グリコサミノグリカン産生促進剤
【課題】 生体内におけるグリコサミノグリカンの産生を促進し、しわ（Ｗｒｉｎｋｌｅ）やタルミ、変形性関節症等加齢による種々の症状を防止、改善する効果を有する、グリコサミノグリカン産生促進剤を提供する。
【解決手段】 本発明のグリコサミノグリカン産生促進剤は、アルニカ、ユリ属、オトギリソウ属、シナノキ属植物、カミツレ、ローマカミツレから選択される１種又は２種以上の植物の抽出物を有効成分とする。
【解決手段】 本発明のグリコサミノグリカン産生促進剤は、アルニカ、ユリ属、オトギリソウ属、シナノキ属植物、カミツレ、ローマカミツレから選択される１種又は２種以上の植物の抽出物を有効成分とする。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、グリコサミノグリカン産生促進剤に関する。さらに詳しくは、真皮におけるヒアルロン酸や硫酸化グリコサミノグリカンなどのグリコサミノグリカンの産生を促進する、グリコサミノグリカン産生促進剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
グリコサミノグリカンは動物の結合組織を中心にあらゆる組織に普遍的に存在するアミノ糖を含む多糖類で、ヒアルロン酸、コンドロイチン硫酸、デルマタン硫酸、ヘパラン硫酸、ヘパリン、ケラタン硫酸等の種類が知られている。これらのグリコサミノグリカンは、加齢と共にその架橋構造が変化したり、産生量が減少し、様々な老化現象の原因となりうる。例えば、皮膚組織においてグリコサミノグリカンが減少するとしわ（Ｗｒｉｎｋｌｅ）やタルミの原因となること（特許文献１）が、関節組織内でグリコサミノグリカンが減少することにより変形性関節症の原因となること（特許文献２）が知られている。
そのため、生体内のグリコサミノグリカンを補給する目的でグリコサミノグリカンを外用若しくは経口にて投与することがなされてきた。しかしながら、ヒアルロン酸などのグリコサミノグリカンは、組織内に存在するため、経皮で投与しても組織内にそのまま取り込まれることはなく、経口では消化器官において分解された状態でしか吸収されないため、グリコサミノグリカンを直接経皮若しくは経口で投与してもその効果は極限られたものにしかすぎなかった。
【０００３】
【特許文献１】特開平８−６７６２１号公報
【特許文献２】特表２００４−５０７４９０号公報
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
生体内におけるグリコサミノグリカンの産生を促進し、しわ（Ｗｒｉｎｋｌｅ）やタルミ、変形性関節症等加齢による種々の症状を防止、改善する効果を有する、グリコサミノグリカン産生促進剤を提供することを目的とした。
【課題を解決するための手段】
【０００５】
本発明は、アルニカ、ユリ属、オトギリソウ属、シナノキ属植物、カミツレ、ローマカミツレから選択される１種又は２種以上の植物の抽出物を有効成分とする、硫酸化グリコサミノグリカン、ヒアルロン酸などのグリコサミノグリカン産生促進剤を提供するものである。
【発明の効果】
【０００６】
本発明によれば、組織におけるグリコサミノグリカンの産生を促進する効果を有する、グリコサミノグリカン産生促進剤を提供することができる。
【発明を実施するための最良の形態】
【０００７】
本発明のグリコサミノグリカン産生促進剤は、アルニカ、ユリ属、オトギリソウ属、シナノキ属植物、カミツレ、ローマカミツレから選択される１種又は２種以上の植物の抽出物を有効成分とする。
【０００８】
本発明において用いるアルニカ（Ａｒｎｉｃａ ｍｏｎｔａｎａ Ｌ．）は、キク科（Ｃｏｍｐｏｓｉｔａｅ）に属する多年草である。
【０００９】
本発明において用いるユリ属（Ｌｉｌｉｕｍ）植物としては、ヤマユリ（Ｌｉｌｉｕｍ ａｕｒａｔｕｍ Ｌｉｎｄｌ．），マドンナリリー（Ｌｉｌｉｕｍ ｃａｎｄｉｄｕｍ Ｌ．），ヒメユリ（Ｌｉｌｉｕｍ ｃｏｎｃｏｌｏｒ Ｓａｌｉｓｂ．），タカサゴユリ（Ｌｉｌｉｕｍ ｆｏｒｍｏｓａｎｕｍ Ｗａｌｌａｃｅ），ササユリ（Ｌｉｌｉｕｍ ｊａｐｏｎｉｃｕｍ Ｔｈｕｎｂ． ｅｘ Ｈｏｕｔｔ．），オニユリ（Ｌｉｌｉｕｍ ｌａｎｃｉｆｏｌｉｕｍ Ｔｈｕｎｂ．），コオニユリ（Ｌｉｌｉｕｍ ｌｅｉｃｈｔｌｉｎｉｉ Ｈｏｏｋ． ｆ． ｖａｒ． ｍａｘｉｍｏｗｉｃｚｉｉ Ｂａｋｅｒ），テッポウユリ（Ｌｉｌｉｕｍ ｌｏｎｇｉｆｌｏｒｕｍ Ｔｈｕｎｂ．），イワトユリ（Ｌｉｌｉｕｍ ｍａｃｕｌａｔｕｍ Ｔｈｕｎｂ．），クルマユリ（Ｌｉｌｉｕｍ ｍｅｄｅｏｌｏｉｄｅｓ Ａ． Ｇｒａｙ），リーガル・リリー（Ｌｉｌｉｕｍ ｒｅｇａｌｅ Ｗｉｌｓ．），オトメユリ（Ｌｉｌｉｕｍ ｒｅｂｅｌｌｕｍ Ｂａｋｅｒ），カノコユリ（Ｌｉｌｉｕｍ ｓｐｅｃｉｏｓｕｍ Ｔｈｕｎｂ．）等が挙げられる。これらはユリ科（Ｌｉｌｉａｃｅａｅ）に属する多年草である。これらのユリ属の植物には、アジアティック・ハイブリッド、ロンギフローラム・ハイブリッド、マルタゴン・ハイブリッド、トランペット・ハイブリッド、オリエンタル・ハイブリッド等多くの栽培品種が知られており、これらの栽培品種のユリを用いてもよいが、本発明においては、その効果並びに収率のよさから、栽培品種のカサブランカを用いることが好ましい。
【００１０】
本発明において用いるオトギリソウ属（Ｈｙｐｅｒｉｃｕｍ Ｌ．）植物としては、トモエソウ（Ｈｙｐｅｒｉｃｕｍ ａｓｃｙｒｏｎ Ｌ．）、ビヨウヤナギ（Ｈｙｐｅｒｉｃｕｍ ｃｈｉｎｅｎｓｉｓ Ｌ． ｖａｒ． ｓａｌｉｃｉｆｏｌｉａ（Ｓｉｅｂ． ｅｔ Ｚｕｃｃ．）、オトギリソウ（Ｈｙｐｅｒｉｃｕｍ ｅｒｅｃｔｕｍ Ｔｈｕｎｂ．）、ヒメオトギリ（Ｈｙｐｅｒｉｃｕｍ ｊａｐｏｎｉｃｕｍ Ｔｈｕｎｂ．）、キンシバイ（Ｈｙｐｅｒｉｃｕｍ ｐａｔｕｌｕｍ Ｔｈｕｎｂ．）、セイヨウオトギリ（Ｈｙｐｅｒｉｃｕｍ ｐｅｒｆｏｒａｔｕｍ Ｌ．）、ハイオトギリ（Ｈｙｐｅｒｉｃｕｍ ｋａｍｔｓｃｈａｔｉｃｕｍ ｖａｒ． ｋａｍｔｓｃｈａｔｉｃｕｍ）、イワオトギリ（Ｈｙｐｅｒｉｃｕｍ ｋａｍｔｓｃｈａｔｉｃｕｍ ｖａｒ． ｈｏｎｄｏｎｅｎｓｅ）、シナノオトギリ（Ｈｙｐｅｒｉｃｕｍ ｋａｍｔｓｃｈａｔｉｃｕｍ ｖａｒ． ｓｅｎａｎｅｎｓｅ）、タカネオトギリ（Ｈｙｐｅｒｉｃｕｍ ｓｉｋｏｋｕｍｏｎｔａｎｕｍ）、センカクオトギリ（Ｈｙｐｅｒｉｃｕｍ ｓｅｎｋａｋｕｉｎｓｕｌａｒｅ）、コケオトギリ（Ｈｙｐｅｒｉｃｕｍ ｌａｘｕｍ）等が挙げられるが、本発明の効果の点からオトギリソウを用いることが好ましい。
【００１１】
本発明において用いるシナノキ属（Ｔｉｌｉａ Ｌ．）植物は、アメリカシナノキ（Ｔｉｌｉａ ａｍｅｒｉｃａｎａ Ｌ．）、フユボダイジュ（Ｔｉｌｉａ ｃｏｒｄａｔａ Ｍｉｌｌ．）、セイヨウシナノキ（Ｔｉｌｉａ ｅｕｒｏｐａｅａ Ｌ．）、シナノキ（Ｔｉｌｉａ ｊａｐｏｎｉｃａ Ｓｉｍｏｎｋ．）、ヘラノキ（Ｔｉｌｉａ ｋｉｕｓｉａｎａ Ｍａｋｉｎｏ ｅｔ Ｓｈｉｒａｓ．）、オオバオダイジュ（Ｔｉｌｉａ ｍａｘｉｍｏｗｉｃｚｉａｎａ Ｓｈｉｒａｓ．）、ナツボダイジュ（Ｔｉｌｉａ ｐｌａｔｙｐｈｙｌｌｏｓ Ｓｃｏｐ．），ボダイジュ（Ｔｉｌｉａ ｍｉｑｕｅｌｉａｎａ Ｍａｘｉｍ．）等が例示される。本発明の効果の点からフユボダイジュ、シナノキ、ボダイジュから選択される１種又は２種以上を用いることが好ましい。
【００１２】
カミツレ（Ｍａｔｒｉｃａｒｉａ ｃｈａｍｏｍｉｌｌａ Ｌ．）は、キク科（Ｃｏｍｐｏｓｉｔａｅ）に属する１年草又は越年草で、生薬「カミツレ（Ｃｈａｍｏｍｉｌｌａｅ Ｆｌｏｓ）」の基原植物である。
【００１３】
ローマカミツレ（Ａｎｔｈｅｍｉｓ ｎｏｂｉｌｉｓ Ｌ．）は、キク科（Ｃｏｍｐｏｓｉｔａｅ）に属する多年草である。
【００１４】
本発明における上記植物の抽出物には、植物の原体や乾燥物も抽出物に含まれるが、各種溶媒を用いて抽出した抽出物若しくは精油を用いるのが好ましい。抽出には、植物の葉、花、種子、根、茎、芽、枝、樹皮などのいずれの部位を用いても構わない。抽出は、抽出溶媒に浸漬するか、超臨界流体や亜臨界流体を用いた抽出方法でも行うことができる。抽出効果を上げるため、攪拌や抽出溶媒中でホモジナイズしてもよい。抽出温度としては、５℃程度から抽出溶媒の沸点以下の温度とするのが適切である。抽出時間は抽出溶媒の種類や抽出温度によっても異なるが、１時間〜１４日間程度とするのが適切である。
【００１５】
抽出溶媒としては、特に極性の生むなどで限定されず、水の他、メタノール、エタノール、プロパノール、イソプロパノール等の低級アルコール、１，３−ブチレングリコール、プロピレングリコール、ジプロピレングリコール、グリセリン等の多価アルコール、エチルエーテル、プロピルエーテル等のエーテル類、酢酸ブチル、酢酸エチル等のエステル類、アセトン、エチルメチルケトン等のケトン類、流動パラフィン、スクワランなどの炭化水素油類、大豆油、ヒマワリ油、コーン油、ベニバナ油、アルモンド油等の植物油類、ワックス類、ペースト類などを用いることができ、これらより１種又は２種以上を選択して用いる。また、生理食塩水、リン酸緩衝液、リン酸緩衝生理食塩水等を用いてもよい。さらに、水や二酸化炭素、エチレン、プロピレン、エタノール、メタノール、アンモニアなどの１種又は２種以上の超臨界流体や亜臨界流体を用いてもよい。
【００１６】
植物の上記溶媒による抽出物は、そのままでも使用することができるが、濃縮、乾固した物を水や溶媒に再度溶解して使用することもでき、これらの生理作用を損なわない範囲で脱色、脱臭、脱塩等の精製処理やカラムクロマトグラフィー等による分画処理を行った後に用いてもよい。植物の前記抽出物やその処理物及び分画物は、各処理及び分画後に凍結乾燥し、用時に溶解して用いることもできる。
【００１７】
アルニカ抽出物を用いる際には、抽出部位としては花を、抽出溶媒としては大豆油を用いることが好ましい。
【００１８】
ユリ属植物抽出物を用いる際には、抽出部位としては花を、抽出溶媒としてヒマワリ種子油を用いることが好ましい。
【００１９】
オトギリソウ属植物抽出物を用いる際には、抽出部位としては花、葉、茎を含む地上部位を、溶媒としてはエタノール水溶液を用いることが好ましい。
【００２０】
シナノキ属植物抽出物を用いる際には、抽出部位としては花を、抽出溶媒としてはヒマワリ種子油を用いることが好ましい。
【００２１】
カミツレ抽出物を用いる際には、抽出部位としては花を、抽出溶媒としてはヒマワリ種子油、５０質量％エタノール水溶液、又は熱水を用いることが好ましい。
【００２２】
ローマカミツレ抽出物を用いる際には、乾燥した花頭から得られた精油、５０質量％エタノール水溶液、又は熱水を用いることが好ましい。
【実施例】
【００２３】
以下に、本発明のグリコサミノグリカン産生促進剤にかかる各種植物の抽出物の製造例及びグリコサミノグリカン産生促進作用を評価するための試験について詳細に説明する。
【００２４】
［製造例１］ アルニカ抽出物
乾燥したアルニカ花を、ダイズ油に浸漬して抽出し、不溶物を除去することにより、アルニカ抽出物を得た。
【００２５】
［製造例２］ オトギリソウ抽出物
乾燥したオトギリソウ花を、３０質量％エタノール水溶液に浸漬して抽出した。上清を減圧濃縮することにより溶媒を除去して得られた抽出物を、スクワランに溶解することにより、オトギリソウ抽出物を得た。
【００２６】
［製造例３］ シナノキ抽出物
乾燥したフユボダイジュ花を、ヒマワリ種子油に浸漬して抽出し、不溶物を除去することにより、シナノキ抽出物を得た。
【００２７】
［製造例４］ カミツレ抽出物１
乾燥したカミツレ花を、ヒマワリ種子油に浸漬して抽出し、不溶物を除去することにより、カミツレ抽出物を得た。
【００２８】
［製造例５］ カミツレ抽出物２
乾燥したカミツレ花を粉砕し、２０倍量の５０質量％エタノール水溶液を加え、室温で攪拌しながら２時間抽出した。得られた抽出液を濾過して不溶物を取り除き、減圧濃縮後、凍結乾燥を行って、カミツレ抽出物２を得た。
【００２９】
［製造例６］ カミツレ抽出物３
乾燥したカミツレ花を粉砕し、サンプル質量の２０倍量の精製水を加え、２０分間、１２０℃に加温して抽出した。得られた抽出液から、吸引濾過により不溶物を取り除いた後、凍結乾燥を行って、カミツレ抽出物３を得た。
【００３０】
［製造例７］ ローマカミツレ精油
乾燥したローマカミツレ花頭から得られた精油をローマカミツレ精油として用いた。
【００３１】
［製造例８］ ローマカミツレ抽出物１
乾燥したローマカミツレ花を粉砕し、２０倍量の５０質量％エタノール水溶液を加え、室温で攪拌しながら２時間抽出した。得られた抽出液を濾過して不溶物を取り除き、減圧濃縮後、凍結乾燥を行って、ローマカミツレ抽出物１を得た。
【００３２】
［製造例９］ ローマカミツレ抽出物２
乾燥したローマカミツレ花を粉砕し、サンプル質量の２０倍量の精製水を加え、２０分間、１２０℃に加温して抽出した。得られた抽出液から、吸引濾過により不溶物を取り除いた後、凍結乾燥を行って、ローマカミツレ抽出物２を得た。
【００３３】
［製造例１０］ カサブランカ抽出物
乾燥したカサブランカ花を、ヒマワリ種子油に浸漬して抽出し、不溶物を除去することにより、カサブランカ抽出物を得た。
【００３４】
製造例４〜１０を用いて、硫酸化グリコサミノグリカン産生促進作用を、製造例１〜３、１０を用いてヒアルロン酸産生促進作用をそれぞれ評価した。
【００３５】
［硫酸化グリコサミノグリカン（ＧＡＧ）産生促進作用］
正常ヒト真皮線維芽細胞を１ウェル当り３．０×１０5個となるように６ウェルマイクロプレートに播種した。播種培地にはダルベッコ改変イーグル培地（ＤＭＥＭ）に５質量％のウシ胎児血清（ＦＢＳ）を添加したものを用いた。２４時間後、１質量％ＦＢＳ添加ＤＭＥＭ培地にて各濃度に調整した抽出物含有培養液に交換しさらに７２時間培養した。硫酸化グリコサミノグリカンの産生量の定量にはＢｌｙｓｃａｎ Ｓｕｌｆａｔｅｄ Ｇｌｙｃｏｓａｍｉｎｏｇｌｙｃａｎ Ａｓｓａｙ（Ｂｉｏｃｏｌｏｒ社製）キットを使用した。キットは硫酸基に特異的に結合する発色物質を用いている。マイクロプレートリーダーにて６５６−５５０ｎｍの吸光度を測定した。評価ではサンプル培養液の他にネガティブコントロールとして１質量％ＦＢＳ添加ＤＭＥＭ培地を用いた。同時にＰＩＥＲＣＥ社製ＢＣＡ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ａｓｓａｙ Ｋｉｔにてタンパク量を測定し単位タンパク量当りの硫酸化グリコサミノグリカン産生量を求めた。評価はネガティブコントロールの単位蛋白量当りの硫酸化グリコサミノグリカン産生量を１００とした時の相対値にて表１〜３に示す。
【００３６】
［ヒト真皮線維芽細胞ヒアルロン酸（ＨＡ）産生促進作用］
正常ヒト真皮繊維芽細胞を１ウェル当り２．０×１０4個となるように９６ウェルマイクロプレートに播種した。播種培地には５質量％のウシ胎児血清（ＦＢＳ）を添加したダルベッコ改変イーグル培地（ＤＭＥＭ）を用いた。２４時間後、０．５質量％ＦＢＳ添加ＤＭＥＭ培地にて各濃度に調整した抽出液含有培養液に交換し、さらに３日間培養した。培養上清中に分泌されたヒアルロン酸の定量には、プロテオグリカンを用いた間接ＥＬＩＳＡ法を用い、最後は標識されたペルオキシダーゼに対し２，２’−アジノビス（３−エチルベンゾチアゾリン−６−スルホン酸）ジアンモニウム塩（ＡＢＴＳ）及び過酸化水素を添加し反応させた後、マイクロプレートリーダーにて４０５ｎｍの吸光度を測定した。ＰＩＥＲＣＥ社製ＢＣＡ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ａｓｓａｙ Ｋｉｔにて各ウェルのタンパク量を測定し、単位タンパク量当りのヒアルロン酸産生量を求めた。評価結果を試料無添加のコントロールにおける単位タンパク量当りのヒアルロン酸産生量を１００とした相対値にて表４〜７に示す。
【００３７】
なお、ｔ検定における有意確率P値に対し、有意確率５％未満（Ｐ＜０．０５）を＊、有意確率１％未満（Ｐ＜０．０１）を＊＊で表す。
【００３８】
【表１】
【００３９】
【表２】
【００４０】
【表３】
【００４１】
【表４】
【００４２】
【表５】
【００４３】
【表６】
【００４４】
【表７】
【００４５】
【表８】
【００４６】
【表９】
【００４７】
【表１０】
【００４８】
【表１１】
【００４９】
表１〜１１に示したとおり、製造例１〜１０の抽出物は、高いグリコサミノグリカン産生促進作用を示した。
【技術分野】
【０００１】
本発明は、グリコサミノグリカン産生促進剤に関する。さらに詳しくは、真皮におけるヒアルロン酸や硫酸化グリコサミノグリカンなどのグリコサミノグリカンの産生を促進する、グリコサミノグリカン産生促進剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
グリコサミノグリカンは動物の結合組織を中心にあらゆる組織に普遍的に存在するアミノ糖を含む多糖類で、ヒアルロン酸、コンドロイチン硫酸、デルマタン硫酸、ヘパラン硫酸、ヘパリン、ケラタン硫酸等の種類が知られている。これらのグリコサミノグリカンは、加齢と共にその架橋構造が変化したり、産生量が減少し、様々な老化現象の原因となりうる。例えば、皮膚組織においてグリコサミノグリカンが減少するとしわ（Ｗｒｉｎｋｌｅ）やタルミの原因となること（特許文献１）が、関節組織内でグリコサミノグリカンが減少することにより変形性関節症の原因となること（特許文献２）が知られている。
そのため、生体内のグリコサミノグリカンを補給する目的でグリコサミノグリカンを外用若しくは経口にて投与することがなされてきた。しかしながら、ヒアルロン酸などのグリコサミノグリカンは、組織内に存在するため、経皮で投与しても組織内にそのまま取り込まれることはなく、経口では消化器官において分解された状態でしか吸収されないため、グリコサミノグリカンを直接経皮若しくは経口で投与してもその効果は極限られたものにしかすぎなかった。
【０００３】
【特許文献１】特開平８−６７６２１号公報
【特許文献２】特表２００４−５０７４９０号公報
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
生体内におけるグリコサミノグリカンの産生を促進し、しわ（Ｗｒｉｎｋｌｅ）やタルミ、変形性関節症等加齢による種々の症状を防止、改善する効果を有する、グリコサミノグリカン産生促進剤を提供することを目的とした。
【課題を解決するための手段】
【０００５】
本発明は、アルニカ、ユリ属、オトギリソウ属、シナノキ属植物、カミツレ、ローマカミツレから選択される１種又は２種以上の植物の抽出物を有効成分とする、硫酸化グリコサミノグリカン、ヒアルロン酸などのグリコサミノグリカン産生促進剤を提供するものである。
【発明の効果】
【０００６】
本発明によれば、組織におけるグリコサミノグリカンの産生を促進する効果を有する、グリコサミノグリカン産生促進剤を提供することができる。
【発明を実施するための最良の形態】
【０００７】
本発明のグリコサミノグリカン産生促進剤は、アルニカ、ユリ属、オトギリソウ属、シナノキ属植物、カミツレ、ローマカミツレから選択される１種又は２種以上の植物の抽出物を有効成分とする。
【０００８】
本発明において用いるアルニカ（Ａｒｎｉｃａ ｍｏｎｔａｎａ Ｌ．）は、キク科（Ｃｏｍｐｏｓｉｔａｅ）に属する多年草である。
【０００９】
本発明において用いるユリ属（Ｌｉｌｉｕｍ）植物としては、ヤマユリ（Ｌｉｌｉｕｍ ａｕｒａｔｕｍ Ｌｉｎｄｌ．），マドンナリリー（Ｌｉｌｉｕｍ ｃａｎｄｉｄｕｍ Ｌ．），ヒメユリ（Ｌｉｌｉｕｍ ｃｏｎｃｏｌｏｒ Ｓａｌｉｓｂ．），タカサゴユリ（Ｌｉｌｉｕｍ ｆｏｒｍｏｓａｎｕｍ Ｗａｌｌａｃｅ），ササユリ（Ｌｉｌｉｕｍ ｊａｐｏｎｉｃｕｍ Ｔｈｕｎｂ． ｅｘ Ｈｏｕｔｔ．），オニユリ（Ｌｉｌｉｕｍ ｌａｎｃｉｆｏｌｉｕｍ Ｔｈｕｎｂ．），コオニユリ（Ｌｉｌｉｕｍ ｌｅｉｃｈｔｌｉｎｉｉ Ｈｏｏｋ． ｆ． ｖａｒ． ｍａｘｉｍｏｗｉｃｚｉｉ Ｂａｋｅｒ），テッポウユリ（Ｌｉｌｉｕｍ ｌｏｎｇｉｆｌｏｒｕｍ Ｔｈｕｎｂ．），イワトユリ（Ｌｉｌｉｕｍ ｍａｃｕｌａｔｕｍ Ｔｈｕｎｂ．），クルマユリ（Ｌｉｌｉｕｍ ｍｅｄｅｏｌｏｉｄｅｓ Ａ． Ｇｒａｙ），リーガル・リリー（Ｌｉｌｉｕｍ ｒｅｇａｌｅ Ｗｉｌｓ．），オトメユリ（Ｌｉｌｉｕｍ ｒｅｂｅｌｌｕｍ Ｂａｋｅｒ），カノコユリ（Ｌｉｌｉｕｍ ｓｐｅｃｉｏｓｕｍ Ｔｈｕｎｂ．）等が挙げられる。これらはユリ科（Ｌｉｌｉａｃｅａｅ）に属する多年草である。これらのユリ属の植物には、アジアティック・ハイブリッド、ロンギフローラム・ハイブリッド、マルタゴン・ハイブリッド、トランペット・ハイブリッド、オリエンタル・ハイブリッド等多くの栽培品種が知られており、これらの栽培品種のユリを用いてもよいが、本発明においては、その効果並びに収率のよさから、栽培品種のカサブランカを用いることが好ましい。
【００１０】
本発明において用いるオトギリソウ属（Ｈｙｐｅｒｉｃｕｍ Ｌ．）植物としては、トモエソウ（Ｈｙｐｅｒｉｃｕｍ ａｓｃｙｒｏｎ Ｌ．）、ビヨウヤナギ（Ｈｙｐｅｒｉｃｕｍ ｃｈｉｎｅｎｓｉｓ Ｌ． ｖａｒ． ｓａｌｉｃｉｆｏｌｉａ（Ｓｉｅｂ． ｅｔ Ｚｕｃｃ．）、オトギリソウ（Ｈｙｐｅｒｉｃｕｍ ｅｒｅｃｔｕｍ Ｔｈｕｎｂ．）、ヒメオトギリ（Ｈｙｐｅｒｉｃｕｍ ｊａｐｏｎｉｃｕｍ Ｔｈｕｎｂ．）、キンシバイ（Ｈｙｐｅｒｉｃｕｍ ｐａｔｕｌｕｍ Ｔｈｕｎｂ．）、セイヨウオトギリ（Ｈｙｐｅｒｉｃｕｍ ｐｅｒｆｏｒａｔｕｍ Ｌ．）、ハイオトギリ（Ｈｙｐｅｒｉｃｕｍ ｋａｍｔｓｃｈａｔｉｃｕｍ ｖａｒ． ｋａｍｔｓｃｈａｔｉｃｕｍ）、イワオトギリ（Ｈｙｐｅｒｉｃｕｍ ｋａｍｔｓｃｈａｔｉｃｕｍ ｖａｒ． ｈｏｎｄｏｎｅｎｓｅ）、シナノオトギリ（Ｈｙｐｅｒｉｃｕｍ ｋａｍｔｓｃｈａｔｉｃｕｍ ｖａｒ． ｓｅｎａｎｅｎｓｅ）、タカネオトギリ（Ｈｙｐｅｒｉｃｕｍ ｓｉｋｏｋｕｍｏｎｔａｎｕｍ）、センカクオトギリ（Ｈｙｐｅｒｉｃｕｍ ｓｅｎｋａｋｕｉｎｓｕｌａｒｅ）、コケオトギリ（Ｈｙｐｅｒｉｃｕｍ ｌａｘｕｍ）等が挙げられるが、本発明の効果の点からオトギリソウを用いることが好ましい。
【００１１】
本発明において用いるシナノキ属（Ｔｉｌｉａ Ｌ．）植物は、アメリカシナノキ（Ｔｉｌｉａ ａｍｅｒｉｃａｎａ Ｌ．）、フユボダイジュ（Ｔｉｌｉａ ｃｏｒｄａｔａ Ｍｉｌｌ．）、セイヨウシナノキ（Ｔｉｌｉａ ｅｕｒｏｐａｅａ Ｌ．）、シナノキ（Ｔｉｌｉａ ｊａｐｏｎｉｃａ Ｓｉｍｏｎｋ．）、ヘラノキ（Ｔｉｌｉａ ｋｉｕｓｉａｎａ Ｍａｋｉｎｏ ｅｔ Ｓｈｉｒａｓ．）、オオバオダイジュ（Ｔｉｌｉａ ｍａｘｉｍｏｗｉｃｚｉａｎａ Ｓｈｉｒａｓ．）、ナツボダイジュ（Ｔｉｌｉａ ｐｌａｔｙｐｈｙｌｌｏｓ Ｓｃｏｐ．），ボダイジュ（Ｔｉｌｉａ ｍｉｑｕｅｌｉａｎａ Ｍａｘｉｍ．）等が例示される。本発明の効果の点からフユボダイジュ、シナノキ、ボダイジュから選択される１種又は２種以上を用いることが好ましい。
【００１２】
カミツレ（Ｍａｔｒｉｃａｒｉａ ｃｈａｍｏｍｉｌｌａ Ｌ．）は、キク科（Ｃｏｍｐｏｓｉｔａｅ）に属する１年草又は越年草で、生薬「カミツレ（Ｃｈａｍｏｍｉｌｌａｅ Ｆｌｏｓ）」の基原植物である。
【００１３】
ローマカミツレ（Ａｎｔｈｅｍｉｓ ｎｏｂｉｌｉｓ Ｌ．）は、キク科（Ｃｏｍｐｏｓｉｔａｅ）に属する多年草である。
【００１４】
本発明における上記植物の抽出物には、植物の原体や乾燥物も抽出物に含まれるが、各種溶媒を用いて抽出した抽出物若しくは精油を用いるのが好ましい。抽出には、植物の葉、花、種子、根、茎、芽、枝、樹皮などのいずれの部位を用いても構わない。抽出は、抽出溶媒に浸漬するか、超臨界流体や亜臨界流体を用いた抽出方法でも行うことができる。抽出効果を上げるため、攪拌や抽出溶媒中でホモジナイズしてもよい。抽出温度としては、５℃程度から抽出溶媒の沸点以下の温度とするのが適切である。抽出時間は抽出溶媒の種類や抽出温度によっても異なるが、１時間〜１４日間程度とするのが適切である。
【００１５】
抽出溶媒としては、特に極性の生むなどで限定されず、水の他、メタノール、エタノール、プロパノール、イソプロパノール等の低級アルコール、１，３−ブチレングリコール、プロピレングリコール、ジプロピレングリコール、グリセリン等の多価アルコール、エチルエーテル、プロピルエーテル等のエーテル類、酢酸ブチル、酢酸エチル等のエステル類、アセトン、エチルメチルケトン等のケトン類、流動パラフィン、スクワランなどの炭化水素油類、大豆油、ヒマワリ油、コーン油、ベニバナ油、アルモンド油等の植物油類、ワックス類、ペースト類などを用いることができ、これらより１種又は２種以上を選択して用いる。また、生理食塩水、リン酸緩衝液、リン酸緩衝生理食塩水等を用いてもよい。さらに、水や二酸化炭素、エチレン、プロピレン、エタノール、メタノール、アンモニアなどの１種又は２種以上の超臨界流体や亜臨界流体を用いてもよい。
【００１６】
植物の上記溶媒による抽出物は、そのままでも使用することができるが、濃縮、乾固した物を水や溶媒に再度溶解して使用することもでき、これらの生理作用を損なわない範囲で脱色、脱臭、脱塩等の精製処理やカラムクロマトグラフィー等による分画処理を行った後に用いてもよい。植物の前記抽出物やその処理物及び分画物は、各処理及び分画後に凍結乾燥し、用時に溶解して用いることもできる。
【００１７】
アルニカ抽出物を用いる際には、抽出部位としては花を、抽出溶媒としては大豆油を用いることが好ましい。
【００１８】
ユリ属植物抽出物を用いる際には、抽出部位としては花を、抽出溶媒としてヒマワリ種子油を用いることが好ましい。
【００１９】
オトギリソウ属植物抽出物を用いる際には、抽出部位としては花、葉、茎を含む地上部位を、溶媒としてはエタノール水溶液を用いることが好ましい。
【００２０】
シナノキ属植物抽出物を用いる際には、抽出部位としては花を、抽出溶媒としてはヒマワリ種子油を用いることが好ましい。
【００２１】
カミツレ抽出物を用いる際には、抽出部位としては花を、抽出溶媒としてはヒマワリ種子油、５０質量％エタノール水溶液、又は熱水を用いることが好ましい。
【００２２】
ローマカミツレ抽出物を用いる際には、乾燥した花頭から得られた精油、５０質量％エタノール水溶液、又は熱水を用いることが好ましい。
【実施例】
【００２３】
以下に、本発明のグリコサミノグリカン産生促進剤にかかる各種植物の抽出物の製造例及びグリコサミノグリカン産生促進作用を評価するための試験について詳細に説明する。
【００２４】
［製造例１］ アルニカ抽出物
乾燥したアルニカ花を、ダイズ油に浸漬して抽出し、不溶物を除去することにより、アルニカ抽出物を得た。
【００２５】
［製造例２］ オトギリソウ抽出物
乾燥したオトギリソウ花を、３０質量％エタノール水溶液に浸漬して抽出した。上清を減圧濃縮することにより溶媒を除去して得られた抽出物を、スクワランに溶解することにより、オトギリソウ抽出物を得た。
【００２６】
［製造例３］ シナノキ抽出物
乾燥したフユボダイジュ花を、ヒマワリ種子油に浸漬して抽出し、不溶物を除去することにより、シナノキ抽出物を得た。
【００２７】
［製造例４］ カミツレ抽出物１
乾燥したカミツレ花を、ヒマワリ種子油に浸漬して抽出し、不溶物を除去することにより、カミツレ抽出物を得た。
【００２８】
［製造例５］ カミツレ抽出物２
乾燥したカミツレ花を粉砕し、２０倍量の５０質量％エタノール水溶液を加え、室温で攪拌しながら２時間抽出した。得られた抽出液を濾過して不溶物を取り除き、減圧濃縮後、凍結乾燥を行って、カミツレ抽出物２を得た。
【００２９】
［製造例６］ カミツレ抽出物３
乾燥したカミツレ花を粉砕し、サンプル質量の２０倍量の精製水を加え、２０分間、１２０℃に加温して抽出した。得られた抽出液から、吸引濾過により不溶物を取り除いた後、凍結乾燥を行って、カミツレ抽出物３を得た。
【００３０】
［製造例７］ ローマカミツレ精油
乾燥したローマカミツレ花頭から得られた精油をローマカミツレ精油として用いた。
【００３１】
［製造例８］ ローマカミツレ抽出物１
乾燥したローマカミツレ花を粉砕し、２０倍量の５０質量％エタノール水溶液を加え、室温で攪拌しながら２時間抽出した。得られた抽出液を濾過して不溶物を取り除き、減圧濃縮後、凍結乾燥を行って、ローマカミツレ抽出物１を得た。
【００３２】
［製造例９］ ローマカミツレ抽出物２
乾燥したローマカミツレ花を粉砕し、サンプル質量の２０倍量の精製水を加え、２０分間、１２０℃に加温して抽出した。得られた抽出液から、吸引濾過により不溶物を取り除いた後、凍結乾燥を行って、ローマカミツレ抽出物２を得た。
【００３３】
［製造例１０］ カサブランカ抽出物
乾燥したカサブランカ花を、ヒマワリ種子油に浸漬して抽出し、不溶物を除去することにより、カサブランカ抽出物を得た。
【００３４】
製造例４〜１０を用いて、硫酸化グリコサミノグリカン産生促進作用を、製造例１〜３、１０を用いてヒアルロン酸産生促進作用をそれぞれ評価した。
【００３５】
［硫酸化グリコサミノグリカン（ＧＡＧ）産生促進作用］
正常ヒト真皮線維芽細胞を１ウェル当り３．０×１０5個となるように６ウェルマイクロプレートに播種した。播種培地にはダルベッコ改変イーグル培地（ＤＭＥＭ）に５質量％のウシ胎児血清（ＦＢＳ）を添加したものを用いた。２４時間後、１質量％ＦＢＳ添加ＤＭＥＭ培地にて各濃度に調整した抽出物含有培養液に交換しさらに７２時間培養した。硫酸化グリコサミノグリカンの産生量の定量にはＢｌｙｓｃａｎ Ｓｕｌｆａｔｅｄ Ｇｌｙｃｏｓａｍｉｎｏｇｌｙｃａｎ Ａｓｓａｙ（Ｂｉｏｃｏｌｏｒ社製）キットを使用した。キットは硫酸基に特異的に結合する発色物質を用いている。マイクロプレートリーダーにて６５６−５５０ｎｍの吸光度を測定した。評価ではサンプル培養液の他にネガティブコントロールとして１質量％ＦＢＳ添加ＤＭＥＭ培地を用いた。同時にＰＩＥＲＣＥ社製ＢＣＡ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ａｓｓａｙ Ｋｉｔにてタンパク量を測定し単位タンパク量当りの硫酸化グリコサミノグリカン産生量を求めた。評価はネガティブコントロールの単位蛋白量当りの硫酸化グリコサミノグリカン産生量を１００とした時の相対値にて表１〜３に示す。
【００３６】
［ヒト真皮線維芽細胞ヒアルロン酸（ＨＡ）産生促進作用］
正常ヒト真皮繊維芽細胞を１ウェル当り２．０×１０4個となるように９６ウェルマイクロプレートに播種した。播種培地には５質量％のウシ胎児血清（ＦＢＳ）を添加したダルベッコ改変イーグル培地（ＤＭＥＭ）を用いた。２４時間後、０．５質量％ＦＢＳ添加ＤＭＥＭ培地にて各濃度に調整した抽出液含有培養液に交換し、さらに３日間培養した。培養上清中に分泌されたヒアルロン酸の定量には、プロテオグリカンを用いた間接ＥＬＩＳＡ法を用い、最後は標識されたペルオキシダーゼに対し２，２’−アジノビス（３−エチルベンゾチアゾリン−６−スルホン酸）ジアンモニウム塩（ＡＢＴＳ）及び過酸化水素を添加し反応させた後、マイクロプレートリーダーにて４０５ｎｍの吸光度を測定した。ＰＩＥＲＣＥ社製ＢＣＡ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ａｓｓａｙ Ｋｉｔにて各ウェルのタンパク量を測定し、単位タンパク量当りのヒアルロン酸産生量を求めた。評価結果を試料無添加のコントロールにおける単位タンパク量当りのヒアルロン酸産生量を１００とした相対値にて表４〜７に示す。
【００３７】
なお、ｔ検定における有意確率P値に対し、有意確率５％未満（Ｐ＜０．０５）を＊、有意確率１％未満（Ｐ＜０．０１）を＊＊で表す。
【００３８】
【表１】
【００３９】
【表２】
【００４０】
【表３】
【００４１】
【表４】
【００４２】
【表５】
【００４３】
【表６】
【００４４】
【表７】
【００４５】
【表８】
【００４６】
【表９】
【００４７】
【表１０】
【００４８】
【表１１】
【００４９】
表１〜１１に示したとおり、製造例１〜１０の抽出物は、高いグリコサミノグリカン産生促進作用を示した。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
アルニカ、ユリ属、オトギリソウ属、シナノキ属植物、カミツレ、ローマカミツレから選択される１種又は２種以上の植物の抽出物を有効成分とする、グリコサミノグリカン産生促進剤。
【請求項２】
グリコサミノグリカンが硫酸化グリコサミノグリカンである、請求項１に記載のグリコサミノグリカン産生促進剤。
【請求項３】
グリコサミノグリカンがヒアルロン酸である、請求項１に記載のグリコサミノグリカン産生促進剤。
【請求項１】
アルニカ、ユリ属、オトギリソウ属、シナノキ属植物、カミツレ、ローマカミツレから選択される１種又は２種以上の植物の抽出物を有効成分とする、グリコサミノグリカン産生促進剤。
【請求項２】
グリコサミノグリカンが硫酸化グリコサミノグリカンである、請求項１に記載のグリコサミノグリカン産生促進剤。
【請求項３】
グリコサミノグリカンがヒアルロン酸である、請求項１に記載のグリコサミノグリカン産生促進剤。
【公開番号】特開２０１０−１８５９４（Ｐ２０１０−１８５９４Ａ）
【公開日】平成２２年１月２８日（２０１０．１．２８）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００８−１８２８３０（Ｐ２００８−１８２８３０）
【出願日】平成２０年７月１４日（２００８．７．１４）
【出願人】（０００１３５３２４）株式会社ノエビア (258)
【Ｆターム（参考）】
【公開日】平成２２年１月２８日（２０１０．１．２８）
【国際特許分類】
【出願日】平成２０年７月１４日（２００８．７．１４）
【出願人】（０００１３５３２４）株式会社ノエビア (258)
【Ｆターム（参考）】
[ Back to top ]