インスリン様成長因子−１分泌促進剤及びそれを含む飲食品
【課 題】
安全で日常的に摂取しやすいインスリン様成長因子−１（ＩＧＦ−１）分泌促進剤、およびそれを含む飲食品の提供。ＩＧＦ−１分泌を促進する方法の提供。ＩＧＦ−１分泌促進作用を有する飲食品を製造するためのポリフェノールの使用の提供。
【解決手段】
ポリフェノールを有効成分とすることを特徴とするＩＧＦ−１分泌促進剤、およびそれを含む飲食品。ポリフェノールを含有する飲食品を哺乳動物に経口摂取して、血中または臓器中のＩＧＦ−１分泌を促進する方法。ＩＧＦ−１分泌促進作用を有する飲食品を製造するためのポリフェノールの使用。
安全で日常的に摂取しやすいインスリン様成長因子−１（ＩＧＦ−１）分泌促進剤、およびそれを含む飲食品の提供。ＩＧＦ−１分泌を促進する方法の提供。ＩＧＦ−１分泌促進作用を有する飲食品を製造するためのポリフェノールの使用の提供。
【解決手段】
ポリフェノールを有効成分とすることを特徴とするＩＧＦ−１分泌促進剤、およびそれを含む飲食品。ポリフェノールを含有する飲食品を哺乳動物に経口摂取して、血中または臓器中のＩＧＦ−１分泌を促進する方法。ＩＧＦ−１分泌促進作用を有する飲食品を製造するためのポリフェノールの使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ポリフェノールを有効成分とすることを特徴とするインスリン様成長因子−１分泌促進剤、およびそれを含む飲食品に関する。
【背景技術】
【０００２】
ポリフェノールは、抗菌、抗ウイルス、抗酸化、抗突然変異、抗癌、血小板凝集抑制、血糖上昇抑制、血中コレステロール低下、抗う蝕、抗アレルギー、腸内フローラ改善、消臭など非常に広範な生理作用を有することが知られている。
中でも特に、カカオポリフェノールの機能については種々の作用が確認されている。
【０００３】
抗酸化能に基づく作用としては、油脂の変敗抑制、ミクロゾームや赤血球膜といった生体成分の酸化抑制、スーパーオキシドディスムターゼ様作用やヒドロキシラジカル消去作用などのインビトロでの作用、胃潰瘍予防作用、低密度リポ蛋白酸化抵抗性増強作用などが知られている。
また、抗酸化作用以外では、ヘテロサイクリックアミンに対する抗変異原性作用、血小板凝集能低下作用、血圧低下作用、低密度リポ蛋白低下作用が知られている（非特許文献1
）。
【０００４】
一方、インスリン様成長因子−１（insulin-like growth factor-1；以下、ＩＧＦ−１と略記することもある。）はインスリンに非常に似た構造及び作用を持つ分子量約７５００のペプチドホルモンである（非特許文献２）。ＩＧＦ−１は細胞の分化を促し、細胞の増殖を助ける等、積極的に細胞を健康な状態に維持し（非特許文献３，４）、老化の進行を阻止することが知られている（非特許文献５）。
【０００５】
ＩＧＦ−１は成長ホルモン分泌刺激によって主に肝臓で生成されることが知られているポリペプチドであり、血中ではＩＧＦ結合タンパクと結合し高分子複合体として存在している。ＩＧＦ−１の代謝、ＩＧＦ−１の受容体への親和性はこのＩＧＦ結合タンパクによって調節されており、ＩＧＦ結合タンパクの発現は成長ホルモンによって制御されることが知られている。最近では、全身に分布している知覚神経に存在するバニロイド受容体の活性化によって、カルシトニン遺伝子ペプチド（以下ＣＧＲＰと略記することがある）が放出され、種々の臓器の幼若細胞からのＩＧＦ−１産生を促すことが報告されている。（非特許文献６）。
【０００６】
実験的にはリコンビナントＩＧＦ−１の投与によってインスリン抵抗性が改善されることが報告されているが（非特許文献７）、臨床の現場ではリコンビナント成長ホルモンを投与し、その結果としてＩＧＦ−１を上昇させる治療法が普及している。しかしながらリコンビナント成長ホルモンには関節痛、過敏症、肝機能障害、皮膚の硬化、甲状腺ホルモンの低下、頭痛などの副作用が生じることが知られており、更に、投与方法は皮下注射など侵襲を伴う方法に限られ、その治療費用は非常に高価であるという問題があった。
【０００７】
リコンビナント成長ホルモン以外では、非選択性β遮断薬であるカルベジロールを静脈内投与することでＩＧＦ−１の分泌が促進されると報告されている（非特許文献８）。しかしながら本薬品も侵襲を伴う方法により投与されなければならないので、その治療費用が安くはないことに加え、日常的に気軽に摂取し難いという問題があった。
【０００８】
このような背景から、より安全かつ安価にＩＧＦ−１の分泌を促進する手段として食品成分に注目が集まっており、これまで唐辛子に含まれるカプサイシンが有効であると報告されている（特許文献１、非特許文献９）。しかしながら、カプサイシンは唐辛子の辛味成分であり、添加できる量は少なくならざるを得ないという問題点があった。
【特許文献１】特開２００６−１５１９７１
【非特許文献１】チョコレート・ココアの科学と機能、第二部チョコレート・ココアの生理機能、福場博保、木村修一・板倉広重・大澤俊彦編、PP56-179、アイ・ケイコーポレーション
【非特許文献２】グッドマン・ギルマン薬理書［下］ 薬物治療の基礎と臨床第１０版；第６１章 インスリン、経口血糖降下薬と膵臓内分泌の薬理学 2003、p2144 監訳：高折 修二、福田 英臣、赤池 昭紀 東京廣川書店発行
【非特許文献３】コーン・ケー・ジェイ（Conn K J）外６名，ザ・ジャーナル・オブ・バイオロジカル・ケミストリー（J. Biol. Chem.）1996年、第２７１巻、第４６号、p.28853-28860
【非特許文献４】ブラハム・シー（Braham C）外４名，デルマトロジー（Dermatology）、2002年、第２０巻、第４号、p.325-329
【非特許文献５】ローベノッフ・アール（Roubenoff R）外８名，ザ・アメリカン・ジャーナル・オブ。メディシン（Am. J. Med.）、2003年、第１１５巻、第６号、p.501-502
【非特許文献６】岡嶋研二ら「マイクロバブル・ナノバブルの最新技術」 Ｐ131-149,（2007）
【非特許文献７】Acerini CL. et al. Randomised placebo-controlled trial of human recombinant insulin-like growth factor I plus intensive insulin therapy in adolescents with insulin-dependent diabetes mellitus. Lancet 350, 1199-204 (1997)
【非特許文献８】Okajima K, et al. J. Pharmacol Exp. Ther. 2004; 309: 684-691
【非特許文献９】Okajima K. et al Effect of capsaicin on plasma and tissue levels of insulin-like growth factor-I in spontaneously hypertensive rats.Growth Horm IGF Res. 18、75-81 （2008）
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００９】
本発明は、安全で日常的に摂取しやすいＩＧＦ−１分泌促進剤、およびそれを含む飲食品を提供することを目的とする。また本発明の他の目的は、ＩＧＦ−１分泌を促進する方法の提供にある。さらに、本発明の他の目的は、ＩＧＦ−１分泌促進作用を有する飲食品を製造するためのポリフェノールの使用の提供にある。
【課題を解決するための手段】
【００１０】
本発明者らは、上記課題を解決するために鋭意検討を行った結果、ポリフェノールを含有する食品を摂取したマウスにおいて、血中および種々の臓器中のＩＧＦ−１が顕著に増加することを見出した。
また、ポリフェノールを含有する食品を摂取したマウスにおいて、記憶や認知力が高まることを見出した。
【００１１】
さらに、これまでに唐辛子に含まれるカプサイシンがＩＧＦ−１分泌促進に有効であると報告されているが、本発明者らはＩＧＦ−１産生機序についてさらに検討した結果、カプサイシンと同様に、プロシアニジン類がバニロイド受容体を備えるマウス脊髄後根神経節細胞（以下ＤＲＧと略記することがある）を刺激し、カルシトニン遺伝子関連ペプチド（ＣＧＲＰ）の放出を促進することを見出した。
本発明はこれらの知見に基づくものである。
【００１２】
すなわち、本願は以下の発明を包含する。
（１）ポリフェノールを有効成分とすることを特徴とするインスリン様成長因子−１分泌
促進剤。
（２）ポリフェノールがプロシアニジン類である上記（１）に記載のインスリン様成長因
子−１分泌促進剤。
（３）プロシアニジン類がカカオ、ぶどう、リンゴ、松の樹皮のうちのいずれか１種また
は２種以上に由来する上記（２）に記載のインスリン様成長因子―１分泌促進剤。（４）プロシアニジンＢ２、プロシアニジンＢ５、プロシアニジンＣ１、シンナムタンニ
ンＡ２から選択される１種または２種以上の化合物を有効成分とすることを特徴と
するインスリン様成長因子―１分泌促進剤。
（５）上記（１）〜（４）のいずれか１つに記載のインスリン様成長因子−１分泌促進剤
を含む飲食品。
（６）プロシアニジン類含有量が０．０１〜２０重量％である上記（５）に記載の飲食
品。
（７）ポリフェノールを含有する飲食品を哺乳動物に経口摂取して、血中または臓器中の
インスリン様成長因子−１分泌を促進する方法。
（８）インスリン様成長因子−１分泌促進作用を有する飲食品を製造するためのポリフェ
ノールの使用。
【発明の効果】
【００１３】
本発明によれば、ポリフェノールを有効成分とするＩＧＦ−１分泌促進剤が提供される。また、本発明によればＩＧＦ−１分泌促進剤を含む飲食品が提供される。
そして、本発明によればポリフェノールを含有する飲食品を哺乳動物に経口摂取して、血中または臓器中のＩＧＦ−１分泌を促進する方法が提供される。
さらに、本発明によればＩＧＦ−１分泌促進作用を有する飲食品を製造するためのポリフェノールの使用が提供される。
【００１４】
本発明のＩＧＦ−１分泌促進剤およびそれを含む飲食品は、血中および臓器においてＩＧＦ−１の分泌を促進し得る。
本発明のＩＧＦ−１分泌促進剤およびそれを含む飲食品は、記憶や認知力を高め得る。
本発明のＩＧＦ−１分泌促進剤の有効成分の１つであるプロシアニジン類が、カプサイシンと同様に、バニロイド受容体を備えるマウス脊髄後根神経節細胞（ＤＲＧ）を刺激しカルシトニン遺伝子関連ペプチドの放出を促進する。
【００１５】
本発明のＩＧＦ−１分泌促進剤は、天然の植物由来とすることができるから、安全性に優れ、長期に摂取しても副作用がない。したがって、本発明のＩＧＦ−１分泌促進剤およびそれを含む飲食品は、日常的にかつ継続的に摂取しうるものとして非常に有用である。
【００１６】
また、ＩＧＦ−１に関するこれまでの報告から、さらに次のような可能性が考えられる。ＩＧＦ−１は、皮膚中の線維芽細胞を活性化し、該細胞の分化、増殖及び／又は機能を促進する。線維芽細胞は、コラーゲン、エラスチン及びヒアルロン酸等の体内の間質物質の産生を促進する。コラーゲンは結合組織を構成する主要タンパク質で、皮膚のコラーゲンは、皮膚の質感又は弾力等の皮膚の形状形成に関与している。エラスチンはコラーゲンと同様に皮膚の結合組織に存在する繊維状のタンパク質で、コラーゲン繊維を束ね、バネのように支えて、皮膚の弾力性とハリを保つ機能を有する。ヒアルロン酸はグリコサミノグルカンの一種で、哺乳動物の結合組織に多量に分布し、肌に潤いを与え、クッションの役割を担っている。このため、本発明のＩＧＦ−１分泌促進剤は、皮膚中のＩＧＦ−１を増加させ、終局的には上記した皮膚中でのコラーゲン、エラスチン及びヒアルロン酸を増加させ得るので、皮膚の弾力性や皮膚の張り、肌の潤いを維持することができる可能性がある。
【００１７】
また、本発明のＩＧＦ−１分泌促進剤が、弾力性の低下した皮膚又はしわやたるみのある皮膚に適用されると、適用部位で、ＩＧＦ−１の分泌が促進されるので該部位の皮膚の弾力性が回復し、しわが伸び、たるみが改善される可能性がある。
【００１８】
また、本発明のＩＧＦ−１分泌促進剤は、皮膚中のＩＧＦ−１を増加させ、線維芽細胞の分化、増殖及び／又は機能を促進するので、例えば外傷や手術後の創傷治癒を早め得る可能性がある。
【００１９】
また、ＩＧＦ−１は、毛母、毛乳頭等毛根部の細胞を活性化することから、本発明のＩＧＦ−１分泌促進剤は、育毛や発毛を目的に頭皮に適用し得る。
【００２０】
高齢者では、骨組織内ＩＧＦ−１量や血中ＩＧＦ−１濃度、作用が低下し、骨量も低下するため本発明のＩＧＦ−１分泌促進剤は骨密度増加に寄与する可能性がある。
【００２１】
ＩＧＦ−１が作用すると血管が拡張し血圧低下の効果が得られるので、本発明のＩＧＦ−１分泌促進剤によって血圧低下効果が得られる可能性がある。
【００２２】
また、ＩＧＦ−１はアルツハイマー病において窿Aミロイド原線維を分解し解毒（無毒化
）するＨＳＦ−１を調整するので、本発明のＩＧＦ−１分泌促進剤は、アルツハイマー病の発症を遅延させることができる可能性がある。
【発明を実施するための最良の形態】
【００２３】
本願において用語を以下のように定義する。
【００２４】
ポリフェノール
本発明において「ポリフェノール」とは、ベンゼン環に２つ以上のヒドロキシル基がついている構造を示す化合物をいう。ポリフェノールはシンプルフェノール類、フラボノイド類、加水分解型タンニン類、縮合型タンニン類(プロアントシアニジン類)に分けられる。シンプルフェノールとしては、ジヒドロキシル酸、ヒドロキシルカフェ酸誘導体類等が例示でき、フラボノイド類としては、フラボン類、フラボノール類、イソフラボン類、フラバン類、フラバノール（カテキン）類、フラバノン類、フラバノノール類、カルコン類、アントシアニジン類等が例示できる。カテキン類としては、カテキン・エピカテキンなどが挙げられる。加水分解型タンニン類はシンプルフェノールの重合物であり、縮合型タンニン類（プロアントシアニジン類）はフラボノイド類の重合物である。
【００２５】
プロシアニジン類
本発明において「プロシアニジン類」とは、例えば以下の（化１）〜（化９）の構造式（ｎ＝０〜１）で示される、フラボノイド類の基本骨格が重合した構造を持つ物質であり、４位→６位、４位→８位、２位→５位および４位→６位の２箇所、２位→７位および４位→８位の２箇所で結合する構造が認められている。代表的なものとしては、プロシアニジンＢ２（化１）、プロシアニジンＢ５（化２）、プロシアニジンＣ１（化３）、シンナムタンニンＡ２（化４）がある。
プロシアニジン類は、カカオ以外にも、ぶどう種子・皮、リンゴ、松の樹皮などに含まれる。
【００２６】
プロシアニジンＢ２
【化１】
【００２７】
プロシアニジンＢ５
【化２】
【００２８】
プロシアニジンＣ１
【化３】
【００２９】
シンナムタンニンＡ２
【化４】
【００３０】
その他のプロシアニジン類
【化５】
【００３１】
【化６】
【００３２】
【化７】
【００３３】
【化８】
【００３４】
【化９】
【００３５】
ポリフェノール総量定量方法
ポリフェノール総量は、プルシアンブルー法により測定した。Martin L. Price and Larry G. Butler, J. Agric Food Chem., Vol. 25 No.6, 1268-1273,1977に記載の方法に従い、市販のエピカテキンを標準物質として算出した値を用いた。
【００３６】
ポリフェノール個別成分定量方法
個別成分の定量は次の条件の逆相ＨＰＬＣにて行った。
（逆相ＨＰＬＣ条件）
分離用カラム：Deverosil ＯＤＳ ＨＧ−５（野村化学、φ４．６ｍｍ×２５０ｍｍ、
５μｍ）
溶離液：Ａ）０．１％トリフルオロ酢酸水溶液 と Ｂ）０．１％トリフルオロ酢酸アセ
トニトリル溶液 の２液のグラジェント
グラジェント条件：０分：Ａ９０％、５分：Ａ９０％、３５分：Ａ７５％、
４０分：Ａ０％、４５分：Ａ０％（溶離液の組成変化は
リニアグラジェント）。
溶離液の流速：０．８ｍｌ/ｍｉｎ
検出：ＵＶ２８０ｎｍ
標準物質：エピカテキン
【００３７】
ＩＧＦ−１分泌促進剤調製方法
本発明のＩＧＦ−１分泌促進剤はポリフェノールを含有することを特徴としているので、ポリフェノールを含有する植物体から溶媒抽出等によって抽出し、さらに必要に応じてイオン交換樹脂等を使用して純度を高めることによって得ることができるが、その調製方法は特に限定されない。
【００３８】
また、本発明のＩＧＦ−１分泌促進剤におけるポリフェノールの濃度は、ＩＧＦ−１の分泌が促進される濃度であれば特に制限されない。
【００３９】
本発明によるＩＧＦ−１分泌促進剤は、天然の植物由来とすることができるため、飲食品として用いることができる。本発明の飲食品としては、チョコレートやココアのようにカカオ豆を主原料とする飲食品はもちろんのこと、パン、ビスケット、麺類をはじめとする澱粉系食品、あるいはキャンデー、飲料、ヨーグルトなど広範な飲食品に用いることができ、使用態様としては各飲食品の特性、目的に応じ、適当な製造工程で適宜添加すればよく、例えば、チョコレート、キャンデー、パン、ココア飲料、クッキー等の飲食品には重量割合でおおよそ０．０１％〜２０％添加するのが、これらの飲食品の味や物性を活かす上で好ましい。
【００４０】
本発明のＩＧＦ−１分泌促進剤は、経口又は非経口投与のいずれかの投与経路で、ヒトやヒト以外の動物に投与し、ＩＧＦ−１の分泌を促進することができる。
【００４１】
経口投与する場合には、例えば、乳糖、結晶セルロース、デンプン、リン酸カルシウム等の賦形剤、例えば、デンプン、カルメロースナトリウム、ヒドロキシプロピルセルロース等の結合剤、例えばカルメロースカルシウム、炭酸カルシウム等の崩壊剤、例えばステアリン酸マグネシウム、タルク等の滑沢剤、コーティング剤、保存剤、安定剤などを用いることにより、錠剤、カプセル剤、顆粒剤、シロップ剤、ドライシロップ剤、散剤、丸剤、細粒剤、トローチ錠、乳濁剤や、又は常法によるシロップを含む各種液剤、ドリンク剤等の形態に処方できる。そして、これらの各種製剤は、長時間にわたって作用が持続する徐放性製剤とすることもできる。
【００４２】
経口投与以外の場合としては、貼付剤、軟膏、クリーム剤、ローション剤、更にシャンプー、リンス、ボディーソープ、石鹸、洗顔料、整髪料、乳液、パック、入浴剤などの形態が挙げられる。
【００４３】
次に、実施例を挙げて本発明をより具体的に説明するが、本発明はこれらに限定されるものではない。
【実施例１】
【００４４】
ココアパウダーＨＰＡ１２（明治製菓株式会社製、油分１２重量%）２５０Ｋｇを、５０
％エタノール水溶液１２５０Ｋｇに、攪拌しながらゆっくりと添加した。温度を５０℃にまで上げ３０分間引き続き攪拌して抽出をおこなった。デカンターで分離後、さらに３０００Ｇで遠心分離を行い、エキスとスラッジに分離した。エキスの収量は１００３．６Ｋｇであった。さらにエキスをウルトラフィルター（ミウラ化学装置株式会社製）で精密ろ過し、清澄ろ過液９８２．８Ｋｇを得た。続いてエキスにデキストリン４．４Ｋｇを加えてよく攪拌した後、エバポレーターで濃縮をおこない、一次濃縮液２３４Ｋｇを得た。アルコールが若干残存していたため、水を２４０Ｋｇ加えて再度よく攪拌した後、再度エバポレーターで濃縮した。濃縮液は２３５．４Ｋｇであった。この濃縮液を加熱殺菌処理後、スプレードライを行い、粉末３９．２ｋｇを得た。得られた粉末を、以下カカオポリフェノール濃縮粉末と呼ぶ。カカオポリフェノール濃縮粉末の分析結果を表１に示した。
【００４５】
【表１】
【実施例２】
【００４６】
ココアパウダーＨＰＡ１２(明治製菓株式会社製、油分１２重量％)１．０ｋｇにｎ−ヘキサン５Ｌを加え脱脂した。脱脂カカオ７７５ｇに７０％アセトン６Ｌを加え抽出した。次にエバポレーターで抽出液中のアセトンを除いた。続いて抽出液に９倍量の水飽和ブタノールを加え攪拌した後、静置しブタノール層を回収し濃縮した。濃縮液をDiaion ＨＰ２ＭＧ（三菱化学、１５ｃｍ×内径１０ｃｍ）に吸着させた。吸着後、１５％エタノール溶出で不要成分を除き、次いで８０％エタノール水溶液で溶出し、その８０％エタノール画分を濃縮してカカオプロシアニジン画分（ＣＬＰｒ）を得た。本サンプルを分析した結果、プロシアニジンＢ２(３．９％)、プロシアニジンＢ５（１．３％）、プロシアニジンＣ１（２．６％）、シンナムタンニンＡ２（３．２％）が含まれていた。
【実施例３】
【００４７】
（成分の精製・単離）
実施例２記載のカカオプロシアニジン画分（ＣＬＰｒ）２８４ｍｇをメタノール２．８４ｍｌに溶解し、ＬＣ-Ｓｉカラム（Supelcosil、２５ｃｍ×φ２０ｍｍ、５μｍ）で分離
した。溶離液は、Ａ）ｎ−ヘキサン：メタノール：酢酸エチル＝８：３：１とＢ）ｎ−ヘキサン：メタノール：酢酸エチル＝２：３：１の２液のグラジェントで溶出した。グラジェント条件は、０分Ａ１００％、２０分Ａ１００％、５０分Ａ０％であった（溶離液の組成変化はリニアグラジェント）。溶離液の流速は２０ｍｌ/ｍｉｎ、検出は、ＵＶ２８０
ｎｍで行った。本条件下で、図1に示すようにプロシアニジン類が分子量毎に溶出され、
それぞれピーク２から２３．１ｍｇ、ピーク３から２３．３ｍｇ、ピーク４から２４．３ｍｇのＩＧＦ−１分泌促進剤が得られた。
ピーク２から得られたＩＧＦ−１分泌促進剤２３．１ｍｇを５０％メタノール２．３１ｍｌに溶解して、次の条件でプロシアニジンＢ２ならびにプロシアニジンＢ５の精製・単離を行った。
分離用カラム：Deverosil ＯＤＳ ＨＧ−５（野村化学、φ４．６ｍｍ×２５０ｍｍ、
５μｍ）
溶離液：Ａ）０．１％トリフルオロ酢酸水溶液 と Ｂ）０．１％トリフルオロ酢酸アセ
トニトリル溶液 の２液のグラジェント
グラジェント条件：０分：Ａ９０％、５分：Ａ９０％、３５分：Ａ７５％、
４０分：Ａ０％、４５分：Ａ０％（溶離液の組成変化は
リニアグラジェント）。
溶離液の流速：０．８ｍｌ/ｍｉｎ
検出：ＵＶ２８０ｎｍ
標準物質：エピカテキン
【００４８】
同様にピーク３から得られたＩＧＦ−１分泌促進剤からプロシアニジンＣ１を、ピーク４から得られたＩＧＦ−１分泌促進剤からシンナムタンニンＡ２を精製・単離した。
【実施例４】
【００４９】
（チョコレート）
以下の配合のミルクチョコレートを定法に従って製造した。本チョコレートは５０ｇあたりプロシアニジン類を１１２．９ｍｇ含むミルクチョコレートである。
グラニュー糖 ４２ 重量％
カカオマス １９ 重量％
全粉乳 １７．４ 重量％
ココアバター １７．０ 重量％
レシチン ０．５ 重量％
香料 ０．１ 重量％
実施例１のカカオポリフェノール濃縮粉末 ４ 重量％
【実施例５】
【００５０】
（錠菓）
以下の配合の錠菓を定法に従って製造した。本品は２０ｇあたりプロシアニジン類を２７．７ｍｇ含む錠菓である。
粉糖 ８５．０重量％
クエン酸 ３．５重量％
香料 ３．０重量％
乳化剤 ２．０重量％
実施例１のカカオポリフェノール濃縮粉末 ６．５重量％
【実施例６】
【００５１】
（ゼリードリンク）
以下の配合のゼリードリンクを定法に従って製造した。本品は１００ｇあたりプロシアニジン類を４２．６ｍｇ含むゼリードリンクである。
果糖ぶどう糖液糖 １６．０重量％
クエン酸 ０．７重量％
香料 ０．２重量％
ゲル化剤 ０．２重量％
実施例１のカカオポリフェノール濃縮粉末 ２．０重量％
水 ８０．９重量％
【実施例７】
【００５２】
（チューイングガム）
以下の配合のチューイングガムを定法に従って製造した。本品は１０gあたりプロシアニ
ジン類を１４．９ｍｇ含むチューイングガムである。
砂糖 ６８．５重量％
ガムベース ２０ 重量％
香料 ３．０重量％
クエン酸 １．５重量％
実施例１のカカオポリフェノール濃縮粉末 ７ 重量％
【実施例８】
【００５３】
（飲料）
以下の配合の飲料を定法に従って製造した。本品は１００gあたりプロシアニジン類を１
２．８ｍｇ含む飲料である。
果糖ぶどう糖液糖 １６．０重量％
クエン酸 ０．７重量％
香料 ０．２重量％
実施例１のカカオポリフェノール濃縮粉末 ０．６重量％
水 ８２．５重量％
【実施例９】
【００５４】
（ハードキャンデー）
以下の配合のハードキャンデーを定法に従って製造した。本品は２０gあたりプロシアニ
ジン類を１２．８ｍｇ含むハードキャンデーである。
ショ糖 ６５ 重量％
水あめ ３１．３重量％
クエン酸 ０．７重量％
実施例１のカカオポリフェノール濃縮粉末 ３．０重量％
【実施例１０】
【００５５】
（調整ココア）
以下の配合の調整ココアを定法に従って製造した。本品は３０ｇあたりプロシアニジン類を３２．０ｍｇ含む調整ココアである。
ココアパウダー ２０重量％
実施例１のカカオポリフェノール濃縮粉末 ５重量％
脱脂粉乳 １８重量％
全粉乳 ９重量％
砂糖 ４８重量％
【００５６】
〔試験例１〕
プロシアニジン類によるＣＧＲＰ放出作用の確認
６〜８週齢のＣ５７ＢＬ／６マウス（雄）からマウス脊髄後根神経節細胞（ＤＲＧ）を採取し、以下の条件で７日間培養した。
（培養条件）
培養液：以下成分を含有するＤ−ＭＥＭ／Ｆ１２培養液（インビトロジェン株
式会社製）
１０％ウシ胎児血清
１０ Ｕ/ｍｌ ペニシリン
０．１ ｍｇ/ｍｌ ストレプトマイシン
０．２５ μｇ/ｍｌ アンフォテリシンＢ
１０ ｎｇ/ｍｌ 神経成長因子(シグマ社製)
培養環境：３７℃のＣＯ２インキュベーター内で培養した。
【００５７】
（作用確認方法）
培養上清中に、実施例３によって得られたプロシアニジンＢ２（procyanidin B2）、プロシアニジンＢ５（procyanidin B5）、プロシアニジンＣ１（procyanidin C1）、およびシンナムタンニンＡ２（cinnamtannin A2）を、それぞれ１または１０μＭ加え、３０分後
に培養上清を採取し、それに含まれるカルシトニン遺伝子関連ペプチド（ＣＧＲＰ）濃度を測定してＣＧＲＰ放出に対する効果を検討した。ＣＧＲＰ濃度は、ＥＬＩＳＡキット（ＳＰＩ-ＢＩＯ, Massey Cedex, France）を用いて測定した。陽性コントロールとしてカ
プサイシン（capsaicin）を用いた。その結果、それぞれプロシアニジンＢ２、プロシア
ニジンＢ５、プロシアニジンＣ１、シンナムタンニンＡ２を添加したいずれのケースでもＣＧＲＰ放出が見られた。中でもシンナムタンニンＡ２は、陽性コントロールであるカプサイシンと同等の結果が得られた。結果を図２に示す。
【００５８】
〔試験例２〕
カカオポリフェノールのＩＧＦ−１分泌作用の確認
カカオポリフェノール（実施例２のＣＬＰｒ）０．５％含有粉餌（組成は下記）をマウスに４週間投与して、全身の臓器を採取し、１Ｎの酢酸溶液につけてホモジネートし、遠心分離後上清中のＩＧＦ−１濃度をenzyme immunoassay（ＥＩＡ） kit（Diagnostic Systems Laboratories Inc., Webster, TX）を用いて測定した。また、腹部大動脈から採血し
血漿中のＩＧＦ-１濃度も測定した。測定した結果を図３に示す。０．５％カカオポリフ
ェノール含有粉餌の投与によって、各臓器および血液中のＩＧＦ−１濃度が増加した。
（０．５％カカオポリフェノール含有粉餌配合）
粉餌（CLEA Rod ent Diet CE-2；日本クレア株式会社製） ９９．５重量％
カカオポリフェノール（実施例２のＣＬＰｒ） ０．５重量％
【００５９】
〔試験例３〕
カカオポリフェノール摂取の空間認知機能への影響
試験例２と同様にして０．５％カカオポリフェノール含有粉餌を投与したマウスを用いてモーリス水迷路試験を行った。具体的には、直径１２０ｃｍのプールに直径１０ｃｍ、高さ１１ｃｍの透明なアクリル板のプラットホームを設置し、その１ｃｍ上まで水を満たし、プラットホームを隠す。１日１回、固定したスタート地点からプラットホームに到着するまでの時間を計測し、これを５日間繰り返した。比較としてＣＧＲＰの放出能を欠損したマウスを用いた場合も実施した。結果を図４に示す。０．５％カカオポリフェノール含有粉餌をマウスに投与することによって、スタート地点からプラットホームに到着するまでの所要時間は有意に減少した。一方ＣＧＲＰ放出能欠損マウスの実験では０．５％カカオポリフェノール含有粉餌の投与による効果はみられなかったことから、上記０．５％カカオポリフェノール含有粉餌の投与による効果はＣＧＲＰを介する作用であることが確認された。
【図面の簡単な説明】
【００６０】
【図１】実施例２のＣＬＰｒをＨＰＬＣで分析したクロマトグラムである。
【００６１】
【図２】プロシアニジン類のＣＧＲＰ放出効果測定結果を示す図である。
【００６２】
【図３】カカオポリフェノール摂取の、臓器および血液中のＩＧＦ−１濃度に対する影響を表すグラフである。
【００６３】
【図４】カカオポリフェノール摂取の空間認知機能への影響を表すグラフである。上のグラフが野生型Ｃ５７ＢＬ／６マウスの場合（Wild-typeと標記）、下のグラフがＣＧＲＰの放出能を欠損したＣＧＲＰノックアウト（−／−）マウスの場合（CGRPKOと標記）を示す。
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ポリフェノールを有効成分とすることを特徴とするインスリン様成長因子−１分泌促進剤、およびそれを含む飲食品に関する。
【背景技術】
【０００２】
ポリフェノールは、抗菌、抗ウイルス、抗酸化、抗突然変異、抗癌、血小板凝集抑制、血糖上昇抑制、血中コレステロール低下、抗う蝕、抗アレルギー、腸内フローラ改善、消臭など非常に広範な生理作用を有することが知られている。
中でも特に、カカオポリフェノールの機能については種々の作用が確認されている。
【０００３】
抗酸化能に基づく作用としては、油脂の変敗抑制、ミクロゾームや赤血球膜といった生体成分の酸化抑制、スーパーオキシドディスムターゼ様作用やヒドロキシラジカル消去作用などのインビトロでの作用、胃潰瘍予防作用、低密度リポ蛋白酸化抵抗性増強作用などが知られている。
また、抗酸化作用以外では、ヘテロサイクリックアミンに対する抗変異原性作用、血小板凝集能低下作用、血圧低下作用、低密度リポ蛋白低下作用が知られている（非特許文献1
）。
【０００４】
一方、インスリン様成長因子−１（insulin-like growth factor-1；以下、ＩＧＦ−１と略記することもある。）はインスリンに非常に似た構造及び作用を持つ分子量約７５００のペプチドホルモンである（非特許文献２）。ＩＧＦ−１は細胞の分化を促し、細胞の増殖を助ける等、積極的に細胞を健康な状態に維持し（非特許文献３，４）、老化の進行を阻止することが知られている（非特許文献５）。
【０００５】
ＩＧＦ−１は成長ホルモン分泌刺激によって主に肝臓で生成されることが知られているポリペプチドであり、血中ではＩＧＦ結合タンパクと結合し高分子複合体として存在している。ＩＧＦ−１の代謝、ＩＧＦ−１の受容体への親和性はこのＩＧＦ結合タンパクによって調節されており、ＩＧＦ結合タンパクの発現は成長ホルモンによって制御されることが知られている。最近では、全身に分布している知覚神経に存在するバニロイド受容体の活性化によって、カルシトニン遺伝子ペプチド（以下ＣＧＲＰと略記することがある）が放出され、種々の臓器の幼若細胞からのＩＧＦ−１産生を促すことが報告されている。（非特許文献６）。
【０００６】
実験的にはリコンビナントＩＧＦ−１の投与によってインスリン抵抗性が改善されることが報告されているが（非特許文献７）、臨床の現場ではリコンビナント成長ホルモンを投与し、その結果としてＩＧＦ−１を上昇させる治療法が普及している。しかしながらリコンビナント成長ホルモンには関節痛、過敏症、肝機能障害、皮膚の硬化、甲状腺ホルモンの低下、頭痛などの副作用が生じることが知られており、更に、投与方法は皮下注射など侵襲を伴う方法に限られ、その治療費用は非常に高価であるという問題があった。
【０００７】
リコンビナント成長ホルモン以外では、非選択性β遮断薬であるカルベジロールを静脈内投与することでＩＧＦ−１の分泌が促進されると報告されている（非特許文献８）。しかしながら本薬品も侵襲を伴う方法により投与されなければならないので、その治療費用が安くはないことに加え、日常的に気軽に摂取し難いという問題があった。
【０００８】
このような背景から、より安全かつ安価にＩＧＦ−１の分泌を促進する手段として食品成分に注目が集まっており、これまで唐辛子に含まれるカプサイシンが有効であると報告されている（特許文献１、非特許文献９）。しかしながら、カプサイシンは唐辛子の辛味成分であり、添加できる量は少なくならざるを得ないという問題点があった。
【特許文献１】特開２００６−１５１９７１
【非特許文献１】チョコレート・ココアの科学と機能、第二部チョコレート・ココアの生理機能、福場博保、木村修一・板倉広重・大澤俊彦編、PP56-179、アイ・ケイコーポレーション
【非特許文献２】グッドマン・ギルマン薬理書［下］ 薬物治療の基礎と臨床第１０版；第６１章 インスリン、経口血糖降下薬と膵臓内分泌の薬理学 2003、p2144 監訳：高折 修二、福田 英臣、赤池 昭紀 東京廣川書店発行
【非特許文献３】コーン・ケー・ジェイ（Conn K J）外６名，ザ・ジャーナル・オブ・バイオロジカル・ケミストリー（J. Biol. Chem.）1996年、第２７１巻、第４６号、p.28853-28860
【非特許文献４】ブラハム・シー（Braham C）外４名，デルマトロジー（Dermatology）、2002年、第２０巻、第４号、p.325-329
【非特許文献５】ローベノッフ・アール（Roubenoff R）外８名，ザ・アメリカン・ジャーナル・オブ。メディシン（Am. J. Med.）、2003年、第１１５巻、第６号、p.501-502
【非特許文献６】岡嶋研二ら「マイクロバブル・ナノバブルの最新技術」 Ｐ131-149,（2007）
【非特許文献７】Acerini CL. et al. Randomised placebo-controlled trial of human recombinant insulin-like growth factor I plus intensive insulin therapy in adolescents with insulin-dependent diabetes mellitus. Lancet 350, 1199-204 (1997)
【非特許文献８】Okajima K, et al. J. Pharmacol Exp. Ther. 2004; 309: 684-691
【非特許文献９】Okajima K. et al Effect of capsaicin on plasma and tissue levels of insulin-like growth factor-I in spontaneously hypertensive rats.Growth Horm IGF Res. 18、75-81 （2008）
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００９】
本発明は、安全で日常的に摂取しやすいＩＧＦ−１分泌促進剤、およびそれを含む飲食品を提供することを目的とする。また本発明の他の目的は、ＩＧＦ−１分泌を促進する方法の提供にある。さらに、本発明の他の目的は、ＩＧＦ−１分泌促進作用を有する飲食品を製造するためのポリフェノールの使用の提供にある。
【課題を解決するための手段】
【００１０】
本発明者らは、上記課題を解決するために鋭意検討を行った結果、ポリフェノールを含有する食品を摂取したマウスにおいて、血中および種々の臓器中のＩＧＦ−１が顕著に増加することを見出した。
また、ポリフェノールを含有する食品を摂取したマウスにおいて、記憶や認知力が高まることを見出した。
【００１１】
さらに、これまでに唐辛子に含まれるカプサイシンがＩＧＦ−１分泌促進に有効であると報告されているが、本発明者らはＩＧＦ−１産生機序についてさらに検討した結果、カプサイシンと同様に、プロシアニジン類がバニロイド受容体を備えるマウス脊髄後根神経節細胞（以下ＤＲＧと略記することがある）を刺激し、カルシトニン遺伝子関連ペプチド（ＣＧＲＰ）の放出を促進することを見出した。
本発明はこれらの知見に基づくものである。
【００１２】
すなわち、本願は以下の発明を包含する。
（１）ポリフェノールを有効成分とすることを特徴とするインスリン様成長因子−１分泌
促進剤。
（２）ポリフェノールがプロシアニジン類である上記（１）に記載のインスリン様成長因
子−１分泌促進剤。
（３）プロシアニジン類がカカオ、ぶどう、リンゴ、松の樹皮のうちのいずれか１種また
は２種以上に由来する上記（２）に記載のインスリン様成長因子―１分泌促進剤。（４）プロシアニジンＢ２、プロシアニジンＢ５、プロシアニジンＣ１、シンナムタンニ
ンＡ２から選択される１種または２種以上の化合物を有効成分とすることを特徴と
するインスリン様成長因子―１分泌促進剤。
（５）上記（１）〜（４）のいずれか１つに記載のインスリン様成長因子−１分泌促進剤
を含む飲食品。
（６）プロシアニジン類含有量が０．０１〜２０重量％である上記（５）に記載の飲食
品。
（７）ポリフェノールを含有する飲食品を哺乳動物に経口摂取して、血中または臓器中の
インスリン様成長因子−１分泌を促進する方法。
（８）インスリン様成長因子−１分泌促進作用を有する飲食品を製造するためのポリフェ
ノールの使用。
【発明の効果】
【００１３】
本発明によれば、ポリフェノールを有効成分とするＩＧＦ−１分泌促進剤が提供される。また、本発明によればＩＧＦ−１分泌促進剤を含む飲食品が提供される。
そして、本発明によればポリフェノールを含有する飲食品を哺乳動物に経口摂取して、血中または臓器中のＩＧＦ−１分泌を促進する方法が提供される。
さらに、本発明によればＩＧＦ−１分泌促進作用を有する飲食品を製造するためのポリフェノールの使用が提供される。
【００１４】
本発明のＩＧＦ−１分泌促進剤およびそれを含む飲食品は、血中および臓器においてＩＧＦ−１の分泌を促進し得る。
本発明のＩＧＦ−１分泌促進剤およびそれを含む飲食品は、記憶や認知力を高め得る。
本発明のＩＧＦ−１分泌促進剤の有効成分の１つであるプロシアニジン類が、カプサイシンと同様に、バニロイド受容体を備えるマウス脊髄後根神経節細胞（ＤＲＧ）を刺激しカルシトニン遺伝子関連ペプチドの放出を促進する。
【００１５】
本発明のＩＧＦ−１分泌促進剤は、天然の植物由来とすることができるから、安全性に優れ、長期に摂取しても副作用がない。したがって、本発明のＩＧＦ−１分泌促進剤およびそれを含む飲食品は、日常的にかつ継続的に摂取しうるものとして非常に有用である。
【００１６】
また、ＩＧＦ−１に関するこれまでの報告から、さらに次のような可能性が考えられる。ＩＧＦ−１は、皮膚中の線維芽細胞を活性化し、該細胞の分化、増殖及び／又は機能を促進する。線維芽細胞は、コラーゲン、エラスチン及びヒアルロン酸等の体内の間質物質の産生を促進する。コラーゲンは結合組織を構成する主要タンパク質で、皮膚のコラーゲンは、皮膚の質感又は弾力等の皮膚の形状形成に関与している。エラスチンはコラーゲンと同様に皮膚の結合組織に存在する繊維状のタンパク質で、コラーゲン繊維を束ね、バネのように支えて、皮膚の弾力性とハリを保つ機能を有する。ヒアルロン酸はグリコサミノグルカンの一種で、哺乳動物の結合組織に多量に分布し、肌に潤いを与え、クッションの役割を担っている。このため、本発明のＩＧＦ−１分泌促進剤は、皮膚中のＩＧＦ−１を増加させ、終局的には上記した皮膚中でのコラーゲン、エラスチン及びヒアルロン酸を増加させ得るので、皮膚の弾力性や皮膚の張り、肌の潤いを維持することができる可能性がある。
【００１７】
また、本発明のＩＧＦ−１分泌促進剤が、弾力性の低下した皮膚又はしわやたるみのある皮膚に適用されると、適用部位で、ＩＧＦ−１の分泌が促進されるので該部位の皮膚の弾力性が回復し、しわが伸び、たるみが改善される可能性がある。
【００１８】
また、本発明のＩＧＦ−１分泌促進剤は、皮膚中のＩＧＦ−１を増加させ、線維芽細胞の分化、増殖及び／又は機能を促進するので、例えば外傷や手術後の創傷治癒を早め得る可能性がある。
【００１９】
また、ＩＧＦ−１は、毛母、毛乳頭等毛根部の細胞を活性化することから、本発明のＩＧＦ−１分泌促進剤は、育毛や発毛を目的に頭皮に適用し得る。
【００２０】
高齢者では、骨組織内ＩＧＦ−１量や血中ＩＧＦ−１濃度、作用が低下し、骨量も低下するため本発明のＩＧＦ−１分泌促進剤は骨密度増加に寄与する可能性がある。
【００２１】
ＩＧＦ−１が作用すると血管が拡張し血圧低下の効果が得られるので、本発明のＩＧＦ−１分泌促進剤によって血圧低下効果が得られる可能性がある。
【００２２】
また、ＩＧＦ−１はアルツハイマー病において窿Aミロイド原線維を分解し解毒（無毒化
）するＨＳＦ−１を調整するので、本発明のＩＧＦ−１分泌促進剤は、アルツハイマー病の発症を遅延させることができる可能性がある。
【発明を実施するための最良の形態】
【００２３】
本願において用語を以下のように定義する。
【００２４】
ポリフェノール
本発明において「ポリフェノール」とは、ベンゼン環に２つ以上のヒドロキシル基がついている構造を示す化合物をいう。ポリフェノールはシンプルフェノール類、フラボノイド類、加水分解型タンニン類、縮合型タンニン類(プロアントシアニジン類)に分けられる。シンプルフェノールとしては、ジヒドロキシル酸、ヒドロキシルカフェ酸誘導体類等が例示でき、フラボノイド類としては、フラボン類、フラボノール類、イソフラボン類、フラバン類、フラバノール（カテキン）類、フラバノン類、フラバノノール類、カルコン類、アントシアニジン類等が例示できる。カテキン類としては、カテキン・エピカテキンなどが挙げられる。加水分解型タンニン類はシンプルフェノールの重合物であり、縮合型タンニン類（プロアントシアニジン類）はフラボノイド類の重合物である。
【００２５】
プロシアニジン類
本発明において「プロシアニジン類」とは、例えば以下の（化１）〜（化９）の構造式（ｎ＝０〜１）で示される、フラボノイド類の基本骨格が重合した構造を持つ物質であり、４位→６位、４位→８位、２位→５位および４位→６位の２箇所、２位→７位および４位→８位の２箇所で結合する構造が認められている。代表的なものとしては、プロシアニジンＢ２（化１）、プロシアニジンＢ５（化２）、プロシアニジンＣ１（化３）、シンナムタンニンＡ２（化４）がある。
プロシアニジン類は、カカオ以外にも、ぶどう種子・皮、リンゴ、松の樹皮などに含まれる。
【００２６】
プロシアニジンＢ２
【化１】
【００２７】
プロシアニジンＢ５
【化２】
【００２８】
プロシアニジンＣ１
【化３】
【００２９】
シンナムタンニンＡ２
【化４】
【００３０】
その他のプロシアニジン類
【化５】
【００３１】
【化６】
【００３２】
【化７】
【００３３】
【化８】
【００３４】
【化９】
【００３５】
ポリフェノール総量定量方法
ポリフェノール総量は、プルシアンブルー法により測定した。Martin L. Price and Larry G. Butler, J. Agric Food Chem., Vol. 25 No.6, 1268-1273,1977に記載の方法に従い、市販のエピカテキンを標準物質として算出した値を用いた。
【００３６】
ポリフェノール個別成分定量方法
個別成分の定量は次の条件の逆相ＨＰＬＣにて行った。
（逆相ＨＰＬＣ条件）
分離用カラム：Deverosil ＯＤＳ ＨＧ−５（野村化学、φ４．６ｍｍ×２５０ｍｍ、
５μｍ）
溶離液：Ａ）０．１％トリフルオロ酢酸水溶液 と Ｂ）０．１％トリフルオロ酢酸アセ
トニトリル溶液 の２液のグラジェント
グラジェント条件：０分：Ａ９０％、５分：Ａ９０％、３５分：Ａ７５％、
４０分：Ａ０％、４５分：Ａ０％（溶離液の組成変化は
リニアグラジェント）。
溶離液の流速：０．８ｍｌ/ｍｉｎ
検出：ＵＶ２８０ｎｍ
標準物質：エピカテキン
【００３７】
ＩＧＦ−１分泌促進剤調製方法
本発明のＩＧＦ−１分泌促進剤はポリフェノールを含有することを特徴としているので、ポリフェノールを含有する植物体から溶媒抽出等によって抽出し、さらに必要に応じてイオン交換樹脂等を使用して純度を高めることによって得ることができるが、その調製方法は特に限定されない。
【００３８】
また、本発明のＩＧＦ−１分泌促進剤におけるポリフェノールの濃度は、ＩＧＦ−１の分泌が促進される濃度であれば特に制限されない。
【００３９】
本発明によるＩＧＦ−１分泌促進剤は、天然の植物由来とすることができるため、飲食品として用いることができる。本発明の飲食品としては、チョコレートやココアのようにカカオ豆を主原料とする飲食品はもちろんのこと、パン、ビスケット、麺類をはじめとする澱粉系食品、あるいはキャンデー、飲料、ヨーグルトなど広範な飲食品に用いることができ、使用態様としては各飲食品の特性、目的に応じ、適当な製造工程で適宜添加すればよく、例えば、チョコレート、キャンデー、パン、ココア飲料、クッキー等の飲食品には重量割合でおおよそ０．０１％〜２０％添加するのが、これらの飲食品の味や物性を活かす上で好ましい。
【００４０】
本発明のＩＧＦ−１分泌促進剤は、経口又は非経口投与のいずれかの投与経路で、ヒトやヒト以外の動物に投与し、ＩＧＦ−１の分泌を促進することができる。
【００４１】
経口投与する場合には、例えば、乳糖、結晶セルロース、デンプン、リン酸カルシウム等の賦形剤、例えば、デンプン、カルメロースナトリウム、ヒドロキシプロピルセルロース等の結合剤、例えばカルメロースカルシウム、炭酸カルシウム等の崩壊剤、例えばステアリン酸マグネシウム、タルク等の滑沢剤、コーティング剤、保存剤、安定剤などを用いることにより、錠剤、カプセル剤、顆粒剤、シロップ剤、ドライシロップ剤、散剤、丸剤、細粒剤、トローチ錠、乳濁剤や、又は常法によるシロップを含む各種液剤、ドリンク剤等の形態に処方できる。そして、これらの各種製剤は、長時間にわたって作用が持続する徐放性製剤とすることもできる。
【００４２】
経口投与以外の場合としては、貼付剤、軟膏、クリーム剤、ローション剤、更にシャンプー、リンス、ボディーソープ、石鹸、洗顔料、整髪料、乳液、パック、入浴剤などの形態が挙げられる。
【００４３】
次に、実施例を挙げて本発明をより具体的に説明するが、本発明はこれらに限定されるものではない。
【実施例１】
【００４４】
ココアパウダーＨＰＡ１２（明治製菓株式会社製、油分１２重量%）２５０Ｋｇを、５０
％エタノール水溶液１２５０Ｋｇに、攪拌しながらゆっくりと添加した。温度を５０℃にまで上げ３０分間引き続き攪拌して抽出をおこなった。デカンターで分離後、さらに３０００Ｇで遠心分離を行い、エキスとスラッジに分離した。エキスの収量は１００３．６Ｋｇであった。さらにエキスをウルトラフィルター（ミウラ化学装置株式会社製）で精密ろ過し、清澄ろ過液９８２．８Ｋｇを得た。続いてエキスにデキストリン４．４Ｋｇを加えてよく攪拌した後、エバポレーターで濃縮をおこない、一次濃縮液２３４Ｋｇを得た。アルコールが若干残存していたため、水を２４０Ｋｇ加えて再度よく攪拌した後、再度エバポレーターで濃縮した。濃縮液は２３５．４Ｋｇであった。この濃縮液を加熱殺菌処理後、スプレードライを行い、粉末３９．２ｋｇを得た。得られた粉末を、以下カカオポリフェノール濃縮粉末と呼ぶ。カカオポリフェノール濃縮粉末の分析結果を表１に示した。
【００４５】
【表１】
【実施例２】
【００４６】
ココアパウダーＨＰＡ１２(明治製菓株式会社製、油分１２重量％)１．０ｋｇにｎ−ヘキサン５Ｌを加え脱脂した。脱脂カカオ７７５ｇに７０％アセトン６Ｌを加え抽出した。次にエバポレーターで抽出液中のアセトンを除いた。続いて抽出液に９倍量の水飽和ブタノールを加え攪拌した後、静置しブタノール層を回収し濃縮した。濃縮液をDiaion ＨＰ２ＭＧ（三菱化学、１５ｃｍ×内径１０ｃｍ）に吸着させた。吸着後、１５％エタノール溶出で不要成分を除き、次いで８０％エタノール水溶液で溶出し、その８０％エタノール画分を濃縮してカカオプロシアニジン画分（ＣＬＰｒ）を得た。本サンプルを分析した結果、プロシアニジンＢ２(３．９％)、プロシアニジンＢ５（１．３％）、プロシアニジンＣ１（２．６％）、シンナムタンニンＡ２（３．２％）が含まれていた。
【実施例３】
【００４７】
（成分の精製・単離）
実施例２記載のカカオプロシアニジン画分（ＣＬＰｒ）２８４ｍｇをメタノール２．８４ｍｌに溶解し、ＬＣ-Ｓｉカラム（Supelcosil、２５ｃｍ×φ２０ｍｍ、５μｍ）で分離
した。溶離液は、Ａ）ｎ−ヘキサン：メタノール：酢酸エチル＝８：３：１とＢ）ｎ−ヘキサン：メタノール：酢酸エチル＝２：３：１の２液のグラジェントで溶出した。グラジェント条件は、０分Ａ１００％、２０分Ａ１００％、５０分Ａ０％であった（溶離液の組成変化はリニアグラジェント）。溶離液の流速は２０ｍｌ/ｍｉｎ、検出は、ＵＶ２８０
ｎｍで行った。本条件下で、図1に示すようにプロシアニジン類が分子量毎に溶出され、
それぞれピーク２から２３．１ｍｇ、ピーク３から２３．３ｍｇ、ピーク４から２４．３ｍｇのＩＧＦ−１分泌促進剤が得られた。
ピーク２から得られたＩＧＦ−１分泌促進剤２３．１ｍｇを５０％メタノール２．３１ｍｌに溶解して、次の条件でプロシアニジンＢ２ならびにプロシアニジンＢ５の精製・単離を行った。
分離用カラム：Deverosil ＯＤＳ ＨＧ−５（野村化学、φ４．６ｍｍ×２５０ｍｍ、
５μｍ）
溶離液：Ａ）０．１％トリフルオロ酢酸水溶液 と Ｂ）０．１％トリフルオロ酢酸アセ
トニトリル溶液 の２液のグラジェント
グラジェント条件：０分：Ａ９０％、５分：Ａ９０％、３５分：Ａ７５％、
４０分：Ａ０％、４５分：Ａ０％（溶離液の組成変化は
リニアグラジェント）。
溶離液の流速：０．８ｍｌ/ｍｉｎ
検出：ＵＶ２８０ｎｍ
標準物質：エピカテキン
【００４８】
同様にピーク３から得られたＩＧＦ−１分泌促進剤からプロシアニジンＣ１を、ピーク４から得られたＩＧＦ−１分泌促進剤からシンナムタンニンＡ２を精製・単離した。
【実施例４】
【００４９】
（チョコレート）
以下の配合のミルクチョコレートを定法に従って製造した。本チョコレートは５０ｇあたりプロシアニジン類を１１２．９ｍｇ含むミルクチョコレートである。
グラニュー糖 ４２ 重量％
カカオマス １９ 重量％
全粉乳 １７．４ 重量％
ココアバター １７．０ 重量％
レシチン ０．５ 重量％
香料 ０．１ 重量％
実施例１のカカオポリフェノール濃縮粉末 ４ 重量％
【実施例５】
【００５０】
（錠菓）
以下の配合の錠菓を定法に従って製造した。本品は２０ｇあたりプロシアニジン類を２７．７ｍｇ含む錠菓である。
粉糖 ８５．０重量％
クエン酸 ３．５重量％
香料 ３．０重量％
乳化剤 ２．０重量％
実施例１のカカオポリフェノール濃縮粉末 ６．５重量％
【実施例６】
【００５１】
（ゼリードリンク）
以下の配合のゼリードリンクを定法に従って製造した。本品は１００ｇあたりプロシアニジン類を４２．６ｍｇ含むゼリードリンクである。
果糖ぶどう糖液糖 １６．０重量％
クエン酸 ０．７重量％
香料 ０．２重量％
ゲル化剤 ０．２重量％
実施例１のカカオポリフェノール濃縮粉末 ２．０重量％
水 ８０．９重量％
【実施例７】
【００５２】
（チューイングガム）
以下の配合のチューイングガムを定法に従って製造した。本品は１０gあたりプロシアニ
ジン類を１４．９ｍｇ含むチューイングガムである。
砂糖 ６８．５重量％
ガムベース ２０ 重量％
香料 ３．０重量％
クエン酸 １．５重量％
実施例１のカカオポリフェノール濃縮粉末 ７ 重量％
【実施例８】
【００５３】
（飲料）
以下の配合の飲料を定法に従って製造した。本品は１００gあたりプロシアニジン類を１
２．８ｍｇ含む飲料である。
果糖ぶどう糖液糖 １６．０重量％
クエン酸 ０．７重量％
香料 ０．２重量％
実施例１のカカオポリフェノール濃縮粉末 ０．６重量％
水 ８２．５重量％
【実施例９】
【００５４】
（ハードキャンデー）
以下の配合のハードキャンデーを定法に従って製造した。本品は２０gあたりプロシアニ
ジン類を１２．８ｍｇ含むハードキャンデーである。
ショ糖 ６５ 重量％
水あめ ３１．３重量％
クエン酸 ０．７重量％
実施例１のカカオポリフェノール濃縮粉末 ３．０重量％
【実施例１０】
【００５５】
（調整ココア）
以下の配合の調整ココアを定法に従って製造した。本品は３０ｇあたりプロシアニジン類を３２．０ｍｇ含む調整ココアである。
ココアパウダー ２０重量％
実施例１のカカオポリフェノール濃縮粉末 ５重量％
脱脂粉乳 １８重量％
全粉乳 ９重量％
砂糖 ４８重量％
【００５６】
〔試験例１〕
プロシアニジン類によるＣＧＲＰ放出作用の確認
６〜８週齢のＣ５７ＢＬ／６マウス（雄）からマウス脊髄後根神経節細胞（ＤＲＧ）を採取し、以下の条件で７日間培養した。
（培養条件）
培養液：以下成分を含有するＤ−ＭＥＭ／Ｆ１２培養液（インビトロジェン株
式会社製）
１０％ウシ胎児血清
１０ Ｕ/ｍｌ ペニシリン
０．１ ｍｇ/ｍｌ ストレプトマイシン
０．２５ μｇ/ｍｌ アンフォテリシンＢ
１０ ｎｇ/ｍｌ 神経成長因子(シグマ社製)
培養環境：３７℃のＣＯ２インキュベーター内で培養した。
【００５７】
（作用確認方法）
培養上清中に、実施例３によって得られたプロシアニジンＢ２（procyanidin B2）、プロシアニジンＢ５（procyanidin B5）、プロシアニジンＣ１（procyanidin C1）、およびシンナムタンニンＡ２（cinnamtannin A2）を、それぞれ１または１０μＭ加え、３０分後
に培養上清を採取し、それに含まれるカルシトニン遺伝子関連ペプチド（ＣＧＲＰ）濃度を測定してＣＧＲＰ放出に対する効果を検討した。ＣＧＲＰ濃度は、ＥＬＩＳＡキット（ＳＰＩ-ＢＩＯ, Massey Cedex, France）を用いて測定した。陽性コントロールとしてカ
プサイシン（capsaicin）を用いた。その結果、それぞれプロシアニジンＢ２、プロシア
ニジンＢ５、プロシアニジンＣ１、シンナムタンニンＡ２を添加したいずれのケースでもＣＧＲＰ放出が見られた。中でもシンナムタンニンＡ２は、陽性コントロールであるカプサイシンと同等の結果が得られた。結果を図２に示す。
【００５８】
〔試験例２〕
カカオポリフェノールのＩＧＦ−１分泌作用の確認
カカオポリフェノール（実施例２のＣＬＰｒ）０．５％含有粉餌（組成は下記）をマウスに４週間投与して、全身の臓器を採取し、１Ｎの酢酸溶液につけてホモジネートし、遠心分離後上清中のＩＧＦ−１濃度をenzyme immunoassay（ＥＩＡ） kit（Diagnostic Systems Laboratories Inc., Webster, TX）を用いて測定した。また、腹部大動脈から採血し
血漿中のＩＧＦ-１濃度も測定した。測定した結果を図３に示す。０．５％カカオポリフ
ェノール含有粉餌の投与によって、各臓器および血液中のＩＧＦ−１濃度が増加した。
（０．５％カカオポリフェノール含有粉餌配合）
粉餌（CLEA Rod ent Diet CE-2；日本クレア株式会社製） ９９．５重量％
カカオポリフェノール（実施例２のＣＬＰｒ） ０．５重量％
【００５９】
〔試験例３〕
カカオポリフェノール摂取の空間認知機能への影響
試験例２と同様にして０．５％カカオポリフェノール含有粉餌を投与したマウスを用いてモーリス水迷路試験を行った。具体的には、直径１２０ｃｍのプールに直径１０ｃｍ、高さ１１ｃｍの透明なアクリル板のプラットホームを設置し、その１ｃｍ上まで水を満たし、プラットホームを隠す。１日１回、固定したスタート地点からプラットホームに到着するまでの時間を計測し、これを５日間繰り返した。比較としてＣＧＲＰの放出能を欠損したマウスを用いた場合も実施した。結果を図４に示す。０．５％カカオポリフェノール含有粉餌をマウスに投与することによって、スタート地点からプラットホームに到着するまでの所要時間は有意に減少した。一方ＣＧＲＰ放出能欠損マウスの実験では０．５％カカオポリフェノール含有粉餌の投与による効果はみられなかったことから、上記０．５％カカオポリフェノール含有粉餌の投与による効果はＣＧＲＰを介する作用であることが確認された。
【図面の簡単な説明】
【００６０】
【図１】実施例２のＣＬＰｒをＨＰＬＣで分析したクロマトグラムである。
【００６１】
【図２】プロシアニジン類のＣＧＲＰ放出効果測定結果を示す図である。
【００６２】
【図３】カカオポリフェノール摂取の、臓器および血液中のＩＧＦ−１濃度に対する影響を表すグラフである。
【００６３】
【図４】カカオポリフェノール摂取の空間認知機能への影響を表すグラフである。上のグラフが野生型Ｃ５７ＢＬ／６マウスの場合（Wild-typeと標記）、下のグラフがＣＧＲＰの放出能を欠損したＣＧＲＰノックアウト（−／−）マウスの場合（CGRPKOと標記）を示す。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ポリフェノールを有効成分とすることを特徴とするインスリン様成長因子−１分泌促進剤。
【請求項２】
ポリフェノールがプロシアニジン類である請求項１に記載のインスリン様成長因子−１分泌促進剤。
【請求項３】
プロシアニジン類がカカオ、ぶどう、リンゴ、松の樹皮のうちのいずれか１種または２種以上に由来する請求項２に記載のインスリン様成長因子―１分泌促進剤。
【請求項４】
プロシアニジンＢ２、プロシアニジンＢ５、プロシアニジンＣ１、シンナムタンニンＡ２から選択される１種または２種以上の化合物を有効成分とすることを特徴とするインスリン様成長因子―１分泌促進剤。
【請求項５】
請求項１から4のいずれか１項に記載のインスリン様成長因子−１分泌促進剤を含む飲食
品。
【請求項６】
プロシアニジン類含有量が０．０１〜２０重量％である請求項５に記載の飲食品。
【請求項７】
ポリフェノールを含有する飲食品を哺乳動物に経口摂取して、血中または臓器中のインスリン様成長因子−１分泌を促進する方法。
【請求項８】
インスリン様成長因子−１分泌促進作用を有する飲食品を製造するためのポリフェノールの使用。
【請求項１】
ポリフェノールを有効成分とすることを特徴とするインスリン様成長因子−１分泌促進剤。
【請求項２】
ポリフェノールがプロシアニジン類である請求項１に記載のインスリン様成長因子−１分泌促進剤。
【請求項３】
プロシアニジン類がカカオ、ぶどう、リンゴ、松の樹皮のうちのいずれか１種または２種以上に由来する請求項２に記載のインスリン様成長因子―１分泌促進剤。
【請求項４】
プロシアニジンＢ２、プロシアニジンＢ５、プロシアニジンＣ１、シンナムタンニンＡ２から選択される１種または２種以上の化合物を有効成分とすることを特徴とするインスリン様成長因子―１分泌促進剤。
【請求項５】
請求項１から4のいずれか１項に記載のインスリン様成長因子−１分泌促進剤を含む飲食
品。
【請求項６】
プロシアニジン類含有量が０．０１〜２０重量％である請求項５に記載の飲食品。
【請求項７】
ポリフェノールを含有する飲食品を哺乳動物に経口摂取して、血中または臓器中のインスリン様成長因子−１分泌を促進する方法。
【請求項８】
インスリン様成長因子−１分泌促進作用を有する飲食品を製造するためのポリフェノールの使用。
【図１】
【図２】
【図３】
【図４】
【図２】
【図３】
【図４】
【公開番号】特開２０１１−９３８０７（Ｐ２０１１−９３８０７Ａ）
【公開日】平成２３年５月１２日（２０１１．５．１２）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００８−２３８８５９（Ｐ２００８−２３８８５９）
【出願日】平成２０年９月１８日（２００８．９．１８）
【出願人】（０００００６０９１）明治製菓株式会社 (180)
【Ｆターム（参考）】
【公開日】平成２３年５月１２日（２０１１．５．１２）
【国際特許分類】
【出願日】平成２０年９月１８日（２００８．９．１８）
【出願人】（０００００６０９１）明治製菓株式会社 (180)
【Ｆターム（参考）】
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