アンモニア検査具、及びアンモニア検査具の感度調整方法
【課題】短時間でかつ簡易な操作で、精度良く、唾液中のアンモニアを検出測定する検査具及び方法を提供。
【解決手段】支持体１上に、アンモニアにより呈色反応する指示薬層２を有するアンモニア検査具であって、前記指示薬層が、ポリビニルピロリドンと界面活性剤とを含有しｐＨ２．０〜５．０（２５℃）に調整された被覆剤水溶液で形成された皮膜４で被覆されてなり、該皮膜の乾燥質量が指示薬層の２５〜５０質量％であり、唾液中のアンモニアを検出又は測定するためのアンモニア検査具。
【効果】試料の唾液を希釈操作することなくそのまま検体として使用して、短時間でかつ簡易な操作で、精度良く、唾液中のアンモニアを検出又は測定でき、安全面や環境面も良好である。更に、唾液中のアンモニアの検出又は測定結果から、口臭や唾液中の内細菌数等が推測でき、これを指標として口腔内清潔度を判断することが可能である。
【解決手段】支持体１上に、アンモニアにより呈色反応する指示薬層２を有するアンモニア検査具であって、前記指示薬層が、ポリビニルピロリドンと界面活性剤とを含有しｐＨ２．０〜５．０（２５℃）に調整された被覆剤水溶液で形成された皮膜４で被覆されてなり、該皮膜の乾燥質量が指示薬層の２５〜５０質量％であり、唾液中のアンモニアを検出又は測定するためのアンモニア検査具。
【効果】試料の唾液を希釈操作することなくそのまま検体として使用して、短時間でかつ簡易な操作で、精度良く、唾液中のアンモニアを検出又は測定でき、安全面や環境面も良好である。更に、唾液中のアンモニアの検出又は測定結果から、口臭や唾液中の内細菌数等が推測でき、これを指標として口腔内清潔度を判断することが可能である。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、唾液中に含まれるアンモニアの検出又はその濃度の測定を、唾液（検体）の希釈操作を行うことなく迅速かつ簡便に、精度良く行うことができるアンモニア検査具、及びその感度調整方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
口腔内の清潔度に影響する因子として、プラーク（歯垢）や歯石の存在、舌苔の付着量、唾液の濁度、口腔内の細菌数などが考えられている。これら因子を簡便にチェックできる方法として、例えばプラーク、歯石、舌苔付着量については、歯垢染色剤のエリスロシン、フロキシンなどの色素や、蛍光色素のフルオレセインナトリウム、新しい歯垢と古い歯垢を色分けする２色性歯垢染色剤ツートン（株式会社モリタ製）などを用い、染色の有無等により判別する方法がある。
【０００３】
しかし、これらの染色を利用した方法は、使用する色素による着色部位の選択性が低く、唇や粘膜細胞などの染色する必要がない部位も染色されてしまうことや、退色に長時間を要することなどから審美面でも問題があった。
【０００４】
唾液の濁度測定による検査方法としては、唾液性状検査用キット及び口腔内疾患判定方法（特許文献１：特開２００４−１０８９７６号公報参照）が提案され、唾液の濁度が口臭との間に密接な相関があることが示されている。しかし、この方法は唾液中の不溶性物質量を視覚的に判定するものであるが、唾液の成分が均等に分散し難いことが測定値のばらつきの原因となり、精度に劣るものであった。
【０００５】
口腔内の細菌数を調べる方法としては、一般に試料を一定倍数に希釈・分散させ、培養後のコロニー数をカウントする方法が行われているが、この方法は希釈倍数に個人差が影響したり、培地調製や培養時間に長時間を要するなど、操作が面倒であるといった問題点があった。
【０００６】
特定細菌に対するモノクローナル抗体を用いた口腔内の細菌量の測定（特許文献２：特開昭６０−７３４６３号公報、特許文献３：特開昭６２−２１１５５８号公報参照）、ＤＮＡやＲＮＡプローブを用いた細菌や細胞数の測定方法（特許文献４：特開昭６１−２５７２００号公報参照）なども提案されている。しかし、これらの方法は、特殊かつ高価な試薬を用いるため集団検診や健康教育などで広範囲の人々が使用するには、経済的に問題があった。
【０００７】
一方、アンモニアが口臭や唾液中の細菌数といった因子と高い相関を示すこと（非特許文献１：Ｊ．Ｄｅｎｔ．Ｒｅｓ．Ａｂｓｔｒａｃｔｓ ＃１８３０，２００６参照）が知られている。そこで、出願人は、唾液中のアンモニアを指標とすることで口腔内の清潔度を推測することが可能であると考え、唾液中のアンモニアを測定する手段について検討した。しかし、公知のアンモニア検査紙などのアンモニアを検出又は測定する検査手段は、水質検査や血中のアンモニア濃度の測定には適しているものの、その感度が高いために唾液中のアンモニアを簡単に精度良く検出又は測定するには不適であった。
【０００８】
従って、唾液中のアンモニアを簡便かつ短時間で、精度よく検出又は測定することができ、唾液中のアンモニアを指標として口腔内の清潔度を推測するのに有用な検査手段の開発が望まれる。
【０００９】
【特許文献１】特開２００４−１０８９７６号公報
【特許文献２】特開昭６０−７３４６３号公報
【特許文献３】特開昭６２−２１１５５８号公報
【特許文献４】特開昭６１−２５７２００号公報
【特許文献５】特開昭５８−１９３４５９号公報
【非特許文献１】Ｊ．Ｄｅｎｔ．Ｒｅｓ．Ａｂｓｔｒａｃｔｓ ＃１８３０，２００６
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００１０】
本発明は、上記事情に鑑みなされたもので、短時間でかつ簡易な操作で、精度良く、唾液中のアンモニアを検出又はその濃度を測定できるアンモニア検査具、及びその感度調整方法を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【００１１】
本発明者らは上記目的を達成するため鋭意研究を重ねた結果、支持体上に、アンモニアにより呈色反応する指示薬層を有するアンモニア検査具であって、前記指示薬層が、ポリビニルピロリドンと界面活性剤とを含有しｐＨ２．０〜５．０（２５℃）に調整された被覆剤水溶液で形成された皮膜で被覆されてなり、該皮膜の乾燥質量が指示薬層の２５〜５０質量％であることにより、指示薬層の感度が調整されて、試料の唾液を希釈操作することなくそのまま検体として使用して、短時間でかつ簡易な操作で、精度良く、唾液中のアンモニアを検出又はその濃度を測定できるアンモニア検査具が得られることを見出した。
【００１２】
即ち、本発明者らは口腔内の清潔度を判断する指標として、口臭や唾液中の細菌数といった因子と高い相関を示すアンモニアに注目し、唾液中のアンモニアを検出又は測定する検査手段について検討した。
液体試料中のアンモニア又は尿素の濃度を測定するための分析具は、特許文献５：特開昭５８−１９３４５９号公報等に提案され、水質検査や血中のアンモニア濃度を測定するためのアンモニア検査紙は種々市販されている。
例えば、アミチェック（商品名、（株）京都第一科学製）は、アミノ酸代謝異常、肝機能異常、腎機能異常などの病態把握を目的に血中、血清又は血漿中のアンモニアを測定するものである。これは、その添付文書からアンモニア測定濃度範囲は０．１〜４μｇ／ｍＬと考えられ、血中アンモニアの基準値が０．１８〜０．７０μｇ／ｍＬであることから、適度な測定濃度範囲となる。簡易水質検査試験紙のアクアチェックＡ（商品名、バイエルメディカル（株）製）は、０．１〜１０μｇ／ｍＬのアンモニアが測定できる。テストスティックアンモニア（商品名、（株）ニッソー製）は、０．１〜５μｇ／ｍＬのアンモニアが測定でき、熱帯魚や観賞魚の水槽中の水質検査に好ましい測定濃度の範囲となっている。
【００１３】
しかしながら、成人唾液中のアンモニア濃度は約１０〜１，０００μｇ／ｍＬの範囲（Ｊ．Ｄｅｎｔ．Ｒｅｓ．Ａｂｓｔｒａｃｔｓ ＃１８３０，２００６参照）であるため、市販検査紙は測定感度が高すぎるために唾液中のアンモニアを精度良く検出又は測定するには不適であった。なお、メルコクアントアンモニウムテスト（商品名、ＭＥＲＣＫ社製）は、測定範囲が０．１〜４００μｇ／ｍＬで、より高濃度までアンモニア測定が可能ではあるが、有毒なヨウ化水銀（ＩＩ）を使用することから安全面、環境面で問題があった。
これらの市販アンモニア検査紙のアンモニア測定範囲、更には唾液中のアンモニア濃度は、表１に示すとおりである。
【００１４】
【表１】
【００１５】
口中から採取した唾液を予め適当濃度まで希釈してこの希釈唾液を検体として使用すれば、上記市販品を用いて唾液中のアンモニアを検出又は測定することは可能であるが、唾液を希釈する操作は手間がかかり面倒であり、工程が煩雑となって処理時間もかかり、これらの要因が測定精度へ悪影響を及ぼす場合もある。集団検診や健康教育事業などで行う検査は、簡便かつ安価で短時間に検査結果が得られることが望ましい。
【００１６】
本発明のアンモニア検査具によれば、上記課題を解決でき、検査具の判定部位（指示薬層）を特定の被覆剤水溶液に浸漬し、乾燥することにより得られる皮膜で被覆することにより、アンモニアと指示薬との反応による指示薬層の発色までの展開時間が調整され、判定感度が下がることによって、唾液を希釈することなくそのまま検体として使用して判定部位に直接接触させることで、アンモニアを検出又はその濃度を精度良く、簡単な操作で測定することができる。
【００１７】
従って、本発明は、下記のアンモニア検査具及びその感度調整方法を提供する。
（ｉ）支持体上に、アンモニアにより呈色反応する指示薬層を有するアンモニア検査具であって、前記指示薬層が、ポリビニルピロリドンと界面活性剤とを含有しｐＨ２．０〜５．０（２５℃）に調整された被覆剤水溶液で形成された皮膜で被覆されてなり、該皮膜の乾燥質量が指示薬層の２５〜５０質量％であり、唾液中のアンモニアを検出又は測定するためのものであることを特徴とするアンモニア検査具。
（ｉｉ）唾液中のアンモニアを検出又は測定して口腔内の清潔度を推測するためのものである上記アンモニア検査具。
（ｉｉｉ）支持体上に、アンモニアにより呈色反応する指示薬層を有するアンモニア検査具の前記指示薬層を、ポリビニルピロリドンと界面活性剤とを含有しｐＨ２．０〜５．０（２５℃）に調整された被覆剤水溶液に浸漬後、乾燥させ、乾燥質量が指示薬層の２５〜５０質量％である皮膜で被覆して感度を調整することを特徴とする、唾液中のアンモニアを検出又は測定するためのアンモニア検査具の感度調整方法。
【発明の効果】
【００１８】
本発明のアンモニア検査具、及びその感度調整方法によれば、試料の唾液を希釈操作することなくそのまま検体として使用して、短時間でかつ簡易な操作で、精度良く、唾液中のアンモニアを検出又は測定でき、安全面や環境面も良好である。更に、本発明によれば、唾液中のアンモニアの検出又は測定結果から、口臭や唾液中の内細菌数等が推測でき、これを指標として口腔内清潔度を判断することが可能である。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１９】
以下、本発明につき更に詳細に説明すると、本発明のアンモニア検査具は、支持体上に、アンモニアにより呈色反応する指示薬層を有するアンモニア検査具であって、前記指示薬層が、特定の被覆剤水溶液で形成された皮膜で被覆されてなる。
【００２０】
ここで、本発明で使用される被覆剤水溶液は、ポリビニルピロリドンと界面活性剤とを含有する水溶液であり、ｐＨ２．０〜５．０（２５℃）に調整される。
【００２１】
ポリビニルピロリドンは、皮膜形成成分としての高分子物質であり、平均分子量が１万〜３６万、特に１万〜１６万のものが好ましく、平均分子量が１万に満たないと粘度安定性が低く、３６万を超えると粘度安定性は高いものの、沈殿が起こるなどの品質上の問題が発生する場合がある。
なお、上記平均分子量の測定は、分子量と相関する粘度特性値（Ｋ）で、毛細管粘度計により測定される相対粘度値（２５℃）を下記のＦｉｋｅｎｔｓｃｈｅｒ（フィケンチャー）の式に適用して計算した値である。
【数１】
【００２２】
ポリビニルピロリドンは市販品を使用でき、例えばルビスコールＫ１５（平均分子量１万）、Ｋ３０（平均分子量４万）、Ｋ６０（平均分子量１６万）、Ｋ９０（平均分子量３６万）（いずれもＢＡＳＦジャパン（株）製）が挙げられ、これらの１種を単独で用いても、あるいは２種以上を組み合わせて用いても良い。
【００２３】
ポリビニルピロリドンの配合量は、被覆剤水溶液全体の１０〜４０％、特に２５〜４０％（質量％、以下同様。）、とりわけ２６〜３８％が好ましい。１０％に満たないと、唾液のアンモニア判定時の濃度差が見づらく、４０％を超えると、検査紙の指示薬層とアンモニアの反応に時間が３分以上かかり、迅速な判定ができない場合がある。
【００２４】
被覆剤には更に界面活性剤を配合する。界面活性剤を配合することで、アンモニア検査紙の指示薬層の被覆が行いやすくなり有利である。
界面活性剤としては、アニオン性界面活性剤、ノニオン性界面活性剤、カチオン性界面活性剤等を使用できる。例えば、ラウリル硫酸塩等のアルキル硫酸塩、ラウロイルサルコシン酸塩、アルキルアリールポリエチレングリコール、アミノ酸糖エステル化合物、脂肪酸糖エステル、塩化セチルピリジニウム塩などが挙げられる
【００２５】
これらの中では、特にアルキル硫酸塩、ラルロイルサルコシン酸塩等のアニオン性界面活性剤、アルキルアリールポリエチレングリコール等のノニオン性界面活性剤が、被覆剤及び界面活性剤の安定性を保つ上で好ましい。
【００２６】
界面活性剤の配合量は、被覆剤水溶液全体の０．３〜１．２％、特に０．５〜１．０％が好ましい。０．３％に満たないと、被覆剤による膜が形成しにくく、１．２％を超えると被覆剤の安定性に問題が発生する場合がある。
【００２７】
被覆剤には、更に必要に応じて、ゲルろ過剤であるセファデックスＧ−２５、Ｇ−５０、Ｇ−１００（ＧＥヘルスケア バイオサイエンス（株）製）等の公知成分を適宜添加してもよい。
【００２８】
本発明において、被覆剤水溶液のｐＨは２．０〜５．０、好ましくは２．０〜４．６の範囲に設定する。この範囲にｐＨ調整することで、指示薬層に含まれる試薬の変色を効果的に抑えることができる。ｐＨが５．０を超えると指示薬層の安定性の低下により変色が生じ、ｐＨが２．０に満たないと、指示薬層の発色度が低下しアンモニア判定が行いにくくなる場合がある。
なお、ｐＨ調整には必要に応じてｐＨ調整剤を用いることができる。ｐＨ調整剤としては、酢酸、リン酸、塩酸、クエン酸、乳酸、グルコン酸等の酸又はその塩が使用できる。
【００２９】
本発明のアンモニア検査具は、支持体上に、アンモニアにより呈色反応する指示薬層を有するアンモニア検査具の前記指示薬層が、上記被覆剤水溶液で形成された皮膜で被覆され、皮膜の乾燥質量が指示薬層の乾燥質量の２５〜５０％であるものである。
【００３０】
ここで、支持体上にアンモニアにより呈色反応する指示薬層を有するアンモニア検査具としては、紙、プラスチック等の支持体の表面上の一部又は全面に指示薬を含む層を有するものであればその材質や成分、構造などに特に制限はなく、支持体上に指示薬層と、唾液中のアンモニアをガス化するアルカリ性緩衝液を含む担体とを有するアンモニア検査具であってもよく、公知のアンモニア検査紙等のアンモニア検査具で、安全面や環境面に問題のないものを使用することができる。
【００３１】
上記アンモニア検査具として具体的には、市販品を使用でき、アミチェック（商品名、（株）京都第一科学製）、アクアチェックＡ（商品名、バイエルメディカル（株）製）、テストスティックアンモニア（商品名、（株）ニッソー製）等が挙げられる。
【００３２】
なお、アンモニア検査具の支持体の形状は、使用性の点から通常スティック状で幅３〜７ｍｍ、長さ５０〜１００ｍｍ、厚さ０．２〜０．４ｍｍのものが望ましく、特に幅５ｍｍ、長さ８２ｍｍ、厚さ０．２５ｍｍのものが好適である。
【００３３】
指示薬層に含まれる指示薬は、例えばブロムチモールブルー、チモールブルー、ブロムフェノールレット、フェノールレッド、ブロムクレゾールグリーンなどが使用可能であり、市販のアンモニア検査具に使用されている指示薬を用いることができる。
指示薬層の形状は全面積９〜４９ｍｍ2のものが好ましく、特に２５ｍｍ2のものが好適である。
【００３４】
本発明において、支持体上の指示薬層を被覆剤水溶液で形成された皮膜で被覆する方法は、特に限定されず、前記指示薬層を被覆剤水溶液中に６０〜６００秒間浸漬し、引き上げた後、室温下で２４〜７２時間風乾し作製する方法、あるいは、被覆剤水溶液を指示薬層上に滴下して指示薬層表面の全面がコートされたのを確認後、室温下で５〜６０分間放置し、その後、室温下で２４〜７２時間風乾し作製する方法などを採用できる。
【００３５】
被覆剤水溶液により形成される被覆剤皮膜は、乾燥質量が指示薬層の２５〜５０％、好ましくは２８〜４７％の範囲であり、これにより、１分程度の短時間で唾液中のアンモニアを希釈操作なく判定できる。乾燥質量が２５％未満では、ブランクの色調（指示薬層）が、黄色からうす黄緑に変化し、視覚判定し難くなり、５０％を超えると判定に要する時間が長くなって短時間での判定が困難になる。
更に、被覆剤皮膜の乾燥質量は１〜３ｍｇ、特に１．３〜２．６ｍｇが好ましい。
なお、上記乾燥質量とは、指示薬層又は被覆剤皮膜を４０℃で２日間乾燥させた後の質量である。
乾燥質量が上記範囲となる皮膜は、１０〜３８％の被覆剤（ポリビニルピロリドン）を含有する被覆剤水溶液を用いて皮膜を形成することで得ることができる。
【００３６】
本発明のアンモニア検査具の具体例を図１〜３に示す。図１，２は、スティック状の支持体１上に指示薬層２と担体（アルカリ層）３とを有するアンモニア検査紙（市販のアンモニア検査紙、アクアチェックＡ（商品名、バイエルメディカル（株）製）の指示薬層２が、本発明にかかわる被覆剤水溶液で形成された皮膜４で被覆されたものであり、図１は概略断面図、図２は分解斜視図である。更に、図１，２に示すアンモニア検査紙は、図３の分解斜視図に示すように、皮膜４上を唾液浸入防止カバー５で被覆し、唾液の浸入部位を限定してもよい。
【００３７】
本発明のアンモニア検査具は、試料の唾液を、被覆剤皮膜で被覆された指示薬層（判定部位）に滴下し、一定時間経過後に指示薬層の色調を判別することで、唾液中のアンモニアの存在の有無、あるいはアンモニアの濃度を定量することができる。
【００３８】
検体に使用する唾液は、人の唾液、あるいは動物等の唾液であってもよく、安静時唾液、刺激唾液（ガムやワックスを咀嚼後、一定時間内に回収した唾液）、吐出唾液（一定量の蒸留水を口腔内に含み一定時間後に吐出した唾液）のいずれをも使用できる。
【００３９】
唾液を用いた検査条件は特に制限されないが、本発明のアンモニア検査具と唾液２ｍＬを、３０秒間撹拌後、３０〜１２０秒放置し、使用した市販のアンモニア検査具（例えばアクアチェックＡ等）の色見本を基準に判定することができる。判定は、唾液と接触反応させた後、３０秒〜１分間で判定できる。
【実施例】
【００４０】
以下、実験例、実施例及び比較例を挙げて本発明をより詳細に説明するが、本発明はこれらの実施例に制限されるものではない。なお、下記例に示す％は特にことわらない限り質量％を意味する。
【００４１】
〔実験例〕
被覆剤に用いる成分として、表２に示す高分子化合物のカルボキシメチルセルロースナトリウムとポリビニルピロリドンについて、溶解性、溶液のｐＨを下記方法で調べた。結果を表２に示した。
【００４２】
溶解性の評価方法；
被覆剤は、高分子化合物（ポリビニルピロリドン又はカルボキシメチルセルロースナトリウム）の水溶液であり、調製時に、界面活性剤はじめｐＨ調整剤を混合することができる。１２時間スターラーで撹拌後、溶解性を視覚で判定し、下記基準で評価した。
○； 完全に溶解した
×； 不溶物が残った
ｐＨの測定方法；
ｐＨは、被覆剤水溶液中にｐＨ電極（ＨＯＲＩＢＡ社製 ｐＨメーター Ｄ−５１）を入れ、室温下のｐＨ値を測定した。
【００４３】
【表２】
【００４４】
表２の結果から、唾液中のアンモニアを判定するには、適度な皮膜形成が必要であり、被覆剤の濃度を２０％に調整して評価した結果、カルボキシメチルセルロースナトリウムは、ポリビニルピロリドンに比べ溶解性が悪く、アンモニア検査具の被覆剤に用いる高分子物質としてはポリビニルピロリドンが好適であることがわかった。
【００４５】
〔実施例、比較例〕
市販のアンモニア検査紙、アクアチェックＡ（商品名、バイエルメディカル（株）製）の指示薬層（面積は５．２ｍｍ×５．２ｍｍ＝２７ｍｍ2、重量は５．２ｍｇ）を用い、また、被覆剤成分としてポリビニルピロリドン（ＢＡＳＦジャパン（株）製、ルビスコールＫ３０、表中、ＰＶＰと略す。）、ラウリル硫酸ナトリウム（東邦化学工業（株）製、表中、ＳＤＳと略す。）、ｐＨ調整剤の１０％酢酸水溶液又は１０％リン酸水溶液を用い、表３に示す組成の被覆剤水溶液を調製し、下記方法で被覆剤処理したアンモニア検査紙を作製して評価した。結果を表４，５に示す。
【００４６】
被覆剤処理アンモニア検査紙の調製；
表３に示す成分を水に溶解し、そのまま、あるいは１０％酢酸水溶液や１０％リン酸水溶液でｐＨ調整して水溶液を調製した。
得られた被覆剤水溶液中に室温でアクアチェックＡの指示薬層部分を６０秒間浸漬し、その後、室温で２日間乾燥して、被覆剤処理検査紙を作製した。
作製した検査紙（実施例１〜４、比較例１〜５）の被覆剤組成、ｐＨと、判定部位の全乾燥質量、被覆剤質量及び被覆率を表３にまとめて示した。なお、ｐＨの測定法、判定部位の全乾燥質量及び被覆剤質量、被覆率の算出法は、下記のとおりである。
【００４７】
ｐＨの測定方法；
ｐＨは、被覆剤水溶液中にｐＨ電極（ＨＯＲＩＢＡ社製 ｐＨメーター Ｄ−５１）を入れ、室温下のｐＨ値を測定した。
全乾燥質量（Ｂ）；
検査紙の判定部位（被覆剤皮膜が形成された指示薬層）全体の乾燥質量
被覆剤質量（Ａ）；
被覆剤皮膜の乾燥質量
被覆率；
上記の全乾燥質量（Ｂ）、被覆剤質量（Ａ）から下記式により検査紙の被覆率（指示薬層に対する被覆剤皮膜の乾燥質量の割合（質量比））を求めた。
被覆率（％）＝（Ａ／（Ｂ−Ａ））×１００
【００４８】
【表３】
【００４９】
唾液検体を用いたアンモニア検査紙によるアンモニア検出における反応時間の検討；
３名の成人被験者から採取した安静時唾液を検体とした。
次に、コントロールのアンモニア検査紙と、被覆剤で処理したアンモニア検査紙（実施例３）を用い、アンモニア検査紙の上に検体の唾液（安静時又は刺激時の唾液）２．０ｍＬを滴下し、滴下から１分後と３分後のアンモニア検査紙の色の変化について、視覚判定した。視覚判定は、アクアチェックＡの判定基準に従い、下記の視覚評価基準で行った。結果を表４に示す。
なお、本発明では、塩化アンモニウムのアンモニウムイオンが、アルカリ性で、ガス化により、被覆剤処理した皮膜層を通過し、指示薬層で発色する。その際、皮膜層のｐＨもガス化に作用しているものと考えられる。指示薬層では、アクアチェックＡの中に含まれるｐＨ指示薬がアンモニアガスと反応し、１分後の色の変化を視覚判定することで、唾液中のアンモニアを、希釈操作することなく測定ができる。
【００５０】
視覚評価基準（各判定基準におけるアンモニア濃度値、μｇ／ｍＬ）；
アンモニア濃度の判定は、アンモニア検査紙とアンモニア標準液又は唾液を１分間反応させた後の色の変化を、アクアチェックＡの基準色に従い、下記の６段階で視覚判定した。
− ：黄色（０μｇ／ｍＬ） ± ：うす黄緑（２５μｇ／ｍＬ）
＋ ：黄緑（５０μｇ／ｍＬ） ＋＋ ：うす緑（１００μｇ／ｍＬ）
＋＋＋：緑（４００μｇ／ｍＬ） ＋＋＋＋：深緑（９００μｇ／ｍＬ）
【００５１】
【表４】
【００５２】
表４の結果から、被覆剤で処理したアンモニア検査紙は、３分後の判定ではアンモニア濃度４００μｇ／ｍＬと９００μｇ／ｍＬとの差に色の変化が認められず（いずれも＋＋＋＋）、視覚的な判定が難しいが、１分後を判定時間に設定すると、１００μｇ／ｍＬから９００μｇ／ｍＬまで色の変化が認められ、短時間かつ正確にアンモニア濃度を視覚判定できることがわかった。
【００５３】
アンモニア検査紙を用いた唾液検体中のアンモニアの検出；
表３に示す組成のアンモニア検査紙（実施例１〜４、比較例１〜５）について、まず、判定評価前のアンモニア検査紙の判定部位（指示薬層）の視覚判定を上記と同様の基準で行った。次に、上記と同様の検体を用いて同様の方法で、判定時間１分でアンモニア検出を行い、同様に評価した。また、検体として水を用いて同様に評価し、その判定結果をブランク値として示した。以上の結果を表５に示す。
【００５４】
【表５】
【００５５】
表５の結果から、コントロール検査紙（被覆剤処理なし）は、唾液中アンモニアと瞬時に反応し、１分後にはアンモニア濃度１００μｇ／ｍＬでも測定限界を超え、全ての濃度の視覚評価が＋＋＋＋（深緑）となり、判別できなかった。また、比較例１〜５は、被覆剤処理による遅延効果によりアンモニア濃度の違いで発色の変化が認められるが、アンモニア濃度４００μｇ／ｍＬと９００μｇ／ｍＬとの濃度で差が認められず、視覚判定できなかった。比較例１，２，４の検査紙は、検査前に検査紙がすでに着色しており、水を検体として検査した場合のブランク値にも増加が認められ、アンモニア濃度判定の精度に劣ることがわかった。
【００５６】
これらに対して、本発明品（実施例）では、唾液検体と接触させて１分後という短時間で唾液中アンモニアの検出及びその濃度の定量判定が可能であり、ブランク値の増加も認められなかった。よって、本発明にかかわる被覆剤水溶液で被覆したアンモニア検査紙は、唾液を希釈することなく検体として用いて、唾液中のアンモニアを簡単かつ短時間で検出又はその濃度を測定して判定できることが確認できた。
【００５７】
次に、本発明のアンモニア検査具の他の実施例を示す。いずれの検査具も上記実施例と同様に唾液中のアンモニアの存在の有無又はその濃度を迅速かつ簡単に測定できるものであった。
【００５８】
〔実施例５〕
被覆剤水溶液組成
ポリビニルピロリドン（ルビスコールＫ３０） ２６．０ｇ
ラウリル硫酸ナトリウム ０．７ｇ
ｐＨ調整剤（１０％リン酸） ０．３ｍＬ
水 適量
計 １００ｇ
（ｐＨ２．０）
市販アンモニア検査紙（バイエルメディカル（株））の指示薬層（面積２７ｍｍ2、重量５．２ｍｇ）を、上記被覆剤に１分間浸し、室温で２日間乾燥した。このときの全乾燥質量（Ｂ）は６．７０ｍｇ、被覆剤質量（Ａ）は１．５０ｍｇであり、指示薬層に対し被覆処理し、室温２日間乾燥したときの被覆率は２８．８％であった。
【００５９】
〔実施例６〕
被覆剤水溶液組成
ポリビニルピロリドン（ルビスコールＫ３０） ３１．０ｇ
ラウリル硫酸ナトリウム ０．７ｇ
ｐＨ調整剤（１０％酢酸） ０．３ｍＬ
水 適量
計 １００ｇ
（ｐＨ３．５）
市販アンモニア検査紙（バイエルメディカル（株））の指示薬層（面積２７ｍｍ2、重量５．２ｍｇ）を、上記被覆剤に１分間浸し、室温で２日間乾燥した。このときの全乾燥質量（Ｂ）は７．１０ｍｇ、被覆剤質量（Ａ）は１．９０ｍｇであり、指示薬層に対し被覆処理し、室温２日間乾燥したときの被覆率は３６．５％であった。
【００６０】
〔実施例７〕
被覆剤水溶液組成
ポリビニルピロリドン（ルビスコールＫ３０） ３２．０ｇ
ラウリル硫酸ナトリウム １．０ｇ
ｐＨ調整剤（１０％酢酸） ０．４ｍＬ
水 適量
計 １００ｇ
（ｐＨ２．８）
市販アンモニア検査紙（バイエルメディカル（株））の指示薬層（面積２７ｍｍ2、重量５．２ｍｇ）を、上記被覆剤に１分間浸し、室温で２日間乾燥した。このときの全乾燥質量（Ｂ）は７．１０ｍｇ、被覆剤質量（Ａ）は１．９０ｍｇであり、指示薬層に対し被覆処理し、室温２日間乾燥したときの被覆率は３６．５％であった。
【００６１】
〔実施例８〕
被覆剤水溶液組成
ポリビニルピロリドン（ルビスコールＫ３０） ３８．０ｇ
ラウリル硫酸ナトリウム ０．７ｇ
ｐＨ調整剤（１０％酢酸） ０．１ｍＬ
水 適量
計 １００ｇ
（ｐＨ４．６）
市販アンモニア検査紙（バイエルメディカル（株））の指示薬層（面積２７ｍｍ2、重量５．２ｍｇ）を、上記被覆剤に１分間浸し、室温で２日間乾燥した。このときの全乾燥質量（Ｂ）は７．６０ｍｇ、被覆剤質量（Ａ）は２．４０ｍｇであり、指示薬層に対し被覆処理し、室温２日間乾燥したときの被覆率は４６．２％であった。
【００６２】
〔実施例９〕
被覆剤水溶液組成
ポリビニルピロリドン（ルビスコールＫ３０） １８．０ｇ
ポリビニルピロリドン（ルビスコールＫ６０） １２．０ｇ
ラウリル硫酸ナトリウム １．０ｇ
ｐＨ調整剤（１０％リン酸） ０．２ｍＬ
水 適量
計 １００ｇ
（ｐＨ４．１）
市販アンモニア検査紙（バイエルメディカル（株））の指示薬層（面積２７ｍｍ2、重量５．２ｍｇ）を、上記被覆剤に１分間浸し、室温で２日間乾燥した。このときの全乾燥質量（Ｂ）は７．１１ｍｇ、被覆剤質量（Ａ）は１．９１ｍｇであり、指示薬層に対し被覆処理し、室温２日間乾燥したときの被覆率は３６．７％であった。
【００６３】
〔実施例１０〕
被覆剤水溶液組成
ポリビニルピロリドン（ルビスコールＫ９０） ２８．０ｇ
ラウリル硫酸ナトリウム ０．８ｇ
ｐＨ調整剤（１０％酢酸） ０．３ｍＬ
水 適量
計 １００ｇ
（ｐＨ３．５）
市販アンモニア検査紙（バイエルメディカル（株））の指示薬層（面積２７ｍｍ2、重量５．２ｍｇ）を、上記被覆剤に１分間浸し、室温で２日間乾燥した。このときの全乾燥質量（Ｂ）は６．８０ｍｇ、被覆剤質量（Ａ）は１．６０ｍｇであり、指示薬層に対し被覆処理し、室温２日間乾燥したときの被覆率は３０．７％であった。
【００６４】
〔実施例１１〕
被覆剤水溶液組成
ポリビニルピロリドン（ルビスコールＫ６０） ２８．０ｇ
ラウリル硫酸ナトリウム ０．８ｇ
セファデックスＧ−２５ ２．０ｇ
ｐＨ調整剤（１０％酢酸） ０．３ｍＬ
水 適量
計 １００ｇ
（ｐＨ３．５）
市販アンモニア検査紙（バイエルメディカル（株））の指示薬層（面積２７ｍｍ2、重量５．２ｍｇ）を、上記被覆剤に１分間浸し、室温で２日間乾燥した。このときの全乾燥質量（Ｂ）は７．５１ｍｇ、被覆剤質量（Ａ）は２．３１ｍｇであり、指示薬層に対し被覆処理し、室温２日間乾燥したときの被覆率は４４．５％であった。
【図面の簡単な説明】
【００６５】
【図１】本発明のアンモニア検査具の一実施例を示す断面図である。
【図２】本発明のアンモニア検査具の一実施例を示す分解斜視図である。
【図３】本発明のアンモニア検査具の他の一実施例を示す分解斜視図である。
【符号の説明】
【００６６】
１ 支持体
２ 指示薬層
３ 担体（アルカリ層）
４ 皮膜（被覆剤）
５ 唾液浸入防止カバー
【技術分野】
【０００１】
本発明は、唾液中に含まれるアンモニアの検出又はその濃度の測定を、唾液（検体）の希釈操作を行うことなく迅速かつ簡便に、精度良く行うことができるアンモニア検査具、及びその感度調整方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
口腔内の清潔度に影響する因子として、プラーク（歯垢）や歯石の存在、舌苔の付着量、唾液の濁度、口腔内の細菌数などが考えられている。これら因子を簡便にチェックできる方法として、例えばプラーク、歯石、舌苔付着量については、歯垢染色剤のエリスロシン、フロキシンなどの色素や、蛍光色素のフルオレセインナトリウム、新しい歯垢と古い歯垢を色分けする２色性歯垢染色剤ツートン（株式会社モリタ製）などを用い、染色の有無等により判別する方法がある。
【０００３】
しかし、これらの染色を利用した方法は、使用する色素による着色部位の選択性が低く、唇や粘膜細胞などの染色する必要がない部位も染色されてしまうことや、退色に長時間を要することなどから審美面でも問題があった。
【０００４】
唾液の濁度測定による検査方法としては、唾液性状検査用キット及び口腔内疾患判定方法（特許文献１：特開２００４−１０８９７６号公報参照）が提案され、唾液の濁度が口臭との間に密接な相関があることが示されている。しかし、この方法は唾液中の不溶性物質量を視覚的に判定するものであるが、唾液の成分が均等に分散し難いことが測定値のばらつきの原因となり、精度に劣るものであった。
【０００５】
口腔内の細菌数を調べる方法としては、一般に試料を一定倍数に希釈・分散させ、培養後のコロニー数をカウントする方法が行われているが、この方法は希釈倍数に個人差が影響したり、培地調製や培養時間に長時間を要するなど、操作が面倒であるといった問題点があった。
【０００６】
特定細菌に対するモノクローナル抗体を用いた口腔内の細菌量の測定（特許文献２：特開昭６０−７３４６３号公報、特許文献３：特開昭６２−２１１５５８号公報参照）、ＤＮＡやＲＮＡプローブを用いた細菌や細胞数の測定方法（特許文献４：特開昭６１−２５７２００号公報参照）なども提案されている。しかし、これらの方法は、特殊かつ高価な試薬を用いるため集団検診や健康教育などで広範囲の人々が使用するには、経済的に問題があった。
【０００７】
一方、アンモニアが口臭や唾液中の細菌数といった因子と高い相関を示すこと（非特許文献１：Ｊ．Ｄｅｎｔ．Ｒｅｓ．Ａｂｓｔｒａｃｔｓ ＃１８３０，２００６参照）が知られている。そこで、出願人は、唾液中のアンモニアを指標とすることで口腔内の清潔度を推測することが可能であると考え、唾液中のアンモニアを測定する手段について検討した。しかし、公知のアンモニア検査紙などのアンモニアを検出又は測定する検査手段は、水質検査や血中のアンモニア濃度の測定には適しているものの、その感度が高いために唾液中のアンモニアを簡単に精度良く検出又は測定するには不適であった。
【０００８】
従って、唾液中のアンモニアを簡便かつ短時間で、精度よく検出又は測定することができ、唾液中のアンモニアを指標として口腔内の清潔度を推測するのに有用な検査手段の開発が望まれる。
【０００９】
【特許文献１】特開２００４−１０８９７６号公報
【特許文献２】特開昭６０−７３４６３号公報
【特許文献３】特開昭６２−２１１５５８号公報
【特許文献４】特開昭６１−２５７２００号公報
【特許文献５】特開昭５８−１９３４５９号公報
【非特許文献１】Ｊ．Ｄｅｎｔ．Ｒｅｓ．Ａｂｓｔｒａｃｔｓ ＃１８３０，２００６
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００１０】
本発明は、上記事情に鑑みなされたもので、短時間でかつ簡易な操作で、精度良く、唾液中のアンモニアを検出又はその濃度を測定できるアンモニア検査具、及びその感度調整方法を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【００１１】
本発明者らは上記目的を達成するため鋭意研究を重ねた結果、支持体上に、アンモニアにより呈色反応する指示薬層を有するアンモニア検査具であって、前記指示薬層が、ポリビニルピロリドンと界面活性剤とを含有しｐＨ２．０〜５．０（２５℃）に調整された被覆剤水溶液で形成された皮膜で被覆されてなり、該皮膜の乾燥質量が指示薬層の２５〜５０質量％であることにより、指示薬層の感度が調整されて、試料の唾液を希釈操作することなくそのまま検体として使用して、短時間でかつ簡易な操作で、精度良く、唾液中のアンモニアを検出又はその濃度を測定できるアンモニア検査具が得られることを見出した。
【００１２】
即ち、本発明者らは口腔内の清潔度を判断する指標として、口臭や唾液中の細菌数といった因子と高い相関を示すアンモニアに注目し、唾液中のアンモニアを検出又は測定する検査手段について検討した。
液体試料中のアンモニア又は尿素の濃度を測定するための分析具は、特許文献５：特開昭５８−１９３４５９号公報等に提案され、水質検査や血中のアンモニア濃度を測定するためのアンモニア検査紙は種々市販されている。
例えば、アミチェック（商品名、（株）京都第一科学製）は、アミノ酸代謝異常、肝機能異常、腎機能異常などの病態把握を目的に血中、血清又は血漿中のアンモニアを測定するものである。これは、その添付文書からアンモニア測定濃度範囲は０．１〜４μｇ／ｍＬと考えられ、血中アンモニアの基準値が０．１８〜０．７０μｇ／ｍＬであることから、適度な測定濃度範囲となる。簡易水質検査試験紙のアクアチェックＡ（商品名、バイエルメディカル（株）製）は、０．１〜１０μｇ／ｍＬのアンモニアが測定できる。テストスティックアンモニア（商品名、（株）ニッソー製）は、０．１〜５μｇ／ｍＬのアンモニアが測定でき、熱帯魚や観賞魚の水槽中の水質検査に好ましい測定濃度の範囲となっている。
【００１３】
しかしながら、成人唾液中のアンモニア濃度は約１０〜１，０００μｇ／ｍＬの範囲（Ｊ．Ｄｅｎｔ．Ｒｅｓ．Ａｂｓｔｒａｃｔｓ ＃１８３０，２００６参照）であるため、市販検査紙は測定感度が高すぎるために唾液中のアンモニアを精度良く検出又は測定するには不適であった。なお、メルコクアントアンモニウムテスト（商品名、ＭＥＲＣＫ社製）は、測定範囲が０．１〜４００μｇ／ｍＬで、より高濃度までアンモニア測定が可能ではあるが、有毒なヨウ化水銀（ＩＩ）を使用することから安全面、環境面で問題があった。
これらの市販アンモニア検査紙のアンモニア測定範囲、更には唾液中のアンモニア濃度は、表１に示すとおりである。
【００１４】
【表１】
【００１５】
口中から採取した唾液を予め適当濃度まで希釈してこの希釈唾液を検体として使用すれば、上記市販品を用いて唾液中のアンモニアを検出又は測定することは可能であるが、唾液を希釈する操作は手間がかかり面倒であり、工程が煩雑となって処理時間もかかり、これらの要因が測定精度へ悪影響を及ぼす場合もある。集団検診や健康教育事業などで行う検査は、簡便かつ安価で短時間に検査結果が得られることが望ましい。
【００１６】
本発明のアンモニア検査具によれば、上記課題を解決でき、検査具の判定部位（指示薬層）を特定の被覆剤水溶液に浸漬し、乾燥することにより得られる皮膜で被覆することにより、アンモニアと指示薬との反応による指示薬層の発色までの展開時間が調整され、判定感度が下がることによって、唾液を希釈することなくそのまま検体として使用して判定部位に直接接触させることで、アンモニアを検出又はその濃度を精度良く、簡単な操作で測定することができる。
【００１７】
従って、本発明は、下記のアンモニア検査具及びその感度調整方法を提供する。
（ｉ）支持体上に、アンモニアにより呈色反応する指示薬層を有するアンモニア検査具であって、前記指示薬層が、ポリビニルピロリドンと界面活性剤とを含有しｐＨ２．０〜５．０（２５℃）に調整された被覆剤水溶液で形成された皮膜で被覆されてなり、該皮膜の乾燥質量が指示薬層の２５〜５０質量％であり、唾液中のアンモニアを検出又は測定するためのものであることを特徴とするアンモニア検査具。
（ｉｉ）唾液中のアンモニアを検出又は測定して口腔内の清潔度を推測するためのものである上記アンモニア検査具。
（ｉｉｉ）支持体上に、アンモニアにより呈色反応する指示薬層を有するアンモニア検査具の前記指示薬層を、ポリビニルピロリドンと界面活性剤とを含有しｐＨ２．０〜５．０（２５℃）に調整された被覆剤水溶液に浸漬後、乾燥させ、乾燥質量が指示薬層の２５〜５０質量％である皮膜で被覆して感度を調整することを特徴とする、唾液中のアンモニアを検出又は測定するためのアンモニア検査具の感度調整方法。
【発明の効果】
【００１８】
本発明のアンモニア検査具、及びその感度調整方法によれば、試料の唾液を希釈操作することなくそのまま検体として使用して、短時間でかつ簡易な操作で、精度良く、唾液中のアンモニアを検出又は測定でき、安全面や環境面も良好である。更に、本発明によれば、唾液中のアンモニアの検出又は測定結果から、口臭や唾液中の内細菌数等が推測でき、これを指標として口腔内清潔度を判断することが可能である。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１９】
以下、本発明につき更に詳細に説明すると、本発明のアンモニア検査具は、支持体上に、アンモニアにより呈色反応する指示薬層を有するアンモニア検査具であって、前記指示薬層が、特定の被覆剤水溶液で形成された皮膜で被覆されてなる。
【００２０】
ここで、本発明で使用される被覆剤水溶液は、ポリビニルピロリドンと界面活性剤とを含有する水溶液であり、ｐＨ２．０〜５．０（２５℃）に調整される。
【００２１】
ポリビニルピロリドンは、皮膜形成成分としての高分子物質であり、平均分子量が１万〜３６万、特に１万〜１６万のものが好ましく、平均分子量が１万に満たないと粘度安定性が低く、３６万を超えると粘度安定性は高いものの、沈殿が起こるなどの品質上の問題が発生する場合がある。
なお、上記平均分子量の測定は、分子量と相関する粘度特性値（Ｋ）で、毛細管粘度計により測定される相対粘度値（２５℃）を下記のＦｉｋｅｎｔｓｃｈｅｒ（フィケンチャー）の式に適用して計算した値である。
【数１】
【００２２】
ポリビニルピロリドンは市販品を使用でき、例えばルビスコールＫ１５（平均分子量１万）、Ｋ３０（平均分子量４万）、Ｋ６０（平均分子量１６万）、Ｋ９０（平均分子量３６万）（いずれもＢＡＳＦジャパン（株）製）が挙げられ、これらの１種を単独で用いても、あるいは２種以上を組み合わせて用いても良い。
【００２３】
ポリビニルピロリドンの配合量は、被覆剤水溶液全体の１０〜４０％、特に２５〜４０％（質量％、以下同様。）、とりわけ２６〜３８％が好ましい。１０％に満たないと、唾液のアンモニア判定時の濃度差が見づらく、４０％を超えると、検査紙の指示薬層とアンモニアの反応に時間が３分以上かかり、迅速な判定ができない場合がある。
【００２４】
被覆剤には更に界面活性剤を配合する。界面活性剤を配合することで、アンモニア検査紙の指示薬層の被覆が行いやすくなり有利である。
界面活性剤としては、アニオン性界面活性剤、ノニオン性界面活性剤、カチオン性界面活性剤等を使用できる。例えば、ラウリル硫酸塩等のアルキル硫酸塩、ラウロイルサルコシン酸塩、アルキルアリールポリエチレングリコール、アミノ酸糖エステル化合物、脂肪酸糖エステル、塩化セチルピリジニウム塩などが挙げられる
【００２５】
これらの中では、特にアルキル硫酸塩、ラルロイルサルコシン酸塩等のアニオン性界面活性剤、アルキルアリールポリエチレングリコール等のノニオン性界面活性剤が、被覆剤及び界面活性剤の安定性を保つ上で好ましい。
【００２６】
界面活性剤の配合量は、被覆剤水溶液全体の０．３〜１．２％、特に０．５〜１．０％が好ましい。０．３％に満たないと、被覆剤による膜が形成しにくく、１．２％を超えると被覆剤の安定性に問題が発生する場合がある。
【００２７】
被覆剤には、更に必要に応じて、ゲルろ過剤であるセファデックスＧ−２５、Ｇ−５０、Ｇ−１００（ＧＥヘルスケア バイオサイエンス（株）製）等の公知成分を適宜添加してもよい。
【００２８】
本発明において、被覆剤水溶液のｐＨは２．０〜５．０、好ましくは２．０〜４．６の範囲に設定する。この範囲にｐＨ調整することで、指示薬層に含まれる試薬の変色を効果的に抑えることができる。ｐＨが５．０を超えると指示薬層の安定性の低下により変色が生じ、ｐＨが２．０に満たないと、指示薬層の発色度が低下しアンモニア判定が行いにくくなる場合がある。
なお、ｐＨ調整には必要に応じてｐＨ調整剤を用いることができる。ｐＨ調整剤としては、酢酸、リン酸、塩酸、クエン酸、乳酸、グルコン酸等の酸又はその塩が使用できる。
【００２９】
本発明のアンモニア検査具は、支持体上に、アンモニアにより呈色反応する指示薬層を有するアンモニア検査具の前記指示薬層が、上記被覆剤水溶液で形成された皮膜で被覆され、皮膜の乾燥質量が指示薬層の乾燥質量の２５〜５０％であるものである。
【００３０】
ここで、支持体上にアンモニアにより呈色反応する指示薬層を有するアンモニア検査具としては、紙、プラスチック等の支持体の表面上の一部又は全面に指示薬を含む層を有するものであればその材質や成分、構造などに特に制限はなく、支持体上に指示薬層と、唾液中のアンモニアをガス化するアルカリ性緩衝液を含む担体とを有するアンモニア検査具であってもよく、公知のアンモニア検査紙等のアンモニア検査具で、安全面や環境面に問題のないものを使用することができる。
【００３１】
上記アンモニア検査具として具体的には、市販品を使用でき、アミチェック（商品名、（株）京都第一科学製）、アクアチェックＡ（商品名、バイエルメディカル（株）製）、テストスティックアンモニア（商品名、（株）ニッソー製）等が挙げられる。
【００３２】
なお、アンモニア検査具の支持体の形状は、使用性の点から通常スティック状で幅３〜７ｍｍ、長さ５０〜１００ｍｍ、厚さ０．２〜０．４ｍｍのものが望ましく、特に幅５ｍｍ、長さ８２ｍｍ、厚さ０．２５ｍｍのものが好適である。
【００３３】
指示薬層に含まれる指示薬は、例えばブロムチモールブルー、チモールブルー、ブロムフェノールレット、フェノールレッド、ブロムクレゾールグリーンなどが使用可能であり、市販のアンモニア検査具に使用されている指示薬を用いることができる。
指示薬層の形状は全面積９〜４９ｍｍ2のものが好ましく、特に２５ｍｍ2のものが好適である。
【００３４】
本発明において、支持体上の指示薬層を被覆剤水溶液で形成された皮膜で被覆する方法は、特に限定されず、前記指示薬層を被覆剤水溶液中に６０〜６００秒間浸漬し、引き上げた後、室温下で２４〜７２時間風乾し作製する方法、あるいは、被覆剤水溶液を指示薬層上に滴下して指示薬層表面の全面がコートされたのを確認後、室温下で５〜６０分間放置し、その後、室温下で２４〜７２時間風乾し作製する方法などを採用できる。
【００３５】
被覆剤水溶液により形成される被覆剤皮膜は、乾燥質量が指示薬層の２５〜５０％、好ましくは２８〜４７％の範囲であり、これにより、１分程度の短時間で唾液中のアンモニアを希釈操作なく判定できる。乾燥質量が２５％未満では、ブランクの色調（指示薬層）が、黄色からうす黄緑に変化し、視覚判定し難くなり、５０％を超えると判定に要する時間が長くなって短時間での判定が困難になる。
更に、被覆剤皮膜の乾燥質量は１〜３ｍｇ、特に１．３〜２．６ｍｇが好ましい。
なお、上記乾燥質量とは、指示薬層又は被覆剤皮膜を４０℃で２日間乾燥させた後の質量である。
乾燥質量が上記範囲となる皮膜は、１０〜３８％の被覆剤（ポリビニルピロリドン）を含有する被覆剤水溶液を用いて皮膜を形成することで得ることができる。
【００３６】
本発明のアンモニア検査具の具体例を図１〜３に示す。図１，２は、スティック状の支持体１上に指示薬層２と担体（アルカリ層）３とを有するアンモニア検査紙（市販のアンモニア検査紙、アクアチェックＡ（商品名、バイエルメディカル（株）製）の指示薬層２が、本発明にかかわる被覆剤水溶液で形成された皮膜４で被覆されたものであり、図１は概略断面図、図２は分解斜視図である。更に、図１，２に示すアンモニア検査紙は、図３の分解斜視図に示すように、皮膜４上を唾液浸入防止カバー５で被覆し、唾液の浸入部位を限定してもよい。
【００３７】
本発明のアンモニア検査具は、試料の唾液を、被覆剤皮膜で被覆された指示薬層（判定部位）に滴下し、一定時間経過後に指示薬層の色調を判別することで、唾液中のアンモニアの存在の有無、あるいはアンモニアの濃度を定量することができる。
【００３８】
検体に使用する唾液は、人の唾液、あるいは動物等の唾液であってもよく、安静時唾液、刺激唾液（ガムやワックスを咀嚼後、一定時間内に回収した唾液）、吐出唾液（一定量の蒸留水を口腔内に含み一定時間後に吐出した唾液）のいずれをも使用できる。
【００３９】
唾液を用いた検査条件は特に制限されないが、本発明のアンモニア検査具と唾液２ｍＬを、３０秒間撹拌後、３０〜１２０秒放置し、使用した市販のアンモニア検査具（例えばアクアチェックＡ等）の色見本を基準に判定することができる。判定は、唾液と接触反応させた後、３０秒〜１分間で判定できる。
【実施例】
【００４０】
以下、実験例、実施例及び比較例を挙げて本発明をより詳細に説明するが、本発明はこれらの実施例に制限されるものではない。なお、下記例に示す％は特にことわらない限り質量％を意味する。
【００４１】
〔実験例〕
被覆剤に用いる成分として、表２に示す高分子化合物のカルボキシメチルセルロースナトリウムとポリビニルピロリドンについて、溶解性、溶液のｐＨを下記方法で調べた。結果を表２に示した。
【００４２】
溶解性の評価方法；
被覆剤は、高分子化合物（ポリビニルピロリドン又はカルボキシメチルセルロースナトリウム）の水溶液であり、調製時に、界面活性剤はじめｐＨ調整剤を混合することができる。１２時間スターラーで撹拌後、溶解性を視覚で判定し、下記基準で評価した。
○； 完全に溶解した
×； 不溶物が残った
ｐＨの測定方法；
ｐＨは、被覆剤水溶液中にｐＨ電極（ＨＯＲＩＢＡ社製 ｐＨメーター Ｄ−５１）を入れ、室温下のｐＨ値を測定した。
【００４３】
【表２】
【００４４】
表２の結果から、唾液中のアンモニアを判定するには、適度な皮膜形成が必要であり、被覆剤の濃度を２０％に調整して評価した結果、カルボキシメチルセルロースナトリウムは、ポリビニルピロリドンに比べ溶解性が悪く、アンモニア検査具の被覆剤に用いる高分子物質としてはポリビニルピロリドンが好適であることがわかった。
【００４５】
〔実施例、比較例〕
市販のアンモニア検査紙、アクアチェックＡ（商品名、バイエルメディカル（株）製）の指示薬層（面積は５．２ｍｍ×５．２ｍｍ＝２７ｍｍ2、重量は５．２ｍｇ）を用い、また、被覆剤成分としてポリビニルピロリドン（ＢＡＳＦジャパン（株）製、ルビスコールＫ３０、表中、ＰＶＰと略す。）、ラウリル硫酸ナトリウム（東邦化学工業（株）製、表中、ＳＤＳと略す。）、ｐＨ調整剤の１０％酢酸水溶液又は１０％リン酸水溶液を用い、表３に示す組成の被覆剤水溶液を調製し、下記方法で被覆剤処理したアンモニア検査紙を作製して評価した。結果を表４，５に示す。
【００４６】
被覆剤処理アンモニア検査紙の調製；
表３に示す成分を水に溶解し、そのまま、あるいは１０％酢酸水溶液や１０％リン酸水溶液でｐＨ調整して水溶液を調製した。
得られた被覆剤水溶液中に室温でアクアチェックＡの指示薬層部分を６０秒間浸漬し、その後、室温で２日間乾燥して、被覆剤処理検査紙を作製した。
作製した検査紙（実施例１〜４、比較例１〜５）の被覆剤組成、ｐＨと、判定部位の全乾燥質量、被覆剤質量及び被覆率を表３にまとめて示した。なお、ｐＨの測定法、判定部位の全乾燥質量及び被覆剤質量、被覆率の算出法は、下記のとおりである。
【００４７】
ｐＨの測定方法；
ｐＨは、被覆剤水溶液中にｐＨ電極（ＨＯＲＩＢＡ社製 ｐＨメーター Ｄ−５１）を入れ、室温下のｐＨ値を測定した。
全乾燥質量（Ｂ）；
検査紙の判定部位（被覆剤皮膜が形成された指示薬層）全体の乾燥質量
被覆剤質量（Ａ）；
被覆剤皮膜の乾燥質量
被覆率；
上記の全乾燥質量（Ｂ）、被覆剤質量（Ａ）から下記式により検査紙の被覆率（指示薬層に対する被覆剤皮膜の乾燥質量の割合（質量比））を求めた。
被覆率（％）＝（Ａ／（Ｂ−Ａ））×１００
【００４８】
【表３】
【００４９】
唾液検体を用いたアンモニア検査紙によるアンモニア検出における反応時間の検討；
３名の成人被験者から採取した安静時唾液を検体とした。
次に、コントロールのアンモニア検査紙と、被覆剤で処理したアンモニア検査紙（実施例３）を用い、アンモニア検査紙の上に検体の唾液（安静時又は刺激時の唾液）２．０ｍＬを滴下し、滴下から１分後と３分後のアンモニア検査紙の色の変化について、視覚判定した。視覚判定は、アクアチェックＡの判定基準に従い、下記の視覚評価基準で行った。結果を表４に示す。
なお、本発明では、塩化アンモニウムのアンモニウムイオンが、アルカリ性で、ガス化により、被覆剤処理した皮膜層を通過し、指示薬層で発色する。その際、皮膜層のｐＨもガス化に作用しているものと考えられる。指示薬層では、アクアチェックＡの中に含まれるｐＨ指示薬がアンモニアガスと反応し、１分後の色の変化を視覚判定することで、唾液中のアンモニアを、希釈操作することなく測定ができる。
【００５０】
視覚評価基準（各判定基準におけるアンモニア濃度値、μｇ／ｍＬ）；
アンモニア濃度の判定は、アンモニア検査紙とアンモニア標準液又は唾液を１分間反応させた後の色の変化を、アクアチェックＡの基準色に従い、下記の６段階で視覚判定した。
− ：黄色（０μｇ／ｍＬ） ± ：うす黄緑（２５μｇ／ｍＬ）
＋ ：黄緑（５０μｇ／ｍＬ） ＋＋ ：うす緑（１００μｇ／ｍＬ）
＋＋＋：緑（４００μｇ／ｍＬ） ＋＋＋＋：深緑（９００μｇ／ｍＬ）
【００５１】
【表４】
【００５２】
表４の結果から、被覆剤で処理したアンモニア検査紙は、３分後の判定ではアンモニア濃度４００μｇ／ｍＬと９００μｇ／ｍＬとの差に色の変化が認められず（いずれも＋＋＋＋）、視覚的な判定が難しいが、１分後を判定時間に設定すると、１００μｇ／ｍＬから９００μｇ／ｍＬまで色の変化が認められ、短時間かつ正確にアンモニア濃度を視覚判定できることがわかった。
【００５３】
アンモニア検査紙を用いた唾液検体中のアンモニアの検出；
表３に示す組成のアンモニア検査紙（実施例１〜４、比較例１〜５）について、まず、判定評価前のアンモニア検査紙の判定部位（指示薬層）の視覚判定を上記と同様の基準で行った。次に、上記と同様の検体を用いて同様の方法で、判定時間１分でアンモニア検出を行い、同様に評価した。また、検体として水を用いて同様に評価し、その判定結果をブランク値として示した。以上の結果を表５に示す。
【００５４】
【表５】
【００５５】
表５の結果から、コントロール検査紙（被覆剤処理なし）は、唾液中アンモニアと瞬時に反応し、１分後にはアンモニア濃度１００μｇ／ｍＬでも測定限界を超え、全ての濃度の視覚評価が＋＋＋＋（深緑）となり、判別できなかった。また、比較例１〜５は、被覆剤処理による遅延効果によりアンモニア濃度の違いで発色の変化が認められるが、アンモニア濃度４００μｇ／ｍＬと９００μｇ／ｍＬとの濃度で差が認められず、視覚判定できなかった。比較例１，２，４の検査紙は、検査前に検査紙がすでに着色しており、水を検体として検査した場合のブランク値にも増加が認められ、アンモニア濃度判定の精度に劣ることがわかった。
【００５６】
これらに対して、本発明品（実施例）では、唾液検体と接触させて１分後という短時間で唾液中アンモニアの検出及びその濃度の定量判定が可能であり、ブランク値の増加も認められなかった。よって、本発明にかかわる被覆剤水溶液で被覆したアンモニア検査紙は、唾液を希釈することなく検体として用いて、唾液中のアンモニアを簡単かつ短時間で検出又はその濃度を測定して判定できることが確認できた。
【００５７】
次に、本発明のアンモニア検査具の他の実施例を示す。いずれの検査具も上記実施例と同様に唾液中のアンモニアの存在の有無又はその濃度を迅速かつ簡単に測定できるものであった。
【００５８】
〔実施例５〕
被覆剤水溶液組成
ポリビニルピロリドン（ルビスコールＫ３０） ２６．０ｇ
ラウリル硫酸ナトリウム ０．７ｇ
ｐＨ調整剤（１０％リン酸） ０．３ｍＬ
水 適量
計 １００ｇ
（ｐＨ２．０）
市販アンモニア検査紙（バイエルメディカル（株））の指示薬層（面積２７ｍｍ2、重量５．２ｍｇ）を、上記被覆剤に１分間浸し、室温で２日間乾燥した。このときの全乾燥質量（Ｂ）は６．７０ｍｇ、被覆剤質量（Ａ）は１．５０ｍｇであり、指示薬層に対し被覆処理し、室温２日間乾燥したときの被覆率は２８．８％であった。
【００５９】
〔実施例６〕
被覆剤水溶液組成
ポリビニルピロリドン（ルビスコールＫ３０） ３１．０ｇ
ラウリル硫酸ナトリウム ０．７ｇ
ｐＨ調整剤（１０％酢酸） ０．３ｍＬ
水 適量
計 １００ｇ
（ｐＨ３．５）
市販アンモニア検査紙（バイエルメディカル（株））の指示薬層（面積２７ｍｍ2、重量５．２ｍｇ）を、上記被覆剤に１分間浸し、室温で２日間乾燥した。このときの全乾燥質量（Ｂ）は７．１０ｍｇ、被覆剤質量（Ａ）は１．９０ｍｇであり、指示薬層に対し被覆処理し、室温２日間乾燥したときの被覆率は３６．５％であった。
【００６０】
〔実施例７〕
被覆剤水溶液組成
ポリビニルピロリドン（ルビスコールＫ３０） ３２．０ｇ
ラウリル硫酸ナトリウム １．０ｇ
ｐＨ調整剤（１０％酢酸） ０．４ｍＬ
水 適量
計 １００ｇ
（ｐＨ２．８）
市販アンモニア検査紙（バイエルメディカル（株））の指示薬層（面積２７ｍｍ2、重量５．２ｍｇ）を、上記被覆剤に１分間浸し、室温で２日間乾燥した。このときの全乾燥質量（Ｂ）は７．１０ｍｇ、被覆剤質量（Ａ）は１．９０ｍｇであり、指示薬層に対し被覆処理し、室温２日間乾燥したときの被覆率は３６．５％であった。
【００６１】
〔実施例８〕
被覆剤水溶液組成
ポリビニルピロリドン（ルビスコールＫ３０） ３８．０ｇ
ラウリル硫酸ナトリウム ０．７ｇ
ｐＨ調整剤（１０％酢酸） ０．１ｍＬ
水 適量
計 １００ｇ
（ｐＨ４．６）
市販アンモニア検査紙（バイエルメディカル（株））の指示薬層（面積２７ｍｍ2、重量５．２ｍｇ）を、上記被覆剤に１分間浸し、室温で２日間乾燥した。このときの全乾燥質量（Ｂ）は７．６０ｍｇ、被覆剤質量（Ａ）は２．４０ｍｇであり、指示薬層に対し被覆処理し、室温２日間乾燥したときの被覆率は４６．２％であった。
【００６２】
〔実施例９〕
被覆剤水溶液組成
ポリビニルピロリドン（ルビスコールＫ３０） １８．０ｇ
ポリビニルピロリドン（ルビスコールＫ６０） １２．０ｇ
ラウリル硫酸ナトリウム １．０ｇ
ｐＨ調整剤（１０％リン酸） ０．２ｍＬ
水 適量
計 １００ｇ
（ｐＨ４．１）
市販アンモニア検査紙（バイエルメディカル（株））の指示薬層（面積２７ｍｍ2、重量５．２ｍｇ）を、上記被覆剤に１分間浸し、室温で２日間乾燥した。このときの全乾燥質量（Ｂ）は７．１１ｍｇ、被覆剤質量（Ａ）は１．９１ｍｇであり、指示薬層に対し被覆処理し、室温２日間乾燥したときの被覆率は３６．７％であった。
【００６３】
〔実施例１０〕
被覆剤水溶液組成
ポリビニルピロリドン（ルビスコールＫ９０） ２８．０ｇ
ラウリル硫酸ナトリウム ０．８ｇ
ｐＨ調整剤（１０％酢酸） ０．３ｍＬ
水 適量
計 １００ｇ
（ｐＨ３．５）
市販アンモニア検査紙（バイエルメディカル（株））の指示薬層（面積２７ｍｍ2、重量５．２ｍｇ）を、上記被覆剤に１分間浸し、室温で２日間乾燥した。このときの全乾燥質量（Ｂ）は６．８０ｍｇ、被覆剤質量（Ａ）は１．６０ｍｇであり、指示薬層に対し被覆処理し、室温２日間乾燥したときの被覆率は３０．７％であった。
【００６４】
〔実施例１１〕
被覆剤水溶液組成
ポリビニルピロリドン（ルビスコールＫ６０） ２８．０ｇ
ラウリル硫酸ナトリウム ０．８ｇ
セファデックスＧ−２５ ２．０ｇ
ｐＨ調整剤（１０％酢酸） ０．３ｍＬ
水 適量
計 １００ｇ
（ｐＨ３．５）
市販アンモニア検査紙（バイエルメディカル（株））の指示薬層（面積２７ｍｍ2、重量５．２ｍｇ）を、上記被覆剤に１分間浸し、室温で２日間乾燥した。このときの全乾燥質量（Ｂ）は７．５１ｍｇ、被覆剤質量（Ａ）は２．３１ｍｇであり、指示薬層に対し被覆処理し、室温２日間乾燥したときの被覆率は４４．５％であった。
【図面の簡単な説明】
【００６５】
【図１】本発明のアンモニア検査具の一実施例を示す断面図である。
【図２】本発明のアンモニア検査具の一実施例を示す分解斜視図である。
【図３】本発明のアンモニア検査具の他の一実施例を示す分解斜視図である。
【符号の説明】
【００６６】
１ 支持体
２ 指示薬層
３ 担体（アルカリ層）
４ 皮膜（被覆剤）
５ 唾液浸入防止カバー
【特許請求の範囲】
【請求項１】
支持体上に、アンモニアにより呈色反応する指示薬層を有するアンモニア検査具であって、前記指示薬層が、ポリビニルピロリドンと界面活性剤とを含有しｐＨ２．０〜５．０（２５℃）に調整された被覆剤水溶液で形成された皮膜で被覆されてなり、該皮膜の乾燥質量が指示薬層の２５〜５０質量％であり、唾液中のアンモニアを検出又は測定するためのものであることを特徴とするアンモニア検査具。
【請求項２】
唾液中のアンモニアを検出又は測定して、口腔内の清潔度を推測するためのものである請求項１記載のアンモニア検査具。
【請求項３】
支持体上に、アンモニアにより呈色反応する指示薬層を有するアンモニア検査具の前記指示薬層を、ポリビニルピロリドンと界面活性剤とを含有しｐＨ２．０〜５．０（２５℃）に調整された被覆剤水溶液に浸漬後、乾燥させ、乾燥質量が指示薬層の２５〜５０質量％である皮膜で被覆して感度を調整することを特徴とする、唾液中のアンモニアを検出又は測定するためのアンモニア検査具の感度調整方法。
【請求項１】
支持体上に、アンモニアにより呈色反応する指示薬層を有するアンモニア検査具であって、前記指示薬層が、ポリビニルピロリドンと界面活性剤とを含有しｐＨ２．０〜５．０（２５℃）に調整された被覆剤水溶液で形成された皮膜で被覆されてなり、該皮膜の乾燥質量が指示薬層の２５〜５０質量％であり、唾液中のアンモニアを検出又は測定するためのものであることを特徴とするアンモニア検査具。
【請求項２】
唾液中のアンモニアを検出又は測定して、口腔内の清潔度を推測するためのものである請求項１記載のアンモニア検査具。
【請求項３】
支持体上に、アンモニアにより呈色反応する指示薬層を有するアンモニア検査具の前記指示薬層を、ポリビニルピロリドンと界面活性剤とを含有しｐＨ２．０〜５．０（２５℃）に調整された被覆剤水溶液に浸漬後、乾燥させ、乾燥質量が指示薬層の２５〜５０質量％である皮膜で被覆して感度を調整することを特徴とする、唾液中のアンモニアを検出又は測定するためのアンモニア検査具の感度調整方法。
【図１】
【図２】
【図３】
【図２】
【図３】
【公開番号】特開２０１０−３８６６６（Ｐ２０１０−３８６６６Ａ）
【公開日】平成２２年２月１８日（２０１０．２．１８）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００８−２００３３８（Ｐ２００８−２００３３８）
【出願日】平成２０年８月４日（２００８．８．４）
【出願人】（０００００６７６９）ライオン株式会社 (1,816)
【Ｆターム（参考）】
【公開日】平成２２年２月１８日（２０１０．２．１８）
【国際特許分類】
【出願日】平成２０年８月４日（２００８．８．４）
【出願人】（０００００６７６９）ライオン株式会社 (1,816)
【Ｆターム（参考）】
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