エマルジョン中の架橋ヒアルロン酸
【課題】
知られている方法の欠点を示さない架橋マイクロビーズを調製する方法を提供する。
【解決手段】
本発明は、架橋ヒアルロン酸マイクロビーズを生成する方法、並びに生成されたマイクロビーズに関し、前記方法は：（a）ヒアルロン酸又はその塩を含む水性アルカリ溶液を提供する工程と；（b）有機中水又は油中水（ＶＷＯ）エマルジョンが形成されるように、有機又は油相中で工程（a）の混合溶液から所望のサイズを有する微小液滴を形成する工程であって、使用される油相の量が油相及び水の合計に対して２０〜５０重量％未満のものである工程と；（c）エマルジョンに架橋剤を含む溶液を添加し、ヒアルロン酸と架橋剤との反応が生じて架橋ヒアルロン酸マイクロビーズが得られる工程と；（d）任意選択により、工程（c）で得られた架橋ヒアルロン酸マイクロビーズの分散液を後処理する工程とを含む。
知られている方法の欠点を示さない架橋マイクロビーズを調製する方法を提供する。
【解決手段】
本発明は、架橋ヒアルロン酸マイクロビーズを生成する方法、並びに生成されたマイクロビーズに関し、前記方法は：（a）ヒアルロン酸又はその塩を含む水性アルカリ溶液を提供する工程と；（b）有機中水又は油中水（ＶＷＯ）エマルジョンが形成されるように、有機又は油相中で工程（a）の混合溶液から所望のサイズを有する微小液滴を形成する工程であって、使用される油相の量が油相及び水の合計に対して２０〜５０重量％未満のものである工程と；（c）エマルジョンに架橋剤を含む溶液を添加し、ヒアルロン酸と架橋剤との反応が生じて架橋ヒアルロン酸マイクロビーズが得られる工程と；（d）任意選択により、工程（c）で得られた架橋ヒアルロン酸マイクロビーズの分散液を後処理する工程とを含む。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、架橋ヒアルロン酸マイクロビーズを生成する方法に関し、前記方法は：
（a）ヒアルロン酸又はその塩を含む水性アルカリ溶液を提供する工程と；
（b）有機中水又は油中水（Ｗ／Ｏ：Ｗａｔｅｒ ｉｎ Ｏｉｌ）エマルジョンが形成されるように、有機又は油相中で、工程（a）の混合溶液から、所望のサイズを有する微小液滴を形成する工程であって、使用される油相の量が、油相及び水の合計に対して２０〜５０重量％未満のものである工程と；
（c）Ｗ／Ｏエマルジョンを連続的に撹拌しながら、エマルジョンに架橋剤を含む溶液を添加し、それによって、ヒアルロン酸と架橋剤との反応が生じて架橋ヒアルロン酸マイクロビーズが得られる工程と；
（d）任意選択により、工程（c）で得られた架橋ヒアルロン酸マイクロビーズの分散液を後処理する工程と
を含む。
【背景技術】
【０００２】
本発明は、化粧品及びパーソナルケアの適用分野で使用される修飾ヒアルロン酸（ＨＡ）、特にエマルジョン中の架橋ＨＡを調製するための方法に関する。
【０００３】
ヒアルロン酸（ＨＡ）は、非硫酸化グリコサミノグリカンの種類に属する、天然の線状炭水化物ポリマーである。ヒアルロン酸は、β−１，３−Ｎ−アセチルグルコサミン及びβ−１，４−グルクロン酸反復二糖単位であって分子量（ＭＷ）が最大６ＭＤａであるものからなる。ＨＡは、ヒアリン軟骨、滑膜関節液と、真皮及び表皮の両方の皮膚組織に存在する。ＨＡは、脊椎動物の結合組織を含む天然組織から、ヒト臍帯から、及び鶏冠から抽出することができる。しかし今日では、感染物質が移動する潜在的リスクを最小限に抑えるために、また生成物の均一性、品質、及び利用可能性を増大させるために、微生物法で調製することが好ましい（ＷＯ０３／０１７５９０２、Novozymes）。
【０００４】
体内におけるＨＡの数多くの役割が明らかにされている。ＨＡは、皮膚や腱、筋肉、軟骨などの多くの組織の細胞のメカニズムの支援として、生物学的有機体で重要な役割を演ずる。ＨＡは、組織の湿潤や潤滑など、重要な生物学的プロセスに関与する。ＨＡは、癒着、発生、細胞運動、癌、血管新生、及び創傷治癒など、数多くの生理学的機能の役割を有するとも考えられる。ＨＡの独特の物理的及び生物学的性質（粘弾性、生体適合性、生分解性を含む）により、ＨＡは、化粧品、眼科、リウマチ、薬物送達、創傷治癒、及び組織工学における広範な現行の及び開発中の適用例で用いられる。これら適用例のいくつかにおけるＨＡの使用は、ＨＡが室温で、即ち約２０℃で水に可溶であり、体内ではヒアルロニダーゼにより素早く分解され、生体材料に加工し難いことによって制限されている。したがって、ＨＡの物理的及び機械的性質とｉｎ ｖｉｖｏ滞留時間とを改善するために、ＨＡの架橋が導入されている。
【０００５】
米国特許第４，５８２，８６５号（Biomatrix Inc.）は、架橋剤としてジビニルスルホン（ＤＶＳ）を使用した、単独の、又はその他の親水性ポリマーと混合したＨＡの架橋ゲルの調製について記述している。多官能性エポキシ化合物を使用した架橋ＨＡあるいはその塩の調製は、ＥＰ０１６１８８７Ｂ１に開示されている。共有結合を通してＨＡを架橋するのに用いられてきた、その他の二官能性又は多官能性試薬には、ホルムアルデヒド（米国特許第４，７１３，４４８号、Biomatrix Inc.）、ポリアジリジン（ＷＯ０３／０８９４７６Ａ１、Genzyme Corp.）、Ｌ−アミノ酸又はＬ−アミノエステル（ＷＯ２００４／０６７５７５、Biosphere S.P.A.）が含まれる。カルボジイミドも、ＨＡを架橋することが報告されている（米国特許第５，０１７，２２９号、Genzyme Corp.;米国特許第６，０１３，６７９号、Anika Research Inc.）。脂肪族アルコールを用いたＨＡの全部あるいは部分架橋エステル、並びにそのような部分エステルと無機又は有機塩基との塩は、米国特許第４，９５７，７４４号に開示されている。ＨＡ鎖と、塩酸１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド（「ＥＤＡＣ」）及びアジピン酸ジヒドロアジドとの、水／アセトン混合物中での架橋は、ＵＳ２００６／００４０８９２（University of North Texas）に開示された。ＷＯ２００６／５６２０４（Novozyme A/S）は、架橋剤としてジビニルスルホン（ＤＶＳ）を使用して、ＨＡの架橋ゲルを調製するための方法も開示している。
【０００６】
ＷＯ２００８／１０００４４は、ヒアルロン酸を架橋することによってヒアルロン酸ヒドロゲルナノ粒子を調製する方法について記述しており、この方法は、ｉ）内部に溶解した界面活性剤を含有する油相と、ｉｉ）塩基性溶液に溶解したヒアルロン酸及び水溶性架橋剤を含有する水相とを混合して、ｗ／ｏエマルジョンを形成するようにする工程と、ｗ／ｏエマルジョン中のヒアルロン酸を架橋する工程とを含み、この油相は、ドデカン、ヘプタン、又はセチルエチルヘキサノエートを含むものである。
【０００７】
ＥＰ０８３０４１６（米国特許第６，２１４，３３１号と同等）は、ヒアルロン酸、硫酸コンドロイチン、硫酸デルマタン、硫酸ケラタン、セルロース、キチン、キトサン、アガロース、カラギナン、カードラン、デキストラン、エマルサン、ゲラン、キサンタン、ポリ（エチレンオキシド）、ポリ（ビニルアルコール）、ポリ（Ｎ−ビニルピロリドン）、タンパク質、糖タンパク質、ペプチドグリカン、プロテオグリカン、リポ多糖、又はこれらの組合せから選択される水溶性ポリマーと、水性媒体とを含む水性ポリマー溶液を、油乳化剤中に水を含有する油ベースに添加し、この混合物を撹拌してポリマー液滴を含有するエマルジョンを形成し、架橋剤によってその場でポリマー液滴を架橋し、それによって架橋ポリマー粒子を形成することが可能な、粒子の直径が２１２μｍ未満でありかつ粒子の少なくとも８０％が球状である、架橋水溶性ポリマー粒子製剤の調製について記述している。ヒアルロン酸微小球を生成するために、架橋剤を、トルエン中の水性ヒアルロン酸のエマルジョンに直接添加する。架橋剤は、まず水溶液のｐＨをｐＨ１１に調節することによって不活性化され、次いでｐＨを７〜８に低下させることによって活性化される。油相として、トルエン、ｏ−キシレン、又はイソオクタンを使用することが好ましい。水相と油相との重量比は、約１対１である。
【０００８】
Ｎｕｒｅｔｔｉｎ Ｓａｈｉｎｅｒ及びＸｉｎｑｉａｏ Ｊａｉ（Turk J Chem, 32（2008）, 397-409）は、油相としてイソオクタンを使用した、ヒアルロン酸ベースのサブミクロンのヒドロゲル粒子の調製について述べている。エマルジョンを調製するために、水性ヒアルロン酸溶液０．５４ｍｌをイソオクタン１５ｍｌに添加した結果、水相と油相との重量比は１０対１よりも高くなる。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００９】
上述の内容から、架橋したＨＡ−マイクロビーズを調製するためのいくつかのプロセスが知られていることが、明らかである。知られているプロセスで油相として使用される成分のいくつかは、化粧品又はパーソナルケア用組成物の成分として使用するのに適していない。大量の水又は油相が、マイクロビーズを精製するために使用される。したがって、知られている方法の１つ又は複数の欠点を示さない、架橋マイクロビーズを調製する代替方法を提供することが求められている。
【課題を解決するための手段】
【００１０】
驚くべきことに、本発明者らは、
（a）ヒアルロン酸又はその塩を含む水性アルカリ溶液を提供する工程と；
（b）有機中水又は油中水（Ｗ／Ｏ）エマルジョンが形成されるように、有機又は油相中で、工程（a）の混合溶液から、所望のサイズを有する微小液滴を形成する工程であって、使用される油相の量が、油相及び水の合計に対して２０〜５０重量％未満のものである工程と；
（c）Ｗ／Ｏエマルジョンを連続的に撹拌しながら、エマルジョンに架橋剤を含む溶液を添加し、それによって、ヒアルロン酸と架橋剤との反応が生じて架橋ヒアルロン酸マイクロビーズが得られる工程と；
（d）任意選択により、工程（c）で得られた架橋ヒアルロン酸マイクロビーズの分散液を後処理する工程と
を含む、架橋ヒアルロン酸マイクロビーズの生成方法が、従来技術の方法から明らかにされた問題を解決することを見出した。
【００１１】
本発明の方法には、最小限に抑えられた廃水又は廃油相が生成されるという利点がある。パーソナルケア又は化粧品の用途で許容される皮膚軟化剤を使用することによって、得られる本発明のマイクロビーズは、皮膚軟化剤として炭水化物を使用したときに生じ得る皮膚刺激の問題を全く示さない。本発明の方法には、化粧品又はパーソナルケアの配合物を形成する前に、マイクロビーズから、油相として使用される成分を完全に除去する必要がないという利点がある。段階（c）から得られた分散液を、引き続き中和させ、あるいは中和させることなしに、直接使用することも可能である。
【００１２】
したがって、本発明の第１の態様では、
（a）ヒアルロン酸又はその塩を含む水性アルカリ溶液を提供する工程と；
（b）有機中水又は油中水（Ｗ／Ｏ）エマルジョンが形成されるように、有機又は油相中で、工程（a）の混合溶液から、所望のサイズを有する微小液滴を形成する工程であって、使用される油相の量が、油相及び水の合計に対して２０〜５０重量％未満のものである工程と；
（c）Ｗ／Ｏエマルジョンを連続的に撹拌しながら、エマルジョンに架橋剤を含む溶液を添加し、それによって、ヒアルロン酸と架橋剤との反応が生じて架橋ヒアルロン酸マイクロビーズが得られる工程と；
（d）任意選択により、工程（c）で得られた架橋ヒアルロン酸マイクロビーズの分散液を後処理する工程と
を含む、架橋ヒアルロン酸マイクロビーズの生成方法が提供される。
【００１３】
第２の態様では、本発明は、好ましくはジビニルスルホンと架橋したヒアルロン酸又はその塩を含むマイクロビーズに関する。これらのマイクロビーズは、好ましくは、第１の態様の方法によって作製され、あるいは得られる。
【００１４】
第３の態様では、本発明は、第２の態様で定義されたマイクロビーズを含む組成物に関する。
【００１５】
本発明の第４の態様は、保湿剤、パーソナルケア、ヘアケア、スキンケア、又は化粧品組成物を製造するための、本発明の第２の態様によるマイクロビーズ、又は本発明の第３の態様による組成物、又は本発明の第１の態様による方法によって得られた分散液の使用に関する。
【００１６】
本発明のその他の態様は、ビヒクルとして第２の態様で定義されたマイクロビーズの（有効量）を、好ましくはこのマイクロビーズに封入されたパーソナルケア用活性剤と共に含むパーソナルケア用組成物、第２の態様で定義されたマイクロビーズ又は第３の態様で定義された組成物の有効量を活性成分として含む化粧物品、第２の態様で定義されたマイクロビーズ又は第３の態様で定義された組成物を含む衛生物品に関し、好ましくはこの物品は、おむつ、衛生用タオル、手術用スポンジ、創傷治癒スポンジ、又はバンドエイドもしくはその他の創傷ドレッシング材料に含まれる部分である。
【００１７】
いくつかの態様は、保湿剤又は化粧品を製造するための、又は審美的治療での、第２の態様で定義されたマイクロビーズ又は第３の態様で定義された組成物の使用に関する。
【図面の簡単な説明】
【００１８】
【図１】その適用範囲が記述全体及び特許請求の範囲から明らかな本発明を、実施例に特定される実施形態に限定することなく、一例として本発明を示す図である。実施例２により得られた分散液の顕微鏡写真を示す。マイクロビーズ（粒子）の球状の特徴がわかる。
【図２】その適用範囲が記述全体及び特許請求の範囲から明らかな本発明を、実施例に特定される実施形態に限定することなく、一例として本発明を示す図である。実施例２で得られた粒子の粒度分布のグラフを示す。
【図３】その適用範囲が記述全体及び特許請求の範囲から明らかな本発明を、実施例に特定される実施形態に限定することなく、一例として本発明を示す図である。ブタの皮膚の顕微鏡写真を示す。ブタの皮膚は、実施例７により処理した。
【図４】実施例１１で決定された、皮膚パラメータである鱗状態を示す図である。
【図５】実施例１１で決定された、皮膚パラメータである表面及び体積を示す図である。
【図６】実施例１１で決定された、皮膚パラメータである粗さを示す図である。
【図７】実施例１１で決定された、皮膚パラメータである肌理を示す図である。
【発明を実施するための形態】
【００１９】
（定義）
「ヒアルロン酸（hyaluronic acis）」という用語は、文献では、細胞表面、脊椎動物の結合組織の塩基性細胞外物質、関節の滑液、眼の眼球内液、ヒト臍帯組織、及び鶏冠で自然に生ずる、Ｄ−グルクロン及びＮ−アセチル−Ｄ−グルコサミン酸の残基によって構成された種々の分子量の酸性多糖を意味するのに使用される。
【００２０】
「ヒアルロン酸（hyaluronic acid）」という用語は、実際に、通常は、様々な分子量の交互に配されたＤ−グルコン及びＮ−アセチル−Ｄ−グルコサミン酸残基を有する一連の多糖全て、又はその分解画分をも意味するとして使用され、したがって、「ヒアルロン酸（hyaluronic acids）」という複数を示す用語を使用することがより正しいと考えられる。しかし、単数を示す用語が、この記述においては全て同じに使用することにし；さらに、「ＨＡ」という略称を、この集合的な用語の代わりに頻繁に使用することにする。
【００２１】
「ヒアルロン酸」は、本明細書では、β−１，４及びβ−１，３−グリコシド結合を交互に配することによって一緒に結合されたＮ−アセチルグルコサミン（ＧｌｃＮＡｃ）及びグルクロン酸（ＧｌｃＵＡ）の反復二糖単位で構成された非硫酸化グリコサミノグリカンと定義される。ヒアルロン酸は、ヒアルロナン、ヒアルロネート、又はＨＡとしても知られる。ヒアルロナン及びヒアルロン酸という用語は、本明細書では同義に使用される。
【００２２】
「ヒアルロン酸」又は「ＨＡ」という用語は、本発明では、他に明白に記述されない限り、ヒアルロン酸又はその塩を示すのに使用される。
【００２３】
「マイクロビーズ」という用語は、本明細書では、マイクロドロップ、微小液滴、微粒子、微小球、ナノビーズ、ナノドロップ、ナノ液滴、ナノ粒子、粒子、ナノスフィアなどと同義に使用される。
【００２４】
ヒアルロン酸の含量は、変更を加えたカルバゾール法（Bitter及びMuir, 1962, Anal Biochem. 4: 330-334）により決定することができる。さらに、ヒアルロン酸の数平均分子量は、Ueno et al., 1988, Chem.Pharm.Bull. 36, 4971-4975; Wyatt, 1993, Anal.Chim.Acta 272: 1-40; Wyatt Technologies, 1999, "Light Scattering University DAWN Course Manual"及び“Dawn EOS Manual” Wyatt Technology Corporation, Santa Barbara, Californiaに記載されているものなど、当技術分野で標準的な方法を使用して決定することができる。
【００２５】
本発明のいくつかの態様は、数ある構成成分の中でも、架橋ＨＡ生成物（マイクロビーズ）及び活性成分の（有効）量を含む、様々な組成物及び配合物に関し、好ましくはこの活性成分は、皮膚科用又は化粧品用活性剤；パーソナルケアとして許容される担体、賦形剤、又は希釈剤、好ましくは水溶性賦形剤、最も好ましくはラクトースである。
【００２６】
さらに、本発明の態様は、第１の態様で定義された生成物又は上記態様及び実施形態で定義された組成物を含む物品、例えば一般に、化粧物品、衛生物品、又はパーソナルケア用物品に関する。最後の態様では、本発明は、第１の態様で定義された生成物又は本発明のその他の態様及び実施形態で定義された組成物を含む、化粧用カプセル又はマイクロカプセルに関する。
【００２７】
（発明の詳細な説明）
架橋ヒアルロン酸マイクロビーズを得る本発明の方法について、次に詳細に記述する。
【００２８】
本発明の、架橋ヒアルロン酸マイクロビーズを生成する方法は、
（a）ヒアルロン酸又はその塩を含む水性アルカリ溶液を提供する工程と；
（b）有機中水又は油中水（Ｗ／Ｏ）エマルジョンが形成されるように、有機又は油相中で、工程（a）の混合溶液から、所望のサイズを有する微小液滴を形成する工程であって、使用される油相の量が、油相及び水の合計に対して２０〜５０重量％未満のものである工程と；
（c）エマルジョンに架橋剤を含む溶液を添加し、それによって、ヒアルロン酸と架橋剤との反応が生じて架橋ヒアルロン酸マイクロビーズが得られる工程と；
（d）任意選択により、架橋ヒアルロン酸マイクロビーズの分散液を後処理する工程と
を含む。
【００２９】
工程（a）：
ヒアルロン酸の供給源は、重要ではない。雄鶏のとさかは、ヒアルロナンの有意な商業的供給源である。微生物は、代替の供給源である。米国特許第４，８０１，５３９号は、報告されたヒアルロン酸の収量がリットル当たり約３．６ｇである、ストレプトコッカス・ズーエピデミカス（Streptococcus zooepidemics）の株を含むヒアルロン酸を調製するための発酵法を開示する。欧州特許Ｎｏ．ＥＰ０６９４６１６は、報告されたヒアルロン酸の収量がリットル当たり約３．５ｇである、改善されたストレプトコッカス・ズーエピデミカスの株を使用した発酵プロセスを開示する。その全体が本明細書に組み込まれるＷＯ０３／０５４１６３（Novozymes）に開示されるように、ヒアルロン酸又はその塩は、例えばグラム陽性バチルス（Bacillus）宿主で、組換えにより生成することができる。
【００３０】
ヒアルロナンシンターゼは、脊椎動物、病原菌、及び藻類ウイルスから得られた（DeAngelis,P.L., 1999, Cell.Mol.Life Sci. 56: 670-682）。ＷＯ９９／２３２２７は、ストレプトコッカス・エキシミリス（Streptococcus equisimilis）からのＩ族ヒアルロネートシンターゼを開示する。ＷＯ９９／５１２６５及びＷＯ００／２７４３７は、パスツレラ・ムルトシダ（Pasturella multocida）からのＩＩ族ヒアルロネートシンターゼについて記述する。Ｆｅｒｒｅｔｔｉらは、ヒアルロネートシンターゼ、ＵＤＰグルコースデヒドロゲナーゼ、及びＵＤＰ−グルコースピロホスホリラーゼをそれぞれコード化する３種の遺伝子、ｈａｓＡ、ｈａｓＢ、及びｈａｓＣからなるストレプトコッカス・ピオゲネス（Streptococcus pyogenes）のヒアルロナンシンターゼオペロンを開示する（Proc.Natl.Acad.Sci.USA. 98, 4658-4663, 2001）。ＷＯ９９／５１２６５は、ストレプトコッカス・エキシミリス・ヒアルロナンシンターゼのコード領域を有する核酸セグメントについて記述する。
【００３１】
組換えバチルス細胞のヒアルロナンは、培地に対して直接発現し、単純なプロセスを使用して培地からヒアルロナンを単離することができる。まず、バチルス細胞及び細胞砕片を培地から物理的に除去する。望む場合には培地を最初に希釈して、培地の粘度を低下させてもよい。遠心分離や精密濾過など、培地から細胞を除去するための多くの方法が、当業者に知られている。望む場合には、残りの上澄みをその後限外濾過などによって濾過して、小分子汚染物質を濃縮しヒアルロナンから除去してもよい。細胞及び細胞砕片の除去後、培地からのヒアルロナンの簡単な沈殿を、知られているメカニズムによって行う。塩、アルコール、又は塩とアルコールとの組合せを使用して、濾液からヒアルロナンを沈殿させてもよい。沈殿物にまで変性させると、ヒアルロナンを、物理的手段によって溶液から容易に単離することができる。ヒアルロナンは、凍結乾燥や噴霧乾燥など、当技術分野で知られている蒸発技法を使用することによって、濾液溶液から乾燥させるか、あるいは濃縮されることができる。
【００３２】
使用されるヒアルロン酸又はその塩は、好ましくはグラム陽性菌又は宿主細胞によって、より好ましくはバチルス属の細菌によって、組換え生成される場合に有利になりうる。バチルス宿主細胞で組換えによりヒアルロン酸をどのように生成するかは、既に記述されており、その全体が本明細書に組み込まれているＷＯ２００３／０５４１６３、Ｎｏｖｏｚｙｍｅｓ Ａ／Ｓを参照されたい。このように、好ましい実施形態では、本発明は、ヒアルロン酸又はその塩をバチルス宿主細胞で組換えにより生成する、第１の態様の方法に関する。
【００３３】
宿主細胞は、ヒアルロン酸の組換え生成に適した任意のバチルス細胞であってもよい。バチルス宿主細胞は、野生型バチルス細胞又はその変異体であってもよい。本発明を実施するのに有用なバチルス細胞には、限定するものではないがバチルス・アガルデルヘンス（Bacillus agaraderhens）、バチルス・アルカロフィルス（Bacillus alkalophilus）、バチルス・アミロリケファシェンス（Bacillus amyloliquefaciens）、バチルス・ブレビス（Bacillus brevis）、バチルス・サーキュランス（Bacillus circulans）、バチルス・クラウシー（Bacillus clausii）、バチルス・コアギュランス（Bacillus coagulans）、バチルス・フィルムス（Bacillus firmus）、バチルス・ラウタス（Bacillus lautus）、バチルス・レンタス（Bacillus lentus）、バチルス・リケニフォルミス（Bacillus licheniformis）、バチルス・メガトリウム（Bacillus megatrium）、バチルス・プミルス（Bacillus pumilus）、バチルス・ステアロサーモフィルス（Bacillus stearothermophilus）、バチルス・サブチリス（Bacillus subtilis）、及びバチルス・スリンギエネシス（Bacillus thuringiensis）細胞が含まれる。組換え発現に特に適応させた変異体バチルス・サブチリス細胞は、ＷＯ９８／２２５９８に記載されている。非包封バチルス細胞が、本発明で特に有用である。
【００３４】
好ましい実施形態では、Ｂａｃｉｌｌｕｓ宿主細胞は、Ｂａｃｉｌｌｕｓ ａｍｙｌｏｌｉｑｕｅｆａｃｉｅｎｓ、Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｌａｕｓｉｉ、Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｌｅｎｔｕｓ、Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｌｉｃｈｅｎｉｆｏｒｍｉｓ、Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｔｅａｒｏｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｕｓ、又はＢａｃｉｌｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌｉｓ細胞である。より好ましい実施形態では、Ｂａｃｉｌｌｕｓ細胞は、Ｂａｃｉｌｌｕｓ ａｍｙｌｏｌｉｑｕｅｆａｃｉｅｎｓ細胞である。別のより好ましい実施形態では、Ｂａｃｉｌｌｕｓ細胞はＢａｃｉｌｌｕｓ ｃｌａｉｓｉｉ細胞である。別のより好ましい実施形態では、Ｂａｃｉｌｌｕｓ細胞はＢａｃｉｌｌｕｓ ｌｅｎｔｕｓ細胞である。別のより好ましい実施形態では、Ｂａｃｉｌｌｕｓ細胞はＢａｃｉｌｌｕｓ ｌｉｃｈｅｎｉｆｏｒｍｉｓ細胞である。別のより好ましい実施形態では、Ｂａｃｉｌｌｕｓ細胞はＢａｃｉｌｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌｉｓ細胞である。最も好ましい実施形態では、Ｂａｃｉｌｌｕｓ宿主細胞がＢａｃｉｌｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌｉｓ Ａ１６４Δ５（米国特許第５，８９１，７０１号参照）又はＢａｃｉｌｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌｉｓ １６８Δ４である。
【００３５】
ヒアルロン酸は、それ自体を使用することができ、又はヒアルロン酸の塩を使用することができる。ヒアルロン酸の塩、好ましくは無機塩を使用することが有利になりうる。本発明で有用な、好ましいヒアルロン酸の塩は、ヒアルロン酸ナトリウム、ヒアルロン酸カリウム、ヒアルロン酸アンモニウム、ヒアルロン酸カルシウム、ヒアルロン酸マグネシウム、ヒアルロン酸亜鉛、又はヒアルロン酸コバルトである。
【００３６】
ヒアルロン酸の様々な分子量画分が、特定の目的に有利であると記述されてきた。本発明で使用されるヒアルロン酸又はその塩は、好ましくは、約１０，０００〜約１０，０００，０００Ｄａ、より好ましくは２５，０００〜５，０００，０００Ｄａ、さらにより好ましくは５０，０００〜３，０００，０００Ｄａの数平均分子量を有する。
【００３７】
本発明の好ましい実施形態では、ヒアルロン酸又はその塩は、３００，０００〜３，０００，０００Ｄａの範囲、好ましくは４００，０００〜２，５００，０００Ｄａ、より好ましくは５００，０００〜２，０００，０００Ｄａ、最も好ましくは５００，０００〜１，０００，０００Ｄａの範囲の数平均分子量を有する。
【００３８】
さらに別の好ましい実施形態では、ヒアルロン酸又はその塩は、１０，０００〜３００，０００Ｄａの間の範囲、好ましくは２０，０００〜２００，０００Ｄａの範囲、より好ましくは２５，０００〜１００，０００Ｄａの範囲、最も好ましくは２５，０００〜８０，０００Ｄａの範囲の数平均分子量を有する。
【００３９】
工程ａ）の水性アルカリ溶液中のヒアルロン酸又はその塩の初期濃度は、得られる架橋マイクロビーズの性質に影響を及ぼす可能性がある。したがって本発明の好ましい実施形態は、水性アルカリ溶液が、溶解したヒアルロン酸又はその塩を０．１％〜４０％（w/v）の間、好ましくは１〜１５％（w/v）、より好ましくは４〜６％（w/v）の濃度で含む、第１の態様の方法に関する。
【００４０】
水性アルカリ溶液は、ヒアルロン酸又はその塩とアルカリ水溶液とを混合することによって、得ることができる。
【００４１】
水性アルカリ溶液は、塩基、好ましくは無機塩基、より好ましくはアルカリ金属水酸化物、最も好ましくは水酸化ナトリウムを、水又は水を含有する溶液に添加することによって調製してもよい。架橋反応中のｐＨ値も、結果に影響を及ぼす。本発明の好ましい実施形態では、アルカリ溶液は、溶解したアルカリ金属水酸化物、好ましくは水酸化ナトリウムを、０．００１〜２．０Ｍの濃度で含む。
【００４２】
工程（a）の溶液は、好ましくは、１１〜１３のｐＨを、より好ましくは１１．５〜１２．５、最も好ましくは約１２のｐＨを有する。
【００４３】
工程（b）で溶液を使用する前に、工程（a）の溶液を激しく撹拌することが有利となりうる。
【００４４】
工程（b）：
工程（b）でエマルジョンを形成する場合、使用される油相の量は、油相及び水の合計に対して２０乃至＜５０重量％、好ましくは２５〜４５重量％、より好ましくは３０〜４０重量％である。
【００４５】
油層として化粧品又はパーソナルケア用配合物に使用される、標準的な皮膚軟化剤を使用することが好ましい。そのような標準的な皮膚軟化剤は、炭水化物又は芳香族炭水化物ではなく、特にトルエン、ｏ−キシレン、ドデカン、ヘプタン、イソオクタン、又はセチルエチルヘキサノエートではない。本発明で使用される好ましい皮膚軟化剤は、２〜４４個のＣ原子を有する直鎖状及び／又は分岐状モノ及び／又はジカルボン酸と、１〜２２個のＣ原子を有する直鎖状及び／又は分岐状飽和又は不飽和アルコールとのモノ又はジエステル、２〜３６個のＣ原子を有する脂肪族二官能性アルコールと、１〜２２個のＣ原子を有する一官能性脂肪族カルボン酸とのエステル化生成物、長鎖アリール酸エステル、例えば、安息香酸と直鎖状及び／又は分岐状Ｃ６〜Ｃ２２アルコールとのエステルなど、又は同様に安息香酸イソステアリルエステル、安息香酸ブチルオクチルエステル、又は安息香酸オクチルドデシルエステル、カーボネート、好ましくは直鎖状Ｃ６〜Ｃ２２脂肪アルコールカーボネート、Ｇｕｅｒｂｅｔカーボネート、例えば、炭酸ジカプリリル、炭酸ジエチルヘキシル、長鎖トリグリセリド、即ち３個の酸分子を有するグリセロールのトリプルエステルであって、その少なくとも１つがＣ６〜Ｃ１０脂肪酸に対して長鎖トリグリセリドであるもの、オレイルアルコールやオクチルドデカノールなどの直鎖状又は分岐状脂肪アルコール、ジアルキルエーテルなどの脂肪アルコールエーテル、例えばジカプリリルエーテル、シリコーン油及びワックス、例えばポリメチルシロキサン、シクロメチルシロキサン、及びアリール又はアルキル又はアルコキシ置換ポリメチルシロキサン又はシクロメチルシロキサン、６〜１８個、好ましくは８〜１０個の炭素原子を有する脂肪アルコールをベースにしたＧｕｅｒｂｅｔアルコール、直鎖状Ｃ６〜Ｃ２２脂肪酸と直鎖状Ｃ６〜Ｃ２２脂肪アルコールとのエステル、分岐状Ｃ６〜Ｃ１３カルボン酸と直鎖状Ｃ６〜Ｃ２２脂肪アルコールとのエステル、直鎖状Ｃ６〜Ｃ２２脂肪酸と分岐状Ｃ８〜Ｃ１８アルコール、特に２−エチルヘキサノール又はイソノナノールとのエステル、分岐状Ｃ６〜Ｃ１３カルボン酸と分岐状アルコール、特に２−エチルヘキサノール又はイソノナノールとのエステル、直鎖状及び／又は分岐状脂肪酸と多価アルコール（例えば、プロピレングリコール、ダイマージオール、又はトリマートリオールなど）及び／又はＧｕｅｒｂｅｔアルコールとのエステル、Ｃ６〜Ｃ１８脂肪酸をベースにした液体モノ／ジ／トリグリセリド混合物、Ｃ６〜Ｃ２２脂肪アルコール及び／又はＧｕｅｒｂｅｔアルコールと芳香族カルボン酸とのエステル、植物油、分岐状一次アルコール、置換シクロヘキサン、エポキシド化脂肪酸エステルとポリオールとの開環生成物、及び／又はシリコーン油、又はこれら化合物の２種以上の混合物から選択される。使用される皮膚軟化剤は、相分離せずに水と混和しないことが好ましい。
【００４６】
皮膚軟化剤及び油成分として適切なモノエステルは、例えば、１２から２２個のＣ原子を有する脂肪酸のメチルエステル及びイソプロピルエステル、例えば、ラウリン酸メチル、ステアリン酸メチル、オレイン酸メチル、エルカ酸メチル、ミリスチン酸イソプロピル、パルミチン酸イソプロピル、ステアリン酸イソプロピル、オレイン酸イソプロピルなどである。その他の適切なモノエステルは、例えば、ステアリン酸ｎ−ブチル、ラウリン酸ｎ−ヘキシル、オレイン酸ｎ−デシル、ステアリン酸イソオクチル、パルミチン酸イソノニル、イソノナン酸イソノニル、ラウリン酸２−エチルヘキシル、パルミチン酸２−エチルヘキシル、ステアリン酸２−エチルヘキシル、ステアリン酸２−ヘキシルデシル、パルミチン酸２−オクチルドデシル、オレイン酸オレイル、エルカ酸オレイル、オレイン酸エルシルと、テクニカルグレードの脂肪族アルコールカット及びテクニカルグレードの脂肪族カルボン酸の混合物から得ることが可能なエステル、例えば、１２から２２個のＣ原子を有する不飽和脂肪アルコールと１２から２２個のＣ原子を有する飽和及び不飽和脂肪酸とのエステルであり、動物及び植物脂肪から得られるようなものである。しかし、例えばホホバ油やマッコウクジラ油中に存在するような、天然に生ずるモノエステル及び蝋エステルの混合物も適切である。適切なジカルボン酸エステルは、例えば、アジピン酸ジ−ｎ−ブチル、セバシン酸ジ−ｎ−ブチル、アジピン酸ジ（２−エチルヘキシル）、コハク酸ジ（２−ヘキシルデシル）、アゼライン酸ジ−イソトリデシルである。適切なジオールエステルは、例えば、エチレングリコールジオレエート、エチレングリコールジ−イソトリデカノエート、プロピレングリコールジ−（２−エチルヘキサノエート）、ジ−イソステアリン酸ブタンジオール、ジ−カプリル酸／カプリン酸ブタンジオール、及びネオペンチルグリコールジ−カプリレートである。
【００４７】
例として、脂肪酸トリグリセリドを本明細書に挙げることができ；そのようなものとして例えば、天然の植物油、例えばオリーブ油、ヒマワリ油、大豆油、ラッカセイ油、菜種油、アーモンド油、ゴマ油、アボカド油、ヒマシ油、カカオバター、ヤシ油であるが、ココナツ油又はパーム核油の液体内容物でもあり、また、動物油、例えばサメ肝油、タラ肝油、鯨油、牛脂、及びバター脂肪など、蜜蝋やカルナバヤシ蝋、鯨蝋、ラノリン、及び牛脚油などの蝋でもあり、牛脂の液体内容物又はカプリル・カプリン酸混合物の合成トリグリセリド、テクニカルグレードのオレイン酸からのトリグリセリド、イソステアリン酸のトリグリセリド、又はパルミチン酸／オレイン酸混合物からのトリグリセリドを皮膚軟化剤（油相）として使用することができる。
【００４８】
本発明で油相として有用な好ましい皮膚軟化剤は、炭酸ジエチルヘキシル又はデシルココエート又はこれらの混合物である。
【００４９】
油相として前記皮膚軟化剤を使用することによって、この皮膚軟化剤が化粧品又はパーソナルケア用配合物を配合するのに有用である場合には、マイクロビーズ分散液から油相を除去することが必要ではなくなる。
【００５０】
エマルジョンを調製するのに、工程（a）又は工程（b）で１種又は複数の乳化剤を添加することが、助けになりうる。本発明で有用な乳化剤は、追加の構成成分として以下に列挙するものから選択することができる。
【００５１】
工程（b）で形成された微小液滴が約１ナノメートル〜１ミリメートルの範囲の数平均直径を有する場合に有利になりうる。工程（b）の微小液滴の粒度分布の最大値は、好ましくは０．１〜１００μｍの範囲、より好ましくは０．５〜１０μｍ、最も好ましくは１〜２μｍの範囲である。液滴のサイズは、使用される乳化剤の選択及び撹拌の強度によって調節することができる。所望のサイズの液滴を得るのに必要な、使用される乳化剤及び撹拌の強度の組合せは、簡単な試験シリーズによって決定することができる。液滴又はマイクロビーズのサイズは、Ａｃｃｕｓｉｚｅｒ（Accusizer 780 Optical Particle Sizer, PSS NICOMP, Santa Barbara, CAL, USA、Accusizer 780AD CW788-Nicompソフトウェアを備えるもの、V 1.68 （2000）)で決定することができる。
【００５２】
本発明で使用される好ましい乳化剤は、３〜９、好ましくは４〜６、より好ましくは約５のＨＬＢ値を有するものから選択される。好ましい乳化剤は、ポリグリセリル−４−ジイソステアレート／ポリヒドロキシステアレート／セバケート（ISOLAN（登録商標）GPS）、ＰＥＧ／ＰＰＧ−１０／１ジメチコーン（ABIL（登録商標）EM 90）、イソステアリン酸ポリグリセリル−４（ISOLAN（登録商標）GI 34）、オレイン酸ポリグリセリル−３（ISOLAN（登録商標）GO 33）、イソステアリン酸メチルグルコース（ISOLAN（登録商標）IS）、ジイソステアロイルポリグリセリル−３ダイマージリノレエート（ISOLAN（登録商標）PDI）、オレイン酸グリセリル（TEGIN（登録商標）OV）、ラウリン酸ソルビタン（TEGO（登録商標）SML）、オレイン酸ソルビタン（TEGO（登録商標）SMO V）、及びステアリン酸ソルビタン（TEGO（登録商標）SMS）から選択される。これらの好ましい乳化剤は、Ｅｖｏｎｉｋ Ｇｏｌｄｓｃｈｍｉｄｔ ＧｍｂＨから入手可能である。
【００５３】
工程（c）：
架橋剤の濃度は、得られるマイクロビーズに多大な影響を及ぼした可能性がある。その結果、本発明の好ましい実施形態は、架橋剤（ＣＡ）の重量比が、ヒアルロン酸又はその塩（ＨＡ）／架橋剤（ＣＡ）（乾燥重量）が１：１〜１００：１の間にあり、好ましくはＨＡ／ＣＡ（乾燥重量）が２：１から５０：１の間にある第１の態様の方法に関する。
【００５４】
架橋度は、好ましくは０．００１〜１の範囲であり、より好ましくは０．０１〜０．５、さらにより好ましくは約０．１である。架橋度１は、ｎ官能性のＯＨ反応性化合物１モルが、ヒアルロン酸のｎモル単糖と反応することを意味する。架橋度は、反応混合物中の未反応の架橋剤の量を分析することによって決定することができる。分析は、知られている分析方法、例えばＨＰＬＣによって行うことができる。
【００５５】
本発明の方法に適した架橋剤は、例えば、多官能性（>=2）ＯＨ反応性化合物である。適切な架橋剤の例は、ジビニルスルホン（ＤＶＳ）、又はビスエポキシド架橋技法をベースにした架橋剤であり、例えば、ＧＤＥ＝グリセロールジグリシジルエーテル又はＢＤＥ：１，４−ブタンジイルジグリシジルエーテルである。架橋剤は、ジビニルスルホン、グリセロールジグリシジルエーテル、又は１，４−ブタンジイルジグリシジルエーテルから選択されることが好ましい。本発明の最も好ましい架橋剤は、上述の重量比で好ましく使用されるジビニルスルホンである。
【００５６】
架橋剤は、直接又は溶液として添加してもよい。架橋剤が溶液として添加される場合、その架橋剤は、好ましくは油相に溶解され、好ましくは工程（b）で使用したものと同じ油相に溶解される。架橋剤は、Ｃ１〜Ｃ４アルコール、好ましくはエタノールを含む溶液として添加することが有利になりうる。架橋剤を、上述の油相及びＣ１〜Ｃ４アルコール、好ましくはエタノールを含む溶液として添加することがより有利になりうる。エタノールを含む架橋剤溶液を使用することにより、架橋剤は、微小液滴中により素早く分布し得る。架橋剤の好ましい溶液は、油相２０〜８０重量％、好ましくは４０〜６０重量％と、Ｃ１〜Ｃ４アルコール８０〜２０重量％、好ましくは４０〜６０重量％の混合物を、溶媒として含む。
【００５７】
本発明者らは、工程（c）の架橋剤及びＨＡ溶液を含む溶液を混合する間及び／又は混合した直後に撹拌する初期の期間は、満足のいくゲル化を実現することが望ましいことを見出した。したがって、架橋剤を含む溶液の添加は、撹拌しながら、好ましくは激しく撹拌しながら行われる。工程（c）で架橋剤を含む溶液を、１〜１８０分の期間、好ましくは撹拌しながら添加することが有利になりうる。架橋剤を含む溶液の前回の量を添加した後に、さらに１〜１８０分間にわたり撹拌することが好ましい場合がある。
【００５８】
ヒアルロン酸又はその塩と、架橋剤、好ましくはジビニルスルホンとの反応は、好ましくは０℃〜１００℃の温度、より好ましくは１０℃から５０℃、さらにより好ましくは２０℃から３０℃の温度で生じる。
【００５９】
本発明者らは、加熱工程が、溶液を混合した後に有益であると判断した。したがって本発明の好ましい実施形態は、工程（c）の混合溶液が、２０℃〜１００℃の範囲の温度、好ましくは２５℃〜８０℃の範囲、より好ましくは３０℃〜６０℃の範囲、最も好ましくは３５℃〜５５℃の範囲の温度に加熱され、その温度はこの範囲で、溶液を混合した後に少なくとも５分間にわたり、好ましくは少なくとも１０分、２０分、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１１０、１２０、１３０、１４０、１５０、１６０、１７０、又は最も好ましくは少なくとも１８０分間にわたり、好ましくは撹拌せずに維持される、第１の態様の方法に関する。
【００６０】
本発明の、別の好ましい実施形態では、工程（c）の反応混合物を、架橋反応が生じた後に室温で短時間、しかし連続して撹拌したまま行わせることが有利である。
【００６１】
本発明の方法の好ましい実施形態では、工程（c）の反応混合物は、反応が生じた後に少なくとも５分間にわたり、好ましくは少なくとも１０分間、２０分間、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１１０、１２０、１３０、１４０、１５０、１６０、１７０、又は最も好ましくは少なくとも１８０分間にわたり、０℃〜４０℃の範囲、好ましくは１０℃〜３０℃の範囲の温度で維持される。
【００６２】
工程（c）から得られる架橋マイクロビーズは、約１ナノメートル〜１ミリメートルの範囲の数平均直径を有することが好ましい。本発明の工程（c）の架橋マイクロビーズの粒度分布の最大値は、好ましくは、０．１〜１００μｍ、より好ましくは０．５〜１０μｍ、最も好ましくは１〜２μｍの範囲にある。
【００６３】
未反応の架橋剤をほとんど含まない、工程（c）の分散液を得ることが有利になりうる。好ましくは分散液、より好ましくはマイクロビーズは、１０重量ｐｐｍ（ｗｐｐｍ）未満、より好ましくは５ｗｐｐｍ未満を構成する。分散液中の遊離架橋剤の濃度は、未反応の架橋剤が毒物学的脅威になり得るので、この分散液が化粧品又はパーソナルケア用組成物を配合するのに直接使用される場合には特に低いものであることが必要である。したがって、未反応の架橋剤を上述の濃度で含む分散液が得られるまで、工程（c）の反応を続けることが好ましい。
【００６４】
任意選択による工程（d）
任意選択による工程ｄ）は、例えば、中和及び／又は分離工程とすることができる。
【００６５】
中和の場合、架橋マイクロビーズは直接又は分散液からの分離後に、水、水及び酸、水及び緩衝液、特に水及びリン酸緩衝液、水及び生理食塩緩衝液、又は水及びリン酸緩衝液及び生理食塩緩衝液に、少なくとも１回接触させてもよい。好ましくは、任意選択による工程（d）は、架橋マイクロビーズのｐＨを緩衝液又は酸で中和する工程を含む。多くのタイプの緩衝液又は酸は、当業者に周知のように、本発明の工程ｄ）での架橋マイクロビーズの膨潤及び中和に適していると考えられてきた。使用される酸又は酸溶液は、好ましくは、２５℃の脂肪酸液体、特に乳酸、オレイン酸、又はイソステアリン酸を含む群から選択される。水溶性の酸、例えば乳酸を、７５〜９５重量％、好ましくは８０〜９０重量％含む、酸の水性溶液を使用することが有利になりうる。好ましくは、架橋マイクロビーズを液体に、特に水性酸溶液又は水性緩衝液であってそのｐＨ値が２．０〜１０．０の範囲、好ましくは５．０〜９．５の範囲にあるものに、接触させる。中和が、マイクロビーズの分離なしに行われる場合、中和のために鉱酸を使用しないことが有利であるが、それはそのような酸が、エマルジョン／分散液の破壊をもたらす可能性があるからである。
【００６６】
好ましい適切な緩衝液は、ｐＨ値で選択され、その結果、架橋マイクロビーズは、７〜９．５のｐＨ値、好ましくは８．５〜９．５、より好ましくは約９のｐＨ値を有する。分散液（マイクロビーズを含む液体）のｐＨは、マイクロビーズのｐＨ値と本質的に同じであることが推測される。したがって、マイクロビーズのｐＨは、周知の方法によって、例えばｐＨ紙又はｐＨメータのｐＨ電極を分散液中に入れることによって、容易に決定することができる。
【００６７】
第１の態様の方法の緩衝液は、リン酸緩衝液及び／又は生理食塩緩衝液を含むことが好ましい。
【００６８】
任意選択による精製工程は、当技術分野で知られている任意の分離技法、例えば濾過、デカンテーション、及び遠心分離などを含んでもよい。好ましくは、任意選択による工程（d）は、１３，０００ダルトン未満のサイズを有する分子を自由拡散させる透析膜を使用して、脱イオン水に対して架橋マイクロビーズを透析する工程を含む精製工程である。
【００６９】
１つ又は複数の精製工程と、１つ又は複数の中和工程とを組み合わせることが有利になりうる。
【００７０】
パーソナルケア用配合物に許容される皮膚軟化剤である皮膚軟化剤を油相として使用する場合、分離又は精製工程は、必ずしも必要ではない。工程（c）から得られた分散液は、直接又は中和後に、化粧品又はパーソナルケア用組成物を配合するのに使用することができる。
【００７１】
本発明の方法により、本発明のマイクロビーズを得てもよい。本発明の好ましいマイクロビーズは、ジビニルスルホンと架橋した、ヒアルロン酸又はその塩を含む。本発明のこの好ましいマイクロビーズは、本発明の方法によって得てもよい。
【００７２】
本発明の好ましいマイクロビーズは、ほぼ球形である。本発明のマイクロビーズは、好ましくは、１ナノメートル〜１ミリメートルの間の範囲、より好ましくは０．０１〜１０００μｍ、さらにより好ましくは０．１〜１００μｍ、最も好ましくは０．５〜１０μｍの範囲で断面又は直径の分布の最大値を有する。通常、本発明のマイクロビーズは、はるかに狭い範囲の所望のサイズで作製されることになり、即ちこれらマイクロビーズは、かなり均一になる。工程（c）から得られる架橋マイクロビーズは、好ましくは、約１ナノメートルから１ミリメートルの範囲の数平均直径を有する。マイクロビーズは、好ましくは、約１００〜１，０００ナノメートルの範囲；又は１，０００ナノメートル超〜１，０００マイクロメートルの範囲の数平均直径を有する。本発明のマイクロビーズの多分散性は、好ましくは狭く、これは粒子の９５％超、好ましくは９７％超が、粒度分布の最大値の１０倍以下であることを意味している。多分散性は、上述のＡｃｃｕｓｉｚｅｒ法を用いて、単一粒子光学的寸法決定法により決定することができる。
【００７３】
本発明の好ましいマイクロビーズは、数平均分子量が約１０，０００〜約１０，０００，０００Ｄａ、より好ましくは２５，０００〜５，０００，０００Ｄａ、さらにより好ましくは５０，０００〜３，０００，０００Ｄａであるヒアルロン酸又はその塩を使用して得られる。
【００７４】
本発明の好ましい実施形態では、マイクロビーズは、３００，０００〜３，０００，０００Ｄａの範囲、好ましくは４００，０００〜２，５００，０００Ｄａ、より好ましくは５００，０００〜２，０００，０００Ｄａ、最も好ましくは５００，０００〜１，０００，０００Ｄａの範囲の数平均分子量を有するヒアルロン酸又はその塩を使用して得られる。
【００７５】
さらに別の好ましい実施形態では、マイクロビーズは、１０，０００〜３００，０００Ｄａの間の範囲、好ましくは２０，０００〜２００，０００Ｄａの範囲、より好ましくは２５，０００〜１００，０００Ｄａの範囲、最も好ましくは２５，０００〜８０，０００Ｄａの範囲の数平均分子量を有するヒアルロン酸又はその塩を使用して得られる。
【００７６】
好ましいマイクロビーズは、ヒアルロン酸の無機塩として、ヒアルロン酸ナトリウム、ヒアルロン酸カリウム、ヒアルロン酸アンモニウム、ヒアルロン酸カルシウム、ヒアルロン酸マグネシウム、ヒアルロン酸亜鉛、又はヒアルロン酸コバルトを含む。
【００７７】
本発明のマイクロビーズは、活性成分、水溶性賦形剤、及び／又は保存剤、又はその他の成分を含んでもよい。好ましくは、活性成分はパーソナルケア用活性物質である。本発明のマイクロビーズは、皮膚軟化剤、乳化剤及び界面活性剤、増粘剤／粘度調節剤／安定化剤、ＵＶ光防護フィルタ、酸化防止剤、屈水剤（又はポリオール）、固形分及び充填材、被膜形成剤、真珠光沢添加剤、デオドラント及び制汗活性化合物、防虫剤、セルフタンニング剤、保存剤、コンディショニング剤、香料、染料、生体活性化合物、ケア用添加剤、スーパーオイリング剤、保湿剤、及びそれらの内部の溶媒の群から選択される少なくとも１種の追加の成分を含んでもよい。
【００７８】
本発明のマイクロビーズは、これらマイクロビーズを含む本発明の組成物に接近できる。本発明の組成物は、皮膚軟化剤、乳化剤及び界面活性剤、増粘剤／粘度調節剤／安定化剤、ＵＶ光防護フィルタ、酸化防止剤、屈水剤（又はポリオール）、固形分及び充填材、被膜形成剤、真珠光沢添加剤、デオドラント及び制汗活性化合物、防虫剤、セルフタンニング剤、保存剤、コンディショニング剤、香料、染料、生体活性化合物、ケア用添加剤、スーパーオイリング剤、保湿剤、及び溶媒の群から選択される少なくとも１種の追加の成分を含んでもよい。追加の成分は、マイクロビーズの内部及び／又は外部にあってもよい。好ましくは追加の成分は、マイクロビーズの外側の本発明の組成物中にのみ存在する。
【００７９】
上述のように、本発明の生成物、例えばマイクロビーズ又はこれらマイクロビーズを含む組成物もしくは分散液が、その他の成分（追加の成分）も含む場合、有利になりうる。その他の成分は、本発明の生成物が組成物又は分散液である場合、マイクロビーズの内部、又はマイクロビーズの内部及び／又は外部にあってもよい。有用になりうるその他の成分は、好ましくは１種又は複数の活性成分であり、好ましくは１種又は複数のパーソナルケア用活性物質であり、特に生体活性剤、及び／又は１種又は複数の水溶性賦形剤である。
【００８０】
水溶性賦形剤は、（１種又は複数の）活性成分を安定化させる目的で含めてもよく、そのような賦形剤には、タンパク質、例えばアルブミン又はゼラチン；グリシン、アラニン、グルタミン酸、アルギニン、リシン、及びこれらの塩などのアミノ酸；グルコース、ラクトース、キシロース、ガラクトース、フルクトース、マルトース、サッカロース、デキストラン、マンニトール、ソルビトール、トレハロース、及びコンドロイチンスルフェートなどの炭水化物；リン酸塩などの無機塩；ＴＷＥＥＮ（登録商標）（ＩＣＩ）、ポリエチレングリコール、及びこれらの混合物などの界面活性剤を含めてもよい。賦形剤又は安定化剤は、生成物の０．００１〜９９重量％に及ぶ量で使用してもよい。
【００８１】
皮膚軟化剤、乳化剤及び界面活性剤、増粘剤／粘度調節剤／安定化剤、ＵＶ光防護フィルタ、酸化防止剤、屈水剤（又はポリオール）、固形分及び充填材、被膜形成剤、真珠光沢添加剤、デオドラント及び制汗活性化合物、防虫剤、セルフタンニング剤、保存剤、コンディショニング剤、香料、染料、生体活性化合物、ケア用添加剤、スーパーオイリング剤、及び溶媒の群から選択される追加の成分の好ましい例を、以下に示す。
【００８２】
追加の成分として使用することができる乳化剤又は界面活性剤は、非イオン、陰イオン、陽イオン、又は両性界面活性剤である。
【００８３】
以下の群の少なくとも１種からの化合物は、非イオン性乳化剤又は界面活性剤として用いることができる。
８から２２個のＣ原子を有する直鎖状脂肪アルコール、１２から２２個のＣ原子を有する脂肪酸、及びアルキル基中に８から１５個のＣ原子を有するアルキルフェノールへの、エチレンオキシド２から１００モル及び／又はプロピレンオキシド０から５モルの付加生成物、グリセロールへの、エチレンオキシド１から１００モルの付加生成物の、Ｃ１２／１８脂肪酸モノ及びジエステル、６から２２個の炭素原子を有する飽和及び不飽和脂肪酸の、グリセロールモノ及びジエステルとソルビタンモノ及びジエステルと、それらのエチレンオキシド付加生成物、アルキル基中に８から２２個の炭素原子を有するアルキルモノ及びオリゴグリコシドと、それらのエチレンオキシド付加生成物、ヒマシ油及び／又は水素化ヒマシ油への、エチレンオキシド２から２００モルの付加生成物、直鎖状、分岐状、不飽和又は飽和Ｃ６〜Ｃ２２脂肪酸、リシノール酸、及び１２−ヒドロキシステアリン酸と、グリセロール、ポリグリセロール、ペンタエリスリトール、ジペンタエリスリトール、糖アルコール（例えば、ソルビトール）、アルキルグルコシド（例えば、メチルグルコシド、ブチルグルコシド、ラウリルグルコシド）、及びポリグルコシド（例えば、セルロース）をベースにした部分エステル、モノ、ジ、及びトリアルキルホスフェートと、モノ、ジ、及び／又はトリ−ＰＥＧ−アルキルホスフェートと、それらの塩、例えば、ＰＥＧ／ＰＰＧ−２０／６ジメチコーン、ＰＥＧ／ＰＰＧ−２０／２０ジメチコーン、ビス−ＰＥＧ／ＰＰＧ−２０／２０ジメチコーン、ＰＥＧ−１２又はＰＥＧ−１４ジメチコーン、ＰＥＧ／ＰＰＧ−１４／４又は４／１２又は２０／２０又は１８／１８又は１７／１８又は１５／１５などの，ポリシロキサン／ポリエーテルコポリマー（ジメチコーンコポリオール）、ポリシロキサン／ポリアルキルポリエーテルコポリマー及び対応する誘導体、例えば、ラウリル又はセチルジメチコーンコポリオールなど、特にセチルＰＥＧ／ＰＰＧ−１０／１ジメチコーン（ABIL(登録商標)EM 90(Evonik Degussa)）、ＤＥ１１６５５７４によるペンタエリスリトール、脂肪酸、クエン酸、及び脂肪アルコールの混合エステル、及び／又は、６から２２個の炭素原子を有する脂肪酸、メチルグルコース、及びポリオール、例えばグリセロールやポリグリセロールなどの混合エステル、例えばグリセリルステアレートシトレート、グリセリルオレエートシトレート、及びクエン酸ジラウリルなどのクエン酸エステル。
【００８４】
陰イオン性乳化剤又は界面活性剤は、例えばカルボン酸基、硫酸基、スルホン酸基、又はリン酸基など、水に対する溶解性を与える基と、親油性基を含有することができる。皮膚が耐えられる陰イオン界面活性剤は、その多数が当業者に知られており、商業的に得ることができる。この文脈では、これらは、そのアルカリ金属、アンモニウム、又はアルカノールアンモニウム塩の形をとるアルキルスルフェート又はアルキルホスフェート、アルキルエーテル−スルフェート、アルキルエーテル−カルボキシレート、アシルサルコシネート、及びスルホスクシネート、と、そのアルカリ金属又はアンモニウム塩の形をとるアシルグルタメートとすることができる。
【００８５】
陽イオン乳化剤及び界面活性剤も、添加することができる。第４級アンモニウム化合物、特に、８から２２個のＣ原子を有する少なくとも１つの直鎖状及び／又は分岐状の飽和又は不飽和アルキル鎖を備えたものを使用することができ、特にしたがって例えば、アルキルトリメチルアンモニウムハロゲン化物などであって、例えば、塩化もしくは臭化セチルトリメチルアンモニウム又は塩化ベヘニルトリメチルアンモニウムなどであり、またさらに、ジアルキルジメチルアンモニウムハロゲン化物であって、例えば塩化ジステアリルジメチルアンモニウムなどである。
【００８６】
例えば塩化パルミトアミドプロピルトリメチルアンモニウムなどのモノアルキルアミドクアットや、対応するジアルキルアミドクアットをさらに使用することができる。
【００８７】
モノ、ジ、又はトリエタノールアミンをベースにした４級化脂肪酸エステルであってもよい、容易に生分解可能な第４級エステル化合物をさらに使用することができる。アルキルグアニジニウム塩を、陽イオン乳化剤としてさらに混合することができる。
【００８８】
穏やかな界面活性剤、即ち特に皮膚が耐えられる界面活性剤の、典型的な例は、脂肪アルコールポリグリコールエーテル−スルフェート、硫酸モノグリセリド、モノ及び／ジアルキルスルホスクシネート、脂肪酸イセチオネート、脂肪酸サルコシネート、脂肪酸タウリド、脂肪酸グルタメート、エーテル−カルボン酸、アルキルオリゴグルコシド、脂肪酸グルカミド、アルキルアミドベタイン、及び／又はタンパク質−脂肪酸縮合体であり、後者は例えば、小麦タンパク質をベースにする。
【００８９】
さらに、両性界面活性剤、例えばベタイン、アンホアセテート、又はアンホプロピオネートなど、したがって例えば、Ｎ−アルキル−Ｎ，Ｎ−ジメチルアンモニウムグリシネートなど、例えばココ−アルキルジメチルアンモニウムグリシネート、Ｎ−アシルアミノプロピル−Ｎ，Ｎ−ジメチルアンモニウムグリシネート、例えばココ−アシルアミノプロピルジメチルアンモニウムグリシネート、及び２−アルキル−３−カルボキシ−メチル−３−ヒドロキシエチルイミダゾリンであって、それぞれの場合に８から１８個のＣ原子をアルキル又はアシル基中に有する物質、及びココ−アシルアミノエチルヒドロキシエチルカルボキシメチルグリシネートを使用することが可能である。
【００９０】
両性界面活性剤の中で、Ｃ８／Ｃ１８アルキル又はアシル基とは別に、分子中に少なくとも１個の遊離アミノ基と少なくとも１個の−ＣＯＯＨ又はＳＯ３Ｈ基とを含有し、かつ内塩の形成が可能であるような、表面活性化合物を使用することが可能である。適切な両性界面活性剤の例は、Ｎ−アルキルグリシン、Ｎ−アルキルプロピオン酸、Ｎ−アルキルアミノ酪酸、Ｎ−アルキルイミノジプロピオン酸、Ｎ−ヒドロキシエチル−Ｎ−アルキルアミドプロピルグリシン、Ｎ−アルキルタウリン、Ｎ−アルキルサルコシン、２−アルキルアミノプロピオン酸、及びアルキルアミノ酢酸であって、それぞれの場合に８から１８個のＣ原子をアルキル基中に有するものである。両性界面活性剤のその他の例は、Ｎ−ココアルキルアミノプロピオネート、ココアシルアミノエチルアミノプロピオネート、及びＣ１２／１８アシルサルコシンである。
【００９１】
組成物の配合に使用される好ましい乳化剤又は界面活性剤は、マイクロビーズの生成に使用されるものと同一である。
【００９２】
適切な増粘剤は、例えば、多糖、特にキサンタンガム、グアールガム、寒天、アルギネート、及びチロースと、カルボキシメチルセルロース及びヒドロキシエチルセルロース、さらに高い分子量の、脂肪酸のポリエチレングリコールモノ及びジエステル、ポリアクリレート（例えば、Carbopols(商標)又はSynthalens(商標)）、ポリアクリルアミド、ポリビニルアルコール、及びポリビニルピロリドン、界面活性剤、例えばエトキシル化脂肪酸グリセリドなど、脂肪酸とポリオール、例えばペンタエリスリトールやトリメチロールプロパンなどとのエステル、制限された相同分布を有する脂肪アルコールエトキシレート、又はオリゴグルコシド、塩化ナトリウムや塩化アンモニウムなどの電解質である。
【００９３】
油状の相を濃化するための可能性ある増粘剤は、全て当業者に知られている増粘剤である。この文脈では、特に、硬化ヒマシ油や蜜蝋、マイクロワックスなどのワックスを挙げることができる。シリカやアルミナ、層状シリケート（例えば、ヘクトライト、ラポナイト、サポナイト）などの無機増粘剤も、さらに用いることができる。この文脈では、油状相に関するこれら無機増粘剤を、疎水的に変性させることができる。この文脈では、エアロシル、層状シリケート、及び／又は脂肪酸の金属塩、例えばステアリン酸亜鉛などを、油中水エマルジョンを濃化／安定化させるのに特に用いることができる
【００９４】
製剤は、水性界面活性剤系用の粘度調節剤として、例えば、ＮａＣｌ、ココアミドＤＥＡ／ＭＥＡやラウレス−３などの低分子量非イオン性界面活性剤、又は、ＰＥＧ−２００水素化グリセリルパルメートなどの、ポリマー性、高分子量、結合性の、高度にエトキシル化された脂肪誘導体を含むことができる。
【００９５】
用いることができるＵＶ光防護フィルタは、例えば、紫外線を吸収することが可能であり、かつ吸収されたエネルギーを、より長い波長の放射線の形で、例えば熱として再び放出することが可能な有機物質である。ＵＶＢフィルタは、油溶性又は水溶性にすることができる。挙げることができる油溶性ＵＶＢ光防護フィルタは、例えば：３−ベンジリデンカンファー及びその誘導体、例えば３−（４−メチルベンジリデン）カンファー（INCI:４−メチルベンジリデンカンファー、商標：Eusolex 6300）、４−アミノ安息香酸誘導体、例えば４−（ジメチルアミノ）−安息香酸２−メチルヘキシルエステル、４−（ジメチルアミノ）安息香酸２−エチルヘキシルエステル、及び４−（ジメチルアミノ）安息香酸アミルエステルなど、桂皮酸のエステル、例えば４−メトキシ桂皮酸２−エチルヘキシルエステル（INCI:メトキシ桂皮酸オクチル、商標：Parsol（登録商標）MCX）、４−メトキシ桂皮酸イソペンチルエステル、２−エチルヘキシル２−シアノ−３，３−ジフェニルアクリレート（INCI:オクトクリレン；商標：Uvinul N-539）など、サリチル酸のエステル、例えばサリチル酸２−エチルヘキシルエステル、サリチル酸４−イソプロピルベンジルエステル、サリチル酸ホモメチルエステルなど、ベンゾフェノンの誘導体、例えば２−ヒドロキシ−４メトキシベンゾフェノン、２−ヒドロキシ−４−メトキシ−４’−メチルベンゾフェノン、２，２’−ジヒドロキシ−４−メトキシベンゾフェノン、２−（４’−ジエチルアミノ−２’−ヒドロキシベンゾイル）−安息香酸ヘキシルエステル（アミノベンゾフェノンとも呼ぶ）など、ベンザルマロン酸のエステル、例えば４−ケトキシベンズマロン酸ジ−２−エチルヘキシルエステルなど、トリアジン誘導体、例えば４，４’，４”−（１，３，５−トリアジン−２，４，６−トリルトリイミノ）−トリス−安息香酸トリス（２−エチルヘキシルエステル）（２，４，６−トリス−［アニリノ−（ｐ−カーボ−２’−エチル−１’−ヘキシルオキシ）］−１，３，５−トリアジンとも呼ぶ。INCL:オクチルトリアゾン、BASF AktiengesellschaftからUVINUL（登録商標）T 150という商標で販売されている）、２，４−ビス−｛［４−（２−エチル−ヘキシルオキシ）−２−ヒドロキシ］−フェニル｝−６−（４−メトキシフェニル）−１，３，５−トリアジン（INCN:アニソトリアジン、Tinosorb（登録商用）Sという商標で得ることが可能）、ジオクチルブチルアミドトリアゾン（INCI:ジオクチルブタミドトリアゾン）、２，４−ビス−［５−１（ジメチルプロピル）ベンゾキサゾール−２−イル−（４−フェニル）−イミノ］−６−（２−エチルヘキシル）−イミノ−１，３，５−トリアジン（CAS番号288254-16-0、Uvasorb（登録商標）K2Aという商標で3V Sigmaから得ることが可能）、２，４−ビス−｛［４−（２−エチル−ヘキシルオキシ）−２−ヒドロキシ］−フェニル｝−６−（４−メトキシフェニル）−１，３，５−トリアジン（INCI:ビス−エチルヘキシルオキシフェノールメトキシフェニルトリアジン）であって、ＣＩＢＡ−Ｃｈｅｍｉｋａｌｉｅｎ ＧｍｂＨからＴｉｎｏｓｏｒｂ（登録商標）という商標で得ることが可能なもの、及び２−［４，６−ビス（２，４−ジメチルフェニル）−１，３，５−トリアジン−２−イル］−５−（オクチルオキシ）フェノール（CAS番号：2725-22-6）など、プロパン−１，３−ジオン、例えば１−（４−ｔｅｒｔ−ブチルフェニル）−３−（４’−メトキシフェニル）プロパン−１，３−ジオンなどである。
【００９６】
本明細書で特に好ましく用いられるＵＶ−Ｂフィルタは、ＵＶ光防護フィルタ物質、２−シアノ−３−フェニル-桂皮酸２−エチルヘキシルエステル、２，４−ビス−｛［４−（２−エチル−ヘキシルオキシ）−２−ヒドロキシ］−フェニル｝−６−（４−メトキシフェニル）−１，３，５−トリアジン、ジオクチルブチルアミドトリアゾン、２−ヒドロキシ−４−メトキシベンゾフェノン、２−ヒドロキシ−４−メトキシ−４’−メチルベンゾフェノン、２，２’−ジヒドロキシ−４−メトキシベンゾフェノン、４−メトキシベンズマロン酸ジ−２−エチルヘキシルエステル、２，４，６−トリス−［アニリノ−（ｐ−カーボ−２’−エチル−１’−ヘキシルオキシ）］−１，３，５−トリアジン、２，４−ビス−［５−１（ジメチルプロピル）ベンゾキサゾール−２−イル−(４−フェニル)−イミノ］−６−（２−エチルヘキシル）−イミノ−１，３，５−トリアジン、２，４−ビス−｛［４−（２−エチル−ヘキシルオキシ）−２−ヒドロキシ］−フェニル｝−６−（４−メトキシフェニル）−１，３，５−トリアジン、及び２−［４，６−ビス（２，４−ジメチルフェニル）−１，３，５−トリアジン−２−イル］−５−（オクチルオキシ）フェノールである。
【００９７】
好ましく用いられるＵＶ−Ａフィルタは、１−（４’−ｔｅｒｔ−ブチルフェニル）−３−（４’−メトキシフェニル）−プロパン−１，３−ジオン、１−フェニル−３−（４’−イソプロピルフェニル）プロパン−１，３−ジオンである。
【００９８】
特に好ましいＵＶ−Ａフィルタは、Ｐａｒｓｏｌ（登録商標）１７８９という商標でＧｉｖａｕｄａｎから、及びＥｕｓｏｌｅｘ（登録商標）９０２０という商標でＭｅｒｃｋから販売されている４−（ｔｅｒｔ−ブチル）−４’−メトキシジベンゾイルメタン（CAS番号70356-09-01）と、ＤＥ１０２００４０２７４７５によるヒドロキシベンゾフェノン、特に好ましくは２−（４’−ジエチルアミノ−２’−ヒドロキシベンゾイル）−安息香酸ヘキシルエステル（アミノベンゾフェノンとも呼ぶ）であって、ＢＡＳＦからＵｖｉｎｕｌ Ａ Ｐｌｕｓという商標で得ることができるものである。
【００９９】
さらに好ましいＵＶフィタ物質は、いわゆるブロードバンドフィルタであり、即ち、ＵＶ−Ａ及びＵＶ−Ｂ放射線の両方を吸収するフィルタ物質である。この群の中で、ＣＩＢＡ−Ｃｈｅｍｉｋａｌｉｅｎ ＧｍｂＨからＴｉｎｏｓｏｒｂ（登録商標）Ｍという商標で得ることができる２，２’メチレン−ビス−（６−（２Ｈ−ベンゾトリアゾール−２−イル）−４−（１，１，３，３−テトラメチルブチル）−フェノールと、ＩＮＣＩ名がドロメトリゾールトリシロキサンである２−（２Ｈ−ベンゾトリアゾール−２−イル）−４−メチル−６−［２−メチル−３−［１，３，３，３−テトラメチル−１−［（トリメチルシリル）オキシ］−ジシロキサニル］プロピル］−フェノール（CAS番号:155633-54-8）とが好ましく用いられる。
【０１００】
いくつかの異なるＵＶフィルタの組合せを使用することが好ましい。
【０１０１】
言及した可溶性物質に加えて、不溶性顔料、即ち細かく分散した金属酸化物及び塩、例えば二酸化チタン、酸化亜鉛、酸化鉄、酸化アルミニウム、酸化セリウム、酸化ジルコニウム、シリケート（タルク）、硫酸バリウム、及びステアリン酸亜鉛なども、この目的に適している。この文脈では、粒子は、１００ｎｍ未満の平均直径、例えば５から５０ｎｍの間、特に１５から３０ｎｍの間の平均直径を有するべきである。これらの粒子は球形を有することができるが、楕円形を有するか、あるいはそれ以外で球形から逸脱した形状を有する粒子を用いることもできる。微細化した有機顔料、例えば５０％強度の水性分散液として得ることができる、例えば＜２００ｎｍの粒度を有する２，２’−メチレン−ビス−｛６−（２Ｈ−ベンゾトリアゾール−２−イル）−４−（１，１，３，３−テトラメチルブチル）フェノール｝などは、光防護フィルタの比較的新規な種類である。
【０１０２】
その他の適切なＵＶ光防護フィルタは、Ｐ．ＦｉｎｋｅｌのＳＯＦＷ−Ｊｏｕｒｎａｌ １２２、５４３（１９９６）の概説にさらに見出すことができる。
【０１０３】
用いられるＵＶ光防護フィルタの量は、配合物に対して好ましくは０．０１〜１５％、好ましくは０．０５から１０％、特に好ましくは０．１〜５％である。
【０１０４】
主なＵＶ光防護フィルタの上記２つの群に加え、ＵＶ放射線が皮膚に浸透したときに引き起こされる光化学反応の連鎖を妨げる、酸化防止タイプの２次的な光防護剤も、用いることができる。用いることができる酸化防止剤は、例えば超酸化物ジスムターゼ、トコフェロール（ビタミンE）、ジブチルヒドロキシトルエン、及びアスコルビン酸（ビタミンC）である。
【０１０５】
流動特性及び使用特性を改善するのに使用することができる屈水剤は、例えば、エタノール、イソプロピルアルコール、又はポリオールである。本明細書に適したポリオールは、２から１５個の炭素原子及び少なくとも２個のヒドロキシル基を有することができる。典型的な例は：
グリセロールアルキレングリコール、例えばエチレングリコール、ジエチレングリコール、プロピレングリコール、ブチレングリコール、ヘキシレングリコール及びポリエチレングリコールなどであって、平均分子量が１００から１０００ダルトンであるもの、自己縮合度が１．５から１０のテクニカルグレードのオリゴグリセロール混合物、例えば、ジグリセロール含量が４０から５０重量％のテクニカルグレードのジグリセロール混合物、メチロール化合物、特に、トリメチロールエタン、トリメチロールプロパン、トリメチロールブタン、ペンタエリスリトール、及びジペンタエリスリトールなど、低級アルキルグルコシド、特に１から４個の炭素原子をアルキル基中に有するもの、例えばメチル及びブチルグルコシド、５から１２個の炭素原子を有する糖アルコール、例えばソルビトール又はマンニトールなど、５から１２個の炭素原子を有する糖、例えばグルコース又はスクロースなど、アミノ糖、例えばグルカミンなどである。
【０１０６】
用いることができる固形分は、例えば、酸化鉄顔料、二酸化チタン又は酸化亜鉛粒子、及び「ＵＶ安定化剤」で追加的に述べたものである。例えばナイロン１２、窒化ホウ素、例えばポリアクリレートやポリメタクリレートなどのポリマー粒子、又はシリコーンエラストマーなど、特定の感覚作用をもたらす粒子もさらに用いることができる。使用することができる充填剤には、タピオカデンプン、リン酸架橋デンプン、アルミニウム−デンプン、又はナトリウム−デンプンなどの、デンプン及びデンプン誘導体、コハク酸オクテニル、及び主にＵＶフィルタ作用も着色作用も発揮しない顔料、例えばＡｅｒｏｓｉｌｓ（登録商標）（ＣＡＳ Ｎｏ．７６３１−８６−９）が含まれる。
【０１０７】
用いることができる、例えば耐水性を改善するための被膜形成剤は、例えば：ポリウレタン、ジメチコーンコポリオール、ポリアクリレート、又はＰＶＰ／ＶＡコポリマー（ＰＶＰ＝ポリビニルピロリドン、ＶＡ＝酢酸ビニル）である。用いることができる脂溶性被膜形成剤は：例えば、ポリビニルピロリドン（ＰＶＰ）をベースにしたポリマー、ポリビニルピロリドンのコポリマー、ＰＶＰ／ヘキサデセンコポリマー、又はＰＶＰ／エイコセンコポリマーである。
【０１０８】
使用することができる、真珠光沢のある添加剤は、例えば、ジステアリン酸グリコール又はジステアリン酸ＰＥＧ−３である。
【０１０９】
可能性あるデオドラント活性化合物は、例えば、通常の香料成分などの臭気マスク剤、臭気吸収剤、例えば特許公開明細書ＤＥ４００９３４７に記載されている層状シリケートであり、これらの中では特に、モンモリロナイト、カオリナイト、イライト、ベイデライト、ノントロナイト、サポナイト、ヘクトライト、ベントナイト、スメクタイト、さらに例えば、リシノール酸の亜鉛塩である。微生物阻害物質も、組み込むのに同様に適している。微生物阻害物質は、例えば、２，４，４’−トリクロロ−２’−ヒドロキシジフェニルエーテル（Irgasan）、１，６−ジ−（４クロロフェニルビグアニド）ヘキサン（クロロヘキシジン）、３，４，４’トリクロロカルボニリド、第４級アンモニウム化合物、丁子油、ハッカ油、タイム油、クエン酸トリエチル、ファルネソール（３，７，１１−トリメチル−２，６，１０−ドデカトリエン−１−オール）、エチルヘキシルグリセリルエーテル、カプリル酸ポリグリセリル−３（TEGO(登録商標)Cosmo P813, Evonik Degussa）、及び特許公開明細書ＤＥ１９８５５９３４、ＤＥ３７４０１８６、ＤＥ３９３８１４０、ＤＥ４２０４３２１、ＤＥ４２２９７０７、ＤＥ４２２９７３７、ＤＥ４２３８０８１、ＤＥ４３０９３７２、ＤＥ４３２４２１９、及びＥＰ６６６７３２に記載されている、活性剤である。
【０１１０】
使用することができる制汗剤活性化合物は、収斂薬、例えば、アルミニウムクロロハイドレート（「ＡＣＨ」）及びアルミニウムジルコニウムグリシン塩（「ＺＡＧ」）などの塩基性塩化アルミニウムである。
【０１１１】
使用することができる防虫剤は、例えば、Ｎ，Ｎ−ジエチル−ｍ−トルアミド、１，２−ペンタンジオール、又はＩｎｓｅｃｔ Ｒｅｐｅｌｌｅｎｔ ３５３５である。
【０１１２】
使用することができるセルフタンニング剤は、例えば、ジヒドロキシアセトン及びエリスルロースである。
【０１１３】
使用することができる保存剤は、例えば、単一又は複数のアルキルパラベンエステルとフェノキシエタノールとの混合物である。アルキルパラベンエステルは、メチルパラベン、エチルパラベン、プロピルパラベン、及び／又はブタンパラベンとすることができる。フェノキシエタノールの代わりに、例えばベンジルアルコールやエタノールなどのその他のアルコールを使用することも可能である。さらに、その他の従来の保存剤、例えばソルビン酸又は安息香酸、サリチル酸、２−ブロモ−２−ニトロプロパン−１，３−ジオール、クロロアセトアミド、ジアゾリジニル尿素、ＤＭＤＭヒダントイン、ヨードプロピニルブチルカルバメート、ヒドロキシメチルグリシン酸ナトリウム、メチル−イソチアゾリン、クロロメチル−イソチアゾリン、エチルヘキシルグリセロール、又はカプリリルグリコールなどを使用することも可能である。
【０１１４】
使用することができるコンディショニング剤は、例えば、塩化セトリモニウム、塩化ジセチルジモニウム、塩化ベヘントリモニウム、塩化ジステアリルジモニウム、メト硫酸ベヘントリモニウム、塩化ジステアロイルエチルジモニウム、塩化パルミトアミドプロピルトリモニウム、グアールヒドロキシプロピルトリモニウム塩化物、ヒドロキシプロピル−グアール、塩化ヒドロキシプロピルトリモニウム又はクオタニウム−８０などの有機第４級化合物、あるいはまたそれらのアミン誘導体、例えばアミノプロピルジメチコーン又はステアラミドプロピルジメチルアミンである。
【０１１５】
使用することができる香料は、天然又は合成の芳香物質、又はそれらの混合物である。天然の芳香物質は、花（ユリ、ラベンダー、バラ、ジャスミン、オレンジの花、イラン−イラン）、幹及び葉（ゼラニウム、パチョリ、プチグレン）、実（アニシード、コリアンダー、キャラウェイ、ジュニパー）、果物の皮（ベルガモット、レモン、オレンジ）、根（メース、アンゲリカ、セロリ、カルダモン、コスタス、アイリス、タイム）、針及び枝（トウヒ、モミ、マツ、ドワーフパイン）、樹脂及びバルサム（ガルバナム、エレミ、ベンゾイン、ミルラ、乳香、オポポナックス）からの抽出物である。動物性原材料、例えばシベットやビーバーなどがさらに適している。典型的な合成芳香化合物は、エステル、エーテル、アルデヒド、ケトン、アルコール、及び炭化水素タイプの生成物である。エステルタイプの芳香化合物は、例えば、酢酸ベンジル、イソ酪酸フェノキシエチル、酢酸ｐ−ｔ−ブチルシクロヘキシル、酢酸リナリル、酢酸ジメチルベンジルカルビニル、酢酸フェニルエチル、安息香酸リナリル、ギ酸ベンジル、グリシン酸エチルメチル−フェニル、プロピオン酸アリルシクロヘキシル、プロピオン酸スチラリル、及びサリチル酸ベンジルである。エーテルには、例えばベンジルエチルエーテルが含まれ、アルデヒドには、例えば８から１８個の炭素原子を有する直鎖状アルカナール、シトラール、シトロネラル、シトロネリルオキシアセトアルデヒド、シクラメンアルデヒド、ヒドロイシトロネラル、イリアル、及びブルゲオナールが含まれ、ケトンには、例えばイオノン、α−イソメチルイオノン、及びメチルセドリルケトンが含まれ、アルコールには、アネトール、シトロネロール、オイゲノール、イソオイゲノール、ゲラニオール、リナロール、フェニルエチルアルコール、及びテルピネオールが含まれ、炭化水素には、主にテルペン及びバルサムが含まれる。心地良いフレグランスノートを一緒に発生させる様々な芳香物質の混合物を、用いることができる。芳香成分として通常使用されている低揮発性の精油、例えばセージ油、カモミール油、クローブ油、メリッサ油、ハッカ油、ケイ皮油、リンデンブロッサム油、ジュニパーベリー油、ベチベル油、乳香油、ガルバナム油、ラボラナム油、及びラバンジン油も、香料として適している。ベルガモット油、ジヒドロミルセノール、リリアル、ライラール、シトロネロール、フェニルエチルアルコール、α−ヘキシルシンナムアルデヒド、ゲラニオール、ベンジルアセトン、シクラメンアルデヒド、リナロール、ボイサムブレンフォルテ、アムブロキサン、インドール、ヘジオン、サンデリス、レモン油、マンダリン油、オレンジ油、アリルアミルグリコレート、シクロベルタール、ラバンジン油、クラリーセージ油、β−ダマスコン、バーボンゼラニウム油、サリチル酸シクロヘキシル、ベルトフィックスケウアー、イソ−Ｅ−スーパー、フィクソリドＮＰ、エベルニル、イラルデインγ、フェニル酢酸、酢酸ゲラニル、酢酸ベンジル、ローズオキシド、ロミラット、イロチル、及びフロラマットを、単独で又は混合物として使用することも可能である。
【０１１６】
用いることができる染料は、例えば刊行物「Ｋｏｓｍｅｔｉｓｃｈｅ Ｆａｒｂｅｍｉｔｔｅｌ［化粧品着色剤］、ｔｈｅ Ｄｙｅｓｔｕｆｆｓ Ｃｏｍｍｉｓｓｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ Ｄｅｕｔｓｃｈｅ Ｆｏｒｓｃｈｕｎｇｓｇｅｍｅｉｎｓｃｈａｆｔ、Ｖｅｒｌａｇ Ｃｈｅｍｉｅ、Ｗｅｉｎｈｅｉｍ、１９８４、ｐ．８１〜１０６」に要約されているような、化粧品を目的として適切であり承認された物質である。
【０１１７】
生体活性化合物は、例えば、トコフェロール、酢酸トコフェロール、パルミチン酸トコフェロール、アスコルビン酸、デオキシリボ核酸、補酵素Ｑ１０、レチノール、ビスアボロール、アラントイン、フィタントリオール、パンテノール、ＡＨＡ酸、アミノ酸、ヒアルロン酸、α−ヒドロキシ酸、ポリグルタミン酸、クレアチン（及びクレアチン誘導体）、グアニジン（及びグアニジン誘導体）、セラミド、フィトスフィンゴシン（及びフィトスフィンゴシン誘導体）、スフィンゴシン（及びスフィンゴシン誘導体）、擬似セラミド、精油、ペプチド、タンパク質加水分解物、植物エキス、スフィンゴ脂質、及びビタミン複合体を意味すると理解すべきである。
【０１１８】
製剤が含むことができるケア添加剤は、例えば、エトキシル化グリセロール脂肪酸エステルであって例えばＰＥＧ−７グリセロールココエートなど、又は、例えばポリクウォタニウム−７やポリグリセロールエステルなどの陽イオンポリマーである。
【０１１９】
使用することができるスーパーオイリング剤は、例えば、ラノリン及びレシチンと、ポリエトキシル化又はアシル化ラノリン及びレシチン誘導体、ポリオール脂肪酸エステル、モノグリセリド及び脂肪酸アルカノールアミドなどの物質であり、後者はフォーム安定化剤としても同時に機能する。
【０１２０】
使用することができる溶媒は、例えば、エタノール、プロパノール、又は１，３−プロパンジオールなどの脂肪族アルコール、炭酸エチレン、炭酸プロピレン、炭酸グリセロールなどの環状カーボネート、酢酸エチル、乳酸エチル、アジピン酸ジメチル、及びアジピン酸ジエチルなどのモノ又はポリカルボン酸のエステル、プロピレングリコール、ジプロピレングリコール、グリセロール、炭酸グリセロール、又は水である。
【０１２１】
組成物の耐水性を改善するために、したがってＵＶ防護性能も増大させるために好ましく用いられるその他の追加の成分は、被膜形成剤の群である。好ましく用いられる被膜形成剤は、ポリウレタン、ジメチコーンコポリオール、ポリアクリレート、ＰＶＰ／ＶＡコポリマー（ＰＶＰ＝ポリビニルピロリドン、ＶＡ＝酢酸ビニル）、ポリビニルピロリドン（ＰＶＰ）、ポリビニルピロリドンのコポリマー、ＰＶＰ／ヘキサデセンコポリマー、又はＰＶＰ／エイコセンコポリマーである。
【０１２２】
好ましく用いられるその他の追加の成分は、デオドラント及び制汗活性化合物の群である。この群からは、収斂剤が好ましく用いられ、特に好ましくは、アルミニウムクロロハイドレート（「ＡＣＨ」）やアルミニウムジルコニウムグリシン塩（「ＺＡＧ」）などの塩基性塩化アルミニウムである。
【０１２３】
追加の成分は、本発明の方法の工程（c）を終了した後に、又は工程（a）、（b）、及び／又は（c）の実施中に、組成物に添加してもよい。特に保存剤の添加は、工程（b）及び／又は（c）を実施している間に行ってもよい。追加の成分は、工程（c）で得られた分散液に添加することが好ましい。
【０１２４】
本発明による組成物は、例えば、スキンケア、フェイスケア、ヘッドケア、ボディケア、インティメートケア、フットケア、ヘアケア、ネイルケア、デンタルケア、又はオーラルケア製品に使用することができる。したがって本発明の組成物は、スキンケア、フェイスケア、ヘッドケア、ボディケア、インティメートケア、フットケア、ヘアケア、ネイルケア、デンタルケア、又はオーラルケア組成物から選択されるパーソナルケア又は化粧品用組成物にすることができる。
【０１２５】
本発明による組成物は、例えば、エマルジョン、懸濁液、溶液、クリーム、軟膏、ペースト、ゲル、油、粉末、エアロゾル、スティック、スプレー、クレンジング製品、メイクアップもしくはサンスクリーン製剤、又はフェイスローションの形で使用することができる。したがって本発明の組成物は、エマルジョン、懸濁液、溶液、クリーム、軟膏、ペースト、ゲル、油、粉末、エアロゾル、スティック、スプレー、クレンジング製品、メイクアップもしくはサンスクリーン製剤、又はフェイスローションにすることができる。
【０１２６】
本発明の組成物、好ましくは化粧品、皮膚科、又はパーソナルケア用組成物は、好ましくは、本発明のマイクロビーズを０．１〜６０重量％、好ましくは０．５〜２５重量％、より好ましくは１から１０重量％、特に好ましくは２〜５重量％含む。
【０１２７】
本発明のマイクロビーズ又は本発明の組成物又は本発明による方法によって得られた分散液は、保湿剤、パーソナルケア、ヘアケア、スキンケア、又は化粧品用組成物の製造に使用することができる。
【０１２８】
本発明のマイクロビーズ又は本発明の組成物又は本発明による方法によって得られた分散液は、特に、局所皮膚充填材として使用することができる。本発明のマイクロビーズは、好ましくは、皮膚の皺及び襞に集まる。したがって本発明の生成物は、製剤に使用、あるいは局所皮膚充填材として使用した場合に多くの利点を示す。特別な利点は、皺の深さの減少と、皮膚の粗さの減少である。皮膚は、より艶やかになり、より良好な輝きを有する。したがって、本発明の別の態様は、皺及び粗い肌を治療する局所皮膚充填材を製造するための、本発明のマイクロビーズ又は本発明の組成物又は本発明による方法によって得られた分散液の使用である。
【０１２９】
以下に示す実施例は、その適用範囲が説明全体及び特許請求の範囲から明らかである本発明を、これらの実施例で特定される実施形態に限定することなく、例として本発明について述べている。
【実施例】
【０１３０】
（実施例１）
デシルココエートでの架橋微粒子の調製
ヒアルロン酸ナトリウム（HyaCare（登録商標）、Evonik Goldschmidt GmbH）６重量％を水性ＮａＯＨ（０．２Ｍ）に溶かした溶液７０ｇを、レベル１のハンドブレンダ（SG Zauberstab、Typ M 122 2-Speed）で激しく撹拌することによって、２分で、デシルココエート（TEGOSOFT（登録商標）DC、Evonik Goldschmidt GmbH）２７ｇ及びポリグリセリル−４−ジイソステアレート／ポリヒドロキシステアレート／セバケート（ISOLAN（登録商標）GPS、Evonik Goldschmidt GmbH）３ｇの混合物に添加した。得られた混合物を、レベル２のハンドブレンダで３分間均質化させた。デシルココエート３ｇ及びエタノール５ｍｌの混合物中のジビニルスルホンの５１２μｌの溶液を、撹拌することによって、均質化された混合物に添加した。得られたエマルジョンをさらに１．５時間撹拌した。次いでｐＨを、撹拌しながら乳酸（水中で９０重量％）を添加することによって、９の値に調節した。得られた生成物は、白色の分散液であった。
【０１３１】
（実施例２）
ヘキシル炭酸ジエチルでの架橋微粒子の調製
ヒアルロン酸ナトリウム（HyaCare（登録商標）、Evonik Goldschmidt GmbH）４．２ｇを水性ＮａＯＨ（０．２Ｍ）６６ｇに溶かした溶液を、ハンドブレンダ（レベル１）で激しく撹拌することによって、２分で、ヘキシル炭酸ジエチル（TEGOSOFT（登録商標）DEC、Evonik Goldschmidt GmbH）２７ｇ及びポリグリセリル−４−ジイソステアレート／ポリヒドロキシステアレート／セバケート（ISOLAN（登録商標）GPS、Evonik Goldschmidt GmbH）３ｇの混合物に添加した。得られたプレエマルジョンを、レベル２のハンドブレンダで２分間均質化させた。ジビニルスルホン３５８μｌをヘキシル炭酸ジエチル３ｇに溶かした溶液を、１滴ずつ、均質化されたプレエマルジョンに添加した。得られた混合物をさらに０．５時間、５０℃の温度で撹拌した。得られた生成物は、白色の分散液であった。
【０１３２】
顕微鏡で撮影した分散液の写真（図１）は、マイクロビーズ（粒子）の球形の特徴を明瞭に示す。
【０１３３】
粒度分布は、光学的粒子寸法測定器（Accusizer、会社：Particle Sizing Systems）で決定した。粒度分布を図２に示す。
【０１３４】
（実施例３）
乳化剤としてＰＥＧ／ＰＰＧ−１０／１ジメチコーンを使用したデシルココエートでの架橋微粒子の分散液の調製
ヒアルロン酸ナトリウム（HyaCare（登録商標）、Evonik Goldschmidt GmbH）５．９ｇを水性ＮａＯＨ（０．２Ｍ）９２ｇに溶かした溶液を、ハンドブレンダ（レベル１）で激しく撹拌することによって、２分で、デシルココエート（TEGOSOFT（登録商標）DC、Evonik Goldschmidt GmbH）３８．２ｇ及びＰＥＧ／ＰＰＧ−１０／１ジメチコーン（ABIL（登録商標）EM 90、Evonik Goldschmidt GmbH）４．２ｇの混合物に添加した。得られたプレエマルジョンを、レベル２のハンドブレンダで２分間均質化させた。ジビニルスルホン４５０μｌをデシルココエート３．８ｇに溶かした溶液を、１滴ずつ、均質化されたプレエマルジョンに添加した。得られた混合物をさらに０．５時間、室温で撹拌した。得られた生成物は、白色の分散液であった。
【０１３５】
（実施例４）
乳化剤としてモノオレイン酸グリセリルを使用したジエチルヘキシルカーボネートでの架橋微粒子の分散液の調製
調製は、実施例２に従って行った。モノオレイン酸グリセリル（TEGIN（登録商標）O V、Evonik Goldschmidt GmbH）３ｇを、ポリグリセリル−４−ジイソステアレート／ポリヒドロキシステアレート／セバケート３ｇの代わりに使用した。
【０１３６】
（実施例５）
ヒアルロン酸ナトリウムの蛍光標識架橋微粒子の調製
ヒアルロン酸ナトリウム（HyaCare（登録商標）、Evonik Goldschmidt GmbH）５．６ｇ及びフルオレシン０．５ｍｇを水性ＮａＯＨ（０．２Ｍ）８８ｇに溶かした溶液を、ハンドブレンダ（レベル１）で激しく撹拌することによって、２分で、ヘキシル炭酸ジエチル（TEGOSOFT（登録商標）DEC、Evonik Goldschmidt GmbH）３６ｇ及びポリグリセリル−４ジイソステアレート／ポリヒドロキシステアレート／セバケート（ISOLAN（登録商標）GPS、Evonik Goldschmidt GmbH）４ｇの混合物に添加した。得られたプレエマルジョンを、レベル２のハンドブレンダで２分間均質化させた。ジビニルスルホン４８６μｌをヘキシル炭酸ジエチル４ｇに溶かした溶液を、１滴ずつ、均質化されたプレエマルジョンに添加した。得られた混合物をさらに０．５時間、５０℃の温度で撹拌した。得られた生成物は、薄緑色の分散液であった。
【０１３７】
（実施例６）
ブタ皮膚への架橋ヒアルロン酸ナトリウム微粒子の分散液の適用
凍結させたブタ皮膚約２ｃｍ２を解凍し、後で剃毛した。実施例５の分散液０．１ｍｌを、スパチュラを使用してブタ皮膚に塗り拡げた。ブタ皮膚を、後で蛍光顕微鏡（位相差顕微鏡、会社：Leica、倍率１０×）で検査した。この顕微鏡画像の写真を図３に示す。蛍光粒子が皮膚の皺に蓄積されている状態を、明瞭に見ることができる。
【０１３８】
（実施例７）
中和のためにイソステアリン酸を使用した架橋微粒子の分散液の調製
調製は、実施例１に従い行った。イソステアリン酸（分散液の全重量に対して１重量％）を乳酸の代わりに使用して、ｐＨを調節した。得られた生成物は、白色の分散液であった。
【０１３９】
（実施例８）
ヒアルロン酸ナトリウムの蛍光修飾
ヒアルロン酸ナトリウム（HyaCare（登録商標））１０ｇを、トルエン１００ｍｌに懸濁した。ＤＴＡＦ（５−（４，６−ジクロロ−ｓ−トリアジン−２−イルアミノ）フルオレセイン塩酸塩、Sigma）０．０２５ｇをエタノール１５ｍｌに溶解し、この溶液をＨｙａＣａｒｅ（登録商標）懸濁液に添加した。懸濁液を室温で１６時間撹拌し、濾過した。固体残留物をエタノールで洗浄し、減圧下で乾燥した。
【０１４０】
（実施例９）
蛍光標識粒子分散液の調製
実施例９の蛍光ヒアルロン酸ナトリウムを０．２Ｍ ＮａＯＨに溶かした６（重量）％溶液１１６ｇを、デシルココエート（TEGOSOFT（登録商標）DC）４３．３ｇ及びＩＳＯＬＡＮ（登録商標）ＧＰＳ ４．８ｇの混合物に、撹拌しながら（ハンドブレンダ、レベル１）添加した。エマルジョンを、ハンドブレンダ（レベル２）で３分間均質化した。ジビニルスルホン５７２μｇを、デシルココエート４．８ｇ及びエタノール５ｍｌの混合物に加えたものを、撹拌しながらエマルジョンに添加した。撹拌は、室温で１時間継続し、その後、イソステアリン酸８ｇを撹拌しながら添加した。得られた分散液は、ｐＨ９を有していた。
【０１４１】
（実施例１０）
ＨＡ粒子を含有する化粧品配合物
実施例９で得られた蛍光標識粒子の分散液を、化粧品クリームに配合した。このクリームの組成（単位：重量％）を表１に示す。
【０１４２】
【表１】
【０１４３】
（実施例１１）
架橋ヒアルロン酸を含有するクリーム
以下の成分（表２）を撹拌しながら混合することによって、０．１１％架橋ヒアルロン酸（CL-HA）を含有するクリームを生成する。
【０１４４】
【表２】
【０１４５】
この配合物を、１２名のパネリストの前腕内側に適用する。適用前と、２及び７時間後に、デジタルカメラ（Visioscan VC 98、Courage & Khazaka、Cologne、Germany）を使用して前腕内側の写真を撮影する。この写真は、デジタルの白黒写真であり、２５６のグレイレベルに分割されている。グレイレベル分布に基づいて、ソフトウェア（Visioscan VC 98に装備されている）が、鱗状態、粗さ、表面、体積、又は肌理のパラメータなどの種々の皮膚パラメータを計算する。
【０１４６】
１．皮膚の鱗状態
グレイレベル分布に基づいて、ソフトウェアが、光画素の割合を計算し、それによって、パラメータである皮膚の鱗状態を評価する。以下の表３は、鱗状態の低減を示す。
【０１４７】
【表３】
【０１４８】
適用後２時間で、対照領域（未処理）並びにビヒクル又はＣＬ−ＨＡで処理した領域は、皮膚の鱗状態が低減したことを示す。この効果は、対照領域及びビヒクルで処理した領域では７時間後に低下したが、ＣＬ−ＨＡによる鱗状態の低減は、７時間後も続いたままである。皮膚の鱗状態の試験結果を示すグラフを、図４に示す。
【０１４９】
２．表面及び体積
パラメータである表面は、皮膚の全表面を計算する。これは、皺の数が少なくなるほど又は皺が小さくなるほど、表面が小さくなるべきであることを意味する。パラメータである体積は、皺を充填するのに必要な体積を指す。両方のパラメータは、皺の深さ及び数が試験配合物によって減少する場合、低下することになる。このような理由で、試験配合物で処理した後の両方のパラメータの変化の合計が、計算される：
合計表面−体積＝Δ表面＋Δ体積［％］。
【０１５０】
結果を表４に示す。
【０１５１】
【表４】
【０１５２】
適用後２時間で、表面及び体積は、ビヒクルとＣＬ−ＨＡを含有する配合物とによって減少する。７時間後、このプラスの効果は、ビヒクルで処理した皮膚で消失するのに対し、この効果は、ＣＬ−ＨＡで処理した試験領域でさらに改善された。表面及び体積試験から得た結果を示すグラフを、図５に示す。
【０１５３】
３．粗さパラメータＲ１〜Ｒ５
粗さパラメータＲ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、及びＲ５は、金属産業に由来する。これらのパラメータは、ＤＩＮ ４７６２〜４７６８で定義された粗さパラメータＲｔ、Ｒｍ、Ｒｚ、Ｒｐ、及びＲａに対応する。これらは、深く微細な皺の深さを指す。全ての粗さパラメータは、皺の深さが減少した場合に低下することになる。このような理由で、パラメータは下記の通りまとめられる：
合計Ｒ１〜Ｒ５＝ΔＲ１＋ΔＲ２＋ΔＲ３＋ΔＲ４＋ΔＲ５
【０１５４】
以下の表５は、合計Ｒ１〜Ｒ５の結果を示す。
【０１５５】
【表５】
【０１５６】
適用後２時間で、ビヒクルとＣＬ−ＨＡを含有する試験配合物とは皮膚の粗さを低減させる。この効果は、７時間後にビヒクルで処理した試験領域で消失するのに対し、ＣＬ−ＨＡで処理した試験領域では、その効果がほぼ一定のままである。粗さパラメータ試験の結果を示すグラフを、図６に示す。
【０１５７】
４．肌理パラメータ
肌理パラメータ（エネルギーNRJ、エントロピーENT、均質性HOM、コントラストCONT、及び分散VAR）は、隣接する画素の色差を指す。これらのパラメータは、皮膚の色調がどれくらい均一かを示し、即ち、肌理パラメータの改善は、改善された皮膚外観と連関することを意味する。このパラメータは、以下の方程式を使用してまとめられる：
合計肌理−パラメータ＝ΔＮＲＪ＋ΔＥＮＴ＋ΔＨＯＭ−ΔＣＯＮＴ−ΔＶＡＲ
【０１５８】
以下の表６は、合計肌理−パラメータの結果を示す。
【０１５９】
【表６】
【０１６０】
適用後２時間で、ビヒクル並びにＣＬ−ＨＡを有する試験配合物は、肌理パラメータを改善する。ＣＬ−ＨＡで処理した試験領域では、この効果は７時間後も持続したままであるのに対し、この効果は、ビヒクルで処理した皮膚では低下する。肌理パラメータ試験の結果を示すグラフを、図７に示す。
【０１６１】
このように、本発明のマイクロビーズは、皺及び皮膚の鱗状態を低減させるのに、また、皮膚の肌理パラメータを改善してより均一は皮膚の色調をもたらすのに、有効である。
【技術分野】
【０００１】
本発明は、架橋ヒアルロン酸マイクロビーズを生成する方法に関し、前記方法は：
（a）ヒアルロン酸又はその塩を含む水性アルカリ溶液を提供する工程と；
（b）有機中水又は油中水（Ｗ／Ｏ：Ｗａｔｅｒ ｉｎ Ｏｉｌ）エマルジョンが形成されるように、有機又は油相中で、工程（a）の混合溶液から、所望のサイズを有する微小液滴を形成する工程であって、使用される油相の量が、油相及び水の合計に対して２０〜５０重量％未満のものである工程と；
（c）Ｗ／Ｏエマルジョンを連続的に撹拌しながら、エマルジョンに架橋剤を含む溶液を添加し、それによって、ヒアルロン酸と架橋剤との反応が生じて架橋ヒアルロン酸マイクロビーズが得られる工程と；
（d）任意選択により、工程（c）で得られた架橋ヒアルロン酸マイクロビーズの分散液を後処理する工程と
を含む。
【背景技術】
【０００２】
本発明は、化粧品及びパーソナルケアの適用分野で使用される修飾ヒアルロン酸（ＨＡ）、特にエマルジョン中の架橋ＨＡを調製するための方法に関する。
【０００３】
ヒアルロン酸（ＨＡ）は、非硫酸化グリコサミノグリカンの種類に属する、天然の線状炭水化物ポリマーである。ヒアルロン酸は、β−１，３−Ｎ−アセチルグルコサミン及びβ−１，４−グルクロン酸反復二糖単位であって分子量（ＭＷ）が最大６ＭＤａであるものからなる。ＨＡは、ヒアリン軟骨、滑膜関節液と、真皮及び表皮の両方の皮膚組織に存在する。ＨＡは、脊椎動物の結合組織を含む天然組織から、ヒト臍帯から、及び鶏冠から抽出することができる。しかし今日では、感染物質が移動する潜在的リスクを最小限に抑えるために、また生成物の均一性、品質、及び利用可能性を増大させるために、微生物法で調製することが好ましい（ＷＯ０３／０１７５９０２、Novozymes）。
【０００４】
体内におけるＨＡの数多くの役割が明らかにされている。ＨＡは、皮膚や腱、筋肉、軟骨などの多くの組織の細胞のメカニズムの支援として、生物学的有機体で重要な役割を演ずる。ＨＡは、組織の湿潤や潤滑など、重要な生物学的プロセスに関与する。ＨＡは、癒着、発生、細胞運動、癌、血管新生、及び創傷治癒など、数多くの生理学的機能の役割を有するとも考えられる。ＨＡの独特の物理的及び生物学的性質（粘弾性、生体適合性、生分解性を含む）により、ＨＡは、化粧品、眼科、リウマチ、薬物送達、創傷治癒、及び組織工学における広範な現行の及び開発中の適用例で用いられる。これら適用例のいくつかにおけるＨＡの使用は、ＨＡが室温で、即ち約２０℃で水に可溶であり、体内ではヒアルロニダーゼにより素早く分解され、生体材料に加工し難いことによって制限されている。したがって、ＨＡの物理的及び機械的性質とｉｎ ｖｉｖｏ滞留時間とを改善するために、ＨＡの架橋が導入されている。
【０００５】
米国特許第４，５８２，８６５号（Biomatrix Inc.）は、架橋剤としてジビニルスルホン（ＤＶＳ）を使用した、単独の、又はその他の親水性ポリマーと混合したＨＡの架橋ゲルの調製について記述している。多官能性エポキシ化合物を使用した架橋ＨＡあるいはその塩の調製は、ＥＰ０１６１８８７Ｂ１に開示されている。共有結合を通してＨＡを架橋するのに用いられてきた、その他の二官能性又は多官能性試薬には、ホルムアルデヒド（米国特許第４，７１３，４４８号、Biomatrix Inc.）、ポリアジリジン（ＷＯ０３／０８９４７６Ａ１、Genzyme Corp.）、Ｌ−アミノ酸又はＬ−アミノエステル（ＷＯ２００４／０６７５７５、Biosphere S.P.A.）が含まれる。カルボジイミドも、ＨＡを架橋することが報告されている（米国特許第５，０１７，２２９号、Genzyme Corp.;米国特許第６，０１３，６７９号、Anika Research Inc.）。脂肪族アルコールを用いたＨＡの全部あるいは部分架橋エステル、並びにそのような部分エステルと無機又は有機塩基との塩は、米国特許第４，９５７，７４４号に開示されている。ＨＡ鎖と、塩酸１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド（「ＥＤＡＣ」）及びアジピン酸ジヒドロアジドとの、水／アセトン混合物中での架橋は、ＵＳ２００６／００４０８９２（University of North Texas）に開示された。ＷＯ２００６／５６２０４（Novozyme A/S）は、架橋剤としてジビニルスルホン（ＤＶＳ）を使用して、ＨＡの架橋ゲルを調製するための方法も開示している。
【０００６】
ＷＯ２００８／１０００４４は、ヒアルロン酸を架橋することによってヒアルロン酸ヒドロゲルナノ粒子を調製する方法について記述しており、この方法は、ｉ）内部に溶解した界面活性剤を含有する油相と、ｉｉ）塩基性溶液に溶解したヒアルロン酸及び水溶性架橋剤を含有する水相とを混合して、ｗ／ｏエマルジョンを形成するようにする工程と、ｗ／ｏエマルジョン中のヒアルロン酸を架橋する工程とを含み、この油相は、ドデカン、ヘプタン、又はセチルエチルヘキサノエートを含むものである。
【０００７】
ＥＰ０８３０４１６（米国特許第６，２１４，３３１号と同等）は、ヒアルロン酸、硫酸コンドロイチン、硫酸デルマタン、硫酸ケラタン、セルロース、キチン、キトサン、アガロース、カラギナン、カードラン、デキストラン、エマルサン、ゲラン、キサンタン、ポリ（エチレンオキシド）、ポリ（ビニルアルコール）、ポリ（Ｎ−ビニルピロリドン）、タンパク質、糖タンパク質、ペプチドグリカン、プロテオグリカン、リポ多糖、又はこれらの組合せから選択される水溶性ポリマーと、水性媒体とを含む水性ポリマー溶液を、油乳化剤中に水を含有する油ベースに添加し、この混合物を撹拌してポリマー液滴を含有するエマルジョンを形成し、架橋剤によってその場でポリマー液滴を架橋し、それによって架橋ポリマー粒子を形成することが可能な、粒子の直径が２１２μｍ未満でありかつ粒子の少なくとも８０％が球状である、架橋水溶性ポリマー粒子製剤の調製について記述している。ヒアルロン酸微小球を生成するために、架橋剤を、トルエン中の水性ヒアルロン酸のエマルジョンに直接添加する。架橋剤は、まず水溶液のｐＨをｐＨ１１に調節することによって不活性化され、次いでｐＨを７〜８に低下させることによって活性化される。油相として、トルエン、ｏ−キシレン、又はイソオクタンを使用することが好ましい。水相と油相との重量比は、約１対１である。
【０００８】
Ｎｕｒｅｔｔｉｎ Ｓａｈｉｎｅｒ及びＸｉｎｑｉａｏ Ｊａｉ（Turk J Chem, 32（2008）, 397-409）は、油相としてイソオクタンを使用した、ヒアルロン酸ベースのサブミクロンのヒドロゲル粒子の調製について述べている。エマルジョンを調製するために、水性ヒアルロン酸溶液０．５４ｍｌをイソオクタン１５ｍｌに添加した結果、水相と油相との重量比は１０対１よりも高くなる。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００９】
上述の内容から、架橋したＨＡ−マイクロビーズを調製するためのいくつかのプロセスが知られていることが、明らかである。知られているプロセスで油相として使用される成分のいくつかは、化粧品又はパーソナルケア用組成物の成分として使用するのに適していない。大量の水又は油相が、マイクロビーズを精製するために使用される。したがって、知られている方法の１つ又は複数の欠点を示さない、架橋マイクロビーズを調製する代替方法を提供することが求められている。
【課題を解決するための手段】
【００１０】
驚くべきことに、本発明者らは、
（a）ヒアルロン酸又はその塩を含む水性アルカリ溶液を提供する工程と；
（b）有機中水又は油中水（Ｗ／Ｏ）エマルジョンが形成されるように、有機又は油相中で、工程（a）の混合溶液から、所望のサイズを有する微小液滴を形成する工程であって、使用される油相の量が、油相及び水の合計に対して２０〜５０重量％未満のものである工程と；
（c）Ｗ／Ｏエマルジョンを連続的に撹拌しながら、エマルジョンに架橋剤を含む溶液を添加し、それによって、ヒアルロン酸と架橋剤との反応が生じて架橋ヒアルロン酸マイクロビーズが得られる工程と；
（d）任意選択により、工程（c）で得られた架橋ヒアルロン酸マイクロビーズの分散液を後処理する工程と
を含む、架橋ヒアルロン酸マイクロビーズの生成方法が、従来技術の方法から明らかにされた問題を解決することを見出した。
【００１１】
本発明の方法には、最小限に抑えられた廃水又は廃油相が生成されるという利点がある。パーソナルケア又は化粧品の用途で許容される皮膚軟化剤を使用することによって、得られる本発明のマイクロビーズは、皮膚軟化剤として炭水化物を使用したときに生じ得る皮膚刺激の問題を全く示さない。本発明の方法には、化粧品又はパーソナルケアの配合物を形成する前に、マイクロビーズから、油相として使用される成分を完全に除去する必要がないという利点がある。段階（c）から得られた分散液を、引き続き中和させ、あるいは中和させることなしに、直接使用することも可能である。
【００１２】
したがって、本発明の第１の態様では、
（a）ヒアルロン酸又はその塩を含む水性アルカリ溶液を提供する工程と；
（b）有機中水又は油中水（Ｗ／Ｏ）エマルジョンが形成されるように、有機又は油相中で、工程（a）の混合溶液から、所望のサイズを有する微小液滴を形成する工程であって、使用される油相の量が、油相及び水の合計に対して２０〜５０重量％未満のものである工程と；
（c）Ｗ／Ｏエマルジョンを連続的に撹拌しながら、エマルジョンに架橋剤を含む溶液を添加し、それによって、ヒアルロン酸と架橋剤との反応が生じて架橋ヒアルロン酸マイクロビーズが得られる工程と；
（d）任意選択により、工程（c）で得られた架橋ヒアルロン酸マイクロビーズの分散液を後処理する工程と
を含む、架橋ヒアルロン酸マイクロビーズの生成方法が提供される。
【００１３】
第２の態様では、本発明は、好ましくはジビニルスルホンと架橋したヒアルロン酸又はその塩を含むマイクロビーズに関する。これらのマイクロビーズは、好ましくは、第１の態様の方法によって作製され、あるいは得られる。
【００１４】
第３の態様では、本発明は、第２の態様で定義されたマイクロビーズを含む組成物に関する。
【００１５】
本発明の第４の態様は、保湿剤、パーソナルケア、ヘアケア、スキンケア、又は化粧品組成物を製造するための、本発明の第２の態様によるマイクロビーズ、又は本発明の第３の態様による組成物、又は本発明の第１の態様による方法によって得られた分散液の使用に関する。
【００１６】
本発明のその他の態様は、ビヒクルとして第２の態様で定義されたマイクロビーズの（有効量）を、好ましくはこのマイクロビーズに封入されたパーソナルケア用活性剤と共に含むパーソナルケア用組成物、第２の態様で定義されたマイクロビーズ又は第３の態様で定義された組成物の有効量を活性成分として含む化粧物品、第２の態様で定義されたマイクロビーズ又は第３の態様で定義された組成物を含む衛生物品に関し、好ましくはこの物品は、おむつ、衛生用タオル、手術用スポンジ、創傷治癒スポンジ、又はバンドエイドもしくはその他の創傷ドレッシング材料に含まれる部分である。
【００１７】
いくつかの態様は、保湿剤又は化粧品を製造するための、又は審美的治療での、第２の態様で定義されたマイクロビーズ又は第３の態様で定義された組成物の使用に関する。
【図面の簡単な説明】
【００１８】
【図１】その適用範囲が記述全体及び特許請求の範囲から明らかな本発明を、実施例に特定される実施形態に限定することなく、一例として本発明を示す図である。実施例２により得られた分散液の顕微鏡写真を示す。マイクロビーズ（粒子）の球状の特徴がわかる。
【図２】その適用範囲が記述全体及び特許請求の範囲から明らかな本発明を、実施例に特定される実施形態に限定することなく、一例として本発明を示す図である。実施例２で得られた粒子の粒度分布のグラフを示す。
【図３】その適用範囲が記述全体及び特許請求の範囲から明らかな本発明を、実施例に特定される実施形態に限定することなく、一例として本発明を示す図である。ブタの皮膚の顕微鏡写真を示す。ブタの皮膚は、実施例７により処理した。
【図４】実施例１１で決定された、皮膚パラメータである鱗状態を示す図である。
【図５】実施例１１で決定された、皮膚パラメータである表面及び体積を示す図である。
【図６】実施例１１で決定された、皮膚パラメータである粗さを示す図である。
【図７】実施例１１で決定された、皮膚パラメータである肌理を示す図である。
【発明を実施するための形態】
【００１９】
（定義）
「ヒアルロン酸（hyaluronic acis）」という用語は、文献では、細胞表面、脊椎動物の結合組織の塩基性細胞外物質、関節の滑液、眼の眼球内液、ヒト臍帯組織、及び鶏冠で自然に生ずる、Ｄ−グルクロン及びＮ−アセチル−Ｄ−グルコサミン酸の残基によって構成された種々の分子量の酸性多糖を意味するのに使用される。
【００２０】
「ヒアルロン酸（hyaluronic acid）」という用語は、実際に、通常は、様々な分子量の交互に配されたＤ−グルコン及びＮ−アセチル−Ｄ−グルコサミン酸残基を有する一連の多糖全て、又はその分解画分をも意味するとして使用され、したがって、「ヒアルロン酸（hyaluronic acids）」という複数を示す用語を使用することがより正しいと考えられる。しかし、単数を示す用語が、この記述においては全て同じに使用することにし；さらに、「ＨＡ」という略称を、この集合的な用語の代わりに頻繁に使用することにする。
【００２１】
「ヒアルロン酸」は、本明細書では、β−１，４及びβ−１，３−グリコシド結合を交互に配することによって一緒に結合されたＮ−アセチルグルコサミン（ＧｌｃＮＡｃ）及びグルクロン酸（ＧｌｃＵＡ）の反復二糖単位で構成された非硫酸化グリコサミノグリカンと定義される。ヒアルロン酸は、ヒアルロナン、ヒアルロネート、又はＨＡとしても知られる。ヒアルロナン及びヒアルロン酸という用語は、本明細書では同義に使用される。
【００２２】
「ヒアルロン酸」又は「ＨＡ」という用語は、本発明では、他に明白に記述されない限り、ヒアルロン酸又はその塩を示すのに使用される。
【００２３】
「マイクロビーズ」という用語は、本明細書では、マイクロドロップ、微小液滴、微粒子、微小球、ナノビーズ、ナノドロップ、ナノ液滴、ナノ粒子、粒子、ナノスフィアなどと同義に使用される。
【００２４】
ヒアルロン酸の含量は、変更を加えたカルバゾール法（Bitter及びMuir, 1962, Anal Biochem. 4: 330-334）により決定することができる。さらに、ヒアルロン酸の数平均分子量は、Ueno et al., 1988, Chem.Pharm.Bull. 36, 4971-4975; Wyatt, 1993, Anal.Chim.Acta 272: 1-40; Wyatt Technologies, 1999, "Light Scattering University DAWN Course Manual"及び“Dawn EOS Manual” Wyatt Technology Corporation, Santa Barbara, Californiaに記載されているものなど、当技術分野で標準的な方法を使用して決定することができる。
【００２５】
本発明のいくつかの態様は、数ある構成成分の中でも、架橋ＨＡ生成物（マイクロビーズ）及び活性成分の（有効）量を含む、様々な組成物及び配合物に関し、好ましくはこの活性成分は、皮膚科用又は化粧品用活性剤；パーソナルケアとして許容される担体、賦形剤、又は希釈剤、好ましくは水溶性賦形剤、最も好ましくはラクトースである。
【００２６】
さらに、本発明の態様は、第１の態様で定義された生成物又は上記態様及び実施形態で定義された組成物を含む物品、例えば一般に、化粧物品、衛生物品、又はパーソナルケア用物品に関する。最後の態様では、本発明は、第１の態様で定義された生成物又は本発明のその他の態様及び実施形態で定義された組成物を含む、化粧用カプセル又はマイクロカプセルに関する。
【００２７】
（発明の詳細な説明）
架橋ヒアルロン酸マイクロビーズを得る本発明の方法について、次に詳細に記述する。
【００２８】
本発明の、架橋ヒアルロン酸マイクロビーズを生成する方法は、
（a）ヒアルロン酸又はその塩を含む水性アルカリ溶液を提供する工程と；
（b）有機中水又は油中水（Ｗ／Ｏ）エマルジョンが形成されるように、有機又は油相中で、工程（a）の混合溶液から、所望のサイズを有する微小液滴を形成する工程であって、使用される油相の量が、油相及び水の合計に対して２０〜５０重量％未満のものである工程と；
（c）エマルジョンに架橋剤を含む溶液を添加し、それによって、ヒアルロン酸と架橋剤との反応が生じて架橋ヒアルロン酸マイクロビーズが得られる工程と；
（d）任意選択により、架橋ヒアルロン酸マイクロビーズの分散液を後処理する工程と
を含む。
【００２９】
工程（a）：
ヒアルロン酸の供給源は、重要ではない。雄鶏のとさかは、ヒアルロナンの有意な商業的供給源である。微生物は、代替の供給源である。米国特許第４，８０１，５３９号は、報告されたヒアルロン酸の収量がリットル当たり約３．６ｇである、ストレプトコッカス・ズーエピデミカス（Streptococcus zooepidemics）の株を含むヒアルロン酸を調製するための発酵法を開示する。欧州特許Ｎｏ．ＥＰ０６９４６１６は、報告されたヒアルロン酸の収量がリットル当たり約３．５ｇである、改善されたストレプトコッカス・ズーエピデミカスの株を使用した発酵プロセスを開示する。その全体が本明細書に組み込まれるＷＯ０３／０５４１６３（Novozymes）に開示されるように、ヒアルロン酸又はその塩は、例えばグラム陽性バチルス（Bacillus）宿主で、組換えにより生成することができる。
【００３０】
ヒアルロナンシンターゼは、脊椎動物、病原菌、及び藻類ウイルスから得られた（DeAngelis,P.L., 1999, Cell.Mol.Life Sci. 56: 670-682）。ＷＯ９９／２３２２７は、ストレプトコッカス・エキシミリス（Streptococcus equisimilis）からのＩ族ヒアルロネートシンターゼを開示する。ＷＯ９９／５１２６５及びＷＯ００／２７４３７は、パスツレラ・ムルトシダ（Pasturella multocida）からのＩＩ族ヒアルロネートシンターゼについて記述する。Ｆｅｒｒｅｔｔｉらは、ヒアルロネートシンターゼ、ＵＤＰグルコースデヒドロゲナーゼ、及びＵＤＰ−グルコースピロホスホリラーゼをそれぞれコード化する３種の遺伝子、ｈａｓＡ、ｈａｓＢ、及びｈａｓＣからなるストレプトコッカス・ピオゲネス（Streptococcus pyogenes）のヒアルロナンシンターゼオペロンを開示する（Proc.Natl.Acad.Sci.USA. 98, 4658-4663, 2001）。ＷＯ９９／５１２６５は、ストレプトコッカス・エキシミリス・ヒアルロナンシンターゼのコード領域を有する核酸セグメントについて記述する。
【００３１】
組換えバチルス細胞のヒアルロナンは、培地に対して直接発現し、単純なプロセスを使用して培地からヒアルロナンを単離することができる。まず、バチルス細胞及び細胞砕片を培地から物理的に除去する。望む場合には培地を最初に希釈して、培地の粘度を低下させてもよい。遠心分離や精密濾過など、培地から細胞を除去するための多くの方法が、当業者に知られている。望む場合には、残りの上澄みをその後限外濾過などによって濾過して、小分子汚染物質を濃縮しヒアルロナンから除去してもよい。細胞及び細胞砕片の除去後、培地からのヒアルロナンの簡単な沈殿を、知られているメカニズムによって行う。塩、アルコール、又は塩とアルコールとの組合せを使用して、濾液からヒアルロナンを沈殿させてもよい。沈殿物にまで変性させると、ヒアルロナンを、物理的手段によって溶液から容易に単離することができる。ヒアルロナンは、凍結乾燥や噴霧乾燥など、当技術分野で知られている蒸発技法を使用することによって、濾液溶液から乾燥させるか、あるいは濃縮されることができる。
【００３２】
使用されるヒアルロン酸又はその塩は、好ましくはグラム陽性菌又は宿主細胞によって、より好ましくはバチルス属の細菌によって、組換え生成される場合に有利になりうる。バチルス宿主細胞で組換えによりヒアルロン酸をどのように生成するかは、既に記述されており、その全体が本明細書に組み込まれているＷＯ２００３／０５４１６３、Ｎｏｖｏｚｙｍｅｓ Ａ／Ｓを参照されたい。このように、好ましい実施形態では、本発明は、ヒアルロン酸又はその塩をバチルス宿主細胞で組換えにより生成する、第１の態様の方法に関する。
【００３３】
宿主細胞は、ヒアルロン酸の組換え生成に適した任意のバチルス細胞であってもよい。バチルス宿主細胞は、野生型バチルス細胞又はその変異体であってもよい。本発明を実施するのに有用なバチルス細胞には、限定するものではないがバチルス・アガルデルヘンス（Bacillus agaraderhens）、バチルス・アルカロフィルス（Bacillus alkalophilus）、バチルス・アミロリケファシェンス（Bacillus amyloliquefaciens）、バチルス・ブレビス（Bacillus brevis）、バチルス・サーキュランス（Bacillus circulans）、バチルス・クラウシー（Bacillus clausii）、バチルス・コアギュランス（Bacillus coagulans）、バチルス・フィルムス（Bacillus firmus）、バチルス・ラウタス（Bacillus lautus）、バチルス・レンタス（Bacillus lentus）、バチルス・リケニフォルミス（Bacillus licheniformis）、バチルス・メガトリウム（Bacillus megatrium）、バチルス・プミルス（Bacillus pumilus）、バチルス・ステアロサーモフィルス（Bacillus stearothermophilus）、バチルス・サブチリス（Bacillus subtilis）、及びバチルス・スリンギエネシス（Bacillus thuringiensis）細胞が含まれる。組換え発現に特に適応させた変異体バチルス・サブチリス細胞は、ＷＯ９８／２２５９８に記載されている。非包封バチルス細胞が、本発明で特に有用である。
【００３４】
好ましい実施形態では、Ｂａｃｉｌｌｕｓ宿主細胞は、Ｂａｃｉｌｌｕｓ ａｍｙｌｏｌｉｑｕｅｆａｃｉｅｎｓ、Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｌａｕｓｉｉ、Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｌｅｎｔｕｓ、Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｌｉｃｈｅｎｉｆｏｒｍｉｓ、Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｔｅａｒｏｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｕｓ、又はＢａｃｉｌｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌｉｓ細胞である。より好ましい実施形態では、Ｂａｃｉｌｌｕｓ細胞は、Ｂａｃｉｌｌｕｓ ａｍｙｌｏｌｉｑｕｅｆａｃｉｅｎｓ細胞である。別のより好ましい実施形態では、Ｂａｃｉｌｌｕｓ細胞はＢａｃｉｌｌｕｓ ｃｌａｉｓｉｉ細胞である。別のより好ましい実施形態では、Ｂａｃｉｌｌｕｓ細胞はＢａｃｉｌｌｕｓ ｌｅｎｔｕｓ細胞である。別のより好ましい実施形態では、Ｂａｃｉｌｌｕｓ細胞はＢａｃｉｌｌｕｓ ｌｉｃｈｅｎｉｆｏｒｍｉｓ細胞である。別のより好ましい実施形態では、Ｂａｃｉｌｌｕｓ細胞はＢａｃｉｌｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌｉｓ細胞である。最も好ましい実施形態では、Ｂａｃｉｌｌｕｓ宿主細胞がＢａｃｉｌｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌｉｓ Ａ１６４Δ５（米国特許第５，８９１，７０１号参照）又はＢａｃｉｌｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌｉｓ １６８Δ４である。
【００３５】
ヒアルロン酸は、それ自体を使用することができ、又はヒアルロン酸の塩を使用することができる。ヒアルロン酸の塩、好ましくは無機塩を使用することが有利になりうる。本発明で有用な、好ましいヒアルロン酸の塩は、ヒアルロン酸ナトリウム、ヒアルロン酸カリウム、ヒアルロン酸アンモニウム、ヒアルロン酸カルシウム、ヒアルロン酸マグネシウム、ヒアルロン酸亜鉛、又はヒアルロン酸コバルトである。
【００３６】
ヒアルロン酸の様々な分子量画分が、特定の目的に有利であると記述されてきた。本発明で使用されるヒアルロン酸又はその塩は、好ましくは、約１０，０００〜約１０，０００，０００Ｄａ、より好ましくは２５，０００〜５，０００，０００Ｄａ、さらにより好ましくは５０，０００〜３，０００，０００Ｄａの数平均分子量を有する。
【００３７】
本発明の好ましい実施形態では、ヒアルロン酸又はその塩は、３００，０００〜３，０００，０００Ｄａの範囲、好ましくは４００，０００〜２，５００，０００Ｄａ、より好ましくは５００，０００〜２，０００，０００Ｄａ、最も好ましくは５００，０００〜１，０００，０００Ｄａの範囲の数平均分子量を有する。
【００３８】
さらに別の好ましい実施形態では、ヒアルロン酸又はその塩は、１０，０００〜３００，０００Ｄａの間の範囲、好ましくは２０，０００〜２００，０００Ｄａの範囲、より好ましくは２５，０００〜１００，０００Ｄａの範囲、最も好ましくは２５，０００〜８０，０００Ｄａの範囲の数平均分子量を有する。
【００３９】
工程ａ）の水性アルカリ溶液中のヒアルロン酸又はその塩の初期濃度は、得られる架橋マイクロビーズの性質に影響を及ぼす可能性がある。したがって本発明の好ましい実施形態は、水性アルカリ溶液が、溶解したヒアルロン酸又はその塩を０．１％〜４０％（w/v）の間、好ましくは１〜１５％（w/v）、より好ましくは４〜６％（w/v）の濃度で含む、第１の態様の方法に関する。
【００４０】
水性アルカリ溶液は、ヒアルロン酸又はその塩とアルカリ水溶液とを混合することによって、得ることができる。
【００４１】
水性アルカリ溶液は、塩基、好ましくは無機塩基、より好ましくはアルカリ金属水酸化物、最も好ましくは水酸化ナトリウムを、水又は水を含有する溶液に添加することによって調製してもよい。架橋反応中のｐＨ値も、結果に影響を及ぼす。本発明の好ましい実施形態では、アルカリ溶液は、溶解したアルカリ金属水酸化物、好ましくは水酸化ナトリウムを、０．００１〜２．０Ｍの濃度で含む。
【００４２】
工程（a）の溶液は、好ましくは、１１〜１３のｐＨを、より好ましくは１１．５〜１２．５、最も好ましくは約１２のｐＨを有する。
【００４３】
工程（b）で溶液を使用する前に、工程（a）の溶液を激しく撹拌することが有利となりうる。
【００４４】
工程（b）：
工程（b）でエマルジョンを形成する場合、使用される油相の量は、油相及び水の合計に対して２０乃至＜５０重量％、好ましくは２５〜４５重量％、より好ましくは３０〜４０重量％である。
【００４５】
油層として化粧品又はパーソナルケア用配合物に使用される、標準的な皮膚軟化剤を使用することが好ましい。そのような標準的な皮膚軟化剤は、炭水化物又は芳香族炭水化物ではなく、特にトルエン、ｏ−キシレン、ドデカン、ヘプタン、イソオクタン、又はセチルエチルヘキサノエートではない。本発明で使用される好ましい皮膚軟化剤は、２〜４４個のＣ原子を有する直鎖状及び／又は分岐状モノ及び／又はジカルボン酸と、１〜２２個のＣ原子を有する直鎖状及び／又は分岐状飽和又は不飽和アルコールとのモノ又はジエステル、２〜３６個のＣ原子を有する脂肪族二官能性アルコールと、１〜２２個のＣ原子を有する一官能性脂肪族カルボン酸とのエステル化生成物、長鎖アリール酸エステル、例えば、安息香酸と直鎖状及び／又は分岐状Ｃ６〜Ｃ２２アルコールとのエステルなど、又は同様に安息香酸イソステアリルエステル、安息香酸ブチルオクチルエステル、又は安息香酸オクチルドデシルエステル、カーボネート、好ましくは直鎖状Ｃ６〜Ｃ２２脂肪アルコールカーボネート、Ｇｕｅｒｂｅｔカーボネート、例えば、炭酸ジカプリリル、炭酸ジエチルヘキシル、長鎖トリグリセリド、即ち３個の酸分子を有するグリセロールのトリプルエステルであって、その少なくとも１つがＣ６〜Ｃ１０脂肪酸に対して長鎖トリグリセリドであるもの、オレイルアルコールやオクチルドデカノールなどの直鎖状又は分岐状脂肪アルコール、ジアルキルエーテルなどの脂肪アルコールエーテル、例えばジカプリリルエーテル、シリコーン油及びワックス、例えばポリメチルシロキサン、シクロメチルシロキサン、及びアリール又はアルキル又はアルコキシ置換ポリメチルシロキサン又はシクロメチルシロキサン、６〜１８個、好ましくは８〜１０個の炭素原子を有する脂肪アルコールをベースにしたＧｕｅｒｂｅｔアルコール、直鎖状Ｃ６〜Ｃ２２脂肪酸と直鎖状Ｃ６〜Ｃ２２脂肪アルコールとのエステル、分岐状Ｃ６〜Ｃ１３カルボン酸と直鎖状Ｃ６〜Ｃ２２脂肪アルコールとのエステル、直鎖状Ｃ６〜Ｃ２２脂肪酸と分岐状Ｃ８〜Ｃ１８アルコール、特に２−エチルヘキサノール又はイソノナノールとのエステル、分岐状Ｃ６〜Ｃ１３カルボン酸と分岐状アルコール、特に２−エチルヘキサノール又はイソノナノールとのエステル、直鎖状及び／又は分岐状脂肪酸と多価アルコール（例えば、プロピレングリコール、ダイマージオール、又はトリマートリオールなど）及び／又はＧｕｅｒｂｅｔアルコールとのエステル、Ｃ６〜Ｃ１８脂肪酸をベースにした液体モノ／ジ／トリグリセリド混合物、Ｃ６〜Ｃ２２脂肪アルコール及び／又はＧｕｅｒｂｅｔアルコールと芳香族カルボン酸とのエステル、植物油、分岐状一次アルコール、置換シクロヘキサン、エポキシド化脂肪酸エステルとポリオールとの開環生成物、及び／又はシリコーン油、又はこれら化合物の２種以上の混合物から選択される。使用される皮膚軟化剤は、相分離せずに水と混和しないことが好ましい。
【００４６】
皮膚軟化剤及び油成分として適切なモノエステルは、例えば、１２から２２個のＣ原子を有する脂肪酸のメチルエステル及びイソプロピルエステル、例えば、ラウリン酸メチル、ステアリン酸メチル、オレイン酸メチル、エルカ酸メチル、ミリスチン酸イソプロピル、パルミチン酸イソプロピル、ステアリン酸イソプロピル、オレイン酸イソプロピルなどである。その他の適切なモノエステルは、例えば、ステアリン酸ｎ−ブチル、ラウリン酸ｎ−ヘキシル、オレイン酸ｎ−デシル、ステアリン酸イソオクチル、パルミチン酸イソノニル、イソノナン酸イソノニル、ラウリン酸２−エチルヘキシル、パルミチン酸２−エチルヘキシル、ステアリン酸２−エチルヘキシル、ステアリン酸２−ヘキシルデシル、パルミチン酸２−オクチルドデシル、オレイン酸オレイル、エルカ酸オレイル、オレイン酸エルシルと、テクニカルグレードの脂肪族アルコールカット及びテクニカルグレードの脂肪族カルボン酸の混合物から得ることが可能なエステル、例えば、１２から２２個のＣ原子を有する不飽和脂肪アルコールと１２から２２個のＣ原子を有する飽和及び不飽和脂肪酸とのエステルであり、動物及び植物脂肪から得られるようなものである。しかし、例えばホホバ油やマッコウクジラ油中に存在するような、天然に生ずるモノエステル及び蝋エステルの混合物も適切である。適切なジカルボン酸エステルは、例えば、アジピン酸ジ−ｎ−ブチル、セバシン酸ジ−ｎ−ブチル、アジピン酸ジ（２−エチルヘキシル）、コハク酸ジ（２−ヘキシルデシル）、アゼライン酸ジ−イソトリデシルである。適切なジオールエステルは、例えば、エチレングリコールジオレエート、エチレングリコールジ−イソトリデカノエート、プロピレングリコールジ−（２−エチルヘキサノエート）、ジ−イソステアリン酸ブタンジオール、ジ−カプリル酸／カプリン酸ブタンジオール、及びネオペンチルグリコールジ−カプリレートである。
【００４７】
例として、脂肪酸トリグリセリドを本明細書に挙げることができ；そのようなものとして例えば、天然の植物油、例えばオリーブ油、ヒマワリ油、大豆油、ラッカセイ油、菜種油、アーモンド油、ゴマ油、アボカド油、ヒマシ油、カカオバター、ヤシ油であるが、ココナツ油又はパーム核油の液体内容物でもあり、また、動物油、例えばサメ肝油、タラ肝油、鯨油、牛脂、及びバター脂肪など、蜜蝋やカルナバヤシ蝋、鯨蝋、ラノリン、及び牛脚油などの蝋でもあり、牛脂の液体内容物又はカプリル・カプリン酸混合物の合成トリグリセリド、テクニカルグレードのオレイン酸からのトリグリセリド、イソステアリン酸のトリグリセリド、又はパルミチン酸／オレイン酸混合物からのトリグリセリドを皮膚軟化剤（油相）として使用することができる。
【００４８】
本発明で油相として有用な好ましい皮膚軟化剤は、炭酸ジエチルヘキシル又はデシルココエート又はこれらの混合物である。
【００４９】
油相として前記皮膚軟化剤を使用することによって、この皮膚軟化剤が化粧品又はパーソナルケア用配合物を配合するのに有用である場合には、マイクロビーズ分散液から油相を除去することが必要ではなくなる。
【００５０】
エマルジョンを調製するのに、工程（a）又は工程（b）で１種又は複数の乳化剤を添加することが、助けになりうる。本発明で有用な乳化剤は、追加の構成成分として以下に列挙するものから選択することができる。
【００５１】
工程（b）で形成された微小液滴が約１ナノメートル〜１ミリメートルの範囲の数平均直径を有する場合に有利になりうる。工程（b）の微小液滴の粒度分布の最大値は、好ましくは０．１〜１００μｍの範囲、より好ましくは０．５〜１０μｍ、最も好ましくは１〜２μｍの範囲である。液滴のサイズは、使用される乳化剤の選択及び撹拌の強度によって調節することができる。所望のサイズの液滴を得るのに必要な、使用される乳化剤及び撹拌の強度の組合せは、簡単な試験シリーズによって決定することができる。液滴又はマイクロビーズのサイズは、Ａｃｃｕｓｉｚｅｒ（Accusizer 780 Optical Particle Sizer, PSS NICOMP, Santa Barbara, CAL, USA、Accusizer 780AD CW788-Nicompソフトウェアを備えるもの、V 1.68 （2000）)で決定することができる。
【００５２】
本発明で使用される好ましい乳化剤は、３〜９、好ましくは４〜６、より好ましくは約５のＨＬＢ値を有するものから選択される。好ましい乳化剤は、ポリグリセリル−４−ジイソステアレート／ポリヒドロキシステアレート／セバケート（ISOLAN（登録商標）GPS）、ＰＥＧ／ＰＰＧ−１０／１ジメチコーン（ABIL（登録商標）EM 90）、イソステアリン酸ポリグリセリル−４（ISOLAN（登録商標）GI 34）、オレイン酸ポリグリセリル−３（ISOLAN（登録商標）GO 33）、イソステアリン酸メチルグルコース（ISOLAN（登録商標）IS）、ジイソステアロイルポリグリセリル−３ダイマージリノレエート（ISOLAN（登録商標）PDI）、オレイン酸グリセリル（TEGIN（登録商標）OV）、ラウリン酸ソルビタン（TEGO（登録商標）SML）、オレイン酸ソルビタン（TEGO（登録商標）SMO V）、及びステアリン酸ソルビタン（TEGO（登録商標）SMS）から選択される。これらの好ましい乳化剤は、Ｅｖｏｎｉｋ Ｇｏｌｄｓｃｈｍｉｄｔ ＧｍｂＨから入手可能である。
【００５３】
工程（c）：
架橋剤の濃度は、得られるマイクロビーズに多大な影響を及ぼした可能性がある。その結果、本発明の好ましい実施形態は、架橋剤（ＣＡ）の重量比が、ヒアルロン酸又はその塩（ＨＡ）／架橋剤（ＣＡ）（乾燥重量）が１：１〜１００：１の間にあり、好ましくはＨＡ／ＣＡ（乾燥重量）が２：１から５０：１の間にある第１の態様の方法に関する。
【００５４】
架橋度は、好ましくは０．００１〜１の範囲であり、より好ましくは０．０１〜０．５、さらにより好ましくは約０．１である。架橋度１は、ｎ官能性のＯＨ反応性化合物１モルが、ヒアルロン酸のｎモル単糖と反応することを意味する。架橋度は、反応混合物中の未反応の架橋剤の量を分析することによって決定することができる。分析は、知られている分析方法、例えばＨＰＬＣによって行うことができる。
【００５５】
本発明の方法に適した架橋剤は、例えば、多官能性（>=2）ＯＨ反応性化合物である。適切な架橋剤の例は、ジビニルスルホン（ＤＶＳ）、又はビスエポキシド架橋技法をベースにした架橋剤であり、例えば、ＧＤＥ＝グリセロールジグリシジルエーテル又はＢＤＥ：１，４−ブタンジイルジグリシジルエーテルである。架橋剤は、ジビニルスルホン、グリセロールジグリシジルエーテル、又は１，４−ブタンジイルジグリシジルエーテルから選択されることが好ましい。本発明の最も好ましい架橋剤は、上述の重量比で好ましく使用されるジビニルスルホンである。
【００５６】
架橋剤は、直接又は溶液として添加してもよい。架橋剤が溶液として添加される場合、その架橋剤は、好ましくは油相に溶解され、好ましくは工程（b）で使用したものと同じ油相に溶解される。架橋剤は、Ｃ１〜Ｃ４アルコール、好ましくはエタノールを含む溶液として添加することが有利になりうる。架橋剤を、上述の油相及びＣ１〜Ｃ４アルコール、好ましくはエタノールを含む溶液として添加することがより有利になりうる。エタノールを含む架橋剤溶液を使用することにより、架橋剤は、微小液滴中により素早く分布し得る。架橋剤の好ましい溶液は、油相２０〜８０重量％、好ましくは４０〜６０重量％と、Ｃ１〜Ｃ４アルコール８０〜２０重量％、好ましくは４０〜６０重量％の混合物を、溶媒として含む。
【００５７】
本発明者らは、工程（c）の架橋剤及びＨＡ溶液を含む溶液を混合する間及び／又は混合した直後に撹拌する初期の期間は、満足のいくゲル化を実現することが望ましいことを見出した。したがって、架橋剤を含む溶液の添加は、撹拌しながら、好ましくは激しく撹拌しながら行われる。工程（c）で架橋剤を含む溶液を、１〜１８０分の期間、好ましくは撹拌しながら添加することが有利になりうる。架橋剤を含む溶液の前回の量を添加した後に、さらに１〜１８０分間にわたり撹拌することが好ましい場合がある。
【００５８】
ヒアルロン酸又はその塩と、架橋剤、好ましくはジビニルスルホンとの反応は、好ましくは０℃〜１００℃の温度、より好ましくは１０℃から５０℃、さらにより好ましくは２０℃から３０℃の温度で生じる。
【００５９】
本発明者らは、加熱工程が、溶液を混合した後に有益であると判断した。したがって本発明の好ましい実施形態は、工程（c）の混合溶液が、２０℃〜１００℃の範囲の温度、好ましくは２５℃〜８０℃の範囲、より好ましくは３０℃〜６０℃の範囲、最も好ましくは３５℃〜５５℃の範囲の温度に加熱され、その温度はこの範囲で、溶液を混合した後に少なくとも５分間にわたり、好ましくは少なくとも１０分、２０分、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１１０、１２０、１３０、１４０、１５０、１６０、１７０、又は最も好ましくは少なくとも１８０分間にわたり、好ましくは撹拌せずに維持される、第１の態様の方法に関する。
【００６０】
本発明の、別の好ましい実施形態では、工程（c）の反応混合物を、架橋反応が生じた後に室温で短時間、しかし連続して撹拌したまま行わせることが有利である。
【００６１】
本発明の方法の好ましい実施形態では、工程（c）の反応混合物は、反応が生じた後に少なくとも５分間にわたり、好ましくは少なくとも１０分間、２０分間、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１１０、１２０、１３０、１４０、１５０、１６０、１７０、又は最も好ましくは少なくとも１８０分間にわたり、０℃〜４０℃の範囲、好ましくは１０℃〜３０℃の範囲の温度で維持される。
【００６２】
工程（c）から得られる架橋マイクロビーズは、約１ナノメートル〜１ミリメートルの範囲の数平均直径を有することが好ましい。本発明の工程（c）の架橋マイクロビーズの粒度分布の最大値は、好ましくは、０．１〜１００μｍ、より好ましくは０．５〜１０μｍ、最も好ましくは１〜２μｍの範囲にある。
【００６３】
未反応の架橋剤をほとんど含まない、工程（c）の分散液を得ることが有利になりうる。好ましくは分散液、より好ましくはマイクロビーズは、１０重量ｐｐｍ（ｗｐｐｍ）未満、より好ましくは５ｗｐｐｍ未満を構成する。分散液中の遊離架橋剤の濃度は、未反応の架橋剤が毒物学的脅威になり得るので、この分散液が化粧品又はパーソナルケア用組成物を配合するのに直接使用される場合には特に低いものであることが必要である。したがって、未反応の架橋剤を上述の濃度で含む分散液が得られるまで、工程（c）の反応を続けることが好ましい。
【００６４】
任意選択による工程（d）
任意選択による工程ｄ）は、例えば、中和及び／又は分離工程とすることができる。
【００６５】
中和の場合、架橋マイクロビーズは直接又は分散液からの分離後に、水、水及び酸、水及び緩衝液、特に水及びリン酸緩衝液、水及び生理食塩緩衝液、又は水及びリン酸緩衝液及び生理食塩緩衝液に、少なくとも１回接触させてもよい。好ましくは、任意選択による工程（d）は、架橋マイクロビーズのｐＨを緩衝液又は酸で中和する工程を含む。多くのタイプの緩衝液又は酸は、当業者に周知のように、本発明の工程ｄ）での架橋マイクロビーズの膨潤及び中和に適していると考えられてきた。使用される酸又は酸溶液は、好ましくは、２５℃の脂肪酸液体、特に乳酸、オレイン酸、又はイソステアリン酸を含む群から選択される。水溶性の酸、例えば乳酸を、７５〜９５重量％、好ましくは８０〜９０重量％含む、酸の水性溶液を使用することが有利になりうる。好ましくは、架橋マイクロビーズを液体に、特に水性酸溶液又は水性緩衝液であってそのｐＨ値が２．０〜１０．０の範囲、好ましくは５．０〜９．５の範囲にあるものに、接触させる。中和が、マイクロビーズの分離なしに行われる場合、中和のために鉱酸を使用しないことが有利であるが、それはそのような酸が、エマルジョン／分散液の破壊をもたらす可能性があるからである。
【００６６】
好ましい適切な緩衝液は、ｐＨ値で選択され、その結果、架橋マイクロビーズは、７〜９．５のｐＨ値、好ましくは８．５〜９．５、より好ましくは約９のｐＨ値を有する。分散液（マイクロビーズを含む液体）のｐＨは、マイクロビーズのｐＨ値と本質的に同じであることが推測される。したがって、マイクロビーズのｐＨは、周知の方法によって、例えばｐＨ紙又はｐＨメータのｐＨ電極を分散液中に入れることによって、容易に決定することができる。
【００６７】
第１の態様の方法の緩衝液は、リン酸緩衝液及び／又は生理食塩緩衝液を含むことが好ましい。
【００６８】
任意選択による精製工程は、当技術分野で知られている任意の分離技法、例えば濾過、デカンテーション、及び遠心分離などを含んでもよい。好ましくは、任意選択による工程（d）は、１３，０００ダルトン未満のサイズを有する分子を自由拡散させる透析膜を使用して、脱イオン水に対して架橋マイクロビーズを透析する工程を含む精製工程である。
【００６９】
１つ又は複数の精製工程と、１つ又は複数の中和工程とを組み合わせることが有利になりうる。
【００７０】
パーソナルケア用配合物に許容される皮膚軟化剤である皮膚軟化剤を油相として使用する場合、分離又は精製工程は、必ずしも必要ではない。工程（c）から得られた分散液は、直接又は中和後に、化粧品又はパーソナルケア用組成物を配合するのに使用することができる。
【００７１】
本発明の方法により、本発明のマイクロビーズを得てもよい。本発明の好ましいマイクロビーズは、ジビニルスルホンと架橋した、ヒアルロン酸又はその塩を含む。本発明のこの好ましいマイクロビーズは、本発明の方法によって得てもよい。
【００７２】
本発明の好ましいマイクロビーズは、ほぼ球形である。本発明のマイクロビーズは、好ましくは、１ナノメートル〜１ミリメートルの間の範囲、より好ましくは０．０１〜１０００μｍ、さらにより好ましくは０．１〜１００μｍ、最も好ましくは０．５〜１０μｍの範囲で断面又は直径の分布の最大値を有する。通常、本発明のマイクロビーズは、はるかに狭い範囲の所望のサイズで作製されることになり、即ちこれらマイクロビーズは、かなり均一になる。工程（c）から得られる架橋マイクロビーズは、好ましくは、約１ナノメートルから１ミリメートルの範囲の数平均直径を有する。マイクロビーズは、好ましくは、約１００〜１，０００ナノメートルの範囲；又は１，０００ナノメートル超〜１，０００マイクロメートルの範囲の数平均直径を有する。本発明のマイクロビーズの多分散性は、好ましくは狭く、これは粒子の９５％超、好ましくは９７％超が、粒度分布の最大値の１０倍以下であることを意味している。多分散性は、上述のＡｃｃｕｓｉｚｅｒ法を用いて、単一粒子光学的寸法決定法により決定することができる。
【００７３】
本発明の好ましいマイクロビーズは、数平均分子量が約１０，０００〜約１０，０００，０００Ｄａ、より好ましくは２５，０００〜５，０００，０００Ｄａ、さらにより好ましくは５０，０００〜３，０００，０００Ｄａであるヒアルロン酸又はその塩を使用して得られる。
【００７４】
本発明の好ましい実施形態では、マイクロビーズは、３００，０００〜３，０００，０００Ｄａの範囲、好ましくは４００，０００〜２，５００，０００Ｄａ、より好ましくは５００，０００〜２，０００，０００Ｄａ、最も好ましくは５００，０００〜１，０００，０００Ｄａの範囲の数平均分子量を有するヒアルロン酸又はその塩を使用して得られる。
【００７５】
さらに別の好ましい実施形態では、マイクロビーズは、１０，０００〜３００，０００Ｄａの間の範囲、好ましくは２０，０００〜２００，０００Ｄａの範囲、より好ましくは２５，０００〜１００，０００Ｄａの範囲、最も好ましくは２５，０００〜８０，０００Ｄａの範囲の数平均分子量を有するヒアルロン酸又はその塩を使用して得られる。
【００７６】
好ましいマイクロビーズは、ヒアルロン酸の無機塩として、ヒアルロン酸ナトリウム、ヒアルロン酸カリウム、ヒアルロン酸アンモニウム、ヒアルロン酸カルシウム、ヒアルロン酸マグネシウム、ヒアルロン酸亜鉛、又はヒアルロン酸コバルトを含む。
【００７７】
本発明のマイクロビーズは、活性成分、水溶性賦形剤、及び／又は保存剤、又はその他の成分を含んでもよい。好ましくは、活性成分はパーソナルケア用活性物質である。本発明のマイクロビーズは、皮膚軟化剤、乳化剤及び界面活性剤、増粘剤／粘度調節剤／安定化剤、ＵＶ光防護フィルタ、酸化防止剤、屈水剤（又はポリオール）、固形分及び充填材、被膜形成剤、真珠光沢添加剤、デオドラント及び制汗活性化合物、防虫剤、セルフタンニング剤、保存剤、コンディショニング剤、香料、染料、生体活性化合物、ケア用添加剤、スーパーオイリング剤、保湿剤、及びそれらの内部の溶媒の群から選択される少なくとも１種の追加の成分を含んでもよい。
【００７８】
本発明のマイクロビーズは、これらマイクロビーズを含む本発明の組成物に接近できる。本発明の組成物は、皮膚軟化剤、乳化剤及び界面活性剤、増粘剤／粘度調節剤／安定化剤、ＵＶ光防護フィルタ、酸化防止剤、屈水剤（又はポリオール）、固形分及び充填材、被膜形成剤、真珠光沢添加剤、デオドラント及び制汗活性化合物、防虫剤、セルフタンニング剤、保存剤、コンディショニング剤、香料、染料、生体活性化合物、ケア用添加剤、スーパーオイリング剤、保湿剤、及び溶媒の群から選択される少なくとも１種の追加の成分を含んでもよい。追加の成分は、マイクロビーズの内部及び／又は外部にあってもよい。好ましくは追加の成分は、マイクロビーズの外側の本発明の組成物中にのみ存在する。
【００７９】
上述のように、本発明の生成物、例えばマイクロビーズ又はこれらマイクロビーズを含む組成物もしくは分散液が、その他の成分（追加の成分）も含む場合、有利になりうる。その他の成分は、本発明の生成物が組成物又は分散液である場合、マイクロビーズの内部、又はマイクロビーズの内部及び／又は外部にあってもよい。有用になりうるその他の成分は、好ましくは１種又は複数の活性成分であり、好ましくは１種又は複数のパーソナルケア用活性物質であり、特に生体活性剤、及び／又は１種又は複数の水溶性賦形剤である。
【００８０】
水溶性賦形剤は、（１種又は複数の）活性成分を安定化させる目的で含めてもよく、そのような賦形剤には、タンパク質、例えばアルブミン又はゼラチン；グリシン、アラニン、グルタミン酸、アルギニン、リシン、及びこれらの塩などのアミノ酸；グルコース、ラクトース、キシロース、ガラクトース、フルクトース、マルトース、サッカロース、デキストラン、マンニトール、ソルビトール、トレハロース、及びコンドロイチンスルフェートなどの炭水化物；リン酸塩などの無機塩；ＴＷＥＥＮ（登録商標）（ＩＣＩ）、ポリエチレングリコール、及びこれらの混合物などの界面活性剤を含めてもよい。賦形剤又は安定化剤は、生成物の０．００１〜９９重量％に及ぶ量で使用してもよい。
【００８１】
皮膚軟化剤、乳化剤及び界面活性剤、増粘剤／粘度調節剤／安定化剤、ＵＶ光防護フィルタ、酸化防止剤、屈水剤（又はポリオール）、固形分及び充填材、被膜形成剤、真珠光沢添加剤、デオドラント及び制汗活性化合物、防虫剤、セルフタンニング剤、保存剤、コンディショニング剤、香料、染料、生体活性化合物、ケア用添加剤、スーパーオイリング剤、及び溶媒の群から選択される追加の成分の好ましい例を、以下に示す。
【００８２】
追加の成分として使用することができる乳化剤又は界面活性剤は、非イオン、陰イオン、陽イオン、又は両性界面活性剤である。
【００８３】
以下の群の少なくとも１種からの化合物は、非イオン性乳化剤又は界面活性剤として用いることができる。
８から２２個のＣ原子を有する直鎖状脂肪アルコール、１２から２２個のＣ原子を有する脂肪酸、及びアルキル基中に８から１５個のＣ原子を有するアルキルフェノールへの、エチレンオキシド２から１００モル及び／又はプロピレンオキシド０から５モルの付加生成物、グリセロールへの、エチレンオキシド１から１００モルの付加生成物の、Ｃ１２／１８脂肪酸モノ及びジエステル、６から２２個の炭素原子を有する飽和及び不飽和脂肪酸の、グリセロールモノ及びジエステルとソルビタンモノ及びジエステルと、それらのエチレンオキシド付加生成物、アルキル基中に８から２２個の炭素原子を有するアルキルモノ及びオリゴグリコシドと、それらのエチレンオキシド付加生成物、ヒマシ油及び／又は水素化ヒマシ油への、エチレンオキシド２から２００モルの付加生成物、直鎖状、分岐状、不飽和又は飽和Ｃ６〜Ｃ２２脂肪酸、リシノール酸、及び１２−ヒドロキシステアリン酸と、グリセロール、ポリグリセロール、ペンタエリスリトール、ジペンタエリスリトール、糖アルコール（例えば、ソルビトール）、アルキルグルコシド（例えば、メチルグルコシド、ブチルグルコシド、ラウリルグルコシド）、及びポリグルコシド（例えば、セルロース）をベースにした部分エステル、モノ、ジ、及びトリアルキルホスフェートと、モノ、ジ、及び／又はトリ−ＰＥＧ−アルキルホスフェートと、それらの塩、例えば、ＰＥＧ／ＰＰＧ−２０／６ジメチコーン、ＰＥＧ／ＰＰＧ−２０／２０ジメチコーン、ビス−ＰＥＧ／ＰＰＧ−２０／２０ジメチコーン、ＰＥＧ−１２又はＰＥＧ−１４ジメチコーン、ＰＥＧ／ＰＰＧ−１４／４又は４／１２又は２０／２０又は１８／１８又は１７／１８又は１５／１５などの，ポリシロキサン／ポリエーテルコポリマー（ジメチコーンコポリオール）、ポリシロキサン／ポリアルキルポリエーテルコポリマー及び対応する誘導体、例えば、ラウリル又はセチルジメチコーンコポリオールなど、特にセチルＰＥＧ／ＰＰＧ−１０／１ジメチコーン（ABIL(登録商標)EM 90(Evonik Degussa)）、ＤＥ１１６５５７４によるペンタエリスリトール、脂肪酸、クエン酸、及び脂肪アルコールの混合エステル、及び／又は、６から２２個の炭素原子を有する脂肪酸、メチルグルコース、及びポリオール、例えばグリセロールやポリグリセロールなどの混合エステル、例えばグリセリルステアレートシトレート、グリセリルオレエートシトレート、及びクエン酸ジラウリルなどのクエン酸エステル。
【００８４】
陰イオン性乳化剤又は界面活性剤は、例えばカルボン酸基、硫酸基、スルホン酸基、又はリン酸基など、水に対する溶解性を与える基と、親油性基を含有することができる。皮膚が耐えられる陰イオン界面活性剤は、その多数が当業者に知られており、商業的に得ることができる。この文脈では、これらは、そのアルカリ金属、アンモニウム、又はアルカノールアンモニウム塩の形をとるアルキルスルフェート又はアルキルホスフェート、アルキルエーテル−スルフェート、アルキルエーテル−カルボキシレート、アシルサルコシネート、及びスルホスクシネート、と、そのアルカリ金属又はアンモニウム塩の形をとるアシルグルタメートとすることができる。
【００８５】
陽イオン乳化剤及び界面活性剤も、添加することができる。第４級アンモニウム化合物、特に、８から２２個のＣ原子を有する少なくとも１つの直鎖状及び／又は分岐状の飽和又は不飽和アルキル鎖を備えたものを使用することができ、特にしたがって例えば、アルキルトリメチルアンモニウムハロゲン化物などであって、例えば、塩化もしくは臭化セチルトリメチルアンモニウム又は塩化ベヘニルトリメチルアンモニウムなどであり、またさらに、ジアルキルジメチルアンモニウムハロゲン化物であって、例えば塩化ジステアリルジメチルアンモニウムなどである。
【００８６】
例えば塩化パルミトアミドプロピルトリメチルアンモニウムなどのモノアルキルアミドクアットや、対応するジアルキルアミドクアットをさらに使用することができる。
【００８７】
モノ、ジ、又はトリエタノールアミンをベースにした４級化脂肪酸エステルであってもよい、容易に生分解可能な第４級エステル化合物をさらに使用することができる。アルキルグアニジニウム塩を、陽イオン乳化剤としてさらに混合することができる。
【００８８】
穏やかな界面活性剤、即ち特に皮膚が耐えられる界面活性剤の、典型的な例は、脂肪アルコールポリグリコールエーテル−スルフェート、硫酸モノグリセリド、モノ及び／ジアルキルスルホスクシネート、脂肪酸イセチオネート、脂肪酸サルコシネート、脂肪酸タウリド、脂肪酸グルタメート、エーテル−カルボン酸、アルキルオリゴグルコシド、脂肪酸グルカミド、アルキルアミドベタイン、及び／又はタンパク質−脂肪酸縮合体であり、後者は例えば、小麦タンパク質をベースにする。
【００８９】
さらに、両性界面活性剤、例えばベタイン、アンホアセテート、又はアンホプロピオネートなど、したがって例えば、Ｎ−アルキル−Ｎ，Ｎ−ジメチルアンモニウムグリシネートなど、例えばココ−アルキルジメチルアンモニウムグリシネート、Ｎ−アシルアミノプロピル−Ｎ，Ｎ−ジメチルアンモニウムグリシネート、例えばココ−アシルアミノプロピルジメチルアンモニウムグリシネート、及び２−アルキル−３−カルボキシ−メチル−３−ヒドロキシエチルイミダゾリンであって、それぞれの場合に８から１８個のＣ原子をアルキル又はアシル基中に有する物質、及びココ−アシルアミノエチルヒドロキシエチルカルボキシメチルグリシネートを使用することが可能である。
【００９０】
両性界面活性剤の中で、Ｃ８／Ｃ１８アルキル又はアシル基とは別に、分子中に少なくとも１個の遊離アミノ基と少なくとも１個の−ＣＯＯＨ又はＳＯ３Ｈ基とを含有し、かつ内塩の形成が可能であるような、表面活性化合物を使用することが可能である。適切な両性界面活性剤の例は、Ｎ−アルキルグリシン、Ｎ−アルキルプロピオン酸、Ｎ−アルキルアミノ酪酸、Ｎ−アルキルイミノジプロピオン酸、Ｎ−ヒドロキシエチル−Ｎ−アルキルアミドプロピルグリシン、Ｎ−アルキルタウリン、Ｎ−アルキルサルコシン、２−アルキルアミノプロピオン酸、及びアルキルアミノ酢酸であって、それぞれの場合に８から１８個のＣ原子をアルキル基中に有するものである。両性界面活性剤のその他の例は、Ｎ−ココアルキルアミノプロピオネート、ココアシルアミノエチルアミノプロピオネート、及びＣ１２／１８アシルサルコシンである。
【００９１】
組成物の配合に使用される好ましい乳化剤又は界面活性剤は、マイクロビーズの生成に使用されるものと同一である。
【００９２】
適切な増粘剤は、例えば、多糖、特にキサンタンガム、グアールガム、寒天、アルギネート、及びチロースと、カルボキシメチルセルロース及びヒドロキシエチルセルロース、さらに高い分子量の、脂肪酸のポリエチレングリコールモノ及びジエステル、ポリアクリレート（例えば、Carbopols(商標)又はSynthalens(商標)）、ポリアクリルアミド、ポリビニルアルコール、及びポリビニルピロリドン、界面活性剤、例えばエトキシル化脂肪酸グリセリドなど、脂肪酸とポリオール、例えばペンタエリスリトールやトリメチロールプロパンなどとのエステル、制限された相同分布を有する脂肪アルコールエトキシレート、又はオリゴグルコシド、塩化ナトリウムや塩化アンモニウムなどの電解質である。
【００９３】
油状の相を濃化するための可能性ある増粘剤は、全て当業者に知られている増粘剤である。この文脈では、特に、硬化ヒマシ油や蜜蝋、マイクロワックスなどのワックスを挙げることができる。シリカやアルミナ、層状シリケート（例えば、ヘクトライト、ラポナイト、サポナイト）などの無機増粘剤も、さらに用いることができる。この文脈では、油状相に関するこれら無機増粘剤を、疎水的に変性させることができる。この文脈では、エアロシル、層状シリケート、及び／又は脂肪酸の金属塩、例えばステアリン酸亜鉛などを、油中水エマルジョンを濃化／安定化させるのに特に用いることができる
【００９４】
製剤は、水性界面活性剤系用の粘度調節剤として、例えば、ＮａＣｌ、ココアミドＤＥＡ／ＭＥＡやラウレス−３などの低分子量非イオン性界面活性剤、又は、ＰＥＧ−２００水素化グリセリルパルメートなどの、ポリマー性、高分子量、結合性の、高度にエトキシル化された脂肪誘導体を含むことができる。
【００９５】
用いることができるＵＶ光防護フィルタは、例えば、紫外線を吸収することが可能であり、かつ吸収されたエネルギーを、より長い波長の放射線の形で、例えば熱として再び放出することが可能な有機物質である。ＵＶＢフィルタは、油溶性又は水溶性にすることができる。挙げることができる油溶性ＵＶＢ光防護フィルタは、例えば：３−ベンジリデンカンファー及びその誘導体、例えば３−（４−メチルベンジリデン）カンファー（INCI:４−メチルベンジリデンカンファー、商標：Eusolex 6300）、４−アミノ安息香酸誘導体、例えば４−（ジメチルアミノ）−安息香酸２−メチルヘキシルエステル、４−（ジメチルアミノ）安息香酸２−エチルヘキシルエステル、及び４−（ジメチルアミノ）安息香酸アミルエステルなど、桂皮酸のエステル、例えば４−メトキシ桂皮酸２−エチルヘキシルエステル（INCI:メトキシ桂皮酸オクチル、商標：Parsol（登録商標）MCX）、４−メトキシ桂皮酸イソペンチルエステル、２−エチルヘキシル２−シアノ−３，３−ジフェニルアクリレート（INCI:オクトクリレン；商標：Uvinul N-539）など、サリチル酸のエステル、例えばサリチル酸２−エチルヘキシルエステル、サリチル酸４−イソプロピルベンジルエステル、サリチル酸ホモメチルエステルなど、ベンゾフェノンの誘導体、例えば２−ヒドロキシ−４メトキシベンゾフェノン、２−ヒドロキシ−４−メトキシ−４’−メチルベンゾフェノン、２，２’−ジヒドロキシ−４−メトキシベンゾフェノン、２−（４’−ジエチルアミノ−２’−ヒドロキシベンゾイル）−安息香酸ヘキシルエステル（アミノベンゾフェノンとも呼ぶ）など、ベンザルマロン酸のエステル、例えば４−ケトキシベンズマロン酸ジ−２−エチルヘキシルエステルなど、トリアジン誘導体、例えば４，４’，４”−（１，３，５−トリアジン−２，４，６−トリルトリイミノ）−トリス−安息香酸トリス（２−エチルヘキシルエステル）（２，４，６−トリス−［アニリノ−（ｐ−カーボ−２’−エチル−１’−ヘキシルオキシ）］−１，３，５−トリアジンとも呼ぶ。INCL:オクチルトリアゾン、BASF AktiengesellschaftからUVINUL（登録商標）T 150という商標で販売されている）、２，４−ビス−｛［４−（２−エチル−ヘキシルオキシ）−２−ヒドロキシ］−フェニル｝−６−（４−メトキシフェニル）−１，３，５−トリアジン（INCN:アニソトリアジン、Tinosorb（登録商用）Sという商標で得ることが可能）、ジオクチルブチルアミドトリアゾン（INCI:ジオクチルブタミドトリアゾン）、２，４−ビス−［５−１（ジメチルプロピル）ベンゾキサゾール−２−イル−（４−フェニル）−イミノ］−６−（２−エチルヘキシル）−イミノ−１，３，５−トリアジン（CAS番号288254-16-0、Uvasorb（登録商標）K2Aという商標で3V Sigmaから得ることが可能）、２，４−ビス−｛［４−（２−エチル−ヘキシルオキシ）−２−ヒドロキシ］−フェニル｝−６−（４−メトキシフェニル）−１，３，５−トリアジン（INCI:ビス−エチルヘキシルオキシフェノールメトキシフェニルトリアジン）であって、ＣＩＢＡ−Ｃｈｅｍｉｋａｌｉｅｎ ＧｍｂＨからＴｉｎｏｓｏｒｂ（登録商標）という商標で得ることが可能なもの、及び２−［４，６−ビス（２，４−ジメチルフェニル）−１，３，５−トリアジン−２−イル］−５−（オクチルオキシ）フェノール（CAS番号：2725-22-6）など、プロパン−１，３−ジオン、例えば１−（４−ｔｅｒｔ−ブチルフェニル）−３−（４’−メトキシフェニル）プロパン−１，３−ジオンなどである。
【００９６】
本明細書で特に好ましく用いられるＵＶ−Ｂフィルタは、ＵＶ光防護フィルタ物質、２−シアノ−３−フェニル-桂皮酸２−エチルヘキシルエステル、２，４−ビス−｛［４−（２−エチル−ヘキシルオキシ）−２−ヒドロキシ］−フェニル｝−６−（４−メトキシフェニル）−１，３，５−トリアジン、ジオクチルブチルアミドトリアゾン、２−ヒドロキシ−４−メトキシベンゾフェノン、２−ヒドロキシ−４−メトキシ−４’−メチルベンゾフェノン、２，２’−ジヒドロキシ−４−メトキシベンゾフェノン、４−メトキシベンズマロン酸ジ−２−エチルヘキシルエステル、２，４，６−トリス−［アニリノ−（ｐ−カーボ−２’−エチル−１’−ヘキシルオキシ）］−１，３，５−トリアジン、２，４−ビス−［５−１（ジメチルプロピル）ベンゾキサゾール−２−イル−(４−フェニル)−イミノ］−６−（２−エチルヘキシル）−イミノ−１，３，５−トリアジン、２，４−ビス−｛［４−（２−エチル−ヘキシルオキシ）−２−ヒドロキシ］−フェニル｝−６−（４−メトキシフェニル）−１，３，５−トリアジン、及び２−［４，６−ビス（２，４−ジメチルフェニル）−１，３，５−トリアジン−２−イル］−５−（オクチルオキシ）フェノールである。
【００９７】
好ましく用いられるＵＶ−Ａフィルタは、１−（４’−ｔｅｒｔ−ブチルフェニル）−３−（４’−メトキシフェニル）−プロパン−１，３−ジオン、１−フェニル−３−（４’−イソプロピルフェニル）プロパン−１，３−ジオンである。
【００９８】
特に好ましいＵＶ−Ａフィルタは、Ｐａｒｓｏｌ（登録商標）１７８９という商標でＧｉｖａｕｄａｎから、及びＥｕｓｏｌｅｘ（登録商標）９０２０という商標でＭｅｒｃｋから販売されている４−（ｔｅｒｔ−ブチル）−４’−メトキシジベンゾイルメタン（CAS番号70356-09-01）と、ＤＥ１０２００４０２７４７５によるヒドロキシベンゾフェノン、特に好ましくは２−（４’−ジエチルアミノ−２’−ヒドロキシベンゾイル）−安息香酸ヘキシルエステル（アミノベンゾフェノンとも呼ぶ）であって、ＢＡＳＦからＵｖｉｎｕｌ Ａ Ｐｌｕｓという商標で得ることができるものである。
【００９９】
さらに好ましいＵＶフィタ物質は、いわゆるブロードバンドフィルタであり、即ち、ＵＶ−Ａ及びＵＶ−Ｂ放射線の両方を吸収するフィルタ物質である。この群の中で、ＣＩＢＡ−Ｃｈｅｍｉｋａｌｉｅｎ ＧｍｂＨからＴｉｎｏｓｏｒｂ（登録商標）Ｍという商標で得ることができる２，２’メチレン−ビス−（６−（２Ｈ−ベンゾトリアゾール−２−イル）−４−（１，１，３，３−テトラメチルブチル）−フェノールと、ＩＮＣＩ名がドロメトリゾールトリシロキサンである２−（２Ｈ−ベンゾトリアゾール−２−イル）−４−メチル−６−［２−メチル−３−［１，３，３，３−テトラメチル−１−［（トリメチルシリル）オキシ］−ジシロキサニル］プロピル］−フェノール（CAS番号:155633-54-8）とが好ましく用いられる。
【０１００】
いくつかの異なるＵＶフィルタの組合せを使用することが好ましい。
【０１０１】
言及した可溶性物質に加えて、不溶性顔料、即ち細かく分散した金属酸化物及び塩、例えば二酸化チタン、酸化亜鉛、酸化鉄、酸化アルミニウム、酸化セリウム、酸化ジルコニウム、シリケート（タルク）、硫酸バリウム、及びステアリン酸亜鉛なども、この目的に適している。この文脈では、粒子は、１００ｎｍ未満の平均直径、例えば５から５０ｎｍの間、特に１５から３０ｎｍの間の平均直径を有するべきである。これらの粒子は球形を有することができるが、楕円形を有するか、あるいはそれ以外で球形から逸脱した形状を有する粒子を用いることもできる。微細化した有機顔料、例えば５０％強度の水性分散液として得ることができる、例えば＜２００ｎｍの粒度を有する２，２’−メチレン−ビス−｛６−（２Ｈ−ベンゾトリアゾール−２−イル）−４−（１，１，３，３−テトラメチルブチル）フェノール｝などは、光防護フィルタの比較的新規な種類である。
【０１０２】
その他の適切なＵＶ光防護フィルタは、Ｐ．ＦｉｎｋｅｌのＳＯＦＷ−Ｊｏｕｒｎａｌ １２２、５４３（１９９６）の概説にさらに見出すことができる。
【０１０３】
用いられるＵＶ光防護フィルタの量は、配合物に対して好ましくは０．０１〜１５％、好ましくは０．０５から１０％、特に好ましくは０．１〜５％である。
【０１０４】
主なＵＶ光防護フィルタの上記２つの群に加え、ＵＶ放射線が皮膚に浸透したときに引き起こされる光化学反応の連鎖を妨げる、酸化防止タイプの２次的な光防護剤も、用いることができる。用いることができる酸化防止剤は、例えば超酸化物ジスムターゼ、トコフェロール（ビタミンE）、ジブチルヒドロキシトルエン、及びアスコルビン酸（ビタミンC）である。
【０１０５】
流動特性及び使用特性を改善するのに使用することができる屈水剤は、例えば、エタノール、イソプロピルアルコール、又はポリオールである。本明細書に適したポリオールは、２から１５個の炭素原子及び少なくとも２個のヒドロキシル基を有することができる。典型的な例は：
グリセロールアルキレングリコール、例えばエチレングリコール、ジエチレングリコール、プロピレングリコール、ブチレングリコール、ヘキシレングリコール及びポリエチレングリコールなどであって、平均分子量が１００から１０００ダルトンであるもの、自己縮合度が１．５から１０のテクニカルグレードのオリゴグリセロール混合物、例えば、ジグリセロール含量が４０から５０重量％のテクニカルグレードのジグリセロール混合物、メチロール化合物、特に、トリメチロールエタン、トリメチロールプロパン、トリメチロールブタン、ペンタエリスリトール、及びジペンタエリスリトールなど、低級アルキルグルコシド、特に１から４個の炭素原子をアルキル基中に有するもの、例えばメチル及びブチルグルコシド、５から１２個の炭素原子を有する糖アルコール、例えばソルビトール又はマンニトールなど、５から１２個の炭素原子を有する糖、例えばグルコース又はスクロースなど、アミノ糖、例えばグルカミンなどである。
【０１０６】
用いることができる固形分は、例えば、酸化鉄顔料、二酸化チタン又は酸化亜鉛粒子、及び「ＵＶ安定化剤」で追加的に述べたものである。例えばナイロン１２、窒化ホウ素、例えばポリアクリレートやポリメタクリレートなどのポリマー粒子、又はシリコーンエラストマーなど、特定の感覚作用をもたらす粒子もさらに用いることができる。使用することができる充填剤には、タピオカデンプン、リン酸架橋デンプン、アルミニウム−デンプン、又はナトリウム−デンプンなどの、デンプン及びデンプン誘導体、コハク酸オクテニル、及び主にＵＶフィルタ作用も着色作用も発揮しない顔料、例えばＡｅｒｏｓｉｌｓ（登録商標）（ＣＡＳ Ｎｏ．７６３１−８６−９）が含まれる。
【０１０７】
用いることができる、例えば耐水性を改善するための被膜形成剤は、例えば：ポリウレタン、ジメチコーンコポリオール、ポリアクリレート、又はＰＶＰ／ＶＡコポリマー（ＰＶＰ＝ポリビニルピロリドン、ＶＡ＝酢酸ビニル）である。用いることができる脂溶性被膜形成剤は：例えば、ポリビニルピロリドン（ＰＶＰ）をベースにしたポリマー、ポリビニルピロリドンのコポリマー、ＰＶＰ／ヘキサデセンコポリマー、又はＰＶＰ／エイコセンコポリマーである。
【０１０８】
使用することができる、真珠光沢のある添加剤は、例えば、ジステアリン酸グリコール又はジステアリン酸ＰＥＧ−３である。
【０１０９】
可能性あるデオドラント活性化合物は、例えば、通常の香料成分などの臭気マスク剤、臭気吸収剤、例えば特許公開明細書ＤＥ４００９３４７に記載されている層状シリケートであり、これらの中では特に、モンモリロナイト、カオリナイト、イライト、ベイデライト、ノントロナイト、サポナイト、ヘクトライト、ベントナイト、スメクタイト、さらに例えば、リシノール酸の亜鉛塩である。微生物阻害物質も、組み込むのに同様に適している。微生物阻害物質は、例えば、２，４，４’−トリクロロ−２’−ヒドロキシジフェニルエーテル（Irgasan）、１，６−ジ−（４クロロフェニルビグアニド）ヘキサン（クロロヘキシジン）、３，４，４’トリクロロカルボニリド、第４級アンモニウム化合物、丁子油、ハッカ油、タイム油、クエン酸トリエチル、ファルネソール（３，７，１１−トリメチル−２，６，１０−ドデカトリエン−１−オール）、エチルヘキシルグリセリルエーテル、カプリル酸ポリグリセリル−３（TEGO(登録商標)Cosmo P813, Evonik Degussa）、及び特許公開明細書ＤＥ１９８５５９３４、ＤＥ３７４０１８６、ＤＥ３９３８１４０、ＤＥ４２０４３２１、ＤＥ４２２９７０７、ＤＥ４２２９７３７、ＤＥ４２３８０８１、ＤＥ４３０９３７２、ＤＥ４３２４２１９、及びＥＰ６６６７３２に記載されている、活性剤である。
【０１１０】
使用することができる制汗剤活性化合物は、収斂薬、例えば、アルミニウムクロロハイドレート（「ＡＣＨ」）及びアルミニウムジルコニウムグリシン塩（「ＺＡＧ」）などの塩基性塩化アルミニウムである。
【０１１１】
使用することができる防虫剤は、例えば、Ｎ，Ｎ−ジエチル−ｍ−トルアミド、１，２−ペンタンジオール、又はＩｎｓｅｃｔ Ｒｅｐｅｌｌｅｎｔ ３５３５である。
【０１１２】
使用することができるセルフタンニング剤は、例えば、ジヒドロキシアセトン及びエリスルロースである。
【０１１３】
使用することができる保存剤は、例えば、単一又は複数のアルキルパラベンエステルとフェノキシエタノールとの混合物である。アルキルパラベンエステルは、メチルパラベン、エチルパラベン、プロピルパラベン、及び／又はブタンパラベンとすることができる。フェノキシエタノールの代わりに、例えばベンジルアルコールやエタノールなどのその他のアルコールを使用することも可能である。さらに、その他の従来の保存剤、例えばソルビン酸又は安息香酸、サリチル酸、２−ブロモ−２−ニトロプロパン−１，３−ジオール、クロロアセトアミド、ジアゾリジニル尿素、ＤＭＤＭヒダントイン、ヨードプロピニルブチルカルバメート、ヒドロキシメチルグリシン酸ナトリウム、メチル−イソチアゾリン、クロロメチル−イソチアゾリン、エチルヘキシルグリセロール、又はカプリリルグリコールなどを使用することも可能である。
【０１１４】
使用することができるコンディショニング剤は、例えば、塩化セトリモニウム、塩化ジセチルジモニウム、塩化ベヘントリモニウム、塩化ジステアリルジモニウム、メト硫酸ベヘントリモニウム、塩化ジステアロイルエチルジモニウム、塩化パルミトアミドプロピルトリモニウム、グアールヒドロキシプロピルトリモニウム塩化物、ヒドロキシプロピル−グアール、塩化ヒドロキシプロピルトリモニウム又はクオタニウム−８０などの有機第４級化合物、あるいはまたそれらのアミン誘導体、例えばアミノプロピルジメチコーン又はステアラミドプロピルジメチルアミンである。
【０１１５】
使用することができる香料は、天然又は合成の芳香物質、又はそれらの混合物である。天然の芳香物質は、花（ユリ、ラベンダー、バラ、ジャスミン、オレンジの花、イラン−イラン）、幹及び葉（ゼラニウム、パチョリ、プチグレン）、実（アニシード、コリアンダー、キャラウェイ、ジュニパー）、果物の皮（ベルガモット、レモン、オレンジ）、根（メース、アンゲリカ、セロリ、カルダモン、コスタス、アイリス、タイム）、針及び枝（トウヒ、モミ、マツ、ドワーフパイン）、樹脂及びバルサム（ガルバナム、エレミ、ベンゾイン、ミルラ、乳香、オポポナックス）からの抽出物である。動物性原材料、例えばシベットやビーバーなどがさらに適している。典型的な合成芳香化合物は、エステル、エーテル、アルデヒド、ケトン、アルコール、及び炭化水素タイプの生成物である。エステルタイプの芳香化合物は、例えば、酢酸ベンジル、イソ酪酸フェノキシエチル、酢酸ｐ−ｔ−ブチルシクロヘキシル、酢酸リナリル、酢酸ジメチルベンジルカルビニル、酢酸フェニルエチル、安息香酸リナリル、ギ酸ベンジル、グリシン酸エチルメチル−フェニル、プロピオン酸アリルシクロヘキシル、プロピオン酸スチラリル、及びサリチル酸ベンジルである。エーテルには、例えばベンジルエチルエーテルが含まれ、アルデヒドには、例えば８から１８個の炭素原子を有する直鎖状アルカナール、シトラール、シトロネラル、シトロネリルオキシアセトアルデヒド、シクラメンアルデヒド、ヒドロイシトロネラル、イリアル、及びブルゲオナールが含まれ、ケトンには、例えばイオノン、α−イソメチルイオノン、及びメチルセドリルケトンが含まれ、アルコールには、アネトール、シトロネロール、オイゲノール、イソオイゲノール、ゲラニオール、リナロール、フェニルエチルアルコール、及びテルピネオールが含まれ、炭化水素には、主にテルペン及びバルサムが含まれる。心地良いフレグランスノートを一緒に発生させる様々な芳香物質の混合物を、用いることができる。芳香成分として通常使用されている低揮発性の精油、例えばセージ油、カモミール油、クローブ油、メリッサ油、ハッカ油、ケイ皮油、リンデンブロッサム油、ジュニパーベリー油、ベチベル油、乳香油、ガルバナム油、ラボラナム油、及びラバンジン油も、香料として適している。ベルガモット油、ジヒドロミルセノール、リリアル、ライラール、シトロネロール、フェニルエチルアルコール、α−ヘキシルシンナムアルデヒド、ゲラニオール、ベンジルアセトン、シクラメンアルデヒド、リナロール、ボイサムブレンフォルテ、アムブロキサン、インドール、ヘジオン、サンデリス、レモン油、マンダリン油、オレンジ油、アリルアミルグリコレート、シクロベルタール、ラバンジン油、クラリーセージ油、β−ダマスコン、バーボンゼラニウム油、サリチル酸シクロヘキシル、ベルトフィックスケウアー、イソ−Ｅ−スーパー、フィクソリドＮＰ、エベルニル、イラルデインγ、フェニル酢酸、酢酸ゲラニル、酢酸ベンジル、ローズオキシド、ロミラット、イロチル、及びフロラマットを、単独で又は混合物として使用することも可能である。
【０１１６】
用いることができる染料は、例えば刊行物「Ｋｏｓｍｅｔｉｓｃｈｅ Ｆａｒｂｅｍｉｔｔｅｌ［化粧品着色剤］、ｔｈｅ Ｄｙｅｓｔｕｆｆｓ Ｃｏｍｍｉｓｓｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ Ｄｅｕｔｓｃｈｅ Ｆｏｒｓｃｈｕｎｇｓｇｅｍｅｉｎｓｃｈａｆｔ、Ｖｅｒｌａｇ Ｃｈｅｍｉｅ、Ｗｅｉｎｈｅｉｍ、１９８４、ｐ．８１〜１０６」に要約されているような、化粧品を目的として適切であり承認された物質である。
【０１１７】
生体活性化合物は、例えば、トコフェロール、酢酸トコフェロール、パルミチン酸トコフェロール、アスコルビン酸、デオキシリボ核酸、補酵素Ｑ１０、レチノール、ビスアボロール、アラントイン、フィタントリオール、パンテノール、ＡＨＡ酸、アミノ酸、ヒアルロン酸、α−ヒドロキシ酸、ポリグルタミン酸、クレアチン（及びクレアチン誘導体）、グアニジン（及びグアニジン誘導体）、セラミド、フィトスフィンゴシン（及びフィトスフィンゴシン誘導体）、スフィンゴシン（及びスフィンゴシン誘導体）、擬似セラミド、精油、ペプチド、タンパク質加水分解物、植物エキス、スフィンゴ脂質、及びビタミン複合体を意味すると理解すべきである。
【０１１８】
製剤が含むことができるケア添加剤は、例えば、エトキシル化グリセロール脂肪酸エステルであって例えばＰＥＧ−７グリセロールココエートなど、又は、例えばポリクウォタニウム−７やポリグリセロールエステルなどの陽イオンポリマーである。
【０１１９】
使用することができるスーパーオイリング剤は、例えば、ラノリン及びレシチンと、ポリエトキシル化又はアシル化ラノリン及びレシチン誘導体、ポリオール脂肪酸エステル、モノグリセリド及び脂肪酸アルカノールアミドなどの物質であり、後者はフォーム安定化剤としても同時に機能する。
【０１２０】
使用することができる溶媒は、例えば、エタノール、プロパノール、又は１，３−プロパンジオールなどの脂肪族アルコール、炭酸エチレン、炭酸プロピレン、炭酸グリセロールなどの環状カーボネート、酢酸エチル、乳酸エチル、アジピン酸ジメチル、及びアジピン酸ジエチルなどのモノ又はポリカルボン酸のエステル、プロピレングリコール、ジプロピレングリコール、グリセロール、炭酸グリセロール、又は水である。
【０１２１】
組成物の耐水性を改善するために、したがってＵＶ防護性能も増大させるために好ましく用いられるその他の追加の成分は、被膜形成剤の群である。好ましく用いられる被膜形成剤は、ポリウレタン、ジメチコーンコポリオール、ポリアクリレート、ＰＶＰ／ＶＡコポリマー（ＰＶＰ＝ポリビニルピロリドン、ＶＡ＝酢酸ビニル）、ポリビニルピロリドン（ＰＶＰ）、ポリビニルピロリドンのコポリマー、ＰＶＰ／ヘキサデセンコポリマー、又はＰＶＰ／エイコセンコポリマーである。
【０１２２】
好ましく用いられるその他の追加の成分は、デオドラント及び制汗活性化合物の群である。この群からは、収斂剤が好ましく用いられ、特に好ましくは、アルミニウムクロロハイドレート（「ＡＣＨ」）やアルミニウムジルコニウムグリシン塩（「ＺＡＧ」）などの塩基性塩化アルミニウムである。
【０１２３】
追加の成分は、本発明の方法の工程（c）を終了した後に、又は工程（a）、（b）、及び／又は（c）の実施中に、組成物に添加してもよい。特に保存剤の添加は、工程（b）及び／又は（c）を実施している間に行ってもよい。追加の成分は、工程（c）で得られた分散液に添加することが好ましい。
【０１２４】
本発明による組成物は、例えば、スキンケア、フェイスケア、ヘッドケア、ボディケア、インティメートケア、フットケア、ヘアケア、ネイルケア、デンタルケア、又はオーラルケア製品に使用することができる。したがって本発明の組成物は、スキンケア、フェイスケア、ヘッドケア、ボディケア、インティメートケア、フットケア、ヘアケア、ネイルケア、デンタルケア、又はオーラルケア組成物から選択されるパーソナルケア又は化粧品用組成物にすることができる。
【０１２５】
本発明による組成物は、例えば、エマルジョン、懸濁液、溶液、クリーム、軟膏、ペースト、ゲル、油、粉末、エアロゾル、スティック、スプレー、クレンジング製品、メイクアップもしくはサンスクリーン製剤、又はフェイスローションの形で使用することができる。したがって本発明の組成物は、エマルジョン、懸濁液、溶液、クリーム、軟膏、ペースト、ゲル、油、粉末、エアロゾル、スティック、スプレー、クレンジング製品、メイクアップもしくはサンスクリーン製剤、又はフェイスローションにすることができる。
【０１２６】
本発明の組成物、好ましくは化粧品、皮膚科、又はパーソナルケア用組成物は、好ましくは、本発明のマイクロビーズを０．１〜６０重量％、好ましくは０．５〜２５重量％、より好ましくは１から１０重量％、特に好ましくは２〜５重量％含む。
【０１２７】
本発明のマイクロビーズ又は本発明の組成物又は本発明による方法によって得られた分散液は、保湿剤、パーソナルケア、ヘアケア、スキンケア、又は化粧品用組成物の製造に使用することができる。
【０１２８】
本発明のマイクロビーズ又は本発明の組成物又は本発明による方法によって得られた分散液は、特に、局所皮膚充填材として使用することができる。本発明のマイクロビーズは、好ましくは、皮膚の皺及び襞に集まる。したがって本発明の生成物は、製剤に使用、あるいは局所皮膚充填材として使用した場合に多くの利点を示す。特別な利点は、皺の深さの減少と、皮膚の粗さの減少である。皮膚は、より艶やかになり、より良好な輝きを有する。したがって、本発明の別の態様は、皺及び粗い肌を治療する局所皮膚充填材を製造するための、本発明のマイクロビーズ又は本発明の組成物又は本発明による方法によって得られた分散液の使用である。
【０１２９】
以下に示す実施例は、その適用範囲が説明全体及び特許請求の範囲から明らかである本発明を、これらの実施例で特定される実施形態に限定することなく、例として本発明について述べている。
【実施例】
【０１３０】
（実施例１）
デシルココエートでの架橋微粒子の調製
ヒアルロン酸ナトリウム（HyaCare（登録商標）、Evonik Goldschmidt GmbH）６重量％を水性ＮａＯＨ（０．２Ｍ）に溶かした溶液７０ｇを、レベル１のハンドブレンダ（SG Zauberstab、Typ M 122 2-Speed）で激しく撹拌することによって、２分で、デシルココエート（TEGOSOFT（登録商標）DC、Evonik Goldschmidt GmbH）２７ｇ及びポリグリセリル−４−ジイソステアレート／ポリヒドロキシステアレート／セバケート（ISOLAN（登録商標）GPS、Evonik Goldschmidt GmbH）３ｇの混合物に添加した。得られた混合物を、レベル２のハンドブレンダで３分間均質化させた。デシルココエート３ｇ及びエタノール５ｍｌの混合物中のジビニルスルホンの５１２μｌの溶液を、撹拌することによって、均質化された混合物に添加した。得られたエマルジョンをさらに１．５時間撹拌した。次いでｐＨを、撹拌しながら乳酸（水中で９０重量％）を添加することによって、９の値に調節した。得られた生成物は、白色の分散液であった。
【０１３１】
（実施例２）
ヘキシル炭酸ジエチルでの架橋微粒子の調製
ヒアルロン酸ナトリウム（HyaCare（登録商標）、Evonik Goldschmidt GmbH）４．２ｇを水性ＮａＯＨ（０．２Ｍ）６６ｇに溶かした溶液を、ハンドブレンダ（レベル１）で激しく撹拌することによって、２分で、ヘキシル炭酸ジエチル（TEGOSOFT（登録商標）DEC、Evonik Goldschmidt GmbH）２７ｇ及びポリグリセリル−４−ジイソステアレート／ポリヒドロキシステアレート／セバケート（ISOLAN（登録商標）GPS、Evonik Goldschmidt GmbH）３ｇの混合物に添加した。得られたプレエマルジョンを、レベル２のハンドブレンダで２分間均質化させた。ジビニルスルホン３５８μｌをヘキシル炭酸ジエチル３ｇに溶かした溶液を、１滴ずつ、均質化されたプレエマルジョンに添加した。得られた混合物をさらに０．５時間、５０℃の温度で撹拌した。得られた生成物は、白色の分散液であった。
【０１３２】
顕微鏡で撮影した分散液の写真（図１）は、マイクロビーズ（粒子）の球形の特徴を明瞭に示す。
【０１３３】
粒度分布は、光学的粒子寸法測定器（Accusizer、会社：Particle Sizing Systems）で決定した。粒度分布を図２に示す。
【０１３４】
（実施例３）
乳化剤としてＰＥＧ／ＰＰＧ−１０／１ジメチコーンを使用したデシルココエートでの架橋微粒子の分散液の調製
ヒアルロン酸ナトリウム（HyaCare（登録商標）、Evonik Goldschmidt GmbH）５．９ｇを水性ＮａＯＨ（０．２Ｍ）９２ｇに溶かした溶液を、ハンドブレンダ（レベル１）で激しく撹拌することによって、２分で、デシルココエート（TEGOSOFT（登録商標）DC、Evonik Goldschmidt GmbH）３８．２ｇ及びＰＥＧ／ＰＰＧ−１０／１ジメチコーン（ABIL（登録商標）EM 90、Evonik Goldschmidt GmbH）４．２ｇの混合物に添加した。得られたプレエマルジョンを、レベル２のハンドブレンダで２分間均質化させた。ジビニルスルホン４５０μｌをデシルココエート３．８ｇに溶かした溶液を、１滴ずつ、均質化されたプレエマルジョンに添加した。得られた混合物をさらに０．５時間、室温で撹拌した。得られた生成物は、白色の分散液であった。
【０１３５】
（実施例４）
乳化剤としてモノオレイン酸グリセリルを使用したジエチルヘキシルカーボネートでの架橋微粒子の分散液の調製
調製は、実施例２に従って行った。モノオレイン酸グリセリル（TEGIN（登録商標）O V、Evonik Goldschmidt GmbH）３ｇを、ポリグリセリル−４−ジイソステアレート／ポリヒドロキシステアレート／セバケート３ｇの代わりに使用した。
【０１３６】
（実施例５）
ヒアルロン酸ナトリウムの蛍光標識架橋微粒子の調製
ヒアルロン酸ナトリウム（HyaCare（登録商標）、Evonik Goldschmidt GmbH）５．６ｇ及びフルオレシン０．５ｍｇを水性ＮａＯＨ（０．２Ｍ）８８ｇに溶かした溶液を、ハンドブレンダ（レベル１）で激しく撹拌することによって、２分で、ヘキシル炭酸ジエチル（TEGOSOFT（登録商標）DEC、Evonik Goldschmidt GmbH）３６ｇ及びポリグリセリル−４ジイソステアレート／ポリヒドロキシステアレート／セバケート（ISOLAN（登録商標）GPS、Evonik Goldschmidt GmbH）４ｇの混合物に添加した。得られたプレエマルジョンを、レベル２のハンドブレンダで２分間均質化させた。ジビニルスルホン４８６μｌをヘキシル炭酸ジエチル４ｇに溶かした溶液を、１滴ずつ、均質化されたプレエマルジョンに添加した。得られた混合物をさらに０．５時間、５０℃の温度で撹拌した。得られた生成物は、薄緑色の分散液であった。
【０１３７】
（実施例６）
ブタ皮膚への架橋ヒアルロン酸ナトリウム微粒子の分散液の適用
凍結させたブタ皮膚約２ｃｍ２を解凍し、後で剃毛した。実施例５の分散液０．１ｍｌを、スパチュラを使用してブタ皮膚に塗り拡げた。ブタ皮膚を、後で蛍光顕微鏡（位相差顕微鏡、会社：Leica、倍率１０×）で検査した。この顕微鏡画像の写真を図３に示す。蛍光粒子が皮膚の皺に蓄積されている状態を、明瞭に見ることができる。
【０１３８】
（実施例７）
中和のためにイソステアリン酸を使用した架橋微粒子の分散液の調製
調製は、実施例１に従い行った。イソステアリン酸（分散液の全重量に対して１重量％）を乳酸の代わりに使用して、ｐＨを調節した。得られた生成物は、白色の分散液であった。
【０１３９】
（実施例８）
ヒアルロン酸ナトリウムの蛍光修飾
ヒアルロン酸ナトリウム（HyaCare（登録商標））１０ｇを、トルエン１００ｍｌに懸濁した。ＤＴＡＦ（５−（４，６−ジクロロ−ｓ−トリアジン−２−イルアミノ）フルオレセイン塩酸塩、Sigma）０．０２５ｇをエタノール１５ｍｌに溶解し、この溶液をＨｙａＣａｒｅ（登録商標）懸濁液に添加した。懸濁液を室温で１６時間撹拌し、濾過した。固体残留物をエタノールで洗浄し、減圧下で乾燥した。
【０１４０】
（実施例９）
蛍光標識粒子分散液の調製
実施例９の蛍光ヒアルロン酸ナトリウムを０．２Ｍ ＮａＯＨに溶かした６（重量）％溶液１１６ｇを、デシルココエート（TEGOSOFT（登録商標）DC）４３．３ｇ及びＩＳＯＬＡＮ（登録商標）ＧＰＳ ４．８ｇの混合物に、撹拌しながら（ハンドブレンダ、レベル１）添加した。エマルジョンを、ハンドブレンダ（レベル２）で３分間均質化した。ジビニルスルホン５７２μｇを、デシルココエート４．８ｇ及びエタノール５ｍｌの混合物に加えたものを、撹拌しながらエマルジョンに添加した。撹拌は、室温で１時間継続し、その後、イソステアリン酸８ｇを撹拌しながら添加した。得られた分散液は、ｐＨ９を有していた。
【０１４１】
（実施例１０）
ＨＡ粒子を含有する化粧品配合物
実施例９で得られた蛍光標識粒子の分散液を、化粧品クリームに配合した。このクリームの組成（単位：重量％）を表１に示す。
【０１４２】
【表１】
【０１４３】
（実施例１１）
架橋ヒアルロン酸を含有するクリーム
以下の成分（表２）を撹拌しながら混合することによって、０．１１％架橋ヒアルロン酸（CL-HA）を含有するクリームを生成する。
【０１４４】
【表２】
【０１４５】
この配合物を、１２名のパネリストの前腕内側に適用する。適用前と、２及び７時間後に、デジタルカメラ（Visioscan VC 98、Courage & Khazaka、Cologne、Germany）を使用して前腕内側の写真を撮影する。この写真は、デジタルの白黒写真であり、２５６のグレイレベルに分割されている。グレイレベル分布に基づいて、ソフトウェア（Visioscan VC 98に装備されている）が、鱗状態、粗さ、表面、体積、又は肌理のパラメータなどの種々の皮膚パラメータを計算する。
【０１４６】
１．皮膚の鱗状態
グレイレベル分布に基づいて、ソフトウェアが、光画素の割合を計算し、それによって、パラメータである皮膚の鱗状態を評価する。以下の表３は、鱗状態の低減を示す。
【０１４７】
【表３】
【０１４８】
適用後２時間で、対照領域（未処理）並びにビヒクル又はＣＬ−ＨＡで処理した領域は、皮膚の鱗状態が低減したことを示す。この効果は、対照領域及びビヒクルで処理した領域では７時間後に低下したが、ＣＬ−ＨＡによる鱗状態の低減は、７時間後も続いたままである。皮膚の鱗状態の試験結果を示すグラフを、図４に示す。
【０１４９】
２．表面及び体積
パラメータである表面は、皮膚の全表面を計算する。これは、皺の数が少なくなるほど又は皺が小さくなるほど、表面が小さくなるべきであることを意味する。パラメータである体積は、皺を充填するのに必要な体積を指す。両方のパラメータは、皺の深さ及び数が試験配合物によって減少する場合、低下することになる。このような理由で、試験配合物で処理した後の両方のパラメータの変化の合計が、計算される：
合計表面−体積＝Δ表面＋Δ体積［％］。
【０１５０】
結果を表４に示す。
【０１５１】
【表４】
【０１５２】
適用後２時間で、表面及び体積は、ビヒクルとＣＬ−ＨＡを含有する配合物とによって減少する。７時間後、このプラスの効果は、ビヒクルで処理した皮膚で消失するのに対し、この効果は、ＣＬ−ＨＡで処理した試験領域でさらに改善された。表面及び体積試験から得た結果を示すグラフを、図５に示す。
【０１５３】
３．粗さパラメータＲ１〜Ｒ５
粗さパラメータＲ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、及びＲ５は、金属産業に由来する。これらのパラメータは、ＤＩＮ ４７６２〜４７６８で定義された粗さパラメータＲｔ、Ｒｍ、Ｒｚ、Ｒｐ、及びＲａに対応する。これらは、深く微細な皺の深さを指す。全ての粗さパラメータは、皺の深さが減少した場合に低下することになる。このような理由で、パラメータは下記の通りまとめられる：
合計Ｒ１〜Ｒ５＝ΔＲ１＋ΔＲ２＋ΔＲ３＋ΔＲ４＋ΔＲ５
【０１５４】
以下の表５は、合計Ｒ１〜Ｒ５の結果を示す。
【０１５５】
【表５】
【０１５６】
適用後２時間で、ビヒクルとＣＬ−ＨＡを含有する試験配合物とは皮膚の粗さを低減させる。この効果は、７時間後にビヒクルで処理した試験領域で消失するのに対し、ＣＬ−ＨＡで処理した試験領域では、その効果がほぼ一定のままである。粗さパラメータ試験の結果を示すグラフを、図６に示す。
【０１５７】
４．肌理パラメータ
肌理パラメータ（エネルギーNRJ、エントロピーENT、均質性HOM、コントラストCONT、及び分散VAR）は、隣接する画素の色差を指す。これらのパラメータは、皮膚の色調がどれくらい均一かを示し、即ち、肌理パラメータの改善は、改善された皮膚外観と連関することを意味する。このパラメータは、以下の方程式を使用してまとめられる：
合計肌理−パラメータ＝ΔＮＲＪ＋ΔＥＮＴ＋ΔＨＯＭ−ΔＣＯＮＴ−ΔＶＡＲ
【０１５８】
以下の表６は、合計肌理−パラメータの結果を示す。
【０１５９】
【表６】
【０１６０】
適用後２時間で、ビヒクル並びにＣＬ−ＨＡを有する試験配合物は、肌理パラメータを改善する。ＣＬ−ＨＡで処理した試験領域では、この効果は７時間後も持続したままであるのに対し、この効果は、ビヒクルで処理した皮膚では低下する。肌理パラメータ試験の結果を示すグラフを、図７に示す。
【０１６１】
このように、本発明のマイクロビーズは、皺及び皮膚の鱗状態を低減させるのに、また、皮膚の肌理パラメータを改善してより均一は皮膚の色調をもたらすのに、有効である。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
（a）ヒアルロン酸又はその塩を含む水性アルカリ溶液を提供する工程と；
（b）有機中水又は油中水（Ｗ／Ｏ）エマルジョンが形成されるように、有機又は油相中で、工程（a）の混合溶液から、所望のサイズを有する微小液滴を形成する工程であって、使用される油相の量が、油相及び水の合計に対して２０〜５０重量％未満のものである工程と；
（c）前記エマルジョンに、架橋剤を含む溶液を添加し、それによって、ヒアルロン酸と前記架橋剤との反応が生じて架橋ヒアルロン酸マイクロビーズが得られる工程と；
（d）任意選択により、工程（c）で得られた前記架橋ヒアルロン酸マイクロビーズの分散液を後処理する工程と
を含む、架橋ヒアルロン酸マイクロビーズを生成する方法。
【請求項２】
前記ヒアルロン酸又はその塩が、バチルス宿主細胞で組換えにより生成される、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記ヒアルロン酸又はその塩が、５０〜３，０００ｋＤａの間の平均分子量を有する、請求項１又は２に記載の方法。
【請求項４】
前記アルカリ溶液が、溶解したヒアルロン酸又はその塩を０．１〜４０％（ｗ／ｖ）の間の濃度で含む、請求項１から３のいずれかに記載の方法。
【請求項５】
前記アルカリ溶液が、溶解した水酸化ナトリウムを０．００１〜２．０Ｍの間の濃度で含む、請求項１から４のいずれかに記載の方法。
【請求項６】
ヒアルロン酸又はその塩：架橋剤（乾燥重量）が１：１〜１００：１の間の重量比で、前記架橋剤が工程（c）の混合溶液に含まれる、請求項１から５のいずれかに記載の方法。
【請求項７】
工程（b）では、炭化水素、芳香族炭化水素、及びセチルエチルヘキサノエートを除く、化粧品又はパーソナルケア用配合物で使用される標準的な皮膚軟化剤からなる群から選択される皮膚軟化剤が、油相として使用される、請求項１から６のいずれかに記載の方法。
【請求項８】
前記架橋剤が、ジビニルスルホン、グリセロールジグリシジルエーエル、又は１，４−ブタンジイルジグリシジルエーテルから選択される請求項１から７のいずれかに記載の方法。
【請求項９】
工程（b）の微小液滴が、約１ナノメートル〜１ミリメートルの平均直径を有する、請求項１から８のいずれかに記載の方法。
【請求項１０】
任意選択による工程（d）が、１３，０００ダルトン未満のサイズを有する分子を自由拡散させる透析膜を使用して、脱イオン水に対して架橋マイクロビーズを透析する工程を含む、請求項１から９のいずれかに記載の方法。
【請求項１１】
任意選択による工程（d）が、７．０〜９．５のｐＨまで、緩衝液又は酸で架橋マイクロビーズのｐＨを中和させる工程を含む、請求項１から１０のいずれかに記載の方法。
【請求項１２】
工程（b）では、ポリグリセリル−４−ジイソステアレート／ポリヒドロキシステアレート／セバケート又はＰＥＧ／ＰＰＧ−１０／１ジメチコーンを乳化剤として使用する、請求項１から１１のいずれかに記載の方法。
【請求項１３】
ジビニルスルホンで架橋されたヒアルロン酸又はその塩を含むマイクロビーズ。
【請求項１４】
請求項１から１２のいずれかに記載の方法によって得られたマイクロビーズ。
【請求項１５】
約１ナノメートル〜１ミリメートルの範囲の平均直径を有する、請求項１３又は１４に記載のマイクロビーズ。
【請求項１６】
ヒアルロン酸の無機塩として、ヒアルロン酸ナトリウム、ヒアルロン酸カリウム、ヒアルロン酸アンモニウム、ヒアルロン酸カルシウム、ヒアルロン酸マグネシウム、ヒアルロン酸亜鉛、又はヒアルロン酸コバルトを使用して得られた、請求項１３から１５のいずれかに記載のマイクロビーズ。
【請求項１７】
活性成分、水溶性賦形剤、及び／又は保存剤も含む、請求項１３から１６のいずれかに記載のマイクロビーズ。
【請求項１８】
前記活性剤成分が、パーソナルケア用活性物質である、請求項１７に記載のマイクロビーズ。
【請求項１９】
請求項１３から１８のいずれかに記載のマイクロビーズを含む組成物。
【請求項２０】
皮膚軟化剤、乳化剤及び界面活性剤、増粘剤／粘度調節剤／安定化剤、ＵＶ光防護フィルタ、酸化防止剤、屈水剤（又はポリオール）、固形分及び充填材、被膜形成剤、真珠光沢添加剤、デオドラント及び制汗活性化合物、防虫剤、セルフタンニング剤、保存剤、コンディショニング剤、香料、染料、生体活性化合物、ケア用添加剤、スーパーオイリング剤、及び溶媒の群から選択される少なくとも１種の追加の成分を含む、請求項１９に記載の組成物。
【請求項２１】
スキンケア、フェイスケア、ヘッドケア、ボディケア、インティメートケア、フットケア、ヘアケア、ネイルケア、デンタルケア、又はオーラルケア用組成物から選択されるパーソナルケア又は化粧品用組成物である、請求項１９又は２０に記載の組成物。
【請求項２２】
エマルジョン、懸濁液、溶液、クリーム、軟膏、ペースト、ゲル、油、粉末、エアロゾル、スティック、スプレー、クレンジング製品、メイクアップもしくはサンスクリーン製剤、又はフェイスローションである、請求項１９から２１のいずれかに記載の組成物。
【請求項２３】
保湿剤、パーソナルケア、ヘアケア、スキンケア、又は化粧品用組成物を製造するための、請求項１３から１８のいずれかに記載のマイクロビーズ、又は請求項１９から２２のいずれかに記載の組成物、又は請求項１から１２のいずれかに記載の方法によって得られた分散液の使用。
【請求項２４】
局所皮膚充填材としての、請求項１３から１８のいずれかに記載のマイクロビーズ、又は請求項１９から２２のいずれかに記載の組成物、又は請求項１から１２のいずれかに記載の方法によって得られた分散液の使用。
【請求項２５】
皺及び荒れた皮膚の治療用の局所皮膚充填材を製造するための、請求項１３から１８のいずれかに記載のマイクロビーズ、又は請求項１９から２２のいずれかに記載の組成物、又は請求項１から１２のいずれかに記載の方法によって得られた分散液の使用。
【請求項１】
（a）ヒアルロン酸又はその塩を含む水性アルカリ溶液を提供する工程と；
（b）有機中水又は油中水（Ｗ／Ｏ）エマルジョンが形成されるように、有機又は油相中で、工程（a）の混合溶液から、所望のサイズを有する微小液滴を形成する工程であって、使用される油相の量が、油相及び水の合計に対して２０〜５０重量％未満のものである工程と；
（c）前記エマルジョンに、架橋剤を含む溶液を添加し、それによって、ヒアルロン酸と前記架橋剤との反応が生じて架橋ヒアルロン酸マイクロビーズが得られる工程と；
（d）任意選択により、工程（c）で得られた前記架橋ヒアルロン酸マイクロビーズの分散液を後処理する工程と
を含む、架橋ヒアルロン酸マイクロビーズを生成する方法。
【請求項２】
前記ヒアルロン酸又はその塩が、バチルス宿主細胞で組換えにより生成される、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記ヒアルロン酸又はその塩が、５０〜３，０００ｋＤａの間の平均分子量を有する、請求項１又は２に記載の方法。
【請求項４】
前記アルカリ溶液が、溶解したヒアルロン酸又はその塩を０．１〜４０％（ｗ／ｖ）の間の濃度で含む、請求項１から３のいずれかに記載の方法。
【請求項５】
前記アルカリ溶液が、溶解した水酸化ナトリウムを０．００１〜２．０Ｍの間の濃度で含む、請求項１から４のいずれかに記載の方法。
【請求項６】
ヒアルロン酸又はその塩：架橋剤（乾燥重量）が１：１〜１００：１の間の重量比で、前記架橋剤が工程（c）の混合溶液に含まれる、請求項１から５のいずれかに記載の方法。
【請求項７】
工程（b）では、炭化水素、芳香族炭化水素、及びセチルエチルヘキサノエートを除く、化粧品又はパーソナルケア用配合物で使用される標準的な皮膚軟化剤からなる群から選択される皮膚軟化剤が、油相として使用される、請求項１から６のいずれかに記載の方法。
【請求項８】
前記架橋剤が、ジビニルスルホン、グリセロールジグリシジルエーエル、又は１，４−ブタンジイルジグリシジルエーテルから選択される請求項１から７のいずれかに記載の方法。
【請求項９】
工程（b）の微小液滴が、約１ナノメートル〜１ミリメートルの平均直径を有する、請求項１から８のいずれかに記載の方法。
【請求項１０】
任意選択による工程（d）が、１３，０００ダルトン未満のサイズを有する分子を自由拡散させる透析膜を使用して、脱イオン水に対して架橋マイクロビーズを透析する工程を含む、請求項１から９のいずれかに記載の方法。
【請求項１１】
任意選択による工程（d）が、７．０〜９．５のｐＨまで、緩衝液又は酸で架橋マイクロビーズのｐＨを中和させる工程を含む、請求項１から１０のいずれかに記載の方法。
【請求項１２】
工程（b）では、ポリグリセリル−４−ジイソステアレート／ポリヒドロキシステアレート／セバケート又はＰＥＧ／ＰＰＧ−１０／１ジメチコーンを乳化剤として使用する、請求項１から１１のいずれかに記載の方法。
【請求項１３】
ジビニルスルホンで架橋されたヒアルロン酸又はその塩を含むマイクロビーズ。
【請求項１４】
請求項１から１２のいずれかに記載の方法によって得られたマイクロビーズ。
【請求項１５】
約１ナノメートル〜１ミリメートルの範囲の平均直径を有する、請求項１３又は１４に記載のマイクロビーズ。
【請求項１６】
ヒアルロン酸の無機塩として、ヒアルロン酸ナトリウム、ヒアルロン酸カリウム、ヒアルロン酸アンモニウム、ヒアルロン酸カルシウム、ヒアルロン酸マグネシウム、ヒアルロン酸亜鉛、又はヒアルロン酸コバルトを使用して得られた、請求項１３から１５のいずれかに記載のマイクロビーズ。
【請求項１７】
活性成分、水溶性賦形剤、及び／又は保存剤も含む、請求項１３から１６のいずれかに記載のマイクロビーズ。
【請求項１８】
前記活性剤成分が、パーソナルケア用活性物質である、請求項１７に記載のマイクロビーズ。
【請求項１９】
請求項１３から１８のいずれかに記載のマイクロビーズを含む組成物。
【請求項２０】
皮膚軟化剤、乳化剤及び界面活性剤、増粘剤／粘度調節剤／安定化剤、ＵＶ光防護フィルタ、酸化防止剤、屈水剤（又はポリオール）、固形分及び充填材、被膜形成剤、真珠光沢添加剤、デオドラント及び制汗活性化合物、防虫剤、セルフタンニング剤、保存剤、コンディショニング剤、香料、染料、生体活性化合物、ケア用添加剤、スーパーオイリング剤、及び溶媒の群から選択される少なくとも１種の追加の成分を含む、請求項１９に記載の組成物。
【請求項２１】
スキンケア、フェイスケア、ヘッドケア、ボディケア、インティメートケア、フットケア、ヘアケア、ネイルケア、デンタルケア、又はオーラルケア用組成物から選択されるパーソナルケア又は化粧品用組成物である、請求項１９又は２０に記載の組成物。
【請求項２２】
エマルジョン、懸濁液、溶液、クリーム、軟膏、ペースト、ゲル、油、粉末、エアロゾル、スティック、スプレー、クレンジング製品、メイクアップもしくはサンスクリーン製剤、又はフェイスローションである、請求項１９から２１のいずれかに記載の組成物。
【請求項２３】
保湿剤、パーソナルケア、ヘアケア、スキンケア、又は化粧品用組成物を製造するための、請求項１３から１８のいずれかに記載のマイクロビーズ、又は請求項１９から２２のいずれかに記載の組成物、又は請求項１から１２のいずれかに記載の方法によって得られた分散液の使用。
【請求項２４】
局所皮膚充填材としての、請求項１３から１８のいずれかに記載のマイクロビーズ、又は請求項１９から２２のいずれかに記載の組成物、又は請求項１から１２のいずれかに記載の方法によって得られた分散液の使用。
【請求項２５】
皺及び荒れた皮膚の治療用の局所皮膚充填材を製造するための、請求項１３から１８のいずれかに記載のマイクロビーズ、又は請求項１９から２２のいずれかに記載の組成物、又は請求項１から１２のいずれかに記載の方法によって得られた分散液の使用。
【図１】
【図２】
【図３】
【図４】
【図５】
【図６】
【図７】
【図２】
【図３】
【図４】
【図５】
【図６】
【図７】
【公表番号】特表２０１１−５０６７１９（Ｐ２０１１−５０６７１９Ａ）
【公表日】平成２３年３月３日（２０１１．３．３）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２０１０−５３８５７５（Ｐ２０１０−５３８５７５）
【出願日】平成２０年１２月１０日（２００８．１２．１０）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＥＰ２００８／０６７１７２
【国際公開番号】ＷＯ２００９／０７７３９９
【国際公開日】平成２１年６月２５日（２００９．６．２５）
【出願人】（５０７３７５４６５）エヴォニク ゴールドシュミット ゲーエムベーハー (100)
【出願人】（５１０１０１６６４）
【Ｆターム（参考）】
【公表日】平成２３年３月３日（２０１１．３．３）
【国際特許分類】
【出願日】平成２０年１２月１０日（２００８．１２．１０）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＥＰ２００８／０６７１７２
【国際公開番号】ＷＯ２００９／０７７３９９
【国際公開日】平成２１年６月２５日（２００９．６．２５）
【出願人】（５０７３７５４６５）エヴォニク ゴールドシュミット ゲーエムベーハー (100)
【出願人】（５１０１０１６６４）
【Ｆターム（参考）】
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