オリゴリボヌクレオチドおよびその使用
本発明は、免疫刺激性ＲＮＡオリゴヌクレオチド（ＯＲＮ）に関する。特に、ＯＲＮは、３’ポリＧモチーフ、および任意選択により５’ポリＧモチーフが直接的または間接的に隣接する免疫刺激性ＯＲＮモチーフを有する。本発明はまた、治療方法およびスクリーニング方法を含む方法およびＯＲＮを使用するための関連キットに関する。
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
ＧＧ（Ｒ１）ｎ（Ｕ）４〜２０（Ｒ２）ｍＧＧＧＧ（配列番号２９）［式中、Ｒ１およびＲ２は、リボヌクレオシド、デオキシリボヌクレオシド、スペーサーまたは非ヌクレオチドリンカーであり、Ｕは、ウリジンまたはその誘導体であり、Ｇは、グアノシンであり、ｎ＝０〜２０、ｍ＝０〜２０である］を含む、１０〜１００個のリボヌクレオチドの長さのＲＮＡオリゴヌクレオチド（ＯＲＮ）。
【請求項２】
５’ＧＧＧＧＵＵＵＵＧＧＧＧＧ３’（配列番号３３）または５’ＧＧＧＧＵＵＵＵＧＧＧＧ３’（配列番号３４）でない、請求項１に記載のＯＲＮ。
【請求項３】
ＧＧ（Ｒ１）ｎ（Ｕ）５〜２０（Ｒ２）ｍＧＧＧＧ（配列番号３０）［式中、Ｒ１およびＲ２は、リボヌクレオシド、デオキシリボヌクレオシド、スペーサーまたは非ヌクレオチドリンカーであり、Ｕは、ウリジンまたはその誘導体であり、Ｇは、グアノシンであり、ｎ＝０〜２０、ｍ＝０〜２０である］を含む、１０〜１００個のリボヌクレオチドの長さのＲＮＡオリゴヌクレオチド（ＯＲＮ）。
【請求項４】
ＧＧ（Ｒ１）ｎ（Ｕ）４（Ｒ２）ｍＧＧＧＧ（配列番号３１）［式中、Ｒ１およびＲ２は、リボヌクレオシド、デオキシリボヌクレオシド、スペーサーまたは非ヌクレオチドリンカーであり、Ｕは、ウリジンまたはその誘導体であり、Ｇは、グアノシンであり、ｎ＝０〜２０、ｍ＝０〜２０であり、ここで、（Ｒ１）ｎがＧＧである場合、（Ｒ２）ｍはＧではないか、ｍ＝０ではない］を含む、１０〜１００個のリボヌクレオチドの長さのＲＮＡオリゴヌクレオチド（ＯＲＮ）。
【請求項５】
ＧＧ（Ｒ１）ｎ（Ｕ）４〜２０（Ｒ２）ｍＧＧＧＧ（配列番号２９）［式中、Ｒ１およびＲ２は、リボヌクレオシド、デオキシリボヌクレオシド、スペーサーまたは非ヌクレオチドリンカーであり、Ｕは、ウリジンまたはその誘導体であり、Ｇは、グアノシンであり、ｎ＝０〜２０、ｍ＝０〜２０である］を含み
【化１】
［式中、
Ｒ１は、水素（Ｈ）、ＣＯＯＲ、ＯＨ、Ｃ１〜Ｃ１８アルキル、Ｃ６Ｈ５または（ＣＨ２）ｍ−ＮＨ−Ｒ２であり、ここで、Ｒは、Ｈまたはメチル、ブチル、メトキシエチル、ピバロイルオキシメチル、ピバロイルオキシベンジルまたはＳ−ピバロイルチオエチルであり、Ｒ２は、Ｈ、Ｃ１〜Ｃ１８アルキルまたはＣ２〜Ｃ１８アシルであり、ｍは、１〜１７であり、
Ｘは、酸素（Ｏ）または硫黄（Ｓ）であり、
ＮｕおよびＮｕ’は各々独立に、ヌクレオシドまたはヌクレオシド類似体であり、
ただし、Ｒ１がＨである場合、ＸはＳである］、
【化２】
［式中、
Ｘは、ＯまたはＳであり、
Ｘ１は、ＯＨ、ＳＨ、ＢＨ３、ＯＲ３またはＮＨＲ３であり、ここで、Ｒ３は、Ｃ１〜Ｃ１８アルキルであり、
Ｘ２およびＸ３は各々独立に、Ｏ、Ｓ、ＣＨ２またはＣＦ２であり、
ＮｕおよびＮｕ’は各々独立に、ヌクレオシドまたはヌクレオシド類似体であり、
ただし、
（ａ）Ｘ、Ｘ２およびＸ３のうち少なくとも１つはＯではない、またはＸ１はＯＨではなく、
（ｂ）Ｘ１がＳＨである場合、Ｘ、Ｘ２およびＸ３のうち少なくとも１つはＯではなく、
（ｃ）ＸおよびＸ２がＯであり、Ｘ１がＯＨである場合、Ｘ３はＳではなく、Ｎｕは３’Ｎｕであり、Ｎｕ’は５’Ｎｕ’であり、
（ｄ）Ｘ１がＢＨ３である場合、Ｘ、Ｘ２またはＸ３のうち少なくとも１つはＳである］および
（ｉｉｉ）（ｉ）および（ｉｉ）の任意の組合せ
からなる群から選択される修飾されたリン酸結合を含まず、
式ＩＩＩＡもしくは式ＩＩＩＢとして示される少なくとも１つのヌクレオチド類似体
【化３】
［式中、
Ｒ４は、ＨまたはＯＲであり、ここで、Ｒは、ＨまたはＣ１〜Ｃ１８アシルであり、
Ｂは、核酸塩基、修飾された核酸塩基またはＨであり、
ＸおよびＸ５は各々独立に、ＯまたはＳであり、
Ｘ４は、ＯＨ、ＳＨ、メチルまたはＮＨＲ５であり、ここで、Ｒ５は、Ｃ１〜Ｃ１８アルキルであり、
破線は各々独立に、隣接する単位、水素または有機基との任意選択の結合を表し、
ただし、ＸおよびＸ５の少なくとも一方はＯではない、またはＸ４はＯＨではない］
を含まない、１０〜１００個のリボヌクレオチドの長さのＲＮＡオリゴヌクレオチド（ＯＲＮ）。
【請求項６】
５’ＧＧＧＵＵＵＵ３’モチーフを含まない、請求項１に記載のＯＲＮ。
【請求項７】
滅菌担体をさらに含む、請求項１に記載のＯＲＮ。
【請求項８】
脂質担体とともに製剤される、請求項１に記載のＯＲＮ。
【請求項９】
一本鎖である、請求項１に記載のＯＲＮ。
【請求項１０】
ｓｉＲＮＡまたはアンチセンスオリゴヌクレオチドではない、請求項１に記載のＯＲＮ。
【請求項１１】
少なくとも１つのホスホロチオエート結合を含む、請求項１に記載のＯＲＮ。
【請求項１２】
ＯＲＮのすべてのヌクレオチド間結合が、ホスホロチオエート結合である、請求項１に記載のＯＲＮ。
【請求項１３】
少なくとも１つのホスホジエステル様結合を含む、請求項１に記載のＯＲＮ。
【請求項１４】
ホスホジエステル様結合が、ホスホジエステル結合である、請求項１３に記載のＯＲＮ。
【請求項１５】
少なくとも１つの５’−５’ヌクレオチド間結合をさらに含む、請求項１に記載のＯＲＮ。
【請求項１６】
５’−５’ヌクレオチド間結合が、リンカーを含む、請求項１５に記載のＯＲＮ。
【請求項１７】
少なくとも１つの３’−３’ヌクレオチド間結合をさらに含む、請求項１に記載のＯＲＮ。
【請求項１８】
３’−３’ヌクレオチド間結合が、リンカーを含む、請求項１７に記載のＯＲＮ。
【請求項１９】
２’−Ｏ−アルキル修飾、２−フルオロ−アラビノ修飾、またはＬＮＡ修飾された少なくとも１つのＧをさらに含む、請求項１に記載のＯＲＮ。
【請求項２０】
ＣＧジヌクレオチドを含まない、請求項１に記載のＯＲＮ。
【請求項２１】
少なくとも１つのメチル化されていないＣｐＧジヌクレオチドを含む、請求項１に記載のＯＲＮ。
【請求項２２】
少なくとも２つの隣接する水素結合した塩基対によって提供される、二次構造を形成できる、ヌクレオシド、ヌクレオシド類似体またはヌクレオシドとヌクレオシド類似体の組合せの配列を含む、請求項１に記載のＯＲＮ。
【請求項２３】
二次構造が、ステムループ二次構造である、請求項２２に記載のＯＲＮ。
【請求項２４】
（Ｒ１）ｎが、ＧＧである、請求項１に記載のＯＲＮ。
【請求項２５】
（Ｒ２）ｍが、ＧＧＧである、請求項１に記載のＯＲＮ。
【請求項２６】
（Ｕ）４〜２０が、ＵＵＵＵＵである、請求項１に記載のＯＲＮ。
【請求項２７】
（Ｕ）４〜２０が、ＵＵＵＵＵＵＵである、請求項１に記載のＯＲＮ。
【請求項２８】
（Ｕ）４〜２０が、ＵＵＵＵＵＵＵＵＵＵ（配列番号３２）である、請求項１に記載のＯＲＮ。
【請求項２９】
ＧＧおよび（Ｒ１）ｎが、直接接続している、請求項１に記載のＯＲＮ。
【請求項３０】
ＧＧおよび（Ｒ１）ｎが、３’−３’結合を介して接続している、請求項１に記載のＯＲＮ。
【請求項３１】
ＧＧおよび（Ｒ１）ｎが、スペーサーによって接続している、請求項１に記載のＯＲＮ。
【請求項３２】
スペーサーが、非ヌクレオチドスペーサーである、請求項３１に記載のＯＲＮ。
【請求項３３】
非ヌクレオチドスペーサーが、Ｄ−スペーサーである、請求項３２に記載のＯＲＮ。
【請求項３４】
非ヌクレオチドスペーサーが、リンカーである、請求項３２に記載のＯＲＮ。
【請求項３５】
ｒＧ＊ｒＧ＊ｒＧ＊ｒＧ＊ｒＵ＊ｒＵ＊ｒＵ＊ｒＵ＊ｒＵ＊ｒＵ＊ｒＵ＊ｒＵ＊ｒＵ＊ｒＵ＊ｒＧ＊ｒＧ＊ｒＧ＊ｒＧ＊ｒＧ＊ｒＧ＊ｒＧ（配列番号４）を含むＯＲＮ。
【請求項３６】
ｒＧ＊ｒＧ＊ｒＧ＊ｒＧ＊ｒＵ＊ｒＵ＊ｒＧ＊ｒＵ＊ｒＵ＊ｒＧ＊ｒＵ＊ｒＵ＊ｒＧ＊ｒＵ＊ｒＧ＊ｒＧ＊ｒＧ＊ｒＧ＊ｒＧ＊ｒＧ＊ｒＧ（配列番号５）を含むＯＲＮ。
【請求項３７】
ｒＧ＊ｒＧ＊ｒＧ＊ｒＧ＊ｒＵ＊ｒＵ＊ｒＡ＊ｒＵ＊ｒＵ＊ｒＡ＊ｒＵ＊ｒＵ＊ｒＡ＊ｒＵ＊ｒＧ＊ｒＧ＊ｒＧ＊ｒＧ＊ｒＧ＊ｒＧ＊ｒＧ（配列番号６）を含むＯＲＮ。
【請求項３８】
ｒＧ＊ｒＧ＊ｒＧ＊ｒＧ−ｒＵ−ｒＵ−ｒＵ−ｒＵ−ｒＵ−ｒＵ−ｒＵ−ｒＵ−ｒＵ−ｒＵ−ｒＧ＊ｒＧ＊ｒＧ＊ｒＧ＊ｒＧ＊ｒＧ＊ｒＧ（配列番号８）を含むＯＲＮ。
【請求項３９】
ｒＧ＊ｒＵ＊ｒＵ＊ｒＧ＊ｒＵ＊ｒＧ＊ｒＵ＊ｄＧ＊ｄＧ＊ｄＧ＊ｄＧ＊ｄＧ（配列番号１０）を含むＯＲＮ。
【請求項４０】
ポリＧモチーフと連結している免疫刺激性ＲＮＡオリゴヌクレオチド（ＯＲＮ）モチーフを含み、ポリＧモチーフが、免疫刺激性ＯＲＮモチーフの３’側にあり、ポリＧモチーフが、少なくとも４個のＧを含み、Ｇがグアノシンである、８〜１００個のリボヌクレオチドの長さの免疫刺激性ＯＲＮ。
【請求項４１】
以下の５’ＧＧＧＧＵＵＵＵＧＧＧＧＧ３’（配列番号３３）、５’ＧＧＧＧＵＵＵＵＧＧＧＧ３’（配列番号３４）、ＧＵＵＵＵＵＧ（配列番号３５）、ＧＧＧＧＧＧＧＵＵＧＵＧＵＧＧＧＧＧ（配列番号３６）、ＣＣＣＣＵＵＵＵＧＧＧＧＧ（配列番号３７）、ＧＵＵＵＧＵＧＵＧＧＧＧ（配列番号３８）、ＧＵＵＧＵＧＵＧＧＧＧＧ（配列番号３９）、ＵＵＵＵＵＵＧＧＧＧＧ（配列番号４０）、ＵＵＵＵＵＧＧＧＧＧ（配列番号４１）、ＵＵＵＵＧＧＧＧＧ（配列番号１９）、またはＵＵＵＵＧＧＧＧ（配列番号１５）のうちの１つではない、請求項４０に記載のＯＲＮ。
【請求項４２】
免疫刺激性ＯＲＮモチーフが、ＴＬＲ８モチーフである、請求項４０に記載のＯＲＮ。
【請求項４３】
ＴＬＲ８モチーフが、Ｎ−Ｕ−Ｒ１−Ｒ２であり、Ｎが、リボヌクレオチドであり、ＮがＵを含まず、Ｕが、ウラシルまたはその誘導体であり、Ｒが、リボヌクレオチドであり、ここで、Ｒ１およびＲ２の少なくとも一方が、アデノシン（Ａ）またはシトシンまたはその誘導体であり、Ｎ−Ｕ−Ｒ１−Ｒ２が、少なくとも２個のＡを含まない限り、ＲがＵではない、請求項４２に記載のＯＲＮ。
【請求項４４】
Ｎが、アデノシンまたはシトシン（Ｃ）またはその誘導体である、請求項４３に記載のＯＲＮ。
【請求項４５】
第２のＮ−Ｕ−Ｒ１−Ｒ２モチーフをさらに含む、請求項４３に記載のＯＲＮ。
【請求項４６】
免疫刺激性ＯＲＮモチーフが、ＴＬＲ７／８モチーフである、請求項４０に記載のＯＲＮ。
【請求項４７】
ＴＬＲ７／８モチーフが、
（ｉ）５’−Ｃ／Ｕ−Ｕ−Ｇ／Ｕ−Ｕ−３’、
（ｉｉ）５’−Ｒ−Ｕ−Ｒ−Ｇ−Ｙ−３’、
（ｉｉｉ）５’−Ｇ−Ｕ−Ｕ−Ｇ−Ｂ−３’、
（ｉｖ）５’−Ｇ−Ｕ−Ｇ−Ｕ−Ｇ／Ｕ−３’、および
（ｖ）５’−Ｇ／Ｃ−Ｕ−Ａ／Ｃ−Ｇ−Ｇ−Ｃ−Ａ−Ｃ−３’
［式中、Ｃ／Ｕは、シトシン（Ｃ）またはウラシル（Ｕ）であり、Ｇ／Ｕは、グアニン（Ｇ）またはＵであり、Ｒは、プリンであり、Ｙは、ピリミジンであり、Ｂは、Ｕ、Ｇ、またはＣであり、Ｇ／Ｃは、ＧまたはＣであり、Ａ／Ｃは、アデニン（Ａ）またはＣである］
からなる群から選択されるリボヌクレオチド配列を含む、請求項４６に記載のＯＲＮ。
【請求項４８】
ポリＧモチーフが、６個のＧである、請求項４０に記載のＯＲＮ。
【請求項４９】
ポリＧモチーフが、７個のＧである、請求項４０に記載のＯＲＮ。
【請求項５０】
免疫刺激性ＯＲＮモチーフおよびポリＧモチーフが、直接連結している、請求項４０に記載のＯＲＮ。
【請求項５１】
免疫刺激性ＯＲＮモチーフおよびポリＧモチーフが、スペーサー、ヌクレオチドリンカーまたは非ヌクレオチドリンカーであるリンカーを介して間接的に連結している、請求項４０に記載のＯＲＮ。
【請求項５２】
少なくとも１つのホスホロチオエート結合を含む、請求項４０に記載のＯＲＮ。
【請求項５３】
ＯＲＮのすべてのヌクレオチド間結合が、ホスホロチオエート結合である、請求項４０に記載のＯＲＮ。
【請求項５４】
少なくとも１つのホスホジエステル様結合を含む、請求項５２に記載のＯＲＮ。
【請求項５５】
脂質、小分子、ペプチドまたはタンパク質からなる群から選択される分子とコンジュゲートしている、請求項１、３、４、５または３５から４０のいずれか一項に記載のＯＲＮ。
【請求項５６】
ＯＲＮおよび分子が、直接コンジュゲートしている、請求項５５に記載のＯＲＮ。
【請求項５７】
ＯＲＮおよび分子が、リンカーを介してコンジュゲートしている、請求項５５に記載のＯＲＮ。
【請求項５８】
ＩＦＮ−αの産生を刺激する方法であって、ＴＬＲ７発現細胞を、ＩＦＮ−α産生を刺激するのに有効な量の、ポリＧモチーフと連結している免疫刺激性ＲＮＡオリゴヌクレオチド（ＯＲＮ）モチーフを含むＯＲＮと接触させることを含み、ポリＧモチーフは免疫刺激性ＯＲＮモチーフの３’側にあり、ポリＧモチーフは少なくとも４個のＧを含み、Ｇはグアノシンであるステップを含み、ＯＲＮに応じたＩＦＮ−γまたはＩＬ−１２産生はバックグラウンドと比較して大幅には誘導されない方法。
【請求項５９】
ＯＲＮが、ＧＧ（Ｒ１）ｎ（Ｕ）４〜２０（Ｒ２）ｍＧＧＧＧ［式中、Ｒ１およびＲ２は、リボヌクレオシド、デオキシリボヌクレオシド、スペーサーまたは非ヌクレオチドリンカーであり、ｎ＝０〜２０であり、ｍ＝０〜２０であり、Ｕはウリジンまたはその誘導体であり、Ｇはグアノシンである］である、請求項５７に記載の方法。
【請求項６０】
ＴＬＲ７発現細胞がｍＤＣである、請求項５８に記載の方法。
【請求項６１】
ＴＬＲ７発現細胞がｉｎ ｖｉｔｒｏである、請求項５８に記載の方法。
【請求項６２】
ＴＬＲ７発現細胞がｉｎ ｖｉｖｏである、請求項５８に記載の方法。
【請求項６３】
癌を治療する方法であって、それを必要とする対象に、癌を治療するのに有効な量の、請求項１から５７のいずれか一項に記載のＯＲＮを投与することを含む方法。
【請求項６４】
対象に化学療法薬を投与することをさらに含む、請求項６３に記載の方法。
【請求項６５】
対象に放射線を施すことをさらに含む、請求項６４に記載の方法。
【請求項６６】
喘息を治療する方法であって、それを必要とする対象に、喘息を治療するのに有効な量の、請求項１から５７のいずれか一項に記載のＯＲＮを投与することを含む方法。
【請求項６７】
アレルギーを治療する方法であって、それを必要とする対象に、アレルギーを治療するのに有効な量の、請求項１から５７のいずれか一項に記載のＯＲＮを投与することを含む方法。
【請求項６８】
対象がアレルギー性鼻炎である、請求項６７に記載の方法。
【請求項６９】
対象において免疫応答を調節する方法であって、それを必要とする対象に、免疫応答を調節するのに有効な量の、請求項１から５７のいずれか一項に記載のＯＲＮを投与することを含む方法。
【請求項７０】
対象において自己免疫疾患を治療するために、ＯＲＮが対象に送達される、請求項６９に記載の方法。
【請求項７１】
対象において気道リモデリングを治療するために、ＯＲＮが対象に送達される、請求項６９に記載の方法。
【請求項７２】
ＯＲＮが、抗原を伴わずに対象に投与される、請求項６９に記載の方法。
【請求項７３】
ＯＲＮが、経口、鼻腔、舌下、静脈内、皮下、粘膜、呼吸器、直接注射および経皮的からなる群から選択される経路によって送達される、請求項６９に記載の方法。
【請求項７４】
ＯＲＮが、ＩＦＮα発現を誘導するのに有効な量で対象に送達される、請求項６９に記載の方法。
【請求項７５】
ウイルス感染によって悪化した喘息を治療する方法であって、それを必要とする対象に、ウイルス感染によって悪化した喘息を治療するのに有効な量の、請求項１から５４のいずれか一項に記載のＯＲＮを投与することを含む方法。
【請求項７６】
ウイルス感染がＲＳＶによる、請求項７５に記載の方法。
【請求項７７】
感染性疾患を治療する方法であって、それを必要とする対象に、感染性疾患を治療するのに有効な量の、請求項１から５４のいずれか一項に記載のＯＲＮを投与することを含む方法。
【請求項７８】
対象がウイルス感染症である、請求項７７に記載の方法。
【請求項７９】
ウイルス感染症が、Ｂ型肝炎である、請求項７８に記載の方法。
【請求項８０】
ウイルス感染症が、Ｃ型肝炎である、請求項７８に記載の方法。
【請求項８１】
対象に抗ウイルス薬を投与することをさらに含む、請求項７８に記載の方法。
【請求項８２】
抗ウイルス薬が、ＯＲＮと連結している、請求項６８に記載の方法。
【請求項８３】
ＯＲＮが、経口、鼻腔、舌下、静脈内、皮下、粘膜、呼吸器、直接注射および経皮的からなる群から選択される経路によって送達される、請求項７７に記載の方法。
【請求項１】
ＧＧ（Ｒ１）ｎ（Ｕ）４〜２０（Ｒ２）ｍＧＧＧＧ（配列番号２９）［式中、Ｒ１およびＲ２は、リボヌクレオシド、デオキシリボヌクレオシド、スペーサーまたは非ヌクレオチドリンカーであり、Ｕは、ウリジンまたはその誘導体であり、Ｇは、グアノシンであり、ｎ＝０〜２０、ｍ＝０〜２０である］を含む、１０〜１００個のリボヌクレオチドの長さのＲＮＡオリゴヌクレオチド（ＯＲＮ）。
【請求項２】
５’ＧＧＧＧＵＵＵＵＧＧＧＧＧ３’（配列番号３３）または５’ＧＧＧＧＵＵＵＵＧＧＧＧ３’（配列番号３４）でない、請求項１に記載のＯＲＮ。
【請求項３】
ＧＧ（Ｒ１）ｎ（Ｕ）５〜２０（Ｒ２）ｍＧＧＧＧ（配列番号３０）［式中、Ｒ１およびＲ２は、リボヌクレオシド、デオキシリボヌクレオシド、スペーサーまたは非ヌクレオチドリンカーであり、Ｕは、ウリジンまたはその誘導体であり、Ｇは、グアノシンであり、ｎ＝０〜２０、ｍ＝０〜２０である］を含む、１０〜１００個のリボヌクレオチドの長さのＲＮＡオリゴヌクレオチド（ＯＲＮ）。
【請求項４】
ＧＧ（Ｒ１）ｎ（Ｕ）４（Ｒ２）ｍＧＧＧＧ（配列番号３１）［式中、Ｒ１およびＲ２は、リボヌクレオシド、デオキシリボヌクレオシド、スペーサーまたは非ヌクレオチドリンカーであり、Ｕは、ウリジンまたはその誘導体であり、Ｇは、グアノシンであり、ｎ＝０〜２０、ｍ＝０〜２０であり、ここで、（Ｒ１）ｎがＧＧである場合、（Ｒ２）ｍはＧではないか、ｍ＝０ではない］を含む、１０〜１００個のリボヌクレオチドの長さのＲＮＡオリゴヌクレオチド（ＯＲＮ）。
【請求項５】
ＧＧ（Ｒ１）ｎ（Ｕ）４〜２０（Ｒ２）ｍＧＧＧＧ（配列番号２９）［式中、Ｒ１およびＲ２は、リボヌクレオシド、デオキシリボヌクレオシド、スペーサーまたは非ヌクレオチドリンカーであり、Ｕは、ウリジンまたはその誘導体であり、Ｇは、グアノシンであり、ｎ＝０〜２０、ｍ＝０〜２０である］を含み
【化１】
［式中、
Ｒ１は、水素（Ｈ）、ＣＯＯＲ、ＯＨ、Ｃ１〜Ｃ１８アルキル、Ｃ６Ｈ５または（ＣＨ２）ｍ−ＮＨ−Ｒ２であり、ここで、Ｒは、Ｈまたはメチル、ブチル、メトキシエチル、ピバロイルオキシメチル、ピバロイルオキシベンジルまたはＳ−ピバロイルチオエチルであり、Ｒ２は、Ｈ、Ｃ１〜Ｃ１８アルキルまたはＣ２〜Ｃ１８アシルであり、ｍは、１〜１７であり、
Ｘは、酸素（Ｏ）または硫黄（Ｓ）であり、
ＮｕおよびＮｕ’は各々独立に、ヌクレオシドまたはヌクレオシド類似体であり、
ただし、Ｒ１がＨである場合、ＸはＳである］、
【化２】
［式中、
Ｘは、ＯまたはＳであり、
Ｘ１は、ＯＨ、ＳＨ、ＢＨ３、ＯＲ３またはＮＨＲ３であり、ここで、Ｒ３は、Ｃ１〜Ｃ１８アルキルであり、
Ｘ２およびＸ３は各々独立に、Ｏ、Ｓ、ＣＨ２またはＣＦ２であり、
ＮｕおよびＮｕ’は各々独立に、ヌクレオシドまたはヌクレオシド類似体であり、
ただし、
（ａ）Ｘ、Ｘ２およびＸ３のうち少なくとも１つはＯではない、またはＸ１はＯＨではなく、
（ｂ）Ｘ１がＳＨである場合、Ｘ、Ｘ２およびＸ３のうち少なくとも１つはＯではなく、
（ｃ）ＸおよびＸ２がＯであり、Ｘ１がＯＨである場合、Ｘ３はＳではなく、Ｎｕは３’Ｎｕであり、Ｎｕ’は５’Ｎｕ’であり、
（ｄ）Ｘ１がＢＨ３である場合、Ｘ、Ｘ２またはＸ３のうち少なくとも１つはＳである］および
（ｉｉｉ）（ｉ）および（ｉｉ）の任意の組合せ
からなる群から選択される修飾されたリン酸結合を含まず、
式ＩＩＩＡもしくは式ＩＩＩＢとして示される少なくとも１つのヌクレオチド類似体
【化３】
［式中、
Ｒ４は、ＨまたはＯＲであり、ここで、Ｒは、ＨまたはＣ１〜Ｃ１８アシルであり、
Ｂは、核酸塩基、修飾された核酸塩基またはＨであり、
ＸおよびＸ５は各々独立に、ＯまたはＳであり、
Ｘ４は、ＯＨ、ＳＨ、メチルまたはＮＨＲ５であり、ここで、Ｒ５は、Ｃ１〜Ｃ１８アルキルであり、
破線は各々独立に、隣接する単位、水素または有機基との任意選択の結合を表し、
ただし、ＸおよびＸ５の少なくとも一方はＯではない、またはＸ４はＯＨではない］
を含まない、１０〜１００個のリボヌクレオチドの長さのＲＮＡオリゴヌクレオチド（ＯＲＮ）。
【請求項６】
５’ＧＧＧＵＵＵＵ３’モチーフを含まない、請求項１に記載のＯＲＮ。
【請求項７】
滅菌担体をさらに含む、請求項１に記載のＯＲＮ。
【請求項８】
脂質担体とともに製剤される、請求項１に記載のＯＲＮ。
【請求項９】
一本鎖である、請求項１に記載のＯＲＮ。
【請求項１０】
ｓｉＲＮＡまたはアンチセンスオリゴヌクレオチドではない、請求項１に記載のＯＲＮ。
【請求項１１】
少なくとも１つのホスホロチオエート結合を含む、請求項１に記載のＯＲＮ。
【請求項１２】
ＯＲＮのすべてのヌクレオチド間結合が、ホスホロチオエート結合である、請求項１に記載のＯＲＮ。
【請求項１３】
少なくとも１つのホスホジエステル様結合を含む、請求項１に記載のＯＲＮ。
【請求項１４】
ホスホジエステル様結合が、ホスホジエステル結合である、請求項１３に記載のＯＲＮ。
【請求項１５】
少なくとも１つの５’−５’ヌクレオチド間結合をさらに含む、請求項１に記載のＯＲＮ。
【請求項１６】
５’−５’ヌクレオチド間結合が、リンカーを含む、請求項１５に記載のＯＲＮ。
【請求項１７】
少なくとも１つの３’−３’ヌクレオチド間結合をさらに含む、請求項１に記載のＯＲＮ。
【請求項１８】
３’−３’ヌクレオチド間結合が、リンカーを含む、請求項１７に記載のＯＲＮ。
【請求項１９】
２’−Ｏ−アルキル修飾、２−フルオロ−アラビノ修飾、またはＬＮＡ修飾された少なくとも１つのＧをさらに含む、請求項１に記載のＯＲＮ。
【請求項２０】
ＣＧジヌクレオチドを含まない、請求項１に記載のＯＲＮ。
【請求項２１】
少なくとも１つのメチル化されていないＣｐＧジヌクレオチドを含む、請求項１に記載のＯＲＮ。
【請求項２２】
少なくとも２つの隣接する水素結合した塩基対によって提供される、二次構造を形成できる、ヌクレオシド、ヌクレオシド類似体またはヌクレオシドとヌクレオシド類似体の組合せの配列を含む、請求項１に記載のＯＲＮ。
【請求項２３】
二次構造が、ステムループ二次構造である、請求項２２に記載のＯＲＮ。
【請求項２４】
（Ｒ１）ｎが、ＧＧである、請求項１に記載のＯＲＮ。
【請求項２５】
（Ｒ２）ｍが、ＧＧＧである、請求項１に記載のＯＲＮ。
【請求項２６】
（Ｕ）４〜２０が、ＵＵＵＵＵである、請求項１に記載のＯＲＮ。
【請求項２７】
（Ｕ）４〜２０が、ＵＵＵＵＵＵＵである、請求項１に記載のＯＲＮ。
【請求項２８】
（Ｕ）４〜２０が、ＵＵＵＵＵＵＵＵＵＵ（配列番号３２）である、請求項１に記載のＯＲＮ。
【請求項２９】
ＧＧおよび（Ｒ１）ｎが、直接接続している、請求項１に記載のＯＲＮ。
【請求項３０】
ＧＧおよび（Ｒ１）ｎが、３’−３’結合を介して接続している、請求項１に記載のＯＲＮ。
【請求項３１】
ＧＧおよび（Ｒ１）ｎが、スペーサーによって接続している、請求項１に記載のＯＲＮ。
【請求項３２】
スペーサーが、非ヌクレオチドスペーサーである、請求項３１に記載のＯＲＮ。
【請求項３３】
非ヌクレオチドスペーサーが、Ｄ−スペーサーである、請求項３２に記載のＯＲＮ。
【請求項３４】
非ヌクレオチドスペーサーが、リンカーである、請求項３２に記載のＯＲＮ。
【請求項３５】
ｒＧ＊ｒＧ＊ｒＧ＊ｒＧ＊ｒＵ＊ｒＵ＊ｒＵ＊ｒＵ＊ｒＵ＊ｒＵ＊ｒＵ＊ｒＵ＊ｒＵ＊ｒＵ＊ｒＧ＊ｒＧ＊ｒＧ＊ｒＧ＊ｒＧ＊ｒＧ＊ｒＧ（配列番号４）を含むＯＲＮ。
【請求項３６】
ｒＧ＊ｒＧ＊ｒＧ＊ｒＧ＊ｒＵ＊ｒＵ＊ｒＧ＊ｒＵ＊ｒＵ＊ｒＧ＊ｒＵ＊ｒＵ＊ｒＧ＊ｒＵ＊ｒＧ＊ｒＧ＊ｒＧ＊ｒＧ＊ｒＧ＊ｒＧ＊ｒＧ（配列番号５）を含むＯＲＮ。
【請求項３７】
ｒＧ＊ｒＧ＊ｒＧ＊ｒＧ＊ｒＵ＊ｒＵ＊ｒＡ＊ｒＵ＊ｒＵ＊ｒＡ＊ｒＵ＊ｒＵ＊ｒＡ＊ｒＵ＊ｒＧ＊ｒＧ＊ｒＧ＊ｒＧ＊ｒＧ＊ｒＧ＊ｒＧ（配列番号６）を含むＯＲＮ。
【請求項３８】
ｒＧ＊ｒＧ＊ｒＧ＊ｒＧ−ｒＵ−ｒＵ−ｒＵ−ｒＵ−ｒＵ−ｒＵ−ｒＵ−ｒＵ−ｒＵ−ｒＵ−ｒＧ＊ｒＧ＊ｒＧ＊ｒＧ＊ｒＧ＊ｒＧ＊ｒＧ（配列番号８）を含むＯＲＮ。
【請求項３９】
ｒＧ＊ｒＵ＊ｒＵ＊ｒＧ＊ｒＵ＊ｒＧ＊ｒＵ＊ｄＧ＊ｄＧ＊ｄＧ＊ｄＧ＊ｄＧ（配列番号１０）を含むＯＲＮ。
【請求項４０】
ポリＧモチーフと連結している免疫刺激性ＲＮＡオリゴヌクレオチド（ＯＲＮ）モチーフを含み、ポリＧモチーフが、免疫刺激性ＯＲＮモチーフの３’側にあり、ポリＧモチーフが、少なくとも４個のＧを含み、Ｇがグアノシンである、８〜１００個のリボヌクレオチドの長さの免疫刺激性ＯＲＮ。
【請求項４１】
以下の５’ＧＧＧＧＵＵＵＵＧＧＧＧＧ３’（配列番号３３）、５’ＧＧＧＧＵＵＵＵＧＧＧＧ３’（配列番号３４）、ＧＵＵＵＵＵＧ（配列番号３５）、ＧＧＧＧＧＧＧＵＵＧＵＧＵＧＧＧＧＧ（配列番号３６）、ＣＣＣＣＵＵＵＵＧＧＧＧＧ（配列番号３７）、ＧＵＵＵＧＵＧＵＧＧＧＧ（配列番号３８）、ＧＵＵＧＵＧＵＧＧＧＧＧ（配列番号３９）、ＵＵＵＵＵＵＧＧＧＧＧ（配列番号４０）、ＵＵＵＵＵＧＧＧＧＧ（配列番号４１）、ＵＵＵＵＧＧＧＧＧ（配列番号１９）、またはＵＵＵＵＧＧＧＧ（配列番号１５）のうちの１つではない、請求項４０に記載のＯＲＮ。
【請求項４２】
免疫刺激性ＯＲＮモチーフが、ＴＬＲ８モチーフである、請求項４０に記載のＯＲＮ。
【請求項４３】
ＴＬＲ８モチーフが、Ｎ−Ｕ−Ｒ１−Ｒ２であり、Ｎが、リボヌクレオチドであり、ＮがＵを含まず、Ｕが、ウラシルまたはその誘導体であり、Ｒが、リボヌクレオチドであり、ここで、Ｒ１およびＲ２の少なくとも一方が、アデノシン（Ａ）またはシトシンまたはその誘導体であり、Ｎ−Ｕ−Ｒ１−Ｒ２が、少なくとも２個のＡを含まない限り、ＲがＵではない、請求項４２に記載のＯＲＮ。
【請求項４４】
Ｎが、アデノシンまたはシトシン（Ｃ）またはその誘導体である、請求項４３に記載のＯＲＮ。
【請求項４５】
第２のＮ−Ｕ−Ｒ１−Ｒ２モチーフをさらに含む、請求項４３に記載のＯＲＮ。
【請求項４６】
免疫刺激性ＯＲＮモチーフが、ＴＬＲ７／８モチーフである、請求項４０に記載のＯＲＮ。
【請求項４７】
ＴＬＲ７／８モチーフが、
（ｉ）５’−Ｃ／Ｕ−Ｕ−Ｇ／Ｕ−Ｕ−３’、
（ｉｉ）５’−Ｒ−Ｕ−Ｒ−Ｇ−Ｙ−３’、
（ｉｉｉ）５’−Ｇ−Ｕ−Ｕ−Ｇ−Ｂ−３’、
（ｉｖ）５’−Ｇ−Ｕ−Ｇ−Ｕ−Ｇ／Ｕ−３’、および
（ｖ）５’−Ｇ／Ｃ−Ｕ−Ａ／Ｃ−Ｇ−Ｇ−Ｃ−Ａ−Ｃ−３’
［式中、Ｃ／Ｕは、シトシン（Ｃ）またはウラシル（Ｕ）であり、Ｇ／Ｕは、グアニン（Ｇ）またはＵであり、Ｒは、プリンであり、Ｙは、ピリミジンであり、Ｂは、Ｕ、Ｇ、またはＣであり、Ｇ／Ｃは、ＧまたはＣであり、Ａ／Ｃは、アデニン（Ａ）またはＣである］
からなる群から選択されるリボヌクレオチド配列を含む、請求項４６に記載のＯＲＮ。
【請求項４８】
ポリＧモチーフが、６個のＧである、請求項４０に記載のＯＲＮ。
【請求項４９】
ポリＧモチーフが、７個のＧである、請求項４０に記載のＯＲＮ。
【請求項５０】
免疫刺激性ＯＲＮモチーフおよびポリＧモチーフが、直接連結している、請求項４０に記載のＯＲＮ。
【請求項５１】
免疫刺激性ＯＲＮモチーフおよびポリＧモチーフが、スペーサー、ヌクレオチドリンカーまたは非ヌクレオチドリンカーであるリンカーを介して間接的に連結している、請求項４０に記載のＯＲＮ。
【請求項５２】
少なくとも１つのホスホロチオエート結合を含む、請求項４０に記載のＯＲＮ。
【請求項５３】
ＯＲＮのすべてのヌクレオチド間結合が、ホスホロチオエート結合である、請求項４０に記載のＯＲＮ。
【請求項５４】
少なくとも１つのホスホジエステル様結合を含む、請求項５２に記載のＯＲＮ。
【請求項５５】
脂質、小分子、ペプチドまたはタンパク質からなる群から選択される分子とコンジュゲートしている、請求項１、３、４、５または３５から４０のいずれか一項に記載のＯＲＮ。
【請求項５６】
ＯＲＮおよび分子が、直接コンジュゲートしている、請求項５５に記載のＯＲＮ。
【請求項５７】
ＯＲＮおよび分子が、リンカーを介してコンジュゲートしている、請求項５５に記載のＯＲＮ。
【請求項５８】
ＩＦＮ−αの産生を刺激する方法であって、ＴＬＲ７発現細胞を、ＩＦＮ−α産生を刺激するのに有効な量の、ポリＧモチーフと連結している免疫刺激性ＲＮＡオリゴヌクレオチド（ＯＲＮ）モチーフを含むＯＲＮと接触させることを含み、ポリＧモチーフは免疫刺激性ＯＲＮモチーフの３’側にあり、ポリＧモチーフは少なくとも４個のＧを含み、Ｇはグアノシンであるステップを含み、ＯＲＮに応じたＩＦＮ−γまたはＩＬ−１２産生はバックグラウンドと比較して大幅には誘導されない方法。
【請求項５９】
ＯＲＮが、ＧＧ（Ｒ１）ｎ（Ｕ）４〜２０（Ｒ２）ｍＧＧＧＧ［式中、Ｒ１およびＲ２は、リボヌクレオシド、デオキシリボヌクレオシド、スペーサーまたは非ヌクレオチドリンカーであり、ｎ＝０〜２０であり、ｍ＝０〜２０であり、Ｕはウリジンまたはその誘導体であり、Ｇはグアノシンである］である、請求項５７に記載の方法。
【請求項６０】
ＴＬＲ７発現細胞がｍＤＣである、請求項５８に記載の方法。
【請求項６１】
ＴＬＲ７発現細胞がｉｎ ｖｉｔｒｏである、請求項５８に記載の方法。
【請求項６２】
ＴＬＲ７発現細胞がｉｎ ｖｉｖｏである、請求項５８に記載の方法。
【請求項６３】
癌を治療する方法であって、それを必要とする対象に、癌を治療するのに有効な量の、請求項１から５７のいずれか一項に記載のＯＲＮを投与することを含む方法。
【請求項６４】
対象に化学療法薬を投与することをさらに含む、請求項６３に記載の方法。
【請求項６５】
対象に放射線を施すことをさらに含む、請求項６４に記載の方法。
【請求項６６】
喘息を治療する方法であって、それを必要とする対象に、喘息を治療するのに有効な量の、請求項１から５７のいずれか一項に記載のＯＲＮを投与することを含む方法。
【請求項６７】
アレルギーを治療する方法であって、それを必要とする対象に、アレルギーを治療するのに有効な量の、請求項１から５７のいずれか一項に記載のＯＲＮを投与することを含む方法。
【請求項６８】
対象がアレルギー性鼻炎である、請求項６７に記載の方法。
【請求項６９】
対象において免疫応答を調節する方法であって、それを必要とする対象に、免疫応答を調節するのに有効な量の、請求項１から５７のいずれか一項に記載のＯＲＮを投与することを含む方法。
【請求項７０】
対象において自己免疫疾患を治療するために、ＯＲＮが対象に送達される、請求項６９に記載の方法。
【請求項７１】
対象において気道リモデリングを治療するために、ＯＲＮが対象に送達される、請求項６９に記載の方法。
【請求項７２】
ＯＲＮが、抗原を伴わずに対象に投与される、請求項６９に記載の方法。
【請求項７３】
ＯＲＮが、経口、鼻腔、舌下、静脈内、皮下、粘膜、呼吸器、直接注射および経皮的からなる群から選択される経路によって送達される、請求項６９に記載の方法。
【請求項７４】
ＯＲＮが、ＩＦＮα発現を誘導するのに有効な量で対象に送達される、請求項６９に記載の方法。
【請求項７５】
ウイルス感染によって悪化した喘息を治療する方法であって、それを必要とする対象に、ウイルス感染によって悪化した喘息を治療するのに有効な量の、請求項１から５４のいずれか一項に記載のＯＲＮを投与することを含む方法。
【請求項７６】
ウイルス感染がＲＳＶによる、請求項７５に記載の方法。
【請求項７７】
感染性疾患を治療する方法であって、それを必要とする対象に、感染性疾患を治療するのに有効な量の、請求項１から５４のいずれか一項に記載のＯＲＮを投与することを含む方法。
【請求項７８】
対象がウイルス感染症である、請求項７７に記載の方法。
【請求項７９】
ウイルス感染症が、Ｂ型肝炎である、請求項７８に記載の方法。
【請求項８０】
ウイルス感染症が、Ｃ型肝炎である、請求項７８に記載の方法。
【請求項８１】
対象に抗ウイルス薬を投与することをさらに含む、請求項７８に記載の方法。
【請求項８２】
抗ウイルス薬が、ＯＲＮと連結している、請求項６８に記載の方法。
【請求項８３】
ＯＲＮが、経口、鼻腔、舌下、静脈内、皮下、粘膜、呼吸器、直接注射および経皮的からなる群から選択される経路によって送達される、請求項７７に記載の方法。
【図１】
【図２】
【図３】
【図５】
【図７】
【図８】
【図９】
【図１０】
【図１１】
【図４】
【図６】
【図２】
【図３】
【図５】
【図７】
【図８】
【図９】
【図１０】
【図１１】
【図４】
【図６】
【公表番号】特表２０１０−５０７３８６（Ｐ２０１０−５０７３８６Ａ）
【公表日】平成２２年３月１１日（２０１０．３．１１）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００９−５３３９８３（Ｐ２００９−５３３９８３）
【出願日】平成１９年１０月２６日（２００７．１０．２６）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＩＢ２００７／００４５９３
【国際公開番号】ＷＯ２００８／１３９２６２
【国際公開日】平成２０年１１月２０日（２００８．１１．２０）
【出願人】（５０８０９２９１２）コーリー ファーマシューティカル ゲーエムベーハー (10)
【Ｆターム（参考）】
【公表日】平成２２年３月１１日（２０１０．３．１１）
【国際特許分類】
【出願日】平成１９年１０月２６日（２００７．１０．２６）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＩＢ２００７／００４５９３
【国際公開番号】ＷＯ２００８／１３９２６２
【国際公開日】平成２０年１１月２０日（２００８．１１．２０）
【出願人】（５０８０９２９１２）コーリー ファーマシューティカル ゲーエムベーハー (10)
【Ｆターム（参考）】
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