イグチ科ヌメリイグチ属担子菌培地培養物とその利用法
【課題】イグチ科ヌメリイグチ属（Ｓｕｉｌｌｕｓ）担子菌の培養において、美白効果を向上させる培養物の提供。
【解決手段】イグチ科ヌメリイグチ属（Ｓｕｉｌｌｕｓ）、特にハナイグチ、ヌメリイグチ、アミタケ、チチアワタケ、シロヌメリイグチ、ヌメリツバイグチからなる担子菌を、豆乳及び／またはモノテルペンを添加した培地で培養した担子菌培養物。および、イグチ科ヌメリイグチ属培養物を含む、美白効果の高い皮フ外用剤。
【解決手段】イグチ科ヌメリイグチ属（Ｓｕｉｌｌｕｓ）、特にハナイグチ、ヌメリイグチ、アミタケ、チチアワタケ、シロヌメリイグチ、ヌメリツバイグチからなる担子菌を、豆乳及び／またはモノテルペンを添加した培地で培養した担子菌培養物。および、イグチ科ヌメリイグチ属培養物を含む、美白効果の高い皮フ外用剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、イグチ科ヌメリイグチ属担子菌培養物に関するものであり、更に詳しくは、イグチ科ヌメリイグチ属（Ｓｕｉｌｌｕｓ）担子菌の美白効果を向上させるための培地及びその培地を用いた培養物とその利用方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
イグチ科に属するヌメリイグチ属（Ｓｕｉｌｌｕｓ）の担子菌は、いくつかの生理活性効果が知られている。イグチ科担子菌のヌメリイグチ属（Ｓｕｉｌｌｕｓ）は、ハナイグチ（Ｓｕｉｌｌｕｓ ｇｒｅｖｉｌｌｅｉ）、ヌメリイグチ（Ｓｕｉｌｌｕｓ ｌｕｔｅｕｓ）、アミタケ（Ｓｕｉｌｌｕｓ
ｂｏｖｉｎｕｓ）、チチアワタケ（Ｓｕｉｌｌｕｓ ｇｒａｎｕｌａｔｕｓ）、シロヌメリイグチ（Ｓｕｉｌｌｕｓ ｌａｒｉｃｉｎｕｓ）、ヌメリツバイグチ（Ｓｕｉｌｌｕｓ ｌｕｔｅｕｓ）等が属する。しかし、その供給源としての天然の子実体は入手の時期が限定され、また入手した後も、子実体の個体差による有用性の変動や量産化等実用面での問題点が多い。そこで近年、イグチ科担子菌を含む外生菌根菌の菌糸体を人工的に培養する方法が提案されている（例えば、特許文献１）。
【０００３】
担子菌類は、胞子が発芽した後、菌糸が成長し、ある特定条件下で子実体が形成される。一般には、この菌糸から分化した子実体が「キノコ」と呼ばれ、市場に出回っているのは菌糸から子実体への栽培が確立したものである。担子菌類においては、菌糸や子実体自体に含まれる成分や二次代謝物は、摂取する有機物の種類や分化の段階によってもその成分や量が変動することが知られており、愛好家の中では、天然物のキノコが有する風味は市販されているものが有するそれと比べて格段に良いと言われている。これは、人工の栽培物が天然に生息・発生した子実体とは成分的にも大きく異なることに起因していると考えられている。
【０００４】
上述したように、菌糸は子実体とは形態的にも成分的にも異なっており、加えて培養により得られた菌糸と子実体の構成組織として存在する菌糸も異なっている。さらに、同じ培養物においても培地に添加する組成物により、培養菌糸の成分が異なることが知られている（例えば、特許文献２）。また、イグチ科のヌメリイグチ属（Ｓｕｉｌｌｕｓ）担子菌の天然子実体は美白効果を有することが知られている（例えば、特許文献３）が、従来の培養等の方法で得られる菌糸はその効果が十分ではなく、高い効果が得られる培養物の確立が望まれていた。
【０００５】
【特許文献１】特開２００５−２７５４６号公報
【特許文献２】特開２００５−２７５１１号公報
【特許文献３】特許３６７８８３２号公報
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
解決しようとする問題点は、ヌメリイグチ属（Ｓｕｉｌｌｕｓ）担子菌の培養等の方法で得られる菌糸は、充分な美白効果を有していないことである。
【課題を解決する手段】
【０００７】
本発明者等は鋭意研究を重ねた結果、イグチ科担子菌（Ｂｏｌｅｔａｃｅａｅ）のヌメリイグチ属（Ｓｕｉｌｌｕｓ）の培養方法として、液体培養培地に添加剤として豆乳及び／またはモノテルペンを添加した組成分により培養することで、該培養菌糸抽出物の美白効果が向上することを見いだし、本発明を完成するに至った。即ち本発明は、豆乳及び／またはモノテルペンを添加した培地で培養されたヌメリイグチ属に属する担子菌の培養物を用いるものである。
【発明を実施するための最良の形態】
【０００８】
本発明における豆乳は、水に浸漬処理した大豆を磨砕して絞った絞り汁である。豆乳はタンパク質、脂質、あるいは無機質などの成分を含有するため、担子菌の良い窒素源となる。本発明で使用する液体培養に用いる豆乳は、豆乳あれば特に限定はなく、実施例では、株式会社紀文フードケミファ製の市販品を用いた。また配合量についても有効量配合されていれば特に限定はないが、好ましくは液体培地組成物中０．１〜２０重量％
、更に好ましくは０．５〜１０重量％ である。０．５〜１０重量％ であれば、より高い美白効果が期待できる。配合量が０．１重量％未満の場合には十分な効果を発揮させることができない為に好ましくなく、２０重量％より多い場合には高圧滅菌時または培養時の操作性が低下する為に好ましくない。
【０００９】
本発明におけるモノテルペンは、テルペン一種である。テルペンは、イソプレンを構成単位とする一群の天然有機化合物の総称であり、不飽和炭化水素以外に、これらの酸化還元生成物（アルコール、アルデヒド、ケトン、酸等）や、炭素の脱離した化合物等が多くの植物および動物体内に見出されている。また、これらの化合物は、形式上2つ以上のイソプレン単位（C5）から構成されており、分子骨格のイソプレン単位の数に応じて、それぞれモノテルペン（C10）、セスキテルペン（C15）、ジテルペン （C20）、セスタテルペン（C25）、トリテルペン（C30）、テトラテルペン（C40）、およびその他のポリテルペンに分類される。また、モノテルペンはモノテルペン合成酵素によってゲラニル二リン酸から生合成され、非環式と環式とに分類される。非環式のものとしては、ゲラニオール（Ｃ１０Ｈ１８Ｏ）、リナロール（Ｃ１０Ｈ１８Ｏ）、シトロネロール（Ｃ１０Ｈ２０Ｏ）、ミルセン（Ｃ１０Ｈ１６）等が例示され、環式のものとしては、ｌ−メントール（Ｃ１０Ｈ２０Ｏ）、チモール（Ｃ１０Ｈ１４Ｏ）、アネトール（Ｃ１０Ｈ１２Ｏ）、テルピネオール（Ｃ１０Ｈ１８Ｏ）等が例示される。該モノテルペンは試薬特級または一級相当品であれば特に限定はなく、実施例では、和光純薬工業株式会社製の一級品を用いた。また配合量ついても有効量配合されていれば特に限定はないが、好ましくは液体培地組成物中０．０００１〜０．０２％
、更に好ましくは０．００１〜０．０１重量％ である。０．００１〜０．０１重量％であれば、より高い美白効果が期待できる。配合量が０．０００１重量％未満の場合には十分な効果を発揮させることができない為に好ましくなく、０．０２重量％より多い場合には効果が平衡に達する。
【００１０】
本発明の液体培養で用いられる基本培地には、イグチ科担子菌を含む外生菌根菌の培養に用いられるポテトデキストロース培地、改変メーリン・ノルクラン（MMN）培地、改変浜田培地が好適に示される。ポテトデキストロース培地は、例えばＰｏｔａｔｏ−Ｄｅｘｔｒｏｓｅ Ｂｒｏｔｈ２．４gを精製水１００ｍＬに溶解させることで調製可能である。MMN培地は、例えばグルコース１．０
ｇ 、モルトエキス０．３ｇ、塩化カルシウム２水和物０．００６６ｇ、塩化ナトリウム０．００２５ｇ、リン酸２水素カリウム０．０５ｇ、リン酸水素２アンモニウム０．０２５ｇ、硫酸マグネシウム７水和物０．０１５ｇ、塩化鉄（III）１%溶液０．１２ｍＬ、チアミン塩酸塩０．０１mg を精製水1００ｍLの水に溶解させることで調製可能である。改変浜田培地は、例えばグルコース２．０ｇ、乾燥酵母０．５ｇを精製水1００ｍLに溶解させることで調製可能である。基本培地には炭素源、窒素源などイグチ科担子菌菌糸体を培養する際の生育に必要な栄養素が含まれており、さらにビタミン類やミネラルを添加することも可能である。
【００１１】
基本培地の炭素源としては、グルコース、キシロース、マンノース、ガラクトース等の単糖類、シュクロース、マルトース、ラクトース、トレハロース等の二糖類、デキストリン、デンプン、セルロース等の多糖類を用いることができる。
【００１２】
基本培地の窒素源としては、イーストエキス、モルトエキス、ペプトン、ポリペプトン、カザミノ酸等の有機物、硝酸カルシウム、硫酸アンモニウム、硝酸ナトリウム、塩化アンモニウム等の窒素含有化合物を用いることができる。
【００１３】
また、ビタミン類としては、例えばビオチン、チアミン（ビタミンＢ1）、ピリドキシン（ビタミンＢ6）、パントテン酸、イノシトール、ニコチン酸等を用いることができる。ミネラルとしては、例えばリン、窒素、カリウム、カルシウム、マグネシウム、イオウ、鉄、マンガン、亜鉛、ホウ素、銅、モリブデン、塩素、ナトリウム、ヨウ素、コバルト等が挙げられ、これらの成分は例えば硝酸カリウム、硝酸ナトリウム、硝酸カルシウム、塩化カリウム、リン酸１水素カリウム、リン酸２水素カリウム、塩化カルシウム、硫酸マグネシウム、硫酸ナトリウム、硫酸第一鉄、硫酸第二鉄、硫酸マンガン、硫酸亜鉛、ホウ酸、硫酸銅、モリブデン酸ナトリウム、三酸化モリブデン、ヨウ化カリウム、塩化コバルト等の化合物として用いることができる。
【００１４】
前記以外の培地組成であっても、イグチ科ヌメリイグチ属担子菌菌糸培養に適している培地であれば、本発明に適用されるのは勿論である。
【００１５】
本発明におけるイグチ科担子菌の液体培養法は、前述の豆乳及び／またはモノテルペンを添加した液体培地にイグチ科ヌメリイグチ属担子菌の種菌を接種し、室温約２０〜３0℃ の好気条件下で約１０〜２０日間培養するのが望ましい。培養は、振とう培養を行なっても良いし、通気培養を行なっても良い。
【００１６】
本発明にいう培養物とは菌糸、培養後菌糸をろ過等の方法により分離した培養液、培養したイグチ科ヌメリイグチ属担子菌の菌糸体を通常の方法により抽出した菌糸体抽出物である。また培養物は通常の方法により精製したものを含む。
【００１７】
本発明における培養液は、培養した培養物をろ過し、菌糸体を取り除くことで調製される。ろ過方法は特に限定はされないが、例えば種々の適当なろ紙またはメンブレンを用いて常圧下または吸引下でろ過することができる。ろ紙素材としては、セルロース、ガラス繊維、シリカ繊維、セルロースアセテート、セルロース混合エステル、ポリカーボネート等が例示される。
【００１８】
本発明に用いるハナイグチ培養菌糸抽出物の調製法は、特に限定されないが、例えば種々の適当な有機溶媒を用いて低温下から加温下で抽出することができる。抽出溶媒としては、例えば、水；メチルアルコール、エチルアルコール等の低級１
価アルコール；グリセリン、プロピレングリコール、１、３−ブチレングリコール等の液状多価アルコール；アセトン、メチルエチルケトン等のケトン；酢酸エチルなどのアルキルエステル；ベンゼン、ヘキサン等の炭化水素；ジエチルエーテル等のエーテル類；ジクロルメタン、クロロホルム等のハロゲン化アルカン等の１
種または２ 種以上を用いることが出来る。そのうち、水、エチルアルコール、１、３−ブチレングリコールの１種または２種以上の混合溶媒が特に好適に示される。
【００１９】
ヌメリイグチ属担子菌の培養菌糸の抽出は、菌糸をそのままあるいは乾燥したものを重量比で１〜１０００倍量、特に５〜１００倍量の溶媒を用いることが出来る。常温抽出の場合には、０℃以上、特に２０℃〜４０℃で１時間以上、特に３〜７日間行うのが好適である。また、６０〜１００℃で０．５〜２４時間、加熱抽出しても良い。
【００２０】
以上のような条件で得られるヌメリイグチ属担子菌の培養菌糸抽出物は、ろ過等の処理をして溶液のまま用いても良いが、更に必要により、濃縮、粉末化したものを適宜使い分けて用いることが出来る。
【００２１】
本発明に係る培養物の他に、水性成分、油性成分、植物抽出物、動物抽出物、粉末、賦形剤、界面活性剤、油剤、アルコール、ｐＨ調整剤、防腐剤、酸化防止剤、増粘剤、色素、香料等を必要に応じて混合して適宜配合することにより調製される。本発明の化粧料の剤型は特に限定されず、化粧水、乳液、クリーム、パック、パウダー、スプレー、軟膏、分散液、洗浄料等種々の剤型とすることができる。
【実施例】
【００２２】
以下に、本発明に関する実施例を示すと共にその素材を用いた皮膚外用剤への応用処方例等について述べるが、本発明は、ここに記載された実施例に限定されるものではない。
【００２３】
＜実施例1＞ メラニン産生抑制効果の測定
皮膚の黒化には色素のメラニンが深く関与していると考えられる。即ち、メラニンが紫外線などの外的刺激を受けて肌の皮膚組織で生産され、その結果、肌の黒化が促進され、シミ・ソバカス・色黒等の症状が引き起こされると考えられている。よって、肌の美白作用の確認法としメラニン産生抑制効果に着目し、マウスメラノーマ細胞によるメラニン産生抑制試験を行った。以下、ハナイグチ培養菌糸抽出 物の美白効果に関するメラニン産生抑制試験について説明する。
【００２４】
＜液体培養の組成例＞
本発明に係る液体培養培地を表１に示した組成にて作製した。グルコース１０．０ ｇ 、モルトエキス３．０ｇ、塩化カルシウム２水和物０．０６６ｇ、塩化ナトリウム０．０２５ｇ、リン酸２水素カリウム０．５ｇ、リン酸水素２アンモニウム０．２５ｇ、硫酸マグネシウム７水和物０．１５ｇ、塩化鉄（III）１%溶液１．２ｍＬ、チアミン塩酸塩０．１mg を1０００ｍLの水に添加して基本の液体培地を作った。また、添加物として豆乳及び／またはモノテルペンを表１の量を添加して液体培地を調製後、オートクレーブを用いて高圧殺菌した。
【００２５】
植え付ける種菌は、天然子実体より分離したハナイグチ菌糸をＰｏｔａｔｏ−Ｄｅｘｔｒｏｓｅ
Ｂｒｏｔｈ（Ｄｉｆｃｏ社製）２．４％で振とう培養（２４℃、１５０ｒｐｍ、２週間）したものを用いた。得られた菌糸をホモジネートしたものを５ｍLずつ培養瓶に接種した。接種後は２４℃の条件下で通気しながら培養を行った。
【００２６】
培養を開始して約１４日後には液体培地に菌糸体が生育した。そこで、生育した菌糸体を収集し、これを水でよく洗浄したのち凍結乾燥し、ハナイグチ培養菌糸を得た。
【００２７】
【表１】
【００２８】
＜試料の調製＞
ハナイグチ培養菌糸のエタノール抽出物は、ハナイグチ培養菌糸をエタノールで、６０℃にて２４時間抽出した。溶媒を留去し、１％濃度になるようにエタノールに溶解した。ハナイグチ培養菌糸の水抽出物は、ハナイグチ培養菌糸を精製水で、６０℃にて２４時間抽出した。溶媒を留去し、１％濃度になるように精製水に溶解した。ハナイグチ培養液は、培養した培養物をＡＤＶＡＮＴＥＣ 5Ｃ定量ろ過を用いて吸引ろ過し調製した。陽性対照として用いたアルブチンは、市販の試薬を用いてＰＢＳ（−）溶液に溶解した。試料は全て、０．２μｍメンブレンフィルターで除菌ろ過を行った。
【００２９】
天然子実体抽出物は、ハナイグチ天然子実体をエタノール溶液または精製水で、６０℃にて２４時間抽出した。その後、溶媒を留去し、１％濃度になるようにエタノール溶液または水に溶解、調製した。
【００３０】
＜細胞培養＞
培養液は、牛胎児血清５．０％を加えたダルベッコＭＥＭ（Ｄ−ＭＥＭ）培地を用いた。細胞は、マウスメラノーマＢ−１６ Ｆ−１０を１２ウェルプレートに植え付けた。植え付け量は５×１０４／ｗｅｌｌとした。植え付けの翌日、抽出物試料を乾燥物濃度にして、エタノール抽出物は２５ｐｐｍ、水抽出物は２００ｐｐｍの濃度になるよう添加し、添加後３日後に試験を終了した。
【００３１】
＜評価方法＞
１２ウェルプレートに増殖した細胞をＰＢＳ（−）溶液で洗浄後、２Ｎ−ＮａＯＨ溶液に溶解し、４０５ｎｍの吸光度を測定した。それぞれ吸光度をコントロールと比較することにより、８段階表示をした。
【００３２】
＜判定基準＞
表２に結果の判定基準を示す。メラニン量はコントロールと比較した吸光度値の割合で示した。なおアルブチンは、メラニン産生抑制の陽性対照物質として示している。
【００３３】
【表２】
【００３４】
表１に示した培地組成で培養することにより得た培養菌糸のエタノール抽出液、および天然子実体のエタノール抽出液を用いた場合のメラニン産生抑制効果試験の測定結果を表３に示す。表３より明らかなように、本発明に係わる豆乳を添加した実施例１のエタノール抽出液のメラニン産生抑制の判定は２、ゲラニオールを添加した実施例２のエタノール抽出液のメラニン産生抑制の判定は３、豆乳およびゲラニオールを添加した実施例３のエタノール抽出液のメラニン産生抑制の判定は１であり、高いメラニン産生抑制効果が認められた。また、ｌ−メントールを添加した実施例４、リナロールを添加した実施例５のエタノール抽出液のメラニン産生抑制の判定も高いメラニン産生抑制効果が認められた。実施例１、実施例３、実施例４については、メラニン産生抑制効果の高いことで知られているアルブチンの効果（判定２）と同等以上の高い効果であった。一方、添加物無添加の比較例１のエタノール抽出液のメラニン産生抑制の判定は７であり、天然のハナイグチ子実体のエタノール抽出液を用いた比較例２はメラニン産生抑制の判定が６であった。
【００３５】
【表３】
【００３６】
表１に示した培地組成で培養することにより得た培養菌糸の水抽出液を用いた場合のメラニン産生抑制効果試験の測定結果を表４に示す。表４より明らかなように、本発明に係わる豆乳を添加した実施例６の水抽出液のメラニン産生抑制の判定は３、ゲラニオールを添加した実施例７の水抽出液のメラニン産生抑制の判定は２、豆乳およびゲラニオールを添加した実施例８の水抽出液のメラニン産生抑制の判定は１であり、高いメラニン産生抑制効果が認められた。また、ｌ−メントールを添加した実施例９、リナロールを添加した実施例１０の水抽出液のメラニン産生抑制の判定も高いメラニン産生抑制効果が認められ、実施例７、実施例８、実施例９、実施例１０については、アルブチンの効果と同等以上の高い効果を有していた、一方、添加物無添加の比較例３の水抽出液のメラニン産生抑制の判定は７であった。
【００３７】
【表４】
【００３８】
表１に示した培地組成で培養することにより得た培養液のメラニン産生抑制効果試験の測定結果を表５に示す。表５より明らかなように、本発明に係わる豆乳を添加した実施例１１の培養液のメラニン産生抑制の判定は３、ゲラニオールを添加した実施例１２の培養液のメラニン産生抑制の判定は３、豆乳およびゲラニオールを添加した実施例１３の培養液のメラニン産生抑制の判定は２、ｌ−メントールを添加した実施例１４の培養液のメラニン産生抑制の判定は３、リナロールを添加した実施例１５の培養液のメラニン産生抑制の判定は３であり、高いメラニン産生抑制効果が認められた。一方、添加物無添加の比較例４の培養液のメラニン産生抑制の判定は８であった。
【００３９】
【表５】
【００４０】
この様に、豆乳及び／またはモノテルペンを添加した菌糸体抽出物、培養液のメラニン産生抑制効果は、高いメラニン産生抑制効果があるとされているアルブチン及び天然のハナイグチ子実体と比較しても同等以上の高い効果を有することが認められた。実施例に供した豆乳、またはモノテルペン自体のメラニン産生抑制効果は報告されていないことから上記の結果は豆乳またはモノテルペン自体の効果ではなく、豆乳及び／またはモノテルペンを添加して培養することにより、菌糸体のメラニン産生抑制効果が明らかに向上することを示している。
【００４１】
実施例と同様に、ヌメリイグチ（Ｓｕｉｌｌｕｓ ｌｕｔｅｕｓ）、アミタケ（Ｓｕｉｌｌｕｓ
ｂｏｖｉｎｕｓ）、チチアワタケ（Ｓｕｉｌｌｕｓ ｇｒａｎｕｌａｔｕｓ）、シロヌメリイグチ（Ｓｕｉｌｌｕｓ ｌａｒｉｃｉｎｕｓ）、ヌメリツバイグチ（Ｓｕｉｌｌｕｓ ｌｕｔｅｕｓ）の培養においても、豆乳及び／またはモノテルペンの添加によって、菌糸水抽出液、菌糸エタノール抽出液、培養液のメラニン産生抑制効果が向上した。
【００４２】
次に、本発明の培養処理物を配合した処方例を示すが、本発明はこれに限定されるものでない。
化粧料の処方例
【００４３】
（１）化粧用クリーム （重量％）
ａ） ミツロウ・・・２．０
ｂ） ステアリルアルコール・・・５．０
ｃ） ステアリン酸・・・８．０
ｄ） スクワラン・・・１０．０
ｅ） 自己乳化型グリセリルモノステアレート・・・３．０
ｆ） ポリオキシエチレンセチルエーテル（２０Ｅ．Ｏ．）・・・１．０
ｇ） ハナイグチ菌糸体水抽出物（ゲラニオール０．００５%配合培養）・・・２．０
ｈ） １，３−ブチレングリコール・・・５．０
ｉ） 水酸化カリウム・・・０．３
ｊ） 防腐剤・酸化防止剤・・・適量
ｋ） 精製水・・・残部
製法
ａ）〜ｆ）までを加熱溶解し、８０℃に保つ。ｈ）
〜 ｋ）までを加熱溶解し、８０℃に保ち、ａ） 〜ｆ）に加えて乳化し、４０℃まで撹拌しながら冷却する。その後、ｇ）を加え、攪拌し均一に溶解する。
【００４４】
（２）乳液 （ 重量％ ）
ａ） ミツロウ・・・０．５
ｂ） ワセリン・・・２．０
ｃ） スクワラン・・・８．０
ｄ） ソルビタンセスキオレエート・・・０．８
ｅ） ポリオキシエチレンオレイルエーテル（２０Ｅ．Ｏ．）・・・１．２
ｆ） ハナイグチ菌糸体エタノール抽出物（ゲラニオール０．００５%配合培養）・・・１．０
ｇ） １，３− ブチレングリコール・・・７．０
ｈ） カルボキシビニルポリマー・・・０．２
ｉ） 水酸化カリウム・・・０．１
ｊ） 精製水・・・残部
ｋ） 防腐剤・酸化防止剤・・・適量
ｌ） エタノール・・・７．０
製法
ａ）〜ｅ）までを加熱溶解し、８０℃に保つ。ｇ）〜ｋ）までを加熱溶解し、８０℃に保ち、ａ）〜ｅ）に加えて乳化し、５０℃
まで撹拌しながら冷却する。５０℃ でｆ）、ｌ）を添加し、４０℃まで攪拌、冷却する。
【００４５】
（３）化粧水 （重量％）
ａ） ハナイグチ菌糸体エタノール抽出物（豆乳５%配合培養）・・・１．０
ｂ） グリセリン・・・５．０
ｃ） ポリオキシエチレンソルビタンモノラウレート（２０Ｅ．Ｏ．）・・・１．０
ｄ） エタノール・・・６．０
ｅ） 香料・・・適量
ｆ） 防腐剤・酸化防止剤・・・適量
ｇ） 精製水・・・残部
製法
a）〜ｇ）までを混合し、均一に溶解する。
【００４６】
（４）洗顔料 （重量％）
ａ） ステアリン酸・・・１２ ．０
ｂ） ミリスチン酸・・・１４ ．０
ｃ） ラウリン酸・・・５．０
ｄ） ホホバ油・・・３．０
ｅ） グリセリン・・・１０．０
ｆ） ソルビトール・・・１５．０
ｇ） １，３−ブチレングリコール・・・１０．０
ｈ） ＰＯＥ（２０）グリセロールモノステアリン酸・・・２．０
ｉ） 水酸化カリウム・・・５．０
ｊ） 水・・・残部
ｋ） キレート剤・・・適量
ｌ） 香料・・・適量
ｍ） ハナイグチ菌糸体水抽出物（豆乳５%配合培養）・・・２．０
製法
ａ）〜ｈ）までを加熱溶解し７０℃に保つ。ｊ）にｉ）を溶解後ａ）〜ｈ）に加えケン化する。その後ｋ）、ｌ）を入れ攪拌しながら冷却する。５０℃でｍ）を添加し、４０℃まで攪拌、冷却する。
【００４７】
＜効果確認試験＞
（１）塗布によるヒトでの効果確認試験
被験者として、２０〜５０歳の女性１５名に１日２回（朝、夜）連続２ヵ月間、本発明品と比較品のそれぞれを使用させ、塗布部位の状態を試験前後で比較し、改善効果を調べた。本試験には、実施例１６
として処方例中の（１）化粧用クリームで示した化粧料を用い、比較例５には実施例１６からハナイグチ菌糸体水抽出物（ゲラニオール０．００５%配合培養）を除き、代わりに添加物無配合で培養したハナイグチ菌糸体水抽出物を配合した化粧料、比較例６には実施例１からハナイグチ菌糸体水抽出物を除いた化粧料を作成し、その使用による効果について調べた。本発明の有効成分を配合した化粧料を毎日使用しながら肌の美白効果及び使用後の肌の感触について塗布開始前及び２ヶ月塗布後におけるアンケートで集計し、効果の確認を行った。
【００４８】
＜美白効果の評価基準＞
著効：しみ・ソバカスが消えた部分がある。
有効：しみ・ソバカスが目立たなくなった。
やや有効：しみ・ソバカスがやや目立たなくなった。
無効：変化が認められなかった。
【００４９】
【表６】
【００５０】
表６より、比較例６にもやや美白効果が見られるが、ゲラニオール０．００５%配合培地で培養したハナイグチ菌糸体抽出物を配合した実施例１６は、非常に高い美白効果があることがわかる。実施例１６ と比較例６を比較すると、実施例１６の方が比較例６よりはるかにこれらの効果が高いことから、これらの効果はゲラニオールの配合に起因していることが明らかになった。
尚、本試験において実施例１６を使用して何らかの刺激があったと答えた人はいなかった。
【産業上の利用可能性】
【００５１】
本発明によるイグチ科ヌメリイグチ属担子菌の菌糸体の培養方法によれば、豆乳及び／またはモノテルペンを含有する液体培地の中で培養させることで、天然の子実体及び公知であるアルブチンと比較して、高い美白効果有する培養物を提供することが可能であり、化粧料や医薬品、及び食品の各分野に広く応用が期待できる。
【技術分野】
【０００１】
本発明は、イグチ科ヌメリイグチ属担子菌培養物に関するものであり、更に詳しくは、イグチ科ヌメリイグチ属（Ｓｕｉｌｌｕｓ）担子菌の美白効果を向上させるための培地及びその培地を用いた培養物とその利用方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
イグチ科に属するヌメリイグチ属（Ｓｕｉｌｌｕｓ）の担子菌は、いくつかの生理活性効果が知られている。イグチ科担子菌のヌメリイグチ属（Ｓｕｉｌｌｕｓ）は、ハナイグチ（Ｓｕｉｌｌｕｓ ｇｒｅｖｉｌｌｅｉ）、ヌメリイグチ（Ｓｕｉｌｌｕｓ ｌｕｔｅｕｓ）、アミタケ（Ｓｕｉｌｌｕｓ
ｂｏｖｉｎｕｓ）、チチアワタケ（Ｓｕｉｌｌｕｓ ｇｒａｎｕｌａｔｕｓ）、シロヌメリイグチ（Ｓｕｉｌｌｕｓ ｌａｒｉｃｉｎｕｓ）、ヌメリツバイグチ（Ｓｕｉｌｌｕｓ ｌｕｔｅｕｓ）等が属する。しかし、その供給源としての天然の子実体は入手の時期が限定され、また入手した後も、子実体の個体差による有用性の変動や量産化等実用面での問題点が多い。そこで近年、イグチ科担子菌を含む外生菌根菌の菌糸体を人工的に培養する方法が提案されている（例えば、特許文献１）。
【０００３】
担子菌類は、胞子が発芽した後、菌糸が成長し、ある特定条件下で子実体が形成される。一般には、この菌糸から分化した子実体が「キノコ」と呼ばれ、市場に出回っているのは菌糸から子実体への栽培が確立したものである。担子菌類においては、菌糸や子実体自体に含まれる成分や二次代謝物は、摂取する有機物の種類や分化の段階によってもその成分や量が変動することが知られており、愛好家の中では、天然物のキノコが有する風味は市販されているものが有するそれと比べて格段に良いと言われている。これは、人工の栽培物が天然に生息・発生した子実体とは成分的にも大きく異なることに起因していると考えられている。
【０００４】
上述したように、菌糸は子実体とは形態的にも成分的にも異なっており、加えて培養により得られた菌糸と子実体の構成組織として存在する菌糸も異なっている。さらに、同じ培養物においても培地に添加する組成物により、培養菌糸の成分が異なることが知られている（例えば、特許文献２）。また、イグチ科のヌメリイグチ属（Ｓｕｉｌｌｕｓ）担子菌の天然子実体は美白効果を有することが知られている（例えば、特許文献３）が、従来の培養等の方法で得られる菌糸はその効果が十分ではなく、高い効果が得られる培養物の確立が望まれていた。
【０００５】
【特許文献１】特開２００５−２７５４６号公報
【特許文献２】特開２００５−２７５１１号公報
【特許文献３】特許３６７８８３２号公報
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
解決しようとする問題点は、ヌメリイグチ属（Ｓｕｉｌｌｕｓ）担子菌の培養等の方法で得られる菌糸は、充分な美白効果を有していないことである。
【課題を解決する手段】
【０００７】
本発明者等は鋭意研究を重ねた結果、イグチ科担子菌（Ｂｏｌｅｔａｃｅａｅ）のヌメリイグチ属（Ｓｕｉｌｌｕｓ）の培養方法として、液体培養培地に添加剤として豆乳及び／またはモノテルペンを添加した組成分により培養することで、該培養菌糸抽出物の美白効果が向上することを見いだし、本発明を完成するに至った。即ち本発明は、豆乳及び／またはモノテルペンを添加した培地で培養されたヌメリイグチ属に属する担子菌の培養物を用いるものである。
【発明を実施するための最良の形態】
【０００８】
本発明における豆乳は、水に浸漬処理した大豆を磨砕して絞った絞り汁である。豆乳はタンパク質、脂質、あるいは無機質などの成分を含有するため、担子菌の良い窒素源となる。本発明で使用する液体培養に用いる豆乳は、豆乳あれば特に限定はなく、実施例では、株式会社紀文フードケミファ製の市販品を用いた。また配合量についても有効量配合されていれば特に限定はないが、好ましくは液体培地組成物中０．１〜２０重量％
、更に好ましくは０．５〜１０重量％ である。０．５〜１０重量％ であれば、より高い美白効果が期待できる。配合量が０．１重量％未満の場合には十分な効果を発揮させることができない為に好ましくなく、２０重量％より多い場合には高圧滅菌時または培養時の操作性が低下する為に好ましくない。
【０００９】
本発明におけるモノテルペンは、テルペン一種である。テルペンは、イソプレンを構成単位とする一群の天然有機化合物の総称であり、不飽和炭化水素以外に、これらの酸化還元生成物（アルコール、アルデヒド、ケトン、酸等）や、炭素の脱離した化合物等が多くの植物および動物体内に見出されている。また、これらの化合物は、形式上2つ以上のイソプレン単位（C5）から構成されており、分子骨格のイソプレン単位の数に応じて、それぞれモノテルペン（C10）、セスキテルペン（C15）、ジテルペン （C20）、セスタテルペン（C25）、トリテルペン（C30）、テトラテルペン（C40）、およびその他のポリテルペンに分類される。また、モノテルペンはモノテルペン合成酵素によってゲラニル二リン酸から生合成され、非環式と環式とに分類される。非環式のものとしては、ゲラニオール（Ｃ１０Ｈ１８Ｏ）、リナロール（Ｃ１０Ｈ１８Ｏ）、シトロネロール（Ｃ１０Ｈ２０Ｏ）、ミルセン（Ｃ１０Ｈ１６）等が例示され、環式のものとしては、ｌ−メントール（Ｃ１０Ｈ２０Ｏ）、チモール（Ｃ１０Ｈ１４Ｏ）、アネトール（Ｃ１０Ｈ１２Ｏ）、テルピネオール（Ｃ１０Ｈ１８Ｏ）等が例示される。該モノテルペンは試薬特級または一級相当品であれば特に限定はなく、実施例では、和光純薬工業株式会社製の一級品を用いた。また配合量ついても有効量配合されていれば特に限定はないが、好ましくは液体培地組成物中０．０００１〜０．０２％
、更に好ましくは０．００１〜０．０１重量％ である。０．００１〜０．０１重量％であれば、より高い美白効果が期待できる。配合量が０．０００１重量％未満の場合には十分な効果を発揮させることができない為に好ましくなく、０．０２重量％より多い場合には効果が平衡に達する。
【００１０】
本発明の液体培養で用いられる基本培地には、イグチ科担子菌を含む外生菌根菌の培養に用いられるポテトデキストロース培地、改変メーリン・ノルクラン（MMN）培地、改変浜田培地が好適に示される。ポテトデキストロース培地は、例えばＰｏｔａｔｏ−Ｄｅｘｔｒｏｓｅ Ｂｒｏｔｈ２．４gを精製水１００ｍＬに溶解させることで調製可能である。MMN培地は、例えばグルコース１．０
ｇ 、モルトエキス０．３ｇ、塩化カルシウム２水和物０．００６６ｇ、塩化ナトリウム０．００２５ｇ、リン酸２水素カリウム０．０５ｇ、リン酸水素２アンモニウム０．０２５ｇ、硫酸マグネシウム７水和物０．０１５ｇ、塩化鉄（III）１%溶液０．１２ｍＬ、チアミン塩酸塩０．０１mg を精製水1００ｍLの水に溶解させることで調製可能である。改変浜田培地は、例えばグルコース２．０ｇ、乾燥酵母０．５ｇを精製水1００ｍLに溶解させることで調製可能である。基本培地には炭素源、窒素源などイグチ科担子菌菌糸体を培養する際の生育に必要な栄養素が含まれており、さらにビタミン類やミネラルを添加することも可能である。
【００１１】
基本培地の炭素源としては、グルコース、キシロース、マンノース、ガラクトース等の単糖類、シュクロース、マルトース、ラクトース、トレハロース等の二糖類、デキストリン、デンプン、セルロース等の多糖類を用いることができる。
【００１２】
基本培地の窒素源としては、イーストエキス、モルトエキス、ペプトン、ポリペプトン、カザミノ酸等の有機物、硝酸カルシウム、硫酸アンモニウム、硝酸ナトリウム、塩化アンモニウム等の窒素含有化合物を用いることができる。
【００１３】
また、ビタミン類としては、例えばビオチン、チアミン（ビタミンＢ1）、ピリドキシン（ビタミンＢ6）、パントテン酸、イノシトール、ニコチン酸等を用いることができる。ミネラルとしては、例えばリン、窒素、カリウム、カルシウム、マグネシウム、イオウ、鉄、マンガン、亜鉛、ホウ素、銅、モリブデン、塩素、ナトリウム、ヨウ素、コバルト等が挙げられ、これらの成分は例えば硝酸カリウム、硝酸ナトリウム、硝酸カルシウム、塩化カリウム、リン酸１水素カリウム、リン酸２水素カリウム、塩化カルシウム、硫酸マグネシウム、硫酸ナトリウム、硫酸第一鉄、硫酸第二鉄、硫酸マンガン、硫酸亜鉛、ホウ酸、硫酸銅、モリブデン酸ナトリウム、三酸化モリブデン、ヨウ化カリウム、塩化コバルト等の化合物として用いることができる。
【００１４】
前記以外の培地組成であっても、イグチ科ヌメリイグチ属担子菌菌糸培養に適している培地であれば、本発明に適用されるのは勿論である。
【００１５】
本発明におけるイグチ科担子菌の液体培養法は、前述の豆乳及び／またはモノテルペンを添加した液体培地にイグチ科ヌメリイグチ属担子菌の種菌を接種し、室温約２０〜３0℃ の好気条件下で約１０〜２０日間培養するのが望ましい。培養は、振とう培養を行なっても良いし、通気培養を行なっても良い。
【００１６】
本発明にいう培養物とは菌糸、培養後菌糸をろ過等の方法により分離した培養液、培養したイグチ科ヌメリイグチ属担子菌の菌糸体を通常の方法により抽出した菌糸体抽出物である。また培養物は通常の方法により精製したものを含む。
【００１７】
本発明における培養液は、培養した培養物をろ過し、菌糸体を取り除くことで調製される。ろ過方法は特に限定はされないが、例えば種々の適当なろ紙またはメンブレンを用いて常圧下または吸引下でろ過することができる。ろ紙素材としては、セルロース、ガラス繊維、シリカ繊維、セルロースアセテート、セルロース混合エステル、ポリカーボネート等が例示される。
【００１８】
本発明に用いるハナイグチ培養菌糸抽出物の調製法は、特に限定されないが、例えば種々の適当な有機溶媒を用いて低温下から加温下で抽出することができる。抽出溶媒としては、例えば、水；メチルアルコール、エチルアルコール等の低級１
価アルコール；グリセリン、プロピレングリコール、１、３−ブチレングリコール等の液状多価アルコール；アセトン、メチルエチルケトン等のケトン；酢酸エチルなどのアルキルエステル；ベンゼン、ヘキサン等の炭化水素；ジエチルエーテル等のエーテル類；ジクロルメタン、クロロホルム等のハロゲン化アルカン等の１
種または２ 種以上を用いることが出来る。そのうち、水、エチルアルコール、１、３−ブチレングリコールの１種または２種以上の混合溶媒が特に好適に示される。
【００１９】
ヌメリイグチ属担子菌の培養菌糸の抽出は、菌糸をそのままあるいは乾燥したものを重量比で１〜１０００倍量、特に５〜１００倍量の溶媒を用いることが出来る。常温抽出の場合には、０℃以上、特に２０℃〜４０℃で１時間以上、特に３〜７日間行うのが好適である。また、６０〜１００℃で０．５〜２４時間、加熱抽出しても良い。
【００２０】
以上のような条件で得られるヌメリイグチ属担子菌の培養菌糸抽出物は、ろ過等の処理をして溶液のまま用いても良いが、更に必要により、濃縮、粉末化したものを適宜使い分けて用いることが出来る。
【００２１】
本発明に係る培養物の他に、水性成分、油性成分、植物抽出物、動物抽出物、粉末、賦形剤、界面活性剤、油剤、アルコール、ｐＨ調整剤、防腐剤、酸化防止剤、増粘剤、色素、香料等を必要に応じて混合して適宜配合することにより調製される。本発明の化粧料の剤型は特に限定されず、化粧水、乳液、クリーム、パック、パウダー、スプレー、軟膏、分散液、洗浄料等種々の剤型とすることができる。
【実施例】
【００２２】
以下に、本発明に関する実施例を示すと共にその素材を用いた皮膚外用剤への応用処方例等について述べるが、本発明は、ここに記載された実施例に限定されるものではない。
【００２３】
＜実施例1＞ メラニン産生抑制効果の測定
皮膚の黒化には色素のメラニンが深く関与していると考えられる。即ち、メラニンが紫外線などの外的刺激を受けて肌の皮膚組織で生産され、その結果、肌の黒化が促進され、シミ・ソバカス・色黒等の症状が引き起こされると考えられている。よって、肌の美白作用の確認法としメラニン産生抑制効果に着目し、マウスメラノーマ細胞によるメラニン産生抑制試験を行った。以下、ハナイグチ培養菌糸抽出 物の美白効果に関するメラニン産生抑制試験について説明する。
【００２４】
＜液体培養の組成例＞
本発明に係る液体培養培地を表１に示した組成にて作製した。グルコース１０．０ ｇ 、モルトエキス３．０ｇ、塩化カルシウム２水和物０．０６６ｇ、塩化ナトリウム０．０２５ｇ、リン酸２水素カリウム０．５ｇ、リン酸水素２アンモニウム０．２５ｇ、硫酸マグネシウム７水和物０．１５ｇ、塩化鉄（III）１%溶液１．２ｍＬ、チアミン塩酸塩０．１mg を1０００ｍLの水に添加して基本の液体培地を作った。また、添加物として豆乳及び／またはモノテルペンを表１の量を添加して液体培地を調製後、オートクレーブを用いて高圧殺菌した。
【００２５】
植え付ける種菌は、天然子実体より分離したハナイグチ菌糸をＰｏｔａｔｏ−Ｄｅｘｔｒｏｓｅ
Ｂｒｏｔｈ（Ｄｉｆｃｏ社製）２．４％で振とう培養（２４℃、１５０ｒｐｍ、２週間）したものを用いた。得られた菌糸をホモジネートしたものを５ｍLずつ培養瓶に接種した。接種後は２４℃の条件下で通気しながら培養を行った。
【００２６】
培養を開始して約１４日後には液体培地に菌糸体が生育した。そこで、生育した菌糸体を収集し、これを水でよく洗浄したのち凍結乾燥し、ハナイグチ培養菌糸を得た。
【００２７】
【表１】
【００２８】
＜試料の調製＞
ハナイグチ培養菌糸のエタノール抽出物は、ハナイグチ培養菌糸をエタノールで、６０℃にて２４時間抽出した。溶媒を留去し、１％濃度になるようにエタノールに溶解した。ハナイグチ培養菌糸の水抽出物は、ハナイグチ培養菌糸を精製水で、６０℃にて２４時間抽出した。溶媒を留去し、１％濃度になるように精製水に溶解した。ハナイグチ培養液は、培養した培養物をＡＤＶＡＮＴＥＣ 5Ｃ定量ろ過を用いて吸引ろ過し調製した。陽性対照として用いたアルブチンは、市販の試薬を用いてＰＢＳ（−）溶液に溶解した。試料は全て、０．２μｍメンブレンフィルターで除菌ろ過を行った。
【００２９】
天然子実体抽出物は、ハナイグチ天然子実体をエタノール溶液または精製水で、６０℃にて２４時間抽出した。その後、溶媒を留去し、１％濃度になるようにエタノール溶液または水に溶解、調製した。
【００３０】
＜細胞培養＞
培養液は、牛胎児血清５．０％を加えたダルベッコＭＥＭ（Ｄ−ＭＥＭ）培地を用いた。細胞は、マウスメラノーマＢ−１６ Ｆ−１０を１２ウェルプレートに植え付けた。植え付け量は５×１０４／ｗｅｌｌとした。植え付けの翌日、抽出物試料を乾燥物濃度にして、エタノール抽出物は２５ｐｐｍ、水抽出物は２００ｐｐｍの濃度になるよう添加し、添加後３日後に試験を終了した。
【００３１】
＜評価方法＞
１２ウェルプレートに増殖した細胞をＰＢＳ（−）溶液で洗浄後、２Ｎ−ＮａＯＨ溶液に溶解し、４０５ｎｍの吸光度を測定した。それぞれ吸光度をコントロールと比較することにより、８段階表示をした。
【００３２】
＜判定基準＞
表２に結果の判定基準を示す。メラニン量はコントロールと比較した吸光度値の割合で示した。なおアルブチンは、メラニン産生抑制の陽性対照物質として示している。
【００３３】
【表２】
【００３４】
表１に示した培地組成で培養することにより得た培養菌糸のエタノール抽出液、および天然子実体のエタノール抽出液を用いた場合のメラニン産生抑制効果試験の測定結果を表３に示す。表３より明らかなように、本発明に係わる豆乳を添加した実施例１のエタノール抽出液のメラニン産生抑制の判定は２、ゲラニオールを添加した実施例２のエタノール抽出液のメラニン産生抑制の判定は３、豆乳およびゲラニオールを添加した実施例３のエタノール抽出液のメラニン産生抑制の判定は１であり、高いメラニン産生抑制効果が認められた。また、ｌ−メントールを添加した実施例４、リナロールを添加した実施例５のエタノール抽出液のメラニン産生抑制の判定も高いメラニン産生抑制効果が認められた。実施例１、実施例３、実施例４については、メラニン産生抑制効果の高いことで知られているアルブチンの効果（判定２）と同等以上の高い効果であった。一方、添加物無添加の比較例１のエタノール抽出液のメラニン産生抑制の判定は７であり、天然のハナイグチ子実体のエタノール抽出液を用いた比較例２はメラニン産生抑制の判定が６であった。
【００３５】
【表３】
【００３６】
表１に示した培地組成で培養することにより得た培養菌糸の水抽出液を用いた場合のメラニン産生抑制効果試験の測定結果を表４に示す。表４より明らかなように、本発明に係わる豆乳を添加した実施例６の水抽出液のメラニン産生抑制の判定は３、ゲラニオールを添加した実施例７の水抽出液のメラニン産生抑制の判定は２、豆乳およびゲラニオールを添加した実施例８の水抽出液のメラニン産生抑制の判定は１であり、高いメラニン産生抑制効果が認められた。また、ｌ−メントールを添加した実施例９、リナロールを添加した実施例１０の水抽出液のメラニン産生抑制の判定も高いメラニン産生抑制効果が認められ、実施例７、実施例８、実施例９、実施例１０については、アルブチンの効果と同等以上の高い効果を有していた、一方、添加物無添加の比較例３の水抽出液のメラニン産生抑制の判定は７であった。
【００３７】
【表４】
【００３８】
表１に示した培地組成で培養することにより得た培養液のメラニン産生抑制効果試験の測定結果を表５に示す。表５より明らかなように、本発明に係わる豆乳を添加した実施例１１の培養液のメラニン産生抑制の判定は３、ゲラニオールを添加した実施例１２の培養液のメラニン産生抑制の判定は３、豆乳およびゲラニオールを添加した実施例１３の培養液のメラニン産生抑制の判定は２、ｌ−メントールを添加した実施例１４の培養液のメラニン産生抑制の判定は３、リナロールを添加した実施例１５の培養液のメラニン産生抑制の判定は３であり、高いメラニン産生抑制効果が認められた。一方、添加物無添加の比較例４の培養液のメラニン産生抑制の判定は８であった。
【００３９】
【表５】
【００４０】
この様に、豆乳及び／またはモノテルペンを添加した菌糸体抽出物、培養液のメラニン産生抑制効果は、高いメラニン産生抑制効果があるとされているアルブチン及び天然のハナイグチ子実体と比較しても同等以上の高い効果を有することが認められた。実施例に供した豆乳、またはモノテルペン自体のメラニン産生抑制効果は報告されていないことから上記の結果は豆乳またはモノテルペン自体の効果ではなく、豆乳及び／またはモノテルペンを添加して培養することにより、菌糸体のメラニン産生抑制効果が明らかに向上することを示している。
【００４１】
実施例と同様に、ヌメリイグチ（Ｓｕｉｌｌｕｓ ｌｕｔｅｕｓ）、アミタケ（Ｓｕｉｌｌｕｓ
ｂｏｖｉｎｕｓ）、チチアワタケ（Ｓｕｉｌｌｕｓ ｇｒａｎｕｌａｔｕｓ）、シロヌメリイグチ（Ｓｕｉｌｌｕｓ ｌａｒｉｃｉｎｕｓ）、ヌメリツバイグチ（Ｓｕｉｌｌｕｓ ｌｕｔｅｕｓ）の培養においても、豆乳及び／またはモノテルペンの添加によって、菌糸水抽出液、菌糸エタノール抽出液、培養液のメラニン産生抑制効果が向上した。
【００４２】
次に、本発明の培養処理物を配合した処方例を示すが、本発明はこれに限定されるものでない。
化粧料の処方例
【００４３】
（１）化粧用クリーム （重量％）
ａ） ミツロウ・・・２．０
ｂ） ステアリルアルコール・・・５．０
ｃ） ステアリン酸・・・８．０
ｄ） スクワラン・・・１０．０
ｅ） 自己乳化型グリセリルモノステアレート・・・３．０
ｆ） ポリオキシエチレンセチルエーテル（２０Ｅ．Ｏ．）・・・１．０
ｇ） ハナイグチ菌糸体水抽出物（ゲラニオール０．００５%配合培養）・・・２．０
ｈ） １，３−ブチレングリコール・・・５．０
ｉ） 水酸化カリウム・・・０．３
ｊ） 防腐剤・酸化防止剤・・・適量
ｋ） 精製水・・・残部
製法
ａ）〜ｆ）までを加熱溶解し、８０℃に保つ。ｈ）
〜 ｋ）までを加熱溶解し、８０℃に保ち、ａ） 〜ｆ）に加えて乳化し、４０℃まで撹拌しながら冷却する。その後、ｇ）を加え、攪拌し均一に溶解する。
【００４４】
（２）乳液 （ 重量％ ）
ａ） ミツロウ・・・０．５
ｂ） ワセリン・・・２．０
ｃ） スクワラン・・・８．０
ｄ） ソルビタンセスキオレエート・・・０．８
ｅ） ポリオキシエチレンオレイルエーテル（２０Ｅ．Ｏ．）・・・１．２
ｆ） ハナイグチ菌糸体エタノール抽出物（ゲラニオール０．００５%配合培養）・・・１．０
ｇ） １，３− ブチレングリコール・・・７．０
ｈ） カルボキシビニルポリマー・・・０．２
ｉ） 水酸化カリウム・・・０．１
ｊ） 精製水・・・残部
ｋ） 防腐剤・酸化防止剤・・・適量
ｌ） エタノール・・・７．０
製法
ａ）〜ｅ）までを加熱溶解し、８０℃に保つ。ｇ）〜ｋ）までを加熱溶解し、８０℃に保ち、ａ）〜ｅ）に加えて乳化し、５０℃
まで撹拌しながら冷却する。５０℃ でｆ）、ｌ）を添加し、４０℃まで攪拌、冷却する。
【００４５】
（３）化粧水 （重量％）
ａ） ハナイグチ菌糸体エタノール抽出物（豆乳５%配合培養）・・・１．０
ｂ） グリセリン・・・５．０
ｃ） ポリオキシエチレンソルビタンモノラウレート（２０Ｅ．Ｏ．）・・・１．０
ｄ） エタノール・・・６．０
ｅ） 香料・・・適量
ｆ） 防腐剤・酸化防止剤・・・適量
ｇ） 精製水・・・残部
製法
a）〜ｇ）までを混合し、均一に溶解する。
【００４６】
（４）洗顔料 （重量％）
ａ） ステアリン酸・・・１２ ．０
ｂ） ミリスチン酸・・・１４ ．０
ｃ） ラウリン酸・・・５．０
ｄ） ホホバ油・・・３．０
ｅ） グリセリン・・・１０．０
ｆ） ソルビトール・・・１５．０
ｇ） １，３−ブチレングリコール・・・１０．０
ｈ） ＰＯＥ（２０）グリセロールモノステアリン酸・・・２．０
ｉ） 水酸化カリウム・・・５．０
ｊ） 水・・・残部
ｋ） キレート剤・・・適量
ｌ） 香料・・・適量
ｍ） ハナイグチ菌糸体水抽出物（豆乳５%配合培養）・・・２．０
製法
ａ）〜ｈ）までを加熱溶解し７０℃に保つ。ｊ）にｉ）を溶解後ａ）〜ｈ）に加えケン化する。その後ｋ）、ｌ）を入れ攪拌しながら冷却する。５０℃でｍ）を添加し、４０℃まで攪拌、冷却する。
【００４７】
＜効果確認試験＞
（１）塗布によるヒトでの効果確認試験
被験者として、２０〜５０歳の女性１５名に１日２回（朝、夜）連続２ヵ月間、本発明品と比較品のそれぞれを使用させ、塗布部位の状態を試験前後で比較し、改善効果を調べた。本試験には、実施例１６
として処方例中の（１）化粧用クリームで示した化粧料を用い、比較例５には実施例１６からハナイグチ菌糸体水抽出物（ゲラニオール０．００５%配合培養）を除き、代わりに添加物無配合で培養したハナイグチ菌糸体水抽出物を配合した化粧料、比較例６には実施例１からハナイグチ菌糸体水抽出物を除いた化粧料を作成し、その使用による効果について調べた。本発明の有効成分を配合した化粧料を毎日使用しながら肌の美白効果及び使用後の肌の感触について塗布開始前及び２ヶ月塗布後におけるアンケートで集計し、効果の確認を行った。
【００４８】
＜美白効果の評価基準＞
著効：しみ・ソバカスが消えた部分がある。
有効：しみ・ソバカスが目立たなくなった。
やや有効：しみ・ソバカスがやや目立たなくなった。
無効：変化が認められなかった。
【００４９】
【表６】
【００５０】
表６より、比較例６にもやや美白効果が見られるが、ゲラニオール０．００５%配合培地で培養したハナイグチ菌糸体抽出物を配合した実施例１６は、非常に高い美白効果があることがわかる。実施例１６ と比較例６を比較すると、実施例１６の方が比較例６よりはるかにこれらの効果が高いことから、これらの効果はゲラニオールの配合に起因していることが明らかになった。
尚、本試験において実施例１６を使用して何らかの刺激があったと答えた人はいなかった。
【産業上の利用可能性】
【００５１】
本発明によるイグチ科ヌメリイグチ属担子菌の菌糸体の培養方法によれば、豆乳及び／またはモノテルペンを含有する液体培地の中で培養させることで、天然の子実体及び公知であるアルブチンと比較して、高い美白効果有する培養物を提供することが可能であり、化粧料や医薬品、及び食品の各分野に広く応用が期待できる。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
豆乳及び／またはモノテルペンを配合した培地にて培養したイグチ科ヌメリイグチ属（Ｓｕｉｌｌｕｓ）担子菌培養物。
【請求項２】
豆乳を培地全量の０．５〜１０重量％及び／またはモノテルペンを０．００１〜０．０１重量％配合したことを特徴とする請求項１記載の培地で培養したイグチ科ヌメリイグチ属（Ｓｕｉｌｌｕｓ）担子菌培養物。
【請求項３】
イグチ科ヌメリイグチ属（Ｓｕｉｌｌｕｓ）担子菌が、ハナイグチ（Ｓｕｉｌｌｕｓ ｇｒｅｖｉｌｌｅｉ）、ヌメリイグチ（Ｓｕｉｌｌｕｓ ｌｕｔｅｕｓ）、アミタケ（Ｓｕｉｌｌｕｓ
ｂｏｖｉｎｕｓ）、チチアワタケ（Ｓｕｉｌｌｕｓ ｇｒａｎｕｌａｔｕｓ）、シロヌメリイグチ（Ｓｕｉｌｌｕｓ ｌａｒｉｃｉｎｕｓ）、ヌメリツバイグチ（Ｓｕｉｌｌｕｓ ｌｕｔｅｕｓ）であることを特徴とする請求項１乃至請求項２記載の培養物。
【請求項４】
請求項１乃至請求項３記載のイグチ科ヌメリイグチ属（Ｓｕｉｌｌｕｓ）担子菌培養物を配合することを特徴とする皮膚外用剤。
【請求項１】
豆乳及び／またはモノテルペンを配合した培地にて培養したイグチ科ヌメリイグチ属（Ｓｕｉｌｌｕｓ）担子菌培養物。
【請求項２】
豆乳を培地全量の０．５〜１０重量％及び／またはモノテルペンを０．００１〜０．０１重量％配合したことを特徴とする請求項１記載の培地で培養したイグチ科ヌメリイグチ属（Ｓｕｉｌｌｕｓ）担子菌培養物。
【請求項３】
イグチ科ヌメリイグチ属（Ｓｕｉｌｌｕｓ）担子菌が、ハナイグチ（Ｓｕｉｌｌｕｓ ｇｒｅｖｉｌｌｅｉ）、ヌメリイグチ（Ｓｕｉｌｌｕｓ ｌｕｔｅｕｓ）、アミタケ（Ｓｕｉｌｌｕｓ
ｂｏｖｉｎｕｓ）、チチアワタケ（Ｓｕｉｌｌｕｓ ｇｒａｎｕｌａｔｕｓ）、シロヌメリイグチ（Ｓｕｉｌｌｕｓ ｌａｒｉｃｉｎｕｓ）、ヌメリツバイグチ（Ｓｕｉｌｌｕｓ ｌｕｔｅｕｓ）であることを特徴とする請求項１乃至請求項２記載の培養物。
【請求項４】
請求項１乃至請求項３記載のイグチ科ヌメリイグチ属（Ｓｕｉｌｌｕｓ）担子菌培養物を配合することを特徴とする皮膚外用剤。
【公開番号】特開２００９−２４０２７９（Ｐ２００９−２４０２７９Ａ）
【公開日】平成２１年１０月２２日（２００９．１０．２２）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００８−９３８６３（Ｐ２００８−９３８６３）
【出願日】平成２０年３月３１日（２００８．３．３１）
【出願人】（５９１２３０６１９）株式会社ナリス化粧品 (200)
【Ｆターム（参考）】
【公開日】平成２１年１０月２２日（２００９．１０．２２）
【国際特許分類】
【出願日】平成２０年３月３１日（２００８．３．３１）
【出願人】（５９１２３０６１９）株式会社ナリス化粧品 (200)
【Ｆターム（参考）】
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