インスリン、ニコチンアミド及びアミノ酸を含む製剤
インスリン化合物又は二以上のインスリン化合物の混合物、ニコチン化合物及びアミノ酸を含有するインスリン製剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明はインスリン化合物、ニコチン化合物及びアミノ酸を含む薬学的製剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
真性糖尿病はグルコース利用能が部分的又は完全に失われる代謝疾患である。全てのヒトのうち約５％が糖尿病を患い、その疾患は大流行に近づいている。
【０００３】
１９２０年代にインスリンが導入されて以来、糖尿病治療に絶え間ない改良が行われてきた。高血糖値を避けられるように、糖尿病患者はインスリンが各食事と一緒に投与される複数の注射療法をたびたび行っている。糖尿病患者は数十年にわたりインスリンで治療されてきたので、安全で生活の質を改善するインスリン製剤に対して大きな需要がある。商業的に入手可能なインスリン製剤としては、速効型、中間型および持続性作用型の製剤を挙げることができる。
【０００４】
真性糖尿病の治療において、レギュラーインスリン（例えばアクトラピッド（登録商標））、イソフェンインスリン(ＮＰＨと称される)、インスリン亜鉛懸濁剤(例えばＳｅｍｉｌｅｎｔｅ(登録商標)、Ｌｅｎｔｅ(登録商標)、及びＵｌｔｒａｌｅｎｔｅ(登録商標))、及び二相性イソフェンインスリン（例えばノボミックス（登録商標））等の、多くの様々なインスリンの薬学的製剤が提案され使用されてきた。ヒトインスリンアナログ及び誘導体もまた開発され、作用の特別なプロファイル、つまり速効作用又は持続作用に対して設計されている。そうした速効性インスリンアナログを含む市販のインスリン製剤のいくつかは、ノボラピッド（登録商標）（Ｂ２８Ａｓｐヒトインスリン製剤）、ヒューマログ（登録商標）（Ｂ２８ＬｙｓＢ２９Ｐｒｏヒトインスリン製剤）及びアピドラ（登録商標）（Ｂ３ＬｙｓＢ２９Ｇｌｕヒトインスリン製剤）を含む。
【０００５】
国際出願ＷＯ９１／０９６１７号及びＷＯ／９６１０４１７号（ノボノルデイスクＡ／Ｓ）は、ニコチンアミド又はニコチン酸又はその塩を含むインスリン製剤を開示している。
【０００６】
ほとんどの場合インスリンの薬学的製剤は皮下注射により投与される。患者のために重要なのはインスリンの作用プロファイルであり、注射してからの時間の関数としてのグルコース代謝におけるインスリンの作用を意味する。このプロファイルにて、とりわけ、開始時間、作用の最大値及び総持続時間は重要である。ボーラス投与インスリンの場合、異なる作用プロファイルを持つ様々なインスリン製剤が患者により望まれ要求されている。ある患者は、同じ日にインスリン製剤を非常に異なった作用プロファイルで使用し得る。例として望まれる作用プロファイルは、その日の時刻及び患者が食べた食事の量と組成物に依存する。
【０００７】
患者にとって同様に重要なのは、インスリン製剤が、１．５〜３．０ｍｌのカートリッジを含む器具について少なくとも１から２週間、カートリッジ全体が空になるまで保管される、例えばペンフィル（登録商標）カートリッジを含む器具等のペン型注射器具の豊富な使用のためインスリン製剤の化学的安定性である。保管の間、インスリンの構造の共有結合性の化学変化が起きる。これは、活性が低く、及び/又は、アミド分解産物や高分子量変換産物（二量体、多量体）等の潜在的に免疫原性となり得る分子の形成を引き起こし得る。更に、長期間保管は結果的に生物的に不活性で潜在的に免疫原性である不溶性フィブリルの形成につながるため、インスリン製剤の物理的安定性もまた重要である。
【発明の概要】
【０００８】
本発明は好ましい吸収速度及び好ましい化学的及び物理的安定性を持つインスリン製剤に関する。本発明は、ヒトインスリン及び／又はそのアナログ、ニコチンアミド又はニコチン酸及び／又はその塩、及びアルギニンを含むインスリン製剤に関する。
【０００９】
一実施態様では、本発明は、
・インスリン化合物
・ニコチン化合物、及び
・アルギニン、
を含有するインスリン製剤に関する。
【００１０】
他の実施態様では、インスリン製剤はグルタミン酸を更に含有し得る。
【００１１】
その他の実施態様では、本発明はまた、本発明に係るインスリン製剤を被験者又は哺乳動物に投与することを含む被験者の真性糖尿病の治療方法、又は被験者の血糖値を下げる方法を熟考する。
【図面の簡単な説明】
【００１２】
【図１】図１は本発明に係る製剤を３７℃で２週間保管した間の分解産物の全インスリン含有量のパーセンテージの進展を示す。文字Ａはノボラピッド（登録商標）基準を指し、残りの文字は、実施例１の表１に記載のインスリンアスパルト製剤に対応する。ノボラピッド（登録商標）製剤（製剤Ａ）と比較し、ニコチンアミド（製剤Ｂ及びＤ）の添加は分解産物形成の増加を引き起こす。一方、ニコチンアミド、グルタミン酸及びアルギニンの複合添加（製剤Ｃ及びＥ）では、ＨＭＷＰの形成が少なく、ほとんど類似の分解パターンを有している。
【図２】図２は本発明に係る製剤を３７℃で２週間保管した間の分解産物の全インスリン含有量のパーセンテージの進展を示す。文字Ａはノボラピッド（登録商標）基準を指し、残りの文字は、実施例１の表１に記載のインスリンアスパルト製剤に対応する。ニコチンアミド、グルタミン酸及びアルギニンの複合添加である、製剤Ｆ、Ｇ、Ｈ、及びＩは、バッファー系が異なり、リン酸又はトリスバッファーであり、インスリン及びＺｎの濃度は、０．６ｍＭ及び０．３ｍＭ、又は１．２ｍＭ及び０．６ｍＭであり、製剤Ａのノボラピッド（登録商標）製剤と似た分解パターンを有している。
【図３】図３は本発明に係る製剤を０分時に１ｎｍｏｌ／ｋｇ投与量をブタに皮下注射した後の血漿中グルコース濃度（平均＋/−ＳＥＭ、Ｎ＝８）を示す。文字Ａはノボラピッド（登録商標）基準を指し、残りの文字は実施例１の表１に記載されたインスリンアスパルト製剤に対応する。ノボラピッド（登録商標）製剤（製剤Ａ）と比較して、血漿グルコース低下の初期速度はニコチンアミド添加製剤（製剤Ｎ）においてより速く、及びニコチンアミド及びアルギニンの組み合わせ（製剤Ｍ）においてなお一層速い。
【図４】図４は本発明による製剤を０分時に１ｎｍｏｌ／ｋｇ投与量をブタに皮下注射した後の血漿中グルコース濃度（平均＋/−ＳＥＭ、Ｎ＝７）を示す。文字Ａはノボラピッド（登録商標）基準を指し、残りの文字は実施例１の表１に記載されたインスリンアスパルト製剤に対応する。ノボラピッド（登録商標）製剤（製剤Ａ）と比較して、血漿グルコース低下の初期速度はニコチンアミド、アルギニン及びグルタミン酸を組み合わせた製剤（製剤Ｌ）及びニコチンアミド及びアルギニンを組み合わせた製剤（製剤Ｋ）においてより速い。
【図５】図５は本発明による製剤を０分時にて１ｎｍｏｌ／ｋｇ投与量をブタに皮下注射した後の血漿中グルコース濃度（平均＋/−ＳＥＭ、Ｎ＝７）を示す。文字Ａはノボラピッド（登録商標）基準を指し、残りの文字は実施例１の表１に記載されたインスリンアスパルト製剤に対応する。ノボラピッド（登録商標）製剤（製剤Ａ）と比較して、ニコチンアミドの製剤（製剤Ｊ）、ニコチンアミド及びアルギニンを組み合わせた製剤（製剤Ｋ）、及びニコチンアミド、アルギニン及びグルタミン酸を組み合わせた製剤（調剤Ｌ）のインスリン組成物の初期吸収速度は著しく速い。
【発明を実施するための形態】
【００１３】
本発明のインスリン製剤のインスリン化合物の皮下注射後の吸収は、驚くべきことに基準インスリン製剤のそれよりも速いことが見いだされた。この性質は速効性インスリン、とりわけ毎食前にインスリンを与える複数の注射療法に関連して有用である。速い作用の開始により、インスリンは一般的な速効性インスリン溶液によるよりも食事にちかづけて都合良く摂取できる。更に、インスリンの速い消失は食後の低血糖のリスクを恐らく減少させる。
【００１４】
本発明のインスリン製剤は、インスリンアスパルト等のインスリン化合物、ニコチンアミド等のニコチン化合物及びアミノ酸のアルギニンを含む速効性インスリン製剤である。任意で、本発明のインスリン製剤は更にグルタミン酸等のアミノ酸を含みうる。これらのインスリン製剤は、既存の治療よりもより密接に正常な生理機能を模倣する急速な吸収プロファイルを有している。更に、本発明のインスリン製剤は市販の薬学的製剤に適した化学的及び物理的安定性を有している。
【００１５】
本発明のインスリン製剤は既存のインスリン治療法と比較して更に速い作用の開始を提供する。そうした超速効性インスリン製剤は、第一段階のインスリン放出を回復する利点、注射の利便性及び肝臓でのグルコース生成の停止を有する。本発明のインスリン製剤は、ブタにおけるいくつかのＰＫ／ＰＤ実験で示唆されたように、ノボラピッド（登録商標）等の伝統的製剤と比較した時、初期吸収速度が１．５から５倍の範囲で増加し、皮下組織から血漿へ好ましい吸収速度を有する。この速い吸収速度は血糖のコントロールと利便性を改善し得て、食前から食後の投薬への変更を可能とし得る。本発明のインスリン製剤は一部は、ニコチンアミドの添加は吸収速度の増加を可能にするが、ＨＭＷＰの量の著しい増加により化学的安定性に負の効果も有するという、驚くべき発見に基づく。本発明のインスリン製剤は、アルギニンの添加により改善された化学的安定性を有し、そのことは、例えば保管後に二量体又は多量体又はデスアミドインスリンの形成の減少に反映される。本発明のインスリン製剤は更に改善された物理的安定性をも有し得、ポンプでの使用に有用でありうる。
【００１６】
本発明は、約０．１ｍＭから約１０．０ｍＭの濃度で存在する本発明によるインスリン化合物を含むインスリン製剤を提供し、上記製剤は３から８．５のｐＨを有する。製剤はまたニコチン化合物及びアルギニンを含む。製剤は更に、プロテアーゼ阻害剤、金属イオン、バッファー系、保存料、等張化剤、キレート剤、安定剤及び界面活性剤を含み得る。
【００１７】
一実施態様では、インスリン製剤はヒトインスリン、そのアナログ又は組合わせ、ニコチンアミド及び／又はニコチン酸及び／又はその塩、及びアルギニン及び／又はその塩を含む。
【００１８】
一実施態様にて、本発明のインスリン製剤はＢ２８Ａｓｐヒトインスリン、ニコチンアミド及びアルギニンの水溶液を含む。
【００１９】
本発明の溶液中のＢ２８Ａｓｐヒトインスリンの含有量は注射製剤中にて、１５から５００国際単位（ＩＵ）／ｍｌ、好ましくは５０から３３３（ＩＵ）／ｍｌの範囲であり得る。しかしながら、他の非経口投与目的においては、インスリン化合物の含有量はより高い場合がある。
【００２０】
ここでまた、インスリン化合物、ニコチン化合物及びグルタミン酸を含むインスリン製剤を述べる。
【００２１】
本文脈中において単位「ＩＵ」は６ｎｍｏｌに相当する。
【００２２】
「インスリンアスパルト」なる用語はヒトインスリンアナログＢ２８Ａｓｐヒトインスリンを指す。
【００２３】
「開始」なる用語は注射後にＰＫカーブが増加に転じるまでの時間を指す。
【００２４】
「吸収速度」なる用語はＰＫカーブの勾配を指す。
【００２５】
本発明による「インスリン化合物」はここではヒトインスリン、インスリンアナログ及び／又はその何れかの組合わせとして理解されるべきである。
【００２６】
ここで使用される「ヒトインスリン」なる用語は、構造及び特性を良く知られたヒトホルモンを意味する。ヒトインスリンはシステイン残基間のジスルフィド結合により連結した２本のポリペプチド鎖、すなわちＡ鎖及びＢ鎖を持つ。Ａ鎖は２１アミノ酸ペプチド及びＢ鎖は３０アミノ酸ペプチドであり、２本鎖は３つのジスルフィド結合で連結しており：１つはＡ鎖の位置６と１１のシステイン間、２つ目はＡ鎖の位置７のシステイン及びＢ鎖の位置７のシステイン間、３つ目はＡ鎖の位置２０のシステイン及びＢ鎖の位置１９のシステイン間である。
【００２７】
ホルモンはその構造に８６アミノ酸を含むプロインスリンが続く２４アミノ酸からなるプレペプチドを含む単鎖前駆体プロインスリン（プレプロインスリン）：プレペプチド−Ｂ−Ａｒｇ Ａｒｇ−Ｃ−Ｌｙs Ａｒｇ−Ａとして合成され、ここでＣは３１アミノ酸からなる連結ペプチドである。Ａｒｇ−Ａｒｇ及びＬｙｓ−ＡｒｇはＡ鎖とＢ鎖からの連結ペプチドの分割の切断部位である。
【００２８】
ここで使用される「インスリンアナログ」により、変異によって天然インスリンの一次構造、例えばヒトインスリンの一次構造に由来したポリペプチドを意味する。一以上の変異は、天然インスリンに起きる少なくとも一アミノ酸残基の欠失及び／又は置換により、及び／又は少なくとも一アミノ酸の付加により作られる。付加及び／又は置換されたアミノ酸残基はコード化可能なアミノ酸残基又は他の天然アミノ酸残基であり得る。
【００２９】
一実施態様では、インスリンアナログは親インスリンに対して８未満の修飾（置換、欠失、付加及びその何れかの組合わせ）、あるいは親インスリンに対して７未満の修飾、あるいは親インスリンに対して６未満の修飾、あるいは親インスリンに対して５未満の修飾、あるいは親インスリンに対して４未満の修飾、あるいは親インスリンに対して３未満の修飾、あるいは親インスリンに対して２未満の修飾を含む。
【００３０】
インスリン分子の変異は、鎖（Ａ又はＢ）、位置、及び天然アミノ酸を置換するアミノ酸の３文字コードを記載して表示される。「ｄｅｓＢ３０」又は「Ｂ（１−２９）」により、Ｂ３０アミノ酸残基を欠いた天然インスリンＢ鎖又はそのアナログを意味し、Ｂ２８Ａｓｐインスリンにより、Ｂ鎖の位置２８のアミノ酸残基がＡｓｐと置換されたヒトインスリンを意味する。
【００３１】
インスリンアナログの例として、Ｂ鎖の位置２８のＰｒｏがＡｓｐ、Ｌｙｓ、Ｌｅｕ、Ｖａｌ、又はＡｌａに変異し、及び／又は位置Ｂ２９のＬｙｓがＰｒｏ、Ｇｌｕ又はＡｓｐに変異した例がある。更に、位置Ｂ３のＡｓｎはＴｈｒ、Ｌｙｓ、Ｇｌｎ、Ｇｌｕ又はＡｓｐに変異し得る。位置Ａ２１のアミノ酸残基はＧｌｙに変異し得る。位置Ｂ１のアミノ酸はＧｌｕに変異し得る。位置Ｂ１６のアミノ酸はＧｌｕ又はＨｉｓに変異し得る。インスリンアナログの更なる例は、例えばヒトインスリンＢ３０アミノ酸が欠失したアナログ（ｄｅｓ（Ｂ３０）ヒトインスリン）、ヒトインスリンのＢ１アミノ酸が欠失したインスリンアナログ（ｄｅｓ（Ｂ１）ヒトインスリン）、ｄｅｓ（Ｂ２８−Ｂ３０）ヒトインスリン及びｄｅｓ（Ｂ２７）ヒトインスリンなどの欠失アナログである。Ａ鎖及び／又はＢ鎖がＮ末端伸長を持つインスリンアナログ、及びＡ鎖及び／又はＢ鎖が、Ｂ鎖のＣ末端に付加した２つのアルギニン残基等のＣ末端伸長を持つインスリンアナログもまたインスリンアナログの例である。更なる例は言及された変異の組合わせを含むインスリンアナログである。位置Ａ１４のアミノ酸がＡｓｎ、Ｇｌｎ、Ｇｌｕ、Ａｒｇ、Ａｓｐ、Ｇｌｙ又はＨｉｓであり、位置Ｂ２５のアミノ酸がＨｉｓであり、場合によっては更に一以上の追加の変異を含むインスリンアナログはインスリンアナログの更なる例である。位置Ａ２１のアミノ酸がＧｌｙであり及びそのインスリンアナログはＣ末端に２つのアルギニン残基を更に伸長したヒトインスリンのインスリンアナログもまたインスリンアナログの例である。
【００３２】
インスリンアナログの更なる例は、限定されないが、ＤｅｓＢ３０ヒトインスリン；ＡｓｐＢ２８ヒトインスリン；ＡｓｐＢ２８，ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン；ＬｙｓＢ３，ＧｌｕＢ２９ヒトインスリン；ＬｙｓＢ２８,ＰｒｏＢ２９ヒトインスリン；ＧｌｙＡ２１，ＡｒｇＢ３１,ＡｒｇＢ３２ヒトインスリン；ＧｌｕＡ１４，ＨｉｓＢ２５ヒトインスリン；ＨｉｓＡ１４，ＨｉｓＢ２５ヒトインスリン；ＧｌｕＡ１４，ＨｉｓＢ２５，ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン；ＨｉｓＡ１４，ＨｉｓＢ２５，ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン；ＧｌｕＡ１４，ＨｉｓＢ２５，ｄｅｓＢ２７，ｄｅｓＢ２８，ｄｅｓＢ２９，ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン；ＧｌｕＡ１４，ＨｉｓＢ２５，ＧｌｕＢ２７，ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン；ＧｌｕＡ１４，ＨｉｓＢ１６，ＨｉｓＢ２５，ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン；ＨｉｓＡ１４，ＨｉｓＢ１６，ＨｉｓＢ２５，ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン；ＨｉｓＡ８，ＧｌｕＡ１４，ＨｉｓＢ２５，ＧｌｕＢ２７，ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン；ＨｉｓＡ８，ＧｌｕＡ１４，ＧｌｕＢ１，ＧｌｕＢ１６，ＨｉｓＢ２５，ＧｌｕＢ２７，ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン；及びＨｉｓＡ８，ＧｌｕＡ１４，ＧｌｕＢ１６，ＨｉｓＢ２５，ｄｅｓＢ３０ヒトインスリンを含む。
【００３３】
「ニコチン化合物」なる用語はニコチンアミド、ニコチン酸、ナイアシン、ナイアシンアミド及びビタミンＢ３及び／又はその塩及び／又はその何れかの組合わせを含む。
【００３４】
本発明によれば、ニコチン化合物の濃度及び／又はその塩は約１ｍＭから約３００ｍＭ又は約５ｍＭから約２００ｍＭの範囲である。
【００３５】
「アルギニン」又は「Ａｒｇ」なる用語はアミノ酸のアルギニン及び／又はその塩を含む。
【００３６】
一実施態様では、インスリン製剤は１から１００ｍＭのアルギニンを含む。
【００３７】
一実施態様では、インスリン製剤は１から２０ｍＭのアルギニンを含む。
【００３８】
一実施態様では、インスリン製剤は２０から９０ｍＭのアルギニンを含む。
【００３９】
一実施態様では、インスリン製剤は３０から８５ｍＭのアルギニンを含む。
【００４０】
「グルタミン酸」又は「Ｇｌｕ」なる用語はアミノ酸のグルタミン酸及び／又はその塩を含む。
【００４１】
一実施態様では、インスリン製剤は１から１００ｍＭのグルタミン酸を含む。
【００４２】
一実施態様では、インスリン製剤は２０から９０ｍＭのグルタミン酸を含む。
【００４３】
一実施態様では、インスリン製剤は３０から８５ｍＭのグルタミン酸を含む。
【００４４】
ここで使用される「薬学的製剤」又は「インスリン製剤」なる用語は、インスリン化合物、すなわちヒトインスリン、そのアナログ及び又はその組合わせ及びニコチン化合物及びアミノ酸を、場合によっては、保存料、キレート剤、張力修正剤、増量剤、安定剤、酸化防止剤、ポリマーおよび界面活性剤等の他の賦形剤、金属イオン、油性賦形剤及びタンパク質（例えば、ヒト血清アルブミン、ゼラチン又はタンパク質）と共に含む製品を意味し、上記インスリン製剤はヒトに上記インスリン製剤を投与することにより、疾病又は疾患を治療、予防又は重症度を低減するために有効である。従って、インスリン製剤は当該技術分野では薬学的製剤又は薬学的組成物としても知られている。
【００４５】
バッファーは、限定されないが、酢酸ナトリウム、炭酸ナトリウム、クエン酸塩、リン酸二水素ナトリウム、リン酸水素二ナトリウム、リン酸ナトリウム、及びトリス（ヒドロキシメチル）−アミノメタン、ビシン、トリシン、リンゴ酸、コハク酸、マレイン酸、フマル酸、酒石酸、アスパラギン酸又はその組合わせからなる群から選択されうる。これらの特定のバッファーの各々は本発明のもう一つの実施態様を構成する。
【００４６】
本発明のインスリン製剤は更に、インスリン製剤に一般的な他の成分、例えばクエン酸塩等の亜鉛錯化剤及びリン酸バッファーを含み得る。
【００４７】
グリセロール及び／又はマンニトール及び／又は塩化ナトリウムは０から２５０ｍＭ、０から２００ｍＭ又は０から１００ｍＭの濃度に対応する量にて存在しうる。
【００４８】
安定剤、界面活性剤及び保存料もまた本発明のインスリン製剤に存在しうる。
【００４９】
本発明のインスリン製剤は更に薬学的に許容される保存料を含み得る。保存料は保存効果を得るに十分な量存在し得る。インスリン製剤中の保存料の量は、例えば当該分野の文献及び/又は、例えば商品中の保存料の既知の量から決定され得る。これらの特定の保存料のおのおのは本発明のもう一つの実施態様を構成する。薬学的製剤中の保存料の使用は、例えばレミントンによる「Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ」第１９版、１９９５年に記載されている。
【００５０】
本発明のインスリン製剤に存在する保存料はこれまでの伝統的なインスリン製剤にあるように、例えばフェノール、ｍ-クレゾール及びメチルパラベンであり得る。
【００５１】
本発明のインスリン製剤は更にキレート剤を含み得る。薬学的製剤中のキレート剤の使用は当業者には良く知られている。便宜上、レミントンによる「Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ」第１９版、１９９５年が参照される。
【００５２】
本発明のインスリン製剤は更に安定剤を含み得る。ここで使用される「安定剤」なる用語はペプチドを安定化し、すなわち、そうした製剤の有効期間及び／又は使用時間を増大させるために、薬学的製剤を含むポリペプチドに添加される化学薬品を言う。便宜上、レミントンによる「Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ」第１９版、１９９５年が参照される。
【００５３】
本発明のインスリン製剤は更に界面活性剤を含み得る。ここで使用される「界面活性剤」なる用語は、水溶性（親水性）部分、頭部、及び脂溶性（親油性）部分を含む分子又はイオンを言う。界面活性剤は界面に好んで蓄積し、親水性部分は水（親水相）に向けて、及び親油性部分は油−又は疎水相（例えばガラス、空気、油等）に向けて配向する。界面活性剤がミセルを形成し始める濃度は臨界ミセル濃度又はＣＭＣとして知られている。更に、界面活性剤は液体の表面張力を下げる。界面活性剤は両親媒性化合物として知られている。「デタージェント（界面活性剤）」なる用語は一般的に界面活性剤に対して使用される同義語である。薬学的製剤中の界面活性剤の使用は当業者には良く知られている。便宜上、レミントンによる「Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ」第１９版、１９９５年が参照される。
【００５４】
更なる態様では、本発明は本発明のインスリン化合物の水溶液及びバッファーを含むインスリン製剤に係り、その中で上記インスリンン化合物は０．１ｍＭ以上の濃度で存在し、及びその中で上記製剤は室温（〜２５℃）にて約３．０から約８．５のｐＨを有する。
【００５５】
本発明はまた本発明のインスリン製剤の生産方法に関する。
【００５６】
一実施態様では、本発明のインスリン製剤の製造方法は、
ａ）インスリン化合物又はインスリン化合物の混合物を水又はバッファーに溶解した溶液を調製し；
ｂ）二価の金属イオンを水又はバッファーに溶解した溶液を調製し；
ｃ）保存料を水又はバッファーに溶解した溶液を調製し；
ｄ）等張化剤を水又はバッファーに溶解した溶液を調製し；
ｅ）界面活性剤及び／又は安定剤を水又はバッファーに溶解した溶液を調製し；
ｆ）溶液ａ）と溶液ｂ）、ｃ）、ｄ）、及びｅ）の一以上を混合し；
最後にｆ）中の混合物のｐＨを望まれるｐＨに調整した後濾過滅菌を行う。
【００５７】
本発明のインスリン製剤は非経口投与により糖尿病の治療に使用できる。患者に投与されるべき本発明のインスリン製剤の用量は医師により設定されることが推奨される。
【００５８】
非経口投与は、注射器や任意でペン型注射器を用いて、皮下、筋肉内、腹腔内又は静脈内注射によって行われ得る。あるいは、非経口投与は輸液ポンプを用いて行うことができる。更なる選択肢として、本発明のインスリン化合物を含むインスリン製剤は、例えば無針注射により又はパッチから、任意でイオン注入パッチからの経皮投与、又は例えば口腔などの経粘膜投与にもまた適用できる。
【００５９】
本発明によるインスリン製剤は複数の部位、例えば、例えば皮膚及び粘膜部位等の局所部位、例えば動脈内、静脈内、心臓内投与等の吸収を迂回する部位、及び、例えば皮膚内、皮膚下、筋肉内又は腹部内への投与等の吸収を含む部位において、そうした治療を必要としている患者に投与され得る。
【００６０】
本発明の一実施態様では、インスリン製剤は水性製剤であり、すなわち水を含む製剤である。そうした製剤は典型的には溶液又は懸濁液である。本発明の更なる態様にて、インスリン製剤は水溶液である。
【００６１】
「水性製剤」なる用語は、少なくとも５０％ｗ／ｗの水を含む製剤として定義される。同様に「水溶液」なる用語は、少なくとも５０％ｗ／ｗの水を含む溶液として定義され、及び「水性懸濁液」なる用語は、少なくとも５０％ｗ／ｗの水を含む懸濁剤として定義される。
【００６２】
水性懸濁液は水性懸濁液の製造に適した賦形剤との混合剤中の活性化合物を含みうる。
【００６３】
一実施態様では、本発明のインスリン製剤は注射によるインスリン療法に使用されるペン型機器での適用に良く適している。
【００６４】
一実施態様では、本発明のインスリン製剤はインスリン投与のためのポンプにおいて使用できる。
【００６５】
ここで用いられるインスリン製剤の「物理的安定性」という用語は、熱機械的ストレスへのタンパク質の暴露、及び／又は、例えば疎水性表面及び界面のような、不安定化している界面及び表面、との相互作用の結果としての、生物学的に不活性な及び／又は不溶性のタンパク質の凝集体を形成するタンパク質の傾向について言及するものである。水性のタンパク質製剤の物理的安定性は、適切な容器（例えばカートリッジもしくはバイアル）中に満たした製剤を機械的／物理的ストレス（例えば攪拌）に様々な時間の間、異なった温度で暴露した後に、視覚的な検査及び／又は濁度の測定をすることにより評価される。製剤の視覚的な検査は、暗い背景中において鋭く集光された光下で実施される。製剤の濁度は、濁りの度合いを、例えば０から３の尺度（濁りを示さない製剤が視覚スコア０に相当し、昼光で可視できる濁りを示す製剤は視覚スコア３に相当する）でランク付けする視覚スコアにより特徴付けされる。製剤は、昼光下で可視できる濁りを示す時に、タンパク質凝集に関して物理的に不安定であると分類される。あるいは、製剤の濁度は、当業者によく知られている簡単な濁度測定により評価することができる。タンパク質水性製剤の物理的安定性は、タンパク質の立体構造状態の分光学的な薬剤もしくはプローブを使用することによっても、評価することができる。プローブは好ましくはタンパク質の非天然配座異性体に優先的に結合する小分子である。タンパク質構造の小分子性分光学的プローブの一例はチオフラビンＴである。チオフラビンＴはアミロイドフィブリルの検出に広く用いられている蛍光染料である。フィブリル及びおそらくは他のタンパク質の立体構造の存在下においても、チオフラビンＴは、フォブリルタンパク質形態に結合する時、約４５０ｎｍで新たな励起極大と、約４８２ｎｍで増強された発光とを生じる。未結合のチオフラビンＴは本質的にはその波長で非蛍光である。
【００６６】
ここで用いられるタンパク質製剤の「化学的安定性」という用語は、天然タンパク質構造と比較して、潜在的に低い生物学的効力及び／又は潜在的に高い免疫原性を有する化学的分解産物の形成に至る共有結合性のタンパク質構造の変化を意味する。天然タンパク質の種類と性質及びタンパク質がさらされる環境に応じて、様々な化学的分解産物が形成されうる。タンパク質製剤の保管及び使用中に、化学的分解産物の量の増加がしばしば観察される。大部分のタンパク質は、グルタミニル又はアスパラギニル残基の側鎖アミド基が加水分解されて遊離のカルボン酸又はアスパラギニル残基を形成し、ＩｓｏＡｓｐ誘導体を形成するプロセスである脱アミド化を受ける傾向がある。他の分解経路は、二以上のタンパク質分子が、アミド基転移及び／又はジスルフィド相互作用を通して互いに共有結合し、共有結合した二量体、オリゴマー及び多量体分解産物の形成に至る高分子量産物の形成を含む（Ｓｔａｂｉｌｉｔｙ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ， Ａｈｅｒｎ.Ｔ.Ｊ. ＆ Ｍａｎｎｉｎｇ Ｍ.Ｃ., Ｐｌｅｎｕｍ Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ,１９９２）。（例えばメチオニン残基の）酸化は、化学的分解の他の変形例として述べることができる。タンパク質製剤の化学的安定性は、異なった環境条件への暴露（分解産物の形成はしばしば例えば温度上昇により加速され得る）後に、様々な時点において化学的分解産物の量を測定することにより評価することができる。それぞれ個別の分解産物の量は、しばしば、様々なクロマトグラフィー法（例えば、ＳＥＣ−ＨＰＬＣ及び／又はＲＰ−ＨＰＬＣ)を用いて、分子サイズ及び／又は電荷に応じて分解産物を分離することにより決定される。ＨＭＷＰ産物は潜在的に免疫原性であり生物学的に活性では無いため、低レベルのＨＭＷＰが好都合である。
【００６７】
「安定化製剤」なる用語は、増加した物理的安定性、増加した化学的安定性、又は増加した物理的及び化学的安定性を有する製剤を言う。一般に、製剤は有効期限に達するまで（推奨された使用及び保管条件に応じて）使用及び保管中は安定でなければならない。
【００６８】
「糖尿病」又は「真性糖尿病」なる用語は、１型糖尿病、２型糖尿病、妊娠糖尿病（妊娠中）及び高血糖症を生じさせる他の状態を含む。該用語は、膵臓が不十分な量のインスリンを生産するか、又は体の細胞が適切にはインスリンに応答せず、細胞がグルコースを吸収するのを妨げる代謝疾患について使用される。その結果、グルコースが血液中に蓄積する。
【００６９】
インスリン依存性糖尿病（ＩＤＤＭ）及び若年発症型糖尿病とも呼ばれる１型糖尿病は、Ｂ細胞破壊によって引き起こされ、通常は絶対的インスリン欠乏に至る。
【００７０】
インスリン非依存性糖尿病（ＮＩＤＤＭ）及び成人発症型糖尿病としても知られている２型糖尿病は、主たるインスリン耐性、よって相対的なインスリン欠乏及び／又はインスリン耐性を伴う主たるインスリン分泌欠陥に関連している。
【００７１】
ここで使用される「薬学的に許容可能な」なる用語は、正常な薬学的適用に適した、すなわち患者に何らの重篤な有害事象を引き起こさないことを意味する。
【００７２】
ここで使用される「疾病の治療」なる用語は、疾病、病状又は疾患を発症した患者の管理及び世話(ケア)を意味し、疾病の治療、予防又は緩和を含む。治療の目的は、疾病、症状又は疾患と闘うことである。治療には、疾病、症状又は疾患を排除し又は制御するため、並びに疾病、症状又は疾患に関連した徴候又は合併症を緩和するための活性な化合物の投与、及び疾病、症状又は疾患の予防を含む。
【００７３】
その他の実施態様にて、本発明によるインスリンアナログは、２型糖尿病の疾患の進行を遅延又は予防するための医薬として使用される。
【００７４】
本発明の一実施態様では、ストレス誘導性高血糖、２型糖尿病、耐糖能異常、１型糖尿病、及び、治療に同化作用が必要なやけど、手術創及び他の疾患又は創傷、心筋梗塞、脳卒中、冠状動脈性心臓病及び他の心血管疾患の予防又は治療のための医薬として使用される本発明によるインスリン製剤が提供される。
【００７５】
本発明の更なる実施態様では、ストレス誘導性高血糖、２型糖尿病、耐糖能異常、１型糖尿病を含む高血糖、及び治療に同化作用が必要なやけど、手術創、及び他の疾患又は創傷、心筋梗塞、冠状動脈性心臓病やその他の心血管疾患、脳卒中の予防又は治療のための方法であって、本発明によるインスリン製剤をそのような治療を必要とする患者への投与を含む方法が与えられる。
【００７６】
本発明によるインスリン製剤による治療は、例えば抗糖尿病薬、抗肥満薬、食欲の調節薬、降圧薬、糖尿病に由来又は関連して起こる合併症の治療及び／又は予防のための薬剤及び肥満に由来又は関連して起こる合併症及び疾患の治療及び／又は予防のための薬剤から選択される、第二の又はより薬理学的に活性な物質ともまた組合わされうる。
【００７７】
本発明によるインスリン製剤による治療は、胃バンディング術又は胃バイパス手術等の血糖値及び/又は脂質ホメオスタシスに影響を与える手術である肥満手術ともまた組合わされうる。
【００７８】
ポリペプチド、例えばインスリンの生成は当該技術分野で良く知られている。本発明によるインスリンアナログは例えば古典的なペプチド合成、例えばｔ−Ｂｏｃ又はＦｍｏｃ化学又はその他の十分に確立された技術を使用した固相ペプチド合成により生成されうる。Ｇｒｅｅｎｅ及びＷｕｔｓ，「Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ Ｇｒｏｕｐｓ ｉｎ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ」，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ,１９９９を参照のこと。インスリンアナログは、アナログをエンコードしインスリンアナログの発現を可能にした条件下で適切な栄養培地にてインスリンアナログを発現する能力のあるＤＮＡ配列を含む宿主細胞の培養を含む方法によっても生成され得る。非天然アミノ酸残基を含むインスリンアナログに対して、組換え細胞は例えばｔＲＮＡ変異体の使用により、非天然アミノ酸がアナログに導入されるように改変されるべきである。従って、本発明によるインスリンアナログは簡単に既知のインスリンアナログの調製に類似して調製される。
【００７９】
ヒトインスリン及びヒトインスリンアナログの生産のために幾つかの方法が使用されうる。例えば、微生物中でのインスリン生産に使用される３つの主要な方法が国際公開第２００８０３４８８１号に開示されている。これらのうち２つは、細胞質中での大きな融合タンパク質の発現（Ｆｒａｎｋ等（１９８１）,Ｐｅｐｔｉｄｅｓ：Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ ｏｆ ｔｈｅ ７ｔｈ Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｐｅｐｔｉｄｅ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ Ｓｙｍｐｏｓｉｕｍ（Ｒｉｃｈ＆Ｇｒｏｓｓ編集），Ｐｉｅｒｃｅ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃｏ．，Ｒｏｃｋｆｏｒｄ，ＩＩＩ．頁７２９−７３９）、又は細胞膜周辺腔への分泌を可能にするシグナルペプチドの使用(Ｃｈａｎ等（１９８１）ＰＮＡＳ ７８：５４０１−５４０４)の何れかとともに大腸菌を使う。第三の方法はインスリン前駆体を培地へ分泌する出芽酵母を使用する（Ｔｈｉｍ等、（１９８６）ＰＮＡＳ ８３：６７６６−６７７０）。従来技術は大腸菌又は出芽酵母で発現される多数のインスリン前駆体を開示しており、米国特許第５，９６２，２６７号、国際公開９５／１６７０８、欧州特許出願公開第００５５９４５号、欧州特許出願公開第０１６３５２９号、欧州特許出願公開第０３４７８４５号及び欧州特許出願公開第０７４１１８８号を参照のこと。
【００８０】
インスリンアナログは、例えば米国特許第６５００６４５号に開示され良く知られた技術により、当該のインスリンアナログをエンコードしているＤＮＡ配列を適切な宿主細胞中で発現することにより産生される。インスリンアナログは直接的に又はＢ鎖のＮ末端伸長又はＢ鎖のＣ末端伸長を有する前駆体分子として発現される。Ｎ末端伸長は直接発現された産物の収率を増やす機能を持ち得、１５アミノ酸長以下であり得る。Ｎ末端伸長は培養液から単離後にインビトロで切断されるべきであり、従ってＢ１の隣に切断部位を持つであろう。本発明に適したＮ末端伸長のタイプは、米国特許第５，３９５，９２２号又は欧州特許出願公開第７６５３９５号に開示されている。Ｃ末端伸長は宿主細胞のエキソプロテアーゼによる細胞内タンパク質プロセシングに対して、成熟インスリン又はインスリンアナログ分子を保護する機能を有し得る。Ｃ末端伸長は分泌された活性カルボキシペプチダーゼにより培養液中の細胞外にて、又は培養液から単離後にインビトロで切断されるべきである。成熟インスリン及びカルボキシペプチダーゼにより除かれるＢ鎖のＣ末端伸長を持つインスリンアナログを生産する方法は国際公開第０８０３７７３５号に開示されている。本方法による標的インスリン産物は、２本鎖ヒトインスリン又はＢ鎖の短いＣ末端伸長を有し得る又は有し得ない２本鎖ヒトインスリンアナログであり得る。もし標的インスリン産物がＢ鎖のＣ末端伸長を持たなければ、更なる精製工程の前に上記Ｃ末端伸長は後にＢ鎖から切断される能力があるはずである。
【００８１】
本発明は以下の限定されない実施態様のリストをもまた熟考し、それらは本明細書の他の箇所で更に記述される。
【００８２】
１．・インスリン化合物、
・ニコチン化合物、及び
・アルギニン
を含有するインスリン製剤。
２．インスリン化合物がインスリン又はインスリンアナログである、実施態様１によるインスリン製剤。
３．インスリン化合物がＢ２８Ａｓｐヒトインスリンである、実施態様１から２の何れかに記載のインスリン製剤。
４．インスリン化合物がＢ２８ＬｙｓＢ２９Ｐｒｏヒトインスリンである、実施態様１から３の何れかに記載のインスリン製剤。
５．インスリン化合物がＢ３ＬｙｓＢ２９Ｇｌｕヒトインスリンである、実施態様１から４の何れかに記載のインスリン製剤。
６．インスリン化合物が、０．１−１０．０ｍＭ；０．１−３．０ｍＭ；０．１−２．５ｍＭ；０．１−２．０ｍＭ；０．１−１．５ｍＭ；０．２−２．５ｍＭ；０．２−２．０ｍＭ；０．２−１．５ｍＭ；０．３−３．０ｍＭ；０．３−２．５ｍＭ；０．３−２．０ｍＭ；０．３−１．５ｍＭ；０．５−１．３ｍＭ及び０．６−１．２ｍＭから選択された範囲において存在する、実施態様１から５の何れかに記載のインスリン製剤。
７．インスリン化合物が約０．１ｍＭから約１０．０ｍＭの量で存在する、実施態様１から６の何れかに記載のインスリン製剤。
８．インスリン化合物が約０．１ｍＭから約３．０ｍＭの量で存在する、実施態様１から７の何れかに記載のインスリン製剤。
９．インスリン化合物が約０．１ｍＭから約２．５ｍＭの量で存在する、実施態様１から８の何れかに記載のインスリン製剤。
１０．インスリン化合物が約０．１ｍＭから約２．０ｍＭの量で存在する、実施態様１から９の何れかに記載のインスリン製剤。
１１．インスリン化合物が約０．１ｍＭから約１．５ｍＭの量で存在する、実施態様１から１０の何れかに記載のインスリン製剤。
１２．インスリン化合物が約０．２ｍＭから約２．５ｍＭの量で存在する、実施態様１から１１の何れかに記載のインスリン製剤。
１３．インスリン化合物が約０．２ｍＭから約２．０ｍＭの量で存在する、実施態様１から１２の何れかに記載のインスリン製剤。
１４．インスリン化合物が約０．２ｍＭから約１．５ｍＭの量で存在する、実施態様１から１３の何れかに記載のインスリン製剤。
１５．インスリン化合物が約０．３ｍＭから約３．０ｍＭの量で存在する、実施態様１から１４の何れかに記載のインスリン製剤。
１６．インスリン化合物が約０．３ｍＭから約２．５ｍＭの量で存在する、実施態様１から１５の何れかに記載のインスリン製剤。
１７．インスリン化合物が約０．３ｍＭから約２．０ｍＭの量で存在する、実施態様１から１６の何れかに記載のインスリン製剤。
１８．インスリン化合物が約０．３ｍＭから約１．５ｍＭの量で存在する、実施態様１から１７の何れかに記載のインスリン製剤。
１９．インスリン化合物が約０．５ｍＭから約１．３ｍＭの量で存在する、実施態様１から１８の何れかに記載のインスリン製剤。
２０．インスリン化合物が約０．３ｍＭから約１．２ｍＭの量で存在する、実施態様１から１９の何れかに記載のインスリン製剤。
２１．インスリン化合物が約０．６ｍＭから約１．２ｍＭの量で存在する、実施態様１から２０の何れかに記載のインスリン製剤。
２２．インスリン化合物が約０．６又は約１．２ｍＭの量で存在する、実施態様１から２１の何れかに記載のインスリン製剤。
２３．インスリン化合物が約０．３ｍＭの量で存在する、実施態様１から２２の何れかに記載のインスリン製剤。
２４．インスリン化合物が約０．６ｍＭの量で存在する、実施態様１から２３の何れかに記載のインスリン製剤。
２５．インスリン化合物が約１．２ｍＭの量で存在する、実施態様１から２４の何れかに記載のインスリン製剤。
２６．ニコチン化合物がニコチンアミド、ニコチン酸、ナイアシン、ナイアシンアミド及びビタミンＢ３及び／又はその塩及び／又はその何れかの組合わせからなる群から選択される、実施態様１から２５の何れかに記載のインスリン製剤。
２７．ニコチン化合物がニコチンアミド、ニコチン酸、及び／又はその塩及び／又はその何れかの組合わせから選択される、実施態様１から２６の何れかに記載のインスリン製剤。
２８．ニコチン化合物が１−３００ｍＭ；５−２００ｍＭ；４０−１２０ｍＭ，７０−１４０ｍＭ又は８０−１３０ｍＭから選択される範囲に存在する、実施態様１から２７の何れかに記載のインスリン製剤。
２９．ニコチン化合物を約１ｍＭから約３００ｍＭ含む、実施態様１から２８の何れかに記載のインスリン製剤。
３０．ニコチン化合物を約８ｍＭから約２６０ｍＭ含む、実施態様１から２９の何れかに記載のインスリン製剤。
３１．ニコチン化合物を約５ｍＭから約２００ｍＭ含む、実施態様１から３０の何れかに記載のインスリン製剤。
３２．ニコチン化合物を約１ｍＭから約１５０ｍＭ含む、実施態様１から３１の何れかに記載のインスリン製剤。
３３．ニコチン化合物を約５ｍＭから約２０ｍＭ含む、実施態様１から３２の何れかに記載のインスリン製剤。
３４．ニコチン化合物を約２０ｍＭから約１２０ｍＭ含む、実施態様１から３３の何れかに記載のインスリン製剤。
３５．ニコチン化合物を約４０ｍＭから約１２０ｍＭ含む、実施態様１から３４の何れかに記載のインスリン製剤。
３６．ニコチン化合物を約２０ｍＭから約４０ｍＭ含む、実施態様１から３５の何れかに記載のインスリン製剤。
３７．ニコチン化合物を約６０ｍＭから約８０ｍＭ含む、実施態様１から３６の何れかに記載のインスリン製剤。
３８．ニコチン化合物を約７０ｍＭから約１４０ｍＭ含む、実施態様１から３７の何れかに記載のインスリン製剤。
３９．ニコチン化合物を約８０ｍＭから約１３０ｍＭ含む、実施態様１から３８の何れかに記載のインスリン製剤。
４０．ニコチン化合物を約８ｍＭ、３０ｍＭ、１００ｍＭ又は１３０ｍＭ含む、実施態様１から３９の何れかに記載のインスリン製剤。
４１．ニコチン化合物を約８ｍＭ含む、実施態様１から４０の何れかに記載のインスリン製剤。
４２．ニコチン化合物を約３０ｍＭ、１００ｍＭ、１３０ｍＭ含む、実施態様１から４１の何れかに記載のインスリン製剤。
４３．ニコチン化合物を約３０ｍＭ含む、実施態様１から４２の何れかに記載のインスリン製剤。
４４．ニコチン化合物を約１００ｍＭ含む、実施態様１から４３の何れかに記載のインスリン製剤。
４５．ニコチン化合物を約１３０ｍＭ含む、実施態様１から４４の何れかに記載のインスリン製剤。
４６．ニコチン化合物を約１５０ｍＭ含む、実施態様１から４５の何れかに記載のインスリン製剤。
４７．アルギニン化合物を１−１００ｍＭ，５−１２０ｍＭ，８−８５ｍＭ，２０−９０ｍＭ，３０−９０ｍＭ，３０−８５ｍＭ，３０−６０ｍＭ又は１０−４０ｍＭの範囲にて含む、実施態様１から４６の何れかに記載のインスリン製剤
４８．アルギニン化合物を１−１２０ｍＭ，８−８５ｍＭ又は１−４０ｍＭの範囲にて含む、実施態様１から４７の何れかに記載のインスリン製剤。
４９．アルギニンを約１ｍＭから約１２０ｍＭ含む、実施態様１から４８の何れかに記載のインスリン製剤。
５０．アルギニンを約１ｍＭから約１００ｍＭ含む、実施態様１から４９の何れかに記載のインスリン製剤。
５１．アルギニンを約５ｍＭから約１２０ｍＭ含む、実施態様１から５０の何れかに記載のインスリン製剤。
５２．アルギニンを約２０ｍＭから約９０ｍＭ含む、実施態様１から５１の何れかに記載のインスリン製剤。
５３．アルギニンを約３０ｍＭから約８５ｍＭ含む、実施態様１から５２の何れかに記載のインスリン製剤。
５４．アルギニンを約８ｍＭから約８５ｍＭ含む、実施態様１から５３の何れかに記載のインスリン製剤。
５５．アルギニンを約３０ｍＭから約６０ｍＭ含む、実施態様１から５４の何れかに記載のインスリン製剤。
５６．アルギニンを約１０ｍＭから約４０ｍＭ含む、実施態様１から５５の何れかに記載のインスリン製剤。
５７．アルギニンを約１ｍＭから約４０ｍＭ含む、実施態様１から５６の何れかに記載のインスリン製剤。
５８．アルギニンが、１ｍＭ，２ｍＭ，３ｍＭ，４ｍＭ，５ｍＭ，６ｍＭ，７ｍＭ，８ｍＭ，９ｍＭ，１０ｍＭ，１５ｍＭ，２０ｍＭ，２５ｍＭ，３０ｍＭ，３５ｍＭ又は４０ｍＭ，４５ｍＭ，５０ｍＭ，５５ｍＭ又は６０ｍＭから選択される範囲で存在する、実施態様１から５７の何れかに記載のインスリン製剤。
５９．アルギニンを約１ｍＭ含む、実施態様１から５８の何れかに記載のインスリン製剤。
６０．アルギニンを約２ｍＭ含む、実施態様１から５９の何れかに記載のインスリン製剤。
６１．アルギニンを約３ｍＭ含む、実施態様１から６０の何れかに記載のインスリン製剤。
６２．アルギニンを約４ｍＭ含む、実施態様１から６１の何れかに記載のインスリン製剤。
６３．アルギニンを約５ｍＭ含む、実施態様１から６２の何れかに記載のインスリン製剤。
６４．アルギニンを約６ｍＭ含む、実施態様１から６３の何れかに記載のインスリン製剤。
６５．アルギニンを約７ｍＭ含む、実施態様１から６４の何れかに記載のインスリン製剤。
６６．アルギニンを約８ｍＭ含む、実施態様１から６５の何れかに記載のインスリン製剤。
６７．アルギニンを約９ｍＭ含む、実施態様１から６６の何れかに記載のインスリン製剤。
６８．アルギニンを約１０ｍＭ含む、実施態様１から６７の何れかに記載のインスリン製剤。
６９．アルギニンを約１５ｍＭ含む、実施態様１から６８の何れかに記載のインスリン製剤。
７０．アルギニンを約２０ｍＭ含む、実施態様１から６９の何れかに記載のインスリン製剤。
７１．アルギニンを約２５ｍＭ含む、実施態様１から７０の何れかに記載のインスリン製剤。
７２．アルギニンを約３０ｍＭ含む、実施態様１から７１の何れかに記載のインスリン製剤。
７３．アルギニンを約３５ｍＭ含む、実施態様１から７２の何れかに記載のインスリン製剤。
７４．アルギニンを約４０ｍＭ含む、実施態様１から７３の何れかに記載のインスリン製剤。
７５．アルギニンを約４５ｍＭ含む、実施態様１から７４の何れかに記載のインスリン製剤。
７６．アルギニンを約５０ｍＭ含む、実施態様１から７５の何れかに記載のインスリン製剤。
７７．アルギニンを約５５ｍＭ含む、実施態様１から７６の何れかに記載のインスリン製剤。
７８．アルギニンを約６０ｍＭ含む、実施態様１から７７の何れかに記載のインスリン製剤。
７９．グルタミン酸を更に含む、実施態様１から７８の何れかに記載のインスリン製剤。
８０．グルタミン酸を１−１００ｍＭ，２０−９０ｍＭ，３０−９０ｍＭ，３０−８５ｍＭ又は３０−５０ｍＭから選択される範囲にて存在する、実施態様７９に記載のインスリン製剤。
８１．グルタミン酸を約１ｍＭから約１００ｍＭ含む、実施態様７９に記載のインスリン製剤。
８２．グルタミン酸を約２０ｍＭから約９０ｍＭ含む、実施態様７９に記載のインスリン製剤。
８３．グルタミン酸を約３０ｍＭから約８５ｍＭ含む、実施態様７９に記載のインスリン製剤。
８４．グルタミン酸を約３０ｍＭから約５０ｍＭ含む、実施態様７９に記載のインスリン製剤。
８５．グルタミン酸を約３０ｍＭ又は５０ｍＭ含む、実施態様７９に記載のインスリン製剤。
８６．グルタミン酸を約３０ｍＭ含む、実施態様７９に記載のインスリン製剤。
８７．グルタミン酸を約５０ｍＭ含む、実施態様７９に記載のインスリン製剤。
８８．更に金属イオン、保存料、等張化剤及び安定剤、界面活性剤及びバッファーを含む、実施態様１から８７の何れかに記載のインスリン製剤。
８９．バッファーがトリスである、実施態様８８に記載のインスリン製剤。
９０．約２ｍＭから約５０ｍＭのトリスを含む、実施態様８９に記載のインスリン製剤。
９１．約１０ｍＭから約４０ｍＭのトリスを含む、実施態様８９に記載のインスリン製剤。
９２．約２０ｍＭから約３０ｍＭのトリスを含む、実施態様８９に記載のインスリン製剤。
９３．約１０ｍＭ、２０ｍＭ、３０ｍＭ又は４０ｍＭのトリスを含む、実施態様８９に記載のインスリン製剤。
９４．約１０ｍＭのトリスを含む、実施態様８９に記載のインスリン製剤。
９５．約２０ｍＭのトリスを含む、実施態様８９に記載のインスリン製剤。
９６．約３０ｍＭのトリスを含む、実施態様８９に記載のインスリン製剤。
９７．約４０ｍＭのトリスを含む、実施態様８９に記載のインスリン製剤。
９８．金属イオンが亜鉛である、実施態様８９に記載のインスリン製剤。
９９．インスリン化合物のヘキサマーあたり約６つ未満の亜鉛イオンが存在する、実施態様９８に記載のインスリン製剤。
１００．インスリン化合物のヘキサマーあたり約４つ未満の亜鉛イオンが存在する、実施態様９８に記載のインスリン製剤。
１０１．インスリン化合物のヘキサマーあたり約３つ未満の亜鉛イオンが存在する、実施態様９８に記載のインスリン製剤。
１０２．「亜鉛：インスリン」のモル比が約２：６から約５：６である、実施態様９８に記載のインスリン製剤。
１０３．「亜鉛：インスリン」のモル比が約２．５：６から約４．５：６である、実施態様９８に記載のインスリン製剤。
１０４．「亜鉛：インスリン」のモル比が約３：６から約４：６である、実施態様９８に記載のインスリン製剤。
１０５．「亜鉛：インスリン」のモル比が約２：６である、実施態様９８に記載のインスリン製剤。
１０６．「亜鉛：インスリン」のモル比が約２．５：６である、実施態様９８に記載のインスリン製剤。
１０７．「亜鉛：インスリン」のモル比が約３：６である、実施態様９８に記載のインスリン製剤。
１０８．「亜鉛：インスリン」のモル比が約３．５：６である、実施態様９８に記載のインスリン製剤。
１０９．「亜鉛：インスリン」のモル比が約４：６である、実施態様９８に記載のインスリン製剤。
１１０．「亜鉛：インスリン」のモル比が約４．５：６である、実施態様９８に記載のインスリン製剤。
１１１．「亜鉛：インスリン」のモル比が約５：６である、実施態様９８に記載のインスリン製剤。
１１２．安定剤が非イオン性界面活性剤である、実施態様８８に記載のインスリン製剤。
１１３．界面活性剤がポリソルベート２０（Ｔｗｅｅｎ２０）又はポリソルベート８０（Ｔｗｅｅｎ８０）である、実施態様１１２に記載のインスリン製剤。
１１４．界面活性剤がポリソルベート２０（Ｔｗｅｅｎ２０）である、実施態様１１２に記載のインスリン製剤。
１１５．界面活性剤がポリソルベート８０（Ｔｗｅｅｎ８０）である、実施態様１１２に記載のインスリン製剤。
１１６．ポリソルベートを約５から１００ｐｐｍ、約１０から５０ｐｐｍ又は約１０から２０ｐｐｍ含む、実施態様１１２−１１５の何れかに記載のインスリン製剤。
１１７．更にフェノール化合物を含む、実施態様８８に記載のインスリン製剤。
１１８．上記フェノール化合物が約０から約６ｍｇ／ｍｌ又は約０から約４ｍｇ／ｍｌにおける量存在する、実施態様１１７に記載のインスリン製剤。
１１９．更にｍ−クレゾールを含む、実施態様８８に記載のインスリン製剤。
１２０．ｍ−クレゾールが約０．５から約４．０ｍｇ／ｍｌ又は約０．６から約４．０ｍｇ／ｍｌにおける量存在する、実施態様１１９に記載のインスリン製剤。
１２１．ｐＨが中性から弱塩基性である、実施態様１から１２０の何れかに記載のインスリン製剤。
１２２．ｐＨが約７．０から約８．０である、実施態様１から１２１の何れかに記載のインスリン製剤。
１２３．ｐＨが約７．０である、実施態様１から１２２の何れかに記載のインスリン製剤。
１２４．ｐＨが約７．１である、実施態様１から１２３の何れかに記載のインスリン製剤。
１２５．ｐＨが約７．２である、実施態様１から１２４の何れかに記載のインスリン製剤。
１２６．ｐＨが約７．３である、実施態様１から１２５の何れかに記載のインスリン製剤。
１２７．ｐＨが約７．４である、実施態様１から１２６の何れかに記載のインスリン製剤。
１２８．ｐＨが約７．５である、実施態様１から１２７の何れかに記載のインスリン製剤。
１２９．ｐＨが約７．６である、実施態様１から１２８の何れかに記載のインスリン製剤。
１３０．ｐＨが約７．７である、実施態様１から１２９の何れかに記載のインスリン製剤。
１３１．ｐＨが約７．８である、実施態様１から１３０の何れかに記載のインスリン製剤。
１３２．ｐＨが約７．９である、実施態様１から１３１の何れかに記載のインスリン製剤。
１３３．ｐＨが約８．０である、実施態様１から１３２の何れかに記載のインスリン製剤。
１３４．実施態様１から１３３の何れかに記載のインスリン製剤を治療に有効な用量、その治療を必要とする患者への投与により、哺乳動物の血糖値を下げる方法。
１３５．実施態様１から１３４の何れかに記載のインスリン製剤を被験者へ投与することを含む、被験者の真性糖尿病を治療する方法。
１３６．非経口投与のための、実施態様１から１３５の何れかに記載の方法。
１３７．ストレス誘導による高血糖を含む高血糖症、２型糖尿病、耐糖能異常、１型糖尿病、及び治療に同化作用が必要なやけどや手術創及び他の疾患又は創傷、心筋梗塞、脳卒中、冠状動脈性心疾患や他の心血管疾患の治療又は予防、及び危篤状態の糖尿病患者及び非糖尿病患者の治療における使用のための、実施態様１から１３６の何れかに記載のインスリン製剤。
【００８３】
本発明は以下の実施例で更に説明されるが、限定するものとして解釈されるべきではない。
【００８４】
ここに引用される出版物、特許出願、及び特許を含む全ての参考文献は、あたかも各参考文献が個々に特に出典明示により援用されると示され、（法律で許容される最大範囲で）ここにその全体が説明されたかの如く、その全体において同程度に出典明示により援用される。
【００８５】
全ての表題及び副題はここでは便宜のためだけに使用され、決して本発明を限定すると解釈されるべきではない。
【００８６】
あらゆる実施例、又はここで供される例示的な言葉（例えば、「例えば」）の使用は単に本発明の理解をより容易にすることを目的としており、他に主張されない限り本発明の範囲を制限をもたらすものではない。本明細書ではいかなる言葉も、何れかの非請求要素が本発明の実施に必要不可欠であることを示すものとして解釈されるべきではない。
【００８７】
ここでの特許文書の引用と編入は、単に便宜上のために行われるものであり、そのような特許文書の有効性、特許性及び／又は権利行使可能性の如何なる見解も反映するものではない。
【００８８】
この発明には、適用される法律により許可される限り、ここに添付された特許請求の範囲に記載される主題事項の全ての変形例及び均等物が含まれる。
【実施例】
【００８９】
実施例１
薬学的製剤の調製
本発明の薬学的製剤は水溶液として調剤され得る。水性溶媒は、例えば、塩化ナトリウム又はグリセロールで等張にされる。更に、水性溶媒は、例えば酢酸亜鉛又は塩化亜鉛として添加された亜鉛イオン、バッファー及び保存料を含み得る。アルギニンがＡｒｇ,ＨＣｌとして添加され得る。製剤のｐＨの値は望まれた値に調整され、当該のインスリンの等電点、ｐＩ、に依存して約３から約８．５の間、約３から約５の間又は約６．５から約７．５の間であり得る。
【００９０】
実施例２
インスリンの化学的安定性の分析
サイズ排除クロマトグラフィー
【００９１】
高分子量タンパク質（ＨＭＷＰ）及びモノマーインスリンアスパルトの定量はウォーターズ（Ｗａｔｅｒｓ）インスリン（３００×７．８ｍｍ，部品番号 ｗａｔ２０１５４９）で、２．５Ｍ酢酸、４ｍＭのＬ−アルギニン及び２０％（Ｖ／Ｖ）のアセトニトリルを含む溶離液により流量１ｍｌ／分で４０℃にて実施した。検出は同調型吸光度検出器（ウォーターズ４８６）で２７６ｎｍで行った。注入容積は４０μｌ及び６００μｌのヒトインスリン標準であった。ＨＭＷＰ及び製剤の濃度は各サンプリング点において測定した。
【００９２】
逆相クロマトグラフィー（ＵＰＬＣ）
インスリンアスパルトに関連した不純物の決定は、ＢＥＨ ＲＰ Ｃ８ ２．１×１００ｍｍカラム、粒子径１．７μｍ、ウォーターズ部品番号１８６００２８７８を使用し、流量０．５ｍｌ／分、４０℃で、２２０ｎｍにおける検出でＵＰＬＣシステム上で行った。溶出は以下からなる移動相で行った。
Ａ．１０％（ｗ／Ｖ）アセトニトリル、２．８％（ｗ／ｗ）硫酸ナトリウム、０．３％（ｗ／ｗ）ｏ−リン酸、ｐＨ ３．５。
Ｂ．７０％（ｗ／Ｖ）アセトニトリル、勾配：０−１１分 アイソクラチック Ａ／Ｂは７３％／２７％、１１−１２ Ａ／Ｂは５２％／４８％に線形変化、１３−１５分 Ａ／Ｂは７３％／２７％に線形変化、１５−２０分 Ａ／Ｂは７３％／２７％でアイソクラチック勾配。
【００９３】
Ｂ２８イソアスパラギン酸、デスアミド及び他の関連した不純物の量は、保存料の溶出後に決定した総吸光度面積の百分率で測定された吸光度面積として決定された。ＲＰ−ＵＰＬＣ法はノボノルディスクが市販するインスリンアスパルト薬剤の品質管理に使用される分析的方法と同等である。
【００９４】
アルギニンの追加は形成される分解産物、特にＨＭＷＰ及びデスアミド型の量を減少させ、アルギニンの濃度を１０から５０ｍＭの範囲で増加させると更に分解の減少をもたらす。ＴｈＴアッセイにおける遅延時間として測定される物理的安定性はアルギニンの添加によって減少し、アルギニン濃度を増加させるとますます減少する。５０ｍＭアルギニンの全効能は、下の表３に示される通り、分解産物形成の減少に関して、５０ｍＭグリシン、５０ｍＭグルタミン酸又は５０ｍＭヒスチジンよりより優れている。
【００９５】
実施例３
ＬＹＤブタモデルにおける薬物動態（ＰＫ）／薬動力学（ＰＤ）研究及び血漿分析アッセイ
ＬＹＤブタにおけるＰＫ／ＰＤ研究
ＰＫ／ＰＤ研究は５５から１１０ｋｇの重さのＬＹＤ異種交配した国産メスブタで行った。ブタは研究開始の少なくとも２日前に、耳の静脈を通して頚部静脈にカテーテルが挿入された。研究開始前の最後の食餌は、試験製剤の注射の約１８時間前に動物に出され、動物は絶食期間及び試験期間中いつでも自由に水を摂取できた。
【００９６】
０時間にて試験製剤が首の横側の皮下へ与えられた。投薬前に血液試料が採血され、投薬後一定の時間間隔でカテーテルから試料が摂取され、ヘパリンで事前にコーティングされた１．５ｍｌガラスチューブへサンプリングした。血液試料は、最初の３０分以内に行われた３０００ｒｐｍ、４℃で１０分間の遠心分離による血漿の分画まで氷水中で保管された。血漿試料は短時間（２−３時間）４℃で、又は長期間−１８℃で保管され、グルコースはＹＳＩ又はＫｏｎｅｌａｂ ３０ｉにて、及びインスリンアスパルト濃度はＬＯＣＩにより分析された。
【００９７】
インスリンアスパルト定量化のための発光酸素チャネリングイムノアッセイ（ＬＯＣＩ）
インスリンアスパルトＬＯＣＩはモノクロナール抗体にもとずくサンドイッチ免疫測定法であり、ユーロピウムでコーティングされたアクセプタービーズとストレプトアビジンでコーティングされたドナービーズである２つのビーズの近接を利用する。アクセプタービーズはヒトインスリンに対する特異的抗体でコートされており、血漿試料中のインスリンアスパルトを認識する。第２のビオチン標識化抗体はインスリンアスパルトに特異的に結合し、ストレプトアビジンでコーティングされたビーズと共にサンドイッチを作り上げる。ビーズが会合した免疫複合体のイルミネーションはドナービーズから一重項酸素を放出し化学発光を引き起こす。化学発光が測定され、生成した光量がインスリンアスパルトの濃度に比例する。
【００９８】
市販品のノボラピッド（登録商標）と比較して、血漿グルコース低下の初期速度は本発明による製剤においてより速い（図３及び４）。同様に、ノボラピッド（登録商標）と比較した場合、本発明による製剤のインスリン組成物の初期吸収速度は著しく速い（図５）。
【００９９】
実施例４
タンパク質製剤の物理的安定性に関する評価のためのＴｈＴフィブリル化アッセイの概略紹介
ペプチドの低い物理的安定性はアミロイドフィブリル形成を引き起こし得、それは試料中に良く整頓された糸状高分子構造として観察され、最終的にゲルの形成を引き起こす。これは伝統的に試料の目視により測定されている。しかしながら、そのような測定は非常に主観的であり観察者に依存している。従って、小分子指標プローブの適用がはるかに有利である。チオフラビンＴ（ＴｈＴ）はそのようなプローブであり、フィブリルに結合すると異なる蛍光サインを示す［Ｎａｉｋｉ等、（１９８９） Ａｎａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．１７７, ２４４−２４９；ＬｅＶｉｎｅ（１９９９） Ｍｅｔｈｏｄｓ．Ｅｎｚｙｍｏｌ．３０９, ２７４−２８４］。フィブリル形成の時間的経過は次の式によるＳ字型曲線により記述できる［Ｎｉｅｌｓｅｎ等、（２００１） Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ４０，６０３６−６０４６］。
【０１００】
ここで、Ｆは時刻ｔにおけるＴｈＴ蛍光である。定数ｔ0は最大蛍光の５０％に達するために必要な時間である。フィブリル形成を記述する２つの重要なパラメーターはｔ0−２τにより計算される遅延時間と見かけの速度定数ｋａｐｐ＝１／τである。
【０１０１】
部分的にフォールドしたペプチドの中間体はフィブリル化の一般的な開始機構として提案されている。そうした中間体が核形成して鋳型を作りそこに更に中間体が会合してフィブリル化が進行しうることは少ない。遅延時間は臨界量の核が蓄積される間隔に対応し、見かけの速度定数はフィブリルそれ自身が形成される速度である。
【０１０２】
試料調製
試料は各アッセイ前に新しく調製した。各試料の組成物は各実施例中に記述する。試料のｐＨは濃縮されたＮａＯＨ及びＨＣｌＯ４又はＨＣｌを適量使用して望まれる値に調整した。Ｈ２Ｏ中のストック溶液からチオフラビンＴを試料に添加して最終濃度を１μＭとした。
【０１０３】
２００μｌの試料を９６穴マイクロタイタープレート（Ｐａｃｋａｒｄ ＯｐｔｉＰｌａｔｅＴＭ-９６、白色ポリスチレン）に置いた。通常、各試料について４又は８の複製（１回の試験条件に対応する）が穴の一列に置かれる。プレートはスコッチパッド（Ｑｉａｇｅｎ）で密封した。
【０１０４】
インキュベーション及び蛍光測定
所定の温度でのインキュベーション、震盪及びＴｈＴ蛍光発光の測定はＦｌｕｏｒｏｓｋａｎ Ａｓｃｅｎｔ ＦＬ蛍光プレートリーダー又はＶａｒｉｏｓｋａｎプレートリーダー（Ｔｈｅｒｍｏ Ｌａｂｓｙｓｔｅｍｓ）で行った。温度は３７℃に調整した。軌道震盪は全ての提示データにおいて１ｍｍの振幅で９６０ｒｐｍに設定した。蛍光測定は４４４ｎｍフィルターを通した励起及び４８５ｎｍフィルターを通した発光測定を使用して行った。
【０１０５】
各実行はアッセイ温度にてプレートを１０分間インキュベートすることから開始した。プレートは２０分ごとに望まれた時間測定した。各測定の間、記述した通りにプレートを震盪し加熱した。
【０１０６】
データの取り扱い
測定点を更なる処理のためマイクロソフトエクセル形式に保存し、ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍを使用して曲線描画及びフィッティングを行った。フィブリルが無いときのＴｈＴ由来のバックグランド発光は無視できるものであった。データ点は典型的には４つ又は８つの試料の平均であり標準偏差のエラーバーと共に示される。同一実験で得られたデータのみ（すなわち同一プレート上の試料）同一グラフに提示され、実験の間におけるフィブリル化の相対的な測定を保証している。
【０１０７】
データセットは式（１）にフィットさせ得る。しかしながら全Ｓ字曲線が常に実験時間中に得られるわけではなく、ＴｈＴ蛍光がバックグランドレベルとは異なる時点として、遅延時間をＴｈＴ蛍光曲線から目視で決定した。
【０１０８】
初期及び最終濃度の測定
試験された各製剤におけるペプチド濃度はＴｈＴフィブリル化アッセイ「初期」及びＴｈＴフィブリル化完了後「ＴｈＴアッセイ後」の両方で測定した。濃度はプラムリンチド標準を参照として使用し逆ＨＰＬＣ法で決定した。完了後の測定前に各複製から１５０μｌを採取しエッペンドルフチューブへ移した。これらを３００００Ｇで４０分間遠心した。ＨＰＬＣシステムに適用前に上清を０．２２μｍフィルターを通して濾過した。
【技術分野】
【０００１】
本発明はインスリン化合物、ニコチン化合物及びアミノ酸を含む薬学的製剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
真性糖尿病はグルコース利用能が部分的又は完全に失われる代謝疾患である。全てのヒトのうち約５％が糖尿病を患い、その疾患は大流行に近づいている。
【０００３】
１９２０年代にインスリンが導入されて以来、糖尿病治療に絶え間ない改良が行われてきた。高血糖値を避けられるように、糖尿病患者はインスリンが各食事と一緒に投与される複数の注射療法をたびたび行っている。糖尿病患者は数十年にわたりインスリンで治療されてきたので、安全で生活の質を改善するインスリン製剤に対して大きな需要がある。商業的に入手可能なインスリン製剤としては、速効型、中間型および持続性作用型の製剤を挙げることができる。
【０００４】
真性糖尿病の治療において、レギュラーインスリン（例えばアクトラピッド（登録商標））、イソフェンインスリン(ＮＰＨと称される)、インスリン亜鉛懸濁剤(例えばＳｅｍｉｌｅｎｔｅ(登録商標)、Ｌｅｎｔｅ(登録商標)、及びＵｌｔｒａｌｅｎｔｅ(登録商標))、及び二相性イソフェンインスリン（例えばノボミックス（登録商標））等の、多くの様々なインスリンの薬学的製剤が提案され使用されてきた。ヒトインスリンアナログ及び誘導体もまた開発され、作用の特別なプロファイル、つまり速効作用又は持続作用に対して設計されている。そうした速効性インスリンアナログを含む市販のインスリン製剤のいくつかは、ノボラピッド（登録商標）（Ｂ２８Ａｓｐヒトインスリン製剤）、ヒューマログ（登録商標）（Ｂ２８ＬｙｓＢ２９Ｐｒｏヒトインスリン製剤）及びアピドラ（登録商標）（Ｂ３ＬｙｓＢ２９Ｇｌｕヒトインスリン製剤）を含む。
【０００５】
国際出願ＷＯ９１／０９６１７号及びＷＯ／９６１０４１７号（ノボノルデイスクＡ／Ｓ）は、ニコチンアミド又はニコチン酸又はその塩を含むインスリン製剤を開示している。
【０００６】
ほとんどの場合インスリンの薬学的製剤は皮下注射により投与される。患者のために重要なのはインスリンの作用プロファイルであり、注射してからの時間の関数としてのグルコース代謝におけるインスリンの作用を意味する。このプロファイルにて、とりわけ、開始時間、作用の最大値及び総持続時間は重要である。ボーラス投与インスリンの場合、異なる作用プロファイルを持つ様々なインスリン製剤が患者により望まれ要求されている。ある患者は、同じ日にインスリン製剤を非常に異なった作用プロファイルで使用し得る。例として望まれる作用プロファイルは、その日の時刻及び患者が食べた食事の量と組成物に依存する。
【０００７】
患者にとって同様に重要なのは、インスリン製剤が、１．５〜３．０ｍｌのカートリッジを含む器具について少なくとも１から２週間、カートリッジ全体が空になるまで保管される、例えばペンフィル（登録商標）カートリッジを含む器具等のペン型注射器具の豊富な使用のためインスリン製剤の化学的安定性である。保管の間、インスリンの構造の共有結合性の化学変化が起きる。これは、活性が低く、及び/又は、アミド分解産物や高分子量変換産物（二量体、多量体）等の潜在的に免疫原性となり得る分子の形成を引き起こし得る。更に、長期間保管は結果的に生物的に不活性で潜在的に免疫原性である不溶性フィブリルの形成につながるため、インスリン製剤の物理的安定性もまた重要である。
【発明の概要】
【０００８】
本発明は好ましい吸収速度及び好ましい化学的及び物理的安定性を持つインスリン製剤に関する。本発明は、ヒトインスリン及び／又はそのアナログ、ニコチンアミド又はニコチン酸及び／又はその塩、及びアルギニンを含むインスリン製剤に関する。
【０００９】
一実施態様では、本発明は、
・インスリン化合物
・ニコチン化合物、及び
・アルギニン、
を含有するインスリン製剤に関する。
【００１０】
他の実施態様では、インスリン製剤はグルタミン酸を更に含有し得る。
【００１１】
その他の実施態様では、本発明はまた、本発明に係るインスリン製剤を被験者又は哺乳動物に投与することを含む被験者の真性糖尿病の治療方法、又は被験者の血糖値を下げる方法を熟考する。
【図面の簡単な説明】
【００１２】
【図１】図１は本発明に係る製剤を３７℃で２週間保管した間の分解産物の全インスリン含有量のパーセンテージの進展を示す。文字Ａはノボラピッド（登録商標）基準を指し、残りの文字は、実施例１の表１に記載のインスリンアスパルト製剤に対応する。ノボラピッド（登録商標）製剤（製剤Ａ）と比較し、ニコチンアミド（製剤Ｂ及びＤ）の添加は分解産物形成の増加を引き起こす。一方、ニコチンアミド、グルタミン酸及びアルギニンの複合添加（製剤Ｃ及びＥ）では、ＨＭＷＰの形成が少なく、ほとんど類似の分解パターンを有している。
【図２】図２は本発明に係る製剤を３７℃で２週間保管した間の分解産物の全インスリン含有量のパーセンテージの進展を示す。文字Ａはノボラピッド（登録商標）基準を指し、残りの文字は、実施例１の表１に記載のインスリンアスパルト製剤に対応する。ニコチンアミド、グルタミン酸及びアルギニンの複合添加である、製剤Ｆ、Ｇ、Ｈ、及びＩは、バッファー系が異なり、リン酸又はトリスバッファーであり、インスリン及びＺｎの濃度は、０．６ｍＭ及び０．３ｍＭ、又は１．２ｍＭ及び０．６ｍＭであり、製剤Ａのノボラピッド（登録商標）製剤と似た分解パターンを有している。
【図３】図３は本発明に係る製剤を０分時に１ｎｍｏｌ／ｋｇ投与量をブタに皮下注射した後の血漿中グルコース濃度（平均＋/−ＳＥＭ、Ｎ＝８）を示す。文字Ａはノボラピッド（登録商標）基準を指し、残りの文字は実施例１の表１に記載されたインスリンアスパルト製剤に対応する。ノボラピッド（登録商標）製剤（製剤Ａ）と比較して、血漿グルコース低下の初期速度はニコチンアミド添加製剤（製剤Ｎ）においてより速く、及びニコチンアミド及びアルギニンの組み合わせ（製剤Ｍ）においてなお一層速い。
【図４】図４は本発明による製剤を０分時に１ｎｍｏｌ／ｋｇ投与量をブタに皮下注射した後の血漿中グルコース濃度（平均＋/−ＳＥＭ、Ｎ＝７）を示す。文字Ａはノボラピッド（登録商標）基準を指し、残りの文字は実施例１の表１に記載されたインスリンアスパルト製剤に対応する。ノボラピッド（登録商標）製剤（製剤Ａ）と比較して、血漿グルコース低下の初期速度はニコチンアミド、アルギニン及びグルタミン酸を組み合わせた製剤（製剤Ｌ）及びニコチンアミド及びアルギニンを組み合わせた製剤（製剤Ｋ）においてより速い。
【図５】図５は本発明による製剤を０分時にて１ｎｍｏｌ／ｋｇ投与量をブタに皮下注射した後の血漿中グルコース濃度（平均＋/−ＳＥＭ、Ｎ＝７）を示す。文字Ａはノボラピッド（登録商標）基準を指し、残りの文字は実施例１の表１に記載されたインスリンアスパルト製剤に対応する。ノボラピッド（登録商標）製剤（製剤Ａ）と比較して、ニコチンアミドの製剤（製剤Ｊ）、ニコチンアミド及びアルギニンを組み合わせた製剤（製剤Ｋ）、及びニコチンアミド、アルギニン及びグルタミン酸を組み合わせた製剤（調剤Ｌ）のインスリン組成物の初期吸収速度は著しく速い。
【発明を実施するための形態】
【００１３】
本発明のインスリン製剤のインスリン化合物の皮下注射後の吸収は、驚くべきことに基準インスリン製剤のそれよりも速いことが見いだされた。この性質は速効性インスリン、とりわけ毎食前にインスリンを与える複数の注射療法に関連して有用である。速い作用の開始により、インスリンは一般的な速効性インスリン溶液によるよりも食事にちかづけて都合良く摂取できる。更に、インスリンの速い消失は食後の低血糖のリスクを恐らく減少させる。
【００１４】
本発明のインスリン製剤は、インスリンアスパルト等のインスリン化合物、ニコチンアミド等のニコチン化合物及びアミノ酸のアルギニンを含む速効性インスリン製剤である。任意で、本発明のインスリン製剤は更にグルタミン酸等のアミノ酸を含みうる。これらのインスリン製剤は、既存の治療よりもより密接に正常な生理機能を模倣する急速な吸収プロファイルを有している。更に、本発明のインスリン製剤は市販の薬学的製剤に適した化学的及び物理的安定性を有している。
【００１５】
本発明のインスリン製剤は既存のインスリン治療法と比較して更に速い作用の開始を提供する。そうした超速効性インスリン製剤は、第一段階のインスリン放出を回復する利点、注射の利便性及び肝臓でのグルコース生成の停止を有する。本発明のインスリン製剤は、ブタにおけるいくつかのＰＫ／ＰＤ実験で示唆されたように、ノボラピッド（登録商標）等の伝統的製剤と比較した時、初期吸収速度が１．５から５倍の範囲で増加し、皮下組織から血漿へ好ましい吸収速度を有する。この速い吸収速度は血糖のコントロールと利便性を改善し得て、食前から食後の投薬への変更を可能とし得る。本発明のインスリン製剤は一部は、ニコチンアミドの添加は吸収速度の増加を可能にするが、ＨＭＷＰの量の著しい増加により化学的安定性に負の効果も有するという、驚くべき発見に基づく。本発明のインスリン製剤は、アルギニンの添加により改善された化学的安定性を有し、そのことは、例えば保管後に二量体又は多量体又はデスアミドインスリンの形成の減少に反映される。本発明のインスリン製剤は更に改善された物理的安定性をも有し得、ポンプでの使用に有用でありうる。
【００１６】
本発明は、約０．１ｍＭから約１０．０ｍＭの濃度で存在する本発明によるインスリン化合物を含むインスリン製剤を提供し、上記製剤は３から８．５のｐＨを有する。製剤はまたニコチン化合物及びアルギニンを含む。製剤は更に、プロテアーゼ阻害剤、金属イオン、バッファー系、保存料、等張化剤、キレート剤、安定剤及び界面活性剤を含み得る。
【００１７】
一実施態様では、インスリン製剤はヒトインスリン、そのアナログ又は組合わせ、ニコチンアミド及び／又はニコチン酸及び／又はその塩、及びアルギニン及び／又はその塩を含む。
【００１８】
一実施態様にて、本発明のインスリン製剤はＢ２８Ａｓｐヒトインスリン、ニコチンアミド及びアルギニンの水溶液を含む。
【００１９】
本発明の溶液中のＢ２８Ａｓｐヒトインスリンの含有量は注射製剤中にて、１５から５００国際単位（ＩＵ）／ｍｌ、好ましくは５０から３３３（ＩＵ）／ｍｌの範囲であり得る。しかしながら、他の非経口投与目的においては、インスリン化合物の含有量はより高い場合がある。
【００２０】
ここでまた、インスリン化合物、ニコチン化合物及びグルタミン酸を含むインスリン製剤を述べる。
【００２１】
本文脈中において単位「ＩＵ」は６ｎｍｏｌに相当する。
【００２２】
「インスリンアスパルト」なる用語はヒトインスリンアナログＢ２８Ａｓｐヒトインスリンを指す。
【００２３】
「開始」なる用語は注射後にＰＫカーブが増加に転じるまでの時間を指す。
【００２４】
「吸収速度」なる用語はＰＫカーブの勾配を指す。
【００２５】
本発明による「インスリン化合物」はここではヒトインスリン、インスリンアナログ及び／又はその何れかの組合わせとして理解されるべきである。
【００２６】
ここで使用される「ヒトインスリン」なる用語は、構造及び特性を良く知られたヒトホルモンを意味する。ヒトインスリンはシステイン残基間のジスルフィド結合により連結した２本のポリペプチド鎖、すなわちＡ鎖及びＢ鎖を持つ。Ａ鎖は２１アミノ酸ペプチド及びＢ鎖は３０アミノ酸ペプチドであり、２本鎖は３つのジスルフィド結合で連結しており：１つはＡ鎖の位置６と１１のシステイン間、２つ目はＡ鎖の位置７のシステイン及びＢ鎖の位置７のシステイン間、３つ目はＡ鎖の位置２０のシステイン及びＢ鎖の位置１９のシステイン間である。
【００２７】
ホルモンはその構造に８６アミノ酸を含むプロインスリンが続く２４アミノ酸からなるプレペプチドを含む単鎖前駆体プロインスリン（プレプロインスリン）：プレペプチド−Ｂ−Ａｒｇ Ａｒｇ−Ｃ−Ｌｙs Ａｒｇ−Ａとして合成され、ここでＣは３１アミノ酸からなる連結ペプチドである。Ａｒｇ−Ａｒｇ及びＬｙｓ−ＡｒｇはＡ鎖とＢ鎖からの連結ペプチドの分割の切断部位である。
【００２８】
ここで使用される「インスリンアナログ」により、変異によって天然インスリンの一次構造、例えばヒトインスリンの一次構造に由来したポリペプチドを意味する。一以上の変異は、天然インスリンに起きる少なくとも一アミノ酸残基の欠失及び／又は置換により、及び／又は少なくとも一アミノ酸の付加により作られる。付加及び／又は置換されたアミノ酸残基はコード化可能なアミノ酸残基又は他の天然アミノ酸残基であり得る。
【００２９】
一実施態様では、インスリンアナログは親インスリンに対して８未満の修飾（置換、欠失、付加及びその何れかの組合わせ）、あるいは親インスリンに対して７未満の修飾、あるいは親インスリンに対して６未満の修飾、あるいは親インスリンに対して５未満の修飾、あるいは親インスリンに対して４未満の修飾、あるいは親インスリンに対して３未満の修飾、あるいは親インスリンに対して２未満の修飾を含む。
【００３０】
インスリン分子の変異は、鎖（Ａ又はＢ）、位置、及び天然アミノ酸を置換するアミノ酸の３文字コードを記載して表示される。「ｄｅｓＢ３０」又は「Ｂ（１−２９）」により、Ｂ３０アミノ酸残基を欠いた天然インスリンＢ鎖又はそのアナログを意味し、Ｂ２８Ａｓｐインスリンにより、Ｂ鎖の位置２８のアミノ酸残基がＡｓｐと置換されたヒトインスリンを意味する。
【００３１】
インスリンアナログの例として、Ｂ鎖の位置２８のＰｒｏがＡｓｐ、Ｌｙｓ、Ｌｅｕ、Ｖａｌ、又はＡｌａに変異し、及び／又は位置Ｂ２９のＬｙｓがＰｒｏ、Ｇｌｕ又はＡｓｐに変異した例がある。更に、位置Ｂ３のＡｓｎはＴｈｒ、Ｌｙｓ、Ｇｌｎ、Ｇｌｕ又はＡｓｐに変異し得る。位置Ａ２１のアミノ酸残基はＧｌｙに変異し得る。位置Ｂ１のアミノ酸はＧｌｕに変異し得る。位置Ｂ１６のアミノ酸はＧｌｕ又はＨｉｓに変異し得る。インスリンアナログの更なる例は、例えばヒトインスリンＢ３０アミノ酸が欠失したアナログ（ｄｅｓ（Ｂ３０）ヒトインスリン）、ヒトインスリンのＢ１アミノ酸が欠失したインスリンアナログ（ｄｅｓ（Ｂ１）ヒトインスリン）、ｄｅｓ（Ｂ２８−Ｂ３０）ヒトインスリン及びｄｅｓ（Ｂ２７）ヒトインスリンなどの欠失アナログである。Ａ鎖及び／又はＢ鎖がＮ末端伸長を持つインスリンアナログ、及びＡ鎖及び／又はＢ鎖が、Ｂ鎖のＣ末端に付加した２つのアルギニン残基等のＣ末端伸長を持つインスリンアナログもまたインスリンアナログの例である。更なる例は言及された変異の組合わせを含むインスリンアナログである。位置Ａ１４のアミノ酸がＡｓｎ、Ｇｌｎ、Ｇｌｕ、Ａｒｇ、Ａｓｐ、Ｇｌｙ又はＨｉｓであり、位置Ｂ２５のアミノ酸がＨｉｓであり、場合によっては更に一以上の追加の変異を含むインスリンアナログはインスリンアナログの更なる例である。位置Ａ２１のアミノ酸がＧｌｙであり及びそのインスリンアナログはＣ末端に２つのアルギニン残基を更に伸長したヒトインスリンのインスリンアナログもまたインスリンアナログの例である。
【００３２】
インスリンアナログの更なる例は、限定されないが、ＤｅｓＢ３０ヒトインスリン；ＡｓｐＢ２８ヒトインスリン；ＡｓｐＢ２８，ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン；ＬｙｓＢ３，ＧｌｕＢ２９ヒトインスリン；ＬｙｓＢ２８,ＰｒｏＢ２９ヒトインスリン；ＧｌｙＡ２１，ＡｒｇＢ３１,ＡｒｇＢ３２ヒトインスリン；ＧｌｕＡ１４，ＨｉｓＢ２５ヒトインスリン；ＨｉｓＡ１４，ＨｉｓＢ２５ヒトインスリン；ＧｌｕＡ１４，ＨｉｓＢ２５，ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン；ＨｉｓＡ１４，ＨｉｓＢ２５，ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン；ＧｌｕＡ１４，ＨｉｓＢ２５，ｄｅｓＢ２７，ｄｅｓＢ２８，ｄｅｓＢ２９，ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン；ＧｌｕＡ１４，ＨｉｓＢ２５，ＧｌｕＢ２７，ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン；ＧｌｕＡ１４，ＨｉｓＢ１６，ＨｉｓＢ２５，ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン；ＨｉｓＡ１４，ＨｉｓＢ１６，ＨｉｓＢ２５，ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン；ＨｉｓＡ８，ＧｌｕＡ１４，ＨｉｓＢ２５，ＧｌｕＢ２７，ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン；ＨｉｓＡ８，ＧｌｕＡ１４，ＧｌｕＢ１，ＧｌｕＢ１６，ＨｉｓＢ２５，ＧｌｕＢ２７，ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン；及びＨｉｓＡ８，ＧｌｕＡ１４，ＧｌｕＢ１６，ＨｉｓＢ２５，ｄｅｓＢ３０ヒトインスリンを含む。
【００３３】
「ニコチン化合物」なる用語はニコチンアミド、ニコチン酸、ナイアシン、ナイアシンアミド及びビタミンＢ３及び／又はその塩及び／又はその何れかの組合わせを含む。
【００３４】
本発明によれば、ニコチン化合物の濃度及び／又はその塩は約１ｍＭから約３００ｍＭ又は約５ｍＭから約２００ｍＭの範囲である。
【００３５】
「アルギニン」又は「Ａｒｇ」なる用語はアミノ酸のアルギニン及び／又はその塩を含む。
【００３６】
一実施態様では、インスリン製剤は１から１００ｍＭのアルギニンを含む。
【００３７】
一実施態様では、インスリン製剤は１から２０ｍＭのアルギニンを含む。
【００３８】
一実施態様では、インスリン製剤は２０から９０ｍＭのアルギニンを含む。
【００３９】
一実施態様では、インスリン製剤は３０から８５ｍＭのアルギニンを含む。
【００４０】
「グルタミン酸」又は「Ｇｌｕ」なる用語はアミノ酸のグルタミン酸及び／又はその塩を含む。
【００４１】
一実施態様では、インスリン製剤は１から１００ｍＭのグルタミン酸を含む。
【００４２】
一実施態様では、インスリン製剤は２０から９０ｍＭのグルタミン酸を含む。
【００４３】
一実施態様では、インスリン製剤は３０から８５ｍＭのグルタミン酸を含む。
【００４４】
ここで使用される「薬学的製剤」又は「インスリン製剤」なる用語は、インスリン化合物、すなわちヒトインスリン、そのアナログ及び又はその組合わせ及びニコチン化合物及びアミノ酸を、場合によっては、保存料、キレート剤、張力修正剤、増量剤、安定剤、酸化防止剤、ポリマーおよび界面活性剤等の他の賦形剤、金属イオン、油性賦形剤及びタンパク質（例えば、ヒト血清アルブミン、ゼラチン又はタンパク質）と共に含む製品を意味し、上記インスリン製剤はヒトに上記インスリン製剤を投与することにより、疾病又は疾患を治療、予防又は重症度を低減するために有効である。従って、インスリン製剤は当該技術分野では薬学的製剤又は薬学的組成物としても知られている。
【００４５】
バッファーは、限定されないが、酢酸ナトリウム、炭酸ナトリウム、クエン酸塩、リン酸二水素ナトリウム、リン酸水素二ナトリウム、リン酸ナトリウム、及びトリス（ヒドロキシメチル）−アミノメタン、ビシン、トリシン、リンゴ酸、コハク酸、マレイン酸、フマル酸、酒石酸、アスパラギン酸又はその組合わせからなる群から選択されうる。これらの特定のバッファーの各々は本発明のもう一つの実施態様を構成する。
【００４６】
本発明のインスリン製剤は更に、インスリン製剤に一般的な他の成分、例えばクエン酸塩等の亜鉛錯化剤及びリン酸バッファーを含み得る。
【００４７】
グリセロール及び／又はマンニトール及び／又は塩化ナトリウムは０から２５０ｍＭ、０から２００ｍＭ又は０から１００ｍＭの濃度に対応する量にて存在しうる。
【００４８】
安定剤、界面活性剤及び保存料もまた本発明のインスリン製剤に存在しうる。
【００４９】
本発明のインスリン製剤は更に薬学的に許容される保存料を含み得る。保存料は保存効果を得るに十分な量存在し得る。インスリン製剤中の保存料の量は、例えば当該分野の文献及び/又は、例えば商品中の保存料の既知の量から決定され得る。これらの特定の保存料のおのおのは本発明のもう一つの実施態様を構成する。薬学的製剤中の保存料の使用は、例えばレミントンによる「Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ」第１９版、１９９５年に記載されている。
【００５０】
本発明のインスリン製剤に存在する保存料はこれまでの伝統的なインスリン製剤にあるように、例えばフェノール、ｍ-クレゾール及びメチルパラベンであり得る。
【００５１】
本発明のインスリン製剤は更にキレート剤を含み得る。薬学的製剤中のキレート剤の使用は当業者には良く知られている。便宜上、レミントンによる「Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ」第１９版、１９９５年が参照される。
【００５２】
本発明のインスリン製剤は更に安定剤を含み得る。ここで使用される「安定剤」なる用語はペプチドを安定化し、すなわち、そうした製剤の有効期間及び／又は使用時間を増大させるために、薬学的製剤を含むポリペプチドに添加される化学薬品を言う。便宜上、レミントンによる「Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ」第１９版、１９９５年が参照される。
【００５３】
本発明のインスリン製剤は更に界面活性剤を含み得る。ここで使用される「界面活性剤」なる用語は、水溶性（親水性）部分、頭部、及び脂溶性（親油性）部分を含む分子又はイオンを言う。界面活性剤は界面に好んで蓄積し、親水性部分は水（親水相）に向けて、及び親油性部分は油−又は疎水相（例えばガラス、空気、油等）に向けて配向する。界面活性剤がミセルを形成し始める濃度は臨界ミセル濃度又はＣＭＣとして知られている。更に、界面活性剤は液体の表面張力を下げる。界面活性剤は両親媒性化合物として知られている。「デタージェント（界面活性剤）」なる用語は一般的に界面活性剤に対して使用される同義語である。薬学的製剤中の界面活性剤の使用は当業者には良く知られている。便宜上、レミントンによる「Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ」第１９版、１９９５年が参照される。
【００５４】
更なる態様では、本発明は本発明のインスリン化合物の水溶液及びバッファーを含むインスリン製剤に係り、その中で上記インスリンン化合物は０．１ｍＭ以上の濃度で存在し、及びその中で上記製剤は室温（〜２５℃）にて約３．０から約８．５のｐＨを有する。
【００５５】
本発明はまた本発明のインスリン製剤の生産方法に関する。
【００５６】
一実施態様では、本発明のインスリン製剤の製造方法は、
ａ）インスリン化合物又はインスリン化合物の混合物を水又はバッファーに溶解した溶液を調製し；
ｂ）二価の金属イオンを水又はバッファーに溶解した溶液を調製し；
ｃ）保存料を水又はバッファーに溶解した溶液を調製し；
ｄ）等張化剤を水又はバッファーに溶解した溶液を調製し；
ｅ）界面活性剤及び／又は安定剤を水又はバッファーに溶解した溶液を調製し；
ｆ）溶液ａ）と溶液ｂ）、ｃ）、ｄ）、及びｅ）の一以上を混合し；
最後にｆ）中の混合物のｐＨを望まれるｐＨに調整した後濾過滅菌を行う。
【００５７】
本発明のインスリン製剤は非経口投与により糖尿病の治療に使用できる。患者に投与されるべき本発明のインスリン製剤の用量は医師により設定されることが推奨される。
【００５８】
非経口投与は、注射器や任意でペン型注射器を用いて、皮下、筋肉内、腹腔内又は静脈内注射によって行われ得る。あるいは、非経口投与は輸液ポンプを用いて行うことができる。更なる選択肢として、本発明のインスリン化合物を含むインスリン製剤は、例えば無針注射により又はパッチから、任意でイオン注入パッチからの経皮投与、又は例えば口腔などの経粘膜投与にもまた適用できる。
【００５９】
本発明によるインスリン製剤は複数の部位、例えば、例えば皮膚及び粘膜部位等の局所部位、例えば動脈内、静脈内、心臓内投与等の吸収を迂回する部位、及び、例えば皮膚内、皮膚下、筋肉内又は腹部内への投与等の吸収を含む部位において、そうした治療を必要としている患者に投与され得る。
【００６０】
本発明の一実施態様では、インスリン製剤は水性製剤であり、すなわち水を含む製剤である。そうした製剤は典型的には溶液又は懸濁液である。本発明の更なる態様にて、インスリン製剤は水溶液である。
【００６１】
「水性製剤」なる用語は、少なくとも５０％ｗ／ｗの水を含む製剤として定義される。同様に「水溶液」なる用語は、少なくとも５０％ｗ／ｗの水を含む溶液として定義され、及び「水性懸濁液」なる用語は、少なくとも５０％ｗ／ｗの水を含む懸濁剤として定義される。
【００６２】
水性懸濁液は水性懸濁液の製造に適した賦形剤との混合剤中の活性化合物を含みうる。
【００６３】
一実施態様では、本発明のインスリン製剤は注射によるインスリン療法に使用されるペン型機器での適用に良く適している。
【００６４】
一実施態様では、本発明のインスリン製剤はインスリン投与のためのポンプにおいて使用できる。
【００６５】
ここで用いられるインスリン製剤の「物理的安定性」という用語は、熱機械的ストレスへのタンパク質の暴露、及び／又は、例えば疎水性表面及び界面のような、不安定化している界面及び表面、との相互作用の結果としての、生物学的に不活性な及び／又は不溶性のタンパク質の凝集体を形成するタンパク質の傾向について言及するものである。水性のタンパク質製剤の物理的安定性は、適切な容器（例えばカートリッジもしくはバイアル）中に満たした製剤を機械的／物理的ストレス（例えば攪拌）に様々な時間の間、異なった温度で暴露した後に、視覚的な検査及び／又は濁度の測定をすることにより評価される。製剤の視覚的な検査は、暗い背景中において鋭く集光された光下で実施される。製剤の濁度は、濁りの度合いを、例えば０から３の尺度（濁りを示さない製剤が視覚スコア０に相当し、昼光で可視できる濁りを示す製剤は視覚スコア３に相当する）でランク付けする視覚スコアにより特徴付けされる。製剤は、昼光下で可視できる濁りを示す時に、タンパク質凝集に関して物理的に不安定であると分類される。あるいは、製剤の濁度は、当業者によく知られている簡単な濁度測定により評価することができる。タンパク質水性製剤の物理的安定性は、タンパク質の立体構造状態の分光学的な薬剤もしくはプローブを使用することによっても、評価することができる。プローブは好ましくはタンパク質の非天然配座異性体に優先的に結合する小分子である。タンパク質構造の小分子性分光学的プローブの一例はチオフラビンＴである。チオフラビンＴはアミロイドフィブリルの検出に広く用いられている蛍光染料である。フィブリル及びおそらくは他のタンパク質の立体構造の存在下においても、チオフラビンＴは、フォブリルタンパク質形態に結合する時、約４５０ｎｍで新たな励起極大と、約４８２ｎｍで増強された発光とを生じる。未結合のチオフラビンＴは本質的にはその波長で非蛍光である。
【００６６】
ここで用いられるタンパク質製剤の「化学的安定性」という用語は、天然タンパク質構造と比較して、潜在的に低い生物学的効力及び／又は潜在的に高い免疫原性を有する化学的分解産物の形成に至る共有結合性のタンパク質構造の変化を意味する。天然タンパク質の種類と性質及びタンパク質がさらされる環境に応じて、様々な化学的分解産物が形成されうる。タンパク質製剤の保管及び使用中に、化学的分解産物の量の増加がしばしば観察される。大部分のタンパク質は、グルタミニル又はアスパラギニル残基の側鎖アミド基が加水分解されて遊離のカルボン酸又はアスパラギニル残基を形成し、ＩｓｏＡｓｐ誘導体を形成するプロセスである脱アミド化を受ける傾向がある。他の分解経路は、二以上のタンパク質分子が、アミド基転移及び／又はジスルフィド相互作用を通して互いに共有結合し、共有結合した二量体、オリゴマー及び多量体分解産物の形成に至る高分子量産物の形成を含む（Ｓｔａｂｉｌｉｔｙ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ， Ａｈｅｒｎ.Ｔ.Ｊ. ＆ Ｍａｎｎｉｎｇ Ｍ.Ｃ., Ｐｌｅｎｕｍ Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ,１９９２）。（例えばメチオニン残基の）酸化は、化学的分解の他の変形例として述べることができる。タンパク質製剤の化学的安定性は、異なった環境条件への暴露（分解産物の形成はしばしば例えば温度上昇により加速され得る）後に、様々な時点において化学的分解産物の量を測定することにより評価することができる。それぞれ個別の分解産物の量は、しばしば、様々なクロマトグラフィー法（例えば、ＳＥＣ−ＨＰＬＣ及び／又はＲＰ−ＨＰＬＣ)を用いて、分子サイズ及び／又は電荷に応じて分解産物を分離することにより決定される。ＨＭＷＰ産物は潜在的に免疫原性であり生物学的に活性では無いため、低レベルのＨＭＷＰが好都合である。
【００６７】
「安定化製剤」なる用語は、増加した物理的安定性、増加した化学的安定性、又は増加した物理的及び化学的安定性を有する製剤を言う。一般に、製剤は有効期限に達するまで（推奨された使用及び保管条件に応じて）使用及び保管中は安定でなければならない。
【００６８】
「糖尿病」又は「真性糖尿病」なる用語は、１型糖尿病、２型糖尿病、妊娠糖尿病（妊娠中）及び高血糖症を生じさせる他の状態を含む。該用語は、膵臓が不十分な量のインスリンを生産するか、又は体の細胞が適切にはインスリンに応答せず、細胞がグルコースを吸収するのを妨げる代謝疾患について使用される。その結果、グルコースが血液中に蓄積する。
【００６９】
インスリン依存性糖尿病（ＩＤＤＭ）及び若年発症型糖尿病とも呼ばれる１型糖尿病は、Ｂ細胞破壊によって引き起こされ、通常は絶対的インスリン欠乏に至る。
【００７０】
インスリン非依存性糖尿病（ＮＩＤＤＭ）及び成人発症型糖尿病としても知られている２型糖尿病は、主たるインスリン耐性、よって相対的なインスリン欠乏及び／又はインスリン耐性を伴う主たるインスリン分泌欠陥に関連している。
【００７１】
ここで使用される「薬学的に許容可能な」なる用語は、正常な薬学的適用に適した、すなわち患者に何らの重篤な有害事象を引き起こさないことを意味する。
【００７２】
ここで使用される「疾病の治療」なる用語は、疾病、病状又は疾患を発症した患者の管理及び世話(ケア)を意味し、疾病の治療、予防又は緩和を含む。治療の目的は、疾病、症状又は疾患と闘うことである。治療には、疾病、症状又は疾患を排除し又は制御するため、並びに疾病、症状又は疾患に関連した徴候又は合併症を緩和するための活性な化合物の投与、及び疾病、症状又は疾患の予防を含む。
【００７３】
その他の実施態様にて、本発明によるインスリンアナログは、２型糖尿病の疾患の進行を遅延又は予防するための医薬として使用される。
【００７４】
本発明の一実施態様では、ストレス誘導性高血糖、２型糖尿病、耐糖能異常、１型糖尿病、及び、治療に同化作用が必要なやけど、手術創及び他の疾患又は創傷、心筋梗塞、脳卒中、冠状動脈性心臓病及び他の心血管疾患の予防又は治療のための医薬として使用される本発明によるインスリン製剤が提供される。
【００７５】
本発明の更なる実施態様では、ストレス誘導性高血糖、２型糖尿病、耐糖能異常、１型糖尿病を含む高血糖、及び治療に同化作用が必要なやけど、手術創、及び他の疾患又は創傷、心筋梗塞、冠状動脈性心臓病やその他の心血管疾患、脳卒中の予防又は治療のための方法であって、本発明によるインスリン製剤をそのような治療を必要とする患者への投与を含む方法が与えられる。
【００７６】
本発明によるインスリン製剤による治療は、例えば抗糖尿病薬、抗肥満薬、食欲の調節薬、降圧薬、糖尿病に由来又は関連して起こる合併症の治療及び／又は予防のための薬剤及び肥満に由来又は関連して起こる合併症及び疾患の治療及び／又は予防のための薬剤から選択される、第二の又はより薬理学的に活性な物質ともまた組合わされうる。
【００７７】
本発明によるインスリン製剤による治療は、胃バンディング術又は胃バイパス手術等の血糖値及び/又は脂質ホメオスタシスに影響を与える手術である肥満手術ともまた組合わされうる。
【００７８】
ポリペプチド、例えばインスリンの生成は当該技術分野で良く知られている。本発明によるインスリンアナログは例えば古典的なペプチド合成、例えばｔ−Ｂｏｃ又はＦｍｏｃ化学又はその他の十分に確立された技術を使用した固相ペプチド合成により生成されうる。Ｇｒｅｅｎｅ及びＷｕｔｓ，「Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ Ｇｒｏｕｐｓ ｉｎ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ」，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ,１９９９を参照のこと。インスリンアナログは、アナログをエンコードしインスリンアナログの発現を可能にした条件下で適切な栄養培地にてインスリンアナログを発現する能力のあるＤＮＡ配列を含む宿主細胞の培養を含む方法によっても生成され得る。非天然アミノ酸残基を含むインスリンアナログに対して、組換え細胞は例えばｔＲＮＡ変異体の使用により、非天然アミノ酸がアナログに導入されるように改変されるべきである。従って、本発明によるインスリンアナログは簡単に既知のインスリンアナログの調製に類似して調製される。
【００７９】
ヒトインスリン及びヒトインスリンアナログの生産のために幾つかの方法が使用されうる。例えば、微生物中でのインスリン生産に使用される３つの主要な方法が国際公開第２００８０３４８８１号に開示されている。これらのうち２つは、細胞質中での大きな融合タンパク質の発現（Ｆｒａｎｋ等（１９８１）,Ｐｅｐｔｉｄｅｓ：Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ ｏｆ ｔｈｅ ７ｔｈ Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｐｅｐｔｉｄｅ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ Ｓｙｍｐｏｓｉｕｍ（Ｒｉｃｈ＆Ｇｒｏｓｓ編集），Ｐｉｅｒｃｅ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃｏ．，Ｒｏｃｋｆｏｒｄ，ＩＩＩ．頁７２９−７３９）、又は細胞膜周辺腔への分泌を可能にするシグナルペプチドの使用(Ｃｈａｎ等（１９８１）ＰＮＡＳ ７８：５４０１−５４０４)の何れかとともに大腸菌を使う。第三の方法はインスリン前駆体を培地へ分泌する出芽酵母を使用する（Ｔｈｉｍ等、（１９８６）ＰＮＡＳ ８３：６７６６−６７７０）。従来技術は大腸菌又は出芽酵母で発現される多数のインスリン前駆体を開示しており、米国特許第５，９６２，２６７号、国際公開９５／１６７０８、欧州特許出願公開第００５５９４５号、欧州特許出願公開第０１６３５２９号、欧州特許出願公開第０３４７８４５号及び欧州特許出願公開第０７４１１８８号を参照のこと。
【００８０】
インスリンアナログは、例えば米国特許第６５００６４５号に開示され良く知られた技術により、当該のインスリンアナログをエンコードしているＤＮＡ配列を適切な宿主細胞中で発現することにより産生される。インスリンアナログは直接的に又はＢ鎖のＮ末端伸長又はＢ鎖のＣ末端伸長を有する前駆体分子として発現される。Ｎ末端伸長は直接発現された産物の収率を増やす機能を持ち得、１５アミノ酸長以下であり得る。Ｎ末端伸長は培養液から単離後にインビトロで切断されるべきであり、従ってＢ１の隣に切断部位を持つであろう。本発明に適したＮ末端伸長のタイプは、米国特許第５，３９５，９２２号又は欧州特許出願公開第７６５３９５号に開示されている。Ｃ末端伸長は宿主細胞のエキソプロテアーゼによる細胞内タンパク質プロセシングに対して、成熟インスリン又はインスリンアナログ分子を保護する機能を有し得る。Ｃ末端伸長は分泌された活性カルボキシペプチダーゼにより培養液中の細胞外にて、又は培養液から単離後にインビトロで切断されるべきである。成熟インスリン及びカルボキシペプチダーゼにより除かれるＢ鎖のＣ末端伸長を持つインスリンアナログを生産する方法は国際公開第０８０３７７３５号に開示されている。本方法による標的インスリン産物は、２本鎖ヒトインスリン又はＢ鎖の短いＣ末端伸長を有し得る又は有し得ない２本鎖ヒトインスリンアナログであり得る。もし標的インスリン産物がＢ鎖のＣ末端伸長を持たなければ、更なる精製工程の前に上記Ｃ末端伸長は後にＢ鎖から切断される能力があるはずである。
【００８１】
本発明は以下の限定されない実施態様のリストをもまた熟考し、それらは本明細書の他の箇所で更に記述される。
【００８２】
１．・インスリン化合物、
・ニコチン化合物、及び
・アルギニン
を含有するインスリン製剤。
２．インスリン化合物がインスリン又はインスリンアナログである、実施態様１によるインスリン製剤。
３．インスリン化合物がＢ２８Ａｓｐヒトインスリンである、実施態様１から２の何れかに記載のインスリン製剤。
４．インスリン化合物がＢ２８ＬｙｓＢ２９Ｐｒｏヒトインスリンである、実施態様１から３の何れかに記載のインスリン製剤。
５．インスリン化合物がＢ３ＬｙｓＢ２９Ｇｌｕヒトインスリンである、実施態様１から４の何れかに記載のインスリン製剤。
６．インスリン化合物が、０．１−１０．０ｍＭ；０．１−３．０ｍＭ；０．１−２．５ｍＭ；０．１−２．０ｍＭ；０．１−１．５ｍＭ；０．２−２．５ｍＭ；０．２−２．０ｍＭ；０．２−１．５ｍＭ；０．３−３．０ｍＭ；０．３−２．５ｍＭ；０．３−２．０ｍＭ；０．３−１．５ｍＭ；０．５−１．３ｍＭ及び０．６−１．２ｍＭから選択された範囲において存在する、実施態様１から５の何れかに記載のインスリン製剤。
７．インスリン化合物が約０．１ｍＭから約１０．０ｍＭの量で存在する、実施態様１から６の何れかに記載のインスリン製剤。
８．インスリン化合物が約０．１ｍＭから約３．０ｍＭの量で存在する、実施態様１から７の何れかに記載のインスリン製剤。
９．インスリン化合物が約０．１ｍＭから約２．５ｍＭの量で存在する、実施態様１から８の何れかに記載のインスリン製剤。
１０．インスリン化合物が約０．１ｍＭから約２．０ｍＭの量で存在する、実施態様１から９の何れかに記載のインスリン製剤。
１１．インスリン化合物が約０．１ｍＭから約１．５ｍＭの量で存在する、実施態様１から１０の何れかに記載のインスリン製剤。
１２．インスリン化合物が約０．２ｍＭから約２．５ｍＭの量で存在する、実施態様１から１１の何れかに記載のインスリン製剤。
１３．インスリン化合物が約０．２ｍＭから約２．０ｍＭの量で存在する、実施態様１から１２の何れかに記載のインスリン製剤。
１４．インスリン化合物が約０．２ｍＭから約１．５ｍＭの量で存在する、実施態様１から１３の何れかに記載のインスリン製剤。
１５．インスリン化合物が約０．３ｍＭから約３．０ｍＭの量で存在する、実施態様１から１４の何れかに記載のインスリン製剤。
１６．インスリン化合物が約０．３ｍＭから約２．５ｍＭの量で存在する、実施態様１から１５の何れかに記載のインスリン製剤。
１７．インスリン化合物が約０．３ｍＭから約２．０ｍＭの量で存在する、実施態様１から１６の何れかに記載のインスリン製剤。
１８．インスリン化合物が約０．３ｍＭから約１．５ｍＭの量で存在する、実施態様１から１７の何れかに記載のインスリン製剤。
１９．インスリン化合物が約０．５ｍＭから約１．３ｍＭの量で存在する、実施態様１から１８の何れかに記載のインスリン製剤。
２０．インスリン化合物が約０．３ｍＭから約１．２ｍＭの量で存在する、実施態様１から１９の何れかに記載のインスリン製剤。
２１．インスリン化合物が約０．６ｍＭから約１．２ｍＭの量で存在する、実施態様１から２０の何れかに記載のインスリン製剤。
２２．インスリン化合物が約０．６又は約１．２ｍＭの量で存在する、実施態様１から２１の何れかに記載のインスリン製剤。
２３．インスリン化合物が約０．３ｍＭの量で存在する、実施態様１から２２の何れかに記載のインスリン製剤。
２４．インスリン化合物が約０．６ｍＭの量で存在する、実施態様１から２３の何れかに記載のインスリン製剤。
２５．インスリン化合物が約１．２ｍＭの量で存在する、実施態様１から２４の何れかに記載のインスリン製剤。
２６．ニコチン化合物がニコチンアミド、ニコチン酸、ナイアシン、ナイアシンアミド及びビタミンＢ３及び／又はその塩及び／又はその何れかの組合わせからなる群から選択される、実施態様１から２５の何れかに記載のインスリン製剤。
２７．ニコチン化合物がニコチンアミド、ニコチン酸、及び／又はその塩及び／又はその何れかの組合わせから選択される、実施態様１から２６の何れかに記載のインスリン製剤。
２８．ニコチン化合物が１−３００ｍＭ；５−２００ｍＭ；４０−１２０ｍＭ，７０−１４０ｍＭ又は８０−１３０ｍＭから選択される範囲に存在する、実施態様１から２７の何れかに記載のインスリン製剤。
２９．ニコチン化合物を約１ｍＭから約３００ｍＭ含む、実施態様１から２８の何れかに記載のインスリン製剤。
３０．ニコチン化合物を約８ｍＭから約２６０ｍＭ含む、実施態様１から２９の何れかに記載のインスリン製剤。
３１．ニコチン化合物を約５ｍＭから約２００ｍＭ含む、実施態様１から３０の何れかに記載のインスリン製剤。
３２．ニコチン化合物を約１ｍＭから約１５０ｍＭ含む、実施態様１から３１の何れかに記載のインスリン製剤。
３３．ニコチン化合物を約５ｍＭから約２０ｍＭ含む、実施態様１から３２の何れかに記載のインスリン製剤。
３４．ニコチン化合物を約２０ｍＭから約１２０ｍＭ含む、実施態様１から３３の何れかに記載のインスリン製剤。
３５．ニコチン化合物を約４０ｍＭから約１２０ｍＭ含む、実施態様１から３４の何れかに記載のインスリン製剤。
３６．ニコチン化合物を約２０ｍＭから約４０ｍＭ含む、実施態様１から３５の何れかに記載のインスリン製剤。
３７．ニコチン化合物を約６０ｍＭから約８０ｍＭ含む、実施態様１から３６の何れかに記載のインスリン製剤。
３８．ニコチン化合物を約７０ｍＭから約１４０ｍＭ含む、実施態様１から３７の何れかに記載のインスリン製剤。
３９．ニコチン化合物を約８０ｍＭから約１３０ｍＭ含む、実施態様１から３８の何れかに記載のインスリン製剤。
４０．ニコチン化合物を約８ｍＭ、３０ｍＭ、１００ｍＭ又は１３０ｍＭ含む、実施態様１から３９の何れかに記載のインスリン製剤。
４１．ニコチン化合物を約８ｍＭ含む、実施態様１から４０の何れかに記載のインスリン製剤。
４２．ニコチン化合物を約３０ｍＭ、１００ｍＭ、１３０ｍＭ含む、実施態様１から４１の何れかに記載のインスリン製剤。
４３．ニコチン化合物を約３０ｍＭ含む、実施態様１から４２の何れかに記載のインスリン製剤。
４４．ニコチン化合物を約１００ｍＭ含む、実施態様１から４３の何れかに記載のインスリン製剤。
４５．ニコチン化合物を約１３０ｍＭ含む、実施態様１から４４の何れかに記載のインスリン製剤。
４６．ニコチン化合物を約１５０ｍＭ含む、実施態様１から４５の何れかに記載のインスリン製剤。
４７．アルギニン化合物を１−１００ｍＭ，５−１２０ｍＭ，８−８５ｍＭ，２０−９０ｍＭ，３０−９０ｍＭ，３０−８５ｍＭ，３０−６０ｍＭ又は１０−４０ｍＭの範囲にて含む、実施態様１から４６の何れかに記載のインスリン製剤
４８．アルギニン化合物を１−１２０ｍＭ，８−８５ｍＭ又は１−４０ｍＭの範囲にて含む、実施態様１から４７の何れかに記載のインスリン製剤。
４９．アルギニンを約１ｍＭから約１２０ｍＭ含む、実施態様１から４８の何れかに記載のインスリン製剤。
５０．アルギニンを約１ｍＭから約１００ｍＭ含む、実施態様１から４９の何れかに記載のインスリン製剤。
５１．アルギニンを約５ｍＭから約１２０ｍＭ含む、実施態様１から５０の何れかに記載のインスリン製剤。
５２．アルギニンを約２０ｍＭから約９０ｍＭ含む、実施態様１から５１の何れかに記載のインスリン製剤。
５３．アルギニンを約３０ｍＭから約８５ｍＭ含む、実施態様１から５２の何れかに記載のインスリン製剤。
５４．アルギニンを約８ｍＭから約８５ｍＭ含む、実施態様１から５３の何れかに記載のインスリン製剤。
５５．アルギニンを約３０ｍＭから約６０ｍＭ含む、実施態様１から５４の何れかに記載のインスリン製剤。
５６．アルギニンを約１０ｍＭから約４０ｍＭ含む、実施態様１から５５の何れかに記載のインスリン製剤。
５７．アルギニンを約１ｍＭから約４０ｍＭ含む、実施態様１から５６の何れかに記載のインスリン製剤。
５８．アルギニンが、１ｍＭ，２ｍＭ，３ｍＭ，４ｍＭ，５ｍＭ，６ｍＭ，７ｍＭ，８ｍＭ，９ｍＭ，１０ｍＭ，１５ｍＭ，２０ｍＭ，２５ｍＭ，３０ｍＭ，３５ｍＭ又は４０ｍＭ，４５ｍＭ，５０ｍＭ，５５ｍＭ又は６０ｍＭから選択される範囲で存在する、実施態様１から５７の何れかに記載のインスリン製剤。
５９．アルギニンを約１ｍＭ含む、実施態様１から５８の何れかに記載のインスリン製剤。
６０．アルギニンを約２ｍＭ含む、実施態様１から５９の何れかに記載のインスリン製剤。
６１．アルギニンを約３ｍＭ含む、実施態様１から６０の何れかに記載のインスリン製剤。
６２．アルギニンを約４ｍＭ含む、実施態様１から６１の何れかに記載のインスリン製剤。
６３．アルギニンを約５ｍＭ含む、実施態様１から６２の何れかに記載のインスリン製剤。
６４．アルギニンを約６ｍＭ含む、実施態様１から６３の何れかに記載のインスリン製剤。
６５．アルギニンを約７ｍＭ含む、実施態様１から６４の何れかに記載のインスリン製剤。
６６．アルギニンを約８ｍＭ含む、実施態様１から６５の何れかに記載のインスリン製剤。
６７．アルギニンを約９ｍＭ含む、実施態様１から６６の何れかに記載のインスリン製剤。
６８．アルギニンを約１０ｍＭ含む、実施態様１から６７の何れかに記載のインスリン製剤。
６９．アルギニンを約１５ｍＭ含む、実施態様１から６８の何れかに記載のインスリン製剤。
７０．アルギニンを約２０ｍＭ含む、実施態様１から６９の何れかに記載のインスリン製剤。
７１．アルギニンを約２５ｍＭ含む、実施態様１から７０の何れかに記載のインスリン製剤。
７２．アルギニンを約３０ｍＭ含む、実施態様１から７１の何れかに記載のインスリン製剤。
７３．アルギニンを約３５ｍＭ含む、実施態様１から７２の何れかに記載のインスリン製剤。
７４．アルギニンを約４０ｍＭ含む、実施態様１から７３の何れかに記載のインスリン製剤。
７５．アルギニンを約４５ｍＭ含む、実施態様１から７４の何れかに記載のインスリン製剤。
７６．アルギニンを約５０ｍＭ含む、実施態様１から７５の何れかに記載のインスリン製剤。
７７．アルギニンを約５５ｍＭ含む、実施態様１から７６の何れかに記載のインスリン製剤。
７８．アルギニンを約６０ｍＭ含む、実施態様１から７７の何れかに記載のインスリン製剤。
７９．グルタミン酸を更に含む、実施態様１から７８の何れかに記載のインスリン製剤。
８０．グルタミン酸を１−１００ｍＭ，２０−９０ｍＭ，３０−９０ｍＭ，３０−８５ｍＭ又は３０−５０ｍＭから選択される範囲にて存在する、実施態様７９に記載のインスリン製剤。
８１．グルタミン酸を約１ｍＭから約１００ｍＭ含む、実施態様７９に記載のインスリン製剤。
８２．グルタミン酸を約２０ｍＭから約９０ｍＭ含む、実施態様７９に記載のインスリン製剤。
８３．グルタミン酸を約３０ｍＭから約８５ｍＭ含む、実施態様７９に記載のインスリン製剤。
８４．グルタミン酸を約３０ｍＭから約５０ｍＭ含む、実施態様７９に記載のインスリン製剤。
８５．グルタミン酸を約３０ｍＭ又は５０ｍＭ含む、実施態様７９に記載のインスリン製剤。
８６．グルタミン酸を約３０ｍＭ含む、実施態様７９に記載のインスリン製剤。
８７．グルタミン酸を約５０ｍＭ含む、実施態様７９に記載のインスリン製剤。
８８．更に金属イオン、保存料、等張化剤及び安定剤、界面活性剤及びバッファーを含む、実施態様１から８７の何れかに記載のインスリン製剤。
８９．バッファーがトリスである、実施態様８８に記載のインスリン製剤。
９０．約２ｍＭから約５０ｍＭのトリスを含む、実施態様８９に記載のインスリン製剤。
９１．約１０ｍＭから約４０ｍＭのトリスを含む、実施態様８９に記載のインスリン製剤。
９２．約２０ｍＭから約３０ｍＭのトリスを含む、実施態様８９に記載のインスリン製剤。
９３．約１０ｍＭ、２０ｍＭ、３０ｍＭ又は４０ｍＭのトリスを含む、実施態様８９に記載のインスリン製剤。
９４．約１０ｍＭのトリスを含む、実施態様８９に記載のインスリン製剤。
９５．約２０ｍＭのトリスを含む、実施態様８９に記載のインスリン製剤。
９６．約３０ｍＭのトリスを含む、実施態様８９に記載のインスリン製剤。
９７．約４０ｍＭのトリスを含む、実施態様８９に記載のインスリン製剤。
９８．金属イオンが亜鉛である、実施態様８９に記載のインスリン製剤。
９９．インスリン化合物のヘキサマーあたり約６つ未満の亜鉛イオンが存在する、実施態様９８に記載のインスリン製剤。
１００．インスリン化合物のヘキサマーあたり約４つ未満の亜鉛イオンが存在する、実施態様９８に記載のインスリン製剤。
１０１．インスリン化合物のヘキサマーあたり約３つ未満の亜鉛イオンが存在する、実施態様９８に記載のインスリン製剤。
１０２．「亜鉛：インスリン」のモル比が約２：６から約５：６である、実施態様９８に記載のインスリン製剤。
１０３．「亜鉛：インスリン」のモル比が約２．５：６から約４．５：６である、実施態様９８に記載のインスリン製剤。
１０４．「亜鉛：インスリン」のモル比が約３：６から約４：６である、実施態様９８に記載のインスリン製剤。
１０５．「亜鉛：インスリン」のモル比が約２：６である、実施態様９８に記載のインスリン製剤。
１０６．「亜鉛：インスリン」のモル比が約２．５：６である、実施態様９８に記載のインスリン製剤。
１０７．「亜鉛：インスリン」のモル比が約３：６である、実施態様９８に記載のインスリン製剤。
１０８．「亜鉛：インスリン」のモル比が約３．５：６である、実施態様９８に記載のインスリン製剤。
１０９．「亜鉛：インスリン」のモル比が約４：６である、実施態様９８に記載のインスリン製剤。
１１０．「亜鉛：インスリン」のモル比が約４．５：６である、実施態様９８に記載のインスリン製剤。
１１１．「亜鉛：インスリン」のモル比が約５：６である、実施態様９８に記載のインスリン製剤。
１１２．安定剤が非イオン性界面活性剤である、実施態様８８に記載のインスリン製剤。
１１３．界面活性剤がポリソルベート２０（Ｔｗｅｅｎ２０）又はポリソルベート８０（Ｔｗｅｅｎ８０）である、実施態様１１２に記載のインスリン製剤。
１１４．界面活性剤がポリソルベート２０（Ｔｗｅｅｎ２０）である、実施態様１１２に記載のインスリン製剤。
１１５．界面活性剤がポリソルベート８０（Ｔｗｅｅｎ８０）である、実施態様１１２に記載のインスリン製剤。
１１６．ポリソルベートを約５から１００ｐｐｍ、約１０から５０ｐｐｍ又は約１０から２０ｐｐｍ含む、実施態様１１２−１１５の何れかに記載のインスリン製剤。
１１７．更にフェノール化合物を含む、実施態様８８に記載のインスリン製剤。
１１８．上記フェノール化合物が約０から約６ｍｇ／ｍｌ又は約０から約４ｍｇ／ｍｌにおける量存在する、実施態様１１７に記載のインスリン製剤。
１１９．更にｍ−クレゾールを含む、実施態様８８に記載のインスリン製剤。
１２０．ｍ−クレゾールが約０．５から約４．０ｍｇ／ｍｌ又は約０．６から約４．０ｍｇ／ｍｌにおける量存在する、実施態様１１９に記載のインスリン製剤。
１２１．ｐＨが中性から弱塩基性である、実施態様１から１２０の何れかに記載のインスリン製剤。
１２２．ｐＨが約７．０から約８．０である、実施態様１から１２１の何れかに記載のインスリン製剤。
１２３．ｐＨが約７．０である、実施態様１から１２２の何れかに記載のインスリン製剤。
１２４．ｐＨが約７．１である、実施態様１から１２３の何れかに記載のインスリン製剤。
１２５．ｐＨが約７．２である、実施態様１から１２４の何れかに記載のインスリン製剤。
１２６．ｐＨが約７．３である、実施態様１から１２５の何れかに記載のインスリン製剤。
１２７．ｐＨが約７．４である、実施態様１から１２６の何れかに記載のインスリン製剤。
１２８．ｐＨが約７．５である、実施態様１から１２７の何れかに記載のインスリン製剤。
１２９．ｐＨが約７．６である、実施態様１から１２８の何れかに記載のインスリン製剤。
１３０．ｐＨが約７．７である、実施態様１から１２９の何れかに記載のインスリン製剤。
１３１．ｐＨが約７．８である、実施態様１から１３０の何れかに記載のインスリン製剤。
１３２．ｐＨが約７．９である、実施態様１から１３１の何れかに記載のインスリン製剤。
１３３．ｐＨが約８．０である、実施態様１から１３２の何れかに記載のインスリン製剤。
１３４．実施態様１から１３３の何れかに記載のインスリン製剤を治療に有効な用量、その治療を必要とする患者への投与により、哺乳動物の血糖値を下げる方法。
１３５．実施態様１から１３４の何れかに記載のインスリン製剤を被験者へ投与することを含む、被験者の真性糖尿病を治療する方法。
１３６．非経口投与のための、実施態様１から１３５の何れかに記載の方法。
１３７．ストレス誘導による高血糖を含む高血糖症、２型糖尿病、耐糖能異常、１型糖尿病、及び治療に同化作用が必要なやけどや手術創及び他の疾患又は創傷、心筋梗塞、脳卒中、冠状動脈性心疾患や他の心血管疾患の治療又は予防、及び危篤状態の糖尿病患者及び非糖尿病患者の治療における使用のための、実施態様１から１３６の何れかに記載のインスリン製剤。
【００８３】
本発明は以下の実施例で更に説明されるが、限定するものとして解釈されるべきではない。
【００８４】
ここに引用される出版物、特許出願、及び特許を含む全ての参考文献は、あたかも各参考文献が個々に特に出典明示により援用されると示され、（法律で許容される最大範囲で）ここにその全体が説明されたかの如く、その全体において同程度に出典明示により援用される。
【００８５】
全ての表題及び副題はここでは便宜のためだけに使用され、決して本発明を限定すると解釈されるべきではない。
【００８６】
あらゆる実施例、又はここで供される例示的な言葉（例えば、「例えば」）の使用は単に本発明の理解をより容易にすることを目的としており、他に主張されない限り本発明の範囲を制限をもたらすものではない。本明細書ではいかなる言葉も、何れかの非請求要素が本発明の実施に必要不可欠であることを示すものとして解釈されるべきではない。
【００８７】
ここでの特許文書の引用と編入は、単に便宜上のために行われるものであり、そのような特許文書の有効性、特許性及び／又は権利行使可能性の如何なる見解も反映するものではない。
【００８８】
この発明には、適用される法律により許可される限り、ここに添付された特許請求の範囲に記載される主題事項の全ての変形例及び均等物が含まれる。
【実施例】
【００８９】
実施例１
薬学的製剤の調製
本発明の薬学的製剤は水溶液として調剤され得る。水性溶媒は、例えば、塩化ナトリウム又はグリセロールで等張にされる。更に、水性溶媒は、例えば酢酸亜鉛又は塩化亜鉛として添加された亜鉛イオン、バッファー及び保存料を含み得る。アルギニンがＡｒｇ,ＨＣｌとして添加され得る。製剤のｐＨの値は望まれた値に調整され、当該のインスリンの等電点、ｐＩ、に依存して約３から約８．５の間、約３から約５の間又は約６．５から約７．５の間であり得る。
【００９０】
実施例２
インスリンの化学的安定性の分析
サイズ排除クロマトグラフィー
【００９１】
高分子量タンパク質（ＨＭＷＰ）及びモノマーインスリンアスパルトの定量はウォーターズ（Ｗａｔｅｒｓ）インスリン（３００×７．８ｍｍ，部品番号 ｗａｔ２０１５４９）で、２．５Ｍ酢酸、４ｍＭのＬ−アルギニン及び２０％（Ｖ／Ｖ）のアセトニトリルを含む溶離液により流量１ｍｌ／分で４０℃にて実施した。検出は同調型吸光度検出器（ウォーターズ４８６）で２７６ｎｍで行った。注入容積は４０μｌ及び６００μｌのヒトインスリン標準であった。ＨＭＷＰ及び製剤の濃度は各サンプリング点において測定した。
【００９２】
逆相クロマトグラフィー（ＵＰＬＣ）
インスリンアスパルトに関連した不純物の決定は、ＢＥＨ ＲＰ Ｃ８ ２．１×１００ｍｍカラム、粒子径１．７μｍ、ウォーターズ部品番号１８６００２８７８を使用し、流量０．５ｍｌ／分、４０℃で、２２０ｎｍにおける検出でＵＰＬＣシステム上で行った。溶出は以下からなる移動相で行った。
Ａ．１０％（ｗ／Ｖ）アセトニトリル、２．８％（ｗ／ｗ）硫酸ナトリウム、０．３％（ｗ／ｗ）ｏ−リン酸、ｐＨ ３．５。
Ｂ．７０％（ｗ／Ｖ）アセトニトリル、勾配：０−１１分 アイソクラチック Ａ／Ｂは７３％／２７％、１１−１２ Ａ／Ｂは５２％／４８％に線形変化、１３−１５分 Ａ／Ｂは７３％／２７％に線形変化、１５−２０分 Ａ／Ｂは７３％／２７％でアイソクラチック勾配。
【００９３】
Ｂ２８イソアスパラギン酸、デスアミド及び他の関連した不純物の量は、保存料の溶出後に決定した総吸光度面積の百分率で測定された吸光度面積として決定された。ＲＰ−ＵＰＬＣ法はノボノルディスクが市販するインスリンアスパルト薬剤の品質管理に使用される分析的方法と同等である。
【００９４】
アルギニンの追加は形成される分解産物、特にＨＭＷＰ及びデスアミド型の量を減少させ、アルギニンの濃度を１０から５０ｍＭの範囲で増加させると更に分解の減少をもたらす。ＴｈＴアッセイにおける遅延時間として測定される物理的安定性はアルギニンの添加によって減少し、アルギニン濃度を増加させるとますます減少する。５０ｍＭアルギニンの全効能は、下の表３に示される通り、分解産物形成の減少に関して、５０ｍＭグリシン、５０ｍＭグルタミン酸又は５０ｍＭヒスチジンよりより優れている。
【００９５】
実施例３
ＬＹＤブタモデルにおける薬物動態（ＰＫ）／薬動力学（ＰＤ）研究及び血漿分析アッセイ
ＬＹＤブタにおけるＰＫ／ＰＤ研究
ＰＫ／ＰＤ研究は５５から１１０ｋｇの重さのＬＹＤ異種交配した国産メスブタで行った。ブタは研究開始の少なくとも２日前に、耳の静脈を通して頚部静脈にカテーテルが挿入された。研究開始前の最後の食餌は、試験製剤の注射の約１８時間前に動物に出され、動物は絶食期間及び試験期間中いつでも自由に水を摂取できた。
【００９６】
０時間にて試験製剤が首の横側の皮下へ与えられた。投薬前に血液試料が採血され、投薬後一定の時間間隔でカテーテルから試料が摂取され、ヘパリンで事前にコーティングされた１．５ｍｌガラスチューブへサンプリングした。血液試料は、最初の３０分以内に行われた３０００ｒｐｍ、４℃で１０分間の遠心分離による血漿の分画まで氷水中で保管された。血漿試料は短時間（２−３時間）４℃で、又は長期間−１８℃で保管され、グルコースはＹＳＩ又はＫｏｎｅｌａｂ ３０ｉにて、及びインスリンアスパルト濃度はＬＯＣＩにより分析された。
【００９７】
インスリンアスパルト定量化のための発光酸素チャネリングイムノアッセイ（ＬＯＣＩ）
インスリンアスパルトＬＯＣＩはモノクロナール抗体にもとずくサンドイッチ免疫測定法であり、ユーロピウムでコーティングされたアクセプタービーズとストレプトアビジンでコーティングされたドナービーズである２つのビーズの近接を利用する。アクセプタービーズはヒトインスリンに対する特異的抗体でコートされており、血漿試料中のインスリンアスパルトを認識する。第２のビオチン標識化抗体はインスリンアスパルトに特異的に結合し、ストレプトアビジンでコーティングされたビーズと共にサンドイッチを作り上げる。ビーズが会合した免疫複合体のイルミネーションはドナービーズから一重項酸素を放出し化学発光を引き起こす。化学発光が測定され、生成した光量がインスリンアスパルトの濃度に比例する。
【００９８】
市販品のノボラピッド（登録商標）と比較して、血漿グルコース低下の初期速度は本発明による製剤においてより速い（図３及び４）。同様に、ノボラピッド（登録商標）と比較した場合、本発明による製剤のインスリン組成物の初期吸収速度は著しく速い（図５）。
【００９９】
実施例４
タンパク質製剤の物理的安定性に関する評価のためのＴｈＴフィブリル化アッセイの概略紹介
ペプチドの低い物理的安定性はアミロイドフィブリル形成を引き起こし得、それは試料中に良く整頓された糸状高分子構造として観察され、最終的にゲルの形成を引き起こす。これは伝統的に試料の目視により測定されている。しかしながら、そのような測定は非常に主観的であり観察者に依存している。従って、小分子指標プローブの適用がはるかに有利である。チオフラビンＴ（ＴｈＴ）はそのようなプローブであり、フィブリルに結合すると異なる蛍光サインを示す［Ｎａｉｋｉ等、（１９８９） Ａｎａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．１７７, ２４４−２４９；ＬｅＶｉｎｅ（１９９９） Ｍｅｔｈｏｄｓ．Ｅｎｚｙｍｏｌ．３０９, ２７４−２８４］。フィブリル形成の時間的経過は次の式によるＳ字型曲線により記述できる［Ｎｉｅｌｓｅｎ等、（２００１） Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ４０，６０３６−６０４６］。
【０１００】
ここで、Ｆは時刻ｔにおけるＴｈＴ蛍光である。定数ｔ0は最大蛍光の５０％に達するために必要な時間である。フィブリル形成を記述する２つの重要なパラメーターはｔ0−２τにより計算される遅延時間と見かけの速度定数ｋａｐｐ＝１／τである。
【０１０１】
部分的にフォールドしたペプチドの中間体はフィブリル化の一般的な開始機構として提案されている。そうした中間体が核形成して鋳型を作りそこに更に中間体が会合してフィブリル化が進行しうることは少ない。遅延時間は臨界量の核が蓄積される間隔に対応し、見かけの速度定数はフィブリルそれ自身が形成される速度である。
【０１０２】
試料調製
試料は各アッセイ前に新しく調製した。各試料の組成物は各実施例中に記述する。試料のｐＨは濃縮されたＮａＯＨ及びＨＣｌＯ４又はＨＣｌを適量使用して望まれる値に調整した。Ｈ２Ｏ中のストック溶液からチオフラビンＴを試料に添加して最終濃度を１μＭとした。
【０１０３】
２００μｌの試料を９６穴マイクロタイタープレート（Ｐａｃｋａｒｄ ＯｐｔｉＰｌａｔｅＴＭ-９６、白色ポリスチレン）に置いた。通常、各試料について４又は８の複製（１回の試験条件に対応する）が穴の一列に置かれる。プレートはスコッチパッド（Ｑｉａｇｅｎ）で密封した。
【０１０４】
インキュベーション及び蛍光測定
所定の温度でのインキュベーション、震盪及びＴｈＴ蛍光発光の測定はＦｌｕｏｒｏｓｋａｎ Ａｓｃｅｎｔ ＦＬ蛍光プレートリーダー又はＶａｒｉｏｓｋａｎプレートリーダー（Ｔｈｅｒｍｏ Ｌａｂｓｙｓｔｅｍｓ）で行った。温度は３７℃に調整した。軌道震盪は全ての提示データにおいて１ｍｍの振幅で９６０ｒｐｍに設定した。蛍光測定は４４４ｎｍフィルターを通した励起及び４８５ｎｍフィルターを通した発光測定を使用して行った。
【０１０５】
各実行はアッセイ温度にてプレートを１０分間インキュベートすることから開始した。プレートは２０分ごとに望まれた時間測定した。各測定の間、記述した通りにプレートを震盪し加熱した。
【０１０６】
データの取り扱い
測定点を更なる処理のためマイクロソフトエクセル形式に保存し、ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍを使用して曲線描画及びフィッティングを行った。フィブリルが無いときのＴｈＴ由来のバックグランド発光は無視できるものであった。データ点は典型的には４つ又は８つの試料の平均であり標準偏差のエラーバーと共に示される。同一実験で得られたデータのみ（すなわち同一プレート上の試料）同一グラフに提示され、実験の間におけるフィブリル化の相対的な測定を保証している。
【０１０７】
データセットは式（１）にフィットさせ得る。しかしながら全Ｓ字曲線が常に実験時間中に得られるわけではなく、ＴｈＴ蛍光がバックグランドレベルとは異なる時点として、遅延時間をＴｈＴ蛍光曲線から目視で決定した。
【０１０８】
初期及び最終濃度の測定
試験された各製剤におけるペプチド濃度はＴｈＴフィブリル化アッセイ「初期」及びＴｈＴフィブリル化完了後「ＴｈＴアッセイ後」の両方で測定した。濃度はプラムリンチド標準を参照として使用し逆ＨＰＬＣ法で決定した。完了後の測定前に各複製から１５０μｌを採取しエッペンドルフチューブへ移した。これらを３００００Ｇで４０分間遠心した。ＨＰＬＣシステムに適用前に上清を０．２２μｍフィルターを通して濾過した。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
・インスリン化合物
・ニコチン化合物、及び
・アルギニン
を含有するインスリン製剤。
【請求項２】
インスリン化合物がインスリン又はインスリンアナログである、請求項１に記載のインスリン製剤。
【請求項３】
インスリン化合物がＢ２８Ａｓｐヒトインスリンである、請求項１又は２に記載のインスリン製剤。
【請求項４】
インスリン化合物がＢ２８ＬｙｓＢ２９Ｐｒｏヒトインスリンである、前記請求項の何れかに記載のインスリン製剤。
【請求項５】
インスリン化合物がＢ３ＬｙｓＢ２９Ｇｌｕヒトインスリンである、前記請求項の何れかに記載のインスリン製剤。
【請求項６】
インスリン化合物が約０．２ｍＭから約２．０ｍＭの量で存在する、請求項１から５の何れかに記載のインスリン製剤。
【請求項７】
インスリン化合物が約０．３ｍＭから約１．２ｍＭの量で存在する、請求項１から６の何れかに記載のインスリン製剤。
【請求項８】
ニコチン化合物がニコチンアミド、ニコチン酸、ナイアシン、ナイアシンアミド及びビタミンＢ３及び／又はその塩及び／又はその何れかの組合わせからなる群から選択される、請求項１から７の何れかに記載のインスリン製剤。
【請求項９】
ニコチン化合物を約１ｍＭから約１５０ｍＭ含む、請求項１から８の何れかに記載のインスリン製剤。
【請求項１０】
アルギニンを約１ｍＭから約８５ｍＭ含む、請求項１から９の何れかに記載のインスリン製剤。
【請求項１１】
グルタミン酸を更に含む、請求項１から１０の何れかに記載のインスリン製剤。
【請求項１２】
金属イオン、保存料、等張化剤及び安定化剤、界面活性剤及びバッファーを更に含む、請求項１から１１の何れかに記載のインスリン製剤。
【請求項１３】
請求項１から１２の何れかに記載のインスリン製剤を治療に有効な用量、その治療を必要とする患者へ投与することにより、哺乳動物の血糖値を下げる方法。
【請求項１４】
請求項１から１３の何れかに記載のインスリン製剤を被験者へ投与することを含む、被験者の真性糖尿病を治療する方法。
【請求項１５】
ストレス誘導性高血糖を含む高血糖、２型糖尿病、耐糖能異常、１型糖尿病、及び治療に同化作用が必要なやけどや手術創及び他の疾患又は創傷、心筋梗塞、脳卒中、冠状動脈性心疾患や他の心血管疾患の治療又は予防、及び危篤状態の糖尿病患者及び非糖尿病患者の治療における使用のための、請求項１から１４の何れかに記載のインスリン製剤。
【請求項１】
・インスリン化合物
・ニコチン化合物、及び
・アルギニン
を含有するインスリン製剤。
【請求項２】
インスリン化合物がインスリン又はインスリンアナログである、請求項１に記載のインスリン製剤。
【請求項３】
インスリン化合物がＢ２８Ａｓｐヒトインスリンである、請求項１又は２に記載のインスリン製剤。
【請求項４】
インスリン化合物がＢ２８ＬｙｓＢ２９Ｐｒｏヒトインスリンである、前記請求項の何れかに記載のインスリン製剤。
【請求項５】
インスリン化合物がＢ３ＬｙｓＢ２９Ｇｌｕヒトインスリンである、前記請求項の何れかに記載のインスリン製剤。
【請求項６】
インスリン化合物が約０．２ｍＭから約２．０ｍＭの量で存在する、請求項１から５の何れかに記載のインスリン製剤。
【請求項７】
インスリン化合物が約０．３ｍＭから約１．２ｍＭの量で存在する、請求項１から６の何れかに記載のインスリン製剤。
【請求項８】
ニコチン化合物がニコチンアミド、ニコチン酸、ナイアシン、ナイアシンアミド及びビタミンＢ３及び／又はその塩及び／又はその何れかの組合わせからなる群から選択される、請求項１から７の何れかに記載のインスリン製剤。
【請求項９】
ニコチン化合物を約１ｍＭから約１５０ｍＭ含む、請求項１から８の何れかに記載のインスリン製剤。
【請求項１０】
アルギニンを約１ｍＭから約８５ｍＭ含む、請求項１から９の何れかに記載のインスリン製剤。
【請求項１１】
グルタミン酸を更に含む、請求項１から１０の何れかに記載のインスリン製剤。
【請求項１２】
金属イオン、保存料、等張化剤及び安定化剤、界面活性剤及びバッファーを更に含む、請求項１から１１の何れかに記載のインスリン製剤。
【請求項１３】
請求項１から１２の何れかに記載のインスリン製剤を治療に有効な用量、その治療を必要とする患者へ投与することにより、哺乳動物の血糖値を下げる方法。
【請求項１４】
請求項１から１３の何れかに記載のインスリン製剤を被験者へ投与することを含む、被験者の真性糖尿病を治療する方法。
【請求項１５】
ストレス誘導性高血糖を含む高血糖、２型糖尿病、耐糖能異常、１型糖尿病、及び治療に同化作用が必要なやけどや手術創及び他の疾患又は創傷、心筋梗塞、脳卒中、冠状動脈性心疾患や他の心血管疾患の治療又は予防、及び危篤状態の糖尿病患者及び非糖尿病患者の治療における使用のための、請求項１から１４の何れかに記載のインスリン製剤。
【図１】
【図２】
【図３】
【図４】
【図５】
【図２】
【図３】
【図４】
【図５】
【公表番号】特表２０１２−５３０７６８（Ｐ２０１２−５３０７６８Ａ）
【公表日】平成２４年１２月６日（２０１２．１２．６）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２０１２−５１６７６３（Ｐ２０１２−５１６７６３）
【出願日】平成２２年６月２５日（２０１０．６．２５）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＥＰ２０１０／０５９０６９
【国際公開番号】ＷＯ２０１０／１４９７７２
【国際公開日】平成２２年１２月２９日（２０１０．１２．２９）
【出願人】（５９６１１３０９６）ノボ・ノルデイスク・エー／エス (241)
【Ｆターム（参考）】
【公表日】平成２４年１２月６日（２０１２．１２．６）
【国際特許分類】
【出願日】平成２２年６月２５日（２０１０．６．２５）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＥＰ２０１０／０５９０６９
【国際公開番号】ＷＯ２０１０／１４９７７２
【国際公開日】平成２２年１２月２９日（２０１０．１２．２９）
【出願人】（５９６１１３０９６）ノボ・ノルデイスク・エー／エス (241)
【Ｆターム（参考）】
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