サイトカインレセプターファミリーのメンバーであるＭＵ−１
【課題】造血素レセプタースーパーファミリーの従来未知であったメンバーに関するＤＮＡおよびタンパク質の配列を提供すること。
【解決手段】ＭＵ−１造血素レセプタースーパーファミリー鎖をコードするマウス由来のポリヌクレオチド、およびＭＵ−１造血素レセプタースーパーファミリー鎖をコードするヒト由来のポリヌクレオチド、ならびにマウスＭＵ−１造血素レセプタースーパーファミリー鎖の生物学的活性を有するアミノ酸配列を含む単離されたＭＵ−１タンパク質、およびヒトＭＵ−１造血素レセプタースーパーファミリー鎖の生物学的活性を有するアミノ酸配列を含む単離されたＭＵ−１タンパク質。
【解決手段】ＭＵ−１造血素レセプタースーパーファミリー鎖をコードするマウス由来のポリヌクレオチド、およびＭＵ−１造血素レセプタースーパーファミリー鎖をコードするヒト由来のポリヌクレオチド、ならびにマウスＭＵ−１造血素レセプタースーパーファミリー鎖の生物学的活性を有するアミノ酸配列を含む単離されたＭＵ−１タンパク質、およびヒトＭＵ−１造血素レセプタースーパーファミリー鎖の生物学的活性を有するアミノ酸配列を含む単離されたＭＵ−１タンパク質。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
（発明の分野）
本発明は、哺乳動物サイトカインレセプターファミリーのタンパク質の新規なメンバー（限定はしないが、ヒトレセプタータンパク質およびマウスレセプタータンパク質が、挙げられる）、そのフラグメント、ならびにそのようなタンパク質を発現するために有用な組換えポリヌクレオチドおよび細胞に関する。
【背景技術】
【０００２】
（発明の背景）
種々の造血細胞集団または血球集団の発生および増殖に関与する、種々の調節分子（造血素として公知）が、同定されている。ほとんどの造血素は、標的細胞の表面上のレセプターと相互作用することにより、特定の生物学的活性を示す。サイトカインレセプターは、１つ、２つ、または３つの鎖から一般に構成される。多くのサイトカインレセプターおよびいくつかのサイトカイン（例えば、ＩＬ−１２ ｐ４０）が、造血素レセプタースーパーファミリータンパク質のメンバーである。この造血素レセプタースーパーファミリーの新規なメンバーを同定することは、造血の調節、免疫応答の調節、および造血素スーパーファミリーの他のメンバー（サイトカインおよびレセプターを含む）の同定において、有用であり得る。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００３】
この造血素レセプタースーパーファミリーの従来未知であったメンバーに関するＤＮＡおよびタンパク質の配列を、同定および決定することが望ましい。
【課題を解決するための手段】
【０００４】
（発明の要旨）
本発明に従って、ＭＵ−１造血素レセプタースーパーファミリー鎖をコードするポリヌクレオチド（マウス供給源およびヒト供給源由来のものが挙げられるが、限定はしない）が、開示される。
【０００５】
特定の実施形態において、本発明は、ヌクレオチド配列を含む単離されたポリヌクレオチドを提供し、このヌクレオチド配列は、以下：
（ａ）配列番号１のヌクレオチド配列；
（ｂ）配列番号１のヌクレオチド２３８〜ヌクレオチド１８５２のヌクレオチド配列；
（ｃ）配列番号１のヌクレオチド３０１〜ヌクレオチド１８５２のヌクレオチド配列；
（ｄ）配列番号１のヌクレオチド３０１〜ヌクレオチド９４５のヌクレオチド配列；
（ｅ）（ａ）〜（ｄ）のいずれかにおいて特定されるヌクレオチド配列の配列と、遺伝暗号の縮重の結果として異なる、ヌクレオチド配列；
（ｆ）（ａ）〜（ｄ）のいずれかにおいて特定されるヌクレオチドに、ストリンジェントな条件下でハイブリダイズし得る、ヌクレオチド配列；
（ｇ）配列番号２の配列の種ホモログをコードするヌクレオチド配列；および
（ｈ）（ａ）〜（ｄ）のいずれかにおいて特定されるヌクレオチド配列の対立遺伝子改変体、
からなる群より選択される。好ましくは、このヌクレオチド配列は、ＭＵ−１造血素レセプタースーパーファミリー鎖の生物学的活性を有するタンパク質をコードする。このヌクレオチド配列は、発現制御配列に作動可能に連結され得る。
【０００６】
本発明はまた、アミノ酸配列を含むペプチドまたはタンパク質をコードするヌクレオチド配列を含む単離されたポリヌクレオチドも提供し、このアミノ酸配列は、以下：
（ａ）配列番号２のアミノ酸配列；
（ｂ）配列番号２のアミノ酸２２〜５３８のアミノ酸配列；
（ｃ）配列番号２のアミノ酸２２〜２３６のアミノ酸配列；
（ｄ）配列番号２のアミノ酸１〜２３６のアミノ酸配列；および
（ｅ）ＭＵ−１造血素レセプタースーパーファミリー鎖の生物学的活性を有する、（ａ）〜（ｄ）のフラグメント、
からなる群より選択される。
【０００７】
別の実施形態において、本発明は、ヌクレオチド配列を含む単離されたポリヌクレオチドを提供し、このヌクレオチド配列は、以下：
（ａ）配列番号９のヌクレオチド配列；
（ｂ）（ａ）において特定されるヌクレオチド配列と、遺伝暗号の縮重の結果として異なる、ヌクレオチド配列；
（ｃ）（ａ）において特定されるヌクレオチドに、ストリンジェントな条件下でハイブリダイズし得る、ヌクレオチド配列；
（ｄ）（ａ）において特定されるヌクレオチド配列の対立遺伝子改変体、
からなる群より選択される。
【０００８】
本発明はまた、アミノ酸配列を含むペプチドまたはタンパク質をコードするヌクレオチド配列を含む単離されたポリヌクレオチドを提供し、このアミノ酸配列は、以下：
（ａ）配列番号１０のアミノ酸配列；
（ｂ）ＭＵ−１造血素レセプタースーパーファミリー鎖の生物学的活性を有する、（ａ）のフラグメント、
からなる群より選択される。
【０００９】
これらのポリヌクレオチドで形質転換された宿主細胞（好ましくは、哺乳動物細胞）もまた、提供される。
【００１０】
他の実施形態において、本発明は、ＭＵ−１タンパク質を産生するためのプロセスを提供する。このプロセスは、以下：
（ａ）適切な培養培地において本発明の宿主細胞の培養物を増殖させる工程；および
（ｂ）その培養物からヒトＭＵ−１タンパク質を精製する工程、
を包含する。これらの方法により産生されたタンパク質もまた、提供される。
【００１１】
本発明はまた、アミノ酸配列を含む単離されたＭＵ−１タンパク質を提供し、このアミノ酸配列は、以下：
（ａ）配列番号２のアミノ酸配列；
（ｂ）配列番号２のアミノ酸２２〜５３８のアミノ酸配列；
（ｃ）配列番号２のアミノ酸２２〜２３６のアミノ酸配列；
（ｄ）配列番号２のアミノ酸１〜２３６のアミノ酸配列；および
（ｅ）ＭＵ−１造血素レセプタースーパーファミリー鎖の生物学的活性を有する、（ａ）〜（ｄ）のフラグメント、
からなる群より選択される。
【００１２】
本発明はまた、アミノ酸配列を含む単離されたＭＵ−１タンパク質を提供し、このアミノ酸配列は、以下：
（ａ）配列番号１０のアミノ酸配列；
（ｂ）ＭＵ−１造血素レセプタースーパーファミリー鎖の生物学的活性を有する、（ａ）のフラグメント、
からなる群より選択される。
【００１３】
マウスＭＵ−１（配列番号１０）のアミノ酸配列は、ヒトＭＵ−１のアミノ酸配列と約６５％同一である。
【００１４】
他の好ましい実施形態において、特定のアミノ酸配列は、融合タンパク質の一部（ＭＵ−１に由来しないさらなるアミノ酸配列）である。好ましい融合タンパク質は、抗体フラグメント（例えば、Ｆｃフラグメント）を含む。
【００１５】
本発明のタンパク質および薬学的に受容可能なキャリアを含む薬学的組成物もまた、提供される。
【００１６】
本発明はさらに、本発明のタンパク質と特異的に反応する抗体を含む組成物を提供する。
【００１７】
１つの実施形態において、本発明のＭＵ−１核酸分子は、配列番号１または９に示されるヌクレオチド配列に対して（例えば、全長ヌクレオチド配列に対して）、少なくとも６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％またはそれ以上同一である。
【００１８】
別の好ましい実施形態において、核酸分子は、配列番号１または９に示されるヌクレオチド配列からなる。別の好ましい実施形態において、核酸分子は、配列番号１または９のヌクレオチド配列のうちの少なくとも５０ヌクレオチド、１００ヌクレオチド、２００ヌクレオチド、３００ヌクレオチド、４００ヌクレオチド、５００ヌクレオチド、６００ヌクレオチド、７００ヌクレオチド、８００ヌクレオチド、９００ヌクレオチド、１０００ヌクレオチド、１１００ヌクレオチド、１２００ヌクレオチド、１３００ヌクレオチド、１４００ヌクレオチド、１５００ヌクレオチド、１６００ヌクレオチド、１７００ヌクレオチド、１８００ヌクレオチドまたはそれ以上のヌクレオチド（例えば、連続するヌクレオチド）のフラグメント、あるいはその相補体を含む。
【００１９】
好ましい実施形態において、ＭＵ−１タンパク質ファミリーメンバーは、配列番号２または１０のアミノ酸配列に対して、少なくとも約６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％またはそれ以上同一である、アミノ酸配列を有する。
【００２０】
別の実施形態において、本発明は、配列番号２または１０のアミノ酸配列を有するタンパク質のフラグメントを特徴とし、ここで、このフラグメントは、配列番号２または１０のアミノ酸配列のうちの少なくとも１５アミノ酸、２０アミノ酸、３０アミノ酸、４０アミノ酸、５０アミノ酸、６０アミノ酸、７０アミノ酸、８０アミノ酸、９０アミノ酸または１００アミノ酸（例えば、連続するアミノ酸）を含む。
【００２１】
別の局面において、本発明は、生物学的サンプルにおけるＭＵ−１核酸分子、タンパク質またはポリペプチドの存在を検出するための方法を提供し、この方法は、ＭＵ−１核酸分子、ＭＵ−１タンパク質またはＭＵ−１ポリペプチドがこの生物学的サンプルにおいて検出されるように、この生物学的サンプルに、ＭＵ−１核酸分子、ＭＵ−１タンパク質またはＭＵ−１ポリペプチドを検出し得る因子を接触させることによる。
【００２２】
別の局面において、本発明は、生物学的サンプルにおけるＭＵ−１活性の存在を検出するための方法を提供し、この方法は、ＭＵ−１活性の存在がこの生物学的サンプルにおいて検出されるように、この生物学的サンプルに、ＭＵ−１活性の指標を検出し得る因子を接触させることによる。
【００２３】
別の局面において、本発明は、ＭＵ−１活性を調節するための方法を提供し、この方法は、ＭＵ−１を発現し得る細胞においてＭＵ−１活性が調節されるように、この細胞に、ＭＵ−１活性を調節する因子を接触させる工程を包含する。１つの実施形態において、この因子は、ＭＵ−１活性を阻害する。別の実施形態において、この因子は、ＭＵ−１活性を刺激する。１つの実施形態において、この因子は、ＭＵ−１タンパク質に特異的に結合する抗体である。別の実施形態において、この因子は、ＭＵ−１遺伝子の転写またはＭＵ−１ ｍＲＮＡの翻訳を調節することによって、ＭＵ−１の発現を調節する。なお別の実施形態において、この因子は、ＭＵ−１ ｍＲＮＡまたはＭＵ−１遺伝子のコード鎖に対してアンチセンスであるヌクレオチド配列を有する核酸分子である。
【００２４】
１つの実施形態において、本発明の方法は、異常であるかまたは所望されない、ＭＵ−１タンパク質またはＭＵ−１核酸の発現または活性によって特徴付けられる障害（例えば、ＭＵ−１関連障害）を有する被験体を、その被験体にＭＵ−１モジュレーターである因子を投与することによって処置するために使用される。１つの実施形態において、ＭＵ−１モジュレーターは、ＭＵ−１タンパク質である。別の実施形態において、ＭＵ−１モジュレーターは、ＭＵ−１核酸分子である。なお別の実施形態において、ＭＵ−１モジュレーターは、ペプチド、ペプチド模倣物、抗体または他の低分子である。
【００２５】
本発明はまた、以下の少なくとも１つによって特徴付けられる遺伝的変化の存在または非存在を同定するための診断アッセイを提供する：（ｉ）ＭＵ−１タンパク質をコードする遺伝子の異常な修飾または変異；（ｉｉ）ＭＵ−１遺伝子の調節不全（ｍｉｓ-ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ）；および（ｉｉｉ）ＭＵ−１タンパク質の異常な翻訳後修飾（ここで、この遺伝子の野生型形態は、ＭＵ−１活性を有するタンパク質をコードする）。
【００２６】
別の局面において、本発明は、ＭＵ−１タンパク質に結合するかまたはＭＵ−１タンパク質の活性を調節する、化合物を同定するための方法を提供し、この方法は、ＭＵ−１活性を有するＭＵ−１タンパク質を含む指標組成物を提供する工程、この指標組成物に試験化合物を接触させる工程、および指標組成物におけるＭＵ−１活性に対する試験化合物の効果（例えば、ＳＴＡＴリン酸化（例えば、ＳＴＡＴ３またはＳＴＡＴ５リン酸化）の調節）を決定し、ＭＵ−１タンパク質の活性を調節する化合物を同定する工程による。
・本発明はまた、以下を提供し得る：
・（項目１） ヌクレオチド配列を含む単離されたポリヌクレオチドであって、上記ヌクレオチド配列は、以下：
（ａ）配列番号９のヌクレオチド配列；
（ｂ）（ａ）において特定されるヌクレオチド配列の配列と、遺伝暗号の縮重の結果として異なる、ヌクレオチド配列；
（ｃ）（ａ）において特定されるヌクレオチド配列に、ストリンジェントな条件下でハイブリダイズし得る、ヌクレオチド配列；
（ｄ）配列番号１０の配列の種ホモログをコードする、ヌクレオチド配列；および
（ｅ）（ａ）において特定されるヌクレオチド配列の対立遺伝子改変体、
からなる群より選択される、ポリヌクレオチド。
・（項目２） 項目１に記載のポリヌクレオチドであって、上記ヌクレオチド配列が、ＭＵ−１の生物学的活性を有するタンパク質をコードする、ポリヌクレオチド。
・（項目３） 項目２に記載のポリヌクレオチドであって、上記生物学的活性が、ＳＴＡＴ分子との相互作用である、ポリヌクレオチド。
・（項目４） 項目１に記載のポリヌクレオチドであって、上記ヌクレオチド配列が、発現制御配列に作動可能に連結されている、ポリヌクレオチド。
・（項目５） 項目１に記載のポリヌクレオチドであって、配列番号９のヌクレオチド配列を含む、ポリヌクレオチド。
・（項目６） 項目４に記載のポリヌクレオチドで形質転換された、宿主細胞。
・（項目７） 哺乳動物細胞である、項目６に記載の宿主細胞。
・（項目８） ＭＵ−１タンパク質を産生するためのプロセスであって、上記プロセスは、以下：
（ａ）適切な培養培地において項目６に記載の宿主細胞の培養物を増殖させる工程；および
（ｂ）上記培養物から上記ＭＵ−１タンパク質を精製する工程、
を包含する、プロセス。
・（項目９） アミノ酸配列を含む単離されたＭＵ−１タンパク質であって、上記アミノ酸配列は、以下：
（ａ）配列番号１０のアミノ酸配列；および
（ｂ）ＭＵ−１の生物学的活性を有する、（ａ）のフラグメント、
からなる群より選択される、タンパク質。
・（項目１０） 配列番号１０のアミノ酸配列を含む、項目９に記載のタンパク質。
・（項目１１） 薬学的組成物であって、
項目９に記載のタンパク質と、
薬学的に受容可能なキャリアと、
を含む、組成物。
・（項目１２） 項目８に記載のプロセスにより産生された、タンパク質。
・（項目１３） 抗体を含む組成物であって、上記抗体は、項目９に記載のタンパク質と特異的に反応する、組成物。
・（項目１４） アミノ酸配列を含むペプチドまたはタンパク質をコードするヌクレオチド配列を含む単離されたポリヌクレオチドであって、上記アミノ酸配列は、以下：
（ａ）配列番号１０のアミノ酸配列；および
（ｂ）ＭＵ−１の生物学的活性を有する、（ａ）のフラグメント、
からなる群より選択される、ポリヌクレオチド。
・（項目１５） 項目９に記載のタンパク質であって、上記アミノ酸配列が融合タンパク質の一部である、タンパク質。
・（項目１６） Ｆｃフラグメントを含む、項目１５に記載のタンパク質。
・（項目１７） 項目１４に記載のポリヌクレオチドであって、配列番号１０のアミノ酸配列を含むペプチドまたはタンパク質をコードする、ポリヌクレオチド。
・（項目１８） 配列番号９のヌクレオチド配列を含む単離されたポリヌクレオチドであって、ＳＴＡＴ分子と相互作用するＭＵ−１タンパク質をコードする、ポリヌクレオチド。
・（項目１９） ＳＴＡＴシグナル伝達経路を調節するための方法であって、
ＳＴＡＴシグナル伝達に関与する細胞を、ＭＵ−１活性を調節し得る因子と接触させ、それによりＳＴＡＴシグナル伝達経路を調節する工程、
を包含する、方法。
・（項目２０） 項目１９に記載の方法であって、上記ＳＴＡＴシグナル伝達経路が、ＳＴＡＴ ３シグナル伝達経路であるか、またはＳＴＡＴ ５シグナル伝達経路である、方法。
・（項目２１） 免疫障害を処置し得る化合物を同定するための方法であって、
ＳＴＡＴ分子とＭＵ−１ポリペプチドとの相互作用を上記化合物が調節する能力をアッセイし、それにより免疫障害を処置し得る化合物を同定する工程、
を包含する、方法。
・（項目２２） 項目２１に記載の方法であって、上記ＳＴＡＴシグナル伝達経路が、ＳＴＡＴ ３シグナル伝達経路であるか、またはＳＴＡＴ ５シグナル伝達経路である、方法。
【発明を実施するための最良の形態】
【００２７】
（好ましい実施形態の詳細な説明）
本出願の発明者は、ＭＵ−１造血素レセプタースーパーファミリー鎖（本明細書中以後、「ＭＵ−１」または「ＭＵ−１タンパク質」）をコードするポリヌクレオチド（ヒトおよびマウスＭＵ−１をコードするポリヌクレオチドが挙げられるが、これらに限定されない）を、初めて同定および提供した。
【００２８】
特に好ましい実施形態において、本発明のＭＵ−１タンパク質およびＭＵ−１核酸分子は、ヒトＭＵ−１分子である。ヒトＩＬ５レセプターの７０アミノ酸領域
【００２９】
【化１】
を用いて、ＴＢＬＡＳＴＮアルゴリズムを使用してＧｅｎＢａｎｋ ＥＳＴデータベースを検索した。ヒト染色体１６ｐ１２由来のゲノムＢＡＣクローンＡＣ００２３０３中の配列は、この領域に対する相同性を有することが同定され、これは、このセグメントが新規造血素レセプターの遺伝子をコードすることを示唆する。ヌクレオチド４０，８８６の１０００ｂｐ中のオープンリーディングフレームの試験は、ＧｅｎＰｅｐｔのＢＬＡＳＴＰ検索を使用した場合にサイトカインレセプターファミリーのメンバーを専ら同定した、２７０ｂｐのオープンリーディングフレームを明らかにした。このリーディングフレームの末端の終止コドンは、エキソン／イントロン境界にまたがるトランジションの表れであると解釈された。
【００３０】
次いで、ＲＮＡが、第１６ｐ１２染色体由来のこのＢＡＣクローン内に含まれる遺伝子から転写されるか否かを決定した。ＰＣＲプライマーを、サイトカインレセプターファミリー内で保存されるペプチド配列を含む最大のＯＲＦセグメントに基づいて合成した。プライマーＧＡＧＴＣＣＧＡＧＧＡＧＡＡＡＧＣＴＧＡＴＣＴＣＡ（５ｐ）（配列番号４）およびプライマーＧＡＡＡＧＡＴＧＡＣＣＧＧＧＴＣＡＣＴＣＣＡＴＴ（３ｐ）（配列番号５）をＰＣＲにおいて用いて、種々のヒト組織由来のファージライブラリー（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ）をスクリーニングした。配列ＡＣＴＣＧＡＧＣＴＡＴＧＡＧＣＴＧＣＡＧＧＴＧＣＧＧＧＣＡ（配列番号６）の３２−Ｐ標識オリゴヌクレオチドに特異的にハイブリダイズする、予測された１６４ｂｐサイズのＰＣＲ産物が、肺、腎臓、胎盤および心臓由来のファージにおいて観察された。オリゴヌクレオチドＡＣＴＣＧＡＧＣＴＡＴＧＡＧＣＴＧＣＡＧＧＴＧＣＧＧＧＣＡ（配列番号７）を用いて、全長のｃＤＮＡクローンＮＮ１４−１ｂ（ＭＵ−１）が同定され、これを精製し、そして配列決定した。ＤＮＡ配列および推定アミノ酸配列をそれぞれ、配列番号１および配列番号２に示す。ヒトＭＵ−１レセプター鎖の推定アミノ酸配列は、アミノ酸１〜２１の推定シグナル配列を含む。成熟ヒトＭＵ−１は、配列番号２のアミノ酸２４〜５３８の配列を有すると考えられる。膜貫通ドメインは、アミノ酸２３７〜２５４に見出される。
【００３１】
別の特に好ましい実施形態では、本発明のＭＵ−１タンパク質分子およびＭＵ−１核酸分子は、マウスＭＵ−１分子である。マウスＭＵ−１タンパク質をコードするポリヌクレオチド配列を同定するために、ＭＵ−１レセプターのマウスホモログの部分フラグメントを、実施例１に記載されるように、ヒト配列から誘導されたオリゴヌクレオチドを用いるＰＣＲによってマウスｃＤＮＡから単離した。このフラグメントのＤＮＡ配列を決定し、そして２つのオリゴヌクレオチドを、以下の配列を用いて、このフラグメントの内部部分から誘導した：
ＴＴＧＡＡＣＧＴＧＡＣＴＧＴＧＧＣＣＴＴ（５ｐ）（配列番号１３）
ＴＧＡＡＴＧＡＡＧＴＧＣＣＴＧＧＣＴＧＡ（３ｐ）（配列番号１４）。
これらのオリゴヌクレオチドを用いて、元のＰＣＲ産物（図１および配列番号９のマウスｃＤＮＡ配列のヌクレオチド７８１〜１０４３に対応する）の内部の２６２ヌクレオチドフラグメントを増幅し、２Ｄ６ Ｔ細胞株から単離されたｃＤＮＡライブラリーをスクリーニングするためのハイブリダイゼーションプローブとして用いた。ＤＮＡ配列を、２つの独立したクローンから決定した。クローン６を配列決定し、そしてヒトＭＵ−１の全長マウスホモログであることを確認した。
【００３２】
マウスＭＵ−１の全長ヌクレオチド配列を、図１（配列番号９のヌクレオチド１〜２６２８に対応する）に示す。このヌクレオチド配列は、推定リーダー配列をヌクレオチド４０７〜４６４に、コード配列をヌクレオチド４０７〜１９９３に、そして終結コドンをヌクレオチド１９９４〜１９９７に有する。ヌクレオチド１〜４０６は、５’非翻訳領域に対応し、そしてヌクレオチド１９９８〜２６２８は３’非翻訳領域に対応する。マウスＭＵ−１の推定タンパク質配列を図２（配列番号１０のアミノ酸１〜５２９に対応する）に示す。
【００３３】
このマウスＭＵ−１タンパク質は、ＳＰＳｃａｎ（スコア＝１０．１）によって決定したところ、推定リーダー配列（配列番号１０のアミノ酸１〜１９に対応する）、および推定膜貫通ドメイン（配列番号１０のアミノ酸２３７〜２５３に対応する）を含む。推定シグナルモチーフは、以下の領域を含む：ボックス１：配列番号１０のアミノ酸２６５〜２７４、ボックス２：配列番号１０のアミノ酸３１０〜３２４、配列番号１０の２８１位、３１９位、３６１位、３６８位、３９７位および５１０位の６個のチロシン残基。潜在的なＳＴＡＴドッキング部位は、ＳＴＡＴ ５：ＥＤＤＧＹＰＡ、ＳＴＡＴ ３：ＹＬＱＲを含むがこれらに限定されない。
【００３４】
ＭＵ−１のオープンリーディングフレームは、造血素レセプターファミリーの新規メンバーをコードする。好ましい実施形態では、ＭＵ−１は、リーダー配列、保存されたシステイン対、このファミリーに特有のＰＰモチーフおよびＷＳＸＷＳ（配列番号８）モチーフ、ならびに膜貫通ドメインおよび広範囲にわたる細胞質ドメインを有する。ＭＵ−１はまた、細胞質ドメイン中に、保存されたＰＸＰＰならびにボックスＩおよびボックスＩＩのシグナル伝達モチーフを含む（図５を参照のこと）。これらのドメインは、マウスＭＵ−１とヒトＭＵ−１との間で保存される。その後のＧｅｎＰｅｐｔを用いたＭＵ−１配列のＦＡＳＴＡ整列は、ヒトＩＬ−２Ｒｂと最大の相同性を示した（図５を参照のこと）。
【００３５】
ヒトＭＵ−１ ｃＤＮＡを、登録番号ＡＴＣＣ ９８６８７として１９９８年３月１０日にＡｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎに寄託した。
【００３６】
ノーザン分析によって、実施例４に記載されるように、マウスＭＵ−１は、成体マウスの脾臓組織、肺組織および心臓組織において検出された。ヒトＭＵ−１は、成体ヒトのリンパ組織、ＰＢＬ、胸腺、脾臓およびリンパ節において、ならびに胎児肺において検出された。
【００３７】
全長よりも短い任意の形態のＭＵ−１タンパク質は、本発明の範囲内に包含され、そして全長および成熟形態とともに本明細書中で集合的に「ＭＵ−１」または「ＭＵ−１タンパク質」と呼ばれる。全長よりも短いＭＵ−１タンパク質は、全長ＭＵ−１タンパク質（配列番号４または配列番号６）をコードするポリヌクレオチドの対応するフラグメントを発現させることによって産生され得る。これらの対応するポリヌクレオチドフラグメントもまた、本発明の一部である。上記の通りの改変されたポリヌクレオチドは、標準的な分子生物学的技術（適切な所望の欠失変異体の構築を含む）によって、部位特異的変異誘発法、または適切なオリゴヌクレオチドプライマーを使用するポリメラーゼ連鎖反応によって作製され得る。
【００３８】
本発明の目的のために、タンパク質は、対応する成熟ＭＵ−１タンパク質の１以上の生物学的活性を保有する場合、「ＭＵ−１造血素レセプタースーパーファミリー鎖の生物学的活性」を有する。１つの実施形態では、ＭＵ−１活性は、ＳＴＡＴ分子（例えば、ＳＴＡＴ ５、ＳＴＡＴ ３）との相互作用を含む。別の実施形態では、ＭＵ−１タンパク質の活性は、いかなる公知のサイトカインへの結合も含まない。
【００３９】
ＭＵ−１またはその活性なフラグメント（ＭＵ−１タンパク質）は、キャリア分子（例えば、免疫グロブリンまたは免疫グロブリンフラグメント）に融合され得る。例えば、可溶性形態のＭＵ−１は、「リンカー」配列を通して、免疫グロブリンのＦｃ部分へと融合され得る。他の融合タンパク質（例えば、ＧＳＴ、Ｌｅｘ−ＡまたはＭＢＰを有する融合タンパク質）もまた用いられ得る。
【００４０】
本発明はまた、配列番号１および配列番号９に示すようなヌクレオチド配列の対立遺伝子改変体（すなわち、ＭＵ−１タンパク質（好ましくはＭＵ−１の生物学的活性を有するタンパク質）をまたコードする、配列番号１または配列番号９の天然に存在する選択的形態の単離されたポリヌクレオチド）を包含する。本発明にはまた包含されるのは、配列番号１または配列番号９に示されるヌクレオチド配列に、非常にストリンジェントな条件（例えば、６５℃で０．１×ＳＳＣ）下でハイブリダイズする、単離されたポリヌクレオチドである。ＭＵ−１タンパク質をコードするが、遺伝暗号の縮重によって、配列番号１または配列番号９に示されるヌクレオチド配列とは異なる、単離されたポリヌクレオチドもまた本発明によって包含される。点変異または誘導改変によって引き起こされる、配列番号１または配列番号９に示されるようなヌクレオチド配列におけるバリエーションもまた、本発明に包含される。
【００４１】
本明細書中で使用される場合、用語「ストリンジェントな条件下でハイブリダイズする」は、互いに少なくとも６０％同一なヌクレオチド配列が代表的に、互いにハイブリダイズしたままである、ハイブリダイゼーションおよび洗浄についての条件を記載することを意図する。好ましくは、この条件は、互いに少なくとも約７０％、より好ましくは少なくとも約８０％、さらにより好ましくは少なくとも約８５％または９０％同一な配列が代表的に、互いにハイブリダイズしたままである条件である。このようなストリンジェントな条件は当業者に公知であり、そしてＣｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ，Ｎ．Ｙ．（１９８９），６．３．１−６．３．６に見出され得る。ストリンジェントなハイブリダイゼーション条件の好ましい非限定的な例は、約４５℃での６×塩化ナトリウム／クエン酸ナトリウム（ＳＳＣ）中でのハイブリダイゼーション、続いて０．２×ＳＳＣ、０．１％ ＳＤＳ中での５０℃（好ましくは５５℃、より好ましくは６０℃、そしてさらにより好ましくは６５℃）での１回以上の洗浄である。上記で記載した値にわたる範囲（例えば、５５℃〜６０℃または５０℃〜６５℃）は、本発明によって包含される。好ましくは、配列番号１または配列番号９の配列に、ストリンジェントな条件下でハイブリダイズする、本発明の単離された核酸分子は、天然に存在する核酸分子に対応する。本明細書中で使用される場合、「天然に存在する」核酸分子とは、天然に存在する（例えば、天然タンパク質をコードする）ヌクレオチド配列を有する、ＲＮＡ分子またはＤＮＡ分子をいう。
【００４２】
２つのアミノ酸配列または２つの核酸配列の同一性％を決定するために、これらの配列は、最適な比較目的のために整列される（例えば、第一および第二のアミノ酸配列または核酸配列の一方または両方に、最適な整列のためにギャップが導入され得、そして同一でない配列は、比較目的のために無視され得る）。好ましい実施形態では、比較目的のために整列された参照配列の長さは、参照配列の長さの少なくとも３０％、好ましくは少なくとも４０％、より好ましくは少なくとも５０％、さらにより好ましくは少なくとも６０％、そしてさらにより好ましくは少なくとも７０％、８０％、または９０％である。次いで、対応するアミノ酸位置もしくはヌクレオチド位置でのアミノ酸残基またはヌクレオチドが比較される。第一の配列における位置が、第二の配列における対応する位置と同じアミノ酸残基またはヌクレオチドで占められていたならば、この分子はその位置で同一である（本明細書中で使用される場合、アミノ酸または核酸の「同一性」は、アミノ酸または核酸の「相同性」と等価である）。２つの配列間の同一性パーセントは、２つの配列の最適な整列のために導入する必要があるギャップの数および各ギャップの長さを考慮に入れた、これらの配列によって共有される同一位置数の関数である。
【００４３】
２つの配列間の配列比較および同一性パーセントの決定は、数理的アルゴリズムを使用して達成され得る。好ましい実施形態において、２つのアミノ酸配列間の同一性パーセントは、ＧＣＧソフトウェアパッケージ（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｇｃｇ．ｃｏｍにおいて入手可能）中のＧＡＰプログラム中に組込まれたＮｅｅｄｌｅｍａｎおよびＷｕｎｓｃｈ（Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．（４８）：４４４−４５３（１９７０））アルゴリズムを用い、Ｂｌｏｓｕｍ ６２マトリックスまたはＰＡＭ２５０マトリックスのいずれか、ならびにギャップウェイト（ｇａｐ ｗｅｉｇｈｔ）＝１６、１４、１２、１０、８、６、または４、およびレングスウェイト（ｌｅｎｇｔｈ ｗｅｉｇｈｔ）＝１、２、３、４、５、または６を使用して決定される。さらに別の好ましい実施形態において、２つのヌクレオチド配列間の同一性パーセントは、ＧＣＧソフトウェアパッケージ（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｇｃｇ．ｃｏｍにおいて入手可能）中のＧＡＰプログラムを用い、ＮＷＳｇａｐｄｎａ．ＣＭＰマトリックス、およびギャップウェイト（ｇａｐ ｗｅｉｇｈｔ）＝４０、５０、６０、７０、または８０、およびレングスウェイト（ｌｅｎｇｔｈ ｗｅｉｇｈｔ）＝１、２、３、４、５、または６を使用して決定される。別の実施形態において、２つのアミノ酸配列間または２つのヌクレオチド配列間の同一性パーセントは、ＡＬＩＧＮプログラム（バージョン２．０）中に組込まれたＥ．ＭｅｙｅｒｓおよびＷ．Ｍｉｌｌｅｒ（ＭｙｅｒｓおよびＭｉｌｌｅｒ，１９８８，Ｃｏｍｐｕｔ．Ａｐｐｌ．Ｂｉｏｓｃｉ．４：１１−１７）のアルゴリズムを用い、ＰＡＭ１２０ウェイト残基表（ｗｅｉｇｈｔ ｒｅｓｉｕｅ ｔａｂｌｅ）、ギャップレングスペナルティ（ｇａｐ ｌｅｎｇｔｈ ｐｅｎａｌｔｙ）＝１２、およびギャップペナルティ（ｇａｐ ｐｅｎａｌｔｙ）＝４を使用して決定される。
【００４４】
本発明の核酸配列およびタンパク質配列はさらに、公共のデータベースに対する検索を実行するための「問い合わせ配列」としてさらに使用されて、例えば、他のファミリーのメンバーまたは関連する配列を同定し得る。このような検索はＡｌｔｓｃｈｕｌら（（１９９０）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２１５：４０３−１０）のＮＢＬＡＳＴプログラムおよびＸＢＬＡＳＴプログラム（バージョン２．０）を用いて実行され得る。ＢＬＡＳＴヌクレオチド検索は、ＮＢＬＡＳＴプログラム、スコア（ｓｃｏｒｅ）＝１００、ワードレングス（ｗｏｒｄｌｅｎｇｔｈ）＝１２を用いて実行されて、本発明のＡｄｈｒ−１核酸分子に相同性のヌクレオチド配列を獲得し得る。ＢＬＡＳＴタンパク質検索は、ＸＢＬＡＳＴプログラム、スコア（ｓｃｏｒｅ）＝１００、ワードレングス（ｗｏｒｄｌｅｎｇｔｈ）＝３を用いて実行されて、本発明のＡｄｈｒ−１タンパク質分子に相同性のアミノ酸配列を獲得し得る。比較目的のためにギャップの入った整列を獲得するために、Ｇａｐｐｅｄ ＢＬＡＳＴを、Ａｌｔｓｃｈｕｌら（１９９７）Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．２５（１７）：３３８９−３４０２に記載されるように利用し得る。ＢＬＡＳＴプログラムおよびＧａｐｐｅｄ ＢＬＡＳＴプログラムを利用する場合、それぞれのプログラム（例えば、ＸＢＬＡＳＴおよびＮＢＬＡＳＴ）のデフォルトパラメーターを使用し得る。ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ．を参照のこと。
【００４５】
本発明はまた、他の動物種（特に、他の哺乳動物種）由来のヒトＭＵ−１のホモログをコードするポリヌクレオチドを提供する。種ホモログは、本明細書中に開示されるマウス配列またはヒト配列からプローブまたはプライマーを作製し、そして適切な種由来のライブラリー（例えば、関連する種のＰＢＭＣ、胸腺または精巣から構築されたライブラリーなど）をスクリーニングすることによって同定および単離され得る。
【００４６】
本発明の単離されたポリヌクレオチドは、ＭＵ−１タンパク質を組み換え産生するために、Ｋａｕｆｍａｎら、Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．１９，４４８５−４４９０（１９９１）に開示されるｐＭＴ２発現ベクターまたはｐＥＤ発現ベクターのような発現制御配列に作動可能に連結され得る。多くの適切な発現制御配列が、当該分野で公知である。組換えタンパク質を発現させる一般的な方法もまた公知であり、そしてＲ．Ｋａｕｆｍａｎ、Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ １８５，５３７−５６６（１９９０）に例示される。本明細書中に規定されるように、「作動可能に連結された」は、連結されたポリヌクレオチド／発現制御配列を用いて形質転換（トランスフェクト）された宿主細胞によってＭＵ−１タンパク質が発現されるような様式で、本発明の単離されたポリヌクレオチドと発現制御配列との間に共有結合を形成するように酵素的または化学的に連結されることを意味する。
【００４７】
多数の型の細胞が、ＭＵ−１タンパク質の発現のための適切な宿主細胞として作用し得る。機能的なＭＵ−１タンパク質を発現し得る任意の細胞型が、使用され得る。適切な哺乳動物宿主細胞としては、例えば、サルＣＯＳ細胞、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞、ヒト腎臓２９３細胞、ヒト上皮Ａ４３１細胞、ヒトＣｏｌｏ２０５細胞、３Ｔ３細胞、ＣＶ−１細胞、他の形質転換された霊長類細胞株、正常複相体細胞、インビトロ初代培養の組織由来の細胞株、初代外植片、ＨｅＬａ細胞、マウスＬ細胞、ＢＨＫ細胞、ＨＬ−６０細胞、Ｕ９３７細胞、ＨａＫ細胞、Ｒａｔ２細胞、ＢａＦ３細胞、３２Ｄ細胞、ＦＤＣＰ−１細胞、ＰＣ１２細胞、Ｍ１ｘ細胞、Ｃ２Ｃ１２細胞が挙げられる。
【００４８】
ＭＵ−１タンパク質はまた、１つ以上の昆虫発現ベクターにおいて本発明の単離されたポリヌクレオチドを適切な制御配列に作動可能に連結し、そして昆虫発現系を使用することによって、産生され得る。バキュロウイルス／昆虫細胞発現系についての材料および方法は、例えば、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ，Ｕ．Ｓ．Ａ．からのキットの形態（ＭａｘＢａｃ（登録商標）キット）で市販され、そしてそのような方法は、ＳｕｍｍｅｒｓおよびＳｍｉｔｈ，Ｔｅｘａｓ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔ Ｓｔａｔｉｏｎ Ｂｕｌｌｅｔｉｎ Ｎｏ．１５５５（１９８７）（本明細書中に参考として援用される）に記載されるように当該分野で周知である。ＭＵ−１タンパク質の可溶性形態がまた、上記のような適切な単離ポリヌクレオチドを用いて昆虫細胞中で産生され得る。
【００４９】
あるいは、ＭＵ−１タンパク質は、酵母のような下等真核生物または細菌のような原核生物中で産生され得る。適切な酵母株としては、Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ、Ｓｃｈｉｚｏｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｐｏｍｂｅ、Ｋｌｕｙｖｅｒｏｍｙｃｅｓ株、Ｃａｎｄｉｄａ、または異種タンパク質を発現し得る任意の酵母株が挙げられる。適切な細菌株としては、Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ、Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌｉｓ、Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ ｔｙｐｈｉｍｕｒｉｕｍ、または異種タンパク質を発現し得る任意の細菌株が挙げられる。
【００５０】
細菌中での発現は、組換えタンパク質を組込んだ封入体の形成をもたらし得る。従って、活性な材料またはより活性な材料を産生するために、組換えタンパク質の再折り畳みが、必要であり得る。正確に折り畳まれた異種タンパク質を細菌封入体から得るためのいくつかの方法が、当該分野で公知である。これらの方法は一般的に、タンパク質を封入体から可溶化する工程、次いで、カオトロピック薬剤を使用してこのタンパク質を完全に変性する工程を包含する。システイン残基がタンパク質の一次アミノ酸配列中に存在する場合、ジスルフィド結合の正確な形成を可能にする環境下（酸化還元系）で再折り畳みを達成することが、しばしば必要である。再折り畳みの一般的な方法は、Ｋｏｈｎｏ，Ｍｅｔｈ．Ｅｎｚｙｍ．，１８５：１８７−１９５（１９９０）に開示される。ＥＰ ０４３３２２５および同時係属出願ＵＳＳＮ ０８／１６３，８７７は、他の適切な方法を記載する。
【００５１】
本発明のＭＵ−１タンパク質はまた、トランスジェニック動物の生成物として、例えば、ＭＵ−１タンパク質をコードするポリヌクレオチド配列を含む体細胞または生殖細胞によって特徴付けられる、トランスジェニックウシ、トランスジェニックヤギ、トランスジェニックブタ、またはトランスジェニックヒツジの乳汁成分として発現され得る。
【００５２】
本発明のＭＵ−１タンパク質は、所望のタンパク質を発現するのに必要な培養条件下で形質転換された培養宿主細胞を増殖させることによって調製され得る。次いで、生じる発現タンパク質は、この培養培地または細胞抽出物から精製され得る。本発明のＭＵ−１タンパク質の可溶性形態は、馴化培地から精製され得る。本発明のＭＵ−１タンパク質の膜結合形態は、発現している細胞から総膜画分を調製し、そして非イオン性変性剤（例えば、Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ−１００）を用いてこの膜を抽出することによって精製され得る。
【００５３】
ＭＵ−１タンパク質は、当業者に公知の方法を用いて精製され得る。例えば、本発明のＭＵ−１タンパク質は、市販のタンパク質濃縮フィルター（例えば、ＡｍｉｃｏｎまたはＭｉｌｌｉｐｏｒｅ Ｐｅｌｌｉｃｏｎ限外濾過ユニット）を用いて濃縮され得る。濃縮工程後、濃縮物は、ゲル濾過媒体のような精製マトリックスにアプライされ得る。あるいは、陰イオン交換樹脂（例えば、ペンダントジエチルアミノエチル（ＤＥＡＥ）基もしくはポリエチレンイミン（ＰＥＩ）基を有するマトリックスまたは基材）が、使用され得る。マトリックスは、アクリルアミド、アガロース、デキストラン、セルロース、またはタンパク質精製に一般的に使用される他の型であり得る。あるいは、陽イオン交換工程が、使用され得る。適切な陽イオン交換体としては、スルホプロピル基またはカルボキシメチル基を含む種々の不溶性マトリックスが挙げられる。スルホプロピル基（例えば、Ｓ−Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ（登録商標）カラム）が、好ましい。培養上清からのＭＵ−１タンパク質の精製はまた、コンカナバリンＡ−アガロース、ｈｅｐａｒｉｎ−ｔｏｙｏｐｅａｒｌ（登録商標）またはＣｉｂａｃｒｏｍ ｂｌｕｅ ３ＧＡ Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ（登録商標）のようなアフィニティー樹脂で；あるいは、フェニルエーテル、ブチルエーテル、またはプロピルエーテルのような樹脂を用いた疎水性相互作用クロマトグラフィーによる；あるいは、免疫アフィニティークロマトグラフィーによる、１つ以上のカラム工程が挙げられ得る。最後に、疎水性ＲＰ−ＨＰＬＣ媒体（例えば、ペンダントメチル基または他の脂肪族基を有するシリカゲル）を使用する１つ以上の逆相高速液体クロマトグラフィー（ＲＰ−ＨＰＬＣ）工程が、ＭＵ−１タンパク質をさらに精製するために使用され得る。ＭＵ−１タンパク質に対する抗体を含むアフィニティーカラムもまた、公知の方法に従って精製に使用され得る。種々の組合わせまたは他の公知の方法における、上記の精製工程のうちのいくつかまたは全てがまた使用されて、実質的に精製された単離組み換えタンパク質を提供し得る。好ましくは、単離されたＭＵ−１タンパク質は、他の哺乳動物タンパク質を実質的に含まないように、精製される。
【００５４】
本発明のＭＵ−１タンパク質はまた、ＭＵ−１に結合し得る因子をスクリーニングするために使用され得る。所望の結合タンパク質（固定されているかまたは固定されていない）を用いた結合アッセイが、当該分野で周知であり、そして本発明のＭＵ−１タンパク質を使用する本目的のために使用され得る。精製された細胞に基づくスクリーニングアッセイまたは精製されたタンパク質に基づく（無細胞）スクリーニングアッセイが、このような因子を同定するために使用され得る。例えば、ＭＵ−１タンパク質は、精製形態でキャリアに固定され得、そして精製されたＭＵ−１タンパク質に対する結合または潜在的なリガンドが、測定され得る。
【００５５】
ＭＵ−１タンパク質（細胞から精製されたか、または組み換え生成された）は、薬学的に受容可能なキャリアと組み合わせた場合に、薬学的組成物として用いられ得る。このような組成物は、ＭＵ−１またはインヒビターおよびキャリアに加えて、種々の希釈剤、充填剤、塩、緩衝液、安定化剤、可溶化剤、および当該分野で周知の他の物質を含み得る。用語、「薬学的に受容可能な」とは、活性成分の生物学的活性の有効性を妨害しない非毒性の物質を意味する。キャリアの特徴は、投与の経路に依存する。
【００５６】
本発明の薬学的組成物はまた、サイトカイン、リンホカイン、またはＭ−ＣＳＦ、ＧＭ−ＣＳＦ、ＩＬ−１、ＩＬ−２、ＩＬ−３、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−６、ＩＬ−７、ＩＬ−８、ＩＬ−９、ＩＬ−１０、ＩＬ−１１、ＩＬ−１２、ＩＬ−１４、ＩＬ−１５、Ｇ−ＣＳＦ、幹細胞因子、およびエリスロポエチンのような他の造血因子を含み得る。この薬学的組成物はまた、抗サイトカイン抗体も含み得る。この薬学的組成物は、プラスミノゲン活性化因子および第ＶＩＩＩ因子のような血栓溶解性因子または抗血栓性因子を含み得る。この薬学的組成物はさらに、他の抗炎症性因子を含み得る。このようなさらなる因子（ｆａｃｔｏｒ）および／または物質（ａｇｅｎｔ）は、この薬学的組成物中に含まれて、単離されたＭＵ−１タンパク質と相乗効果を生じ得るか、または単離されたＭＵ−１タンパク質によって生じる副作用を最小にし得る。逆に、単離されたＭＵ−１タンパク質は、特定のサイトカイン、リンホカイン、他の造血因子、血栓溶解因子もしくは抗血栓性因子、または抗炎症剤の処方物に含まれて、サイトカイン、リンホカイン、他の造血因子、血栓溶解因子もしくは抗血栓性因子、または抗炎症剤の副作用を最小限にし得る。
【００５７】
本発明の薬学的組成物は、単離されたＭＵ−１タンパク質が、他の薬学的に受容可能なキャリアに加えて、水溶液中に、ミセルとして凝集形態で存在する脂質のような両親媒性因子と組み合わせられるリポソーム、不溶性単層、液晶、または層状層（ｌａｍｅｌｌａｒ ｌａｙｅｒ）の形態中に存在し得る。リポソーム処方物のために適切な脂質としては、限定はしないが、モノグリセリド、ジグリセリド、スルファチド、リゾレシチン、リン脂質、サポニン、胆汁酸などが挙げられるがこれらに限定されない。このようなリポソーム処方物の調製は、例えば、米国特許第４，２３５，８７１号；米国特許第４，５０１，７２８号；米国特許第４，８３７，０２８号；および米国特許第４，７３７，３２３号（これらの全てが、本明細書において参考として援用されている）に記載のように、当業者のレベルの範囲内である。
【００５８】
本明細書において用いる場合、用語「治療的有効量」とは、意味のある患者の利点（例えば、このような状態の症状の改善、このような状態の治癒、またはこのような状態の治癒率の上昇）を示すのに十分である、この薬学的組成物の各々の活性成分の総量または方法を意味する。単独で投与された、個々の活性成分に対して適用される場合、この用語は、その成分単独をいう。組み合わせ（併用）に対して適用される場合、この用語は、組み合わせて投与されても、連続して投与されても、または同時に投与されても、治療効果を生じる活性成分の合わせた量をいう。
【００５９】
本発明の処置または使用の方法の実施において、治療的有効量の単離されたＭＵ−Ｉタンパク質が哺乳動物に投与される。単離されたＭＵ−１タンパク質は、単独でか、または他の治療（例えば、サイトカイン、リンホカイン、または他の造血因子を使用する処置）と組み合わせてのいずれかで、本発明の方法に従って投与され得る。１つ以上のサイトカイン、リンホカイン、または他の造血因子とともに同時投与される場合、ＭＵ−１タンパク質は、サイトカイン、リンホカイン、他の造血因子、血栓溶解因子もしくは抗血栓性因子と同時にか、または連続してのいずれかで投与され得る。連続的に投与される場合、主治医は、サイトカイン、リンホカイン、他の造血因子、血栓溶解因子もしくは抗血栓性因子と組み合わせた、ＭＵ−１タンパク質投与の適切な順序を決定する。
【００６０】
薬学的組成物において用いられるＭＵ−１タンパク質の投与、または本発明の本発明法を実施するために用いられるＭＵ−１タンパク質の投与は、従来の種々の方法（例えば、経口摂取、吸引、または皮膚注射、皮下注射、もしくは静脈注射）で実行され得る。患者に対する静脈投与が好ましい。
【００６１】
治療上有効な量のＭＵ−１タンパク質を経口的に投与する場合、ＭＵ−１タンパク質は、錠剤、カプセル、粉末、溶液、またはエリキシルの形態である。錠剤形態で投与される場合、本発明の薬学的組成物は、ゼラチンまたはアジュバントのような固体キャリアをさらに含み得る。この錠剤、カプセル、および粉末は、約５〜９５％のＭＵ−１タンパク質、そして好ましくは、約２５〜９０％のＭＵ−１タンパク質を含む。液体形態で投与される場合、液体キャリア（例えば、水、石油、動物もしくは植物起源の油脂（例えば、ピーナッツオイル、鉱油、ダイズ油、またはゴマ油）、または合成油）が添加され得る。この薬学的組成物の液体形態は、さらに、生理食塩水溶液、デキストロースもしくは他の糖溶液、またはグリコール（例えば、エチレングリコール、プロピレングリコール、またはポリエチレングリコール）を含み得る。液体形態で投与される場合、この薬学的組成物は、約０．５〜９０重量％のＭＵ−１タンパク質、そして好ましくは約１〜５０％のＭＵ−１タンパク質を含む。
【００６２】
治療上有効な量のＭＵ−１タンパク質を静脈注射、皮膚注射、または皮下注射によって投与する場合、ＭＵ−１タンパク質は、パイロジェン（発熱物質）のない、非経口的に受容可能な水溶液の形態である。このような非経口的に受容可能なタンパク質溶液（ｐＨによって、等張性、安定性などを有する）の調製は、当該分野の範囲内である。静脈注射、皮膚注射、または皮下注射のために好ましい薬学的組成物は、ＭＵ−１タンパク質に加えて、等張性ビヒクル（例えば、注射用塩化ナトリウム、注射用リンゲル液、注射用デキストロース、注射用デキストロースおよび塩化ナトリウム、注射用乳酸リンゲル液、または当該分野で公知の他のビヒクル）を含むべきである。本発明の薬学的組成物はまた、安定化剤、保存剤、緩衝液、抗酸化剤、または当業者に公知の他の添加物を含み得る。
【００６３】
本発明の薬学的組成物中のＭＵ−１タンパク質の量は、処置される状態の性質および重篤度、ならびに患者が以前に受けた事前処置の性質に依存する。結局、主治医が、各々の個々の患者を処置するＭＵ−１タンパク質の量を決定する。最初に、主治医は、低用量のＭＵ−１タンパク質を投与して、患者の反応を観察する。ＭＵ−１タンパク質のさらに高い用量を、患者に至適の治療効果が得られるまで投与し得るが、その時点でこの投薬量は、さらに漸増されることはない。本発明の方法を実施するために用いられる種々の薬学的組成物は、体重１ｋｇあたり、約０．１μｇ〜約１００ｍｇのＭＵ−１タンパク質を含むべきことが意図される。
【００６４】
本発明の薬学的組成物を用いる静脈内治療の期間は、処置される疾患の重篤度、ならびに各々の個々の患者の状態および可能性のある特有の応答に依存して変化する。ＭＵ−１タンパク質の各出願の期間は、１２〜２４時間の範囲の連続的静脈投与であることが意図される。結局、主治医は、本発明の薬学的組成物を用いて静脈治療の適切な期間を決定する。
【００６５】
本発明のポリヌクレオチドおよびタンパク質は、以下に同定された、１つ以上の用途または生物学的活性（本明細書に言及されるアッセイに関連するものを含む）を示すと期待される。本発明のタンパク質について記載された用途または活性は、このようなタンパク質の投与もしくは使用によって、またはこのようなタンパク質をコードするポリヌクレオチドの投与もしくは使用によって（例えば、遺伝子治療において、またはＤＮＡの導入に適切なベクターにおいて）、提供され得る。
【００６６】
（サイトカインおよび細胞増殖／細胞分化活性）
本発明のタンパク質は、サイトカイン活性、細胞増殖（誘導または阻害のいずれか）活性、もしくは細胞分化（誘導または阻害のいずれか）活性を示し得るか、または特定の細胞集団における他のサイトカインの産生を誘導し得る。
【００６７】
今日までに発見された多くのタンパク質因子（全ての公知のサイトカインを含む）は、１つ以上の因子依存性細胞増殖アッセイにおいて活性を示しており、従って、このアッセイは、サイトカイン活性の都合のよい確証として機能する。本発明のタンパク質の活性は、以下：３２Ｄ、ＤＡ２、ＤＡ１Ｇ、Ｔ１０、Ｂ９、Ｂ９／１１、ＢａＦ３、ＭＣ９／Ｇ、Ｍ＋（プレＢ Ｍ＋）、２Ｅ８、ＲＢ５、ＤＡ１、１２３、Ｔ１１６５、ＨＴ２、ＣＴＬＬ２、ＴＦ−１、Ｍｏ７ｅ、およびＣＭＫを含むがこれらに限定されない細胞株についての多数の慣用的な因子依存性細胞増殖アッセイのいずれか１つによって証明されている。
【００６８】
ｈｕＥＰＯＲ−ｈｕＭＵキメラレセプターを発現するＢＡＦ−３細胞は、ｈｕＥＰＯに応答して増殖する。ＭＵレセプターが、その細胞質ドメインを通じてシグナル伝達する能力を試験するために、ＢＡＦ−３細胞を操作して、ＥＰＯｒ／ＭＵ（ｃｙｔｏ）キメラレセプターを発現し、そしてＥＰＯの存在下における３Ｈチミジンの取り込みについてアッセイした。インタクトなＥＰＯｒ分子を発現するＢＡＦ−３細胞は、ＥＰＯに応答して増殖するが、親のＢＡＦ−３細胞は増殖しない。Ａ５クローン（キメラＥＰＯｒ／ＭＵ（ｃｙｔｏ）を保有する）は、ＥＰＯに応答して増殖し、このことは、ＭＵ−１の細胞質部分が、増殖シグナルを保持し得ることを実証する。ＢＡＦ−３細胞（その表面上でＥＰＯｒを発現する）はまた、ＥＰＯに応答する。
【００６９】
本発明のタンパク質の活性は、他にも方法はあるが、以下の方法によって測定され得る：
Ｔ細胞または胸腺細胞の増殖についてのアッセイとしては、以下に記載されるアッセイが、これらに制限することなく挙げられる：Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，Ｊ．Ｅ．Ｃｏｌｉｇａｎ，Ａ．Ｍ．Ｋｒｕｉｓｂｅｅｋ，Ｄ．Ｈ．Ｍａｒｇｕｌｉｅｓ，Ｅ．Ｍ．Ｓｈｅｖａｃｈ，Ｗ Ｓｔｒｏｂｅｒ編，Ｐｕｂ．Ｇｒｅｅｎｅ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ａｓｓｏｃｉａｔｅｓ ａｎｄ Ｗｉｌｅｙ−Ｉｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅ（第３章、Ｉｎ Ｖｉｔｒｏ ａｓｓａｙｓ ｆｏｒ Ｍｏｕｓｅ Ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅ Ｆｕｎｃｔｉｏｎ ３．１−３．１９；第７章、Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃ ｓｔｕｄｉｅｓ ｉｎ Ｈｕｍａｎｓ）；Ｔａｋａｉら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１３７：３４９４−３５００，１９８６；Ｂｅｒｔａｇｎｏｌｌｉら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４５：１７０６−１７１２，１９９０；Ｂｅｒｔａｇｎｏｌｌｉら、Ｃｅｌｌｕｌａｒ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ １３３：３２７−３４１，１９９１；Ｂｅｒｔａｇｎｏｌｌｉら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４９：３７７８−３７８３，１９９２；Ｂｏｗｍａｎら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５２：１７５６−１７６１，１９９４。
【００７０】
脾細胞、リンパ節細胞、または胸腺細胞のサイトカイン産生および／または増殖についてのアッセイとしては、以下に記載されるアッセイが、これらに制限することなく挙げられる：Ｐｏｌｙｃｌｏｎａｌ Ｔ ｃｅｌｌ ｓｔｉｍｕｌａｔｉｏｎ，Ｋｒｕｉｓｂｅｅｋ，Ａ．Ｍ．およびＳｈｅｖａｃｈ，Ｅ．Ｍ．Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ．Ｊ．Ｅ．ｅ．ａ．Ｃｏｌｉｇａｎ編、第１巻、３．１２．１−３．１２．１４頁、Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ａｎｄ Ｓｏｎｓ，Ｔｏｒｏｎｔｏ．１９９４；ならびにＭｅａｓｕｒｅｍｅｎｔ ｏｆ ｍｏｕｓｅ ａｎｄ ｈｕｍａｎ Ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ γ，Ｓｃｈｒｅｉｂｅｒ，Ｒ．Ｄ．Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ．Ｊ．Ｅ．ｅ．ａ．Ｃｏｌｉｇａｎ編、第１巻、６．８．１−６．８．８頁、Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ａｎｄ Ｓｏｎｓ，Ｔｏｒｏｎｔｏ．１９９４。
【００７１】
造血細胞およびリンパ球産生細胞の増殖および分化についてのアッセイとしては、以下に記載されるアッセイが、これらに制限することなく挙げられる：Ｍｅａｓｕｒｅｍｅｎｔ ｏｆ Ｈｕｍａｎ ａｎｄ Ｍｕｒｉｎｅ Ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ ２ ａｎｄ Ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ ４，Ｂｏｔｔｏｍｌｙ，Ｋ．，Ｄａｖｉｓ，Ｌ．Ｓ．およびＬｉｐｓｋｙ，Ｐ．Ｅ．Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ．Ｊ．Ｅ．ｅ．ａ．Ｃｏｌｉｇａｎ編、第１巻、６．３．１−６．３．１２頁、Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ａｎｄ Ｓｏｎｓ，Ｔｏｒｏｎｔｏ．１９９１；ｄｅＶｒｉｅｓら、Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１７３ ：１２０５−１２１１，１９９１；Ｍｏｒｅａｕら、Ｎａｔｕｒｅ ３３６：６９０−６９２，１９８８；Ｇｒｅｅｎｂｅｒｇｅｒら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．８０：２９３１−２９３８，１９８３；Ｍｅａｓｕｒｅｍｅｎｔ ｏｆ ｍｏｕｓｅ ａｎｄ ｈｕｍａｎ ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ ６−Ｎｏｒｄａｎ，Ｒ．Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ
ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ．Ｊ．Ｅ．ｅ．ａ．Ｃｏｌｉｇａｎ編、第１巻、６．６．１−６．６．５頁、Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ａｎｄ Ｓｏｎｓ，Ｔｏｒｏｎｔｏ．１９９１；Ｓｍｉｔｈら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．８３：１８５７−１８６１，１９８６；Ｍｅａｓｕｒｅｍｅｎｔ ｏｆ ｈｕｍａｎ Ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ １１−Ｂｅｎｎｅｔｔ，Ｆ．，Ｇｉａｎｎｏｔｔｉ，Ｊ．，Ｃｌａｒｋ，Ｓ．Ｃ．およびＴｕｒｎｅｒ，Ｋ．Ｊ．Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ．Ｊ．Ｅ．ｅ．ａ．Ｃｏｌｉｇａｎ編、第１巻、６．１５．１頁、Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ａｎｄ Ｓｏｎｓ，Ｔｏｒｏｎｔｏ．１９９１；Ｍｅａｓｕｒｅｍｅｎｔ ｏｆ
ｍｏｕｓｅ ａｎｄ ｈｕｍａｎ Ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ ９−Ｃｉａｒｌｅｔｔａ，Ａ．，Ｇｉａｎｎｏｔｔｉ，Ｊ．，Ｃｌａｒｋ，Ｓ．Ｃ．およびＴｕｒｎｅｒ，Ｋ．Ｊ．Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ．Ｊ．Ｅ．ｅ．ａ．Ｃｏｌｉｇａｎ編、第１巻、６．１３．１頁、Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ａｎｄ Ｓｏｎｓ，Ｔｏｒｏｎｔｏ．１９９１。
【００７２】
抗原に対するＴ細胞クローンの応答についてのアッセイ（とりわけ、ＡＰＣ−Ｔ細胞相互作用に影響する、ならびにＴ細胞効果を指向するタンパク質を、増殖およびサイトカイン産生を測定することにより同定する）としては、以下に記載されるアッセイが、これらに制限することなく挙げられる：Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，Ｊ．Ｅ．Ｃｏｌｉｇａｎ，Ａ．Ｍ．Ｋｒｕｉｓｂｅｅｋ，Ｄ．Ｈ．Ｍａｒｇｕｌｉｅｓ，Ｅ．Ｍ．Ｓｈｅｖａｃｈ，Ｗ Ｓｔｒｏｂｅｒ編、Ｐｕｂ．Ｇｒｅｅｎｅ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ａｓｓｏｃｉａｔｅｓ ａｎｄ Ｗｉｌｅｙ−Ｉｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅ（第３章、Ｉｎ Ｖｉｔｒｏ ａｓｓａｙｓ ｆｏｒ Ｍｏｕｓｅ Ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅ Ｆｕｎｃｔｉｏｎ；第６章、Ｃｙｔｏｋｉｎｅｓ ａｎｄ ｔｈｅｉｒ ｃｅｌｌｕｌａｒ ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ；第７章、Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃ ｓｔｕｄｉｅｓ ｉｎ Ｈｕｍａｎｓ）；Ｗｅｉｎｂｅｒｇｅｒら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ７７：６０９１−６０９５，１９８０；Ｗｅｉｎｂｅｒｇｅｒら、Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎ．１１：４０５−４１１，１９８１；Ｔａｋａｉら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１３７：３４９４−３５００，１９８６；Ｔａｋａｉら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４０：５０８−５１２，１９８８。
【００７３】
（免疫刺激活性または免疫抑制活性）
本発明のタンパク質はまた、免疫刺激活性または免疫抑制活性（その活性に対するアッセイが本明細書中に記載される活性が挙げられるが、これらに限定されない）を示し得る。タンパク質は、種々の免疫不全および障害（重症複合型免疫不全（ＳＣＩＤ）を含む）の処置において（例えば、Ｔリンパ球および／またはＢリンパ球の成長および増殖の調節（上方または下方）、ならびにＮＫ細胞および他の細胞集団の細胞溶解活性の誘導において）有用であり得る。これらの免疫不全は、遺伝的であり得るか、またはウイルス（例えば、ＨＩＶ）および細菌もしくは真菌の感染によって引き起こされ得るか、あるいは自己免疫障害から生じ得る。より具体的には、ウイルス、細菌、真菌または他の感染（ＨＩＶ、肝炎ウイルス、ヘルペスウイルス、ミコバクテリア、Ｌｅｉｓｈｍａｎｉａ ｓｐｐ．、マラリアｓｐｐ．による感染、およびカンジダ症のような種々の真菌感染が挙げられる）によって引き起こされる感染性疾患は、本発明のタンパク質を使用して、処置可能であり得る。もちろん、これに関して、本発明のタンパク質はまた、免疫系に対するブーストが一般的に所望であり得る場合に（すなわち、癌の処置において）有用であり得る。
【００７４】
本発明のタンパク質を使用して処置され得る自己免疫障害としては、例えば、結合組織疾患、多発性硬化症、全身性エリテマトーデス、慢性関節リウマチ、自己免疫肺炎症、ギヤン−バレー症候群、自己免疫性甲状腺炎、インスリン依存性糖尿病、筋無力症、対宿主性移植片病および自己免疫炎症性眼疾患が挙げられる。本発明のこのようなタンパク質はまた、アレルギー性の反応および状態（例えば、喘息（特に、アレルギー性喘息））または他の呼吸の問題の処置において、有用であり得る。免疫抑制が所望である他の状態（例えば、器官移植が挙げられる）もまた、本発明のタンパク質を使用して処置可能であり得る。
【００７５】
ＭＵ−１ ＤＮＡはまた、クローン病に対する染色体遺伝子座をマッピングする。その結果、本発明のタンパク質は、クローン病および他の炎症性腸疾患を処置するために、使用され得る。
【００７６】
本発明のタンパク質を使用して、免疫応答を多数の様式で調節することもまた可能であり得る。ダウンレギュレーションは、既に進行している免疫応答を阻害またはブロックする形態であり得るか、あるいは免疫応答の誘導の防止を包含し得る。活性化Ｔ細胞の機能は、Ｔ細胞応答を抑制することによってか、またはＴ細胞における特異的耐性を誘導することによってか、あるいはその両方によって、阻害され得る。Ｔ細胞応答の免疫抑制は、一般に、活性な、非抗原特異的なプロセスであり、このプロセスは、抑制因子に対するＴ細胞の連続的な曝露を必要とする。耐性（これは、Ｔ細胞における非応答性またはアネルギーの誘導を伴う）は、一般的に抗原特異性である点、および耐性化因子への曝露が終了した後にも持続する点で、免疫抑制から区別可能である。機能上、耐性は、耐性化因子の非存在下での特異的抗原への再曝露の際の、Ｔ細胞応答の欠如によって、実証され得る。
【００７７】
１つ以上の抗原機能（Ｂリンパ球抗原機能（例えば、Ｂ７のような）が挙げられるが、これらに限定されない）のダウンレギュレーションまたは防止（例えば、活性化Ｔ細胞による高レベルのリンホカイン合成の防止）は、組織、皮膚および器官の移植の状況において、ならびに対宿主性移植片病（ＧＶＨＤ）において、有用である。例えば、Ｔ細胞機能のブロックは、組織移植において、組織破壊の低下を生じるはずである。代表的に、組織移植において、移植物の拒絶は、Ｔ細胞によるその移植物の外来物質としての認識を介して開始され、続いて、この移植物を破壊する免疫反応が起こる。Ｂ７リンパ球抗原の、その天然のリガンドとの相互作用を阻害またはブロックする分子を（例えば、Ｂ７−２活性を有するペプチドの可溶性の単量体形態を、単独でか、あるいは別のＢリンパ球抗原（例えば、Ｂ７−１、Ｂ７−３）の活性を有するペプチドの単量体形態または遮断抗体と組合せて）免疫細胞に、移植前に投与することによって、その天然のリガンドに対するその分子の結合が、その免疫細胞において、対応する同時刺激信号を伝達することなくもたらされ得る。この様式で、Ｂリンパ球抗原機能をブロックすることにより、免疫細胞（例えば、Ｔ細胞）によるサイトカイン合成が防止され、従って、免疫抑制剤として作用する。さらに、同時刺激の欠如はまた、Ｔ細胞をアネルギー化し、これによって被験体において耐性を誘導するに十分であり得る。Ｂリンパ球抗原ブロック試薬による、長期間の耐性の誘導は、これらのブロッキング試薬のたびたびの投与の必要性を回避し得る。十分な免疫抑制または耐性を被験体において達成するためには、Ｂリンパ球抗原の組み合わせの機能をブロックすることもまた必要であり得る。
【００７８】
器官移植拒絶またはＧＶＨＤの予防における、特定のブロッキング試薬の効力は、ヒトにおける効力を予測可能な動物モデルを使用して、評価され得る。使用され得る適切な系の例としては、ラットにおける同種異型の心臓移植片およびマウスにおける異種のランゲルハンス島細胞移植片が挙げられ、これらの両方は、Ｌｅｎｓｃｈｏｗら、Ｓｃｉｅｎｃｅ ２５７：７８９−７９２（１９９２）およびＴｕｒｋａら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ ＵＳＡ，８９：１１１０２−１１１０５（１９９２）に記載されるように、インビボでのＣＴＬＡ４Ｉｇ融合タンパク質の免疫抑制効果を試験するために使用された。さらに、ＧＶＨＤのマウスモデル（Ｐａｕｌ編、Ｆｕｎｄａｍｅｎｔａｌ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，Ｒａｖｅｎ Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，１９８９，８４６−８４７頁を参照のこと）は、インビボでのＢリンパ球抗原機能のブロックの、この疾患の発達に対する影響を決定するために、使用され得る。
【００７９】
抗原機能をブロックすることはまた、自己免疫疾患を処置するために治療的に有用であり得る。多くの自己免疫障害は、自己組織に対して反応性であり、そしてこれらの疾患の病理に関与するサイトカインおよび自己抗原の産生を促進する、Ｔ細胞の不適切な活性化の結果である。自己反応性Ｔ細胞の活性化の防止は、疾患の症状を低下または排除し得る。Ｂリンパ球抗原のレセプター：リガンド相互作用を妨害することによってＴ細胞の同時刺激をブロックする試薬の投与を使用して、Ｔ細胞の活性化を阻害し得、そしてこの疾患プロセスに関与し得る自己抗原またはＴ細胞由来のサイトカインの産生を防止し得る。さらに、ブロッキング試薬は、自己反応性Ｔ細胞の抗原特異的耐性を誘導し得、このことは、疾患の長期間の軽減をもたらし得る。自己免疫障害の予防または軽減におけるブロッキング試薬の効力は、ヒト自己免疫疾患の十分に特徴付けられた多数の動物モデルを使用して、決定され得る。例としては、マウス実験的自己免疫性脳脊髄炎、ＭＲＬ／ｌｐｒ／ｌｐｒマウスまたはＮＺＢハイブリッドマウスにおける全身性エリテマトーデス、マウス自己免疫性コラーゲン関節炎、ＮＯＤマウスおよびＢＢラットにおける真性糖尿病、ならびにマウス実験的重症筋無力症が挙げられる（Ｐａｕｌ編、Ｆｕｎｄａｍｅｎｔａｌ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，Ｒａｖｅｎ Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，１９８９，８４０−８５６頁を参照のこと）。
【００８０】
免疫応答をアップレギュレートする手段としての抗原機能（好ましくは、Ｂリンパ球抗原機能）のアップレギュレーションはまた、治療において有用であり得る。免疫応答のアップレギュレーションは、既存の免疫応答の増大または最初の免疫応答の誘発の形態であり得る。例えば、Ｂリンパ球抗原機能の刺激を介する免疫応答の増大は、ウイルス感染の場合に有用であり得る。さらに、全身性ウイルス疾患（例えば、インフルエンザ、感冒、および脳炎）は、Ｂリンパ球抗原の刺激性形態を全身的に投与することによって緩和され得る。
【００８１】
あるいは、抗ウイルス免疫応答は、患者からのＴ細胞の除去、本発明のペプチドを発現するウイルス抗原パルスＡＰＣで、または本発明の可溶性ペプチドの刺激性形態と共にウイルス抗原パルスＡＰＣでのいずれかでの、インビトロでのＴ細胞の同時刺激、およびインビトロで活性化されたＴ細胞のこの患者への再導入によって、感染した患者において増大され得る。抗ウイルス免疫応答を増大する別の方法は、感染した細胞を患者から単離し、これらの細胞を、本明細書中に記載される本発明のタンパク質をコードする核酸で、この細胞がその表面上にこのタンパク質の全てまたは一部を発現するようにトランスフェクトし、そしてこのトランスフェクトした細胞を患者に再導入することである。感染した細胞は、ここで同時刺激シグナルをインビボでＴ細胞に送達し得、そしてこれによってＴ細胞を活性化し得る。
【００８２】
別の適用において、抗原機能（好ましくは、Ｂリンパ球抗原機能）のアップレギュレーションまたは増大は、腫瘍免疫の誘導において有用であり得る。本発明の少なくとも１つのペプチドをコードする核酸でトランスフェクトされた腫瘍細胞（例えば、肉腫、黒色腫、リンパ腫、白血病、神経芽細胞腫、癌）は、被験体における腫瘍特異的耐性を克服するために、被験体に投与され得る。所望の場合、この腫瘍細胞は、ペプチドの組み合わせを発現するためにトランスフェクトされ得る。例えば、患者から得られる腫瘍細胞は、Ｂ７−２様活性を単独で有するペプチドの発現、またはＢ７−１様活性および／もしくはＢ７−３様活性を有するペプチドと関連した発現を指向する発現ベクターを用いて、エキソビボでトランスフェクトされ得る。このトランスフェクトされた腫瘍細胞は患者に戻されて、このトランスフェクトされた細胞の表面上でのこのペプチドの発現を生じる。あるいは、遺伝子治療技術が、インビボでのトランスフェクションのための腫瘍細胞を標的するために使用され得る。
【００８３】
腫瘍細胞の表面上での、Ｂリンパ球抗原の活性を有する本発明のペプチドの存在は、トランスフェクトされた腫瘍細胞に対するＴ細胞媒介免疫応答を誘導するために必要な同時刺激シグナルを、Ｔ細胞に提供する。さらに、ＭＨＣクラスＩ分子またはＭＨＣクラスＩＩ分子を欠いた腫瘍細胞、あるいは十分な量のＭＨＣクラスＩ分子またはＭＨＣクラスＩＩ分子を再発現できない腫瘍細胞は、ＭＨＣクラスＩα鎖タンパク質およびβ２ミクログロブリンタンパク質またはＭＨＣクラスＩＩα鎖タンパク質およびＭＨＣクラスＩＩβ鎖タンパク質の全てまたは一部（例えば、細胞質ドメインの短縮部分）をコードする核酸でトランスフェクトされ得、これによってＭＨＣクラスＩまたはＭＨＣクラスＩＩタンパク質を細胞表面に発現する。Ｂリンパ球抗原（例えば、Ｂ７−１、Ｂ７−２、Ｂ７−３）の活性を有するペプチドと関連しての、適切なクラスＩまたはクラスＩＩ ＭＨＣの発現は、トランスフェクトされた腫瘍細胞に対するＴ細胞媒介免疫応答を誘導する。必要に応じて、ＭＨＣクラスＩＩ関連タンパク質（例えば、不変の鎖）の発現をブロックするアンチセンス構築物をコードする遺伝子はまた、Ｂリンパ球抗原の活性を有するペプチドをコードするＤＮＡで同時トランスフェクトされ得、腫瘍関連抗原の提示を促進し、そして腫瘍特異的免疫を誘導する。従って、ヒト被験体におけるＴ細胞媒介免疫応答の誘導は、この被験体における腫瘍特異的耐性を克服するために十分であり得る。
【００８４】
本発明のタンパク質の活性は、他の手段の中でも、以下の方法によって測定され得る：
胸腺細胞または脾細胞の細胞傷害性についての適切なアッセイとしては、以下に記載されるものが挙げられるが、これらに限定されない：Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，Ｊ．Ｅ．Ｃｏｌｉｇａｎ編，Ａ．Ｍ．Ｋｒｕｉｓｂｅｅｋ，Ｄ．Ｈ．Ｍａｒｇｕｌｉｅｓ，Ｅ．Ｍ．Ｓｈｅｖａｃｈ，Ｗ Ｓｔｒｏｂｅｒ，Ｐｕｂ．Ｇｒｅｅｎｅ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ａｓｓｏｃｉａｔｅｓ ａｎｄ Ｗｉｌｅｙ−Ｉｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅ（Ｃｈａｐｔｅｒ ３，Ｉｎ Ｖｉｔｒｏ ａｓｓａｙｓ ｆｏｒ Ｍｏｕｓｅ Ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅ Ｆｕｎｃｔｉｏｎ ３．１−３．１９；Ｃｈａｐｔｅｒ ７，Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃ ｓｔｕｄｉｅｓ ｉｎ Ｈｕｍａｎｓ）；Ｈｅｒｒｍａｎｎら，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ７８：２４８８−２４９２，１９８１；Ｈｅｒｒｍａｎｎら，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１２８：１９６８−１９７４，１９８２；Ｈａｎｄａら，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１３５：１５６４−１５７２，１９８５；Ｔａｋａｉら，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１３７：３４９４−３５００，１９８６；Ｔａｋａｉら，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４０：５０８−５１２，１９８８；Ｈｅｒｒｍａｎｎら，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ７８：２４８８−２４９２，１９８１；Ｈｅｒｒｍａｎｎら，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１２８：１９６８−１９７４，１９８２；Ｈａｎｄａら，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１３５：１５６４−１５７２，１９８５；Ｔａｋａｉら，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１３７：３４９４−３５００，１９８６；Ｂｏｗｍａｎら，Ｊ．Ｖｉｒｏｌｏｇｙ ６１：１９９２−１９９８；Ｔａｋａｉら，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４０：５０８−５１２，１９８８；Ｂｅｒｔａｇｎｏｌｌｉら，Ｃｅｌｌｕｌａｒ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ １３３：３２７−３４１，１９９１；Ｂｒｏｗｎら，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５３：３０７９−３０９２，１９９４。
【００８５】
Ｔ細胞依存性免疫グロブリン応答およびアイソタイプのスイッチングについてのアッセイ（これは、とりわけ、Ｔ細胞依存性抗体応答を調節しそしてＴｈ１／Ｔｈ２プロフィールに影響するタンパク質を同定する）としては、以下に記載されるものが挙げられるが、これらに限定されない：Ｍａｌｉｓｚｅｗｓｋｉ，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４４：３０２８−３０３３，１９９０；ならびにＡｓｓａｙｓ ｆｏｒ Ｂ ｃｅｌｌ ｆｕｎｃｔｉｏｎ：Ｉｎ ｖｉｔｒｏ ａｎｔｉｂｏｄｙ ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ，Ｍｏｎｄ，Ｊ．Ｊ．およびＢｒｕｎｓｗｉｃｋ，Ｍ．、Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ．Ｊ．Ｅ．ｅ．ａ．Ｃｏｌｉｇａｎ編，Ｖｏｌ １，ｐｐ．３．８．１−３．８．１６，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ａｎｄ Ｓｏｎｓ，Ｔｏｒｏｎｔｏ．１９９４。
【００８６】
混合リンパ球反応（ＭＬＲ）アッセイ（これは、とりわけ、主にＴｈ１およびＣＴＬ応答を生成するタンパク質を同定する）としては、以下に記載されるものが挙げられるが、これらに限定されない：Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ
ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，Ｊ．Ｅ．Ｃｏｌｉｇａｎ編，Ａ．Ｍ．Ｋｒｕｉｓｂｅｅｋ，Ｄ．Ｈ．Ｍａｒｇｕｌｉｅｓ，Ｅ．Ｍ．Ｓｈｅｖａｃｈ，Ｗ Ｓｔｒｏｂｅｒ，Ｐｕｂ．Ｇｒｅｅｎｅ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ａｓｓｏｃｉａｔｅｓ ａｎｄ Ｗｉｌｅｙ−Ｉｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅ（Ｃｈａｐｔｅｒ ３，Ｉｎ Ｖｉｔｒｏ ａｓｓａｙｓ ｆｏｒ Ｍｏｕｓｅ Ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅ
Ｆｕｎｃｔｉｏｎ ３．１−３．１９；Ｃｈａｐｔｅｒ ７，Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃ ｓｔｕｄｉｅｓ ｉｎ Ｈｕｍａｎｓ）；Ｔａｋａｉら，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１３７：３４９４−３５００，１９８６；Ｔａｋａｉら，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４０：５０８−５１２，１９８８；Ｂｅｒｔａｇｎｏｌｌｉら，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４９：３７７８−３７８３，１９９２。
【００８７】
樹状細胞依存性アッセイ（これは、とりわけ、ネイティブのＴ細胞を活性化する樹状細胞によって発現されるタンパク質を同定する）としては、以下に記載されるものが挙げられるが、これらに限定されない：Ｇｕｅｒｙら，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１３４：５３６−５４４，１９９５；Ｉｎａｂａら，Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ １７３：５４９−５５９，１９９１；Ｍａｃａｔｏｎｉａら，Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ １５４：５０７１−５０７９，１９９５；Ｐｏｒｇａｄｏｒら，Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ １８２：２５５−２６０，１９９５；Ｎａｉｒら，Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｖｉｒｏｌｏｇｙ ６７：４０６２−４０６９，１９９３；Ｈｕａｎｇら，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２６４：９６１−９６５，１９９４；Ｍａｃａｔｏｎｉａら，Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ １６９：１２５５−１２６４，１９８９；Ｂｈａｒｄｗａｊら，Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｏｎ ９４：７９７−８０７，１９９４；およびＩｎａｂａら，Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ １７２：６３１−６４０，１９９０。
【００８８】
リンパ球の生存／アポトーシスについてのアッセイ（これは、とりわけ、スーパー抗原誘導後にアポトーシスを防止するタンパク質およびリンパ球のホメオスタシスを調節するタンパク質を同定する）としては、以下に記載されるものが挙げられるが、これらに限定されない：Ｄａｒｚｙｎｋｉｅｗｉｃｚら，Ｃｙｔｏｍｅｔｒｙ １３：７９５−８０８，１９９２；Ｇｏｒｃｚｙｃａら，Ｌｅｕｋｅｍｉａ ７：６５９−６７０，１９９３；Ｇｏｒｃｚｙｃａら，Ｃａｎｃｅｒ
Ｒｅｓｅａｒｃｈ ５３：１９４５−１９５１，１９９３；Ｉｔｏｈら，Ｃｅｌｌ ６６：２３３−２４３，１９９１；Ｚａｃｈａｒｃｈｕｋ，Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ １４５：４０３７−４０４５，１９９０；Ｚａｍａｉら，Ｃｙｔｏｍｅｔｒｙ １４：８９１−８９７，１９９３；Ｇｏｒｃｚｙｃａら，Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｏｎｃｏｌｏｇｙ １：６３９−６４８，１９９２。
【００８９】
Ｔ細胞の拘束および発生の初期段階に影響するタンパク質についてのアッセイとしては、以下に記載されるものが挙げられるが、これらに限定されない：Ａｎｔｉｃａら，Ｂｌｏｏｄ ８４：１１１−１１７，１９９４；Ｆｉｎｅら，Ｃｅｌｌｕｌｅｒ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ １５５：１１１−１２２，１９９４；Ｇａｌｙら，Ｂｌｏｏｄ ８５：２７７０−２７７８，１９９５；Ｔｏｋｉら，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ．Ａｃａｄ Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８８：７５４８−７５５１，１９９１。
【００９０】
本発明のＭＵ−１分子はまた、ＳＴＡＴ活性（例えば、シグナル伝達）の調節（例えば、ＳＴＡＴ分子（例えば、ＳＴＡＴ３および／またはＳＴＡＴ５）との相互作用を介する調節、およびＳＴＡＴリン酸化の調節）に関与する。ＳＴＡＴのシグナル伝達のモジュレーター、およびＳＴＡＴ分子とのＭＵ−１の相互作用のモジュレーターは、本明細書中に記載されるスクリーニングアッセイを介して同定され得る。
【００９１】
ＭＵ−１活性のモジュレーターを同定するために使用され得るアッセイとしては、ＳＴＡＴ活性（例えば、ＳＴＡＴシグナル伝達）についてのアッセイ（例えば、当該分野で公知のアッセイおよび本明細書中に記載されるアッセイ）が挙げられる。ＳＴＡＴ活性についてのアッセイはまた、例えば、Ｆｒｉｅｄｒｉｃｈ
Ｋ．ら（２００１）Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ ３８２（２）：３４３−５１に記載される。ＳＴＡＴ活性についての他のアッセイとしては、細胞増殖およびＳＴＡＴリン酸化についてのアッセイが挙げられる。
【００９２】
１つの局面において、ＭＵ−１活性のモジュレーターについてのアッセイは、細胞ベースのアッセイ（ここで、ＭＵ−１タンパク質またはその生物学的に活性な部分を発現する細胞が、試験化合物と接触され、そしてこの試験化合物がＭＵ−１活性を調節する能力（例えば、ＳＴＡＴ分子との相互作用またはＳＴＡＴシグナル伝達の調節）が決定される）である。試験化合物がＭＵ−１活性を調節する能力の決定は、例えば、ＳＴＡＴシグナル伝達、ＳＴＡＴ分子のリン酸化、細胞増殖、細胞の分化、またはサイトカインの産生をモニターすることによって達成され得る。この細胞は、例えば、哺乳動物起源の細胞（例えば、活性化Ｔ細胞）であり得る。
【００９３】
（造血調節活性）
本発明のタンパク質は、造血の調節において、従って骨髄性細胞またはリンパ球様細胞の欠失の処置において有用であり得る。コロニー形成細胞または因子依存性細胞株の支持における辺縁の生物学的な活性でさえ、以下の造血の調節への関与を示す：例えば、赤血球系前駆細胞の成長および増殖を単独または他のサイトカインと組み合わせて支持し、これにより、例えば、種々の貧血症の処置、または赤血球系前駆体細胞および／または赤血球系細胞の産生を刺激するための照射／化学療法と組み合わせた使用の有用性を示すこと；例えば、結果的に骨髄の抑制を予防または処置するための化学療法と組み合わせて有用な、骨髄性細胞（例えば、有用な顆粒球および単球／マクロファージ）の成長および増殖を支持すること（すなわち、古典的なＣＳＦ活性）；巨核球および結果的に血小板の成長および増殖を支持し、これにより、血小板減少症のような種々の血小板障害の予防または処置、および一般に、血小板の輸血の代わりにまたは補充での使用を可能にすること；ならびに／または上記の任意および全ての造血細胞に成熟し得る造血幹細胞の成長および増殖を支持すること。これにより種々の幹細胞の障害（例えば、移植を用いて処置される障害（これには、再生不良性貧血および発作性夜間血色素尿症が挙げられるが、これらに限定されない））、および正常な細胞または遺伝子治療のために遺伝子操作された細胞として、インビボまたはエキソビボのいずれかで（すなわち、骨髄移植と組み合わせるかまたは辺縁の前駆体細胞（相同性または非相同性）の移植を用いて）、照射／化学療法後に幹細胞のコンパートメントを再増殖することでの治療利用を見出す。
【００９４】
本発明のタンパク質の活性は、とりわけ、以下の方法によって測定され得る。
【００９５】
種々の造血株の増殖および分化のための適切なアッセイは、上に挙げられる。
【００９６】
胚幹細胞の分化についてのアッセイ（このアッセイにより、とりわけ、胚性分化造血に影響を及ぼすタンパク質を同定する）としては、以下に記載されるアッセイが挙げられるが、これらに限定されない：Ｊｏｈａｎｓｓｏｎら、Ｃｅｌｌｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ １５：１４１−１５１、１９９５；Ｋｅｌｌｅｒら、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ａｎｄ Ｃｅｌｌｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ １３：４７３−４８６、１９９３；ＭｃＣｌａｎａｈａｎら、Ｂｌｏｏｄ ８１：２９０３−２９１５、１９９３。
【００９７】
幹細胞の生存および分化についてのアッセイ（このアッセイにより、とりわけ、リンパ−造血を調節するタンパク質を同定する）としては、以下に記載されるアッセイが挙げられるが、これらに限定されない：Ｍｅｔｈｙｌｃｅｌｌｕｌｏｓｅ ｃｏｌｏｎｙ ｆｏｒｍｉｎｇ ａｓｓａｙｓ、Ｆｒｅｓｈｎｅｙ、Ｍ．Ｇ．、Ｃｕｌｔｕｒｅ ｏｆ Ｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃ Ｃｅｌｌｓ．Ｒ．Ｉ．Ｆｒｅｓｈｎｅｙら編、第２６５〜２６８頁、Ｗｉｅｌｙ−Ｌｉｓｓ，Ｉｎｃ．、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ、ＮＹ．１９９４；Ｈｉｒａｙａｍａら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８９：５９０７−５９１１、１９９２；Ｐｒｉｍｉｔｉｖｅ ｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃ ｃｏｌｏｎｙ ｆｏｒｍｉｎｇ ｃｅｌｌｓ ｗｉｔｈ ｈｉｇｈ ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｖｅ ｐｏｔｅｎｔｉａｌ、ＭｃＮｉｅｃｅ、Ｉ．Ｋ．およびＢｒｉｄｄｅｌｌ，Ｒ．Ａ．、Ｃｕｌｔｕｒｅ ｏｆ Ｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃ Ｃｅｌｌｓ、Ｒ．Ｉ．Ｆｒｅｓｈｎｅｙら編、第２３〜３９頁、Ｗｉｌｅｙ−Ｌｉｓｓ，Ｉｎｃ．、Ｎｅｗ
Ｙｏｒｋ，ＮＹ．１９９４；Ｎｅｂｅｎら、Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ Ｈｅｍａｔｏｌｏｇｙ ２２：３５３−３５９、１９９４；Ｃｏｂｂｌｅｓｔｏｎｅ
ａｒｅａ ｆｏｒｍｉｎｇ ｃｅｌｌ ａｓｓａｙ、Ｐｌｏｅｍａｃｈｅｒ、Ｒ．Ｅ．、Ｃｕｌｔｕｒｅ ｏｆ Ｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃ Ｃｅｌｌｓ．Ｒ．Ｉ．Ｆｒｅｓｈｎｅｙら編、第１〜２１頁、Ｗｉｌｅｙ−Ｌｉｓｓ，Ｉｎｃ．、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，ＮＹ．１９９４；Ｌｏｎｇ ｔｅｒｍ ｂｏｎｅ ｍａｒｒｏｗ ｃｕｌｔｕｒｅｓ ｉｎ ｔｈｅ ｐｒｅｓｅｎｃｅ ｏｆ ｓｔｒｏｍａｌ ｃｅｌｌｓ、Ｓｐｏｏｎｃｅｒ，Ｅ．、Ｄｅｘｔｅｒ，Ｍ．およびＡｌｌｅｎ，Ｔ、Ｃｕｌｔｕｒｅ ｏｆ Ｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃ Ｃｅｌｌｓ、Ｒ．Ｉ．Ｆｒｅｓｈｎｅｙら編、第１６３〜１７９頁、Ｗｉｌｅｙ−Ｌｉｓｓ，Ｉｎｃ．、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，ＮＹ．１９９４；Ｌｏｎｇ ｔｅｒｍ ｃｕｌｔｕｒｅ ｉｎｉｔｉａｔｉｎｇ ｃｅｌｌ ａｓｓａｙ、Ｓｕｔｈｅｒｌａｎｄ，Ｈ．Ｊ．、Ｃｕｌｔｕｒｅ ｏｆ Ｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃ Ｃｅｌｌｓ、Ｒ．Ｉ．Ｆｒｅｓｈｎｅｙら編、第１３９〜１６２頁、Ｗｉｌｅｙ−Ｌｉｓｓ，Ｉｎｃ．、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，ＮＹ．１９９４。
【００９８】
（リサーチの使用および有用性）
本発明により提供されるポリヌクレオチドは、種々の目的のためにリサーチコミュニティによって使用され得る。ポリヌクレオチドは、分析、特徴付け、または治療に使用するための組換えタンパク質を発現するために；対応するタンパク質が優先的に発現される組織（構成的に、あるいは組織の分化もしくは発達または疾患状態の特定の段階のいずれか）のためのマーカーとして；サザンゲルにおける分子量マーカーとして；染色体を同定するためもしくは関連する遺伝子座マッピングするための染色体マーカーもしくはタグ（標識された場合）として；可能性のある遺伝子障害を同定するために、患者の内因性ＤＮＡ配列と比較するため；ハイブリダイズするため、従って新規な関連するＤＮＡ配列を発見するためのプローブとして；遺伝子フィンガープリントのためのＰＣＲプライマーを誘導するための情報の供給源として；他の新規なポリヌクレオチドを発見するプロセスにおいて、既知の配列を「差引きする（ｓｕｂｔｒａｃｔ−ｏｕｔ）」ためのプローブとして；「遺伝子チップ」または他の支持体への連結のためにオリゴマーを選択し、そして作製するため（発現パターンの試験を含む）；ＤＮＡ免疫化技術を使用して抗タンパク質抗体を産生させるため；ならびに抗ＤＮＡ抗体を産生するため、または別の免疫応答を惹起するための抗原として、使用され得る。ポリヌクレオチドが、別のタンパク質に（例えば、レセプター−リガンドの相互作用において）結合または部分的に結合するタンパク質をコードする場合、このポリヌクレオチドはまた、相互作用トラップアッセイ（例えば、Ｇｙｕｒｉｓら、Ｃｅｌｌ ７５：７９１−８０３（１９９３）に記載されるアッセイ）において、結合が生じる他のタンパク質をコードするポリヌクレオチドを同定するため、または結合相互作用のインヒビターを同定するために使用され得る。
【００９９】
本発明によって提供されるタンパク質は、以下に挙げられる生物学的な活性を決定するためのアッセイにおいて同様に使用され得る：ハイスループットスクリーニングのための複数のタンパク質のパネル；抗体を産生するか、または別の免疫応答を惹起するため；生物学的流体中でのタンパク質（またはそのレセプター）のレベルを定量的に決定するように設計されたアッセイにおける試薬（標識化された試薬を含む）として；対応するタンパク質が優先的に発現される組織（構成的に、あるいは組織の分化もしくは発達または疾患状態の特定の段階でのいずれか）のためのマーカーとして；ならびに当然、相関するレセプターまたはリガンドを単離するため。タンパク質が、別のタンパク質に（例えば、レセプター−リガンド相互作用により）結合または部分的に結合する場合、このタンパク質は、結合が生じる他のタンパク質を同定するためか、または結合相互作用のインヒビターを同定するために使用され得る。これらの結合相互作用に関与するタンパク質はまた、この結合相互作用のペプチドまたは小分子のインヒビターもしくはアゴニストをスクリーニングするために使用され得る。
【０１００】
これらのリサーチのいずれかまたは全ての有用性は、リサーチ製品として市販するための、試薬等級またはキットフォーマットに発展され得る。
【０１０１】
上に列挙される使用を実施するための方法は、当業者に周知である。このような方法を開示する参考文献としては、以下が挙げられるが、これらに限定されない：「Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ」、第２版、Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ、Ｓａｍｂｒｏｏｋ，Ｊ．、Ｅ．Ｆ．ＦｒｉｔｓｃｈおよびＴ．Ｍａｎｉａｔｉｓ編、１９８９、ならびに「Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ：Ｇｕｉｄｅ ｔｏ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ」，Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，Ｂｅｒｇｅｒ，Ｓ．Ｌ．およびＡ．Ｒ．Ｋｉｍｍｅｌ編、１９８７。
【０１０２】
（栄養性使用）
本発明のポリヌクレオチドおよびタンパク質はまた、栄養性供給源または補充物として使用され得る。このような使用は、以下が挙げられるが、これらに限定されない：タンパク質またはアミノ酸サプリメントとしての使用、炭素供給源としての使用、窒素供給源としての使用および炭化水素の供給源としての使用。このような場合において、本発明のタンパク質またはポリヌクレオチドは、特定の生物の飼料（フィード）に添加され得、あるいは例えば、粉末、ピル、溶液、懸濁物またはカプセルの形態のような、別の固体調製物または液体調製物として投与され得る。微生物の場合において、本発明のタンパク質およびポリヌクレオチドは、培地中に添加され得、この培地中または培地上で、微生物は培養される。
【０１０３】
本発明のＭＵ−１タンパク質はまた、ポリクローナル抗体およびモノクローナル抗体を得るために動物を免疫するために使用され得、これらの抗体は、ＭＵ−１タンパク質と特異的に反応し、そしてこれらの抗体は、リガンドのレセプターに対する結合を阻害し得る。このような抗体は、免疫原として全ＭＵ−１を使用することによるか、またはＭＵ−１のフラグメントを使用することによって得られ得る。このＭＵ−１のより小さなフラグメントはまた、動物を免疫するために使用され得る。このペプチド免疫原は、カルボキシル末端にシステイン残基をされに含み得、そしてキーホールリンペットヘモシアニン（ｋｅｙｈｏｌｅ ｌｉｍｐｅｔ ｈｅｍｏｃｙａｎｉｎ（ＫＬＨ））のようなハプテンに結合される。さらなるペプチド免疫原は、チロシン残基を硫酸化されたチロシン残基を用いて置換することによって生成され得る。このようなペプチドを合成するための方法は、例えばＲ．Ｐ．Ｍｅｒｒｉｆｉｅｌｄ，Ｊ．Ａｍｅｒ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．８５，２１４９−２１５４（１９６３）；Ｊ．Ｌ．Ｋｒｓｔｅｎａｎｓｋｙら、ＦＥＢＳ Ｌｅｔｔ．２１１、１０（１９８７）にあるように当該分野で公知である。
【０１０４】
ＭＵ−１タンパク質に結合する、中和抗体または非中和抗体（好ましくは、モノクローナル抗体）はまた、特定の腫瘍のための有用な治療剤であり得、そして上記の状態の処置においてまた有用であり得る。これらの中和モノクローナル抗体は、ＭＵ−１レセプター鎖に結合するリガンドをブロックし得る。
【０１０５】
本明細書中で引用される全ての特許および参考文献は、完全に記載されているかのように参考として援用されている。本発明は、以下の実施例によってさらに例示され、これらの実施例は、限定するものとして構成されるべきではない。
【実施例】
【０１０６】
（実施例）
（実施例１：マウスＭＵ−１ ｃＤＮＡの単離および特徴付け）
Ｍｕ−１レセプターのマウスホモログの部分的フラグメントを、ヒト配列に由来するオリゴヌクレオチドを使用するＰＣＲによって単離した。ｃＤＮＡを、１７日齢のマウス胸腺およびマウス２Ｄ６Ｔ細胞株から単離したＲＮＡから調製した。約３００ヌクレオチドのＤＮＡフラグメントを、以下のオリゴヌクレオチド（図１のヒトｃＤＮＡ配列（配列番号１に対応する）のそれぞれ領域５８４〜６０３および８７６〜８９６に対応する）を用いるＰＣＲによってｃＤＮＡから増幅した。
【０１０７】
【化２】
増幅は、９４℃で１分間、５０℃で１分間、および７２℃で１分間の３０サイクルの間、１．５ｍＭの塩化マグネシウムを含む１×Ｔａｑ緩衝液中でＴａｑポリメラーゼを使用して行なった。このフラグメントのＤＮＡ配列を決定し、そして２つのオリゴヌクレオチドは、以下の配列を有するこのフラグメントの内部部分に由来した：
【０１０８】
【化３】
オリゴヌクレオチドを使用して、２Ｄ６ Ｔ細胞株から単離したｃＤＮＡライブラリーをスクリーニングためのハイブリダイゼーションプローブとして使用するために、本来のＰＣＲ産物（図１のマウスｃＤＮＡ配列のヌクレオチド７８１〜１０４３、および配列番号９に対応する）の内部２６２ヌクレオチドフラグメントを増幅した。フィルターを、標準５×ＳＳＣハイブリダイゼーション条件を使用して、６５℃でハイブリダイズし、そして６５℃でＳＳＣ中に洗浄した。４２６，０００個のクローンのスクリーニングにおいてプローブにハイブリダイズした２０個のクローンを単離した。ＤＮＡ配列を、２つの独立したクローンから決定した。クローン番号６の全長配列は、これがヒトＭＵ−１（配列番号９）の全長マウスホモログであることを確認した。
【０１０９】
マウスＭＵ−１の全長ヌクレオチド配列（配列番号９に対応する）を、図１に示す。ヌクレオチド配列は、ヌクレオチド４０７〜７６４の推定リーダー配列、ヌクレオチド４０７〜１９９３のコード配列、ヌクレオチド１９９４〜１９９７の終止コドンを有する。ヌクレオチド１〜４０６は、５’非翻訳領域に対応し、そしてヌクレオチド１９９８〜２６２８は、３’非翻訳領域に対応する。
【０１１０】
マウスＭＵ−１の推定タンパク質配列（配列番号１０に対応する）を、図２に示す。このマウスＭＵ−１タンパク質は、ＳＰＳｃａｎ（スコア＝１０．１）によって決定された推定リーダー配列（配列番号１０のアミノ酸１〜１９に対応する）および推定膜貫通ドメイン（配列番号１０のアミノ酸２３７〜２５３に対応する）を含む。推定シグナル伝達モチーフは、以下の領域を含む：ボックス１：配列番号１０のアミノ酸２６５〜２７４、ボックス２：配列番号１０のアミノ酸３１０〜３２４、配列番号１０の２８１位、３１９位、３６１位、３６８位、３９７位、および５１０位の６つのチロシン残基。潜在的なＳＴＡＴドッキング部位は、以下を含む：ＳＴＡＴ５：ＥＤＤＧＹＰＡ、ＳＴＡＴ３：ＹＬＱＲ。
【０１１１】
（実施例２：ヒトＭＵ−１およびマウスＭＵ−１の比較）
ＧＡＰアルゴニズムを使用して、ヒトＭＵ−１およびマウスＭＵ−１のアミノ酸を比較する。マウスおよびヒト推定タンパク質配列の比較を、図４に示す。アミノ酸は、ＧＡＰアルゴリズムを使用して、６５．２６７％同一であった。整列を、ＢＬＯＳＵＭ６２アミノ酸置換マトリクスによって作成した（Ｈｅｎｉｋｏｆｆ，Ｓ．およびＨｅｎｉｋｏｆｆ，Ｊ．Ｇ．（１９９２））。タンパク質ブロック質由来のアミノ酸置換マトリクス（Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８９：１０９１５−１０９１９）。Ｇａｐパラメーター：Ｇａｐ Ｗｅｉｇｈｔ＝８、Ａｖｅｒａｇｅ Ｍａｔｃｈ＝２．９１２、Ｌｅｎｇｔｈ Ｗｅｉｇｈｔ＝２、Ａｖｅｒａｇｅ Ｍｉｓｍａｔｃｈ＝−２．００３。Ｐｅｒｃｅｎｔ Ｓｉｍｉｌａｒｉｔｙ＝６９．４６６。
【０１１２】
ヒトおよびマウスｃＤＮＡヌクレオチド配列の比較を図３に示す。ＤＮＡ配列は、ＧＡＰアルゴリズムを使用して整列される場合、６６．１１６％同一である。Ｇａｐパラメーター：Ｇａｐ Ｗｅｉｇｈｔ＝５０、Ａｖｅｒａｇｅ Ｍａｔｃｈ＝１０．０００、Ｌｅｎｇｔｈ Ｗｅｉｇｈｔ＝３、Ａｖｅｒａｇｅ Ｍｉｓｍａｔｃｈ＝０．０００。Ｐｅｒｃｅｎｔ Ｓｉｍｉｌａｒｉｔｙ＝６６．１９８。
【０１１３】
ヒトＭＵ−１タンパク質およびマウスＭＵ−１タンパク質の両方は、１型サイトカインレセプタースーパーファミリーのメンバーである。マウスＭＵ−１およびヒトＭＵ−１の両方の配列の評価は、潜在的なボックス１およびボックス２シグナル伝達モチーフの存在を明らかにする。６つのチロシン残基が、細胞質ドメインに存在し、そしてＭＵ−１のシグナル伝達機能において重要であり得る。ＭＵ−１の他のファミリーのメンバーとの配列の比較は、ＳＴＡＴ５およびＳＴＡＴ３についての潜在的なドッキング部位の存在を示唆した。
【０１１４】
（実施例３：ヒトＭＵ−１によって使用されるＳＴＡＴシグナル伝達経路の決定）
ＢＡＦ−３細胞を操作して、ヒトＥＰＯレセプターの細胞外ドメインおよびＭＵ−１のレセプターの細胞内ドメインからなるキメラサイトカインレセプターを発現した。ｈｕＥＰＯＲ／ＭＵ−１（細胞質）キメラレセプターを発現したＢＡＦ−３細胞は、ヒト可溶性ＥＰＯに応答して増殖した。これらの細胞を分析して、どのＳＴＡＴ分子がＥＰＯシグナル伝達に応答してリン酸化されているかを決定した。手短にいうと、コントロール未改変親ＢＡＦ−３細胞およびＥＰＯＲ／ＭＵキメラＢＡＦ−３細胞を、ＩＬ−３含有増殖培養から静止させ、そしてＩＬ−３またはＥＰＯのいずれかを用いて、０、１５、３０および６０分間再刺激した。リン酸化されたチロシンを保存するために、細胞をペレット化し、そしてオルトバナジン酸塩を含む氷冷した溶解緩衝液中に再懸濁した。等量の細胞溶解物を、ＳＤＳ−ＰＡＧＥによって電気泳動して、そしてウエスタン分析についてニトロセルロース膜にブロットした。二連のブロットを、ＳＴＡＴ分子の各形態に特異的な抗体を使用することによって、ＳＴＡＴ１、３、５、および６のリン酸化形態および非リン酸化形態について染色した。活性化していないＨＥＬＡ細胞、α−インターフェロンで活性化したＨＥＬＡ細胞を陽性コントロールとして使用した。
【０１１５】
これらの結果は、これらの特定の条件化で、ＭＵ−１を介するシグナル伝達が、試験された全ての時点（Ｔ＝０、Ｔ＝１５’、Ｔ＝３０’、Ｔ＝６０’）においてＳＴＡＴ５のリン酸化を生じることを示した。コントロールまたはキメラＢＡＦ−３細胞のＩＬ−３を用いる処理は、ＳＴＡＴ１または５ではなく、ＳＴＡＴ３のリン酸化を生じた。
【０１１６】
（実施例４：マウスＭＵ−１およびヒトＭＵ−１の組織発現）
（ノーザン分析）
種々の組織（Ｃｌｏｎｅｔｅｃｈ，Ｐａｌｏ Ａｌｔｏ，ＣＡ）由来のポリＡ＋ＲＮＡのノーザンブロットを、製造業者によって推奨されるようにして行なった。マウスブロットについて、図１のヌクレオチド７８１〜１０４３および配列番号９に対応する２６２ヌクレオチドフラグメントを、ハイブリダイゼーションのために使用した。
【０１１７】
マウスＭＵ−１の単一の転写物を、成体マウスの脾臓、肺および心臓組織において検出した。ヒト組織において観察されるより大きい転写物は、マウス組織において観察されなかった。
【０１１８】
ヒトＭＵ−１の２つの転写物を、成体ヒトリンパ様組織、ＰＢＬ、胸腺、脾臓およびリンパ節、ならびに胎児肺において検出した。
【０１１９】
（インサイチュハイブリダイゼーション）
インサイチュハイブリダイゼーションにおいて、研究は、Ｃｏｌｕｍｂｕｓ，ＯＨのＰｈｙｌｏｇｅｎｃｙ Ｉｎｃ．によって行なわれた（Ｌｙｏｎｓら、１９９０、Ｊ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ：１１１：２４２７−２４３６の方法に従う）。手短にいうと、連続的な５〜７ミクロンのパラフィン切片を、脱パラフィン化し、固定し、プロテイナーゼＫを用いて消化し、トリエタノールアミンを用いて処理し、そして脱水した。ｃＲＮＡを、アンチセンスおよびセンスプローブを作成するために、直鎖状ｃＤＮＡテンプレートから調製した。ｃＲＮＡ転写物を、製造業者の条件（Ａｍｂｉｏｎ）に従って合成し、そして３５Ｓ−ＵＴＰで標識した。切片を、一晩ハイブリダイズし、ストリンジェントに洗浄し、そしてＲＮＡａｓｅ Ａを用いて処理し、そして核トラックエマルジョンに浸漬し、そして２〜３週間露光した。コントロール切片を、手順のバックグラウンドレベルを示すために、センスプローブを用いてハイブリダイズした。マウスプローブは、ヌクレオチド８６０〜１０６４（配列番号９）に対応する１８６ｂｐフラグメントからなった。ヒトプローブは、ヒトＭＵ−１ ＤＮＡから作成された２３１ｂｐ
ＰＣＲ産物であった。
【０１２０】
マウスＭＵ−１発現は、胚中心および外部筋層（ｍｕｓｃｕｌａｒｉｓ ｅｘｔｅｒｎａ）における成体小腸のリンパ節において観察された。分化したリンパ節およびパイアー斑はまた、マウスＭＵ−１発現を示した。
【０１２１】
ヒトＭＵ−１発現は、皮質のリンパ小節の胚中心において検出された。髄質（これは、マクロファージを含む）は、ヒトＭＵ−１について陰性であった。ヒト脾臓において、ヒトＭＵ−１発現は、赤脾髄ではなく、白脾髄の領域において検出された。
【０１２２】
（実施例５：細胞および細胞株におけるヒトＭＵ−１の発現）
ＲＮアーセプロテクション分析を、休止しているおよび活性化したヒトＴ細胞株およびＢ細胞株、ＲａｊｉおよびＲＰＭＩ ８８６６、ならびにＴ細胞株ジャーカットについて行った。ヒトＴ細胞を、抗ＣＤ３および抗ＣＤ２８を用いて活性化した。細胞株をホルボールエステルおよびイオノマイシンで活性化した。２３１ｂｐのＰＣＲ産物（ＰＣＲを、５’プライマー：
【０１２３】
【化４】
（配列番号１５）
および３’プライマー：
【０１２４】
【化５】
（配列番号１６）
を使用することによって行った）をｐＧＥＭ３ｚｆ（−）（Ｐｒｏｍｅｇａ，Ｍａｄｉｓｏｎ，ＷＩ）ベクターのＢａｍＨ１部位およびＨｉｎｄＩＩＩ部位に挿入することによって、ＭＵ−１リボプローブ産生プラスミドを構築した。このリボプローブを作製するために、リボプローブ産生プラスミドをＨｉｎｄＩＩＩで直線化した。得られたＤＮＡを、フェノール／クロロホルム抽出し、そしてエタノールを用いて沈殿させた。Ｔ７ ＲＮＡポリメラーゼを使用して、メーカー（ＰｈａｒＭｉｎｇｅｎ，Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ）により指示されたプロトコルに従って、リボプローブを作製した。ＰｈａｒＭｉｎｇｅｎのＲｉｂｏＱｕａｎｔ Ｍｕｌｔｉ−Ｐｒｏｂｅ Ｒｉｂｏｎｕｃｌｅａｓｅ Ｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎ Ａｓｓａｙシステムを使用することによって、ＲＮＡｓｅ保護アッセイを行った。ＲＮＡｓｅ消化の後、２．０μｇの総ＲＮＡが、各ＲＰＡ反応物に含まれ、保護されたリボプローブを、ＱｕｉｃｋＰｏｉｎｔ高速核酸分離システム（Ｎｏｖｅｘ，Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ）で実行した。ゲルを、メーカーの指示に従って乾燥し、そして暴露した。
【０１２５】
ヒトＭＵ−１ ＲＮＡは、非刺激集団と比較する場合、抗ＣＤ３＋抗ＣＤ２８刺激ヒト精製ＣＤ３＋細胞においてアップレギュレートされる。ＭＵ−１はまた、ＴｈおよびＴｈ２非対称Ｔ細胞集団において再刺激される際に、アップレギュレートされる。Ｂ細胞株、ＲＰＭＩ ８８６６およびＲａｊｉは、ＭＵ−１を構成的に発現し、一方、ジャーカットＴ細胞株はＭＵ−１を発現しない。
【０１２６】
（実施例６：既知のサイトカインへのヒトＭＵ−１の結合）
ヒトＩｇ融合タンパク質およびマウスＩｇ融合タンパク質の両方は、ＭＵ−１に対するリガンドを同定する試みにおいて、Ｂｉａｃｏｒｅチップ上で構築されこのチップ上に固定される。様々な細胞培養物の馴化培地ならびに既知のサイトカインのパネルを、ＭＵ−１に対する結合について評価した。いくつかのサイトカインをまた、このファミリーの他のレセプター鎖と組み合わせて試験して、ＭＵ−１がリガンド結合のために第２のレセプター鎖を必要とし得る可能性を考察した。以下のサイトカインを試験し、そしてＭＵ−１結合に対して陰性であることを見出した：ｍＩＬ−２、ｈＩＬ−２、ｈＩＬ−１５、ｍＩＬ−７、ＴＳＬＰ、ＴＳＬＰ＋ＩＬ７、ＴＳＬＰ＋ＩＬ７Ｒ、ＴＳＬＰ＋ＩＬ７ｇ、ＴＳＬＰ＋ＩＬ−２、ＴＳＬＰ＋ＩＬ２＋ＩＬ２Ｒβ、ＩＬ２Ｒβ、ＩＬ２Ｒγ、ＩＬ７Ｒ、ＩＬ２＋２Ｒβ、ＩＬ２＋２Ｒγ、ＩＬ１５＋ＩＬ２Ｒβ、Ｉｌ１５＋２Ｒγ、ＩＬ７＋２Ｒγ、ＩＬ２＋ＩＬ７Ｒ、ＩＬ１５＋ＩＬ７Ｒ、ＩＬ７＋ＩＬ７Ｒ。既知のレセプターを同様に固定し、そしてＭＵＦｃ結合について試験し、陰性結果を得た。ＩＬ−１５はＩＬ２Ｒｂに結合するが、ＩＬ２ＲｇにもＭＵＦｃにも結合しない。
【０１２７】
（等価物）
当業者は、単に慣用的な実験を使用して、本明細書中に記載される本発明の特定の実施形態の多くの等価物を認識するか、または確認し得る。このような等価物は、上記の特許請求の範囲に包含されることが意図される。
【図面の簡単な説明】
【０１２８】
【図１−１】図１は、マウスＭＵ−１の全長ｃＤＮＡ配列を示す。このヌクレオチド配列は、配列番号９のヌクレオチド１〜２５２８に対応する。
【図１−２】図１は、マウスＭＵ−１の全長ｃＤＮＡ配列を示す。このヌクレオチド配列は、配列番号９のヌクレオチド１〜２５２８に対応する。
【図２】図２は、マウスＭＵ−１のアミノ酸配列（配列番号１０のアミノ酸１〜５２９に対応する）を示す。ＳＰＳｃａｎによって１０．１のスコアで推定された、アミノ酸１〜１９に推定リーダー配列が存在する（太字）。アミノ酸２３７〜２５７に推定膜貫通ドメインが存在する（下線）。推定シグナル伝達モチーフは、以下の領域を含む：ボックス１：アミノ酸２６５〜２７４およびボックス２：アミノ酸３１０〜３２４（太字および下線）。６つのチロシンが、アミノ酸第２８１位、第３１９位、第３６１位、第３６８位、第３９７位および第５１０位に位置する。ＷＳＸＷＳモチーフ（配列番号８）は、アミノ酸残基２１４〜アミノ酸残基２１８に位置付する（大きい太字）。可能性のあるＳＴＡＴ結合（ｄｏｃｋｉｎｇ）部位は、アミノ酸３９３〜３９８およびアミノ酸５１０〜５１３を含む。
【図３−１】図３は、ヒトＭＵ−１およびマウスＭＵ−１のｃＤＮＡ配列（それぞれ、配列番号１の核酸１〜２６６５および配列番号９の１〜２６２８に対応する）のＧＡＰ比較を示す。ＨｕＭＵ−１＝ヒトＭＵ−１、ｍｕｒＭＵ−１＝マウスＭＵ−１。Ｇａｐパラメーター：Ｇａｐ Ｗｅｉｇｈｔ＝５０、Ａｖｅｒａｇｅ Ｍａｔｃｈ＝１０．０００、Ｌｅｎｇｔｈ Ｗｅｉｇｈｔ＝３、Ａｖｅｒａｇｅ Ｍｉｓｍａｔｃｈ＝０．０００。同一性％＝６６．１１６。
【図３−２】図３は、ヒトＭＵ−１およびマウスＭＵ−１のｃＤＮＡ配列（それぞれ、配列番号１の核酸１〜２６６５および配列番号９の１〜２６２８に対応する）のＧＡＰ比較を示す。ＨｕＭＵ−１＝ヒトＭＵ−１、ｍｕｒＭＵ−１＝マウスＭＵ−１。Ｇａｐパラメーター：Ｇａｐ Ｗｅｉｇｈｔ＝５０、Ａｖｅｒａｇｅ Ｍａｔｃｈ＝１０．０００、Ｌｅｎｇｔｈ Ｗｅｉｇｈｔ＝３、Ａｖｅｒａｇｅ Ｍｉｓｍａｔｃｈ＝０．０００。同一性％＝６６．１１６。
【図３−３】図３は、ヒトＭＵ−１およびマウスＭＵ−１のｃＤＮＡ配列（それぞれ、配列番号１の核酸１〜２６６５および配列番号９の１〜２６２８に対応する）のＧＡＰ比較を示す。ＨｕＭＵ−１＝ヒトＭＵ−１、ｍｕｒＭＵ−１＝マウスＭＵ−１。Ｇａｐパラメーター：Ｇａｐ Ｗｅｉｇｈｔ＝５０、Ａｖｅｒａｇｅ Ｍａｔｃｈ＝１０．０００、Ｌｅｎｇｔｈ Ｗｅｉｇｈｔ＝３、Ａｖｅｒａｇｅ Ｍｉｓｍａｔｃｈ＝０．０００。同一性％＝６６．１１６。
【図３−４】図３は、ヒトＭＵ−１およびマウスＭＵ−１のｃＤＮＡ配列（それぞれ、配列番号１の核酸１〜２６６５および配列番号９の１〜２６２８に対応する）のＧＡＰ比較を示す。ＨｕＭＵ−１＝ヒトＭＵ−１、ｍｕｒＭＵ−１＝マウスＭＵ−１。Ｇａｐパラメーター：Ｇａｐ Ｗｅｉｇｈｔ＝５０、Ａｖｅｒａｇｅ Ｍａｔｃｈ＝１０．０００、Ｌｅｎｇｔｈ Ｗｅｉｇｈｔ＝３、Ａｖｅｒａｇｅ Ｍｉｓｍａｔｃｈ＝０．０００。同一性％＝６６．１１６。
【図４】図４は、ヒトＭＵ−１タンパク質（配列番号２のアミノ酸１〜５３８に対応する）およびマウスＭＵ−１タンパク質（配列番号１０のアミノ酸１〜５２９に対応する）のＧＡＰ比較を示す。ＢＬＯＳＵＭ６２アミノ酸置換マトリクス（Ｈｅｎｉｋｏｆｆ，Ｓ．およびＨｅｎｉｋｏｆｆ，Ｊ．Ｇ．（１９９２））。タンパク質ブロックからのアミノ酸置換マトリクス（Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８９：１０９１５−１０９１９）。Ｇａｐパラメーター：Ｇａｐ Ｗｅｉｇｈｔ＝８、Ａｖｅｒａｇｅ Ｍａｔｃｈ＝２．９１２、Ｌｅｎｇｔｈ Ｗｅｉｇｈｔ＝２、Ａｖｅｒａｇｅ Ｍｉｓｍａｔｃｈ＝−２．００３。同一性％＝６５．２６７。
【図５】図５は、ヒトＭＵ−１（ｈｕｍｕ）（配列番号２に対応する）、マウスＭＵ−１（ｍｏｕｓｅｍｕ）（配列番号１０）およびヒトＩＬ２β鎖（ｈｕｍｉｌ２ｒｂｃ）（ＧＥＮｂａｎｋ登録番号Ｍ２６０６２）のアミノ酸の多重配列アライメントを示す。リーダーおよび膜貫通ドメインに下線を付す。保存サイトカインレセプターモジュールモチーフを、太字で示す。可能性のあるシグナル伝達領域を、下線および太字で示す。
【図６】図６は、ＭＵ−１を介するシグナル伝達を示す。ＭＵ−１は、クローンＥ７ ＥＰＯ−ＭＵ−１キメラにおいてＳＴＡＴ５をリン酸化する。実施例３に示される条件下で、ＭＵ−１を介するシグナル伝達は、試験された全ての時点でＳＴＡＴ５のリン酸化を生じる。ＩＬ−３でのコントロールまたはキメラＢＡＦ−３細胞の処理は、ＳＴＡＴ３のリン酸化を生じたが、ＳＴＡＴ１およびＳＴＡＴ５のいずれのリン酸化も生じなかった。
【技術分野】
【０００１】
（発明の分野）
本発明は、哺乳動物サイトカインレセプターファミリーのタンパク質の新規なメンバー（限定はしないが、ヒトレセプタータンパク質およびマウスレセプタータンパク質が、挙げられる）、そのフラグメント、ならびにそのようなタンパク質を発現するために有用な組換えポリヌクレオチドおよび細胞に関する。
【背景技術】
【０００２】
（発明の背景）
種々の造血細胞集団または血球集団の発生および増殖に関与する、種々の調節分子（造血素として公知）が、同定されている。ほとんどの造血素は、標的細胞の表面上のレセプターと相互作用することにより、特定の生物学的活性を示す。サイトカインレセプターは、１つ、２つ、または３つの鎖から一般に構成される。多くのサイトカインレセプターおよびいくつかのサイトカイン（例えば、ＩＬ−１２ ｐ４０）が、造血素レセプタースーパーファミリータンパク質のメンバーである。この造血素レセプタースーパーファミリーの新規なメンバーを同定することは、造血の調節、免疫応答の調節、および造血素スーパーファミリーの他のメンバー（サイトカインおよびレセプターを含む）の同定において、有用であり得る。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００３】
この造血素レセプタースーパーファミリーの従来未知であったメンバーに関するＤＮＡおよびタンパク質の配列を、同定および決定することが望ましい。
【課題を解決するための手段】
【０００４】
（発明の要旨）
本発明に従って、ＭＵ−１造血素レセプタースーパーファミリー鎖をコードするポリヌクレオチド（マウス供給源およびヒト供給源由来のものが挙げられるが、限定はしない）が、開示される。
【０００５】
特定の実施形態において、本発明は、ヌクレオチド配列を含む単離されたポリヌクレオチドを提供し、このヌクレオチド配列は、以下：
（ａ）配列番号１のヌクレオチド配列；
（ｂ）配列番号１のヌクレオチド２３８〜ヌクレオチド１８５２のヌクレオチド配列；
（ｃ）配列番号１のヌクレオチド３０１〜ヌクレオチド１８５２のヌクレオチド配列；
（ｄ）配列番号１のヌクレオチド３０１〜ヌクレオチド９４５のヌクレオチド配列；
（ｅ）（ａ）〜（ｄ）のいずれかにおいて特定されるヌクレオチド配列の配列と、遺伝暗号の縮重の結果として異なる、ヌクレオチド配列；
（ｆ）（ａ）〜（ｄ）のいずれかにおいて特定されるヌクレオチドに、ストリンジェントな条件下でハイブリダイズし得る、ヌクレオチド配列；
（ｇ）配列番号２の配列の種ホモログをコードするヌクレオチド配列；および
（ｈ）（ａ）〜（ｄ）のいずれかにおいて特定されるヌクレオチド配列の対立遺伝子改変体、
からなる群より選択される。好ましくは、このヌクレオチド配列は、ＭＵ−１造血素レセプタースーパーファミリー鎖の生物学的活性を有するタンパク質をコードする。このヌクレオチド配列は、発現制御配列に作動可能に連結され得る。
【０００６】
本発明はまた、アミノ酸配列を含むペプチドまたはタンパク質をコードするヌクレオチド配列を含む単離されたポリヌクレオチドも提供し、このアミノ酸配列は、以下：
（ａ）配列番号２のアミノ酸配列；
（ｂ）配列番号２のアミノ酸２２〜５３８のアミノ酸配列；
（ｃ）配列番号２のアミノ酸２２〜２３６のアミノ酸配列；
（ｄ）配列番号２のアミノ酸１〜２３６のアミノ酸配列；および
（ｅ）ＭＵ−１造血素レセプタースーパーファミリー鎖の生物学的活性を有する、（ａ）〜（ｄ）のフラグメント、
からなる群より選択される。
【０００７】
別の実施形態において、本発明は、ヌクレオチド配列を含む単離されたポリヌクレオチドを提供し、このヌクレオチド配列は、以下：
（ａ）配列番号９のヌクレオチド配列；
（ｂ）（ａ）において特定されるヌクレオチド配列と、遺伝暗号の縮重の結果として異なる、ヌクレオチド配列；
（ｃ）（ａ）において特定されるヌクレオチドに、ストリンジェントな条件下でハイブリダイズし得る、ヌクレオチド配列；
（ｄ）（ａ）において特定されるヌクレオチド配列の対立遺伝子改変体、
からなる群より選択される。
【０００８】
本発明はまた、アミノ酸配列を含むペプチドまたはタンパク質をコードするヌクレオチド配列を含む単離されたポリヌクレオチドを提供し、このアミノ酸配列は、以下：
（ａ）配列番号１０のアミノ酸配列；
（ｂ）ＭＵ−１造血素レセプタースーパーファミリー鎖の生物学的活性を有する、（ａ）のフラグメント、
からなる群より選択される。
【０００９】
これらのポリヌクレオチドで形質転換された宿主細胞（好ましくは、哺乳動物細胞）もまた、提供される。
【００１０】
他の実施形態において、本発明は、ＭＵ−１タンパク質を産生するためのプロセスを提供する。このプロセスは、以下：
（ａ）適切な培養培地において本発明の宿主細胞の培養物を増殖させる工程；および
（ｂ）その培養物からヒトＭＵ−１タンパク質を精製する工程、
を包含する。これらの方法により産生されたタンパク質もまた、提供される。
【００１１】
本発明はまた、アミノ酸配列を含む単離されたＭＵ−１タンパク質を提供し、このアミノ酸配列は、以下：
（ａ）配列番号２のアミノ酸配列；
（ｂ）配列番号２のアミノ酸２２〜５３８のアミノ酸配列；
（ｃ）配列番号２のアミノ酸２２〜２３６のアミノ酸配列；
（ｄ）配列番号２のアミノ酸１〜２３６のアミノ酸配列；および
（ｅ）ＭＵ−１造血素レセプタースーパーファミリー鎖の生物学的活性を有する、（ａ）〜（ｄ）のフラグメント、
からなる群より選択される。
【００１２】
本発明はまた、アミノ酸配列を含む単離されたＭＵ−１タンパク質を提供し、このアミノ酸配列は、以下：
（ａ）配列番号１０のアミノ酸配列；
（ｂ）ＭＵ−１造血素レセプタースーパーファミリー鎖の生物学的活性を有する、（ａ）のフラグメント、
からなる群より選択される。
【００１３】
マウスＭＵ−１（配列番号１０）のアミノ酸配列は、ヒトＭＵ−１のアミノ酸配列と約６５％同一である。
【００１４】
他の好ましい実施形態において、特定のアミノ酸配列は、融合タンパク質の一部（ＭＵ−１に由来しないさらなるアミノ酸配列）である。好ましい融合タンパク質は、抗体フラグメント（例えば、Ｆｃフラグメント）を含む。
【００１５】
本発明のタンパク質および薬学的に受容可能なキャリアを含む薬学的組成物もまた、提供される。
【００１６】
本発明はさらに、本発明のタンパク質と特異的に反応する抗体を含む組成物を提供する。
【００１７】
１つの実施形態において、本発明のＭＵ−１核酸分子は、配列番号１または９に示されるヌクレオチド配列に対して（例えば、全長ヌクレオチド配列に対して）、少なくとも６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％またはそれ以上同一である。
【００１８】
別の好ましい実施形態において、核酸分子は、配列番号１または９に示されるヌクレオチド配列からなる。別の好ましい実施形態において、核酸分子は、配列番号１または９のヌクレオチド配列のうちの少なくとも５０ヌクレオチド、１００ヌクレオチド、２００ヌクレオチド、３００ヌクレオチド、４００ヌクレオチド、５００ヌクレオチド、６００ヌクレオチド、７００ヌクレオチド、８００ヌクレオチド、９００ヌクレオチド、１０００ヌクレオチド、１１００ヌクレオチド、１２００ヌクレオチド、１３００ヌクレオチド、１４００ヌクレオチド、１５００ヌクレオチド、１６００ヌクレオチド、１７００ヌクレオチド、１８００ヌクレオチドまたはそれ以上のヌクレオチド（例えば、連続するヌクレオチド）のフラグメント、あるいはその相補体を含む。
【００１９】
好ましい実施形態において、ＭＵ−１タンパク質ファミリーメンバーは、配列番号２または１０のアミノ酸配列に対して、少なくとも約６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％またはそれ以上同一である、アミノ酸配列を有する。
【００２０】
別の実施形態において、本発明は、配列番号２または１０のアミノ酸配列を有するタンパク質のフラグメントを特徴とし、ここで、このフラグメントは、配列番号２または１０のアミノ酸配列のうちの少なくとも１５アミノ酸、２０アミノ酸、３０アミノ酸、４０アミノ酸、５０アミノ酸、６０アミノ酸、７０アミノ酸、８０アミノ酸、９０アミノ酸または１００アミノ酸（例えば、連続するアミノ酸）を含む。
【００２１】
別の局面において、本発明は、生物学的サンプルにおけるＭＵ−１核酸分子、タンパク質またはポリペプチドの存在を検出するための方法を提供し、この方法は、ＭＵ−１核酸分子、ＭＵ−１タンパク質またはＭＵ−１ポリペプチドがこの生物学的サンプルにおいて検出されるように、この生物学的サンプルに、ＭＵ−１核酸分子、ＭＵ−１タンパク質またはＭＵ−１ポリペプチドを検出し得る因子を接触させることによる。
【００２２】
別の局面において、本発明は、生物学的サンプルにおけるＭＵ−１活性の存在を検出するための方法を提供し、この方法は、ＭＵ−１活性の存在がこの生物学的サンプルにおいて検出されるように、この生物学的サンプルに、ＭＵ−１活性の指標を検出し得る因子を接触させることによる。
【００２３】
別の局面において、本発明は、ＭＵ−１活性を調節するための方法を提供し、この方法は、ＭＵ−１を発現し得る細胞においてＭＵ−１活性が調節されるように、この細胞に、ＭＵ−１活性を調節する因子を接触させる工程を包含する。１つの実施形態において、この因子は、ＭＵ−１活性を阻害する。別の実施形態において、この因子は、ＭＵ−１活性を刺激する。１つの実施形態において、この因子は、ＭＵ−１タンパク質に特異的に結合する抗体である。別の実施形態において、この因子は、ＭＵ−１遺伝子の転写またはＭＵ−１ ｍＲＮＡの翻訳を調節することによって、ＭＵ−１の発現を調節する。なお別の実施形態において、この因子は、ＭＵ−１ ｍＲＮＡまたはＭＵ−１遺伝子のコード鎖に対してアンチセンスであるヌクレオチド配列を有する核酸分子である。
【００２４】
１つの実施形態において、本発明の方法は、異常であるかまたは所望されない、ＭＵ−１タンパク質またはＭＵ−１核酸の発現または活性によって特徴付けられる障害（例えば、ＭＵ−１関連障害）を有する被験体を、その被験体にＭＵ−１モジュレーターである因子を投与することによって処置するために使用される。１つの実施形態において、ＭＵ−１モジュレーターは、ＭＵ−１タンパク質である。別の実施形態において、ＭＵ−１モジュレーターは、ＭＵ−１核酸分子である。なお別の実施形態において、ＭＵ−１モジュレーターは、ペプチド、ペプチド模倣物、抗体または他の低分子である。
【００２５】
本発明はまた、以下の少なくとも１つによって特徴付けられる遺伝的変化の存在または非存在を同定するための診断アッセイを提供する：（ｉ）ＭＵ−１タンパク質をコードする遺伝子の異常な修飾または変異；（ｉｉ）ＭＵ−１遺伝子の調節不全（ｍｉｓ-ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ）；および（ｉｉｉ）ＭＵ−１タンパク質の異常な翻訳後修飾（ここで、この遺伝子の野生型形態は、ＭＵ−１活性を有するタンパク質をコードする）。
【００２６】
別の局面において、本発明は、ＭＵ−１タンパク質に結合するかまたはＭＵ−１タンパク質の活性を調節する、化合物を同定するための方法を提供し、この方法は、ＭＵ−１活性を有するＭＵ−１タンパク質を含む指標組成物を提供する工程、この指標組成物に試験化合物を接触させる工程、および指標組成物におけるＭＵ−１活性に対する試験化合物の効果（例えば、ＳＴＡＴリン酸化（例えば、ＳＴＡＴ３またはＳＴＡＴ５リン酸化）の調節）を決定し、ＭＵ−１タンパク質の活性を調節する化合物を同定する工程による。
・本発明はまた、以下を提供し得る：
・（項目１） ヌクレオチド配列を含む単離されたポリヌクレオチドであって、上記ヌクレオチド配列は、以下：
（ａ）配列番号９のヌクレオチド配列；
（ｂ）（ａ）において特定されるヌクレオチド配列の配列と、遺伝暗号の縮重の結果として異なる、ヌクレオチド配列；
（ｃ）（ａ）において特定されるヌクレオチド配列に、ストリンジェントな条件下でハイブリダイズし得る、ヌクレオチド配列；
（ｄ）配列番号１０の配列の種ホモログをコードする、ヌクレオチド配列；および
（ｅ）（ａ）において特定されるヌクレオチド配列の対立遺伝子改変体、
からなる群より選択される、ポリヌクレオチド。
・（項目２） 項目１に記載のポリヌクレオチドであって、上記ヌクレオチド配列が、ＭＵ−１の生物学的活性を有するタンパク質をコードする、ポリヌクレオチド。
・（項目３） 項目２に記載のポリヌクレオチドであって、上記生物学的活性が、ＳＴＡＴ分子との相互作用である、ポリヌクレオチド。
・（項目４） 項目１に記載のポリヌクレオチドであって、上記ヌクレオチド配列が、発現制御配列に作動可能に連結されている、ポリヌクレオチド。
・（項目５） 項目１に記載のポリヌクレオチドであって、配列番号９のヌクレオチド配列を含む、ポリヌクレオチド。
・（項目６） 項目４に記載のポリヌクレオチドで形質転換された、宿主細胞。
・（項目７） 哺乳動物細胞である、項目６に記載の宿主細胞。
・（項目８） ＭＵ−１タンパク質を産生するためのプロセスであって、上記プロセスは、以下：
（ａ）適切な培養培地において項目６に記載の宿主細胞の培養物を増殖させる工程；および
（ｂ）上記培養物から上記ＭＵ−１タンパク質を精製する工程、
を包含する、プロセス。
・（項目９） アミノ酸配列を含む単離されたＭＵ−１タンパク質であって、上記アミノ酸配列は、以下：
（ａ）配列番号１０のアミノ酸配列；および
（ｂ）ＭＵ−１の生物学的活性を有する、（ａ）のフラグメント、
からなる群より選択される、タンパク質。
・（項目１０） 配列番号１０のアミノ酸配列を含む、項目９に記載のタンパク質。
・（項目１１） 薬学的組成物であって、
項目９に記載のタンパク質と、
薬学的に受容可能なキャリアと、
を含む、組成物。
・（項目１２） 項目８に記載のプロセスにより産生された、タンパク質。
・（項目１３） 抗体を含む組成物であって、上記抗体は、項目９に記載のタンパク質と特異的に反応する、組成物。
・（項目１４） アミノ酸配列を含むペプチドまたはタンパク質をコードするヌクレオチド配列を含む単離されたポリヌクレオチドであって、上記アミノ酸配列は、以下：
（ａ）配列番号１０のアミノ酸配列；および
（ｂ）ＭＵ−１の生物学的活性を有する、（ａ）のフラグメント、
からなる群より選択される、ポリヌクレオチド。
・（項目１５） 項目９に記載のタンパク質であって、上記アミノ酸配列が融合タンパク質の一部である、タンパク質。
・（項目１６） Ｆｃフラグメントを含む、項目１５に記載のタンパク質。
・（項目１７） 項目１４に記載のポリヌクレオチドであって、配列番号１０のアミノ酸配列を含むペプチドまたはタンパク質をコードする、ポリヌクレオチド。
・（項目１８） 配列番号９のヌクレオチド配列を含む単離されたポリヌクレオチドであって、ＳＴＡＴ分子と相互作用するＭＵ−１タンパク質をコードする、ポリヌクレオチド。
・（項目１９） ＳＴＡＴシグナル伝達経路を調節するための方法であって、
ＳＴＡＴシグナル伝達に関与する細胞を、ＭＵ−１活性を調節し得る因子と接触させ、それによりＳＴＡＴシグナル伝達経路を調節する工程、
を包含する、方法。
・（項目２０） 項目１９に記載の方法であって、上記ＳＴＡＴシグナル伝達経路が、ＳＴＡＴ ３シグナル伝達経路であるか、またはＳＴＡＴ ５シグナル伝達経路である、方法。
・（項目２１） 免疫障害を処置し得る化合物を同定するための方法であって、
ＳＴＡＴ分子とＭＵ−１ポリペプチドとの相互作用を上記化合物が調節する能力をアッセイし、それにより免疫障害を処置し得る化合物を同定する工程、
を包含する、方法。
・（項目２２） 項目２１に記載の方法であって、上記ＳＴＡＴシグナル伝達経路が、ＳＴＡＴ ３シグナル伝達経路であるか、またはＳＴＡＴ ５シグナル伝達経路である、方法。
【発明を実施するための最良の形態】
【００２７】
（好ましい実施形態の詳細な説明）
本出願の発明者は、ＭＵ−１造血素レセプタースーパーファミリー鎖（本明細書中以後、「ＭＵ−１」または「ＭＵ−１タンパク質」）をコードするポリヌクレオチド（ヒトおよびマウスＭＵ−１をコードするポリヌクレオチドが挙げられるが、これらに限定されない）を、初めて同定および提供した。
【００２８】
特に好ましい実施形態において、本発明のＭＵ−１タンパク質およびＭＵ−１核酸分子は、ヒトＭＵ−１分子である。ヒトＩＬ５レセプターの７０アミノ酸領域
【００２９】
【化１】
を用いて、ＴＢＬＡＳＴＮアルゴリズムを使用してＧｅｎＢａｎｋ ＥＳＴデータベースを検索した。ヒト染色体１６ｐ１２由来のゲノムＢＡＣクローンＡＣ００２３０３中の配列は、この領域に対する相同性を有することが同定され、これは、このセグメントが新規造血素レセプターの遺伝子をコードすることを示唆する。ヌクレオチド４０，８８６の１０００ｂｐ中のオープンリーディングフレームの試験は、ＧｅｎＰｅｐｔのＢＬＡＳＴＰ検索を使用した場合にサイトカインレセプターファミリーのメンバーを専ら同定した、２７０ｂｐのオープンリーディングフレームを明らかにした。このリーディングフレームの末端の終止コドンは、エキソン／イントロン境界にまたがるトランジションの表れであると解釈された。
【００３０】
次いで、ＲＮＡが、第１６ｐ１２染色体由来のこのＢＡＣクローン内に含まれる遺伝子から転写されるか否かを決定した。ＰＣＲプライマーを、サイトカインレセプターファミリー内で保存されるペプチド配列を含む最大のＯＲＦセグメントに基づいて合成した。プライマーＧＡＧＴＣＣＧＡＧＧＡＧＡＡＡＧＣＴＧＡＴＣＴＣＡ（５ｐ）（配列番号４）およびプライマーＧＡＡＡＧＡＴＧＡＣＣＧＧＧＴＣＡＣＴＣＣＡＴＴ（３ｐ）（配列番号５）をＰＣＲにおいて用いて、種々のヒト組織由来のファージライブラリー（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ）をスクリーニングした。配列ＡＣＴＣＧＡＧＣＴＡＴＧＡＧＣＴＧＣＡＧＧＴＧＣＧＧＧＣＡ（配列番号６）の３２−Ｐ標識オリゴヌクレオチドに特異的にハイブリダイズする、予測された１６４ｂｐサイズのＰＣＲ産物が、肺、腎臓、胎盤および心臓由来のファージにおいて観察された。オリゴヌクレオチドＡＣＴＣＧＡＧＣＴＡＴＧＡＧＣＴＧＣＡＧＧＴＧＣＧＧＧＣＡ（配列番号７）を用いて、全長のｃＤＮＡクローンＮＮ１４−１ｂ（ＭＵ−１）が同定され、これを精製し、そして配列決定した。ＤＮＡ配列および推定アミノ酸配列をそれぞれ、配列番号１および配列番号２に示す。ヒトＭＵ−１レセプター鎖の推定アミノ酸配列は、アミノ酸１〜２１の推定シグナル配列を含む。成熟ヒトＭＵ−１は、配列番号２のアミノ酸２４〜５３８の配列を有すると考えられる。膜貫通ドメインは、アミノ酸２３７〜２５４に見出される。
【００３１】
別の特に好ましい実施形態では、本発明のＭＵ−１タンパク質分子およびＭＵ−１核酸分子は、マウスＭＵ−１分子である。マウスＭＵ−１タンパク質をコードするポリヌクレオチド配列を同定するために、ＭＵ−１レセプターのマウスホモログの部分フラグメントを、実施例１に記載されるように、ヒト配列から誘導されたオリゴヌクレオチドを用いるＰＣＲによってマウスｃＤＮＡから単離した。このフラグメントのＤＮＡ配列を決定し、そして２つのオリゴヌクレオチドを、以下の配列を用いて、このフラグメントの内部部分から誘導した：
ＴＴＧＡＡＣＧＴＧＡＣＴＧＴＧＧＣＣＴＴ（５ｐ）（配列番号１３）
ＴＧＡＡＴＧＡＡＧＴＧＣＣＴＧＧＣＴＧＡ（３ｐ）（配列番号１４）。
これらのオリゴヌクレオチドを用いて、元のＰＣＲ産物（図１および配列番号９のマウスｃＤＮＡ配列のヌクレオチド７８１〜１０４３に対応する）の内部の２６２ヌクレオチドフラグメントを増幅し、２Ｄ６ Ｔ細胞株から単離されたｃＤＮＡライブラリーをスクリーニングするためのハイブリダイゼーションプローブとして用いた。ＤＮＡ配列を、２つの独立したクローンから決定した。クローン６を配列決定し、そしてヒトＭＵ−１の全長マウスホモログであることを確認した。
【００３２】
マウスＭＵ−１の全長ヌクレオチド配列を、図１（配列番号９のヌクレオチド１〜２６２８に対応する）に示す。このヌクレオチド配列は、推定リーダー配列をヌクレオチド４０７〜４６４に、コード配列をヌクレオチド４０７〜１９９３に、そして終結コドンをヌクレオチド１９９４〜１９９７に有する。ヌクレオチド１〜４０６は、５’非翻訳領域に対応し、そしてヌクレオチド１９９８〜２６２８は３’非翻訳領域に対応する。マウスＭＵ−１の推定タンパク質配列を図２（配列番号１０のアミノ酸１〜５２９に対応する）に示す。
【００３３】
このマウスＭＵ−１タンパク質は、ＳＰＳｃａｎ（スコア＝１０．１）によって決定したところ、推定リーダー配列（配列番号１０のアミノ酸１〜１９に対応する）、および推定膜貫通ドメイン（配列番号１０のアミノ酸２３７〜２５３に対応する）を含む。推定シグナルモチーフは、以下の領域を含む：ボックス１：配列番号１０のアミノ酸２６５〜２７４、ボックス２：配列番号１０のアミノ酸３１０〜３２４、配列番号１０の２８１位、３１９位、３６１位、３６８位、３９７位および５１０位の６個のチロシン残基。潜在的なＳＴＡＴドッキング部位は、ＳＴＡＴ ５：ＥＤＤＧＹＰＡ、ＳＴＡＴ ３：ＹＬＱＲを含むがこれらに限定されない。
【００３４】
ＭＵ−１のオープンリーディングフレームは、造血素レセプターファミリーの新規メンバーをコードする。好ましい実施形態では、ＭＵ−１は、リーダー配列、保存されたシステイン対、このファミリーに特有のＰＰモチーフおよびＷＳＸＷＳ（配列番号８）モチーフ、ならびに膜貫通ドメインおよび広範囲にわたる細胞質ドメインを有する。ＭＵ−１はまた、細胞質ドメイン中に、保存されたＰＸＰＰならびにボックスＩおよびボックスＩＩのシグナル伝達モチーフを含む（図５を参照のこと）。これらのドメインは、マウスＭＵ−１とヒトＭＵ−１との間で保存される。その後のＧｅｎＰｅｐｔを用いたＭＵ−１配列のＦＡＳＴＡ整列は、ヒトＩＬ−２Ｒｂと最大の相同性を示した（図５を参照のこと）。
【００３５】
ヒトＭＵ−１ ｃＤＮＡを、登録番号ＡＴＣＣ ９８６８７として１９９８年３月１０日にＡｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎに寄託した。
【００３６】
ノーザン分析によって、実施例４に記載されるように、マウスＭＵ−１は、成体マウスの脾臓組織、肺組織および心臓組織において検出された。ヒトＭＵ−１は、成体ヒトのリンパ組織、ＰＢＬ、胸腺、脾臓およびリンパ節において、ならびに胎児肺において検出された。
【００３７】
全長よりも短い任意の形態のＭＵ−１タンパク質は、本発明の範囲内に包含され、そして全長および成熟形態とともに本明細書中で集合的に「ＭＵ−１」または「ＭＵ−１タンパク質」と呼ばれる。全長よりも短いＭＵ−１タンパク質は、全長ＭＵ−１タンパク質（配列番号４または配列番号６）をコードするポリヌクレオチドの対応するフラグメントを発現させることによって産生され得る。これらの対応するポリヌクレオチドフラグメントもまた、本発明の一部である。上記の通りの改変されたポリヌクレオチドは、標準的な分子生物学的技術（適切な所望の欠失変異体の構築を含む）によって、部位特異的変異誘発法、または適切なオリゴヌクレオチドプライマーを使用するポリメラーゼ連鎖反応によって作製され得る。
【００３８】
本発明の目的のために、タンパク質は、対応する成熟ＭＵ−１タンパク質の１以上の生物学的活性を保有する場合、「ＭＵ−１造血素レセプタースーパーファミリー鎖の生物学的活性」を有する。１つの実施形態では、ＭＵ−１活性は、ＳＴＡＴ分子（例えば、ＳＴＡＴ ５、ＳＴＡＴ ３）との相互作用を含む。別の実施形態では、ＭＵ−１タンパク質の活性は、いかなる公知のサイトカインへの結合も含まない。
【００３９】
ＭＵ−１またはその活性なフラグメント（ＭＵ−１タンパク質）は、キャリア分子（例えば、免疫グロブリンまたは免疫グロブリンフラグメント）に融合され得る。例えば、可溶性形態のＭＵ−１は、「リンカー」配列を通して、免疫グロブリンのＦｃ部分へと融合され得る。他の融合タンパク質（例えば、ＧＳＴ、Ｌｅｘ−ＡまたはＭＢＰを有する融合タンパク質）もまた用いられ得る。
【００４０】
本発明はまた、配列番号１および配列番号９に示すようなヌクレオチド配列の対立遺伝子改変体（すなわち、ＭＵ−１タンパク質（好ましくはＭＵ−１の生物学的活性を有するタンパク質）をまたコードする、配列番号１または配列番号９の天然に存在する選択的形態の単離されたポリヌクレオチド）を包含する。本発明にはまた包含されるのは、配列番号１または配列番号９に示されるヌクレオチド配列に、非常にストリンジェントな条件（例えば、６５℃で０．１×ＳＳＣ）下でハイブリダイズする、単離されたポリヌクレオチドである。ＭＵ−１タンパク質をコードするが、遺伝暗号の縮重によって、配列番号１または配列番号９に示されるヌクレオチド配列とは異なる、単離されたポリヌクレオチドもまた本発明によって包含される。点変異または誘導改変によって引き起こされる、配列番号１または配列番号９に示されるようなヌクレオチド配列におけるバリエーションもまた、本発明に包含される。
【００４１】
本明細書中で使用される場合、用語「ストリンジェントな条件下でハイブリダイズする」は、互いに少なくとも６０％同一なヌクレオチド配列が代表的に、互いにハイブリダイズしたままである、ハイブリダイゼーションおよび洗浄についての条件を記載することを意図する。好ましくは、この条件は、互いに少なくとも約７０％、より好ましくは少なくとも約８０％、さらにより好ましくは少なくとも約８５％または９０％同一な配列が代表的に、互いにハイブリダイズしたままである条件である。このようなストリンジェントな条件は当業者に公知であり、そしてＣｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ，Ｎ．Ｙ．（１９８９），６．３．１−６．３．６に見出され得る。ストリンジェントなハイブリダイゼーション条件の好ましい非限定的な例は、約４５℃での６×塩化ナトリウム／クエン酸ナトリウム（ＳＳＣ）中でのハイブリダイゼーション、続いて０．２×ＳＳＣ、０．１％ ＳＤＳ中での５０℃（好ましくは５５℃、より好ましくは６０℃、そしてさらにより好ましくは６５℃）での１回以上の洗浄である。上記で記載した値にわたる範囲（例えば、５５℃〜６０℃または５０℃〜６５℃）は、本発明によって包含される。好ましくは、配列番号１または配列番号９の配列に、ストリンジェントな条件下でハイブリダイズする、本発明の単離された核酸分子は、天然に存在する核酸分子に対応する。本明細書中で使用される場合、「天然に存在する」核酸分子とは、天然に存在する（例えば、天然タンパク質をコードする）ヌクレオチド配列を有する、ＲＮＡ分子またはＤＮＡ分子をいう。
【００４２】
２つのアミノ酸配列または２つの核酸配列の同一性％を決定するために、これらの配列は、最適な比較目的のために整列される（例えば、第一および第二のアミノ酸配列または核酸配列の一方または両方に、最適な整列のためにギャップが導入され得、そして同一でない配列は、比較目的のために無視され得る）。好ましい実施形態では、比較目的のために整列された参照配列の長さは、参照配列の長さの少なくとも３０％、好ましくは少なくとも４０％、より好ましくは少なくとも５０％、さらにより好ましくは少なくとも６０％、そしてさらにより好ましくは少なくとも７０％、８０％、または９０％である。次いで、対応するアミノ酸位置もしくはヌクレオチド位置でのアミノ酸残基またはヌクレオチドが比較される。第一の配列における位置が、第二の配列における対応する位置と同じアミノ酸残基またはヌクレオチドで占められていたならば、この分子はその位置で同一である（本明細書中で使用される場合、アミノ酸または核酸の「同一性」は、アミノ酸または核酸の「相同性」と等価である）。２つの配列間の同一性パーセントは、２つの配列の最適な整列のために導入する必要があるギャップの数および各ギャップの長さを考慮に入れた、これらの配列によって共有される同一位置数の関数である。
【００４３】
２つの配列間の配列比較および同一性パーセントの決定は、数理的アルゴリズムを使用して達成され得る。好ましい実施形態において、２つのアミノ酸配列間の同一性パーセントは、ＧＣＧソフトウェアパッケージ（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｇｃｇ．ｃｏｍにおいて入手可能）中のＧＡＰプログラム中に組込まれたＮｅｅｄｌｅｍａｎおよびＷｕｎｓｃｈ（Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．（４８）：４４４−４５３（１９７０））アルゴリズムを用い、Ｂｌｏｓｕｍ ６２マトリックスまたはＰＡＭ２５０マトリックスのいずれか、ならびにギャップウェイト（ｇａｐ ｗｅｉｇｈｔ）＝１６、１４、１２、１０、８、６、または４、およびレングスウェイト（ｌｅｎｇｔｈ ｗｅｉｇｈｔ）＝１、２、３、４、５、または６を使用して決定される。さらに別の好ましい実施形態において、２つのヌクレオチド配列間の同一性パーセントは、ＧＣＧソフトウェアパッケージ（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｇｃｇ．ｃｏｍにおいて入手可能）中のＧＡＰプログラムを用い、ＮＷＳｇａｐｄｎａ．ＣＭＰマトリックス、およびギャップウェイト（ｇａｐ ｗｅｉｇｈｔ）＝４０、５０、６０、７０、または８０、およびレングスウェイト（ｌｅｎｇｔｈ ｗｅｉｇｈｔ）＝１、２、３、４、５、または６を使用して決定される。別の実施形態において、２つのアミノ酸配列間または２つのヌクレオチド配列間の同一性パーセントは、ＡＬＩＧＮプログラム（バージョン２．０）中に組込まれたＥ．ＭｅｙｅｒｓおよびＷ．Ｍｉｌｌｅｒ（ＭｙｅｒｓおよびＭｉｌｌｅｒ，１９８８，Ｃｏｍｐｕｔ．Ａｐｐｌ．Ｂｉｏｓｃｉ．４：１１−１７）のアルゴリズムを用い、ＰＡＭ１２０ウェイト残基表（ｗｅｉｇｈｔ ｒｅｓｉｕｅ ｔａｂｌｅ）、ギャップレングスペナルティ（ｇａｐ ｌｅｎｇｔｈ ｐｅｎａｌｔｙ）＝１２、およびギャップペナルティ（ｇａｐ ｐｅｎａｌｔｙ）＝４を使用して決定される。
【００４４】
本発明の核酸配列およびタンパク質配列はさらに、公共のデータベースに対する検索を実行するための「問い合わせ配列」としてさらに使用されて、例えば、他のファミリーのメンバーまたは関連する配列を同定し得る。このような検索はＡｌｔｓｃｈｕｌら（（１９９０）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２１５：４０３−１０）のＮＢＬＡＳＴプログラムおよびＸＢＬＡＳＴプログラム（バージョン２．０）を用いて実行され得る。ＢＬＡＳＴヌクレオチド検索は、ＮＢＬＡＳＴプログラム、スコア（ｓｃｏｒｅ）＝１００、ワードレングス（ｗｏｒｄｌｅｎｇｔｈ）＝１２を用いて実行されて、本発明のＡｄｈｒ−１核酸分子に相同性のヌクレオチド配列を獲得し得る。ＢＬＡＳＴタンパク質検索は、ＸＢＬＡＳＴプログラム、スコア（ｓｃｏｒｅ）＝１００、ワードレングス（ｗｏｒｄｌｅｎｇｔｈ）＝３を用いて実行されて、本発明のＡｄｈｒ−１タンパク質分子に相同性のアミノ酸配列を獲得し得る。比較目的のためにギャップの入った整列を獲得するために、Ｇａｐｐｅｄ ＢＬＡＳＴを、Ａｌｔｓｃｈｕｌら（１９９７）Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．２５（１７）：３３８９−３４０２に記載されるように利用し得る。ＢＬＡＳＴプログラムおよびＧａｐｐｅｄ ＢＬＡＳＴプログラムを利用する場合、それぞれのプログラム（例えば、ＸＢＬＡＳＴおよびＮＢＬＡＳＴ）のデフォルトパラメーターを使用し得る。ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ．を参照のこと。
【００４５】
本発明はまた、他の動物種（特に、他の哺乳動物種）由来のヒトＭＵ−１のホモログをコードするポリヌクレオチドを提供する。種ホモログは、本明細書中に開示されるマウス配列またはヒト配列からプローブまたはプライマーを作製し、そして適切な種由来のライブラリー（例えば、関連する種のＰＢＭＣ、胸腺または精巣から構築されたライブラリーなど）をスクリーニングすることによって同定および単離され得る。
【００４６】
本発明の単離されたポリヌクレオチドは、ＭＵ−１タンパク質を組み換え産生するために、Ｋａｕｆｍａｎら、Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．１９，４４８５−４４９０（１９９１）に開示されるｐＭＴ２発現ベクターまたはｐＥＤ発現ベクターのような発現制御配列に作動可能に連結され得る。多くの適切な発現制御配列が、当該分野で公知である。組換えタンパク質を発現させる一般的な方法もまた公知であり、そしてＲ．Ｋａｕｆｍａｎ、Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ １８５，５３７−５６６（１９９０）に例示される。本明細書中に規定されるように、「作動可能に連結された」は、連結されたポリヌクレオチド／発現制御配列を用いて形質転換（トランスフェクト）された宿主細胞によってＭＵ−１タンパク質が発現されるような様式で、本発明の単離されたポリヌクレオチドと発現制御配列との間に共有結合を形成するように酵素的または化学的に連結されることを意味する。
【００４７】
多数の型の細胞が、ＭＵ−１タンパク質の発現のための適切な宿主細胞として作用し得る。機能的なＭＵ−１タンパク質を発現し得る任意の細胞型が、使用され得る。適切な哺乳動物宿主細胞としては、例えば、サルＣＯＳ細胞、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞、ヒト腎臓２９３細胞、ヒト上皮Ａ４３１細胞、ヒトＣｏｌｏ２０５細胞、３Ｔ３細胞、ＣＶ−１細胞、他の形質転換された霊長類細胞株、正常複相体細胞、インビトロ初代培養の組織由来の細胞株、初代外植片、ＨｅＬａ細胞、マウスＬ細胞、ＢＨＫ細胞、ＨＬ−６０細胞、Ｕ９３７細胞、ＨａＫ細胞、Ｒａｔ２細胞、ＢａＦ３細胞、３２Ｄ細胞、ＦＤＣＰ−１細胞、ＰＣ１２細胞、Ｍ１ｘ細胞、Ｃ２Ｃ１２細胞が挙げられる。
【００４８】
ＭＵ−１タンパク質はまた、１つ以上の昆虫発現ベクターにおいて本発明の単離されたポリヌクレオチドを適切な制御配列に作動可能に連結し、そして昆虫発現系を使用することによって、産生され得る。バキュロウイルス／昆虫細胞発現系についての材料および方法は、例えば、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ，Ｕ．Ｓ．Ａ．からのキットの形態（ＭａｘＢａｃ（登録商標）キット）で市販され、そしてそのような方法は、ＳｕｍｍｅｒｓおよびＳｍｉｔｈ，Ｔｅｘａｓ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔ Ｓｔａｔｉｏｎ Ｂｕｌｌｅｔｉｎ Ｎｏ．１５５５（１９８７）（本明細書中に参考として援用される）に記載されるように当該分野で周知である。ＭＵ−１タンパク質の可溶性形態がまた、上記のような適切な単離ポリヌクレオチドを用いて昆虫細胞中で産生され得る。
【００４９】
あるいは、ＭＵ−１タンパク質は、酵母のような下等真核生物または細菌のような原核生物中で産生され得る。適切な酵母株としては、Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ、Ｓｃｈｉｚｏｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｐｏｍｂｅ、Ｋｌｕｙｖｅｒｏｍｙｃｅｓ株、Ｃａｎｄｉｄａ、または異種タンパク質を発現し得る任意の酵母株が挙げられる。適切な細菌株としては、Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ、Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌｉｓ、Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ ｔｙｐｈｉｍｕｒｉｕｍ、または異種タンパク質を発現し得る任意の細菌株が挙げられる。
【００５０】
細菌中での発現は、組換えタンパク質を組込んだ封入体の形成をもたらし得る。従って、活性な材料またはより活性な材料を産生するために、組換えタンパク質の再折り畳みが、必要であり得る。正確に折り畳まれた異種タンパク質を細菌封入体から得るためのいくつかの方法が、当該分野で公知である。これらの方法は一般的に、タンパク質を封入体から可溶化する工程、次いで、カオトロピック薬剤を使用してこのタンパク質を完全に変性する工程を包含する。システイン残基がタンパク質の一次アミノ酸配列中に存在する場合、ジスルフィド結合の正確な形成を可能にする環境下（酸化還元系）で再折り畳みを達成することが、しばしば必要である。再折り畳みの一般的な方法は、Ｋｏｈｎｏ，Ｍｅｔｈ．Ｅｎｚｙｍ．，１８５：１８７−１９５（１９９０）に開示される。ＥＰ ０４３３２２５および同時係属出願ＵＳＳＮ ０８／１６３，８７７は、他の適切な方法を記載する。
【００５１】
本発明のＭＵ−１タンパク質はまた、トランスジェニック動物の生成物として、例えば、ＭＵ−１タンパク質をコードするポリヌクレオチド配列を含む体細胞または生殖細胞によって特徴付けられる、トランスジェニックウシ、トランスジェニックヤギ、トランスジェニックブタ、またはトランスジェニックヒツジの乳汁成分として発現され得る。
【００５２】
本発明のＭＵ−１タンパク質は、所望のタンパク質を発現するのに必要な培養条件下で形質転換された培養宿主細胞を増殖させることによって調製され得る。次いで、生じる発現タンパク質は、この培養培地または細胞抽出物から精製され得る。本発明のＭＵ−１タンパク質の可溶性形態は、馴化培地から精製され得る。本発明のＭＵ−１タンパク質の膜結合形態は、発現している細胞から総膜画分を調製し、そして非イオン性変性剤（例えば、Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ−１００）を用いてこの膜を抽出することによって精製され得る。
【００５３】
ＭＵ−１タンパク質は、当業者に公知の方法を用いて精製され得る。例えば、本発明のＭＵ−１タンパク質は、市販のタンパク質濃縮フィルター（例えば、ＡｍｉｃｏｎまたはＭｉｌｌｉｐｏｒｅ Ｐｅｌｌｉｃｏｎ限外濾過ユニット）を用いて濃縮され得る。濃縮工程後、濃縮物は、ゲル濾過媒体のような精製マトリックスにアプライされ得る。あるいは、陰イオン交換樹脂（例えば、ペンダントジエチルアミノエチル（ＤＥＡＥ）基もしくはポリエチレンイミン（ＰＥＩ）基を有するマトリックスまたは基材）が、使用され得る。マトリックスは、アクリルアミド、アガロース、デキストラン、セルロース、またはタンパク質精製に一般的に使用される他の型であり得る。あるいは、陽イオン交換工程が、使用され得る。適切な陽イオン交換体としては、スルホプロピル基またはカルボキシメチル基を含む種々の不溶性マトリックスが挙げられる。スルホプロピル基（例えば、Ｓ−Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ（登録商標）カラム）が、好ましい。培養上清からのＭＵ−１タンパク質の精製はまた、コンカナバリンＡ−アガロース、ｈｅｐａｒｉｎ−ｔｏｙｏｐｅａｒｌ（登録商標）またはＣｉｂａｃｒｏｍ ｂｌｕｅ ３ＧＡ Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ（登録商標）のようなアフィニティー樹脂で；あるいは、フェニルエーテル、ブチルエーテル、またはプロピルエーテルのような樹脂を用いた疎水性相互作用クロマトグラフィーによる；あるいは、免疫アフィニティークロマトグラフィーによる、１つ以上のカラム工程が挙げられ得る。最後に、疎水性ＲＰ−ＨＰＬＣ媒体（例えば、ペンダントメチル基または他の脂肪族基を有するシリカゲル）を使用する１つ以上の逆相高速液体クロマトグラフィー（ＲＰ−ＨＰＬＣ）工程が、ＭＵ−１タンパク質をさらに精製するために使用され得る。ＭＵ−１タンパク質に対する抗体を含むアフィニティーカラムもまた、公知の方法に従って精製に使用され得る。種々の組合わせまたは他の公知の方法における、上記の精製工程のうちのいくつかまたは全てがまた使用されて、実質的に精製された単離組み換えタンパク質を提供し得る。好ましくは、単離されたＭＵ−１タンパク質は、他の哺乳動物タンパク質を実質的に含まないように、精製される。
【００５４】
本発明のＭＵ−１タンパク質はまた、ＭＵ−１に結合し得る因子をスクリーニングするために使用され得る。所望の結合タンパク質（固定されているかまたは固定されていない）を用いた結合アッセイが、当該分野で周知であり、そして本発明のＭＵ−１タンパク質を使用する本目的のために使用され得る。精製された細胞に基づくスクリーニングアッセイまたは精製されたタンパク質に基づく（無細胞）スクリーニングアッセイが、このような因子を同定するために使用され得る。例えば、ＭＵ−１タンパク質は、精製形態でキャリアに固定され得、そして精製されたＭＵ−１タンパク質に対する結合または潜在的なリガンドが、測定され得る。
【００５５】
ＭＵ−１タンパク質（細胞から精製されたか、または組み換え生成された）は、薬学的に受容可能なキャリアと組み合わせた場合に、薬学的組成物として用いられ得る。このような組成物は、ＭＵ−１またはインヒビターおよびキャリアに加えて、種々の希釈剤、充填剤、塩、緩衝液、安定化剤、可溶化剤、および当該分野で周知の他の物質を含み得る。用語、「薬学的に受容可能な」とは、活性成分の生物学的活性の有効性を妨害しない非毒性の物質を意味する。キャリアの特徴は、投与の経路に依存する。
【００５６】
本発明の薬学的組成物はまた、サイトカイン、リンホカイン、またはＭ−ＣＳＦ、ＧＭ−ＣＳＦ、ＩＬ−１、ＩＬ−２、ＩＬ−３、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−６、ＩＬ−７、ＩＬ−８、ＩＬ−９、ＩＬ−１０、ＩＬ−１１、ＩＬ−１２、ＩＬ−１４、ＩＬ−１５、Ｇ−ＣＳＦ、幹細胞因子、およびエリスロポエチンのような他の造血因子を含み得る。この薬学的組成物はまた、抗サイトカイン抗体も含み得る。この薬学的組成物は、プラスミノゲン活性化因子および第ＶＩＩＩ因子のような血栓溶解性因子または抗血栓性因子を含み得る。この薬学的組成物はさらに、他の抗炎症性因子を含み得る。このようなさらなる因子（ｆａｃｔｏｒ）および／または物質（ａｇｅｎｔ）は、この薬学的組成物中に含まれて、単離されたＭＵ−１タンパク質と相乗効果を生じ得るか、または単離されたＭＵ−１タンパク質によって生じる副作用を最小にし得る。逆に、単離されたＭＵ−１タンパク質は、特定のサイトカイン、リンホカイン、他の造血因子、血栓溶解因子もしくは抗血栓性因子、または抗炎症剤の処方物に含まれて、サイトカイン、リンホカイン、他の造血因子、血栓溶解因子もしくは抗血栓性因子、または抗炎症剤の副作用を最小限にし得る。
【００５７】
本発明の薬学的組成物は、単離されたＭＵ−１タンパク質が、他の薬学的に受容可能なキャリアに加えて、水溶液中に、ミセルとして凝集形態で存在する脂質のような両親媒性因子と組み合わせられるリポソーム、不溶性単層、液晶、または層状層（ｌａｍｅｌｌａｒ ｌａｙｅｒ）の形態中に存在し得る。リポソーム処方物のために適切な脂質としては、限定はしないが、モノグリセリド、ジグリセリド、スルファチド、リゾレシチン、リン脂質、サポニン、胆汁酸などが挙げられるがこれらに限定されない。このようなリポソーム処方物の調製は、例えば、米国特許第４，２３５，８７１号；米国特許第４，５０１，７２８号；米国特許第４，８３７，０２８号；および米国特許第４，７３７，３２３号（これらの全てが、本明細書において参考として援用されている）に記載のように、当業者のレベルの範囲内である。
【００５８】
本明細書において用いる場合、用語「治療的有効量」とは、意味のある患者の利点（例えば、このような状態の症状の改善、このような状態の治癒、またはこのような状態の治癒率の上昇）を示すのに十分である、この薬学的組成物の各々の活性成分の総量または方法を意味する。単独で投与された、個々の活性成分に対して適用される場合、この用語は、その成分単独をいう。組み合わせ（併用）に対して適用される場合、この用語は、組み合わせて投与されても、連続して投与されても、または同時に投与されても、治療効果を生じる活性成分の合わせた量をいう。
【００５９】
本発明の処置または使用の方法の実施において、治療的有効量の単離されたＭＵ−Ｉタンパク質が哺乳動物に投与される。単離されたＭＵ−１タンパク質は、単独でか、または他の治療（例えば、サイトカイン、リンホカイン、または他の造血因子を使用する処置）と組み合わせてのいずれかで、本発明の方法に従って投与され得る。１つ以上のサイトカイン、リンホカイン、または他の造血因子とともに同時投与される場合、ＭＵ−１タンパク質は、サイトカイン、リンホカイン、他の造血因子、血栓溶解因子もしくは抗血栓性因子と同時にか、または連続してのいずれかで投与され得る。連続的に投与される場合、主治医は、サイトカイン、リンホカイン、他の造血因子、血栓溶解因子もしくは抗血栓性因子と組み合わせた、ＭＵ−１タンパク質投与の適切な順序を決定する。
【００６０】
薬学的組成物において用いられるＭＵ−１タンパク質の投与、または本発明の本発明法を実施するために用いられるＭＵ−１タンパク質の投与は、従来の種々の方法（例えば、経口摂取、吸引、または皮膚注射、皮下注射、もしくは静脈注射）で実行され得る。患者に対する静脈投与が好ましい。
【００６１】
治療上有効な量のＭＵ−１タンパク質を経口的に投与する場合、ＭＵ−１タンパク質は、錠剤、カプセル、粉末、溶液、またはエリキシルの形態である。錠剤形態で投与される場合、本発明の薬学的組成物は、ゼラチンまたはアジュバントのような固体キャリアをさらに含み得る。この錠剤、カプセル、および粉末は、約５〜９５％のＭＵ−１タンパク質、そして好ましくは、約２５〜９０％のＭＵ−１タンパク質を含む。液体形態で投与される場合、液体キャリア（例えば、水、石油、動物もしくは植物起源の油脂（例えば、ピーナッツオイル、鉱油、ダイズ油、またはゴマ油）、または合成油）が添加され得る。この薬学的組成物の液体形態は、さらに、生理食塩水溶液、デキストロースもしくは他の糖溶液、またはグリコール（例えば、エチレングリコール、プロピレングリコール、またはポリエチレングリコール）を含み得る。液体形態で投与される場合、この薬学的組成物は、約０．５〜９０重量％のＭＵ−１タンパク質、そして好ましくは約１〜５０％のＭＵ−１タンパク質を含む。
【００６２】
治療上有効な量のＭＵ−１タンパク質を静脈注射、皮膚注射、または皮下注射によって投与する場合、ＭＵ−１タンパク質は、パイロジェン（発熱物質）のない、非経口的に受容可能な水溶液の形態である。このような非経口的に受容可能なタンパク質溶液（ｐＨによって、等張性、安定性などを有する）の調製は、当該分野の範囲内である。静脈注射、皮膚注射、または皮下注射のために好ましい薬学的組成物は、ＭＵ−１タンパク質に加えて、等張性ビヒクル（例えば、注射用塩化ナトリウム、注射用リンゲル液、注射用デキストロース、注射用デキストロースおよび塩化ナトリウム、注射用乳酸リンゲル液、または当該分野で公知の他のビヒクル）を含むべきである。本発明の薬学的組成物はまた、安定化剤、保存剤、緩衝液、抗酸化剤、または当業者に公知の他の添加物を含み得る。
【００６３】
本発明の薬学的組成物中のＭＵ−１タンパク質の量は、処置される状態の性質および重篤度、ならびに患者が以前に受けた事前処置の性質に依存する。結局、主治医が、各々の個々の患者を処置するＭＵ−１タンパク質の量を決定する。最初に、主治医は、低用量のＭＵ−１タンパク質を投与して、患者の反応を観察する。ＭＵ−１タンパク質のさらに高い用量を、患者に至適の治療効果が得られるまで投与し得るが、その時点でこの投薬量は、さらに漸増されることはない。本発明の方法を実施するために用いられる種々の薬学的組成物は、体重１ｋｇあたり、約０．１μｇ〜約１００ｍｇのＭＵ−１タンパク質を含むべきことが意図される。
【００６４】
本発明の薬学的組成物を用いる静脈内治療の期間は、処置される疾患の重篤度、ならびに各々の個々の患者の状態および可能性のある特有の応答に依存して変化する。ＭＵ−１タンパク質の各出願の期間は、１２〜２４時間の範囲の連続的静脈投与であることが意図される。結局、主治医は、本発明の薬学的組成物を用いて静脈治療の適切な期間を決定する。
【００６５】
本発明のポリヌクレオチドおよびタンパク質は、以下に同定された、１つ以上の用途または生物学的活性（本明細書に言及されるアッセイに関連するものを含む）を示すと期待される。本発明のタンパク質について記載された用途または活性は、このようなタンパク質の投与もしくは使用によって、またはこのようなタンパク質をコードするポリヌクレオチドの投与もしくは使用によって（例えば、遺伝子治療において、またはＤＮＡの導入に適切なベクターにおいて）、提供され得る。
【００６６】
（サイトカインおよび細胞増殖／細胞分化活性）
本発明のタンパク質は、サイトカイン活性、細胞増殖（誘導または阻害のいずれか）活性、もしくは細胞分化（誘導または阻害のいずれか）活性を示し得るか、または特定の細胞集団における他のサイトカインの産生を誘導し得る。
【００６７】
今日までに発見された多くのタンパク質因子（全ての公知のサイトカインを含む）は、１つ以上の因子依存性細胞増殖アッセイにおいて活性を示しており、従って、このアッセイは、サイトカイン活性の都合のよい確証として機能する。本発明のタンパク質の活性は、以下：３２Ｄ、ＤＡ２、ＤＡ１Ｇ、Ｔ１０、Ｂ９、Ｂ９／１１、ＢａＦ３、ＭＣ９／Ｇ、Ｍ＋（プレＢ Ｍ＋）、２Ｅ８、ＲＢ５、ＤＡ１、１２３、Ｔ１１６５、ＨＴ２、ＣＴＬＬ２、ＴＦ−１、Ｍｏ７ｅ、およびＣＭＫを含むがこれらに限定されない細胞株についての多数の慣用的な因子依存性細胞増殖アッセイのいずれか１つによって証明されている。
【００６８】
ｈｕＥＰＯＲ−ｈｕＭＵキメラレセプターを発現するＢＡＦ−３細胞は、ｈｕＥＰＯに応答して増殖する。ＭＵレセプターが、その細胞質ドメインを通じてシグナル伝達する能力を試験するために、ＢＡＦ−３細胞を操作して、ＥＰＯｒ／ＭＵ（ｃｙｔｏ）キメラレセプターを発現し、そしてＥＰＯの存在下における３Ｈチミジンの取り込みについてアッセイした。インタクトなＥＰＯｒ分子を発現するＢＡＦ−３細胞は、ＥＰＯに応答して増殖するが、親のＢＡＦ−３細胞は増殖しない。Ａ５クローン（キメラＥＰＯｒ／ＭＵ（ｃｙｔｏ）を保有する）は、ＥＰＯに応答して増殖し、このことは、ＭＵ−１の細胞質部分が、増殖シグナルを保持し得ることを実証する。ＢＡＦ−３細胞（その表面上でＥＰＯｒを発現する）はまた、ＥＰＯに応答する。
【００６９】
本発明のタンパク質の活性は、他にも方法はあるが、以下の方法によって測定され得る：
Ｔ細胞または胸腺細胞の増殖についてのアッセイとしては、以下に記載されるアッセイが、これらに制限することなく挙げられる：Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，Ｊ．Ｅ．Ｃｏｌｉｇａｎ，Ａ．Ｍ．Ｋｒｕｉｓｂｅｅｋ，Ｄ．Ｈ．Ｍａｒｇｕｌｉｅｓ，Ｅ．Ｍ．Ｓｈｅｖａｃｈ，Ｗ Ｓｔｒｏｂｅｒ編，Ｐｕｂ．Ｇｒｅｅｎｅ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ａｓｓｏｃｉａｔｅｓ ａｎｄ Ｗｉｌｅｙ−Ｉｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅ（第３章、Ｉｎ Ｖｉｔｒｏ ａｓｓａｙｓ ｆｏｒ Ｍｏｕｓｅ Ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅ Ｆｕｎｃｔｉｏｎ ３．１−３．１９；第７章、Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃ ｓｔｕｄｉｅｓ ｉｎ Ｈｕｍａｎｓ）；Ｔａｋａｉら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１３７：３４９４−３５００，１９８６；Ｂｅｒｔａｇｎｏｌｌｉら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４５：１７０６−１７１２，１９９０；Ｂｅｒｔａｇｎｏｌｌｉら、Ｃｅｌｌｕｌａｒ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ １３３：３２７−３４１，１９９１；Ｂｅｒｔａｇｎｏｌｌｉら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４９：３７７８−３７８３，１９９２；Ｂｏｗｍａｎら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５２：１７５６−１７６１，１９９４。
【００７０】
脾細胞、リンパ節細胞、または胸腺細胞のサイトカイン産生および／または増殖についてのアッセイとしては、以下に記載されるアッセイが、これらに制限することなく挙げられる：Ｐｏｌｙｃｌｏｎａｌ Ｔ ｃｅｌｌ ｓｔｉｍｕｌａｔｉｏｎ，Ｋｒｕｉｓｂｅｅｋ，Ａ．Ｍ．およびＳｈｅｖａｃｈ，Ｅ．Ｍ．Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ．Ｊ．Ｅ．ｅ．ａ．Ｃｏｌｉｇａｎ編、第１巻、３．１２．１−３．１２．１４頁、Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ａｎｄ Ｓｏｎｓ，Ｔｏｒｏｎｔｏ．１９９４；ならびにＭｅａｓｕｒｅｍｅｎｔ ｏｆ ｍｏｕｓｅ ａｎｄ ｈｕｍａｎ Ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ γ，Ｓｃｈｒｅｉｂｅｒ，Ｒ．Ｄ．Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ．Ｊ．Ｅ．ｅ．ａ．Ｃｏｌｉｇａｎ編、第１巻、６．８．１−６．８．８頁、Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ａｎｄ Ｓｏｎｓ，Ｔｏｒｏｎｔｏ．１９９４。
【００７１】
造血細胞およびリンパ球産生細胞の増殖および分化についてのアッセイとしては、以下に記載されるアッセイが、これらに制限することなく挙げられる：Ｍｅａｓｕｒｅｍｅｎｔ ｏｆ Ｈｕｍａｎ ａｎｄ Ｍｕｒｉｎｅ Ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ ２ ａｎｄ Ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ ４，Ｂｏｔｔｏｍｌｙ，Ｋ．，Ｄａｖｉｓ，Ｌ．Ｓ．およびＬｉｐｓｋｙ，Ｐ．Ｅ．Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ．Ｊ．Ｅ．ｅ．ａ．Ｃｏｌｉｇａｎ編、第１巻、６．３．１−６．３．１２頁、Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ａｎｄ Ｓｏｎｓ，Ｔｏｒｏｎｔｏ．１９９１；ｄｅＶｒｉｅｓら、Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１７３ ：１２０５−１２１１，１９９１；Ｍｏｒｅａｕら、Ｎａｔｕｒｅ ３３６：６９０−６９２，１９８８；Ｇｒｅｅｎｂｅｒｇｅｒら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．８０：２９３１−２９３８，１９８３；Ｍｅａｓｕｒｅｍｅｎｔ ｏｆ ｍｏｕｓｅ ａｎｄ ｈｕｍａｎ ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ ６−Ｎｏｒｄａｎ，Ｒ．Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ
ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ．Ｊ．Ｅ．ｅ．ａ．Ｃｏｌｉｇａｎ編、第１巻、６．６．１−６．６．５頁、Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ａｎｄ Ｓｏｎｓ，Ｔｏｒｏｎｔｏ．１９９１；Ｓｍｉｔｈら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．８３：１８５７−１８６１，１９８６；Ｍｅａｓｕｒｅｍｅｎｔ ｏｆ ｈｕｍａｎ Ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ １１−Ｂｅｎｎｅｔｔ，Ｆ．，Ｇｉａｎｎｏｔｔｉ，Ｊ．，Ｃｌａｒｋ，Ｓ．Ｃ．およびＴｕｒｎｅｒ，Ｋ．Ｊ．Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ．Ｊ．Ｅ．ｅ．ａ．Ｃｏｌｉｇａｎ編、第１巻、６．１５．１頁、Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ａｎｄ Ｓｏｎｓ，Ｔｏｒｏｎｔｏ．１９９１；Ｍｅａｓｕｒｅｍｅｎｔ ｏｆ
ｍｏｕｓｅ ａｎｄ ｈｕｍａｎ Ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ ９−Ｃｉａｒｌｅｔｔａ，Ａ．，Ｇｉａｎｎｏｔｔｉ，Ｊ．，Ｃｌａｒｋ，Ｓ．Ｃ．およびＴｕｒｎｅｒ，Ｋ．Ｊ．Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ．Ｊ．Ｅ．ｅ．ａ．Ｃｏｌｉｇａｎ編、第１巻、６．１３．１頁、Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ａｎｄ Ｓｏｎｓ，Ｔｏｒｏｎｔｏ．１９９１。
【００７２】
抗原に対するＴ細胞クローンの応答についてのアッセイ（とりわけ、ＡＰＣ−Ｔ細胞相互作用に影響する、ならびにＴ細胞効果を指向するタンパク質を、増殖およびサイトカイン産生を測定することにより同定する）としては、以下に記載されるアッセイが、これらに制限することなく挙げられる：Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，Ｊ．Ｅ．Ｃｏｌｉｇａｎ，Ａ．Ｍ．Ｋｒｕｉｓｂｅｅｋ，Ｄ．Ｈ．Ｍａｒｇｕｌｉｅｓ，Ｅ．Ｍ．Ｓｈｅｖａｃｈ，Ｗ Ｓｔｒｏｂｅｒ編、Ｐｕｂ．Ｇｒｅｅｎｅ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ａｓｓｏｃｉａｔｅｓ ａｎｄ Ｗｉｌｅｙ−Ｉｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅ（第３章、Ｉｎ Ｖｉｔｒｏ ａｓｓａｙｓ ｆｏｒ Ｍｏｕｓｅ Ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅ Ｆｕｎｃｔｉｏｎ；第６章、Ｃｙｔｏｋｉｎｅｓ ａｎｄ ｔｈｅｉｒ ｃｅｌｌｕｌａｒ ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ；第７章、Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃ ｓｔｕｄｉｅｓ ｉｎ Ｈｕｍａｎｓ）；Ｗｅｉｎｂｅｒｇｅｒら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ７７：６０９１−６０９５，１９８０；Ｗｅｉｎｂｅｒｇｅｒら、Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎ．１１：４０５−４１１，１９８１；Ｔａｋａｉら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１３７：３４９４−３５００，１９８６；Ｔａｋａｉら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４０：５０８−５１２，１９８８。
【００７３】
（免疫刺激活性または免疫抑制活性）
本発明のタンパク質はまた、免疫刺激活性または免疫抑制活性（その活性に対するアッセイが本明細書中に記載される活性が挙げられるが、これらに限定されない）を示し得る。タンパク質は、種々の免疫不全および障害（重症複合型免疫不全（ＳＣＩＤ）を含む）の処置において（例えば、Ｔリンパ球および／またはＢリンパ球の成長および増殖の調節（上方または下方）、ならびにＮＫ細胞および他の細胞集団の細胞溶解活性の誘導において）有用であり得る。これらの免疫不全は、遺伝的であり得るか、またはウイルス（例えば、ＨＩＶ）および細菌もしくは真菌の感染によって引き起こされ得るか、あるいは自己免疫障害から生じ得る。より具体的には、ウイルス、細菌、真菌または他の感染（ＨＩＶ、肝炎ウイルス、ヘルペスウイルス、ミコバクテリア、Ｌｅｉｓｈｍａｎｉａ ｓｐｐ．、マラリアｓｐｐ．による感染、およびカンジダ症のような種々の真菌感染が挙げられる）によって引き起こされる感染性疾患は、本発明のタンパク質を使用して、処置可能であり得る。もちろん、これに関して、本発明のタンパク質はまた、免疫系に対するブーストが一般的に所望であり得る場合に（すなわち、癌の処置において）有用であり得る。
【００７４】
本発明のタンパク質を使用して処置され得る自己免疫障害としては、例えば、結合組織疾患、多発性硬化症、全身性エリテマトーデス、慢性関節リウマチ、自己免疫肺炎症、ギヤン−バレー症候群、自己免疫性甲状腺炎、インスリン依存性糖尿病、筋無力症、対宿主性移植片病および自己免疫炎症性眼疾患が挙げられる。本発明のこのようなタンパク質はまた、アレルギー性の反応および状態（例えば、喘息（特に、アレルギー性喘息））または他の呼吸の問題の処置において、有用であり得る。免疫抑制が所望である他の状態（例えば、器官移植が挙げられる）もまた、本発明のタンパク質を使用して処置可能であり得る。
【００７５】
ＭＵ−１ ＤＮＡはまた、クローン病に対する染色体遺伝子座をマッピングする。その結果、本発明のタンパク質は、クローン病および他の炎症性腸疾患を処置するために、使用され得る。
【００７６】
本発明のタンパク質を使用して、免疫応答を多数の様式で調節することもまた可能であり得る。ダウンレギュレーションは、既に進行している免疫応答を阻害またはブロックする形態であり得るか、あるいは免疫応答の誘導の防止を包含し得る。活性化Ｔ細胞の機能は、Ｔ細胞応答を抑制することによってか、またはＴ細胞における特異的耐性を誘導することによってか、あるいはその両方によって、阻害され得る。Ｔ細胞応答の免疫抑制は、一般に、活性な、非抗原特異的なプロセスであり、このプロセスは、抑制因子に対するＴ細胞の連続的な曝露を必要とする。耐性（これは、Ｔ細胞における非応答性またはアネルギーの誘導を伴う）は、一般的に抗原特異性である点、および耐性化因子への曝露が終了した後にも持続する点で、免疫抑制から区別可能である。機能上、耐性は、耐性化因子の非存在下での特異的抗原への再曝露の際の、Ｔ細胞応答の欠如によって、実証され得る。
【００７７】
１つ以上の抗原機能（Ｂリンパ球抗原機能（例えば、Ｂ７のような）が挙げられるが、これらに限定されない）のダウンレギュレーションまたは防止（例えば、活性化Ｔ細胞による高レベルのリンホカイン合成の防止）は、組織、皮膚および器官の移植の状況において、ならびに対宿主性移植片病（ＧＶＨＤ）において、有用である。例えば、Ｔ細胞機能のブロックは、組織移植において、組織破壊の低下を生じるはずである。代表的に、組織移植において、移植物の拒絶は、Ｔ細胞によるその移植物の外来物質としての認識を介して開始され、続いて、この移植物を破壊する免疫反応が起こる。Ｂ７リンパ球抗原の、その天然のリガンドとの相互作用を阻害またはブロックする分子を（例えば、Ｂ７−２活性を有するペプチドの可溶性の単量体形態を、単独でか、あるいは別のＢリンパ球抗原（例えば、Ｂ７−１、Ｂ７−３）の活性を有するペプチドの単量体形態または遮断抗体と組合せて）免疫細胞に、移植前に投与することによって、その天然のリガンドに対するその分子の結合が、その免疫細胞において、対応する同時刺激信号を伝達することなくもたらされ得る。この様式で、Ｂリンパ球抗原機能をブロックすることにより、免疫細胞（例えば、Ｔ細胞）によるサイトカイン合成が防止され、従って、免疫抑制剤として作用する。さらに、同時刺激の欠如はまた、Ｔ細胞をアネルギー化し、これによって被験体において耐性を誘導するに十分であり得る。Ｂリンパ球抗原ブロック試薬による、長期間の耐性の誘導は、これらのブロッキング試薬のたびたびの投与の必要性を回避し得る。十分な免疫抑制または耐性を被験体において達成するためには、Ｂリンパ球抗原の組み合わせの機能をブロックすることもまた必要であり得る。
【００７８】
器官移植拒絶またはＧＶＨＤの予防における、特定のブロッキング試薬の効力は、ヒトにおける効力を予測可能な動物モデルを使用して、評価され得る。使用され得る適切な系の例としては、ラットにおける同種異型の心臓移植片およびマウスにおける異種のランゲルハンス島細胞移植片が挙げられ、これらの両方は、Ｌｅｎｓｃｈｏｗら、Ｓｃｉｅｎｃｅ ２５７：７８９−７９２（１９９２）およびＴｕｒｋａら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ ＵＳＡ，８９：１１１０２−１１１０５（１９９２）に記載されるように、インビボでのＣＴＬＡ４Ｉｇ融合タンパク質の免疫抑制効果を試験するために使用された。さらに、ＧＶＨＤのマウスモデル（Ｐａｕｌ編、Ｆｕｎｄａｍｅｎｔａｌ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，Ｒａｖｅｎ Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，１９８９，８４６−８４７頁を参照のこと）は、インビボでのＢリンパ球抗原機能のブロックの、この疾患の発達に対する影響を決定するために、使用され得る。
【００７９】
抗原機能をブロックすることはまた、自己免疫疾患を処置するために治療的に有用であり得る。多くの自己免疫障害は、自己組織に対して反応性であり、そしてこれらの疾患の病理に関与するサイトカインおよび自己抗原の産生を促進する、Ｔ細胞の不適切な活性化の結果である。自己反応性Ｔ細胞の活性化の防止は、疾患の症状を低下または排除し得る。Ｂリンパ球抗原のレセプター：リガンド相互作用を妨害することによってＴ細胞の同時刺激をブロックする試薬の投与を使用して、Ｔ細胞の活性化を阻害し得、そしてこの疾患プロセスに関与し得る自己抗原またはＴ細胞由来のサイトカインの産生を防止し得る。さらに、ブロッキング試薬は、自己反応性Ｔ細胞の抗原特異的耐性を誘導し得、このことは、疾患の長期間の軽減をもたらし得る。自己免疫障害の予防または軽減におけるブロッキング試薬の効力は、ヒト自己免疫疾患の十分に特徴付けられた多数の動物モデルを使用して、決定され得る。例としては、マウス実験的自己免疫性脳脊髄炎、ＭＲＬ／ｌｐｒ／ｌｐｒマウスまたはＮＺＢハイブリッドマウスにおける全身性エリテマトーデス、マウス自己免疫性コラーゲン関節炎、ＮＯＤマウスおよびＢＢラットにおける真性糖尿病、ならびにマウス実験的重症筋無力症が挙げられる（Ｐａｕｌ編、Ｆｕｎｄａｍｅｎｔａｌ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，Ｒａｖｅｎ Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，１９８９，８４０−８５６頁を参照のこと）。
【００８０】
免疫応答をアップレギュレートする手段としての抗原機能（好ましくは、Ｂリンパ球抗原機能）のアップレギュレーションはまた、治療において有用であり得る。免疫応答のアップレギュレーションは、既存の免疫応答の増大または最初の免疫応答の誘発の形態であり得る。例えば、Ｂリンパ球抗原機能の刺激を介する免疫応答の増大は、ウイルス感染の場合に有用であり得る。さらに、全身性ウイルス疾患（例えば、インフルエンザ、感冒、および脳炎）は、Ｂリンパ球抗原の刺激性形態を全身的に投与することによって緩和され得る。
【００８１】
あるいは、抗ウイルス免疫応答は、患者からのＴ細胞の除去、本発明のペプチドを発現するウイルス抗原パルスＡＰＣで、または本発明の可溶性ペプチドの刺激性形態と共にウイルス抗原パルスＡＰＣでのいずれかでの、インビトロでのＴ細胞の同時刺激、およびインビトロで活性化されたＴ細胞のこの患者への再導入によって、感染した患者において増大され得る。抗ウイルス免疫応答を増大する別の方法は、感染した細胞を患者から単離し、これらの細胞を、本明細書中に記載される本発明のタンパク質をコードする核酸で、この細胞がその表面上にこのタンパク質の全てまたは一部を発現するようにトランスフェクトし、そしてこのトランスフェクトした細胞を患者に再導入することである。感染した細胞は、ここで同時刺激シグナルをインビボでＴ細胞に送達し得、そしてこれによってＴ細胞を活性化し得る。
【００８２】
別の適用において、抗原機能（好ましくは、Ｂリンパ球抗原機能）のアップレギュレーションまたは増大は、腫瘍免疫の誘導において有用であり得る。本発明の少なくとも１つのペプチドをコードする核酸でトランスフェクトされた腫瘍細胞（例えば、肉腫、黒色腫、リンパ腫、白血病、神経芽細胞腫、癌）は、被験体における腫瘍特異的耐性を克服するために、被験体に投与され得る。所望の場合、この腫瘍細胞は、ペプチドの組み合わせを発現するためにトランスフェクトされ得る。例えば、患者から得られる腫瘍細胞は、Ｂ７−２様活性を単独で有するペプチドの発現、またはＢ７−１様活性および／もしくはＢ７−３様活性を有するペプチドと関連した発現を指向する発現ベクターを用いて、エキソビボでトランスフェクトされ得る。このトランスフェクトされた腫瘍細胞は患者に戻されて、このトランスフェクトされた細胞の表面上でのこのペプチドの発現を生じる。あるいは、遺伝子治療技術が、インビボでのトランスフェクションのための腫瘍細胞を標的するために使用され得る。
【００８３】
腫瘍細胞の表面上での、Ｂリンパ球抗原の活性を有する本発明のペプチドの存在は、トランスフェクトされた腫瘍細胞に対するＴ細胞媒介免疫応答を誘導するために必要な同時刺激シグナルを、Ｔ細胞に提供する。さらに、ＭＨＣクラスＩ分子またはＭＨＣクラスＩＩ分子を欠いた腫瘍細胞、あるいは十分な量のＭＨＣクラスＩ分子またはＭＨＣクラスＩＩ分子を再発現できない腫瘍細胞は、ＭＨＣクラスＩα鎖タンパク質およびβ２ミクログロブリンタンパク質またはＭＨＣクラスＩＩα鎖タンパク質およびＭＨＣクラスＩＩβ鎖タンパク質の全てまたは一部（例えば、細胞質ドメインの短縮部分）をコードする核酸でトランスフェクトされ得、これによってＭＨＣクラスＩまたはＭＨＣクラスＩＩタンパク質を細胞表面に発現する。Ｂリンパ球抗原（例えば、Ｂ７−１、Ｂ７−２、Ｂ７−３）の活性を有するペプチドと関連しての、適切なクラスＩまたはクラスＩＩ ＭＨＣの発現は、トランスフェクトされた腫瘍細胞に対するＴ細胞媒介免疫応答を誘導する。必要に応じて、ＭＨＣクラスＩＩ関連タンパク質（例えば、不変の鎖）の発現をブロックするアンチセンス構築物をコードする遺伝子はまた、Ｂリンパ球抗原の活性を有するペプチドをコードするＤＮＡで同時トランスフェクトされ得、腫瘍関連抗原の提示を促進し、そして腫瘍特異的免疫を誘導する。従って、ヒト被験体におけるＴ細胞媒介免疫応答の誘導は、この被験体における腫瘍特異的耐性を克服するために十分であり得る。
【００８４】
本発明のタンパク質の活性は、他の手段の中でも、以下の方法によって測定され得る：
胸腺細胞または脾細胞の細胞傷害性についての適切なアッセイとしては、以下に記載されるものが挙げられるが、これらに限定されない：Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，Ｊ．Ｅ．Ｃｏｌｉｇａｎ編，Ａ．Ｍ．Ｋｒｕｉｓｂｅｅｋ，Ｄ．Ｈ．Ｍａｒｇｕｌｉｅｓ，Ｅ．Ｍ．Ｓｈｅｖａｃｈ，Ｗ Ｓｔｒｏｂｅｒ，Ｐｕｂ．Ｇｒｅｅｎｅ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ａｓｓｏｃｉａｔｅｓ ａｎｄ Ｗｉｌｅｙ−Ｉｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅ（Ｃｈａｐｔｅｒ ３，Ｉｎ Ｖｉｔｒｏ ａｓｓａｙｓ ｆｏｒ Ｍｏｕｓｅ Ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅ Ｆｕｎｃｔｉｏｎ ３．１−３．１９；Ｃｈａｐｔｅｒ ７，Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃ ｓｔｕｄｉｅｓ ｉｎ Ｈｕｍａｎｓ）；Ｈｅｒｒｍａｎｎら，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ７８：２４８８−２４９２，１９８１；Ｈｅｒｒｍａｎｎら，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１２８：１９６８−１９７４，１９８２；Ｈａｎｄａら，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１３５：１５６４−１５７２，１９８５；Ｔａｋａｉら，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１３７：３４９４−３５００，１９８６；Ｔａｋａｉら，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４０：５０８−５１２，１９８８；Ｈｅｒｒｍａｎｎら，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ７８：２４８８−２４９２，１９８１；Ｈｅｒｒｍａｎｎら，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１２８：１９６８−１９７４，１９８２；Ｈａｎｄａら，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１３５：１５６４−１５７２，１９８５；Ｔａｋａｉら，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１３７：３４９４−３５００，１９８６；Ｂｏｗｍａｎら，Ｊ．Ｖｉｒｏｌｏｇｙ ６１：１９９２−１９９８；Ｔａｋａｉら，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４０：５０８−５１２，１９８８；Ｂｅｒｔａｇｎｏｌｌｉら，Ｃｅｌｌｕｌａｒ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ １３３：３２７−３４１，１９９１；Ｂｒｏｗｎら，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５３：３０７９−３０９２，１９９４。
【００８５】
Ｔ細胞依存性免疫グロブリン応答およびアイソタイプのスイッチングについてのアッセイ（これは、とりわけ、Ｔ細胞依存性抗体応答を調節しそしてＴｈ１／Ｔｈ２プロフィールに影響するタンパク質を同定する）としては、以下に記載されるものが挙げられるが、これらに限定されない：Ｍａｌｉｓｚｅｗｓｋｉ，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４４：３０２８−３０３３，１９９０；ならびにＡｓｓａｙｓ ｆｏｒ Ｂ ｃｅｌｌ ｆｕｎｃｔｉｏｎ：Ｉｎ ｖｉｔｒｏ ａｎｔｉｂｏｄｙ ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ，Ｍｏｎｄ，Ｊ．Ｊ．およびＢｒｕｎｓｗｉｃｋ，Ｍ．、Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ．Ｊ．Ｅ．ｅ．ａ．Ｃｏｌｉｇａｎ編，Ｖｏｌ １，ｐｐ．３．８．１−３．８．１６，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ａｎｄ Ｓｏｎｓ，Ｔｏｒｏｎｔｏ．１９９４。
【００８６】
混合リンパ球反応（ＭＬＲ）アッセイ（これは、とりわけ、主にＴｈ１およびＣＴＬ応答を生成するタンパク質を同定する）としては、以下に記載されるものが挙げられるが、これらに限定されない：Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ
ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，Ｊ．Ｅ．Ｃｏｌｉｇａｎ編，Ａ．Ｍ．Ｋｒｕｉｓｂｅｅｋ，Ｄ．Ｈ．Ｍａｒｇｕｌｉｅｓ，Ｅ．Ｍ．Ｓｈｅｖａｃｈ，Ｗ Ｓｔｒｏｂｅｒ，Ｐｕｂ．Ｇｒｅｅｎｅ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ａｓｓｏｃｉａｔｅｓ ａｎｄ Ｗｉｌｅｙ−Ｉｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅ（Ｃｈａｐｔｅｒ ３，Ｉｎ Ｖｉｔｒｏ ａｓｓａｙｓ ｆｏｒ Ｍｏｕｓｅ Ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅ
Ｆｕｎｃｔｉｏｎ ３．１−３．１９；Ｃｈａｐｔｅｒ ７，Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃ ｓｔｕｄｉｅｓ ｉｎ Ｈｕｍａｎｓ）；Ｔａｋａｉら，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１３７：３４９４−３５００，１９８６；Ｔａｋａｉら，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４０：５０８−５１２，１９８８；Ｂｅｒｔａｇｎｏｌｌｉら，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４９：３７７８−３７８３，１９９２。
【００８７】
樹状細胞依存性アッセイ（これは、とりわけ、ネイティブのＴ細胞を活性化する樹状細胞によって発現されるタンパク質を同定する）としては、以下に記載されるものが挙げられるが、これらに限定されない：Ｇｕｅｒｙら，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１３４：５３６−５４４，１９９５；Ｉｎａｂａら，Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ １７３：５４９−５５９，１９９１；Ｍａｃａｔｏｎｉａら，Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ １５４：５０７１−５０７９，１９９５；Ｐｏｒｇａｄｏｒら，Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ １８２：２５５−２６０，１９９５；Ｎａｉｒら，Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｖｉｒｏｌｏｇｙ ６７：４０６２−４０６９，１９９３；Ｈｕａｎｇら，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２６４：９６１−９６５，１９９４；Ｍａｃａｔｏｎｉａら，Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ １６９：１２５５−１２６４，１９８９；Ｂｈａｒｄｗａｊら，Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｏｎ ９４：７９７−８０７，１９９４；およびＩｎａｂａら，Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ １７２：６３１−６４０，１９９０。
【００８８】
リンパ球の生存／アポトーシスについてのアッセイ（これは、とりわけ、スーパー抗原誘導後にアポトーシスを防止するタンパク質およびリンパ球のホメオスタシスを調節するタンパク質を同定する）としては、以下に記載されるものが挙げられるが、これらに限定されない：Ｄａｒｚｙｎｋｉｅｗｉｃｚら，Ｃｙｔｏｍｅｔｒｙ １３：７９５−８０８，１９９２；Ｇｏｒｃｚｙｃａら，Ｌｅｕｋｅｍｉａ ７：６５９−６７０，１９９３；Ｇｏｒｃｚｙｃａら，Ｃａｎｃｅｒ
Ｒｅｓｅａｒｃｈ ５３：１９４５−１９５１，１９９３；Ｉｔｏｈら，Ｃｅｌｌ ６６：２３３−２４３，１９９１；Ｚａｃｈａｒｃｈｕｋ，Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ １４５：４０３７−４０４５，１９９０；Ｚａｍａｉら，Ｃｙｔｏｍｅｔｒｙ １４：８９１−８９７，１９９３；Ｇｏｒｃｚｙｃａら，Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｏｎｃｏｌｏｇｙ １：６３９−６４８，１９９２。
【００８９】
Ｔ細胞の拘束および発生の初期段階に影響するタンパク質についてのアッセイとしては、以下に記載されるものが挙げられるが、これらに限定されない：Ａｎｔｉｃａら，Ｂｌｏｏｄ ８４：１１１−１１７，１９９４；Ｆｉｎｅら，Ｃｅｌｌｕｌｅｒ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ １５５：１１１−１２２，１９９４；Ｇａｌｙら，Ｂｌｏｏｄ ８５：２７７０−２７７８，１９９５；Ｔｏｋｉら，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ．Ａｃａｄ Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８８：７５４８−７５５１，１９９１。
【００９０】
本発明のＭＵ−１分子はまた、ＳＴＡＴ活性（例えば、シグナル伝達）の調節（例えば、ＳＴＡＴ分子（例えば、ＳＴＡＴ３および／またはＳＴＡＴ５）との相互作用を介する調節、およびＳＴＡＴリン酸化の調節）に関与する。ＳＴＡＴのシグナル伝達のモジュレーター、およびＳＴＡＴ分子とのＭＵ−１の相互作用のモジュレーターは、本明細書中に記載されるスクリーニングアッセイを介して同定され得る。
【００９１】
ＭＵ−１活性のモジュレーターを同定するために使用され得るアッセイとしては、ＳＴＡＴ活性（例えば、ＳＴＡＴシグナル伝達）についてのアッセイ（例えば、当該分野で公知のアッセイおよび本明細書中に記載されるアッセイ）が挙げられる。ＳＴＡＴ活性についてのアッセイはまた、例えば、Ｆｒｉｅｄｒｉｃｈ
Ｋ．ら（２００１）Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ ３８２（２）：３４３−５１に記載される。ＳＴＡＴ活性についての他のアッセイとしては、細胞増殖およびＳＴＡＴリン酸化についてのアッセイが挙げられる。
【００９２】
１つの局面において、ＭＵ−１活性のモジュレーターについてのアッセイは、細胞ベースのアッセイ（ここで、ＭＵ−１タンパク質またはその生物学的に活性な部分を発現する細胞が、試験化合物と接触され、そしてこの試験化合物がＭＵ−１活性を調節する能力（例えば、ＳＴＡＴ分子との相互作用またはＳＴＡＴシグナル伝達の調節）が決定される）である。試験化合物がＭＵ−１活性を調節する能力の決定は、例えば、ＳＴＡＴシグナル伝達、ＳＴＡＴ分子のリン酸化、細胞増殖、細胞の分化、またはサイトカインの産生をモニターすることによって達成され得る。この細胞は、例えば、哺乳動物起源の細胞（例えば、活性化Ｔ細胞）であり得る。
【００９３】
（造血調節活性）
本発明のタンパク質は、造血の調節において、従って骨髄性細胞またはリンパ球様細胞の欠失の処置において有用であり得る。コロニー形成細胞または因子依存性細胞株の支持における辺縁の生物学的な活性でさえ、以下の造血の調節への関与を示す：例えば、赤血球系前駆細胞の成長および増殖を単独または他のサイトカインと組み合わせて支持し、これにより、例えば、種々の貧血症の処置、または赤血球系前駆体細胞および／または赤血球系細胞の産生を刺激するための照射／化学療法と組み合わせた使用の有用性を示すこと；例えば、結果的に骨髄の抑制を予防または処置するための化学療法と組み合わせて有用な、骨髄性細胞（例えば、有用な顆粒球および単球／マクロファージ）の成長および増殖を支持すること（すなわち、古典的なＣＳＦ活性）；巨核球および結果的に血小板の成長および増殖を支持し、これにより、血小板減少症のような種々の血小板障害の予防または処置、および一般に、血小板の輸血の代わりにまたは補充での使用を可能にすること；ならびに／または上記の任意および全ての造血細胞に成熟し得る造血幹細胞の成長および増殖を支持すること。これにより種々の幹細胞の障害（例えば、移植を用いて処置される障害（これには、再生不良性貧血および発作性夜間血色素尿症が挙げられるが、これらに限定されない））、および正常な細胞または遺伝子治療のために遺伝子操作された細胞として、インビボまたはエキソビボのいずれかで（すなわち、骨髄移植と組み合わせるかまたは辺縁の前駆体細胞（相同性または非相同性）の移植を用いて）、照射／化学療法後に幹細胞のコンパートメントを再増殖することでの治療利用を見出す。
【００９４】
本発明のタンパク質の活性は、とりわけ、以下の方法によって測定され得る。
【００９５】
種々の造血株の増殖および分化のための適切なアッセイは、上に挙げられる。
【００９６】
胚幹細胞の分化についてのアッセイ（このアッセイにより、とりわけ、胚性分化造血に影響を及ぼすタンパク質を同定する）としては、以下に記載されるアッセイが挙げられるが、これらに限定されない：Ｊｏｈａｎｓｓｏｎら、Ｃｅｌｌｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ １５：１４１−１５１、１９９５；Ｋｅｌｌｅｒら、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ａｎｄ Ｃｅｌｌｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ １３：４７３−４８６、１９９３；ＭｃＣｌａｎａｈａｎら、Ｂｌｏｏｄ ８１：２９０３−２９１５、１９９３。
【００９７】
幹細胞の生存および分化についてのアッセイ（このアッセイにより、とりわけ、リンパ−造血を調節するタンパク質を同定する）としては、以下に記載されるアッセイが挙げられるが、これらに限定されない：Ｍｅｔｈｙｌｃｅｌｌｕｌｏｓｅ ｃｏｌｏｎｙ ｆｏｒｍｉｎｇ ａｓｓａｙｓ、Ｆｒｅｓｈｎｅｙ、Ｍ．Ｇ．、Ｃｕｌｔｕｒｅ ｏｆ Ｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃ Ｃｅｌｌｓ．Ｒ．Ｉ．Ｆｒｅｓｈｎｅｙら編、第２６５〜２６８頁、Ｗｉｅｌｙ−Ｌｉｓｓ，Ｉｎｃ．、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ、ＮＹ．１９９４；Ｈｉｒａｙａｍａら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８９：５９０７−５９１１、１９９２；Ｐｒｉｍｉｔｉｖｅ ｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃ ｃｏｌｏｎｙ ｆｏｒｍｉｎｇ ｃｅｌｌｓ ｗｉｔｈ ｈｉｇｈ ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｖｅ ｐｏｔｅｎｔｉａｌ、ＭｃＮｉｅｃｅ、Ｉ．Ｋ．およびＢｒｉｄｄｅｌｌ，Ｒ．Ａ．、Ｃｕｌｔｕｒｅ ｏｆ Ｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃ Ｃｅｌｌｓ、Ｒ．Ｉ．Ｆｒｅｓｈｎｅｙら編、第２３〜３９頁、Ｗｉｌｅｙ−Ｌｉｓｓ，Ｉｎｃ．、Ｎｅｗ
Ｙｏｒｋ，ＮＹ．１９９４；Ｎｅｂｅｎら、Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ Ｈｅｍａｔｏｌｏｇｙ ２２：３５３−３５９、１９９４；Ｃｏｂｂｌｅｓｔｏｎｅ
ａｒｅａ ｆｏｒｍｉｎｇ ｃｅｌｌ ａｓｓａｙ、Ｐｌｏｅｍａｃｈｅｒ、Ｒ．Ｅ．、Ｃｕｌｔｕｒｅ ｏｆ Ｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃ Ｃｅｌｌｓ．Ｒ．Ｉ．Ｆｒｅｓｈｎｅｙら編、第１〜２１頁、Ｗｉｌｅｙ−Ｌｉｓｓ，Ｉｎｃ．、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，ＮＹ．１９９４；Ｌｏｎｇ ｔｅｒｍ ｂｏｎｅ ｍａｒｒｏｗ ｃｕｌｔｕｒｅｓ ｉｎ ｔｈｅ ｐｒｅｓｅｎｃｅ ｏｆ ｓｔｒｏｍａｌ ｃｅｌｌｓ、Ｓｐｏｏｎｃｅｒ，Ｅ．、Ｄｅｘｔｅｒ，Ｍ．およびＡｌｌｅｎ，Ｔ、Ｃｕｌｔｕｒｅ ｏｆ Ｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃ Ｃｅｌｌｓ、Ｒ．Ｉ．Ｆｒｅｓｈｎｅｙら編、第１６３〜１７９頁、Ｗｉｌｅｙ−Ｌｉｓｓ，Ｉｎｃ．、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，ＮＹ．１９９４；Ｌｏｎｇ ｔｅｒｍ ｃｕｌｔｕｒｅ ｉｎｉｔｉａｔｉｎｇ ｃｅｌｌ ａｓｓａｙ、Ｓｕｔｈｅｒｌａｎｄ，Ｈ．Ｊ．、Ｃｕｌｔｕｒｅ ｏｆ Ｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃ Ｃｅｌｌｓ、Ｒ．Ｉ．Ｆｒｅｓｈｎｅｙら編、第１３９〜１６２頁、Ｗｉｌｅｙ−Ｌｉｓｓ，Ｉｎｃ．、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，ＮＹ．１９９４。
【００９８】
（リサーチの使用および有用性）
本発明により提供されるポリヌクレオチドは、種々の目的のためにリサーチコミュニティによって使用され得る。ポリヌクレオチドは、分析、特徴付け、または治療に使用するための組換えタンパク質を発現するために；対応するタンパク質が優先的に発現される組織（構成的に、あるいは組織の分化もしくは発達または疾患状態の特定の段階のいずれか）のためのマーカーとして；サザンゲルにおける分子量マーカーとして；染色体を同定するためもしくは関連する遺伝子座マッピングするための染色体マーカーもしくはタグ（標識された場合）として；可能性のある遺伝子障害を同定するために、患者の内因性ＤＮＡ配列と比較するため；ハイブリダイズするため、従って新規な関連するＤＮＡ配列を発見するためのプローブとして；遺伝子フィンガープリントのためのＰＣＲプライマーを誘導するための情報の供給源として；他の新規なポリヌクレオチドを発見するプロセスにおいて、既知の配列を「差引きする（ｓｕｂｔｒａｃｔ−ｏｕｔ）」ためのプローブとして；「遺伝子チップ」または他の支持体への連結のためにオリゴマーを選択し、そして作製するため（発現パターンの試験を含む）；ＤＮＡ免疫化技術を使用して抗タンパク質抗体を産生させるため；ならびに抗ＤＮＡ抗体を産生するため、または別の免疫応答を惹起するための抗原として、使用され得る。ポリヌクレオチドが、別のタンパク質に（例えば、レセプター−リガンドの相互作用において）結合または部分的に結合するタンパク質をコードする場合、このポリヌクレオチドはまた、相互作用トラップアッセイ（例えば、Ｇｙｕｒｉｓら、Ｃｅｌｌ ７５：７９１−８０３（１９９３）に記載されるアッセイ）において、結合が生じる他のタンパク質をコードするポリヌクレオチドを同定するため、または結合相互作用のインヒビターを同定するために使用され得る。
【００９９】
本発明によって提供されるタンパク質は、以下に挙げられる生物学的な活性を決定するためのアッセイにおいて同様に使用され得る：ハイスループットスクリーニングのための複数のタンパク質のパネル；抗体を産生するか、または別の免疫応答を惹起するため；生物学的流体中でのタンパク質（またはそのレセプター）のレベルを定量的に決定するように設計されたアッセイにおける試薬（標識化された試薬を含む）として；対応するタンパク質が優先的に発現される組織（構成的に、あるいは組織の分化もしくは発達または疾患状態の特定の段階でのいずれか）のためのマーカーとして；ならびに当然、相関するレセプターまたはリガンドを単離するため。タンパク質が、別のタンパク質に（例えば、レセプター−リガンド相互作用により）結合または部分的に結合する場合、このタンパク質は、結合が生じる他のタンパク質を同定するためか、または結合相互作用のインヒビターを同定するために使用され得る。これらの結合相互作用に関与するタンパク質はまた、この結合相互作用のペプチドまたは小分子のインヒビターもしくはアゴニストをスクリーニングするために使用され得る。
【０１００】
これらのリサーチのいずれかまたは全ての有用性は、リサーチ製品として市販するための、試薬等級またはキットフォーマットに発展され得る。
【０１０１】
上に列挙される使用を実施するための方法は、当業者に周知である。このような方法を開示する参考文献としては、以下が挙げられるが、これらに限定されない：「Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ」、第２版、Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ、Ｓａｍｂｒｏｏｋ，Ｊ．、Ｅ．Ｆ．ＦｒｉｔｓｃｈおよびＴ．Ｍａｎｉａｔｉｓ編、１９８９、ならびに「Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ：Ｇｕｉｄｅ ｔｏ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ」，Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，Ｂｅｒｇｅｒ，Ｓ．Ｌ．およびＡ．Ｒ．Ｋｉｍｍｅｌ編、１９８７。
【０１０２】
（栄養性使用）
本発明のポリヌクレオチドおよびタンパク質はまた、栄養性供給源または補充物として使用され得る。このような使用は、以下が挙げられるが、これらに限定されない：タンパク質またはアミノ酸サプリメントとしての使用、炭素供給源としての使用、窒素供給源としての使用および炭化水素の供給源としての使用。このような場合において、本発明のタンパク質またはポリヌクレオチドは、特定の生物の飼料（フィード）に添加され得、あるいは例えば、粉末、ピル、溶液、懸濁物またはカプセルの形態のような、別の固体調製物または液体調製物として投与され得る。微生物の場合において、本発明のタンパク質およびポリヌクレオチドは、培地中に添加され得、この培地中または培地上で、微生物は培養される。
【０１０３】
本発明のＭＵ−１タンパク質はまた、ポリクローナル抗体およびモノクローナル抗体を得るために動物を免疫するために使用され得、これらの抗体は、ＭＵ−１タンパク質と特異的に反応し、そしてこれらの抗体は、リガンドのレセプターに対する結合を阻害し得る。このような抗体は、免疫原として全ＭＵ−１を使用することによるか、またはＭＵ−１のフラグメントを使用することによって得られ得る。このＭＵ−１のより小さなフラグメントはまた、動物を免疫するために使用され得る。このペプチド免疫原は、カルボキシル末端にシステイン残基をされに含み得、そしてキーホールリンペットヘモシアニン（ｋｅｙｈｏｌｅ ｌｉｍｐｅｔ ｈｅｍｏｃｙａｎｉｎ（ＫＬＨ））のようなハプテンに結合される。さらなるペプチド免疫原は、チロシン残基を硫酸化されたチロシン残基を用いて置換することによって生成され得る。このようなペプチドを合成するための方法は、例えばＲ．Ｐ．Ｍｅｒｒｉｆｉｅｌｄ，Ｊ．Ａｍｅｒ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．８５，２１４９−２１５４（１９６３）；Ｊ．Ｌ．Ｋｒｓｔｅｎａｎｓｋｙら、ＦＥＢＳ Ｌｅｔｔ．２１１、１０（１９８７）にあるように当該分野で公知である。
【０１０４】
ＭＵ−１タンパク質に結合する、中和抗体または非中和抗体（好ましくは、モノクローナル抗体）はまた、特定の腫瘍のための有用な治療剤であり得、そして上記の状態の処置においてまた有用であり得る。これらの中和モノクローナル抗体は、ＭＵ−１レセプター鎖に結合するリガンドをブロックし得る。
【０１０５】
本明細書中で引用される全ての特許および参考文献は、完全に記載されているかのように参考として援用されている。本発明は、以下の実施例によってさらに例示され、これらの実施例は、限定するものとして構成されるべきではない。
【実施例】
【０１０６】
（実施例）
（実施例１：マウスＭＵ−１ ｃＤＮＡの単離および特徴付け）
Ｍｕ−１レセプターのマウスホモログの部分的フラグメントを、ヒト配列に由来するオリゴヌクレオチドを使用するＰＣＲによって単離した。ｃＤＮＡを、１７日齢のマウス胸腺およびマウス２Ｄ６Ｔ細胞株から単離したＲＮＡから調製した。約３００ヌクレオチドのＤＮＡフラグメントを、以下のオリゴヌクレオチド（図１のヒトｃＤＮＡ配列（配列番号１に対応する）のそれぞれ領域５８４〜６０３および８７６〜８９６に対応する）を用いるＰＣＲによってｃＤＮＡから増幅した。
【０１０７】
【化２】
増幅は、９４℃で１分間、５０℃で１分間、および７２℃で１分間の３０サイクルの間、１．５ｍＭの塩化マグネシウムを含む１×Ｔａｑ緩衝液中でＴａｑポリメラーゼを使用して行なった。このフラグメントのＤＮＡ配列を決定し、そして２つのオリゴヌクレオチドは、以下の配列を有するこのフラグメントの内部部分に由来した：
【０１０８】
【化３】
オリゴヌクレオチドを使用して、２Ｄ６ Ｔ細胞株から単離したｃＤＮＡライブラリーをスクリーニングためのハイブリダイゼーションプローブとして使用するために、本来のＰＣＲ産物（図１のマウスｃＤＮＡ配列のヌクレオチド７８１〜１０４３、および配列番号９に対応する）の内部２６２ヌクレオチドフラグメントを増幅した。フィルターを、標準５×ＳＳＣハイブリダイゼーション条件を使用して、６５℃でハイブリダイズし、そして６５℃でＳＳＣ中に洗浄した。４２６，０００個のクローンのスクリーニングにおいてプローブにハイブリダイズした２０個のクローンを単離した。ＤＮＡ配列を、２つの独立したクローンから決定した。クローン番号６の全長配列は、これがヒトＭＵ−１（配列番号９）の全長マウスホモログであることを確認した。
【０１０９】
マウスＭＵ−１の全長ヌクレオチド配列（配列番号９に対応する）を、図１に示す。ヌクレオチド配列は、ヌクレオチド４０７〜７６４の推定リーダー配列、ヌクレオチド４０７〜１９９３のコード配列、ヌクレオチド１９９４〜１９９７の終止コドンを有する。ヌクレオチド１〜４０６は、５’非翻訳領域に対応し、そしてヌクレオチド１９９８〜２６２８は、３’非翻訳領域に対応する。
【０１１０】
マウスＭＵ−１の推定タンパク質配列（配列番号１０に対応する）を、図２に示す。このマウスＭＵ−１タンパク質は、ＳＰＳｃａｎ（スコア＝１０．１）によって決定された推定リーダー配列（配列番号１０のアミノ酸１〜１９に対応する）および推定膜貫通ドメイン（配列番号１０のアミノ酸２３７〜２５３に対応する）を含む。推定シグナル伝達モチーフは、以下の領域を含む：ボックス１：配列番号１０のアミノ酸２６５〜２７４、ボックス２：配列番号１０のアミノ酸３１０〜３２４、配列番号１０の２８１位、３１９位、３６１位、３６８位、３９７位、および５１０位の６つのチロシン残基。潜在的なＳＴＡＴドッキング部位は、以下を含む：ＳＴＡＴ５：ＥＤＤＧＹＰＡ、ＳＴＡＴ３：ＹＬＱＲ。
【０１１１】
（実施例２：ヒトＭＵ−１およびマウスＭＵ−１の比較）
ＧＡＰアルゴニズムを使用して、ヒトＭＵ−１およびマウスＭＵ−１のアミノ酸を比較する。マウスおよびヒト推定タンパク質配列の比較を、図４に示す。アミノ酸は、ＧＡＰアルゴリズムを使用して、６５．２６７％同一であった。整列を、ＢＬＯＳＵＭ６２アミノ酸置換マトリクスによって作成した（Ｈｅｎｉｋｏｆｆ，Ｓ．およびＨｅｎｉｋｏｆｆ，Ｊ．Ｇ．（１９９２））。タンパク質ブロック質由来のアミノ酸置換マトリクス（Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８９：１０９１５−１０９１９）。Ｇａｐパラメーター：Ｇａｐ Ｗｅｉｇｈｔ＝８、Ａｖｅｒａｇｅ Ｍａｔｃｈ＝２．９１２、Ｌｅｎｇｔｈ Ｗｅｉｇｈｔ＝２、Ａｖｅｒａｇｅ Ｍｉｓｍａｔｃｈ＝−２．００３。Ｐｅｒｃｅｎｔ Ｓｉｍｉｌａｒｉｔｙ＝６９．４６６。
【０１１２】
ヒトおよびマウスｃＤＮＡヌクレオチド配列の比較を図３に示す。ＤＮＡ配列は、ＧＡＰアルゴリズムを使用して整列される場合、６６．１１６％同一である。Ｇａｐパラメーター：Ｇａｐ Ｗｅｉｇｈｔ＝５０、Ａｖｅｒａｇｅ Ｍａｔｃｈ＝１０．０００、Ｌｅｎｇｔｈ Ｗｅｉｇｈｔ＝３、Ａｖｅｒａｇｅ Ｍｉｓｍａｔｃｈ＝０．０００。Ｐｅｒｃｅｎｔ Ｓｉｍｉｌａｒｉｔｙ＝６６．１９８。
【０１１３】
ヒトＭＵ−１タンパク質およびマウスＭＵ−１タンパク質の両方は、１型サイトカインレセプタースーパーファミリーのメンバーである。マウスＭＵ−１およびヒトＭＵ−１の両方の配列の評価は、潜在的なボックス１およびボックス２シグナル伝達モチーフの存在を明らかにする。６つのチロシン残基が、細胞質ドメインに存在し、そしてＭＵ−１のシグナル伝達機能において重要であり得る。ＭＵ−１の他のファミリーのメンバーとの配列の比較は、ＳＴＡＴ５およびＳＴＡＴ３についての潜在的なドッキング部位の存在を示唆した。
【０１１４】
（実施例３：ヒトＭＵ−１によって使用されるＳＴＡＴシグナル伝達経路の決定）
ＢＡＦ−３細胞を操作して、ヒトＥＰＯレセプターの細胞外ドメインおよびＭＵ−１のレセプターの細胞内ドメインからなるキメラサイトカインレセプターを発現した。ｈｕＥＰＯＲ／ＭＵ−１（細胞質）キメラレセプターを発現したＢＡＦ−３細胞は、ヒト可溶性ＥＰＯに応答して増殖した。これらの細胞を分析して、どのＳＴＡＴ分子がＥＰＯシグナル伝達に応答してリン酸化されているかを決定した。手短にいうと、コントロール未改変親ＢＡＦ−３細胞およびＥＰＯＲ／ＭＵキメラＢＡＦ−３細胞を、ＩＬ−３含有増殖培養から静止させ、そしてＩＬ−３またはＥＰＯのいずれかを用いて、０、１５、３０および６０分間再刺激した。リン酸化されたチロシンを保存するために、細胞をペレット化し、そしてオルトバナジン酸塩を含む氷冷した溶解緩衝液中に再懸濁した。等量の細胞溶解物を、ＳＤＳ−ＰＡＧＥによって電気泳動して、そしてウエスタン分析についてニトロセルロース膜にブロットした。二連のブロットを、ＳＴＡＴ分子の各形態に特異的な抗体を使用することによって、ＳＴＡＴ１、３、５、および６のリン酸化形態および非リン酸化形態について染色した。活性化していないＨＥＬＡ細胞、α−インターフェロンで活性化したＨＥＬＡ細胞を陽性コントロールとして使用した。
【０１１５】
これらの結果は、これらの特定の条件化で、ＭＵ−１を介するシグナル伝達が、試験された全ての時点（Ｔ＝０、Ｔ＝１５’、Ｔ＝３０’、Ｔ＝６０’）においてＳＴＡＴ５のリン酸化を生じることを示した。コントロールまたはキメラＢＡＦ−３細胞のＩＬ−３を用いる処理は、ＳＴＡＴ１または５ではなく、ＳＴＡＴ３のリン酸化を生じた。
【０１１６】
（実施例４：マウスＭＵ−１およびヒトＭＵ−１の組織発現）
（ノーザン分析）
種々の組織（Ｃｌｏｎｅｔｅｃｈ，Ｐａｌｏ Ａｌｔｏ，ＣＡ）由来のポリＡ＋ＲＮＡのノーザンブロットを、製造業者によって推奨されるようにして行なった。マウスブロットについて、図１のヌクレオチド７８１〜１０４３および配列番号９に対応する２６２ヌクレオチドフラグメントを、ハイブリダイゼーションのために使用した。
【０１１７】
マウスＭＵ−１の単一の転写物を、成体マウスの脾臓、肺および心臓組織において検出した。ヒト組織において観察されるより大きい転写物は、マウス組織において観察されなかった。
【０１１８】
ヒトＭＵ−１の２つの転写物を、成体ヒトリンパ様組織、ＰＢＬ、胸腺、脾臓およびリンパ節、ならびに胎児肺において検出した。
【０１１９】
（インサイチュハイブリダイゼーション）
インサイチュハイブリダイゼーションにおいて、研究は、Ｃｏｌｕｍｂｕｓ，ＯＨのＰｈｙｌｏｇｅｎｃｙ Ｉｎｃ．によって行なわれた（Ｌｙｏｎｓら、１９９０、Ｊ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ：１１１：２４２７−２４３６の方法に従う）。手短にいうと、連続的な５〜７ミクロンのパラフィン切片を、脱パラフィン化し、固定し、プロテイナーゼＫを用いて消化し、トリエタノールアミンを用いて処理し、そして脱水した。ｃＲＮＡを、アンチセンスおよびセンスプローブを作成するために、直鎖状ｃＤＮＡテンプレートから調製した。ｃＲＮＡ転写物を、製造業者の条件（Ａｍｂｉｏｎ）に従って合成し、そして３５Ｓ−ＵＴＰで標識した。切片を、一晩ハイブリダイズし、ストリンジェントに洗浄し、そしてＲＮＡａｓｅ Ａを用いて処理し、そして核トラックエマルジョンに浸漬し、そして２〜３週間露光した。コントロール切片を、手順のバックグラウンドレベルを示すために、センスプローブを用いてハイブリダイズした。マウスプローブは、ヌクレオチド８６０〜１０６４（配列番号９）に対応する１８６ｂｐフラグメントからなった。ヒトプローブは、ヒトＭＵ−１ ＤＮＡから作成された２３１ｂｐ
ＰＣＲ産物であった。
【０１２０】
マウスＭＵ−１発現は、胚中心および外部筋層（ｍｕｓｃｕｌａｒｉｓ ｅｘｔｅｒｎａ）における成体小腸のリンパ節において観察された。分化したリンパ節およびパイアー斑はまた、マウスＭＵ−１発現を示した。
【０１２１】
ヒトＭＵ−１発現は、皮質のリンパ小節の胚中心において検出された。髄質（これは、マクロファージを含む）は、ヒトＭＵ−１について陰性であった。ヒト脾臓において、ヒトＭＵ−１発現は、赤脾髄ではなく、白脾髄の領域において検出された。
【０１２２】
（実施例５：細胞および細胞株におけるヒトＭＵ−１の発現）
ＲＮアーセプロテクション分析を、休止しているおよび活性化したヒトＴ細胞株およびＢ細胞株、ＲａｊｉおよびＲＰＭＩ ８８６６、ならびにＴ細胞株ジャーカットについて行った。ヒトＴ細胞を、抗ＣＤ３および抗ＣＤ２８を用いて活性化した。細胞株をホルボールエステルおよびイオノマイシンで活性化した。２３１ｂｐのＰＣＲ産物（ＰＣＲを、５’プライマー：
【０１２３】
【化４】
（配列番号１５）
および３’プライマー：
【０１２４】
【化５】
（配列番号１６）
を使用することによって行った）をｐＧＥＭ３ｚｆ（−）（Ｐｒｏｍｅｇａ，Ｍａｄｉｓｏｎ，ＷＩ）ベクターのＢａｍＨ１部位およびＨｉｎｄＩＩＩ部位に挿入することによって、ＭＵ−１リボプローブ産生プラスミドを構築した。このリボプローブを作製するために、リボプローブ産生プラスミドをＨｉｎｄＩＩＩで直線化した。得られたＤＮＡを、フェノール／クロロホルム抽出し、そしてエタノールを用いて沈殿させた。Ｔ７ ＲＮＡポリメラーゼを使用して、メーカー（ＰｈａｒＭｉｎｇｅｎ，Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ）により指示されたプロトコルに従って、リボプローブを作製した。ＰｈａｒＭｉｎｇｅｎのＲｉｂｏＱｕａｎｔ Ｍｕｌｔｉ−Ｐｒｏｂｅ Ｒｉｂｏｎｕｃｌｅａｓｅ Ｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎ Ａｓｓａｙシステムを使用することによって、ＲＮＡｓｅ保護アッセイを行った。ＲＮＡｓｅ消化の後、２．０μｇの総ＲＮＡが、各ＲＰＡ反応物に含まれ、保護されたリボプローブを、ＱｕｉｃｋＰｏｉｎｔ高速核酸分離システム（Ｎｏｖｅｘ，Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ）で実行した。ゲルを、メーカーの指示に従って乾燥し、そして暴露した。
【０１２５】
ヒトＭＵ−１ ＲＮＡは、非刺激集団と比較する場合、抗ＣＤ３＋抗ＣＤ２８刺激ヒト精製ＣＤ３＋細胞においてアップレギュレートされる。ＭＵ−１はまた、ＴｈおよびＴｈ２非対称Ｔ細胞集団において再刺激される際に、アップレギュレートされる。Ｂ細胞株、ＲＰＭＩ ８８６６およびＲａｊｉは、ＭＵ−１を構成的に発現し、一方、ジャーカットＴ細胞株はＭＵ−１を発現しない。
【０１２６】
（実施例６：既知のサイトカインへのヒトＭＵ−１の結合）
ヒトＩｇ融合タンパク質およびマウスＩｇ融合タンパク質の両方は、ＭＵ−１に対するリガンドを同定する試みにおいて、Ｂｉａｃｏｒｅチップ上で構築されこのチップ上に固定される。様々な細胞培養物の馴化培地ならびに既知のサイトカインのパネルを、ＭＵ−１に対する結合について評価した。いくつかのサイトカインをまた、このファミリーの他のレセプター鎖と組み合わせて試験して、ＭＵ−１がリガンド結合のために第２のレセプター鎖を必要とし得る可能性を考察した。以下のサイトカインを試験し、そしてＭＵ−１結合に対して陰性であることを見出した：ｍＩＬ−２、ｈＩＬ−２、ｈＩＬ−１５、ｍＩＬ−７、ＴＳＬＰ、ＴＳＬＰ＋ＩＬ７、ＴＳＬＰ＋ＩＬ７Ｒ、ＴＳＬＰ＋ＩＬ７ｇ、ＴＳＬＰ＋ＩＬ−２、ＴＳＬＰ＋ＩＬ２＋ＩＬ２Ｒβ、ＩＬ２Ｒβ、ＩＬ２Ｒγ、ＩＬ７Ｒ、ＩＬ２＋２Ｒβ、ＩＬ２＋２Ｒγ、ＩＬ１５＋ＩＬ２Ｒβ、Ｉｌ１５＋２Ｒγ、ＩＬ７＋２Ｒγ、ＩＬ２＋ＩＬ７Ｒ、ＩＬ１５＋ＩＬ７Ｒ、ＩＬ７＋ＩＬ７Ｒ。既知のレセプターを同様に固定し、そしてＭＵＦｃ結合について試験し、陰性結果を得た。ＩＬ−１５はＩＬ２Ｒｂに結合するが、ＩＬ２ＲｇにもＭＵＦｃにも結合しない。
【０１２７】
（等価物）
当業者は、単に慣用的な実験を使用して、本明細書中に記載される本発明の特定の実施形態の多くの等価物を認識するか、または確認し得る。このような等価物は、上記の特許請求の範囲に包含されることが意図される。
【図面の簡単な説明】
【０１２８】
【図１−１】図１は、マウスＭＵ−１の全長ｃＤＮＡ配列を示す。このヌクレオチド配列は、配列番号９のヌクレオチド１〜２５２８に対応する。
【図１−２】図１は、マウスＭＵ−１の全長ｃＤＮＡ配列を示す。このヌクレオチド配列は、配列番号９のヌクレオチド１〜２５２８に対応する。
【図２】図２は、マウスＭＵ−１のアミノ酸配列（配列番号１０のアミノ酸１〜５２９に対応する）を示す。ＳＰＳｃａｎによって１０．１のスコアで推定された、アミノ酸１〜１９に推定リーダー配列が存在する（太字）。アミノ酸２３７〜２５７に推定膜貫通ドメインが存在する（下線）。推定シグナル伝達モチーフは、以下の領域を含む：ボックス１：アミノ酸２６５〜２７４およびボックス２：アミノ酸３１０〜３２４（太字および下線）。６つのチロシンが、アミノ酸第２８１位、第３１９位、第３６１位、第３６８位、第３９７位および第５１０位に位置する。ＷＳＸＷＳモチーフ（配列番号８）は、アミノ酸残基２１４〜アミノ酸残基２１８に位置付する（大きい太字）。可能性のあるＳＴＡＴ結合（ｄｏｃｋｉｎｇ）部位は、アミノ酸３９３〜３９８およびアミノ酸５１０〜５１３を含む。
【図３−１】図３は、ヒトＭＵ−１およびマウスＭＵ−１のｃＤＮＡ配列（それぞれ、配列番号１の核酸１〜２６６５および配列番号９の１〜２６２８に対応する）のＧＡＰ比較を示す。ＨｕＭＵ−１＝ヒトＭＵ−１、ｍｕｒＭＵ−１＝マウスＭＵ−１。Ｇａｐパラメーター：Ｇａｐ Ｗｅｉｇｈｔ＝５０、Ａｖｅｒａｇｅ Ｍａｔｃｈ＝１０．０００、Ｌｅｎｇｔｈ Ｗｅｉｇｈｔ＝３、Ａｖｅｒａｇｅ Ｍｉｓｍａｔｃｈ＝０．０００。同一性％＝６６．１１６。
【図３−２】図３は、ヒトＭＵ−１およびマウスＭＵ−１のｃＤＮＡ配列（それぞれ、配列番号１の核酸１〜２６６５および配列番号９の１〜２６２８に対応する）のＧＡＰ比較を示す。ＨｕＭＵ−１＝ヒトＭＵ−１、ｍｕｒＭＵ−１＝マウスＭＵ−１。Ｇａｐパラメーター：Ｇａｐ Ｗｅｉｇｈｔ＝５０、Ａｖｅｒａｇｅ Ｍａｔｃｈ＝１０．０００、Ｌｅｎｇｔｈ Ｗｅｉｇｈｔ＝３、Ａｖｅｒａｇｅ Ｍｉｓｍａｔｃｈ＝０．０００。同一性％＝６６．１１６。
【図３−３】図３は、ヒトＭＵ−１およびマウスＭＵ−１のｃＤＮＡ配列（それぞれ、配列番号１の核酸１〜２６６５および配列番号９の１〜２６２８に対応する）のＧＡＰ比較を示す。ＨｕＭＵ−１＝ヒトＭＵ−１、ｍｕｒＭＵ−１＝マウスＭＵ−１。Ｇａｐパラメーター：Ｇａｐ Ｗｅｉｇｈｔ＝５０、Ａｖｅｒａｇｅ Ｍａｔｃｈ＝１０．０００、Ｌｅｎｇｔｈ Ｗｅｉｇｈｔ＝３、Ａｖｅｒａｇｅ Ｍｉｓｍａｔｃｈ＝０．０００。同一性％＝６６．１１６。
【図３−４】図３は、ヒトＭＵ−１およびマウスＭＵ−１のｃＤＮＡ配列（それぞれ、配列番号１の核酸１〜２６６５および配列番号９の１〜２６２８に対応する）のＧＡＰ比較を示す。ＨｕＭＵ−１＝ヒトＭＵ−１、ｍｕｒＭＵ−１＝マウスＭＵ−１。Ｇａｐパラメーター：Ｇａｐ Ｗｅｉｇｈｔ＝５０、Ａｖｅｒａｇｅ Ｍａｔｃｈ＝１０．０００、Ｌｅｎｇｔｈ Ｗｅｉｇｈｔ＝３、Ａｖｅｒａｇｅ Ｍｉｓｍａｔｃｈ＝０．０００。同一性％＝６６．１１６。
【図４】図４は、ヒトＭＵ−１タンパク質（配列番号２のアミノ酸１〜５３８に対応する）およびマウスＭＵ−１タンパク質（配列番号１０のアミノ酸１〜５２９に対応する）のＧＡＰ比較を示す。ＢＬＯＳＵＭ６２アミノ酸置換マトリクス（Ｈｅｎｉｋｏｆｆ，Ｓ．およびＨｅｎｉｋｏｆｆ，Ｊ．Ｇ．（１９９２））。タンパク質ブロックからのアミノ酸置換マトリクス（Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８９：１０９１５−１０９１９）。Ｇａｐパラメーター：Ｇａｐ Ｗｅｉｇｈｔ＝８、Ａｖｅｒａｇｅ Ｍａｔｃｈ＝２．９１２、Ｌｅｎｇｔｈ Ｗｅｉｇｈｔ＝２、Ａｖｅｒａｇｅ Ｍｉｓｍａｔｃｈ＝−２．００３。同一性％＝６５．２６７。
【図５】図５は、ヒトＭＵ−１（ｈｕｍｕ）（配列番号２に対応する）、マウスＭＵ−１（ｍｏｕｓｅｍｕ）（配列番号１０）およびヒトＩＬ２β鎖（ｈｕｍｉｌ２ｒｂｃ）（ＧＥＮｂａｎｋ登録番号Ｍ２６０６２）のアミノ酸の多重配列アライメントを示す。リーダーおよび膜貫通ドメインに下線を付す。保存サイトカインレセプターモジュールモチーフを、太字で示す。可能性のあるシグナル伝達領域を、下線および太字で示す。
【図６】図６は、ＭＵ−１を介するシグナル伝達を示す。ＭＵ−１は、クローンＥ７ ＥＰＯ−ＭＵ−１キメラにおいてＳＴＡＴ５をリン酸化する。実施例３に示される条件下で、ＭＵ−１を介するシグナル伝達は、試験された全ての時点でＳＴＡＴ５のリン酸化を生じる。ＩＬ−３でのコントロールまたはキメラＢＡＦ−３細胞の処理は、ＳＴＡＴ３のリン酸化を生じたが、ＳＴＡＴ１およびＳＴＡＴ５のいずれのリン酸化も生じなかった。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
本明細書に記載されるような、タンパク質。
【請求項１】
本明細書に記載されるような、タンパク質。
【図１−１】
【図１−２】
【図２】
【図３−１】
【図３−２】
【図３−３】
【図３−４】
【図４】
【図５】
【図６】
【図１−２】
【図２】
【図３−１】
【図３−２】
【図３−３】
【図３−４】
【図４】
【図５】
【図６】
【公開番号】特開２００９−１９０３７（Ｐ２００９−１９０３７Ａ）
【公開日】平成２１年１月２９日（２００９．１．２９）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００８−１６１０１０（Ｐ２００８−１６１０１０）
【出願日】平成２０年６月１９日（２００８．６．１９）
【分割の表示】特願２００１−５８２３９１（Ｐ２００１−５８２３９１）の分割
【原出願日】平成１３年５月１１日（２００１．５．１１）
【出願人】（５０１４１８２１４）ジェネティクス インスティテュート，エルエルシー (35)
【Ｆターム（参考）】
【公開日】平成２１年１月２９日（２００９．１．２９）
【国際特許分類】
【出願日】平成２０年６月１９日（２００８．６．１９）
【分割の表示】特願２００１−５８２３９１（Ｐ２００１−５８２３９１）の分割
【原出願日】平成１３年５月１１日（２００１．５．１１）
【出願人】（５０１４１８２１４）ジェネティクス インスティテュート，エルエルシー (35)
【Ｆターム（参考）】
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