オメガ−３脂肪酸を産生するための酵素および方法
本発明は、一般に、特にトランスジェニック植物における、組換え脂肪酸合成の分野に関する。本出願は、脂肪酸合成に関与する遺伝子を記載するものであり、植物油の脂肪酸組成の操作のための方法およびベクターを提供するものである。特に、本発明は、得られる植物が改変したレベルの多価不飽和脂肪酸を産生するように植物ゲノム中への脂肪酸合成に関与する多重異種遺伝子の組込みを達成するための構築物を提供する。また、植物貯蔵器官の中においてサイレンシングサプレッサーを共発現させることによって脂肪酸生合成酵素の発現を増強するための方法も記載される。
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
Δ５エロンガーゼ活性を有する脂肪酸エロンガーゼをコードする外因性ポリヌクレオチドを含む組換え細胞であって、前記細胞中において、好ましくは植物細胞中において前記エロンガーゼが前記外因性ポリヌクレオチドから発現される場合、前記エロンガーゼが、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％または少なくとも７５％の効率でＤＰＡを産生する、ＥＰＡに対する活性を有する、組換え細胞。
【請求項２】
前記エロンガーゼが、配列番号６において提供される配列、その生物学的に活性な断片または配列番号６と少なくとも４７％同一であるアミノ酸配列を有するアミノ酸を含む、請求項１に記載の細胞。
【請求項３】
ｉ）Δ８デサチュラーゼおよび／またはΔ６デサチュラーゼ、
ｉｉ）Δ９エロンガーゼおよび／またはΔ６エロンガーゼ、
ｉｉｉ）Δ５デサチュラーゼ、ならびに
ｉｖ）場合によって、Δ４デサチュラーゼおよび／またはω３デサチュラーゼ
をコードする外因性ポリヌクレオチドをさらに含み、
各ポリヌクレオチドが、前記細胞中における前記ポリヌクレオチドの発現を誘導できる１つまたは複数のプロモーターに作動可能に連結する、請求項１または請求項２に記載の細胞。
【請求項４】
ω３デサチュラーゼ活性を有する脂肪酸デサチュラーゼをコードする外因性ポリヌクレオチドを含む組換え細胞であって、前記デサチュラーゼが前記細胞中における前記外因性ポリヌクレオチドから発現される場合、前記デサチュラーゼが、ＡＲＡからＥＰＡ、ＤＧＬＡからＥＴＡ、ＧＬＡからＳＤＡの内の少なくとも１つ、ＡＲＡからＥＰＡおよびＤＧＬＡからＥＴＡの両方、ＡＲＡからＥＰＡおよびＧＬＡからＳＤＡの両方、またはこれらの３つ全てを不飽和化することができる、組換え細胞。
【請求項５】
前記デサチュラーゼがフロントエンドデサチュラーゼである、請求項４に記載の細胞。
【請求項６】
前記デサチュラーゼが、そのアシル鎖中に少なくとも３個の炭素−炭素二重結合を有するＣ２０脂肪酸、好ましくはＡＲＡに対するΔ１７デサチュラーゼ活性を有する、請求項４または請求項５に記載の細胞。
【請求項７】
前記デサチュラーゼが、そのアシル鎖中に３個の炭素−炭素二重結合を有するＣ１８脂肪酸、好ましくはＧＬＡに対するΔ１５デサチュラーゼ活性を有する、請求項４から６のいずれか一項に記載の細胞。
【請求項８】
前記デサチュラーゼが、対応するアシル−ＰＣ基質よりもアシル−ＣｏＡ基質に対して、より大きな活性を有する、請求項４から７のいずれか一項に記載の細胞。
【請求項９】
前記アシル−ＣｏＡ基質がＡＲＡ−ＣｏＡであり、前記アシル−ＰＣ基質が、ＰＣのｓｎ−２位でＡＲＡを含む、請求項８に記載の細胞。
【請求項１０】
前記細胞が植物細胞であり、前記デサチュラーゼが、前記細胞中において前記外因性ポリヌクレオチドから発現される場合、少なくとも４０％の効率でＥＰＡを産生する、ＡＲＡに対する活性を有する、請求項４から９のいずれか一項に記載の細胞。
【請求項１１】
前記デサチュラーゼが、配列番号１５、１７もしくは２０において提供される配列、その生物学的に活性な断片、または配列番号１５と少なくとも３５％同一である、配列番号１７と少なくとも６０％同一であるおよび／もしくは配列番号２０と少なくとも６０％同一であるアミノ酸配列を有するアミノ酸を含む、請求項４から１０のいずれか一項に記載の細胞。
【請求項１２】
Δ６デサチュラーゼ活性を有する脂肪酸デサチュラーゼをコードする外因性ポリヌクレオチドを含む組換え細胞であって、前記デサチュラーゼが、以下の
ｉ）好ましくは植物細胞中における、脂肪酸基質としてのＬＡよりもＡＬＡに対して、より大きなΔ６デサチュラーゼ活性、
ｉｉ）好ましくは植物細胞中における、脂肪酸基質としての、ＰＣのｓｎ−２位に接合したＡＬＡに対するよりも脂肪酸基質としてのＡＬＡ−ＣｏＡに対して、より大きなΔ６デサチュラーゼ活性、および
ｉｉｉ）好ましくは植物細胞中における、ＥＴｒＡに対するΔ８デサチュラーゼ活性
の内の少なくとも２つ、好ましくは３つ全てを有することをさらに特徴とする、組換え細胞。
【請求項１３】
Δ６デサチュラーゼ活性を有する脂肪酸デサチュラーゼをコードする外因性ポリヌクレオチドを含む組換え細胞であって、前記デサチュラーゼが、対応するω６基質よりもω３基質に対して、より大きな活性を有し、前記デサチュラーゼが前記細胞中において前記外因性ポリヌクレオチドから発現される場合に、前記デサチュラーゼが、少なくとも５％、少なくとも７．５％もしくは少なくとも１０％の効率で、または酵母細胞中において発現される場合に少なくとも３５％の効率でＳＤＡを産生する、ＡＬＡに対する活性を有する、組換え細胞。
【請求項１４】
前記デサチュラーゼが、好ましくは植物細胞中において、脂肪酸基質としてのＬＡよりもＡＬＡに対して、より大きなΔ６デサチュラーゼ活性を有する、請求項１３に記載の細胞。
【請求項１５】
前記デサチュラーゼが、好ましくは植物細胞中において、ＬＡと比較して基質としてのＡＬＡに対する少なくとも約２倍大きなΔ６デサチュラーゼ活性、少なくとも３倍大きな活性、少なくとも４倍大きな活性または少なくとも５倍大きな活性を有する、請求項１２または請求項１４に記載の細胞。
【請求項１６】
前記デサチュラーゼが、好ましくは植物細胞中において、脂肪酸基質としての、ＰＣのｓｎ−２位に接合したＡＬＡに対するよりも脂肪酸基質としてのＡＬＡ−ＣｏＡに対して、より大きな活性を有する、請求項１３から１５のいずれか一項に記載の細胞。
【請求項１７】
前記デサチュラーゼが、好ましくは植物細胞中において、脂肪酸基質としてＰＣのｓｎ−２位に接合したＡＬＡに対するよりも、脂肪酸基質としてのＡＬＡ−ＣｏＡに対する少なくとも約５倍大きなΔ６デサチュラーゼ活性または少なくとも１０倍大きな活性を有する、請求項１２または請求項１６に記載の細胞。
【請求項１８】
前記デサチュラーゼがフロントエンドデサチュラーゼである、請求項１２から１７のいずれか一項に記載の細胞。
【請求項１９】
ｉ）Δ６エロンガーゼ、
ｉｉ）Δ５デサチュラーゼ、
ｉｉｉ）Δ５エロンガーゼ、ならびに
ｉｖ）場合によって、Δ４デサチュラーゼおよび／またはω３デサチュラーゼ
をコードする外因性ポリヌクレオチドをさらに含み、
各ポリヌクレオチドが、前記細胞中における前記ポリヌクレオチドの発現を誘導できる１つまたは複数のプロモーターに作動可能に連結する、請求項１２から１８のいずれか一項に記載の細胞。
【請求項２０】
前記Δ６デサチュラーゼが、ＥＴＡに対する検出可能なΔ５デサチュラーゼ活性を有さない、請求項１２から１９のいずれか一項に記載の細胞。
【請求項２１】
前記Δ６デサチュラーゼが、配列番号１０において提供される配列、その生物学的に活性な断片または配列番号１０と少なくとも７７％同一であるアミノ酸配列を有するアミノ酸を含む、請求項１２から２０のいずれか一項に記載の細胞。
【請求項２２】
前記Δ６デサチュラーゼが、配列番号８において提供される配列、その生物学的に活性な断片または配列番号８と少なくとも６７％同一であるアミノ酸配列を有するアミノ酸を含み、Δ８デサチュラーゼ活性を有する、請求項１２から２１のいずれか一項に記載の細胞。
【請求項２３】
ジアシルグリセロールアシルトランスフェラーゼをコードする外因性ポリヌクレオチドを含む組換え細胞であって、前記ジアシルグリセロールアシルトランスフェラーゼが、配列番号１０８において提供される配列、その生物学的に活性な断片または配列番号１０８と少なくとも５４％同一であるアミノ酸配列を有するアミノ酸を含む、組換え細胞。
【請求項２４】
ｉ）Δ９エロンガーゼ、
ｉｉ）Δ８デサチュラーゼ、
ｉｉｉ）Δ５デサチュラーゼ、
ｉｖ）場合によって、Δ５エロンガーゼ、および
ｖ）前記Δ５エロンガーゼが存在する場合、場合によって、Δ４デサチュラーゼ
をコードする外因性ポリヌクレオチドを含む組換え細胞であって、
各ポリヌクレオチドが、前記細胞中における前記ポリヌクレオチドの発現を誘導できる１つまたは複数のプロモーターに作動可能に連結し、前記細胞中における全脂肪酸の少なくとも１５％、少なくとも２０％または少なくとも２５％が、それらのアシル鎖中に少なくとも２０個の炭素および少なくとも３個の炭素−炭素二重結合を含む、組換え細胞。
【請求項２５】
前記細胞中における前記脂肪酸中におけるＡＲＡ、ＥＰＡ、ＤＰＡおよびＤＨＡの総計が、前記細胞中における全脂肪酸の少なくとも１５％、少なくとも２０％または少なくとも２５％を含む、請求項２４に記載の細胞。
【請求項２６】
前記細胞が、野生型植物と比較した場合、オレイン酸をエイコセン酸（Ｃ２０：１）に変換する低下した能力を有し、および／または前記オレイン酸の５％未満が前記細胞中においてエイコセン酸に変換される、請求項１から２５のいずれか一項に記載の細胞。
【請求項２７】
前記細胞中における全脂肪酸は、１％未満のＣ２０：１を有する、請求項２６に記載の細胞。
【請求項２８】
前記細胞が、野生型細胞と比較した場合、低下した内因性Δ１５デサチュラーゼ活性を有し、および／または前記ＬＡの１０％未満が前記細胞中においてＡＬＡに変換される、請求項１から２７のいずれか一項に記載の細胞。
【請求項２９】
前記内因性Δ１５デサチュラーゼが、好ましくはアシル基がＬＡである場合、前記対応するアシル−ＣｏＡ基質に対するよりもアシル−ＰＣ基質に対して、より大きな活性を有する、請求項２８に記載の細胞。
【請求項３０】
前記細胞が、前記外因性ポリヌクレオチドを欠く対応する細胞と比較して、ＧＬＡからＳＤＡおよび／またはＡＲＡからＥＰＡの増加した変換率をさらに含む、請求項１から２９のいずれか一項に記載の細胞。
【請求項３１】
前記細胞中における前記脂肪酸中におけるＤＨＡの量が、前記細胞中における全脂肪酸の少なくとも３％、少なくとも５％または少なくとも１０％である、請求項１から３０のいずれか一項に記載の細胞。
【請求項３２】
ＬＡからＡＲＡおよび／またはＡＬＡからＥＰＡの変換の効率が、少なくとも８０％または少なくとも９０％である、請求項１から３１のいずれか一項に記載の細胞。
【請求項３３】
前記Δ９エロンガーゼが、配列番号２２において提供される配列、その生物学的に活性な断片または配列番号２２と少なくとも８０％同一であるアミノ酸配列を有するアミノ酸を含む、請求項２４から３２のいずれか一項に記載の細胞。
【請求項３４】
前記Δ８デサチュラーゼが、配列番号２４において提供される配列、その生物学的に活性な断片または配列番号２４と少なくとも８０％同一であるアミノ酸配列を有するアミノ酸を含む、請求項２４から３３のいずれか一項に記載の細胞。
【請求項３５】
前記Δ５デサチュラーゼが、配列番号２６において提供される配列、その生物学的に活性な断片または配列番号２６と少なくとも８０％同一であるアミノ酸配列を有するアミノ酸を含む、請求項２４から３４のいずれか一項に記載の細胞。
【請求項３６】
ｉ）Δ６エロンガーゼおよび／またはΔ９エロンガーゼ、
ｉｉ）Δ６デサチュラーゼおよび／またはΔ８デサチュラーゼ、
ｉｉｉ）Δ５デサチュラーゼ、
ｉｖ）Δ５エロンガーゼ、
ｖ）Δ４デサチュラーゼ、ならびに
ｖｉ）場合によって、ジアシルグリセロールアシルトランスフェラーゼ
をコードする外因性ポリヌクレオチドを含む組換え細胞であって、
各ポリヌクレオチドが、前記細胞中における前記ポリヌクレオチドの発現を誘導できる１つまたは複数のプロモーターに作動可能に連結し、
ａ）ＡＬＡからＥＰＡ、ＤＰＡまたはＤＨＡの変換の効率が、少なくとも１７．３％または少なくとも２３％である性質、
ｂ）ＡＬＡからＤＰＡまたはＤＨＡの変換の効率が、少なくとも１５．４％または少なくとも２１％である性質、
ｃ）ＡＬＡからＤＨＡの変換の効率が、少なくとも９．５％または少なくとも１０．８％である性質、および
ｄ）ＥＰＡからＤＨＡの変換の効率が、少なくとも４５％または少なくとも５０％である性質
の内の１つもしくは複数または全てを特徴とし、
好ましくはさらに、前記細胞中における全脂肪酸の少なくとも４％がＤＨＡであることを特徴とする、組換え細胞。
【請求項３７】
前記細胞中におけるトリアシルグリセロール中に組み込まれた全脂肪酸の少なくとも６％、少なくとも１１％または少なくとも１５％が、ＤＨＡである、請求項３６に記載の細胞。
【請求項３８】
ＤＨＡが、前記細胞中におけるＳＤＡ、ＥＴＡ、ＥＰＡ、ＤＰＡおよびＤＨＡの合計の２０〜６５％、好ましくは４０〜６５％を構成する、請求項３６または請求項３７に記載の細胞。
【請求項３９】
前記細胞中におけるω３脂肪酸の０．１〜２５％がＳＤＡであり、０．１〜１０％がＥＴＡであり、０．１〜６０％がＥＰＡであり、０．１〜５０％がＤＰＡであり、３０〜９５％がＤＨＡである、または前記細胞中における前記ω３脂肪酸の０．１〜２５％がＳＤＡであり、０．１〜１０％がＥＴＡであり、０．１〜５０％がＥＰＡであり、０．１〜５０％がＤＰＡであり、４０〜９５％がＤＨＡである、請求項３６から３８のいずれか一項に記載の細胞。
【請求項４０】
前記Δ４デサチュラーゼが、配列番号７３において提供される配列、その生物学的に活性な断片または配列番号７３と少なくとも８０％同一であるアミノ酸配列を有するアミノ酸を含む、請求項３６から３９のいずれか一項に記載の細胞。
【請求項４１】
ｉ）Δ６エロンガーゼおよび／またはΔ９エロンガーゼ、
ｉｉ）Δ６デサチュラーゼおよび／またはΔ８デサチュラーゼ、
ｉｉｉ）Δ５デサチュラーゼ、
ｉｖ）Δ５エロンガーゼ、ならびに
ｖi）場合によって、ジアシルグリセロールアシルトランスフェラーゼ
をコードする外因性ポリヌクレオチドを含む組換え細胞であって、
各ポリヌクレオチドが、前記細胞中における前記ポリヌクレオチドの発現を誘導できる１つまたは複数のプロモーターに作動可能に連結し、
ａ）ＡＬＡからＥＰＡまたはＤＰＡの変換の効率が少なくとも１７．３％または少なくとも２３％である性質、および
ｂ）ＡＬＡからＤＰＡの変換の効率が少なくとも１５．４％または少なくとも２１％である性質
の内の１つもしくは複数または全てを特徴とし、
好ましくはさらに、前記細胞中における全脂肪酸の少なくとも４％がＤＰＡであることを特徴とする、組換え細胞。
【請求項４２】
前記細胞中におけるトリアシルグリセロール中に組み込まれた全脂肪酸の少なくとも６％、少なくとも１１％または少なくとも１５％が、ＤＰＡである、請求項４１に記載の細胞。
【請求項４３】
ＤＰＡが、前記細胞中におけるＳＤＡ、ＥＴＡ、ＥＰＡおよびＤＰＡの合計の２０〜６５％、好ましくは４０〜６５％を構成する、請求項４１または請求項４２に記載の細胞。
【請求項４４】
前記細胞中におけるω３脂肪酸の０．１〜３５％がＳＤＡであり、０．１〜１５％がＥＴＡであり、０．１〜６０％がＥＰＡであり、３０〜７５％がＤＰＡである、または前記細胞中における前記ω３脂肪酸の０．１〜３５％がＳＤＡであり、０．１〜１５％がＥＴＡであり、０．１〜５０％がＥＰＡであり、４０〜７５％がＤＰＡである、請求項４１から４３のいずれか一項に記載の細胞。
【請求項４５】
前記Δ６エロンガーゼが、配列番号４において提供される配列、その生物学的に活性な断片または配列番号４と少なくとも５５％同一であるアミノ酸配列を有するアミノ酸を含む、請求項３６から４４のいずれか一項に記載の細胞。
【請求項４６】
前記Δ６デサチュラーゼが、配列番号８において提供される配列、その生物学的に活性な断片または配列番号８と少なくとも６７％同一であるアミノ酸配列を有するアミノ酸を含む、請求項３６から４５のいずれか一項に記載の細胞。
【請求項４７】
前記Δ５デサチュラーゼが、配列番号２６において提供される配列、その生物学的に活性な断片または配列番号２６と少なくとも８０％同一であるアミノ酸配列を有するアミノ酸を含む、請求項３６から４６のいずれか一項に記載の細胞。
【請求項４８】
前記Δ５エロンガーゼが、配列番号６において提供される配列、その生物学的に活性な断片または配列番号６と少なくとも４７％同一であるアミノ酸配列を有するアミノ酸を含む、請求項３６から４７のいずれか一項に記載の細胞。
【請求項４９】
前記ジアシルグリセロールアシルトランスフェラーゼが、配列番号７５または配列番号１０８において提供される配列、その生物学的に活性な断片または配列番号７５および／または配列番号１０８と少なくとも８０％同一であるアミノ酸配列を有するアミノ酸を含む、請求項３６から４８のいずれか一項に記載の細胞。
【請求項５０】
ｉ）Δ１７デサチュラーゼ、
ｉｉ）Δ１５デサチュラーゼ、および／または
ｉｉｉ）Δ１２デサチュラーゼ
をコードする外因性ポリヌクレオチドをさらに含み、
各ポリヌクレオチドが、前記細胞中における前記ポリヌクレオチドの発現を誘導できる１つまたは複数のプロモーターに作動可能に連結する、請求項１から４９のいずれか一項に記載の細胞。
【請求項５１】
前記デサチュラーゼの内の１種もしくは複数種または全てが、対応するアシル−ＰＣ基質よりも大きなアシル−ＣｏＡ基質に対する活性を有する、請求項１から５０のいずれか一項に記載の細胞。
【請求項５２】
Δ６エロンガーゼおよびΔ９エロンガーゼ活性を有する脂肪酸エロンガーゼをコードする外因性ポリヌクレオチドを含む組換え細胞であって、前記エロンガーゼが、Δ９エロンガーゼ活性より大きなΔ６エロンガーゼ活性を有する、組換え細胞。
【請求項５３】
前記エロンガーゼが、少なくとも５０％もしくは少なくとも６０％である、ＳＤＡについての、ＥＴＡを産生する変換の効率を有し、および／または少なくとも６％もしくは少なくとも９％である、ＡＬＡについての、ＥＴｒＡを産生する変換の効率を有する、請求項５２に記載の細胞。
【請求項５４】
前記エロンガーゼが、Δ９エロンガーゼ活性より少なくとも約６．５倍大きなΔ６エロンガーゼ活性を有する、請求項５２または請求項５３に記載の細胞。
【請求項５５】
前記エロンガーゼが、検出可能なΔ５エロンガーゼ活性を有さない、請求項５２から５４のいずれか一項に記載の細胞。
【請求項５６】
前記エロンガーゼが、配列番号４において提供される配列、その生物学的に活性な断片または配列番号４と少なくとも５５％同一であるアミノ酸配列を有するアミノ酸を含む、請求項５２から５５のいずれか一項に記載の細胞。
【請求項５７】
ｉ）Δ８デサチュラーゼおよび／またはΔ６デサチュラーゼ、
ｉｉ）Δ５デサチュラーゼ、
ｉｉｉ）Δ５エロンガーゼ、ならびに
ｉｖ）場合によって、Δ４デサチュラーゼおよび／またはω３デサチュラーゼ
をコードする外因性ポリヌクレオチドをさらに含み、
各ポリヌクレオチドが、前記細胞中における前記ポリヌクレオチドの発現を誘導できる１つまたは複数のプロモーターに作動可能に連結する、請求項５２から５６のいずれか一項に記載の細胞。
【請求項５８】
Δ５デサチュラーゼ活性を有する脂肪酸デサチュラーゼをコードする外因性ポリヌクレオチドを含む組換え細胞であって、前記デサチュラーゼが、配列番号１３において提供される配列、その生物学的に活性な断片または配列番号１３と少なくとも５３％同一であるアミノ酸配列を有するアミノ酸を含む、組換え細胞。
【請求項５９】
Δ９エロンガーゼ活性を有する脂肪酸エロンガーゼをコードする外因性ポリヌクレオチドを含む組換え細胞であって、前記エロンガーゼが、配列番号２８、９４および９６のいずれか１つにおいて提供される配列、その生物学的に活性な断片、配列番号２８と少なくとも８１％同一であるアミノ酸配列、または配列番号９４および／もしくは配列番号９６と少なくとも５０％同一であるアミノ酸配列を有するアミノ酸を含む、組換え細胞。
【請求項６０】
前記Δ９エロンガーゼが、配列番号９４もしくは配列番号９６において提供される配列、その生物学的に活性な断片、または配列番号９４および／もしくは配列番号９６と少なくとも５０％同一であるアミノ酸配列を有するアミノ酸を含み、前記エロンガーゼが、対応するω３基質よりもω６基質に対して、より大きな活性を有する、請求項５９に記載の細胞。
【請求項６１】
前記デサチュラーゼおよび／またはエロンガーゼが微細藻類から精製できる、請求項１から６０のいずれか一項に記載の細胞。
【請求項６２】
真核細胞である、請求項１から６１のいずれか一項に記載の細胞。
【請求項６３】
植物細胞、哺乳動物細胞、昆虫細胞、真菌細胞または酵母細胞である、請求項６２に記載の細胞。
【請求項６４】
植物中のものおよび／または成熟植物種子細胞である、請求項６３に記載の細胞。
【請求項６５】
前記植物または植物の種子が、それぞれ油料種子植物または油料種子である、請求項６４に記載の細胞。
【請求項６６】
長鎖多価不飽和脂肪酸（ＬＣ−ＰＵＦＡ）を合成することができ、前記ＬＣ−ＰＵＦＡを合成することができない細胞に由来する、請求項１から６５のいずれか一項に記載の細胞。
【請求項６７】
サイレンシングサプレッサーをコードする外因性ポリヌクレオチドをさらに含む、請求項１から６６のいずれか一項に記載の細胞。
【請求項６８】
前記サイレンシングサプレッサーをコードする前記外因性ポリヌクレオチドが、植物貯蔵器官特異的プロモーターに作動可能に連結する、請求項６７に記載の細胞。
【請求項６９】
前記植物貯蔵器官特異的プロモーターが、種子特異的プロモーターである、請求項６８に記載の細胞。
【請求項７０】
１種または複数種の長鎖多価不飽和脂肪酸（ＬＣ−ＰＵＦＡ）を合成できる細胞を得る方法であって、
ａ）脂肪酸ω３デサチュラーゼ活性をコードする外因性ポリヌクレオチドを細胞、好ましくは前記ＬＣ−ＰＵＦＡを合成することができない細胞中に導入するステップであり、前記ポリヌクレオチドが、前記細胞中における前記ポリヌクレオチドの発現を誘導できるプロモーターに作動可能に連結する、ステップ、
ｂ）前記細胞中において前記外因性ポリヌクレオチドを発現させるステップ、
ｃ）前記細胞の脂肪酸組成を分析するステップ、ならびに
ｄ）ＡＲＡからＥＰＡ、ＤＧＬＡからＥＴＡ、ＧＬＡからＳＤＡの内の少なくとも１つ、ＡＲＡからＥＰＡおよびＤＧＬＡからＥＴＡの両方、ＡＲＡからＥＰＡおよびＧＬＡからＳＤＡの両方、またはこれらの３つ全てを不飽和化し得る細胞を選択するステップ
を含む方法。
【請求項７１】
前記選択される細胞が、請求項４から１１のいずれか一項に記載の細胞である、請求項７０に記載の方法。
【請求項７２】
１種または複数種の長鎖多価不飽和脂肪酸（ＬＣ−ＰＵＦＡ）を合成できる細胞を得る方法であって、
ａ）脂肪酸Δ５エロンガーゼをコードする外因性ポリヌクレオチドを細胞、好ましくは前記ＬＣ−ＰＵＦＡを合成することができない細胞中に導入するステップであり、前記ポリヌクレオチドが、前記細胞中における前記ポリヌクレオチドの発現を誘導できるプロモーターに作動可能に連結する、ステップ、
ｂ）前記細胞中において前記外因性ポリヌクレオチドを発現させるステップ、
ｃ）前記細胞の脂肪酸組成を分析するステップ、および
ｄ）細胞を選択するステップであり、前記Δ５エロンガーゼが、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％または少なくとも７５％の効率でＤＰＡを産生する、ＥＰＡに対する活性を有する、ステップ
を含む方法。
【請求項７３】
前記選択される細胞が、請求項１から３のいずれか一項に記載の細胞である、請求項７２に記載の方法。
【請求項７４】
１種または複数種の長鎖多価不飽和脂肪酸（ＬＣ−ＰＵＦＡ）を合成できる細胞を得る方法であって、
ａ）脂肪酸Δ６デサチュラーゼをコードする外因性ポリヌクレオチドを細胞、好ましくは前記ＬＣ−ＰＵＦＡを合成することができない細胞中に導入するステップであり、前記ポリヌクレオチドが、前記細胞中における前記ポリヌクレオチドの発現を誘導できるプロモーターに作動可能に連結する、ステップ、
ｂ）前記細胞中において前記外因性ポリヌクレオチドを発現させるステップ、
ｃ）前記細胞の脂肪酸組成を分析するステップ、ならびに
ｄ）以下の、
ｉ）好ましくは植物細胞中における、脂肪酸基質としてのＬＡよりもＡＬＡに対して、より大きなΔ６デサチュラーゼ活性、
ｉｉ）好ましくは植物細胞中における、脂肪酸基質としてＰＣのｓｎ−２位に接合したＡＬＡに対するよりも脂肪酸基質としてのＡＬＡ−ＣｏＡに対して、より大きなΔ６デサチュラーゼ活性、ならびに
ｉｉｉ）好ましくは植物細胞中における、ＡＬＡに対するΔ６デサチュラーゼ活性およびＥＴｒＡに対するΔ８デサチュラーゼ活性
の内の少なくとも２つ、好ましくは３つ全てを有する細胞を選択するステップ
を含む方法。
【請求項７５】
１種または複数種の長鎖多価不飽和脂肪酸（ＬＣ−ＰＵＦＡ）を合成できる細胞を得る方法であって、
ａ）脂肪酸Δ６デサチュラーゼをコードする外因性ポリヌクレオチドを細胞、好ましくは前記ＬＣ−ＰＵＦＡを合成することができない細胞中に導入するステップであり、前記ポリヌクレオチドが、前記細胞中における前記ポリヌクレオチドの発現を誘導できるプロモーターに作動可能に連結する、ステップ、
ｂ）前記細胞中において前記外因性ポリヌクレオチドを発現させるステップ、
ｃ）前記細胞の脂肪酸組成を分析するステップ、ならびに
ｄ）対応するω６基質よりもω３基質に対して、より大きな活性を有するΔ６デサチュラーゼ活性を有し、酵母細胞中において発現される場合、少なくとも５％、少なくとも７．５％、または少なくとも１０％または少なくとも３５％の効率でＳＤＡを産生する、ＡＬＡに対する活性を有する細胞を選択するステップ
を含む方法。
【請求項７６】
前記選択される細胞が、請求項１２から２２のいずれか一項に記載の細胞である、請求項７４または請求項７５に記載の方法。
【請求項７７】
１種または複数種の長鎖多価不飽和脂肪酸（ＬＣ−ＰＵＦＡ）を合成できる細胞を得る方法であって、
ａ） ｉ）Δ９エロンガーゼ、
ｉｉ）Δ８デサチュラーゼ、
ｉｉｉ）Δ５デサチュラーゼ、
ｉｖ）場合によって、Δ５エロンガーゼ、および
ｖ）前記Δ５エロンガーゼが存在する場合、場合によって、Δ４デサチュラーゼ
をコードする外因性ポリヌクレオチドを細胞、好ましくは前記ＬＣ−ＰＵＦＡを合成することができない細胞中に導入するステップであり、各ポリヌクレオチドが、前記細胞中における前記ポリヌクレオチドの発現を誘導できる１つまたは複数のプロモーターに作動可能に連結する、ステップ
ｂ）前記細胞中において前記外因性ポリヌクレオチドを発現させるステップ、
ｃ）前記細胞の脂肪酸組成を分析するステップ、ならびに
ｄ）細胞を選択するステップであり、全脂肪酸の少なくとも１５％、少なくとも２０％または少なくとも２５％が、それらのアシル鎖中に少なくとも２０個の炭素および少なくとも３個の炭素−炭素二重結合を含む、ステップ
を含む方法。
【請求項７８】
前記選択される細胞が、請求項２４から３５のいずれか一項に記載の細胞である、請求項７７に記載の方法。
【請求項７９】
１種または複数種の長鎖多価不飽和脂肪酸（ＬＣ−ＰＵＦＡ）を合成できる細胞を得る方法であって、
ａ） ｉ）Δ６エロンガーゼおよび／またはΔ９エロンガーゼ、
ｉｉ）Δ６デサチュラーゼおよび／またはΔ８デサチュラーゼ、
ｉｉｉ）Δ５デサチュラーゼ、
ｉｖ）Δ５エロンガーゼ、
ｖ）Δ４デサチュラーゼ、ならびに
ｖｉ）場合によって、ジアシルグリセロールアシルトランスフェラーゼ
をコードする外因性ポリヌクレオチドを細胞、好ましくは前記ＬＣ−ＰＵＦＡを合成することができない細胞中に導入するステップであり、各ポリヌクレオチドが、前記細胞中における前記ポリヌクレオチドの発現を誘導できる１つまたは複数のプロモーターに作動可能に連結する、ステップ、
ｂ）前記細胞中において前記外因性ポリヌクレオチドを発現させるステップ、
ｃ）前記細胞の脂肪酸組成を分析するステップ、ならびに
ｄ） １）ＡＬＡからＥＰＡ、ＤＰＡまたはＤＨＡの変換の効率が少なくとも１７．３％または少なくとも２３％である性質、
２）ＡＬＡからＤＰＡまたはＤＨＡの変換の効率が少なくとも１５．４％または少なくとも２１％である性質、
３）ＡＬＡからＤＨＡの変換の効率が少なくとも９．５％または少なくとも１０．８％である性質、および
４）ＥＰＡからＤＨＡの変換の効率が少なくとも４５％または少なくとも５０％である性質
の内の１つもしくは複数または全てを特徴とする細胞であり、好ましくはさらに、前記細胞中における全脂肪酸の少なくとも４％がＤＨＡであることを特徴とする細胞を選択するステップ
を含む方法。
【請求項８０】
１種または複数種の長鎖多価不飽和脂肪酸（ＬＣ−ＰＵＦＡ）を合成できる細胞を得る方法であって、
ａ） ｉ）Δ６エロンガーゼおよび／またはΔ９エロンガーゼ、
ｉｉ）Δ６デサチュラーゼおよび／またはΔ８デサチュラーゼ、
ｉｉｉ）Δ５デサチュラーゼ、
ｉｖ）Δ５エロンガーゼ、ならびに
ｖ）場合によって、ジアシルグリセロールアシルトランスフェラーゼ
をコードする外因性ポリヌクレオチドを細胞、好ましくは前記ＬＣ−ＰＵＦＡを合成することができない細胞中に導入するステップであり、各ポリヌクレオチドが、前記細胞中における前記ポリヌクレオチドの発現を誘導できる１つまたは複数のプロモーターに作動可能に連結する、ステップ、
ｂ）前記細胞中において前記外因性ポリヌクレオチドを発現させるステップ、
ｃ）前記細胞の脂肪酸組成を分析するステップ、ならびに
ｄ） ａ）ＡＬＡからＥＰＡまたはＤＰＡの変換の効率が少なくとも１７．３％または少なくとも２３％である性質、および
ｂ）ＡＬＡからＤＰＡの変換の効率が少なくとも１５．４％または少なくとも２１％である性質
の内の１つもしくは複数または全てを特徴とする細胞であり、好ましくはさらに、前記細胞中における全脂肪酸の少なくとも４％がＤＰＡであることを特徴とする細胞を選択するステップ
を含む方法。
【請求項８１】
前記外因性ポリヌクレオチドが、前記細胞のゲノム中に安定して組み込まれるようになる、請求項７０から８０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８２】
ステップａ）の前記細胞から形質転換植物を再生させるステップをさらに含む、請求項８１に記載の方法。
【請求項８３】
前記外因性ポリヌクレオチドまたは複数の前記外因性ポリヌクレオチドが、前記細胞中において一過性に発現される、請求項７０から８０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８４】
前記細胞が、植物中における葉細胞である、請求項７０から８３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８５】
脂肪酸不飽和化に関与する核酸分子を選択する方法であって、
ｉ）プロモーターに作動可能に連結する核酸分子を得るステップであり、前記核酸分子が、脂肪酸デサチュラーゼであり得るポリペプチドをコードする、ステップ、
ｉｉ）前記プロモーターが活性である細胞中に前記核酸分子を導入するステップ、
ｉｉｉ）前記細胞中において前記核酸分子を発現させるステップ、
ｉｖ）前記細胞の脂肪酸組成を分析するステップ、ならびに
ｖ）前記ポリペプチドがω３デサチュラーゼ活性を有し、かつＡＲＡからＥＰＡ、ＤＧＬＡからＥＴＡ、ＧＬＡからＳＤＡの内の少なくとも１つ、ＡＲＡからＥＰＡおよびＤＧＬＡからＥＴＡの両方、ＡＲＡからＥＰＡおよびＧＬＡからＳＤＡの両方、またはこれらの３つ全てを不飽和化することができることに基づいて、脂肪酸不飽和化に関与する核酸分子を選択するステップ
を含む方法。
【請求項８６】
前記ポリペプチドのアミノ酸配列が、配列番号１５と少なくとも３５％同一であり、配列番号１７と少なくとも６０％同一であり、および／または配列番号２０と少なくとも６０％同一である、請求項８５に記載の方法。
【請求項８７】
脂肪酸伸長に関与する核酸分子を選択する方法であって、
ｉ）プロモーターに作動可能に連結する核酸分子を得るステップであり、前記核酸分子が、脂肪酸エロンガーゼであり得るポリペプチドをコードする、ステップ、
ｉｉ）前記プロモーターが活性である細胞中に前記核酸分子を導入するステップ、
ｉｉｉ）前記細胞中において前記核酸分子を発現させるステップ、
ｉｖ）前記細胞の脂肪酸組成を分析するステップ、および
ｖ）前記ポリペプチドがΔ５エロンガーゼ活性を有し、かつ少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％または少なくとも７５％である、ＥＰＡについての、ＤＰＡを産生する変換の効率を有することに基づいて、脂肪酸伸長に関与する核酸分子を選択するステップ
を含む方法。
【請求項８８】
前記ポリペプチドのアミノ酸配列が、配列番号６と少なくとも４７％同一である、請求項８７に記載の方法。
【請求項８９】
脂肪酸不飽和化に関与する核酸分子を選択する方法であって、
ｉ）プロモーターに作動可能に連結する核酸分子を得るステップであり、前記核酸分子が、脂肪酸デサチュラーゼであり得るポリペプチドをコードする、ステップ、
ｉｉ）前記プロモーターが活性である細胞中に前記核酸分子を導入するステップ、
ｉｉｉ）前記細胞中において前記核酸分子を発現させるステップ、
ｉｖ）前記細胞の脂肪酸組成を分析するステップ、ならびに
ｖ）前記ポリペプチドがΔ６デサチュラーゼ活性を有し、かつ
ａ）好ましくは植物細胞中における、脂肪酸基質としてのＬＡよりもＡＬＡに対して、より大きなΔ６デサチュラーゼ活性、
ｂ）好ましくは植物細胞中における、脂肪酸基質としてＰＣのｓｎ−２位に接合したＡＬＡに対するよりも脂肪酸基質としてのＡＬＡ−ＣｏＡに対して、より大きなΔ６デサチュラーゼ活性、および
ｃ）好ましくは植物細胞中における、ＡＬＡに対するΔ８デサチュラーゼ活性
の内の少なくとも２つ、好ましくは３つ全てを有することに基づいて、脂肪酸不飽和化に関与する核酸分子を選択するステップ
を含む方法。
【請求項９０】
前記ポリペプチドのアミノ酸配列が、配列番号１０と少なくとも７７％同一であり、および／または配列番号８と少なくとも６７％同一である、請求項８９に記載の方法。
【請求項９１】
脂肪酸不飽和化に関与する核酸分子を選択する方法であって、
ｉ）プロモーターに作動可能に連結する核酸分子を得るステップであり、前記核酸分子が、脂肪酸デサチュラーゼであり得るポリペプチドをコードする、ステップ、
ｉｉ）前記プロモーターが活性である細胞中に前記核酸分子を導入するステップ、
ｉｉｉ）前記細胞中において前記核酸分子を発現させるステップ、
ｉｖ）前記細胞の脂肪酸組成を分析するステップ、ならびに
ｖ）前記ポリペプチドがΔ６デサチュラーゼ活性およびΔ８デサチュラーゼ活性の両方を有することに基づいて、脂肪酸不飽和化に関与する核酸分子を選択するステップ
を含む方法。
【請求項９２】
前記ポリペプチドのアミノ酸配列が、配列番号８と少なくとも６７％同一である、請求項９１に記載の方法。
【請求項９３】
ステップ（ｖ）が、アシル−ＣｏＡ基質に対して活性なデサチュラーゼまたはフロントエンドデサチュラーゼをコードする核酸分子を選択することを含む、請求項８５、８６または８９から９２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項９４】
組換え細胞を産生するため、組換え細胞中において少なくとも２種の脂肪酸デサチュラーゼおよび２種の脂肪酸エロンガーゼの組合せを発現するため、および／または組換え細胞中においてＬＣ−ＰＵＦＡを産生するために使用される場合における、請求項１〜９３のいずれかに記載の外因性ポリヌクレオチドの組合せ。
【請求項９５】
細胞中において外因性ポリヌクレオチドから発現される場合、ＡＲＡからＥＰＡ、ＤＧＬＡからＥＴＡ、ＧＬＡからＳＤＡの内の少なくとも１つ、ＡＲＡからＥＰＡおよびＤＧＬＡからＥＴＡの両方、ＡＲＡからＥＰＡおよびＧＬＡからＳＤＡの両方、またはこれらの３つ全てを不飽和化することができる実質的に精製されたおよび／または組換えの脂肪酸ω３デサチュラーゼ。
【請求項９６】
請求項４から１１のいずれか一項に記載の性質の内のいずれか１つまたは複数を特徴とする、請求項９５に記載のω３デサチュラーゼ。
【請求項９７】
細胞中において外因性ポリヌクレオチドから発現される場合、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％または少なくとも７５％の効率でＤＰＡを産生する、ＥＰＡに対する活性を有する、実質的に精製されたおよび／または組換えの脂肪酸Δ５エロンガーゼ。
【請求項９８】
請求項１から３のいずれか一項に記載の性質の内のいずれか１つまたは複数を特徴とする、請求項９７に記載のΔ５エロンガーゼ。
【請求項９９】
ｉ）好ましくは植物細胞中における、脂肪酸基質としてのＬＡよりもＡＬＡに対して、より大きなΔ６デサチュラーゼ活性、
ｉｉ）好ましくは植物細胞中における、脂肪酸基質としてＰＣのｓｎ−２位に接合したＡＬＡに対するよりも脂肪酸基質としてのＡＬＡ−ＣｏＡに対して、より大きなΔ６デサチュラーゼ活性、および
ｉｉｉ）好ましくは植物細胞中における、ＥＴｒＡに対するΔ８デサチュラーゼ活性
の内の少なくとも２つ、好ましくは３つ全てを有することをさらに特徴とする、実質的に精製されたおよび／または組換えの脂肪酸Δ６デサチュラーゼ。
【請求項１００】
対応するω６基質よりもω３基質に対して、より大きな活性を有し、細胞中において外因性ポリヌクレオチドから発現される場合に少なくとも５％、少なくとも７．５％もしくは少なくとも１０％の効率で、または酵母細胞中において発現される場合に少なくとも３５％の効率でＳＤＡを産生するＡＬＡに対する活性を有する、実質的に精製されたおよび／または組換えの脂肪酸Δ６デサチュラーゼ。
【請求項１０１】
請求項１２から２２のいずれか一項に記載の性質のいずれか１つまたは複数を特徴とする、請求項９９または１００に記載のΔ６デサチュラーゼ。
【請求項１０２】
Δ９エロンガーゼ活性より大きなΔ６エロンガーゼ活性を有する、実質的に精製されたおよび／または組換えの脂肪酸Δ６エロンガーゼおよびΔ９エロンガーゼ。
【請求項１０３】
請求項５３から５６のいずれか一項に記載の性質のいずれか１つまたは複数を特徴とする、請求項１０２に記載のΔ６エロンガーゼおよびΔ９エロンガーゼ。
【請求項１０４】
配列番号１３において提供される配列、その生物学的に活性な断片または配列番号１３と少なくとも５３％同一であるアミノ酸配列を有するアミノ酸を含む実質的に精製されたおよび／または組換えの脂肪酸Δ５デサチュラーゼ。
【請求項１０５】
配列番号２８、９４および９６のいずれか１つにおいて提供される配列、その生物学的に活性な断片、配列番号２８と少なくとも８１％同一であるアミノ酸配列、または配列番号９４および／もしくは配列番号９６と少なくとも５０％同一であるアミノ酸配列を有するアミノ酸を含む実質的に精製されたおよび／または組換えの脂肪酸Δ９エロンガーゼ。
【請求項１０６】
配列番号１０８において提供される配列、その生物学的に活性な断片または配列番号１０８と少なくとも５４％同一であるアミノ酸配列を有するアミノ酸を含む実質的に精製されたおよび／または組換えジアシルグリセロールアシルトランスフェラーゼ。
【請求項１０７】
デサチュラーゼおよび／またはエロンガーゼが微細藻類から精製できる、請求項９５から１０６のいずれか一項に記載のデサチュラーゼまたはエロンガーゼ。
【請求項１０８】
ｉ）配列番号３、５、７、９、１１、１２、１４、１６、１８、１９、２７、２９、９３、９５、１０７もしくは１２５から１２９のいずれか１つから選択されるヌクレオチドの配列、
ｉｉ）請求項９５から１０７のいずれか一項に記載のデサチュラーゼもしくはエロンガーゼをコードするヌクレオチドの配列、
ｉｉｉ）配列番号３、５、７、９、１１、１２、１４、１６、１８、１９、２７、２９、９３、９５、１０７もしくは１２５から１２９において記載される配列の内の１つまたは複数と少なくとも５０％同一であるヌクレオチドの配列、および／または
ｉｖ）ストリンジェントな条件下でｉ）からｉｉｉ）のいずれか１つにハイブリダイズする配列
を含む単離されたおよび／または外因性ポリヌクレオチド。
【請求項１０９】
植物細胞のゲノム中に組み込むためのおよび／または組み込まれたＤＮＡ構築物であって、前記構築物が、前記植物細胞中における脂肪酸合成をモジュレートするタンパク質をコードする少なくとも３つのオープンリーディングフレームのクラスターを含み、好ましくは、各タンパク質が脂肪酸デサチュラーゼまたは脂肪酸エロンガーゼであり、同じ転写方向を有する各オープンリーディングフレームが、少なくとも７５０ｂｐ、少なくとも１，０００ｂｐまたは少なくとも１，２５０ｂｐによって分離され、前記オープンリーディングフレームの内の少なくとも２つが、異なる転写方向を有し、各オープンリーディングフレームが、前記植物細胞中において活性なプロモーターに作動可能に連結し、各プロモーターが、独立して同一または異なってよい、ＤＮＡ構築物。
【請求項１１０】
前記プロモーターの内の少なくとも２つが異なる、請求項１０９に記載のＤＮＡ構築物。
【請求項１１１】
各オープンリーディングフレームが、異種５’リーダー配列に作動可能に連結し、その各々が、独立して同一または異なってよく、各異種５’リーダー配列が、特定のオープンリーディングフレームに対する天然に存在する５’リーダー配列と比較して転写効率を増強する、請求項１０９または請求項１１０に記載のＤＮＡ構築物。
【請求項１１２】
前記異種５’リーダー配列が、タバコモザイクウイルス（ＴＭＶ）５’リーダー配列である、請求項１１１に記載のＤＮＡ構築物。
【請求項１１３】
前記タンパク質が、エロンガーゼおよび／またはデサチュラーゼである、請求項１０９から１１２のいずれか一項に記載のＤＮＡ構築物。
【請求項１１４】
タンパク質に翻訳されるオープンリーディングフレームを３または４つだけ有する、請求項１０９から１１３のいずれか一項に記載のＤＮＡ構築物。
【請求項１１５】
請求項１０８に記載のポリヌクレオチドおよび／または請求項１０９から１１４のいずれか一項に記載のＤＮＡ構築物を含むベクター。
【請求項１１６】
前記ポリヌクレオチドが、プロモーターに作動可能に連結する、請求項１１５に記載のベクター。
【請求項１１７】
請求項９５から１０７のいずれか一項に記載のデサチュラーゼまたはエロンガーゼを産生する方法であって、細胞または無細胞発現系中において請求項１０８に記載のポリヌクレオチド、請求項１０９から１１４のいずれか一項に記載のＤＮＡ構築物および／または請求項１１５もしくは請求項１１６に記載のベクターを発現させるステップを含む方法。
【請求項１１８】
少なくとも３種の異なる外因性ポリヌクレオチドで真核細胞を一過性にトランスフェクトする方法であって、
ｉ）少なくとも
ａ）第１の外因性ポリヌクレオチドを含む染色体外転移核酸を含む第１の細菌、
ｂ）第２の外因性ポリヌクレオチドを含む染色体外転移核酸を含む第２の細菌、および
ｃ）第３の外因性ポリヌクレオチドを含む染色体外転移核酸を含む第３の細菌
を得るステップ、ならびに
ｉｉ）ステップｉ）の前記細菌を前記細胞に接触させるステップ
を含み、前記染色体外転移核酸の各々を前記細菌から前記細胞に転移させて、一過性にトランスフェクトされた細胞を産生し、前記外因性ポリヌクレオチドの各々が前記細胞中において活性なプロモーターを含み、各プロモーターが独立して同一または異なってよく、前記外因性ポリヌクレオチドの内の少なくとも１つがサイレンシングサプレッサーをコードする、方法。
【請求項１１９】
前記細胞を得るステップと、次いで前記細胞に第４の外因性ポリヌクレオチドを含む染色体外転移核酸を含む第４の細菌を接触させるステップとを含む、請求項１１８に記載の方法。
【請求項１２０】
前記細胞を得るステップと、次いで前記細胞に第５の外因性ポリヌクレオチドを含む染色体外転移核酸を含む第５の細菌を接触させるステップとを含む、請求項１１９に記載の方法。
【請求項１２１】
前記細胞を得るステップと、次いで前記細胞に第６の外因性ポリヌクレオチドを含む染色体外転移核酸を含む第６の細菌を接触させるステップとを含む、請求項１２０に記載の方法。
【請求項１２２】
前記細胞を得るステップと、次いで前記細胞に第７の外因性ポリヌクレオチドを含む染色体外転移核酸を含む第７の細菌を接触させるステップとを含む、請求項１２１に記載の方法。
【請求項１２３】
前記細胞を得るステップと、次いで前記細胞に第８の外因性ポリヌクレオチドを含む染色体外転移核酸を含む第８の細菌を接触させるステップとを含む、請求項１２２に記載の方法。
【請求項１２４】
所望の活性について一過性にトランスフェクトされた細胞をスクリーニングする方法であって、請求項１１８から１２３のいずれか一項に記載の方法を実施するステップと、前記所望の活性について前記細胞を試験するステップとを含む方法。
【請求項１２５】
少なくとも６種の異なる外因性ポリヌクレオチドで真核細胞を形質転換する方法であって、
ｉ）少なくとも
ａ）３種、４種、５種または６種の異なる外因性ポリヌクレオチドを含む第１の染色体外転移核酸を含む第１の細菌、および
ｂ）３種、４種、５種または６種の異なる外因性ポリヌクレオチドを含む第１と異なる第２の染色体外転移核酸を含む第２の細菌
を得るステップ、
ｉｉ）ステップｉ）の前記細菌を前記細胞に接触させるステップ、ならびに
ｉｉｉ）場合によって、前記第１および第２の染色体外転移核酸の前記外因性ポリヌクレオチドで安定して形質転換された細胞を選択するステップ
を含み、前記第１および第２の染色体外転移核酸の前記外因性ポリヌクレオチドの各々を前記細菌から前記細胞に転移させて、前記形質転換細胞を産生し、前記外因性ポリヌクレオチドの各々が、前記細胞またはそれに由来し得る細胞中において活性なプロモーターを含み、各プロモーターが、独立して同一または異なってよい、方法。
【請求項１２６】
前記ｉ）第１の染色体外転移核酸が、３から６種だけ、３から５種だけ、３から４種だけ、４から６種だけ、４から５種だけ、または５から６種だけの異なる外因性ポリヌクレオチドを有し、ｉｉ）前記第２の染色体外転移核酸が、３から６種だけ、３から５種だけ、３から４種だけ、４から６種だけ、４から５種だけ、または５から６種だけの異なる外因性ポリヌクレオチドを有する、請求項１２５に記載の方法。
【請求項１２７】
前記外因性ポリヌクレオチドの各々がポリペプチドをコードし、前記ポリペプチドの各々が異なる、請求項１２５または請求項１２６に記載の方法。
【請求項１２８】
ｉ）前記第１の染色体外転移核酸が、Δ６デサチュラーゼ、Δ１２デサチュラーゼおよびΔ１５デサチュラーゼから成る群から選択されるポリペプチドを独立してコードする２種の外因性ポリヌクレオチドを含み、ならびに
ｉｉ）前記第２の染色体外転移核酸が、前記群からの第３の酵素であるポリペプチドをコードする外因性ポリヌクレオチドを含む、請求項１２５から１２７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１２９】
前記細胞が植物細胞であり、前記安定形質転換細胞から形質転換植物を生成するステップをさらに含む、請求項１２５から１２８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１３０】
各外因性ポリヌクレオチドが、酵素経路の部分を形成する酵素をコードするか、またはかかる酵素の候補物質である、請求項１１８から１２９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１３１】
各外因性ポリヌクレオチドが、脂肪酸合成、脂肪酸修飾、ジアシルグリセロール構築、トリアシルグリセロール構築もしくはそれらの内の２つ以上の組合せに関与する酵素をコードするか、またはかかる酵素の候補物質である、請求項１１８から１３０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１３２】
前記細菌が、アグロバクテリウム属種、リゾビウム属種、シノリゾビウム・メリロティ、メゾリゾビウム・ロティ、シゲラ・フレクスネリ、サルモネラ・チフィムリウム、サルモネラ・コレレスイス、リステリア・モノサイトゲネス、エシェリヒア・コリ、エルシニア・シュードツベルクローシスおよびエルシニア・エンテロコリチカから選択される、請求項１１８から１３１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１３３】
前記染色体外転移核酸が、Ｐ−ＤＮＡ、アグロバクテリウム属種Ｔ−ＤＮＡまたはそれらの組合せである、請求項１１８から１３２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１３４】
前記細胞が、植物細胞または哺乳動物細胞である、請求項１１８から１３３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１３５】
前記細胞が、組織または器官の部分である、請求項１１８から１３４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１３６】
前記細胞が植物細胞であり、前記組織または器官が、葉、茎、根、分裂組織、カルスまたは胚珠である、請求項１３５に記載の方法。
【請求項１３７】
請求項１１８から１３６のいずれか一項に記載の方法によって産生される細胞。
【請求項１３８】
少なくとも６種の異なる外因性ポリヌクレオチドで安定形質転換植物を産生する方法であって、
ｉ）３種、４種、５種または６種の異なる外因性ポリヌクレオチドを含む第１の外因性ゲノム領域を含む第１の安定形質転換植物を得るステップ、
ｉｉ）３種、４種、５種または６種の異なる外因性ポリヌクレオチドを含む前記第１と異なる第２の外因性ゲノム領域を含み、前記第１と性的に適合性のある種の第２の安定形質転換植物を得るステップ、
ｉｉｉ）前記第１の安定形質転換植物を前記第２の安定形質転換植物と交配するステップ、ならびに
ｉｖ）ステップｉｉｉ）から産生された植物または前記第１および第２のゲノム領域を含むその子孫を選択することによって安定形質転換植物を産生するステップ
を含み、前記外因性ポリヌクレオチドの各々が、前記植物中において活性なプロモーターを含み、各プロモーターが、独立して同一または異なってよい、方法。
【請求項１３９】
ステップｉ）が、
ａ）３種、４種、５種または６種の異なる外因性ポリヌクレオチドを含む第１の染色体外転移核酸を含む第１の細菌を植物細胞に接触させるステップ、
ｂ）ステップａ）の前記植物細胞から安定形質転換植物を生成するステップ、および場合によって、
ｃ）ステップｂ）の前記安定形質転換植物から子孫植物を産生するステップ
によって前記第１の安定形質転換植物を産生することを含み、
ならびに／またはステップｉｉ）が、
ｄ）３種、４種、５種または６種の異なる外因性ポリヌクレオチドを含む第２の染色体外転移核酸を含む第２の細菌を植物細胞に接触させるステップ、
ｅ）ステップｄ）の前記植物細胞から安定形質転換植物を生成するステップ、および場合によって
ｆ）ステップｅ）の前記安定形質転換植物から子孫植物を産生するステップ
によって前記第２の安定形質転換植物を産生することを含む、請求項１３８に記載の方法。
【請求項１４０】
少なくとも６種の異なる外因性ポリヌクレオチドを有する安定形質転換植物を産生する方法であって、
ｉ）３種、４種、５種または６種の異なる外因性ポリヌクレオチドを含む第１の外因性ゲノム領域を含む第１の安定形質転換植物または植物部分を得るステップ、
ｉｉ）前記第１の安定形質転換植物の細胞または植物部分に３種、４種、５種または６種の異なる外因性ポリヌクレオチドを含む染色体外転移核酸を含む細菌を接触させるステップ、
ｉｉｉ）前記細胞から植物を産生するステップ、および
ｉｖ）場合によって、前記少なくとも６種の異なる外因性ポリヌクレオチドを含む、ステップｉｉｉ）から産生された植物を選択するステップ
を含む方法。
【請求項１４１】
少なくとも、
ａ）第１の外因性ポリヌクレオチドを含む第１の染色体外転移核酸、
ｂ）第２の外因性ポリヌクレオチドを含む第２の染色体外転移核酸、および
ｃ）第３の外因性ポリヌクレオチドを含む第３の染色体外転移核酸
を含む細胞。
【請求項１４２】
３種、４種、５種または６種の異なる外因性ポリヌクレオチドを含む第１の外因性ゲノム領域と、３種、４種、５種または６種の異なる外因性ポリヌクレオチドを含む第２の外因性ゲノム領域とを含むトランスジェニック植物もしくはその子孫または種子。
【請求項１４３】
請求項１から６９、１３７または１４１のいずれか一項に記載の細胞を含むトランスジェニック非ヒト生物。
【請求項１４４】
トランスジェニック植物である、請求項１４３に記載の生物。
【請求項１４５】
請求項１から６９、１３７もしくは１４１のいずれか一項に記載の細胞を含んでいるか、または請求項１４２もしくは請求項１４４に記載のトランスジェニック植物から得られた種子。
【請求項１４６】
請求項１から６９、１３７もしくは１４１のいずれか一項に記載の細胞、請求項１４２に記載の植物、請求項１４３もしくは１４４に記載のトランスジェニック非ヒト生物または請求項１４５に記載の種子によって産生された、あるいは請求項１から６９、１３７もしくは１４１のいずれか一項に記載の細胞、請求項１４２に記載の植物、請求項１４３もしくは１４４に記載のトランスジェニック非ヒト生物または請求項１４５に記載の種子から得られた油。
【請求項１４７】
前記油が、油料種子からの油の抽出によって得られる、請求項１４６に記載の油。
【請求項１４８】
キャノーラ油（ブラッシカ・ナパス、ブラッシカ・ラパ属種）、カラシ油（ブラッシカ・ユンケア）、他のブラッシカ油、ヒマワリ油（ヘリアンサス・アナス）、アマニ油（リナム・ウシタチシマム）、ダイズ油（グリシン・マックス）、サフラワー油（カーサマス・ティンクトリアス）、トウモロコシ油（ゼア・マイス）、タバコ油（ニコチアナ・タバカム）、落花生油（アラキス・ヒポゲア）、パーム油、綿実油（ゴシピウム・ヒルスツム）、ヤシ油（ココス・ヌシフェラ）、アボカド油（ペルセア・アメリカナ）、オリーブ油（オレア・エウロパエア）、カシュー油（アナカルジウム・オクシデンタレ）、マカダミア油（マカダミア・インテルグリフォリア）、扁桃油（プルヌス・アミグダルス）またはアラビドプシス種子油（アラビドプシス・サリアナ）である、請求項１４６または請求項１４７に記載の油。
【請求項１４９】
請求項１から６９、１３７もしくは１４１のいずれか一項に記載の細胞、請求項１４２に記載の植物、請求項１４３もしくは１４４に記載のトランスジェニック非ヒト生物または請求項１４５に記載の種子によって産生された、あるいは請求項１から６９、１３７もしくは１４１のいずれか一項に記載の細胞、請求項１４２に記載の植物、請求項１４３もしくは１４４に記載のトランスジェニック非ヒト生物または請求項１４５に記載の種子から得られた脂肪酸。
【請求項１５０】
不飽和脂肪酸を含有する油の製造方法であって、請求項１から６９、１３７もしくは１４１のいずれか一項に記載の細胞、請求項１４２に記載の植物、請求項１４３もしくは１４４に記載のトランスジェニック非ヒト生物または請求項１４５に記載の種子から油を抽出するステップを含む方法。
【請求項１５１】
請求項１から６８、１３７もしくは１４１のいずれか一項に記載の細胞、請求項９５から１０７のいずれか一項に記載のデサチュラーゼもしくはエロンガーゼ、請求項１０８に記載のポリヌクレオチド、請求項１０９から１１４のいずれか一項に記載のＤＮＡ構築物、請求項１１５もしくは請求項１１６に記載のベクター、請求項１４６から１４８のいずれか一項に記載の油または請求項１４９に記載の脂肪酸を含む組成物。
【請求項１５２】
請求項１から６９、１３７もしくは１４１のいずれか一項に記載の細胞、請求項１４２に記載の植物、請求項１４３もしくは１４４に記載のトランスジェニック非ヒト生物、請求項１４５に記載の種子、請求項１４６から１４８のいずれか一項に記載の油および／または請求項１４９に記載の脂肪酸を含む飼料、化粧品または化学物質。
【請求項１５３】
デサチュラーゼ反応を実施する方法であって、ＣｏＡにエステル化された多価不飽和脂肪酸に請求項４から２２のいずれか一項に記載のデサチュラーゼを接触させるステップを含む方法。
【請求項１５４】
請求項９５から１０７のいずれか一項に記載のデサチュラーゼまたはエロンガーゼに特異的に結合する実質的に精製された抗体またはその断片。
【請求項１５５】
ＰＵＦＡから利益を受ける状態を治療または予防する方法であって、請求項１から６８、１３７もしくは１４１のいずれか一項に記載の細胞、請求項９５から１０７のいずれか一項に記載のデサチュラーゼもしくはエロンガーゼ、請求項１０８に記載のポリヌクレオチド、請求項１０９から１１４のいずれか一項に記載のＤＮＡ構築物、請求項１１５もしくは請求項１１６に記載のベクター、請求項１４２に記載の植物、請求項１４３もしくは１４４に記載のトランスジェニック非ヒト生物、請求項１４５に記載の種子、請求項１４６から１４８のいずれか一項に記載の油、請求項１４９に記載の脂肪酸および／または請求項１５２に記載の飼料を対象に投与するステップを含む方法。
【請求項１５６】
前記状態が、不整脈、血管形成、炎症、喘息、乾癬、骨粗鬆症、腎結石、エイズ、多発性硬化症、関節リウマチ、クローン病、統合失調症、癌、胎児性アルコール症候群、注意欠陥多動性障害、嚢胞性線維症、フェニルケトン尿症、単極性うつ病、攻撃的敵意、アドレノロイコジストフィー（adrenoleukodystophy）、冠性心疾患、高血圧、糖尿病、肥満、アルツハイマー病、慢性閉塞性肺疾患、潰瘍性大腸炎、血管形成術後の再狭窄、湿疹、高血圧症、血小板凝集、胃腸出血、子宮内膜症、月経前症候群、筋痛性脳脊髄炎、ウイルス感染後の慢性疲労または眼疾患である、請求項１５５に記載の方法。
【請求項１５７】
ＰＵＦＡから利益を受ける状態を治療または予防するための医薬品の製造のための、請求項１から６８、１３７もしくは１４１のいずれか一項に記載の細胞、請求項９５から１０７のいずれか一項に記載のデサチュラーゼもしくはエロンガーゼ、請求項１０８に記載のポリヌクレオチド、請求項１０９から１１４のいずれか一項に記載のＤＮＡ構築物、請求項１１５もしくは請求項１１６に記載のベクター、請求項１４２に記載の植物、請求項１４３もしくは１４４に記載のトランスジェニック非ヒト生物、請求項１４５に記載の種子、請求項１４６から１４８のいずれか一項に記載の油、請求項１４９に記載の脂肪酸および／または請求項１５２に記載の飼料の使用。
【請求項１５８】
ｉ）植物貯蔵器官特異的プロモーターに作動可能に連結したサイレンシングサプレッサーをコードする第１の外因性ポリヌクレオチド、および
ｉｉ）前記植物貯蔵器官中における遺伝子転写を誘導するプロモーターに作動可能に連結したＲＮＡ分子をコードする第２の外因性ポリヌクレオチド
を含む植物細胞。
【請求項１５９】
前記植物貯蔵器官特異的プロモーターが、種子特異的プロモーター、例えば、子葉特異的プロモーターまたは内乳特異的プロモーターである、請求項１５８に記載の細胞。
【請求項１６０】
前記サイレンシングサプレッサーが、ウイルスサプレッサータンパク質である、請求項１５８または請求項１５９に記載の細胞。
【請求項１６１】
前記ＲＮＡ分子がポリペプチドをコードする、請求項１５８から１６０のいずれか一項に記載の細胞。
【請求項１６２】
前記ポリペプチドが、脂肪酸もしくは脂質の合成もしくは修飾に関与し、種子貯蔵タンパク質であり、炭水化物合成もしくは修飾に関与し、または医薬である、請求項１６１に記載の細胞。
【請求項１６３】
少なくとも１種、少なくとも２種、少なくとも３種、少なくとも４種または少なくとも５種の更なる異なる外因性ポリヌクレオチドを含み、各々が、ＲＮＡ分子をコードし、前記貯蔵器官中における遺伝子転写を誘導するプロモーターに作動可能に連結する、請求項１５８から１６２のいずれか一項に記載の細胞。
【請求項１６４】
前記外因性ポリヌクレオチドがＤＮＡである、請求項１５８から１６３のいずれか一項に記載の細胞。
【請求項１６５】
種子等の植物貯蔵器官中にある、請求項１５８から１６４のいずれか一項に記載の細胞。
【請求項１６６】
前記ＲＮＡモレケウル（moleceule）が、前記第１の外因性ポリヌクレオチドを欠くアイソジェニックな細胞と比較して増加したレベルで存在する、請求項１５８から１６５のいずれか一項に記載の細胞。
【請求項１６７】
少なくとも前記更なる外因性ポリヌクレオチドの内によってコードされる少なくとも１種のＲＮＡ分子が、前記第１の外因性ポリヌクレオチドを欠くアイソジェニックな細胞と比較して増加したレベルで存在する、請求項１６６に記載の細胞。
【請求項１６８】
請求項１５８から１６７のいずれか一項に記載の細胞を含むトランスジェニック植物。
【請求項１６９】
請求項１５８から１６７のいずれか一項に記載の細胞を含むおよび／または請求項１６８に記載のトランスジェニック植物から得られる植物貯蔵器官。
【請求項１７０】
種子である、請求項１６９に記載の植物貯蔵器官。
【請求項１７１】
その貯蔵器官中におけるＲＮＡ分子の増加したレベルを有する表現型的に正常な植物を得る方法であって、
ａ） ｉ）植物貯蔵器官特異的プロモーターに作動可能に連結したサイレンシングサプレッサーをコードする第１の外因性ポリヌクレオチド、および
ｉｉ）前記植物貯蔵器官中における遺伝子転写を誘導するプロモーターに作動可能に連結したＲＮＡ分子をコードする第２の外因性ポリヌクレオチド
を植物細胞中に導入するステップ、
ｂ）ステップａ）の前記細胞から形質転換植物を再生させるステップ、
ｃ）前記形質転換植物が貯蔵器官を産生するまで、前記形質転換植物を成長させるステップ、
ｄ）前記貯蔵器官中における前記ＲＮＡ分子のレベルを決定するステップ、および
ｅ）表現型的に正常な植物を選択するステップ
を含み、前記ＲＮＡ分子が、前記第１の外因性ポリヌクレオチドを欠く対応する貯蔵器官と比較して前記貯蔵器官中において増加したレベルで存在する、方法。
【請求項１７２】
その貯蔵器官中におけるＲＮＡ分子の安定化された発現を有する表現型的に正常な植物を得る方法であって、
ａ） ｉ）植物貯蔵器官特異的プロモーターに作動可能に連結したサイレンシングサプレッサーをコードする第１の外因性ポリヌクレオチド、および
ｉｉ）前記植物貯蔵器官中における遺伝子転写を誘導するプロモーターに作動可能に連結したＲＮＡ分子をコードする第２の外因性ポリヌクレオチド
を植物細胞中に導入するステップ、
ｂ）ステップａ）の前記細胞から形質転換植物を再生させるステップ、
ｃ）ステップｂ）の前記植物に由来する前記貯蔵器官を含む第３世代の子孫植物を産生するステップ、ならびに
ｄ）第３世代の子孫植物を選択するステップ
を含み、前記ＲＮＡ分子が、前記植物の前世代の貯蔵器官中におけるレベルの少なくとも９０％のレベルで前記貯蔵器官中に存在する、方法。
【請求項１７３】
前記外因性ポリヌクレオチドが、前記細胞のゲノム中に安定して組み込まれる、請求項１７１または請求項１７２に記載の方法。
【請求項１７４】
トランスジェニック植物の貯蔵器官中におけるＲＮＡ分子の発現を安定させる方法であって、
ｉ）植物貯蔵器官特異的プロモーターに作動可能に連結したサイレンシングサプレッサーをコードする第１の外因性ポリヌクレオチドを発現させるステップ、および
ｉｉ）前記植物貯蔵器官中における遺伝子転写を誘導するプロモーターに作動可能に連結したＲＮＡ分子をコードする第２の外因性ポリヌクレオチドを発現させるステップ
を含み、前記トランスジェニック植物が、前記外因性ポリヌクレオチドで形質転換された親植物から得られた少なくとも第３世代の子孫植物であり、前記ＲＮＡ分子が、前記植物の前世代の貯蔵器官中におけるレベルの少なくとも９０％のレベルで前記植物の前記貯蔵器官中に存在する、方法。
【請求項１７５】
前記植物を野外において成長させる、請求項１７１から１７４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１】
Δ５エロンガーゼ活性を有する脂肪酸エロンガーゼをコードする外因性ポリヌクレオチドを含む組換え細胞であって、前記細胞中において、好ましくは植物細胞中において前記エロンガーゼが前記外因性ポリヌクレオチドから発現される場合、前記エロンガーゼが、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％または少なくとも７５％の効率でＤＰＡを産生する、ＥＰＡに対する活性を有する、組換え細胞。
【請求項２】
前記エロンガーゼが、配列番号６において提供される配列、その生物学的に活性な断片または配列番号６と少なくとも４７％同一であるアミノ酸配列を有するアミノ酸を含む、請求項１に記載の細胞。
【請求項３】
ｉ）Δ８デサチュラーゼおよび／またはΔ６デサチュラーゼ、
ｉｉ）Δ９エロンガーゼおよび／またはΔ６エロンガーゼ、
ｉｉｉ）Δ５デサチュラーゼ、ならびに
ｉｖ）場合によって、Δ４デサチュラーゼおよび／またはω３デサチュラーゼ
をコードする外因性ポリヌクレオチドをさらに含み、
各ポリヌクレオチドが、前記細胞中における前記ポリヌクレオチドの発現を誘導できる１つまたは複数のプロモーターに作動可能に連結する、請求項１または請求項２に記載の細胞。
【請求項４】
ω３デサチュラーゼ活性を有する脂肪酸デサチュラーゼをコードする外因性ポリヌクレオチドを含む組換え細胞であって、前記デサチュラーゼが前記細胞中における前記外因性ポリヌクレオチドから発現される場合、前記デサチュラーゼが、ＡＲＡからＥＰＡ、ＤＧＬＡからＥＴＡ、ＧＬＡからＳＤＡの内の少なくとも１つ、ＡＲＡからＥＰＡおよびＤＧＬＡからＥＴＡの両方、ＡＲＡからＥＰＡおよびＧＬＡからＳＤＡの両方、またはこれらの３つ全てを不飽和化することができる、組換え細胞。
【請求項５】
前記デサチュラーゼがフロントエンドデサチュラーゼである、請求項４に記載の細胞。
【請求項６】
前記デサチュラーゼが、そのアシル鎖中に少なくとも３個の炭素−炭素二重結合を有するＣ２０脂肪酸、好ましくはＡＲＡに対するΔ１７デサチュラーゼ活性を有する、請求項４または請求項５に記載の細胞。
【請求項７】
前記デサチュラーゼが、そのアシル鎖中に３個の炭素−炭素二重結合を有するＣ１８脂肪酸、好ましくはＧＬＡに対するΔ１５デサチュラーゼ活性を有する、請求項４から６のいずれか一項に記載の細胞。
【請求項８】
前記デサチュラーゼが、対応するアシル−ＰＣ基質よりもアシル−ＣｏＡ基質に対して、より大きな活性を有する、請求項４から７のいずれか一項に記載の細胞。
【請求項９】
前記アシル−ＣｏＡ基質がＡＲＡ−ＣｏＡであり、前記アシル−ＰＣ基質が、ＰＣのｓｎ−２位でＡＲＡを含む、請求項８に記載の細胞。
【請求項１０】
前記細胞が植物細胞であり、前記デサチュラーゼが、前記細胞中において前記外因性ポリヌクレオチドから発現される場合、少なくとも４０％の効率でＥＰＡを産生する、ＡＲＡに対する活性を有する、請求項４から９のいずれか一項に記載の細胞。
【請求項１１】
前記デサチュラーゼが、配列番号１５、１７もしくは２０において提供される配列、その生物学的に活性な断片、または配列番号１５と少なくとも３５％同一である、配列番号１７と少なくとも６０％同一であるおよび／もしくは配列番号２０と少なくとも６０％同一であるアミノ酸配列を有するアミノ酸を含む、請求項４から１０のいずれか一項に記載の細胞。
【請求項１２】
Δ６デサチュラーゼ活性を有する脂肪酸デサチュラーゼをコードする外因性ポリヌクレオチドを含む組換え細胞であって、前記デサチュラーゼが、以下の
ｉ）好ましくは植物細胞中における、脂肪酸基質としてのＬＡよりもＡＬＡに対して、より大きなΔ６デサチュラーゼ活性、
ｉｉ）好ましくは植物細胞中における、脂肪酸基質としての、ＰＣのｓｎ−２位に接合したＡＬＡに対するよりも脂肪酸基質としてのＡＬＡ−ＣｏＡに対して、より大きなΔ６デサチュラーゼ活性、および
ｉｉｉ）好ましくは植物細胞中における、ＥＴｒＡに対するΔ８デサチュラーゼ活性
の内の少なくとも２つ、好ましくは３つ全てを有することをさらに特徴とする、組換え細胞。
【請求項１３】
Δ６デサチュラーゼ活性を有する脂肪酸デサチュラーゼをコードする外因性ポリヌクレオチドを含む組換え細胞であって、前記デサチュラーゼが、対応するω６基質よりもω３基質に対して、より大きな活性を有し、前記デサチュラーゼが前記細胞中において前記外因性ポリヌクレオチドから発現される場合に、前記デサチュラーゼが、少なくとも５％、少なくとも７．５％もしくは少なくとも１０％の効率で、または酵母細胞中において発現される場合に少なくとも３５％の効率でＳＤＡを産生する、ＡＬＡに対する活性を有する、組換え細胞。
【請求項１４】
前記デサチュラーゼが、好ましくは植物細胞中において、脂肪酸基質としてのＬＡよりもＡＬＡに対して、より大きなΔ６デサチュラーゼ活性を有する、請求項１３に記載の細胞。
【請求項１５】
前記デサチュラーゼが、好ましくは植物細胞中において、ＬＡと比較して基質としてのＡＬＡに対する少なくとも約２倍大きなΔ６デサチュラーゼ活性、少なくとも３倍大きな活性、少なくとも４倍大きな活性または少なくとも５倍大きな活性を有する、請求項１２または請求項１４に記載の細胞。
【請求項１６】
前記デサチュラーゼが、好ましくは植物細胞中において、脂肪酸基質としての、ＰＣのｓｎ−２位に接合したＡＬＡに対するよりも脂肪酸基質としてのＡＬＡ−ＣｏＡに対して、より大きな活性を有する、請求項１３から１５のいずれか一項に記載の細胞。
【請求項１７】
前記デサチュラーゼが、好ましくは植物細胞中において、脂肪酸基質としてＰＣのｓｎ−２位に接合したＡＬＡに対するよりも、脂肪酸基質としてのＡＬＡ−ＣｏＡに対する少なくとも約５倍大きなΔ６デサチュラーゼ活性または少なくとも１０倍大きな活性を有する、請求項１２または請求項１６に記載の細胞。
【請求項１８】
前記デサチュラーゼがフロントエンドデサチュラーゼである、請求項１２から１７のいずれか一項に記載の細胞。
【請求項１９】
ｉ）Δ６エロンガーゼ、
ｉｉ）Δ５デサチュラーゼ、
ｉｉｉ）Δ５エロンガーゼ、ならびに
ｉｖ）場合によって、Δ４デサチュラーゼおよび／またはω３デサチュラーゼ
をコードする外因性ポリヌクレオチドをさらに含み、
各ポリヌクレオチドが、前記細胞中における前記ポリヌクレオチドの発現を誘導できる１つまたは複数のプロモーターに作動可能に連結する、請求項１２から１８のいずれか一項に記載の細胞。
【請求項２０】
前記Δ６デサチュラーゼが、ＥＴＡに対する検出可能なΔ５デサチュラーゼ活性を有さない、請求項１２から１９のいずれか一項に記載の細胞。
【請求項２１】
前記Δ６デサチュラーゼが、配列番号１０において提供される配列、その生物学的に活性な断片または配列番号１０と少なくとも７７％同一であるアミノ酸配列を有するアミノ酸を含む、請求項１２から２０のいずれか一項に記載の細胞。
【請求項２２】
前記Δ６デサチュラーゼが、配列番号８において提供される配列、その生物学的に活性な断片または配列番号８と少なくとも６７％同一であるアミノ酸配列を有するアミノ酸を含み、Δ８デサチュラーゼ活性を有する、請求項１２から２１のいずれか一項に記載の細胞。
【請求項２３】
ジアシルグリセロールアシルトランスフェラーゼをコードする外因性ポリヌクレオチドを含む組換え細胞であって、前記ジアシルグリセロールアシルトランスフェラーゼが、配列番号１０８において提供される配列、その生物学的に活性な断片または配列番号１０８と少なくとも５４％同一であるアミノ酸配列を有するアミノ酸を含む、組換え細胞。
【請求項２４】
ｉ）Δ９エロンガーゼ、
ｉｉ）Δ８デサチュラーゼ、
ｉｉｉ）Δ５デサチュラーゼ、
ｉｖ）場合によって、Δ５エロンガーゼ、および
ｖ）前記Δ５エロンガーゼが存在する場合、場合によって、Δ４デサチュラーゼ
をコードする外因性ポリヌクレオチドを含む組換え細胞であって、
各ポリヌクレオチドが、前記細胞中における前記ポリヌクレオチドの発現を誘導できる１つまたは複数のプロモーターに作動可能に連結し、前記細胞中における全脂肪酸の少なくとも１５％、少なくとも２０％または少なくとも２５％が、それらのアシル鎖中に少なくとも２０個の炭素および少なくとも３個の炭素−炭素二重結合を含む、組換え細胞。
【請求項２５】
前記細胞中における前記脂肪酸中におけるＡＲＡ、ＥＰＡ、ＤＰＡおよびＤＨＡの総計が、前記細胞中における全脂肪酸の少なくとも１５％、少なくとも２０％または少なくとも２５％を含む、請求項２４に記載の細胞。
【請求項２６】
前記細胞が、野生型植物と比較した場合、オレイン酸をエイコセン酸（Ｃ２０：１）に変換する低下した能力を有し、および／または前記オレイン酸の５％未満が前記細胞中においてエイコセン酸に変換される、請求項１から２５のいずれか一項に記載の細胞。
【請求項２７】
前記細胞中における全脂肪酸は、１％未満のＣ２０：１を有する、請求項２６に記載の細胞。
【請求項２８】
前記細胞が、野生型細胞と比較した場合、低下した内因性Δ１５デサチュラーゼ活性を有し、および／または前記ＬＡの１０％未満が前記細胞中においてＡＬＡに変換される、請求項１から２７のいずれか一項に記載の細胞。
【請求項２９】
前記内因性Δ１５デサチュラーゼが、好ましくはアシル基がＬＡである場合、前記対応するアシル−ＣｏＡ基質に対するよりもアシル−ＰＣ基質に対して、より大きな活性を有する、請求項２８に記載の細胞。
【請求項３０】
前記細胞が、前記外因性ポリヌクレオチドを欠く対応する細胞と比較して、ＧＬＡからＳＤＡおよび／またはＡＲＡからＥＰＡの増加した変換率をさらに含む、請求項１から２９のいずれか一項に記載の細胞。
【請求項３１】
前記細胞中における前記脂肪酸中におけるＤＨＡの量が、前記細胞中における全脂肪酸の少なくとも３％、少なくとも５％または少なくとも１０％である、請求項１から３０のいずれか一項に記載の細胞。
【請求項３２】
ＬＡからＡＲＡおよび／またはＡＬＡからＥＰＡの変換の効率が、少なくとも８０％または少なくとも９０％である、請求項１から３１のいずれか一項に記載の細胞。
【請求項３３】
前記Δ９エロンガーゼが、配列番号２２において提供される配列、その生物学的に活性な断片または配列番号２２と少なくとも８０％同一であるアミノ酸配列を有するアミノ酸を含む、請求項２４から３２のいずれか一項に記載の細胞。
【請求項３４】
前記Δ８デサチュラーゼが、配列番号２４において提供される配列、その生物学的に活性な断片または配列番号２４と少なくとも８０％同一であるアミノ酸配列を有するアミノ酸を含む、請求項２４から３３のいずれか一項に記載の細胞。
【請求項３５】
前記Δ５デサチュラーゼが、配列番号２６において提供される配列、その生物学的に活性な断片または配列番号２６と少なくとも８０％同一であるアミノ酸配列を有するアミノ酸を含む、請求項２４から３４のいずれか一項に記載の細胞。
【請求項３６】
ｉ）Δ６エロンガーゼおよび／またはΔ９エロンガーゼ、
ｉｉ）Δ６デサチュラーゼおよび／またはΔ８デサチュラーゼ、
ｉｉｉ）Δ５デサチュラーゼ、
ｉｖ）Δ５エロンガーゼ、
ｖ）Δ４デサチュラーゼ、ならびに
ｖｉ）場合によって、ジアシルグリセロールアシルトランスフェラーゼ
をコードする外因性ポリヌクレオチドを含む組換え細胞であって、
各ポリヌクレオチドが、前記細胞中における前記ポリヌクレオチドの発現を誘導できる１つまたは複数のプロモーターに作動可能に連結し、
ａ）ＡＬＡからＥＰＡ、ＤＰＡまたはＤＨＡの変換の効率が、少なくとも１７．３％または少なくとも２３％である性質、
ｂ）ＡＬＡからＤＰＡまたはＤＨＡの変換の効率が、少なくとも１５．４％または少なくとも２１％である性質、
ｃ）ＡＬＡからＤＨＡの変換の効率が、少なくとも９．５％または少なくとも１０．８％である性質、および
ｄ）ＥＰＡからＤＨＡの変換の効率が、少なくとも４５％または少なくとも５０％である性質
の内の１つもしくは複数または全てを特徴とし、
好ましくはさらに、前記細胞中における全脂肪酸の少なくとも４％がＤＨＡであることを特徴とする、組換え細胞。
【請求項３７】
前記細胞中におけるトリアシルグリセロール中に組み込まれた全脂肪酸の少なくとも６％、少なくとも１１％または少なくとも１５％が、ＤＨＡである、請求項３６に記載の細胞。
【請求項３８】
ＤＨＡが、前記細胞中におけるＳＤＡ、ＥＴＡ、ＥＰＡ、ＤＰＡおよびＤＨＡの合計の２０〜６５％、好ましくは４０〜６５％を構成する、請求項３６または請求項３７に記載の細胞。
【請求項３９】
前記細胞中におけるω３脂肪酸の０．１〜２５％がＳＤＡであり、０．１〜１０％がＥＴＡであり、０．１〜６０％がＥＰＡであり、０．１〜５０％がＤＰＡであり、３０〜９５％がＤＨＡである、または前記細胞中における前記ω３脂肪酸の０．１〜２５％がＳＤＡであり、０．１〜１０％がＥＴＡであり、０．１〜５０％がＥＰＡであり、０．１〜５０％がＤＰＡであり、４０〜９５％がＤＨＡである、請求項３６から３８のいずれか一項に記載の細胞。
【請求項４０】
前記Δ４デサチュラーゼが、配列番号７３において提供される配列、その生物学的に活性な断片または配列番号７３と少なくとも８０％同一であるアミノ酸配列を有するアミノ酸を含む、請求項３６から３９のいずれか一項に記載の細胞。
【請求項４１】
ｉ）Δ６エロンガーゼおよび／またはΔ９エロンガーゼ、
ｉｉ）Δ６デサチュラーゼおよび／またはΔ８デサチュラーゼ、
ｉｉｉ）Δ５デサチュラーゼ、
ｉｖ）Δ５エロンガーゼ、ならびに
ｖi）場合によって、ジアシルグリセロールアシルトランスフェラーゼ
をコードする外因性ポリヌクレオチドを含む組換え細胞であって、
各ポリヌクレオチドが、前記細胞中における前記ポリヌクレオチドの発現を誘導できる１つまたは複数のプロモーターに作動可能に連結し、
ａ）ＡＬＡからＥＰＡまたはＤＰＡの変換の効率が少なくとも１７．３％または少なくとも２３％である性質、および
ｂ）ＡＬＡからＤＰＡの変換の効率が少なくとも１５．４％または少なくとも２１％である性質
の内の１つもしくは複数または全てを特徴とし、
好ましくはさらに、前記細胞中における全脂肪酸の少なくとも４％がＤＰＡであることを特徴とする、組換え細胞。
【請求項４２】
前記細胞中におけるトリアシルグリセロール中に組み込まれた全脂肪酸の少なくとも６％、少なくとも１１％または少なくとも１５％が、ＤＰＡである、請求項４１に記載の細胞。
【請求項４３】
ＤＰＡが、前記細胞中におけるＳＤＡ、ＥＴＡ、ＥＰＡおよびＤＰＡの合計の２０〜６５％、好ましくは４０〜６５％を構成する、請求項４１または請求項４２に記載の細胞。
【請求項４４】
前記細胞中におけるω３脂肪酸の０．１〜３５％がＳＤＡであり、０．１〜１５％がＥＴＡであり、０．１〜６０％がＥＰＡであり、３０〜７５％がＤＰＡである、または前記細胞中における前記ω３脂肪酸の０．１〜３５％がＳＤＡであり、０．１〜１５％がＥＴＡであり、０．１〜５０％がＥＰＡであり、４０〜７５％がＤＰＡである、請求項４１から４３のいずれか一項に記載の細胞。
【請求項４５】
前記Δ６エロンガーゼが、配列番号４において提供される配列、その生物学的に活性な断片または配列番号４と少なくとも５５％同一であるアミノ酸配列を有するアミノ酸を含む、請求項３６から４４のいずれか一項に記載の細胞。
【請求項４６】
前記Δ６デサチュラーゼが、配列番号８において提供される配列、その生物学的に活性な断片または配列番号８と少なくとも６７％同一であるアミノ酸配列を有するアミノ酸を含む、請求項３６から４５のいずれか一項に記載の細胞。
【請求項４７】
前記Δ５デサチュラーゼが、配列番号２６において提供される配列、その生物学的に活性な断片または配列番号２６と少なくとも８０％同一であるアミノ酸配列を有するアミノ酸を含む、請求項３６から４６のいずれか一項に記載の細胞。
【請求項４８】
前記Δ５エロンガーゼが、配列番号６において提供される配列、その生物学的に活性な断片または配列番号６と少なくとも４７％同一であるアミノ酸配列を有するアミノ酸を含む、請求項３６から４７のいずれか一項に記載の細胞。
【請求項４９】
前記ジアシルグリセロールアシルトランスフェラーゼが、配列番号７５または配列番号１０８において提供される配列、その生物学的に活性な断片または配列番号７５および／または配列番号１０８と少なくとも８０％同一であるアミノ酸配列を有するアミノ酸を含む、請求項３６から４８のいずれか一項に記載の細胞。
【請求項５０】
ｉ）Δ１７デサチュラーゼ、
ｉｉ）Δ１５デサチュラーゼ、および／または
ｉｉｉ）Δ１２デサチュラーゼ
をコードする外因性ポリヌクレオチドをさらに含み、
各ポリヌクレオチドが、前記細胞中における前記ポリヌクレオチドの発現を誘導できる１つまたは複数のプロモーターに作動可能に連結する、請求項１から４９のいずれか一項に記載の細胞。
【請求項５１】
前記デサチュラーゼの内の１種もしくは複数種または全てが、対応するアシル−ＰＣ基質よりも大きなアシル−ＣｏＡ基質に対する活性を有する、請求項１から５０のいずれか一項に記載の細胞。
【請求項５２】
Δ６エロンガーゼおよびΔ９エロンガーゼ活性を有する脂肪酸エロンガーゼをコードする外因性ポリヌクレオチドを含む組換え細胞であって、前記エロンガーゼが、Δ９エロンガーゼ活性より大きなΔ６エロンガーゼ活性を有する、組換え細胞。
【請求項５３】
前記エロンガーゼが、少なくとも５０％もしくは少なくとも６０％である、ＳＤＡについての、ＥＴＡを産生する変換の効率を有し、および／または少なくとも６％もしくは少なくとも９％である、ＡＬＡについての、ＥＴｒＡを産生する変換の効率を有する、請求項５２に記載の細胞。
【請求項５４】
前記エロンガーゼが、Δ９エロンガーゼ活性より少なくとも約６．５倍大きなΔ６エロンガーゼ活性を有する、請求項５２または請求項５３に記載の細胞。
【請求項５５】
前記エロンガーゼが、検出可能なΔ５エロンガーゼ活性を有さない、請求項５２から５４のいずれか一項に記載の細胞。
【請求項５６】
前記エロンガーゼが、配列番号４において提供される配列、その生物学的に活性な断片または配列番号４と少なくとも５５％同一であるアミノ酸配列を有するアミノ酸を含む、請求項５２から５５のいずれか一項に記載の細胞。
【請求項５７】
ｉ）Δ８デサチュラーゼおよび／またはΔ６デサチュラーゼ、
ｉｉ）Δ５デサチュラーゼ、
ｉｉｉ）Δ５エロンガーゼ、ならびに
ｉｖ）場合によって、Δ４デサチュラーゼおよび／またはω３デサチュラーゼ
をコードする外因性ポリヌクレオチドをさらに含み、
各ポリヌクレオチドが、前記細胞中における前記ポリヌクレオチドの発現を誘導できる１つまたは複数のプロモーターに作動可能に連結する、請求項５２から５６のいずれか一項に記載の細胞。
【請求項５８】
Δ５デサチュラーゼ活性を有する脂肪酸デサチュラーゼをコードする外因性ポリヌクレオチドを含む組換え細胞であって、前記デサチュラーゼが、配列番号１３において提供される配列、その生物学的に活性な断片または配列番号１３と少なくとも５３％同一であるアミノ酸配列を有するアミノ酸を含む、組換え細胞。
【請求項５９】
Δ９エロンガーゼ活性を有する脂肪酸エロンガーゼをコードする外因性ポリヌクレオチドを含む組換え細胞であって、前記エロンガーゼが、配列番号２８、９４および９６のいずれか１つにおいて提供される配列、その生物学的に活性な断片、配列番号２８と少なくとも８１％同一であるアミノ酸配列、または配列番号９４および／もしくは配列番号９６と少なくとも５０％同一であるアミノ酸配列を有するアミノ酸を含む、組換え細胞。
【請求項６０】
前記Δ９エロンガーゼが、配列番号９４もしくは配列番号９６において提供される配列、その生物学的に活性な断片、または配列番号９４および／もしくは配列番号９６と少なくとも５０％同一であるアミノ酸配列を有するアミノ酸を含み、前記エロンガーゼが、対応するω３基質よりもω６基質に対して、より大きな活性を有する、請求項５９に記載の細胞。
【請求項６１】
前記デサチュラーゼおよび／またはエロンガーゼが微細藻類から精製できる、請求項１から６０のいずれか一項に記載の細胞。
【請求項６２】
真核細胞である、請求項１から６１のいずれか一項に記載の細胞。
【請求項６３】
植物細胞、哺乳動物細胞、昆虫細胞、真菌細胞または酵母細胞である、請求項６２に記載の細胞。
【請求項６４】
植物中のものおよび／または成熟植物種子細胞である、請求項６３に記載の細胞。
【請求項６５】
前記植物または植物の種子が、それぞれ油料種子植物または油料種子である、請求項６４に記載の細胞。
【請求項６６】
長鎖多価不飽和脂肪酸（ＬＣ−ＰＵＦＡ）を合成することができ、前記ＬＣ−ＰＵＦＡを合成することができない細胞に由来する、請求項１から６５のいずれか一項に記載の細胞。
【請求項６７】
サイレンシングサプレッサーをコードする外因性ポリヌクレオチドをさらに含む、請求項１から６６のいずれか一項に記載の細胞。
【請求項６８】
前記サイレンシングサプレッサーをコードする前記外因性ポリヌクレオチドが、植物貯蔵器官特異的プロモーターに作動可能に連結する、請求項６７に記載の細胞。
【請求項６９】
前記植物貯蔵器官特異的プロモーターが、種子特異的プロモーターである、請求項６８に記載の細胞。
【請求項７０】
１種または複数種の長鎖多価不飽和脂肪酸（ＬＣ−ＰＵＦＡ）を合成できる細胞を得る方法であって、
ａ）脂肪酸ω３デサチュラーゼ活性をコードする外因性ポリヌクレオチドを細胞、好ましくは前記ＬＣ−ＰＵＦＡを合成することができない細胞中に導入するステップであり、前記ポリヌクレオチドが、前記細胞中における前記ポリヌクレオチドの発現を誘導できるプロモーターに作動可能に連結する、ステップ、
ｂ）前記細胞中において前記外因性ポリヌクレオチドを発現させるステップ、
ｃ）前記細胞の脂肪酸組成を分析するステップ、ならびに
ｄ）ＡＲＡからＥＰＡ、ＤＧＬＡからＥＴＡ、ＧＬＡからＳＤＡの内の少なくとも１つ、ＡＲＡからＥＰＡおよびＤＧＬＡからＥＴＡの両方、ＡＲＡからＥＰＡおよびＧＬＡからＳＤＡの両方、またはこれらの３つ全てを不飽和化し得る細胞を選択するステップ
を含む方法。
【請求項７１】
前記選択される細胞が、請求項４から１１のいずれか一項に記載の細胞である、請求項７０に記載の方法。
【請求項７２】
１種または複数種の長鎖多価不飽和脂肪酸（ＬＣ−ＰＵＦＡ）を合成できる細胞を得る方法であって、
ａ）脂肪酸Δ５エロンガーゼをコードする外因性ポリヌクレオチドを細胞、好ましくは前記ＬＣ−ＰＵＦＡを合成することができない細胞中に導入するステップであり、前記ポリヌクレオチドが、前記細胞中における前記ポリヌクレオチドの発現を誘導できるプロモーターに作動可能に連結する、ステップ、
ｂ）前記細胞中において前記外因性ポリヌクレオチドを発現させるステップ、
ｃ）前記細胞の脂肪酸組成を分析するステップ、および
ｄ）細胞を選択するステップであり、前記Δ５エロンガーゼが、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％または少なくとも７５％の効率でＤＰＡを産生する、ＥＰＡに対する活性を有する、ステップ
を含む方法。
【請求項７３】
前記選択される細胞が、請求項１から３のいずれか一項に記載の細胞である、請求項７２に記載の方法。
【請求項７４】
１種または複数種の長鎖多価不飽和脂肪酸（ＬＣ−ＰＵＦＡ）を合成できる細胞を得る方法であって、
ａ）脂肪酸Δ６デサチュラーゼをコードする外因性ポリヌクレオチドを細胞、好ましくは前記ＬＣ−ＰＵＦＡを合成することができない細胞中に導入するステップであり、前記ポリヌクレオチドが、前記細胞中における前記ポリヌクレオチドの発現を誘導できるプロモーターに作動可能に連結する、ステップ、
ｂ）前記細胞中において前記外因性ポリヌクレオチドを発現させるステップ、
ｃ）前記細胞の脂肪酸組成を分析するステップ、ならびに
ｄ）以下の、
ｉ）好ましくは植物細胞中における、脂肪酸基質としてのＬＡよりもＡＬＡに対して、より大きなΔ６デサチュラーゼ活性、
ｉｉ）好ましくは植物細胞中における、脂肪酸基質としてＰＣのｓｎ−２位に接合したＡＬＡに対するよりも脂肪酸基質としてのＡＬＡ−ＣｏＡに対して、より大きなΔ６デサチュラーゼ活性、ならびに
ｉｉｉ）好ましくは植物細胞中における、ＡＬＡに対するΔ６デサチュラーゼ活性およびＥＴｒＡに対するΔ８デサチュラーゼ活性
の内の少なくとも２つ、好ましくは３つ全てを有する細胞を選択するステップ
を含む方法。
【請求項７５】
１種または複数種の長鎖多価不飽和脂肪酸（ＬＣ−ＰＵＦＡ）を合成できる細胞を得る方法であって、
ａ）脂肪酸Δ６デサチュラーゼをコードする外因性ポリヌクレオチドを細胞、好ましくは前記ＬＣ−ＰＵＦＡを合成することができない細胞中に導入するステップであり、前記ポリヌクレオチドが、前記細胞中における前記ポリヌクレオチドの発現を誘導できるプロモーターに作動可能に連結する、ステップ、
ｂ）前記細胞中において前記外因性ポリヌクレオチドを発現させるステップ、
ｃ）前記細胞の脂肪酸組成を分析するステップ、ならびに
ｄ）対応するω６基質よりもω３基質に対して、より大きな活性を有するΔ６デサチュラーゼ活性を有し、酵母細胞中において発現される場合、少なくとも５％、少なくとも７．５％、または少なくとも１０％または少なくとも３５％の効率でＳＤＡを産生する、ＡＬＡに対する活性を有する細胞を選択するステップ
を含む方法。
【請求項７６】
前記選択される細胞が、請求項１２から２２のいずれか一項に記載の細胞である、請求項７４または請求項７５に記載の方法。
【請求項７７】
１種または複数種の長鎖多価不飽和脂肪酸（ＬＣ−ＰＵＦＡ）を合成できる細胞を得る方法であって、
ａ） ｉ）Δ９エロンガーゼ、
ｉｉ）Δ８デサチュラーゼ、
ｉｉｉ）Δ５デサチュラーゼ、
ｉｖ）場合によって、Δ５エロンガーゼ、および
ｖ）前記Δ５エロンガーゼが存在する場合、場合によって、Δ４デサチュラーゼ
をコードする外因性ポリヌクレオチドを細胞、好ましくは前記ＬＣ−ＰＵＦＡを合成することができない細胞中に導入するステップであり、各ポリヌクレオチドが、前記細胞中における前記ポリヌクレオチドの発現を誘導できる１つまたは複数のプロモーターに作動可能に連結する、ステップ
ｂ）前記細胞中において前記外因性ポリヌクレオチドを発現させるステップ、
ｃ）前記細胞の脂肪酸組成を分析するステップ、ならびに
ｄ）細胞を選択するステップであり、全脂肪酸の少なくとも１５％、少なくとも２０％または少なくとも２５％が、それらのアシル鎖中に少なくとも２０個の炭素および少なくとも３個の炭素−炭素二重結合を含む、ステップ
を含む方法。
【請求項７８】
前記選択される細胞が、請求項２４から３５のいずれか一項に記載の細胞である、請求項７７に記載の方法。
【請求項７９】
１種または複数種の長鎖多価不飽和脂肪酸（ＬＣ−ＰＵＦＡ）を合成できる細胞を得る方法であって、
ａ） ｉ）Δ６エロンガーゼおよび／またはΔ９エロンガーゼ、
ｉｉ）Δ６デサチュラーゼおよび／またはΔ８デサチュラーゼ、
ｉｉｉ）Δ５デサチュラーゼ、
ｉｖ）Δ５エロンガーゼ、
ｖ）Δ４デサチュラーゼ、ならびに
ｖｉ）場合によって、ジアシルグリセロールアシルトランスフェラーゼ
をコードする外因性ポリヌクレオチドを細胞、好ましくは前記ＬＣ−ＰＵＦＡを合成することができない細胞中に導入するステップであり、各ポリヌクレオチドが、前記細胞中における前記ポリヌクレオチドの発現を誘導できる１つまたは複数のプロモーターに作動可能に連結する、ステップ、
ｂ）前記細胞中において前記外因性ポリヌクレオチドを発現させるステップ、
ｃ）前記細胞の脂肪酸組成を分析するステップ、ならびに
ｄ） １）ＡＬＡからＥＰＡ、ＤＰＡまたはＤＨＡの変換の効率が少なくとも１７．３％または少なくとも２３％である性質、
２）ＡＬＡからＤＰＡまたはＤＨＡの変換の効率が少なくとも１５．４％または少なくとも２１％である性質、
３）ＡＬＡからＤＨＡの変換の効率が少なくとも９．５％または少なくとも１０．８％である性質、および
４）ＥＰＡからＤＨＡの変換の効率が少なくとも４５％または少なくとも５０％である性質
の内の１つもしくは複数または全てを特徴とする細胞であり、好ましくはさらに、前記細胞中における全脂肪酸の少なくとも４％がＤＨＡであることを特徴とする細胞を選択するステップ
を含む方法。
【請求項８０】
１種または複数種の長鎖多価不飽和脂肪酸（ＬＣ−ＰＵＦＡ）を合成できる細胞を得る方法であって、
ａ） ｉ）Δ６エロンガーゼおよび／またはΔ９エロンガーゼ、
ｉｉ）Δ６デサチュラーゼおよび／またはΔ８デサチュラーゼ、
ｉｉｉ）Δ５デサチュラーゼ、
ｉｖ）Δ５エロンガーゼ、ならびに
ｖ）場合によって、ジアシルグリセロールアシルトランスフェラーゼ
をコードする外因性ポリヌクレオチドを細胞、好ましくは前記ＬＣ−ＰＵＦＡを合成することができない細胞中に導入するステップであり、各ポリヌクレオチドが、前記細胞中における前記ポリヌクレオチドの発現を誘導できる１つまたは複数のプロモーターに作動可能に連結する、ステップ、
ｂ）前記細胞中において前記外因性ポリヌクレオチドを発現させるステップ、
ｃ）前記細胞の脂肪酸組成を分析するステップ、ならびに
ｄ） ａ）ＡＬＡからＥＰＡまたはＤＰＡの変換の効率が少なくとも１７．３％または少なくとも２３％である性質、および
ｂ）ＡＬＡからＤＰＡの変換の効率が少なくとも１５．４％または少なくとも２１％である性質
の内の１つもしくは複数または全てを特徴とする細胞であり、好ましくはさらに、前記細胞中における全脂肪酸の少なくとも４％がＤＰＡであることを特徴とする細胞を選択するステップ
を含む方法。
【請求項８１】
前記外因性ポリヌクレオチドが、前記細胞のゲノム中に安定して組み込まれるようになる、請求項７０から８０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８２】
ステップａ）の前記細胞から形質転換植物を再生させるステップをさらに含む、請求項８１に記載の方法。
【請求項８３】
前記外因性ポリヌクレオチドまたは複数の前記外因性ポリヌクレオチドが、前記細胞中において一過性に発現される、請求項７０から８０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８４】
前記細胞が、植物中における葉細胞である、請求項７０から８３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８５】
脂肪酸不飽和化に関与する核酸分子を選択する方法であって、
ｉ）プロモーターに作動可能に連結する核酸分子を得るステップであり、前記核酸分子が、脂肪酸デサチュラーゼであり得るポリペプチドをコードする、ステップ、
ｉｉ）前記プロモーターが活性である細胞中に前記核酸分子を導入するステップ、
ｉｉｉ）前記細胞中において前記核酸分子を発現させるステップ、
ｉｖ）前記細胞の脂肪酸組成を分析するステップ、ならびに
ｖ）前記ポリペプチドがω３デサチュラーゼ活性を有し、かつＡＲＡからＥＰＡ、ＤＧＬＡからＥＴＡ、ＧＬＡからＳＤＡの内の少なくとも１つ、ＡＲＡからＥＰＡおよびＤＧＬＡからＥＴＡの両方、ＡＲＡからＥＰＡおよびＧＬＡからＳＤＡの両方、またはこれらの３つ全てを不飽和化することができることに基づいて、脂肪酸不飽和化に関与する核酸分子を選択するステップ
を含む方法。
【請求項８６】
前記ポリペプチドのアミノ酸配列が、配列番号１５と少なくとも３５％同一であり、配列番号１７と少なくとも６０％同一であり、および／または配列番号２０と少なくとも６０％同一である、請求項８５に記載の方法。
【請求項８７】
脂肪酸伸長に関与する核酸分子を選択する方法であって、
ｉ）プロモーターに作動可能に連結する核酸分子を得るステップであり、前記核酸分子が、脂肪酸エロンガーゼであり得るポリペプチドをコードする、ステップ、
ｉｉ）前記プロモーターが活性である細胞中に前記核酸分子を導入するステップ、
ｉｉｉ）前記細胞中において前記核酸分子を発現させるステップ、
ｉｖ）前記細胞の脂肪酸組成を分析するステップ、および
ｖ）前記ポリペプチドがΔ５エロンガーゼ活性を有し、かつ少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％または少なくとも７５％である、ＥＰＡについての、ＤＰＡを産生する変換の効率を有することに基づいて、脂肪酸伸長に関与する核酸分子を選択するステップ
を含む方法。
【請求項８８】
前記ポリペプチドのアミノ酸配列が、配列番号６と少なくとも４７％同一である、請求項８７に記載の方法。
【請求項８９】
脂肪酸不飽和化に関与する核酸分子を選択する方法であって、
ｉ）プロモーターに作動可能に連結する核酸分子を得るステップであり、前記核酸分子が、脂肪酸デサチュラーゼであり得るポリペプチドをコードする、ステップ、
ｉｉ）前記プロモーターが活性である細胞中に前記核酸分子を導入するステップ、
ｉｉｉ）前記細胞中において前記核酸分子を発現させるステップ、
ｉｖ）前記細胞の脂肪酸組成を分析するステップ、ならびに
ｖ）前記ポリペプチドがΔ６デサチュラーゼ活性を有し、かつ
ａ）好ましくは植物細胞中における、脂肪酸基質としてのＬＡよりもＡＬＡに対して、より大きなΔ６デサチュラーゼ活性、
ｂ）好ましくは植物細胞中における、脂肪酸基質としてＰＣのｓｎ−２位に接合したＡＬＡに対するよりも脂肪酸基質としてのＡＬＡ−ＣｏＡに対して、より大きなΔ６デサチュラーゼ活性、および
ｃ）好ましくは植物細胞中における、ＡＬＡに対するΔ８デサチュラーゼ活性
の内の少なくとも２つ、好ましくは３つ全てを有することに基づいて、脂肪酸不飽和化に関与する核酸分子を選択するステップ
を含む方法。
【請求項９０】
前記ポリペプチドのアミノ酸配列が、配列番号１０と少なくとも７７％同一であり、および／または配列番号８と少なくとも６７％同一である、請求項８９に記載の方法。
【請求項９１】
脂肪酸不飽和化に関与する核酸分子を選択する方法であって、
ｉ）プロモーターに作動可能に連結する核酸分子を得るステップであり、前記核酸分子が、脂肪酸デサチュラーゼであり得るポリペプチドをコードする、ステップ、
ｉｉ）前記プロモーターが活性である細胞中に前記核酸分子を導入するステップ、
ｉｉｉ）前記細胞中において前記核酸分子を発現させるステップ、
ｉｖ）前記細胞の脂肪酸組成を分析するステップ、ならびに
ｖ）前記ポリペプチドがΔ６デサチュラーゼ活性およびΔ８デサチュラーゼ活性の両方を有することに基づいて、脂肪酸不飽和化に関与する核酸分子を選択するステップ
を含む方法。
【請求項９２】
前記ポリペプチドのアミノ酸配列が、配列番号８と少なくとも６７％同一である、請求項９１に記載の方法。
【請求項９３】
ステップ（ｖ）が、アシル−ＣｏＡ基質に対して活性なデサチュラーゼまたはフロントエンドデサチュラーゼをコードする核酸分子を選択することを含む、請求項８５、８６または８９から９２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項９４】
組換え細胞を産生するため、組換え細胞中において少なくとも２種の脂肪酸デサチュラーゼおよび２種の脂肪酸エロンガーゼの組合せを発現するため、および／または組換え細胞中においてＬＣ−ＰＵＦＡを産生するために使用される場合における、請求項１〜９３のいずれかに記載の外因性ポリヌクレオチドの組合せ。
【請求項９５】
細胞中において外因性ポリヌクレオチドから発現される場合、ＡＲＡからＥＰＡ、ＤＧＬＡからＥＴＡ、ＧＬＡからＳＤＡの内の少なくとも１つ、ＡＲＡからＥＰＡおよびＤＧＬＡからＥＴＡの両方、ＡＲＡからＥＰＡおよびＧＬＡからＳＤＡの両方、またはこれらの３つ全てを不飽和化することができる実質的に精製されたおよび／または組換えの脂肪酸ω３デサチュラーゼ。
【請求項９６】
請求項４から１１のいずれか一項に記載の性質の内のいずれか１つまたは複数を特徴とする、請求項９５に記載のω３デサチュラーゼ。
【請求項９７】
細胞中において外因性ポリヌクレオチドから発現される場合、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％または少なくとも７５％の効率でＤＰＡを産生する、ＥＰＡに対する活性を有する、実質的に精製されたおよび／または組換えの脂肪酸Δ５エロンガーゼ。
【請求項９８】
請求項１から３のいずれか一項に記載の性質の内のいずれか１つまたは複数を特徴とする、請求項９７に記載のΔ５エロンガーゼ。
【請求項９９】
ｉ）好ましくは植物細胞中における、脂肪酸基質としてのＬＡよりもＡＬＡに対して、より大きなΔ６デサチュラーゼ活性、
ｉｉ）好ましくは植物細胞中における、脂肪酸基質としてＰＣのｓｎ−２位に接合したＡＬＡに対するよりも脂肪酸基質としてのＡＬＡ−ＣｏＡに対して、より大きなΔ６デサチュラーゼ活性、および
ｉｉｉ）好ましくは植物細胞中における、ＥＴｒＡに対するΔ８デサチュラーゼ活性
の内の少なくとも２つ、好ましくは３つ全てを有することをさらに特徴とする、実質的に精製されたおよび／または組換えの脂肪酸Δ６デサチュラーゼ。
【請求項１００】
対応するω６基質よりもω３基質に対して、より大きな活性を有し、細胞中において外因性ポリヌクレオチドから発現される場合に少なくとも５％、少なくとも７．５％もしくは少なくとも１０％の効率で、または酵母細胞中において発現される場合に少なくとも３５％の効率でＳＤＡを産生するＡＬＡに対する活性を有する、実質的に精製されたおよび／または組換えの脂肪酸Δ６デサチュラーゼ。
【請求項１０１】
請求項１２から２２のいずれか一項に記載の性質のいずれか１つまたは複数を特徴とする、請求項９９または１００に記載のΔ６デサチュラーゼ。
【請求項１０２】
Δ９エロンガーゼ活性より大きなΔ６エロンガーゼ活性を有する、実質的に精製されたおよび／または組換えの脂肪酸Δ６エロンガーゼおよびΔ９エロンガーゼ。
【請求項１０３】
請求項５３から５６のいずれか一項に記載の性質のいずれか１つまたは複数を特徴とする、請求項１０２に記載のΔ６エロンガーゼおよびΔ９エロンガーゼ。
【請求項１０４】
配列番号１３において提供される配列、その生物学的に活性な断片または配列番号１３と少なくとも５３％同一であるアミノ酸配列を有するアミノ酸を含む実質的に精製されたおよび／または組換えの脂肪酸Δ５デサチュラーゼ。
【請求項１０５】
配列番号２８、９４および９６のいずれか１つにおいて提供される配列、その生物学的に活性な断片、配列番号２８と少なくとも８１％同一であるアミノ酸配列、または配列番号９４および／もしくは配列番号９６と少なくとも５０％同一であるアミノ酸配列を有するアミノ酸を含む実質的に精製されたおよび／または組換えの脂肪酸Δ９エロンガーゼ。
【請求項１０６】
配列番号１０８において提供される配列、その生物学的に活性な断片または配列番号１０８と少なくとも５４％同一であるアミノ酸配列を有するアミノ酸を含む実質的に精製されたおよび／または組換えジアシルグリセロールアシルトランスフェラーゼ。
【請求項１０７】
デサチュラーゼおよび／またはエロンガーゼが微細藻類から精製できる、請求項９５から１０６のいずれか一項に記載のデサチュラーゼまたはエロンガーゼ。
【請求項１０８】
ｉ）配列番号３、５、７、９、１１、１２、１４、１６、１８、１９、２７、２９、９３、９５、１０７もしくは１２５から１２９のいずれか１つから選択されるヌクレオチドの配列、
ｉｉ）請求項９５から１０７のいずれか一項に記載のデサチュラーゼもしくはエロンガーゼをコードするヌクレオチドの配列、
ｉｉｉ）配列番号３、５、７、９、１１、１２、１４、１６、１８、１９、２７、２９、９３、９５、１０７もしくは１２５から１２９において記載される配列の内の１つまたは複数と少なくとも５０％同一であるヌクレオチドの配列、および／または
ｉｖ）ストリンジェントな条件下でｉ）からｉｉｉ）のいずれか１つにハイブリダイズする配列
を含む単離されたおよび／または外因性ポリヌクレオチド。
【請求項１０９】
植物細胞のゲノム中に組み込むためのおよび／または組み込まれたＤＮＡ構築物であって、前記構築物が、前記植物細胞中における脂肪酸合成をモジュレートするタンパク質をコードする少なくとも３つのオープンリーディングフレームのクラスターを含み、好ましくは、各タンパク質が脂肪酸デサチュラーゼまたは脂肪酸エロンガーゼであり、同じ転写方向を有する各オープンリーディングフレームが、少なくとも７５０ｂｐ、少なくとも１，０００ｂｐまたは少なくとも１，２５０ｂｐによって分離され、前記オープンリーディングフレームの内の少なくとも２つが、異なる転写方向を有し、各オープンリーディングフレームが、前記植物細胞中において活性なプロモーターに作動可能に連結し、各プロモーターが、独立して同一または異なってよい、ＤＮＡ構築物。
【請求項１１０】
前記プロモーターの内の少なくとも２つが異なる、請求項１０９に記載のＤＮＡ構築物。
【請求項１１１】
各オープンリーディングフレームが、異種５’リーダー配列に作動可能に連結し、その各々が、独立して同一または異なってよく、各異種５’リーダー配列が、特定のオープンリーディングフレームに対する天然に存在する５’リーダー配列と比較して転写効率を増強する、請求項１０９または請求項１１０に記載のＤＮＡ構築物。
【請求項１１２】
前記異種５’リーダー配列が、タバコモザイクウイルス（ＴＭＶ）５’リーダー配列である、請求項１１１に記載のＤＮＡ構築物。
【請求項１１３】
前記タンパク質が、エロンガーゼおよび／またはデサチュラーゼである、請求項１０９から１１２のいずれか一項に記載のＤＮＡ構築物。
【請求項１１４】
タンパク質に翻訳されるオープンリーディングフレームを３または４つだけ有する、請求項１０９から１１３のいずれか一項に記載のＤＮＡ構築物。
【請求項１１５】
請求項１０８に記載のポリヌクレオチドおよび／または請求項１０９から１１４のいずれか一項に記載のＤＮＡ構築物を含むベクター。
【請求項１１６】
前記ポリヌクレオチドが、プロモーターに作動可能に連結する、請求項１１５に記載のベクター。
【請求項１１７】
請求項９５から１０７のいずれか一項に記載のデサチュラーゼまたはエロンガーゼを産生する方法であって、細胞または無細胞発現系中において請求項１０８に記載のポリヌクレオチド、請求項１０９から１１４のいずれか一項に記載のＤＮＡ構築物および／または請求項１１５もしくは請求項１１６に記載のベクターを発現させるステップを含む方法。
【請求項１１８】
少なくとも３種の異なる外因性ポリヌクレオチドで真核細胞を一過性にトランスフェクトする方法であって、
ｉ）少なくとも
ａ）第１の外因性ポリヌクレオチドを含む染色体外転移核酸を含む第１の細菌、
ｂ）第２の外因性ポリヌクレオチドを含む染色体外転移核酸を含む第２の細菌、および
ｃ）第３の外因性ポリヌクレオチドを含む染色体外転移核酸を含む第３の細菌
を得るステップ、ならびに
ｉｉ）ステップｉ）の前記細菌を前記細胞に接触させるステップ
を含み、前記染色体外転移核酸の各々を前記細菌から前記細胞に転移させて、一過性にトランスフェクトされた細胞を産生し、前記外因性ポリヌクレオチドの各々が前記細胞中において活性なプロモーターを含み、各プロモーターが独立して同一または異なってよく、前記外因性ポリヌクレオチドの内の少なくとも１つがサイレンシングサプレッサーをコードする、方法。
【請求項１１９】
前記細胞を得るステップと、次いで前記細胞に第４の外因性ポリヌクレオチドを含む染色体外転移核酸を含む第４の細菌を接触させるステップとを含む、請求項１１８に記載の方法。
【請求項１２０】
前記細胞を得るステップと、次いで前記細胞に第５の外因性ポリヌクレオチドを含む染色体外転移核酸を含む第５の細菌を接触させるステップとを含む、請求項１１９に記載の方法。
【請求項１２１】
前記細胞を得るステップと、次いで前記細胞に第６の外因性ポリヌクレオチドを含む染色体外転移核酸を含む第６の細菌を接触させるステップとを含む、請求項１２０に記載の方法。
【請求項１２２】
前記細胞を得るステップと、次いで前記細胞に第７の外因性ポリヌクレオチドを含む染色体外転移核酸を含む第７の細菌を接触させるステップとを含む、請求項１２１に記載の方法。
【請求項１２３】
前記細胞を得るステップと、次いで前記細胞に第８の外因性ポリヌクレオチドを含む染色体外転移核酸を含む第８の細菌を接触させるステップとを含む、請求項１２２に記載の方法。
【請求項１２４】
所望の活性について一過性にトランスフェクトされた細胞をスクリーニングする方法であって、請求項１１８から１２３のいずれか一項に記載の方法を実施するステップと、前記所望の活性について前記細胞を試験するステップとを含む方法。
【請求項１２５】
少なくとも６種の異なる外因性ポリヌクレオチドで真核細胞を形質転換する方法であって、
ｉ）少なくとも
ａ）３種、４種、５種または６種の異なる外因性ポリヌクレオチドを含む第１の染色体外転移核酸を含む第１の細菌、および
ｂ）３種、４種、５種または６種の異なる外因性ポリヌクレオチドを含む第１と異なる第２の染色体外転移核酸を含む第２の細菌
を得るステップ、
ｉｉ）ステップｉ）の前記細菌を前記細胞に接触させるステップ、ならびに
ｉｉｉ）場合によって、前記第１および第２の染色体外転移核酸の前記外因性ポリヌクレオチドで安定して形質転換された細胞を選択するステップ
を含み、前記第１および第２の染色体外転移核酸の前記外因性ポリヌクレオチドの各々を前記細菌から前記細胞に転移させて、前記形質転換細胞を産生し、前記外因性ポリヌクレオチドの各々が、前記細胞またはそれに由来し得る細胞中において活性なプロモーターを含み、各プロモーターが、独立して同一または異なってよい、方法。
【請求項１２６】
前記ｉ）第１の染色体外転移核酸が、３から６種だけ、３から５種だけ、３から４種だけ、４から６種だけ、４から５種だけ、または５から６種だけの異なる外因性ポリヌクレオチドを有し、ｉｉ）前記第２の染色体外転移核酸が、３から６種だけ、３から５種だけ、３から４種だけ、４から６種だけ、４から５種だけ、または５から６種だけの異なる外因性ポリヌクレオチドを有する、請求項１２５に記載の方法。
【請求項１２７】
前記外因性ポリヌクレオチドの各々がポリペプチドをコードし、前記ポリペプチドの各々が異なる、請求項１２５または請求項１２６に記載の方法。
【請求項１２８】
ｉ）前記第１の染色体外転移核酸が、Δ６デサチュラーゼ、Δ１２デサチュラーゼおよびΔ１５デサチュラーゼから成る群から選択されるポリペプチドを独立してコードする２種の外因性ポリヌクレオチドを含み、ならびに
ｉｉ）前記第２の染色体外転移核酸が、前記群からの第３の酵素であるポリペプチドをコードする外因性ポリヌクレオチドを含む、請求項１２５から１２７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１２９】
前記細胞が植物細胞であり、前記安定形質転換細胞から形質転換植物を生成するステップをさらに含む、請求項１２５から１２８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１３０】
各外因性ポリヌクレオチドが、酵素経路の部分を形成する酵素をコードするか、またはかかる酵素の候補物質である、請求項１１８から１２９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１３１】
各外因性ポリヌクレオチドが、脂肪酸合成、脂肪酸修飾、ジアシルグリセロール構築、トリアシルグリセロール構築もしくはそれらの内の２つ以上の組合せに関与する酵素をコードするか、またはかかる酵素の候補物質である、請求項１１８から１３０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１３２】
前記細菌が、アグロバクテリウム属種、リゾビウム属種、シノリゾビウム・メリロティ、メゾリゾビウム・ロティ、シゲラ・フレクスネリ、サルモネラ・チフィムリウム、サルモネラ・コレレスイス、リステリア・モノサイトゲネス、エシェリヒア・コリ、エルシニア・シュードツベルクローシスおよびエルシニア・エンテロコリチカから選択される、請求項１１８から１３１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１３３】
前記染色体外転移核酸が、Ｐ−ＤＮＡ、アグロバクテリウム属種Ｔ−ＤＮＡまたはそれらの組合せである、請求項１１８から１３２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１３４】
前記細胞が、植物細胞または哺乳動物細胞である、請求項１１８から１３３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１３５】
前記細胞が、組織または器官の部分である、請求項１１８から１３４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１３６】
前記細胞が植物細胞であり、前記組織または器官が、葉、茎、根、分裂組織、カルスまたは胚珠である、請求項１３５に記載の方法。
【請求項１３７】
請求項１１８から１３６のいずれか一項に記載の方法によって産生される細胞。
【請求項１３８】
少なくとも６種の異なる外因性ポリヌクレオチドで安定形質転換植物を産生する方法であって、
ｉ）３種、４種、５種または６種の異なる外因性ポリヌクレオチドを含む第１の外因性ゲノム領域を含む第１の安定形質転換植物を得るステップ、
ｉｉ）３種、４種、５種または６種の異なる外因性ポリヌクレオチドを含む前記第１と異なる第２の外因性ゲノム領域を含み、前記第１と性的に適合性のある種の第２の安定形質転換植物を得るステップ、
ｉｉｉ）前記第１の安定形質転換植物を前記第２の安定形質転換植物と交配するステップ、ならびに
ｉｖ）ステップｉｉｉ）から産生された植物または前記第１および第２のゲノム領域を含むその子孫を選択することによって安定形質転換植物を産生するステップ
を含み、前記外因性ポリヌクレオチドの各々が、前記植物中において活性なプロモーターを含み、各プロモーターが、独立して同一または異なってよい、方法。
【請求項１３９】
ステップｉ）が、
ａ）３種、４種、５種または６種の異なる外因性ポリヌクレオチドを含む第１の染色体外転移核酸を含む第１の細菌を植物細胞に接触させるステップ、
ｂ）ステップａ）の前記植物細胞から安定形質転換植物を生成するステップ、および場合によって、
ｃ）ステップｂ）の前記安定形質転換植物から子孫植物を産生するステップ
によって前記第１の安定形質転換植物を産生することを含み、
ならびに／またはステップｉｉ）が、
ｄ）３種、４種、５種または６種の異なる外因性ポリヌクレオチドを含む第２の染色体外転移核酸を含む第２の細菌を植物細胞に接触させるステップ、
ｅ）ステップｄ）の前記植物細胞から安定形質転換植物を生成するステップ、および場合によって
ｆ）ステップｅ）の前記安定形質転換植物から子孫植物を産生するステップ
によって前記第２の安定形質転換植物を産生することを含む、請求項１３８に記載の方法。
【請求項１４０】
少なくとも６種の異なる外因性ポリヌクレオチドを有する安定形質転換植物を産生する方法であって、
ｉ）３種、４種、５種または６種の異なる外因性ポリヌクレオチドを含む第１の外因性ゲノム領域を含む第１の安定形質転換植物または植物部分を得るステップ、
ｉｉ）前記第１の安定形質転換植物の細胞または植物部分に３種、４種、５種または６種の異なる外因性ポリヌクレオチドを含む染色体外転移核酸を含む細菌を接触させるステップ、
ｉｉｉ）前記細胞から植物を産生するステップ、および
ｉｖ）場合によって、前記少なくとも６種の異なる外因性ポリヌクレオチドを含む、ステップｉｉｉ）から産生された植物を選択するステップ
を含む方法。
【請求項１４１】
少なくとも、
ａ）第１の外因性ポリヌクレオチドを含む第１の染色体外転移核酸、
ｂ）第２の外因性ポリヌクレオチドを含む第２の染色体外転移核酸、および
ｃ）第３の外因性ポリヌクレオチドを含む第３の染色体外転移核酸
を含む細胞。
【請求項１４２】
３種、４種、５種または６種の異なる外因性ポリヌクレオチドを含む第１の外因性ゲノム領域と、３種、４種、５種または６種の異なる外因性ポリヌクレオチドを含む第２の外因性ゲノム領域とを含むトランスジェニック植物もしくはその子孫または種子。
【請求項１４３】
請求項１から６９、１３７または１４１のいずれか一項に記載の細胞を含むトランスジェニック非ヒト生物。
【請求項１４４】
トランスジェニック植物である、請求項１４３に記載の生物。
【請求項１４５】
請求項１から６９、１３７もしくは１４１のいずれか一項に記載の細胞を含んでいるか、または請求項１４２もしくは請求項１４４に記載のトランスジェニック植物から得られた種子。
【請求項１４６】
請求項１から６９、１３７もしくは１４１のいずれか一項に記載の細胞、請求項１４２に記載の植物、請求項１４３もしくは１４４に記載のトランスジェニック非ヒト生物または請求項１４５に記載の種子によって産生された、あるいは請求項１から６９、１３７もしくは１４１のいずれか一項に記載の細胞、請求項１４２に記載の植物、請求項１４３もしくは１４４に記載のトランスジェニック非ヒト生物または請求項１４５に記載の種子から得られた油。
【請求項１４７】
前記油が、油料種子からの油の抽出によって得られる、請求項１４６に記載の油。
【請求項１４８】
キャノーラ油（ブラッシカ・ナパス、ブラッシカ・ラパ属種）、カラシ油（ブラッシカ・ユンケア）、他のブラッシカ油、ヒマワリ油（ヘリアンサス・アナス）、アマニ油（リナム・ウシタチシマム）、ダイズ油（グリシン・マックス）、サフラワー油（カーサマス・ティンクトリアス）、トウモロコシ油（ゼア・マイス）、タバコ油（ニコチアナ・タバカム）、落花生油（アラキス・ヒポゲア）、パーム油、綿実油（ゴシピウム・ヒルスツム）、ヤシ油（ココス・ヌシフェラ）、アボカド油（ペルセア・アメリカナ）、オリーブ油（オレア・エウロパエア）、カシュー油（アナカルジウム・オクシデンタレ）、マカダミア油（マカダミア・インテルグリフォリア）、扁桃油（プルヌス・アミグダルス）またはアラビドプシス種子油（アラビドプシス・サリアナ）である、請求項１４６または請求項１４７に記載の油。
【請求項１４９】
請求項１から６９、１３７もしくは１４１のいずれか一項に記載の細胞、請求項１４２に記載の植物、請求項１４３もしくは１４４に記載のトランスジェニック非ヒト生物または請求項１４５に記載の種子によって産生された、あるいは請求項１から６９、１３７もしくは１４１のいずれか一項に記載の細胞、請求項１４２に記載の植物、請求項１４３もしくは１４４に記載のトランスジェニック非ヒト生物または請求項１４５に記載の種子から得られた脂肪酸。
【請求項１５０】
不飽和脂肪酸を含有する油の製造方法であって、請求項１から６９、１３７もしくは１４１のいずれか一項に記載の細胞、請求項１４２に記載の植物、請求項１４３もしくは１４４に記載のトランスジェニック非ヒト生物または請求項１４５に記載の種子から油を抽出するステップを含む方法。
【請求項１５１】
請求項１から６８、１３７もしくは１４１のいずれか一項に記載の細胞、請求項９５から１０７のいずれか一項に記載のデサチュラーゼもしくはエロンガーゼ、請求項１０８に記載のポリヌクレオチド、請求項１０９から１１４のいずれか一項に記載のＤＮＡ構築物、請求項１１５もしくは請求項１１６に記載のベクター、請求項１４６から１４８のいずれか一項に記載の油または請求項１４９に記載の脂肪酸を含む組成物。
【請求項１５２】
請求項１から６９、１３７もしくは１４１のいずれか一項に記載の細胞、請求項１４２に記載の植物、請求項１４３もしくは１４４に記載のトランスジェニック非ヒト生物、請求項１４５に記載の種子、請求項１４６から１４８のいずれか一項に記載の油および／または請求項１４９に記載の脂肪酸を含む飼料、化粧品または化学物質。
【請求項１５３】
デサチュラーゼ反応を実施する方法であって、ＣｏＡにエステル化された多価不飽和脂肪酸に請求項４から２２のいずれか一項に記載のデサチュラーゼを接触させるステップを含む方法。
【請求項１５４】
請求項９５から１０７のいずれか一項に記載のデサチュラーゼまたはエロンガーゼに特異的に結合する実質的に精製された抗体またはその断片。
【請求項１５５】
ＰＵＦＡから利益を受ける状態を治療または予防する方法であって、請求項１から６８、１３７もしくは１４１のいずれか一項に記載の細胞、請求項９５から１０７のいずれか一項に記載のデサチュラーゼもしくはエロンガーゼ、請求項１０８に記載のポリヌクレオチド、請求項１０９から１１４のいずれか一項に記載のＤＮＡ構築物、請求項１１５もしくは請求項１１６に記載のベクター、請求項１４２に記載の植物、請求項１４３もしくは１４４に記載のトランスジェニック非ヒト生物、請求項１４５に記載の種子、請求項１４６から１４８のいずれか一項に記載の油、請求項１４９に記載の脂肪酸および／または請求項１５２に記載の飼料を対象に投与するステップを含む方法。
【請求項１５６】
前記状態が、不整脈、血管形成、炎症、喘息、乾癬、骨粗鬆症、腎結石、エイズ、多発性硬化症、関節リウマチ、クローン病、統合失調症、癌、胎児性アルコール症候群、注意欠陥多動性障害、嚢胞性線維症、フェニルケトン尿症、単極性うつ病、攻撃的敵意、アドレノロイコジストフィー（adrenoleukodystophy）、冠性心疾患、高血圧、糖尿病、肥満、アルツハイマー病、慢性閉塞性肺疾患、潰瘍性大腸炎、血管形成術後の再狭窄、湿疹、高血圧症、血小板凝集、胃腸出血、子宮内膜症、月経前症候群、筋痛性脳脊髄炎、ウイルス感染後の慢性疲労または眼疾患である、請求項１５５に記載の方法。
【請求項１５７】
ＰＵＦＡから利益を受ける状態を治療または予防するための医薬品の製造のための、請求項１から６８、１３７もしくは１４１のいずれか一項に記載の細胞、請求項９５から１０７のいずれか一項に記載のデサチュラーゼもしくはエロンガーゼ、請求項１０８に記載のポリヌクレオチド、請求項１０９から１１４のいずれか一項に記載のＤＮＡ構築物、請求項１１５もしくは請求項１１６に記載のベクター、請求項１４２に記載の植物、請求項１４３もしくは１４４に記載のトランスジェニック非ヒト生物、請求項１４５に記載の種子、請求項１４６から１４８のいずれか一項に記載の油、請求項１４９に記載の脂肪酸および／または請求項１５２に記載の飼料の使用。
【請求項１５８】
ｉ）植物貯蔵器官特異的プロモーターに作動可能に連結したサイレンシングサプレッサーをコードする第１の外因性ポリヌクレオチド、および
ｉｉ）前記植物貯蔵器官中における遺伝子転写を誘導するプロモーターに作動可能に連結したＲＮＡ分子をコードする第２の外因性ポリヌクレオチド
を含む植物細胞。
【請求項１５９】
前記植物貯蔵器官特異的プロモーターが、種子特異的プロモーター、例えば、子葉特異的プロモーターまたは内乳特異的プロモーターである、請求項１５８に記載の細胞。
【請求項１６０】
前記サイレンシングサプレッサーが、ウイルスサプレッサータンパク質である、請求項１５８または請求項１５９に記載の細胞。
【請求項１６１】
前記ＲＮＡ分子がポリペプチドをコードする、請求項１５８から１６０のいずれか一項に記載の細胞。
【請求項１６２】
前記ポリペプチドが、脂肪酸もしくは脂質の合成もしくは修飾に関与し、種子貯蔵タンパク質であり、炭水化物合成もしくは修飾に関与し、または医薬である、請求項１６１に記載の細胞。
【請求項１６３】
少なくとも１種、少なくとも２種、少なくとも３種、少なくとも４種または少なくとも５種の更なる異なる外因性ポリヌクレオチドを含み、各々が、ＲＮＡ分子をコードし、前記貯蔵器官中における遺伝子転写を誘導するプロモーターに作動可能に連結する、請求項１５８から１６２のいずれか一項に記載の細胞。
【請求項１６４】
前記外因性ポリヌクレオチドがＤＮＡである、請求項１５８から１６３のいずれか一項に記載の細胞。
【請求項１６５】
種子等の植物貯蔵器官中にある、請求項１５８から１６４のいずれか一項に記載の細胞。
【請求項１６６】
前記ＲＮＡモレケウル（moleceule）が、前記第１の外因性ポリヌクレオチドを欠くアイソジェニックな細胞と比較して増加したレベルで存在する、請求項１５８から１６５のいずれか一項に記載の細胞。
【請求項１６７】
少なくとも前記更なる外因性ポリヌクレオチドの内によってコードされる少なくとも１種のＲＮＡ分子が、前記第１の外因性ポリヌクレオチドを欠くアイソジェニックな細胞と比較して増加したレベルで存在する、請求項１６６に記載の細胞。
【請求項１６８】
請求項１５８から１６７のいずれか一項に記載の細胞を含むトランスジェニック植物。
【請求項１６９】
請求項１５８から１６７のいずれか一項に記載の細胞を含むおよび／または請求項１６８に記載のトランスジェニック植物から得られる植物貯蔵器官。
【請求項１７０】
種子である、請求項１６９に記載の植物貯蔵器官。
【請求項１７１】
その貯蔵器官中におけるＲＮＡ分子の増加したレベルを有する表現型的に正常な植物を得る方法であって、
ａ） ｉ）植物貯蔵器官特異的プロモーターに作動可能に連結したサイレンシングサプレッサーをコードする第１の外因性ポリヌクレオチド、および
ｉｉ）前記植物貯蔵器官中における遺伝子転写を誘導するプロモーターに作動可能に連結したＲＮＡ分子をコードする第２の外因性ポリヌクレオチド
を植物細胞中に導入するステップ、
ｂ）ステップａ）の前記細胞から形質転換植物を再生させるステップ、
ｃ）前記形質転換植物が貯蔵器官を産生するまで、前記形質転換植物を成長させるステップ、
ｄ）前記貯蔵器官中における前記ＲＮＡ分子のレベルを決定するステップ、および
ｅ）表現型的に正常な植物を選択するステップ
を含み、前記ＲＮＡ分子が、前記第１の外因性ポリヌクレオチドを欠く対応する貯蔵器官と比較して前記貯蔵器官中において増加したレベルで存在する、方法。
【請求項１７２】
その貯蔵器官中におけるＲＮＡ分子の安定化された発現を有する表現型的に正常な植物を得る方法であって、
ａ） ｉ）植物貯蔵器官特異的プロモーターに作動可能に連結したサイレンシングサプレッサーをコードする第１の外因性ポリヌクレオチド、および
ｉｉ）前記植物貯蔵器官中における遺伝子転写を誘導するプロモーターに作動可能に連結したＲＮＡ分子をコードする第２の外因性ポリヌクレオチド
を植物細胞中に導入するステップ、
ｂ）ステップａ）の前記細胞から形質転換植物を再生させるステップ、
ｃ）ステップｂ）の前記植物に由来する前記貯蔵器官を含む第３世代の子孫植物を産生するステップ、ならびに
ｄ）第３世代の子孫植物を選択するステップ
を含み、前記ＲＮＡ分子が、前記植物の前世代の貯蔵器官中におけるレベルの少なくとも９０％のレベルで前記貯蔵器官中に存在する、方法。
【請求項１７３】
前記外因性ポリヌクレオチドが、前記細胞のゲノム中に安定して組み込まれる、請求項１７１または請求項１７２に記載の方法。
【請求項１７４】
トランスジェニック植物の貯蔵器官中におけるＲＮＡ分子の発現を安定させる方法であって、
ｉ）植物貯蔵器官特異的プロモーターに作動可能に連結したサイレンシングサプレッサーをコードする第１の外因性ポリヌクレオチドを発現させるステップ、および
ｉｉ）前記植物貯蔵器官中における遺伝子転写を誘導するプロモーターに作動可能に連結したＲＮＡ分子をコードする第２の外因性ポリヌクレオチドを発現させるステップ
を含み、前記トランスジェニック植物が、前記外因性ポリヌクレオチドで形質転換された親植物から得られた少なくとも第３世代の子孫植物であり、前記ＲＮＡ分子が、前記植物の前世代の貯蔵器官中におけるレベルの少なくとも９０％のレベルで前記植物の前記貯蔵器官中に存在する、方法。
【請求項１７５】
前記植物を野外において成長させる、請求項１７１から１７４のいずれか一項に記載の方法。
【図１】
【図２】
【図３】
【図４】
【図５】
【図６】
【図７】
【図８】
【図９】
【図１０】
【図１１】
【図１２】
【図１３】
【図１４】
【図１５】
【図１６】
【図１７】
【図１８】
【図１９】
【図２０】
【図２１】
【図２２】
【図２３】
【図２】
【図３】
【図４】
【図５】
【図６】
【図７】
【図８】
【図９】
【図１０】
【図１１】
【図１２】
【図１３】
【図１４】
【図１５】
【図１６】
【図１７】
【図１８】
【図１９】
【図２０】
【図２１】
【図２２】
【図２３】
【公表番号】特表２０１２−５０９０５９（Ｐ２０１２−５０９０５９Ａ）
【公表日】平成２４年４月１９日（２０１２．４．１９）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２０１１−５３５８３９（Ｐ２０１１−５３５８３９）
【出願日】平成２１年１１月１７日（２００９．１１．１７）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＡＵ２００９／００１４８８
【国際公開番号】ＷＯ２０１０／０５７２４６
【国際公開日】平成２２年５月２７日（２０１０．５．２７）
【公序良俗違反の表示】
（特許庁注：以下のものは登録商標）
１．テフロン
【出願人】（３０５０３９９９８）コモンウェルス サイエンティフィック アンド インダストリアル リサーチ オーガニゼイション (92)
【出願人】（５１１１１９７９８）グレインズ リサーチ アンド デヴェロップメント コーポレイション (1)
【Ｆターム（参考）】
【公表日】平成２４年４月１９日（２０１２．４．１９）
【国際特許分類】
【出願日】平成２１年１１月１７日（２００９．１１．１７）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＡＵ２００９／００１４８８
【国際公開番号】ＷＯ２０１０／０５７２４６
【国際公開日】平成２２年５月２７日（２０１０．５．２７）
【公序良俗違反の表示】
（特許庁注：以下のものは登録商標）
１．テフロン
【出願人】（３０５０３９９９８）コモンウェルス サイエンティフィック アンド インダストリアル リサーチ オーガニゼイション (92)
【出願人】（５１１１１９７９８）グレインズ リサーチ アンド デヴェロップメント コーポレイション (1)
【Ｆターム（参考）】
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