【課題】光学的分析法と両立し、高いスループット分析に容易に修正できる、生きている細胞の膜電位を調整する確実で特定の方法に対する需要が存在する。
【解決手段】候補化合物の生物学的活動をキャラクタライズする方法は、細胞を候補化合物に曝すことと、その後で、トランスメンブレンポテンシャルをターゲットイオンチャネルの予め選択された電圧依存状態に対応するレベルに設定するように、細胞を電界に繰り返し曝すこととを含むことができる。

【特許請求の範囲】
【請求項１】
目標とするイオンチャネルに対する化合物の生化学的活性を測定する方法であって、
前記目標とするイオンチャネルの選択された電圧依存状態に対応する正常な休止トランスメンブレンポテンシャルを有する細胞系統を選択することと、
前記選択された細胞系統の細胞の集団において前記目標とするイオンチャネルを発現させることと、
前記細胞の集団を前記化合物に曝すことと、
前記１または複数の細胞のトランスメンブレンポテンシャルにおいて制御された変化がもたらされるように、前記細胞の集団に１または複数の電界を繰り返し加えることと、
前記１または複数の細胞のトランスメンブレンポテンシャルの変化をモニタすることと、
を有する方法。
【請求項２】
前記目標とするイオンチャネルは前記細胞系統において外因的に発現される、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記細胞系統は、前記目標とするイオンチャネルをコードする核酸でトランスフェクトされる、請求項１に記載の方法。
【請求項４】
前記細胞系統は、他のイオンチャネルの顕著でないレベルを発現する、請求項３に記載の方法。
【請求項５】
前記細胞系統は、ＣＨＬ、ＬＴＫ（−）およびＣＨＯ−Ｋ１からなる群から選択される、請求項４に記載の方法。
【請求項６】
前記目標とするイオンチャネルはナトリウムチャネルであり、前記細胞の集団は、ＣＨＬ細胞、ＬＴＫ（−）細胞およびＣＨＯ−Ｋ１細胞からなる群から選択される、請求項１に記載の方法。
【請求項７】
前記目標とするイオンチャネルはナトリウムチャネルであり、前記細胞の集団は、ＨＥＫ−２９３細胞、ＲＢＬ細胞、Ｆ１１細胞およびＨＬ５細胞からなる群から選択される、請求項１に記載の方法。
【請求項８】
前記目標とするイオンチャネルはカリウムチャネルであり、前記細胞の集団は、ＣＨＬ細胞、ＬＴＫ（−）細胞およびＣＨＯ−Ｋ１細胞からなる群から選択される、請求項１に記載の方法。
【請求項９】
前記目標とするイオンチャネルはカルシウムチャネルであり、前記細胞の集団は、ＣＨＬ細胞、ＬＴＫ（−）細胞およびＣＨＯ−Ｋ１細胞からなる群から選択される、請求項１に記載の方法。
【請求項１０】
イオンチャネルの活動度を測定する方法であって、
トランスメンブレンポテンシャルにおける制御された変化を発生させ、かつ対象とするイオンチャネルを活性化するように、複数の電界パルスを少なくとも１つの細胞に加えることと、
パッチクランプを使用することなく、トランスメンブレンポテンシャルの１または複数の変化を検出することにより、イオンチャネルの活動度を検出することと、
を有する方法。
【請求項１１】
前記少なくとも１つの細胞は、ＦＲＥＴをベースとする電圧センサ、エレクトロクロミックトランスメンブレンポテンシャル染料、トランスメンブレンポテンシャル再分配染料、イオン感応性蛍光またはルミネッセント分子、および放射性イオンからなる群から選択された電圧センサを備えている、請求項１０に記載の方法。
【請求項１２】
前記電圧センサはＦＲＥＴをベースとする電圧センサである請求項１１に記載の方法。
【請求項１３】
前記対象とするイオンチャネルは、電圧が規制されたイオンチャネルである、請求項１２に記載の方法。
【請求項１４】
前記複数の電界パルスは、前記対象とするイオンチャネルを異なる電圧依存状態の間で循環させる、請求項１３に記載の方法。
【請求項１５】
前記少なくとも１つの細胞は真核生物細胞である請求項１０に記載の方法。
【請求項１６】
前記少なくとも１つの細胞は興奮可能でない細胞である請求項１０に記載の方法。
【請求項１７】
前記少なくとも１つの細胞は原核生物細胞である請求項１０に記載の方法。
【請求項１８】
前記少なくとも１つの細胞は組織培養細胞である請求項１０に記載の方法。
【請求項１９】
前記少なくとも１つの細胞は１次細胞系統である請求項１０に記載の方法。
【請求項２０】
前記少なくとも１つの細胞は無損傷生存器官の一部である請求項１０に記載の方法。
【請求項２１】
イオンチャネルの活動度を測定する方法であって、
少なくとも１つの細胞中で、選択された目標とするイオンチャネルを発現させることと、
前記少なくとも１つの細胞中で、選択された対イオンチャネルを発現させることと、
トランスメンブレンポテンシャルの制御された変化を発生させ、かつ前記対イオンチャネルを活性化するように、複数の電界パルスを少なくとも１つの細胞に加えることと、
前記少なくとも１つの細胞のトランスメンブレンポテンシャルをモニタすることと、
を有する方法。
【請求項２２】
トランスメンブレンポテンシャルの変化は、前記対象とするイオンチャネルがブロックされたときに検出される、請求項２１に記載の方法。
【請求項２３】
前記対象とするイオンチャネルは、配位子ゲーテッドイオンチャネルである、請求項２１に記載の方法。
【請求項２４】
前記対チャネルはナトリウムチャネルである請求項２３に記載の方法。
【請求項２５】
細部のトランスメンブレンポテンシャルを変化させる方法であって、二相電界パルスを前記細胞に繰り返し加えることを備え、前記パルスは約９０Ｖ／ｃｍより小さい最大振幅を有し、前記パルスは１秒あたり少なくとも１回の割合で加えられ、各パルスの総持続時間は少なくとも１ミリ秒である、方法。
【請求項２６】
前記最大振幅は約２０乃至４０Ｖ／ｃｍである請求項２５に記載の方法。
【請求項２７】
前記パルス持続時間は１相あたり約２乃至１０ミリ秒である請求項２５に記載の方法。
【請求項２８】
前記パルスは１秒あたり約２０乃至１００個のパルスの割合で加えられる請求項２５に記載の方法。

【図１Ａ】

【図１Ｂ】

【図１Ｃ】

【図２Ａ】

【図２Ｂ】

【図２Ｃ】

【図２Ｄ】

【図３】

【図４】

【図５】

【図６】

【図７】

【図８】

【図９】

【図１０】

【図１１】

【図１２】

【図１３】

【図１４】

【図１５】

【図１６】

【図１７】

【図１８】

【図１９】

【図２０】

【図２１】

【図２２】

【図２３】

【図２４】

【図２５】

【図２６】

【図２７】

【図２８】

【図２９】

【図３０】

【図３１】

【公開番号】特開２０１２−１１０３２７（Ｐ２０１２−１１０３２７Ａ）
【公開日】平成２４年６月１４日（２０１２．６．１４）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２０１１−２７４３８９（Ｐ２０１１−２７４３８９）
【出願日】平成２３年１２月１５日（２０１１．１２．１５）
【分割の表示】特願２００２−５１４３９１（Ｐ２００２−５１４３９１）の分割
【原出願日】平成１３年７月９日（２００１．７．９）
【公序良俗違反の表示】
（特許庁注：以下のものは登録商標）
１．テフロン
【出願人】（５０２３０８１３６）ヴァーテックス　ファーマシューティカルズ　（サンディエゴ）エルエルシー (1)
【Ｆターム（参考）】