アシルオキサゾロン誘導体及びβ−ケトアミノ酸誘導体の製造方法
【課題】β−ケトアミノ酸誘導体に変換可能なアシルオキサゾロン化合物を短工程、かつ強塩基や高価な試薬、極低温を必要としない安価な条件で効率的・高収率、かつ後処理・精製が容易な方法で製造することができる、アシルオキサゾロン化合物の工業的製造方法を提供すること。
【解決手段】オキサゾール化合物にルイス酸の存在下、酸ハライド、酸無水物等のアシル化剤を作用させることにより、アシルオキサゾロン化合物を得ることを特徴とするアシルオキサゾロン化合物の製造方法、及び上記アシルオキサゾロン化合物からβ−ケトアミノ酸誘導体を製造する方法。
【解決手段】オキサゾール化合物にルイス酸の存在下、酸ハライド、酸無水物等のアシル化剤を作用させることにより、アシルオキサゾロン化合物を得ることを特徴とするアシルオキサゾロン化合物の製造方法、及び上記アシルオキサゾロン化合物からβ−ケトアミノ酸誘導体を製造する方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、アシルオキサゾロン化合物及びβ−ケトアミノ酸誘導体の製造方法に関する。本発明の方法で得られるβ−ケトアミノ酸誘導体は、変換して光学活性β−ヒドロキシアミノ酸を経由して、抗ＨＩＶウィルス薬として有用なことが知られている薬剤の中間体であるＤ−エリスロ−３−シクロヘキシルセリンに誘導可能であることから、医農薬中間体として有用な化合物である。
【背景技術】
【０００２】
アシルオキサゾロン類の合成方法としては、馬尿酸又は２−フェニルオキサゾール−５−オンをトリフルオロ酢酸存在下、γ−ピコリン中、酸クロリドと反応させる方法（非特許文献１）、及び馬尿酸ナトリウム塩と酸無水物をβ−ピコリン中反応させる方法（非特許文献２及び３）が知られている。しかし、いずれの反応も酸クロリド又は酸無水物を過剰に用いる必要があり、高価な酸クロリド又は酸無水物を使用する必要がある場合、製造コストが高額になるという問題点があった。
【０００３】
また、２−フェニルオキサゾール−５−オンとアシル化剤等量を用いる方法（非特許文献４）も報告されている。この文献では高価なγ−ピコリンを溶媒として用いているが、γ−ピコリンは高沸点かつ水溶性も高いため回収が困難であるので製造コストが高くなり、また、大量の溶媒を用い、反応時間に１日を要する等実用的ではない。一方、γ−ピコリンを用いない方法（特許文献１及び２）も報告されているが、いずれも用いる酸クロリドはコハク酸モノエステルクロライド誘導体に限定され、一般性が高いとは言えず、反応時間も１日〜３日と長時間を要する。
【０００４】
また、これまでに報告されているアシルオキサゾロン類の合成例は単純な化合物又は類似した化合物が多く、特に立体障害の大きいα位に置換基を持つ酸クロリド又は酸無水物を用いた例はわずかしかない上（特許文献１、非特許文献３）、そのいずれも収率３０％程度と低収率であり、工業的に安価かつ汎用性の高いアシルオキサゾロン類の製造には課題が残されていた。
【０００５】
【非特許文献１】Ｂｕｌｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＳＲ Ｄｉｖ．Ｃｈｅｍ．Ｓｃｉ．１９８２，３１，２２２３．
【非特許文献２】Ｊ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．１９４８，３，３１０−３１８
【非特許文献３】Ｊ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．１９６０，９６８−９７３
【非特許文献４】Ｂｕｌｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＳＲ Ｄｉｖ．Ｃｈｅｍ．Ｓｃｉ．１９８４，３３，３８４．
【特許文献１】特開平１−３０５０７１号公報
【特許文献２】国際公開第９８／５４１６２号パンフレット
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
本発明は、β−ケトアミノ酸誘導体に変換可能なアシルオキサゾロン化合物を短工程、かつ強塩基や高価な試薬、極低温を必要としない安価な条件で効率的・高収率、かつ後処理・精製が容易な方法で製造することができる、アシルオキサゾロン化合物の工業的製造方法を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本発明者は、上記課題を解決するために鋭意検討した結果、オキサゾール化合物をアシル化することでアシルオキサゾロン化合物を合成でき、このアシルオキサゾロン化合物をアルコール類と反応させることでβ−ケトアミノ酸化合物を一貫して温和な条件で効率的に合成できることを見出し、本発明を完成するに至った。
【０００８】
即ち、本発明によれば、以下の発明が提供される。
（１） 下記一般式（１）
【化１】
（式中、Ｒ1及びＲ2はそれぞれ独立して、置換していてもよいアルキル基、又は置換していてもよいアリール基を示す。）で表されるオキサゾール化合物にルイス酸の存在下、アシル化剤を作用させることにより、下記一般式（２）
【化２】
（式中、Ｒ1は前記と同義であり、Ｒ3は置換していてもよいアルキル基、又は置換していてもよいアリール基を示し、Ｘは水素原子又は金属原子を示す。Ｘが水素原子の場合、金属化合物と錯体を形成していてもよい。）で表されるアシルオキサゾロン化合物を製造する工程を含む、アシルオキサゾロン化合物の製造方法。
【０００９】
（２） アシル化剤が、酸ハライド又は酸無水物である、（１）に記載の方法。
【００１０】
（３） （１）の方法により製造した一般式（２）で表されるオキサゾロン化合物にアルコール類を作用させることにより下記一般式（３）
【化３】
（式中、Ｒ1及びＲ3はそれぞれ独立して、置換していてもよいアルキル基、又は置換していてもよいアリール基を示し、Ｒ4は置換してもよいアルキル基、又は置換していてもよいアラルキル基を示す。）で表される化合物を製造する工程を含む、β−ケトアミノ酸誘導体の製造方法。
【００１１】
（４） 下記一般式（４）
【化４】
（式中、Ｒ1は置換していてもよいアルキル基、又は置換していてもよいアリール基を示し、Ｘは水素原子又は金属原子を示す。Ｘが水素原子の場合、金属化合物と錯体を形成していてもよい。）で表されるシクロヘキシルメチリデニルオキサゾロン化合物。
【００１２】
（５） （ｉ）（３）に記載の方法により一般式（３）で表されるβ−ケトアミノ酸誘導体を製造する工程、及び
（ｉｉ）上記工程（ｉ）で得られた一般式（３）で表されるβ−ケトアミノ酸誘導体に微生物の菌体及び／又は該菌体処理物を作用させて下記一般式（５）
【化５】
（式中、Ｒ1及びＲ3はそれぞれ独立して、置換していてもよいアルキル基、又は置換していてもよいアリール基を示し、Ｒ4は置換してもよいアルキル基、又は置換していてもよいアラルキル基を示し、Ｘは水素原子又は金属原子を示す。Ｘが水素原子の場合、金属化合物と錯体を形成していてもよい。）で表されるα−Ｎ−アシルアミノ−β−ヒドロキシエステルを得る工程を含む、α−Ｎ−アシルアミノ−β−ヒドロキシエステルを製造する方法。
【００１３】
（６） （ｉ）（５）に記載の方法により一般式（５）で表されるＮ−アシルアミノ−β−ヒドロキシエステルを製造する工程、
（ｉｉ）上記工程（ｉ）で得られたα−Ｎ−アシルアミノ−β−ヒドロキシエステルに酸又は塩基を作用させて加水分解を行い、下記一般式（６）
【化６】
（式中、Ｒ3は置換していてもよいアルキル基、又は置換していてもよいアリール基を示し、Ｘは水素原子又は金属原子を示す。Ｘが水素原子の場合、金属化合物と錯体を形成していてもよい。）で表されるβ−ヒドロキシアミノ酸を得る工程；及び
（ｉｉｉ）上記工程（ｉｉ）で得られたβ−ヒドロキシアミノ酸にｔ−ブトキシカルボニル化剤を作用させて下記一般式（７）
【化７】
（式中、Ｒ3及びＸは前記と同義。Ｘが水素原子の場合、金属化合物と錯体を形成していてもよい。）で表される化合物を製造する工程、を含むＮ−ｔ−ブトキシカルボニル−β−ヒドロキシアミノ酸の製造方法。
【発明の効果】
【００１４】
本発明によれば、安価かつ温和な工業的製造法で、医農薬中間体として有用な化合物であるアシルオキサゾロン化合物及びβ−ケトアミノ酸化合物を効率よく製造することができる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１５】
以下、本発明を詳細に説明する。
＜オキサゾ−ル化合物、アシルオキサゾロン化合物＞
本発明の製造方法は、上記一般式（１）で表されるオキサゾール化合物にルイス酸の存在下、酸ハライド又は酸無水物などのアシル化剤を作用させることにより、上記一般式（２）で表されるアシルオキサゾロン化合物を得ることを特徴とするものである。
【００１６】
上記一般式（１）において、Ｒ1は、置換していてもよいアルキル基又は置換してもよいアリール基を示す。アルキル基としては、好ましくは炭素数１〜１０の直鎖状、分岐状若しくは環状のアルキル基であり、更に好ましくは炭素数１〜６の直鎖状若しくは分岐状のアルキル基であり、より好ましくは炭素数１〜４の直鎖状若しくは分岐状のアルキル基であり、例えば、メチル基、エチル基、イソプロピル基、ノルマルプロピル基、ノルマルブチル基、ｔ−ブチル基、シクロヘキシル基であり、最も好ましくはメチル基である。置換してもよいアリール基のアリール基としては、ナフチル基、フェニル基等であり、最も好ましくはフェニル基である。上記のアルキル基及びアリール基は置換していてもよく、置換基としては特に限定はないが、アルキル基、アリール基、アルコキシ基、フッ素原子、塩素原子、臭素原子等のハロゲン原子、ニトロ基、水酸基、カルボキシル基、アミノ基等が挙げられる。好ましくはハロゲン原子、アルコキシ基である。置換してもよいアリール基としては、フェニル基や４−メトキシフェニル基が好ましく、更に好ましくはフェニル基である。
【００１７】
上記一般式（１）において、Ｒ2は置換していてもよいアルキル基又は置換していてもよいアリール基を示す。アルキル基としては、好ましくは炭素数１〜１０の直鎖状、分岐状若しくは環状のアルキル基であり、更に好ましくは炭素数１〜６の直鎖状若しくは分岐状のアルキル基であり、より好ましくは炭素数１〜４の直鎖状若しくは分岐状のアルキル基であり、例えば、メチル基、エチル基、イソプロピル基、ノルマルプロピル基、ノルマルブチル基、ｔ−ブチル基、又はシクロヘキシル基であり、最も好ましくはメチル基である。置換してもよいアリール基のアリール基としては、ナフチル基、フェニル基等であり、最も好ましくはフェニル基である。上記アルキル基及びアリール基は置換していてもよく、置換基としては特に限定はないが、アルキル基、アリール基、アルコキシ基、フッ素原子、塩素原子、臭素原子等のハロゲン原子、ニトロ基、水酸基、カルボキシル基、アミノ基等が挙げられる。好ましくはハロゲン原子、アルコキシ基である。置換してもよいアリール基としては、フェニル基や４−メトキシフェニル基が好ましく、更に好ましくはフェニル基である。
【００１８】
一般式（１）は、好ましくはＲ1がフェニル基で、Ｒ2がメチル基又はフェニル基であることが好ましい。
【００１９】
上記一般式（２）において、Ｒ1は前記と同義であり、Ｒ3は置換していてもよいアルキル基、又は置換していてもよいアリール基を示す。アルキル基としては、好ましくは炭素数１〜１０の直鎖状、分岐状若しくは環状のアルキル基であり、更に好ましくはメチル基、エチル基、イソプロピル基、ノルマルプロピル基、ノルマルブチル基、ｔ−ブチル基、シクロプロピル基、シクロブチル基、シクロペンチル基、シクロヘキシル基、シクロヘプチル基等の炭素数１〜７の直鎖状、分岐状若しくは環状のアルキル基、特に好ましくは炭素数１〜４の直鎖状若しくは分岐状のアルキル基又は炭素数５〜７の環状のアルキル基であり、最も好ましくは炭素数５〜７の環状のアルキル基である。置換していてもよいアリール基のアリール基としては、ナフチル基、フェニル基等であり、最も好ましくはフェニル基である。上記アルキル基及びアリール基は置換していてもよく、置換基としては特に限定はないが、フッ素原子、塩素原子、臭素原子等のハロゲン原子、アルキル基、アリール基、アルコキシ基、ニトロ基、水酸基、カルボキシル基、アミノ基等が挙げられ、好ましくはアルコキシ基である。置換してもよいアリール基としては、フェニル基や４−メトキシフェニル基が好ましく、更に好ましくはフェニル基である。
【００２０】
上記一般式（２）において、Ｘは水素原子又は金属原子を示す。金属原子は特に限定はないが、Ｌｉ、Ｎａ、Ｋ、Ｒｂ等のアルカリ金属原子、Ｂｅ、Ｍｇ、Ｃａ、Ｓｒ、Ｂａ等のアルカリ土類金属、Ｔｉ、Ｍｎ、Ｆｅ、Ｎｉ、Ｚｎ、Ｚｒ、Ｈｇ、Ｐｄ等の遷移金属原子、Ｓｎ、Ｐｂ、Ａｌ等の典型金属が挙げられる。金属原子として好ましいのは、アルカリ金属であるＬｉ、Ｎａ、Ｋ、Ｒｂ、又はアルカリ土類金属であるＢｅ、Ｍｇ、Ｃａ、Ｓｒ、Ｂａである。Ｘとして、好ましいのは水素原子である。
【００２１】
上記一般式（２）において、Ｘが水素原子の場合、金属化合物と錯体を形成していてもよい。具体的には、一般式（２）のヒドロキシル基とカルボニル基が金属化合物と配位結合をして錯体を形成する場合や、一般式（２）のヒドロキシル基と窒素原子が金属化合物と配位結合をして錯体を形成する場合が挙げられる。また、金属に対して、一般式（２）は１：１配位であってもよく、１：２配位であってもかまわない。
【００２２】
金属化合物は特に限定はないが、金属原子は、Ｔｉ、Ｍｎ、Ｆｅ、Ｎｉ、Ｚｎ、 Ｚｒ、Ｈｇ、Ｐｄ等の遷移金属原子、Ｓｎ、Ｐｂ、Ａｌ等の典型金属が挙げられる。また、金属原子として好ましいのは、安価かつ本反応で種々の基質に対して汎用性のある触媒となりうるＳｎ、Ａｌ、Ｆｅ、Ｎｉ、Ｚｎ等が好ましい。
【００２３】
錯体として、好ましいのは反応に用いるルイス酸又はその派生物がヒドロキシル基とカルボニル基と配位結合をしている化合物である。具体的には、塩化スズ（IV）錯体、塩化アルミニウム錯体、塩化鉄（III）錯体、塩化ニッケル錯体等が挙げられる。好ましくは塩化スズ（IV）錯体、塩化アルミニウム錯体である。
【００２４】
一般式（２）において好ましくは、Ｒ1がフェニル基であり、Ｒ3がシクロヘキシル基であり、Ｘが水素、Ｎａ、Ｋ、又はＣａであるか、又はＸが水素でＳｎ、Ａｌ、Ｆｅ、Ｎｉ、Ｚｎ錯体である。より好ましくは、Ｒ1がフェニル基であり、Ｒ3がシクロヘキシル基であり、Ｘが水素であるか、又はＸが水素でＳｎ、Ａｌ、Ｆｅ、Ｎｉ、Ｚｎ錯体である。
【００２５】
また、一般式（２）及び（４）で表される化合物のうち、Ｘが水素原子の場合は、ケト型の互変異性体であってもよい。
【００２６】
本発明においては、一般式（１）のオキサゾール化合物をルイス酸の存在下、酸ハライド（例えば、酸クロライド）又は酸無水物などのアシル化剤を作用させて一般式（２）のアシルオキサゾロン化合物を得るものである。かくして製造される一般式（２）のアシルオキサゾロン化合物のうち、下記一般式（４）
【００２７】
【化８】
【００２８】
（式中、Ｒ1及びＸは前記と同義。Ｘが水素原子の場合、金属化合物と錯体を形成していてもよい。）で表される化合物は新規化合物である。
【００２９】
一般式（４）の具体例としては、次のような化合物が挙げられる。
【００３０】
【化９】
【００３１】
式（４ａ）〜（４ｅ）中、Ｒ1はメチル基、フェニル基を、Ｍ1はＮａ、Ｋ、Ｃａを、Ｍ2はＳｎＣｌ4、ＡｌＣｌ3、ＦｅＣｌ3、ＮｉＣｌ2、ＺｎＣｌ2を表す。
【００３２】
＜アシルオキサゾロン誘導体の製造方法＞
本発明は、一般式（１）のオキサゾール化合物をルイス酸の存在下、酸ハライド或いは酸無水物などのアシル化剤を作用させて一般式（２）のアシルオキサゾロン化合物を得るものである。
【００３３】
ルイス酸としては、特に限定はないが、具体的には塩化アルミニウム（III）、四塩化スズ（IV）、塩化鉄（III）、塩化亜鉛（II）、塩化ニッケル（II）、三フッ化ホウ素エーテル錯体等が挙げられ、好ましくは工業的に入手が容易である四塩化スズ（IV）、塩化鉄（III）、塩化ニッケル（II）、塩化アルミニウム（III）が好ましい。
【００３４】
ルイス酸の使用量としては特に限定されないが、通常は原料である一般式（１）に対して０．０２モルから１０モル倍で反応は進行するが、生成物とルイス酸が錯体を形成しやすい性質があるため１モル倍以上の使用が好ましく、コストの観点から１〜３モル倍の使用が好ましい。
【００３５】
本発明で使用するアシル化剤は、一般式（１）のオキサゾール化合物に作用させることによって一般式（２）のアシルオキサゾロン化合物を製造することができるものであれば特に限定されないが、好ましくは酸ハライド又は酸無水物である。酸ハライド又は酸無水物としては、特に限定されないが、具体的には、アセチルクロリド、イソ酪酸クロリド、ピバロイルクロリド、シクロヘキサノイルクロリド、ベンゾイルクロリド、４−メトキシベンゾイルクロリド等の酸クロリド；アセチルブロミド、イソプロピオン酸ブロミド、ピバロイルブロミド、シクロヘキシルブロミド、ベンゾイルブロミド、４−メトキシベンゾイルブロミド等の酸ブロミド；アセチルヨージド、イソ酪酸ヨージド、ピバロイルヨージド、シクロヘキサノイルヨージド、ベンゾイルヨージド、４−メトキシベンゾイルヨージド等の酸ヨージドが挙げられ、好ましくはコスト的に安価である酸クロリド、酸ブロミドが好ましく、更に好ましくはシクロヘキサノイルクロリドやイソ酪酸クロリド、ベンゾイルクロリド等である。
【００３６】
酸無水物としては、無水酢酸、プロピオン酸無水物、ピバリン酸無水物、シクロヘキサン酸カルボン酸無水物、安息香酸無水物等があり、好ましくはシクロヘキサン酸カルボン酸無水物、プロピオン酸無水物、ピバリン酸無水物である。
【００３７】
酸ハライドの使用量としては特に限定されないが、通常は原料である化合物（１）に対して０．８〜５倍モル、コストや化合物（２）の精製のしやすさの観点から一般式（１）と同モルに近い０．９〜２倍モルの使用が好ましい。
【００３８】
反応を行う条件のうち、用いる溶媒としては反応に悪影響を与えないものであれば特に限定はないが、ヘキサン、ベンゼン、トルエン等の炭化水素系溶媒；エチルエーテル、プロピルエーテル、ブチルエーテル、テトラヒドロフラン等のエーテル系溶媒；ジクロロメタン、クロロホルム、ジクロロエタン、クロロベンゼン等のハロゲン系溶媒；酢酸エチル、酢酸ブチル等のエステル系溶媒、アセトニトリル等のニトリル系溶媒、ニトロベンゼン、ニトロメタン等のニトロ系溶媒；等が挙げられる。これらから選ばれる複数の溶媒を任意の割合に混合して用いてもよい。好ましい溶媒は、一般的にアシル化反応に影響を及ぼさないジクロロメタン、クロロベンゼン等のハロゲン系溶媒、アセトニトリル等のニトリル系溶媒、ニトロベンゼン、ニトロメタン等のニトロ系溶媒、ヘキサン、ベンゼン、トルエン等の炭化水素系溶媒である。更に好ましくは、アセトニトリル、ジクロロメタン、クロロホルム、クロロベンゼン、ニトロベンゼン、ニトロメタン及びトルエンである。
【００３９】
また、溶媒の使用量としては、任意の量の溶媒を用いることができるが、通常は原料基質に対して２〜５０倍体積量、好ましくは３〜１０倍体積量である。
【００４０】
この反応を実施する温度としては、特に限定されないが−５０℃から１００℃程度であり、好ましくは−１０℃から４０℃程度が好ましい。実施する圧力に関しては特に加圧下で行う必要はないが、反応時間を短縮する等の観点から常圧から１０気圧程度の圧力をかけてもよい。反応時間は、１０分〜数日の範囲で行うことができるが、製造コストを抑える観点から２４時間以内に終了させることが好ましく、更に好ましくは１０分から８時間である。
【００４１】
一般式（１）のオキサゾール化合物は公知の方法で製造すれば特に限定はないが、下記一般式（８）
【００４２】
【化１０】
【００４３】
で表されるオキサゾロン化合物とベンゾイルクロリドやアセチルクロリド等のアシル化剤を作用させる、あるいは下記一般式（９）
【００４４】
【化１１】
【００４５】
で表される馬尿酸とベンゾイルクロライドやアセチルクロライド等のアシル化剤を作用させることで合成可能である。ここで、一般式（８）及び（９）におけるＲ1は、一般式（１）におけるＲ1と同義である。
【００４６】
＜β−ケトアミノ酸誘導体の製造方法＞
上記一般式（２）で表されるオキサゾロン化合物にアルコール類を作用させることにより下記一般式（３）
【００４７】
【化１２】
【００４８】
（式中、Ｒ1及びＲ3は前記と同義である。Ｒ4は置換してもよいアルキル基、又は置換していてもよいアラルキル基を示す。）で表されるβ−ケトアミノ酸誘導体を製造することができる。
【００４９】
アルキル基としては、好ましくは炭素数１〜６の直鎖状、分岐状又は環状のアルキル基であり、更に好ましくはメチル基、エチル基、イソプロピル基、ノルマルプロピル基、ノルマルブチル基、ｔ−ブチル基等の炭素数１〜４の直鎖状若しくは分岐状のアルキル基であり、より好ましくはメチル基、エチル基、イソプロピル基、ｔ−ブチル基である。
【００５０】
アラルキル基としては、ベンジル基が好ましい。
【００５１】
上記アルキル基及びアラルキル基は置換していてもよく、置換基としては特に限定はないが、フッ素原子、塩素原子、臭素原子等のハロゲン原子、アルキル基、アルコキシ基、ニトロ基、アリールオキシ基、アミノ基、アリール基等が挙げられる。好ましくは塩素原子、アルコキシ基である。置換してもよいアラルキル基としては、ベンジル基、４−メトキシベンジル基、４−フルオロベンジル基、４−クロロベンジル基、３，４−ジメチルベンジル基が好ましく、更に好ましくはベンジル基、４−クロロベンジル基である。
【００５２】
一般式（３）は、好ましくはＲ1がフェニル基又はメチル基であり、Ｒ3がシクロヘキシル基であり、Ｒ4がメチル基、エチル基、イソプロピル基、ｔ−ブチル基、又はベンジル基であることが好ましい。
【００５３】
上記一般式（２）で表されるオキサゾロン化合物にアルコール類を作用させることにより、上記一般式（３）で表されるβ−ケトアミノ酸誘導体を製造することができる。
【００５４】
一般式（２）で表されるオキサゾロン化合物は、アルコールと反応させるにあたり、各種有機溶媒にて抽出及び／又は晶析等の方法で精製・単離することが好ましい。好ましくは、ろ過操作にて原料を取得する或いは塩酸等の酸の水溶液にて反応を終結後、有機溶媒にて抽出・洗浄操作を行い、反応に用いたルイス酸を除去したのち、晶析操作を行うことが望ましい。
【００５５】
反応に用いるアルコールとしては、特に限定されるものではないが、具体的にはメタノール、エタノール、ノルマルプロピルアルコール、イソプロピルアルコール、ノルマルブチルアルコール、イソブチルアルコール、ｔ−ブチルアルコール、ベンジルアルコール等であり、好ましくはエタノール、イソプロピルアルコール、ｔ−ブチルアルコール、ベンジルアルコールである。
【００５６】
アルコールの使用量は、一般式（２）のオキサゾロン化合物に対して１倍量から溶媒量まで使用することができるが、好ましくは１〜５倍量で使用することがコスト的に好ましい。
【００５７】
反応の温度としては、特に限定はされないが、通常室温から各種溶媒の沸点付近まで、好ましくは２０℃から１００℃がよい。この反応は常圧、大気中で行うことができ、特に窒素雰囲気下で行う必要はないが、必要に応じて窒素、ヘリウム等の不活性気体中で加圧下にて実施することもできる。
【００５８】
反応時間は、１０分〜数日の範囲で行うことができるが、製造コストを抑える観点から２４時間以内に終了させることが好ましく、更に好ましくは１０分から８時間である。
【００５９】
上記にて製造した一般式（３）のβ−ケトアミノ酸化合物は、反応液を濃縮するだけで特に精製は必要ないが、用いるアルコールの沸点が高い場合、用いた一般式（２）のオキサゾロン化合物の純度が低かった場合等は必要に応じて適宜、有機溶媒と水による分液操作での単離又は晶析による精製を行うことができる。
【００６０】
＜β−ケトアミノ酸化合物の用途＞
上記一般式（３）で表されるβ−ケトアミノ酸化合物は、それ自体或いは各種の手法にて誘導化し、種々の医薬や農薬の中間体として有用である。特に、一般式（７）で表される化合物において、Ｒ3がシクロヘキシル基である化合物に相当する下記式（１０）
【００６１】
【化１３】
で表される化合物は抗ＨＩＶ活性をもつ薬剤（ＷＯ０１／４０２２７） の中間体として工業的に有用である。上記式（１０）やその類縁体への変換の手法としては、上記一般式（３）で表される化合物を下記一般式（５）
【００６２】
【化１４】
【００６３】
（式中、Ｒ1、Ｒ3、Ｒ4は前記と同義。）で表される化合物に立体選択的に変換する。
【００６４】
この変換の手法としては、微生物の菌体及び／又は該菌体処理物を作用させる方法、或いは特許文献（ＷＯ０４／００５３７１Ａ１）や非特許文献（Tetrahedron Asymmetry 2001,12,1757-1762）に記載のルテニウム等の金属触媒を用いた不斉水素化反応が利用可能である。好ましくは、重金属混入の恐れがない微生物の菌体及び／又は該菌体処理物を作用させる方法である。
【００６５】
微生物の菌体及び／又は該菌体処理物を作用させる方法としては、特に限定はないが、アグロバクテリウム属又はエクシグオバクテリウム（Ｅｘｉｇｕｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ）属に属する微生物を使用するか、不斉還元反応を触媒するタンパク質をコードする遺伝子を導入した形質転換細胞を作製し、該細胞、該細胞の調製物、又は該細胞を培養して得られた培養液を原料と作用させてもかまわない。
【００６６】
上記一般式（５）で表される化合物を下記一般式（６）
【００６７】
【化１５】
表される化合物或いはその塩に変換する。
【００６８】
この変換の手法としては、酸又は塩基の存在下での加水分解、又は加水分解酵素にて加水分解を行う手法が挙げられる。
【００６９】
上記一般式（６）で表される化合物を塩基条件下、ｔ−ブトキシカルボニル化を行うことにより上記一般式（７）で表される化合物（例えば、式（１０）で表される化合物）へと変換可能である。
【００７０】
以下、本発明を実施例により更に詳細に説明するが、本発明はこれらによって限定されるものではない。
【実施例】
【００７１】
［実施例１ａ］４−(１−シクロヘキシル−１−ヒドロキシメチリデン)−２−フェニルオキサゾール−５−オンの合成
１００ｍＬのフラスコにジクロロメタン４３ｍＬ、５−アセトキシ−２−フェニルオキサゾール４．２８ｇ（２１．１ｍｍｏｌ）を仕込み、シクロヘキサンカルボン酸クロリド３．１０ｍＬ（２３．２ｍｍｏｌ）を添加し、しばらく撹拌した後に四塩化スズ３．８７ｍＬ（７３．２ｍｍｏｌ）を１０分間かけて滴下した。２４時間後、ＴＬＣにて原料の消失を確認し、４Ｎ塩酸水溶液１０ｍＬ及び酢酸エチル１５０ｍＬを添加し、有機層を分離した後、更に水５０ｍＬで２回、飽和食塩水５０ｍＬにて洗浄し、硫酸マグネシウムにて乾燥後、溶媒を留去した。得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（シリカゲル１５０ｇ、 ヘキサン：酢酸エチル＝１００：２〜１００：４）にて精製し、黄色固体として目的物３．２０g（純度換算後の収率５２％）を得た。
1Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ）：δ１．１４−１．５１（５Ｈ，ｍ），１．６８−１．７９（５Ｈ，ｍ），３．３１−３．３７（１Ｈ，ｍ），１．６８−１．７９（５Ｈ，ｍ），３．３１−３．３７（１Ｈ，ｍ），７．５３−７．５７（３Ｈ，ｍ），７．９６−８．０１（２Ｈ，ｍ）
【００７２】
［実施例１ｂ］４−〔１−シクロヘキシル−１−ヒドロキシメチリデン〕−２−フェニルオキサゾール−５−オンの合成
１Ｌのフラスコに５−ベンゾイルオキシ−２−フェニルオキサゾール４７．０ｇ（１７７ｍｍｏｌ）、ジクロロメタン３８０ｍＬを仕込み、氷冷下にてシクロヘキサンカルボン酸クロリド３３．０ｍＬ（２４８ｍｍｏｌ）を添加し、しばらく撹拌した後に四塩化スズ２９．０ｍＬ（２４８ｍｍｏｌ）を２分間かけて滴下した。室温に昇温した後、２４時間後にＴＬＣにて原料の消失を確認し、反応液をろ過して得られた４−〔１−シクロヘキシル−１−ヒドロキシメチリデン〕−２−フェニルオキサゾール−５−オンの塩化スズ錯体をＬＣにて定量分析したところ、４−〔１−シクロヘキシル−１−ヒドロキシメチリデン〕−２−フェニルオキサゾール−５−オンとしての収率は８９％であった。この錯体に２Ｎ塩酸１６０ｍＬ及び酢酸エチル５００ｍＬを添加し、有機層を分離した後に更に２Ｎ塩酸１６０ｍＬで２回洗浄し、硫酸マグネシウムにて乾燥後、溶媒を留去した。得られた残渣をジクロロメタン１５ｍＬ、ヘキサン１５ｍＬにて懸洗し、ろ過して得られた黄色固体として目的物４−〔１−シクロヘキシル−１−ヒドロキシメチリデン〕−２−フェニルオキサゾール−５−オン１５．５ｇ（純度９８％、収率３２％）を得た。
1Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ）：δ１．１４−１．５１（５Ｈ，ｍ），１．６８−１．７９（５Ｈ，ｍ），３．３１−３．３７（１Ｈ，ｍ），７．５３−７．５７（３Ｈ，ｍ），７．９６−８．０１（２Ｈ，ｍ）．
【００７３】
［実施例１ｃ］４−(１−シクロヘキシル-1-ヒドロキシメチリデン)−２−フェニルオキサゾール-5-オンの合成
200mlのフラスコにジクロロメタン94ml、５−ベンゾイルオキシ-２−フェニルオキサゾール 13.4g(50.5mmol)を仕込み、氷冷下にてシクロヘキサンカルボン酸クロリド13.5ml（101mmol）を添加し、しばらく攪拌した後に四塩化すず16.5ml（2.8mmol）を10分間かけて滴下した。室温に昇温させて16時間攪拌後、TLCにて原料の消失を確認し、反応液をろ過し、固体部分を塩化メチレン：n-ヘキサンの１：１の混合溶液20mlにて洗浄後、淡黄色固体として目的物のすず塩３４．６g（純度換算後の収率９７％）を得た。
1H-NMR(400MHz, DMSO-d):δ1.14-1.51(5H,m), 1.68-1.79(5H, m), 3.31-3.37(1H, m), 7.53-7.57（3H,m）, 7.96-8.01(2H, m)
【００７４】
［実施例２ａ］イソプロピル−２−ベンゾイルアミノ−３−シクロヘキサノイル−３−オキソプロピオン酸の合成
実施例１ｂで合成した４−〔１−シクロヘキシル−１−ヒドロキシメチリデン〕−２−フェニルオキサゾール−５−オン４７．５ｇ（１７５ｍｍｏｌ）、及びイソプロピルアルコール２３８ｍＬを仕込み、加熱還流下２時間撹拌した後、減圧濃縮し、白色固体としてイソプロピル−２−ベンゾイルアミノ−３−シクロヘキサノイル−３−オキソプロピオン酸を６６．１ｇ（純分として５３．９ｇ、収率９３％）得た。
1Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ3）：δ１．２０−１．３８（９Ｈ，ｍ），１．４５−１．５６（２Ｈ，ｍ），１．６９−１．８５（４Ｈ，ｍ），２．０８−２．１０（１Ｈ，ｂｒ−ｓ），２．８６−２．９３（１Ｈ，ｍ），５．１０−５．１７（１Ｈ，ｍ），５．５２（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．６Ｈｚ），７．２９（１Ｈ,ｄ，Ｊ＝６．１Ｈｚ），７．４３−７．５５（３Ｈ，ｍ），７．８３−７．８５（ｍ，２Ｈ）．
【００７５】
［実施例２ｂ］tert-ブチル-2-ベンゾイルアミノ -3-シクロヘキサノイル -3-オキソプロピオン酸の合成
実施例１ｂで合成した（ ４−〔１−シクロヘキシル-1-ヒドロキシメチリデン〕−２−フェニルオキサゾール-5-オン 150mg（0.553mmol）、およびtert-ブチルアルコール3.0mlを仕込み、油浴にて９０度に加熱し、2時間攪拌した後、減圧濃縮し、白色固体としてtert-ブチル-2-ベンゾイルアミノ -3-シクロヘキサノイル -3-オキソプロピオン酸を248mg（純分を換算後、収率９９%）得た。
1H-NMR(400MHz,CDCl3):δ
1.22-1.85(19H,m), 2.10-2.12(1H, m), 2.90-2.93(1H, m), 5.47 (1H,d, J=6.6Hz), 7.26(1H, br-s) , 7.42-7.54(3H, m), 7.83-7.85(m, 2H)
【００７６】
［実施例２ｃ］ベンジル-2-ベンゾイルアミノ -3-シクロヘキサノイル -3-オキソプロピオン酸の合成
実施例１ｂで合成した（ ４−〔１−シクロヘキシル-1-ヒドロキシメチリデン〕−２−フェニルオキサゾール-5-オン 150mg（0.553mmol）、およびベンジルアルコール3.0mlを仕込み、油浴にて１００度に加熱し、2時間攪拌した後、減圧濃縮し、白色固体としてベンジル-2-ベンゾイルアミノ -3-シクロヘキサノイル -3-オキソプロピオン酸を253mg（純分を換算後、収率：定量的）得た。
1H-NMR(400MHz,CDCl3):δ
0.95-1.97(10H, m), 2.65-2.74(1H, m), 5.19(2H, AB-q, J=12Hz), 5.52(1H, d, J=6.6Hz), 7.19-7.30 (6H,m) , 7.36-7.48(3H, m), 7.76-7.78(m, 2H)
【００７７】
［実施例２ｄ］エチル-2-ベンゾイルアミノ -3-シクロヘキサノイル -3-オキソプロピオン酸の合成
実施例１ｂで合成した（ ４−〔１−シクロヘキシル-1-ヒドロキシメチリデン〕−２−フェニルオキサゾール-5-オン 100mg（0.369mmol）、およびエチルアルコール2.0mlを仕込み、油浴にて加熱還流させ、2時間攪拌した後減圧濃縮し、白色固体としてエチル-2-ベンゾイルアミノ -3-シクロヘキサノイル -3-オキソプロピオン酸を131mg（純分を換算後、収率９９%）得た。
1H-NMR(400MHz,CDCl3):δ
1.15-1.78(13H,m), 2.00-2.03(1H, m), 2.79-2.86(1H, m), 4.14-4.29(m、2H), 5.49 (1H, d, J=6.6Hz), 7.24(1H, m) , 7.37-7.48(3H, m), 7.76-7.79(m, 2H)
【００７８】
［実施例２ｅ］イソプロピル-2-ベンゾイルアミノ -3-シクロヘキサノイル -3-オキソプロピオン酸の合成
実施例１ｃで合成した４−〔１−シクロヘキシル-1-ヒドロキシメチリデン〕−２−フェニルオキサゾール-5-オンのずず塩３４．５g（純分として49.2mmol）、およびイソプロピルアルコール53.4ml、ピリジン9.3mlを仕込み、加熱還流下4時間30分攪拌した後、反応液を室温にもどし、酢酸エチル２０mlにて３回希釈し、ろ過して得られた溶液を減圧濃縮し、白色固体としてイソプロピル-2-ベンゾイルアミノ -3-シクロヘキサノイル -3-オキソプロピオン酸を19.4g（純分として13.6 g、収率84%）を得た。
1H-NMR(400MHz,CDCl3):δ
1.20-1.38(9H,m), 1.45-1.56(2H, m), 1.69-1.85((4H, m), 2.08-2.10(1H, br-s), 2.86-2.93(1H, m), 5.10-5.17 (1H,m), 5.52(1H, d, J=6.6Hz), 7.29(1H,d,J=6.1Hz) , 7.43-7.55(3H, m), 7.83-7.85(m, 2H)
【００７９】
［実施例３］イソプロピル（２Ｒ，３Ｒ）−２−ベンゾイルアミノ−３−シクロヘキシル−３−ヒドロキシプロピオン酸エステルの合成
［１］エクシグオバクテリウム（Ｅｘｉｇｕｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ）ｓｐ．ＭＣＩ４３２２由来のカルボニルレダクターゼ遺伝子で形質転換された形質転換細胞の作製
エクシグオバクテリウム（Ｅｘｉｇｕｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ）ｓｐ．ＭＣＩ４３２２由来のカルボニルレダクターゼ（Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ Ｎｏ．３０１６３３０Ａ、配列番号２）をコードするＤＮＡ配列（ｇｅｎｂａｎｋ Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ Ｎｏ．ｇｐ：ＡＢ１５４４０９、配列番号１）をもとに配列番号３及び４に記載のプライマーを合成した。
【００８０】
配列番号１：
atgaaatata cggtgattac tggagcaagt tcaggaattg gatatgagac ggcaaaacta 60
ctcgcaggaa aaggaaaatc actcgttctc gtcgcgcgac ggacgtctga gctcgaaaaa 120
cttcgggatg aagtcaaaca aatctcacca gatagtgatg tcatcctcaa gtcggtcgat 180
ctcgcagata accaaaatgt ccatgattta tatgagggat taaaggaact cgacatcgaa 240
acgtggatca acaatgctgg attcggcgat tttgatctcg tccaggacat tgagctcggg 300
aaaatcgaga aaatgcttcg cttgaacatc gaggcgctaa cgattctatc gagtctgttc 360
gtccgcgatc atcatgacat cgaaggaacg acgctcgtca atatctcgtc agcaggtggc 420
taccggatcg tgccgaacgc ggtcacgtat tgcgcgacga agttctatgt cagtgcttat 480
acagaagggc tcgcgcaaga actgcaaaaa ggtggggcaa aacttcgggc gaaagtactg 540
gcaccagctg cgactgagac agagtttgcg gatcgttcgc gcggcgaagc aggtttcgac 600
tacagcaaga acgtcaaaaa gtaccatacg gcggctgaaa tggcaggctt cctgcatcag 660
ttgattgaaa gcgacgcgat cgtcggcatc gtcgacggtg agacgtatga gttcgaattg 720
cgtggtccat tgttcaacta cgcaggataa 750
【００８１】
配列番号２：
Met Lys Tyr Thr Val Ile Thr Gly Ala Ser Ser Gly Ile Gly Tyr Glu
Thr Ala Lys Leu Leu Ala Gly Lys Gly Lys Ser Leu Val Leu Val Ala
Arg Arg Thr Ser Glu Leu Glu Lys Leu Arg Asp Glu Val Lys Gln Ile
Ser Pro Asp Ser Asp Val Ile Leu Lys Ser Val Asp Leu Ala Asp Asn
Gln Asn Val His Asp Leu Tyr Glu Gly Leu Lys Glu Leu Asp Ile Glu
Thr Trp Ile Asn Asn Ala Gly Phe Gly Asp Phe Asp Leu Val Gln Asp
Ile Glu Leu Gly Lys Ile Glu Lys Met Leu Arg Leu Asn Ile Glu Ala
Leu Thr Ile Leu Ser Ser Leu Phe Val Arg Asp His His Asp Ile Glu
Gly Thr Thr Leu Val Asn Ile Ser Ser Ala Gly Gly Tyr Arg Ile Val
Pro Asn Ala Val Thr Tyr Cys Ala Thr Lys Phe Tyr Val Ser Ala Tyr
Thr Glu Gly Leu Ala Gln Glu Leu Gln Lys Gly Gly Ala Lys Leu Arg
Ala Lys Val Leu Ala Pro Ala Ala Thr Glu Thr Glu Phe Ala Asp Arg
Ser Arg Gly Glu Ala Gly Phe Asp Tyr Ser Lys Asn Val Lys Lys Tyr
His Thr Ala Ala Glu Met Ala Gly Phe Leu His Gln Leu Ile Glu Ser
Asp Ala Ile Val Gly Ile Val Asp Gly Glu Thr Tyr Glu Phe Glu Leu
Arg Gly Pro Leu Phe Asn Tyr Ala Gly
【００８２】
配列番号３：ggaggcgaat tcatgaaata tacggtgatt
配列番号４：taatcactgc agttatcctg cgtagttgaa
【００８３】
これらのプライマーを各１５ｐｍｏｌ、ｄＮＴＰ各１０ｎｍｏｌ、エクシグオバクテリウム（Ｅｘｉｇｕｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ）ｓｐ．ＭＣＩ４３２２のゲノムＤＮＡ ２５ｎｇ、ＫＯＤ−ｐｌｕｓ−用１０×緩衝液（東洋紡績社製）５μＬ、ＫＯＤ−ｐｌｕｓ−１ユニット（東洋紡績社製）を含む５０μＬの反応液を用い、変性（９４℃、１５秒）、アニール（５７℃、３０秒）、伸長（６８℃、２分）を３０サイクルで、ＰＴＣ−２００（ＭＪ Ｒｅｓｅａｒｃｈ社製）を用いてＰＣＲ反応を行った。なお、エクシグオバクテリウム ｓｐ（Exiguobacterium sp）MCI4322株は、FERM-P-19239として独立行政法人産業総合研究所特許生物寄託センターから入手可能である。ＰＣＲ反応液の一部をアガロースゲル電気泳動により解析した結果、特異的と思われるバンドが検出できた。
【００８４】
上記反応液をＭｉｎＥｌｕｔｅ ＰＣＲ Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｋｉｔ（Ｑｉａｇｅｎ社製）にて精製した。精製したＤＮＡ断片を制限酵素ＥｃｏＲＩとＰｓｔＩで消化し、アガロースゲル電気泳動を行い、目的とするバンドの部分を切り出し、Ｑｉａｇｅｎ Ｇｅｌ Ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｋｉｔ（Ｑｉａｇｅｎ社製）により精製後回収した。得られたＤＮＡ断片を、ＥｃｏＲＩ、及びＰｓｔＩで消化したｐＫＫ２２３−３とＴａｋａｒａ Ｌｉｇａｔｉｏｎ Ｋｉｔを用いてライゲーションし、大腸菌ＪＭ１０９株を形質転換した。
【００８５】
形質転換細胞をアンピシリン（５０μｇ／ｍＬ）を含むＬＢ寒天培地上で生育させ、コロニーダイレクトＰＣＲを行い、挿入断片のサイズを確認した。目的とするＤＮＡ断片が挿入されていると考えられる形質転換細胞を５０μｇ／ｍＬのアンピシリンを含むＬＢ培地で培養し、ＱＩＡＰｒｅｐＳｐｉｎ Ｍｉｎｉ Ｐｒｅｐ ｋｉｔ（Ｑｉａｇｅｎ社製）を用いてプラスミドを精製し、ｐＥｘＳＤＲ１とした。プラスミドに挿入したＤＮＡの塩基配列をダイターミネーター法により解析したところ、挿入されたＤＮＡ断片は、配列番号１の塩基配列と一致した。
【００８６】
［２］カルボニルレダクターゼをコードするＤＮＡで形質転換した大腸菌を用いた イソプロピル（２Ｒ，３Ｒ）−３−シクロヘキシル−３−ヒドロキシ−２−アミノベンゾイルプロピオン酸エステルの合成
上記［１］で得られた形質転換体をアンピシリン（５０μｇ／ｍＬ）を含むＣｉｒｃｌｅＧｒｏｗ培地（国産化学社製）で３０℃で１．７時間生育させ、０．１ｍＭになるようにイソプロピル−β−Ｄ−チオガラクトピラノシド（ＩＰＴＧ）を添加し、更に３０℃で２０時間培養した。得られた菌体ブロス１ｍＬを遠心分離により集菌し、１００μＬの緩衝液（１０％硫酸ナトリウム、１０％グルコースを含む１００ｍＭトリス（最終ｐＨ９．９））を加えよく混合した。これに３０μＬの１０ｇ／Ｌ ＮＡＤＰ+（オリエンタル酵母社製）、３０μＬのグルコースデヒドロゲナーゼ（天野製薬社製、１ｕｎｉｔ／ｍＬ）、実施例２ａで得られた２０μＬの１０ｇ／Ｌイソプロピル（２Ｒ，３Ｒ）−２−ベンゾイルアミノ−３−シクロヘキシル−３−オキソプロピオン酸エステル（ＤＭＳＯ溶液）を添加後４０℃で１８時間振とう反応させた。反応終了後の反応液を酢酸エチル抽出、濃縮し、２００μＬのイソプロピルアルコールで溶かし、イソプロピル（２Ｒ，３Ｒ）−３−シクロヘキシル−３−ヒドロキシ−２−アミノベンゾイルプロピオン酸エステルを定量した。定量は高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）を用いて測定した。ＨＰＬＣの条件は以下のとおりである。
【００８７】
カラム：ＯＤＳカラム Ａｃｅｎｔｉｓ Ａｍｉｄｅ（Ｓｐｅｌｃｏ社製、４．６ｍｍｘ１０ｃｍ）、４０℃
溶離液：１０ｍＭ酢酸アンモニウム／アセトニトリル＝５５／４５
流速：１ｍＬ／ｍｉｎ
検出：ＵＶ２５４ｎｍ
【００８８】
この結果、イソプロピル（２Ｒ，３Ｒ）−３−シクロヘキシル−３−ヒドロキシ−２−アミノベンゾイルプロピオン酸エステルの収量は１４．１μｇであった。ジアステレオ選択性は９０％ｄ．ｅ．であった。また、該遺伝子を含まないプラスミドｐＫＫ２２３−３をもつ大腸菌を上記と同様の方法で培養し、反応させてみたが上記生成物は認められなかった。次に光学純度の測定をＨＰＬＣを用いて行なった。ＨＰＬＣの条件は以下のとおりである。
【００８９】
カラム：ＯＤ−ＲＨ（ダイセル社製、４．６ｍｍｘ１５ｃｍ）、３０℃
溶離液：４０％アセトニトリル
流速：０．５ｍＬ／ｍｉｎ
検出：ＵＶ２５４ｎｍ
光学純度は１００％ｅ．ｅ．であった。
【００９０】
［実施例４］（２Ｒ，３Ｒ）−２−アミノ−３−シクロヘキシル−３−ヒドロキシプロピオン酸の合成法
５００ｍＬのナスフラスコに、実施例３と同様に、ただし反応スケールを１０００倍にあげて実施して得られたイソプロピル−２−ベンゾイルアミノ−３−シクロヘキサノイル−３−オキソプロピオン酸エステル１２．４ｇ（３７．０ｍｍｏｌ）を仕込み、６Ｎ塩酸水溶液を添加して１１０℃に加温しながら６．５時間反応させた。室温に冷却後、トルエン５０ｍＬにて２回洗浄し、水層部を更に１１０℃に昇温し、５時間反応させた。室温に戻し、トルエン５０ｍＬにて２回洗浄し、得られた水層に２５ｗｔ％の水酸化ナトリウム水溶液をｐＨ５．６８になるまで添加した。析出した固体をろ過し、減圧乾燥後に純度９０％程度の白色固体として（２Ｒ，３Ｒ）−２−アミノ−３−シクロヘキシル−３−ヒドロキシプロピオン酸を８．４０ｇ取得した。この化合物を塩酸塩に変換後、下記スペクトルを取得した。
1Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤ3ＯＤ）：δ０．８０−１．２７（５Ｈ，ｍ），１．５８−１．７９（５Ｈ，ｍ），１．９６−１．９９（１Ｈ，ｍ），３．４２（１Ｈ，ｍ），４．００（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝２．３Ｈｚ）．
【００９１】
［実施例５］（２Ｒ，３Ｒ）−２−ｔ−ブトキシカルボニルアミノ−３−シクロヘキシル−３−ヒドロキシプロピオン酸の合成
実施例４で取得した（２Ｒ，３Ｒ）−２−アミノ−３−シクロヘキシル−３−ヒドロキシプロピオン酸８．４０ｇを１Ｎ水酸化ナトリウム水溶液３５ｍＬ及びＴＨＦ３５ｍＬに溶解させ、ジ−ｔ−ブチルジカルボナート８．８９ｇ（４０．７ｍｍｏｌ）を添加した。室温下で６時間反応させ、反応液を減圧下でＴＨＦを留去した。トルエン２０ｍＬを添加し、有機層と水層を分離し、更に有機層を１Ｎ水酸化ナトリウム水溶液５ｍＬで３回抽出した。水層を併せ、１Ｎ塩酸６０ｍＬにて酸性に調整し、酢酸エチル７０ｍＬ、３０ｍＬでそれぞれ抽出した。得られた有機層を硫酸マグネシウムで乾燥・ろ過し、得られた液を濃縮し、（２Ｒ，３Ｒ）−２−ｔ−ブトキシカルボニルアミノ−３−シクロヘキシル−３−ヒドロキシプロピオン酸７．０９ｇ（純度９６％、イソプロピル−２−ベンゾイルアミノ−３−シクロヘキサノイル−３−オキソプロピオン酸エステルからの換算収率６７％）を得た。
1Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤ3ＯＤ）：δ０．８８−１．２４（５Ｈ，ｍ），１．６２−１．６８（５Ｈ，ｍ），１．７９−１．８３（１Ｈ，ｍ），３．３７（１Ｈ，ｔ，Ｊ＝６．２Ｈｚ），４．０７−４．１８（１Ｈ，ｍ）．
【００９２】
［比較例１］４−（１−ヒドロキシメチリデン）−２−フェニルオキサゾール−５−オンの合成（非特許文献２及び非特許文献３）
馬尿酸１．００ｇ（５．５８ｍｍｏｌ）をエタノール５ｍＬに懸濁させ、２０％ナトリウムエトキシドエタノール溶液を４．７６ｇ（１４ｍｍｏｌ）添加した。２時間撹拌後、反応液を減圧乾燥して馬尿酸のナトリウム塩１．１２とした。この馬尿酸ナトリウム塩にβ−ピコリン１．７０ｍＬ、無水酢酸（１．６７ｍＬ）を添加し、室温にて２時間反応後、更に４０℃にて５時間反応させた。反応液を室温に冷却し、ＬＣにて定量分析したところ収率は１５％、変換率は５０％であった。
1Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ3）：δ２．５０（３Ｈ，ｓ），７．５２−７．５７（３Ｈ，ｍ），７．８８−７．９４（２Ｈ，ｍ）．
【００９３】
［比較例２］４−〔１−シクロヘキシル−１−ヒドロキシメチリデン〕−２−フェニルオキサゾール−５−オンの合成（非特許文献２及び非特許文献３）
２−フェニルオキサゾール−５−オン２００ｍｇ（１．２４ｍｍｏｌ）をβ−ピコリン０．３８ｍＬに懸濁させ、氷冷下、シクロヘキサンカルボン酸クロライド０．１６ｍＬを滴下して室温に戻して２０時間反応させた。反応液に２Ｎ塩酸水２０ｍＬを加え、ジクロロメタン３０ｍＬにて２回抽出し、得られた有機層をＬＣにて定量分析したところ収率は１８％、変換率は１００％であった。反応副生物である４−（２−Ｎ−ベンゾイルアミノ−１−ヒドロキシルメチリデン）−イル−２−フェニルオキサゾール−５−オンが５０％生成していた。
1Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ3）：δ４．４６（３Ｈ，ｍ），７．４３−７．６６（７Ｈ，ｍ），７．８３（２Ｈ），７．９０（１Ｈ，ｓ），１２．５５（１Ｈ，ｓ）.
【図面の簡単な説明】
【００９４】
【図１】図１は、実施例及び比較例における反応の概要を示す。
【配列表フリーテキスト】
【００９５】
［配列表］
SEQUENCE LISTING
<110> API Corporation
<120> A method for producing an acyloxazolone derivative and beta-ketoamino acid derivative
<130> A61441A
<160> 4
<210> 1
<211> 750
<212> DNA
<213> Exiguobacterium sp.
<400> 1
atgaaatata cggtgattac tggagcaagt tcaggaattg gatatgagac ggcaaaacta 60
ctcgcaggaa aaggaaaatc actcgttctc gtcgcgcgac ggacgtctga gctcgaaaaa 120
cttcgggatg aagtcaaaca aatctcacca gatagtgatg tcatcctcaa gtcggtcgat 180
ctcgcagata accaaaatgt ccatgattta tatgagggat taaaggaact cgacatcgaa 240
acgtggatca acaatgctgg attcggcgat tttgatctcg tccaggacat tgagctcggg 300
aaaatcgaga aaatgcttcg cttgaacatc gaggcgctaa cgattctatc gagtctgttc 360
gtccgcgatc atcatgacat cgaaggaacg acgctcgtca atatctcgtc agcaggtggc 420
taccggatcg tgccgaacgc ggtcacgtat tgcgcgacga agttctatgt cagtgcttat 480
acagaagggc tcgcgcaaga actgcaaaaa ggtggggcaa aacttcgggc gaaagtactg 540
gcaccagctg cgactgagac agagtttgcg gatcgttcgc gcggcgaagc aggtttcgac 600
tacagcaaga acgtcaaaaa gtaccatacg gcggctgaaa tggcaggctt cctgcatcag 660
ttgattgaaa gcgacgcgat cgtcggcatc gtcgacggtg agacgtatga gttcgaattg 720
cgtggtccat tgttcaacta cgcaggataa 750
<210> 2
<211> 249
<212> PRT
<213> Exiguobacterium sp.
<400> 2
Met Lys Tyr Thr Val Ile Thr Gly Ala Ser Ser Gly Ile Gly Tyr Glu
1 5 10 15
Thr Ala Lys Leu Leu Ala Gly Lys Gly Lys Ser Leu Val Leu Val Ala
20 25 30
Arg Arg Thr Ser Glu Leu Glu Lys Leu Arg Asp Glu Val Lys Gln Ile
35 40 45
Ser Pro Asp Ser Asp Val Ile Leu Lys Ser Val Asp Leu Ala Asp Asn
50 55 60
Gln Asn Val His Asp Leu Tyr Glu Gly Leu Lys Glu Leu Asp Ile Glu
65 70 75 80
Thr Trp Ile Asn Asn Ala Gly Phe Gly Asp Phe Asp Leu Val Gln Asp
85 90 95
Ile Glu Leu Gly Lys Ile Glu Lys Met Leu Arg Leu Asn Ile Glu Ala
100 105 110
Leu Thr Ile Leu Ser Ser Leu Phe Val Arg Asp His His Asp Ile Glu
115 120 125
Gly Thr Thr Leu Val Asn Ile Ser Ser Ala Gly Gly Tyr Arg Ile Val
130 135 140
Pro Asn Ala Val Thr Tyr Cys Ala Thr Lys Phe Tyr Val Ser Ala Tyr
145 150 155 160
Thr Glu Gly Leu Ala Gln Glu Leu Gln Lys Gly Gly Ala Lys Leu Arg
165 170 175
Ala Lys Val Leu Ala Pro Ala Ala Thr Glu Thr Glu Phe Ala Asp Arg
180 185 190
Ser Arg Gly Glu Ala Gly Phe Asp Tyr Ser Lys Asn Val Lys Lys Tyr
195 200 205
His Thr Ala Ala Glu Met Ala Gly Phe Leu His Gln Leu Ile Glu Ser
210 215 220
Asp Ala Ile Val Gly Ile Val Asp Gly Glu Thr Tyr Glu Phe Glu Leu
225 230 235 240
Arg Gly Pro Leu Phe Asn Tyr Ala Gly
245
<210> 3
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<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> PCR primer
<400> 3
ggaggcgaat tcatgaaata tacggtgatt 30
<210> 4
<211> 30
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> PCR primer
<400> 4
taatcactgc agttatcctg cgtagttgaa 30
【技術分野】
【０００１】
本発明は、アシルオキサゾロン化合物及びβ−ケトアミノ酸誘導体の製造方法に関する。本発明の方法で得られるβ−ケトアミノ酸誘導体は、変換して光学活性β−ヒドロキシアミノ酸を経由して、抗ＨＩＶウィルス薬として有用なことが知られている薬剤の中間体であるＤ−エリスロ−３−シクロヘキシルセリンに誘導可能であることから、医農薬中間体として有用な化合物である。
【背景技術】
【０００２】
アシルオキサゾロン類の合成方法としては、馬尿酸又は２−フェニルオキサゾール−５−オンをトリフルオロ酢酸存在下、γ−ピコリン中、酸クロリドと反応させる方法（非特許文献１）、及び馬尿酸ナトリウム塩と酸無水物をβ−ピコリン中反応させる方法（非特許文献２及び３）が知られている。しかし、いずれの反応も酸クロリド又は酸無水物を過剰に用いる必要があり、高価な酸クロリド又は酸無水物を使用する必要がある場合、製造コストが高額になるという問題点があった。
【０００３】
また、２−フェニルオキサゾール−５−オンとアシル化剤等量を用いる方法（非特許文献４）も報告されている。この文献では高価なγ−ピコリンを溶媒として用いているが、γ−ピコリンは高沸点かつ水溶性も高いため回収が困難であるので製造コストが高くなり、また、大量の溶媒を用い、反応時間に１日を要する等実用的ではない。一方、γ−ピコリンを用いない方法（特許文献１及び２）も報告されているが、いずれも用いる酸クロリドはコハク酸モノエステルクロライド誘導体に限定され、一般性が高いとは言えず、反応時間も１日〜３日と長時間を要する。
【０００４】
また、これまでに報告されているアシルオキサゾロン類の合成例は単純な化合物又は類似した化合物が多く、特に立体障害の大きいα位に置換基を持つ酸クロリド又は酸無水物を用いた例はわずかしかない上（特許文献１、非特許文献３）、そのいずれも収率３０％程度と低収率であり、工業的に安価かつ汎用性の高いアシルオキサゾロン類の製造には課題が残されていた。
【０００５】
【非特許文献１】Ｂｕｌｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＳＲ Ｄｉｖ．Ｃｈｅｍ．Ｓｃｉ．１９８２，３１，２２２３．
【非特許文献２】Ｊ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．１９４８，３，３１０−３１８
【非特許文献３】Ｊ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．１９６０，９６８−９７３
【非特許文献４】Ｂｕｌｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＳＲ Ｄｉｖ．Ｃｈｅｍ．Ｓｃｉ．１９８４，３３，３８４．
【特許文献１】特開平１−３０５０７１号公報
【特許文献２】国際公開第９８／５４１６２号パンフレット
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
本発明は、β−ケトアミノ酸誘導体に変換可能なアシルオキサゾロン化合物を短工程、かつ強塩基や高価な試薬、極低温を必要としない安価な条件で効率的・高収率、かつ後処理・精製が容易な方法で製造することができる、アシルオキサゾロン化合物の工業的製造方法を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本発明者は、上記課題を解決するために鋭意検討した結果、オキサゾール化合物をアシル化することでアシルオキサゾロン化合物を合成でき、このアシルオキサゾロン化合物をアルコール類と反応させることでβ−ケトアミノ酸化合物を一貫して温和な条件で効率的に合成できることを見出し、本発明を完成するに至った。
【０００８】
即ち、本発明によれば、以下の発明が提供される。
（１） 下記一般式（１）
【化１】
（式中、Ｒ1及びＲ2はそれぞれ独立して、置換していてもよいアルキル基、又は置換していてもよいアリール基を示す。）で表されるオキサゾール化合物にルイス酸の存在下、アシル化剤を作用させることにより、下記一般式（２）
【化２】
（式中、Ｒ1は前記と同義であり、Ｒ3は置換していてもよいアルキル基、又は置換していてもよいアリール基を示し、Ｘは水素原子又は金属原子を示す。Ｘが水素原子の場合、金属化合物と錯体を形成していてもよい。）で表されるアシルオキサゾロン化合物を製造する工程を含む、アシルオキサゾロン化合物の製造方法。
【０００９】
（２） アシル化剤が、酸ハライド又は酸無水物である、（１）に記載の方法。
【００１０】
（３） （１）の方法により製造した一般式（２）で表されるオキサゾロン化合物にアルコール類を作用させることにより下記一般式（３）
【化３】
（式中、Ｒ1及びＲ3はそれぞれ独立して、置換していてもよいアルキル基、又は置換していてもよいアリール基を示し、Ｒ4は置換してもよいアルキル基、又は置換していてもよいアラルキル基を示す。）で表される化合物を製造する工程を含む、β−ケトアミノ酸誘導体の製造方法。
【００１１】
（４） 下記一般式（４）
【化４】
（式中、Ｒ1は置換していてもよいアルキル基、又は置換していてもよいアリール基を示し、Ｘは水素原子又は金属原子を示す。Ｘが水素原子の場合、金属化合物と錯体を形成していてもよい。）で表されるシクロヘキシルメチリデニルオキサゾロン化合物。
【００１２】
（５） （ｉ）（３）に記載の方法により一般式（３）で表されるβ−ケトアミノ酸誘導体を製造する工程、及び
（ｉｉ）上記工程（ｉ）で得られた一般式（３）で表されるβ−ケトアミノ酸誘導体に微生物の菌体及び／又は該菌体処理物を作用させて下記一般式（５）
【化５】
（式中、Ｒ1及びＲ3はそれぞれ独立して、置換していてもよいアルキル基、又は置換していてもよいアリール基を示し、Ｒ4は置換してもよいアルキル基、又は置換していてもよいアラルキル基を示し、Ｘは水素原子又は金属原子を示す。Ｘが水素原子の場合、金属化合物と錯体を形成していてもよい。）で表されるα−Ｎ−アシルアミノ−β−ヒドロキシエステルを得る工程を含む、α−Ｎ−アシルアミノ−β−ヒドロキシエステルを製造する方法。
【００１３】
（６） （ｉ）（５）に記載の方法により一般式（５）で表されるＮ−アシルアミノ−β−ヒドロキシエステルを製造する工程、
（ｉｉ）上記工程（ｉ）で得られたα−Ｎ−アシルアミノ−β−ヒドロキシエステルに酸又は塩基を作用させて加水分解を行い、下記一般式（６）
【化６】
（式中、Ｒ3は置換していてもよいアルキル基、又は置換していてもよいアリール基を示し、Ｘは水素原子又は金属原子を示す。Ｘが水素原子の場合、金属化合物と錯体を形成していてもよい。）で表されるβ−ヒドロキシアミノ酸を得る工程；及び
（ｉｉｉ）上記工程（ｉｉ）で得られたβ−ヒドロキシアミノ酸にｔ−ブトキシカルボニル化剤を作用させて下記一般式（７）
【化７】
（式中、Ｒ3及びＸは前記と同義。Ｘが水素原子の場合、金属化合物と錯体を形成していてもよい。）で表される化合物を製造する工程、を含むＮ−ｔ−ブトキシカルボニル−β−ヒドロキシアミノ酸の製造方法。
【発明の効果】
【００１４】
本発明によれば、安価かつ温和な工業的製造法で、医農薬中間体として有用な化合物であるアシルオキサゾロン化合物及びβ−ケトアミノ酸化合物を効率よく製造することができる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１５】
以下、本発明を詳細に説明する。
＜オキサゾ−ル化合物、アシルオキサゾロン化合物＞
本発明の製造方法は、上記一般式（１）で表されるオキサゾール化合物にルイス酸の存在下、酸ハライド又は酸無水物などのアシル化剤を作用させることにより、上記一般式（２）で表されるアシルオキサゾロン化合物を得ることを特徴とするものである。
【００１６】
上記一般式（１）において、Ｒ1は、置換していてもよいアルキル基又は置換してもよいアリール基を示す。アルキル基としては、好ましくは炭素数１〜１０の直鎖状、分岐状若しくは環状のアルキル基であり、更に好ましくは炭素数１〜６の直鎖状若しくは分岐状のアルキル基であり、より好ましくは炭素数１〜４の直鎖状若しくは分岐状のアルキル基であり、例えば、メチル基、エチル基、イソプロピル基、ノルマルプロピル基、ノルマルブチル基、ｔ−ブチル基、シクロヘキシル基であり、最も好ましくはメチル基である。置換してもよいアリール基のアリール基としては、ナフチル基、フェニル基等であり、最も好ましくはフェニル基である。上記のアルキル基及びアリール基は置換していてもよく、置換基としては特に限定はないが、アルキル基、アリール基、アルコキシ基、フッ素原子、塩素原子、臭素原子等のハロゲン原子、ニトロ基、水酸基、カルボキシル基、アミノ基等が挙げられる。好ましくはハロゲン原子、アルコキシ基である。置換してもよいアリール基としては、フェニル基や４−メトキシフェニル基が好ましく、更に好ましくはフェニル基である。
【００１７】
上記一般式（１）において、Ｒ2は置換していてもよいアルキル基又は置換していてもよいアリール基を示す。アルキル基としては、好ましくは炭素数１〜１０の直鎖状、分岐状若しくは環状のアルキル基であり、更に好ましくは炭素数１〜６の直鎖状若しくは分岐状のアルキル基であり、より好ましくは炭素数１〜４の直鎖状若しくは分岐状のアルキル基であり、例えば、メチル基、エチル基、イソプロピル基、ノルマルプロピル基、ノルマルブチル基、ｔ−ブチル基、又はシクロヘキシル基であり、最も好ましくはメチル基である。置換してもよいアリール基のアリール基としては、ナフチル基、フェニル基等であり、最も好ましくはフェニル基である。上記アルキル基及びアリール基は置換していてもよく、置換基としては特に限定はないが、アルキル基、アリール基、アルコキシ基、フッ素原子、塩素原子、臭素原子等のハロゲン原子、ニトロ基、水酸基、カルボキシル基、アミノ基等が挙げられる。好ましくはハロゲン原子、アルコキシ基である。置換してもよいアリール基としては、フェニル基や４−メトキシフェニル基が好ましく、更に好ましくはフェニル基である。
【００１８】
一般式（１）は、好ましくはＲ1がフェニル基で、Ｒ2がメチル基又はフェニル基であることが好ましい。
【００１９】
上記一般式（２）において、Ｒ1は前記と同義であり、Ｒ3は置換していてもよいアルキル基、又は置換していてもよいアリール基を示す。アルキル基としては、好ましくは炭素数１〜１０の直鎖状、分岐状若しくは環状のアルキル基であり、更に好ましくはメチル基、エチル基、イソプロピル基、ノルマルプロピル基、ノルマルブチル基、ｔ−ブチル基、シクロプロピル基、シクロブチル基、シクロペンチル基、シクロヘキシル基、シクロヘプチル基等の炭素数１〜７の直鎖状、分岐状若しくは環状のアルキル基、特に好ましくは炭素数１〜４の直鎖状若しくは分岐状のアルキル基又は炭素数５〜７の環状のアルキル基であり、最も好ましくは炭素数５〜７の環状のアルキル基である。置換していてもよいアリール基のアリール基としては、ナフチル基、フェニル基等であり、最も好ましくはフェニル基である。上記アルキル基及びアリール基は置換していてもよく、置換基としては特に限定はないが、フッ素原子、塩素原子、臭素原子等のハロゲン原子、アルキル基、アリール基、アルコキシ基、ニトロ基、水酸基、カルボキシル基、アミノ基等が挙げられ、好ましくはアルコキシ基である。置換してもよいアリール基としては、フェニル基や４−メトキシフェニル基が好ましく、更に好ましくはフェニル基である。
【００２０】
上記一般式（２）において、Ｘは水素原子又は金属原子を示す。金属原子は特に限定はないが、Ｌｉ、Ｎａ、Ｋ、Ｒｂ等のアルカリ金属原子、Ｂｅ、Ｍｇ、Ｃａ、Ｓｒ、Ｂａ等のアルカリ土類金属、Ｔｉ、Ｍｎ、Ｆｅ、Ｎｉ、Ｚｎ、Ｚｒ、Ｈｇ、Ｐｄ等の遷移金属原子、Ｓｎ、Ｐｂ、Ａｌ等の典型金属が挙げられる。金属原子として好ましいのは、アルカリ金属であるＬｉ、Ｎａ、Ｋ、Ｒｂ、又はアルカリ土類金属であるＢｅ、Ｍｇ、Ｃａ、Ｓｒ、Ｂａである。Ｘとして、好ましいのは水素原子である。
【００２１】
上記一般式（２）において、Ｘが水素原子の場合、金属化合物と錯体を形成していてもよい。具体的には、一般式（２）のヒドロキシル基とカルボニル基が金属化合物と配位結合をして錯体を形成する場合や、一般式（２）のヒドロキシル基と窒素原子が金属化合物と配位結合をして錯体を形成する場合が挙げられる。また、金属に対して、一般式（２）は１：１配位であってもよく、１：２配位であってもかまわない。
【００２２】
金属化合物は特に限定はないが、金属原子は、Ｔｉ、Ｍｎ、Ｆｅ、Ｎｉ、Ｚｎ、 Ｚｒ、Ｈｇ、Ｐｄ等の遷移金属原子、Ｓｎ、Ｐｂ、Ａｌ等の典型金属が挙げられる。また、金属原子として好ましいのは、安価かつ本反応で種々の基質に対して汎用性のある触媒となりうるＳｎ、Ａｌ、Ｆｅ、Ｎｉ、Ｚｎ等が好ましい。
【００２３】
錯体として、好ましいのは反応に用いるルイス酸又はその派生物がヒドロキシル基とカルボニル基と配位結合をしている化合物である。具体的には、塩化スズ（IV）錯体、塩化アルミニウム錯体、塩化鉄（III）錯体、塩化ニッケル錯体等が挙げられる。好ましくは塩化スズ（IV）錯体、塩化アルミニウム錯体である。
【００２４】
一般式（２）において好ましくは、Ｒ1がフェニル基であり、Ｒ3がシクロヘキシル基であり、Ｘが水素、Ｎａ、Ｋ、又はＣａであるか、又はＸが水素でＳｎ、Ａｌ、Ｆｅ、Ｎｉ、Ｚｎ錯体である。より好ましくは、Ｒ1がフェニル基であり、Ｒ3がシクロヘキシル基であり、Ｘが水素であるか、又はＸが水素でＳｎ、Ａｌ、Ｆｅ、Ｎｉ、Ｚｎ錯体である。
【００２５】
また、一般式（２）及び（４）で表される化合物のうち、Ｘが水素原子の場合は、ケト型の互変異性体であってもよい。
【００２６】
本発明においては、一般式（１）のオキサゾール化合物をルイス酸の存在下、酸ハライド（例えば、酸クロライド）又は酸無水物などのアシル化剤を作用させて一般式（２）のアシルオキサゾロン化合物を得るものである。かくして製造される一般式（２）のアシルオキサゾロン化合物のうち、下記一般式（４）
【００２７】
【化８】
【００２８】
（式中、Ｒ1及びＸは前記と同義。Ｘが水素原子の場合、金属化合物と錯体を形成していてもよい。）で表される化合物は新規化合物である。
【００２９】
一般式（４）の具体例としては、次のような化合物が挙げられる。
【００３０】
【化９】
【００３１】
式（４ａ）〜（４ｅ）中、Ｒ1はメチル基、フェニル基を、Ｍ1はＮａ、Ｋ、Ｃａを、Ｍ2はＳｎＣｌ4、ＡｌＣｌ3、ＦｅＣｌ3、ＮｉＣｌ2、ＺｎＣｌ2を表す。
【００３２】
＜アシルオキサゾロン誘導体の製造方法＞
本発明は、一般式（１）のオキサゾール化合物をルイス酸の存在下、酸ハライド或いは酸無水物などのアシル化剤を作用させて一般式（２）のアシルオキサゾロン化合物を得るものである。
【００３３】
ルイス酸としては、特に限定はないが、具体的には塩化アルミニウム（III）、四塩化スズ（IV）、塩化鉄（III）、塩化亜鉛（II）、塩化ニッケル（II）、三フッ化ホウ素エーテル錯体等が挙げられ、好ましくは工業的に入手が容易である四塩化スズ（IV）、塩化鉄（III）、塩化ニッケル（II）、塩化アルミニウム（III）が好ましい。
【００３４】
ルイス酸の使用量としては特に限定されないが、通常は原料である一般式（１）に対して０．０２モルから１０モル倍で反応は進行するが、生成物とルイス酸が錯体を形成しやすい性質があるため１モル倍以上の使用が好ましく、コストの観点から１〜３モル倍の使用が好ましい。
【００３５】
本発明で使用するアシル化剤は、一般式（１）のオキサゾール化合物に作用させることによって一般式（２）のアシルオキサゾロン化合物を製造することができるものであれば特に限定されないが、好ましくは酸ハライド又は酸無水物である。酸ハライド又は酸無水物としては、特に限定されないが、具体的には、アセチルクロリド、イソ酪酸クロリド、ピバロイルクロリド、シクロヘキサノイルクロリド、ベンゾイルクロリド、４−メトキシベンゾイルクロリド等の酸クロリド；アセチルブロミド、イソプロピオン酸ブロミド、ピバロイルブロミド、シクロヘキシルブロミド、ベンゾイルブロミド、４−メトキシベンゾイルブロミド等の酸ブロミド；アセチルヨージド、イソ酪酸ヨージド、ピバロイルヨージド、シクロヘキサノイルヨージド、ベンゾイルヨージド、４−メトキシベンゾイルヨージド等の酸ヨージドが挙げられ、好ましくはコスト的に安価である酸クロリド、酸ブロミドが好ましく、更に好ましくはシクロヘキサノイルクロリドやイソ酪酸クロリド、ベンゾイルクロリド等である。
【００３６】
酸無水物としては、無水酢酸、プロピオン酸無水物、ピバリン酸無水物、シクロヘキサン酸カルボン酸無水物、安息香酸無水物等があり、好ましくはシクロヘキサン酸カルボン酸無水物、プロピオン酸無水物、ピバリン酸無水物である。
【００３７】
酸ハライドの使用量としては特に限定されないが、通常は原料である化合物（１）に対して０．８〜５倍モル、コストや化合物（２）の精製のしやすさの観点から一般式（１）と同モルに近い０．９〜２倍モルの使用が好ましい。
【００３８】
反応を行う条件のうち、用いる溶媒としては反応に悪影響を与えないものであれば特に限定はないが、ヘキサン、ベンゼン、トルエン等の炭化水素系溶媒；エチルエーテル、プロピルエーテル、ブチルエーテル、テトラヒドロフラン等のエーテル系溶媒；ジクロロメタン、クロロホルム、ジクロロエタン、クロロベンゼン等のハロゲン系溶媒；酢酸エチル、酢酸ブチル等のエステル系溶媒、アセトニトリル等のニトリル系溶媒、ニトロベンゼン、ニトロメタン等のニトロ系溶媒；等が挙げられる。これらから選ばれる複数の溶媒を任意の割合に混合して用いてもよい。好ましい溶媒は、一般的にアシル化反応に影響を及ぼさないジクロロメタン、クロロベンゼン等のハロゲン系溶媒、アセトニトリル等のニトリル系溶媒、ニトロベンゼン、ニトロメタン等のニトロ系溶媒、ヘキサン、ベンゼン、トルエン等の炭化水素系溶媒である。更に好ましくは、アセトニトリル、ジクロロメタン、クロロホルム、クロロベンゼン、ニトロベンゼン、ニトロメタン及びトルエンである。
【００３９】
また、溶媒の使用量としては、任意の量の溶媒を用いることができるが、通常は原料基質に対して２〜５０倍体積量、好ましくは３〜１０倍体積量である。
【００４０】
この反応を実施する温度としては、特に限定されないが−５０℃から１００℃程度であり、好ましくは−１０℃から４０℃程度が好ましい。実施する圧力に関しては特に加圧下で行う必要はないが、反応時間を短縮する等の観点から常圧から１０気圧程度の圧力をかけてもよい。反応時間は、１０分〜数日の範囲で行うことができるが、製造コストを抑える観点から２４時間以内に終了させることが好ましく、更に好ましくは１０分から８時間である。
【００４１】
一般式（１）のオキサゾール化合物は公知の方法で製造すれば特に限定はないが、下記一般式（８）
【００４２】
【化１０】
【００４３】
で表されるオキサゾロン化合物とベンゾイルクロリドやアセチルクロリド等のアシル化剤を作用させる、あるいは下記一般式（９）
【００４４】
【化１１】
【００４５】
で表される馬尿酸とベンゾイルクロライドやアセチルクロライド等のアシル化剤を作用させることで合成可能である。ここで、一般式（８）及び（９）におけるＲ1は、一般式（１）におけるＲ1と同義である。
【００４６】
＜β−ケトアミノ酸誘導体の製造方法＞
上記一般式（２）で表されるオキサゾロン化合物にアルコール類を作用させることにより下記一般式（３）
【００４７】
【化１２】
【００４８】
（式中、Ｒ1及びＲ3は前記と同義である。Ｒ4は置換してもよいアルキル基、又は置換していてもよいアラルキル基を示す。）で表されるβ−ケトアミノ酸誘導体を製造することができる。
【００４９】
アルキル基としては、好ましくは炭素数１〜６の直鎖状、分岐状又は環状のアルキル基であり、更に好ましくはメチル基、エチル基、イソプロピル基、ノルマルプロピル基、ノルマルブチル基、ｔ−ブチル基等の炭素数１〜４の直鎖状若しくは分岐状のアルキル基であり、より好ましくはメチル基、エチル基、イソプロピル基、ｔ−ブチル基である。
【００５０】
アラルキル基としては、ベンジル基が好ましい。
【００５１】
上記アルキル基及びアラルキル基は置換していてもよく、置換基としては特に限定はないが、フッ素原子、塩素原子、臭素原子等のハロゲン原子、アルキル基、アルコキシ基、ニトロ基、アリールオキシ基、アミノ基、アリール基等が挙げられる。好ましくは塩素原子、アルコキシ基である。置換してもよいアラルキル基としては、ベンジル基、４−メトキシベンジル基、４−フルオロベンジル基、４−クロロベンジル基、３，４−ジメチルベンジル基が好ましく、更に好ましくはベンジル基、４−クロロベンジル基である。
【００５２】
一般式（３）は、好ましくはＲ1がフェニル基又はメチル基であり、Ｒ3がシクロヘキシル基であり、Ｒ4がメチル基、エチル基、イソプロピル基、ｔ−ブチル基、又はベンジル基であることが好ましい。
【００５３】
上記一般式（２）で表されるオキサゾロン化合物にアルコール類を作用させることにより、上記一般式（３）で表されるβ−ケトアミノ酸誘導体を製造することができる。
【００５４】
一般式（２）で表されるオキサゾロン化合物は、アルコールと反応させるにあたり、各種有機溶媒にて抽出及び／又は晶析等の方法で精製・単離することが好ましい。好ましくは、ろ過操作にて原料を取得する或いは塩酸等の酸の水溶液にて反応を終結後、有機溶媒にて抽出・洗浄操作を行い、反応に用いたルイス酸を除去したのち、晶析操作を行うことが望ましい。
【００５５】
反応に用いるアルコールとしては、特に限定されるものではないが、具体的にはメタノール、エタノール、ノルマルプロピルアルコール、イソプロピルアルコール、ノルマルブチルアルコール、イソブチルアルコール、ｔ−ブチルアルコール、ベンジルアルコール等であり、好ましくはエタノール、イソプロピルアルコール、ｔ−ブチルアルコール、ベンジルアルコールである。
【００５６】
アルコールの使用量は、一般式（２）のオキサゾロン化合物に対して１倍量から溶媒量まで使用することができるが、好ましくは１〜５倍量で使用することがコスト的に好ましい。
【００５７】
反応の温度としては、特に限定はされないが、通常室温から各種溶媒の沸点付近まで、好ましくは２０℃から１００℃がよい。この反応は常圧、大気中で行うことができ、特に窒素雰囲気下で行う必要はないが、必要に応じて窒素、ヘリウム等の不活性気体中で加圧下にて実施することもできる。
【００５８】
反応時間は、１０分〜数日の範囲で行うことができるが、製造コストを抑える観点から２４時間以内に終了させることが好ましく、更に好ましくは１０分から８時間である。
【００５９】
上記にて製造した一般式（３）のβ−ケトアミノ酸化合物は、反応液を濃縮するだけで特に精製は必要ないが、用いるアルコールの沸点が高い場合、用いた一般式（２）のオキサゾロン化合物の純度が低かった場合等は必要に応じて適宜、有機溶媒と水による分液操作での単離又は晶析による精製を行うことができる。
【００６０】
＜β−ケトアミノ酸化合物の用途＞
上記一般式（３）で表されるβ−ケトアミノ酸化合物は、それ自体或いは各種の手法にて誘導化し、種々の医薬や農薬の中間体として有用である。特に、一般式（７）で表される化合物において、Ｒ3がシクロヘキシル基である化合物に相当する下記式（１０）
【００６１】
【化１３】
で表される化合物は抗ＨＩＶ活性をもつ薬剤（ＷＯ０１／４０２２７） の中間体として工業的に有用である。上記式（１０）やその類縁体への変換の手法としては、上記一般式（３）で表される化合物を下記一般式（５）
【００６２】
【化１４】
【００６３】
（式中、Ｒ1、Ｒ3、Ｒ4は前記と同義。）で表される化合物に立体選択的に変換する。
【００６４】
この変換の手法としては、微生物の菌体及び／又は該菌体処理物を作用させる方法、或いは特許文献（ＷＯ０４／００５３７１Ａ１）や非特許文献（Tetrahedron Asymmetry 2001,12,1757-1762）に記載のルテニウム等の金属触媒を用いた不斉水素化反応が利用可能である。好ましくは、重金属混入の恐れがない微生物の菌体及び／又は該菌体処理物を作用させる方法である。
【００６５】
微生物の菌体及び／又は該菌体処理物を作用させる方法としては、特に限定はないが、アグロバクテリウム属又はエクシグオバクテリウム（Ｅｘｉｇｕｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ）属に属する微生物を使用するか、不斉還元反応を触媒するタンパク質をコードする遺伝子を導入した形質転換細胞を作製し、該細胞、該細胞の調製物、又は該細胞を培養して得られた培養液を原料と作用させてもかまわない。
【００６６】
上記一般式（５）で表される化合物を下記一般式（６）
【００６７】
【化１５】
表される化合物或いはその塩に変換する。
【００６８】
この変換の手法としては、酸又は塩基の存在下での加水分解、又は加水分解酵素にて加水分解を行う手法が挙げられる。
【００６９】
上記一般式（６）で表される化合物を塩基条件下、ｔ−ブトキシカルボニル化を行うことにより上記一般式（７）で表される化合物（例えば、式（１０）で表される化合物）へと変換可能である。
【００７０】
以下、本発明を実施例により更に詳細に説明するが、本発明はこれらによって限定されるものではない。
【実施例】
【００７１】
［実施例１ａ］４−(１−シクロヘキシル−１−ヒドロキシメチリデン)−２−フェニルオキサゾール−５−オンの合成
１００ｍＬのフラスコにジクロロメタン４３ｍＬ、５−アセトキシ−２−フェニルオキサゾール４．２８ｇ（２１．１ｍｍｏｌ）を仕込み、シクロヘキサンカルボン酸クロリド３．１０ｍＬ（２３．２ｍｍｏｌ）を添加し、しばらく撹拌した後に四塩化スズ３．８７ｍＬ（７３．２ｍｍｏｌ）を１０分間かけて滴下した。２４時間後、ＴＬＣにて原料の消失を確認し、４Ｎ塩酸水溶液１０ｍＬ及び酢酸エチル１５０ｍＬを添加し、有機層を分離した後、更に水５０ｍＬで２回、飽和食塩水５０ｍＬにて洗浄し、硫酸マグネシウムにて乾燥後、溶媒を留去した。得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（シリカゲル１５０ｇ、 ヘキサン：酢酸エチル＝１００：２〜１００：４）にて精製し、黄色固体として目的物３．２０g（純度換算後の収率５２％）を得た。
1Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ）：δ１．１４−１．５１（５Ｈ，ｍ），１．６８−１．７９（５Ｈ，ｍ），３．３１−３．３７（１Ｈ，ｍ），１．６８−１．７９（５Ｈ，ｍ），３．３１−３．３７（１Ｈ，ｍ），７．５３−７．５７（３Ｈ，ｍ），７．９６−８．０１（２Ｈ，ｍ）
【００７２】
［実施例１ｂ］４−〔１−シクロヘキシル−１−ヒドロキシメチリデン〕−２−フェニルオキサゾール−５−オンの合成
１Ｌのフラスコに５−ベンゾイルオキシ−２−フェニルオキサゾール４７．０ｇ（１７７ｍｍｏｌ）、ジクロロメタン３８０ｍＬを仕込み、氷冷下にてシクロヘキサンカルボン酸クロリド３３．０ｍＬ（２４８ｍｍｏｌ）を添加し、しばらく撹拌した後に四塩化スズ２９．０ｍＬ（２４８ｍｍｏｌ）を２分間かけて滴下した。室温に昇温した後、２４時間後にＴＬＣにて原料の消失を確認し、反応液をろ過して得られた４−〔１−シクロヘキシル−１−ヒドロキシメチリデン〕−２−フェニルオキサゾール−５−オンの塩化スズ錯体をＬＣにて定量分析したところ、４−〔１−シクロヘキシル−１−ヒドロキシメチリデン〕−２−フェニルオキサゾール−５−オンとしての収率は８９％であった。この錯体に２Ｎ塩酸１６０ｍＬ及び酢酸エチル５００ｍＬを添加し、有機層を分離した後に更に２Ｎ塩酸１６０ｍＬで２回洗浄し、硫酸マグネシウムにて乾燥後、溶媒を留去した。得られた残渣をジクロロメタン１５ｍＬ、ヘキサン１５ｍＬにて懸洗し、ろ過して得られた黄色固体として目的物４−〔１−シクロヘキシル−１−ヒドロキシメチリデン〕−２−フェニルオキサゾール−５−オン１５．５ｇ（純度９８％、収率３２％）を得た。
1Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ）：δ１．１４−１．５１（５Ｈ，ｍ），１．６８−１．７９（５Ｈ，ｍ），３．３１−３．３７（１Ｈ，ｍ），７．５３−７．５７（３Ｈ，ｍ），７．９６−８．０１（２Ｈ，ｍ）．
【００７３】
［実施例１ｃ］４−(１−シクロヘキシル-1-ヒドロキシメチリデン)−２−フェニルオキサゾール-5-オンの合成
200mlのフラスコにジクロロメタン94ml、５−ベンゾイルオキシ-２−フェニルオキサゾール 13.4g(50.5mmol)を仕込み、氷冷下にてシクロヘキサンカルボン酸クロリド13.5ml（101mmol）を添加し、しばらく攪拌した後に四塩化すず16.5ml（2.8mmol）を10分間かけて滴下した。室温に昇温させて16時間攪拌後、TLCにて原料の消失を確認し、反応液をろ過し、固体部分を塩化メチレン：n-ヘキサンの１：１の混合溶液20mlにて洗浄後、淡黄色固体として目的物のすず塩３４．６g（純度換算後の収率９７％）を得た。
1H-NMR(400MHz, DMSO-d):δ1.14-1.51(5H,m), 1.68-1.79(5H, m), 3.31-3.37(1H, m), 7.53-7.57（3H,m）, 7.96-8.01(2H, m)
【００７４】
［実施例２ａ］イソプロピル−２−ベンゾイルアミノ−３−シクロヘキサノイル−３−オキソプロピオン酸の合成
実施例１ｂで合成した４−〔１−シクロヘキシル−１−ヒドロキシメチリデン〕−２−フェニルオキサゾール−５−オン４７．５ｇ（１７５ｍｍｏｌ）、及びイソプロピルアルコール２３８ｍＬを仕込み、加熱還流下２時間撹拌した後、減圧濃縮し、白色固体としてイソプロピル−２−ベンゾイルアミノ−３−シクロヘキサノイル−３−オキソプロピオン酸を６６．１ｇ（純分として５３．９ｇ、収率９３％）得た。
1Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ3）：δ１．２０−１．３８（９Ｈ，ｍ），１．４５−１．５６（２Ｈ，ｍ），１．６９−１．８５（４Ｈ，ｍ），２．０８−２．１０（１Ｈ，ｂｒ−ｓ），２．８６−２．９３（１Ｈ，ｍ），５．１０−５．１７（１Ｈ，ｍ），５．５２（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．６Ｈｚ），７．２９（１Ｈ,ｄ，Ｊ＝６．１Ｈｚ），７．４３−７．５５（３Ｈ，ｍ），７．８３−７．８５（ｍ，２Ｈ）．
【００７５】
［実施例２ｂ］tert-ブチル-2-ベンゾイルアミノ -3-シクロヘキサノイル -3-オキソプロピオン酸の合成
実施例１ｂで合成した（ ４−〔１−シクロヘキシル-1-ヒドロキシメチリデン〕−２−フェニルオキサゾール-5-オン 150mg（0.553mmol）、およびtert-ブチルアルコール3.0mlを仕込み、油浴にて９０度に加熱し、2時間攪拌した後、減圧濃縮し、白色固体としてtert-ブチル-2-ベンゾイルアミノ -3-シクロヘキサノイル -3-オキソプロピオン酸を248mg（純分を換算後、収率９９%）得た。
1H-NMR(400MHz,CDCl3):δ
1.22-1.85(19H,m), 2.10-2.12(1H, m), 2.90-2.93(1H, m), 5.47 (1H,d, J=6.6Hz), 7.26(1H, br-s) , 7.42-7.54(3H, m), 7.83-7.85(m, 2H)
【００７６】
［実施例２ｃ］ベンジル-2-ベンゾイルアミノ -3-シクロヘキサノイル -3-オキソプロピオン酸の合成
実施例１ｂで合成した（ ４−〔１−シクロヘキシル-1-ヒドロキシメチリデン〕−２−フェニルオキサゾール-5-オン 150mg（0.553mmol）、およびベンジルアルコール3.0mlを仕込み、油浴にて１００度に加熱し、2時間攪拌した後、減圧濃縮し、白色固体としてベンジル-2-ベンゾイルアミノ -3-シクロヘキサノイル -3-オキソプロピオン酸を253mg（純分を換算後、収率：定量的）得た。
1H-NMR(400MHz,CDCl3):δ
0.95-1.97(10H, m), 2.65-2.74(1H, m), 5.19(2H, AB-q, J=12Hz), 5.52(1H, d, J=6.6Hz), 7.19-7.30 (6H,m) , 7.36-7.48(3H, m), 7.76-7.78(m, 2H)
【００７７】
［実施例２ｄ］エチル-2-ベンゾイルアミノ -3-シクロヘキサノイル -3-オキソプロピオン酸の合成
実施例１ｂで合成した（ ４−〔１−シクロヘキシル-1-ヒドロキシメチリデン〕−２−フェニルオキサゾール-5-オン 100mg（0.369mmol）、およびエチルアルコール2.0mlを仕込み、油浴にて加熱還流させ、2時間攪拌した後減圧濃縮し、白色固体としてエチル-2-ベンゾイルアミノ -3-シクロヘキサノイル -3-オキソプロピオン酸を131mg（純分を換算後、収率９９%）得た。
1H-NMR(400MHz,CDCl3):δ
1.15-1.78(13H,m), 2.00-2.03(1H, m), 2.79-2.86(1H, m), 4.14-4.29(m、2H), 5.49 (1H, d, J=6.6Hz), 7.24(1H, m) , 7.37-7.48(3H, m), 7.76-7.79(m, 2H)
【００７８】
［実施例２ｅ］イソプロピル-2-ベンゾイルアミノ -3-シクロヘキサノイル -3-オキソプロピオン酸の合成
実施例１ｃで合成した４−〔１−シクロヘキシル-1-ヒドロキシメチリデン〕−２−フェニルオキサゾール-5-オンのずず塩３４．５g（純分として49.2mmol）、およびイソプロピルアルコール53.4ml、ピリジン9.3mlを仕込み、加熱還流下4時間30分攪拌した後、反応液を室温にもどし、酢酸エチル２０mlにて３回希釈し、ろ過して得られた溶液を減圧濃縮し、白色固体としてイソプロピル-2-ベンゾイルアミノ -3-シクロヘキサノイル -3-オキソプロピオン酸を19.4g（純分として13.6 g、収率84%）を得た。
1H-NMR(400MHz,CDCl3):δ
1.20-1.38(9H,m), 1.45-1.56(2H, m), 1.69-1.85((4H, m), 2.08-2.10(1H, br-s), 2.86-2.93(1H, m), 5.10-5.17 (1H,m), 5.52(1H, d, J=6.6Hz), 7.29(1H,d,J=6.1Hz) , 7.43-7.55(3H, m), 7.83-7.85(m, 2H)
【００７９】
［実施例３］イソプロピル（２Ｒ，３Ｒ）−２−ベンゾイルアミノ−３−シクロヘキシル−３−ヒドロキシプロピオン酸エステルの合成
［１］エクシグオバクテリウム（Ｅｘｉｇｕｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ）ｓｐ．ＭＣＩ４３２２由来のカルボニルレダクターゼ遺伝子で形質転換された形質転換細胞の作製
エクシグオバクテリウム（Ｅｘｉｇｕｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ）ｓｐ．ＭＣＩ４３２２由来のカルボニルレダクターゼ（Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ Ｎｏ．３０１６３３０Ａ、配列番号２）をコードするＤＮＡ配列（ｇｅｎｂａｎｋ Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ Ｎｏ．ｇｐ：ＡＢ１５４４０９、配列番号１）をもとに配列番号３及び４に記載のプライマーを合成した。
【００８０】
配列番号１：
atgaaatata cggtgattac tggagcaagt tcaggaattg gatatgagac ggcaaaacta 60
ctcgcaggaa aaggaaaatc actcgttctc gtcgcgcgac ggacgtctga gctcgaaaaa 120
cttcgggatg aagtcaaaca aatctcacca gatagtgatg tcatcctcaa gtcggtcgat 180
ctcgcagata accaaaatgt ccatgattta tatgagggat taaaggaact cgacatcgaa 240
acgtggatca acaatgctgg attcggcgat tttgatctcg tccaggacat tgagctcggg 300
aaaatcgaga aaatgcttcg cttgaacatc gaggcgctaa cgattctatc gagtctgttc 360
gtccgcgatc atcatgacat cgaaggaacg acgctcgtca atatctcgtc agcaggtggc 420
taccggatcg tgccgaacgc ggtcacgtat tgcgcgacga agttctatgt cagtgcttat 480
acagaagggc tcgcgcaaga actgcaaaaa ggtggggcaa aacttcgggc gaaagtactg 540
gcaccagctg cgactgagac agagtttgcg gatcgttcgc gcggcgaagc aggtttcgac 600
tacagcaaga acgtcaaaaa gtaccatacg gcggctgaaa tggcaggctt cctgcatcag 660
ttgattgaaa gcgacgcgat cgtcggcatc gtcgacggtg agacgtatga gttcgaattg 720
cgtggtccat tgttcaacta cgcaggataa 750
【００８１】
配列番号２：
Met Lys Tyr Thr Val Ile Thr Gly Ala Ser Ser Gly Ile Gly Tyr Glu
Thr Ala Lys Leu Leu Ala Gly Lys Gly Lys Ser Leu Val Leu Val Ala
Arg Arg Thr Ser Glu Leu Glu Lys Leu Arg Asp Glu Val Lys Gln Ile
Ser Pro Asp Ser Asp Val Ile Leu Lys Ser Val Asp Leu Ala Asp Asn
Gln Asn Val His Asp Leu Tyr Glu Gly Leu Lys Glu Leu Asp Ile Glu
Thr Trp Ile Asn Asn Ala Gly Phe Gly Asp Phe Asp Leu Val Gln Asp
Ile Glu Leu Gly Lys Ile Glu Lys Met Leu Arg Leu Asn Ile Glu Ala
Leu Thr Ile Leu Ser Ser Leu Phe Val Arg Asp His His Asp Ile Glu
Gly Thr Thr Leu Val Asn Ile Ser Ser Ala Gly Gly Tyr Arg Ile Val
Pro Asn Ala Val Thr Tyr Cys Ala Thr Lys Phe Tyr Val Ser Ala Tyr
Thr Glu Gly Leu Ala Gln Glu Leu Gln Lys Gly Gly Ala Lys Leu Arg
Ala Lys Val Leu Ala Pro Ala Ala Thr Glu Thr Glu Phe Ala Asp Arg
Ser Arg Gly Glu Ala Gly Phe Asp Tyr Ser Lys Asn Val Lys Lys Tyr
His Thr Ala Ala Glu Met Ala Gly Phe Leu His Gln Leu Ile Glu Ser
Asp Ala Ile Val Gly Ile Val Asp Gly Glu Thr Tyr Glu Phe Glu Leu
Arg Gly Pro Leu Phe Asn Tyr Ala Gly
【００８２】
配列番号３：ggaggcgaat tcatgaaata tacggtgatt
配列番号４：taatcactgc agttatcctg cgtagttgaa
【００８３】
これらのプライマーを各１５ｐｍｏｌ、ｄＮＴＰ各１０ｎｍｏｌ、エクシグオバクテリウム（Ｅｘｉｇｕｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ）ｓｐ．ＭＣＩ４３２２のゲノムＤＮＡ ２５ｎｇ、ＫＯＤ−ｐｌｕｓ−用１０×緩衝液（東洋紡績社製）５μＬ、ＫＯＤ−ｐｌｕｓ−１ユニット（東洋紡績社製）を含む５０μＬの反応液を用い、変性（９４℃、１５秒）、アニール（５７℃、３０秒）、伸長（６８℃、２分）を３０サイクルで、ＰＴＣ−２００（ＭＪ Ｒｅｓｅａｒｃｈ社製）を用いてＰＣＲ反応を行った。なお、エクシグオバクテリウム ｓｐ（Exiguobacterium sp）MCI4322株は、FERM-P-19239として独立行政法人産業総合研究所特許生物寄託センターから入手可能である。ＰＣＲ反応液の一部をアガロースゲル電気泳動により解析した結果、特異的と思われるバンドが検出できた。
【００８４】
上記反応液をＭｉｎＥｌｕｔｅ ＰＣＲ Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｋｉｔ（Ｑｉａｇｅｎ社製）にて精製した。精製したＤＮＡ断片を制限酵素ＥｃｏＲＩとＰｓｔＩで消化し、アガロースゲル電気泳動を行い、目的とするバンドの部分を切り出し、Ｑｉａｇｅｎ Ｇｅｌ Ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｋｉｔ（Ｑｉａｇｅｎ社製）により精製後回収した。得られたＤＮＡ断片を、ＥｃｏＲＩ、及びＰｓｔＩで消化したｐＫＫ２２３−３とＴａｋａｒａ Ｌｉｇａｔｉｏｎ Ｋｉｔを用いてライゲーションし、大腸菌ＪＭ１０９株を形質転換した。
【００８５】
形質転換細胞をアンピシリン（５０μｇ／ｍＬ）を含むＬＢ寒天培地上で生育させ、コロニーダイレクトＰＣＲを行い、挿入断片のサイズを確認した。目的とするＤＮＡ断片が挿入されていると考えられる形質転換細胞を５０μｇ／ｍＬのアンピシリンを含むＬＢ培地で培養し、ＱＩＡＰｒｅｐＳｐｉｎ Ｍｉｎｉ Ｐｒｅｐ ｋｉｔ（Ｑｉａｇｅｎ社製）を用いてプラスミドを精製し、ｐＥｘＳＤＲ１とした。プラスミドに挿入したＤＮＡの塩基配列をダイターミネーター法により解析したところ、挿入されたＤＮＡ断片は、配列番号１の塩基配列と一致した。
【００８６】
［２］カルボニルレダクターゼをコードするＤＮＡで形質転換した大腸菌を用いた イソプロピル（２Ｒ，３Ｒ）−３−シクロヘキシル−３−ヒドロキシ−２−アミノベンゾイルプロピオン酸エステルの合成
上記［１］で得られた形質転換体をアンピシリン（５０μｇ／ｍＬ）を含むＣｉｒｃｌｅＧｒｏｗ培地（国産化学社製）で３０℃で１．７時間生育させ、０．１ｍＭになるようにイソプロピル−β−Ｄ−チオガラクトピラノシド（ＩＰＴＧ）を添加し、更に３０℃で２０時間培養した。得られた菌体ブロス１ｍＬを遠心分離により集菌し、１００μＬの緩衝液（１０％硫酸ナトリウム、１０％グルコースを含む１００ｍＭトリス（最終ｐＨ９．９））を加えよく混合した。これに３０μＬの１０ｇ／Ｌ ＮＡＤＰ+（オリエンタル酵母社製）、３０μＬのグルコースデヒドロゲナーゼ（天野製薬社製、１ｕｎｉｔ／ｍＬ）、実施例２ａで得られた２０μＬの１０ｇ／Ｌイソプロピル（２Ｒ，３Ｒ）−２−ベンゾイルアミノ−３−シクロヘキシル−３−オキソプロピオン酸エステル（ＤＭＳＯ溶液）を添加後４０℃で１８時間振とう反応させた。反応終了後の反応液を酢酸エチル抽出、濃縮し、２００μＬのイソプロピルアルコールで溶かし、イソプロピル（２Ｒ，３Ｒ）−３−シクロヘキシル−３−ヒドロキシ−２−アミノベンゾイルプロピオン酸エステルを定量した。定量は高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）を用いて測定した。ＨＰＬＣの条件は以下のとおりである。
【００８７】
カラム：ＯＤＳカラム Ａｃｅｎｔｉｓ Ａｍｉｄｅ（Ｓｐｅｌｃｏ社製、４．６ｍｍｘ１０ｃｍ）、４０℃
溶離液：１０ｍＭ酢酸アンモニウム／アセトニトリル＝５５／４５
流速：１ｍＬ／ｍｉｎ
検出：ＵＶ２５４ｎｍ
【００８８】
この結果、イソプロピル（２Ｒ，３Ｒ）−３−シクロヘキシル−３−ヒドロキシ−２−アミノベンゾイルプロピオン酸エステルの収量は１４．１μｇであった。ジアステレオ選択性は９０％ｄ．ｅ．であった。また、該遺伝子を含まないプラスミドｐＫＫ２２３−３をもつ大腸菌を上記と同様の方法で培養し、反応させてみたが上記生成物は認められなかった。次に光学純度の測定をＨＰＬＣを用いて行なった。ＨＰＬＣの条件は以下のとおりである。
【００８９】
カラム：ＯＤ−ＲＨ（ダイセル社製、４．６ｍｍｘ１５ｃｍ）、３０℃
溶離液：４０％アセトニトリル
流速：０．５ｍＬ／ｍｉｎ
検出：ＵＶ２５４ｎｍ
光学純度は１００％ｅ．ｅ．であった。
【００９０】
［実施例４］（２Ｒ，３Ｒ）−２−アミノ−３−シクロヘキシル−３−ヒドロキシプロピオン酸の合成法
５００ｍＬのナスフラスコに、実施例３と同様に、ただし反応スケールを１０００倍にあげて実施して得られたイソプロピル−２−ベンゾイルアミノ−３−シクロヘキサノイル−３−オキソプロピオン酸エステル１２．４ｇ（３７．０ｍｍｏｌ）を仕込み、６Ｎ塩酸水溶液を添加して１１０℃に加温しながら６．５時間反応させた。室温に冷却後、トルエン５０ｍＬにて２回洗浄し、水層部を更に１１０℃に昇温し、５時間反応させた。室温に戻し、トルエン５０ｍＬにて２回洗浄し、得られた水層に２５ｗｔ％の水酸化ナトリウム水溶液をｐＨ５．６８になるまで添加した。析出した固体をろ過し、減圧乾燥後に純度９０％程度の白色固体として（２Ｒ，３Ｒ）−２−アミノ−３−シクロヘキシル−３−ヒドロキシプロピオン酸を８．４０ｇ取得した。この化合物を塩酸塩に変換後、下記スペクトルを取得した。
1Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤ3ＯＤ）：δ０．８０−１．２７（５Ｈ，ｍ），１．５８−１．７９（５Ｈ，ｍ），１．９６−１．９９（１Ｈ，ｍ），３．４２（１Ｈ，ｍ），４．００（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝２．３Ｈｚ）．
【００９１】
［実施例５］（２Ｒ，３Ｒ）−２−ｔ−ブトキシカルボニルアミノ−３−シクロヘキシル−３−ヒドロキシプロピオン酸の合成
実施例４で取得した（２Ｒ，３Ｒ）−２−アミノ−３−シクロヘキシル−３−ヒドロキシプロピオン酸８．４０ｇを１Ｎ水酸化ナトリウム水溶液３５ｍＬ及びＴＨＦ３５ｍＬに溶解させ、ジ−ｔ−ブチルジカルボナート８．８９ｇ（４０．７ｍｍｏｌ）を添加した。室温下で６時間反応させ、反応液を減圧下でＴＨＦを留去した。トルエン２０ｍＬを添加し、有機層と水層を分離し、更に有機層を１Ｎ水酸化ナトリウム水溶液５ｍＬで３回抽出した。水層を併せ、１Ｎ塩酸６０ｍＬにて酸性に調整し、酢酸エチル７０ｍＬ、３０ｍＬでそれぞれ抽出した。得られた有機層を硫酸マグネシウムで乾燥・ろ過し、得られた液を濃縮し、（２Ｒ，３Ｒ）−２−ｔ−ブトキシカルボニルアミノ−３−シクロヘキシル−３−ヒドロキシプロピオン酸７．０９ｇ（純度９６％、イソプロピル−２−ベンゾイルアミノ−３−シクロヘキサノイル−３−オキソプロピオン酸エステルからの換算収率６７％）を得た。
1Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤ3ＯＤ）：δ０．８８−１．２４（５Ｈ，ｍ），１．６２−１．６８（５Ｈ，ｍ），１．７９−１．８３（１Ｈ，ｍ），３．３７（１Ｈ，ｔ，Ｊ＝６．２Ｈｚ），４．０７−４．１８（１Ｈ，ｍ）．
【００９２】
［比較例１］４−（１−ヒドロキシメチリデン）−２−フェニルオキサゾール−５−オンの合成（非特許文献２及び非特許文献３）
馬尿酸１．００ｇ（５．５８ｍｍｏｌ）をエタノール５ｍＬに懸濁させ、２０％ナトリウムエトキシドエタノール溶液を４．７６ｇ（１４ｍｍｏｌ）添加した。２時間撹拌後、反応液を減圧乾燥して馬尿酸のナトリウム塩１．１２とした。この馬尿酸ナトリウム塩にβ−ピコリン１．７０ｍＬ、無水酢酸（１．６７ｍＬ）を添加し、室温にて２時間反応後、更に４０℃にて５時間反応させた。反応液を室温に冷却し、ＬＣにて定量分析したところ収率は１５％、変換率は５０％であった。
1Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ3）：δ２．５０（３Ｈ，ｓ），７．５２−７．５７（３Ｈ，ｍ），７．８８−７．９４（２Ｈ，ｍ）．
【００９３】
［比較例２］４−〔１−シクロヘキシル−１−ヒドロキシメチリデン〕−２−フェニルオキサゾール−５−オンの合成（非特許文献２及び非特許文献３）
２−フェニルオキサゾール−５−オン２００ｍｇ（１．２４ｍｍｏｌ）をβ−ピコリン０．３８ｍＬに懸濁させ、氷冷下、シクロヘキサンカルボン酸クロライド０．１６ｍＬを滴下して室温に戻して２０時間反応させた。反応液に２Ｎ塩酸水２０ｍＬを加え、ジクロロメタン３０ｍＬにて２回抽出し、得られた有機層をＬＣにて定量分析したところ収率は１８％、変換率は１００％であった。反応副生物である４−（２−Ｎ−ベンゾイルアミノ−１−ヒドロキシルメチリデン）−イル−２−フェニルオキサゾール−５−オンが５０％生成していた。
1Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ3）：δ４．４６（３Ｈ，ｍ），７．４３−７．６６（７Ｈ，ｍ），７．８３（２Ｈ），７．９０（１Ｈ，ｓ），１２．５５（１Ｈ，ｓ）.
【図面の簡単な説明】
【００９４】
【図１】図１は、実施例及び比較例における反応の概要を示す。
【配列表フリーテキスト】
【００９５】
［配列表］
SEQUENCE LISTING
<110> API Corporation
<120> A method for producing an acyloxazolone derivative and beta-ketoamino acid derivative
<130> A61441A
<160> 4
<210> 1
<211> 750
<212> DNA
<213> Exiguobacterium sp.
<400> 1
atgaaatata cggtgattac tggagcaagt tcaggaattg gatatgagac ggcaaaacta 60
ctcgcaggaa aaggaaaatc actcgttctc gtcgcgcgac ggacgtctga gctcgaaaaa 120
cttcgggatg aagtcaaaca aatctcacca gatagtgatg tcatcctcaa gtcggtcgat 180
ctcgcagata accaaaatgt ccatgattta tatgagggat taaaggaact cgacatcgaa 240
acgtggatca acaatgctgg attcggcgat tttgatctcg tccaggacat tgagctcggg 300
aaaatcgaga aaatgcttcg cttgaacatc gaggcgctaa cgattctatc gagtctgttc 360
gtccgcgatc atcatgacat cgaaggaacg acgctcgtca atatctcgtc agcaggtggc 420
taccggatcg tgccgaacgc ggtcacgtat tgcgcgacga agttctatgt cagtgcttat 480
acagaagggc tcgcgcaaga actgcaaaaa ggtggggcaa aacttcgggc gaaagtactg 540
gcaccagctg cgactgagac agagtttgcg gatcgttcgc gcggcgaagc aggtttcgac 600
tacagcaaga acgtcaaaaa gtaccatacg gcggctgaaa tggcaggctt cctgcatcag 660
ttgattgaaa gcgacgcgat cgtcggcatc gtcgacggtg agacgtatga gttcgaattg 720
cgtggtccat tgttcaacta cgcaggataa 750
<210> 2
<211> 249
<212> PRT
<213> Exiguobacterium sp.
<400> 2
Met Lys Tyr Thr Val Ile Thr Gly Ala Ser Ser Gly Ile Gly Tyr Glu
1 5 10 15
Thr Ala Lys Leu Leu Ala Gly Lys Gly Lys Ser Leu Val Leu Val Ala
20 25 30
Arg Arg Thr Ser Glu Leu Glu Lys Leu Arg Asp Glu Val Lys Gln Ile
35 40 45
Ser Pro Asp Ser Asp Val Ile Leu Lys Ser Val Asp Leu Ala Asp Asn
50 55 60
Gln Asn Val His Asp Leu Tyr Glu Gly Leu Lys Glu Leu Asp Ile Glu
65 70 75 80
Thr Trp Ile Asn Asn Ala Gly Phe Gly Asp Phe Asp Leu Val Gln Asp
85 90 95
Ile Glu Leu Gly Lys Ile Glu Lys Met Leu Arg Leu Asn Ile Glu Ala
100 105 110
Leu Thr Ile Leu Ser Ser Leu Phe Val Arg Asp His His Asp Ile Glu
115 120 125
Gly Thr Thr Leu Val Asn Ile Ser Ser Ala Gly Gly Tyr Arg Ile Val
130 135 140
Pro Asn Ala Val Thr Tyr Cys Ala Thr Lys Phe Tyr Val Ser Ala Tyr
145 150 155 160
Thr Glu Gly Leu Ala Gln Glu Leu Gln Lys Gly Gly Ala Lys Leu Arg
165 170 175
Ala Lys Val Leu Ala Pro Ala Ala Thr Glu Thr Glu Phe Ala Asp Arg
180 185 190
Ser Arg Gly Glu Ala Gly Phe Asp Tyr Ser Lys Asn Val Lys Lys Tyr
195 200 205
His Thr Ala Ala Glu Met Ala Gly Phe Leu His Gln Leu Ile Glu Ser
210 215 220
Asp Ala Ile Val Gly Ile Val Asp Gly Glu Thr Tyr Glu Phe Glu Leu
225 230 235 240
Arg Gly Pro Leu Phe Asn Tyr Ala Gly
245
<210> 3
<211> 30
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> PCR primer
<400> 3
ggaggcgaat tcatgaaata tacggtgatt 30
<210> 4
<211> 30
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> PCR primer
<400> 4
taatcactgc agttatcctg cgtagttgaa 30
【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記一般式（１）
【化１】
（式中、Ｒ1及びＲ2はそれぞれ独立して、置換していてもよいアルキル基、又は置換していてもよいアリール基を示す。）で表されるオキサゾール化合物にルイス酸の存在下、アシル化剤を作用させることにより、下記一般式（２）
【化２】
（式中、Ｒ1は前記と同義であり、Ｒ3は置換していてもよいアルキル基、又は置換していてもよいアリール基を示し、Ｘは水素原子又は金属原子を示す。Ｘが水素原子の場合、金属化合物と錯体を形成していてもよい。）で表されるアシルオキサゾロン化合物を製造する工程を含む、アシルオキサゾロン化合物の製造方法。
【請求項２】
アシル化剤が、酸ハライド又は酸無水物である、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
請求項１の方法により製造した一般式（２）で表されるオキサゾロン化合物にアルコール類を作用させることにより下記一般式（３）
【化３】
（式中、Ｒ1及びＲ3はそれぞれ独立して、置換していてもよいアルキル基、又は置換していてもよいアリール基を示し、Ｒ4は置換してもよいアルキル基、又は置換していてもよいアラルキル基を示す。）で表される化合物を製造する工程を含む、β−ケトアミノ酸誘導体の製造方法。
【請求項４】
下記一般式（４）
【化４】
（式中、Ｒ1は置換していてもよいアルキル基、又は置換していてもよいアリール基を示し、Ｘは水素原子又は金属原子を示す。Ｘが水素原子の場合、金属化合物と錯体を形成していてもよい。）で表されるシクロヘキシルメチリデニルオキサゾロン化合物。
【請求項５】
（ｉ）請求項３に記載の方法により一般式（３）で表されるβ−ケトアミノ酸誘導体を製造する工程、及び
（ｉｉ）上記工程（ｉ）で得られた一般式（３）で表されるβ−ケトアミノ酸誘導体に微生物の菌体及び／又は該菌体処理物を作用させて下記一般式（５）
【化５】
（式中、Ｒ1及びＲ3はそれぞれ独立して、置換していてもよいアルキル基、又は置換していてもよいアリール基を示し、Ｒ4は置換してもよいアルキル基、又は置換していてもよいアラルキル基を示し、Ｘは水素原子又は金属原子を示す。Ｘが水素原子の場合、金属化合物と錯体を形成していてもよい。）で表されるα−Ｎ−アシルアミノ−β−ヒドロキシエステルを得る工程を含む、α−Ｎ−アシルアミノ−β−ヒドロキシエステルを製造する方法。
【請求項６】
（ｉ）請求項５に記載の方法により一般式（５）で表されるＮ−アシルアミノ−β−ヒドロキシエステルを製造する工程、
（ｉｉ）上記工程（ｉ）で得られたα−Ｎ−アシルアミノ−β−ヒドロキシエステルに酸又は塩基を作用させて加水分解を行い、下記一般式（６）
【化６】
（式中、Ｒ3は置換していてもよいアルキル基、又は置換していてもよいアリール基を示し、Ｘは水素原子又は金属原子を示す。Ｘが水素原子の場合、金属化合物と錯体を形成していてもよい。）で表されるβ−ヒドロキシアミノ酸を得る工程；及び
（ｉｉｉ）上記工程（ｉｉ）で得られたβ−ヒドロキシアミノ酸にｔ−ブトキシカルボニル化剤を作用させて下記一般式（７）
【化７】
（式中、Ｒ3及びＸは前記と同義。Ｘが水素原子の場合、金属化合物と錯体を形成していてもよい。）で表される化合物を製造する工程、を含むＮ−ｔ−ブトキシカルボニル−β−ヒドロキシアミノ酸の製造方法。
【請求項１】
下記一般式（１）
【化１】
（式中、Ｒ1及びＲ2はそれぞれ独立して、置換していてもよいアルキル基、又は置換していてもよいアリール基を示す。）で表されるオキサゾール化合物にルイス酸の存在下、アシル化剤を作用させることにより、下記一般式（２）
【化２】
（式中、Ｒ1は前記と同義であり、Ｒ3は置換していてもよいアルキル基、又は置換していてもよいアリール基を示し、Ｘは水素原子又は金属原子を示す。Ｘが水素原子の場合、金属化合物と錯体を形成していてもよい。）で表されるアシルオキサゾロン化合物を製造する工程を含む、アシルオキサゾロン化合物の製造方法。
【請求項２】
アシル化剤が、酸ハライド又は酸無水物である、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
請求項１の方法により製造した一般式（２）で表されるオキサゾロン化合物にアルコール類を作用させることにより下記一般式（３）
【化３】
（式中、Ｒ1及びＲ3はそれぞれ独立して、置換していてもよいアルキル基、又は置換していてもよいアリール基を示し、Ｒ4は置換してもよいアルキル基、又は置換していてもよいアラルキル基を示す。）で表される化合物を製造する工程を含む、β−ケトアミノ酸誘導体の製造方法。
【請求項４】
下記一般式（４）
【化４】
（式中、Ｒ1は置換していてもよいアルキル基、又は置換していてもよいアリール基を示し、Ｘは水素原子又は金属原子を示す。Ｘが水素原子の場合、金属化合物と錯体を形成していてもよい。）で表されるシクロヘキシルメチリデニルオキサゾロン化合物。
【請求項５】
（ｉ）請求項３に記載の方法により一般式（３）で表されるβ−ケトアミノ酸誘導体を製造する工程、及び
（ｉｉ）上記工程（ｉ）で得られた一般式（３）で表されるβ−ケトアミノ酸誘導体に微生物の菌体及び／又は該菌体処理物を作用させて下記一般式（５）
【化５】
（式中、Ｒ1及びＲ3はそれぞれ独立して、置換していてもよいアルキル基、又は置換していてもよいアリール基を示し、Ｒ4は置換してもよいアルキル基、又は置換していてもよいアラルキル基を示し、Ｘは水素原子又は金属原子を示す。Ｘが水素原子の場合、金属化合物と錯体を形成していてもよい。）で表されるα−Ｎ−アシルアミノ−β−ヒドロキシエステルを得る工程を含む、α−Ｎ−アシルアミノ−β−ヒドロキシエステルを製造する方法。
【請求項６】
（ｉ）請求項５に記載の方法により一般式（５）で表されるＮ−アシルアミノ−β−ヒドロキシエステルを製造する工程、
（ｉｉ）上記工程（ｉ）で得られたα−Ｎ−アシルアミノ−β−ヒドロキシエステルに酸又は塩基を作用させて加水分解を行い、下記一般式（６）
【化６】
（式中、Ｒ3は置換していてもよいアルキル基、又は置換していてもよいアリール基を示し、Ｘは水素原子又は金属原子を示す。Ｘが水素原子の場合、金属化合物と錯体を形成していてもよい。）で表されるβ−ヒドロキシアミノ酸を得る工程；及び
（ｉｉｉ）上記工程（ｉｉ）で得られたβ−ヒドロキシアミノ酸にｔ−ブトキシカルボニル化剤を作用させて下記一般式（７）
【化７】
（式中、Ｒ3及びＸは前記と同義。Ｘが水素原子の場合、金属化合物と錯体を形成していてもよい。）で表される化合物を製造する工程、を含むＮ−ｔ−ブトキシカルボニル−β−ヒドロキシアミノ酸の製造方法。
【図１】
【公開番号】特開２００７−３１４２８（Ｐ２００７−３１４２８Ａ）
【公開日】平成１９年２月８日（２００７．２．８）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００６−１７２１９１（Ｐ２００６−１７２１９１）
【出願日】平成１８年６月２２日（２００６．６．２２）
【出願人】（３９６０２０４６４）株式会社エーピーアイ コーポレーション (39)
【Ｆターム（参考）】
【公開日】平成１９年２月８日（２００７．２．８）
【国際特許分類】
【出願日】平成１８年６月２２日（２００６．６．２２）
【出願人】（３９６０２０４６４）株式会社エーピーアイ コーポレーション (39)
【Ｆターム（参考）】
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