グルタチオンレダクターゼ活性増強剤
【課題】本発明は、細胞内のグルタチオンレダクターゼの活性を増強させて、還元型のグルタチオンの生体濃度を高めるものであり、還元型のグルタチオンの欠乏により生じる過酸化物の皮膚障害を防止するグルタチオンレダクターゼ活性増強剤を提供することを目的とする。
【解決手段】メハジキ、カンゾウ、エゾウコギ、サイシン、コメ、センキュウ、ユリおよびシロキクラゲの中から選ばれる一種又は二種以上の抽出物を含有することを特徴とするグルタチオンレダクターゼ活性増強剤を提供する。
【効果】食品、化粧品、医薬部外品または医薬品等に配合してグルタチオンレダクターゼの活性を増強し、還元型グルタチオンの生成を促進することにより皮膚の酸化傷害や皮膚老化にその有効性を発揮する。詳しくは、細胞機能の低下により生じる皮膚細胞へのメラニンの沈着およびしわやハリの低下などの老化症状の改善に有効である。
【解決手段】メハジキ、カンゾウ、エゾウコギ、サイシン、コメ、センキュウ、ユリおよびシロキクラゲの中から選ばれる一種又は二種以上の抽出物を含有することを特徴とするグルタチオンレダクターゼ活性増強剤を提供する。
【効果】食品、化粧品、医薬部外品または医薬品等に配合してグルタチオンレダクターゼの活性を増強し、還元型グルタチオンの生成を促進することにより皮膚の酸化傷害や皮膚老化にその有効性を発揮する。詳しくは、細胞機能の低下により生じる皮膚細胞へのメラニンの沈着およびしわやハリの低下などの老化症状の改善に有効である。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、グルタチオンレダクターゼ活性増強剤に関し、特に食品、化粧品、医薬部外品または医薬品等に配合してグルタチオンレダクターゼの活性を増強し、還元型グルタチオンの生成を促進することにより皮膚の酸化傷害や皮膚老化にその有効性を発揮する生体の酸化防止または予防剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
皮膚は生体の最外層に位置し、紫外線等の影響により活性酸素が発生しやすい臓器であり、絶えずその酸素ストレスに曝されている。一方、皮膚細胞内にはグルタチオンに代表される還元物質が存在しており、その能力を超える過酸化物が発生しないかぎり過酸化物の傷害から皮膚細胞を防衛している。グルタチオンは細胞内で酸化型と還元型の２種類の構造で存在し、グルタチオンレダクターゼにより酸化型のグルタチオンは還元型に変換され、細胞内の還元能力が保持されている。したがって、細胞の還元能力を保持するためには、還元型のグルタチオンの濃度を上げることが重要であり、還元型のグルタチオンの生成を促進するグルタチオンレダクターゼは、細胞の還元能力を保持する重要な酵素である。
【０００３】
ところが、紫外線などの酸化ストレスにより、皮膚中のグルタチオンレダクターゼ活性が低下することが知られている（非特許文献１）。グルタチオンレダクターゼ活性が低下すると、還元型グルタチオンの生成量が減少し、細胞の還元能力が低下する。したがって、過酸化物による傷害がその防御反応を凌駕したとき、皮膚は酸化され、細胞機能が劣化して老化してゆくと考えられる。
【非特許文献１】Ｊｕｒｇｅｎ Ｆｕｃｈｓ Ｍ．Ｄ．，Ｊ．Ｉｎｖｅｓｔ．Ｄｅｒｍａｔｏｌ，９３：７６９−７７３，１９８９．
【０００４】
そこで、過酸化物による傷害からの防御を目的として、特許文献１〜４などのように抗酸化剤や活性酸素消去剤が検討され、ＳＯＤやカタラーゼ等の活性酸素消去酵素、ＳＯＤ様活性物質などの活性酸素消去剤や抗酸化剤、細胞内のグルタチオン濃度を増強させる組成物を配合した食品、化粧品、医薬部外品または医薬品等が開発されている。
【特許文献１】特開平９−１１８６３０
【特許文献２】特開平９−２０８４８４
【特許文献３】特開平２００２−２７５０７９
【特許文献４】特開平２００３−３２１４６３
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
しかしながら、ＳＯＤやカタラーゼ等の活性酸素消去酵素は安定性に問題があり、活性酸素消去剤や抗酸化剤は、その効果が充分ではない。また、細胞内のグルタチオン濃度を増強させる組成物も還元型グルタチオンの量が保持されなければ、十分な過酸化物による傷害からの防御効果が期待されないため、不充分である。
【０００６】
本発明は、細胞内のグルタチオンレダクターゼの活性を増強させて、還元型のグルタチオンの生体濃度を高めるものであり、還元型グルタチオンの欠乏により生じる過酸化物の皮膚障害を防止するグルタチオンレダクターゼ活性増強剤を提供することを目的とする。また、細胞機能の低下により生じる皮膚細胞へのメラニンの沈着およびしわやハリの低下などの老化症状の改善を目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本発明者らは、過酸化物による傷害からの防御作用に優れた外用剤を得るために鋭意検討した結果、メハジキ、カンゾウ、エゾウコギ、サイシン、コメ、センキュウ、ユリおよびシロキクラゲの中から選ばれる一種または二種以上の抽出物が安定で、皮膚細胞のグルタチオンレダクターゼの活性を増強させて、還元型のグルタチオンの生体濃度を高めることを見出し、本発明を完成するに至った。
【発明の効果】
【０００８】
本発明のメハジキ、カンゾウ、エゾウコギ、サイシン、コメ、センキュウ、ユリおよびシロキクラゲの中から選ばれる一種又は二種以上の抽出物を含有することを特徴とするグルタチオンレダクターゼ活性増強剤は、グルタチオンレダクターゼの活性を増強させて、還元型のグルタチオンの生体濃度を高める作用を有する。詳しくは、細胞機能の低下により生じる皮膚細胞へのメラニンの沈着およびしわやハリの低下などの老化症状の改善に有効なグルタチオンレダクターゼ活性増強剤に関するものである。
【発明を実施するための最良の形態】
【０００９】
本発明で用いられるメハジキ（学名：Ｌｅｏｎｕｒｕｓ ｓｉｂｉｒｉｃｕｓ Ｌ．）は、シソ科メハジキ属に属する草本で、本州、四国、九州、朝鮮及び中国から東南アジアにかけて山野の日当りの良い場所に自生する。メハジキの地上部の全草は益母草（ヤクモソウ）の名称で、また、成熟果実がじゅう蔚子（ジュウイシ）の名称として流通しているので使用できる。
【００１０】
本発明で用いられるカンゾウ（学名：Ｇｌｙｃｙｒｒｈｉｚａ ｕｒａｌｅｎｓｉｓ）はマメ科カンゾウ属に属する草本で、アフリカ、ヨーロッパからアジア、オーストラリア、北米西部に分布する。根や走出茎（ストロン）が漢方薬で甘草と呼ばれ利用することができる。近縁のスペインカンゾウ（学名：Ｇｌｙｃｙｒｒｈｉｚａ ｇｌａｂｒａ）を用いてもよい。
【００１１】
本発明で用いられるエゾウコギ（学名：Ａｃａｎｔｈｏｐａｎａｘ ｓｅｎｔｉｃｏｓｕｓ）はウコギ科ウコギ属に属する低木で、東アジアから東南アジア、フィリピンに分布する。生薬として流通する根皮などを利用することができる。
【００１２】
本発明で用いられるサイシンは、ウマノスズクサ科のケイリンサイシン（学名：Ａｓｉａｓａｒｕｍ ｈｅｔｅｒｏｔｒｏｐｏｉｄｅｓ Ｆ．）またはウスバサイシン（学名：Ａｓｉａｓａｒｕｍ ｓｉｅｂｏｌｄｉ Ｆ．）であり、根茎および根、または根つき全草を乾燥したもの（細辛）などを利用することができる。
【００１３】
本発明に用いるコメは、イネ科に属するＯｒｙｚａ ｓａｔｉｖａ Ｌの果実であり、玄米や米ヌカなどを利用することができる。
【００１４】
本発明で用いられるセンキュウ（学名：Ｃｎｉｄｉｕｍ ｏｆｆｉｃｉｎａｌｅ Ｍ．またはＬｉｇｕｓｔｉｃｕｍ ｃｈｕａｘｉｏｎｇ Ｈ．）は、セリ科に属する草本で中国、日本に分布する。生薬として用いられる根茎を乾燥したもの（川きゅう）などを利用することができる。
【００１５】
本発明に用いるユリは、ユリ科ユリ属に属し、例えばマドンナリリー（学名：Ｌｉｌｉｕｍ ｃａｎｄｉｄｕｍ）またはハカタユリ（学名：Ｌｉｌｉｕｍ ｂｒｏｗｎｉｉ Ｆ．Ｅ．Ｂ．）、ヒメユリ（学名：Ｌｉｌｉｕｍ ｃｏｎｃｏｌｏｒ Ｓ．）、オニユリ（Ｌｉｌｉｕｍ ｌａｎｃｉｆｏｌｉｕｍ Ｔ．）、ヤマユリ（学名：Ｌｉｌｉｕｍ ａｕｒａｔｕｍ Ｌ．）の球根を乾燥したもの（生薬名：百合）などを利用することができる。
【００１６】
本発明で用いるシロキクラゲ（学名：Ｔｒｅｍｅｌｌａ ｆｕｃｉｆｏｒｍｉｓ Ｂ．）は、シロキクラゲ科に属するキノコで、子実体、菌体などを利用することができる。
【００１７】
また、本発明で使用するメハジキ、カンゾウ、エゾウコギ、サイシン、コメ、センキュウ、ユリおよびシロキクラゲの抽出物は、例えば、植物を抽出溶媒と共に浸漬または加熱した後、濾過し、必要ならば濃縮して得られる。抽出溶媒としては、例えば、水、低級１価アルコール類（メタノール、エタノール、１−プロパノール、２−プロパノール、１−ブタノール、２−ブタノール等）、液状多価アルコール（１，３−ブチレングリコール、プロピレングリコール等）、炭化水素（ヘキサン、ペンタン等）、ケトン類（アセトン、メチルエチルケトン等）、エーテル類（エチルエーテル、テトラヒドロフラン、プロピルエーテル等）、アセトニトリル等があげられる。これらの溶媒は単独で用いても２種以上を混合して用いてもよい。好ましくは、水あるいは水溶性溶媒（水と任意の割合で混合可能な溶媒。例えば、エタノール、１，３−ブチレングリコール、プロピレングリコール等）のうち１種または２種以上の溶媒を用いるのがよい。抽出物はそのまま用いてもよいし、溶媒を一部、または全部留去して用いてもよい。
【００１８】
本発明のグルタチオンレダクターゼ活性増強剤には、上記メハジキ、カンゾウ、エゾウコギ、サイシン、コメ、センキュウ、ユリおよびシロキクラゲの抽出物をそのまま使用しても良く、効果を損なわない範囲内で、通常の外用剤に用いられる成分である油脂類、ロウ類、炭化水素類、脂肪酸類、アルコール類、エステル類、界面活性剤、金属石鹸、ｐＨ調整剤、防腐剤、香料、保湿剤、粉体、紫外線吸収剤、増粘剤、色素、酸化防止剤、美白剤、キレート剤等の成分を配合することもできる。
【００１９】
本発明に用いるグルタチオンレダクターゼ活性増強剤は、食品、化粧品、医薬部外品または医薬品のいずれにも用いることができ、その剤型としては、例えば、錠菓、飲料、化粧水、クリーム、乳液、ゲル剤、エアゾール剤、軟膏、パップ剤、ペースト剤、プラスター剤、エッセンス、パック、洗浄剤、浴用剤、ファンデーション、打粉、口紅、散剤、丸剤、錠剤、注射剤、坐剤、乳剤、カプセル剤、顆粒剤、液剤（チンキ剤、流エキス剤、酒精剤、懸濁剤、リモナーデ剤などを含む）等が挙げられる。
【００２０】
本発明に用いるメハジキ、カンゾウ、エゾウコギ、サイシン、コメ、センキュウ、ユリおよびシロキクラゲの抽出物の配合量は特に限定されないが、乾燥物として０．０００１〜７５重量％の範囲が好ましく、さらに好ましくは０．００１〜３０重量％である。０．０００１重量％以下では効果が低く、また７５重量％を超えても効果に大きな増強はみられにくく、効率的でない。また、添加の方法については、予め加えておいても製造途中で添加しても良く、作業性を考えて適宜選択すれば良い。
【実施例１】
【００２１】
次に本発明を詳細に説明するため、実施例として本発明に用いる抽出物の製造例、処方例及び実験例を挙げるが、本発明はこれに限定されるものではない。実施例に示す配合量は重量％を示す。
【００２２】
製造例１ メハジキのエタノール抽出物
益母草１００ｇに９００ｍＬの３０％エタノールを加え、常温で７日間抽出した後、濾過し、その濾液を濃縮乾固して、メハジキのエタノール抽出物を７．５ｇ得た。
【００２３】
製造例２ カンゾウのエタノール抽出物
甘草１００ｇに９００ｍＬの３０％エタノールを加え、常温で７日間抽出した後、濾過し、その濾液を濃縮乾固して、カンゾウのエタノール抽出物を６．０ｇ得た。
【００２４】
製造例３ エゾウコギのエタノール抽出物
エゾウコギの根皮の乾燥物１００ｇに９００ｍＬの３０％エタノールを加え、常温で７日間抽出した後、濾過し、その濾液を濃縮乾固して、エゾウコギのエタノール抽出物を６．０ｇ得た。
【００２５】
製造例４ サイシンのエタノール抽出物
細辛１００ｇに９００ｍＬの３０％エタノールを加え、常温で７日間抽出した後、濾過し、その濾液を濃縮乾固して、サイシンのエタノール抽出物を４．９ｇ得た。
【００２６】
製造例５ コメのエタノール抽出物
米ヌカの乾燥物１００ｇに９００ｍＬの３０％エタノールを加え、常温で７日間抽出した後、濾過し、その濾液を濃縮乾固して、コメのエタノール抽出物を７．５ｇ得た。
【００２７】
製造例６ センキュウのエタノール抽出物
川きゅう１００ｇに９００ｍＬの３０％エタノールを加え、常温で７日間抽出した後、濾過し、その濾液を濃縮乾固して、センキュウのエタノール抽出物を６．３ｇ得た。
【００２８】
製造例７ ユリのエタノール抽出物
マドンナリリーの球根の乾燥物１００ｇに９００ｍＬの３０％エタノールを加え、常温で７日間抽出した後、濾過し、その濾液を濃縮乾固して、ユリのエタノール抽出物を５．４ｇ得た。
【００２９】
製造例８ シロキクラゲのエタノール抽出物
シロキクラゲの子実体の乾燥物１００ｇに９００ｍＬの３０％エタノールを加え、常温で７日間抽出した後、濾過し、その濾液を濃縮乾固して、シロキクラゲのエタノール抽出物を３．４ｇ得た。
【００３０】
製造例９ メハジキの熱水抽出物
益母草２０ｇに４００ｍＬの精製水を加え、９５〜１００℃で２時間抽出した後、濾過し、その濾液を濃縮し、凍結乾燥してメハジキの熱水抽出物を２．２ｇ得た。
【００３１】
製造例１０ カンゾウの熱水抽出物
甘草２０ｇに４００ｍＬの精製水を加え、９５〜１００℃で２時間抽出した後、濾過し、その濾液を濃縮し、凍結乾燥してカンゾウの熱水抽出物を１．０ｇ得た。
【００３２】
製造例１１ エゾウコギの熱水抽出物
エゾウコギの根皮の乾燥物２０ｇに４００ｍＬの精製水を加え、９５〜１００℃で２時間抽出した後、濾過し、その濾液を濃縮し、凍結乾燥してエゾウコギの熱水抽出物を１．８ｇ得た。
【００３３】
製造例１２ サイシンの熱水抽出物
細辛２０ｇに４００ｍＬの精製水を加え、９５〜１００℃で２時間抽出した後、濾過し、その濾液を濃縮し、凍結乾燥してサイシンの熱水抽出物を１．５ｇ得た。
【００３４】
製造例１３ コメの熱水抽出物
米ヌカの乾燥物２０ｇに４００ｍＬの精製水を加え、９５〜１００℃で２時間抽出した後、濾過し、その濾液を濃縮し、凍結乾燥してコメの熱水抽出物を３．３ｇ得た。
【００３５】
製造例１４ センキュウの熱水抽出物
川きゅう２０ｇに４００ｍＬの精製水を加え、９５〜１００℃で２時間抽出した後、濾過し、その濾液を濃縮し、凍結乾燥してセンキュウの熱水抽出物を１．８ｇ得た。
【００３６】
製造例１５ ユリの熱水抽出物
マドンナリリーの球根の乾燥物２０ｇに４００ｍＬの精製水を加え、９５〜１００℃で２時間抽出した後、濾過し、その濾液を濃縮し、凍結乾燥してユリの熱水抽出物を０．３ｇ得た。
【００３７】
製造例１６ シロキクラゲの熱水抽出物
シロキクラゲの子実体の乾燥物２０ｇに４Ｌの精製水を加え、９５〜１００℃で２時間抽出した後、濾過し、その濾液を濃縮し、凍結乾燥してシロキクラゲの熱水抽出物を１．５ｇ得た。
【００３８】
製造例１７ メハジキの１，３−ブチレングリコール水溶液抽出物
メハジキの全草の乾燥物１００ｇに１ｋｇの精製水及び１ｋｇの１，３−ブチレングリコールを加え、常温で７日間抽出した後、濾過し、メハジキの１，３−ブチレングリコール水溶液抽出物を１．９ｋｇ得た。
【００３９】
製造例１８ カンゾウの１，３−ブチレングリコール水溶液抽出物
カンゾウの葉の乾燥物１００ｇに１ｋｇの精製水及び１ｋｇの１，３−ブチレングリコールを加え、常温で７日間抽出した後、濾過し、カンゾウの１，３−ブチレングリコール水溶液抽出物を１．９ｋｇ得た。
【００４０】
製造例１９ エゾウコギの１，３−ブチレングリコール水溶液抽出物
エゾウコギの全草の乾燥物１００ｇに１ｋｇの精製水及び１ｋｇの１，３−ブチレングリコールを加え、常温で７日間抽出した後、濾過し、エゾウコギの１，３−ブチレングリコール水溶液抽出物を１．９ｋｇ得た。
【００４１】
製造例２０ サイシンの１，３−ブチレングリコール水溶液抽出物
細辛１００ｇに１ｋｇの精製水及び１ｋｇの１，３−ブチレングリコールを加え、常温で７日間抽出した後、濾過し、サイシンの１，３−ブチレングリコール水溶液抽出物を１．９ｋｇ得た。
【００４２】
製造例２１ コメの１，３−ブチレングリコール水溶液抽出物
米ヌカの乾燥物１００ｇに１ｋｇの精製水及び１ｋｇの１，３−ブチレングリコールを加え、常温で７日間抽出した後、濾過し、コメの１，３−ブチレングリコール水溶液抽出物を１．９ｋｇ得た。
【００４３】
製造例２２ センキュウの１，３−ブチレングリコール水溶液抽出物
川きゅう１００ｇに１ｋｇの精製水及び１ｋｇの１，３−ブチレングリコールを加え、常温で７日間抽出した後、濾過し、センキュウの１，３−ブチレングリコール水溶液抽出物を１．９ｋｇ得た。
【００４４】
製造例２３ ユリの１，３−ブチレングリコール水溶液抽出物
オニユリの全草の乾燥物１００ｇに１ｋｇの精製水及び１ｋｇの１，３−ブチレングリコールを加え、常温で７日間抽出した後、濾過し、ユリの１，３−ブチレングリコール水溶液抽出物を１．９ｋｇ得た。
【００４５】
製造例２４ シロキクラゲの１，３−ブチレングリコール水溶液抽出物
シロキクラゲの子実体の乾燥物１００ｇに１ｋｇの精製水及び１ｋｇの１，３−ブチレングリコールを加え、常温で７日間抽出した後、濾過し、シロキクラゲの１，３−ブチレングリコール水溶液抽出物を１．９ｋｇ得た。
【実施例２】
【００４６】
次に、本発明に係る実施例の処方を示す。
【００４７】
処方例１ クリーム
処方 配合量（重量％）
１．メハジキのエタノール抽出物（製造例１） ０．５
２．スクワラン ５．５
３．オリーブ油 ３．０
４．ステアリン酸 ２．０
５．ミツロウ ２．０
６．ミリスチン酸オクチルドデシル ３．５
７．ポリオキシエチレンセチルエーテル（２０Ｅ．Ｏ．） ３．０
８．ベヘニルアルコール １．５
９．モノステアリン酸グリセリン ２．５
１０．香料 ０．１
１１．１，３−ブチレングリコール ８．５
１２．パラオキシ安息香酸エチル ０．０５
１３．パラオキシ安息香酸メチル ０．２
１４．精製水 ６７．６５
［製造方法］成分１〜９を加熱して混合し、７０℃に保ち油相とする。成分１１〜１４を加熱溶解して混合し、７５℃に保ち水相とする。油相に水相を加えて乳化して、かき混ぜながら冷却し、４５℃で成分１０を加え、更に３０℃まで冷却して製品とする。
【００４８】
処方例２ クリーム２
処方例１において、メハジキのエタノール抽出物をカンゾウのエタノール抽出物（製造例２）に置き換えたものをクリーム２とした。
【００４９】
処方例３ クリーム３
処方例１において、メハジキのエタノール抽出物をエゾウコギのエタノール抽出物（製造例３）に置き換えたものをクリーム３とした。
【００５０】
処方例４ クリーム４
処方例１において、メハジキのエタノール抽出物をサイシンのエタノール抽出物（製造例４）に置き換えたものをクリーム４とした。
【００５１】
処方例５ クリーム５
処方例１において、メハジキのエタノール抽出物をコメのエタノール抽出物（製造例５）に置き換えたものをクリーム５とした。
【００５２】
処方例６ クリーム６
処方例１において、メハジキのエタノール抽出物をセンキュウのエタノール抽出物（製造例６）に置き換えたものをクリーム６とした。
【００５３】
処方例７ クリーム７
処方例１において、メハジキのエタノール抽出物をユリのエタノール抽出物（製造例７）に置き換えたものをクリーム７とした。
【００５４】
処方例８ クリーム８
処方例１において、シロキクラゲのエタノール抽出物をシロキクラゲのエタノール抽出物（製造例８）に置き換えたものをクリーム８とした。
【００５５】
比較例１ 従来のクリーム
処方例１において、メハジキのエタノール抽出物を精製水に置き換えたものを従来のクリームとした。
【００５６】
処方例９ 化粧水
処方 配合量（重量％）
１．メハジキの１，３−ブチレン
グリコール水溶液抽出物（製造例１７） ０．１
２．１，３−ブチレングリコール ８．０
３．グリセリン ２．０
４．キサンタンガム ０．０２
５．クエン酸 ０．０１
６．クエン酸ナトリウム ０．１
７．エタノール ５．０
８．パラオキシ安息香酸メチル ０．１
９．ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油（４０Ｅ．Ｏ．） ０．１
１０．香料 ０．１
１１．精製水 ８４．４７
［製造方法］成分２〜６及び１１と、成分１及び７〜１０をそれぞれ均一に溶解し、両者を混合し濾過して製品とする。
【００５７】
処方例１０ 乳液
処方 配合量（重量％）
１．カンゾウの熱水抽出物（製造例１０） ０．０５
２．スクワラン ５．０
３．オリーブ油 ５．０
４．ホホバ油 ５．０
５．セタノール １．５
６．モノステアリン酸グリセリン ２．０
７．ポリオキシエチレンセチルエーテル（２０Ｅ．Ｏ．） ３．０
８．ポリオキシエチレンソルビタンモノオレエート ２．０
９．香料 ０．１
１０．プロピレングリコール １．０
１１．グリセリン ２．０
１２．パラオキシ安息香酸メチル ０．２
１３．精製水 ７３．１５
［製造方法］成分２〜８を加熱溶解して混合し、７０℃に保ち油相とする。成分１及び１０〜１３を加熱溶解して混合し、７５℃に保ち水相とする。油相に水相を加えて乳化して、かき混ぜながら冷却し、４５℃で成分９を加え、更に３０℃まで冷却して製品とする。
【００５８】
処方例１１ 軟膏
処方 配合量（重量％）
１．エゾウコギの１，３−ブチレン
グリコール水溶液抽出物（製造例１９） １．０
２．ポリオキシエチレンセチルエーテル（３０Ｅ．Ｏ．） ２．０
３．モノステアリン酸グリセリン １０．０
４．流動パラフィン ５．０
５．セタノール ６．０
６．パラオキシ安息香酸メチル ０．１
７．プロピレングリコール １０．０
８．精製水 ６５．９
［製造方法］成分２〜５を加熱溶解して混合し、７０℃に保ち油相とする。成分１及び６〜８を加熱溶解して混合し、７５℃に保ち水相とする。油相に水相を加えて乳化して、かき混ぜながら３０℃まで冷却して製品とする。
【００５９】
処方例１２ ファンデーション
処方 配合量（重量％）
１．サイシンの１，３−ブチレン
グリコール水溶液抽出物（製造例２０） １．０
２．ステアリン酸 ２．４
３．ポリオキシエチレンソルビタンモノステアレート １．０
（２０Ｅ．Ｏ．）
４．ポリオキシエチレンセチルエーテル（２０Ｅ．Ｏ．） ２．０
５．セタノール １．０
６．液状ラノリン ２．０
７．流動パラフィン ３．０
８．ミリスチン酸イソプロピル ６．５
９．パラオキシ安息香酸ブチル ０．１
１０．カルボキシメチルセルロースナトリウム ０．１
１１．ベントナイト ０．５
１２．プロピレングリコール ４．０
１３．トリエタノールアミン １．１
１４．パラオキシ安息香酸メチル ０．２
１５．二酸化チタン ８．０
１６．タルク ４．０
１７．ベンガラ １．０
１８．黄酸化鉄 ２．０
１９．香料 ０．１
２０．精製水 ６０．０
［製造方法］成分２〜９を加熱溶解し、８０℃に保ち油相とする。成分２０に成分１０をよく膨潤させ、続いて、成分１及び１１〜１４を加えて均一に混合する。これに粉砕機で粉砕混合した成分１５〜１８を加え、ホモミキサーで撹拌し７５℃に保ち水相とする。この水相に油相をかき混ぜながら加え、冷却し、４５℃で成分１９を加え、かき混ぜながら３０℃まで冷却して製品とする。
【００６０】
処方例１３ 浴用剤
処方 配合量（重量％）
１．コメの熱水抽出物（製造例１３） ５．０
２．炭酸水素ナトリウム ５０．０
３．黄色２０２号（１） ０．０５
４．香料 ０．２５
５．無水硫酸ナトリウム ４４．７
［製造方法］成分１〜５を均一に混合し製品とする。
【００６１】
処方例１４ 錠菓
処方 配合量（重量％）
１．センキュウの熱水抽出物（製造例１４） ２．０
２．乾燥コーンスターチ ５０．０
３．エリスリトール ４０．０
４．クエン酸 ５．０
５．ショ糖脂肪酸エステル ３．０
６．香料 適量
７．水 適量
［製造方法］成分１〜４及び７を混合し、顆粒成形する。成形した顆粒に成分５及び６を加えて打錠する。１粒１．０ｇとする。
【００６２】
処方例１５ 飲料
処方 配合量（重量％）
１．ユリの熱水抽出物（製造例１５） １．０
２．ステビア ０．０５
３．リンゴ酸 ５．０
４．香料 ０．１
５．水にて全量を１００とする
［製造方法］成分２及び３を少量の水に溶解する。次いで、成分１及び４、５を加えて混合する。
【００６３】
処方例１６ 錠剤
処方 配合量（重量％）
１．シロキクラゲの熱水抽出物（製造例１６） １０．０
２．トウモロコシデンプン １０．０
３．精製白糖 ２０．０
４．カルボキシメチルセルロース １０．０
５．微結晶セルロース ３５．０
６．ポリビニルピロリドン ５．０
７．タルク １０．０
［製造方法］成分１〜５を混合し、次いで成分６の水溶液を結合剤として加えて常法により顆粒化した。これに滑沢剤として成分７を加えて配合した後、１錠１００ｍｇの錠剤に打錠した。
【００６４】
処方例１７ 散剤
処方 配合量（重量％）
１．メハジキの熱水抽出物（製造例９） １０．０
２．トウモロコシデンプン ４０．０
３．微結晶セルロース ５０．０
［製造方法］上記成分を混合し、常法により散剤とした。
【００６５】
処方例１８ 注射剤
処方 配合量（重量％）
１．カンゾウの熱水抽出物（製造例１０） １．０
２．ポリオキシエチレン（６０）硬化ヒマシ油 ３．７
３．ゴマ油 ０．２
４．塩化ナトリウム ０．９
５．プロピレングリコール ４．０
６．リン酸緩衝液（０．１Ｍ、ｐＨ６．０） １０．０
７．蒸留水 ８０．２
［製造方法］成分１、２、３および成分５の半量を混合して約８０℃で加温溶解し、これに成分４、６と成分５を予め溶解した成分７を約８０℃に加温して加え全量を１０００ｍＬの水溶液とした。この水溶液を１ｍＬのアンプルに分注して熔閉した後、加熱滅菌した。
【実施例３】
【００６６】
次に、本発明の効果を詳細に説明するため、実験例をあげる。
【００６７】
実験例１ 細胞内グルタチオンレダクターゼの活性化試験
細胞内グルタチオンレダクターゼの活性化効果を下記の条件にて測定した。
【００６８】
コンフルエントな状態のヒト表皮角化細胞を、１μｇ／ｍＬの試料を含むＤＭＥＭ培地でさらに２４時間培養した後、細胞を剥離し、１ｍＭＥＤＴＡを含む５０ｍＭリン酸緩衝液（ｐＨ７．５）１ｍＬを加えて超音波破砕し、１５，０００ｒｐｍで１５分間遠心分離を行い、上澄を試料溶液とした。試料溶液９００μＬに、９．５ｍＭ酸化型グルタチオン／リン酸緩衝溶液１００μＬ及び２ｍＭＮＡＤＰＨ／リン酸緩衝溶液１２０μＬを加え、３４０ｎｍの吸光度の時間変化（φＡ３４０ｎｍ／ｍｉｎ、３分間）を測定し、標準のグルタチオンレダクターゼ０，５，１０および２０ｍＵ／ｍＬから作成した検量線より試料溶液のグルタチオンレダクターゼ活性を算出した。同時に、試料溶液のタンパク濃度を測定し、単位タンパク当りのグルタチオンレダクターゼ活性を算出した。試料未添加の細胞のグルタチオンレダクターゼ活性をコントロールとし、コントロールを１００としたときの試料添加のグルタチオンレダクターゼ活性の値を細胞内グルタチオンレダクターゼ活性として算出した。
【００６９】
これらの試験結果を表１に示した。その結果、メハジキ、カンゾウ、エゾウコギ、サイシン、コメ、センキュウ、ユリおよびシロキクラゲの抽出物には優れた細胞内グルタチオンレダクターゼの活性化作用が認められた。また、製造例９〜２４の抽出物の試験を行ったところ、いずれも優れた細胞内グルタチオンレダクターゼの活性化作用を示した。
【００７０】
【表１】
【００７１】
実験例２ 細胞内還元型グルタチオン比の増加作用の評価
細胞内還元型グルタチオン比の増加作用を下記の条件にて測定した。
【００７２】
コンフルエントな状態になった表皮角化細胞を１μｇ／ｍＬ濃度の試料を添加したＥａｇｌｅ’ｓ ＭＥＭ培地にてさらに２４時間培養した後、細胞を剥離し、１ｍＭＥＤＴＡを含む５０ｍＭリン酸緩衝液（ｐＨ７．５）０．５ｍＬを加えて超音波破砕し、１５，０００ｒｐｍで１５分間遠心分離を行い、上清を試料溶液とした。９６ｗｅｌｌプレートを用い試料溶液１００μＬに０．５ｍＭＮＡＤＰＨ／リン酸緩衝溶液と１Ｕ／ｍＬグルタチオンレダクターゼ／リン酸緩衝溶液の１：１混合液２５μＬを添加し、室温で１０分間反応させた。さらに１０ｍＭ５，５’−ｄｉｔｈｉｏｂｉｓ−２−ｎｉｔｒｏｂｅｎｚｏｉｃ ａｃｉｄ／リン酸緩衝溶液２５μＬを添加し、室温で１０分間反応させた後、４０５ｎｍにおける吸光度を測定した。標準の還元型グルタチオン（ＧＳＨ）から作成した検量線より試料溶液の総グルタチオン量を算出した。また、試料溶液１５０μＬに１Ｍ２−ｖｉｎｙｌｐｙｒｉｄｉｎｅ２．５μＬを添加し、室温で１時間反応させＧＳＨを除いた後、同様な反応により酸化型グルタチオン（ＧＳＳＧ）量を求めた。同時に、試料溶液のタンパク濃度を測定し、単位タンパク当りの総グルタチオン量とＧＳＳＧ量からＧＳＨ量を算出し、ＧＳＨ／ＧＳＳＧ比を求めた。試料未添加の細胞のＧＳＨ／ＧＳＳＧ比をコントロールとし、コントロールを１００としたときの試料添加のＧＳＨ／ＧＳＳＧ比の値を細胞内還元型グルタチオン比として算出した。
【００７３】
これらの試験結果を表２に示した。その結果、メハジキ、カンゾウ、エゾウコギ、サイシン、コメ、センキュウ、ユリおよびシロキクラゲの抽出物には優れた細胞内還元型グルタチオン比の増加作用が認められ、細胞の還元型グルタチオン割合を増加させる作用が認められた。また、製造例９〜２４の抽出物の試験を行ったところ、いずれも優れた細胞内還元型グルタチオン比の増加作用を示した。
【００７４】
【表２】
【００７５】
実験例３ 使用試験
処方例１〜８のクリーム及び比較例１の従来のクリームを用いて、しわ、シミに悩む女性３０人（２０〜４５才）を対象に６ヶ月間の使用試験を行った。使用後、しわ、シミの改善についてのアンケート調査を行って、皮膚性状の改善効果を判定した。アンケートの評価基準は、有効なものを「優」、やや有効なものを「良」、わずかに有効なものを「可」、無効なものを「不可」として評価した。
【００７６】
これらの結果を表３に示した。処方例１〜８のグルタチオンレダクターゼ活性増強剤を含む皮膚外用剤は優れたしわ、シミの改善効果を示した。なお、試験期間中皮膚トラブルは一人もなく、安全性においても問題なかった。
【００７７】
【表３】
【００７８】
処方例９〜１７の化粧水、乳液、軟膏、ファンデーション、浴用剤、錠菓、飲料、錠剤および散剤の使用試験を行ったところ、いずれも安全で優れたしわ、シミの改善効果を示した。
【産業上の利用可能性】
【００７９】
本発明の活用例として、食品、化粧品、医薬部外品または医薬品のいずれにも用いることができる。その剤型としては、錠菓、飲料、化粧水、クリーム、乳液、ゲル剤、エアゾール剤、軟膏、パップ剤、ペースト剤、プラスター剤、エッセンス、パック、洗浄剤、浴用剤、ファンデーション、打粉、口紅、散剤、丸剤、錠剤、注射剤、坐剤、乳剤、カプセル剤、顆粒剤、液剤（チンキ剤、流エキス剤、酒精剤、懸濁剤、リモナーデ剤などを含む）等が挙げられ、皮膚細胞の還元能力の低下に由来する皮膚のしわ、シミの防止等の改善効果が得られる。
【技術分野】
【０００１】
本発明は、グルタチオンレダクターゼ活性増強剤に関し、特に食品、化粧品、医薬部外品または医薬品等に配合してグルタチオンレダクターゼの活性を増強し、還元型グルタチオンの生成を促進することにより皮膚の酸化傷害や皮膚老化にその有効性を発揮する生体の酸化防止または予防剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
皮膚は生体の最外層に位置し、紫外線等の影響により活性酸素が発生しやすい臓器であり、絶えずその酸素ストレスに曝されている。一方、皮膚細胞内にはグルタチオンに代表される還元物質が存在しており、その能力を超える過酸化物が発生しないかぎり過酸化物の傷害から皮膚細胞を防衛している。グルタチオンは細胞内で酸化型と還元型の２種類の構造で存在し、グルタチオンレダクターゼにより酸化型のグルタチオンは還元型に変換され、細胞内の還元能力が保持されている。したがって、細胞の還元能力を保持するためには、還元型のグルタチオンの濃度を上げることが重要であり、還元型のグルタチオンの生成を促進するグルタチオンレダクターゼは、細胞の還元能力を保持する重要な酵素である。
【０００３】
ところが、紫外線などの酸化ストレスにより、皮膚中のグルタチオンレダクターゼ活性が低下することが知られている（非特許文献１）。グルタチオンレダクターゼ活性が低下すると、還元型グルタチオンの生成量が減少し、細胞の還元能力が低下する。したがって、過酸化物による傷害がその防御反応を凌駕したとき、皮膚は酸化され、細胞機能が劣化して老化してゆくと考えられる。
【非特許文献１】Ｊｕｒｇｅｎ Ｆｕｃｈｓ Ｍ．Ｄ．，Ｊ．Ｉｎｖｅｓｔ．Ｄｅｒｍａｔｏｌ，９３：７６９−７７３，１９８９．
【０００４】
そこで、過酸化物による傷害からの防御を目的として、特許文献１〜４などのように抗酸化剤や活性酸素消去剤が検討され、ＳＯＤやカタラーゼ等の活性酸素消去酵素、ＳＯＤ様活性物質などの活性酸素消去剤や抗酸化剤、細胞内のグルタチオン濃度を増強させる組成物を配合した食品、化粧品、医薬部外品または医薬品等が開発されている。
【特許文献１】特開平９−１１８６３０
【特許文献２】特開平９−２０８４８４
【特許文献３】特開平２００２−２７５０７９
【特許文献４】特開平２００３−３２１４６３
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
しかしながら、ＳＯＤやカタラーゼ等の活性酸素消去酵素は安定性に問題があり、活性酸素消去剤や抗酸化剤は、その効果が充分ではない。また、細胞内のグルタチオン濃度を増強させる組成物も還元型グルタチオンの量が保持されなければ、十分な過酸化物による傷害からの防御効果が期待されないため、不充分である。
【０００６】
本発明は、細胞内のグルタチオンレダクターゼの活性を増強させて、還元型のグルタチオンの生体濃度を高めるものであり、還元型グルタチオンの欠乏により生じる過酸化物の皮膚障害を防止するグルタチオンレダクターゼ活性増強剤を提供することを目的とする。また、細胞機能の低下により生じる皮膚細胞へのメラニンの沈着およびしわやハリの低下などの老化症状の改善を目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本発明者らは、過酸化物による傷害からの防御作用に優れた外用剤を得るために鋭意検討した結果、メハジキ、カンゾウ、エゾウコギ、サイシン、コメ、センキュウ、ユリおよびシロキクラゲの中から選ばれる一種または二種以上の抽出物が安定で、皮膚細胞のグルタチオンレダクターゼの活性を増強させて、還元型のグルタチオンの生体濃度を高めることを見出し、本発明を完成するに至った。
【発明の効果】
【０００８】
本発明のメハジキ、カンゾウ、エゾウコギ、サイシン、コメ、センキュウ、ユリおよびシロキクラゲの中から選ばれる一種又は二種以上の抽出物を含有することを特徴とするグルタチオンレダクターゼ活性増強剤は、グルタチオンレダクターゼの活性を増強させて、還元型のグルタチオンの生体濃度を高める作用を有する。詳しくは、細胞機能の低下により生じる皮膚細胞へのメラニンの沈着およびしわやハリの低下などの老化症状の改善に有効なグルタチオンレダクターゼ活性増強剤に関するものである。
【発明を実施するための最良の形態】
【０００９】
本発明で用いられるメハジキ（学名：Ｌｅｏｎｕｒｕｓ ｓｉｂｉｒｉｃｕｓ Ｌ．）は、シソ科メハジキ属に属する草本で、本州、四国、九州、朝鮮及び中国から東南アジアにかけて山野の日当りの良い場所に自生する。メハジキの地上部の全草は益母草（ヤクモソウ）の名称で、また、成熟果実がじゅう蔚子（ジュウイシ）の名称として流通しているので使用できる。
【００１０】
本発明で用いられるカンゾウ（学名：Ｇｌｙｃｙｒｒｈｉｚａ ｕｒａｌｅｎｓｉｓ）はマメ科カンゾウ属に属する草本で、アフリカ、ヨーロッパからアジア、オーストラリア、北米西部に分布する。根や走出茎（ストロン）が漢方薬で甘草と呼ばれ利用することができる。近縁のスペインカンゾウ（学名：Ｇｌｙｃｙｒｒｈｉｚａ ｇｌａｂｒａ）を用いてもよい。
【００１１】
本発明で用いられるエゾウコギ（学名：Ａｃａｎｔｈｏｐａｎａｘ ｓｅｎｔｉｃｏｓｕｓ）はウコギ科ウコギ属に属する低木で、東アジアから東南アジア、フィリピンに分布する。生薬として流通する根皮などを利用することができる。
【００１２】
本発明で用いられるサイシンは、ウマノスズクサ科のケイリンサイシン（学名：Ａｓｉａｓａｒｕｍ ｈｅｔｅｒｏｔｒｏｐｏｉｄｅｓ Ｆ．）またはウスバサイシン（学名：Ａｓｉａｓａｒｕｍ ｓｉｅｂｏｌｄｉ Ｆ．）であり、根茎および根、または根つき全草を乾燥したもの（細辛）などを利用することができる。
【００１３】
本発明に用いるコメは、イネ科に属するＯｒｙｚａ ｓａｔｉｖａ Ｌの果実であり、玄米や米ヌカなどを利用することができる。
【００１４】
本発明で用いられるセンキュウ（学名：Ｃｎｉｄｉｕｍ ｏｆｆｉｃｉｎａｌｅ Ｍ．またはＬｉｇｕｓｔｉｃｕｍ ｃｈｕａｘｉｏｎｇ Ｈ．）は、セリ科に属する草本で中国、日本に分布する。生薬として用いられる根茎を乾燥したもの（川きゅう）などを利用することができる。
【００１５】
本発明に用いるユリは、ユリ科ユリ属に属し、例えばマドンナリリー（学名：Ｌｉｌｉｕｍ ｃａｎｄｉｄｕｍ）またはハカタユリ（学名：Ｌｉｌｉｕｍ ｂｒｏｗｎｉｉ Ｆ．Ｅ．Ｂ．）、ヒメユリ（学名：Ｌｉｌｉｕｍ ｃｏｎｃｏｌｏｒ Ｓ．）、オニユリ（Ｌｉｌｉｕｍ ｌａｎｃｉｆｏｌｉｕｍ Ｔ．）、ヤマユリ（学名：Ｌｉｌｉｕｍ ａｕｒａｔｕｍ Ｌ．）の球根を乾燥したもの（生薬名：百合）などを利用することができる。
【００１６】
本発明で用いるシロキクラゲ（学名：Ｔｒｅｍｅｌｌａ ｆｕｃｉｆｏｒｍｉｓ Ｂ．）は、シロキクラゲ科に属するキノコで、子実体、菌体などを利用することができる。
【００１７】
また、本発明で使用するメハジキ、カンゾウ、エゾウコギ、サイシン、コメ、センキュウ、ユリおよびシロキクラゲの抽出物は、例えば、植物を抽出溶媒と共に浸漬または加熱した後、濾過し、必要ならば濃縮して得られる。抽出溶媒としては、例えば、水、低級１価アルコール類（メタノール、エタノール、１−プロパノール、２−プロパノール、１−ブタノール、２−ブタノール等）、液状多価アルコール（１，３−ブチレングリコール、プロピレングリコール等）、炭化水素（ヘキサン、ペンタン等）、ケトン類（アセトン、メチルエチルケトン等）、エーテル類（エチルエーテル、テトラヒドロフラン、プロピルエーテル等）、アセトニトリル等があげられる。これらの溶媒は単独で用いても２種以上を混合して用いてもよい。好ましくは、水あるいは水溶性溶媒（水と任意の割合で混合可能な溶媒。例えば、エタノール、１，３−ブチレングリコール、プロピレングリコール等）のうち１種または２種以上の溶媒を用いるのがよい。抽出物はそのまま用いてもよいし、溶媒を一部、または全部留去して用いてもよい。
【００１８】
本発明のグルタチオンレダクターゼ活性増強剤には、上記メハジキ、カンゾウ、エゾウコギ、サイシン、コメ、センキュウ、ユリおよびシロキクラゲの抽出物をそのまま使用しても良く、効果を損なわない範囲内で、通常の外用剤に用いられる成分である油脂類、ロウ類、炭化水素類、脂肪酸類、アルコール類、エステル類、界面活性剤、金属石鹸、ｐＨ調整剤、防腐剤、香料、保湿剤、粉体、紫外線吸収剤、増粘剤、色素、酸化防止剤、美白剤、キレート剤等の成分を配合することもできる。
【００１９】
本発明に用いるグルタチオンレダクターゼ活性増強剤は、食品、化粧品、医薬部外品または医薬品のいずれにも用いることができ、その剤型としては、例えば、錠菓、飲料、化粧水、クリーム、乳液、ゲル剤、エアゾール剤、軟膏、パップ剤、ペースト剤、プラスター剤、エッセンス、パック、洗浄剤、浴用剤、ファンデーション、打粉、口紅、散剤、丸剤、錠剤、注射剤、坐剤、乳剤、カプセル剤、顆粒剤、液剤（チンキ剤、流エキス剤、酒精剤、懸濁剤、リモナーデ剤などを含む）等が挙げられる。
【００２０】
本発明に用いるメハジキ、カンゾウ、エゾウコギ、サイシン、コメ、センキュウ、ユリおよびシロキクラゲの抽出物の配合量は特に限定されないが、乾燥物として０．０００１〜７５重量％の範囲が好ましく、さらに好ましくは０．００１〜３０重量％である。０．０００１重量％以下では効果が低く、また７５重量％を超えても効果に大きな増強はみられにくく、効率的でない。また、添加の方法については、予め加えておいても製造途中で添加しても良く、作業性を考えて適宜選択すれば良い。
【実施例１】
【００２１】
次に本発明を詳細に説明するため、実施例として本発明に用いる抽出物の製造例、処方例及び実験例を挙げるが、本発明はこれに限定されるものではない。実施例に示す配合量は重量％を示す。
【００２２】
製造例１ メハジキのエタノール抽出物
益母草１００ｇに９００ｍＬの３０％エタノールを加え、常温で７日間抽出した後、濾過し、その濾液を濃縮乾固して、メハジキのエタノール抽出物を７．５ｇ得た。
【００２３】
製造例２ カンゾウのエタノール抽出物
甘草１００ｇに９００ｍＬの３０％エタノールを加え、常温で７日間抽出した後、濾過し、その濾液を濃縮乾固して、カンゾウのエタノール抽出物を６．０ｇ得た。
【００２４】
製造例３ エゾウコギのエタノール抽出物
エゾウコギの根皮の乾燥物１００ｇに９００ｍＬの３０％エタノールを加え、常温で７日間抽出した後、濾過し、その濾液を濃縮乾固して、エゾウコギのエタノール抽出物を６．０ｇ得た。
【００２５】
製造例４ サイシンのエタノール抽出物
細辛１００ｇに９００ｍＬの３０％エタノールを加え、常温で７日間抽出した後、濾過し、その濾液を濃縮乾固して、サイシンのエタノール抽出物を４．９ｇ得た。
【００２６】
製造例５ コメのエタノール抽出物
米ヌカの乾燥物１００ｇに９００ｍＬの３０％エタノールを加え、常温で７日間抽出した後、濾過し、その濾液を濃縮乾固して、コメのエタノール抽出物を７．５ｇ得た。
【００２７】
製造例６ センキュウのエタノール抽出物
川きゅう１００ｇに９００ｍＬの３０％エタノールを加え、常温で７日間抽出した後、濾過し、その濾液を濃縮乾固して、センキュウのエタノール抽出物を６．３ｇ得た。
【００２８】
製造例７ ユリのエタノール抽出物
マドンナリリーの球根の乾燥物１００ｇに９００ｍＬの３０％エタノールを加え、常温で７日間抽出した後、濾過し、その濾液を濃縮乾固して、ユリのエタノール抽出物を５．４ｇ得た。
【００２９】
製造例８ シロキクラゲのエタノール抽出物
シロキクラゲの子実体の乾燥物１００ｇに９００ｍＬの３０％エタノールを加え、常温で７日間抽出した後、濾過し、その濾液を濃縮乾固して、シロキクラゲのエタノール抽出物を３．４ｇ得た。
【００３０】
製造例９ メハジキの熱水抽出物
益母草２０ｇに４００ｍＬの精製水を加え、９５〜１００℃で２時間抽出した後、濾過し、その濾液を濃縮し、凍結乾燥してメハジキの熱水抽出物を２．２ｇ得た。
【００３１】
製造例１０ カンゾウの熱水抽出物
甘草２０ｇに４００ｍＬの精製水を加え、９５〜１００℃で２時間抽出した後、濾過し、その濾液を濃縮し、凍結乾燥してカンゾウの熱水抽出物を１．０ｇ得た。
【００３２】
製造例１１ エゾウコギの熱水抽出物
エゾウコギの根皮の乾燥物２０ｇに４００ｍＬの精製水を加え、９５〜１００℃で２時間抽出した後、濾過し、その濾液を濃縮し、凍結乾燥してエゾウコギの熱水抽出物を１．８ｇ得た。
【００３３】
製造例１２ サイシンの熱水抽出物
細辛２０ｇに４００ｍＬの精製水を加え、９５〜１００℃で２時間抽出した後、濾過し、その濾液を濃縮し、凍結乾燥してサイシンの熱水抽出物を１．５ｇ得た。
【００３４】
製造例１３ コメの熱水抽出物
米ヌカの乾燥物２０ｇに４００ｍＬの精製水を加え、９５〜１００℃で２時間抽出した後、濾過し、その濾液を濃縮し、凍結乾燥してコメの熱水抽出物を３．３ｇ得た。
【００３５】
製造例１４ センキュウの熱水抽出物
川きゅう２０ｇに４００ｍＬの精製水を加え、９５〜１００℃で２時間抽出した後、濾過し、その濾液を濃縮し、凍結乾燥してセンキュウの熱水抽出物を１．８ｇ得た。
【００３６】
製造例１５ ユリの熱水抽出物
マドンナリリーの球根の乾燥物２０ｇに４００ｍＬの精製水を加え、９５〜１００℃で２時間抽出した後、濾過し、その濾液を濃縮し、凍結乾燥してユリの熱水抽出物を０．３ｇ得た。
【００３７】
製造例１６ シロキクラゲの熱水抽出物
シロキクラゲの子実体の乾燥物２０ｇに４Ｌの精製水を加え、９５〜１００℃で２時間抽出した後、濾過し、その濾液を濃縮し、凍結乾燥してシロキクラゲの熱水抽出物を１．５ｇ得た。
【００３８】
製造例１７ メハジキの１，３−ブチレングリコール水溶液抽出物
メハジキの全草の乾燥物１００ｇに１ｋｇの精製水及び１ｋｇの１，３−ブチレングリコールを加え、常温で７日間抽出した後、濾過し、メハジキの１，３−ブチレングリコール水溶液抽出物を１．９ｋｇ得た。
【００３９】
製造例１８ カンゾウの１，３−ブチレングリコール水溶液抽出物
カンゾウの葉の乾燥物１００ｇに１ｋｇの精製水及び１ｋｇの１，３−ブチレングリコールを加え、常温で７日間抽出した後、濾過し、カンゾウの１，３−ブチレングリコール水溶液抽出物を１．９ｋｇ得た。
【００４０】
製造例１９ エゾウコギの１，３−ブチレングリコール水溶液抽出物
エゾウコギの全草の乾燥物１００ｇに１ｋｇの精製水及び１ｋｇの１，３−ブチレングリコールを加え、常温で７日間抽出した後、濾過し、エゾウコギの１，３−ブチレングリコール水溶液抽出物を１．９ｋｇ得た。
【００４１】
製造例２０ サイシンの１，３−ブチレングリコール水溶液抽出物
細辛１００ｇに１ｋｇの精製水及び１ｋｇの１，３−ブチレングリコールを加え、常温で７日間抽出した後、濾過し、サイシンの１，３−ブチレングリコール水溶液抽出物を１．９ｋｇ得た。
【００４２】
製造例２１ コメの１，３−ブチレングリコール水溶液抽出物
米ヌカの乾燥物１００ｇに１ｋｇの精製水及び１ｋｇの１，３−ブチレングリコールを加え、常温で７日間抽出した後、濾過し、コメの１，３−ブチレングリコール水溶液抽出物を１．９ｋｇ得た。
【００４３】
製造例２２ センキュウの１，３−ブチレングリコール水溶液抽出物
川きゅう１００ｇに１ｋｇの精製水及び１ｋｇの１，３−ブチレングリコールを加え、常温で７日間抽出した後、濾過し、センキュウの１，３−ブチレングリコール水溶液抽出物を１．９ｋｇ得た。
【００４４】
製造例２３ ユリの１，３−ブチレングリコール水溶液抽出物
オニユリの全草の乾燥物１００ｇに１ｋｇの精製水及び１ｋｇの１，３−ブチレングリコールを加え、常温で７日間抽出した後、濾過し、ユリの１，３−ブチレングリコール水溶液抽出物を１．９ｋｇ得た。
【００４５】
製造例２４ シロキクラゲの１，３−ブチレングリコール水溶液抽出物
シロキクラゲの子実体の乾燥物１００ｇに１ｋｇの精製水及び１ｋｇの１，３−ブチレングリコールを加え、常温で７日間抽出した後、濾過し、シロキクラゲの１，３−ブチレングリコール水溶液抽出物を１．９ｋｇ得た。
【実施例２】
【００４６】
次に、本発明に係る実施例の処方を示す。
【００４７】
処方例１ クリーム
処方 配合量（重量％）
１．メハジキのエタノール抽出物（製造例１） ０．５
２．スクワラン ５．５
３．オリーブ油 ３．０
４．ステアリン酸 ２．０
５．ミツロウ ２．０
６．ミリスチン酸オクチルドデシル ３．５
７．ポリオキシエチレンセチルエーテル（２０Ｅ．Ｏ．） ３．０
８．ベヘニルアルコール １．５
９．モノステアリン酸グリセリン ２．５
１０．香料 ０．１
１１．１，３−ブチレングリコール ８．５
１２．パラオキシ安息香酸エチル ０．０５
１３．パラオキシ安息香酸メチル ０．２
１４．精製水 ６７．６５
［製造方法］成分１〜９を加熱して混合し、７０℃に保ち油相とする。成分１１〜１４を加熱溶解して混合し、７５℃に保ち水相とする。油相に水相を加えて乳化して、かき混ぜながら冷却し、４５℃で成分１０を加え、更に３０℃まで冷却して製品とする。
【００４８】
処方例２ クリーム２
処方例１において、メハジキのエタノール抽出物をカンゾウのエタノール抽出物（製造例２）に置き換えたものをクリーム２とした。
【００４９】
処方例３ クリーム３
処方例１において、メハジキのエタノール抽出物をエゾウコギのエタノール抽出物（製造例３）に置き換えたものをクリーム３とした。
【００５０】
処方例４ クリーム４
処方例１において、メハジキのエタノール抽出物をサイシンのエタノール抽出物（製造例４）に置き換えたものをクリーム４とした。
【００５１】
処方例５ クリーム５
処方例１において、メハジキのエタノール抽出物をコメのエタノール抽出物（製造例５）に置き換えたものをクリーム５とした。
【００５２】
処方例６ クリーム６
処方例１において、メハジキのエタノール抽出物をセンキュウのエタノール抽出物（製造例６）に置き換えたものをクリーム６とした。
【００５３】
処方例７ クリーム７
処方例１において、メハジキのエタノール抽出物をユリのエタノール抽出物（製造例７）に置き換えたものをクリーム７とした。
【００５４】
処方例８ クリーム８
処方例１において、シロキクラゲのエタノール抽出物をシロキクラゲのエタノール抽出物（製造例８）に置き換えたものをクリーム８とした。
【００５５】
比較例１ 従来のクリーム
処方例１において、メハジキのエタノール抽出物を精製水に置き換えたものを従来のクリームとした。
【００５６】
処方例９ 化粧水
処方 配合量（重量％）
１．メハジキの１，３−ブチレン
グリコール水溶液抽出物（製造例１７） ０．１
２．１，３−ブチレングリコール ８．０
３．グリセリン ２．０
４．キサンタンガム ０．０２
５．クエン酸 ０．０１
６．クエン酸ナトリウム ０．１
７．エタノール ５．０
８．パラオキシ安息香酸メチル ０．１
９．ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油（４０Ｅ．Ｏ．） ０．１
１０．香料 ０．１
１１．精製水 ８４．４７
［製造方法］成分２〜６及び１１と、成分１及び７〜１０をそれぞれ均一に溶解し、両者を混合し濾過して製品とする。
【００５７】
処方例１０ 乳液
処方 配合量（重量％）
１．カンゾウの熱水抽出物（製造例１０） ０．０５
２．スクワラン ５．０
３．オリーブ油 ５．０
４．ホホバ油 ５．０
５．セタノール １．５
６．モノステアリン酸グリセリン ２．０
７．ポリオキシエチレンセチルエーテル（２０Ｅ．Ｏ．） ３．０
８．ポリオキシエチレンソルビタンモノオレエート ２．０
９．香料 ０．１
１０．プロピレングリコール １．０
１１．グリセリン ２．０
１２．パラオキシ安息香酸メチル ０．２
１３．精製水 ７３．１５
［製造方法］成分２〜８を加熱溶解して混合し、７０℃に保ち油相とする。成分１及び１０〜１３を加熱溶解して混合し、７５℃に保ち水相とする。油相に水相を加えて乳化して、かき混ぜながら冷却し、４５℃で成分９を加え、更に３０℃まで冷却して製品とする。
【００５８】
処方例１１ 軟膏
処方 配合量（重量％）
１．エゾウコギの１，３−ブチレン
グリコール水溶液抽出物（製造例１９） １．０
２．ポリオキシエチレンセチルエーテル（３０Ｅ．Ｏ．） ２．０
３．モノステアリン酸グリセリン １０．０
４．流動パラフィン ５．０
５．セタノール ６．０
６．パラオキシ安息香酸メチル ０．１
７．プロピレングリコール １０．０
８．精製水 ６５．９
［製造方法］成分２〜５を加熱溶解して混合し、７０℃に保ち油相とする。成分１及び６〜８を加熱溶解して混合し、７５℃に保ち水相とする。油相に水相を加えて乳化して、かき混ぜながら３０℃まで冷却して製品とする。
【００５９】
処方例１２ ファンデーション
処方 配合量（重量％）
１．サイシンの１，３−ブチレン
グリコール水溶液抽出物（製造例２０） １．０
２．ステアリン酸 ２．４
３．ポリオキシエチレンソルビタンモノステアレート １．０
（２０Ｅ．Ｏ．）
４．ポリオキシエチレンセチルエーテル（２０Ｅ．Ｏ．） ２．０
５．セタノール １．０
６．液状ラノリン ２．０
７．流動パラフィン ３．０
８．ミリスチン酸イソプロピル ６．５
９．パラオキシ安息香酸ブチル ０．１
１０．カルボキシメチルセルロースナトリウム ０．１
１１．ベントナイト ０．５
１２．プロピレングリコール ４．０
１３．トリエタノールアミン １．１
１４．パラオキシ安息香酸メチル ０．２
１５．二酸化チタン ８．０
１６．タルク ４．０
１７．ベンガラ １．０
１８．黄酸化鉄 ２．０
１９．香料 ０．１
２０．精製水 ６０．０
［製造方法］成分２〜９を加熱溶解し、８０℃に保ち油相とする。成分２０に成分１０をよく膨潤させ、続いて、成分１及び１１〜１４を加えて均一に混合する。これに粉砕機で粉砕混合した成分１５〜１８を加え、ホモミキサーで撹拌し７５℃に保ち水相とする。この水相に油相をかき混ぜながら加え、冷却し、４５℃で成分１９を加え、かき混ぜながら３０℃まで冷却して製品とする。
【００６０】
処方例１３ 浴用剤
処方 配合量（重量％）
１．コメの熱水抽出物（製造例１３） ５．０
２．炭酸水素ナトリウム ５０．０
３．黄色２０２号（１） ０．０５
４．香料 ０．２５
５．無水硫酸ナトリウム ４４．７
［製造方法］成分１〜５を均一に混合し製品とする。
【００６１】
処方例１４ 錠菓
処方 配合量（重量％）
１．センキュウの熱水抽出物（製造例１４） ２．０
２．乾燥コーンスターチ ５０．０
３．エリスリトール ４０．０
４．クエン酸 ５．０
５．ショ糖脂肪酸エステル ３．０
６．香料 適量
７．水 適量
［製造方法］成分１〜４及び７を混合し、顆粒成形する。成形した顆粒に成分５及び６を加えて打錠する。１粒１．０ｇとする。
【００６２】
処方例１５ 飲料
処方 配合量（重量％）
１．ユリの熱水抽出物（製造例１５） １．０
２．ステビア ０．０５
３．リンゴ酸 ５．０
４．香料 ０．１
５．水にて全量を１００とする
［製造方法］成分２及び３を少量の水に溶解する。次いで、成分１及び４、５を加えて混合する。
【００６３】
処方例１６ 錠剤
処方 配合量（重量％）
１．シロキクラゲの熱水抽出物（製造例１６） １０．０
２．トウモロコシデンプン １０．０
３．精製白糖 ２０．０
４．カルボキシメチルセルロース １０．０
５．微結晶セルロース ３５．０
６．ポリビニルピロリドン ５．０
７．タルク １０．０
［製造方法］成分１〜５を混合し、次いで成分６の水溶液を結合剤として加えて常法により顆粒化した。これに滑沢剤として成分７を加えて配合した後、１錠１００ｍｇの錠剤に打錠した。
【００６４】
処方例１７ 散剤
処方 配合量（重量％）
１．メハジキの熱水抽出物（製造例９） １０．０
２．トウモロコシデンプン ４０．０
３．微結晶セルロース ５０．０
［製造方法］上記成分を混合し、常法により散剤とした。
【００６５】
処方例１８ 注射剤
処方 配合量（重量％）
１．カンゾウの熱水抽出物（製造例１０） １．０
２．ポリオキシエチレン（６０）硬化ヒマシ油 ３．７
３．ゴマ油 ０．２
４．塩化ナトリウム ０．９
５．プロピレングリコール ４．０
６．リン酸緩衝液（０．１Ｍ、ｐＨ６．０） １０．０
７．蒸留水 ８０．２
［製造方法］成分１、２、３および成分５の半量を混合して約８０℃で加温溶解し、これに成分４、６と成分５を予め溶解した成分７を約８０℃に加温して加え全量を１０００ｍＬの水溶液とした。この水溶液を１ｍＬのアンプルに分注して熔閉した後、加熱滅菌した。
【実施例３】
【００６６】
次に、本発明の効果を詳細に説明するため、実験例をあげる。
【００６７】
実験例１ 細胞内グルタチオンレダクターゼの活性化試験
細胞内グルタチオンレダクターゼの活性化効果を下記の条件にて測定した。
【００６８】
コンフルエントな状態のヒト表皮角化細胞を、１μｇ／ｍＬの試料を含むＤＭＥＭ培地でさらに２４時間培養した後、細胞を剥離し、１ｍＭＥＤＴＡを含む５０ｍＭリン酸緩衝液（ｐＨ７．５）１ｍＬを加えて超音波破砕し、１５，０００ｒｐｍで１５分間遠心分離を行い、上澄を試料溶液とした。試料溶液９００μＬに、９．５ｍＭ酸化型グルタチオン／リン酸緩衝溶液１００μＬ及び２ｍＭＮＡＤＰＨ／リン酸緩衝溶液１２０μＬを加え、３４０ｎｍの吸光度の時間変化（φＡ３４０ｎｍ／ｍｉｎ、３分間）を測定し、標準のグルタチオンレダクターゼ０，５，１０および２０ｍＵ／ｍＬから作成した検量線より試料溶液のグルタチオンレダクターゼ活性を算出した。同時に、試料溶液のタンパク濃度を測定し、単位タンパク当りのグルタチオンレダクターゼ活性を算出した。試料未添加の細胞のグルタチオンレダクターゼ活性をコントロールとし、コントロールを１００としたときの試料添加のグルタチオンレダクターゼ活性の値を細胞内グルタチオンレダクターゼ活性として算出した。
【００６９】
これらの試験結果を表１に示した。その結果、メハジキ、カンゾウ、エゾウコギ、サイシン、コメ、センキュウ、ユリおよびシロキクラゲの抽出物には優れた細胞内グルタチオンレダクターゼの活性化作用が認められた。また、製造例９〜２４の抽出物の試験を行ったところ、いずれも優れた細胞内グルタチオンレダクターゼの活性化作用を示した。
【００７０】
【表１】
【００７１】
実験例２ 細胞内還元型グルタチオン比の増加作用の評価
細胞内還元型グルタチオン比の増加作用を下記の条件にて測定した。
【００７２】
コンフルエントな状態になった表皮角化細胞を１μｇ／ｍＬ濃度の試料を添加したＥａｇｌｅ’ｓ ＭＥＭ培地にてさらに２４時間培養した後、細胞を剥離し、１ｍＭＥＤＴＡを含む５０ｍＭリン酸緩衝液（ｐＨ７．５）０．５ｍＬを加えて超音波破砕し、１５，０００ｒｐｍで１５分間遠心分離を行い、上清を試料溶液とした。９６ｗｅｌｌプレートを用い試料溶液１００μＬに０．５ｍＭＮＡＤＰＨ／リン酸緩衝溶液と１Ｕ／ｍＬグルタチオンレダクターゼ／リン酸緩衝溶液の１：１混合液２５μＬを添加し、室温で１０分間反応させた。さらに１０ｍＭ５，５’−ｄｉｔｈｉｏｂｉｓ−２−ｎｉｔｒｏｂｅｎｚｏｉｃ ａｃｉｄ／リン酸緩衝溶液２５μＬを添加し、室温で１０分間反応させた後、４０５ｎｍにおける吸光度を測定した。標準の還元型グルタチオン（ＧＳＨ）から作成した検量線より試料溶液の総グルタチオン量を算出した。また、試料溶液１５０μＬに１Ｍ２−ｖｉｎｙｌｐｙｒｉｄｉｎｅ２．５μＬを添加し、室温で１時間反応させＧＳＨを除いた後、同様な反応により酸化型グルタチオン（ＧＳＳＧ）量を求めた。同時に、試料溶液のタンパク濃度を測定し、単位タンパク当りの総グルタチオン量とＧＳＳＧ量からＧＳＨ量を算出し、ＧＳＨ／ＧＳＳＧ比を求めた。試料未添加の細胞のＧＳＨ／ＧＳＳＧ比をコントロールとし、コントロールを１００としたときの試料添加のＧＳＨ／ＧＳＳＧ比の値を細胞内還元型グルタチオン比として算出した。
【００７３】
これらの試験結果を表２に示した。その結果、メハジキ、カンゾウ、エゾウコギ、サイシン、コメ、センキュウ、ユリおよびシロキクラゲの抽出物には優れた細胞内還元型グルタチオン比の増加作用が認められ、細胞の還元型グルタチオン割合を増加させる作用が認められた。また、製造例９〜２４の抽出物の試験を行ったところ、いずれも優れた細胞内還元型グルタチオン比の増加作用を示した。
【００７４】
【表２】
【００７５】
実験例３ 使用試験
処方例１〜８のクリーム及び比較例１の従来のクリームを用いて、しわ、シミに悩む女性３０人（２０〜４５才）を対象に６ヶ月間の使用試験を行った。使用後、しわ、シミの改善についてのアンケート調査を行って、皮膚性状の改善効果を判定した。アンケートの評価基準は、有効なものを「優」、やや有効なものを「良」、わずかに有効なものを「可」、無効なものを「不可」として評価した。
【００７６】
これらの結果を表３に示した。処方例１〜８のグルタチオンレダクターゼ活性増強剤を含む皮膚外用剤は優れたしわ、シミの改善効果を示した。なお、試験期間中皮膚トラブルは一人もなく、安全性においても問題なかった。
【００７７】
【表３】
【００７８】
処方例９〜１７の化粧水、乳液、軟膏、ファンデーション、浴用剤、錠菓、飲料、錠剤および散剤の使用試験を行ったところ、いずれも安全で優れたしわ、シミの改善効果を示した。
【産業上の利用可能性】
【００７９】
本発明の活用例として、食品、化粧品、医薬部外品または医薬品のいずれにも用いることができる。その剤型としては、錠菓、飲料、化粧水、クリーム、乳液、ゲル剤、エアゾール剤、軟膏、パップ剤、ペースト剤、プラスター剤、エッセンス、パック、洗浄剤、浴用剤、ファンデーション、打粉、口紅、散剤、丸剤、錠剤、注射剤、坐剤、乳剤、カプセル剤、顆粒剤、液剤（チンキ剤、流エキス剤、酒精剤、懸濁剤、リモナーデ剤などを含む）等が挙げられ、皮膚細胞の還元能力の低下に由来する皮膚のしわ、シミの防止等の改善効果が得られる。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
メハジキ、カンゾウ、エゾウコギ、サイシン、コメ、センキュウ、ユリおよびシロキクラゲの中から選ばれる一種又は二種以上の抽出物を含有することを特徴とするグルタチオンレダクターゼの活性増強剤。
【請求項２】
メハジキ、カンゾウ、エゾウコギ、サイシン、コメ、センキュウ、ユリおよびシロキクラゲの中から選ばれる一種又は二種以上の抽出物を含有することを特徴とする還元型グルタチオン生成促進剤。
【請求項３】
請求項１記載のグルタチオンレダクターゼの活性増強剤を含む還元型グルタチオンの生成促進による抗酸化剤。
【請求項４】
請求項１記載のグルタチオンレダクターゼの活性増強剤を含む還元型グルタチオンの生成促進による美白用組成物。
【請求項５】
請求項１記載のグルタチオンレダクターゼの活性増強剤を含む還元型グルタチオンの生成促進による老化防止用組成物。
【請求項１】
メハジキ、カンゾウ、エゾウコギ、サイシン、コメ、センキュウ、ユリおよびシロキクラゲの中から選ばれる一種又は二種以上の抽出物を含有することを特徴とするグルタチオンレダクターゼの活性増強剤。
【請求項２】
メハジキ、カンゾウ、エゾウコギ、サイシン、コメ、センキュウ、ユリおよびシロキクラゲの中から選ばれる一種又は二種以上の抽出物を含有することを特徴とする還元型グルタチオン生成促進剤。
【請求項３】
請求項１記載のグルタチオンレダクターゼの活性増強剤を含む還元型グルタチオンの生成促進による抗酸化剤。
【請求項４】
請求項１記載のグルタチオンレダクターゼの活性増強剤を含む還元型グルタチオンの生成促進による美白用組成物。
【請求項５】
請求項１記載のグルタチオンレダクターゼの活性増強剤を含む還元型グルタチオンの生成促進による老化防止用組成物。
【公開番号】特開２００６−１１１５４５（Ｐ２００６−１１１５４５Ａ）
【公開日】平成１８年４月２７日（２００６．４．２７）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００４−２９８５１４（Ｐ２００４−２９８５１４）
【出願日】平成１６年１０月１３日（２００４．１０．１３）
【出願人】（５９２２６２５４３）日本メナード化粧品株式会社 (223)
【Ｆターム（参考）】
【公開日】平成１８年４月２７日（２００６．４．２７）
【国際特許分類】
【出願日】平成１６年１０月１３日（２００４．１０．１３）
【出願人】（５９２２６２５４３）日本メナード化粧品株式会社 (223)
【Ｆターム（参考）】
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