラビリントペプチン（ＭＷ＝２１９０Ｄａ）を含有していた。凍結乾燥後、４８ｇの粗生産物を得た。
【００７１】
実施例７：ラビリントペプチンＡ３の最終精製
実施例６からのフラクション１９（４８ｍｇ）を５０ｍｌのメタノールに溶解し、Ｗａｔｅｒｓ ＸＴｅｒｒａ（登録商標） Ｐｒｅｐ ＭＳ Ｃ１８ １０μプレカラム（寸法１９×１０ｍｍ）を備えるＰｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｌｕｎａ（登録商標）５μ Ｃ１８（２）Ａｘｉａカラム（寸法３０ｍｍ×１００ｍｍ）にローディングした。化合物を、７０ｍｌ／分の流量で４０分間かけて５％から７５％へのアセトニトリル水溶液の勾配で溶離した（緩衝液：０．１％酢酸アンモニウム、ｐＨ９．０、３０％のアンモニア水溶液を用いて調整）。溶離物をＵＶトリガリングを使用してフラクションに集めた。ラビリントペプチン含有フラクション（フラクション９−１２）をプールした。凍結乾燥後、１２ｍｇのラビリントペプチンＡ３を得た。
【００７２】
実施例８：ラビリントペプチンＡ１およびＡ３の、ダイオードアレイおよび質量分析検出を備えた高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ−ＤＡＤ−ＭＳ）によるキャラクタリゼーション
ラビリントペプチンＡ１およびＡ３を、Ｓａｍｐｌｅ Ｍａｎａｇｅｒ、Ｂｉｎａｒｙ Ｓｏｌｖｅｎｔ ＭａｎａｇｅｒおよびＰＤＡ（フォトダイオードアレイ検出器）を備えるＷａｔｅｒｓ Ａｃｑｕｉｔｙ ＵＰＬＣ Ｓｙｓｔｅｍで分析した。ＵＰＬＣカラムとして、Ｗａｔｅｒｓ Ａｃｑｕｉｔｙ ＵＰＬＣ ＢＥＨ Ｃ１８（１．７μ；２．１×１００ｍｍ）を使用して、全ての溶媒を６．５ｍＭの酢酸アンモニウムを使用してｐＨ４．６に緩衝した水：アセトニトリル（９：１）の勾配を使用して、１５分以内に１００％アセトニトリルまで、０．６ｍｌ／分の流量で溶離した。ＵＶスペクトルを、２００〜６００ｎＭの波長でＰＤＡ検出器により記録した。質量スペクトルを、Ｂｒｕｃｋｅｒ μＴＯＦ ＬＣ ＭＳで、直交型エレクトロスプレーイオン化（ｏｒｔｈｏｇｏｎａｌ ｅｌｅｃｔｒｏｓｐｒａｙ ｉｏｎｉｓａｔｉｏｎ）、サンプリング速度０．５Ｈｚおよび検出限界１５０−１５００原子質量単位を用いて、記録した。
【００７３】
実施例９：ラビリントペプチンＡ１のキャラクタリゼーション
ラビリントペプチンＡ１は、５．４６分で溶離した（ＰＤＡ）。このＵＶスペクトルは、２１８ｎｍ（ｓｈ）および２７９ｎｍのλmaxによって特徴づけられる。
【００７４】
二重荷電分子イオンが、ネガティブモードでは、ｍ／ｚ（Ｉ）： １０３５．８７（４５３９）、１０３６．３７（５５６６）、１０３６．８７（４０８６）、１０３７．３７（２２９６）、１０３７．８７（１０３４）および１０３８．３７（２８０）で観察された。ポジティブモードにおいては、ｍ／ｚ（Ｉ）： １０３７．８８（２９２５）、１０３８．３８（３２５２）、１０３８．８８（２４９２）、１０３９．３８（１３９６）、および１０３９．８８（６２３）の二重荷電分子イオンが観察された。
【００７５】
高分解能ＥＳＩ−ＦＴＩＣＲ−質量分析器による、ラビリントペプチンＡ１のキャラクタリゼーション：メタノール中のラビリントペプチンＡ１溶液（ｃ＝０．２ｍｇ／ｍｌ）を、エレクトロスプレー源を備えたＢｒｕｋｅｒ Ａｐｅｘ ＩＩＩ ＦＴＩＣＲ ＭＳ （７Ｔ ｍａｇｎｅｔ）にシリンジポンプを通して２μｌ／分の流量で入れた。スペクトルを、外部校正を使用してポジティブモードで記録した。
【００７６】
【表１】
【００７７】
実施例１０：ラビリントペプチンＡ３のキャラクタリゼーション
ラビリントペプチンＡ３は、４．７９分で溶離した（ＰＤＡ）。このＵＶスペクトルは、２１８ｎｍ（ｓｈ）および２７４ｎｍ（ｓｈ）のλmaxによって特徴づけられる。
【００７８】
二重荷電分子イオンが、ネガティブモードでは、ｍ／ｚ （Ｉ）： １０９３．３８（１２６２）、１０９３．８８（１５８７）、１０９４．３９（１２０１）、１０９４．８９（６８６）および１０９５．３８（１９５）で観察された。ポジティブモードにおいては、ｍ／ｚ（Ｉ）： １０９５．４０（３６５）、１０９５．９１（４３３）および１０９６．４１（２９４）の二重荷電分子イオンが観察された。
【００７９】
高分解能ＥＳＩ−ＦＴＩＣＲ−質量分析器による、ラビリントペプチンＡ３のキャラクタリゼーション（実施例９に記載したとおりの方法）：
【表２】
【００８０】
実施例１１：ラビリントペプチンＡ１のアミノ酸分析
加水分解：ラビリントペプチンＡ１（０．０５ｍｇ）を、６Ｎ ＨＣｌ、５％フェノール（ｐｈｅｎｏｌｅ）で、窒素雰囲気において１１０℃で２４時間加水分解した。加水分解物を窒素流中乾燥した。
【００８１】
アキラルＧＣ−ＭＳ：前記加水分解物を、ビス−（トリメチルシリル）トリフルオロアセトアミド（ＢＳＴＦＡ）／アセトニトリル（１：１）と共に１５０℃で４時間加熱した。ＧＣ−ＭＳ実験用に、ＤＢ５溶融シリカキャピラリーを使用した（ジメチル−（５％−フェニルメチル）−ポリシロキサンでコーティングされたｌ＝１５ｍ×０．２５μｍ溶融シリカ、ｄf＝０．１０μｍ；温度プログラム：Ｔ＝６５°／３’／６／２８０℃）。
【００８２】
キラルＧＣ−ＭＳ：前記加水分解物を、エタノール中の２Ｎ ＨＣｌ ２００μｌで、１１０℃で３０分間エステル化し、そして乾燥した。引き続いて、混合物をジクロロメタン１００μｌ中のトリフルオロ酢酸無水物（ＴＦＡＡ）２５μｌで、１１０℃で１０分間アシル化し、そして乾燥した。ＧＣ−ＭＳ実験用に、溶融シリカキャピラリーを使用した（ｃｈｉｒａｓｉｌ−Ｓ−Ｖａｌ（Ｍａｃｈｅｒｙ−Ｎａｇｅｌ）でコーティングされたｌ＝２２ｍ×０．２５μｍ溶融シリカ、ｄｆ＝０．１３μｍ；温度プログラム：Ｔ＝５５°／３’／３，２／１８０℃）。
【００８３】
【表３】
【００８４】
実施例１２：ラビリントペプチンＡ１およびＡ３についての構造遺伝子の同定
微生物株アクチノマデュラ・ナミビエンシス（ＤＳＭ ６３１３）のコスミドバンクは、ｐＷＥＢ−コスミドベクター（Ｅｐｉｃｅｎｔｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｍａｄｉｓｏｎ，ＵＳＡ）をベースに、Ａｇｏｗａ ＧｍｂＨ，Ｂｅｒｌｉｎによって作製された。フィルターは、Ｚｅｈｅｔｎｅｒ ＆ Ｓｃｈaｆｅｒ，Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２００１，１７５，１６９−１８８に記載の方法を適用してＲＺＰＤ ＧｍｂＨ，Ｂｅｒｌｉｎによって調製された。
【００８５】
ラビリントペプチンＡ２の既知の構造をベースにして、伸長した変性プライマーをＮ−末端及びＣ−末端から推定した（Ｆｗ：５’−ＣＡＧＧＡＡＡＣＡＧＣＴＡＴＧＡＣＣＧＡＹＴＧＧＷＳＮＹＴＮＴＧＧＧ−３’（配列番号４）；Ｒｅｖ：５’−ＴＧＴＡＡＡＡＣＧＡＣＧＧＣＣＡＧＴＲＣＡＮＧＡＮＧＣＲＡＡＮＡＲＲＣ−３’（配列番号５）；Ｄａｂａｒｄ ｅｔ ａｌ．，Ａｐｐｌ．Ｅｎｖｉｒｏｎ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．２００１，４１１１−４１１８．）。このプライマーの５’−伸長は、よりよい検出および取り扱いのために、予想されたＰＣＲ産物のサイズを増強するためである（ＰＣＲ条件：３分 ９５℃；３０×（６０秒 ９５℃；３０秒 ５０℃；６０秒 ７２℃）７分 ７２℃；Ｔａｑ−ポリメラーゼ）。ＰＣＲ産物をゲル精製し、ベクターｐＤｒｉｖｅ（Ｑｉａｇｅｎ）中にクローニングした。配列決定により、Ａ２遺伝子の中央から、１８ヌクレオチド長の配列が得られた（ＡＧＴＧＣＴＧＴＡＧＣＡＣＧＧＧＡＡ、配列番号６）。この１８ヌクレオチド長の公知の配列をベースにして、２工程のＰＣＲによりより多くの配列情報を得た。最初の工程において、Ａ２のＣ末端の変性逆方向（ｒｅｖ）プライマー（５’−ＲＣＡＲＣＡＮＧＣＲＡＡＮＡＲＲＣＴＴＣＣ−３’、配列番号７）および非特異的順方向（ｆｗ）プライマー（５’−ＣＡＣＧＧＴＡＣＣＴＡＧＡＣＴＡＧＴＧＡＣＣＡＡＧＴＧＣＧＣＣＧＧＴＣ−３’、配列番号８）で、単一特異的プライマーＰＣＲを行った（ＰＣＲ−条件：３分 ９５℃；１０×（４５秒 ９５℃；４５秒 ３８℃；３．５分 ７２℃）；３０×（４５秒 ９５℃；４５秒 ５２℃；３．５分 ７２℃） ５分 ７２℃；Ｔａｑ−ポリメラーゼ）。プライマーを消化するためのエキソヌクレアーゼＩ消化（５μｌ ＰＣＲ−サンプル＋０．５μｌ エキソヌクレアーゼ−Ｉ（２０Ｕ／μｌ）；１５分 ３７℃；１５分 ８０℃ 熱失活）後、ＰＣＲサンプルを第２のＰＣＲ（ＰＣＲ−条件：３分 ９５℃；３０×（４５秒 ９５℃；４５秒 ５６℃；３．５分 ７２℃） ５分 ７２℃；Ｔａｑ−ポリメラーゼ）のためのテンプレートとして用いた。第２のＰＣＲを、最初のＰＣＲからの非特異的ｆｗ−プライマーおよび特異的ｒｅｖ−プライマーからなるプライマー対（公知の１８ヌクレオチド（５’−ＣＴＴＣＣＣＧＴＧＣＴＡＣＡＧＣＡＣＴＣＣＣ−３’、配列番号９）を含む）を用いてｎｅｓｔｅｄ−ＰＣＲ様式で行った。０．４ｋｂｐの産物をゲル精製し、ｐＤｒｉｖｅ中にクローニングした。配列決定により、Ａ２のＣ末端の推定アミノ酸配列が示された。この０．４ｋｂｐの配列から、Ｄｉｇ標識されたプローブをＰＣＲによって構築した（Ｆｗ：５’−ＡＴＧＧＡＣＣＴＣＧＣＣＡＣＧＧＧＣＴＣ−３’、配列番号１０；５’−ＣＴＴＣＣＣＧＴＧＣＴＡＣＡＧＣＡＣＴＣＣＣ−３’、配列番号１１）。このＤｉｇ標識されたプローブを用いてハイブリダイゼーションによりフィルターをスクリーニングし、アルカリホスファターゼで標識された抗Ｄｉｇ抗体による検出を行った。この方法において、１つのポジティブコスミドを得、配列決定した。
【００８６】
配列データをローカルｂｌａｓｔおよびｆｒａｍｅｐｌｏｔにより分析した。この分析により、ラビリントペプチンＡ２の構造遺伝子を含む、以下のオープンリーディングフレーム（ｏｒｆ）が得られた：
【化３６】
【００８７】
このｏｒｆ内で、以下の配列は、プレプロ−ラビリントペプチンＡ２（停止コドンＴＧＡが続くプロペプチドコード配列が続くリーダー配列）の構造遺伝子を示している：
【化３７】
【００８８】
配列番号１３に示されるようなＤＮＡ配列の翻訳により、以下のプレプロ−ラビリントペプチンＡ２のアミノ酸配列（配列番号１４）およびプロ−ラビリントペプチンＡ２のアミノ酸配列（配列番号１５）が得られた：
【化３８】
【００８９】
このプロペプチド配列は、微生物アクチノマデュラ・ナミビエンシス（ＤＳＭ ６３１３）の酵素による翻訳後修飾によって、ラビリントペプチンＡ２中に形質転換される。
【００９０】
実施例１３：ラビリントペプチンＡ１およびＡ３の構造決定
Ａ２遺伝子の上流領域は、ラビリントペプチンＡ２の構造遺伝子に対して高い相同性を有する別の小さなｏｒｆをはっきりと示している。このオープンリーディングフレーム（ｏｒｆ）は、ラビリントペプチンＡ１およびＡ３の構造遺伝子を含んでいた。ラビリントペプチンＡ１についてのｏｒｆは、以下の遺伝子配列を有する：
【化３９】
【００９１】
このｏｒｆ内で、以下の配列は、プレプロ−ラビリントペプチンＡ１およびＡ３（停止コドンＴＧＡが続くプロペプチドコード配列が続くリーダー配列）の構造遺伝子を示している：
【化４０】
【００９２】
配列番号１７に示されるようなＤＮＡ配列の翻訳により、以下のプレプロ−ラビリントペプチンＡ１のアミノ酸配列（配列番号１８）およびプロ−ラビリントペプチンＡ１のアミノ酸配列（配列番号１９）が得られた：
【化４１】
【００９３】
このアミノ酸配列は、ラビリントペプチンＡ１のアミノ酸分析およびＭＳ分析の結果に基づく、ラビリントペプチンＡ１の推定アミノ酸組成（前出）と一致した。側鎖の翻訳後修飾は、ラビリントペプチンＡ２の翻訳後修飾と類似していると推論された。アミノ酸の立体化学は、アミノ酸分析（実施例１１）から得られた。最終的に、デヒドロ酪酸を与えるスレオニン（Ｔｈｒ）残基の脱水は、高分解能ＭＳから算出された実験的分子式に合致すると推定された。類似のラビリントペプチンＡ２の翻訳後修飾されたアミノ酸の立体化学に基づいて、式（ＶＩＩＩ）はラビリントペプチンＡ１に誘導される。
【００９４】
前出の質量分析により、ラビリントペプチンＡ１とＡ３の間の差異はＡｓｐであると示唆された。このことは、ラビリントペプチンＡ１のプロテアーゼ切断側前方の１位にＡｓｐを含むコードされた配列によって確認された。そのラビリントペプチンＡ１とＡ３が、リーダー配列のプロテアーゼ切断においてのみ異なり、同じ遺伝子によってコードされるという仮定の下で、さらなるＡｓｐはラビリントペプチンＡ３のＮ−末端にある。この方法で、式（Ｖ）はラビリントペプチンＡ３に誘導された。ラビリントペプチンＡ２と類似する翻訳後修飾されたアミノ酸の立体化学に基づいて、式（ＶＩ）はラビリントペプチンＡ３に誘導された。
【００９５】
実施例１４：ラビリントペプチンＡ１のジスルフィド架橋の切断および引き続くヨウ化メチルでのアルキル化
【化４２】
ラビリントペプチンＡ１（５０ｍｇ、０．０２４ｍｍｏｌ）をメタノール（３ｍｌ）に溶解し、ジチオスレイトール溶液を室温で加えた（１ｍｌ、１ｍｌの水に４０ｍｇ ＮａＨＣＯ3を溶解した溶液中の７５ｍｇのジチオスレイトールから新たに調製した）。この混合物を６０℃で１時間攪拌した。その後室温に冷却し、ヨウ化メチル（５０μｌ、０．８０ｍｍｏｌ）を加えた。室温で４時間後、混合物を濾過し、Ｗａｔｅｒｓ ＸＴｅｒｒａ（登録商標） Ｐｒｅｐ ＭＳ Ｃ１８ １０μｍプレカラム（寸法１９ｍｍ×１０ｍｍ）を備えたＰｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｌｕｎａ（登録商標） Ａｘｉａ ５μｍ Ｃ１８（２）カラム（寸法１００ｍｍ×３０ｍｍ）を使用して逆相ＨＰＬＣにより精製した。３０分以内の５％から９５％への水中アセトニトリルの勾配を行なった（緩衝液：ｐＨ２．０、ギ酸で調整）。流量は６０ｍｌ／分であり、ピークをＵＶにより分画した。フラクション１２と１３を合わせ、凍結乾燥後、２３．１ｍｇ（４５．５％）の所望の化合物を得た。生成物をＵＶ分光法および質量分析法（Ｂｒｕｋｅｒ Ｄａｌｔｏｎｉｃｓ ＭｉｃｒｏＴｏｆ）でキャラクタリゼーションした。
ＲＴmin＝５．４６分（ＰＤＡ；実施例８と同様のＬＣ方法）
ＵＶ（λmax）：２１７ｎｍ（ｓｈ）、２７９ｎｍ
ＥＳＩ−ＭＳ（ｎｅｇ）：［Ｍ−２Ｈ］2-＝１０５０．８９４
実験的な中性モノアイソトピック質量 ［Ｍ］＝２１０３．８０２
Ｃ94Ｈ125Ｎ23Ｏ25Ｓ4について算出した中性モノアイソトピック質量： ２１０３．８１０
分子式：Ｃ94Ｈ125Ｎ23Ｏ25Ｓ4
化学分子量＝２１０５．４４。
【００９６】
実施例１５：ラビリントペプチンＡ１のジスルフィド架橋の切断および引き続くヨードアセトアミドでのアルキル化
ラビリントペプチンＡ１（５０ｍｇ、０．０２４ｍｍｏｌ）をメタノール（３ｍｌ）に溶解し、ジチオスレイトール溶液を室温で加えた（１ｍｌ、１ｍｌの水に４０ｍｇ ＮａＨＣＯ3を溶解した溶液中の７０ｍｇのジチオスレイトールから新たに調製した）。この混合物を６０℃で１時間攪拌した。その後室温に冷却し、ヨードアセトアミド（４０ｍｇ、０．２１６ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を室温で一晩攪拌した。溶液を濾過し、Ｗａｔｅｒｓ ＸＴｅｒｒａ（登録商標） Ｐｒｅｐ ＭＳ Ｃ１８ １０μｍプレカラム（寸法１９ｍｍ×１０ｍｍ）を備えたＰｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｌｕｎａ（登録商標） Ａｘｉａ ５μｍ Ｃ１８（２）カラム（寸法１００ｍｍ×３０ｍｍ）を使用して逆相ＨＰＬＣにより精製した。３０分以内の５％から９５％への水中アセトニトリルの勾配を行なった（緩衝液：０．１％酢酸アンモニウム、ｐＨ４．６、酢酸で調整）。流量は６０ｍｌ／分であり、ピークをＵＶにより分画した。以下の化合物を得た：
ビス−アセトアミド化ラビリントペプチンＡ１：
【化４３】
【００９７】
フラクション７と８を合わせ、凍結乾燥後、１３．３ｍｇ（２５．２％）の所望の化合物を得た。生成物をＵＶ分光法および質量分析法（Ｂｒｕｋｅｒ Ｄａｌｔｏｎｉｃｓ ＭｉｃｒｏＴｏｆ）でキャラクタリゼーションした。
ＲＴmin＝５．０９分（ＰＤＡ；実施例８と同様のＬＣ方法）
ＵＶ（λmax）： ２１８ｎｍ（ｓｈ）、２８０ｎｍ
ＥＳＩ−ＭＳ （ｎｅｇ）： ［Ｍ−２Ｈ］2-＝１０９３．９０２２
実験的な中性モノアイソトピック質量、［Ｍ］＝２１８９．８１９
Ｃ96Ｈ127Ｎ25Ｏ27Ｓ4について算出した中性モノアイソトピック質量： ２１８９．８２２
分子式： Ｃ96Ｈ127Ｎ25Ｏ27Ｓ4
化学分子量＝２１９１．４９。
【００９８】
モノ−アセトアミド化ラビリントペプチンＡ１：
【化４４】
フラクション１０と１１を合わせ、凍結乾燥後、５．３ｍｇ（１０．３％）の所望の化合物を得た。生成物をＵＶ分光法および質量分析法（ＢｒｕｋｅｒＤａｌｔｏｎｉｃｓ ＭｉｃｒｏＴｏｆ）でキャラクタリゼーションした。
ＲＴmin＝５．３１分（ＰＤＡ；実施例８と同様のＬＣ方法）
ＵＶ（λmax）：２１７ｎｍ（ｓｈ）、２８０ｎｍ
ＥＳＩ−ＭＳ（ｎｅｇ）：［Ｍ−２Ｈ］2-＝１０６５．３９０
実験的な中性モノアイソトピック質量 ［Ｍ］＝２１３２．７９４
Ｃ94Ｈ124Ｎ24Ｏ26Ｓ4について算出した中性モノアイソトピック質量： ２１３２．８００
分子式： Ｃ94Ｈ124Ｎ24Ｏ26Ｓ4
化学分子量＝２１３４．４４。
【００９９】
実施例１６：Ｂｏｃ−保護ラビリントペプチンＡ１の合成
【化４５】
ジメチルホルムアミド（３ｍｌ）中のラビリントペプチンＡ１のの溶液（５０ｍｇ、０．０２４ｍｍｏｌ）に、ジ−ｔｅｒｔ−ブチル−ジカルボナート（１１ｍｇ、０．０４８ｍｍｏｌ）およびｎ−エチルジイソプロピルアミン（６ｍｇ、０．０４８ｍｍｏｌ）を室温で加えた。混合物を室温で２時間攪拌した。その後Ｗａｔｅｒｓ ＸＴｅｒｒａ（登録商標） Ｐｒｅｐ ＭＳ Ｃ１８ １０μｍプレカラム（寸法１９ｍｍ×１０ｍｍ）を備えたＰｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｌｕｎａ（登録商標） Ａｘｉａ ５μｍ Ｃ１８（２）カラム（寸法１００ｍｍ×３０ｍｍ）を使用して逆相ＨＰＬＣにより精製した。３０分以内の５％から９５％への水中アセトニトリルの勾配を行なった（緩衝液：０．１％酢酸アンモニウム、ｐＨ７．０）。流量は６０ｍｌ／分であり、ピークをＵＶにより分画した。フラクション４〜７を合わせ、凍結乾燥後、２１．４ｍｇ（４０．８％）の所望の化合物を得た。生成物をＵＶ分光法および質量分析法（Ｂｒｕｋｅｒ Ｄａｌｔｏｎｉｃｓ ＭｉｃｒｏＴｏｆ）でキャラクタリゼーションした。
ＲＴmin＝５．３０分（ＰＤＡ；実施例８と同様のＬＣ方法）
ＵＶ（λmax）：２１９ｎｍ（ｓｈ）、２７８ｎｍ
ＥＳＩ−ＭＳ（ｎｅｇ）：［Ｍ−２Ｈ］2-＝１０８５．８９５
実験的な中性モノアイソトピック質量［Ｍ］＝２１７３．８０５
Ｃ97Ｈ127Ｎ23Ｏ27Ｓ4について算出した中性モノアイソトピック質量：２１７３．８１５分子式：Ｃ97Ｈ127Ｎ23Ｏ27Ｓ4
化学分子量＝２１７４．４９。
【０１００】
実施例１７：ラビリントペプチンＡ１のベンジル誘導体
ジメチルホルムアミド（２ｍｌ）中のラビリントペプチンＡ１（５０ｍｇ、０．０２４ｍｍｏｌ）の溶液に、ジ−ｔｅｒｔ−ブチル−ジカルボナート（１０ｍｇ、０．０４６ｍｍｏｌ）およびｎ−エチルジイソプロピルアミン（７ｍｇ、０．０５４ｍｍｏｌ）を室温で加えた。室温での１時間後、ラビリントペプチンＡ１は完全になくなった。ベンジルアミン（６．８ｍｇ、０．０６３ｍｍｏｌ）およびｎ−プロピルホスホン酸無水物（Ｔ３Ｐ（登録商標）、５０μｌ、０．０７２ｍｍｏｌ、ＤＭＦ中５０％）を加えた。混合物を室温で２時間攪拌した。その後Ｗａｔｅｒｓ ＸＴｅｒｒａ（登録商標）Ｐｒｅｐ ＭＳ Ｃ１８ １０μｍプレカラム（寸法１９ｍｍ×１０ｍｍ）を備えたＰｈｅｎｏｍｅｎｅｘ
Ｌｕｎａ（登録商標）Ａｘｉａ ５μｍ Ｃ１８（２）カラム（寸法１００ｍｍ×３０ｍｍ）を使用して逆相ＨＰＬＣにより精製した。３０分以内の５％から９５％への水中アセトニトリルの勾配を行なった（緩衝液：０．１％酢酸アンモニウム、ｐＨ７．０）。流量は６０ｍｌ／分であり、ピークをＵＶにより分画した（２２０ｎｍ）。以下の２つの化合物を得た：
【０１０１】
ラビリントペプチンＡ１のモノベンジル誘導体：
【化４６】
フラクション７と８を合わせ、凍結乾燥後、１０．４ｍｇ（１９．１％）の所望の化合物を得た。生成物をＵＶ分光法および質量分析法（Ｂｒｕｋｅｒ Ｄａｌｔｏｎｉｃｓ ＭｉｃｒｏＴｏｆ）でキャラクタリゼーションした。
ＲＴmin＝７．０３分（ＰＤＡ；実施例８と同様のＬＣ方法）
ＵＶ（λmax）：２１７ｎｍ（ｓｈ）、２７５ｎｍ
ＥＳＩ−ＭＳ（ｎｅｇ）：［Ｍ−２Ｈ］2-＝１１３０．４２７
実験的な中性モノアイソトピック質量［Ｍ］＝２２６２．８６８
Ｃ104Ｈ134Ｎ24Ｏ26Ｓ4について算出した中性モノアイソトピック質量：２２６２．８７８
分子式：Ｃ104Ｈ134Ｎ24Ｏ26Ｓ4
化学分子量＝２２６４．６３。
【０１０２】
ラビリントペプチンＡ１のビス−ベンジル誘導体：
【化４７】
フラクション１３と１４を合わせ、凍結乾燥後、９．９ｍｇ（１７．５％）の所望の化合物を得た。生成物をＵＶ分光法および質量分析法（Ｂｒｕｋｅｒ Ｄａｌｔｏｎｉｃｓ ＭｉｃｒｏＴｏｆ）でキャラクタリゼーションした。
ＲＴmin＝８．３１分（ＰＤＡ；実施例８と同様のＬＣ方法）
ＵＶ（λmax）：２１４ｎｍ（ｓｈ）、２７６ｎｍ
ＥＳＩ−ＭＳ（ｐｏｓ）：［Ｍ＋２（ＮＨ4）］2+＝１１９４．００２
実験的な中性モノアイソトピック質量［Ｍ］＝２３５１．９３７
Ｃ111Ｈ141Ｎ25Ｏ25Ｓ4について算出した中性モノアイソトピック質量：２３５１．９４１
分子式：Ｃ111Ｈ141Ｎ25Ｏ25Ｓ4
化学分子量＝２３５３．７７。
【０１０３】
実施例１８：ラビリントペプチンＡ１のＮ−末端におけるアシル化反応
【化４８】
ジメチルホルムアミド（２ｍｌ）中の２−クロロ−４，６−ジメトキシ−１，３，５−トリアジン（ＣＤＭＴ、５ｍｇ、０．０２８ｍｍｏｌ）の溶液に、ｎ−メチルモルホリン（８．６ｍｇ、０．０８５ｍｍｏｌ）を室温で加えた。室温で１時間経過後、ｎ−ヘキサンカルボン酸（３．３ｍｇ、０．０２８ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を３０分間攪拌した後、ラビリントペプチンＡ１（５０ｍｇ、０．０２４ｍｍｏｌ）を加え、その後室温で２時間攪拌した。混合物を、Ｗａｔｅｒｓ ＸＢｒｉｄｇｅ Ｓｈｉｅｌｄ（登録商標）Ｃ１８ １０μｍプレカラム（寸法１９ｍｍ×１０ｍｍ）を備えるＷａｔｅｒｓ ＸＢｒｉｄｇｅ Ｓｈｉｅｌｄ（登録商標）５μｍ Ｃ１８カラム（寸法１００ｍｍ×３０ｍｍ）を用いた逆相ＨＰＬＣによって精製した。３０分以内の５％から９５％への水中アセトニトリルの勾配を行なった（緩衝液：０．１％酢酸アンモニウム、ｐＨ７．０）。流量は６０ｍｌ／分であり、ピークをＵＶにより分画した（２２０ｎｍ）。フラクション３９より、凍結乾燥後、２．０ｍｇ（３．８％）の所望の化合物を得た。生成物をＵＶ分光法および質量分析法（Ｂｒｕｋｅｒ Ｄａｌｔｏｎｉｃｓ ＭｉｃｒｏＴｏｆ）でキャラクタリゼーションした。
ＲＴmin＝５．４１分（ＰＤＡ；実施例８と同様のＬＣ方法）
ＵＶ（λmax）：２１６ｎｍ（ｓｈ）、２６６ｎｍ
ＥＳＩ−ＭＳ（ｎｅｇ）：［Ｍ−２Ｈ］2-＝１０８４．９０６
実験的な中性モノアイソトピック質量［Ｍ］＝２１７１．８２７
について算出した中性モノアイソトピック質量Ｃ98Ｈ129Ｎ23Ｏ26Ｓ4：２１７１．８３６分子式：Ｃ98Ｈ129Ｎ23Ｏ26Ｓ4
化学分子量＝２１７３．５２。
【０１０４】
実施例１９：ラビリントペプチンおよび誘導体の抗菌活性
化合物を最終濃度が１ｍｇ／ｍｌとなるように１０％ＭｅＯＨを含む水に溶解した。バイオアッセイ用に２４×２４ｃｍサイズの滅菌Ｎｕｎｃプレートを用いた。１つのプレートについて２００ｍｌの寒天を使用した。寒天を、オートクレービング後５５℃に冷却し、２〜４ｍｌの試験生物の培養懸濁液をプレーティング前に加えた。各プレートに、直径６ｍｍの６４フィルタープレートを加えた。各フィルターに２０μｌの試験溶液を加え、２８℃または３７℃で１〜３日間インキュベートした。この阻害ゾーンをｍｍで報告した。この方法の詳細な記載については、Ｂａｕｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ａｍｅｒ．Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｐａｔｈｏｌ．１９６６，４５，４９３−４９６；Ｍｕｅｌｌｅｒ ＆ Ｍｅｌｃｈｉｎｇｅｒ，Ｍｅｔｈｏｄｅｎ ｉｎ ｄｅｒ Ｍｉｋｒｏｂｉｏｌｏｇｉｅ，Ｆｒａｎｃｋｈｓｃｈｅ Ｖｅｒｌａｇｓｈａｎｄｌｕｎｇ，Ｓｔｕｔｔｇａｒｔ（１９６４）；Ｍｕｅｌｌｅｒ ＆ Ｈｉｎｔｏｎ，Ｐｒｏｃ．Ｓｏｃ．Ｅｘｐｔ．Ｂｉｏｌ．Ｍｅｄ．１９４１，４８，３３０−３３３を参照のこと。
【０１０５】
【表４】
【０１０６】
実施例２０：神経障害性疼痛（ｎｅｕｒｏｐａｔｈｉｃ ｐａｉｎ）活性
接触性アロディニアに対する活性を試験するために、ラビリントペプチンＡ１を神経障害性疼痛の坐骨神経部分損傷（ｓｐａｒｅｄ ｎｅｒｖｅ ｉｎｊｕｒｙ）（ＳＮＩ）マウスモデルで研究した。全身麻酔下で、腓腹神経はインタクトのまま、成体雄性Ｃ５７Ｂ６マウス（２２．８ｇ±０．３５ＳＥＭ）における坐骨神経の２つの主要な枝を結紮しそして切断した。接触性アロディニアを、自動ｖｏｎ Ｆｒｅｙテストで測定した：ダンプニードルスティックを使用して、後肢の足底皮膚を、５ｇまで増加する強度の圧力刺激に曝露した。動物が後肢を引込めて反応したグラム力を接触性アロディニアの読み出しとして使用した。研究を神経損傷の７日後に６時間にわたって行い、２４時間後さらに測定した。神経切断後２日以内に、接触性アロディニアが完全に発症し、そして少なくとも２週間にわたって安定したままであった。化合物を単回投与（３ｍｇ／ｋｇ）として静脈内投与した。静脈内投与のビヒクルとして、１：１：１８（エタノール：ソルトール（Ｓｏｌｕｔｏｌ）：リン酸化緩衝生理食塩水）ビヒクルを選択した。
【０１０７】
肢逃避反応閾値（ｐａｗ ｗｉｔｈｄｒａｗａｌ ｔｈｒｅｓｈｏｌｄ）（ＰＷＴ）測定値を使用して、有意な治療効果を計算し、そして基準期間（６時間）にわたるＡＵＣ計算及び引き続いての％便益計算を行った。統計分析のために、同側後肢のＰＷＴ値を２つの様式で使用した：第１に、特定の時間（２４時間の期間内）のＰＷＴ値に基づく２ウエイＡＮＯＶＡ、及び第２に、非変換デルタＡＵＣ値｜ＡＵＣ１−６時間｜の１ウエイＡＮＯＶＡ。
【０１０８】
反復測定（ｒｅｐｅａｔｅｄ ｍｅａｓｕｒｅｓ）の２ウエイ分散分析（反復要因（Ｒｅｐｅａｔｅｄ ｆａｃｔｏｒ）：ＴＩＭＥ、分析変数（Ａｎａｌｙｓｉｓ ｖａｒｉａｂｌｅ）：ＰＷＴ）続いての補完的分析（Ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔａｒｙ Ａｎａｌｙｓｉｓ）（要因ＴＩＭＥの各レベルについての要因ＧＲＯＵＰの効果（Ｗｉｎｅｒ分析）、分析変数：ＰＷＴ）及び要因ＴＩＭＥの各レベルについての要因ＴＲＥＡＴＭＥＮＴに関する引き続いてのＤｕｎｎｅｔｔ検定（両側比較 対 レベルＶＥＨＩＣＬＥ）によって、各化合物についての静脈内投与後１〜６時間のビヒクル群に対する高度に有意な差が明らかとなった。効果は投与の２４時間後なくなった。デルタ｜ＡＵＣ１−６時間｜値を使用する１ウエイＡＮＯＶＡは、ｐ＜０．０００１のｐ値を示した。Ｄｕｎｎｅｔｔ分析はラビリントペプチンＡ１について有意な治療効果を与えた。治療のパーセント便益を、同側ビヒクル群（０％便益）の｜ＡＵＣ１−６時間｜値、及び反対側の３つ全ての群［１００％便益＝最大可能効果（ｍａｘｉｍａｌ ｐｏｓｓｉｂｌｅ ｅｆｆｅｃｔ）］の全ての｜ＡＵＣ１−６時間｜値を使用して評価した。これらのマージンを比較すると、ラビリントペプチンＡ１は９５％便益を達成した。
【０１０９】
結論として、式（Ｉ）の化合物は、神経障害性疼痛のＳＮＩマウスモデルにおける接触性アロディニアを有意に軽減した。
【背景技術】
【０００１】
いくつかの高度に架橋したペプチド、例えばイモガイ（ｃｏｎｅ ｓｎａｉｌ）から単離されたコノペプチド（ｃｏｎｏｐｅｐｔｉｄｅｓ：概説については、例えば非特許文献１を参照のこと）又はグラム陽性菌源由来のいわゆるランチビオティクス（非特許文献２）が、文献において公知である。該ペプチドは様々な有用性を有する。例えば、ランチビオティックスのナイシンは、食品防腐剤として長年使用されている。
【０００２】
コノペプチドは、例えば疼痛、糖尿病、多発性硬化症及び心臓血管疾患の治療に有用であり、現在、前臨床又は臨床開発に至っている。コノペプチドの例は、α−ＧＩ（配列：ＥＣＣＮＰＡＣＧＲＨＹＳＣ*、*アミド化、連結性：１−３、２−４）及びα−ＧＩＤ（配列：ＩＲγＣＣＳＮＰＡＣＲＶＮＮＯＨＶＣ、連結性：１−３、２−４）であり、ここで、Ｏ／Ｈｙｐは、ヒドロキシプロリンであり、連結性は、各々特定のジスルフィド結合に関与するシステインの位置、例えばα−ＧＩＤにおけるように第１−第３及び第２−第４を示す：
【化１】
【０００３】
ラビリントペプチンと呼ばれる高度に架橋されたペプチドの新しいグループが近年発見された（特許文献１）。このいわゆるラビリントペプチン類は、以下の式の化合物によって示されるようにそのペプチド鎖にまたがる独特な架橋モチーフを示す：
【化２】
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００４】
【特許文献１】欧州特許出願ＥＰ０６０２０９８０．６
【非特許文献】
【０００５】
【非特許文献１】Ｔｅｒｌａｕ＆Ｏｌｉｖｅｒａ，Ｐｈｙｓｉｏｌ．Ｒｅｖ．２００４，８４，４１−６８
【非特許文献２】Ｃｈａｔｔｅｒｊｅｅ ｅｔ ａｌ．，Ｃｈｅｍ．Ｒｅｖ．２００５，１０５，６３３−６８３
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００６】
ここで、さらにラビリントペプチン類のさらに高度に架橋されたペプチドが、微生物株アクチノマデュラ・ナミビエンシス（ＤＳＭ ６３１３）から単離され得ることを発見した。これらの化合物は、特許出願ＥＰ０６０２０９８０．６に記載したラビリントペプチン誘導体とは明確に異なるものである。
【発明を実施するための形態】
【０００７】
本発明のある態様は、任意の立体化学形態にある、又は任意の立体化学形態の任意の比率の混合物である、式（Ｉ）：
【化３】
【０００８】
〔式中、
｛Ａ｝は、以下から選択される基であり；
【化４】
｛Ｂ｝は、以下から選択される基であり；
【化５】
｛Ｃ｝は、以下から選択される基であり；
【化６】
【０００９】
Ｒ1は、Ｒ1’基または以下
【化７】
［式中、Ｒ1’は、Ｈ、Ｃ（Ｏ）−（Ｃ1−Ｃ6）アルキルまたはＣ（Ｏ）−Ｏ−（Ｃ1−Ｃ6）アルキルである］の基であり；
Ｒ2は、ＯＨ、ＮＨ2、ＮＨ−（Ｃ1−Ｃ6）アルキル、ＮＨ−（Ｃ1−Ｃ4）アルキレン−フェニルまたはＮＨ−（Ｃ1−Ｃ4）アルキレン−ピリジルであり；
Ｒ3およびＲ4は、互いに独立してＨ、（Ｃ1−Ｃ6）アルキル、（Ｃ1−Ｃ6）アルキレン−Ｃ（Ｏ）ＮＨ2、（Ｃ1−Ｃ6）アルキレン−Ｃ（Ｏ）ＮＨ（Ｃ1−Ｃ4）アルキルもしくは（Ｃ1−Ｃ6）アルキレン−Ｃ（Ｏ）Ｎ［（Ｃ1−Ｃ4）アルキル］2であるか、
またはＲ3およびＲ4は、それらが結合するＳ原子と一緒になってジスルフィド基Ｓ−Ｓを形成し；
Ｒ5およびＲ6は、互いに独立してＨもしくはＯＨであるか、またはＲ5およびＲ6は一緒になって＝Ｏであり；
ｍおよびｎは、互いに独立して０、１または２である；
ただし、
【００１０】
｛Ａ｝が
【化８】
｛Ｂ｝が
【化９】
で、かつ
｛Ｃ｝が
【化１０】
である場合は、
Ｒ3およびＲ4は、それらが結合するＳ原子と一緒になってジスルフィド基Ｓ−Ｓを形成しない〕
の化合物、またはその生理学的に許容される塩である。
【００１１】
好ましくは、
｛Ａ｝は、
【化１１】
｛Ｂ｝は、
【化１２】
｛Ｃ｝は、
【化１３】
である。
【００１２】
さらに好ましくは、
｛Ａ｝は、
【化１４】
｛Ｂ｝は、
【化１５】
｛Ｃ｝は、
【化１６】
であり、そして
Ｒ1は好ましくはＲ1’基である。
【００１３】
Ｒ1’は、好ましくはＨである。
【００１４】
Ｒ2は、好ましくはＯＨである。
【００１５】
Ｒ3およびＲ4は、好ましくは互いに独立してＨ、（Ｃ1−Ｃ6）アルキル、（Ｃ1−Ｃ6）アルキレン−Ｃ（Ｏ）ＮＨ2であるか、またはそれらが結合するＳ原子と一緒になってジスルフィド基Ｓ−Ｓを形成する。より好ましくは、Ｒ3およびＲ4がＨであるか、またはそれらが結合するＳ原子と一緒になってジスルフィド基Ｓ−Ｓを形成する。最も好ましくはＲ3およびＲ4が、それらが結合するＳ原子と一緒になってジスルフィド基Ｓ−Ｓを形成する。
【００１６】
Ｒ5およびＲ6は、好ましくはＨまたはＯＨであり、Ｒ5がＯＨである場合はＲ6がＨであり、およびＲ5がＨである場合はＲ6がＯＨであるか、またはＲ5およびＲ6が一緒になって＝Ｏである。より好ましくは、Ｒ5がＯＨでありＲ6がＨであるか、またはＲ5がＨでありＲ6がＯＨである。
【００１７】
好ましくは、化合物（Ｉ）は、以下の式（ＩＩ）：
【化１７】
〔式中、
Ｒ1はＲ1’または以下：
【化１８】
［式中、Ｒ1’はＨ、Ｃ（Ｏ）−（Ｃ1−Ｃ6）アルキルまたはＣ（Ｏ）−Ｏ−（Ｃ1−Ｃ6）アルキル、好ましくはＨである］の基である〕
を特徴とする。
【００１８】
さらに好ましくは、化合物（Ｉ）は、以下の式（ＩＩＩ）：
【化１９】
〔式中、
Ｒ1は、Ｒ1’または以下：
【化２０】
［式中、
Ｒ1’はＨ、Ｃ（Ｏ）−（Ｃ1−Ｃ6）アルキルまたはＣ（Ｏ）−Ｏ−（Ｃ1−Ｃ6）アルキル、好ましくはＨである］の基であり；
Ｒ2はＯＨ、ＮＨ2、ＮＨ−（Ｃ1−Ｃ6）−アルキル、Ｎ［（Ｃ1−Ｃ6）−アルキル］2、ＮＨ−（Ｃ1−Ｃ4）−アルキレン−フェニルまたはＮＨ（Ｃ1−Ｃ4）−アルキレン−ピリジル、好ましくはＲ2はＨであり；そして
Ｒ3およびＲ4は互いに独立してＨ、（Ｃ1−Ｃ6）アルキルまたは（Ｃ1−Ｃ4）−アルキレン−Ｃ（Ｏ）ＮＨ2である〕
を特徴とする。
【００１９】
Ｒ1がＲ1’である式（ＩＩ）および（ＩＩＩ）の化合物は、後にラビリントペプチンＡ１と名付けた。
【００２０】
Ｒ1が以下の基：
【化２１】
である式（ＩＩ）および（ＩＩＩ）の化合物は、後にラビリントペプチンＡ３と名付けた。
【００２１】
さらに好ましくは、化合物（Ｉ）は、以下の式（ＩＶ）：
【化２２】
〔式中、
Ｒ1はＨ、Ｃ（Ｏ）−（Ｃ1−Ｃ6）アルキルまたはＣ（Ｏ）−Ｏ−（Ｃ1−Ｃ6）アルキルであり、
Ｒ2はＯＨ、ＮＨ2、ＮＨ−（Ｃ1−Ｃ6）−アルキル、Ｎ［（Ｃ1−Ｃ6）−アルキル］2、ＮＨ−（Ｃ1−Ｃ4）−アルキレン−フェニルまたはＮＨ（Ｃ1−Ｃ4）−アルキレン−ピリジルであり、そして
Ｒ3およびＲ4は互いに独立してＨ、（Ｃ1−Ｃ6）アルキルまたは（Ｃ1−Ｃ4）−アルキレン−Ｃ（Ｏ）ＮＨ2である〕
を特徴とする。
【００２２】
この式（ＩＶ）の化合物は、ラビリントペプチンＡ２と名付けた。
【００２３】
好ましくは、この式（Ｉ）の化合物は、ｍおよびｎが０であるか、またはｍおよびｎが２であるか、またはｍが０でありかつｎが２であるか、またはｍが２でありかつｎが０である。最も好ましくは、ｍおよびｎが０である。
【００２４】
本発明は、さらに、本発明に従う式（Ｉ）の化合物の全ての自明な化学的均等物に関する。これらの均等物は、ほんの僅かな化学的差異を示しかつ同一の薬理学的効果を有する化合物、又は穏やかな条件下で本発明に従う化合物へ変換される化合物である。前記均等物はまた、例えば式（Ｉ）の化合物の塩、還元生成物、酸化生成物、部分加水分解処理エステル、エーテル、アセタール又はアミド、並びに当業者が標準的な方法を使用して製造し得る均等物、並びにこれに加えて、全ての光学的対掌体及びジアステレオマー及び全ての立体異性形態を含む。
【００２５】
特に記載しない限り、式（Ｉ）の化合物のキラル中心は、Ｒ立体配置又はＳ立体配置で存在し得る。本発明は、光学的に純粋な化合物、並びに立体異性体混合物（例えばエナンチオマー混合物及びジアステレオマー混合物）の両方に関する。
【００２６】
式（Ｉ）の化合物の生理学的に許容される塩は、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ（１７ｔｈ ｅｄｉｔｉｏｎ，ｐａｇｅ １４１８（１９８５））に記載されるように、それらの有機塩及びそれらの無機塩の両方であると理解される。それらの物理的及び化学的安定性並びにそれらの溶解性のために、ナトリウム、カリウム、カルシウム及びアンモニウム塩が、特に酸性基について好ましく；塩酸、硫酸若しくはリン酸、又はカルボン酸若しくはスルホン酸、例えば酢酸、クエン酸、安息香酸、マレイン酸、フマル酸、酒石酸及びｐ−トルエンスルホン酸の塩が、特に塩基性基について好ましい。
【００２７】
より好ましくは、式（Ｉ）〜（ＩＶ）の化合物は、式（Ｖ）
【化２３】
の化合物について示される立体化学を特徴とする、すなわち式（Ｉ）［式中、
｛Ａ｝が、
【化２４】
｛Ｂ｝が、
【化２５】
および
｛Ｃ｝が、
【化２６】
Ｒ1は、
【化２７】
（式中、Ｒ1’はＨである）の基であり、
Ｒ2はＯＨであり；
Ｒ3およびＲ4は、それらが結合するＳ原子と一緒になってジスルフィド基Ｓ−Ｓを形成し；
Ｒ5はＨであり；
Ｒ6はＯＨであり；かつ
ｍおよびｎは０である］
の化合物であり：
【００２８】
最も好ましくは、式（ＶＩ）
【化２８】
に記載されるとおりである。
【００２９】
本発明のさらなる態様は、式（ＶＩＩ）：
【化２９】
【００３０】
好ましくは式（ＶＩＩＩ）：
【化３０】
を特徴とする式（Ｉ）の化合物であって、式（Ｖ）および（ＶＩ）は、ラビリントペプチンＡ３と呼び、式（ＶＩＩ）および（ＶＩＩＩ）をラビリントペプチンＡ１と呼ぶ。
【００３１】
本発明の化合物のさらなるキャラクタライゼーションのために、ペプチド残基を、リボソームペプチド合成由来のそれらの可能性の高い前駆体へ変換し戻した。残基４及び１３におけるα，α二置換アミノ酸は、文献に先行記載されていない。前記アミノ酸は、式（ＩＩ）および（ＩＩＩ）の化合物について下記に示すように、β位でヒドロキシル基が置換されたＳｅｒ残基として記載され得る：
【化３１】
【００３２】
前出のラビリントペプチンＡ２に関する欧州特許出願（ＥＰ０６０２０９８０．６）において、以下のリボソーム前駆体は、生合成における知識がないと想定された：
【化３２】
【００３３】
ラビリントペプチン（以下を参照）の生合成における新しい見識に基づいて、式（ＩＶ）の化合物の生合成前駆体は、以下のとおりに記載される：
【化３３】
【００３４】
本発明はまた、請求項１に記載の式（Ｉ）の化合物の製造方法であって、
ａ）培地において、アクチノマデュラ・ナミビエンシス株（ＤＳＭ ６３１３）、又はその変異体及び／若しくは突然変異体の１つを、適した条件下、式（Ｉ）の化合物の１つ又はそれ以上が培地に生じるまで、発酵させること、
ｂ）式（Ｉ）の化合物を培地から単離すること、並びに
ｃ）必要に応じて、工程ｂ）で単離された化合物を誘導体化し、および／または必要に応じて、工程ｂ）で単離された化合物もしくは工程ｂ）で単離された化合物の誘導体を生理学的に許容される塩へ変換すること
を含む方法に関する。
【００３５】
好ましくは、工程ｂ）において単離された化合物は、
ｍおよびｎが０であり、
Ｒ1はＲ1’または以下：
【化３４】
（式中、Ｒ1’はＨである）の基であり、
Ｒ2がＯＨである、式（ＩＩ）
を特徴とする。
【００３６】
さらに好ましくは、工程ｂ）において単離された化合物は、その後工程ｃ）において式（ＩＶ）：
〔式中、
ｍおよびｎが両方とも０であり、
Ｒ1はＨであり、
Ｒ2はＯＨであり、かつ
Ｒ3およびＲ4は、互いに独立してＨ、（Ｃ1−Ｃ6）アルキル、（Ｃ1−Ｃ6）アルキレン−Ｃ（Ｏ）ＮＨ2、（Ｃ1−Ｃ6）アルキレン−Ｃ（Ｏ）ＮＨ（Ｃ1−Ｃ4）アルキルまたは（Ｃ1−Ｃ6）アルキレン−Ｃ（Ｏ）Ｎ［（Ｃ1−Ｃ4）アルキル］2である〕の化合物に誘導体化される、ラビリントペプチンＡ２である。
【００３７】
培地は、少なくとも１つの通常の炭素源及び少なくとも１つの窒素源並びに１又はそれ以上の通常の無機塩を含有する栄養溶液又は固形培地である。
【００３８】
本発明の方法は、実験室規模（ミリリットル〜リットル規模）での発酵及び工業規模（立方メートル規模）での発酵に使用され得る。
【００３９】
発酵のための好適な炭素源は、同化可能な炭水化物及び糖アルコール、例えばグルコース、ラクトース、スクロース又はＤ−マンニトール、並びに炭水化物含有天然物、例えば麦芽エキス又は酵母エキスである。窒素含有栄養素の例は、アミノ酸；ペプチド及びタンパク質並びにまたそれらの分解産物、例えばカゼイン、ペプトン又はトリプトン；肉エキス；酵母エキス；グルテン；例えばトウモロコシ、小麦、豆、大豆又はワタ由来の、粉砕した種子；製造アルコールからの蒸留残滓；肉粉；酵母エキス；アンモニウム塩；ニトレートである。好ましくは、窒素源は、合成的に又は生合成的に得られている１つ又はそれ以上のペプチドである。無機塩の例は、アルカリ金属、アルカリ土類金属、鉄、亜鉛、コバルト及びマンガンの、塩化物、炭酸塩、硫酸塩又はリン酸塩である。微量元素の例は、コバルト及びマンガンである。
【００４０】
本発明のラビリントペプチンを形成するために特に好適である条件は、以下の通りである：０．０５〜５％、好ましくは０．１〜２．５％、酵母エキス；０．２〜５．０％、好ましくは０．１〜２％、カジトン（ｃａｓｉｔｏｎｅ）；０．０２〜１．０％、好ましくは０．０５〜０．５％、ＣａＣｌ2×２Ｈ2Ｏ；０．０２〜１．５％、好ましくは０．０５〜０．７％、ＭｇＳＯ4×７Ｈ2Ｏ、及び０．００００１％〜０．００１％シアノコバラミン。与えられるパーセンテージ値は、各場合において、栄養溶液全体の質量に基づく。
【００４１】
前記微生物を、好気的に、即ち例えば必要に応じて空気又は酸素を通気させながら、振盪又は撹拌しながら振盪フラスコ又は発酵槽の液中、又は固形培地上において、培養する。微生物は、約１８〜３５℃、好ましくは約２０〜３２℃、特に２７〜３０℃の温度範囲で培養し得る。ｐＨ範囲は、４〜１０、好ましくは６．５〜７．５とした方が良い。微生物を、一般的に、これらの条件下で、２〜１０日間、好ましくは７２〜１６８時間、培養する。有利には、数工程で微生物を培養する。即ち、最初に１つ又はそれ以上の予備培養物を液体栄養培地に調製し、次いでこれらの予備培養物を例えば１：１０〜１：１００の体積比で、実際の生産培地（即ち本培養）に接種する。予備培養物は、例えば前記株を栄養細胞又は胞子の形態で栄養溶液中に接種し、そしてそれを約２０〜１２０時間、好ましくは４８〜９６時間増殖させることによって得られる。栄養細胞及び／又は胞子は、例えば前記株を約１〜１５日間、好ましくは４〜１０日間、固形又は液体栄養培地、例えば酵母寒天上において増殖させることによって、得ることができる。
【００４２】
ラビリントペプチン誘導体は、公知の方法を使用し、かつ、該天然物質の化学的、物理的及び生物学的特性を考慮して、培養培地から単離しそして精製し得る。培地における又は個々の単離工程におけるそれぞれのラビリントペプチン誘導体の濃度を試験するためにＨＰＬＣを使用し、形成された物質の量を較正溶液と便宜的に比較した。
【００４３】
単離のために、培養ブロス、又は固形培地と一緒の培養物を、場合により凍結乾燥し、そして有機溶媒、又は好ましくは有機溶媒を５０〜９０％含有する水と有機溶媒との混合液を使用して、ラビリントペプチン誘導体を凍結乾燥物から抽出する。有機溶媒の例は、メタノール及び２−プロパノールである。有機溶媒相は、本発明に従う天然物質を含有し；それは、必要に応じて真空で濃縮され、そしてさらなる精製に供される。
【００４４】
本発明の１つ又はそれ以上の化合物のさらなる精製は、好適な材料、好ましくは例えばモレキュラーシーブ、シリカゲル、酸化アルミニウム、イオン交換体又は吸着樹脂又は逆相（ＲＰ）の、クロマトグラフィーによって行われる。このクロマトグラフィーは、ラビリントペプチン誘導体を分離するために使用される。ラビリントペプチン誘導体は、緩衝化された、塩基性又は酸性の水溶液又は水溶液と有機溶液との混合液を使用して、クロマトグラフィーに供される。
【００４５】
水溶液又は有機溶液の混合液は、５〜９９％有機溶媒、好ましくは５〜５０％有機溶媒の濃度での、全ての水混和性有機溶媒、好ましくはメタノール、２−プロパノール若しくはアセトニトリル、又は有機溶媒と混和性である全ての緩衝化された水溶液であると理解される。使用される緩衝剤は、上記で挙げたものと同一である。
【００４６】
ラビリントペプチン誘導体は、それらの異なる極性に基づいて、例えばＭＣＩ（吸着樹脂、三菱、日本）若しくはＡｍｂｅｒｌｉｔｅ ＸＡＤ（ＴＯＳＯＨＡＡＳ）の、又は他の疎水性材料、例えばＲＰ−８若しくはＲＰ−１８相の、逆相クロマトグラフィーによって分離される。さらに、分離は、例えばシリカゲル、酸化アルミニウムなどの、順相クロマトグラフィーによって行われ得る。
【００４７】
緩衝化された、塩基性又は酸性水溶液は、例えば０．５Ｍまでの濃度での水、リン酸緩衝液、酢酸アンモニウム及びクエン酸緩衝液、並びに好ましくは１％までの濃度での、ギ酸、酢酸、トリフルオロ酢酸、アンモニア及びトリエチルアミン、又は当業者に公知の全ての市販の酸及び塩基であると理解される。緩衝水溶液の場合、０．１％酢酸アンモニウムが、特に好ましい。
【００４８】
クロマトグラフィーは、１００％水から開始しそして１００％有機溶媒で終了する勾配を使用して行うことができ；クロマトグラフィーは、好ましくは５から９５％へのアセトニトリルの線形勾配で行った。
【００４９】
あるいは、疎水性相のクロマトグラフィー又はゲルクロマトグラフィーを行うことも可能である。ゲルクロマトグラフィーは、例えばポリアクリルアミドゲル又はコポリマーゲルで行なうことができる。上述のクロマトグラフィー工程の順序は、逆にされ得る。
【００５０】
ラビリントペプチンが立体異性体として存在する場合、それらは、公知の方法を使用して、例えばキラルカラムを使用する分離によって、分離され得る。
【００５１】
ＯＨ基のエステル又はエーテル誘導体への誘導体化は、自体公知の方法（Ｊ．Ｍａｒｃｈ，Ａｄｖａｎｃｅｄ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ，４ｔｈ ｅｄｉｔｉｏｎ，１９９２）を使用して、例えば酸無水物との反応、又は炭酸ジアルキル若しくは硫酸ジアルキルとの反応によって、行われる。ＣＯＯＨ基のエステル又はアミド誘導体への誘導体化は、自体公知の方法（Ｊ．Ｍａｒｃｈ，Ａｄｖａｎｃｅｄ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ，４ｔｈ ｅｄｉｔｉｏｎ，１９９２）を使用して、例えばアンモニアとのそれぞれのＣＯＮＨ2基への反応、又は場合により活性化されたアルキル化合物とのそれぞれのアルキルエステルへの反応によって、行われる。−ＣＨ2−Ｓ−ＣＨ2−基の−ＣＨ2−Ｓ（Ｏ）−ＣＨ2−又は−ＣＨ2−Ｓ（Ｏ）2−ＣＨ2−基への酸化は、それぞれのラビリントペプチン誘導体を酸素又は空気へ曝露することで達成され得る。ジスルフィドの還元（必要に応じて引き続くＳＨ基のアルキル化）は、それ自体公知の方法（Ａ．Ｈｅｎｓｃｈｅｎ，Ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ｃｙｓｔ（ｅ）ｉｎｅ ｒｅｓｉｄｕｅｓ，ｄｉｓｕｌｆｉｄｅ ｂｒｉｄｇｅｓ，ａｎｄ ｓｕｌｆｈｙｄｒｙｌ ｇｒｏｕｐｓ ｉｎ ｐｒｏｔｅｉｎｓ：Ｂ．Ｗｉｔｔｍａｎｎ−Ｌｉｅｂｏｌｄ，Ｊ．Ｓａｌｎｉｋｏｖ，Ｖ．Ａ．Ｅｒｄｍａｎ（Ｅｄｓ．），Ａｄｖａｎｃｅｄ Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｍｉｃｒｏｓｅｑｕｅｎｃｅ Ａｎａｌｙｓｉｓ，Ｓｐｒｉｎｇｅｒ，Ｂｅｒｌｉｎ，１９８６，ｐｐ．２４４−２５５）を用いて、例えば、ジチオスレイトール還元法、およびヨウ化アルキルを用いるアルキル化によって実施される。Ｒ3およびＲ4がＨ、（Ｃ1−Ｃ6）アルキル、（Ｃ1−Ｃ6）アルキレン−Ｃ（Ｏ）ＮＨ2、（Ｃ1−Ｃ6）アルキレン−Ｃ（Ｏ）ＮＨ（Ｃ1−Ｃ4）アルキルまたは（Ｃ1−Ｃ6）アルキレン−Ｃ（Ｏ）Ｎ［（Ｃ1−Ｃ4）アルキル］2である式（Ｉ）の化合物へのスルフィド還元は、Ｒ3およびＲ4が、それらが結合するＳ原子と一緒になってジスルフィド基Ｓ−Ｓを形成している式（Ｉ）の化合物と、（Ｃ1−Ｃ6）アルキル−ハロゲン化物またはハロゲン−（Ｃ1−Ｃ6）アルキレン−Ｃ（Ｏ）ＮＨ2、ハロゲン−（Ｃ1−Ｃ6）アルキレン−Ｃ（Ｏ）ＮＨ（Ｃ1−Ｃ4）アルキルまたはハロゲン−（Ｃ1−Ｃ6）アルキレン−Ｃ（Ｏ）Ｎ［（Ｃ1−Ｃ4）アルキル］2とを、ジチオスレイトールの存在下で反応させることによって達成され得る（一般的な文献）。ハロゲンとは、Ｆ、Ｃｌ、ＢｒまたはＩである。
【００５２】
微生物株アクチノマデュラ・ナミビエンシスの分離株は、番号：ＤＳＭ ６３１３で、１９９１年１月２３日に、ブダペスト条約の規則に従って、Ｄｅｕｔｓｃｈｅ Ｓａｍｍｌｕｎｇ ｖｏｎ Ｍｉｋｒｏｏｒｇａｎｉｓｍｅｎ ｕｎｄ Ｚｅｌｌｋｕｌｔｕｒｅｎ［Ｇｅｒｍａｎ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ ｏｆ Ｍｉｃｒｏｏｒｇａｎｉｓｍｓ ａｎｄ Ｃｅｌｌ Ｃｕｌｔｕｒｅｓ］ＧｍｂＨ（ＤＳＭＺ），Ｍａｓｃｈｅｒｏｄｅｒ Ｗｅｇ １Ｂ，３８１２４ Ｂｒａｕｎｓｃｈｗｅｉｇ，Ｇｅｒｍａｎｙに識別リファレンスＦＨ−Ａ １１９８でＨｏｅｓｔ ＡＧ，Ｆｒａｎｋｆｕｒｔ，Ｇｅｒｍａｎｙによって寄託された。微生物株アクチノマデュラ・ナミビエンシスは、Ｗｉｎｋ ｅｔ ａｌ．，Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｓｙｓｔｅｍａｔｉｃ ａｎｄ Ｅｖｏｌｕｔｉｏｎａｒｙ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ ２００３，５３，７２１−７２４にさらに記載されている。
【００５３】
アクチノマデュラ・ナミビエンシス株（ＤＳＭ ６３１３）の代わりに、本発明の１つ又はそれ以上の化合物を合成するその突然変異体及び／又は変異体を使用することも可能である。
【００５４】
突然変異体は、本発明化合物を産生する前記生物の能力の原因である遺伝子は機能性かつ遺伝性のまま、ゲノム中の１つ又はそれ以上の遺伝子で修飾されている微生物である。
【００５５】
このような突然変異体は、物理的手段、例えば紫外線若しくはＸ線での照射、又は化学的突然変異原、例えばメタンスルホン酸エチル（ＥＭＳ）；２−ヒドロキシ−４−メトキシベンゾフェノン（ＭＯＢ）若しくはＮ−メチル−Ｎ’−ニトロ−Ｎ−ニトロソグアニジン（ＭＮＮＧ）を使用して、自体公知の様式で、又はＢｒｏｃｋ ｅｔ ａｌ．，“Ｂｉｏｌｏｇｙ ｏｆ Ｍｉｃｒｏｏｒｇａｎｉｓｍｓ”，Ｐｒｅｎｔｉｃｅ Ｈａｌｌ，ｐａｇｅｓ ２３８−２４７（１９８４）に記載されるように、生産することができる。
【００５６】
変異体は、前記微生物の表現型である。微生物は、それらの環境に適応する能力を有し、従って高度に発達した生理学的適応性を示す。微生物の全ての細胞は、表現型適応に関与し、変化の性質は、遺伝的に条件付けされず、変更された条件下で可逆性である（Ｈ．Ｓｔｏｌｐ，Ｍｉｃｒｏｂｉａｌ ｅｃｏｌｏｇｙ：ｏｒｇａｎｉｓｍ，ｈａｂｉｔａｔｓ，ａｃｔｉｖｉｔｉｅｓ．Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｐｒｅｓｓ，Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ，ＧＢ，ｐａｇｅ １８０，１９８８）。
【００５７】
本発明の１つ又はそれ以上の化合物を合成する突然変異体及び／又は変異体のスクリーニングは、場合により発酵培地を凍結乾燥し、そして凍結乾燥物又は発酵ブロスを上述の有機溶媒又は水と有機溶媒との混合液で抽出し、そしてＨＰＬＣ若しくはＴＬＣにより分析することにより、又は生物学的活性を試験することにより、達成される。
【００５８】
前記発酵条件は、アクチノマデュラ・ナミビエンシス（ＤＳＭ ６３１３）並びにその突然変異体及び／又は変異体に適用され得る。
【００５９】
本発明のさらなる態様は、細菌感染、特にグラム陽性菌によって引き起こされる細菌感染の治療、ウイルス感染の治療及び／又は疼痛、特に神経因性疼痛若しくは炎症誘発疼痛の治療のための、上述の、式（Ｉ）の化合物の使用である。
【００６０】
上述の薬剤（薬剤又は薬学的組成物ともいう）は、上述の、任意の立体化学形態、又は任意の比率の任意の立体化学形態の混合物の、有効量の少なくとも１つの式（Ｉ）の化合物、又はそれらの生理学的に許容される塩若しくは化学的均等物と、少なくとも１つの薬学的に許容される担体、好ましくは１つ又はそれ以上の薬学的に許容される担体物質（又はビヒクル）及び／又は添加物（又は添加剤）とを含有する。
【００６１】
薬剤は、例えば丸剤、錠剤、ラッカー錠剤（ｌａｃｑｕｅｒｅｄ ｔａｂｌｅｔ）、コーティング錠剤、顆粒剤、ゼラチン硬及び軟カプセル剤、液剤、シロップ剤、乳剤、懸濁剤又はエアゾール混合物の形態で、経口投与され得る。しかし、投与はまた、例えば坐剤の形態で、直腸投与で、又は非経口的に、例えば注射用液剤若しくは注入液剤、マイクロカプセル剤、インプラント剤若しくはロッド剤（ｒｏｄｓ）の形態で、静脈内に、筋肉内に若しくは皮下に、又は例えば軟膏剤、液剤若しくはチンキ剤の形態で、経皮的に若しくは局所的に、又は例えばエアゾール剤若しくは鼻スプレー剤の形態で、他の様式で、行われ得る。
【００６２】
本発明の薬剤は、自体公知でかつ当業者によく知られている様式で調製され、薬学的に許容される不活性無機及び／又は有機担体物質及び／又は添加物が、上述の、任意の立体化学形態、又は任意の比率の任意の立体化学形態の混合物の、式（Ｉ）の化合物、又はそれらの生理学的に許容される塩若しくは化学的均等物に加えて使用される。丸剤、錠剤、コーティング錠剤及びゼラチン硬カプセル剤の作製には、例えば、ラクトース、トウモロコシデンプン又はその誘導体、タルク、ステアリン酸又はその塩などを使用することが可能である。ゼラチン軟カプセル剤及び坐剤用の担体物質は、例えば、脂肪、ワックス、半固体及び液体ポリオール、天然又は硬化油などである。液剤（例えば、注射用液剤）又は乳剤若しくはシロップ剤の作製用の好適な担体物質は、例えば、水、生理食塩水、アルコール、グリセリン、ポリオール、スクロース、転化糖、グルコース、植物油などである。マイクロカプセル剤、インプラント剤又はロッド剤用の好適な担体物質は、例えばグリコール酸と乳酸とのコポリマーである。製剤は、通常、式（Ｉ）の化合物及び／又はそれらの生理学的に許容される塩及び／又はそれらのプロドラッグを約０．５〜約９０質量％含有する。薬剤中における、上述の、任意の立体化学形態、又は任意の比率の任意の立体化学形態の混合物の、式（Ｉ）の有効成分、又はそれらの生理学的に許容される塩若しくは化学的均等物の量は、通常、約０．５〜約１０００ｍｇ、好ましくは約１〜約５００ｍｇである。
【００６３】
上述の、任意の立体化学形態、又は任意の比率の任意の立体化学形態の混合物の、式（Ｉ）の有効成分、又はそれらの生理学的に許容される塩若しくは化学的均等物、並びに担体物質に加えて、製剤は、１つ又はそれ以上の添加物、例えば賦形剤、崩壊剤、結合剤、滑沢剤、湿潤剤、安定剤、乳化剤、保存剤、甘味剤、着色剤、着香剤、芳香剤、増粘剤、希釈剤、緩衝剤物質、溶剤、可溶化剤、デポー効果を達成するための薬剤、浸透圧を変化させるための塩、コーティング剤又は抗酸化剤を含有し得る。それらはまた、任意の立体化学形態、又は任意の比率の任意の立体化学形態の混合物の、２つ若しくはそれ以上の式（Ｉ）の化合物、又はそれらの生理学的に許容される塩若しくは化学的均等物を含有し得る。製剤が式（Ｉ）の化合物を２つ又はそれ以上含有する場合、個々の化合物の選択は、製剤の特定の全体的な薬理学的プロフィールを目標とし得る。例えば、短い作用持続期間を有する非常に強力な化合物は、より低い効力の長く作用する化合物と組み合わせられ得る。式（Ｉ）の化合物中における置換基の選択に関して許されるフレキシビリティーのために、化合物の生物学的及び物理化学的特性の多くの制御が可能となり、従って、このような所望の化合物の選択が可能となる。さらに、少なくとも１つの式（Ｉ）の化合物に加えて、製剤はまた、１つ又はそれ以上の他の治療的又は予防的有効成分を含有し得る。
【００６４】
式（Ｉ）の化合物を使用する場合、用量は、広い限度範囲内で変動し得、通例でありかつ医師に公知であるように、各個体の症例における個体の状態に適合すべきである。それは、例えば使用される特定の化合物、治療しようとする疾患の性質及び重症度、投与の様式及びスケジュール、又は急性若しくは慢性の状態を治療するかどうか、又は予防を行なうのかどうかに依存する。好適な用量は、医学の分野においてよく知られた臨床的アプローチを使用して確立し得る。一般的に、体重約７５ｋｇの成人において所望の結果を達成するための一日用量は、約０．０１〜約１００ｍｇ／ｋｇ、好ましくは約０．１〜約５０ｍｇ／ｋｇ、特に約０．１〜約１０ｍｇ／ｋｇ（各場合において、体重１ｋｇ当たりのｍｇ）である。一日用量は、特に比較的多量の投与の場合に、いくつかの、例えば２、３又は４つの部分の投与へ分割し得る。通常であるように、個体の反応に依存して、示した一日用量から上方又は下方へ外す必要があり得る。
【実施例】
【００６５】
実施例１：アクチノマデュラ・ナミビエンシス（ＤＳＭ ６３１３）のクライオ培養物（ｃｒｙｏｃｕｌｔｕｒｅ）の調製
滅菌５００ｍｌ エルレンマイヤーフラスコ中培地１００ｍｌ（デンプン１０ｇ、酵母エキス２ｇ、グルコース１０ｇ、グリセリン１０ｇ、コーンスティープ粉末２．５ｇ、ペプトン２ｇ、ＮａＣｌ １ｇ、水道水１ｌ中ＣａＣＯ3３ｇ、滅菌前ｐＨ７．２）に、アクチノマデュラ・ナミビエンシス株（ＤＳＭ ６３１３）を播種し、そして振盪器において１２０ｒｐｍで２７℃にて７２時間インキュベートした。引き続いて、培養物１ｍｌ及び滅菌保存溶液１ｍｌ（グリセリン２０ｇ、サッカロース１０ｇ、脱イオン水７０ｍｌ）を混合し、そして−８０℃で保存した。代替として、寒天上の十分に増殖させた培養物の小片を、５０％滅菌グリセリン溶液１．５ｍｌを含むＣｒｙｏｔｕｂｅｓ（登録商標）（Ｖａｎｇａｒｄ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ）に移し、そして液体窒素で−１９６℃で保存した。
【００６６】
実施例２：ラビリントペプチンの調製
実施例１に記載の培地１００ｍｌを含有する滅菌５００ｍｌ エルレンマイヤーフラスコに、寒天プレート上で増殖させたアクチノマデュラ・ナミビエンシス（ＤＳＭ ６３１３）の培養物を播種し、そして振盪器において１２０ｒｐｍで２７℃にてインキュベートした。７２時間後、同一量の同一培地を含有するさらなるエルレンマイヤーフラスコに、各々、この前培養物２ｍｌを播種し、そして同一条件下で１６８時間インキュベートした。代替として、実施例１に記載の培地１００ｍｌを含有する３００ｍｌ エルレンマイヤーフラスコに、アクチノマデュラ・ナミビエンシス（ＤＳＭ ６３１３）の培養物を播種し、そして１８０ｒｐｍで２５℃にてインキュベートした。７２時間後、同一量の同一培地を含有するさらなるエルレンマイヤーフラスコに、各々、この前培養物５ｍｌを播種し、そして同一条件下で１６８時間インキュベートした。
【００６７】
実施例３：ラビリントペプチンの固相抽出
４０Ｌのアクチノマデュラ・ナミビエンシス（ＤＳＭ６３１３）の発酵が完了した後、その培養ブロスを濾過した。培養濾過液（約３０Ｌ）を約３ＬのＣＨＰ−２０Ｐ物質を充填したカラム（寸法：１６０×２００ｍｍ）にローディングした。化合物を、５％〜９５％へのイソプロパノール水溶液の勾配を使用して２５０ｍｌ／分の流量で溶離した。フラクションを４５分間にわたり４分ごとに集めた。ラビリントペプチン含有フラクションをプールし、凍結乾燥した（フラクション８：ＭＷ＝２１９０Ｄａ；フラクション９：ＭＷ＝２１９０および２０７４Ｄａ；フラクション１０−１２：ＭＷ＝２０７４Ｄａ）。
【００６８】
実施例４：ＲＰ−１８クロマトグラフィーを用いたラビリントペプチンＡ１の前精製
実施例３からのフラクション１０−１２（６７０ｍｇ）を５００ｍｌのメタノールに溶解し、Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｌｕｎａ（登録商標）１０μ Ｃ１８（２）プレカラム（寸法２１．２ｍｍ×６０ｍｍ）を備えるＰｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｌｕｎａ（登録商標）１０μ Ｃ１８（２）カラム（寸法５０ｍｍ×２５０ｍｍ）にローディングした。化合物を、１９０ｍｌ／分の流量で４０分間かけて５％から７５％へのアセトニトリル水溶液の勾配で溶離した（緩衝液：０．１％酢酸アンモニウム、ｐＨ９．０、３０％のアンモニア水溶液を用いて調整）。フラクションを１分ごとに集めた。フラクション２１−２２は、所望のラビリントペプチン（ＭＷ＝２０７４Ｄａ）を含有していた。凍結乾燥後、３２２ｍｇの粗生産物を得た。
【００６９】
実施例５：ラビリントペプチンＡ１の最終精製
実施例４からのフラクション２１−２２（６０ｍｇ）を５０ｍｌのメタノールに溶解し、Ｗａｔｅｒｓ ＸＴｅｒｒａ（登録商標） Ｐｒｅｐ ＭＳ Ｃ１８ １０μプレカラム（寸法１９×１０ｍｍ）を備えるＰｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｌｕｎａ（登録商標）５μ Ｃ１８（２）Ａｘｉａカラム（寸法３０ｍｍ×１００ｍｍ）にローディングした。化合物を、７０ｍｌ／分の流量で４０分間かけて５％から７５％へのアセトニトリル水溶液の勾配で溶離した（緩衝液：０．１％酢酸アンモニウム、ｐＨ４．６、酢酸水溶液を使用して調整）。溶離物をＵＶトリガリングを使用して１０ｍｌのフラクションに集めた。ラビリントペプチン含有フラクション（フラクション９−１２）をプールした。凍結乾燥後、１７ｍｇのラビリントペプチンＡ１を得た。
【００７０】
実施例６：ＲＰ−１８クロマトグラフィーを用いたラビリントペプチンＡ３の前精製
実施例３からのフラクション８（約８５０ｍｇ）を５００ｍｌのメタノールに溶解し、Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｌｕｎａ（登録商標）１０μ Ｃ１８（２）プレカラム（寸法２１．２ｍｍ×６０ｍｍ）を備えるＰｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｌｕｎａ（登録商標）１０μ Ｃ１８（２）カラム（寸法５０ｍｍ×２５０ｍｍ）にローディングした。化合物を、１９０ｍｌ／分の流量で４０分間かけて５％から７５％へのアセトニトリル水溶液の勾配で溶離した（緩衝液：０．１％酢酸アンモニウム、ｐＨ７．０）。フラクションを１分ごとに集めた。フラクション１９は、所望のラビリントペプチン（ＭＷ＝２１９０Ｄａ）を含有していた。凍結乾燥後、４８ｇの粗生産物を得た。
【００７１】
実施例７：ラビリントペプチンＡ３の最終精製
実施例６からのフラクション１９（４８ｍｇ）を５０ｍｌのメタノールに溶解し、Ｗａｔｅｒｓ ＸＴｅｒｒａ（登録商標） Ｐｒｅｐ ＭＳ Ｃ１８ １０μプレカラム（寸法１９×１０ｍｍ）を備えるＰｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｌｕｎａ（登録商標）５μ Ｃ１８（２）Ａｘｉａカラム（寸法３０ｍｍ×１００ｍｍ）にローディングした。化合物を、７０ｍｌ／分の流量で４０分間かけて５％から７５％へのアセトニトリル水溶液の勾配で溶離した（緩衝液：０．１％酢酸アンモニウム、ｐＨ９．０、３０％のアンモニア水溶液を用いて調整）。溶離物をＵＶトリガリングを使用してフラクションに集めた。ラビリントペプチン含有フラクション（フラクション９−１２）をプールした。凍結乾燥後、１２ｍｇのラビリントペプチンＡ３を得た。
【００７２】
実施例８：ラビリントペプチンＡ１およびＡ３の、ダイオードアレイおよび質量分析検出を備えた高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ−ＤＡＤ−ＭＳ）によるキャラクタリゼーション
ラビリントペプチンＡ１およびＡ３を、Ｓａｍｐｌｅ Ｍａｎａｇｅｒ、Ｂｉｎａｒｙ Ｓｏｌｖｅｎｔ ＭａｎａｇｅｒおよびＰＤＡ（フォトダイオードアレイ検出器）を備えるＷａｔｅｒｓ Ａｃｑｕｉｔｙ ＵＰＬＣ Ｓｙｓｔｅｍで分析した。ＵＰＬＣカラムとして、Ｗａｔｅｒｓ Ａｃｑｕｉｔｙ ＵＰＬＣ ＢＥＨ Ｃ１８（１．７μ；２．１×１００ｍｍ）を使用して、全ての溶媒を６．５ｍＭの酢酸アンモニウムを使用してｐＨ４．６に緩衝した水：アセトニトリル（９：１）の勾配を使用して、１５分以内に１００％アセトニトリルまで、０．６ｍｌ／分の流量で溶離した。ＵＶスペクトルを、２００〜６００ｎＭの波長でＰＤＡ検出器により記録した。質量スペクトルを、Ｂｒｕｃｋｅｒ μＴＯＦ ＬＣ ＭＳで、直交型エレクトロスプレーイオン化（ｏｒｔｈｏｇｏｎａｌ ｅｌｅｃｔｒｏｓｐｒａｙ ｉｏｎｉｓａｔｉｏｎ）、サンプリング速度０．５Ｈｚおよび検出限界１５０−１５００原子質量単位を用いて、記録した。
【００７３】
実施例９：ラビリントペプチンＡ１のキャラクタリゼーション
ラビリントペプチンＡ１は、５．４６分で溶離した（ＰＤＡ）。このＵＶスペクトルは、２１８ｎｍ（ｓｈ）および２７９ｎｍのλmaxによって特徴づけられる。
【００７４】
二重荷電分子イオンが、ネガティブモードでは、ｍ／ｚ（Ｉ）： １０３５．８７（４５３９）、１０３６．３７（５５６６）、１０３６．８７（４０８６）、１０３７．３７（２２９６）、１０３７．８７（１０３４）および１０３８．３７（２８０）で観察された。ポジティブモードにおいては、ｍ／ｚ（Ｉ）： １０３７．８８（２９２５）、１０３８．３８（３２５２）、１０３８．８８（２４９２）、１０３９．３８（１３９６）、および１０３９．８８（６２３）の二重荷電分子イオンが観察された。
【００７５】
高分解能ＥＳＩ−ＦＴＩＣＲ−質量分析器による、ラビリントペプチンＡ１のキャラクタリゼーション：メタノール中のラビリントペプチンＡ１溶液（ｃ＝０．２ｍｇ／ｍｌ）を、エレクトロスプレー源を備えたＢｒｕｋｅｒ Ａｐｅｘ ＩＩＩ ＦＴＩＣＲ ＭＳ （７Ｔ ｍａｇｎｅｔ）にシリンジポンプを通して２μｌ／分の流量で入れた。スペクトルを、外部校正を使用してポジティブモードで記録した。
【００７６】
【表１】
【００７７】
実施例１０：ラビリントペプチンＡ３のキャラクタリゼーション
ラビリントペプチンＡ３は、４．７９分で溶離した（ＰＤＡ）。このＵＶスペクトルは、２１８ｎｍ（ｓｈ）および２７４ｎｍ（ｓｈ）のλmaxによって特徴づけられる。
【００７８】
二重荷電分子イオンが、ネガティブモードでは、ｍ／ｚ （Ｉ）： １０９３．３８（１２６２）、１０９３．８８（１５８７）、１０９４．３９（１２０１）、１０９４．８９（６８６）および１０９５．３８（１９５）で観察された。ポジティブモードにおいては、ｍ／ｚ（Ｉ）： １０９５．４０（３６５）、１０９５．９１（４３３）および１０９６．４１（２９４）の二重荷電分子イオンが観察された。
【００７９】
高分解能ＥＳＩ−ＦＴＩＣＲ−質量分析器による、ラビリントペプチンＡ３のキャラクタリゼーション（実施例９に記載したとおりの方法）：
【表２】
【００８０】
実施例１１：ラビリントペプチンＡ１のアミノ酸分析
加水分解：ラビリントペプチンＡ１（０．０５ｍｇ）を、６Ｎ ＨＣｌ、５％フェノール（ｐｈｅｎｏｌｅ）で、窒素雰囲気において１１０℃で２４時間加水分解した。加水分解物を窒素流中乾燥した。
【００８１】
アキラルＧＣ−ＭＳ：前記加水分解物を、ビス−（トリメチルシリル）トリフルオロアセトアミド（ＢＳＴＦＡ）／アセトニトリル（１：１）と共に１５０℃で４時間加熱した。ＧＣ−ＭＳ実験用に、ＤＢ５溶融シリカキャピラリーを使用した（ジメチル−（５％−フェニルメチル）−ポリシロキサンでコーティングされたｌ＝１５ｍ×０．２５μｍ溶融シリカ、ｄf＝０．１０μｍ；温度プログラム：Ｔ＝６５°／３’／６／２８０℃）。
【００８２】
キラルＧＣ−ＭＳ：前記加水分解物を、エタノール中の２Ｎ ＨＣｌ ２００μｌで、１１０℃で３０分間エステル化し、そして乾燥した。引き続いて、混合物をジクロロメタン１００μｌ中のトリフルオロ酢酸無水物（ＴＦＡＡ）２５μｌで、１１０℃で１０分間アシル化し、そして乾燥した。ＧＣ−ＭＳ実験用に、溶融シリカキャピラリーを使用した（ｃｈｉｒａｓｉｌ−Ｓ−Ｖａｌ（Ｍａｃｈｅｒｙ−Ｎａｇｅｌ）でコーティングされたｌ＝２２ｍ×０．２５μｍ溶融シリカ、ｄｆ＝０．１３μｍ；温度プログラム：Ｔ＝５５°／３’／３，２／１８０℃）。
【００８３】
【表３】
【００８４】
実施例１２：ラビリントペプチンＡ１およびＡ３についての構造遺伝子の同定
微生物株アクチノマデュラ・ナミビエンシス（ＤＳＭ ６３１３）のコスミドバンクは、ｐＷＥＢ−コスミドベクター（Ｅｐｉｃｅｎｔｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｍａｄｉｓｏｎ，ＵＳＡ）をベースに、Ａｇｏｗａ ＧｍｂＨ，Ｂｅｒｌｉｎによって作製された。フィルターは、Ｚｅｈｅｔｎｅｒ ＆ Ｓｃｈaｆｅｒ，Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２００１，１７５，１６９−１８８に記載の方法を適用してＲＺＰＤ ＧｍｂＨ，Ｂｅｒｌｉｎによって調製された。
【００８５】
ラビリントペプチンＡ２の既知の構造をベースにして、伸長した変性プライマーをＮ−末端及びＣ−末端から推定した（Ｆｗ：５’−ＣＡＧＧＡＡＡＣＡＧＣＴＡＴＧＡＣＣＧＡＹＴＧＧＷＳＮＹＴＮＴＧＧＧ−３’（配列番号４）；Ｒｅｖ：５’−ＴＧＴＡＡＡＡＣＧＡＣＧＧＣＣＡＧＴＲＣＡＮＧＡＮＧＣＲＡＡＮＡＲＲＣ−３’（配列番号５）；Ｄａｂａｒｄ ｅｔ ａｌ．，Ａｐｐｌ．Ｅｎｖｉｒｏｎ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．２００１，４１１１−４１１８．）。このプライマーの５’−伸長は、よりよい検出および取り扱いのために、予想されたＰＣＲ産物のサイズを増強するためである（ＰＣＲ条件：３分 ９５℃；３０×（６０秒 ９５℃；３０秒 ５０℃；６０秒 ７２℃）７分 ７２℃；Ｔａｑ−ポリメラーゼ）。ＰＣＲ産物をゲル精製し、ベクターｐＤｒｉｖｅ（Ｑｉａｇｅｎ）中にクローニングした。配列決定により、Ａ２遺伝子の中央から、１８ヌクレオチド長の配列が得られた（ＡＧＴＧＣＴＧＴＡＧＣＡＣＧＧＧＡＡ、配列番号６）。この１８ヌクレオチド長の公知の配列をベースにして、２工程のＰＣＲによりより多くの配列情報を得た。最初の工程において、Ａ２のＣ末端の変性逆方向（ｒｅｖ）プライマー（５’−ＲＣＡＲＣＡＮＧＣＲＡＡＮＡＲＲＣＴＴＣＣ−３’、配列番号７）および非特異的順方向（ｆｗ）プライマー（５’−ＣＡＣＧＧＴＡＣＣＴＡＧＡＣＴＡＧＴＧＡＣＣＡＡＧＴＧＣＧＣＣＧＧＴＣ−３’、配列番号８）で、単一特異的プライマーＰＣＲを行った（ＰＣＲ−条件：３分 ９５℃；１０×（４５秒 ９５℃；４５秒 ３８℃；３．５分 ７２℃）；３０×（４５秒 ９５℃；４５秒 ５２℃；３．５分 ７２℃） ５分 ７２℃；Ｔａｑ−ポリメラーゼ）。プライマーを消化するためのエキソヌクレアーゼＩ消化（５μｌ ＰＣＲ−サンプル＋０．５μｌ エキソヌクレアーゼ−Ｉ（２０Ｕ／μｌ）；１５分 ３７℃；１５分 ８０℃ 熱失活）後、ＰＣＲサンプルを第２のＰＣＲ（ＰＣＲ−条件：３分 ９５℃；３０×（４５秒 ９５℃；４５秒 ５６℃；３．５分 ７２℃） ５分 ７２℃；Ｔａｑ−ポリメラーゼ）のためのテンプレートとして用いた。第２のＰＣＲを、最初のＰＣＲからの非特異的ｆｗ−プライマーおよび特異的ｒｅｖ−プライマーからなるプライマー対（公知の１８ヌクレオチド（５’−ＣＴＴＣＣＣＧＴＧＣＴＡＣＡＧＣＡＣＴＣＣＣ−３’、配列番号９）を含む）を用いてｎｅｓｔｅｄ−ＰＣＲ様式で行った。０．４ｋｂｐの産物をゲル精製し、ｐＤｒｉｖｅ中にクローニングした。配列決定により、Ａ２のＣ末端の推定アミノ酸配列が示された。この０．４ｋｂｐの配列から、Ｄｉｇ標識されたプローブをＰＣＲによって構築した（Ｆｗ：５’−ＡＴＧＧＡＣＣＴＣＧＣＣＡＣＧＧＧＣＴＣ−３’、配列番号１０；５’−ＣＴＴＣＣＣＧＴＧＣＴＡＣＡＧＣＡＣＴＣＣＣ−３’、配列番号１１）。このＤｉｇ標識されたプローブを用いてハイブリダイゼーションによりフィルターをスクリーニングし、アルカリホスファターゼで標識された抗Ｄｉｇ抗体による検出を行った。この方法において、１つのポジティブコスミドを得、配列決定した。
【００８６】
配列データをローカルｂｌａｓｔおよびｆｒａｍｅｐｌｏｔにより分析した。この分析により、ラビリントペプチンＡ２の構造遺伝子を含む、以下のオープンリーディングフレーム（ｏｒｆ）が得られた：
【化３６】
【００８７】
このｏｒｆ内で、以下の配列は、プレプロ−ラビリントペプチンＡ２（停止コドンＴＧＡが続くプロペプチドコード配列が続くリーダー配列）の構造遺伝子を示している：
【化３７】
【００８８】
配列番号１３に示されるようなＤＮＡ配列の翻訳により、以下のプレプロ−ラビリントペプチンＡ２のアミノ酸配列（配列番号１４）およびプロ−ラビリントペプチンＡ２のアミノ酸配列（配列番号１５）が得られた：
【化３８】
【００８９】
このプロペプチド配列は、微生物アクチノマデュラ・ナミビエンシス（ＤＳＭ ６３１３）の酵素による翻訳後修飾によって、ラビリントペプチンＡ２中に形質転換される。
【００９０】
実施例１３：ラビリントペプチンＡ１およびＡ３の構造決定
Ａ２遺伝子の上流領域は、ラビリントペプチンＡ２の構造遺伝子に対して高い相同性を有する別の小さなｏｒｆをはっきりと示している。このオープンリーディングフレーム（ｏｒｆ）は、ラビリントペプチンＡ１およびＡ３の構造遺伝子を含んでいた。ラビリントペプチンＡ１についてのｏｒｆは、以下の遺伝子配列を有する：
【化３９】
【００９１】
このｏｒｆ内で、以下の配列は、プレプロ−ラビリントペプチンＡ１およびＡ３（停止コドンＴＧＡが続くプロペプチドコード配列が続くリーダー配列）の構造遺伝子を示している：
【化４０】
【００９２】
配列番号１７に示されるようなＤＮＡ配列の翻訳により、以下のプレプロ−ラビリントペプチンＡ１のアミノ酸配列（配列番号１８）およびプロ−ラビリントペプチンＡ１のアミノ酸配列（配列番号１９）が得られた：
【化４１】
【００９３】
このアミノ酸配列は、ラビリントペプチンＡ１のアミノ酸分析およびＭＳ分析の結果に基づく、ラビリントペプチンＡ１の推定アミノ酸組成（前出）と一致した。側鎖の翻訳後修飾は、ラビリントペプチンＡ２の翻訳後修飾と類似していると推論された。アミノ酸の立体化学は、アミノ酸分析（実施例１１）から得られた。最終的に、デヒドロ酪酸を与えるスレオニン（Ｔｈｒ）残基の脱水は、高分解能ＭＳから算出された実験的分子式に合致すると推定された。類似のラビリントペプチンＡ２の翻訳後修飾されたアミノ酸の立体化学に基づいて、式（ＶＩＩＩ）はラビリントペプチンＡ１に誘導される。
【００９４】
前出の質量分析により、ラビリントペプチンＡ１とＡ３の間の差異はＡｓｐであると示唆された。このことは、ラビリントペプチンＡ１のプロテアーゼ切断側前方の１位にＡｓｐを含むコードされた配列によって確認された。そのラビリントペプチンＡ１とＡ３が、リーダー配列のプロテアーゼ切断においてのみ異なり、同じ遺伝子によってコードされるという仮定の下で、さらなるＡｓｐはラビリントペプチンＡ３のＮ−末端にある。この方法で、式（Ｖ）はラビリントペプチンＡ３に誘導された。ラビリントペプチンＡ２と類似する翻訳後修飾されたアミノ酸の立体化学に基づいて、式（ＶＩ）はラビリントペプチンＡ３に誘導された。
【００９５】
実施例１４：ラビリントペプチンＡ１のジスルフィド架橋の切断および引き続くヨウ化メチルでのアルキル化
【化４２】
ラビリントペプチンＡ１（５０ｍｇ、０．０２４ｍｍｏｌ）をメタノール（３ｍｌ）に溶解し、ジチオスレイトール溶液を室温で加えた（１ｍｌ、１ｍｌの水に４０ｍｇ ＮａＨＣＯ3を溶解した溶液中の７５ｍｇのジチオスレイトールから新たに調製した）。この混合物を６０℃で１時間攪拌した。その後室温に冷却し、ヨウ化メチル（５０μｌ、０．８０ｍｍｏｌ）を加えた。室温で４時間後、混合物を濾過し、Ｗａｔｅｒｓ ＸＴｅｒｒａ（登録商標） Ｐｒｅｐ ＭＳ Ｃ１８ １０μｍプレカラム（寸法１９ｍｍ×１０ｍｍ）を備えたＰｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｌｕｎａ（登録商標） Ａｘｉａ ５μｍ Ｃ１８（２）カラム（寸法１００ｍｍ×３０ｍｍ）を使用して逆相ＨＰＬＣにより精製した。３０分以内の５％から９５％への水中アセトニトリルの勾配を行なった（緩衝液：ｐＨ２．０、ギ酸で調整）。流量は６０ｍｌ／分であり、ピークをＵＶにより分画した。フラクション１２と１３を合わせ、凍結乾燥後、２３．１ｍｇ（４５．５％）の所望の化合物を得た。生成物をＵＶ分光法および質量分析法（Ｂｒｕｋｅｒ Ｄａｌｔｏｎｉｃｓ ＭｉｃｒｏＴｏｆ）でキャラクタリゼーションした。
ＲＴmin＝５．４６分（ＰＤＡ；実施例８と同様のＬＣ方法）
ＵＶ（λmax）：２１７ｎｍ（ｓｈ）、２７９ｎｍ
ＥＳＩ−ＭＳ（ｎｅｇ）：［Ｍ−２Ｈ］2-＝１０５０．８９４
実験的な中性モノアイソトピック質量 ［Ｍ］＝２１０３．８０２
Ｃ94Ｈ125Ｎ23Ｏ25Ｓ4について算出した中性モノアイソトピック質量： ２１０３．８１０
分子式：Ｃ94Ｈ125Ｎ23Ｏ25Ｓ4
化学分子量＝２１０５．４４。
【００９６】
実施例１５：ラビリントペプチンＡ１のジスルフィド架橋の切断および引き続くヨードアセトアミドでのアルキル化
ラビリントペプチンＡ１（５０ｍｇ、０．０２４ｍｍｏｌ）をメタノール（３ｍｌ）に溶解し、ジチオスレイトール溶液を室温で加えた（１ｍｌ、１ｍｌの水に４０ｍｇ ＮａＨＣＯ3を溶解した溶液中の７０ｍｇのジチオスレイトールから新たに調製した）。この混合物を６０℃で１時間攪拌した。その後室温に冷却し、ヨードアセトアミド（４０ｍｇ、０．２１６ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を室温で一晩攪拌した。溶液を濾過し、Ｗａｔｅｒｓ ＸＴｅｒｒａ（登録商標） Ｐｒｅｐ ＭＳ Ｃ１８ １０μｍプレカラム（寸法１９ｍｍ×１０ｍｍ）を備えたＰｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｌｕｎａ（登録商標） Ａｘｉａ ５μｍ Ｃ１８（２）カラム（寸法１００ｍｍ×３０ｍｍ）を使用して逆相ＨＰＬＣにより精製した。３０分以内の５％から９５％への水中アセトニトリルの勾配を行なった（緩衝液：０．１％酢酸アンモニウム、ｐＨ４．６、酢酸で調整）。流量は６０ｍｌ／分であり、ピークをＵＶにより分画した。以下の化合物を得た：
ビス−アセトアミド化ラビリントペプチンＡ１：
【化４３】
【００９７】
フラクション７と８を合わせ、凍結乾燥後、１３．３ｍｇ（２５．２％）の所望の化合物を得た。生成物をＵＶ分光法および質量分析法（Ｂｒｕｋｅｒ Ｄａｌｔｏｎｉｃｓ ＭｉｃｒｏＴｏｆ）でキャラクタリゼーションした。
ＲＴmin＝５．０９分（ＰＤＡ；実施例８と同様のＬＣ方法）
ＵＶ（λmax）： ２１８ｎｍ（ｓｈ）、２８０ｎｍ
ＥＳＩ−ＭＳ （ｎｅｇ）： ［Ｍ−２Ｈ］2-＝１０９３．９０２２
実験的な中性モノアイソトピック質量、［Ｍ］＝２１８９．８１９
Ｃ96Ｈ127Ｎ25Ｏ27Ｓ4について算出した中性モノアイソトピック質量： ２１８９．８２２
分子式： Ｃ96Ｈ127Ｎ25Ｏ27Ｓ4
化学分子量＝２１９１．４９。
【００９８】
モノ−アセトアミド化ラビリントペプチンＡ１：
【化４４】
フラクション１０と１１を合わせ、凍結乾燥後、５．３ｍｇ（１０．３％）の所望の化合物を得た。生成物をＵＶ分光法および質量分析法（ＢｒｕｋｅｒＤａｌｔｏｎｉｃｓ ＭｉｃｒｏＴｏｆ）でキャラクタリゼーションした。
ＲＴmin＝５．３１分（ＰＤＡ；実施例８と同様のＬＣ方法）
ＵＶ（λmax）：２１７ｎｍ（ｓｈ）、２８０ｎｍ
ＥＳＩ−ＭＳ（ｎｅｇ）：［Ｍ−２Ｈ］2-＝１０６５．３９０
実験的な中性モノアイソトピック質量 ［Ｍ］＝２１３２．７９４
Ｃ94Ｈ124Ｎ24Ｏ26Ｓ4について算出した中性モノアイソトピック質量： ２１３２．８００
分子式： Ｃ94Ｈ124Ｎ24Ｏ26Ｓ4
化学分子量＝２１３４．４４。
【００９９】
実施例１６：Ｂｏｃ−保護ラビリントペプチンＡ１の合成
【化４５】
ジメチルホルムアミド（３ｍｌ）中のラビリントペプチンＡ１のの溶液（５０ｍｇ、０．０２４ｍｍｏｌ）に、ジ−ｔｅｒｔ−ブチル−ジカルボナート（１１ｍｇ、０．０４８ｍｍｏｌ）およびｎ−エチルジイソプロピルアミン（６ｍｇ、０．０４８ｍｍｏｌ）を室温で加えた。混合物を室温で２時間攪拌した。その後Ｗａｔｅｒｓ ＸＴｅｒｒａ（登録商標） Ｐｒｅｐ ＭＳ Ｃ１８ １０μｍプレカラム（寸法１９ｍｍ×１０ｍｍ）を備えたＰｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｌｕｎａ（登録商標） Ａｘｉａ ５μｍ Ｃ１８（２）カラム（寸法１００ｍｍ×３０ｍｍ）を使用して逆相ＨＰＬＣにより精製した。３０分以内の５％から９５％への水中アセトニトリルの勾配を行なった（緩衝液：０．１％酢酸アンモニウム、ｐＨ７．０）。流量は６０ｍｌ／分であり、ピークをＵＶにより分画した。フラクション４〜７を合わせ、凍結乾燥後、２１．４ｍｇ（４０．８％）の所望の化合物を得た。生成物をＵＶ分光法および質量分析法（Ｂｒｕｋｅｒ Ｄａｌｔｏｎｉｃｓ ＭｉｃｒｏＴｏｆ）でキャラクタリゼーションした。
ＲＴmin＝５．３０分（ＰＤＡ；実施例８と同様のＬＣ方法）
ＵＶ（λmax）：２１９ｎｍ（ｓｈ）、２７８ｎｍ
ＥＳＩ−ＭＳ（ｎｅｇ）：［Ｍ−２Ｈ］2-＝１０８５．８９５
実験的な中性モノアイソトピック質量［Ｍ］＝２１７３．８０５
Ｃ97Ｈ127Ｎ23Ｏ27Ｓ4について算出した中性モノアイソトピック質量：２１７３．８１５分子式：Ｃ97Ｈ127Ｎ23Ｏ27Ｓ4
化学分子量＝２１７４．４９。
【０１００】
実施例１７：ラビリントペプチンＡ１のベンジル誘導体
ジメチルホルムアミド（２ｍｌ）中のラビリントペプチンＡ１（５０ｍｇ、０．０２４ｍｍｏｌ）の溶液に、ジ−ｔｅｒｔ−ブチル−ジカルボナート（１０ｍｇ、０．０４６ｍｍｏｌ）およびｎ−エチルジイソプロピルアミン（７ｍｇ、０．０５４ｍｍｏｌ）を室温で加えた。室温での１時間後、ラビリントペプチンＡ１は完全になくなった。ベンジルアミン（６．８ｍｇ、０．０６３ｍｍｏｌ）およびｎ−プロピルホスホン酸無水物（Ｔ３Ｐ（登録商標）、５０μｌ、０．０７２ｍｍｏｌ、ＤＭＦ中５０％）を加えた。混合物を室温で２時間攪拌した。その後Ｗａｔｅｒｓ ＸＴｅｒｒａ（登録商標）Ｐｒｅｐ ＭＳ Ｃ１８ １０μｍプレカラム（寸法１９ｍｍ×１０ｍｍ）を備えたＰｈｅｎｏｍｅｎｅｘ
Ｌｕｎａ（登録商標）Ａｘｉａ ５μｍ Ｃ１８（２）カラム（寸法１００ｍｍ×３０ｍｍ）を使用して逆相ＨＰＬＣにより精製した。３０分以内の５％から９５％への水中アセトニトリルの勾配を行なった（緩衝液：０．１％酢酸アンモニウム、ｐＨ７．０）。流量は６０ｍｌ／分であり、ピークをＵＶにより分画した（２２０ｎｍ）。以下の２つの化合物を得た：
【０１０１】
ラビリントペプチンＡ１のモノベンジル誘導体：
【化４６】
フラクション７と８を合わせ、凍結乾燥後、１０．４ｍｇ（１９．１％）の所望の化合物を得た。生成物をＵＶ分光法および質量分析法（Ｂｒｕｋｅｒ Ｄａｌｔｏｎｉｃｓ ＭｉｃｒｏＴｏｆ）でキャラクタリゼーションした。
ＲＴmin＝７．０３分（ＰＤＡ；実施例８と同様のＬＣ方法）
ＵＶ（λmax）：２１７ｎｍ（ｓｈ）、２７５ｎｍ
ＥＳＩ−ＭＳ（ｎｅｇ）：［Ｍ−２Ｈ］2-＝１１３０．４２７
実験的な中性モノアイソトピック質量［Ｍ］＝２２６２．８６８
Ｃ104Ｈ134Ｎ24Ｏ26Ｓ4について算出した中性モノアイソトピック質量：２２６２．８７８
分子式：Ｃ104Ｈ134Ｎ24Ｏ26Ｓ4
化学分子量＝２２６４．６３。
【０１０２】
ラビリントペプチンＡ１のビス−ベンジル誘導体：
【化４７】
フラクション１３と１４を合わせ、凍結乾燥後、９．９ｍｇ（１７．５％）の所望の化合物を得た。生成物をＵＶ分光法および質量分析法（Ｂｒｕｋｅｒ Ｄａｌｔｏｎｉｃｓ ＭｉｃｒｏＴｏｆ）でキャラクタリゼーションした。
ＲＴmin＝８．３１分（ＰＤＡ；実施例８と同様のＬＣ方法）
ＵＶ（λmax）：２１４ｎｍ（ｓｈ）、２７６ｎｍ
ＥＳＩ−ＭＳ（ｐｏｓ）：［Ｍ＋２（ＮＨ4）］2+＝１１９４．００２
実験的な中性モノアイソトピック質量［Ｍ］＝２３５１．９３７
Ｃ111Ｈ141Ｎ25Ｏ25Ｓ4について算出した中性モノアイソトピック質量：２３５１．９４１
分子式：Ｃ111Ｈ141Ｎ25Ｏ25Ｓ4
化学分子量＝２３５３．７７。
【０１０３】
実施例１８：ラビリントペプチンＡ１のＮ−末端におけるアシル化反応
【化４８】
ジメチルホルムアミド（２ｍｌ）中の２−クロロ−４，６−ジメトキシ−１，３，５−トリアジン（ＣＤＭＴ、５ｍｇ、０．０２８ｍｍｏｌ）の溶液に、ｎ−メチルモルホリン（８．６ｍｇ、０．０８５ｍｍｏｌ）を室温で加えた。室温で１時間経過後、ｎ−ヘキサンカルボン酸（３．３ｍｇ、０．０２８ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を３０分間攪拌した後、ラビリントペプチンＡ１（５０ｍｇ、０．０２４ｍｍｏｌ）を加え、その後室温で２時間攪拌した。混合物を、Ｗａｔｅｒｓ ＸＢｒｉｄｇｅ Ｓｈｉｅｌｄ（登録商標）Ｃ１８ １０μｍプレカラム（寸法１９ｍｍ×１０ｍｍ）を備えるＷａｔｅｒｓ ＸＢｒｉｄｇｅ Ｓｈｉｅｌｄ（登録商標）５μｍ Ｃ１８カラム（寸法１００ｍｍ×３０ｍｍ）を用いた逆相ＨＰＬＣによって精製した。３０分以内の５％から９５％への水中アセトニトリルの勾配を行なった（緩衝液：０．１％酢酸アンモニウム、ｐＨ７．０）。流量は６０ｍｌ／分であり、ピークをＵＶにより分画した（２２０ｎｍ）。フラクション３９より、凍結乾燥後、２．０ｍｇ（３．８％）の所望の化合物を得た。生成物をＵＶ分光法および質量分析法（Ｂｒｕｋｅｒ Ｄａｌｔｏｎｉｃｓ ＭｉｃｒｏＴｏｆ）でキャラクタリゼーションした。
ＲＴmin＝５．４１分（ＰＤＡ；実施例８と同様のＬＣ方法）
ＵＶ（λmax）：２１６ｎｍ（ｓｈ）、２６６ｎｍ
ＥＳＩ−ＭＳ（ｎｅｇ）：［Ｍ−２Ｈ］2-＝１０８４．９０６
実験的な中性モノアイソトピック質量［Ｍ］＝２１７１．８２７
について算出した中性モノアイソトピック質量Ｃ98Ｈ129Ｎ23Ｏ26Ｓ4：２１７１．８３６分子式：Ｃ98Ｈ129Ｎ23Ｏ26Ｓ4
化学分子量＝２１７３．５２。
【０１０４】
実施例１９：ラビリントペプチンおよび誘導体の抗菌活性
化合物を最終濃度が１ｍｇ／ｍｌとなるように１０％ＭｅＯＨを含む水に溶解した。バイオアッセイ用に２４×２４ｃｍサイズの滅菌Ｎｕｎｃプレートを用いた。１つのプレートについて２００ｍｌの寒天を使用した。寒天を、オートクレービング後５５℃に冷却し、２〜４ｍｌの試験生物の培養懸濁液をプレーティング前に加えた。各プレートに、直径６ｍｍの６４フィルタープレートを加えた。各フィルターに２０μｌの試験溶液を加え、２８℃または３７℃で１〜３日間インキュベートした。この阻害ゾーンをｍｍで報告した。この方法の詳細な記載については、Ｂａｕｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ａｍｅｒ．Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｐａｔｈｏｌ．１９６６，４５，４９３−４９６；Ｍｕｅｌｌｅｒ ＆ Ｍｅｌｃｈｉｎｇｅｒ，Ｍｅｔｈｏｄｅｎ ｉｎ ｄｅｒ Ｍｉｋｒｏｂｉｏｌｏｇｉｅ，Ｆｒａｎｃｋｈｓｃｈｅ Ｖｅｒｌａｇｓｈａｎｄｌｕｎｇ，Ｓｔｕｔｔｇａｒｔ（１９６４）；Ｍｕｅｌｌｅｒ ＆ Ｈｉｎｔｏｎ，Ｐｒｏｃ．Ｓｏｃ．Ｅｘｐｔ．Ｂｉｏｌ．Ｍｅｄ．１９４１，４８，３３０−３３３を参照のこと。
【０１０５】
【表４】
【０１０６】
実施例２０：神経障害性疼痛（ｎｅｕｒｏｐａｔｈｉｃ ｐａｉｎ）活性
接触性アロディニアに対する活性を試験するために、ラビリントペプチンＡ１を神経障害性疼痛の坐骨神経部分損傷（ｓｐａｒｅｄ ｎｅｒｖｅ ｉｎｊｕｒｙ）（ＳＮＩ）マウスモデルで研究した。全身麻酔下で、腓腹神経はインタクトのまま、成体雄性Ｃ５７Ｂ６マウス（２２．８ｇ±０．３５ＳＥＭ）における坐骨神経の２つの主要な枝を結紮しそして切断した。接触性アロディニアを、自動ｖｏｎ Ｆｒｅｙテストで測定した：ダンプニードルスティックを使用して、後肢の足底皮膚を、５ｇまで増加する強度の圧力刺激に曝露した。動物が後肢を引込めて反応したグラム力を接触性アロディニアの読み出しとして使用した。研究を神経損傷の７日後に６時間にわたって行い、２４時間後さらに測定した。神経切断後２日以内に、接触性アロディニアが完全に発症し、そして少なくとも２週間にわたって安定したままであった。化合物を単回投与（３ｍｇ／ｋｇ）として静脈内投与した。静脈内投与のビヒクルとして、１：１：１８（エタノール：ソルトール（Ｓｏｌｕｔｏｌ）：リン酸化緩衝生理食塩水）ビヒクルを選択した。
【０１０７】
肢逃避反応閾値（ｐａｗ ｗｉｔｈｄｒａｗａｌ ｔｈｒｅｓｈｏｌｄ）（ＰＷＴ）測定値を使用して、有意な治療効果を計算し、そして基準期間（６時間）にわたるＡＵＣ計算及び引き続いての％便益計算を行った。統計分析のために、同側後肢のＰＷＴ値を２つの様式で使用した：第１に、特定の時間（２４時間の期間内）のＰＷＴ値に基づく２ウエイＡＮＯＶＡ、及び第２に、非変換デルタＡＵＣ値｜ＡＵＣ１−６時間｜の１ウエイＡＮＯＶＡ。
【０１０８】
反復測定（ｒｅｐｅａｔｅｄ ｍｅａｓｕｒｅｓ）の２ウエイ分散分析（反復要因（Ｒｅｐｅａｔｅｄ ｆａｃｔｏｒ）：ＴＩＭＥ、分析変数（Ａｎａｌｙｓｉｓ ｖａｒｉａｂｌｅ）：ＰＷＴ）続いての補完的分析（Ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔａｒｙ Ａｎａｌｙｓｉｓ）（要因ＴＩＭＥの各レベルについての要因ＧＲＯＵＰの効果（Ｗｉｎｅｒ分析）、分析変数：ＰＷＴ）及び要因ＴＩＭＥの各レベルについての要因ＴＲＥＡＴＭＥＮＴに関する引き続いてのＤｕｎｎｅｔｔ検定（両側比較 対 レベルＶＥＨＩＣＬＥ）によって、各化合物についての静脈内投与後１〜６時間のビヒクル群に対する高度に有意な差が明らかとなった。効果は投与の２４時間後なくなった。デルタ｜ＡＵＣ１−６時間｜値を使用する１ウエイＡＮＯＶＡは、ｐ＜０．０００１のｐ値を示した。Ｄｕｎｎｅｔｔ分析はラビリントペプチンＡ１について有意な治療効果を与えた。治療のパーセント便益を、同側ビヒクル群（０％便益）の｜ＡＵＣ１−６時間｜値、及び反対側の３つ全ての群［１００％便益＝最大可能効果（ｍａｘｉｍａｌ ｐｏｓｓｉｂｌｅ ｅｆｆｅｃｔ）］の全ての｜ＡＵＣ１−６時間｜値を使用して評価した。これらのマージンを比較すると、ラビリントペプチンＡ１は９５％便益を達成した。
【０１０９】
結論として、式（Ｉ）の化合物は、神経障害性疼痛のＳＮＩマウスモデルにおける接触性アロディニアを有意に軽減した。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
任意の立体化学形態にある、又は任意の立体化学形態の任意の比率の混合物である、式（Ｉ）：
【化１】
〔式中、
｛Ａ｝は、以下から選択される基であり；
【化２】
｛Ｂ｝は、以下から選択される基であり；
【化３】
｛Ｃ｝は、以下から選択される基であり；
【化４】
Ｒ1は、Ｒ1’基または以下
【化５】
［式中、Ｒ1’は、Ｈ、Ｃ（Ｏ）−（Ｃ1−Ｃ6）アルキルまたはＣ（Ｏ）−Ｏ−（Ｃ1−Ｃ6）アルキルである］の基であり；
Ｒ2は、ＯＨ、ＮＨ2、ＮＨ−（Ｃ1−Ｃ6）アルキル、ＮＨ−（Ｃ1−Ｃ4）アルキレン−フェニルまたはＮＨ−（Ｃ1−Ｃ4）アルキレン−ピリジルであり；
Ｒ3およびＲ4は、互いに独立してＨ、（Ｃ1−Ｃ6）アルキル、（Ｃ1−Ｃ6）アルキレン−Ｃ（Ｏ）ＮＨ2、（Ｃ1−Ｃ6）アルキレン−Ｃ（Ｏ）ＮＨ（Ｃ1−Ｃ4）アルキルもしくは（Ｃ1−Ｃ6）アルキレン−Ｃ（Ｏ）Ｎ［（Ｃ1−Ｃ4）アルキル］2であるか、
またはＲ3およびＲ4は、それらが結合するＳ原子と一緒になってジスルフィド基Ｓ−Ｓを形成し；
Ｒ5およびＲ6は、互いに独立してＨもしくはＯＨであるか、またはＲ5およびＲ6は一緒になって＝Ｏであり；
ｍおよびｎは、互いに独立して０、１または２である；
ただし、
｛Ａ｝が
【化６】
｛Ｂ｝が
【化７】
で、かつ
｛Ｃ｝が
【化８】
である場合は、
Ｒ3およびＲ4は、それらが結合するＳ原子と一緒になってジスルフィド基Ｓ−Ｓを形成しない〕
の化合物、またはその生理学的に許容される塩。
【請求項２】
請求項１に記載の式（Ｉ）の化合物であって、
式中、
｛Ａ｝は、
【化９】
｛Ｂ｝は、
【化１０】
｛Ｃ｝は、
【化１１】
である、上記化合物。
【請求項３】
請求項１に記載の化合物であって、
式中、
｛Ａ｝は、
【化１２】
｛Ｂ｝は、
【化１３】
｛Ｃ｝は、
【化１４】
であり、そして
Ｒ1は好ましくはＲ1’基である、化合物。
【請求項４】
Ｒ1’がＨである、請求項１〜３のいずれか１項に記載の式（Ｉ）の化合物。
【請求項５】
Ｒ2がＯＨである、請求項１〜４のいずれか１項に記載の式（Ｉ）の化合物。
【請求項６】
Ｒ3およびＲ4が互いに独立してＨ、（Ｃ1−Ｃ6）アルキル、（Ｃ1−Ｃ6）アルキレン−Ｃ（Ｏ）ＮＨ2であるか、またはそれらが結合するＳ原子と一緒になってジスルフィド基Ｓ−Ｓを形成する、請求項１〜５のいずれか１項に記載の式（Ｉ）の化合物。
【請求項７】
Ｒ3およびＲ4がＨであるか、またはそれらが結合するＳ原子と一緒になってジスルフィド基Ｓ−Ｓを形成する、請求項１〜６のいずれか１項に記載の式（Ｉ）の化合物。
【請求項８】
Ｒ5およびＲ6が、ＨもしくはＯＨであり、ここでＲ5がＯＨである場合はＲ6がＨであり、Ｒ5がＨである場合はＲ6がＯＨであり、またはＲ5およびＲ6が一緒になって＝Ｏである、請求項１〜７のいずれか１項に記載の式（Ｉ）の化合物。
【請求項９】
Ｒ5がＯＨでありＲ6がＨであり、Ｒ5がＨでありＲ6がＯＨである、請求項１〜８のいずれか１項に記載の式（Ｉ）の化合物。
【請求項１０】
以下の式（ＩＩ）：
【化１５】
〔式中、
Ｒ1は、Ｒ1’または以下：
【化１６】
［式中、Ｒ1’はＨ、Ｃ（Ｏ）−（Ｃ1−Ｃ6）アルキルまたはＣ（Ｏ）−Ｏ−（Ｃ1−Ｃ6）アルキル、好ましくはＨである］の基である〕
を特徴とする、請求項１〜９のいずれか１項に記載の式（Ｉ）の化合物。
【請求項１１】
以下の式（ＩＩＩ）：
【化１７】
〔式中、
Ｒ1は、Ｒ1’または以下：
【化１８】
［式中、
Ｒ1’はＨ、Ｃ（Ｏ）−（Ｃ1−Ｃ6）アルキルまたはＣ（Ｏ）−Ｏ−（Ｃ1−Ｃ6）アルキル、好ましくはＨである］の基であり；
Ｒ2はＯＨ、ＮＨ2、ＮＨ−（Ｃ1−Ｃ6）−アルキル、Ｎ［（Ｃ1−Ｃ6）−アルキル］2、ＮＨ−（Ｃ1−Ｃ4）−アルキレン−フェニルまたはＮＨ（Ｃ1−Ｃ4）−アルキレン−ピリジル、好ましくはＲ2はＨであり；そして
Ｒ3およびＲ4は互いに独立してＨ、（Ｃ1−Ｃ6）アルキルまたは（Ｃ1−Ｃ4）−アルキレン−Ｃ（Ｏ）ＮＨ2である〕
を特徴とする、請求項１〜９のいずれか１項に記載の式（Ｉ）の化合物。
【請求項１２】
以下の式（ＩＶ）：
【化１９】
〔式中、
Ｒ1はＨ、Ｃ（Ｏ）−（Ｃ1−Ｃ6）アルキルまたはＣ（Ｏ）−Ｏ−（Ｃ1−Ｃ6）アルキルであり、
Ｒ2はＯＨ、ＮＨ2、ＮＨ−（Ｃ1−Ｃ6）−アルキル、Ｎ［（Ｃ1−Ｃ6）−アルキル］2、ＮＨ−（Ｃ1−Ｃ4）−アルキレン−フェニルまたはＮＨ（Ｃ1−Ｃ4）−アルキレン−ピリジルであり、そして
Ｒ3およびＲ4は互いに独立してＨ、（Ｃ1−Ｃ6）アルキルまたは（Ｃ1−Ｃ4）−アルキレン−Ｃ（Ｏ）ＮＨ2である〕
を特徴とする、請求項１〜９のいずれか１項に記載の式（Ｉ）の化合物。
【請求項１３】
ｍおよびｎが０であるか；またはｍおよびｎが２であるか；またはｍが０でありかつｎが２であるか；またはｍが２でありかつｎが０である、請求項１〜１２のいずれか１項に記載の式（Ｉ）の化合物。
【請求項１４】
ｍおよびｎが０である、請求項１〜１３のいずれか１項に記載の式（Ｉ）の化合物。
【請求項１５】
ａ）培地において、アクチノマデュラ・ナミビエンシス株（ＤＳＭ ６３１３）、又はその変異体及び／若しくは突然変異体の１つを、適した条件下、式（Ｉ）の化合物の１つ又はそれ以上が培地に生じるまで、発酵させること、
ｂ）式（Ｉ）の化合物を培地から単離すること、並びに
ｃ）必要に応じて、工程ｂ）で単離された化合物を誘導体化し、および／または必要に応じて、工程ｂ）で単離された化合物もしくは工程ｂ）で単離された化合物の誘導体を生理学的に許容される塩に変換すること、
を含む、請求項１に記載の式（Ｉ）の化合物を製造する方法。
【請求項１６】
工程ｂ）で単離された化合物が、式（ＩＩ）：
【化２０】
［式中、
ｍおよびｎは０であり、
Ｒ1はＲ1’または以下：
【化２１】
（式中、Ｒ1’はＨである）の基であり、
Ｒ2はＯＨである］
を特徴とする、請求項１５に記載の方法。
【請求項１７】
工程ｂ）で単離された化合物がラビリントペプチンＡ２であり、そしてここで工程ｃ）において、該化合物が式（ＩＶ）：
【化２２】
〔式中、
ｍおよびｎが両方とも０であり、
Ｒ1はＨであり、
Ｒ2はＯＨであり、かつ
Ｒ3およびＲ4は、互いに独立してＨ、（Ｃ1−Ｃ6）アルキル、（Ｃ1−Ｃ6）アルキレン−Ｃ（Ｏ）ＮＨ2、（Ｃ1−Ｃ6）アルキレン−Ｃ（Ｏ）ＮＨ（Ｃ1−Ｃ4）アルキルまたは（Ｃ1−Ｃ6）アルキレン−Ｃ（Ｏ）Ｎ［（Ｃ1−Ｃ4）アルキル］2である〕
で特徴づけられる化合物に誘導体化される、請求項１５に記載の方法。
【請求項１８】
細菌感染、ウイルス感染および／または疼痛の治療用の薬剤を製造するための、請求項１〜１４のいずれか１項に記載の化合物の使用。
【請求項１９】
請求項１〜１４のいずれか１項に記載の少なくとも１つの式（Ｉ）の化合物および少なくとも１つの薬学的に許容される成分を含む、薬学的組成物。
【請求項２０】
配列番号１３に示される核酸配列を有するプレプロ−ラビリントペプチンＡ２をコードするＤＮＡ。
【請求項２１】
配列番号１４に示されるアミノ酸配列を有する、プレプロ−ラビリントペプチンＡ２。
【請求項２２】
配列番号１５に示されるアミノ酸配列を有する、プロ−ラビリントペプチンＡ２。
【請求項２３】
配列番号１７に示される核酸配列を有する、プレプロ−ラビリントペプチンＡ１をコードするＤＮＡ。
【請求項２４】
配列番号１８に示されるアミノ酸配列を有する、プレプロ−ラビリントペプチンＡ１。
【請求項２５】
配列番号１９に示されるアミノ酸配列を有する、プロ−ラビリントペプチンＡ１。
【請求項１】
任意の立体化学形態にある、又は任意の立体化学形態の任意の比率の混合物である、式（Ｉ）：
【化１】
〔式中、
｛Ａ｝は、以下から選択される基であり；
【化２】
｛Ｂ｝は、以下から選択される基であり；
【化３】
｛Ｃ｝は、以下から選択される基であり；
【化４】
Ｒ1は、Ｒ1’基または以下
【化５】
［式中、Ｒ1’は、Ｈ、Ｃ（Ｏ）−（Ｃ1−Ｃ6）アルキルまたはＣ（Ｏ）−Ｏ−（Ｃ1−Ｃ6）アルキルである］の基であり；
Ｒ2は、ＯＨ、ＮＨ2、ＮＨ−（Ｃ1−Ｃ6）アルキル、ＮＨ−（Ｃ1−Ｃ4）アルキレン−フェニルまたはＮＨ−（Ｃ1−Ｃ4）アルキレン−ピリジルであり；
Ｒ3およびＲ4は、互いに独立してＨ、（Ｃ1−Ｃ6）アルキル、（Ｃ1−Ｃ6）アルキレン−Ｃ（Ｏ）ＮＨ2、（Ｃ1−Ｃ6）アルキレン−Ｃ（Ｏ）ＮＨ（Ｃ1−Ｃ4）アルキルもしくは（Ｃ1−Ｃ6）アルキレン−Ｃ（Ｏ）Ｎ［（Ｃ1−Ｃ4）アルキル］2であるか、
またはＲ3およびＲ4は、それらが結合するＳ原子と一緒になってジスルフィド基Ｓ−Ｓを形成し；
Ｒ5およびＲ6は、互いに独立してＨもしくはＯＨであるか、またはＲ5およびＲ6は一緒になって＝Ｏであり；
ｍおよびｎは、互いに独立して０、１または２である；
ただし、
｛Ａ｝が
【化６】
｛Ｂ｝が
【化７】
で、かつ
｛Ｃ｝が
【化８】
である場合は、
Ｒ3およびＲ4は、それらが結合するＳ原子と一緒になってジスルフィド基Ｓ−Ｓを形成しない〕
の化合物、またはその生理学的に許容される塩。
【請求項２】
請求項１に記載の式（Ｉ）の化合物であって、
式中、
｛Ａ｝は、
【化９】
｛Ｂ｝は、
【化１０】
｛Ｃ｝は、
【化１１】
である、上記化合物。
【請求項３】
請求項１に記載の化合物であって、
式中、
｛Ａ｝は、
【化１２】
｛Ｂ｝は、
【化１３】
｛Ｃ｝は、
【化１４】
であり、そして
Ｒ1は好ましくはＲ1’基である、化合物。
【請求項４】
Ｒ1’がＨである、請求項１〜３のいずれか１項に記載の式（Ｉ）の化合物。
【請求項５】
Ｒ2がＯＨである、請求項１〜４のいずれか１項に記載の式（Ｉ）の化合物。
【請求項６】
Ｒ3およびＲ4が互いに独立してＨ、（Ｃ1−Ｃ6）アルキル、（Ｃ1−Ｃ6）アルキレン−Ｃ（Ｏ）ＮＨ2であるか、またはそれらが結合するＳ原子と一緒になってジスルフィド基Ｓ−Ｓを形成する、請求項１〜５のいずれか１項に記載の式（Ｉ）の化合物。
【請求項７】
Ｒ3およびＲ4がＨであるか、またはそれらが結合するＳ原子と一緒になってジスルフィド基Ｓ−Ｓを形成する、請求項１〜６のいずれか１項に記載の式（Ｉ）の化合物。
【請求項８】
Ｒ5およびＲ6が、ＨもしくはＯＨであり、ここでＲ5がＯＨである場合はＲ6がＨであり、Ｒ5がＨである場合はＲ6がＯＨであり、またはＲ5およびＲ6が一緒になって＝Ｏである、請求項１〜７のいずれか１項に記載の式（Ｉ）の化合物。
【請求項９】
Ｒ5がＯＨでありＲ6がＨであり、Ｒ5がＨでありＲ6がＯＨである、請求項１〜８のいずれか１項に記載の式（Ｉ）の化合物。
【請求項１０】
以下の式（ＩＩ）：
【化１５】
〔式中、
Ｒ1は、Ｒ1’または以下：
【化１６】
［式中、Ｒ1’はＨ、Ｃ（Ｏ）−（Ｃ1−Ｃ6）アルキルまたはＣ（Ｏ）−Ｏ−（Ｃ1−Ｃ6）アルキル、好ましくはＨである］の基である〕
を特徴とする、請求項１〜９のいずれか１項に記載の式（Ｉ）の化合物。
【請求項１１】
以下の式（ＩＩＩ）：
【化１７】
〔式中、
Ｒ1は、Ｒ1’または以下：
【化１８】
［式中、
Ｒ1’はＨ、Ｃ（Ｏ）−（Ｃ1−Ｃ6）アルキルまたはＣ（Ｏ）−Ｏ−（Ｃ1−Ｃ6）アルキル、好ましくはＨである］の基であり；
Ｒ2はＯＨ、ＮＨ2、ＮＨ−（Ｃ1−Ｃ6）−アルキル、Ｎ［（Ｃ1−Ｃ6）−アルキル］2、ＮＨ−（Ｃ1−Ｃ4）−アルキレン−フェニルまたはＮＨ（Ｃ1−Ｃ4）−アルキレン−ピリジル、好ましくはＲ2はＨであり；そして
Ｒ3およびＲ4は互いに独立してＨ、（Ｃ1−Ｃ6）アルキルまたは（Ｃ1−Ｃ4）−アルキレン−Ｃ（Ｏ）ＮＨ2である〕
を特徴とする、請求項１〜９のいずれか１項に記載の式（Ｉ）の化合物。
【請求項１２】
以下の式（ＩＶ）：
【化１９】
〔式中、
Ｒ1はＨ、Ｃ（Ｏ）−（Ｃ1−Ｃ6）アルキルまたはＣ（Ｏ）−Ｏ−（Ｃ1−Ｃ6）アルキルであり、
Ｒ2はＯＨ、ＮＨ2、ＮＨ−（Ｃ1−Ｃ6）−アルキル、Ｎ［（Ｃ1−Ｃ6）−アルキル］2、ＮＨ−（Ｃ1−Ｃ4）−アルキレン−フェニルまたはＮＨ（Ｃ1−Ｃ4）−アルキレン−ピリジルであり、そして
Ｒ3およびＲ4は互いに独立してＨ、（Ｃ1−Ｃ6）アルキルまたは（Ｃ1−Ｃ4）−アルキレン−Ｃ（Ｏ）ＮＨ2である〕
を特徴とする、請求項１〜９のいずれか１項に記載の式（Ｉ）の化合物。
【請求項１３】
ｍおよびｎが０であるか；またはｍおよびｎが２であるか；またはｍが０でありかつｎが２であるか；またはｍが２でありかつｎが０である、請求項１〜１２のいずれか１項に記載の式（Ｉ）の化合物。
【請求項１４】
ｍおよびｎが０である、請求項１〜１３のいずれか１項に記載の式（Ｉ）の化合物。
【請求項１５】
ａ）培地において、アクチノマデュラ・ナミビエンシス株（ＤＳＭ ６３１３）、又はその変異体及び／若しくは突然変異体の１つを、適した条件下、式（Ｉ）の化合物の１つ又はそれ以上が培地に生じるまで、発酵させること、
ｂ）式（Ｉ）の化合物を培地から単離すること、並びに
ｃ）必要に応じて、工程ｂ）で単離された化合物を誘導体化し、および／または必要に応じて、工程ｂ）で単離された化合物もしくは工程ｂ）で単離された化合物の誘導体を生理学的に許容される塩に変換すること、
を含む、請求項１に記載の式（Ｉ）の化合物を製造する方法。
【請求項１６】
工程ｂ）で単離された化合物が、式（ＩＩ）：
【化２０】
［式中、
ｍおよびｎは０であり、
Ｒ1はＲ1’または以下：
【化２１】
（式中、Ｒ1’はＨである）の基であり、
Ｒ2はＯＨである］
を特徴とする、請求項１５に記載の方法。
【請求項１７】
工程ｂ）で単離された化合物がラビリントペプチンＡ２であり、そしてここで工程ｃ）において、該化合物が式（ＩＶ）：
【化２２】
〔式中、
ｍおよびｎが両方とも０であり、
Ｒ1はＨであり、
Ｒ2はＯＨであり、かつ
Ｒ3およびＲ4は、互いに独立してＨ、（Ｃ1−Ｃ6）アルキル、（Ｃ1−Ｃ6）アルキレン−Ｃ（Ｏ）ＮＨ2、（Ｃ1−Ｃ6）アルキレン−Ｃ（Ｏ）ＮＨ（Ｃ1−Ｃ4）アルキルまたは（Ｃ1−Ｃ6）アルキレン−Ｃ（Ｏ）Ｎ［（Ｃ1−Ｃ4）アルキル］2である〕
で特徴づけられる化合物に誘導体化される、請求項１５に記載の方法。
【請求項１８】
細菌感染、ウイルス感染および／または疼痛の治療用の薬剤を製造するための、請求項１〜１４のいずれか１項に記載の化合物の使用。
【請求項１９】
請求項１〜１４のいずれか１項に記載の少なくとも１つの式（Ｉ）の化合物および少なくとも１つの薬学的に許容される成分を含む、薬学的組成物。
【請求項２０】
配列番号１３に示される核酸配列を有するプレプロ−ラビリントペプチンＡ２をコードするＤＮＡ。
【請求項２１】
配列番号１４に示されるアミノ酸配列を有する、プレプロ−ラビリントペプチンＡ２。
【請求項２２】
配列番号１５に示されるアミノ酸配列を有する、プロ−ラビリントペプチンＡ２。
【請求項２３】
配列番号１７に示される核酸配列を有する、プレプロ−ラビリントペプチンＡ１をコードするＤＮＡ。
【請求項２４】
配列番号１８に示されるアミノ酸配列を有する、プレプロ−ラビリントペプチンＡ１。
【請求項２５】
配列番号１９に示されるアミノ酸配列を有する、プロ−ラビリントペプチンＡ１。
【公表番号】特表２０１１−５１６０４８（Ｐ２０１１−５１６０４８Ａ）
【公表日】平成２３年５月２６日（２０１１．５．２６）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２０１１−５０２２５２（Ｐ２０１１−５０２２５２）
【出願日】平成２１年３月１８日（２００９．３．１８）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＥＰ２００９／００１９８２
【国際公開番号】ＷＯ２００９／１２１４８３
【国際公開日】平成２１年１０月８日（２００９．１０．８）
【出願人】（３９９０５０９０９）サノフィ−アベンティス (225)
【Ｆターム（参考）】
【公表日】平成２３年５月２６日（２０１１．５．２６）
【国際特許分類】
【出願日】平成２１年３月１８日（２００９．３．１８）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＥＰ２００９／００１９８２
【国際公開番号】ＷＯ２００９／１２１４８３
【国際公開日】平成２１年１０月８日（２００９．１０．８）
【出願人】（３９９０５０９０９）サノフィ−アベンティス (225)
【Ｆターム（参考）】
[ Back to top ]