アジピン酸を調製する生物学的方法
本技術は、部分的に、アジピン酸を産生するための生物学的方法およびそのような産生が可能な工学的に作り出された微生物に関する。ある実施形態では、方法は、脂肪アルコールオキシダーゼ活性（たとえば６−ヒドロキシヘキサン酸デヒドロゲナーゼ活性、オメガヒドロキシル脂肪酸デヒドロゲナーゼ活性）を追加するもしくは増加させる遺伝子修飾を導入し、それによって、工学的に作り出された微生物を産生するステップと、宿主微生物に比べて検出可能なおよび／または増加した６−ヒドロキシヘキサン酸デヒドロゲナーゼ活性またはオメガヒドロキシル脂肪酸デヒドロゲナーゼ活性を有する工学的に作り出された微生物を選択するステップとを含む。
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
アジピン酸を産生する工学的に作り出された微生物であって、６−オキソヘキサン酸デヒドロゲナーゼ活性、オメガオキソ脂肪酸デヒドロゲナーゼ活性、６−ヒドロキシヘキサン酸デヒドロゲナーゼ活性、オメガヒドロキシル脂肪酸デヒドロゲナーゼ活性、ヘキサノエートシンターゼ活性、モノオキシゲナーゼ活性、モノオキシゲナーゼレダクターゼ活性、脂肪アルコールオキシダーゼ活性、アシル−ＣｏＡリガーゼ活性、アシル−ＣｏＡオキシダーゼ活性、エノイル−ＣｏＡヒドラターゼ活性、３−Ｌ−ヒドロキシアシル−ＣｏＡデヒドロゲナーゼ活性、およびアセチル−ＣｏＡ Ｃ−アシルトランスフェラーゼ活性から成る群から選択される１つ以上の改変された活性を含む、工学的に作り出された微生物。
【請求項２】
前記６−オキソヘキサン酸デヒドロゲナーゼ活性、オメガオキソ脂肪酸デヒドロゲナーゼ活性、６−ヒドロキシヘキサン酸デヒドロゲナーゼ活性、オメガヒドロキシル脂肪酸デヒドロゲナーゼ活性、ヘキサノエートシンターゼ活性、モノオキシゲナーゼ活性、モノオキシゲナーゼレダクターゼ活性、脂肪アルコールオキシダーゼ活性、アシル−ＣｏＡリガーゼ活性、アシル−ＣｏＡオキシダーゼ活性、エノイル−ＣｏＡヒドラターゼ活性、３−Ｌ−ヒドロキシアシル−ＣｏＡデヒドロゲナーゼ活性、および／またはアセチル−ＣｏＡ Ｃ−アシルトランスフェラーゼ活性を追加するまたは増加させる遺伝子修飾を含む、請求項１に記載の工学的に作り出された微生物。
【請求項３】
前記アシル−ＣｏＡオキシダーゼ活性を低下させる遺伝子修飾を含む、請求項１に記載の工学的に作り出された微生物。
【請求項４】
前記遺伝子修飾は、６−オキソヘキサン酸デヒドロゲナーゼ活性、オメガオキソ脂肪酸デヒドロゲナーゼ活性、６−ヒドロキシヘキサン酸デヒドロゲナーゼ活性、オメガヒドロキシル脂肪酸デヒドロゲナーゼ活性、ヘキサノエートシンターゼ活性、モノオキシゲナーゼ活性、モノオキシゲナーゼレダクターゼ活性、脂肪アルコールオキシダーゼ活性、アシル−ＣｏＡリガーゼ活性、アシル−ＣｏＡオキシダーゼ活性、エノイル−ＣｏＡヒドラターゼ活性、３−Ｌ−ヒドロキシアシル−ＣｏＡデヒドロゲナーゼ活性、またはアセチル−ＣｏＡ Ｃ−アシルトランスフェラーゼ活性を有するポリペプチドをコードするポリヌクレオチドのコピーの増加を含む、請求項２に記載の工学的に作り出された微生物。
【請求項５】
前記遺伝子修飾は、６−オキソヘキサン酸デヒドロゲナーゼ活性、オメガオキソ脂肪酸デヒドロゲナーゼ活性、６−ヒドロキシヘキサン酸デヒドロゲナーゼ活性、オメガヒドロキシル脂肪酸デヒドロゲナーゼ活性、ヘキサノエートシンターゼ活性、モノオキシゲナーゼ活性、モノオキシゲナーゼレダクターゼ活性、脂肪アルコールオキシダーゼ活性、アシル−ＣｏＡリガーゼ活性、アシル−ＣｏＡオキシダーゼ活性、エノイル−ＣｏＡヒドラターゼ活性、３−Ｌ−ヒドロキシアシル−ＣｏＡデヒドロゲナーゼ活性、またはアセチル−ＣｏＡ Ｃ−アシルトランスフェラーゼ活性を有するポリペプチドをコードするポリヌクレオチドと機能的に関連する異種のプロモーターおよび／または５’ＵＴＲを前記微生物のゲノムＤＮＡに挿入することを含む、請求項２に記載の工学的に作り出された微生物。
【請求項６】
改変されたチオエステラーゼ活性を含む、請求項１〜５のいずれか一項に記載の工学的に作り出された微生物。
【請求項７】
チオエステラーゼ活性を追加するまたは増加させる遺伝子改変を含む、請求項６に記載の工学的に作り出された微生物。
【請求項８】
チオエステラーゼ活性を有するポリペプチドをコードする異種のポリヌクレオチドを含む、請求項７に記載の工学的に作り出された微生物。
【請求項９】
６−オキソヘキサン酸デヒドロゲナーゼ活性、オメガオキソ脂肪酸デヒドロゲナーゼ活性、または６−オキソヘキサン酸デヒドロゲナーゼ活性およびオメガオキソ脂肪酸デヒドロゲナーゼ活性を有するポリペプチドをコードする異種のポリヌクレオチドを含む、請求項１〜８のいずれか一項に記載の工学的に作り出された微生物。
【請求項１０】
前記異種のポリヌクレオチドは、細菌に由来する、請求項９に記載の工学的に作り出された微生物。
【請求項１１】
前記細菌は、アシネトバクター属細菌、ノカルジア属細菌、シュードモナス属細菌、またはザントバクター属細菌である、請求項１０に記載の工学的に作り出された微生物。
【請求項１２】
６−ヒドロキシヘキサン酸デヒドロゲナーゼ活性、オメガヒドロキシル脂肪酸デヒドロゲナーゼ活性、または６−ヒドロキシヘキサン酸デヒドロゲナーゼ活性およびオメガヒドロキシル脂肪酸デヒドロゲナーゼ活性を有するポリペプチドをコードする異種のポリヌクレオチドを含む、請求項１または６に記載の工学的に作り出された微生物。
【請求項１３】
前記異種のポリヌクレオチドは、細菌に由来する、請求項１２に記載の工学的に作り出された微生物。
【請求項１４】
前記細菌は、アシネトバクター属細菌、ノカルジア属細菌、シュードモナス属細菌、またはザントバクター属細菌である、請求項１３に記載の工学的に作り出された微生物。
【請求項１５】
ヘキサノエートシンターゼサブユニットＡ活性を有するポリペプチドをコードする異種のポリヌクレオチドを含む、請求項１または６に記載の工学的に作り出された微生物。
【請求項１６】
ヘキサノエートシンターゼサブユニットＢ活性を有するポリペプチドをコードする異種のポリヌクレオチドを含む、請求項１または６に記載の工学的に作り出された微生物。
【請求項１７】
前記異種のポリヌクレオチドは、細菌から独立して選択される、請求項１５または１６に記載の工学的に作り出された微生物。
【請求項１８】
前記細菌は、バチルス属細菌である、請求項１７に記載の工学的に作り出された微生物。
【請求項１９】
前記バチルス属細菌は、Ｂ．ｍｅｇａｔｅｒｉｕｍである、請求項１８に記載の工学的に作り出された微生物。
【請求項２０】
モノオキシゲナーゼ活性を有するポリペプチドをコードする異種のポリヌクレオチドを含む、請求項１または６に記載の工学的に作り出された微生物。
【請求項２１】
前記異種のポリヌクレオチドは、真菌に由来する、請求項２０に記載の工学的に作り出された微生物。
【請求項２２】
前記真菌は、アスペルギルス属真菌である、請求項２１に記載の工学的に作り出された微生物。
【請求項２３】
前記アスペルギルス属真菌は、Ａ．ｐａｒａｓｉｔｉｃｕｓである、請求項２２に記載の工学的に作り出された微生物。
【請求項２４】
モノオキシゲナーゼ活性による一次のヘキサノエート使用をもたらす遺伝子修飾を含む、請求項１または２に記載の工学的に作り出された微生物。
【請求項２５】
前記遺伝子修飾は、ポリケチドシンターゼ活性を低下させる、請求項２４に記載の工学的に作り出された微生物。
【請求項２６】
真核生物である、請求項１〜２５のいずれか一項に記載の工学的に作り出された微生物。
【請求項２７】
酵母である、請求項２６に記載の工学的に作り出された微生物。
【請求項２８】
前記酵母は、カンジダ属酵母である、請求項２７に記載の工学的に作り出された微生物。
【請求項２９】
前記カンジダ属酵母は、Ｃ．ｔｒｏｐｉｃａｌｉｓ株である、請求項２８に記載の工学的に作り出された微生物。
【請求項３０】
真菌である、請求項２６に記載の工学的に作り出された微生物。
【請求項３１】
前記真菌は、ヤロウイア属真菌である、請求項３０に記載の工学的に作り出された微生物。
【請求項３２】
前記ヤロウイア属真菌は、Ｙ．ｌｉｐｏｌｙｔｉｃａである、請求項３１に記載の工学的に作り出された微生物。
【請求項３３】
前記真菌は、アスペルギルス属真菌である、請求項３０に記載の工学的に作り出された微生物。
【請求項３４】
前記アスペルギルス属真菌は、Ａ．ｐａｒａｓｉｔｉｃｕｓ株またはＡ．ｎｉｄｕｌａｎｓ株である、請求項３３に記載の工学的に作り出された微生物。
【請求項３５】
６−ヒドロキシヘキサン酸変換を低下させる遺伝子修飾を含む、請求項１〜３４のいずれか一項に記載の工学的に作り出された微生物。
【請求項３６】
前記遺伝子修飾は、６−ヒドロキシヘキサン酸デヒドロゲナーゼ活性を低下させる、請求項３５に記載の工学的に作り出された微生物。
【請求項３７】
ベータ酸化活性を低下させる遺伝子修飾を含む、請求項１〜３６のいずれか一項に記載の工学的に作り出された微生物。
【請求項３８】
前記遺伝子修飾は、ベータ酸化活性を検出不可能にする、請求項３７に記載の工学的に作り出された微生物。
【請求項３９】
前記遺伝子修飾は、ベータ酸化活性を部分的に低下させる、請求項３７に記載の工学的に作り出された微生物。
【請求項４０】
前記遺伝子修飾は、アシル−ＣｏＡオキシダーゼ活性を有するポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを破壊することを含む、請求項３７〜３９のいずれか一項に記載の工学的に作り出された微生物。
【請求項４１】
前記遺伝子修飾は、アシル−ＣｏＡオキシダーゼ活性を有するポリペプチドをコードするポリヌクレオチドと機能的に関連するプロモーターを破壊することを含む、請求項３７〜３９のいずれか一項に記載の工学的に作り出された微生物。
【請求項４２】
前記アシル−ＣｏＡオキシダーゼ活性を有する前記ポリペプチドは、ＰＯＸポリペプチドである、請求項４０または４１に記載の工学的に作り出された微生物。
【請求項４３】
前記ＰＯＸポリペプチドは、ＰＯＸ４ポリペプチド、ＰＯＸ５ポリペプチド、またはＰＯＸ４ポリペプチドおよびＰＯＸ５ポリペプチドである、請求項４２に記載の工学的に作り出された微生物。
【請求項４４】
供給材料と接触する、請求項１〜４３のいずれか一項に記載の工学的に作り出された微生物。
【請求項４５】
前記供給材料は、糖類を含む、請求項４４に記載の工学的に作り出された微生物。
【請求項４６】
前記糖類は、単糖、多糖、または単糖および多糖の混合物である、請求項４５に記載の工学的に作り出された微生物。
【請求項４７】
前記供給材料は、パラフィンを含む、請求項４４に記載の工学的に作り出された微生物。
【請求項４８】
前記パラフィンは、飽和パラフィン、不飽和パラフィン、置換パラフィン、分岐パラフィン、直鎖状パラフィン、またはその組合せである、請求項４７に記載の工学的に作り出された微生物。
【請求項４９】
前記パラフィンは、約１〜約６０個の炭素原子を含む、請求項４７または４８に記載の工学的に作り出された微生物。
【請求項５０】
前記パラフィンは、複数のパラフィンの混合物中にある、請求項４７〜４９に記載の工学的に作り出された微生物。
【請求項５１】
前記複数のパラフィンの混合物中の前記複数のパラフィンは、約８〜約１８の平均炭素原子数を有する、請求項５０に記載の工学的に作り出された微生物。
【請求項５２】
前記平均炭素原子数は、約１０〜約１６である、請求項５１に記載の工学的に作り出された微生物。
【請求項５３】
前記平均炭素原子数は、約１２である、請求項５２に記載の工学的に作り出された微生物。
【請求項５４】
前記パラフィンは、ろう中にある、請求項４７〜５３１のいずれか一項に記載の工学的に作り出された微生物。
【請求項５５】
前記パラフィンは、オイル中にある、請求項４７〜５３のいずれか一項に記載の工学的に作り出された微生物。
【請求項５６】
前記パラフィンは、石油生成物に由来する、請求項４７〜５５のいずれか一項に記載の工学的に作り出された微生物。
【請求項５７】
前記石油生成物は、石油蒸留物である、請求項５６に記載の工学的に作り出された微生物。
【請求項５８】
前記パラフィンは、植物または植物生成物に由来する、請求項４７〜５５のいずれか一項に記載の工学的に作り出された微生物。
【請求項５９】
改変されたモノオキシゲナーゼ活性を含み、アジピン酸を産生する工学的に作り出された微生物。
【請求項６０】
前記モノオキシゲナーゼ活性を改変する遺伝子修飾を含む、請求項５９に記載の工学的に作り出された微生物。
【請求項６１】
ＣＹＰ５２１５活性、ＣＹＰ５２１６活性、またはＣＹＰ５２１５活性およびＣＹＰ５２１６活性から成る群から選択されるモノオキシゲナーゼ活性を改変する遺伝子修飾を含む、請求項５９または６０に記載の工学的に作り出された微生物。
【請求項６２】
モノオキシゲナーゼ活性を有するポリペプチドをコードする異種のポリヌクレオチドを含む、請求項６０に記載の工学的に作り出された微生物。
【請求項６３】
前記異種のポリヌクレオチドは、真菌に由来する、請求項６２に記載の工学的に作り出された微生物。
【請求項６４】
前記真菌は、アスペルギルス属真菌である、請求項６３に記載の工学的に作り出された微生物。
【請求項６５】
前記アスペルギルス属真菌は、Ａ．ｐａｒａｓｉｔｉｃｕｓである、請求項６４に記載の工学的に作り出された微生物。
【請求項６６】
前記モノオキシゲナーゼ活性による実質的なヘキサノエート使用をもたらす遺伝子修飾を含む、請求項５９〜６５のいずれか一項に記載の工学的に作り出された微生物。
【請求項６７】
前記遺伝子修飾は、ポリケチドシンターゼ活性を低下させる、請求項６６に記載の工学的に作り出された微生物。
【請求項６８】
改変されたヘキサノエートシンターゼ活性を含む、請求項５９〜６５のいずれか一項に記載の工学的に作り出された微生物。
【請求項６９】
前記改変されたヘキサノエートシンターゼ活性は、改変されたヘキサノエートシンターゼサブユニットＡ活性、改変されたヘキサノエートシンターゼサブユニットＢ活性、または改変されたヘキサノエートシンターゼサブユニットＡ活性および改変されたヘキサノエートシンターゼサブユニットＢ活性である、請求項６８に記載の工学的に作り出された微生物。
【請求項７０】
ヘキサノエートシンターゼ活性を追加するまたは増加させる遺伝子改変を含む、請求項６９に記載の工学的に作り出された微生物。
【請求項７１】
ヘキサノエートシンターゼ活性を有するポリペプチドをコードする異種のポリヌクレオチドを含む、請求項６８、６９または７０のいずれか一項に記載の工学的に作り出された微生物。
【請求項７２】
前記異種のポリヌクレオチドは、真菌に由来する、請求項７１に記載の工学的に作り出された微生物。
【請求項７３】
前記真菌は、アスペルギルス属真菌である、請求項７２に記載の工学的に作り出された微生物。
【請求項７４】
前記アスペルギルス属真菌は、Ａ．ｐａｒａｓｉｔｉｃｕｓである、請求項７２に記載の工学的に作り出された微生物。
【請求項７５】
改変されたチオエステラーゼ活性を含む、請求項５９〜７４のいずれか一項に記載の工学的に作り出された微生物。
【請求項７６】
前記チオエステラーゼ活性を追加するまたは増加させる遺伝子修飾を含む、請求項７５に記載の工学的に作り出された微生物。
【請求項７７】
チオエステラーゼ活性を有するポリペプチドをコードする異種のポリヌクレオチドを含む、請求項７５または７６に記載の工学的に作り出された微生物。
【請求項７８】
改変された６−オキソヘキサン酸デヒドロゲナーゼ活性、改変されたオメガオキソ脂肪酸デヒドロゲナーゼ活性、または改変された６−オキソヘキサン酸デヒドロゲナーゼ活性および改変されたオメガオキソ脂肪酸デヒドロゲナーゼ活性を含む、請求項５９〜７７のいずれか一項に記載の工学的に作り出された微生物。
【請求項７９】
前記６−オキソヘキサン酸デヒドロゲナーゼ活性を追加するもしくは増加させる、前記オメガオキソ脂肪酸デヒドロゲナーゼ活性を追加するもしくは増加させる、または前記６−オキソヘキサン酸デヒドロゲナーゼ活性および前記オメガオキソ脂肪酸デヒドロゲナーゼ活性を追加するもしくは増加させる遺伝子修飾を含む、請求項７８に記載の工学的に作り出された微生物。
【請求項８０】
６−オキソヘキサン酸デヒドロゲナーゼ活性を有するポリペプチドをコードする異種のポリヌクレオチド、オメガオキソ脂肪酸デヒドロゲナーゼ活性を有するポリペプチドをコードする異種のポリヌクレオチド、または６−オキソヘキサン酸デヒドロゲナーゼ活性を有するポリペプチドをコードする異種のポリヌクレオチドおよびオメガオキソ脂肪酸デヒドロゲナーゼ活性を有するポリペプチドをコードする異種のポリヌクレオチドを含む、請求項７８または７９に記載の工学的に作り出された微生物。
【請求項８１】
前記異種のポリヌクレオチドは、細菌に由来する、請求項８０に記載の工学的に作り出された微生物。
【請求項８２】
前記細菌は、アシネトバクター属細菌、ノカルジア属細菌、シュードモナス属細菌、またはザントバクター属細菌である、請求項８１に記載の工学的に作り出された微生物。
【請求項８３】
改変された６−ヒドロキシヘキサン酸デヒドロゲナーゼ活性、改変されたオメガヒドキシル脂肪酸デヒドロゲナーゼ活性、または改変された６−ヒドロキシヘキサン酸デヒドロゲナーゼ活性および改変されたオメガヒドロキシル脂肪酸デヒドロゲナーゼ活性を含む、請求項５９〜８２のいずれか一項に記載の工学的に作り出された微生物。
【請求項８４】
前記６−ヒドロキシヘキサン酸デヒドロゲナーゼ活性を追加するもしくは増加させる、前記オメガヒドロキシル脂肪酸デヒドロゲナーゼ活性を追加するもしくは増加させる、または前記６−ヒドロキシヘキサン酸デヒドロゲナーゼ活性および前記オメガヒドロキシル脂肪酸デヒドロゲナーゼ活性を追加するもしくは増加させる遺伝子修飾を含む、請求項８３に記載の工学的に作り出された微生物。
【請求項８５】
６−ヒドロキシヘキサン酸デヒドロゲナーゼ活性を有するポリペプチドをコードする異種のポリヌクレオチド、オメガヒドロキシル脂肪酸デヒドロゲナーゼ活性を有するポリペプチドをコードする異種のポリヌクレオチド、または６−ヒドロキシヘキサン酸デヒドロゲナーゼ活性を有するポリペプチドをコードする異種のポリヌクレオチドおよびオメガヒドロキシル脂肪酸デヒドロゲナーゼ活性を有するポリペプチドをコードする異種のポリヌクレオチドを含む、請求項８３または８４に記載の工学的に作り出された微生物。
【請求項８６】
前記異種のポリヌクレオチドは、細菌に由来する、請求項８５に記載の工学的に作り出された微生物。
【請求項８７】
前記細菌は、アシネトバクター属細菌、ノカルジア属細菌、シュードモナス属細菌、またはザントバクター属細菌である、請求項８６に記載の工学的に作り出された微生物。
【請求項８８】
真核生物である、請求項５９〜８７のいずれか一項に記載の工学的に作り出された微生物。
【請求項８９】
酵母である、請求項８８に記載の工学的に作り出された微生物。
【請求項９０】
前記酵母は、カンジダ属酵母である、請求項８９に記載の工学的に作り出された微生物。
【請求項９１】
前記カンジダ属酵母は、Ｃ．ｔｒｏｐｉｃａｌｉｓである、請求項９０に記載の工学的に作り出された微生物。
【請求項９２】
真菌である、請求項８８に記載の工学的に作り出された微生物。
【請求項９３】
前記真菌は、ヤロウイア属真菌である、請求項９２に記載の工学的に作り出された微生物。
【請求項９４】
前記ヤロウイア属真菌は、Ｙ．ｌｉｐｏｌｙｔｉｃａである、請求項９３に記載の工学的に作り出された微生物。
【請求項９５】
前記真菌は、アスペルギルス属である、請求項９２に記載の工学的に作り出された微生物。
【請求項９６】
前記アスペルギルス属真菌は、Ａ．ｐａｒａｓｉｔｉｃｕｓまたはＡ．ｎｉｄｕｌａｎｓである、請求項９５に記載の工学的に作り出された微生物。
【請求項９７】
６−ヒドロキシヘキサン酸変換を低下させる遺伝子修飾を含む、請求項５９〜９６のいずれか一項に記載の工学的に作り出された微生物。
【請求項９８】
前記遺伝子修飾は、６−ヒドロキシヘキサン酸デヒドロゲナーゼ活性を低下させる、請求項９７に記載の工学的に作り出された微生物。
【請求項９９】
ベータ酸化活性を低下させる遺伝子修飾を含む、請求項５９〜９８のいずれか一項に記載の工学的に作り出された微生物。
【請求項１００】
前記遺伝子修飾は、ベータ酸化活性を検出不可能にする、請求項９９に記載の工学的に作り出された微生物。
【請求項１０１】
請求項１〜１００のいずれか一項に記載の工学的に作り出された微生物を、培養された微生物がアジピン酸を産生する培養条件下で培養するステップを含む、アジピン酸を製造するための方法。
【請求項１０２】
前記工学的に作り出された微生物が産生される宿主微生物は、検出可能な量のアジピン酸を産生しない、請求項１０１に記載の方法。
【請求項１０３】
前記培養条件は、発酵条件を含む、請求項１０１または１０２に記載の方法。
【請求項１０４】
前記培養条件は、バイオマスの導入を含む、請求項１０１〜１０３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１０５】
前記培養条件は、グルコースの導入を含む、請求項１０１または１０３に記載の方法。
【請求項１０６】
前記培養条件は、ヘキサンの導入を含む、請求項１０１または１０３に記載の方法。
【請求項１０７】
前記アジピン酸は、追加されるグルコース１グラム当たり約０．３グラムを超える収量で産生される、請求項１０１〜１０６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１０８】
前記培養された微生物から前記アジピン酸を精製するステップを含む、請求項１０１〜１０７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１０９】
前記アジピン酸を修飾し、それによって、修飾されたアジピン酸を産生するステップを含む、請求項１０８に記載の方法。
【請求項１１０】
前記培養された微生物、前記アジピン酸、または前記修飾されたアジピン酸を容器に配置するステップを含む、請求項１０１〜１０９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１１１】
前記容器を輸送するステップを含む、請求項１１０に記載の方法。
【請求項１１２】
請求項３５、３６、９７または９８のいずれか一項に記載の工学的に作り出された微生物を、培養された微生物が６−ヒドロキシヘキサン酸を産生する培養条件下で培養するステップを含む、６−ヒドロキシヘキサン酸を製造するための方法。
【請求項１１３】
前記工学的に作り出された微生物が産生される宿主微生物は、検出可能な量の６−ヒドロキシヘキサン酸を産生しない、請求項１１２に記載の方法。
【請求項１１４】
前記培養条件は、発酵条件を含む、請求項１１２または１１３に記載の方法。
【請求項１１５】
前記培養条件は、バイオマスの導入を含む、請求項１１２〜１１４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１１６】
前記培養条件は、グルコースの導入を含む、請求項１１２または１１４に記載の方法。
【請求項１１７】
前記培養条件は、ヘキサンの導入を含む、請求項１１２または１１４に記載の方法。
【請求項１１８】
前記６−ヒドロキシヘキサン酸は、追加されるグルコース１グラム当たり約０．３グラムを超える収量で産生される、請求項１１２〜１１７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１１９】
前記培養された微生物から前記６−ヒドロキシヘキサン酸を精製するステップを含む、請求項１１２〜１１８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１２０】
前記６−ヒドロキシヘキサン酸を修飾し、それによって、修飾された６−ヒドロキシヘキサン酸を産生するステップを含む、請求項１１９に記載の方法。
【請求項１２１】
前記培養された微生物、前記６−ヒドロキシヘキサン酸、または前記修飾された６−ヒドロキシヘキサン酸を容器に配置するステップを含む、請求項１１２〜１２０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１２２】
前記容器を輸送するステップを含む、請求項１２１に記載の方法。
【請求項１２３】
アジピン酸を産生する工学的に作り出された微生物を調製するための方法であって、
（ａ）モノオキシゲナーゼ活性を追加するまたは増加させる遺伝子修飾を宿主生物に導入し、それによって、検出可能なおよび／または増加したモノオキシゲナーゼ活性を有する工学的に作り出された微生物を産生するステップと、
（ｂ）アジピン酸を産生する工学的に作り出された微生物を選択するステップと
を含む方法。
【請求項１２４】
前記モノオキシゲナーゼ活性は、６炭素分子へのヒドロキシル部分の組込みである、請求項Ｅ１に記載の方法。
【請求項１２５】
前記６炭素分子は、ヘキサノエートである、請求項１２３または１２４に記載の方法。
【請求項１２６】
アジピン酸を産生する工学的に作り出された微生物を調製するための方法であって、
（ａ）宿主生物を栄養源であるヘキサンと共に培養し、それによって、検出可能なモノオキシゲナーゼ活性を有する工学的に作り出された微生物を産生するステップと、
（ｂ）アジピン酸を産生する工学的に作り出された微生物を選択するステップと
を含む方法。
【請求項１２７】
前記モノオキシゲナーゼ活性は、６炭素分子へのヒドロキシル部分の組込みである、請求項１２６に記載の方法。
【請求項１２８】
前記６炭素分子は、ヘキサノエートである、請求項１２６または１２７に記載の方法。
【請求項１２９】
検出可能な量の前記モノオキシゲナーゼ活性を有する、前記工学的に作り出された微生物を選択するステップを含む、請求項１２６〜１２８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１３０】
ヘキサノエートシンターゼ活性を追加するまたは増加させる遺伝子修飾を導入し、それによって、工学的に作り出された微生物を産生するステップと、検出可能なおよび／または増加したヘキサノエートシンターゼ活性を有する工学的に作り出された微生物を選択するステップとを含む、請求項１２６〜１２９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１３１】
前記遺伝子修飾は、ヘキサノエートシンターゼサブユニットＡ活性、ヘキサノエートシンターゼサブユニットＢ活性、またはヘキサノエートシンターゼサブユニットＡ活性およびヘキサノエートシンターゼサブユニットＢ活性を有するポリペプチドをコードする、請求項１３０に記載の方法。
【請求項１３２】
６−オキソヘキサン酸デヒドロゲナーゼ活性を追加するもしくは増加させる、オメガオキソ脂肪酸デヒドロゲナーゼ活性を追加するもしくは増加させる、または６−オキソヘキサン酸デヒドロゲナーゼ活性およびオメガオキソ脂肪酸デヒドロゲナーゼ活性を追加するもしくは増加させる遺伝子修飾を導入し、それによって、工学的に作り出された微生物を産生するステップと、宿主微生物に比べて検出可能なおよび／または増加した６−オキソヘキサン酸デヒドロゲナーゼおよび／またはオメガオキソ脂肪酸デヒドロゲナーゼ活性を有する工学的に作り出された微生物を選択するステップとを含む、請求項１２３〜１３１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１３３】
６−ヒドロキシヘキサン酸デヒドロゲナーゼ活性を追加するもしくは増加させる、オメガヒドロキシル脂肪酸デヒドロゲナーゼ活性を追加するもしくは増加させる、または６−ヒドロキシヘキサン酸デヒドロゲナーゼ活性およびオメガヒドロキシル脂肪酸デヒドロゲナーゼ活性を追加するもしくは増加させる遺伝子修飾を導入し、それによって、工学的に作り出された微生物を産生するステップと、前記宿主微生物に比べて検出可能なおよび／または増加した６−ヒドロキシヘキサン酸デヒドロゲナーゼ活性および／またはオメガヒドロキシル脂肪酸デヒドロゲナーゼ活性を有する工学的に作り出された微生物を選択するステップとを含む、請求項１２３〜１３２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１３４】
チオエステラーゼ活性を追加するもしくは増加させる遺伝子修飾を導入し、それによって、工学的に作り出された微生物を産生するステップと、前記宿主微生物に比べて検出可能なおよび／または増加したチオエステラーゼ活性を有する工学的に作り出された微生物を選択するステップとを含む、請求項１２３〜１３３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１３５】
６−ヒドロキシヘキサン酸変換を低下させる遺伝子修飾を導入し、それによって、工学的に作り出された微生物を産生するステップと、前記宿主微生物に比べて低下した６−ヒドロキシヘキサン酸変換を有する工学的に作り出された微生物を選択するステップとを含む、請求項１２３〜１３４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１３６】
ベータ酸化活性を低下させる遺伝子修飾を導入し、それによって、工学的に作り出された微生物を産生するステップと、前記宿主微生物に比べて低下したベータ酸化活性を有する工学的に作り出された微生物を選択するステップとを含む、請求項１２３〜１３５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１３７】
前記モノオキシゲナーゼ活性による実質的なヘキサノエート使用をもたらす遺伝子修飾を導入し、それによって、工学的に作り出された微生物を産生するステップと、前記宿主微生物と比較して、実質的なヘキサノエート使用が前記モノオキシゲナーゼ活性によるものである工学的に作り出された微生物を選択するステップとを含む、請求項１２３〜１３６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１３８】
アジピン酸を産生する微生物を調製する方法であって、（ａ）６−オキソヘキサン酸デヒドロゲナーゼ活性、オメガオキソ脂肪酸デヒドロゲナーゼ活性、６−ヒドロキシヘキサン酸デヒドロゲナーゼ活性、オメガヒドロキシル脂肪酸デヒドロゲナーゼ活性、ヘキサノエートシンターゼ活性、およびモノオキシゲナーゼ活性から成る群から選択される１つ以上の活性を追加するまたは増加させる１つ以上の遺伝子修飾を宿主生物に導入し、それによって、工学的に作り出された微生物を産生するステップと、（ｂ）アジピン酸を産生する工学的に作り出された微生物を選択するステップとを含む方法。
【請求項１３９】
宿主微生物に比べて、６−オキソヘキサン酸デヒドロゲナーゼ活性、オメガオキソ脂肪酸デヒドロゲナーゼ活性、６−ヒドロキシヘキサン酸デヒドロゲナーゼ活性、オメガヒドロキシル脂肪酸デヒドロゲナーゼ活性、ヘキサノエートシンターゼ活性、およびモノオキシゲナーゼ活性から成る群から選択される１つ以上の検出可能なおよび／または増加した活性を有する工学的に作り出された微生物を選択するステップを含む、請求項１３８に記載の方法。
【請求項１４０】
６−ヒドロキシヘキサン酸変換を低下させる遺伝子修飾を導入し、それによって、工学的に作り出された微生物を産生するステップと、前記宿主微生物に比べて低下した６−ヒドロキシヘキサン酸変換を有する工学的に作り出された微生物を選択するステップとを含む、請求項１３８または１３９に記載の方法。
【請求項１４１】
ベータ酸化活性を低下させる遺伝子修飾を導入し、それによって、工学的に作り出された微生物を産生するステップと、前記宿主微生物に比べて低下したベータ酸化活性を有する工学的に作り出された微生物を選択するステップとを含む、請求項１３８〜１４０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１４２】
前記モノオキシゲナーゼ活性による実質的なヘキサノエート使用をもたらす遺伝子修飾を導入し、それによって、工学的に作り出された微生物を産生するステップと、前記宿主微生物と比較して、実質的なヘキサノエート使用が前記モノオキシゲナーゼ活性によるものである工学的に作り出された微生物を選択するステップとを含む、請求項１３８〜１４１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１４３】
６−ヒドロキシヘキサン酸を産生する微生物を調製するための方法であって、（ａ）６−オキソヘキサン酸デヒドロゲナーゼ活性、オメガオキソ脂肪酸デヒドロゲナーゼ活性、オメガヒドロキシル脂肪酸デヒドロゲナーゼ活性、ヘキサノエートシンターゼ活性、およびモノオキシゲナーゼ活性から成る群から選択される１つ以上の活性を追加するまたは増加させる１つ以上の遺伝子修飾を宿主生物に導入し、それによって、工学的に作り出された微生物を産生するステップと、（ｂ）６−ヒドロキシヘキサン酸変換を低下させる遺伝子修飾を宿主生物に導入するステップと、（ｃ）６−ヒドロキシヘキサン酸を産生する工学的に作り出された微生物を選択するステップとを含む方法。
【請求項１４４】
前記宿主微生物に比べて低下した６−ヒドロキシヘキサン酸変換を有する工学的に作り出された微生物を選択するステップを含む、請求項１４３に記載の方法。
【請求項１４５】
前記宿主微生物に比べて、６−オキソヘキサン酸デヒドロゲナーゼ活性、オメガオキソ脂肪酸デヒドロゲナーゼ活性、６−ヒドロキシヘキサン酸デヒドロゲナーゼ活性、オメガヒドロキシル脂肪酸デヒドロゲナーゼ活性、ヘキサノエートシンターゼ活性、およびモノオキシゲナーゼ活性から成る群から選択される１つ以上の検出可能なおよび／または増加した活性を有する工学的に作り出された微生物を選択するステップを含む、請求項１４３または１４４に記載の方法。
【請求項１４６】
ベータ酸化活性を低下させる遺伝子修飾を導入し、それによって、工学的に作り出された微生物を産生するステップと、前記宿主微生物に比べて低下したベータ酸化活性を有する工学的に作り出された微生物を選択するステップとを含む、請求項１４３〜１４５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１４７】
前記モノオキシゲナーゼ活性による実質的なヘキサノエート使用をもたらす遺伝子修飾を導入し、それによって、工学的に作り出された微生物を産生するステップと、前記宿主微生物と比較して、実質的なヘキサノエート使用が前記モノオキシゲナーゼ活性によるものである工学的に作り出された微生物を選択するステップとを含む、請求項１４３〜１４６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１４８】
ａ．ベータ酸化活性をブロックする遺伝子改変、および
ｂ．モノオキシゲナーゼ活性を追加するもしくは増加させる遺伝子改変、またはヘキサノエートシンテターゼ活性を追加するもしくは増加させる遺伝子改変
を含む工学的に作り出された微生物を、１つ以上の多糖を含む供給材料と接触させるステップと、
アジピン酸が産生される条件下で、前記工学的に作り出された微生物を培養するステップと
を含む方法。
【請求項１４９】
前記工学的に作り出された微生物は、ヘキサノエートシンテターゼ活性を追加するまたは増加させる遺伝子改変を含む、請求項１４８に記載の方法。
【請求項１５０】
前記工学的に作り出された微生物は、ヘキサノエートシンターゼサブユニットＡ活性を有するポリペプチドをコードする異種のポリヌクレオチドを含む、請求項１４９に記載の方法。
【請求項１５１】
前記工学的に作り出された微生物は、ヘキサノエートシンターゼサブユニットＢ活性を有するポリペプチドをコードする異種のポリヌクレオチドを含む、請求項１４９に記載の方法。
【請求項１５２】
前記異種のポリヌクレオチドは、細菌から独立して選択される、請求項１５０または１５１に記載の方法。
【請求項１５３】
前記細菌は、バチルス属細菌である、請求項１５２に記載の方法。
【請求項１５４】
前記バチルス属細菌は、Ｂ．ｍｅｇａｔｅｒｉｕｍである、請求項１５３に記載の方法。
【請求項１５５】
前記微生物は、カンジダ属酵母である、請求項１４９または１５４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１５６】
前記微生物は、Ｃ．ｔｒｏｐｉｃａｌｉｓ株である、請求項１５５に記載の方法。
【請求項１５７】
モノオキシゲナーゼ活性を増加させる前記遺伝子改変は、シトクロムＰ４５０レダクターゼ活性を増加させる遺伝子改変を含む、請求項１４８〜１５６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１５８】
前記遺伝子改変は、前記シトクロムＰ４５０レダクターゼ活性を有するポリペプチドをコードするポリヌクレオチドのコピー数を増加させる、請求項１５７に記載の方法。
【請求項１５９】
前記遺伝子改変は、前記シトクロムＰ４５０レダクターゼ活性を有するポリペプチドをコードするポリヌクレオチドと機能的に関連するプロモーターを配置する、請求項１５７に記載の方法。
【請求項１６０】
前記モノオキシゲナーゼ活性は、ＣＹＰ５２１５活性、ＣＹＰ５２１６活性、またはＣＹＰ５２１５活性およびＣＹＰ５２１６活性である、請求項１４８〜１５９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１６１】
前記遺伝子改変は、前記モノオキシゲナーゼ活性を有するポリペプチドをコードするポリヌクレオチドのコピー数を増加させる、請求項１４８〜１６０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１６２】
前記遺伝子改変は、前記モノオキシゲナーゼ活性を有するポリペプチドをコードするポリヌクレオチドと機能的に関連するプロモーターを配置する、請求項１４８〜１６０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１６３】
ベータ酸化活性をブロックする前記遺伝子改変は、アシル−ＣｏＡオキシダーゼ活性を破壊する、請求項１４８〜１６０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１６４】
前記遺伝子改変は、ＰＯＸ４活性およびＰＯＸ５活性を破壊する、請求項１６３に記載の方法。
【請求項１６５】
前記遺伝子改変は、前記アシル−ＣｏＡオキシダーゼ活性を有するポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを破壊する、請求項１６３または１６４に記載の方法。
【請求項１６６】
前記遺伝子改変は、前記アシル−ＣｏＡオキシダーゼ活性を有するポリペプチドをコードするポリヌクレオチドと機能的に関連するプロモーターを破壊する、請求項１６３または１６４に記載の方法。
【請求項１６７】
前記供給材料は、６炭素糖を含む、請求項１４８〜１６６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１６８】
前記供給材料は、５炭素糖を含む、請求項１４８〜１６６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１６９】
前記アジピン酸は、約８０％以上の理論的収率のレベルで産生される、請求項１４８〜１６８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１７０】
産生されたアジピン酸の量を検出するステップを含む、請求項１４８〜１６９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１７１】
産生された前記アジピン酸を単離するステップを含む、請求項１４８〜１７０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１７２】
前記培養条件は、前記工学的に作り出された微生物を発酵させることを含む、請求項１４８〜１７１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１７３】
ベータ酸化活性を部分的にブロックする遺伝子改変を含む工学的に作り出された微生物を、１つ以上のパラフィンを含む供給材料と接触させるステップと
前記工学的に作り出された微生物をアジピン酸が産生される条件下で培養するステップと
を含む方法。
【請求項１７４】
前記微生物は、モノオキシゲナーゼ活性を増加させる遺伝子改変を含む、請求項１７３に記載の方法。
【請求項１７５】
前記微生物は、カンジダ属酵母である、請求項１７３または１７４に記載の方法。
【請求項１７６】
前記微生物は、Ｃ．ｔｒｏｐｉｃａｌｉｓ株である、請求項１７５に記載の方法。
【請求項１７７】
モノオキシゲナーゼ活性を増加させる前記遺伝子改変は、シトクロムＰ４５０レダクターゼ活性を増加させる遺伝子改変を含む、請求項１７３〜１７６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１７８】
前記遺伝子改変は、前記シトクロムＰ４５０レダクターゼ活性を有するポリペプチドをコードするポリヌクレオチドのコピー数を増加させる、請求項１７４に記載の方法。
【請求項１７９】
前記遺伝子改変は、前記シトクロムＰ４５０レダクターゼ活性を有するポリペプチドをコードするポリヌクレオチドと機能的に関連するプロモーターを配置する、請求項１７４に記載の方法。
【請求項１８０】
前記モノオキシゲナーゼ活性は、ＣＹＰ５２１５活性、ＣＹＰ５２１６活性、またはＣＹＰ５２１５活性およびＣＹＰ５２１６活性である、請求項１７３〜１７９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１８１】
前記遺伝子改変は、前記モノオキシゲナーゼ活性を有するポリペプチドをコードするポリヌクレオチドのコピー数を増加させる、請求項１７３〜１８０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１８２】
前記遺伝子改変は、前記モノオキシゲナーゼ活性を有するポリペプチドをコードするポリヌクレオチドと機能的に関連するプロモーターを配置する、請求項１７３〜１８０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１８３】
ベータ酸化活性をブロックする前記遺伝子改変は、アシル−ＣｏＡオキシダーゼ活性を破壊する、請求項１７３〜１８０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１８４】
前記遺伝子改変は、ＰＯＸ４活性またはＰＯＸ５活性を破壊する、請求項１８３に記載の方法。
【請求項１８５】
前記遺伝子改変は、前記アシル−ＣｏＡオキシダーゼ活性を有するポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを破壊する、請求項１８３または１８４に記載の方法。
【請求項１８６】
前記遺伝子改変は、前記アシル−ＣｏＡオキシダーゼ活性を有するポリペプチドをコードするポリヌクレオチドと機能的に関連するプロモーターを破壊する、請求項１８３または１８４に記載の方法。
【請求項１８７】
前記アジピン酸は、約８０％以上の理論的収率のレベルで産生される、請求項１７３〜１８６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１８８】
産生されたアジピン酸の量を検出するステップを含む、請求項１７３〜１８７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１８９】
産生された前記アジピン酸を単離するステップを含む、請求項１７３〜１８８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１９０】
前記培養条件は、前記工学的に作り出された微生物を発酵させることを含む、請求項１７３〜１８９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１９１】
前記パラフィンは、飽和パラフィン、不飽和パラフィン、置換パラフィン、分岐パラフィン、直鎖状パラフィン、またはその組合せである、請求項１７３〜１９０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１９２】
前記パラフィンは、約１〜約６０個の炭素原子を含む、請求項１７３〜１９１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１９３】
前記パラフィンは、複数のパラフィンの混合物中にある、請求項１７３〜１９２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１９４】
前記複数のパラフィンの混合物中の前記複数のパラフィンは、約８〜約１８の平均炭素原子数を有する、請求項１９３に記載の方法。
【請求項１９５】
前記平均炭素原子数は、約１０〜約１６である、請求項１９４に記載の方法。
【請求項１９６】
前記平均炭素原子数は、約１２である、請求項１９５に記載の方法。
【請求項１９７】
前記パラフィンは、ろう中にある、請求項１７３〜１９６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１９８】
前記パラフィンは、オイル中にある、請求項１７３〜１９６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１９９】
前記パラフィンは、石油生成物に由来する、請求項１７３〜１９８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２００】
前記石油生成物は、石油蒸留物である、請求項１９９に記載の方法。
【請求項２０１】
前記パラフィンは、植物または植物生成物に由来する、請求項１７３〜２００のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２０２】
配列番号１のヌクレオチド配列と９６％以上同一のヌクレオチド配列を有するポリヌクレオチド、
配列番号８のポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を有するポリヌクレオチド、および
配列番号１のヌクレオチド配列と９６％以上同一のヌクレオチド配列の一部を有し、脂肪アルコールオキシダーゼ活性を有するポリペプチドをコードするポリヌクレオチド
から成る群から選択される単離ポリヌクレオチド。
【請求項２０３】
配列番号２のヌクレオチド配列と９８％以上同一のヌクレオチド配列を有するポリヌクレオチド、
配列番号１０のポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を有するポリヌクレオチド、および
配列番号２のヌクレオチド配列と９８％以上同一のヌクレオチド配列の一部を有し、脂肪アルコールオキシダーゼ活性を有するポリペプチドをコードするポリヌクレオチド
から成る群から選択される単離ポリヌクレオチド。
【請求項２０４】
配列番号３のヌクレオチド配列と９５％以上同一のヌクレオチド配列を有するポリヌクレオチド、
配列番号９のポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を有するポリヌクレオチド、および
配列番号３のヌクレオチド配列と９５％以上同一のヌクレオチド配列の一部を有し、脂肪アルコールオキシダーゼ活性を有するポリペプチドをコードするポリヌクレオチド
から成る群から選択される単離ポリヌクレオチド。
【請求項２０５】
配列番号４のヌクレオチド配列と８３％以上同一のヌクレオチド配列を有するポリヌクレオチド、
配列番号１１のポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を有するポリヌクレオチド、および
配列番号４のヌクレオチド配列と８３％以上同一のヌクレオチド配列の一部を有し、脂肪アルコールオキシダーゼ活性を有するポリペプチドをコードするポリヌクレオチド
から成る群から選択される単離ポリヌクレオチド。
【請求項２０６】
配列番号５のヌクレオチド配列と８２％以上同一のヌクレオチド配列を有するポリヌクレオチド、
配列番号１２のポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を有するポリヌクレオチド、および
配列番号５のヌクレオチド配列と８２％以上同一のヌクレオチド配列の一部を有し、脂肪アルコールオキシダーゼ活性を有するポリペプチドをコードするポリヌクレオチド
から成る群から選択される単離ポリヌクレオチド。
【請求項２０７】
請求項２０２〜２０６のいずれか一項に記載のポリヌクレオチドを含む発現ベクター。
【請求項２０８】
請求項２０２〜２０６のいずれか一項に記載のポリヌクレオチドを含む組込み型ベクター。
【請求項２０９】
請求項２０７に記載の発現ベクターまたは請求項２０８に記載の組込み型ベクターを含む微生物。
【請求項２１０】
請求項２０９に記載の微生物を含む培養物。
【請求項２１１】
請求項２１０に記載の微生物を含む発酵デバイス。
【請求項２１２】
請求項２０２〜２０６のいずれか一項に記載のポリヌクレオチドによってコードされる、または請求項Ｊ４に記載の発現ベクターもしくは請求項２０９に記載の微生物によって産生されるポリペプチド。
【請求項２１３】
請求項２１２に記載のポリペプチドに特異的に結合する抗体。
【請求項１】
アジピン酸を産生する工学的に作り出された微生物であって、６−オキソヘキサン酸デヒドロゲナーゼ活性、オメガオキソ脂肪酸デヒドロゲナーゼ活性、６−ヒドロキシヘキサン酸デヒドロゲナーゼ活性、オメガヒドロキシル脂肪酸デヒドロゲナーゼ活性、ヘキサノエートシンターゼ活性、モノオキシゲナーゼ活性、モノオキシゲナーゼレダクターゼ活性、脂肪アルコールオキシダーゼ活性、アシル−ＣｏＡリガーゼ活性、アシル−ＣｏＡオキシダーゼ活性、エノイル−ＣｏＡヒドラターゼ活性、３−Ｌ−ヒドロキシアシル−ＣｏＡデヒドロゲナーゼ活性、およびアセチル−ＣｏＡ Ｃ−アシルトランスフェラーゼ活性から成る群から選択される１つ以上の改変された活性を含む、工学的に作り出された微生物。
【請求項２】
前記６−オキソヘキサン酸デヒドロゲナーゼ活性、オメガオキソ脂肪酸デヒドロゲナーゼ活性、６−ヒドロキシヘキサン酸デヒドロゲナーゼ活性、オメガヒドロキシル脂肪酸デヒドロゲナーゼ活性、ヘキサノエートシンターゼ活性、モノオキシゲナーゼ活性、モノオキシゲナーゼレダクターゼ活性、脂肪アルコールオキシダーゼ活性、アシル−ＣｏＡリガーゼ活性、アシル−ＣｏＡオキシダーゼ活性、エノイル−ＣｏＡヒドラターゼ活性、３−Ｌ−ヒドロキシアシル−ＣｏＡデヒドロゲナーゼ活性、および／またはアセチル−ＣｏＡ Ｃ−アシルトランスフェラーゼ活性を追加するまたは増加させる遺伝子修飾を含む、請求項１に記載の工学的に作り出された微生物。
【請求項３】
前記アシル−ＣｏＡオキシダーゼ活性を低下させる遺伝子修飾を含む、請求項１に記載の工学的に作り出された微生物。
【請求項４】
前記遺伝子修飾は、６−オキソヘキサン酸デヒドロゲナーゼ活性、オメガオキソ脂肪酸デヒドロゲナーゼ活性、６−ヒドロキシヘキサン酸デヒドロゲナーゼ活性、オメガヒドロキシル脂肪酸デヒドロゲナーゼ活性、ヘキサノエートシンターゼ活性、モノオキシゲナーゼ活性、モノオキシゲナーゼレダクターゼ活性、脂肪アルコールオキシダーゼ活性、アシル−ＣｏＡリガーゼ活性、アシル−ＣｏＡオキシダーゼ活性、エノイル−ＣｏＡヒドラターゼ活性、３−Ｌ−ヒドロキシアシル−ＣｏＡデヒドロゲナーゼ活性、またはアセチル−ＣｏＡ Ｃ−アシルトランスフェラーゼ活性を有するポリペプチドをコードするポリヌクレオチドのコピーの増加を含む、請求項２に記載の工学的に作り出された微生物。
【請求項５】
前記遺伝子修飾は、６−オキソヘキサン酸デヒドロゲナーゼ活性、オメガオキソ脂肪酸デヒドロゲナーゼ活性、６−ヒドロキシヘキサン酸デヒドロゲナーゼ活性、オメガヒドロキシル脂肪酸デヒドロゲナーゼ活性、ヘキサノエートシンターゼ活性、モノオキシゲナーゼ活性、モノオキシゲナーゼレダクターゼ活性、脂肪アルコールオキシダーゼ活性、アシル−ＣｏＡリガーゼ活性、アシル−ＣｏＡオキシダーゼ活性、エノイル−ＣｏＡヒドラターゼ活性、３−Ｌ−ヒドロキシアシル−ＣｏＡデヒドロゲナーゼ活性、またはアセチル−ＣｏＡ Ｃ−アシルトランスフェラーゼ活性を有するポリペプチドをコードするポリヌクレオチドと機能的に関連する異種のプロモーターおよび／または５’ＵＴＲを前記微生物のゲノムＤＮＡに挿入することを含む、請求項２に記載の工学的に作り出された微生物。
【請求項６】
改変されたチオエステラーゼ活性を含む、請求項１〜５のいずれか一項に記載の工学的に作り出された微生物。
【請求項７】
チオエステラーゼ活性を追加するまたは増加させる遺伝子改変を含む、請求項６に記載の工学的に作り出された微生物。
【請求項８】
チオエステラーゼ活性を有するポリペプチドをコードする異種のポリヌクレオチドを含む、請求項７に記載の工学的に作り出された微生物。
【請求項９】
６−オキソヘキサン酸デヒドロゲナーゼ活性、オメガオキソ脂肪酸デヒドロゲナーゼ活性、または６−オキソヘキサン酸デヒドロゲナーゼ活性およびオメガオキソ脂肪酸デヒドロゲナーゼ活性を有するポリペプチドをコードする異種のポリヌクレオチドを含む、請求項１〜８のいずれか一項に記載の工学的に作り出された微生物。
【請求項１０】
前記異種のポリヌクレオチドは、細菌に由来する、請求項９に記載の工学的に作り出された微生物。
【請求項１１】
前記細菌は、アシネトバクター属細菌、ノカルジア属細菌、シュードモナス属細菌、またはザントバクター属細菌である、請求項１０に記載の工学的に作り出された微生物。
【請求項１２】
６−ヒドロキシヘキサン酸デヒドロゲナーゼ活性、オメガヒドロキシル脂肪酸デヒドロゲナーゼ活性、または６−ヒドロキシヘキサン酸デヒドロゲナーゼ活性およびオメガヒドロキシル脂肪酸デヒドロゲナーゼ活性を有するポリペプチドをコードする異種のポリヌクレオチドを含む、請求項１または６に記載の工学的に作り出された微生物。
【請求項１３】
前記異種のポリヌクレオチドは、細菌に由来する、請求項１２に記載の工学的に作り出された微生物。
【請求項１４】
前記細菌は、アシネトバクター属細菌、ノカルジア属細菌、シュードモナス属細菌、またはザントバクター属細菌である、請求項１３に記載の工学的に作り出された微生物。
【請求項１５】
ヘキサノエートシンターゼサブユニットＡ活性を有するポリペプチドをコードする異種のポリヌクレオチドを含む、請求項１または６に記載の工学的に作り出された微生物。
【請求項１６】
ヘキサノエートシンターゼサブユニットＢ活性を有するポリペプチドをコードする異種のポリヌクレオチドを含む、請求項１または６に記載の工学的に作り出された微生物。
【請求項１７】
前記異種のポリヌクレオチドは、細菌から独立して選択される、請求項１５または１６に記載の工学的に作り出された微生物。
【請求項１８】
前記細菌は、バチルス属細菌である、請求項１７に記載の工学的に作り出された微生物。
【請求項１９】
前記バチルス属細菌は、Ｂ．ｍｅｇａｔｅｒｉｕｍである、請求項１８に記載の工学的に作り出された微生物。
【請求項２０】
モノオキシゲナーゼ活性を有するポリペプチドをコードする異種のポリヌクレオチドを含む、請求項１または６に記載の工学的に作り出された微生物。
【請求項２１】
前記異種のポリヌクレオチドは、真菌に由来する、請求項２０に記載の工学的に作り出された微生物。
【請求項２２】
前記真菌は、アスペルギルス属真菌である、請求項２１に記載の工学的に作り出された微生物。
【請求項２３】
前記アスペルギルス属真菌は、Ａ．ｐａｒａｓｉｔｉｃｕｓである、請求項２２に記載の工学的に作り出された微生物。
【請求項２４】
モノオキシゲナーゼ活性による一次のヘキサノエート使用をもたらす遺伝子修飾を含む、請求項１または２に記載の工学的に作り出された微生物。
【請求項２５】
前記遺伝子修飾は、ポリケチドシンターゼ活性を低下させる、請求項２４に記載の工学的に作り出された微生物。
【請求項２６】
真核生物である、請求項１〜２５のいずれか一項に記載の工学的に作り出された微生物。
【請求項２７】
酵母である、請求項２６に記載の工学的に作り出された微生物。
【請求項２８】
前記酵母は、カンジダ属酵母である、請求項２７に記載の工学的に作り出された微生物。
【請求項２９】
前記カンジダ属酵母は、Ｃ．ｔｒｏｐｉｃａｌｉｓ株である、請求項２８に記載の工学的に作り出された微生物。
【請求項３０】
真菌である、請求項２６に記載の工学的に作り出された微生物。
【請求項３１】
前記真菌は、ヤロウイア属真菌である、請求項３０に記載の工学的に作り出された微生物。
【請求項３２】
前記ヤロウイア属真菌は、Ｙ．ｌｉｐｏｌｙｔｉｃａである、請求項３１に記載の工学的に作り出された微生物。
【請求項３３】
前記真菌は、アスペルギルス属真菌である、請求項３０に記載の工学的に作り出された微生物。
【請求項３４】
前記アスペルギルス属真菌は、Ａ．ｐａｒａｓｉｔｉｃｕｓ株またはＡ．ｎｉｄｕｌａｎｓ株である、請求項３３に記載の工学的に作り出された微生物。
【請求項３５】
６−ヒドロキシヘキサン酸変換を低下させる遺伝子修飾を含む、請求項１〜３４のいずれか一項に記載の工学的に作り出された微生物。
【請求項３６】
前記遺伝子修飾は、６−ヒドロキシヘキサン酸デヒドロゲナーゼ活性を低下させる、請求項３５に記載の工学的に作り出された微生物。
【請求項３７】
ベータ酸化活性を低下させる遺伝子修飾を含む、請求項１〜３６のいずれか一項に記載の工学的に作り出された微生物。
【請求項３８】
前記遺伝子修飾は、ベータ酸化活性を検出不可能にする、請求項３７に記載の工学的に作り出された微生物。
【請求項３９】
前記遺伝子修飾は、ベータ酸化活性を部分的に低下させる、請求項３７に記載の工学的に作り出された微生物。
【請求項４０】
前記遺伝子修飾は、アシル−ＣｏＡオキシダーゼ活性を有するポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを破壊することを含む、請求項３７〜３９のいずれか一項に記載の工学的に作り出された微生物。
【請求項４１】
前記遺伝子修飾は、アシル−ＣｏＡオキシダーゼ活性を有するポリペプチドをコードするポリヌクレオチドと機能的に関連するプロモーターを破壊することを含む、請求項３７〜３９のいずれか一項に記載の工学的に作り出された微生物。
【請求項４２】
前記アシル−ＣｏＡオキシダーゼ活性を有する前記ポリペプチドは、ＰＯＸポリペプチドである、請求項４０または４１に記載の工学的に作り出された微生物。
【請求項４３】
前記ＰＯＸポリペプチドは、ＰＯＸ４ポリペプチド、ＰＯＸ５ポリペプチド、またはＰＯＸ４ポリペプチドおよびＰＯＸ５ポリペプチドである、請求項４２に記載の工学的に作り出された微生物。
【請求項４４】
供給材料と接触する、請求項１〜４３のいずれか一項に記載の工学的に作り出された微生物。
【請求項４５】
前記供給材料は、糖類を含む、請求項４４に記載の工学的に作り出された微生物。
【請求項４６】
前記糖類は、単糖、多糖、または単糖および多糖の混合物である、請求項４５に記載の工学的に作り出された微生物。
【請求項４７】
前記供給材料は、パラフィンを含む、請求項４４に記載の工学的に作り出された微生物。
【請求項４８】
前記パラフィンは、飽和パラフィン、不飽和パラフィン、置換パラフィン、分岐パラフィン、直鎖状パラフィン、またはその組合せである、請求項４７に記載の工学的に作り出された微生物。
【請求項４９】
前記パラフィンは、約１〜約６０個の炭素原子を含む、請求項４７または４８に記載の工学的に作り出された微生物。
【請求項５０】
前記パラフィンは、複数のパラフィンの混合物中にある、請求項４７〜４９に記載の工学的に作り出された微生物。
【請求項５１】
前記複数のパラフィンの混合物中の前記複数のパラフィンは、約８〜約１８の平均炭素原子数を有する、請求項５０に記載の工学的に作り出された微生物。
【請求項５２】
前記平均炭素原子数は、約１０〜約１６である、請求項５１に記載の工学的に作り出された微生物。
【請求項５３】
前記平均炭素原子数は、約１２である、請求項５２に記載の工学的に作り出された微生物。
【請求項５４】
前記パラフィンは、ろう中にある、請求項４７〜５３１のいずれか一項に記載の工学的に作り出された微生物。
【請求項５５】
前記パラフィンは、オイル中にある、請求項４７〜５３のいずれか一項に記載の工学的に作り出された微生物。
【請求項５６】
前記パラフィンは、石油生成物に由来する、請求項４７〜５５のいずれか一項に記載の工学的に作り出された微生物。
【請求項５７】
前記石油生成物は、石油蒸留物である、請求項５６に記載の工学的に作り出された微生物。
【請求項５８】
前記パラフィンは、植物または植物生成物に由来する、請求項４７〜５５のいずれか一項に記載の工学的に作り出された微生物。
【請求項５９】
改変されたモノオキシゲナーゼ活性を含み、アジピン酸を産生する工学的に作り出された微生物。
【請求項６０】
前記モノオキシゲナーゼ活性を改変する遺伝子修飾を含む、請求項５９に記載の工学的に作り出された微生物。
【請求項６１】
ＣＹＰ５２１５活性、ＣＹＰ５２１６活性、またはＣＹＰ５２１５活性およびＣＹＰ５２１６活性から成る群から選択されるモノオキシゲナーゼ活性を改変する遺伝子修飾を含む、請求項５９または６０に記載の工学的に作り出された微生物。
【請求項６２】
モノオキシゲナーゼ活性を有するポリペプチドをコードする異種のポリヌクレオチドを含む、請求項６０に記載の工学的に作り出された微生物。
【請求項６３】
前記異種のポリヌクレオチドは、真菌に由来する、請求項６２に記載の工学的に作り出された微生物。
【請求項６４】
前記真菌は、アスペルギルス属真菌である、請求項６３に記載の工学的に作り出された微生物。
【請求項６５】
前記アスペルギルス属真菌は、Ａ．ｐａｒａｓｉｔｉｃｕｓである、請求項６４に記載の工学的に作り出された微生物。
【請求項６６】
前記モノオキシゲナーゼ活性による実質的なヘキサノエート使用をもたらす遺伝子修飾を含む、請求項５９〜６５のいずれか一項に記載の工学的に作り出された微生物。
【請求項６７】
前記遺伝子修飾は、ポリケチドシンターゼ活性を低下させる、請求項６６に記載の工学的に作り出された微生物。
【請求項６８】
改変されたヘキサノエートシンターゼ活性を含む、請求項５９〜６５のいずれか一項に記載の工学的に作り出された微生物。
【請求項６９】
前記改変されたヘキサノエートシンターゼ活性は、改変されたヘキサノエートシンターゼサブユニットＡ活性、改変されたヘキサノエートシンターゼサブユニットＢ活性、または改変されたヘキサノエートシンターゼサブユニットＡ活性および改変されたヘキサノエートシンターゼサブユニットＢ活性である、請求項６８に記載の工学的に作り出された微生物。
【請求項７０】
ヘキサノエートシンターゼ活性を追加するまたは増加させる遺伝子改変を含む、請求項６９に記載の工学的に作り出された微生物。
【請求項７１】
ヘキサノエートシンターゼ活性を有するポリペプチドをコードする異種のポリヌクレオチドを含む、請求項６８、６９または７０のいずれか一項に記載の工学的に作り出された微生物。
【請求項７２】
前記異種のポリヌクレオチドは、真菌に由来する、請求項７１に記載の工学的に作り出された微生物。
【請求項７３】
前記真菌は、アスペルギルス属真菌である、請求項７２に記載の工学的に作り出された微生物。
【請求項７４】
前記アスペルギルス属真菌は、Ａ．ｐａｒａｓｉｔｉｃｕｓである、請求項７２に記載の工学的に作り出された微生物。
【請求項７５】
改変されたチオエステラーゼ活性を含む、請求項５９〜７４のいずれか一項に記載の工学的に作り出された微生物。
【請求項７６】
前記チオエステラーゼ活性を追加するまたは増加させる遺伝子修飾を含む、請求項７５に記載の工学的に作り出された微生物。
【請求項７７】
チオエステラーゼ活性を有するポリペプチドをコードする異種のポリヌクレオチドを含む、請求項７５または７６に記載の工学的に作り出された微生物。
【請求項７８】
改変された６−オキソヘキサン酸デヒドロゲナーゼ活性、改変されたオメガオキソ脂肪酸デヒドロゲナーゼ活性、または改変された６−オキソヘキサン酸デヒドロゲナーゼ活性および改変されたオメガオキソ脂肪酸デヒドロゲナーゼ活性を含む、請求項５９〜７７のいずれか一項に記載の工学的に作り出された微生物。
【請求項７９】
前記６−オキソヘキサン酸デヒドロゲナーゼ活性を追加するもしくは増加させる、前記オメガオキソ脂肪酸デヒドロゲナーゼ活性を追加するもしくは増加させる、または前記６−オキソヘキサン酸デヒドロゲナーゼ活性および前記オメガオキソ脂肪酸デヒドロゲナーゼ活性を追加するもしくは増加させる遺伝子修飾を含む、請求項７８に記載の工学的に作り出された微生物。
【請求項８０】
６−オキソヘキサン酸デヒドロゲナーゼ活性を有するポリペプチドをコードする異種のポリヌクレオチド、オメガオキソ脂肪酸デヒドロゲナーゼ活性を有するポリペプチドをコードする異種のポリヌクレオチド、または６−オキソヘキサン酸デヒドロゲナーゼ活性を有するポリペプチドをコードする異種のポリヌクレオチドおよびオメガオキソ脂肪酸デヒドロゲナーゼ活性を有するポリペプチドをコードする異種のポリヌクレオチドを含む、請求項７８または７９に記載の工学的に作り出された微生物。
【請求項８１】
前記異種のポリヌクレオチドは、細菌に由来する、請求項８０に記載の工学的に作り出された微生物。
【請求項８２】
前記細菌は、アシネトバクター属細菌、ノカルジア属細菌、シュードモナス属細菌、またはザントバクター属細菌である、請求項８１に記載の工学的に作り出された微生物。
【請求項８３】
改変された６−ヒドロキシヘキサン酸デヒドロゲナーゼ活性、改変されたオメガヒドキシル脂肪酸デヒドロゲナーゼ活性、または改変された６−ヒドロキシヘキサン酸デヒドロゲナーゼ活性および改変されたオメガヒドロキシル脂肪酸デヒドロゲナーゼ活性を含む、請求項５９〜８２のいずれか一項に記載の工学的に作り出された微生物。
【請求項８４】
前記６−ヒドロキシヘキサン酸デヒドロゲナーゼ活性を追加するもしくは増加させる、前記オメガヒドロキシル脂肪酸デヒドロゲナーゼ活性を追加するもしくは増加させる、または前記６−ヒドロキシヘキサン酸デヒドロゲナーゼ活性および前記オメガヒドロキシル脂肪酸デヒドロゲナーゼ活性を追加するもしくは増加させる遺伝子修飾を含む、請求項８３に記載の工学的に作り出された微生物。
【請求項８５】
６−ヒドロキシヘキサン酸デヒドロゲナーゼ活性を有するポリペプチドをコードする異種のポリヌクレオチド、オメガヒドロキシル脂肪酸デヒドロゲナーゼ活性を有するポリペプチドをコードする異種のポリヌクレオチド、または６−ヒドロキシヘキサン酸デヒドロゲナーゼ活性を有するポリペプチドをコードする異種のポリヌクレオチドおよびオメガヒドロキシル脂肪酸デヒドロゲナーゼ活性を有するポリペプチドをコードする異種のポリヌクレオチドを含む、請求項８３または８４に記載の工学的に作り出された微生物。
【請求項８６】
前記異種のポリヌクレオチドは、細菌に由来する、請求項８５に記載の工学的に作り出された微生物。
【請求項８７】
前記細菌は、アシネトバクター属細菌、ノカルジア属細菌、シュードモナス属細菌、またはザントバクター属細菌である、請求項８６に記載の工学的に作り出された微生物。
【請求項８８】
真核生物である、請求項５９〜８７のいずれか一項に記載の工学的に作り出された微生物。
【請求項８９】
酵母である、請求項８８に記載の工学的に作り出された微生物。
【請求項９０】
前記酵母は、カンジダ属酵母である、請求項８９に記載の工学的に作り出された微生物。
【請求項９１】
前記カンジダ属酵母は、Ｃ．ｔｒｏｐｉｃａｌｉｓである、請求項９０に記載の工学的に作り出された微生物。
【請求項９２】
真菌である、請求項８８に記載の工学的に作り出された微生物。
【請求項９３】
前記真菌は、ヤロウイア属真菌である、請求項９２に記載の工学的に作り出された微生物。
【請求項９４】
前記ヤロウイア属真菌は、Ｙ．ｌｉｐｏｌｙｔｉｃａである、請求項９３に記載の工学的に作り出された微生物。
【請求項９５】
前記真菌は、アスペルギルス属である、請求項９２に記載の工学的に作り出された微生物。
【請求項９６】
前記アスペルギルス属真菌は、Ａ．ｐａｒａｓｉｔｉｃｕｓまたはＡ．ｎｉｄｕｌａｎｓである、請求項９５に記載の工学的に作り出された微生物。
【請求項９７】
６−ヒドロキシヘキサン酸変換を低下させる遺伝子修飾を含む、請求項５９〜９６のいずれか一項に記載の工学的に作り出された微生物。
【請求項９８】
前記遺伝子修飾は、６−ヒドロキシヘキサン酸デヒドロゲナーゼ活性を低下させる、請求項９７に記載の工学的に作り出された微生物。
【請求項９９】
ベータ酸化活性を低下させる遺伝子修飾を含む、請求項５９〜９８のいずれか一項に記載の工学的に作り出された微生物。
【請求項１００】
前記遺伝子修飾は、ベータ酸化活性を検出不可能にする、請求項９９に記載の工学的に作り出された微生物。
【請求項１０１】
請求項１〜１００のいずれか一項に記載の工学的に作り出された微生物を、培養された微生物がアジピン酸を産生する培養条件下で培養するステップを含む、アジピン酸を製造するための方法。
【請求項１０２】
前記工学的に作り出された微生物が産生される宿主微生物は、検出可能な量のアジピン酸を産生しない、請求項１０１に記載の方法。
【請求項１０３】
前記培養条件は、発酵条件を含む、請求項１０１または１０２に記載の方法。
【請求項１０４】
前記培養条件は、バイオマスの導入を含む、請求項１０１〜１０３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１０５】
前記培養条件は、グルコースの導入を含む、請求項１０１または１０３に記載の方法。
【請求項１０６】
前記培養条件は、ヘキサンの導入を含む、請求項１０１または１０３に記載の方法。
【請求項１０７】
前記アジピン酸は、追加されるグルコース１グラム当たり約０．３グラムを超える収量で産生される、請求項１０１〜１０６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１０８】
前記培養された微生物から前記アジピン酸を精製するステップを含む、請求項１０１〜１０７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１０９】
前記アジピン酸を修飾し、それによって、修飾されたアジピン酸を産生するステップを含む、請求項１０８に記載の方法。
【請求項１１０】
前記培養された微生物、前記アジピン酸、または前記修飾されたアジピン酸を容器に配置するステップを含む、請求項１０１〜１０９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１１１】
前記容器を輸送するステップを含む、請求項１１０に記載の方法。
【請求項１１２】
請求項３５、３６、９７または９８のいずれか一項に記載の工学的に作り出された微生物を、培養された微生物が６−ヒドロキシヘキサン酸を産生する培養条件下で培養するステップを含む、６−ヒドロキシヘキサン酸を製造するための方法。
【請求項１１３】
前記工学的に作り出された微生物が産生される宿主微生物は、検出可能な量の６−ヒドロキシヘキサン酸を産生しない、請求項１１２に記載の方法。
【請求項１１４】
前記培養条件は、発酵条件を含む、請求項１１２または１１３に記載の方法。
【請求項１１５】
前記培養条件は、バイオマスの導入を含む、請求項１１２〜１１４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１１６】
前記培養条件は、グルコースの導入を含む、請求項１１２または１１４に記載の方法。
【請求項１１７】
前記培養条件は、ヘキサンの導入を含む、請求項１１２または１１４に記載の方法。
【請求項１１８】
前記６−ヒドロキシヘキサン酸は、追加されるグルコース１グラム当たり約０．３グラムを超える収量で産生される、請求項１１２〜１１７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１１９】
前記培養された微生物から前記６−ヒドロキシヘキサン酸を精製するステップを含む、請求項１１２〜１１８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１２０】
前記６−ヒドロキシヘキサン酸を修飾し、それによって、修飾された６−ヒドロキシヘキサン酸を産生するステップを含む、請求項１１９に記載の方法。
【請求項１２１】
前記培養された微生物、前記６−ヒドロキシヘキサン酸、または前記修飾された６−ヒドロキシヘキサン酸を容器に配置するステップを含む、請求項１１２〜１２０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１２２】
前記容器を輸送するステップを含む、請求項１２１に記載の方法。
【請求項１２３】
アジピン酸を産生する工学的に作り出された微生物を調製するための方法であって、
（ａ）モノオキシゲナーゼ活性を追加するまたは増加させる遺伝子修飾を宿主生物に導入し、それによって、検出可能なおよび／または増加したモノオキシゲナーゼ活性を有する工学的に作り出された微生物を産生するステップと、
（ｂ）アジピン酸を産生する工学的に作り出された微生物を選択するステップと
を含む方法。
【請求項１２４】
前記モノオキシゲナーゼ活性は、６炭素分子へのヒドロキシル部分の組込みである、請求項Ｅ１に記載の方法。
【請求項１２５】
前記６炭素分子は、ヘキサノエートである、請求項１２３または１２４に記載の方法。
【請求項１２６】
アジピン酸を産生する工学的に作り出された微生物を調製するための方法であって、
（ａ）宿主生物を栄養源であるヘキサンと共に培養し、それによって、検出可能なモノオキシゲナーゼ活性を有する工学的に作り出された微生物を産生するステップと、
（ｂ）アジピン酸を産生する工学的に作り出された微生物を選択するステップと
を含む方法。
【請求項１２７】
前記モノオキシゲナーゼ活性は、６炭素分子へのヒドロキシル部分の組込みである、請求項１２６に記載の方法。
【請求項１２８】
前記６炭素分子は、ヘキサノエートである、請求項１２６または１２７に記載の方法。
【請求項１２９】
検出可能な量の前記モノオキシゲナーゼ活性を有する、前記工学的に作り出された微生物を選択するステップを含む、請求項１２６〜１２８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１３０】
ヘキサノエートシンターゼ活性を追加するまたは増加させる遺伝子修飾を導入し、それによって、工学的に作り出された微生物を産生するステップと、検出可能なおよび／または増加したヘキサノエートシンターゼ活性を有する工学的に作り出された微生物を選択するステップとを含む、請求項１２６〜１２９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１３１】
前記遺伝子修飾は、ヘキサノエートシンターゼサブユニットＡ活性、ヘキサノエートシンターゼサブユニットＢ活性、またはヘキサノエートシンターゼサブユニットＡ活性およびヘキサノエートシンターゼサブユニットＢ活性を有するポリペプチドをコードする、請求項１３０に記載の方法。
【請求項１３２】
６−オキソヘキサン酸デヒドロゲナーゼ活性を追加するもしくは増加させる、オメガオキソ脂肪酸デヒドロゲナーゼ活性を追加するもしくは増加させる、または６−オキソヘキサン酸デヒドロゲナーゼ活性およびオメガオキソ脂肪酸デヒドロゲナーゼ活性を追加するもしくは増加させる遺伝子修飾を導入し、それによって、工学的に作り出された微生物を産生するステップと、宿主微生物に比べて検出可能なおよび／または増加した６−オキソヘキサン酸デヒドロゲナーゼおよび／またはオメガオキソ脂肪酸デヒドロゲナーゼ活性を有する工学的に作り出された微生物を選択するステップとを含む、請求項１２３〜１３１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１３３】
６−ヒドロキシヘキサン酸デヒドロゲナーゼ活性を追加するもしくは増加させる、オメガヒドロキシル脂肪酸デヒドロゲナーゼ活性を追加するもしくは増加させる、または６−ヒドロキシヘキサン酸デヒドロゲナーゼ活性およびオメガヒドロキシル脂肪酸デヒドロゲナーゼ活性を追加するもしくは増加させる遺伝子修飾を導入し、それによって、工学的に作り出された微生物を産生するステップと、前記宿主微生物に比べて検出可能なおよび／または増加した６−ヒドロキシヘキサン酸デヒドロゲナーゼ活性および／またはオメガヒドロキシル脂肪酸デヒドロゲナーゼ活性を有する工学的に作り出された微生物を選択するステップとを含む、請求項１２３〜１３２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１３４】
チオエステラーゼ活性を追加するもしくは増加させる遺伝子修飾を導入し、それによって、工学的に作り出された微生物を産生するステップと、前記宿主微生物に比べて検出可能なおよび／または増加したチオエステラーゼ活性を有する工学的に作り出された微生物を選択するステップとを含む、請求項１２３〜１３３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１３５】
６−ヒドロキシヘキサン酸変換を低下させる遺伝子修飾を導入し、それによって、工学的に作り出された微生物を産生するステップと、前記宿主微生物に比べて低下した６−ヒドロキシヘキサン酸変換を有する工学的に作り出された微生物を選択するステップとを含む、請求項１２３〜１３４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１３６】
ベータ酸化活性を低下させる遺伝子修飾を導入し、それによって、工学的に作り出された微生物を産生するステップと、前記宿主微生物に比べて低下したベータ酸化活性を有する工学的に作り出された微生物を選択するステップとを含む、請求項１２３〜１３５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１３７】
前記モノオキシゲナーゼ活性による実質的なヘキサノエート使用をもたらす遺伝子修飾を導入し、それによって、工学的に作り出された微生物を産生するステップと、前記宿主微生物と比較して、実質的なヘキサノエート使用が前記モノオキシゲナーゼ活性によるものである工学的に作り出された微生物を選択するステップとを含む、請求項１２３〜１３６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１３８】
アジピン酸を産生する微生物を調製する方法であって、（ａ）６−オキソヘキサン酸デヒドロゲナーゼ活性、オメガオキソ脂肪酸デヒドロゲナーゼ活性、６−ヒドロキシヘキサン酸デヒドロゲナーゼ活性、オメガヒドロキシル脂肪酸デヒドロゲナーゼ活性、ヘキサノエートシンターゼ活性、およびモノオキシゲナーゼ活性から成る群から選択される１つ以上の活性を追加するまたは増加させる１つ以上の遺伝子修飾を宿主生物に導入し、それによって、工学的に作り出された微生物を産生するステップと、（ｂ）アジピン酸を産生する工学的に作り出された微生物を選択するステップとを含む方法。
【請求項１３９】
宿主微生物に比べて、６−オキソヘキサン酸デヒドロゲナーゼ活性、オメガオキソ脂肪酸デヒドロゲナーゼ活性、６−ヒドロキシヘキサン酸デヒドロゲナーゼ活性、オメガヒドロキシル脂肪酸デヒドロゲナーゼ活性、ヘキサノエートシンターゼ活性、およびモノオキシゲナーゼ活性から成る群から選択される１つ以上の検出可能なおよび／または増加した活性を有する工学的に作り出された微生物を選択するステップを含む、請求項１３８に記載の方法。
【請求項１４０】
６−ヒドロキシヘキサン酸変換を低下させる遺伝子修飾を導入し、それによって、工学的に作り出された微生物を産生するステップと、前記宿主微生物に比べて低下した６−ヒドロキシヘキサン酸変換を有する工学的に作り出された微生物を選択するステップとを含む、請求項１３８または１３９に記載の方法。
【請求項１４１】
ベータ酸化活性を低下させる遺伝子修飾を導入し、それによって、工学的に作り出された微生物を産生するステップと、前記宿主微生物に比べて低下したベータ酸化活性を有する工学的に作り出された微生物を選択するステップとを含む、請求項１３８〜１４０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１４２】
前記モノオキシゲナーゼ活性による実質的なヘキサノエート使用をもたらす遺伝子修飾を導入し、それによって、工学的に作り出された微生物を産生するステップと、前記宿主微生物と比較して、実質的なヘキサノエート使用が前記モノオキシゲナーゼ活性によるものである工学的に作り出された微生物を選択するステップとを含む、請求項１３８〜１４１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１４３】
６−ヒドロキシヘキサン酸を産生する微生物を調製するための方法であって、（ａ）６−オキソヘキサン酸デヒドロゲナーゼ活性、オメガオキソ脂肪酸デヒドロゲナーゼ活性、オメガヒドロキシル脂肪酸デヒドロゲナーゼ活性、ヘキサノエートシンターゼ活性、およびモノオキシゲナーゼ活性から成る群から選択される１つ以上の活性を追加するまたは増加させる１つ以上の遺伝子修飾を宿主生物に導入し、それによって、工学的に作り出された微生物を産生するステップと、（ｂ）６−ヒドロキシヘキサン酸変換を低下させる遺伝子修飾を宿主生物に導入するステップと、（ｃ）６−ヒドロキシヘキサン酸を産生する工学的に作り出された微生物を選択するステップとを含む方法。
【請求項１４４】
前記宿主微生物に比べて低下した６−ヒドロキシヘキサン酸変換を有する工学的に作り出された微生物を選択するステップを含む、請求項１４３に記載の方法。
【請求項１４５】
前記宿主微生物に比べて、６−オキソヘキサン酸デヒドロゲナーゼ活性、オメガオキソ脂肪酸デヒドロゲナーゼ活性、６−ヒドロキシヘキサン酸デヒドロゲナーゼ活性、オメガヒドロキシル脂肪酸デヒドロゲナーゼ活性、ヘキサノエートシンターゼ活性、およびモノオキシゲナーゼ活性から成る群から選択される１つ以上の検出可能なおよび／または増加した活性を有する工学的に作り出された微生物を選択するステップを含む、請求項１４３または１４４に記載の方法。
【請求項１４６】
ベータ酸化活性を低下させる遺伝子修飾を導入し、それによって、工学的に作り出された微生物を産生するステップと、前記宿主微生物に比べて低下したベータ酸化活性を有する工学的に作り出された微生物を選択するステップとを含む、請求項１４３〜１４５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１４７】
前記モノオキシゲナーゼ活性による実質的なヘキサノエート使用をもたらす遺伝子修飾を導入し、それによって、工学的に作り出された微生物を産生するステップと、前記宿主微生物と比較して、実質的なヘキサノエート使用が前記モノオキシゲナーゼ活性によるものである工学的に作り出された微生物を選択するステップとを含む、請求項１４３〜１４６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１４８】
ａ．ベータ酸化活性をブロックする遺伝子改変、および
ｂ．モノオキシゲナーゼ活性を追加するもしくは増加させる遺伝子改変、またはヘキサノエートシンテターゼ活性を追加するもしくは増加させる遺伝子改変
を含む工学的に作り出された微生物を、１つ以上の多糖を含む供給材料と接触させるステップと、
アジピン酸が産生される条件下で、前記工学的に作り出された微生物を培養するステップと
を含む方法。
【請求項１４９】
前記工学的に作り出された微生物は、ヘキサノエートシンテターゼ活性を追加するまたは増加させる遺伝子改変を含む、請求項１４８に記載の方法。
【請求項１５０】
前記工学的に作り出された微生物は、ヘキサノエートシンターゼサブユニットＡ活性を有するポリペプチドをコードする異種のポリヌクレオチドを含む、請求項１４９に記載の方法。
【請求項１５１】
前記工学的に作り出された微生物は、ヘキサノエートシンターゼサブユニットＢ活性を有するポリペプチドをコードする異種のポリヌクレオチドを含む、請求項１４９に記載の方法。
【請求項１５２】
前記異種のポリヌクレオチドは、細菌から独立して選択される、請求項１５０または１５１に記載の方法。
【請求項１５３】
前記細菌は、バチルス属細菌である、請求項１５２に記載の方法。
【請求項１５４】
前記バチルス属細菌は、Ｂ．ｍｅｇａｔｅｒｉｕｍである、請求項１５３に記載の方法。
【請求項１５５】
前記微生物は、カンジダ属酵母である、請求項１４９または１５４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１５６】
前記微生物は、Ｃ．ｔｒｏｐｉｃａｌｉｓ株である、請求項１５５に記載の方法。
【請求項１５７】
モノオキシゲナーゼ活性を増加させる前記遺伝子改変は、シトクロムＰ４５０レダクターゼ活性を増加させる遺伝子改変を含む、請求項１４８〜１５６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１５８】
前記遺伝子改変は、前記シトクロムＰ４５０レダクターゼ活性を有するポリペプチドをコードするポリヌクレオチドのコピー数を増加させる、請求項１５７に記載の方法。
【請求項１５９】
前記遺伝子改変は、前記シトクロムＰ４５０レダクターゼ活性を有するポリペプチドをコードするポリヌクレオチドと機能的に関連するプロモーターを配置する、請求項１５７に記載の方法。
【請求項１６０】
前記モノオキシゲナーゼ活性は、ＣＹＰ５２１５活性、ＣＹＰ５２１６活性、またはＣＹＰ５２１５活性およびＣＹＰ５２１６活性である、請求項１４８〜１５９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１６１】
前記遺伝子改変は、前記モノオキシゲナーゼ活性を有するポリペプチドをコードするポリヌクレオチドのコピー数を増加させる、請求項１４８〜１６０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１６２】
前記遺伝子改変は、前記モノオキシゲナーゼ活性を有するポリペプチドをコードするポリヌクレオチドと機能的に関連するプロモーターを配置する、請求項１４８〜１６０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１６３】
ベータ酸化活性をブロックする前記遺伝子改変は、アシル−ＣｏＡオキシダーゼ活性を破壊する、請求項１４８〜１６０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１６４】
前記遺伝子改変は、ＰＯＸ４活性およびＰＯＸ５活性を破壊する、請求項１６３に記載の方法。
【請求項１６５】
前記遺伝子改変は、前記アシル−ＣｏＡオキシダーゼ活性を有するポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを破壊する、請求項１６３または１６４に記載の方法。
【請求項１６６】
前記遺伝子改変は、前記アシル−ＣｏＡオキシダーゼ活性を有するポリペプチドをコードするポリヌクレオチドと機能的に関連するプロモーターを破壊する、請求項１６３または１６４に記載の方法。
【請求項１６７】
前記供給材料は、６炭素糖を含む、請求項１４８〜１６６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１６８】
前記供給材料は、５炭素糖を含む、請求項１４８〜１６６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１６９】
前記アジピン酸は、約８０％以上の理論的収率のレベルで産生される、請求項１４８〜１６８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１７０】
産生されたアジピン酸の量を検出するステップを含む、請求項１４８〜１６９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１７１】
産生された前記アジピン酸を単離するステップを含む、請求項１４８〜１７０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１７２】
前記培養条件は、前記工学的に作り出された微生物を発酵させることを含む、請求項１４８〜１７１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１７３】
ベータ酸化活性を部分的にブロックする遺伝子改変を含む工学的に作り出された微生物を、１つ以上のパラフィンを含む供給材料と接触させるステップと
前記工学的に作り出された微生物をアジピン酸が産生される条件下で培養するステップと
を含む方法。
【請求項１７４】
前記微生物は、モノオキシゲナーゼ活性を増加させる遺伝子改変を含む、請求項１７３に記載の方法。
【請求項１７５】
前記微生物は、カンジダ属酵母である、請求項１７３または１７４に記載の方法。
【請求項１７６】
前記微生物は、Ｃ．ｔｒｏｐｉｃａｌｉｓ株である、請求項１７５に記載の方法。
【請求項１７７】
モノオキシゲナーゼ活性を増加させる前記遺伝子改変は、シトクロムＰ４５０レダクターゼ活性を増加させる遺伝子改変を含む、請求項１７３〜１７６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１７８】
前記遺伝子改変は、前記シトクロムＰ４５０レダクターゼ活性を有するポリペプチドをコードするポリヌクレオチドのコピー数を増加させる、請求項１７４に記載の方法。
【請求項１７９】
前記遺伝子改変は、前記シトクロムＰ４５０レダクターゼ活性を有するポリペプチドをコードするポリヌクレオチドと機能的に関連するプロモーターを配置する、請求項１７４に記載の方法。
【請求項１８０】
前記モノオキシゲナーゼ活性は、ＣＹＰ５２１５活性、ＣＹＰ５２１６活性、またはＣＹＰ５２１５活性およびＣＹＰ５２１６活性である、請求項１７３〜１７９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１８１】
前記遺伝子改変は、前記モノオキシゲナーゼ活性を有するポリペプチドをコードするポリヌクレオチドのコピー数を増加させる、請求項１７３〜１８０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１８２】
前記遺伝子改変は、前記モノオキシゲナーゼ活性を有するポリペプチドをコードするポリヌクレオチドと機能的に関連するプロモーターを配置する、請求項１７３〜１８０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１８３】
ベータ酸化活性をブロックする前記遺伝子改変は、アシル−ＣｏＡオキシダーゼ活性を破壊する、請求項１７３〜１８０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１８４】
前記遺伝子改変は、ＰＯＸ４活性またはＰＯＸ５活性を破壊する、請求項１８３に記載の方法。
【請求項１８５】
前記遺伝子改変は、前記アシル−ＣｏＡオキシダーゼ活性を有するポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを破壊する、請求項１８３または１８４に記載の方法。
【請求項１８６】
前記遺伝子改変は、前記アシル−ＣｏＡオキシダーゼ活性を有するポリペプチドをコードするポリヌクレオチドと機能的に関連するプロモーターを破壊する、請求項１８３または１８４に記載の方法。
【請求項１８７】
前記アジピン酸は、約８０％以上の理論的収率のレベルで産生される、請求項１７３〜１８６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１８８】
産生されたアジピン酸の量を検出するステップを含む、請求項１７３〜１８７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１８９】
産生された前記アジピン酸を単離するステップを含む、請求項１７３〜１８８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１９０】
前記培養条件は、前記工学的に作り出された微生物を発酵させることを含む、請求項１７３〜１８９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１９１】
前記パラフィンは、飽和パラフィン、不飽和パラフィン、置換パラフィン、分岐パラフィン、直鎖状パラフィン、またはその組合せである、請求項１７３〜１９０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１９２】
前記パラフィンは、約１〜約６０個の炭素原子を含む、請求項１７３〜１９１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１９３】
前記パラフィンは、複数のパラフィンの混合物中にある、請求項１７３〜１９２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１９４】
前記複数のパラフィンの混合物中の前記複数のパラフィンは、約８〜約１８の平均炭素原子数を有する、請求項１９３に記載の方法。
【請求項１９５】
前記平均炭素原子数は、約１０〜約１６である、請求項１９４に記載の方法。
【請求項１９６】
前記平均炭素原子数は、約１２である、請求項１９５に記載の方法。
【請求項１９７】
前記パラフィンは、ろう中にある、請求項１７３〜１９６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１９８】
前記パラフィンは、オイル中にある、請求項１７３〜１９６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１９９】
前記パラフィンは、石油生成物に由来する、請求項１７３〜１９８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２００】
前記石油生成物は、石油蒸留物である、請求項１９９に記載の方法。
【請求項２０１】
前記パラフィンは、植物または植物生成物に由来する、請求項１７３〜２００のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２０２】
配列番号１のヌクレオチド配列と９６％以上同一のヌクレオチド配列を有するポリヌクレオチド、
配列番号８のポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を有するポリヌクレオチド、および
配列番号１のヌクレオチド配列と９６％以上同一のヌクレオチド配列の一部を有し、脂肪アルコールオキシダーゼ活性を有するポリペプチドをコードするポリヌクレオチド
から成る群から選択される単離ポリヌクレオチド。
【請求項２０３】
配列番号２のヌクレオチド配列と９８％以上同一のヌクレオチド配列を有するポリヌクレオチド、
配列番号１０のポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を有するポリヌクレオチド、および
配列番号２のヌクレオチド配列と９８％以上同一のヌクレオチド配列の一部を有し、脂肪アルコールオキシダーゼ活性を有するポリペプチドをコードするポリヌクレオチド
から成る群から選択される単離ポリヌクレオチド。
【請求項２０４】
配列番号３のヌクレオチド配列と９５％以上同一のヌクレオチド配列を有するポリヌクレオチド、
配列番号９のポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を有するポリヌクレオチド、および
配列番号３のヌクレオチド配列と９５％以上同一のヌクレオチド配列の一部を有し、脂肪アルコールオキシダーゼ活性を有するポリペプチドをコードするポリヌクレオチド
から成る群から選択される単離ポリヌクレオチド。
【請求項２０５】
配列番号４のヌクレオチド配列と８３％以上同一のヌクレオチド配列を有するポリヌクレオチド、
配列番号１１のポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を有するポリヌクレオチド、および
配列番号４のヌクレオチド配列と８３％以上同一のヌクレオチド配列の一部を有し、脂肪アルコールオキシダーゼ活性を有するポリペプチドをコードするポリヌクレオチド
から成る群から選択される単離ポリヌクレオチド。
【請求項２０６】
配列番号５のヌクレオチド配列と８２％以上同一のヌクレオチド配列を有するポリヌクレオチド、
配列番号１２のポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を有するポリヌクレオチド、および
配列番号５のヌクレオチド配列と８２％以上同一のヌクレオチド配列の一部を有し、脂肪アルコールオキシダーゼ活性を有するポリペプチドをコードするポリヌクレオチド
から成る群から選択される単離ポリヌクレオチド。
【請求項２０７】
請求項２０２〜２０６のいずれか一項に記載のポリヌクレオチドを含む発現ベクター。
【請求項２０８】
請求項２０２〜２０６のいずれか一項に記載のポリヌクレオチドを含む組込み型ベクター。
【請求項２０９】
請求項２０７に記載の発現ベクターまたは請求項２０８に記載の組込み型ベクターを含む微生物。
【請求項２１０】
請求項２０９に記載の微生物を含む培養物。
【請求項２１１】
請求項２１０に記載の微生物を含む発酵デバイス。
【請求項２１２】
請求項２０２〜２０６のいずれか一項に記載のポリヌクレオチドによってコードされる、または請求項Ｊ４に記載の発現ベクターもしくは請求項２０９に記載の微生物によって産生されるポリペプチド。
【請求項２１３】
請求項２１２に記載のポリペプチドに特異的に結合する抗体。
【図１】
【図２】
【図３】
【図４】
【図５】
【図６】
【図７】
【図８】
【図９】
【図１０】
【図１１Ａ】
【図１１Ｂ】
【図１２】
【図１３】
【図１４】
【図１５Ａ】
【図１５Ｂ】
【図１５Ｃ】
【図１６】
【図１７】
【図１８】
【図１９】
【図２０】
【図２１】
【図２２】
【図２３】
【図２４】
【図２５】
【図２６】
【図２７】
【図２８】
【図２９】
【図３０】
【図３１】
【図３２】
【図３３】
【図３４】
【図２】
【図３】
【図４】
【図５】
【図６】
【図７】
【図８】
【図９】
【図１０】
【図１１Ａ】
【図１１Ｂ】
【図１２】
【図１３】
【図１４】
【図１５Ａ】
【図１５Ｂ】
【図１５Ｃ】
【図１６】
【図１７】
【図１８】
【図１９】
【図２０】
【図２１】
【図２２】
【図２３】
【図２４】
【図２５】
【図２６】
【図２７】
【図２８】
【図２９】
【図３０】
【図３１】
【図３２】
【図３３】
【図３４】
【公表番号】特表２０１２−５３１９０３（Ｐ２０１２−５３１９０３Ａ）
【公表日】平成２４年１２月１３日（２０１２．１２．１３）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２０１２−５１７９１３（Ｐ２０１２−５１７９１３）
【出願日】平成２２年７月１日（２０１０．７．１）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＵＳ２０１０／０４０８３７
【国際公開番号】ＷＯ２０１１／００３０３４
【国際公開日】平成２３年１月６日（２０１１．１．６）
【出願人】（５１１３１１１６３）バーデザイン， インコーポレイテッド (1)
【Ｆターム（参考）】
【公表日】平成２４年１２月１３日（２０１２．１２．１３）
【国際特許分類】
【出願日】平成２２年７月１日（２０１０．７．１）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＵＳ２０１０／０４０８３７
【国際公開番号】ＷＯ２０１１／００３０３４
【国際公開日】平成２３年１月６日（２０１１．１．６）
【出願人】（５１１３１１１６３）バーデザイン， インコーポレイテッド (1)
【Ｆターム（参考）】
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