オルタナティブスプライシングを調節するリボスイッチに関連する方法および組成物を開示する。コード領域に作動可能に連結されたリボスイッチを含むＲＮＡをコードする核酸分子を含み、リボスイッチがＲＮＡのスプライシングを調節し、リボスイッチおよびコード領域が非相同である、調節可能な遺伝子発現構築物を本明細書中に開示する。リボスイッチはアプタマードメインおよび発現プラットフォームドメインを含むことができ、両者は非相同である。発現プラットフォームドメインはイントロン中にオルタナティブスプライスジャンクションを含む。発現プラットフォームドメインはイントロンの末端にスプライスジャンクションを含む。リボスイッチを、トリガー分子（ＴＰＰ）によって活性化することができる。リボスイッチは、オルタナティブスプライシングを活性化、オルタナティブスプライシングを抑制、ＲＮＡのスプライシングを変化させることができる。

【特許請求の範囲】
【請求項１】
調節可能な遺伝子発現構築物であって、
コード領域に作動可能に連結されたリボスイッチを含むＲＮＡをコードする核酸分子を含み、該リボスイッチが該ＲＮＡのスプライシングを調節し、該リボスイッチおよび該コード領域が非相同である、調節可能な遺伝子発現構築物。
【請求項２】
オルタナティブスプライシング（ａｌｔｅｒｎａｔｉｖｅ ｓｐｉｃｉｎｇ）を調節する、請求項１に記載の構築物。
【請求項３】
前記リボスイッチがアプタマードメインおよび発現プラットフォームドメインを含み、該アプタマードメインおよび該発現プラットフォームドメインが非相同である、請求項１または請求項２に記載の構築物。
【請求項４】
前記ＲＮＡがイントロンをさらに含み、前記発現プラットフォームドメインが該イントロン中にオルタナティブスプライスジャンクションを含む、請求項１から３のいずれか１項に記載の構築物。
【請求項５】
前記ＲＮＡがイントロンをさらに含み、前記発現プラットフォームドメインが該イントロンの末端にスプライスジャンクションを含む、請求項１から４のいずれか１項に記載の構築物。
【請求項６】
前記オルタナティブスプライスジャンクションが、前記リボスイッチが活性化される場合に活性である、請求項４または請求項５に記載の構築物。
【請求項７】
前記オルタナティブスプライスジャンクションが、前記リボスイッチが活性化されない場合に活性である、請求項４または請求項５に記載の構築物。
【請求項８】
前記リボスイッチがトリガー分子によって活性化される、請求項１から７のいずれか１項に記載の構築物。
【請求項９】
前記トリガー分子がＴＰＰである、請求項８に記載の構築物。
【請求項１０】
前記リボスイッチがＴＰＰ応答性リボスイッチである、請求項１から９のいずれか１項に記載の構築物。
【請求項１１】
前記リボスイッチがオルタナティブスプライシングを活性化する、請求項１から１０のいずれか１項に記載の構築物。
【請求項１２】
前記リボスイッチがオルタナティブスプライシングを抑制する、請求項１から１０のいずれか１項に記載の構築物。
【請求項１３】
ＲＮＡが分岐構造を有する、請求項１から１２のいずれか１項に記載の構築物。
【請求項１４】
前記ＲＮＡがｐｒｅ−ｍＲＮＡである、請求項１から１３のいずれか１項に記載の構築物。
【請求項１５】
スプライシング調節を有する前記アプタマードメイン領域がＰ４ステムおよびＰ５ステム中に存在する、請求項３から１３のいずれか１項に記載の構築物。
【請求項１６】
前記スプライシング調節を有する前記アプタマードメイン領域がループ５中にも存在する、請求項１５に記載の構築物。
【請求項１７】
前記スプライシング調節を有する前記アプタマードメイン領域がステムＰ２中にも存在する、請求項１５または請求項１６に記載の構築物。
【請求項１８】
前記スプライス部位が前記アプタマードメインの５’末端に対して−６と−２４との間の位置に存在する、請求項３から１７のいずれか１項に記載の構築物。
【請求項１９】
前記スプライス部位が配列ＧＵＡに続く、請求項３から１７のいずれか１項に記載の構築物。
【請求項２０】
ＲＮＡのスプライシングを調節する方法であって、該ＲＮＡにリボスイッチを含む構築物を導入する工程を含み、該リボスイッチがＲＮＡのスプライシングを調節することができる、方法。
【請求項２１】
前記リボスイッチがアプタマードメインおよび発現プラットフォームドメインを含み、該アプタマードメインおよび該発現プラットフォームドメインが非相同である、請求項２０に記載の方法。
【請求項２２】
前記リボスイッチが前期ＲＮＡのイントロンにある、請求項２０または請求項２１に記載の方法。
【請求項２３】
前記リボスイッチがトリガー分子によって活性化される、請求項２０から２２のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２４】
前記トリガー分子がＴＰＰである、請求項２３に記載の方法。
【請求項２５】
前記リボスイッチがＴＰＰ応答性リボスイッチである、請求項２０から２４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２６】
前記リボスイッチがオルタナティブスプライシングを活性化する、請求項２０から２５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２７】
前記リボスイッチがオルタナティブスプライシングを抑制する、請求項２０から２５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２８】
前記スプライシングが天然に起こらない、請求項２０から２７のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２９】
前記スプライシング調節を有する前記アプタマードメイン領域がループ５中に存在する、請求項２１から２８のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３０】
前記スプライシング調節を有する前記アプタマードメイン領域がステムＰ２中に存在する、請求項２１から２８のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３１】
前記スプライス部位が前記アプタマードメインの５’末端に対して−６と−２４との間の位置に存在する、請求項２１から３０のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３２】
前記スプライス部位が前記アプタマードメイン中の前記配列ＧＵＡに続く、請求項２１から３０のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３３】
真菌増殖を阻害する方法であって、
（ａ）真菌感染した被験体を同定する工程、
（ｂ）ＴＰＰ応答性リボスイッチを阻害する有効量の化合物を該被験体に投与し、それにより、真菌増殖を阻害する工程、
を含む、方法。
【請求項３４】
前記真菌増殖の阻害が、真菌バイオマスを１０％以上減少させる工程を含む、請求項３３に記載の方法。

【図１ａ】

【図１ｂ】

【図１ｃ】

【図１ｄ】

【図２ａ】

【図２ｂ】

【図２ｃ】

【図３】

【図４ａ】

【図４ｂ】

【図４ｃ】

【図５ａ】

【図５ｂ】

【図６】

【図７】

【図８ａ】

【図８ｂ】

【図８ｃ】

【図９】

【図１０】

【図１１】

【図１２ａ】

【図１２ｂ】

【図１２ｃ】

【図１２ｄ】

【図１２ｅ】

【図１２ｆ】

【図１３ａ】

【図１３ｂ】

【図１４ａ】

【図１４ｂ】

【公表番号】特表２０１０−５２１９７７（Ｐ２０１０−５２１９７７Ａ）
【公表日】平成２２年７月１日（２０１０．７．１）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００９−５５４７９０（Ｐ２００９−５５４７９０）
【出願日】平成２０年３月２２日（２００８．３．２２）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＵＳ２００８／０５８０４５
【国際公開番号】ＷＯ２００８／１１６２２０
【国際公開日】平成２０年９月２５日（２００８．９．２５）
【出願人】（３９２０１９３５２）イェール　ユニバーシティー (38)
【氏名又は名称原語表記】ＹＡＬＥ　ＵＮＩＶＥＲＳＩＴＹ
【Ｆターム（参考）】