アルトカルピン誘導体ならびにアルトカルピン類似化合物、およびこれを含有する育毛・養毛用組成物、美白化粧料用組成物、ならびに抗癌剤、消炎鎮痛剤、解熱剤または抗アレルギー剤としての医薬および色素性皮膚病変治療用医薬
【課題】テストステロン−５α−リダクターゼ活性阻害能、癌細胞増殖阻害並びに抑制作用、シクロオキシゲナーゼ阻害能および５−リポキシゲナーゼ阻害能、正常メラノサイト増殖抑制能、及び正常ファイブロブラスト増殖抑制能を有する物質を提供する。
【解決手段】アルトカルピン分子内の一部分が変化して生じた化合物、や、アルトカルピンの水素付加体、脱メチル体、メトキシ付加体、メチル化体、アセチル化体、ジヒドロキシル化体、ジメチルエーテル付加体、エポキシ化体、ヒドロキシル化体などのアルトカルピン類似化合物は、優れたテストステロン−５α−リダクターゼ活性阻害能、癌細胞増殖阻害並びに抑制作用、シクロオキシゲナーゼ阻害能および５−リポキシゲナーゼ阻害能、正常メラノサイト増殖抑制能、及び正常ファイブロブラスト増殖抑制能を有する。
【解決手段】アルトカルピン分子内の一部分が変化して生じた化合物、や、アルトカルピンの水素付加体、脱メチル体、メトキシ付加体、メチル化体、アセチル化体、ジヒドロキシル化体、ジメチルエーテル付加体、エポキシ化体、ヒドロキシル化体などのアルトカルピン類似化合物は、優れたテストステロン−５α−リダクターゼ活性阻害能、癌細胞増殖阻害並びに抑制作用、シクロオキシゲナーゼ阻害能および５−リポキシゲナーゼ阻害能、正常メラノサイト増殖抑制能、及び正常ファイブロブラスト増殖抑制能を有する。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、アルトカルピン誘導体ならびにアルトカルピン類似化合物、およびこれを含有する育毛・養毛用組成物、美白化粧料用組成物、ならびに抗癌剤、消炎鎮痛剤、解熱剤または抗アレルギー剤としての医薬および色素性皮膚病変治療用医薬に関する。
【背景技術】
【０００２】
クワ科植物であるアルトカルパス属植物から公知の方法で抽出精製することができるアルトカルピンは、テストステロン−５α−リダクターゼ活性阻害能を有し、育毛・養毛作用、皮脂分泌抑制作用、美白作用に効果があることや（特許文献１、参照。）、癌細胞の増殖阻害並びに抑制作用があること（特許文献２、参照。）が知られている。
【０００３】
また、アルトカルピンにはさらに、シクロオキシゲナーゼ阻害活性および５−リポキシゲナーゼ阻害活性を示し、消炎鎮痛剤、解熱剤または抗アレルギー剤として有用であることも知られている（特許文献３、参照）。
【０００４】
【特許文献１】国際公開第００／４５７８２号パンフレット
【特許文献２】特開２００３−１９２５９０号公報
【特許文献３】特開２００４−２３１５８７号公報
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
本発明もまた、テストステロン−５α−リダクターゼ活性阻害能、癌細胞増殖阻害並びに抑制作用、シクロオキシゲナーゼ阻害能、５−リポキシゲナーゼ阻害能、正常メラノサイト増殖抑制能、及び正常ファイブロブラスト増殖抑制能を有する物質を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
本発明者は、鋭意研究の結果、新規化合物であるアルトカルピン誘導体ならびにアルトカルピンを合成する際に合成されるアルトカルピン類似化合物においても、優れたテストステロン−５α−リダクターゼ活性阻害能、癌細胞増殖阻害並びに抑制作用、シクロオキシゲナーゼ阻害能、５−リポキシゲナーゼ阻害能、ならびに正常メラノサイト増殖抑制能、及び正常ファイブロブラスト増殖抑制能を有することを見出し、本発明に至った。
【０００７】
すなわち、本発明は、テストステロン−５α−リダクターゼ活性阻害能、癌細胞増殖阻害並びに抑制作用、シクロオキシゲナーゼ阻害能、５−リポキシゲナーゼ阻害能、正常メラノサイト増殖抑制能、及び正常ファイブロブラスト増殖抑制能を有するアルトカルピン誘導体である。
【０００８】
また、本発明は、テストステロン−５α−リダクターゼ活性阻害能、細胞増殖阻害並びに抑制作用、シクロオキシゲナーゼ阻害能、５−リポキシゲナーゼ阻害能、正常メラノサイト増殖抑制、及び正常ファイブロブラスト増殖抑制能を有するアルトカルピン類似化合物である。
【０００９】
ここで、本発明において、アルトカルピン誘導体とは、アルトカルピン分子内の一部分が変化して生じた化合物、すなわち、アルトカルピンにプレニル基や３−メチル−１−ブテニル基などの側鎖が付加された化合物や、糖が配合された配糖体のことを示す。また、アルトカルピン類似化合物とは、アルトカルピンやアルトカルピン誘導体を合成する際に合成される化合物であり、具体的には、アルトカルピンの水素付加体、脱メチル体、メトキシ付加体、メチル化体、アセチル化体、ジヒドロキシル化体、ジメチルエーテル付加体、エポキシ化体、ヒドロキシル化体などが挙げられる。
【００１０】
また、本発明は、前記アルトカルピン誘導体、またはアルトカルピン類似化合物のどちらか一方を少なくとも含有する育毛・養毛用組成物、美白化粧料用組成物、抗癌剤、消炎鎮痛剤、解熱剤、抗アレルギー剤としての医薬および色素性皮膚病変治療用医薬である。
【発明の効果】
【００１１】
本発明によれば、テストステロン−５α−リダクターゼ活性阻害能、癌細胞増殖阻害並びに抑制作用、シクロオキシゲナーゼ阻害能、５−リポキシゲナーゼ阻害能、正常メラサノイト増殖抑制能、及び正常ファイブロブラスト増殖抑制能を有する育毛・養毛用組成物、美白化粧料用組成物ならびに抗癌剤、消炎鎮痛剤、解熱剤または抗アレルギー剤としての医薬および色素性皮膚病変治療用医薬を提供することができる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１２】
以下、本発明をさらに詳細に説明する。
アルトカルピン誘導体としては、下記構造式で表される化合物ＡのＲ１、Ｒ２、Ｒ３の一つ以上がプレニル基または/及び３−メチル−１−ブテニル基である化合物（下記構造式１〜６）、３個の水酸基（ＯＨ基）のうちの一つ以上にグルコース等の糖が導入された化合物（下記構造式７〜９）、およびＲ１、Ｒ２、Ｒ３の一つ以上がプレニル基または/及び３−メチル−１−ブテニル基でありかつ３個の水酸基（ＯＨ基）のうちの一つ以上にグルコース等の糖が導入された化合物（下記構造式１０，１１）が挙げられる。
【００１３】
【化１】
Ｍｅ：メチル基
【００１４】
【化２】
【００１５】
【化３】
【００１６】
【化４】
【００１７】
【化５】
【００１８】
【化６】
【００１９】
【化７】
【００２０】
【化８】
Ｇｌｕ：グルコース残基
【００２１】
【化９】
【００２２】
【化１０】
【００２３】
ここで、構造式７〜９に付加される糖は上記グルコースに限定するものではなく、たとえば、セドヘプツロース、フルクトース、ガラクトース、リブロース、タロース、アロース、リボース、アピオース等の単糖類や、マルトース、ラクトース、スクロース等の二糖類や、フルクトオリゴ糖、ガラクトオリゴ糖などのオリゴ糖、デンプンなどの多糖類を付加することができる。
【００２４】
【化１１】
【００２５】
【化１２】
【００２６】
また、アルトカルピン類似化合物としては、下記構造式１２〜２４で表される化合物が挙げられる。
【００２７】
【化１３】
【００２８】
【化１４】
【００２９】
【化１５】
【００３０】
【化１６】
【００３１】
【化１７】
【００３２】
【化１８】
【００３３】
【化１９】
【００３４】
【化２０】
【００３５】
【化２１】
【００３６】
【化２２】
【００３７】
【化２３】
【００３８】
【化２４】
【００３９】
【化２５】
【００４０】
本発明の実施の形態におけるアルトカルピン誘導体またはアルトカルピン類似化合物は、後述する実施例で明らかなようにテストステロン−５α−リダクターゼ（以下、「ＴＳＲ」と称す。）活性阻害能を有していることから、育毛・養毛作用、美白作用、皮脂分泌抑制作用等が期待できるので、例えば、ヘアーローション、ヘアーパック、ヘアートニック、シャンプー、リンス、コンディショナー、スカルプトリートメント等の育毛・養毛剤、化粧水、乳液、パック剤、ハップ剤、プラスター剤、ファンデーション、浴用剤、ボディ洗浄剤、ローション、洗顔洗浄剤、石けん、栄養クリーム、スキンオイル等の美白剤など、各種化粧料や医薬品に配合することにより所望の効果を発揮させることができる。化粧料とする際のアルトカルピン誘導体またはアルトカルピン類似化合物の配合割合や形態は、上述した化粧料の種類等により適宜選択することができる。
【００４１】
また、上記育毛・養毛剤には、従来公知の育毛・養毛促進物質や抗菌剤、清涼剤、保湿剤をさらに含有させてもよい。育毛・養毛促進物質としては、たとえば、ビタミンＢ6、ビタミンＥおよびその誘導体、グリチルリチン酸およびその誘導体、ニコチン酸ベンジル等のニコチン酸エステル類、サイクロスポリン類、塩化カルプロニウム、セファランチン、オキセンドロン、ジアゾキシド、ミノキシジル、エチニルエストラジオール、エストラジオール又はこれらを含有する動植物抽出物等が挙げられる。
【００４２】
また、抗菌剤としては、たとえば、ヒノキチオール、ピロクトオラミン、ピロチオン亜鉛、ヘキサクロロフェン、フェノール、塩化ベンザルコニウム、塩化セチルピリジニウム、ウンデシレン酸、トリクロロカルバニリド等が挙げられる。
【００４３】
清涼剤としては、たとえば、メントール等が挙げられる。また、保湿剤としては、たとえば、グリセリン、プロピレングリコール、１，３−ブチレングリコール、ソルビトール、マンニトール、ポリエチレングリコール、ジプロピレングリコール等の多価アルコール類、アミン酸、乳酸ナトリウム、ピロリドンカルボン酸ナトリウム等のＮＭＦ成分、ヒアルロン酸、コラーゲン、エラスチン、コンドロイチン硫酸、フィブロネクチン、セラミド類、ヘパリン類似様物質、キトサン等の水溶性高分子物質等が挙げられる。
【００４４】
また、上記育毛・養毛剤に各種添加物を配合することもできる。添加物としては、油脂類、界面活性剤、アルコール類、脂肪酸類、防腐剤、酸化防止剤、色素、香料、紫外線吸収剤、キレート剤、ｐＨ調整剤、緩衝剤、精製水等が挙げられ、その配合量は適宜選択することができる。
【００４５】
また、本発明の実施の形態におけるアルトカルピン誘導体またはアルトカルピン類似化合物は、後述する実施例で明らかなように癌細胞増殖阻害並びに抑制作用を有することから、薬理学的、製剤学的に許容される製造助剤等を用いて常法に従った製造方法により抗癌剤とすることができる。
【００４６】
本発明の実施の形態における抗癌剤の投与方法は、たとえば、癌細胞や粘膜への注射、外用剤としての塗布等が好ましく挙げられる。注射剤とするには、たとえば、注射用蒸留水、生理食塩水、プロピレングリコール等の溶解剤や溶解補助剤、ｐＨ調整剤、安定剤等の製剤用成分を用いて製造することができる。また、外用剤とするには、たとえば、アルコール、脂肪酸エステル等の溶解剤や溶解助剤、カルボキシビニルポリマー、多糖類等の粘着剤、乳化剤、安定剤等の製剤用成分を用いて製造することができる。
【００４７】
また、本発明の実施の形態における抗癌剤の投与量は、投与方法、癌細胞の種類や大きさ、患者の年齢、性別、態様等に応じて適宜選択することができる。
【００４８】
また、本発明の実施の形態におけるアルトカルピン誘導体またはアルトカルピン類似化合物は、後述する実施例で明らかなようにシクロオキシゲナーゼ阻害能および５−リポキシゲナーゼ阻害能を有することから、薬理学的、製剤学的に許容される製造助剤等を用いて常法に従った製造方法により、消炎鎮痛剤、解熱剤、抗アレルギー剤とすることができる。
【００４９】
上記消炎鎮痛剤、解熱剤、抗アレルギー剤の薬剤は、たとえば、錠剤やカプセル剤等による内服、坐薬、皮下への注射、外用剤としての塗布等によって投与することができる。
【００５０】
錠剤とするには、たとえば、乳糖、白糖、リン酸カルシウム等の賦形剤、ゼラチン、ポリビニルピロリドン、アラビアゴム、カルボキシメチルセルロース等の結合剤、デンプン、カンテン、ゼラチン粉末などの崩壊剤、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸カルシウム等の滑択剤等の製剤用成分を用いて製造することができる。また、カプセル剤とするには、たとえば、ゼラチン、精製水、単シロップ、アラビアゴム等の製剤用成分を用いて製造することができる。また、坐薬とするには、たとえば、カカオ脂、ラウリン脂、グリセロゼラチン、ポリエチレングリコール等の製剤用成分を用いて製造することができる。また、注射剤とするには、たとえば、注射用蒸留水、生理食塩水、プロピレングリコール等の溶解剤や溶解補助剤、ｐＨ調整剤、安定剤等の製剤用成分を用いて製造することができる。また、外用剤とするには、たとえば、アルコール、脂肪酸エステル等の溶解剤や溶解助剤、カルボキシビニルポリマー、多糖類等の粘着剤、乳化剤、安定剤等の製剤用成分を用いて製造することができる。
【００５１】
また、本発明の実施の形態における消炎鎮痛剤、解熱剤、抗アレルギー剤の投与量は、投与方法、治療対象、患者の年齢、性別、態様等に応じて適宜選択することができる。
【００５２】
また、本発明の実施の形態におけるアルトカルピン誘導体またはアルトカルピン類似化合物は、後述する実施例で明らかなように正常メラノサイト増殖抑制能、及び正常ファイブロブラスト増殖抑制能を有していることから、レックリングハウゼン病カフェオレ斑や小レックリングハウゼン斑、神経線維腫に加え、基本的には表皮の加齢変化による過形成により生じるが臨床的には皮膚の色素性病変とみられる脂漏性角化症や老人性色素斑や、扁平母斑、色素性母斑、太田母斑、青色母斑、異所性蒙古斑などの母斑性色素異常症、炎症後色素沈着症等の色素性皮膚病変治療用の薬剤とすることができる。
【００５３】
上記色素性皮膚病変治療用の薬剤は、たとえば、経口剤による内服、坐薬、皮下への注射、外用剤としての塗布等によって投与することができる。これらの色素性皮膚病変治療用の薬剤は、薬理学的、製剤学的に許容される製造助剤等を用いて常法に従って製造することができる。
【００５４】
ここで、外用剤としては、軟膏剤、クリーム剤、ローション剤、テープ剤等の各種形態が挙げられる。なお、前記外用剤とするには、例えば、アルコール、脂肪酸エステル等の溶解剤や溶解助剤、カルボキシビニルポリマー、多糖類等の粘着剤、乳化剤、安定剤等の製剤用成分を用いて製造することができる。経口剤としては、たとえば錠剤やカプセル剤等の各種形態が挙げられる。錠剤とするには、たとえば、乳糖、白糖、リン酸カルシウム等の賦形剤、ゼラチン、ポリビニルピロリドン、アラビアゴム、カルボキシメチルセルロース等の結合剤、デンプン、カンテン、ゼラチン粉末などの崩壊剤、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸カルシウム等の滑択剤等の製剤用成分を用いて製造することができる。また、カプセル剤とするには、たとえば、ゼラチン、精製水、単シロップ、アラビアゴム等の製剤用成分を用いて製造することができる。また、注射剤とするには、たとえば、注射用蒸留水、生理食塩水、プロピレングリコール等の溶解剤や溶解補助剤、ｐＨ調整剤、安定剤等の製剤用成分を用いて製造することができる。また、坐剤とするには、たとえば、カカオ脂、ラウリン脂、グリセロゼラチン、ポリエチレングリコール等の製剤用成分を用いて製造することができる。
【００５５】
また、本発明の実施の形態における色素性皮膚病変治療剤の投与量は、投与方法、病変部分の大きさ、患者の年齢、性別、態様等に応じて適宜選択することができる。
【実施例】
【００５６】
（実施例１：ＴＳＲ活性阻害能の測定）
構造式１〜２４の化合物について、雌ラットの肝臓由来のミクロソーム（ＴＳＲ）を用いた酵素活性を測定し、各化合物のＴＳＲ活性阻害能を測定した。酵素活性は、１００ｍｍｏｌ／Ｌ濃度のリン酸ナトリウム系バッファ（ｐＨ６．５）中に、酵素反応開始時の濃度が１５０μｍｏｌ／Ｌテストステロン、１ｍｍｏｌ／Ｌジチオトレイトールになるようそれぞれを添加し、３７℃でプレインキュベートした。１０分後、酵素反応開始時の濃度が１６７μｍｏｌ／ＬになるようにＮＡＤＰＨを添加し、さらに、添加タンパク質が０．２５ｍｇになるようにミクロソーム溶液を添加して反応を開始した。３７℃で１０分間反応させた後、３ｍｏｌ／ＬのＮａＯＨ溶液を反応系の１／３０容量添加し、反応を終了させた。この反応系より、ジヒドロテストステロンを抽出し、マススペクトル（ＧＣ−ｍａｓｓ ｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｒｙ）にて反応生成量を測定し、酵素反応速度とした。
【００５７】
ＴＳＲ活性阻害能の測定は、上記酵素活性の測定において、構造式１〜２４で表される上記化合物を、それぞれ反応開始時の濃度が１０ｐｐｍになるようプレインキュベートする前に添加し、他の条件は同様に行って酵素反応速度を測定し、構造式１〜２４で表される上記化合物を含まない際の上記で測定した酵素反応速度との割合から阻害率を計算により求めた。結果を表１に示す。
【００５８】
表１の結果より、構造式１〜２４で示されるアルトカルピン誘導体ならびにアルトカルピン類似化合物は、ＴＳＲ活性阻害能を有していることがわかり、これらをＴＳＲ活性阻害剤の有効成分、すなわち、育毛・養毛用組成物、美白化粧料用組成物の有効成分として用いることが有用であることがわかる。
【００５９】
【表１】
【００６０】
（比較例１）
下記構造式２５〜２９で示される化合物について、実施例１と同様にＴＳＲ活性阻害能を測定した。結果を表２に示す。
【００６１】
【化２６】
【００６２】
【化２７】
【００６３】
【化２８】
【００６４】
【化２９】
【００６５】
【化３０】
【００６６】
【表２】
【００６７】
（実施例２：癌細胞増殖阻害能の測定）
１０％ＦＢＳ含有のイーグルＭＥＭ培地(Eagle's minimal essential media)に懸濁させた、Ｂ１６メラノーマ細胞を９６穴マイクロプレートに１×１０5ｃｅｌｌ／ｗｅｌｌ播種し、２４時間経過後、上記構造式１〜２４で示される化合物を最終濃度０．０１〜５００μｇ／ｍｌとなるように添加した。次いで、２４時間培養後、コントロールウェルのＢ１６メラノーマ細胞増殖に対して５０％増殖阻害されるアルトカルピン濃度（ＩＣ50）をＭＴＴ法により求めた。結果を表３に示す。また、対照として、アルトカルピンの代わりに、抗腫瘍性化合物として知られた、ビンブラスチン、カルムスチン又は５―フルオロウラシルを用い、同様にＩＣ50を測定した。結果を表４に示す。
【００６８】
【表３】
【００６９】
【表４】
【００７０】
表３に示すように、上記構造式１〜２４で示されるアルトカルピン誘導体ならびにアルトカルピン類似化合物は、従来、抗腫瘍性化合物として知られた表４に示す各化合物よりＢ１６メラノーマ細胞に対し優れた抗腫瘍作用を示すことがわかり、これらを抗癌剤の有効成分として用いることが有用であることがわかる。
【００７１】
（実施例３：シクロオキシゲナーゼおよび５−リポキシゲナーゼ阻害能の測定）
３−１：シクロオキシゲナーゼ阻害能の測定
５０ｍＭのトリプトファン５μｌ、１００μＭのヘマチン２．５μｌ、及び０．１Ｎ水酸化ナトリウムに溶解した５ｍＭのフェニル水銀水酸化物２．５μｌを混合し溶液（Ａ）を調製した。エタノールに溶解した［14Ｃ］アラキドン酸２μｌ及び所定の濃度でエタノールに溶解した上記構造式１〜２４で示される化合物１０μｌをガラスチューブに入れ、窒素でエタノールを留去させた後、Ｔｒｉｓ−ＨＣｌバッファ３５μｌと前記溶液（Ａ）１０μｌとを加え、ボルテックスで撹拌した。
【００７２】
続いて、シクロオキシゲナーゼ溶液５μｌを前記ガラスチューブに入れ、ボルテックスで撹拌した後、直ちに３７℃インキュベーターに斜めに入れた。１分間反応させた後、ジエチルエーテル：メタノール：１Ｍのクエン酸（３０：４：１）からなる混合溶液２５０μｌを加え、ボルテックスで撹拌して反応を停止させ、生成物を抽出した。次いで、得られた生成物にＮａ2ＳＯ4を添加して脱水した後、有機層のうちの５０μｌを薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）にチャージし、更に、ヘキサン：ジエチルエーテル：酢酸（３０：２０：１）で展開した。
【００７３】
得られたＴＬＣ板をラップに包み、ＢＡＳ ｉｍａｇｉｎｇ ｐｌａｔｅ（富士フィルム社製）にカセット中で当て、２時間暗所で放置した。次いで、ＢＡＳで放射活性を測定し、アラキドン酸の生成物への変換量から活性を算出し、シクロオキシゲナーゼＩＣ50を求めた。結果を表５に示す。また、対照として、上記構造式１〜２４で示される化合物の代わりに市販のインドメタシン及びノルジヒドログアイアレチン酸についても同様な試験を行った。結果を表６に示す。
【００７４】
３−２：５−リポキシゲナーゼ阻害能の測定
約４．０×１０7ｃｅｌｌのＲＢＬ細胞を直径１５ｃｍのシャーレ４枚で培養し、トリプシン処理後、ＰＢＳ、ｐＨ６．８の１０ｍＭ ＢＥＳ、１０ｍＭ ＰＩＰＥＳ、及び１ｍＭ ＥＤＴＡからなる抽出バッファ５ｍｌをそれぞれ添加した。次いで、１０分間超音波処理を行い、１５０００ｇで１０分間遠心処理し、上清１ｍｌずつをチューブに取り−８０℃で保存した。エタノールに溶解した［14Ｃ］アラキドン酸２μｌ及び所定の濃度でエタノールに溶解した上記構造式１〜２４で示される化合物１０μｌをガラスチューブに入れ、窒素でエタノールを留去させた後、反応バッファ（１０ｍＭ ＢＥＳ、１０ｍＭ ＰＩＰＥＳ、１ｍＭ ＥＤＴＡ、０．７ｍＭＣａＣｌ2、ｐＨ６．８）１００μｌと、前記上清１０μｌとを加え、ボルテックスで撹拌した。
【００７５】
続いて、５−リポキシゲナーゼ溶液５０μｌを前記ガラスチューブに入れ、ボルテックスで撹拌した後、直ちに３７℃インキュベーターに斜めに入れた。正確に２分間反応させた後、ジエチルエーテル：メタノール：１Ｍのクエン酸（３０：４：１）からなる混合溶液２５０μｌを加え、ボルテックスで撹拌して反応を停止させ、生成物を抽出した。次いで、得られた生成物を含む有機層のうちの５０μｌをＴＬＣにチャージし、更に、ヘキサン：ジエチルエーテル：酢酸（３０：２０：１）で展開した。続いて、プロスタグランジンＢ2、プロスタグランジンＥ2、プロスタグランジンＤ2を入れてＲｆ値を確認した。
【００７６】
次に、得られたＴＬＣ板をラップに包み、ＢＡＳ ｉｍａｇｉｎｇ ｐｌａｔｅ（富士フィルム社製）にカセット中で当て、２時間暗所で放置した。次いで、ＢＡＳで放射活性を測定し、アラキドン酸の生成物への変換量から活性を算出し、５−リポキシゲナーゼＩＣ50を求めた。結果を表５に示す。また、対照として、上記構造式１〜２４で示される化合物の代わりに市販のインドメタシン及びノルジヒドログアイアレチン酸についても同様な試験を行った。結果を表７に示す。
【００７７】
【表５】
【００７８】
【表６】
【００７９】
【表７】
【００８０】
表５から表７の結果より、構造式１〜２４で示されるアルトカルピン誘導体ならびにアルトカルピン類似化合物は、優れたシクロオキシゲナーゼ阻害能および５−リポキシゲナーゼ阻害能を有していることがわかり、これらをシクロオキシゲナーゼ活性阻害剤および５−リポキシゲナーゼ活性阻害剤の有効成分、すなわち、消炎鎮痛剤、解熱剤または抗アレルギー剤の有効成分として用いることが有用であることがわかる。
【００８１】
（実施例４：正常メラノサイトおよび正常ファイブロブラスト増殖抑制能の測定）
正常ヒト皮膚メラノ細胞（セルシステム社製）および正常ヒト皮膚ファイブロセル（セルシステム社製）を用いてアルトカルピンの増殖抑制効果を下記の方法で検討した。１２ウエルプレート（BECTON DICKINSON）の各ウエルに上記のヒトメラノサイトおよびファイブロブラストをそれぞれ５×１０4個／ｍｌで播種し、それぞれ増殖因子を含む合成培養液で培養した。ここで、各ウエルには、ＤＭＳＯ（ジメチルスルホキシド）を溶媒として溶解させたアルトカルピン誘導体および類似化合物を最終濃度２．５μｇ／ｍｌで添加した。５日間培養後、ニュートラルレッド法で各ウエル中の細胞数を測定した。なお、培地は培養開始３日目に交換した。表８に、上記各細胞を用いた実験結果を示す。
【００８２】
【表８】
コントロールに対する細胞増殖抑制率（％）
【００８３】
表８に示すように、構造式１〜２４で示されるアルトカルピン誘導体ならびにアルトカルピン類似化合物は、優れた正常メラノサイト増殖抑制能、及び正常ファイブロブラスト増殖抑制能を有していることがわかり、これらをレックリングハウゼン病カフェオレ斑や小レックリングハウゼン斑、神経線維腫、脂漏性角化症、老人性色素斑、扁平母斑、色素性母斑、太田母斑、青色母斑、異所性蒙古斑などの母斑性色素異常症、炎症後色素沈着症等の色素性皮膚病変の治療剤の有効成分として用いることが有用であることがわかる。
【産業上の利用可能性】
【００８４】
本発明によれば、アルトカルピン誘導体ならびにアルトカルピン類似化合物は優れた、テストステロン−５α−リダクターゼ活性阻害能、細胞増殖阻害並びに抑制作用、シクロオキシゲナーゼ阻害能および５−リポキシゲナーゼ阻害能、および正常メラノサイト増殖抑制能、及び正常ファイブロブラスト増殖抑制能を有するので、育毛・養毛用組成物や美白化粧料用組成物、抗癌剤、消炎鎮痛剤、解熱剤または抗アレルギー剤としての医薬の有効成分、および色素性皮膚病変治療用医薬として有用である。
【技術分野】
【０００１】
本発明は、アルトカルピン誘導体ならびにアルトカルピン類似化合物、およびこれを含有する育毛・養毛用組成物、美白化粧料用組成物、ならびに抗癌剤、消炎鎮痛剤、解熱剤または抗アレルギー剤としての医薬および色素性皮膚病変治療用医薬に関する。
【背景技術】
【０００２】
クワ科植物であるアルトカルパス属植物から公知の方法で抽出精製することができるアルトカルピンは、テストステロン−５α−リダクターゼ活性阻害能を有し、育毛・養毛作用、皮脂分泌抑制作用、美白作用に効果があることや（特許文献１、参照。）、癌細胞の増殖阻害並びに抑制作用があること（特許文献２、参照。）が知られている。
【０００３】
また、アルトカルピンにはさらに、シクロオキシゲナーゼ阻害活性および５−リポキシゲナーゼ阻害活性を示し、消炎鎮痛剤、解熱剤または抗アレルギー剤として有用であることも知られている（特許文献３、参照）。
【０００４】
【特許文献１】国際公開第００／４５７８２号パンフレット
【特許文献２】特開２００３−１９２５９０号公報
【特許文献３】特開２００４−２３１５８７号公報
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
本発明もまた、テストステロン−５α−リダクターゼ活性阻害能、癌細胞増殖阻害並びに抑制作用、シクロオキシゲナーゼ阻害能、５−リポキシゲナーゼ阻害能、正常メラノサイト増殖抑制能、及び正常ファイブロブラスト増殖抑制能を有する物質を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
本発明者は、鋭意研究の結果、新規化合物であるアルトカルピン誘導体ならびにアルトカルピンを合成する際に合成されるアルトカルピン類似化合物においても、優れたテストステロン−５α−リダクターゼ活性阻害能、癌細胞増殖阻害並びに抑制作用、シクロオキシゲナーゼ阻害能、５−リポキシゲナーゼ阻害能、ならびに正常メラノサイト増殖抑制能、及び正常ファイブロブラスト増殖抑制能を有することを見出し、本発明に至った。
【０００７】
すなわち、本発明は、テストステロン−５α−リダクターゼ活性阻害能、癌細胞増殖阻害並びに抑制作用、シクロオキシゲナーゼ阻害能、５−リポキシゲナーゼ阻害能、正常メラノサイト増殖抑制能、及び正常ファイブロブラスト増殖抑制能を有するアルトカルピン誘導体である。
【０００８】
また、本発明は、テストステロン−５α−リダクターゼ活性阻害能、細胞増殖阻害並びに抑制作用、シクロオキシゲナーゼ阻害能、５−リポキシゲナーゼ阻害能、正常メラノサイト増殖抑制、及び正常ファイブロブラスト増殖抑制能を有するアルトカルピン類似化合物である。
【０００９】
ここで、本発明において、アルトカルピン誘導体とは、アルトカルピン分子内の一部分が変化して生じた化合物、すなわち、アルトカルピンにプレニル基や３−メチル−１−ブテニル基などの側鎖が付加された化合物や、糖が配合された配糖体のことを示す。また、アルトカルピン類似化合物とは、アルトカルピンやアルトカルピン誘導体を合成する際に合成される化合物であり、具体的には、アルトカルピンの水素付加体、脱メチル体、メトキシ付加体、メチル化体、アセチル化体、ジヒドロキシル化体、ジメチルエーテル付加体、エポキシ化体、ヒドロキシル化体などが挙げられる。
【００１０】
また、本発明は、前記アルトカルピン誘導体、またはアルトカルピン類似化合物のどちらか一方を少なくとも含有する育毛・養毛用組成物、美白化粧料用組成物、抗癌剤、消炎鎮痛剤、解熱剤、抗アレルギー剤としての医薬および色素性皮膚病変治療用医薬である。
【発明の効果】
【００１１】
本発明によれば、テストステロン−５α−リダクターゼ活性阻害能、癌細胞増殖阻害並びに抑制作用、シクロオキシゲナーゼ阻害能、５−リポキシゲナーゼ阻害能、正常メラサノイト増殖抑制能、及び正常ファイブロブラスト増殖抑制能を有する育毛・養毛用組成物、美白化粧料用組成物ならびに抗癌剤、消炎鎮痛剤、解熱剤または抗アレルギー剤としての医薬および色素性皮膚病変治療用医薬を提供することができる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１２】
以下、本発明をさらに詳細に説明する。
アルトカルピン誘導体としては、下記構造式で表される化合物ＡのＲ１、Ｒ２、Ｒ３の一つ以上がプレニル基または/及び３−メチル−１−ブテニル基である化合物（下記構造式１〜６）、３個の水酸基（ＯＨ基）のうちの一つ以上にグルコース等の糖が導入された化合物（下記構造式７〜９）、およびＲ１、Ｒ２、Ｒ３の一つ以上がプレニル基または/及び３−メチル−１−ブテニル基でありかつ３個の水酸基（ＯＨ基）のうちの一つ以上にグルコース等の糖が導入された化合物（下記構造式１０，１１）が挙げられる。
【００１３】
【化１】
Ｍｅ：メチル基
【００１４】
【化２】
【００１５】
【化３】
【００１６】
【化４】
【００１７】
【化５】
【００１８】
【化６】
【００１９】
【化７】
【００２０】
【化８】
Ｇｌｕ：グルコース残基
【００２１】
【化９】
【００２２】
【化１０】
【００２３】
ここで、構造式７〜９に付加される糖は上記グルコースに限定するものではなく、たとえば、セドヘプツロース、フルクトース、ガラクトース、リブロース、タロース、アロース、リボース、アピオース等の単糖類や、マルトース、ラクトース、スクロース等の二糖類や、フルクトオリゴ糖、ガラクトオリゴ糖などのオリゴ糖、デンプンなどの多糖類を付加することができる。
【００２４】
【化１１】
【００２５】
【化１２】
【００２６】
また、アルトカルピン類似化合物としては、下記構造式１２〜２４で表される化合物が挙げられる。
【００２７】
【化１３】
【００２８】
【化１４】
【００２９】
【化１５】
【００３０】
【化１６】
【００３１】
【化１７】
【００３２】
【化１８】
【００３３】
【化１９】
【００３４】
【化２０】
【００３５】
【化２１】
【００３６】
【化２２】
【００３７】
【化２３】
【００３８】
【化２４】
【００３９】
【化２５】
【００４０】
本発明の実施の形態におけるアルトカルピン誘導体またはアルトカルピン類似化合物は、後述する実施例で明らかなようにテストステロン−５α−リダクターゼ（以下、「ＴＳＲ」と称す。）活性阻害能を有していることから、育毛・養毛作用、美白作用、皮脂分泌抑制作用等が期待できるので、例えば、ヘアーローション、ヘアーパック、ヘアートニック、シャンプー、リンス、コンディショナー、スカルプトリートメント等の育毛・養毛剤、化粧水、乳液、パック剤、ハップ剤、プラスター剤、ファンデーション、浴用剤、ボディ洗浄剤、ローション、洗顔洗浄剤、石けん、栄養クリーム、スキンオイル等の美白剤など、各種化粧料や医薬品に配合することにより所望の効果を発揮させることができる。化粧料とする際のアルトカルピン誘導体またはアルトカルピン類似化合物の配合割合や形態は、上述した化粧料の種類等により適宜選択することができる。
【００４１】
また、上記育毛・養毛剤には、従来公知の育毛・養毛促進物質や抗菌剤、清涼剤、保湿剤をさらに含有させてもよい。育毛・養毛促進物質としては、たとえば、ビタミンＢ6、ビタミンＥおよびその誘導体、グリチルリチン酸およびその誘導体、ニコチン酸ベンジル等のニコチン酸エステル類、サイクロスポリン類、塩化カルプロニウム、セファランチン、オキセンドロン、ジアゾキシド、ミノキシジル、エチニルエストラジオール、エストラジオール又はこれらを含有する動植物抽出物等が挙げられる。
【００４２】
また、抗菌剤としては、たとえば、ヒノキチオール、ピロクトオラミン、ピロチオン亜鉛、ヘキサクロロフェン、フェノール、塩化ベンザルコニウム、塩化セチルピリジニウム、ウンデシレン酸、トリクロロカルバニリド等が挙げられる。
【００４３】
清涼剤としては、たとえば、メントール等が挙げられる。また、保湿剤としては、たとえば、グリセリン、プロピレングリコール、１，３−ブチレングリコール、ソルビトール、マンニトール、ポリエチレングリコール、ジプロピレングリコール等の多価アルコール類、アミン酸、乳酸ナトリウム、ピロリドンカルボン酸ナトリウム等のＮＭＦ成分、ヒアルロン酸、コラーゲン、エラスチン、コンドロイチン硫酸、フィブロネクチン、セラミド類、ヘパリン類似様物質、キトサン等の水溶性高分子物質等が挙げられる。
【００４４】
また、上記育毛・養毛剤に各種添加物を配合することもできる。添加物としては、油脂類、界面活性剤、アルコール類、脂肪酸類、防腐剤、酸化防止剤、色素、香料、紫外線吸収剤、キレート剤、ｐＨ調整剤、緩衝剤、精製水等が挙げられ、その配合量は適宜選択することができる。
【００４５】
また、本発明の実施の形態におけるアルトカルピン誘導体またはアルトカルピン類似化合物は、後述する実施例で明らかなように癌細胞増殖阻害並びに抑制作用を有することから、薬理学的、製剤学的に許容される製造助剤等を用いて常法に従った製造方法により抗癌剤とすることができる。
【００４６】
本発明の実施の形態における抗癌剤の投与方法は、たとえば、癌細胞や粘膜への注射、外用剤としての塗布等が好ましく挙げられる。注射剤とするには、たとえば、注射用蒸留水、生理食塩水、プロピレングリコール等の溶解剤や溶解補助剤、ｐＨ調整剤、安定剤等の製剤用成分を用いて製造することができる。また、外用剤とするには、たとえば、アルコール、脂肪酸エステル等の溶解剤や溶解助剤、カルボキシビニルポリマー、多糖類等の粘着剤、乳化剤、安定剤等の製剤用成分を用いて製造することができる。
【００４７】
また、本発明の実施の形態における抗癌剤の投与量は、投与方法、癌細胞の種類や大きさ、患者の年齢、性別、態様等に応じて適宜選択することができる。
【００４８】
また、本発明の実施の形態におけるアルトカルピン誘導体またはアルトカルピン類似化合物は、後述する実施例で明らかなようにシクロオキシゲナーゼ阻害能および５−リポキシゲナーゼ阻害能を有することから、薬理学的、製剤学的に許容される製造助剤等を用いて常法に従った製造方法により、消炎鎮痛剤、解熱剤、抗アレルギー剤とすることができる。
【００４９】
上記消炎鎮痛剤、解熱剤、抗アレルギー剤の薬剤は、たとえば、錠剤やカプセル剤等による内服、坐薬、皮下への注射、外用剤としての塗布等によって投与することができる。
【００５０】
錠剤とするには、たとえば、乳糖、白糖、リン酸カルシウム等の賦形剤、ゼラチン、ポリビニルピロリドン、アラビアゴム、カルボキシメチルセルロース等の結合剤、デンプン、カンテン、ゼラチン粉末などの崩壊剤、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸カルシウム等の滑択剤等の製剤用成分を用いて製造することができる。また、カプセル剤とするには、たとえば、ゼラチン、精製水、単シロップ、アラビアゴム等の製剤用成分を用いて製造することができる。また、坐薬とするには、たとえば、カカオ脂、ラウリン脂、グリセロゼラチン、ポリエチレングリコール等の製剤用成分を用いて製造することができる。また、注射剤とするには、たとえば、注射用蒸留水、生理食塩水、プロピレングリコール等の溶解剤や溶解補助剤、ｐＨ調整剤、安定剤等の製剤用成分を用いて製造することができる。また、外用剤とするには、たとえば、アルコール、脂肪酸エステル等の溶解剤や溶解助剤、カルボキシビニルポリマー、多糖類等の粘着剤、乳化剤、安定剤等の製剤用成分を用いて製造することができる。
【００５１】
また、本発明の実施の形態における消炎鎮痛剤、解熱剤、抗アレルギー剤の投与量は、投与方法、治療対象、患者の年齢、性別、態様等に応じて適宜選択することができる。
【００５２】
また、本発明の実施の形態におけるアルトカルピン誘導体またはアルトカルピン類似化合物は、後述する実施例で明らかなように正常メラノサイト増殖抑制能、及び正常ファイブロブラスト増殖抑制能を有していることから、レックリングハウゼン病カフェオレ斑や小レックリングハウゼン斑、神経線維腫に加え、基本的には表皮の加齢変化による過形成により生じるが臨床的には皮膚の色素性病変とみられる脂漏性角化症や老人性色素斑や、扁平母斑、色素性母斑、太田母斑、青色母斑、異所性蒙古斑などの母斑性色素異常症、炎症後色素沈着症等の色素性皮膚病変治療用の薬剤とすることができる。
【００５３】
上記色素性皮膚病変治療用の薬剤は、たとえば、経口剤による内服、坐薬、皮下への注射、外用剤としての塗布等によって投与することができる。これらの色素性皮膚病変治療用の薬剤は、薬理学的、製剤学的に許容される製造助剤等を用いて常法に従って製造することができる。
【００５４】
ここで、外用剤としては、軟膏剤、クリーム剤、ローション剤、テープ剤等の各種形態が挙げられる。なお、前記外用剤とするには、例えば、アルコール、脂肪酸エステル等の溶解剤や溶解助剤、カルボキシビニルポリマー、多糖類等の粘着剤、乳化剤、安定剤等の製剤用成分を用いて製造することができる。経口剤としては、たとえば錠剤やカプセル剤等の各種形態が挙げられる。錠剤とするには、たとえば、乳糖、白糖、リン酸カルシウム等の賦形剤、ゼラチン、ポリビニルピロリドン、アラビアゴム、カルボキシメチルセルロース等の結合剤、デンプン、カンテン、ゼラチン粉末などの崩壊剤、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸カルシウム等の滑択剤等の製剤用成分を用いて製造することができる。また、カプセル剤とするには、たとえば、ゼラチン、精製水、単シロップ、アラビアゴム等の製剤用成分を用いて製造することができる。また、注射剤とするには、たとえば、注射用蒸留水、生理食塩水、プロピレングリコール等の溶解剤や溶解補助剤、ｐＨ調整剤、安定剤等の製剤用成分を用いて製造することができる。また、坐剤とするには、たとえば、カカオ脂、ラウリン脂、グリセロゼラチン、ポリエチレングリコール等の製剤用成分を用いて製造することができる。
【００５５】
また、本発明の実施の形態における色素性皮膚病変治療剤の投与量は、投与方法、病変部分の大きさ、患者の年齢、性別、態様等に応じて適宜選択することができる。
【実施例】
【００５６】
（実施例１：ＴＳＲ活性阻害能の測定）
構造式１〜２４の化合物について、雌ラットの肝臓由来のミクロソーム（ＴＳＲ）を用いた酵素活性を測定し、各化合物のＴＳＲ活性阻害能を測定した。酵素活性は、１００ｍｍｏｌ／Ｌ濃度のリン酸ナトリウム系バッファ（ｐＨ６．５）中に、酵素反応開始時の濃度が１５０μｍｏｌ／Ｌテストステロン、１ｍｍｏｌ／Ｌジチオトレイトールになるようそれぞれを添加し、３７℃でプレインキュベートした。１０分後、酵素反応開始時の濃度が１６７μｍｏｌ／ＬになるようにＮＡＤＰＨを添加し、さらに、添加タンパク質が０．２５ｍｇになるようにミクロソーム溶液を添加して反応を開始した。３７℃で１０分間反応させた後、３ｍｏｌ／ＬのＮａＯＨ溶液を反応系の１／３０容量添加し、反応を終了させた。この反応系より、ジヒドロテストステロンを抽出し、マススペクトル（ＧＣ−ｍａｓｓ ｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｒｙ）にて反応生成量を測定し、酵素反応速度とした。
【００５７】
ＴＳＲ活性阻害能の測定は、上記酵素活性の測定において、構造式１〜２４で表される上記化合物を、それぞれ反応開始時の濃度が１０ｐｐｍになるようプレインキュベートする前に添加し、他の条件は同様に行って酵素反応速度を測定し、構造式１〜２４で表される上記化合物を含まない際の上記で測定した酵素反応速度との割合から阻害率を計算により求めた。結果を表１に示す。
【００５８】
表１の結果より、構造式１〜２４で示されるアルトカルピン誘導体ならびにアルトカルピン類似化合物は、ＴＳＲ活性阻害能を有していることがわかり、これらをＴＳＲ活性阻害剤の有効成分、すなわち、育毛・養毛用組成物、美白化粧料用組成物の有効成分として用いることが有用であることがわかる。
【００５９】
【表１】
【００６０】
（比較例１）
下記構造式２５〜２９で示される化合物について、実施例１と同様にＴＳＲ活性阻害能を測定した。結果を表２に示す。
【００６１】
【化２６】
【００６２】
【化２７】
【００６３】
【化２８】
【００６４】
【化２９】
【００６５】
【化３０】
【００６６】
【表２】
【００６７】
（実施例２：癌細胞増殖阻害能の測定）
１０％ＦＢＳ含有のイーグルＭＥＭ培地(Eagle's minimal essential media)に懸濁させた、Ｂ１６メラノーマ細胞を９６穴マイクロプレートに１×１０5ｃｅｌｌ／ｗｅｌｌ播種し、２４時間経過後、上記構造式１〜２４で示される化合物を最終濃度０．０１〜５００μｇ／ｍｌとなるように添加した。次いで、２４時間培養後、コントロールウェルのＢ１６メラノーマ細胞増殖に対して５０％増殖阻害されるアルトカルピン濃度（ＩＣ50）をＭＴＴ法により求めた。結果を表３に示す。また、対照として、アルトカルピンの代わりに、抗腫瘍性化合物として知られた、ビンブラスチン、カルムスチン又は５―フルオロウラシルを用い、同様にＩＣ50を測定した。結果を表４に示す。
【００６８】
【表３】
【００６９】
【表４】
【００７０】
表３に示すように、上記構造式１〜２４で示されるアルトカルピン誘導体ならびにアルトカルピン類似化合物は、従来、抗腫瘍性化合物として知られた表４に示す各化合物よりＢ１６メラノーマ細胞に対し優れた抗腫瘍作用を示すことがわかり、これらを抗癌剤の有効成分として用いることが有用であることがわかる。
【００７１】
（実施例３：シクロオキシゲナーゼおよび５−リポキシゲナーゼ阻害能の測定）
３−１：シクロオキシゲナーゼ阻害能の測定
５０ｍＭのトリプトファン５μｌ、１００μＭのヘマチン２．５μｌ、及び０．１Ｎ水酸化ナトリウムに溶解した５ｍＭのフェニル水銀水酸化物２．５μｌを混合し溶液（Ａ）を調製した。エタノールに溶解した［14Ｃ］アラキドン酸２μｌ及び所定の濃度でエタノールに溶解した上記構造式１〜２４で示される化合物１０μｌをガラスチューブに入れ、窒素でエタノールを留去させた後、Ｔｒｉｓ−ＨＣｌバッファ３５μｌと前記溶液（Ａ）１０μｌとを加え、ボルテックスで撹拌した。
【００７２】
続いて、シクロオキシゲナーゼ溶液５μｌを前記ガラスチューブに入れ、ボルテックスで撹拌した後、直ちに３７℃インキュベーターに斜めに入れた。１分間反応させた後、ジエチルエーテル：メタノール：１Ｍのクエン酸（３０：４：１）からなる混合溶液２５０μｌを加え、ボルテックスで撹拌して反応を停止させ、生成物を抽出した。次いで、得られた生成物にＮａ2ＳＯ4を添加して脱水した後、有機層のうちの５０μｌを薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）にチャージし、更に、ヘキサン：ジエチルエーテル：酢酸（３０：２０：１）で展開した。
【００７３】
得られたＴＬＣ板をラップに包み、ＢＡＳ ｉｍａｇｉｎｇ ｐｌａｔｅ（富士フィルム社製）にカセット中で当て、２時間暗所で放置した。次いで、ＢＡＳで放射活性を測定し、アラキドン酸の生成物への変換量から活性を算出し、シクロオキシゲナーゼＩＣ50を求めた。結果を表５に示す。また、対照として、上記構造式１〜２４で示される化合物の代わりに市販のインドメタシン及びノルジヒドログアイアレチン酸についても同様な試験を行った。結果を表６に示す。
【００７４】
３−２：５−リポキシゲナーゼ阻害能の測定
約４．０×１０7ｃｅｌｌのＲＢＬ細胞を直径１５ｃｍのシャーレ４枚で培養し、トリプシン処理後、ＰＢＳ、ｐＨ６．８の１０ｍＭ ＢＥＳ、１０ｍＭ ＰＩＰＥＳ、及び１ｍＭ ＥＤＴＡからなる抽出バッファ５ｍｌをそれぞれ添加した。次いで、１０分間超音波処理を行い、１５０００ｇで１０分間遠心処理し、上清１ｍｌずつをチューブに取り−８０℃で保存した。エタノールに溶解した［14Ｃ］アラキドン酸２μｌ及び所定の濃度でエタノールに溶解した上記構造式１〜２４で示される化合物１０μｌをガラスチューブに入れ、窒素でエタノールを留去させた後、反応バッファ（１０ｍＭ ＢＥＳ、１０ｍＭ ＰＩＰＥＳ、１ｍＭ ＥＤＴＡ、０．７ｍＭＣａＣｌ2、ｐＨ６．８）１００μｌと、前記上清１０μｌとを加え、ボルテックスで撹拌した。
【００７５】
続いて、５−リポキシゲナーゼ溶液５０μｌを前記ガラスチューブに入れ、ボルテックスで撹拌した後、直ちに３７℃インキュベーターに斜めに入れた。正確に２分間反応させた後、ジエチルエーテル：メタノール：１Ｍのクエン酸（３０：４：１）からなる混合溶液２５０μｌを加え、ボルテックスで撹拌して反応を停止させ、生成物を抽出した。次いで、得られた生成物を含む有機層のうちの５０μｌをＴＬＣにチャージし、更に、ヘキサン：ジエチルエーテル：酢酸（３０：２０：１）で展開した。続いて、プロスタグランジンＢ2、プロスタグランジンＥ2、プロスタグランジンＤ2を入れてＲｆ値を確認した。
【００７６】
次に、得られたＴＬＣ板をラップに包み、ＢＡＳ ｉｍａｇｉｎｇ ｐｌａｔｅ（富士フィルム社製）にカセット中で当て、２時間暗所で放置した。次いで、ＢＡＳで放射活性を測定し、アラキドン酸の生成物への変換量から活性を算出し、５−リポキシゲナーゼＩＣ50を求めた。結果を表５に示す。また、対照として、上記構造式１〜２４で示される化合物の代わりに市販のインドメタシン及びノルジヒドログアイアレチン酸についても同様な試験を行った。結果を表７に示す。
【００７７】
【表５】
【００７８】
【表６】
【００７９】
【表７】
【００８０】
表５から表７の結果より、構造式１〜２４で示されるアルトカルピン誘導体ならびにアルトカルピン類似化合物は、優れたシクロオキシゲナーゼ阻害能および５−リポキシゲナーゼ阻害能を有していることがわかり、これらをシクロオキシゲナーゼ活性阻害剤および５−リポキシゲナーゼ活性阻害剤の有効成分、すなわち、消炎鎮痛剤、解熱剤または抗アレルギー剤の有効成分として用いることが有用であることがわかる。
【００８１】
（実施例４：正常メラノサイトおよび正常ファイブロブラスト増殖抑制能の測定）
正常ヒト皮膚メラノ細胞（セルシステム社製）および正常ヒト皮膚ファイブロセル（セルシステム社製）を用いてアルトカルピンの増殖抑制効果を下記の方法で検討した。１２ウエルプレート（BECTON DICKINSON）の各ウエルに上記のヒトメラノサイトおよびファイブロブラストをそれぞれ５×１０4個／ｍｌで播種し、それぞれ増殖因子を含む合成培養液で培養した。ここで、各ウエルには、ＤＭＳＯ（ジメチルスルホキシド）を溶媒として溶解させたアルトカルピン誘導体および類似化合物を最終濃度２．５μｇ／ｍｌで添加した。５日間培養後、ニュートラルレッド法で各ウエル中の細胞数を測定した。なお、培地は培養開始３日目に交換した。表８に、上記各細胞を用いた実験結果を示す。
【００８２】
【表８】
コントロールに対する細胞増殖抑制率（％）
【００８３】
表８に示すように、構造式１〜２４で示されるアルトカルピン誘導体ならびにアルトカルピン類似化合物は、優れた正常メラノサイト増殖抑制能、及び正常ファイブロブラスト増殖抑制能を有していることがわかり、これらをレックリングハウゼン病カフェオレ斑や小レックリングハウゼン斑、神経線維腫、脂漏性角化症、老人性色素斑、扁平母斑、色素性母斑、太田母斑、青色母斑、異所性蒙古斑などの母斑性色素異常症、炎症後色素沈着症等の色素性皮膚病変の治療剤の有効成分として用いることが有用であることがわかる。
【産業上の利用可能性】
【００８４】
本発明によれば、アルトカルピン誘導体ならびにアルトカルピン類似化合物は優れた、テストステロン−５α−リダクターゼ活性阻害能、細胞増殖阻害並びに抑制作用、シクロオキシゲナーゼ阻害能および５−リポキシゲナーゼ阻害能、および正常メラノサイト増殖抑制能、及び正常ファイブロブラスト増殖抑制能を有するので、育毛・養毛用組成物や美白化粧料用組成物、抗癌剤、消炎鎮痛剤、解熱剤または抗アレルギー剤としての医薬の有効成分、および色素性皮膚病変治療用医薬として有用である。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
テストステロン−５α−リダクターゼ活性阻害能、癌細胞増殖阻害並びに抑制作用、シクロオキシゲナーゼ阻害能および５−リポキシゲナーゼ阻害能、正常メラノサイト増殖抑制能、及び正常ファイブロブラスト増殖抑制能を有するアルトカルピン誘導体。
【請求項２】
テストステロン−５α−リダクターゼ活性阻害能、癌細胞増殖阻害並びに抑制作用、シクロオキシゲナーゼ阻害能および５−リポキシゲナーゼ阻害能、正常メラノサイト増殖抑制能、及び正常ファイブロブラスト増殖抑制能を有するアルトカルピン類似化合物。
【請求項３】
請求項１に記載のアルトカルピン誘導体、または請求項２に記載のアルトカルピン類似化合物のどちらか一方を少なくとも含有する育毛・養毛用組成物。
【請求項４】
請求項１に記載のアルトカルピン誘導体、または請求項２に記載のアルトカルピン類似化合物のどちらか一方を少なくとも含有する美白化粧料用組成物。
【請求項５】
請求項１に記載のアルトカルピン誘導体、または請求項２に記載のアルトカルピン類似化合物のどちらか一方を少なくとも含有する抗癌剤、消炎鎮痛剤、解熱剤または抗アレルギー剤としての医薬。
【請求項６】
請求項１に記載のアルトカルピン誘導体、または請求項２に記載のアルトカルピン類似化合物のどちらか一方を少なくとも含有する色素性皮膚病変治療用医薬。
【請求項１】
テストステロン−５α−リダクターゼ活性阻害能、癌細胞増殖阻害並びに抑制作用、シクロオキシゲナーゼ阻害能および５−リポキシゲナーゼ阻害能、正常メラノサイト増殖抑制能、及び正常ファイブロブラスト増殖抑制能を有するアルトカルピン誘導体。
【請求項２】
テストステロン−５α−リダクターゼ活性阻害能、癌細胞増殖阻害並びに抑制作用、シクロオキシゲナーゼ阻害能および５−リポキシゲナーゼ阻害能、正常メラノサイト増殖抑制能、及び正常ファイブロブラスト増殖抑制能を有するアルトカルピン類似化合物。
【請求項３】
請求項１に記載のアルトカルピン誘導体、または請求項２に記載のアルトカルピン類似化合物のどちらか一方を少なくとも含有する育毛・養毛用組成物。
【請求項４】
請求項１に記載のアルトカルピン誘導体、または請求項２に記載のアルトカルピン類似化合物のどちらか一方を少なくとも含有する美白化粧料用組成物。
【請求項５】
請求項１に記載のアルトカルピン誘導体、または請求項２に記載のアルトカルピン類似化合物のどちらか一方を少なくとも含有する抗癌剤、消炎鎮痛剤、解熱剤または抗アレルギー剤としての医薬。
【請求項６】
請求項１に記載のアルトカルピン誘導体、または請求項２に記載のアルトカルピン類似化合物のどちらか一方を少なくとも含有する色素性皮膚病変治療用医薬。
【公開番号】特開２００８−４４８９７（Ｐ２００８−４４８９７Ａ）
【公開日】平成２０年２月２８日（２００８．２．２８）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００６−２２２７５２（Ｐ２００６−２２２７５２）
【出願日】平成１８年８月１７日（２００６．８．１７）
【出願人】（５９１２６７７８５）関西酵素株式会社 (5)
【Ｆターム（参考）】
【公開日】平成２０年２月２８日（２００８．２．２８）
【国際特許分類】
【出願日】平成１８年８月１７日（２００６．８．１７）
【出願人】（５９１２６７７８５）関西酵素株式会社 (5)
【Ｆターム（参考）】
[ Back to top ]