サイトカインの使用；組成物；方法
【課題】造血細胞を含む様々な細胞型の、細胞生理学、発達、分化、または機能を調節する核酸、タンパク質、抗体、および模倣物を提供する。
【解決手段】ＩＬ−１７４と名付けられたサイトカンのアゴニストまたはアンタゴニスト、およびその使用の種々の方法が提供される。特に、ＩＬ−１７４の多くの活性を利用する方法が提供される。本発明は、哺乳類の免疫反応をＴｈ２型反応へ向ける方法；哺乳類の先天的免疫応答を刺激する方法；上皮または線維芽細胞からの哺乳類の炎症応答を増加させる方法；消化管細胞増殖を誘導する方法；哺乳類の骨髄外造血を促進する方法；または血清および糞便物質中の抗体応答を増加させる方法を提供する。
【解決手段】ＩＬ−１７４と名付けられたサイトカンのアゴニストまたはアンタゴニスト、およびその使用の種々の方法が提供される。特に、ＩＬ−１７４の多くの活性を利用する方法が提供される。本発明は、哺乳類の免疫反応をＴｈ２型反応へ向ける方法；哺乳類の先天的免疫応答を刺激する方法；上皮または線維芽細胞からの哺乳類の炎症応答を増加させる方法；消化管細胞増殖を誘導する方法；哺乳類の骨髄外造血を促進する方法；または血清および糞便物質中の抗体応答を増加させる方法を提供する。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
（発明の分野）
本発明は、哺乳類細胞、例えば哺乳類の免疫系細胞の生理学、発達、および分化の制御において機能するタンパク質に関連した組成物に関する。特に、それは、造血細胞を含む様々な細胞型の、細胞生理学、発達、分化、または機能を調節する核酸、タンパク質、抗体、および模倣物を提供する。
【背景技術】
【０００２】
（発明の背景）
脊椎動物の免疫系は、多くの臓器およびいくつかの異なる細胞型から成る。２つの主な細胞型は、骨髄およびリンパ系統を含む。リンパ球系統には、本来胎児肝臓または成人骨髄で分化するものとして特徴付けられたＢ細胞、および本来胸腺で分化するものとして特徴付けられたＴ細胞がある。例えばＰａｕｌ（編、１９９８）Ｆｕｎｄａｍｅｎｔａｌ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ（第４版）Ｒａｖｅｎ Ｐｒｅｓｓ、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋを参照のこと。
【０００３】
免疫応答または細胞分化の発達の多くの局面において、サイトカインとして公知の可溶性タンパク質は、細胞相互作用の調節に重要な役割を果たしている。これらのサイトカインは、多くの方法で細胞の活動を明らかに媒介している。それらは、多くの場合において、造血幹細胞の、免疫応答の原因となる系統を構成する非常に多くの子孫への増殖、成長、および分化を調節することが示された。
【０００４】
しかし、これらの成熟経路において、異なる発達段階の細胞によって発現される細胞分子は、まだ完全に同定されていない。さらに、これらの細胞の様々な生理学的、発達、または増殖状態を誘導、維持、または調節するシグナル伝達分子の役割および作用メカニズムは、十分に理解されていない。明らかに、免疫系およびその様々なストレスに対する反応、例えば感染性疾患、癌関連応答および処置、アレルギーおよび移植拒絶応答は、薬剤と関連を有する。例えば、Ｔｈｏｒｎら、Ｈａｒｒｉｓｏｎ’ｓ Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ ｏｆ Ｉｎｔｅｒｎａｌ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ、ＭｃＧｒａｗ／Ｈｉｌｌ、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋを参照のこと。
【０００５】
医療科学は、環境因子に対する不十分または不適切な生理学的応答を治療するのに、免疫系の適切な増加または抑制に大幅に依存している。しかし、免疫系がどのように制御されているのか、または分化するのかについての理解の欠如が、生物学的チャレンジに対する正常な防御機構を有利に調節する能力を妨げてきた。従って、関連する細胞の発達または生理学の異常または不適切な制御によって特徴付けられる医学的状態は扱いにくいままである。特定のサイトカインの発見および特徴付けは、免疫系、造血細胞および他の細胞型に影響する、広い範囲の変性または他の状態に対する治療の開発に寄与する。本発明は、これらのいくつか、および他の多くの問題の解答を提供する。
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００６】
（発明の要旨）
本発明は、部分的には、ＩＬ−１７４として公知のサイトカインの生物学的活性に基づく。特に、多くのアッセイは、このサイトカインがＴｈ２型免疫応答の確立、先天的免疫、炎症応答、粘膜および線維芽細胞の増殖、特定の造血活性、および肉芽種の形成の調節における機能を有することを示す。
【０００７】
本発明は、哺乳類の免疫細胞にＩＬ−１７４アゴニストを投与することを含む、哺乳類の免疫反応をＴｈ２型反応へ向ける方法；哺乳類の免疫細胞にＩＬ−１７４アゴニストを投与することを含む、哺乳類の先天的免疫応答を刺激する方法；哺乳類にさらにＩＬ−１７４アゴニストを投与することを含む、上皮または線維芽細胞からの哺乳類の炎症応答を増加させる方法；細胞にＩＬ−１７４アゴニストを投与することを含む、消化管細胞増殖を誘導する方法；哺乳類にＩＬ−１７４アゴニストを投与することを含む、哺乳類の骨髄外（ｅｘｔｒａ ｍｅｄｕｌａｒｙ）造血を促進する方法；または細胞にＩＬ−１７４アゴニストを投与することを含む、血清および糞便物質中の抗体応答を増加させる方法を提供する。
【０００８】
種々の実施形態において、その方法はアゴニストの投与を含む。ここでその投与は、造血細胞、線維芽細胞、上皮細胞または内皮細胞によるサイトカイン産生を誘導するか；感染に伴う炎症応答をダウンレギュレートするか；上皮細胞の増殖を刺激するか；あるいは消化管上皮、線維芽、または杯状細胞の増殖を誘導する。いくつかの実施形態では、その方法はアゴニストの投与を含む。ここで哺乳類は、自己免疫状態；感染性疾患免疫応答；創傷治癒応答；またはＴｈ１によって媒介される状態を刺激する状態を示すか、または経験した。さらなる実施形態において、自己免疫状態は、多発性硬化症、全身性エリテマトーデス、慢性関節リウマチ、糖尿病、または乾癬から選択される；感染応答はアスペルギルス感染（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｉｓ ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ）、真菌感染（カンジダ症（Ｃａｎｄｉｄａｉｓｉｓ）、ブラストミセス症、またはアスペルギルス症を含む）、寄生虫感染（住血吸虫症、吸虫、蠕虫、またはフィラリア症を含む）、またはウイルス感染（肝炎を含む）の症候である；またはＴｈ１に媒介される状態は、炎症性状態（クローン病、潰瘍性大腸炎、膵炎、または肝炎を含む）である。さらに、本発明は、感染を処置するために別の治療薬を投与することをさらに含む、感染応答を処置する方法を提供する。
【０００９】
本発明はまた、他の方法、例えば、哺乳類の免疫細胞にＩＬ−１７４アンタゴニストを投与することを含む、哺乳類の免疫反応をＴｈ２型反応から離れるように向ける方法；免疫系細胞にＩＬ−１７４アンタゴニストを投与することを含む、哺乳類の炎症または肉芽種形成を予防する方法を提供する。多くの場合、アンタゴニストはＩＬ−１７４に対するモノクローナル抗体またはポリクローナル抗体である。その方法は、アンタゴニストを投与することを含み得る。ここでその投与は、好酸球の誘引、組織リモデリング、または線維症を阻害するか；あるいはその哺乳類は、アレルギー状態；炎症性状態；またはＴｈ２に媒介される状態を刺激する状態を示すか、または経験した。さらなる実施形態において、好酸球は肺（すなわち喘息）、肝臓または腸（すなわち好酸球胃炎）に誘引されるか；線維症は膵管または胆管周囲（ｐｅｒｉｂｉｌｉａｒｙ）線維症であるか；アンタゴニストはＩＬ−４、ＩＬ−５、および／またはＩＬ−１３の産生を抑制するか；アンタゴニストはＢＡＬにおけるエオタキシン（ｅｏｔａｘｉｎ）、ＣＣＲ４および／またはＣＣＲ４発現を減少させるか；アレルギー状態の症状は肺におけるものであるか；アレルギー状態は全身性アナフィラキシー応答、皮膚過敏性応答、または食物アレルギーであるか；あるいは炎症性状態またはＴｈ２に媒介される状態は皮膚炎または喘息性炎症である。さらに別の実施形態では、哺乳類は、アレルギー状態；炎症性状態；またはＴｈ２に媒介される状態を刺激する状態を示すか、または経験した。
【００１０】
本発明はまた、ＩＬ−１７４アゴニストおよび抗菌剤（抗生物質、抗ウイルス、または抗菌化合物を含む）または化学療法剤；あるいはＩＬ−１７４アンタゴニスト；およびアレルギー薬剤、喘息薬剤、皮膚炎薬剤、線維症薬剤、または好酸球胃炎薬剤を含む組成物を提供する。
本発明は例えば、以下の項目を提供する：
（項目１）以下：
ａ）哺乳動物の免疫応答をＴｈ２型応答に指向する方法であって、該方法は、ＩＬ−１７４アゴニストを該哺乳動物の免疫細胞に投与する工程を包含する、方法；
ｂ）哺乳動物の先天的免疫応答を刺激する方法であって、該方法は、ＩＬ−１７４アゴニストを該哺乳動物の免疫細胞に投与する工程を包含する、方法；
ｃ）上皮細胞または線維芽細胞からの哺乳動物の炎症性応答を増強する方法であって、該方法は、ＩＬ−１７４アゴニストを該哺乳動物にさらに投与する工程を包含する、方法；
ｄ）消化管細胞増殖を誘導する方法であって、該方法は、ＩＬ−１７４アゴニストを該細胞に投与する工程を包含する、方法；
ｅ）哺乳動物の骨髄外造血を促進する方法であって、該方法は、ＩＬ−１７４アゴニストを該哺乳動物に投与する工程を包含する、方法；
ｆ）哺乳動物の免疫応答をＴｈ２型応答から離れて指向する方法であって、該方法は、ＩＬ−１７４アンタゴニストを、該哺乳動物の免疫細胞に投与する工程を包含する、方法；
ｇ）哺乳動物の炎症もしくは肉芽腫の形成を予防する方法であって、該方法は、ＩＬ−１７４アンタゴニストを免疫系細胞に投与する工程を包含する、方法；または
ｈ）血清および糞便物質における抗体応答を増強する方法であって、該方法は、ＩＬ−１７４アゴニストを、該哺乳動物の免疫細胞に投与する工程を包含する、方法、
である、方法。
（項目２）項目１に記載の方法であって、以下：
ａ）哺乳動物の免疫応答をＴｈ２型応答に指向する方法であって、該方法は、ＩＬ−１７４アゴニストを該哺乳動物の免疫細胞に投与する工程を包含する、方法；
ｂ）哺乳動物の先天的免疫応答を刺激する方法であって、該方法は、ＩＬ−１７４アゴニストを該哺乳動物の免疫細胞に投与する工程を包含する、方法；
ｃ）上皮細胞または線維芽細胞からの哺乳動物の炎症性応答を増強する方法であって、該方法は、ＩＬ−１７４アゴニストを該哺乳動物にさらに投与する工程を包含する、方法；
ｄ）消化管細胞増殖を誘導する方法であって、該方法は、ＩＬ−１７４アゴニストを該細胞に投与する工程を包含する、方法；または
ｅ）哺乳動物の骨髄外造血を促進する方法であって、該方法は、ＩＬ−１７４アゴニストを該哺乳動物に投与する工程を包含する、方法、
である、方法。
（項目３）項目２に記載の方法であって、以下：
ｄ）消化管細胞増殖を誘導する方法であって、該方法は、ＩＬ−１７４アゴニストを該細胞に投与する工程を包含する、方法；
ｅ）哺乳動物の骨髄外造血を促進する方法であって、該方法は、ＩＬ−１７４アゴニストを該哺乳動物に投与する工程を包含する、方法、
である、方法。
（項目４）項目１に記載の方法であって、以下：
ｆ）哺乳動物の免疫応答をＴｈ２型応答から離れて指向する方法であって、該方法は、ＩＬ−１７４アンタゴニストを、該哺乳動物の免疫細胞に投与する工程を包含する、方法；
ｇ）哺乳動物の炎症もしくは肉芽腫の形成を予防する方法であって、該方法は、ＩＬ−１７４アンタゴニストを免疫系細胞に投与する工程を包含する、方法；または
ｈ）血清および糞便物質における抗体応答を増強する方法であって、該方法は、ＩＬ−１７４アゴニストを、該哺乳動物の免疫細胞に投与する工程を包含する、方法、
である、方法。
（項目５）アゴニストを投与する項目２に記載の方法であて、ここで、該投与が、以下：
ａ）線維芽細胞、上皮細胞または内皮細胞によるサイトカインの産生を誘導するか；
ｂ）感染に伴なう炎症性応答をダウンレギュレートするか；
ｃ）上皮細胞の増殖を刺激するか；あるいは
ｄ）消化管内皮細胞、線維芽細胞、または杯状細胞の増殖を誘導する、
方法。
（項目６）アゴニストを投与する項目２に記載の方法であって、前記哺乳動物が、以下：
ａ）自己免疫状態；
ｂ）感染性疾患の免疫応答；
ｃ）創傷治癒応答；または
ｄ）Ｔｈ１媒介状態、
を刺激する状態を示すか、または該状態を経験した、方法。
（項目７）項目６に記載の方法であって、ここで：
ａ）前記自己免疫状態が、以下：
ｉ）多発性硬化症；
ｉｉ）全身性エリテマトーデス；
ｉｉｉ）慢性関節リウマチ；
ｉｖ）糖尿病；または
ｖ）乾癬、
から選択されるか、
ｂ）前記感染性応答が、以下：
ｉ）アスペルギルス感染；
ｉｉ）カンジダ症、ブラストミセス症、もしくはアスペルギルス症を含む、真菌感染；
ｉｉｉ）住血吸虫症、吸虫、蠕虫、もしくはフィラリア症を含む寄生虫感染；または
ｉｖ）肝炎を含むウイルス感染、
の症状であるか、あるいは
ｃ）前記Ｔｈ１媒介状態が、クローン病、潰瘍性大腸炎、膵炎、肝炎、または好酸球性胃炎を含む炎症性状態である、
方法。
（項目８）感染性応答を処置する項目７に記載の方法であって、該感染を処置するために、別の治療薬を投与する工程をさらに包含する、方法。
（項目９）哺乳動物の先天的免疫応答を刺激する、項目２に記載の方法。
（項目１０）アンタゴニストを投与する項目４に記載の方法であって、ここで、該アンタゴニストが、ＩＬ−１７４に対するモノクローナル抗体である、方法。
（項目１１）アンタゴニストを投与する項目４に記載の方法であって、ここで：
ａ）該投与が、好酸球誘引、組織リモデリング、または線維症をブロックするか；あるいは
ｂ）前記哺乳動物が、以下：
ｉ）アレルギー状態；
ｉｉ）炎症性状態；または
ｉｉｉ）Ｔｈ２媒介状態、
を刺激する状態を示すか、または該状態を経験した、
方法。
（項目１２）項目１１に記載の方法であって、ここで：
ａ）前記好酸球が、肺、肝臓または腸に誘引されるか；
ｂ）前記線維症が、膵管または胆管周囲線維症であるか；
ｃ）前記アンタゴニストが、ＩＬ−４、ＩＬ−５、および／またはＩＬ−１３の産生を抑制するか；
ｄ）前記アンタゴニストが、ＢＡＬにおけるエオタキシン、ＣＣＲ４および／またはＣＣＲ４発現を減少させるか；
ｅ）前記アレルギー状態の症状が、肺における症状であるか；
ｆ）前記アレルギー状態が、全身性アナフィラキシー応答、皮膚過敏性応答、または食物アレルギーであるか；あるいは
ｇ）前記炎症性またはＴｈ２媒介状態が、皮膚炎または喘息性炎症である、
方法。
（項目１３）項目１１に記載の方法であって、前記哺乳動物が、以下：
ａ）アレルギー状態；
ｂ）炎症性状態；または
ｃ）Ｔｈ２媒介状態、
を刺激する状態を示すか、あるいは該状態を経験した、方法。
（項目１４）組成物であって、以下：
ａ）ＩＬ−１７４アゴニスト、および以下：
ｉ）抗生物質化合物、抗ウイルス化合物、もしくは抗真菌化合物を含む抗菌薬；または
ｉｉ）化学療法剤；あるいは
ｂ）ＩＬ−１７４アンタゴニスト、および以下：
ｉ）アレルギー薬剤；
ｉｉ）喘息薬剤；
ｉｉｉ）皮膚炎薬剤；
ｉｖ）線維症薬剤；または
ｖ）好酸球性胃炎薬剤、
を含む、組成物。
【発明を実施するための形態】
【００１１】
（発明の詳細な説明）
概略
Ｉ．概要
ＩＩ．サイトカインアゴニストおよびアンタゴニスト
Ａ．ＩＬ−１７４および改変体
Ｂ．抗体
Ｃ．他の分子
ＩＩＩ．イムノアッセイ
ＩＶ．使用
（Ｉ．概要）
本発明は、部分的には、ＩＬ−１７４と呼ばれるサイトカインが、免疫応答の様々な局面において役割を果たしているという驚くべき発見に基づく。ＩＬ−１７４は、サイトカインに特徴的な構造的特徴を示すタンパク質をコードする遺伝子ファミリーの１つであり、特にＣＴＬＡ−８（ＩＬ−１７とも呼ばれる）と呼ばれるサイトカインと関連している。ＣＴＬＡ−８のラット、マウス、ヒトの形態およびウイルスホモログが記載され、そしてその配列はＧｅｎＢａｎｋから入手可能である。Ｒｏｕｖｉｅｒら（１９９３）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５０：５４４５−５４５６；Ｙａｏら（１９９５）Ｉｍｍｕｎｉｔｙ ３：８１１−８２１；Ｙａｏら（１９９５）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５５：５４８３−５４８６；およびＫｅｎｎｅｄｙら（１９９６）Ｊ．Ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ ａｎｄ Ｃｙｔｏｋｉｎｅ Ｒｅｓ．１６：６１１−６１７を参照のこと。ＣＴＬＡ−８は、関節炎、腎臓移植拒絶、腫瘍形成、ウイルス−宿主相互作用、および先天的免疫に関連する活性を有し、そしてＩＬ−６と同様の特定の調節性機能を示すようである。ＰｕｂＭｅｄ（ＩＬ−１７で検索）；Ｃｈａｂａｕｄら（１９９８）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．６３：１３９−１４８；Ａｍｉｎら（１９９８）Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｒｈｅｕｍａｔｏｌ．１０：２６３−２６８；Ｖａｎ Ｋｏｏｔｅｎら（１９９８）Ｊ．Ａｍ．Ｓｏｃ．Ｎｅｐｈｒｏｌ．９：１５２６−１５３４；Ｆｏｓｓｉｅｚら（１９９８）Ｉｎｔ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６：５４１−５５１；Ｋｎａｐｐｅら（１９９８）Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．７２：５７９７−５８０１；Ｓｅｏｗ（１９９８）Ｖｅｔ．Ｉｍｍｕｎｏ．Ｉｍｍｕｎｏｐａｔｈｏｌ．６３：１３９−４８；およびＴｅｕｎｉｓｓｅｎら（１９９８）Ｊ．Ｉｎｖｅｓｔ．Ｄｅｒｍａｔｏｌ．１１１：６４５−６４９を参照のこと。ＮＦκＢ転写因子を介したシグナル伝達についての報告は、先天的免疫で使用されるシグナル経路と関係する。Ｓｈａｌｏｍ−Ｂａｒａｋら（１９９８）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７３：２７４６７−２７４７３。
【００１２】
ＩＬ−１７４ｃＤＮＡ配列は、サイトカイン、増殖因子、および癌遺伝子をコードするｍＲＮＡに特徴的な様々な特徴を示す。ＩＬ−１７は、このＴＧＦ−βに関連する新たに認識されたサイトカインファミリーの最初のメンバーであり、そして「ＩＬ−１７０」と呼ばれるこのファミリーの多くのメンバーが同定された。このファミリーのフォールディングは、サイトカインのＴＧＦ−βファミリーのものであると予測される。サイトカインのＴＧＦ−βファミリーおよびＩＬ−１７０ファミリーは、システイン残基の特定の間隔によって特徴付けられる、シスチンノットモチーフの共通の特徴を有する。例えば、ＳｕｎおよびＤａｖｉｅｓ（１９９５）Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｂｉｏｍｏｌｅｃ．Ｓｔｒｕｃｔ．２４：２６９−２９１；ＭｃＤｏｎａｌｄら（１９９３）Ｃｅｌｌ ７３：４２１−４２４；およびＩｓａａｃｓ（１９９５）Ｃｕｒｒ．Ｏｐ．Ｓｔｒｕｃｔ．Ｂｉｏｌ．５：３９１−３９５を参照のこと。特に、その構造は、多くの保存されたシステインを示唆する。ジスルフィド結合はシステイン２と５；および３と６；および１と４である。フォールディングの類似性の機能的重要性は、ＩＬ−１７０ファミリーのダイマー形成を示唆する。結果として、ＩＬ−１７０ダイマーは２つの細胞表面レセプターを１つに集め、それによってシグナル伝達が起こる。
【００１３】
これらの新規タンパク質はＣＴＬＡ−８関連タンパク質、または一般的にＩＬ−１７０タンパク質と呼ばれる。天然タンパク質は、標的細胞における生物学的または生理学的応答を導く様々な生理学的応答、例えばサイトカインシグナル伝達に特徴的な応答を媒介し得るはずである。
【００１４】
精製ＣＴＬＡ−８は、滑膜細胞と培養した場合、これらの細胞からＩＬ−６の分泌を誘導し得る。この誘導は、ヒトＣＴＬＡ−８に対して産生した中和抗体の追加時に逆転する。内皮、上皮、線維芽、および癌腫細胞もまた、ＣＴＬＡ−８による処置に対する応答を示す。このデータは、ＣＴＬＡ−８が、炎症性線維症、例えば乾癬、硬皮症、肺線維症、または硬変に関連し得ることを示唆する。ＣＴＬＡ−８はまた、ＩＬ−６が多くの場合そのような細胞において増殖因子として作用する程度に、癌腫または癌細胞の増殖を引き起こし得る。そのように、新規に発見された他の関連するファミリーメンバーは、同様のまたは関連する生物学的活性を有する可能性がある。
【００１５】
マウスおよびヒト由来のサイトカインＩＬ−１７４が、ＰＣＴ／ＵＳ００／００００６において以前に記載された。これは全ての目的のために本明細書中で参考として援用される。ヒトＩＬ−１７４をコードする核酸配列および対応するアミノ酸配列を、それぞれ配列番号１および２として示す。重要な予測される構造モチーフは、例えば２１−２４、５３−５６、および９５−９８のｃＡＭＰ ＰＫ部位；１５−１７、１６−１８、および４５−４７のＣａリン酸化部位；１２−１６、１１５−１１９、および１１８−１２２のミリストイル化部位；１０４−１０７のＮ−グリコシル化部位；２１、２３、４３、５３、５６、９５、９８、および１３１のリン酸化部位；４１−４３および１１９−１２１のＰＫＣリン酸化部位；および９５−１０２のチロシンキナーゼ部位を含む。ＩＬ−１７４のマウス核酸および対応するアミノ酸配列を、それぞれ配列番号３および４として示す。重要な予測されるモチーフは、例えば２９−３２および６１−６４のｃＡＭＰ ＰＫ部位；１８−２０、５３−５５、および６７−６９のＣａリン酸化部位；１２３−１２７のミリストイル化部位；１１２−１１４のＮ−グリコシル化部位；および２９、３１、５１、５３、６１、６４、１３９、および１４１のリン酸化部位；および２−４、４９−５１、および１２７−１２９のＰＫＣリン酸化部位を含む。
【００１６】
（ＩＩ．サイトカインアゴニストおよびアンタゴニスト）
哺乳類ＩＬ−１７４サイトカインは、ＰＣＴ／ＵＳ００／００００６において以前に記載された。天然リガンドの様々なアゴニストおよびアンタゴニストが産生され得る。
【００１７】
（Ａ．ＩＬ−１７４および改変体）
ＩＬ−１７４アゴニストは、サイトカインのいくつかの、または全てのシグナル伝達機能を示す。様々な哺乳類ＩＬ−１７４配列を評価して、どの残基が種を超えて保存されているかを決定し、どの残基を生物学的活性に劇的な影響を与えずに変化させ得るかを示唆し得る。あるいは、保存的置換は生物学的活性を保持する可能性があり、従ってアゴニスト活性を保持するサイトカインの改変体を導く。変異体または改変体ＩＬ−１７４ポリペプチドをスクリーニングする標準的な方法が、どの配列が有用な治療的アゴニストであるかを決定する。
【００１８】
さらに、特定の核酸発現方法を適用し得る。様々なプロモーターを遺伝子に操作可能に連結し、それによって制御された発現を可能にし得る。
【００１９】
あるいは、アンタゴニスト活性を試験し得る。サイトカイン活性と拮抗する能力に関する試験を、下記で記載するようなアッセイを用いて開発し得る。レセプター結合能力を保持するが、シグナル伝達能力を欠く、様々なリガンドホモログを作成し得る。小分子もＩＬ−１７４に拮抗する能力に関してスクリーニングされ得る。一般的にはＧｉｌｍａｎら（編、１９９０）Ｇｏｏｄｍａｎ ａｎｄ Ｇｉｌｍａｎ’ｓ：Ｔｈｅ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ Ｂａｓｅｓ ｏｆ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ、第８版、Ｐｅｒｇａｍｏｎ Ｐｒｅｓｓ；Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ、第１７版（１９９０）、Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏ．、Ｅａｓｔｏｎ、Ｐｅｎｎを参照のこと、これらはそれぞれ本明細書中で参考として援用される。
【００２０】
（Ｂ．抗体）
本発明は、好ましくは哺乳類、例えば霊長類、ヒト、ネコ、イヌ、ラット、またはマウスのＩＬ−１７４に特異的に結合し、そしてサイトカインがそのシグナルを媒介する能力を中和化する抗体または結合組成物の使用を提供する。抗体を、個体、多型、対立遺伝子、系統、または種改変体を含む、様々なＩＬ−１７４タンパク質、およびそのフラグメントに対して、その天然に存在する形式（全長）またはその組換え形式のいずれに対しても産生し得る。さらに、ＩＬ−１７４ポリペプチドに対して、その天然（または活性）形式またはその不活性、例えば変性形式のいずれにおいても、リガンドのシグナルを媒介する能力を中和化し得る抗体を産生し得る。抗体はリガンドとそのレセプターの相互作用を阻害し得る。
【００２１】
多くの免疫原を、ＩＬ−１７４タンパク質と特異的に反応するか、または選択的に結合する抗体を産生するのに選択し得る。組換えタンパク質が、モノクローナルまたはポリクローナル抗体の産生に好ましい免疫原である。適切な供給源、例えば霊長類、げっ歯類等由来の天然に存在するタンパク質も、純粋なまたは不純な形式で使用され得る。本明細書中で記載されたＩＬ−１７４タンパク質配列を用いて作成した合成ペプチドも、ＩＬ−１７４タンパク質に対する抗体の産生に免疫原として使用され得る。例えば、Ｃｏｌｉｇａｎら（編、１９９５および定期的な補遺）Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｓｃｉｅｎｃｅ、Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ、ＮＹ；およびＡｕｓｕｂｅｌら（編、１９８７および定期的な補遺）Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ、Ｇｒｅｅｎｅ／Ｗｉｌｅｙ、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ、ＮＹで記載されているように、組換えタンパク質を、真核細胞または原核細胞で発現および精製し得る。天然にフォールディングしたか、または変性した物質を、適切な場合には抗体の産生に使用し得る。モノクローナルまたはポリクローナル抗体のいずれかを、例えば続くタンパク質を測定するイムノアッセイで使用するために、または免疫精製（ｉｍｍｕｎｏｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ）法のために産生し得る。
【００２２】
ポリクローナル抗体を産生する方法は、当業者に周知である。典型的には、免疫原、好ましくは精製タンパク質をアジュバントと混合し、そして動物をその混合物で免疫する。免疫原調製物に対する動物の免疫反応を、試験血液を採取し、そしてＩＬ−１７４タンパク質または関心のあるペプチドに対する反応性力価を決定することによってモニターする。例えば、通常反復した免疫後に、免疫原に対する抗体の適切な高い力価が得られたら、血液を動物から採取し、そして抗血清を調製する。所望の場合、タンパク質に反応性の抗体を濃縮するために、抗血清のさらなる分画を行い得る。例えば、ＨａｒｌｏｗおよびＬａｎｅ、Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ、ＣＳＨ Ｐｒｅｓｓ、ＮＹ；またはＣｏｌｉｇａｎ（編）Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙを参照のこと。他の方法、例えばＤＮＡベクター免疫によっても免疫を行い得る。例えば、Ｗａｎｇら（１９９７）Ｖｉｒｏｌｏｇｙ ２２８：２７８−２８４を参照のこと。
【００２３】
モノクローナル抗体は、当業者に周知の様々な技術によって得られ得る。典型的には、免疫後、動物由来の脾臓細胞を、通常骨髄腫細胞と融合することによって不死化する。ＫｏｈｌｅｒおよびＭｉｌｓｔｅｉｎ（１９７６）Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．６：５１１−５１９を参照のこと。不死化の代替方法は、エプスタインバーウイルス、癌遺伝子、またはレトロウイルスによる形質転換、または当該分野で公知の他の方法を含む。例えば、Ｄｏｙｌｅら（編、１９９４および定期的な補遺）Ｃｅｌｌ ａｎｄ Ｔｉｓｓｕｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ：Ｌａｂｏｒａｔｒｙ Ｐｒｏｃｅｄｕｒｅｓ、Ｗｉｌｅｙ、ＮＹ、ＮＹを参照のこと。単一の不死化細胞からできたコロニーを、抗原に対する望ましい特異性および親和性を有する抗体の産生に関してスクリーニングし、そしてそのような細胞によって産生されるモノクローナル抗体の収量を、脊椎動物宿主の腹腔への注入を含む、様々な技術によって増強し得る。あるいは、例えばＨｕｓｅら（１９８９）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４６：１２７５−１２８１によって概略が述べられた一般的なプロトコルによって、ヒトＢ細胞由来のＤＮＡライブラリーをスクリーニングすることによって、モノクローナル抗体またはその結合フラグメントをコードするＤＮＡ配列を単離し得る。
【００２４】
ＩＬ−１７４ポリペプチドの予め決定したフラグメントに対する、抗体、または結合フラグメントおよび一本鎖を含む結合組成物を、上記で記載したように、動物をフラグメントとキャリアタンパク質の結合物で免疫することによって産生し得る。モノクローナル抗体を、望ましい抗体を分泌する細胞から調製する。これらの抗体を、正常または不完全なＩＬ−１７４タンパク質に対する結合に関してスクリーニングし得る。これらのモノクローナル抗体は、通常少なくとも約１ｍＭ、より通常には少なくとも約３００μＭ、典型的には少なくとも約１０μＭ、より典型的には少なくとも約３０μＭ、好ましくは少なくとも約１０μＭ、そしてより好ましくは少なくとも約３μＭまたはそれよりよいＫＤで結合する。
【００２５】
いくつかの場合には、マウス、げっ歯類、霊長類、ヒト等のような様々な哺乳類宿主からモノクローナル抗体（ｍＡｂ）を調製することが望ましい。そのようなモノクローナル抗体調製技術の記載は、例えばＳｔｉｔｅｓら（編）Ｂａｓｉｃ ａｎｄ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ（第４版）Ｌａｎｇｅ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎｓ、Ｌｏｓ Ａｌｔｏｓ、ＣＡおよびそこに引用された参考文献；ＨａｒｌｏｗおよびＬａｎｅ（１９８８）Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ、ＣＳＨ Ｐｒｅｓｓ；Ｇｏｄｉｎｇ（１９８６）Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ： Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ（第２版）、Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ、ＮＹ；および特にモノクローナル抗体を産生する１つの方法を論じているＫｏｈｌｅｒおよびＭｉｌｓｔｅｉｎ（１９７５）Ｎａｔｕｒｅ ２５６：４９５−４９７において見出すことができる。簡単にまとめると、本方法は、動物に免疫原を注射することを含む。次いで動物を屠殺し、そして細胞をその脾臓から取り、それを次いで骨髄腫細胞と融合する。その結果は、インビトロで複製可能なハイブリッド細胞または「ハイブリドーマ」である。次いでハイブリドーマの集団をスクリーニングして個々のクローンを単離する。それらはそれぞれ免疫原に対する単一の抗体種を分泌する。この方法では、得られた個々の抗体種は、免疫原物質において認識される特異的部位に対して反応して産生された、免疫動物由来の不死化およびクローン化単一Ｂ細胞の産物である。
【００２６】
他の適切な技術は、ファージまたは同様のベクターにおける抗体のライブラリーの選択を含む。例えばＨｕｓｅら（１９８９）「Ｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ ｏｆ Ｌａｒｇｅ Ｃｏｍｂｉｎａｔｏｒｉａｌ Ｌｉｂｒａｒｙ ｏｆ ｔｈｅ Ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎ Ｒｅｐｅｒｔｏｉｒｅ ｉｎ Ｐｈａｒｇｅ Ｌａｍｂｄａ」Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４６：１２７５−１２８１；およびＷａｒｄら（１９８９）Ｎａｔｕｒｅ ３４１：５４４−５４６を参照のこと。キメラまたはヒト化抗体を含んで、本発明のポリペプチドおよび抗体を、修飾してまたは修飾なしで使用し得る。多くの場合、ポリペプチドおよび抗体を、検出可能なシグナルを提供する物質と、共有結合的にまたは非共有結合的に結合させることによって標識化する。広く多様な標識および結合技術が公知であり、そして科学的および特許文献において広範囲に報告されている。適切な標識は、放射性核種、酵素、基質、補助因子、阻害剤、蛍光分子、化学発光分子、磁気粒子、等を含む。そのような標識の使用を記載している特許は、米国特許第３，８１７，８３７；３，８５０，７５２；３，９３９，３５０；３，９９６，３４５；４，２７７，４３７；４，２７５，１４９；および４，３６６，２４１号を含む。また、組換え免疫グロブリンを産生し得る。Ｃａｂｉｌｌｙ、米国特許第４，８１６，５６７号；およびＱｕｅｅｎら（１９８９）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８６：１００２９−１００３３を参照のこと。またはトランスジェニックマウスで産生し得る。Ｍｅｎｄｅｚら（１９９７）Ｎａｔｕｒｅ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ １５：１４６−１５６；ＡｂｇｅｎｉｘおよびＭｅｄａｒｅｘ技術を参照のこと。
【００２７】
結合フラグメントを含む本発明の抗体結合化合物は、有意な診断的または治療的価値を有し得る。それらは非中和化結合化合物として有用であり得、そして毒素または放射性核種と結合して、結合化合物が抗原に結合した時、それを例えば表面に発現している細胞を破壊し得る。さらに、これらの結合化合物を、直接またはリンカーによって間接的に、薬剤または他の治療的薬剤と結合し得、そして薬剤標的化を実施し得る。
【００２８】
（Ｃ．他の分子）
抗体は、特異的結合組成物の単なる１つの形式である。多くの場合同様の使用法を有する他の結合組成物としては、例えば、共有結合または非共有結合のいずれかで、タンパク質−結合パートナー様式、抗体−抗原相互作用、または天然で生理学的に関連するタンパク質−タンパク質相互作用で、ＩＬ−１７４に特異性をもって結合する分子（例えばＩＬ−１７４タンパク質と特異的に結合するタンパク質）が挙げられる。その分子は、ポリマー、または化学的試薬であり得る。機能的アナログは、構造的修飾を有するタンパク質であっても、または構造的に関連のない分子（例えば適当な結合決定基と相互作用する分子の形を有するもの）であってもよい。
【００２９】
抗体またはＩＬ−１７４またはそのフラグメントを用いた薬剤スクリーニングを行って、ＩＬ−１７４に対する結合親和性を有する化合物を同定し得るか、またはリガンドとの天然の相互作用をブロックまたは刺激し得る。次いで、続いて生物学的アッセイを利用して、その化合物が内因性ブロッキング活性を有し、そして従ってアンタゴニストであるかどうかを決定し得る。同様に、内因性の刺激活性を有する化合物は、ＩＬ−１７４経路によって細胞にシグナル伝達し得、そして従って、それがリガンドの活性を刺激する点でアゴニストである。レセプター結合を保持するがシグナル伝達を欠くムテインアンタゴニストを開発し得る。
【００３０】
リガンドの構造的研究は、新規変異体、特にレセプターに対するアゴニストまたはアンタゴニスト性質を示すアナログの設計へ至る。これを以前に記載したスクリーニング方法と組み合わせて、望ましい活性の範囲を示すムテインを単離し得る。
【００３１】
レセプター特異的な結合分子が提供される場合、スクリーニング手順によって同定された小分子も含まれる。特に、例えば、多くの場合レセプターに対する特異的な結合および天然リガンドによる結合のブロッキングによって、リガンドのレセプターへの結合を阻害する小分子をスクリーニングする方法が、当該分野で周知である。例えばハイスループットスクリーニングに関する会議、Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｂｕｓｉｎｅｓｓ Ｃｏｍｍｕｎｉｃａｔｉｏｎｓ、Ｓｏｕｔｈｂｏｒｏｕｇｈ、ＭＡ、０１７７２−１７４９を参照のこと。そのような分子は、天然リガンドと競合し、そしてＩＬ−１７４に選択的に結合し得る。
【００３２】
（ＩＩＩ．イムノアッセイ）
イムノアッセイは、ＩＬ−１７４の不均衡または病的状態に関連する疾患または阻害を診断するのに価値がある。特定のタンパク質の定性的または定量的測定を、様々なイムノアッセイ方法で行い得る。一般的な免疫学的手順およびイムノアッセイ手順の論評に関しては、ＳｔｉｔｅｓおよびＴｅｒｒ（編）（１９９１）Ｂａｓｉｃ ａｎｄ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ（第７版）を参照のこと。さらに、本発明のイムノアッセイを、Ｍａｇｇｉｏ（編、１９８０）Ｅｎｚｙｍｅ Ｉｍｍｕｎｏａｓｓａｙ、ＣＲＣ Ｐｒｅｓｓ、Ｂｏｃａ Ｒａｔｏｎ、Ｆｌｏｒｉｄａ；Ｔｉｊａｎ（１９８５）「酵素イムノアッセイの実施および理論」Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ ｉｎ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ａｎｄ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ、Ｅｌｓｅｖｉｅｒ Ｓｃｉｅｎｃｅ Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ Ｂ．Ｖ．、Ａｍｓｔｅｒｄａｍ；ならびにＨａｒｌｏｗおよびＬａｎｅ、Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ： Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ、前出で広範囲に論評されている、多くの設定で実施し得る。Ｃｈａｎ（編、１９８７）Ｉｍｍｕｎｏａｓｓａｙ： Ａ Ｐｒａｃｔｉｃａｌ Ｇｕｉｄｅ、Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ、Ｏｒｌａｎｄｏ、ＦＬ；ＰｒｉｃｅおよびＮｅｗｍａｎ（編、１９９１）Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏａｓｓａｙｓ、Ｓｔｏｃｋｔｏｎ Ｐｒｅｓｓ、ＮＹ；およびＮｇｏ（編、１９８８）Ｎｏｎ−ｉｓｏｔｏｐｉｃ Ｉｍｍｕｎｏａｓｓａｙｓ、Ｐｌｅｎｕｍ Ｐｒｅｓｓ、ＮＹも参照のこと。
【００３３】
ＩＬ−１７４タンパク質またはペプチドの測定のためのイムノアッセイを、当業者に公知の様々な方法によって行い得る。簡単には、タンパク質を測定するイムノアッセイは、競合的または非競合的結合アッセイのいずれかであり得る。競合的結合アッセイでは、分析する試料は、固体表面に結合した捕獲剤の特異的結合部位に関して標識分析物と競合する。好ましくは、捕獲剤は、上記のように産生した、ＩＬ−１７４タンパク質と特異的に反応する抗体である。捕獲剤に結合した標識分析物の濃度は、試料中に存在するフリーの分析物の量に逆比例する。
【００３４】
競合的結合イムノアッセイでは、試料中に存在するＩＬ−１７４タンパク質が、特異的な結合剤、例えばＩＬ−１７４タンパク質と特異的に反応する抗体への結合に関して、標識タンパク質と競合する。結合剤は、結合した標識タンパク質を結合していない標識タンパク質から分離するために、固体表面に結合され得る。あるいは、競合的結合アッセイを、液相で行い得、そして当該分野で公知の様々な技術を用いて、結合した標識タンパク質を結合していない標識タンパク質から分離し得る。分離後、結合した標識タンパク質の量を決定する。試料中に存在するタンパク質の量は、標識タンパク質結合の量と逆比例する。
【００３５】
あるいは、分離工程が不要な均一イムノアッセイを行い得る。これらのイムノアッセイでは、タンパク質の標識が、タンパク質の特異的な結合剤へのそのタンパク質の結合によって変化する。この標識タンパク質における変化が、標識によって放出されるシグナルの増加または減少を引き起こし、イムノアッセイの最後における標識の測定が、タンパク質の検出または定量を可能にする。
【００３６】
ＩＬ−１７４タンパク質をまた、様々な非競合的イムノアッセイ法によって決定し得る。例えば、２部位、固相サンドイッチイムノアッセイを使用し得る。この型のアッセイでは、タンパク質の結合剤、例えば抗体を、固体支持体に結合する。２番目のタンパク質結合剤（これもまた抗体であり得、そして異なる部位でタンパク質に結合する）を標識する。タンパク質の両部位での結合が起こった後、結合していない標識結合剤を除去し、そして固相に結合した標識結合剤の量を測定する。結合した標識結合剤の量は、試料中のタンパク質の量と直接比例する。
【００３７】
ウェスタンブロット分析を用いて、試料中のＩＬ−１７４タンパク質の存在を決定し得る。電気泳動を、例えばそのタンパク質を含むと考えられる組織試料で行う。タンパク質を分離するための電気泳動、およびタンパク質を適当な固体支持体、例えばニトロセルロースフィルターへ移動した後、固体支持体をタンパク質と反応する抗体とインキュベートする。この抗体を標識し得るか、あるいは続いて一次抗体に結合する二次標識抗体とインキュベートすることによって検出し得る。
【００３８】
上記のイムノアッセイの方式は、標識アッセイ成分を採用し得る。標識を、当該分野で周知の方法によって、アッセイの望ましい成分に直接または間接的に結合し得る。広く様々な標識および方法を使用し得る。伝統的には、３Ｈ、１２５Ｉ、３５Ｓ、１４Ｃ、または３２Ｐを組み込む放射活標識を使用した。非放射活標識は、標識抗体に結合するリガンド、蛍光団、化学発光剤、酵素、および標識リガンドに対しての特異的な結合ペアのメンバーとしてはたらき得る抗体を含む。標識の選択は、必要な感度、化合物との結合のしやすさ、必要な安定性、および利用可能な器具に依存する。使用し得る様々な標識またはシグナル産生システムの論評に関しては、米国特許第４，３９１，９０４号を参照のこと。
【００３９】
特定のタンパク質に反応する抗体も、様々なイムノアッセイ法によって測定し得る。従って、上記の手順の改変を使用して、様々なＩＬ−１７４抗体または抗体調製物の量または親和性を決定し得る。イムノアッセイ技術による抗体の測定に適用できる免疫学的手順およびイムノアッセイ手順の論評に関しては、ＳｔｉｔｅｓおよびＴｅｒｒ（編）Ｂａｓｉｃ ａｎｄ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ（第７版）前出；Ｍａｇｇｉｏ（編）Ｅｎｚｙｍｅ Ｉｍｍｕｎｏａｓｓａｙ、前出；およびＨａｒｌｏｗおよびＬａｎｅ、Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ．Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ、前出を参照のこと。
【００４０】
ｍＡｂおよび結合組成物の結合および活性を評価するためのスクリーニングは、様々な方法を含む。上記のように、抗体または結合組成物を検出可能に標識することによって、結合をアッセイし得る。ＩＬ−１７４に応答する細胞を、抗体または結合組成物をアッセイするために使用し得る。
【００４１】
抗体の評価を、他の動物、例えばヒトで、様々な方法を用いて実施し得る。例えば、示した疾患または障害に罹患した患者から、例えば候補ｍＡｂによる治療の前および後に血液試料を採取する。
【００４２】
（ＩＶ．使用）
現在ＩＬ−１７４は様々な細胞に効果を示し、その効果は間接および直接であり得る。数または細胞に対する効果における統計学的に有意な変化は、典型的に少なくとも約１０％、好ましくは２０％、３０％、５０％、７０％、９０％、またはそれより多くである。１００％より大きい効果、例えば１３０％、１５０％、２×、３×、５×等が多くの場合望ましい。その効果は、示した状態の症状または徴候を抑制するのに特異的であり得る。
【００４３】
本発明は、記載した免疫学的状態と関連する医学的状態または疾患の治療に有用である。例えば、Ｆｒａｎｋら（編、１９９５）Ｓａｍｔｅｒ’ｓ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃ Ｄｉｓｅａｓｅｓ、第５版、Ｉ−ＩＩ巻、Ｌｉｔｔｌｅ，Ｂｒｏｗｎ ａｎｄ Ｃｏ．、Ｂｏｓｔｏｎ、ＭＡを参照のこと。記載したアゴニストまたはアンタゴニストを、本明細書中で記載した医学的状況の他の治療、例えばＴｈ１／Ｔｈ２バランスに関係する別のサイトカイン（Ｔｈ１へはＩＬ−１γおよび／またはＩＬ−１２；またはＴｈ２へはＩＬ−４のような）、抗生物質、免疫抑制剤、免疫アジュバント、鎮痛剤、抗炎症薬、増殖因子、血管拡張薬、または血管収縮薬と組み合わせ得る。
【００４４】
好ましい併用治療は、ＩＬ−１７４アゴニストと、Ｔｈ２型免疫応答を促進する様々な治療薬（例えばＩＬ−４、ＩＬ−１γアンタゴニスト、ＩＬ−１２アンタゴニスト）、局所、経皮、または全身性の刺激薬のような炎症性薬剤、様々な成長因子、および造血因子とを含む。ＩＬ−１７４のアンタゴニスト、例えば抗体またはリガンドムテインを、Ｔｈ１型免疫応答を促進する治療薬（例えばＩＬ−１γおよび／またはＩＬ−１２、ＩＬ−４アンタゴニスト）、または抗炎症性薬剤（例えばステロイド、糖質コルチコイドステロイド）と組み合わせ得る。
【００４５】
標準的な免疫学的技術が、例えばＨｅｒｔｚｅｎｂｅｒｇら（編、１９９６）Ｗｅｉｒ’ｓ Ｈａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ 第１−４巻、Ｂｌａｃｋｗｅｌｌ Ｓｃｉｅｎｃｅ；Ｃｏｌｉｇａｎ（１９９１）Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、Ｗｉｌｅｙ／Ｇｒｅｅｎｅ、ＮＹ；およびＭｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ、第７０、７３、７４、８４、９２、９３、１０８、１１６、１２１、１３２、１５０、１６２、および１６３巻に記載されている。これらは、細胞部分集団の精製等のための試薬の使用を可能にする。
【００４６】
ＩＬ−１７４、アンタゴニスト、またはその組み合わせを含む医薬品または滅菌組成物を調製するために、試薬を、好ましくは不活性の薬学的に受容可能な担体または賦形剤と混合する。そのような医薬品組成物の調製は、当該分野で公知である。例えばＲｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ ＳｃｉｅｎｃｅｓおよびＵ．Ｓ．Ｐｈａｒｍａｃｏｐｅｉａ：Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｆｏｒｍｕｌａｒｙ、Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏｍｐａｎｙ、Ｅａｓｔｏｎ、ＰＡ（１９８４）を参照のこと。
【００４７】
アゴニスト、例えば天然リガンド、またはアンタゴニスト、例えば抗体もしくは結合組成物を、通常非経口的に、好ましくは静脈内投与する。そのようなタンパク質またはペプチドアンタゴニストは免疫原性であり得るので、例えばＴｏｍａｓｉら、米国特許第４，７３２，８６３号によって教示されたように、好ましくはそれらを伝統的なＩＶ投与セットによってか、または皮下の貯蔵場所からのいずれかで、ゆっくりと投与する。
【００４８】
非経口投与する場合、治療薬を多くの場合、薬学的に受容可能な非経口ビヒクルと共に単位投与量注射可能形式（溶液、懸濁液、エマルション）に処方する。そのようなビヒクルは、典型的には本質的に非毒性および非治療薬である。典型的により小さい生物製剤であるアゴニストは、典型的には抗体生物製剤より低い投与量で投与する。アンタゴニストは、様々な添加剤および／または希釈剤とともに、または無しで、水、生理食塩水、または緩衝化ビヒクルのような水性ビヒクルで投与し得る。あるいは、亜鉛懸濁液のような懸濁液を、ペプチドを含むように調製し得る。そのような懸濁液は、皮下（ＳＱ）、皮内（ＩＤ）、または筋肉内（ＩＭ）注射に有用であり得る。治療実体および添加剤の割合は、両者が有効な量で存在する限り、広い範囲にわたって変化し得る。治療薬は、好ましくは約５から３０ｍｇ／ｍｌ、好ましくは１０から２０ｍｇ／ｍｌの濃度で、凝集物、他のタンパク質、エンドトキシン等を本質的に含まない精製した形式で処方される。好ましくは、エンドトキシンレベルは２．５ＥＵ／ｍｌより少ない。例えばＡｖｉｓら（編、１９９３）Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｄｏｓａｇｅ Ｆｏｒｍｓ：Ｐａｒｅｎｔｅｒａｌ Ｍｅｄｉｃａｔｉｏｎｓ、第２版、Ｄｅｋｋｅｒ、ＮＹ；Ｌｉｅｂｅｒｍａｎら（編、１９９０）Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｄｏｓａｇｅ Ｆｏｒｍｓ：Ｔａｂｌｅｔｓ、第２版、Ｄｅｋｋｅｒ、ＮＹ；Ｌｉｅｂｅｒｍａｎら（編、１９９０）Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｄｏｓａｇｅ Ｆｏｒｍｓ：Ｄｉｓｐｅｒｓｅ Ｓｙｓｔｅｍｓ、Ｄｅｋｋｅｒ、ＮＹ；Ｆｏｄｏｒら（１９９１）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２５１：７６７−７７３；Ｃｏｌｉｇａｎ（編）Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ；Ｈｏｏｄら、Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ Ｂｅｎｊａｍｉｎ／Ｃｕｍｍｉｎｇｓ；Ｐａｕｌ（編、１９９７）Ｆｕｎｄａｍｅｎｔａｌ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、第４版、Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ；Ｐａｒｃｅら（１９８９）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４６：２４３−２４７；Ｏｗｉｃｋｉら（１９９０）Ｐｒｏｃ Ｎａｔ’ｌ Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８７：４００７−４０１１；ならびにＢｌｕｎｄｅｌｌおよびＪｏｈｎｓｏｎ（１９７６）Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｃｒｙｓｔａｌｌｏｇｒａｐｈｙ、Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋを参照のこと。
【００４９】
治療的アゴニストまたはアンタゴニストの投与レジメンの選択は、治療薬の血清または組織回転率、治療薬の免疫原性、または標的細胞への近づきやすさを含むいくつかの因子に依存する。好ましくは、投与レジメンは、許容できるレベルの副作用と両立して、患者に伝達される治療薬の量を最大にする。よって、伝達される治療薬の量は、部分的には特定のアゴニストまたはアンタゴニストおよび治療する状態の重篤度に依存する。抗体の適当な用量を選択する手引きは、治療的使用についての文献、例えばＦｅｒｒｏｎｅら（編、１９８５）Ｈａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ、Ｎｏｇｅｓ Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎｓ、Ｐａｒｋ Ｒｉｄｇｅ、ＮＪ中のＢａｃｈら、第２２章；およびＨａｂｅｒら（編、１９７７）Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ｉｎ Ｈｕｍａｎ Ｄｉａｇｎｏｓｉｓ ａｎｄ Ｔｈｅｒａｐｙ、Ｒａｖｅｎ Ｐｒｅｓｓ、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ、ＮＹ中のＲｕｓｓｅｌｌ、３０３−３５７頁、およびＳｍｉｔｈら、３６５−３８９頁に見出される。
【００５０】
適当な用量の決定は、医師によって、例えば治療に影響すると当該分野で公知の、または治療に影響すると予測されるパラメーターまたは因子を用いてなされる。一般的には、用量は最適な用量よりいくらか少ない量から始め、そしてその後あらゆる負の副作用と比較して望ましいまたは最適な効果が達成されるまで少しずつ増加する。好ましくは、使用される抗体またはその結合組成物は、治療の標的となる動物と同じ種から得、それによって試薬に対する体液性応答を最小にする。
【００５１】
特異的にＩＬ−１７４に結合する抗体またはそのフラグメントの全週単位用量範囲は、一般的に体重１ｋｇあたり約１ｎｇ、より一般的には約１０ｎｇ、典型的には約１００ｎｇ；より典型的には約１μｇ、より典型的には約１０μｇ、好ましくは約１００μｇ、そしてより好ましくは約１ｍｇからの範囲である。より多くの量はより有効であり得るが、より低い投与量は典型的にはより少ない副作用を有する。一般的に、その範囲は体重１ｋｇあたり１００ｍｇより少なく、好ましくは約５０ｍｇより少なく、そしてより好ましくは約２５ｍｇより少ない。
【００５２】
アンタゴニスト、例えば抗体、結合フラグメントの週単位用量範囲は、体重１ｋｇあたり約１０μｇ、好ましくは少なくとも約５０μｇ、そしてより好ましくは少なくとも約１００μｇからの範囲である。一般的に、その範囲は体重１ｋｇあたり約１０００μｇより少なく、好ましくは約５００μｇより少なく、そしてより好ましくは約１００μｇより少ない。投与は、望ましい治療をもたらすスケジュールであり、そして短いまたは長い期間にわたって定期的であり得る。一般的に、範囲は体重１ｋｇあたり少なくとも約１０μｇから約５０ｍｇ、好ましくは約１００μｇから約１０ｍｇである。
【００５３】
リガンドの他のアゴニストまたはアンタゴニスト、例えばムテインも企図される。サイトカインまたはムテインの時間単位用量範囲は、１時間あたり少なくとも約１０μｇ、一般的には少なくとも約５０μｇ、典型的には少なくとも約１００μｇ、そして好ましくは少なくとも５００μｇからの範囲である。一般的に、用量は１時間あたり約１００ｍｇより少なく、典型的には約３０ｍｇより少なく、好ましくは約１０ｍｇより少なく、そしてより好ましくは約６ｍｇより少ない。一般的な範囲は、１時間あたり少なくとも約１μｇから約１０００μｇ、好ましくは約１０μｇから約５００μｇである。
【００５４】
本発明はまた、公知の治療、例えばステロイド、特に糖質コルチコイドのような、過剰な炎症性応答に関連する症状を緩和する治療と組み合わせた、ＩＬ−１７４抗体または結合組成物の投与を提供する。糖質コルチコイドの日単位投与量は、１日あたり少なくとも約１ｍｇ、一般的には少なくとも約２ｍｇ、そして好ましくは少なくとも約５ｍｇからの範囲である。一般的に、その投与量は、１日あたり約１００ｍｇより少なく、典型的には約５０ｍｇより少なく、好ましくは約２０ｍｇより少なく、そしてより好ましくは少なくとも約１０ｍｇである。一般的に、その範囲は１日あたり少なくとも約１ｍｇから約１００ｍｇ、好ましくは約２ｍｇから５０ｍｇである。
【００５５】
「有効な量」という語句は、望ましい応答を起こすのに、または示された状態の症状または徴候を改善するのに十分な量を意味する。典型的な哺乳類宿主は、マウス、ラット、ネコ、イヌ、およびヒトを含む霊長類を含む。特定の患者に対する有効な量は、治療する状態、患者の全般的な健康、投与の方法、経路、および用量、および副作用の重篤度のような因子に依存して変化し得る。好ましくは、その効果は少なくとも約１０％、好ましくは少なくとも２０％、３０％、５０％、７０％、または９０％以上の量の変化を引き起こす。組み合わせた場合には、有効な量は構成成分の組み合わせに対する比における量であり、そしてその効果は個々の構成成分単独に限定されない。
【００５６】
治療薬の有効な量は、症状を典型的には少なくとも約１０％；通常少なくとも約２０％；好ましくは少なくとも約３０％；またはより好ましくは少なくとも約５０％調節する。あるいは、活動の調節は、様々な細胞型の活動または往来が影響を受けることを意味する。それは、例えば影響された細胞の数の、統計学的に有意かつ定量可能な変化を引き起こす。これは、時間中にまたは標的領域に誘引された標的細胞の数の増加または減少であり得る。
【００５７】
本発明は、本明細書中の他の場所、例えば示された状態に関連する障害の治療に関する一般的な説明で記載されたような治療的適用における使用が見出された試薬を提供する。例えば、Ｂｅｒｋｏｗ（編）Ｔｈｅ Ｍｅｒｃｋ Ｍａｎｕａｌ ｏｆ Ｄｉａｇｎｏｓｉｓ ａｎｄ Ｔｈｅｒａｐｙ、Ｍｅｒｃｋ＆Ｃｏ．、Ｒａｈｗａｙ、Ｎ．Ｊ．；Ｔｈｏｒｎら、Ｈａｒｒｉｓｏｎ’ｓ Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ ｏｆ Ｉｎｔｅｒｎａｌ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ、ＭｃＧｒａｗ−Ｈｉｌｌ、ＮＹ；Ｇｉｌｍａｎら（編、１９９０）Ｇｏｏｄｍａｎ ａｎｄ Ｇｉｌｍａｎ’ｓ： Ｔｈｅ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ Ｂａｓｅｓ ｏｆ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ、第８版、Ｐｅｒｇａｍｏｎ Ｐｒｅｓｓ；Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ、第１７版（１９９０）、Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏ．、Ｅａｓｔｏｎ、Ｐｅｎｎ；Ｌａｎｇｅｒ（１９９０）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４９：１５２７−１５３３；およびＭｅｒｃｋ Ｉｎｄｅｘ、Ｍｅｒｃｋ＆Ｃｏ．、Ｒａｈｗａｙ、Ｎｅｗ Ｊｅｒｓｅｙを参照のこと。
【００５８】
ＩＬ−１７４タンパク質に対する抗体を、ＩＬ−１７４タンパク質を発現する細胞集団を同定または分類するために使用し得る。そのような集団を分類する方法は、当該分野で周知である。例えば、Ｍｅｌａｍｅｄら（１９９０）Ｆｌｏｗ Ｃｙｔｏｍｅｔｒｙ ａｎｄ Ｓｏｒｔｉｎｇ、Ｗｉｌｅｙ−Ｌｉｓｓ，Ｉｎｃ．、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ、ＮＹ；Ｓｈａｐｉｒｏ（１９８８）Ｐｒａｃｔｉｃａｌ Ｆｌｏｗ Ｃｙｔｏｍｅｔｒｙ、Ｌｉｓｓ、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ、ＮＹ；およびＲｏｂｉｎｓｏｎら（１９９３）Ｈａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ Ｆｌｏｗ Ｃｙｔｏｍｅｔｒｙ Ｍｅｔｈｏｄｓ、Ｗｉｌｅｙ−Ｌｉｓｓ、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ、ＮＹを参照のこと。ＩＬ−１７４レセプターを発現する細胞の集団も、例えばＢｉｅｖａら（１９８９）Ｅｘｐ．Ｈｅｍａｔｏｌ．１７：９１４−９２０；Ｈｅｒｎｅｂｔｕｂら（１９９０）Ｂｉｏｃｏｎｊ．Ｃｈｅｍ．１：４１１−４１８；Ｖａｃｃａｒｏ（１９９０）Ａｍ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．Ｌａｂ．３：３０において記載されたような磁気ビーズを用いて精製し得る。
【００５９】
さらに、アンチセンス核酸を使用し得る。例えば、リガンドなどをコードする核酸に特異的なアンチセンス構築物は、リガンドアンタゴニストのような方式で機能し得、そしてレセプターをコードするものに特異的なアンチセンス構築物は、レセプターアンタゴニストのように機能し得る。例えば、Ｓｔｅｐｋｏｗｓｋｉら（１９９８）Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ ６６：６９９−７０７；およびＩＳＩＳ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓの技術を参照のこと。従って、アンチセンス核酸でこれらの経路を通してシグナル伝達を阻害することが可能であり得る。
【００６０】
上記のアッセイ方法を用いて、抗体または結合組成物は、示された障害を引き起こす疾患状態を診断するのに有用である。ＩＬ−１７４タンパク質に対して惹起された抗体はまた、抗イディオタイプ抗体を惹起するのに有用である。これらは、それぞれの抗原の発現に関連する様々な免疫学的状態を検出または診断するのに有用である。これらのシグナルの組み合わせも追究され得る。
【００６１】
本発明の広い範囲は、以下の実施例を参照して最もよく理解される。これらの実施例は本発明を特定の実施形態に制限することを意図しない。
【実施例】
【００６２】
（実施例）
（Ｉ．一般的な方法）
マウスおよびヒト由来のサイトカインＩＬ−１７４は、ＰＣＴ／ＵＳ００／００００６（これは全ての目的のために本明細書中で参考文献に援用される）において以前に記載された。
【００６３】
標準的な方法のいくつかは、例えばＭａｎｉａｔｉｓら（１９８２）Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ．Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ、Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ、Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｐｒｅｓｓ；Ｓａｍｂｒｏｏｋら（１９８９）Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ（第２版）、第１−３巻、ＣＳＨ Ｐｒｅｓｓ、ＮＹ；Ａｕｓｕｂｅｌら、Ｂｉｏｌｏｇｙ、Ｇｒｅｅｎｅ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ａｓｓｏｃｉａｔｅｓ、Ｂｒｏｏｋｌｙｎ、ＮＹ；またはＡｕｓｕｂｅｌら（１９８７および補遺）Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ、Ｇｒｅｅｎｅ／Ｗｉｌｅｙ、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ；Ｉｎｎｉｓら（編）（１９９０）ＰＣＲ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ：Ａ Ｇｕｉｄｅ ｔｏ Ｍｅｔｈｏｄｓ ａｎｄ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ、Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ、Ｎ．Ｙ．において記載または参照されている。タンパク質精製方法は、硫酸アンモニウム沈殿、カラムクロマトグラフィー、電気泳動、遠心分離、結晶化などのような方法を含む。例えば、Ａｕｓｕｂｅｌら（１９８７および定期的な補遺）；Ｄｅｕｔｓｃｈｅｒ（１９９０）Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ、第１８２巻中の「タンパク質精製の手引き」およびこのシリーズの他の巻；タンパク質精製製品の使用に関する製造会社の文献、例えばＰｈａｒｍａｃｉａ、Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ、Ｎ．Ｊ．、またはＢｉｏ−Ｒａｄ、Ｒｉｃｈｍｏｎｄ、ＣＡ；およびＣｏｌｉｇａｎら（編）（１９９５および定期的な補遺）Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｓｃｉｅｎｃｅ、Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ、ＮＹを参照のこと。組換え技術との組み合わせは、適当な区分の、例えばプロテアーゼで除去可能な配列によって融合し得るＦＬＡＧ配列または同等物への融合を可能にする。例えば、Ｈｏｃｈｕｌｉ（１９８９）Ｃｈｅｍｉｓｃｈｅ Ｉｎｄｕｓｔｒｉｅ １２：６９−７０；Ｓｅｔｌｏｗ（編）Ｇｅｎｅｔｉｃ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅ ａｎｄ Ｍｅｔｈｏｄｓ １２：８７−９８、Ｐｌｅｎｕｍ Ｐｒｅｓｓ、Ｎ．Ｙ．中のＨｏｃｈｕｌｉ（１９９０）「金属キレート吸着剤を用いた組換えタンパク質の精製」；およびＣｒｏｗｅら（１９９２）ＱＩＡｅｘｐｒｅｓｓ：Ｔｈｅ Ｈｉｇｈ Ｌｅｖｅｌ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ＆ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ Ｓｙｓｔｅｍ、ＱＩＡＧＥＮ，Ｉｎｃ．、Ｃｈａｔｓｗｏｒｔｈ、ＣＡを参照のこと。
【００６４】
標準的な免疫学的技術は、例えばＨｅｒｔｚｅｎｂｅｒｇら（編、１９９６）Ｗｅｉｒ’ｓ Ｈａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、第１−４巻、Ｂｌａｃｋｗｅｌｌ Ｓｃｉｅｎｃｅ；Ｃｏｌｉｇａｎ（１９９１）Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、Ｗｉｌｅｙ／Ｇｒｅｅｎｅ、ＮＹ；およびＭｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ、第７０、７３、７４、８４、９２、９３、１０８、１１６、１２１、１３２、１５０、１６２、および１６３巻に記載されている。
【００６５】
ＦＡＣＳ分析は、Ｍｅｌａｍｅｄら（１９９０）Ｆｌｏｗ Ｃｙｔｏｍｅｔｒｙ ａｎｄ Ｓｏｒｔｉｎｇ、Ｗｉｌｅｙ−Ｌｉｓｓ，Ｉｎｃ．、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ、ＮＹ；Ｓｈａｐｉｒｏ（１９８８）Ｐｒａｃｔｉｃａｌ Ｆｌｏｗ Ｃｙｔｏｍｅｔｒｙ、Ｌｉｓｓ、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ、ＮＹ；およびＲｏｂｉｎｓｏｎら（１９９３）Ｈａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ Ｆｌｏｗ Ｃｙｔｏｍｅｔｒｙ Ｍｅｔｈｏｄｓ、Ｗｉｌｅｙ−Ｌｉｓｓ、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ、ＮＹに記載されている。
【００６６】
（ＩＩ．抗体産生）
適切な哺乳類を、適切な量のＩＬ−１７４遺伝子トランスフェクト細胞で、例えば腹腔内に２週間ごと８週間免疫する。典型的にはげっ歯類を使用するが、他の種が選択的および特異的抗体の産生に適応するはずである。最終的な免疫を、尾静脈から静脈内（ＩＶ）に与える。
【００６７】
一般的なポリクローナル抗体を採取し得る。あるいは、モノクローナル抗体を産生し得る。例えば、ＩＶ注射から４日後、脾臓を摘出してそしてＳＰ２／０およびＮＳ１細胞と融合する。例えばＳｔｅｍ Ｃｅｌｌ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ（Ｖａｎｃｏｕｖｅｒ、ＢＣ）によって設計されたプロトコールを用いて、ＨＡＴ耐性ハイブリドーマを選択する。ＨＡＴ選択の１０日後、耐性の病巣を９６穴プレートに移し、そして３日間増殖させる。抗体を含む上清を、例えばＮＩＨ３Ｔ３／表面ＩＬ−１７４トランスフェクト体への結合に関してＦＡＣＳによって分析する。典型的には多くの異なるＩＬ−１７４ｍＡｂが産生される。これらの抗体を、例えば当該分野で標準的なように、標識化または他の手段によって、単離または改変し得る。例えば、ＨａｒｌｏｗおよびＬａｎｅ（１９８８）Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ、ＣＳＨ Ｐｒｅｓｓ；Ｇｏｄｉｎｇ（１９８６）Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ（第２版）Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ、ＮＹを参照のこと。磁気試薬、毒物実体、標識を結合する方法、抗体を固体物質、滅菌フィルター等へ付着させる方法は、当該分野で公知である。
【００６８】
（ＩＩＩ．ＩＬ−１７４アンタゴニスト）
ＩＬ−１７４の様々なアンタゴニストが入手可能になった。例えば、このサイトカイン自体に対する抗体は、リガンドのその受容体への結合を阻害し得、それによって直接レセプターアンタゴニストとしてはたらく。他のアンタゴニストは、例えばレセプターに結合する可能性を妨げるようにリガンドに結合することによって、リガンドのレセプターへの結合をブロッキングすることによって機能し得る。他のアンタゴニスト、例えばムテインアンタゴニストは、シグナル伝達無しにレセプターに結合し得、それによって真のアゴニストが結合するのを阻害する。これらの多くは、標的細胞、特にＩＬ−１７４応答性細胞へ伝達されるシグナルをブロックするようにはたらき得る。
【００６９】
特定残基の重要性についての情報を、標準的な手順および分析を用いて決定する。標準的な変異誘発生成分析を、例えば多くの異なる改変体を、決定した位置（例えば上記で同定した位置）で産生することによって、そしてその改変体の生物学的活性を評価することによって行う。これを、活性を改変する位置を決定する程度まで、または特定の位置に焦点を合わせて、生物学的活性を保持、ブロック、または調節するために置換し得る残基を決定するために行い得る。
【００７０】
あるいは、天然改変体の分析が、どの位置が天然の変異を許容するか示し得る。これは、個体間、または系統または種にわたる変異体の集団分析から得ることができる。選択された個体からの試料を、例えばＰＣＲ分析および配列決定によって分析する。これは、集団の多型性の評価を可能にする。
【００７１】
（ＩＶ．アデノウイルス感染）
アデノウイルス構築物を調製した。マウスにアデノウイルス−ＩＬ−１７４を経鼻経路または静脈内経路によって感染させた。例えば、Ｈｉｔｔら（１９９７）Ａｄｖ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．４０：１３７−１９５を参照のこと。与えたアデノウイルス−ＩＬ−１７４の投与量は、５×１０９から５×１０１０粒子までの範囲であった。マウスを、標準的な組織学的、免疫学的、および血液学的方法を用いて、感染から７、１４、２１、および３５日後に評価した。
【００７２】
（Ｖ．組織学的分析）
マウス由来の組織を、顕微鏡検査のために、ホルマリン固定し、決まった手順で処理し、薄片に切断し、そしてヘマトキシリンおよびエオシンで染色した。検査した臓器は、肺、心臓、肝臓、腎臓、脾臓、骨髄、および胃腸管を含んでいた。例えば、Ｋｅｒｒ（１９９９）Ａｔｌａｓ ｏｆ Ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ Ｈｉｓｔｏｌｏｇｙ；Ｓｔｅｒｎｂｅｒｇ（編、１９９８）Ｈｉｓｔｏｌｏｇｙ ｆｏｒ Ｐａｔｈｏｌｏｇｉｓｔｓ；およびＳｔｅｖｅｎｓおよびＬｏｗｅ（１９９６）Ｈｕｍａｎ Ｈｉｓｔｏｌｏｇｙを参照のこと。
【００７３】
（ＶＩ．造血コロニー形成アッセイ）
マウスの脾臓における造血前駆細胞を、通常のコロニー形成アッセイで数えた。脾細胞を、低浸透圧溶解によって赤血球を涸渇させた。脾細胞を、ＣＤ２（ＲＭ２．２；Ｙａｇａｔａら（１９８９）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８６：６４５−６４９を参照のこと）、ＣＤ８（５３．６．７；Ｌｅｄｂｅｔｔｅｒら、Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｒｅｖ．４７：６３−９０を参照のこと）、Ｂ２２０（ＲＡ３−６Ｂ２；Ｃｏｆｆｍａｎら（１９８１）Ｎａｔｕｒｅ ２８９：６８１−６８３を参照のこと）、Ｍａｃ１（Ｍ１／７０；Ｓｐｒｉｎｇｅｒら（１９７９）Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．９：３０１−３０６を参照のこと）、ＧＲ１（ＲＢ６−８Ｃ５；Ｊｕｌｉａら（１９８８）Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１０：１８１９−１８２６を参照のこと）、および赤血球（Ｔｅｒ−１１９；Ｓｐａｎｇｒｕｄｅら（１９９０）Ｅｘｐ．Ｈｅｍａｔ．１８：９２０−９２６を参照のこと）に特異的な、未改変ラットモノクローナル抗体とインキュベートした。系統陽性細胞を、ヤギ抗ラットでコートしたＢｉｏＭａｇＲビーズ（ＰｅｒＳｅｐｔｉｖｅ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ、Ｆｒａｍｉｎｇｈａｍ、ＭＡ）を用いたネガティブ選択によって、２回の連続的な処置で涸渇させた。残りの系統陰性脾細胞を、１ｍｌの改変Ｉｓｃｏｖｅ’ｓ培地（ＪＲＨ、Ｋａｎｓａｓ Ｃｉｔｙ、ＫＳ）、２０％の胎児ウシ血清（ＦＣＳ）（ＪＲＨ）、５０ｍＭの２−メルカプトエタノール、および０．８％（ｗｔ／ｖｏｌ）のメチルセルロースを含む、３５ｍｍの培養皿に播種した。全ての培養に、飽和濃度の様々な増殖因子を追加した。培養を、３７℃で、５％ＣＯ２を流した加湿雰囲気中でインキュベートした。１０日間インキュベートした後、コロニーを数および大きさに関して分析した。顕微鏡検査のためにコロニーをガラススライドに適用して、そしてライトギームザで染色した後、細胞形態を決定した。Ｍｅｔｃａｌｆ（１９８４）Ｔｈｅ Ｈｅｍｏｐｏｉｅｔｉｃ Ｃｏｌｏｎｙ Ｓｔｉｍｕｌａｔｉｎｇ Ｆａｃｔｏｒｓ、Ｅｌｓｅｖｉｅｒ、Ａｍｓｔｅｒｄａｍを参照のこと。
【００７４】
（ＶＩＩ．血球分析）
マウス由来の血液を、Ｉｓｏｔｏｎｉｃ Ｂｕｆｆｅｒｅｄ Ｄｉｌｕｅｎｔ（ＢｉｏＣｈｅｍ ＩｍｍｕｎｏＳｙｓｔｅｍｓ、Ａｌｌｅｎｔｏｗｎ、ＰＡ）中に採取し、そしてヘモグロビン、ヘマトクリット、白血球、赤血球、および血小板の数を、自動化細胞計数器（Ｓｅｒｏｎｏ ９０１０、Ｓｅｒｏｎｏ−Ｂａｋｅｒ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ，Ｉｎｃ．、Ａｌｌｅｎｔｏｗｎ、ＰＡ）によって決定した。血液スミアをライトギームザで染色し、そして顕微鏡の助けをかりて鑑別計数を行った。例えば、Ｄａｉｎｉａｋ（１９９０）Ｔｈｅ Ｂｉｏｌｏｇｙ ｏｆ Ｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｓｉｓ、Ｗｉｌｅｙ−Ｌｉｓｓ Ｉｎｃ．、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ；ＴｅｓｔａおよびＭｏｌｉｎｅｕｘ（１９９３）Ｈａｅｍｏｐｏｉｅｓｉｓ、Ｏｘｆｏｒｄ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｐｒｅｓｓ、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋを参照のこと。
【００７５】
（ＶＩＩＩ．抗体アイソタイプの決定）
マウス由来の血清を、ラット抗マウス重鎖クラス特異的抗体（抗−α、抗−γ１、抗−γ２ａ、および抗−ε）でコートしたマイクロタイターウェル中で、等張緩衝液に連続希釈した。ビオチン化二次抗体（重鎖クラスに特異的）を加え、そして次いでストレプトアビジン−ＨＲＰ（Ｊａｃｋｓｏｎ ＩｍｍｕｎｏＲｅｓｅａｒｃｈ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ Ｉｎｃ．、Ｗｅｓｔ Ｇｒｏｖｅ、ＰＡ）と反応させた。このＴＭＢペルオキシダーゼ基質システム（Ｋｉｒｋｅｇａａｒｄ ＆ Ｐｅｒｒｙ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、Ｇａｉｔｈｅｒｓｂｕｒｇ、ＭＤ）によって産生された染色産物を、長波長ＵＶランプ（４５０ナノメートル）下で検出する。例えば、Ｃｏｌｉｇａｎら（編、１９９１および補遺）Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、Ｇｒｅｅｎｅ／Ｗｉｌｅｙを参照のこと。
【００７６】
（ＩＸ．細気管支−肺胞洗浄液分析）
細気管支−肺胞洗浄（ＢＡＬ）液を、針を気管へ挿入し、そして１ｍｌのＤＭＥＭ培地を投薬することによって、屠殺マウスから採取した。回収試料の２００μｌを、サイトスピン、続いてライトギームザ染色によって、細胞の組成を検査した。顕微鏡の助けをかりて鑑別計測を行った。
【００７７】
（Ｘ．リアルタイムＲＴ−ＰＣＲによる遺伝子発現の定量）
処理後マウスから試料組織を摘出し、そして液体窒素中で急速冷凍（ｓｎａｐ−ｆｒｏｚｅｎ）した。全ＲＮＡを、ＲＮＡｓｔａｔ６０（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｃｅｎｔｅｒ）を用いて、製造会社の指示に従って抽出し、そしてヌクレアーゼフリーで、−８０℃で保存した。ｃＤＮＡ合成のために、ＲＮＡを１０ユニットのＤＮａｓｅＩ（Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ Ｍａｎｎｈｅｉｍ）と、ＲＮａｓｉｎ（Ｐｒｏｍｅｇａ）の存在下で、３７℃で３０分間インキュベートした。次いで試料を、９５℃で１０分間熱不活化し、冷却し、そしてＳｕｐｅｒｓｃｒｉｐｔＩＩ逆転写酵素（Ｇｉｂｃｏ／ＢＲＬ）で、ランダムヘキサマーを用いて、製造会社のプロトコールに従って逆転写した。プライマーは、Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒから得たか、またはＰｒｉｍｅｒ Ｅｘｐｒｅｓｓソフトウェア（Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ）で生成し、そしてＤＮＡＸプライマーコア設備で合成するかのいずれかであった。可能な場合にはいつでも、プライマーペアはイントロン／エキソン境界にまたがるように設計した。次いで試料を、製造会社（Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ）に従って、ＡＢＩ ＧｅｎｅＡｍｐ ５７００配列検出システムおよびＳＹＢＲグリーン緩衝液を用いて、９５℃で１５秒間、続いて６０℃で１分間の増幅を４０サイクル行った。ハウスキーピング遺伝子ユビキチンのＰＣＲ増幅を、試料充填のコントロールとして、そして試料間の標準化を可能にするために、製造会社（Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ）の指示に従って、各試料に関して行った。水およびゲノムＤＮＡコントロールの両方を、特異性を保証するために含めた。各データポイントを、増幅プロットおよび分離曲線の分析によって、完全さに関して検査した。
【００７８】
本明細書中の全ての引用は、個々の出版物または特許出願それぞれが明確にそして個々に参考として援用されると示されたと同じ程度に、本明細書中で参考として援用される。
【００７９】
本発明の多くの改変および変更が、当業者に明らかなように、その精神および範囲から離れることなく行われ得る。本明細書中で記載された特定の実施形態は、例示のためだけに提供され、そして本発明は、添付の特許請求の範囲が権利を与えられる同等物の全範囲とともに、このような特許請求の範囲によって制限される；そして本発明は、本明細書中で例示として示された特定の実施形態によって制限されるべきではない。
［配列表］
【配列表フリーテキスト】
【００８０】
配列番号１は、霊長類のＩＬ−１７４ポリヌクレオチド配列を提供する。
配列番号２は、霊長類のＩＬ−１７４ポリペプチド配列を提供する。
配列番号３は、マウスのＩＬ−１７４ポリヌクレオチド配列を提供する。
配列番号４は、マウスのＩＬ−１７４ポリペプチド配列を提供する。
【技術分野】
【０００１】
（発明の分野）
本発明は、哺乳類細胞、例えば哺乳類の免疫系細胞の生理学、発達、および分化の制御において機能するタンパク質に関連した組成物に関する。特に、それは、造血細胞を含む様々な細胞型の、細胞生理学、発達、分化、または機能を調節する核酸、タンパク質、抗体、および模倣物を提供する。
【背景技術】
【０００２】
（発明の背景）
脊椎動物の免疫系は、多くの臓器およびいくつかの異なる細胞型から成る。２つの主な細胞型は、骨髄およびリンパ系統を含む。リンパ球系統には、本来胎児肝臓または成人骨髄で分化するものとして特徴付けられたＢ細胞、および本来胸腺で分化するものとして特徴付けられたＴ細胞がある。例えばＰａｕｌ（編、１９９８）Ｆｕｎｄａｍｅｎｔａｌ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ（第４版）Ｒａｖｅｎ Ｐｒｅｓｓ、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋを参照のこと。
【０００３】
免疫応答または細胞分化の発達の多くの局面において、サイトカインとして公知の可溶性タンパク質は、細胞相互作用の調節に重要な役割を果たしている。これらのサイトカインは、多くの方法で細胞の活動を明らかに媒介している。それらは、多くの場合において、造血幹細胞の、免疫応答の原因となる系統を構成する非常に多くの子孫への増殖、成長、および分化を調節することが示された。
【０００４】
しかし、これらの成熟経路において、異なる発達段階の細胞によって発現される細胞分子は、まだ完全に同定されていない。さらに、これらの細胞の様々な生理学的、発達、または増殖状態を誘導、維持、または調節するシグナル伝達分子の役割および作用メカニズムは、十分に理解されていない。明らかに、免疫系およびその様々なストレスに対する反応、例えば感染性疾患、癌関連応答および処置、アレルギーおよび移植拒絶応答は、薬剤と関連を有する。例えば、Ｔｈｏｒｎら、Ｈａｒｒｉｓｏｎ’ｓ Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ ｏｆ Ｉｎｔｅｒｎａｌ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ、ＭｃＧｒａｗ／Ｈｉｌｌ、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋを参照のこと。
【０００５】
医療科学は、環境因子に対する不十分または不適切な生理学的応答を治療するのに、免疫系の適切な増加または抑制に大幅に依存している。しかし、免疫系がどのように制御されているのか、または分化するのかについての理解の欠如が、生物学的チャレンジに対する正常な防御機構を有利に調節する能力を妨げてきた。従って、関連する細胞の発達または生理学の異常または不適切な制御によって特徴付けられる医学的状態は扱いにくいままである。特定のサイトカインの発見および特徴付けは、免疫系、造血細胞および他の細胞型に影響する、広い範囲の変性または他の状態に対する治療の開発に寄与する。本発明は、これらのいくつか、および他の多くの問題の解答を提供する。
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００６】
（発明の要旨）
本発明は、部分的には、ＩＬ−１７４として公知のサイトカインの生物学的活性に基づく。特に、多くのアッセイは、このサイトカインがＴｈ２型免疫応答の確立、先天的免疫、炎症応答、粘膜および線維芽細胞の増殖、特定の造血活性、および肉芽種の形成の調節における機能を有することを示す。
【０００７】
本発明は、哺乳類の免疫細胞にＩＬ−１７４アゴニストを投与することを含む、哺乳類の免疫反応をＴｈ２型反応へ向ける方法；哺乳類の免疫細胞にＩＬ−１７４アゴニストを投与することを含む、哺乳類の先天的免疫応答を刺激する方法；哺乳類にさらにＩＬ−１７４アゴニストを投与することを含む、上皮または線維芽細胞からの哺乳類の炎症応答を増加させる方法；細胞にＩＬ−１７４アゴニストを投与することを含む、消化管細胞増殖を誘導する方法；哺乳類にＩＬ−１７４アゴニストを投与することを含む、哺乳類の骨髄外（ｅｘｔｒａ ｍｅｄｕｌａｒｙ）造血を促進する方法；または細胞にＩＬ−１７４アゴニストを投与することを含む、血清および糞便物質中の抗体応答を増加させる方法を提供する。
【０００８】
種々の実施形態において、その方法はアゴニストの投与を含む。ここでその投与は、造血細胞、線維芽細胞、上皮細胞または内皮細胞によるサイトカイン産生を誘導するか；感染に伴う炎症応答をダウンレギュレートするか；上皮細胞の増殖を刺激するか；あるいは消化管上皮、線維芽、または杯状細胞の増殖を誘導する。いくつかの実施形態では、その方法はアゴニストの投与を含む。ここで哺乳類は、自己免疫状態；感染性疾患免疫応答；創傷治癒応答；またはＴｈ１によって媒介される状態を刺激する状態を示すか、または経験した。さらなる実施形態において、自己免疫状態は、多発性硬化症、全身性エリテマトーデス、慢性関節リウマチ、糖尿病、または乾癬から選択される；感染応答はアスペルギルス感染（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｉｓ ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ）、真菌感染（カンジダ症（Ｃａｎｄｉｄａｉｓｉｓ）、ブラストミセス症、またはアスペルギルス症を含む）、寄生虫感染（住血吸虫症、吸虫、蠕虫、またはフィラリア症を含む）、またはウイルス感染（肝炎を含む）の症候である；またはＴｈ１に媒介される状態は、炎症性状態（クローン病、潰瘍性大腸炎、膵炎、または肝炎を含む）である。さらに、本発明は、感染を処置するために別の治療薬を投与することをさらに含む、感染応答を処置する方法を提供する。
【０００９】
本発明はまた、他の方法、例えば、哺乳類の免疫細胞にＩＬ−１７４アンタゴニストを投与することを含む、哺乳類の免疫反応をＴｈ２型反応から離れるように向ける方法；免疫系細胞にＩＬ−１７４アンタゴニストを投与することを含む、哺乳類の炎症または肉芽種形成を予防する方法を提供する。多くの場合、アンタゴニストはＩＬ−１７４に対するモノクローナル抗体またはポリクローナル抗体である。その方法は、アンタゴニストを投与することを含み得る。ここでその投与は、好酸球の誘引、組織リモデリング、または線維症を阻害するか；あるいはその哺乳類は、アレルギー状態；炎症性状態；またはＴｈ２に媒介される状態を刺激する状態を示すか、または経験した。さらなる実施形態において、好酸球は肺（すなわち喘息）、肝臓または腸（すなわち好酸球胃炎）に誘引されるか；線維症は膵管または胆管周囲（ｐｅｒｉｂｉｌｉａｒｙ）線維症であるか；アンタゴニストはＩＬ−４、ＩＬ−５、および／またはＩＬ−１３の産生を抑制するか；アンタゴニストはＢＡＬにおけるエオタキシン（ｅｏｔａｘｉｎ）、ＣＣＲ４および／またはＣＣＲ４発現を減少させるか；アレルギー状態の症状は肺におけるものであるか；アレルギー状態は全身性アナフィラキシー応答、皮膚過敏性応答、または食物アレルギーであるか；あるいは炎症性状態またはＴｈ２に媒介される状態は皮膚炎または喘息性炎症である。さらに別の実施形態では、哺乳類は、アレルギー状態；炎症性状態；またはＴｈ２に媒介される状態を刺激する状態を示すか、または経験した。
【００１０】
本発明はまた、ＩＬ−１７４アゴニストおよび抗菌剤（抗生物質、抗ウイルス、または抗菌化合物を含む）または化学療法剤；あるいはＩＬ−１７４アンタゴニスト；およびアレルギー薬剤、喘息薬剤、皮膚炎薬剤、線維症薬剤、または好酸球胃炎薬剤を含む組成物を提供する。
本発明は例えば、以下の項目を提供する：
（項目１）以下：
ａ）哺乳動物の免疫応答をＴｈ２型応答に指向する方法であって、該方法は、ＩＬ−１７４アゴニストを該哺乳動物の免疫細胞に投与する工程を包含する、方法；
ｂ）哺乳動物の先天的免疫応答を刺激する方法であって、該方法は、ＩＬ−１７４アゴニストを該哺乳動物の免疫細胞に投与する工程を包含する、方法；
ｃ）上皮細胞または線維芽細胞からの哺乳動物の炎症性応答を増強する方法であって、該方法は、ＩＬ−１７４アゴニストを該哺乳動物にさらに投与する工程を包含する、方法；
ｄ）消化管細胞増殖を誘導する方法であって、該方法は、ＩＬ−１７４アゴニストを該細胞に投与する工程を包含する、方法；
ｅ）哺乳動物の骨髄外造血を促進する方法であって、該方法は、ＩＬ−１７４アゴニストを該哺乳動物に投与する工程を包含する、方法；
ｆ）哺乳動物の免疫応答をＴｈ２型応答から離れて指向する方法であって、該方法は、ＩＬ−１７４アンタゴニストを、該哺乳動物の免疫細胞に投与する工程を包含する、方法；
ｇ）哺乳動物の炎症もしくは肉芽腫の形成を予防する方法であって、該方法は、ＩＬ−１７４アンタゴニストを免疫系細胞に投与する工程を包含する、方法；または
ｈ）血清および糞便物質における抗体応答を増強する方法であって、該方法は、ＩＬ−１７４アゴニストを、該哺乳動物の免疫細胞に投与する工程を包含する、方法、
である、方法。
（項目２）項目１に記載の方法であって、以下：
ａ）哺乳動物の免疫応答をＴｈ２型応答に指向する方法であって、該方法は、ＩＬ−１７４アゴニストを該哺乳動物の免疫細胞に投与する工程を包含する、方法；
ｂ）哺乳動物の先天的免疫応答を刺激する方法であって、該方法は、ＩＬ−１７４アゴニストを該哺乳動物の免疫細胞に投与する工程を包含する、方法；
ｃ）上皮細胞または線維芽細胞からの哺乳動物の炎症性応答を増強する方法であって、該方法は、ＩＬ−１７４アゴニストを該哺乳動物にさらに投与する工程を包含する、方法；
ｄ）消化管細胞増殖を誘導する方法であって、該方法は、ＩＬ−１７４アゴニストを該細胞に投与する工程を包含する、方法；または
ｅ）哺乳動物の骨髄外造血を促進する方法であって、該方法は、ＩＬ−１７４アゴニストを該哺乳動物に投与する工程を包含する、方法、
である、方法。
（項目３）項目２に記載の方法であって、以下：
ｄ）消化管細胞増殖を誘導する方法であって、該方法は、ＩＬ−１７４アゴニストを該細胞に投与する工程を包含する、方法；
ｅ）哺乳動物の骨髄外造血を促進する方法であって、該方法は、ＩＬ−１７４アゴニストを該哺乳動物に投与する工程を包含する、方法、
である、方法。
（項目４）項目１に記載の方法であって、以下：
ｆ）哺乳動物の免疫応答をＴｈ２型応答から離れて指向する方法であって、該方法は、ＩＬ−１７４アンタゴニストを、該哺乳動物の免疫細胞に投与する工程を包含する、方法；
ｇ）哺乳動物の炎症もしくは肉芽腫の形成を予防する方法であって、該方法は、ＩＬ−１７４アンタゴニストを免疫系細胞に投与する工程を包含する、方法；または
ｈ）血清および糞便物質における抗体応答を増強する方法であって、該方法は、ＩＬ−１７４アゴニストを、該哺乳動物の免疫細胞に投与する工程を包含する、方法、
である、方法。
（項目５）アゴニストを投与する項目２に記載の方法であて、ここで、該投与が、以下：
ａ）線維芽細胞、上皮細胞または内皮細胞によるサイトカインの産生を誘導するか；
ｂ）感染に伴なう炎症性応答をダウンレギュレートするか；
ｃ）上皮細胞の増殖を刺激するか；あるいは
ｄ）消化管内皮細胞、線維芽細胞、または杯状細胞の増殖を誘導する、
方法。
（項目６）アゴニストを投与する項目２に記載の方法であって、前記哺乳動物が、以下：
ａ）自己免疫状態；
ｂ）感染性疾患の免疫応答；
ｃ）創傷治癒応答；または
ｄ）Ｔｈ１媒介状態、
を刺激する状態を示すか、または該状態を経験した、方法。
（項目７）項目６に記載の方法であって、ここで：
ａ）前記自己免疫状態が、以下：
ｉ）多発性硬化症；
ｉｉ）全身性エリテマトーデス；
ｉｉｉ）慢性関節リウマチ；
ｉｖ）糖尿病；または
ｖ）乾癬、
から選択されるか、
ｂ）前記感染性応答が、以下：
ｉ）アスペルギルス感染；
ｉｉ）カンジダ症、ブラストミセス症、もしくはアスペルギルス症を含む、真菌感染；
ｉｉｉ）住血吸虫症、吸虫、蠕虫、もしくはフィラリア症を含む寄生虫感染；または
ｉｖ）肝炎を含むウイルス感染、
の症状であるか、あるいは
ｃ）前記Ｔｈ１媒介状態が、クローン病、潰瘍性大腸炎、膵炎、肝炎、または好酸球性胃炎を含む炎症性状態である、
方法。
（項目８）感染性応答を処置する項目７に記載の方法であって、該感染を処置するために、別の治療薬を投与する工程をさらに包含する、方法。
（項目９）哺乳動物の先天的免疫応答を刺激する、項目２に記載の方法。
（項目１０）アンタゴニストを投与する項目４に記載の方法であって、ここで、該アンタゴニストが、ＩＬ−１７４に対するモノクローナル抗体である、方法。
（項目１１）アンタゴニストを投与する項目４に記載の方法であって、ここで：
ａ）該投与が、好酸球誘引、組織リモデリング、または線維症をブロックするか；あるいは
ｂ）前記哺乳動物が、以下：
ｉ）アレルギー状態；
ｉｉ）炎症性状態；または
ｉｉｉ）Ｔｈ２媒介状態、
を刺激する状態を示すか、または該状態を経験した、
方法。
（項目１２）項目１１に記載の方法であって、ここで：
ａ）前記好酸球が、肺、肝臓または腸に誘引されるか；
ｂ）前記線維症が、膵管または胆管周囲線維症であるか；
ｃ）前記アンタゴニストが、ＩＬ−４、ＩＬ−５、および／またはＩＬ−１３の産生を抑制するか；
ｄ）前記アンタゴニストが、ＢＡＬにおけるエオタキシン、ＣＣＲ４および／またはＣＣＲ４発現を減少させるか；
ｅ）前記アレルギー状態の症状が、肺における症状であるか；
ｆ）前記アレルギー状態が、全身性アナフィラキシー応答、皮膚過敏性応答、または食物アレルギーであるか；あるいは
ｇ）前記炎症性またはＴｈ２媒介状態が、皮膚炎または喘息性炎症である、
方法。
（項目１３）項目１１に記載の方法であって、前記哺乳動物が、以下：
ａ）アレルギー状態；
ｂ）炎症性状態；または
ｃ）Ｔｈ２媒介状態、
を刺激する状態を示すか、あるいは該状態を経験した、方法。
（項目１４）組成物であって、以下：
ａ）ＩＬ−１７４アゴニスト、および以下：
ｉ）抗生物質化合物、抗ウイルス化合物、もしくは抗真菌化合物を含む抗菌薬；または
ｉｉ）化学療法剤；あるいは
ｂ）ＩＬ−１７４アンタゴニスト、および以下：
ｉ）アレルギー薬剤；
ｉｉ）喘息薬剤；
ｉｉｉ）皮膚炎薬剤；
ｉｖ）線維症薬剤；または
ｖ）好酸球性胃炎薬剤、
を含む、組成物。
【発明を実施するための形態】
【００１１】
（発明の詳細な説明）
概略
Ｉ．概要
ＩＩ．サイトカインアゴニストおよびアンタゴニスト
Ａ．ＩＬ−１７４および改変体
Ｂ．抗体
Ｃ．他の分子
ＩＩＩ．イムノアッセイ
ＩＶ．使用
（Ｉ．概要）
本発明は、部分的には、ＩＬ−１７４と呼ばれるサイトカインが、免疫応答の様々な局面において役割を果たしているという驚くべき発見に基づく。ＩＬ−１７４は、サイトカインに特徴的な構造的特徴を示すタンパク質をコードする遺伝子ファミリーの１つであり、特にＣＴＬＡ−８（ＩＬ−１７とも呼ばれる）と呼ばれるサイトカインと関連している。ＣＴＬＡ−８のラット、マウス、ヒトの形態およびウイルスホモログが記載され、そしてその配列はＧｅｎＢａｎｋから入手可能である。Ｒｏｕｖｉｅｒら（１９９３）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５０：５４４５−５４５６；Ｙａｏら（１９９５）Ｉｍｍｕｎｉｔｙ ３：８１１−８２１；Ｙａｏら（１９９５）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５５：５４８３−５４８６；およびＫｅｎｎｅｄｙら（１９９６）Ｊ．Ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ ａｎｄ Ｃｙｔｏｋｉｎｅ Ｒｅｓ．１６：６１１−６１７を参照のこと。ＣＴＬＡ−８は、関節炎、腎臓移植拒絶、腫瘍形成、ウイルス−宿主相互作用、および先天的免疫に関連する活性を有し、そしてＩＬ−６と同様の特定の調節性機能を示すようである。ＰｕｂＭｅｄ（ＩＬ−１７で検索）；Ｃｈａｂａｕｄら（１９９８）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．６３：１３９−１４８；Ａｍｉｎら（１９９８）Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｒｈｅｕｍａｔｏｌ．１０：２６３−２６８；Ｖａｎ Ｋｏｏｔｅｎら（１９９８）Ｊ．Ａｍ．Ｓｏｃ．Ｎｅｐｈｒｏｌ．９：１５２６−１５３４；Ｆｏｓｓｉｅｚら（１９９８）Ｉｎｔ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６：５４１−５５１；Ｋｎａｐｐｅら（１９９８）Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．７２：５７９７−５８０１；Ｓｅｏｗ（１９９８）Ｖｅｔ．Ｉｍｍｕｎｏ．Ｉｍｍｕｎｏｐａｔｈｏｌ．６３：１３９−４８；およびＴｅｕｎｉｓｓｅｎら（１９９８）Ｊ．Ｉｎｖｅｓｔ．Ｄｅｒｍａｔｏｌ．１１１：６４５−６４９を参照のこと。ＮＦκＢ転写因子を介したシグナル伝達についての報告は、先天的免疫で使用されるシグナル経路と関係する。Ｓｈａｌｏｍ−Ｂａｒａｋら（１９９８）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７３：２７４６７−２７４７３。
【００１２】
ＩＬ−１７４ｃＤＮＡ配列は、サイトカイン、増殖因子、および癌遺伝子をコードするｍＲＮＡに特徴的な様々な特徴を示す。ＩＬ−１７は、このＴＧＦ−βに関連する新たに認識されたサイトカインファミリーの最初のメンバーであり、そして「ＩＬ−１７０」と呼ばれるこのファミリーの多くのメンバーが同定された。このファミリーのフォールディングは、サイトカインのＴＧＦ−βファミリーのものであると予測される。サイトカインのＴＧＦ−βファミリーおよびＩＬ−１７０ファミリーは、システイン残基の特定の間隔によって特徴付けられる、シスチンノットモチーフの共通の特徴を有する。例えば、ＳｕｎおよびＤａｖｉｅｓ（１９９５）Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｂｉｏｍｏｌｅｃ．Ｓｔｒｕｃｔ．２４：２６９−２９１；ＭｃＤｏｎａｌｄら（１９９３）Ｃｅｌｌ ７３：４２１−４２４；およびＩｓａａｃｓ（１９９５）Ｃｕｒｒ．Ｏｐ．Ｓｔｒｕｃｔ．Ｂｉｏｌ．５：３９１−３９５を参照のこと。特に、その構造は、多くの保存されたシステインを示唆する。ジスルフィド結合はシステイン２と５；および３と６；および１と４である。フォールディングの類似性の機能的重要性は、ＩＬ−１７０ファミリーのダイマー形成を示唆する。結果として、ＩＬ−１７０ダイマーは２つの細胞表面レセプターを１つに集め、それによってシグナル伝達が起こる。
【００１３】
これらの新規タンパク質はＣＴＬＡ−８関連タンパク質、または一般的にＩＬ−１７０タンパク質と呼ばれる。天然タンパク質は、標的細胞における生物学的または生理学的応答を導く様々な生理学的応答、例えばサイトカインシグナル伝達に特徴的な応答を媒介し得るはずである。
【００１４】
精製ＣＴＬＡ−８は、滑膜細胞と培養した場合、これらの細胞からＩＬ−６の分泌を誘導し得る。この誘導は、ヒトＣＴＬＡ−８に対して産生した中和抗体の追加時に逆転する。内皮、上皮、線維芽、および癌腫細胞もまた、ＣＴＬＡ−８による処置に対する応答を示す。このデータは、ＣＴＬＡ−８が、炎症性線維症、例えば乾癬、硬皮症、肺線維症、または硬変に関連し得ることを示唆する。ＣＴＬＡ−８はまた、ＩＬ−６が多くの場合そのような細胞において増殖因子として作用する程度に、癌腫または癌細胞の増殖を引き起こし得る。そのように、新規に発見された他の関連するファミリーメンバーは、同様のまたは関連する生物学的活性を有する可能性がある。
【００１５】
マウスおよびヒト由来のサイトカインＩＬ−１７４が、ＰＣＴ／ＵＳ００／００００６において以前に記載された。これは全ての目的のために本明細書中で参考として援用される。ヒトＩＬ−１７４をコードする核酸配列および対応するアミノ酸配列を、それぞれ配列番号１および２として示す。重要な予測される構造モチーフは、例えば２１−２４、５３−５６、および９５−９８のｃＡＭＰ ＰＫ部位；１５−１７、１６−１８、および４５−４７のＣａリン酸化部位；１２−１６、１１５−１１９、および１１８−１２２のミリストイル化部位；１０４−１０７のＮ−グリコシル化部位；２１、２３、４３、５３、５６、９５、９８、および１３１のリン酸化部位；４１−４３および１１９−１２１のＰＫＣリン酸化部位；および９５−１０２のチロシンキナーゼ部位を含む。ＩＬ−１７４のマウス核酸および対応するアミノ酸配列を、それぞれ配列番号３および４として示す。重要な予測されるモチーフは、例えば２９−３２および６１−６４のｃＡＭＰ ＰＫ部位；１８−２０、５３−５５、および６７−６９のＣａリン酸化部位；１２３−１２７のミリストイル化部位；１１２−１１４のＮ−グリコシル化部位；および２９、３１、５１、５３、６１、６４、１３９、および１４１のリン酸化部位；および２−４、４９−５１、および１２７−１２９のＰＫＣリン酸化部位を含む。
【００１６】
（ＩＩ．サイトカインアゴニストおよびアンタゴニスト）
哺乳類ＩＬ−１７４サイトカインは、ＰＣＴ／ＵＳ００／００００６において以前に記載された。天然リガンドの様々なアゴニストおよびアンタゴニストが産生され得る。
【００１７】
（Ａ．ＩＬ−１７４および改変体）
ＩＬ−１７４アゴニストは、サイトカインのいくつかの、または全てのシグナル伝達機能を示す。様々な哺乳類ＩＬ−１７４配列を評価して、どの残基が種を超えて保存されているかを決定し、どの残基を生物学的活性に劇的な影響を与えずに変化させ得るかを示唆し得る。あるいは、保存的置換は生物学的活性を保持する可能性があり、従ってアゴニスト活性を保持するサイトカインの改変体を導く。変異体または改変体ＩＬ−１７４ポリペプチドをスクリーニングする標準的な方法が、どの配列が有用な治療的アゴニストであるかを決定する。
【００１８】
さらに、特定の核酸発現方法を適用し得る。様々なプロモーターを遺伝子に操作可能に連結し、それによって制御された発現を可能にし得る。
【００１９】
あるいは、アンタゴニスト活性を試験し得る。サイトカイン活性と拮抗する能力に関する試験を、下記で記載するようなアッセイを用いて開発し得る。レセプター結合能力を保持するが、シグナル伝達能力を欠く、様々なリガンドホモログを作成し得る。小分子もＩＬ−１７４に拮抗する能力に関してスクリーニングされ得る。一般的にはＧｉｌｍａｎら（編、１９９０）Ｇｏｏｄｍａｎ ａｎｄ Ｇｉｌｍａｎ’ｓ：Ｔｈｅ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ Ｂａｓｅｓ ｏｆ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ、第８版、Ｐｅｒｇａｍｏｎ Ｐｒｅｓｓ；Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ、第１７版（１９９０）、Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏ．、Ｅａｓｔｏｎ、Ｐｅｎｎを参照のこと、これらはそれぞれ本明細書中で参考として援用される。
【００２０】
（Ｂ．抗体）
本発明は、好ましくは哺乳類、例えば霊長類、ヒト、ネコ、イヌ、ラット、またはマウスのＩＬ−１７４に特異的に結合し、そしてサイトカインがそのシグナルを媒介する能力を中和化する抗体または結合組成物の使用を提供する。抗体を、個体、多型、対立遺伝子、系統、または種改変体を含む、様々なＩＬ−１７４タンパク質、およびそのフラグメントに対して、その天然に存在する形式（全長）またはその組換え形式のいずれに対しても産生し得る。さらに、ＩＬ−１７４ポリペプチドに対して、その天然（または活性）形式またはその不活性、例えば変性形式のいずれにおいても、リガンドのシグナルを媒介する能力を中和化し得る抗体を産生し得る。抗体はリガンドとそのレセプターの相互作用を阻害し得る。
【００２１】
多くの免疫原を、ＩＬ−１７４タンパク質と特異的に反応するか、または選択的に結合する抗体を産生するのに選択し得る。組換えタンパク質が、モノクローナルまたはポリクローナル抗体の産生に好ましい免疫原である。適切な供給源、例えば霊長類、げっ歯類等由来の天然に存在するタンパク質も、純粋なまたは不純な形式で使用され得る。本明細書中で記載されたＩＬ−１７４タンパク質配列を用いて作成した合成ペプチドも、ＩＬ−１７４タンパク質に対する抗体の産生に免疫原として使用され得る。例えば、Ｃｏｌｉｇａｎら（編、１９９５および定期的な補遺）Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｓｃｉｅｎｃｅ、Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ、ＮＹ；およびＡｕｓｕｂｅｌら（編、１９８７および定期的な補遺）Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ、Ｇｒｅｅｎｅ／Ｗｉｌｅｙ、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ、ＮＹで記載されているように、組換えタンパク質を、真核細胞または原核細胞で発現および精製し得る。天然にフォールディングしたか、または変性した物質を、適切な場合には抗体の産生に使用し得る。モノクローナルまたはポリクローナル抗体のいずれかを、例えば続くタンパク質を測定するイムノアッセイで使用するために、または免疫精製（ｉｍｍｕｎｏｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ）法のために産生し得る。
【００２２】
ポリクローナル抗体を産生する方法は、当業者に周知である。典型的には、免疫原、好ましくは精製タンパク質をアジュバントと混合し、そして動物をその混合物で免疫する。免疫原調製物に対する動物の免疫反応を、試験血液を採取し、そしてＩＬ−１７４タンパク質または関心のあるペプチドに対する反応性力価を決定することによってモニターする。例えば、通常反復した免疫後に、免疫原に対する抗体の適切な高い力価が得られたら、血液を動物から採取し、そして抗血清を調製する。所望の場合、タンパク質に反応性の抗体を濃縮するために、抗血清のさらなる分画を行い得る。例えば、ＨａｒｌｏｗおよびＬａｎｅ、Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ、ＣＳＨ Ｐｒｅｓｓ、ＮＹ；またはＣｏｌｉｇａｎ（編）Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙを参照のこと。他の方法、例えばＤＮＡベクター免疫によっても免疫を行い得る。例えば、Ｗａｎｇら（１９９７）Ｖｉｒｏｌｏｇｙ ２２８：２７８−２８４を参照のこと。
【００２３】
モノクローナル抗体は、当業者に周知の様々な技術によって得られ得る。典型的には、免疫後、動物由来の脾臓細胞を、通常骨髄腫細胞と融合することによって不死化する。ＫｏｈｌｅｒおよびＭｉｌｓｔｅｉｎ（１９７６）Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．６：５１１−５１９を参照のこと。不死化の代替方法は、エプスタインバーウイルス、癌遺伝子、またはレトロウイルスによる形質転換、または当該分野で公知の他の方法を含む。例えば、Ｄｏｙｌｅら（編、１９９４および定期的な補遺）Ｃｅｌｌ ａｎｄ Ｔｉｓｓｕｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ：Ｌａｂｏｒａｔｒｙ Ｐｒｏｃｅｄｕｒｅｓ、Ｗｉｌｅｙ、ＮＹ、ＮＹを参照のこと。単一の不死化細胞からできたコロニーを、抗原に対する望ましい特異性および親和性を有する抗体の産生に関してスクリーニングし、そしてそのような細胞によって産生されるモノクローナル抗体の収量を、脊椎動物宿主の腹腔への注入を含む、様々な技術によって増強し得る。あるいは、例えばＨｕｓｅら（１９８９）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４６：１２７５−１２８１によって概略が述べられた一般的なプロトコルによって、ヒトＢ細胞由来のＤＮＡライブラリーをスクリーニングすることによって、モノクローナル抗体またはその結合フラグメントをコードするＤＮＡ配列を単離し得る。
【００２４】
ＩＬ−１７４ポリペプチドの予め決定したフラグメントに対する、抗体、または結合フラグメントおよび一本鎖を含む結合組成物を、上記で記載したように、動物をフラグメントとキャリアタンパク質の結合物で免疫することによって産生し得る。モノクローナル抗体を、望ましい抗体を分泌する細胞から調製する。これらの抗体を、正常または不完全なＩＬ−１７４タンパク質に対する結合に関してスクリーニングし得る。これらのモノクローナル抗体は、通常少なくとも約１ｍＭ、より通常には少なくとも約３００μＭ、典型的には少なくとも約１０μＭ、より典型的には少なくとも約３０μＭ、好ましくは少なくとも約１０μＭ、そしてより好ましくは少なくとも約３μＭまたはそれよりよいＫＤで結合する。
【００２５】
いくつかの場合には、マウス、げっ歯類、霊長類、ヒト等のような様々な哺乳類宿主からモノクローナル抗体（ｍＡｂ）を調製することが望ましい。そのようなモノクローナル抗体調製技術の記載は、例えばＳｔｉｔｅｓら（編）Ｂａｓｉｃ ａｎｄ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ（第４版）Ｌａｎｇｅ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎｓ、Ｌｏｓ Ａｌｔｏｓ、ＣＡおよびそこに引用された参考文献；ＨａｒｌｏｗおよびＬａｎｅ（１９８８）Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ、ＣＳＨ Ｐｒｅｓｓ；Ｇｏｄｉｎｇ（１９８６）Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ： Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ（第２版）、Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ、ＮＹ；および特にモノクローナル抗体を産生する１つの方法を論じているＫｏｈｌｅｒおよびＭｉｌｓｔｅｉｎ（１９７５）Ｎａｔｕｒｅ ２５６：４９５−４９７において見出すことができる。簡単にまとめると、本方法は、動物に免疫原を注射することを含む。次いで動物を屠殺し、そして細胞をその脾臓から取り、それを次いで骨髄腫細胞と融合する。その結果は、インビトロで複製可能なハイブリッド細胞または「ハイブリドーマ」である。次いでハイブリドーマの集団をスクリーニングして個々のクローンを単離する。それらはそれぞれ免疫原に対する単一の抗体種を分泌する。この方法では、得られた個々の抗体種は、免疫原物質において認識される特異的部位に対して反応して産生された、免疫動物由来の不死化およびクローン化単一Ｂ細胞の産物である。
【００２６】
他の適切な技術は、ファージまたは同様のベクターにおける抗体のライブラリーの選択を含む。例えばＨｕｓｅら（１９８９）「Ｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ ｏｆ Ｌａｒｇｅ Ｃｏｍｂｉｎａｔｏｒｉａｌ Ｌｉｂｒａｒｙ ｏｆ ｔｈｅ Ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎ Ｒｅｐｅｒｔｏｉｒｅ ｉｎ Ｐｈａｒｇｅ Ｌａｍｂｄａ」Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４６：１２７５−１２８１；およびＷａｒｄら（１９８９）Ｎａｔｕｒｅ ３４１：５４４−５４６を参照のこと。キメラまたはヒト化抗体を含んで、本発明のポリペプチドおよび抗体を、修飾してまたは修飾なしで使用し得る。多くの場合、ポリペプチドおよび抗体を、検出可能なシグナルを提供する物質と、共有結合的にまたは非共有結合的に結合させることによって標識化する。広く多様な標識および結合技術が公知であり、そして科学的および特許文献において広範囲に報告されている。適切な標識は、放射性核種、酵素、基質、補助因子、阻害剤、蛍光分子、化学発光分子、磁気粒子、等を含む。そのような標識の使用を記載している特許は、米国特許第３，８１７，８３７；３，８５０，７５２；３，９３９，３５０；３，９９６，３４５；４，２７７，４３７；４，２７５，１４９；および４，３６６，２４１号を含む。また、組換え免疫グロブリンを産生し得る。Ｃａｂｉｌｌｙ、米国特許第４，８１６，５６７号；およびＱｕｅｅｎら（１９８９）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８６：１００２９−１００３３を参照のこと。またはトランスジェニックマウスで産生し得る。Ｍｅｎｄｅｚら（１９９７）Ｎａｔｕｒｅ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ １５：１４６−１５６；ＡｂｇｅｎｉｘおよびＭｅｄａｒｅｘ技術を参照のこと。
【００２７】
結合フラグメントを含む本発明の抗体結合化合物は、有意な診断的または治療的価値を有し得る。それらは非中和化結合化合物として有用であり得、そして毒素または放射性核種と結合して、結合化合物が抗原に結合した時、それを例えば表面に発現している細胞を破壊し得る。さらに、これらの結合化合物を、直接またはリンカーによって間接的に、薬剤または他の治療的薬剤と結合し得、そして薬剤標的化を実施し得る。
【００２８】
（Ｃ．他の分子）
抗体は、特異的結合組成物の単なる１つの形式である。多くの場合同様の使用法を有する他の結合組成物としては、例えば、共有結合または非共有結合のいずれかで、タンパク質−結合パートナー様式、抗体−抗原相互作用、または天然で生理学的に関連するタンパク質−タンパク質相互作用で、ＩＬ−１７４に特異性をもって結合する分子（例えばＩＬ−１７４タンパク質と特異的に結合するタンパク質）が挙げられる。その分子は、ポリマー、または化学的試薬であり得る。機能的アナログは、構造的修飾を有するタンパク質であっても、または構造的に関連のない分子（例えば適当な結合決定基と相互作用する分子の形を有するもの）であってもよい。
【００２９】
抗体またはＩＬ−１７４またはそのフラグメントを用いた薬剤スクリーニングを行って、ＩＬ−１７４に対する結合親和性を有する化合物を同定し得るか、またはリガンドとの天然の相互作用をブロックまたは刺激し得る。次いで、続いて生物学的アッセイを利用して、その化合物が内因性ブロッキング活性を有し、そして従ってアンタゴニストであるかどうかを決定し得る。同様に、内因性の刺激活性を有する化合物は、ＩＬ−１７４経路によって細胞にシグナル伝達し得、そして従って、それがリガンドの活性を刺激する点でアゴニストである。レセプター結合を保持するがシグナル伝達を欠くムテインアンタゴニストを開発し得る。
【００３０】
リガンドの構造的研究は、新規変異体、特にレセプターに対するアゴニストまたはアンタゴニスト性質を示すアナログの設計へ至る。これを以前に記載したスクリーニング方法と組み合わせて、望ましい活性の範囲を示すムテインを単離し得る。
【００３１】
レセプター特異的な結合分子が提供される場合、スクリーニング手順によって同定された小分子も含まれる。特に、例えば、多くの場合レセプターに対する特異的な結合および天然リガンドによる結合のブロッキングによって、リガンドのレセプターへの結合を阻害する小分子をスクリーニングする方法が、当該分野で周知である。例えばハイスループットスクリーニングに関する会議、Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｂｕｓｉｎｅｓｓ Ｃｏｍｍｕｎｉｃａｔｉｏｎｓ、Ｓｏｕｔｈｂｏｒｏｕｇｈ、ＭＡ、０１７７２−１７４９を参照のこと。そのような分子は、天然リガンドと競合し、そしてＩＬ−１７４に選択的に結合し得る。
【００３２】
（ＩＩＩ．イムノアッセイ）
イムノアッセイは、ＩＬ−１７４の不均衡または病的状態に関連する疾患または阻害を診断するのに価値がある。特定のタンパク質の定性的または定量的測定を、様々なイムノアッセイ方法で行い得る。一般的な免疫学的手順およびイムノアッセイ手順の論評に関しては、ＳｔｉｔｅｓおよびＴｅｒｒ（編）（１９９１）Ｂａｓｉｃ ａｎｄ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ（第７版）を参照のこと。さらに、本発明のイムノアッセイを、Ｍａｇｇｉｏ（編、１９８０）Ｅｎｚｙｍｅ Ｉｍｍｕｎｏａｓｓａｙ、ＣＲＣ Ｐｒｅｓｓ、Ｂｏｃａ Ｒａｔｏｎ、Ｆｌｏｒｉｄａ；Ｔｉｊａｎ（１９８５）「酵素イムノアッセイの実施および理論」Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ ｉｎ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ａｎｄ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ、Ｅｌｓｅｖｉｅｒ Ｓｃｉｅｎｃｅ Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ Ｂ．Ｖ．、Ａｍｓｔｅｒｄａｍ；ならびにＨａｒｌｏｗおよびＬａｎｅ、Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ： Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ、前出で広範囲に論評されている、多くの設定で実施し得る。Ｃｈａｎ（編、１９８７）Ｉｍｍｕｎｏａｓｓａｙ： Ａ Ｐｒａｃｔｉｃａｌ Ｇｕｉｄｅ、Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ、Ｏｒｌａｎｄｏ、ＦＬ；ＰｒｉｃｅおよびＮｅｗｍａｎ（編、１９９１）Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏａｓｓａｙｓ、Ｓｔｏｃｋｔｏｎ Ｐｒｅｓｓ、ＮＹ；およびＮｇｏ（編、１９８８）Ｎｏｎ−ｉｓｏｔｏｐｉｃ Ｉｍｍｕｎｏａｓｓａｙｓ、Ｐｌｅｎｕｍ Ｐｒｅｓｓ、ＮＹも参照のこと。
【００３３】
ＩＬ−１７４タンパク質またはペプチドの測定のためのイムノアッセイを、当業者に公知の様々な方法によって行い得る。簡単には、タンパク質を測定するイムノアッセイは、競合的または非競合的結合アッセイのいずれかであり得る。競合的結合アッセイでは、分析する試料は、固体表面に結合した捕獲剤の特異的結合部位に関して標識分析物と競合する。好ましくは、捕獲剤は、上記のように産生した、ＩＬ−１７４タンパク質と特異的に反応する抗体である。捕獲剤に結合した標識分析物の濃度は、試料中に存在するフリーの分析物の量に逆比例する。
【００３４】
競合的結合イムノアッセイでは、試料中に存在するＩＬ−１７４タンパク質が、特異的な結合剤、例えばＩＬ−１７４タンパク質と特異的に反応する抗体への結合に関して、標識タンパク質と競合する。結合剤は、結合した標識タンパク質を結合していない標識タンパク質から分離するために、固体表面に結合され得る。あるいは、競合的結合アッセイを、液相で行い得、そして当該分野で公知の様々な技術を用いて、結合した標識タンパク質を結合していない標識タンパク質から分離し得る。分離後、結合した標識タンパク質の量を決定する。試料中に存在するタンパク質の量は、標識タンパク質結合の量と逆比例する。
【００３５】
あるいは、分離工程が不要な均一イムノアッセイを行い得る。これらのイムノアッセイでは、タンパク質の標識が、タンパク質の特異的な結合剤へのそのタンパク質の結合によって変化する。この標識タンパク質における変化が、標識によって放出されるシグナルの増加または減少を引き起こし、イムノアッセイの最後における標識の測定が、タンパク質の検出または定量を可能にする。
【００３６】
ＩＬ−１７４タンパク質をまた、様々な非競合的イムノアッセイ法によって決定し得る。例えば、２部位、固相サンドイッチイムノアッセイを使用し得る。この型のアッセイでは、タンパク質の結合剤、例えば抗体を、固体支持体に結合する。２番目のタンパク質結合剤（これもまた抗体であり得、そして異なる部位でタンパク質に結合する）を標識する。タンパク質の両部位での結合が起こった後、結合していない標識結合剤を除去し、そして固相に結合した標識結合剤の量を測定する。結合した標識結合剤の量は、試料中のタンパク質の量と直接比例する。
【００３７】
ウェスタンブロット分析を用いて、試料中のＩＬ−１７４タンパク質の存在を決定し得る。電気泳動を、例えばそのタンパク質を含むと考えられる組織試料で行う。タンパク質を分離するための電気泳動、およびタンパク質を適当な固体支持体、例えばニトロセルロースフィルターへ移動した後、固体支持体をタンパク質と反応する抗体とインキュベートする。この抗体を標識し得るか、あるいは続いて一次抗体に結合する二次標識抗体とインキュベートすることによって検出し得る。
【００３８】
上記のイムノアッセイの方式は、標識アッセイ成分を採用し得る。標識を、当該分野で周知の方法によって、アッセイの望ましい成分に直接または間接的に結合し得る。広く様々な標識および方法を使用し得る。伝統的には、３Ｈ、１２５Ｉ、３５Ｓ、１４Ｃ、または３２Ｐを組み込む放射活標識を使用した。非放射活標識は、標識抗体に結合するリガンド、蛍光団、化学発光剤、酵素、および標識リガンドに対しての特異的な結合ペアのメンバーとしてはたらき得る抗体を含む。標識の選択は、必要な感度、化合物との結合のしやすさ、必要な安定性、および利用可能な器具に依存する。使用し得る様々な標識またはシグナル産生システムの論評に関しては、米国特許第４，３９１，９０４号を参照のこと。
【００３９】
特定のタンパク質に反応する抗体も、様々なイムノアッセイ法によって測定し得る。従って、上記の手順の改変を使用して、様々なＩＬ−１７４抗体または抗体調製物の量または親和性を決定し得る。イムノアッセイ技術による抗体の測定に適用できる免疫学的手順およびイムノアッセイ手順の論評に関しては、ＳｔｉｔｅｓおよびＴｅｒｒ（編）Ｂａｓｉｃ ａｎｄ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ（第７版）前出；Ｍａｇｇｉｏ（編）Ｅｎｚｙｍｅ Ｉｍｍｕｎｏａｓｓａｙ、前出；およびＨａｒｌｏｗおよびＬａｎｅ、Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ．Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ、前出を参照のこと。
【００４０】
ｍＡｂおよび結合組成物の結合および活性を評価するためのスクリーニングは、様々な方法を含む。上記のように、抗体または結合組成物を検出可能に標識することによって、結合をアッセイし得る。ＩＬ−１７４に応答する細胞を、抗体または結合組成物をアッセイするために使用し得る。
【００４１】
抗体の評価を、他の動物、例えばヒトで、様々な方法を用いて実施し得る。例えば、示した疾患または障害に罹患した患者から、例えば候補ｍＡｂによる治療の前および後に血液試料を採取する。
【００４２】
（ＩＶ．使用）
現在ＩＬ−１７４は様々な細胞に効果を示し、その効果は間接および直接であり得る。数または細胞に対する効果における統計学的に有意な変化は、典型的に少なくとも約１０％、好ましくは２０％、３０％、５０％、７０％、９０％、またはそれより多くである。１００％より大きい効果、例えば１３０％、１５０％、２×、３×、５×等が多くの場合望ましい。その効果は、示した状態の症状または徴候を抑制するのに特異的であり得る。
【００４３】
本発明は、記載した免疫学的状態と関連する医学的状態または疾患の治療に有用である。例えば、Ｆｒａｎｋら（編、１９９５）Ｓａｍｔｅｒ’ｓ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃ Ｄｉｓｅａｓｅｓ、第５版、Ｉ−ＩＩ巻、Ｌｉｔｔｌｅ，Ｂｒｏｗｎ ａｎｄ Ｃｏ．、Ｂｏｓｔｏｎ、ＭＡを参照のこと。記載したアゴニストまたはアンタゴニストを、本明細書中で記載した医学的状況の他の治療、例えばＴｈ１／Ｔｈ２バランスに関係する別のサイトカイン（Ｔｈ１へはＩＬ−１γおよび／またはＩＬ−１２；またはＴｈ２へはＩＬ−４のような）、抗生物質、免疫抑制剤、免疫アジュバント、鎮痛剤、抗炎症薬、増殖因子、血管拡張薬、または血管収縮薬と組み合わせ得る。
【００４４】
好ましい併用治療は、ＩＬ−１７４アゴニストと、Ｔｈ２型免疫応答を促進する様々な治療薬（例えばＩＬ−４、ＩＬ−１γアンタゴニスト、ＩＬ−１２アンタゴニスト）、局所、経皮、または全身性の刺激薬のような炎症性薬剤、様々な成長因子、および造血因子とを含む。ＩＬ−１７４のアンタゴニスト、例えば抗体またはリガンドムテインを、Ｔｈ１型免疫応答を促進する治療薬（例えばＩＬ−１γおよび／またはＩＬ−１２、ＩＬ−４アンタゴニスト）、または抗炎症性薬剤（例えばステロイド、糖質コルチコイドステロイド）と組み合わせ得る。
【００４５】
標準的な免疫学的技術が、例えばＨｅｒｔｚｅｎｂｅｒｇら（編、１９９６）Ｗｅｉｒ’ｓ Ｈａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ 第１−４巻、Ｂｌａｃｋｗｅｌｌ Ｓｃｉｅｎｃｅ；Ｃｏｌｉｇａｎ（１９９１）Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、Ｗｉｌｅｙ／Ｇｒｅｅｎｅ、ＮＹ；およびＭｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ、第７０、７３、７４、８４、９２、９３、１０８、１１６、１２１、１３２、１５０、１６２、および１６３巻に記載されている。これらは、細胞部分集団の精製等のための試薬の使用を可能にする。
【００４６】
ＩＬ−１７４、アンタゴニスト、またはその組み合わせを含む医薬品または滅菌組成物を調製するために、試薬を、好ましくは不活性の薬学的に受容可能な担体または賦形剤と混合する。そのような医薬品組成物の調製は、当該分野で公知である。例えばＲｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ ＳｃｉｅｎｃｅｓおよびＵ．Ｓ．Ｐｈａｒｍａｃｏｐｅｉａ：Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｆｏｒｍｕｌａｒｙ、Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏｍｐａｎｙ、Ｅａｓｔｏｎ、ＰＡ（１９８４）を参照のこと。
【００４７】
アゴニスト、例えば天然リガンド、またはアンタゴニスト、例えば抗体もしくは結合組成物を、通常非経口的に、好ましくは静脈内投与する。そのようなタンパク質またはペプチドアンタゴニストは免疫原性であり得るので、例えばＴｏｍａｓｉら、米国特許第４，７３２，８６３号によって教示されたように、好ましくはそれらを伝統的なＩＶ投与セットによってか、または皮下の貯蔵場所からのいずれかで、ゆっくりと投与する。
【００４８】
非経口投与する場合、治療薬を多くの場合、薬学的に受容可能な非経口ビヒクルと共に単位投与量注射可能形式（溶液、懸濁液、エマルション）に処方する。そのようなビヒクルは、典型的には本質的に非毒性および非治療薬である。典型的により小さい生物製剤であるアゴニストは、典型的には抗体生物製剤より低い投与量で投与する。アンタゴニストは、様々な添加剤および／または希釈剤とともに、または無しで、水、生理食塩水、または緩衝化ビヒクルのような水性ビヒクルで投与し得る。あるいは、亜鉛懸濁液のような懸濁液を、ペプチドを含むように調製し得る。そのような懸濁液は、皮下（ＳＱ）、皮内（ＩＤ）、または筋肉内（ＩＭ）注射に有用であり得る。治療実体および添加剤の割合は、両者が有効な量で存在する限り、広い範囲にわたって変化し得る。治療薬は、好ましくは約５から３０ｍｇ／ｍｌ、好ましくは１０から２０ｍｇ／ｍｌの濃度で、凝集物、他のタンパク質、エンドトキシン等を本質的に含まない精製した形式で処方される。好ましくは、エンドトキシンレベルは２．５ＥＵ／ｍｌより少ない。例えばＡｖｉｓら（編、１９９３）Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｄｏｓａｇｅ Ｆｏｒｍｓ：Ｐａｒｅｎｔｅｒａｌ Ｍｅｄｉｃａｔｉｏｎｓ、第２版、Ｄｅｋｋｅｒ、ＮＹ；Ｌｉｅｂｅｒｍａｎら（編、１９９０）Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｄｏｓａｇｅ Ｆｏｒｍｓ：Ｔａｂｌｅｔｓ、第２版、Ｄｅｋｋｅｒ、ＮＹ；Ｌｉｅｂｅｒｍａｎら（編、１９９０）Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｄｏｓａｇｅ Ｆｏｒｍｓ：Ｄｉｓｐｅｒｓｅ Ｓｙｓｔｅｍｓ、Ｄｅｋｋｅｒ、ＮＹ；Ｆｏｄｏｒら（１９９１）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２５１：７６７−７７３；Ｃｏｌｉｇａｎ（編）Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ；Ｈｏｏｄら、Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ Ｂｅｎｊａｍｉｎ／Ｃｕｍｍｉｎｇｓ；Ｐａｕｌ（編、１９９７）Ｆｕｎｄａｍｅｎｔａｌ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、第４版、Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ；Ｐａｒｃｅら（１９８９）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４６：２４３−２４７；Ｏｗｉｃｋｉら（１９９０）Ｐｒｏｃ Ｎａｔ’ｌ Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８７：４００７−４０１１；ならびにＢｌｕｎｄｅｌｌおよびＪｏｈｎｓｏｎ（１９７６）Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｃｒｙｓｔａｌｌｏｇｒａｐｈｙ、Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋを参照のこと。
【００４９】
治療的アゴニストまたはアンタゴニストの投与レジメンの選択は、治療薬の血清または組織回転率、治療薬の免疫原性、または標的細胞への近づきやすさを含むいくつかの因子に依存する。好ましくは、投与レジメンは、許容できるレベルの副作用と両立して、患者に伝達される治療薬の量を最大にする。よって、伝達される治療薬の量は、部分的には特定のアゴニストまたはアンタゴニストおよび治療する状態の重篤度に依存する。抗体の適当な用量を選択する手引きは、治療的使用についての文献、例えばＦｅｒｒｏｎｅら（編、１９８５）Ｈａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ、Ｎｏｇｅｓ Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎｓ、Ｐａｒｋ Ｒｉｄｇｅ、ＮＪ中のＢａｃｈら、第２２章；およびＨａｂｅｒら（編、１９７７）Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ｉｎ Ｈｕｍａｎ Ｄｉａｇｎｏｓｉｓ ａｎｄ Ｔｈｅｒａｐｙ、Ｒａｖｅｎ Ｐｒｅｓｓ、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ、ＮＹ中のＲｕｓｓｅｌｌ、３０３−３５７頁、およびＳｍｉｔｈら、３６５−３８９頁に見出される。
【００５０】
適当な用量の決定は、医師によって、例えば治療に影響すると当該分野で公知の、または治療に影響すると予測されるパラメーターまたは因子を用いてなされる。一般的には、用量は最適な用量よりいくらか少ない量から始め、そしてその後あらゆる負の副作用と比較して望ましいまたは最適な効果が達成されるまで少しずつ増加する。好ましくは、使用される抗体またはその結合組成物は、治療の標的となる動物と同じ種から得、それによって試薬に対する体液性応答を最小にする。
【００５１】
特異的にＩＬ−１７４に結合する抗体またはそのフラグメントの全週単位用量範囲は、一般的に体重１ｋｇあたり約１ｎｇ、より一般的には約１０ｎｇ、典型的には約１００ｎｇ；より典型的には約１μｇ、より典型的には約１０μｇ、好ましくは約１００μｇ、そしてより好ましくは約１ｍｇからの範囲である。より多くの量はより有効であり得るが、より低い投与量は典型的にはより少ない副作用を有する。一般的に、その範囲は体重１ｋｇあたり１００ｍｇより少なく、好ましくは約５０ｍｇより少なく、そしてより好ましくは約２５ｍｇより少ない。
【００５２】
アンタゴニスト、例えば抗体、結合フラグメントの週単位用量範囲は、体重１ｋｇあたり約１０μｇ、好ましくは少なくとも約５０μｇ、そしてより好ましくは少なくとも約１００μｇからの範囲である。一般的に、その範囲は体重１ｋｇあたり約１０００μｇより少なく、好ましくは約５００μｇより少なく、そしてより好ましくは約１００μｇより少ない。投与は、望ましい治療をもたらすスケジュールであり、そして短いまたは長い期間にわたって定期的であり得る。一般的に、範囲は体重１ｋｇあたり少なくとも約１０μｇから約５０ｍｇ、好ましくは約１００μｇから約１０ｍｇである。
【００５３】
リガンドの他のアゴニストまたはアンタゴニスト、例えばムテインも企図される。サイトカインまたはムテインの時間単位用量範囲は、１時間あたり少なくとも約１０μｇ、一般的には少なくとも約５０μｇ、典型的には少なくとも約１００μｇ、そして好ましくは少なくとも５００μｇからの範囲である。一般的に、用量は１時間あたり約１００ｍｇより少なく、典型的には約３０ｍｇより少なく、好ましくは約１０ｍｇより少なく、そしてより好ましくは約６ｍｇより少ない。一般的な範囲は、１時間あたり少なくとも約１μｇから約１０００μｇ、好ましくは約１０μｇから約５００μｇである。
【００５４】
本発明はまた、公知の治療、例えばステロイド、特に糖質コルチコイドのような、過剰な炎症性応答に関連する症状を緩和する治療と組み合わせた、ＩＬ−１７４抗体または結合組成物の投与を提供する。糖質コルチコイドの日単位投与量は、１日あたり少なくとも約１ｍｇ、一般的には少なくとも約２ｍｇ、そして好ましくは少なくとも約５ｍｇからの範囲である。一般的に、その投与量は、１日あたり約１００ｍｇより少なく、典型的には約５０ｍｇより少なく、好ましくは約２０ｍｇより少なく、そしてより好ましくは少なくとも約１０ｍｇである。一般的に、その範囲は１日あたり少なくとも約１ｍｇから約１００ｍｇ、好ましくは約２ｍｇから５０ｍｇである。
【００５５】
「有効な量」という語句は、望ましい応答を起こすのに、または示された状態の症状または徴候を改善するのに十分な量を意味する。典型的な哺乳類宿主は、マウス、ラット、ネコ、イヌ、およびヒトを含む霊長類を含む。特定の患者に対する有効な量は、治療する状態、患者の全般的な健康、投与の方法、経路、および用量、および副作用の重篤度のような因子に依存して変化し得る。好ましくは、その効果は少なくとも約１０％、好ましくは少なくとも２０％、３０％、５０％、７０％、または９０％以上の量の変化を引き起こす。組み合わせた場合には、有効な量は構成成分の組み合わせに対する比における量であり、そしてその効果は個々の構成成分単独に限定されない。
【００５６】
治療薬の有効な量は、症状を典型的には少なくとも約１０％；通常少なくとも約２０％；好ましくは少なくとも約３０％；またはより好ましくは少なくとも約５０％調節する。あるいは、活動の調節は、様々な細胞型の活動または往来が影響を受けることを意味する。それは、例えば影響された細胞の数の、統計学的に有意かつ定量可能な変化を引き起こす。これは、時間中にまたは標的領域に誘引された標的細胞の数の増加または減少であり得る。
【００５７】
本発明は、本明細書中の他の場所、例えば示された状態に関連する障害の治療に関する一般的な説明で記載されたような治療的適用における使用が見出された試薬を提供する。例えば、Ｂｅｒｋｏｗ（編）Ｔｈｅ Ｍｅｒｃｋ Ｍａｎｕａｌ ｏｆ Ｄｉａｇｎｏｓｉｓ ａｎｄ Ｔｈｅｒａｐｙ、Ｍｅｒｃｋ＆Ｃｏ．、Ｒａｈｗａｙ、Ｎ．Ｊ．；Ｔｈｏｒｎら、Ｈａｒｒｉｓｏｎ’ｓ Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ ｏｆ Ｉｎｔｅｒｎａｌ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ、ＭｃＧｒａｗ−Ｈｉｌｌ、ＮＹ；Ｇｉｌｍａｎら（編、１９９０）Ｇｏｏｄｍａｎ ａｎｄ Ｇｉｌｍａｎ’ｓ： Ｔｈｅ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ Ｂａｓｅｓ ｏｆ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ、第８版、Ｐｅｒｇａｍｏｎ Ｐｒｅｓｓ；Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ、第１７版（１９９０）、Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏ．、Ｅａｓｔｏｎ、Ｐｅｎｎ；Ｌａｎｇｅｒ（１９９０）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４９：１５２７−１５３３；およびＭｅｒｃｋ Ｉｎｄｅｘ、Ｍｅｒｃｋ＆Ｃｏ．、Ｒａｈｗａｙ、Ｎｅｗ Ｊｅｒｓｅｙを参照のこと。
【００５８】
ＩＬ−１７４タンパク質に対する抗体を、ＩＬ−１７４タンパク質を発現する細胞集団を同定または分類するために使用し得る。そのような集団を分類する方法は、当該分野で周知である。例えば、Ｍｅｌａｍｅｄら（１９９０）Ｆｌｏｗ Ｃｙｔｏｍｅｔｒｙ ａｎｄ Ｓｏｒｔｉｎｇ、Ｗｉｌｅｙ−Ｌｉｓｓ，Ｉｎｃ．、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ、ＮＹ；Ｓｈａｐｉｒｏ（１９８８）Ｐｒａｃｔｉｃａｌ Ｆｌｏｗ Ｃｙｔｏｍｅｔｒｙ、Ｌｉｓｓ、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ、ＮＹ；およびＲｏｂｉｎｓｏｎら（１９９３）Ｈａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ Ｆｌｏｗ Ｃｙｔｏｍｅｔｒｙ Ｍｅｔｈｏｄｓ、Ｗｉｌｅｙ−Ｌｉｓｓ、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ、ＮＹを参照のこと。ＩＬ−１７４レセプターを発現する細胞の集団も、例えばＢｉｅｖａら（１９８９）Ｅｘｐ．Ｈｅｍａｔｏｌ．１７：９１４−９２０；Ｈｅｒｎｅｂｔｕｂら（１９９０）Ｂｉｏｃｏｎｊ．Ｃｈｅｍ．１：４１１−４１８；Ｖａｃｃａｒｏ（１９９０）Ａｍ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．Ｌａｂ．３：３０において記載されたような磁気ビーズを用いて精製し得る。
【００５９】
さらに、アンチセンス核酸を使用し得る。例えば、リガンドなどをコードする核酸に特異的なアンチセンス構築物は、リガンドアンタゴニストのような方式で機能し得、そしてレセプターをコードするものに特異的なアンチセンス構築物は、レセプターアンタゴニストのように機能し得る。例えば、Ｓｔｅｐｋｏｗｓｋｉら（１９９８）Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ ６６：６９９−７０７；およびＩＳＩＳ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓの技術を参照のこと。従って、アンチセンス核酸でこれらの経路を通してシグナル伝達を阻害することが可能であり得る。
【００６０】
上記のアッセイ方法を用いて、抗体または結合組成物は、示された障害を引き起こす疾患状態を診断するのに有用である。ＩＬ−１７４タンパク質に対して惹起された抗体はまた、抗イディオタイプ抗体を惹起するのに有用である。これらは、それぞれの抗原の発現に関連する様々な免疫学的状態を検出または診断するのに有用である。これらのシグナルの組み合わせも追究され得る。
【００６１】
本発明の広い範囲は、以下の実施例を参照して最もよく理解される。これらの実施例は本発明を特定の実施形態に制限することを意図しない。
【実施例】
【００６２】
（実施例）
（Ｉ．一般的な方法）
マウスおよびヒト由来のサイトカインＩＬ−１７４は、ＰＣＴ／ＵＳ００／００００６（これは全ての目的のために本明細書中で参考文献に援用される）において以前に記載された。
【００６３】
標準的な方法のいくつかは、例えばＭａｎｉａｔｉｓら（１９８２）Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ．Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ、Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ、Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｐｒｅｓｓ；Ｓａｍｂｒｏｏｋら（１９８９）Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ（第２版）、第１−３巻、ＣＳＨ Ｐｒｅｓｓ、ＮＹ；Ａｕｓｕｂｅｌら、Ｂｉｏｌｏｇｙ、Ｇｒｅｅｎｅ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ａｓｓｏｃｉａｔｅｓ、Ｂｒｏｏｋｌｙｎ、ＮＹ；またはＡｕｓｕｂｅｌら（１９８７および補遺）Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ、Ｇｒｅｅｎｅ／Ｗｉｌｅｙ、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ；Ｉｎｎｉｓら（編）（１９９０）ＰＣＲ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ：Ａ Ｇｕｉｄｅ ｔｏ Ｍｅｔｈｏｄｓ ａｎｄ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ、Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ、Ｎ．Ｙ．において記載または参照されている。タンパク質精製方法は、硫酸アンモニウム沈殿、カラムクロマトグラフィー、電気泳動、遠心分離、結晶化などのような方法を含む。例えば、Ａｕｓｕｂｅｌら（１９８７および定期的な補遺）；Ｄｅｕｔｓｃｈｅｒ（１９９０）Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ、第１８２巻中の「タンパク質精製の手引き」およびこのシリーズの他の巻；タンパク質精製製品の使用に関する製造会社の文献、例えばＰｈａｒｍａｃｉａ、Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ、Ｎ．Ｊ．、またはＢｉｏ−Ｒａｄ、Ｒｉｃｈｍｏｎｄ、ＣＡ；およびＣｏｌｉｇａｎら（編）（１９９５および定期的な補遺）Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｓｃｉｅｎｃｅ、Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ、ＮＹを参照のこと。組換え技術との組み合わせは、適当な区分の、例えばプロテアーゼで除去可能な配列によって融合し得るＦＬＡＧ配列または同等物への融合を可能にする。例えば、Ｈｏｃｈｕｌｉ（１９８９）Ｃｈｅｍｉｓｃｈｅ Ｉｎｄｕｓｔｒｉｅ １２：６９−７０；Ｓｅｔｌｏｗ（編）Ｇｅｎｅｔｉｃ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅ ａｎｄ Ｍｅｔｈｏｄｓ １２：８７−９８、Ｐｌｅｎｕｍ Ｐｒｅｓｓ、Ｎ．Ｙ．中のＨｏｃｈｕｌｉ（１９９０）「金属キレート吸着剤を用いた組換えタンパク質の精製」；およびＣｒｏｗｅら（１９９２）ＱＩＡｅｘｐｒｅｓｓ：Ｔｈｅ Ｈｉｇｈ Ｌｅｖｅｌ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ＆ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ Ｓｙｓｔｅｍ、ＱＩＡＧＥＮ，Ｉｎｃ．、Ｃｈａｔｓｗｏｒｔｈ、ＣＡを参照のこと。
【００６４】
標準的な免疫学的技術は、例えばＨｅｒｔｚｅｎｂｅｒｇら（編、１９９６）Ｗｅｉｒ’ｓ Ｈａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、第１−４巻、Ｂｌａｃｋｗｅｌｌ Ｓｃｉｅｎｃｅ；Ｃｏｌｉｇａｎ（１９９１）Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、Ｗｉｌｅｙ／Ｇｒｅｅｎｅ、ＮＹ；およびＭｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ、第７０、７３、７４、８４、９２、９３、１０８、１１６、１２１、１３２、１５０、１６２、および１６３巻に記載されている。
【００６５】
ＦＡＣＳ分析は、Ｍｅｌａｍｅｄら（１９９０）Ｆｌｏｗ Ｃｙｔｏｍｅｔｒｙ ａｎｄ Ｓｏｒｔｉｎｇ、Ｗｉｌｅｙ−Ｌｉｓｓ，Ｉｎｃ．、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ、ＮＹ；Ｓｈａｐｉｒｏ（１９８８）Ｐｒａｃｔｉｃａｌ Ｆｌｏｗ Ｃｙｔｏｍｅｔｒｙ、Ｌｉｓｓ、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ、ＮＹ；およびＲｏｂｉｎｓｏｎら（１９９３）Ｈａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ Ｆｌｏｗ Ｃｙｔｏｍｅｔｒｙ Ｍｅｔｈｏｄｓ、Ｗｉｌｅｙ−Ｌｉｓｓ、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ、ＮＹに記載されている。
【００６６】
（ＩＩ．抗体産生）
適切な哺乳類を、適切な量のＩＬ−１７４遺伝子トランスフェクト細胞で、例えば腹腔内に２週間ごと８週間免疫する。典型的にはげっ歯類を使用するが、他の種が選択的および特異的抗体の産生に適応するはずである。最終的な免疫を、尾静脈から静脈内（ＩＶ）に与える。
【００６７】
一般的なポリクローナル抗体を採取し得る。あるいは、モノクローナル抗体を産生し得る。例えば、ＩＶ注射から４日後、脾臓を摘出してそしてＳＰ２／０およびＮＳ１細胞と融合する。例えばＳｔｅｍ Ｃｅｌｌ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ（Ｖａｎｃｏｕｖｅｒ、ＢＣ）によって設計されたプロトコールを用いて、ＨＡＴ耐性ハイブリドーマを選択する。ＨＡＴ選択の１０日後、耐性の病巣を９６穴プレートに移し、そして３日間増殖させる。抗体を含む上清を、例えばＮＩＨ３Ｔ３／表面ＩＬ−１７４トランスフェクト体への結合に関してＦＡＣＳによって分析する。典型的には多くの異なるＩＬ−１７４ｍＡｂが産生される。これらの抗体を、例えば当該分野で標準的なように、標識化または他の手段によって、単離または改変し得る。例えば、ＨａｒｌｏｗおよびＬａｎｅ（１９８８）Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ、ＣＳＨ Ｐｒｅｓｓ；Ｇｏｄｉｎｇ（１９８６）Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ（第２版）Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ、ＮＹを参照のこと。磁気試薬、毒物実体、標識を結合する方法、抗体を固体物質、滅菌フィルター等へ付着させる方法は、当該分野で公知である。
【００６８】
（ＩＩＩ．ＩＬ−１７４アンタゴニスト）
ＩＬ−１７４の様々なアンタゴニストが入手可能になった。例えば、このサイトカイン自体に対する抗体は、リガンドのその受容体への結合を阻害し得、それによって直接レセプターアンタゴニストとしてはたらく。他のアンタゴニストは、例えばレセプターに結合する可能性を妨げるようにリガンドに結合することによって、リガンドのレセプターへの結合をブロッキングすることによって機能し得る。他のアンタゴニスト、例えばムテインアンタゴニストは、シグナル伝達無しにレセプターに結合し得、それによって真のアゴニストが結合するのを阻害する。これらの多くは、標的細胞、特にＩＬ−１７４応答性細胞へ伝達されるシグナルをブロックするようにはたらき得る。
【００６９】
特定残基の重要性についての情報を、標準的な手順および分析を用いて決定する。標準的な変異誘発生成分析を、例えば多くの異なる改変体を、決定した位置（例えば上記で同定した位置）で産生することによって、そしてその改変体の生物学的活性を評価することによって行う。これを、活性を改変する位置を決定する程度まで、または特定の位置に焦点を合わせて、生物学的活性を保持、ブロック、または調節するために置換し得る残基を決定するために行い得る。
【００７０】
あるいは、天然改変体の分析が、どの位置が天然の変異を許容するか示し得る。これは、個体間、または系統または種にわたる変異体の集団分析から得ることができる。選択された個体からの試料を、例えばＰＣＲ分析および配列決定によって分析する。これは、集団の多型性の評価を可能にする。
【００７１】
（ＩＶ．アデノウイルス感染）
アデノウイルス構築物を調製した。マウスにアデノウイルス−ＩＬ−１７４を経鼻経路または静脈内経路によって感染させた。例えば、Ｈｉｔｔら（１９９７）Ａｄｖ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．４０：１３７−１９５を参照のこと。与えたアデノウイルス−ＩＬ−１７４の投与量は、５×１０９から５×１０１０粒子までの範囲であった。マウスを、標準的な組織学的、免疫学的、および血液学的方法を用いて、感染から７、１４、２１、および３５日後に評価した。
【００７２】
（Ｖ．組織学的分析）
マウス由来の組織を、顕微鏡検査のために、ホルマリン固定し、決まった手順で処理し、薄片に切断し、そしてヘマトキシリンおよびエオシンで染色した。検査した臓器は、肺、心臓、肝臓、腎臓、脾臓、骨髄、および胃腸管を含んでいた。例えば、Ｋｅｒｒ（１９９９）Ａｔｌａｓ ｏｆ Ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ Ｈｉｓｔｏｌｏｇｙ；Ｓｔｅｒｎｂｅｒｇ（編、１９９８）Ｈｉｓｔｏｌｏｇｙ ｆｏｒ Ｐａｔｈｏｌｏｇｉｓｔｓ；およびＳｔｅｖｅｎｓおよびＬｏｗｅ（１９９６）Ｈｕｍａｎ Ｈｉｓｔｏｌｏｇｙを参照のこと。
【００７３】
（ＶＩ．造血コロニー形成アッセイ）
マウスの脾臓における造血前駆細胞を、通常のコロニー形成アッセイで数えた。脾細胞を、低浸透圧溶解によって赤血球を涸渇させた。脾細胞を、ＣＤ２（ＲＭ２．２；Ｙａｇａｔａら（１９８９）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８６：６４５−６４９を参照のこと）、ＣＤ８（５３．６．７；Ｌｅｄｂｅｔｔｅｒら、Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｒｅｖ．４７：６３−９０を参照のこと）、Ｂ２２０（ＲＡ３−６Ｂ２；Ｃｏｆｆｍａｎら（１９８１）Ｎａｔｕｒｅ ２８９：６８１−６８３を参照のこと）、Ｍａｃ１（Ｍ１／７０；Ｓｐｒｉｎｇｅｒら（１９７９）Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．９：３０１−３０６を参照のこと）、ＧＲ１（ＲＢ６−８Ｃ５；Ｊｕｌｉａら（１９８８）Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１０：１８１９−１８２６を参照のこと）、および赤血球（Ｔｅｒ−１１９；Ｓｐａｎｇｒｕｄｅら（１９９０）Ｅｘｐ．Ｈｅｍａｔ．１８：９２０−９２６を参照のこと）に特異的な、未改変ラットモノクローナル抗体とインキュベートした。系統陽性細胞を、ヤギ抗ラットでコートしたＢｉｏＭａｇＲビーズ（ＰｅｒＳｅｐｔｉｖｅ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ、Ｆｒａｍｉｎｇｈａｍ、ＭＡ）を用いたネガティブ選択によって、２回の連続的な処置で涸渇させた。残りの系統陰性脾細胞を、１ｍｌの改変Ｉｓｃｏｖｅ’ｓ培地（ＪＲＨ、Ｋａｎｓａｓ Ｃｉｔｙ、ＫＳ）、２０％の胎児ウシ血清（ＦＣＳ）（ＪＲＨ）、５０ｍＭの２−メルカプトエタノール、および０．８％（ｗｔ／ｖｏｌ）のメチルセルロースを含む、３５ｍｍの培養皿に播種した。全ての培養に、飽和濃度の様々な増殖因子を追加した。培養を、３７℃で、５％ＣＯ２を流した加湿雰囲気中でインキュベートした。１０日間インキュベートした後、コロニーを数および大きさに関して分析した。顕微鏡検査のためにコロニーをガラススライドに適用して、そしてライトギームザで染色した後、細胞形態を決定した。Ｍｅｔｃａｌｆ（１９８４）Ｔｈｅ Ｈｅｍｏｐｏｉｅｔｉｃ Ｃｏｌｏｎｙ Ｓｔｉｍｕｌａｔｉｎｇ Ｆａｃｔｏｒｓ、Ｅｌｓｅｖｉｅｒ、Ａｍｓｔｅｒｄａｍを参照のこと。
【００７４】
（ＶＩＩ．血球分析）
マウス由来の血液を、Ｉｓｏｔｏｎｉｃ Ｂｕｆｆｅｒｅｄ Ｄｉｌｕｅｎｔ（ＢｉｏＣｈｅｍ ＩｍｍｕｎｏＳｙｓｔｅｍｓ、Ａｌｌｅｎｔｏｗｎ、ＰＡ）中に採取し、そしてヘモグロビン、ヘマトクリット、白血球、赤血球、および血小板の数を、自動化細胞計数器（Ｓｅｒｏｎｏ ９０１０、Ｓｅｒｏｎｏ−Ｂａｋｅｒ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ，Ｉｎｃ．、Ａｌｌｅｎｔｏｗｎ、ＰＡ）によって決定した。血液スミアをライトギームザで染色し、そして顕微鏡の助けをかりて鑑別計数を行った。例えば、Ｄａｉｎｉａｋ（１９９０）Ｔｈｅ Ｂｉｏｌｏｇｙ ｏｆ Ｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｓｉｓ、Ｗｉｌｅｙ−Ｌｉｓｓ Ｉｎｃ．、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ；ＴｅｓｔａおよびＭｏｌｉｎｅｕｘ（１９９３）Ｈａｅｍｏｐｏｉｅｓｉｓ、Ｏｘｆｏｒｄ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｐｒｅｓｓ、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋを参照のこと。
【００７５】
（ＶＩＩＩ．抗体アイソタイプの決定）
マウス由来の血清を、ラット抗マウス重鎖クラス特異的抗体（抗−α、抗−γ１、抗−γ２ａ、および抗−ε）でコートしたマイクロタイターウェル中で、等張緩衝液に連続希釈した。ビオチン化二次抗体（重鎖クラスに特異的）を加え、そして次いでストレプトアビジン−ＨＲＰ（Ｊａｃｋｓｏｎ ＩｍｍｕｎｏＲｅｓｅａｒｃｈ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ Ｉｎｃ．、Ｗｅｓｔ Ｇｒｏｖｅ、ＰＡ）と反応させた。このＴＭＢペルオキシダーゼ基質システム（Ｋｉｒｋｅｇａａｒｄ ＆ Ｐｅｒｒｙ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、Ｇａｉｔｈｅｒｓｂｕｒｇ、ＭＤ）によって産生された染色産物を、長波長ＵＶランプ（４５０ナノメートル）下で検出する。例えば、Ｃｏｌｉｇａｎら（編、１９９１および補遺）Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、Ｇｒｅｅｎｅ／Ｗｉｌｅｙを参照のこと。
【００７６】
（ＩＸ．細気管支−肺胞洗浄液分析）
細気管支−肺胞洗浄（ＢＡＬ）液を、針を気管へ挿入し、そして１ｍｌのＤＭＥＭ培地を投薬することによって、屠殺マウスから採取した。回収試料の２００μｌを、サイトスピン、続いてライトギームザ染色によって、細胞の組成を検査した。顕微鏡の助けをかりて鑑別計測を行った。
【００７７】
（Ｘ．リアルタイムＲＴ−ＰＣＲによる遺伝子発現の定量）
処理後マウスから試料組織を摘出し、そして液体窒素中で急速冷凍（ｓｎａｐ−ｆｒｏｚｅｎ）した。全ＲＮＡを、ＲＮＡｓｔａｔ６０（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｃｅｎｔｅｒ）を用いて、製造会社の指示に従って抽出し、そしてヌクレアーゼフリーで、−８０℃で保存した。ｃＤＮＡ合成のために、ＲＮＡを１０ユニットのＤＮａｓｅＩ（Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ Ｍａｎｎｈｅｉｍ）と、ＲＮａｓｉｎ（Ｐｒｏｍｅｇａ）の存在下で、３７℃で３０分間インキュベートした。次いで試料を、９５℃で１０分間熱不活化し、冷却し、そしてＳｕｐｅｒｓｃｒｉｐｔＩＩ逆転写酵素（Ｇｉｂｃｏ／ＢＲＬ）で、ランダムヘキサマーを用いて、製造会社のプロトコールに従って逆転写した。プライマーは、Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒから得たか、またはＰｒｉｍｅｒ Ｅｘｐｒｅｓｓソフトウェア（Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ）で生成し、そしてＤＮＡＸプライマーコア設備で合成するかのいずれかであった。可能な場合にはいつでも、プライマーペアはイントロン／エキソン境界にまたがるように設計した。次いで試料を、製造会社（Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ）に従って、ＡＢＩ ＧｅｎｅＡｍｐ ５７００配列検出システムおよびＳＹＢＲグリーン緩衝液を用いて、９５℃で１５秒間、続いて６０℃で１分間の増幅を４０サイクル行った。ハウスキーピング遺伝子ユビキチンのＰＣＲ増幅を、試料充填のコントロールとして、そして試料間の標準化を可能にするために、製造会社（Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ）の指示に従って、各試料に関して行った。水およびゲノムＤＮＡコントロールの両方を、特異性を保証するために含めた。各データポイントを、増幅プロットおよび分離曲線の分析によって、完全さに関して検査した。
【００７８】
本明細書中の全ての引用は、個々の出版物または特許出願それぞれが明確にそして個々に参考として援用されると示されたと同じ程度に、本明細書中で参考として援用される。
【００７９】
本発明の多くの改変および変更が、当業者に明らかなように、その精神および範囲から離れることなく行われ得る。本明細書中で記載された特定の実施形態は、例示のためだけに提供され、そして本発明は、添付の特許請求の範囲が権利を与えられる同等物の全範囲とともに、このような特許請求の範囲によって制限される；そして本発明は、本明細書中で例示として示された特定の実施形態によって制限されるべきではない。
［配列表］
【配列表フリーテキスト】
【００８０】
配列番号１は、霊長類のＩＬ−１７４ポリヌクレオチド配列を提供する。
配列番号２は、霊長類のＩＬ−１７４ポリペプチド配列を提供する。
配列番号３は、マウスのＩＬ−１７４ポリヌクレオチド配列を提供する。
配列番号４は、マウスのＩＬ−１７４ポリペプチド配列を提供する。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
アレルギー障害または炎症障害を有する患者を処置するための医薬の製造におけるＩＬ−１７４アンタゴニスト抗体の使用。
【請求項２】
前記炎症障害が皮膚炎または喘息性炎症である、請求項１に記載の使用。
【請求項３】
前記アレルギー障害が、
（ａ）肺アレルギー；
（ｂ）全身性アナフィラキシー応答；
（ｃ）皮膚過敏症；および
（ｄ）食物アレルギー；
からなる群より選択される、請求項１に記載の使用。
【請求項４】
前記ＩＬ−１７４アンタゴニスト抗体が、ａ）ポリクローナル抗体；ｂ）モノクローナル抗体；ｃ）抗体フラグメント；またはｄ）ヒト化抗体を含む、請求項１に記載の使用。
【請求項５】
前記ＩＬ−１７４アンタゴニスト抗体が、ヒトＩＬ−１７４ポリペプチドに特異的に結合するモノクローナル抗体であるか、または、前記ＩＬ−１７４アンタゴニストが、該モノクローナル抗体の結合フラグメントである、請求項１に記載の使用。
【請求項６】
前記ＩＬ−１７４アンタゴニスト抗体が、配列番号２の１位のアミノ酸Ｔｒｙ〜１４５位のアミノ酸Ｇｌｙを含むヒトＩＬ−１７４ポリペプチドに特異的に結合するモノクローナル抗体であるか、または、前記ＩＬ−１７４アンタゴニストが、該モノクローナル抗体の結合フラグメントである、請求項１に記載の使用。
【請求項７】
アレルギー障害または炎症障害を有する患者を処置するための、ＩＬ−１７４アンタゴニスト抗体を含む医薬。
【請求項８】
前記炎症障害が皮膚炎または喘息性炎症である、請求項７に記載の医薬。
【請求項９】
前記アレルギー障害が、
（ａ）肺アレルギー；
（ｂ）全身性アナフィラキシー応答；
（ｃ）皮膚過敏症；および
（ｄ）食物アレルギー；
からなる群より選択される、請求項７に記載の医薬。
【請求項１０】
Ｔｈ２媒介状態の処置において使用するための、ＩＬ−１７４アンタゴニスト抗体。
【請求項１１】
ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−１３、エオタキシンまたはＣＣＲ４の産生を抑制する、請求項１０に記載のＩＬ−１７４アンタゴニスト。
【請求項１２】
前記処置が肺または線維症に対する好酸球の誘引をブロックする、請求項１０に記載のＩＬ−１７４アンタゴニスト。
【請求項１３】
前記ＩＬ−１７４アンタゴニスト抗体が、ａ）ポリクローナル抗体；ｂ）モノクローナル抗体；ｃ）抗体フラグメント；またはｄ）ヒト化抗体を含む、請求項１０〜１２のいずれか１項に記載のＩＬ−１７４アンタゴニスト。
【請求項１４】
前記ＩＬ−１７４アンタゴニストが、ＩＬ−１７４に対するモノクローナル抗体である、請求項１０〜１３のいずれか１項に記載のＩＬ−１７４アンタゴニスト。
【請求項１５】
前記ＩＬ−１７４アンタゴニストが、ヒトＩＬ−１７４ポリペプチドに特異的に結合するモノクローナル抗体であるか、または、該ＩＬ−１７４アンタゴニストが、該モノクローナル抗体の結合フラグメントである、請求項１４に記載のＩＬ−１７４アンタゴニスト。
【請求項１６】
前記ＩＬ−１７４アンタゴニストが、配列番号２の１位のアミノ酸Ｔｒｙ〜１４５位のアミノ酸Ｇｌｙを含むヒトＩＬ−１７４ポリペプチドに特異的に結合するモノクローナル抗体であるか、または、該ＩＬ−１７４アンタゴニストが、該抗体の結合フラグメントである、請求項１５に記載のＩＬ−１７４アンタゴニスト。
【請求項１７】
Ｔｈ２媒介状態の処置において使用するための、ＩＬ−１７４アンタゴニスト抗体を含む医薬。
【請求項１８】
前記処置が肺または線維症に対する好酸球の誘引をブロックする、請求項１７に記載の医薬。
【請求項１９】
前記ＩＬ−１７４アンタゴニストが、ａ）ポリクローナル抗体；ｂ）モノクローナル抗体；ｃ）抗体フラグメント；またはｄ）ヒト化抗体を含む、請求項１７または１８に記載の医薬。
【請求項２０】
前記ＩＬ−１７４アンタゴニストが、ＩＬ−１７４に対するモノクローナル抗体である、請求項１９に記載の医薬。
【請求項２１】
前記ＩＬ−１７４アンタゴニストが、ヒトＩＬ−１７４ポリペプチドに特異的に結合するモノクローナル抗体であるか、または、該ＩＬ−１７４アンタゴニストが、該モノクローナル抗体の結合フラグメントである、請求項２０に記載の医薬。
【請求項２２】
前記ＩＬ−１７４アンタゴニストが、配列番号２の１位のアミノ酸Ｔｒｙ〜１４５位のアミノ酸Ｇｌｙを含むヒトＩＬ−１７４ポリペプチドに特異的に結合するモノクローナル抗体であるか、または、該ＩＬ−１７４アンタゴニストが、該抗体の結合フラグメントである、請求項２１に記載の医薬。
【請求項１】
アレルギー障害または炎症障害を有する患者を処置するための医薬の製造におけるＩＬ−１７４アンタゴニスト抗体の使用。
【請求項２】
前記炎症障害が皮膚炎または喘息性炎症である、請求項１に記載の使用。
【請求項３】
前記アレルギー障害が、
（ａ）肺アレルギー；
（ｂ）全身性アナフィラキシー応答；
（ｃ）皮膚過敏症；および
（ｄ）食物アレルギー；
からなる群より選択される、請求項１に記載の使用。
【請求項４】
前記ＩＬ−１７４アンタゴニスト抗体が、ａ）ポリクローナル抗体；ｂ）モノクローナル抗体；ｃ）抗体フラグメント；またはｄ）ヒト化抗体を含む、請求項１に記載の使用。
【請求項５】
前記ＩＬ−１７４アンタゴニスト抗体が、ヒトＩＬ−１７４ポリペプチドに特異的に結合するモノクローナル抗体であるか、または、前記ＩＬ−１７４アンタゴニストが、該モノクローナル抗体の結合フラグメントである、請求項１に記載の使用。
【請求項６】
前記ＩＬ−１７４アンタゴニスト抗体が、配列番号２の１位のアミノ酸Ｔｒｙ〜１４５位のアミノ酸Ｇｌｙを含むヒトＩＬ−１７４ポリペプチドに特異的に結合するモノクローナル抗体であるか、または、前記ＩＬ−１７４アンタゴニストが、該モノクローナル抗体の結合フラグメントである、請求項１に記載の使用。
【請求項７】
アレルギー障害または炎症障害を有する患者を処置するための、ＩＬ−１７４アンタゴニスト抗体を含む医薬。
【請求項８】
前記炎症障害が皮膚炎または喘息性炎症である、請求項７に記載の医薬。
【請求項９】
前記アレルギー障害が、
（ａ）肺アレルギー；
（ｂ）全身性アナフィラキシー応答；
（ｃ）皮膚過敏症；および
（ｄ）食物アレルギー；
からなる群より選択される、請求項７に記載の医薬。
【請求項１０】
Ｔｈ２媒介状態の処置において使用するための、ＩＬ−１７４アンタゴニスト抗体。
【請求項１１】
ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−１３、エオタキシンまたはＣＣＲ４の産生を抑制する、請求項１０に記載のＩＬ−１７４アンタゴニスト。
【請求項１２】
前記処置が肺または線維症に対する好酸球の誘引をブロックする、請求項１０に記載のＩＬ−１７４アンタゴニスト。
【請求項１３】
前記ＩＬ−１７４アンタゴニスト抗体が、ａ）ポリクローナル抗体；ｂ）モノクローナル抗体；ｃ）抗体フラグメント；またはｄ）ヒト化抗体を含む、請求項１０〜１２のいずれか１項に記載のＩＬ−１７４アンタゴニスト。
【請求項１４】
前記ＩＬ−１７４アンタゴニストが、ＩＬ−１７４に対するモノクローナル抗体である、請求項１０〜１３のいずれか１項に記載のＩＬ−１７４アンタゴニスト。
【請求項１５】
前記ＩＬ−１７４アンタゴニストが、ヒトＩＬ−１７４ポリペプチドに特異的に結合するモノクローナル抗体であるか、または、該ＩＬ−１７４アンタゴニストが、該モノクローナル抗体の結合フラグメントである、請求項１４に記載のＩＬ−１７４アンタゴニスト。
【請求項１６】
前記ＩＬ−１７４アンタゴニストが、配列番号２の１位のアミノ酸Ｔｒｙ〜１４５位のアミノ酸Ｇｌｙを含むヒトＩＬ−１７４ポリペプチドに特異的に結合するモノクローナル抗体であるか、または、該ＩＬ−１７４アンタゴニストが、該抗体の結合フラグメントである、請求項１５に記載のＩＬ−１７４アンタゴニスト。
【請求項１７】
Ｔｈ２媒介状態の処置において使用するための、ＩＬ−１７４アンタゴニスト抗体を含む医薬。
【請求項１８】
前記処置が肺または線維症に対する好酸球の誘引をブロックする、請求項１７に記載の医薬。
【請求項１９】
前記ＩＬ−１７４アンタゴニストが、ａ）ポリクローナル抗体；ｂ）モノクローナル抗体；ｃ）抗体フラグメント；またはｄ）ヒト化抗体を含む、請求項１７または１８に記載の医薬。
【請求項２０】
前記ＩＬ−１７４アンタゴニストが、ＩＬ−１７４に対するモノクローナル抗体である、請求項１９に記載の医薬。
【請求項２１】
前記ＩＬ−１７４アンタゴニストが、ヒトＩＬ−１７４ポリペプチドに特異的に結合するモノクローナル抗体であるか、または、該ＩＬ−１７４アンタゴニストが、該モノクローナル抗体の結合フラグメントである、請求項２０に記載の医薬。
【請求項２２】
前記ＩＬ−１７４アンタゴニストが、配列番号２の１位のアミノ酸Ｔｒｙ〜１４５位のアミノ酸Ｇｌｙを含むヒトＩＬ−１７４ポリペプチドに特異的に結合するモノクローナル抗体であるか、または、該ＩＬ−１７４アンタゴニストが、該抗体の結合フラグメントである、請求項２１に記載の医薬。
【公開番号】特開２０１１−２１９５０１（Ｐ２０１１−２１９５０１Ａ）
【公開日】平成２３年１１月４日（２０１１．１１．４）
【国際特許分類】
【外国語出願】
【出願番号】特願２０１１−１７２３９１（Ｐ２０１１−１７２３９１）
【出願日】平成２３年８月５日（２０１１．８．５）
【分割の表示】特願２００１−５７６８８３（Ｐ２００１−５７６８８３）の分割
【原出願日】平成１３年４月１７日（２００１．４．１７）
【出願人】（５９６１２９２１５）シェーリング コーポレイション (785)
【氏名又は名称原語表記】Ｓｃｈｅｒｉｎｇ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ
【Ｆターム（参考）】
【公開日】平成２３年１１月４日（２０１１．１１．４）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２０１１−１７２３９１（Ｐ２０１１−１７２３９１）
【出願日】平成２３年８月５日（２０１１．８．５）
【分割の表示】特願２００１−５７６８８３（Ｐ２００１−５７６８８３）の分割
【原出願日】平成１３年４月１７日（２００１．４．１７）
【出願人】（５９６１２９２１５）シェーリング コーポレイション (785)
【氏名又は名称原語表記】Ｓｃｈｅｒｉｎｇ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ
【Ｆターム（参考）】
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