キレート剤の存在下で高安定性を有するアミラーゼ変異体を含む洗浄組成物
本発明は、親酵素と比較して、キレート剤への改善された安定性を有するアルファ−アミラーゼの変異体含む洗浄組成物、及びそのような組成物を含む洗浄プロセスに関する。
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
洗浄組成物であって、
（ａ）親アルファ−アミラーゼの変異体であって、配列番号６による番号付けを用いて、１９５、１９３、１９７、１９８、２００、２０３、２０６、２１０、２１２、２１３及び２４３からなる群から選択される１つ以上の位置での置換を含む、変異体と、
（ｂ）好ましくは、０．０１〜９９．９重量％の量の洗浄補助剤と、任意で、
（ｃ）少なくとも１つのキレート剤であって、１０ｍＭ未満の濃度の前記キレート剤が、２１℃及びｐＨ ８．０で測定されるとき、遊離カルシウムイオンの濃度を２．０ｍＭから０．１０ｍＭに減少させることができる、キレート剤と、を含む、洗浄組成物。
【請求項２】
キレート剤を含み、
（ａ）１０ｍＭ未満の濃度の前記キレート剤が、８０ｍＭの塩化カリウム及び４９ｍＭのＥＰＰＳ中で、２１℃及びｐＨ ８．０で測定されるとき、遊離カルシウムイオンの濃度を２．０ｍＭから０．１０ｍＭに減少させることができ、及び／又は
（ｂ）１０ｍＭ未満の濃度の前記キレート剤が、実施例２ａに記載のアッセイで測定されるとき、遊離カルシウムイオンの濃度を２．０ｍＭから０．１０ｍＭに減少させることができ、及び／又は
（ｃ）前記キレート剤が、８ｍＭ未満、好ましくは７ｍＭ未満、好ましくは６ｍＭ未満、好ましくは５ｍＭ未満、好ましくは４ｍＭ未満のキレート剤濃度で、遊離カルシウムイオンの濃度を２．０ｍＭから０．１０ｍＭに減少させることができ、及び／又は
（ｄ）前記キレート剤が、２１℃及びｐＨ ８で測定されるとき、遊離カルシウムイオン濃度を２．０ｍＭから０．１０ｍＭに減少させることができるクエン酸塩の濃度の０．９倍未満のキレート剤濃度で、遊離カルシウムイオン濃度を２．０ｍＭから０．１０ｍＭに減少させることができ、及び／又は
（ｅ）前記キレート剤が、遊離カルシウムイオン濃度を２．０ｍＭから０．１０ｍＭに減少させることができるクエン酸塩の濃度の０．７倍未満、例えば０．５倍未満、例えば０．３倍未満のキレート剤濃度で、遊離カルシウムイオン濃度を２．０ｍＭから０．１０ｍＭに減少させることができる、請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
洗浄組成物であって、
（ａ）親アルファ−アミラーゼの変異体であって、配列番号６による番号付けを用いて、１９５、１９３、１９７、１９８、２００、２０３、２０６、２１０、２１２、２１３及び２４３からなる群から選択される１つ以上の位置での置換を含む、変異体と、
（ｂ）好ましくは、０．０１〜９９．９重量％の量の洗浄補助剤と、任意で、
（ｃ）少なくとも１つのキレート剤であって、２１℃及びｐＨ ８．０で測定されるとき、遊離カルシウムイオンを２．０ｍＭから０．１０ｍＭに減少させることができるクエン酸塩の濃度の０．９倍未満のキレート剤濃度で、遊離カルシウムイオン濃度を２．０ｍＭから０．１０ｍＭに減少させることができる、キレート剤と、を含む、洗浄組成物。
【請求項４】
（ａ）前記変異体が、配列番号６による番号付けを用いて、１９５、１９３、１９７、１９８、２００、２０３、２０６、２１０、２１２、２１３又は２４３位に相当する１つ以上の位置での少なくとも２つの置換を含み、及び／又は
（ｂ）前記親アルファ−アミラーゼ配列が、１９３が、［Ｇ、Ａ、Ｓ、Ｔ又はＭ］であるか、１９５位が、［Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｌ、Ｉ又はＶ］であるか、１９７位が、［Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｌ、Ｉ又はＶ］であるか、１９８位が、［Ｑ又はＮ］であるか、２００位が、［Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｌ、Ｉ又はＶ］であるか、２０３位が、［Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｌ、Ｉ又はＶ］であるか、２０６位が、［Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｎ、Ｌ、Ｉ、Ｖ、Ｈ、Ｑ、Ｄ又はＥ］であるか、２１０位が、［Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｌ、Ｉ又はＶ］であるか、２１２位が、［Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｌ、Ｉ又はＶ］であるか、又は２１３位が、［Ｇ、Ａ、Ｓ、Ｔ又はＭ］であるか、あるいは２４３が、［Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｌ、Ｉ又はＶ］である置換のうちの少なくとも１つによって修飾され、及び／又は
（ｃ）前記親アルファ−アミラーゼ配列が、１９３がＴであるか、１９５位がＦ又はＹであるか、１９７位がＦ又はＬであるか、１９８位がＮであるか、２００位がＦであるか、２０３位がＦであるか、２０６位がＹであるか、２１０位がＹであるか、２１２位がＶであるか、又は２１３位がＡであるか、あるいは２４３位がＦである置換のうちの少なくとも１つによって修飾され、かつ／あるいは前記変異体が、（配列番号６の番号付けを用いて）１８１、１８２、１８３、又は１８４のアミノ酸領域における少なくとも１つ、少なくとも２つ、又は少なくとも３つの欠失を更に含み、及び／又は
（ｄ）前記変異体が、配列番号６の成熟ポリペプチドの１９３、１９５、１９７、１９８、２００、２０３、２０６、２１０、２１２、２１３位に相当する１つ以上の位置での置換と、１１６、１１８、１２９、１３３、１４２、１４６、１４７、１４９、１５１、１５２、１６９、１７４、１８６、２３５、２４４、３０３、３２０、３３９、３５９、４１８、４３１、４３４、４４７、４５８位に相当する１つ以上の位置での置換と、を含み、及び／又は
（ｅ）前記変異体が、キレート剤の存在下で、ｐＨ ８及び３１℃で１８時間後、少なくとも６０％の残存活性を有し、１０ｍＭ未満の濃度の前記キレート剤が、２１℃及びｐＨ ８．０で、遊離カルシウムイオンの濃度を２．０ｍＭから０．１０ｍＭに減少させることができ、及び／又は
（ｆ）前記変異体が、キレート剤の存在下で、ｐＨ ８及び３１℃で１８時間後、少なくとも７０％の残存活性を有し、１０ｍＭ未満の濃度の前記キレート剤が、２１℃及びｐＨ ８．０で、遊離カルシウムイオンの濃度を２．０ｍＭから０．１０ｍＭに減少させることができ、前記残存活性が、「材料及び方法」に記載されるように測定され、及び／又は
（ｇ）前記変異体が、「材料及び方法」に記載のＡＭＳＡで測定されるとき、前記親アルファ−アミラーゼと比較して、改善された洗浄性能を有する、請求項１又は２に記載の組成物。
【請求項５】
前記キレート剤が、ＥＤＴＡ、ＭＧＤＡ、ＥＧＴＡ、ＤＴＰＡ、ＤＴＰＭＰ、ＨＥＤＰ及びこれらの混合物からなる群から選択される、請求項１〜４のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項６】
前記親アルファ−アミラーゼの変異体が、配列番号６の成熟ポリペプチドの１９５、１９７、１９８、２００、２０３、２０６、２１０、２１２、２１３、２４３からなる群から選択される位置に相当する１つ以上の位置での変更を含み、１１６、１１８、１２９、１３３、１４２、１４６、１４７、１４９、１５１、１５２、１６９、１７４、１８６、２３５、２４４、３０３、３２０、３３９、３５９、４１８、４３１、４３４、４４７、４５８からなる群から選択される位置に相当する１つ以上の位置での変更を更に含み、
（ａ）前記（１つ又は複数の）変更が独立して、
（ｉ）前記位置のすぐ下流で隣接したアミノ酸の挿入、
（ｉｉ）前記位置を占有する前記アミノ酸の欠失、及び／又は
（ｉｉｉ）前記位置を占有する前記アミノ酸の置換であり、
（ｂ）前記変異体が、アルファ−アミラーゼ活性を有し、及び
（ｃ）それぞれの位置が、配列番号６のアミノ酸配列を有する酵素のアミノ酸配列の位置に相当する、請求項１〜５のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項７】
前記親アルファ−アミラーゼの変異体が、１８１、１８２、１８３、又は１８４のアミノ酸領域において少なくとも１つ、少なくとも２つ、又は少なくとも３つの欠失を含み、１９５、１９７、１９８、２００、２０３、２０６、２１０、２１２、２１３、２４３からなる群から選択される１つ以上の位置での変更を更に含み、１１６、１１８、１２９、１３３、１４２、１４６、１４７、１４９、１５１、１５２、１６９、１７４、１８６、２３５、２４４、３０３、３２０、３３９、３５９、４１８、４３１、４３４、４４７、４５８からなる群から選択される１つ以上の位置での変更を更に含み、
（ａ）前記（１つ又は複数の）変更が独立して、
（ｉ）前記位置のすぐ下流で隣接したアミノ酸の挿入、
（ｉｉ）前記位置を占有する前記アミノ酸の欠失、及び／又は
（ｉｉｉ）前記位置を占有する前記アミノ酸の置換であり、
（ｂ）前記変異体が、アルファ−アミラーゼ活性を有し、及び
（ｃ）それぞれの位置が、配列番号６のアミノ酸配列を有する酵素のアミノ酸配列の位置に相当する、請求項１〜６のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項８】
前記変異体が、キレート剤を含む組成物において、前記親アルファ−アミラーゼと比較して、又は配列番号６と比較して、改善された安定性を有し、１０ｍＭ未満の濃度の前記キレート剤が、２１℃及びｐＨ ８．０で、遊離カルシウムイオンの濃度を２．０ｍＭから０．１０ｍＭに減少させることができ、好ましくは、前記変異体が、キレート剤の存在下で、ｐＨ ８で１８時間後、少なくとも６０％の残存活性を有し、１０ｍＭ未満の濃度の前記キレート剤が、２１℃及びｐＨ ８．０で、遊離カルシウムイオンの濃度を２．０ｍＭから０．１０ｍＭに減少させることができ、前記残存活性が、「材料及び方法」に記載されるように測定される、請求項１〜７のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項９】
デンプン分解活性を有する前記変異体が、配列番号６、８、１０、１２、１８又は２０の成熟ポリペプチドと少なくとも６０％、より好ましくは少なくとも６５％、より好ましくは少なくとも７０％、より好ましくは少なくとも７５％、より好ましくは少なくとも８０％、より好ましくは少なくとも８５％、更により好ましくは少なくとも９０％、及び最も好ましくは少なくとも９５％の同一性を有するアミノ酸配列を有する、請求項１〜８のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１０】
デンプン分解活性を有する前記親ポリペプチドが、好ましくは少なくとも低ストリンジェンシー条件、より好ましくは少なくとも中程度のストリンジェンシー条件、更により好ましくは少なくとも中程度〜高ストリンジェンシー条件、及び最も好ましくは少なくとも高ストリンジェンシー条件下で、（ｉ）配列番号５、７、９又は１１、１７、１９の成熟ポリペプチドコード配列、（ｉｉ）配列番号５、７、９、１１、１７、１９の成熟ポリペプチドコード配列を含むゲノムＤＮＡ配列、又は（ｉｉｉ）（ｉ）若しくは（ｉｉ）の全長相補鎖とハイブリダイズするポリヌクレオチドによってコードされる、請求項１〜９のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１１】
前記アミラーゼが、親アルファ−アミラーゼの変異体であり、前記親アルファ−アミラーゼが、配列番号６のものであり、前記変異体が、前記欠失Ｄ１８３＊及びＧ１８４＊と、
（ａ）Ｎ１９５Ｆ＋Ｈ２１０Ｙ、
（ｂ）Ｎ１９５Ｆ＋Ｖ２０６Ｌ、Ｈ、Ｙ、
（ｃ）Ｎ１９５Ｆ＋Ｖ２０６Ｌ＋Ｈ２１０Ｙ、
（ｄ）Ｎ１９５Ｆ＋Ｖ２０６Ｙ＋Ｙ２４３Ｆ、
（ｅ）ＮＳ１８０５６（我々が変異を得る場合）
（ｆ）Ｓ１９３Ｔ＋Ｖ２０６Ｌ、
（ｇ）Ｇ１３３Ｅ＋Ｇ１４９Ｒ＋Ｎ１９５Ｙ＋Ｙ２０３Ｆ＋Ｖ２０６Ｌ、
（ｈ）Ｉ２０６Ｌ、Ｙ、
（ｉ）Ｙ２４３Ｆ、
（ｊ）Ｎ１９５Ｆ＋Ｖ２０６Ｌ＋Ｙ２４３Ｆ、
（ｋ）Ｎ１９５Ｆ、又は
（ｌ）Ｖ２０６Ｆ＋Ｙ２４３Ｆの組の変異のうちの１つを含む、請求項１〜１０のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１２】
前記キレート剤が、ＤＴＰＡ、ＨＥＤＰ、ＭＧＤＡ、ＤＴＰＭＰ及びこれらの混合物からなる群から選択される、請求項１〜１１のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１３】
前記洗浄補助剤が、香料マイクロカプセル、布地色相剤、プロテアーゼ、ポリエチレンイミンポリマー、リパーゼ、及びこれらの任意の混合物のうちの１つ以上を含む、請求項１〜１２のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１４】
前記組成物が、液体洗濯洗剤組成物である、請求項１〜１３のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１５】
洗濯方法であって、好ましくは３０℃以下の温度で、又はより好ましくは２０℃以下の温度で、請求項１〜１４のいずれか一項に記載の組成物で衣類を洗濯する工程を含む、方法。
【請求項１】
洗浄組成物であって、
（ａ）親アルファ−アミラーゼの変異体であって、配列番号６による番号付けを用いて、１９５、１９３、１９７、１９８、２００、２０３、２０６、２１０、２１２、２１３及び２４３からなる群から選択される１つ以上の位置での置換を含む、変異体と、
（ｂ）好ましくは、０．０１〜９９．９重量％の量の洗浄補助剤と、任意で、
（ｃ）少なくとも１つのキレート剤であって、１０ｍＭ未満の濃度の前記キレート剤が、２１℃及びｐＨ ８．０で測定されるとき、遊離カルシウムイオンの濃度を２．０ｍＭから０．１０ｍＭに減少させることができる、キレート剤と、を含む、洗浄組成物。
【請求項２】
キレート剤を含み、
（ａ）１０ｍＭ未満の濃度の前記キレート剤が、８０ｍＭの塩化カリウム及び４９ｍＭのＥＰＰＳ中で、２１℃及びｐＨ ８．０で測定されるとき、遊離カルシウムイオンの濃度を２．０ｍＭから０．１０ｍＭに減少させることができ、及び／又は
（ｂ）１０ｍＭ未満の濃度の前記キレート剤が、実施例２ａに記載のアッセイで測定されるとき、遊離カルシウムイオンの濃度を２．０ｍＭから０．１０ｍＭに減少させることができ、及び／又は
（ｃ）前記キレート剤が、８ｍＭ未満、好ましくは７ｍＭ未満、好ましくは６ｍＭ未満、好ましくは５ｍＭ未満、好ましくは４ｍＭ未満のキレート剤濃度で、遊離カルシウムイオンの濃度を２．０ｍＭから０．１０ｍＭに減少させることができ、及び／又は
（ｄ）前記キレート剤が、２１℃及びｐＨ ８で測定されるとき、遊離カルシウムイオン濃度を２．０ｍＭから０．１０ｍＭに減少させることができるクエン酸塩の濃度の０．９倍未満のキレート剤濃度で、遊離カルシウムイオン濃度を２．０ｍＭから０．１０ｍＭに減少させることができ、及び／又は
（ｅ）前記キレート剤が、遊離カルシウムイオン濃度を２．０ｍＭから０．１０ｍＭに減少させることができるクエン酸塩の濃度の０．７倍未満、例えば０．５倍未満、例えば０．３倍未満のキレート剤濃度で、遊離カルシウムイオン濃度を２．０ｍＭから０．１０ｍＭに減少させることができる、請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
洗浄組成物であって、
（ａ）親アルファ−アミラーゼの変異体であって、配列番号６による番号付けを用いて、１９５、１９３、１９７、１９８、２００、２０３、２０６、２１０、２１２、２１３及び２４３からなる群から選択される１つ以上の位置での置換を含む、変異体と、
（ｂ）好ましくは、０．０１〜９９．９重量％の量の洗浄補助剤と、任意で、
（ｃ）少なくとも１つのキレート剤であって、２１℃及びｐＨ ８．０で測定されるとき、遊離カルシウムイオンを２．０ｍＭから０．１０ｍＭに減少させることができるクエン酸塩の濃度の０．９倍未満のキレート剤濃度で、遊離カルシウムイオン濃度を２．０ｍＭから０．１０ｍＭに減少させることができる、キレート剤と、を含む、洗浄組成物。
【請求項４】
（ａ）前記変異体が、配列番号６による番号付けを用いて、１９５、１９３、１９７、１９８、２００、２０３、２０６、２１０、２１２、２１３又は２４３位に相当する１つ以上の位置での少なくとも２つの置換を含み、及び／又は
（ｂ）前記親アルファ−アミラーゼ配列が、１９３が、［Ｇ、Ａ、Ｓ、Ｔ又はＭ］であるか、１９５位が、［Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｌ、Ｉ又はＶ］であるか、１９７位が、［Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｌ、Ｉ又はＶ］であるか、１９８位が、［Ｑ又はＮ］であるか、２００位が、［Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｌ、Ｉ又はＶ］であるか、２０３位が、［Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｌ、Ｉ又はＶ］であるか、２０６位が、［Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｎ、Ｌ、Ｉ、Ｖ、Ｈ、Ｑ、Ｄ又はＥ］であるか、２１０位が、［Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｌ、Ｉ又はＶ］であるか、２１２位が、［Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｌ、Ｉ又はＶ］であるか、又は２１３位が、［Ｇ、Ａ、Ｓ、Ｔ又はＭ］であるか、あるいは２４３が、［Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｌ、Ｉ又はＶ］である置換のうちの少なくとも１つによって修飾され、及び／又は
（ｃ）前記親アルファ−アミラーゼ配列が、１９３がＴであるか、１９５位がＦ又はＹであるか、１９７位がＦ又はＬであるか、１９８位がＮであるか、２００位がＦであるか、２０３位がＦであるか、２０６位がＹであるか、２１０位がＹであるか、２１２位がＶであるか、又は２１３位がＡであるか、あるいは２４３位がＦである置換のうちの少なくとも１つによって修飾され、かつ／あるいは前記変異体が、（配列番号６の番号付けを用いて）１８１、１８２、１８３、又は１８４のアミノ酸領域における少なくとも１つ、少なくとも２つ、又は少なくとも３つの欠失を更に含み、及び／又は
（ｄ）前記変異体が、配列番号６の成熟ポリペプチドの１９３、１９５、１９７、１９８、２００、２０３、２０６、２１０、２１２、２１３位に相当する１つ以上の位置での置換と、１１６、１１８、１２９、１３３、１４２、１４６、１４７、１４９、１５１、１５２、１６９、１７４、１８６、２３５、２４４、３０３、３２０、３３９、３５９、４１８、４３１、４３４、４４７、４５８位に相当する１つ以上の位置での置換と、を含み、及び／又は
（ｅ）前記変異体が、キレート剤の存在下で、ｐＨ ８及び３１℃で１８時間後、少なくとも６０％の残存活性を有し、１０ｍＭ未満の濃度の前記キレート剤が、２１℃及びｐＨ ８．０で、遊離カルシウムイオンの濃度を２．０ｍＭから０．１０ｍＭに減少させることができ、及び／又は
（ｆ）前記変異体が、キレート剤の存在下で、ｐＨ ８及び３１℃で１８時間後、少なくとも７０％の残存活性を有し、１０ｍＭ未満の濃度の前記キレート剤が、２１℃及びｐＨ ８．０で、遊離カルシウムイオンの濃度を２．０ｍＭから０．１０ｍＭに減少させることができ、前記残存活性が、「材料及び方法」に記載されるように測定され、及び／又は
（ｇ）前記変異体が、「材料及び方法」に記載のＡＭＳＡで測定されるとき、前記親アルファ−アミラーゼと比較して、改善された洗浄性能を有する、請求項１又は２に記載の組成物。
【請求項５】
前記キレート剤が、ＥＤＴＡ、ＭＧＤＡ、ＥＧＴＡ、ＤＴＰＡ、ＤＴＰＭＰ、ＨＥＤＰ及びこれらの混合物からなる群から選択される、請求項１〜４のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項６】
前記親アルファ−アミラーゼの変異体が、配列番号６の成熟ポリペプチドの１９５、１９７、１９８、２００、２０３、２０６、２１０、２１２、２１３、２４３からなる群から選択される位置に相当する１つ以上の位置での変更を含み、１１６、１１８、１２９、１３３、１４２、１４６、１４７、１４９、１５１、１５２、１６９、１７４、１８６、２３５、２４４、３０３、３２０、３３９、３５９、４１８、４３１、４３４、４４７、４５８からなる群から選択される位置に相当する１つ以上の位置での変更を更に含み、
（ａ）前記（１つ又は複数の）変更が独立して、
（ｉ）前記位置のすぐ下流で隣接したアミノ酸の挿入、
（ｉｉ）前記位置を占有する前記アミノ酸の欠失、及び／又は
（ｉｉｉ）前記位置を占有する前記アミノ酸の置換であり、
（ｂ）前記変異体が、アルファ−アミラーゼ活性を有し、及び
（ｃ）それぞれの位置が、配列番号６のアミノ酸配列を有する酵素のアミノ酸配列の位置に相当する、請求項１〜５のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項７】
前記親アルファ−アミラーゼの変異体が、１８１、１８２、１８３、又は１８４のアミノ酸領域において少なくとも１つ、少なくとも２つ、又は少なくとも３つの欠失を含み、１９５、１９７、１９８、２００、２０３、２０６、２１０、２１２、２１３、２４３からなる群から選択される１つ以上の位置での変更を更に含み、１１６、１１８、１２９、１３３、１４２、１４６、１４７、１４９、１５１、１５２、１６９、１７４、１８６、２３５、２４４、３０３、３２０、３３９、３５９、４１８、４３１、４３４、４４７、４５８からなる群から選択される１つ以上の位置での変更を更に含み、
（ａ）前記（１つ又は複数の）変更が独立して、
（ｉ）前記位置のすぐ下流で隣接したアミノ酸の挿入、
（ｉｉ）前記位置を占有する前記アミノ酸の欠失、及び／又は
（ｉｉｉ）前記位置を占有する前記アミノ酸の置換であり、
（ｂ）前記変異体が、アルファ−アミラーゼ活性を有し、及び
（ｃ）それぞれの位置が、配列番号６のアミノ酸配列を有する酵素のアミノ酸配列の位置に相当する、請求項１〜６のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項８】
前記変異体が、キレート剤を含む組成物において、前記親アルファ−アミラーゼと比較して、又は配列番号６と比較して、改善された安定性を有し、１０ｍＭ未満の濃度の前記キレート剤が、２１℃及びｐＨ ８．０で、遊離カルシウムイオンの濃度を２．０ｍＭから０．１０ｍＭに減少させることができ、好ましくは、前記変異体が、キレート剤の存在下で、ｐＨ ８で１８時間後、少なくとも６０％の残存活性を有し、１０ｍＭ未満の濃度の前記キレート剤が、２１℃及びｐＨ ８．０で、遊離カルシウムイオンの濃度を２．０ｍＭから０．１０ｍＭに減少させることができ、前記残存活性が、「材料及び方法」に記載されるように測定される、請求項１〜７のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項９】
デンプン分解活性を有する前記変異体が、配列番号６、８、１０、１２、１８又は２０の成熟ポリペプチドと少なくとも６０％、より好ましくは少なくとも６５％、より好ましくは少なくとも７０％、より好ましくは少なくとも７５％、より好ましくは少なくとも８０％、より好ましくは少なくとも８５％、更により好ましくは少なくとも９０％、及び最も好ましくは少なくとも９５％の同一性を有するアミノ酸配列を有する、請求項１〜８のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１０】
デンプン分解活性を有する前記親ポリペプチドが、好ましくは少なくとも低ストリンジェンシー条件、より好ましくは少なくとも中程度のストリンジェンシー条件、更により好ましくは少なくとも中程度〜高ストリンジェンシー条件、及び最も好ましくは少なくとも高ストリンジェンシー条件下で、（ｉ）配列番号５、７、９又は１１、１７、１９の成熟ポリペプチドコード配列、（ｉｉ）配列番号５、７、９、１１、１７、１９の成熟ポリペプチドコード配列を含むゲノムＤＮＡ配列、又は（ｉｉｉ）（ｉ）若しくは（ｉｉ）の全長相補鎖とハイブリダイズするポリヌクレオチドによってコードされる、請求項１〜９のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１１】
前記アミラーゼが、親アルファ−アミラーゼの変異体であり、前記親アルファ−アミラーゼが、配列番号６のものであり、前記変異体が、前記欠失Ｄ１８３＊及びＧ１８４＊と、
（ａ）Ｎ１９５Ｆ＋Ｈ２１０Ｙ、
（ｂ）Ｎ１９５Ｆ＋Ｖ２０６Ｌ、Ｈ、Ｙ、
（ｃ）Ｎ１９５Ｆ＋Ｖ２０６Ｌ＋Ｈ２１０Ｙ、
（ｄ）Ｎ１９５Ｆ＋Ｖ２０６Ｙ＋Ｙ２４３Ｆ、
（ｅ）ＮＳ１８０５６（我々が変異を得る場合）
（ｆ）Ｓ１９３Ｔ＋Ｖ２０６Ｌ、
（ｇ）Ｇ１３３Ｅ＋Ｇ１４９Ｒ＋Ｎ１９５Ｙ＋Ｙ２０３Ｆ＋Ｖ２０６Ｌ、
（ｈ）Ｉ２０６Ｌ、Ｙ、
（ｉ）Ｙ２４３Ｆ、
（ｊ）Ｎ１９５Ｆ＋Ｖ２０６Ｌ＋Ｙ２４３Ｆ、
（ｋ）Ｎ１９５Ｆ、又は
（ｌ）Ｖ２０６Ｆ＋Ｙ２４３Ｆの組の変異のうちの１つを含む、請求項１〜１０のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１２】
前記キレート剤が、ＤＴＰＡ、ＨＥＤＰ、ＭＧＤＡ、ＤＴＰＭＰ及びこれらの混合物からなる群から選択される、請求項１〜１１のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１３】
前記洗浄補助剤が、香料マイクロカプセル、布地色相剤、プロテアーゼ、ポリエチレンイミンポリマー、リパーゼ、及びこれらの任意の混合物のうちの１つ以上を含む、請求項１〜１２のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１４】
前記組成物が、液体洗濯洗剤組成物である、請求項１〜１３のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１５】
洗濯方法であって、好ましくは３０℃以下の温度で、又はより好ましくは２０℃以下の温度で、請求項１〜１４のいずれか一項に記載の組成物で衣類を洗濯する工程を含む、方法。
【公表番号】特表２０１３−５１９７５７（Ｐ２０１３−５１９７５７Ａ）
【公表日】平成２５年５月３０日（２０１３．５．３０）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２０１２−５５２９８８（Ｐ２０１２−５５２９８８）
【出願日】平成２３年２月１０日（２０１１．２．１０）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＵＳ２０１１／０２４３２１
【国際公開番号】ＷＯ２０１１／１００４１０
【国際公開日】平成２３年８月１８日（２０１１．８．１８）
【出願人】（５９０００５０５８）ザ プロクター アンド ギャンブル カンパニー (2,280)
【Ｆターム（参考）】
【公表日】平成２５年５月３０日（２０１３．５．３０）
【国際特許分類】
【出願日】平成２３年２月１０日（２０１１．２．１０）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＵＳ２０１１／０２４３２１
【国際公開番号】ＷＯ２０１１／１００４１０
【国際公開日】平成２３年８月１８日（２０１１．８．１８）
【出願人】（５９０００５０５８）ザ プロクター アンド ギャンブル カンパニー (2,280)
【Ｆターム（参考）】
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