カスパーゼ−３活性化作用及びアポトーシス誘導作用を有する薬剤及び健康食品
【課題】新たなカスパーゼ−３活性化剤及びカスパーゼ−３活性化作用に基づくアポトーシス誘導剤を提供すること、さらにはカスパーゼ−３活性化用健康食品及びカスパーゼ−３活性化作用に基づくアポトーシス誘導用健康食品を提供すること。
【解決手段】カスパーゼ−３活性化剤及びカスパーゼ−３活性化作用に基づくアポトーシス誘導剤が、パンダナス コノイデウス（Ｐｕｎｄａｎｕｓ ｃｏｎｏｉｄｅｕｓ）の抽出物を含有することからなる。また、カスパーゼ−３活性化用健康食品及びカスパーゼ−３活性化作用に基づくアポトーシス誘導用健康食品が、パンダナス コノイデウス（Ｐｕｎｄａｎｕｓ ｃｏｎｏｉｄｅｕｓ）又はその抽出物を含有することからなる。
【解決手段】カスパーゼ−３活性化剤及びカスパーゼ−３活性化作用に基づくアポトーシス誘導剤が、パンダナス コノイデウス（Ｐｕｎｄａｎｕｓ ｃｏｎｏｉｄｅｕｓ）の抽出物を含有することからなる。また、カスパーゼ−３活性化用健康食品及びカスパーゼ−３活性化作用に基づくアポトーシス誘導用健康食品が、パンダナス コノイデウス（Ｐｕｎｄａｎｕｓ ｃｏｎｏｉｄｅｕｓ）又はその抽出物を含有することからなる。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、カスパーゼ−３活性化剤、アポトーシス誘導剤、カスパーゼ−３活性化用健康食品、並びにアポトーシス誘導用健康食品に関する。
【背景技術】
【０００２】
アポトーシスは神経系、内分泌系、免疫系における基本的な生命現象の制御に重要な役割を果たし、また多くの疾病の発症に深く関わっている。特に、アポトーシスが過剰に抑制される場合の疾患としては癌や自己免疫疾患などが知られている。
アポトーシスに関与しているシグナル経路としてはＦＡＳ受容体（ＣＤ９５）やＴＮＦ受容体を介するデスレセプター経路やミトコンドリアの機能が関与したミトコンドリア経路などが知られている。そして、それらの経路の下流にあるカスパーゼ類が次々に活性化されることによってシグナル伝達が行われ、最終的には実行因子であるカスパーゼ−３などが活性化されてアポトーシスが起こる。これらのアポトーシス関連分子を細胞に強制発現させた場合アポトーシスを誘導することができる。従って、アポトーシス関連分子を修飾するような治療及び薬剤はアポトーシスを誘導あるいは阻害することが期待される。
癌治療については、これまでは癌細胞の増殖阻害のみが治療の目標であったが、癌細胞に積極的にアポトーシスを誘導し、治療効果を期待する考えが報告され、現在種々アポトーシス誘導剤が開発されてきている。
【０００３】
一方、パンダナス コノイデウス（Ｐｕｎｄａｎｕｓ ｃｏｎｏｉｄｅｕｓ）はタコノキ科植物で、その果実は長さ約１ｍ、１０ｋｇにも達し、熟すると真っ赤になる。原産地のパプアニューギニアでは、その果実をブアメラと称し、強壮薬として用いられている。
また、タコノキ科の植物を育毛剤として利用する技術が開示されている（例えば、特許文献１及び特許文献２参照。）。
しかし、そのカスパーゼ−３活性化作用及びアポトーシス誘導作用については知られていなかった。
【特許文献１】特開２００４−４３３９２
【特許文献２】特開２０００−３３６１７
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
そこで、本発明は、新たなカスパーゼ−３活性化剤及びカスパーゼ−３活性化作用に基づくアポトーシス誘導剤を提供すること、さらにはカスパーゼ−３活性化用健康食品及びカスパーゼ−３活性化作用に基づくアポトーシス誘導用健康食品を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００５】
上記課題を解決するため、本発明は、カスパーゼ−３活性化剤が、パンダナス コノイデウス（Ｐｕｎｄａｎｕｓ ｃｏｎｏｉｄｅｕｓ）の抽出物を含有することからなる。また、カスパーゼ−３活性化作用に基づくアポトーシス誘導剤が、パンダナス コノイデウス（Ｐｕｎｄａｎｕｓ ｃｏｎｏｉｄｅｕｓ）の抽出物を含有することからなる。
また、カスパーゼ−３活性化用健康食品が、パンダナス コノイデウス（Ｐｕｎｄａｎｕｓ ｃｏｎｏｉｄｅｕｓ）又はその抽出物を含有することからなる。また、カスパーゼ−３活性化作用に基づくアポトーシス誘導用健康食品が、パンダナス コノイデウス（Ｐｕｎｄａｎｕｓ ｃｏｎｏｉｄｅｕｓ）又はその抽出物を含有することからなる。
【０００６】
アポトーシス誘導剤は、癌や自己免疫疾患などの予防および／又は治療に有用なものである。
【０００７】
本発明で用いられる植物はＰａｎｄａｎｕｓ ｃｏｎｏｉｄｅｕｓであり、この植物を構成する部位全て、又は果実、葉、茎、根などの一部を用いることができ、これらを乾燥した後、粉砕して粉末状にして用いることもできる。
【０００８】
本発明においては、この植物の抽出物を用いる。本願において抽出物は抽出液・エキス・個体・粉末等を含む概念である。抽出物を得る方法としては、例えばこの植物の果実、葉、茎、根などを水および／又は親水性有機溶媒を用いて抽出して抽出液を得る方法；さらにこのような抽出液から凍結乾燥、噴霧乾燥、減圧留去などにより粉末を得る方法などが挙げられる。親水性有機溶媒としては、例えばメタノール、エタノールなどの炭素数１〜４の低級アルコール、アセトンなどが挙げられる。特にエタノールが好ましい。これらの溶媒は単独でも、２種以上を組み合わせて使用してもよく。また、水とこれらの親水性有機溶媒を混合して使用してもよい。好ましい抽出溶媒としては、含水アルコールが挙げられ、特に含水エタノールが好ましい。これらの抽出溶媒の使用量は特に制限されないが、例えばエキス剤、チンキ剤などを製する際に用いられる冷浸法、温浸法、パーコレーション法などを適用することができる。得られた抽出液はそのまま、又はさらに濃縮したり、希釈したり、精製したりして用いることができる。
さらに、これらの抽出液や粉末を、カラムクロマトグラフィーなどを用いて精製することにより、単一成分としたものを用いることもできる。
【０００９】
この抽出液、エキス、個体、粉末に必要に応じて製剤学的に受容可能な添加物（例えば賦形剤、界面活性剤等）を加えることにより、薬剤を製造することが出来る。また、抽出液、エキス等は瓶詰めにしたり、個体、粉末等はカプセルに入れる等して健康食品として用いることが出来る。
【発明の効果】
【００１０】
本発明にかかる植物は、優れたカスパーゼ−３活性化作用及びカスパーゼ−３活性化作用に基づくアポトーシス誘導作用を有する薬剤・健康食品を提供することができ、それらは癌や自己免疫疾患などの予防および／又は治療に有用なものである。
【実施例】
【００１１】
次に、実施例を挙げて本発明をさらに説明するが、本発明はこれら実施例に限定されるものではない。
【００１２】
参考例１
Ｐａｎｄａｎｕｓ ｃｏｎｏｉｄｅｕｓの果実（以下、ブアメラとする）を、１０倍量の５０％エタノールにて1時間2回熱時抽出し、減圧下でエタノールを留去後、凍結乾燥して得たエキス（ＢＭ−５０Ｅ−ｅｘｔ、収率；１２．３％）および１０倍量のエタノールにて１時間２回熱時抽出し、減圧下でエタノールを留去して得られたエキス（ＢＭ−Ｅ−ｅｘｔ、収率；７．９％）を被検体とした。
【００１３】
実施例１（細胞増殖抑制作用）
参考例１で得られた被検体の細胞増殖抑制作用を調べた。
１．被検液の調製
被検体を５％ｄｉｍｅｔｈｙｌ ｓｕｌｆｗｏｌｉｄｅ（ＤＭＳＯ）含有ＰＢＳ（ｐＨ７．４）に溶解し、これを被検液とした。
２．使用した腫瘍細胞
ヒト由来白血病細胞（ＨＬ６０）、ヒト由来舌癌細胞（ＨＳＣ３）、ヒト由来胃癌細胞（ＭＫＮ４５）、ラット由来脳腫瘍細胞（Ｃ６）およびマウス由来骨肉腫細胞（ＬＭ８）を使用した。
３．細胞増殖抑制作用
細胞増殖抑制試験はｔｒｙｐａｎ ｂｌｕｅ ｄｙｅ法にて測定した。各種腫瘍細胞を２×１０４個／ｍＬに調整した細胞浮遊液を９６−ｗｅｌｌ ｐｌａｔｅに播種し、最終濃度が１０、２５、５０、１００および２５０μｇ／ｍＬになるように被検液を添加した。その後、２４、４８および７２時間インキュベートを行い、生細胞および死細胞を顕微鏡下で算定した。被検体処置群の生細胞数は各測定時におけるｃｏｎｔｒｏｌの生細胞数を１００とし、それに対する割合として算出した。
【００１４】
実験結果を表１−１〜５に示す。ブアメラエキスはいずれの腫瘍細胞に対しても細胞増殖抑制作用を示した。
【００１５】
【表１−１】
【表１−２】
【表１−３】
【表１−４】
【表１−５】
【００１６】
実施例２（アポトーシス誘導作用）
参考例１で得られた被検体のアポトーシス誘導作用を調べた。
１．被検液の調製
被検体を５％ｄｉｍｅｔｈｙｌ ｓｕｌｆｏｘｉｄｅ（ＤＭＳＯ）含有ＰＢＳ（ｐＨ７．４）に溶解し、これを被検液とした。
２．使用した腫瘍細胞
参考例１で使用した腫瘍細胞を使用した。
３．アポトーシス誘導作用
各種腫瘍細胞を培養フラスコに播種し、終濃度が５０または２５０μｇ／ｍＬとなるように被検液を添加した。４８時間処理後、細胞を回収し、ＰＢＳ（−）で洗浄後、生細胞を１×１０６ｃｅｌｌｓに調整し、遠心分離（１,０００ｒｐｍ、４℃、２分)を行った。得られたペレットにｃｅｌｌ ｌｙｓｉｓ ｂｕｆｆｗｅｒを添加し、さらに２×ｒｅａｃｔｉｏｎ ｂｕｆｆｗｅｒと１ Ｍ ＤＴＴを１００：1で調整したものを添加した。その後、蛍光基質（ＡＦＣ）を添加し、３７℃で２時間インキュベートした。氷冷して反応を停止させた後、蛍光分光光度計を用い蛍光強度を測定した。また、各細胞に含まれるタンパク量をローリー法にて測定し、得られたタンパク含有量、および反応時間(分)で、その蛍光強度を除した値をユニット（Ｕｎｉｔ（ＯＤ／ｍｉｎ／ｍｇ ｏｆ ｐｒｏｔｅｉｎ））と定め、これをｃａｓｐａｓｅ−３活性単位として評価した。
【００１７】
実験結果を表2に示す。表2から明らかなように、ブアメラから得た抽出エキスはカスパーゼ−３を活性化し、アポトーシス誘導作用がみられた。
【００１８】
【表２】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、カスパーゼ−３活性化剤、アポトーシス誘導剤、カスパーゼ−３活性化用健康食品、並びにアポトーシス誘導用健康食品に関する。
【背景技術】
【０００２】
アポトーシスは神経系、内分泌系、免疫系における基本的な生命現象の制御に重要な役割を果たし、また多くの疾病の発症に深く関わっている。特に、アポトーシスが過剰に抑制される場合の疾患としては癌や自己免疫疾患などが知られている。
アポトーシスに関与しているシグナル経路としてはＦＡＳ受容体（ＣＤ９５）やＴＮＦ受容体を介するデスレセプター経路やミトコンドリアの機能が関与したミトコンドリア経路などが知られている。そして、それらの経路の下流にあるカスパーゼ類が次々に活性化されることによってシグナル伝達が行われ、最終的には実行因子であるカスパーゼ−３などが活性化されてアポトーシスが起こる。これらのアポトーシス関連分子を細胞に強制発現させた場合アポトーシスを誘導することができる。従って、アポトーシス関連分子を修飾するような治療及び薬剤はアポトーシスを誘導あるいは阻害することが期待される。
癌治療については、これまでは癌細胞の増殖阻害のみが治療の目標であったが、癌細胞に積極的にアポトーシスを誘導し、治療効果を期待する考えが報告され、現在種々アポトーシス誘導剤が開発されてきている。
【０００３】
一方、パンダナス コノイデウス（Ｐｕｎｄａｎｕｓ ｃｏｎｏｉｄｅｕｓ）はタコノキ科植物で、その果実は長さ約１ｍ、１０ｋｇにも達し、熟すると真っ赤になる。原産地のパプアニューギニアでは、その果実をブアメラと称し、強壮薬として用いられている。
また、タコノキ科の植物を育毛剤として利用する技術が開示されている（例えば、特許文献１及び特許文献２参照。）。
しかし、そのカスパーゼ−３活性化作用及びアポトーシス誘導作用については知られていなかった。
【特許文献１】特開２００４−４３３９２
【特許文献２】特開２０００−３３６１７
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
そこで、本発明は、新たなカスパーゼ−３活性化剤及びカスパーゼ−３活性化作用に基づくアポトーシス誘導剤を提供すること、さらにはカスパーゼ−３活性化用健康食品及びカスパーゼ−３活性化作用に基づくアポトーシス誘導用健康食品を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００５】
上記課題を解決するため、本発明は、カスパーゼ−３活性化剤が、パンダナス コノイデウス（Ｐｕｎｄａｎｕｓ ｃｏｎｏｉｄｅｕｓ）の抽出物を含有することからなる。また、カスパーゼ−３活性化作用に基づくアポトーシス誘導剤が、パンダナス コノイデウス（Ｐｕｎｄａｎｕｓ ｃｏｎｏｉｄｅｕｓ）の抽出物を含有することからなる。
また、カスパーゼ−３活性化用健康食品が、パンダナス コノイデウス（Ｐｕｎｄａｎｕｓ ｃｏｎｏｉｄｅｕｓ）又はその抽出物を含有することからなる。また、カスパーゼ−３活性化作用に基づくアポトーシス誘導用健康食品が、パンダナス コノイデウス（Ｐｕｎｄａｎｕｓ ｃｏｎｏｉｄｅｕｓ）又はその抽出物を含有することからなる。
【０００６】
アポトーシス誘導剤は、癌や自己免疫疾患などの予防および／又は治療に有用なものである。
【０００７】
本発明で用いられる植物はＰａｎｄａｎｕｓ ｃｏｎｏｉｄｅｕｓであり、この植物を構成する部位全て、又は果実、葉、茎、根などの一部を用いることができ、これらを乾燥した後、粉砕して粉末状にして用いることもできる。
【０００８】
本発明においては、この植物の抽出物を用いる。本願において抽出物は抽出液・エキス・個体・粉末等を含む概念である。抽出物を得る方法としては、例えばこの植物の果実、葉、茎、根などを水および／又は親水性有機溶媒を用いて抽出して抽出液を得る方法；さらにこのような抽出液から凍結乾燥、噴霧乾燥、減圧留去などにより粉末を得る方法などが挙げられる。親水性有機溶媒としては、例えばメタノール、エタノールなどの炭素数１〜４の低級アルコール、アセトンなどが挙げられる。特にエタノールが好ましい。これらの溶媒は単独でも、２種以上を組み合わせて使用してもよく。また、水とこれらの親水性有機溶媒を混合して使用してもよい。好ましい抽出溶媒としては、含水アルコールが挙げられ、特に含水エタノールが好ましい。これらの抽出溶媒の使用量は特に制限されないが、例えばエキス剤、チンキ剤などを製する際に用いられる冷浸法、温浸法、パーコレーション法などを適用することができる。得られた抽出液はそのまま、又はさらに濃縮したり、希釈したり、精製したりして用いることができる。
さらに、これらの抽出液や粉末を、カラムクロマトグラフィーなどを用いて精製することにより、単一成分としたものを用いることもできる。
【０００９】
この抽出液、エキス、個体、粉末に必要に応じて製剤学的に受容可能な添加物（例えば賦形剤、界面活性剤等）を加えることにより、薬剤を製造することが出来る。また、抽出液、エキス等は瓶詰めにしたり、個体、粉末等はカプセルに入れる等して健康食品として用いることが出来る。
【発明の効果】
【００１０】
本発明にかかる植物は、優れたカスパーゼ−３活性化作用及びカスパーゼ−３活性化作用に基づくアポトーシス誘導作用を有する薬剤・健康食品を提供することができ、それらは癌や自己免疫疾患などの予防および／又は治療に有用なものである。
【実施例】
【００１１】
次に、実施例を挙げて本発明をさらに説明するが、本発明はこれら実施例に限定されるものではない。
【００１２】
参考例１
Ｐａｎｄａｎｕｓ ｃｏｎｏｉｄｅｕｓの果実（以下、ブアメラとする）を、１０倍量の５０％エタノールにて1時間2回熱時抽出し、減圧下でエタノールを留去後、凍結乾燥して得たエキス（ＢＭ−５０Ｅ−ｅｘｔ、収率；１２．３％）および１０倍量のエタノールにて１時間２回熱時抽出し、減圧下でエタノールを留去して得られたエキス（ＢＭ−Ｅ−ｅｘｔ、収率；７．９％）を被検体とした。
【００１３】
実施例１（細胞増殖抑制作用）
参考例１で得られた被検体の細胞増殖抑制作用を調べた。
１．被検液の調製
被検体を５％ｄｉｍｅｔｈｙｌ ｓｕｌｆｗｏｌｉｄｅ（ＤＭＳＯ）含有ＰＢＳ（ｐＨ７．４）に溶解し、これを被検液とした。
２．使用した腫瘍細胞
ヒト由来白血病細胞（ＨＬ６０）、ヒト由来舌癌細胞（ＨＳＣ３）、ヒト由来胃癌細胞（ＭＫＮ４５）、ラット由来脳腫瘍細胞（Ｃ６）およびマウス由来骨肉腫細胞（ＬＭ８）を使用した。
３．細胞増殖抑制作用
細胞増殖抑制試験はｔｒｙｐａｎ ｂｌｕｅ ｄｙｅ法にて測定した。各種腫瘍細胞を２×１０４個／ｍＬに調整した細胞浮遊液を９６−ｗｅｌｌ ｐｌａｔｅに播種し、最終濃度が１０、２５、５０、１００および２５０μｇ／ｍＬになるように被検液を添加した。その後、２４、４８および７２時間インキュベートを行い、生細胞および死細胞を顕微鏡下で算定した。被検体処置群の生細胞数は各測定時におけるｃｏｎｔｒｏｌの生細胞数を１００とし、それに対する割合として算出した。
【００１４】
実験結果を表１−１〜５に示す。ブアメラエキスはいずれの腫瘍細胞に対しても細胞増殖抑制作用を示した。
【００１５】
【表１−１】
【表１−２】
【表１−３】
【表１−４】
【表１−５】
【００１６】
実施例２（アポトーシス誘導作用）
参考例１で得られた被検体のアポトーシス誘導作用を調べた。
１．被検液の調製
被検体を５％ｄｉｍｅｔｈｙｌ ｓｕｌｆｏｘｉｄｅ（ＤＭＳＯ）含有ＰＢＳ（ｐＨ７．４）に溶解し、これを被検液とした。
２．使用した腫瘍細胞
参考例１で使用した腫瘍細胞を使用した。
３．アポトーシス誘導作用
各種腫瘍細胞を培養フラスコに播種し、終濃度が５０または２５０μｇ／ｍＬとなるように被検液を添加した。４８時間処理後、細胞を回収し、ＰＢＳ（−）で洗浄後、生細胞を１×１０６ｃｅｌｌｓに調整し、遠心分離（１,０００ｒｐｍ、４℃、２分)を行った。得られたペレットにｃｅｌｌ ｌｙｓｉｓ ｂｕｆｆｗｅｒを添加し、さらに２×ｒｅａｃｔｉｏｎ ｂｕｆｆｗｅｒと１ Ｍ ＤＴＴを１００：1で調整したものを添加した。その後、蛍光基質（ＡＦＣ）を添加し、３７℃で２時間インキュベートした。氷冷して反応を停止させた後、蛍光分光光度計を用い蛍光強度を測定した。また、各細胞に含まれるタンパク量をローリー法にて測定し、得られたタンパク含有量、および反応時間(分)で、その蛍光強度を除した値をユニット（Ｕｎｉｔ（ＯＤ／ｍｉｎ／ｍｇ ｏｆ ｐｒｏｔｅｉｎ））と定め、これをｃａｓｐａｓｅ−３活性単位として評価した。
【００１７】
実験結果を表2に示す。表2から明らかなように、ブアメラから得た抽出エキスはカスパーゼ−３を活性化し、アポトーシス誘導作用がみられた。
【００１８】
【表２】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
パンダナス コノイデウス（Ｐｕｎｄａｎｕｓ ｃｏｎｏｉｄｅｕｓ）の抽出物を含有することを特徴とするカスパーゼ−３活性化剤。
【請求項２】
パンダナス コノイデウス（Ｐｕｎｄａｎｕｓ ｃｏｎｏｉｄｅｕｓ）の抽出物を含有することを特徴とするカスパーゼ−３活性化作用に基づくアポトーシス誘導剤。
【請求項３】
パンダナス コノイデウス（Ｐｕｎｄａｎｕｓ ｃｏｎｏｉｄｅｕｓ）又はその抽出物を含有することを特徴とするカスパーゼ−３活性化用健康食品。
【請求項４】
パンダナス コノイデウス（Ｐｕｎｄａｎｕｓ ｃｏｎｏｉｄｅｕｓ）又はその抽出物を含有することを特徴とするカスパーゼ−３活性化作用に基づくアポトーシス誘導用健康食品。
【請求項１】
パンダナス コノイデウス（Ｐｕｎｄａｎｕｓ ｃｏｎｏｉｄｅｕｓ）の抽出物を含有することを特徴とするカスパーゼ−３活性化剤。
【請求項２】
パンダナス コノイデウス（Ｐｕｎｄａｎｕｓ ｃｏｎｏｉｄｅｕｓ）の抽出物を含有することを特徴とするカスパーゼ−３活性化作用に基づくアポトーシス誘導剤。
【請求項３】
パンダナス コノイデウス（Ｐｕｎｄａｎｕｓ ｃｏｎｏｉｄｅｕｓ）又はその抽出物を含有することを特徴とするカスパーゼ−３活性化用健康食品。
【請求項４】
パンダナス コノイデウス（Ｐｕｎｄａｎｕｓ ｃｏｎｏｉｄｅｕｓ）又はその抽出物を含有することを特徴とするカスパーゼ−３活性化作用に基づくアポトーシス誘導用健康食品。
【公開番号】特開２００８−３０８４５５（Ｐ２００８−３０８４５５Ａ）
【公開日】平成２０年１２月２５日（２００８．１２．２５）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００７−１５８７８０（Ｐ２００７−１５８７８０）
【出願日】平成１９年６月１５日（２００７．６．１５）
【出願人】（５０６３７５４５１）光和産業株式会社 (2)
【Ｆターム（参考）】
【公開日】平成２０年１２月２５日（２００８．１２．２５）
【国際特許分類】
【出願日】平成１９年６月１５日（２００７．６．１５）
【出願人】（５０６３７５４５１）光和産業株式会社 (2)
【Ｆターム（参考）】
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