本発明は、少なくとも１つの染色体編集を有する動物または細胞を作り出すための方法を包含する。特に、本発明は、染色体配列を編集するための、標的化亜鉛フィンガーヌクレアーゼの使用に関する。本発明は、本発明の方法によって作り出される動物または細胞をさらに包含する。

【特許請求の範囲】
【請求項１】
染色体配列を編集するための方法であって、
（ａ） 前記染色体配列を含む細胞中に、前記染色体配列内の標的配列を認識し、前記染色体配列内の切断部位を切断することができる亜鉛フィンガーヌクレアーゼをコードする、少なくとも１つの核酸と、任意に、
（ｉ） 組込みのためのドナー配列、上流配列、および下流配列を含む少なくとも１つのドナーポリヌクレオチドであって、前記ドナー配列は、前記上流配列および前記下流配列によって側面を囲まれ、前記上流配列および前記下流配列は、前記切断部位のいずれかの側と実質的な配列同一性を共有する、ドナーポリヌクレオチド、または
（ｉｉ） 前記切断部位における前記染色体配列の一部分と実質的に同一である交換配列を含み、少なくとも１つのヌクレオチド変化をさらに含む、少なくとも１つの交換ポリヌクレオチドと、を導入することと、
（ｂ） 前記亜鉛フィンガーヌクレアーゼが２本鎖切断を前記切断部位における前記染色体配列内に導入するように、前記亜鉛フィンガーヌクレアーゼの発現を可能にするために、前記細胞を培養することであって、前記２本鎖切断は、
（ｉ） 変異が前記染色体配列内に導入されるような、非相同末端連結修復プロセス、または任意に、
（ｉｉ） 前記ドナー配列が前記染色体配列内に組み込まれるか、もしくは前記交換配列が前記染色体配列の前記一部分と交換されるような、相同性指向性修復プロセスによって修復されること、を含む、方法。
【請求項２】
前記細胞は、胚である、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記胚は、単細胞胚である、請求項２に記載の方法。
【請求項４】
亜鉛フィンガーヌクレアーゼをコードする２つ以上の核酸が、前記細胞中に導入される、請求項１に記載の方法。
【請求項５】
亜鉛フィンガーヌクレアーゼをコードする前記核酸は、ＲＮＡである、請求項１に記載の方法。
【請求項６】
前記ＲＮＡは、キャッピングされる、請求項５に記載の方法。
【請求項７】
前記ＲＮＡは、ポリアデニル化される、請求項５に記載の方法。
【請求項８】
前記ドナーポリヌクレオチド、前記交換ポリヌクレオチド、またはそれらの任意の組み合わせから選択される、ポリヌクレオチドのうちの２つ以上が、前記細胞中に導入される、請求項１に記載の方法。
【請求項９】
前記細胞は、培養細胞、初代細胞、または幹細胞である、請求項１に記載の方法。
【請求項１０】
前記細胞は、ヒト細胞、哺乳動物細胞、脊椎動物細胞、無脊椎動物細胞、または真菌細胞である、請求項１に記載の方法。
【請求項１１】
非ヒト動物であって、前記動物は、請求項１に記載の方法によって作り出される、非ヒト動物。
【請求項１２】
前記動物は、齧歯動物である、請求項１１に記載の非ヒト動物。
【請求項１３】
前記動物は、家畜動物である、請求項１１に記載の非ヒト動物。
【請求項１４】
前記動物は、伴侶動物である、請求項１１に記載の非ヒト動物。
【請求項１５】
細胞であって、前記細胞は、請求項１に記載の方法を用いて作り出される、細胞。
【請求項１６】
前記細胞は、胚である、請求項１５に記載の細胞。
【請求項１７】
前記胚は、単細胞胚である、請求項１６に記載の細胞。
【請求項１８】
前記細胞は、培養細胞、初代細胞、または幹細胞である、請求項１５に記載の細胞。
【請求項１９】
胚であって、前記胚は、前記染色体配列内の標的配列を認識し、前記染色体配列内の切断部位を切断することができる亜鉛フィンガーヌクレアーゼをコードする、少なくとも１つの核酸と、任意に、
（ｉ） 組込みのためのドナー配列、上流配列、および下流配列を含む少なくとも１つのドナーポリヌクレオチドであって、前記ドナー配列は、前記上流配列および前記下流配列によって側面を囲まれ、前記上流配列および前記下流配列は、前記切断部位のいずれかの側と実質的な配列同一性を共有する、ドナーポリヌクレオチド、または
（ｉｉ） 前記切断部位における前記染色体配列の一部分と実質的に同一である交換配列を含み、少なくとも１つのヌクレオチド変化をさらに含む、少なくとも１つの交換ポリヌクレオチドと、を含む、胚。
【請求項２０】
前記胚は、単細胞胚である、請求項１９に記載の胚。

【図１】

【図２】

【図３】

【図４】

【図５】

【図６Ａ】

【図６Ｂ】

【図７Ａ】

【図７Ｂ】

【図８】

【図９】

【図１０Ａ】

【図１０Ｂ】

【図１１】

【図１２】

【図１３】

【図１４】

【図１５】

【図１６】

【図１７】

【図１８】

【図１９】

【図２０】

【図２１】

【図２２】

【図２３】

【図２４Ａ】

【図２４Ｂ】

【図２４Ｃ】

【図２５】

【図２６】

【図２７】

【図２８】

【図２９】

【図３０】

【図３１】

【図３２Ａ】

【図３２Ｂ】

【図３３】

【図３４】

【図３５】

【図３６】

【図３７】

【図３８】

【図３９Ａ】

【図３９Ｂ】

【図４０】

【図４１】

【図４２】

【図４３】

【図４４】

【図４５】

【図４６】

【図４７】

【図４８】

【図４９】

【公表番号】特表２０１３−５０００１８（Ｐ２０１３−５０００１８Ａ）
【公表日】平成２５年１月７日（２０１３．１．７）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２０１２−５２１８６７（Ｐ２０１２−５２１８６７）
【出願日】平成２２年７月２３日（２０１０．７．２３）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＵＳ２０１０／０４３１６７
【国際公開番号】ＷＯ２０１１／０１１７６７
【国際公開日】平成２３年１月２７日（２０１１．１．２７）
【出願人】（３１１０１６９４９）シグマ−アルドリッチ・カンパニー・リミテッド・ライアビリティ・カンパニー (3)
【氏名又は名称原語表記】Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ　Ｃｏ．，　　ＬＬＣ
【Ｆターム（参考）】