ゲノムが改変された細胞
本発明により、生産蛋白質である糖蛋白質の糖鎖構造を制御することが可能な細胞、すなわち、ＧＤＰ−マンノースをＧＤＰ−４−ケト，６−デオキシ−ＧＤＰ−マンノースに変換する脱水反応を触媒する酵素のゲノム遺伝子がノックアウトされた細胞、該細胞を用いた糖蛋白質の製造方法、該製造方法で製造された糖蛋白質、ならびにその用途を提供する。
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
ＧＤＰ−マンノースをＧＤＰ−４−ケト，６−デオキシ−ＧＤＰ−マンノースに変換する脱水反応を触媒する酵素の、ゲノム遺伝子がノックアウトされた細胞。
【請求項２】
ＧＤＰ−マンノースをＧＤＰ−４−ケト，６−デオキシ−ＧＤＰ−マンノースに変換する脱水反応を触媒する酵素の、ゲノム上の対立遺伝子のすべてがノックアウトされた、請求項１に記載の細胞。
【請求項３】
ＧＤＰ−マンノースをＧＤＰ−４−ケト，６−デオキシ−ＧＤＰ−マンノースに変換する脱水反応を触媒する酵素の、ゲノム遺伝子の少なくとも第５エクソン領域を欠失した、請求項１または２に記載の細胞。
【請求項４】
ＧＤＰ−マンノースをＧＤＰ−４−ケト，６−デオキシ−ＧＤＰ−マンノースに変換する脱水反応を触媒する酵素が、ＧＤＰ−マンノース４，６−デヒドラターゼである、請求項１〜３のいずれか１項に記載の細胞。
【請求項５】
Ｎ−グリコシド結合複合型糖鎖還元末端のＮ−アセチルグルコサミンの６位とフコースの１位がα結合した糖鎖構造を認識するレクチンに耐性である、請求項１〜４のいずれかｌ項に記載の細胞。
【請求項６】
レクチンに耐性である細胞が、Ｎ−グリコシド結合複合型糖鎖還元末端のＮ−アセチルグルコサミンの６位とフコースの１位がα結合した糖鎖構造を認識するレクチンを含む培地で培養した場合に、ゲノム遺伝子がノックアウトされる以前の細胞よりも高い生存率を示すことを指標に選択した細胞である、請求項５に記載の細胞。
【請求項７】
糖蛋白質をコードする遺伝子を含む請求項１〜６のいずれか１項に記載の細胞。
【請求項８】
糖蛋白質が、Ｎ−グリコシド結合複合型糖鎖還元末端のＮ−アセチルグルコサミンの６位とフコースの１位がα結合した糖鎖構造を有さない糖蛋白質である請求項７に記載の細胞。
【請求項９】
糖蛋白質が、抗体分子である請求項７または８に記載の細胞。
【請求項１０】
抗体分子のクラスがＩｇＧである、請求項９に記載の細胞。
【請求項１１】
請求項１〜１０のいずれか１項に記載の細胞を用いることを特徴とする、糖蛋白質組成物を製造する方法。
【請求項１２】
請求項１〜１０のいずれか１項に記載の細胞を培地に培養し、培養物中に糖蛋白質組成物を生成蓄積させ、該培養物から糖蛋白質組成物を採取し、精製する工程を含む、糖蛋白質組成物を製造する方法。
【請求項１３】
糖蛋白質が、抗体である請求項１１または１２に記載の方法。
【請求項１４】
請求項１〜６のいずれか１項に記載の細胞を用いて作製された、トランスジェニック非ヒト動物あるいは植物、またはその子孫。
【請求項１５】
トランスジェニック非ヒト動物が、ウシ、ヒツジ、ヤギ、ブタ、ウマ、マウス、ラット、ニワトリ、サル及びウサギからなる群から選ばれる動物あるいは植物である、請求項１４に記載のトランスジェニック非ヒト動物、またはその子孫。
【請求項１６】
糖蛋白質をコードする遺伝子を導入した請求項１４または１５に記載のトランスジェニック非ヒト動物あるいは植物、またはその子孫。
【請求項１７】
糖蛋白質が抗体分子である、請求項１６記載のトランスジェニック非ヒト動物あるいは植物、またはその子孫。
【請求項１８】
抗体分子のクラスがＩｇＧである、請求項１７に記載のトランスジェニック非ヒト動物あるいは植物、またはその子孫。
【請求項１９】
請求項１４〜１８のいずれか１項に記載のトランスジェニック非ヒト動物あるいは植物、またはその子孫を飼育し、飼育した動物あるいは植物から導入した糖蛋白質組成物を含む組織あるいは体液を取得し、取得した組織あるいは体液から目的とする糖蛋白質組成物を採取精製する工程を含む、糖蛋白質を製造する方法。
【請求項２０】
請求項１４〜１８のいずれか１項に記載のトランスジェニック非ヒト動物あるいは植物、またはその子孫の糖蛋白質生産細胞を取得し、取得した糖蛋白質生産細胞を培地に培養し、培養物中に糖蛋白質組成物を生成蓄積させ、該培養物から糖蛋白質組成物を採取精製する工程を含む、糖蛋白質組成物を製造する方法。
【請求項２１】
糖蛋白質が抗体である、請求項１９または２０に記載の方法。
【請求項２２】
請求項１１〜１３および１９〜２１のいずれか１項に記載の方法を用いて製造される糖蛋白質組成物。
【請求項２３】
請求項１３または２１に記載の方法を用いて製造される抗体組成物。
【請求項２４】
請求項２２または２３に記載の組成物を有効成分として含有する医薬。
【請求項１】
ＧＤＰ−マンノースをＧＤＰ−４−ケト，６−デオキシ−ＧＤＰ−マンノースに変換する脱水反応を触媒する酵素の、ゲノム遺伝子がノックアウトされた細胞。
【請求項２】
ＧＤＰ−マンノースをＧＤＰ−４−ケト，６−デオキシ−ＧＤＰ−マンノースに変換する脱水反応を触媒する酵素の、ゲノム上の対立遺伝子のすべてがノックアウトされた、請求項１に記載の細胞。
【請求項３】
ＧＤＰ−マンノースをＧＤＰ−４−ケト，６−デオキシ−ＧＤＰ−マンノースに変換する脱水反応を触媒する酵素の、ゲノム遺伝子の少なくとも第５エクソン領域を欠失した、請求項１または２に記載の細胞。
【請求項４】
ＧＤＰ−マンノースをＧＤＰ−４−ケト，６−デオキシ−ＧＤＰ−マンノースに変換する脱水反応を触媒する酵素が、ＧＤＰ−マンノース４，６−デヒドラターゼである、請求項１〜３のいずれか１項に記載の細胞。
【請求項５】
Ｎ−グリコシド結合複合型糖鎖還元末端のＮ−アセチルグルコサミンの６位とフコースの１位がα結合した糖鎖構造を認識するレクチンに耐性である、請求項１〜４のいずれかｌ項に記載の細胞。
【請求項６】
レクチンに耐性である細胞が、Ｎ−グリコシド結合複合型糖鎖還元末端のＮ−アセチルグルコサミンの６位とフコースの１位がα結合した糖鎖構造を認識するレクチンを含む培地で培養した場合に、ゲノム遺伝子がノックアウトされる以前の細胞よりも高い生存率を示すことを指標に選択した細胞である、請求項５に記載の細胞。
【請求項７】
糖蛋白質をコードする遺伝子を含む請求項１〜６のいずれか１項に記載の細胞。
【請求項８】
糖蛋白質が、Ｎ−グリコシド結合複合型糖鎖還元末端のＮ−アセチルグルコサミンの６位とフコースの１位がα結合した糖鎖構造を有さない糖蛋白質である請求項７に記載の細胞。
【請求項９】
糖蛋白質が、抗体分子である請求項７または８に記載の細胞。
【請求項１０】
抗体分子のクラスがＩｇＧである、請求項９に記載の細胞。
【請求項１１】
請求項１〜１０のいずれか１項に記載の細胞を用いることを特徴とする、糖蛋白質組成物を製造する方法。
【請求項１２】
請求項１〜１０のいずれか１項に記載の細胞を培地に培養し、培養物中に糖蛋白質組成物を生成蓄積させ、該培養物から糖蛋白質組成物を採取し、精製する工程を含む、糖蛋白質組成物を製造する方法。
【請求項１３】
糖蛋白質が、抗体である請求項１１または１２に記載の方法。
【請求項１４】
請求項１〜６のいずれか１項に記載の細胞を用いて作製された、トランスジェニック非ヒト動物あるいは植物、またはその子孫。
【請求項１５】
トランスジェニック非ヒト動物が、ウシ、ヒツジ、ヤギ、ブタ、ウマ、マウス、ラット、ニワトリ、サル及びウサギからなる群から選ばれる動物あるいは植物である、請求項１４に記載のトランスジェニック非ヒト動物、またはその子孫。
【請求項１６】
糖蛋白質をコードする遺伝子を導入した請求項１４または１５に記載のトランスジェニック非ヒト動物あるいは植物、またはその子孫。
【請求項１７】
糖蛋白質が抗体分子である、請求項１６記載のトランスジェニック非ヒト動物あるいは植物、またはその子孫。
【請求項１８】
抗体分子のクラスがＩｇＧである、請求項１７に記載のトランスジェニック非ヒト動物あるいは植物、またはその子孫。
【請求項１９】
請求項１４〜１８のいずれか１項に記載のトランスジェニック非ヒト動物あるいは植物、またはその子孫を飼育し、飼育した動物あるいは植物から導入した糖蛋白質組成物を含む組織あるいは体液を取得し、取得した組織あるいは体液から目的とする糖蛋白質組成物を採取精製する工程を含む、糖蛋白質を製造する方法。
【請求項２０】
請求項１４〜１８のいずれか１項に記載のトランスジェニック非ヒト動物あるいは植物、またはその子孫の糖蛋白質生産細胞を取得し、取得した糖蛋白質生産細胞を培地に培養し、培養物中に糖蛋白質組成物を生成蓄積させ、該培養物から糖蛋白質組成物を採取精製する工程を含む、糖蛋白質組成物を製造する方法。
【請求項２１】
糖蛋白質が抗体である、請求項１９または２０に記載の方法。
【請求項２２】
請求項１１〜１３および１９〜２１のいずれか１項に記載の方法を用いて製造される糖蛋白質組成物。
【請求項２３】
請求項１３または２１に記載の方法を用いて製造される抗体組成物。
【請求項２４】
請求項２２または２３に記載の組成物を有効成分として含有する医薬。
【国際公開番号】ＷＯ２００５／０３５７４１
【国際公開日】平成１７年４月２１日（２００５．４．２１）
【発行日】平成１８年１２月２１日（２００６．１２．２１）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００５−５１４６７０（Ｐ２００５−５１４６７０）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＪＰ２００４／０１５３１８
【国際出願日】平成１６年１０月８日（２００４．１０．８）
【出願人】（０００００１０２９）協和醗酵工業株式会社 (276)
【Ｆターム（参考）】
【国際公開日】平成１７年４月２１日（２００５．４．２１）
【発行日】平成１８年１２月２１日（２００６．１２．２１）
【国際特許分類】
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＪＰ２００４／０１５３１８
【国際出願日】平成１６年１０月８日（２００４．１０．８）
【出願人】（０００００１０２９）協和醗酵工業株式会社 (276)
【Ｆターム（参考）】
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