カルジオリピン組成物、その製造方法及び使用
本発明は、異なる鎖長を有し、及びまた不飽和の有無の両方の場合の異なる脂肪酸及び／又はアルキル鎖を有するカルジオリピンの新規合成経路を提供する。カルジオリピン変異体を含むカルジオリピンの新規形態を製造するために、反応スキームが使用できる。本方法によって製造されるカルジオリピンは、疎水性又は親水性薬剤などの活性剤をまた含むことができるリポソームや他の脂質製剤に便利にも組み込むことができる。このような製剤は、疾患の治療、あるいは診断アッセイ及び／又は分析アッセイで使用できる。リポソームはまた、例えば、リガンドをある細胞型又は特異的組織に向かわせるために、リガンドを含むことができる。
【化１】
【化１】
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
発明の分野
本発明は、新規なカルジオリピン組成物、それらの製造方法、及びそれらを含むリポソーム組成物に関する。本発明はまた、活性剤を含むリポソーム製剤又は複合体又はエマルション、並びに診断アッセイ並びにヒトと動物における疾患でのそれらの使用に関する。
【背景技術】
【０００２】
発明の背景
リポソーム製剤は、水溶液中で疎水性薬剤の溶解性を増加する能力を有する。それらはしばしば、薬剤療法と関連する副作用を減少し、活性剤の新規製剤を開発する柔軟性のある道具を提供する。
【０００３】
リポソームは、ホスファチジルコリン、ホスファチジルエタノールアミン、ホスファチジルセリン、ホスファチジルグリセロール、ホスファチジン酸、及びホスファチジルイノシトールなどの天然リン脂質から通常製造される。ホスファチジルグリセロールやカルジオリピンなどのアニオン性リン脂質を加えて、正味の陰性表面電荷を産生でき、それは、コロイド安定性を提供する。これらの成分はしばしば、天然源から精製されるが、一部の場合には、化学合成できる。
【０００４】
カルジオリピン（ジホスファチジルグリセロールとしても知られる）は、一群の複雑なアニオン性リン脂質を構成し、それは、心筋や骨格筋のミトコンドリアを含む、高代謝活性と関連する組織の細胞膜から典型的に精製される。しかし、公知のクロマトグラフィー精製技術は、カルジオリピンを別個の分子種に分離できない。従って、この成分を含む薬剤製剤は均一ではない。
【０００５】
均一なテトラミリストイルカルジオリピンは、化学合成によって得ることができる。しかし、この化合物の利用性は限定され、薬剤製剤での一般的使用のために、それは現在あまりに高価である。脂肪酸などの規定された疎水性アシル基を有する他の均一なカルジオリピン種は、現在市販されていないか、少量で、かなりの価格でのみ利用できる。
【０００６】
カルジオリピンの利用性が限定されているのは、部分的には、その合成方法が面倒で、時間がかかり、高価であるという事実による。一般的に、それらは、置換グリセロールの種々の誘導体から出発する分子の個々のパートのステップワイズ構築と複数の中間体精製を含む。公知の合成方法は主に２群に分類される：（ａ）ホスホリル化剤を用いて、２−Ｏ−保護グリセロールの１級ヒドロキシル基を、１，２−Ｏ−ジアシル−ｓｎ−グリセロールと結合させること、及び（ｂ）２，４，６−トリイソプロピルベンゼンスルホニル クロリド（ＴＰＳ）とピリジンの存在下、２−Ｏ−保護グリセロールの両方の１級ヒドロキシル基とホスファチジン酸での縮合。
【０００７】
Ｒａｍｉｒｅｚ ｅｔ ａｌ．（Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，７６９−７７０（１９７６）；Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ，３３：５９９−６０８（１９７７））は、トリエチルアミンの存在下、１，２−Ｏ−ジアシルグリセロールが、ジ（１，２−ジメチルエテニレン）ピロホスフェートによってリン酸化されるカルジオリピンの合成方法を記載する。生成物を、アミン触媒存在下、２−ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル クロリド グリセロールと反応させ、カルジオリピンのホスホトリエステル形態を産生する。アセトニルホスフェート保護基は温和な塩基性条件下除去され、ホスホジエステルが得られ、シリル基は温和な酸性条件下除去される。この合成法は、かなりのトランスエステル化反応を受け、それは、所望のカルジオリピンに加えて、多くの副産物を産生する。
【０００８】
Ｄｕｒａｌｓｋｉ ｅｔ ａｌ．（Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ Ｌｅｔｔ．，３９：１６０７−１６１０（１９９８））は、４，４’−ジメトキシトリチルクロリドとの反応によるグリセロールの１級ヒドロキシル基の保護を記載する。次いで、２−ヒドロキシル基は、ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル クロリドとの反応によって保護され、トリチル基は、ｐ−トルエンスルホン酸による処理によって除去された。ジアシルグリセロールの１級ヒドロキシル基は、二官能性リン酸化剤２−クロロフェニルホスホロジ−（１，２，４−トリアゾリド）を用いてリン酸化され（２−クロロフェニルホスホロジ−（１，２，４−トリアゾリド）は、トリエチルアミン存在下、１，２，４−トリアゾールと２−クロロフェニル ホスホジクロリデートを含む混合物からｉｎ ｓｉｔｕで産生された）、２，４，６−トリイソプロピルスルホニル クロリドとＮ−メチルイミダゾール存在下、シリル化グリセロールと反応させた。十分に保護されたカルジオリピンは、２−ニトロベンズアルドオキシムとＮ，Ｎ，Ｎ，Ｎ−テトラメチルグアニジンによる処理によって脱保護され、シリル基は、酢酸による処理によって除去された。
【０００９】
Ｓａｕｎｄｅｒｓ ａｎｄ Ｓｃｈｗａｒｚ（Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．，８８：３８４４−３８４７（１９６６））は、オキシ塩化リンによって２，３−ジ−Ｏ−ステアロイル−Ｄ−グリセロールをリン酸化し、２−Ｏ−ベンジルグリセロールを加え、接触水素化によってベンジル基を除去することによるカルジオリピンの製造を記載した。生成物をケイ酸クロマトグラフィーによって精製した。この方法は後に研究者（Ｒａｍｉｒｅｚ ｅｔ ａｌ．，Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ，３３：５９９−６０８（１９７７））によって疑問視された。研究者は、それを使用してカルジオリピンを成功裏に得ることができなかった。
【００１０】
Ｍｉｓｈｉｎａ ｅｔ ａｌ．（Ｂｉｏｏｒｇ．Ｋｈｉｍ．，１１：９９２−９９４（１９８５）；Ｂｉｏｏｒｇ．Ｋｈｉｍ．，１３：１１１０−１１１５（１９８７））は、オレイックイミダゾールを用い、ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリンをアシル化し、次いで、それを、キャベツホスホリパーゼＤによって切断し、１，２−ジオレオイル−ｓｎ−グリセロ−３−リン酸を得た。この化合物は、２，４，６−トリイソプロピルベンゼンスルホニル クロリドを含有するピリジン中で２−Ｏ−ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルグリセロールと縮合され、保護されたカルジオリピンが得られ、それを、標準的方法によって脱保護し、カルジオリピンが産生された。
【００１１】
Ｓｔｅｐａｎｏｖ ｅｔ ａｌ．（Ｚｈ．Ｏｒｇ．Ｋｈｉｍ，２０：９８５−９８８（１９８４））は、縮合剤２，４，６−トリイソプロピルベンゼンスルホニル クロリドを用いての、ジアシルホスファチジン酸と２−Ｏ−ベンジルグリセロールの縮合を記載する。
【００１２】
Ｋｅａｎａ ｅｔ ａｌ．（Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．，５１：２２９７−２２９９（１９８６））は、２，４，６−トリイソプロピルベンゼンスルホニル クロリドを用いて、ピリジン中、ホスファチジルグリセロール（ＰＧ）メチルエステルとホスファチジン酸（ＰＡ）の結合を記載する。結合生成物のモノメチルエステルを、ジアゾメタンでメチル化し、カルジオリピンのジメチルエステルを得、それを、ＮａＩで脱メチル化し、カルジオリピンを得た。
【００１３】
カルジオリピンはまた、ジアシルグリセロリン酸ベンジルエステルの銀塩と１，３−ジヨードプロパノールベンジルエーテルもしくは１，３−ジヨードプロパノール ｔ−ブチルエーテルとの反応によって産生された。例えば、Ｄｅ Ｈａａｓ ａｎｄ ｖａｎ Ｄｅｅｎｅｎ（Ｂｉｏｃｈｉｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ａｃｔａ，１１６：１１４−１２４（１９６６））は、複数工程順序を用いて、全体収率２６％でカルジオリピンを得た。２：１モル比での銀 ベンジルジアシル−Ｌ−α−グリセロホスフェートと２−ｔｅｒｔ−ブトキシ−１，３−ジヨードグリセロールとの反応によってトリエステルが得られ、それを精製し、脱保護して、カルジオリピンを得た。ベンジル保護基は、ヨウ化バリウムによる処理によってトリエステル中間体から除去され、ｔｅｒｔ−ブチル−エーテル基は、クロロホルム中、無水ＨＣｌによる処理によって除去された。同様に、Ｉｎｏｕｅ ｅｔ ａｌ．（Ｃｈｅｍ．Ｐｈａｒｍ．Ｂｕｌｌ．，１１：１１５０−１１５６（１９６３））は、カルジオリピンの１，３−プロパンジオールアナログの製造方法を記載したが、そこでは、ホスホジエステル結合は、１，３−ジヨードプロパンと銀 ベンジルジアシル−Ｌ−α−グリセロ−ホスフェートとの反応、及びヨウ化ナトリウムによるベンジル保護基の除去によって産生された。これらの後のスキームは、少量のカルジオリピンの製造に適したが、関与する多数工程、中間体の注意深い精製の必要性、非常に光感受性の銀塩中間体と不安定なヨード中間体の使用のために、大量のルーチンな製造には魅力がない。
【００１４】
コスト的により有効な方法で、大量の、多様で均一なカルジオリピン種を製造するために使用できる新規合成方法が必要である。このような方法は、広範な種々の均一なカルジオリピン種の利用性を増し、現在可能であるよりもより規定された組成を有するであろう活性剤の新規リポソーム製剤の開発のために利用できる脂質を多様化しよう。
【００１５】
本発明は、このような方法と組成物を提供する。本発明のこれらの利点や他の利点並びに更なる本発明の性質は、本明細書記載の発明の説明から明らかとなろう。
【発明の開示】
【課題を解決するための手段】
【００１６】
発明の概要
本発明は、新規カルジオリピン分子とアナログ、並びに種々の鎖長及び飽和／不飽和を有する異なる脂肪酸及び／又はアルキル鎖を有するカルジオリピンの新規合成経路を提供する。カルジオリピン変異体を含むカルジオリピンの新規形態を製造するために、該反応スキームが使用できる。本方法によって製造されるカルジオリピンは、遺伝子や遺伝子ベクター、アンチセンス分子（例えば、オリゴヌクレオチド）、蛋白質やペプチド、蛋白質もしくは化学薬剤（例えば、疎水性薬剤又は親水性薬剤）、又は診断薬などの活性剤をまた含むことができる（例えば、リポソームと複合体形成する、又はリポソーム内に捕捉される）リポソーム、エマルション、又は複合体（例えば、薬剤複合体）に便利にも組み込むことができる。このようなリポソームや他の製剤は、疾患の治療、あるいは診断アッセイ及び／又は分析アッセイで使用できる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１７】
本発明は、カルジオリピン分子（そのアナログ又は誘導体を含む）を提供する。１実施態様では、カルジオリピン分子は、以下の一般式：
【００１８】
【化１】
【００１９】
（式中、Ｚ１及びＺ２は、同一又は異なって、−Ｏ−Ｃ（Ｏ）−，−Ｏ−，−Ｓ−，−ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−などであり；
Ｒ１及びＲ２は、同一又は異なって、Ｈ、又は飽和もしくは不飽和アルキル基のいずれかであり；
Ｒ３は（ＣＨ２）ｎであり、及びｎ＝０−１０；
Ｒ４は、水素、アルキル、置換アルキル、シクロアルキル、置換シクロアルキル、ペプチド、ジペプチド、ポリペプチド、蛋白質、グルコース、マンノース、ガラクトース、多糖などの炭水化物など、複素環、ヌクレオシド、ポリヌクレオチドなどであり；
Ｘはカチオンであり、最も好ましくは、水素、アンモニウム、ナトリウム、カリウム、カルシウム、バリウムイオンなどの非毒性カチオンである）
の構造を有する。
【００２０】
好適実施態様では、カルジオリピンアナログは、式ＩＩ
【００２１】
【化２】
【００２２】
又は式ＩＩＩ
【００２３】
【化３】
【００２４】
を有しうる。
【００２５】
本発明はまた、以下の一般式：
【００２６】
【化４】
【００２７】
（式中、Ｚ１及びＺ２は、同一又は異なって、−Ｏ−Ｃ（Ｏ）−，−Ｏ−，−Ｓ−，−ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−などであり；
Ｒ１及びＲ２は、同一又は異なって、Ｈ、又は飽和もしくは不飽和アルキル基であり；
Ｒ３は（ＣＨ２）ｎであり、及びｎ＝０−１０；
Ｒ４は、水素、アルキル、置換アルキル、シクロアルキル、置換シクロアルキル、ペプチド、ジペプチド、ポリペプチド、蛋白質、グルコース、マンノース、ガラクトース、多糖などの炭水化物など、複素環、ヌクレオシド、ポリヌクレオチドなどであり；
Ｒ５は、リンカーであり、それは、アルキル、置換アルキル、シクロアルキル、置換シクロアルキル、アルキルオキシ、約１〜約５００個（そして、少なくとも約１０アルキルオキシマー（少なくとも約５０アルキルオキシマーなど）もしくは少なくとも約１００アルキルオキシマー（少なくとも約２００アルキルオキシマーもしくは少なくとも約３００アルキルオキシマー又は少なくとも約４００アルキルオキシマーなど）を有しうる）のアルキルオキシマーを含有するペギレーテッド（ｐｅｇｙｌａｔｅｄ）エーテルなどのポリアルキルオキシ、置換ポリアルキルオキシなど、ペプチド、ジペプチド、ポリペプチド、蛋白質、グルコース、マンノース、ガラクトース、多糖などの炭水化物などを含み得る；
Ｘはカチオンであり、最も好ましくは、水素、アンモニウム、ナトリウム、カリウム、カルシウム、バリウムイオンなど、などの非毒性カチオンである）の構造を有するカルジオリピンアナログを含む組成物も提供する。
【００２８】
最も好ましい実施態様では、Ｚ１とＺ２は−Ｏ−Ｃ（Ｏ）−であり、Ｒ１とＲ２は同じでＣ４〜Ｃ３４の飽和及び／又は不飽和アルキル基、より好ましくは、１４〜２４炭素原子（約１６〜約２０炭素原子など）を有するものである。用語「アルキル」は、飽和又は不飽和の直鎖及び分岐鎖の炭化水素部分を包含する。用語「置換アルキル」は、ヒドロキシ、アルコキシ（低級アルキル基の）、メルカプト（低級アルキル基の）、シクロアルキル、置換シクロアルキル、ハロゲン、シアノ、ニトロ、アミノ、アミド、イミノ、チオ、−Ｃ（Ｏ）Ｈ、アシル、オキシアシル、カルボキシルなどから選択される１つ以上の置換基を更に担持するアルキル基を含む。Ｒ３は最も好ましくはＣＨ２である。Ｒ４は好ましくは水素である。Ｘは最も好ましくは水素又はアンモニウムイオンであり、それは、図１に示されるカルジオリピンの一般構造を与える。
【００２９】
カルジオリピン分子及びアナログは、任意の所望する方法によって製造できる。カルジオリピン分子又はそのアナログを製造するために本発明によって提供される１つの好適な方法は、Ｎ，Ｎ’−ジシクロヘキシルカルボジイミド又はＮ，Ｎ’−カルボニルジイミダゾールであるカップリング剤の存在下、ホスファチジン酸と２−Ｏ−保護グリセロールを反応させることを含む。本発明の別の好適実施態様は、トリイソプロピルベンゼンスルホニル クロリド、又はＮ，Ｎ’−ジシクロヘキシルカルボジイミド又はＮ，Ｎ’−カルボニルジイミダゾールであるカップリング剤の存在下、ホスファチジン酸とグリセロールを反応させることを含むカルジオリピン又はそのアナログの製造方法である。
【００３０】
本発明の化合物などのカルジオリピン及びそのアナログの製造の為の適切な方法（該方法は、本発明の１実施態様である）は、ジクロロホスフェート又はＮ，Ｎ−ジイソプロピルメチルホスホンアミディック クロリドのいずれかであるカップリング剤の存在下、式Ｖ
【００３１】
【化５】
【００３２】
（式中、Ｚ１、Ｚ２、Ｒ１、Ｒ２及びＲ３は上記の通りである）のアルコールと、２−Ｏ−保護グリセロール又は２−Ｏ−置換グリセロールを反応させることを含む。この方法は、式Ｉ、ＩＩ及びＩＩＩのカルジオリピンの製造に特に適切である。式ＩＩのカルジオリピンを製造するのに特に適した本発明の方法の別の実施態様は、ジクロロホスフェート又はＮ，Ｎ−ジイソプロピルメチルホスホンアミディック クロリドのいずれかであるカップリング剤の存在下、１，２−Ｏ−ジアシルグリセロールと２−Ｏ−保護グリセロールを反応させることを含む。式ＩＩＩのカルジオリピンエーテルアナログの製造に特に好適な本発明の方法の別の実施態様は、ジクロロホスフェート又はＮ，Ｎ−ジイソプロピルメチルホスホンアミディック クロリドのいずれかであるカップリング剤の存在下、１，２−Ｏ−ジアルキルグリセロールと２−Ｏ−保護グリセロールとを反応させることを含む。
【００３３】
本発明の１実施態様である、カルジオリピン分子とそのアナログを合成する別の方法は、ジクロロホスフェート又はＮ，Ｎ−ジイソプロピルメチルホスホンアミディック クロリドのいずれかであるカップリング剤の存在下、式Ｖ（上記）のアルコールと式ＶＩ
【００３４】
【化６】
【００３５】
（式中、Ｒ４及びＲ５は上記定義の通りである）のジオールとを反応させることを含む。この方法は、式ＩＶの分子を製造するのに特に適している。
【００３６】
本発明の合成方法での使用に好適なカップリング剤は、式ＶＩＩ
【００３７】
【化７】
【００３８】
（式中、Ｗは、メチル、エチル、イソプロピル、ｔ−ブチル、アリル、２−置換エチル、２，２，２−トリブロモエチルなどのハロエチルを含むアルキル基又は置換アルキル基；ベンジル基又は置換ベンジル基；フェニル基、又は２−クロロフェニル、４−クロロフェニル及び２，４−ジクロロフェニルなどの置換フェニル基；又は任意の他の除去可能保護基である）のジクロロホスフェートである。本発明の合成方法の文脈で使用される別の好適カップリング剤は、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルメチルホスホンアミディック クロリドである。
【００３９】
本発明の１実施態様を図２に示すが、図２は、カルジオリピン合成の新規アプローチを描く。この方法では、リン酸化試薬であるｏ−クロロフェニル ジクロロホスフェート（ＣＰＤＣＰ）３を、１，２−Ｏ−ジアシルグリセロール１及び２−Ｏ−保護グリセロール２（Ｙはヒドロキシ保護基、好ましくは、ベンジル基など、又はシリル保護基、例えば、ｔ−ブチルジメチルシリルなど）を、塩基（例えば、ピリジンなど）の存在下、不活性溶媒（例えば、ジクロロメタンなど）中、反応させ、カルジオリピン前駆体４を得る。ｏ−クロロフェニルの除去は、４と、２−ピリジンアルドオキシム（ＰＡＯ）及び１，１，３，３−テトラメチルグアニジン（ＴＭＧ）との反応、次いで、水酸化アンモニウム水溶液による処理によって達成でき、カルジオリピン前駆体５のアンモニウム塩を得ることができる。２−ピリジンアルドオキシム（ＰＡＯ）の他に、ＴＭＧ存在下、２−ニトロベンズアルドオキシムなどの他の試薬が、ｏ−クロロフェニル基の除去のために使用できる。
【００４０】
カルジオリピン６を与えるための脱保護は、保護基の性質に依存する方法によって達成できる。例えば、ベンジル基は、パラジウム触媒の存在下、水素化によって除去できる。ｔ−ブチルジメチルシリル（ＴＢＤＭＳ）基は、酸性条件下、脱保護できる。ｐ−メトキシベンジル（ＰＭＢ）基は、２，３−ジクロロ−５，６−ジシアノ−１，４−ベンゾキノン（ＤＤＱ）による処理によって脱保護できる。
【００４１】
本明細書で使用する用語「ヒドロキシ保護基」は、合成方法中、非所望の反応に対しヒドロキシ基を保護するために使用する基を指す。通常使用されるヒドロキシ保護基は、Ｔ．Ｗ．Ｇｒｅｅｎｅ ａｎｄ Ｐ．Ｇ．Ｍ．Ｗｕｔｓ，Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ Ｇｒｏｕｐｓ ｉｎ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，３ｒｄ ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ（１９９９）に開示されている。このようなヒドロキシ保護基として、メチルエーテル；メトキシメチル、ベンジルオキシメチル、ｐ−メトキシベンジルオキシメチル、ｔ−ブトキシメチル、２−メトキシエトキシメチル、テトラヒドロピラニル、テトラヒドロフラニルエーテルなどを含む置換メチルエーテル；１−エトキシエチル、１−メチル−１−メトキシエチル、１−メチル−１−ベンジルオキシエチル、アリル、ｔ−ブチルエーテルなどを含む置換エチルエーテル；ベンジルエーテル；ｐ−メトキシベンジル、３，４−ジメトキシベンジル エーテルなどを含む置換ベンジルエーテル；トリメチルシリル、トリエチルシリル、ジメチルイソプロピルシリル、ジエチルイソプロピルシリル、ｔ−ブチルジメチルシリル エーテルなどを含むシリルエーテル；ホルメート、アセテート、クロロアセテート、ジクロロアセテート、トリクロロアセテート、メトキシアセテート、フェノキシアセテートなどを含むエステル；及び、カーボネートが挙げられる。
【００４２】
上記発明は、カルジオリピンの製造のための単純で効率的な方法である。合成の鍵工程は、リン酸化カップリング反応である。このホスホトリエステルアプローチで、ＣＰＤＣＰを用いて、順次、直接的な様式でアルコールをリン酸化し、直接的に、良好収率で中間体ホスフェートトリエステルを提供する。本方法は、カルジオリピンコア構造を構築するための、単純で、コスト的に有効な１ポット方法である。
【００４３】
本発明のこの新規なジクロロホスフェートカップリングプロトコルは、伝統的なホスホロジ（１，２，４−トリアゾリド）又はホスホロビス（ヒドロキシベンゾトリアゾール）アプローチ（Ｒａｍｉｒｅｚ ｅｔ ａｌ．，Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，４４９−４８９（１９８５）；ｖａｎ Ｂｏｅｃｋｅｌ ｅｔ ａｌ．，Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ Ｌｅｔｔ．，２１：３７０５−３７０８（１９８０）；ｖａｎ Ｂｏｅｃｋｅｌ ｅｔ ａｌ．，Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，３９９−４０２（１９８２））よりも優れている。１局面で、ホスホロジ（１，２，４−トリアゾリド）又はホスホロビス（ヒドロキシベンゾトリアゾール）は、対応するジクロロホスフェア（ｄｉｃｈｌｏｒｏｐｈｏｓｐｈａｒｅ）から製造される必要がある。更なる局面で、ホスホロジ（１，２，４−トリアゾリド）アプローチは、大部分の場合、第２のアルコールとの縮合反応において、２，４，６−トリイソプロピルベンゼンスルホニル−（３−ニトロ−１，２，４−トリアゾール）又は２，４，６−トリイソプロピルベンゼンスルホニル クロリドなどの更なる活性化剤を好ましくは使用する。
【００４４】
図３で表される本発明の別の実施態様は、新規リン酸化剤であるクロロホスホルアミダイトを用いて、１，２−二置換グリセロールと２−保護グリセロールとのカップリングを含む。（Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルメチルホスホンアミディック クロリド７は、イノシトールリン脂質の合成に用いられてきたが（Ｂｒｕｚｉｋ ｅｔ ａｌ．，Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ Ｌｅｔｔ．，３６：２４１５−２４１８（１９９５）、それは、カルジオリピンの合成には使用されてこなかった。）この方法では、コア構造を構築するために、カップリング反応でクロロホスホルアミダイト７を用いる。このスキームでは、１，２−Ｏ−ジアシルグリセロール１は次いで、塩基（例えば、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミンなど）の存在下、不活性溶媒中（例えば、ジクロロメタンなど）、試薬７と反応し、次いで、テトラゾールなどの活性化剤の存在下、２−Ｏ−保護グリセロール２（Ｙはヒドロキシ保護基、好ましくは、ベンジル基など）と反応し、続いて、ｍ−クロロペルオキシ安息香酸（ＭＣＰＢＡ）によって酸化され、保護されたカルジオリピン前駆体８を得る。次いで、保護された前駆体８のメチル基は、ＮａＩとの反応によって除去され、カルジオリピン前駆体のナトリウム塩が産生され、次いで、希ＨＣｌによる処理、次いで、１０％水酸化アンモニウムによって、アンモニウム塩に変換される。カルジオリピンを与える脱保護は、上記のように行うことができる。
【００４５】
図４で表す本発明の別の実施態様では、カルジオリピンのエーテルアナログが産生されるが、そこでは、アルキル基が、カルジオリピングリセロールの側鎖のアシル基に置き換わる。このスキームによれば、１，２−Ｏ−ジアルキル−ｓｎ−グリセロール９は、クロロホスホルアミダイト７の存在下、それと、２−Ｏ−保護グリセロール２とをカップリングするように反応し、中間体１０を提供する。図３で記載したのと同様の方法によって、２−ブタノン中、ＮａＩによるこの中間体１０の脱メチル化は、保護されたカルジオリピンアナログ１１を与え、それは、脱保護で、カルジオリピンのエーテルアナログ１２を与える。
【００４６】
本発明の別の実施態様は図５で表される。この方法では、ホスファチジン酸（ＰＡ）１３は、Ｎ，Ｎ’−ジシクロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣ）又はＮ，Ｎ’−カルボニルイミダゾール（ＣＤＩ）などの縮合剤の存在下、不活性溶媒（例えば、ジクロロメタンなど）中、２−Ｏ−保護グリセロール２（Ｙはヒドロキシ保護基、好ましくは、ベンジル基など、又はシリル保護基、例えば、ｔ−ブチルジメチルシリルなど）と反応し、次いで、水酸化アンモニウム水溶液による処理によって、カルジオリピン前駆体５が形成する。脱保護は、上記のようにカルジオリピン６を与える。
【００４７】
本発明の別の実施態様は図６で表される。この方法では、保護基無しのグリセロール１４が、縮合反応で反応物として直接的に使用される。グリセロール１４の１級アルコールの選択的リン酸化は、トリイソプロピルベンゼンスルホニル クロリド（ＴＰＳＣｌ）とピリジンの存在下、ホスファチジン酸（ＰＡ）１３との縮合によって起こり、次いで、水酸化アンモニウム水溶液による処理によってカルジオリピン６が与えられる。ＤＣＣ、ＣＤＩなどの他のカップリング試薬はまた、カルジオリピンのこの１工程合成で使用できる。
【００４８】
本発明の別の実施態様は図７で表される。この方法では、コア構造を構築するために、ジクロロホスフェート１５を、カップリング反応で使用する。このスキームでは、１，２−ジアシルグリセロール１と２−保護グリセロール２とは、ピリジンなどの塩基の存在下、ジクロロホスフェート１５と反応し、保護されたカルジオリピン前駆体８を与える。次いで、保護されたカルジオリピン８のメチル基は、ＮａＩとの反応によって除去され、カルジオリピン前駆体のナトリウム塩が産生され、次いで、希ＨＣｌ、次いで１０％水酸化アンモニウムによる処理によってアンモニウム塩５に変換される。成熟カルジオリピンを与えるための脱保護は上記のように行うことができる。
【００４９】
本発明の別の実施態様は図８で表される。カルジオリピンのエーテルアナログが生じるこの方法において、コア構造を構築するために、ジクロロホスフェート１５を、カップリング反応で使用する。このスキームでは、１，２−ジアルキル−ｓｎ−グリセロール９と２−保護グリセロール２とは、ジクロロホスフェート１５と反応し、保護された中間体１０を与える。次いで、ＮａＩとの反応及び希ＨＣｌによる処理、次いで１０％水酸化アンモニウムによる処理によって中間体１０のメチル基は除去され保護されたアンモニウム塩１１が産生される。成熟カルジオリピンを与えるための脱保護は上記のように行うことができる。
【００５０】
記載された方法を用いて、種々の新規カルジオリピン種が製造できる。例えば、Ｒ１及び／又はＲ２置換基などの任意の所望の脂肪酸鎖を含むカルジオリピンとそのアナログを製造するために、該方法を使用できる。好適な脂肪酸は、約Ｃ４〜約Ｃ３４、好ましくは約Ｃ１４〜約Ｃ２４の炭素鎖長さの範囲であり、とりわけ、テトラン酸（Ｃ４：０）、ペンタン酸（Ｃ５：０）、ヘキサン酸（Ｃ６：０）、ヘプタン酸（Ｃ７：０）、オクタン酸（Ｃ８：０）、ノナン酸（Ｃ９：０）、デカン酸（Ｃ１０：０）、ウンデカン酸（Ｃ１１：０）、ドデカン酸（Ｃ１２：０）、トリデカン酸（１３：０）、テトラデカン酸（Ｃ１４：０）、ペンタデカン酸（Ｃ１５：０）、ヘキサデカン酸（Ｃ１６：０）、ヘプタデカン酸（Ｃ１７：０）、オクタデカン酸（Ｃ１８：０）、ノナデカン酸（Ｃ１９：０）、エイコサン酸（Ｃ２０：０）、ヘンエイコサン酸（Ｃ２１：０）、ドコサン酸（Ｃ２２：０）、トリコサン酸（Ｃ２３：０）、テトラコサン酸（Ｃ２４：０）、１０−ウンデカン酸（Ｃ１１：１）、１１−ドデカン酸（Ｃ１２：１）、１２−トリデセン酸（Ｃ１３：１）、ミリストレイン酸（Ｃ１４：１）、１０−ペンタデセン酸（Ｃ１５：１）、パルミトレイン酸（Ｃ１６：１）、オレイン酸（Ｃ１８：１）、リノール酸（Ｃ１８：２）、リノレン酸（Ｃ１８：３）、エイコスジエン酸（Ｃ２０：２）、エイコストリエン酸（Ｃ２０：３）、アラキドン酸（シス−５，８，１１，１４−エイコサテトラエン酸）、及びシス−５，８，１１，１４，１７−エイコサペンタエン酸が挙げられる。エーテルアナログに関し、アルキル鎖はまた、約Ｃ４〜約Ｃ３４、好ましくは約Ｃ１４〜約Ｃ２４の炭素鎖長さの範囲であろう。他の脂肪酸鎖も、Ｒ１及び／又はＲ２置換基として使用できる。このようなものの例として、メタン酸（又は、ギ酸）、エタン酸（又は、酢酸）、プロパン酸（又は、プロピオン酸）、ブタン酸（又は、酪酸）、ヘキサコサン酸（又は、セロチン酸）、オクタコサン酸（又は、モンタン酸）、トリアコンタン酸（又は、メリッシン酸）、ドトリアコンタン酸（又は、ラッセル酸）、テトラトリアコンタン酸（又は、ゲダ酸）、ペンタントリアコンタン酸（又は、セロプラスチン酸）などの飽和脂肪酸；ｔｒａｎｓ−２−ブテン酸（又は、クロトン酸）、ｃｉｓ−２−ブテン酸（又は、イソクロテン酸）、２−ヘキセン酸（又は、イソヒドロソルビン酸）、４−デカン酸（又は、トウハク酸（ｏｂｔｕｓｉｌｉｃ ａｃｉｄ）、９−デカノン酸（又は、カプロレイック アシッド）、４−ドデセン酸（又は、リンデリック アシッド）、５−ドデセン酸（又は、デンティセティック アシッド）、９−ドデセン酸（又は、ラウロレイン酸）、４−テトラデセン酸（又は、ツズ酸（ｔｓｕｚｕｉｃ ａｃｉｄ））、５−テトラデセン酸（又は、フィセテリック アシッド）、６−オクタデセン酸（又は、ペトロテリン酸）、ｔｒａｎｓ−オクタデセン酸（又は、エライジン酸）、ｔｒａｎｓ−１１−オクタデセン酸（又は、ワクシニック アシッド）、９−エイコセン酸（又は、ガドレイン酸）、１１−エイコセン酸（又は、ゴンド酸）、１１−ドコセン酸（又は、セトレイック アシッド）、１３−デコセン酸（又は、エルカ酸）、１５−テトラコセン酸（又は、ネルボン酸）、１７−ヘキサコセン酸（又は、キシメニック アシッド）、２１−トリアコンテン酸（又は、ルメクエイック アシッド）などのモノエテェン不飽和脂肪酸；２，４−ペンタジエン酸（又は、β−ビニルアクリル酸）、２，４−ヘキサジエン酸（又は、ソルビン酸）、２，４−デカジエン酸（又は、スチリンジック アシッド）、２，４−ドデカジエン酸、９，１２−ヘキサデカジエン酸、ｃｉｓ−９，ｃｉｓ−１２−オクタデカジエン酸（又は、α−リノール酸）、ｔｒａｎｓ−９，ｔｒａｎｓ−１２−オクタデカジエン酸（又は、リノールライディック アシッド）、ｔｒａｎｓ−１０−ｔｒａｎｓ−１２−オクタデカジエン酸、１１，１４−エイコサジエン酸、１３，１６−ドコサジエン酸、１７，２０−ヘキサコサジエン酸などのジエン不飽和脂肪酸；６，１０，１４−ヘキサデカトリエン酸（又は、ヒラゴニック アシッド）、７，１０，１３−ヘキサデカトリエン酸、ｃｉｓ−６，ｃｉｓ−９，ｃｉｓ−１２−オクタデカトリアン酸（又は、γ−リノレン酸）、ｔｒａｎｓ−８，ｔｒａｎｓ，１０，ｃｉｓ−１２−オクタデカトリエン酸（又は、α−カレンディック アシッド）、ｔｒａｎｓ−８，ｔｒａｎｓ−１０，ｔｒａｎｓ−１２オクタデカトリエン酸（又は、β−カレンディック アシッド）、ｃｉｓ−８，ｔｒａｎｓ−１０，ｃｉｓ−１２−オクタデカトリエン酸、ｃｉｓ−９，ｃｉｓ−１２，ｃｉｓ−１５−オクタデカトリエン酸（又は、α−リノレン酸）、ｔｒａｎｓ−９，ｔｒａｎｓ−１２，ｔｒａｎｓ−１５−オクタデカトリエン酸（又は、リノレンライディック アシッド）、ｃｉｓ−９，ｔｒａｎｓ−１１，ｔｒａｎｓ−１３−オクタデカトリエン酸（又は、α−エレオステアリック アシッド）、ｔｒａｎｓ−９，ｔｒａｎｓ−１１，ｔｒａｎｓ−１３−オクタデカトリエン酸（又は、β−エレオステアリック アシッド）、ｃｉｓ−９，ｔｒａｎｓ−１１，ｃｉｓ−１３−オクタデカトリエン酸（又は、プニシック アシッド）、ｔｒａｎｓ−９，ｔｒａｎｓ−１１，ｔｒａｎｓ−１３−オクタデカトリエン酸、５，８，１１−エイコサトリエン酸、８，１１，１４−エイコサトリエン酸などのトリエン不飽和脂肪酸；４，８，１１，１４−ヘキサデカテトラエン酸、６，９，１２，１５−ヘキサデカテトラエン酸、４，８，１２，１５−オクタデカテトラエン酸（又は、モロクティック アシッド）、６，９，１２，１５−オクタデカテトラエン酸、９，１１，１３，１５−オクタデカテトラエン酸（又は、α−もしくはβ−パリナリック アシッド）、９，１２，１５，１８−オクタデカテトラエン酸、４，８，１２，１６−エイコサテトラエン酸、６，１０，１４，１８−エイコサテトラエン酸、４，７，１０，１３−ドコサテトラエン酸、７，１０，１３，１６−ドコサテトラエン酸、８，１２，１６，１９−ドコサテトラエン酸などのテトラエン不飽和脂肪酸；４，８，１２，１５，１８−エイコサペンタエン酸（又は、チムノドニック アシッド）、４，７，１０，１３，１６−ドコサペンタエン酸、４，８，１２，１５，１９−ドコサペンタエン酸（又は、クルパノドニック アシッド）、７，１０，１３，１６，１９−ドコサペンタエン酸、４，７，１０，１３，１６，１９−ドコサヘキサエン酸、４，８，１２，１５，１８，２１−テトラコサヘキサエン酸（又は、ニシニック アシッド）などのペンタ−及びヘキサ−エン不飽和脂肪酸；３−メチルブタン酸（又は、イソ吉草酸）、ｄ−６−メチルオクタン酸、８−メチルデカン酸、１０−メチルウンデカン酸（又は、イソラウリン酸）、ｄ−１０−メチルドデカン酸、１１−メチルドデカン酸（又は、イソウンデシリック アシッド）、１２−メチルトリデカン酸（又は、イソミリスチン酸）、ｄ−１２−メチルテトラデカン酸、１３−メチルテトラデカン酸（又は、イソペンタデシリック アシッド）、１４−メチルペンタデカン酸（又は、イソパルミチン酸）、ｄ−１４−メチルヘキサデカン酸、１５−メチルヘキサデカン酸、１０−メチルヘプタデカン酸、１６−メチルヘプタデカン酸（又は、イソステアリン酸）、ｔ−Ｄ−１０−メチルオクタデカン酸（又は、ツベクロステアリン酸）、ｄ−１６−メチルオクタデカン酸、１８−メチルノナデカン酸（又は、イソアラキドン酸）、ｄ−１８−メチルエイコサン酸、２０−メチルヘンエイコサン酸（又は、イソベヘーニック アシッド）、ｄ−２０−メチルドコサン酸、２２−メチルトリコサン酸（又は、イソリグノセリック アシッド）、ｄ−２２−メチルテトラコサン酸、２４−メチルペンタコサン酸（又は、イソセロティック アシッド）、ｄ−２４−メチルヘキサコサン酸、２６−メチルヘプタコサン酸（又は、イソモナタニック アシッド）、ｄ−２８−メチルトリアコンタン酸、２，４，６−（Ｄ）−トリメチルオクタコサン酸（又は、ミコセラニック アシッドもしくはミコセロシック アシッド）、２−メチル−ｃｉｓ−２−ブテン酸（アンゲリック アシッド）、２−メチル−ｔｒａｎｓ−２−ブテン酸（又は、チグリック アシッド）、４−メチル−３−ペンテン酸（又は、ピロテレビック アシッド）、ｄ−２，４（Ｌ），６（Ｌ）−トリメチル−ｔｒａｎｓ−２−テトラコセン酸（又は、Ｃ２７−フチエノイック アシッドもしくはミコリペニック アシッド）などの分岐鎖脂肪酸が挙げられる。
【００５１】
本明細書記載のカルジオリピン分子、及び本発明の方法によって産生されるカルジオリピン分子は、脂質製剤中で使用できる。好適な製剤又は組成物は、本発明のカルジオリピンアナログを含むリポソーム組成物である。本発明のカルジオリピンを含む、複合体、エマルション、及び他の製剤も、本発明の範囲内である。本発明のこのような製剤は、任意の適切な技術によって製造できる。本発明の合成カルジオリピンに加えて、リポソーム組成物、複合体、エマルションなどは、安定化剤、吸収増進剤、抗酸化剤、リン脂質、生分解性ポリマー、及び他の成分の中でとりわけ医薬的に活性な剤を含み得る。実施態様の一部では、本発明の組成物、特にリポソーム組成物はまた、細胞レセプターを認識する抗体（又はそのフラグメント）又はリガンドなどの、特異的基質と結合する炭水化物又は蛋白質又は他のリガンドなどの標的指向剤を含むことが好適である。このような薬剤（炭水化物、あるいは、細胞レセプターへの抗体などの、抗体、抗体フラグメント、ペプチド、ペプチドホルモン、レセプターリガンド、及びそれらの混合物からなる蛋白質の群から選択される１種以上の蛋白質）を含めることは、リポソームを、所定の組織又は細胞型へ向かわせることを容易にしうる。
【００５２】
ホスファチジルコリン、上記方法によって製造されるカルジオリピン、コレステロール及びα−トコフェロールなどの親油性のリポソーム形成成分は、適切な溶媒中、又は溶媒と乾燥の組合せ中に溶解又は分散できる。適切な溶媒として、任意の非極性又は僅かに極性の溶媒、例えば、医薬として許容できない残渣を残さずに蒸留できる、ブタノール、エタノール、メタノール、クロロホルム、又はアセトンが挙げられる。乾燥は、凍結乾燥などの任意の適切な手段でありえ、凍結乾燥の間、凍結保護物質（例えば、トレハロースなどの保護糖）を用いることも好適である。親水性成分は、水を含む極性溶媒に溶解できる。
【００５３】
リポソームは、乾燥された親油性成分を親水性混合物と混合することによって形成できる。極性溶液を、乾燥脂質フィルムと混合することは、混合物を強くホモジナイズする任意の手段によってでありうる。ホモジナイゼーションは、ボルテックス、磁気撹拌及び／又は音波処理によって行うことができる。
【００５４】
リポソームはまた、活性剤を含み得、本発明は、リポソーム中に活性剤を保持する方法を提供する。方法は、本明細書記載のカルジオリピン又はカルジオリピンアナログを製造し、リポソーム中に、カルジオリピン又はカルジオリピンアナログ及び活性剤を含めることを含む。活性剤は、脂質（本発明のカルジオリピンなど）の一部と複合体形成するようになり得、又は活性剤は、リポソーム内に捕捉されるようになり得る。本方法によれば、活性剤は、適切な溶媒中に溶解又は分散でき、混合前にリポソーム混合物に加えることができる。典型的には、親水性活性剤は、極性溶媒に直接的に加えられ、疎水性活性剤は、他の成分を溶解するのに使用した非極性溶媒に加えられようが、これは必要ではない。活性剤は、第３の溶媒又は溶媒混合物中に溶解でき、混合物をホモジナイズする前に、極性溶媒の混合物に脂質フィルムを加え得る。
【００５５】
一般的に、リポソームは、正味の中性、陰性又は陽性電荷を有し得る。例えば、陽性リポソームは、ホスファチジルコリン、コレステロール、カルジオリピン、及びカルジオリピンの正味の陰性電荷を克服するために十分なステアリルアミンを含む溶液から形成できる。陰性リポソームは、例えば、ホスファチジルコリン、コレステロール、及び／又はカルジオリピンを含む溶液から形成できる。
【００５６】
本発明のカルジオリピンを含むリポソームはまた、脂質相内に他の成分を含み得る。好適成分として、ジミリストイルホスファチジルコリン、ジステアロイルホスファチジルコリン、ジオレイルホスファチジルコリン、ジパルミトイルホスファチジルコリン、ジアラキドノイルホスファチジルコリン、卵ホスファチジルコリン、大豆ホスファチジルコリン、水素添加大豆ホスファチジルコリン、及びそれらの混合物からなる群から選択されるホスファチジルコリンが挙げられる。別の好適成分は、ジミリストイルホスファチジルグリセロール、ジステアロイルホスファチジルグリセロール、ジオレイルホスファチジルグリセロール、ジパルミトイルホスファチジルグリセロール、ジアラキドノイルホスファチジルグリセロール、及びそれらの混合物からなる群から選択されるホスファチジルグリセロールである。リポソームはまた、コレステロール、ポリエチレングリコール、コレステロール誘導体、コプロスタノール、コレスタノール、コレスタン、コレステロールヘミサクシネート、コレステロールサルフェート、及びそれらの混合物からなる群から選択されるステロールを含み得る。
【００５７】
本発明のリポソームは、特定の組成物とそれらの製造に使用される方法に依存して、多重又は単一ラメラベシクルでありうる。リポソームは、約１ミクロン以下、又は約５００ｎｍ以下、約２００ｎｍ以下、又は約１００ｎｍ以下などの選択されたサイズ範囲でほぼ均一なサイズを有するように製造できる。１つの有効なサイズ決定方法は、選択された均一のポアサイズを有する、一連のポリカーボネート膜を通し、リポソームの水性懸濁液を押出すことを含む；膜のポアサイズは、膜を介する押出しによって製造されるリポソームの最大サイズと粗く対応しよう。
【００５８】
リポソームは、シュークロース、エピクロロヒドリン、分岐したシュークロースの親水性ポリマー、ポリエチレングリコール、ポリビニルアルコール、メトキシポリエチレングリコール、エトキシポリエチレングリコール、ポリエチレンオキシド、ポリオキシエチレン、ポリオキシプロピレン、セルロースアセテート、アルギン酸ナトリウム、Ｎ，Ｎ−ジエチルアミノアセテート、ポリオキシエチレンとポリオキシプロピレンのブロックコポリマー、ポリビニルピロリドン、ポリオキシエチレン Ｘ−ラウリルエーテル（Ｘは９〜２０である）、及びポリオキシエチレンソルビタンエステルなどの生分解性ポリマーで被覆できる。
【００５９】
抗酸化剤は、本発明の、リポソーム製剤、複合体、エマルション、又は他の製剤に含めることができる。適切な抗酸化剤として、アスコルビン酸、トコフェロール及びデテロオキシム メシレートなどの化合物が挙げられる。
【００６０】
吸収増進剤も、所望ならば、本発明のリポソーム製剤、複合体、エマルションなどに含めることができる。適切な吸収増進剤として、Ｎａ−サリシレート−ケノデオキシコレート、Ｎａ−デオキシコレート、ポリオキシエチレン９−ラウリルエーテル、ケノデオキシコレート−デオキシコレートやポリオキシエチレン９−ラウリルエーテル、モノオレイン、Ｎａ−タウロ−２４，２５−ジヒドロフシデート、Ｎａ−タウロデオキシコレート、Ｎａ−グリコケノデオキシコレート、オレイン酸、リノール酸、リノレン酸が挙げられる。ポリオキシエチレンエーテル、ポリオキシエチレンソルビタンエステル、ポリオキシエチレン１０−ラウリルエーテル、ポリオキシエチレン１６−ラウリルエーテル、アゾン（１−ドデシルアザシクロヘプタン−２−オン）などのポリマー性吸収増進剤も含めることができる。
【００６１】
本発明のカルジオリピン（本発明の方法により製造されるものを含む）を含む本発明の組成物のリポソーム型や他の型は、活性剤を含むように製剤化できる。活性剤は、例えば、組成物中のリポソーム内に捕捉されえ、組成物中で成分の１つと複合体を形成しえ（例えば、組成物中のカルジオリピンと複合体形成する）、又はさもなければ、組成物中に存在しうる。本発明の組成物中に含めることは、界面活性剤の存在下で安定である活性剤に一般的であると考えられる。組成物がリポソームを含むとき、親水性薬剤が適切であり、リポソーム二重層が、身体中にランダムに拡散するのを防止する拡散バリアを作出するように、リポソーム内部に含めることができる。疎水性活性剤は、本発明の製剤、特にリポソーム製剤での使用に特に良く適していると考えられる。疎水性活性剤は、毒性の減少を示すことによって利益を得るばかりではなくて、リポソームの脂質二重層内に良く溶解する傾向があるからである。医療又は化粧品使用に関し、製剤は、医薬として許容できるなどのように、生理的に適合性でありえ、医薬組成物を製剤化する当業者公知の他の薬剤を含め得る（例えば、緩衝剤、抗生物質、保存剤や他の賦形剤、例えば、１種以上の医薬として許容できる賦形剤など）。
【００６２】
本発明の組成物が活性剤を含む場合、本発明はまた、ヒト又は動物細胞に活性剤を投与するために、このような組成物の使用方法を提供する。細胞はインビトロでありえ、その場合、製剤は、診断や研究目的のために、又は、ヒト又は動物患者に移植される細胞に活性剤を送達するために使用できる。あるいは、細胞はインビボでありえ、その場合、本発明は、ヒト又は動物中に（例えば、活性剤を用いて治療の必要のある患者に、又は化粧目的のために）活性剤を送達する方法を提供する。実質的に、任意の活性剤を、患者の疾患細胞又は器官に投与するために、本方法を使用できる。適切な活性剤として、以下のような疾患を治療するために使用される診断試薬や医薬剤が挙げられる：炎症（例えば、慢性炎症）、血管新生依存性疾患、関節炎、再狭窄、乾癬、癌（例えば、肺癌、脳癌もしくは中枢神経系の他の癌、メラノーマ、膵臓癌、肝臓癌、精巣もしくは卵巣の癌、及び他の腫瘍性疾患）、多発性硬化症、アルツハイマー、パーキンソン、及び種々の血管疾患が挙げられる。リポソーム製剤、エマルション、又は複合体はまた、抗真菌適用にも有用でありえ、活性剤として適切な抗真菌剤を含み得る。典型的には、活性剤は、１種以上の遺伝子と遺伝子ベクター、アンチセンス分子（例えば、オリゴヌクレオチド）、蛋白質とペプチド、蛋白質又は化学薬剤（例えば、疎水性薬剤又は親水性薬剤）、又は診断剤でありうる。
【００６３】
本発明と適合性のある活性剤として、末梢神経、アドレナリン性レセプター、コリン性レセプター、骨格筋、心臓血管系、平滑筋、血液循環系、シナプス部位、ニューロエフクタージャンクション部位、内分泌系とホルモン系、免疫系、生殖系、骨格系、栄養系と排出系、ヒスタミン系及び中枢神経系に作用する薬剤が挙げられる。適切な薬剤は、例えば、蛋白質、酵素、ホルモン、ヌクレオチド、ポリヌクレオチド、核蛋白質、多糖、糖蛋白質、リポ蛋白質、ポリペプチド、ステロイド、テルペノイド、トリテルピン、レチノイド、抗潰瘍Ｈ２レセプターアンタゴニスト、抗潰瘍薬、低カルシウム剤、モイスチャーライザー、化粧品などから選択されうる。活性剤は、鎮痛剤；麻酔剤；抗不整脈剤、抗生物質；抗アレルギー剤、抗真菌剤、抗癌剤（例えば、ミトキサントロン（例えば、国際特許公開ＷＯ０２／３２４００参照）、タキサン（例えば、国際特許公開ＷＯ００／０１３６６参照）、パクリタキセル、カンプトテシン、及びカンプトテシン誘導体（（例えば、ＳＮ−３８）（例えば、国際特許公開ＷＯ０２／０５８６２２参照）、イリノテカン（例えば、国際特許公開ＷＯ０３／０３０８６４参照）、及び他のカンプトテシン）、ゲムシタビン、アンスラサイクリン、アンチセンスオリゴヌクレオチド（例えば、ｒａｆ遺伝子などの癌遺伝子を標的とするもの（例えば、国際特許公開ＷＯ９８／４３０９５参照））、ビンカアルカロイド（例えば、ビノレルビン、例えば、国際特許公開ＷＯ０３／０１８０１８参照）、抗体、サイトトキシン（イムノトキシンなど）、抗高血圧剤（例えば、ジヒドロピリジン、抗うつ剤、ｃｏｘ−２阻害剤）；抗凝固剤；抗うつ剤、抗糖尿病薬、抗てんかん剤、抗炎症性コルチコステロイド；アルツハイマー又はパーキンソン病の治療剤；抗潰瘍剤；抗原生動物剤、抗不安薬、甲状腺剤、抗甲状腺剤、抗ウイルス剤、食欲抑制剤、ビスホスホネート、強心剤、心臓血管剤、コルチコステロイド、利尿剤、ドーパミン性薬剤、胃腸剤、止血剤、高コレステロール剤、抗高血圧剤；免疫抑制剤；抗痛風剤、抗マラリア剤、抗偏頭痛剤、抗ムスカリン剤、抗炎症剤（例えば、リウマチ、関節炎、乾癬、炎症性腸疾患、クローン病の治療剤など）；多発性硬化症を含む脱髄性疾患；眼薬；ワクチン（例えば、インフルエンザウイルス、肺炎、肝炎Ａ、肝炎Ｂ、肝炎Ｃ、コレラ毒素Ｂ−サブユニット、腸チフス、熱帯熱マラリア、ジフテリア、破傷風、単純ヘルペスウイルス、結核、ＨＩＶ、ＳＡＲＳウイルス、百日咳菌、麻疹、おたふくかぜ、風疹、細菌トキソイド、ワクシニアウイルス、アデノウイルス、カナリア痘ウイルス、バチルスカルメット−ゲラン、クレブシエラ・ニューモニアワクチンなどに対し）；ヒスタミンレセプターアンタゴニスト、催眠剤、腎臓保護剤、脂質制御剤、筋肉弛緩剤、神経弛緩剤、神経向性剤、オピオイドアゴニストとアンタゴニスト、副交感神経様剤、プロテアーゼ阻害剤、プロスタグランジン、鎮静剤、性ホルモン（例えば、アンドロゲン、エストロゲンなど）、刺激剤、交感神経様剤、血管拡張剤及びキサンチン及びこれらの種の合成アナログでありうる。治療薬は、サイクロスポリンやアンホテリシンＢなど、腎毒性、又はアンホテリシンＢやパクリタキセルなど、心臓毒性でありうる。代表的抗癌剤として、メルファラン、クロルメチン、エクストラムスチンホスフェート、ウラムスチン、イフォファミド、マンノムスチン、トリフォスファミド、ストレプトゾトシン、ミトブロニトール、ミトキサントロン、メトトレキセート、フルオロウラシル、シタラビン、テガフール、イドキシド、タキソール、パクリタキセル、ダウノマイシン、ダウノルビシン、ブレオマイシン、アンホテリシン、カルボプラチン、シスプラチン、パクリタキセル、ＢＣＮＵ、ビンクリスチン、カンプトテシン、ドキソルビシン、エトプシド、サイトカイン、リボザイム、インターフェロン、オリゴヌクレオチド、及び上記の機能性誘導体が挙げられる。本方法に従って送達されうる薬剤の更なる例として、プロクロルペルジンエディシレート、硫酸第一鉄、アミノカプロン酸、メカミルアミン塩酸塩、プロカインアミド塩酸塩、硫酸アンフェタミン、メタンフェタミン塩酸塩、ベンズアンフェタミン塩酸塩、硫酸イソプロテレノール、フェンメトラジン塩酸塩、ベタンコールクロリド、メタコリンクロリド、ピロカルピン塩酸塩、硫酸アトロピン、スコポラミンブロミド、イソプロパミドヨーダイド、トリジヘキセチルクロリド、フェンホルミン塩酸塩、メチルフェニデート塩酸塩、テオフィリンコリネート、セファレキシン塩酸塩、ジフェニドール、メクリジン塩酸塩、プロクロルペラジンマレエート、フェノキシベンズアミン、チエチルペルジンマレエート、アニシンドン、ジフェナジオン エリトリチル テトラナイトレート、ジゴキシン、イソフルロフェート、アセトアゾラミド、メタゾラミド、ベンドロフルメチアジド、クロロプロマイド、トラザミド、クロルマジノンアセテート、フェナグリコドール、アロプリノール、アルミニウムアスピリン、メトトレキセート、アセチルスルフィソキサゾール、エリスロマイシン、ヒドロコルチゾン、ヒドロコルチコステロンアセテート、コルチゾンアセテート、デキサメタゾン及びその誘導体（ベタメタゾンなど）、トリアムシノロン、メチルテストステロン、１７−Ｓ−エストラジオール、エチニルエストラジオール、エチニルエストラジオール３−メチルエーテル、プレドニゾロン、１７α−ヒドロキシプロゲステロンアセテート、１９−ノルプロゲステロン、ノルゲストレル、ノルエチンドロン、ノルエチステロン、ノルエチエデロン、プロゲステロン、ノルゲステロン、ノルエチノドレル、アスピリン、インドメタシン、ナプロキセン、フェノプロフェン、スリンダック、インドプロフェン、ニトログリセリン、イソソルビドジナイトレート、プロプラノロール、チモロール、アテノロール、アルプレノロール、シメチジン、クロニジン、イミプラミン、レボドパ、クロルプロマジン、メチルドパ、ジヒドロキシフェニルアラニン、テオフィリン、カルシウムグルコネート、ケトプロフェン、イブプロフェン、セファレキシン、エリスロマイシン、ハロペリドール、ゾメピラック、乳酸第一鉄、ビンカミン、ジアゼパム、フェノキシベンズアミン、ジルチアゼム、ミルリノン、マンドール、クアンベンツ、ヒドロクロロチアジド、ラニチジン、フルルビプロフェン、フェヌフェン、フルプロフェン、トルメチン、アルクロフェナック、メフェナミック、フルフェナミック、ジフイナール、ニモジピン、ニトレンジピン、ニソルジピン、ニカルジピン、フェロジピン、リドフラジン、チアパミル、ガロパミル、アモロジピン、ミオフラジン、リシノルプリル、エナラプリル、エナラプリラット カプトプリル、ラミプリル、ファモチジン、ニザチジン、スクラルファート、エチンチジン、テトラトロール、ミノキシジル、クロルジアゼポキシド、ジアゼパム、アミトリプチリン、及びイミプラミンが挙げられる。更なる例は、蛋白質とペプチドであり、骨形成蛋白質、インスリン、ヘパリン、コルヒチン、グルカゴン、甲状腺刺激ホルモン、副甲状腺ホルモンや下垂体ホルモン、カルシトニン、レニン、プロラクチン、コルチコトロフィン、甲状腺刺激ホルモン、卵胞刺激ホルモン、絨毛膜ゴナドトロピン、ゴナドトロピン放出ホルモン、ソマトトロピン（例えば、ウシソマトトロピン、ブタソマトトロピンなど）、オキシトシン、バソプレシン、ＧＲＦ、ソマトスタチン、リプレシン、パンクレオチミン、黄体化ホルモン、ＬＨＲＨ，ＬＨＲＨアゴニストとアンタゴニスト、ロイプロリド、インターフェロン（例えば、α−、β−、又はγ−インターフェロン、インターフェロンα−２ａ、インターフェロンα−２ｂ、及びコンセンサスインターフェロンなど）、インターロイキン、成長ホルモン（例えば、ヒト成長ホルモン及びその誘導体（例えば、メチオニン−ヒト成長ホルモンやデス−フェニルアラニンヒト成長ホルモン、ウシ成長ホルモン、ブタ成長ホルモン、インスリン様成長ホルモンなど）、消化性ホルモン、甲状腺剤、抗甲状腺剤、プロスタグランジンなどの受精阻害剤、受精促進剤、インスリン様成長因子などの成長因子、凝固因子、膵臓ホルモン放出因子、これらの化合物のアナログと誘導体、並びにこれらの化合物の医薬として許容できる塩、又はそれらのアナログもしくは誘導体が挙げられるがこれらに限定されない。診断又は治療使用のための活性剤はまた、ＲＮＡ、ＤＮＡ（例えば、オリゴヌクレオチド、プラスミド、ファージ、又はウイルスベクターなど）などの核酸でありうる、又は含めうる。活性剤は、リポソーム製剤、複合体、エマルション、又は他の製剤で共投与して有益でありうる薬剤の混合物（例えば、２種以上）でありうる。
【００６４】
上記のような化学療法剤や他の抗癌剤は、本発明の組成物や治療方法での使用に良く適している。化学療法剤や他の抗癌剤を含むリポソーム製剤、複合体、エマルションなどは、癌細胞へ直接的に化学療法剤や他の抗癌剤を送達するために、腫瘍組織に直接注入できる。場合によっては、特に、腫瘍切除後、リポソーム製剤、エマルション、複合体、又はその他の本発明の製剤を、生じた空洞に直接移植でき、又は、被覆として、残りの組織に適用できる。本発明のリポソーム製剤が手術後、投与される場合、約１ミクロンのより大きな直径のリポソームを用いることができる。リポソームは、血管構造を通過する必要はないからである。
【００６５】
組成物が活性剤を含む場合、本発明は、細胞への活性剤の送達方法を提供する。この方法によれば、本発明のカルジオリピンと所望の活性剤を含む組成物は、本明細書記載のように製造される。次いで、活性剤を細胞に送達するように、組成物を細胞に曝す。任意の所望の細胞に、薬剤、核酸、及び他の適切な薬剤などの活性剤を送達するために、本方法は使用できる。例えば、培養中の細胞に活性剤を送達するために、本方法は、インビトロ適用で使用できる。あるいは、インビボで細胞に薬剤などの活性剤を送達するために、本方法は使用できる。本方法がインビボで用いられる場合、ヒト又は動物の疾患を治療するために、方法は使用できる。この実施態様では、活性剤をヒト又は動物に送達するように、組成物をヒト又は動物に曝す。幾つかの適用において、該剤と組成物は、化粧品として使用できる。この方法の好適な適用は、本明細書記載のように、組成物が１種以上の抗癌剤を含む場合のような、癌の治療を含む。
【００６６】
インビボ適用に関し、組成物が１種以上の医薬として許容できる賦形剤を含むことが好ましい。また、本明細書記載の、抗癌剤、核酸、及び蛋白質性薬剤などの医薬として活性な薬剤は、医薬として有効な投与量を送達するのに適した濃度で、本発明の組成物に組み込まれ得る。抗癌剤などの医薬として活性な薬剤の投与量は、治療する医師や獣医に妥当と認められるように変わり得、治療的治療のための適切な投与量の選択は、このような専門家の技術の範囲内である。
【００６７】
方法は、活性剤のリポソーム製剤（及び、本発明のカルジオリピンと活性剤を含む他の製剤）に加えて、非毒性で不活性な、医薬として適切な賦形剤を含む医薬製剤の投与を提供する。医薬として適切な賦形剤として、全ての種類の、固体、半固体、又は液体希釈剤、充填剤及び製剤補助剤が挙げられる。本発明はまた、投与単位での医薬製剤を含む。これの意味するところによれば、製剤は、個々のパート、例えば、バイアル、シリンジ、カプセル、ピル、座薬、又はアンプルの形態であり、活性剤のリポソーム製剤の、それの含量は、個々の投与量の分数又は乗数に対応する。投与単位は、例えば、１、２、３、又は４倍の個々の投与量、あるいは、個々の投与量の１／２、１／３、又は１／４を含み得る。個々の投与量は好ましくは、１回の投与で与えられ、通常、１日投与量の全部、半分、１／３、又は１／４に対応する活性剤量を含む。
【００６８】
錠剤、糖衣錠、カプセル、ピル、顆粒、座薬、溶液、懸濁剤とエマルション、ペースト、軟膏（例えば、乾燥皮膚軟膏）、ゲル、クリーム、ローション（例えば、乾燥皮膚軟化剤、モイスチャーライザーなど）、粉末、及びスプレーは、適切な医薬製剤でありうる。座薬は、リポソーム活性剤に加えて、適当な水溶性又は水不溶性賦形剤を含み得る。適切な賦形剤は、本発明のリポソーム活性剤が、治療用途を可能とするために十分に安定であるものであり、例えば、ポリエチレングリコール、ある種の脂肪、及びこれらの物質のエステル又は混合物である。軟膏、ペースト、クリーム、ゲルも、その中でリポソーム活性剤が安定である適切な賦形剤を含み得る。
【００６９】
活性剤又はその医薬製剤は、静脈内、皮下、局所、経口、非経口、腹腔内、及び／又は直腸に投与でき、又は、公知である、もしくは開発されている方法によって治療の必要のある腫瘍又は器官又は他の部位に直接注入によって投与できる。カルジオリピン及びカルジオリピンアナログベースの製剤も、局所的に、例えば、クリーム、皮膚軟膏、乾燥皮膚軟化剤、モイスチャーライザーなどとして投与できる。
【００７０】
以下の実施例で、非限定的に、本発明を更に説明する。
【実施例１】
【００７１】
実施例１
１Ａ．十分に保護されたカルジオリピンの合成
【００７２】
【化８】
【００７３】
Ｒ＝ミリストイル（Ｃ１４：０鎖）
【００７４】
ＣＨ２Ｃｌ２（１０ｍＬ）中のｏ−クロロフェニル ジクロロホスフェート（２．４５ｇ，９．９８ｍｍｏｌ）と乾燥ピリジン（４．３９ｍＬ，５４．２８ｍｍｏｌ）の溶液に、ＣＨ２Ｃｌ２（５０ｍＬ）中の１，２−Ｏ−ジミリストイル−ｓｎ−グリセロール（５．００ｇ，９．７５ｍｍｏｌ）の溶液を、０℃で４５分で滴下添加した。反応混合物を、０℃で１時間、室温で１時間撹拌後、ＣＨ２Ｃｌ２（８ｍＬ）中の２−ベンジルオキシ−１，３−プロパンジオール（０．７１ｇ，３．９０ｍｍｏｌ）の溶液を滴下添加した。反応混合物を室温で３時間撹拌した。有機溶媒を真空除去し、残渣を、酢酸エチル（１５０ｍＬ）と冷０．５Ｎ ＨＣｌ（１００ｍＬ）の間で分配した。有機相を、水、ブラインで洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、真空濃縮した。得られた残渣を、ヘキサン／酢酸エチル（３：１）を用いるシリカゲルのフラッシュクロマトグラフィーで精製し、無色油状物として十分に保護されたカルジオリピン４．３７ｇを得た。収率は７２％である。ＴＬＣ（ヘキサン／ＥｔＯＡｃ ３：１） Ｒｆ＝０．３１；１ＨＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３） δ ７．４０−７．０８（ｍ，１３Ｈ，ＡｒＨ），５．２２（ｍ，２Ｈ，ＲＣＯＯＣＨ），４．６３（ｍ，２Ｈ，ＣＨ２Ｐｈ），４．４０−４．０６（ｍ，１２Ｈ，ＲＣＯＯＣＨ２，ＰＯＣＨ２），３．８９（ｍ，１Ｈ，ＢｎＯＣＨ），２．２６（ｍ，８Ｈ，−ＣＨ２ＣＯＯ−），１．５７（ｍ，８Ｈ，−ＣＨ２ＣＨ２ＣＯＯ−），１．２５（ｂｒ ｓ，８０Ｈ，ＣＨ２），０．８８（ｔ，Ｊ＝６．５，１２Ｈ，ＣＨ３；ＥＳＩ−ＭＳ，ｍ／ｚ（Ｍ＋Ｎａ）＋１５７６．６。
【００７５】
１Ｂ．２−Ｏ−ベンジル−１，３−ビス（１，２−Ｏ−ジミリストイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホリル）グリセロール 二アンモニウム塩の合成
【００７６】
【化９】
【００７７】
Ｒ＝ミリストイル（Ｃ１４：０鎖）
【００７８】
方法１．ＴＨＦ（５ｍＬ）中の十分に保護されたカルジオリピン（２６０．３ｍｇ，０．１７ｍｍｏｌ）の撹拌溶液に、２−ピリジンアルドオキシム（２０２．５ｍｇ，１．６６ｍｍｏｌ）とテトラメチルグアニジン（１７６．０ｍｇ，１．５３ｍｍｏｌ）を加えた。水１滴の添加後、混合物を室温で２．５時間撹拌した。溶媒を真空除去した。残渣をＣＨＣｌ３（１０ｍＬ）に溶解し、Ｈ２Ｏ（４ｍＬｘ２）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、真空濃縮した。得られた残渣を、ＣＨＣｌ３／ＭｅＯＨ／ＮＨ４ＯＨ（６５：１５：１）を用いるシリカゲルのフラッシュクロマトグラフィーで精製し、白色固体として２−Ｏ−ベンジル−１，３−ビス（１，２−Ｏ−ジミリストイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホリル）グリセロール 二アンモニウム塩を２００ｍｇ得た。収率は８７％であった。ＴＬＣ（ＣＨＣｌ３／ＭｅＯＨ／ＮＨ４ＯＨ ６５：２５：５） Ｒｆ＝０．６４；１ＨＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３） δ ７．４２−７．２３（ｍ，５Ｈ，ＡｒＨ），５．２０（ｍ，２Ｈ，ＲＣＯＯＣＨ），４．６０（ｓ，２Ｈ，ＣＨ２Ｐｈ），４．２９−３．８９（ｍ，１２Ｈ，ＲＣＯＯＣＨ２，ＰＯＣＨ２），３．６９（ｍ，１Ｈ，ＢｎＯＣＨ），２．２７（ｍ，８Ｈ，−ＣＨ２ＣＯＯ−），１．５６（ｍ，８Ｈ，−ＣＨ２ＣＨ２ＣＯＯ−），１．２８（ｂｒ ｓ，８０Ｈ，ＣＨ２），０．８８（ｔ，Ｊ＝６．５，１２Ｈ，ＣＨ３）；ＥＳＩ−ＭＳ，ｍ／ｚ（Ｍ−２ＮＨ４）２−６６４．９，（Ｍ−２ＮＨ４−ＲＣＯＯ）−１１０２．０，（Ｍ−２ＮＨ４＋Ｈ）−１３３０．３。
【００７９】
方法２．ＴＨＦ（６５ｍＬ）中の十分に保護されたカルジオリピン（３．８８ｇ，２．５０ｍｍｏｌ）の撹拌溶液に、２−ニトロベンズアルドオキシム（４．１１ｇ，２４．７４ｍｍｏｌ）とテトラメチルグアニジン（２．６２ｇ，２２．７５ｍｍｏｌ）を加えた。水１５滴の添加後、混合物を室温で４時間撹拌した。溶媒を真空除去した。残渣をＣＨＣｌ３（１００ｍＬ）に溶解し、Ｈ２Ｏ（４０ｍＬ）とＭｅＯＨ（２ｍＬ）で洗浄した。有機相をＮａ２ＳＯ４で乾燥し、真空濃縮した。得られた黄色の残渣を、ＣＨＣｌ３／ＭｅＯＨ／ＮＨ４ＯＨ（６５：１５：１）を用いるシリカゲルのフラッシュクロマトグラフィーで精製し、白色固体として２−Ｏ−ベンジル−１，３−ビス（１，２−Ｏ−ジミリストイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホリル）グリセロール 二アンモニウム塩を２．１７ｇ得た。収率は６４％である。ＴＬＣ（ＣＨＣｌ３／ＭｅＯＨ／ＮＨ４ＯＨ ６５：２５：５） Ｒｆ＝０．６４。
【００８０】
１Ｃ．１，３−ビス（１，２−Ｏ−ジミリストイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホリル）グリセロール 二アンモニウム塩（テトラミリストイル カルジオリピン）の合成
【００８１】
【化１０】
【００８２】
Ｒ＝ミリストイル（Ｃ１４：０鎖）
【００８３】
方法１．２−Ｏ−ベンジル−１，３−ビス（１，２−Ｏ−ジミリストイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホリル）グリセロール 二アンモニウム塩のサンプル（５２０．１ｍｇ，０．３８ｍｍｏｌ）を、ＴＨＦ（２５ｍＬ）に溶解し、水素バルーン下、３．５時間、パラジウムブラック（２００ｍｇ）で水素化した。触媒を除くために濾過後、溶液を蒸発乾固した。残渣をＴＨＦ（７ｍＬ）に溶解し、次いでアセトン（３５ｍＬ）を用いて沈殿させた。混合物を一晩フリーザーに保ち、翌日、白色固体を濾過し、少量の冷アセトンで洗浄した。ドライアライト下１２時間、Ｐ２Ｏ５下５時間、真空デシケーター中で乾燥後、１，３−ビス（１，２−Ｏ−ジミリストイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホリル）グリセロール 二アンモニウム塩（テトラミリストイル カルジオリピン）４１５．１ｍｇを得た。収率は８６％である。ＴＬＣ（ＣＨＣｌ３／ＭｅＯＨ／ＮＨ４ＯＨ ６５：２５：５） Ｒｆ＝０．２９；１ＨＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３） δ ７．３２（ｂｒ ｓ，ＮＨ４），５．２６（ｍ，２Ｈ，ＲＣＯＯＣＨ），４．３４−３．９２（ｍ，１３Ｈ，ＲＣＯＯＣＨ２，ＰＯＣＨ２，ＨＯＣＨ），２．３３（ｍ ８Ｈ，−ＣＨ２ＣＯＯ−），２．２９（ｔ，Ｊ＝７．５，１Ｈ，ＣＨＯＨ），１．５８（ｍ，８Ｈ，−ＣＨ２ＣＨ２ＣＯＯ−），１．３０（ｂｒ ｓ，８０Ｈ，ＣＨ２），０．８８（ｔ，Ｊ＝６．５，１２Ｈ，ＣＨ３）； ＦＴＩＲ（ＡＴＲ） ３２３１ｓ，２９１８ｓ，２８５０ｓ，１７３８ｓ，１４６７ｗ，１３７８ｗ，１２０３ｍｓ，１０６７ｓ ｃｍ−１；ＥＳＩ−ＭＳ，ｍ／ｚ（Ｍ−２ＮＨ４）２− ６１９．９，（Ｍ−２ＮＨ４−ＲＣＯＯ）−１０１１．９，（Ｍ−２ＮＨ４＋Ｈ）−１２４０．２。
【００８４】
方法２．２−Ｏ−ベンジル−１，３−ビス（１，２−Ｏ−ジミリストイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホリル）グリセロール 二アンモニウム塩のサンプル（１２４．７ｍｇ，０．０９ｍｍｏｌ）を、ＴＨＦ（１５ｍＬ）に溶解し、圧力５０ｐｓｉ下一晩、１０％Ｐｄ−Ｃ（５０ｍｇ）で水素化した。触媒を除くために濾過後、溶液を蒸発乾固した。残渣をＴＨＦ（２ｍＬ）に溶解し、次いでアセトン（１０ｍＬ）を用いて沈殿させた。混合物を一晩フリーザーに保ち、白色固体を濾過し、少量の冷アセトンで洗浄した。ドライアライト下３時間、真空デシケーター中で乾燥後、１，３−ビス（１，２−Ｏ−ジミリストイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホリル）グリセロール 二アンモニウム塩（テトラミリストイル カルジオリピン）９８．６ｍｇを得た。収率は８５％である。ＴＬＣ（ＣＨＣｌ３／ＭｅＯＨ／ＮＨ４ＯＨ ６５：２５：５） Ｒｆ＝０．２９。
【実施例２】
【００８５】
実施例２
２Ａ．ｃｉｓ−２−フェニル−１，３−ジオキサン−５−イル ｔ−ブチルジメチルシリルエーテルの合成
【００８６】
【化１１】
【００８７】
標記化合物は、改変したＤｏｄｄ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．Ｐｅｒｋｉｎ Ｉ，２２７３−２２７７（１９７６）に記載の手順に基き、ｃｉｓ−２−フェニル−１，３−ジオキサン−５−オールから製造する。以下は、改変した方法である。
【００８８】
ＤＭＦ（１５ｍＬ）中のｃｉｓ−２−フェニル−１，３−ジオキサン−５−オール（５．０１ｇ，２７．８ｍｍｏｌ）とイミダゾール（３．７８ｇ，５５．５ｍｍｏｌ）の溶液に、ジメチル−ｔ−ブチルシリルクロリド（５．０３ｇ，３３．４ｍｍｏｌ）を一部ずつ加えた。反応混合物を室温で一晩撹拌し、次いでＨ２Ｏ（２０ｍＬ）を加えた。混合物をヘキサン（２５ｍＬｘ３）で抽出した。有機相を一緒にし、ブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、真空濃縮し、無色油状物としてｃｉｓ−２−フェニル−１，３−ジオキサン−５−イル ｔ−ブチルジメチルシリルエーテルを定量的収量（８．１８ｇ）で得た。この生成物は、更なる精製無しに次工程合成で使用した。
【００８９】
２Ｂ．２−Ｏ−ｔ−ブチルジメチルシリルグリセロールの合成
【００９０】
【化１２】
【００９１】
標記化合物を、Ｄｏｄｄ ｅｔ ａｌ．，ＪＣｈｅｍ．Ｓｏｃ．Ｐｅｒｋｉｎ １，２２７３−２２７７（１９７６）に記載された方法に従って、ｃｉｓ−２−フェニル−１，３−ジオキサン−５−イル ｔ−ブチルジメチルシリルエーテルから製造する。１ＨＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３） δ ３．６５（ｍ，５Ｈ，ＣＨ２ＣＨＣＨ２），１．８８（ｔ，Ｊ＝６．０，２Ｈ，ＯＨ），０．９２（ｓ，９Ｈ，ＳｉＣＣＨ３），０．１２（ｓ，６Ｈ，ＳｉＣＨ３）．
【００９２】
２Ｃ．十分に保護されたカルジオリピンの合成
【００９３】
【化１３】
【００９４】
Ｒ＝ミリストイル（Ｃ１４：０鎖）
【００９５】
ＣＨ２Ｃｌ２（６ｍＬ）中のｏ−クロロフェニル ジクロロホスフェート（１．５１ｇ，６．１５ｍｍｏｌ）と乾燥ピリジン（２．７ｍＬ，３３．３ｍｍｏｌ）の溶液に、ＣＨ２Ｃｌ２（３０ｍＬ）中の１，２−Ｏ−ジミリストイル−ｓｎ−グリセロール（３．０８ｇ，６．０ｍｍｏｌ）の溶液を、０℃で１５分で滴下添加した。反応混合物を、０℃で１時間、室温で１時間撹拌後、ＣＨ２Ｃｌ２（６ｍＬ）中の２−Ｏ−ｔ−ブチルジメチルシリルグリセロール（４９５．３ｍｇ，２．４ｍｍｏｌ）の溶液を滴下添加した。反応混合物を室温で３時間撹拌した。有機溶媒を真空除去し、残った残渣を、冷酢酸エチル（１２０ｍＬ）／０．２５Ｎ ＨＣｌ（１２０ｍＬ）で注意深く処理した。有機相を、水、ブラインで洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、真空濃縮した。得られた残渣を、ヘキサン／酢酸エチル（４：１から３．５：１へ）を用いるシリカゲルのフラッシュクロマトグラフィーで精製し、無色油状物として十分に保護されたカルジオリピン２．７９ｇを得た。収率は７４％である。ＴＬＣ（ヘキサン／ＥｔＯＡｃ ３：１） Ｒｆ＝０．４２；１ＨＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３） δ ７．４１（ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，４Ｈ，ＡｒＨ），７．２３（ｔ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，２Ｈ，ＡｒＨ），７．１２（ｔ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，２Ｈ，ＡｒＨ），５．２３（ｍ，２Ｈ，ＲＣＯＯＣＨ），４．３６−４．０６（ｍ，１３Ｈ，ＲＣＯＯＣＨ２，ＰＯＣＨ２，ＳｉＯＣＨ），２．２６（ｍ，８Ｈ，−ＣＨ２ＣＯＯ−），１．５７（ｍ，８Ｈ，−ＣＨ２ＣＨ２ＣＯＯ−），１．２５（ｂｒ ｓ，８０Ｈ，ＣＨ２），０．８８（ｔ，Ｊ＝６．５，１２Ｈ，ＣＨ３），０．８７（ｓ，９Ｈ，ＳｉＣＣＨ３），０．０８（ｓ，６Ｈ，ＳｉＣＨ３）。
【００９６】
２Ｄ．１，３−ビス（１，２−Ｏ−ジミリストイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホリル）−２−Ｏ−（ｔ−ブチルジメチルシリル）グリセロール 二アンモニウム塩の合成
【００９７】
【化１４】
【００９８】
Ｒ＝ミリストイル（Ｃ１４：０鎖）
【００９９】
ＴＨＦ（１０ｍＬ）中の十分に保護されたカルジオリピン（０．６８ｇ，０．４３ｍｍｏｌ）の撹拌溶液に、２−ニトロベンズアルドオキシム（０．７１ｇ，４．２６ｍｍｏｌ）とテトラメチルグアニジン（０．４５ｇ，３．９１ｍｍｏｌ）を加えた。水３滴の添加後、混合物を室温で３時間撹拌した。溶媒を真空除去した。残渣をＣＨＣｌ３（２５ｍＬ）に溶解し、Ｈ２Ｏ（１０ｍＬ）で洗浄した。有機相をＮａ２ＳＯ４で乾燥し、真空濃縮した。得られた黄色残渣を、ＣＨＣｌ３／ＭｅＯＨ／ＮＨ４ＯＨ（６５：１５：１）を用いるシリカゲルのフラッシュクロマトグラフィーで精製し、白色固体として１，３−ビス（１，２−Ｏ−ジミリストイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホリル）−２−Ｏ−（ｔ−ブチルジメチルシリル）グリセロール 二アンモニウム塩を３７０ｍｇ得た。収率は６２％である。ＴＬＣ（ＣＨＣｌ３／ＭｅＯＨ／ＮＨ４ＯＨ ６５：２５：５） Ｒｆ＝０．６４；１ＨＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３） δ ７．３２（ｂｒ ｓ，ＮＨ４），５．２６（ｍ，２Ｈ，ＲＣＯＯＣＨ），４．３４−３．９２（ｍ，１３Ｈ，ＲＣＯＯＣＨ２，ＰＯＣＨ２ ＳｉＯＣＨ），２．３０（ｍ，８Ｈ，−ＣＨ２ＣＯＯ−），１．５８（ｍ，８Ｈ，−ＣＨ２ＣＨ２ＣＯＯ−），１．３０（ｂｒ ｓ，８０Ｈ，ＣＨ２），０．８８（ｔ，Ｊ＝６．５，１２Ｈ，ＣＨ３），０．８７（ｓ，９Ｈ，ＳｉＣＣＨ３），０．０８（ｓ，６Ｈ，ＳｉＣＨ３）。
【０１００】
２Ｅ．１，３−ビス（１，２−Ｏ−ジミリストイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホリル）グリセロール 二アンモニウム塩（テトラミリストイル カルジオリピン）の合成
【０１０１】
【化１５】
【０１０２】
Ｒ＝ミリストイル（Ｃ１４：０鎖）
【０１０３】
ＣＨＣｌ３（１ｍＬ）、ＭｅＯＨ（２０ｍＬ）及びＨ２Ｏ（７ｍＬ）中の１，３−ビス（１，２−Ｏ−ジミリストイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホリル）−２−Ｏ−（ｔ−ブチルジメチルシリル）グリセロール 二アンモニウム塩（１３８．０ｍｇ，０．０９９ｍｍｏｌ）の撹拌混合物に、１Ｎ ＨＣｌ（０．３ｍＬ）を滴下添加した。混合物を室温で６時間撹拌し、次いで、氷浴中で冷却した。冷反応混合物に、１０％ＮＨ４ＯＨ（２ｍＬ）を滴下添加した。有機溶媒を真空除去し、残りの水相をＣＨＣｌ３で２回抽出した。一緒にした有機相をＮａ２ＳＯ４で乾燥し、濃縮乾固した。残渣をＴＨＦ（５ｍＬ）に溶解し、次いでアセトン（２５ｍＬ）を用いて沈殿させた。混合物を一晩フリーザーに保ち、白色固体を濾過し、少量の冷アセトンで洗浄した。ドライアライト下１時間、Ｐ２Ｏ５下５時間、真空デシケーター中で乾燥後、１，３−ビス（１，２−Ｏ−ジミリストイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホリル）グリセロール 二アンモニウム塩（テトラミリストイル カルジオリピン）１１５ｍｇを得た。収率は８３％であった。ＴＬＣ（ＣＨＣｌ３／ＭｅＯＨ／ＮＨ４ＯＨ ６５：２５：５） Ｒｆ＝０．２９。実施例２Ｅから製造されたテトラミリストイル カルジオリピンの特徴は、実施例１Ｃからのものと同一である。
【実施例３】
【０１０４】
実施例３
３Ａ．十分に保護された不飽和カルジオリピンの合成
【０１０５】
【化１６】
【０１０６】
Ｒ＝オレオイル（Ｃ１８：１鎖）
【０１０７】
１，２−ジミリストイル−ｓｎ−グリセロールの代わりに１，２−Ｏ−ジオレオイル−ｓｎ−グリセロールに置換して、標記化合物を実施例２Ｃに記載の方法に従って製造した。生成物は無色油状物で、収率は３５％であった。ＴＬＣ（ヘキサン／ＥｔＯＡｃ ３：１） Ｒｆ＝０．４６；１ＨＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３） δ ７．４１（ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，４Ｈ，ＡｒＨ），７．２３（ｔ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，２Ｈ，ＡｒＨ），７．１２（ｔ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，２Ｈ，ＡｒＨ），５．３６（ｍ，８Ｈ，オレフィン性プロトン），５．２４（ｍ，２Ｈ，ＲＣＯＯＣＨ），４．３５−４．０６（ｍ，１３Ｈ，ＲＣＯＯＣＨ２，ＰＯＣＨ２，ＳｉＯＣＨ），２．２８（ｍ，８Ｈ，−ＣＨ２ＣＯＯ−），２．００（ｍ，１６Ｈ，アリル性ＣＨ２），１．５７（ｍ，８Ｈ，−ＣＨ２ＣＨ２ＣＯＯ−），１．２８（ｂｒ ｓ，８８Ｈ，ＣＨ２），０．８８（ｔ，Ｊ＝６．５，１２Ｈ，ＣＨ３），０．８８（ｓ，９Ｈ，ＳｉＣＣＨ３），０．０８（ｓ，６Ｈ，ＳｉＣＨ３）。ＥＳＩ−ＭＳ，ｍ／ｚ（Ｍ＋Ｎａ）＋１８１６．４。
【０１０８】
３Ｂ．１，３−ビス（１，２−Ｏ−ジオレオイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホリル）−２−Ｏ−（ｔ−ブチルジメチルシリル）グリセロール 二アンモニウム塩の合成
【０１０９】
【化１７】
【０１１０】
Ｒ＝オレオイル（Ｃ１８：１鎖）
【０１１１】
方法１．ＴＨＦ（３ｍＬ）中の、実施例３Ａに記載の方法により製造された、十分に保護された不飽和カルジオリピン（１７０．０ｍｇ，０．０９５ｍｍｏｌ）の撹拌溶液に、２−ピリジンアルドオキシム（９２．７ｍｇ，０．７６ｍｍｏｌ）とテトラメチルグアニジン（８０．６ｍｇ，０．７０ｍｍｏｌ）を加えた。水１滴の添加後、混合物を室温で７時間撹拌した。溶媒を真空除去した。残渣をＣＨＣｌ３（１０ｍＬ）に溶解し、Ｈ２Ｏ（４ｍＬｘ２）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、真空濃縮した。得られた残渣を、ＣＨＣｌ３／ＭｅＯＨ／ＮＨ４ＯＨ（６５：１５：１）を用いるフラッシュクロマトグラフィーで精製し、白色ゴム状固体として１，３−ビス（１，２−Ｏ−ジオレオイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホリル）−２−Ｏ−（ｔ−ブチルジメチルシリル）グリセロール 二アンモニウム塩を１３４ｍｇ得た。収率は８８％である。ＴＬＣ（ＣＨＣｌ３／ＭｅＯＨ／ＮＨ４ＯＨ ６５：２５：５） Ｒｆ＝０．６７；１ＨＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３） δ ７．３９（ｂｒ ｓ，ＮＨ４），５．３４（ｍ，８Ｈ，オレフィン性プロトン），５．２５（ｍ，２Ｈ，ＲＣＯＯＣＨ），４．３１−３．９０（ｍ，１３Ｈ，ＲＣＯＯＣＨ２，ＰＯＣＨ２，ＳｉＯＣＨ），２．３０（ｍ，８Ｈ，−ＣＨ２ＣＯＯ−），２．０１（ｍ，１６Ｈ，アリル性ＣＨ２），１．５９（ｍ，８Ｈ，−ＣＨ２ＣＨ２ＣＯＯ−），１．２９（ｂｒ ｓ，８８Ｈ，ＣＨ２），０．８８（ｔ，Ｊ＝６．５，１２Ｈ，ＣＨ３），０．８７（ｓ，９Ｈ，ＳｉＣＣＨ３），０．０８（ｓ，６Ｈ，ＳｉＣＨ３）。ＥＳＩ−ＭＳ，ｍ／ｚ（Ｍ−２ＮＨ４）２−７８４．８，（Ｍ−２ＮＨ４−ＲＣＯＯ）−１２８８．３，（Ｍ−２ＮＨ４＋Ｈ）−１５７１．９。
【０１１２】
方法２．ＴＨＦ（８ｍＬ）中の、実施例３Ａに記載の方法により製造された、十分に保護された不飽和カルジオリピン（０．５９ｇ，０．３３ｍｍｏｌ）の撹拌溶液に、２−ニトロベンズアルドオキシム（０．５４ｇ，３．２３ｍｍｏｌ）とテトラメチルグアニジン（０．３５ｇ，３．００ｍｍｏｌ）を加えた。水３滴の添加後、混合物を室温で３時間撹拌した。溶媒を真空除去した。残渣をＣＨＣｌ３（１５ｍＬ）に溶解し、Ｈ２Ｏ（６ｍＬ）で洗浄した。有機相を真空濃縮した。得られた黄色残渣を、ＣＨＣｌ３／ＭｅＯＨ／ＮＨ４ＯＨ（６５：１５：１）を用いるフラッシュクロマトグラフィーで精製し、白色ゴム状固体として１，３−ビス（１，２−Ｏ−ジオレオイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホリル）−２−Ｏ−（ｔ−ブチルジメチルシリル）グリセロール 二アンモニウム塩を３５０ｍｇ得た。収率は６６％である。ＴＬＣ（ＣＨＣｌ３／ＭｅＯＨ／ＮＨ４ＯＨ ６５：２５：５） Ｒｆ＝０．６７。
【０１１３】
３Ｃ．１，３−ビス（１，２−Ｏ−ジオレオイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホリル）グリセロール 二アンモニウム塩（テトラオレオイル カルジオリピン）の合成
【０１１４】
【化１８】
【０１１５】
Ｒ＝オレオイル（Ｃ１８：１鎖）
【０１１６】
ＣＨＣｌ３（１０ｍＬ），ＭｅＯＨ（２０ｍＬ）及びＨ２Ｏ（７ｍＬ）中の１，３−ビス（１，２−Ｏ−ジオレオイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホリル）−２−Ｏ−（ｔ−ブチルジメチルシリル）グリセロール 二アンモニウム塩（１１０．１ｍｇ，０．０６９ｍｍｏｌ）の撹拌混合物に、１Ｎ ＨＣｌ（０．３ｍＬ）を滴下添加した。混合物を室温で５時間撹拌した。更に０．１ｍＬの１Ｎ ＨＣｌを加えた。混合物を室温で更に４時間撹拌し、次いで、氷浴中で冷却した。冷反応混合物に、１０％ＮＨ４ＯＨ（２ｍＬ）を滴下添加した。有機溶媒を真空除去し、残りの残渣をＣＨＣｌ３で抽出した。有機層を濃縮乾固した。粗生成物をＣＨＣｌ３／ＭｅＯＨ／ＮＨ４ＯＨ（６５：１５：１）を用いるシリカゲルフラッシュクロマトグラフィーで精製し、白色ゴム状固体として１，３−ビス（１，２−Ｏ−ジオレオイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホリル）グリセロール 二アンモニウム塩（テトラオレオイル カルジオリピン）を７１ｍｇ得た。収率は７０％である。ＴＬＣ（ＣＨＣｌ３／ＭｅＯＨ／ＮＨ４ＯＨ ６５：２５：５） Ｒｆ＝０．４０；１ＨＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３） δ ７．４３（ｂｒ ｓ，ＮＨ４），５．３４（ｍ，８Ｈ，オレフィン性プロトン），５．１９（ｍ，２Ｈ，ＲＣＯＯＣＨ），４．３８−３．９１（ｍ，１３Ｈ，ＲＣＯＯＣＨ２，ＰＯＣＨ２，ＨＯＣＨ），２．２９（ｍ，８Ｈ，−ＣＨ２ＣＯＯ−），２．１７（ｂｒ ｓ，１Ｈ，ＯＨ），２．０１（ｍ，１６Ｈ，アリル性ＣＨ２），１．５８（ｍ，８Ｈ，−ＣＨ２ＣＨ２ＣＯＯ−），１．２９（ｂｒ ｓ，８８Ｈ，ＣＨ２），０．８７（ｔ，Ｊ＝６．５，１２Ｈ，ＣＨ３）。ＥＳＩ−ＭＳ，ｍ／ｚ（Ｍ−２ＮＨ４）２−７２７．６，（Ｍ−２ＮＨ４−ＲＣＯＯ）−１１７４．２，（Ｍ−２ＮＨ４＋Ｈ）−１４５６．６。
【実施例４】
【０１１７】
実施例４
４Ａ．十分に保護されたカルジオリピンの合成
【０１１８】
【化１９】
【０１１９】
Ｒ＝ミリストイル（Ｃ１４：０鎖）
【０１２０】
ＣＨ２Ｃｌ２（１０ｍＬ）中のＮ，Ｎ−ジイソプロピルメチルホスホンアミディック クロリド（１．９２ｇ，９．２２ｍｍｏｌ）と乾燥Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（１．９２ｍＬ，１１．１ｍｍｏｌ）の溶液に、ＣＨ２Ｃｌ２（４５ｍＬ）中の１，２−Ｏ−ジミリストイル−ｓｎ−グリセロール（４．６１ｇ，９．０ｍｍｏｌ）の溶液を室温で３０分で滴下添加した。反応混合物を室温で１．５時間撹拌後、アセトニトリル（７１．８ｍＬ，２４．３ｍｍｏｌ）中の３重量％溶液の１Ｈ−テトラゾールを加えた。この反応混合物に、ＣＨ２Ｃｌ２（１０ｍＬ）中の２−ベンジルオキシ−１，３−プロパンジオール（０．６６ｇ，３．６０ｍｍｏｌ）の溶液を滴下添加した。反応混合物を室温で３時間撹拌した。次いで、反応混合物を−４０℃に冷却し、反応混合物の温度が０℃未満に保たれるように、ＣＨ２Ｃｌ２（１０ｍＬ）中の７７％ｍ−クロロペルオキシ安息香酸（２．６４ｇ，１１．８０ｍｍｏｌ）の溶液を加えた。２５℃に温めて、混合物を分離漏斗に移し、５％ＮａＨＣＯ３（２ｘ５０ｍＬ），冷１Ｎ ＨＣｌ（２ｘ１５ｍＬ），水、ブラインで洗浄した。有機相をＮａ２ＳＯ４で乾燥し、真空濃縮し、油状残渣を得た。残渣を、ヘキサン／酢酸エチル（２：１から１：１へ）で溶出するシリカゲルのフラッシュクロマトグラフィーで精製し、無色油状物として十分に保護されたカルジオリピン４．３８ｇを得た。収率は９０％である。ＴＬＣ（ヘキサン／ＥｔＯＡｃ １：１） Ｒｆ＝０．１６；１ＨＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３） δ ７．３５（ｍ，５Ｈ，ＡｒＨ），５．２２（ｍ，２Ｈ，ＲＣＯＯＣＨ），４．６７（ｍ，２Ｈ，ＣＨ２Ｐｈ），４．３４−４．０６（ｍ，１２Ｈ，ＲＣＯＯＣＨ２，ＰＯＣＨ２），３．８３（ｍ，１Ｈ，ＢｎＯＣＨ），３．７５（ｄｔ，Ｊｌ＝１１．４，Ｊ２＝３．０，６Ｈ，ＰＯＣＨ３），２．３１（ｍ，８Ｈ，−ＣＨ２ＣＯＯ−），１．５９（ｍ，８Ｈ，−ＣＨ２ＣＨ２ＣＯＯ−），１．２５（ｂｒ ｓ，８０Ｈ，ＣＨ２），０．８８（ｔ，Ｊ＝６．６，１２Ｈ，ＣＨ３）。
【０１２１】
４Ｂ．２−Ｏ−ベンジル−１，３−ビス（１，２−Ｏ−ジミリストイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホリル）グリセロール 二アンモニウム塩の合成
【０１２２】
【化２０】
【０１２３】
Ｒ＝ミリストイル（Ｃ１４：０鎖）
【０１２４】
２−ブタノン（８５ｍＬ）中の十分に保護されたカルジオリピン（１．８０ｇ，１．３２ｍｍｏｌ）の撹拌溶液に、ＮａＩ（０．５９ｇ，３．９６ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物を１．５時間還流し、２５℃に冷却した。生じた白色沈殿を濾過し、冷２−ブタノンで洗浄し、白色固体として２−Ｏ−ベンジル−１，３−ビス（１，２−Ｏ−ジミリストイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホリル）グリセロール 二ナトリウム塩１．７１ｇを得た。
【０１２５】
Ｂｌｉｇｈ ａｎｄ Ｄｙｅｒ，Ｃａｎ．Ｊ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．，３７：９１１−９１７（１９５９）の抽出方法の適用によって、二ナトリウム塩を、対応する遊離酸に変換した。即ち、上記二ナトリウム塩を、ＣＨＣｌ３（８０ｍＬ），ＭｅＯＨ（１６０ｍＬ） 及び０．１Ｎ ＨＣｌ（８０ｍＬ）の冷混合物に溶解し、室温で４０分間撹拌した。次いで、Ｈ２Ｏ（８０ｍＬ）及びＣＨＣｌ３（８０ｍＬ）を加え、分離したＣＨＣｌ３相を単離し、Ｈ２Ｏ（５０ｍＬ）で洗浄した。１０％ＮＨ４ＯＨ（１５ｍＬ）の添加によって有機相を中和した。有機相を分離し、真空濃縮し、残渣を得、それを、ＣＨＣｌ３／ＭｅＯＨ／ＮＨ４ＯＨ（６５：１５：１）を用いる短いシリカゲルカラムで更に精製し、白色固体として２−Ｏ−ベンジル−１，３−ビス（１，２−Ｏ−ジミリストイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホリル）グリセロール 二アンモニウム塩を１．４２ｇ得た。収率は７９％であった。 ＴＬＣ（ＣＨＣｌ３／ＭｅＯＨ／ＮＨ４ＯＨ ６５：２５：５） Ｒｆ＝０．６４。実施例４Ｂから製造された最終生成物の特徴は、実施例１Ｂからのものと同一である。
【０１２６】
４Ｃ．１，３−ビス（１，２−Ｏ−ジミリストイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホリル）グリセロール 二アンモニウム塩（テトラミリストイル カルジオリピン）の合成
【０１２７】
【化２１】
【０１２８】
Ｒ＝ミリストイル（Ｃ１４：０鎖）
【０１２９】
標記化合物は、実施例１Ｃに記載の方法に従って製造される。実施例４で記載した方法から製造されたテトラミリストイル カルジオリピンの特徴は、実施例１からのものと同一である。
【実施例５】
【０１３０】
実施例５
５Ａ．２−Ｏ−ベンジル−１，３−ビス（１，２−Ｏ−ジミリスチル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホリル）グリセロール ジメチルエステルの合成
【０１３１】
【化２２】
【０１３２】
Ｒ＝ミリスチル（Ｃ１４：０鎖）
【０１３３】
ＣＨ２Ｃｌ２（４ｍＬ）中のＮ，Ｎ−ジイソプロピルメチルホスホンアミディック クロリド（１．０２ｇ，５．１５ｍｍｏｌ）と乾燥Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（１．２ｍＬ，６．９４ｍｍｏｌ）の撹拌溶液に、ＣＨ２Ｃｌ２（２０ｍＬ）中の１，２−Ｏ−ジミリスチル−ｓｎ−グリセロール（２．００ｇ，４．１３ｍｍｏｌ）の溶液を室温で１５分で滴下添加した。反応混合物を室温で１．５時間撹拌後、アセトニトリル（３１．０ｍＬ，１０．５ｍｍｏｌ）中の３重量％溶液の１Ｈ−テトラゾールを加えた。この反応混合物に、ＣＨ２Ｃｌ２（５ｍＬ）中の２−ベンジルオキシ−１，３−プロパンジオール（０．３０ｇ，１．６５ｍｍｏｌ）の溶液を添加した。反応混合物を室温で３時間撹拌した。次いで、反応混合物を−４０℃に冷却し、ＣＨ２Ｃｌ２（７ｍＬ）中の７７％ｍ−クロロペルオキシ安息香酸（１．１４ｇ，６．６ｍｍｏｌ）の溶液を加えた。混合物を３０分間室温に徐々に温めて、次いで、混合物を分離漏斗に移動し、５％ＮａＨＣＯ３（２ｘ３０ｍＬ），１Ｎ ＨＣｌ（２ｘ２０ｍＬ），水、ブラインで洗浄した。有機相をＮａ２ＳＯ４で乾燥し、真空濃縮した。残渣を、ヘキサン／酢酸エチル（１：０から１：１へ）のグラジエントで溶出するシリカゲルのフラッシュクロマトグラフィーで精製し、２−Ｏ−ベンジル−１，３−ビス（１，２−Ｏ−ジミリスチル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホリル）グリセロール ジメチルエステル１．６９ｇを得た。収率は７９％である。ＴＬＣ（ヘキサン／ＥｔＯＡｃ １：１） Ｒｆ＝０．２４．１ＨＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３） δ ７．３５−７．２９（ｍ，５Ｈ，ＡｒＨ），４．６８（ｍ，２Ｈ，ＣＨ２Ｐｈ），４．２６−４．０２（ｍ，８Ｈ，ＰＯＣＨ２），３．８６（ｍ，２Ｈ，ＲＯＣＨ），３．７５（ｄ，Ｊ１＝１２．０，６Ｈ，ＰＯＣＨ３），３．６１−３．３８（ｍ，１３Ｈ，−ＣＨ２ＯＣＨ２−，−ＣＨ２ＯＣＨ−，ＢｎＯＣＨ），１．５４（ｍ，８Ｈ，−ＣＨ２ＣＨ２Ｏ−），１．２９（ｍ，８８Ｈ，ＣＨ２），０．８８（ｔ，Ｊ＝６．７，１２Ｈ，ＣＨ３）。
【０１３４】
５Ｂ．２−Ｏ−ベンジル−１，３−ビス（１，２−Ｏ−ジミリスチル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホリル）グリセロール 二アンモニウム塩の合成
【０１３５】
【化２３】
【０１３６】
Ｒ＝ミリスチル（Ｃ１４：０鎖）
【０１３７】
２−ブタノン（４ｍＬ）中の２−Ｏ−ベンジル−１，３−ビス（１，２−Ｏ−ジミリスチル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホリル）グリセロール ジメチルエステル（２３０ｍｇ，０．１８ｍｍｏｌ）の撹拌溶液に、ＮａＩ（８８ｍｇ，０．５９ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を１．５時間還流し、２５℃に、次いで０℃に冷却した。生じた白色沈殿を濾過し、冷２−ブタノンで洗浄し、２−Ｏ−ベンジル−１，３−ビス（１，２−Ｏ−ジミリスチル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホリル）グリセロール 二ナトリウム塩を得た。二ナトリウム塩を、クロロホルム／メタノール／０．１Ｎ ＨＣｌ（３０：５：１５ ｍＬ）にとり、１時間激しく撹拌した。有機相を分離し、水相をクロロホルム（２ｘ１０ｍＬ）で抽出した。一緒にした有機抽出物を水（２ｘ１０ｍＬ）で洗浄した。水酸化アンモニウム水溶液（５ｍｌ）をクロロホルム抽出物に加え、真空濃縮し、高真空下一晩乾燥し、２−Ｏ−ベンジル−１，３−ビス（１，２−Ｏ−ジミリスチル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホリル）グリセロール 二アンモニウム塩２３１ｍｇを得た。収率は６０％である。ＴＬＣ（ＣＨＣｌ３／ＭｅＯＨ／ＮＨ４ＯＨ，６５：２５：５） Ｒｆ＝０．５；１ＨＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）： δ ７．２９−７．２１（ｍ，５Ｈ，ＡｒＨ），４．５７（ｍ，２Ｈ，ＣＨ２Ｐｈ），４．２１−３．３８（ｍ，２３Ｈ，ＰＯＣＨ２，−ＣＨ２ＯＣＨ２−；−ＣＨ２ＯＣＨ−，ＢｎＯＣＨ），１．５０（ｍ，８Ｈ，ＣＨ２ＣＨ２Ｏ−），１．２５（ｍ，８８Ｈ，ＣＨ２），０．８９（ｔ，１２Ｈ，Ｊ＝６．５４Ｈｚ，ＣＨ３）；ＥＳＩ−ＭＳ，ｍ／ｚ（Ｍ−２ＮＨ４＋Ｈ）−，１２７４．１，（Ｍ−２ＮＨ４）２−６３６．９。
【０１３８】
５Ｃ．１，３−ビス（１，２−Ｏ−ジミリスチル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホリル）グリセロール 二アンモニウム塩（テトラミリスチルカルジオリピンエーテルアナログ）の合成
【０１３９】
【化２４】
【０１４０】
Ｒ＝ミリスチル（Ｃ１４：０鎖）
【０１４１】
２−Ｏ−ベンジル−１，３−ビス（１，２−Ｏ−ジミリスチル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホリル）グリセロール 二アンモニウム塩（８５ｍｇ，０．０６５ｍｍｏｌ）を、テトラヒドロフラン（１０ｍＬ）に溶解した。これに、１０％Ｐｄ−Ｃ（７０ｍｇ）を加え、混合物を１６時間５０ｐｓｉでＰａｒｒハイドロゲネーター上で振盪した。溶液をセライトパッドで濾過し、クロロホルム（５ｍＬ）で洗浄した。濾液と洗浄液を一緒にし、真空濃縮し、乾燥した。テトラヒドロフラン（０．２ｍＬ）−アセトン（８ｍＬ）混合物から結晶化後、１，３−ビス（１，２−Ｏ−ジミリスチル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホリル）グリセロール 二アンモニウム塩４４ｍｇ。収率は５６％である。ＴＬＣ（ＣＨＣｌ３／ＭｅＯＨ／ＮＨ４ＯＨ，６５：２５：５） Ｒｆ＝０．２８；１ＨＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）： δ ７．２９（ｂｒ，ＮＨ４＋），４．２０−３．８０（ｍ，８Ｈ，ＰＯＣＨ２），３．５７−３．４１（ｍ，１５Ｈ，ＣＨ２ＯＣＨ２；ＣＨ２ＯＣＨ−，ＨＯＣＨ），２．３（ｂｒ，１Ｈ，ＯＨ），１．５３（ｍ，８Ｈ，ＣＨ２ＣＨ２Ｏ−），１．２５（ｍ，８８Ｈ，ＣＨ２），０．８７５（（ｔ，１２Ｈ，Ｊ＝６．９Ｈｚ，ＣＨ３）；ＥＳＩ−ＭＳ，ｍ／ｚ １１８４．７（Ｍ−２ＮＨ４＋Ｈ）−，５９１．３（Ｍ−２ＮＨ４）２−。
【実施例６】
【０１４２】
実施例６
６Ａ．２−Ｏ−ベンジル−１，３−ビス（１，２−Ｏ−ジミリストイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホリル）グリセロール 二アンモニウム塩の合成
【０１４３】
【化２５】
【０１４４】
Ｒ＝ミリストイル（Ｃ１４：０鎖）
【０１４５】
ピリジン（２ｍＬ）中のＮ，Ｎ’−ジシクロヘキシルカルボジイミド（２６５ｍｇ，１．２８ｍｍｏｌ）の撹拌溶液に、無水ＣＨ２Ｃｌ２（３ｍＬ）中の１，２−Ｏ−ジミリストイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスファチジン酸（２８１ｍｇ，０．４７ｍｍｏｌ）を滴下添加した。溶液を室温で５分撹拌し、次いで、ＣＨ２Ｃｌ２（８ｍＬ）中の２−ベンジルオキシ−１，３−プロパンジオール（０．７１ｇ，３．９０ｍｍｏｌ）を加え、撹拌を室温で２４時間続けた。反応液を濾過し、ＣＨ２Ｃｌ２で洗浄した。濾液を濃縮し、トルエンと共蒸発させ、微量のピリジンを除去した。残渣へＣＨ２Ｃｌ２（１５ｍＬ）を加え、混合物をフリーザー中で一晩保存した。白色沈殿を濾過で除去した。濾液を真空濃縮し、ＣＨＣｌ３／ＭｅＯＨ／ＮＨ４ＯＨ（６５：１５：１）で溶出するシリカゲルカラムで精製した。収量１３ｍｇ（４％）。ＴＬＣ（ＣＨＣｌ３／ＭｅＯＨ／ＮＨ４ＯＨ ６５：２５：５） Ｒｆ＝０．６４。ＴＬＣは、実施例１Ｂで記載した方法に従って製造した真正サンプルと同一であった。
【０１４６】
６Ｂ．１，３−ビス（１，２−Ｏ−ジミリストイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホリル）グリセロール 二アンモニウム塩（テトラミリストイル カルジオリピン）の合成
【０１４７】
【化２６】
【０１４８】
Ｒ＝ミリストイル（Ｃ１４：０鎖）
【０１４９】
標記化合物は、実施例１Ｃに記載の方法に従って製造される。ＴＬＣ（ＣＨＣｌ３／ＭｅＯＨ／ＮＨ４ＯＨ ６５：２５：５） Ｒｆ＝０．２９。ＴＬＣは、実施例１Ｃで記載した方法に従って製造した真正サンプルと同一であった。
【実施例７】
【０１５０】
実施例７
本実施例は、本発明のカルジオリピン含有のリポソーム組成物の製造を示す。上記で製造したテトラミリストイルカルジオリピン１９．１μｍｏｌ、ホスファチジルコリン９６．２μｍｏｌ、コレステロール６４．６μｍｏｌを混合して、小さい単一ラメラベシクルを形成する。徹底的な撹拌後、ロータリーエバポレーターを用い、５０ｍｌ丸底フラスコ中で混合物を蒸発乾固する。生じた乾燥脂質フィルムを、１０ｍｌの滅菌したパイロジェン非含有の水に再懸濁する。３０分の膨潤時間後、生じる懸濁液を、２５℃の固定温度浴で１５分間音波処理する。次いで、リポソーム製剤を、トレハロースと共に凍結乾燥する。
【実施例８】
【０１５１】
実施例８
本実施例は、アンスラサイクリンであるドキソルビシンを保持する、上記で製造したテトラミリストイルカルジオリピンを含むリポソームの製造を示す。４０ｍｇのカルジオリピン−リポソーム凍結乾燥物と、２ｍｇ／ｍｌで０．８５％ＮａＣｌ中に前もって調製したドキソルビシン２．５ｍｌの単純なボルテックス混合によって、臨床投与のために、リポソームドキソルビシンを製造できる。ボルテックス混合は１分で完了し、１５分インキュベーションのために、混合物を３７℃に保つ。
【実施例９】
【０１５２】
実施例９
本実施例は、薬剤ミトキサントロンＨＣｌを保持するリポソームの製造を示す。溶液の全重量が１３．０５ｋｇとなるように、ｔ−ブチルアルコール中の１．９６ｇｍのＤ−α−トコフェロール、上記で製造した５８．７ｇｍのテトラミリストイルカルジオリピン、９７．９ｇｍコレステロール、２９３．６ｇｍの卵ホスファチジルコリンを混合して、脂質混合物を調製する。次いで、トレハロース二水和物１２２．４ｇｍを含有する３，０８０ｇｍの水溶液を上記ブチルアルコール溶液中に混合する。バイアルを、この混合物１１．１ｇｍで充填し、凍結乾燥するが、脂質約３００ｍｇが各バイアルに含まれるようにする。Ｎｏｖａｎｔｒｏｎｅ（登録商標）（１５ｍｇ）７．５ｍｌと水７．５ｍｌを脂質バイアルに加え、リポソーム包埋ミトキサントロンを製造する。リポソームを、室温で３０分間水和させ、２分間激しくボルテックスし、最大強度で１０分音波処理する。８時間内での使用のために、４５分かけて、適切な量をシリンジ又は標準点滴セットに分配する。
【実施例１０】
【０１５３】
実施例１０
本実施例は、薬剤パクリタキセルを保持するリポソームの製造を示す。パクリタキセルは、カルジオリピン、ホスファチジルコリン、コレステロール、α−トコフェロールのリポソームに包埋できる。パクリタキセルの１ｍｇ当り、脂質の割合は、
１．８ｍｇ カルジオリピン
９．０ｍｇ ホスファチジルコリン
３．０ｍｇ コレステロール
０．１ｍｇ α−トコフェロール
である。
【０１５４】
リポソーム包埋パクリタキセルは、１２．０リットルフラスコにｔ−ブチルアルコール８．８９キログラムを加え、４０−４５℃に加熱することによって製造できる。以下の添加は、溶解と４０−４５℃での加熱まで、混合と共に順次なされた：Ｄ−α−トコフェリル酸サクシネート３．４１２グラム、卵ホスファチジルコリン２０５グラム、パクリタキセル２２．７８グラム、上記で製造したテトラミリストイルカルジオリピン４１．００グラム、コレステロール６８．３３グラム。
【０１５５】
生じる溶液は、０．２２ミクロンフィルターで濾過する。生じる濾液を、滅菌バイアルに充填し、各々は、濾液約１０．１グラムを含む。バイアルにストッパーをかけ、凍結乾燥した。使用まで、バイアルは、−２０℃で保存できる。
【０１５６】
必要なとき、通常の生理食塩水によって、リポソームは、乾燥脂質フィルムから製造される。約１時間、混合物を室温で水和させ、その後、約１分ボルテックスし、最大周波数で浴型音波器で約１０分音波処理する。バイアルの内容物の適当量を、点滴バッグに移すことができ、本発明に従って、患者に点滴することができる。
【０１５７】
パクリタキセルのリポソーム製剤は、実質的な毒性反応を誘導せずに、ヒトに大量のタキサンを急速に投与するために使用できる。治療は、約１時間、又は４５分さえ、もしくはそれ未満の時間で、静脈内に投与できる。少なくとも３人の患者は、ほぼ以下の投与量で治療された：９０ｍｇ／ｍ２、１３５ｍｇ／ｍ２、１７５ｍｇ／ｍ２、２５０ｍｇ／ｍ２、３００ｍｇ／ｍ２（通常の実験室や治療的投与量変動を可能とする）。製剤は、ステロイド、抗ヒスタミン剤、又はアナフィラキシー阻害剤などの他の治療剤による前処置なく、単一薬剤として与えることができる。治療は、患者耐性が許す限り、２１日毎に繰り返すことができる。
【実施例１１】
【０１５８】
実施例１１
本実施例は、溶液中にＳＮ−３８を含有するリポソームの製造を示す。約３５−４０℃に温められているｔ−ブチルアルコール約１ｋｇへＤ−α−トコフェロール酸サクシネート約０．２ｇを加えることによって脂質フィルムを製造する。トコフェロールが溶解するまで、溶液を約５分混合する。上記で製造したテトラミリストイルカルジオリピン約６．０ｇを溶液に加え、溶液を約５分混合する。コレステロール約１０ｇを溶液に加え、該溶液を更に約５分混合し、次いで、卵ホスファチジルコリン約３０ｇを加え、次いで、更に５分混合する。生じる脂質溶液約１１グラムを凍結乾燥し、脂質フィルムが産生される。
【０１５９】
リポソーム性ＳＮ−３８を製造するために、８〜１０のｐＨを有するアルカリ水溶液中にＳＮ−３８を溶解することによって、ＳＮ−３８の１．２ｍｇ／ｍｌ溶液を調製する。このＳＮ−３８溶液の約１５ｍｌを、脂質フィルムを含有するバイアルに加える。バイアルを温和に回転し、室温で３０分間水和させ、２分激しくボルテックスし、最大強度で浴型音波器中で１０分間音波処理する。リポソーム溶液のｐＨを酸性ｐＨに下げる。この方法を用いて、ＳＮ−３８の９０重量％超が、リポソームの形態の脂質と複合体形成する。
【０１６０】
引用文献:
1. Bruzik, K. S.; Kubiak, R. J. Tetrahedron Lett., 36: 2415-2418 (1995).
2. DeHaas, G. H.; Bonsen, P. P. M.; VanDeenen, L. L. M. Biochim. Biophys. Acta, 116: 114-124 (1966).
3. Dodd, G. H.; Dolding, B. T.; Ioannou, P. V. J. Chem. Soc. Perkin I, 21: 2273 - 2277 (1976).
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5. Inoue, K.; Nojima, S. Chem. Pharm. Bull., 16: 76-81 (1968).
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10. Mishina, I. M.; Vasilenko, I. A.; Stepanov, A. E.; Shvets, V. I. Bioorg. Khim., 11 : 992-994 (1985).
11. Mishina, I. M.; Vasilenko, I. A.; Stepanov, A. E.; Shvets, V. I. Bioorg. Khim., 13: 1110-1115 (1987).
12. Moschidis, M. C. Chem. Phys. Lipids, 46: 253-257 (1988).
13. Ramirez, F.; Ioannou, P. V.; Marecek, J. F.; Golding, B. T.; Dodd, G. H.
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14. Ramirez, F.; Ioannou, P. V.; Marecek, J. F.; Dodd, G. H.; Golding, B. T.
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15. Saunders, R. M.; Schwarz, H. P. J. Am. Chem. Soc. 88: 3844-3847 (1966).
Stepanov, A. E.; Makarova, I. M.; Shvets, V. I. Zh. Org. Khim., 20: 985-988 (1984).
【０１６１】
本明細書で引用した刊行物、特許出願、及び特許を含み、前述のリストのものと本明細書でその他の個所で引用したものを含む、本明細書全ての引用文献は、各引用文献が引用により含まれるように個々に、及び具体的に示され、本明細書にその全体が記載されているかのような程度まで、引用により本明細書に含まれるものである。
【０１６２】
本発明の説明の文脈において（特に、以下のクレームの文脈において）、用語“ａ”及び“ａｎ”及び“ｔｈｅ”及び同様の指示語の使用は、本明細書で違うように記載されるか、文脈によって明確に否定されなければ、単数と複数の両方を包含するように解釈されるべきである。用語“含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）”“有する（ｈａｖｉｎｇ）”“含む（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）”及び“含む（ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ）”は、ことわりがない限り、許容範囲が制約のない用語（ｏｐｅｎ−ｅｎｄｅｄ ｔｅｒｍｓ）（即ち、「・・を含むが、・・に限定されない」ことを意味する）として解釈されるべきである。本明細書で値の範囲の記載は、本明細書で違うように記載されていなければ、その範囲内の各々の分離した値へ個々に言及することの略記方法として役立つことが単に意図され、各々の分離した値は、それが本明細書に個々に記載されているかのように本明細書に含まれるものである。本明細書で記載される方法の全ては、本明細書で違うように記載されるか、さもなければ文脈によって明確に否定されなければ、任意の適切な順序で行うことができる。本明細書で提供される任意の、及び全ての例、又は例示的言葉（例えば、“などの”）の使用は、本発明をより良く明瞭にすることが単に意図され、違うようにクレームされていなければ、本発明の範囲を制限するものではない。本明細書の如何なる言葉も、本発明の実施に必須なものとしてクレームされていないいかなる要素を示すものとして解釈されるべきではない。
【０１６３】
本発明を実施するのに本発明者らが知っている最良の形態を含む、本発明の好適な実施態様を本明細書で記載する。上記説明を読むと、それらの好適な実施態様のバリエーションが当業者に明白となろう。本発明者らは、当業者が適宜このようなバリエーションを用いることを期待し、本発明者らは、本発明が、本明細書に具体的に記載されたものとは異なるように実施されることを意図する。それ故、本発明は、適用法によって許されるように、本明細書に添えられたクレームに記載の主題の全ての改変及び均等物を含むものである。更に、本明細書で違うように記載されていないか、さもなければ文脈によって違うように明瞭に否定されていなければ、その全ての可能なバリエーション中の上記要素の任意の組合わせも本発明に包含される。
【図面の簡単な説明】
【０１６４】
【図１】図１は、カルジオリピンの一般的構造を示す。
【図２】図２は、カルジオリピンの１つの合成スキームを示す。
【図３】図３は、カルジオリピンの別の合成スキームを示す。
【図４】図４は、カルジオリピンエーテルアナログの別の合成スキームを示す。
【図５】図５は、カルジオリピンの別の合成スキームを示す。
【図６】図６は、カルジオリピンの別の合成スキームを示す。
【図７】図７は、カルジオリピンの別の合成スキームを示す。
【図８】図８は、カルジオリピンの別の合成スキームを示す。
【技術分野】
【０００１】
発明の分野
本発明は、新規なカルジオリピン組成物、それらの製造方法、及びそれらを含むリポソーム組成物に関する。本発明はまた、活性剤を含むリポソーム製剤又は複合体又はエマルション、並びに診断アッセイ並びにヒトと動物における疾患でのそれらの使用に関する。
【背景技術】
【０００２】
発明の背景
リポソーム製剤は、水溶液中で疎水性薬剤の溶解性を増加する能力を有する。それらはしばしば、薬剤療法と関連する副作用を減少し、活性剤の新規製剤を開発する柔軟性のある道具を提供する。
【０００３】
リポソームは、ホスファチジルコリン、ホスファチジルエタノールアミン、ホスファチジルセリン、ホスファチジルグリセロール、ホスファチジン酸、及びホスファチジルイノシトールなどの天然リン脂質から通常製造される。ホスファチジルグリセロールやカルジオリピンなどのアニオン性リン脂質を加えて、正味の陰性表面電荷を産生でき、それは、コロイド安定性を提供する。これらの成分はしばしば、天然源から精製されるが、一部の場合には、化学合成できる。
【０００４】
カルジオリピン（ジホスファチジルグリセロールとしても知られる）は、一群の複雑なアニオン性リン脂質を構成し、それは、心筋や骨格筋のミトコンドリアを含む、高代謝活性と関連する組織の細胞膜から典型的に精製される。しかし、公知のクロマトグラフィー精製技術は、カルジオリピンを別個の分子種に分離できない。従って、この成分を含む薬剤製剤は均一ではない。
【０００５】
均一なテトラミリストイルカルジオリピンは、化学合成によって得ることができる。しかし、この化合物の利用性は限定され、薬剤製剤での一般的使用のために、それは現在あまりに高価である。脂肪酸などの規定された疎水性アシル基を有する他の均一なカルジオリピン種は、現在市販されていないか、少量で、かなりの価格でのみ利用できる。
【０００６】
カルジオリピンの利用性が限定されているのは、部分的には、その合成方法が面倒で、時間がかかり、高価であるという事実による。一般的に、それらは、置換グリセロールの種々の誘導体から出発する分子の個々のパートのステップワイズ構築と複数の中間体精製を含む。公知の合成方法は主に２群に分類される：（ａ）ホスホリル化剤を用いて、２−Ｏ−保護グリセロールの１級ヒドロキシル基を、１，２−Ｏ−ジアシル−ｓｎ−グリセロールと結合させること、及び（ｂ）２，４，６−トリイソプロピルベンゼンスルホニル クロリド（ＴＰＳ）とピリジンの存在下、２−Ｏ−保護グリセロールの両方の１級ヒドロキシル基とホスファチジン酸での縮合。
【０００７】
Ｒａｍｉｒｅｚ ｅｔ ａｌ．（Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，７６９−７７０（１９７６）；Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ，３３：５９９−６０８（１９７７））は、トリエチルアミンの存在下、１，２−Ｏ−ジアシルグリセロールが、ジ（１，２−ジメチルエテニレン）ピロホスフェートによってリン酸化されるカルジオリピンの合成方法を記載する。生成物を、アミン触媒存在下、２−ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル クロリド グリセロールと反応させ、カルジオリピンのホスホトリエステル形態を産生する。アセトニルホスフェート保護基は温和な塩基性条件下除去され、ホスホジエステルが得られ、シリル基は温和な酸性条件下除去される。この合成法は、かなりのトランスエステル化反応を受け、それは、所望のカルジオリピンに加えて、多くの副産物を産生する。
【０００８】
Ｄｕｒａｌｓｋｉ ｅｔ ａｌ．（Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ Ｌｅｔｔ．，３９：１６０７−１６１０（１９９８））は、４，４’−ジメトキシトリチルクロリドとの反応によるグリセロールの１級ヒドロキシル基の保護を記載する。次いで、２−ヒドロキシル基は、ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル クロリドとの反応によって保護され、トリチル基は、ｐ−トルエンスルホン酸による処理によって除去された。ジアシルグリセロールの１級ヒドロキシル基は、二官能性リン酸化剤２−クロロフェニルホスホロジ−（１，２，４−トリアゾリド）を用いてリン酸化され（２−クロロフェニルホスホロジ−（１，２，４−トリアゾリド）は、トリエチルアミン存在下、１，２，４−トリアゾールと２−クロロフェニル ホスホジクロリデートを含む混合物からｉｎ ｓｉｔｕで産生された）、２，４，６−トリイソプロピルスルホニル クロリドとＮ−メチルイミダゾール存在下、シリル化グリセロールと反応させた。十分に保護されたカルジオリピンは、２−ニトロベンズアルドオキシムとＮ，Ｎ，Ｎ，Ｎ−テトラメチルグアニジンによる処理によって脱保護され、シリル基は、酢酸による処理によって除去された。
【０００９】
Ｓａｕｎｄｅｒｓ ａｎｄ Ｓｃｈｗａｒｚ（Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．，８８：３８４４−３８４７（１９６６））は、オキシ塩化リンによって２，３−ジ−Ｏ−ステアロイル−Ｄ−グリセロールをリン酸化し、２−Ｏ−ベンジルグリセロールを加え、接触水素化によってベンジル基を除去することによるカルジオリピンの製造を記載した。生成物をケイ酸クロマトグラフィーによって精製した。この方法は後に研究者（Ｒａｍｉｒｅｚ ｅｔ ａｌ．，Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ，３３：５９９−６０８（１９７７））によって疑問視された。研究者は、それを使用してカルジオリピンを成功裏に得ることができなかった。
【００１０】
Ｍｉｓｈｉｎａ ｅｔ ａｌ．（Ｂｉｏｏｒｇ．Ｋｈｉｍ．，１１：９９２−９９４（１９８５）；Ｂｉｏｏｒｇ．Ｋｈｉｍ．，１３：１１１０−１１１５（１９８７））は、オレイックイミダゾールを用い、ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリンをアシル化し、次いで、それを、キャベツホスホリパーゼＤによって切断し、１，２−ジオレオイル−ｓｎ−グリセロ−３−リン酸を得た。この化合物は、２，４，６−トリイソプロピルベンゼンスルホニル クロリドを含有するピリジン中で２−Ｏ−ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルグリセロールと縮合され、保護されたカルジオリピンが得られ、それを、標準的方法によって脱保護し、カルジオリピンが産生された。
【００１１】
Ｓｔｅｐａｎｏｖ ｅｔ ａｌ．（Ｚｈ．Ｏｒｇ．Ｋｈｉｍ，２０：９８５−９８８（１９８４））は、縮合剤２，４，６−トリイソプロピルベンゼンスルホニル クロリドを用いての、ジアシルホスファチジン酸と２−Ｏ−ベンジルグリセロールの縮合を記載する。
【００１２】
Ｋｅａｎａ ｅｔ ａｌ．（Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．，５１：２２９７−２２９９（１９８６））は、２，４，６−トリイソプロピルベンゼンスルホニル クロリドを用いて、ピリジン中、ホスファチジルグリセロール（ＰＧ）メチルエステルとホスファチジン酸（ＰＡ）の結合を記載する。結合生成物のモノメチルエステルを、ジアゾメタンでメチル化し、カルジオリピンのジメチルエステルを得、それを、ＮａＩで脱メチル化し、カルジオリピンを得た。
【００１３】
カルジオリピンはまた、ジアシルグリセロリン酸ベンジルエステルの銀塩と１，３−ジヨードプロパノールベンジルエーテルもしくは１，３−ジヨードプロパノール ｔ−ブチルエーテルとの反応によって産生された。例えば、Ｄｅ Ｈａａｓ ａｎｄ ｖａｎ Ｄｅｅｎｅｎ（Ｂｉｏｃｈｉｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ａｃｔａ，１１６：１１４−１２４（１９６６））は、複数工程順序を用いて、全体収率２６％でカルジオリピンを得た。２：１モル比での銀 ベンジルジアシル−Ｌ−α−グリセロホスフェートと２−ｔｅｒｔ−ブトキシ−１，３−ジヨードグリセロールとの反応によってトリエステルが得られ、それを精製し、脱保護して、カルジオリピンを得た。ベンジル保護基は、ヨウ化バリウムによる処理によってトリエステル中間体から除去され、ｔｅｒｔ−ブチル−エーテル基は、クロロホルム中、無水ＨＣｌによる処理によって除去された。同様に、Ｉｎｏｕｅ ｅｔ ａｌ．（Ｃｈｅｍ．Ｐｈａｒｍ．Ｂｕｌｌ．，１１：１１５０−１１５６（１９６３））は、カルジオリピンの１，３−プロパンジオールアナログの製造方法を記載したが、そこでは、ホスホジエステル結合は、１，３−ジヨードプロパンと銀 ベンジルジアシル−Ｌ−α−グリセロ−ホスフェートとの反応、及びヨウ化ナトリウムによるベンジル保護基の除去によって産生された。これらの後のスキームは、少量のカルジオリピンの製造に適したが、関与する多数工程、中間体の注意深い精製の必要性、非常に光感受性の銀塩中間体と不安定なヨード中間体の使用のために、大量のルーチンな製造には魅力がない。
【００１４】
コスト的により有効な方法で、大量の、多様で均一なカルジオリピン種を製造するために使用できる新規合成方法が必要である。このような方法は、広範な種々の均一なカルジオリピン種の利用性を増し、現在可能であるよりもより規定された組成を有するであろう活性剤の新規リポソーム製剤の開発のために利用できる脂質を多様化しよう。
【００１５】
本発明は、このような方法と組成物を提供する。本発明のこれらの利点や他の利点並びに更なる本発明の性質は、本明細書記載の発明の説明から明らかとなろう。
【発明の開示】
【課題を解決するための手段】
【００１６】
発明の概要
本発明は、新規カルジオリピン分子とアナログ、並びに種々の鎖長及び飽和／不飽和を有する異なる脂肪酸及び／又はアルキル鎖を有するカルジオリピンの新規合成経路を提供する。カルジオリピン変異体を含むカルジオリピンの新規形態を製造するために、該反応スキームが使用できる。本方法によって製造されるカルジオリピンは、遺伝子や遺伝子ベクター、アンチセンス分子（例えば、オリゴヌクレオチド）、蛋白質やペプチド、蛋白質もしくは化学薬剤（例えば、疎水性薬剤又は親水性薬剤）、又は診断薬などの活性剤をまた含むことができる（例えば、リポソームと複合体形成する、又はリポソーム内に捕捉される）リポソーム、エマルション、又は複合体（例えば、薬剤複合体）に便利にも組み込むことができる。このようなリポソームや他の製剤は、疾患の治療、あるいは診断アッセイ及び／又は分析アッセイで使用できる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１７】
本発明は、カルジオリピン分子（そのアナログ又は誘導体を含む）を提供する。１実施態様では、カルジオリピン分子は、以下の一般式：
【００１８】
【化１】
【００１９】
（式中、Ｚ１及びＺ２は、同一又は異なって、−Ｏ−Ｃ（Ｏ）−，−Ｏ−，−Ｓ−，−ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−などであり；
Ｒ１及びＲ２は、同一又は異なって、Ｈ、又は飽和もしくは不飽和アルキル基のいずれかであり；
Ｒ３は（ＣＨ２）ｎであり、及びｎ＝０−１０；
Ｒ４は、水素、アルキル、置換アルキル、シクロアルキル、置換シクロアルキル、ペプチド、ジペプチド、ポリペプチド、蛋白質、グルコース、マンノース、ガラクトース、多糖などの炭水化物など、複素環、ヌクレオシド、ポリヌクレオチドなどであり；
Ｘはカチオンであり、最も好ましくは、水素、アンモニウム、ナトリウム、カリウム、カルシウム、バリウムイオンなどの非毒性カチオンである）
の構造を有する。
【００２０】
好適実施態様では、カルジオリピンアナログは、式ＩＩ
【００２１】
【化２】
【００２２】
又は式ＩＩＩ
【００２３】
【化３】
【００２４】
を有しうる。
【００２５】
本発明はまた、以下の一般式：
【００２６】
【化４】
【００２７】
（式中、Ｚ１及びＺ２は、同一又は異なって、−Ｏ−Ｃ（Ｏ）−，−Ｏ−，−Ｓ−，−ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−などであり；
Ｒ１及びＲ２は、同一又は異なって、Ｈ、又は飽和もしくは不飽和アルキル基であり；
Ｒ３は（ＣＨ２）ｎであり、及びｎ＝０−１０；
Ｒ４は、水素、アルキル、置換アルキル、シクロアルキル、置換シクロアルキル、ペプチド、ジペプチド、ポリペプチド、蛋白質、グルコース、マンノース、ガラクトース、多糖などの炭水化物など、複素環、ヌクレオシド、ポリヌクレオチドなどであり；
Ｒ５は、リンカーであり、それは、アルキル、置換アルキル、シクロアルキル、置換シクロアルキル、アルキルオキシ、約１〜約５００個（そして、少なくとも約１０アルキルオキシマー（少なくとも約５０アルキルオキシマーなど）もしくは少なくとも約１００アルキルオキシマー（少なくとも約２００アルキルオキシマーもしくは少なくとも約３００アルキルオキシマー又は少なくとも約４００アルキルオキシマーなど）を有しうる）のアルキルオキシマーを含有するペギレーテッド（ｐｅｇｙｌａｔｅｄ）エーテルなどのポリアルキルオキシ、置換ポリアルキルオキシなど、ペプチド、ジペプチド、ポリペプチド、蛋白質、グルコース、マンノース、ガラクトース、多糖などの炭水化物などを含み得る；
Ｘはカチオンであり、最も好ましくは、水素、アンモニウム、ナトリウム、カリウム、カルシウム、バリウムイオンなど、などの非毒性カチオンである）の構造を有するカルジオリピンアナログを含む組成物も提供する。
【００２８】
最も好ましい実施態様では、Ｚ１とＺ２は−Ｏ−Ｃ（Ｏ）−であり、Ｒ１とＲ２は同じでＣ４〜Ｃ３４の飽和及び／又は不飽和アルキル基、より好ましくは、１４〜２４炭素原子（約１６〜約２０炭素原子など）を有するものである。用語「アルキル」は、飽和又は不飽和の直鎖及び分岐鎖の炭化水素部分を包含する。用語「置換アルキル」は、ヒドロキシ、アルコキシ（低級アルキル基の）、メルカプト（低級アルキル基の）、シクロアルキル、置換シクロアルキル、ハロゲン、シアノ、ニトロ、アミノ、アミド、イミノ、チオ、−Ｃ（Ｏ）Ｈ、アシル、オキシアシル、カルボキシルなどから選択される１つ以上の置換基を更に担持するアルキル基を含む。Ｒ３は最も好ましくはＣＨ２である。Ｒ４は好ましくは水素である。Ｘは最も好ましくは水素又はアンモニウムイオンであり、それは、図１に示されるカルジオリピンの一般構造を与える。
【００２９】
カルジオリピン分子及びアナログは、任意の所望する方法によって製造できる。カルジオリピン分子又はそのアナログを製造するために本発明によって提供される１つの好適な方法は、Ｎ，Ｎ’−ジシクロヘキシルカルボジイミド又はＮ，Ｎ’−カルボニルジイミダゾールであるカップリング剤の存在下、ホスファチジン酸と２−Ｏ−保護グリセロールを反応させることを含む。本発明の別の好適実施態様は、トリイソプロピルベンゼンスルホニル クロリド、又はＮ，Ｎ’−ジシクロヘキシルカルボジイミド又はＮ，Ｎ’−カルボニルジイミダゾールであるカップリング剤の存在下、ホスファチジン酸とグリセロールを反応させることを含むカルジオリピン又はそのアナログの製造方法である。
【００３０】
本発明の化合物などのカルジオリピン及びそのアナログの製造の為の適切な方法（該方法は、本発明の１実施態様である）は、ジクロロホスフェート又はＮ，Ｎ−ジイソプロピルメチルホスホンアミディック クロリドのいずれかであるカップリング剤の存在下、式Ｖ
【００３１】
【化５】
【００３２】
（式中、Ｚ１、Ｚ２、Ｒ１、Ｒ２及びＲ３は上記の通りである）のアルコールと、２−Ｏ−保護グリセロール又は２−Ｏ−置換グリセロールを反応させることを含む。この方法は、式Ｉ、ＩＩ及びＩＩＩのカルジオリピンの製造に特に適切である。式ＩＩのカルジオリピンを製造するのに特に適した本発明の方法の別の実施態様は、ジクロロホスフェート又はＮ，Ｎ−ジイソプロピルメチルホスホンアミディック クロリドのいずれかであるカップリング剤の存在下、１，２−Ｏ−ジアシルグリセロールと２−Ｏ−保護グリセロールを反応させることを含む。式ＩＩＩのカルジオリピンエーテルアナログの製造に特に好適な本発明の方法の別の実施態様は、ジクロロホスフェート又はＮ，Ｎ−ジイソプロピルメチルホスホンアミディック クロリドのいずれかであるカップリング剤の存在下、１，２−Ｏ−ジアルキルグリセロールと２−Ｏ−保護グリセロールとを反応させることを含む。
【００３３】
本発明の１実施態様である、カルジオリピン分子とそのアナログを合成する別の方法は、ジクロロホスフェート又はＮ，Ｎ−ジイソプロピルメチルホスホンアミディック クロリドのいずれかであるカップリング剤の存在下、式Ｖ（上記）のアルコールと式ＶＩ
【００３４】
【化６】
【００３５】
（式中、Ｒ４及びＲ５は上記定義の通りである）のジオールとを反応させることを含む。この方法は、式ＩＶの分子を製造するのに特に適している。
【００３６】
本発明の合成方法での使用に好適なカップリング剤は、式ＶＩＩ
【００３７】
【化７】
【００３８】
（式中、Ｗは、メチル、エチル、イソプロピル、ｔ−ブチル、アリル、２−置換エチル、２，２，２−トリブロモエチルなどのハロエチルを含むアルキル基又は置換アルキル基；ベンジル基又は置換ベンジル基；フェニル基、又は２−クロロフェニル、４−クロロフェニル及び２，４−ジクロロフェニルなどの置換フェニル基；又は任意の他の除去可能保護基である）のジクロロホスフェートである。本発明の合成方法の文脈で使用される別の好適カップリング剤は、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルメチルホスホンアミディック クロリドである。
【００３９】
本発明の１実施態様を図２に示すが、図２は、カルジオリピン合成の新規アプローチを描く。この方法では、リン酸化試薬であるｏ−クロロフェニル ジクロロホスフェート（ＣＰＤＣＰ）３を、１，２−Ｏ−ジアシルグリセロール１及び２−Ｏ−保護グリセロール２（Ｙはヒドロキシ保護基、好ましくは、ベンジル基など、又はシリル保護基、例えば、ｔ−ブチルジメチルシリルなど）を、塩基（例えば、ピリジンなど）の存在下、不活性溶媒（例えば、ジクロロメタンなど）中、反応させ、カルジオリピン前駆体４を得る。ｏ−クロロフェニルの除去は、４と、２−ピリジンアルドオキシム（ＰＡＯ）及び１，１，３，３−テトラメチルグアニジン（ＴＭＧ）との反応、次いで、水酸化アンモニウム水溶液による処理によって達成でき、カルジオリピン前駆体５のアンモニウム塩を得ることができる。２−ピリジンアルドオキシム（ＰＡＯ）の他に、ＴＭＧ存在下、２−ニトロベンズアルドオキシムなどの他の試薬が、ｏ−クロロフェニル基の除去のために使用できる。
【００４０】
カルジオリピン６を与えるための脱保護は、保護基の性質に依存する方法によって達成できる。例えば、ベンジル基は、パラジウム触媒の存在下、水素化によって除去できる。ｔ−ブチルジメチルシリル（ＴＢＤＭＳ）基は、酸性条件下、脱保護できる。ｐ−メトキシベンジル（ＰＭＢ）基は、２，３−ジクロロ−５，６−ジシアノ−１，４−ベンゾキノン（ＤＤＱ）による処理によって脱保護できる。
【００４１】
本明細書で使用する用語「ヒドロキシ保護基」は、合成方法中、非所望の反応に対しヒドロキシ基を保護するために使用する基を指す。通常使用されるヒドロキシ保護基は、Ｔ．Ｗ．Ｇｒｅｅｎｅ ａｎｄ Ｐ．Ｇ．Ｍ．Ｗｕｔｓ，Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ Ｇｒｏｕｐｓ ｉｎ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，３ｒｄ ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ（１９９９）に開示されている。このようなヒドロキシ保護基として、メチルエーテル；メトキシメチル、ベンジルオキシメチル、ｐ−メトキシベンジルオキシメチル、ｔ−ブトキシメチル、２−メトキシエトキシメチル、テトラヒドロピラニル、テトラヒドロフラニルエーテルなどを含む置換メチルエーテル；１−エトキシエチル、１−メチル−１−メトキシエチル、１−メチル−１−ベンジルオキシエチル、アリル、ｔ−ブチルエーテルなどを含む置換エチルエーテル；ベンジルエーテル；ｐ−メトキシベンジル、３，４−ジメトキシベンジル エーテルなどを含む置換ベンジルエーテル；トリメチルシリル、トリエチルシリル、ジメチルイソプロピルシリル、ジエチルイソプロピルシリル、ｔ−ブチルジメチルシリル エーテルなどを含むシリルエーテル；ホルメート、アセテート、クロロアセテート、ジクロロアセテート、トリクロロアセテート、メトキシアセテート、フェノキシアセテートなどを含むエステル；及び、カーボネートが挙げられる。
【００４２】
上記発明は、カルジオリピンの製造のための単純で効率的な方法である。合成の鍵工程は、リン酸化カップリング反応である。このホスホトリエステルアプローチで、ＣＰＤＣＰを用いて、順次、直接的な様式でアルコールをリン酸化し、直接的に、良好収率で中間体ホスフェートトリエステルを提供する。本方法は、カルジオリピンコア構造を構築するための、単純で、コスト的に有効な１ポット方法である。
【００４３】
本発明のこの新規なジクロロホスフェートカップリングプロトコルは、伝統的なホスホロジ（１，２，４−トリアゾリド）又はホスホロビス（ヒドロキシベンゾトリアゾール）アプローチ（Ｒａｍｉｒｅｚ ｅｔ ａｌ．，Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，４４９−４８９（１９８５）；ｖａｎ Ｂｏｅｃｋｅｌ ｅｔ ａｌ．，Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ Ｌｅｔｔ．，２１：３７０５−３７０８（１９８０）；ｖａｎ Ｂｏｅｃｋｅｌ ｅｔ ａｌ．，Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，３９９−４０２（１９８２））よりも優れている。１局面で、ホスホロジ（１，２，４−トリアゾリド）又はホスホロビス（ヒドロキシベンゾトリアゾール）は、対応するジクロロホスフェア（ｄｉｃｈｌｏｒｏｐｈｏｓｐｈａｒｅ）から製造される必要がある。更なる局面で、ホスホロジ（１，２，４−トリアゾリド）アプローチは、大部分の場合、第２のアルコールとの縮合反応において、２，４，６−トリイソプロピルベンゼンスルホニル−（３−ニトロ−１，２，４−トリアゾール）又は２，４，６−トリイソプロピルベンゼンスルホニル クロリドなどの更なる活性化剤を好ましくは使用する。
【００４４】
図３で表される本発明の別の実施態様は、新規リン酸化剤であるクロロホスホルアミダイトを用いて、１，２−二置換グリセロールと２−保護グリセロールとのカップリングを含む。（Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルメチルホスホンアミディック クロリド７は、イノシトールリン脂質の合成に用いられてきたが（Ｂｒｕｚｉｋ ｅｔ ａｌ．，Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ Ｌｅｔｔ．，３６：２４１５−２４１８（１９９５）、それは、カルジオリピンの合成には使用されてこなかった。）この方法では、コア構造を構築するために、カップリング反応でクロロホスホルアミダイト７を用いる。このスキームでは、１，２−Ｏ−ジアシルグリセロール１は次いで、塩基（例えば、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミンなど）の存在下、不活性溶媒中（例えば、ジクロロメタンなど）、試薬７と反応し、次いで、テトラゾールなどの活性化剤の存在下、２−Ｏ−保護グリセロール２（Ｙはヒドロキシ保護基、好ましくは、ベンジル基など）と反応し、続いて、ｍ−クロロペルオキシ安息香酸（ＭＣＰＢＡ）によって酸化され、保護されたカルジオリピン前駆体８を得る。次いで、保護された前駆体８のメチル基は、ＮａＩとの反応によって除去され、カルジオリピン前駆体のナトリウム塩が産生され、次いで、希ＨＣｌによる処理、次いで、１０％水酸化アンモニウムによって、アンモニウム塩に変換される。カルジオリピンを与える脱保護は、上記のように行うことができる。
【００４５】
図４で表す本発明の別の実施態様では、カルジオリピンのエーテルアナログが産生されるが、そこでは、アルキル基が、カルジオリピングリセロールの側鎖のアシル基に置き換わる。このスキームによれば、１，２−Ｏ−ジアルキル−ｓｎ−グリセロール９は、クロロホスホルアミダイト７の存在下、それと、２−Ｏ−保護グリセロール２とをカップリングするように反応し、中間体１０を提供する。図３で記載したのと同様の方法によって、２−ブタノン中、ＮａＩによるこの中間体１０の脱メチル化は、保護されたカルジオリピンアナログ１１を与え、それは、脱保護で、カルジオリピンのエーテルアナログ１２を与える。
【００４６】
本発明の別の実施態様は図５で表される。この方法では、ホスファチジン酸（ＰＡ）１３は、Ｎ，Ｎ’−ジシクロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣ）又はＮ，Ｎ’−カルボニルイミダゾール（ＣＤＩ）などの縮合剤の存在下、不活性溶媒（例えば、ジクロロメタンなど）中、２−Ｏ−保護グリセロール２（Ｙはヒドロキシ保護基、好ましくは、ベンジル基など、又はシリル保護基、例えば、ｔ−ブチルジメチルシリルなど）と反応し、次いで、水酸化アンモニウム水溶液による処理によって、カルジオリピン前駆体５が形成する。脱保護は、上記のようにカルジオリピン６を与える。
【００４７】
本発明の別の実施態様は図６で表される。この方法では、保護基無しのグリセロール１４が、縮合反応で反応物として直接的に使用される。グリセロール１４の１級アルコールの選択的リン酸化は、トリイソプロピルベンゼンスルホニル クロリド（ＴＰＳＣｌ）とピリジンの存在下、ホスファチジン酸（ＰＡ）１３との縮合によって起こり、次いで、水酸化アンモニウム水溶液による処理によってカルジオリピン６が与えられる。ＤＣＣ、ＣＤＩなどの他のカップリング試薬はまた、カルジオリピンのこの１工程合成で使用できる。
【００４８】
本発明の別の実施態様は図７で表される。この方法では、コア構造を構築するために、ジクロロホスフェート１５を、カップリング反応で使用する。このスキームでは、１，２−ジアシルグリセロール１と２−保護グリセロール２とは、ピリジンなどの塩基の存在下、ジクロロホスフェート１５と反応し、保護されたカルジオリピン前駆体８を与える。次いで、保護されたカルジオリピン８のメチル基は、ＮａＩとの反応によって除去され、カルジオリピン前駆体のナトリウム塩が産生され、次いで、希ＨＣｌ、次いで１０％水酸化アンモニウムによる処理によってアンモニウム塩５に変換される。成熟カルジオリピンを与えるための脱保護は上記のように行うことができる。
【００４９】
本発明の別の実施態様は図８で表される。カルジオリピンのエーテルアナログが生じるこの方法において、コア構造を構築するために、ジクロロホスフェート１５を、カップリング反応で使用する。このスキームでは、１，２−ジアルキル−ｓｎ−グリセロール９と２−保護グリセロール２とは、ジクロロホスフェート１５と反応し、保護された中間体１０を与える。次いで、ＮａＩとの反応及び希ＨＣｌによる処理、次いで１０％水酸化アンモニウムによる処理によって中間体１０のメチル基は除去され保護されたアンモニウム塩１１が産生される。成熟カルジオリピンを与えるための脱保護は上記のように行うことができる。
【００５０】
記載された方法を用いて、種々の新規カルジオリピン種が製造できる。例えば、Ｒ１及び／又はＲ２置換基などの任意の所望の脂肪酸鎖を含むカルジオリピンとそのアナログを製造するために、該方法を使用できる。好適な脂肪酸は、約Ｃ４〜約Ｃ３４、好ましくは約Ｃ１４〜約Ｃ２４の炭素鎖長さの範囲であり、とりわけ、テトラン酸（Ｃ４：０）、ペンタン酸（Ｃ５：０）、ヘキサン酸（Ｃ６：０）、ヘプタン酸（Ｃ７：０）、オクタン酸（Ｃ８：０）、ノナン酸（Ｃ９：０）、デカン酸（Ｃ１０：０）、ウンデカン酸（Ｃ１１：０）、ドデカン酸（Ｃ１２：０）、トリデカン酸（１３：０）、テトラデカン酸（Ｃ１４：０）、ペンタデカン酸（Ｃ１５：０）、ヘキサデカン酸（Ｃ１６：０）、ヘプタデカン酸（Ｃ１７：０）、オクタデカン酸（Ｃ１８：０）、ノナデカン酸（Ｃ１９：０）、エイコサン酸（Ｃ２０：０）、ヘンエイコサン酸（Ｃ２１：０）、ドコサン酸（Ｃ２２：０）、トリコサン酸（Ｃ２３：０）、テトラコサン酸（Ｃ２４：０）、１０−ウンデカン酸（Ｃ１１：１）、１１−ドデカン酸（Ｃ１２：１）、１２−トリデセン酸（Ｃ１３：１）、ミリストレイン酸（Ｃ１４：１）、１０−ペンタデセン酸（Ｃ１５：１）、パルミトレイン酸（Ｃ１６：１）、オレイン酸（Ｃ１８：１）、リノール酸（Ｃ１８：２）、リノレン酸（Ｃ１８：３）、エイコスジエン酸（Ｃ２０：２）、エイコストリエン酸（Ｃ２０：３）、アラキドン酸（シス−５，８，１１，１４−エイコサテトラエン酸）、及びシス−５，８，１１，１４，１７−エイコサペンタエン酸が挙げられる。エーテルアナログに関し、アルキル鎖はまた、約Ｃ４〜約Ｃ３４、好ましくは約Ｃ１４〜約Ｃ２４の炭素鎖長さの範囲であろう。他の脂肪酸鎖も、Ｒ１及び／又はＲ２置換基として使用できる。このようなものの例として、メタン酸（又は、ギ酸）、エタン酸（又は、酢酸）、プロパン酸（又は、プロピオン酸）、ブタン酸（又は、酪酸）、ヘキサコサン酸（又は、セロチン酸）、オクタコサン酸（又は、モンタン酸）、トリアコンタン酸（又は、メリッシン酸）、ドトリアコンタン酸（又は、ラッセル酸）、テトラトリアコンタン酸（又は、ゲダ酸）、ペンタントリアコンタン酸（又は、セロプラスチン酸）などの飽和脂肪酸；ｔｒａｎｓ−２−ブテン酸（又は、クロトン酸）、ｃｉｓ−２−ブテン酸（又は、イソクロテン酸）、２−ヘキセン酸（又は、イソヒドロソルビン酸）、４−デカン酸（又は、トウハク酸（ｏｂｔｕｓｉｌｉｃ ａｃｉｄ）、９−デカノン酸（又は、カプロレイック アシッド）、４−ドデセン酸（又は、リンデリック アシッド）、５−ドデセン酸（又は、デンティセティック アシッド）、９−ドデセン酸（又は、ラウロレイン酸）、４−テトラデセン酸（又は、ツズ酸（ｔｓｕｚｕｉｃ ａｃｉｄ））、５−テトラデセン酸（又は、フィセテリック アシッド）、６−オクタデセン酸（又は、ペトロテリン酸）、ｔｒａｎｓ−オクタデセン酸（又は、エライジン酸）、ｔｒａｎｓ−１１−オクタデセン酸（又は、ワクシニック アシッド）、９−エイコセン酸（又は、ガドレイン酸）、１１−エイコセン酸（又は、ゴンド酸）、１１−ドコセン酸（又は、セトレイック アシッド）、１３−デコセン酸（又は、エルカ酸）、１５−テトラコセン酸（又は、ネルボン酸）、１７−ヘキサコセン酸（又は、キシメニック アシッド）、２１−トリアコンテン酸（又は、ルメクエイック アシッド）などのモノエテェン不飽和脂肪酸；２，４−ペンタジエン酸（又は、β−ビニルアクリル酸）、２，４−ヘキサジエン酸（又は、ソルビン酸）、２，４−デカジエン酸（又は、スチリンジック アシッド）、２，４−ドデカジエン酸、９，１２−ヘキサデカジエン酸、ｃｉｓ−９，ｃｉｓ−１２−オクタデカジエン酸（又は、α−リノール酸）、ｔｒａｎｓ−９，ｔｒａｎｓ−１２−オクタデカジエン酸（又は、リノールライディック アシッド）、ｔｒａｎｓ−１０−ｔｒａｎｓ−１２−オクタデカジエン酸、１１，１４−エイコサジエン酸、１３，１６−ドコサジエン酸、１７，２０−ヘキサコサジエン酸などのジエン不飽和脂肪酸；６，１０，１４−ヘキサデカトリエン酸（又は、ヒラゴニック アシッド）、７，１０，１３−ヘキサデカトリエン酸、ｃｉｓ−６，ｃｉｓ−９，ｃｉｓ−１２−オクタデカトリアン酸（又は、γ−リノレン酸）、ｔｒａｎｓ−８，ｔｒａｎｓ，１０，ｃｉｓ−１２−オクタデカトリエン酸（又は、α−カレンディック アシッド）、ｔｒａｎｓ−８，ｔｒａｎｓ−１０，ｔｒａｎｓ−１２オクタデカトリエン酸（又は、β−カレンディック アシッド）、ｃｉｓ−８，ｔｒａｎｓ−１０，ｃｉｓ−１２−オクタデカトリエン酸、ｃｉｓ−９，ｃｉｓ−１２，ｃｉｓ−１５−オクタデカトリエン酸（又は、α−リノレン酸）、ｔｒａｎｓ−９，ｔｒａｎｓ−１２，ｔｒａｎｓ−１５−オクタデカトリエン酸（又は、リノレンライディック アシッド）、ｃｉｓ−９，ｔｒａｎｓ−１１，ｔｒａｎｓ−１３−オクタデカトリエン酸（又は、α−エレオステアリック アシッド）、ｔｒａｎｓ−９，ｔｒａｎｓ−１１，ｔｒａｎｓ−１３−オクタデカトリエン酸（又は、β−エレオステアリック アシッド）、ｃｉｓ−９，ｔｒａｎｓ−１１，ｃｉｓ−１３−オクタデカトリエン酸（又は、プニシック アシッド）、ｔｒａｎｓ−９，ｔｒａｎｓ−１１，ｔｒａｎｓ−１３−オクタデカトリエン酸、５，８，１１−エイコサトリエン酸、８，１１，１４−エイコサトリエン酸などのトリエン不飽和脂肪酸；４，８，１１，１４−ヘキサデカテトラエン酸、６，９，１２，１５−ヘキサデカテトラエン酸、４，８，１２，１５−オクタデカテトラエン酸（又は、モロクティック アシッド）、６，９，１２，１５−オクタデカテトラエン酸、９，１１，１３，１５−オクタデカテトラエン酸（又は、α−もしくはβ−パリナリック アシッド）、９，１２，１５，１８−オクタデカテトラエン酸、４，８，１２，１６−エイコサテトラエン酸、６，１０，１４，１８−エイコサテトラエン酸、４，７，１０，１３−ドコサテトラエン酸、７，１０，１３，１６−ドコサテトラエン酸、８，１２，１６，１９−ドコサテトラエン酸などのテトラエン不飽和脂肪酸；４，８，１２，１５，１８−エイコサペンタエン酸（又は、チムノドニック アシッド）、４，７，１０，１３，１６−ドコサペンタエン酸、４，８，１２，１５，１９−ドコサペンタエン酸（又は、クルパノドニック アシッド）、７，１０，１３，１６，１９−ドコサペンタエン酸、４，７，１０，１３，１６，１９−ドコサヘキサエン酸、４，８，１２，１５，１８，２１−テトラコサヘキサエン酸（又は、ニシニック アシッド）などのペンタ−及びヘキサ−エン不飽和脂肪酸；３−メチルブタン酸（又は、イソ吉草酸）、ｄ−６−メチルオクタン酸、８−メチルデカン酸、１０−メチルウンデカン酸（又は、イソラウリン酸）、ｄ−１０−メチルドデカン酸、１１−メチルドデカン酸（又は、イソウンデシリック アシッド）、１２−メチルトリデカン酸（又は、イソミリスチン酸）、ｄ−１２−メチルテトラデカン酸、１３−メチルテトラデカン酸（又は、イソペンタデシリック アシッド）、１４−メチルペンタデカン酸（又は、イソパルミチン酸）、ｄ−１４−メチルヘキサデカン酸、１５−メチルヘキサデカン酸、１０−メチルヘプタデカン酸、１６−メチルヘプタデカン酸（又は、イソステアリン酸）、ｔ−Ｄ−１０−メチルオクタデカン酸（又は、ツベクロステアリン酸）、ｄ−１６−メチルオクタデカン酸、１８−メチルノナデカン酸（又は、イソアラキドン酸）、ｄ−１８−メチルエイコサン酸、２０−メチルヘンエイコサン酸（又は、イソベヘーニック アシッド）、ｄ−２０−メチルドコサン酸、２２−メチルトリコサン酸（又は、イソリグノセリック アシッド）、ｄ−２２−メチルテトラコサン酸、２４−メチルペンタコサン酸（又は、イソセロティック アシッド）、ｄ−２４−メチルヘキサコサン酸、２６−メチルヘプタコサン酸（又は、イソモナタニック アシッド）、ｄ−２８−メチルトリアコンタン酸、２，４，６−（Ｄ）−トリメチルオクタコサン酸（又は、ミコセラニック アシッドもしくはミコセロシック アシッド）、２−メチル−ｃｉｓ−２−ブテン酸（アンゲリック アシッド）、２−メチル−ｔｒａｎｓ−２−ブテン酸（又は、チグリック アシッド）、４−メチル−３−ペンテン酸（又は、ピロテレビック アシッド）、ｄ−２，４（Ｌ），６（Ｌ）−トリメチル−ｔｒａｎｓ−２−テトラコセン酸（又は、Ｃ２７−フチエノイック アシッドもしくはミコリペニック アシッド）などの分岐鎖脂肪酸が挙げられる。
【００５１】
本明細書記載のカルジオリピン分子、及び本発明の方法によって産生されるカルジオリピン分子は、脂質製剤中で使用できる。好適な製剤又は組成物は、本発明のカルジオリピンアナログを含むリポソーム組成物である。本発明のカルジオリピンを含む、複合体、エマルション、及び他の製剤も、本発明の範囲内である。本発明のこのような製剤は、任意の適切な技術によって製造できる。本発明の合成カルジオリピンに加えて、リポソーム組成物、複合体、エマルションなどは、安定化剤、吸収増進剤、抗酸化剤、リン脂質、生分解性ポリマー、及び他の成分の中でとりわけ医薬的に活性な剤を含み得る。実施態様の一部では、本発明の組成物、特にリポソーム組成物はまた、細胞レセプターを認識する抗体（又はそのフラグメント）又はリガンドなどの、特異的基質と結合する炭水化物又は蛋白質又は他のリガンドなどの標的指向剤を含むことが好適である。このような薬剤（炭水化物、あるいは、細胞レセプターへの抗体などの、抗体、抗体フラグメント、ペプチド、ペプチドホルモン、レセプターリガンド、及びそれらの混合物からなる蛋白質の群から選択される１種以上の蛋白質）を含めることは、リポソームを、所定の組織又は細胞型へ向かわせることを容易にしうる。
【００５２】
ホスファチジルコリン、上記方法によって製造されるカルジオリピン、コレステロール及びα−トコフェロールなどの親油性のリポソーム形成成分は、適切な溶媒中、又は溶媒と乾燥の組合せ中に溶解又は分散できる。適切な溶媒として、任意の非極性又は僅かに極性の溶媒、例えば、医薬として許容できない残渣を残さずに蒸留できる、ブタノール、エタノール、メタノール、クロロホルム、又はアセトンが挙げられる。乾燥は、凍結乾燥などの任意の適切な手段でありえ、凍結乾燥の間、凍結保護物質（例えば、トレハロースなどの保護糖）を用いることも好適である。親水性成分は、水を含む極性溶媒に溶解できる。
【００５３】
リポソームは、乾燥された親油性成分を親水性混合物と混合することによって形成できる。極性溶液を、乾燥脂質フィルムと混合することは、混合物を強くホモジナイズする任意の手段によってでありうる。ホモジナイゼーションは、ボルテックス、磁気撹拌及び／又は音波処理によって行うことができる。
【００５４】
リポソームはまた、活性剤を含み得、本発明は、リポソーム中に活性剤を保持する方法を提供する。方法は、本明細書記載のカルジオリピン又はカルジオリピンアナログを製造し、リポソーム中に、カルジオリピン又はカルジオリピンアナログ及び活性剤を含めることを含む。活性剤は、脂質（本発明のカルジオリピンなど）の一部と複合体形成するようになり得、又は活性剤は、リポソーム内に捕捉されるようになり得る。本方法によれば、活性剤は、適切な溶媒中に溶解又は分散でき、混合前にリポソーム混合物に加えることができる。典型的には、親水性活性剤は、極性溶媒に直接的に加えられ、疎水性活性剤は、他の成分を溶解するのに使用した非極性溶媒に加えられようが、これは必要ではない。活性剤は、第３の溶媒又は溶媒混合物中に溶解でき、混合物をホモジナイズする前に、極性溶媒の混合物に脂質フィルムを加え得る。
【００５５】
一般的に、リポソームは、正味の中性、陰性又は陽性電荷を有し得る。例えば、陽性リポソームは、ホスファチジルコリン、コレステロール、カルジオリピン、及びカルジオリピンの正味の陰性電荷を克服するために十分なステアリルアミンを含む溶液から形成できる。陰性リポソームは、例えば、ホスファチジルコリン、コレステロール、及び／又はカルジオリピンを含む溶液から形成できる。
【００５６】
本発明のカルジオリピンを含むリポソームはまた、脂質相内に他の成分を含み得る。好適成分として、ジミリストイルホスファチジルコリン、ジステアロイルホスファチジルコリン、ジオレイルホスファチジルコリン、ジパルミトイルホスファチジルコリン、ジアラキドノイルホスファチジルコリン、卵ホスファチジルコリン、大豆ホスファチジルコリン、水素添加大豆ホスファチジルコリン、及びそれらの混合物からなる群から選択されるホスファチジルコリンが挙げられる。別の好適成分は、ジミリストイルホスファチジルグリセロール、ジステアロイルホスファチジルグリセロール、ジオレイルホスファチジルグリセロール、ジパルミトイルホスファチジルグリセロール、ジアラキドノイルホスファチジルグリセロール、及びそれらの混合物からなる群から選択されるホスファチジルグリセロールである。リポソームはまた、コレステロール、ポリエチレングリコール、コレステロール誘導体、コプロスタノール、コレスタノール、コレスタン、コレステロールヘミサクシネート、コレステロールサルフェート、及びそれらの混合物からなる群から選択されるステロールを含み得る。
【００５７】
本発明のリポソームは、特定の組成物とそれらの製造に使用される方法に依存して、多重又は単一ラメラベシクルでありうる。リポソームは、約１ミクロン以下、又は約５００ｎｍ以下、約２００ｎｍ以下、又は約１００ｎｍ以下などの選択されたサイズ範囲でほぼ均一なサイズを有するように製造できる。１つの有効なサイズ決定方法は、選択された均一のポアサイズを有する、一連のポリカーボネート膜を通し、リポソームの水性懸濁液を押出すことを含む；膜のポアサイズは、膜を介する押出しによって製造されるリポソームの最大サイズと粗く対応しよう。
【００５８】
リポソームは、シュークロース、エピクロロヒドリン、分岐したシュークロースの親水性ポリマー、ポリエチレングリコール、ポリビニルアルコール、メトキシポリエチレングリコール、エトキシポリエチレングリコール、ポリエチレンオキシド、ポリオキシエチレン、ポリオキシプロピレン、セルロースアセテート、アルギン酸ナトリウム、Ｎ，Ｎ−ジエチルアミノアセテート、ポリオキシエチレンとポリオキシプロピレンのブロックコポリマー、ポリビニルピロリドン、ポリオキシエチレン Ｘ−ラウリルエーテル（Ｘは９〜２０である）、及びポリオキシエチレンソルビタンエステルなどの生分解性ポリマーで被覆できる。
【００５９】
抗酸化剤は、本発明の、リポソーム製剤、複合体、エマルション、又は他の製剤に含めることができる。適切な抗酸化剤として、アスコルビン酸、トコフェロール及びデテロオキシム メシレートなどの化合物が挙げられる。
【００６０】
吸収増進剤も、所望ならば、本発明のリポソーム製剤、複合体、エマルションなどに含めることができる。適切な吸収増進剤として、Ｎａ−サリシレート−ケノデオキシコレート、Ｎａ−デオキシコレート、ポリオキシエチレン９−ラウリルエーテル、ケノデオキシコレート−デオキシコレートやポリオキシエチレン９−ラウリルエーテル、モノオレイン、Ｎａ−タウロ−２４，２５−ジヒドロフシデート、Ｎａ−タウロデオキシコレート、Ｎａ−グリコケノデオキシコレート、オレイン酸、リノール酸、リノレン酸が挙げられる。ポリオキシエチレンエーテル、ポリオキシエチレンソルビタンエステル、ポリオキシエチレン１０−ラウリルエーテル、ポリオキシエチレン１６−ラウリルエーテル、アゾン（１−ドデシルアザシクロヘプタン−２−オン）などのポリマー性吸収増進剤も含めることができる。
【００６１】
本発明のカルジオリピン（本発明の方法により製造されるものを含む）を含む本発明の組成物のリポソーム型や他の型は、活性剤を含むように製剤化できる。活性剤は、例えば、組成物中のリポソーム内に捕捉されえ、組成物中で成分の１つと複合体を形成しえ（例えば、組成物中のカルジオリピンと複合体形成する）、又はさもなければ、組成物中に存在しうる。本発明の組成物中に含めることは、界面活性剤の存在下で安定である活性剤に一般的であると考えられる。組成物がリポソームを含むとき、親水性薬剤が適切であり、リポソーム二重層が、身体中にランダムに拡散するのを防止する拡散バリアを作出するように、リポソーム内部に含めることができる。疎水性活性剤は、本発明の製剤、特にリポソーム製剤での使用に特に良く適していると考えられる。疎水性活性剤は、毒性の減少を示すことによって利益を得るばかりではなくて、リポソームの脂質二重層内に良く溶解する傾向があるからである。医療又は化粧品使用に関し、製剤は、医薬として許容できるなどのように、生理的に適合性でありえ、医薬組成物を製剤化する当業者公知の他の薬剤を含め得る（例えば、緩衝剤、抗生物質、保存剤や他の賦形剤、例えば、１種以上の医薬として許容できる賦形剤など）。
【００６２】
本発明の組成物が活性剤を含む場合、本発明はまた、ヒト又は動物細胞に活性剤を投与するために、このような組成物の使用方法を提供する。細胞はインビトロでありえ、その場合、製剤は、診断や研究目的のために、又は、ヒト又は動物患者に移植される細胞に活性剤を送達するために使用できる。あるいは、細胞はインビボでありえ、その場合、本発明は、ヒト又は動物中に（例えば、活性剤を用いて治療の必要のある患者に、又は化粧目的のために）活性剤を送達する方法を提供する。実質的に、任意の活性剤を、患者の疾患細胞又は器官に投与するために、本方法を使用できる。適切な活性剤として、以下のような疾患を治療するために使用される診断試薬や医薬剤が挙げられる：炎症（例えば、慢性炎症）、血管新生依存性疾患、関節炎、再狭窄、乾癬、癌（例えば、肺癌、脳癌もしくは中枢神経系の他の癌、メラノーマ、膵臓癌、肝臓癌、精巣もしくは卵巣の癌、及び他の腫瘍性疾患）、多発性硬化症、アルツハイマー、パーキンソン、及び種々の血管疾患が挙げられる。リポソーム製剤、エマルション、又は複合体はまた、抗真菌適用にも有用でありえ、活性剤として適切な抗真菌剤を含み得る。典型的には、活性剤は、１種以上の遺伝子と遺伝子ベクター、アンチセンス分子（例えば、オリゴヌクレオチド）、蛋白質とペプチド、蛋白質又は化学薬剤（例えば、疎水性薬剤又は親水性薬剤）、又は診断剤でありうる。
【００６３】
本発明と適合性のある活性剤として、末梢神経、アドレナリン性レセプター、コリン性レセプター、骨格筋、心臓血管系、平滑筋、血液循環系、シナプス部位、ニューロエフクタージャンクション部位、内分泌系とホルモン系、免疫系、生殖系、骨格系、栄養系と排出系、ヒスタミン系及び中枢神経系に作用する薬剤が挙げられる。適切な薬剤は、例えば、蛋白質、酵素、ホルモン、ヌクレオチド、ポリヌクレオチド、核蛋白質、多糖、糖蛋白質、リポ蛋白質、ポリペプチド、ステロイド、テルペノイド、トリテルピン、レチノイド、抗潰瘍Ｈ２レセプターアンタゴニスト、抗潰瘍薬、低カルシウム剤、モイスチャーライザー、化粧品などから選択されうる。活性剤は、鎮痛剤；麻酔剤；抗不整脈剤、抗生物質；抗アレルギー剤、抗真菌剤、抗癌剤（例えば、ミトキサントロン（例えば、国際特許公開ＷＯ０２／３２４００参照）、タキサン（例えば、国際特許公開ＷＯ００／０１３６６参照）、パクリタキセル、カンプトテシン、及びカンプトテシン誘導体（（例えば、ＳＮ−３８）（例えば、国際特許公開ＷＯ０２／０５８６２２参照）、イリノテカン（例えば、国際特許公開ＷＯ０３／０３０８６４参照）、及び他のカンプトテシン）、ゲムシタビン、アンスラサイクリン、アンチセンスオリゴヌクレオチド（例えば、ｒａｆ遺伝子などの癌遺伝子を標的とするもの（例えば、国際特許公開ＷＯ９８／４３０９５参照））、ビンカアルカロイド（例えば、ビノレルビン、例えば、国際特許公開ＷＯ０３／０１８０１８参照）、抗体、サイトトキシン（イムノトキシンなど）、抗高血圧剤（例えば、ジヒドロピリジン、抗うつ剤、ｃｏｘ−２阻害剤）；抗凝固剤；抗うつ剤、抗糖尿病薬、抗てんかん剤、抗炎症性コルチコステロイド；アルツハイマー又はパーキンソン病の治療剤；抗潰瘍剤；抗原生動物剤、抗不安薬、甲状腺剤、抗甲状腺剤、抗ウイルス剤、食欲抑制剤、ビスホスホネート、強心剤、心臓血管剤、コルチコステロイド、利尿剤、ドーパミン性薬剤、胃腸剤、止血剤、高コレステロール剤、抗高血圧剤；免疫抑制剤；抗痛風剤、抗マラリア剤、抗偏頭痛剤、抗ムスカリン剤、抗炎症剤（例えば、リウマチ、関節炎、乾癬、炎症性腸疾患、クローン病の治療剤など）；多発性硬化症を含む脱髄性疾患；眼薬；ワクチン（例えば、インフルエンザウイルス、肺炎、肝炎Ａ、肝炎Ｂ、肝炎Ｃ、コレラ毒素Ｂ−サブユニット、腸チフス、熱帯熱マラリア、ジフテリア、破傷風、単純ヘルペスウイルス、結核、ＨＩＶ、ＳＡＲＳウイルス、百日咳菌、麻疹、おたふくかぜ、風疹、細菌トキソイド、ワクシニアウイルス、アデノウイルス、カナリア痘ウイルス、バチルスカルメット−ゲラン、クレブシエラ・ニューモニアワクチンなどに対し）；ヒスタミンレセプターアンタゴニスト、催眠剤、腎臓保護剤、脂質制御剤、筋肉弛緩剤、神経弛緩剤、神経向性剤、オピオイドアゴニストとアンタゴニスト、副交感神経様剤、プロテアーゼ阻害剤、プロスタグランジン、鎮静剤、性ホルモン（例えば、アンドロゲン、エストロゲンなど）、刺激剤、交感神経様剤、血管拡張剤及びキサンチン及びこれらの種の合成アナログでありうる。治療薬は、サイクロスポリンやアンホテリシンＢなど、腎毒性、又はアンホテリシンＢやパクリタキセルなど、心臓毒性でありうる。代表的抗癌剤として、メルファラン、クロルメチン、エクストラムスチンホスフェート、ウラムスチン、イフォファミド、マンノムスチン、トリフォスファミド、ストレプトゾトシン、ミトブロニトール、ミトキサントロン、メトトレキセート、フルオロウラシル、シタラビン、テガフール、イドキシド、タキソール、パクリタキセル、ダウノマイシン、ダウノルビシン、ブレオマイシン、アンホテリシン、カルボプラチン、シスプラチン、パクリタキセル、ＢＣＮＵ、ビンクリスチン、カンプトテシン、ドキソルビシン、エトプシド、サイトカイン、リボザイム、インターフェロン、オリゴヌクレオチド、及び上記の機能性誘導体が挙げられる。本方法に従って送達されうる薬剤の更なる例として、プロクロルペルジンエディシレート、硫酸第一鉄、アミノカプロン酸、メカミルアミン塩酸塩、プロカインアミド塩酸塩、硫酸アンフェタミン、メタンフェタミン塩酸塩、ベンズアンフェタミン塩酸塩、硫酸イソプロテレノール、フェンメトラジン塩酸塩、ベタンコールクロリド、メタコリンクロリド、ピロカルピン塩酸塩、硫酸アトロピン、スコポラミンブロミド、イソプロパミドヨーダイド、トリジヘキセチルクロリド、フェンホルミン塩酸塩、メチルフェニデート塩酸塩、テオフィリンコリネート、セファレキシン塩酸塩、ジフェニドール、メクリジン塩酸塩、プロクロルペラジンマレエート、フェノキシベンズアミン、チエチルペルジンマレエート、アニシンドン、ジフェナジオン エリトリチル テトラナイトレート、ジゴキシン、イソフルロフェート、アセトアゾラミド、メタゾラミド、ベンドロフルメチアジド、クロロプロマイド、トラザミド、クロルマジノンアセテート、フェナグリコドール、アロプリノール、アルミニウムアスピリン、メトトレキセート、アセチルスルフィソキサゾール、エリスロマイシン、ヒドロコルチゾン、ヒドロコルチコステロンアセテート、コルチゾンアセテート、デキサメタゾン及びその誘導体（ベタメタゾンなど）、トリアムシノロン、メチルテストステロン、１７−Ｓ−エストラジオール、エチニルエストラジオール、エチニルエストラジオール３−メチルエーテル、プレドニゾロン、１７α−ヒドロキシプロゲステロンアセテート、１９−ノルプロゲステロン、ノルゲストレル、ノルエチンドロン、ノルエチステロン、ノルエチエデロン、プロゲステロン、ノルゲステロン、ノルエチノドレル、アスピリン、インドメタシン、ナプロキセン、フェノプロフェン、スリンダック、インドプロフェン、ニトログリセリン、イソソルビドジナイトレート、プロプラノロール、チモロール、アテノロール、アルプレノロール、シメチジン、クロニジン、イミプラミン、レボドパ、クロルプロマジン、メチルドパ、ジヒドロキシフェニルアラニン、テオフィリン、カルシウムグルコネート、ケトプロフェン、イブプロフェン、セファレキシン、エリスロマイシン、ハロペリドール、ゾメピラック、乳酸第一鉄、ビンカミン、ジアゼパム、フェノキシベンズアミン、ジルチアゼム、ミルリノン、マンドール、クアンベンツ、ヒドロクロロチアジド、ラニチジン、フルルビプロフェン、フェヌフェン、フルプロフェン、トルメチン、アルクロフェナック、メフェナミック、フルフェナミック、ジフイナール、ニモジピン、ニトレンジピン、ニソルジピン、ニカルジピン、フェロジピン、リドフラジン、チアパミル、ガロパミル、アモロジピン、ミオフラジン、リシノルプリル、エナラプリル、エナラプリラット カプトプリル、ラミプリル、ファモチジン、ニザチジン、スクラルファート、エチンチジン、テトラトロール、ミノキシジル、クロルジアゼポキシド、ジアゼパム、アミトリプチリン、及びイミプラミンが挙げられる。更なる例は、蛋白質とペプチドであり、骨形成蛋白質、インスリン、ヘパリン、コルヒチン、グルカゴン、甲状腺刺激ホルモン、副甲状腺ホルモンや下垂体ホルモン、カルシトニン、レニン、プロラクチン、コルチコトロフィン、甲状腺刺激ホルモン、卵胞刺激ホルモン、絨毛膜ゴナドトロピン、ゴナドトロピン放出ホルモン、ソマトトロピン（例えば、ウシソマトトロピン、ブタソマトトロピンなど）、オキシトシン、バソプレシン、ＧＲＦ、ソマトスタチン、リプレシン、パンクレオチミン、黄体化ホルモン、ＬＨＲＨ，ＬＨＲＨアゴニストとアンタゴニスト、ロイプロリド、インターフェロン（例えば、α−、β−、又はγ−インターフェロン、インターフェロンα−２ａ、インターフェロンα−２ｂ、及びコンセンサスインターフェロンなど）、インターロイキン、成長ホルモン（例えば、ヒト成長ホルモン及びその誘導体（例えば、メチオニン−ヒト成長ホルモンやデス−フェニルアラニンヒト成長ホルモン、ウシ成長ホルモン、ブタ成長ホルモン、インスリン様成長ホルモンなど）、消化性ホルモン、甲状腺剤、抗甲状腺剤、プロスタグランジンなどの受精阻害剤、受精促進剤、インスリン様成長因子などの成長因子、凝固因子、膵臓ホルモン放出因子、これらの化合物のアナログと誘導体、並びにこれらの化合物の医薬として許容できる塩、又はそれらのアナログもしくは誘導体が挙げられるがこれらに限定されない。診断又は治療使用のための活性剤はまた、ＲＮＡ、ＤＮＡ（例えば、オリゴヌクレオチド、プラスミド、ファージ、又はウイルスベクターなど）などの核酸でありうる、又は含めうる。活性剤は、リポソーム製剤、複合体、エマルション、又は他の製剤で共投与して有益でありうる薬剤の混合物（例えば、２種以上）でありうる。
【００６４】
上記のような化学療法剤や他の抗癌剤は、本発明の組成物や治療方法での使用に良く適している。化学療法剤や他の抗癌剤を含むリポソーム製剤、複合体、エマルションなどは、癌細胞へ直接的に化学療法剤や他の抗癌剤を送達するために、腫瘍組織に直接注入できる。場合によっては、特に、腫瘍切除後、リポソーム製剤、エマルション、複合体、又はその他の本発明の製剤を、生じた空洞に直接移植でき、又は、被覆として、残りの組織に適用できる。本発明のリポソーム製剤が手術後、投与される場合、約１ミクロンのより大きな直径のリポソームを用いることができる。リポソームは、血管構造を通過する必要はないからである。
【００６５】
組成物が活性剤を含む場合、本発明は、細胞への活性剤の送達方法を提供する。この方法によれば、本発明のカルジオリピンと所望の活性剤を含む組成物は、本明細書記載のように製造される。次いで、活性剤を細胞に送達するように、組成物を細胞に曝す。任意の所望の細胞に、薬剤、核酸、及び他の適切な薬剤などの活性剤を送達するために、本方法は使用できる。例えば、培養中の細胞に活性剤を送達するために、本方法は、インビトロ適用で使用できる。あるいは、インビボで細胞に薬剤などの活性剤を送達するために、本方法は使用できる。本方法がインビボで用いられる場合、ヒト又は動物の疾患を治療するために、方法は使用できる。この実施態様では、活性剤をヒト又は動物に送達するように、組成物をヒト又は動物に曝す。幾つかの適用において、該剤と組成物は、化粧品として使用できる。この方法の好適な適用は、本明細書記載のように、組成物が１種以上の抗癌剤を含む場合のような、癌の治療を含む。
【００６６】
インビボ適用に関し、組成物が１種以上の医薬として許容できる賦形剤を含むことが好ましい。また、本明細書記載の、抗癌剤、核酸、及び蛋白質性薬剤などの医薬として活性な薬剤は、医薬として有効な投与量を送達するのに適した濃度で、本発明の組成物に組み込まれ得る。抗癌剤などの医薬として活性な薬剤の投与量は、治療する医師や獣医に妥当と認められるように変わり得、治療的治療のための適切な投与量の選択は、このような専門家の技術の範囲内である。
【００６７】
方法は、活性剤のリポソーム製剤（及び、本発明のカルジオリピンと活性剤を含む他の製剤）に加えて、非毒性で不活性な、医薬として適切な賦形剤を含む医薬製剤の投与を提供する。医薬として適切な賦形剤として、全ての種類の、固体、半固体、又は液体希釈剤、充填剤及び製剤補助剤が挙げられる。本発明はまた、投与単位での医薬製剤を含む。これの意味するところによれば、製剤は、個々のパート、例えば、バイアル、シリンジ、カプセル、ピル、座薬、又はアンプルの形態であり、活性剤のリポソーム製剤の、それの含量は、個々の投与量の分数又は乗数に対応する。投与単位は、例えば、１、２、３、又は４倍の個々の投与量、あるいは、個々の投与量の１／２、１／３、又は１／４を含み得る。個々の投与量は好ましくは、１回の投与で与えられ、通常、１日投与量の全部、半分、１／３、又は１／４に対応する活性剤量を含む。
【００６８】
錠剤、糖衣錠、カプセル、ピル、顆粒、座薬、溶液、懸濁剤とエマルション、ペースト、軟膏（例えば、乾燥皮膚軟膏）、ゲル、クリーム、ローション（例えば、乾燥皮膚軟化剤、モイスチャーライザーなど）、粉末、及びスプレーは、適切な医薬製剤でありうる。座薬は、リポソーム活性剤に加えて、適当な水溶性又は水不溶性賦形剤を含み得る。適切な賦形剤は、本発明のリポソーム活性剤が、治療用途を可能とするために十分に安定であるものであり、例えば、ポリエチレングリコール、ある種の脂肪、及びこれらの物質のエステル又は混合物である。軟膏、ペースト、クリーム、ゲルも、その中でリポソーム活性剤が安定である適切な賦形剤を含み得る。
【００６９】
活性剤又はその医薬製剤は、静脈内、皮下、局所、経口、非経口、腹腔内、及び／又は直腸に投与でき、又は、公知である、もしくは開発されている方法によって治療の必要のある腫瘍又は器官又は他の部位に直接注入によって投与できる。カルジオリピン及びカルジオリピンアナログベースの製剤も、局所的に、例えば、クリーム、皮膚軟膏、乾燥皮膚軟化剤、モイスチャーライザーなどとして投与できる。
【００７０】
以下の実施例で、非限定的に、本発明を更に説明する。
【実施例１】
【００７１】
実施例１
１Ａ．十分に保護されたカルジオリピンの合成
【００７２】
【化８】
【００７３】
Ｒ＝ミリストイル（Ｃ１４：０鎖）
【００７４】
ＣＨ２Ｃｌ２（１０ｍＬ）中のｏ−クロロフェニル ジクロロホスフェート（２．４５ｇ，９．９８ｍｍｏｌ）と乾燥ピリジン（４．３９ｍＬ，５４．２８ｍｍｏｌ）の溶液に、ＣＨ２Ｃｌ２（５０ｍＬ）中の１，２−Ｏ−ジミリストイル−ｓｎ−グリセロール（５．００ｇ，９．７５ｍｍｏｌ）の溶液を、０℃で４５分で滴下添加した。反応混合物を、０℃で１時間、室温で１時間撹拌後、ＣＨ２Ｃｌ２（８ｍＬ）中の２−ベンジルオキシ−１，３−プロパンジオール（０．７１ｇ，３．９０ｍｍｏｌ）の溶液を滴下添加した。反応混合物を室温で３時間撹拌した。有機溶媒を真空除去し、残渣を、酢酸エチル（１５０ｍＬ）と冷０．５Ｎ ＨＣｌ（１００ｍＬ）の間で分配した。有機相を、水、ブラインで洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、真空濃縮した。得られた残渣を、ヘキサン／酢酸エチル（３：１）を用いるシリカゲルのフラッシュクロマトグラフィーで精製し、無色油状物として十分に保護されたカルジオリピン４．３７ｇを得た。収率は７２％である。ＴＬＣ（ヘキサン／ＥｔＯＡｃ ３：１） Ｒｆ＝０．３１；１ＨＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３） δ ７．４０−７．０８（ｍ，１３Ｈ，ＡｒＨ），５．２２（ｍ，２Ｈ，ＲＣＯＯＣＨ），４．６３（ｍ，２Ｈ，ＣＨ２Ｐｈ），４．４０−４．０６（ｍ，１２Ｈ，ＲＣＯＯＣＨ２，ＰＯＣＨ２），３．８９（ｍ，１Ｈ，ＢｎＯＣＨ），２．２６（ｍ，８Ｈ，−ＣＨ２ＣＯＯ−），１．５７（ｍ，８Ｈ，−ＣＨ２ＣＨ２ＣＯＯ−），１．２５（ｂｒ ｓ，８０Ｈ，ＣＨ２），０．８８（ｔ，Ｊ＝６．５，１２Ｈ，ＣＨ３；ＥＳＩ−ＭＳ，ｍ／ｚ（Ｍ＋Ｎａ）＋１５７６．６。
【００７５】
１Ｂ．２−Ｏ−ベンジル−１，３−ビス（１，２−Ｏ−ジミリストイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホリル）グリセロール 二アンモニウム塩の合成
【００７６】
【化９】
【００７７】
Ｒ＝ミリストイル（Ｃ１４：０鎖）
【００７８】
方法１．ＴＨＦ（５ｍＬ）中の十分に保護されたカルジオリピン（２６０．３ｍｇ，０．１７ｍｍｏｌ）の撹拌溶液に、２−ピリジンアルドオキシム（２０２．５ｍｇ，１．６６ｍｍｏｌ）とテトラメチルグアニジン（１７６．０ｍｇ，１．５３ｍｍｏｌ）を加えた。水１滴の添加後、混合物を室温で２．５時間撹拌した。溶媒を真空除去した。残渣をＣＨＣｌ３（１０ｍＬ）に溶解し、Ｈ２Ｏ（４ｍＬｘ２）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、真空濃縮した。得られた残渣を、ＣＨＣｌ３／ＭｅＯＨ／ＮＨ４ＯＨ（６５：１５：１）を用いるシリカゲルのフラッシュクロマトグラフィーで精製し、白色固体として２−Ｏ−ベンジル−１，３−ビス（１，２−Ｏ−ジミリストイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホリル）グリセロール 二アンモニウム塩を２００ｍｇ得た。収率は８７％であった。ＴＬＣ（ＣＨＣｌ３／ＭｅＯＨ／ＮＨ４ＯＨ ６５：２５：５） Ｒｆ＝０．６４；１ＨＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３） δ ７．４２−７．２３（ｍ，５Ｈ，ＡｒＨ），５．２０（ｍ，２Ｈ，ＲＣＯＯＣＨ），４．６０（ｓ，２Ｈ，ＣＨ２Ｐｈ），４．２９−３．８９（ｍ，１２Ｈ，ＲＣＯＯＣＨ２，ＰＯＣＨ２），３．６９（ｍ，１Ｈ，ＢｎＯＣＨ），２．２７（ｍ，８Ｈ，−ＣＨ２ＣＯＯ−），１．５６（ｍ，８Ｈ，−ＣＨ２ＣＨ２ＣＯＯ−），１．２８（ｂｒ ｓ，８０Ｈ，ＣＨ２），０．８８（ｔ，Ｊ＝６．５，１２Ｈ，ＣＨ３）；ＥＳＩ−ＭＳ，ｍ／ｚ（Ｍ−２ＮＨ４）２−６６４．９，（Ｍ−２ＮＨ４−ＲＣＯＯ）−１１０２．０，（Ｍ−２ＮＨ４＋Ｈ）−１３３０．３。
【００７９】
方法２．ＴＨＦ（６５ｍＬ）中の十分に保護されたカルジオリピン（３．８８ｇ，２．５０ｍｍｏｌ）の撹拌溶液に、２−ニトロベンズアルドオキシム（４．１１ｇ，２４．７４ｍｍｏｌ）とテトラメチルグアニジン（２．６２ｇ，２２．７５ｍｍｏｌ）を加えた。水１５滴の添加後、混合物を室温で４時間撹拌した。溶媒を真空除去した。残渣をＣＨＣｌ３（１００ｍＬ）に溶解し、Ｈ２Ｏ（４０ｍＬ）とＭｅＯＨ（２ｍＬ）で洗浄した。有機相をＮａ２ＳＯ４で乾燥し、真空濃縮した。得られた黄色の残渣を、ＣＨＣｌ３／ＭｅＯＨ／ＮＨ４ＯＨ（６５：１５：１）を用いるシリカゲルのフラッシュクロマトグラフィーで精製し、白色固体として２−Ｏ−ベンジル−１，３−ビス（１，２−Ｏ−ジミリストイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホリル）グリセロール 二アンモニウム塩を２．１７ｇ得た。収率は６４％である。ＴＬＣ（ＣＨＣｌ３／ＭｅＯＨ／ＮＨ４ＯＨ ６５：２５：５） Ｒｆ＝０．６４。
【００８０】
１Ｃ．１，３−ビス（１，２−Ｏ−ジミリストイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホリル）グリセロール 二アンモニウム塩（テトラミリストイル カルジオリピン）の合成
【００８１】
【化１０】
【００８２】
Ｒ＝ミリストイル（Ｃ１４：０鎖）
【００８３】
方法１．２−Ｏ−ベンジル−１，３−ビス（１，２−Ｏ−ジミリストイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホリル）グリセロール 二アンモニウム塩のサンプル（５２０．１ｍｇ，０．３８ｍｍｏｌ）を、ＴＨＦ（２５ｍＬ）に溶解し、水素バルーン下、３．５時間、パラジウムブラック（２００ｍｇ）で水素化した。触媒を除くために濾過後、溶液を蒸発乾固した。残渣をＴＨＦ（７ｍＬ）に溶解し、次いでアセトン（３５ｍＬ）を用いて沈殿させた。混合物を一晩フリーザーに保ち、翌日、白色固体を濾過し、少量の冷アセトンで洗浄した。ドライアライト下１２時間、Ｐ２Ｏ５下５時間、真空デシケーター中で乾燥後、１，３−ビス（１，２−Ｏ−ジミリストイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホリル）グリセロール 二アンモニウム塩（テトラミリストイル カルジオリピン）４１５．１ｍｇを得た。収率は８６％である。ＴＬＣ（ＣＨＣｌ３／ＭｅＯＨ／ＮＨ４ＯＨ ６５：２５：５） Ｒｆ＝０．２９；１ＨＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３） δ ７．３２（ｂｒ ｓ，ＮＨ４），５．２６（ｍ，２Ｈ，ＲＣＯＯＣＨ），４．３４−３．９２（ｍ，１３Ｈ，ＲＣＯＯＣＨ２，ＰＯＣＨ２，ＨＯＣＨ），２．３３（ｍ ８Ｈ，−ＣＨ２ＣＯＯ−），２．２９（ｔ，Ｊ＝７．５，１Ｈ，ＣＨＯＨ），１．５８（ｍ，８Ｈ，−ＣＨ２ＣＨ２ＣＯＯ−），１．３０（ｂｒ ｓ，８０Ｈ，ＣＨ２），０．８８（ｔ，Ｊ＝６．５，１２Ｈ，ＣＨ３）； ＦＴＩＲ（ＡＴＲ） ３２３１ｓ，２９１８ｓ，２８５０ｓ，１７３８ｓ，１４６７ｗ，１３７８ｗ，１２０３ｍｓ，１０６７ｓ ｃｍ−１；ＥＳＩ−ＭＳ，ｍ／ｚ（Ｍ−２ＮＨ４）２− ６１９．９，（Ｍ−２ＮＨ４−ＲＣＯＯ）−１０１１．９，（Ｍ−２ＮＨ４＋Ｈ）−１２４０．２。
【００８４】
方法２．２−Ｏ−ベンジル−１，３−ビス（１，２−Ｏ−ジミリストイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホリル）グリセロール 二アンモニウム塩のサンプル（１２４．７ｍｇ，０．０９ｍｍｏｌ）を、ＴＨＦ（１５ｍＬ）に溶解し、圧力５０ｐｓｉ下一晩、１０％Ｐｄ−Ｃ（５０ｍｇ）で水素化した。触媒を除くために濾過後、溶液を蒸発乾固した。残渣をＴＨＦ（２ｍＬ）に溶解し、次いでアセトン（１０ｍＬ）を用いて沈殿させた。混合物を一晩フリーザーに保ち、白色固体を濾過し、少量の冷アセトンで洗浄した。ドライアライト下３時間、真空デシケーター中で乾燥後、１，３−ビス（１，２−Ｏ−ジミリストイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホリル）グリセロール 二アンモニウム塩（テトラミリストイル カルジオリピン）９８．６ｍｇを得た。収率は８５％である。ＴＬＣ（ＣＨＣｌ３／ＭｅＯＨ／ＮＨ４ＯＨ ６５：２５：５） Ｒｆ＝０．２９。
【実施例２】
【００８５】
実施例２
２Ａ．ｃｉｓ−２−フェニル−１，３−ジオキサン−５−イル ｔ−ブチルジメチルシリルエーテルの合成
【００８６】
【化１１】
【００８７】
標記化合物は、改変したＤｏｄｄ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．Ｐｅｒｋｉｎ Ｉ，２２７３−２２７７（１９７６）に記載の手順に基き、ｃｉｓ−２−フェニル−１，３−ジオキサン−５−オールから製造する。以下は、改変した方法である。
【００８８】
ＤＭＦ（１５ｍＬ）中のｃｉｓ−２−フェニル−１，３−ジオキサン−５−オール（５．０１ｇ，２７．８ｍｍｏｌ）とイミダゾール（３．７８ｇ，５５．５ｍｍｏｌ）の溶液に、ジメチル−ｔ−ブチルシリルクロリド（５．０３ｇ，３３．４ｍｍｏｌ）を一部ずつ加えた。反応混合物を室温で一晩撹拌し、次いでＨ２Ｏ（２０ｍＬ）を加えた。混合物をヘキサン（２５ｍＬｘ３）で抽出した。有機相を一緒にし、ブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、真空濃縮し、無色油状物としてｃｉｓ−２−フェニル−１，３−ジオキサン−５−イル ｔ−ブチルジメチルシリルエーテルを定量的収量（８．１８ｇ）で得た。この生成物は、更なる精製無しに次工程合成で使用した。
【００８９】
２Ｂ．２−Ｏ−ｔ−ブチルジメチルシリルグリセロールの合成
【００９０】
【化１２】
【００９１】
標記化合物を、Ｄｏｄｄ ｅｔ ａｌ．，ＪＣｈｅｍ．Ｓｏｃ．Ｐｅｒｋｉｎ １，２２７３−２２７７（１９７６）に記載された方法に従って、ｃｉｓ−２−フェニル−１，３−ジオキサン−５−イル ｔ−ブチルジメチルシリルエーテルから製造する。１ＨＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３） δ ３．６５（ｍ，５Ｈ，ＣＨ２ＣＨＣＨ２），１．８８（ｔ，Ｊ＝６．０，２Ｈ，ＯＨ），０．９２（ｓ，９Ｈ，ＳｉＣＣＨ３），０．１２（ｓ，６Ｈ，ＳｉＣＨ３）．
【００９２】
２Ｃ．十分に保護されたカルジオリピンの合成
【００９３】
【化１３】
【００９４】
Ｒ＝ミリストイル（Ｃ１４：０鎖）
【００９５】
ＣＨ２Ｃｌ２（６ｍＬ）中のｏ−クロロフェニル ジクロロホスフェート（１．５１ｇ，６．１５ｍｍｏｌ）と乾燥ピリジン（２．７ｍＬ，３３．３ｍｍｏｌ）の溶液に、ＣＨ２Ｃｌ２（３０ｍＬ）中の１，２−Ｏ−ジミリストイル−ｓｎ−グリセロール（３．０８ｇ，６．０ｍｍｏｌ）の溶液を、０℃で１５分で滴下添加した。反応混合物を、０℃で１時間、室温で１時間撹拌後、ＣＨ２Ｃｌ２（６ｍＬ）中の２−Ｏ−ｔ−ブチルジメチルシリルグリセロール（４９５．３ｍｇ，２．４ｍｍｏｌ）の溶液を滴下添加した。反応混合物を室温で３時間撹拌した。有機溶媒を真空除去し、残った残渣を、冷酢酸エチル（１２０ｍＬ）／０．２５Ｎ ＨＣｌ（１２０ｍＬ）で注意深く処理した。有機相を、水、ブラインで洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、真空濃縮した。得られた残渣を、ヘキサン／酢酸エチル（４：１から３．５：１へ）を用いるシリカゲルのフラッシュクロマトグラフィーで精製し、無色油状物として十分に保護されたカルジオリピン２．７９ｇを得た。収率は７４％である。ＴＬＣ（ヘキサン／ＥｔＯＡｃ ３：１） Ｒｆ＝０．４２；１ＨＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３） δ ７．４１（ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，４Ｈ，ＡｒＨ），７．２３（ｔ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，２Ｈ，ＡｒＨ），７．１２（ｔ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，２Ｈ，ＡｒＨ），５．２３（ｍ，２Ｈ，ＲＣＯＯＣＨ），４．３６−４．０６（ｍ，１３Ｈ，ＲＣＯＯＣＨ２，ＰＯＣＨ２，ＳｉＯＣＨ），２．２６（ｍ，８Ｈ，−ＣＨ２ＣＯＯ−），１．５７（ｍ，８Ｈ，−ＣＨ２ＣＨ２ＣＯＯ−），１．２５（ｂｒ ｓ，８０Ｈ，ＣＨ２），０．８８（ｔ，Ｊ＝６．５，１２Ｈ，ＣＨ３），０．８７（ｓ，９Ｈ，ＳｉＣＣＨ３），０．０８（ｓ，６Ｈ，ＳｉＣＨ３）。
【００９６】
２Ｄ．１，３−ビス（１，２−Ｏ−ジミリストイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホリル）−２−Ｏ−（ｔ−ブチルジメチルシリル）グリセロール 二アンモニウム塩の合成
【００９７】
【化１４】
【００９８】
Ｒ＝ミリストイル（Ｃ１４：０鎖）
【００９９】
ＴＨＦ（１０ｍＬ）中の十分に保護されたカルジオリピン（０．６８ｇ，０．４３ｍｍｏｌ）の撹拌溶液に、２−ニトロベンズアルドオキシム（０．７１ｇ，４．２６ｍｍｏｌ）とテトラメチルグアニジン（０．４５ｇ，３．９１ｍｍｏｌ）を加えた。水３滴の添加後、混合物を室温で３時間撹拌した。溶媒を真空除去した。残渣をＣＨＣｌ３（２５ｍＬ）に溶解し、Ｈ２Ｏ（１０ｍＬ）で洗浄した。有機相をＮａ２ＳＯ４で乾燥し、真空濃縮した。得られた黄色残渣を、ＣＨＣｌ３／ＭｅＯＨ／ＮＨ４ＯＨ（６５：１５：１）を用いるシリカゲルのフラッシュクロマトグラフィーで精製し、白色固体として１，３−ビス（１，２−Ｏ−ジミリストイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホリル）−２−Ｏ−（ｔ−ブチルジメチルシリル）グリセロール 二アンモニウム塩を３７０ｍｇ得た。収率は６２％である。ＴＬＣ（ＣＨＣｌ３／ＭｅＯＨ／ＮＨ４ＯＨ ６５：２５：５） Ｒｆ＝０．６４；１ＨＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３） δ ７．３２（ｂｒ ｓ，ＮＨ４），５．２６（ｍ，２Ｈ，ＲＣＯＯＣＨ），４．３４−３．９２（ｍ，１３Ｈ，ＲＣＯＯＣＨ２，ＰＯＣＨ２ ＳｉＯＣＨ），２．３０（ｍ，８Ｈ，−ＣＨ２ＣＯＯ−），１．５８（ｍ，８Ｈ，−ＣＨ２ＣＨ２ＣＯＯ−），１．３０（ｂｒ ｓ，８０Ｈ，ＣＨ２），０．８８（ｔ，Ｊ＝６．５，１２Ｈ，ＣＨ３），０．８７（ｓ，９Ｈ，ＳｉＣＣＨ３），０．０８（ｓ，６Ｈ，ＳｉＣＨ３）。
【０１００】
２Ｅ．１，３−ビス（１，２−Ｏ−ジミリストイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホリル）グリセロール 二アンモニウム塩（テトラミリストイル カルジオリピン）の合成
【０１０１】
【化１５】
【０１０２】
Ｒ＝ミリストイル（Ｃ１４：０鎖）
【０１０３】
ＣＨＣｌ３（１ｍＬ）、ＭｅＯＨ（２０ｍＬ）及びＨ２Ｏ（７ｍＬ）中の１，３−ビス（１，２−Ｏ−ジミリストイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホリル）−２−Ｏ−（ｔ−ブチルジメチルシリル）グリセロール 二アンモニウム塩（１３８．０ｍｇ，０．０９９ｍｍｏｌ）の撹拌混合物に、１Ｎ ＨＣｌ（０．３ｍＬ）を滴下添加した。混合物を室温で６時間撹拌し、次いで、氷浴中で冷却した。冷反応混合物に、１０％ＮＨ４ＯＨ（２ｍＬ）を滴下添加した。有機溶媒を真空除去し、残りの水相をＣＨＣｌ３で２回抽出した。一緒にした有機相をＮａ２ＳＯ４で乾燥し、濃縮乾固した。残渣をＴＨＦ（５ｍＬ）に溶解し、次いでアセトン（２５ｍＬ）を用いて沈殿させた。混合物を一晩フリーザーに保ち、白色固体を濾過し、少量の冷アセトンで洗浄した。ドライアライト下１時間、Ｐ２Ｏ５下５時間、真空デシケーター中で乾燥後、１，３−ビス（１，２−Ｏ−ジミリストイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホリル）グリセロール 二アンモニウム塩（テトラミリストイル カルジオリピン）１１５ｍｇを得た。収率は８３％であった。ＴＬＣ（ＣＨＣｌ３／ＭｅＯＨ／ＮＨ４ＯＨ ６５：２５：５） Ｒｆ＝０．２９。実施例２Ｅから製造されたテトラミリストイル カルジオリピンの特徴は、実施例１Ｃからのものと同一である。
【実施例３】
【０１０４】
実施例３
３Ａ．十分に保護された不飽和カルジオリピンの合成
【０１０５】
【化１６】
【０１０６】
Ｒ＝オレオイル（Ｃ１８：１鎖）
【０１０７】
１，２−ジミリストイル−ｓｎ−グリセロールの代わりに１，２−Ｏ−ジオレオイル−ｓｎ−グリセロールに置換して、標記化合物を実施例２Ｃに記載の方法に従って製造した。生成物は無色油状物で、収率は３５％であった。ＴＬＣ（ヘキサン／ＥｔＯＡｃ ３：１） Ｒｆ＝０．４６；１ＨＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３） δ ７．４１（ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，４Ｈ，ＡｒＨ），７．２３（ｔ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，２Ｈ，ＡｒＨ），７．１２（ｔ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，２Ｈ，ＡｒＨ），５．３６（ｍ，８Ｈ，オレフィン性プロトン），５．２４（ｍ，２Ｈ，ＲＣＯＯＣＨ），４．３５−４．０６（ｍ，１３Ｈ，ＲＣＯＯＣＨ２，ＰＯＣＨ２，ＳｉＯＣＨ），２．２８（ｍ，８Ｈ，−ＣＨ２ＣＯＯ−），２．００（ｍ，１６Ｈ，アリル性ＣＨ２），１．５７（ｍ，８Ｈ，−ＣＨ２ＣＨ２ＣＯＯ−），１．２８（ｂｒ ｓ，８８Ｈ，ＣＨ２），０．８８（ｔ，Ｊ＝６．５，１２Ｈ，ＣＨ３），０．８８（ｓ，９Ｈ，ＳｉＣＣＨ３），０．０８（ｓ，６Ｈ，ＳｉＣＨ３）。ＥＳＩ−ＭＳ，ｍ／ｚ（Ｍ＋Ｎａ）＋１８１６．４。
【０１０８】
３Ｂ．１，３−ビス（１，２−Ｏ−ジオレオイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホリル）−２−Ｏ−（ｔ−ブチルジメチルシリル）グリセロール 二アンモニウム塩の合成
【０１０９】
【化１７】
【０１１０】
Ｒ＝オレオイル（Ｃ１８：１鎖）
【０１１１】
方法１．ＴＨＦ（３ｍＬ）中の、実施例３Ａに記載の方法により製造された、十分に保護された不飽和カルジオリピン（１７０．０ｍｇ，０．０９５ｍｍｏｌ）の撹拌溶液に、２−ピリジンアルドオキシム（９２．７ｍｇ，０．７６ｍｍｏｌ）とテトラメチルグアニジン（８０．６ｍｇ，０．７０ｍｍｏｌ）を加えた。水１滴の添加後、混合物を室温で７時間撹拌した。溶媒を真空除去した。残渣をＣＨＣｌ３（１０ｍＬ）に溶解し、Ｈ２Ｏ（４ｍＬｘ２）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、真空濃縮した。得られた残渣を、ＣＨＣｌ３／ＭｅＯＨ／ＮＨ４ＯＨ（６５：１５：１）を用いるフラッシュクロマトグラフィーで精製し、白色ゴム状固体として１，３−ビス（１，２−Ｏ−ジオレオイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホリル）−２−Ｏ−（ｔ−ブチルジメチルシリル）グリセロール 二アンモニウム塩を１３４ｍｇ得た。収率は８８％である。ＴＬＣ（ＣＨＣｌ３／ＭｅＯＨ／ＮＨ４ＯＨ ６５：２５：５） Ｒｆ＝０．６７；１ＨＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３） δ ７．３９（ｂｒ ｓ，ＮＨ４），５．３４（ｍ，８Ｈ，オレフィン性プロトン），５．２５（ｍ，２Ｈ，ＲＣＯＯＣＨ），４．３１−３．９０（ｍ，１３Ｈ，ＲＣＯＯＣＨ２，ＰＯＣＨ２，ＳｉＯＣＨ），２．３０（ｍ，８Ｈ，−ＣＨ２ＣＯＯ−），２．０１（ｍ，１６Ｈ，アリル性ＣＨ２），１．５９（ｍ，８Ｈ，−ＣＨ２ＣＨ２ＣＯＯ−），１．２９（ｂｒ ｓ，８８Ｈ，ＣＨ２），０．８８（ｔ，Ｊ＝６．５，１２Ｈ，ＣＨ３），０．８７（ｓ，９Ｈ，ＳｉＣＣＨ３），０．０８（ｓ，６Ｈ，ＳｉＣＨ３）。ＥＳＩ−ＭＳ，ｍ／ｚ（Ｍ−２ＮＨ４）２−７８４．８，（Ｍ−２ＮＨ４−ＲＣＯＯ）−１２８８．３，（Ｍ−２ＮＨ４＋Ｈ）−１５７１．９。
【０１１２】
方法２．ＴＨＦ（８ｍＬ）中の、実施例３Ａに記載の方法により製造された、十分に保護された不飽和カルジオリピン（０．５９ｇ，０．３３ｍｍｏｌ）の撹拌溶液に、２−ニトロベンズアルドオキシム（０．５４ｇ，３．２３ｍｍｏｌ）とテトラメチルグアニジン（０．３５ｇ，３．００ｍｍｏｌ）を加えた。水３滴の添加後、混合物を室温で３時間撹拌した。溶媒を真空除去した。残渣をＣＨＣｌ３（１５ｍＬ）に溶解し、Ｈ２Ｏ（６ｍＬ）で洗浄した。有機相を真空濃縮した。得られた黄色残渣を、ＣＨＣｌ３／ＭｅＯＨ／ＮＨ４ＯＨ（６５：１５：１）を用いるフラッシュクロマトグラフィーで精製し、白色ゴム状固体として１，３−ビス（１，２−Ｏ−ジオレオイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホリル）−２−Ｏ−（ｔ−ブチルジメチルシリル）グリセロール 二アンモニウム塩を３５０ｍｇ得た。収率は６６％である。ＴＬＣ（ＣＨＣｌ３／ＭｅＯＨ／ＮＨ４ＯＨ ６５：２５：５） Ｒｆ＝０．６７。
【０１１３】
３Ｃ．１，３−ビス（１，２−Ｏ−ジオレオイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホリル）グリセロール 二アンモニウム塩（テトラオレオイル カルジオリピン）の合成
【０１１４】
【化１８】
【０１１５】
Ｒ＝オレオイル（Ｃ１８：１鎖）
【０１１６】
ＣＨＣｌ３（１０ｍＬ），ＭｅＯＨ（２０ｍＬ）及びＨ２Ｏ（７ｍＬ）中の１，３−ビス（１，２−Ｏ−ジオレオイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホリル）−２−Ｏ−（ｔ−ブチルジメチルシリル）グリセロール 二アンモニウム塩（１１０．１ｍｇ，０．０６９ｍｍｏｌ）の撹拌混合物に、１Ｎ ＨＣｌ（０．３ｍＬ）を滴下添加した。混合物を室温で５時間撹拌した。更に０．１ｍＬの１Ｎ ＨＣｌを加えた。混合物を室温で更に４時間撹拌し、次いで、氷浴中で冷却した。冷反応混合物に、１０％ＮＨ４ＯＨ（２ｍＬ）を滴下添加した。有機溶媒を真空除去し、残りの残渣をＣＨＣｌ３で抽出した。有機層を濃縮乾固した。粗生成物をＣＨＣｌ３／ＭｅＯＨ／ＮＨ４ＯＨ（６５：１５：１）を用いるシリカゲルフラッシュクロマトグラフィーで精製し、白色ゴム状固体として１，３−ビス（１，２−Ｏ−ジオレオイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホリル）グリセロール 二アンモニウム塩（テトラオレオイル カルジオリピン）を７１ｍｇ得た。収率は７０％である。ＴＬＣ（ＣＨＣｌ３／ＭｅＯＨ／ＮＨ４ＯＨ ６５：２５：５） Ｒｆ＝０．４０；１ＨＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３） δ ７．４３（ｂｒ ｓ，ＮＨ４），５．３４（ｍ，８Ｈ，オレフィン性プロトン），５．１９（ｍ，２Ｈ，ＲＣＯＯＣＨ），４．３８−３．９１（ｍ，１３Ｈ，ＲＣＯＯＣＨ２，ＰＯＣＨ２，ＨＯＣＨ），２．２９（ｍ，８Ｈ，−ＣＨ２ＣＯＯ−），２．１７（ｂｒ ｓ，１Ｈ，ＯＨ），２．０１（ｍ，１６Ｈ，アリル性ＣＨ２），１．５８（ｍ，８Ｈ，−ＣＨ２ＣＨ２ＣＯＯ−），１．２９（ｂｒ ｓ，８８Ｈ，ＣＨ２），０．８７（ｔ，Ｊ＝６．５，１２Ｈ，ＣＨ３）。ＥＳＩ−ＭＳ，ｍ／ｚ（Ｍ−２ＮＨ４）２−７２７．６，（Ｍ−２ＮＨ４−ＲＣＯＯ）−１１７４．２，（Ｍ−２ＮＨ４＋Ｈ）−１４５６．６。
【実施例４】
【０１１７】
実施例４
４Ａ．十分に保護されたカルジオリピンの合成
【０１１８】
【化１９】
【０１１９】
Ｒ＝ミリストイル（Ｃ１４：０鎖）
【０１２０】
ＣＨ２Ｃｌ２（１０ｍＬ）中のＮ，Ｎ−ジイソプロピルメチルホスホンアミディック クロリド（１．９２ｇ，９．２２ｍｍｏｌ）と乾燥Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（１．９２ｍＬ，１１．１ｍｍｏｌ）の溶液に、ＣＨ２Ｃｌ２（４５ｍＬ）中の１，２−Ｏ−ジミリストイル−ｓｎ−グリセロール（４．６１ｇ，９．０ｍｍｏｌ）の溶液を室温で３０分で滴下添加した。反応混合物を室温で１．５時間撹拌後、アセトニトリル（７１．８ｍＬ，２４．３ｍｍｏｌ）中の３重量％溶液の１Ｈ−テトラゾールを加えた。この反応混合物に、ＣＨ２Ｃｌ２（１０ｍＬ）中の２−ベンジルオキシ−１，３−プロパンジオール（０．６６ｇ，３．６０ｍｍｏｌ）の溶液を滴下添加した。反応混合物を室温で３時間撹拌した。次いで、反応混合物を−４０℃に冷却し、反応混合物の温度が０℃未満に保たれるように、ＣＨ２Ｃｌ２（１０ｍＬ）中の７７％ｍ−クロロペルオキシ安息香酸（２．６４ｇ，１１．８０ｍｍｏｌ）の溶液を加えた。２５℃に温めて、混合物を分離漏斗に移し、５％ＮａＨＣＯ３（２ｘ５０ｍＬ），冷１Ｎ ＨＣｌ（２ｘ１５ｍＬ），水、ブラインで洗浄した。有機相をＮａ２ＳＯ４で乾燥し、真空濃縮し、油状残渣を得た。残渣を、ヘキサン／酢酸エチル（２：１から１：１へ）で溶出するシリカゲルのフラッシュクロマトグラフィーで精製し、無色油状物として十分に保護されたカルジオリピン４．３８ｇを得た。収率は９０％である。ＴＬＣ（ヘキサン／ＥｔＯＡｃ １：１） Ｒｆ＝０．１６；１ＨＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３） δ ７．３５（ｍ，５Ｈ，ＡｒＨ），５．２２（ｍ，２Ｈ，ＲＣＯＯＣＨ），４．６７（ｍ，２Ｈ，ＣＨ２Ｐｈ），４．３４−４．０６（ｍ，１２Ｈ，ＲＣＯＯＣＨ２，ＰＯＣＨ２），３．８３（ｍ，１Ｈ，ＢｎＯＣＨ），３．７５（ｄｔ，Ｊｌ＝１１．４，Ｊ２＝３．０，６Ｈ，ＰＯＣＨ３），２．３１（ｍ，８Ｈ，−ＣＨ２ＣＯＯ−），１．５９（ｍ，８Ｈ，−ＣＨ２ＣＨ２ＣＯＯ−），１．２５（ｂｒ ｓ，８０Ｈ，ＣＨ２），０．８８（ｔ，Ｊ＝６．６，１２Ｈ，ＣＨ３）。
【０１２１】
４Ｂ．２−Ｏ−ベンジル−１，３−ビス（１，２−Ｏ−ジミリストイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホリル）グリセロール 二アンモニウム塩の合成
【０１２２】
【化２０】
【０１２３】
Ｒ＝ミリストイル（Ｃ１４：０鎖）
【０１２４】
２−ブタノン（８５ｍＬ）中の十分に保護されたカルジオリピン（１．８０ｇ，１．３２ｍｍｏｌ）の撹拌溶液に、ＮａＩ（０．５９ｇ，３．９６ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物を１．５時間還流し、２５℃に冷却した。生じた白色沈殿を濾過し、冷２−ブタノンで洗浄し、白色固体として２−Ｏ−ベンジル−１，３−ビス（１，２−Ｏ−ジミリストイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホリル）グリセロール 二ナトリウム塩１．７１ｇを得た。
【０１２５】
Ｂｌｉｇｈ ａｎｄ Ｄｙｅｒ，Ｃａｎ．Ｊ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．，３７：９１１−９１７（１９５９）の抽出方法の適用によって、二ナトリウム塩を、対応する遊離酸に変換した。即ち、上記二ナトリウム塩を、ＣＨＣｌ３（８０ｍＬ），ＭｅＯＨ（１６０ｍＬ） 及び０．１Ｎ ＨＣｌ（８０ｍＬ）の冷混合物に溶解し、室温で４０分間撹拌した。次いで、Ｈ２Ｏ（８０ｍＬ）及びＣＨＣｌ３（８０ｍＬ）を加え、分離したＣＨＣｌ３相を単離し、Ｈ２Ｏ（５０ｍＬ）で洗浄した。１０％ＮＨ４ＯＨ（１５ｍＬ）の添加によって有機相を中和した。有機相を分離し、真空濃縮し、残渣を得、それを、ＣＨＣｌ３／ＭｅＯＨ／ＮＨ４ＯＨ（６５：１５：１）を用いる短いシリカゲルカラムで更に精製し、白色固体として２−Ｏ−ベンジル−１，３−ビス（１，２−Ｏ−ジミリストイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホリル）グリセロール 二アンモニウム塩を１．４２ｇ得た。収率は７９％であった。 ＴＬＣ（ＣＨＣｌ３／ＭｅＯＨ／ＮＨ４ＯＨ ６５：２５：５） Ｒｆ＝０．６４。実施例４Ｂから製造された最終生成物の特徴は、実施例１Ｂからのものと同一である。
【０１２６】
４Ｃ．１，３−ビス（１，２−Ｏ−ジミリストイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホリル）グリセロール 二アンモニウム塩（テトラミリストイル カルジオリピン）の合成
【０１２７】
【化２１】
【０１２８】
Ｒ＝ミリストイル（Ｃ１４：０鎖）
【０１２９】
標記化合物は、実施例１Ｃに記載の方法に従って製造される。実施例４で記載した方法から製造されたテトラミリストイル カルジオリピンの特徴は、実施例１からのものと同一である。
【実施例５】
【０１３０】
実施例５
５Ａ．２−Ｏ−ベンジル−１，３−ビス（１，２−Ｏ−ジミリスチル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホリル）グリセロール ジメチルエステルの合成
【０１３１】
【化２２】
【０１３２】
Ｒ＝ミリスチル（Ｃ１４：０鎖）
【０１３３】
ＣＨ２Ｃｌ２（４ｍＬ）中のＮ，Ｎ−ジイソプロピルメチルホスホンアミディック クロリド（１．０２ｇ，５．１５ｍｍｏｌ）と乾燥Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（１．２ｍＬ，６．９４ｍｍｏｌ）の撹拌溶液に、ＣＨ２Ｃｌ２（２０ｍＬ）中の１，２−Ｏ−ジミリスチル−ｓｎ−グリセロール（２．００ｇ，４．１３ｍｍｏｌ）の溶液を室温で１５分で滴下添加した。反応混合物を室温で１．５時間撹拌後、アセトニトリル（３１．０ｍＬ，１０．５ｍｍｏｌ）中の３重量％溶液の１Ｈ−テトラゾールを加えた。この反応混合物に、ＣＨ２Ｃｌ２（５ｍＬ）中の２−ベンジルオキシ−１，３−プロパンジオール（０．３０ｇ，１．６５ｍｍｏｌ）の溶液を添加した。反応混合物を室温で３時間撹拌した。次いで、反応混合物を−４０℃に冷却し、ＣＨ２Ｃｌ２（７ｍＬ）中の７７％ｍ−クロロペルオキシ安息香酸（１．１４ｇ，６．６ｍｍｏｌ）の溶液を加えた。混合物を３０分間室温に徐々に温めて、次いで、混合物を分離漏斗に移動し、５％ＮａＨＣＯ３（２ｘ３０ｍＬ），１Ｎ ＨＣｌ（２ｘ２０ｍＬ），水、ブラインで洗浄した。有機相をＮａ２ＳＯ４で乾燥し、真空濃縮した。残渣を、ヘキサン／酢酸エチル（１：０から１：１へ）のグラジエントで溶出するシリカゲルのフラッシュクロマトグラフィーで精製し、２−Ｏ−ベンジル−１，３−ビス（１，２−Ｏ−ジミリスチル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホリル）グリセロール ジメチルエステル１．６９ｇを得た。収率は７９％である。ＴＬＣ（ヘキサン／ＥｔＯＡｃ １：１） Ｒｆ＝０．２４．１ＨＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３） δ ７．３５−７．２９（ｍ，５Ｈ，ＡｒＨ），４．６８（ｍ，２Ｈ，ＣＨ２Ｐｈ），４．２６−４．０２（ｍ，８Ｈ，ＰＯＣＨ２），３．８６（ｍ，２Ｈ，ＲＯＣＨ），３．７５（ｄ，Ｊ１＝１２．０，６Ｈ，ＰＯＣＨ３），３．６１−３．３８（ｍ，１３Ｈ，−ＣＨ２ＯＣＨ２−，−ＣＨ２ＯＣＨ−，ＢｎＯＣＨ），１．５４（ｍ，８Ｈ，−ＣＨ２ＣＨ２Ｏ−），１．２９（ｍ，８８Ｈ，ＣＨ２），０．８８（ｔ，Ｊ＝６．７，１２Ｈ，ＣＨ３）。
【０１３４】
５Ｂ．２−Ｏ−ベンジル−１，３−ビス（１，２−Ｏ−ジミリスチル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホリル）グリセロール 二アンモニウム塩の合成
【０１３５】
【化２３】
【０１３６】
Ｒ＝ミリスチル（Ｃ１４：０鎖）
【０１３７】
２−ブタノン（４ｍＬ）中の２−Ｏ−ベンジル−１，３−ビス（１，２−Ｏ−ジミリスチル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホリル）グリセロール ジメチルエステル（２３０ｍｇ，０．１８ｍｍｏｌ）の撹拌溶液に、ＮａＩ（８８ｍｇ，０．５９ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を１．５時間還流し、２５℃に、次いで０℃に冷却した。生じた白色沈殿を濾過し、冷２−ブタノンで洗浄し、２−Ｏ−ベンジル−１，３−ビス（１，２−Ｏ−ジミリスチル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホリル）グリセロール 二ナトリウム塩を得た。二ナトリウム塩を、クロロホルム／メタノール／０．１Ｎ ＨＣｌ（３０：５：１５ ｍＬ）にとり、１時間激しく撹拌した。有機相を分離し、水相をクロロホルム（２ｘ１０ｍＬ）で抽出した。一緒にした有機抽出物を水（２ｘ１０ｍＬ）で洗浄した。水酸化アンモニウム水溶液（５ｍｌ）をクロロホルム抽出物に加え、真空濃縮し、高真空下一晩乾燥し、２−Ｏ−ベンジル−１，３−ビス（１，２−Ｏ−ジミリスチル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホリル）グリセロール 二アンモニウム塩２３１ｍｇを得た。収率は６０％である。ＴＬＣ（ＣＨＣｌ３／ＭｅＯＨ／ＮＨ４ＯＨ，６５：２５：５） Ｒｆ＝０．５；１ＨＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）： δ ７．２９−７．２１（ｍ，５Ｈ，ＡｒＨ），４．５７（ｍ，２Ｈ，ＣＨ２Ｐｈ），４．２１−３．３８（ｍ，２３Ｈ，ＰＯＣＨ２，−ＣＨ２ＯＣＨ２−；−ＣＨ２ＯＣＨ−，ＢｎＯＣＨ），１．５０（ｍ，８Ｈ，ＣＨ２ＣＨ２Ｏ−），１．２５（ｍ，８８Ｈ，ＣＨ２），０．８９（ｔ，１２Ｈ，Ｊ＝６．５４Ｈｚ，ＣＨ３）；ＥＳＩ−ＭＳ，ｍ／ｚ（Ｍ−２ＮＨ４＋Ｈ）−，１２７４．１，（Ｍ−２ＮＨ４）２−６３６．９。
【０１３８】
５Ｃ．１，３−ビス（１，２−Ｏ−ジミリスチル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホリル）グリセロール 二アンモニウム塩（テトラミリスチルカルジオリピンエーテルアナログ）の合成
【０１３９】
【化２４】
【０１４０】
Ｒ＝ミリスチル（Ｃ１４：０鎖）
【０１４１】
２−Ｏ−ベンジル−１，３−ビス（１，２−Ｏ−ジミリスチル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホリル）グリセロール 二アンモニウム塩（８５ｍｇ，０．０６５ｍｍｏｌ）を、テトラヒドロフラン（１０ｍＬ）に溶解した。これに、１０％Ｐｄ−Ｃ（７０ｍｇ）を加え、混合物を１６時間５０ｐｓｉでＰａｒｒハイドロゲネーター上で振盪した。溶液をセライトパッドで濾過し、クロロホルム（５ｍＬ）で洗浄した。濾液と洗浄液を一緒にし、真空濃縮し、乾燥した。テトラヒドロフラン（０．２ｍＬ）−アセトン（８ｍＬ）混合物から結晶化後、１，３−ビス（１，２−Ｏ−ジミリスチル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホリル）グリセロール 二アンモニウム塩４４ｍｇ。収率は５６％である。ＴＬＣ（ＣＨＣｌ３／ＭｅＯＨ／ＮＨ４ＯＨ，６５：２５：５） Ｒｆ＝０．２８；１ＨＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）： δ ７．２９（ｂｒ，ＮＨ４＋），４．２０−３．８０（ｍ，８Ｈ，ＰＯＣＨ２），３．５７−３．４１（ｍ，１５Ｈ，ＣＨ２ＯＣＨ２；ＣＨ２ＯＣＨ−，ＨＯＣＨ），２．３（ｂｒ，１Ｈ，ＯＨ），１．５３（ｍ，８Ｈ，ＣＨ２ＣＨ２Ｏ−），１．２５（ｍ，８８Ｈ，ＣＨ２），０．８７５（（ｔ，１２Ｈ，Ｊ＝６．９Ｈｚ，ＣＨ３）；ＥＳＩ−ＭＳ，ｍ／ｚ １１８４．７（Ｍ−２ＮＨ４＋Ｈ）−，５９１．３（Ｍ−２ＮＨ４）２−。
【実施例６】
【０１４２】
実施例６
６Ａ．２−Ｏ−ベンジル−１，３−ビス（１，２−Ｏ−ジミリストイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホリル）グリセロール 二アンモニウム塩の合成
【０１４３】
【化２５】
【０１４４】
Ｒ＝ミリストイル（Ｃ１４：０鎖）
【０１４５】
ピリジン（２ｍＬ）中のＮ，Ｎ’−ジシクロヘキシルカルボジイミド（２６５ｍｇ，１．２８ｍｍｏｌ）の撹拌溶液に、無水ＣＨ２Ｃｌ２（３ｍＬ）中の１，２−Ｏ−ジミリストイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスファチジン酸（２８１ｍｇ，０．４７ｍｍｏｌ）を滴下添加した。溶液を室温で５分撹拌し、次いで、ＣＨ２Ｃｌ２（８ｍＬ）中の２−ベンジルオキシ−１，３−プロパンジオール（０．７１ｇ，３．９０ｍｍｏｌ）を加え、撹拌を室温で２４時間続けた。反応液を濾過し、ＣＨ２Ｃｌ２で洗浄した。濾液を濃縮し、トルエンと共蒸発させ、微量のピリジンを除去した。残渣へＣＨ２Ｃｌ２（１５ｍＬ）を加え、混合物をフリーザー中で一晩保存した。白色沈殿を濾過で除去した。濾液を真空濃縮し、ＣＨＣｌ３／ＭｅＯＨ／ＮＨ４ＯＨ（６５：１５：１）で溶出するシリカゲルカラムで精製した。収量１３ｍｇ（４％）。ＴＬＣ（ＣＨＣｌ３／ＭｅＯＨ／ＮＨ４ＯＨ ６５：２５：５） Ｒｆ＝０．６４。ＴＬＣは、実施例１Ｂで記載した方法に従って製造した真正サンプルと同一であった。
【０１４６】
６Ｂ．１，３−ビス（１，２−Ｏ−ジミリストイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホリル）グリセロール 二アンモニウム塩（テトラミリストイル カルジオリピン）の合成
【０１４７】
【化２６】
【０１４８】
Ｒ＝ミリストイル（Ｃ１４：０鎖）
【０１４９】
標記化合物は、実施例１Ｃに記載の方法に従って製造される。ＴＬＣ（ＣＨＣｌ３／ＭｅＯＨ／ＮＨ４ＯＨ ６５：２５：５） Ｒｆ＝０．２９。ＴＬＣは、実施例１Ｃで記載した方法に従って製造した真正サンプルと同一であった。
【実施例７】
【０１５０】
実施例７
本実施例は、本発明のカルジオリピン含有のリポソーム組成物の製造を示す。上記で製造したテトラミリストイルカルジオリピン１９．１μｍｏｌ、ホスファチジルコリン９６．２μｍｏｌ、コレステロール６４．６μｍｏｌを混合して、小さい単一ラメラベシクルを形成する。徹底的な撹拌後、ロータリーエバポレーターを用い、５０ｍｌ丸底フラスコ中で混合物を蒸発乾固する。生じた乾燥脂質フィルムを、１０ｍｌの滅菌したパイロジェン非含有の水に再懸濁する。３０分の膨潤時間後、生じる懸濁液を、２５℃の固定温度浴で１５分間音波処理する。次いで、リポソーム製剤を、トレハロースと共に凍結乾燥する。
【実施例８】
【０１５１】
実施例８
本実施例は、アンスラサイクリンであるドキソルビシンを保持する、上記で製造したテトラミリストイルカルジオリピンを含むリポソームの製造を示す。４０ｍｇのカルジオリピン−リポソーム凍結乾燥物と、２ｍｇ／ｍｌで０．８５％ＮａＣｌ中に前もって調製したドキソルビシン２．５ｍｌの単純なボルテックス混合によって、臨床投与のために、リポソームドキソルビシンを製造できる。ボルテックス混合は１分で完了し、１５分インキュベーションのために、混合物を３７℃に保つ。
【実施例９】
【０１５２】
実施例９
本実施例は、薬剤ミトキサントロンＨＣｌを保持するリポソームの製造を示す。溶液の全重量が１３．０５ｋｇとなるように、ｔ−ブチルアルコール中の１．９６ｇｍのＤ−α−トコフェロール、上記で製造した５８．７ｇｍのテトラミリストイルカルジオリピン、９７．９ｇｍコレステロール、２９３．６ｇｍの卵ホスファチジルコリンを混合して、脂質混合物を調製する。次いで、トレハロース二水和物１２２．４ｇｍを含有する３，０８０ｇｍの水溶液を上記ブチルアルコール溶液中に混合する。バイアルを、この混合物１１．１ｇｍで充填し、凍結乾燥するが、脂質約３００ｍｇが各バイアルに含まれるようにする。Ｎｏｖａｎｔｒｏｎｅ（登録商標）（１５ｍｇ）７．５ｍｌと水７．５ｍｌを脂質バイアルに加え、リポソーム包埋ミトキサントロンを製造する。リポソームを、室温で３０分間水和させ、２分間激しくボルテックスし、最大強度で１０分音波処理する。８時間内での使用のために、４５分かけて、適切な量をシリンジ又は標準点滴セットに分配する。
【実施例１０】
【０１５３】
実施例１０
本実施例は、薬剤パクリタキセルを保持するリポソームの製造を示す。パクリタキセルは、カルジオリピン、ホスファチジルコリン、コレステロール、α−トコフェロールのリポソームに包埋できる。パクリタキセルの１ｍｇ当り、脂質の割合は、
１．８ｍｇ カルジオリピン
９．０ｍｇ ホスファチジルコリン
３．０ｍｇ コレステロール
０．１ｍｇ α−トコフェロール
である。
【０１５４】
リポソーム包埋パクリタキセルは、１２．０リットルフラスコにｔ−ブチルアルコール８．８９キログラムを加え、４０−４５℃に加熱することによって製造できる。以下の添加は、溶解と４０−４５℃での加熱まで、混合と共に順次なされた：Ｄ−α−トコフェリル酸サクシネート３．４１２グラム、卵ホスファチジルコリン２０５グラム、パクリタキセル２２．７８グラム、上記で製造したテトラミリストイルカルジオリピン４１．００グラム、コレステロール６８．３３グラム。
【０１５５】
生じる溶液は、０．２２ミクロンフィルターで濾過する。生じる濾液を、滅菌バイアルに充填し、各々は、濾液約１０．１グラムを含む。バイアルにストッパーをかけ、凍結乾燥した。使用まで、バイアルは、−２０℃で保存できる。
【０１５６】
必要なとき、通常の生理食塩水によって、リポソームは、乾燥脂質フィルムから製造される。約１時間、混合物を室温で水和させ、その後、約１分ボルテックスし、最大周波数で浴型音波器で約１０分音波処理する。バイアルの内容物の適当量を、点滴バッグに移すことができ、本発明に従って、患者に点滴することができる。
【０１５７】
パクリタキセルのリポソーム製剤は、実質的な毒性反応を誘導せずに、ヒトに大量のタキサンを急速に投与するために使用できる。治療は、約１時間、又は４５分さえ、もしくはそれ未満の時間で、静脈内に投与できる。少なくとも３人の患者は、ほぼ以下の投与量で治療された：９０ｍｇ／ｍ２、１３５ｍｇ／ｍ２、１７５ｍｇ／ｍ２、２５０ｍｇ／ｍ２、３００ｍｇ／ｍ２（通常の実験室や治療的投与量変動を可能とする）。製剤は、ステロイド、抗ヒスタミン剤、又はアナフィラキシー阻害剤などの他の治療剤による前処置なく、単一薬剤として与えることができる。治療は、患者耐性が許す限り、２１日毎に繰り返すことができる。
【実施例１１】
【０１５８】
実施例１１
本実施例は、溶液中にＳＮ−３８を含有するリポソームの製造を示す。約３５−４０℃に温められているｔ−ブチルアルコール約１ｋｇへＤ−α−トコフェロール酸サクシネート約０．２ｇを加えることによって脂質フィルムを製造する。トコフェロールが溶解するまで、溶液を約５分混合する。上記で製造したテトラミリストイルカルジオリピン約６．０ｇを溶液に加え、溶液を約５分混合する。コレステロール約１０ｇを溶液に加え、該溶液を更に約５分混合し、次いで、卵ホスファチジルコリン約３０ｇを加え、次いで、更に５分混合する。生じる脂質溶液約１１グラムを凍結乾燥し、脂質フィルムが産生される。
【０１５９】
リポソーム性ＳＮ−３８を製造するために、８〜１０のｐＨを有するアルカリ水溶液中にＳＮ−３８を溶解することによって、ＳＮ−３８の１．２ｍｇ／ｍｌ溶液を調製する。このＳＮ−３８溶液の約１５ｍｌを、脂質フィルムを含有するバイアルに加える。バイアルを温和に回転し、室温で３０分間水和させ、２分激しくボルテックスし、最大強度で浴型音波器中で１０分間音波処理する。リポソーム溶液のｐＨを酸性ｐＨに下げる。この方法を用いて、ＳＮ−３８の９０重量％超が、リポソームの形態の脂質と複合体形成する。
【０１６０】
引用文献:
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2. DeHaas, G. H.; Bonsen, P. P. M.; VanDeenen, L. L. M. Biochim. Biophys. Acta, 116: 114-124 (1966).
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Stepanov, A. E.; Makarova, I. M.; Shvets, V. I. Zh. Org. Khim., 20: 985-988 (1984).
【０１６１】
本明細書で引用した刊行物、特許出願、及び特許を含み、前述のリストのものと本明細書でその他の個所で引用したものを含む、本明細書全ての引用文献は、各引用文献が引用により含まれるように個々に、及び具体的に示され、本明細書にその全体が記載されているかのような程度まで、引用により本明細書に含まれるものである。
【０１６２】
本発明の説明の文脈において（特に、以下のクレームの文脈において）、用語“ａ”及び“ａｎ”及び“ｔｈｅ”及び同様の指示語の使用は、本明細書で違うように記載されるか、文脈によって明確に否定されなければ、単数と複数の両方を包含するように解釈されるべきである。用語“含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）”“有する（ｈａｖｉｎｇ）”“含む（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）”及び“含む（ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ）”は、ことわりがない限り、許容範囲が制約のない用語（ｏｐｅｎ−ｅｎｄｅｄ ｔｅｒｍｓ）（即ち、「・・を含むが、・・に限定されない」ことを意味する）として解釈されるべきである。本明細書で値の範囲の記載は、本明細書で違うように記載されていなければ、その範囲内の各々の分離した値へ個々に言及することの略記方法として役立つことが単に意図され、各々の分離した値は、それが本明細書に個々に記載されているかのように本明細書に含まれるものである。本明細書で記載される方法の全ては、本明細書で違うように記載されるか、さもなければ文脈によって明確に否定されなければ、任意の適切な順序で行うことができる。本明細書で提供される任意の、及び全ての例、又は例示的言葉（例えば、“などの”）の使用は、本発明をより良く明瞭にすることが単に意図され、違うようにクレームされていなければ、本発明の範囲を制限するものではない。本明細書の如何なる言葉も、本発明の実施に必須なものとしてクレームされていないいかなる要素を示すものとして解釈されるべきではない。
【０１６３】
本発明を実施するのに本発明者らが知っている最良の形態を含む、本発明の好適な実施態様を本明細書で記載する。上記説明を読むと、それらの好適な実施態様のバリエーションが当業者に明白となろう。本発明者らは、当業者が適宜このようなバリエーションを用いることを期待し、本発明者らは、本発明が、本明細書に具体的に記載されたものとは異なるように実施されることを意図する。それ故、本発明は、適用法によって許されるように、本明細書に添えられたクレームに記載の主題の全ての改変及び均等物を含むものである。更に、本明細書で違うように記載されていないか、さもなければ文脈によって違うように明瞭に否定されていなければ、その全ての可能なバリエーション中の上記要素の任意の組合わせも本発明に包含される。
【図面の簡単な説明】
【０１６４】
【図１】図１は、カルジオリピンの一般的構造を示す。
【図２】図２は、カルジオリピンの１つの合成スキームを示す。
【図３】図３は、カルジオリピンの別の合成スキームを示す。
【図４】図４は、カルジオリピンエーテルアナログの別の合成スキームを示す。
【図５】図５は、カルジオリピンの別の合成スキームを示す。
【図６】図６は、カルジオリピンの別の合成スキームを示す。
【図７】図７は、カルジオリピンの別の合成スキームを示す。
【図８】図８は、カルジオリピンの別の合成スキームを示す。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
以下の構造
【化１】
（式中、Ｚ１及びＺ２は、同一又は異なって、−Ｏ−Ｃ（Ｏ）−，−Ｏ−，−Ｓ−，又は−ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−であり；
Ｒ１及びＲ２は、同一又は異なって、Ｈ及び／又は飽和もしくは不飽和アルキル基であり；
Ｒ３は（ＣＨ２）ｎであり、及びｎ＝０−１０；
Ｒ４は、水素、アルキル、置換アルキル、シクロアルキル、置換シクロアルキル、ペプチド、ジペプチド、ポリペプチド、蛋白質、グルコース、マンノース、ガラクトース、多糖などの炭水化物、複素環、ヌクレオシド、又はポリヌクレオチドであり；
Ｘはカチオンである）
を有するカルジオリピン分子。
【請求項２】
以下の構造
【化２】
を有する、請求項１に記載のカルジオリピン分子。
【請求項３】
以下の構造
【化３】
を有するカルジオリピンエーテルアナログである、請求項１に記載のカルジオリピン分子。
【請求項４】
以下の構造
【化４】
（式中、Ｚ１及びＺ２は、同一又は異なって、−Ｏ−Ｃ（Ｏ）−，−Ｏ−，−Ｓ−，−ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−であり；
Ｒ１及びＲ２は、同一又は異なって、Ｈ又は飽和もしくは不飽和アルキル基であり；
Ｒ３は、（ＣＨ２）ｎであり、及びｎ＝０−１０；
Ｒ４は、水素、アルキル、置換アルキル、シクロアルキル、置換シクロアルキル、ペプチド、ジペプチド、ポリペプチド、蛋白質、グルコース、マンノース、ガラクトース、多糖などの炭水化物、複素環、ヌクレオシド、又はポリヌクレオチドであり；
Ｒ５は、リンカーであり；
Ｘはカチオンである）
を有するカルジオリピンアナログ。
【請求項５】
リンカーが、アルキル、置換アルキル、シクロアルキル、置換シクロアルキル、アルキルオキシ、１〜５００個のアルキルオキシマーを含有するペギレーテッドエーテルなどのポリアルキルオキシ、置換ポリアルキルオキシなど、ペプチド、ジペプチド、ポリペプチド、蛋白質、グルコース、マンノース、ガラクトース、及び多糖などの炭水化物を含む、請求項４に記載のカルジオリピンアナログ。
【請求項６】
Ｒ１及び／又はＲ２の少なくとも１つが、１４〜３４個の炭素を有する飽和又は不飽和アルキル基である、請求項１〜５のいずれか１項に記載のカルジオリピン分子。
【請求項７】
Ｘが非毒性カチオンである、請求項１〜６のいずれか１項に記載のカルジオリピン分子。
【請求項８】
Ｘは、水素、アンモニウム、ナトリウム、カリウム、カルシウム又はバリウムイオンである、請求項１〜７のいずれか１項に記載のカルジオリピンアナログ。
【請求項９】
カルジオリピン分子又はそのアナログの製造方法であって、
Ｎ，Ｎ’−ジシクロヘキシルカルボジイミド又はＮ，Ｎ’−カルボニルジイミダゾールであるカップリング剤の存在下、ホスファチジン酸と２−Ｏ−保護グリセロールを反応させることを含む方法。
【請求項１０】
カルジオリピン又はそのアナログの製造方法であって、トリイソプロピルベンゼンスルホニル クロリド、又はＮ，Ｎ’−ジシクロヘキシルカルボジイミド又はＮ，Ｎ’−カルボニルジイミダゾールであるカップリング剤の存在下、ホスファチジン酸とグリセロールを反応させることを含む方法。
【請求項１１】
カルジオリピン分子の製造方法であって、ジクロロホスフェート又はＮ，Ｎ−ジイソプロピルメチルホスホンアミディック クロリドのいずれかであるカップリング剤の存在下、式Ｖ
【化５】
（式中、Ｚ１及びＺ２は、同一又は異なって、−Ｏ−Ｃ（Ｏ）−，−Ｏ−，−Ｓ−，−ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−であり、Ｒ１及びＲ２は、同一又は異なって、Ｈ及び／又は飽和もしくは不飽和アルキル基であり;Ｒ３は（ＣＨ２）ｎであり、及びｎ＝０−１０）
のアルコールと、２−Ｏ−保護グリセロール又は２−Ｏ−置換グリセロールを反応させることを含む方法。
【請求項１２】
Ｒ１及び／又はＲ２の少なくとも１つが、４〜３４個の炭素を有する飽和又は不飽和アルキル基である、請求項１１に記載の方法。
【請求項１３】
Ｒ１及び／又はＲ２の少なくとも１つが、１４〜２４個の炭素を有する飽和又は不飽和アルキル基である、請求項１１に記載の方法。
【請求項１４】
カルジオリピン分子が、請求項１〜３のいずれか１項に記載の分子である、請求項１１に記載の方法。
【請求項１５】
ジクロロホスフェート又はＮ，Ｎ−ジイソプロピルメチルホスホンアミディック クロリドのいずれかであるカップリング剤の存在下、１，２−Ｏ−ジアシルグリセロールと２−Ｏ−保護グリセロールを反応させることを含む、請求項２に記載のカルジオリピンの製造方法。
【請求項１６】
ジクロロホスフェート又はＮ，Ｎ−ジイソプロピルメチルホスホンアミディック クロリドのいずれかであるカップリング剤の存在下、１，２−Ｏ−ジアルキルグリセロールと２−Ｏ−保護グリセロールを反応させることを含む、請求項３に記載のカルジオリピンの製造方法。
【請求項１７】
ジクロロホスフェート又はＮ，Ｎ−ジイソプロピルメチルホスホンアミディック クロリドのいずれかであるカップリング剤の存在下、式Ｖのアルコールと式ＶＩ
【化６】
（式中、Ｒ４及びＲ５は、請求項４又は５中に定義されている通りである）のジオールを反応させることを含む、請求項４又は５に記載のカルジオリピンアナログの製造方法。
【請求項１８】
カップリング剤が、式ＶＩＩ
【化７】
（式中、Ｗは、メチル、エチル、イソプロピル、ｔ−ブチル、アリル、２−置換エチル、２，２，２−トリブロモエチルなどのハロエチルを含むアルキル基又は置換アルキル基；ベンジル基又は置換ベンジル基；フェニル基、又は２−クロロフェニル、４−クロロフェニル及び２，４−ジクロロフェニルなどの置換フェニル基；又は任意の他の除去可能保護基である）のジクロロホスフェートである、請求項１１〜１７のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１９】
カップリング剤が、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルメチルホスホンアミディック クロリドである、請求項１１〜１７に記載の方法。
【請求項２０】
請求項９〜１９のいずれか１項に記載の方法に従って製造されるカルジオリピン又はカルジオリピンアナログ。
【請求項２１】
リポソームの製造方法であって、請求項９〜１９の方法のいずれかによってカルジオリピン又はカルジオリピンアナログを製造し、次いで、該カルジオリピン又はカルジオリピンアナログをリポソームに含ませることを含む方法。
【請求項２２】
リポソーム中に活性剤を保持させる方法であって、請求項９〜１９のいずれか１項に記載の方法のいずれかによってカルジオリピン又はカルジオリピンアナログを製造し、該カルジオリピン又はカルジオリピンアナログ及び活性剤をリポソームに含ませることを含む方法。
【請求項２３】
活性剤が薬剤を含む、請求項２２に記載の方法。
【請求項２４】
活性剤がオリゴヌクレオチドを含む、請求項２２に記載の方法。
【請求項２５】
活性剤が抗癌剤を含む、請求項２２に記載の方法。
【請求項２６】
活性剤が、リポソーム内に捕捉されるようになる、請求項２２に記載の方法。
【請求項２７】
活性剤がカルジオリピンと複合体形成するようになる、請求項２２に記載の方法。
【請求項２８】
リポソームを凍結保護物質と共に凍結乾燥することを更に含む、請求項２１〜２７のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２９】
請求項２１〜２８のいずれか１項に記載の方法に従って製造されるリポソーム組成物。
【請求項３０】
請求項１〜８のいずれか１項に記載のカルジオリピンを含む組成物。
【請求項３１】
請求項９〜１９のいずれか１項に記載の方法に従って製造されるカルジオリピン又はカルジオリピンアナログを含む組成物。
【請求項３２】
ホスファチジルコリン、ステロール及びトコフェロールを更に含む、請求項２９〜３１のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項３３】
ジミリストイルホスファチジルコリン、ジステアロイルホスファチジルコリン、ジオレイルホスファチジルコリン、ジパルミトイルホスファチジルコリン、ジアラキドノイルホスファチジルコリン、卵ホスファチジルコリン、大豆ホスファチジルコリン、水素添加大豆ホスファチジルコリン、及びそれらの混合物からなる群から選択されるホスファチジルコリンを更に含む、請求項２９〜３２のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項３４】
ジミリストイルホスファチジルグリセロール、ジステアロイルホスファチジルグリセロール、ジオレイルホスファチジルグリセロール、ジパルミトイルホスファチジルグリセロール、ジアラキドノイルホスファチジルグリセロール、及びそれらの混合物からなる群から選択されるホスファチジルグリセロールを更に含む、請求項２９〜３３のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項３５】
コレステロール、コレステロール誘導体、コプロスタノール、コレスタノール、コレスタン、コレステロールヘミサクシネート、コレステロールサルフェート、及びそれらの混合物からなる群から選択されるステロールを更に含む、請求項２９〜３４のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項３６】
標的指向剤を更に含む、請求項２９〜３５のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項３７】
標的指向剤が蛋白質である、請求項３６に記載の組成物。
【請求項３８】
蛋白質が、抗体、抗体フラグメント、ペプチド、ペプチドホルモン、レセプターリガンド、及びそれらの混合物からなる蛋白質の群から選択される、請求項３７に記載の組成物。
【請求項３９】
標的指向剤が炭水化物である、３６に記載の組成物。
【請求項４０】
リガンドを更に含む、請求項２９〜３９のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項４１】
リガンドが、細胞レセプターの抗体又はリガンドである、請求項４０に記載の組成物。
【請求項４２】
活性剤を含む、請求項２９〜４１のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項４３】
活性剤が、カルジオリピンと複合体形成する、請求項４２に記載の組成物。
【請求項４４】
活性剤が、１種以上の遺伝子ベクター、アンチセンス分子、蛋白質、ペプチド又は薬剤を含む、請求項４２又は４３に記載の組成物。
【請求項４５】
活性剤が、１種以上の抗癌剤を含む、請求項４２〜４４のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項４６】
脂質複合体又はエマルションの形態である、請求項２９〜４５のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項４７】
リポソームを含む、請求項２９〜４６のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項４８】
リポソームがカルジオリピンを含む、請求項４７に記載の組成物。
【請求項４９】
活性剤を更に含む、請求項４７又は４８に記載の組成物。
【請求項５０】
リポソーム形態の請求項１〜８及び２０のいずれか１項に記載のカルジオリピン又はカルジオリピンアナログ及び活性剤を含む組成物。
【請求項５１】
リポソーム形態の、請求項９〜１９のいずれか１項に記載の方法に従って製造されるカルジオリピン又はカルジオリピンアナログと活性剤とを含む組成物。
【請求項５２】
活性剤が、１つ以上のリポソーム中に捕捉される、請求項４７〜５１のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項５３】
活性剤が、カルジオリピンと複合体形成している、請求項４７〜５２のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項５４】
凍結乾燥形態の、請求項４７〜５３に記載の組成物。
【請求項５５】
凍結保護物質を更に含む、請求項５４に記載の組成物。
【請求項５６】
リポソームの直径が約１ミクロン以下である、請求項４７〜５５のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項５７】
リポソームの直径が約５００ｎｍ以下である、請求項４７〜５６のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項５８】
リポソームの直径が約２００ｎｍ以下である、請求項４７〜５７のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項５９】
リポソームの直径が約１００ｎｍ以下である、請求項４７〜５８のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項６０】
医薬として許容できる賦形剤を更に含む、請求項２９〜５９のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項６１】
疾患の治療用医薬を製造するための、請求項２９〜６０のいずれか１項に記載の組成物の使用。
【請求項６２】
疾患が癌である、請求項６１に記載の使用。
【請求項６３】
細胞への活性剤の送達方法であって、請求項４２〜６０のいずれか１項に記載の組成物を製造し、該組成物を細胞に曝すことを含む方法。
【請求項６４】
細胞がインビトロである、請求項６３に記載の方法。
【請求項６５】
細胞がインビボである、請求項６３に記載の方法。
【請求項６６】
ヒト又は動物の疾患の治療方法であって、請求項４２〜６０のいずれか１項に記載の組成物を製造し、活性剤がヒト又は動物患者に送達されるように、該組成物を、その必要のあるヒト又は動物に曝すことを含む方法。
【請求項６７】
疾患が癌であり、活性剤が抗癌剤である、請求項６６に記載の方法。
【請求項６８】
組成物が、１つ以上のリポソームを含む、請求項６３〜６７のいずれか１項に記載の方法。
【請求項６９】
活性剤が、組成物中でカルジオリピンと複合体形成している、請求項６３〜６８のいずれか１項に記載の方法。
【請求項７０】
活性剤が、組成物中でリポソーム内に捕捉されている、請求項６８又は６９に記載の方法。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
カルジオリピン又はカルジオリピンアナログの製造方法であって、
Ｎ，Ｎ’−ジシクロヘキシルカルボジイミド又はＮ，Ｎ’−カルボニルジイミダゾールであるカップリング剤の存在下、ホスファチジン酸と２−Ｏ−保護グリセロールを反応させることを含む方法。
【請求項２】
カルジオリピン又はカルジオリピンアナログの製造方法であって、トリイソプロピルベンゼンスルホニル クロリド、又はＮ，Ｎ’−ジシクロヘキシルカルボジイミド又はＮ，Ｎ’−カルボニルジイミダゾールであるカップリング剤の存在下、ホスファチジン酸とグリセロールを反応させることを含む方法。
【請求項３】
カルジオリピン又はカルジオリピンアナログの製造方法であって、ジクロロホスフェート又はＮ，Ｎ−ジイソプロピルメチルホスホンアミディック クロリドのいずれかであるカップリング剤の存在下、式Ｖ
【化１】
（式中、Ｚ１及びＺ２は、同一又は異なって、−Ｏ−Ｃ（Ｏ）−，−Ｏ−，−Ｓ−，又は−ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−であり；
Ｒ１及びＲ２は、同一又は異なって、Ｈ及び／又は飽和もしくは不飽和アルキル基であり;
Ｒ３は（ＣＨ２）ｎであり、及びｎ＝０−１０）
のアルコールと、２−Ｏ−保護グリセロール又は２−Ｏ−置換グリセロールを反応させることを含む方法。
【請求項４】
カルジオリピン又はカルジオリピンアナログが以下の構造
【化２】
（式中、Ｚ１及びＺ２は、同一又は異なって、−Ｏ−Ｃ（Ｏ）−，−Ｏ−，−Ｓ−，又は−ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−であり；
Ｒ１及びＲ２は、同一又は異なって、Ｈ及び／又は飽和もしくは不飽和アルキル基であり；
Ｒ３は（ＣＨ２）ｎであり、及びｎ＝０−１０；
Ｒ４は、水素、アルキル、置換アルキル、シクロアルキル、置換シクロアルキル、ペプチド、ジペプチド、ポリペプチド、蛋白質、グルコース、マンノース、ガラクトース、多糖などの炭水化物、複素環、ヌクレオシド、又はポリヌクレオチドであり；
Ｘはカチオンである）
を有するものである、請求項１〜３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項５】
カルジオリピン又はカルジオリピンアナログが以下の構造
【化３】
を有するものである、請求項４に記載の方法。
【請求項６】
カルジオリピン又はカルジオリピンアナログが以下の構造
【化４】
を有するカルジオリピンエーテルアナログである、請求項４に記載の方法。
【請求項７】
カルジオリピン又はカルジオリピンアナログが以下の構造
【化５】
（式中、Ｚ１及びＺ２は、同一又は異なって、−Ｏ−Ｃ（Ｏ）−，−Ｏ−，−Ｓ−，−ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−であり；
Ｒ１及びＲ２は、同一又は異なって、Ｈ又は飽和もしくは不飽和アルキル基であり；
Ｒ３は、（ＣＨ２）ｎであり、及びｎ＝０−１０；
Ｒ４は、水素、アルキル、置換アルキル、シクロアルキル、置換シクロアルキル、ペプチド、ジペプチド、ポリペプチド、蛋白質、グルコース、マンノース、ガラクトース、多糖などの炭水化物、複素環、ヌクレオシド、又はポリヌクレオチドであり；
Ｒ５は、リンカーであり；
Ｘはカチオンである）
を有するものである、請求項１〜３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項８】
リンカーが、アルキル、置換アルキル、シクロアルキル、置換シクロアルキル、アルキルオキシ、１〜５００個のアルキルオキシマーを含有するペギレーテッドエーテルなどのポリアルキルオキシ、置換ポリアルキルオキシなど、ペプチド、ジペプチド、ポリペプチド、蛋白質、グルコース、マンノース、ガラクトース、及び多糖などの炭水化物を含む、請求項７に記載の方法。
【請求項９】
Ｒ１及び／又はＲ２の少なくとも１つが、４〜３４個の炭素を有する飽和又は不飽和アルキル基である、請求項４〜８のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１０】
Ｘが非毒性カチオンである、請求項４〜９のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１１】
Ｘが、水素、アンモニウム、ナトリウム、カリウム、カルシウム又はバリウムイオンである、請求項４〜９のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１２】
Ｒ１及び／又はＲ２の少なくとも１つが、１４〜３４個の炭素を有する飽和又は不飽和アルキル基である、請求項４〜１１のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１３】
Ｒ１及び／又はＲ２の少なくとも１つが、１４〜２４個の炭素を有する飽和又は不飽和アルキル基である、請求項４〜１２のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１４】
カルジオリピン又はカルジオリピンアナログが、式Ｉ、ＩＩ又はＩＩＩのカルジオリピン又はカルジオリピンアナログである、請求項３に記載の方法。
【請求項１５】
ジクロロホスフェート又はＮ，Ｎ−ジイソプロピルメチルホスホンアミディック クロリドのいずれかであるカップリング剤の存在下、１，２−Ｏ−ジアシルグリセロールと２−Ｏ−保護グリセロールを反応させることを含む、化合物ＩＩのカルジオリピン又はカルジオリピンアナログの製造方法。
【請求項１６】
ジクロロホスフェート又はＮ，Ｎ−ジイソプロピルメチルホスホンアミディック クロリドのいずれかであるカップリング剤の存在下、１，２−Ｏ−ジアルキルグリセロールと２−Ｏ−保護グリセロールを反応させることを含む、化合物ＩＩＩのカルジオリピン又はカルジオリピンアナログの製造方法。
【請求項１７】
ジクロロホスフェート又はＮ，Ｎ−ジイソプロピルメチルホスホンアミディック クロリドのいずれかであるカップリング剤の存在下、式Ｖのアルコールと式ＶＩ
【化６】
（式中、Ｒ４及びＲ５は、請求項１に定義されている通りである）のジオールを反応させることを含む、化合物ＩＶのカルジオリピン又はカルジオリピンアナログの製造方法。
【請求項１８】
カップリング剤が、式ＶＩＩ
【化７】
（式中、Ｗは、メチル、エチル、イソプロピル、ｔ−ブチル、アリル、２−置換エチル、２，２，２−トリブロモエチルなどのハロエチルを含むアルキル基又は置換アルキル基；ベンジル基又は置換ベンジル基；フェニル基、又は２−クロロフェニル、４−クロロフェニル及び２，４−ジクロロフェニルなどの置換フェニル基；又は任意の他の除去可能保護基である）のジクロロホスフェートである、請求項３〜１７のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１９】
カップリング剤が、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルメチルホスホンアミディック クロリドである、請求項３〜１７に記載の方法。
【請求項２０】
請求項１〜１９のいずれか１項に記載の方法に従って製造されるカルジオリピンアナログ。
【請求項２１】
請求項１〜１９のいずれか１項に記載の方法に従って製造される、カルジオリピン又はカルジオリピンアナログであって、該カルジオリピンがＣ４−Ｃ１３鎖長を有するものである、カルジオリピン又はカルジオリピンアナログ。
【請求項２２】
請求項１〜１９のいずれか１項に記載の方法に従って製造されるカルジオリピン又はカルジオリピンアナログであって、該カルジオリピンがＣ１５−Ｃ３４鎖長を有するものである、カルジオリピン又はカルジオリピンアナログ。
【請求項２３】
リポソームの製造方法であって、請求項１〜１９のいずれか１項に記載の方法によってカルジオリピン又はカルジオリピンアナログを製造し、次いで、該カルジオリピン又はカルジオリピンアナログをリポソームに含ませることを含む方法。
【請求項２４】
リポソーム中に活性剤を保持させる方法であって、請求項１〜１９のいずれか１項に記載の方法のいずれかによってカルジオリピン又はカルジオリピンアナログを製造し、該カルジオリピン又はカルジオリピンアナログ及び活性剤をリポソームに含ませることを含む方法。
【請求項２５】
活性剤が１以上の遺伝子ベクター、アンチセンス分子、蛋白質又は薬剤を含む、請求項２４に記載の方法。
【請求項２６】
活性剤が１以上の活性な抗癌剤を含む、請求項２４又は２５に記載の方法。
【請求項２７】
活性剤が１以上の抗体を含む、請求項２４〜２６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２８】
活性剤が核酸を含む、請求項２４〜２６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２９】
核酸がＲＮＡである、請求項２８に記載の方法。
【請求項３０】
ＲＮＡが癌遺伝子を指向するものである、請求項２９に記載の方法。
【請求項３１】
核酸がオリゴヌクレオチドである、請求項２９に記載の方法。
【請求項３２】
活性剤が、リポソーム内に捕捉されるようになる、請求項２４に記載の方法。
【請求項３３】
活性剤がカルジオリピン又はカルジオリピンアナログと複合体形成するようになる、請求項２４に記載の方法。
【請求項３４】
リポソームを凍結保護物質と共に凍結乾燥することを更に含む、請求項２３〜２９のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３５】
請求項２３〜３４のいずれか１項に記載の方法に従って製造されるカルジオリピンアナログを含むリポソーム組成物
【請求項３６】
請求項２３〜３４のいずれか１項に記載の方法に従って製造されるカルジオリピン又はカルジオリピンアナログを含むリポソーム組成物であって、該カルジオリピンがＣ４−Ｃ１３鎖長を有するものである、リポソーム組成物。
【請求項３７】
請求項２３〜３４のいずれか１項に記載の方法に従って製造されるカルジオリピン又はカルジオリピンアナログを含むリポソーム組成物であって、該カルジオリピンがＣ１５−Ｃ３４鎖長を有するものである、リポソーム組成物。
【請求項３８】
凍結乾燥形態である、請求項３５〜３７のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項３９】
請求項１〜１９のいずれか１項に記載の方法に従って製造されるカルジオリピンアナログを含む組成物。
【請求項４０】
請求項１〜１９のいずれか１項に記載の方法に従って製造されるカルジオリピン又はカルジオリピンアナログを含む組成物であって、該カルジオリピンがＣ４−Ｃ１３鎖長を有するものである、組成物。
【請求項４１】
請求項１〜１９のいずれか１項に記載の方法に従って製造されるカルジオリピン又はカルジオリピンアナログを含む組成物であって、該カルジオリピンがＣ１５−Ｃ３４鎖長を有するものである、組成物。
【請求項４２】
ホスファチジルコリン、ステロール及びトコフェロールを更に含む、請求項３５〜４１のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項４３】
ジミリストイルホスファチジルコリン、ジステアロイルホスファチジルコリン、ジオレイルホスファチジルコリン、ジパルミトイルホスファチジルコリン、ジアラキドノイルホスファチジルコリン、卵ホスファチジルコリン、大豆ホスファチジルコリン、水素添加大豆ホスファチジルコリン、及びそれらの混合物からなる群から選択されるホスファチジルコリンを更に含む、請求項３５〜４２のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項４４】
ジミリストイルホスファチジルグリセロール、ジステアロイルホスファチジルグリセロール、ジオレイルホスファチジルグリセロール、ジパルミトイルホスファチジルグリセロール、ジアラキドノイルホスファチジルグリセロール、及びそれらの混合物からなる群から選択されるホスファチジルグリセロールを更に含む、請求項３５〜４３のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項４５】
コレステロール、コレステロール誘導体、コプロスタノール、コレスタノール、コレスタン、コレステロールヘミサクシネート、コレステロールサルフェート、及びそれらの混合物からなる群から選択されるステロールを更に含む、請求項３５〜４４のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項４６】
標的指向剤を更に含む、請求項３５〜４５のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項４７】
標的指向剤が蛋白質である、請求項４６に記載の組成物。
【請求項４８】
蛋白質が、抗体、抗体フラグメント、ペプチド、ペプチドホルモン、レセプターリガンド、及びそれらの混合物からなる蛋白質の群から選択される、請求項４７に記載の組成物。
【請求項４９】
標的指向剤が炭水化物である、４８に記載の組成物。
【請求項５０】
リガンドを更に含む、請求項３５〜４９のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項５１】
リガンドが、細胞レセプターの抗体又はリガンドである、請求項５０に記載の組成物。
【請求項５２】
脂質複合体又はエマルションの形態である、請求項３５〜５１に記載の組成物。
【請求項５３】
リポソームを含む、請求項３５〜５２のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項５４】
該リポソームがカルジオリピンを含む、請求項５３記載の組成物
【請求項５５】
さらに活性剤を含む、請求項５３又は５４記載の組成物。
【請求項５６】
請求項２０〜２２のいずれか１項に記載のカルジオリピン又はカルジオリピンアナログをリポソーム形態で含み、且つ活性剤を含む組成物。
【請求項５７】
請求項１〜１９のいずれか１項に記載の方法に従って製造されるカルジオリピンアナログをリポソーム形態で含み、且つ活性剤を含む組成物。
【請求項５８】
請求項１〜１９のいずれか１項に記載の方法に従って製造されるカルジオリピンをリポソーム形態で含み、且つ活性剤を含む組成物であって、該カルジオリピンがＣ４−Ｃ１３鎖長を有するものである、組成物。
【請求項５９】
請求項１〜１９のいずれか１項に記載の方法に従って製造されるカルジオリピンをリポソーム形態で含み、且つ活性剤を含む組成物であって、該カルジオリピンがＣ１５−Ｃ３４鎖長を有するものである、組成物。
【請求項６０】
活性剤が、１つ以上のリポソーム中に捕捉される、請求項５５〜５９のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項６１】
活性剤が、カルジオリピン又はカルジオリピンアナログと複合体形成している、請求項５５〜５９のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項６２】
凍結乾燥形態の、請求項５３〜６１に記載の組成物。
【請求項６３】
凍結保護物質を更に含む、請求項６２に記載の組成物。
【請求項６４】
リポソームの直径が約１ミクロン以下である、請求項５３〜６３のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項６５】
リポソームの直径が約５００ｎｍ以下である、請求項５３〜６３のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項６６】
リポソームの直径が約２００ｎｍ以下である、請求項５３〜６３のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項６７】
リポソームの直径が約１００ｎｍ以下である、請求項５３〜６３のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項６８】
医薬として許容できる賦形剤を更に含む、請求項３５〜６７のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項６９】
さらに活性剤を含む、請求項３５〜５２のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項７０】
活性剤がカルジオリピン又はカルジオリピンアナログと複合体形成する、請求項６９記載の組成物。
【請求項７１】
活性剤が１以上の遺伝子ベクター、アンチセンス分子、蛋白質又は薬剤を含む、請求項５５〜６１又は６９〜７０のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項７２】
活性剤が１以上の活性な抗癌剤を含む、請求項５５〜６１又は６９〜７１のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項７３】
活性剤が１以上の抗体を含む、請求項５５〜６１又は６９〜７２のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項７４】
活性剤が核酸を含む、請求項５５〜６１又は６９〜７３のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項７５】
核酸がＲＮＡである、請求項７４に記載の組成物。
【請求項７６】
ＲＮＡが癌遺伝子を指向するものである、請求項７５に記載の組成物。
【請求項７７】
核酸がオリゴヌクレオチドである、請求項７４に記載の組成物。
【請求項７８】
疾患の治療用医薬を製造するための、請求項３５〜７７のいずれか１項に記載の組成物の使用。
【請求項７９】
疾患が癌である、請求項７８に記載の使用。
【請求項８０】
細胞への活性剤の送達方法であって、請求項５５〜６１又は６９〜７７のいずれか１項に記載の組成物を製造し、該組成物を細胞に曝すことを含む方法。
【請求項８１】
細胞がインビトロである、請求項８０に記載の方法。
【請求項８２】
細胞がインビボである、請求項８０に記載の方法。
【請求項８３】
ヒト又は動物の疾患の治療方法であって、請求項５５〜６１又は６９〜７７のいずれか１項に記載の組成物を製造し、活性剤がヒト又は動物患者に送達されるように、該組成物を、その必要のあるヒト又は動物に曝すことを含む方法。
【請求項８４】
疾患が癌であり、活性剤が抗癌剤である、請求項８３に記載の方法。
【請求項８５】
組成物が、１つ以上のリポソームを含む、請求項８０〜８４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項８６】
活性剤が、組成物中でカルジオリピン又はカルジオリピンアナログと複合体形成している、請求項８０〜８５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項８７】
活性剤が、組成物中でリポソーム内に捕捉されている、請求項８０〜８６に記載の方法。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
カルジオリピン又はカルジオリピンアナログの製造方法であって、
Ｎ，Ｎ’−ジシクロヘキシルカルボジイミド又はＮ，Ｎ’−カルボニルジイミダゾールであるカップリング剤の存在下、ホスファチジン酸と２−Ｏ−保護グリセロールを反応させることを含む方法。
【請求項２】
カルジオリピン又はカルジオリピンアナログの製造方法であって、トリイソプロピルベンゼンスルホニル クロリド、又はＮ，Ｎ’−ジシクロヘキシルカルボジイミド又はＮ，Ｎ’−カルボニルジイミダゾールであるカップリング剤の存在下、ホスファチジン酸とグリセロールを反応させることを含む方法。
【請求項３】
カルジオリピン又はカルジオリピンアナログの製造方法であって、ジクロロホスフェート又はＮ，Ｎ−ジイソプロピルメチルホスホンアミディック クロリドのいずれかであるカップリング剤の存在下、式Ｖ
【化１】
（式中、Ｚ１及びＺ２は、同一又は異なって、−Ｏ−Ｃ（Ｏ）−，−Ｏ−，−Ｓ−，又は−ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−であり；
Ｒ１及びＲ２は、同一又は異なって、Ｈ及び／又は飽和もしくは不飽和アルキル基であり；
Ｒ３は（ＣＨ２）ｎであり、及びｎ＝０−１０）
のアルコールと、２−Ｏ−保護グリセロール又は２−Ｏ−置換グリセロールを反応させることを含む方法。
【請求項４】
カルジオリピン又はカルジオリピンアナログが以下の構造
【化２】
（式中、Ｚ１及びＺ２は、同一又は異なって、−Ｏ−Ｃ（Ｏ）−，−Ｏ−，−Ｓ−，又は−ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−であり；
Ｒ１及びＲ２は、同一又は異なって、Ｈ及び／又は飽和もしくは不飽和アルキル基であり；
Ｒ３は（ＣＨ２）ｎであり、及びｎ＝０−１０；
Ｒ４は、水素、アルキル、置換アルキル、シクロアルキル、置換シクロアルキル、ペプチド、ジペプチド、ポリペプチド、蛋白質、グルコース、マンノース、ガラクトース、多糖などの炭水化物、複素環、ヌクレオシド、又はポリヌクレオチドであり；
Ｘはカチオンである）
を有するものである、請求項１〜３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項５】
カルジオリピン又はカルジオリピンアナログが以下の構造
【化３】
を有するものである、請求項４に記載の方法。
【請求項６】
カルジオリピン又はカルジオリピンアナログが以下の構造
【化４】
を有するカルジオリピンエーテルアナログである、請求項４に記載の方法。
【請求項７】
カルジオリピン又はカルジオリピンアナログが以下の構造
【化５】
（式中、Ｚ１及びＺ２は、同一又は異なって、−Ｏ−Ｃ（Ｏ）−，−Ｏ−，−Ｓ−，−ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−であり；
Ｒ１及びＲ２は、同一又は異なって、Ｈ又は飽和もしくは不飽和アルキル基であり；
Ｒ３は、（ＣＨ２）ｎであり、及びｎ＝０−１０；
Ｒ４は、水素、アルキル、置換アルキル、シクロアルキル、置換シクロアルキル、ペプチド、ジペプチド、ポリペプチド、蛋白質、グルコース、マンノース、ガラクトース、多糖などの炭水化物、複素環、ヌクレオシド、又はポリヌクレオチドであり；
Ｒ５は、リンカーであり；
Ｘはカチオンである）
を有するものである、請求項１〜３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項８】
リンカーが、アルキル、置換アルキル、シクロアルキル、置換シクロアルキル、アルキルオキシ、１〜５００個のアルキルオキシマーを含有するペギレーテッドエーテルなどのポリアルキルオキシ、置換ポリアルキルオキシなど、ペプチド、ジペプチド、ポリペプチド、蛋白質、グルコース、マンノース、ガラクトース、及び多糖などの炭水化物を含む、請求項７に記載の方法。
【請求項９】
Ｒ１及び／又はＲ２の少なくとも１つが、４〜３４個の炭素を有する飽和又は不飽和アルキル基である、請求項４〜８のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１０】
Ｘが非毒性カチオンである、請求項４〜９のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１１】
Ｘが、水素、アンモニウム、ナトリウム、カリウム、カルシウム又はバリウムイオンである、請求項４〜９のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１２】
Ｒ１及び／又はＲ２の少なくとも１つが、１４〜３４個の炭素を有する飽和又は不飽和アルキル基である、請求項４〜１１のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１３】
Ｒ１及び／又はＲ２の少なくとも１つが、１４〜２４個の炭素を有する飽和又は不飽和アルキル基である、請求項４〜１２のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１４】
カルジオリピン又はカルジオリピンアナログが、式Ｉ、ＩＩ又はＩＩＩのカルジオリピン又はカルジオリピンアナログである、請求項３に記載の方法。
【請求項１５】
ジクロロホスフェート又はＮ，Ｎ−ジイソプロピルメチルホスホンアミディック クロリドのいずれかであるカップリング剤の存在下、１，２−Ｏ−ジアシルグリセロールと２−Ｏ−保護グリセロールを反応させることを含む、化合物ＩＩのカルジオリピン又はカルジオリピンアナログの製造方法。
【請求項１６】
ジクロロホスフェート又はＮ，Ｎ−ジイソプロピルメチルホスホンアミディック クロリドのいずれかであるカップリング剤の存在下、１，２−Ｏ−ジアルキルグリセロールと２−Ｏ−保護グリセロールを反応させることを含む、化合物ＩＩＩのカルジオリピン又はカルジオリピンアナログの製造方法。
【請求項１７】
ジクロロホスフェート又はＮ，Ｎ−ジイソプロピルメチルホスホンアミディック クロリドのいずれかであるカップリング剤の存在下、式Ｖのアルコールと式ＶＩ
【化６】
（式中、Ｒ４及びＲ５は、請求項１に定義されている通りである）のジオールを反応させることを含む、化合物ＩＶのカルジオリピン又はカルジオリピンアナログの製造方法。
【請求項１８】
カップリング剤が、式ＶＩＩ
【化７】
（式中、Ｗは、メチル、エチル、イソプロピル、ｔ−ブチル、アリル、２−置換エチル、２，２，２−トリブロモエチルなどのハロエチルを含むアルキル基又は置換アルキル基；ベンジル基又は置換ベンジル基；フェニル基、又は２−クロロフェニル、４−クロロフェニル及び２，４−ジクロロフェニルなどの置換フェニル基；又は任意の他の除去可能保護基である）のジクロロホスフェートである、請求項３〜１７のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１９】
カップリング剤が、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルメチルホスホンアミディック クロリドである、請求項３〜１７に記載の方法。
【請求項２０】
請求項１〜１９のいずれか１項に記載の方法に従って製造されるカルジオリピンアナログ。
【請求項２１】
請求項１〜１９のいずれか１項に記載の方法に従って製造される、カルジオリピン又はカルジオリピンアナログであって、該カルジオリピンがＣ４−Ｃ１３鎖長を有するものである、カルジオリピン又はカルジオリピンアナログ。
【請求項２２】
請求項１〜１９のいずれか１項に記載の方法に従って製造されるカルジオリピン又はカルジオリピンアナログであって、該カルジオリピンがＣ１５−Ｃ３４鎖長を有するものである、カルジオリピン又はカルジオリピンアナログ。
【請求項２３】
請求項１〜１９のいずれか１項に記載の方法に従って製造される、カルジオリピン又はカルジオリピンアナログであって、該カルジオリピンがＣ４−Ｃ３４鎖長を有するものである、カルジオリピン又はカルジオリピンアナログ。
【請求項２４】
請求項１〜１９のいずれか１項に記載の方法に従って製造される、カルジオリピン又はカルジオリピンアナログであって、該カルジオリピンがＣ１４鎖長を有するものである、カルジオリピン又はカルジオリピンアナログ。
【請求項２５】
リポソームの製造方法であって、請求項１〜１９のいずれか１項に記載の方法によってカルジオリピン又はカルジオリピンアナログを製造し、次いで、該カルジオリピン又はカルジオリピンアナログをリポソームに含ませることを含む方法。
【請求項２６】
リポソーム中に活性剤を保持させる方法であって、請求項１〜１９のいずれか１項に記載の方法のいずれかによってカルジオリピン又はカルジオリピンアナログを製造し、該カルジオリピン又はカルジオリピンアナログ及び活性剤をリポソームに含ませることを含む方法。
【請求項２７】
活性剤が１以上の遺伝子ベクター、アンチセンス分子、蛋白質又は薬剤を含む、請求項２６に記載の方法。
【請求項２８】
活性剤が１以上の活性な抗癌剤を含む、請求項２６又は２７に記載の方法。
【請求項２９】
活性剤が１以上の抗体を含む、請求項２６〜２８のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３０】
活性剤が核酸を含む、請求項２６〜２８のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３１】
核酸がＲＮＡである、請求項３０に記載の方法。
【請求項３２】
ＲＮＡが癌遺伝子を指向するものである、請求項３１に記載の方法。
【請求項３３】
核酸がオリゴヌクレオチドである、請求項３１に記載の方法。
【請求項３４】
活性剤が、リポソーム内に捕捉されるようになる、請求項２６に記載の方法。
【請求項３５】
活性剤がカルジオリピン又はカルジオリピンアナログと複合体形成するようになる、請求項２６に記載の方法。
【請求項３６】
リポソームを凍結保護物質と共に凍結乾燥することを更に含む、請求項２５〜３１のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３７】
請求項２５〜３６のいずれか１項に記載の方法に従って製造されるカルジオリピンアナログを含むリポソーム組成物。
【請求項３８】
請求項２５〜３６のいずれか１項に記載の方法に従って製造されるカルジオリピン又はカルジオリピンアナログを含むリポソーム組成物であって、該カルジオリピンがＣ４−Ｃ１３鎖長を有するものである、リポソーム組成物。
【請求項３９】
請求項２５〜３６のいずれか１項に記載の方法に従って製造されるカルジオリピン又はカルジオリピンアナログを含むリポソーム組成物であって、該カルジオリピンがＣ１５−Ｃ３４鎖長を有するものである、リポソーム組成物。
【請求項４０】
請求項２５〜３６のいずれか１項に記載の方法に従って製造されるカルジオリピン又はカルジオリピンアナログを含むリポソーム組成物であって、該カルジオリピンがＣ４−Ｃ３４鎖長を有するものである、リポソーム組成物。
【請求項４１】
請求項２５〜３６のいずれか１項に記載の方法に従って製造されるカルジオリピン又はカルジオリピンアナログを含むリポソーム組成物であって、該カルジオリピンがＣ１４鎖長を有するものである、リポソーム組成物。
【請求項４２】
凍結乾燥形態である、請求項３７〜４１のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項４３】
請求項１〜１９のいずれか１項に記載の方法に従って製造されるカルジオリピンアナログを含む組成物。
【請求項４４】
請求項１〜１９のいずれか１項に記載の方法に従って製造されるカルジオリピン又はカルジオリピンアナログを含む組成物であって、該カルジオリピンがＣ４−Ｃ１３鎖長を有するものである、組成物。
【請求項４５】
請求項１〜１９のいずれか１項に記載の方法に従って製造されるカルジオリピン又はカルジオリピンアナログを含む組成物であって、該カルジオリピンがＣ１５−Ｃ３４鎖長を有するものである、組成物。
【請求項４６】
請求項１〜１９のいずれか１項に記載の方法に従って製造されるカルジオリピン又はカルジオリピンアナログを含む組成物であって、該カルジオリピンがＣ４−Ｃ３４鎖長を有するものである、組成物。
【請求項４７】
請求項１〜１９のいずれか１項に記載の方法に従って製造されるカルジオリピン又はカルジオリピンアナログを含む組成物であって、該カルジオリピンがＣ１４鎖長を有するものである、組成物。
【請求項４８】
ホスファチジルコリン、ステロール及びトコフェロールを更に含む、請求項３７〜４７のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項４９】
ジミリストイルホスファチジルコリン、ジステアロイルホスファチジルコリン、ジオレイルホスファチジルコリン、ジパルミトイルホスファチジルコリン、ジアラキドノイルホスファチジルコリン、卵ホスファチジルコリン、大豆ホスファチジルコリン、水素添加大豆ホスファチジルコリン、及びそれらの混合物からなる群から選択されるホスファチジルコリンを更に含む、請求項３７〜４８のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項５０】
ジミリストイルホスファチジルグリセロール、ジステアロイルホスファチジルグリセロール、ジオレイルホスファチジルグリセロール、ジパルミトイルホスファチジルグリセロール、ジアラキドノイルホスファチジルグリセロール、及びそれらの混合物からなる群から選択されるホスファチジルグリセロールを更に含む、請求項３７〜４９のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項５１】
コレステロール、コレステロール誘導体、コプロスタノール、コレスタノール、コレスタン、コレステロールヘミサクシネート、コレステロールサルフェート、及びそれらの混合物からなる群から選択されるステロールを更に含む、請求項３７〜５０のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項５２】
標的指向剤を更に含む、請求項３７〜５１のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項５３】
標的指向剤が蛋白質である、請求項５２に記載の組成物。
【請求項５４】
蛋白質が、抗体、抗体フラグメント、ペプチド、ペプチドホルモン、レセプターリガンド、及びそれらの混合物からなる蛋白質の群から選択される、請求項５３に記載の組成物。
【請求項５５】
標的指向剤が炭水化物である、請求項５４に記載の組成物。
【請求項５６】
リガンドを更に含む、請求項３７〜５５のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項５７】
リガンドが、細胞レセプターの抗体又はリガンドである、請求項５６に記載の組成物。
【請求項５８】
脂質複合体又はエマルションの形態である、請求項３７〜５７に記載の組成物。
【請求項５９】
リポソームを含む、請求項３７〜５８のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項６０】
該リポソームがカルジオリピンを含む、請求項５９記載の組成物。
【請求項６１】
さらに活性剤を含む、請求項５９又は６０記載の組成物。
【請求項６２】
請求項２０〜２４のいずれか１項に記載のカルジオリピン又はカルジオリピンアナログをリポソーム形態で含み、且つ活性剤を含む組成物。
【請求項６３】
請求項１〜１９のいずれか１項に記載の方法に従って製造されるカルジオリピンアナログをリポソーム形態で含み、且つ活性剤を含む組成物。
【請求項６４】
請求項１〜１９のいずれか１項に記載の方法に従って製造されるカルジオリピンをリポソーム形態で含み、且つ活性剤を含む組成物であって、該カルジオリピンがＣ４−Ｃ１３鎖長を有するものである、組成物。
【請求項６５】
請求項１〜１９のいずれか１項に記載の方法に従って製造されるカルジオリピンをリポソーム形態で含み、且つ活性剤を含む組成物であって、該カルジオリピンがＣ１５−Ｃ３４鎖長を有するものである、組成物。
【請求項６６】
請求項１〜１９のいずれか１項に記載の方法に従って製造されるカルジオリピンをリポソーム形態で含み、且つ活性剤を含む組成物であって、該カルジオリピンがＣ４−Ｃ３４鎖長を有するものである、組成物。
【請求項６７】
請求項１〜１９のいずれか１項に記載の方法に従って製造されるカルジオリピンをリポソーム形態で含み、且つ活性剤を含む組成物であって、該カルジオリピンがＣ１４鎖長を有するものである、組成物。
【請求項６８】
活性剤が、１つ以上のリポソーム中に捕捉される、請求項６１〜６７のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項６９】
活性剤が、カルジオリピン又はカルジオリピンアナログと複合体形成している、請求項６１〜６７のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項７０】
凍結乾燥形態の、請求項５９〜６９に記載の組成物。
【請求項７１】
凍結保護物質を更に含む、請求項７０に記載の組成物。
【請求項７２】
リポソームの直径が約１ミクロン以下である、請求項５９〜７１のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項７３】
リポソームの直径が約５００ｎｍ以下である、請求項５９〜７１のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項７４】
リポソームの直径が約２００ｎｍ以下である、請求項５９〜７１のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項７５】
リポソームの直径が約１００ｎｍ以下である、請求項５９〜７１のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項７６】
医薬として許容できる賦形剤を更に含む、請求項３７〜７５のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項７７】
さらに活性剤を含む、請求項３７〜５８のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項７８】
活性剤がカルジオリピン又はカルジオリピンアナログと複合体形成する、請求項７７記載の組成物。
【請求項７９】
活性剤が１以上の遺伝子ベクター、アンチセンス分子、蛋白質又は薬剤を含む、請求項６１〜６９又は７７〜７８のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項８０】
活性剤が１以上の活性な抗癌剤を含む、請求項６１〜６９又は７７〜７９のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項８１】
活性剤が１以上の抗体を含む、請求項６１〜６９又は７７〜８０のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項８２】
活性剤が核酸を含む、請求項６１〜６９又は７７〜８１のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項８３】
核酸がＲＮＡである、請求項８２に記載の組成物。
【請求項８４】
ＲＮＡが癌遺伝子を指向するものである、請求項８３に記載の組成物。
【請求項８５】
核酸がオリゴヌクレオチドである、請求項８２に記載の組成物。
【請求項８６】
疾患の治療用医薬を製造するための、請求項３７〜８５のいずれか１項に記載の組成物の使用。
【請求項８７】
疾患が癌である、請求項８６に記載の使用。
【請求項８８】
細胞への活性剤の送達方法であって、請求項６１〜６９又は７７〜８５のいずれか１項に記載の組成物を製造し、該組成物を細胞に曝すことを含む方法。
【請求項８９】
細胞がインビトロである、請求項８８に記載の方法。
【請求項９０】
細胞がインビボである、請求項８８に記載の方法。
【請求項９１】
ヒト又は動物の疾患の治療方法であって、請求項６１〜６９又は７７〜８５のいずれか１項に記載の組成物を製造し、活性剤がヒト又は動物患者に送達されるように、該組成物を、その必要のあるヒト又は動物に曝すことを含む方法。
【請求項９２】
疾患が癌であり、活性剤が抗癌剤である、請求項９１に記載の方法。
【請求項９３】
組成物が、１つ以上のリポソームを含む、請求項８８〜９２のいずれか１項に記載の方法。
【請求項９４】
活性剤が、組成物中でカルジオリピン又はカルジオリピンアナログと複合体形成している、請求項８８〜９３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項９５】
活性剤が、組成物中でリポソーム内に捕捉されている、請求項８８〜９４に記載の方法。
【請求項１】
以下の構造
【化１】
（式中、Ｚ１及びＺ２は、同一又は異なって、−Ｏ−Ｃ（Ｏ）−，−Ｏ−，−Ｓ−，又は−ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−であり；
Ｒ１及びＲ２は、同一又は異なって、Ｈ及び／又は飽和もしくは不飽和アルキル基であり；
Ｒ３は（ＣＨ２）ｎであり、及びｎ＝０−１０；
Ｒ４は、水素、アルキル、置換アルキル、シクロアルキル、置換シクロアルキル、ペプチド、ジペプチド、ポリペプチド、蛋白質、グルコース、マンノース、ガラクトース、多糖などの炭水化物、複素環、ヌクレオシド、又はポリヌクレオチドであり；
Ｘはカチオンである）
を有するカルジオリピン分子。
【請求項２】
以下の構造
【化２】
を有する、請求項１に記載のカルジオリピン分子。
【請求項３】
以下の構造
【化３】
を有するカルジオリピンエーテルアナログである、請求項１に記載のカルジオリピン分子。
【請求項４】
以下の構造
【化４】
（式中、Ｚ１及びＺ２は、同一又は異なって、−Ｏ−Ｃ（Ｏ）−，−Ｏ−，−Ｓ−，−ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−であり；
Ｒ１及びＲ２は、同一又は異なって、Ｈ又は飽和もしくは不飽和アルキル基であり；
Ｒ３は、（ＣＨ２）ｎであり、及びｎ＝０−１０；
Ｒ４は、水素、アルキル、置換アルキル、シクロアルキル、置換シクロアルキル、ペプチド、ジペプチド、ポリペプチド、蛋白質、グルコース、マンノース、ガラクトース、多糖などの炭水化物、複素環、ヌクレオシド、又はポリヌクレオチドであり；
Ｒ５は、リンカーであり；
Ｘはカチオンである）
を有するカルジオリピンアナログ。
【請求項５】
リンカーが、アルキル、置換アルキル、シクロアルキル、置換シクロアルキル、アルキルオキシ、１〜５００個のアルキルオキシマーを含有するペギレーテッドエーテルなどのポリアルキルオキシ、置換ポリアルキルオキシなど、ペプチド、ジペプチド、ポリペプチド、蛋白質、グルコース、マンノース、ガラクトース、及び多糖などの炭水化物を含む、請求項４に記載のカルジオリピンアナログ。
【請求項６】
Ｒ１及び／又はＲ２の少なくとも１つが、１４〜３４個の炭素を有する飽和又は不飽和アルキル基である、請求項１〜５のいずれか１項に記載のカルジオリピン分子。
【請求項７】
Ｘが非毒性カチオンである、請求項１〜６のいずれか１項に記載のカルジオリピン分子。
【請求項８】
Ｘは、水素、アンモニウム、ナトリウム、カリウム、カルシウム又はバリウムイオンである、請求項１〜７のいずれか１項に記載のカルジオリピンアナログ。
【請求項９】
カルジオリピン分子又はそのアナログの製造方法であって、
Ｎ，Ｎ’−ジシクロヘキシルカルボジイミド又はＮ，Ｎ’−カルボニルジイミダゾールであるカップリング剤の存在下、ホスファチジン酸と２−Ｏ−保護グリセロールを反応させることを含む方法。
【請求項１０】
カルジオリピン又はそのアナログの製造方法であって、トリイソプロピルベンゼンスルホニル クロリド、又はＮ，Ｎ’−ジシクロヘキシルカルボジイミド又はＮ，Ｎ’−カルボニルジイミダゾールであるカップリング剤の存在下、ホスファチジン酸とグリセロールを反応させることを含む方法。
【請求項１１】
カルジオリピン分子の製造方法であって、ジクロロホスフェート又はＮ，Ｎ−ジイソプロピルメチルホスホンアミディック クロリドのいずれかであるカップリング剤の存在下、式Ｖ
【化５】
（式中、Ｚ１及びＺ２は、同一又は異なって、−Ｏ−Ｃ（Ｏ）−，−Ｏ−，−Ｓ−，−ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−であり、Ｒ１及びＲ２は、同一又は異なって、Ｈ及び／又は飽和もしくは不飽和アルキル基であり;Ｒ３は（ＣＨ２）ｎであり、及びｎ＝０−１０）
のアルコールと、２−Ｏ−保護グリセロール又は２−Ｏ−置換グリセロールを反応させることを含む方法。
【請求項１２】
Ｒ１及び／又はＲ２の少なくとも１つが、４〜３４個の炭素を有する飽和又は不飽和アルキル基である、請求項１１に記載の方法。
【請求項１３】
Ｒ１及び／又はＲ２の少なくとも１つが、１４〜２４個の炭素を有する飽和又は不飽和アルキル基である、請求項１１に記載の方法。
【請求項１４】
カルジオリピン分子が、請求項１〜３のいずれか１項に記載の分子である、請求項１１に記載の方法。
【請求項１５】
ジクロロホスフェート又はＮ，Ｎ−ジイソプロピルメチルホスホンアミディック クロリドのいずれかであるカップリング剤の存在下、１，２−Ｏ−ジアシルグリセロールと２−Ｏ−保護グリセロールを反応させることを含む、請求項２に記載のカルジオリピンの製造方法。
【請求項１６】
ジクロロホスフェート又はＮ，Ｎ−ジイソプロピルメチルホスホンアミディック クロリドのいずれかであるカップリング剤の存在下、１，２−Ｏ−ジアルキルグリセロールと２−Ｏ−保護グリセロールを反応させることを含む、請求項３に記載のカルジオリピンの製造方法。
【請求項１７】
ジクロロホスフェート又はＮ，Ｎ−ジイソプロピルメチルホスホンアミディック クロリドのいずれかであるカップリング剤の存在下、式Ｖのアルコールと式ＶＩ
【化６】
（式中、Ｒ４及びＲ５は、請求項４又は５中に定義されている通りである）のジオールを反応させることを含む、請求項４又は５に記載のカルジオリピンアナログの製造方法。
【請求項１８】
カップリング剤が、式ＶＩＩ
【化７】
（式中、Ｗは、メチル、エチル、イソプロピル、ｔ−ブチル、アリル、２−置換エチル、２，２，２−トリブロモエチルなどのハロエチルを含むアルキル基又は置換アルキル基；ベンジル基又は置換ベンジル基；フェニル基、又は２−クロロフェニル、４−クロロフェニル及び２，４−ジクロロフェニルなどの置換フェニル基；又は任意の他の除去可能保護基である）のジクロロホスフェートである、請求項１１〜１７のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１９】
カップリング剤が、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルメチルホスホンアミディック クロリドである、請求項１１〜１７に記載の方法。
【請求項２０】
請求項９〜１９のいずれか１項に記載の方法に従って製造されるカルジオリピン又はカルジオリピンアナログ。
【請求項２１】
リポソームの製造方法であって、請求項９〜１９の方法のいずれかによってカルジオリピン又はカルジオリピンアナログを製造し、次いで、該カルジオリピン又はカルジオリピンアナログをリポソームに含ませることを含む方法。
【請求項２２】
リポソーム中に活性剤を保持させる方法であって、請求項９〜１９のいずれか１項に記載の方法のいずれかによってカルジオリピン又はカルジオリピンアナログを製造し、該カルジオリピン又はカルジオリピンアナログ及び活性剤をリポソームに含ませることを含む方法。
【請求項２３】
活性剤が薬剤を含む、請求項２２に記載の方法。
【請求項２４】
活性剤がオリゴヌクレオチドを含む、請求項２２に記載の方法。
【請求項２５】
活性剤が抗癌剤を含む、請求項２２に記載の方法。
【請求項２６】
活性剤が、リポソーム内に捕捉されるようになる、請求項２２に記載の方法。
【請求項２７】
活性剤がカルジオリピンと複合体形成するようになる、請求項２２に記載の方法。
【請求項２８】
リポソームを凍結保護物質と共に凍結乾燥することを更に含む、請求項２１〜２７のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２９】
請求項２１〜２８のいずれか１項に記載の方法に従って製造されるリポソーム組成物。
【請求項３０】
請求項１〜８のいずれか１項に記載のカルジオリピンを含む組成物。
【請求項３１】
請求項９〜１９のいずれか１項に記載の方法に従って製造されるカルジオリピン又はカルジオリピンアナログを含む組成物。
【請求項３２】
ホスファチジルコリン、ステロール及びトコフェロールを更に含む、請求項２９〜３１のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項３３】
ジミリストイルホスファチジルコリン、ジステアロイルホスファチジルコリン、ジオレイルホスファチジルコリン、ジパルミトイルホスファチジルコリン、ジアラキドノイルホスファチジルコリン、卵ホスファチジルコリン、大豆ホスファチジルコリン、水素添加大豆ホスファチジルコリン、及びそれらの混合物からなる群から選択されるホスファチジルコリンを更に含む、請求項２９〜３２のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項３４】
ジミリストイルホスファチジルグリセロール、ジステアロイルホスファチジルグリセロール、ジオレイルホスファチジルグリセロール、ジパルミトイルホスファチジルグリセロール、ジアラキドノイルホスファチジルグリセロール、及びそれらの混合物からなる群から選択されるホスファチジルグリセロールを更に含む、請求項２９〜３３のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項３５】
コレステロール、コレステロール誘導体、コプロスタノール、コレスタノール、コレスタン、コレステロールヘミサクシネート、コレステロールサルフェート、及びそれらの混合物からなる群から選択されるステロールを更に含む、請求項２９〜３４のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項３６】
標的指向剤を更に含む、請求項２９〜３５のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項３７】
標的指向剤が蛋白質である、請求項３６に記載の組成物。
【請求項３８】
蛋白質が、抗体、抗体フラグメント、ペプチド、ペプチドホルモン、レセプターリガンド、及びそれらの混合物からなる蛋白質の群から選択される、請求項３７に記載の組成物。
【請求項３９】
標的指向剤が炭水化物である、３６に記載の組成物。
【請求項４０】
リガンドを更に含む、請求項２９〜３９のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項４１】
リガンドが、細胞レセプターの抗体又はリガンドである、請求項４０に記載の組成物。
【請求項４２】
活性剤を含む、請求項２９〜４１のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項４３】
活性剤が、カルジオリピンと複合体形成する、請求項４２に記載の組成物。
【請求項４４】
活性剤が、１種以上の遺伝子ベクター、アンチセンス分子、蛋白質、ペプチド又は薬剤を含む、請求項４２又は４３に記載の組成物。
【請求項４５】
活性剤が、１種以上の抗癌剤を含む、請求項４２〜４４のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項４６】
脂質複合体又はエマルションの形態である、請求項２９〜４５のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項４７】
リポソームを含む、請求項２９〜４６のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項４８】
リポソームがカルジオリピンを含む、請求項４７に記載の組成物。
【請求項４９】
活性剤を更に含む、請求項４７又は４８に記載の組成物。
【請求項５０】
リポソーム形態の請求項１〜８及び２０のいずれか１項に記載のカルジオリピン又はカルジオリピンアナログ及び活性剤を含む組成物。
【請求項５１】
リポソーム形態の、請求項９〜１９のいずれか１項に記載の方法に従って製造されるカルジオリピン又はカルジオリピンアナログと活性剤とを含む組成物。
【請求項５２】
活性剤が、１つ以上のリポソーム中に捕捉される、請求項４７〜５１のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項５３】
活性剤が、カルジオリピンと複合体形成している、請求項４７〜５２のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項５４】
凍結乾燥形態の、請求項４７〜５３に記載の組成物。
【請求項５５】
凍結保護物質を更に含む、請求項５４に記載の組成物。
【請求項５６】
リポソームの直径が約１ミクロン以下である、請求項４７〜５５のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項５７】
リポソームの直径が約５００ｎｍ以下である、請求項４７〜５６のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項５８】
リポソームの直径が約２００ｎｍ以下である、請求項４７〜５７のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項５９】
リポソームの直径が約１００ｎｍ以下である、請求項４７〜５８のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項６０】
医薬として許容できる賦形剤を更に含む、請求項２９〜５９のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項６１】
疾患の治療用医薬を製造するための、請求項２９〜６０のいずれか１項に記載の組成物の使用。
【請求項６２】
疾患が癌である、請求項６１に記載の使用。
【請求項６３】
細胞への活性剤の送達方法であって、請求項４２〜６０のいずれか１項に記載の組成物を製造し、該組成物を細胞に曝すことを含む方法。
【請求項６４】
細胞がインビトロである、請求項６３に記載の方法。
【請求項６５】
細胞がインビボである、請求項６３に記載の方法。
【請求項６６】
ヒト又は動物の疾患の治療方法であって、請求項４２〜６０のいずれか１項に記載の組成物を製造し、活性剤がヒト又は動物患者に送達されるように、該組成物を、その必要のあるヒト又は動物に曝すことを含む方法。
【請求項６７】
疾患が癌であり、活性剤が抗癌剤である、請求項６６に記載の方法。
【請求項６８】
組成物が、１つ以上のリポソームを含む、請求項６３〜６７のいずれか１項に記載の方法。
【請求項６９】
活性剤が、組成物中でカルジオリピンと複合体形成している、請求項６３〜６８のいずれか１項に記載の方法。
【請求項７０】
活性剤が、組成物中でリポソーム内に捕捉されている、請求項６８又は６９に記載の方法。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
カルジオリピン又はカルジオリピンアナログの製造方法であって、
Ｎ，Ｎ’−ジシクロヘキシルカルボジイミド又はＮ，Ｎ’−カルボニルジイミダゾールであるカップリング剤の存在下、ホスファチジン酸と２−Ｏ−保護グリセロールを反応させることを含む方法。
【請求項２】
カルジオリピン又はカルジオリピンアナログの製造方法であって、トリイソプロピルベンゼンスルホニル クロリド、又はＮ，Ｎ’−ジシクロヘキシルカルボジイミド又はＮ，Ｎ’−カルボニルジイミダゾールであるカップリング剤の存在下、ホスファチジン酸とグリセロールを反応させることを含む方法。
【請求項３】
カルジオリピン又はカルジオリピンアナログの製造方法であって、ジクロロホスフェート又はＮ，Ｎ−ジイソプロピルメチルホスホンアミディック クロリドのいずれかであるカップリング剤の存在下、式Ｖ
【化１】
（式中、Ｚ１及びＺ２は、同一又は異なって、−Ｏ−Ｃ（Ｏ）−，−Ｏ−，−Ｓ−，又は−ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−であり；
Ｒ１及びＲ２は、同一又は異なって、Ｈ及び／又は飽和もしくは不飽和アルキル基であり;
Ｒ３は（ＣＨ２）ｎであり、及びｎ＝０−１０）
のアルコールと、２−Ｏ−保護グリセロール又は２−Ｏ−置換グリセロールを反応させることを含む方法。
【請求項４】
カルジオリピン又はカルジオリピンアナログが以下の構造
【化２】
（式中、Ｚ１及びＺ２は、同一又は異なって、−Ｏ−Ｃ（Ｏ）−，−Ｏ−，−Ｓ−，又は−ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−であり；
Ｒ１及びＲ２は、同一又は異なって、Ｈ及び／又は飽和もしくは不飽和アルキル基であり；
Ｒ３は（ＣＨ２）ｎであり、及びｎ＝０−１０；
Ｒ４は、水素、アルキル、置換アルキル、シクロアルキル、置換シクロアルキル、ペプチド、ジペプチド、ポリペプチド、蛋白質、グルコース、マンノース、ガラクトース、多糖などの炭水化物、複素環、ヌクレオシド、又はポリヌクレオチドであり；
Ｘはカチオンである）
を有するものである、請求項１〜３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項５】
カルジオリピン又はカルジオリピンアナログが以下の構造
【化３】
を有するものである、請求項４に記載の方法。
【請求項６】
カルジオリピン又はカルジオリピンアナログが以下の構造
【化４】
を有するカルジオリピンエーテルアナログである、請求項４に記載の方法。
【請求項７】
カルジオリピン又はカルジオリピンアナログが以下の構造
【化５】
（式中、Ｚ１及びＺ２は、同一又は異なって、−Ｏ−Ｃ（Ｏ）−，−Ｏ−，−Ｓ−，−ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−であり；
Ｒ１及びＲ２は、同一又は異なって、Ｈ又は飽和もしくは不飽和アルキル基であり；
Ｒ３は、（ＣＨ２）ｎであり、及びｎ＝０−１０；
Ｒ４は、水素、アルキル、置換アルキル、シクロアルキル、置換シクロアルキル、ペプチド、ジペプチド、ポリペプチド、蛋白質、グルコース、マンノース、ガラクトース、多糖などの炭水化物、複素環、ヌクレオシド、又はポリヌクレオチドであり；
Ｒ５は、リンカーであり；
Ｘはカチオンである）
を有するものである、請求項１〜３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項８】
リンカーが、アルキル、置換アルキル、シクロアルキル、置換シクロアルキル、アルキルオキシ、１〜５００個のアルキルオキシマーを含有するペギレーテッドエーテルなどのポリアルキルオキシ、置換ポリアルキルオキシなど、ペプチド、ジペプチド、ポリペプチド、蛋白質、グルコース、マンノース、ガラクトース、及び多糖などの炭水化物を含む、請求項７に記載の方法。
【請求項９】
Ｒ１及び／又はＲ２の少なくとも１つが、４〜３４個の炭素を有する飽和又は不飽和アルキル基である、請求項４〜８のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１０】
Ｘが非毒性カチオンである、請求項４〜９のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１１】
Ｘが、水素、アンモニウム、ナトリウム、カリウム、カルシウム又はバリウムイオンである、請求項４〜９のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１２】
Ｒ１及び／又はＲ２の少なくとも１つが、１４〜３４個の炭素を有する飽和又は不飽和アルキル基である、請求項４〜１１のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１３】
Ｒ１及び／又はＲ２の少なくとも１つが、１４〜２４個の炭素を有する飽和又は不飽和アルキル基である、請求項４〜１２のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１４】
カルジオリピン又はカルジオリピンアナログが、式Ｉ、ＩＩ又はＩＩＩのカルジオリピン又はカルジオリピンアナログである、請求項３に記載の方法。
【請求項１５】
ジクロロホスフェート又はＮ，Ｎ−ジイソプロピルメチルホスホンアミディック クロリドのいずれかであるカップリング剤の存在下、１，２−Ｏ−ジアシルグリセロールと２−Ｏ−保護グリセロールを反応させることを含む、化合物ＩＩのカルジオリピン又はカルジオリピンアナログの製造方法。
【請求項１６】
ジクロロホスフェート又はＮ，Ｎ−ジイソプロピルメチルホスホンアミディック クロリドのいずれかであるカップリング剤の存在下、１，２−Ｏ−ジアルキルグリセロールと２−Ｏ−保護グリセロールを反応させることを含む、化合物ＩＩＩのカルジオリピン又はカルジオリピンアナログの製造方法。
【請求項１７】
ジクロロホスフェート又はＮ，Ｎ−ジイソプロピルメチルホスホンアミディック クロリドのいずれかであるカップリング剤の存在下、式Ｖのアルコールと式ＶＩ
【化６】
（式中、Ｒ４及びＲ５は、請求項１に定義されている通りである）のジオールを反応させることを含む、化合物ＩＶのカルジオリピン又はカルジオリピンアナログの製造方法。
【請求項１８】
カップリング剤が、式ＶＩＩ
【化７】
（式中、Ｗは、メチル、エチル、イソプロピル、ｔ−ブチル、アリル、２−置換エチル、２，２，２−トリブロモエチルなどのハロエチルを含むアルキル基又は置換アルキル基；ベンジル基又は置換ベンジル基；フェニル基、又は２−クロロフェニル、４−クロロフェニル及び２，４−ジクロロフェニルなどの置換フェニル基；又は任意の他の除去可能保護基である）のジクロロホスフェートである、請求項３〜１７のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１９】
カップリング剤が、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルメチルホスホンアミディック クロリドである、請求項３〜１７に記載の方法。
【請求項２０】
請求項１〜１９のいずれか１項に記載の方法に従って製造されるカルジオリピンアナログ。
【請求項２１】
請求項１〜１９のいずれか１項に記載の方法に従って製造される、カルジオリピン又はカルジオリピンアナログであって、該カルジオリピンがＣ４−Ｃ１３鎖長を有するものである、カルジオリピン又はカルジオリピンアナログ。
【請求項２２】
請求項１〜１９のいずれか１項に記載の方法に従って製造されるカルジオリピン又はカルジオリピンアナログであって、該カルジオリピンがＣ１５−Ｃ３４鎖長を有するものである、カルジオリピン又はカルジオリピンアナログ。
【請求項２３】
リポソームの製造方法であって、請求項１〜１９のいずれか１項に記載の方法によってカルジオリピン又はカルジオリピンアナログを製造し、次いで、該カルジオリピン又はカルジオリピンアナログをリポソームに含ませることを含む方法。
【請求項２４】
リポソーム中に活性剤を保持させる方法であって、請求項１〜１９のいずれか１項に記載の方法のいずれかによってカルジオリピン又はカルジオリピンアナログを製造し、該カルジオリピン又はカルジオリピンアナログ及び活性剤をリポソームに含ませることを含む方法。
【請求項２５】
活性剤が１以上の遺伝子ベクター、アンチセンス分子、蛋白質又は薬剤を含む、請求項２４に記載の方法。
【請求項２６】
活性剤が１以上の活性な抗癌剤を含む、請求項２４又は２５に記載の方法。
【請求項２７】
活性剤が１以上の抗体を含む、請求項２４〜２６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２８】
活性剤が核酸を含む、請求項２４〜２６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２９】
核酸がＲＮＡである、請求項２８に記載の方法。
【請求項３０】
ＲＮＡが癌遺伝子を指向するものである、請求項２９に記載の方法。
【請求項３１】
核酸がオリゴヌクレオチドである、請求項２９に記載の方法。
【請求項３２】
活性剤が、リポソーム内に捕捉されるようになる、請求項２４に記載の方法。
【請求項３３】
活性剤がカルジオリピン又はカルジオリピンアナログと複合体形成するようになる、請求項２４に記載の方法。
【請求項３４】
リポソームを凍結保護物質と共に凍結乾燥することを更に含む、請求項２３〜２９のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３５】
請求項２３〜３４のいずれか１項に記載の方法に従って製造されるカルジオリピンアナログを含むリポソーム組成物
【請求項３６】
請求項２３〜３４のいずれか１項に記載の方法に従って製造されるカルジオリピン又はカルジオリピンアナログを含むリポソーム組成物であって、該カルジオリピンがＣ４−Ｃ１３鎖長を有するものである、リポソーム組成物。
【請求項３７】
請求項２３〜３４のいずれか１項に記載の方法に従って製造されるカルジオリピン又はカルジオリピンアナログを含むリポソーム組成物であって、該カルジオリピンがＣ１５−Ｃ３４鎖長を有するものである、リポソーム組成物。
【請求項３８】
凍結乾燥形態である、請求項３５〜３７のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項３９】
請求項１〜１９のいずれか１項に記載の方法に従って製造されるカルジオリピンアナログを含む組成物。
【請求項４０】
請求項１〜１９のいずれか１項に記載の方法に従って製造されるカルジオリピン又はカルジオリピンアナログを含む組成物であって、該カルジオリピンがＣ４−Ｃ１３鎖長を有するものである、組成物。
【請求項４１】
請求項１〜１９のいずれか１項に記載の方法に従って製造されるカルジオリピン又はカルジオリピンアナログを含む組成物であって、該カルジオリピンがＣ１５−Ｃ３４鎖長を有するものである、組成物。
【請求項４２】
ホスファチジルコリン、ステロール及びトコフェロールを更に含む、請求項３５〜４１のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項４３】
ジミリストイルホスファチジルコリン、ジステアロイルホスファチジルコリン、ジオレイルホスファチジルコリン、ジパルミトイルホスファチジルコリン、ジアラキドノイルホスファチジルコリン、卵ホスファチジルコリン、大豆ホスファチジルコリン、水素添加大豆ホスファチジルコリン、及びそれらの混合物からなる群から選択されるホスファチジルコリンを更に含む、請求項３５〜４２のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項４４】
ジミリストイルホスファチジルグリセロール、ジステアロイルホスファチジルグリセロール、ジオレイルホスファチジルグリセロール、ジパルミトイルホスファチジルグリセロール、ジアラキドノイルホスファチジルグリセロール、及びそれらの混合物からなる群から選択されるホスファチジルグリセロールを更に含む、請求項３５〜４３のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項４５】
コレステロール、コレステロール誘導体、コプロスタノール、コレスタノール、コレスタン、コレステロールヘミサクシネート、コレステロールサルフェート、及びそれらの混合物からなる群から選択されるステロールを更に含む、請求項３５〜４４のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項４６】
標的指向剤を更に含む、請求項３５〜４５のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項４７】
標的指向剤が蛋白質である、請求項４６に記載の組成物。
【請求項４８】
蛋白質が、抗体、抗体フラグメント、ペプチド、ペプチドホルモン、レセプターリガンド、及びそれらの混合物からなる蛋白質の群から選択される、請求項４７に記載の組成物。
【請求項４９】
標的指向剤が炭水化物である、４８に記載の組成物。
【請求項５０】
リガンドを更に含む、請求項３５〜４９のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項５１】
リガンドが、細胞レセプターの抗体又はリガンドである、請求項５０に記載の組成物。
【請求項５２】
脂質複合体又はエマルションの形態である、請求項３５〜５１に記載の組成物。
【請求項５３】
リポソームを含む、請求項３５〜５２のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項５４】
該リポソームがカルジオリピンを含む、請求項５３記載の組成物
【請求項５５】
さらに活性剤を含む、請求項５３又は５４記載の組成物。
【請求項５６】
請求項２０〜２２のいずれか１項に記載のカルジオリピン又はカルジオリピンアナログをリポソーム形態で含み、且つ活性剤を含む組成物。
【請求項５７】
請求項１〜１９のいずれか１項に記載の方法に従って製造されるカルジオリピンアナログをリポソーム形態で含み、且つ活性剤を含む組成物。
【請求項５８】
請求項１〜１９のいずれか１項に記載の方法に従って製造されるカルジオリピンをリポソーム形態で含み、且つ活性剤を含む組成物であって、該カルジオリピンがＣ４−Ｃ１３鎖長を有するものである、組成物。
【請求項５９】
請求項１〜１９のいずれか１項に記載の方法に従って製造されるカルジオリピンをリポソーム形態で含み、且つ活性剤を含む組成物であって、該カルジオリピンがＣ１５−Ｃ３４鎖長を有するものである、組成物。
【請求項６０】
活性剤が、１つ以上のリポソーム中に捕捉される、請求項５５〜５９のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項６１】
活性剤が、カルジオリピン又はカルジオリピンアナログと複合体形成している、請求項５５〜５９のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項６２】
凍結乾燥形態の、請求項５３〜６１に記載の組成物。
【請求項６３】
凍結保護物質を更に含む、請求項６２に記載の組成物。
【請求項６４】
リポソームの直径が約１ミクロン以下である、請求項５３〜６３のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項６５】
リポソームの直径が約５００ｎｍ以下である、請求項５３〜６３のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項６６】
リポソームの直径が約２００ｎｍ以下である、請求項５３〜６３のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項６７】
リポソームの直径が約１００ｎｍ以下である、請求項５３〜６３のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項６８】
医薬として許容できる賦形剤を更に含む、請求項３５〜６７のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項６９】
さらに活性剤を含む、請求項３５〜５２のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項７０】
活性剤がカルジオリピン又はカルジオリピンアナログと複合体形成する、請求項６９記載の組成物。
【請求項７１】
活性剤が１以上の遺伝子ベクター、アンチセンス分子、蛋白質又は薬剤を含む、請求項５５〜６１又は６９〜７０のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項７２】
活性剤が１以上の活性な抗癌剤を含む、請求項５５〜６１又は６９〜７１のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項７３】
活性剤が１以上の抗体を含む、請求項５５〜６１又は６９〜７２のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項７４】
活性剤が核酸を含む、請求項５５〜６１又は６９〜７３のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項７５】
核酸がＲＮＡである、請求項７４に記載の組成物。
【請求項７６】
ＲＮＡが癌遺伝子を指向するものである、請求項７５に記載の組成物。
【請求項７７】
核酸がオリゴヌクレオチドである、請求項７４に記載の組成物。
【請求項７８】
疾患の治療用医薬を製造するための、請求項３５〜７７のいずれか１項に記載の組成物の使用。
【請求項７９】
疾患が癌である、請求項７８に記載の使用。
【請求項８０】
細胞への活性剤の送達方法であって、請求項５５〜６１又は６９〜７７のいずれか１項に記載の組成物を製造し、該組成物を細胞に曝すことを含む方法。
【請求項８１】
細胞がインビトロである、請求項８０に記載の方法。
【請求項８２】
細胞がインビボである、請求項８０に記載の方法。
【請求項８３】
ヒト又は動物の疾患の治療方法であって、請求項５５〜６１又は６９〜７７のいずれか１項に記載の組成物を製造し、活性剤がヒト又は動物患者に送達されるように、該組成物を、その必要のあるヒト又は動物に曝すことを含む方法。
【請求項８４】
疾患が癌であり、活性剤が抗癌剤である、請求項８３に記載の方法。
【請求項８５】
組成物が、１つ以上のリポソームを含む、請求項８０〜８４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項８６】
活性剤が、組成物中でカルジオリピン又はカルジオリピンアナログと複合体形成している、請求項８０〜８５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項８７】
活性剤が、組成物中でリポソーム内に捕捉されている、請求項８０〜８６に記載の方法。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
カルジオリピン又はカルジオリピンアナログの製造方法であって、
Ｎ，Ｎ’−ジシクロヘキシルカルボジイミド又はＮ，Ｎ’−カルボニルジイミダゾールであるカップリング剤の存在下、ホスファチジン酸と２−Ｏ−保護グリセロールを反応させることを含む方法。
【請求項２】
カルジオリピン又はカルジオリピンアナログの製造方法であって、トリイソプロピルベンゼンスルホニル クロリド、又はＮ，Ｎ’−ジシクロヘキシルカルボジイミド又はＮ，Ｎ’−カルボニルジイミダゾールであるカップリング剤の存在下、ホスファチジン酸とグリセロールを反応させることを含む方法。
【請求項３】
カルジオリピン又はカルジオリピンアナログの製造方法であって、ジクロロホスフェート又はＮ，Ｎ−ジイソプロピルメチルホスホンアミディック クロリドのいずれかであるカップリング剤の存在下、式Ｖ
【化１】
（式中、Ｚ１及びＺ２は、同一又は異なって、−Ｏ−Ｃ（Ｏ）−，−Ｏ−，−Ｓ−，又は−ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−であり；
Ｒ１及びＲ２は、同一又は異なって、Ｈ及び／又は飽和もしくは不飽和アルキル基であり；
Ｒ３は（ＣＨ２）ｎであり、及びｎ＝０−１０）
のアルコールと、２−Ｏ−保護グリセロール又は２−Ｏ−置換グリセロールを反応させることを含む方法。
【請求項４】
カルジオリピン又はカルジオリピンアナログが以下の構造
【化２】
（式中、Ｚ１及びＺ２は、同一又は異なって、−Ｏ−Ｃ（Ｏ）−，−Ｏ−，−Ｓ−，又は−ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−であり；
Ｒ１及びＲ２は、同一又は異なって、Ｈ及び／又は飽和もしくは不飽和アルキル基であり；
Ｒ３は（ＣＨ２）ｎであり、及びｎ＝０−１０；
Ｒ４は、水素、アルキル、置換アルキル、シクロアルキル、置換シクロアルキル、ペプチド、ジペプチド、ポリペプチド、蛋白質、グルコース、マンノース、ガラクトース、多糖などの炭水化物、複素環、ヌクレオシド、又はポリヌクレオチドであり；
Ｘはカチオンである）
を有するものである、請求項１〜３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項５】
カルジオリピン又はカルジオリピンアナログが以下の構造
【化３】
を有するものである、請求項４に記載の方法。
【請求項６】
カルジオリピン又はカルジオリピンアナログが以下の構造
【化４】
を有するカルジオリピンエーテルアナログである、請求項４に記載の方法。
【請求項７】
カルジオリピン又はカルジオリピンアナログが以下の構造
【化５】
（式中、Ｚ１及びＺ２は、同一又は異なって、−Ｏ−Ｃ（Ｏ）−，−Ｏ−，−Ｓ−，−ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−であり；
Ｒ１及びＲ２は、同一又は異なって、Ｈ又は飽和もしくは不飽和アルキル基であり；
Ｒ３は、（ＣＨ２）ｎであり、及びｎ＝０−１０；
Ｒ４は、水素、アルキル、置換アルキル、シクロアルキル、置換シクロアルキル、ペプチド、ジペプチド、ポリペプチド、蛋白質、グルコース、マンノース、ガラクトース、多糖などの炭水化物、複素環、ヌクレオシド、又はポリヌクレオチドであり；
Ｒ５は、リンカーであり；
Ｘはカチオンである）
を有するものである、請求項１〜３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項８】
リンカーが、アルキル、置換アルキル、シクロアルキル、置換シクロアルキル、アルキルオキシ、１〜５００個のアルキルオキシマーを含有するペギレーテッドエーテルなどのポリアルキルオキシ、置換ポリアルキルオキシなど、ペプチド、ジペプチド、ポリペプチド、蛋白質、グルコース、マンノース、ガラクトース、及び多糖などの炭水化物を含む、請求項７に記載の方法。
【請求項９】
Ｒ１及び／又はＲ２の少なくとも１つが、４〜３４個の炭素を有する飽和又は不飽和アルキル基である、請求項４〜８のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１０】
Ｘが非毒性カチオンである、請求項４〜９のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１１】
Ｘが、水素、アンモニウム、ナトリウム、カリウム、カルシウム又はバリウムイオンである、請求項４〜９のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１２】
Ｒ１及び／又はＲ２の少なくとも１つが、１４〜３４個の炭素を有する飽和又は不飽和アルキル基である、請求項４〜１１のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１３】
Ｒ１及び／又はＲ２の少なくとも１つが、１４〜２４個の炭素を有する飽和又は不飽和アルキル基である、請求項４〜１２のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１４】
カルジオリピン又はカルジオリピンアナログが、式Ｉ、ＩＩ又はＩＩＩのカルジオリピン又はカルジオリピンアナログである、請求項３に記載の方法。
【請求項１５】
ジクロロホスフェート又はＮ，Ｎ−ジイソプロピルメチルホスホンアミディック クロリドのいずれかであるカップリング剤の存在下、１，２−Ｏ−ジアシルグリセロールと２−Ｏ−保護グリセロールを反応させることを含む、化合物ＩＩのカルジオリピン又はカルジオリピンアナログの製造方法。
【請求項１６】
ジクロロホスフェート又はＮ，Ｎ−ジイソプロピルメチルホスホンアミディック クロリドのいずれかであるカップリング剤の存在下、１，２−Ｏ−ジアルキルグリセロールと２−Ｏ−保護グリセロールを反応させることを含む、化合物ＩＩＩのカルジオリピン又はカルジオリピンアナログの製造方法。
【請求項１７】
ジクロロホスフェート又はＮ，Ｎ−ジイソプロピルメチルホスホンアミディック クロリドのいずれかであるカップリング剤の存在下、式Ｖのアルコールと式ＶＩ
【化６】
（式中、Ｒ４及びＲ５は、請求項１に定義されている通りである）のジオールを反応させることを含む、化合物ＩＶのカルジオリピン又はカルジオリピンアナログの製造方法。
【請求項１８】
カップリング剤が、式ＶＩＩ
【化７】
（式中、Ｗは、メチル、エチル、イソプロピル、ｔ−ブチル、アリル、２−置換エチル、２，２，２−トリブロモエチルなどのハロエチルを含むアルキル基又は置換アルキル基；ベンジル基又は置換ベンジル基；フェニル基、又は２−クロロフェニル、４−クロロフェニル及び２，４−ジクロロフェニルなどの置換フェニル基；又は任意の他の除去可能保護基である）のジクロロホスフェートである、請求項３〜１７のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１９】
カップリング剤が、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルメチルホスホンアミディック クロリドである、請求項３〜１７に記載の方法。
【請求項２０】
請求項１〜１９のいずれか１項に記載の方法に従って製造されるカルジオリピンアナログ。
【請求項２１】
請求項１〜１９のいずれか１項に記載の方法に従って製造される、カルジオリピン又はカルジオリピンアナログであって、該カルジオリピンがＣ４−Ｃ１３鎖長を有するものである、カルジオリピン又はカルジオリピンアナログ。
【請求項２２】
請求項１〜１９のいずれか１項に記載の方法に従って製造されるカルジオリピン又はカルジオリピンアナログであって、該カルジオリピンがＣ１５−Ｃ３４鎖長を有するものである、カルジオリピン又はカルジオリピンアナログ。
【請求項２３】
請求項１〜１９のいずれか１項に記載の方法に従って製造される、カルジオリピン又はカルジオリピンアナログであって、該カルジオリピンがＣ４−Ｃ３４鎖長を有するものである、カルジオリピン又はカルジオリピンアナログ。
【請求項２４】
請求項１〜１９のいずれか１項に記載の方法に従って製造される、カルジオリピン又はカルジオリピンアナログであって、該カルジオリピンがＣ１４鎖長を有するものである、カルジオリピン又はカルジオリピンアナログ。
【請求項２５】
リポソームの製造方法であって、請求項１〜１９のいずれか１項に記載の方法によってカルジオリピン又はカルジオリピンアナログを製造し、次いで、該カルジオリピン又はカルジオリピンアナログをリポソームに含ませることを含む方法。
【請求項２６】
リポソーム中に活性剤を保持させる方法であって、請求項１〜１９のいずれか１項に記載の方法のいずれかによってカルジオリピン又はカルジオリピンアナログを製造し、該カルジオリピン又はカルジオリピンアナログ及び活性剤をリポソームに含ませることを含む方法。
【請求項２７】
活性剤が１以上の遺伝子ベクター、アンチセンス分子、蛋白質又は薬剤を含む、請求項２６に記載の方法。
【請求項２８】
活性剤が１以上の活性な抗癌剤を含む、請求項２６又は２７に記載の方法。
【請求項２９】
活性剤が１以上の抗体を含む、請求項２６〜２８のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３０】
活性剤が核酸を含む、請求項２６〜２８のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３１】
核酸がＲＮＡである、請求項３０に記載の方法。
【請求項３２】
ＲＮＡが癌遺伝子を指向するものである、請求項３１に記載の方法。
【請求項３３】
核酸がオリゴヌクレオチドである、請求項３１に記載の方法。
【請求項３４】
活性剤が、リポソーム内に捕捉されるようになる、請求項２６に記載の方法。
【請求項３５】
活性剤がカルジオリピン又はカルジオリピンアナログと複合体形成するようになる、請求項２６に記載の方法。
【請求項３６】
リポソームを凍結保護物質と共に凍結乾燥することを更に含む、請求項２５〜３１のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３７】
請求項２５〜３６のいずれか１項に記載の方法に従って製造されるカルジオリピンアナログを含むリポソーム組成物。
【請求項３８】
請求項２５〜３６のいずれか１項に記載の方法に従って製造されるカルジオリピン又はカルジオリピンアナログを含むリポソーム組成物であって、該カルジオリピンがＣ４−Ｃ１３鎖長を有するものである、リポソーム組成物。
【請求項３９】
請求項２５〜３６のいずれか１項に記載の方法に従って製造されるカルジオリピン又はカルジオリピンアナログを含むリポソーム組成物であって、該カルジオリピンがＣ１５−Ｃ３４鎖長を有するものである、リポソーム組成物。
【請求項４０】
請求項２５〜３６のいずれか１項に記載の方法に従って製造されるカルジオリピン又はカルジオリピンアナログを含むリポソーム組成物であって、該カルジオリピンがＣ４−Ｃ３４鎖長を有するものである、リポソーム組成物。
【請求項４１】
請求項２５〜３６のいずれか１項に記載の方法に従って製造されるカルジオリピン又はカルジオリピンアナログを含むリポソーム組成物であって、該カルジオリピンがＣ１４鎖長を有するものである、リポソーム組成物。
【請求項４２】
凍結乾燥形態である、請求項３７〜４１のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項４３】
請求項１〜１９のいずれか１項に記載の方法に従って製造されるカルジオリピンアナログを含む組成物。
【請求項４４】
請求項１〜１９のいずれか１項に記載の方法に従って製造されるカルジオリピン又はカルジオリピンアナログを含む組成物であって、該カルジオリピンがＣ４−Ｃ１３鎖長を有するものである、組成物。
【請求項４５】
請求項１〜１９のいずれか１項に記載の方法に従って製造されるカルジオリピン又はカルジオリピンアナログを含む組成物であって、該カルジオリピンがＣ１５−Ｃ３４鎖長を有するものである、組成物。
【請求項４６】
請求項１〜１９のいずれか１項に記載の方法に従って製造されるカルジオリピン又はカルジオリピンアナログを含む組成物であって、該カルジオリピンがＣ４−Ｃ３４鎖長を有するものである、組成物。
【請求項４７】
請求項１〜１９のいずれか１項に記載の方法に従って製造されるカルジオリピン又はカルジオリピンアナログを含む組成物であって、該カルジオリピンがＣ１４鎖長を有するものである、組成物。
【請求項４８】
ホスファチジルコリン、ステロール及びトコフェロールを更に含む、請求項３７〜４７のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項４９】
ジミリストイルホスファチジルコリン、ジステアロイルホスファチジルコリン、ジオレイルホスファチジルコリン、ジパルミトイルホスファチジルコリン、ジアラキドノイルホスファチジルコリン、卵ホスファチジルコリン、大豆ホスファチジルコリン、水素添加大豆ホスファチジルコリン、及びそれらの混合物からなる群から選択されるホスファチジルコリンを更に含む、請求項３７〜４８のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項５０】
ジミリストイルホスファチジルグリセロール、ジステアロイルホスファチジルグリセロール、ジオレイルホスファチジルグリセロール、ジパルミトイルホスファチジルグリセロール、ジアラキドノイルホスファチジルグリセロール、及びそれらの混合物からなる群から選択されるホスファチジルグリセロールを更に含む、請求項３７〜４９のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項５１】
コレステロール、コレステロール誘導体、コプロスタノール、コレスタノール、コレスタン、コレステロールヘミサクシネート、コレステロールサルフェート、及びそれらの混合物からなる群から選択されるステロールを更に含む、請求項３７〜５０のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項５２】
標的指向剤を更に含む、請求項３７〜５１のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項５３】
標的指向剤が蛋白質である、請求項５２に記載の組成物。
【請求項５４】
蛋白質が、抗体、抗体フラグメント、ペプチド、ペプチドホルモン、レセプターリガンド、及びそれらの混合物からなる蛋白質の群から選択される、請求項５３に記載の組成物。
【請求項５５】
標的指向剤が炭水化物である、請求項５４に記載の組成物。
【請求項５６】
リガンドを更に含む、請求項３７〜５５のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項５７】
リガンドが、細胞レセプターの抗体又はリガンドである、請求項５６に記載の組成物。
【請求項５８】
脂質複合体又はエマルションの形態である、請求項３７〜５７に記載の組成物。
【請求項５９】
リポソームを含む、請求項３７〜５８のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項６０】
該リポソームがカルジオリピンを含む、請求項５９記載の組成物。
【請求項６１】
さらに活性剤を含む、請求項５９又は６０記載の組成物。
【請求項６２】
請求項２０〜２４のいずれか１項に記載のカルジオリピン又はカルジオリピンアナログをリポソーム形態で含み、且つ活性剤を含む組成物。
【請求項６３】
請求項１〜１９のいずれか１項に記載の方法に従って製造されるカルジオリピンアナログをリポソーム形態で含み、且つ活性剤を含む組成物。
【請求項６４】
請求項１〜１９のいずれか１項に記載の方法に従って製造されるカルジオリピンをリポソーム形態で含み、且つ活性剤を含む組成物であって、該カルジオリピンがＣ４−Ｃ１３鎖長を有するものである、組成物。
【請求項６５】
請求項１〜１９のいずれか１項に記載の方法に従って製造されるカルジオリピンをリポソーム形態で含み、且つ活性剤を含む組成物であって、該カルジオリピンがＣ１５−Ｃ３４鎖長を有するものである、組成物。
【請求項６６】
請求項１〜１９のいずれか１項に記載の方法に従って製造されるカルジオリピンをリポソーム形態で含み、且つ活性剤を含む組成物であって、該カルジオリピンがＣ４−Ｃ３４鎖長を有するものである、組成物。
【請求項６７】
請求項１〜１９のいずれか１項に記載の方法に従って製造されるカルジオリピンをリポソーム形態で含み、且つ活性剤を含む組成物であって、該カルジオリピンがＣ１４鎖長を有するものである、組成物。
【請求項６８】
活性剤が、１つ以上のリポソーム中に捕捉される、請求項６１〜６７のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項６９】
活性剤が、カルジオリピン又はカルジオリピンアナログと複合体形成している、請求項６１〜６７のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項７０】
凍結乾燥形態の、請求項５９〜６９に記載の組成物。
【請求項７１】
凍結保護物質を更に含む、請求項７０に記載の組成物。
【請求項７２】
リポソームの直径が約１ミクロン以下である、請求項５９〜７１のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項７３】
リポソームの直径が約５００ｎｍ以下である、請求項５９〜７１のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項７４】
リポソームの直径が約２００ｎｍ以下である、請求項５９〜７１のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項７５】
リポソームの直径が約１００ｎｍ以下である、請求項５９〜７１のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項７６】
医薬として許容できる賦形剤を更に含む、請求項３７〜７５のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項７７】
さらに活性剤を含む、請求項３７〜５８のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項７８】
活性剤がカルジオリピン又はカルジオリピンアナログと複合体形成する、請求項７７記載の組成物。
【請求項７９】
活性剤が１以上の遺伝子ベクター、アンチセンス分子、蛋白質又は薬剤を含む、請求項６１〜６９又は７７〜７８のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項８０】
活性剤が１以上の活性な抗癌剤を含む、請求項６１〜６９又は７７〜７９のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項８１】
活性剤が１以上の抗体を含む、請求項６１〜６９又は７７〜８０のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項８２】
活性剤が核酸を含む、請求項６１〜６９又は７７〜８１のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項８３】
核酸がＲＮＡである、請求項８２に記載の組成物。
【請求項８４】
ＲＮＡが癌遺伝子を指向するものである、請求項８３に記載の組成物。
【請求項８５】
核酸がオリゴヌクレオチドである、請求項８２に記載の組成物。
【請求項８６】
疾患の治療用医薬を製造するための、請求項３７〜８５のいずれか１項に記載の組成物の使用。
【請求項８７】
疾患が癌である、請求項８６に記載の使用。
【請求項８８】
細胞への活性剤の送達方法であって、請求項６１〜６９又は７７〜８５のいずれか１項に記載の組成物を製造し、該組成物を細胞に曝すことを含む方法。
【請求項８９】
細胞がインビトロである、請求項８８に記載の方法。
【請求項９０】
細胞がインビボである、請求項８８に記載の方法。
【請求項９１】
ヒト又は動物の疾患の治療方法であって、請求項６１〜６９又は７７〜８５のいずれか１項に記載の組成物を製造し、活性剤がヒト又は動物患者に送達されるように、該組成物を、その必要のあるヒト又は動物に曝すことを含む方法。
【請求項９２】
疾患が癌であり、活性剤が抗癌剤である、請求項９１に記載の方法。
【請求項９３】
組成物が、１つ以上のリポソームを含む、請求項８８〜９２のいずれか１項に記載の方法。
【請求項９４】
活性剤が、組成物中でカルジオリピン又はカルジオリピンアナログと複合体形成している、請求項８８〜９３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項９５】
活性剤が、組成物中でリポソーム内に捕捉されている、請求項８８〜９４に記載の方法。
【図１】
【図２】
【図３】
【図４】
【図５】
【図６】
【図７】
【図８】
【図２】
【図３】
【図４】
【図５】
【図６】
【図７】
【図８】
【公表番号】特表２００６−５１８７０１（Ｐ２００６−５１８７０１Ａ）
【公表日】平成１８年８月１７日（２００６．８．１７）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００４−５０７４８７（Ｐ２００４−５０７４８７）
【出願日】平成１５年５月２３日（２００３．５．２３）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＵＳ２００３／０１６４１２
【国際公開番号】ＷＯ２００３／０９９８３０
【国際公開日】平成１５年１２月４日（２００３．１２．４）
【出願人】（５０３１４００７８）ネオファーム、インコーポレイティッド (6)
【Ｆターム（参考）】
【公表日】平成１８年８月１７日（２００６．８．１７）
【国際特許分類】
【出願日】平成１５年５月２３日（２００３．５．２３）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＵＳ２００３／０１６４１２
【国際公開番号】ＷＯ２００３／０９９８３０
【国際公開日】平成１５年１２月４日（２００３．１２．４）
【出願人】（５０３１４００７８）ネオファーム、インコーポレイティッド (6)
【Ｆターム（参考）】
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