インスリン抵抗性の予防及び／又は改善剤
【課題】 インスリン抵抗性の予防及び／又は改善剤、とりわけ、高脂肪食品／飼料によりもたらされるインスリン抵抗性を予防及び／又は改善するためのインスリン抵抗性の予防及び／又は改善剤を提供することを課題とする。
【解決手段】 α，α−トレハロースを有効成分として含んでなるインスリン抵抗性の予防及び／又は改善剤、とりわけ、高脂肪食品／飼料によりもたらされるインスリン抵抗性を予防及び／又は改善するための、α，α−トレハロースを有効成分として含んでなるインスリン抵抗性の予防及び／又は改善剤を提供することにより前記課題を解決する。
【解決手段】 α，α−トレハロースを有効成分として含んでなるインスリン抵抗性の予防及び／又は改善剤、とりわけ、高脂肪食品／飼料によりもたらされるインスリン抵抗性を予防及び／又は改善するための、α，α−トレハロースを有効成分として含んでなるインスリン抵抗性の予防及び／又は改善剤を提供することにより前記課題を解決する。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ヒトを含む哺乳動物において、正常な状態と比べ、インスリンの感受性が低下し、より多くのインスリンが必要とされる状態（＝インスリン抵抗性）となるのを予防及び／又は改善するための薬剤に関するものである。より詳細には、本発明は、α，α−トレハロースを有効成分として含んでなるインスリン抵抗性の予防及び／又は改善剤、とりわけ、高脂肪食品／飼料によりもたらされるインスリン抵抗性を予防及び／又は改善するための、α，α−トレハロースを有効成分として含んでなるインスリン抵抗性の予防及び／又は改善剤に関するものである。
【背景技術】
【０００２】
インスリン抵抗性という概念は、１９３６年、エイチ・ピー・ヒムスワース（Ｈ． Ｐ． Ｈｉｍｓｗｏｒｔｈ）が提唱したもので、同氏によれば、インスリン抵抗性とは、「血中にインスリンが存在していても、標的組織である肝、筋肉、脂肪組織などにおいて十分な作用が発現できない状態」と定義されている。インスリンは、骨格筋や脂肪、肝臓で血液からの糖の吸収を促し、エネルギーを作ったり蓄えたりする働きをもつホルモンであるが、インスリン抵抗性が惹起されると、インスリンが十分存在しているにもかかわらず、その作用が鈍くなり、その結果、血糖値が下がりにくくなり、血糖値を正常に保つためにより多くのインスリンが必要となる。
【０００３】
インスリン抵抗性を惹起する最も重要な環境因子は脂肪摂取量であると言われる中、近年、食生活の欧米化に伴う変化（高脂肪食化）や交通手段の発達に伴う運動不足などにより過栄養状態となり、この状態が肥満をきたし、インスリン抵抗性を惹起している患者が急増している（非特許文献１参照）。
【０００４】
インスリン抵抗性の発現は、生体内の脂肪組織における脂肪細胞の肥大化と密接に関連している。脂肪細胞は、褐色脂肪細胞と白色脂肪細胞とに分類され、その内、後者の白色脂肪細胞は、下記メカニズムによりインスリン抵抗性を惹起すると言われている。すなわち、白色脂肪細胞は、過栄養や運動不足により中性脂肪の蓄積が進むと肥大化し、アディポネクチン（糖の取り込み、脂肪酸の燃焼亢進作用を有するホルモン）の産生量が低下し、インスリン受容体の機能を阻害するＴＮＦ−α、遊離脂肪酸（ＦＦＡ）、及びレジスチンなどの分泌が増加し、さらに、白色脂肪細胞は、中性脂肪蓄積の亢進に伴って肥大化し、インスリン抵抗性が引き起こされる（非特許文献２参照）。また、前記刊行物には、インスリン抵抗性と、メタボリックシンドローム、癌、睡眠時無呼吸症候群、糖尿病、多のう胞性卵巣症候群、アルツハイマーなどの種々の疾患の発症との関連性が述べられている。
【０００５】
このような状況下、従来、インスリン抵抗性を改善する目的で、特定のジグリセリド及び／又はモノグリセリドを含有する油脂からなるインスリン抵抗性改善剤（特許文献１参照）、レモン果実由来の親水性成分（ポリフェノール）を有効成分とするインスリン抵抗性改善剤（特許文献２参照）、γ−アミノ酪酸を有効成分とするインスリン抵抗性改善剤（特許文献３参照）、或いは、カルボン酸誘導体またはその塩を含有してなるインスリン抵抗性改善剤（特許文献４参照）など種々の報告がなされている。
【０００６】
しかしながら、上記特許文献１乃至３に記載されたインスリン抵抗性改善剤は、特定の油脂、ポリフェノール、又はγ−アミノ酪酸を有効成分とするもので、それら有効成分の入手性、取扱性には難点があった。一方、上記特許文献４に記載されたインスリン抵抗性改善剤は、カルボン酸誘導体またはその塩を有効成分とするインスリン抵抗性改善剤であって、ヒト成人（体重５０ｋｇ）に経口投与する場合、当該有効成分の投与量は、１回投与量として約０．００１〜５００ｍｇを１日１回〜３回投与することが規定された薬剤であり、ヒトを含む哺乳類に日常的に容易、安全かつ手軽に摂取させるか投与し得るものとは言い難いものであった。
【０００７】
このような状況下、ヒトを含む哺乳類に日常的に容易、安全かつ手軽に摂取させるか投与することのできるインスリン抵抗性の予防及び／又は改善剤、とりわけ、高脂肪食品／飼料によりもたらされるインスリン抵抗性を予防及び／又は改善するための新たなインスリン抵抗性の予防及び／又は改善剤が鶴首されていた。
【０００８】
なお、非特許文献２に示されるとおり、糖尿病は、１型糖尿病（インスリン依存性糖尿病）と２型糖尿病（インスリン非依存性糖尿病）とに分類され、更に、２型糖尿病は、インスリン分泌低下が原因となる糖尿病と、インスリンは分泌され、その濃度も十分高いにも拘わらず、インスリン感受性の低下が原因となって血糖値が下がらない糖尿病とに分けられており、後者の糖尿病がインスリン抵抗性と関連性を有すると言われている。
【０００９】
ちなみに、本願と同じ出願人は、α，α−トレハロースの薬理作用について研究する中、特許文献５において、１型糖尿病を誘発する薬剤であるストレプトゾトシン（ＳＴＺ）を用いる動物実験において、α，α−トレハロースに膵機能調節作用、とりわけ、糖尿病を予防する作用があることを報告した。特許文献５で報告された内容は、１型糖尿病とα，α−トレハロースとの関連性についてのものであって、α，α−トレハロースと２型糖尿病、とりわけ、血中にインスリンが存在していても、骨格筋や脂肪、肝臓で血液からの糖の吸収が十分に行われない状態、つまり、インスリン抵抗性との関連性について報告したものではない。また、本出願人と同じ出願人は、特許文献６において、糖尿病を緩和する作用を有する、有効成分としてα，α−トレハロースを含んでなる抗内分泌障害剤を報告しているものの、これは、特許文献５と同様、１型糖尿病を誘発する薬剤であるストレプトゾトシン（ＳＴＺ）を用いる動物実験において、α，α−トレハロースが、ＳＴＺによるランゲルハンス氏島β細胞の減少及び核濃縮並びにβ細胞そのものの萎縮を抑制する作用を有することに基づいて、α，α−トレハロースには、抗内分泌障害作用があることを報告したものである。したがって、特許文献６は、α，α−トレハロースと、ランゲルハンス氏島β細胞とは因果関係のないインスリン抵抗性との関連性について開示するものではない。更に、本願と同じ出願人は、特許文献７において、α，α−トレハロースをエネルギー用糖源として用いることを開示しているものの、その内容は、α，α−トレハロース自体が生体のエネルギー用糖源として利用されることについてのものであって、α，α−トレハロースとインスリン抵抗性との関連性について開示するものではない。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００１０】
【特許文献１】特開２００１−２４７４７３号公報
【特許文献２】特開２００７−６３２２１号公報
【特許文献３】特開２００８−７４７３４号公報
【特許文献４】特許第４４８４４２７号公報
【特許文献５】特開平１１−１５８０７５号公報
【特許文献６】特開２０００−７５７０号公報
【特許文献７】特許第３８７７５８９号公報
【非特許文献】
【００１１】
【非特許文献１】『インスリン抵抗性』、松澤祐次等編集、株式会社医学書院発行、第１版第２刷、１３５〜１５０頁、２００８年
【非特許文献２】『ニュー・フード・インダストリー（Ｎｅｗ Ｆｏｏｄ Ｉｎｄｕｓｔｒｙ）』、第４８巻、第１１号、１〜１４頁、２００６年
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１２】
本発明は、インスリン抵抗性を予防及び／又は改善するためのインスリン抵抗性の予防及び／又は改善剤、とりわけ、高脂肪食品／飼料によりもたらされるインスリン抵抗性を予防及び／又は改善するための、インスリン抵抗性の予防及び／又は改善剤とその用途を提供することを課題とする。
【課題を解決するための手段】
【００１３】
本発明者等は、ヒトを含む哺乳類に日常的に容易かつ安全に摂取させるか投与することのできるインスリン抵抗性の予防及び／又は改善剤、とりわけ、高脂肪食品／飼料によりもたらされるインスリン抵抗性の予防及び／又は改善剤を確立することを目的とし、各種糖質の利用に着目し、鋭意研究を続けてきた。その結果、本発明者等は、全く意外なことに、インスリン抵抗性が二糖類であるα，α−トレハロースにより有意に予防及び／又は改善されることを見出し、本発明を完成した。
【００１４】
α，α−トレハロースが、インスリン抵抗性、とりわけ、高脂肪食品／飼料によりもたらされるインスリン抵抗性を予防及び／又は改善する作用を有することを見出したのは、本発明をもって嚆矢とするものである。
【００１５】
なお、特許第３８７７５８９号公報に示されるとおり、α，α−トレハロースは、自体、これを生体に摂取させるか投与すると、カロリー源として利用されるとともに、Ｄ−グルコースと同様、血糖値やインスリンの上昇をもたらす物質であることから、斯かるα，α−トレハロースが、インスリン抵抗性を予防及び／又は改善する作用を有することなど、本発明者等自身、全く予想外のことであった。
【００１６】
すなわち、本発明は、高脂肪食品／飼料によりもたらされるインスリン抵抗性を予防及び／又は改善するための、α，α−トレハロースを有効成分として含んでなるインスリン抵抗性の予防及び／又は改善剤を提供するものである。
【００１７】
また、本発明は、インスリン抵抗性の指標であるＨＯＭＡ−ＩＲ値を有意に低下させる作用を有するインスリン抵抗性の予防及び／又は改善剤を提供するものである。
【００１８】
さらに、本発明は、α，α−トレハロースを無水物換算で１乃至２０ｇ含んでなる単位投与形態にあるインスリン抵抗性の予防及び／又は改善剤を提供するものである。
【００１９】
さらに、本発明は、α，α−トレハロースと、医薬許容性担体とからなる、インスリン抵抗性の予防及び／又は改善剤を提供するものである。
【００２０】
さらに、本発明は、腸管膜脂肪細胞（「白色脂肪細胞」に分類される脂肪細胞）の肥大化を抑制する作用を有するインスリン抵抗性の予防及び／又は改善剤を提供するものである。
【発明の効果】
【００２１】
本発明のインスリン抵抗性の予防及び／又は改善剤は、所謂、現代病／生活習慣病とも言われている種々の疾患を惹起するインスリン機能不全の予防と改善の鍵を握る、インスリン抵抗性を予防及び／又は改善するための薬剤、詳細には、ヒトを含む哺乳類において、高脂肪食品／飼料によりもたらされるインスリン抵抗性を効果的に予防及び／又は改善するための薬剤であり、しかも、腸間膜脂肪細胞の肥大化を抑制し、耐糖能を改善することのできる薬剤である。当該インスリン抵抗性の予防及び／又は改善剤によれば、インスリン抵抗性を効果的に予防及び／又は改善できることから、例えば、メタボリックシンドローム、癌、アルツハイマー病、睡眠時無呼吸症候群、多のう性卵巣症候群（ＰＣＯＳ）などの疾患を改善できるのではないかと考えられる。また、当該インスリン抵抗性の予防及び／又は改善剤が有効成分とするα，α−トレハロースは、昨今、工業的に廉価かつ大量に市場に供給されている、有用で安全性の高い糖質であることから、これを有効成分とする当該インスリン抵抗性の予防及び／又は改善剤は、経済性、安全性の面からみて、ヒトを含む哺乳類に日常的に安心して摂取させるか投与することができ、しかも、工業的に廉価かつ大量に製造できる優れた実益を有する。
【図面の簡単な説明】
【００２２】
【図１】高脂肪飼料摂取試験におけるマウスの体重変化を示す図である。
【図２】高脂肪飼料摂取試験におけるマウスの摂餌量変化を示す図である。
【図３】高脂肪飼料摂取試験におけるマウスの飲水量変化を示す図である。
【図４】高脂肪飼料摂取試験において、飼育試験開始後、７週間目における糖負荷試験結果を示す。
【図５】高脂肪飼料摂取試験において、飼育試験開始後、７週間目における糖負荷試験時のインスリン濃度の測定結果を示す。
【図６】インスリン抵抗性の指標であるＨＯＭＡ−ＩＲ値の測定結果を示す。
【図７】腸間膜脂肪細胞の面積の測定結果を示す。
【図８】腸間膜脂肪細胞の顕微鏡写真である。
【図９】高脂肪飼料摂取試験におけるマウスの体重変化を示す図である。
【図１０】高脂肪飼料摂取試験におけるマウスの摂餌量変化を示す図である。
【図１１】高脂肪飼料摂取試験におけるマウスの飲水量変化を示す図である。
【図１２】高脂肪飼料摂取試験において、飼育試験開始後、１４週間目における糖負荷試験時の血糖値の測定結果を示す。
【図１３】高脂肪飼料摂取試験において、飼育試験開始後、８週間目における腸間膜脂肪細胞のＭＣＰ−１遺伝子のｍＲＮＡ発現量を、蒸留水投与群マウスにおけるＭＣＰ−１遺伝子のｍＲＮＡ発現量を１．０としたときの相対値で示す図である。
【図１４】各種糖質による脂肪前駆細胞の脂肪細胞への分化誘導抑制作用を調べる実験において、対照１及び対照２の吸光度（Ａ４９０）差に対する、Ａ乃至Ｅ群及び対照１の吸光度（Ａ４９０）の百分率（％）を示す図である。
【発明を実施するための形態】
【００２３】
本発明で言うインスリン抵抗性の予防及び／又は改善剤とは、ヒトを含む哺乳動物に高脂肪食品／飼料を日常的に摂取させるか投与する場合にもたらされるインスリン抵抗性を予防及び／又は改善することのできる薬剤を意味する。斯かる本発明のインスリン抵抗性の予防及び／又は改善剤が有効成分とするα，α−トレハロースは、本発明の目的を逸脱しない限り、その製法、給源、由来は特に限定されることなく用いることができる。例えば、従来公知の製造方法によって得られるα，α−トレハロースは言うに及ばず、現在、市販されている、粉末状、粒状、シラップ状などの形態を有するα，α−トレハロース製品をそのまま、あるいは、それらを公知の１種又は２種以上の糖質の精製方法を適宜適用して、所望の純度にまで高めたものを適宜用いることができる。また、本発明のインスリン抵抗性の予防及び／又は改善剤が有効成分とするα，α−トレハロースの純度は、その使用形態にもよるが、本発明の目的を逸脱しない限り、純度９９質量％（以下、特に断りがない限り、「質量％」を単に「％」と略記する。）以上もの高純度のものに限定されない。なお、高純度のα，α−トレハロースとしては、α，α−トレハロース二含水結晶やα，α−トレハロース無水結晶などの結晶性α，α−トレハロースを例示できる。
【００２４】
本発明のインスリン抵抗性の予防及び／又は改善剤は、実質的にα，α−トレハロースのみからなるものであっても、あるいは、α，α−トレハロースと１種又は２種以上の他の医薬許容性の担体、例えば、水、水性媒体、着色料、着香料、糊料、増量剤、ｐＨ調整剤、賦形剤、結合剤、崩壊剤、滑沢剤、安定化剤、矯味矯臭剤、希釈剤、及び注射剤用溶剤などの担体を含む組成物であってもよい。
【００２５】
また、本発明のインスリン抵抗性の予防及び／又は改善剤に配合し得るα，α−トレハロース以外の他の成分としては、例えば、α，α−トレハロースの製造方法に起因して共存するα，α−トレハロース以外の他の糖類、さらには、蛋白質、ペプチド（グレリンなど）、アミノ酸、糖類、ポリフェノール（フラボノイド、タンニンなど）、ビタミン、ミネラル、抗菌物質、酵素、ホルモン（レプチン、レジスチン、ＧＬＰ−１、インスリンなど）、サイトカイン（アディポネクチン、ＴＮＦ−αなど）、難消化性の多糖類（プルラン、エルシナン、カラギ−ナン、セルロース、及びそれらの誘導体など）、及び高甘味度甘味料（スクラロース、アスパルテーム、サッカリン、ステビオサイドなど）などを例示できる。上記α，α−トレハロース以外の他の成分は、その１種又は２種以上を必要に応じて適宜組み合わせて、本発明のインスリン抵抗性の予防及び／又は改善剤当たり、合計で、通常、０．０１％以上９９％未満、好適には、０．１％以上９８％未満、より好適には、０．１％以上９０％未満、より更に好適には、０．１％以上８０％未満用いることができる。
【００２６】
なお、上記組み合わせの内、インスリン抵抗性改善作用を有するα，α−トレハロースと、インスリン抵抗性の程度を増大させる中性脂肪を低減する作用を有することが知られているポリフェノールとの併用は、本発明において特に好ましい組み合わせである。上記ポリフェノールの内、ナリンジン、ヘスペリジン、ルチンなどのフラボノイド、大豆イソフラボン、茶カテキン、及びそれらの酵素処理物又はグリコシル誘導体は、本発明においてはより好適に用いることができる。
【００２７】
本発明のインスリン抵抗性の予防及び／又は改善剤の形態としては、例えば、錠剤、カプセル剤、トローチ剤、舌下剤、シロップ剤、液剤、顆粒剤、散剤、粉剤、乳剤、噴霧剤、座剤、注射剤、軟膏、テープ剤、パップ剤などを例示することができる。本発明のインスリン抵抗性の予防及び／又は改善剤の形態が、シロップ剤、液剤などの液状である場合、当該インスリン抵抗性の予防及び／又は改善剤のｐＨは、通常、３乃至９、好適には、６乃至８の範囲とする。
【００２８】
当該インスリン抵抗性の予防及び／又は改善剤の摂取量又は投与量に関し、当該インスリン抵抗性の予防及び／又は改善剤を、例えば、ヒトに適用する場合、後述する実験１乃至６の結果から判断して、当該インスリン抵抗性の予防及び／又は改善剤が有効成分とするα，α−トレハロースを、無水物換算で、ヒト成人（体重６０ｋｇ）一日当たり、通常、１乃至２０ｇ、好適には、３乃至１８ｇ、より好適には、５乃至１６ｇの範囲で摂取させるか投与する。なお、上記範囲の下限を下回る場合には、本発明の所期の作用効果が著しく低減するか発揮されなくなる。また、上記範囲の上限を上回る場合には、本発明の所期の作用効果がさほど変わらないか、むしろ、α，α−トレハロースによる好ましくない血糖値の上昇や血中インスリン濃度の上昇を招く恐れがあることから推奨されない。
【００２９】
本発明のインスリン抵抗性の予防及び／又は改善剤は、その所望量をヒトを含む哺乳類（犬、猫、ウサギ、マウス、ラット、ハムスター、リスなどの愛玩動物、馬、牛、豚、羊、山羊、鶏などの家畜・家禽、更には類人猿などへ、経口的又は非経口的に摂取させるか投与することにより、インスリン抵抗性、とりわけ、高脂肪食品／飼料によりもたらされるインスリン抵抗性を効果的に予防及び／又は改善することができる。
【００３０】
また、本発明のインスリン抵抗性の予防及び／又は改善剤を高脂肪食品／飼料によりもたらされるインスリン抵抗性を予防及び／又は改善するために用いる場合には、当該インスリン抵抗性の予防及び／又は改善剤の有効成分であるα，α−トレハロースを無水物換算で、当該高脂肪食品／飼料中に含まれる脂肪酸総質量に対し、通常、１乃至５０質量％、好適には、５乃至４０質量％、より好適には、５乃至３０質量％、更に好適には、５乃至２０質量％、より更に好適には、５乃至１５質量％の割合となるように、ヒトを含む哺乳動物に摂取させるか投与することにより、当該高脂肪食品／飼料によりもたらされるインスリン抵抗性を効果的に予防及び／又は改善することができる。
【００３１】
本発明で言う高脂肪食品とは、所謂、脂肪・油脂を比較的多く含む食品全般を意味し、それら各食品当たり、脂肪酸を合計で、通常、５％以上１００％未満、狭義には、１０％以上１００％未満、より狭義には、１５％以上１００％未満、更に狭義には、２０％以上１００％未満、より更に狭義には、３０％以上１００％未満含む食品を意味する。本発明で言う脂肪酸とは、飽和脂肪酸、不飽和一価脂肪酸、及び不飽和多価脂肪酸を意味し、その具体例としては、ミリスチン酸、ミリストレイン酸、ペンタデカン酸、パルミチン酸、パルミトレイン酸、ヘプタデカン酸、ヘプタデセン酸、ステアリン酸、オレイン酸、リノール酸、リノレン酸、アラキジン酸、イコセン酸、ベヘン酸、ドコサヘキサエン酸などを例示できる。上記脂肪酸の中でも、パルミチン酸、ステアリン酸、オレイン酸、及びリノール酸は、高脂肪食品／飼料中に、通常、他の脂肪酸と比べより多く含まれている。殊に、脂肪酸組成で、パルミチン酸、ステアリン酸、オレイン酸、及びリノール酸含有量の高い高脂肪食品／飼料によりもたらされるインスリン抵抗性は、本発明のインスリン抵抗性の予防及び／又は改善剤によれば効果的に改善される。なお、上記脂肪酸は、斯界において公知の方法により定量することができる。その代表的な定量方法としては、例えば、『栄養表示基準（平成８年５月厚生省告示第１４６号）』における栄養成分等の分析方法等（栄養表示基準別第１の第３欄に掲げる方法）に添付された別添資料の６〜９頁に記載された方法を例示できる。
【００３２】
本発明で言う高脂肪食品の具体例としては、自体、加工食品材料として用いられる、牛肉、豚肉、馬肉、羊肉、鶏肉、魚肉、魚卵（タラコ、数の子、ブリ、イクラ）、魚油（イワシ油、ニシン油、マグロ油、カツオ油、サンマ油、メンハーデン油など）、肝油、魚油、魚粕、骨油、牛脂、豚脂、馬脂、シア脂、魚油エキス、家禽卵（鶏卵、鶉卵など）、牛乳、アボカド油、あまに油、オリーブ油、カカオ脂、からし油、きり油、こめ油、サフラワー油、大豆油、とうもろこし油、菜種油、パーム油、パーム核油、ひまし油、ぶどう種子油、ホホバ油、綿実油、やし油、落花生油、カポック油、ごま油、けし油、ひまわり油など、さらには、上記加工食品材料を用いて製造される加工食品、例えば、畜肉・魚肉加工品（ハム、ソーセージ、ベーコン、フライドチキンなど）、乳製品（ヨーグルトなどの発酵乳製品を含む）、パン、ケーキ、菓子類（チョコレート、クッキー、クラッカー、ドーナツなど）、ハンバーグ、ハンバーガー、バター、マーガリン、マヨネーズ、ドレッシング、アイスクリーム、油脂粉乳、中華料理、ラーメン、即席麺（即席ラーメンなど）、スープ、天ぷら、フライ、油揚げなどの食品を例示できる。なお、上記高脂肪食品の内、パルミチン酸、ステアリン酸、オレイン酸、及びリノール酸を合計で、当該高脂肪食品当たり、通常、５％以上１００％未満、厳密には、１０％以上１００％未満、より厳密には、１５％以上１００％未満、更に厳密には、２０％以上１００％未満、より更に厳密には、３０％以上１００％未満含む高脂肪食品は、本発明のインスリン抵抗性の予防及び／又は改善剤により、それら食品によりもたらされるインスリン抵抗性が効果的に予防及び／又は改善剤される食品である。上記高脂肪食品をヒトが摂取する前、後、及び／又は、摂取中に本発明のインスリン抵抗性の予防及び／又は改善剤の所定量をヒトに摂取させる場合には、上記高脂肪食品を比較的多量、日常的に摂取する場合であっても、上記高脂肪食品によりもたらされるインスリン抵抗性を一層効果的に予防及び／又は改善することができる。また、本発明で言う高脂肪飼料とは、上記した高脂肪食品と同様、高脂肪飼料当たり、脂肪酸を合計で、通常、５％以上１００％未満、厳密には、１０％以上１００％未満、より厳密には、１５％以上１００％未満、更に厳密には、２０％以上１００％未満、より更に厳密には、３０％以上１００％未満含む高脂肪飼料を意味する。
【００３３】
本発明のインスリン抵抗性の予防及び／又は改善剤の流通形態として、例えば、インスリン抵抗性を改善するために用いられる趣旨の表示を付した容器又は包装体内に収容されるか、インスリン抵抗性を予防及び／又は改善するとともに、腸間膜脂肪細胞の肥大化を抑制し、及び／又は、インスリン抵抗性により引き起こされる耐糖能（＝負荷したＤ−グルコースに対して生体が示す代謝能力を指す。）の低下を改善するために用いられる趣旨の表示を付した容器又は包装体内に収容されたものを例示できる。
【００３４】
このように、本発明のインスリン抵抗性の予防及び／又は改善剤によれば、インスリン抵抗性、とりわけ、高脂肪食品／飼料によりもたらされるインスリン抵抗性を効果的に予防及び／又は改善できる。また、本発明のインスリン抵抗性の予防及び／又は改善剤によれば、インスリン抵抗性を効果的に予防及び／又は改善できることから、インスリン抵抗性と関連性を有する、例えば、メタボリックシンドローム、癌、睡眠時無呼吸症候群、多のう胞性卵巣症候群、アルツハイマーなどの疾患を改善することができるのではないかと考えられる。
【００３５】
以下、実験に基づいて本発明をより詳細に説明する。
【００３６】
実験１
＜高脂肪飼料摂取試験＞
Ａ．試験方法
Ｃ５７ＢＬ／６Ｎ雌マウス（７週齢：日本チャールス・リバー株式会社から購入）５０匹を無作為に一群８匹からなるＡ乃至Ｅ群、及び一群５匹からなるＦ群及びＧ群に分けた。Ａ乃至Ｅ群のマウスは、飼育飼料として、糖尿病・肥満研究用高脂肪飼料（『Ｈｉｇｈ Ｆａｔ Ｄｉｅｔ ３２（ＨＦＤ３２）』、日本クレア株式会社製）（以下、単に、「高脂肪飼料」と言う。）［一般成分値、配合組成、及び脂肪酸含量は、下記（１）参照］を用いて飼育するとともに、飲用水として、Ａ群のマウスにはＤ−グルコース（純度９８％、和光純薬工業株式会社製）を、Ｂ群のマウスにはα，α−トレハロース（純度９９％以上、株式会社林原生物化学研究所製）を、Ｃ群のマウスにはマルトース（純度９７％、三和澱粉工業株式会社製）、Ｄ群のマウスには、異性化糖（商品名『ハイフラクトＭ７５』、フラクトース含量約６０％、Ｄ−グルコース含量約４０％、日本コーンスターチ株式会社製）を、また、Ｅ群のマウスにはフラクトース（純度９８％、株式会社林原製）をそれぞれ蒸留水に無水物換算で、濃度２．５％（ｗ／ｖ）含むように溶解した糖質含有水溶液［下記（２）参照］を用いて飼育した。なお、対照１（Ｆ群）として、飲用水として、糖質含有水溶液に代えて蒸留水を用いた以外は、Ａ乃至Ｅ群のマウスと同様にして飼育する群を設けた。また、対照２（Ｇ群）として、飼育飼料として、高脂肪飼料に代えて標準飼料（商品名『ＮＭＦ』、オリエンタル酵母工業株式会社製）（以下、単に、「標準飼料」と言う。）［一般成分値は、下記（３）参照］を用い、飲用水として、前記糖質含有水溶液に代えて蒸留水を用いた以外は、Ａ乃至Ｅ群のマウスと同様にして飼育する群を設けた。飼育試験期間中、定期的に各群マウスの体重、摂餌量、及び飲水量を測定した。飼育試験開始後、７週間目に耐糖能を評価するためのＤ−グルコース負荷試験（糖負荷試験）［下記（４）参照］を行い、各群マウスの血糖値、インスリン濃度、及び空腹時の血糖値とインスリン濃度に基づいて算出されるインスリン抵抗性の指標である、ＨＯＭＡ−ＩＲ（「ＨＯＭＡ−Ｒ」とも言う。）（Ｈｏｍｅｏｓｔａｓｉｓ Ｍｏｄｅｌ Ａｓｓｅｓｓｍｅｎｔ − Ｉｎｓｕｌｉｎ Ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ）値（＝｛［空腹時の血糖値（ｍｇ／ｄｌ）］×［空腹時のインスリン濃度（μＵ／ｍｌ）］／４０５｝の計算式により算出される。）を常法により調べた。なお、ＨＯＭＡ−ＩＲ値は、インスリン抵抗性が高いほど高値を示す。ちなみに、ヒトにおいて、正常者のＨＯＭＡ−ＩＲ値は１．６以下は正常、２．５以上のときインスリン抵抗性ありとされている（『糖尿病学 基礎と臨床』、門脇孝等編集、西村書店出版、初版、４２７〜４３０頁、２００７年参照）。また、Ａ乃至Ｇ群のマウスについてそれぞれ、飼育試験開始後、８週間目にエーテル麻酔下で腹部大静脈から全採血するとともに、腸間膜脂肪組織を採取し、その一部を後述する実験３で行う腸間膜脂肪細胞の遺伝子解析用試料として、試験に供するまで−８０℃で凍結保存した。一方、採取した残りの腸間膜脂肪組織の一部を常法にしたがってホルマリン固定し、ヘマトキシリン・エオジン（ＨＥ）標本を作成した。ＨＥ標本それぞれにつき、光学顕微鏡（倍率２００倍）を用いて、無作為に５視野の写真を撮影し、０．２６７ｍｍ２（１視野の面積）当たりの腸間膜脂肪細胞数をカウントし、その面積を細胞数で除した数値を腸間膜脂肪細胞面積とした。
【００３７】
高脂肪飼料の一般成分値、配合組成、及び脂肪酸含量：
【００３８】
【表１】
【００３９】
【表２】
【００４０】
【表３】
【００４１】
（２）糖質含有水溶液の調製：
既述のＤ−グルコース、α，α−トレハロース、マルトース、異性化糖又はフラクトースを無水物換算で濃度２．５％（ｗ／ｖ）含むように蒸留水に溶解して調製した。
【００４２】
（３）標準飼料の一般成分値：
【００４３】
【表４】
【００４４】
（４）Ｄ−グルコース負荷試験（糖負荷試験）：
１．糖負荷試験前日の夕方から絶食させ、蒸留水だけを摂取させる。
２．空腹時の血糖値を調べるために、糖負荷前に眼底静脈から採血する。
３．投与量が２ｇ／ｋｇマウス体重となるように、Ｄ−グルコース溶液（濃度０．４ｇ／ｍｌ）を胃ゾンデを用いて経口投与する。
４．Ｄ−グルコース投与後、３０、６０及び１２０分間経過後に眼底静脈からヘマトクリット管で採血し、採血チューブに血液を移し採り、血清を分離するまで氷冷しておく。
５．血液を４℃で遠心分離（１０，０００ｒｐｍ）し、得られた血清の血糖値を『グルコースＣＩＩテストワコー』（和光純薬工業株式会社製）にて測定する。
【００４５】
Ｂ．試験結果
図１乃至３は、Ｄ−グルコース投与群（Ａ群、ｎ＝８）、α，α−トレハロース投与群（Ｂ群、ｎ＝８）、マルトース投与群（Ｃ群、ｎ＝８）、異性化糖投与群（Ｄ群、ｎ＝８）、フラクトース投与群（Ｅ群、ｎ＝８）、蒸留水投与群（Ｆ群：対照１、ｎ＝５）、及び標準飼料飼育群（Ｇ群：対照２、ｎ＝５）のマウスの試験期間中における体重、摂餌量、及び飲水量変化（各群マウスの平均値）をそれぞれ示す。図１乃至３に示すとおり、試験期間中、Ａ乃至Ｆ群のマウスにおいては、体重、摂餌量、飲水量変化に有意差は認められなかった。Ｇ群のマウスにおいては、Ａ乃至Ｆ群のマウスと比べ、摂餌量に有意差は認められなかったが、飲水量は多く、体重増加は少なかった。なお、図２の結果から、Ａ乃至Ｆ群のマウスは高脂肪飼料（脂肪酸総量３１．９％）を約２乃至３ｇ／日／匹摂取したことから、それらマウスは脂肪酸をその総量で約０．６乃至１ｇ／日／匹、摂取したことがわかる。一方、図３の結果から、Ａ乃至Ｆ群のマウスは水（Ｄ−グルコース、α，α−トレハロース、マルトース、異性化糖、又はフラクトース濃度２．５％（ｗ／ｖ））を約２乃至３ｇ／日／匹、摂取したことから、それらマウスは、Ｄ−グルコース、α，α−トレハロース、マルトース、異性化糖、又はフラクトースを約０．０５乃至０．０８ｇ／日／匹、摂取したことがわかる。つまり、Ｄ−グルコース、α，α−トレハロース、マルトース、異性化糖、又はフラクトースは、マウスが摂取した脂肪酸総量に対し、約５乃至１３％投与されたことを意味する。
【００４６】
図４は、飼育試験開始後、７週間目に耐糖能を評価するために行なったＤ−グルコース負荷試験（糖負荷試験）結果（各群マウスの平均値）を示す。図４に示すとおり、糖負荷試験開始直前（０分）の空腹時の血糖値は、高脂肪飼料で飼育したマウス［Ａ乃至Ｅ群のマウス（各群ｎ＝８）及びＦ群のマウス（ｎ＝５）］、及び標準飼料で飼育した対照２のマウス［Ｇ群のマウス（ｎ＝５）］との間に差は認められなかったが、糖負荷試験開始後、１２０分間に亘り、高脂肪飼料で飼育したマウス（Ａ乃至Ｆ群のマウス）の血糖値は、標準飼料で飼育した対照２（Ｇ群）のマウスと比べ高かった。また、Ａ乃至Ｆ群のマウスにおいて、糖負荷試験開始後、３０〜６０分後には、幾分、血糖値に差を認めたものの、糖負荷試験開始後、１２０分後には、各群のマウスに有意差は認められなかった。
【００４７】
図５は、インスリン濃度の測定結果（各群マウスの平均値）を示す。図５に示すとおり、高脂肪飼料で飼育したマウス［Ａ乃至Ｅ群のマウス（各群ｎ＝８）及びＦ群のマウス（ｎ＝５）］のインスリン濃度は、標準飼料で飼育した対照２（Ｇ群、ｎ＝５）のマウスと比べ高かった。また、α，α−トレハロース投与群（Ｂ群）のマウスの空腹時インスリン濃度は、Ａ群及びＣ群のマウスと比べ、有意に低い値を示した（ｐ＜０．０５）。また、Ｂ群のマウスのインスリン濃度は、糖負荷試験開始後、０〜６０分間に亘り、Ａ群及びＣ乃至Ｆ群のいずれのマウスと比べても明らかに低い値を示した。
【００４８】
図６は、飼育試験開始後、７週間目に行なった、インスリン抵抗性の指標であるＨＯＭＡ−ＩＲ値の測定結果（各群マウスの平均値）を示す。図６に示すとおり、α，α−トレハロース投与群（Ｂ群、ｎ＝８）のマウスのＨＯＭＡ−ＩＲ値は、マルトース投与群（Ｃ群、ｎ＝８）のマウスと比べ有意に低い値を示し（ｐ＜０．０５）、Ｄ−グルコース投与群（Ａ群、ｎ＝８）のマウスに比べ低い傾向を示した（ｐ＝０．１１）。また、α，α−トレハロース投与群（Ｂ群）のマウスのＨＯＭＡ−ＩＲ値は、異性化糖投与群（Ｄ群、ｎ＝８）、フラクトース投与群（Ｅ群、ｎ＝８）、及び蒸留水投与群（Ｆ群：対照１、ｎ＝５）のいずれのマウスと比べても明らかに低い値を示した。
【００４９】
図７は、腸間膜脂肪細胞面積の測定結果（各群マウスの平均値）を示す。図７に示すとおり、高脂肪飼料で飼育したマウス［Ａ乃至Ｅ群のマウス（各群ｎ＝８）及びＦ群のマウス（ｎ＝５）］の腸間膜脂肪細胞面積は、標準飼料で飼育した対照２（Ｇ群、ｎ＝５）のマウスと比べ明らかに大きかった。しかしながら、α，α−トレハロース投与群（Ｂ群）のマウスの腸間膜脂肪細胞面積は、Ｄ−グルコース投与群（Ａ群）、マルトース投与群（Ｃ群）、異性化糖投与群（Ｄ群）、及びフラクトース投与群（Ｅ群）のマウスと比べ有意に小さかった（ｐ＜０．０５）。また、α，α−トレハロース投与群（Ｂ群）のマウスの腸間膜脂肪細胞面積は、蒸留水投与群（Ｆ群）のマウスと比べても明らかに小さかった。
【００５０】
図８は、腸間膜脂肪細胞の顕微鏡写真（各群マウスの代表例）である。図８に示すとおり、Ｄ−グルコース投与群（Ａ群、ｎ＝８）、マルトース投与群（Ｃ群、ｎ＝８）、異性化糖投与群（Ｄ群、ｎ＝８）、フラクトース投与群（Ｅ群、ｎ＝８）、及び蒸留水投与群（Ｆ群：対照１、ｎ＝５）のマウスの腸間膜脂肪細胞は、対照２（Ｇ群、ｎ＝５）のマウスと比べ著しく肥大化していた。しかしながら、α，α−トレハロース投与群（Ｂ群）のマウスの腸間膜脂肪細胞は、対照２（Ｇ群）のマウスと比べると幾分肥大化は認められたものの、Ａ群及びＣ乃至Ｆ群のマウスと比べ肥大化は著しく抑制されていた。
【００５１】
本実験において、Ａ群及びＣ乃至Ｆ群のマウスに見られるとおり、マウスを高脂肪飼料で飼育すると、糖負荷試験における血糖値及びインスリン濃度、及びＨＯＭＡ−ＩＲ値が著しく上昇し、腸間膜脂肪細胞が著しく肥大化するのに対し、Ｂ群のマウスに見られるとおり、高脂肪飼料とともにα，α−トレハロースを投与したときには、糖負荷試験におけるインスリン濃度、及びＨＯＭＡ−ＩＲ値の上昇が顕著に抑制されるとともに、腸間膜脂肪細胞の肥大化が顕著に抑制されることが判明した。殊に、図４及び図５に示すとおり、高脂肪飼料で飼育したマウスの血糖値とインスリン濃度は、標準飼料で飼育したマウスの血糖値とインスリン濃度と比べ高かった。これは、高脂肪飼料で飼育したマウスにおいては、標準飼料で飼育したマウスと比べ、高脂肪飼料によりもたらされる血糖値の上昇を低下させるために、より多くのインスリンが要求されていたことを示している。このような状況下、高脂肪飼料で飼育したマウスの内、α，α−トレハロースを投与したマウスにおいては、α，α−トレハロース以外の他の糖質を投与したマウスと比べ、インスリン濃度は、有意ないしは明らかに低い値を示したことから、α，α−トレハロースを投与したマウスにおいては、α，α−トレハロース以外の他の糖質を投与したマウスと比べ、血糖値を下げるために要求されるインスリンの量が少ない状態、つまり、インスリン感受性が高い状態にあったと判断される。本実験結果は、α，α−トレハロースがインスリン抵抗性を効果的に予防ないしは改善する作用を有することを示すものである。
【００５２】
実験２
＜高脂肪飼料摂取試験＞
Ａ．試験方法
実験１で行った高脂肪飼料摂取試験の期間を８週間から１４週間に延長した以外は実験１と同様にして、Ｄ−グルコース投与群（Ａ群、ｎ＝８）、α，α−トレハロース投与群（Ｂ群、ｎ＝８）、マルトース投与群（Ｃ群、ｎ＝８）、異性化糖投与群（Ｄ群、ｎ＝８）、フラクトース投与群（Ｅ群、ｎ＝８）、飲用水として糖質含有水溶液に代えて蒸留水を用いた以外は、Ａ乃至Ｅ群のマウスと同様にして飼育する対照１（Ｆ群、ｎ＝５）、及び飼育飼料として、実験１で用いたと同じ標準飼料を用い、飲用水として、糖質含有水溶液に代えて蒸留水を用いた以外は、Ａ乃至Ｅ群のマウスと同様にして飼育する対照２（Ｇ群、ｎ＝５）を設けた。飼育試験開始後、１４週間目に、実験１と同様にして、耐糖能を評価するためのＤ−グルコース負荷試験を行った。なお、飼育試験期間中、定期的に各群マウスの体重、摂餌量、及び飲水量を測定した。
【００５３】
Ｂ．試験結果
図９乃至１１は、Ｄ−グルコース投与群（Ａ群、ｎ＝８）、α，α−トレハロース投与群（Ｂ群、ｎ＝８）、マルトース投与群（Ｃ群、ｎ＝８）、異性化糖投与群（Ｄ群、ｎ＝８）、フラクトース投与群（Ｅ群、ｎ＝８）、蒸留水投与群（Ｆ群：対照１、ｎ＝５）、及び標準飼料飼育群（Ｇ群：対照２、ｎ＝５）のマウスの試験期間中における体重、摂餌量、及び飲水量変化（各群マウスの平均値）をそれぞれ示す。図９乃至１１に示されるとおり、試験期間中、Ａ乃至Ｅ群のマウス間において、体重、摂餌量、及び飲水量変化に有意差は認められなかった。また、Ｆ群のマウスの摂餌量は、Ａ乃至Ｅ群のマウスよりやや多く、飲水量はやや少なかった。Ｇ群のマウスにおいては、Ａ乃至Ｆ群のマウスと比べ、摂餌量に有意差は認められなかったが、飲水量は多く、体重増加は少なかった。なお、図１０の結果から、Ａ乃至Ｆ群のマウスは高脂肪飼料（脂肪酸総量３１．９％）を約２．２乃至３．２ｇ／日／匹摂取したことから、それらマウスは脂肪酸をその総量で約０．７乃至１ｇ／日／匹、摂取したことがわかる。一方、図１２の結果から、Ａ乃至Ｆ群のマウスは水（Ｄ−グルコース、α，α−トレハロース、マルトース、異性化糖、又はフラクトース濃度２．５％（ｗ／ｖ））を約１．５乃至３ｇ／日／匹、摂取したことから、それらマウスは、Ｄ−グルコース、α，α−トレハロース、マルトース、異性化糖、又はフラクトースを約０．０４乃至０．０８ｇ／日／匹、摂取したことがわかる。つまり、Ｄ−グルコース、α，α−トレハロース、マルトース、異性化糖、又はフラクトースは、マウスが摂取した脂肪酸総量に対し、約５乃至１１％投与されたことを意味する。
【００５４】
図１２は、飼育試験開始後、１４週間目に耐糖能を評価するために行なったＤ−グルコース負荷試験（糖負荷試験）結果（各群マウスの平均値）を示す。図１２に示すとおり、高脂肪飼料で飼育したＡ乃至Ｆ群のマウス［Ａ乃至Ｅ群のマウス（各群ｎ＝８）及びＦ群のマウス（ｎ＝５）］の血糖値は、標準飼料で飼育したＧ群（対照２、ｎ＝５）のマウスと比べ高かった。また、高脂肪飼料で飼育したＡ乃至Ｆ群のマウスの内、α，α−トレハロースを投与したＢ群のマウスの血糖値は、糖負荷試験開始後、３０〜１２０分間の全期間に亘って、Ａ群及びＣ乃至Ｆ群のマウスと比べ低い値であった。とりわけ、糖負荷試験開始後、１２０分間後におけるＢ群のマウスの血糖値は、Ａ群及びＤ乃至Ｆ群のいずれのマウスと比べても有意に低く（ｐ＜０．０５）、Ｃ群のマウスと比べても低い傾向が認められた（ｐ＝０．０７）。
【００５５】
実験１の糖負荷試験（飼育期間７週間目）においては、高脂肪飼料とともにα，α−トレハロースを投与したマウスにおいて、α，α−トレハロースによる血糖値の有意な低下促進作用は認められなかったけれども、飼育期間を１４週間に延長した場合には、α，α−トレハロースを投与して飼育したＢ群のマウスにおいては、Ｄ−グルコース、異性化糖、又はフラクトースを投与したＡ、Ｄ、及びＥ群のマウス、及び蒸留水を投与した対照１（Ｆ群）のマウスと比べ、α，α−トレハロースによる血糖値の有意な低下促進作用が認められた。また、Ｂ群のマウスの血糖値は、マルトースを投与したＣ群のマウスと比べても低下傾向が認められた。
【００５６】
高脂肪飼料摂取試験の期間を１４週間とした本実験結果から、マウスに比較的長期間に亘って、高脂肪飼料を摂取させる場合、α，α−トレハロースを継続的に投与すると、高脂肪飼料によりもたらされる耐糖能の低下が有意に改善されることが判明した。これは、Ｂ群のマウスにおいては、耐糖能を低下させる、高脂肪飼料によりもたらされるインスリン感受性の低下が、α，α−トレハロースにより、予防ないしは改善されたことによると判断された。
【００５７】
実験３
＜腸間膜脂肪細胞の遺伝子解析＞
Ａ．試験方法
マウスにおいて、インスリン抵抗性を惹起することが知られているＭＣＰ−１（オフィシャル遺伝子シンボルは、『Ｃｃｌ２』）遺伝子のｍＲＮＡ発現量を調べる目的で、既述の実験１において、飼育試験開始後、８週間目に採取し、保存しておいたＡ乃至Ｇ群のマウスの腸間膜脂肪組織を用いて、それら組織における腸間膜脂肪細胞のＭＣＰ−１遺伝子のｍＲＮＡ発現量を以下のようにして調べた。すなわち、各群マウスの腸間膜脂肪細胞につき、全ＲＮＡを『ＲＮｅａｓｙ Ｌｉｐｉｄ Ｔｉｓｓｕｅ Ｍｉｎｉ Ｋｉｔ』（株式会社キアゲン製）を用いて、常法にしたがって抽出し、その２μｇに、『オリゴｄＴ１２−１８プライマー』（プライマー含量２５０ｎｇ／μｌ、インビトロジェン社製）を１μｌ、１０ｍＭ−ｄＮＴＰｓ（ＧＥヘルスケア・ジャパン株式会社製）を１μｌ添加し、ＲＮａｓｅ不含有水で全量を１４μｌとし、６５℃で５分間保った後、氷上にて１分間静置し、５×１ｓｔストランド緩衝液４μｌ、０．１Ｍ−ジチオスレイトール１μｌ、『ＳｕｐｅｒＳｃｒｉｐｔ ＩＩＩ Ｒｅｖｅｒｓｅ Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔａｓｅ』（酵素活性２００単位／μｌ、インビトロジェン株式会社製）を１μｌ添加し、５０℃で３０分間、５５℃で３０分間、７０℃で１５分間順次保ってｃＤＮＡを合成した。
【００５８】
ＰＣＲ解析に必要なＭＣＰ−１遺伝子のプライマーは、常法に準じて、ジェンバンク（ＧｅｎＢａｎｋ）の『Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ Ｎｏ．ＮＭ ０１１３３３』に基づいて、『Ｐｒｉｍｅｒ ３ ソフトウェア』（スティーブ・ローゼン及びヘレン・スカレツスキーにより開発されたプライマー設計支援ソフトウェア、公式サイト「http://primer3.sourceforge.net/」から入手可能）を用いて設計し、リアルタイムＰＣＲ解析は、『Ｌｉｇｈｔ Ｃｙｃｌｅｒ ４８０ システム』（ロシュ・ダイアグノスティック株式会社製）を用いて行った。リアルタイムＰＣＲ解析における内部標準としては、サイクロフィリンＡ（ＣｙｐＡ：オフィシャル遺伝子シンボルは、『Ｐｐｉａ』）（ジェンバンクの『Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ Ｎｏ．ＮＭ ００８９０７』）遺伝子を用いた。
【００５９】
Ｂ．試験結果
図１３は、飼育試験開始後、８週間目におけるＤ−グルコース投与群（Ａ群、ｎ＝８）、α，α−トレハロース投与群（Ｂ群、ｎ＝８）、マルトース投与群（Ｃ群、ｎ＝８）、異性化糖投与群（Ｄ群、ｎ＝８）、フラクトース投与群（Ｅ群、ｎ＝８）、蒸留水投与群（Ｆ群：対照１、ｎ＝５）、及び標準飼料飼育群（Ｇ群：対照２、ｎ＝５）における、腸間膜脂肪細胞のＭＣＰ−１遺伝子のｍＲＮＡ発現量をそれぞれ、蒸留水投与群（Ｆ群：対照１、ｎ＝５）におけるＭＣＰ−１遺伝子のｍＲＮＡ発現量を１．０としたときの相対値で表したものである。図１３に示すとおり、Ａ、Ｃ、Ｅ、及びＦ群のマウスにおいては、Ｇ群（対照２）のマウスと比べ、有意（ｐ＜０．０５）に高いＭＣＰ−１遺伝子のｍＲＮＡ発現量を示した。Ｂ群及びＤ群のマウスと、対照２（Ｇ群）のマウスとの間で、ＭＣＰ−１遺伝子のｍＲＮＡ発現量に統計学上の有意差は認められなかったが、Ｂ群及びＤ群のマウスにおける、ＭＣＰ−１遺伝子のｍＲＮＡ発現量はいずれも、Ｆ群（対照１）のマウスと比べ、有意（ｐ＜０．０５）に減少していた。
【００６０】
実験１乃至３において、高脂肪飼料を用いてマウスを飼育するに際し、α，α−トレハロースを投与した場合には、α，α−トレハロースを投与しなかった場合と比べ、インスリン濃度及びＨＯＭＡ−ＩＲ値の上昇が顕著に抑制され、耐糖能が改善され、腸間膜脂肪細胞の肥大化も顕著に抑制されたこと、更には、インスリン抵抗性を誘導することが知られているＭＣＰ−１遺伝子のｍＲＮＡ発現量を抑制する傾向が示された。これらの結果から、α，α−トレハロースには、インスリン抵抗性を効果的に予防ないしは改善する作用があると判断される。
【００６１】
実験４
＜中性脂肪蓄積抑制試験＞
各種糖質による中性脂肪蓄積抑制作用を調べる実験系として、脂肪前駆細胞であるマウス３Ｔ３−Ｌ１細胞株（ＡＴＣＣ ＣＬ−１７３）を用いて下記の実験を行った。すなわち、１０％牛胎仔血清（ＦＣＳ）含有ダルベッコＭＥＭ培地（日水製薬株式会社販売、以下、単に「Ｄ−ＭＥＭ培地」と言う。）に最終濃度が２ｍｇ／ｍＬとなるようにＤ−グルコースを添加した培地を用いて、マウス３Ｔ３−Ｌ１細胞株を懸濁し、当該細胞を３×１０4個／穴の割合で、予めアテロコラーゲン（株式会社高研販売）をコーティングした２４穴プレートに播種し、３７℃、５％ＣＯ2下で３日間培養した。次いで、培養上清を、脂肪前駆細胞の分化誘導剤（デキサメタゾン０．１μｇ／ｍＬ及びインスリン１０μｇ／ｍＬ）と、糖質として、実験１で用いたと同じＤ−グルコース、α，α−トレハロース、マルトース、異性化糖、又はフラクトースを４ｍＭ含むＤ−ＭＥＭ培地と交換し、細胞を常法に従って３日間培養した。なお、糖質として、Ｄ−グルコース、α，α−トレハロース、マルトース、異性化糖、及びフラクトースを添加した系をそれぞれ、Ａ系、Ｂ系、Ｃ系、Ｄ系、及びＥ系とした。また、対照としては、分化誘導剤は添加するも、糖質は無添加の系（対照１）と、分化誘導剤及び糖質のいずれも無添加の系（対照２）とを設けた。培養終了後、Ａ乃至Ｅ系及び対照１、２の培養上清を、インスリンを濃度５μｇ／ｍＬ及びＤ−グルコースを濃度４ｍｇ／ｍＬで含むＤ−ＭＥＭ培地と交換した後、細胞を３日間培養した。その後、２日毎に、Ａ乃至Ｅ系、対照１、２の培養上清をそれぞれ、Ｄ−グルコースを濃度４ｍｇ／ｍＬ含み、分化誘導剤は含まないＤ−ＭＥＭ培地にて交換し、最初の分化誘導剤による刺激を開始してから１０日目に培養細胞における中性脂肪蓄積量を以下に示す方法により測定した。すなわち、各実験系における培養上清を除去した後、培養細胞をダルベッコ・リン酸緩衝生理食塩水（日水製薬株式会社販売、以下、単に「Ｄ−ＰＢＳ」と言う。）にて３回洗浄し、１０％ホルマリン／Ｄ−ＰＢＳにて、４℃下、１時間処理して固定し、乾燥した後、これに、染色色素である「オイルレッドＯ」を含む溶液を添加し、室温で１５分間保持して細胞を染色した。その後、各実験系における細胞を蒸留水で３回洗浄し、イソプロパノール（特級試薬級の原液）０．３ｍＬ／穴を添加して細胞内に取り込まれた染色色素を抽出し、得られた抽出液につき、染色色素の吸収波長である４９０ｎｍにおける吸光度（Ａ４９０）を測定した。対照１と対照２の吸光度差を求め、この吸光度差に対するＡ乃至Ｅ系及び対照１の吸光度（Ａ４９０）の百分率（％）を求めた。結果は図１４に示す。
【００６２】
図１４に示すとおり、Ａ乃至Ｅ系の内、Ｂ系の吸光度（Ａ４９０）は約７０％と、対照1と比べ有意（ｐ＜０．０５）に低い値を示した。これは、Ｂ系にあっては、分化誘導剤による脂肪前駆細胞の脂肪細胞への分化誘導によりもたらされる中性脂肪蓄積が、α，α−トレハロースにより有意に抑制されたことを意味する。一方、Ｄ−グルコース、マルトース、異性化糖、及びフラクトースをそれぞれ添加したＡ系及びＣ乃至Ｅ系における吸光度（Ａ４９０）は約９０％とＢ系と較べ低値を示し、しかも対照1と比べ有意差は認められなかった。これは、Ａ系及びＣ乃至Ｅ系においては、分化誘導剤による脂肪前駆細胞の脂肪細胞への分化誘導によりもたらされる中性脂肪蓄積が有意に抑制されなかったことを意味する。
【００６３】
本実験において、α，α−トレハロースは、脂肪前駆細胞の脂肪細胞への分化誘導によりもたらされる中性脂肪蓄積を有意に抑制したことから、α，α−トレハロースは、脂肪蓄積、殊に、内臓脂肪蓄積に起因するインスリン抵抗性を予防ないしは改善する作用を有する糖質であることが強く示唆される。
【００６４】
実験５
＜臨床試験＞
実験１乃至３において、マウスを用いる動物実験により、α，α−トレハロースがインスリン抵抗性を効果的に予防ないしは改善する作用を有することを認めた。また、実験４においては、培養細胞を用いての試験において、α，α−トレハロースが脂肪前駆細胞の脂肪細胞への分化誘導によりもたらされる脂肪蓄積を有意に抑制することを認めた。これらの実験結果を踏まえ、本実験においては、α，α−トレハロースがインスリン抵抗性に及ぼす影響について、ヒトを被験者とする臨床試験を行った。本臨床試験における被験者としては、閉経を迎える更年期女性を選択した。その理由は、更年期女性においては、通常、インスリン感受性を高めるエストロゲンの分泌が減少する一方、プロゲステロンによってインスリン抵抗性が上昇し、このエストロゲンの減少によって内臓脂肪がつきやすく、さらに運動不足や栄養過多になると肥満となり、インスリン抵抗性が惹起されることに鑑み、更年期女性は、本実験目的の被験者として適切であると判断したからである。より詳細には、医師の診断により、体脂肪率３０％以上の肥満と判定され、インスリン抵抗性が既に惹起されているかその予備軍と診断された更年期女性１０名（５４乃至６１歳）を無作為に２群（各群５名からなる「試験群」と「対照群」）に分け、α，α−トレハロースのインスリン抵抗性改善作用について調べた。なお、試験開始前の問診によれば、いずれの被験者も、日常的に、魚肉よりも牛・豚肉などの獣肉中心の食事を比較的多く摂るとともに、脂肪酸を比較的多く含むケーキ類、脂肪・油脂食品などを好んで食するなど、一日当たりの脂肪酸摂取量が比較的多い食習慣を有していた。
【００６５】
試験群の各被験者に対し、無水物換算でα，α−トレハロース（純度９９％以上、株式会社林原生物化学研究所製）を５乃至２０ｇ／日の範囲で６カ月間に亘って経口摂取させ、α，α−トレハロースのインスリン抵抗性に及ぼす影響について調べた。各被験者には、α，α−トレハロースを上記摂取量の範囲内で経口摂取することを条件に、α，α−トレハロースの摂取方法、摂取時間の指定はせず、各被験者毎に好みの方法、好みの時間にα，α−トレハロースを経口摂取させ、かつ、特段の食事制限を課すことなく、各自の通常の生活習慣にしたがって生活させた。なお、各被験者には、予め、１日当たり、無水物換算で２０ｇのα，α−トレハロース（無水物換算で５ｇずつ、ポーションタイプのポリエチレン製容器に収容したもの４個分に相当）を６カ月分配布し、上記摂取量の範囲内で、α，α−トレハロースを毎日経口摂取させた。試験終了後、各被験者から未使用分のα，α−トレハロースを全て回収し、各被験者毎に一日当たりのα，α−トレハロース摂取量を算出した。
【００６６】
一方、対照群の各被験者には、α，α−トレハロースを摂取させなかった以外は、試験群と同様にして、特段の食事制限を課すことなく、各自の通常の生活習慣にしたがって生活させた。試験終了後、各群の被験者全てにつき、市販の身長計（商品名『ＹＧ−２００』、株式会社ヤガミ製）を用いて身長を測定するとともに、体重、体脂肪率を市販の体重・体脂肪計（商品名『ＴＢＦ−１０２』、株式会社タニタ製）を用いて測定した。ＢＭＩは身長、体重に基づいて、常法により算出した。また、常法により、インスリン抵抗性を判断するための指標であるＨＯＭＡ−ＩＲ値を求めた。その結果を表５に示す。なお、表５には、試験開始前、予め、上記測定計を用いて測定しておいた、各群の各被験者の身長、体重、体脂肪率、ＢＭＩ、及びＨＯＭＡ−ＩＲ値を併記した。
【００６７】
【表５】
【００６８】
表５に示す試験開始前後における試験群と対照群の被験者の身長、体重、体脂肪率、ＢＭＩ、及びＨＯＭＡ−ＩＲ値を比較検討した結果、試験群及び対照群のいずれにおいても、身長、体重に有意差は認められなかった。一方、体脂肪率、ＢＭＩ値は、対照群においては有意差は認められなかったが、体脂肪率は、試験群においては有意（ｐ＜０．０５）ないしは顕著な低下が認められた。また、ＨＯＭＡ−ＩＲ値は、対照群においては、有意差は認められなかったが、試験群においては、有意（ｐ＜０．０５）な低下が認められた。しかも、試験後、試験群におけるＨＯＭＡ−ＩＲ値は、対照群と比べ有意（ｐ＜０．０５）に低い値であった。なお、試験群の各被験者は、表５に示すとおり、無水物換算でα，α−トレハロースを、一日当たり、約５乃至１６ｇの量を経口摂取していることからみて、α，α−トレハロースを摂取しなかった対照群の被験者と比べ、α，α−トレハロースを摂取した分、カロリー摂取量は多かったにも拘わらず、両群の被験者間で、体重増加に有意差が認められなかったことは、全く予期しなかった結果であった。
【００６９】
上記の結果は、体脂肪率３０％以上の肥満状態のヒトでみられる特異な現象であるか否かは定かではないとしても、肥満状態のヒトがα，α−トレハロースを上記範囲で日常的に経口摂取した場合には、体重増加を引き起こすことなく、体脂肪率、ＢＭＩが、有意ないしは顕著に低下し、ＨＯＭＡ−ＩＲ値が有意に低下すると判断される。また、上記したとおり、試験群のＨＯＭＡ−ＩＲ値が、対照群と比べ、有意に低下したという事実は、実験１乃至３で得られた動物実験結果と同様、α，α−トレハロースには、ヒトにおいてもインスリン抵抗性を効果的に予防及び／又は改善する作用を有することを如実に示すものである。また、本実験において、試験群の各被験者が一日当たり摂取したα，α−トレハロース経口摂取量は、約５乃至１６ｇであったことから、α，α−トレハロースをこの量で、又はこの量に準じてヒトに経口摂取させるか投与する場合には、ヒトにおけるインスリン抵抗性を効果的に予防及び／又は改善できると判断される。
【００７０】
実験１乃至５の結果は、ヒトを含む哺乳類が、日常的に比較的多量の高脂肪食品／飼料などを摂取するか投与される場合であっても、本発明のα，α−トレハロースを有効成分とするインスリン抵抗性の予防及び／又は改善剤を日常的に摂取させるか投与することにより、高脂肪食品／飼料によりもたらされるインスリン抵抗性を効果的に予防及び／又は改善できることを示すものである。
【００７１】
実験６
＜急性毒性試験＞
７週齢のｄｄ系マウスを用いて、実験１で用いたと同じα，α−トレハロース（純度９９％以上、株式会社林原生物化学研究所製）を経口投与して急性毒性試験を行なった。その結果、α，α−トレハロースは低毒性の物質で、投与可能な最大投与量においても死亡例は認められなかった。この結果から、α，α−トレハロースのＬＤ５０値は、５０ｇ／ｋｇマウス体重以上と判断された。
【００７２】
本実験結果から、本発明のα，α−トレハロースを有効成分とするインスリン抵抗性の予防及び／又は改善剤は、ヒトを含む哺乳類に安全かつ安心して日常的に摂取させるか投与することのできる薬剤である。
【００７３】
以下、実施例に基づいて本発明をより詳細に説明する。しかしながら、本発明は、これら実施例によりなんら限定されるものではない。
【実施例１】
【００７４】
＜インスリン抵抗性の予防及び／又は改善剤＞
無水物換算で、α，α−トレハロース（純度９９％以上、株式会社林原生物化学研究所製）５ｇを超純水９５ｍｌに溶解し、常法にしたがって精密濾過して、１００ｍｌ容ボトルに無菌的に充填して、液剤形態のインスリン抵抗性の予防及び／又は改善剤を得た。
【００７５】
本品は、取扱性、保存安定がともに性良好で、ヒト成人（体重６０ｋｇ）一日当たりの摂取量又は投与量として、通常、本品を１／５乃至４本程度、日常的に摂取することにより、高脂肪食品によりもたらされるインスリン抵抗性を効果的に予防及び／又は改善することができる。また、本品は、哺乳類に対し、日常的に摂取させるか投与することにより、高脂肪飼料によりもたらされるインスリン抵抗性を効果的に予防及び／又は改善することができる。
【実施例２】
【００７６】
＜インスリン抵抗性の予防及び／又は改善剤＞
無水物換算で、α，α−トレハロース（純度９９％以上、株式会社林原生物化学研究所製）１５０質量部をミキサーで攪拌しつつ、これにプルラン（商品名『ＰＩ−２０』、株式会社林原商事販売）を２％含有する水溶液１０質量部を均一に噴霧し、粉剤形態のインスリン抵抗性の予防及び／又は改善剤を得た。
【００７７】
本品は、取扱性、水への分散性・溶解性、保存安定性のいずれもが良好で、ヒトを含む哺乳類に対し、日常的に摂取させるか投与することにより、高脂肪食品／飼料によりもたらされるインスリン抵抗性を効果的に予防及び／又は改善することができる。
【実施例３】
【００７８】
＜インスリン抵抗性の予防及び／又は改善剤＞
無水物換算で、α，α−トレハロース（純度９９％以上、株式会社林原生物化学研究所製）９５質量部及びα−グルコシルヘスペリジン（商品名『林原ヘスペリジンＳ』、株式会社林原商事販売）５質量部とを均一に攪拌し、攪拌混合し、常法にしたがって、顆粒形成機にかけて顆粒化し、硬質カプセルに充填して、カプセル剤形態のインスリン抵抗性の予防及び／又は改善剤を得た。
【００７９】
本品は、取扱性、保存安定性が良好で、α，α−トレハロースによるインスリン抵抗性改善作用と、α−グルコシルヘスペリジンの中性脂肪低減作用とが相まって、これをヒトを含む哺乳類に対し、日常的に摂取させるか投与することにより、高脂肪食品／飼料によりもたらされるインスリン抵抗性を効果的に予防及び／又は改善することができる。
【実施例４】
【００８０】
＜インスリン抵抗性の予防及び／又は改善剤＞
無水物換算で、α，α−トレハロース（純度９９％以上、株式会社林原生物化学研究所製）１０質量部及びα−グルコシルルチン（商品名『αＧルチン』、株式会社林原商事販売）１質量部とを均一に攪拌し、混合し、常法にしたがって、打錠して、錠剤形態のインスリン抵抗性の予防及び／又は改善剤を得た。
【００８１】
本品は、取扱性、保存安定性が良好で、これをヒトを含む哺乳類に対し、日常的に摂取させるか投与することにより、高脂肪食品／飼料によりもたらされるインスリン抵抗性を効果的に予防及び／又は改善することができる。
【実施例５】
【００８２】
＜インスリン抵抗性の予防及び／又は改善剤＞
無水物換算で、α，α−トレハロース（純度９９％以上、株式会社林原生物化学研究所製）５質量部、２−Ｏ−α−Ｄ−グルコシル−Ｌ−アスコルビン酸（商品名『ＡＡ２Ｇ』、株式会社林原生物化学研究所販売）０．３質量部、及びα−グルコシルルチン（商品名『αＧルチン』、株式会社林原商事販売）１質量部を超純水７４質量部に溶解し、常法にしたがって精密濾過して、１００ｍｌ容ボトルに無菌的に充填して、液剤形態のインスリン抵抗性の予防及び／又は改善剤を得た。
【００８３】
本品は、取扱性、保存安定性良好で、ヒト成人（体重６０ｋｇ）一日当たりの摂取量又は投与量として、通常、本品を１／５乃至４本程度、日常的に摂取することにより、高脂肪食品によりもたらされるインスリン抵抗性を効果的に予防及び／又は改善することができる。
【実施例６】
【００８４】
＜インスリン抵抗性の予防及び／又は改善剤＞
無水物換算で、α，α−トレハロース（純度９９％以上、株式会社林原生物化学研究所製）２質量部、２−Ｏ−α−Ｄ−グルコシル−Ｌ−アスコルビン酸（商品名『ＡＡ２Ｇ』、株式会社林原生物化学研究所販売）１質量部、及びα−グルコシルヘスペリジン（商品名『αＧヘスペリジン』、株式会社林原商事販売）１質量部を超純水７９．５質量部に溶解し、常法にしたがって精密濾過して、５０ｍｌ容ボトルに無菌的に充填して、液剤形態のインスリン抵抗性の予防及び／又は改善剤を得た。
【００８５】
本品は、取扱性、保存安定性良好で、ヒト成人（体重６０ｋｇ）一日当たりの摂取量又は投与量として、通常、本品を１乃至５本程度、日常的に摂取することにより、高脂肪食品によりもたらされるインスリン抵抗性を効果的に予防及び／又は改善することができる。また、本品は、哺乳類に対し、日常的に摂取させるか投与することにより、高脂肪飼料によりもたらされるインスリン抵抗性を効果的に予防及び／又は改善する善することができる。
【００８６】
以下、本発明のインスリン抵抗性の予防及び／又は改善剤の適用例について参考例として述べる。
【００８７】
参考例１
＜油脂含有組成物＞
実施例２乃至４で得た本発明のインスリン抵抗性の予防及び／又は改善剤１０質量部を、パルミチン酸１０％、ステアリン酸１０％、オレイン酸１０％、及びリノール酸１０％（総脂肪酸質量４０％）含む油脂含有組成物１００質量部に配合し、容器に充填して、本発明のインスリン抵抗性の予防及び／又は改善剤を含む油脂含有組成物を得た。
【００８８】
本品は、取扱性、保存安定性が良好で、自体、インスリン抵抗性を惹起し難い油脂含有組成物である。
【００８９】
参考例２
＜食用クリーム＞
実施例２乃至４で得た本発明のインスリン抵抗性の予防及び／又は改善剤５質量部を、カカオペースト４０質量部、及びカカオバター１０質量部と混合し、レファイナーに通して粒度を下げた後、コンチェに入れ、５０℃で２昼夜練り上げる。この間に、レシチン０．５質量部を加え充分に混和し、分散させた。次いで、温度調節機で３１℃に調節し、バターが固まる直前に型に流し込み、振動機でアワ抜きを行ない、１０℃の冷却トンネルを２０分間くぐらせて固化させた。これを型抜きして包装し製品を得た。
【００９０】
本品は、取扱性、保存安定性が良好で、口中でなめらかに溶け、上品な甘味とまろやかな風味を有し、自体、インスリン抵抗性を惹起し難い食用クリームである。
【００９１】
参考例３
＜生クリーム＞
実施例１乃至６で得た本発明のインスリン抵抗性の予防及び／又は改善剤１質量部を、生クリーム５質量部に溶解し、プレートヒーターで加熱殺菌し、無菌的に缶詰して製品を得た。
【００９２】
本品は、取扱性、保存安定性が良好で、温和な甘味で、風味もよく、フルーツ、コーヒー、ココア、紅茶などの調味用に用いることのできる、自体、インスリン抵抗性を惹起し難い生クリームである。
【００９３】
参考例４
＜ハム＞
豚もも肉１，０００質量部に、食塩１５質量部、及び硝酸カリウム３質量部を均一にすり込んで、冷室に１昼夜堆積する。これを実施例１乃至６で得た本発明のインスリン抵抗性の予防及び／又は改善剤１００質量部、水５００質量部、食塩１００質量部、硝酸カリウム３質量部、及び香辛料からなる塩漬液に冷室で７日間漬け込み、次いで、常法に従い、冷水で洗浄し、ひもで巻き締め、燻煙し、クッキングし、冷却包装して製品を得た。
【００９４】
本品は、色合いもよく、風味良好で、自体、インスリン抵抗性を惹起し難いハムである。
【００９５】
参考例５
＜粉末卵黄＞
生卵から調製した卵黄をプレート式加熱殺菌機で６０乃至６４℃で殺菌し、得られる液状卵黄１質量部に対し、実施例２乃至４で得た本発明のインスリン抵抗性の予防及び／又は改善剤０．１質量部及びマルトース５質量部の割合で混合した後、バットに移し、一夜放置して、固化し、切削機にかけて粉末化し、粉末卵黄を得た。
【００９６】
本品は、取扱性、保存安定性が良好で、自体、インスリン抵抗性を惹起し難い粉末卵黄である。
【００９７】
参考例６
＜バターロールパン＞
実施例２乃至４で得た本発明のインスリン抵抗性の予防及び／又は改善剤１質量部、強力粉１１８質量部、砂糖８質量部、食塩１．７質量部、脱脂粉乳２質量部、海洋酵母（三共フーヅ（株）製）２質量部、全卵１２質量部、無塩バター１０質量部、牛乳２０質量部、水７５質量部をミキサーにかけ、２４℃で、低速６分、中速５分で混捏し、一時停止した後、更に中速で４．５分間混捏し、生地を調製した。次いで、これを醗酵（フロアータイムは５０分間）させた。生地は４０ｇに分割して丸めを行い、２０分間のベンチタイムで処理した後、４０℃、湿度８０％のホイロにて５０分間発酵させた。発酵終了後、上火２３０℃、下火２００℃のオーブンにて７分間焼成し、バターロールを調製した。
【００９８】
本品は、取扱性、保存安定性が良好で、自体、インスリン抵抗性を惹起し難いバターロールである。
【００９９】
参考例７
＜チョコレートバー＞
下記原材料を用い、常法にしたがって、大豆パフ入りチョコレートバーを製造した。
＜原材料＞
大豆パフ １３．５質量部
チョコレート用油脂 ６０．５０質量部
分離大豆蛋白質 ５．００質量部
粉末ローヤルゼリー ５．００質量部
α，α−トレハロース（純度９９％以上、 １４．６８質量部
株式会社林原生物化学研究所製）から
なる本発明のインスリン抵抗性の
予防及び／又は改善剤
ヘスペリジン ０．８５質量部
スクラロース（高甘味度甘味料） ０．１２質量部
香料 適量
【０１００】
本品は、取扱性、保存安定性が良好で、自体、インスリン抵抗性を惹起し難いチョコレートバーである。
【０１０１】
参考例８
＜バター＞
市販のバター１０質量部に、実施例２乃至４で得た本発明のインスリン抵抗性の予防及び／又は改善剤５質量部を添加し、均一に混合し、本発明のインスリン抵抗性の予防及び／又は改善剤が配合されたバターを得た。
【０１０２】
本品は、取扱性、保存安定性が良好で、自体、インスリン抵抗性を惹起し難いバターである。
【０１０３】
参考例９
＜牛脂＞
牛脂１０質量部に、実施例２乃至４で得た本発明のインスリン抵抗性の予防及び／又は改善剤５質量部を添加し、均一に混合し、本発明のインスリン抵抗性の予防及び／又は改善剤が配合された牛脂を得た。
【０１０４】
本品は、取扱性、保存安定性が良好で、自体、インスリン抵抗性を惹起し難い牛脂である。
【０１０５】
参考例１０
＜脂肪乳剤＞
本発明のα，α−トレハロース（純度９９％以上、株式会社林原生物化学研究所製）１質量部、精製ダイズ油１０質量部、濃グリセリン１．２質量部、精製卵黄レシチン１．２質量部、及び超純水２５０質量部とを均一に混合し、常法にしたがって加熱滅菌して、無菌的に３００ｍｌ容ポリエチレン製バッグに充填して、本発明のインスリン抵抗性の予防及び／又は改善剤が配合された脂肪乳剤を得た。
【０１０６】
本品は、取扱性、保存安定性が良好で、自体、インスリン抵抗性を惹起し難い脂肪乳剤である。
【０１０７】
参考例１１
＜パッケージ組体＞
実施例２乃至４で得た本発明のインスリン抵抗性の予防及び／又は改善剤１０質量部を、遮光性プラスチック製の第１の容器に収容し密閉するとともに、市販の食用菜種油１００質量部（脂肪酸組成：パルミチン酸約３％、ステアリン酸約１％、オレイン酸約１６％、リノール酸約１６％）を遮光性プラスチック製の第２の容器に収容し密閉したものを、第３の遮光性プラスチック製の容器に収容して、本発明のパッケージ組体を得た。第１の容器内に収容されたα，α−トレハロースの量は、第２の容器に収容された食用菜種油によりもたらされるインスリン抵抗性を効果的に予防及び／又は改善し得るα，α−トレハロースの量である。
【０１０８】
当該パッケージ組体の使用例として、第３の容器から、第１及び第２の容器を取り出し、それら容器内にそれぞれ収容されたα，α−トレハロースと食用菜種油の全量を取り出し、第１の容器に収容されたα，α−トレハロースを直接、又は、適量のミネラルウォーターなどに溶解し、第２の容器に収容された食用菜種油を用いて調理した料理に添加するか、或いはその前後に、複数回に分けて摂取することにより、食用菜種油によりもたらされるインスリン抵抗性を効果的に改善することができる。また、当該パッケージ組体の使用例として、第３の容器から、第１及び第２の容器を取り出し、それら容器内にそれぞれ収容されたα，α−トレハロースと食用菜種油の全量を取り出し混合し、例えば、ドレッシング用食用油として好適に用いることもできる。
【０１０９】
参考例１２乃至５５
下記表６に示す参考例１２乃至５５に列挙した高脂肪食品を、それら各食品中に含まれる脂肪酸総質量に対し、α，α−トレハロース（純度９９％以上、株式会社林原生物化学研究所製）からなる本発明のインスリン抵抗性の予防及び／又は改善剤を、無水物換算で、表６に示す配合量となるように添加して製造した。
【０１１０】
【表６】
【０１１１】
参考例１２乃至５５に示す高脂肪食品のいずれも、自体、ヒトが日常的に比較的多く摂取してもインスリン抵抗性が惹起され難い食品である。
【産業上の利用可能性】
【０１１２】
本発明のインスリン抵抗性の予防及び／又は改善剤は、所謂、現代病／生活習慣病とも言われている種々の疾患を惹起するインスリン機能不全の予防と改善の鍵を握る、インスリン抵抗性を予防及び／又は改善するための薬剤、詳細には、ヒトを含む哺乳類において、高脂肪食品／飼料によりもたらされるインスリン抵抗性を効果的に予防及び／又は改善するための薬剤であり、しかも、腸間膜脂肪細胞の肥大化を抑制し、耐糖能を改善することのできる薬剤である。当該インスリン抵抗性の予防及び／又は改善剤によれば、インスリン抵抗性を効果的に予防及び／又は改善できることから、例えば、メタボリックシンドローム、癌、アルツハイマー病、睡眠時無呼吸症候群、多のう性卵巣症候群（ＰＣＯＳ）などの疾患を改善できるのではないかと考えられる。また、当該インスリン抵抗性の予防及び／又は改善剤が有効成分とするα，α−トレハロースは、昨今、工業的に廉価かつ大量に市場に供給されている、有用で安全性の高い糖質であることから、これを有効成分とする当該インスリン抵抗性の予防及び／又は改善剤は、経済性、安全性の面からみて、ヒトを含む哺乳類に日常的に安心して摂取させるか投与することができ、しかも、工業的に廉価かつ大量に製造できる優れた実益を有する。
【０１１３】
本発明は斯くも顕著なる産業上の有用性を具備する発明であり、斯界に貢献すること誠に多大な発明である。
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ヒトを含む哺乳動物において、正常な状態と比べ、インスリンの感受性が低下し、より多くのインスリンが必要とされる状態（＝インスリン抵抗性）となるのを予防及び／又は改善するための薬剤に関するものである。より詳細には、本発明は、α，α−トレハロースを有効成分として含んでなるインスリン抵抗性の予防及び／又は改善剤、とりわけ、高脂肪食品／飼料によりもたらされるインスリン抵抗性を予防及び／又は改善するための、α，α−トレハロースを有効成分として含んでなるインスリン抵抗性の予防及び／又は改善剤に関するものである。
【背景技術】
【０００２】
インスリン抵抗性という概念は、１９３６年、エイチ・ピー・ヒムスワース（Ｈ． Ｐ． Ｈｉｍｓｗｏｒｔｈ）が提唱したもので、同氏によれば、インスリン抵抗性とは、「血中にインスリンが存在していても、標的組織である肝、筋肉、脂肪組織などにおいて十分な作用が発現できない状態」と定義されている。インスリンは、骨格筋や脂肪、肝臓で血液からの糖の吸収を促し、エネルギーを作ったり蓄えたりする働きをもつホルモンであるが、インスリン抵抗性が惹起されると、インスリンが十分存在しているにもかかわらず、その作用が鈍くなり、その結果、血糖値が下がりにくくなり、血糖値を正常に保つためにより多くのインスリンが必要となる。
【０００３】
インスリン抵抗性を惹起する最も重要な環境因子は脂肪摂取量であると言われる中、近年、食生活の欧米化に伴う変化（高脂肪食化）や交通手段の発達に伴う運動不足などにより過栄養状態となり、この状態が肥満をきたし、インスリン抵抗性を惹起している患者が急増している（非特許文献１参照）。
【０００４】
インスリン抵抗性の発現は、生体内の脂肪組織における脂肪細胞の肥大化と密接に関連している。脂肪細胞は、褐色脂肪細胞と白色脂肪細胞とに分類され、その内、後者の白色脂肪細胞は、下記メカニズムによりインスリン抵抗性を惹起すると言われている。すなわち、白色脂肪細胞は、過栄養や運動不足により中性脂肪の蓄積が進むと肥大化し、アディポネクチン（糖の取り込み、脂肪酸の燃焼亢進作用を有するホルモン）の産生量が低下し、インスリン受容体の機能を阻害するＴＮＦ−α、遊離脂肪酸（ＦＦＡ）、及びレジスチンなどの分泌が増加し、さらに、白色脂肪細胞は、中性脂肪蓄積の亢進に伴って肥大化し、インスリン抵抗性が引き起こされる（非特許文献２参照）。また、前記刊行物には、インスリン抵抗性と、メタボリックシンドローム、癌、睡眠時無呼吸症候群、糖尿病、多のう胞性卵巣症候群、アルツハイマーなどの種々の疾患の発症との関連性が述べられている。
【０００５】
このような状況下、従来、インスリン抵抗性を改善する目的で、特定のジグリセリド及び／又はモノグリセリドを含有する油脂からなるインスリン抵抗性改善剤（特許文献１参照）、レモン果実由来の親水性成分（ポリフェノール）を有効成分とするインスリン抵抗性改善剤（特許文献２参照）、γ−アミノ酪酸を有効成分とするインスリン抵抗性改善剤（特許文献３参照）、或いは、カルボン酸誘導体またはその塩を含有してなるインスリン抵抗性改善剤（特許文献４参照）など種々の報告がなされている。
【０００６】
しかしながら、上記特許文献１乃至３に記載されたインスリン抵抗性改善剤は、特定の油脂、ポリフェノール、又はγ−アミノ酪酸を有効成分とするもので、それら有効成分の入手性、取扱性には難点があった。一方、上記特許文献４に記載されたインスリン抵抗性改善剤は、カルボン酸誘導体またはその塩を有効成分とするインスリン抵抗性改善剤であって、ヒト成人（体重５０ｋｇ）に経口投与する場合、当該有効成分の投与量は、１回投与量として約０．００１〜５００ｍｇを１日１回〜３回投与することが規定された薬剤であり、ヒトを含む哺乳類に日常的に容易、安全かつ手軽に摂取させるか投与し得るものとは言い難いものであった。
【０００７】
このような状況下、ヒトを含む哺乳類に日常的に容易、安全かつ手軽に摂取させるか投与することのできるインスリン抵抗性の予防及び／又は改善剤、とりわけ、高脂肪食品／飼料によりもたらされるインスリン抵抗性を予防及び／又は改善するための新たなインスリン抵抗性の予防及び／又は改善剤が鶴首されていた。
【０００８】
なお、非特許文献２に示されるとおり、糖尿病は、１型糖尿病（インスリン依存性糖尿病）と２型糖尿病（インスリン非依存性糖尿病）とに分類され、更に、２型糖尿病は、インスリン分泌低下が原因となる糖尿病と、インスリンは分泌され、その濃度も十分高いにも拘わらず、インスリン感受性の低下が原因となって血糖値が下がらない糖尿病とに分けられており、後者の糖尿病がインスリン抵抗性と関連性を有すると言われている。
【０００９】
ちなみに、本願と同じ出願人は、α，α−トレハロースの薬理作用について研究する中、特許文献５において、１型糖尿病を誘発する薬剤であるストレプトゾトシン（ＳＴＺ）を用いる動物実験において、α，α−トレハロースに膵機能調節作用、とりわけ、糖尿病を予防する作用があることを報告した。特許文献５で報告された内容は、１型糖尿病とα，α−トレハロースとの関連性についてのものであって、α，α−トレハロースと２型糖尿病、とりわけ、血中にインスリンが存在していても、骨格筋や脂肪、肝臓で血液からの糖の吸収が十分に行われない状態、つまり、インスリン抵抗性との関連性について報告したものではない。また、本出願人と同じ出願人は、特許文献６において、糖尿病を緩和する作用を有する、有効成分としてα，α−トレハロースを含んでなる抗内分泌障害剤を報告しているものの、これは、特許文献５と同様、１型糖尿病を誘発する薬剤であるストレプトゾトシン（ＳＴＺ）を用いる動物実験において、α，α−トレハロースが、ＳＴＺによるランゲルハンス氏島β細胞の減少及び核濃縮並びにβ細胞そのものの萎縮を抑制する作用を有することに基づいて、α，α−トレハロースには、抗内分泌障害作用があることを報告したものである。したがって、特許文献６は、α，α−トレハロースと、ランゲルハンス氏島β細胞とは因果関係のないインスリン抵抗性との関連性について開示するものではない。更に、本願と同じ出願人は、特許文献７において、α，α−トレハロースをエネルギー用糖源として用いることを開示しているものの、その内容は、α，α−トレハロース自体が生体のエネルギー用糖源として利用されることについてのものであって、α，α−トレハロースとインスリン抵抗性との関連性について開示するものではない。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００１０】
【特許文献１】特開２００１−２４７４７３号公報
【特許文献２】特開２００７−６３２２１号公報
【特許文献３】特開２００８−７４７３４号公報
【特許文献４】特許第４４８４４２７号公報
【特許文献５】特開平１１−１５８０７５号公報
【特許文献６】特開２０００−７５７０号公報
【特許文献７】特許第３８７７５８９号公報
【非特許文献】
【００１１】
【非特許文献１】『インスリン抵抗性』、松澤祐次等編集、株式会社医学書院発行、第１版第２刷、１３５〜１５０頁、２００８年
【非特許文献２】『ニュー・フード・インダストリー（Ｎｅｗ Ｆｏｏｄ Ｉｎｄｕｓｔｒｙ）』、第４８巻、第１１号、１〜１４頁、２００６年
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１２】
本発明は、インスリン抵抗性を予防及び／又は改善するためのインスリン抵抗性の予防及び／又は改善剤、とりわけ、高脂肪食品／飼料によりもたらされるインスリン抵抗性を予防及び／又は改善するための、インスリン抵抗性の予防及び／又は改善剤とその用途を提供することを課題とする。
【課題を解決するための手段】
【００１３】
本発明者等は、ヒトを含む哺乳類に日常的に容易かつ安全に摂取させるか投与することのできるインスリン抵抗性の予防及び／又は改善剤、とりわけ、高脂肪食品／飼料によりもたらされるインスリン抵抗性の予防及び／又は改善剤を確立することを目的とし、各種糖質の利用に着目し、鋭意研究を続けてきた。その結果、本発明者等は、全く意外なことに、インスリン抵抗性が二糖類であるα，α−トレハロースにより有意に予防及び／又は改善されることを見出し、本発明を完成した。
【００１４】
α，α−トレハロースが、インスリン抵抗性、とりわけ、高脂肪食品／飼料によりもたらされるインスリン抵抗性を予防及び／又は改善する作用を有することを見出したのは、本発明をもって嚆矢とするものである。
【００１５】
なお、特許第３８７７５８９号公報に示されるとおり、α，α−トレハロースは、自体、これを生体に摂取させるか投与すると、カロリー源として利用されるとともに、Ｄ−グルコースと同様、血糖値やインスリンの上昇をもたらす物質であることから、斯かるα，α−トレハロースが、インスリン抵抗性を予防及び／又は改善する作用を有することなど、本発明者等自身、全く予想外のことであった。
【００１６】
すなわち、本発明は、高脂肪食品／飼料によりもたらされるインスリン抵抗性を予防及び／又は改善するための、α，α−トレハロースを有効成分として含んでなるインスリン抵抗性の予防及び／又は改善剤を提供するものである。
【００１７】
また、本発明は、インスリン抵抗性の指標であるＨＯＭＡ−ＩＲ値を有意に低下させる作用を有するインスリン抵抗性の予防及び／又は改善剤を提供するものである。
【００１８】
さらに、本発明は、α，α−トレハロースを無水物換算で１乃至２０ｇ含んでなる単位投与形態にあるインスリン抵抗性の予防及び／又は改善剤を提供するものである。
【００１９】
さらに、本発明は、α，α−トレハロースと、医薬許容性担体とからなる、インスリン抵抗性の予防及び／又は改善剤を提供するものである。
【００２０】
さらに、本発明は、腸管膜脂肪細胞（「白色脂肪細胞」に分類される脂肪細胞）の肥大化を抑制する作用を有するインスリン抵抗性の予防及び／又は改善剤を提供するものである。
【発明の効果】
【００２１】
本発明のインスリン抵抗性の予防及び／又は改善剤は、所謂、現代病／生活習慣病とも言われている種々の疾患を惹起するインスリン機能不全の予防と改善の鍵を握る、インスリン抵抗性を予防及び／又は改善するための薬剤、詳細には、ヒトを含む哺乳類において、高脂肪食品／飼料によりもたらされるインスリン抵抗性を効果的に予防及び／又は改善するための薬剤であり、しかも、腸間膜脂肪細胞の肥大化を抑制し、耐糖能を改善することのできる薬剤である。当該インスリン抵抗性の予防及び／又は改善剤によれば、インスリン抵抗性を効果的に予防及び／又は改善できることから、例えば、メタボリックシンドローム、癌、アルツハイマー病、睡眠時無呼吸症候群、多のう性卵巣症候群（ＰＣＯＳ）などの疾患を改善できるのではないかと考えられる。また、当該インスリン抵抗性の予防及び／又は改善剤が有効成分とするα，α−トレハロースは、昨今、工業的に廉価かつ大量に市場に供給されている、有用で安全性の高い糖質であることから、これを有効成分とする当該インスリン抵抗性の予防及び／又は改善剤は、経済性、安全性の面からみて、ヒトを含む哺乳類に日常的に安心して摂取させるか投与することができ、しかも、工業的に廉価かつ大量に製造できる優れた実益を有する。
【図面の簡単な説明】
【００２２】
【図１】高脂肪飼料摂取試験におけるマウスの体重変化を示す図である。
【図２】高脂肪飼料摂取試験におけるマウスの摂餌量変化を示す図である。
【図３】高脂肪飼料摂取試験におけるマウスの飲水量変化を示す図である。
【図４】高脂肪飼料摂取試験において、飼育試験開始後、７週間目における糖負荷試験結果を示す。
【図５】高脂肪飼料摂取試験において、飼育試験開始後、７週間目における糖負荷試験時のインスリン濃度の測定結果を示す。
【図６】インスリン抵抗性の指標であるＨＯＭＡ−ＩＲ値の測定結果を示す。
【図７】腸間膜脂肪細胞の面積の測定結果を示す。
【図８】腸間膜脂肪細胞の顕微鏡写真である。
【図９】高脂肪飼料摂取試験におけるマウスの体重変化を示す図である。
【図１０】高脂肪飼料摂取試験におけるマウスの摂餌量変化を示す図である。
【図１１】高脂肪飼料摂取試験におけるマウスの飲水量変化を示す図である。
【図１２】高脂肪飼料摂取試験において、飼育試験開始後、１４週間目における糖負荷試験時の血糖値の測定結果を示す。
【図１３】高脂肪飼料摂取試験において、飼育試験開始後、８週間目における腸間膜脂肪細胞のＭＣＰ−１遺伝子のｍＲＮＡ発現量を、蒸留水投与群マウスにおけるＭＣＰ−１遺伝子のｍＲＮＡ発現量を１．０としたときの相対値で示す図である。
【図１４】各種糖質による脂肪前駆細胞の脂肪細胞への分化誘導抑制作用を調べる実験において、対照１及び対照２の吸光度（Ａ４９０）差に対する、Ａ乃至Ｅ群及び対照１の吸光度（Ａ４９０）の百分率（％）を示す図である。
【発明を実施するための形態】
【００２３】
本発明で言うインスリン抵抗性の予防及び／又は改善剤とは、ヒトを含む哺乳動物に高脂肪食品／飼料を日常的に摂取させるか投与する場合にもたらされるインスリン抵抗性を予防及び／又は改善することのできる薬剤を意味する。斯かる本発明のインスリン抵抗性の予防及び／又は改善剤が有効成分とするα，α−トレハロースは、本発明の目的を逸脱しない限り、その製法、給源、由来は特に限定されることなく用いることができる。例えば、従来公知の製造方法によって得られるα，α−トレハロースは言うに及ばず、現在、市販されている、粉末状、粒状、シラップ状などの形態を有するα，α−トレハロース製品をそのまま、あるいは、それらを公知の１種又は２種以上の糖質の精製方法を適宜適用して、所望の純度にまで高めたものを適宜用いることができる。また、本発明のインスリン抵抗性の予防及び／又は改善剤が有効成分とするα，α−トレハロースの純度は、その使用形態にもよるが、本発明の目的を逸脱しない限り、純度９９質量％（以下、特に断りがない限り、「質量％」を単に「％」と略記する。）以上もの高純度のものに限定されない。なお、高純度のα，α−トレハロースとしては、α，α−トレハロース二含水結晶やα，α−トレハロース無水結晶などの結晶性α，α−トレハロースを例示できる。
【００２４】
本発明のインスリン抵抗性の予防及び／又は改善剤は、実質的にα，α−トレハロースのみからなるものであっても、あるいは、α，α−トレハロースと１種又は２種以上の他の医薬許容性の担体、例えば、水、水性媒体、着色料、着香料、糊料、増量剤、ｐＨ調整剤、賦形剤、結合剤、崩壊剤、滑沢剤、安定化剤、矯味矯臭剤、希釈剤、及び注射剤用溶剤などの担体を含む組成物であってもよい。
【００２５】
また、本発明のインスリン抵抗性の予防及び／又は改善剤に配合し得るα，α−トレハロース以外の他の成分としては、例えば、α，α−トレハロースの製造方法に起因して共存するα，α−トレハロース以外の他の糖類、さらには、蛋白質、ペプチド（グレリンなど）、アミノ酸、糖類、ポリフェノール（フラボノイド、タンニンなど）、ビタミン、ミネラル、抗菌物質、酵素、ホルモン（レプチン、レジスチン、ＧＬＰ−１、インスリンなど）、サイトカイン（アディポネクチン、ＴＮＦ−αなど）、難消化性の多糖類（プルラン、エルシナン、カラギ−ナン、セルロース、及びそれらの誘導体など）、及び高甘味度甘味料（スクラロース、アスパルテーム、サッカリン、ステビオサイドなど）などを例示できる。上記α，α−トレハロース以外の他の成分は、その１種又は２種以上を必要に応じて適宜組み合わせて、本発明のインスリン抵抗性の予防及び／又は改善剤当たり、合計で、通常、０．０１％以上９９％未満、好適には、０．１％以上９８％未満、より好適には、０．１％以上９０％未満、より更に好適には、０．１％以上８０％未満用いることができる。
【００２６】
なお、上記組み合わせの内、インスリン抵抗性改善作用を有するα，α−トレハロースと、インスリン抵抗性の程度を増大させる中性脂肪を低減する作用を有することが知られているポリフェノールとの併用は、本発明において特に好ましい組み合わせである。上記ポリフェノールの内、ナリンジン、ヘスペリジン、ルチンなどのフラボノイド、大豆イソフラボン、茶カテキン、及びそれらの酵素処理物又はグリコシル誘導体は、本発明においてはより好適に用いることができる。
【００２７】
本発明のインスリン抵抗性の予防及び／又は改善剤の形態としては、例えば、錠剤、カプセル剤、トローチ剤、舌下剤、シロップ剤、液剤、顆粒剤、散剤、粉剤、乳剤、噴霧剤、座剤、注射剤、軟膏、テープ剤、パップ剤などを例示することができる。本発明のインスリン抵抗性の予防及び／又は改善剤の形態が、シロップ剤、液剤などの液状である場合、当該インスリン抵抗性の予防及び／又は改善剤のｐＨは、通常、３乃至９、好適には、６乃至８の範囲とする。
【００２８】
当該インスリン抵抗性の予防及び／又は改善剤の摂取量又は投与量に関し、当該インスリン抵抗性の予防及び／又は改善剤を、例えば、ヒトに適用する場合、後述する実験１乃至６の結果から判断して、当該インスリン抵抗性の予防及び／又は改善剤が有効成分とするα，α−トレハロースを、無水物換算で、ヒト成人（体重６０ｋｇ）一日当たり、通常、１乃至２０ｇ、好適には、３乃至１８ｇ、より好適には、５乃至１６ｇの範囲で摂取させるか投与する。なお、上記範囲の下限を下回る場合には、本発明の所期の作用効果が著しく低減するか発揮されなくなる。また、上記範囲の上限を上回る場合には、本発明の所期の作用効果がさほど変わらないか、むしろ、α，α−トレハロースによる好ましくない血糖値の上昇や血中インスリン濃度の上昇を招く恐れがあることから推奨されない。
【００２９】
本発明のインスリン抵抗性の予防及び／又は改善剤は、その所望量をヒトを含む哺乳類（犬、猫、ウサギ、マウス、ラット、ハムスター、リスなどの愛玩動物、馬、牛、豚、羊、山羊、鶏などの家畜・家禽、更には類人猿などへ、経口的又は非経口的に摂取させるか投与することにより、インスリン抵抗性、とりわけ、高脂肪食品／飼料によりもたらされるインスリン抵抗性を効果的に予防及び／又は改善することができる。
【００３０】
また、本発明のインスリン抵抗性の予防及び／又は改善剤を高脂肪食品／飼料によりもたらされるインスリン抵抗性を予防及び／又は改善するために用いる場合には、当該インスリン抵抗性の予防及び／又は改善剤の有効成分であるα，α−トレハロースを無水物換算で、当該高脂肪食品／飼料中に含まれる脂肪酸総質量に対し、通常、１乃至５０質量％、好適には、５乃至４０質量％、より好適には、５乃至３０質量％、更に好適には、５乃至２０質量％、より更に好適には、５乃至１５質量％の割合となるように、ヒトを含む哺乳動物に摂取させるか投与することにより、当該高脂肪食品／飼料によりもたらされるインスリン抵抗性を効果的に予防及び／又は改善することができる。
【００３１】
本発明で言う高脂肪食品とは、所謂、脂肪・油脂を比較的多く含む食品全般を意味し、それら各食品当たり、脂肪酸を合計で、通常、５％以上１００％未満、狭義には、１０％以上１００％未満、より狭義には、１５％以上１００％未満、更に狭義には、２０％以上１００％未満、より更に狭義には、３０％以上１００％未満含む食品を意味する。本発明で言う脂肪酸とは、飽和脂肪酸、不飽和一価脂肪酸、及び不飽和多価脂肪酸を意味し、その具体例としては、ミリスチン酸、ミリストレイン酸、ペンタデカン酸、パルミチン酸、パルミトレイン酸、ヘプタデカン酸、ヘプタデセン酸、ステアリン酸、オレイン酸、リノール酸、リノレン酸、アラキジン酸、イコセン酸、ベヘン酸、ドコサヘキサエン酸などを例示できる。上記脂肪酸の中でも、パルミチン酸、ステアリン酸、オレイン酸、及びリノール酸は、高脂肪食品／飼料中に、通常、他の脂肪酸と比べより多く含まれている。殊に、脂肪酸組成で、パルミチン酸、ステアリン酸、オレイン酸、及びリノール酸含有量の高い高脂肪食品／飼料によりもたらされるインスリン抵抗性は、本発明のインスリン抵抗性の予防及び／又は改善剤によれば効果的に改善される。なお、上記脂肪酸は、斯界において公知の方法により定量することができる。その代表的な定量方法としては、例えば、『栄養表示基準（平成８年５月厚生省告示第１４６号）』における栄養成分等の分析方法等（栄養表示基準別第１の第３欄に掲げる方法）に添付された別添資料の６〜９頁に記載された方法を例示できる。
【００３２】
本発明で言う高脂肪食品の具体例としては、自体、加工食品材料として用いられる、牛肉、豚肉、馬肉、羊肉、鶏肉、魚肉、魚卵（タラコ、数の子、ブリ、イクラ）、魚油（イワシ油、ニシン油、マグロ油、カツオ油、サンマ油、メンハーデン油など）、肝油、魚油、魚粕、骨油、牛脂、豚脂、馬脂、シア脂、魚油エキス、家禽卵（鶏卵、鶉卵など）、牛乳、アボカド油、あまに油、オリーブ油、カカオ脂、からし油、きり油、こめ油、サフラワー油、大豆油、とうもろこし油、菜種油、パーム油、パーム核油、ひまし油、ぶどう種子油、ホホバ油、綿実油、やし油、落花生油、カポック油、ごま油、けし油、ひまわり油など、さらには、上記加工食品材料を用いて製造される加工食品、例えば、畜肉・魚肉加工品（ハム、ソーセージ、ベーコン、フライドチキンなど）、乳製品（ヨーグルトなどの発酵乳製品を含む）、パン、ケーキ、菓子類（チョコレート、クッキー、クラッカー、ドーナツなど）、ハンバーグ、ハンバーガー、バター、マーガリン、マヨネーズ、ドレッシング、アイスクリーム、油脂粉乳、中華料理、ラーメン、即席麺（即席ラーメンなど）、スープ、天ぷら、フライ、油揚げなどの食品を例示できる。なお、上記高脂肪食品の内、パルミチン酸、ステアリン酸、オレイン酸、及びリノール酸を合計で、当該高脂肪食品当たり、通常、５％以上１００％未満、厳密には、１０％以上１００％未満、より厳密には、１５％以上１００％未満、更に厳密には、２０％以上１００％未満、より更に厳密には、３０％以上１００％未満含む高脂肪食品は、本発明のインスリン抵抗性の予防及び／又は改善剤により、それら食品によりもたらされるインスリン抵抗性が効果的に予防及び／又は改善剤される食品である。上記高脂肪食品をヒトが摂取する前、後、及び／又は、摂取中に本発明のインスリン抵抗性の予防及び／又は改善剤の所定量をヒトに摂取させる場合には、上記高脂肪食品を比較的多量、日常的に摂取する場合であっても、上記高脂肪食品によりもたらされるインスリン抵抗性を一層効果的に予防及び／又は改善することができる。また、本発明で言う高脂肪飼料とは、上記した高脂肪食品と同様、高脂肪飼料当たり、脂肪酸を合計で、通常、５％以上１００％未満、厳密には、１０％以上１００％未満、より厳密には、１５％以上１００％未満、更に厳密には、２０％以上１００％未満、より更に厳密には、３０％以上１００％未満含む高脂肪飼料を意味する。
【００３３】
本発明のインスリン抵抗性の予防及び／又は改善剤の流通形態として、例えば、インスリン抵抗性を改善するために用いられる趣旨の表示を付した容器又は包装体内に収容されるか、インスリン抵抗性を予防及び／又は改善するとともに、腸間膜脂肪細胞の肥大化を抑制し、及び／又は、インスリン抵抗性により引き起こされる耐糖能（＝負荷したＤ−グルコースに対して生体が示す代謝能力を指す。）の低下を改善するために用いられる趣旨の表示を付した容器又は包装体内に収容されたものを例示できる。
【００３４】
このように、本発明のインスリン抵抗性の予防及び／又は改善剤によれば、インスリン抵抗性、とりわけ、高脂肪食品／飼料によりもたらされるインスリン抵抗性を効果的に予防及び／又は改善できる。また、本発明のインスリン抵抗性の予防及び／又は改善剤によれば、インスリン抵抗性を効果的に予防及び／又は改善できることから、インスリン抵抗性と関連性を有する、例えば、メタボリックシンドローム、癌、睡眠時無呼吸症候群、多のう胞性卵巣症候群、アルツハイマーなどの疾患を改善することができるのではないかと考えられる。
【００３５】
以下、実験に基づいて本発明をより詳細に説明する。
【００３６】
実験１
＜高脂肪飼料摂取試験＞
Ａ．試験方法
Ｃ５７ＢＬ／６Ｎ雌マウス（７週齢：日本チャールス・リバー株式会社から購入）５０匹を無作為に一群８匹からなるＡ乃至Ｅ群、及び一群５匹からなるＦ群及びＧ群に分けた。Ａ乃至Ｅ群のマウスは、飼育飼料として、糖尿病・肥満研究用高脂肪飼料（『Ｈｉｇｈ Ｆａｔ Ｄｉｅｔ ３２（ＨＦＤ３２）』、日本クレア株式会社製）（以下、単に、「高脂肪飼料」と言う。）［一般成分値、配合組成、及び脂肪酸含量は、下記（１）参照］を用いて飼育するとともに、飲用水として、Ａ群のマウスにはＤ−グルコース（純度９８％、和光純薬工業株式会社製）を、Ｂ群のマウスにはα，α−トレハロース（純度９９％以上、株式会社林原生物化学研究所製）を、Ｃ群のマウスにはマルトース（純度９７％、三和澱粉工業株式会社製）、Ｄ群のマウスには、異性化糖（商品名『ハイフラクトＭ７５』、フラクトース含量約６０％、Ｄ−グルコース含量約４０％、日本コーンスターチ株式会社製）を、また、Ｅ群のマウスにはフラクトース（純度９８％、株式会社林原製）をそれぞれ蒸留水に無水物換算で、濃度２．５％（ｗ／ｖ）含むように溶解した糖質含有水溶液［下記（２）参照］を用いて飼育した。なお、対照１（Ｆ群）として、飲用水として、糖質含有水溶液に代えて蒸留水を用いた以外は、Ａ乃至Ｅ群のマウスと同様にして飼育する群を設けた。また、対照２（Ｇ群）として、飼育飼料として、高脂肪飼料に代えて標準飼料（商品名『ＮＭＦ』、オリエンタル酵母工業株式会社製）（以下、単に、「標準飼料」と言う。）［一般成分値は、下記（３）参照］を用い、飲用水として、前記糖質含有水溶液に代えて蒸留水を用いた以外は、Ａ乃至Ｅ群のマウスと同様にして飼育する群を設けた。飼育試験期間中、定期的に各群マウスの体重、摂餌量、及び飲水量を測定した。飼育試験開始後、７週間目に耐糖能を評価するためのＤ−グルコース負荷試験（糖負荷試験）［下記（４）参照］を行い、各群マウスの血糖値、インスリン濃度、及び空腹時の血糖値とインスリン濃度に基づいて算出されるインスリン抵抗性の指標である、ＨＯＭＡ−ＩＲ（「ＨＯＭＡ−Ｒ」とも言う。）（Ｈｏｍｅｏｓｔａｓｉｓ Ｍｏｄｅｌ Ａｓｓｅｓｓｍｅｎｔ − Ｉｎｓｕｌｉｎ Ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ）値（＝｛［空腹時の血糖値（ｍｇ／ｄｌ）］×［空腹時のインスリン濃度（μＵ／ｍｌ）］／４０５｝の計算式により算出される。）を常法により調べた。なお、ＨＯＭＡ−ＩＲ値は、インスリン抵抗性が高いほど高値を示す。ちなみに、ヒトにおいて、正常者のＨＯＭＡ−ＩＲ値は１．６以下は正常、２．５以上のときインスリン抵抗性ありとされている（『糖尿病学 基礎と臨床』、門脇孝等編集、西村書店出版、初版、４２７〜４３０頁、２００７年参照）。また、Ａ乃至Ｇ群のマウスについてそれぞれ、飼育試験開始後、８週間目にエーテル麻酔下で腹部大静脈から全採血するとともに、腸間膜脂肪組織を採取し、その一部を後述する実験３で行う腸間膜脂肪細胞の遺伝子解析用試料として、試験に供するまで−８０℃で凍結保存した。一方、採取した残りの腸間膜脂肪組織の一部を常法にしたがってホルマリン固定し、ヘマトキシリン・エオジン（ＨＥ）標本を作成した。ＨＥ標本それぞれにつき、光学顕微鏡（倍率２００倍）を用いて、無作為に５視野の写真を撮影し、０．２６７ｍｍ２（１視野の面積）当たりの腸間膜脂肪細胞数をカウントし、その面積を細胞数で除した数値を腸間膜脂肪細胞面積とした。
【００３７】
高脂肪飼料の一般成分値、配合組成、及び脂肪酸含量：
【００３８】
【表１】
【００３９】
【表２】
【００４０】
【表３】
【００４１】
（２）糖質含有水溶液の調製：
既述のＤ−グルコース、α，α−トレハロース、マルトース、異性化糖又はフラクトースを無水物換算で濃度２．５％（ｗ／ｖ）含むように蒸留水に溶解して調製した。
【００４２】
（３）標準飼料の一般成分値：
【００４３】
【表４】
【００４４】
（４）Ｄ−グルコース負荷試験（糖負荷試験）：
１．糖負荷試験前日の夕方から絶食させ、蒸留水だけを摂取させる。
２．空腹時の血糖値を調べるために、糖負荷前に眼底静脈から採血する。
３．投与量が２ｇ／ｋｇマウス体重となるように、Ｄ−グルコース溶液（濃度０．４ｇ／ｍｌ）を胃ゾンデを用いて経口投与する。
４．Ｄ−グルコース投与後、３０、６０及び１２０分間経過後に眼底静脈からヘマトクリット管で採血し、採血チューブに血液を移し採り、血清を分離するまで氷冷しておく。
５．血液を４℃で遠心分離（１０，０００ｒｐｍ）し、得られた血清の血糖値を『グルコースＣＩＩテストワコー』（和光純薬工業株式会社製）にて測定する。
【００４５】
Ｂ．試験結果
図１乃至３は、Ｄ−グルコース投与群（Ａ群、ｎ＝８）、α，α−トレハロース投与群（Ｂ群、ｎ＝８）、マルトース投与群（Ｃ群、ｎ＝８）、異性化糖投与群（Ｄ群、ｎ＝８）、フラクトース投与群（Ｅ群、ｎ＝８）、蒸留水投与群（Ｆ群：対照１、ｎ＝５）、及び標準飼料飼育群（Ｇ群：対照２、ｎ＝５）のマウスの試験期間中における体重、摂餌量、及び飲水量変化（各群マウスの平均値）をそれぞれ示す。図１乃至３に示すとおり、試験期間中、Ａ乃至Ｆ群のマウスにおいては、体重、摂餌量、飲水量変化に有意差は認められなかった。Ｇ群のマウスにおいては、Ａ乃至Ｆ群のマウスと比べ、摂餌量に有意差は認められなかったが、飲水量は多く、体重増加は少なかった。なお、図２の結果から、Ａ乃至Ｆ群のマウスは高脂肪飼料（脂肪酸総量３１．９％）を約２乃至３ｇ／日／匹摂取したことから、それらマウスは脂肪酸をその総量で約０．６乃至１ｇ／日／匹、摂取したことがわかる。一方、図３の結果から、Ａ乃至Ｆ群のマウスは水（Ｄ−グルコース、α，α−トレハロース、マルトース、異性化糖、又はフラクトース濃度２．５％（ｗ／ｖ））を約２乃至３ｇ／日／匹、摂取したことから、それらマウスは、Ｄ−グルコース、α，α−トレハロース、マルトース、異性化糖、又はフラクトースを約０．０５乃至０．０８ｇ／日／匹、摂取したことがわかる。つまり、Ｄ−グルコース、α，α−トレハロース、マルトース、異性化糖、又はフラクトースは、マウスが摂取した脂肪酸総量に対し、約５乃至１３％投与されたことを意味する。
【００４６】
図４は、飼育試験開始後、７週間目に耐糖能を評価するために行なったＤ−グルコース負荷試験（糖負荷試験）結果（各群マウスの平均値）を示す。図４に示すとおり、糖負荷試験開始直前（０分）の空腹時の血糖値は、高脂肪飼料で飼育したマウス［Ａ乃至Ｅ群のマウス（各群ｎ＝８）及びＦ群のマウス（ｎ＝５）］、及び標準飼料で飼育した対照２のマウス［Ｇ群のマウス（ｎ＝５）］との間に差は認められなかったが、糖負荷試験開始後、１２０分間に亘り、高脂肪飼料で飼育したマウス（Ａ乃至Ｆ群のマウス）の血糖値は、標準飼料で飼育した対照２（Ｇ群）のマウスと比べ高かった。また、Ａ乃至Ｆ群のマウスにおいて、糖負荷試験開始後、３０〜６０分後には、幾分、血糖値に差を認めたものの、糖負荷試験開始後、１２０分後には、各群のマウスに有意差は認められなかった。
【００４７】
図５は、インスリン濃度の測定結果（各群マウスの平均値）を示す。図５に示すとおり、高脂肪飼料で飼育したマウス［Ａ乃至Ｅ群のマウス（各群ｎ＝８）及びＦ群のマウス（ｎ＝５）］のインスリン濃度は、標準飼料で飼育した対照２（Ｇ群、ｎ＝５）のマウスと比べ高かった。また、α，α−トレハロース投与群（Ｂ群）のマウスの空腹時インスリン濃度は、Ａ群及びＣ群のマウスと比べ、有意に低い値を示した（ｐ＜０．０５）。また、Ｂ群のマウスのインスリン濃度は、糖負荷試験開始後、０〜６０分間に亘り、Ａ群及びＣ乃至Ｆ群のいずれのマウスと比べても明らかに低い値を示した。
【００４８】
図６は、飼育試験開始後、７週間目に行なった、インスリン抵抗性の指標であるＨＯＭＡ−ＩＲ値の測定結果（各群マウスの平均値）を示す。図６に示すとおり、α，α−トレハロース投与群（Ｂ群、ｎ＝８）のマウスのＨＯＭＡ−ＩＲ値は、マルトース投与群（Ｃ群、ｎ＝８）のマウスと比べ有意に低い値を示し（ｐ＜０．０５）、Ｄ−グルコース投与群（Ａ群、ｎ＝８）のマウスに比べ低い傾向を示した（ｐ＝０．１１）。また、α，α−トレハロース投与群（Ｂ群）のマウスのＨＯＭＡ−ＩＲ値は、異性化糖投与群（Ｄ群、ｎ＝８）、フラクトース投与群（Ｅ群、ｎ＝８）、及び蒸留水投与群（Ｆ群：対照１、ｎ＝５）のいずれのマウスと比べても明らかに低い値を示した。
【００４９】
図７は、腸間膜脂肪細胞面積の測定結果（各群マウスの平均値）を示す。図７に示すとおり、高脂肪飼料で飼育したマウス［Ａ乃至Ｅ群のマウス（各群ｎ＝８）及びＦ群のマウス（ｎ＝５）］の腸間膜脂肪細胞面積は、標準飼料で飼育した対照２（Ｇ群、ｎ＝５）のマウスと比べ明らかに大きかった。しかしながら、α，α−トレハロース投与群（Ｂ群）のマウスの腸間膜脂肪細胞面積は、Ｄ−グルコース投与群（Ａ群）、マルトース投与群（Ｃ群）、異性化糖投与群（Ｄ群）、及びフラクトース投与群（Ｅ群）のマウスと比べ有意に小さかった（ｐ＜０．０５）。また、α，α−トレハロース投与群（Ｂ群）のマウスの腸間膜脂肪細胞面積は、蒸留水投与群（Ｆ群）のマウスと比べても明らかに小さかった。
【００５０】
図８は、腸間膜脂肪細胞の顕微鏡写真（各群マウスの代表例）である。図８に示すとおり、Ｄ−グルコース投与群（Ａ群、ｎ＝８）、マルトース投与群（Ｃ群、ｎ＝８）、異性化糖投与群（Ｄ群、ｎ＝８）、フラクトース投与群（Ｅ群、ｎ＝８）、及び蒸留水投与群（Ｆ群：対照１、ｎ＝５）のマウスの腸間膜脂肪細胞は、対照２（Ｇ群、ｎ＝５）のマウスと比べ著しく肥大化していた。しかしながら、α，α−トレハロース投与群（Ｂ群）のマウスの腸間膜脂肪細胞は、対照２（Ｇ群）のマウスと比べると幾分肥大化は認められたものの、Ａ群及びＣ乃至Ｆ群のマウスと比べ肥大化は著しく抑制されていた。
【００５１】
本実験において、Ａ群及びＣ乃至Ｆ群のマウスに見られるとおり、マウスを高脂肪飼料で飼育すると、糖負荷試験における血糖値及びインスリン濃度、及びＨＯＭＡ−ＩＲ値が著しく上昇し、腸間膜脂肪細胞が著しく肥大化するのに対し、Ｂ群のマウスに見られるとおり、高脂肪飼料とともにα，α−トレハロースを投与したときには、糖負荷試験におけるインスリン濃度、及びＨＯＭＡ−ＩＲ値の上昇が顕著に抑制されるとともに、腸間膜脂肪細胞の肥大化が顕著に抑制されることが判明した。殊に、図４及び図５に示すとおり、高脂肪飼料で飼育したマウスの血糖値とインスリン濃度は、標準飼料で飼育したマウスの血糖値とインスリン濃度と比べ高かった。これは、高脂肪飼料で飼育したマウスにおいては、標準飼料で飼育したマウスと比べ、高脂肪飼料によりもたらされる血糖値の上昇を低下させるために、より多くのインスリンが要求されていたことを示している。このような状況下、高脂肪飼料で飼育したマウスの内、α，α−トレハロースを投与したマウスにおいては、α，α−トレハロース以外の他の糖質を投与したマウスと比べ、インスリン濃度は、有意ないしは明らかに低い値を示したことから、α，α−トレハロースを投与したマウスにおいては、α，α−トレハロース以外の他の糖質を投与したマウスと比べ、血糖値を下げるために要求されるインスリンの量が少ない状態、つまり、インスリン感受性が高い状態にあったと判断される。本実験結果は、α，α−トレハロースがインスリン抵抗性を効果的に予防ないしは改善する作用を有することを示すものである。
【００５２】
実験２
＜高脂肪飼料摂取試験＞
Ａ．試験方法
実験１で行った高脂肪飼料摂取試験の期間を８週間から１４週間に延長した以外は実験１と同様にして、Ｄ−グルコース投与群（Ａ群、ｎ＝８）、α，α−トレハロース投与群（Ｂ群、ｎ＝８）、マルトース投与群（Ｃ群、ｎ＝８）、異性化糖投与群（Ｄ群、ｎ＝８）、フラクトース投与群（Ｅ群、ｎ＝８）、飲用水として糖質含有水溶液に代えて蒸留水を用いた以外は、Ａ乃至Ｅ群のマウスと同様にして飼育する対照１（Ｆ群、ｎ＝５）、及び飼育飼料として、実験１で用いたと同じ標準飼料を用い、飲用水として、糖質含有水溶液に代えて蒸留水を用いた以外は、Ａ乃至Ｅ群のマウスと同様にして飼育する対照２（Ｇ群、ｎ＝５）を設けた。飼育試験開始後、１４週間目に、実験１と同様にして、耐糖能を評価するためのＤ−グルコース負荷試験を行った。なお、飼育試験期間中、定期的に各群マウスの体重、摂餌量、及び飲水量を測定した。
【００５３】
Ｂ．試験結果
図９乃至１１は、Ｄ−グルコース投与群（Ａ群、ｎ＝８）、α，α−トレハロース投与群（Ｂ群、ｎ＝８）、マルトース投与群（Ｃ群、ｎ＝８）、異性化糖投与群（Ｄ群、ｎ＝８）、フラクトース投与群（Ｅ群、ｎ＝８）、蒸留水投与群（Ｆ群：対照１、ｎ＝５）、及び標準飼料飼育群（Ｇ群：対照２、ｎ＝５）のマウスの試験期間中における体重、摂餌量、及び飲水量変化（各群マウスの平均値）をそれぞれ示す。図９乃至１１に示されるとおり、試験期間中、Ａ乃至Ｅ群のマウス間において、体重、摂餌量、及び飲水量変化に有意差は認められなかった。また、Ｆ群のマウスの摂餌量は、Ａ乃至Ｅ群のマウスよりやや多く、飲水量はやや少なかった。Ｇ群のマウスにおいては、Ａ乃至Ｆ群のマウスと比べ、摂餌量に有意差は認められなかったが、飲水量は多く、体重増加は少なかった。なお、図１０の結果から、Ａ乃至Ｆ群のマウスは高脂肪飼料（脂肪酸総量３１．９％）を約２．２乃至３．２ｇ／日／匹摂取したことから、それらマウスは脂肪酸をその総量で約０．７乃至１ｇ／日／匹、摂取したことがわかる。一方、図１２の結果から、Ａ乃至Ｆ群のマウスは水（Ｄ−グルコース、α，α−トレハロース、マルトース、異性化糖、又はフラクトース濃度２．５％（ｗ／ｖ））を約１．５乃至３ｇ／日／匹、摂取したことから、それらマウスは、Ｄ−グルコース、α，α−トレハロース、マルトース、異性化糖、又はフラクトースを約０．０４乃至０．０８ｇ／日／匹、摂取したことがわかる。つまり、Ｄ−グルコース、α，α−トレハロース、マルトース、異性化糖、又はフラクトースは、マウスが摂取した脂肪酸総量に対し、約５乃至１１％投与されたことを意味する。
【００５４】
図１２は、飼育試験開始後、１４週間目に耐糖能を評価するために行なったＤ−グルコース負荷試験（糖負荷試験）結果（各群マウスの平均値）を示す。図１２に示すとおり、高脂肪飼料で飼育したＡ乃至Ｆ群のマウス［Ａ乃至Ｅ群のマウス（各群ｎ＝８）及びＦ群のマウス（ｎ＝５）］の血糖値は、標準飼料で飼育したＧ群（対照２、ｎ＝５）のマウスと比べ高かった。また、高脂肪飼料で飼育したＡ乃至Ｆ群のマウスの内、α，α−トレハロースを投与したＢ群のマウスの血糖値は、糖負荷試験開始後、３０〜１２０分間の全期間に亘って、Ａ群及びＣ乃至Ｆ群のマウスと比べ低い値であった。とりわけ、糖負荷試験開始後、１２０分間後におけるＢ群のマウスの血糖値は、Ａ群及びＤ乃至Ｆ群のいずれのマウスと比べても有意に低く（ｐ＜０．０５）、Ｃ群のマウスと比べても低い傾向が認められた（ｐ＝０．０７）。
【００５５】
実験１の糖負荷試験（飼育期間７週間目）においては、高脂肪飼料とともにα，α−トレハロースを投与したマウスにおいて、α，α−トレハロースによる血糖値の有意な低下促進作用は認められなかったけれども、飼育期間を１４週間に延長した場合には、α，α−トレハロースを投与して飼育したＢ群のマウスにおいては、Ｄ−グルコース、異性化糖、又はフラクトースを投与したＡ、Ｄ、及びＥ群のマウス、及び蒸留水を投与した対照１（Ｆ群）のマウスと比べ、α，α−トレハロースによる血糖値の有意な低下促進作用が認められた。また、Ｂ群のマウスの血糖値は、マルトースを投与したＣ群のマウスと比べても低下傾向が認められた。
【００５６】
高脂肪飼料摂取試験の期間を１４週間とした本実験結果から、マウスに比較的長期間に亘って、高脂肪飼料を摂取させる場合、α，α−トレハロースを継続的に投与すると、高脂肪飼料によりもたらされる耐糖能の低下が有意に改善されることが判明した。これは、Ｂ群のマウスにおいては、耐糖能を低下させる、高脂肪飼料によりもたらされるインスリン感受性の低下が、α，α−トレハロースにより、予防ないしは改善されたことによると判断された。
【００５７】
実験３
＜腸間膜脂肪細胞の遺伝子解析＞
Ａ．試験方法
マウスにおいて、インスリン抵抗性を惹起することが知られているＭＣＰ−１（オフィシャル遺伝子シンボルは、『Ｃｃｌ２』）遺伝子のｍＲＮＡ発現量を調べる目的で、既述の実験１において、飼育試験開始後、８週間目に採取し、保存しておいたＡ乃至Ｇ群のマウスの腸間膜脂肪組織を用いて、それら組織における腸間膜脂肪細胞のＭＣＰ−１遺伝子のｍＲＮＡ発現量を以下のようにして調べた。すなわち、各群マウスの腸間膜脂肪細胞につき、全ＲＮＡを『ＲＮｅａｓｙ Ｌｉｐｉｄ Ｔｉｓｓｕｅ Ｍｉｎｉ Ｋｉｔ』（株式会社キアゲン製）を用いて、常法にしたがって抽出し、その２μｇに、『オリゴｄＴ１２−１８プライマー』（プライマー含量２５０ｎｇ／μｌ、インビトロジェン社製）を１μｌ、１０ｍＭ−ｄＮＴＰｓ（ＧＥヘルスケア・ジャパン株式会社製）を１μｌ添加し、ＲＮａｓｅ不含有水で全量を１４μｌとし、６５℃で５分間保った後、氷上にて１分間静置し、５×１ｓｔストランド緩衝液４μｌ、０．１Ｍ−ジチオスレイトール１μｌ、『ＳｕｐｅｒＳｃｒｉｐｔ ＩＩＩ Ｒｅｖｅｒｓｅ Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔａｓｅ』（酵素活性２００単位／μｌ、インビトロジェン株式会社製）を１μｌ添加し、５０℃で３０分間、５５℃で３０分間、７０℃で１５分間順次保ってｃＤＮＡを合成した。
【００５８】
ＰＣＲ解析に必要なＭＣＰ−１遺伝子のプライマーは、常法に準じて、ジェンバンク（ＧｅｎＢａｎｋ）の『Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ Ｎｏ．ＮＭ ０１１３３３』に基づいて、『Ｐｒｉｍｅｒ ３ ソフトウェア』（スティーブ・ローゼン及びヘレン・スカレツスキーにより開発されたプライマー設計支援ソフトウェア、公式サイト「http://primer3.sourceforge.net/」から入手可能）を用いて設計し、リアルタイムＰＣＲ解析は、『Ｌｉｇｈｔ Ｃｙｃｌｅｒ ４８０ システム』（ロシュ・ダイアグノスティック株式会社製）を用いて行った。リアルタイムＰＣＲ解析における内部標準としては、サイクロフィリンＡ（ＣｙｐＡ：オフィシャル遺伝子シンボルは、『Ｐｐｉａ』）（ジェンバンクの『Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ Ｎｏ．ＮＭ ００８９０７』）遺伝子を用いた。
【００５９】
Ｂ．試験結果
図１３は、飼育試験開始後、８週間目におけるＤ−グルコース投与群（Ａ群、ｎ＝８）、α，α−トレハロース投与群（Ｂ群、ｎ＝８）、マルトース投与群（Ｃ群、ｎ＝８）、異性化糖投与群（Ｄ群、ｎ＝８）、フラクトース投与群（Ｅ群、ｎ＝８）、蒸留水投与群（Ｆ群：対照１、ｎ＝５）、及び標準飼料飼育群（Ｇ群：対照２、ｎ＝５）における、腸間膜脂肪細胞のＭＣＰ−１遺伝子のｍＲＮＡ発現量をそれぞれ、蒸留水投与群（Ｆ群：対照１、ｎ＝５）におけるＭＣＰ−１遺伝子のｍＲＮＡ発現量を１．０としたときの相対値で表したものである。図１３に示すとおり、Ａ、Ｃ、Ｅ、及びＦ群のマウスにおいては、Ｇ群（対照２）のマウスと比べ、有意（ｐ＜０．０５）に高いＭＣＰ−１遺伝子のｍＲＮＡ発現量を示した。Ｂ群及びＤ群のマウスと、対照２（Ｇ群）のマウスとの間で、ＭＣＰ−１遺伝子のｍＲＮＡ発現量に統計学上の有意差は認められなかったが、Ｂ群及びＤ群のマウスにおける、ＭＣＰ−１遺伝子のｍＲＮＡ発現量はいずれも、Ｆ群（対照１）のマウスと比べ、有意（ｐ＜０．０５）に減少していた。
【００６０】
実験１乃至３において、高脂肪飼料を用いてマウスを飼育するに際し、α，α−トレハロースを投与した場合には、α，α−トレハロースを投与しなかった場合と比べ、インスリン濃度及びＨＯＭＡ−ＩＲ値の上昇が顕著に抑制され、耐糖能が改善され、腸間膜脂肪細胞の肥大化も顕著に抑制されたこと、更には、インスリン抵抗性を誘導することが知られているＭＣＰ−１遺伝子のｍＲＮＡ発現量を抑制する傾向が示された。これらの結果から、α，α−トレハロースには、インスリン抵抗性を効果的に予防ないしは改善する作用があると判断される。
【００６１】
実験４
＜中性脂肪蓄積抑制試験＞
各種糖質による中性脂肪蓄積抑制作用を調べる実験系として、脂肪前駆細胞であるマウス３Ｔ３−Ｌ１細胞株（ＡＴＣＣ ＣＬ−１７３）を用いて下記の実験を行った。すなわち、１０％牛胎仔血清（ＦＣＳ）含有ダルベッコＭＥＭ培地（日水製薬株式会社販売、以下、単に「Ｄ−ＭＥＭ培地」と言う。）に最終濃度が２ｍｇ／ｍＬとなるようにＤ−グルコースを添加した培地を用いて、マウス３Ｔ３−Ｌ１細胞株を懸濁し、当該細胞を３×１０4個／穴の割合で、予めアテロコラーゲン（株式会社高研販売）をコーティングした２４穴プレートに播種し、３７℃、５％ＣＯ2下で３日間培養した。次いで、培養上清を、脂肪前駆細胞の分化誘導剤（デキサメタゾン０．１μｇ／ｍＬ及びインスリン１０μｇ／ｍＬ）と、糖質として、実験１で用いたと同じＤ−グルコース、α，α−トレハロース、マルトース、異性化糖、又はフラクトースを４ｍＭ含むＤ−ＭＥＭ培地と交換し、細胞を常法に従って３日間培養した。なお、糖質として、Ｄ−グルコース、α，α−トレハロース、マルトース、異性化糖、及びフラクトースを添加した系をそれぞれ、Ａ系、Ｂ系、Ｃ系、Ｄ系、及びＥ系とした。また、対照としては、分化誘導剤は添加するも、糖質は無添加の系（対照１）と、分化誘導剤及び糖質のいずれも無添加の系（対照２）とを設けた。培養終了後、Ａ乃至Ｅ系及び対照１、２の培養上清を、インスリンを濃度５μｇ／ｍＬ及びＤ−グルコースを濃度４ｍｇ／ｍＬで含むＤ−ＭＥＭ培地と交換した後、細胞を３日間培養した。その後、２日毎に、Ａ乃至Ｅ系、対照１、２の培養上清をそれぞれ、Ｄ−グルコースを濃度４ｍｇ／ｍＬ含み、分化誘導剤は含まないＤ−ＭＥＭ培地にて交換し、最初の分化誘導剤による刺激を開始してから１０日目に培養細胞における中性脂肪蓄積量を以下に示す方法により測定した。すなわち、各実験系における培養上清を除去した後、培養細胞をダルベッコ・リン酸緩衝生理食塩水（日水製薬株式会社販売、以下、単に「Ｄ−ＰＢＳ」と言う。）にて３回洗浄し、１０％ホルマリン／Ｄ−ＰＢＳにて、４℃下、１時間処理して固定し、乾燥した後、これに、染色色素である「オイルレッドＯ」を含む溶液を添加し、室温で１５分間保持して細胞を染色した。その後、各実験系における細胞を蒸留水で３回洗浄し、イソプロパノール（特級試薬級の原液）０．３ｍＬ／穴を添加して細胞内に取り込まれた染色色素を抽出し、得られた抽出液につき、染色色素の吸収波長である４９０ｎｍにおける吸光度（Ａ４９０）を測定した。対照１と対照２の吸光度差を求め、この吸光度差に対するＡ乃至Ｅ系及び対照１の吸光度（Ａ４９０）の百分率（％）を求めた。結果は図１４に示す。
【００６２】
図１４に示すとおり、Ａ乃至Ｅ系の内、Ｂ系の吸光度（Ａ４９０）は約７０％と、対照1と比べ有意（ｐ＜０．０５）に低い値を示した。これは、Ｂ系にあっては、分化誘導剤による脂肪前駆細胞の脂肪細胞への分化誘導によりもたらされる中性脂肪蓄積が、α，α−トレハロースにより有意に抑制されたことを意味する。一方、Ｄ−グルコース、マルトース、異性化糖、及びフラクトースをそれぞれ添加したＡ系及びＣ乃至Ｅ系における吸光度（Ａ４９０）は約９０％とＢ系と較べ低値を示し、しかも対照1と比べ有意差は認められなかった。これは、Ａ系及びＣ乃至Ｅ系においては、分化誘導剤による脂肪前駆細胞の脂肪細胞への分化誘導によりもたらされる中性脂肪蓄積が有意に抑制されなかったことを意味する。
【００６３】
本実験において、α，α−トレハロースは、脂肪前駆細胞の脂肪細胞への分化誘導によりもたらされる中性脂肪蓄積を有意に抑制したことから、α，α−トレハロースは、脂肪蓄積、殊に、内臓脂肪蓄積に起因するインスリン抵抗性を予防ないしは改善する作用を有する糖質であることが強く示唆される。
【００６４】
実験５
＜臨床試験＞
実験１乃至３において、マウスを用いる動物実験により、α，α−トレハロースがインスリン抵抗性を効果的に予防ないしは改善する作用を有することを認めた。また、実験４においては、培養細胞を用いての試験において、α，α−トレハロースが脂肪前駆細胞の脂肪細胞への分化誘導によりもたらされる脂肪蓄積を有意に抑制することを認めた。これらの実験結果を踏まえ、本実験においては、α，α−トレハロースがインスリン抵抗性に及ぼす影響について、ヒトを被験者とする臨床試験を行った。本臨床試験における被験者としては、閉経を迎える更年期女性を選択した。その理由は、更年期女性においては、通常、インスリン感受性を高めるエストロゲンの分泌が減少する一方、プロゲステロンによってインスリン抵抗性が上昇し、このエストロゲンの減少によって内臓脂肪がつきやすく、さらに運動不足や栄養過多になると肥満となり、インスリン抵抗性が惹起されることに鑑み、更年期女性は、本実験目的の被験者として適切であると判断したからである。より詳細には、医師の診断により、体脂肪率３０％以上の肥満と判定され、インスリン抵抗性が既に惹起されているかその予備軍と診断された更年期女性１０名（５４乃至６１歳）を無作為に２群（各群５名からなる「試験群」と「対照群」）に分け、α，α−トレハロースのインスリン抵抗性改善作用について調べた。なお、試験開始前の問診によれば、いずれの被験者も、日常的に、魚肉よりも牛・豚肉などの獣肉中心の食事を比較的多く摂るとともに、脂肪酸を比較的多く含むケーキ類、脂肪・油脂食品などを好んで食するなど、一日当たりの脂肪酸摂取量が比較的多い食習慣を有していた。
【００６５】
試験群の各被験者に対し、無水物換算でα，α−トレハロース（純度９９％以上、株式会社林原生物化学研究所製）を５乃至２０ｇ／日の範囲で６カ月間に亘って経口摂取させ、α，α−トレハロースのインスリン抵抗性に及ぼす影響について調べた。各被験者には、α，α−トレハロースを上記摂取量の範囲内で経口摂取することを条件に、α，α−トレハロースの摂取方法、摂取時間の指定はせず、各被験者毎に好みの方法、好みの時間にα，α−トレハロースを経口摂取させ、かつ、特段の食事制限を課すことなく、各自の通常の生活習慣にしたがって生活させた。なお、各被験者には、予め、１日当たり、無水物換算で２０ｇのα，α−トレハロース（無水物換算で５ｇずつ、ポーションタイプのポリエチレン製容器に収容したもの４個分に相当）を６カ月分配布し、上記摂取量の範囲内で、α，α−トレハロースを毎日経口摂取させた。試験終了後、各被験者から未使用分のα，α−トレハロースを全て回収し、各被験者毎に一日当たりのα，α−トレハロース摂取量を算出した。
【００６６】
一方、対照群の各被験者には、α，α−トレハロースを摂取させなかった以外は、試験群と同様にして、特段の食事制限を課すことなく、各自の通常の生活習慣にしたがって生活させた。試験終了後、各群の被験者全てにつき、市販の身長計（商品名『ＹＧ−２００』、株式会社ヤガミ製）を用いて身長を測定するとともに、体重、体脂肪率を市販の体重・体脂肪計（商品名『ＴＢＦ−１０２』、株式会社タニタ製）を用いて測定した。ＢＭＩは身長、体重に基づいて、常法により算出した。また、常法により、インスリン抵抗性を判断するための指標であるＨＯＭＡ−ＩＲ値を求めた。その結果を表５に示す。なお、表５には、試験開始前、予め、上記測定計を用いて測定しておいた、各群の各被験者の身長、体重、体脂肪率、ＢＭＩ、及びＨＯＭＡ−ＩＲ値を併記した。
【００６７】
【表５】
【００６８】
表５に示す試験開始前後における試験群と対照群の被験者の身長、体重、体脂肪率、ＢＭＩ、及びＨＯＭＡ−ＩＲ値を比較検討した結果、試験群及び対照群のいずれにおいても、身長、体重に有意差は認められなかった。一方、体脂肪率、ＢＭＩ値は、対照群においては有意差は認められなかったが、体脂肪率は、試験群においては有意（ｐ＜０．０５）ないしは顕著な低下が認められた。また、ＨＯＭＡ−ＩＲ値は、対照群においては、有意差は認められなかったが、試験群においては、有意（ｐ＜０．０５）な低下が認められた。しかも、試験後、試験群におけるＨＯＭＡ−ＩＲ値は、対照群と比べ有意（ｐ＜０．０５）に低い値であった。なお、試験群の各被験者は、表５に示すとおり、無水物換算でα，α−トレハロースを、一日当たり、約５乃至１６ｇの量を経口摂取していることからみて、α，α−トレハロースを摂取しなかった対照群の被験者と比べ、α，α−トレハロースを摂取した分、カロリー摂取量は多かったにも拘わらず、両群の被験者間で、体重増加に有意差が認められなかったことは、全く予期しなかった結果であった。
【００６９】
上記の結果は、体脂肪率３０％以上の肥満状態のヒトでみられる特異な現象であるか否かは定かではないとしても、肥満状態のヒトがα，α−トレハロースを上記範囲で日常的に経口摂取した場合には、体重増加を引き起こすことなく、体脂肪率、ＢＭＩが、有意ないしは顕著に低下し、ＨＯＭＡ−ＩＲ値が有意に低下すると判断される。また、上記したとおり、試験群のＨＯＭＡ−ＩＲ値が、対照群と比べ、有意に低下したという事実は、実験１乃至３で得られた動物実験結果と同様、α，α−トレハロースには、ヒトにおいてもインスリン抵抗性を効果的に予防及び／又は改善する作用を有することを如実に示すものである。また、本実験において、試験群の各被験者が一日当たり摂取したα，α−トレハロース経口摂取量は、約５乃至１６ｇであったことから、α，α−トレハロースをこの量で、又はこの量に準じてヒトに経口摂取させるか投与する場合には、ヒトにおけるインスリン抵抗性を効果的に予防及び／又は改善できると判断される。
【００７０】
実験１乃至５の結果は、ヒトを含む哺乳類が、日常的に比較的多量の高脂肪食品／飼料などを摂取するか投与される場合であっても、本発明のα，α−トレハロースを有効成分とするインスリン抵抗性の予防及び／又は改善剤を日常的に摂取させるか投与することにより、高脂肪食品／飼料によりもたらされるインスリン抵抗性を効果的に予防及び／又は改善できることを示すものである。
【００７１】
実験６
＜急性毒性試験＞
７週齢のｄｄ系マウスを用いて、実験１で用いたと同じα，α−トレハロース（純度９９％以上、株式会社林原生物化学研究所製）を経口投与して急性毒性試験を行なった。その結果、α，α−トレハロースは低毒性の物質で、投与可能な最大投与量においても死亡例は認められなかった。この結果から、α，α−トレハロースのＬＤ５０値は、５０ｇ／ｋｇマウス体重以上と判断された。
【００７２】
本実験結果から、本発明のα，α−トレハロースを有効成分とするインスリン抵抗性の予防及び／又は改善剤は、ヒトを含む哺乳類に安全かつ安心して日常的に摂取させるか投与することのできる薬剤である。
【００７３】
以下、実施例に基づいて本発明をより詳細に説明する。しかしながら、本発明は、これら実施例によりなんら限定されるものではない。
【実施例１】
【００７４】
＜インスリン抵抗性の予防及び／又は改善剤＞
無水物換算で、α，α−トレハロース（純度９９％以上、株式会社林原生物化学研究所製）５ｇを超純水９５ｍｌに溶解し、常法にしたがって精密濾過して、１００ｍｌ容ボトルに無菌的に充填して、液剤形態のインスリン抵抗性の予防及び／又は改善剤を得た。
【００７５】
本品は、取扱性、保存安定がともに性良好で、ヒト成人（体重６０ｋｇ）一日当たりの摂取量又は投与量として、通常、本品を１／５乃至４本程度、日常的に摂取することにより、高脂肪食品によりもたらされるインスリン抵抗性を効果的に予防及び／又は改善することができる。また、本品は、哺乳類に対し、日常的に摂取させるか投与することにより、高脂肪飼料によりもたらされるインスリン抵抗性を効果的に予防及び／又は改善することができる。
【実施例２】
【００７６】
＜インスリン抵抗性の予防及び／又は改善剤＞
無水物換算で、α，α−トレハロース（純度９９％以上、株式会社林原生物化学研究所製）１５０質量部をミキサーで攪拌しつつ、これにプルラン（商品名『ＰＩ−２０』、株式会社林原商事販売）を２％含有する水溶液１０質量部を均一に噴霧し、粉剤形態のインスリン抵抗性の予防及び／又は改善剤を得た。
【００７７】
本品は、取扱性、水への分散性・溶解性、保存安定性のいずれもが良好で、ヒトを含む哺乳類に対し、日常的に摂取させるか投与することにより、高脂肪食品／飼料によりもたらされるインスリン抵抗性を効果的に予防及び／又は改善することができる。
【実施例３】
【００７８】
＜インスリン抵抗性の予防及び／又は改善剤＞
無水物換算で、α，α−トレハロース（純度９９％以上、株式会社林原生物化学研究所製）９５質量部及びα−グルコシルヘスペリジン（商品名『林原ヘスペリジンＳ』、株式会社林原商事販売）５質量部とを均一に攪拌し、攪拌混合し、常法にしたがって、顆粒形成機にかけて顆粒化し、硬質カプセルに充填して、カプセル剤形態のインスリン抵抗性の予防及び／又は改善剤を得た。
【００７９】
本品は、取扱性、保存安定性が良好で、α，α−トレハロースによるインスリン抵抗性改善作用と、α−グルコシルヘスペリジンの中性脂肪低減作用とが相まって、これをヒトを含む哺乳類に対し、日常的に摂取させるか投与することにより、高脂肪食品／飼料によりもたらされるインスリン抵抗性を効果的に予防及び／又は改善することができる。
【実施例４】
【００８０】
＜インスリン抵抗性の予防及び／又は改善剤＞
無水物換算で、α，α−トレハロース（純度９９％以上、株式会社林原生物化学研究所製）１０質量部及びα−グルコシルルチン（商品名『αＧルチン』、株式会社林原商事販売）１質量部とを均一に攪拌し、混合し、常法にしたがって、打錠して、錠剤形態のインスリン抵抗性の予防及び／又は改善剤を得た。
【００８１】
本品は、取扱性、保存安定性が良好で、これをヒトを含む哺乳類に対し、日常的に摂取させるか投与することにより、高脂肪食品／飼料によりもたらされるインスリン抵抗性を効果的に予防及び／又は改善することができる。
【実施例５】
【００８２】
＜インスリン抵抗性の予防及び／又は改善剤＞
無水物換算で、α，α−トレハロース（純度９９％以上、株式会社林原生物化学研究所製）５質量部、２−Ｏ−α−Ｄ−グルコシル−Ｌ−アスコルビン酸（商品名『ＡＡ２Ｇ』、株式会社林原生物化学研究所販売）０．３質量部、及びα−グルコシルルチン（商品名『αＧルチン』、株式会社林原商事販売）１質量部を超純水７４質量部に溶解し、常法にしたがって精密濾過して、１００ｍｌ容ボトルに無菌的に充填して、液剤形態のインスリン抵抗性の予防及び／又は改善剤を得た。
【００８３】
本品は、取扱性、保存安定性良好で、ヒト成人（体重６０ｋｇ）一日当たりの摂取量又は投与量として、通常、本品を１／５乃至４本程度、日常的に摂取することにより、高脂肪食品によりもたらされるインスリン抵抗性を効果的に予防及び／又は改善することができる。
【実施例６】
【００８４】
＜インスリン抵抗性の予防及び／又は改善剤＞
無水物換算で、α，α−トレハロース（純度９９％以上、株式会社林原生物化学研究所製）２質量部、２−Ｏ−α−Ｄ−グルコシル−Ｌ−アスコルビン酸（商品名『ＡＡ２Ｇ』、株式会社林原生物化学研究所販売）１質量部、及びα−グルコシルヘスペリジン（商品名『αＧヘスペリジン』、株式会社林原商事販売）１質量部を超純水７９．５質量部に溶解し、常法にしたがって精密濾過して、５０ｍｌ容ボトルに無菌的に充填して、液剤形態のインスリン抵抗性の予防及び／又は改善剤を得た。
【００８５】
本品は、取扱性、保存安定性良好で、ヒト成人（体重６０ｋｇ）一日当たりの摂取量又は投与量として、通常、本品を１乃至５本程度、日常的に摂取することにより、高脂肪食品によりもたらされるインスリン抵抗性を効果的に予防及び／又は改善することができる。また、本品は、哺乳類に対し、日常的に摂取させるか投与することにより、高脂肪飼料によりもたらされるインスリン抵抗性を効果的に予防及び／又は改善する善することができる。
【００８６】
以下、本発明のインスリン抵抗性の予防及び／又は改善剤の適用例について参考例として述べる。
【００８７】
参考例１
＜油脂含有組成物＞
実施例２乃至４で得た本発明のインスリン抵抗性の予防及び／又は改善剤１０質量部を、パルミチン酸１０％、ステアリン酸１０％、オレイン酸１０％、及びリノール酸１０％（総脂肪酸質量４０％）含む油脂含有組成物１００質量部に配合し、容器に充填して、本発明のインスリン抵抗性の予防及び／又は改善剤を含む油脂含有組成物を得た。
【００８８】
本品は、取扱性、保存安定性が良好で、自体、インスリン抵抗性を惹起し難い油脂含有組成物である。
【００８９】
参考例２
＜食用クリーム＞
実施例２乃至４で得た本発明のインスリン抵抗性の予防及び／又は改善剤５質量部を、カカオペースト４０質量部、及びカカオバター１０質量部と混合し、レファイナーに通して粒度を下げた後、コンチェに入れ、５０℃で２昼夜練り上げる。この間に、レシチン０．５質量部を加え充分に混和し、分散させた。次いで、温度調節機で３１℃に調節し、バターが固まる直前に型に流し込み、振動機でアワ抜きを行ない、１０℃の冷却トンネルを２０分間くぐらせて固化させた。これを型抜きして包装し製品を得た。
【００９０】
本品は、取扱性、保存安定性が良好で、口中でなめらかに溶け、上品な甘味とまろやかな風味を有し、自体、インスリン抵抗性を惹起し難い食用クリームである。
【００９１】
参考例３
＜生クリーム＞
実施例１乃至６で得た本発明のインスリン抵抗性の予防及び／又は改善剤１質量部を、生クリーム５質量部に溶解し、プレートヒーターで加熱殺菌し、無菌的に缶詰して製品を得た。
【００９２】
本品は、取扱性、保存安定性が良好で、温和な甘味で、風味もよく、フルーツ、コーヒー、ココア、紅茶などの調味用に用いることのできる、自体、インスリン抵抗性を惹起し難い生クリームである。
【００９３】
参考例４
＜ハム＞
豚もも肉１，０００質量部に、食塩１５質量部、及び硝酸カリウム３質量部を均一にすり込んで、冷室に１昼夜堆積する。これを実施例１乃至６で得た本発明のインスリン抵抗性の予防及び／又は改善剤１００質量部、水５００質量部、食塩１００質量部、硝酸カリウム３質量部、及び香辛料からなる塩漬液に冷室で７日間漬け込み、次いで、常法に従い、冷水で洗浄し、ひもで巻き締め、燻煙し、クッキングし、冷却包装して製品を得た。
【００９４】
本品は、色合いもよく、風味良好で、自体、インスリン抵抗性を惹起し難いハムである。
【００９５】
参考例５
＜粉末卵黄＞
生卵から調製した卵黄をプレート式加熱殺菌機で６０乃至６４℃で殺菌し、得られる液状卵黄１質量部に対し、実施例２乃至４で得た本発明のインスリン抵抗性の予防及び／又は改善剤０．１質量部及びマルトース５質量部の割合で混合した後、バットに移し、一夜放置して、固化し、切削機にかけて粉末化し、粉末卵黄を得た。
【００９６】
本品は、取扱性、保存安定性が良好で、自体、インスリン抵抗性を惹起し難い粉末卵黄である。
【００９７】
参考例６
＜バターロールパン＞
実施例２乃至４で得た本発明のインスリン抵抗性の予防及び／又は改善剤１質量部、強力粉１１８質量部、砂糖８質量部、食塩１．７質量部、脱脂粉乳２質量部、海洋酵母（三共フーヅ（株）製）２質量部、全卵１２質量部、無塩バター１０質量部、牛乳２０質量部、水７５質量部をミキサーにかけ、２４℃で、低速６分、中速５分で混捏し、一時停止した後、更に中速で４．５分間混捏し、生地を調製した。次いで、これを醗酵（フロアータイムは５０分間）させた。生地は４０ｇに分割して丸めを行い、２０分間のベンチタイムで処理した後、４０℃、湿度８０％のホイロにて５０分間発酵させた。発酵終了後、上火２３０℃、下火２００℃のオーブンにて７分間焼成し、バターロールを調製した。
【００９８】
本品は、取扱性、保存安定性が良好で、自体、インスリン抵抗性を惹起し難いバターロールである。
【００９９】
参考例７
＜チョコレートバー＞
下記原材料を用い、常法にしたがって、大豆パフ入りチョコレートバーを製造した。
＜原材料＞
大豆パフ １３．５質量部
チョコレート用油脂 ６０．５０質量部
分離大豆蛋白質 ５．００質量部
粉末ローヤルゼリー ５．００質量部
α，α−トレハロース（純度９９％以上、 １４．６８質量部
株式会社林原生物化学研究所製）から
なる本発明のインスリン抵抗性の
予防及び／又は改善剤
ヘスペリジン ０．８５質量部
スクラロース（高甘味度甘味料） ０．１２質量部
香料 適量
【０１００】
本品は、取扱性、保存安定性が良好で、自体、インスリン抵抗性を惹起し難いチョコレートバーである。
【０１０１】
参考例８
＜バター＞
市販のバター１０質量部に、実施例２乃至４で得た本発明のインスリン抵抗性の予防及び／又は改善剤５質量部を添加し、均一に混合し、本発明のインスリン抵抗性の予防及び／又は改善剤が配合されたバターを得た。
【０１０２】
本品は、取扱性、保存安定性が良好で、自体、インスリン抵抗性を惹起し難いバターである。
【０１０３】
参考例９
＜牛脂＞
牛脂１０質量部に、実施例２乃至４で得た本発明のインスリン抵抗性の予防及び／又は改善剤５質量部を添加し、均一に混合し、本発明のインスリン抵抗性の予防及び／又は改善剤が配合された牛脂を得た。
【０１０４】
本品は、取扱性、保存安定性が良好で、自体、インスリン抵抗性を惹起し難い牛脂である。
【０１０５】
参考例１０
＜脂肪乳剤＞
本発明のα，α−トレハロース（純度９９％以上、株式会社林原生物化学研究所製）１質量部、精製ダイズ油１０質量部、濃グリセリン１．２質量部、精製卵黄レシチン１．２質量部、及び超純水２５０質量部とを均一に混合し、常法にしたがって加熱滅菌して、無菌的に３００ｍｌ容ポリエチレン製バッグに充填して、本発明のインスリン抵抗性の予防及び／又は改善剤が配合された脂肪乳剤を得た。
【０１０６】
本品は、取扱性、保存安定性が良好で、自体、インスリン抵抗性を惹起し難い脂肪乳剤である。
【０１０７】
参考例１１
＜パッケージ組体＞
実施例２乃至４で得た本発明のインスリン抵抗性の予防及び／又は改善剤１０質量部を、遮光性プラスチック製の第１の容器に収容し密閉するとともに、市販の食用菜種油１００質量部（脂肪酸組成：パルミチン酸約３％、ステアリン酸約１％、オレイン酸約１６％、リノール酸約１６％）を遮光性プラスチック製の第２の容器に収容し密閉したものを、第３の遮光性プラスチック製の容器に収容して、本発明のパッケージ組体を得た。第１の容器内に収容されたα，α−トレハロースの量は、第２の容器に収容された食用菜種油によりもたらされるインスリン抵抗性を効果的に予防及び／又は改善し得るα，α−トレハロースの量である。
【０１０８】
当該パッケージ組体の使用例として、第３の容器から、第１及び第２の容器を取り出し、それら容器内にそれぞれ収容されたα，α−トレハロースと食用菜種油の全量を取り出し、第１の容器に収容されたα，α−トレハロースを直接、又は、適量のミネラルウォーターなどに溶解し、第２の容器に収容された食用菜種油を用いて調理した料理に添加するか、或いはその前後に、複数回に分けて摂取することにより、食用菜種油によりもたらされるインスリン抵抗性を効果的に改善することができる。また、当該パッケージ組体の使用例として、第３の容器から、第１及び第２の容器を取り出し、それら容器内にそれぞれ収容されたα，α−トレハロースと食用菜種油の全量を取り出し混合し、例えば、ドレッシング用食用油として好適に用いることもできる。
【０１０９】
参考例１２乃至５５
下記表６に示す参考例１２乃至５５に列挙した高脂肪食品を、それら各食品中に含まれる脂肪酸総質量に対し、α，α−トレハロース（純度９９％以上、株式会社林原生物化学研究所製）からなる本発明のインスリン抵抗性の予防及び／又は改善剤を、無水物換算で、表６に示す配合量となるように添加して製造した。
【０１１０】
【表６】
【０１１１】
参考例１２乃至５５に示す高脂肪食品のいずれも、自体、ヒトが日常的に比較的多く摂取してもインスリン抵抗性が惹起され難い食品である。
【産業上の利用可能性】
【０１１２】
本発明のインスリン抵抗性の予防及び／又は改善剤は、所謂、現代病／生活習慣病とも言われている種々の疾患を惹起するインスリン機能不全の予防と改善の鍵を握る、インスリン抵抗性を予防及び／又は改善するための薬剤、詳細には、ヒトを含む哺乳類において、高脂肪食品／飼料によりもたらされるインスリン抵抗性を効果的に予防及び／又は改善するための薬剤であり、しかも、腸間膜脂肪細胞の肥大化を抑制し、耐糖能を改善することのできる薬剤である。当該インスリン抵抗性の予防及び／又は改善剤によれば、インスリン抵抗性を効果的に予防及び／又は改善できることから、例えば、メタボリックシンドローム、癌、アルツハイマー病、睡眠時無呼吸症候群、多のう性卵巣症候群（ＰＣＯＳ）などの疾患を改善できるのではないかと考えられる。また、当該インスリン抵抗性の予防及び／又は改善剤が有効成分とするα，α−トレハロースは、昨今、工業的に廉価かつ大量に市場に供給されている、有用で安全性の高い糖質であることから、これを有効成分とする当該インスリン抵抗性の予防及び／又は改善剤は、経済性、安全性の面からみて、ヒトを含む哺乳類に日常的に安心して摂取させるか投与することができ、しかも、工業的に廉価かつ大量に製造できる優れた実益を有する。
【０１１３】
本発明は斯くも顕著なる産業上の有用性を具備する発明であり、斯界に貢献すること誠に多大な発明である。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
高脂肪食品／飼料によりもたらされるインスリン抵抗性を予防及び／又は改善するための、α，α−トレハロースを有効成分として含むとともに、高甘味度甘味料を含んでなる、インスリン抵抗性の予防及び／又は改善剤。
【請求項２】
高甘味度甘味料が、スクラロース、アスパルテーム、サッカリン、及びステビオサイドから選ばれる１種又は２種以上である請求項１に記載のインスリン抵抗性の予防及び／又は改善剤。
【請求項１】
高脂肪食品／飼料によりもたらされるインスリン抵抗性を予防及び／又は改善するための、α，α−トレハロースを有効成分として含むとともに、高甘味度甘味料を含んでなる、インスリン抵抗性の予防及び／又は改善剤。
【請求項２】
高甘味度甘味料が、スクラロース、アスパルテーム、サッカリン、及びステビオサイドから選ばれる１種又は２種以上である請求項１に記載のインスリン抵抗性の予防及び／又は改善剤。
【図１】
【図２】
【図３】
【図４】
【図５】
【図６】
【図７】
【図９】
【図１０】
【図１１】
【図１２】
【図１３】
【図８】
【図１４】
【図２】
【図３】
【図４】
【図５】
【図６】
【図７】
【図９】
【図１０】
【図１１】
【図１２】
【図１３】
【図８】
【図１４】
【公開番号】特開２０１３−６７７３（Ｐ２０１３−６７７３Ａ）
【公開日】平成２５年１月１０日（２０１３．１．１０）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２０１１−１２９９８２（Ｐ２０１１−１２９９８２）
【出願日】平成２３年６月１０日（２０１１．６．１０）
【分割の表示】特願２０１１−５２５３０８（Ｐ２０１１−５２５３０８）の分割
【原出願日】平成２３年３月２日（２０１１．３．２）
【出願人】（０００１５５９０８）株式会社林原生物化学研究所 (168)
【Ｆターム（参考）】
【公開日】平成２５年１月１０日（２０１３．１．１０）
【国際特許分類】
【出願日】平成２３年６月１０日（２０１１．６．１０）
【分割の表示】特願２０１１−５２５３０８（Ｐ２０１１−５２５３０８）の分割
【原出願日】平成２３年３月２日（２０１１．３．２）
【出願人】（０００１５５９０８）株式会社林原生物化学研究所 (168)
【Ｆターム（参考）】
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