インビボイメージング用の放射性標識ピリジニル誘導体
本発明は、インビボイメージングに適した新規な放射性標識アリールオキシアニリン誘導体を提供する。既知のアリールオキシアニリン誘導体系インビボ造影剤に比べて、本発明のインビボ造影剤はインビボイメージングのための良好な性質を有する。本発明のインビボ造影剤は、被験体への投与後における良好な脳内取込み及びインビボ動力学と共に、末梢ベンゾジアゼピンレセプター（ＰＢＲ）に対する良好な結合性を示す。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、インビボイメージング、特に末梢ベンゾジアゼピンレセプター（ＰＢＲ）のインビボイメージングに関する。ナノモル親和性をもってＰＢＲに結合し、投与後には脳内への良好な取込みを示し、ＰＢＲへの良好な選択的結合を示すアリールオキシアニリド系インビボ造影剤が提供される。本発明はまた、本発明のインビボ造影剤の合成に有用な前駆体化合物、並びに前記前駆体化合物の使用を含む前記インビボ造影剤の合成方法及び前記方法を実施するためのキットも提供する。インビボ造影剤の自動化合成のためのカセットも提供される。加えて本発明は、本発明のインビボ造影剤を含む放射性医薬組成物並びに前記インビボ造影剤の使用方法も提供する。
【背景技術】
【０００２】
末梢ベンゾジアゼピンレセプター（ＰＢＲ）は、主として末梢組織及びグリア細胞に局在することが知られているが、その生理学的機能はまだ明確に解明されていない。細胞レベル以下では、ＰＢＲはミトコンドリア外膜上に局在することが知られていて、これはミトコンドリア機能の調節及び免疫系で役割を果たす可能性を表している。さらに、ＰＢＲが細胞増殖、ステロイド生成、カルシウム流れ及び細胞呼吸に関係することも仮定されてきた。ＰＢＲは、急性及び慢性ストレス、不安、うつ病、パーキンソン病、アルツハイマー病、脳損傷、癌（Ｇａｖｉｓｈ ｅｔ ａｌ，Ｐｈａｒｍ．Ｒｅｖ．１９９９；５１：６２９）、ハンチントン病（Ｍｅｓｓｍｅｒ ａｎｄ Ｒｅｙｎｏｌｄｓ，Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．Ｌｅｔｔ．１９９８；２４１：５３−６）、喘息（Ｐｅｌａｉａ ｅｔ ａｌ，Ｇｅｎ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．１９９７；２８（４）：４９５−８）、慢性関節リウマチ（Ｂｒｉｂｅｓ ｅｔ ａｌ，Ｅｕｒ．Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．２００２；４５２（１）：１１１−２２）、アテローム性動脈硬化症（Ｄａｖｉｅｓ ｅｔ ａｌ，Ｊ．Ｎｕｃｌ．Ｍｅｄ．２００４；４５：１８９８−１９０７）及び多発性硬化症（Ｂａｎａｔｉ ｅｔ ａｌ，２０００ Ｂｒａｉｎ；１２３：２３２１）を始めとする各種の状態と関連していた。ＰＢＲはニューロパシー性疼痛にも関連する可能性があり、Ｔｓｕｄａ ｅｔ ａｌはニューロパシー性疼痛をもった被験者で小グリア細胞の活性化を観察している（２００５ ＴＩＮＳ ２８（２）ｐｐ１０１−７）。
【０００３】
ＰＢＲ選択性リガンド(Ｒ)−[11Ｃ]−ＰＫ１１１９５を用いる陽電子放出断層撮影（ＰＥＴ）イメージングは、中枢神経系（ＣＮＳ）炎症の包括的指標を提供する。(Ｒ)−[11Ｃ]−ＰＫ１１１９５の使用の成功にもかかわらず、それには制約がある。それは、高いタンパク質結合性及び低特異的乃至非特異的結合性を有することが知られている。その放射性標識代謝産物の役割は知られておらず、結合の定量化には複雑なモデル化が要求される。ＰＢＲに対して高い親和性及び選択性を有することでＣＮＳにおけるＰＢＲ測定の向上を可能にする化合物を得るための努力が行われてきた。
【０００４】
ＰＢＲに対する高い親和性並びに中枢ベンゾジアゼピンレセプター（ＣＢＲ）に比べてＰＢＲに対する高い選択性を有するアリールオキシアニリン誘導体が提唱された（Ｃｈａｋｉ ｅｔ ａｌ，１９９９ Ｅｕｒ．Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．；３７１：１９７−２０４）。［11Ｃ］−ＤＡＡ１１０６及び［18Ｆ］−ＦＥ−ＤＡＡ１１０６は、これらのアリールオキシアニリン化合物に基づくＰＥＴ放射性リガンドである。これらのＰＥＴ放射性リガンドは米国特許第６８７００６９号に教示され、ヒトで研究されてきた（Ｉｋｏｍｏ ｅｔ ａｌ，Ｊ．Ｃｅｒｅｂ．Ｂｌｏｏｄ Ｆｌｏｗ Ｍｅｔａｂ．２００７；２７：１７３−８４及びＦｕｊｉｍｕｒａ ｅｔ ａｌ，Ｊ．Ｎｕｃ．Ｍｅｄ．２００６；４７：４３−５０）。別の放射性フッ素化ＤＡＡ１１０６誘導体は国際公開第２００７／０７４３８３号に教示されている。別の11Ｃ標識ＤＡＡ１１０６誘導体は国際公開第２００７／０３６７８５号に教示されている。放射性ヨウ素化ＤＡＡ１１０６は、欧州特許出願公開第１８５４７８１号に記載され、またＺｈａｎｇ ｅｔ ａｌ（２００７ Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．；５０：８４８−５５）によって記載されている。［11Ｃ］−ＤＡＡ１１０６、［18Ｆ］−ＦＥ−ＤＡＡ１１０６及び［123Ｉ］−ＤＡＡ１１０６の化学構造は以下の通りである。
【０００５】
【化１】
【０００６】
しかし、これらの化合物の動力学的性質はインビボイメージングには理想的でないため、定量的研究に対するその適用は制限されることがある。
【０００７】
ＤＡＡ１１０６系列の放射性リガンドにさらなる改良を加えようという努力の中で、Ｂｒｉａｒｄ ｅｔ ａｌ（Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．２００８；５１：１７−３０）は別のアリールオキシアニリン誘導体ＰＢＲ２８を報告した。ＰＢＲ２８及びＰＢＲ２８から導かれるＰＥＴ放射性リガンドの構造は以下の通りである。
【０００８】
【化２】
【０００９】
（［18Ｆ］−ＦＥ−ＰＢＲ２８としても知られる）［18Ｆ］−ＦＥＰＰＡは、感度及び特異性は測定されなかったものの、インビトロでＰＢＲに対するナノモル未満の親和性を有することが判明し、また静脈内注射後に天然ラットの脳内への良好な取込みを示した（Ｗｉｌｓｏｎ ｅｔ ａｌ，Ｎｕｃ．Ｍｅｄ．Ｂｉｏｌ．２００８；３５：３０５−１４）。［11Ｃ］−ＰＢＲ２８をサルで試験し、ＰＥＴを用いてその脳内動力学を評価した。Ｂｒｉａｒｄ ｅｔ ａｌ（上記）により、［11Ｃ］−ＰＢＲ２８は、(Ｒ)−[11Ｃ]−ＰＫ１１１９５に比べて高い脳内取込み、ＰＢＲ発現組織に対する良好な特異的結合、及びインビボイメージングに一段と適した動力学的性質を有することが報告された。本発明者らは、ＰＢＲ２８が(Ｒ)−[11Ｃ]−ＰＫ１１１９５よりインビボＰＢＲ造影剤として良好な性質を示すものの、ＰＢＲ発現組織に対するその特異性は理想的でないことを見出した。さらに本発明者らは、ＰＢＲ２８のインビボクリアランス特性も理想的でないことを見出した。したがって、さらに改良されたＰＢＲ特異的インビボ造影剤を得る余地が存在している。
【００１０】
本願の優先日後に公開された国際公開第２０１０／０１５３４０号及び同第２０１０／０１５３８７号は、ＰＢＲ２８と同じ環上であるが、その環中の異なる位置に窒素ヘテロ原子を有するさらに別の部類のアリールオキシアニリン誘導体を開示している。一般的には、国際公開第２０１０／０１５３４０号及び同第２０１０／０１５３８７号は次の式Ｉの化合物を開示している。
【００１１】
【化３】
【００１２】
式中、
Ｒ1及びＲ2は各々独立かつ個別に、（Ｇ3）アリール、置換（Ｇ3）アリール、（Ｇ3−（Ｃ1〜Ｃ8）アルキル）アリール、（Ｇ3−（Ｃ1〜Ｃ8）アルコキシ）アリール、（Ｇ3−（Ｃ2〜Ｃ8）アルキニル）アリール、（Ｇ3−（Ｃ2〜Ｃ8）アルケニル）アリール、置換（Ｇ3−（Ｃ1〜Ｃ8）アルキル）アリール、置換（Ｇ3−（Ｃ1〜Ｃ8）アルコキシ）アリール、置換（Ｇ3−（Ｃ2〜Ｃ8）アルキニル）アリール及び置換（Ｇ3−（Ｃ2〜Ｃ8）アルケニル）アリールからなる群から選択され、
Ｇ1、Ｇ2及びＧ3は各々独立かつ個別に、式Ｉの化合物が正確に１つのＬを含むことを条件として、水素及びＬからなる群から選択され、
ＬはＲ3、［18Ｆ］−フルオロ及び［19Ｆ］−フルオロからなる群から選択され、
Ｒ3は脱離基であり、
ｎは０〜６の整数である。
【００１３】
国際公開第２０１０／０１５３４０号及び同第２０１０／０１５３８７号には、（「２ｄ」及び「５ｄ」と命名された）２種の特定化合物が以前のアリールオキシアニリン誘導体に比べて脳内ＰＢＲのインビボイメージングのための改善された性質を有することを示すデータが記載されている。これら２種の化合物の化学式を以下に示す。
【００１４】
【化４】
【先行技術文献】
【特許文献】
【００１５】
特開２０００−００１４７６号公報
【発明の概要】
【００１６】
本発明は、インビボイメージングに適した新規な放射性標識アリールオキシアニリン誘導体を提供する。本発明のインビボ造影剤は、中枢神経系（ＣＮＳ）における末梢ベンゾジアゼピンレセプター（ＰＢＲ）のインビボイメージングのための良好な性質を有する。本発明のインビボ造影剤は、被験体への投与後における良好な脳内取込み及びインビボ動力学と共に、ＰＢＲに対する良好な結合性を示す。
【図面の簡単な説明】
【００１７】
【図１】図１は、［18Ｆ］−ＦＥ−ＰＢＲ２８の脳内分布（上部）を造影剤１の脳内分布（下部）と比較して示している。
【発明を実施するための形態】
【００１８】
造影剤
一態様では、本発明は次の式Ｉのインビボ造影剤或いはその塩又は溶媒和物を提供する。
【００１９】
【化５】
【００２０】
式中、
Ｒ1はメチル及びＣ1-3フルオロアルキルから選択され、
Ｒ2は水素、ハロゲン、Ｃ1-3アルコキシ及びＣ1-3フルオロアルコキシから選択され、
Ｒ3は水素、ハロゲン及びＣ1-3アルコキシから選択され、
Ａ1はＣＨ又はＮであり、
Ａ2及びＡ4-7の１つ又は２つがＮであり、Ａ2及びＡ4-7の残りがＣＨであり、
Ａ3はＣＨ又はＣＨ−Ｏ−Ｒ4（式中、Ｒ4はＨ、Ｃ1-3アルキル又はＣ1-3ハロアルキルである。）であるか、或いは別法としてＡ2及びＡ4-7の１つがＮでありかつＡ2及びＡ4-7の残りがＣＨである場合にＡ3はＮであってよく、
式Ｉはインビボイメージングに適した放射性同位体である原子を含む。
【００２１】
本発明に関連する「インビボ造影剤」とは、インビボイメージングに適した放射性標識化合物をいう。本明細書で使用する「インビボイメージング」という用語は、被験体の内部構造の全部又は一部の画像を非侵襲的に生成する技術をいう。かかるインビボイメージング方法の例は、単光子放出コンピューター断層撮影法（ＳＰＥＣＴ）及び陽電子放出断層撮影法（ＰＥＴ）である。
【００２２】
本発明に係る好適な塩には、（ｉ）鉱酸（例えば、塩酸、臭化水素酸、リン酸、メタリン酸、硝酸及び硫酸）から導かれるもの並びに有機酸（例えば、酒石酸、トリフルオロ酢酸、クエン酸、リンゴ酸、乳酸、フマル酸、安息香酸、グリコール酸、グルコン酸、コハク酸、メタンスルホン酸及びｐ−トルエンスルホン酸）から導かれるもののような生理学的に許容される酸付加塩、並びに（ｉｉ）アンモニウム塩、アルカリ金属塩（例えば、ナトリウム塩及びカリウム塩）、アルカリ土類金属塩（例えば、カルシウム塩及びマグネシウム塩）、有機塩基（例えば、トリエタノールアミン、Ｎ−メチル−Ｄ−グルカミン、ピペリジン、ピリジン、ピペラジン及びモルホリン）との塩、及びアミノ酸（例えば、アルギニン及びリシン）との塩のような生理学的に許容される塩基塩がある。
【００２３】
本発明に係る好適な溶媒和物には、エタノール、水、食塩水、生理的緩衝液及びグリコールと共に生成されるものがある。
【００２４】
特記しない限り、単独で又は組み合わせて使用される「アルキル」という用語は、好ましくは１〜３の炭素原子を含む直鎖又は枝分れアルキル基を意味する。かかる基の例には、メチル、エチル及びプロピルがある。
【００２５】
特記しない限り、単独で又は組み合わせて使用される「アルコキシ」という用語は式−Ｏ−アルキルのアルキルエーテル基を意味し、ここでアルキルという用語は上記に定義した通りである。好適なアルキルエーテル基の例には、メトキシ、エトキシ及びプロポキシがある。
【００２６】
「ハロゲン」又は「ハロ」という用語は、フッ素、塩素、臭素及びヨウ素から選択される置換基を意味する。「ハロアルキル」及び「ハロアルコキシ」とは、それぞれ、上記に定義したアルキル基及びアルコキシ基が１以上のハロゲンで置換されたもの、好ましくは末端で置換されたもの（即ち、−アルキル−ハロゲン及び−アルコキシ−ハロゲン）である。
【００２７】
「インビボイメージングに適した放射性同位体である原子を含む」という用語は、上記に定義した式Ｉにおいて、１つの原子の同位体形態がインビボイメージングに適した放射性同位体であることを意味する。インビボイメージングに適するには、放射性同位体は前記被験体への投与後に外部で検出可能である。本発明の好ましい放射性同位体は、γ線放出型放射性ハロゲン及び陽電子放出型放射性非金属である。本発明で使用するのに適したγ線放出型放射性ハロゲンの例は、123Ｉ、131Ｉ及び77Ｂｒである。好ましいγ線放出型放射性ハロゲンは123Ｉである。本発明で使用するのに適した陽電子放出型放射性非金属の例は、11Ｃ、13Ｎ、18Ｆ及び124Ｉである。好ましい陽電子放出型放射性非金属は11Ｃ及び18Ｆ、特に18Ｆである。
【００２８】
好ましくは、Ｒ1がＣ1-3フルオロアルキルであり、Ｒ2が水素であるか、或いはＲ1がメチルであり、Ｒ2がＣ1-3フルオロアルコキシである。
【００２９】
Ｒ3は、好ましくは水素である。
【００３０】
式Ｉのインビボ造影剤の好ましい一実施形態では、Ａ1、Ａ2及びＡ4-7の２つがＮであり、Ａ1、Ａ2及びＡ4-7の残りがＣＨである。
【００３１】
式Ｉのインビボ造影剤の別の好ましい実施形態では、Ａ2及びＡ4〜Ａ6の１つがＮであり、Ａ1がＣＨであり、Ａ7がＣＨである。
【００３２】
式Ｉのインビボ造影剤のさらに別の好ましい実施形態では、Ａ7がＮであり、Ａ1-6がＣＨであり、Ｒ3が水素である。
【００３３】
本発明におけるインビボイメージングに適した好ましい放射性同位体は18Ｆである。最も好ましくは、Ｒ1が［18Ｆ］−フルオロアルキルであるか、或いはＲ2が［18Ｆ］−フルオロアルコキシである。かかるインビボ造影剤の例は、以下の造影剤１〜１９である。
【００３４】
【化６】
【００３５】
本発明の好ましい18Ｆインビボ造影剤はインビボ造影剤１、１８及び１９であり、最も好ましくはインビボ造影剤１である。
【００３６】
（上記に示した）非放射性インビボ造影剤１の効力（実施例６）を測定し、その異性体であるＮ−［３−（２−フルオロエトキシ）ベンジル］−Ｎ−（４−フェノキシ−ピリジン−３−イル）アセトアミド（即ち、先行技術化合物［18Ｆ］−ＦＥ−ＰＢＲ２８の非放射性バージョン）と比較した。動物体内分布モデル（実施例７）では、インビボ造影剤１を試験し、その体内分布を（Ｗｉｌｓｏｎ ｅｔ ａｌ，Ｎｕｃ．Ｍｅｄ．Ｂｉｏｌ．２００８；３５：３０５−１４に従って製造した）先行技術化合物［18Ｆ］−ＦＥ−ＰＢＲ２８の体内分布と比較した。
【００３７】
［18Ｆ］−ＦＥ−ＰＢＲ２８の異性体であるにもかかわらず、造影剤１のＰＢＲに関して測定された効力は２桁低いことが判明した。さらに、造影剤１に関しては、［18Ｆ］−ＦＥ−ＰＢＲ２８に比べて脳内のＰＢＲ発現組織に対する向上した選択性が認められた。本発明者らは、［18Ｆ］−ＦＥ−ＰＢＲ２８の（３０分後に対する２分後の）全脳クリアランス比が造影剤１の３．４６に比べて１．９７である子とを認めたが、これはＰＢＲレセプターに結合しない造影剤１が脳から一層急速に排出されることを示している。これにより、造影剤１に関して認められる信号／バックグラウンド比が［18Ｆ］−ＦＥ−ＰＢＲ２８に比べて高いのはそのためであるという仮説が立てられる。
【００３８】
図１は、注射後６０分までにおける各化合物の脳内分布を示している。これらのグラフは、注射後３０分では、インビボ造影剤１が［18Ｆ］−ＦＥ−ＰＢＲ２８に比べて脳の残部より嗅球（ＯＢ）中に多く保持されることを示しており、これはインビボ造影剤１が先に例示したインビボ造影剤［18Ｆ］−ＦＥ−ＰＢＲ２８よりＰＢＲに対して向上した選択性を有することを実証している。さらに、これらのグラフは、造影剤１のクリアランスプロファイルが［18Ｆ］−ＦＥ−ＰＢＲ２８に比べてインビボイメージングに一層有利であることを示している。
【００３９】
製造方法
さらに別の態様では、本発明は、上述した本発明のインビボ造影剤の製造方法であって、前記放射性同位体の適当な供給源を次の式ＩＩの前駆体化合物と反応させる段階を含んでなる方法を提供する。
【００４０】
【化７】
【００４１】
式中、
Ｒ11-13の１つは前駆体基を含み、Ｒ11-13の残りはそれぞれ式ＩのＲ1-3に関して定義した通りであって、任意には保護基を含み、
Ａ11-17はそれぞれ式ＩのＡ1-7に関して定義した通りであって、任意には保護基を含み、
ただしＡ17がＮであり、かつＡ11、Ａ12及びＡ14-16がすべてＣＨである場合には、Ａ13がＣＨであり、Ｒ13が水素であることを条件とする。
【００４２】
「前駆体化合物」は、インビボイメージングに適した前記放射性同位体の好都合な化学形態との化学反応が部位特異的に起こり、最小数の段階（理想的にはただ１つの段階）で反応を実施でき、かつ格別の精製の必要なしに（理想的にはいかなる追加の精製も必要なしに）所望のインビボ造影剤が得られるように設計された、放射性標識化合物の非放射性誘導体からなる。かかる前駆体化合物は合成品であり、良好な化学純度で簡便に得ることができる。前駆体化合物は、任意には前駆体化合物のある種の官能基に関して保護基を含むことができる。前駆体化合物は、キット中又は自動化合成装置と共に使用するのに適したカセット中に溶液状態で供給するか、或いは固体担体に結合した状態で供給することができる。キット及びカセットは本発明の追加の態様をなし、以下に一層詳しく論議される。
【００４３】
「保護基」という用語は、望ましくない化学反応を阻止又は抑制するが、分子の残部を変質させない十分に温和な条件下で問題の官能基から脱離させ得るのに十分な反応性を有するように設計された基を意味する。脱保護後には所望のインビボ造影剤が得られる。保護基は当業者にとって公知であり、‘Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ Ｇｒｏｕｐｓ ｉｎ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ’，Ｔｈｅｏｒｏｄｏｒａ Ｗ．Ｇｒｅｅｎｅ ａｎｄ Ｐｅｔｅｒ Ｇ．Ｍ．Ｗｕｔｓ（Ｔｈｉｒｄ Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ，１９９９）に記載されている。
【００４４】
「前記放射性同位体の適当な供給源」という用語は、放射性同位体が前駆体化合物に共有結合するようにして前駆体化合物の置換基と反応し得る化学形態の放射性同位体を意味する。
【００４５】
概して言えば、前駆体化合物を前記放射性同位体の適当な供給源と「反応させる」段階は、できるだけ高い放射化学収率（ＲＣＹ）で所望のインビボ造影剤を生成するのに適した反応条件下で２種の反応体を合わせることを含んでいる。若干の一層詳細な経路を以下の実験セクションに示す。
【００４６】
次に、本発明の各種インビボ造影剤を得るための一般的方法を記載する。当業者であれば、本発明の技術的範囲全体にわたるインビボ造影剤を得るため、格別の実験を行わなくても以下に記載される教示内容を適用することができよう。
【００４７】
Ｏｋｕｂｕ ｅｔ ａｌ（２００４ Ｂｉｏｏｒｇ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．；１２：４２３−３８）は、非放射性アリールオキシアニリド化合物を得るための方法を記載している。本発明のインビボ造影剤に類似したインビボ造影剤を得るための合成スキームは、Ｂｒｉａｒｄ ｅｔ ａｌ（Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．２００８；５１；１７−３１）、Ｗｉｌｓｏｎ ｅｔ ａｌ（Ｎｕｃ．Ｍｅｄ．Ｂｉｏｌ．２００８；３５；３０５−１４）、及びＺｈａｎｇ ｅｔ ａｌ（Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．２００７；５０：８４８−５５）によって記載されている。これらの先行技術方法は、本発明のインビボ造影剤を得るのに適した前駆体化合物を得るために容易に適合させることができる。
【００４８】
以下のスキーム１は、本発明のインビボ造影剤を製造するのに適した前駆体化合物を得るための一般反応スキームである。
【００４９】
【化８】
【００５０】
Ｒ22はヒドロキシル、アルコキシ又はハロアルコキシであり、ＬＧはクロリド又はブロミドのような脱離基であり、Ｚは(ＣＨ2)x−Ｙ（式中、ｘは１〜３であり、Ｙは水素又はインビボイメージングに適した放射性同位体の適当な供給源によって置換され得る基である。）であり、Ａ21-27はそれぞれＡ1-7に関して本明細書で定義した通りである。
【００５１】
求核芳香族置換が起こる塩基性条件下でｏ−クロロニトロ芳香族化合物（ａ）をヒドロキシル芳香族化合物（ｂ）と反応させる。水素化によってニトロ基を還元すれば、対応するアニリン（ｄ）が得られる。芳香族アルデヒド（ｅ）による還元性アルキル化でベンジルアミン（ｆ）が得られる。アセチル化によってアセトキシアミド（ｇ）が得られる。標識に使用すべき放射性同位体に応じ、（ｇ）自体が前駆体化合物であるか、或いは以下に一層詳しく論議されるようにして前駆体化合物に転化させることができる。
【００５２】
インビボ造影剤の放射性同位体が18Ｆである場合、放射性フッ素原子はフルオロアルキル基又はフルオロアルコキシ基の一部をなすことができる。これは、アルキルフルオリドがインビボでの代謝に耐えるからである。別法として、放射性フッ素原子は直接共有結合によって芳香環に結合することができる。
【００５３】
放射性フッ素化は、18Ｆ−フッ化物と良好な脱離基を有する前駆体化合物（例えば、アルキルブロミド、アルキルメシレート又はアルキルトシレート）中の適当な化学基との反応を用いる直接標識によって実施できる。18Ｆはまた、［18Ｆ］−フルオロアルキルブロミド、［18Ｆ］−フルオロアルキルメシレート又は［18Ｆ］−フルオロアルキルトシレートでヒドロキシル基をＯ−アルキル化することによっても導入できる。
【００５４】
アリール系に関しては、アリールジアゾニウム塩、アリールニトロ化合物又はアリール第四級アンモニウム塩からの18Ｆ−フッ化物求核置換が、アリール−18Ｆ誘導体への好適な経路である。
【００５５】
別法として、18Ｆによる標識は、前駆体化合物からの脱離基の求核置換によって達成できる。好適な脱離基には、クロリド、ブロミド、ヨージド、トシレート、メシレート及びトリフレートがある。かかる誘導体は、本発明のインビボ造影化合物を製造するための前駆体化合物である。
【００５６】
別の方策は、上記に定義したような好適な脱離基を、前駆体化合物上に存在するアルキルアミド基上に設けることである。このようにすれば、通常は核反応18Ｏ(ｐ，ｎ)18Ｆから水溶液として得られ、次いで陽性対イオンの添加及びそれに続く水の除去によって反応性にされる［18Ｆ］−フッ化物イオン（18Ｆ-）の適当な供給源との反応によって前駆体化合物を一段階で標識できる。この方法には、前駆体化合物は、放射性フッ素化が化合物上の特定の部位で起こるように選択的に化学保護されるのが普通である。好適な保護基は既に前述したものである。
【００５７】
放射性同位体が18Ｆである場合、前駆体化合物は以下のいずれかであることが好ましい。
（ｉ）求核置換のためのアルキルハライド又はアルキルスルホネート（例えば、アルキルブロミド、アルキルメシレート又はアルキルトシレート）、或いは
（ｉｉ）（例えば、18Ｆ(ＣＨ2)3ＯＭｓ又は18Ｆ(ＣＨ2)3ＯＢｒでヒドロキシル基をＯ−アルキル化することによる18Ｆの導入のための）ヒドロキシル。
【００５８】
（上記スキーム１の続きである）以下のスキーム２では、Ｚは−(ＣＨ2)−ブロミド又は−(ＣＨ2)−クロリドである。これを塩基性条件下で［18Ｆ］−フッ化物イオンで処理すれば、標識18Ｆ−フルオロアセチル化合物（ｈ）（即ち、Ｒ1が18Ｆからなる式Ｉのインビボ造影剤）が得られる。
【００５９】
【化９】
【００６０】
（上記スキーム１の（ｆ）からの続きである）以下のスキーム３では、（ｆ）のＲ22はヒドロキシルであり、アセチル−ＬＧによる（ｆ）のアセチル化でアセトキシアミド（ｉ）が得られる。アセテートの加水分解でアルコール（ｊ）が得られ、これを18Ｆ−フルオロエチルトシレート及び水素化ナトリウムでアルキル化することで18Ｆ−フルオロエトキシ化合物（ｋ）（即ち、Ｒ2が18Ｆからなる式Ｉのインビボ造影剤）が得られる。
【００６１】
【化１０】
【００６２】
造影剤１もこの経路で得ることができる。
【００６３】
【化１１】
【００６４】
スキーム３についてさらに説明すると、同じインビボ造影剤（ｋ）は、脱離基を含む前駆体化合物を［18Ｆ］−フッ化物で直接標識することでも得ることができる。脱離基がトシレートであるこのような直接標識前駆体は、（ｊ）を特定のアルキルグリコールジトシレートと反応させて（ｊ１）とすることで得られる。次に、（ｊ１）を［18Ｆ］−フッ化物で直接標識することで18Ｆ−フルオロエトキシ化合物（ｋ）が得られる。造影剤１もこの経路で得ることができる。
【００６５】
【化１２】
【００６６】
放射性同位体が放射性ヨウ素である本発明のインビボ造影剤を得るためには、好ましい前駆体化合物は、求電子又は求核ヨウ素化を受ける誘導体或いは標識アルデヒド又はケトンとの縮合を受ける誘導体を含むものである。第１のカテゴリーの例は以下の（ａ）及び（ｂ）である。
（ａ）トリアルキルスタンナン（例えば、トリメチルスタンニル又はトリブチルスタンニル）、トリアルキルシラン（例えば、トリメチルシリル）或いは有機ホウ素化合物（例えば、ボロネートエステル又はオルガノトリフルオロボレート）のような有機金属誘導体。
（ｂ）求電子ヨウ素化に向けて活性化された芳香環（例えば、フェノール類）及び求核ヨウ素化に向けて活性化された芳香環（例えば、アリールヨードニウム塩、アリールジアゾニウム塩、アリールトリアルキルアンモニウム塩又はニトロアリール誘導体）。
【００６７】
放射性ヨウ素化には、前駆体化合物は好ましくは、（放射性ヨウ素交換を可能にするための）アリールヨージド又はブロミド、活性化前駆体化合物アリール環（例えば、フェノール基）、有機金属前駆体化合物（例えば、トリアルキルスズ、トリアルキルシリル又は有機ホウ素化合物）、或いはトリアゼンのような有機前駆体化合物又は求核置換のための良好な脱離基（例えば、ヨードニウム塩）からなる。放射性ヨウ素を有機分子中に導入するための前駆体化合物及び方法は、Ｂｏｌｔｏｎ（Ｊ．Ｌａｂ．Ｃｏｍｐ．Ｒａｄｉｏｐｈａｒｍ．２００２；４５：４８５−５２８）によって記載されている。好適なボロネートエステル有機ホウ素化合物及びその製法は、Ｋａｂａｌｋａ ｅｔ ａｌ（Ｎｕｃｌ．Ｍｅｄ．Ｂｉｏｌ．２００２；２９：８４１−８４３及び２００３；３０：３６９−３７３）によって記載されている。好適なオルガノトリフルオロボレート及びその製法は、Ｋａｂａｌｋａ ｅｔ ａｌ（Ｎｕｃｌ．Ｍｅｄ．Ｂｉｏｌ．２００４；３１：９３５−９３８）によって記載されている。放射性ヨウ素化用の好ましい前駆体化合物は有機金属前駆体化合物からなり、最も好ましくはトリアルキルスズからなる。
【００６８】
放射性ヨウ素を結合できるアリール基の例を以下に示す。
【００６９】
【化１３】
【００７０】
これらの基はいずれも、芳香環上への容易な放射性ヨウ素置換を可能にする置換基を含んでいる。放射性ヨウ素を含む別の置換基は、例えば次式のように、放射性ハロゲン交換による直接ヨウ素化で合成することができる。
【００７１】
【化１４】
【００７２】
例えば、本発明の放射性ヨウ素化インビボ造影剤を得るのに適した前駆体化合物では、式ＩＩＩのＲ21又はＲ23は、それが結合した芳香族基と共に、
（ｉ）有機金属誘導体又は有機ホウ素化合物で置換された芳香環を形成するか、
（ｉｉ）求電子放射性ヨウ素化に向けて活性化された芳香環（例えば、フェノール類）を形成するか、或いは
（ｉｉｉ）求核放射性ヨウ素化に向けて活性化された芳香環（例えば、アリールヨードニウム塩、アリールジアゾニウム塩、アリールトリアルキルアンモニウム塩又はニトロアリール誘導体）を形成する。
【００７３】
これらの前駆体化合物は、放射性ヨウ素置換により、本発明の放射性ヨウ素化インビボ造影剤に容易に転化される。
【００７４】
本発明のインビボ造影剤に類似した構造を有する放射性ヨウ素化化合物は、Ｚｈａｎｇ ｅｔ ａｌ（２００７ Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．；５０：８４８−５５）によって記載されている。これらの化合物は、トリブチルスタンナン前駆体化合物の放射性ヨウ素化によってベンゼン環上に放射性ヨウ素を導入することで得られた。本発明の放射性ヨウ素化インビボ造影剤を得るためには、（上記スキーム１の続きである）以下のスキーム４（式中、（ｇ）のＲ22はブロミドである。）に例示されるように類似の方法が使用できる。
【００７５】
【化１５】
【００７６】
Ｒ2又はＲ3が放射性臭素である式Ｉの化合物は、式Ｉの放射性ヨウ素化化合物に関して上記に記載した前駆体化合物の放射性臭素化によって得ることができる。Ｋａｂａｌｋａ ａｎｄ Ｖａｒｍａは、放射性臭素化化合物を含む放射性ハロゲン化化合物を合成するための様々な方法を総説している（Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ １９８９；４５（２１）：６６０１−２１）。
【００７７】
本発明の11Ｃ標識インビボ造影剤は、インビボ造影剤のデスメチル化バージョンである前駆体化合物を11Ｃ−メチルヨージドと反応させることで直截的に合成できる。11Ｃ標識アリールオキシアニリド化合物を得るためのかかる方法は、Ｂｒｉａｒｄ ｅｔ ａｌ（２００８ Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．；５１；１７−３０）によって記載されている。Ｂｒｉａｒｄによって記載された方法は、異なる出発原料を使用しながら、本発明の11Ｃ標識インビボ造影剤を得るために容易に適合させることができる。（上記スキーム１の続きである）以下のスキーム５（式中、（ｇ）のＲ22はヒドロキシルである。）は、放射性同位体が11Ｃである本発明のインビボ造影剤を得るため、Ｂｒｉａｒｄ ｅｔ ａｌの教示内容をいかにして適合させ得るかを例示している。
【００７８】
【化１６】
【００７９】
また、所望のインビボ造影剤の特定の炭化水素のグリニャール試薬を［11Ｃ］−ＣＯ2と反応させて、前駆体化合物中のアミン基と反応して所望の11Ｃ標識インビボ造影剤を与える11Ｃ試薬を得ることによって11Ｃを組み込むことも可能である。グリニャール試薬は、所望の放射性標識部位にハロゲン化マグネシウム前駆体基を含んでいる。
【００８０】
11Ｃの半減期は２０．４分にすぎないので、11Ｃ標識中間体は高い比放射能を有すること、したがってできるだけ速い反応プロセスを用いてそれを製造することが重要である。かかる11Ｃ標識技術に関する徹底的な総説を、Ａｎｔｏｎｉ ｅｔ ａｌ，“Ａｓｐｅｃｔｓ ｏｎ ｔｈｅ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ ｏｆ 11Ｃ−Ｌａｂｅｌｌｅｄ Ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ”ｉｎ Ｈａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ Ｒａｄｉｏｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ，Ｅｄ．Ｍ．Ｊ．Ｗｅｌｃｈ ａｎｄ Ｃ．Ｓ．Ｒｅｄｖａｎｌｙ（２００３，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ａｎｄ Ｓｏｎｓ）に見出すことができる。
【００８１】
本発明の前駆体化合物は、理想的には無菌で非発熱性の形態で供給される。したがって前駆体化合物は、インビボ造影剤を哺乳動物への投与に適した生体適合性キャリヤーと共に含んでなる医薬組成物の製造に使用できる。前駆体化合物はまた、かかる医薬組成物を製造するためのキット中に一成分として含めるためにも適している。
【００８２】
好ましい実施形態では、前駆体化合物はキット又は自動化合成装置で使用するように設計されたカセットの一部として溶液状態で供給される。これらの態様は、本発明の追加の態様に関連して以下に一層詳しく論議される。
【００８３】
別の好ましい実施形態では、前駆体化合物は固相に結合されている。前駆体化合物は、好ましくは固体担体マトリックスに共有結合した状態で供給される。このようにすれば、所望の生成物は溶液状態で生成される一方、出発原料及び不純物は固相に結合したままに保たれる。かかる系の例としては、18Ｆ−フッ化物による固相求電子フッ素化用の前駆体化合物が国際公開第０３／００２４８９号に記載されており、18Ｆ−フッ化物による固相求核フッ素化用の前駆体化合物が国際公開第０３／００２１５７号に記載されている。
【００８４】
本発明の製造方法で使用するための好ましい前駆体化合物の多くは、アルキルブロミド、アルキルメシレート、アルキルトシレート、トリアルキルスタンナン、トリアルキルシラン及び有機ホウ素化合物から選択される前駆体基を含んでいる。これら多くの好ましい前駆体化合物自体は、本発明の独立した態様をなしている。
【００８５】
放射性医薬組成物
さらに別の態様では、本発明は「放射性医薬組成物」を提供し、これは本発明のインビボ造影剤を哺乳動物への投与に適した形態の生体適合性キャリヤーと共に含んでいる。
【００８６】
「生体適合性キャリヤー」は、放射性医薬組成物が生理学的に認容され得るようにして（即ち、毒性又は過度の不快感なしに哺乳動物体に投与できるようにして）インビボ造影剤を懸濁又は溶解するための流体（特に液体）である。生体適合性キャリヤーは、好適には、無菌のパイロジェンフリー注射用水、（有利には注射用の最終生成物が等張性又は非低張性になるように平衡させ得る）食塩水のような水溶液、或いは１種以上の張度調整物質（例えば、血漿陽イオンと生体適合性対イオンとの塩）、糖（例えば、グルコース又はスクロース）、糖アルコール（例えば、ソルビトール又はマンニトール）、グリコール（例えば、グリセロール）又は他の非イオン性ポリオール物質（例えば、ポリエチレングリコール、プロピレングリコールなど）の水溶液のような注射可能なキャリヤー液体である。生体適合性キャリヤーはまた、エタノールのような生体適合性有機溶媒を含んでいてもよい。かかる有機溶媒は、親油性の高い化合物又は配合物を可溶化するために有用である。好ましくは、生体適合性キャリヤーはパイロジェンフリー注射用水、等張食塩水又はエタノール水溶液である。静脈内注射用生体適合性キャリヤーのｐＨは好適には４．０〜１０．５の範囲内にある。
【００８７】
本発明の放射性医薬組成物中に含まれる場合におけるインビボ造影剤の好適な実施形態及び好ましい実施形態は、本明細書で既に記載した通りである。
【００８８】
かかる放射性医薬組成物は非経口的に（即ち、注射によって）投与でき、最も好ましくは水溶液である。かかる組成物は、緩衝剤、薬学的に許容される可溶化剤（例えば、シクロデキストリン或いはＰｌｕｒｏｎｉｃ、Ｔｗｅｅｎ又はリン脂質のような界面活性剤）、薬学的に許容される安定剤又は酸化防止剤（例えば、アスコルビン酸、ゲンチジン酸又はｐ−アミノ安息香酸）のような追加成分を任意に含み得る。本発明のインビボ造影剤が放射性医薬組成物として提供される場合、前記インビボ造影剤の製造方法はさらに、放射性医薬組成物を得るために必要な段階（例えば、有機溶媒の除去、生体適合性緩衝剤及び任意の追加成分の添加）を含むことができる。非経口的投与には、放射性医薬組成物が無菌性かつ無発熱原性であることを保証するための手段を講じることも必要である。
【００８９】
キット及びカセット
好ましい実施形態では、本発明のインビボ造影剤の製造方法は、キット又は自動化合成装置に挿入し得るカセットを用いて実施できる。これらのキット及びカセットはまた、本発明の追加の態様をなしており、本明細書で定義される本発明の放射性医薬組成物の製造のため特に好都合である。
【００９０】
本発明のキットは、本発明の前駆体化合物を密封容器内に含んでいる。「密封容器」は、好ましくは、注射器による溶液の追加及び抜取りを許しながら、無菌保全性及び／又は放射能安全性の維持、さらに任意には不活性ヘッドスペースガス（例えば、窒素又はアルゴン）の維持を可能にする。好ましい密封容器は、気密クロージャーを（通例はアルミニウムからなる）オーバーシールと共にクリンプ加工した隔壁密封バイアルである。かかる密封容器は、例えばヘッドスペースガスの変更又は溶液のガス抜きに所望される場合、クロージャーが真空に耐え得るという追加の利点を有している。
【００９１】
本発明のキット中に使用する場合、前駆体化合物の好適な実施形態及び好ましい実施形態は、本明細書で既に記載した通りである。
【００９２】
キット中に使用するための前駆体化合物を無菌製造条件下で使用すれば、所望の無菌で非発熱性の材料を得ることができる。別法として、前駆体化合物を非無菌条件下で使用し、次いで例えばγ線照射、オートクレーブ処理、乾熱又は（例えば、エチレンオキシドによる）化学処理を用いる終末滅菌を施すこともできる。好ましくは、前駆体化合物は無菌で非発熱性の形態で供給される。最も好ましくは、無菌で非発熱性の前駆体化合物は上述したような密封容器に入れて供給される。
【００９３】
好ましくは、試験間での汚染の可能性を最小限に抑えると共に無菌性及び品質保証を確実にするため、キットのすべての構成要素が使い捨てである。
【００９４】
別の態様では、本発明は、本発明のインビボ造影剤を合成するため適宜に改造された自動化合成装置に挿入し得るカセットを提供する。現在、特に［18Ｆ］−ラジオトレーサーはしばしば自動化放射合成装置で簡便に製造されている。かかる装置には、Ｔｒａｃｅｒｌａｂ（商標）及びＦＡＳＴｌａｂ（商標）（いずれもＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ社製）を始めとするいくつかの市販例が存在している。放射化学は、カセットを装置に取り付けることにより、自動化合成装置上で実施される。普通、カセットは流体通路、反応器、及び試薬バイアル並びに放射合成後の清掃段階で使用される任意の固相抽出カートリッジを受け入れるためのポートを含んでいる。
【００９５】
本発明のインビボ造影剤の自動化合成のためのカセットは、
（ｉ）本明細書で定義した前駆体化合物を含む容器、及び
（ｉｉ）本明細書で定義したような、インビボイメージングに適した放射性同位体の適当な供給源を用いて容器を溶出するための手段
を含んでいる。
【００９６】
かかるカセットはさらに、
（ｉｉｉ）過剰の前記放射性同位体を除去するためのイオン交換カートリッジ、及び任意には
（ｉｖ）得られた放射性標識生成物を脱保護して本明細書で定義したインビボ造影剤を生成するためのカートリッジ
を含むことができる。
【００９７】
自動化合成に必要な試薬、溶媒及び他の消耗品もまた、濃度、体積、送出時間などに関する最終ユーザーの要求条件を満たすように自動化合成装置を運転させるソフトウェアを保持したコンパクトディスクのようなデータ媒体と共に含めることができる。
【００９８】
使用方法
さらに別の態様では、本発明は、
被験体におけるＰＢＲ発現の分布及び／又は程度を決定する際に使用するためのインビボイメージング方法であって、
（ｉ）本明細書で定義したインビボ造影剤を前記被験体に投与する段階、
（ｉｉ）前記造影剤を前記被験体内のＰＢＲに結合させる段階、
（ｉｉｉ）前記造影剤の放射性同位体から放出される信号をインビボイメージング技術によって検出する段階、
（ｉｖ）前記信号の位置及び／又は量を表す画像を生成する段階、並びに
（ｖ）前記被験体におけるＰＢＲ発現の分布及び程度を決定する段階であって、前記発現は前記インビボ造影剤から放出される前記信号と直接に相関している段階
を含んでなるインビボイメージング方法を提供する。
【００９９】
本発明のインビボイメージング方法に関しては、インビボ造影剤の好適な態様及び好ましい態様は本明細書で前記に定義した通りである。
【０１００】
インビボ造影剤を「投与する」段階は、好ましくは非経口的に実施され、最も好ましくは静脈内に実施される。静脈内経路は、インビボ造影剤を被験体の身体全域に送達するため、したがって血液脳関門（ＢＢＢ）を横切って前記被験体で発現されたＰＢＲに接触させるための最も効率的な方法である。本発明のインビボ造影剤は、好ましくは本明細書で定義された本発明の医薬組成物として投与される。本発明のインビボイメージング方法はまた、本発明のインビボ造影剤を予め投与した被験体に関して実施される上記の段階（ｉｉ）〜（ｖ）を含むものとしても理解できる。
【０１０１】
投与段階後かつ検出段階前に、インビボ造影剤をＰＢＲに結合させる。例えば、被験体がインタクトな哺乳動物である場合、インビボ造影剤は哺乳動物の身体を通って動的に移動し、体内の様々な組織に接触する。ひとたびインビボ造影剤がＰＢＲに接触すれば、特異的な相互作用が起こる結果、ＰＢＲをもった組織からのインビボ造影剤のクリアランスは、ＰＢＲをもたない組織又はＰＢＲの少ない組織よりも長い時間がかかる。一定の時点に達すれば、ＰＢＲをもった組織に結合したインビボ造影剤とＰＢＲをもたない組織又はＰＢＲの少ない組織に結合したインビボ造影剤との比の結果として、ＰＢＲに特異的に結合したインビボ造影剤の検出が可能となる。理想的には、この比は２：１以上である。
【０１０２】
本発明の方法の「検出」段階は、放射性同位体から放出される信号を、前記信号に対して感受性を有する検出器によって検出することを含んでいる。この検出段階はまた、信号データの取得として理解することもできる。単光子放出断層撮影法（ＳＰＥＣＴ）及び陽電子放出断層撮影法（ＰＥＴ）が、本発明の方法で使用するための最も好適なインビボイメージング技術である。ＰＥＴが、本発明の方法で使用するための好ましいインビボイメージング技術である。
【０１０３】
本発明の方法の「生成」段階は、取得された信号データに再構築アルゴリズムを適用してデータセットを得るコンピューターによって実施される。次いで、このデータセットを操作することで、前記放射性同位体から放出される信号の位置及び／又は量を示す画像が生成される。放出される信号はＰＢＲの発現と直接に相関する結果、生成された画像を評価することで「決定」段階を行うことができる。
【０１０４】
本発明の「被験体」は、任意のヒト又は動物被験体であり得る。好ましくは、本発明の被験体は哺乳動物である。最も好ましくは、前記被験体はインタクトな哺乳動物生体である。特に好ましい実施形態では、本発明の被験体はヒトである。本インビボイメージング方法は、健常被験体或いはＰＢＲの異常発現に関連する病的状態（「ＰＢＲ状態」）を有することが知られ又は疑われる被験体でのＰＢＲの検査に使用できる。好ましくは、前記方法はＰＢＲ状態を有することが知られ又は疑われる被験体のインビボイメージングに関し、したがって前記状態の診断方法の一部として有用である。インビボイメージングが役に立つかかるＰＢＲ状態の例には、神経炎症が存在するパーキンソン病、多発性硬化症、アルツハイマー病及びハンチントン病のような神経疾患がある。本発明の化合物によるイメージングが有用であり得る他のＰＢＲ状態には、ニューロパシー性疼痛、関節炎、喘息、アテローム性動脈硬化症、並びに結腸直腸癌及び乳癌のような悪性疾患がある。本発明のインビボ造影剤は、中枢神経系（ＣＮＳ）におけるＰＢＲ発現のインビボイメージングに特に適している。
【０１０５】
別の実施形態では、本発明のインビボイメージング方法は前記被験体に関する治療計画の進行中に繰り返して実施することができ、前記計画はＰＢＲ状態と戦うための薬物の投与を含んでいる。例えば、本発明のインビボイメージング方法は、ＰＢＲ状態と戦うための薬物による治療前、治療中及び治療後に実施できる。このようにすれば、前記治療の効果を経時的にモニターすることができる。この実施形態では、好ましくは、インビボイメージング技術はＰＥＴである。ＰＥＴは優れた感度及び分解能を有する結果、病変部における比較的小さい変化でも経時的に観察でき、これは治療モニタリングに有利である。ＰＥＴスキャナーは、日常的にピコモル範囲内の放射能濃度を測定している。現在、マイクロＰＥＴスキャナーは約１ｍｍの空間分解能に接近しているが、臨床スキャナーは約４〜５ｍｍである。
【０１０６】
さらに別の態様では、本発明はＰＢＲ状態の診断方法を提供する。本発明の診断方法は、上記に定義したインビボイメージング方法を、ＰＢＲ発現の分布及び程度を特定の臨床像に帰因させる追加段階（ｖｉ）（即ち、演繹的な医学的決断段階）と共に含んでいる。
【０１０７】
別の態様では、本発明は、本明細書で定義した診断方法で使用するための、本明細書で定義したインビボ造影剤を提供する。
【０１０８】
さらに別の態様では、本発明は、本明細書で定義した診断方法で使用するための本明細書で定義した放射性医薬組成物の製造で使用するための、本明細書で定義したインビボ造影剤を提供する。
【実施例】
【０１０９】
以下、一連の非限定的な実施例によって本発明を例示する。
【０１１０】
実施例の簡単な説明
実施例１は、非放射性造影剤１の合成法を記載している。
【０１１１】
実施例２は、非放射性造影剤１８の合成法を記載している。
【０１１２】
実施例３は、非放射性造影剤１９の合成法を記載している。
【０１１３】
実施例４は、造影剤１用の直接標識前駆体化合物の合成法を記載している。
【０１１４】
実施例５は、造影剤１の合成法を記載している。
【０１１５】
実施例６は、ＰＢＲに対する造影剤の結合親和性を測定するために使用したインビトロ効力アッセイを記載している。
【０１１６】
実施例７は、静脈内投与後における造影剤の体内分布を測定するために使用した動物モデルを記載している。
【０１１７】
実施例中で使用される略語のリスト
℃ 摂氏度
ａｑ 水性
ＤＭＦ ジメチルホルムアミド
ＤＭＳＯ ジメチルスルホキシド
ｇ グラム
ｈ 時間
Ｋi 半最大阻害に必要な化合物の濃度
ＭＢｑ メガベクレル
ｍｇ ミリグラム
ｍｉｎ 分
ｍｌ ミリリットル
ｍＭ ミリモル濃度
ｍｍｏｌ ミリモル
ｎ 実験回数
ＮＭＲ 核磁気共鳴
ＰＢＲ 末梢ベンゾジアゼピンレセプター
ＲＴ 室温
ＴＬＣ 薄層クロマトグラフィー
Ｔｒｉｓ トリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン
ＵＶ 紫外。
【０１１８】
実施例１：Ｎ−［２−（２−フルオロエトキシ）ベンジル］−Ｎ−（２−フェノキシピリジン−３−イル）アセトアミド（非放射性造影剤１）の合成
１(ｉ) ２−フェノキシ−３−ニトロピリジン
【０１１９】
【化１７】
【０１２０】
ＤＭＦ（５０ｍｌ）中の２−クロロ−３−ニトロピリジン（１０ｇ、６３ｍｍｏｌ）をフェノール（８ｇ、８５ｍｍｏｌ）及び炭酸カリウム（１５．４ｇ、１．７６ｍｍｏｌ）により７０℃で２時間処理し、次いで室温で一晩撹拌した。次いで、反応物を高真空中で濃縮してガム質とし、酢酸エチル（５０ｍｌ）及び水（１５０ｍｌ）の混合物で希釈し、撹拌した。酢酸エチル溶液を分離し、硫酸マグネシウム上で乾燥し、真空中で濃縮してガム質とした。水溶液をさらに５０ｍｌの酢酸エチルで再抽出し、酢酸エチル層を分離し、硫酸マグネシウム上で乾燥し、以前の酢酸エチル抽出液に添加し、真空中で濃縮して黄色の結晶質固体を得た。この固体をジエチルエーテル（２０ｍｌ）で洗浄し、濾過により集めて２−フェノキシ−３−ニトロピリジンの無色結晶（１０．４９ｇ、４６．５ｍｍｏｌ、７３．８％）を得た。母液は廃棄した。
【０１２１】
1Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3）７．１８（３Ｈ，ｍ，ＡｒＨ）、７．３（１Ｈ，ｍ，ＡｒＨ）、７．４５（２Ｈ，ｔ，ＡｒＨ）、８．３４（２Ｈ，ｍ，ＡｒＨ）。
【０１２２】
13Ｃ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3）１１８．３、１２１．６、１２５．７、１２９．６、１３４．５、１３５．４、１５１．７、１５２．５、１５５．８。
【０１２３】
１(ｉｉ) ２−フェノキシ−３−アミノピリジン
【０１２４】
【化１８】
【０１２５】
メタノール（２５０ｍｌ）中の２−フェノキシ−３−ニトロピリジン（８．０ｇ、３７ｍｍｏｌ）を木炭上のパラジウム（８００ｍｇ）により水素雰囲気下で３０℃で２時間処理した。急速な水素の吸収があり、検出可能な発熱の結果として温度が４８℃に上昇した後、降下して元に戻った。次いで、反応物をセライトで濾過して無色溶液を得、これを高真空中で濃縮することで油状の２−フェノキシ−３−アミノピリジン（６．８ｇ、３６ｍｍｏｌ、９８％）を得たが、これは静置後に結晶化した。
【０１２６】
1Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3）３．９６（２Ｈ，ｂｒｓ，ＮＨ2）、６．８６，（１Ｈ，ｍ，ＡｒＨ）、７．００（１Ｈ，ｍ，ＡｒＨ）；７．１６（３Ｈ，ｍ，ＡｒＨ）、７．３６（２Ｈ，ｍ，ＡｒＨ）、７．３９（１Ｈ，ｍ，ＡｒＨ）。
【０１２７】
13Ｃ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3）１１９．４、１２０．６、１２２．０、１２４．２、１２９．５、１３１．９、１３５．６、１５１．６、１５４．２。
【０１２８】
１(ｉｉｉ) ２−［（２−フェノキシ−ピリド−３−イルアミノ）メチル］フェノール
【０１２９】
【化１９】
【０１３０】
２−フェノキシ−３−アミノピリジン（６ｇ、３２．２５ｍｍｏｌ）をｏ−サリチルアルデヒド（２−ヒドロキシベンズアルデヒド）（６ｇ、５０ｍｍｏｌ）及びトルエン（１０ｍｌ）で処理し、激しく撹拌しながら窒素雰囲気下で９０℃で１時間加熱した。溶液はは黄色で均質になった。次いで、反応物を０℃に冷却したところ凝固し、それをメタノール（１００ｍｌ）で希釈したところ固体がすべて溶解した。これに水素化ホウ素ナトリウム（３．７ｇ、９７．５ｍｍｏｌ）を少量ずつ２０分かけて添加して処理した。この間に白色の沈殿が生じた。次いで、反応物を室温に放温し、さらに３０分間撹拌した。ギ酸（３ｍｌ）を添加し、反応物をさらに１８時間撹拌した。反応物から固体が晶出し、これを濾過によって集め（７．５６８ｇ）、真空中で乾燥した。母液を真空中で約３０ｍｌに濃縮し、追加量の結晶を集めた（２．２５６８ｇ）。固体をクロロホルムから再結晶して２−［（２−フェノキシ−ピリド−３−イルアミノ）メチル］フェノール（８．５ｇ、２９．１ｍｍｏｌ、９０％）を得た。
【０１３１】
1Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3）１．６９（１Ｈ，ｂｒｓ，ＮＨ）；４．４５（２Ｈ，ｓ，ＣＨ2Ｎ）；４．７５，（１Ｈ，ｂｒｓ，ＯＨ）、６．８−７．７，（１２Ｈ，ｍ，ＡｒＨ）。
【０１３２】
13Ｃ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3）４６．９、１１６．５、１１９．３、１２０．２、１２０．４、１２１．０、１２１．５、１２４．７、１２８．８、１２９．３、１２９．６、１３１．５、１３３．０、１５１．５、１５２．０、１５６．０。
【０１３３】
１(ｉｖ) ２−［（フェノキシ−ピリド−３−イルアセチルアミノ）メチル］フェノールアセテート
【０１３４】
【化２０】
【０１３５】
ジクロロメタン（１０ｍｌ）中の２−［（フェノキシ−ピリド−３−イルアミノ）メチル］フェノール（１ｇ、３．４２ｍｍｏｌ）を無水酢酸（１．３９ｇ、１３．６ｍｍｏｌ）及びピリジン（１．０７４ｇ、１３．６ｍｍｏｌ）で処理し、窒素雰囲気下で２０℃で１８時間加熱した。次いで、反応物をジクロロメタン（５０ｍｌ）で希釈し、５Ｎ塩酸（２０ｍｌ）で洗浄してピリジンを除去し、有機層を分離し、硫酸マグネシウム上で乾燥し、高真空中で濃縮してガム質にしたが、これは静置後に結晶化した。ジエチルエーテル及び石油エーテルから再結晶することで、白色固体の２−［（フェノキシ−ピリド−３−イルアセチルアミノ）メチル］フェノールアセテート（１．０５ｇ、２．７９ｍｍｏｌ、８１％）を得た。
【０１３６】
1Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3）１．９３（３Ｈ，ｓ，ＣＨ3）、２．２５（３Ｈ，ｓ，ＣＨ3）、４．３７（２Ｈ，ｄ，ＣＨ）、ａｎｄ５．５４（２Ｈ，ｄ，ＣＨ）、ｔｏｇｅｔｈｅｒ ＣＨ2Ｎ，６．５−７．５（１０Ｈ，ｍ，ＡｒＨ）、８．０（１Ｈ，ｄ，ＡｒＨ）。
【０１３７】
13Ｃ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3）２０．９、２２．１、４５．４、１１８．８、１２１．２、１２２．７、１２５．１、１２５．７、１２５．９、１２８．８、１２９．０、１２９．６、１３１．９、１４０．０、１４７．０、１２４９．５、１５３．１、１５９．４、１６９．７、１７０．１。
【０１３８】
１(ｖ) Ｎ−（２−ヒドロキシベンジル）−Ｎ−（フェノキシ−ピリド−３−イル）アセトアミド
【０１３９】
【化２１】
【０１４０】
メタノール（２０ｍｌ）中のＮ−（２−アセトキシベンジル）−Ｎ−（フェノキシ−ピリド−３−イル）アセトアミド（０．５ｇ、１．７１ｍｍｏｌ）を水酸化ナトリウム（２１２ｍｇ、５．３ｍｍｏｌ）で処理し、室温で３０分間撹拌した。シリカでジクロロメタン中２０％酢酸エチルで展開したＴＬＣは、アセテートから（意外にも）一層速く走行するフェノールへの完全な転化を示した。次いで、反応物を酢酸（約３１８ｍｇ、５．３ｍｍｏｌ）で（リトマス紙でモニターして）中性に調整し、真空中で濃縮して白色固体を得た。この固体をジクロロメタン（５０ｍｌ）と水（５０ｍｌ）との間に分配した。ジクロロメタン層を分離し、硫酸マグネシウム上で乾燥し、真空中で濃縮して固体のＮ−（２−ヒドロキシベンジル）−Ｎ−（フェノキシ−ピリド−３−イル）アセトアミド（４１１ｍｇ、１．２２ｍｍｏｌ、９１％）を得た。
【０１４１】
1Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3）２．０１（３Ｈ，ｓ，ＣＨ3）、４．６３（１Ｈ，ｓ）、５．０２（１Ｈ，ｓ）ｔｏｇｅｔｈｅｒ ＣＨ2Ｎ，６．６−７．４（１１Ｈ，ｍ，ＡｒＨ）、８．１７（１Ｈ，ｄ，ＡｒＨ）、９．３４（１Ｈ，ｓ，ＯＨ）。
【０１４２】
13Ｃ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3）２１．７、４９．７、１１７．７、１１８．９、１１９．２５、１２１．３、１２１．６、１２５．３、１２５．５、１２９．６、１３０．３、１３１．３、１３８．８．１４７．７、１５２．７、１５６．１、１５９．１、１７３．４。
【０１４３】
１(ｖｉ) Ｎ−［２−（２−フルオロエトキシ）ベンジル］−Ｎ−（２−フェノキシピリジン−３−イル）アセトアミド
【０１４４】
【化２２】
【０１４５】
ＤＭＦ（１０ｍｌ）中のＮ−［２−（２−ヒドロキシ）ベンジル］−Ｎ−（２−フェノキシピリジン−３−イル）アセトアミド（３００ｍｇ、０．８９８ｍｍｏｌ）を水素化ナトリウム（９６ｍｇ、２．４ｍｍｏｌ）及び２−フルオロエチルトシレート（５２７ｇ、２．４ｍｍｏｌ）で処理し、窒素雰囲気下で３０℃で１時間撹拌した。ジクロロメタン中２０％酢酸エチルで展開されかつＵＶ光下で可視化されるＴＬＣによって反応物をモニターした。これはゆっくりと走行するスポットの形成を示し、それは１時間後に完了した。次いで、反応物を酢酸（１ｍｌ）の添加によって奪活し、高真空中で濃縮して油状物を得た。この油状物を酢酸エチル（１００ｍｌ）と重炭酸ナトリウム溶液（５０ｍｌ）との間に分配した。酢酸エチル溶液を分離し、硫酸マグネシウム上で乾燥し、真空中で濃縮してガム質にした。このガム質をシリカゲル上でジクロロメタン中５〜２０％酢酸エチルの勾配でクロマトグラフィー処理して２つの画分を得た。画分１は本質的にボイド容積中に溶出する回収フルオロエチルトシレートであり、約６カラム容積後に溶出する画分２はＮ−［２−（２−フルオロエトキシ）ベンジル］−Ｎ−（２−フェノキシピリジン−３−イル）アセトアミド（３３２ｍｇ、０．８７ｍｍｏｌ、９７％）であった。
【０１４６】
1Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3）１．９８（３Ｈ，ｓ，ＣＨ3）、３．６７（３Ｈ，ｓ，ＯＣＨ3）、３．９（２Ｈ，ｂｒｍ，ＣＨ2Ｏ）、４．４４，ａｎｄ４．６０（２Ｈ，ｅａｃｈ ｍ，ＣＨ2Ｆ）、４．８６（１Ｈ，ｄ）、ａｎｄ ５．２３（１Ｈ，ｄ）ｔｏｇｅｔｈｅｒ ＣＨ2Ｎ，６．６７−７．３７（１０Ｈ，ｍ，ＡｒＨ）、８．０（１ｈ，ｓ，ＡｒＨ）。
【０１４７】
13Ｃ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3）２２．３、４５．６、５５．６、６７．９、６８．１、８０．７、８３．０、１１２．８、１１３．７、１１６．７、１１８．６、１２１．３、１２５．０、１２６．７、１２９．５、１３９．１、１４６．６、１５０．５、１５３、２、１５３．９、１５９．６、１７０．５。
【０１４８】
実施例２：Ｎ−［２−（２−フルオロエトキシ）ピリジン−３−イルメチル］−Ｎ−（２−フェノキシ−フェニル）アセトアミド（非放射性造影剤１９）の合成
２(ｉ) ２−アミノジフェニルエーテル
【０１４９】
【化２３】
【０１５０】
メタノール（２５０ｍｌ）中の２−ニトロジフェニルエーテル（１６ｇ、７４ｍｍｏｌ）を木炭上のパラジウム（１．６ｇ）と共に水素雰囲気下で２０〜５０℃で３０分間振盪した。急速な水素の吸収があり、２０〜５０℃の検出可能な発熱の結果として温度が急速に上昇し、最終的には降下して元に戻った。温度が５０℃を超えて上昇するのを抑えるため、振盪を短時間停止した。次いで、反応物をセライトで濾過し、高真空中で濃縮することで、２−アミノジフェニルエーテル（１３．５ｇ、７２．９ｍｍｏｌ、９８％）を油状物として得たが、これは静置後に結晶化した。
【０１５１】
1Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ3）：δH ３．８（２Ｈ，ｂｒｓ，ＮＨ）、６．７−６．７５（１Ｈ，ｍ，ＡｒＨ）、６．８−６．９４（２Ｈ，ｍ，ＡｒＨ）、６．９４−７．１（（４Ｈ，ｍ，ＡｒＨ）、７．２５−７．４（２Ｈ，ｍ，ＡｒＨ）。
【０１５２】
13Ｃ ＮＭＲ（７５ＭＨｚ，ＣＤＣｌ3）：δC １１６．４，１１７．１，１１８．７，１２０．２，１２２０６，１２４．９，１２９．７，１３８．７，１４３．０，１５７．５。
【０１５３】
２(ｉｉ) （２−メトキシ−ピリジン−３−イルメチル）−（２−フェノキシ−フェニル）アミン
【０１５４】
【化２４】
【０１５５】
段階２(ｉ)からの２−アミノジフェニルエーテル（１．８０ｇ、９．８ｍｍｏｌ）と２−メトキシ−３−ピリジンカルボキシアルデヒド（２．０ｇ、１４．６ｍｍｏｌ）との混合物を水素下で９０℃で１時間加熱した。反応混合物を０℃に冷却し、ＭｅＯＨ（２０ｍＬ）を添加し、次いで水素化ホウ素ナトリウム（１．１１ｇ、２９．４ｍｍｏｌ）を少量ずつ２０分かけて添加した。混合物をＲＴで２４時間撹拌した。ギ酸（２．４ｇ、５３．０ｍｍｏｌ）を添加し、混合物を１５分間撹拌した。溶媒を真空中で除去し、残留物を１０％重炭酸ナトリウム水溶液（１００ｍＬ）で奪活し、ＤＣＭ（２×３０ｍＬ）で抽出し、硫酸マグネシウム上で乾燥し、濾過し、溶媒を真空中で除去した。粗物質をＤＣＭ（Ａ）：酢酸エチル（Ｂ）で溶出するシリカゲルクロマトグラフィー（２％（Ｂ）、８０ｇ、２．０ＣＶ、６０ｍＬ／分）で精製して不純生成物を得た。試料をメタノールから結晶化することで、２．２ｇ（７３％）の（２−メトキシ−ピリジン−３−イルメチル）−（２−フェノキシ−フェニル）アミンを白色固体として得た。
【０１５６】
1Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ3）：δH ３．９０（３Ｈ，ｓ，ＯＣＨ3）、４．３３（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝６Ｈｚ，ＮＣＨ2）、４．７３（１Ｈ，ｍ，ＮＨ）、６．６１−６．６８（２Ｈ，ｍ，Ｐｈ）、６．７７−７．０９（６Ｈ，ｍ，Ｐｈ）、７．２７−７．３４（２Ｈ，ｍ，Ｐｈ）、７．４８（１Ｈ，ｍ，Ｐｈ）、ａｎｄ ８．０３（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝２ ａｎｄ ５Ｈｚ，Ｐｈ）。
【０１５７】
ＬＣ−ＭＳ：Ｃ19Ｈ18Ｎ2Ｏ2に関するｍ／ｚ計算値，３０６．１、実測値，３０７．１(Ｍ＋Ｈ)+。
【０１５８】
２(ｉｉｉ) Ｎ−（２−メトキシ−ピリジン−３−イルメチル）−Ｎ−（２−フェノキシ−フェニル）アセトアミド
【０１５９】
【化２５】
【０１６０】
段階２(ｉｉ)からの（２−メトキシ−ピリジン−３−イルメチル）−（２−フェノキシ−フェニル）アミン（１．０ｇ、３．２６ｍｍｏｌ）を無水ＤＣＭ（１５ｍＬ）に溶解した溶液に４−（ジメチルアミノ）ピリジン（０．０１ｇ、０．０８ｍｍｏｌ）を添加した。反応物を０℃に冷却し、塩化アセチル（１．５４ｇ、１９．６ｍｍｏｌ、１．４０ｍＬ）を添加した。混合物をＲＴで３時間撹拌した。溶媒を真空中で除去し、残留物を１Ｎ水酸化ナトリウム水溶液（５ｍＬ）で奪活し、ＤＣＭ（２×２０ｍＬ）で抽出し、硫酸マグネシウム上で乾燥し、濾過し、溶媒を真空中で除去した。粗物質をＤＣＭ（Ａ）：メタノール（Ｂ）で溶出するシリカゲルクロマトグラフィー（５％（Ｂ）、８０ｇ、２．０ＣＶ、６０ｍＬ／分）で精製することで、１．１ｇ（９７％）のＮ−（２−メトキシ−ピリジン−３−イルメチル）−Ｎ−（２−フェノキシ−フェニル）アセトアミドを無色油状物として得た。
【０１６１】
1Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ3）：δH １．９７（３Ｈ，ｓ，ＣＯＣＨ3）、３．７４（３Ｈ，ｓ，ＯＣＨ3）、４．７３（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１５Ｈｚ，ＮＣＨ）、４．９９（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１５Ｈｚ，ＮＣＨ）、６．７２−６．９１（４Ｈ，ｍ，Ｐｈ）、６．９８−７．３７（６Ｈ，ｍ，Ｐｈ）、７．６５（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝２ ａｎｄ ７Ｈｚ，Ｐｈ）、ａｎｄ ８．００（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝２ ａｎｄ ５Ｈｚ，Ｐｈ）。
【０１６２】
２(ｉｖ) ３−［（２−フェノキシ−フェニルアミノ）メチル］ピリジン−２−オール
【０１６３】
【化２６】
【０１６４】
段階２(ｉｉｉ)からのＮ−（２−メトキシ−ピリジン−３−イルメチル）−Ｎ−（２−フェノキシ−フェニル）アセトアミド（０．６０ｇ、１．７２ｍｍｏｌ）を４８％臭化水素酸水溶液（４４．７ｇ、５５２．０ｍｍｏｌ、３０ｍＬ）に溶解した溶液を水素下で１００℃で２４時間加熱した。溶媒を真空中で除去し、残留物を１０％炭酸カリウム水溶液（５０ｍＬ）で奪活し、ＤＣＭ（２×３０ｍＬ）で抽出し、硫酸マグネシウム上で乾燥し、濾過し、溶媒を真空中で除去することで、０．５１ｇ（１００％）の３−［（２−フェノキシ−フェニルアミノ）メチル］ピリジン−２−オールをガム質として得た。
【０１６５】
1Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ3）：δH ４．３２（２Ｈ，ｓ，ＮＣＨ2）、４．９０（１Ｈ，ｓ，ｂｒ，ＮＨ）、６．２２（１Ｈ，ｔ，Ｊ＝７Ｈｚ，Ｐｈ）、ａｎｄ ６．６０−７．４４（１２Ｈ，ｍ，Ｐｈ）。
【０１６６】
ＬＣ−ＭＳ：Ｃ18Ｈ16Ｎ2Ｏ2に関するｍ／ｚ計算値，２９２．１、実測値，２９３．１(Ｍ＋Ｈ)+。
【０１６７】
２(ｖ) Ｎ−（２−ヒドロキシ−ピリジン−３−イルメチル）−Ｎ−（２−フェノキシ−フェニル）アセトアミド
【０１６８】
【化２７】
【０１６９】
段階２(ｉｖ)からの３−［（２−フェノキシ−フェニルアミノ）メチル］ピリジン−２−オール（０．５１ｇ、１．７４ｍｍｏｌ）を無水ＤＣＭ（２０ｍＬ）に溶解した溶液に４−（ジメチルアミノ）ピリジン（０．０１ｇ、０．０８ｍｍｏｌ）を添加した。反応物を０℃に冷却し、塩化アセチル（１．６ｇ、２０．８ｍｍｏｌ、１．５ｍＬ）を添加した。混合物をＲＴで２４時間撹拌した。溶媒を真空中で除去し、水酸化リチウムの飽和メタノール溶液（１０ｍＬ）を残留物に添加した。１０分間撹拌した後、水（２０ｍＬ）を添加し、メタノールを真空中で除去した。水溶液をＤＣＭ（２×２０ｍＬ）で抽出し、合わせた有機相をブライン（２０ｍＬ）で洗浄し、硫酸マグネシウム上で乾燥し、濾過し、溶媒を真空中で除去した。粗物質をＤＣＭ（Ａ）：メタノール（Ｂ）で溶出するシリカゲルクロマトグラフィー（１０％（Ｂ）、１２ｇ、１．０ＣＶ、３０ｍＬ／分）で精製して不純生成物を得た。試料をＤＣＭ（Ａ）：メタノール（Ｂ）で溶出するシリカゲルクロマトグラフィー（２〜１０％（Ｂ）、４０ｇ、８．０ＣＶ、４０ｍＬ／分）で精製することで、０．３５ｇ（５９％）のＮ−（２−ヒドロキシ−ピリジン−３−イルメチル）−Ｎ−（２−フェノキシ−フェニル）アセトアミドを白色泡状物として得た。
【０１７０】
1Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ3）：δH ２．０１（３Ｈ，ｓ，ＣＯＣＨ3）、４．７５（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１６Ｈｚ，ＮＣＨ）、４．８８（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１６Ｈｚ，ＮＣＨ）、６．１２（１Ｈ，ｔ，Ｊ＝７Ｈｚ，Ｐｈ）、６．８０−７．３８（１０Ｈ，ｍ，Ｐｈ）、７．６２（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝７Ｈｚ，Ｐｈ）、ａｎｄ １２．６６（１Ｈ，ｓ，ｂｒ，ＯＨ）。
【０１７１】
ＬＣ−ＭＳ：Ｃ20Ｈ18Ｎ2Ｏ3に関するｍ／ｚ計算値，３３４．１、実測値，３５７．０(Ｍ＋Ｎａ)+。
【０１７２】
２(ｖｉ) 非放射性インビボ造影剤１９
【０１７３】
【化２８】
【０１７４】
段階２(ｖ)からのＮ−（２−ヒドロキシ−ピリジン−３−イルメチル）−Ｎ−（２−フェノキシ−フェニル）アセトアミド（０．１５ｇ、０．４５ｍｍｏｌ）を窒素下でＲＴの無水ＤＭＦ（２ｍＬ）に溶解した。炭酸カリウム（０．１９ｇ、１．３５ｍｍｏｌ）及び２−フルオロエチルトシレート（０．２０ｇ、０．８９ｍｍｏｌ）を添加し、混合物を７０℃で２４時間加熱した。ＤＭＦを真空中で除去し、残留物を水（４０ｍＬ）で奪活し、ＤＣＭ（２×２０ｍＬ）で抽出し、硫酸マグネシウム上で乾燥し、濾過し、溶媒を真空中で除去した。粗物質をＤＣＭ（Ａ）：メタノール（Ｂ）で溶出するシリカゲルクロマトグラフィー（２〜５％（Ｂ）、４０ｇ、３．０ＣＶ及び７．０ＣＶ、４０ｍＬ／分）で精製して不純Ｏ−アルキル及びＮ−アルキル生成物を得た。Ｏ−アルキル試料をＤＣＭ（Ａ）：メタノール（Ｂ）で溶出するシリカゲルクロマトグラフィー（１％（Ｂ）、４０ｇ、４．０ＣＶ、４０ｍＬ／分）で再精製して不純生成物を得た。試料をＤＣＭ（Ａ）：酢酸エチル（Ｂ）で溶出するシリカゲルクロマトグラフィー（１０〜９０％（Ｂ）、４０ｇ、１８．０ＣＶ、４０ｍＬ／分）で再精製することで、３５ｍｇ（２０％）の非放射性インビボ造影剤１９を無色油状物として得た。
【０１７５】
1Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ3）：δH １．９６（３Ｈ，ｓ，ＣＯＣＨ3）、４．２４−４．６５（４Ｈ，ｍ，ＯＣＨ2ＣＨ2Ｆ）、４．７４（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１５Ｈｚ，ＮＣＨ）、５．０５（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１５Ｈｚ，ＮＣＨ）、６．７５−７．３６（１０Ｈ，ｍ，Ｐｈ）、７．７０（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝２ ａｎｄ ７Ｈｚ，Ｐｈ）、ａｎｄ ７．９７（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝２ ａｎｄ ５Ｈｚ，Ｐｈ）。
【０１７６】
ＬＣ−ＭＳ：Ｃ22Ｈ21ＦＮ2Ｏ3に関するｍ／ｚ計算値，３８０．２、実測値，３８１．１(Ｍ＋Ｈ)+。
【０１７７】
実施例３：２−フルオロ−Ｎ−（２−メトキシ−ピリジン−３−イルメチル）−Ｎ−（２−フェノキシ−フェニル）アセトアミド（非放射性インビボ造影剤１８）の合成
【０１７８】
【化２９】
【０１７９】
段階２(ｉｉｉ)で得られたＮ−（２−メトキシ−ピリジン−３−イルメチル）−Ｎ−（２−フェノキシ−フェニル）アセトアミド（０．３１ｇ、１．０ｍｍｏｌ）を無水ＤＣＭ（５ｍＬ）に溶解した溶液に、４−（ジメチルアミノ）ピリジン（０．０１ｇ、０．０８ｍｍｏｌ）を添加した。反応物を０℃に冷却し、塩化フルオロアセチル（０．５８ｇ、６．０ｍｍｏｌ、０．４０ｍＬ）を添加した。混合物をＲＴで３時間撹拌した。溶媒を真空中で除去し、残留物を１Ｎ水酸化ナトリウム水溶液（５ｍＬ）で奪活し、ＤＣＭ（２×２０ｍＬ）で抽出し、硫酸マグネシウム上で乾燥し、濾過し、溶媒を真空中で除去した。粗物質をＤＣＭ（Ａ）：メタノール（Ｂ）で溶出するシリカゲルクロマトグラフィー（１〜５％（Ｂ）、８０ｇ、６．０ＣＶ、６０ｍＬ／分）で精製することで、０．２６ｇ（７１％）の非放射性造影剤１８を白色固体として得た。
【０１８０】
1Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ3）：δH ３．７２（３Ｈ，ｓ，ＯＣＨ3），４．６９（１Ｈ，ｓ，ＦＣＨ），４．７９（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１５Ｈｚ，ＮＣＨ），４．８４（１Ｈ，ｓ，ＦＣＨ），５．０２（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１５Ｈｚ，ＮＣＨ），６．７２−６．８８（４Ｈ，ｍ，Ｐｈ），６．９８−７．３８（６Ｈ，ｍ，Ｐｈ），７．６４（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝２ ａｎｄ ７Ｈｚ，Ｐｈ），ａｎｄ ８．０２（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝２ａｎｄ５Ｈｚ，Ｐｈ）、19Ｆ ＮＭＲ（２８３ＭＨｚ，ＣＤＣｌ3）：δF −２２６．９。
【０１８１】
ＬＣ−ＭＳ：Ｃ21Ｈ19ＦＮ2Ｏ3に関するｍ／ｚ計算値，３６６．１、実測値，３６７．１(Ｍ＋Ｈ)+。
【０１８２】
実施例４：２−［（フェノキシ−ピリド−３−イルアセチルアミノ）メチル］フェノール−２−エチルトルエン−４−スルホネート（造影剤１の直接標識前駆体化合物）の合成
【０１８３】
【化３０】
【０１８４】
ＤＭＦ（３０ｍｌ）中の２−［（フェノキシ−ピリド−３−イルアセチルアミノ）メチル］フェノール（１ｇ、３．０ｍｍｏｌ）を水素化ナトリウム（６０％）（４７８ｍｇ、２．４ｍｍｏｌ）及びエチルグリコールジトシレート（２．７７ｇ、７．５ｍｍｏｌ）で処理し、窒素雰囲気下で２０℃で１時間撹拌した。ガソリン中５０％酢酸エチルで展開されかつＵＶ光下で可視化されるＴＬＣによって反応物をモニターした。これは出発原料の消失及びゆっくりと走行する物質の出現を示した。過剰のエチレングリコールジトシレートは、出発原料よりわずかに速く走行するスポットを形成した。１時間後、ＴＬＣによれば反応は完了した。次いで、反応物を酢酸（４５０ｍｇ）の滴下によって奪活し、その際には水素ガスが激しく発生した。次いで、反応物を高真空中で濃縮して油状物を得た。この油状物を酢酸エチル（１００ｍｌ）と重炭酸ナトリウム溶液（５０ｍｌ）との間に分配した。酢酸エチル溶液を分離し、硫酸マグネシウム上で乾燥し、真空中で濃縮してガム質にした。若干の過剰エチルグリコールジトシレートが晶出したが、エーテルでのトリチュレーション及び濾過によって分離した。このガム質をシリカでガソリン中５〜２０％酢酸エチルの勾配でクロマトグラフィー処理して３つの画分を得た。画分１は回収エチレングリコールジトシレートであり、画分２は少量の回収出発原料であり、画分３は所要の化合物（１．２４６ｇ、２．３４ｍｍｏｌ、７８％）であった。
【０１８５】
1Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3）δ，２．０（３Ｈ，ｓ，ＣＨ3），２．４５，（３Ｈ，ｓ，ＣＨ3），３．９−４．２，（４Ｈ，ｍ，２ＣＨ2），４．８７ａｎｄ５．０４（１Ｈ，ｄ，ｔｏｇｅｔｈｅｒ ＣＨ2Ｎ），６．６２（１Ｈ，ｄ，ＡｒＨ），６．８−６．９５，（４Ｈ，ｍ，ＡｒＨ），７．１−７．５４（８Ｈ，ｍ，ＡｒＨ），７．７７（（２Ｈ，ｄ，ＡｒＨ），８．０（１Ｈ，ｄ，ＡｒＨ）。
【０１８６】
13Ｃ ＮＭＲ ＣＤＣｌ3 δ，２１．４９，２２．１８，４５．７，６５．３，６７．９，１１０．９，１１８．６，１２１．２，１２４．９，１２５．１，１２６．４，１２７．７，１２８．７１２９．４，１２９．８，１３１．１，１３２．６，１３９，１４５．０，１４６．４，１５３．０，１５５．８，１５９．４，１７０．４。
【０１８７】
実施例５：造影剤１の間接標識合成
【０１８８】
【化３１】
【０１８９】
反応器内の［18Ｆ］Ｆ-／Ｈ2Ｏ（約４００ＭＢｑ、１００〜３００μｌ）に、クリプトフィックス（Ｋｒｙｐｔｏｆｉｘ）２．２．２（４ｍｇ、１０．６μｍｏｌ）、炭酸カリウム（０．１ｍｏｌ・ｄｍ-3、５０μｌ、０．７ｍｇ、５μｍｏｌ）及びアセトニトリル（０．５ｍＬ）の混合物を添加した。窒素流下で１００℃で１５〜２０分間加熱することで溶媒を除去した。エチレングリコールジトシレート（３〜５ｍｇ、８〜１３．５μｍｏｌ）のアセトニトリル（１ｍＬ）溶液を添加し、混合物を１００℃で１０分間加熱した。冷却後、反応物を取り出し、反応器を水（１０００μｌ）ですすいで主たる粗反応物に加えた。［18Ｆ］−フルオロエチルトシレートをＨＰＬＣ（ＡＣＥ Ｃ１８（２）カラム，５μ，１００×１０ｍｍ，５ｍｌループ，ポンプ速度３ｍｌ／分，波長２５４ｎｍ，移動相（水：ＭｅＯＨ） ：０−１分 ５０％ＭｅＯＨ；１−２５分 ５０−９５％ＭｅＯＨ；２５−３０分 ９５％ＭｅＯＨ；３０−３１分 ９５−５０％ＭｅＯＨ；３１−３３分 ５０％ＭｅＯＨ）によって精製した。［18Ｆ］−フルオロエチルトシレートのｔRは７．５分であった。［18Ｆ］−フルオロエチルトシレートの放射化学収率は約４０％（非崩壊補正収率）であった。
【０１９０】
［18Ｆ］−フルオロエチルトシレートのカットピークをＨ2Ｏで約２０ｍｌの体積に希釈し、コンディショニング済みのライトｔ−Ｃ１８ ｓｅｐ ｐａｋ上に装填し、Ｈ2Ｏ（１×２ｍｌ）でフラッシュした。装填したｓｅｐ ｐａｋを、高流量のＮ2ライン上で１５〜２０分間乾燥した。
【０１９１】
撹拌機を含むホイートン（Ｗｈｅａｔｏｎ）バイアル（１ｍｌ）内で、ＣＨ3ＣＮ（１００μｌ）中のＮ−（２−ヒドロキシベンジル）−Ｎ−（フェノキシ−ピリド−３−イル）アセトアミド（２〜４ｍｇ、６〜１２μｍｏｌ、実施例１(ｖ)に従って製造）及びＣｓ2ＣＯ3（８〜１０ｍｇ、２４〜３０μｍｏｌ）を室温で１〜２時間撹拌した。乾燥したライトｔ−Ｃ１８ ｓｅｐ ｐａｋ上の放射能をＣＨ3ＣＮ（０．５ｍｌ）でホイートンバイアル中に溶出した。ホイートンバイアルを密封し、反応物を１２０〜１３０℃の油浴中で１５分間加熱撹拌した。その後、反応物を冷却し、水（５００μｌ）で奪活した。造影剤１を
ＨＰＬＣ（ＡＣＥ Ｃ１８（２）カラム，５μ，１００ｘ１０ｍｍ，５ｍｌループ，ポンプ速度３ｍｌ／分，波長２５４ｎｍ，移動相（水：ＭｅＯＨ）：０−１分 ５０％ＭｅＯＨ；１−２０分 ５０−９５％ＭｅＯＨ；２０−２５分 ９５％ＭｅＯＨ；２５−２６分 ９５−５０％ＭｅＯＨ；２６−２８分 ５０％ＭｅＯＨ）によって精製した。
【０１９２】
実施例６：インビトロ効力アッセイ
Ｌｅ Ｆｕｒ ｅｔ ａｌ（Ｌｉｆｅ Ｓｃｉ．１９８３；ＵＳＡ ３３：４４９−５７）の方法を改変した方法を用いて、ＰＢＲに対する親和性のスクリーニングを行った。試験した化合物は、非放射性造影剤１及び先行技術化合物ＦＥ−ＰＢＲ２８の非放射性バージョンであった。
【０１９３】
（１％ＤＭＳＯを含む５０ｍＭトリス−ＨＣｌ、ｐＨ７．４、１０ｍＭ ＭｇＣｌ2に溶解した）各試験化合物を、ウィスター系ラットの心臓ＰＢＲとの結合に関して０．３ｎＭ［3Ｈ］−ＰＫ−１１１９５と競合させた。反応は５０ｍＭトリス−ＨＣｌ、ｐＨ７．４、１０ｍＭ ＭｇＣｌ2中で２５℃で１５分間実施した。
【０１９４】
各試験化合物のスクリーニングは、推定Ｋiの周辺の３００倍の濃度範囲にわたる６種の濃度で行った。非放射性造影剤１に関するＫiは４．２４ｎＭであることが判明し、ＦＥ−ＰＢＲ２８に関するＫiは０．０５６ｎＭであることが判明した。
【０１９５】
【表１】
【０１９６】
実施例７：インビボ体内分布方法
インビボ造影剤１及び（Ｗｉｌｓｏｎ ｅｔ ａｌ，Ｎｕｃ．Ｍｅｄ．Ｂｉｏｌ．２００８；３５：３０５−１４に従って製造した）先行技術化合物［18Ｆ］−ＦＥ−ＰＢＲ２８をインビボ体内分布モデルで試験し、それぞれの体内分布を比較した。
【０１９７】
雄ウィスター系ラット成体（２００〜３００ｇ）に、側尾静脈を通して１〜３ＭＢｑの各インビボ造影剤を注射した。注射から２分後、１０分後、３０分後又は６０分後（ｎ＝３）に、ラットを安楽死させ、γ線カウンター上での放射能測定に組織又は体液の試料を採取した。図１は得られたデータを示している。さらに詳しく説明すると、造影剤の注射後、注射から２分後における嗅球（ＯＢ）中への取込み量、並びに注射から３０分後におけるＯＢ取込み量と線条体取込み量との比を調べた。これらの特定測定値を採用した理由は、ＯＢがラット脳の他の領域に比べて高いレベルのＰＢＲを発現することが知られているからである（“Ｈａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ Ｓｕｂｓｔａｎｃｅ Ａｂｕｓｅ”ｂｙ Ｔａｒｔｅｒ，Ａｍｍｅｒｍａｎ ａｎｄ Ｏｔｔ；Ｓｐｒｉｎｇｅｒ １９９８：３９８−９９を参照されたい）。
【０１９８】
以下表１では、造影剤１が［18Ｆ］−ＦＥ−ＰＢＲ２８と比較されている。
【０１９９】
【表２】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、インビボイメージング、特に末梢ベンゾジアゼピンレセプター（ＰＢＲ）のインビボイメージングに関する。ナノモル親和性をもってＰＢＲに結合し、投与後には脳内への良好な取込みを示し、ＰＢＲへの良好な選択的結合を示すアリールオキシアニリド系インビボ造影剤が提供される。本発明はまた、本発明のインビボ造影剤の合成に有用な前駆体化合物、並びに前記前駆体化合物の使用を含む前記インビボ造影剤の合成方法及び前記方法を実施するためのキットも提供する。インビボ造影剤の自動化合成のためのカセットも提供される。加えて本発明は、本発明のインビボ造影剤を含む放射性医薬組成物並びに前記インビボ造影剤の使用方法も提供する。
【背景技術】
【０００２】
末梢ベンゾジアゼピンレセプター（ＰＢＲ）は、主として末梢組織及びグリア細胞に局在することが知られているが、その生理学的機能はまだ明確に解明されていない。細胞レベル以下では、ＰＢＲはミトコンドリア外膜上に局在することが知られていて、これはミトコンドリア機能の調節及び免疫系で役割を果たす可能性を表している。さらに、ＰＢＲが細胞増殖、ステロイド生成、カルシウム流れ及び細胞呼吸に関係することも仮定されてきた。ＰＢＲは、急性及び慢性ストレス、不安、うつ病、パーキンソン病、アルツハイマー病、脳損傷、癌（Ｇａｖｉｓｈ ｅｔ ａｌ，Ｐｈａｒｍ．Ｒｅｖ．１９９９；５１：６２９）、ハンチントン病（Ｍｅｓｓｍｅｒ ａｎｄ Ｒｅｙｎｏｌｄｓ，Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．Ｌｅｔｔ．１９９８；２４１：５３−６）、喘息（Ｐｅｌａｉａ ｅｔ ａｌ，Ｇｅｎ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．１９９７；２８（４）：４９５−８）、慢性関節リウマチ（Ｂｒｉｂｅｓ ｅｔ ａｌ，Ｅｕｒ．Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．２００２；４５２（１）：１１１−２２）、アテローム性動脈硬化症（Ｄａｖｉｅｓ ｅｔ ａｌ，Ｊ．Ｎｕｃｌ．Ｍｅｄ．２００４；４５：１８９８−１９０７）及び多発性硬化症（Ｂａｎａｔｉ ｅｔ ａｌ，２０００ Ｂｒａｉｎ；１２３：２３２１）を始めとする各種の状態と関連していた。ＰＢＲはニューロパシー性疼痛にも関連する可能性があり、Ｔｓｕｄａ ｅｔ ａｌはニューロパシー性疼痛をもった被験者で小グリア細胞の活性化を観察している（２００５ ＴＩＮＳ ２８（２）ｐｐ１０１−７）。
【０００３】
ＰＢＲ選択性リガンド(Ｒ)−[11Ｃ]−ＰＫ１１１９５を用いる陽電子放出断層撮影（ＰＥＴ）イメージングは、中枢神経系（ＣＮＳ）炎症の包括的指標を提供する。(Ｒ)−[11Ｃ]−ＰＫ１１１９５の使用の成功にもかかわらず、それには制約がある。それは、高いタンパク質結合性及び低特異的乃至非特異的結合性を有することが知られている。その放射性標識代謝産物の役割は知られておらず、結合の定量化には複雑なモデル化が要求される。ＰＢＲに対して高い親和性及び選択性を有することでＣＮＳにおけるＰＢＲ測定の向上を可能にする化合物を得るための努力が行われてきた。
【０００４】
ＰＢＲに対する高い親和性並びに中枢ベンゾジアゼピンレセプター（ＣＢＲ）に比べてＰＢＲに対する高い選択性を有するアリールオキシアニリン誘導体が提唱された（Ｃｈａｋｉ ｅｔ ａｌ，１９９９ Ｅｕｒ．Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．；３７１：１９７−２０４）。［11Ｃ］−ＤＡＡ１１０６及び［18Ｆ］−ＦＥ−ＤＡＡ１１０６は、これらのアリールオキシアニリン化合物に基づくＰＥＴ放射性リガンドである。これらのＰＥＴ放射性リガンドは米国特許第６８７００６９号に教示され、ヒトで研究されてきた（Ｉｋｏｍｏ ｅｔ ａｌ，Ｊ．Ｃｅｒｅｂ．Ｂｌｏｏｄ Ｆｌｏｗ Ｍｅｔａｂ．２００７；２７：１７３−８４及びＦｕｊｉｍｕｒａ ｅｔ ａｌ，Ｊ．Ｎｕｃ．Ｍｅｄ．２００６；４７：４３−５０）。別の放射性フッ素化ＤＡＡ１１０６誘導体は国際公開第２００７／０７４３８３号に教示されている。別の11Ｃ標識ＤＡＡ１１０６誘導体は国際公開第２００７／０３６７８５号に教示されている。放射性ヨウ素化ＤＡＡ１１０６は、欧州特許出願公開第１８５４７８１号に記載され、またＺｈａｎｇ ｅｔ ａｌ（２００７ Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．；５０：８４８−５５）によって記載されている。［11Ｃ］−ＤＡＡ１１０６、［18Ｆ］−ＦＥ−ＤＡＡ１１０６及び［123Ｉ］−ＤＡＡ１１０６の化学構造は以下の通りである。
【０００５】
【化１】
【０００６】
しかし、これらの化合物の動力学的性質はインビボイメージングには理想的でないため、定量的研究に対するその適用は制限されることがある。
【０００７】
ＤＡＡ１１０６系列の放射性リガンドにさらなる改良を加えようという努力の中で、Ｂｒｉａｒｄ ｅｔ ａｌ（Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．２００８；５１：１７−３０）は別のアリールオキシアニリン誘導体ＰＢＲ２８を報告した。ＰＢＲ２８及びＰＢＲ２８から導かれるＰＥＴ放射性リガンドの構造は以下の通りである。
【０００８】
【化２】
【０００９】
（［18Ｆ］−ＦＥ−ＰＢＲ２８としても知られる）［18Ｆ］−ＦＥＰＰＡは、感度及び特異性は測定されなかったものの、インビトロでＰＢＲに対するナノモル未満の親和性を有することが判明し、また静脈内注射後に天然ラットの脳内への良好な取込みを示した（Ｗｉｌｓｏｎ ｅｔ ａｌ，Ｎｕｃ．Ｍｅｄ．Ｂｉｏｌ．２００８；３５：３０５−１４）。［11Ｃ］−ＰＢＲ２８をサルで試験し、ＰＥＴを用いてその脳内動力学を評価した。Ｂｒｉａｒｄ ｅｔ ａｌ（上記）により、［11Ｃ］−ＰＢＲ２８は、(Ｒ)−[11Ｃ]−ＰＫ１１１９５に比べて高い脳内取込み、ＰＢＲ発現組織に対する良好な特異的結合、及びインビボイメージングに一段と適した動力学的性質を有することが報告された。本発明者らは、ＰＢＲ２８が(Ｒ)−[11Ｃ]−ＰＫ１１１９５よりインビボＰＢＲ造影剤として良好な性質を示すものの、ＰＢＲ発現組織に対するその特異性は理想的でないことを見出した。さらに本発明者らは、ＰＢＲ２８のインビボクリアランス特性も理想的でないことを見出した。したがって、さらに改良されたＰＢＲ特異的インビボ造影剤を得る余地が存在している。
【００１０】
本願の優先日後に公開された国際公開第２０１０／０１５３４０号及び同第２０１０／０１５３８７号は、ＰＢＲ２８と同じ環上であるが、その環中の異なる位置に窒素ヘテロ原子を有するさらに別の部類のアリールオキシアニリン誘導体を開示している。一般的には、国際公開第２０１０／０１５３４０号及び同第２０１０／０１５３８７号は次の式Ｉの化合物を開示している。
【００１１】
【化３】
【００１２】
式中、
Ｒ1及びＲ2は各々独立かつ個別に、（Ｇ3）アリール、置換（Ｇ3）アリール、（Ｇ3−（Ｃ1〜Ｃ8）アルキル）アリール、（Ｇ3−（Ｃ1〜Ｃ8）アルコキシ）アリール、（Ｇ3−（Ｃ2〜Ｃ8）アルキニル）アリール、（Ｇ3−（Ｃ2〜Ｃ8）アルケニル）アリール、置換（Ｇ3−（Ｃ1〜Ｃ8）アルキル）アリール、置換（Ｇ3−（Ｃ1〜Ｃ8）アルコキシ）アリール、置換（Ｇ3−（Ｃ2〜Ｃ8）アルキニル）アリール及び置換（Ｇ3−（Ｃ2〜Ｃ8）アルケニル）アリールからなる群から選択され、
Ｇ1、Ｇ2及びＧ3は各々独立かつ個別に、式Ｉの化合物が正確に１つのＬを含むことを条件として、水素及びＬからなる群から選択され、
ＬはＲ3、［18Ｆ］−フルオロ及び［19Ｆ］−フルオロからなる群から選択され、
Ｒ3は脱離基であり、
ｎは０〜６の整数である。
【００１３】
国際公開第２０１０／０１５３４０号及び同第２０１０／０１５３８７号には、（「２ｄ」及び「５ｄ」と命名された）２種の特定化合物が以前のアリールオキシアニリン誘導体に比べて脳内ＰＢＲのインビボイメージングのための改善された性質を有することを示すデータが記載されている。これら２種の化合物の化学式を以下に示す。
【００１４】
【化４】
【先行技術文献】
【特許文献】
【００１５】
特開２０００−００１４７６号公報
【発明の概要】
【００１６】
本発明は、インビボイメージングに適した新規な放射性標識アリールオキシアニリン誘導体を提供する。本発明のインビボ造影剤は、中枢神経系（ＣＮＳ）における末梢ベンゾジアゼピンレセプター（ＰＢＲ）のインビボイメージングのための良好な性質を有する。本発明のインビボ造影剤は、被験体への投与後における良好な脳内取込み及びインビボ動力学と共に、ＰＢＲに対する良好な結合性を示す。
【図面の簡単な説明】
【００１７】
【図１】図１は、［18Ｆ］−ＦＥ−ＰＢＲ２８の脳内分布（上部）を造影剤１の脳内分布（下部）と比較して示している。
【発明を実施するための形態】
【００１８】
造影剤
一態様では、本発明は次の式Ｉのインビボ造影剤或いはその塩又は溶媒和物を提供する。
【００１９】
【化５】
【００２０】
式中、
Ｒ1はメチル及びＣ1-3フルオロアルキルから選択され、
Ｒ2は水素、ハロゲン、Ｃ1-3アルコキシ及びＣ1-3フルオロアルコキシから選択され、
Ｒ3は水素、ハロゲン及びＣ1-3アルコキシから選択され、
Ａ1はＣＨ又はＮであり、
Ａ2及びＡ4-7の１つ又は２つがＮであり、Ａ2及びＡ4-7の残りがＣＨであり、
Ａ3はＣＨ又はＣＨ−Ｏ−Ｒ4（式中、Ｒ4はＨ、Ｃ1-3アルキル又はＣ1-3ハロアルキルである。）であるか、或いは別法としてＡ2及びＡ4-7の１つがＮでありかつＡ2及びＡ4-7の残りがＣＨである場合にＡ3はＮであってよく、
式Ｉはインビボイメージングに適した放射性同位体である原子を含む。
【００２１】
本発明に関連する「インビボ造影剤」とは、インビボイメージングに適した放射性標識化合物をいう。本明細書で使用する「インビボイメージング」という用語は、被験体の内部構造の全部又は一部の画像を非侵襲的に生成する技術をいう。かかるインビボイメージング方法の例は、単光子放出コンピューター断層撮影法（ＳＰＥＣＴ）及び陽電子放出断層撮影法（ＰＥＴ）である。
【００２２】
本発明に係る好適な塩には、（ｉ）鉱酸（例えば、塩酸、臭化水素酸、リン酸、メタリン酸、硝酸及び硫酸）から導かれるもの並びに有機酸（例えば、酒石酸、トリフルオロ酢酸、クエン酸、リンゴ酸、乳酸、フマル酸、安息香酸、グリコール酸、グルコン酸、コハク酸、メタンスルホン酸及びｐ−トルエンスルホン酸）から導かれるもののような生理学的に許容される酸付加塩、並びに（ｉｉ）アンモニウム塩、アルカリ金属塩（例えば、ナトリウム塩及びカリウム塩）、アルカリ土類金属塩（例えば、カルシウム塩及びマグネシウム塩）、有機塩基（例えば、トリエタノールアミン、Ｎ−メチル−Ｄ−グルカミン、ピペリジン、ピリジン、ピペラジン及びモルホリン）との塩、及びアミノ酸（例えば、アルギニン及びリシン）との塩のような生理学的に許容される塩基塩がある。
【００２３】
本発明に係る好適な溶媒和物には、エタノール、水、食塩水、生理的緩衝液及びグリコールと共に生成されるものがある。
【００２４】
特記しない限り、単独で又は組み合わせて使用される「アルキル」という用語は、好ましくは１〜３の炭素原子を含む直鎖又は枝分れアルキル基を意味する。かかる基の例には、メチル、エチル及びプロピルがある。
【００２５】
特記しない限り、単独で又は組み合わせて使用される「アルコキシ」という用語は式−Ｏ−アルキルのアルキルエーテル基を意味し、ここでアルキルという用語は上記に定義した通りである。好適なアルキルエーテル基の例には、メトキシ、エトキシ及びプロポキシがある。
【００２６】
「ハロゲン」又は「ハロ」という用語は、フッ素、塩素、臭素及びヨウ素から選択される置換基を意味する。「ハロアルキル」及び「ハロアルコキシ」とは、それぞれ、上記に定義したアルキル基及びアルコキシ基が１以上のハロゲンで置換されたもの、好ましくは末端で置換されたもの（即ち、−アルキル−ハロゲン及び−アルコキシ−ハロゲン）である。
【００２７】
「インビボイメージングに適した放射性同位体である原子を含む」という用語は、上記に定義した式Ｉにおいて、１つの原子の同位体形態がインビボイメージングに適した放射性同位体であることを意味する。インビボイメージングに適するには、放射性同位体は前記被験体への投与後に外部で検出可能である。本発明の好ましい放射性同位体は、γ線放出型放射性ハロゲン及び陽電子放出型放射性非金属である。本発明で使用するのに適したγ線放出型放射性ハロゲンの例は、123Ｉ、131Ｉ及び77Ｂｒである。好ましいγ線放出型放射性ハロゲンは123Ｉである。本発明で使用するのに適した陽電子放出型放射性非金属の例は、11Ｃ、13Ｎ、18Ｆ及び124Ｉである。好ましい陽電子放出型放射性非金属は11Ｃ及び18Ｆ、特に18Ｆである。
【００２８】
好ましくは、Ｒ1がＣ1-3フルオロアルキルであり、Ｒ2が水素であるか、或いはＲ1がメチルであり、Ｒ2がＣ1-3フルオロアルコキシである。
【００２９】
Ｒ3は、好ましくは水素である。
【００３０】
式Ｉのインビボ造影剤の好ましい一実施形態では、Ａ1、Ａ2及びＡ4-7の２つがＮであり、Ａ1、Ａ2及びＡ4-7の残りがＣＨである。
【００３１】
式Ｉのインビボ造影剤の別の好ましい実施形態では、Ａ2及びＡ4〜Ａ6の１つがＮであり、Ａ1がＣＨであり、Ａ7がＣＨである。
【００３２】
式Ｉのインビボ造影剤のさらに別の好ましい実施形態では、Ａ7がＮであり、Ａ1-6がＣＨであり、Ｒ3が水素である。
【００３３】
本発明におけるインビボイメージングに適した好ましい放射性同位体は18Ｆである。最も好ましくは、Ｒ1が［18Ｆ］−フルオロアルキルであるか、或いはＲ2が［18Ｆ］−フルオロアルコキシである。かかるインビボ造影剤の例は、以下の造影剤１〜１９である。
【００３４】
【化６】
【００３５】
本発明の好ましい18Ｆインビボ造影剤はインビボ造影剤１、１８及び１９であり、最も好ましくはインビボ造影剤１である。
【００３６】
（上記に示した）非放射性インビボ造影剤１の効力（実施例６）を測定し、その異性体であるＮ−［３−（２−フルオロエトキシ）ベンジル］−Ｎ−（４−フェノキシ−ピリジン−３−イル）アセトアミド（即ち、先行技術化合物［18Ｆ］−ＦＥ−ＰＢＲ２８の非放射性バージョン）と比較した。動物体内分布モデル（実施例７）では、インビボ造影剤１を試験し、その体内分布を（Ｗｉｌｓｏｎ ｅｔ ａｌ，Ｎｕｃ．Ｍｅｄ．Ｂｉｏｌ．２００８；３５：３０５−１４に従って製造した）先行技術化合物［18Ｆ］−ＦＥ−ＰＢＲ２８の体内分布と比較した。
【００３７】
［18Ｆ］−ＦＥ−ＰＢＲ２８の異性体であるにもかかわらず、造影剤１のＰＢＲに関して測定された効力は２桁低いことが判明した。さらに、造影剤１に関しては、［18Ｆ］−ＦＥ−ＰＢＲ２８に比べて脳内のＰＢＲ発現組織に対する向上した選択性が認められた。本発明者らは、［18Ｆ］−ＦＥ−ＰＢＲ２８の（３０分後に対する２分後の）全脳クリアランス比が造影剤１の３．４６に比べて１．９７である子とを認めたが、これはＰＢＲレセプターに結合しない造影剤１が脳から一層急速に排出されることを示している。これにより、造影剤１に関して認められる信号／バックグラウンド比が［18Ｆ］−ＦＥ−ＰＢＲ２８に比べて高いのはそのためであるという仮説が立てられる。
【００３８】
図１は、注射後６０分までにおける各化合物の脳内分布を示している。これらのグラフは、注射後３０分では、インビボ造影剤１が［18Ｆ］−ＦＥ−ＰＢＲ２８に比べて脳の残部より嗅球（ＯＢ）中に多く保持されることを示しており、これはインビボ造影剤１が先に例示したインビボ造影剤［18Ｆ］−ＦＥ−ＰＢＲ２８よりＰＢＲに対して向上した選択性を有することを実証している。さらに、これらのグラフは、造影剤１のクリアランスプロファイルが［18Ｆ］−ＦＥ−ＰＢＲ２８に比べてインビボイメージングに一層有利であることを示している。
【００３９】
製造方法
さらに別の態様では、本発明は、上述した本発明のインビボ造影剤の製造方法であって、前記放射性同位体の適当な供給源を次の式ＩＩの前駆体化合物と反応させる段階を含んでなる方法を提供する。
【００４０】
【化７】
【００４１】
式中、
Ｒ11-13の１つは前駆体基を含み、Ｒ11-13の残りはそれぞれ式ＩのＲ1-3に関して定義した通りであって、任意には保護基を含み、
Ａ11-17はそれぞれ式ＩのＡ1-7に関して定義した通りであって、任意には保護基を含み、
ただしＡ17がＮであり、かつＡ11、Ａ12及びＡ14-16がすべてＣＨである場合には、Ａ13がＣＨであり、Ｒ13が水素であることを条件とする。
【００４２】
「前駆体化合物」は、インビボイメージングに適した前記放射性同位体の好都合な化学形態との化学反応が部位特異的に起こり、最小数の段階（理想的にはただ１つの段階）で反応を実施でき、かつ格別の精製の必要なしに（理想的にはいかなる追加の精製も必要なしに）所望のインビボ造影剤が得られるように設計された、放射性標識化合物の非放射性誘導体からなる。かかる前駆体化合物は合成品であり、良好な化学純度で簡便に得ることができる。前駆体化合物は、任意には前駆体化合物のある種の官能基に関して保護基を含むことができる。前駆体化合物は、キット中又は自動化合成装置と共に使用するのに適したカセット中に溶液状態で供給するか、或いは固体担体に結合した状態で供給することができる。キット及びカセットは本発明の追加の態様をなし、以下に一層詳しく論議される。
【００４３】
「保護基」という用語は、望ましくない化学反応を阻止又は抑制するが、分子の残部を変質させない十分に温和な条件下で問題の官能基から脱離させ得るのに十分な反応性を有するように設計された基を意味する。脱保護後には所望のインビボ造影剤が得られる。保護基は当業者にとって公知であり、‘Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ Ｇｒｏｕｐｓ ｉｎ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ’，Ｔｈｅｏｒｏｄｏｒａ Ｗ．Ｇｒｅｅｎｅ ａｎｄ Ｐｅｔｅｒ Ｇ．Ｍ．Ｗｕｔｓ（Ｔｈｉｒｄ Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ，１９９９）に記載されている。
【００４４】
「前記放射性同位体の適当な供給源」という用語は、放射性同位体が前駆体化合物に共有結合するようにして前駆体化合物の置換基と反応し得る化学形態の放射性同位体を意味する。
【００４５】
概して言えば、前駆体化合物を前記放射性同位体の適当な供給源と「反応させる」段階は、できるだけ高い放射化学収率（ＲＣＹ）で所望のインビボ造影剤を生成するのに適した反応条件下で２種の反応体を合わせることを含んでいる。若干の一層詳細な経路を以下の実験セクションに示す。
【００４６】
次に、本発明の各種インビボ造影剤を得るための一般的方法を記載する。当業者であれば、本発明の技術的範囲全体にわたるインビボ造影剤を得るため、格別の実験を行わなくても以下に記載される教示内容を適用することができよう。
【００４７】
Ｏｋｕｂｕ ｅｔ ａｌ（２００４ Ｂｉｏｏｒｇ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．；１２：４２３−３８）は、非放射性アリールオキシアニリド化合物を得るための方法を記載している。本発明のインビボ造影剤に類似したインビボ造影剤を得るための合成スキームは、Ｂｒｉａｒｄ ｅｔ ａｌ（Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．２００８；５１；１７−３１）、Ｗｉｌｓｏｎ ｅｔ ａｌ（Ｎｕｃ．Ｍｅｄ．Ｂｉｏｌ．２００８；３５；３０５−１４）、及びＺｈａｎｇ ｅｔ ａｌ（Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．２００７；５０：８４８−５５）によって記載されている。これらの先行技術方法は、本発明のインビボ造影剤を得るのに適した前駆体化合物を得るために容易に適合させることができる。
【００４８】
以下のスキーム１は、本発明のインビボ造影剤を製造するのに適した前駆体化合物を得るための一般反応スキームである。
【００４９】
【化８】
【００５０】
Ｒ22はヒドロキシル、アルコキシ又はハロアルコキシであり、ＬＧはクロリド又はブロミドのような脱離基であり、Ｚは(ＣＨ2)x−Ｙ（式中、ｘは１〜３であり、Ｙは水素又はインビボイメージングに適した放射性同位体の適当な供給源によって置換され得る基である。）であり、Ａ21-27はそれぞれＡ1-7に関して本明細書で定義した通りである。
【００５１】
求核芳香族置換が起こる塩基性条件下でｏ−クロロニトロ芳香族化合物（ａ）をヒドロキシル芳香族化合物（ｂ）と反応させる。水素化によってニトロ基を還元すれば、対応するアニリン（ｄ）が得られる。芳香族アルデヒド（ｅ）による還元性アルキル化でベンジルアミン（ｆ）が得られる。アセチル化によってアセトキシアミド（ｇ）が得られる。標識に使用すべき放射性同位体に応じ、（ｇ）自体が前駆体化合物であるか、或いは以下に一層詳しく論議されるようにして前駆体化合物に転化させることができる。
【００５２】
インビボ造影剤の放射性同位体が18Ｆである場合、放射性フッ素原子はフルオロアルキル基又はフルオロアルコキシ基の一部をなすことができる。これは、アルキルフルオリドがインビボでの代謝に耐えるからである。別法として、放射性フッ素原子は直接共有結合によって芳香環に結合することができる。
【００５３】
放射性フッ素化は、18Ｆ−フッ化物と良好な脱離基を有する前駆体化合物（例えば、アルキルブロミド、アルキルメシレート又はアルキルトシレート）中の適当な化学基との反応を用いる直接標識によって実施できる。18Ｆはまた、［18Ｆ］−フルオロアルキルブロミド、［18Ｆ］−フルオロアルキルメシレート又は［18Ｆ］−フルオロアルキルトシレートでヒドロキシル基をＯ−アルキル化することによっても導入できる。
【００５４】
アリール系に関しては、アリールジアゾニウム塩、アリールニトロ化合物又はアリール第四級アンモニウム塩からの18Ｆ−フッ化物求核置換が、アリール−18Ｆ誘導体への好適な経路である。
【００５５】
別法として、18Ｆによる標識は、前駆体化合物からの脱離基の求核置換によって達成できる。好適な脱離基には、クロリド、ブロミド、ヨージド、トシレート、メシレート及びトリフレートがある。かかる誘導体は、本発明のインビボ造影化合物を製造するための前駆体化合物である。
【００５６】
別の方策は、上記に定義したような好適な脱離基を、前駆体化合物上に存在するアルキルアミド基上に設けることである。このようにすれば、通常は核反応18Ｏ(ｐ，ｎ)18Ｆから水溶液として得られ、次いで陽性対イオンの添加及びそれに続く水の除去によって反応性にされる［18Ｆ］−フッ化物イオン（18Ｆ-）の適当な供給源との反応によって前駆体化合物を一段階で標識できる。この方法には、前駆体化合物は、放射性フッ素化が化合物上の特定の部位で起こるように選択的に化学保護されるのが普通である。好適な保護基は既に前述したものである。
【００５７】
放射性同位体が18Ｆである場合、前駆体化合物は以下のいずれかであることが好ましい。
（ｉ）求核置換のためのアルキルハライド又はアルキルスルホネート（例えば、アルキルブロミド、アルキルメシレート又はアルキルトシレート）、或いは
（ｉｉ）（例えば、18Ｆ(ＣＨ2)3ＯＭｓ又は18Ｆ(ＣＨ2)3ＯＢｒでヒドロキシル基をＯ−アルキル化することによる18Ｆの導入のための）ヒドロキシル。
【００５８】
（上記スキーム１の続きである）以下のスキーム２では、Ｚは−(ＣＨ2)−ブロミド又は−(ＣＨ2)−クロリドである。これを塩基性条件下で［18Ｆ］−フッ化物イオンで処理すれば、標識18Ｆ−フルオロアセチル化合物（ｈ）（即ち、Ｒ1が18Ｆからなる式Ｉのインビボ造影剤）が得られる。
【００５９】
【化９】
【００６０】
（上記スキーム１の（ｆ）からの続きである）以下のスキーム３では、（ｆ）のＲ22はヒドロキシルであり、アセチル−ＬＧによる（ｆ）のアセチル化でアセトキシアミド（ｉ）が得られる。アセテートの加水分解でアルコール（ｊ）が得られ、これを18Ｆ−フルオロエチルトシレート及び水素化ナトリウムでアルキル化することで18Ｆ−フルオロエトキシ化合物（ｋ）（即ち、Ｒ2が18Ｆからなる式Ｉのインビボ造影剤）が得られる。
【００６１】
【化１０】
【００６２】
造影剤１もこの経路で得ることができる。
【００６３】
【化１１】
【００６４】
スキーム３についてさらに説明すると、同じインビボ造影剤（ｋ）は、脱離基を含む前駆体化合物を［18Ｆ］−フッ化物で直接標識することでも得ることができる。脱離基がトシレートであるこのような直接標識前駆体は、（ｊ）を特定のアルキルグリコールジトシレートと反応させて（ｊ１）とすることで得られる。次に、（ｊ１）を［18Ｆ］−フッ化物で直接標識することで18Ｆ−フルオロエトキシ化合物（ｋ）が得られる。造影剤１もこの経路で得ることができる。
【００６５】
【化１２】
【００６６】
放射性同位体が放射性ヨウ素である本発明のインビボ造影剤を得るためには、好ましい前駆体化合物は、求電子又は求核ヨウ素化を受ける誘導体或いは標識アルデヒド又はケトンとの縮合を受ける誘導体を含むものである。第１のカテゴリーの例は以下の（ａ）及び（ｂ）である。
（ａ）トリアルキルスタンナン（例えば、トリメチルスタンニル又はトリブチルスタンニル）、トリアルキルシラン（例えば、トリメチルシリル）或いは有機ホウ素化合物（例えば、ボロネートエステル又はオルガノトリフルオロボレート）のような有機金属誘導体。
（ｂ）求電子ヨウ素化に向けて活性化された芳香環（例えば、フェノール類）及び求核ヨウ素化に向けて活性化された芳香環（例えば、アリールヨードニウム塩、アリールジアゾニウム塩、アリールトリアルキルアンモニウム塩又はニトロアリール誘導体）。
【００６７】
放射性ヨウ素化には、前駆体化合物は好ましくは、（放射性ヨウ素交換を可能にするための）アリールヨージド又はブロミド、活性化前駆体化合物アリール環（例えば、フェノール基）、有機金属前駆体化合物（例えば、トリアルキルスズ、トリアルキルシリル又は有機ホウ素化合物）、或いはトリアゼンのような有機前駆体化合物又は求核置換のための良好な脱離基（例えば、ヨードニウム塩）からなる。放射性ヨウ素を有機分子中に導入するための前駆体化合物及び方法は、Ｂｏｌｔｏｎ（Ｊ．Ｌａｂ．Ｃｏｍｐ．Ｒａｄｉｏｐｈａｒｍ．２００２；４５：４８５−５２８）によって記載されている。好適なボロネートエステル有機ホウ素化合物及びその製法は、Ｋａｂａｌｋａ ｅｔ ａｌ（Ｎｕｃｌ．Ｍｅｄ．Ｂｉｏｌ．２００２；２９：８４１−８４３及び２００３；３０：３６９−３７３）によって記載されている。好適なオルガノトリフルオロボレート及びその製法は、Ｋａｂａｌｋａ ｅｔ ａｌ（Ｎｕｃｌ．Ｍｅｄ．Ｂｉｏｌ．２００４；３１：９３５−９３８）によって記載されている。放射性ヨウ素化用の好ましい前駆体化合物は有機金属前駆体化合物からなり、最も好ましくはトリアルキルスズからなる。
【００６８】
放射性ヨウ素を結合できるアリール基の例を以下に示す。
【００６９】
【化１３】
【００７０】
これらの基はいずれも、芳香環上への容易な放射性ヨウ素置換を可能にする置換基を含んでいる。放射性ヨウ素を含む別の置換基は、例えば次式のように、放射性ハロゲン交換による直接ヨウ素化で合成することができる。
【００７１】
【化１４】
【００７２】
例えば、本発明の放射性ヨウ素化インビボ造影剤を得るのに適した前駆体化合物では、式ＩＩＩのＲ21又はＲ23は、それが結合した芳香族基と共に、
（ｉ）有機金属誘導体又は有機ホウ素化合物で置換された芳香環を形成するか、
（ｉｉ）求電子放射性ヨウ素化に向けて活性化された芳香環（例えば、フェノール類）を形成するか、或いは
（ｉｉｉ）求核放射性ヨウ素化に向けて活性化された芳香環（例えば、アリールヨードニウム塩、アリールジアゾニウム塩、アリールトリアルキルアンモニウム塩又はニトロアリール誘導体）を形成する。
【００７３】
これらの前駆体化合物は、放射性ヨウ素置換により、本発明の放射性ヨウ素化インビボ造影剤に容易に転化される。
【００７４】
本発明のインビボ造影剤に類似した構造を有する放射性ヨウ素化化合物は、Ｚｈａｎｇ ｅｔ ａｌ（２００７ Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．；５０：８４８−５５）によって記載されている。これらの化合物は、トリブチルスタンナン前駆体化合物の放射性ヨウ素化によってベンゼン環上に放射性ヨウ素を導入することで得られた。本発明の放射性ヨウ素化インビボ造影剤を得るためには、（上記スキーム１の続きである）以下のスキーム４（式中、（ｇ）のＲ22はブロミドである。）に例示されるように類似の方法が使用できる。
【００７５】
【化１５】
【００７６】
Ｒ2又はＲ3が放射性臭素である式Ｉの化合物は、式Ｉの放射性ヨウ素化化合物に関して上記に記載した前駆体化合物の放射性臭素化によって得ることができる。Ｋａｂａｌｋａ ａｎｄ Ｖａｒｍａは、放射性臭素化化合物を含む放射性ハロゲン化化合物を合成するための様々な方法を総説している（Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ １９８９；４５（２１）：６６０１−２１）。
【００７７】
本発明の11Ｃ標識インビボ造影剤は、インビボ造影剤のデスメチル化バージョンである前駆体化合物を11Ｃ−メチルヨージドと反応させることで直截的に合成できる。11Ｃ標識アリールオキシアニリド化合物を得るためのかかる方法は、Ｂｒｉａｒｄ ｅｔ ａｌ（２００８ Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．；５１；１７−３０）によって記載されている。Ｂｒｉａｒｄによって記載された方法は、異なる出発原料を使用しながら、本発明の11Ｃ標識インビボ造影剤を得るために容易に適合させることができる。（上記スキーム１の続きである）以下のスキーム５（式中、（ｇ）のＲ22はヒドロキシルである。）は、放射性同位体が11Ｃである本発明のインビボ造影剤を得るため、Ｂｒｉａｒｄ ｅｔ ａｌの教示内容をいかにして適合させ得るかを例示している。
【００７８】
【化１６】
【００７９】
また、所望のインビボ造影剤の特定の炭化水素のグリニャール試薬を［11Ｃ］−ＣＯ2と反応させて、前駆体化合物中のアミン基と反応して所望の11Ｃ標識インビボ造影剤を与える11Ｃ試薬を得ることによって11Ｃを組み込むことも可能である。グリニャール試薬は、所望の放射性標識部位にハロゲン化マグネシウム前駆体基を含んでいる。
【００８０】
11Ｃの半減期は２０．４分にすぎないので、11Ｃ標識中間体は高い比放射能を有すること、したがってできるだけ速い反応プロセスを用いてそれを製造することが重要である。かかる11Ｃ標識技術に関する徹底的な総説を、Ａｎｔｏｎｉ ｅｔ ａｌ，“Ａｓｐｅｃｔｓ ｏｎ ｔｈｅ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ ｏｆ 11Ｃ−Ｌａｂｅｌｌｅｄ Ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ”ｉｎ Ｈａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ Ｒａｄｉｏｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ，Ｅｄ．Ｍ．Ｊ．Ｗｅｌｃｈ ａｎｄ Ｃ．Ｓ．Ｒｅｄｖａｎｌｙ（２００３，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ａｎｄ Ｓｏｎｓ）に見出すことができる。
【００８１】
本発明の前駆体化合物は、理想的には無菌で非発熱性の形態で供給される。したがって前駆体化合物は、インビボ造影剤を哺乳動物への投与に適した生体適合性キャリヤーと共に含んでなる医薬組成物の製造に使用できる。前駆体化合物はまた、かかる医薬組成物を製造するためのキット中に一成分として含めるためにも適している。
【００８２】
好ましい実施形態では、前駆体化合物はキット又は自動化合成装置で使用するように設計されたカセットの一部として溶液状態で供給される。これらの態様は、本発明の追加の態様に関連して以下に一層詳しく論議される。
【００８３】
別の好ましい実施形態では、前駆体化合物は固相に結合されている。前駆体化合物は、好ましくは固体担体マトリックスに共有結合した状態で供給される。このようにすれば、所望の生成物は溶液状態で生成される一方、出発原料及び不純物は固相に結合したままに保たれる。かかる系の例としては、18Ｆ−フッ化物による固相求電子フッ素化用の前駆体化合物が国際公開第０３／００２４８９号に記載されており、18Ｆ−フッ化物による固相求核フッ素化用の前駆体化合物が国際公開第０３／００２１５７号に記載されている。
【００８４】
本発明の製造方法で使用するための好ましい前駆体化合物の多くは、アルキルブロミド、アルキルメシレート、アルキルトシレート、トリアルキルスタンナン、トリアルキルシラン及び有機ホウ素化合物から選択される前駆体基を含んでいる。これら多くの好ましい前駆体化合物自体は、本発明の独立した態様をなしている。
【００８５】
放射性医薬組成物
さらに別の態様では、本発明は「放射性医薬組成物」を提供し、これは本発明のインビボ造影剤を哺乳動物への投与に適した形態の生体適合性キャリヤーと共に含んでいる。
【００８６】
「生体適合性キャリヤー」は、放射性医薬組成物が生理学的に認容され得るようにして（即ち、毒性又は過度の不快感なしに哺乳動物体に投与できるようにして）インビボ造影剤を懸濁又は溶解するための流体（特に液体）である。生体適合性キャリヤーは、好適には、無菌のパイロジェンフリー注射用水、（有利には注射用の最終生成物が等張性又は非低張性になるように平衡させ得る）食塩水のような水溶液、或いは１種以上の張度調整物質（例えば、血漿陽イオンと生体適合性対イオンとの塩）、糖（例えば、グルコース又はスクロース）、糖アルコール（例えば、ソルビトール又はマンニトール）、グリコール（例えば、グリセロール）又は他の非イオン性ポリオール物質（例えば、ポリエチレングリコール、プロピレングリコールなど）の水溶液のような注射可能なキャリヤー液体である。生体適合性キャリヤーはまた、エタノールのような生体適合性有機溶媒を含んでいてもよい。かかる有機溶媒は、親油性の高い化合物又は配合物を可溶化するために有用である。好ましくは、生体適合性キャリヤーはパイロジェンフリー注射用水、等張食塩水又はエタノール水溶液である。静脈内注射用生体適合性キャリヤーのｐＨは好適には４．０〜１０．５の範囲内にある。
【００８７】
本発明の放射性医薬組成物中に含まれる場合におけるインビボ造影剤の好適な実施形態及び好ましい実施形態は、本明細書で既に記載した通りである。
【００８８】
かかる放射性医薬組成物は非経口的に（即ち、注射によって）投与でき、最も好ましくは水溶液である。かかる組成物は、緩衝剤、薬学的に許容される可溶化剤（例えば、シクロデキストリン或いはＰｌｕｒｏｎｉｃ、Ｔｗｅｅｎ又はリン脂質のような界面活性剤）、薬学的に許容される安定剤又は酸化防止剤（例えば、アスコルビン酸、ゲンチジン酸又はｐ−アミノ安息香酸）のような追加成分を任意に含み得る。本発明のインビボ造影剤が放射性医薬組成物として提供される場合、前記インビボ造影剤の製造方法はさらに、放射性医薬組成物を得るために必要な段階（例えば、有機溶媒の除去、生体適合性緩衝剤及び任意の追加成分の添加）を含むことができる。非経口的投与には、放射性医薬組成物が無菌性かつ無発熱原性であることを保証するための手段を講じることも必要である。
【００８９】
キット及びカセット
好ましい実施形態では、本発明のインビボ造影剤の製造方法は、キット又は自動化合成装置に挿入し得るカセットを用いて実施できる。これらのキット及びカセットはまた、本発明の追加の態様をなしており、本明細書で定義される本発明の放射性医薬組成物の製造のため特に好都合である。
【００９０】
本発明のキットは、本発明の前駆体化合物を密封容器内に含んでいる。「密封容器」は、好ましくは、注射器による溶液の追加及び抜取りを許しながら、無菌保全性及び／又は放射能安全性の維持、さらに任意には不活性ヘッドスペースガス（例えば、窒素又はアルゴン）の維持を可能にする。好ましい密封容器は、気密クロージャーを（通例はアルミニウムからなる）オーバーシールと共にクリンプ加工した隔壁密封バイアルである。かかる密封容器は、例えばヘッドスペースガスの変更又は溶液のガス抜きに所望される場合、クロージャーが真空に耐え得るという追加の利点を有している。
【００９１】
本発明のキット中に使用する場合、前駆体化合物の好適な実施形態及び好ましい実施形態は、本明細書で既に記載した通りである。
【００９２】
キット中に使用するための前駆体化合物を無菌製造条件下で使用すれば、所望の無菌で非発熱性の材料を得ることができる。別法として、前駆体化合物を非無菌条件下で使用し、次いで例えばγ線照射、オートクレーブ処理、乾熱又は（例えば、エチレンオキシドによる）化学処理を用いる終末滅菌を施すこともできる。好ましくは、前駆体化合物は無菌で非発熱性の形態で供給される。最も好ましくは、無菌で非発熱性の前駆体化合物は上述したような密封容器に入れて供給される。
【００９３】
好ましくは、試験間での汚染の可能性を最小限に抑えると共に無菌性及び品質保証を確実にするため、キットのすべての構成要素が使い捨てである。
【００９４】
別の態様では、本発明は、本発明のインビボ造影剤を合成するため適宜に改造された自動化合成装置に挿入し得るカセットを提供する。現在、特に［18Ｆ］−ラジオトレーサーはしばしば自動化放射合成装置で簡便に製造されている。かかる装置には、Ｔｒａｃｅｒｌａｂ（商標）及びＦＡＳＴｌａｂ（商標）（いずれもＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ社製）を始めとするいくつかの市販例が存在している。放射化学は、カセットを装置に取り付けることにより、自動化合成装置上で実施される。普通、カセットは流体通路、反応器、及び試薬バイアル並びに放射合成後の清掃段階で使用される任意の固相抽出カートリッジを受け入れるためのポートを含んでいる。
【００９５】
本発明のインビボ造影剤の自動化合成のためのカセットは、
（ｉ）本明細書で定義した前駆体化合物を含む容器、及び
（ｉｉ）本明細書で定義したような、インビボイメージングに適した放射性同位体の適当な供給源を用いて容器を溶出するための手段
を含んでいる。
【００９６】
かかるカセットはさらに、
（ｉｉｉ）過剰の前記放射性同位体を除去するためのイオン交換カートリッジ、及び任意には
（ｉｖ）得られた放射性標識生成物を脱保護して本明細書で定義したインビボ造影剤を生成するためのカートリッジ
を含むことができる。
【００９７】
自動化合成に必要な試薬、溶媒及び他の消耗品もまた、濃度、体積、送出時間などに関する最終ユーザーの要求条件を満たすように自動化合成装置を運転させるソフトウェアを保持したコンパクトディスクのようなデータ媒体と共に含めることができる。
【００９８】
使用方法
さらに別の態様では、本発明は、
被験体におけるＰＢＲ発現の分布及び／又は程度を決定する際に使用するためのインビボイメージング方法であって、
（ｉ）本明細書で定義したインビボ造影剤を前記被験体に投与する段階、
（ｉｉ）前記造影剤を前記被験体内のＰＢＲに結合させる段階、
（ｉｉｉ）前記造影剤の放射性同位体から放出される信号をインビボイメージング技術によって検出する段階、
（ｉｖ）前記信号の位置及び／又は量を表す画像を生成する段階、並びに
（ｖ）前記被験体におけるＰＢＲ発現の分布及び程度を決定する段階であって、前記発現は前記インビボ造影剤から放出される前記信号と直接に相関している段階
を含んでなるインビボイメージング方法を提供する。
【００９９】
本発明のインビボイメージング方法に関しては、インビボ造影剤の好適な態様及び好ましい態様は本明細書で前記に定義した通りである。
【０１００】
インビボ造影剤を「投与する」段階は、好ましくは非経口的に実施され、最も好ましくは静脈内に実施される。静脈内経路は、インビボ造影剤を被験体の身体全域に送達するため、したがって血液脳関門（ＢＢＢ）を横切って前記被験体で発現されたＰＢＲに接触させるための最も効率的な方法である。本発明のインビボ造影剤は、好ましくは本明細書で定義された本発明の医薬組成物として投与される。本発明のインビボイメージング方法はまた、本発明のインビボ造影剤を予め投与した被験体に関して実施される上記の段階（ｉｉ）〜（ｖ）を含むものとしても理解できる。
【０１０１】
投与段階後かつ検出段階前に、インビボ造影剤をＰＢＲに結合させる。例えば、被験体がインタクトな哺乳動物である場合、インビボ造影剤は哺乳動物の身体を通って動的に移動し、体内の様々な組織に接触する。ひとたびインビボ造影剤がＰＢＲに接触すれば、特異的な相互作用が起こる結果、ＰＢＲをもった組織からのインビボ造影剤のクリアランスは、ＰＢＲをもたない組織又はＰＢＲの少ない組織よりも長い時間がかかる。一定の時点に達すれば、ＰＢＲをもった組織に結合したインビボ造影剤とＰＢＲをもたない組織又はＰＢＲの少ない組織に結合したインビボ造影剤との比の結果として、ＰＢＲに特異的に結合したインビボ造影剤の検出が可能となる。理想的には、この比は２：１以上である。
【０１０２】
本発明の方法の「検出」段階は、放射性同位体から放出される信号を、前記信号に対して感受性を有する検出器によって検出することを含んでいる。この検出段階はまた、信号データの取得として理解することもできる。単光子放出断層撮影法（ＳＰＥＣＴ）及び陽電子放出断層撮影法（ＰＥＴ）が、本発明の方法で使用するための最も好適なインビボイメージング技術である。ＰＥＴが、本発明の方法で使用するための好ましいインビボイメージング技術である。
【０１０３】
本発明の方法の「生成」段階は、取得された信号データに再構築アルゴリズムを適用してデータセットを得るコンピューターによって実施される。次いで、このデータセットを操作することで、前記放射性同位体から放出される信号の位置及び／又は量を示す画像が生成される。放出される信号はＰＢＲの発現と直接に相関する結果、生成された画像を評価することで「決定」段階を行うことができる。
【０１０４】
本発明の「被験体」は、任意のヒト又は動物被験体であり得る。好ましくは、本発明の被験体は哺乳動物である。最も好ましくは、前記被験体はインタクトな哺乳動物生体である。特に好ましい実施形態では、本発明の被験体はヒトである。本インビボイメージング方法は、健常被験体或いはＰＢＲの異常発現に関連する病的状態（「ＰＢＲ状態」）を有することが知られ又は疑われる被験体でのＰＢＲの検査に使用できる。好ましくは、前記方法はＰＢＲ状態を有することが知られ又は疑われる被験体のインビボイメージングに関し、したがって前記状態の診断方法の一部として有用である。インビボイメージングが役に立つかかるＰＢＲ状態の例には、神経炎症が存在するパーキンソン病、多発性硬化症、アルツハイマー病及びハンチントン病のような神経疾患がある。本発明の化合物によるイメージングが有用であり得る他のＰＢＲ状態には、ニューロパシー性疼痛、関節炎、喘息、アテローム性動脈硬化症、並びに結腸直腸癌及び乳癌のような悪性疾患がある。本発明のインビボ造影剤は、中枢神経系（ＣＮＳ）におけるＰＢＲ発現のインビボイメージングに特に適している。
【０１０５】
別の実施形態では、本発明のインビボイメージング方法は前記被験体に関する治療計画の進行中に繰り返して実施することができ、前記計画はＰＢＲ状態と戦うための薬物の投与を含んでいる。例えば、本発明のインビボイメージング方法は、ＰＢＲ状態と戦うための薬物による治療前、治療中及び治療後に実施できる。このようにすれば、前記治療の効果を経時的にモニターすることができる。この実施形態では、好ましくは、インビボイメージング技術はＰＥＴである。ＰＥＴは優れた感度及び分解能を有する結果、病変部における比較的小さい変化でも経時的に観察でき、これは治療モニタリングに有利である。ＰＥＴスキャナーは、日常的にピコモル範囲内の放射能濃度を測定している。現在、マイクロＰＥＴスキャナーは約１ｍｍの空間分解能に接近しているが、臨床スキャナーは約４〜５ｍｍである。
【０１０６】
さらに別の態様では、本発明はＰＢＲ状態の診断方法を提供する。本発明の診断方法は、上記に定義したインビボイメージング方法を、ＰＢＲ発現の分布及び程度を特定の臨床像に帰因させる追加段階（ｖｉ）（即ち、演繹的な医学的決断段階）と共に含んでいる。
【０１０７】
別の態様では、本発明は、本明細書で定義した診断方法で使用するための、本明細書で定義したインビボ造影剤を提供する。
【０１０８】
さらに別の態様では、本発明は、本明細書で定義した診断方法で使用するための本明細書で定義した放射性医薬組成物の製造で使用するための、本明細書で定義したインビボ造影剤を提供する。
【実施例】
【０１０９】
以下、一連の非限定的な実施例によって本発明を例示する。
【０１１０】
実施例の簡単な説明
実施例１は、非放射性造影剤１の合成法を記載している。
【０１１１】
実施例２は、非放射性造影剤１８の合成法を記載している。
【０１１２】
実施例３は、非放射性造影剤１９の合成法を記載している。
【０１１３】
実施例４は、造影剤１用の直接標識前駆体化合物の合成法を記載している。
【０１１４】
実施例５は、造影剤１の合成法を記載している。
【０１１５】
実施例６は、ＰＢＲに対する造影剤の結合親和性を測定するために使用したインビトロ効力アッセイを記載している。
【０１１６】
実施例７は、静脈内投与後における造影剤の体内分布を測定するために使用した動物モデルを記載している。
【０１１７】
実施例中で使用される略語のリスト
℃ 摂氏度
ａｑ 水性
ＤＭＦ ジメチルホルムアミド
ＤＭＳＯ ジメチルスルホキシド
ｇ グラム
ｈ 時間
Ｋi 半最大阻害に必要な化合物の濃度
ＭＢｑ メガベクレル
ｍｇ ミリグラム
ｍｉｎ 分
ｍｌ ミリリットル
ｍＭ ミリモル濃度
ｍｍｏｌ ミリモル
ｎ 実験回数
ＮＭＲ 核磁気共鳴
ＰＢＲ 末梢ベンゾジアゼピンレセプター
ＲＴ 室温
ＴＬＣ 薄層クロマトグラフィー
Ｔｒｉｓ トリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン
ＵＶ 紫外。
【０１１８】
実施例１：Ｎ−［２−（２−フルオロエトキシ）ベンジル］−Ｎ−（２−フェノキシピリジン−３−イル）アセトアミド（非放射性造影剤１）の合成
１(ｉ) ２−フェノキシ−３−ニトロピリジン
【０１１９】
【化１７】
【０１２０】
ＤＭＦ（５０ｍｌ）中の２−クロロ−３−ニトロピリジン（１０ｇ、６３ｍｍｏｌ）をフェノール（８ｇ、８５ｍｍｏｌ）及び炭酸カリウム（１５．４ｇ、１．７６ｍｍｏｌ）により７０℃で２時間処理し、次いで室温で一晩撹拌した。次いで、反応物を高真空中で濃縮してガム質とし、酢酸エチル（５０ｍｌ）及び水（１５０ｍｌ）の混合物で希釈し、撹拌した。酢酸エチル溶液を分離し、硫酸マグネシウム上で乾燥し、真空中で濃縮してガム質とした。水溶液をさらに５０ｍｌの酢酸エチルで再抽出し、酢酸エチル層を分離し、硫酸マグネシウム上で乾燥し、以前の酢酸エチル抽出液に添加し、真空中で濃縮して黄色の結晶質固体を得た。この固体をジエチルエーテル（２０ｍｌ）で洗浄し、濾過により集めて２−フェノキシ−３−ニトロピリジンの無色結晶（１０．４９ｇ、４６．５ｍｍｏｌ、７３．８％）を得た。母液は廃棄した。
【０１２１】
1Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3）７．１８（３Ｈ，ｍ，ＡｒＨ）、７．３（１Ｈ，ｍ，ＡｒＨ）、７．４５（２Ｈ，ｔ，ＡｒＨ）、８．３４（２Ｈ，ｍ，ＡｒＨ）。
【０１２２】
13Ｃ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3）１１８．３、１２１．６、１２５．７、１２９．６、１３４．５、１３５．４、１５１．７、１５２．５、１５５．８。
【０１２３】
１(ｉｉ) ２−フェノキシ−３−アミノピリジン
【０１２４】
【化１８】
【０１２５】
メタノール（２５０ｍｌ）中の２−フェノキシ−３−ニトロピリジン（８．０ｇ、３７ｍｍｏｌ）を木炭上のパラジウム（８００ｍｇ）により水素雰囲気下で３０℃で２時間処理した。急速な水素の吸収があり、検出可能な発熱の結果として温度が４８℃に上昇した後、降下して元に戻った。次いで、反応物をセライトで濾過して無色溶液を得、これを高真空中で濃縮することで油状の２−フェノキシ−３−アミノピリジン（６．８ｇ、３６ｍｍｏｌ、９８％）を得たが、これは静置後に結晶化した。
【０１２６】
1Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3）３．９６（２Ｈ，ｂｒｓ，ＮＨ2）、６．８６，（１Ｈ，ｍ，ＡｒＨ）、７．００（１Ｈ，ｍ，ＡｒＨ）；７．１６（３Ｈ，ｍ，ＡｒＨ）、７．３６（２Ｈ，ｍ，ＡｒＨ）、７．３９（１Ｈ，ｍ，ＡｒＨ）。
【０１２７】
13Ｃ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3）１１９．４、１２０．６、１２２．０、１２４．２、１２９．５、１３１．９、１３５．６、１５１．６、１５４．２。
【０１２８】
１(ｉｉｉ) ２−［（２−フェノキシ−ピリド−３−イルアミノ）メチル］フェノール
【０１２９】
【化１９】
【０１３０】
２−フェノキシ−３−アミノピリジン（６ｇ、３２．２５ｍｍｏｌ）をｏ−サリチルアルデヒド（２−ヒドロキシベンズアルデヒド）（６ｇ、５０ｍｍｏｌ）及びトルエン（１０ｍｌ）で処理し、激しく撹拌しながら窒素雰囲気下で９０℃で１時間加熱した。溶液はは黄色で均質になった。次いで、反応物を０℃に冷却したところ凝固し、それをメタノール（１００ｍｌ）で希釈したところ固体がすべて溶解した。これに水素化ホウ素ナトリウム（３．７ｇ、９７．５ｍｍｏｌ）を少量ずつ２０分かけて添加して処理した。この間に白色の沈殿が生じた。次いで、反応物を室温に放温し、さらに３０分間撹拌した。ギ酸（３ｍｌ）を添加し、反応物をさらに１８時間撹拌した。反応物から固体が晶出し、これを濾過によって集め（７．５６８ｇ）、真空中で乾燥した。母液を真空中で約３０ｍｌに濃縮し、追加量の結晶を集めた（２．２５６８ｇ）。固体をクロロホルムから再結晶して２−［（２−フェノキシ−ピリド−３−イルアミノ）メチル］フェノール（８．５ｇ、２９．１ｍｍｏｌ、９０％）を得た。
【０１３１】
1Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3）１．６９（１Ｈ，ｂｒｓ，ＮＨ）；４．４５（２Ｈ，ｓ，ＣＨ2Ｎ）；４．７５，（１Ｈ，ｂｒｓ，ＯＨ）、６．８−７．７，（１２Ｈ，ｍ，ＡｒＨ）。
【０１３２】
13Ｃ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3）４６．９、１１６．５、１１９．３、１２０．２、１２０．４、１２１．０、１２１．５、１２４．７、１２８．８、１２９．３、１２９．６、１３１．５、１３３．０、１５１．５、１５２．０、１５６．０。
【０１３３】
１(ｉｖ) ２−［（フェノキシ−ピリド−３−イルアセチルアミノ）メチル］フェノールアセテート
【０１３４】
【化２０】
【０１３５】
ジクロロメタン（１０ｍｌ）中の２−［（フェノキシ−ピリド−３−イルアミノ）メチル］フェノール（１ｇ、３．４２ｍｍｏｌ）を無水酢酸（１．３９ｇ、１３．６ｍｍｏｌ）及びピリジン（１．０７４ｇ、１３．６ｍｍｏｌ）で処理し、窒素雰囲気下で２０℃で１８時間加熱した。次いで、反応物をジクロロメタン（５０ｍｌ）で希釈し、５Ｎ塩酸（２０ｍｌ）で洗浄してピリジンを除去し、有機層を分離し、硫酸マグネシウム上で乾燥し、高真空中で濃縮してガム質にしたが、これは静置後に結晶化した。ジエチルエーテル及び石油エーテルから再結晶することで、白色固体の２−［（フェノキシ−ピリド−３−イルアセチルアミノ）メチル］フェノールアセテート（１．０５ｇ、２．７９ｍｍｏｌ、８１％）を得た。
【０１３６】
1Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3）１．９３（３Ｈ，ｓ，ＣＨ3）、２．２５（３Ｈ，ｓ，ＣＨ3）、４．３７（２Ｈ，ｄ，ＣＨ）、ａｎｄ５．５４（２Ｈ，ｄ，ＣＨ）、ｔｏｇｅｔｈｅｒ ＣＨ2Ｎ，６．５−７．５（１０Ｈ，ｍ，ＡｒＨ）、８．０（１Ｈ，ｄ，ＡｒＨ）。
【０１３７】
13Ｃ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3）２０．９、２２．１、４５．４、１１８．８、１２１．２、１２２．７、１２５．１、１２５．７、１２５．９、１２８．８、１２９．０、１２９．６、１３１．９、１４０．０、１４７．０、１２４９．５、１５３．１、１５９．４、１６９．７、１７０．１。
【０１３８】
１(ｖ) Ｎ−（２−ヒドロキシベンジル）−Ｎ−（フェノキシ−ピリド−３−イル）アセトアミド
【０１３９】
【化２１】
【０１４０】
メタノール（２０ｍｌ）中のＮ−（２−アセトキシベンジル）−Ｎ−（フェノキシ−ピリド−３−イル）アセトアミド（０．５ｇ、１．７１ｍｍｏｌ）を水酸化ナトリウム（２１２ｍｇ、５．３ｍｍｏｌ）で処理し、室温で３０分間撹拌した。シリカでジクロロメタン中２０％酢酸エチルで展開したＴＬＣは、アセテートから（意外にも）一層速く走行するフェノールへの完全な転化を示した。次いで、反応物を酢酸（約３１８ｍｇ、５．３ｍｍｏｌ）で（リトマス紙でモニターして）中性に調整し、真空中で濃縮して白色固体を得た。この固体をジクロロメタン（５０ｍｌ）と水（５０ｍｌ）との間に分配した。ジクロロメタン層を分離し、硫酸マグネシウム上で乾燥し、真空中で濃縮して固体のＮ−（２−ヒドロキシベンジル）−Ｎ−（フェノキシ−ピリド−３−イル）アセトアミド（４１１ｍｇ、１．２２ｍｍｏｌ、９１％）を得た。
【０１４１】
1Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3）２．０１（３Ｈ，ｓ，ＣＨ3）、４．６３（１Ｈ，ｓ）、５．０２（１Ｈ，ｓ）ｔｏｇｅｔｈｅｒ ＣＨ2Ｎ，６．６−７．４（１１Ｈ，ｍ，ＡｒＨ）、８．１７（１Ｈ，ｄ，ＡｒＨ）、９．３４（１Ｈ，ｓ，ＯＨ）。
【０１４２】
13Ｃ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3）２１．７、４９．７、１１７．７、１１８．９、１１９．２５、１２１．３、１２１．６、１２５．３、１２５．５、１２９．６、１３０．３、１３１．３、１３８．８．１４７．７、１５２．７、１５６．１、１５９．１、１７３．４。
【０１４３】
１(ｖｉ) Ｎ−［２−（２−フルオロエトキシ）ベンジル］−Ｎ−（２−フェノキシピリジン−３−イル）アセトアミド
【０１４４】
【化２２】
【０１４５】
ＤＭＦ（１０ｍｌ）中のＮ−［２−（２−ヒドロキシ）ベンジル］−Ｎ−（２−フェノキシピリジン−３−イル）アセトアミド（３００ｍｇ、０．８９８ｍｍｏｌ）を水素化ナトリウム（９６ｍｇ、２．４ｍｍｏｌ）及び２−フルオロエチルトシレート（５２７ｇ、２．４ｍｍｏｌ）で処理し、窒素雰囲気下で３０℃で１時間撹拌した。ジクロロメタン中２０％酢酸エチルで展開されかつＵＶ光下で可視化されるＴＬＣによって反応物をモニターした。これはゆっくりと走行するスポットの形成を示し、それは１時間後に完了した。次いで、反応物を酢酸（１ｍｌ）の添加によって奪活し、高真空中で濃縮して油状物を得た。この油状物を酢酸エチル（１００ｍｌ）と重炭酸ナトリウム溶液（５０ｍｌ）との間に分配した。酢酸エチル溶液を分離し、硫酸マグネシウム上で乾燥し、真空中で濃縮してガム質にした。このガム質をシリカゲル上でジクロロメタン中５〜２０％酢酸エチルの勾配でクロマトグラフィー処理して２つの画分を得た。画分１は本質的にボイド容積中に溶出する回収フルオロエチルトシレートであり、約６カラム容積後に溶出する画分２はＮ−［２−（２−フルオロエトキシ）ベンジル］−Ｎ−（２−フェノキシピリジン−３−イル）アセトアミド（３３２ｍｇ、０．８７ｍｍｏｌ、９７％）であった。
【０１４６】
1Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3）１．９８（３Ｈ，ｓ，ＣＨ3）、３．６７（３Ｈ，ｓ，ＯＣＨ3）、３．９（２Ｈ，ｂｒｍ，ＣＨ2Ｏ）、４．４４，ａｎｄ４．６０（２Ｈ，ｅａｃｈ ｍ，ＣＨ2Ｆ）、４．８６（１Ｈ，ｄ）、ａｎｄ ５．２３（１Ｈ，ｄ）ｔｏｇｅｔｈｅｒ ＣＨ2Ｎ，６．６７−７．３７（１０Ｈ，ｍ，ＡｒＨ）、８．０（１ｈ，ｓ，ＡｒＨ）。
【０１４７】
13Ｃ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3）２２．３、４５．６、５５．６、６７．９、６８．１、８０．７、８３．０、１１２．８、１１３．７、１１６．７、１１８．６、１２１．３、１２５．０、１２６．７、１２９．５、１３９．１、１４６．６、１５０．５、１５３、２、１５３．９、１５９．６、１７０．５。
【０１４８】
実施例２：Ｎ−［２−（２−フルオロエトキシ）ピリジン−３−イルメチル］−Ｎ−（２−フェノキシ−フェニル）アセトアミド（非放射性造影剤１９）の合成
２(ｉ) ２−アミノジフェニルエーテル
【０１４９】
【化２３】
【０１５０】
メタノール（２５０ｍｌ）中の２−ニトロジフェニルエーテル（１６ｇ、７４ｍｍｏｌ）を木炭上のパラジウム（１．６ｇ）と共に水素雰囲気下で２０〜５０℃で３０分間振盪した。急速な水素の吸収があり、２０〜５０℃の検出可能な発熱の結果として温度が急速に上昇し、最終的には降下して元に戻った。温度が５０℃を超えて上昇するのを抑えるため、振盪を短時間停止した。次いで、反応物をセライトで濾過し、高真空中で濃縮することで、２−アミノジフェニルエーテル（１３．５ｇ、７２．９ｍｍｏｌ、９８％）を油状物として得たが、これは静置後に結晶化した。
【０１５１】
1Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ3）：δH ３．８（２Ｈ，ｂｒｓ，ＮＨ）、６．７−６．７５（１Ｈ，ｍ，ＡｒＨ）、６．８−６．９４（２Ｈ，ｍ，ＡｒＨ）、６．９４−７．１（（４Ｈ，ｍ，ＡｒＨ）、７．２５−７．４（２Ｈ，ｍ，ＡｒＨ）。
【０１５２】
13Ｃ ＮＭＲ（７５ＭＨｚ，ＣＤＣｌ3）：δC １１６．４，１１７．１，１１８．７，１２０．２，１２２０６，１２４．９，１２９．７，１３８．７，１４３．０，１５７．５。
【０１５３】
２(ｉｉ) （２−メトキシ−ピリジン−３−イルメチル）−（２−フェノキシ−フェニル）アミン
【０１５４】
【化２４】
【０１５５】
段階２(ｉ)からの２−アミノジフェニルエーテル（１．８０ｇ、９．８ｍｍｏｌ）と２−メトキシ−３−ピリジンカルボキシアルデヒド（２．０ｇ、１４．６ｍｍｏｌ）との混合物を水素下で９０℃で１時間加熱した。反応混合物を０℃に冷却し、ＭｅＯＨ（２０ｍＬ）を添加し、次いで水素化ホウ素ナトリウム（１．１１ｇ、２９．４ｍｍｏｌ）を少量ずつ２０分かけて添加した。混合物をＲＴで２４時間撹拌した。ギ酸（２．４ｇ、５３．０ｍｍｏｌ）を添加し、混合物を１５分間撹拌した。溶媒を真空中で除去し、残留物を１０％重炭酸ナトリウム水溶液（１００ｍＬ）で奪活し、ＤＣＭ（２×３０ｍＬ）で抽出し、硫酸マグネシウム上で乾燥し、濾過し、溶媒を真空中で除去した。粗物質をＤＣＭ（Ａ）：酢酸エチル（Ｂ）で溶出するシリカゲルクロマトグラフィー（２％（Ｂ）、８０ｇ、２．０ＣＶ、６０ｍＬ／分）で精製して不純生成物を得た。試料をメタノールから結晶化することで、２．２ｇ（７３％）の（２−メトキシ−ピリジン−３−イルメチル）−（２−フェノキシ−フェニル）アミンを白色固体として得た。
【０１５６】
1Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ3）：δH ３．９０（３Ｈ，ｓ，ＯＣＨ3）、４．３３（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝６Ｈｚ，ＮＣＨ2）、４．７３（１Ｈ，ｍ，ＮＨ）、６．６１−６．６８（２Ｈ，ｍ，Ｐｈ）、６．７７−７．０９（６Ｈ，ｍ，Ｐｈ）、７．２７−７．３４（２Ｈ，ｍ，Ｐｈ）、７．４８（１Ｈ，ｍ，Ｐｈ）、ａｎｄ ８．０３（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝２ ａｎｄ ５Ｈｚ，Ｐｈ）。
【０１５７】
ＬＣ−ＭＳ：Ｃ19Ｈ18Ｎ2Ｏ2に関するｍ／ｚ計算値，３０６．１、実測値，３０７．１(Ｍ＋Ｈ)+。
【０１５８】
２(ｉｉｉ) Ｎ−（２−メトキシ−ピリジン−３−イルメチル）−Ｎ−（２−フェノキシ−フェニル）アセトアミド
【０１５９】
【化２５】
【０１６０】
段階２(ｉｉ)からの（２−メトキシ−ピリジン−３−イルメチル）−（２−フェノキシ−フェニル）アミン（１．０ｇ、３．２６ｍｍｏｌ）を無水ＤＣＭ（１５ｍＬ）に溶解した溶液に４−（ジメチルアミノ）ピリジン（０．０１ｇ、０．０８ｍｍｏｌ）を添加した。反応物を０℃に冷却し、塩化アセチル（１．５４ｇ、１９．６ｍｍｏｌ、１．４０ｍＬ）を添加した。混合物をＲＴで３時間撹拌した。溶媒を真空中で除去し、残留物を１Ｎ水酸化ナトリウム水溶液（５ｍＬ）で奪活し、ＤＣＭ（２×２０ｍＬ）で抽出し、硫酸マグネシウム上で乾燥し、濾過し、溶媒を真空中で除去した。粗物質をＤＣＭ（Ａ）：メタノール（Ｂ）で溶出するシリカゲルクロマトグラフィー（５％（Ｂ）、８０ｇ、２．０ＣＶ、６０ｍＬ／分）で精製することで、１．１ｇ（９７％）のＮ−（２−メトキシ−ピリジン−３−イルメチル）−Ｎ−（２−フェノキシ−フェニル）アセトアミドを無色油状物として得た。
【０１６１】
1Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ3）：δH １．９７（３Ｈ，ｓ，ＣＯＣＨ3）、３．７４（３Ｈ，ｓ，ＯＣＨ3）、４．７３（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１５Ｈｚ，ＮＣＨ）、４．９９（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１５Ｈｚ，ＮＣＨ）、６．７２−６．９１（４Ｈ，ｍ，Ｐｈ）、６．９８−７．３７（６Ｈ，ｍ，Ｐｈ）、７．６５（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝２ ａｎｄ ７Ｈｚ，Ｐｈ）、ａｎｄ ８．００（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝２ ａｎｄ ５Ｈｚ，Ｐｈ）。
【０１６２】
２(ｉｖ) ３−［（２−フェノキシ−フェニルアミノ）メチル］ピリジン−２−オール
【０１６３】
【化２６】
【０１６４】
段階２(ｉｉｉ)からのＮ−（２−メトキシ−ピリジン−３−イルメチル）−Ｎ−（２−フェノキシ−フェニル）アセトアミド（０．６０ｇ、１．７２ｍｍｏｌ）を４８％臭化水素酸水溶液（４４．７ｇ、５５２．０ｍｍｏｌ、３０ｍＬ）に溶解した溶液を水素下で１００℃で２４時間加熱した。溶媒を真空中で除去し、残留物を１０％炭酸カリウム水溶液（５０ｍＬ）で奪活し、ＤＣＭ（２×３０ｍＬ）で抽出し、硫酸マグネシウム上で乾燥し、濾過し、溶媒を真空中で除去することで、０．５１ｇ（１００％）の３−［（２−フェノキシ−フェニルアミノ）メチル］ピリジン−２−オールをガム質として得た。
【０１６５】
1Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ3）：δH ４．３２（２Ｈ，ｓ，ＮＣＨ2）、４．９０（１Ｈ，ｓ，ｂｒ，ＮＨ）、６．２２（１Ｈ，ｔ，Ｊ＝７Ｈｚ，Ｐｈ）、ａｎｄ ６．６０−７．４４（１２Ｈ，ｍ，Ｐｈ）。
【０１６６】
ＬＣ−ＭＳ：Ｃ18Ｈ16Ｎ2Ｏ2に関するｍ／ｚ計算値，２９２．１、実測値，２９３．１(Ｍ＋Ｈ)+。
【０１６７】
２(ｖ) Ｎ−（２−ヒドロキシ−ピリジン−３−イルメチル）−Ｎ−（２−フェノキシ−フェニル）アセトアミド
【０１６８】
【化２７】
【０１６９】
段階２(ｉｖ)からの３−［（２−フェノキシ−フェニルアミノ）メチル］ピリジン−２−オール（０．５１ｇ、１．７４ｍｍｏｌ）を無水ＤＣＭ（２０ｍＬ）に溶解した溶液に４−（ジメチルアミノ）ピリジン（０．０１ｇ、０．０８ｍｍｏｌ）を添加した。反応物を０℃に冷却し、塩化アセチル（１．６ｇ、２０．８ｍｍｏｌ、１．５ｍＬ）を添加した。混合物をＲＴで２４時間撹拌した。溶媒を真空中で除去し、水酸化リチウムの飽和メタノール溶液（１０ｍＬ）を残留物に添加した。１０分間撹拌した後、水（２０ｍＬ）を添加し、メタノールを真空中で除去した。水溶液をＤＣＭ（２×２０ｍＬ）で抽出し、合わせた有機相をブライン（２０ｍＬ）で洗浄し、硫酸マグネシウム上で乾燥し、濾過し、溶媒を真空中で除去した。粗物質をＤＣＭ（Ａ）：メタノール（Ｂ）で溶出するシリカゲルクロマトグラフィー（１０％（Ｂ）、１２ｇ、１．０ＣＶ、３０ｍＬ／分）で精製して不純生成物を得た。試料をＤＣＭ（Ａ）：メタノール（Ｂ）で溶出するシリカゲルクロマトグラフィー（２〜１０％（Ｂ）、４０ｇ、８．０ＣＶ、４０ｍＬ／分）で精製することで、０．３５ｇ（５９％）のＮ−（２−ヒドロキシ−ピリジン−３−イルメチル）−Ｎ−（２−フェノキシ−フェニル）アセトアミドを白色泡状物として得た。
【０１７０】
1Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ3）：δH ２．０１（３Ｈ，ｓ，ＣＯＣＨ3）、４．７５（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１６Ｈｚ，ＮＣＨ）、４．８８（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１６Ｈｚ，ＮＣＨ）、６．１２（１Ｈ，ｔ，Ｊ＝７Ｈｚ，Ｐｈ）、６．８０−７．３８（１０Ｈ，ｍ，Ｐｈ）、７．６２（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝７Ｈｚ，Ｐｈ）、ａｎｄ １２．６６（１Ｈ，ｓ，ｂｒ，ＯＨ）。
【０１７１】
ＬＣ−ＭＳ：Ｃ20Ｈ18Ｎ2Ｏ3に関するｍ／ｚ計算値，３３４．１、実測値，３５７．０(Ｍ＋Ｎａ)+。
【０１７２】
２(ｖｉ) 非放射性インビボ造影剤１９
【０１７３】
【化２８】
【０１７４】
段階２(ｖ)からのＮ−（２−ヒドロキシ−ピリジン−３−イルメチル）−Ｎ−（２−フェノキシ−フェニル）アセトアミド（０．１５ｇ、０．４５ｍｍｏｌ）を窒素下でＲＴの無水ＤＭＦ（２ｍＬ）に溶解した。炭酸カリウム（０．１９ｇ、１．３５ｍｍｏｌ）及び２−フルオロエチルトシレート（０．２０ｇ、０．８９ｍｍｏｌ）を添加し、混合物を７０℃で２４時間加熱した。ＤＭＦを真空中で除去し、残留物を水（４０ｍＬ）で奪活し、ＤＣＭ（２×２０ｍＬ）で抽出し、硫酸マグネシウム上で乾燥し、濾過し、溶媒を真空中で除去した。粗物質をＤＣＭ（Ａ）：メタノール（Ｂ）で溶出するシリカゲルクロマトグラフィー（２〜５％（Ｂ）、４０ｇ、３．０ＣＶ及び７．０ＣＶ、４０ｍＬ／分）で精製して不純Ｏ−アルキル及びＮ−アルキル生成物を得た。Ｏ−アルキル試料をＤＣＭ（Ａ）：メタノール（Ｂ）で溶出するシリカゲルクロマトグラフィー（１％（Ｂ）、４０ｇ、４．０ＣＶ、４０ｍＬ／分）で再精製して不純生成物を得た。試料をＤＣＭ（Ａ）：酢酸エチル（Ｂ）で溶出するシリカゲルクロマトグラフィー（１０〜９０％（Ｂ）、４０ｇ、１８．０ＣＶ、４０ｍＬ／分）で再精製することで、３５ｍｇ（２０％）の非放射性インビボ造影剤１９を無色油状物として得た。
【０１７５】
1Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ3）：δH １．９６（３Ｈ，ｓ，ＣＯＣＨ3）、４．２４−４．６５（４Ｈ，ｍ，ＯＣＨ2ＣＨ2Ｆ）、４．７４（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１５Ｈｚ，ＮＣＨ）、５．０５（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１５Ｈｚ，ＮＣＨ）、６．７５−７．３６（１０Ｈ，ｍ，Ｐｈ）、７．７０（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝２ ａｎｄ ７Ｈｚ，Ｐｈ）、ａｎｄ ７．９７（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝２ ａｎｄ ５Ｈｚ，Ｐｈ）。
【０１７６】
ＬＣ−ＭＳ：Ｃ22Ｈ21ＦＮ2Ｏ3に関するｍ／ｚ計算値，３８０．２、実測値，３８１．１(Ｍ＋Ｈ)+。
【０１７７】
実施例３：２−フルオロ−Ｎ−（２−メトキシ−ピリジン−３−イルメチル）−Ｎ−（２−フェノキシ−フェニル）アセトアミド（非放射性インビボ造影剤１８）の合成
【０１７８】
【化２９】
【０１７９】
段階２(ｉｉｉ)で得られたＮ−（２−メトキシ−ピリジン−３−イルメチル）−Ｎ−（２−フェノキシ−フェニル）アセトアミド（０．３１ｇ、１．０ｍｍｏｌ）を無水ＤＣＭ（５ｍＬ）に溶解した溶液に、４−（ジメチルアミノ）ピリジン（０．０１ｇ、０．０８ｍｍｏｌ）を添加した。反応物を０℃に冷却し、塩化フルオロアセチル（０．５８ｇ、６．０ｍｍｏｌ、０．４０ｍＬ）を添加した。混合物をＲＴで３時間撹拌した。溶媒を真空中で除去し、残留物を１Ｎ水酸化ナトリウム水溶液（５ｍＬ）で奪活し、ＤＣＭ（２×２０ｍＬ）で抽出し、硫酸マグネシウム上で乾燥し、濾過し、溶媒を真空中で除去した。粗物質をＤＣＭ（Ａ）：メタノール（Ｂ）で溶出するシリカゲルクロマトグラフィー（１〜５％（Ｂ）、８０ｇ、６．０ＣＶ、６０ｍＬ／分）で精製することで、０．２６ｇ（７１％）の非放射性造影剤１８を白色固体として得た。
【０１８０】
1Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ3）：δH ３．７２（３Ｈ，ｓ，ＯＣＨ3），４．６９（１Ｈ，ｓ，ＦＣＨ），４．７９（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１５Ｈｚ，ＮＣＨ），４．８４（１Ｈ，ｓ，ＦＣＨ），５．０２（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１５Ｈｚ，ＮＣＨ），６．７２−６．８８（４Ｈ，ｍ，Ｐｈ），６．９８−７．３８（６Ｈ，ｍ，Ｐｈ），７．６４（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝２ ａｎｄ ７Ｈｚ，Ｐｈ），ａｎｄ ８．０２（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝２ａｎｄ５Ｈｚ，Ｐｈ）、19Ｆ ＮＭＲ（２８３ＭＨｚ，ＣＤＣｌ3）：δF −２２６．９。
【０１８１】
ＬＣ−ＭＳ：Ｃ21Ｈ19ＦＮ2Ｏ3に関するｍ／ｚ計算値，３６６．１、実測値，３６７．１(Ｍ＋Ｈ)+。
【０１８２】
実施例４：２−［（フェノキシ−ピリド−３−イルアセチルアミノ）メチル］フェノール−２−エチルトルエン−４−スルホネート（造影剤１の直接標識前駆体化合物）の合成
【０１８３】
【化３０】
【０１８４】
ＤＭＦ（３０ｍｌ）中の２−［（フェノキシ−ピリド−３−イルアセチルアミノ）メチル］フェノール（１ｇ、３．０ｍｍｏｌ）を水素化ナトリウム（６０％）（４７８ｍｇ、２．４ｍｍｏｌ）及びエチルグリコールジトシレート（２．７７ｇ、７．５ｍｍｏｌ）で処理し、窒素雰囲気下で２０℃で１時間撹拌した。ガソリン中５０％酢酸エチルで展開されかつＵＶ光下で可視化されるＴＬＣによって反応物をモニターした。これは出発原料の消失及びゆっくりと走行する物質の出現を示した。過剰のエチレングリコールジトシレートは、出発原料よりわずかに速く走行するスポットを形成した。１時間後、ＴＬＣによれば反応は完了した。次いで、反応物を酢酸（４５０ｍｇ）の滴下によって奪活し、その際には水素ガスが激しく発生した。次いで、反応物を高真空中で濃縮して油状物を得た。この油状物を酢酸エチル（１００ｍｌ）と重炭酸ナトリウム溶液（５０ｍｌ）との間に分配した。酢酸エチル溶液を分離し、硫酸マグネシウム上で乾燥し、真空中で濃縮してガム質にした。若干の過剰エチルグリコールジトシレートが晶出したが、エーテルでのトリチュレーション及び濾過によって分離した。このガム質をシリカでガソリン中５〜２０％酢酸エチルの勾配でクロマトグラフィー処理して３つの画分を得た。画分１は回収エチレングリコールジトシレートであり、画分２は少量の回収出発原料であり、画分３は所要の化合物（１．２４６ｇ、２．３４ｍｍｏｌ、７８％）であった。
【０１８５】
1Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3）δ，２．０（３Ｈ，ｓ，ＣＨ3），２．４５，（３Ｈ，ｓ，ＣＨ3），３．９−４．２，（４Ｈ，ｍ，２ＣＨ2），４．８７ａｎｄ５．０４（１Ｈ，ｄ，ｔｏｇｅｔｈｅｒ ＣＨ2Ｎ），６．６２（１Ｈ，ｄ，ＡｒＨ），６．８−６．９５，（４Ｈ，ｍ，ＡｒＨ），７．１−７．５４（８Ｈ，ｍ，ＡｒＨ），７．７７（（２Ｈ，ｄ，ＡｒＨ），８．０（１Ｈ，ｄ，ＡｒＨ）。
【０１８６】
13Ｃ ＮＭＲ ＣＤＣｌ3 δ，２１．４９，２２．１８，４５．７，６５．３，６７．９，１１０．９，１１８．６，１２１．２，１２４．９，１２５．１，１２６．４，１２７．７，１２８．７１２９．４，１２９．８，１３１．１，１３２．６，１３９，１４５．０，１４６．４，１５３．０，１５５．８，１５９．４，１７０．４。
【０１８７】
実施例５：造影剤１の間接標識合成
【０１８８】
【化３１】
【０１８９】
反応器内の［18Ｆ］Ｆ-／Ｈ2Ｏ（約４００ＭＢｑ、１００〜３００μｌ）に、クリプトフィックス（Ｋｒｙｐｔｏｆｉｘ）２．２．２（４ｍｇ、１０．６μｍｏｌ）、炭酸カリウム（０．１ｍｏｌ・ｄｍ-3、５０μｌ、０．７ｍｇ、５μｍｏｌ）及びアセトニトリル（０．５ｍＬ）の混合物を添加した。窒素流下で１００℃で１５〜２０分間加熱することで溶媒を除去した。エチレングリコールジトシレート（３〜５ｍｇ、８〜１３．５μｍｏｌ）のアセトニトリル（１ｍＬ）溶液を添加し、混合物を１００℃で１０分間加熱した。冷却後、反応物を取り出し、反応器を水（１０００μｌ）ですすいで主たる粗反応物に加えた。［18Ｆ］−フルオロエチルトシレートをＨＰＬＣ（ＡＣＥ Ｃ１８（２）カラム，５μ，１００×１０ｍｍ，５ｍｌループ，ポンプ速度３ｍｌ／分，波長２５４ｎｍ，移動相（水：ＭｅＯＨ） ：０−１分 ５０％ＭｅＯＨ；１−２５分 ５０−９５％ＭｅＯＨ；２５−３０分 ９５％ＭｅＯＨ；３０−３１分 ９５−５０％ＭｅＯＨ；３１−３３分 ５０％ＭｅＯＨ）によって精製した。［18Ｆ］−フルオロエチルトシレートのｔRは７．５分であった。［18Ｆ］−フルオロエチルトシレートの放射化学収率は約４０％（非崩壊補正収率）であった。
【０１９０】
［18Ｆ］−フルオロエチルトシレートのカットピークをＨ2Ｏで約２０ｍｌの体積に希釈し、コンディショニング済みのライトｔ−Ｃ１８ ｓｅｐ ｐａｋ上に装填し、Ｈ2Ｏ（１×２ｍｌ）でフラッシュした。装填したｓｅｐ ｐａｋを、高流量のＮ2ライン上で１５〜２０分間乾燥した。
【０１９１】
撹拌機を含むホイートン（Ｗｈｅａｔｏｎ）バイアル（１ｍｌ）内で、ＣＨ3ＣＮ（１００μｌ）中のＮ−（２−ヒドロキシベンジル）−Ｎ−（フェノキシ−ピリド−３−イル）アセトアミド（２〜４ｍｇ、６〜１２μｍｏｌ、実施例１(ｖ)に従って製造）及びＣｓ2ＣＯ3（８〜１０ｍｇ、２４〜３０μｍｏｌ）を室温で１〜２時間撹拌した。乾燥したライトｔ−Ｃ１８ ｓｅｐ ｐａｋ上の放射能をＣＨ3ＣＮ（０．５ｍｌ）でホイートンバイアル中に溶出した。ホイートンバイアルを密封し、反応物を１２０〜１３０℃の油浴中で１５分間加熱撹拌した。その後、反応物を冷却し、水（５００μｌ）で奪活した。造影剤１を
ＨＰＬＣ（ＡＣＥ Ｃ１８（２）カラム，５μ，１００ｘ１０ｍｍ，５ｍｌループ，ポンプ速度３ｍｌ／分，波長２５４ｎｍ，移動相（水：ＭｅＯＨ）：０−１分 ５０％ＭｅＯＨ；１−２０分 ５０−９５％ＭｅＯＨ；２０−２５分 ９５％ＭｅＯＨ；２５−２６分 ９５−５０％ＭｅＯＨ；２６−２８分 ５０％ＭｅＯＨ）によって精製した。
【０１９２】
実施例６：インビトロ効力アッセイ
Ｌｅ Ｆｕｒ ｅｔ ａｌ（Ｌｉｆｅ Ｓｃｉ．１９８３；ＵＳＡ ３３：４４９−５７）の方法を改変した方法を用いて、ＰＢＲに対する親和性のスクリーニングを行った。試験した化合物は、非放射性造影剤１及び先行技術化合物ＦＥ−ＰＢＲ２８の非放射性バージョンであった。
【０１９３】
（１％ＤＭＳＯを含む５０ｍＭトリス−ＨＣｌ、ｐＨ７．４、１０ｍＭ ＭｇＣｌ2に溶解した）各試験化合物を、ウィスター系ラットの心臓ＰＢＲとの結合に関して０．３ｎＭ［3Ｈ］−ＰＫ−１１１９５と競合させた。反応は５０ｍＭトリス−ＨＣｌ、ｐＨ７．４、１０ｍＭ ＭｇＣｌ2中で２５℃で１５分間実施した。
【０１９４】
各試験化合物のスクリーニングは、推定Ｋiの周辺の３００倍の濃度範囲にわたる６種の濃度で行った。非放射性造影剤１に関するＫiは４．２４ｎＭであることが判明し、ＦＥ−ＰＢＲ２８に関するＫiは０．０５６ｎＭであることが判明した。
【０１９５】
【表１】
【０１９６】
実施例７：インビボ体内分布方法
インビボ造影剤１及び（Ｗｉｌｓｏｎ ｅｔ ａｌ，Ｎｕｃ．Ｍｅｄ．Ｂｉｏｌ．２００８；３５：３０５−１４に従って製造した）先行技術化合物［18Ｆ］−ＦＥ−ＰＢＲ２８をインビボ体内分布モデルで試験し、それぞれの体内分布を比較した。
【０１９７】
雄ウィスター系ラット成体（２００〜３００ｇ）に、側尾静脈を通して１〜３ＭＢｑの各インビボ造影剤を注射した。注射から２分後、１０分後、３０分後又は６０分後（ｎ＝３）に、ラットを安楽死させ、γ線カウンター上での放射能測定に組織又は体液の試料を採取した。図１は得られたデータを示している。さらに詳しく説明すると、造影剤の注射後、注射から２分後における嗅球（ＯＢ）中への取込み量、並びに注射から３０分後におけるＯＢ取込み量と線条体取込み量との比を調べた。これらの特定測定値を採用した理由は、ＯＢがラット脳の他の領域に比べて高いレベルのＰＢＲを発現することが知られているからである（“Ｈａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ Ｓｕｂｓｔａｎｃｅ Ａｂｕｓｅ”ｂｙ Ｔａｒｔｅｒ，Ａｍｍｅｒｍａｎ ａｎｄ Ｏｔｔ；Ｓｐｒｉｎｇｅｒ １９９８：３９８−９９を参照されたい）。
【０１９８】
以下表１では、造影剤１が［18Ｆ］−ＦＥ−ＰＢＲ２８と比較されている。
【０１９９】
【表２】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
次の式Ｉのインビボ造影剤或いはその塩又は溶媒和物。
【化１】
（式中、
Ｒ1はメチル及びＣ1-3フルオロアルキルから選択され、
Ｒ2は水素、ハロゲン、Ｃ1-3アルコキシ及びＣ1-3フルオロアルコキシから選択され、
Ｒ3は水素、ハロゲン及びＣ1-3アルコキシから選択され、
Ａ1はＮ又はＣＨであり、
Ａ2及びＡ4-7の１つ又は２つがＮであり、Ａ2及びＡ4-7の残りがＣＨであり、
Ａ3はＣＨ又はＣＨ−Ｏ−Ｒ4（式中、Ｒ4はＨ、Ｃ1-3アルキル又はＣ1-3ハロアルキルである。）であるか、或いは別法としてＡ2及びＡ4-7の１つがＮでありかつＡ2及びＡ4-7の残りがＣＨである場合にＡ3はＮであってよく、
式Ｉはインビボイメージングに適した放射性同位体である原子を含む。）
【請求項２】
Ｒ1がＣ1-3フルオロアルキルであり、Ｒ2が水素である、請求項１記載のインビボ造影剤。
【請求項３】
Ｒ1がメチルであり、Ｒ2がＣ1-3フルオロアルコキシである、請求項１記載のインビボ造影剤。
【請求項４】
Ｒ3が水素である、請求項１乃至請求項３のいずれか１項記載のインビボ造影剤。
【請求項５】
Ａ1、Ａ2及びＡ4-7の２つがＮであり、Ａ1、Ａ2及びＡ4-7の残りがＣＨである、請求項１乃至請求項４のいずれか１項記載のインビボ造影剤。
【請求項６】
Ａ2及びＡ4〜Ａ6の１つがＮであり、Ａ1がＣＨであり、Ａ7がＣＨである、請求項１乃至請求項４のいずれか１項記載のインビボ造影剤。
【請求項７】
Ａ7がＮであり、Ａ1-6がＣＨであり、Ｒ3が水素である、請求項１乃至請求項４のいずれか１項記載のインビボ造影剤。
【請求項８】
前記放射性同位体が18Ｆ、11Ｃ又は123Ｉである、請求項１乃至請求項７のいずれか１項記載のインビボ造影剤。
【請求項９】
前記放射性同位体が18Ｆである、請求項８記載のインビボ造影剤。
【請求項１０】
次の化学構造を有する、請求項９記載のインビボ造影剤。
【化２】
【請求項１１】
請求項１乃至請求項１０のいずれか１項記載のインビボ造影剤の製造方法であって、前記放射性同位体の適当な供給源を次の式ＩＩの前駆体化合物と反応させる段階を含んでなる方法。
【化３】
（式中、
Ｒ11-13の１つは前駆体基を含み、そうでなければＲ11-12は請求項１乃至請求項３でそれぞれＲ1-2に関して定義した通りであり、Ｒ13は請求項１又は請求項４でＲ3に関して定義した通りであり、前駆体基を含まない場合にはＲ11-13の各々は任意に保護基を含み、
Ａ11-17は請求項１及び請求項５乃至請求項７でそれぞれＡ1-7に関して定義した通りであり、任意には保護基を含む。）
【請求項１２】
前記放射性同位体の前記適当な供給源が18Ｆの適当な供給源であり、前記前駆体基がヒドロキシル、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、トシレート、メシレート又はトリフレートからなる、請求項１１記載の方法。
【請求項１３】
18Ｆの前記適当な供給源が［18Ｆ］−フルオロエチルトシレートであり、前記前駆体化合物が次の化学構造を有する、請求項１２記載の方法。
【化４】
【請求項１４】
18Ｆの前記適当な供給源が［18Ｆ］−フッ化物であり、前記前駆体化合物が次の化学構造を有する、請求項１２記載の方法。
【化５】
（式中、ＯＴｓはトシレートを表す。）
【請求項１５】
前記放射性同位体の前記適当な供給源が11Ｃの適当な供給源であり、前記前駆体基がヒドロキシル、カルボキシル、トリアルキルスタンナン又は有機ホウ素化合物である、請求項１１記載の方法。
【請求項１６】
前記放射性同位体の前記適当な供給源が123Ｉの適当な供給源であり、前記前駆体基がトリアルキルスタンナン、トリアルキルシラン又は有機ホウ素化合物であるか、或いは前記前駆体基が式ＩＩのアリール基にしている場合にはそれが前記アリール基と共にフェノール、アリールヨードニウム塩、アリールジアゾニウム塩、アリールトリアルキルアンモニウム塩又はニトロアリール誘導体を形成する、請求項１１記載の方法。
【請求項１７】
自動化される、請求項１１乃至請求項１６のいずれか１項記載の方法。
【請求項１８】
請求項１１乃至請求項１６のいずれか１項記載の方法で定義される前駆体化合物。
【請求項１９】
請求項１乃至請求項１０のいずれか１項記載のインビボ造影剤を、哺乳動物への投与に適した形態の生体適合性キャリヤーと共に含んでなる放射性医薬組成物。
【請求項２０】
請求項１１乃至請求項１６のいずれか１項記載の方法を実施するためのキットであって、密封容器内に請求項１８記載の前駆体化合物を含んでなるキット。
【請求項２１】
請求項１７記載の方法を実施するためのカセットであって、
（ｉ）請求項１８記載の前駆体化合物を含む容器、並びに
（ｉｉ）請求項１１乃至請求項１６のいずれか１項記載の放射性同位体の適当な供給源を用いて容器を溶出するための手段
を含んでなるカセット。
【請求項２２】
さらに、
（ｉｉｉ）過剰の前記放射性同位体を除去するためのイオン交換カートリッジ、及び任意には
（ｉｖ）得られた放射性標識生成物を脱保護して請求項１乃至請求項１０のいずれか１項記載のインビボ造影剤を生成するためのカートリッジ
を含む、請求項２１記載のカセット。
【請求項２３】
被験体におけるＰＢＲ発現の分布及び／又は程度を決定する際に使用するためのインビボイメージング方法であって、
（ｉ）請求項１乃至請求項１０のいずれか１項記載のインビボ造影剤を前記被験体に投与する段階、
（ｉｉ）前記インビボ造影剤を前記被験体内のＰＢＲに結合させる段階、
（ｉｉｉ）前記インビボ造影剤の放射性同位体から放出される信号をインビボイメージング技術によって検出する段階、
（ｉｖ）前記信号の位置及び／又は量を表す画像を生成する段階、並びに
（ｖ）前記被験体におけるＰＢＲ発現の分布及び程度を決定する段階であって、前記発現は前記インビボ造影剤から放出される前記信号と直接に相関している段階
を含んでなるインビボイメージング方法。
【請求項２４】
前記被験体に関する治療計画の進行中に繰り返して実施される請求項２３記載のインビボイメージング方法であって、前記計画がＰＢＲ状態と戦うための薬物の投与を含むインビボイメージング方法。
【請求項２５】
ＰＢＲがアップレギュレートされた状態の診断方法であって、請求項２３又は請求項２４のいずれか記載のインビボイメージング方法を、ＰＢＲ発現の分布及び程度を特定の臨床像に帰因させる追加段階（ｖｉ）と共に含んでなる診断方法。
【請求項２６】
請求項２５記載の診断方法で使用するための、請求項１乃至請求項１０のいずれか１項記載のインビボ造影剤。
【請求項２７】
請求項２５記載の診断方法で使用するための請求項１９記載の放射性医薬組成物の製造に使用するための、請求項１乃至請求項１０のいずれか１項記載のインビボ造影剤。
【請求項１】
次の式Ｉのインビボ造影剤或いはその塩又は溶媒和物。
【化１】
（式中、
Ｒ1はメチル及びＣ1-3フルオロアルキルから選択され、
Ｒ2は水素、ハロゲン、Ｃ1-3アルコキシ及びＣ1-3フルオロアルコキシから選択され、
Ｒ3は水素、ハロゲン及びＣ1-3アルコキシから選択され、
Ａ1はＮ又はＣＨであり、
Ａ2及びＡ4-7の１つ又は２つがＮであり、Ａ2及びＡ4-7の残りがＣＨであり、
Ａ3はＣＨ又はＣＨ−Ｏ−Ｒ4（式中、Ｒ4はＨ、Ｃ1-3アルキル又はＣ1-3ハロアルキルである。）であるか、或いは別法としてＡ2及びＡ4-7の１つがＮでありかつＡ2及びＡ4-7の残りがＣＨである場合にＡ3はＮであってよく、
式Ｉはインビボイメージングに適した放射性同位体である原子を含む。）
【請求項２】
Ｒ1がＣ1-3フルオロアルキルであり、Ｒ2が水素である、請求項１記載のインビボ造影剤。
【請求項３】
Ｒ1がメチルであり、Ｒ2がＣ1-3フルオロアルコキシである、請求項１記載のインビボ造影剤。
【請求項４】
Ｒ3が水素である、請求項１乃至請求項３のいずれか１項記載のインビボ造影剤。
【請求項５】
Ａ1、Ａ2及びＡ4-7の２つがＮであり、Ａ1、Ａ2及びＡ4-7の残りがＣＨである、請求項１乃至請求項４のいずれか１項記載のインビボ造影剤。
【請求項６】
Ａ2及びＡ4〜Ａ6の１つがＮであり、Ａ1がＣＨであり、Ａ7がＣＨである、請求項１乃至請求項４のいずれか１項記載のインビボ造影剤。
【請求項７】
Ａ7がＮであり、Ａ1-6がＣＨであり、Ｒ3が水素である、請求項１乃至請求項４のいずれか１項記載のインビボ造影剤。
【請求項８】
前記放射性同位体が18Ｆ、11Ｃ又は123Ｉである、請求項１乃至請求項７のいずれか１項記載のインビボ造影剤。
【請求項９】
前記放射性同位体が18Ｆである、請求項８記載のインビボ造影剤。
【請求項１０】
次の化学構造を有する、請求項９記載のインビボ造影剤。
【化２】
【請求項１１】
請求項１乃至請求項１０のいずれか１項記載のインビボ造影剤の製造方法であって、前記放射性同位体の適当な供給源を次の式ＩＩの前駆体化合物と反応させる段階を含んでなる方法。
【化３】
（式中、
Ｒ11-13の１つは前駆体基を含み、そうでなければＲ11-12は請求項１乃至請求項３でそれぞれＲ1-2に関して定義した通りであり、Ｒ13は請求項１又は請求項４でＲ3に関して定義した通りであり、前駆体基を含まない場合にはＲ11-13の各々は任意に保護基を含み、
Ａ11-17は請求項１及び請求項５乃至請求項７でそれぞれＡ1-7に関して定義した通りであり、任意には保護基を含む。）
【請求項１２】
前記放射性同位体の前記適当な供給源が18Ｆの適当な供給源であり、前記前駆体基がヒドロキシル、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、トシレート、メシレート又はトリフレートからなる、請求項１１記載の方法。
【請求項１３】
18Ｆの前記適当な供給源が［18Ｆ］−フルオロエチルトシレートであり、前記前駆体化合物が次の化学構造を有する、請求項１２記載の方法。
【化４】
【請求項１４】
18Ｆの前記適当な供給源が［18Ｆ］−フッ化物であり、前記前駆体化合物が次の化学構造を有する、請求項１２記載の方法。
【化５】
（式中、ＯＴｓはトシレートを表す。）
【請求項１５】
前記放射性同位体の前記適当な供給源が11Ｃの適当な供給源であり、前記前駆体基がヒドロキシル、カルボキシル、トリアルキルスタンナン又は有機ホウ素化合物である、請求項１１記載の方法。
【請求項１６】
前記放射性同位体の前記適当な供給源が123Ｉの適当な供給源であり、前記前駆体基がトリアルキルスタンナン、トリアルキルシラン又は有機ホウ素化合物であるか、或いは前記前駆体基が式ＩＩのアリール基にしている場合にはそれが前記アリール基と共にフェノール、アリールヨードニウム塩、アリールジアゾニウム塩、アリールトリアルキルアンモニウム塩又はニトロアリール誘導体を形成する、請求項１１記載の方法。
【請求項１７】
自動化される、請求項１１乃至請求項１６のいずれか１項記載の方法。
【請求項１８】
請求項１１乃至請求項１６のいずれか１項記載の方法で定義される前駆体化合物。
【請求項１９】
請求項１乃至請求項１０のいずれか１項記載のインビボ造影剤を、哺乳動物への投与に適した形態の生体適合性キャリヤーと共に含んでなる放射性医薬組成物。
【請求項２０】
請求項１１乃至請求項１６のいずれか１項記載の方法を実施するためのキットであって、密封容器内に請求項１８記載の前駆体化合物を含んでなるキット。
【請求項２１】
請求項１７記載の方法を実施するためのカセットであって、
（ｉ）請求項１８記載の前駆体化合物を含む容器、並びに
（ｉｉ）請求項１１乃至請求項１６のいずれか１項記載の放射性同位体の適当な供給源を用いて容器を溶出するための手段
を含んでなるカセット。
【請求項２２】
さらに、
（ｉｉｉ）過剰の前記放射性同位体を除去するためのイオン交換カートリッジ、及び任意には
（ｉｖ）得られた放射性標識生成物を脱保護して請求項１乃至請求項１０のいずれか１項記載のインビボ造影剤を生成するためのカートリッジ
を含む、請求項２１記載のカセット。
【請求項２３】
被験体におけるＰＢＲ発現の分布及び／又は程度を決定する際に使用するためのインビボイメージング方法であって、
（ｉ）請求項１乃至請求項１０のいずれか１項記載のインビボ造影剤を前記被験体に投与する段階、
（ｉｉ）前記インビボ造影剤を前記被験体内のＰＢＲに結合させる段階、
（ｉｉｉ）前記インビボ造影剤の放射性同位体から放出される信号をインビボイメージング技術によって検出する段階、
（ｉｖ）前記信号の位置及び／又は量を表す画像を生成する段階、並びに
（ｖ）前記被験体におけるＰＢＲ発現の分布及び程度を決定する段階であって、前記発現は前記インビボ造影剤から放出される前記信号と直接に相関している段階
を含んでなるインビボイメージング方法。
【請求項２４】
前記被験体に関する治療計画の進行中に繰り返して実施される請求項２３記載のインビボイメージング方法であって、前記計画がＰＢＲ状態と戦うための薬物の投与を含むインビボイメージング方法。
【請求項２５】
ＰＢＲがアップレギュレートされた状態の診断方法であって、請求項２３又は請求項２４のいずれか記載のインビボイメージング方法を、ＰＢＲ発現の分布及び程度を特定の臨床像に帰因させる追加段階（ｖｉ）と共に含んでなる診断方法。
【請求項２６】
請求項２５記載の診断方法で使用するための、請求項１乃至請求項１０のいずれか１項記載のインビボ造影剤。
【請求項２７】
請求項２５記載の診断方法で使用するための請求項１９記載の放射性医薬組成物の製造に使用するための、請求項１乃至請求項１０のいずれか１項記載のインビボ造影剤。
【図１】
【公表番号】特表２０１２−５２０８５５（Ｐ２０１２−５２０８５５Ａ）
【公表日】平成２４年９月１０日（２０１２．９．１０）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２０１２−５００２６９（Ｐ２０１２−５００２６９）
【出願日】平成２２年３月１９日（２０１０．３．１９）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＥＰ２０１０／０５３６１４
【国際公開番号】ＷＯ２０１０／１０６１６６
【国際公開日】平成２２年９月２３日（２０１０．９．２３）
【出願人】（３０５０４０７１０）ジーイー・ヘルスケア・リミテッド (99)
【Ｆターム（参考）】
【公表日】平成２４年９月１０日（２０１２．９．１０）
【国際特許分類】
【出願日】平成２２年３月１９日（２０１０．３．１９）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＥＰ２０１０／０５３６１４
【国際公開番号】ＷＯ２０１０／１０６１６６
【国際公開日】平成２２年９月２３日（２０１０．９．２３）
【出願人】（３０５０４０７１０）ジーイー・ヘルスケア・リミテッド (99)
【Ｆターム（参考）】
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