コラーゲン産生促進剤
【課題】優れたコラーゲン産生促進作用を有する新しい植物由来のコラーゲン産生促進剤を提供する。
【解決手段】キク科キク属（Chrysanthemum）またはキク科デンドラテマ属（Dendranthema）の、ノジギク（Chrysanthemum japonenseまたはDendranthema occidentali japonense）の花の溶媒抽出物を含むものとする。
【解決手段】キク科キク属（Chrysanthemum）またはキク科デンドラテマ属（Dendranthema）の、ノジギク（Chrysanthemum japonenseまたはDendranthema occidentali japonense）の花の溶媒抽出物を含むものとする。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、コラーゲン産生促進剤に関し、特に細胞外マトリックス成分の一つであるコラーゲンの産生を促進するコラーゲン産生促進剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
老化皮膚に見られるしわ・たるみの発生は、外見上の加齢変化の主たるものであり、多くの中高年齢者にとって切実な問題となっている。しわ・たるみの成因の一つは、皮膚組織が加齢に伴なって菲薄化することによる。老化した皮膚においては、真皮の主要なマトリックス成分であるコラーゲン線維の減少が著しく、このことが皮膚の厚さが減少する主たる原因となっている。したがって、コラーゲンの産生を促進させてコラーゲン量を維持することが、しわ・たるみの予防・改善に有効であると考えられる。またコラーゲンの産生を促進させることは皮膚の創傷治癒の改善にも有効である。
【０００３】
従来、コラーゲンの産生を促進させることで皮膚の加齢変化を予防・改善する天然物由来の成分としては、例えば、ダイズゼイン、ダイズジン、ゲニスタイン、およびゲニスチンから選ばれるイソフラボン化合物、フィトステロールや（特許文献１参照）、特定の植物プランクトンの抽出物や（特許文献２参照）、加水分解バレイショタンパク（特許文献３参照）等が報告されている。
一方、キク科植物の抽出物に関していえば、キク科キク属植物に臭気発生抑制作用があること（特許文献４参照）、キク科キク属、ヒマワリ属、キンセンカ属、タンポポ属植物にヒアルロニダーゼ活性阻害作用があること（特許文献５参照）、キク科キク属植物に紫外線曝露に起因する皮膚障害を改善すること（特許文献６参照）、キク科キク属植物に含まれるカルコン配糖体に抗酸化作用があること（特許文献７参照）等が知られている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００４】
【特許文献１】特開２００１−３９８４９号公報
【特許文献２】特開２００７−１８６４７１号公報
【特許文献３】特開２００５−２６３６８９号公報
【特許文献４】特開２００２−１１４６６０号公報
【特許文献５】特開２００３−１２４８９号公報
【特許文献６】特開２００５−２９８４８１号公報
【特許文献７】特開２００８−２４７８３９号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
コラーゲンの産生促進作用を有するものとして従来より植物由来の抽出物が、その安全性や皮膚への刺激の穏やかさを期待して種々開発されているが、今までに該効果を奏することが見出されていなかった新しい植物で新たなコラーゲンの産生促進効果を奏する植物のさらなる開発が求められている。
本発明はこのような従来の事情に対処してなされたもので、新しい植物由来のコラーゲン産生促進剤を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
そこで本発明者は、皮膚線維芽細胞のコラーゲン産生を強く促進させる作用を有する物質を鋭意研究した結果、ノジギクの花の溶媒抽出物が優れたコラーゲン産生能を有していることを見出した。
【０００７】
すなわち本発明は、キク科キク属（Chrysanthemum）またはキク科デンドラテマ属（Dendranthema）の、ノジギク（Chrysanthemum japonenseまたはDendranthema occidentali japonense）の花の溶媒抽出物を含むことを特徴とするコラーゲン産生促進剤である。
【発明の効果】
【０００８】
本発明のコラーゲン産生促進剤は、コラーゲン産生を促進する効果に優れ、かつ安全なものである。よって本発明のコラーゲン産生促進剤によれば、コラーゲンの産生を促進して、コラーゲン量を維持することができ、しわ・たるみの予防・改善及び皮膚創傷治癒を促進し、コラーゲン不足に起因する種々の症状の改善に有効である。
【図面の簡単な説明】
【０００９】
【図１】本発明によるノジギク抽出物（採取部位違い２種）のコラーゲン産生促進活性の結果を示す図である。
【発明を実施するための形態】
【００１０】
以下、本発明について詳述する。
本発明のコラーゲン産生促進剤は、優れたコラーゲン産生促進能を有している。よって、本発明のコラーゲン産生促進剤は、医薬品（例えば皮膚外用剤，内服薬），医薬部外品，および化粧料の材料として好適である。また、飲食品（例えばサプリメント，飲料）にも適用することができる。
【００１１】
本発明で用いられるノジギク（Chrysanthemum japonenseまたはDendranthema occidentali japonense）は、キク科キク属（Chrysanthemum）またはキク科デンドラテマ属（Dendranthema）の植物であり、「野路菊」とも表記される。日本の主に本州の山地に群生する多年草である。
【００１２】
本発明で用いられるノジギクについては抗酸化作用があることが知られているが（先の特許文献７）、コラーゲン産生促進作用があるという報告はこれまでになく、本発明者らによって初めて見出されたものである。
【００１３】
本発明に用いられるノジギクの抽出物は、ノジギクの花をそのまま、乾燥あるいは粉砕した後、溶媒にて抽出することにより得られる。抽出は室温静置で行っても良いが、必要に応じて加温、攪拌、加熱還流により抽出を促進することが可能である。得られた抽出液は、そのまま、あるいは適宜濾過・濃縮・脱色などの処理を施して用いることが出来る。また、一旦溶媒を除去した後に、抽出に用いた溶媒とは異なる溶媒に再溶解して用いることも可能である。得られた抽出物を活性炭やカラムマトグラフィーなどによりさらに精製して用いることも可能である。
【００１４】
本発明に用いられる抽出溶媒は、通常抽出に用いられる溶媒であれば何でもよく、特にメタノール、エタノール、１，３−ブタンジオール、プロピレングリコール、ジプロピレングリコール等のアルコール類、含水エタノールや含水メタノールのような含水アルコール類、アセトン、酢酸エチルエステル、クロロホルム等の有機溶媒を単独あるいは組み合わせて用いることができるが、このうちアルコール又は含水アルコールが好ましく、特にメタノール、エタノール、１，３ブチレングリコールおよびこれらの含水物から選ばれる一種又は二種以上が好ましい。
また、これらの抽出物を溶媒分画や活性炭処理やカラムクロマトグラフィーなどにより精製して用いても良い。
【００１５】
本発明のコラーゲン産生促進剤はノジギクの花の溶媒抽出物を含むことを特徴とするが、本発明の効果を損なわない範囲において他の種々の成分を含有することが出来る。
【００１６】
本発明のコラーゲン産生促進剤は、皮膚外用基剤に配合して、コラーゲン産生促進作用に基づく皮膚外用剤とすることができる。これらの皮膚外用剤は、特に化粧料、医薬品、医薬部外品等の分野において好適に用いることができる。
【００１７】
本発明のコラーゲン産生促進剤を含む皮膚外用剤における植物抽出物の配合量は、ノジギク抽出物成分の乾燥残分として、通常０．０００１質量％以上、好ましくは０．００１質量％以上である。配合量が少なすぎると効果が十分に発揮されない。上限は本発明の効果を損なわない範囲において特に限定されないが、過剰に配合しても増量に見合った顕著な効果が得られないこと、また、製剤設計や使用性などにおいて悪影響を及ぼすこともあることなどから、通常１０質量％以下、より好ましくは５質量％以下である。
【００１８】
本発明のコラーゲン産生促進剤を含む皮膚外用剤は、本発明によるコラーゲン産生促進剤を皮膚外用基剤に配合して製造される。皮膚外用剤には、上記必須成分以外に、本発明の効果を損なわない範囲内で、通常化粧品や医薬品等の皮膚外用剤に用いられる成分、例えば、保湿剤、酸化防止剤、油性成分、紫外線吸収剤、界面活性剤、増粘剤、アルコール類、粉末成分、色剤、水性成分、水、植物エキス類、各種皮膚栄養剤等を必要に応じて適宜配合することができる。
【００１９】
その他、エデト酸二ナトリウム、エデト酸三ナトリウム、クエン酸ナトリウム、ポリリン酸ナトリウム、メタリン酸ナトリウム、グルコン酸等の金属封鎖剤、カフェイン、タンニン、ベラパミル、トラネキサム酸およびその誘導体、甘草抽出物、グラブリジン、各種生薬、酢酸トコフェロール、グリチルリチン酸およびその誘導体またはその塩等の薬剤、グルコース、フルクトース、マンノース、ショ糖、トレハロース等の糖類なども適宜配合することができる。
【００２０】
本発明のコラーゲン産生促進剤を含む皮膚外用剤は、例えば軟膏、クリーム、乳液、ローション、パック、浴用剤等、従来皮膚外用剤に用いるものであればいずれでもよく、剤型は特に問わない。
【実施例】
【００２１】
本発明について以下に実施例を挙げてさらに詳述するが、本発明はこれによりなんら限定されるものではない。配合量は特記しない限り質量％で示す。
最初に、本実施例で用いた植物抽出物の調製方法、コラーゲン産生促進効果に関する試験方法とその結果について説明する。
【００２２】
１．試料の調製
（製造例１）
ノジギク（野路菊）の花の乾燥粉砕物１０ｇにメタノールを１０倍量（質量比）加えて室温にて１週間かけて抽出後、４℃にて１晩放置し、ろ過後不溶物を取り除いた。得られたろ過液を花メタノール抽出物と称し、さらに凍結乾燥して得られた固形物をメタノール抽出乾燥物と称する。得られたメタノール抽出乾燥物の収量は２．４ｇ（収率；２４％）であった。
【００２３】
（製造例２）
ノジギク（野路菊）の葉と茎の乾燥粉砕物１０ｇにメタノールを１０倍量加えて室温にて１週間かけて抽出後、４℃にて１晩放置し、ろ過後不溶物を取り除いた。得られたろ過液を葉・茎メタノール抽出物と称し、さらに凍結乾燥して得られた固形物をメタノール抽出乾燥物と称する。得られたメタノール抽出乾燥物の収量は１．７ｇ（収率；１７％）であった。
【００２４】
２．線維芽細胞のＩ型コラーゲン産生促進作用の試験法およびその結果
（１）試験法
（1-1）総コラーゲン量の測定
ヒト皮膚由来の線維芽細胞HF0(K)P=8.5を４００万個培養し、１０万個／穴で２４穴に播種し、０．５％ＦＢＳ／ＤＭＥで培養した。
翌日試験試料であるメタノール抽出乾燥物の濃度が０．００１％および０．０１％となるように添加するとともに、０．２５mMとなるようアスコルビン酸リン酸マグネシウムを添加し、次に血清濃度が０．５％ＦＢＳ／ＤＭＥＭとなるよう調製した。正対照としてはＴＧＦ−β（２ng/μl）を用いた。
３日間培養後、培養上清の総コラーゲン量を測定した。培養上清中に分泌されたＩ型コラーゲンの量は酵素免疫吸着測定法（ＥＬＩＳＡ）を用いて測定した。すなわち抗ＰＩＰモノクローナル抗体プレートに標準抗体液を１００μｌづつ加え、あらかじめ調製した標準液は培養上清中の２０μｌずつ添加し、３７℃で３時間反応した。反応液を捨て、ＰＢＳで４回洗浄後、基質溶液（3,3’,5,5’テトラメチルベンジジン溶液）を１００μｌずつ加えて室温で１５分間反応させ、抗体プレート・ＰＩＰ抗原・標準抗体の結合体をつくった。次に１Ｎ硫酸を溶解した反応停止液を１００μｌ加えよく攪拌し反応をとめた。蒸留水を対照として４５０nmでマイクロプレートリーダーにて吸光度を測定し、総コラーゲン量を算出した。
またコラーゲン産生促進作用（総コラーゲン量／細胞数）を評価するために細胞数の測定を行った。以下に細胞数測定法を記載する。
【００２５】
（1-2）細胞数の測定
試験試料の添加３日後に培地を吸引除去し、５％ＦＢＳで洗浄後、６０μlのHoechstを１２mlのHoechst培地に加えて攪拌し、その５００μlを６ウェルプレートに添加した。３７℃で１時間反応させた後、９６ウェルプレートに移し、マイクロプレートリーダー（励起波長３５５nm、測定波長４６０nm）を用いて細胞数を算出した。
【００２６】
（1-3）コラーゲン産生促進作用の計算
コラーゲン産生促進作用は、以下の式を用いて算出した。
コラーゲン産生量＝試験試料を添加した細胞が産生する総コラーゲン量／試験試料を添加した群の細胞数
【００２７】
なお細胞毒性によるコラーゲン産生量の増加を排除するために、細胞増殖率が２０％に満たない細胞毒性が高い群は、コラーゲン産生促進データから外すこととした。
【００２８】
（２）結果
結果を図１に示す。図１は製造例１で調製したノジギクの花メタノール抽出乾燥物と製造例２で調製したノジギクの葉・茎メタノール抽出乾燥物をそれぞれ０．００１質量％および０．０１質量％添加した時のＩ型コラーゲン産生量を示す図である。
ノジギクの花メタノール抽出乾燥物にはコラーゲン産生促進作用が認められるが、葉・茎メタノール抽出乾燥物にはコラーゲン産生促進作用は認められないことが分かる。
【００２９】
以上の結果から本発明のノジギク花の溶媒抽出物は優れたコラーゲン産生促進効果を示すことから、ヒトの肌に対してもすぐれたコラーゲン産生促進作用を奏するものである。したがって、該植物抽出物を外用剤に配合して、肌の老化を防ぎ、若々しく健康な肌の状態を維持するコラーゲン産生促進作用に基づく抗老化剤や各種皮膚疾患治療剤として用いることができる。
【００３０】
以下に、種々の剤型の本発明によるコラーゲン産生促進剤の配合例を処方例として説明する。本発明はこの処方例によって何ら限定されるものではなく、特許請求の範囲によって特定されるものであることはいうまでもない。
各処方中のノジギク抽出物含量は抽出溶媒を除去した後の乾燥残分量として表した。
【００３１】
配合処方例１（化粧水） 質量％
トリメチルグリシン １．０
コラーゲン産生促進剤（ノジギク花／メタノール抽出乾燥物） ０．００１
グリセリン １．０
１，３−ブチレングリコール ５．０
アルギン酸ナトリウム ０．１
エチルアルコール ５．０
ポリオキシエチレンポリオキシプロピレンデシルテトラデシルエーテル ０．２
ヘキサメタリン酸ナトリウム 適量
クエン酸 適量
クエン酸ナトリウム 適量
フェノキシエタノール 適量
香料 適量
精製水 残余
【００３２】
配合処方例２（化粧水） 質量％
コラーゲン産生促進剤（ノジギク花／メタノール抽出乾燥物／５０％−１，３ブタンジオール置換液） ０．１
グリセリン ２．０
１，３−ブチレングリコール ４．０
ポリオキシエチレンメチルグルコシド １．０
ＰＥＧ／ＰＰＧ−１４／７ジメチルエーテル ３．０
エリスリトール １．０
ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油 ０．５
ジイソステアリン酸ポリグリセリル ０．３
トリエチルヘキサノイン ０．３
ＥＤＴＡ３ナトリウム 適量
クエン酸 適量
クエン酸ナトリウム 適量
フェノキシエタノール 適量
精製水 残余
【００３３】
配合処方例３（乳液） 質量％
グリチルリチン酸ジカリウム ０．０５
酢酸トコフェロール ０．５
コラーゲン産生促進剤（ノジギク花／メタノール抽出乾燥物） ０．００１
Ｌ−グルタミン酸ナトリウム ０．０５
ウイキョウエキス ０．１
酵母エキス ０．１
ジオウエキス ０．１
ヒドロキシプロピル−β−シクロデキストリン ０．１
グリセリン ６．０
１，３−ブチレングリコール ５．０
ポリオキシエチレンメチルグルコシド ３．０
ヒマワリ油 １．０
スクワラン ２．０
イソドデカン ４．０
ジメチルポリシロキサン ３．０
キサンタンガム ０．１
カルボキシビニルポリマー ０．１
アクリル酸・メタクリル酸アルキル共重合体 ０．１
エチルアルコール ５．０
水酸化カリウム 適量
ヘキサメタリン酸ナトリウム 適量
ベンガラ 適量
黄酸化鉄 適量
エチルパラベン 適量
香料 適量
精製水 残余
【００３４】
配合処方例４（日中用乳液） 質量％
グリチルリチン酸ジカリウム ０．１
コラーゲン産生促進剤（ノジギク花／メタノール抽出乾燥物／５０％−１，３ブタンジオール置換液） ０．１
酢酸トコフェロール ０．１
１，３−ブチレングリコール ５．０
スクワラン ０．５
イソドデカン １０．０
イソヘキサデカン ２５．０
ジメチルポリシロキサン ２．０
ポリオキシエチレン・メチルポリシロキサン共重合体 １．５
トリメチルシロキシケイ酸 １．０
４−ｔ−ブチル−４’−メトキシジベンゾイルメタン １．０
パラメトキシ桂皮酸２−エチルヘキシル ５．０
ジパラメトキシ桂皮酸モノ−２−エチルヘキサン酸グリセリル １．０
シリコーン被覆微粒子酸化チタン ４．０
ジメチルジステアリルアンモニウムヘクトライト ０．５
球状ポリエチレン末 ３．０
タルク ５．０
ＥＤＴＡ３ナトリウム 適量
フェノキシエタノール 適量
香料 適量
精製水 残余
【００３５】
配合処方例５（クリーム） 質量％
コラーゲン産生促進剤（ノジギク花／メタノール抽出乾燥物／５０％エタノール置換液） １．０
４−メトキシサリチル酸カリウム ３．０
プロピレングリコール ５．０
グリセリン ８．０
ステアリン酸 ２．０
ステアリルアルコール ７．０
水添ラノリン ２．０
スクワラン ５．０
２−オクチルドデシルアルコール ６．０
ポリオキシエチレンセチルアルコールエーテル ３．０
グリセリンモノステアリン酸エステル ２．０
水酸化カリウム 適量
エチルパラベン 適量
香料 適量
イオン交換水 残余
【００３６】
配合処方例６（クリーム） 質量％
４−メトキシサリチル酸カリウム １．０
３−Ｏ−エチルアスコルビン酸 １．０
コラーゲン産生促進剤（ノジギク花／メタノールエキス乾燥物／５０％−１，３ブタンジオール置換液） ０．１
コエンザイムＱ１０ ０．０３
トラネキサム酸 ２．０
酢酸トコフェロール ０．１
ヒアルロン酸ナトリウム ０．０５
パントテニルエチルエーテル ０．１
グリチルレチン酸ステアリル ０．１
グリセリン ７．０
１，３−ブチレングリコール ５．０
ポリエチレングリコール２００００ ０．５
ワセリン ２．０
ベヘニルアルコール ０．５
バチルアルコール ０．２
スクワラン ２．０
ヒドロキシステアリン酸フィトステリル ０．５
ホホバ油 ３．０
テトラ２−エチルヘキサン酸ペンタエリスリット １．０
ジメチルポリシロキサン ２．０
イソステアリン酸ポリオキシエチレングリセリル １．５
ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油 １．０
カルボキシビニルポリマー ０．２
キサンタンガム ０．１
エタノール ５．０
ヘキサメタリン酸ナトリウム 適量
黄酸化鉄 適量
ＥＤＴＡ３ナトリウム 適量
水酸化カリウム 適量
パラオキシ安息香酸エステル 適量
精製水 残余
【技術分野】
【０００１】
本発明は、コラーゲン産生促進剤に関し、特に細胞外マトリックス成分の一つであるコラーゲンの産生を促進するコラーゲン産生促進剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
老化皮膚に見られるしわ・たるみの発生は、外見上の加齢変化の主たるものであり、多くの中高年齢者にとって切実な問題となっている。しわ・たるみの成因の一つは、皮膚組織が加齢に伴なって菲薄化することによる。老化した皮膚においては、真皮の主要なマトリックス成分であるコラーゲン線維の減少が著しく、このことが皮膚の厚さが減少する主たる原因となっている。したがって、コラーゲンの産生を促進させてコラーゲン量を維持することが、しわ・たるみの予防・改善に有効であると考えられる。またコラーゲンの産生を促進させることは皮膚の創傷治癒の改善にも有効である。
【０００３】
従来、コラーゲンの産生を促進させることで皮膚の加齢変化を予防・改善する天然物由来の成分としては、例えば、ダイズゼイン、ダイズジン、ゲニスタイン、およびゲニスチンから選ばれるイソフラボン化合物、フィトステロールや（特許文献１参照）、特定の植物プランクトンの抽出物や（特許文献２参照）、加水分解バレイショタンパク（特許文献３参照）等が報告されている。
一方、キク科植物の抽出物に関していえば、キク科キク属植物に臭気発生抑制作用があること（特許文献４参照）、キク科キク属、ヒマワリ属、キンセンカ属、タンポポ属植物にヒアルロニダーゼ活性阻害作用があること（特許文献５参照）、キク科キク属植物に紫外線曝露に起因する皮膚障害を改善すること（特許文献６参照）、キク科キク属植物に含まれるカルコン配糖体に抗酸化作用があること（特許文献７参照）等が知られている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００４】
【特許文献１】特開２００１−３９８４９号公報
【特許文献２】特開２００７−１８６４７１号公報
【特許文献３】特開２００５−２６３６８９号公報
【特許文献４】特開２００２−１１４６６０号公報
【特許文献５】特開２００３−１２４８９号公報
【特許文献６】特開２００５−２９８４８１号公報
【特許文献７】特開２００８−２４７８３９号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
コラーゲンの産生促進作用を有するものとして従来より植物由来の抽出物が、その安全性や皮膚への刺激の穏やかさを期待して種々開発されているが、今までに該効果を奏することが見出されていなかった新しい植物で新たなコラーゲンの産生促進効果を奏する植物のさらなる開発が求められている。
本発明はこのような従来の事情に対処してなされたもので、新しい植物由来のコラーゲン産生促進剤を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
そこで本発明者は、皮膚線維芽細胞のコラーゲン産生を強く促進させる作用を有する物質を鋭意研究した結果、ノジギクの花の溶媒抽出物が優れたコラーゲン産生能を有していることを見出した。
【０００７】
すなわち本発明は、キク科キク属（Chrysanthemum）またはキク科デンドラテマ属（Dendranthema）の、ノジギク（Chrysanthemum japonenseまたはDendranthema occidentali japonense）の花の溶媒抽出物を含むことを特徴とするコラーゲン産生促進剤である。
【発明の効果】
【０００８】
本発明のコラーゲン産生促進剤は、コラーゲン産生を促進する効果に優れ、かつ安全なものである。よって本発明のコラーゲン産生促進剤によれば、コラーゲンの産生を促進して、コラーゲン量を維持することができ、しわ・たるみの予防・改善及び皮膚創傷治癒を促進し、コラーゲン不足に起因する種々の症状の改善に有効である。
【図面の簡単な説明】
【０００９】
【図１】本発明によるノジギク抽出物（採取部位違い２種）のコラーゲン産生促進活性の結果を示す図である。
【発明を実施するための形態】
【００１０】
以下、本発明について詳述する。
本発明のコラーゲン産生促進剤は、優れたコラーゲン産生促進能を有している。よって、本発明のコラーゲン産生促進剤は、医薬品（例えば皮膚外用剤，内服薬），医薬部外品，および化粧料の材料として好適である。また、飲食品（例えばサプリメント，飲料）にも適用することができる。
【００１１】
本発明で用いられるノジギク（Chrysanthemum japonenseまたはDendranthema occidentali japonense）は、キク科キク属（Chrysanthemum）またはキク科デンドラテマ属（Dendranthema）の植物であり、「野路菊」とも表記される。日本の主に本州の山地に群生する多年草である。
【００１２】
本発明で用いられるノジギクについては抗酸化作用があることが知られているが（先の特許文献７）、コラーゲン産生促進作用があるという報告はこれまでになく、本発明者らによって初めて見出されたものである。
【００１３】
本発明に用いられるノジギクの抽出物は、ノジギクの花をそのまま、乾燥あるいは粉砕した後、溶媒にて抽出することにより得られる。抽出は室温静置で行っても良いが、必要に応じて加温、攪拌、加熱還流により抽出を促進することが可能である。得られた抽出液は、そのまま、あるいは適宜濾過・濃縮・脱色などの処理を施して用いることが出来る。また、一旦溶媒を除去した後に、抽出に用いた溶媒とは異なる溶媒に再溶解して用いることも可能である。得られた抽出物を活性炭やカラムマトグラフィーなどによりさらに精製して用いることも可能である。
【００１４】
本発明に用いられる抽出溶媒は、通常抽出に用いられる溶媒であれば何でもよく、特にメタノール、エタノール、１，３−ブタンジオール、プロピレングリコール、ジプロピレングリコール等のアルコール類、含水エタノールや含水メタノールのような含水アルコール類、アセトン、酢酸エチルエステル、クロロホルム等の有機溶媒を単独あるいは組み合わせて用いることができるが、このうちアルコール又は含水アルコールが好ましく、特にメタノール、エタノール、１，３ブチレングリコールおよびこれらの含水物から選ばれる一種又は二種以上が好ましい。
また、これらの抽出物を溶媒分画や活性炭処理やカラムクロマトグラフィーなどにより精製して用いても良い。
【００１５】
本発明のコラーゲン産生促進剤はノジギクの花の溶媒抽出物を含むことを特徴とするが、本発明の効果を損なわない範囲において他の種々の成分を含有することが出来る。
【００１６】
本発明のコラーゲン産生促進剤は、皮膚外用基剤に配合して、コラーゲン産生促進作用に基づく皮膚外用剤とすることができる。これらの皮膚外用剤は、特に化粧料、医薬品、医薬部外品等の分野において好適に用いることができる。
【００１７】
本発明のコラーゲン産生促進剤を含む皮膚外用剤における植物抽出物の配合量は、ノジギク抽出物成分の乾燥残分として、通常０．０００１質量％以上、好ましくは０．００１質量％以上である。配合量が少なすぎると効果が十分に発揮されない。上限は本発明の効果を損なわない範囲において特に限定されないが、過剰に配合しても増量に見合った顕著な効果が得られないこと、また、製剤設計や使用性などにおいて悪影響を及ぼすこともあることなどから、通常１０質量％以下、より好ましくは５質量％以下である。
【００１８】
本発明のコラーゲン産生促進剤を含む皮膚外用剤は、本発明によるコラーゲン産生促進剤を皮膚外用基剤に配合して製造される。皮膚外用剤には、上記必須成分以外に、本発明の効果を損なわない範囲内で、通常化粧品や医薬品等の皮膚外用剤に用いられる成分、例えば、保湿剤、酸化防止剤、油性成分、紫外線吸収剤、界面活性剤、増粘剤、アルコール類、粉末成分、色剤、水性成分、水、植物エキス類、各種皮膚栄養剤等を必要に応じて適宜配合することができる。
【００１９】
その他、エデト酸二ナトリウム、エデト酸三ナトリウム、クエン酸ナトリウム、ポリリン酸ナトリウム、メタリン酸ナトリウム、グルコン酸等の金属封鎖剤、カフェイン、タンニン、ベラパミル、トラネキサム酸およびその誘導体、甘草抽出物、グラブリジン、各種生薬、酢酸トコフェロール、グリチルリチン酸およびその誘導体またはその塩等の薬剤、グルコース、フルクトース、マンノース、ショ糖、トレハロース等の糖類なども適宜配合することができる。
【００２０】
本発明のコラーゲン産生促進剤を含む皮膚外用剤は、例えば軟膏、クリーム、乳液、ローション、パック、浴用剤等、従来皮膚外用剤に用いるものであればいずれでもよく、剤型は特に問わない。
【実施例】
【００２１】
本発明について以下に実施例を挙げてさらに詳述するが、本発明はこれによりなんら限定されるものではない。配合量は特記しない限り質量％で示す。
最初に、本実施例で用いた植物抽出物の調製方法、コラーゲン産生促進効果に関する試験方法とその結果について説明する。
【００２２】
１．試料の調製
（製造例１）
ノジギク（野路菊）の花の乾燥粉砕物１０ｇにメタノールを１０倍量（質量比）加えて室温にて１週間かけて抽出後、４℃にて１晩放置し、ろ過後不溶物を取り除いた。得られたろ過液を花メタノール抽出物と称し、さらに凍結乾燥して得られた固形物をメタノール抽出乾燥物と称する。得られたメタノール抽出乾燥物の収量は２．４ｇ（収率；２４％）であった。
【００２３】
（製造例２）
ノジギク（野路菊）の葉と茎の乾燥粉砕物１０ｇにメタノールを１０倍量加えて室温にて１週間かけて抽出後、４℃にて１晩放置し、ろ過後不溶物を取り除いた。得られたろ過液を葉・茎メタノール抽出物と称し、さらに凍結乾燥して得られた固形物をメタノール抽出乾燥物と称する。得られたメタノール抽出乾燥物の収量は１．７ｇ（収率；１７％）であった。
【００２４】
２．線維芽細胞のＩ型コラーゲン産生促進作用の試験法およびその結果
（１）試験法
（1-1）総コラーゲン量の測定
ヒト皮膚由来の線維芽細胞HF0(K)P=8.5を４００万個培養し、１０万個／穴で２４穴に播種し、０．５％ＦＢＳ／ＤＭＥで培養した。
翌日試験試料であるメタノール抽出乾燥物の濃度が０．００１％および０．０１％となるように添加するとともに、０．２５mMとなるようアスコルビン酸リン酸マグネシウムを添加し、次に血清濃度が０．５％ＦＢＳ／ＤＭＥＭとなるよう調製した。正対照としてはＴＧＦ−β（２ng/μl）を用いた。
３日間培養後、培養上清の総コラーゲン量を測定した。培養上清中に分泌されたＩ型コラーゲンの量は酵素免疫吸着測定法（ＥＬＩＳＡ）を用いて測定した。すなわち抗ＰＩＰモノクローナル抗体プレートに標準抗体液を１００μｌづつ加え、あらかじめ調製した標準液は培養上清中の２０μｌずつ添加し、３７℃で３時間反応した。反応液を捨て、ＰＢＳで４回洗浄後、基質溶液（3,3’,5,5’テトラメチルベンジジン溶液）を１００μｌずつ加えて室温で１５分間反応させ、抗体プレート・ＰＩＰ抗原・標準抗体の結合体をつくった。次に１Ｎ硫酸を溶解した反応停止液を１００μｌ加えよく攪拌し反応をとめた。蒸留水を対照として４５０nmでマイクロプレートリーダーにて吸光度を測定し、総コラーゲン量を算出した。
またコラーゲン産生促進作用（総コラーゲン量／細胞数）を評価するために細胞数の測定を行った。以下に細胞数測定法を記載する。
【００２５】
（1-2）細胞数の測定
試験試料の添加３日後に培地を吸引除去し、５％ＦＢＳで洗浄後、６０μlのHoechstを１２mlのHoechst培地に加えて攪拌し、その５００μlを６ウェルプレートに添加した。３７℃で１時間反応させた後、９６ウェルプレートに移し、マイクロプレートリーダー（励起波長３５５nm、測定波長４６０nm）を用いて細胞数を算出した。
【００２６】
（1-3）コラーゲン産生促進作用の計算
コラーゲン産生促進作用は、以下の式を用いて算出した。
コラーゲン産生量＝試験試料を添加した細胞が産生する総コラーゲン量／試験試料を添加した群の細胞数
【００２７】
なお細胞毒性によるコラーゲン産生量の増加を排除するために、細胞増殖率が２０％に満たない細胞毒性が高い群は、コラーゲン産生促進データから外すこととした。
【００２８】
（２）結果
結果を図１に示す。図１は製造例１で調製したノジギクの花メタノール抽出乾燥物と製造例２で調製したノジギクの葉・茎メタノール抽出乾燥物をそれぞれ０．００１質量％および０．０１質量％添加した時のＩ型コラーゲン産生量を示す図である。
ノジギクの花メタノール抽出乾燥物にはコラーゲン産生促進作用が認められるが、葉・茎メタノール抽出乾燥物にはコラーゲン産生促進作用は認められないことが分かる。
【００２９】
以上の結果から本発明のノジギク花の溶媒抽出物は優れたコラーゲン産生促進効果を示すことから、ヒトの肌に対してもすぐれたコラーゲン産生促進作用を奏するものである。したがって、該植物抽出物を外用剤に配合して、肌の老化を防ぎ、若々しく健康な肌の状態を維持するコラーゲン産生促進作用に基づく抗老化剤や各種皮膚疾患治療剤として用いることができる。
【００３０】
以下に、種々の剤型の本発明によるコラーゲン産生促進剤の配合例を処方例として説明する。本発明はこの処方例によって何ら限定されるものではなく、特許請求の範囲によって特定されるものであることはいうまでもない。
各処方中のノジギク抽出物含量は抽出溶媒を除去した後の乾燥残分量として表した。
【００３１】
配合処方例１（化粧水） 質量％
トリメチルグリシン １．０
コラーゲン産生促進剤（ノジギク花／メタノール抽出乾燥物） ０．００１
グリセリン １．０
１，３−ブチレングリコール ５．０
アルギン酸ナトリウム ０．１
エチルアルコール ５．０
ポリオキシエチレンポリオキシプロピレンデシルテトラデシルエーテル ０．２
ヘキサメタリン酸ナトリウム 適量
クエン酸 適量
クエン酸ナトリウム 適量
フェノキシエタノール 適量
香料 適量
精製水 残余
【００３２】
配合処方例２（化粧水） 質量％
コラーゲン産生促進剤（ノジギク花／メタノール抽出乾燥物／５０％−１，３ブタンジオール置換液） ０．１
グリセリン ２．０
１，３−ブチレングリコール ４．０
ポリオキシエチレンメチルグルコシド １．０
ＰＥＧ／ＰＰＧ−１４／７ジメチルエーテル ３．０
エリスリトール １．０
ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油 ０．５
ジイソステアリン酸ポリグリセリル ０．３
トリエチルヘキサノイン ０．３
ＥＤＴＡ３ナトリウム 適量
クエン酸 適量
クエン酸ナトリウム 適量
フェノキシエタノール 適量
精製水 残余
【００３３】
配合処方例３（乳液） 質量％
グリチルリチン酸ジカリウム ０．０５
酢酸トコフェロール ０．５
コラーゲン産生促進剤（ノジギク花／メタノール抽出乾燥物） ０．００１
Ｌ−グルタミン酸ナトリウム ０．０５
ウイキョウエキス ０．１
酵母エキス ０．１
ジオウエキス ０．１
ヒドロキシプロピル−β−シクロデキストリン ０．１
グリセリン ６．０
１，３−ブチレングリコール ５．０
ポリオキシエチレンメチルグルコシド ３．０
ヒマワリ油 １．０
スクワラン ２．０
イソドデカン ４．０
ジメチルポリシロキサン ３．０
キサンタンガム ０．１
カルボキシビニルポリマー ０．１
アクリル酸・メタクリル酸アルキル共重合体 ０．１
エチルアルコール ５．０
水酸化カリウム 適量
ヘキサメタリン酸ナトリウム 適量
ベンガラ 適量
黄酸化鉄 適量
エチルパラベン 適量
香料 適量
精製水 残余
【００３４】
配合処方例４（日中用乳液） 質量％
グリチルリチン酸ジカリウム ０．１
コラーゲン産生促進剤（ノジギク花／メタノール抽出乾燥物／５０％−１，３ブタンジオール置換液） ０．１
酢酸トコフェロール ０．１
１，３−ブチレングリコール ５．０
スクワラン ０．５
イソドデカン １０．０
イソヘキサデカン ２５．０
ジメチルポリシロキサン ２．０
ポリオキシエチレン・メチルポリシロキサン共重合体 １．５
トリメチルシロキシケイ酸 １．０
４−ｔ−ブチル−４’−メトキシジベンゾイルメタン １．０
パラメトキシ桂皮酸２−エチルヘキシル ５．０
ジパラメトキシ桂皮酸モノ−２−エチルヘキサン酸グリセリル １．０
シリコーン被覆微粒子酸化チタン ４．０
ジメチルジステアリルアンモニウムヘクトライト ０．５
球状ポリエチレン末 ３．０
タルク ５．０
ＥＤＴＡ３ナトリウム 適量
フェノキシエタノール 適量
香料 適量
精製水 残余
【００３５】
配合処方例５（クリーム） 質量％
コラーゲン産生促進剤（ノジギク花／メタノール抽出乾燥物／５０％エタノール置換液） １．０
４−メトキシサリチル酸カリウム ３．０
プロピレングリコール ５．０
グリセリン ８．０
ステアリン酸 ２．０
ステアリルアルコール ７．０
水添ラノリン ２．０
スクワラン ５．０
２−オクチルドデシルアルコール ６．０
ポリオキシエチレンセチルアルコールエーテル ３．０
グリセリンモノステアリン酸エステル ２．０
水酸化カリウム 適量
エチルパラベン 適量
香料 適量
イオン交換水 残余
【００３６】
配合処方例６（クリーム） 質量％
４−メトキシサリチル酸カリウム １．０
３−Ｏ−エチルアスコルビン酸 １．０
コラーゲン産生促進剤（ノジギク花／メタノールエキス乾燥物／５０％−１，３ブタンジオール置換液） ０．１
コエンザイムＱ１０ ０．０３
トラネキサム酸 ２．０
酢酸トコフェロール ０．１
ヒアルロン酸ナトリウム ０．０５
パントテニルエチルエーテル ０．１
グリチルレチン酸ステアリル ０．１
グリセリン ７．０
１，３−ブチレングリコール ５．０
ポリエチレングリコール２００００ ０．５
ワセリン ２．０
ベヘニルアルコール ０．５
バチルアルコール ０．２
スクワラン ２．０
ヒドロキシステアリン酸フィトステリル ０．５
ホホバ油 ３．０
テトラ２−エチルヘキサン酸ペンタエリスリット １．０
ジメチルポリシロキサン ２．０
イソステアリン酸ポリオキシエチレングリセリル １．５
ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油 １．０
カルボキシビニルポリマー ０．２
キサンタンガム ０．１
エタノール ５．０
ヘキサメタリン酸ナトリウム 適量
黄酸化鉄 適量
ＥＤＴＡ３ナトリウム 適量
水酸化カリウム 適量
パラオキシ安息香酸エステル 適量
精製水 残余
【特許請求の範囲】
【請求項１】
キク科キク属（Chrysanthemum）またはキク科デンドラテマ属（Dendranthema）の、ノジギク（Chrysanthemum japonenseまたはDendranthema occidentali japonense）の花の溶媒抽出物を含むことを特徴とするコラーゲン産生促進剤。
【請求項１】
キク科キク属（Chrysanthemum）またはキク科デンドラテマ属（Dendranthema）の、ノジギク（Chrysanthemum japonenseまたはDendranthema occidentali japonense）の花の溶媒抽出物を含むことを特徴とするコラーゲン産生促進剤。
【図１】
【公開番号】特開２０１３−３５７７６（Ｐ２０１３−３５７７６Ａ）
【公開日】平成２５年２月２１日（２０１３．２．２１）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２０１１−１７２７９７（Ｐ２０１１−１７２７９７）
【出願日】平成２３年８月８日（２０１１．８．８）
【出願人】（０００００１９５９）株式会社 資生堂 (1,748)
【Ｆターム（参考）】
【公開日】平成２５年２月２１日（２０１３．２．２１）
【国際特許分類】
【出願日】平成２３年８月８日（２０１１．８．８）
【出願人】（０００００１９５９）株式会社 資生堂 (1,748)
【Ｆターム（参考）】
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