グリセロール誘導体
（式中、Ｒは反応性を有する基または反応性を有する基に変換可能な基を含有する残基を表し、ｎは３以上の整数を表し、Ｘはｎ個の
を有することが可能な残基を表し、Ｒ１は水素原子または水素原子に変換可能な基を表し、６個以上存在するＲ１はそれぞれ同一でも異なっていてもよい）
生理活性を維持した状態で生理活性ポリペプチドもしくはその誘導体または低分子化合物を化学修飾し得る、または低分子化合物の安定性もしくは水溶性の向上に有用である上記式（１）で表される化合物を提供する。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
本発明は、生理活性ポリペプチドもしくはその誘導体または低分子化合物の化学修飾に有用な化合物に関する。また、本発明は、生理活性ポリペプチドもしくはその誘導体または低分子化合物が少なくとも１個の該化合物で修飾された化学修飾ポリペプチドまたは化学修飾低分子化合物、および該化学修飾ポリペプチドまたは該化学修飾低分子化合物を含有する医薬に関する。さらに、本発明は、該化合物で生理活性ポリペプチドもしくはその誘導体または低分子化合物を化学修飾することを特徴とする、該生理活性ポリペプチドもしくは該その誘導体または該低分子化合物の安定性または水溶性を向上させる方法に関する。
【背景技術】
生理活性を有するポリペプチドは特定の疾病に対する治療剤として有用であるが、血中に投与されると安定性が悪く、十分な薬理効果が期待できない場合が多い。例えば、血中に存在する加水分解酵素等によって分解され、生理活性を失うことがある。さらに、外因性の生理活性ポリペプチドにおいてもその生理活性が疾患の治療に有効なことがあるが、そのような外因性のポリペプチドや遺伝子組換えによって製造されたポリペプチド等は内因性のポリペプチドと構造が異なるために、それらが血中に投与された場合には免疫反応を誘発し、アナフィラキシーショック等の重篤な副作用を起こす場合もあることが知られている。さらに、生理活性ポリペプチドの中にはそれが治療剤として用いられる際に、溶解性が悪い等の物性が問題になるものも多い。
生理活性ポリペプチドを治療剤として用いる際のこれらの問題を解決する方法の一つとして、ポリエチレングリコール等の不活性型ポリマー鎖をポリペプチドに化学的に結合させる方法が第一に知られている。
例えば、顆粒球コロニー刺激因子（Ｇ−ＣＳＦ）のポリエチレングリコール修飾が知られている［「ジャーナル・オブ・バイオケミストリー（Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｂｉｏｃｈｅｍｓｔｒｙ）」，１９９４年，第１１５巻，ｐ．８１４−８１９］。その他にもアスパラギナーゼ、グルタミナーゼ、アデノシンデアミナーゼ、ウリカーゼ等のポリエチレングリコール修飾の例が報告されている［ティム・ジェイ・ハーン（Ｔｉｍ Ｊ．Ａｈｅｒｎ）、マーク・シー・マンニング（Ｍａｒｋ Ｃ．Ｍａｎｎｉｎｇ）著，「ファーマシューティカル・バイオテクノロジー第３巻，スタビリティ・オブ・プロテイン・ファーマシューティカルズ・パートＢ，イン・ビボ・パスウェイズ・オブ・デグラデーション・アンド・ストラテジーズ・フォー・プロテイン・スタビライゼーション（Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｖｏｌｕｍｅ ３，Ｓｔａｂｉｌｉｔｙ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ，Ｐａｒｔ Ｂ，Ｉｎ Ｖｉｖｏ Ｐａｔｈｗａｙｓ ｏｆ Ｄｅｇｒａｄａｔｉｏｎ ａｎｄ Ｓｔｒａｔｅｇｉｅｓ ｆｏｒ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｓｔａｂｉｌｉｚａｔｉｏｎ）」，（米国），プレナム・パブリッシング（Ｐｌｅｎｕｍ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏ．），１９９２年１１月，ｐ．２３５−２６３］。生理活性ポリペプチドをポリアルキレングリコールで修飾することによって得られる効果としては、血中持続性が向上する、抗原性・免疫原性が低下する、血中安定性が向上する等の他に、熱安定性が高まること［生物物理，１９９８年，第３８巻，ｐ．２０８］、有機溶媒に可溶となること［バイオケミカル・アンド・バイオフィジカル・リサーチ・ミュニケーションズ（Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ ａｎｄ Ｂｉｏｐｈｙｓｉｃａｌ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｃｏｍｕｎｉｃａｔｉｏｎｓ），１９８４年，第１２２巻，ｐ．８４５］等も知られている。
しかしながら、生理活性ポリペプチドをポリアルキレングリコールで修飾する際には、該ポリペプチドの生理活性を損なわずに血中安定性を向上させることは困難な場合が多い。一般的に、ポリアルキレングリコールの分子量が大きいほど、または修飾率が高いほど該ポリペプチドの血中持続性は向上することが知られているが［ジャーナル・オブ・バイオケミストリー（Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｂｉｏｃｈｅｍｓｔｒｙ），１９８８年，第２６３巻，ｐ．１５０６４］、修飾率を高くすると該ポリペプチドの生理活性が損なわれることがある。これは、生理活性に必要な特定のアミノ基やメルカプト基等のアミノ酸残基が化学修飾剤によって修飾されること、生理活性ポリペプチドに結合したポリアルキレングリコールが生理活性部位の相互作用を妨害すること等が原因と考えられている。修飾率に応じて生理活性が低下する例としては、インターロイキン−１５が知られている［ジャーナル・オブ・バイオケミストリー（Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｂｉｏｃｈｅｍｓｔｒｙ），１９９７年，第２７２巻，ｐ．２３１２］。このように、化学修飾によって数多くのメリットが得られるが、一般的に化学修飾によってポリペプチドの生理活性が損なわれてしまうことから、修飾を行ってもポリペプチドの生理活性が損なわれない化学修飾剤が所望されている。
一方、多くの低分子化合物は水溶性が低く、生理活性を発揮するレベルの濃度の水溶液を調製することが困難な場合がある。また、一旦水溶液を調製できたとしても、保存中に沈殿を形成し、溶液濃度の実質的な低下を来たす場合もある。例えば、多くの抗癌剤や抗生物質、抗ウイルス剤等の化合物がこれに該当する。このため、生理化学的な実験を行ったり、治療用の薬剤を生体に投与したりする場合、目的とする有効濃度が得られないばかりでなく、目的の薬理効果を達成できない可能性がある。そこで、ポリマーや界面活性物質を混合または化学的に結合させて難水溶性低分子化合物を可溶化させて利用する試みが行われている。例えば、ポリエチレンオキサイドとアスパラギン酸の共重合体をアンホテリシンＢ（Ａｍｐｈｏｔｅｒｉｃｉｎ Ｂ）の可溶化に利用した例が知られている［ジャーナル・オブ・コントロールド・リリース（Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ Ｒｅｌｅａｓｅ），１９９８年，第５３巻，ｐ．１３１−１３６］。また、シクロデキストリンをアンホテリシンＢの可溶化に利用した例も知られている［バイオポリマーズ（Ｂｉｏｐｏｌｙｍｅｒｓ），１９８９年，第２８巻，ｐ．１５８５−１５９６］。また、コレステロール等の低分子化合物の可溶化のために、胆汁酸ミセル等も利用されている。抗癌剤の溶解性を向上させるためにポリエチレングリコール等も利用されている［「キャンサー・リサーチ（Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ）」，１９９０年，第５０巻，ｐ．１６９３−１７００］。以上のように、生理活性を損なわずに低分子化合物を可溶化するための手法および試薬が求められている。この際、上記のように可溶化剤を添加する方法では、再現性の問題や可溶化剤自身の影響を考慮する必要が生じる。そこで、低分子化合物自身を化学修飾し、溶解性や安定性を向上できる試薬および方法が望まれている。
一方、グリセロールを構造中に有するデンドリマーが知られている［「マクロモレキュールズ（Ｍａｃｒｏｍｏｌｅｃｕｌｅｓ）」，２００１年，第３４巻，ｐ．７６４８−７６５５；「ポリマー・プリプリンツ（Ｐｏｌｙｍｅｒ Ｐｒｅｐｒｉｎｔｓ）」，２００１年，第４２巻，ｐ．１５５−１５６；「ポリマー・プリプリンツ（Ｐｏｌｙｍｅｒ Ｐｒｅｐｒｉｎｔｓ）」，２００１年，第４２巻，ｐ．１５７−１５８；「ジャーナル・オブ・アメリカン・ケミカル・ソサエティ（Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｓｏｃｉｅｔｙ）」，２００１年，第１２３巻，ｐ．２９０５−２９０６；「ジャーナル・オブ・アメリカン・ケミカル・ソサエティ（Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｓｏｃｉｅｔｙ）」，２０００年，第１２２巻，ｐ．１０３３５−１０３４４；「チャイニーズ・ジャーナル・オブ・ケミストリー（Ｃｈｉｎｅｓｅ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ）」，１９９８年，第１６巻，ｐ．２８−３３］。
【発明の開示】
従来の化学修飾剤を用いて調製された化学修飾生理活性ポリペプチドでは生理活性が著しく低下する場合があり、生理活性が損なわれない化学修飾法が望まれている。また、多くの難水溶性低分子化合物の水溶性を向上させる方法が望まれている。
本発明は、以下の（１）〜（３０）に関する。
（１） 式（１）
（式中、Ｒは反応性を有する基または反応性を有する基に変換可能な基を含有する残基を表し、ｎは３以上の整数を表し、Ｘはｎ個の
を有することが可能な残基を表し、Ｒ１は水素原子または水素原子に変換可能な基を表し、６個以上存在するＲ１はそれぞれ同一でも異なっていてもよい）で表される化合物。
（２） 全てのＲ１が水素原子である、前記（１）記載の化合物。
（３） 全てのＲ１がベンジルである、前記（１）記載の化合物。
（４） ｎが２ｍ（式中、ｍは２以上の整数を表す）である、前記（１）〜（３）のいずれか１項に記載の化合物。
（５） Ｘが１以上の直列的分岐構造を有する、前記（１）〜（４）のいずれか１項に記載の化合物。
（６） Ｘが１個以上（ｎ−１）個以下の
または
（式中、Ｙ１、Ｙ２およびＹ３はそれぞれ独立して、単結合、あるいは置換もしくは非置換のアルキレン、カルボニル、置換もしくは非置換のイミノ、Ｏ、Ｓ、スルホニルおよびスルフィニルからなる群より選ばれる一つまたは同一もしくは異なった複数の任意の組み合わせを表し、Ｙ１、Ｙ２およびＹ３が複数存在するとき、これらはそれぞれ同一でも異なっていてもよい）で表される構造を含有する、前記（１）〜（５）のいずれか１項に記載の化合物。
（７） Ｘが１個以上（ｎ−１）個以下の
で表される構造を含有する、前記（１）〜（６）のいずれか１項に記載の化合物。
（８） Ｘが１個以上（ｎ−１）個以下の
で表される構造を含有する、前記（１）〜（７）のいずれか１項に記載の化合物。
（９） Ｘが１個以上（ｎ−１）個以下の
で表される構造を含有する、前記（１）〜（８）のいずれか１項に記載の化合物。
（１０） Ｘが１個以上（ｎ−１）個以下の
で表される構造を含有する、前記（１）〜（９）のいずれか１項に記載の化合物。
（１１） 反応性を有する基または反応性を有する基に変換可能な基を含有する残基が、生理活性ポリペプチドまたはその誘導体中のアミノ酸側鎖、Ｎ末端アミノ基もしくはＣ末端カルボキシル基、あるいはポリペプチドと結合した糖鎖との反応性を有する基または反応性を有する基に変換可能な基を含有する残基である前記（１）〜（１０）のいずれか１項に記載の化合物。
（１２） 反応性を有する基または反応性を有する基に変換可能な基を含有する残基が、カルボン酸活性エステル残基、カーボネート、マレイミド、メルカプト、ホルミル、トレシル、イソシアナート、酸無水物残基、酸ハロゲン化物残基、ビニルスルホニル、ヒドラジド、アミノ、水酸基、ハロゲン、カルボキシ、ビニルおよびホスホノからなる群より選ばれる基である前記（１）〜（１１）のいずれかに記載の化合物。
（１３） 前記（１）〜（１２）のいずれか１項に記載の化合物を少なくとも二つ含有する混合物。
（１４） 式（２）
（式中、Ｒ１Ａは水素原子またはベンジルを表す）で表される化合物。
（１５） 式（３）
（式中、Ｒ１Ａは水素原子またはベンジルを表す）で表される化合物。
（１６） 式（４）
（式中、Ｒ１Ａは水素原子またはベンジルを表す）で表される化合物。
（１７） 式（５）
（式中、Ｒ１Ａは水素原子またはベンジルを表す）で表される化合物。
（１８） 生理活性ポリペプチドまたはその誘導体が少なくとも１個の前記（１）〜（１２）および（１４）〜（１７）のいずれか１項に記載の化合物で直接もしくはスペーサーを介して修飾された化学修飾ポリペプチド。
（１９） 生理活性ポリペプチドまたはその誘導体が、酵素、サイトカイン、ホルモン、毒素、抗体およびそれらの誘導体からなる群より選ばれる前記（１８）記載の化学修飾ポリペプチド。
（２０） 生理活性ポリペプチドまたはその誘導体が、アスパラギナーゼ（Ａｓｐａｒａｇｉｎａｓｅ）、グルタミナーゼ（Ｇｌｕｔａｍｉｎａｓｅ）、アルギナーゼ（Ａｒｇｉｎａｓｅ）、ウリカーゼ（Ｕｒｉｃａｓｅ）、スーパーオキサイドディスムターゼ（Ｓｕｐｅｒｏｘｉｄｅ Ｄｉｓｕｍｕｔａｓｅ）、ラクトフェリン（Ｌａｃｔｏｆｅｒｒｉｎ）、ストレプトキナーゼ（Ｓｔｒｅｐｔｏｋｉｎａｓｅ）、プラスミン（Ｐｌａｓｍｉｎ）、アデノシンデアミナーゼ（Ａｄｅｎｏｓｉｎｅ Ｄｅａｍｉｎａｓｅ）、インターロイキン−１〜２４（Ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ−１〜２４）、インターフェロン−α（Ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ−α）、インターフェロン−β（Ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ−β）、インターフェロン−γ（Ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ−γ）、インターフェロン−ω（Ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ−ω）、インターフェロン−τ（Ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ−τ）、顆粒球コロニー刺激因子（Ｇｒａｎｕｌｏｃｙｔｅ−Ｃｏｌｏｎｙ Ｓｔｉｍｕｌａｔｉｎｇ Ｆａｃｔｏｒ）、エリスロポエチン（Ｅｒｙｔｈｒｏｐｏｉｅｔｉｎ）、腫瘍壊死因子（Ｔｕｍｏｒ Ｎｅｃｒｏｓｉｓ Ｆａｃｔｏｒ）、血小板増加因子（Ｔｈｒｏｍｂｏｐｏｉｅｔｉｎ）、クローソ（Ｋｌｏｔｈｏ）蛋白質、レプチン（Ｌｅｐｔｉｎ）、繊維芽細胞増殖因子１〜１９（Ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔ Ｇｒｏｗｔｈ Ｆａｃｔｏｒ−１〜１９）、ミッドカイン（Ｍｉｄｋｉｎｅ）、カルシトニン（Ｃａｌｃｉｔｏｎｉｎ）、表皮成長因子（Ｅｐｉｄｅｒｍａｌ Ｇｒｏｗｔｈ Ｆａｃｔｏｒ）、グルカゴン（Ｇｌｕｃａｇｏｎ）、インスリン（Ｉｎｓｕｌｉｎ）、インスリン様成長因子１（Ｉｎｓｕｌｉｎ−ｌｉｋｅ Ｇｒｏｗｔｈ Ｆａｃｔｏｒ−１）、オステオジェニックプロテイン１（Ｏｓｔｅｏｇｅｎｉｃ Ｐｒｏｔｅｉｎ−１）、幹細胞増殖因子（Ｓｔｅｍ Ｃｅｌｌ Ｇｒｏｗｔｈ Ｆａｃｔｏｒ）、アミリン（Ａｍｙｌｉｎ）、パラサイロイドホルモン（Ｐａｒａｔｈｙｒｏｉｄ Ｈｏｒｍｏｎｅ）、プラスミノーゲン活性化因子類（Ｐｌａｓｍｉｎｏｇｅｎ Ａｃｔｉｖａｔｏｒ）、血管内皮細胞成長因子（Ｖａｓｃｕｌａｒ Ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ Ｃｅｌｌ Ｇｒｏｗｔｈ Ｆａｃｔｏｒ）、形質転換成長因子類（Ｔｒａｎｓｆｏｒｍｉｎｇ Ｇｒｏｗｔｈ Ｆａｃｔｏｒ）、グルカゴン様ペプチド類（Ｇｌｕｃａｇｏｎ−ｌｉｋｅ Ｐｅｐｔｉｄｅ）、成長ホルモン（Ｇｒｏｗｔｈ Ｈｏｒｍｏｎｅ）、ナトリウム利尿ペプチド類（Ｎａｔｒｉｕｒｅｔｉｃ Ｐｅｐｔｉｄｅ）、プラスミノーゲン（Ｐｌａｓｍｉｎｏｇｅｎ）、アンジオポエチン（Ａｎｇｉｏｐｏｉｅｔｉｎ）、アンジオスタチン（Ａｎｇｉｏｓｔａｔｉｎ）、エンドスタチン（Ｅｎｄｏｓｔａｔｉｎ）、ネオカルチノスタチン（Ｎｅｏｃａｒｚｉｎｏｓｔａｔｉｎ）、肝細胞成長因子（Ｈｅｐａｔｏｃｙｔｅ Ｃｅｌｌ Ｇｒｏｗｔｈ Ｆａｃｔｏｒ）、リシン（Ｒｉｃｉｎ）、シュードモナス外毒素（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ Ｅｘｏｔｏｘｉｎ）、ジフテリア毒素（Ｄｉｐｈｔｈｅｒｉａ Ｔｏｘｉｎ）およびそれらの溶解性レセプターならびにそれらの誘導体からなる群より選ばれる前記（１８）記載の化学修飾ポリペプチド。
（２１） 生理活性ポリペプチドの誘導体が、該ポリペプチドのアミノ酸欠失体、アミノ酸置換体、アミノ酸挿入体、アミノ酸付加体、糖鎖欠失体および糖鎖付加体からなる群より選ばれる前記（１８）〜（２０）のいずれか１項に記載の化学修飾ポリペプチド。
（２２） 前記（１８）〜（２１）のいずれか１項に記載の化学修飾ポリペプチドを含有する医薬。
（２３） 前記（１）〜（１２）および（１４）〜（１７）のいずれか１項に記載の化合物で生理活性ポリペプチドまたはその誘導体を化学修飾することを特徴とする、該生理活性ポリペプチドまたは該その誘導体の安定性または水溶性を向上させる方法。
（２４） 生理活性ポリペプチドまたはその誘導体が、酵素、サイトカイン、ホルモン、毒素、抗体およびそれらの誘導体からなる群より選ばれる前記（２３）記載の方法。
（２５） 生理活性ポリペプチドまたはその誘導体が、アスパラギナーゼ（Ａｓｐａｒａｇｉｎａｓｅ）、グルタミナーゼ（Ｇｌｕｔａｍｉｎａｓｅ）、アルギナーゼ（Ａｒｇｉｎａｓｅ）、ウリカーゼ（Ｕｒｉｃａｓｅ）、スーパーオキサイドディスムターゼ（Ｓｕｐｅｒｏｘｉｄｅ Ｄｉｓｕｍｕｔａｓｅ）、ラクトフェリン（Ｌａｃｔｏｆｅｒｒｉｎ）、ストレプトキナーゼ（Ｓｔｒｅｐｔｏｋｉｎａｓｅ）、プラスミン（Ｐｌａｓｍｉｎ）、アデノシンデアミナーゼ（Ａｄｅｎｏｓｉｎｅ Ｄｅａｍｉｎａｓｅ）、インターロイキン−１〜２４（Ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ−１〜２４）、インターフェロン−α（Ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ−α）、インターフェロン−β（Ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ−β）、インターフェロン−γ（Ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ−γ）、インターフェロン−ω（Ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ−ω）、インターフェロン−τ（Ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ−τ）、顆粒球コロニー刺激因子（Ｇｒａｎｕｌｏｃｙｔｅ−Ｃｏｌｏｎｙ Ｓｔｉｍｕｌａｔｉｎｇ Ｆａｃｔｏｒ）、エリスロポエチン（Ｅｒｙｔｈｒｏｐｏｉｅｔｉｎ）、腫瘍壊死因子（Ｔｕｍｏｒ Ｎｅｃｒｏｓｉｓ Ｆａｃｔｏｒ）、血小板増加因子（Ｔｈｒｏｍｂｏｐｏｉｅｔｉｎ）、クローソ（Ｋｌｏｔｈｏ）蛋白質、レプチン（Ｌｅｐｔｉｎ）、繊維芽細胞増殖因子１〜１９（Ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔ Ｇｒｏｗｔｈ Ｆａｃｔｏｒ−１〜１９）、ミッドカイン（Ｍｉｄｋｉｎｅ）、カルシトニン（Ｃａｌｃｉｔｏｎｉｎ）、表皮成長因子（Ｅｐｉｄｅｒｍａｌ Ｇｒｏｗｔｈ Ｆａｃｔｏｒ）、グルカゴン（Ｇｌｕｃａｇｏｎ）、インスリン（Ｉｎｓｕｌｉｎ）、インスリン様成長因子１（Ｉｎｓｕｌｉｎ−ｌｉｋｅ Ｇｒｏｗｔｈ Ｆａｃｔｏｒ−１）、オステオジェニックプロテイン１（Ｏｓｔｅｏｇｅｎｉｃ Ｐｒｏｔｅｉｎ−１）、幹細胞増殖因子（Ｓｔｅｍ Ｃｅｌｌ Ｇｒｏｗｔｈ Ｆａｃｔｏｒ）、アミリン（Ａｍｙｌｉｎ）、パラサイロイドホルモン（Ｐａｒａｔｈｙｒｏｉｄ Ｈｏｒｍｏｎｅ）、プラスミノーゲン活性化因子類（Ｐｌａｓｍｉｎｏｇｅｎ Ａｃｔｉｖａｔｏｒ）、血管内皮細胞成長因子（Ｖａｓｃｕｌａｒ Ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ Ｃｅｌｌ Ｇｒｏｗｔｈ Ｆａｃｔｏｒ）、形質転換成長因子類（Ｔｒａｎｓｆｏｒｍｉｎｇ Ｇｒｏｗｔｈ Ｆａｃｔｏｒ）、グルカゴン様ペプチド類（Ｇｌｕｃａｇｏｎ−ｌｉｋｅ Ｐｅｐｔｉｄｅ）、成長ホルモン（Ｇｒｏｗｔｈ Ｈｏｒｍｏｎｅ）、ナトリウム利尿ペプチド類（Ｎａｔｒｉｕｒｅｔｉｃ Ｐｅｐｔｉｄｅ）、プラスミノーゲン（Ｐｌａｓｍｉｎｏｇｅｎ）、アンジオポエチン（Ａｎｇｉｏｐｏｉｅｔｉｎ）、アンジオスタチン（Ａｎｇｉｏｓｔａｔｉｎ）、エンドスタチン（Ｅｎｄｏｓｔａｔｉｎ）、ネオカルチノスタチン（Ｎｅｏｃａｒｚｉｎｏｓｔａｔｉｎ）、肝細胞成長因子（Ｈｅｐａｔｏｃｙｔｅ Ｇｒｏｗｔｈ Ｆａｃｔｏｒ）、リシン（Ｒｉｃｉｎ）、シュードモナス外毒素（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ Ｅｘｏｔｏｘｉｎ）、ジフテリア毒素（Ｄｉｐｈｔｈｅｒｉａ Ｔｏｘｉｎ）およびそれらの溶解性レセプターならびにそれらの誘導体からなる群より選ばれる前記（２３）記載の方法。
（２６） 生理活性ポリペプチドの誘導体が、該ポリペプチドのアミノ酸欠失体、アミノ酸置換体、アミノ酸挿入体、アミノ酸付加体、糖鎖欠失体および糖鎖付加体からなる群より選ばれる前記（２３）〜（２５）のいずれか１項に記載の方法。
（２７） 低分子化合物が少なくとも１個の前記（１）〜（１２）および（１４）〜（１７）のいずれか１項に記載の化合物で直接またはスペーサーを介して修飾された化学修飾低分子化合物。
（２８） 前記（２７）記載の化学修飾低分子化合物を含有する医薬。
（２９） 前記（１）〜（１２）および（１４）〜（１７）のいずれか１項に記載の化合物で低分子化合物を化学修飾することを特徴とする、該低分子化合物の安定性または水溶性を向上させる方法。
（３０） 前記（１）〜（１２）および（１４）〜（１７）のいずれか１項に記載の化合物を含有することを特徴とする生理活性ポリペプチドもしくはその誘導体または低分子化合物の化学修飾剤。
式（１）において、Ｒ１は水素原子または水素原子に変換可能な基を表し、水素原子に変換可能な基としては、例えば置換もしくは非置換の低級アルキル、置換もしくは非置換の脂環式複素環基、置換もしくは非置換のアラルキル、置換もしくは非置換のシリル、置換もしくは非置換のアシル等があげられ、Ｒ１としては、中でも水素原子またはベンジルが好ましい。
低級アルキルとしては、例えば炭素数１〜８の、直鎖状または分岐状のアルキル、より具体的にはメチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、イソブチル、ｓｅｃ−ブチル、ｔｅｒｔ−ブチル、ペンチル、ネオペンチル、ヘキシル、ヘプチル、オクチル等があげられる。
脂環式複素環基としては、例えば窒素原子、酸素原子および硫黄原子から選ばれる少なくとも１個の原子を含む３〜８員の単環性脂環式複素環基、３〜８員の環が縮合した二環または三環性で窒素原子、酸素原子および硫黄原子から選ばれる少なくとも１個の原子を含む縮環性脂環式複素環基等があげられ、より具体的にはテトラヒドロピリジニル、テトラヒドロキノリニル、テトラヒドロイソキノリニル、テトラヒドロピラニル、テトラヒドロフラニル、ジヒドロベンゾフラニル、ピロリジニル、ピペリジノ、ピペリジニル、パーヒドロアゼピニル、パーヒドロアゾシニル、モルホリノ、モルホリニル、チオモルホリノ、チオモルホリニル、ピペラジニル、ホモピペリジノ、ホモピペラジニル、ジオキソラニル、イミダゾリジニル、イミダゾリニル、ピラゾリジニル、インドリニル、イソインドリニル、２−ピロリニル、２−ピロリドニル、３−ピロリドニル、２−ピペリドニル、３−ピペリドニル、４−ピペリドニル、パーヒドロ−２−アゼピノニル、パーヒドロ−３−アゼピノニル、パーヒドロ−４−アゼピノニル、２−チアゾリドニル、４−チアゾリドニル、２−オキサゾリドニル、４−オキサゾリドニル、フタルイミド、グルタルイミド、ヒダントイニル、チアゾリジンジオニル、オキサゾリジンジオニル等があげられる。
アラルキルとしては、例えば炭素数７〜１３のアラルキル、より具体的にはベンジル、フェネチル、ベンズヒドリル、ナフチルメチル等があげられる。
アシルとしては、例えば炭素数１〜８の、直鎖状、分岐状または環状のアシル、より具体的にはアセチル、プロピオニル、ベンゾイル等があげられる。
置換低級アルキル、置換脂環式複素環基、置換アラルキル、置換シリルおよび置換アシルの置換基としては、例えば同一または異なって、置換数１〜３の、より具体的には低級アルキル、低級アルコキシ、低級アルコキシ低級アルコキシ、アラルキルオキシ等があげられる。ここで、低級アルキル、低級アルコキシおよび低級アルコキシ低級アルコキシの低級アルキル部分は、前記低級アルキルと同義であり、アラルキルオキシのアラルキル部分は、前記アラルキルと同義である。
式（１）において、Ｘは、Ｒおよびｎ個の
と結合することができる基であれば、特に限定されることはないが、１以上の直列的分岐構造を有することが好ましい。ここで、直列的分岐構造とは、２つ以上に分岐した分岐鎖の少なくとも１つの分岐鎖が、さらに２つ以上分岐し、これが繰り返される構造を意味する。中でも、２つ以上に分岐した分岐鎖のそれぞれが、さらに２つ以上に分岐し、これが繰り返される構造が好ましい。さらに、それぞれの分岐数は２であるのが好ましい。
分岐構造としては、
または
（式中、Ｙ１、Ｙ２およびＹ３はそれぞれ前記と同義である）が好ましく、中でも
（以下、グリセロールユニットと称する）、
または
がより好ましい。これら分岐構造の式（１）における含有数は、特に限定されることはないが、１個以上（ｎ−１）個以下が好ましく、ｎが２ｍである場合は中でも１個以上（２ｍ−２）個以下がより好ましい。
さらに、式（１）において、Ｘが１個以上（ｎ−１）個以下の、ｎが２ｍである場合は１個以上（２ｍ−２）個以下の
で表される構造を含有する化合物も好ましい。
Ｙ１、Ｙ２およびＹ３の定義のうち、アルキレンとしては、例えば炭素数１〜８の、直鎖状、分岐状または環状のアルキレン、より具体的にはメチレン、エチレン、ｎ−プロピレン、イソプロピレン、ｎ−ブチレン、イソブチレン、ｓｅｃ−ブチレン、ｔｅｒｔ−ブチレン、ペンチレン、ネオペンチレン、ヘキシレン、ヘプチレン、オクチレン、シクロプロピレン、シクロブチレン、シクロペンチレン、シクロヘキシレン、シクロペンチレン、シクロオクチレン等があげられる。
置換アルキレンにおける置換基としては、例えば同一または異なって、置換数１〜３の、より具体的にはハロゲン原子、低級アルキル、不飽和炭化水素基、アリール、低級アルコキシ、水酸基、オキソ、カルボキシ、アシル、アミノ、ニトロ、シアノ、複素環基等があげられる。ここで、ハロゲン原子としては、フッ素、塩素、臭素、ヨウ素の各原子があげられる。不飽和炭化水素基としては、例えば炭素数１〜８の、直鎖状、分岐状または環状の不飽和炭化水素基、より具体的にはビニル、アリル、１−プロペニル、メタクリル、２−ブテニル、１−ペンテニル、２−ヘキセニル、１，３−ペンタジエニル、１，３−ヘキサジエニル、シクロペンテニル、シクロペンタジエニル、プロパルギル、ペンチニル等のアルケニルおよびアルキニルがあげられる。アリールとしては、例えば炭素数６〜１４のアリール、より具体的にはフェニル、ナフチル、アントラニル等があげられる。複素環基としては、例えば窒素原子、酸素原子、硫黄原子等のヘテロ原子の少なくとも一つを含有する３〜８員環の複素環基等があげられ、より具体的にはフリル、チエニル、ピロリル、ピリジル、オキサゾリル、チアゾリル、イミダゾリル、ピリミジニル、トリアジニル、インドリル、キノリル、プリニル、ベンゾオキサゾリル、ベンゾチアゾリル、ベンゾイミダゾリル等があげられる。低級アルキルおよび低級アルコキシはそれぞれ前記と同義である。
置換イミノにおける置換基としては、例えば低級アルキル、アリール、アラルキル等があげられる。低級アルキル、アリールおよびアラルキルはそれぞれ前記と同義である。
式（１）において、Ｒは反応性を有する基または反応性を有する基に変換可能な基を含有する残基であり、Ｒの部分構造である反応性を有する基は、生理活性ポリペプチドもしくはその誘導体または低分子化合物中のカルボキシ、アミノ、水酸基、メルカプト、ホルミル、ホスホノ等と反応することが可能であればいかなる基でもよい。具体的には、ポリペプチド中のリジン、システイン、アルギニン、ヒスチジン、セリン、スレオニン、トリプトファン、アスパラギン酸、グルタミン酸、グルタミン等の各アミノ酸の側鎖、Ｎ末端アミノ基、Ｃ末端カルボキシル基、ポリペプチドに結合した糖鎖等との反応性を有する基があげられる。
反応性を有する基として、好ましくは、カルボン酸活性エステル残基、カーボネート、マレイミド、メルカプト、ホルミル、トレシル、イソシアナート、酸無水物残基、酸ハロゲン化物残基、ビニルスルホニル、ヒドラジド、アミノ、ハロゲン等があげられる。
反応性を有する基に変換可能な基として、好ましくは、水酸基、カルボキシ、アミノ、メルカプト、ホルミル、ビニル、ホスホノ、ハロゲン等があげられる。
カルボン酸活性エステル残基におけるカルボン酸活性エステルとしては、置換もしくは非置換のアリール、置換もしくは非置換の複素環基等を有するエステルが好ましく、具体的にはＮ−ヒドロキシスクシンイミドエステル、ｐ−ニトロフェニルエステル、チオフェニルエステル、２，３，５−トリクロロフェニルエステル、２，４，６−トリクロロフェニルエステル、２，４，５−トリクロロフェニルエステル、ペンタクロロフェニルエステル、２，４−ジニトロフェニルエステル、Ｎ−ヒドロキシフタルイミドエステル等があげられる。
酸無水物残基における酸無水物としては、具体的にはカルボン酸の無水物等があげられる。
酸ハロゲン化物残基としては、具体的にはカルボニルクロライド、カルボニルブロマイド、カルボニルアイオダイド、カルボニルフルオライド等があげられる。
反応性を有する基または反応性を有する基に変換可能な基以外のＲ部分は、該反応性を阻害しない基であれば特に限定されず、任意の基であってよく、具体的には、ハロゲン原子、置換もしくは非置換のアルキル、置換もしくは非置換の不飽和炭化水素基、置換もしくは非置換のアルキレン、置換もしくは非置換のアリール、置換もしくは非置換のアルコキシ、水酸基、カルボニル、カルボキシ、置換もしくは非置換のアシル、置換もしくは非置換のアミノ、置換もしくは非置換のイミノ、ニトロ、シアノ、Ｏ、Ｓ、スルフィニル、スルホニル、置換もしくは非置換の複素環基等からなる群より選ばれる一つまたは同一もしくは異なった複数の任意の組み合わせ等を含有することができる。中でも、置換もしくは非置換のアルキレン、カルボニル、置換もしくは非置換のイミノ、ＯおよびＳからなる群より選ばれる一つまたは同一もしくは異なった複数の任意の組み合わせを含有するものが好ましい。
Ｒのアルキルおよびアルコキシのアルキル部分としては、例えば炭素数１〜８の、直鎖状、分岐状または環状のアルキル、より具体的にはメチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、イソブチル、ｓｅｃ−ブチル、ｔｅｒｔ−ブチル、ペンチル、ネオペンチル、ヘキシル、ヘプチル、オクチル、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、シクロヘプチル、シクロオクチル等があげられる。
不飽和炭化水素基、アルキレン、ハロゲン原子および複素環基は、それぞれ前記Ｙ１、Ｙ２およびＹ３の定義において記載されている不飽和炭化水素基、アルキレン、ハロゲン原子および複素環基と同義である。
アリールとしては、例えば炭素数６〜１４のアリール、より具体的にはフェニル、ナフチル、ビフェニル、アントラニル等があげられる。
アシルは、前記Ｒ１の定義で記載されているアシルと同義である。
置換アルキル、置換不飽和炭化水素基、置換アルキレン、置換アリール、置換アルコキシ、置換アシルおよび置換複素環基における置換基としては、例えば同一または異なって、置換数１〜３の、より具体的にはハロゲン原子、アルキル、不飽和炭化水素基、アリール、アルコキシ、水酸基、オキソ、カルボキシ、アシル、アミノ、ニトロ、シアノ、複素環基等があげられ、ハロゲン原子、アルキル、不飽和炭化水素基、アリール、アルコキシ、アシルおよび複素環基はそれぞれ前記と同義である。
置換イミノにおける置換基としては、例えばアルキル、不飽和炭化水素基、アリール、アルコキシ、アシル、アミノ、複素環基等があげられ、置換アミノにおける置換基としては、例えば同一または異なって、置換数１〜２の、より具体的にはアルキル、不飽和炭化水素基、アリール、アルコキシ、アシル、アミノ、複素環基等があげられ、アルキル、不飽和炭化水素基、アリール、アルコキシ、アシルおよび複素環基はそれぞれ前記と同義である。
式（１）において、ｎは３以上の整数であれば特に限定されることはないが、好ましくは２ｍ（式中、ｍは前記と同義である）、さらに好ましくは４〜１０２４（２２〜２１６）である。
本発明の化合物は、単一化合物であっても、構造の異なる化合物の混合物であってもよいが、単一化合物が好ましい。
式（１）で表される化合物は、その分子量が特に限定されることはないが、好ましくは１００〜１，０００，０００、さらに好ましくは１，０００〜１００，０００の分子量を有する。
式（１）で表される化合物において、代表的な具体例として、前記式（２）、（３）、（４）、（５）等で表される化合物があげられる。
式（１）で表される化合物は、通常の有機合成法で知られている反応［日本化学会編、有機合成Ｉ〜ＩＶ、丸善（１９９２年）］等を組み合わせて製造することができる。例として、以下の一般的な製造方法があげられる。
［式中、Ｒ、Ｘおよびｎはそれぞれ前記と同義であり、Ｈａｌはハロゲン原子を表し、Ｒ１ａは水素原子に変換可能な基を表し、Ｒ２はＲに変換可能な基を表し、Ｒ３は
（式中、Ｒ１ａは前記と同義である）と置換可能な基を表す］
ハロゲン原子および水素原子に変換可能な基はそれぞれ前記と同義であり、Ｒに変換可能な基としては、Ｒに変換可能な基であれば特に限定されず、水素原子に変換可能な基の定義で記載したものと同様なものがあげられる。
（式中、Ｒ１ａは前記と同義である）と置換可能な基としては、
（式中、Ｒ１ａは前記と同義である）と置換可能な基であれば特に限定されないが、具体的には、水素原子、ハロゲン原子、水酸基、アルコキシ、アルカノイルオキシ等があげられ、ハロゲン原子は前記と同義であり、アルコキシおよびアルカノイルオキシのアルキル部分は、前記アルキルと同義である。
エピクロロヒドリン、エピブロモヒドリン、エピフルオロヒドリン等のエピハロヒドリン（化合物（ａ））とＲ１ａ−ＯＨ（式中、Ｒ１ａは前記と同義である）を用い、ジャーナル・オブ・オーガニック・ケミストリー（Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．），５７，４３５（１９９２年）、ジャーナル・オブ・メディシナル・ケミストリー（Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．），３８（１０），１６７３（１９９５年）等に記載の方法に順じて、化合物（ｃ）を得ることができる。また、化合物（ｃ）は、グリセロール（化合物（ｂ））１モルに対し、１〜１０モルのＲ１ａ−Ｈａｌ（式中、Ｒ１ａおよびＨａｌはそれぞれ前記と同義である）を用いて適当な塩基存在下で反応させた後に精製して得るか、または触媒量のＢＦ３・Ｏ（Ｃ２Ｈ５）２存在下で２−メチル−１−ブテンと反応させて［テトラヘドロン・レターズ（Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ Ｌｅｔｔ．），２９，２９５１（１９８８年）］、選択的に第一アルコールの水酸基を保護するか、またはテトラヘドロン・レターズ（Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ Ｌｅｔｔ．），４１，６４４１（２０００）、ジャーナル・オブ・オーガニック・ケミストリー（Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．），５４，１３４６（１９８９）、カナディアン・ジャーナル・オブ・ケミストリー（Ｃａｎ．Ｊ．Ｃｈｅｍ．），６２，２４１（１９８４）等に記載の方法に順じて得ることができる。さらに、化合物（ｃ）は化合物（ｂ）の第一アルコールの水酸基を、例えばプロテクティブ・グループス・イン・オーガニック・シンセシス第三版（Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ Ｇｒｏｕｐｓ ｉｎ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，ｔｈｉｒｄ ｅｄｉｔｉｏｎ）、グリーン（Ｔ．Ｗ．Ｇｒｅｅｎｅ）著、ジョン・ワイリー・アンド・サンズ・インコーポレイテッド（Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ Ｉｎｃ．）（１９９９年）等に記載の保護基の導入方法等に準じて保護することでも得られる。
化合物（ａ）と反応させるＲ１ａ−ＯＨとしては、例えばメタノール、エタノール、プロパノール、ｔｅｒｔ−ブチルアルコール、ベンジルアルコール等、種々のアルコール類が利用可能である。また、化合物（ｂ）と反応させるＲ１ａ−ＨａｌのＲ１ａとしては、ベンジル、メチル、エチル、プロピル、ｔｅｒｔ−ブチル、メトキシメチル、メトキシエトキシメチル、テトラヒドロピラニル、テトラヒドロフラニル、トリフェニルメチル、ベンジルオキシメチル、トリエチルシリル等の除去可能な残基が利用可能である。化合物（ａ）および（ｂ）としては市販品を利用することができ、化合物（ｃ）は前記の方法にしたがって合成して得られるか市販品として得ることもできる。
次いで、前記工程で得られた化合物（ｃ）を、さらに化合物（ａ）と反応させるか、化合物（ｂ）を
（式中、ＨａｌおよびＲ１ａはそれぞれ前記と同義である）と反応させることによって、化合物（ｄ）が得られる。
この反応工程を繰り返すことによって、Ｘが直列的分岐構造を有し、Ｘに化合物（ｃ）残基がｎ個結合した化合物（ｅ）を得ることができる。
化合物（ｅ）に存在するＸ末端の水酸基に通常の有機合成反応を利用して反応性を有する基または反応性を有する基に変換可能な基を含有する残基Ｒを結合させるか、該水酸基を、反応性を有する残基に直接変換することで、化合物（Ｉａ）を得ることができる。
一方、化合物（ｆ）に、前記と同様にして合成した化合物（ｃ）を反応させ、化合物（ｇ）を得ることができる。化合物（ｆ）と化合物（ｃ）を反応させ、化合物（ｇ）を得る方法としては、化合物（ｆ）のＲ３の部位と化合物（ｃ）の置換反応、通常の有機合成法で知られている反応［日本化学会編、有機合成Ｉ〜ＩＶ、丸善（１９９２年）等］を組み合わせた方法等があげられる。化合物（ｇ）のＲ２を通常の有機合成反応を利用して反応性を有する基または反応性を有する基に変換可能な基を含有する残基Ｒに変換することで、化合物（Ｉａ）が得られる。化合物（ｆ）としては市販の既知構造の化合物を利用することもできるし、通常の有機合成法で知られている反応［日本化学会編、有機合成Ｉ〜ＩＶ、丸善（１９９２年）等］を組み合わせて化合物（ｆ）を調製することもできる。
化合物（Ｉａ）を、通常の有機合成反応に用いられる保護基の除去反応［例えばプロテクティブ・グループス・イン・オーガニック・シンセシス第三版（Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ Ｇｒｏｕｐｓ ｉｎ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，ｔｈｉｒｄ ｅｄｉｔｉｏｎ）、グリーン（Ｔ．Ｗ．Ｇｒｅｅｎｅ）著、ジョン・ワイリー・アンド・サンズ・インコーポレイテッド（Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ Ｉｎｃ．）（１９９９年）等］に付して、Ｒ１を除去して、水素原子に置換することで化合物（Ｉｂ）が得られる。
また、これとは逆に、式（１）において、Ｘとは反対方向に−ＯＲ１末端からグリセロールユニットを伸ばしていくことにより、本発明の化合物を製造することも可能である。
各反応工程は適当な溶媒、好ましくはジクロロメタン、クロロホルム、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド、ジメチルスルホキシド、トルエン、テトラヒドロフラン、アセトニトリル、メタノール、エタノール、ピリジン、水、およびこれらの混合溶媒の中から任意に選択される溶媒中、−２０〜１５０℃の間の温度で１時間〜数日間行われる。
各工程において得られる各化合物はそのままの純度で、または再結晶、溶媒抽出、シリカゲルクロマトグラフィー、逆相クロマトグラフィー、順相クロマトグラフィー等の一般的な精製方法で任意の純度に精製して次の工程に使用され得る。
本発明の化合物は、例えば生理活性ポリペプチド、低分子化合物等の安定性または水溶性を向上させる目的で化学修飾剤として使用することができる。
具体的には、本発明の化合物と生理活性ポリペプチドもしくはその誘導体または低分子化合物中のカルボキシ、アミノ、水酸基、メルカプト、ホルミル、ホスホノ等とを直接、またはスペーサーを介して結合させることにより上記目的を達成することができる。
スペーサーとしてはアミノ酸やペプチドが好ましいが、本発明の化合物と生理活性ポリペプチドもしくはその誘導体または低分子化合物中のカルボキシ、アミノ、水酸基、メルカプト、ホルミル、ホスホノ等とを結合することができればそれ以外であってもよい。アミノ酸としてはリジン、システイン等の天然アミノ酸等を用いることができ、オルニチン、ジアミノプロピオン酸、ホモシステイン等を用いることもできる。より好ましくは、システインがあげられる。ペプチドとしては、アミノ酸残基２〜１０からなるものが好ましい。アミノ酸およびペプチド以外のスペーサーとしては、グリセロール、エチレングリコール、糖等があげられる。ここで、糖としては、グルコース、ガラクトース、ソルボース、ガラクトサミン、ラクトース等の単糖類や二糖類等があげられる。
これらのスペーサーは、例えば、生理活性ポリペプチドまたはその誘導体中のリジン、システイン、アルギニン、ヒスチジン、セリン、スレオニン等の残基の側鎖とアミド結合、チオエーテル結合、エステル結合等を介して結合するか、該ポリペプチドまたは該その誘導体のＣ末端カルボキシル基とアミド結合やエステル結合するか、該ポリペプチドまたは該その誘導体のＮ末端アミノ基とアミド結合する。これらの結合は、通常のペプチド合成法［泉屋ら、ペプチド合成の基礎と実験、丸善（１９８５年）］や遺伝子組換法を用いて行うことができる。
この場合、生理活性ポリペプチドまたはその誘導体を合成するのと同時に例えば該生理活性ポリペプチドまたはその誘導体のＣ末端カルボキシル基にスペーサーとなるアミノ酸、ペプチド等を導入することが望ましいが、生理活性ポリペプチドまたはその誘導体を合成した後にスペーサーを結合してもよい。また、該ポリペプチドまたはその誘導体のＣ末端カルボキシル基等を化学合成的に活性化してスペーサーに結合することもできる。また、本発明の化合物を予め結合したスペーサーを前記の方法で生理活性ポリペプチドまたはその誘導体に結合することもできる。
本発明で用いられる生理活性ポリペプチドまたはその誘導体としては、酵素、サイトカイン、ホルモン、毒素、抗体およびそれらの誘導体等があげられる。
生理活性ポリペプチドとしては、例えば、アスパラギナーゼ（Ａｓｐａｒａｇｉｎａｓｅ）、グルタミナーゼ（Ｇｌｕｔａｍｉｎａｓｅ）、アルギナーゼ（Ａｒｇｉｎａｓｅ）、ウリカーゼ（Ｕｒｉｃａｓｅ）、スーパーオキサイドディスムターゼ（Ｓｕｐｅｒｏｘｉｄｅ Ｄｉｓｕｍｕｔａｓｅ）、ラクトフェリン（Ｌａｃｔｏｆｅｒｒｉｎ）、ストレプトキナーゼ（Ｓｔｒｅｐｔｏｋｉｎａｓｅ）、プラスミン（Ｐｌａｓｍｉｎ）、アデノシンデアミナーゼ（Ａｄｅｎｏｓｉｎｅ Ｄｅａｍｉｎａｓｅ）、インターロイキン−１〜２４（Ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ−１〜２４）、インターフェロン−α（Ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ−α）、インターフェロン−β（Ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ−β）、インターフェロン−γ（Ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ−γ）、インターフェロン−ω（Ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ−ω）、インターフェロン−τ（Ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ−τ）、顆粒球コロニー刺激因子（Ｇｒａｎｕｌｏｃｙｔｅ−Ｃｏｌｏｎｙ Ｓｔｉｍｕｌａｔｉｎｇ Ｆａｃｔｏｒ）、エリスロポエチン（Ｅｒｙｔｈｒｏｐｏｉｅｔｉｎ）、腫瘍壊死因子（Ｔｕｍｏｒ Ｎｅｃｒｏｓｉｓ Ｆａｃｔｏｒ）、血小板増加因子（Ｔｈｒｏｍｂｏｐｏｉｅｔｉｎ）、クローソ（Ｋｌｏｔｈｏ）蛋白質、レプチン（Ｌｅｐｔｉｎ）、繊維芽細胞増殖因子１〜１９（Ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔ Ｇｒｏｗｔｈ Ｆａｃｔｏｒ−１〜１９）、ミッドカイン（Ｍｉｄｋｉｎｅ）、カルシトニン（Ｃａｌｃｉｔｏｎｉｎ）、表皮成長因子（Ｅｐｉｄｅｒｍａｌ Ｇｒｏｗｔｈ Ｆａｃｔｏｒ）、グルカゴン（Ｇｌｕｃａｇｏｎ）、インスリン（Ｉｎｓｕｌｉｎ）、インスリン様成長因子１（Ｉｎｓｕｌｉｎ−ｌｉｋｅ Ｇｒｏｗｔｈ Ｆａｃｔｏｒ−１）、オステオジェニックプロテイン１（Ｏｓｔｅｏｇｅｎｉｃ Ｐｒｏｔｅｉｎ−１）、幹細胞増殖因子（Ｓｔｅｍ Ｃｅｌｌ Ｇｒｏｗｔｈ Ｆａｃｔｏｒ）、アミリン（Ａｍｙｌｉｎ）、パラサイロイドホルモン（Ｐａｒａｔｈｙｒｏｉｄ Ｈｏｒｍｏｎｅ）、プラスミノーゲン活性化因子類（Ｐｌａｓｍｉｎｏｇｅｎ Ａｃｔｉｖａｔｏｒ）、血管内皮細胞成長因子（Ｖａｓｃｕｌａｒ Ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ Ｃｅｌｌ Ｇｒｏｗｔｈ Ｆａｃｔｏｒ）、形質転換成長因子類（Ｔｒａｎｓｆｏｒｍｉｎｇ Ｇｒｏｗｔｈ Ｆａｃｔｏｒ）、グルカゴン様ペプチド類（Ｇｌｕｃａｇｏｎ−ｌｉｋｅ Ｐｅｐｔｉｄｅ）、成長ホルモン（Ｇｒｏｗｔｈ Ｈｏｒｍｏｎｅ）、ナトリウム利尿ペプチド類（Ｎａｔｒｉｕｒｅｔｉｃ Ｐｅｐｔｉｄｅ）、プラスミノーゲン（Ｐｌａｓｍｉｎｏｇｅｎ）、アンジオポエチン（Ａｎｇｉｏｐｏｉｅｔｉｎ）、アンジオスタチン（Ａｎｇｉｏｓｔａｔｉｎ）、エンドスタチン（Ｅｎｄｏｓｔａｔｉｎ）、ネオカルチノスタチン（Ｎｅｏｃａｒｚｉｎｏｓｔａｔｉｎ）、肝細胞成長因子（Ｈｅｐａｔｏｃｙｔｅ Ｇｒｏｗｔｈ Ｆａｃｔｏｒ）、リシン（Ｒｉｃｉｎ）、シュードモナス外毒素（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ Ｅｘｏｔｏｘｉｎ）、ジフテリア毒素（Ｄｉｐｈｔｈｅｒｉａ Ｔｏｘｉｎ）、それらの溶解性レセプター等があげられる。
本発明で使用される抗体は、公知の手段［アンティボディーズ ア ラボラトリー マニュアル、コールド スプリング ハーバー ラボラトリー（Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ−Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ）（１９８８）］を用いてポリクローナル抗体またはモノクローナル抗体として得ることができる。
本発明で使用される抗体としては、ポリクローナル抗体またはモノクローナル抗体のいずれも用いることができるが、モノクローナル抗体が好ましい。
本発明で使用されるモノクローナル抗体としては、ハイブリドーマが産生する抗体、ヒト化抗体、およびそれらの抗体断片等があげられる。
ヒト化抗体としては、ヒト型キメラ抗体、ヒト型相補性決定領域（以下、ＣＤＲと称す）移植抗体等があげられる。
ヒト型キメラ抗体は、ヒト以外の動物の抗体重鎖可変領域（以下、重鎖はＨ鎖として、可変領域はＶ領域としてＶＨと称す）および軽鎖可変領域（以下、軽鎖はＬ鎖としてＶＬと称す）とヒト抗体の重鎖定常領域（以下、定常領域はＣ領域としてＣＨと称す）およびヒト抗体の軽鎖定常領域（以下、ＣＬと称す）とからなる抗体を意味する。ヒト以外の動物としては、マウス、ラット、ハムスター、ラビット等、ハイブリドーマ細胞を作製することが可能であればいかなるものも用いることができる。
ヒト型ＣＤＲ移植抗体は、ヒト以外の動物の抗体のＨ鎖、Ｌ鎖のＶ領域のＣＤＲのアミノ酸配列をヒトの抗体のＨ鎖、Ｌ鎖のＶ領域の適切な位置に移植した抗体を意味する。
抗体断片としては、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、一本鎖抗体（以下、ｓｃＦｖと称す）、ジスルフィド安定化Ｖ領域断片（以下、ｄｓＦｖと称す）、ＣＤＲを含むペプチド等があげられる。
Ｆａｂは、ＩｇＧのヒンジ領域で２本のＨ鎖を架橋している２つのジスルフィド結合の上部のペプチド部分を酵素パパインで分解して得られた、Ｈ鎖のＮ末端側約半分とＬ鎖全体で構成された、分子量約５万の抗原結合活性を有するフラグメントである。
Ｆａｂ’は、下記Ｆ（ａｂ’）２のヒンジ間のジスルフイド結合を切断した分子量約５万の抗原結合活性を有するフラグメントである。
Ｆ（ａｂ’）２は、ＩｇＧのヒンジ領域の２個のジスルフィド結合の下部を酵素トリプシンで分解して得られた、２つのＦａｂ領域がヒンジ部分で結合して構成された、分子量約１０万の抗原結合活性を有するフラグメントである。
ｓｃＦｖは、一本のＶＨと一本のＶＬとを適当なペプチドリンカー（以下、Ｐと称す）を用いて連結した、ＶＨ−Ｐ−ＶＬないしはＶＬ−Ｐ−ＶＨポリペプチドを示す。本発明で使用されるｓｃＦｖに含まれるＶＨおよびＶＬとしては、本発明のモノクローナル抗体またはヒト型ＣＤＲ移植抗体のいずれをも用いることができる。
ｄｓＦｖは、ＶＨおよびＶＬ中のそれぞれ１アミノ酸残基をシステイン残基に置換したポリペプチドを、ジスルフィド結合を介して結合させたものをいう。システイン残基に置換するアミノ酸残基はＲｅｉｔｅｒらにより示された方法［プロテイン エンジニアリング（Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ），７，６９７（１９９４年）］に従って、抗体の立体構造予測に基づいて選択することができる。本発明のジスルフィド安定化抗体に含まれるＶＨまたはＶＬとしてはモノクローナル抗体あるいはヒト型ＣＤＲ移植抗体のいずれをも用いることができる。
本発明で使用される抗体またはその抗体断片には、該抗体またはその抗体断片に、放射性同位元素、蛋白質、薬剤等を、化学的または遺伝子工学的に結合させた融合抗体も含まれる。
本発明で使用される生理活性ポリペプチドの誘導体としては、前記生理活性ポリペプチドのアミノ酸欠失体、アミノ酸置換体、アミノ酸挿入体、アミノ酸付加体、糖鎖欠失体、糖鎖付加体等があげられる。これらの誘導体は、生理活性ポリペプチドが有する活性を同様に有していることが好ましい（以下、生理活性ポリペプチドとその誘導体を合わせて、「生理活性ポリペプチド」と表記する）。
本発明で使用される低分子化合物としては、式（１）で表される化合物におけるＲの一部と反応し、Ｒの一部と置換可能なものであれば特に限定されないが、例えば、カルボキシ、一級または二級アミノ、水酸基、メルカプト、ホルミル、ホスホノ、カルボン酸活性エステル残基、酸無水物残基、ハロゲン、酸ハロゲン化物残基、イソシアナート、マレイミド、ヒドラジド、ビニルスルホニル等の官能基を有する化合物があげられる。
低分子化合物としては、低分子化合物であればいかなる化合物も利用可能である。低分子化合物の分子量は、特に限定されないが、５０〜１００００であるのが好ましく、１００〜２０００であるのがさらに好ましい。また、水または水溶液への溶解度が、０〜１ｍｏｌ／Ｌ、好ましくは０〜０．１ｍｏｌ／Ｌであり、その溶解度の値が少なくとも１．１倍以上、好ましくは１０〜１０３倍に向上することが求められる水溶性が不十分な低分子化合物が好ましい。低分子化合物の例としては、コレステロール、ジヒドロコレステロール、ラノステロール、β−シトステロール、カンペステロール、スチグマステロール、ブラシカステロール、エルゴカステロール、フコステロー−ル等のステロール類、シトシンアラビノシド、ドキソルビシン、ダウノルビシン、アクラルビシン、マイトマイシン、ブレオマイシン、５−フルオロウラシル、デュオカルマイシン、メトトレキセート、カンプトテシン、タキサン類等の抗癌剤、アンピシリン、セファレキシン、セファクロル、ゲンタマイシン、ストレプトマイシン、カナマイシン、アンホテリシン、ペニシリン、セファゾリン等の抗生物質、ガンシクロビル、アシクロビル等の抗ウイルス剤、これらの誘導体等があげられる。上記誘導体としては、任意の官能基が欠失、置換、挿入、または付加した修飾体、放射性同位元素、薬剤、糖等による修飾体等があげられ、未修飾の低分子化合物が有する活性を同様に有していることが好ましい。
これらの生理活性ポリペプチドまたは低分子化合物は、りん酸緩衝液、ほう酸緩衝液、酢酸緩衝液、クエン酸緩衝液等の緩衝液もしくは水、またはＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド、ジメチルスルホキシド、ジオキサン、テトラヒドロフラン等の適当な有機溶媒中、またはこれらの有機溶媒と水溶液との混合溶媒中で製造され、化学修飾反応に用いられる［稲田祐二・前田浩編、続蛋白質ハイブリッド、共立出版（１９８８年）参照］。
これらの生理活性ポリペプチドまたは低分子化合物を本発明の化合物で化学修飾すると、１分子以上の化合物が結合した化学修飾ポリペプチドまたは化学修飾低分子化合物等が得られる。
生理活性ポリペプチドまたは低分子化合物の化学修飾は、本発明の化合物を生理活性ポリペプチドまたは低分子化合物１モルあたり１〜１０００モル程度、好ましくは１〜５０モル程度用いて反応させることによって行われる。化合物の生理活性ポリペプチドまたは低分子化合物への修飾の度合いは生理活性ポリペプチドまたは低分子化合物に対する化合物のモル比、反応温度、ｐＨ、反応時間等を調節することによって、任意に選択することができる。また、反応に使用する溶媒は反応を妨害しないものであればいずれでもよく、例えばりん酸緩衝液、ほう酸緩衝液、トリス−塩酸緩衝液、炭酸水素ナトリウム水溶液、酢酸ナトリウム緩衝液、クエン酸緩衝液、水、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド、ジメチルスルホキシド、メタノール、アセトニトリル、ジオキサン、テトラヒドロフラン等、およびこれらの混合溶媒から選択される。反応の温度、ｐＨおよび時間は生理活性ポリペプチドまたは低分子化合物の活性が損われない条件であればいずれでもよく、例えば０〜５０℃の間の温度、１０分間〜１００時間、ｐＨ４〜１０が好ましい。
本発明の化合物で修飾された生理活性ポリペプチドまたは低分子化合物の精製は常法に従って、ゲル濾過、イオン交換クロマトグラフィー、逆相高速液体クロマトグラフィー、アフィニティークロマトグラフィー、限外濾過等により行うことができる。また、任意の化学修飾率の化学修飾ポリペプチドまたは化学修飾低分子化合物等をこれらの精製法で分画して精製することもできる。
合成または精製された生理活性ポリペプチドまたは低分子化合物および本発明の化合物で修飾された該生理活性ポリペプチドまたは該低分子化合物の構造の確認は、質量分析、核磁気共鳴（ＮＭＲ）およびアミノ酸分析計によるアミノ酸組成分析により、また気相プロテインシーケンサーによりエドマン分解して得られたフェニルチオヒダントイン（ＰＴＨ）アミノ酸を逆相高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）で分析することによるアミノ酸配列分析等により行うことができる。
前記で調製された化学修飾ポリペプチドまたは化学修飾低分子化合物は診断薬、治療剤等の医薬として利用することができる。これらの治療剤には、生物活性の維持・向上、細網内皮系（ＲＥＳ）回避、血中持続性の向上、薬剤の円滑なリリース、毒性低減に加えて、抗原性・免疫原性の低下、水溶性の向上、プロテアーゼ耐性、立体構造の保持、血清中での安定化、会合体形成抑制等の効果が期待される。
これらの化学修飾ポリペプチドまたは化学修飾低分子化合物の投与方法としては、具体的には、静脈内投与、経口投与等があげられるが、該投与方はこれらに限定されない。
これらの化学修飾ポリペプチドまたは化学修飾低分子化合物を含有する医薬品組成物は、例えば製薬上許容される非経口用媒介物と組み合わされた溶液、サスペンジョン、エマルジョン、凍結乾燥製剤等として表される。該媒介物としては、水、塩水、リンガー液、デキストロース溶液、１〜１０％ヒト血清アルブミン等があげられる。該媒介物は等張性を保持するために塩化ナトリウム、マンニトール、アミノ酸類等の添加剤を含んでいてもよいし、化学安定性を保持するために緩衝液、防腐剤等を含んでいてもよい。該医薬品組成物は通常用いられている方法に従って滅菌されるのが好ましい。注射投与に適した非経口用該医薬品組成物は、前記化学修飾ポリペプチドまたは化学修飾低分子化合物、添加剤等を例えば０．９％塩化ナトリウム含有水溶液に溶解することによって調製される。該医薬品組成物は単回または複数回投与されうる。該医薬品組成物は単一の治療薬として、または他の治療薬と組み合わせて投与されうる。該医薬品組成物による治療は、従来の治療と組み合わせることもでき、この場合、連続もしくは同時投与によってなされる。
これらの化学修飾ポリペプチドまたは化学修飾低分子化合物を含有する医薬品組成物は、また、製薬上許容される伝統的な割賦剤もしくは基材と組み合わされたタブレット、ピル、またはカプセルとして表すこともできる。該割賦剤もしくは基材は、ラクトース、スターチ、ステアリン酸マグネシウムのような伝統的な賦形剤を含んでいてもよい。
投与量または投与回数は、使用される化学修飾ポリペプチドまたは化学修飾低分子化合物、目的とする治療効果、投与方法、治療期間、年齢、体重等により異なるが、通常有効成分を成人１日当たり１０μｇ／ｋｇ〜８ｍｇ／ｋｇ投与する。
以下に、本発明を試験例、実施例および参考例により説明するが、本発明はこれらによって限定されるものではない
【図面の簡単な説明】
第１図は、本発明化合物修飾Ｇ−ＣＳＦ誘導体、ポリエチレングリコール修飾Ｇ−ＣＳＦ誘導体および未修飾Ｇ−ＣＳＦ誘導体の、温度上昇に伴う円二色性偏光スペクトル（楕円率）の変化を示した図である。横軸は温度（℃）を、縦軸は分子楕円率（ａ．ｕ．）を表し、各プロットの意味は、以下のとおりである。
１：未修飾Ｇ−ＣＳＦ誘導体
２：ポリエチレングリコール修飾Ｇ−ＣＳＦ誘導体
３：本発明化合物修飾Ｇ−ＣＳＦ誘導体
【発明を実施するための最良の形態】
試験例１ 化学修飾Ｇ−ＣＳＦ誘導体の生物活性測定
実施例１、参考例１または参考例２で調製した各Ｇ−ＣＳＦ誘導体のマウス白血病細胞ＮＦＳ６０［プロシーディングス・オブ・ザ・ナショナル・アカデミー・オブ・サイエンス・オブ・ザ・ユナイテッド・ステイツ・オブ・アメリカ（Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ），８２，６６８７（１９８５年）］に対する増殖促進活性を、浅野らの方法［薬理と治療，１９，２７６７（１９９１年）］に従って測定した。未修飾のＧ−ＣＳＦ誘導体の比活性（Ｕ／ｍｇ）を１００としたときの各化合物の活性を表１に示す。従来のポリエチレングリコール修飾体の比活性は顕著に低下したが、式（２）で表される本発明の化合物を用いて作製された修飾体では修飾率が高いにも関わらず極めて高い生物活性が維持された。
試験例２ 化学修飾Ｇ−ＣＳＦ誘導体の熱安定性
未修飾Ｇ−ＣＳＦ誘導体ならびに各化学修飾Ｇ−ＣＳＦ誘導体を５０ｍｍｏｌ／Ｌりん酸緩衝液（ｐＨ７．２）中、０．２ｍｇ／ｍＬに調整し、温度上昇変化に伴う円二色性偏光（ＣＤ）スペクトルの変化を測定した。波長２０８ｎｍにおけるスペクトル値（楕円率）の変化を図１に示す。未修飾Ｇ−ＣＳＦ誘導体では５０〜５５℃で急速に楕円率（絶対値）の低下、消失が確認され、この変化は不可逆的であった。一方、本発明の化合物修飾Ｇ−ＣＳＦ誘導体ではポリエチレングリコール修飾体と同様に楕円率は５５℃までほぼ一定であり、７５℃まで温度を上昇させても楕円率（絶対値）は僅かに低下したのみであった。この結果は、本発明の化合物修飾体が温度を上昇させても水溶液中で安定に構造を維持した状態で存在していることを示している。
試験例３ 化学修飾低分子化合物の水に対する溶解度
実施例４および実施例５で調製した化合物の水に対する溶解度を測定したところ、表２に示す結果が得られた。これらの結果から、実施例１で調製した化合物を難溶性の低分子化合物に結合させると、水に対する溶解度が向上することが明らかとなった。
実施例１ 化合物の合成［式（２）で表される化合物］
反応スキームを以下に示す。反応スキーム中で、Ｂｎはベンジル基、Ｅｔはエチル基、ｉ−Ｐｒはイソプロピル基、ＰｙＢＯＰはベンゾトリアゾール−１−イルオキシトリス（ピロリジノ）ホスホニウムヘキサフルオロホスフィン、ＴＦＡはトリフルオロ酢酸、ＮＨＳはＮ−ヒドロキシスクシンイミド、ＥＤＣは１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド塩酸塩、ＴＨＦはテトラヒドロフラン、ＤＭＦはジメチルホルムアミドを表す。
化合物２［２−アミノ−１，３−ビス（１，３−ジ−Ｏ−ベンジル−２−グリセロキシ）プロパン］を根本らの方法［ジャーナル・オブ・メディシナル・ケミストリー（Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．），３８，１６７３（１９９５年）］に従って調製した。化合物１（３．５ｇ，１５．０ｍｍｏｌ）のジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）溶液（５０ｍＬ）に、室温でジイソプロピルエチルアミン（１０．５ｍＬ，６０．０ｍｍｏｌ）、化合物２（１９．８ｇ，３３．０ｍｍｏｌ）のＤＭＦ溶液（２０ｍＬ）およびベンゾトリアゾール−１−イルオキシトリス（ピリジノ）ホスホニウムヘキサフルオロホスフィン（ＰｙＢＯＰ；１５．６ｇ，３０．０ｍｍｏｌ）を順次加えた後、同温度で１５時間攪拌した。反応液を５％硫酸水素カリウム水溶液に注いだ後、酢酸エチルを用いて抽出した。有機層を飽和炭酸水素ナトリウム水溶液、飽和食塩水で順次洗浄した後、無水硫酸マグネシウムを用いて乾燥し、濾過した。溶媒を減圧下で留去し、残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ヘキサン：酢酸エチル＝３：２）で精製し、淡黄色油状の化合物３（１８．７ｇ，収率８９％）を得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，３００ＭＨｚ）δ（ｐｐｍ）：１．３６（９Ｈ，ｓ），３．４０−３．８１（３２Ｈ，ｍ），４．１６（２Ｈ，ｍ），４．４８（１６Ｈ，ｓ），７．１９−７．３１（４０Ｈ，ｍ）．
化合物３（２．０ｇ，１．４３ｍｍｏｌ）のジクロロメタン溶液（４５ｍＬ）に、室温でトリフルオロ酢酸（５ｍＬ）を注入した後、同温度で２０時間攪拌した。反応液に飽和炭酸水素ナトリウム水溶液を加えた後、ジクロロメタンを用いて抽出した。有機層を無水硫酸マグネシウムで乾燥し、濾過した後、溶媒を減圧下で留去し、淡黄色油状の化合物４（１．１９ｇ，収率６４％）を得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，３００ＭＨｚ）δ（ｐｐｍ）：１．７５（１Ｈ，ｓ），２．８７（４Ｈ，ｓ），３．４７−３．８１（２８Ｈ，ｍ），４．１６（２Ｈ，ｍ），４．４８（１６Ｈ，ｓ），７．００（２Ｈ，ｄ），７．１９−７．３１（４０Ｈ，ｍ）．
化合物４（１．５ｇ，１．１６ｍｍｏｌ）のピリジン溶液（２．０ｍＬ）に、室温で無水コハク酸（２３２ｍｇ，２．３１ｍｍｏｌ）をゆっくりと加えた後、１００℃で１．５時間攪拌した。反応液を室温まで冷却した後、２ｍｏｌ／Ｌ塩酸を加え、ジクロロメタンを用いて抽出した。有機層を飽和食塩水で洗浄した後、無水硫酸マグネシウムを用いて乾燥し、濾過した。溶媒を減圧下で留去し、残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ヘキサン：酢酸エチル＝１：３）で精製し、淡黄色油状の化合物５（１．６２ｇ，収率１００％）を得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，３００ＭＨｚ）δ（ｐｐｍ）：２．３９（２Ｈ，ｍ），２．５６（２Ｈ，ｍ），３．４５−３．７６（３２Ｈ，ｍ），４．０９−４．２１（２Ｈ，ｍ），４．４６（１６Ｈ，ｓ），６．８７（１Ｈ，ｄ），７．１９−７．３１（４０Ｈ，ｍ），８．０２（１Ｈ，ｄ）．
化合物５（３．０ｇ，２．１５ｍｍｏｌ）のテトラヒドロフラン溶液（４５ｍＬ）に、室温でＮ−ヒドロキシスクシンイミド（ＮＨＳ；４９５ｍｇ，４．３０ｍｍｏｌ）、１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド塩酸塩（ＥＤＣ；８８６ｍｇ，４．３０ｍｍｏｌ）およびトリエチルアミン（０．２４ｍＬ，１．７２ｍｍｏｌ）を順次加えた後、２時間還流した。反応液に５％硫酸水素カリウム水溶液を加えた後、ジクロロメタンを用いて抽出した。有機層を飽和炭酸水素ナトリウム水溶液、飽和食塩水で順次洗浄した後、無水硫酸マグネシウムを用いて乾燥し、濾過した。溶媒を減圧下で留去し、残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ヘキサン：酢酸エチル＝１：１０）で精製し、淡黄色油状の化合物６（２．３５ｇ，収率７９％）を得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，３００ＭＨｚ）δ（ｐｐｍ）：２．４９（２Ｈ，ｔ），２．６７（４Ｈ，ｓ），２．７８（２Ｈ，ｔ），３．４０−３．７８（３２Ｈ，ｍ），４．１１−４．２２（２Ｈ，ｍ），４．４８（１６Ｈ，ｄ），６．９６（１Ｈ，ｄ），７．１９−７．３１（４０Ｈ，ｍ），８．３７（１Ｈ，ｄ）．
化合物６（１．１５ｇ，０．７７ｍｍｏｌ）のエタノール溶液（５０ｍＬ）に水素気流下、室温でＰｄ（ＯＨ）２／Ｃ（Ｐｄ：２０重量％含有，２００ｍｇ）を加えた後、同温度で１２時間攪拌した。反応液をセライトで濾過した後、溶媒を減圧下で留去し、淡黄色油状の化合物７（５９６ｍｇ，収率１００％）を得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，３００ＭＨｚ）δ（ｐｐｍ）：２．７４（２Ｈ，ｔ），２．８２（４Ｈ，ｓ），２．９６（２Ｈ，ｔ），３．３０（８Ｈ，ｓ），３．４３−３．８０（２８Ｈ，ｍ），４．０５−４．２２（６Ｈ，ｍ）．
実施例２ 本発明化合物で修飾された化学修飾Ｇ−ＣＳＦ誘導体の調製
等張りん酸緩衝液（ｐＨ７．４）で調製した参考例１のＧ−ＣＳＦ誘導体（２７．８ｍＬ，０．７２ｍｇ／ｍＬ）に、実施例１で調製した化合物７（約２０ｍｇ）を加え、冷蔵下で一昼夜攪拌して反応させた。反応液（２６．５ｍＬ）を２０ｍｍｏｌ／Ｌ酢酸緩衝液（ｐＨ４．５）で１０倍に希釈し、ＣＭ Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ ＦＦ レジン１０ｍＬ（Ａｍｅｒｓｈａｍ−Ｐｈａｒｍａｃｉａ Ｂｉｏｔｅｃｈ社製）を用いた陽イオン交換カラムで精製した。０．３ｍｏｌ／Ｌの塩化ナトリウムを含む緩衝液で溶出される目的画分を回収し、２．１ｍｇ／ｍＬの化合物７修飾Ｇ−ＣＳＦ誘導体を含む溶液（８ｍＬ，収率８４％）を得た。
＜ＳＤＳ−ＰＡＧＥ分析＞
分析条件：４−２０％グラジエントゲル（ＰＡＧＥＬ ＳＰＧ−５２０Ｌ）、非還元
結果：２１ｋＤａ〜３１ｋＤａの間に均一なバンド
＜ゲル濾過ＨＰＬＣ分析＞
分析条件：ＴＳＫ ｇｅｌ Ｇ２０００ＳＷＸＬカラム（７．８×３００ｍｍ、東ソー社製）、流速０．５ｍＬ／分、溶媒１５０ｍｍｏｌ／Ｌ食塩を含む２０ｍｍｏｌ／Ｌ酢酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ４．５）、注入量５０μｇ
結果：約１９分に溶出
＜ＭＡＬＤＩ ＴＯＦ−ＭＳ分析＞
結果：質量２０８８０（３分子結合体）、２１５４０（４分子結合体）を主に検出
実施例３ 化合物の合成［式（３）で表される化合物］
反応スキームを以下に示す。反応スキーム中で、Ｂｎはベンジル基を表す。
化合物４（６２４ｍｇ，０．４８ｍｍｏｌ）のＤＭＦ溶液（１３ｍＬ）に化合物１（５１ｍｇ，０．２１９ｍｍｏｌ）、ジイソプロピルエチルアミン（０．１５ｍＬ，０．８７６ｍｍｏｌ）およびＰｙＢＯＰ（２２８ｍｇ，０．４２８ｍｍｏｌ）を室温で加え、同温度で４８時間攪拌した。反応混合物を５％硫酸水素カリウム水溶液中に注いだ後、酢酸エチルで抽出し、有機層を飽和炭酸水素ナトリウム水溶液、飽和食塩水で順次洗浄した。その後有機層を無水硫酸マグネシウムで乾燥し、これを濾過した後、溶媒を減圧下で留去した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（酢酸エチル：酢酸＝１００：０．７）で精製し、黄色油状の化合物８（３２２ｍｇ，０．１１５ｍｍｏｌ，収率５３％）を得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，４００ＭＨｚ）δ（ｐｐｍ）：７．３２−７．１７（８０Ｈ，ｍ），４．４９−４．３８（３２Ｈ，ｍ），４．１５−４．０６（４Ｈ，ｍ），３．７７−３．２７（６８Ｈ，ｍ），１．３２（９Ｈ，ｓ），（ＣＯＮＨは明確に確認されず）．
１３Ｃ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，７５ＭＨｚ）δ（ｐｐｍ）：１７０．２（Ｃ×４，ＣＯＮＨ），１６７．７（Ｃ×２，ＣＯＮ），１５５．４（Ｃ，Ｏ２ＣＮ），１３８．２（Ｃ×１６），１２８．３（ＣＨ×１６），１２８．３（ＣＨ×１６），１２７．７（ＣＨ×１６），１２７．６（ＣＨ×１６），１２７．６（ＣＨ×１６），８０．５（Ｃ），７８．７（ＣＨ×８），７３．２（ＣＨ２×１６），７０．２（ＣＨ２×１６），６８．９（ＣＨ２×８），５２．１（ＣＨ２×２），５１．９（ＣＨ２×４），４９．６（ＣＨ×４），２８．２（ＣＨ３×３）．
化合物８（３２２ｍｇ，０．１１５ｍｍｏｌ）のジクロロメタン溶液（４８．３２ｍＬ）にトリフルオロ酢酸（０．４８ｍＬ）を室温で滴下した。同温度で２４時間攪拌した後、反応液を飽和炭酸水素ナトリウム水溶液中に注ぎ、ジクロロメタンで抽出した後、有機層を無水硫酸マグネシウムで乾燥し、これを濾過した後、溶媒を減圧下で留去することにより白色油状の化合物９（３１０ｍｇ，０．１１５ｍｍｏｌ，収率１００％）を得た。本品は精製することなく次の反応に付した。
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，４００ＭＨｚ）δ（ｐｐｍ）：７．３３−７．１８（８０Ｈ，ｍ），４．５０−４．３９（３２Ｈ，ｍ），４．２０−４．０２（４Ｈ，ｍ），３．９４−３．２８（６８Ｈ，ｍ），（ＮＨは明確に確認されず），（ＣＯＮＨは明確に確認されず）．
化合物９（１９０ｍｇ，０．０７１ｍｍｏｌ）のピリジン溶液（３ｍＬ）に無水コハク酸（２８ｍｇ，０．２８ｍｍｏｌ）、およびＮ，Ｎ−ジメチルアミノピリジン（４ｍｇ，０．０３６ｍｍｏｌ）を室温で加え、５０℃で５時間攪拌した。反応液を２ｍｏｌ／Ｌ塩酸水溶液に加えジクロロメタンで抽出した。有機層を飽和食塩水で洗浄した後、無水硫酸マグネシウムで乾燥し、これを濾過した後、溶媒を減圧下で留去した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（酢酸エチル：酢酸＝１００：０．７）で精製して、白色油状の化合物１０（１５０ｍｇ，０．０５４ｍｍｏｌ，収率７６％）を得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，４００ＭＨｚ）δ（ｐｐｍ）：７．３５−７．１７（８０Ｈ，ｍ），４．５０−４．３９（３２Ｈ，ｍ），４．２２−４．０５（４Ｈ，ｍ），４．０２−３．２７（６８Ｈ，ｍ），２．６２−２．５３（４Ｈ，ｍ），（ＯＨおよびＣＯＮＨのいずれも明確に確認されず）．
化合物１０（１５０ｍｇ，０．０５４ｍｍｏｌ）のテトラヒドロフラン溶液（２ｍＬ）にＮＨＳ（１２ｍｇ，０．１１ｍｍｏｌ）を室温で加え、同温度で１５分間攪拌した後、ＥＤＣ（２１ｍｇ，０．１１ｍｍｏｌ）およびトリエチルアミン（７ｍＬ，０．０４３ｍｍｏｌ）を室温で加え、３０分間還流した。反応液を５％ＫＨＳＯ４水溶液に加え、ジクロロメタンで抽出し、有機層を飽和炭酸水素ナトリウム水溶液、飽和食塩水で順次洗浄した後、無水硫酸マグネシウムで乾燥し、これを濾過した後、溶媒を減圧下で留去した。残渣をフラッシュカラムクロマトグラフィー（酢酸エチル：ヘキサン＝２０：１）で精製し、油状の化合物１１（６２ｍｇ，０．２１ｍｍｏｌ，収率４０％）を得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，４００ＭＨｚ）δ（ｐｐｍ）：７．３９−７．１８（８０Ｈ，ｍ），４．５４−４．３８（３２Ｈ，ｍ），４．２３−４．０７（４Ｈ，ｍ），４．８９−３．３３（６８Ｈ，ｍ），２．７７−２．６９（４Ｈ，ｍ），２．５７−２．４９（４Ｈ，ｍ），（ＣＯＮＨは明確に確認されず）．
１３Ｃ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，７５ＭＨｚ）δ（ｐｐｍ）：１７２．１（Ｃ，ＣＯ２−），１７０．４（Ｃ，ＣＯＮ），１６９．５（Ｃ×４，ＣＯＮＨ），１６８．７（Ｃ×２，ＣＯＮ），１６８．１（Ｃ×２，ＣＯＮ），１３８．８（Ｃ×１６），１２９．０（ＣＨ×１６），１２９．０（ＣＨ×１６），１２８．２（ＣＨ×１６），１２８．０（ＣＨ×１６），１２７．６（ＣＨ×１６），７９．３（ＣＨ×８），７３．８（ＣＨ２×１６），７０．５（ＣＨ２×１６），６８．９（ＣＨ２×８），５２．１（ＣＨ２×２），５１．９（ＣＨ２×４），５０．４（ＣＨ×４），３０．３（ＣＨ２），３０．２（ＣＨ２），２５．９（ＣＨ２×２）．
ＴＯＦ−ＭＳ：精密質量分析（Ｍ）＝２８８６，測定値（Ｍ＋１）＝２８８７．４４
化合物１１（１４ｍｇ，４．８５μｍｏｌ）のエタノール溶液（１ｍＬ）に水素気流下、室温でＰｄ（ＯＨ）２／Ｃ（Ｐｄ：２０重量％含有，１ｍｇ）を加えた後、同温度で３時間攪拌した。反応液を、セライト５３５を用いて濾過した後、溶媒を減圧下で留去し、化合物３２（６ｍｇ，４．１５μｍｏｌ，収率８６％）を得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ，４００ＭＨｚ）δ（ｐｐｍ）：４．２７−４．０７（４Ｈ，ｍ），３．８５−３．３６（７２Ｈ，ｍ），２．６６−２．４１（８Ｈ，ｍ）
実施例４ 本発明化合物で修飾された化学修飾低分子化合物の合成（化合物２４ａ〜２８ａ）
反応スキームを以下に示す。反応スキーム中で、Ｅｔはエチル基、Ｂｎはベンジル基、ＮＨＳはＮ−ヒドロキシスクシンイミド、ＥＤＣは１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド塩酸塩、ＴＨＦはテトラヒドロフランを表す。
化合物１２は、シンセティック・コミュニケーションズ（Ｓｙｎｔｈ．Ｃｏｍｍｕｎ．），２５，９０７（１９９５年）に記載の方法、化合物１３と化合物２は、ジャーナル・オブ・メディシナル・ケミストリー（Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．），３８，１６７３（１９９５年）に記載の方法で合成した。
化合物１２、１３および２（１．０ｍｍｏｌ）それぞれのピリジン溶液（２．０ｍＬ）に室温で、無水コハク酸（１５０．１ｍｇ，１．５ｍｍｏｌ）をゆっくりと加えた後、１００℃で１．５〜４時間攪拌した。反応液を室温まで冷やした後、２ｍｏｌ／Ｌ塩酸を加え、ジクロロメタンを用いて抽出した。有機層を飽和食塩水で洗浄した後、無水硫酸マグネシウムを用いて乾燥し、濾過した。溶媒を減圧下で留去し、残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ヘキサン：酢酸エチル＝１：３）で精製し、それぞれ化合物１４〜１６を得た（収率９２〜１００％）。
（化合物１４）
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，４００ＭＨｚ）δ（ｐｐｍ）：２．５１（２Ｈ，ｔ，Ｊ＝７．０Ｈｚ），２．６９（２Ｈ，ｔ，Ｊ＝７．０Ｈｚ），３．４９（２Ｈ，ｔ，Ｊ＝５．０Ｈｚ），３．５９（２Ｈ，ｔ，Ｊ＝５．０Ｈｚ），４．５４（２Ｈ，ｓ），６．２０（１Ｈ，ｔ，Ｊ＝５．０Ｈｚ），７．３１−７．４２（５Ｈ，ｍ）．
１３Ｃ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，７５ＭＨｚ）δ（ｐｐｍ）：１７５．８（Ｃ），１７２．５（Ｃ），１３７．４（Ｃ），１２８．１（ＣＨ×２），１２７．５（ＣＨ×２），１２７．５（ＣＨ），７２．６（ＣＨ２），６８．２（ＣＨ２），３９．１（ＣＨ２），３０．２（ＣＨ２），２９．２（ＣＨ２）．
（化合物１５）
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，４００ＭＨｚ）δ（ｐｐｍ）：２．４９（２Ｈ，ｔ，Ｊ＝５．０Ｈｚ），２．５７（２Ｈ，ｔ，Ｊ＝５．０Ｈｚ），３．５４（２Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝７．２，４．９Ｈｚ），３．６４（２Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝７．２，３．０Ｈｚ），４．２５−４．３２（１Ｈ，ｍ），４．５０（４Ｈ，ｓ），６．０９（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．９Ｈｚ），７．２５−７．３７（１０Ｈ，ｍ）．
１３Ｃ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，７５ＭＨｚ）δ（ｐｐｍ）：１７５．８（Ｃ），１７１．６（Ｃ），１３７．７（Ｃ×２），１２８．３（ＣＨ×４），１２７．６（ＣＨ×４），１２７．６（ＣＨ×２），１２７．６（Ｃ），７３．１（ＣＨ２×２），６８．３（ＣＨ２×２），４８．７（ＣＨ），３０．６（ＣＨ２），２９．６（ＣＨ２）．
（化合物１６）
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，４００ＭＨｚ）δ（ｐｐｍ）：２．０６（２Ｈ，ｔ，Ｊ＝５．０Ｈｚ），２．４４（２Ｈ，ｔ，Ｊ＝５．０Ｈｚ），３．５０−３．８２（１４Ｈ，ｍ），４．０９−４．１６（１Ｈ，ｍ），４．５０（２Ｈ，ｓ），４．５０（２Ｈ，ｓ），６．８２（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．５Ｈｚ），７．２５−７．３６（２０Ｈ，ｍ）．
１３Ｃ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，３００ＭＨｚ）δ（ｐｐｍ）：１７５．３（Ｃ），１７２．０（Ｃ），１３７．９（Ｃ×２），１３７．７（Ｃ×２），１２８．２（ＣＨ×４），１２８．２（ＣＨ×４），１２７．７（ＣＨ×４），１２７．６（ＣＨ×４），１２７．５（ＣＨ×２），１２７．４（ＣＨ×２），７８．９（ＣＨ×２），７３．４（ＣＨ２×２），７３．２（ＣＨ２×２），７０．５（ＣＨ２×２），６９．９（ＣＨ２×２），６８．４（ＣＨ２×２），４９．６（ＣＨ），３０．１（ＣＨ２），３０．０（ＣＨ２）．
化合物１４〜１６（１．０ｍｍｏｌ）それぞれのテトラヒドフラン溶液（４５ｍＬ）に、室温でＮＨＳ（１２６．６ｍｇ，１．１ｍｍｏｌ）、ＥＤＣ（４１２．７ｍｇ，２．０ｍｍｏｌ）およびトリエチルアミン（０．１１ｍＬ，０．８ｍｍｏｌ）を順次加えた後、２〜４時間還流した。反応液に５％硫酸水素カリウム水溶液を加えた後、ジクロロメタンを用いて抽出した。有機層を飽和炭酸水素ナトリウム水溶液、飽和食塩水で順次洗浄した後、無水硫酸マグネシウムを用いて乾燥し、濾過した。溶媒を減圧下で留去し、残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ヘキサン：酢酸エチル＝１：１０）で精製し、それぞれ化合物１７〜１９を得た（収率５３〜９０％）。
（化合物１７）
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，４００ＭＨｚ）δ（ｐｐｍ）：２．６１（２Ｈ，ｔ，Ｊ＝７．０Ｈｚ），２．８７（４Ｈ，ｓ），３．１９（２Ｈ，ｔ，Ｊ＝７．０Ｈｚ），３．４９（２Ｈ，ｔ，Ｊ＝５．０Ｈｚ），３．５９（２Ｈ，ｔ，Ｊ＝５．０Ｈｚ），４．５５（２Ｈ，ｓ），６．１３−６．２５（１Ｈ，ｍ），７．３１−７．４２（５Ｈ，ｍ）．
１３Ｃ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，７５ＭＨｚ）δ（ｐｐｍ）：１７０．１（Ｃ×２），１６９．１（Ｃ），１６８．２（Ｃ），１３７．８（Ｃ），１２８．５（ＣＨ×２），１２７．９（ＣＨ×２），１２７．９（ＣＨ），７３．２（ＣＨ２），６８．９（ＣＨ２），３９．５（ＣＨ２），３０．６（ＣＨ２），２６．８（ＣＨ２），２５．５（ＣＨ２×２）．
（化合物１８）
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，４００ＭＨｚ）δ（ｐｐｍ）：２．５９（２Ｈ，ｔ，Ｊ＝５．５Ｈｚ），２．７９（４Ｈ，ｓ），２．９８（２Ｈ，ｔ，Ｊ＝５．５Ｈｚ），３．５４（２Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝７．５，５．０Ｈｚ），３．６４（２Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝７．５，３．０Ｈｚ），４．２７−４．３４（１Ｈ，ｍ），４．５１（４Ｈ，ｓ），５．９５（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．８Ｈｚ），７．２５−７．３９（１０Ｈ，ｍ）．１３Ｃ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，７５ＭＨｚ）δ（ｐｐｍ）：１６９．３（Ｃ），１６８．７（Ｃ×２），１６７．９（Ｃ），１３７．９（Ｃ×２），１２８．２（ＣＨ×４），１２７．６（ＣＨ×４），１２７．５（ＣＨ×２），７３．１（ＣＨ２×２），６８．３（ＣＨ２×２），４８．６（ＣＨ），３０．７（ＣＨ２），２６．７（ＣＨ２），２５．５（ＣＨ２×２）．
（化合物１９）
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，４００ＭＨｚ）δ（ｐｐｍ）：２．１２（２Ｈ，ｔ，Ｊ＝５．８Ｈｚ），２．７７−２．８２（６Ｈ，ｍ），３．５１−３．８２（１４Ｈ，ｍ），４．０９−４．１７（１Ｈ，ｍ），４．５０（２Ｈ，ｓ），４．５１（２Ｈ，ｓ），６．６８（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．０Ｈｚ），７．２７−７．３５（２０Ｈ，ｍ）．
１３Ｃ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，７５ＭＨｚ）δ（ｐｐｍ）：１６９．２（Ｃ），６８．７（Ｃ×２），１６７．８（Ｃ），１３８．０（Ｃ×２），１３７．８（Ｃ×２），１２８．３（ＣＨ×４），１２８．２（ＣＨ×４），１２７．７（ＣＨ×４），１２７．６（ＣＨ×４），１２７．４（ＣＨ×４），７９．０（ＣＨ×２），７３．４（ＣＨ２×２），７３．３（ＣＨ２×２），７０．６（ＣＨ２×２），７０．０（ＣＨ２×２），６８．５（ＣＨ２×２），４９．４（ＣＨ），２９．８（ＣＨ２），２６．５（ＣＨ２），２５．０（ＣＨ２×２）．
Ｎ−（８−アミノオクチル）ベンズアミド塩酸塩［Ｎ−（８−ａｍｉｎｏｏｃｔｙｌ）ｂｅｎｚａｍｉｄｅｈｙｄｒｏｃｈｌｏｒｉｄｅ（化合物Ｒａ−Ｈ・ＨＣｌ）］はシンセシス（Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ），９１７（１９８８年）に記載の方法で合成した。
化合物１７〜１９および６（１．０ｍｍｏｌ）それぞれのテトラヒドロフラン溶液（２０ｍＬ）に、室温で化合物Ｒａ−Ｈ・ＨＣｌ（２８４．８ｍｇ，１．０ｍｍｏｌ）、およびトリエチルアミン（０．１４ｍＬ，１．０ｍｍｏｌ）を順次加えた後、同温度で３〜６時間攪拌した。反応液に５％硫酸水素カリウム水溶液を加えた後、クロロホルムで抽出した。有機層を飽和炭酸水素ナトリウム水溶液、飽和食塩水で順次洗浄した後、無水硫酸マグネシウムで乾燥し、濾過した。溶媒を減圧下で留去し、残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ＣＨＣｌ３：メタノール＝２０：１）で精製し、それぞれ化合物２０ａ〜２３ａを得た（収率６２〜７９％）。
（化合物２０ａ）
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，４００ＭＨｚ）δ（ｐｐｍ）：１．２３−１．６８（１２Ｈ，ｍ），２．４６−２．６５（４Ｈ，ｍ），３．１８−３．６０（８Ｈ，ｍ），４．５１（２Ｈ，ｓ），６．１３−６．３８（３Ｈ，ｍ），７．３０−７．８６（１０Ｈ，ｍ）．
１３Ｃ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３：ＣＤ３ＯＤ＝１０：１，７５ＭＨｚ）δ（ｐｐｍ）：１７２．９（Ｃ），１７２．７（Ｃ），１６８．１（Ｃ），１３７．８（Ｃ），１３４．７（Ｃ），１３１．５（ＣＨ），１２８．６（ＣＨ×２），１２８．５（ＣＨ×２），１２７．９（ＣＨ×２），１２７．９（ＣＨ×２），１２６．９（ＣＨ），７３．２（ＣＨ２），６８．７（ＣＨ２），４０．０（ＣＨ２），３９．５（ＣＨ２），３９．４（ＣＨ２），３１．８（ＣＨ２），３１．７（ＣＨ２），２９．５（ＣＨ２），２９．２（ＣＨ２），２９．１（ＣＨ２），２９．０（ＣＨ２），２６．８（ＣＨ２），２６．７（ＣＨ２）．
（化合物２１ａ）
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，４００ＭＨｚ）δ（ｐｐｍ）：１．２３−１．６８（１２Ｈ，ｍ），２．４６−２．６５（４Ｈ，ｍ），３．２０（２Ｈ，ｑ，Ｊ＝５．０Ｈｚ），３．４５（２Ｈ，ｑ，Ｊ＝５．０Ｈｚ），３．５２−３．６６（２Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝８．０，４．５Ｈｚ），３．６３（２Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝８．０，３．０Ｈｚ），４．２３−４．３１（１Ｈ，ｍ），４．５１（４Ｈ，ｓ），５．９４−６．１９（３Ｈ，ｍ），７．２８−７．７９（１５Ｈ，ｍ）．
１３Ｃ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，７５ＭＨｚ）δ（ｐｐｍ）：１７２．１（Ｃ），１７２．０（Ｃ），１６７．６（Ｃ），１３７．８（Ｃ×２），１３４．６（Ｃ），１３１．２（ＣＨ），１２８．４（ＣＨ×２），１２８．３（ＣＨ×６），１２７．６（ＣＨ×２），１２７．５（ＣＨ×２），１２６．７（ＣＨ×２），７３．１（ＣＨ２×２），６８．４（ＣＨ２×２），４８．６（ＣＨ），４０．０（ＣＨ２），３９．５（ＣＨ２），３１．９（ＣＨ２），３１．８（ＣＨ２），２９．５（ＣＨ２），２９．３（ＣＨ２），２９．０（ＣＨ２），２９．０（ＣＨ２），２６．８（ＣＨ２），２６．６（ＣＨ２）．
（化合物２２ａ）
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，４００ＭＨｚ）δ（ｐｐｍ）：１．２３−１．６８（１２Ｈ，ｍ），２．１７（２Ｈ，ｔ，Ｊ＝５．０Ｈｚ），２．３４（２Ｈ，ｔ，Ｊ＝５．０Ｈｚ），３．１５（２Ｈ，ｑ，Ｊ＝５．０Ｈｚ），３．４２（２Ｈ，ｑ，Ｊ＝５．０Ｈｚ），３．５２−３．６５（１０Ｈ，ｍ），３．６５−３．８４（４Ｈ，ｍ），４．０７−４．１５（１Ｈ，ｍ），４．４５（４Ｈ，ｓ），４．５０（４Ｈ，ｓ），６．３０−６．４５（２Ｈ，ｍ），６．７３（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．０Ｈｚ），７．２８−７．７９（２５Ｈ，ｍ）．
１３Ｃ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，７５ＭＨｚ）δ（ｐｐｍ）：１７２．１（Ｃ），１７２．０（Ｃ），１６７．５（Ｃ），１３８．１（Ｃ×２），１３８．０（Ｃ×２），１３４．８（Ｃ），１３１．６（ＣＨ），１２８．４（ＣＨ×２），１２８．４（ＣＨ×４），１２８．３（ＣＨ×４），１２７．７（ＣＨ×４），１２７．７（ＣＨ×２），１２７．６（ＣＨ×２），１２７．６（ＣＨ×４），１２６．９（ＣＨ×２），７９．０（ＣＨ×２），７３．４（ＣＨ２×２），７３．３（ＣＨ２×２），７０．５（ＣＨ２），７０．４（ＣＨ２），７０．０（ＣＨ２），７０．０（ＣＨ２），６８．５（ＣＨ２×２），４９．４（ＣＨ），４０．０（ＣＨ２），３９．４（ＣＨ２），３１．７（ＣＨ２），３１．４（ＣＨ２），２９．５（ＣＨ），２９．４（ＣＨ２），２９．１（ＣＨ２），２９．０（ＣＨ２），２６．８（ＣＨ２），２６．７（ＣＨ２）．
（化合物２３ａ）
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，４００ＭＨｚ）δ（ｐｐｍ）：１．２３−１．６８（１２Ｈ，ｍ），２．３０（２Ｈ，ｔ，Ｊ＝５．０Ｈｚ），２．４５（２Ｈ，ｔ，Ｊ＝５．０Ｈｚ），３．１０（２Ｈ，ｑ，Ｊ＝５．０Ｈｚ），３．４０（２Ｈ，ｑ，Ｊ＝５．０Ｈｚ），３．４０−３．８０（３２Ｈ，ｍ），４．１０−４．２２（２Ｈ，ｍ），４．５０（１６Ｈ，ｓ），５．８７（１Ｈ，ｂｒｄ，Ｊ＝５．０Ｈｚ），６．３２（１Ｈ，ｂｒｄ，Ｊ＝５．０Ｈｚ），７．０８（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．０Ｈｚ），７．２１−７．４１（４０Ｈ，ｍ），７．４１−７．５５（３Ｈ，ｍ），７．７７（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝５．５Ｈｚ），８．２９（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．０Ｈｚ）．
１３Ｃ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，７５ＭＨｚ）δ（ｐｐｍ）：１７３．１（Ｃ），１７１．７（Ｃ），１６８．５（Ｃ），１６８．０（Ｃ），１６７．３（Ｃ），１３８．１（Ｃ×２），１３８．０（Ｃ×４），１３７．９（Ｃ×２），１３４．７（Ｃ），１３１．１（ＣＨ），１２８．３，１２８．２，１２８．２，１２７．６，１２７．６，１２７．５，１２７．５，１２７．５，１２７．４，１２７．４，および１２６．７（ＣＨ×４４），７８．９（ＣＨ×２），７８．８（ＣＨ×２），７３．３（ＣＨ２×２），７３．３（ＣＨ２×２），７３．２（ＣＨ２×４），７０．３（ＣＨ２×２），７０．２（ＣＨ２×２），６９．９（ＣＨ２×２），６９．９（ＣＨ２×２），６８．８（ＣＨ２×２），６８．３（ＣＨ２×２），５３．４（ＣＨ２），５２．３（ＣＨ２），４９．９（ＣＨ），４９．６（ＣＨ），４０．０（ＣＨ２），３９．４（ＣＨ２），３１．１（ＣＨ２），２９．５（ＣＨ２），２９．４（ＣＨ２），２９．１（ＣＨ２），２９．０（ＣＨ２），２８．２（ＣＨ２），２６．８（ＣＨ２），２６．７（ＣＨ２）．
化合物２０ａ〜２３ａ（１．０ｍｍｏｌ）それぞれのエタノール溶液（１５ｍＬ）に水素気流下、室温で、触媒量のＰｄ（ＯＨ）２／Ｃ（Ｐｄ：２０重量％含有）を加えた後、同温度で３〜６時間攪拌した。反応液を、セライト５３５（和光純薬社製）を用いて濾過した後、溶媒を減圧下で留去し、それぞれ化合物２５ａ〜２８ａを得た（収率１００％）。
（化合物２５ａ）
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ，４００ＭＨｚ）δ（ｐｐｍ）：１．２８−１．４１（８Ｈ，ｍ），１．４５−１．５２（２Ｈ，ｍ），１．５８−１．６６（２Ｈ，ｍ），２．４６−２．５０（４Ｈ，ｍ），３．１６（２Ｈ，ｔ，Ｊ＝５．５Ｈｚ），３．３０（２Ｈ，ｔ，Ｊ＝４．５Ｈｚ），３．３８（２Ｈ，ｔ，Ｊ＝５．５Ｈｚ），３．５８（２Ｈ，ｔ，Ｊ＝４．５Ｈｚ），７．４１−７．５３（３Ｈ，ｍ），７．７７−７．８１（２Ｈ，ｍ）．
１３Ｃ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３：ＣＤ３ＯＤ＝１：１０，７５ＭＨｚ）δ（ｐｐｍ）：１７４．７（Ｃ），１７４．３（Ｃ），１７０．１（Ｃ），１３５．６（Ｃ），１３２．３（ＣＨ），１２９．３（ＣＨ×２），１２８．０（ＣＨ×２），６１．４（ＣＨ２），４２．８（ＣＨ２），４０．９（ＣＨ２），４０．３（ＣＨ２），３２．２（ＣＨ２），３２．１（ＣＨ２），３０．３（ＣＨ２），３０．２（ＣＨ２），３０．２（ＣＨ２×２），２７．８（ＣＨ２），２７．７（ＣＨ２）．
（化合物２６ａ）
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ，４００ＭＨｚ）δ（ｐｐｍ）：１．２８−１．４１（８Ｈ，ｍ），１．４５−１．５２（２Ｈ，ｍ），１．５８−１．６６（２Ｈ，ｍ），２．４６−２．５２（４Ｈ，ｍ），３．１６（２Ｈ，ｔ，Ｊ＝５．５Ｈｚ），３．３８（２Ｈ，ｔ，Ｊ＝５．５Ｈｚ），３．５５−３．６５（４Ｈ，ｍ），３．９０（１Ｈ，ｑ，Ｊ＝４．０Ｈｚ），７．４１−７．５３（３Ｈ，ｍ），７．７７−７．８１（２Ｈ，ｍ）．
１３Ｃ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３：ＣＤ３ＯＤ＝３：７，７５ＭＨｚ）δ（ｐｐｍ）：１７３．９（Ｃ），１７３．４（Ｃ），１６９．２（Ｃ），１３４．９（Ｃ），１３１．８（ＣＨ），１２８．８（ＣＨ×２），１２７．４（ＣＨ×２），６１．６（ＣＨ２×２），５３．３（ＣＨ），４０．４（ＣＨ２），３９．８（ＣＨ２），３１．９（ＣＨ２），３１．６（ＣＨ２），２９．７（ＣＨ２），２９．５（ＣＨ２×３），２７．２（ＣＨ２），２７．１（ＣＨ２）．
（化合物２７ａ）
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ，４００ＭＨｚ）δ（ｐｐｍ）：１．２８−１．４１（８Ｈ，ｍ），１．４５−１．５２（２Ｈ，ｍ），１．５８−１．６６（２Ｈ，ｍ），２．４６−２．５２（４Ｈ，ｍ），３．１６（２Ｈ，ｔ，Ｊ＝５．０Ｈｚ），３．３５（２Ｈ，ｔ，Ｊ＝５．０Ｈｚ），３．５５−３．８０（１４Ｈ，ｍ），４．０７−４．１５（１Ｈ，ｍ），７．４１−７．５３（３Ｈ，ｍ），７．７７−７．８１（２Ｈ，ｍ）．
１３Ｃ−ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ，７５ＭＨｚ）δ（ｐｐｍ）：１７４．５（Ｃ），１７４．３（Ｃ），１６９．９（Ｃ），１３５．７（Ｃ），１３２．４（ＣＨ），１２９．４（ＣＨ×２），１２８．１（ＣＨ×２），８２．９（ＣＨ×２），６９．５（ＣＨ２×２），６２．４（ＣＨ２×２），６２．３（ＣＨ２×２），５１．０（ＣＨ），４０．９（ＣＨ２），４０．５（ＣＨ２），３２．３（ＣＨ２），３２．２（ＣＨ２），３０．４（ＣＨ２×２），３０．２（ＣＨ２×２），２７．９（ＣＨ２），２７．８（ＣＨ２）．
（化合物２８ａ）
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ，４００ＭＨｚ）δ（ｐｐｍ）：１．２８−１．４１（８Ｈ，ｍ），１．４５−１．５２（２Ｈ，ｍ），１．５８−１．６６（２Ｈ，ｍ），２．４８（２Ｈ，ｔ，Ｊ＝５．０Ｈｚ），２．６０（２Ｈ，ｔ，Ｊ＝５．０Ｈｚ），３．１６（２Ｈ，ｔ，Ｊ＝５．５Ｈｚ），３．３８（２Ｈ，ｔ，Ｊ＝５．５Ｈｚ），３．５２−３．８２（２８Ｈ，ｍ），４．０５（２Ｈ，ｓ），４．１５（１Ｈ，ｔ，Ｊ＝４．０Ｈｚ），４．２２（１Ｈ，ｔ，Ｊ＝４．０Ｈｚ），４．２７（２Ｈ，ｓ），７．４１−７．５３（３Ｈ，ｍ），７．７７−７．８１（２Ｈ，ｍ）．
１３Ｃ−ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ，７５ＭＨｚ）δ（ｐｐｍ）：１７５．６（Ｃ），１７４．２（Ｃ），１７１．７（Ｃ），１７１．４（Ｃ），１７０．０（Ｃ），１３５．７（Ｃ），１３２．４（ＣＨ），１２９．４（ＣＨ×２），１２８．１（ＣＨ×２），８３．１（ＣＨ×２），８２．９（ＣＨ×２），６９．７（ＣＨ２×２），６９．５（ＣＨ２×２），６２．６（ＣＨ２×２），６２．５（ＣＨ２×２），６２．４（ＣＨ２×４），５４．５（ＣＨ２），５４．０（ＣＨ２），５１．６（ＣＨ），５１．３（ＣＨ），４１．０（ＣＨ２），４０．５（ＣＨ２），３１．７（ＣＨ２），３０．５（ＣＨ２），３０．３（ＣＨ２×２），３０．３（ＣＨ２），２９．２（ＣＨ２），２８．０（ＣＨ２），２７．９（ＣＨ２）．
化合物２４ａ［Ｎ−（８−プロピオニルアミノオクチル）ベンズアミド（Ｎ−（８−ｐｒｏｐｉｏｎｙｌａｍｉｎｏｏｃｔｙｌ）ｂｅｎｚａｍｉｄｅ）］はＲａ−Ｈ・ＨＣｌとプロピオン酸のＮＨＳエステルを用い、上記と同様に反応させて取得した。
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，４００ＭＨｚ）δ（ｐｐｍ）：１．１５（３Ｈ，ｔ，Ｊ＝６．０Ｈｚ），１．２９−１．６８（１２Ｈ，ｍ），２．１９（２Ｈ，ｑ，Ｊ＝５．０Ｈｚ），３．２２（２Ｈ，ｑ，Ｊ＝５．０Ｈｚ），３．４４（２Ｈ，ｑ，Ｊ＝５．０Ｈｚ），５．７１（１Ｈ，ｂｒｄ，ＣＯＮＨ），６．３８（１Ｈ，ｂｒｄ，ＣＯＮＨ），７．４０−７．５０（３Ｈ，ｍ），７．７７（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．０Ｈｚ），
１３Ｃ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，７５ＭＨｚ）δ（ｐｐｍ）：１７４．０（Ｃ），１６７．６（Ｃ），１３４．８（Ｃ），１３１．３（ＣＨ），１２８．５（ＣＨ×２），１２６．９（ＣＨ×２），４０．０（ＣＨ２），３９．５（ＣＨ２），２９．７（ＣＨ２），２９．６（ＣＨ２），２９．５（ＣＨ２），２９．０（ＣＨ２），２９．０（ＣＨ２），２６．８（ＣＨ２），２６．７（ＣＨ２），１０．０（ＣＨ３）．
実施例５ 化合物の合成（化合物２４ｂ〜２８ｂ）
化合物１７〜１９および６（１．０ｍｍｏｌ）それぞれのジクロロメタン溶液（２０ｍＬ）に、室温でＬ−フェニルアラニンメチルエステル塩酸塩（化合物Ｒｂ’−Ｈ・ＨＣｌ、４３１．４ｍｇ，２．０ｍｍｏｌ）、およびトリエチルアミン（０．４２ｍＬ，３．０ｍｍｏｌ）を順次加えた後、同温度で３〜６時間攪拌した。反応液に５％硫酸水素カリウム水溶液を加えた後、ジクロロメタンを用いて抽出した。有機層を飽和炭酸水素ナトリウム水溶液、飽和食塩水で順次洗浄した後、無水硫酸マグネシウムで乾燥し、濾過した。溶媒を減圧下で留去し、残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ヘキサン：酢酸エチル＝１：３）で精製し、それぞれ化合物２０ｂ’〜２３ｂ’を得た（収率７９〜９７％）。
（化合物２０ｂ’）
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，４００ＭＨｚ）δ（ｐｐｍ）：２．４０（２Ｈ，ｔ，Ｊ＝５．０Ｈｚ），２．４９（２Ｈ，ｔ，Ｊ＝５．０Ｈｚ），２．９８（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１１．０，５．０Ｈｚ），３．０９（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１１．０，５．０Ｈｚ），３．４０（２Ｈ，ｔ，Ｊ＝４．０Ｈｚ），３．４８（２Ｈ，ｔ，Ｊ＝４．０Ｈｚ），３．６０（３Ｈ，ｓ），４．４５（２Ｈ，ｓ），４．７９（１Ｈ，ｂｒｑ，Ｊ＝５．０Ｈｚ），６．８３（１Ｈ，ｔ，Ｊ＝４．０Ｈｚ），７．１０−７．３２（１０Ｈ，ｍ），（二つの−ＮＨは明確に観察されず）．
１３Ｃ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，７５ＭＨｚ）δ（ｐｐｍ）：１７１．０（Ｃ），１７０．９（Ｃ），１７０．９（Ｃ），１３６．８（Ｃ），１３５．１（Ｃ），１２８．０（ＣＨ×２），１２７．３（ＣＨ×２），１２７．２（ＣＨ×２），１２６．５（ＣＨ×２），１２５．７（ＣＨ×２），７１．８（ＣＨ２），６７．７（ＣＨ２），５２．４（ＣＨ３），５１．０（ＣＨ），３８．３（ＣＨ２），３６．７（ＣＨ２），３０．２（ＣＨ２×２）．
（化合物２１ｂ’）
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，４００ＭＨｚ）δ（ｐｐｍ）：２．４２−２．５２（４Ｈ，ｍ），３．０５（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１１．０，５．０Ｈｚ），３．１２（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１１．０，４．８Ｈｚ），３．５２（２Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝７．５，４．５Ｈｚ），３．６３（２Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝７．５，３．０Ｈｚ），３．７０（３Ｈ，ｓ），４．２５−４．３２（１Ｈ，ｍ），４．５０（４Ｈ，ｓ），４．８３（１Ｈ，ｄｔ，Ｊ＝６．０，５．０Ｈｚ），６．０６（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．０Ｈｚ），６．３３（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．０Ｈｚ），７．０８−７．３５（１５Ｈ，ｍ）．
１３Ｃ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，７５ＭＨｚ）δ（ｐｐｍ）：１７２．０（Ｃ），１７１．７（Ｃ），１７１．７（Ｃ），１３８．０（Ｃ×２），１３６．０（Ｃ），１２９．２，１２８．５，１２８．４，１２７．６および１２７．０（ＣＨ×１５），７３．１（ＣＨ２×２），６８．４（ＣＨ２×２），５３．３（ＣＨ３），５２．２（ＣＨ），４８．６（ＣＨ），３７．８（ＣＨ２），３１．４（ＣＨ２），３１．３（ＣＨ２）．
（化合物２２ｂ’）
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，４００ＭＨｚ）δ（ｐｐｍ）：２．１３（２Ｈ，ｔ，Ｊ＝５．０Ｈｚ），２．３４（２Ｈ，ｔ，Ｊ＝５．０Ｈｚ），３．０３（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１１．０，４．８Ｈｚ），３．１１（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１１．０，４．８Ｈｚ），３．４９−３．８０（１４Ｈ，ｍ），３．６７（３Ｈ，ｓ），４．１２（１Ｈ，ｑ，Ｊ＝５．５Ｈｚ），４．４９（４Ｈ，ｓ），４．５０（４Ｈ，ｓ），４．８０（１Ｈ，ｄｔ，Ｊ＝５．０，６．０Ｈｚ），６．５９−６．６４（２Ｈ，ｍ），７．０９−７．３３（２５Ｈ，ｍ）．
１３Ｃ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，１００ＭＨｚ）δ（ｐｐｍ）：１７１．９（Ｃ），１７１．７（Ｃ），１７１．６（Ｃ），１３８．１（Ｃ×２），１３８．０（Ｃ×２），１３６．０（Ｃ），１２９．２，１２８．５，１２８．４，１２８．３，１２７．７，１２７．７，１２７．６および１２７．０（ＣＨ×２５），７９．０（ＣＨ），７９．０（ＣＨ），７３．４（ＣＨ２×２），７３．３（ＣＨ２×２），７０．４（ＣＨ２），７０．０（ＣＨ２），６８．５（ＣＨ２×２），６８．５（ＣＨ２×２），５３．３（ＣＨ３），５２．１（ＣＨ），４９．４（ＣＨ），３７．８（ＣＨ２），３１．３（ＣＨ２），３０．９（ＣＨ２）．
（化合物２３ｂ’）
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，４００ＭＨｚ）δ（ｐｐｍ）：２．２６−２．４５（４Ｈ，ｍ），３．００（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１１．０，５．０Ｈｚ），３．０６（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１１．０，５．０Ｈｚ），３．３４−３．８０（３２Ｈ，ｍ），３．６３（３Ｈ，ｓ），４．０７−４．１４（１Ｈ，ｍ），４．１７−４．２５（１Ｈ，ｍ），４．４６（１６Ｈ，ｓ），４．７７（１Ｈ，ｄｔ，Ｊ＝６．０，５．０Ｈｚ），６．１５（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．０Ｈｚ），６．９７（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．０Ｈｚ），７．０６−７．５２（４５Ｈ，ｍ），８．３６（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．０Ｈｚ）．
１３Ｃ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，１００ＭＨｚ）δ（ｐｐｍ）：１７３．０（Ｃ），１７１．８（Ｃ），１７１．５（Ｃ），１６８．８（Ｃ），１６８．３（Ｃ），１３８．３（Ｃ×２），１３８．２（Ｃ×２），１３８．２（Ｃ×２），１３８．１（Ｃ×２），１３６．０（Ｃ），１２９．３，１２８．５，１２８．４，１２８．４，１２７．８，１２７．７，１２７．６および１２７．０（ＣＨ×４５），７９．０（ＣＨ×２），７８．６（ＣＨ×２），７３．４（ＣＨ２×２），７３．３（ＣＨ２×２），７３．３（ＣＨ２×４），７０．４（ＣＨ２×２），７０．２（ＣＨ２×２），７０．０（ＣＨ２×２），７０．０（ＣＨ２×２），６８．９（ＣＨ２×２），６８．４（ＣＨ２×２），５３．６（ＣＨ２），５３．２（ＣＨ３），５２．３（ＣＨ２），５２．１（ＣＨ），４９．９（ＣＨ），４９．６（ＣＨ），３７．８（ＣＨ２），３０．７（ＣＨ２），２７．８（ＣＨ２）．
化合物２０ｂ’〜２３ｂ’（１．０ｍｍｏｌ）のそれぞれを１０％水酸化カリウムエタノール溶液（１５ｍＬ）中、室温で６〜１２時間攪拌した。反応液に５％硫酸水素カリウム水溶液を加えた後、酢酸エチルで抽出した。有機層を飽和食塩水で洗浄した後、無水硫酸マグネシウムで乾燥し、濾過した。溶媒を減圧下で留去し、それぞれ化合物２０ｂ〜２３ｂを得た（収率９１〜９９％）。
（化合物２０ｂ）
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，４００ＭＨｚ）δ（ｐｐｍ）：２．４３−２．４９（４Ｈ，ｍ），３．０２（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１１．０，５．０Ｈｚ），３．１６（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１１．０，４．０Ｈｚ），３．４３（２Ｈ，ｂｒｔ，Ｊ＝３．５Ｈｚ），３．５３（２Ｈ，ｔ，Ｊ＝３．５Ｈｚ），４．５０（２Ｈ，ｓ），４．７４（１Ｈ，ｂｒｄｄ，Ｊ＝５．０，４．０Ｈｚ），６．６４（１Ｈ，ｂｒｄ，ＣＯＮＨ），６．８４（１Ｈ，ｂｒｄ，Ｊ＝３．５Ｈｚ，ＣＯＮＨ），７．１４−７．４０（１０Ｈ，ｍ），８．４５（１Ｈ，ｂｒｄ，ＣＯＯＨ）．
１３Ｃ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，７５ＭＨｚ）δ（ｐｐｍ）：１７３．２（Ｃ），１７３．０（Ｃ），７２．３（Ｃ），１３７．５（Ｃ），１３６．１（Ｃ），１２９．３（ＣＨ），１２８．３（ＣＨ×２），１２８．２（ＣＨ×２），１２７．７（ＣＨ×２），１２７．７（ＣＨ×２），１２６．６（ＣＨ），７３．０（ＣＨ２），６８．４（ＣＨ２），５３．６（ＣＨ），３９．５（ＣＨ２），３７．３（ＣＨ２），３１．８（ＣＨ２×２）．
（化合物２１ｂ）
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，４００ＭＨｚ）δ（ｐｐｍ）：２．４０−２．４６（４Ｈ，ｍ），３．０５（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１１．０，４．５Ｈｚ），３．１９（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１１．０，４．０Ｈｚ），３．５１（２Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝７．０，４．５Ｈｚ），３．６１（２Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝７．０，４．５Ｈｚ），４．２０−４．２８（１Ｈ，ｍ），４．４９（４Ｈ，ｓ），４．７２（１Ｈ，ｄｄｄ，Ｊ＝６．０，４．０，４．５Ｈｚ），６．２９（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．０Ｈｚ，ＣＯＮＨ），６．６８（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．０Ｈｚ，ＣＯＮＨ），７．１２−７．３６（１５Ｈ，ｍ），（ＣＯＯＨは明確に確認されず）．
１３Ｃ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，７５ＭＨｚ）δ（ｐｐｍ）：１７３．５（Ｃ），１７２．９（Ｃ），１７２．３（Ｃ），１３７．８（Ｃ×２），１３６．２（Ｃ），１２９．５，１２９．５，１２８．４，１２８．４，１２７．８，１２７．８，１２７．７および１２６．９（ＣＨ×１５），７３．２（ＣＨ２×２），６８．３（ＣＨ２×２），５３．５（ＣＨ），４８．９（ＣＨ），３７．３（ＣＨ２），３２．１（ＣＨ２），３２．０（ＣＨ２）．
（化合物２２ｂ）
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，４００ＭＨｚ）δ（ｐｐｍ）：２．１４−２．４１（４Ｈ，ｍ），３．０３（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１１．０，５．５Ｈｚ），３．１８（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１１．０，４．５Ｈｚ），３．４７−３．７６（１４Ｈ，ｍ），４．０７−４．１３（１Ｈ，ｍ），４．４８−４．５２（８Ｈ，ｍ），４．６７（１Ｈ，ｂｒｄｄ，Ｊ＝５．５，４．５Ｈｚ），６．７６−６．８６（２Ｈ，ｍ），７．１３−７．３４（２５Ｈ，ｍ），（ＣＯＯＨは明確に確認されず）．
１３Ｃ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，７５ＭＨｚ）δ（ｐｐｍ）：１７３．３（Ｃ），１７２．７（Ｃ），１７２．２（Ｃ），１３８．０（Ｃ），１３８．０（Ｃ），１３７．９（Ｃ），１３７．８（Ｃ），１３６．４（Ｃ），１２９．５，１２８．４，１２８．４，１２８．３，１２７．９，１２７．８，１２７．８，１２７．７，１２７．７，１２７．７，１２７．６および１２６．９（ＣＨ×２５），７９．０（ＣＨ），７８．９（ＣＨ），７３．４（ＣＨ２×２），７３．４（ＣＨ２×２），７０．３（ＣＨ２），７０．０（ＣＨ２），６８．４（ＣＨ２×４），５３．６（ＣＨ），４９．７（ＣＨ），３７．２（ＣＨ２），３１．９（ＣＨ２），３１．７（ＣＨ２）．
（化合物２３ｂ）
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，４００ＭＨｚ）δ（ｐｐｍ）：２．２２−２．５８（４Ｈ，ｍ），２．９２（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝９．０，５．０Ｈｚ），３．１１（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝９．０，３．５Ｈｚ），３．２９−３．８０（３２Ｈ，ｍ），４．０７−４．１４（１Ｈ，ｍ），４．１６−４．２３（１Ｈ，ｍ），４．４６（１６Ｈ，ｓ），４．６４（１Ｈ，ｄｄｄ，Ｊ＝６．０，５．０，３．５Ｈｚ），６．３８（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．０Ｈｚ），７．００（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．０Ｈｚ），６．９１−７．４７（４５Ｈ，ｍ），８．１０（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．０Ｈｚ）．
１３Ｃ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３、７５ＭＨｚ）δ（ｐｐｍ）：１７３．５（Ｃ），１７２．８（Ｃ），１７２．６（Ｃ），１６６．９（Ｃ），１６８．４（Ｃ），１３８．２（Ｃ），１３８．２（Ｃ），１３８．１（Ｃ），１３８．１（Ｃ），１３８．１（Ｃ），１３８．０（Ｃ），１３８．０（Ｃ），１３７．９（Ｃ），１３６．４（Ｃ），１２９．３，１２８．５，１２８．４，１２８．４，１２８．３，１２７．９，１２７．８，１２７．８，１２７．７，１２７．７および１２６．９（ＣＨ×４５Ｈ），７８．９（ＣＨ），７８．９（ＣＨ），７８．７（ＣＨ），７８．６（ＣＨ），７３．４（ＣＨ２×２），７３．４（ＣＨ２×２），７３．３（ＣＨ２×４），７０．４（ＣＨ２），７０．４（ＣＨ２），７０．４（ＣＨ２），７０．３（ＣＨ２），７０．２（ＣＨ２），７０．２（ＣＨ２），７０．１（ＣＨ２），７０．０（ＣＨ２），６８．８（ＣＨ２×２），６８．４（ＣＨ２×２），５３．６（ＣＨ），５３．３（ＣＨ２），５２．１（ＣＨ２），５０．０（ＣＨ），４９．７（ＣＨ），３７．１（ＣＨ２），３１．１（ＣＨ２），２８．４（ＣＨ２）．
化合物２０ｂ〜２３ｂ（１．０ｍｍｏｌ）それぞれのエタノール溶液（１５ｍＬ）に水素気流下、室温で、触媒量のＰｄ／（ＯＨ）２（Ｐｄ：２０重量％含有，１０〜５０ｍｇ）を加えた後、同温度で６〜１２時間攪拌した。反応液を、セライト５３５を用いて濾過した後、溶媒を減圧下で留去し、それぞれ化合物２５ｂ〜２８ｂを得た（収率８９〜９７％）。
（化合物２５ｂ）
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ，４００ＭＨｚ）δ（ｐｐｍ）：２．３６−２．５０（４Ｈ，ｍ），２．９５（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１４．０，９．０Ｈｚ），３．１８（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１４．０，５．０Ｈｚ），３．３０（２Ｈ，ｔ，Ｊ＝６．０Ｈｚ），３．５６（２Ｈ，ｔ，Ｊ＝６．０Ｈｚ），４．６４（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝９．０，５．０Ｈｚ），７．１６−７．３０（５Ｈ，ｍ）．
１３Ｃ−ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ，７５ＭＨｚ）δ（ｐｐｍ）：１７４．９（Ｃ），１７４．７（Ｃ），１７４．５（Ｃ），１３８．４（Ｃ），１３０．３（ＣＨ×２），１２９．４（ＣＨ×２），１２７．８（ＣＨ），６１．６（ＣＨ２），５５．１（ＣＨ），４３．０（ＣＨ２），３８．４（ＣＨ２），３２．２（ＣＨ２），３２．０（ＣＨ２）．
（化合物２６ｂ）
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ，４００ＭＨｚ）δ（ｐｐｍ）：２．５２−２．５９（４Ｈ，ｍ），３．００−３．２１（２Ｈ，ｍ），３．６２−３．７５（４Ｈ，ｍ），４．００−４．０４（１Ｈ，ｍ），４．６０−４．６６（１Ｈ，ｍ），７．３５−７．４９（５Ｈ，ｍ）．
１３Ｃ−ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ，７５ＭＨｚ）δ（ｐｐｍ）：１７４．８（Ｃ），１７４．７（Ｃ），１７４．７（Ｃ），１３８．３（Ｃ），１３０．２（ＣＨ×２），１２９．４（ＣＨ×２），１２７．７（ＣＨ），６２．０（ＣＨ２×２），５５．１（ＣＨ），５４．４（ＣＨ），３８．４（ＣＨ２），３２．３（ＣＨ２），３２．０（ＣＨ２）．
（化合物２７ｂ）
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ，４００ＭＨｚ）δ（ｐｐｍ）：２．５３−２．６３（４Ｈ，ｍ），３．１１（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１１．０，７．０Ｈｚ），３．３２（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１１．０，４．０Ｈｚ），３．６２−３．８１（１４Ｈ，ｍ），４．２１（１Ｈ，ｑ，Ｊ＝４．０Ｈｚ），４．７１−４．７５（１Ｈ，ｍ），７．３６−７．４９（５Ｈ，ｍ）．
１３Ｃ−ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ，７５ＭＨｚ）δ（ｐｐｍ）：１７４．５（Ｃ），１７４．３（Ｃ），１７３．３（Ｃ），１３８．１（Ｃ），１３０．１（ＣＨ），１３０．１（ＣＨ），１２９．３（ＣＨ），１２９．３（ＣＨ），１２７．７（ＣＨ），８２．７（ＣＨ×２），６９．４（ＣＨ２×２），６２．３（ＣＨ２×２），６２．２（ＣＨ２×２），５４．９（ＣＨ），５０．８（ＣＨ），３８．２（ＣＨ２），３２．０（ＣＨ２），３１．８（ＣＨ２）．
（化合物２８ｂ）
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ，４００ＭＨｚ）δ（ｐｐｍ）：２．４９−２．５２（４Ｈ，ｍ），２．９３（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１１．０，６．０Ｈｚ），３．１９（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１１．０，４．０Ｈｚ），３．３０−３．７９（２８Ｈ，ｍ），４．００−４．０３（２Ｈ，ｍ），４．１３−４．１８（２Ｈ，ｍ），４．１８−４．２３（２Ｈ，ｍ），４．４５−４．５１（１Ｈ，ｍ），７．１９−７．２９（５Ｈ，ｍ）．
１３Ｃ−ＮＭＲ（Ｄ２Ｏ：ＣＤ３ＯＤ＝２０：１，７５ＭＨｚ）δ（ｐｐｍ）：１７６．４（Ｃ），１７５．１（Ｃ），１７２．２（Ｃ），１７２．１（Ｃ），１７１．７（Ｃ），１３７．８（Ｃ），１３０．２（ＣＨ×２），１２９．６（ＣＨ×２），１２７．９（ＣＨ），８２．０（ＣＨ×４），６９．３（ＣＨ２×４），６１．６（ＣＨ２×４），６１．５（ＣＨ２×４），５５．５（ＣＨ），５３．９（ＣＨ２），５３．４（ＣＨ２），５１．０（ＣＨ），５０．７（ＣＨ），３７．９（ＣＨ２），３１．１（ＣＨ２），２８．７（ＣＨ２）．
化合物２４ｂ［（３−フェニル−（Ｓ）−２−プロピオニル）アミノプロピオン酸（（３−ｐｈｅｎｙｌ−（Ｓ）−２−ｐｒｏｐｉｏｎｙｌ）ａｍｉｎｏｐｒｏｐｉｏｎｉｃ ａｃｉｄ）］はＬ−フェニルアラニンメチルエステル塩酸塩（Ｒｂ−Ｈ・ＨＣｌ）とプロピオン酸のＮＨＳエステルを用い、上記と同様にして取得した。
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ，４００ＭＨｚ）δ（ｐｐｍ）：１．０２（３Ｈ，ｔ，Ｊ＝６．０Ｈｚ），２．１６（２Ｈ，ｑ，Ｊ＝６．０Ｈｚ），３．１３（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１１．０，５．０Ｈｚ），３．２４（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１１．０，５．０Ｈｚ），４．６６（１Ｈ，ｔ，Ｊ＝５．０Ｈｚ），７．１７−７．２８（５Ｈ，ｍ）．
１３Ｃ−ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ，７５ＭＨｚ）δ（ｐｐｍ）：１７４．６（Ｃ），１７４．４（Ｃ），１３５．８（Ｃ），１２９．４（ＣＨ），１２８．６（ＣＨ），１２７．２（ＣＨ），５３．２（ＣＨ），３７．３（ＣＨ２），２９．５（ＣＨ２），９．７（ＣＨ３）．
実施例６ 本発明化合物で修飾された化学修飾低分子化合物の合成［化合物２５ａ〜２８ａの合成の別法］
反応スキームを以下に示す。
化合物１７〜１９（１．０ｍｍｏｌ）それぞれのエタノール溶液（１５ｍＬ）に水素気流下、室温で、触媒量のＰｄ（ＯＨ）２／Ｃ（Ｐｄ：２０重量％含有，１０〜５０ｍｇ）を加えた後、同温度で６〜１２時間攪拌した。反応液を、セライト５３５を用いて濾過した後、溶媒を減圧下で留去し、それぞれ化合物２９〜３１を得た（収率６２〜１００％）。
（化合物２９）
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ，４００ＭＨｚ）δ（ｐｐｍ）：２．７１（２Ｈ，ｔ，Ｊ＝５．０Ｈｚ），２．９７（４Ｈ，ｓ），３．２２（２Ｈ，ｔ，Ｊ＝５．０Ｈｚ），３．４９（２Ｈ，ｔ，Ｊ＝５．０Ｈｚ），３．５９（２Ｈ，ｔ，Ｊ＝５．０Ｈｚ）．
（化合物３０）
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ，４００ＭＨｚ）δ（ｐｐｍ）：２．７２（２Ｈ，ｔ，Ｊ＝５．０Ｈｚ），２．８９（４Ｈ，ｓ），３．０１（２Ｈ，ｔ，Ｊ＝５．０Ｈｚ），３．６６（４Ｈ，ｄ，Ｊ＝４．５Ｈｚ），３．９０−３．９８（１Ｈ，ｍ）．
（化合物３１）
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ，４００ＭＨｚ）δ（ｐｐｍ）：２．６９（２Ｈ，ｔ，Ｊ＝５．０Ｈｚ），２．８９（４Ｈ，ｓ），３．０１（２Ｈ，ｔ，Ｊ＝５．０Ｈｚ），３．６０−３．８２（１４Ｈ，ｍ），４．１４−４．２１（１Ｈ，ｍ）．
１３Ｃ−ＮＭＲ（ＣＤ３Ｏ，３００ＭＨｚ）δ（ｐｐｍ）：１７２．８（Ｃ），１７１．５（Ｃ×２），１６９．６（Ｃ），８３．０（ＣＨ×２），６９．６（ＣＨ２×２），６２．５（ＣＨ２×２），６２．３（ＣＨ２×２），５１．２（ＣＨ），３１．０（ＣＨ２），２７．５（ＣＨ２），２６．５（ＣＨ２×２）．
化合物Ｒａ−Ｈ（１．０ｍｍｏｌ，２８５ｍｇ）と化合物２９〜３１および７（２．０ｍｍｏｌ）それぞれを５％りん酸二カリウム塩水溶液中（５ｍＬ）、室温で１時間攪拌し、それぞれ化合物２５ａ〜２８ａを得た（実施例４での合成品と照合し、それぞれ同一化合物であることが確認された）。
実施例７ 本発明化合物で修飾された化学修飾低分子化合物の合成（化合物２５ｂ〜２８ｂの合成の別法）
Ｌ−フェニルアラニン（Ｒｂ−Ｈ，１．０ｍｍｏｌ，１６５ｍｇ）と化合物２９〜３１および７（２．０ｍｍｏｌ）それぞれを５％りん酸二カリウム塩水溶液中（５ｍＬ）、室温で１時間攪拌し、それぞれ化合物２５ｂ〜２８ｂを得た（実施例５での合成品と照合し、それぞれ同一化合物であることが確認された）。
実施例８ 化合物の合成［式（４）で表される化合物］
反応スキームを以下に示す。
エタノールアミン（５００ｍｇ，８．２ｍｍｏｌ）および水酸化ナトリウム（１．７ｇ，４０ｍｍｏｌ）をジオキサンと水の混合溶媒（１０：１，５０ｍＬ）に懸濁し、得られた懸濁液にジ−ｔｅｒｔ−ブチルジカーボナート（１．９６ｇ，９．０ｍｍｏｌ）を０℃で数回に分けて加えた。反応液を０℃で２時間攪拌した後、硫酸水素カリウム水溶液（５％，５０ｍＬ）を加え、酢酸エチル（１５０ｍＬ）を用いて抽出した。抽出した有機層を水（３０ｍＬ）、飽和食塩水（３０ｍｌ）で順次洗浄した後、無水硫酸マグネシウムを用いて乾燥し、濾過した。溶媒を減圧下で留去し、粗精製の（２−ヒドロキシエチル）カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル［（２−ｈｙｄｒｏｘｙｅｔｈｙｌ）ｃａｒｂａｍｉｃ ａｃｉｄ ｔｅｒｔ−ｂｕｔｙｌ ｅｓｔｅｒ；１．３２ｇ，８．２ｍｍｏｌ，収率１００％］を得た。
トリフェニルホスフィン（２．１５ｇ，８．２ｍｍｏｌ）のテトラヒドロフラン溶液（２５ｍＬ）に光延試薬［ジエチルアゾジカルボキシレート（ｄｉｅｔｈｙｌａｚｏｄｉｃａｒｂｏｘｙｌａｔｅ）］のトルエン溶液（１．１０６ｇ／ｍＬ，８．２ｍｍｏｌ，１．２９ｍＬ）を−７８℃でゆっくりと加えた。得られた溶液に（２−ヒドロキシエチル）カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル（１．３２ｇ，８．２ｍｍｏｌ）のテトラヒドロフラン溶液（５ｍＬ）およびマレイミド（７９４ｍｇ，８．２ｍｍｏｌ）を加え、−７８℃で５分間攪拌した後、室温で３６時間攪拌した。得られた反応液を濃縮した後、エーテルを加え、生じた沈殿を濾過して取り除いた。得られた濾液を濃縮し、得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトフィー（ヘキサン：酢酸エチル＝１：１）で精製し、２−（マレイミド）エチルカルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル［２−（ｍａｌｅｉｍｉｄｏ）ｅｔｈｙｌｃａｒｂａｍｉｃ ａｃｉｄ ｔｅｒｔ−ｂｕｔｙｌ ｅｓｔｅｒ；５３１ｍｇ，２．５３ｍｍｏｌ，収率３１％］を得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，４００ＭＨｚ）δ（ｐｐｍ）：６．７２（２Ｈ，ｓ），４．７５（１Ｈ，ｂｒ，ＮＨ），３．６６（２Ｈ，ｔ，Ｊ＝５．６Ｈｚ），３．３３（２Ｈ，ｄｔ，Ｊ＝５．１，５．６Ｈｚ），１．４０（９Ｈ，ｓ）．
（２−マレイミド）カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル（４８ｍｇ，０．２ｍｍｏｌ）をトリフルオロ酢酸とジクロロメタンの混合溶媒（３０：７０，５ｍＬ）に溶解し、０℃で２時間攪拌した後、反応液を濃縮した。得られた残渣をジクロロメタン（２０ｍｌ）に溶解し、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液（１０ｍＬ）を加え、分液した。有機層を炭酸水素カリウムを用いて乾燥し、濾過した。溶媒を減圧下で留去し、１−（２−アミノエチル）−３−ピロリン−２，５−ジオン［１−（２−ａｍｉｎｏｅｔｈｙｌ）−３−ｐｙｒｒｏｌｉｎｅ−２，５−ｄｉｏｎｅ；２８ｍｇ，０．２ｍｍｏｌ，収率１００％］を得た。
化合物７（７７．２ｍｇ，０．１ｍｍｏｌ）および１−（２−アミノエチル）−３−ピロリン−２，５−ジオン（２８．０ｍｇ，０．２ｍｍｏｌ）を水（５ｍＬ）に懸濁し、室温で２時間攪拌した。反応液を濃縮し、得られた残渣を分取用逆相薄層クロマトグラフィー（分取用逆相ＴＬＣ）（水：メタノール＝１０：１）で精製し、化合物３３（３９ｍｇ，０．０５ｍｍｏｌ，収率５０％）を得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ，３００ＭＨｚ）δ（ｐｐｍ）：６．５６（２Ｈ，ｓ），４．２２−４．０５（６Ｈ，ｍ），３．８０−３．４３（３２Ｈ，ｍ），２．９６−２．７４（４Ｈ，ｍ）．
実施例９ 化合物の合成［式（５）で表される化合物］
反応スキームを以下に示す。反応スキーム中で、Ｂｎはベンジル基を表す。
化合物３４をジャーナル・オブ・オーガニック・ケミストリー（Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．），５０，１１４８−１１５６（１９９０年）に記載の方法に従って調製した。化合物４（３００ｍｇ，０．２３１ｍｍｏｌ）のテトラヒドロフラン溶液（３ｍＬ）を０℃に冷却し、６０％水素化ナトリウム（１０．２ｍｇ，０．２５５ｍｍｏｌ）を加えた後、１０分間攪拌した。反応液に４−クロロ酪酸クロライド（０．０２８ｍｌ，０．２５５ｍｍｏｌ）を加え１０分間攪拌した後、室温にて８時間攪拌した。反応液に１ｍｏｌ／Ｌ塩酸を加えた後、酢酸エチルを用いて抽出した。有機層を飽和食塩水で洗浄した後、無水硫酸マグネシウムで乾燥し、濾過した。溶媒を減圧下で留去し、残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ヘキサン：酢酸エチル＝１：２）で精製し、化合物３４（２３１．６ｍｇ，０．１６５ｍｍｏｌ，収率７１％）を得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，４００ＭＨｚ）δ（ｐｐｍ）：８．３８（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８Ｈｚ，ＣＯＮＨ），７．３３−７．２１（４０Ｈ，ｍ），６．９９（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，ＣＯＮＨ），４．４６（１６Ｈ，ｓ），４．２５−４．０６（２Ｈ，ｍ），３．８０−３．３７（３４Ｈ，ｍ），２．２９（２Ｈ，ｔ，Ｊ＝６．８Ｈｚ），１．９７（２Ｈ，ｑｕｉｎｔ，Ｊ＝６．４Ｈｚ）．
１３Ｃ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，１００ＭＨｚ）δ（ｐｐｍ）：１７２．４（Ｃ），１６８．５（Ｃ），１６７．９（Ｃ），１３８．０（Ｃ×２），１３８．０（Ｃ×２），１３７．９（Ｃ×２），１３７．９（Ｃ×２），１２８．１，１２８．１，１２８．１，１２７．６，１２７．４，１２７．３および１２７．３（ＣＨ×４０），７８．９（ＣＨ×２），７８．５（ＣＨ×２），７３．３（ＣＨ２×２），７３．２（ＣＨ２×２），７３．１（ＣＨ２×４），７０．４（ＣＨ２×２），７０．１（ＣＨ２×２），６９．９（ＣＨ２×２），６９．８（ＣＨ２×２），６８．８（ＣＨ２×２），６８．２（ＣＨ２×２），５３．５（ＣＨ２），５２．２（ＣＨ２），４９．８（ＣＨ），４９．５（ＣＨ），４４．４（ＣＨ２），２９．２（ＣＨ２），２７．４（ＣＨ２）．
化合物３５をジャーナル・オブ・ザ・アメリカン・ケミカル・ソサエティー（Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．），１１１，２８５−２９１（１９８９年）に記載の方法に従って調製した。
化合物３４（２３１．６ｍｇ，０．１６５ｍｍｏｌ）のエタノール溶液（５０ｍＬ）に、室温でチオ酢酸（０．０２４ｍＬ，０．３３１ｍｍｏｌ）およびナトリウムエトキシド（２２．５ｍｇ，０．３３１ｍｍｏｌ）を加えた後、１５時間還流した。反応液を室温まで冷却した後、１ｍｏｌ／Ｌ塩酸を加え、酢酸エチルを用いて抽出した。有機層を５％炭酸水素ナトリウム水溶液、飽和食塩水で順次洗浄した後、無水硫酸マグネシウムを用いて乾燥し、濾過した。溶媒を減圧下で留去し、残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（酢酸エチル）で精製し、化合物３５（１７４．９ｍｇ，０．１２１ｍｍｏｌ，収率７３％）を得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，４００ＭＨｚ）δ（ｐｐｍ）：８．４８（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．６Ｈｚ，ＣＯＮＨ），７．３３−７．２０（４０Ｈ，ｍ），６．９６（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ），４．４６（１６Ｈ，ｓ），４．２６−４．０５（２Ｈ，ｍ），３．８０−３．３５（３２Ｈ，ｍ），２．８０（２Ｈ，ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ），２．２６（３Ｈ，ｓ），２．１９（２Ｈ，ｔ，Ｊ＝７．０Ｈｚ），１．８０（２Ｈ，ｑｕｉｎｔ，Ｊ＝７．０Ｈｚ）．
化合物３６をジャーナル・オブ・ザ・アメリカン・ケミカル・ソサエティー（Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．），８５，１３３７−１３４１（１９６３年）に記載の方法に従って調製した。
化合物３５（１７４．９ｍｇ，０．１２１ｍｍｏｌ）のエタノール溶液（１０ｍＬ）に、０℃で０．６ｍｏｌ／Ｌ水酸化ナトリウムエタノール溶液（５ｍＬ，３ｍｍｏｌ）を加え、室温で２４時間攪拌した。反応液に１ｍｏｌ／Ｌ塩酸を加えた後、酢酸エチルを用いて抽出した。有機層を飽和食塩水で洗浄した後、無水硫酸マグネシウムで乾燥し、濾過した。溶媒を減圧下で留去し、残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（酢酸エチル）で精製し、化合物３６（１１３．３ｍｇ，０．０７９ｍｍｏｌ，収率６７％）を得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，４００ＭＨｚ）δ（ｐｐｍ）：８．５３（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ），７．３５−７．１８（４０Ｈ，ｍ），６．９８（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ），４．４５（１６Ｈ，ｓ），４．２７−４．０５（２Ｈ，ｍ），３．８１−３．３２（３２Ｈ，ｍ），２．５５（２Ｈ，ｔ，Ｊ＝６．８Ｈｚ），２．２３（２Ｈ，ｔ，Ｊ＝７．０Ｈｚ），１．９０（２Ｈ，ｑｕｉｎｔ，Ｊ＝６．８Ｈｚ）．
１３Ｃ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，１００ＭＨｚ）δ（ｐｐｍ）：１７２．７（Ｃ），１６８．６（Ｃ），１６８．１（Ｃ），１３８．１（Ｃ×２），１３８．０（Ｃ×２），１３７．９（Ｃ×２），１３７．９（Ｃ×２），１２８．１，１２８．１，１２７．６，１２７．４，１２７．３および１２７．３（ＣＨ×４０），７８．８（ＣＨ×２），７８．５（ＣＨ×２），７３．３（ＣＨ２×２），７３．１（ＣＨ２×２），７３．１（ＣＨ２×４），７０．３（ＣＨ２×２），７０．１（ＣＨ２×２），６９．９（ＣＨ２×２），６９．８（ＣＨ２×２），６８．８（ＣＨ２×２），６８．２（ＣＨ２×２），５３．６（ＣＨ２），５２．２（ＣＨ２），４９．８（ＣＨ），４９．４（ＣＨ），３７．３（ＣＨ２），３０．５（ＣＨ２），２３．７（ＣＨ２）．
実施例１０ 本発明化合物で修飾された化学修飾ステロール類の調製
反応スキームを以下に示す。反応スキーム中で、Ｂｎはベンジル基を表す。
化合物６（２．４ｇ，１．６１ｍｍｏｌ）のテトラヒドロフラン溶液に、室温で化合物Ｅ（１．４３ｇ，３．２２ｍｍｏｌ）およびジメチルアミノピリジン（ＤＭＡＰ；０．７９ｇ，６．４４ｍｍｏｌ）を順次加えた後、同温度で２時間撹拌した。反応液を５％硫酸水素カリウム水溶液に注いだ後、酢酸エチルを用いて抽出した。有機層を飽和炭酸水素ナトリウム水溶液、飽和食塩水で順次洗浄した後、無水硫酸マグネシウムを用いて乾燥し、濾過した。溶媒を減圧下で留去し、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（クロロホルム：メタノール＝２０：１）で精製し、化合物３７（２．４５ｇ，１．３３ｍｍｏｌ，収率８３％）を得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，４００ＭＨｚ）δ（ｐｐｍ）：８．２８−８．２２（１Ｈ，ｍ，ＣＯＮＨ），８．３５−８．１９（ｍ，４０Ｈ），７．１０−７．００（１Ｈ，ｍ，ＣＯＮＨ），６．１７−６．０９（１Ｈ，ｍ，ＣＯＮＨ），４．５１−４．４３（１６Ｈ，ｍ），３．８０−３．４０（３６Ｈ，ｍ），３．２６−３．２０（２Ｈ，ｍ），３．１９−３．０８（１Ｈ，ｍ），２．４８−２．４１（２Ｈ，ｍ），２．３５−２．２９（２Ｈ，ｍ），２．００−０．８０（３３Ｈ，ｍ），０．９０（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．４Ｈｚ），０．８６（６Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．４Ｈｚ），０．７７（３Ｈ，ｓ），０．６３（３Ｈ，ｓ）．
１３Ｃ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，７５ＭＨｚ）δ（ｐｐｍ）：１７３．１（Ｃ），１７１．５（Ｃ），１６８．１（Ｃ），１３８．２（Ｃ），１２８．３，１２７．６および１２７．５（ＣＨ×４０），７８．９（ＣＨ×４）７０．４（ＣＨ２×８），７０．０（ＣＨ２×８），６８．４（ＣＨ２×４），６６．４（ＣＨ２），５６．５（ＣＨ），５６．３（ＣＨ），５４．４（ＣＨ），５２．３（ＣＨ２×２），４４．８（ＣＨ×２），４２．６（Ｃ），４０．０（ＣＨ２），３９．５（ＣＨ２），３８．０（ＣＨ２），３７．０（ＣＨ２），３６．２（ＣＨ２），３５．８（ＣＨ），３５．８（Ｃ），３５．５（ＣＨ），３４．８（ＣＨ２），３２．１（ＣＨ２），３１．１（ＣＨ２），３１．０（ＣＨ２），２９．６（ＣＨ２），２８．９（ＣＨ２），２８．３（ＣＨ２），２８．３（ＣＨ２），２８．０（ＣＨ），２４．３（ＣＨ２），２３．９（ＣＨ２），２２．９（ＣＨ３），２２．６（ＣＨ３），２１．３（ＣＨ２），１８．７（ＣＨ３），１２．４（ＣＨ３），１２．１（ＣＨ３）．
化合物３７（２．４５ｇ，１．３３ｍｍｏｌ）のエタノール溶液（１５ｍＬ）に、水素気流下、室温でＰｄ（ＯＨ）２／Ｃ（Ｐｄ：２０重量％含有，２６０ｍｇ）を加えた後、同温度で３時間撹拌した。反応液をセライト５３５を用いて濾過した後、溶媒を減圧下で留去し、化合物３８（１．５２ｇ，１．３３ｍｍｏｌ，収率１００％）を得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ，４００ＭＨｚ）δ（ｐｐｍ）：４．３３−４．１２（４Ｈ，ｍ），４．０８−３．９９（２Ｈ，ｍ），３．９３−３．３６（３２Ｈ，ｍ），３．２７−３．１７（１Ｈ，ｍ），２．６６−２．４３（４Ｈ，ｍ），２．０７−０．８５（３３Ｈ，ｍ），０．９３（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．８Ｈｚ），０．８８（６Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．８Ｈｚ），０．８２（３Ｈ，ｓ），０．６９（３Ｈ，ｓ）．
参考例１ Ｇ−ＣＳＦ誘導体の調製
ヒトＧ−ＣＳＦ（ｈＧ−ＣＳＦ）の１番目のスレオニンをアラニンに、３番目のロイシンをスレオニンに、４番目のグリシンをチロシンに、５番目のプロリンをアルギニンに、１７番目のシステインをセリンにそれぞれ置換した配列番号１または配列番号２に示したアミノ酸配列を有するｈＧ−ＣＳＦ誘導体を、特公平０７−０９６５５８に記載の方法により取得した。なお、配列番号１は、ＭｅｔをＮ末端にシグナルペプチドのアミノ酸として含んでいる。
前記のｈＧ−ＣＳＦ誘導体をコードするＤＮＡを含むプラスミドｐＣｆＢＤ２８を保有する大腸菌Ｗ３１１０ｓｔｒＡ株（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａｃｏｌｉ ＥＣｆＢＤ２８ ＦＥＲＭ ＢＰ−１４７９）をＬＧ培地（バクトトリプトン１０ｇ、酵母エキス５ｇ、塩化ナトリウム５ｇ、グルコース１ｇを水１Ｌに溶かし、ＮａＯＨでｐＨを７．０とする）で３７℃、１８時間培養し、この培養液５ｍＬを２５μｇ／ｍＬのトリプトファンと５０μｇ／ｍＬのアンピシリンを含むＭＣＧ培地（Ｎａ２ＨＰＯ４ ０．６％、ＫＨ２ＰＯ４ ０．３％、塩化ナトリウム０．５％、カザミノ酸０．５％、ＭｇＳＯ４ １ｍｍｏｌ／Ｌ、ビタミンＢ１４μｇ／ｍＬ、ｐＨ７．２）１００ｍＬに摂取し、３０℃で４〜８時間培養した後、トリプトファンの誘導物質である３β−インドールアクリル酸（３β−ｉｎｄｏｌｅａｃｒｙｌｉｃ ａｃｉｄ）を１０μｇ／ｍＬ加え、さらに２〜１２時間培養を続けた。培養液を８，０００ｒｐｍ、１０分間遠心して集菌し、３０ｍｍｏｌ／Ｌ塩化ナトリウム、３０ｍｍｏｌ／Ｌトリス・塩酸緩衝液（ｐＨ７．５）で洗浄した。
洗浄菌体を前記緩衝液３０ｍＬに懸濁し、０℃で１０分間超音波破砕（ＢＲＡＮＳＯＮ ＳＯＮＩＣ ＰＯＷＥＲ ＣＯＭＰＡＮＹ社製、ＳＯＮＩＦＩＥＲ ＣＥＬＬ ＤＩＳＲＵＰＴＯＲ ２００、ＯＵＴＰＵＴ ＣＯＮＴＲＯＬ ２）した。該超音波破砕物を９，０００ｒｐｍで３０分間遠心分離して菌体残渣を得た。
菌体残渣からマーストンらの方法［バイオ／テクノロジー（ＢＩＯ／ＴＥＣＨＮＯＬＯＧＹ），２，８００（１９８４年）］に準じ、ｈＧ−ＣＳＦ誘導体を抽出・精製・可溶化・再生した。
参考例２ ポリエチレングリコール修飾Ｇ−ＣＳＦ誘導体の調製
５０ｍｍｏｌ／Ｌりん酸緩衝液（ｐＨ７．６）で４．０ｍｇ／ｍＬに調製した参考例１のＧ−ＣＳＦ誘導体９９５ｍＬに１９．１ｇ（蛋白質１モル当たり４．５モル）の活性化ＰＥＧ誘導体（Ｍ−ＳＰＡ−２０，０００、Ｓｈｅａｒｗａｔｅｒ Ｐｏｌｙｍｅｒｓ，Ｉｎｃ．社製、平均分子量約２０，０００）を添加し、４℃で一昼夜反応させた。次いで、２０ｍｍｏｌ／Ｌ酢酸緩衝液（ｐＨ４．５）で平衡化したＳＰ Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ ＦＦ カラム２０００ｍＬ（Ａｍｅｒｓｈａｍ−Ｐｈａｒｍａｃｉａ Ｂｉｏｔｅｃｈ社製）に通塔し精製した。
目的画分４０００ｍＬを濃縮し、１１．２ｍｇ／ｍＬの目的物を含む溶液３２０ｍＬを得た（収率９０．４％）。
＜電気泳動＞
２−メルカプトエタノール非存在下、４−２０％グラジエントゲル（ＡＴＴＯ社製ＰＡＧＥＬ ＳＰＧ−５２０Ｌ）でＳＤＳ−ＰＡＧＥを行い、１〜３分子結合体のバンドを確認した。
＜ゲル濾過ＨＰＬＣ分析＞
ＴＳＫ ｇｅｌ Ｇ−４０００ＳＷＸＬカラム（７．８×３００ｍｍ×２本連結，東ソー社製）２本を用い、以下の方法で分析した。
保持時間：３８．２分（１分子結合体）
３４．４分（２分子結合体）
３２．２分（３分子結合体）
移動相：１５０ｍｍｏｌ／Ｌ塩化ナトリウム、２０ｍｍｏｌ／Ｌ酢酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ４．５）流量：０．５ｍＬ／分
検出：ＵＶ２８０ｎｍ
参考例３ ３−（３β，５α−コレスタンオキシ）プロピル−１−アミン［化合物Ｅ；３−（３β，５α−ｃｈｏｌｅｓｔａｎｏｘｙ）ｐｒｏｐｙｌ−１−ａｍｉｎｅ］の合成
反応スキームを以下に示す。反応スキーム中で、Ｔｓはトシル基を表す。
化合物Ａは、ジャーナル・オブ・ザ・ケミカル・ソサエティ，パーキン・トランスアクション１（Ｊ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．，Ｐｅｒｋｉｎ Ｔｒａｎｓ．１），１，１５８−１６０（１９７９年）に記載の方法により合成した。
化合物Ｂをジャーナル・オブ・オーガニック・ケミストリー（Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．），５８，６７５６−６７６５（１９９３年）に記載の方法に従って調製した。化合物Ａ（５５６ｍｇ，１．２５ｍｍｏｌ）のジクロロメタン溶液（４ｍＬ）を−７８℃に冷却し、ＢＨ３・Ｓ（ＣＨ３）２（０．４７ｍＬ，５ｍｍｏｌ）およびトリメチルシリルトリフラート（ＴＭＳＯＴｆ；０．９ｍＬ，５ｍｍｏｌ）を加えた後、同温度で１５分間攪拌した。反応液を炭酸水素ナトリウム水溶液中に注いだ後、ジクロロメタンを用いて抽出した。有機層を、無水硫酸マグネシウムを用いて乾燥し、濾過した。溶媒を減圧下で留去し、残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ヘキサン：酢酸エチル＝３：１）で精製し、化合物Ｂ［３−（３β，５α−ｃｈｏｌｅｓｔａｎｏｘｙ）ｐｒｏｐａｎ−１−ｏｌ；２７９ｍｇ，０．６３ｍｍｏｌ，収率５０％］を得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，４００ＭＨｚ）δ（ｐｐｍ）：３．７８（２Ｈ，ｔ，Ｊ＝６．４Ｈｚ），３．６７（２Ｈ，ｔ，Ｊ＝６．４Ｈｚ），３．２３（１Ｈ，ｄｄｄｄ，Ｊ＝６．４，６．４，１４．４，１４．４Ｈｚ），２．６７（１Ｈ，ｂｒｓ，ＯＨ），２．００−０．８１（３３Ｈ，ｍ），０．９０（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．４Ｈｚ），０．８６（６Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．８Ｈｚ），０．７９（３Ｈ，ｓ），０．６４（３Ｈ，ｓ）．
１３Ｃ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，７５ＭＨｚ）δ（ｐｐｍ）：７９．７（ＣＨ），６８．３（ＣＨ２），６３．３（ＣＨ２），５７．１（ＣＨ），５６．９（ＣＨ），５５．０（ＣＨ），４５．５（ＣＨ），４３．２（Ｃ），４０．７（ＣＨ２），４０．２（ＣＨ２），３７．６（ＣＨ２），３６．８（ＣＨ２），３６．４（ＣＨ），３６．４（Ｃ），３６．１（ＣＨ），３５．４（ＣＨ２），３２．８（ＣＨ２），３２．８（ＣＨ２），２９．５（ＣＨ２），２８．９（ＣＨ２），２８．９（ＣＨ２），２８．７（ＣＨ），２４．９（ＣＨ２），２４．５（ＣＨ２），２３．５（ＣＨ３），２３．２（ＣＨ３），２１．９（ＣＨ２），１９．３（ＣＨ３），１３．０（ＣＨ３），１２．７（ＣＨ３）．
化合物Ｂ（５．１７ｇ，１１．５８ｍｍｏｌ）のジクロロメタン溶液（５０ｍＬ）に、室温でトルエンスルホニルクロライド（４．４２ｇ，２３．１６ｍｍｏｌ）およびトリエチルアミン（７．８ｍＬ，４６．３２ｍｍｏｌ）を加えた後、同温度で２４時間攪拌した。反応液を５％硫酸水素カリウム水溶液に注いだ後、ジクロロメタンを用いて抽出した。有機層を飽和炭酸水素ナトリウム水溶液、飽和食塩水で順次洗浄した後、無水硫酸マグネシウムを用いて乾燥し、濾過した。溶媒を減圧下で留去し、化合物Ｃ［３−（３β，５α−ｃｈｏｌｅｓｔａｎｏｘｙ）ｐｒｏｐｙｌ ４−ｍｅｔｈｙｌｂｅｎｚｅｎｅｓｕｌｆｏｎａｔｅ；６．９５ｇ，１１．５８ｍｍｏｌ，収率１００％］を得た。
化合物Ｃ（６．９５ｇ，１１．５８ｍｍｏｌ）のＤＭＦ溶液（４０ｍＬ）に、アジ化ナトリウム（２．８６ｇ，４４ｍｍｏｌ）を室温で加えた後、１２０℃で３時間攪拌した。反応液を室温まで冷却した後、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液に注ぎ、ジエチルエーテルを用いて抽出した。有機層を飽和食塩水で洗浄した後、硫酸マグネシウムを用いて乾燥し、濾過した。溶媒を減圧下で留去し、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（ヘキサン：酢酸エチル＝３：１）で精製し、化合物Ｄ［３−（３β，５α−ｃｈｏｌｅｓｔａｎｏｘｙ）ｐｒｏｐｙｌ−１−ａｚｉｄｅ；４．６７ｇ，９．９１ｍｍｏｌ，収率８６％］を得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，４００ＭＨｚ）δ（ｐｐｍ）：３．５２−３．４３（２Ｈ，ｍ），３．３６−３．２９（２Ｈ，ｔ，Ｊ＝６．８Ｈｚ），３．１４（１Ｈ，ｄｄｄｄ，Ｊ＝４．４，４．４，１０．８，１０．８Ｈｚ），２．００−０．７５（３３Ｈ，ｍ），０．９０（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．０Ｈｚ），０．８６（６Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．８Ｈｚ），０．７２（３Ｈ，ｓ），０．５８（３Ｈ，ｓ）．
１３Ｃ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，７５ＭＨｚ）δ（ｐｐｍ）：７８．８（ＣＨ），６４．４（ＣＨ２），５６．５（ＣＨ），５６．３（ＣＨ），５４．４（ＣＨ），４８．６（ＣＨ２），４４．８（ＣＨ），４２．６（Ｃ），４０．０（ＣＨ２），３９．５（ＣＨ２），３７．０（ＣＨ２），３６．２（ＣＨ２），３５．８（ＣＨ），３５．８（Ｃ），３５．５（ＣＨ），３４．８（ＣＨ２），３２．１（ＣＨ２），２９．６（ＣＨ２），２８．８（ＣＨ２），２８．２（ＣＨ２），２８．２（ＣＨ２），２８．０（ＣＨ），２４．２（ＣＨ２），２３．８（ＣＨ２），２２．８（ＣＨ３），２２．６（ＣＨ３），２１．２（ＣＨ３），１８．７（ＣＨ３），１２．３（ＣＨ３），１２．１（ＣＨ３）．
化合物Ｄ（１．９７ｇ，４．１８ｍｍｏｌ）のエタノール溶液（２５ｍＬ）に、水素気流下、室温でＰｄ（ＯＨ）２／Ｃ（Ｐｄ：２０重量％含有，２３０ｍｇ）を加えた後、同温度で１２時間攪拌した。反応液を、セライト５３５を用いて濾過した後、溶媒を減圧下で留去し、化合物Ｅ［３−（３β，５α−ｃｈｏｌｅｓｔａｎｏｘｙ）ｐｒｏｐｙｌ−１−ａｍｉｎｅ；１．８６ｇ，４．１８ｍｍｏｌ，収率１００％］を得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，４００ＭＨｚ）δ（ｐｐｍ）：３．６０−３．４９（２Ｈ，ｍ），３．２０（１Ｈ，ｄｄｄｄ，Ｊ＝４．４，４．４，１０．４，１０．４Ｈｚ），２．８１（２Ｈ，ｔ，Ｊ＝６．４Ｈｚ），２．０７−０．８１（３３Ｈ，ｍ），０．９０（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．０Ｈｚ），０．８６（６Ｈ，ｄ，Ｊ＝５．６Ｈｚ），０．７９（３Ｈ，ｓ），０．６４（３Ｈ，ｓ）．
【産業上の利用可能性】
本発明で開示された化合物は生理活性ポリペプチドもしくはその誘導体または低分子化合物の化学修飾に有用である。さらに該化合物で修飾された化学修飾ポリペプチド等は安定性または水溶性が向上しているだけでなく、従来の化学修飾ポリペプチド等に比較して著しく生理活性を維持した状態で製造し得る。本発明の化学修飾ポリペプチド等は、生体内に投与された際に長時間有効にその生理活性を示し、該生理活性に関連した症状の改善剤または治療剤として有用である。また、当該化合物で修飾された化学修飾低分子化合物は、安定性または水溶性が向上しており、低分子医薬品、低分子試薬の可溶化剤等として有用である。
「配列フリーテキスト」
配列番号１−人工配列の説明：ｈＧ−ＣＳＦの５アミノ酸置換ペプチド
配列番号２−人工配列の説明：ｈＧ−ＣＳＦの５アミノ酸置換ペプチド
【配列表】
【図１】
【技術分野】
本発明は、生理活性ポリペプチドもしくはその誘導体または低分子化合物の化学修飾に有用な化合物に関する。また、本発明は、生理活性ポリペプチドもしくはその誘導体または低分子化合物が少なくとも１個の該化合物で修飾された化学修飾ポリペプチドまたは化学修飾低分子化合物、および該化学修飾ポリペプチドまたは該化学修飾低分子化合物を含有する医薬に関する。さらに、本発明は、該化合物で生理活性ポリペプチドもしくはその誘導体または低分子化合物を化学修飾することを特徴とする、該生理活性ポリペプチドもしくは該その誘導体または該低分子化合物の安定性または水溶性を向上させる方法に関する。
【背景技術】
生理活性を有するポリペプチドは特定の疾病に対する治療剤として有用であるが、血中に投与されると安定性が悪く、十分な薬理効果が期待できない場合が多い。例えば、血中に存在する加水分解酵素等によって分解され、生理活性を失うことがある。さらに、外因性の生理活性ポリペプチドにおいてもその生理活性が疾患の治療に有効なことがあるが、そのような外因性のポリペプチドや遺伝子組換えによって製造されたポリペプチド等は内因性のポリペプチドと構造が異なるために、それらが血中に投与された場合には免疫反応を誘発し、アナフィラキシーショック等の重篤な副作用を起こす場合もあることが知られている。さらに、生理活性ポリペプチドの中にはそれが治療剤として用いられる際に、溶解性が悪い等の物性が問題になるものも多い。
生理活性ポリペプチドを治療剤として用いる際のこれらの問題を解決する方法の一つとして、ポリエチレングリコール等の不活性型ポリマー鎖をポリペプチドに化学的に結合させる方法が第一に知られている。
例えば、顆粒球コロニー刺激因子（Ｇ−ＣＳＦ）のポリエチレングリコール修飾が知られている［「ジャーナル・オブ・バイオケミストリー（Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｂｉｏｃｈｅｍｓｔｒｙ）」，１９９４年，第１１５巻，ｐ．８１４−８１９］。その他にもアスパラギナーゼ、グルタミナーゼ、アデノシンデアミナーゼ、ウリカーゼ等のポリエチレングリコール修飾の例が報告されている［ティム・ジェイ・ハーン（Ｔｉｍ Ｊ．Ａｈｅｒｎ）、マーク・シー・マンニング（Ｍａｒｋ Ｃ．Ｍａｎｎｉｎｇ）著，「ファーマシューティカル・バイオテクノロジー第３巻，スタビリティ・オブ・プロテイン・ファーマシューティカルズ・パートＢ，イン・ビボ・パスウェイズ・オブ・デグラデーション・アンド・ストラテジーズ・フォー・プロテイン・スタビライゼーション（Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｖｏｌｕｍｅ ３，Ｓｔａｂｉｌｉｔｙ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ，Ｐａｒｔ Ｂ，Ｉｎ Ｖｉｖｏ Ｐａｔｈｗａｙｓ ｏｆ Ｄｅｇｒａｄａｔｉｏｎ ａｎｄ Ｓｔｒａｔｅｇｉｅｓ ｆｏｒ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｓｔａｂｉｌｉｚａｔｉｏｎ）」，（米国），プレナム・パブリッシング（Ｐｌｅｎｕｍ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏ．），１９９２年１１月，ｐ．２３５−２６３］。生理活性ポリペプチドをポリアルキレングリコールで修飾することによって得られる効果としては、血中持続性が向上する、抗原性・免疫原性が低下する、血中安定性が向上する等の他に、熱安定性が高まること［生物物理，１９９８年，第３８巻，ｐ．２０８］、有機溶媒に可溶となること［バイオケミカル・アンド・バイオフィジカル・リサーチ・ミュニケーションズ（Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ ａｎｄ Ｂｉｏｐｈｙｓｉｃａｌ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｃｏｍｕｎｉｃａｔｉｏｎｓ），１９８４年，第１２２巻，ｐ．８４５］等も知られている。
しかしながら、生理活性ポリペプチドをポリアルキレングリコールで修飾する際には、該ポリペプチドの生理活性を損なわずに血中安定性を向上させることは困難な場合が多い。一般的に、ポリアルキレングリコールの分子量が大きいほど、または修飾率が高いほど該ポリペプチドの血中持続性は向上することが知られているが［ジャーナル・オブ・バイオケミストリー（Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｂｉｏｃｈｅｍｓｔｒｙ），１９８８年，第２６３巻，ｐ．１５０６４］、修飾率を高くすると該ポリペプチドの生理活性が損なわれることがある。これは、生理活性に必要な特定のアミノ基やメルカプト基等のアミノ酸残基が化学修飾剤によって修飾されること、生理活性ポリペプチドに結合したポリアルキレングリコールが生理活性部位の相互作用を妨害すること等が原因と考えられている。修飾率に応じて生理活性が低下する例としては、インターロイキン−１５が知られている［ジャーナル・オブ・バイオケミストリー（Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｂｉｏｃｈｅｍｓｔｒｙ），１９９７年，第２７２巻，ｐ．２３１２］。このように、化学修飾によって数多くのメリットが得られるが、一般的に化学修飾によってポリペプチドの生理活性が損なわれてしまうことから、修飾を行ってもポリペプチドの生理活性が損なわれない化学修飾剤が所望されている。
一方、多くの低分子化合物は水溶性が低く、生理活性を発揮するレベルの濃度の水溶液を調製することが困難な場合がある。また、一旦水溶液を調製できたとしても、保存中に沈殿を形成し、溶液濃度の実質的な低下を来たす場合もある。例えば、多くの抗癌剤や抗生物質、抗ウイルス剤等の化合物がこれに該当する。このため、生理化学的な実験を行ったり、治療用の薬剤を生体に投与したりする場合、目的とする有効濃度が得られないばかりでなく、目的の薬理効果を達成できない可能性がある。そこで、ポリマーや界面活性物質を混合または化学的に結合させて難水溶性低分子化合物を可溶化させて利用する試みが行われている。例えば、ポリエチレンオキサイドとアスパラギン酸の共重合体をアンホテリシンＢ（Ａｍｐｈｏｔｅｒｉｃｉｎ Ｂ）の可溶化に利用した例が知られている［ジャーナル・オブ・コントロールド・リリース（Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ Ｒｅｌｅａｓｅ），１９９８年，第５３巻，ｐ．１３１−１３６］。また、シクロデキストリンをアンホテリシンＢの可溶化に利用した例も知られている［バイオポリマーズ（Ｂｉｏｐｏｌｙｍｅｒｓ），１９８９年，第２８巻，ｐ．１５８５−１５９６］。また、コレステロール等の低分子化合物の可溶化のために、胆汁酸ミセル等も利用されている。抗癌剤の溶解性を向上させるためにポリエチレングリコール等も利用されている［「キャンサー・リサーチ（Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ）」，１９９０年，第５０巻，ｐ．１６９３−１７００］。以上のように、生理活性を損なわずに低分子化合物を可溶化するための手法および試薬が求められている。この際、上記のように可溶化剤を添加する方法では、再現性の問題や可溶化剤自身の影響を考慮する必要が生じる。そこで、低分子化合物自身を化学修飾し、溶解性や安定性を向上できる試薬および方法が望まれている。
一方、グリセロールを構造中に有するデンドリマーが知られている［「マクロモレキュールズ（Ｍａｃｒｏｍｏｌｅｃｕｌｅｓ）」，２００１年，第３４巻，ｐ．７６４８−７６５５；「ポリマー・プリプリンツ（Ｐｏｌｙｍｅｒ Ｐｒｅｐｒｉｎｔｓ）」，２００１年，第４２巻，ｐ．１５５−１５６；「ポリマー・プリプリンツ（Ｐｏｌｙｍｅｒ Ｐｒｅｐｒｉｎｔｓ）」，２００１年，第４２巻，ｐ．１５７−１５８；「ジャーナル・オブ・アメリカン・ケミカル・ソサエティ（Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｓｏｃｉｅｔｙ）」，２００１年，第１２３巻，ｐ．２９０５−２９０６；「ジャーナル・オブ・アメリカン・ケミカル・ソサエティ（Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｓｏｃｉｅｔｙ）」，２０００年，第１２２巻，ｐ．１０３３５−１０３４４；「チャイニーズ・ジャーナル・オブ・ケミストリー（Ｃｈｉｎｅｓｅ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ）」，１９９８年，第１６巻，ｐ．２８−３３］。
【発明の開示】
従来の化学修飾剤を用いて調製された化学修飾生理活性ポリペプチドでは生理活性が著しく低下する場合があり、生理活性が損なわれない化学修飾法が望まれている。また、多くの難水溶性低分子化合物の水溶性を向上させる方法が望まれている。
本発明は、以下の（１）〜（３０）に関する。
（１） 式（１）
（式中、Ｒは反応性を有する基または反応性を有する基に変換可能な基を含有する残基を表し、ｎは３以上の整数を表し、Ｘはｎ個の
を有することが可能な残基を表し、Ｒ１は水素原子または水素原子に変換可能な基を表し、６個以上存在するＲ１はそれぞれ同一でも異なっていてもよい）で表される化合物。
（２） 全てのＲ１が水素原子である、前記（１）記載の化合物。
（３） 全てのＲ１がベンジルである、前記（１）記載の化合物。
（４） ｎが２ｍ（式中、ｍは２以上の整数を表す）である、前記（１）〜（３）のいずれか１項に記載の化合物。
（５） Ｘが１以上の直列的分岐構造を有する、前記（１）〜（４）のいずれか１項に記載の化合物。
（６） Ｘが１個以上（ｎ−１）個以下の
または
（式中、Ｙ１、Ｙ２およびＹ３はそれぞれ独立して、単結合、あるいは置換もしくは非置換のアルキレン、カルボニル、置換もしくは非置換のイミノ、Ｏ、Ｓ、スルホニルおよびスルフィニルからなる群より選ばれる一つまたは同一もしくは異なった複数の任意の組み合わせを表し、Ｙ１、Ｙ２およびＹ３が複数存在するとき、これらはそれぞれ同一でも異なっていてもよい）で表される構造を含有する、前記（１）〜（５）のいずれか１項に記載の化合物。
（７） Ｘが１個以上（ｎ−１）個以下の
で表される構造を含有する、前記（１）〜（６）のいずれか１項に記載の化合物。
（８） Ｘが１個以上（ｎ−１）個以下の
で表される構造を含有する、前記（１）〜（７）のいずれか１項に記載の化合物。
（９） Ｘが１個以上（ｎ−１）個以下の
で表される構造を含有する、前記（１）〜（８）のいずれか１項に記載の化合物。
（１０） Ｘが１個以上（ｎ−１）個以下の
で表される構造を含有する、前記（１）〜（９）のいずれか１項に記載の化合物。
（１１） 反応性を有する基または反応性を有する基に変換可能な基を含有する残基が、生理活性ポリペプチドまたはその誘導体中のアミノ酸側鎖、Ｎ末端アミノ基もしくはＣ末端カルボキシル基、あるいはポリペプチドと結合した糖鎖との反応性を有する基または反応性を有する基に変換可能な基を含有する残基である前記（１）〜（１０）のいずれか１項に記載の化合物。
（１２） 反応性を有する基または反応性を有する基に変換可能な基を含有する残基が、カルボン酸活性エステル残基、カーボネート、マレイミド、メルカプト、ホルミル、トレシル、イソシアナート、酸無水物残基、酸ハロゲン化物残基、ビニルスルホニル、ヒドラジド、アミノ、水酸基、ハロゲン、カルボキシ、ビニルおよびホスホノからなる群より選ばれる基である前記（１）〜（１１）のいずれかに記載の化合物。
（１３） 前記（１）〜（１２）のいずれか１項に記載の化合物を少なくとも二つ含有する混合物。
（１４） 式（２）
（式中、Ｒ１Ａは水素原子またはベンジルを表す）で表される化合物。
（１５） 式（３）
（式中、Ｒ１Ａは水素原子またはベンジルを表す）で表される化合物。
（１６） 式（４）
（式中、Ｒ１Ａは水素原子またはベンジルを表す）で表される化合物。
（１７） 式（５）
（式中、Ｒ１Ａは水素原子またはベンジルを表す）で表される化合物。
（１８） 生理活性ポリペプチドまたはその誘導体が少なくとも１個の前記（１）〜（１２）および（１４）〜（１７）のいずれか１項に記載の化合物で直接もしくはスペーサーを介して修飾された化学修飾ポリペプチド。
（１９） 生理活性ポリペプチドまたはその誘導体が、酵素、サイトカイン、ホルモン、毒素、抗体およびそれらの誘導体からなる群より選ばれる前記（１８）記載の化学修飾ポリペプチド。
（２０） 生理活性ポリペプチドまたはその誘導体が、アスパラギナーゼ（Ａｓｐａｒａｇｉｎａｓｅ）、グルタミナーゼ（Ｇｌｕｔａｍｉｎａｓｅ）、アルギナーゼ（Ａｒｇｉｎａｓｅ）、ウリカーゼ（Ｕｒｉｃａｓｅ）、スーパーオキサイドディスムターゼ（Ｓｕｐｅｒｏｘｉｄｅ Ｄｉｓｕｍｕｔａｓｅ）、ラクトフェリン（Ｌａｃｔｏｆｅｒｒｉｎ）、ストレプトキナーゼ（Ｓｔｒｅｐｔｏｋｉｎａｓｅ）、プラスミン（Ｐｌａｓｍｉｎ）、アデノシンデアミナーゼ（Ａｄｅｎｏｓｉｎｅ Ｄｅａｍｉｎａｓｅ）、インターロイキン−１〜２４（Ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ−１〜２４）、インターフェロン−α（Ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ−α）、インターフェロン−β（Ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ−β）、インターフェロン−γ（Ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ−γ）、インターフェロン−ω（Ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ−ω）、インターフェロン−τ（Ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ−τ）、顆粒球コロニー刺激因子（Ｇｒａｎｕｌｏｃｙｔｅ−Ｃｏｌｏｎｙ Ｓｔｉｍｕｌａｔｉｎｇ Ｆａｃｔｏｒ）、エリスロポエチン（Ｅｒｙｔｈｒｏｐｏｉｅｔｉｎ）、腫瘍壊死因子（Ｔｕｍｏｒ Ｎｅｃｒｏｓｉｓ Ｆａｃｔｏｒ）、血小板増加因子（Ｔｈｒｏｍｂｏｐｏｉｅｔｉｎ）、クローソ（Ｋｌｏｔｈｏ）蛋白質、レプチン（Ｌｅｐｔｉｎ）、繊維芽細胞増殖因子１〜１９（Ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔ Ｇｒｏｗｔｈ Ｆａｃｔｏｒ−１〜１９）、ミッドカイン（Ｍｉｄｋｉｎｅ）、カルシトニン（Ｃａｌｃｉｔｏｎｉｎ）、表皮成長因子（Ｅｐｉｄｅｒｍａｌ Ｇｒｏｗｔｈ Ｆａｃｔｏｒ）、グルカゴン（Ｇｌｕｃａｇｏｎ）、インスリン（Ｉｎｓｕｌｉｎ）、インスリン様成長因子１（Ｉｎｓｕｌｉｎ−ｌｉｋｅ Ｇｒｏｗｔｈ Ｆａｃｔｏｒ−１）、オステオジェニックプロテイン１（Ｏｓｔｅｏｇｅｎｉｃ Ｐｒｏｔｅｉｎ−１）、幹細胞増殖因子（Ｓｔｅｍ Ｃｅｌｌ Ｇｒｏｗｔｈ Ｆａｃｔｏｒ）、アミリン（Ａｍｙｌｉｎ）、パラサイロイドホルモン（Ｐａｒａｔｈｙｒｏｉｄ Ｈｏｒｍｏｎｅ）、プラスミノーゲン活性化因子類（Ｐｌａｓｍｉｎｏｇｅｎ Ａｃｔｉｖａｔｏｒ）、血管内皮細胞成長因子（Ｖａｓｃｕｌａｒ Ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ Ｃｅｌｌ Ｇｒｏｗｔｈ Ｆａｃｔｏｒ）、形質転換成長因子類（Ｔｒａｎｓｆｏｒｍｉｎｇ Ｇｒｏｗｔｈ Ｆａｃｔｏｒ）、グルカゴン様ペプチド類（Ｇｌｕｃａｇｏｎ−ｌｉｋｅ Ｐｅｐｔｉｄｅ）、成長ホルモン（Ｇｒｏｗｔｈ Ｈｏｒｍｏｎｅ）、ナトリウム利尿ペプチド類（Ｎａｔｒｉｕｒｅｔｉｃ Ｐｅｐｔｉｄｅ）、プラスミノーゲン（Ｐｌａｓｍｉｎｏｇｅｎ）、アンジオポエチン（Ａｎｇｉｏｐｏｉｅｔｉｎ）、アンジオスタチン（Ａｎｇｉｏｓｔａｔｉｎ）、エンドスタチン（Ｅｎｄｏｓｔａｔｉｎ）、ネオカルチノスタチン（Ｎｅｏｃａｒｚｉｎｏｓｔａｔｉｎ）、肝細胞成長因子（Ｈｅｐａｔｏｃｙｔｅ Ｃｅｌｌ Ｇｒｏｗｔｈ Ｆａｃｔｏｒ）、リシン（Ｒｉｃｉｎ）、シュードモナス外毒素（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ Ｅｘｏｔｏｘｉｎ）、ジフテリア毒素（Ｄｉｐｈｔｈｅｒｉａ Ｔｏｘｉｎ）およびそれらの溶解性レセプターならびにそれらの誘導体からなる群より選ばれる前記（１８）記載の化学修飾ポリペプチド。
（２１） 生理活性ポリペプチドの誘導体が、該ポリペプチドのアミノ酸欠失体、アミノ酸置換体、アミノ酸挿入体、アミノ酸付加体、糖鎖欠失体および糖鎖付加体からなる群より選ばれる前記（１８）〜（２０）のいずれか１項に記載の化学修飾ポリペプチド。
（２２） 前記（１８）〜（２１）のいずれか１項に記載の化学修飾ポリペプチドを含有する医薬。
（２３） 前記（１）〜（１２）および（１４）〜（１７）のいずれか１項に記載の化合物で生理活性ポリペプチドまたはその誘導体を化学修飾することを特徴とする、該生理活性ポリペプチドまたは該その誘導体の安定性または水溶性を向上させる方法。
（２４） 生理活性ポリペプチドまたはその誘導体が、酵素、サイトカイン、ホルモン、毒素、抗体およびそれらの誘導体からなる群より選ばれる前記（２３）記載の方法。
（２５） 生理活性ポリペプチドまたはその誘導体が、アスパラギナーゼ（Ａｓｐａｒａｇｉｎａｓｅ）、グルタミナーゼ（Ｇｌｕｔａｍｉｎａｓｅ）、アルギナーゼ（Ａｒｇｉｎａｓｅ）、ウリカーゼ（Ｕｒｉｃａｓｅ）、スーパーオキサイドディスムターゼ（Ｓｕｐｅｒｏｘｉｄｅ Ｄｉｓｕｍｕｔａｓｅ）、ラクトフェリン（Ｌａｃｔｏｆｅｒｒｉｎ）、ストレプトキナーゼ（Ｓｔｒｅｐｔｏｋｉｎａｓｅ）、プラスミン（Ｐｌａｓｍｉｎ）、アデノシンデアミナーゼ（Ａｄｅｎｏｓｉｎｅ Ｄｅａｍｉｎａｓｅ）、インターロイキン−１〜２４（Ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ−１〜２４）、インターフェロン−α（Ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ−α）、インターフェロン−β（Ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ−β）、インターフェロン−γ（Ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ−γ）、インターフェロン−ω（Ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ−ω）、インターフェロン−τ（Ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ−τ）、顆粒球コロニー刺激因子（Ｇｒａｎｕｌｏｃｙｔｅ−Ｃｏｌｏｎｙ Ｓｔｉｍｕｌａｔｉｎｇ Ｆａｃｔｏｒ）、エリスロポエチン（Ｅｒｙｔｈｒｏｐｏｉｅｔｉｎ）、腫瘍壊死因子（Ｔｕｍｏｒ Ｎｅｃｒｏｓｉｓ Ｆａｃｔｏｒ）、血小板増加因子（Ｔｈｒｏｍｂｏｐｏｉｅｔｉｎ）、クローソ（Ｋｌｏｔｈｏ）蛋白質、レプチン（Ｌｅｐｔｉｎ）、繊維芽細胞増殖因子１〜１９（Ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔ Ｇｒｏｗｔｈ Ｆａｃｔｏｒ−１〜１９）、ミッドカイン（Ｍｉｄｋｉｎｅ）、カルシトニン（Ｃａｌｃｉｔｏｎｉｎ）、表皮成長因子（Ｅｐｉｄｅｒｍａｌ Ｇｒｏｗｔｈ Ｆａｃｔｏｒ）、グルカゴン（Ｇｌｕｃａｇｏｎ）、インスリン（Ｉｎｓｕｌｉｎ）、インスリン様成長因子１（Ｉｎｓｕｌｉｎ−ｌｉｋｅ Ｇｒｏｗｔｈ Ｆａｃｔｏｒ−１）、オステオジェニックプロテイン１（Ｏｓｔｅｏｇｅｎｉｃ Ｐｒｏｔｅｉｎ−１）、幹細胞増殖因子（Ｓｔｅｍ Ｃｅｌｌ Ｇｒｏｗｔｈ Ｆａｃｔｏｒ）、アミリン（Ａｍｙｌｉｎ）、パラサイロイドホルモン（Ｐａｒａｔｈｙｒｏｉｄ Ｈｏｒｍｏｎｅ）、プラスミノーゲン活性化因子類（Ｐｌａｓｍｉｎｏｇｅｎ Ａｃｔｉｖａｔｏｒ）、血管内皮細胞成長因子（Ｖａｓｃｕｌａｒ Ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ Ｃｅｌｌ Ｇｒｏｗｔｈ Ｆａｃｔｏｒ）、形質転換成長因子類（Ｔｒａｎｓｆｏｒｍｉｎｇ Ｇｒｏｗｔｈ Ｆａｃｔｏｒ）、グルカゴン様ペプチド類（Ｇｌｕｃａｇｏｎ−ｌｉｋｅ Ｐｅｐｔｉｄｅ）、成長ホルモン（Ｇｒｏｗｔｈ Ｈｏｒｍｏｎｅ）、ナトリウム利尿ペプチド類（Ｎａｔｒｉｕｒｅｔｉｃ Ｐｅｐｔｉｄｅ）、プラスミノーゲン（Ｐｌａｓｍｉｎｏｇｅｎ）、アンジオポエチン（Ａｎｇｉｏｐｏｉｅｔｉｎ）、アンジオスタチン（Ａｎｇｉｏｓｔａｔｉｎ）、エンドスタチン（Ｅｎｄｏｓｔａｔｉｎ）、ネオカルチノスタチン（Ｎｅｏｃａｒｚｉｎｏｓｔａｔｉｎ）、肝細胞成長因子（Ｈｅｐａｔｏｃｙｔｅ Ｇｒｏｗｔｈ Ｆａｃｔｏｒ）、リシン（Ｒｉｃｉｎ）、シュードモナス外毒素（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ Ｅｘｏｔｏｘｉｎ）、ジフテリア毒素（Ｄｉｐｈｔｈｅｒｉａ Ｔｏｘｉｎ）およびそれらの溶解性レセプターならびにそれらの誘導体からなる群より選ばれる前記（２３）記載の方法。
（２６） 生理活性ポリペプチドの誘導体が、該ポリペプチドのアミノ酸欠失体、アミノ酸置換体、アミノ酸挿入体、アミノ酸付加体、糖鎖欠失体および糖鎖付加体からなる群より選ばれる前記（２３）〜（２５）のいずれか１項に記載の方法。
（２７） 低分子化合物が少なくとも１個の前記（１）〜（１２）および（１４）〜（１７）のいずれか１項に記載の化合物で直接またはスペーサーを介して修飾された化学修飾低分子化合物。
（２８） 前記（２７）記載の化学修飾低分子化合物を含有する医薬。
（２９） 前記（１）〜（１２）および（１４）〜（１７）のいずれか１項に記載の化合物で低分子化合物を化学修飾することを特徴とする、該低分子化合物の安定性または水溶性を向上させる方法。
（３０） 前記（１）〜（１２）および（１４）〜（１７）のいずれか１項に記載の化合物を含有することを特徴とする生理活性ポリペプチドもしくはその誘導体または低分子化合物の化学修飾剤。
式（１）において、Ｒ１は水素原子または水素原子に変換可能な基を表し、水素原子に変換可能な基としては、例えば置換もしくは非置換の低級アルキル、置換もしくは非置換の脂環式複素環基、置換もしくは非置換のアラルキル、置換もしくは非置換のシリル、置換もしくは非置換のアシル等があげられ、Ｒ１としては、中でも水素原子またはベンジルが好ましい。
低級アルキルとしては、例えば炭素数１〜８の、直鎖状または分岐状のアルキル、より具体的にはメチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、イソブチル、ｓｅｃ−ブチル、ｔｅｒｔ−ブチル、ペンチル、ネオペンチル、ヘキシル、ヘプチル、オクチル等があげられる。
脂環式複素環基としては、例えば窒素原子、酸素原子および硫黄原子から選ばれる少なくとも１個の原子を含む３〜８員の単環性脂環式複素環基、３〜８員の環が縮合した二環または三環性で窒素原子、酸素原子および硫黄原子から選ばれる少なくとも１個の原子を含む縮環性脂環式複素環基等があげられ、より具体的にはテトラヒドロピリジニル、テトラヒドロキノリニル、テトラヒドロイソキノリニル、テトラヒドロピラニル、テトラヒドロフラニル、ジヒドロベンゾフラニル、ピロリジニル、ピペリジノ、ピペリジニル、パーヒドロアゼピニル、パーヒドロアゾシニル、モルホリノ、モルホリニル、チオモルホリノ、チオモルホリニル、ピペラジニル、ホモピペリジノ、ホモピペラジニル、ジオキソラニル、イミダゾリジニル、イミダゾリニル、ピラゾリジニル、インドリニル、イソインドリニル、２−ピロリニル、２−ピロリドニル、３−ピロリドニル、２−ピペリドニル、３−ピペリドニル、４−ピペリドニル、パーヒドロ−２−アゼピノニル、パーヒドロ−３−アゼピノニル、パーヒドロ−４−アゼピノニル、２−チアゾリドニル、４−チアゾリドニル、２−オキサゾリドニル、４−オキサゾリドニル、フタルイミド、グルタルイミド、ヒダントイニル、チアゾリジンジオニル、オキサゾリジンジオニル等があげられる。
アラルキルとしては、例えば炭素数７〜１３のアラルキル、より具体的にはベンジル、フェネチル、ベンズヒドリル、ナフチルメチル等があげられる。
アシルとしては、例えば炭素数１〜８の、直鎖状、分岐状または環状のアシル、より具体的にはアセチル、プロピオニル、ベンゾイル等があげられる。
置換低級アルキル、置換脂環式複素環基、置換アラルキル、置換シリルおよび置換アシルの置換基としては、例えば同一または異なって、置換数１〜３の、より具体的には低級アルキル、低級アルコキシ、低級アルコキシ低級アルコキシ、アラルキルオキシ等があげられる。ここで、低級アルキル、低級アルコキシおよび低級アルコキシ低級アルコキシの低級アルキル部分は、前記低級アルキルと同義であり、アラルキルオキシのアラルキル部分は、前記アラルキルと同義である。
式（１）において、Ｘは、Ｒおよびｎ個の
と結合することができる基であれば、特に限定されることはないが、１以上の直列的分岐構造を有することが好ましい。ここで、直列的分岐構造とは、２つ以上に分岐した分岐鎖の少なくとも１つの分岐鎖が、さらに２つ以上分岐し、これが繰り返される構造を意味する。中でも、２つ以上に分岐した分岐鎖のそれぞれが、さらに２つ以上に分岐し、これが繰り返される構造が好ましい。さらに、それぞれの分岐数は２であるのが好ましい。
分岐構造としては、
または
（式中、Ｙ１、Ｙ２およびＹ３はそれぞれ前記と同義である）が好ましく、中でも
（以下、グリセロールユニットと称する）、
または
がより好ましい。これら分岐構造の式（１）における含有数は、特に限定されることはないが、１個以上（ｎ−１）個以下が好ましく、ｎが２ｍである場合は中でも１個以上（２ｍ−２）個以下がより好ましい。
さらに、式（１）において、Ｘが１個以上（ｎ−１）個以下の、ｎが２ｍである場合は１個以上（２ｍ−２）個以下の
で表される構造を含有する化合物も好ましい。
Ｙ１、Ｙ２およびＹ３の定義のうち、アルキレンとしては、例えば炭素数１〜８の、直鎖状、分岐状または環状のアルキレン、より具体的にはメチレン、エチレン、ｎ−プロピレン、イソプロピレン、ｎ−ブチレン、イソブチレン、ｓｅｃ−ブチレン、ｔｅｒｔ−ブチレン、ペンチレン、ネオペンチレン、ヘキシレン、ヘプチレン、オクチレン、シクロプロピレン、シクロブチレン、シクロペンチレン、シクロヘキシレン、シクロペンチレン、シクロオクチレン等があげられる。
置換アルキレンにおける置換基としては、例えば同一または異なって、置換数１〜３の、より具体的にはハロゲン原子、低級アルキル、不飽和炭化水素基、アリール、低級アルコキシ、水酸基、オキソ、カルボキシ、アシル、アミノ、ニトロ、シアノ、複素環基等があげられる。ここで、ハロゲン原子としては、フッ素、塩素、臭素、ヨウ素の各原子があげられる。不飽和炭化水素基としては、例えば炭素数１〜８の、直鎖状、分岐状または環状の不飽和炭化水素基、より具体的にはビニル、アリル、１−プロペニル、メタクリル、２−ブテニル、１−ペンテニル、２−ヘキセニル、１，３−ペンタジエニル、１，３−ヘキサジエニル、シクロペンテニル、シクロペンタジエニル、プロパルギル、ペンチニル等のアルケニルおよびアルキニルがあげられる。アリールとしては、例えば炭素数６〜１４のアリール、より具体的にはフェニル、ナフチル、アントラニル等があげられる。複素環基としては、例えば窒素原子、酸素原子、硫黄原子等のヘテロ原子の少なくとも一つを含有する３〜８員環の複素環基等があげられ、より具体的にはフリル、チエニル、ピロリル、ピリジル、オキサゾリル、チアゾリル、イミダゾリル、ピリミジニル、トリアジニル、インドリル、キノリル、プリニル、ベンゾオキサゾリル、ベンゾチアゾリル、ベンゾイミダゾリル等があげられる。低級アルキルおよび低級アルコキシはそれぞれ前記と同義である。
置換イミノにおける置換基としては、例えば低級アルキル、アリール、アラルキル等があげられる。低級アルキル、アリールおよびアラルキルはそれぞれ前記と同義である。
式（１）において、Ｒは反応性を有する基または反応性を有する基に変換可能な基を含有する残基であり、Ｒの部分構造である反応性を有する基は、生理活性ポリペプチドもしくはその誘導体または低分子化合物中のカルボキシ、アミノ、水酸基、メルカプト、ホルミル、ホスホノ等と反応することが可能であればいかなる基でもよい。具体的には、ポリペプチド中のリジン、システイン、アルギニン、ヒスチジン、セリン、スレオニン、トリプトファン、アスパラギン酸、グルタミン酸、グルタミン等の各アミノ酸の側鎖、Ｎ末端アミノ基、Ｃ末端カルボキシル基、ポリペプチドに結合した糖鎖等との反応性を有する基があげられる。
反応性を有する基として、好ましくは、カルボン酸活性エステル残基、カーボネート、マレイミド、メルカプト、ホルミル、トレシル、イソシアナート、酸無水物残基、酸ハロゲン化物残基、ビニルスルホニル、ヒドラジド、アミノ、ハロゲン等があげられる。
反応性を有する基に変換可能な基として、好ましくは、水酸基、カルボキシ、アミノ、メルカプト、ホルミル、ビニル、ホスホノ、ハロゲン等があげられる。
カルボン酸活性エステル残基におけるカルボン酸活性エステルとしては、置換もしくは非置換のアリール、置換もしくは非置換の複素環基等を有するエステルが好ましく、具体的にはＮ−ヒドロキシスクシンイミドエステル、ｐ−ニトロフェニルエステル、チオフェニルエステル、２，３，５−トリクロロフェニルエステル、２，４，６−トリクロロフェニルエステル、２，４，５−トリクロロフェニルエステル、ペンタクロロフェニルエステル、２，４−ジニトロフェニルエステル、Ｎ−ヒドロキシフタルイミドエステル等があげられる。
酸無水物残基における酸無水物としては、具体的にはカルボン酸の無水物等があげられる。
酸ハロゲン化物残基としては、具体的にはカルボニルクロライド、カルボニルブロマイド、カルボニルアイオダイド、カルボニルフルオライド等があげられる。
反応性を有する基または反応性を有する基に変換可能な基以外のＲ部分は、該反応性を阻害しない基であれば特に限定されず、任意の基であってよく、具体的には、ハロゲン原子、置換もしくは非置換のアルキル、置換もしくは非置換の不飽和炭化水素基、置換もしくは非置換のアルキレン、置換もしくは非置換のアリール、置換もしくは非置換のアルコキシ、水酸基、カルボニル、カルボキシ、置換もしくは非置換のアシル、置換もしくは非置換のアミノ、置換もしくは非置換のイミノ、ニトロ、シアノ、Ｏ、Ｓ、スルフィニル、スルホニル、置換もしくは非置換の複素環基等からなる群より選ばれる一つまたは同一もしくは異なった複数の任意の組み合わせ等を含有することができる。中でも、置換もしくは非置換のアルキレン、カルボニル、置換もしくは非置換のイミノ、ＯおよびＳからなる群より選ばれる一つまたは同一もしくは異なった複数の任意の組み合わせを含有するものが好ましい。
Ｒのアルキルおよびアルコキシのアルキル部分としては、例えば炭素数１〜８の、直鎖状、分岐状または環状のアルキル、より具体的にはメチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、イソブチル、ｓｅｃ−ブチル、ｔｅｒｔ−ブチル、ペンチル、ネオペンチル、ヘキシル、ヘプチル、オクチル、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、シクロヘプチル、シクロオクチル等があげられる。
不飽和炭化水素基、アルキレン、ハロゲン原子および複素環基は、それぞれ前記Ｙ１、Ｙ２およびＹ３の定義において記載されている不飽和炭化水素基、アルキレン、ハロゲン原子および複素環基と同義である。
アリールとしては、例えば炭素数６〜１４のアリール、より具体的にはフェニル、ナフチル、ビフェニル、アントラニル等があげられる。
アシルは、前記Ｒ１の定義で記載されているアシルと同義である。
置換アルキル、置換不飽和炭化水素基、置換アルキレン、置換アリール、置換アルコキシ、置換アシルおよび置換複素環基における置換基としては、例えば同一または異なって、置換数１〜３の、より具体的にはハロゲン原子、アルキル、不飽和炭化水素基、アリール、アルコキシ、水酸基、オキソ、カルボキシ、アシル、アミノ、ニトロ、シアノ、複素環基等があげられ、ハロゲン原子、アルキル、不飽和炭化水素基、アリール、アルコキシ、アシルおよび複素環基はそれぞれ前記と同義である。
置換イミノにおける置換基としては、例えばアルキル、不飽和炭化水素基、アリール、アルコキシ、アシル、アミノ、複素環基等があげられ、置換アミノにおける置換基としては、例えば同一または異なって、置換数１〜２の、より具体的にはアルキル、不飽和炭化水素基、アリール、アルコキシ、アシル、アミノ、複素環基等があげられ、アルキル、不飽和炭化水素基、アリール、アルコキシ、アシルおよび複素環基はそれぞれ前記と同義である。
式（１）において、ｎは３以上の整数であれば特に限定されることはないが、好ましくは２ｍ（式中、ｍは前記と同義である）、さらに好ましくは４〜１０２４（２２〜２１６）である。
本発明の化合物は、単一化合物であっても、構造の異なる化合物の混合物であってもよいが、単一化合物が好ましい。
式（１）で表される化合物は、その分子量が特に限定されることはないが、好ましくは１００〜１，０００，０００、さらに好ましくは１，０００〜１００，０００の分子量を有する。
式（１）で表される化合物において、代表的な具体例として、前記式（２）、（３）、（４）、（５）等で表される化合物があげられる。
式（１）で表される化合物は、通常の有機合成法で知られている反応［日本化学会編、有機合成Ｉ〜ＩＶ、丸善（１９９２年）］等を組み合わせて製造することができる。例として、以下の一般的な製造方法があげられる。
［式中、Ｒ、Ｘおよびｎはそれぞれ前記と同義であり、Ｈａｌはハロゲン原子を表し、Ｒ１ａは水素原子に変換可能な基を表し、Ｒ２はＲに変換可能な基を表し、Ｒ３は
（式中、Ｒ１ａは前記と同義である）と置換可能な基を表す］
ハロゲン原子および水素原子に変換可能な基はそれぞれ前記と同義であり、Ｒに変換可能な基としては、Ｒに変換可能な基であれば特に限定されず、水素原子に変換可能な基の定義で記載したものと同様なものがあげられる。
（式中、Ｒ１ａは前記と同義である）と置換可能な基としては、
（式中、Ｒ１ａは前記と同義である）と置換可能な基であれば特に限定されないが、具体的には、水素原子、ハロゲン原子、水酸基、アルコキシ、アルカノイルオキシ等があげられ、ハロゲン原子は前記と同義であり、アルコキシおよびアルカノイルオキシのアルキル部分は、前記アルキルと同義である。
エピクロロヒドリン、エピブロモヒドリン、エピフルオロヒドリン等のエピハロヒドリン（化合物（ａ））とＲ１ａ−ＯＨ（式中、Ｒ１ａは前記と同義である）を用い、ジャーナル・オブ・オーガニック・ケミストリー（Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．），５７，４３５（１９９２年）、ジャーナル・オブ・メディシナル・ケミストリー（Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．），３８（１０），１６７３（１９９５年）等に記載の方法に順じて、化合物（ｃ）を得ることができる。また、化合物（ｃ）は、グリセロール（化合物（ｂ））１モルに対し、１〜１０モルのＲ１ａ−Ｈａｌ（式中、Ｒ１ａおよびＨａｌはそれぞれ前記と同義である）を用いて適当な塩基存在下で反応させた後に精製して得るか、または触媒量のＢＦ３・Ｏ（Ｃ２Ｈ５）２存在下で２−メチル−１−ブテンと反応させて［テトラヘドロン・レターズ（Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ Ｌｅｔｔ．），２９，２９５１（１９８８年）］、選択的に第一アルコールの水酸基を保護するか、またはテトラヘドロン・レターズ（Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ Ｌｅｔｔ．），４１，６４４１（２０００）、ジャーナル・オブ・オーガニック・ケミストリー（Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．），５４，１３４６（１９８９）、カナディアン・ジャーナル・オブ・ケミストリー（Ｃａｎ．Ｊ．Ｃｈｅｍ．），６２，２４１（１９８４）等に記載の方法に順じて得ることができる。さらに、化合物（ｃ）は化合物（ｂ）の第一アルコールの水酸基を、例えばプロテクティブ・グループス・イン・オーガニック・シンセシス第三版（Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ Ｇｒｏｕｐｓ ｉｎ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，ｔｈｉｒｄ ｅｄｉｔｉｏｎ）、グリーン（Ｔ．Ｗ．Ｇｒｅｅｎｅ）著、ジョン・ワイリー・アンド・サンズ・インコーポレイテッド（Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ Ｉｎｃ．）（１９９９年）等に記載の保護基の導入方法等に準じて保護することでも得られる。
化合物（ａ）と反応させるＲ１ａ−ＯＨとしては、例えばメタノール、エタノール、プロパノール、ｔｅｒｔ−ブチルアルコール、ベンジルアルコール等、種々のアルコール類が利用可能である。また、化合物（ｂ）と反応させるＲ１ａ−ＨａｌのＲ１ａとしては、ベンジル、メチル、エチル、プロピル、ｔｅｒｔ−ブチル、メトキシメチル、メトキシエトキシメチル、テトラヒドロピラニル、テトラヒドロフラニル、トリフェニルメチル、ベンジルオキシメチル、トリエチルシリル等の除去可能な残基が利用可能である。化合物（ａ）および（ｂ）としては市販品を利用することができ、化合物（ｃ）は前記の方法にしたがって合成して得られるか市販品として得ることもできる。
次いで、前記工程で得られた化合物（ｃ）を、さらに化合物（ａ）と反応させるか、化合物（ｂ）を
（式中、ＨａｌおよびＲ１ａはそれぞれ前記と同義である）と反応させることによって、化合物（ｄ）が得られる。
この反応工程を繰り返すことによって、Ｘが直列的分岐構造を有し、Ｘに化合物（ｃ）残基がｎ個結合した化合物（ｅ）を得ることができる。
化合物（ｅ）に存在するＸ末端の水酸基に通常の有機合成反応を利用して反応性を有する基または反応性を有する基に変換可能な基を含有する残基Ｒを結合させるか、該水酸基を、反応性を有する残基に直接変換することで、化合物（Ｉａ）を得ることができる。
一方、化合物（ｆ）に、前記と同様にして合成した化合物（ｃ）を反応させ、化合物（ｇ）を得ることができる。化合物（ｆ）と化合物（ｃ）を反応させ、化合物（ｇ）を得る方法としては、化合物（ｆ）のＲ３の部位と化合物（ｃ）の置換反応、通常の有機合成法で知られている反応［日本化学会編、有機合成Ｉ〜ＩＶ、丸善（１９９２年）等］を組み合わせた方法等があげられる。化合物（ｇ）のＲ２を通常の有機合成反応を利用して反応性を有する基または反応性を有する基に変換可能な基を含有する残基Ｒに変換することで、化合物（Ｉａ）が得られる。化合物（ｆ）としては市販の既知構造の化合物を利用することもできるし、通常の有機合成法で知られている反応［日本化学会編、有機合成Ｉ〜ＩＶ、丸善（１９９２年）等］を組み合わせて化合物（ｆ）を調製することもできる。
化合物（Ｉａ）を、通常の有機合成反応に用いられる保護基の除去反応［例えばプロテクティブ・グループス・イン・オーガニック・シンセシス第三版（Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ Ｇｒｏｕｐｓ ｉｎ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，ｔｈｉｒｄ ｅｄｉｔｉｏｎ）、グリーン（Ｔ．Ｗ．Ｇｒｅｅｎｅ）著、ジョン・ワイリー・アンド・サンズ・インコーポレイテッド（Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ Ｉｎｃ．）（１９９９年）等］に付して、Ｒ１を除去して、水素原子に置換することで化合物（Ｉｂ）が得られる。
また、これとは逆に、式（１）において、Ｘとは反対方向に−ＯＲ１末端からグリセロールユニットを伸ばしていくことにより、本発明の化合物を製造することも可能である。
各反応工程は適当な溶媒、好ましくはジクロロメタン、クロロホルム、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド、ジメチルスルホキシド、トルエン、テトラヒドロフラン、アセトニトリル、メタノール、エタノール、ピリジン、水、およびこれらの混合溶媒の中から任意に選択される溶媒中、−２０〜１５０℃の間の温度で１時間〜数日間行われる。
各工程において得られる各化合物はそのままの純度で、または再結晶、溶媒抽出、シリカゲルクロマトグラフィー、逆相クロマトグラフィー、順相クロマトグラフィー等の一般的な精製方法で任意の純度に精製して次の工程に使用され得る。
本発明の化合物は、例えば生理活性ポリペプチド、低分子化合物等の安定性または水溶性を向上させる目的で化学修飾剤として使用することができる。
具体的には、本発明の化合物と生理活性ポリペプチドもしくはその誘導体または低分子化合物中のカルボキシ、アミノ、水酸基、メルカプト、ホルミル、ホスホノ等とを直接、またはスペーサーを介して結合させることにより上記目的を達成することができる。
スペーサーとしてはアミノ酸やペプチドが好ましいが、本発明の化合物と生理活性ポリペプチドもしくはその誘導体または低分子化合物中のカルボキシ、アミノ、水酸基、メルカプト、ホルミル、ホスホノ等とを結合することができればそれ以外であってもよい。アミノ酸としてはリジン、システイン等の天然アミノ酸等を用いることができ、オルニチン、ジアミノプロピオン酸、ホモシステイン等を用いることもできる。より好ましくは、システインがあげられる。ペプチドとしては、アミノ酸残基２〜１０からなるものが好ましい。アミノ酸およびペプチド以外のスペーサーとしては、グリセロール、エチレングリコール、糖等があげられる。ここで、糖としては、グルコース、ガラクトース、ソルボース、ガラクトサミン、ラクトース等の単糖類や二糖類等があげられる。
これらのスペーサーは、例えば、生理活性ポリペプチドまたはその誘導体中のリジン、システイン、アルギニン、ヒスチジン、セリン、スレオニン等の残基の側鎖とアミド結合、チオエーテル結合、エステル結合等を介して結合するか、該ポリペプチドまたは該その誘導体のＣ末端カルボキシル基とアミド結合やエステル結合するか、該ポリペプチドまたは該その誘導体のＮ末端アミノ基とアミド結合する。これらの結合は、通常のペプチド合成法［泉屋ら、ペプチド合成の基礎と実験、丸善（１９８５年）］や遺伝子組換法を用いて行うことができる。
この場合、生理活性ポリペプチドまたはその誘導体を合成するのと同時に例えば該生理活性ポリペプチドまたはその誘導体のＣ末端カルボキシル基にスペーサーとなるアミノ酸、ペプチド等を導入することが望ましいが、生理活性ポリペプチドまたはその誘導体を合成した後にスペーサーを結合してもよい。また、該ポリペプチドまたはその誘導体のＣ末端カルボキシル基等を化学合成的に活性化してスペーサーに結合することもできる。また、本発明の化合物を予め結合したスペーサーを前記の方法で生理活性ポリペプチドまたはその誘導体に結合することもできる。
本発明で用いられる生理活性ポリペプチドまたはその誘導体としては、酵素、サイトカイン、ホルモン、毒素、抗体およびそれらの誘導体等があげられる。
生理活性ポリペプチドとしては、例えば、アスパラギナーゼ（Ａｓｐａｒａｇｉｎａｓｅ）、グルタミナーゼ（Ｇｌｕｔａｍｉｎａｓｅ）、アルギナーゼ（Ａｒｇｉｎａｓｅ）、ウリカーゼ（Ｕｒｉｃａｓｅ）、スーパーオキサイドディスムターゼ（Ｓｕｐｅｒｏｘｉｄｅ Ｄｉｓｕｍｕｔａｓｅ）、ラクトフェリン（Ｌａｃｔｏｆｅｒｒｉｎ）、ストレプトキナーゼ（Ｓｔｒｅｐｔｏｋｉｎａｓｅ）、プラスミン（Ｐｌａｓｍｉｎ）、アデノシンデアミナーゼ（Ａｄｅｎｏｓｉｎｅ Ｄｅａｍｉｎａｓｅ）、インターロイキン−１〜２４（Ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ−１〜２４）、インターフェロン−α（Ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ−α）、インターフェロン−β（Ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ−β）、インターフェロン−γ（Ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ−γ）、インターフェロン−ω（Ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ−ω）、インターフェロン−τ（Ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ−τ）、顆粒球コロニー刺激因子（Ｇｒａｎｕｌｏｃｙｔｅ−Ｃｏｌｏｎｙ Ｓｔｉｍｕｌａｔｉｎｇ Ｆａｃｔｏｒ）、エリスロポエチン（Ｅｒｙｔｈｒｏｐｏｉｅｔｉｎ）、腫瘍壊死因子（Ｔｕｍｏｒ Ｎｅｃｒｏｓｉｓ Ｆａｃｔｏｒ）、血小板増加因子（Ｔｈｒｏｍｂｏｐｏｉｅｔｉｎ）、クローソ（Ｋｌｏｔｈｏ）蛋白質、レプチン（Ｌｅｐｔｉｎ）、繊維芽細胞増殖因子１〜１９（Ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔ Ｇｒｏｗｔｈ Ｆａｃｔｏｒ−１〜１９）、ミッドカイン（Ｍｉｄｋｉｎｅ）、カルシトニン（Ｃａｌｃｉｔｏｎｉｎ）、表皮成長因子（Ｅｐｉｄｅｒｍａｌ Ｇｒｏｗｔｈ Ｆａｃｔｏｒ）、グルカゴン（Ｇｌｕｃａｇｏｎ）、インスリン（Ｉｎｓｕｌｉｎ）、インスリン様成長因子１（Ｉｎｓｕｌｉｎ−ｌｉｋｅ Ｇｒｏｗｔｈ Ｆａｃｔｏｒ−１）、オステオジェニックプロテイン１（Ｏｓｔｅｏｇｅｎｉｃ Ｐｒｏｔｅｉｎ−１）、幹細胞増殖因子（Ｓｔｅｍ Ｃｅｌｌ Ｇｒｏｗｔｈ Ｆａｃｔｏｒ）、アミリン（Ａｍｙｌｉｎ）、パラサイロイドホルモン（Ｐａｒａｔｈｙｒｏｉｄ Ｈｏｒｍｏｎｅ）、プラスミノーゲン活性化因子類（Ｐｌａｓｍｉｎｏｇｅｎ Ａｃｔｉｖａｔｏｒ）、血管内皮細胞成長因子（Ｖａｓｃｕｌａｒ Ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ Ｃｅｌｌ Ｇｒｏｗｔｈ Ｆａｃｔｏｒ）、形質転換成長因子類（Ｔｒａｎｓｆｏｒｍｉｎｇ Ｇｒｏｗｔｈ Ｆａｃｔｏｒ）、グルカゴン様ペプチド類（Ｇｌｕｃａｇｏｎ−ｌｉｋｅ Ｐｅｐｔｉｄｅ）、成長ホルモン（Ｇｒｏｗｔｈ Ｈｏｒｍｏｎｅ）、ナトリウム利尿ペプチド類（Ｎａｔｒｉｕｒｅｔｉｃ Ｐｅｐｔｉｄｅ）、プラスミノーゲン（Ｐｌａｓｍｉｎｏｇｅｎ）、アンジオポエチン（Ａｎｇｉｏｐｏｉｅｔｉｎ）、アンジオスタチン（Ａｎｇｉｏｓｔａｔｉｎ）、エンドスタチン（Ｅｎｄｏｓｔａｔｉｎ）、ネオカルチノスタチン（Ｎｅｏｃａｒｚｉｎｏｓｔａｔｉｎ）、肝細胞成長因子（Ｈｅｐａｔｏｃｙｔｅ Ｇｒｏｗｔｈ Ｆａｃｔｏｒ）、リシン（Ｒｉｃｉｎ）、シュードモナス外毒素（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ Ｅｘｏｔｏｘｉｎ）、ジフテリア毒素（Ｄｉｐｈｔｈｅｒｉａ Ｔｏｘｉｎ）、それらの溶解性レセプター等があげられる。
本発明で使用される抗体は、公知の手段［アンティボディーズ ア ラボラトリー マニュアル、コールド スプリング ハーバー ラボラトリー（Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ−Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ）（１９８８）］を用いてポリクローナル抗体またはモノクローナル抗体として得ることができる。
本発明で使用される抗体としては、ポリクローナル抗体またはモノクローナル抗体のいずれも用いることができるが、モノクローナル抗体が好ましい。
本発明で使用されるモノクローナル抗体としては、ハイブリドーマが産生する抗体、ヒト化抗体、およびそれらの抗体断片等があげられる。
ヒト化抗体としては、ヒト型キメラ抗体、ヒト型相補性決定領域（以下、ＣＤＲと称す）移植抗体等があげられる。
ヒト型キメラ抗体は、ヒト以外の動物の抗体重鎖可変領域（以下、重鎖はＨ鎖として、可変領域はＶ領域としてＶＨと称す）および軽鎖可変領域（以下、軽鎖はＬ鎖としてＶＬと称す）とヒト抗体の重鎖定常領域（以下、定常領域はＣ領域としてＣＨと称す）およびヒト抗体の軽鎖定常領域（以下、ＣＬと称す）とからなる抗体を意味する。ヒト以外の動物としては、マウス、ラット、ハムスター、ラビット等、ハイブリドーマ細胞を作製することが可能であればいかなるものも用いることができる。
ヒト型ＣＤＲ移植抗体は、ヒト以外の動物の抗体のＨ鎖、Ｌ鎖のＶ領域のＣＤＲのアミノ酸配列をヒトの抗体のＨ鎖、Ｌ鎖のＶ領域の適切な位置に移植した抗体を意味する。
抗体断片としては、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、一本鎖抗体（以下、ｓｃＦｖと称す）、ジスルフィド安定化Ｖ領域断片（以下、ｄｓＦｖと称す）、ＣＤＲを含むペプチド等があげられる。
Ｆａｂは、ＩｇＧのヒンジ領域で２本のＨ鎖を架橋している２つのジスルフィド結合の上部のペプチド部分を酵素パパインで分解して得られた、Ｈ鎖のＮ末端側約半分とＬ鎖全体で構成された、分子量約５万の抗原結合活性を有するフラグメントである。
Ｆａｂ’は、下記Ｆ（ａｂ’）２のヒンジ間のジスルフイド結合を切断した分子量約５万の抗原結合活性を有するフラグメントである。
Ｆ（ａｂ’）２は、ＩｇＧのヒンジ領域の２個のジスルフィド結合の下部を酵素トリプシンで分解して得られた、２つのＦａｂ領域がヒンジ部分で結合して構成された、分子量約１０万の抗原結合活性を有するフラグメントである。
ｓｃＦｖは、一本のＶＨと一本のＶＬとを適当なペプチドリンカー（以下、Ｐと称す）を用いて連結した、ＶＨ−Ｐ−ＶＬないしはＶＬ−Ｐ−ＶＨポリペプチドを示す。本発明で使用されるｓｃＦｖに含まれるＶＨおよびＶＬとしては、本発明のモノクローナル抗体またはヒト型ＣＤＲ移植抗体のいずれをも用いることができる。
ｄｓＦｖは、ＶＨおよびＶＬ中のそれぞれ１アミノ酸残基をシステイン残基に置換したポリペプチドを、ジスルフィド結合を介して結合させたものをいう。システイン残基に置換するアミノ酸残基はＲｅｉｔｅｒらにより示された方法［プロテイン エンジニアリング（Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ），７，６９７（１９９４年）］に従って、抗体の立体構造予測に基づいて選択することができる。本発明のジスルフィド安定化抗体に含まれるＶＨまたはＶＬとしてはモノクローナル抗体あるいはヒト型ＣＤＲ移植抗体のいずれをも用いることができる。
本発明で使用される抗体またはその抗体断片には、該抗体またはその抗体断片に、放射性同位元素、蛋白質、薬剤等を、化学的または遺伝子工学的に結合させた融合抗体も含まれる。
本発明で使用される生理活性ポリペプチドの誘導体としては、前記生理活性ポリペプチドのアミノ酸欠失体、アミノ酸置換体、アミノ酸挿入体、アミノ酸付加体、糖鎖欠失体、糖鎖付加体等があげられる。これらの誘導体は、生理活性ポリペプチドが有する活性を同様に有していることが好ましい（以下、生理活性ポリペプチドとその誘導体を合わせて、「生理活性ポリペプチド」と表記する）。
本発明で使用される低分子化合物としては、式（１）で表される化合物におけるＲの一部と反応し、Ｒの一部と置換可能なものであれば特に限定されないが、例えば、カルボキシ、一級または二級アミノ、水酸基、メルカプト、ホルミル、ホスホノ、カルボン酸活性エステル残基、酸無水物残基、ハロゲン、酸ハロゲン化物残基、イソシアナート、マレイミド、ヒドラジド、ビニルスルホニル等の官能基を有する化合物があげられる。
低分子化合物としては、低分子化合物であればいかなる化合物も利用可能である。低分子化合物の分子量は、特に限定されないが、５０〜１００００であるのが好ましく、１００〜２０００であるのがさらに好ましい。また、水または水溶液への溶解度が、０〜１ｍｏｌ／Ｌ、好ましくは０〜０．１ｍｏｌ／Ｌであり、その溶解度の値が少なくとも１．１倍以上、好ましくは１０〜１０３倍に向上することが求められる水溶性が不十分な低分子化合物が好ましい。低分子化合物の例としては、コレステロール、ジヒドロコレステロール、ラノステロール、β−シトステロール、カンペステロール、スチグマステロール、ブラシカステロール、エルゴカステロール、フコステロー−ル等のステロール類、シトシンアラビノシド、ドキソルビシン、ダウノルビシン、アクラルビシン、マイトマイシン、ブレオマイシン、５−フルオロウラシル、デュオカルマイシン、メトトレキセート、カンプトテシン、タキサン類等の抗癌剤、アンピシリン、セファレキシン、セファクロル、ゲンタマイシン、ストレプトマイシン、カナマイシン、アンホテリシン、ペニシリン、セファゾリン等の抗生物質、ガンシクロビル、アシクロビル等の抗ウイルス剤、これらの誘導体等があげられる。上記誘導体としては、任意の官能基が欠失、置換、挿入、または付加した修飾体、放射性同位元素、薬剤、糖等による修飾体等があげられ、未修飾の低分子化合物が有する活性を同様に有していることが好ましい。
これらの生理活性ポリペプチドまたは低分子化合物は、りん酸緩衝液、ほう酸緩衝液、酢酸緩衝液、クエン酸緩衝液等の緩衝液もしくは水、またはＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド、ジメチルスルホキシド、ジオキサン、テトラヒドロフラン等の適当な有機溶媒中、またはこれらの有機溶媒と水溶液との混合溶媒中で製造され、化学修飾反応に用いられる［稲田祐二・前田浩編、続蛋白質ハイブリッド、共立出版（１９８８年）参照］。
これらの生理活性ポリペプチドまたは低分子化合物を本発明の化合物で化学修飾すると、１分子以上の化合物が結合した化学修飾ポリペプチドまたは化学修飾低分子化合物等が得られる。
生理活性ポリペプチドまたは低分子化合物の化学修飾は、本発明の化合物を生理活性ポリペプチドまたは低分子化合物１モルあたり１〜１０００モル程度、好ましくは１〜５０モル程度用いて反応させることによって行われる。化合物の生理活性ポリペプチドまたは低分子化合物への修飾の度合いは生理活性ポリペプチドまたは低分子化合物に対する化合物のモル比、反応温度、ｐＨ、反応時間等を調節することによって、任意に選択することができる。また、反応に使用する溶媒は反応を妨害しないものであればいずれでもよく、例えばりん酸緩衝液、ほう酸緩衝液、トリス−塩酸緩衝液、炭酸水素ナトリウム水溶液、酢酸ナトリウム緩衝液、クエン酸緩衝液、水、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド、ジメチルスルホキシド、メタノール、アセトニトリル、ジオキサン、テトラヒドロフラン等、およびこれらの混合溶媒から選択される。反応の温度、ｐＨおよび時間は生理活性ポリペプチドまたは低分子化合物の活性が損われない条件であればいずれでもよく、例えば０〜５０℃の間の温度、１０分間〜１００時間、ｐＨ４〜１０が好ましい。
本発明の化合物で修飾された生理活性ポリペプチドまたは低分子化合物の精製は常法に従って、ゲル濾過、イオン交換クロマトグラフィー、逆相高速液体クロマトグラフィー、アフィニティークロマトグラフィー、限外濾過等により行うことができる。また、任意の化学修飾率の化学修飾ポリペプチドまたは化学修飾低分子化合物等をこれらの精製法で分画して精製することもできる。
合成または精製された生理活性ポリペプチドまたは低分子化合物および本発明の化合物で修飾された該生理活性ポリペプチドまたは該低分子化合物の構造の確認は、質量分析、核磁気共鳴（ＮＭＲ）およびアミノ酸分析計によるアミノ酸組成分析により、また気相プロテインシーケンサーによりエドマン分解して得られたフェニルチオヒダントイン（ＰＴＨ）アミノ酸を逆相高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）で分析することによるアミノ酸配列分析等により行うことができる。
前記で調製された化学修飾ポリペプチドまたは化学修飾低分子化合物は診断薬、治療剤等の医薬として利用することができる。これらの治療剤には、生物活性の維持・向上、細網内皮系（ＲＥＳ）回避、血中持続性の向上、薬剤の円滑なリリース、毒性低減に加えて、抗原性・免疫原性の低下、水溶性の向上、プロテアーゼ耐性、立体構造の保持、血清中での安定化、会合体形成抑制等の効果が期待される。
これらの化学修飾ポリペプチドまたは化学修飾低分子化合物の投与方法としては、具体的には、静脈内投与、経口投与等があげられるが、該投与方はこれらに限定されない。
これらの化学修飾ポリペプチドまたは化学修飾低分子化合物を含有する医薬品組成物は、例えば製薬上許容される非経口用媒介物と組み合わされた溶液、サスペンジョン、エマルジョン、凍結乾燥製剤等として表される。該媒介物としては、水、塩水、リンガー液、デキストロース溶液、１〜１０％ヒト血清アルブミン等があげられる。該媒介物は等張性を保持するために塩化ナトリウム、マンニトール、アミノ酸類等の添加剤を含んでいてもよいし、化学安定性を保持するために緩衝液、防腐剤等を含んでいてもよい。該医薬品組成物は通常用いられている方法に従って滅菌されるのが好ましい。注射投与に適した非経口用該医薬品組成物は、前記化学修飾ポリペプチドまたは化学修飾低分子化合物、添加剤等を例えば０．９％塩化ナトリウム含有水溶液に溶解することによって調製される。該医薬品組成物は単回または複数回投与されうる。該医薬品組成物は単一の治療薬として、または他の治療薬と組み合わせて投与されうる。該医薬品組成物による治療は、従来の治療と組み合わせることもでき、この場合、連続もしくは同時投与によってなされる。
これらの化学修飾ポリペプチドまたは化学修飾低分子化合物を含有する医薬品組成物は、また、製薬上許容される伝統的な割賦剤もしくは基材と組み合わされたタブレット、ピル、またはカプセルとして表すこともできる。該割賦剤もしくは基材は、ラクトース、スターチ、ステアリン酸マグネシウムのような伝統的な賦形剤を含んでいてもよい。
投与量または投与回数は、使用される化学修飾ポリペプチドまたは化学修飾低分子化合物、目的とする治療効果、投与方法、治療期間、年齢、体重等により異なるが、通常有効成分を成人１日当たり１０μｇ／ｋｇ〜８ｍｇ／ｋｇ投与する。
以下に、本発明を試験例、実施例および参考例により説明するが、本発明はこれらによって限定されるものではない
【図面の簡単な説明】
第１図は、本発明化合物修飾Ｇ−ＣＳＦ誘導体、ポリエチレングリコール修飾Ｇ−ＣＳＦ誘導体および未修飾Ｇ−ＣＳＦ誘導体の、温度上昇に伴う円二色性偏光スペクトル（楕円率）の変化を示した図である。横軸は温度（℃）を、縦軸は分子楕円率（ａ．ｕ．）を表し、各プロットの意味は、以下のとおりである。
１：未修飾Ｇ−ＣＳＦ誘導体
２：ポリエチレングリコール修飾Ｇ−ＣＳＦ誘導体
３：本発明化合物修飾Ｇ−ＣＳＦ誘導体
【発明を実施するための最良の形態】
試験例１ 化学修飾Ｇ−ＣＳＦ誘導体の生物活性測定
実施例１、参考例１または参考例２で調製した各Ｇ−ＣＳＦ誘導体のマウス白血病細胞ＮＦＳ６０［プロシーディングス・オブ・ザ・ナショナル・アカデミー・オブ・サイエンス・オブ・ザ・ユナイテッド・ステイツ・オブ・アメリカ（Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ），８２，６６８７（１９８５年）］に対する増殖促進活性を、浅野らの方法［薬理と治療，１９，２７６７（１９９１年）］に従って測定した。未修飾のＧ−ＣＳＦ誘導体の比活性（Ｕ／ｍｇ）を１００としたときの各化合物の活性を表１に示す。従来のポリエチレングリコール修飾体の比活性は顕著に低下したが、式（２）で表される本発明の化合物を用いて作製された修飾体では修飾率が高いにも関わらず極めて高い生物活性が維持された。
試験例２ 化学修飾Ｇ−ＣＳＦ誘導体の熱安定性
未修飾Ｇ−ＣＳＦ誘導体ならびに各化学修飾Ｇ−ＣＳＦ誘導体を５０ｍｍｏｌ／Ｌりん酸緩衝液（ｐＨ７．２）中、０．２ｍｇ／ｍＬに調整し、温度上昇変化に伴う円二色性偏光（ＣＤ）スペクトルの変化を測定した。波長２０８ｎｍにおけるスペクトル値（楕円率）の変化を図１に示す。未修飾Ｇ−ＣＳＦ誘導体では５０〜５５℃で急速に楕円率（絶対値）の低下、消失が確認され、この変化は不可逆的であった。一方、本発明の化合物修飾Ｇ−ＣＳＦ誘導体ではポリエチレングリコール修飾体と同様に楕円率は５５℃までほぼ一定であり、７５℃まで温度を上昇させても楕円率（絶対値）は僅かに低下したのみであった。この結果は、本発明の化合物修飾体が温度を上昇させても水溶液中で安定に構造を維持した状態で存在していることを示している。
試験例３ 化学修飾低分子化合物の水に対する溶解度
実施例４および実施例５で調製した化合物の水に対する溶解度を測定したところ、表２に示す結果が得られた。これらの結果から、実施例１で調製した化合物を難溶性の低分子化合物に結合させると、水に対する溶解度が向上することが明らかとなった。
実施例１ 化合物の合成［式（２）で表される化合物］
反応スキームを以下に示す。反応スキーム中で、Ｂｎはベンジル基、Ｅｔはエチル基、ｉ−Ｐｒはイソプロピル基、ＰｙＢＯＰはベンゾトリアゾール−１−イルオキシトリス（ピロリジノ）ホスホニウムヘキサフルオロホスフィン、ＴＦＡはトリフルオロ酢酸、ＮＨＳはＮ−ヒドロキシスクシンイミド、ＥＤＣは１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド塩酸塩、ＴＨＦはテトラヒドロフラン、ＤＭＦはジメチルホルムアミドを表す。
化合物２［２−アミノ−１，３−ビス（１，３−ジ−Ｏ−ベンジル−２−グリセロキシ）プロパン］を根本らの方法［ジャーナル・オブ・メディシナル・ケミストリー（Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．），３８，１６７３（１９９５年）］に従って調製した。化合物１（３．５ｇ，１５．０ｍｍｏｌ）のジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）溶液（５０ｍＬ）に、室温でジイソプロピルエチルアミン（１０．５ｍＬ，６０．０ｍｍｏｌ）、化合物２（１９．８ｇ，３３．０ｍｍｏｌ）のＤＭＦ溶液（２０ｍＬ）およびベンゾトリアゾール−１−イルオキシトリス（ピリジノ）ホスホニウムヘキサフルオロホスフィン（ＰｙＢＯＰ；１５．６ｇ，３０．０ｍｍｏｌ）を順次加えた後、同温度で１５時間攪拌した。反応液を５％硫酸水素カリウム水溶液に注いだ後、酢酸エチルを用いて抽出した。有機層を飽和炭酸水素ナトリウム水溶液、飽和食塩水で順次洗浄した後、無水硫酸マグネシウムを用いて乾燥し、濾過した。溶媒を減圧下で留去し、残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ヘキサン：酢酸エチル＝３：２）で精製し、淡黄色油状の化合物３（１８．７ｇ，収率８９％）を得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，３００ＭＨｚ）δ（ｐｐｍ）：１．３６（９Ｈ，ｓ），３．４０−３．８１（３２Ｈ，ｍ），４．１６（２Ｈ，ｍ），４．４８（１６Ｈ，ｓ），７．１９−７．３１（４０Ｈ，ｍ）．
化合物３（２．０ｇ，１．４３ｍｍｏｌ）のジクロロメタン溶液（４５ｍＬ）に、室温でトリフルオロ酢酸（５ｍＬ）を注入した後、同温度で２０時間攪拌した。反応液に飽和炭酸水素ナトリウム水溶液を加えた後、ジクロロメタンを用いて抽出した。有機層を無水硫酸マグネシウムで乾燥し、濾過した後、溶媒を減圧下で留去し、淡黄色油状の化合物４（１．１９ｇ，収率６４％）を得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，３００ＭＨｚ）δ（ｐｐｍ）：１．７５（１Ｈ，ｓ），２．８７（４Ｈ，ｓ），３．４７−３．８１（２８Ｈ，ｍ），４．１６（２Ｈ，ｍ），４．４８（１６Ｈ，ｓ），７．００（２Ｈ，ｄ），７．１９−７．３１（４０Ｈ，ｍ）．
化合物４（１．５ｇ，１．１６ｍｍｏｌ）のピリジン溶液（２．０ｍＬ）に、室温で無水コハク酸（２３２ｍｇ，２．３１ｍｍｏｌ）をゆっくりと加えた後、１００℃で１．５時間攪拌した。反応液を室温まで冷却した後、２ｍｏｌ／Ｌ塩酸を加え、ジクロロメタンを用いて抽出した。有機層を飽和食塩水で洗浄した後、無水硫酸マグネシウムを用いて乾燥し、濾過した。溶媒を減圧下で留去し、残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ヘキサン：酢酸エチル＝１：３）で精製し、淡黄色油状の化合物５（１．６２ｇ，収率１００％）を得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，３００ＭＨｚ）δ（ｐｐｍ）：２．３９（２Ｈ，ｍ），２．５６（２Ｈ，ｍ），３．４５−３．７６（３２Ｈ，ｍ），４．０９−４．２１（２Ｈ，ｍ），４．４６（１６Ｈ，ｓ），６．８７（１Ｈ，ｄ），７．１９−７．３１（４０Ｈ，ｍ），８．０２（１Ｈ，ｄ）．
化合物５（３．０ｇ，２．１５ｍｍｏｌ）のテトラヒドロフラン溶液（４５ｍＬ）に、室温でＮ−ヒドロキシスクシンイミド（ＮＨＳ；４９５ｍｇ，４．３０ｍｍｏｌ）、１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド塩酸塩（ＥＤＣ；８８６ｍｇ，４．３０ｍｍｏｌ）およびトリエチルアミン（０．２４ｍＬ，１．７２ｍｍｏｌ）を順次加えた後、２時間還流した。反応液に５％硫酸水素カリウム水溶液を加えた後、ジクロロメタンを用いて抽出した。有機層を飽和炭酸水素ナトリウム水溶液、飽和食塩水で順次洗浄した後、無水硫酸マグネシウムを用いて乾燥し、濾過した。溶媒を減圧下で留去し、残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ヘキサン：酢酸エチル＝１：１０）で精製し、淡黄色油状の化合物６（２．３５ｇ，収率７９％）を得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，３００ＭＨｚ）δ（ｐｐｍ）：２．４９（２Ｈ，ｔ），２．６７（４Ｈ，ｓ），２．７８（２Ｈ，ｔ），３．４０−３．７８（３２Ｈ，ｍ），４．１１−４．２２（２Ｈ，ｍ），４．４８（１６Ｈ，ｄ），６．９６（１Ｈ，ｄ），７．１９−７．３１（４０Ｈ，ｍ），８．３７（１Ｈ，ｄ）．
化合物６（１．１５ｇ，０．７７ｍｍｏｌ）のエタノール溶液（５０ｍＬ）に水素気流下、室温でＰｄ（ＯＨ）２／Ｃ（Ｐｄ：２０重量％含有，２００ｍｇ）を加えた後、同温度で１２時間攪拌した。反応液をセライトで濾過した後、溶媒を減圧下で留去し、淡黄色油状の化合物７（５９６ｍｇ，収率１００％）を得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，３００ＭＨｚ）δ（ｐｐｍ）：２．７４（２Ｈ，ｔ），２．８２（４Ｈ，ｓ），２．９６（２Ｈ，ｔ），３．３０（８Ｈ，ｓ），３．４３−３．８０（２８Ｈ，ｍ），４．０５−４．２２（６Ｈ，ｍ）．
実施例２ 本発明化合物で修飾された化学修飾Ｇ−ＣＳＦ誘導体の調製
等張りん酸緩衝液（ｐＨ７．４）で調製した参考例１のＧ−ＣＳＦ誘導体（２７．８ｍＬ，０．７２ｍｇ／ｍＬ）に、実施例１で調製した化合物７（約２０ｍｇ）を加え、冷蔵下で一昼夜攪拌して反応させた。反応液（２６．５ｍＬ）を２０ｍｍｏｌ／Ｌ酢酸緩衝液（ｐＨ４．５）で１０倍に希釈し、ＣＭ Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ ＦＦ レジン１０ｍＬ（Ａｍｅｒｓｈａｍ−Ｐｈａｒｍａｃｉａ Ｂｉｏｔｅｃｈ社製）を用いた陽イオン交換カラムで精製した。０．３ｍｏｌ／Ｌの塩化ナトリウムを含む緩衝液で溶出される目的画分を回収し、２．１ｍｇ／ｍＬの化合物７修飾Ｇ−ＣＳＦ誘導体を含む溶液（８ｍＬ，収率８４％）を得た。
＜ＳＤＳ−ＰＡＧＥ分析＞
分析条件：４−２０％グラジエントゲル（ＰＡＧＥＬ ＳＰＧ−５２０Ｌ）、非還元
結果：２１ｋＤａ〜３１ｋＤａの間に均一なバンド
＜ゲル濾過ＨＰＬＣ分析＞
分析条件：ＴＳＫ ｇｅｌ Ｇ２０００ＳＷＸＬカラム（７．８×３００ｍｍ、東ソー社製）、流速０．５ｍＬ／分、溶媒１５０ｍｍｏｌ／Ｌ食塩を含む２０ｍｍｏｌ／Ｌ酢酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ４．５）、注入量５０μｇ
結果：約１９分に溶出
＜ＭＡＬＤＩ ＴＯＦ−ＭＳ分析＞
結果：質量２０８８０（３分子結合体）、２１５４０（４分子結合体）を主に検出
実施例３ 化合物の合成［式（３）で表される化合物］
反応スキームを以下に示す。反応スキーム中で、Ｂｎはベンジル基を表す。
化合物４（６２４ｍｇ，０．４８ｍｍｏｌ）のＤＭＦ溶液（１３ｍＬ）に化合物１（５１ｍｇ，０．２１９ｍｍｏｌ）、ジイソプロピルエチルアミン（０．１５ｍＬ，０．８７６ｍｍｏｌ）およびＰｙＢＯＰ（２２８ｍｇ，０．４２８ｍｍｏｌ）を室温で加え、同温度で４８時間攪拌した。反応混合物を５％硫酸水素カリウム水溶液中に注いだ後、酢酸エチルで抽出し、有機層を飽和炭酸水素ナトリウム水溶液、飽和食塩水で順次洗浄した。その後有機層を無水硫酸マグネシウムで乾燥し、これを濾過した後、溶媒を減圧下で留去した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（酢酸エチル：酢酸＝１００：０．７）で精製し、黄色油状の化合物８（３２２ｍｇ，０．１１５ｍｍｏｌ，収率５３％）を得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，４００ＭＨｚ）δ（ｐｐｍ）：７．３２−７．１７（８０Ｈ，ｍ），４．４９−４．３８（３２Ｈ，ｍ），４．１５−４．０６（４Ｈ，ｍ），３．７７−３．２７（６８Ｈ，ｍ），１．３２（９Ｈ，ｓ），（ＣＯＮＨは明確に確認されず）．
１３Ｃ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，７５ＭＨｚ）δ（ｐｐｍ）：１７０．２（Ｃ×４，ＣＯＮＨ），１６７．７（Ｃ×２，ＣＯＮ），１５５．４（Ｃ，Ｏ２ＣＮ），１３８．２（Ｃ×１６），１２８．３（ＣＨ×１６），１２８．３（ＣＨ×１６），１２７．７（ＣＨ×１６），１２７．６（ＣＨ×１６），１２７．６（ＣＨ×１６），８０．５（Ｃ），７８．７（ＣＨ×８），７３．２（ＣＨ２×１６），７０．２（ＣＨ２×１６），６８．９（ＣＨ２×８），５２．１（ＣＨ２×２），５１．９（ＣＨ２×４），４９．６（ＣＨ×４），２８．２（ＣＨ３×３）．
化合物８（３２２ｍｇ，０．１１５ｍｍｏｌ）のジクロロメタン溶液（４８．３２ｍＬ）にトリフルオロ酢酸（０．４８ｍＬ）を室温で滴下した。同温度で２４時間攪拌した後、反応液を飽和炭酸水素ナトリウム水溶液中に注ぎ、ジクロロメタンで抽出した後、有機層を無水硫酸マグネシウムで乾燥し、これを濾過した後、溶媒を減圧下で留去することにより白色油状の化合物９（３１０ｍｇ，０．１１５ｍｍｏｌ，収率１００％）を得た。本品は精製することなく次の反応に付した。
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，４００ＭＨｚ）δ（ｐｐｍ）：７．３３−７．１８（８０Ｈ，ｍ），４．５０−４．３９（３２Ｈ，ｍ），４．２０−４．０２（４Ｈ，ｍ），３．９４−３．２８（６８Ｈ，ｍ），（ＮＨは明確に確認されず），（ＣＯＮＨは明確に確認されず）．
化合物９（１９０ｍｇ，０．０７１ｍｍｏｌ）のピリジン溶液（３ｍＬ）に無水コハク酸（２８ｍｇ，０．２８ｍｍｏｌ）、およびＮ，Ｎ−ジメチルアミノピリジン（４ｍｇ，０．０３６ｍｍｏｌ）を室温で加え、５０℃で５時間攪拌した。反応液を２ｍｏｌ／Ｌ塩酸水溶液に加えジクロロメタンで抽出した。有機層を飽和食塩水で洗浄した後、無水硫酸マグネシウムで乾燥し、これを濾過した後、溶媒を減圧下で留去した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（酢酸エチル：酢酸＝１００：０．７）で精製して、白色油状の化合物１０（１５０ｍｇ，０．０５４ｍｍｏｌ，収率７６％）を得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，４００ＭＨｚ）δ（ｐｐｍ）：７．３５−７．１７（８０Ｈ，ｍ），４．５０−４．３９（３２Ｈ，ｍ），４．２２−４．０５（４Ｈ，ｍ），４．０２−３．２７（６８Ｈ，ｍ），２．６２−２．５３（４Ｈ，ｍ），（ＯＨおよびＣＯＮＨのいずれも明確に確認されず）．
化合物１０（１５０ｍｇ，０．０５４ｍｍｏｌ）のテトラヒドロフラン溶液（２ｍＬ）にＮＨＳ（１２ｍｇ，０．１１ｍｍｏｌ）を室温で加え、同温度で１５分間攪拌した後、ＥＤＣ（２１ｍｇ，０．１１ｍｍｏｌ）およびトリエチルアミン（７ｍＬ，０．０４３ｍｍｏｌ）を室温で加え、３０分間還流した。反応液を５％ＫＨＳＯ４水溶液に加え、ジクロロメタンで抽出し、有機層を飽和炭酸水素ナトリウム水溶液、飽和食塩水で順次洗浄した後、無水硫酸マグネシウムで乾燥し、これを濾過した後、溶媒を減圧下で留去した。残渣をフラッシュカラムクロマトグラフィー（酢酸エチル：ヘキサン＝２０：１）で精製し、油状の化合物１１（６２ｍｇ，０．２１ｍｍｏｌ，収率４０％）を得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，４００ＭＨｚ）δ（ｐｐｍ）：７．３９−７．１８（８０Ｈ，ｍ），４．５４−４．３８（３２Ｈ，ｍ），４．２３−４．０７（４Ｈ，ｍ），４．８９−３．３３（６８Ｈ，ｍ），２．７７−２．６９（４Ｈ，ｍ），２．５７−２．４９（４Ｈ，ｍ），（ＣＯＮＨは明確に確認されず）．
１３Ｃ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，７５ＭＨｚ）δ（ｐｐｍ）：１７２．１（Ｃ，ＣＯ２−），１７０．４（Ｃ，ＣＯＮ），１６９．５（Ｃ×４，ＣＯＮＨ），１６８．７（Ｃ×２，ＣＯＮ），１６８．１（Ｃ×２，ＣＯＮ），１３８．８（Ｃ×１６），１２９．０（ＣＨ×１６），１２９．０（ＣＨ×１６），１２８．２（ＣＨ×１６），１２８．０（ＣＨ×１６），１２７．６（ＣＨ×１６），７９．３（ＣＨ×８），７３．８（ＣＨ２×１６），７０．５（ＣＨ２×１６），６８．９（ＣＨ２×８），５２．１（ＣＨ２×２），５１．９（ＣＨ２×４），５０．４（ＣＨ×４），３０．３（ＣＨ２），３０．２（ＣＨ２），２５．９（ＣＨ２×２）．
ＴＯＦ−ＭＳ：精密質量分析（Ｍ）＝２８８６，測定値（Ｍ＋１）＝２８８７．４４
化合物１１（１４ｍｇ，４．８５μｍｏｌ）のエタノール溶液（１ｍＬ）に水素気流下、室温でＰｄ（ＯＨ）２／Ｃ（Ｐｄ：２０重量％含有，１ｍｇ）を加えた後、同温度で３時間攪拌した。反応液を、セライト５３５を用いて濾過した後、溶媒を減圧下で留去し、化合物３２（６ｍｇ，４．１５μｍｏｌ，収率８６％）を得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ，４００ＭＨｚ）δ（ｐｐｍ）：４．２７−４．０７（４Ｈ，ｍ），３．８５−３．３６（７２Ｈ，ｍ），２．６６−２．４１（８Ｈ，ｍ）
実施例４ 本発明化合物で修飾された化学修飾低分子化合物の合成（化合物２４ａ〜２８ａ）
反応スキームを以下に示す。反応スキーム中で、Ｅｔはエチル基、Ｂｎはベンジル基、ＮＨＳはＮ−ヒドロキシスクシンイミド、ＥＤＣは１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド塩酸塩、ＴＨＦはテトラヒドロフランを表す。
化合物１２は、シンセティック・コミュニケーションズ（Ｓｙｎｔｈ．Ｃｏｍｍｕｎ．），２５，９０７（１９９５年）に記載の方法、化合物１３と化合物２は、ジャーナル・オブ・メディシナル・ケミストリー（Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．），３８，１６７３（１９９５年）に記載の方法で合成した。
化合物１２、１３および２（１．０ｍｍｏｌ）それぞれのピリジン溶液（２．０ｍＬ）に室温で、無水コハク酸（１５０．１ｍｇ，１．５ｍｍｏｌ）をゆっくりと加えた後、１００℃で１．５〜４時間攪拌した。反応液を室温まで冷やした後、２ｍｏｌ／Ｌ塩酸を加え、ジクロロメタンを用いて抽出した。有機層を飽和食塩水で洗浄した後、無水硫酸マグネシウムを用いて乾燥し、濾過した。溶媒を減圧下で留去し、残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ヘキサン：酢酸エチル＝１：３）で精製し、それぞれ化合物１４〜１６を得た（収率９２〜１００％）。
（化合物１４）
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，４００ＭＨｚ）δ（ｐｐｍ）：２．５１（２Ｈ，ｔ，Ｊ＝７．０Ｈｚ），２．６９（２Ｈ，ｔ，Ｊ＝７．０Ｈｚ），３．４９（２Ｈ，ｔ，Ｊ＝５．０Ｈｚ），３．５９（２Ｈ，ｔ，Ｊ＝５．０Ｈｚ），４．５４（２Ｈ，ｓ），６．２０（１Ｈ，ｔ，Ｊ＝５．０Ｈｚ），７．３１−７．４２（５Ｈ，ｍ）．
１３Ｃ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，７５ＭＨｚ）δ（ｐｐｍ）：１７５．８（Ｃ），１７２．５（Ｃ），１３７．４（Ｃ），１２８．１（ＣＨ×２），１２７．５（ＣＨ×２），１２７．５（ＣＨ），７２．６（ＣＨ２），６８．２（ＣＨ２），３９．１（ＣＨ２），３０．２（ＣＨ２），２９．２（ＣＨ２）．
（化合物１５）
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，４００ＭＨｚ）δ（ｐｐｍ）：２．４９（２Ｈ，ｔ，Ｊ＝５．０Ｈｚ），２．５７（２Ｈ，ｔ，Ｊ＝５．０Ｈｚ），３．５４（２Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝７．２，４．９Ｈｚ），３．６４（２Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝７．２，３．０Ｈｚ），４．２５−４．３２（１Ｈ，ｍ），４．５０（４Ｈ，ｓ），６．０９（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．９Ｈｚ），７．２５−７．３７（１０Ｈ，ｍ）．
１３Ｃ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，７５ＭＨｚ）δ（ｐｐｍ）：１７５．８（Ｃ），１７１．６（Ｃ），１３７．７（Ｃ×２），１２８．３（ＣＨ×４），１２７．６（ＣＨ×４），１２７．６（ＣＨ×２），１２７．６（Ｃ），７３．１（ＣＨ２×２），６８．３（ＣＨ２×２），４８．７（ＣＨ），３０．６（ＣＨ２），２９．６（ＣＨ２）．
（化合物１６）
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，４００ＭＨｚ）δ（ｐｐｍ）：２．０６（２Ｈ，ｔ，Ｊ＝５．０Ｈｚ），２．４４（２Ｈ，ｔ，Ｊ＝５．０Ｈｚ），３．５０−３．８２（１４Ｈ，ｍ），４．０９−４．１６（１Ｈ，ｍ），４．５０（２Ｈ，ｓ），４．５０（２Ｈ，ｓ），６．８２（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．５Ｈｚ），７．２５−７．３６（２０Ｈ，ｍ）．
１３Ｃ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，３００ＭＨｚ）δ（ｐｐｍ）：１７５．３（Ｃ），１７２．０（Ｃ），１３７．９（Ｃ×２），１３７．７（Ｃ×２），１２８．２（ＣＨ×４），１２８．２（ＣＨ×４），１２７．７（ＣＨ×４），１２７．６（ＣＨ×４），１２７．５（ＣＨ×２），１２７．４（ＣＨ×２），７８．９（ＣＨ×２），７３．４（ＣＨ２×２），７３．２（ＣＨ２×２），７０．５（ＣＨ２×２），６９．９（ＣＨ２×２），６８．４（ＣＨ２×２），４９．６（ＣＨ），３０．１（ＣＨ２），３０．０（ＣＨ２）．
化合物１４〜１６（１．０ｍｍｏｌ）それぞれのテトラヒドフラン溶液（４５ｍＬ）に、室温でＮＨＳ（１２６．６ｍｇ，１．１ｍｍｏｌ）、ＥＤＣ（４１２．７ｍｇ，２．０ｍｍｏｌ）およびトリエチルアミン（０．１１ｍＬ，０．８ｍｍｏｌ）を順次加えた後、２〜４時間還流した。反応液に５％硫酸水素カリウム水溶液を加えた後、ジクロロメタンを用いて抽出した。有機層を飽和炭酸水素ナトリウム水溶液、飽和食塩水で順次洗浄した後、無水硫酸マグネシウムを用いて乾燥し、濾過した。溶媒を減圧下で留去し、残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ヘキサン：酢酸エチル＝１：１０）で精製し、それぞれ化合物１７〜１９を得た（収率５３〜９０％）。
（化合物１７）
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，４００ＭＨｚ）δ（ｐｐｍ）：２．６１（２Ｈ，ｔ，Ｊ＝７．０Ｈｚ），２．８７（４Ｈ，ｓ），３．１９（２Ｈ，ｔ，Ｊ＝７．０Ｈｚ），３．４９（２Ｈ，ｔ，Ｊ＝５．０Ｈｚ），３．５９（２Ｈ，ｔ，Ｊ＝５．０Ｈｚ），４．５５（２Ｈ，ｓ），６．１３−６．２５（１Ｈ，ｍ），７．３１−７．４２（５Ｈ，ｍ）．
１３Ｃ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，７５ＭＨｚ）δ（ｐｐｍ）：１７０．１（Ｃ×２），１６９．１（Ｃ），１６８．２（Ｃ），１３７．８（Ｃ），１２８．５（ＣＨ×２），１２７．９（ＣＨ×２），１２７．９（ＣＨ），７３．２（ＣＨ２），６８．９（ＣＨ２），３９．５（ＣＨ２），３０．６（ＣＨ２），２６．８（ＣＨ２），２５．５（ＣＨ２×２）．
（化合物１８）
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，４００ＭＨｚ）δ（ｐｐｍ）：２．５９（２Ｈ，ｔ，Ｊ＝５．５Ｈｚ），２．７９（４Ｈ，ｓ），２．９８（２Ｈ，ｔ，Ｊ＝５．５Ｈｚ），３．５４（２Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝７．５，５．０Ｈｚ），３．６４（２Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝７．５，３．０Ｈｚ），４．２７−４．３４（１Ｈ，ｍ），４．５１（４Ｈ，ｓ），５．９５（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．８Ｈｚ），７．２５−７．３９（１０Ｈ，ｍ）．１３Ｃ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，７５ＭＨｚ）δ（ｐｐｍ）：１６９．３（Ｃ），１６８．７（Ｃ×２），１６７．９（Ｃ），１３７．９（Ｃ×２），１２８．２（ＣＨ×４），１２７．６（ＣＨ×４），１２７．５（ＣＨ×２），７３．１（ＣＨ２×２），６８．３（ＣＨ２×２），４８．６（ＣＨ），３０．７（ＣＨ２），２６．７（ＣＨ２），２５．５（ＣＨ２×２）．
（化合物１９）
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，４００ＭＨｚ）δ（ｐｐｍ）：２．１２（２Ｈ，ｔ，Ｊ＝５．８Ｈｚ），２．７７−２．８２（６Ｈ，ｍ），３．５１−３．８２（１４Ｈ，ｍ），４．０９−４．１７（１Ｈ，ｍ），４．５０（２Ｈ，ｓ），４．５１（２Ｈ，ｓ），６．６８（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．０Ｈｚ），７．２７−７．３５（２０Ｈ，ｍ）．
１３Ｃ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，７５ＭＨｚ）δ（ｐｐｍ）：１６９．２（Ｃ），６８．７（Ｃ×２），１６７．８（Ｃ），１３８．０（Ｃ×２），１３７．８（Ｃ×２），１２８．３（ＣＨ×４），１２８．２（ＣＨ×４），１２７．７（ＣＨ×４），１２７．６（ＣＨ×４），１２７．４（ＣＨ×４），７９．０（ＣＨ×２），７３．４（ＣＨ２×２），７３．３（ＣＨ２×２），７０．６（ＣＨ２×２），７０．０（ＣＨ２×２），６８．５（ＣＨ２×２），４９．４（ＣＨ），２９．８（ＣＨ２），２６．５（ＣＨ２），２５．０（ＣＨ２×２）．
Ｎ−（８−アミノオクチル）ベンズアミド塩酸塩［Ｎ−（８−ａｍｉｎｏｏｃｔｙｌ）ｂｅｎｚａｍｉｄｅｈｙｄｒｏｃｈｌｏｒｉｄｅ（化合物Ｒａ−Ｈ・ＨＣｌ）］はシンセシス（Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ），９１７（１９８８年）に記載の方法で合成した。
化合物１７〜１９および６（１．０ｍｍｏｌ）それぞれのテトラヒドロフラン溶液（２０ｍＬ）に、室温で化合物Ｒａ−Ｈ・ＨＣｌ（２８４．８ｍｇ，１．０ｍｍｏｌ）、およびトリエチルアミン（０．１４ｍＬ，１．０ｍｍｏｌ）を順次加えた後、同温度で３〜６時間攪拌した。反応液に５％硫酸水素カリウム水溶液を加えた後、クロロホルムで抽出した。有機層を飽和炭酸水素ナトリウム水溶液、飽和食塩水で順次洗浄した後、無水硫酸マグネシウムで乾燥し、濾過した。溶媒を減圧下で留去し、残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ＣＨＣｌ３：メタノール＝２０：１）で精製し、それぞれ化合物２０ａ〜２３ａを得た（収率６２〜７９％）。
（化合物２０ａ）
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，４００ＭＨｚ）δ（ｐｐｍ）：１．２３−１．６８（１２Ｈ，ｍ），２．４６−２．６５（４Ｈ，ｍ），３．１８−３．６０（８Ｈ，ｍ），４．５１（２Ｈ，ｓ），６．１３−６．３８（３Ｈ，ｍ），７．３０−７．８６（１０Ｈ，ｍ）．
１３Ｃ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３：ＣＤ３ＯＤ＝１０：１，７５ＭＨｚ）δ（ｐｐｍ）：１７２．９（Ｃ），１７２．７（Ｃ），１６８．１（Ｃ），１３７．８（Ｃ），１３４．７（Ｃ），１３１．５（ＣＨ），１２８．６（ＣＨ×２），１２８．５（ＣＨ×２），１２７．９（ＣＨ×２），１２７．９（ＣＨ×２），１２６．９（ＣＨ），７３．２（ＣＨ２），６８．７（ＣＨ２），４０．０（ＣＨ２），３９．５（ＣＨ２），３９．４（ＣＨ２），３１．８（ＣＨ２），３１．７（ＣＨ２），２９．５（ＣＨ２），２９．２（ＣＨ２），２９．１（ＣＨ２），２９．０（ＣＨ２），２６．８（ＣＨ２），２６．７（ＣＨ２）．
（化合物２１ａ）
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，４００ＭＨｚ）δ（ｐｐｍ）：１．２３−１．６８（１２Ｈ，ｍ），２．４６−２．６５（４Ｈ，ｍ），３．２０（２Ｈ，ｑ，Ｊ＝５．０Ｈｚ），３．４５（２Ｈ，ｑ，Ｊ＝５．０Ｈｚ），３．５２−３．６６（２Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝８．０，４．５Ｈｚ），３．６３（２Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝８．０，３．０Ｈｚ），４．２３−４．３１（１Ｈ，ｍ），４．５１（４Ｈ，ｓ），５．９４−６．１９（３Ｈ，ｍ），７．２８−７．７９（１５Ｈ，ｍ）．
１３Ｃ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，７５ＭＨｚ）δ（ｐｐｍ）：１７２．１（Ｃ），１７２．０（Ｃ），１６７．６（Ｃ），１３７．８（Ｃ×２），１３４．６（Ｃ），１３１．２（ＣＨ），１２８．４（ＣＨ×２），１２８．３（ＣＨ×６），１２７．６（ＣＨ×２），１２７．５（ＣＨ×２），１２６．７（ＣＨ×２），７３．１（ＣＨ２×２），６８．４（ＣＨ２×２），４８．６（ＣＨ），４０．０（ＣＨ２），３９．５（ＣＨ２），３１．９（ＣＨ２），３１．８（ＣＨ２），２９．５（ＣＨ２），２９．３（ＣＨ２），２９．０（ＣＨ２），２９．０（ＣＨ２），２６．８（ＣＨ２），２６．６（ＣＨ２）．
（化合物２２ａ）
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，４００ＭＨｚ）δ（ｐｐｍ）：１．２３−１．６８（１２Ｈ，ｍ），２．１７（２Ｈ，ｔ，Ｊ＝５．０Ｈｚ），２．３４（２Ｈ，ｔ，Ｊ＝５．０Ｈｚ），３．１５（２Ｈ，ｑ，Ｊ＝５．０Ｈｚ），３．４２（２Ｈ，ｑ，Ｊ＝５．０Ｈｚ），３．５２−３．６５（１０Ｈ，ｍ），３．６５−３．８４（４Ｈ，ｍ），４．０７−４．１５（１Ｈ，ｍ），４．４５（４Ｈ，ｓ），４．５０（４Ｈ，ｓ），６．３０−６．４５（２Ｈ，ｍ），６．７３（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．０Ｈｚ），７．２８−７．７９（２５Ｈ，ｍ）．
１３Ｃ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，７５ＭＨｚ）δ（ｐｐｍ）：１７２．１（Ｃ），１７２．０（Ｃ），１６７．５（Ｃ），１３８．１（Ｃ×２），１３８．０（Ｃ×２），１３４．８（Ｃ），１３１．６（ＣＨ），１２８．４（ＣＨ×２），１２８．４（ＣＨ×４），１２８．３（ＣＨ×４），１２７．７（ＣＨ×４），１２７．７（ＣＨ×２），１２７．６（ＣＨ×２），１２７．６（ＣＨ×４），１２６．９（ＣＨ×２），７９．０（ＣＨ×２），７３．４（ＣＨ２×２），７３．３（ＣＨ２×２），７０．５（ＣＨ２），７０．４（ＣＨ２），７０．０（ＣＨ２），７０．０（ＣＨ２），６８．５（ＣＨ２×２），４９．４（ＣＨ），４０．０（ＣＨ２），３９．４（ＣＨ２），３１．７（ＣＨ２），３１．４（ＣＨ２），２９．５（ＣＨ），２９．４（ＣＨ２），２９．１（ＣＨ２），２９．０（ＣＨ２），２６．８（ＣＨ２），２６．７（ＣＨ２）．
（化合物２３ａ）
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，４００ＭＨｚ）δ（ｐｐｍ）：１．２３−１．６８（１２Ｈ，ｍ），２．３０（２Ｈ，ｔ，Ｊ＝５．０Ｈｚ），２．４５（２Ｈ，ｔ，Ｊ＝５．０Ｈｚ），３．１０（２Ｈ，ｑ，Ｊ＝５．０Ｈｚ），３．４０（２Ｈ，ｑ，Ｊ＝５．０Ｈｚ），３．４０−３．８０（３２Ｈ，ｍ），４．１０−４．２２（２Ｈ，ｍ），４．５０（１６Ｈ，ｓ），５．８７（１Ｈ，ｂｒｄ，Ｊ＝５．０Ｈｚ），６．３２（１Ｈ，ｂｒｄ，Ｊ＝５．０Ｈｚ），７．０８（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．０Ｈｚ），７．２１−７．４１（４０Ｈ，ｍ），７．４１−７．５５（３Ｈ，ｍ），７．７７（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝５．５Ｈｚ），８．２９（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．０Ｈｚ）．
１３Ｃ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，７５ＭＨｚ）δ（ｐｐｍ）：１７３．１（Ｃ），１７１．７（Ｃ），１６８．５（Ｃ），１６８．０（Ｃ），１６７．３（Ｃ），１３８．１（Ｃ×２），１３８．０（Ｃ×４），１３７．９（Ｃ×２），１３４．７（Ｃ），１３１．１（ＣＨ），１２８．３，１２８．２，１２８．２，１２７．６，１２７．６，１２７．５，１２７．５，１２７．５，１２７．４，１２７．４，および１２６．７（ＣＨ×４４），７８．９（ＣＨ×２），７８．８（ＣＨ×２），７３．３（ＣＨ２×２），７３．３（ＣＨ２×２），７３．２（ＣＨ２×４），７０．３（ＣＨ２×２），７０．２（ＣＨ２×２），６９．９（ＣＨ２×２），６９．９（ＣＨ２×２），６８．８（ＣＨ２×２），６８．３（ＣＨ２×２），５３．４（ＣＨ２），５２．３（ＣＨ２），４９．９（ＣＨ），４９．６（ＣＨ），４０．０（ＣＨ２），３９．４（ＣＨ２），３１．１（ＣＨ２），２９．５（ＣＨ２），２９．４（ＣＨ２），２９．１（ＣＨ２），２９．０（ＣＨ２），２８．２（ＣＨ２），２６．８（ＣＨ２），２６．７（ＣＨ２）．
化合物２０ａ〜２３ａ（１．０ｍｍｏｌ）それぞれのエタノール溶液（１５ｍＬ）に水素気流下、室温で、触媒量のＰｄ（ＯＨ）２／Ｃ（Ｐｄ：２０重量％含有）を加えた後、同温度で３〜６時間攪拌した。反応液を、セライト５３５（和光純薬社製）を用いて濾過した後、溶媒を減圧下で留去し、それぞれ化合物２５ａ〜２８ａを得た（収率１００％）。
（化合物２５ａ）
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ，４００ＭＨｚ）δ（ｐｐｍ）：１．２８−１．４１（８Ｈ，ｍ），１．４５−１．５２（２Ｈ，ｍ），１．５８−１．６６（２Ｈ，ｍ），２．４６−２．５０（４Ｈ，ｍ），３．１６（２Ｈ，ｔ，Ｊ＝５．５Ｈｚ），３．３０（２Ｈ，ｔ，Ｊ＝４．５Ｈｚ），３．３８（２Ｈ，ｔ，Ｊ＝５．５Ｈｚ），３．５８（２Ｈ，ｔ，Ｊ＝４．５Ｈｚ），７．４１−７．５３（３Ｈ，ｍ），７．７７−７．８１（２Ｈ，ｍ）．
１３Ｃ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３：ＣＤ３ＯＤ＝１：１０，７５ＭＨｚ）δ（ｐｐｍ）：１７４．７（Ｃ），１７４．３（Ｃ），１７０．１（Ｃ），１３５．６（Ｃ），１３２．３（ＣＨ），１２９．３（ＣＨ×２），１２８．０（ＣＨ×２），６１．４（ＣＨ２），４２．８（ＣＨ２），４０．９（ＣＨ２），４０．３（ＣＨ２），３２．２（ＣＨ２），３２．１（ＣＨ２），３０．３（ＣＨ２），３０．２（ＣＨ２），３０．２（ＣＨ２×２），２７．８（ＣＨ２），２７．７（ＣＨ２）．
（化合物２６ａ）
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ，４００ＭＨｚ）δ（ｐｐｍ）：１．２８−１．４１（８Ｈ，ｍ），１．４５−１．５２（２Ｈ，ｍ），１．５８−１．６６（２Ｈ，ｍ），２．４６−２．５２（４Ｈ，ｍ），３．１６（２Ｈ，ｔ，Ｊ＝５．５Ｈｚ），３．３８（２Ｈ，ｔ，Ｊ＝５．５Ｈｚ），３．５５−３．６５（４Ｈ，ｍ），３．９０（１Ｈ，ｑ，Ｊ＝４．０Ｈｚ），７．４１−７．５３（３Ｈ，ｍ），７．７７−７．８１（２Ｈ，ｍ）．
１３Ｃ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３：ＣＤ３ＯＤ＝３：７，７５ＭＨｚ）δ（ｐｐｍ）：１７３．９（Ｃ），１７３．４（Ｃ），１６９．２（Ｃ），１３４．９（Ｃ），１３１．８（ＣＨ），１２８．８（ＣＨ×２），１２７．４（ＣＨ×２），６１．６（ＣＨ２×２），５３．３（ＣＨ），４０．４（ＣＨ２），３９．８（ＣＨ２），３１．９（ＣＨ２），３１．６（ＣＨ２），２９．７（ＣＨ２），２９．５（ＣＨ２×３），２７．２（ＣＨ２），２７．１（ＣＨ２）．
（化合物２７ａ）
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ，４００ＭＨｚ）δ（ｐｐｍ）：１．２８−１．４１（８Ｈ，ｍ），１．４５−１．５２（２Ｈ，ｍ），１．５８−１．６６（２Ｈ，ｍ），２．４６−２．５２（４Ｈ，ｍ），３．１６（２Ｈ，ｔ，Ｊ＝５．０Ｈｚ），３．３５（２Ｈ，ｔ，Ｊ＝５．０Ｈｚ），３．５５−３．８０（１４Ｈ，ｍ），４．０７−４．１５（１Ｈ，ｍ），７．４１−７．５３（３Ｈ，ｍ），７．７７−７．８１（２Ｈ，ｍ）．
１３Ｃ−ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ，７５ＭＨｚ）δ（ｐｐｍ）：１７４．５（Ｃ），１７４．３（Ｃ），１６９．９（Ｃ），１３５．７（Ｃ），１３２．４（ＣＨ），１２９．４（ＣＨ×２），１２８．１（ＣＨ×２），８２．９（ＣＨ×２），６９．５（ＣＨ２×２），６２．４（ＣＨ２×２），６２．３（ＣＨ２×２），５１．０（ＣＨ），４０．９（ＣＨ２），４０．５（ＣＨ２），３２．３（ＣＨ２），３２．２（ＣＨ２），３０．４（ＣＨ２×２），３０．２（ＣＨ２×２），２７．９（ＣＨ２），２７．８（ＣＨ２）．
（化合物２８ａ）
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ，４００ＭＨｚ）δ（ｐｐｍ）：１．２８−１．４１（８Ｈ，ｍ），１．４５−１．５２（２Ｈ，ｍ），１．５８−１．６６（２Ｈ，ｍ），２．４８（２Ｈ，ｔ，Ｊ＝５．０Ｈｚ），２．６０（２Ｈ，ｔ，Ｊ＝５．０Ｈｚ），３．１６（２Ｈ，ｔ，Ｊ＝５．５Ｈｚ），３．３８（２Ｈ，ｔ，Ｊ＝５．５Ｈｚ），３．５２−３．８２（２８Ｈ，ｍ），４．０５（２Ｈ，ｓ），４．１５（１Ｈ，ｔ，Ｊ＝４．０Ｈｚ），４．２２（１Ｈ，ｔ，Ｊ＝４．０Ｈｚ），４．２７（２Ｈ，ｓ），７．４１−７．５３（３Ｈ，ｍ），７．７７−７．８１（２Ｈ，ｍ）．
１３Ｃ−ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ，７５ＭＨｚ）δ（ｐｐｍ）：１７５．６（Ｃ），１７４．２（Ｃ），１７１．７（Ｃ），１７１．４（Ｃ），１７０．０（Ｃ），１３５．７（Ｃ），１３２．４（ＣＨ），１２９．４（ＣＨ×２），１２８．１（ＣＨ×２），８３．１（ＣＨ×２），８２．９（ＣＨ×２），６９．７（ＣＨ２×２），６９．５（ＣＨ２×２），６２．６（ＣＨ２×２），６２．５（ＣＨ２×２），６２．４（ＣＨ２×４），５４．５（ＣＨ２），５４．０（ＣＨ２），５１．６（ＣＨ），５１．３（ＣＨ），４１．０（ＣＨ２），４０．５（ＣＨ２），３１．７（ＣＨ２），３０．５（ＣＨ２），３０．３（ＣＨ２×２），３０．３（ＣＨ２），２９．２（ＣＨ２），２８．０（ＣＨ２），２７．９（ＣＨ２）．
化合物２４ａ［Ｎ−（８−プロピオニルアミノオクチル）ベンズアミド（Ｎ−（８−ｐｒｏｐｉｏｎｙｌａｍｉｎｏｏｃｔｙｌ）ｂｅｎｚａｍｉｄｅ）］はＲａ−Ｈ・ＨＣｌとプロピオン酸のＮＨＳエステルを用い、上記と同様に反応させて取得した。
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，４００ＭＨｚ）δ（ｐｐｍ）：１．１５（３Ｈ，ｔ，Ｊ＝６．０Ｈｚ），１．２９−１．６８（１２Ｈ，ｍ），２．１９（２Ｈ，ｑ，Ｊ＝５．０Ｈｚ），３．２２（２Ｈ，ｑ，Ｊ＝５．０Ｈｚ），３．４４（２Ｈ，ｑ，Ｊ＝５．０Ｈｚ），５．７１（１Ｈ，ｂｒｄ，ＣＯＮＨ），６．３８（１Ｈ，ｂｒｄ，ＣＯＮＨ），７．４０−７．５０（３Ｈ，ｍ），７．７７（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．０Ｈｚ），
１３Ｃ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，７５ＭＨｚ）δ（ｐｐｍ）：１７４．０（Ｃ），１６７．６（Ｃ），１３４．８（Ｃ），１３１．３（ＣＨ），１２８．５（ＣＨ×２），１２６．９（ＣＨ×２），４０．０（ＣＨ２），３９．５（ＣＨ２），２９．７（ＣＨ２），２９．６（ＣＨ２），２９．５（ＣＨ２），２９．０（ＣＨ２），２９．０（ＣＨ２），２６．８（ＣＨ２），２６．７（ＣＨ２），１０．０（ＣＨ３）．
実施例５ 化合物の合成（化合物２４ｂ〜２８ｂ）
化合物１７〜１９および６（１．０ｍｍｏｌ）それぞれのジクロロメタン溶液（２０ｍＬ）に、室温でＬ−フェニルアラニンメチルエステル塩酸塩（化合物Ｒｂ’−Ｈ・ＨＣｌ、４３１．４ｍｇ，２．０ｍｍｏｌ）、およびトリエチルアミン（０．４２ｍＬ，３．０ｍｍｏｌ）を順次加えた後、同温度で３〜６時間攪拌した。反応液に５％硫酸水素カリウム水溶液を加えた後、ジクロロメタンを用いて抽出した。有機層を飽和炭酸水素ナトリウム水溶液、飽和食塩水で順次洗浄した後、無水硫酸マグネシウムで乾燥し、濾過した。溶媒を減圧下で留去し、残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ヘキサン：酢酸エチル＝１：３）で精製し、それぞれ化合物２０ｂ’〜２３ｂ’を得た（収率７９〜９７％）。
（化合物２０ｂ’）
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，４００ＭＨｚ）δ（ｐｐｍ）：２．４０（２Ｈ，ｔ，Ｊ＝５．０Ｈｚ），２．４９（２Ｈ，ｔ，Ｊ＝５．０Ｈｚ），２．９８（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１１．０，５．０Ｈｚ），３．０９（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１１．０，５．０Ｈｚ），３．４０（２Ｈ，ｔ，Ｊ＝４．０Ｈｚ），３．４８（２Ｈ，ｔ，Ｊ＝４．０Ｈｚ），３．６０（３Ｈ，ｓ），４．４５（２Ｈ，ｓ），４．７９（１Ｈ，ｂｒｑ，Ｊ＝５．０Ｈｚ），６．８３（１Ｈ，ｔ，Ｊ＝４．０Ｈｚ），７．１０−７．３２（１０Ｈ，ｍ），（二つの−ＮＨは明確に観察されず）．
１３Ｃ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，７５ＭＨｚ）δ（ｐｐｍ）：１７１．０（Ｃ），１７０．９（Ｃ），１７０．９（Ｃ），１３６．８（Ｃ），１３５．１（Ｃ），１２８．０（ＣＨ×２），１２７．３（ＣＨ×２），１２７．２（ＣＨ×２），１２６．５（ＣＨ×２），１２５．７（ＣＨ×２），７１．８（ＣＨ２），６７．７（ＣＨ２），５２．４（ＣＨ３），５１．０（ＣＨ），３８．３（ＣＨ２），３６．７（ＣＨ２），３０．２（ＣＨ２×２）．
（化合物２１ｂ’）
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，４００ＭＨｚ）δ（ｐｐｍ）：２．４２−２．５２（４Ｈ，ｍ），３．０５（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１１．０，５．０Ｈｚ），３．１２（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１１．０，４．８Ｈｚ），３．５２（２Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝７．５，４．５Ｈｚ），３．６３（２Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝７．５，３．０Ｈｚ），３．７０（３Ｈ，ｓ），４．２５−４．３２（１Ｈ，ｍ），４．５０（４Ｈ，ｓ），４．８３（１Ｈ，ｄｔ，Ｊ＝６．０，５．０Ｈｚ），６．０６（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．０Ｈｚ），６．３３（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．０Ｈｚ），７．０８−７．３５（１５Ｈ，ｍ）．
１３Ｃ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，７５ＭＨｚ）δ（ｐｐｍ）：１７２．０（Ｃ），１７１．７（Ｃ），１７１．７（Ｃ），１３８．０（Ｃ×２），１３６．０（Ｃ），１２９．２，１２８．５，１２８．４，１２７．６および１２７．０（ＣＨ×１５），７３．１（ＣＨ２×２），６８．４（ＣＨ２×２），５３．３（ＣＨ３），５２．２（ＣＨ），４８．６（ＣＨ），３７．８（ＣＨ２），３１．４（ＣＨ２），３１．３（ＣＨ２）．
（化合物２２ｂ’）
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，４００ＭＨｚ）δ（ｐｐｍ）：２．１３（２Ｈ，ｔ，Ｊ＝５．０Ｈｚ），２．３４（２Ｈ，ｔ，Ｊ＝５．０Ｈｚ），３．０３（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１１．０，４．８Ｈｚ），３．１１（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１１．０，４．８Ｈｚ），３．４９−３．８０（１４Ｈ，ｍ），３．６７（３Ｈ，ｓ），４．１２（１Ｈ，ｑ，Ｊ＝５．５Ｈｚ），４．４９（４Ｈ，ｓ），４．５０（４Ｈ，ｓ），４．８０（１Ｈ，ｄｔ，Ｊ＝５．０，６．０Ｈｚ），６．５９−６．６４（２Ｈ，ｍ），７．０９−７．３３（２５Ｈ，ｍ）．
１３Ｃ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，１００ＭＨｚ）δ（ｐｐｍ）：１７１．９（Ｃ），１７１．７（Ｃ），１７１．６（Ｃ），１３８．１（Ｃ×２），１３８．０（Ｃ×２），１３６．０（Ｃ），１２９．２，１２８．５，１２８．４，１２８．３，１２７．７，１２７．７，１２７．６および１２７．０（ＣＨ×２５），７９．０（ＣＨ），７９．０（ＣＨ），７３．４（ＣＨ２×２），７３．３（ＣＨ２×２），７０．４（ＣＨ２），７０．０（ＣＨ２），６８．５（ＣＨ２×２），６８．５（ＣＨ２×２），５３．３（ＣＨ３），５２．１（ＣＨ），４９．４（ＣＨ），３７．８（ＣＨ２），３１．３（ＣＨ２），３０．９（ＣＨ２）．
（化合物２３ｂ’）
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，４００ＭＨｚ）δ（ｐｐｍ）：２．２６−２．４５（４Ｈ，ｍ），３．００（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１１．０，５．０Ｈｚ），３．０６（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１１．０，５．０Ｈｚ），３．３４−３．８０（３２Ｈ，ｍ），３．６３（３Ｈ，ｓ），４．０７−４．１４（１Ｈ，ｍ），４．１７−４．２５（１Ｈ，ｍ），４．４６（１６Ｈ，ｓ），４．７７（１Ｈ，ｄｔ，Ｊ＝６．０，５．０Ｈｚ），６．１５（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．０Ｈｚ），６．９７（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．０Ｈｚ），７．０６−７．５２（４５Ｈ，ｍ），８．３６（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．０Ｈｚ）．
１３Ｃ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，１００ＭＨｚ）δ（ｐｐｍ）：１７３．０（Ｃ），１７１．８（Ｃ），１７１．５（Ｃ），１６８．８（Ｃ），１６８．３（Ｃ），１３８．３（Ｃ×２），１３８．２（Ｃ×２），１３８．２（Ｃ×２），１３８．１（Ｃ×２），１３６．０（Ｃ），１２９．３，１２８．５，１２８．４，１２８．４，１２７．８，１２７．７，１２７．６および１２７．０（ＣＨ×４５），７９．０（ＣＨ×２），７８．６（ＣＨ×２），７３．４（ＣＨ２×２），７３．３（ＣＨ２×２），７３．３（ＣＨ２×４），７０．４（ＣＨ２×２），７０．２（ＣＨ２×２），７０．０（ＣＨ２×２），７０．０（ＣＨ２×２），６８．９（ＣＨ２×２），６８．４（ＣＨ２×２），５３．６（ＣＨ２），５３．２（ＣＨ３），５２．３（ＣＨ２），５２．１（ＣＨ），４９．９（ＣＨ），４９．６（ＣＨ），３７．８（ＣＨ２），３０．７（ＣＨ２），２７．８（ＣＨ２）．
化合物２０ｂ’〜２３ｂ’（１．０ｍｍｏｌ）のそれぞれを１０％水酸化カリウムエタノール溶液（１５ｍＬ）中、室温で６〜１２時間攪拌した。反応液に５％硫酸水素カリウム水溶液を加えた後、酢酸エチルで抽出した。有機層を飽和食塩水で洗浄した後、無水硫酸マグネシウムで乾燥し、濾過した。溶媒を減圧下で留去し、それぞれ化合物２０ｂ〜２３ｂを得た（収率９１〜９９％）。
（化合物２０ｂ）
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，４００ＭＨｚ）δ（ｐｐｍ）：２．４３−２．４９（４Ｈ，ｍ），３．０２（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１１．０，５．０Ｈｚ），３．１６（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１１．０，４．０Ｈｚ），３．４３（２Ｈ，ｂｒｔ，Ｊ＝３．５Ｈｚ），３．５３（２Ｈ，ｔ，Ｊ＝３．５Ｈｚ），４．５０（２Ｈ，ｓ），４．７４（１Ｈ，ｂｒｄｄ，Ｊ＝５．０，４．０Ｈｚ），６．６４（１Ｈ，ｂｒｄ，ＣＯＮＨ），６．８４（１Ｈ，ｂｒｄ，Ｊ＝３．５Ｈｚ，ＣＯＮＨ），７．１４−７．４０（１０Ｈ，ｍ），８．４５（１Ｈ，ｂｒｄ，ＣＯＯＨ）．
１３Ｃ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，７５ＭＨｚ）δ（ｐｐｍ）：１７３．２（Ｃ），１７３．０（Ｃ），７２．３（Ｃ），１３７．５（Ｃ），１３６．１（Ｃ），１２９．３（ＣＨ），１２８．３（ＣＨ×２），１２８．２（ＣＨ×２），１２７．７（ＣＨ×２），１２７．７（ＣＨ×２），１２６．６（ＣＨ），７３．０（ＣＨ２），６８．４（ＣＨ２），５３．６（ＣＨ），３９．５（ＣＨ２），３７．３（ＣＨ２），３１．８（ＣＨ２×２）．
（化合物２１ｂ）
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，４００ＭＨｚ）δ（ｐｐｍ）：２．４０−２．４６（４Ｈ，ｍ），３．０５（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１１．０，４．５Ｈｚ），３．１９（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１１．０，４．０Ｈｚ），３．５１（２Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝７．０，４．５Ｈｚ），３．６１（２Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝７．０，４．５Ｈｚ），４．２０−４．２８（１Ｈ，ｍ），４．４９（４Ｈ，ｓ），４．７２（１Ｈ，ｄｄｄ，Ｊ＝６．０，４．０，４．５Ｈｚ），６．２９（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．０Ｈｚ，ＣＯＮＨ），６．６８（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．０Ｈｚ，ＣＯＮＨ），７．１２−７．３６（１５Ｈ，ｍ），（ＣＯＯＨは明確に確認されず）．
１３Ｃ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，７５ＭＨｚ）δ（ｐｐｍ）：１７３．５（Ｃ），１７２．９（Ｃ），１７２．３（Ｃ），１３７．８（Ｃ×２），１３６．２（Ｃ），１２９．５，１２９．５，１２８．４，１２８．４，１２７．８，１２７．８，１２７．７および１２６．９（ＣＨ×１５），７３．２（ＣＨ２×２），６８．３（ＣＨ２×２），５３．５（ＣＨ），４８．９（ＣＨ），３７．３（ＣＨ２），３２．１（ＣＨ２），３２．０（ＣＨ２）．
（化合物２２ｂ）
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，４００ＭＨｚ）δ（ｐｐｍ）：２．１４−２．４１（４Ｈ，ｍ），３．０３（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１１．０，５．５Ｈｚ），３．１８（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１１．０，４．５Ｈｚ），３．４７−３．７６（１４Ｈ，ｍ），４．０７−４．１３（１Ｈ，ｍ），４．４８−４．５２（８Ｈ，ｍ），４．６７（１Ｈ，ｂｒｄｄ，Ｊ＝５．５，４．５Ｈｚ），６．７６−６．８６（２Ｈ，ｍ），７．１３−７．３４（２５Ｈ，ｍ），（ＣＯＯＨは明確に確認されず）．
１３Ｃ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，７５ＭＨｚ）δ（ｐｐｍ）：１７３．３（Ｃ），１７２．７（Ｃ），１７２．２（Ｃ），１３８．０（Ｃ），１３８．０（Ｃ），１３７．９（Ｃ），１３７．８（Ｃ），１３６．４（Ｃ），１２９．５，１２８．４，１２８．４，１２８．３，１２７．９，１２７．８，１２７．８，１２７．７，１２７．７，１２７．７，１２７．６および１２６．９（ＣＨ×２５），７９．０（ＣＨ），７８．９（ＣＨ），７３．４（ＣＨ２×２），７３．４（ＣＨ２×２），７０．３（ＣＨ２），７０．０（ＣＨ２），６８．４（ＣＨ２×４），５３．６（ＣＨ），４９．７（ＣＨ），３７．２（ＣＨ２），３１．９（ＣＨ２），３１．７（ＣＨ２）．
（化合物２３ｂ）
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，４００ＭＨｚ）δ（ｐｐｍ）：２．２２−２．５８（４Ｈ，ｍ），２．９２（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝９．０，５．０Ｈｚ），３．１１（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝９．０，３．５Ｈｚ），３．２９−３．８０（３２Ｈ，ｍ），４．０７−４．１４（１Ｈ，ｍ），４．１６−４．２３（１Ｈ，ｍ），４．４６（１６Ｈ，ｓ），４．６４（１Ｈ，ｄｄｄ，Ｊ＝６．０，５．０，３．５Ｈｚ），６．３８（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．０Ｈｚ），７．００（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．０Ｈｚ），６．９１−７．４７（４５Ｈ，ｍ），８．１０（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．０Ｈｚ）．
１３Ｃ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３、７５ＭＨｚ）δ（ｐｐｍ）：１７３．５（Ｃ），１７２．８（Ｃ），１７２．６（Ｃ），１６６．９（Ｃ），１６８．４（Ｃ），１３８．２（Ｃ），１３８．２（Ｃ），１３８．１（Ｃ），１３８．１（Ｃ），１３８．１（Ｃ），１３８．０（Ｃ），１３８．０（Ｃ），１３７．９（Ｃ），１３６．４（Ｃ），１２９．３，１２８．５，１２８．４，１２８．４，１２８．３，１２７．９，１２７．８，１２７．８，１２７．７，１２７．７および１２６．９（ＣＨ×４５Ｈ），７８．９（ＣＨ），７８．９（ＣＨ），７８．７（ＣＨ），７８．６（ＣＨ），７３．４（ＣＨ２×２），７３．４（ＣＨ２×２），７３．３（ＣＨ２×４），７０．４（ＣＨ２），７０．４（ＣＨ２），７０．４（ＣＨ２），７０．３（ＣＨ２），７０．２（ＣＨ２），７０．２（ＣＨ２），７０．１（ＣＨ２），７０．０（ＣＨ２），６８．８（ＣＨ２×２），６８．４（ＣＨ２×２），５３．６（ＣＨ），５３．３（ＣＨ２），５２．１（ＣＨ２），５０．０（ＣＨ），４９．７（ＣＨ），３７．１（ＣＨ２），３１．１（ＣＨ２），２８．４（ＣＨ２）．
化合物２０ｂ〜２３ｂ（１．０ｍｍｏｌ）それぞれのエタノール溶液（１５ｍＬ）に水素気流下、室温で、触媒量のＰｄ／（ＯＨ）２（Ｐｄ：２０重量％含有，１０〜５０ｍｇ）を加えた後、同温度で６〜１２時間攪拌した。反応液を、セライト５３５を用いて濾過した後、溶媒を減圧下で留去し、それぞれ化合物２５ｂ〜２８ｂを得た（収率８９〜９７％）。
（化合物２５ｂ）
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ，４００ＭＨｚ）δ（ｐｐｍ）：２．３６−２．５０（４Ｈ，ｍ），２．９５（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１４．０，９．０Ｈｚ），３．１８（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１４．０，５．０Ｈｚ），３．３０（２Ｈ，ｔ，Ｊ＝６．０Ｈｚ），３．５６（２Ｈ，ｔ，Ｊ＝６．０Ｈｚ），４．６４（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝９．０，５．０Ｈｚ），７．１６−７．３０（５Ｈ，ｍ）．
１３Ｃ−ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ，７５ＭＨｚ）δ（ｐｐｍ）：１７４．９（Ｃ），１７４．７（Ｃ），１７４．５（Ｃ），１３８．４（Ｃ），１３０．３（ＣＨ×２），１２９．４（ＣＨ×２），１２７．８（ＣＨ），６１．６（ＣＨ２），５５．１（ＣＨ），４３．０（ＣＨ２），３８．４（ＣＨ２），３２．２（ＣＨ２），３２．０（ＣＨ２）．
（化合物２６ｂ）
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ，４００ＭＨｚ）δ（ｐｐｍ）：２．５２−２．５９（４Ｈ，ｍ），３．００−３．２１（２Ｈ，ｍ），３．６２−３．７５（４Ｈ，ｍ），４．００−４．０４（１Ｈ，ｍ），４．６０−４．６６（１Ｈ，ｍ），７．３５−７．４９（５Ｈ，ｍ）．
１３Ｃ−ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ，７５ＭＨｚ）δ（ｐｐｍ）：１７４．８（Ｃ），１７４．７（Ｃ），１７４．７（Ｃ），１３８．３（Ｃ），１３０．２（ＣＨ×２），１２９．４（ＣＨ×２），１２７．７（ＣＨ），６２．０（ＣＨ２×２），５５．１（ＣＨ），５４．４（ＣＨ），３８．４（ＣＨ２），３２．３（ＣＨ２），３２．０（ＣＨ２）．
（化合物２７ｂ）
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ，４００ＭＨｚ）δ（ｐｐｍ）：２．５３−２．６３（４Ｈ，ｍ），３．１１（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１１．０，７．０Ｈｚ），３．３２（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１１．０，４．０Ｈｚ），３．６２−３．８１（１４Ｈ，ｍ），４．２１（１Ｈ，ｑ，Ｊ＝４．０Ｈｚ），４．７１−４．７５（１Ｈ，ｍ），７．３６−７．４９（５Ｈ，ｍ）．
１３Ｃ−ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ，７５ＭＨｚ）δ（ｐｐｍ）：１７４．５（Ｃ），１７４．３（Ｃ），１７３．３（Ｃ），１３８．１（Ｃ），１３０．１（ＣＨ），１３０．１（ＣＨ），１２９．３（ＣＨ），１２９．３（ＣＨ），１２７．７（ＣＨ），８２．７（ＣＨ×２），６９．４（ＣＨ２×２），６２．３（ＣＨ２×２），６２．２（ＣＨ２×２），５４．９（ＣＨ），５０．８（ＣＨ），３８．２（ＣＨ２），３２．０（ＣＨ２），３１．８（ＣＨ２）．
（化合物２８ｂ）
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ，４００ＭＨｚ）δ（ｐｐｍ）：２．４９−２．５２（４Ｈ，ｍ），２．９３（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１１．０，６．０Ｈｚ），３．１９（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１１．０，４．０Ｈｚ），３．３０−３．７９（２８Ｈ，ｍ），４．００−４．０３（２Ｈ，ｍ），４．１３−４．１８（２Ｈ，ｍ），４．１８−４．２３（２Ｈ，ｍ），４．４５−４．５１（１Ｈ，ｍ），７．１９−７．２９（５Ｈ，ｍ）．
１３Ｃ−ＮＭＲ（Ｄ２Ｏ：ＣＤ３ＯＤ＝２０：１，７５ＭＨｚ）δ（ｐｐｍ）：１７６．４（Ｃ），１７５．１（Ｃ），１７２．２（Ｃ），１７２．１（Ｃ），１７１．７（Ｃ），１３７．８（Ｃ），１３０．２（ＣＨ×２），１２９．６（ＣＨ×２），１２７．９（ＣＨ），８２．０（ＣＨ×４），６９．３（ＣＨ２×４），６１．６（ＣＨ２×４），６１．５（ＣＨ２×４），５５．５（ＣＨ），５３．９（ＣＨ２），５３．４（ＣＨ２），５１．０（ＣＨ），５０．７（ＣＨ），３７．９（ＣＨ２），３１．１（ＣＨ２），２８．７（ＣＨ２）．
化合物２４ｂ［（３−フェニル−（Ｓ）−２−プロピオニル）アミノプロピオン酸（（３−ｐｈｅｎｙｌ−（Ｓ）−２−ｐｒｏｐｉｏｎｙｌ）ａｍｉｎｏｐｒｏｐｉｏｎｉｃ ａｃｉｄ）］はＬ−フェニルアラニンメチルエステル塩酸塩（Ｒｂ−Ｈ・ＨＣｌ）とプロピオン酸のＮＨＳエステルを用い、上記と同様にして取得した。
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ，４００ＭＨｚ）δ（ｐｐｍ）：１．０２（３Ｈ，ｔ，Ｊ＝６．０Ｈｚ），２．１６（２Ｈ，ｑ，Ｊ＝６．０Ｈｚ），３．１３（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１１．０，５．０Ｈｚ），３．２４（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１１．０，５．０Ｈｚ），４．６６（１Ｈ，ｔ，Ｊ＝５．０Ｈｚ），７．１７−７．２８（５Ｈ，ｍ）．
１３Ｃ−ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ，７５ＭＨｚ）δ（ｐｐｍ）：１７４．６（Ｃ），１７４．４（Ｃ），１３５．８（Ｃ），１２９．４（ＣＨ），１２８．６（ＣＨ），１２７．２（ＣＨ），５３．２（ＣＨ），３７．３（ＣＨ２），２９．５（ＣＨ２），９．７（ＣＨ３）．
実施例６ 本発明化合物で修飾された化学修飾低分子化合物の合成［化合物２５ａ〜２８ａの合成の別法］
反応スキームを以下に示す。
化合物１７〜１９（１．０ｍｍｏｌ）それぞれのエタノール溶液（１５ｍＬ）に水素気流下、室温で、触媒量のＰｄ（ＯＨ）２／Ｃ（Ｐｄ：２０重量％含有，１０〜５０ｍｇ）を加えた後、同温度で６〜１２時間攪拌した。反応液を、セライト５３５を用いて濾過した後、溶媒を減圧下で留去し、それぞれ化合物２９〜３１を得た（収率６２〜１００％）。
（化合物２９）
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ，４００ＭＨｚ）δ（ｐｐｍ）：２．７１（２Ｈ，ｔ，Ｊ＝５．０Ｈｚ），２．９７（４Ｈ，ｓ），３．２２（２Ｈ，ｔ，Ｊ＝５．０Ｈｚ），３．４９（２Ｈ，ｔ，Ｊ＝５．０Ｈｚ），３．５９（２Ｈ，ｔ，Ｊ＝５．０Ｈｚ）．
（化合物３０）
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ，４００ＭＨｚ）δ（ｐｐｍ）：２．７２（２Ｈ，ｔ，Ｊ＝５．０Ｈｚ），２．８９（４Ｈ，ｓ），３．０１（２Ｈ，ｔ，Ｊ＝５．０Ｈｚ），３．６６（４Ｈ，ｄ，Ｊ＝４．５Ｈｚ），３．９０−３．９８（１Ｈ，ｍ）．
（化合物３１）
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ，４００ＭＨｚ）δ（ｐｐｍ）：２．６９（２Ｈ，ｔ，Ｊ＝５．０Ｈｚ），２．８９（４Ｈ，ｓ），３．０１（２Ｈ，ｔ，Ｊ＝５．０Ｈｚ），３．６０−３．８２（１４Ｈ，ｍ），４．１４−４．２１（１Ｈ，ｍ）．
１３Ｃ−ＮＭＲ（ＣＤ３Ｏ，３００ＭＨｚ）δ（ｐｐｍ）：１７２．８（Ｃ），１７１．５（Ｃ×２），１６９．６（Ｃ），８３．０（ＣＨ×２），６９．６（ＣＨ２×２），６２．５（ＣＨ２×２），６２．３（ＣＨ２×２），５１．２（ＣＨ），３１．０（ＣＨ２），２７．５（ＣＨ２），２６．５（ＣＨ２×２）．
化合物Ｒａ−Ｈ（１．０ｍｍｏｌ，２８５ｍｇ）と化合物２９〜３１および７（２．０ｍｍｏｌ）それぞれを５％りん酸二カリウム塩水溶液中（５ｍＬ）、室温で１時間攪拌し、それぞれ化合物２５ａ〜２８ａを得た（実施例４での合成品と照合し、それぞれ同一化合物であることが確認された）。
実施例７ 本発明化合物で修飾された化学修飾低分子化合物の合成（化合物２５ｂ〜２８ｂの合成の別法）
Ｌ−フェニルアラニン（Ｒｂ−Ｈ，１．０ｍｍｏｌ，１６５ｍｇ）と化合物２９〜３１および７（２．０ｍｍｏｌ）それぞれを５％りん酸二カリウム塩水溶液中（５ｍＬ）、室温で１時間攪拌し、それぞれ化合物２５ｂ〜２８ｂを得た（実施例５での合成品と照合し、それぞれ同一化合物であることが確認された）。
実施例８ 化合物の合成［式（４）で表される化合物］
反応スキームを以下に示す。
エタノールアミン（５００ｍｇ，８．２ｍｍｏｌ）および水酸化ナトリウム（１．７ｇ，４０ｍｍｏｌ）をジオキサンと水の混合溶媒（１０：１，５０ｍＬ）に懸濁し、得られた懸濁液にジ−ｔｅｒｔ−ブチルジカーボナート（１．９６ｇ，９．０ｍｍｏｌ）を０℃で数回に分けて加えた。反応液を０℃で２時間攪拌した後、硫酸水素カリウム水溶液（５％，５０ｍＬ）を加え、酢酸エチル（１５０ｍＬ）を用いて抽出した。抽出した有機層を水（３０ｍＬ）、飽和食塩水（３０ｍｌ）で順次洗浄した後、無水硫酸マグネシウムを用いて乾燥し、濾過した。溶媒を減圧下で留去し、粗精製の（２−ヒドロキシエチル）カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル［（２−ｈｙｄｒｏｘｙｅｔｈｙｌ）ｃａｒｂａｍｉｃ ａｃｉｄ ｔｅｒｔ−ｂｕｔｙｌ ｅｓｔｅｒ；１．３２ｇ，８．２ｍｍｏｌ，収率１００％］を得た。
トリフェニルホスフィン（２．１５ｇ，８．２ｍｍｏｌ）のテトラヒドロフラン溶液（２５ｍＬ）に光延試薬［ジエチルアゾジカルボキシレート（ｄｉｅｔｈｙｌａｚｏｄｉｃａｒｂｏｘｙｌａｔｅ）］のトルエン溶液（１．１０６ｇ／ｍＬ，８．２ｍｍｏｌ，１．２９ｍＬ）を−７８℃でゆっくりと加えた。得られた溶液に（２−ヒドロキシエチル）カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル（１．３２ｇ，８．２ｍｍｏｌ）のテトラヒドロフラン溶液（５ｍＬ）およびマレイミド（７９４ｍｇ，８．２ｍｍｏｌ）を加え、−７８℃で５分間攪拌した後、室温で３６時間攪拌した。得られた反応液を濃縮した後、エーテルを加え、生じた沈殿を濾過して取り除いた。得られた濾液を濃縮し、得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトフィー（ヘキサン：酢酸エチル＝１：１）で精製し、２−（マレイミド）エチルカルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル［２−（ｍａｌｅｉｍｉｄｏ）ｅｔｈｙｌｃａｒｂａｍｉｃ ａｃｉｄ ｔｅｒｔ−ｂｕｔｙｌ ｅｓｔｅｒ；５３１ｍｇ，２．５３ｍｍｏｌ，収率３１％］を得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，４００ＭＨｚ）δ（ｐｐｍ）：６．７２（２Ｈ，ｓ），４．７５（１Ｈ，ｂｒ，ＮＨ），３．６６（２Ｈ，ｔ，Ｊ＝５．６Ｈｚ），３．３３（２Ｈ，ｄｔ，Ｊ＝５．１，５．６Ｈｚ），１．４０（９Ｈ，ｓ）．
（２−マレイミド）カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル（４８ｍｇ，０．２ｍｍｏｌ）をトリフルオロ酢酸とジクロロメタンの混合溶媒（３０：７０，５ｍＬ）に溶解し、０℃で２時間攪拌した後、反応液を濃縮した。得られた残渣をジクロロメタン（２０ｍｌ）に溶解し、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液（１０ｍＬ）を加え、分液した。有機層を炭酸水素カリウムを用いて乾燥し、濾過した。溶媒を減圧下で留去し、１−（２−アミノエチル）−３−ピロリン−２，５−ジオン［１−（２−ａｍｉｎｏｅｔｈｙｌ）−３−ｐｙｒｒｏｌｉｎｅ−２，５−ｄｉｏｎｅ；２８ｍｇ，０．２ｍｍｏｌ，収率１００％］を得た。
化合物７（７７．２ｍｇ，０．１ｍｍｏｌ）および１−（２−アミノエチル）−３−ピロリン−２，５−ジオン（２８．０ｍｇ，０．２ｍｍｏｌ）を水（５ｍＬ）に懸濁し、室温で２時間攪拌した。反応液を濃縮し、得られた残渣を分取用逆相薄層クロマトグラフィー（分取用逆相ＴＬＣ）（水：メタノール＝１０：１）で精製し、化合物３３（３９ｍｇ，０．０５ｍｍｏｌ，収率５０％）を得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ，３００ＭＨｚ）δ（ｐｐｍ）：６．５６（２Ｈ，ｓ），４．２２−４．０５（６Ｈ，ｍ），３．８０−３．４３（３２Ｈ，ｍ），２．９６−２．７４（４Ｈ，ｍ）．
実施例９ 化合物の合成［式（５）で表される化合物］
反応スキームを以下に示す。反応スキーム中で、Ｂｎはベンジル基を表す。
化合物３４をジャーナル・オブ・オーガニック・ケミストリー（Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．），５０，１１４８−１１５６（１９９０年）に記載の方法に従って調製した。化合物４（３００ｍｇ，０．２３１ｍｍｏｌ）のテトラヒドロフラン溶液（３ｍＬ）を０℃に冷却し、６０％水素化ナトリウム（１０．２ｍｇ，０．２５５ｍｍｏｌ）を加えた後、１０分間攪拌した。反応液に４−クロロ酪酸クロライド（０．０２８ｍｌ，０．２５５ｍｍｏｌ）を加え１０分間攪拌した後、室温にて８時間攪拌した。反応液に１ｍｏｌ／Ｌ塩酸を加えた後、酢酸エチルを用いて抽出した。有機層を飽和食塩水で洗浄した後、無水硫酸マグネシウムで乾燥し、濾過した。溶媒を減圧下で留去し、残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ヘキサン：酢酸エチル＝１：２）で精製し、化合物３４（２３１．６ｍｇ，０．１６５ｍｍｏｌ，収率７１％）を得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，４００ＭＨｚ）δ（ｐｐｍ）：８．３８（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８Ｈｚ，ＣＯＮＨ），７．３３−７．２１（４０Ｈ，ｍ），６．９９（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，ＣＯＮＨ），４．４６（１６Ｈ，ｓ），４．２５−４．０６（２Ｈ，ｍ），３．８０−３．３７（３４Ｈ，ｍ），２．２９（２Ｈ，ｔ，Ｊ＝６．８Ｈｚ），１．９７（２Ｈ，ｑｕｉｎｔ，Ｊ＝６．４Ｈｚ）．
１３Ｃ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，１００ＭＨｚ）δ（ｐｐｍ）：１７２．４（Ｃ），１６８．５（Ｃ），１６７．９（Ｃ），１３８．０（Ｃ×２），１３８．０（Ｃ×２），１３７．９（Ｃ×２），１３７．９（Ｃ×２），１２８．１，１２８．１，１２８．１，１２７．６，１２７．４，１２７．３および１２７．３（ＣＨ×４０），７８．９（ＣＨ×２），７８．５（ＣＨ×２），７３．３（ＣＨ２×２），７３．２（ＣＨ２×２），７３．１（ＣＨ２×４），７０．４（ＣＨ２×２），７０．１（ＣＨ２×２），６９．９（ＣＨ２×２），６９．８（ＣＨ２×２），６８．８（ＣＨ２×２），６８．２（ＣＨ２×２），５３．５（ＣＨ２），５２．２（ＣＨ２），４９．８（ＣＨ），４９．５（ＣＨ），４４．４（ＣＨ２），２９．２（ＣＨ２），２７．４（ＣＨ２）．
化合物３５をジャーナル・オブ・ザ・アメリカン・ケミカル・ソサエティー（Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．），１１１，２８５−２９１（１９８９年）に記載の方法に従って調製した。
化合物３４（２３１．６ｍｇ，０．１６５ｍｍｏｌ）のエタノール溶液（５０ｍＬ）に、室温でチオ酢酸（０．０２４ｍＬ，０．３３１ｍｍｏｌ）およびナトリウムエトキシド（２２．５ｍｇ，０．３３１ｍｍｏｌ）を加えた後、１５時間還流した。反応液を室温まで冷却した後、１ｍｏｌ／Ｌ塩酸を加え、酢酸エチルを用いて抽出した。有機層を５％炭酸水素ナトリウム水溶液、飽和食塩水で順次洗浄した後、無水硫酸マグネシウムを用いて乾燥し、濾過した。溶媒を減圧下で留去し、残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（酢酸エチル）で精製し、化合物３５（１７４．９ｍｇ，０．１２１ｍｍｏｌ，収率７３％）を得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，４００ＭＨｚ）δ（ｐｐｍ）：８．４８（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．６Ｈｚ，ＣＯＮＨ），７．３３−７．２０（４０Ｈ，ｍ），６．９６（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ），４．４６（１６Ｈ，ｓ），４．２６−４．０５（２Ｈ，ｍ），３．８０−３．３５（３２Ｈ，ｍ），２．８０（２Ｈ，ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ），２．２６（３Ｈ，ｓ），２．１９（２Ｈ，ｔ，Ｊ＝７．０Ｈｚ），１．８０（２Ｈ，ｑｕｉｎｔ，Ｊ＝７．０Ｈｚ）．
化合物３６をジャーナル・オブ・ザ・アメリカン・ケミカル・ソサエティー（Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．），８５，１３３７−１３４１（１９６３年）に記載の方法に従って調製した。
化合物３５（１７４．９ｍｇ，０．１２１ｍｍｏｌ）のエタノール溶液（１０ｍＬ）に、０℃で０．６ｍｏｌ／Ｌ水酸化ナトリウムエタノール溶液（５ｍＬ，３ｍｍｏｌ）を加え、室温で２４時間攪拌した。反応液に１ｍｏｌ／Ｌ塩酸を加えた後、酢酸エチルを用いて抽出した。有機層を飽和食塩水で洗浄した後、無水硫酸マグネシウムで乾燥し、濾過した。溶媒を減圧下で留去し、残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（酢酸エチル）で精製し、化合物３６（１１３．３ｍｇ，０．０７９ｍｍｏｌ，収率６７％）を得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，４００ＭＨｚ）δ（ｐｐｍ）：８．５３（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ），７．３５−７．１８（４０Ｈ，ｍ），６．９８（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ），４．４５（１６Ｈ，ｓ），４．２７−４．０５（２Ｈ，ｍ），３．８１−３．３２（３２Ｈ，ｍ），２．５５（２Ｈ，ｔ，Ｊ＝６．８Ｈｚ），２．２３（２Ｈ，ｔ，Ｊ＝７．０Ｈｚ），１．９０（２Ｈ，ｑｕｉｎｔ，Ｊ＝６．８Ｈｚ）．
１３Ｃ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，１００ＭＨｚ）δ（ｐｐｍ）：１７２．７（Ｃ），１６８．６（Ｃ），１６８．１（Ｃ），１３８．１（Ｃ×２），１３８．０（Ｃ×２），１３７．９（Ｃ×２），１３７．９（Ｃ×２），１２８．１，１２８．１，１２７．６，１２７．４，１２７．３および１２７．３（ＣＨ×４０），７８．８（ＣＨ×２），７８．５（ＣＨ×２），７３．３（ＣＨ２×２），７３．１（ＣＨ２×２），７３．１（ＣＨ２×４），７０．３（ＣＨ２×２），７０．１（ＣＨ２×２），６９．９（ＣＨ２×２），６９．８（ＣＨ２×２），６８．８（ＣＨ２×２），６８．２（ＣＨ２×２），５３．６（ＣＨ２），５２．２（ＣＨ２），４９．８（ＣＨ），４９．４（ＣＨ），３７．３（ＣＨ２），３０．５（ＣＨ２），２３．７（ＣＨ２）．
実施例１０ 本発明化合物で修飾された化学修飾ステロール類の調製
反応スキームを以下に示す。反応スキーム中で、Ｂｎはベンジル基を表す。
化合物６（２．４ｇ，１．６１ｍｍｏｌ）のテトラヒドロフラン溶液に、室温で化合物Ｅ（１．４３ｇ，３．２２ｍｍｏｌ）およびジメチルアミノピリジン（ＤＭＡＰ；０．７９ｇ，６．４４ｍｍｏｌ）を順次加えた後、同温度で２時間撹拌した。反応液を５％硫酸水素カリウム水溶液に注いだ後、酢酸エチルを用いて抽出した。有機層を飽和炭酸水素ナトリウム水溶液、飽和食塩水で順次洗浄した後、無水硫酸マグネシウムを用いて乾燥し、濾過した。溶媒を減圧下で留去し、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（クロロホルム：メタノール＝２０：１）で精製し、化合物３７（２．４５ｇ，１．３３ｍｍｏｌ，収率８３％）を得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，４００ＭＨｚ）δ（ｐｐｍ）：８．２８−８．２２（１Ｈ，ｍ，ＣＯＮＨ），８．３５−８．１９（ｍ，４０Ｈ），７．１０−７．００（１Ｈ，ｍ，ＣＯＮＨ），６．１７−６．０９（１Ｈ，ｍ，ＣＯＮＨ），４．５１−４．４３（１６Ｈ，ｍ），３．８０−３．４０（３６Ｈ，ｍ），３．２６−３．２０（２Ｈ，ｍ），３．１９−３．０８（１Ｈ，ｍ），２．４８−２．４１（２Ｈ，ｍ），２．３５−２．２９（２Ｈ，ｍ），２．００−０．８０（３３Ｈ，ｍ），０．９０（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．４Ｈｚ），０．８６（６Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．４Ｈｚ），０．７７（３Ｈ，ｓ），０．６３（３Ｈ，ｓ）．
１３Ｃ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，７５ＭＨｚ）δ（ｐｐｍ）：１７３．１（Ｃ），１７１．５（Ｃ），１６８．１（Ｃ），１３８．２（Ｃ），１２８．３，１２７．６および１２７．５（ＣＨ×４０），７８．９（ＣＨ×４）７０．４（ＣＨ２×８），７０．０（ＣＨ２×８），６８．４（ＣＨ２×４），６６．４（ＣＨ２），５６．５（ＣＨ），５６．３（ＣＨ），５４．４（ＣＨ），５２．３（ＣＨ２×２），４４．８（ＣＨ×２），４２．６（Ｃ），４０．０（ＣＨ２），３９．５（ＣＨ２），３８．０（ＣＨ２），３７．０（ＣＨ２），３６．２（ＣＨ２），３５．８（ＣＨ），３５．８（Ｃ），３５．５（ＣＨ），３４．８（ＣＨ２），３２．１（ＣＨ２），３１．１（ＣＨ２），３１．０（ＣＨ２），２９．６（ＣＨ２），２８．９（ＣＨ２），２８．３（ＣＨ２），２８．３（ＣＨ２），２８．０（ＣＨ），２４．３（ＣＨ２），２３．９（ＣＨ２），２２．９（ＣＨ３），２２．６（ＣＨ３），２１．３（ＣＨ２），１８．７（ＣＨ３），１２．４（ＣＨ３），１２．１（ＣＨ３）．
化合物３７（２．４５ｇ，１．３３ｍｍｏｌ）のエタノール溶液（１５ｍＬ）に、水素気流下、室温でＰｄ（ＯＨ）２／Ｃ（Ｐｄ：２０重量％含有，２６０ｍｇ）を加えた後、同温度で３時間撹拌した。反応液をセライト５３５を用いて濾過した後、溶媒を減圧下で留去し、化合物３８（１．５２ｇ，１．３３ｍｍｏｌ，収率１００％）を得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ，４００ＭＨｚ）δ（ｐｐｍ）：４．３３−４．１２（４Ｈ，ｍ），４．０８−３．９９（２Ｈ，ｍ），３．９３−３．３６（３２Ｈ，ｍ），３．２７−３．１７（１Ｈ，ｍ），２．６６−２．４３（４Ｈ，ｍ），２．０７−０．８５（３３Ｈ，ｍ），０．９３（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．８Ｈｚ），０．８８（６Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．８Ｈｚ），０．８２（３Ｈ，ｓ），０．６９（３Ｈ，ｓ）．
参考例１ Ｇ−ＣＳＦ誘導体の調製
ヒトＧ−ＣＳＦ（ｈＧ−ＣＳＦ）の１番目のスレオニンをアラニンに、３番目のロイシンをスレオニンに、４番目のグリシンをチロシンに、５番目のプロリンをアルギニンに、１７番目のシステインをセリンにそれぞれ置換した配列番号１または配列番号２に示したアミノ酸配列を有するｈＧ−ＣＳＦ誘導体を、特公平０７−０９６５５８に記載の方法により取得した。なお、配列番号１は、ＭｅｔをＮ末端にシグナルペプチドのアミノ酸として含んでいる。
前記のｈＧ−ＣＳＦ誘導体をコードするＤＮＡを含むプラスミドｐＣｆＢＤ２８を保有する大腸菌Ｗ３１１０ｓｔｒＡ株（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａｃｏｌｉ ＥＣｆＢＤ２８ ＦＥＲＭ ＢＰ−１４７９）をＬＧ培地（バクトトリプトン１０ｇ、酵母エキス５ｇ、塩化ナトリウム５ｇ、グルコース１ｇを水１Ｌに溶かし、ＮａＯＨでｐＨを７．０とする）で３７℃、１８時間培養し、この培養液５ｍＬを２５μｇ／ｍＬのトリプトファンと５０μｇ／ｍＬのアンピシリンを含むＭＣＧ培地（Ｎａ２ＨＰＯ４ ０．６％、ＫＨ２ＰＯ４ ０．３％、塩化ナトリウム０．５％、カザミノ酸０．５％、ＭｇＳＯ４ １ｍｍｏｌ／Ｌ、ビタミンＢ１４μｇ／ｍＬ、ｐＨ７．２）１００ｍＬに摂取し、３０℃で４〜８時間培養した後、トリプトファンの誘導物質である３β−インドールアクリル酸（３β−ｉｎｄｏｌｅａｃｒｙｌｉｃ ａｃｉｄ）を１０μｇ／ｍＬ加え、さらに２〜１２時間培養を続けた。培養液を８，０００ｒｐｍ、１０分間遠心して集菌し、３０ｍｍｏｌ／Ｌ塩化ナトリウム、３０ｍｍｏｌ／Ｌトリス・塩酸緩衝液（ｐＨ７．５）で洗浄した。
洗浄菌体を前記緩衝液３０ｍＬに懸濁し、０℃で１０分間超音波破砕（ＢＲＡＮＳＯＮ ＳＯＮＩＣ ＰＯＷＥＲ ＣＯＭＰＡＮＹ社製、ＳＯＮＩＦＩＥＲ ＣＥＬＬ ＤＩＳＲＵＰＴＯＲ ２００、ＯＵＴＰＵＴ ＣＯＮＴＲＯＬ ２）した。該超音波破砕物を９，０００ｒｐｍで３０分間遠心分離して菌体残渣を得た。
菌体残渣からマーストンらの方法［バイオ／テクノロジー（ＢＩＯ／ＴＥＣＨＮＯＬＯＧＹ），２，８００（１９８４年）］に準じ、ｈＧ−ＣＳＦ誘導体を抽出・精製・可溶化・再生した。
参考例２ ポリエチレングリコール修飾Ｇ−ＣＳＦ誘導体の調製
５０ｍｍｏｌ／Ｌりん酸緩衝液（ｐＨ７．６）で４．０ｍｇ／ｍＬに調製した参考例１のＧ−ＣＳＦ誘導体９９５ｍＬに１９．１ｇ（蛋白質１モル当たり４．５モル）の活性化ＰＥＧ誘導体（Ｍ−ＳＰＡ−２０，０００、Ｓｈｅａｒｗａｔｅｒ Ｐｏｌｙｍｅｒｓ，Ｉｎｃ．社製、平均分子量約２０，０００）を添加し、４℃で一昼夜反応させた。次いで、２０ｍｍｏｌ／Ｌ酢酸緩衝液（ｐＨ４．５）で平衡化したＳＰ Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ ＦＦ カラム２０００ｍＬ（Ａｍｅｒｓｈａｍ−Ｐｈａｒｍａｃｉａ Ｂｉｏｔｅｃｈ社製）に通塔し精製した。
目的画分４０００ｍＬを濃縮し、１１．２ｍｇ／ｍＬの目的物を含む溶液３２０ｍＬを得た（収率９０．４％）。
＜電気泳動＞
２−メルカプトエタノール非存在下、４−２０％グラジエントゲル（ＡＴＴＯ社製ＰＡＧＥＬ ＳＰＧ−５２０Ｌ）でＳＤＳ−ＰＡＧＥを行い、１〜３分子結合体のバンドを確認した。
＜ゲル濾過ＨＰＬＣ分析＞
ＴＳＫ ｇｅｌ Ｇ−４０００ＳＷＸＬカラム（７．８×３００ｍｍ×２本連結，東ソー社製）２本を用い、以下の方法で分析した。
保持時間：３８．２分（１分子結合体）
３４．４分（２分子結合体）
３２．２分（３分子結合体）
移動相：１５０ｍｍｏｌ／Ｌ塩化ナトリウム、２０ｍｍｏｌ／Ｌ酢酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ４．５）流量：０．５ｍＬ／分
検出：ＵＶ２８０ｎｍ
参考例３ ３−（３β，５α−コレスタンオキシ）プロピル−１−アミン［化合物Ｅ；３−（３β，５α−ｃｈｏｌｅｓｔａｎｏｘｙ）ｐｒｏｐｙｌ−１−ａｍｉｎｅ］の合成
反応スキームを以下に示す。反応スキーム中で、Ｔｓはトシル基を表す。
化合物Ａは、ジャーナル・オブ・ザ・ケミカル・ソサエティ，パーキン・トランスアクション１（Ｊ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．，Ｐｅｒｋｉｎ Ｔｒａｎｓ．１），１，１５８−１６０（１９７９年）に記載の方法により合成した。
化合物Ｂをジャーナル・オブ・オーガニック・ケミストリー（Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．），５８，６７５６−６７６５（１９９３年）に記載の方法に従って調製した。化合物Ａ（５５６ｍｇ，１．２５ｍｍｏｌ）のジクロロメタン溶液（４ｍＬ）を−７８℃に冷却し、ＢＨ３・Ｓ（ＣＨ３）２（０．４７ｍＬ，５ｍｍｏｌ）およびトリメチルシリルトリフラート（ＴＭＳＯＴｆ；０．９ｍＬ，５ｍｍｏｌ）を加えた後、同温度で１５分間攪拌した。反応液を炭酸水素ナトリウム水溶液中に注いだ後、ジクロロメタンを用いて抽出した。有機層を、無水硫酸マグネシウムを用いて乾燥し、濾過した。溶媒を減圧下で留去し、残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ヘキサン：酢酸エチル＝３：１）で精製し、化合物Ｂ［３−（３β，５α−ｃｈｏｌｅｓｔａｎｏｘｙ）ｐｒｏｐａｎ−１−ｏｌ；２７９ｍｇ，０．６３ｍｍｏｌ，収率５０％］を得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，４００ＭＨｚ）δ（ｐｐｍ）：３．７８（２Ｈ，ｔ，Ｊ＝６．４Ｈｚ），３．６７（２Ｈ，ｔ，Ｊ＝６．４Ｈｚ），３．２３（１Ｈ，ｄｄｄｄ，Ｊ＝６．４，６．４，１４．４，１４．４Ｈｚ），２．６７（１Ｈ，ｂｒｓ，ＯＨ），２．００−０．８１（３３Ｈ，ｍ），０．９０（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．４Ｈｚ），０．８６（６Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．８Ｈｚ），０．７９（３Ｈ，ｓ），０．６４（３Ｈ，ｓ）．
１３Ｃ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，７５ＭＨｚ）δ（ｐｐｍ）：７９．７（ＣＨ），６８．３（ＣＨ２），６３．３（ＣＨ２），５７．１（ＣＨ），５６．９（ＣＨ），５５．０（ＣＨ），４５．５（ＣＨ），４３．２（Ｃ），４０．７（ＣＨ２），４０．２（ＣＨ２），３７．６（ＣＨ２），３６．８（ＣＨ２），３６．４（ＣＨ），３６．４（Ｃ），３６．１（ＣＨ），３５．４（ＣＨ２），３２．８（ＣＨ２），３２．８（ＣＨ２），２９．５（ＣＨ２），２８．９（ＣＨ２），２８．９（ＣＨ２），２８．７（ＣＨ），２４．９（ＣＨ２），２４．５（ＣＨ２），２３．５（ＣＨ３），２３．２（ＣＨ３），２１．９（ＣＨ２），１９．３（ＣＨ３），１３．０（ＣＨ３），１２．７（ＣＨ３）．
化合物Ｂ（５．１７ｇ，１１．５８ｍｍｏｌ）のジクロロメタン溶液（５０ｍＬ）に、室温でトルエンスルホニルクロライド（４．４２ｇ，２３．１６ｍｍｏｌ）およびトリエチルアミン（７．８ｍＬ，４６．３２ｍｍｏｌ）を加えた後、同温度で２４時間攪拌した。反応液を５％硫酸水素カリウム水溶液に注いだ後、ジクロロメタンを用いて抽出した。有機層を飽和炭酸水素ナトリウム水溶液、飽和食塩水で順次洗浄した後、無水硫酸マグネシウムを用いて乾燥し、濾過した。溶媒を減圧下で留去し、化合物Ｃ［３−（３β，５α−ｃｈｏｌｅｓｔａｎｏｘｙ）ｐｒｏｐｙｌ ４−ｍｅｔｈｙｌｂｅｎｚｅｎｅｓｕｌｆｏｎａｔｅ；６．９５ｇ，１１．５８ｍｍｏｌ，収率１００％］を得た。
化合物Ｃ（６．９５ｇ，１１．５８ｍｍｏｌ）のＤＭＦ溶液（４０ｍＬ）に、アジ化ナトリウム（２．８６ｇ，４４ｍｍｏｌ）を室温で加えた後、１２０℃で３時間攪拌した。反応液を室温まで冷却した後、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液に注ぎ、ジエチルエーテルを用いて抽出した。有機層を飽和食塩水で洗浄した後、硫酸マグネシウムを用いて乾燥し、濾過した。溶媒を減圧下で留去し、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（ヘキサン：酢酸エチル＝３：１）で精製し、化合物Ｄ［３−（３β，５α−ｃｈｏｌｅｓｔａｎｏｘｙ）ｐｒｏｐｙｌ−１−ａｚｉｄｅ；４．６７ｇ，９．９１ｍｍｏｌ，収率８６％］を得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，４００ＭＨｚ）δ（ｐｐｍ）：３．５２−３．４３（２Ｈ，ｍ），３．３６−３．２９（２Ｈ，ｔ，Ｊ＝６．８Ｈｚ），３．１４（１Ｈ，ｄｄｄｄ，Ｊ＝４．４，４．４，１０．８，１０．８Ｈｚ），２．００−０．７５（３３Ｈ，ｍ），０．９０（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．０Ｈｚ），０．８６（６Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．８Ｈｚ），０．７２（３Ｈ，ｓ），０．５８（３Ｈ，ｓ）．
１３Ｃ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，７５ＭＨｚ）δ（ｐｐｍ）：７８．８（ＣＨ），６４．４（ＣＨ２），５６．５（ＣＨ），５６．３（ＣＨ），５４．４（ＣＨ），４８．６（ＣＨ２），４４．８（ＣＨ），４２．６（Ｃ），４０．０（ＣＨ２），３９．５（ＣＨ２），３７．０（ＣＨ２），３６．２（ＣＨ２），３５．８（ＣＨ），３５．８（Ｃ），３５．５（ＣＨ），３４．８（ＣＨ２），３２．１（ＣＨ２），２９．６（ＣＨ２），２８．８（ＣＨ２），２８．２（ＣＨ２），２８．２（ＣＨ２），２８．０（ＣＨ），２４．２（ＣＨ２），２３．８（ＣＨ２），２２．８（ＣＨ３），２２．６（ＣＨ３），２１．２（ＣＨ３），１８．７（ＣＨ３），１２．３（ＣＨ３），１２．１（ＣＨ３）．
化合物Ｄ（１．９７ｇ，４．１８ｍｍｏｌ）のエタノール溶液（２５ｍＬ）に、水素気流下、室温でＰｄ（ＯＨ）２／Ｃ（Ｐｄ：２０重量％含有，２３０ｍｇ）を加えた後、同温度で１２時間攪拌した。反応液を、セライト５３５を用いて濾過した後、溶媒を減圧下で留去し、化合物Ｅ［３−（３β，５α−ｃｈｏｌｅｓｔａｎｏｘｙ）ｐｒｏｐｙｌ−１−ａｍｉｎｅ；１．８６ｇ，４．１８ｍｍｏｌ，収率１００％］を得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，４００ＭＨｚ）δ（ｐｐｍ）：３．６０−３．４９（２Ｈ，ｍ），３．２０（１Ｈ，ｄｄｄｄ，Ｊ＝４．４，４．４，１０．４，１０．４Ｈｚ），２．８１（２Ｈ，ｔ，Ｊ＝６．４Ｈｚ），２．０７−０．８１（３３Ｈ，ｍ），０．９０（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．０Ｈｚ），０．８６（６Ｈ，ｄ，Ｊ＝５．６Ｈｚ），０．７９（３Ｈ，ｓ），０．６４（３Ｈ，ｓ）．
【産業上の利用可能性】
本発明で開示された化合物は生理活性ポリペプチドもしくはその誘導体または低分子化合物の化学修飾に有用である。さらに該化合物で修飾された化学修飾ポリペプチド等は安定性または水溶性が向上しているだけでなく、従来の化学修飾ポリペプチド等に比較して著しく生理活性を維持した状態で製造し得る。本発明の化学修飾ポリペプチド等は、生体内に投与された際に長時間有効にその生理活性を示し、該生理活性に関連した症状の改善剤または治療剤として有用である。また、当該化合物で修飾された化学修飾低分子化合物は、安定性または水溶性が向上しており、低分子医薬品、低分子試薬の可溶化剤等として有用である。
「配列フリーテキスト」
配列番号１−人工配列の説明：ｈＧ−ＣＳＦの５アミノ酸置換ペプチド
配列番号２−人工配列の説明：ｈＧ−ＣＳＦの５アミノ酸置換ペプチド
【配列表】
【図１】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
式（１）
（式中、Ｒは反応性を有する基または反応性を有する基に変換可能な基を含有する残基を表し、ｎは３以上の整数を表し、Ｘはｎ個の
を有することが可能な残基を表し、Ｒ１は水素原子または水素原子に変換可能な基を表し、６個以上存在するＲ１はそれぞれ同一でも異なっていてもよい）で表される化合物。
【請求項２】
全てのＲ１が水素原子である、請求の範囲１記載の化合物。
【請求項３】
全てのＲ１がベンジルである、請求の範囲１記載の化合物。
【請求項４】
ｎが２ｍ（式中、ｍは２以上の整数を表す）である、請求の範囲１〜３のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項５】
Ｘが１以上の直列的分岐構造を有する、請求の範囲１〜４のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項６】
Ｘが１個以上（ｎ−１）個以下の
または
（式中、Ｙ１、Ｙ２およびＹ３はそれぞれ独立して、単結合、あるいは置換もしくは非置換のアルキレン、カルボニル、置換もしくは非置換のイミノ、Ｏ、Ｓ、スルホニルおよびスルフィニルからなる群より選ばれる一つまたは同一もしくは異なった複数の任意の組み合わせを表し、Ｙ１、Ｙ２およびＹ３が複数存在するとき、これらはそれぞれ同一でも異なっていてもよい）で表される構造を含有する、請求の範囲１〜５のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項７】
Ｘが１個以上（ｎ−１）個以下の
で表される構造を含有する、請求の範囲１〜６のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項８】
Ｘが１個以上（ｎ−１）個以下の
で表される構造を含有する、請求の範囲１〜７のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項９】
Ｘが１個以上（ｎ−１）個以下の
で表される構造を含有する、請求の範囲１〜８のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項１０】
Ｘが１個以上（ｎ−１）個以下の
で表される構造を含有する、請求の範囲１〜９のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項１１】
反応性を有する基または反応性を有する基に変換可能な基を含有する残基が、生理活性ポリペプチドまたはその誘導体中のアミノ酸側鎖、Ｎ末端アミノ基もしくはＣ末端カルボキシル基、またはポリペプチドと結合した糖鎖との反応性を有する基または反応性を有する基に変換可能な基を含有する残基である請求の範囲１〜１０のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項１２】
反応性を有する基または反応性を有する基に変換可能な基を含有する残基が、カルボン酸活性エステル残基、カーボネート、マレイミド、メルカプト、ホルミル、トレシル、イソシアナート、酸無水物残基、酸ハロゲン化物残基、ビニルスルホニル、ヒドラジド、アミノ、水酸基、ハロゲン、カルボキシ、ビニルおよびホスホノからなる群より選ばれる基である請求の範囲１〜１１のいずれかに記載の化合物。
【請求項１３】
請求の範囲１〜１２のいずれか１項に記載の化合物を少なくとも二つ含有する混合物。
【請求項１４】
式（２）
（式中、Ｒ１Ａは水素原子またはベンジルを表す）で表される化合物。
【請求項１５】
式（３）
（式中、Ｒ１Ａは水素原子またはベンジルを表す）で表される化合物。
【請求項１６】
式（４）
（式中、Ｒ１Ａは水素原子またはベンジルを表す）で表される化合物。
【請求項１７】
式（５）
（式中、Ｒ１Ａは水素原子またはベンジルを表す）で表される化合物。
【請求項１８】
生理活性ポリペプチドまたはその誘導体が少なくとも１個の請求の範囲１〜１２および１４〜１７のいずれか１項に記載の化合物で直接もしくはスペーサーを介して修飾された化学修飾ポリペプチド。
【請求項１９】
生理活性ポリペプチドまたはその誘導体が、酵素、サイトカイン、ホルモン、毒素、抗体およびそれらの誘導体からなる群より選ばれる請求の範囲１８記載の化学修飾ポリペプチド。
【請求項２０】
生理活性ポリペプチドまたはその誘導体が、アスパラギナーゼ（Ａｓｐａｒａｇｉｎａｓｅ）、グルタミナーゼ（Ｇｌｕｔａｍｉｎａｓｅ）、アルギナーゼ（Ａｒｇｉｎａｓｅ）、ウリカーゼ（Ｕｒｉｃａｓｅ）、スーパーオキサイドディスムターゼ（Ｓｕｐｅｒｏｘｉｄｅ Ｄｉｓｕｍｕｔａｓｅ）、ラクトフェリン（Ｌａｃｔｏｆｅｒｒｉｎ）、ストレプトキナーゼ（Ｓｔｒｅｐｔｏｋｉｎａｓｅ）、プラスミン（Ｐｌａｓｍｉｎ）、アデノシンデアミナーゼ（Ａｄｅｎｏｓｉｎｅ Ｄｅａｍｉｎａｓｅ）、インターロイキン−１〜２４（Ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ−１〜２４）、インターフェロン−α（Ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ−α）、インターフェロン−β（Ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ−β）、インターフェロン−γ（Ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ−γ）、インターフェロン−ω（Ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ−ω）、インターフェロン−τ（Ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ−τ）、顆粒球コロニー刺激因子（Ｇｒａｎｕｌｏｃｙｔｅ−Ｃｏｌｏｎｙ Ｓｔｉｍｕｌａｔｉｎｇ Ｆａｃｔｏｒ）、エリスロポエチン（Ｅｒｙｔｈｒｏｐｏｉｅｔｉｎ）、腫瘍壊死因子（Ｔｕｍｏｒ Ｎｅｃｒｏｓｉｓ Ｆａｃｔｏｒ）、血小板増加因子（Ｔｈｒｏｍｂｏｐｏｉｅｔｉｎ）、クローソ（Ｋｌｏｔｈｏ）蛋白質、レプチン（Ｌｅｐｔｉｎ）、繊維芽細胞増殖因子１〜１９（Ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔ Ｇｒｏｗｔｈ Ｆａｃｔｏｒ−１〜１９）、ミッドカイン（Ｍｉｄｋｉｎｅ）、カルシトニン（Ｃａｌｃｉｔｏｎｉｎ）、表皮成長因子（Ｅｐｉｄｅｒｍａｌ Ｇｒｏｗｔｈ Ｆａｃｔｏｒ）、グルカゴン（Ｇｌｕｃａｇｏｎ）、インスリン（Ｉｎｓｕｌｉｎ）、インスリン様成長因子１（Ｉｎｓｕｌｉｎ−ｌｉｋｅ Ｇｒｏｗｔｈ Ｆａｃｔｏｒ−１）、オステオジェニックプロテイン１（Ｏｓｔｅｏｇｅｎｉｃ Ｐｒｏｔｅｉｎ−１）、幹細胞増殖因子（Ｓｔｅｍ Ｃｅｌｌ Ｇｒｏｗｔｈ Ｆａｃｔｏｒ）、アミリン（Ａｍｙｌｉｎ）、パラサイロイドホルモン（Ｐａｒａｔｈｙｒｏｉｄ Ｈｏｒｍｏｎｅ）、プラスミノーゲン活性化因子類（Ｐｌａｓｍｉｎｏｇｅｎ Ａｃｔｉｖａｔｏｒ）、血管内皮細胞成長因子（Ｖａｓｃｕｌａｒ Ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ Ｃｅｌｌ Ｇｒｏｗｔｈ Ｆａｃｔｏｒ）、形質転換成長因子類（Ｔｒａｎｓｆｏｒｍｉｎｇ Ｇｒｏｗｔｈ Ｆａｃｔｏｒ）、グルカゴン様ペプチド類（Ｇｌｕｃａｇｏｎ−ｌｉｋｅ Ｐｅｐｔｉｄｅ）、成長ホルモン（Ｇｒｏｗｔｈ Ｈｏｒｍｏｎｅ）、ナトリウム利尿ペプチド類（Ｎａｔｒｉｕｒｅｔｉｃ Ｐｅｐｔｉｄｅ）、プラスミノーゲン（Ｐｌａｓｍｉｎｏｇｅｎ）、アンジオポエチン（Ａｎｇｉｏｐｏｉｅｔｉｎ）、アンジオスタチン（Ａｎｇｉｏｓｔａｔｉｎ）、エンドスタチン（Ｅｎｄｏｓｔａｔｉｎ）、ネオカルチノスタチン（Ｎｅｏｃａｒｚｉｎｏｓｔａｔｉｎ）、肝細胞成長因子（Ｈｅｐａｔｏｃｙｔｅ Ｃｅｌｌ Ｇｒｏｗｔｈ Ｆａｃｔｏｒ）、リシン（Ｒｉｃｉｎ）、シュードモナス外毒素（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ Ｅｘｏｔｏｘｉｎ）、ジフテリア毒素（Ｄｉｐｈｔｈｅｒｉａ Ｔｏｘｉｎ）およびそれらの溶解性レセプターならびにそれらの誘導体からなる群より選ばれる請求の範囲１８記載の化学修飾ポリペプチド。
【請求項２１】
生理活性ポリペプチドの誘導体が、該ポリペプチドのアミノ酸欠失体、アミノ酸置換体、アミノ酸挿入体、アミノ酸付加体、糖鎖欠失体および糖鎖付加体からなる群より選ばれる請求の範囲１８〜２０のいずれか１項に記載の化学修飾ポリペプチド。
【請求項２２】
請求の範囲１８〜２１のいずれか１項に記載の化学修飾ポリペプチドを含有する医薬。
【請求項２３】
請求の範囲１〜１２および１４〜１７のいずれか１項に記載の化合物で生理活性ポリペプチドまたはその誘導体を化学修飾することを特徴とする、該生理活性ポリペプチドまたは該その誘導体の安定性または水溶性を向上させる方法。
【請求項２４】
生理活性ポリペプチドまたはその誘導体が、酵素、サイトカイン、ホルモン、毒素、抗体およびそれらの誘導体からなる群より選ばれる請求の範囲２３記載の方法。
【請求項２５】
生理活性ポリペプチドまたはその誘導体が、アスパラギナーゼ（Ａｓｐａｒａｇｉｎａｓｅ）、グルタミナーゼ（Ｇｌｕｔａｍｉｎａｓｅ）、アルギナーゼ（Ａｒｇｉｎａｓｅ）、ウリカーゼ（Ｕｒｉｃａｓｅ）、スーパーオキサイドディスムターゼ（Ｓｕｐｅｒｏｘｉｄｅ Ｄｉｓｕｍｕｔａｓｅ）、ラクトフェリン（Ｌａｃｔｏｆｅｒｒｉｎ）、ストレプトキナーゼ（Ｓｔｒｅｐｔｏｋｉｎａｓｅ）、プラスミン（Ｐｌａｓｍｉｎ）、アデノシンデアミナーゼ（Ａｄｅｎｏｓｉｎｅ Ｄｅａｍｉｎａｓｅ）、インターロイキン−１〜２４（Ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ−１〜２４）、インターフェロン−α（Ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ−α）、インターフェロン−β（Ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ−β）、インターフェロン−γ（Ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ−γ）、インターフェロン−ω（Ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ−ω）、インターフェロン−τ（Ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ−τ）、顆粒球コロニー刺激因子（Ｇｒａｎｕｌｏｃｙｔｅ−Ｃｏｌｏｎｙ Ｓｔｉｍｕｌａｔｉｎｇ Ｆａｃｔｏｒ）、エリスロポエチン（Ｅｒｙｔｈｒｏｐｏｉｅｔｉｎ）、腫瘍壊死因子（Ｔｕｍｏｒ Ｎｅｃｒｏｓｉｓ Ｆａｃｔｏｒ）、血小板増加因子（Ｔｈｒｏｍｂｏｐｏｉｅｔｉｎ）、クローソ（Ｋｌｏｔｈｏ）蛋白質、レプチン（Ｌｅｐｔｉｎ）、繊維芽細胞増殖因子１〜１９（Ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔ Ｇｒｏｗｔｈ Ｆａｃｔｏｒ−１〜１９）、ミッドカイン（Ｍｉｄｋｉｎｅ）、カルシトニン（Ｃａｌｃｉｔｏｎｉｎ）、表皮成長因子（Ｅｐｉｄｅｒｍａｌ Ｇｒｏｗｔｈ Ｆａｃｔｏｒ）、グルカゴン（Ｇｌｕｃａｇｏｎ）、インスリン（Ｉｎｓｕｌｉｎ）、インスリン様成長因子１（Ｉｎｓｕｌｉｎ−ｌｉｋｅ Ｇｒｏｗｔｈ Ｆａｃｔｏｒ−１）、オステオジェニックプロテイン１（Ｏｓｔｅｏｇｅｎｉｃ Ｐｒｏｔｅｉｎ−１）、幹細胞増殖因子（Ｓｔｅｍ Ｃｅｌｌ Ｇｒｏｗｔｈ Ｆａｃｔｏｒ）、アミリン（Ａｍｙｌｉｎ）、パラサイロイドホルモン（Ｐａｒａｔｈｙｒｏｉｄ Ｈｏｒｍｏｎｅ）、プラスミノーゲン活性化因子類（Ｐｌａｓｍｉｎｏｇｅｎ Ａｃｔｉｖａｔｏｒ）、血管内皮細胞成長因子（Ｖａｓｃｕｌａｒ Ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ Ｃｅｌｌ Ｇｒｏｗｔｈ Ｆａｃｔｏｒ）、形質転換成長因子類（Ｔｒａｎｓｆｏｒｍｉｎｇ Ｇｒｏｗｔｈ Ｆａｃｔｏｒ）、グルカゴン様ペプチド類（Ｇｌｕｃａｇｏｎ−ｌｉｋｅ Ｐｅｐｔｉｄｅ）、成長ホルモン（Ｇｒｏｗｔｈ Ｈｏｒｍｏｎｅ）、ナトリウム利尿ペプチド類（Ｎａｔｒｉｕｒｅｔｉｃ Ｐｅｐｔｉｄｅ）、プラスミノーゲン（Ｐｌａｓｍｉｎｏｇｅｎ）、アンジオポエチン（Ａｎｇｉｏｐｏｉｅｔｉｎ）、アンジオスタチン（Ａｎｇｉｏｓｔａｔｉｎ）、エンドスタチン（Ｅｎｄｏｓｔａｔｉｎ）、ネオカルチノスタチン（Ｎｅｏｃａｒｚｉｎｏｓｔａｔｉｎ）、肝細胞成長因子（Ｈｅｐａｔｏｃｙｔｅ Ｇｒｏｗｔｈ Ｆａｃｔｏｒ）、リシン（Ｒｉｃｉｎ）、シュードモナス外毒素（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ Ｅｘｏｔｏｘｉｎ）、ジフテリア毒素（Ｄｉｐｈｔｈｅｒｉａ Ｔｏｘｉｎ）およびそれらの溶解性レセプターならびにそれらの誘導体からなる群より選ばれる請求の範囲２３記載の方法。
【請求項２６】
生理活性ポリペプチドの誘導体が、該ポリペプチドのアミノ酸欠失体、アミノ酸置換体、アミノ酸挿入体、アミノ酸付加体、糖鎖欠失体および糖鎖付加体からなる群より選ばれる請求の範囲２３〜２５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２７】
低分子化合物が少なくとも１個の請求の範囲１〜１２および１４〜１７のいずれか１項に記載の化合物で直接またはスペーサーを介して修飾された化学修飾低分子化合物。
【請求項２８】
請求の範囲２７記載の化学修飾低分子化合物を含有する医薬。
【請求項２９】
請求の範囲１〜１２および１４〜１７のいずれか１項に記載の化合物で低分子化合物を化学修飾することを特徴とする、該低分子化合物の安定性または水溶性を向上させる方法。
【請求項３０】
請求の範囲１〜１２および１４〜１７のいずれか１項に記載の化合物を含有することを特徴とする生理活性ポリペプチドもしくはその誘導体または低分子化合物の化学修飾剤。
【請求項１】
式（１）
（式中、Ｒは反応性を有する基または反応性を有する基に変換可能な基を含有する残基を表し、ｎは３以上の整数を表し、Ｘはｎ個の
を有することが可能な残基を表し、Ｒ１は水素原子または水素原子に変換可能な基を表し、６個以上存在するＲ１はそれぞれ同一でも異なっていてもよい）で表される化合物。
【請求項２】
全てのＲ１が水素原子である、請求の範囲１記載の化合物。
【請求項３】
全てのＲ１がベンジルである、請求の範囲１記載の化合物。
【請求項４】
ｎが２ｍ（式中、ｍは２以上の整数を表す）である、請求の範囲１〜３のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項５】
Ｘが１以上の直列的分岐構造を有する、請求の範囲１〜４のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項６】
Ｘが１個以上（ｎ−１）個以下の
または
（式中、Ｙ１、Ｙ２およびＹ３はそれぞれ独立して、単結合、あるいは置換もしくは非置換のアルキレン、カルボニル、置換もしくは非置換のイミノ、Ｏ、Ｓ、スルホニルおよびスルフィニルからなる群より選ばれる一つまたは同一もしくは異なった複数の任意の組み合わせを表し、Ｙ１、Ｙ２およびＹ３が複数存在するとき、これらはそれぞれ同一でも異なっていてもよい）で表される構造を含有する、請求の範囲１〜５のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項７】
Ｘが１個以上（ｎ−１）個以下の
で表される構造を含有する、請求の範囲１〜６のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項８】
Ｘが１個以上（ｎ−１）個以下の
で表される構造を含有する、請求の範囲１〜７のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項９】
Ｘが１個以上（ｎ−１）個以下の
で表される構造を含有する、請求の範囲１〜８のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項１０】
Ｘが１個以上（ｎ−１）個以下の
で表される構造を含有する、請求の範囲１〜９のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項１１】
反応性を有する基または反応性を有する基に変換可能な基を含有する残基が、生理活性ポリペプチドまたはその誘導体中のアミノ酸側鎖、Ｎ末端アミノ基もしくはＣ末端カルボキシル基、またはポリペプチドと結合した糖鎖との反応性を有する基または反応性を有する基に変換可能な基を含有する残基である請求の範囲１〜１０のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項１２】
反応性を有する基または反応性を有する基に変換可能な基を含有する残基が、カルボン酸活性エステル残基、カーボネート、マレイミド、メルカプト、ホルミル、トレシル、イソシアナート、酸無水物残基、酸ハロゲン化物残基、ビニルスルホニル、ヒドラジド、アミノ、水酸基、ハロゲン、カルボキシ、ビニルおよびホスホノからなる群より選ばれる基である請求の範囲１〜１１のいずれかに記載の化合物。
【請求項１３】
請求の範囲１〜１２のいずれか１項に記載の化合物を少なくとも二つ含有する混合物。
【請求項１４】
式（２）
（式中、Ｒ１Ａは水素原子またはベンジルを表す）で表される化合物。
【請求項１５】
式（３）
（式中、Ｒ１Ａは水素原子またはベンジルを表す）で表される化合物。
【請求項１６】
式（４）
（式中、Ｒ１Ａは水素原子またはベンジルを表す）で表される化合物。
【請求項１７】
式（５）
（式中、Ｒ１Ａは水素原子またはベンジルを表す）で表される化合物。
【請求項１８】
生理活性ポリペプチドまたはその誘導体が少なくとも１個の請求の範囲１〜１２および１４〜１７のいずれか１項に記載の化合物で直接もしくはスペーサーを介して修飾された化学修飾ポリペプチド。
【請求項１９】
生理活性ポリペプチドまたはその誘導体が、酵素、サイトカイン、ホルモン、毒素、抗体およびそれらの誘導体からなる群より選ばれる請求の範囲１８記載の化学修飾ポリペプチド。
【請求項２０】
生理活性ポリペプチドまたはその誘導体が、アスパラギナーゼ（Ａｓｐａｒａｇｉｎａｓｅ）、グルタミナーゼ（Ｇｌｕｔａｍｉｎａｓｅ）、アルギナーゼ（Ａｒｇｉｎａｓｅ）、ウリカーゼ（Ｕｒｉｃａｓｅ）、スーパーオキサイドディスムターゼ（Ｓｕｐｅｒｏｘｉｄｅ Ｄｉｓｕｍｕｔａｓｅ）、ラクトフェリン（Ｌａｃｔｏｆｅｒｒｉｎ）、ストレプトキナーゼ（Ｓｔｒｅｐｔｏｋｉｎａｓｅ）、プラスミン（Ｐｌａｓｍｉｎ）、アデノシンデアミナーゼ（Ａｄｅｎｏｓｉｎｅ Ｄｅａｍｉｎａｓｅ）、インターロイキン−１〜２４（Ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ−１〜２４）、インターフェロン−α（Ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ−α）、インターフェロン−β（Ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ−β）、インターフェロン−γ（Ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ−γ）、インターフェロン−ω（Ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ−ω）、インターフェロン−τ（Ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ−τ）、顆粒球コロニー刺激因子（Ｇｒａｎｕｌｏｃｙｔｅ−Ｃｏｌｏｎｙ Ｓｔｉｍｕｌａｔｉｎｇ Ｆａｃｔｏｒ）、エリスロポエチン（Ｅｒｙｔｈｒｏｐｏｉｅｔｉｎ）、腫瘍壊死因子（Ｔｕｍｏｒ Ｎｅｃｒｏｓｉｓ Ｆａｃｔｏｒ）、血小板増加因子（Ｔｈｒｏｍｂｏｐｏｉｅｔｉｎ）、クローソ（Ｋｌｏｔｈｏ）蛋白質、レプチン（Ｌｅｐｔｉｎ）、繊維芽細胞増殖因子１〜１９（Ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔ Ｇｒｏｗｔｈ Ｆａｃｔｏｒ−１〜１９）、ミッドカイン（Ｍｉｄｋｉｎｅ）、カルシトニン（Ｃａｌｃｉｔｏｎｉｎ）、表皮成長因子（Ｅｐｉｄｅｒｍａｌ Ｇｒｏｗｔｈ Ｆａｃｔｏｒ）、グルカゴン（Ｇｌｕｃａｇｏｎ）、インスリン（Ｉｎｓｕｌｉｎ）、インスリン様成長因子１（Ｉｎｓｕｌｉｎ−ｌｉｋｅ Ｇｒｏｗｔｈ Ｆａｃｔｏｒ−１）、オステオジェニックプロテイン１（Ｏｓｔｅｏｇｅｎｉｃ Ｐｒｏｔｅｉｎ−１）、幹細胞増殖因子（Ｓｔｅｍ Ｃｅｌｌ Ｇｒｏｗｔｈ Ｆａｃｔｏｒ）、アミリン（Ａｍｙｌｉｎ）、パラサイロイドホルモン（Ｐａｒａｔｈｙｒｏｉｄ Ｈｏｒｍｏｎｅ）、プラスミノーゲン活性化因子類（Ｐｌａｓｍｉｎｏｇｅｎ Ａｃｔｉｖａｔｏｒ）、血管内皮細胞成長因子（Ｖａｓｃｕｌａｒ Ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ Ｃｅｌｌ Ｇｒｏｗｔｈ Ｆａｃｔｏｒ）、形質転換成長因子類（Ｔｒａｎｓｆｏｒｍｉｎｇ Ｇｒｏｗｔｈ Ｆａｃｔｏｒ）、グルカゴン様ペプチド類（Ｇｌｕｃａｇｏｎ−ｌｉｋｅ Ｐｅｐｔｉｄｅ）、成長ホルモン（Ｇｒｏｗｔｈ Ｈｏｒｍｏｎｅ）、ナトリウム利尿ペプチド類（Ｎａｔｒｉｕｒｅｔｉｃ Ｐｅｐｔｉｄｅ）、プラスミノーゲン（Ｐｌａｓｍｉｎｏｇｅｎ）、アンジオポエチン（Ａｎｇｉｏｐｏｉｅｔｉｎ）、アンジオスタチン（Ａｎｇｉｏｓｔａｔｉｎ）、エンドスタチン（Ｅｎｄｏｓｔａｔｉｎ）、ネオカルチノスタチン（Ｎｅｏｃａｒｚｉｎｏｓｔａｔｉｎ）、肝細胞成長因子（Ｈｅｐａｔｏｃｙｔｅ Ｃｅｌｌ Ｇｒｏｗｔｈ Ｆａｃｔｏｒ）、リシン（Ｒｉｃｉｎ）、シュードモナス外毒素（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ Ｅｘｏｔｏｘｉｎ）、ジフテリア毒素（Ｄｉｐｈｔｈｅｒｉａ Ｔｏｘｉｎ）およびそれらの溶解性レセプターならびにそれらの誘導体からなる群より選ばれる請求の範囲１８記載の化学修飾ポリペプチド。
【請求項２１】
生理活性ポリペプチドの誘導体が、該ポリペプチドのアミノ酸欠失体、アミノ酸置換体、アミノ酸挿入体、アミノ酸付加体、糖鎖欠失体および糖鎖付加体からなる群より選ばれる請求の範囲１８〜２０のいずれか１項に記載の化学修飾ポリペプチド。
【請求項２２】
請求の範囲１８〜２１のいずれか１項に記載の化学修飾ポリペプチドを含有する医薬。
【請求項２３】
請求の範囲１〜１２および１４〜１７のいずれか１項に記載の化合物で生理活性ポリペプチドまたはその誘導体を化学修飾することを特徴とする、該生理活性ポリペプチドまたは該その誘導体の安定性または水溶性を向上させる方法。
【請求項２４】
生理活性ポリペプチドまたはその誘導体が、酵素、サイトカイン、ホルモン、毒素、抗体およびそれらの誘導体からなる群より選ばれる請求の範囲２３記載の方法。
【請求項２５】
生理活性ポリペプチドまたはその誘導体が、アスパラギナーゼ（Ａｓｐａｒａｇｉｎａｓｅ）、グルタミナーゼ（Ｇｌｕｔａｍｉｎａｓｅ）、アルギナーゼ（Ａｒｇｉｎａｓｅ）、ウリカーゼ（Ｕｒｉｃａｓｅ）、スーパーオキサイドディスムターゼ（Ｓｕｐｅｒｏｘｉｄｅ Ｄｉｓｕｍｕｔａｓｅ）、ラクトフェリン（Ｌａｃｔｏｆｅｒｒｉｎ）、ストレプトキナーゼ（Ｓｔｒｅｐｔｏｋｉｎａｓｅ）、プラスミン（Ｐｌａｓｍｉｎ）、アデノシンデアミナーゼ（Ａｄｅｎｏｓｉｎｅ Ｄｅａｍｉｎａｓｅ）、インターロイキン−１〜２４（Ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ−１〜２４）、インターフェロン−α（Ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ−α）、インターフェロン−β（Ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ−β）、インターフェロン−γ（Ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ−γ）、インターフェロン−ω（Ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ−ω）、インターフェロン−τ（Ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ−τ）、顆粒球コロニー刺激因子（Ｇｒａｎｕｌｏｃｙｔｅ−Ｃｏｌｏｎｙ Ｓｔｉｍｕｌａｔｉｎｇ Ｆａｃｔｏｒ）、エリスロポエチン（Ｅｒｙｔｈｒｏｐｏｉｅｔｉｎ）、腫瘍壊死因子（Ｔｕｍｏｒ Ｎｅｃｒｏｓｉｓ Ｆａｃｔｏｒ）、血小板増加因子（Ｔｈｒｏｍｂｏｐｏｉｅｔｉｎ）、クローソ（Ｋｌｏｔｈｏ）蛋白質、レプチン（Ｌｅｐｔｉｎ）、繊維芽細胞増殖因子１〜１９（Ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔ Ｇｒｏｗｔｈ Ｆａｃｔｏｒ−１〜１９）、ミッドカイン（Ｍｉｄｋｉｎｅ）、カルシトニン（Ｃａｌｃｉｔｏｎｉｎ）、表皮成長因子（Ｅｐｉｄｅｒｍａｌ Ｇｒｏｗｔｈ Ｆａｃｔｏｒ）、グルカゴン（Ｇｌｕｃａｇｏｎ）、インスリン（Ｉｎｓｕｌｉｎ）、インスリン様成長因子１（Ｉｎｓｕｌｉｎ−ｌｉｋｅ Ｇｒｏｗｔｈ Ｆａｃｔｏｒ−１）、オステオジェニックプロテイン１（Ｏｓｔｅｏｇｅｎｉｃ Ｐｒｏｔｅｉｎ−１）、幹細胞増殖因子（Ｓｔｅｍ Ｃｅｌｌ Ｇｒｏｗｔｈ Ｆａｃｔｏｒ）、アミリン（Ａｍｙｌｉｎ）、パラサイロイドホルモン（Ｐａｒａｔｈｙｒｏｉｄ Ｈｏｒｍｏｎｅ）、プラスミノーゲン活性化因子類（Ｐｌａｓｍｉｎｏｇｅｎ Ａｃｔｉｖａｔｏｒ）、血管内皮細胞成長因子（Ｖａｓｃｕｌａｒ Ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ Ｃｅｌｌ Ｇｒｏｗｔｈ Ｆａｃｔｏｒ）、形質転換成長因子類（Ｔｒａｎｓｆｏｒｍｉｎｇ Ｇｒｏｗｔｈ Ｆａｃｔｏｒ）、グルカゴン様ペプチド類（Ｇｌｕｃａｇｏｎ−ｌｉｋｅ Ｐｅｐｔｉｄｅ）、成長ホルモン（Ｇｒｏｗｔｈ Ｈｏｒｍｏｎｅ）、ナトリウム利尿ペプチド類（Ｎａｔｒｉｕｒｅｔｉｃ Ｐｅｐｔｉｄｅ）、プラスミノーゲン（Ｐｌａｓｍｉｎｏｇｅｎ）、アンジオポエチン（Ａｎｇｉｏｐｏｉｅｔｉｎ）、アンジオスタチン（Ａｎｇｉｏｓｔａｔｉｎ）、エンドスタチン（Ｅｎｄｏｓｔａｔｉｎ）、ネオカルチノスタチン（Ｎｅｏｃａｒｚｉｎｏｓｔａｔｉｎ）、肝細胞成長因子（Ｈｅｐａｔｏｃｙｔｅ Ｇｒｏｗｔｈ Ｆａｃｔｏｒ）、リシン（Ｒｉｃｉｎ）、シュードモナス外毒素（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ Ｅｘｏｔｏｘｉｎ）、ジフテリア毒素（Ｄｉｐｈｔｈｅｒｉａ Ｔｏｘｉｎ）およびそれらの溶解性レセプターならびにそれらの誘導体からなる群より選ばれる請求の範囲２３記載の方法。
【請求項２６】
生理活性ポリペプチドの誘導体が、該ポリペプチドのアミノ酸欠失体、アミノ酸置換体、アミノ酸挿入体、アミノ酸付加体、糖鎖欠失体および糖鎖付加体からなる群より選ばれる請求の範囲２３〜２５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２７】
低分子化合物が少なくとも１個の請求の範囲１〜１２および１４〜１７のいずれか１項に記載の化合物で直接またはスペーサーを介して修飾された化学修飾低分子化合物。
【請求項２８】
請求の範囲２７記載の化学修飾低分子化合物を含有する医薬。
【請求項２９】
請求の範囲１〜１２および１４〜１７のいずれか１項に記載の化合物で低分子化合物を化学修飾することを特徴とする、該低分子化合物の安定性または水溶性を向上させる方法。
【請求項３０】
請求の範囲１〜１２および１４〜１７のいずれか１項に記載の化合物を含有することを特徴とする生理活性ポリペプチドもしくはその誘導体または低分子化合物の化学修飾剤。
【国際公開番号】ＷＯ２００４／０２９０１８
【国際公開日】平成１６年４月８日（２００４．４．８）
【発行日】平成１８年１月２６日（２００６．１．２６）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００４−５３９４６０（Ｐ２００４−５３９４６０）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＪＰ２００３／０１１２１４
【国際出願日】平成１５年９月２日（２００３．９．２）
【出願人】（０００００１０２９）協和醗酵工業株式会社 (276)
【出願人】（５０１１０３０００）株式会社テクノネットワーク四国 (5)
【Ｆターム（参考）】
【国際公開日】平成１６年４月８日（２００４．４．８）
【発行日】平成１８年１月２６日（２００６．１．２６）
【国際特許分類】
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＪＰ２００３／０１１２１４
【国際出願日】平成１５年９月２日（２００３．９．２）
【出願人】（０００００１０２９）協和醗酵工業株式会社 (276)
【出願人】（５０１１０３０００）株式会社テクノネットワーク四国 (5)
【Ｆターム（参考）】
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