アディポネクチン産生増強・促進剤
【課題】天然物由来で安全性が高いアディポネクチン産生増強・促進剤及びそれらを含有する医薬品、飲食品を提供すること。
【解決手段】ナリンゲニンカルコン又はその誘導体を有効成分とするアディポネクチン産生増強・促進剤。このアディポネクチン産生増強・促進剤を含有する医薬品、飲食品。
【効果】これらの剤、医薬品、飲食品は、高いアディポネクチン増強・促進作用を有し、かつ安全性が高いため、アディポネクチン分泌不全に起因する動脈硬化症又は糖尿病、あるいはメタボリックシンドロームの予防又は改善に有用である。
【解決手段】ナリンゲニンカルコン又はその誘導体を有効成分とするアディポネクチン産生増強・促進剤。このアディポネクチン産生増強・促進剤を含有する医薬品、飲食品。
【効果】これらの剤、医薬品、飲食品は、高いアディポネクチン増強・促進作用を有し、かつ安全性が高いため、アディポネクチン分泌不全に起因する動脈硬化症又は糖尿病、あるいはメタボリックシンドロームの予防又は改善に有用である。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、新規なアディポネクチン産生増強・促進剤、及びそれらを含有する医薬品、飲食品に関する。
【背景技術】
【０００２】
近年の生活様式の急速な変化に伴い、内臓脂肪の蓄積を伴う肥満、またはそれを基盤としてなるメタボリックシンドローム（以下、「ＭＳ」と略す）は増加の一途をたどっている。平成１６年の国民健康・栄養調査結果によると、４０〜７４歳におけるＭＳの有病者数・予備軍者数は合わせて１９６０万人と推定されている。
【０００３】
ＭＳは内臓脂肪蓄積を伴う肥満を基盤として高血糖、高血圧、高脂血症などが重複した状態であり、動脈硬化性疾患の発症リスクが極めて高い。動脈硬化性疾患は日本人の死因統計で悪性新生物と双璧をなす位置にあり、その発症リスクであるＭＳの予防・治療対策の確立はきわめて重要である。
【０００４】
ＭＳ発症を惹起する要因は運動不足、過剰な脂質摂取などの生活習慣の乱れや、加齢や喫煙などの外部ストレスなどであり、これらが積み重なることで内臓脂肪の蓄積を伴う肥満を発症する。これが進行すると脂肪細胞から分泌される生体調節因子であるアディポサイトカインのバランスが崩れる。
【０００５】
アディポサイトカインの中でも、とくにＭＳとの関わりが深いものがアディポネクチンであり、冠動脈疾患患者や２型糖尿病患者、肥満患者のアディポネクチン濃度は健常人に比べ有意に低値を示すことが報告されている。また、アディポネクチンノックアウトマウスを用いた解析では、ノックアウトマウスは野生型にくらべ血管傷害による内膜肥厚を起こしやすく、より強いインスリン抵抗性を示すことが報告されている（例えば、非特許文献１，２参照）。これらのことから、アディポネクチンはインスリン抵抗性を伴う２型糖尿病や動脈硬化のリスクを抑制するアディポサイトカインであることがわかってきた。
【０００６】
実際に、粥状動脈硬化を高率に発症するアポＥノックアウトマウスにアディポネクチンを過剰発現させたところ動脈硬化病変の進展が抑制されること（例えば、非特許文献３参照）や、血中アディポネクチン濃度が野生型にくらべ低値を示す肥満・２型糖尿病マウスであるＫＫＡｙおよびｄｂ／ｄｂマウスに生理的濃度のアディポネクチンを補充することによりインスリン抵抗性が改善することが報告されている（例えば、非特許文献４参照）。このように、アディポネクチンは、２型糖尿病のインスリン抵抗性、高血圧、脂質代謝といったＭＳの構成要因への改善作用や抗動脈硬化、抗炎症作用などが見出されていたが、さらに近年の研究で肝繊維化抑制、正常肝細胞増殖促進効果を有することも確認された（例えば、非特許文献５参照）。
【０００７】
これらのことから、アディポネクチンはＭＳによるリスクの低減を考える上で最も重要な因子であるといえ、特異的な発現組織である脂肪細胞におけるアディポネクチン産生・分泌の増強・促進はＭＳの本質的な予防・治療法として有用であるといえる。
【０００８】
これまでに脂肪細胞におけるアディポネクチン産生・分泌の増強・促進効果を有する組成物・化合物として公知のものに２型糖尿病の治療薬として用いられているチアゾリジン誘導体があるが、副作用として肝毒性を示すといった安全上の問題点がある他、医薬品であることから医師のコントロール下かつ２型糖尿病患者に処方が限定されており、比較的軽度のリスク集積状態であるＭＳ有病者・予備軍のＭＳ予防・改善には利用できないという問題点がある。したがって、天然物由来であって高い安全性を有し、かつアディポネクチン産生・分泌を増強・促進する効果のある飲食品の開発が求められている。
【０００９】
これまでに天然物由来のアディポネクチン調節作用を持つ物質として、ホップ由来のキサントフモールが血中のアディポネクチンを増加させることが報告されている（例えば、特許文献１参照）。しかし、これとは異なる構造を有するカルコン類がアディポネクチン産生の場である脂肪細胞において、細胞傷害などの副作用を示すことなく、安全にアディポネクチンの産生を増強・促進することについては明らかでない。
【００１０】
【特許文献１】特開２００６−３０６８００号公報
【非特許文献１】松田ら（Ｍ Ｍａｔｓｕｄａ，ｅｔ ａｌ．）著，「Ｒｏｌｅ ｏｆ ａｄｉｐｏｎｅｃｔｉｎ ｉｎ ｐｒｅｖｅｎｔｉｎｇ ｖａｓｃｕｌａｒ ｓｔｅｎｏｓｉｓ． Ｔｈｅ ｍｉｓｓｉｎｇ ｌｉｎｋ ｏｆ ａｄｉｐｏ‐ｖａｓｃｕｌａｒ ａｘｉｓ．」，Ｔｈｅ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，（米国），米国生化学・分子生物学会（Ｔｈｅ Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｓｏｃｉｅｔｙ ｆｏｒ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ａｎｄ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ），２００２年，２７７（４０），ｐ．３７４８７−３７４９１
【非特許文献２】近藤ら（Ｈ Ｋｏｎｄｏ，ｅｔ ａｌ．）著，「Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ ｏｆ ａｄｉｐｏｎｅｃｔｉｎ ｍｕｔａｔｉｏｎ ｗｉｔｈ ｔｙｐｅ ２ ｄｉａｂｅｔｅｓ： ａ ｃａｎｄｉｄａｔｅ ｇｅｎｅ ｆｏｒ ｔｈｅ ｉｎｓｕｌｉｎ ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ ｓｙｎｄｒｏｍｅ．」，Ｄｉａｂｅｔｅｓ、（米国），米国糖尿病協会（Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｄｉａｂｅｔｅｓ Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ），２００２年，５１（７），ｐ．２３２５−２３２８
【非特許文献３】岡本ら（Ｙ Ｏｋａｍｏｔｏ， ｅｔ ａｌ．）著，「Ａｄｉｐｏｎｅｃｔｉｎ Ｒｅｄｕｃｅｓ Ａｔｈｅｒｏｓｃｌｅｒｏｓｉｓ ｉｎ Ａｐｏｌｉｐｏｐｒｏｔｅｉｎ Ｅ‐Ｄｅｆｉｃｉｅｎｔ Ｍｉｃｅ．」Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ，（米国），米国心臓病協会（Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｈｅａｒｔ Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ），２００２年，１０６（２２），ｐ．２７６７−２７７０
【非特許文献４】山内ら（Ｔ Ｙａｍａｕｃｈｉ， ｅｔ ａｌ．）著，「Ｔｈｅ ｆａｔ‐ｄｅｒｉｖｅｄ ｈｏｒｍｏｎｅ ａｄｉｐｏｎｅｃｔｉｎ ｒｅｖｅｒｓｅｓ ｉｎｓｕｌｉｎ ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｗｉｔｈ ｂｏｔｈ ｌｉｐｏａｔｒｏｐｈｙ ａｎｄ ｏｂｅｓｉｔｙ．」Ｎａｔｕｒｅ Ｍｅｄｅｃｉｎｅ，（英国），ネイチャーパブリッシンググループ（Ｎａｔｕｒｅ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｇｒｏｕｐ），２００１年，７（８），ｐ．９４１−９４６
【非特許文献５】ジンら（X Ｄｉｎｇ， ｅｔ ａｌ．）著，「Ｔｈｅ ｒｏｌｅｓ ｏｆ ｌｅｐｔｉｎ ａｎｄ ａｄｉｐｏｎｅｃｔｉｎ： ａ ｎｏｖｅｌ ｐａｒａｄｉｇｍ ｉｎ ａｄｉｐｏｃｙｔｏｋｉｎｅ ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ ｏｆ ｌｉｖｅｒ ｆｉｂｒｏｓｉｓ ａｎｄ ｓｔｅｌｌａｔｅ ｃｅｌｌ ｂｉｏｌｏｇｙ．」Ｔｈｅ Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｐａｔｈｏｌｏｇｙ，（米国），米国病理学学会（Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｓｏｃｉｅｔｙ ｆｏｒ Ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｖｅ Ｐａｔｈｏｌｏｇｙ），２００５年，１６６，ｐ．１６５５−１６６９
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００１１】
本発明が解決しようとする課題は、天然物由来で安全性が高い、従来とは異なる構造を有するアディポネクチン産生増強・促進剤、及びそれらを含有する医薬品、飲食品を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【００１２】
本発明者らは上記課題解決のため鋭意検討を重ねた結果、ナリンゲニンカルコン又はその誘導体にアディポネクチンの産生を増強・促進する作用があることを見出し、これらの知見に基づき本発明を完成するに至った。
【００１３】
すなわち本発明は、
１）ナリンゲニンカルコン又はその誘導体を有効成分とする、アディポネクチン産生増強・促進剤。
２）ナリンゲニンカルコン又はその誘導体がトマト抽出物に含まれるものである、上記１）記載のアディポネクチン産生増強・促進剤。
３）上記１）または２）に記載の剤を含有する、医薬品又は飲食品。
を提供するものである。
【発明の効果】
【００１４】
本発明のナリンゲニンカルコン又はその誘導体を有効成分とするアディポネクチン産生増強・促進剤は安全性が高く、脂肪細胞におけるアディポネクチンの産生を増強・促進する。その結果、アディポネクチン分泌不全に起因する動脈硬化症又は糖尿病、あるいはメタボリックシンドロームの予防又は改善が可能となる。なお、「アディポネクチン分泌不全に起因する」とは、例えばアディポネクチンの発現・産生の異常など何らかの原因で、アディポネクチンの血中への分泌が正常でなくなることを意味する。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１５】
以下、本発明を詳細に説明する。
本発明のアディポネクチン産生増強・促進剤は、ナリンゲニンカルコン又はその誘導体を有効成分とする。ナリンゲニンカルコン（２’４’６’４-Ｔｅｔｒａｈｙｄｒｏｘｙｃｈａｌｃｏｎｅ）は、下記構造式（II）で示される物質である。
構造式（II）
【００１６】
【化１】
【００１７】
ナリンゲニンカルコンは、アディポネクチン産生増強・促進作用を有する限り、その構造の一部が改変あるいは修飾されている誘導体であっても良い。ナリンゲニンカルコンの誘導体としては、例えば、薬理上許容される塩、エステルあるいはプロドラックなどが挙げられる。
【００１８】
ナリンゲニンカルコンの誘導体のうち、薬理上許容される塩としては、特に限定されないが、例えば、アルカリ金属（ナトリウム、カリウムなど）、アルカリ土類金属（マグネシウム、カルシウムなど）、これらの水酸化物又は炭酸塩、アルカリ金属アルコキサイド（ナトリウムメトキサイド、カリウムｔ−プトキサイドなど）との塩が挙げられる。また、塩としては、無機酸（塩酸、硫酸、リン酸など）や有機酸（マレイン酸、クエン酸、フマル酸など）を付加した酸付加塩、さらにはアミンの付加塩、アミノ酸の付加塩などが挙げられる。なお、上記の塩の水和物もここでいう塩に含まれる。
【００１９】
ナリンゲニンカルコンの誘導体のうち、エステルは、アルコール又はカルボン酸とのエステル化反応で生じるエステルであれば特に限定されない。アルコールとしてはメタノール、エタノール、１‐プロパノール、２‐プロパノールなどが挙げられ、またはカルボン酸としてはギ酸、酢酸、乳酸などが挙げられる。
【００２０】
ナリンゲニンカルコンの誘導体のうち、プロドラックとは、生体に投与された後にナリンゲニンカルコンに変化して、アディポネクチン産生増強・促進剤としての作用を発現する化合物を意味する。安定性や吸収性の改善、副作用の低減などを目的としてプロドラック化されたナリンゲニンカルコンも本発明でいう誘導体に含まれる。
【００２１】
本発明のアディポネクチン産生増強・促進剤の有効成分であるナリンゲニンカルコンは、どのような方法で製造されたものであってもよく、ナリンゲニンカルコンを含有する生物から精製する方法、化学合成法、半合成法などが広く採用できる。
【００２２】
ナリンゲニンカルコンは植物、例えば柑橘類、野菜類、具体的にはトマトより抽出することができる。トマトよりナリンゲニンカルコンを精製する方法は特に限定しないが、例えば、トマト果皮あるいは搾汁粕に、１０〜１５倍量の５０〜９０％エタノールを加え、４０〜８０℃で１〜５時間抽出を行う。ナリンゲニンカルコンを含む抽出物が得られるので、これを、酢酸エチル、ｎ‐ヘキサンなどの有機溶剤を溶出液としたシリカゲル、水‐アセトニトリル溶剤を溶出液としたＯＤＳ逆相系樹脂に供することによりナリンゲニンカルコンを精製することができる。なお、本発明のアディポネクチン産生増強・促進剤は精製されたナリンゲニンカルコンのみを含むものに限定されず、ナリンゲニンカルコンを含む粗精製物であっても良い。
【００２３】
また、ナリンゲニンカルコンの誘導体のうち、薬理上許容される塩は、ナリンゲニンカルコンに、アルカリ金属、アルカリ土類金属、アルカリ金属アルコキサイド、無機酸あるいは有機酸を作用させることにより製造できる。さらに、ナリンゲニンカルコンの誘導体のうち、エステルは、酸触媒の存在下で、ナリンゲニンカルコンにアルコール又はカルボン酸を作用させることにより製造できる。
【００２４】
本発明のアディポネクチン産生増強・促進剤は脂肪細胞におけるアディポネクチン産生増強・促進活性を示す。従って、アディポネクチン分泌不全に起因する動脈硬化症、糖尿病及びメタボリックシンドロームの予防、治療に有用である。該アディポネクチン産生増強・促進剤は、アディポネクチン生産増強・促進活性を有する医薬品、飲食品又は化粧品として、そのままであるいはこれらの製品に添加して使用できる。本発明のアディポネクチン産生増強・促進剤は単独で医薬品、飲食品又は化粧品として使用してもよく、また、他のアディポネクチン産生増強・促進剤などと併用しても良い。
【００２５】
＜医薬品＞
本発明のアディポネクチン産生増強・促進剤は、そのまま、もしくはこれを公知の医薬用担体と共に製剤化することにより医薬品として使用できる。本発明のアディポネクチン産生増強・促進剤は、例えば、錠剤、顆粒剤、粉剤、シロップ剤などの経口剤、坐剤、外用剤などの非経口剤として製剤化できる。医薬用担体としては、特に制限はなく、例えば、固形担体（デンプン、乳糖、カルボキシメチルセルロースなど）、液体担体（蒸留水、生理食塩水、ブドウ糖水溶液、エタノール、プロピレングリコールなど）、油性担体（各種の動植物油、白色ワセリン、パラフィンなど）が挙げられる。
【００２６】
上記医薬品は、人及び人以外の動物（ペット、家畜）用として使用できる。上記医薬の服用量は、それを使用する患者などの症状、性別、年齢に応じて適宜設定すればよいが、例えば、成人一人当たり一日に一回又は数回投与され、一回０．１〜１０００ｍｇ程度摂取できるよう服用すればよい。
【００２７】
＜飲食品＞
本発明のアディポネクチン産生増強・促進剤を飲食品に添加することにより、その飲食品に、アディポネクチン産生増強・促進活性を付与することができる。添加されるべき飲食品は特に限定されないが、肉製品、加工野菜、惣菜類、乳製品、菓子、パン、清涼飲料水、果実飲料、酒類などが挙げられる。食品に対する本発明のアディポネクチン産生増強・促進剤の配合率も特に限定されない。
【００２８】
また、本発明のアディポネクチン産生増強・促進剤とその他の食品素材を混合して、顆粒状・粉末状・錠剤状あるいはブロック状などに成形し、食品素材や健康食品などとしてもよい。その他の食品素材とは、例えば、糖類、食用タンパク質、アルコール、ビタミン、増粘多糖類、アミノ酸、カルシウム塩類、色素、香料、保存剤などである。
【００２９】
＜化粧品＞
本発明のアディポネクチン産生増強・促進剤は、化粧品に添加し、その化粧品にアディポネクチン産生増強・促進活性を付与することができる。化粧品とは、特に限定されないが、例えば、化粧水、化粧クリーム、乳液、ファンデーション、口紅、整髪料、ヘアトニック、育毛料、歯磨き、洗口料、シャンプー、リンスなどである。化粧品を調製する場合には、植物油などの油脂類、ラノリンやミツロウなどのロウ類、炭化水素類、脂肪酸、高級アルコール類、種々の界面活性剤、色素、香料、ビタミン類、植物・動物抽出成分、紫外線吸収剤、抗酸化剤、保存剤など、通常の化粧品原料として使用されているものを適宜配合して製造することができる。
【００３０】
以下、実施例に即して本発明を具体的に説明するが、本発明の技術的範囲はこれらの記載によってなんら制限されるものではない。
【実施例１】
【００３１】
＜ナリンゲニンカルコンの精製＞
乾燥トマト果皮２０ｋｇを２４０ｌの水で５０℃、２時間洗浄し、夾雑物を抽出除去した。ついで、抽出滓を回収し、溶剤として７０％エタノール２４０ｌを加えて、７０℃で加熱しながら２時間抽出した。得られた抽出溶液を濾別したのちに、濾液を減圧濃縮した。その濃縮物を、酢酸エチル、ｎ‐ヘキサンといった有機溶剤を溶出液としたシリカゲルによる精製、及び水‐アセトニトリル溶剤を溶出液としたＯＤＳの逆相系樹脂による精製を行い、ナリンゲニンカルコンを得た。
【実施例２】
【００３２】
＜培養脂肪細胞によるアディポネクチン分泌促進効果の評価＞
マウス３Ｔ３−Ｌ１脂肪細胞における各種カルコン類のアディポネクチン産生、分泌促進作用をＥＬＩＳＡ法にて確認した。マウス３Ｔ３−Ｌ１前駆脂肪細胞を１ｗｅｌｌあたり５×１０４ｃｅｌｌｓになるようにあらかじめコラーゲンコートした２４ｗｅｌｌプレートに播種し、１０％牛血清を含むＤＭＥＭで培養した。前駆脂肪細胞がコンフルエントになった後さらに２日間培養し、０．５ｍＭイソブチルメチルキサンチン、１μＭデキサメタゾン、１０μｇ／ｍｌインスリン、１０％牛胎児血清を含むＤＭＥＭにて２日間培養し、脂肪細胞への分化誘導を行った。その後、５μｇ／ｍｌインスリン、１０％牛胎児血清を含むＤＭＥＭに交換し、各種カルコンのＤＭＳＯ溶液をＤＭＳＯ濃度が０．１％になるように添加した。各種カルコンの処理濃度は以下の通りである：Ａ．ｃｏｎｔｒｏｌ群（ＤＭＳＯ ０．１％のみ）；Ｂ．実施例１で得た、ナリンゲニンカルコン処理群；Ｃ．４−メチルカルコン処理群；Ｄ．４’−メチルカルコン処理群；Ｅ．トランス−カルコン処理群；Ｆ．トランス−４，４’−ジフルオロカルコン処理群；Ｇ．２−ハイドロキシカルコン処理群（すべて３０μｇ／ｍｌにて処理）。この培地を２日ごとに新しく交換し、分化誘導開始から７日から１０日後まで培養した後、培養上清を回収した。この培養上清中のアディポネクチン量をアディポネクチンＥＬＩＳＡキット（大塚製薬）にて測定した。結果を図１に示す。ナリンゲニンカルコン以外のカルコン処理群では、処理開始２４時間後に細胞傷害による細胞死が確認されたため（顕微鏡写真を図２に示す。）、アディポネクチンの測定は行っていない。この結果から、各種カルコン類のなかでも、ナリンゲニンカルコンのみが、細胞傷害の副作用を起こすことなく、安全にアディポネクチンの分泌を促進している事がわかる。
【実施例３】
【００３３】
＜培養脂肪細胞によるアディポネクチン遺伝子発現増強の評価＞
実施例２と同様にして培養・分化させたマウス３Ｔ３−Ｌ１脂肪細胞におけるアディポネクチン遺伝子発現増強効果を定量ＲＴ−ＰＣＲ法にて確認した。実施例２にて培養上清を回収したマウス３Ｔ３−Ｌ１脂肪細胞をＰＢＳで２回洗浄した後、１ｗｅｌｌあたり０．４ｍｌのトリゾール（インビトロジェン）にて回収し、ＲＮＡを抽出した。添付の説明書に従いＤＮＡ、タンパク質を除去しトータルＲＮＡをイソプロピルアルコール沈殿にて回収後、７０％エタノールにて洗浄・風乾させた。このＲＮＡをＥｘＳｃｒｉｐｔ ＲＴ ｒｅａｇｅｎｔ Ｋｉｔ（ＴＡＫＡＲＡ）により逆転写反応を行うことでｃＤＮＡとし、これをテンプレートとして定量ＰＣＲ法を行い、アディポネクチン遺伝子発現量を測定した。用いたプライマーは以下の通りである：マウスアディポネクチン；５’−ＧＡＴＧＧＣＡＧＡＧＡＴＧＧＣＡＣＴＣＣ−３’（配列番号１）及び５’−ＣＴＴＧＣＣＡＧＴＧＣＴＧＣＣＧＴＣＡＴ−３’（配列番号２）、対照としてマウスｃｙｃｌｏｐｈｉｌｉｎ；５’−ＣＡＧＡＣＧＣＣＡＣＴＧＴＣＧＣＴＴＴ−３’（配列番号３）及び５’−ＴＧＴＣＴＴＴＧＧＡＡＣＴＴＴＧＴＣＴＧＣＡＡ−３’（配列番号４）。定量ＰＣＲ反応はＭＸ３０００Ｐ（ＳＴＲＡＴＡＧＥＮＥ）及びＳＹＢＲ Ｐｒｅｍｉｘ Ｅｘ Ｔａｑキット（ＴＡＫＡＲＡ）を用い、添付の説明書に従って行った。結果を図３に示す。ナリンゲニンカルコン添加によりアディポネクチン遺伝子発現が増強されていることがわかり、実施例２とあわせてナリンゲニンカルコンがアディポネクチン分泌及び遺伝子発現を増強・促進していることがわかる。
【実施例４】
【００３４】
＜肥満・糖尿病モデル動物における血中アディポネクチン分泌量促進効果の評価＞
肥満、２型糖尿病モデル動物であるＫＫ−Ａｙマウス（日本クレア）を用いて生体内におけるアディポネクチン分泌促進効果について確認した。５週齢雄性マウスを１週間ＭＦ飼料（オリエンタル酵母）にて予備飼育後、血糖、体重に群間で差が生じないように群分けした。１群５匹とし、群分けは以下のように行った：Ａ．ｃｏｎｔｒｏｌ群（ＭＦ飼料）、Ｂ．０．０２％ＮＧＣ群（ナリンゲニンカルコン０．０２％となるようＭＦ飼料に混餌）、Ｃ．０．１％ＮＧＣ群（ナリンゲニンカルコン０．１％となるようＭＦ飼料に混餌）。動物は個体ごとに飼育し、水、餌ともに自由に摂取させた。体重、摂餌量は2日に1度、定刻に記録を行った。試験期間中、各群間で体重および摂餌量に差は認められなかった。４週間飼育後、麻酔下で心臓から採血を行い、得られた血清中のアディポネクチン量をアディポネクチンＥＬＩＳＡキット（大塚製薬）にて測定した。結果を図４に示す。ナリンゲニンカルコンの摂取量依存的に血中アディポネクチン濃度が上昇していることがわかる。
【産業上の利用可能性】
【００３５】
本発明で得られるアディポネクチン産生増強・促進剤は、優れたアディポネクチン産生増強・促進作用を有する。従って、これらを使用することによって、アディポネクチン分泌不全に起因する動脈硬化症又は糖尿病、及びメタボリックシンドロームの予防・改善剤を提供することが可能となる。さらに、これらを含む医薬品、飲食品又は化粧品を提供することが可能となる。
【図面の簡単な説明】
【００３６】
【図１】細胞培養上清のアディポネクチン濃度をＥＬＩＳＡ法により測定したものである。（実施例２）
【図２】サンプル処理開始２４時間後の細胞の様子を顕微鏡で写真撮影したものである。（実施例２）
【図３】細胞のアディポネクチン遺伝子発現を定量ＰＣＲ法により測定したものである。（実施例３）
【図４】肥満・２型糖尿病モデル動物であるＫＫ−Ａｙマウスの血中アディポネクチン料をＥＬＩＳＡ法により測定したものである。（実施例４）
【技術分野】
【０００１】
本発明は、新規なアディポネクチン産生増強・促進剤、及びそれらを含有する医薬品、飲食品に関する。
【背景技術】
【０００２】
近年の生活様式の急速な変化に伴い、内臓脂肪の蓄積を伴う肥満、またはそれを基盤としてなるメタボリックシンドローム（以下、「ＭＳ」と略す）は増加の一途をたどっている。平成１６年の国民健康・栄養調査結果によると、４０〜７４歳におけるＭＳの有病者数・予備軍者数は合わせて１９６０万人と推定されている。
【０００３】
ＭＳは内臓脂肪蓄積を伴う肥満を基盤として高血糖、高血圧、高脂血症などが重複した状態であり、動脈硬化性疾患の発症リスクが極めて高い。動脈硬化性疾患は日本人の死因統計で悪性新生物と双璧をなす位置にあり、その発症リスクであるＭＳの予防・治療対策の確立はきわめて重要である。
【０００４】
ＭＳ発症を惹起する要因は運動不足、過剰な脂質摂取などの生活習慣の乱れや、加齢や喫煙などの外部ストレスなどであり、これらが積み重なることで内臓脂肪の蓄積を伴う肥満を発症する。これが進行すると脂肪細胞から分泌される生体調節因子であるアディポサイトカインのバランスが崩れる。
【０００５】
アディポサイトカインの中でも、とくにＭＳとの関わりが深いものがアディポネクチンであり、冠動脈疾患患者や２型糖尿病患者、肥満患者のアディポネクチン濃度は健常人に比べ有意に低値を示すことが報告されている。また、アディポネクチンノックアウトマウスを用いた解析では、ノックアウトマウスは野生型にくらべ血管傷害による内膜肥厚を起こしやすく、より強いインスリン抵抗性を示すことが報告されている（例えば、非特許文献１，２参照）。これらのことから、アディポネクチンはインスリン抵抗性を伴う２型糖尿病や動脈硬化のリスクを抑制するアディポサイトカインであることがわかってきた。
【０００６】
実際に、粥状動脈硬化を高率に発症するアポＥノックアウトマウスにアディポネクチンを過剰発現させたところ動脈硬化病変の進展が抑制されること（例えば、非特許文献３参照）や、血中アディポネクチン濃度が野生型にくらべ低値を示す肥満・２型糖尿病マウスであるＫＫＡｙおよびｄｂ／ｄｂマウスに生理的濃度のアディポネクチンを補充することによりインスリン抵抗性が改善することが報告されている（例えば、非特許文献４参照）。このように、アディポネクチンは、２型糖尿病のインスリン抵抗性、高血圧、脂質代謝といったＭＳの構成要因への改善作用や抗動脈硬化、抗炎症作用などが見出されていたが、さらに近年の研究で肝繊維化抑制、正常肝細胞増殖促進効果を有することも確認された（例えば、非特許文献５参照）。
【０００７】
これらのことから、アディポネクチンはＭＳによるリスクの低減を考える上で最も重要な因子であるといえ、特異的な発現組織である脂肪細胞におけるアディポネクチン産生・分泌の増強・促進はＭＳの本質的な予防・治療法として有用であるといえる。
【０００８】
これまでに脂肪細胞におけるアディポネクチン産生・分泌の増強・促進効果を有する組成物・化合物として公知のものに２型糖尿病の治療薬として用いられているチアゾリジン誘導体があるが、副作用として肝毒性を示すといった安全上の問題点がある他、医薬品であることから医師のコントロール下かつ２型糖尿病患者に処方が限定されており、比較的軽度のリスク集積状態であるＭＳ有病者・予備軍のＭＳ予防・改善には利用できないという問題点がある。したがって、天然物由来であって高い安全性を有し、かつアディポネクチン産生・分泌を増強・促進する効果のある飲食品の開発が求められている。
【０００９】
これまでに天然物由来のアディポネクチン調節作用を持つ物質として、ホップ由来のキサントフモールが血中のアディポネクチンを増加させることが報告されている（例えば、特許文献１参照）。しかし、これとは異なる構造を有するカルコン類がアディポネクチン産生の場である脂肪細胞において、細胞傷害などの副作用を示すことなく、安全にアディポネクチンの産生を増強・促進することについては明らかでない。
【００１０】
【特許文献１】特開２００６−３０６８００号公報
【非特許文献１】松田ら（Ｍ Ｍａｔｓｕｄａ，ｅｔ ａｌ．）著，「Ｒｏｌｅ ｏｆ ａｄｉｐｏｎｅｃｔｉｎ ｉｎ ｐｒｅｖｅｎｔｉｎｇ ｖａｓｃｕｌａｒ ｓｔｅｎｏｓｉｓ． Ｔｈｅ ｍｉｓｓｉｎｇ ｌｉｎｋ ｏｆ ａｄｉｐｏ‐ｖａｓｃｕｌａｒ ａｘｉｓ．」，Ｔｈｅ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，（米国），米国生化学・分子生物学会（Ｔｈｅ Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｓｏｃｉｅｔｙ ｆｏｒ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ａｎｄ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ），２００２年，２７７（４０），ｐ．３７４８７−３７４９１
【非特許文献２】近藤ら（Ｈ Ｋｏｎｄｏ，ｅｔ ａｌ．）著，「Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ ｏｆ ａｄｉｐｏｎｅｃｔｉｎ ｍｕｔａｔｉｏｎ ｗｉｔｈ ｔｙｐｅ ２ ｄｉａｂｅｔｅｓ： ａ ｃａｎｄｉｄａｔｅ ｇｅｎｅ ｆｏｒ ｔｈｅ ｉｎｓｕｌｉｎ ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ ｓｙｎｄｒｏｍｅ．」，Ｄｉａｂｅｔｅｓ、（米国），米国糖尿病協会（Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｄｉａｂｅｔｅｓ Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ），２００２年，５１（７），ｐ．２３２５−２３２８
【非特許文献３】岡本ら（Ｙ Ｏｋａｍｏｔｏ， ｅｔ ａｌ．）著，「Ａｄｉｐｏｎｅｃｔｉｎ Ｒｅｄｕｃｅｓ Ａｔｈｅｒｏｓｃｌｅｒｏｓｉｓ ｉｎ Ａｐｏｌｉｐｏｐｒｏｔｅｉｎ Ｅ‐Ｄｅｆｉｃｉｅｎｔ Ｍｉｃｅ．」Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ，（米国），米国心臓病協会（Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｈｅａｒｔ Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ），２００２年，１０６（２２），ｐ．２７６７−２７７０
【非特許文献４】山内ら（Ｔ Ｙａｍａｕｃｈｉ， ｅｔ ａｌ．）著，「Ｔｈｅ ｆａｔ‐ｄｅｒｉｖｅｄ ｈｏｒｍｏｎｅ ａｄｉｐｏｎｅｃｔｉｎ ｒｅｖｅｒｓｅｓ ｉｎｓｕｌｉｎ ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｗｉｔｈ ｂｏｔｈ ｌｉｐｏａｔｒｏｐｈｙ ａｎｄ ｏｂｅｓｉｔｙ．」Ｎａｔｕｒｅ Ｍｅｄｅｃｉｎｅ，（英国），ネイチャーパブリッシンググループ（Ｎａｔｕｒｅ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｇｒｏｕｐ），２００１年，７（８），ｐ．９４１−９４６
【非特許文献５】ジンら（X Ｄｉｎｇ， ｅｔ ａｌ．）著，「Ｔｈｅ ｒｏｌｅｓ ｏｆ ｌｅｐｔｉｎ ａｎｄ ａｄｉｐｏｎｅｃｔｉｎ： ａ ｎｏｖｅｌ ｐａｒａｄｉｇｍ ｉｎ ａｄｉｐｏｃｙｔｏｋｉｎｅ ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ ｏｆ ｌｉｖｅｒ ｆｉｂｒｏｓｉｓ ａｎｄ ｓｔｅｌｌａｔｅ ｃｅｌｌ ｂｉｏｌｏｇｙ．」Ｔｈｅ Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｐａｔｈｏｌｏｇｙ，（米国），米国病理学学会（Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｓｏｃｉｅｔｙ ｆｏｒ Ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｖｅ Ｐａｔｈｏｌｏｇｙ），２００５年，１６６，ｐ．１６５５−１６６９
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００１１】
本発明が解決しようとする課題は、天然物由来で安全性が高い、従来とは異なる構造を有するアディポネクチン産生増強・促進剤、及びそれらを含有する医薬品、飲食品を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【００１２】
本発明者らは上記課題解決のため鋭意検討を重ねた結果、ナリンゲニンカルコン又はその誘導体にアディポネクチンの産生を増強・促進する作用があることを見出し、これらの知見に基づき本発明を完成するに至った。
【００１３】
すなわち本発明は、
１）ナリンゲニンカルコン又はその誘導体を有効成分とする、アディポネクチン産生増強・促進剤。
２）ナリンゲニンカルコン又はその誘導体がトマト抽出物に含まれるものである、上記１）記載のアディポネクチン産生増強・促進剤。
３）上記１）または２）に記載の剤を含有する、医薬品又は飲食品。
を提供するものである。
【発明の効果】
【００１４】
本発明のナリンゲニンカルコン又はその誘導体を有効成分とするアディポネクチン産生増強・促進剤は安全性が高く、脂肪細胞におけるアディポネクチンの産生を増強・促進する。その結果、アディポネクチン分泌不全に起因する動脈硬化症又は糖尿病、あるいはメタボリックシンドロームの予防又は改善が可能となる。なお、「アディポネクチン分泌不全に起因する」とは、例えばアディポネクチンの発現・産生の異常など何らかの原因で、アディポネクチンの血中への分泌が正常でなくなることを意味する。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１５】
以下、本発明を詳細に説明する。
本発明のアディポネクチン産生増強・促進剤は、ナリンゲニンカルコン又はその誘導体を有効成分とする。ナリンゲニンカルコン（２’４’６’４-Ｔｅｔｒａｈｙｄｒｏｘｙｃｈａｌｃｏｎｅ）は、下記構造式（II）で示される物質である。
構造式（II）
【００１６】
【化１】
【００１７】
ナリンゲニンカルコンは、アディポネクチン産生増強・促進作用を有する限り、その構造の一部が改変あるいは修飾されている誘導体であっても良い。ナリンゲニンカルコンの誘導体としては、例えば、薬理上許容される塩、エステルあるいはプロドラックなどが挙げられる。
【００１８】
ナリンゲニンカルコンの誘導体のうち、薬理上許容される塩としては、特に限定されないが、例えば、アルカリ金属（ナトリウム、カリウムなど）、アルカリ土類金属（マグネシウム、カルシウムなど）、これらの水酸化物又は炭酸塩、アルカリ金属アルコキサイド（ナトリウムメトキサイド、カリウムｔ−プトキサイドなど）との塩が挙げられる。また、塩としては、無機酸（塩酸、硫酸、リン酸など）や有機酸（マレイン酸、クエン酸、フマル酸など）を付加した酸付加塩、さらにはアミンの付加塩、アミノ酸の付加塩などが挙げられる。なお、上記の塩の水和物もここでいう塩に含まれる。
【００１９】
ナリンゲニンカルコンの誘導体のうち、エステルは、アルコール又はカルボン酸とのエステル化反応で生じるエステルであれば特に限定されない。アルコールとしてはメタノール、エタノール、１‐プロパノール、２‐プロパノールなどが挙げられ、またはカルボン酸としてはギ酸、酢酸、乳酸などが挙げられる。
【００２０】
ナリンゲニンカルコンの誘導体のうち、プロドラックとは、生体に投与された後にナリンゲニンカルコンに変化して、アディポネクチン産生増強・促進剤としての作用を発現する化合物を意味する。安定性や吸収性の改善、副作用の低減などを目的としてプロドラック化されたナリンゲニンカルコンも本発明でいう誘導体に含まれる。
【００２１】
本発明のアディポネクチン産生増強・促進剤の有効成分であるナリンゲニンカルコンは、どのような方法で製造されたものであってもよく、ナリンゲニンカルコンを含有する生物から精製する方法、化学合成法、半合成法などが広く採用できる。
【００２２】
ナリンゲニンカルコンは植物、例えば柑橘類、野菜類、具体的にはトマトより抽出することができる。トマトよりナリンゲニンカルコンを精製する方法は特に限定しないが、例えば、トマト果皮あるいは搾汁粕に、１０〜１５倍量の５０〜９０％エタノールを加え、４０〜８０℃で１〜５時間抽出を行う。ナリンゲニンカルコンを含む抽出物が得られるので、これを、酢酸エチル、ｎ‐ヘキサンなどの有機溶剤を溶出液としたシリカゲル、水‐アセトニトリル溶剤を溶出液としたＯＤＳ逆相系樹脂に供することによりナリンゲニンカルコンを精製することができる。なお、本発明のアディポネクチン産生増強・促進剤は精製されたナリンゲニンカルコンのみを含むものに限定されず、ナリンゲニンカルコンを含む粗精製物であっても良い。
【００２３】
また、ナリンゲニンカルコンの誘導体のうち、薬理上許容される塩は、ナリンゲニンカルコンに、アルカリ金属、アルカリ土類金属、アルカリ金属アルコキサイド、無機酸あるいは有機酸を作用させることにより製造できる。さらに、ナリンゲニンカルコンの誘導体のうち、エステルは、酸触媒の存在下で、ナリンゲニンカルコンにアルコール又はカルボン酸を作用させることにより製造できる。
【００２４】
本発明のアディポネクチン産生増強・促進剤は脂肪細胞におけるアディポネクチン産生増強・促進活性を示す。従って、アディポネクチン分泌不全に起因する動脈硬化症、糖尿病及びメタボリックシンドロームの予防、治療に有用である。該アディポネクチン産生増強・促進剤は、アディポネクチン生産増強・促進活性を有する医薬品、飲食品又は化粧品として、そのままであるいはこれらの製品に添加して使用できる。本発明のアディポネクチン産生増強・促進剤は単独で医薬品、飲食品又は化粧品として使用してもよく、また、他のアディポネクチン産生増強・促進剤などと併用しても良い。
【００２５】
＜医薬品＞
本発明のアディポネクチン産生増強・促進剤は、そのまま、もしくはこれを公知の医薬用担体と共に製剤化することにより医薬品として使用できる。本発明のアディポネクチン産生増強・促進剤は、例えば、錠剤、顆粒剤、粉剤、シロップ剤などの経口剤、坐剤、外用剤などの非経口剤として製剤化できる。医薬用担体としては、特に制限はなく、例えば、固形担体（デンプン、乳糖、カルボキシメチルセルロースなど）、液体担体（蒸留水、生理食塩水、ブドウ糖水溶液、エタノール、プロピレングリコールなど）、油性担体（各種の動植物油、白色ワセリン、パラフィンなど）が挙げられる。
【００２６】
上記医薬品は、人及び人以外の動物（ペット、家畜）用として使用できる。上記医薬の服用量は、それを使用する患者などの症状、性別、年齢に応じて適宜設定すればよいが、例えば、成人一人当たり一日に一回又は数回投与され、一回０．１〜１０００ｍｇ程度摂取できるよう服用すればよい。
【００２７】
＜飲食品＞
本発明のアディポネクチン産生増強・促進剤を飲食品に添加することにより、その飲食品に、アディポネクチン産生増強・促進活性を付与することができる。添加されるべき飲食品は特に限定されないが、肉製品、加工野菜、惣菜類、乳製品、菓子、パン、清涼飲料水、果実飲料、酒類などが挙げられる。食品に対する本発明のアディポネクチン産生増強・促進剤の配合率も特に限定されない。
【００２８】
また、本発明のアディポネクチン産生増強・促進剤とその他の食品素材を混合して、顆粒状・粉末状・錠剤状あるいはブロック状などに成形し、食品素材や健康食品などとしてもよい。その他の食品素材とは、例えば、糖類、食用タンパク質、アルコール、ビタミン、増粘多糖類、アミノ酸、カルシウム塩類、色素、香料、保存剤などである。
【００２９】
＜化粧品＞
本発明のアディポネクチン産生増強・促進剤は、化粧品に添加し、その化粧品にアディポネクチン産生増強・促進活性を付与することができる。化粧品とは、特に限定されないが、例えば、化粧水、化粧クリーム、乳液、ファンデーション、口紅、整髪料、ヘアトニック、育毛料、歯磨き、洗口料、シャンプー、リンスなどである。化粧品を調製する場合には、植物油などの油脂類、ラノリンやミツロウなどのロウ類、炭化水素類、脂肪酸、高級アルコール類、種々の界面活性剤、色素、香料、ビタミン類、植物・動物抽出成分、紫外線吸収剤、抗酸化剤、保存剤など、通常の化粧品原料として使用されているものを適宜配合して製造することができる。
【００３０】
以下、実施例に即して本発明を具体的に説明するが、本発明の技術的範囲はこれらの記載によってなんら制限されるものではない。
【実施例１】
【００３１】
＜ナリンゲニンカルコンの精製＞
乾燥トマト果皮２０ｋｇを２４０ｌの水で５０℃、２時間洗浄し、夾雑物を抽出除去した。ついで、抽出滓を回収し、溶剤として７０％エタノール２４０ｌを加えて、７０℃で加熱しながら２時間抽出した。得られた抽出溶液を濾別したのちに、濾液を減圧濃縮した。その濃縮物を、酢酸エチル、ｎ‐ヘキサンといった有機溶剤を溶出液としたシリカゲルによる精製、及び水‐アセトニトリル溶剤を溶出液としたＯＤＳの逆相系樹脂による精製を行い、ナリンゲニンカルコンを得た。
【実施例２】
【００３２】
＜培養脂肪細胞によるアディポネクチン分泌促進効果の評価＞
マウス３Ｔ３−Ｌ１脂肪細胞における各種カルコン類のアディポネクチン産生、分泌促進作用をＥＬＩＳＡ法にて確認した。マウス３Ｔ３−Ｌ１前駆脂肪細胞を１ｗｅｌｌあたり５×１０４ｃｅｌｌｓになるようにあらかじめコラーゲンコートした２４ｗｅｌｌプレートに播種し、１０％牛血清を含むＤＭＥＭで培養した。前駆脂肪細胞がコンフルエントになった後さらに２日間培養し、０．５ｍＭイソブチルメチルキサンチン、１μＭデキサメタゾン、１０μｇ／ｍｌインスリン、１０％牛胎児血清を含むＤＭＥＭにて２日間培養し、脂肪細胞への分化誘導を行った。その後、５μｇ／ｍｌインスリン、１０％牛胎児血清を含むＤＭＥＭに交換し、各種カルコンのＤＭＳＯ溶液をＤＭＳＯ濃度が０．１％になるように添加した。各種カルコンの処理濃度は以下の通りである：Ａ．ｃｏｎｔｒｏｌ群（ＤＭＳＯ ０．１％のみ）；Ｂ．実施例１で得た、ナリンゲニンカルコン処理群；Ｃ．４−メチルカルコン処理群；Ｄ．４’−メチルカルコン処理群；Ｅ．トランス−カルコン処理群；Ｆ．トランス−４，４’−ジフルオロカルコン処理群；Ｇ．２−ハイドロキシカルコン処理群（すべて３０μｇ／ｍｌにて処理）。この培地を２日ごとに新しく交換し、分化誘導開始から７日から１０日後まで培養した後、培養上清を回収した。この培養上清中のアディポネクチン量をアディポネクチンＥＬＩＳＡキット（大塚製薬）にて測定した。結果を図１に示す。ナリンゲニンカルコン以外のカルコン処理群では、処理開始２４時間後に細胞傷害による細胞死が確認されたため（顕微鏡写真を図２に示す。）、アディポネクチンの測定は行っていない。この結果から、各種カルコン類のなかでも、ナリンゲニンカルコンのみが、細胞傷害の副作用を起こすことなく、安全にアディポネクチンの分泌を促進している事がわかる。
【実施例３】
【００３３】
＜培養脂肪細胞によるアディポネクチン遺伝子発現増強の評価＞
実施例２と同様にして培養・分化させたマウス３Ｔ３−Ｌ１脂肪細胞におけるアディポネクチン遺伝子発現増強効果を定量ＲＴ−ＰＣＲ法にて確認した。実施例２にて培養上清を回収したマウス３Ｔ３−Ｌ１脂肪細胞をＰＢＳで２回洗浄した後、１ｗｅｌｌあたり０．４ｍｌのトリゾール（インビトロジェン）にて回収し、ＲＮＡを抽出した。添付の説明書に従いＤＮＡ、タンパク質を除去しトータルＲＮＡをイソプロピルアルコール沈殿にて回収後、７０％エタノールにて洗浄・風乾させた。このＲＮＡをＥｘＳｃｒｉｐｔ ＲＴ ｒｅａｇｅｎｔ Ｋｉｔ（ＴＡＫＡＲＡ）により逆転写反応を行うことでｃＤＮＡとし、これをテンプレートとして定量ＰＣＲ法を行い、アディポネクチン遺伝子発現量を測定した。用いたプライマーは以下の通りである：マウスアディポネクチン；５’−ＧＡＴＧＧＣＡＧＡＧＡＴＧＧＣＡＣＴＣＣ−３’（配列番号１）及び５’−ＣＴＴＧＣＣＡＧＴＧＣＴＧＣＣＧＴＣＡＴ−３’（配列番号２）、対照としてマウスｃｙｃｌｏｐｈｉｌｉｎ；５’−ＣＡＧＡＣＧＣＣＡＣＴＧＴＣＧＣＴＴＴ−３’（配列番号３）及び５’−ＴＧＴＣＴＴＴＧＧＡＡＣＴＴＴＧＴＣＴＧＣＡＡ−３’（配列番号４）。定量ＰＣＲ反応はＭＸ３０００Ｐ（ＳＴＲＡＴＡＧＥＮＥ）及びＳＹＢＲ Ｐｒｅｍｉｘ Ｅｘ Ｔａｑキット（ＴＡＫＡＲＡ）を用い、添付の説明書に従って行った。結果を図３に示す。ナリンゲニンカルコン添加によりアディポネクチン遺伝子発現が増強されていることがわかり、実施例２とあわせてナリンゲニンカルコンがアディポネクチン分泌及び遺伝子発現を増強・促進していることがわかる。
【実施例４】
【００３４】
＜肥満・糖尿病モデル動物における血中アディポネクチン分泌量促進効果の評価＞
肥満、２型糖尿病モデル動物であるＫＫ−Ａｙマウス（日本クレア）を用いて生体内におけるアディポネクチン分泌促進効果について確認した。５週齢雄性マウスを１週間ＭＦ飼料（オリエンタル酵母）にて予備飼育後、血糖、体重に群間で差が生じないように群分けした。１群５匹とし、群分けは以下のように行った：Ａ．ｃｏｎｔｒｏｌ群（ＭＦ飼料）、Ｂ．０．０２％ＮＧＣ群（ナリンゲニンカルコン０．０２％となるようＭＦ飼料に混餌）、Ｃ．０．１％ＮＧＣ群（ナリンゲニンカルコン０．１％となるようＭＦ飼料に混餌）。動物は個体ごとに飼育し、水、餌ともに自由に摂取させた。体重、摂餌量は2日に1度、定刻に記録を行った。試験期間中、各群間で体重および摂餌量に差は認められなかった。４週間飼育後、麻酔下で心臓から採血を行い、得られた血清中のアディポネクチン量をアディポネクチンＥＬＩＳＡキット（大塚製薬）にて測定した。結果を図４に示す。ナリンゲニンカルコンの摂取量依存的に血中アディポネクチン濃度が上昇していることがわかる。
【産業上の利用可能性】
【００３５】
本発明で得られるアディポネクチン産生増強・促進剤は、優れたアディポネクチン産生増強・促進作用を有する。従って、これらを使用することによって、アディポネクチン分泌不全に起因する動脈硬化症又は糖尿病、及びメタボリックシンドロームの予防・改善剤を提供することが可能となる。さらに、これらを含む医薬品、飲食品又は化粧品を提供することが可能となる。
【図面の簡単な説明】
【００３６】
【図１】細胞培養上清のアディポネクチン濃度をＥＬＩＳＡ法により測定したものである。（実施例２）
【図２】サンプル処理開始２４時間後の細胞の様子を顕微鏡で写真撮影したものである。（実施例２）
【図３】細胞のアディポネクチン遺伝子発現を定量ＰＣＲ法により測定したものである。（実施例３）
【図４】肥満・２型糖尿病モデル動物であるＫＫ−Ａｙマウスの血中アディポネクチン料をＥＬＩＳＡ法により測定したものである。（実施例４）
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ナリンゲニンカルコン又はその誘導体を有効成分とする、アディポネクチン産生増強・促進剤。
【請求項２】
ナリンゲニンカルコン又はその誘導体がトマト抽出物に含まれるものである、請求項１記載のアディポネクチン産生増強・促進剤。
【請求項３】
請求項１または２に記載の剤を含有する、医薬品又は飲食品。
【請求項１】
ナリンゲニンカルコン又はその誘導体を有効成分とする、アディポネクチン産生増強・促進剤。
【請求項２】
ナリンゲニンカルコン又はその誘導体がトマト抽出物に含まれるものである、請求項１記載のアディポネクチン産生増強・促進剤。
【請求項３】
請求項１または２に記載の剤を含有する、医薬品又は飲食品。
【図１】
【図２】
【図３】
【図４】
【図２】
【図３】
【図４】
【公開番号】特開２００８−１１５１６３（Ｐ２００８−１１５１６３Ａ）
【公開日】平成２０年５月２２日（２００８．５．２２）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００７−２６０１９４（Ｐ２００７−２６０１９４）
【出願日】平成１９年１０月３日（２００７．１０．３）
【出願人】（０００００４４７７）キッコーマン株式会社 (212)
【Ｆターム（参考）】
【公開日】平成２０年５月２２日（２００８．５．２２）
【国際特許分類】
【出願日】平成１９年１０月３日（２００７．１０．３）
【出願人】（０００００４４７７）キッコーマン株式会社 (212)
【Ｆターム（参考）】
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