シルクタンパク質コーティング
本発明は、不活性材料又は自然発生的な材料をシルクポリペプチドでコーティングする方法に関する。本発明は更に、上記方法により入手可能なコーティングされた不活性材料又は自然発生的な材料に、及びその使用に関する。本発明は、上記コーティングされた材料を含む製品にも関する。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、不活性材料又は自然発生的な材料をシルクポリペプチドでコーティングする方法に関する。本発明は更に、上記方法により入手可能なコーティングされた不活性材料又は自然発生的な材料に、及びその使用に関する。本発明は、上記コーティングされた材料を含む製品にも関する。
【背景技術】
【０００２】
スパイダーシルクは、特別な物理特性を示すタンパク質ポリマーである。様々なタイプのスパイダーシルクの中でも、ドラグラインが最も広く研究されている。ドラグラインシルクは円網を張るクモにより、それらの網の縦糸及び横糸を構築するのに、並びに命綱として利用されている。これらの目的のために、高い引張強度及び弾性が要求される。かかる特性の組み合わせにより、ほとんどの他の既知の材料よりも大きい靭性が得られる。例えばニワオニグモ（Araneus diadematus）のドラグラインシルクは、鋼（１．３ＧＰａ）及びアラミド繊維の引張強度とほぼ同等の１．９ＧＰａと高い引張強度を示す。
【０００３】
大腸菌におけるスパイダーシルクタンパク質の組換えによる生成のための系が過去に開発されている（特許文献１、特許文献２）。例として、特許文献１（特許文献３に対する優先権を主張している）に言及される。この発現系では、単一構成要素（＝モジュール）を自由に変えることができ、そのため具体的な事例の要件に適合させることができる。このタイプのモジュールは、非特許文献１にも開示される。更なるモジュールは特許文献４に記載される。スパイダーシルクタンパク質を糸に加工することができることは自然と知られている。クモは様々なタイプのタンパク質を用いて、シルク糸及びクモの巣を形成するエキスパートである。スパイダーシルクタンパク質を糸へと変形させる技術的プロセスが、例えば特許文献５で説明されている。
【０００４】
合成材料又は無機材料、例えば合成繊維又は無機繊維は、何十年にわたり産業的に重要なものとなっている。これらの中でも、例えばアラミド糸ケブラーは、等重量ベースで鋼の５倍の強度があり、同時に軽量である。また該アラミド糸ケブラーは、低い導電率を示し、非常に高い耐薬品性を有する、すなわち不活性である。一方で、この条件は例えば防護服に望ましい。しかしながら他方では、アラミド糸は製造後に改良を加えるのが非常に困難である。効率良くアラミド糸を染色する、又はアラミド糸の表面に分子を接着させるのはほぼ不可能である。またアラミド糸は可湿性を僅かしか有しない。このことは、他の不活性な合成材料又は無機材料でも当てはまる、すなわち該他の不活性な合成材料又は無機材料は、高い耐薬品性を有し、可湿性を僅かしか有さず、穏やかな条件下で、すなわち低温下でかつ毒性溶媒を用いずに重合後に改良を加えることができない。一般的なコーティングは不活性な合成材料又は無機材料、例えば不活性な合成繊維又は無機繊維の表面に十分に密着せず、また一般的なコーティングはあまり耐久性を有さず、又は厳しい条件、すなわち高温及び／若しくは毒性溶媒下で塗布しなければならない。
【０００５】
このため、好ましくは低温下でかつ毒性溶媒を用いずに製造後に不活性な合成材料又は無機材料、例えば不活性な合成糸又は無機糸に改良を加える新規の好適な方法が必要とされている。
【０００６】
本発明者らは驚くべきことに、コーティング材としてのシルクポリペプチドの使用が最も穏やかな条件下での効率性の高いコーティングを提供し、特定用途に合わせたシルクでコーティングされた不活性な合成材料又は無機材料の製造を可能にすることを見出している。今日までは、（たとえ可能であったとしても）プラズマ処理のような非常に厳しい条件が不活性な合成材料又は無機材料、例えば不活性な合成繊維又は無機繊維に変更を加えるのに必要であった。またシルクポリペプチドを用いることで利用可能となる不活性な合成材料又は無機材料をコーティングする方法は存在せず、より重要なことには、これまで完全に不可能であると思われてきたために、既存の不活性な合成繊維又は無機繊維を純粋なシルクの層でコーティングすることについて考える人はいなかった。
【０００７】
本発明のコーティングにより、穏やかな条件下で、すなわち低温下でかつ毒性溶媒を用いずに、分子を不活性な合成材料又は無機材料に接着させることが可能になる。例えば医療技術では、医薬品等の作用物質を非破壊条件下でシルクに覆われた不活性材料に効率的に連結させることができる。
【０００８】
加えて、不活性な合成材料又は無機材料は幾つかの制限を示す。ほとんどの不活性な合成材料又は無機材料、例えばアラミド繊維又は炭素繊維等の不活性な合成繊維は、例えば昆虫シルク等の天然繊維と比較すると表面の感触が望ましくない。これは、ほとんどの不活性な合成材料又は無機材料がザラザラしており（harsh）、粗く脆弱であり、そのため触り心地が良くないことを意味する。他方で、昆虫シルク繊維は不活性な合成繊維又は無機繊維の特質を共有しておらず、はるかに高価であることが多い。
【０００９】
したがって、改善された表面の感触、すなわち改善された触感を有する新規の不活性な合成材料又は無機材料が必要とされている。
【００１０】
本発明者らは驚くべきことに、シルクでコーティングされた不活性な合成材料又は無機材料、例えばシルクでコーティングされたアラミド繊維又は炭素繊維は、不活性な合成材料又は無機材料の利点と、天然材料の利点とを兼ね揃えることを見出している。シルクでコーティングされた不活性な合成材料又は無機材料は改善された表面の感触（触感）を有し、このことがこれらの材料の触り心地をより良くしている。この効果はシルク表面によりもたらされる光沢により達成され、該シルク表面はアラミド繊維の無光沢の外観、又は炭素繊維の黒色の表面よりも魅力的である。例として、ケブラー布は粗く不快な表面の感触により皮膚の付近での又は皮膚での適用にとって最適レベルに到達しない。しかしながらシルクでコーティングされたケブラー布は快適である。
【００１１】
また、産業は、新規の大幅に改善された物理的、化学的及び生物学的な特性及び機能性を示すように、綿又は羊毛等の自然発生的な材料を改良しようと常に試みている。さらに、繊維産業では、綿又は羊毛等の自然発生的な材料に、通気性及び着用の快適性を保持しながら、改善された強度、弾性、曲げ剛性及び／又は運動に対する抵抗性を与えることが望まれる。
【００１２】
本発明者らは驚くべきことに、シルクポリペプチドの使用により、上述の所望の特性を有するコーティングされた自然発生的な材料の製造を可能にする効率性の高いコーティング反応がもたらされることを見出している。
【００１３】
シルクポリペプチドを用いる本発明のコーティング反応により、分子を自然発生的な材料に効率的に接着させ、具体的な用途に合わせた材料、例えばコーティングされた繊維製品、衣類、並びにＵＶ遮断性、抗微生物性及び自浄性を与える活性の高い表面を有する履物用の繊維製品を製造することも可能になる。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００１４】
【特許文献１】国際公開第２００６／００８１６３号
【特許文献２】国際公開第２００６／００２８２７号
【特許文献３】米国仮出願第６０／５９０，１９６号
【特許文献４】国際公開第２００７／０２５７１９号
【特許文献５】国際公開第２００７／０３１３０１号
【非特許文献】
【００１５】
【非特許文献１】Hummerich, D., Helsen, C.W., Oschmann, J., Rudolph, R. &Scheibel, T. （2004）: "Primarystructure elements of dragline silks and their contribution to proteinsolubility and assembly, Biochemistry 43, 13604-13612"
【発明の概要】
【００１６】
第１の態様では、本発明は、不活性材料又は自然発生的な材料をシルクポリペプチドでコーティングする方法であって、
ｉ）少なくとも２つの同一の反復単位を含む少なくとも１つのシルクポリペプチドと溶媒とを含む溶液を準備する工程と、
ｉｉ）不活性材料又は自然発生的な材料上に該溶液を塗布することにより該不活性材料又は該自然発生的な材料を該シルクポリペプチドでコーティングする、塗布することによりコーティングする工程と、
を含む、不活性材料又は自然発生的な材料をシルクポリペプチドでコーティングする方法を提供する。
【００１７】
第２の態様では、本発明は、第１の態様の方法により入手可能なコーティングされた不活性材料又は自然発生的な材料を提供する。
【００１８】
第３の態様では、本発明は、第２の態様のコーティングされた材料を含む製品を提供する。
【００１９】
第４の態様では、本発明は、第２の態様のコーティングされた不活性材料又は自然発生的な材料の使用に関する。
【００２０】
第５の態様では、本発明は、不活性材料を染色するためのシルクポリペプチドの使用に関する。この発明の概要は必ずしも本発明の特徴を全て記載しているわけではない。
【００２１】
本発明を以下で詳細に説明する前に、本発明は本明細書に記載の特定の方法論、プロトコル及び試薬に限定されない（なぜなら、これらの方法論、プロトコル及び試薬は変化し得るものであるためである）ことを理解するべきである。本明細書で用いられる専門用語は特定の実施の形態を説明するためのものにすぎず、本発明の範囲を限定することは意図されず、該範囲は添付の特許請求の範囲でのみ限定されることも理解すべきである。本明細書で他に特に規定されない限り、本明細書で用いられる技術用語及び科学用語は全て、当業者が一般的に理解するものと同じ意味を有する。
【００２２】
好ましくは、本明細書で用いられる用語は、"A multilingual glossary ofbiotechnological terms: （IUPAC Recommendations）", Leuenberger, H.G.W, Nagel, B. and Kolbl, H.編（1995）, Helvetica Chimica Acta, CH-4010 Basel, Switzerland）で記載されるように定義される。
【００２３】
幾つかの文献が本明細書の本文全体を通して引用されている。本明細書で引用される文献（全ての特許、特許出願、科学刊行物、製造業者の仕様書、取扱説明書、ＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号配列寄託書等を含む）の各々が、上記又は下記に関わらず、その全体が参照により本明細書に援用される。本発明が先行発明のためにかかる開示に先行する権利がないことの承認として解釈されるものは本明細書には存在しない。
【００２４】
以下で本発明の要素を説明する。これらの要素を特定の実施の形態とともに挙げるが、付加的な実施の形態を作成するために任意の様式で及び任意の数で該要素を組み合わせることができることを理解すべきである。様々に記載された実施例及び好ましい実施の形態は、本発明を明示的に記載された実施の形態のみに限定するものとは解釈されるべきではない。本記載は明示的に記載された実施の形態を任意の数の開示された及び／又は好ましい要素と組み合わせる実施の形態を支持及び包含するものと理解されるべきである。さらに、本願において記載されたあらゆる要素の任意の並べ替え及び組み合わせは、文脈上他の意味を示していない限り、本願の記載により開示されているとみなすものとする。
【００２５】
本明細書及び添付の特許請求の範囲を通じて、文脈上他の意味に解する必要がある場合を除き、「含む（comprise）」という言葉、及びその変化形（variations such as "comprises"and "comprising"）は、記載の整数若しくは工程、又は整数若しくは工程の群の包含の意図はあるが、任意の他の整数若しくは工程、又は整数若しくは工程の群の排除の意図はないと理解される。
【００２６】
本明細書及び添付の特許請求の範囲に使用される場合、単数形（the singular forms "a","an", and "the"）は、他に文脈上明確に示されていない限り複数の対象を含む。
【００２７】
２つ以上のポリペプチドにおける残基は、該残基がポリペプチド構造において類似の位置を占める場合、互いに「対応する」といわれる。２つ以上のポリペプチドにおける類似の位置は、アミノ酸配列又は構造類似性に基づきポリペプチド配列をアラインメントすることにより決定することができることが当該技術分野で既知である。かかるアラインメントツールは当業者にとって既知であり、例えばワールドワイドウェブ上で入手することができる（例えば、標準的な設定、好ましくはＡｌｉｇｎでは、ＥＭＢＯＳＳ：ｎｅｅｄｌｅ、行列：Ｂｌｏｓｕｍ６２、ギャップ開始（Gap Open）１０．０、ギャップ伸長（Gap Extend）０．５を用いるＣｌｕｓｔａｌＷ（www.ebi.ac.uk/clustalw）又はＡｌｉｇｎ（http://www.ebi.ac.uk/emboss/align/index.html））。
【００２８】
本発明との関連では、「不活性材料」という用語は、高い耐薬品性を有し、僅かに可湿性であるか、若しくは可湿性ではなく、及び／又は穏やかな条件下で、すなわち低温下でかつ毒性溶媒を用いずに重合後に改良を加えることができない材料を表す。
【００２９】
「合成材料」という用語は、本発明との関連で使用される場合、自然において発生するものに対して、人間が製造する又はそうでなければ作り出す材料を表す。「合成」という言葉は、本発明との関連では、人工的に組み立てられることも意味する。
【００３０】
「無機材料」という用語は、本発明との関連で使用される場合、主要素として炭化水素（カーボネート、シアニド及びシアネートを除く）を含有しない材料、つまり植物又は動物以外の、すなわち生体起源ではないものを表す。
【００３１】
「自然発生的な材料」という用語は、本発明との関連で使用される場合、自然に存在する材料を表すが、該自然発生的な材料は改良を加えることが材料のポリマー骨格を著しく変えない限り、例えば漂白、洗浄、伸張、回転等により改良を加え、更には処理することができる。
【００３２】
本発明との関連では、「コーティング」という用語は、コーティング対象の不活性材料又は自然発生的な材料に塗布される被覆を表す。好ましくは、上記「コーティング」は不活性材料又は自然発生的な材料を完全に覆う又は取り囲む。「コーティング」は１ｎｍ〜５０μｍ、好ましくは４０ｎｍ〜５０μｍ、より好ましくは０．５μｍ〜１０μｍ、最も好ましくは１．０μｍ〜５μｍの厚さを有するのが好ましい。
【００３３】
他に示されていない限り、「ポリペプチド」及び「タンパク質」という用語は、本明細書で区別なく使用され、長さ又は翻訳後修飾に関わらず、アミノ酸の任意のペプチド結合した鎖を意味する。
【００３４】
本発明との関連では、「シルクポリペプチド」という用語は、組換え（例えば微生物、昆虫、植物又は哺乳動物の）発現系（すなわちその自然環境から切り離された系）で発現されるシルクポリペプチド若しくはシルクタンパク質（組換えシルクポリペプチド又は組換えシルクタンパク質）、又は天然供給源（例えばクモ、カイコ、イガイ又はハエの幼虫）から採取されるシルクポリペプチド又はタンパク質を表す（他に示されていない限り、これら２つの用語は本明細書で使用される場合、区別されないことに留意する）。好ましくは、「シルクポリペプチド」は単離又は精製される。特に、「精製シルクポリペプチド」又は「単離シルクポリペプチド」は該タンパク質が単離又は誘導される細胞源又は組織源由来の細胞材料又は他の夾雑タンパク質を含まない又は実質的に含まない。「細胞材料を実質的に含まない」シルクポリペプチドという語句は、組換えによる産生の元となる細胞の細胞成分から切り離されたシルクポリペプチドの調製物を含む。このため、細胞材料を実質的に含まないシルクポリペプチドは、約３０％、２０％、１０％、５％又は１％（乾燥重量により）未満の夾雑タンパク質を有するシルクポリペプチドの調製物を含む。
【００３５】
「シルクポリペプチド」は本発明との関連で使用される場合、少なくとも５０％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、好ましくは少なくとも９５％、最も好ましくは１００％の１つの同一の反復単位の多重コピー（例えばＡ２、Ｑ６又はＣ１６（ここで２、６又は１６は反復単位の数を表す））、又は２つ以上の異なる反復単位の多重コピー（例えば（ＡＱ）２４又は（ＡＱ）１２Ｃ１６）を含む又はこれからなるアミノ酸配列を有するポリペプチドを更に表す。シルクポリペプチドは上記タンパク質の検出又は精製を容易にする人工タグ（例えばＴ７タグ）を付加することにより更に改変することができる。
【００３６】
「反復単位」及び「繰り返し単位」という用語は本発明との関連では区別なく使用され得る。
【００３７】
本発明との関連では、「シルクポリペプチド」という用語は、自然発生的なシルクポリペプチドのアミノ酸配列の同一コピー又は自然発生的なシルクポリペプチドのアミノ酸配列の変異体の同一コピー又は両方の組み合わせを含む又はこれからなる少なくとも２つの同一の反復単位を含む又はこれからなるシルクポリペプチドも表す。
【００３８】
本発明との関連では、「反復単位」は、アミノ酸配列において、自然発生的なシルクポリペプチド（例えばＭａＳｐＩ、ＡＤＦ−３、ＡＤＦ−４又はＦｌａｇ）内で反復して発生する少なくとも１つのペプチドモチーフ（例えばＡＡＡＡＡＡ（配列番号１３）又はＧＰＧＱＱ（配列番号４））を含む若しくはこれからなる領域（すなわち同一のアミノ酸配列）、又はそれと実質的に類似のアミノ酸配列（すなわち変動アミノ酸配列）に対応する領域を表す。この点で、「実質的に類似の」は、好ましくはそれぞれの参照となる自然発生的なアミノ酸配列の全長にわたる少なくとも５０％、５１％、５２％、５３％、５４％、５５％、５６％、５７％、５８％、５９％、６０％、６１％、６２％、６３％、６４％、６５％、６６％、６７％、６８％、６９％、７０％、７１％、７２％、７３％、７４％、７５％、７６％、７７％、７８％、７９％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は更には９９．９％のアミノ酸同一性の程度を意味する。自然発生的なシルクポリペプチド内の対応するアミノ酸配列と「実質的に類似の」アミノ酸配列を有する「反復単位」（すなわち野生型反復単位）はその機能特性に関しても類似している。例えば「実質的に類似の反復単位」を含むシルクポリペプチドは依然としてケブラー、羊毛等の合成材料又は自然発生的な材料上にコーティングを形成する能力を有する。好ましくは、「実質的に類似の反復単位」を含むシルクポリペプチドは、各参照（野生型）反復単位を含むシルクポリペプチドを用いて形成することができるのと同様に、１ｎｍ〜５０μｍ、好ましくは４０ｎｍ〜５０μｍ、より好ましくは０．５μｍ〜１０μｍ、最も好ましくは１．０μｍ〜５μｍの厚さのコーティングを形成することが可能である。「実質的に類似の反復単位」を含むシルクポリペプチドで作られたコーティングは、各参照（野生型）反復単位を含むシルクポリペプチドで作られたコーティングと比較して類似の（similar）表面構造（表面起伏）、例えば粗度又は多孔性を有するのも好ましい。「実質的に類似の反復単位」を含むシルクポリペプチドで作られたコーティングは、各参照（野生型）反復単位を含むシルクポリペプチドで作られたコーティングと類似の表面構造及び厚さを示すのが特に好ましい。当業者は電子顕微鏡検査を用いて、コーティングの厚さ又は表面構造（表面起伏）を容易に評価することができる。
【００３９】
自然発生的なシルクポリペプチドのアミノ酸配列と「同一の」アミノ酸配列を有する「反復単位」は例えば、ＭａＳｐ Ｉ（配列番号４３）、ＭａＳｐ ＩＩ（配列番号４４）、ＡＤＦ−３（配列番号１）及び／又はＡＤＦ−４（配列番号２）の１つ又は複数のペプチドモチーフに対応するシルクポリペプチドの一部であり得る。自然発生的なシルクポリペプチドのアミノ酸配列と「実質的に類似の」アミノ酸配列を有する「反復単位」は例えば、ＭａＳｐＩ（配列番号４３）、ＭａＳｐＩＩ（配列番号４４）、ＡＤＦ−３（配列番号１）及び／又はＡＤＦ−４（配列番号２）の１つ又は複数のペプチドモチーフに対応するが、特定のアミノ酸位置に１つ又は複数のアミノ酸置換を有するシルクポリペプチドの一部であり得る。
【００４０】
「反復単位」は、一般的に自然発生的なシルクポリペプチドのカルボキシル末端に存在すると考えられている非反復的な親水性アミノ酸ドメインを含まない。
【００４１】
本発明による「反復単位」は、３個〜２００個又は５個〜１５０個のアミノ酸長、好ましくは１０個〜１００個又は１５個〜８０個のアミノ酸長、より好ましくは１８個〜６０個又は２０個〜４０個のアミノ酸長のアミノ酸配列を更に表す。例えば、本発明による反復単位は、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１１個、１２個、１３個、１４個、１５個、１６個、１７個、１８個、１９個、２０個、２１個、２２個、２３個、２４個、２５個、２６個、２７個、２８個、２９個、３０個、３１個、３２個、３３個、３４個、３５個、３６個、３７個、３８個、３９個、４０個、４１個、４２個、４３個、４４個、４５個、４６個、４７個、４８個、４９個、５０個、５１個、５２個、５３個、５４個、５５個、５６個、５７個、５８個、５９個、６０個、６１個、６２個、６３個、６４個、６５個、６６個、６７個、６８個、６９個、７０個、７１個、７２個、７３個、７４個、７５個、７６個、７７個、７８個、７９個、８０個、８１個、８２個、８３個、８４個、８５個、８６個、８７個、８８個、８９個、９０個、９１個、９２個、９３個、９４個、９５個、９６個、９７個、９８個、９９個、１００個、１０５個、１１０個、１１５個、１２０個、１２５個、１３０個、１３５個、１４０個、１４５個、１５０個、１５５個、１６０個、１６５個、１７０個、１７５個、１８０個、１８５個、１９０個、１９５個又は２００個のアミノ酸長を有し得る。最も好ましくは、本発明による反復単位は、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１２個、１５個、１８個、２０個、２４個、２７個、２８個、３０個、３４個、３５個又は３９個のアミノ酸からなる。
【００４２】
第１の態様では、本発明は、不活性材料又は自然発生的な材料をシルクポリペプチドでコーティングする方法であって、
ｉ）少なくとも２つの同一の反復単位を含む少なくとも１つのシルクポリペプチドと溶媒とを含む溶液を準備する工程と、
ｉｉ）不活性材料又は自然発生的な材料上に該溶液を塗布することにより該不活性材料又は該自然発生的な材料を該シルクポリペプチドでコーティングする、塗布することによりコーティングする工程と、
を含む、これから本質的になる、又はこれからなる、不活性材料又は自然発生的な材料をシルクポリペプチドでコーティングする方法を提供する。
【００４３】
本発明者らは驚くべきことに、シルクポリペプチドが、厳しい反応条件（すなわち高温の適用及び／又は毒性溶媒の使用）を用いることなく、穏やかな反応条件（すなわち低温及び毒性溶媒の不使用）を用いることにより、合成不活性材料又は無機不活性材料（例えばケブラー等のポリアラミド、ポリテトラフルオロエチレン（テフロン登録商標）又は炭素）等の既存の不活性材料に安定して付着することを見出している。上述の方法によるシルクポリペプチドでコーティングされた不活性材料は、コーティングされていない不活性材料と比較して改善された表面の感触（すなわち改善された触感及び／又は平滑表面）を有し、このことが上記材料の人による触り心地をよくしていることも本発明者らにとっては驚くべきことであった。本発明者らは更に驚くべきことに、上述の方法によるシルクポリペプチドでコーティングされた自然発生的な材料が、通気性及び着用の快適性を保持しながら、改善された強度、弾性、曲げ剛性、改善された表面の感触（すなわち改善された触感）及び／又は運動に対する抵抗性を有することを見出している。
【００４４】
好ましくは、本発明の方法ではディップコーティング、スプレーコーティング及び／又はパディングを用いて該溶液を塗布する。
【００４５】
「ディップコーティング」は、（ｉ）不活性材料又は自然発生的な材料を、コーティング材として少なくとも１つのシルクポリペプチド溶液の入ったタンクに浸漬し、（ｉｉ）少なくとも１つのシルクポリペプチドの入ったタンク内で、例えば０．１秒〜１０分の期間、不活性材料又は自然発生的な材料をインキュベートし、（ｉｉｉ）コーティングされた不活性材料又は自然発生的な材料を溶液から取り出し、（ｉｖ）タンクを排水することを意味する。それから、コーティングされた不活性材料又は自然発生的な材料を、（ｖ）例えば加熱チャンバ、放射又はファンを用いて、強制乾燥、ベーキングにより（室温で又は高温で）乾燥することができる。ディップコーティングにより、例えばスピンコーティング手法と同様に薄膜でコーティングされた不活性材料又は自然発生的な材料が作り出される。スピンコーティングは均一な薄膜を不活性材料又は自然発生的な材料に塗布するのに使用される手法である。要するに、過剰量の溶液を上記材料上に配置し、それから遠心力によりシルクポリペプチドを展開させるために、該材料を一定速度、好ましくは１ｍ／分〜１０ｍ／秒で回転させる。スピンコーティングに用いられる機械はスピンコーター、又は単にスピナーと呼ばれる。ディップコーティングの方法は実施例Ｖで例示されるとともに、図１で説明される。
【００４６】
「スプレーコーティング」は、（ｉ）少なくとも１つのシルクポリペプチドを含む溶液をスプレー缶又は噴霧装置に移し、（ｉｉ）不活性材料又は自然発生的な材料上に少なくとも１つのシルクポリペプチドを含む溶液を均一に分配させ、（ｉｉｉ）例えば加熱チャンバ、放射又はファンを用いて、強制乾燥、ベーキングによりコーティングを（室温で又は高温で）乾燥することを意味する。スプレーコーティングの方法は実施例ＶＩで記載されるとともに、図１で説明される。
【００４７】
「パディング」は、（ｉ）不活性材料又は自然発生的な材料を、コーティング材として少なくとも１つのシルクポリペプチドを含有する溶液に浸漬し又は漬け込み、（ｉｉ）少なくとも１つのシルクポリペプチドを有する溶液中で、例えば０．１秒〜１０分の期間、不活性材料又は自然発生的な材料をインキュベートし、（ｉｉｉ）コーティングされた不活性材料又は自然発生的な材料を溶液から取り出し、（ｉｖ）コーティングされた不活性材料又は自然発生的な材料を１対のローラーに通し、余分なシルクポリペプチド（溶液）を搾り出すことを意味する。それから、コーティングされた不活性材料又は自然発生的な材料を、（ｖ）例えば加熱チャンバ、放射又はファンを用いて、強制乾燥、ベーキングにより（室温で又は高温で）乾燥することができる。
【００４８】
本発明の方法に使用されるシルクポリペプチドは好ましくは、６個〜１５００個のアミノ酸、又は２００個〜１３００個のアミノ酸、最も好ましくは２５０個〜１２００個のアミノ酸、又は５００個〜１０００個のアミノ酸からなる。
【００４９】
好ましくは、本発明の方法に使用されるシルクポリペプチドは、２個〜８０個の反復単位、３個〜８０個の反復単位若しくは４個〜６０個の反復単位、より好ましくは８個〜４８個の反復単位、又は１０個〜４０個の反復単位、最も好ましくは１６個〜３２個の反復単位を含む、本質的にこれからなる又はこれからなる。例えば、本発明の方法に使用されるシルクポリペプチドは、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１１個、１２個、１３個、１４個、１５個、１６個、１７個、１８個、１９個、２０個、２１個、２２個、２３個、２４個、２５個、２６個、２７個、２８個、２９個、３０個、３１個、３２個、３３個、３４個、３５個、３６個、３７個、３８個、３９個、４０個、４１個、４２個、４３個、４４個、４５個、４６個、４７個、４８個、４９個、５０個、５１個、５２個、５３個、５４個、５５個、５６個、５７個、５８個、５９個、６０個、６１個、６２個、６３個、６４個、６５個、６６個、６７個、６８個、６９個、７０個、７１個、７２個、７３個、７４個、７５個、７６個、７７個、７８個、７９個又は８０個の反復単位を含み得る又はこれからなり得る。最も好ましくは、シルクポリペプチドは、４個、８個、１２個、１６個、２４個、３２個又は４８個の反復単位を含む。上述のように、本発明の方法に使用されるシルクポリペプチドに含まれる反復単位のうち少なくとも２つが同一の反復単位である。このため、本発明の方法に使用されるシルクポリペプチドは、１つの同一の反復単位の多重コピー（例えばＡ２又はＣ１６（ここで２又は６は反復単位の数を表す））、又は２つ以上の異なる反復単位の多重コピー（例えば（ＡＱ）２４又は（ＱＡＱ）８）を含み得る。例えば、本発明の方法に使用されるシルクポリペプチドに含まれ得る８０個の反復単位のうち２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１１個、１２個、１３個、１４個、１５個、１６個、１７個、１８個、１９個、２０個、２１個、２２個、２３個、２４個、２５個、２６個、２７個、２８個、２９個、３０個、３１個、３２個、３３個、３４個、３５個、３６個、３７個、３８個、３９個、４０個、４１個、４２個、４３個、４４個、４５個、４６個、４７個、４８個、４９個、５０個、５１個、５２個、５３個、５４個、５５個、５６個、５７個、５８個、５９個、６０個、６１個、６２個、６３個、６４個、６５個、６６個、６７個、６８個、６９個、７０個、７１個、７２個、７３個、７４個、７５個、７６個、７７個、７８個、７９個又は８０個が、同一の反復単位であり得る。
【００５０】
本発明の方法に使用されるシルクポリペプチドは、当業者に既知の任意のシルクポリペプチドのアミノ酸配列を含み得る又はこれからなり得る。本発明の方法に使用されるシルクポリペプチドは、節足動物シルクポリペプチド、好ましくはスパイダーシルクポリペプチド、又は昆虫シルクポリペプチドのアミノ酸配列を含む又はこれからなるのが好ましい。また本発明の方法に使用されるシルクポリペプチドは、イガイシルクポリペプチドのアミノ酸配列を含み得る又はこれからなり得る。
【００５１】
スパイダーシルクポリペプチドは、大瓶状腺（major ampullate gland）ポリペプチド（ＭａＳｐ）、例えばドラグラインスパイダーシルクポリペプチド、小瓶状腺（minor ampullate gland）ポリペプチド（ＭｉＳｐ）、鞭毛状ポリペプチド、凝集スパイダーシルクポリペプチド、房状スパイダーシルクポリペプチド、又は梨状スパイダーシルクポリペプチドのアミノ酸配列を含む又はこれからなることが好ましい。最も好ましくは、スパイダーシルクポリペプチドは、ドラグラインスパイダーシルクポリペプチド又は鞭毛状スパイダーシルクポリペプチドのアミノ酸配列を含む又はこれからなる。概してコガネグモ科及びコガネグモ上科（Araneoids）の円網を張るクモのドラグラインポリペプチド又は鞭毛状ポリペプチドのドラグラインポリペプチド又は鞭毛状ポリペプチドのアミノ酸配列を選択するのが好ましい。
【００５２】
昆虫のシルクポリペプチドは、鱗翅目の昆虫のシルクポリペプチドのアミノ酸配列を含む又はこれからなることが好ましい。より好ましくは、昆虫のシルクポリペプチドは、カイコガ科の、最も好ましくはカイコのシルクポリペプチドのアミノ酸配列を含む又はこれからなる。
【００５３】
好ましくは、上述のシルクポリペプチドは組換えにより生成される、すなわち組換え型のシルクポリペプチドである。例えば本発明の方法に使用されるシルクポリペプチドは組換え型のスパイダーシルクポリペプチド（ドラグラインスパイダーシルクポリペプチド若しくは鞭毛状スパイダーシルクポリペプチド等）、組換え型の昆虫シルクポリペプチド、又は組換え型のイガイシルクポリペプチドである。
【００５４】
本発明との関連では、「溶液」という用語は、シルクポリペプチドと溶媒とを含有し、コーティングに適した任意の液体混合物を意味する。
【００５５】
本発明の方法で提供される溶液は、少なくとも一種類のシルクポリペプチドを含む。好ましくは、本発明の方法で提供される溶液は、２種類、３種類、４種類、５種類、６種類、７種類、８種類、９種類又は１０種類の異なるシルクポリペプチド、最も好ましくは２種類の異なるシルクポリペプチドを含む。例えば、該溶液はそのアミノ酸配列が互いに異なる２種類のドラグラインスパイダーシルクポリペプチドを含むことができる。本発明の方法で提供される溶液は、その天然起源が互いに異なるドラグラインスパイダーシルクポリペプチド及び鞭毛状スパイダーシルクポリペプチドも含むことができる。ドラグラインスパイダーシルクポリペプチドは大瓶状腺由来であり、鞭毛状ポリペプチドは鞭状腺由来である。
【００５６】
本発明の方法に使用されるシルクポリペプチド反復単位は、当業者に既知の自然発生的なシルクポリペプチド内で繰り返し生じる少なくとも１つのペプチドモチーフを含む又はこれからなる任意の領域のアミノ酸配列を含み得る又はこれからなり得る。好ましくは、本発明の方法に使用されるシルクポリペプチドの反復単位は、節足動物シルクポリペプチド内で、より好ましくはスパイダーシルクポリペプチド又は昆虫シルクポリペプチド内で繰り返し生じる少なくとも１つのペプチドモチーフを含む又はこれからなる領域のアミノ酸配列を含む又はこれからなる。また本発明の方法に使用されるシルクポリペプチドの反復単位は、イガイシルクポリペプチド内で繰り返し生じる少なくとも１つのペプチドモチーフを含む又はこれからなる領域のアミノ酸配列を含み得る又はこれからなり得る。
【００５７】
スパイダーシルクの反復単位は、自然発生的な大瓶状腺ポリペプチド（ＭａＳｐ）、例えばドラグラインスパイダーシルクポリペプチド、小瓶状腺ポリペプチド（ＭｉＳｐ）、鞭毛状ポリペプチド、凝集スパイダーシルクポリペプチド、房状スパイダーシルクポリペプチド、又は梨状スパイダーシルクポリペプチド内で繰り返し生じる少なくとも１つのペプチドモチーフを含む又はこれからなる領域のアミノ酸配列を含む又はこれからなるのが好ましい。最も好ましくは、反復単位は自然発生的なドラグラインスパイダーシルクポリペプチド又は鞭毛状スパイダーシルクポリペプチド内で繰り返し生じる少なくとも１つのペプチドモチーフを含む又はこれからなる領域のアミノ酸配列を含む又はこれからなる。
【００５８】
昆虫シルクの反復単位は、鱗翅目の昆虫の自然発生的なシルクポリペプチド内で繰り返し生じる少なくとも１つのペプチドモチーフを含む又はこれからなる領域のアミノ酸配列を含む又はこれからなるのが好ましい。より好ましくは、昆虫シルクの反復単位は、カイコガ科の昆虫、最も好ましくはカイコガ（Bombyx mori）の自然発生的な昆虫シルクポリペプチド内で繰り返し生じる少なくとも１つのペプチドモチーフを含む又はこれからなる領域のアミノ酸配列を含む又はこれからなる。
【００５９】
「コンセンサス配列」という用語は本発明との関連で使用する場合、或る特定の位置における発生頻度が高いアミノ酸（例えば「Ｇ」）を含有し、更に決定されていない他のアミノ酸をプレースホルダー「Ｘ」に置き換えたアミノ酸配列を表す。
【００６０】
好ましくは、本発明の方法に使用されるシルクポリペプチドは、各々が、
ｉ）ＧＰＧＸＸ（配列番号３）（ここでＸは任意のアミノ酸であり、好ましくはそれぞれの場合で独立してＡ、Ｓ、Ｇ、Ｙ、Ｐ及びＱから選択される任意のアミノ酸である）、
ｉｉ）ＧＧＸ（ここでＸは任意のアミノ酸であり、好ましくはそれぞれの場合で独立してＹ、Ｐ、Ｒ、Ｓ、Ａ、Ｔ、Ｎ及びＱから選択され、より好ましくはそれぞれの場合で独立してＹ、Ｐ及びＱから選択される任意のアミノ酸である）、
ｉｉｉ）Ａｘ（ここでｘは５〜１０の整数である）
からなる群から選択されるコンセンサス配列を少なくとも１つ、好ましくは１つ含む、少なくとも２つの同一の反復単位を含む、これから本質的になる、又はこれからなる。
【００６１】
本発明の方法に使用されるシルクポリペプチドが、各々がＧＧＲＰＳＤＴＹＧ（配列番号１８）及びＧＧＲＰＳＳＳＹＧ（配列番号１９）からなる群から選択されるアミノ酸配列を少なくとも１つ、好ましくは１つ含む少なくとも２つの同一の反復単位を含む、又はこれからなることも好ましい。
【００６２】
反復（ペプチド）モチーフＧＰＧＸＸ（配列番号３）及びＧＧＸ、すなわち高グリシンモチーフは、シルクポリペプチドに、このため上記モチーフを含有するシルクタンパク質から形成される糸に柔軟性を与える。詳細には、反復ＧＰＧＸＸ（配列番号３）モチーフはβ−ターンらせん構造を形成し、シルクポリペプチドに弾性を付与する。大瓶状腺シルク及び鞭毛状シルクは両方ともＧＰＧＸＸ（配列番号３）モチーフを有する。反復ＧＧＸモチーフは１つのターン当たり３つのアミノ酸を有するヘリックス構造に関連し、ほとんどのスパイダーシルクで見られる。ＧＧＸモチーフはシルクに付加的な弾性を与えることができる。反復ポリアラニンＡｘ（ペプチド）モチーフはシルクポリペプチドに強度を与える結晶性β−シート構造を形成する（国際公開第０３／０５７７２７号）。ＧＧＲＰＳＤＴＹＧ（配列番号１８）及びＧＧＲＰＳＳＳＹＧ（配列番号１９）（ペプチド）モチーフは、レジリン（国際公開第０８／１５５３０４号）から選択されている。レジリンはほとんどの節足動物（節足動物門）で見られる弾性タンパク質である。レジリンは角皮の特定領域に位置しており、低剛性及び高強度を与える（Elvin et al., Nature（437）: 999-1002, 2005）。
【００６３】
このため本発明の好ましい実施の形態では、シルクポリペプチドは、各々がＧＰＧＡＳ（配列番号５）、ＧＰＧＳＧ（配列番号６）、ＧＰＧＧＹ（配列番号７）、ＧＰＧＧＰ（配列番号８）、ＧＰＧＧＡ（配列番号９）、ＧＰＧＱＱ（配列番号４）、ＧＰＧＧＧ（配列番号１０）、ＧＰＧＱＧ（配列番号４０）及びＧＰＧＧＳ（配列番号１１）からなる群から選択されるアミノ酸配列を少なくとも１つ（例えば１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、６つ、７つ、８つ又は９つ）、好ましくは１つ含む反復単位を含む、又はこれからなる。本発明の別の好ましい実施の形態では、シルクポリペプチドは、各々がＧＧＹ、ＧＧＰ、ＧＧＡ、ＧＧＲ、ＧＧＳ、ＧＧＴ、ＧＧＮ及びＧＧＱからなる群から選択されるアミノ酸配列を少なくとも１つ（例えば１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、８つ、７つ又は８つ）、好ましくは１つ含む反復単位を含む、又はこれからなる。本発明の更に好ましい実施の形態では、シルクポリペプチドは、各々がＡＡＡＡＡ（配列番号１２）、ＡＡＡＡＡＡ（配列番号１３）、ＡＡＡＡＡＡＡ（配列番号１４）、ＡＡＡＡＡＡＡＡ（配列番号１５）、ＡＡＡＡＡＡＡＡＡ（配列番号１６）及びＡＡＡＡＡＡＡＡＡＡ（配列番号１７）からなる群から選択されるアミノ酸配列を少なくとも１つ（例えば１つ、２つ、３つ、４つ、５つ又は６つ）、好ましくは１つ含む反復単位を含む、又はこれからなる。
【００６４】
本発明の別の好ましい実施の形態では、シルクポリペプチドは、各々がＧＰＧＡＳ（配列番号５）、ＧＰＧＳＧ（配列番号６）、ＧＰＧＧＹ（配列番号７）、ＧＰＧＧＰ（配列番号８）、ＧＰＧＧＡ（配列番号９）、ＧＰＧＱＱ（配列番号４）、ＧＰＧＧＧ（配列番号１０）、ＧＰＧＱＧ（配列番号４０）、ＧＰＧＧＳ（配列番号１１）、ＧＧＹ、ＧＧＰ、ＧＧＡ、ＧＧＲ、ＧＧＳ、ＧＧＴ、ＧＧＮ、ＧＧＱ、ＡＡＡＡＡ（配列番号１２）、ＡＡＡＡＡＡ（配列番号１３）、ＡＡＡＡＡＡＡ（配列番号１４）、ＡＡＡＡＡＡＡＡ（配列番号１５）、ＡＡＡＡＡＡＡＡＡ（配列番号１６）、ＡＡＡＡＡＡＡＡＡＡ（配列番号１７）、ＧＧＲＰＳＤＴＹＧ（配列番号１８）、及びＧＧＲＰＳＳＳＹＧ（配列番号１９）からなる群から選択されるアミノ酸配列を少なくとも１つ（例えば１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１１個、１２個、１３個、１４個、１５個、１６個、１７個、１８個、１９個、２０個、２１個、２２個、２３個、２４個又は２５個）、好ましくは１つ含む反復単位を含む、又はこれからなる。
【００６５】
最も好ましくは、本発明の方法に使用されるシルクポリペプチドは、
（ｉ）アミノ酸配列として、好ましくはこの順番でＧＰＧＡＳ（配列番号５）、ＡＡＡＡＡＡ（配列番号１３）、ＧＧＹ及びＧＰＧＳＧ（配列番号６）、
（ｉｉ）アミノ酸配列として、好ましくはこの順番でＡＡＡＡＡＡＡＡ（配列番号１５）、ＧＰＧＧＹ（配列番号７）、ＧＰＧＧＹ（配列番号７）及びＧＰＧＧＰ（配列番号８）、
（ｉｉｉ）アミノ酸配列として、ＧＰＧＱＱ（配列番号４）、ＧＰＧＱＱ（配列番号４）、ＧＰＧＱＱ（配列番号４）及びＧＰＧＱＱ（配列番号４）、
（ｉｖ）アミノ酸配列として、好ましくはこの順番でＧＰＧＧＡ（配列番号９）、ＧＧＰ、ＧＰＧＧＡ（配列番号９）、ＧＧＰ、ＧＰＧＧＡ（配列番号９）及びＧＧＰ、
（ｖ）アミノ酸配列として、好ましくはこの順番でＡＡＡＡＡＡＡＡ（配列番号１５）、ＧＰＧＱＧ（配列番号４０）及びＧＧＲ、
（ｖｉ）アミノ酸配列として、好ましくはこの順番でＡＡＡＡＡＡＡＡ（配列番号１５）、ＧＰＧＧＧ（配列番号１０）、ＧＧＲ、ＧＧＮ及びＧＧＲ、
（ｖｉｉ）アミノ酸配列として、好ましくはこの順番でＧＧＡ、ＧＧＡ、ＧＧＡ、ＧＧＳ、ＧＧＡ及びＧＧＳ、並びに／又は
（ｖｉｉｉ）アミノ酸配列として、好ましくはこの順番でＧＰＧＧＡ（配列番号９）、ＧＰＧＧＹ（配列番号７）、ＧＰＧＧＳ（配列番号１１）、ＧＰＧＧＹ（配列番号７）、ＧＰＧＧＳ（配列番号１１）及びＧＰＧＧＹ（配列番号７）
を含むか又はこれからなる反復単位を含む、これから本質的になる、又はこれからなる。
【００６６】
上述のシルクポリペプチドに含まれる反復単位のうち少なくとも２つが同一の反復単位であることに留意すべきである。
【００６７】
好ましくは、本発明の方法に使用されるシルクポリペプチドは、２個〜８０個の反復単位、３個〜８０個の反復単位若しくは４個〜６０個の反復単位、より好ましくは８個〜４８個の反復単位、又は１０個〜４０個の反復単位、最も好ましくは１６個〜３２個の反復単位、すなわち２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１１個、１２個、１３個、１４個、１５個、１６個、１７個、１８個、１９個、２０個、２１個、２２個、２３個、２４個、２５個、２６個、２７個、２８個、２９個、３０個、３１個、３２個、３３個、３４個、３５個、３６個、３７個、３８個、３９個、４０個、４１個、４２個、４３個、４４個、４５個、４６個、４７個、４８個、４９個、５０個、５１個、５２個、５３個、５４個、５５個、５６個、５７個、５８個、５９個、６０個、６１個、６２個、６３個、６４個、６５個、６６個、６７個、６８個、６９個、７０個、７１個、７２個、７３個、７４個、７５個、７６個、７７個、７８個、７９個又は８０個の反復単位（各々が、
ｉ）ＧＰＧＸＸ（配列番号３）（ここでＸは任意のアミノ酸であり、好ましくはそれぞれの場合で独立してＡ、Ｓ、Ｇ、Ｙ、Ｐ及びＱから選択される任意のアミノ酸である）、
ｉｉ）ＧＧＸ（ここでＸは任意のアミノ酸であり、好ましくはそれぞれの場合で独立してＹ、Ｐ、Ｒ、Ｓ、Ａ、Ｔ、Ｎ及びＱから選択され、より好ましくはそれぞれの場合で独立してＹ、Ｐ及びＱから選択される任意のアミノ酸である）、及び
ｉｉｉ）Ａｘ（ここでｘは５〜１０の整数である）
からなる群から選択されるコンセンサス配列を少なくとも１つ、好ましくは１つ含む）を含む、これから本質的になる、又はこれからなる。上述のように、本発明の方法に使用されるシルクポリペプチドに含まれる反復単位のうち少なくとも２つが同一の反復単位である。
【００６８】
本発明の方法に使用されるシルクポリペプチドが、２個〜８０個の反復単位、３個〜８０個の反復単位若しくは４個〜６０個の反復単位、より好ましくは８個〜４８個の反復単位又は１０個〜４０個の反復単位、最も好ましくは１６個〜３２個の反復単位（各々がＧＧＲＰＳＤＴＹＧ（配列番号１８）及びＧＧＲＰＳＳＳＹＧ（配列番号１９）からなる群から選択されるアミノ酸配列を少なくとも１つ、好ましくは１つ含む）を含む、又はこれからなることも好ましい。
【００６９】
このため、本発明の方法に使用されるシルクポリペプチドは好ましくは、２個〜８０個の反復単位、３個〜８０個の反復単位若しくは４個〜６０個の反復単位、より好ましくは８個〜４８個の反復単位又は１０個〜４０個の反復単位、最も好ましくは１６個〜３２個の反復単位、すなわち２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１１個、１２個、１３個、１４個、１５個、１６個、１７個、１８個、１９個、２０個、２１個、２２個、２３個、２４個、２５個、２６個、２７個、２８個、２９個、３０個、３１個、３２個、３３個、３４個、３５個、３６個、３７個、３８個、３９個、４０個、４１個、４２個、４３個、４４個、４５個、４６個、４７個、４８個、４９個、５０個、５１個、５２個、５３個、５４個、５５個、５６個、５７個、５８個、５９個、６０個、６１個、６２個、６３個、６４個、６５個、６６個、６７個、６８個、６９個、７０個、７１個、７２個、７３個、７４個、７５個、７６個、７７個、７８個、７９個又は８０個の反復単位（各々がＧＰＧＡＳ（配列番号５）、ＧＰＧＳＧ（配列番号６）、ＧＰＧＧＹ（配列番号７）、ＧＰＧＧＰ（配列番号８）、ＧＰＧＧＡ（配列番号９）、ＧＰＧＱＱ（配列番号４）、ＧＰＧＱＧ（配列番号４０）、ＧＰＧＧＧ（配列番号１０）、ＧＰＧＧＳ（配列番号１１）、ＧＧＹ、ＧＧＰ、ＧＧＡ、ＧＧＲ、ＧＧＳ、ＧＧＴ、ＧＧＮ、ＧＧＱ、ＡＡＡＡＡ（配列番号１２）、ＡＡＡＡＡＡ（配列番号１３）、ＡＡＡＡＡＡＡ（配列番号１４）、ＡＡＡＡＡＡＡＡ（配列番号１５）、ＡＡＡＡＡＡＡＡＡ（配列番号１６）、ＡＡＡＡＡＡＡＡＡＡ（配列番号１７）、ＧＧＲＰＳＤＴＹＧ（配列番号１８）、及びＧＧＲＰＳＳＳＹＧ（配列番号１９）からなる群から選択されるアミノ酸配列を少なくとも１つ（例えば１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１１個、１２個、１３個、１４個、１５個、１６個、１７個、１８個、１９個、２０個、２１個、２２個、２３個、２４個又は２５個）、好ましくは１つ含む）を含む、又はこれからなる。
【００７０】
最も好ましくは、本発明の方法に使用されるシルクポリペプチドは、
（ｉ）アミノ酸配列として、好ましくはこの順番でＧＰＧＡＳ（配列番号５）、ＡＡＡＡＡＡ（配列番号１３）、ＧＧＹ及びＧＰＧＳＧ（配列番号６）を含む又はこれからなる反復単位、
（ｉｉ）アミノ酸配列として、好ましくはこの順番でＡＡＡＡＡＡＡＡ（配列番号１５）、ＧＰＧＧＹ（配列番号７）、ＧＰＧＧＹ（配列番号７）及びＧＰＧＧＰ（配列番号８）を含む又はこれからなる反復単位、
（ｉｉｉ）アミノ酸配列として、ＧＰＧＱＱ（配列番号４）、ＧＰＧＱＱ（配列番号４）、ＧＰＧＱＱ（配列番号４）及びＧＰＧＱＱ（配列番号４）を含む又はこれからなる反復単位、
（ｉｖ）アミノ酸配列として、好ましくはこの順番でＧＰＧＧＡ（配列番号９）、ＧＧＰ、ＧＰＧＧＡ（配列番号９）、ＧＧＰ、ＧＰＧＧＡ（配列番号９）及びＧＧＰを含む又はこれからなる反復単位、
（ｖ）アミノ酸配列として、好ましくはこの順番でＡＡＡＡＡＡＡＡ（配列番号１５）、ＧＰＧＱＧ（配列番号４０）及びＧＧＲを含む又はこれからなる反復単位、
（ｖｉ）アミノ酸配列として、好ましくはこの順番でＡＡＡＡＡＡＡＡ（配列番号１５）、ＧＰＧＧＧ（配列番号１０）、ＧＧＲ、ＧＧＮ及びＧＧＲを含む又はこれからなる反復単位、
（ｖｉｉ）アミノ酸配列として、好ましくはこの順番でＧＧＡ、ＧＧＡ、ＧＧＡ、ＧＧＳ、ＧＧＡ及びＧＧＳを含む又はこれからなる反復単位、並びに／又は
（ｖｉｉｉ）アミノ酸配列として、好ましくはこの順番でＧＰＧＧＡ（配列番号９）、ＧＰＧＧＹ（配列番号７）、ＧＰＧＧＳ（配列番号１１）、ＧＰＧＧＹ（配列番号７）、ＧＰＧＧＳ（配列番号１１）及びＧＰＧＧＹ（配列番号７）を含む又はこれからなる反復単位
を含む、これから本質的になる、又はこれからなる。
【００７１】
上述のシルクポリペプチドに含まれる反復単位のうち少なくとも２つが同一の反復単位であることに留意すべきである。
【００７２】
好ましくは、本発明の方法に使用されるシルクポリペプチドは、
（ｉ）反復単位として（ＧＰＧＸＸ）ｎ（配列番号３）（ここでＸは任意のアミノ酸であり、好ましくはそれぞれの場合で独立してＡ、Ｓ、Ｇ、Ｙ、Ｐ及びＱから選択され、ｎは２、３、４、５、６、７、８又は９である）、
ｉｉ）反復単位として（ＧＧＸ）ｎ（ここでＸは任意のアミノ酸であり、好ましくはそれぞれの場合で独立してＹ、Ｐ、Ｒ、Ｓ、Ａ、Ｔ、Ｎ及びＱから選択され、より好ましくはそれぞれの場合で独立してＹ、Ｐ及びＱから選択される任意のアミノ酸であり、ｎは２、３、４、５、６、７又は８である）、及び／又は
ｉｉｉ）反復単位として（Ａｘ）ｎ（ここでｘは５〜１０の整数であり、ｎは２、３、４、５、６、７、８、９又は１０である）
を含む、これから本質的になる、又はこれからなる。上述のように、本発明の方法に使用されるシルクポリペプチドに含まれる反復単位のうち少なくとも２つは同一の反復単位である。
【００７３】
反復単位は独立して、モジュールＡ（配列番号２０）、モジュールＣ（配列番号２１）、モジュールＱ（配列番号２２）、モジュールＫ（配列番号２３）、モジュールｓｐ（配列番号２４）、モジュールＳ（配列番号２５）、モジュールＲ（配列番号２６）、モジュールＸ（配列番号２７）若しくはモジュールＹ（配列番号２８）、又はその変異体（すなわちモジュールＡ変異体、モジュールＣ変異体、モジュールＱ変異体、モジュールＫ変異体、モジュールｓｐ変異体、モジュールＳ変異体、モジュールＲ変異体、モジュールＸ変異体又はモジュールＹ変異体）から選択されるのが好ましい。モジュールＡ（配列番号２０）及びモジュールＱ（配列番号２２）はニワオニグモのＡＤＦ−３のアミノ酸配列をベースにしている。モジュールＣ（配列番号２１）はニワオニグモのＡＤＦ−４のアミノ酸配列をベースにしている。モジュールＫ（配列番号２３）、モジュールｓｐ（配列番号２４）、モジュールＸ（配列番号２７）及びモジュールＹ（配列番号２８）はアメリカジョロウグモの鞭毛状タンパク質ＦＬＡＧのアミノ酸配列をベースにしている（国際公開第２００６／００８１６３号）。モジュールＳ（配列番号２５）及びモジュールＲ（配列番号２６）はレジリン（節足動物門）をベースにしている（国際公開第２００８／１５５３０４号）。
【００７４】
このため本発明の好ましい実施の形態では、シルクポリペプチドの反復単位は、モジュールＡ：ＧＰＹＧＰＧＡＳＡＡＡＡＡＡＧＧＹＧＰＧＳＧＱＱ（配列番号２０）、モジュールＣ：ＧＳＳＡＡＡＡＡＡＡＡＳＧＰＧＧＹＧＰＥＮＱＧＰＳＧＰＧＧＹＧＰＧＧＰ（配列番号２１）、モジュールＱ：ＧＰＧＱＱＧＰＧＱＱＧＰＧＱＱＧＰＧＱＱ（配列番号２２）、モジュールＫ：ＧＰＧＧＡＧＧＰＹＧＰＧＧＡＧＧＰＹＧＰＧＧＡＧＧＰＹ（配列番号２３）、モジュールｓｐ：ＧＧＴＴＩＩＥＤＬＤＩＴＩＤＧＡＤＧＰＩＴＩＳＥＥＬＴＩ（配列番号２４）、モジュールＳ：ＰＧＳＳＡＡＡＡＡＡＡＡＳＧＰＧＱＧＱＧＱＧＱＧＱＧＧＲＰＳＤＴＹＧ（配列番号２５）、モジュールＲ：ＳＡＡＡＡＡＡＡＡＧＰＧＧＧＮＧＧＲＰＳＤＴＹＧＡＰＧＧＧＮＧＧＲＰＳＳＳＹＧ（配列番号２６）、モジュールＸ：ＧＧＡＧＧＡＧＧＡＧＧＳＧＧＡＧＧＳ（配列番号２７）若しくはモジュールＹ：ＧＰＧＧＡＧＰＧＧＹＧＰＧＧＳＧＰＧＧＹＧＰＧＧＳＧＰＧＧＹ（配列番号２８）、又はそれらの変異体からなる。
【００７５】
好ましくは、本発明の方法に使用されるシルクポリペプチドは、２個〜８０個の反復単位、３個〜８０個の反復単位若しくは４個〜６０個の反復単位、より好ましくは８個〜４８個の反復単位又は１０個〜４０個の反復単位、最も好ましくは１６個〜３２個の反復単位、すなわち２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１１個、１２個、１３個、１４個、１５個、１６個、１７個、１８個、１９個、２０個、２１個、２２個、２３個、２４個、２５個、２６個、２７個、２８個、２９個、３０個、３１個、３２個、３３個、３４個、３５個、３６個、３７個、３８個、３９個、４０個、４１個、４２個、４３個、４４個、４５個、４６個、４７個、４８個、４９個、５０個、５１個、５２個、５３個、５４個、５５個、５６個、５７個、５８個、５９個、６０個、６１個、６２個、６３個、６４個、６５個、６６個、６７個、６８個、６９個、７０個、７１個、７２個、７３個、７４個、７５個、７６個、７７個、７８個、７９個又は８０個の反復単位（独立して、モジュールＡ（配列番号２０）、モジュールＣ（配列番号２１）、モジュールＱ（配列番号２２）、モジュールＫ（配列番号２３）、モジュールｓｐ（配列番号２４）、モジュールＳ（配列番号２５）、モジュールＲ（配列番号２６）、モジュールＸ（配列番号２７）若しくはモジュールＹ（配列番号２８）、又はその変異体（すなわちモジュールＡ変異体、モジュールＣ変異体、モジュールＱ変異体、モジュールＫ変異体、モジュールｓｐ変異体、モジュールＳ変異体、モジュールＲ変異体、モジュールＸ変異体又はモジュールＹ変異体）から選択される）を含む、これから本質的になる、又はこれからなる。本発明の方法に使用されるシルクポリペプチドに含まれる反復単位のうち少なくとも２つが同一の反復単位（モジュール）であることに留意すべきである。
【００７６】
このため、本発明の方法に使用されるシルクポリペプチドは、（ｉ）モジュールＡからなる反復単位（複数も可）及び／若しくはモジュールＡ変異体からなる反復単位（複数も可）、（ｉｉ）モジュールＣからなる反復単位（複数も可）及び／若しくはモジュールＣ変異体からなる反復単位（複数も可）、（ｉｉｉ）モジュールＱからなる反復単位（複数も可）及び／若しくはモジュールＱ変異体からなる反復単位（複数も可）、（ｉｖ）（ａ）モジュールＡからなる反復単位（複数も可）及びモジュールＱからなる反復単位（複数も可）、（ｂ）モジュールＡからなる反復単位（複数も可）及びモジュールＱ変異体からなる反復単位（複数も可）、（ｃ）モジュールＡ変異体からなる反復単位（複数も可）及びモジュールＱからなる反復単位（複数も可）、（ｄ）モジュールＡ変異体からなる反復単位（複数も可）及びモジュールＱ変異体からなる反復単位（複数も可）、（ｖ）（ａ）モジュールＡからなる反復単位（複数も可）及びモジュールＣからなる反復単位（複数も可）、（ｂ）モジュールＡからなる反復単位（複数も可）及びモジュールＣ変異体からなる反復単位（複数も可）、（ｃ）モジュールＡ変異体からなる反復単位（複数も可）及びモジュールＣからなる反復単位（複数も可）、（ｄ）モジュールＡ変異体からなる反復単位（複数も可）及びモジュールＣ変異体からなる反復単位（複数も可）、（ｖｉ）（ａ）モジュールＣからなる反復単位（複数も可）及びモジュールＱからなる反復単位（複数も可）、（ｂ）モジュールＣからなる反復単位（複数も可）及びモジュールＱ変異体からなる反復単位（複数も可）、（ｃ）モジュールＣ変異体からなる反復単位（複数も可）及びモジュールＱからなる反復単位（複数も可）、（ｄ）モジュールＣ変異体からなる反復単位（複数も可）及びモジュールＱ変異体からなる反復単位（複数も可）、又は（ｖｉｉ）（ａ）モジュールＡからなる反復単位（複数も可）、モジュールＱからなる反復単位（複数も可）及びモジュールＣからなる反復単位（複数も可）、（ｂ）モジュールＡからなる反復単位（複数も可）、モジュールＱからなる反復単位（複数も可）及びモジュールＣ変異体からなる反復単位（複数も可）、（ｃ）モジュールＡからなる反復単位（複数も可）、モジュールＱ変異体からなる反復単位（複数も可）及びモジュールＣからなる反復単位（複数も可）、（ｄ）モジュールＡ変異体からなる反復単位（複数も可）、モジュールＱからなる反復単位（複数も可）及びモジュールＣからなる反復単位（複数も可）、（ｅ）モジュールＡからなる反復単位（複数も可）、モジュールＱ変異体からなる反復単位（複数も可）及びモジュールＣ変異体からなる反復単位（複数も可）、（ｆ）モジュールＡ変異体からなる反復単位（複数も可）、モジュールＱ変異体からなる反復単位（複数も可）及びモジュールＣからなる反復単位（複数も可）、（ｇ）モジュールＡ変異体からなる反復単位（複数も可）、モジュールＱからなる反復単位（複数も可）及びモジュールＣ変異体からなる反復単位（複数も可）、（ｈ）モジュールＡ変異体からなる反復単位（複数も可）、モジュールＱ変異体からなる反復単位（複数も可）及びモジュールＣ変異体からなる反復単位（複数も可）を含む、これから本質的になる、又はこれからなるのが好ましい。
【００７７】
本発明の方法に使用されるシルクポリペプチドは少なくとも２つの同一の反復単位を含む又はこれからなるという条件で、モジュールＡ、モジュールＣ、モジュールＱ、モジュールＫ、モジュールｓｐ、モジュールＳ、モジュールＲ、モジュールＸ、モジュールＹ、又はその変異体（すなわちモジュールＡ変異体、モジュールＣ変異体、モジュールＱ変異体、モジュールＫ変異体、モジュールｓｐ変異体、モジュールＳ変異体、モジュールＲ変異体、モジュールＸ変異体又はモジュールＹ変異体）を各々の任意の組み合わせ及び任意の数で互いに組み合わせることもできる、すなわち例えば、モジュール（反復単位）Ａをモジュール（反復単位）Ｑと組み合わせることができ（すなわち組み合わせＡＱ）、モジュール（反復単位）Ｃをモジュール（反復単位）Ｑと組み合わせることができ（すなわち組み合わせＣＱ）、モジュール（反復単位）Ｑをモジュール（反復単位）Ａ及びモジュール（反復単位）Ｑと組み合わせることができ（すなわち組み合わせＱＡＱ）、モジュール（反復単位）Ａをモジュール（反復単位）Ａ及びモジュール（反復単位）Ｑと組み合わせることができる（すなわち組み合わせＡＡＱ）。例えば、本発明の方法に使用されるシルクポリペプチドは、Ａｎ、（ＡＡ）ｎ、（ＡＱ）ｎ、（ＱＡ）ｎ、Ｑｎ、（ＱＱ）ｎ、（ＱＡＱ）ｎ、（ＡＱＡ）ｎ、Ｃｎ、（ＣＣ）ｎ、（ＣＣＣ）ｎ、（ＣＱ）ｎ、（ＱＣ）ｎ、（ＱＣＱ）ｎ、（ＣＱＣ）ｎ、（ＡＡ）ｎＱｎ、（ＱＱ）ｎＡｎ、（ＡＡＡ）ｎＱｎ、（ＱＱＱ）ｎＡｎ、（ＡＱＱ）ｎ、（ＱＱＡ）ｎ、Ｋｎ、ｓｐｎ、Ｓｎ、Ｒｎ、Ｘｎ、Ｙｎ、（Ｋｓｐ）ｎ、（ｓｐＫ）ｎ、（ＸＹ）ｎ、（ＹＸ）ｎ、（ＸＸ）ｎ、（ＹＹ）ｎ、（ＸＸＸ）ｎ、（ＹＹＹ）ｎ、（ＡＸ）ｎ、（ＸＡ）ｎ、（ＣＸ）ｎ、（ＸＣ）ｎ、（ＱＸ）ｎ、（ＸＱ）ｎ、（ＹＱ）ｎ、（ＱＹ）ｎ、（ＳＳ）ｎ、（ＳＲ）ｎ、（ＲＳ）ｎ又は（ＲＲ）ｎ（ここでｎは少なくとも２、好ましくは４、８、９、１０、１２、１６、２０、２４又は３２である）を含み得る又はこれからなり得る。シルクポリペプチドが（ＡＱ）１２からなる場合、シルクポリペプチドには、モジュール（反復単位）Ａが１２回存在し、モジュール（反復単位）Ｑも１２回存在し、そのためシルクポリペプチドは２４個のモジュール（反復単位）からなることに留意する。（ＡＱ）１２からなるシルクポリペプチドのモジュール（繰り返し単位）の配置は以下のとおりである：ＡＱＡＱＡＱＡＱＡＱＡＱＡＱＡＱＡＱＡＱＡＱＡＱ。さらに、シルクポリペプチドのモジュール（繰り返し単位）のシルクポリペプチドが（ＱＡＱ）８からなる場合、シルクポリペプチドには、モジュール（繰り返し単位）Ａが８回存在し、モジュール（反復単位）Ｑが１６回存在し、そのためシルクポリペプチドは２４個のモジュール（反復単位）からなることに留意する。（ＱＡＱ）８からなるシルクポリペプチドのモジュール（繰り返し単位）の配置は以下のとおりである：ＱＡＱＱＡＱＱＡＱＱＡＱＱＡＱＱＡＱＱＡＱＱＡＱ。
【００７８】
本発明の方法に使用されるシルクポリペプチドはまた、（Ａ＊Ｑ）ｎ、（ＡＱ＊）ｎ、（Ａ＊Ｑ＊）ｎ、（Ｑ＊Ａ）ｎ、（ＱＡ＊）ｎ、（Ｑ＊Ａ＊）ｎ、（ＱＡＱ＊）ｎ、（ＱＡ＊Ｑ）ｎ、（Ｑ＊ＡＱ）ｎ、（ＱＡ＊Ｑ＊）ｎ、（Ｑ＊Ａ＊Ｑ）ｎ、（Ｑ＊ＡＱ＊）ｎ、（Ｑ＊Ａ＊Ｑ＊）ｎ、（ＡＱＡ＊）ｎ、（ＡＱ＊Ａ）ｎ、（Ａ＊ＱＡ）ｎ、（ＡＱ＊Ａ＊）ｎ、（Ａ＊Ｑ＊Ａ）ｎ、（Ａ＊ＱＡ＊）ｎ、（Ａ＊Ｑ＊Ａ＊）ｎ（ここでｎは少なくとも２、好ましくは４、８、９、１０、１２、１６、２０、２４又は３２であり、＊はモジュール変異体、すなわちモジュールＡ変異体又はモジュールＱ変異体を示す）を含み得る又はこれからなり得る。
【００７９】
「互いに組み合わせた」又は「互いに連結した」という用語は、本発明との関連では、複数のモジュール（反復単位）が互いに直接組み合わされている若しくは連結されていることを意味し得る、又は本発明との関連では、複数のモジュール（反復単位）が１つ又は複数のスペーサーアミノ酸を介して互いに組み合わされている若しくは連結されていることを意味し得る。好ましい実施の形態では、シルクポリペプチドに含まれるモジュール（反復単位）が互いに直接組み合わされている若しくは連結されている。他の好ましい実施の形態では、シルクポリペプチドに含まれるモジュール（反復単位）が、１個〜２５個又は１個〜２０個のスペーサーアミノ酸を介して、より好ましくは１個〜１５個又は１個〜１０個のスペーサーアミノ酸を介して、最も好ましくは１個〜５個のスペーサーアミノ酸を介して、すなわち１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１１個、１２個、１３個、１４個、１５個、１６個、１７個、１８個、１９個、２０個、２１個、２２個、２３個、２４個又は２５個のスペーサーアミノ酸を介して互いに組み合わされている又は連結されている。上記スペーサーアミノ酸はタンパク質において自然発生的な任意のアミノ酸であり得る。好ましくは、上記スペーサーアミノ酸はプロリンではない。スペーサーアミノ酸（複数も可）は荷電基を含有するのが好ましい。好ましくは、荷電基を含有するスペーサーアミノ酸（複数も可）は独立して、アスパラギン酸、グルタミン酸、ヒスチジン及びリジンからなる群から選択される。上記スペーサーアミノ酸は、シルクポリペプチドのケブラー又は羊毛等の不活性材料又は自然発生的な材料をコーティング、好ましくは均一にコーティングする能力に負の影響を与えないアミノ酸とする。さらに、上記スペーサーアミノ酸は、立体障害を引き起こさないアミノ酸、例えばリジン及びシステイン等のサイズが小さいアミノ酸とする。
【００８０】
より好ましい実施の形態では、シルクポリペプチドは、互いに直接組み合わせられるモジュール、及び１個〜２５個又は１個〜２０個のスペーサーアミノ酸を介して、より好ましくは１個〜１５個又は１個〜１０個のスペーサーアミノ酸を介して、最も好ましくは１個〜５個のスペーサーアミノ酸を介して、すなわち２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１１個、１２個、１３個、１４個、１５個、１６個、１７個、１８個、１９個、２０個、２１個、２２個、２３個、２４個又は２５個のスペーサーアミノ酸を介して互いに組み合わせられるモジュールを含む。
【００８１】
モジュールＡ、モジュールＣ、モジュールＱ、モジュールＫ、モジュールｓｐ、モジュールＳ、モジュールＲ、モジュールＸ又はモジュールＹの変異体は参照（野生型）モジュールＡ、モジュールＣ、モジュールＱ、モジュールＫ、モジュールｓｐ、モジュールＳ、モジュールＲ、モジュールＸ又はモジュールＹとは異なり、該変異体はそれらからアミノ酸配列における最大１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１１個、１２個、１３個、１４個又は１５個のアミノ酸変化（すなわち置換、付加、挿入、欠失、Ｎ末端切断及び／又はＣ末端切断）により誘導される。代替的に又は付加的に、このようなモジュール変異体は、変異体の誘導元である参照（野生型）モジュールに対する或る特定の程度の配列同一性を特徴とし得る。このため、モジュールＡ、モジュールＣ、モジュールＱ、モジュールＫ、モジュールｓｐ、モジュールＳ、モジュールＲ、モジュールＸ又はモジュールＹの変異体は、各参照（野生型）モジュールＡ、モジュールＣ、モジュールＱ、モジュールＫ、モジュールｓｐ、モジュールＳ、モジュールＲ、モジュールＸ又はモジュールＹに対する少なくとも５０％、５１％、５２％、５３％、５４％、５５％、５６％、５７％、５８％、５９％、６０％、６１％、６２％、６３％、６４％、６５％、６６％、６７％、６８％、６９％、７０％、７１％、７２％、７３％、７４％、７５％、７６％、７７％、７８％、７９％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は更には９９．９％の配列同一性を有する。好ましくは配列同一性は、各参照（野生型）モジュールＡ、モジュールＣ、モジュールＱ、モジュールＫ、モジュールｓｐ、モジュールＳ、モジュールＲ、モジュールＸ又はモジュールＹの少なくとも１０個、１５個、１８個、２０個、２４個、２７個、２８個、３０個、３４個、３５個又はそれ以上のアミノ酸の連続ストレッチにわたる、好ましくは全長にわたるものである。
【００８２】
配列同一性は、各参照（野生型）モジュールＡ、モジュールＣ、モジュールＱ、モジュールＫ、モジュールｓｐ、モジュールＳ、モジュールＲ、モジュールＸ又はモジュールＹの全長にわたって少なくとも８０％、全長にわたって少なくとも８５％、全長にわたって少なくとも９０％、全長にわたって少なくとも９５％、全長にわたって少なくとも９８％、又は全長にわたって少なくとも９９％であるのが特に好ましい。配列同一性は、各参照（野生型）モジュールＡ、モジュールＣ、モジュールＱ、モジュールＫ、モジュールｓｐ、モジュールＳ、モジュールＲ、モジュールＸ若しくはモジュールＹのうちの少なくとも１０個、１５個、１８個、２０個、２４個、２８個若しくは３０個のアミノ酸の連続ストレッチにわたって少なくとも８０％、少なくとも１０個、１５個、１８個、２０個、２４個、２８個若しくは３０個のアミノ酸の連続ストレッチにわたって少なくとも８５％、少なくとも１０個、１５個、１８個、２０個、２４個、２８個若しくは３０個のアミノ酸の連続ストレッチにわたって少なくとも９０％、少なくとも１０個、１５個、１８個、２０個、２４個、２８個若しくは３０個のアミノ酸の連続ストレッチにわたって少なくとも９５％、少なくとも１０個、１５個、１８個、２０個、２４個、２８個若しくは３０個のアミノ酸の連続ストレッチにわたって少なくとも９８％、又は少なくとも１０個、１５個、１８個、２０個、２４個、２８個若しくは３０個のアミノ酸の連続ストレッチにわたって少なくとも９９％であるのが特に好ましい。
【００８３】
モジュールＡ、モジュールＣ、モジュールＱ、モジュールＫ、モジュールｓｐ、モジュールＳ、モジュールＲ、モジュールＸ又はモジュールＹの断片（又は欠失変異体）は好ましくは、そのＮ末端に及び／又はそのＣ末端に最大１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１１個、１２個、１３個、１４個又は１５個のアミノ酸の欠失を有する。欠失は内部にあってもよい。
【００８４】
さらに、モジュールＡ、モジュールＣ、モジュールＱ、モジュールＫ、モジュールｓｐ、モジュールＳ、モジュールＲ、モジュールＸ又はモジュールＹの変異体又は断片は、変異体又は断片の元となるアミノ酸配列に対する修飾が、シルクポリペプチドのケブラー又は羊毛等の不活性材料又は自然発生的な材料をコーティングする、好ましくは均一にコーティングする能力に負の影響を与えない場合にのみ、本発明との関連内においてモジュールＡ、モジュールＣ、モジュールＱ、モジュールＫ、モジュールｓｐ、モジュールＳ、モジュールＲ、モジュールＸ又はモジュールＹの変異体又は断片とみなされる。好ましくは、モジュールＡ、モジュールＣ、モジュールＱ、モジュールＫ、モジュールｓｐ、モジュールＳ、モジュールＲ、モジュールＸ又はモジュールＹの変異体又は断片を含むシルクポリペプチドは、各参照（野生型）モジュールＡ、モジュールＣ、モジュールＱ、モジュールＫ、モジュールｓｐ、モジュールＳ、モジュールＲ、モジュールＸ又はモジュールＹを含むシルクポリペプチドを用いて形成可能であるように、１ｎｍ〜５０μｍ、好ましくは４０ｎｍ〜５０μｍ、より好ましくは０．５μｍ〜１０μｍ、最も好ましくは１．０μｍ〜５μｍの厚さのコーティングを形成することが可能である。モジュールＡ、モジュールＣ、モジュールＱ、モジュールＫ、モジュールｓｐ、モジュールＳ、モジュールＲ、モジュールＸ又はモジュールＹの変異体又は断片を含むシルクポリペプチドで作られたコーティングは、各参照（野生型）モジュールＡ、モジュールＣ、モジュールＱ、モジュールＫ、モジュールｓｐ、モジュールＳ、モジュールＲ、モジュールＸ又はモジュールＹを含むシルクポリペプチドで作られたコーティングと比較して類似の表面構造（表面起伏）、例えば粗度又は多孔性を有するのも好ましい。モジュールＡ、モジュールＣ、モジュールＱ、モジュールＫ、モジュールｓｐ、モジュールＳ、モジュールＲ、モジュールＸ又はモジュールＹの変異体又は断片を含むシルクポリペプチドで作られたコーティングが、各参照（野生型）モジュールＡ、モジュールＣ、モジュールＱ、モジュールＫ、モジュールｓｐ、モジュールＳ、モジュールＲ、モジュールＸ又はモジュールＹを含むシルクポリペプチドで作られたコーティングと類似の表面構造及び厚さを示すのが特に好ましい。当業者は電子顕微鏡検査を用いてコーティングの厚さ又は表面構造（表面起伏）を容易に評価することができる。
【００８５】
このため本発明の好ましい実施の形態では、反復単位は独立して、モジュールＡＣ（配列番号２９）、モジュールＡＫ（配列番号３０）、モジュールＣＣ（配列番号３１）、モジュールＣＫ１（配列番号３２）、モジュールＣＫ２（配列番号３３）又はモジュールＣＫＣ（配列番号３４）から選択される。モジュールＡＣ（配列番号２９）、モジュールＡＫ（配列番号３０）、モジュールＣＣ（配列番号３１）、モジュールＣＫ１（配列番号３２）、モジュールＣＫ２（配列番号３３）及びモジュールＣＫＣ（配列番号３４）は、ニワオニグモのＡＤＦ−３のアミノ酸配列をベースとするモジュールＡ、及びニワオニグモのＡＤＦ−４のアミノ酸配列をベースとするモジュールＣの変異体である（国際公開第２００７／０２５７１９号）。モジュールＡＣ（配列番号２９）では、２１位のアミノ酸Ｓ（セリン）がアミノ酸Ｃ（システイン）に置き換えられており、モジュールＡＫ（配列番号３０）では、２１位のアミノ酸Ｓがアミノ酸Ｋ（リジン）に置き換えられており、モジュールＣＣ（配列番号３１）では、２５位のアミノ酸Ｓがアミノ酸Ｃに置き換えられており、モジュールＣＫ１（配列番号３２）では、２５位のアミノ酸Ｓがアミノ酸Ｋに置き換えられており、モジュールＣＫ２（配列番号３３）では、２０位のアミノ酸Ｅ（グルタミン酸）がアミノ酸Ｋに置き換えられており、モジュールＣＫＣ（配列番号３４）では、２０位のアミノ酸Ｅがアミノ酸Ｋに置き換えられており、２５位のアミノ酸Ｓがアミノ酸Ｃに置き換えられている（国際公開第２００７／０２５７１９号）。
【００８６】
好ましくは、本発明の方法に使用されるシルクポリペプチドにおける反復単位は、モジュールＡＣ：ＧＰＹＧＰＧＡＳＡＡＡＡＡＡＧＧＹＧＰＧＣＧＱＱ（配列番号２９）、モジュールＡＫ：ＧＰＹＧＰＧＡＳＡＡＡＡＡＡＧＧＹＧＰＧＫＧＱＱ（配列番号３０）、モジュールＣＣ：ＧＳＳＡＡＡＡＡＡＡＡＳＧＰＧＧＹＧＰＥＮＱＧＰＣＧＰＧＧＹＧＰＧＧＰ（配列番号３１）、モジュールＣＫ１：ＧＳＳＡＡＡＡＡＡＡＡＳＧＰＧＧＹＧＰＥＮＱＧＰＫＧＰＧＧＹＧＰＧＧＰ（配列番号３２）、モジュールＣＫ２：ＧＳＳＡＡＡＡＡＡＡＡＳＧＰＧＧＹＧＰＫＮＱＧＰＳＧＰＧＧＹＧＰＧＧＰ（配列番号３３）、又はモジュールＣＫＣ：ＧＳＳＡＡＡＡＡＡＡＡＳＧＰＧＧＹＧＰＫＮＱＧＰＣＧＰＧＧＹＧＰＧＧＰ（配列番号３４）からなる。
【００８７】
本発明の方法に使用されるシルクポリペプチドが、２個〜８０個の反復単位、３個〜８０個の反復単位若しくは４個〜６０個の反復単位、好ましくは８個〜４８個の反復単位又は１０個〜４０個の反復単位、最も好ましくは１６個〜３２個の反復単位、すなわち２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１１個、１２個、１３個、１４個、１５個、１６個、１７個、１８個、１９個、２０個、２１個、２２個、２３個、２４個、２５個、２６個、２７個、２８個、２９個、３０個、３１個、３２個、３３個、３４個、３５個、３６個、３７個、３８個、３９個、４０個、４１個、４２個、４３個、４４個、４５個、４６個、４７個、４８個、４９個、５０個、５１個、５２個、５３個、５４個、５５個、５６個、５７個、５８個、５９個、６０個、６１個、６２個、６３個、６４個、６５個、６６個、６７個、６８個、６９個、７０個、７１個、７２個、７３個、７４個、７５個、７６個、７７個、７８個、７９個又は８０個の反復単位（独立して、モジュールＡＣ（配列番号２９）、モジュールＡＫ（配列番号３０）、モジュールＣＣ（配列番号３１）、モジュールＣＫ１（配列番号３２）、モジュールＣＫ２（配列番号３３）又はモジュールＣＫＣ（配列番号３４）から選択される）を含む、これから本質的になる、又はこれからなることも好ましい。本発明の方法に使用されるシルクポリペプチドに含まれる反復単位のうち少なくとも２つが同一の反復単位（モジュール）であることに留意すべきである。
【００８８】
例えば、本発明の方法に使用されるシルクポリペプチドは、モジュールＣＣ４、モジュールＣＣ８、モジュールＣＣ１６、モジュールＣＣ３２、モジュールＡＣ５、モジュールＡＣ８又はモジュールＡＣ１０を含み得る又はこれからなり得る。
【００８９】
本発明の方法に使用されるシルクポリペプチドは少なくとも２つの同一の反復単位を含む又はこれからなるという条件で、モジュールＡＫ、モジュールＣＣ、モジュールＣＫ１、モジュールＣＫ２及びモジュールＣＫＣを互いに組み合わせることもできる、すなわち例えば、モジュール（反復単位）ＡＫをモジュール（反復単位）ＣＣと組み合わせることができ（すなわち組み合わせＡＫＣＣ）、モジュール（反復単位）ＣＫ１をモジュール（反復単位）ＣＫ２及びモジュール（反復単位）ＣＫＣと組み合わせることができる（すなわち組み合わせＣＫ１ＣＫ２ＣＫＣ）。このため、本発明の方法に使用されるシルクポリペプチドはまた、モジュール（ＡＫ）ｎ、モジュール（ＣＣ）ｎ、モジュール（ＣＫ１）ｎ、モジュール（ＣＫ２）ｎ、モジュール（ＣＫＣ）ｎ、モジュール（ＡＫＡＣ）ｎ、モジュール（ＣＣＣＣ）ｎ、モジュール（ＣＫ１ＣＫ２）ｎ、モジュール（ＣＫ２ＣＫ１）ｎ、モジュール（ＣＫ１ＣＫ２ＣＫ１）ｎ、モジュール（ＣＫ２ＣＫ１ＣＫ２）ｎ、モジュール（ＣＫ１ＣＫ２ＣＫＣ）ｎ、モジュール（ＣＫＣＣＫ２ＣＫＣ）ｎ又はモジュール（ＣＫＣＣＫ２ＣＫ１）ｎ（ここでｎは少なくとも２、好ましくは４、５、６、７、８、１０、１２、１６又は２０である）を含み得る又はこれからなり得る。「互いに組み合わせた」という用語は上で定義される。
【００９０】
本発明の方法に使用されるシルクポリペプチドは、２個〜８０個の反復単位、３個〜８０個の反復単位若しくは４個〜６０個の反復単位、好ましくは８個〜４８個の反復単位又は１０個〜４０個の反復単位、最も好ましくは１６個〜３２個の反復単位、すなわち２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１１個、１２個、１３個、１４個、１５個、１６個、１７個、１８個、１９個、２０個、２１個、２２個、２３個、２４個、２５個、２６個、２７個、２８個、２９個、３０個、３１個、３２個、３３個、３４個、３５個、３６個、３７個、３８個、３９個、４０個、４１個、４２個、４３個、４４個、４５個、４６個、４７個、４８個、４９個、５０個、５１個、５２個、５３個、５４個、５５個、５６個、５７個、５８個、５９個、６０個、６１個、６２個、６３個、６４個、６５個、６６個、６７個、６８個、６９個、７０個、７１個、７２個、７３個、７４個、７５個、７６個、７７個、７８個、７９個又は８０個の反復単位（独立して、モジュールＡ（配列番号２０）若しくはその変異体、モジュールＣ（配列番号２１）若しくはその変異体、モジュールＱ（配列番号２２）若しくはその変異体、モジュールＫ（配列番号２３）若しくはその変異体、モジュールｓｐ（配列番号２４）若しくはその変異体、モジュールＳ（配列番号２５）若しくはその変異体、モジュールＲ（配列番号２６）若しくはその変異体、モジュールＸ（配列番号２７）若しくはその変異体、モジュールＹ（配列番号２８）若しくはその変異体、モジュールＡＣ（配列番号２９）、モジュールＡＫ（配列番号３０）、モジュールＣＣ（配列番号３１）、モジュールＣＫ１（配列番号３２）、モジュールＣＫ２（配列番号３３）、又はモジュールＣＫＣ（配列番号３４）から選択される）を含む、これから本質的になる、又はこれからなるのが更に好ましい。この場合も、本発明の方法に使用されるシルクポリペプチドに含まれる反復単位のうち少なくとも２つが同一の反復単位（モジュール）であることに留意すべきである。
【００９１】
本発明の方法に使用されるシルクポリペプチドは少なくとも２つの同一の反復単位を含む又はこれからなるという条件で、モジュールＡＫ、モジュールＣＣ、モジュールＣＫ１、モジュールＣＫ２及びモジュールＣＫＣを、モジュールＡ、モジュールＣ、モジュールＱ、モジュールＫ、モジュールｓｐ、モジュールＳ、モジュールＲ、モジュールＸ又はモジュールＹと互いに組み合わせることもできる、すなわち例えば、モジュール（反復単位）ＡＫをモジュール（反復単位）Ｃと組み合わせることができ（すなわち組み合わせＡＫＣ）、又はモジュール（反復単位）ＣＣをモジュール（反復単位）Ｃと組み合わせることができる（すなわち組み合わせＣＣＣ）。このため、本発明の方法に使用されるシルクポリペプチドはまた、モジュール（ＡＱＡＫ）ｎ、モジュール（ＱＡＫ）ｎ、モジュール（ＱＡＫＱ）ｎ、モジュール（ＡＫＱＡ）ｎ、モジュール（ＡＫＱＡＫ）ｎ、モジュール（ＣＣＣ）ｎ、モジュール（ＣＣＣＣ）ｎ、モジュール（ＣＣＣＣＣ）ｎ、モジュール（ＣＣＣＣＣ）ｎ、モジュール（ＣＣＱ）ｎ、モジュール（ＱＣＣ）ｎ、モジュール（ＱＣＣＱ）ｎ、モジュール（ＣＣＱＣ）ｎ、モジュール（ＣＱＣＣ）ｎ、モジュール（ＣＣＱＣＣ）ｎ、モジュール（ＣＣＫ１）ｎ、モジュール（ＣＫ１Ｃ）ｎ、モジュール（ＣＫ１ＣＣ）ｎ、モジュール（ＣＣＫ１Ｃ）ｎ、モジュール（ＣＫＣＣＫＣＣ）ｎ、モジュール（ＣＣＫＣＣＫＣ）ｎ、モジュール（ＣＫＣＱ）ｎ、モジュール（ＱＣＫＣ）ｎ、モジュール（ＱＣＫＣＱ）ｎ、モジュール（ＡＫＣＫ１Ｑ）ｎ、モジュール（ＱＣＫ２ＡＫ）ｎ、又はモジュール（ＣＫ１ＣＫ２Ｃ）ｎ（ここでｎは少なくとも２、好ましくは４、５、６、７、８、１０、１２、１６又は２０である）を含み得る又はこれからなり得る。「互いに組み合わせた」という用語は上で定義される。
【００９２】
例えば、本発明の方法に使用されるシルクポリペプチドは、モジュールＣ１６ＣＣ、モジュールＣＣＣ１６、モジュールＣ８ＣＣＣ８、モジュールＣ８ＣＣ８、モジュールＣＣ８Ｃ８、モジュールＣ４ＣＣ８Ｃ４、モジュールＣＣ４Ｃ８ＣＣ４、モジュールＣＣ（ＡＱ）２４又はモジュール（ＡＱ）２４ＣＣを含む又はこれからなる。
【００９３】
本発明の方法に使用されるシルクポリペプチドは、少なくとも１つの非反復（ＮＲ）単位、すなわち１個、２個、３個、４個、５個、６個又はそれ以上のＮＲ単位、好ましくは１個のＮＲ単位を更に含むことができる。本発明との関連では、「非反復（ＮＲ）単位」という用語は、明らかな反復パターンを示さない、自然発生的なシルクポリペプチドに存在するアミノ酸の領域（非反復単位又はＮＲ単位）を表す。好ましくは、非反復単位のアミノ酸配列は、自然発生的なドラグラインポリペプチド、好ましくはＡＤＦ−３（配列番号１）若しくはＡＤＦ−４（配列番号２）の非反復アミノ酸配列に、又はそれと実質的に類似のアミノ酸配列に相当する。
【００９４】
非反復単位のアミノ酸配列は、自然発生的なドラグラインポリペプチド、好ましくはＡＤＦ−３（配列番号１）若しくはＡＤＦ−４（配列番号２）の非反復カルボキシ末端アミノ酸配列に、又はそれと実質的に類似のアミノ酸配列に相当するのが特に好ましい。より好ましくは、非反復単位のアミノ酸配列は、アミノ酸５１３〜アミノ酸６３６を含むＡＤＦ−３（配列番号１）若しくはアミノ酸３０２〜アミノ酸４１０を含むＡＤＦ−４（配列番号２）の非反復カルボキシ末端アミノ酸配列に、又はそれと実質的に類似のアミノ酸配列に相当する。
【００９５】
この関連で「実質的に類似の」は、好ましくは２０個、３０個、４０個、５０個、６０個、７０個、８０個又はそれ以上のアミノ酸にわたる、より好ましくは自然発生的なドラグラインポリペプチド、好ましくはＡＤＦ−３（配列番号１）又はＡＤＦ−４（配列番号２）の各参照非反復（カルボキシ末端）アミノ酸配列の全長にわたる少なくとも５０％、５１％、５２％、５３％、５４％、５５％、５６％、５７％、５８％、５９％、６０％、６１％、６２％、６３％、６４％、６５％、６６％、６７％、６８％、６９％、７０％、７１％、７２％、７３％、７４％、７５％、７６％、７７％、７８％、７９％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は更には９９．９％のアミノ酸同一性の程度を意味する。
【００９６】
自然発生的なドラグラインポリペプチド（すなわち野生型非反復（カルボキシ末端）単位）内の、好ましくはＡＤＦ−３（配列番号１）又はＡＤＦ−４（配列番号２）内の対応する非反復（カルボキシ末端）アミノ酸配列と「実質的に類似の」アミノ酸配列を有する「非反復単位」は、その機能特性に関しても類似している。例えば「実質的に類似の非反復単位」を含むシルクポリペプチドは依然として、ケブラー又は羊毛等の合成材料又は自然発生的な材料上にコーティングを形成する能力を有する。好ましくは、「実質的に類似の非反復単位」を含むシルクポリペプチドは、各参照（野生型）非反復（カルボキシ末端）単位を含むシルクポリペプチドを用いて形成することができるのと同様に、１ｎｍ〜５０μｍ、好ましくは４０ｎｍ〜５０μｍ、より好ましくは０．５μｍ〜１０μｍ、最も好ましくは１．０μｍ〜５μｍの厚さのコーティングを形成することが可能である。「実質的に類似の非反復単位」を含むシルクポリペプチドで作られたコーティングは、各参照（野生型）非反復（カルボキシ末端）単位を含むシルクポリペプチドで作られたコーティングと比較して類似の（similar）表面構造（表面起伏）、例えば粗度又は多孔性を有するのも好ましい。「実質的に類似の反復単位」を含むシルクポリペプチドで作られたコーティングは、各参照（野生型）非反復（カルボキシ末端）単位を含むシルクポリペプチドで作られたコーティングに類似の表面構造及び厚さを示すのが特に好ましい。当業者は電子顕微鏡検査を用いて、コーティングの厚さ又は表面構造（表面起伏）を容易に評価することができる。
【００９７】
最も好ましくは、非反復（ＮＲ）単位は、ＮＲ３（配列番号４１）若しくはその変異体、又はＮＲ４（配列番号４２）若しくはその変異体である。ＮＲ３（配列番号４１）単位はニワオニグモのＡＤＦ−３のアミノ酸配列をベースとしており、ＮＲ４（配列番号４２）単位はニワオニグモのＡＤＦ−４のアミノ酸配列をベースとしている（国際公開第２００６／００８１６３号）。
【００９８】
ＮＲ３単位又はＮＲ４単位の変異体は、参照ＮＲ３（配列番号４１）単位又はＮＲ４（配列番号４２）単位とは異なり、該変異体はそれらからアミノ酸配列における最大１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１１個、１２個、１３個、１４個、１５個、１６個、１７個、１８個、１９個、２０個、２５個又は３０個のアミノ酸変化（すなわち置換（exchanges）、挿入、欠失、Ｎ末端切断及び／又はＣ末端切断）により誘導される。代替的に又は付加的に、このようなＮＲ３単位又はＮＲ４単位の変異体は、変異体の誘導元である参照ＮＲ３単位又はＮＲ４単位に対する或る特定の程度の配列同一性を特徴とし得る。このため、ＮＲ３単位又はＮＲ４単位の変異体は、各参照ＮＲ３単位又はＮＲ４単位に対する少なくとも５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、７６％、７７％、７８％、７９％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は更には９９．９％の配列同一性を有する。好ましくは配列同一性は、各参照ＮＲ３単位又はＮＲ４単位の少なくとも１０個、２０個、３０個、４０個、５０個、６０個、７０個、８０個、９０個又はそれ以上のアミノ酸の連続ストレッチにわたる、好ましくは全長にわたるものである。
【００９９】
配列同一性は各参照ＮＲ３単位又はＮＲ４単位の全長にわたって少なくとも８０％、全長にわたって少なくとも８５％、全長にわたって少なくとも９０％、全長にわたって少なくとも９５％、全長にわたって少なくとも９８％、又は全長にわたって少なくとも９９％であるのが特に好ましい。配列同一性は各参照ＮＲ３単位若しくはＮＲ４単位のうちの少なくとも２０個、３０個、４０個、５０個、６０個、７０個若しくは８０個のアミノ酸の連続ストレッチにわたって少なくとも８０％、少なくとも２０個、３０個、４０個、５０個、６０個、７０個若しくは８０個のアミノ酸の連続ストレッチにわたって少なくとも８５％、少なくとも２０個、３０個、４０個、５０個、６０個、７０個若しくは８０個のアミノ酸の連続ストレッチにわたって少なくとも９０％、少なくとも２０個、３０個、４０個、５０個、６０個、７０個若しくは８０個のアミノ酸の連続ストレッチにわたって少なくとも９５％、少なくとも２０個、３０個、４０個、５０個、６０個、７０個若しくは８０個のアミノ酸の連続ストレッチにわたって少なくとも９８％、又は少なくとも２０個、３０個、４０個、５０個、６０個、７０個若しくは８０個のアミノ酸の連続ストレッチにわたって少なくとも９９％であるのが更に特に好ましい。
【０１００】
ＮＲ３単位又はＮＲ４単位の断片（又は欠失変異体）は好ましくは、そのＮ末端に及び／又はそのＣ末端に最大１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１１個、１２個、１３個、１４個、１５個、１６個、１７個、１８個、１９個、２０個、２１個、２２個、２３個、２４個、２５個、３０個、３５個、４０個、４５個、５０個、５５個又は６０個のアミノ酸の欠失を有する。欠失は内部にあってもよい。
【０１０１】
さらに、ＮＲ３単位又はＮＲ４単位の変異体又は断片は、変異体又は断片の元となるアミノ酸配列に対する修飾が、シルクポリペプチドのケブラー又は綿等の不活性材料又は自然発生的な材料をコーティングする、好ましくは均一にコーティングする能力に負の影響を与えない場合にのみ、本発明との関連内においてＮＲ３単位又はＮＲ４単位の変異体又は断片とみなされる。好ましくは、ＮＲ３単位又はＮＲ４単位の変異体又は断片を含むシルクポリペプチドは、各参照ＮＲ３単位又はＮＲ４単位を含むシルクポリペプチドを用いて形成することができるのと同様に、１ｎｍ〜５０μｍ、好ましくは４０ｎｍ〜５０μｍ、より好ましくは０．５μｍ〜１０μｍ、最も好ましくは１．０μｍ〜５．０μｍの厚さのコーティングを形成することが可能である。ＮＲ３単位又はＮＲ４単位の変異体又は断片を含むシルクポリペプチドで作られたコーティングは、各参照ＮＲ３単位又はＮＲ４単位を含むシルクポリペプチドで作られたコーティングと比較して類似の表面構造（表面起伏）、例えば粗度又は多孔性を有するのも好ましい。ＮＲ３単位又はＮＲ４単位の変異体又は断片を含むシルクポリペプチドで作られたコーティングは、各参照ＮＲ３単位又はＮＲ４単位を含むシルクポリペプチドで作られたコーティングに類似の表面構造及び厚さを示すのが特に好ましい。当業者は電子顕微鏡検査を用いて、コーティングの厚さ又は表面構造（表面起伏）を容易に評価することができる。
【０１０２】
代替的には、ＮＲ３単位又はＮＲ４単位の変異体又は断片が依然として、それが含まれるシルクポリペプチドの重合を可能にするか、及び／又は可溶性を増大させるかを試験することができる。当業者は、ＮＲ３単位又はＮＲ４単位の変異体又は断片を含むシルクポリペプチドが、各参照ＮＲ３単位又はＮＲ４単位を含むシルクポリペプチドのように上述の機能特性を有するかを容易に評価することができる。好適なアッセイは当業者にとって既知である。例えば、ＮＲ３単位又はＮＲ４単位の変異体又は断片を含むシルクポリペプチドの重合、及び各参照ＮＲ３単位又はＮＲ４単位を含むシルクポリペプチドの重合を、ネイティブゲル電気泳動により容易に可視化することができる。ＮＲ３単位又はＮＲ４単位の変異体又は断片を含むシルクポリペプチドの可溶性、及び各参照ＮＲ３単位又はＮＲ４単位を含むシルクポリペプチドの可溶性を、水溶液中の上記シルクポリペプチドの飽和により単純に試験することができる。最終的に結果を互いに比較することができる。
【０１０３】
好ましくは、本発明の方法に使用されるシルクポリペプチドは、ＡＤＦ−３（配列番号１）又はその変異体、ＡＤＦ−４（配列番号２）又はその変異体、ＭａＳｐ Ｉ（配列番号４３）又はその変異体、ＭａＳｐ ＩＩ（配列番号４４）又はその変異体、（Ｃ）ｍ、（Ｃ）ｍＮＲｚ、ＮＲｚ（Ｃ）ｍ、（ＡＱ）ｎ、（ＡＱ）ｎＮＲｚ、ＮＲｚ（ＡＱ）ｎ、（ＱＡＱ）ｏ、ＮＲｚ（ＱＡＱ）ｏ、（ＱＡＱ）ｏＮＲｚ、Ｙｐ、Ｘｐ及びＫｐ（ここで、ｍは８〜４８（すなわち８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７又は４８）の整数であり、ｎは６〜２４（すなわち６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３又は２４）の整数であり、ｏは８〜１６（すなわち８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５又は１６）の整数であり、ｐは８〜１６（すなわち８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５又は１６）の整数であり、ｚは１〜３（すなわち１、２又は３）の整数であり、ＮＲは非反復単位を表す）からなる群から選択される。上述の式は以下のうちの１つにより定義される。
（ｉ）式（Ｃ）ｍでは、配列番号２１によるアミノ酸配列で表される、数「ｍ」のＣモジュール、すなわち８個〜４８個のＣモジュールが互いに組み合わせられ、
（ｉｉ）式（Ｃ）ｍＮＲｚでは、配列番号２１によるアミノ酸配列で表される、数「ｍ」のＣモジュール、すなわち８個〜４８個のＣモジュールが互いに組み合わせられ、上記Ｃモジュールはさらに、数「ｚ」の非反復（ＮＲ）単位、すなわち１個〜３個の非反復（ＮＲ）単位、例えば配列番号４１によるアミノ酸配列で表される非反復（ＮＲ）単位ＮＲ３又は配列番号４２によるアミノ酸配列で表される非反復（ＮＲ）単位ＮＲ４と組み合わせられ、
（ｉｉｉ）式ＮＲｚ（Ｃ）ｍでは、数「ｚ」の非反復（ＮＲ）単位、すなわち１個〜３個の非反復（ＮＲ）単位、例えば配列番号４１によるアミノ酸配列で表される非反復（ＮＲ）単位ＮＲ３又は配列番号４２によるアミノ酸配列で表される非反復（ＮＲ）単位ＮＲ４が存在し（ｚ＝１）、又は互いに組み合わせられ（ｚ＝２又は３）、上記非反復（ＮＲ）単位（複数も可）はさらに、配列番号２１によるアミノ酸配列で表される、数「ｍ」のＣモジュール、すなわち８個〜４８個のＣモジュールと組み合わせられ、
（ｉｖ）式（ＡＱ）ｎでは、数「ｎ」のＡモジュールとＱモジュールとの組み合わせ、すなわち６個〜２４個のＡモジュールとＱモジュールとの組み合わせ（ここでモジュールＡは配列番号２０によるアミノ酸配列により表され、モジュールＱは配列番号２２によるアミノ酸配列により表される）が互いに組み合わされ、
（ｖ）式（ＡＱ）ｎＮＲｚでは、数「ｎ」のＡモジュールとＱモジュールとの組み合わせ、すなわち６個〜２４個のＡモジュールとＱモジュールとの組み合わせ（ここでモジュールＡは配列番号２０によるアミノ酸配列により表され、モジュールＱは配列番号２２によるアミノ酸配列により表される）が互いに組み合わされ、上記ＡモジュールとＱモジュールとの組み合わせはさらに、数「ｚ」の非反復（ＮＲ）単位、すなわち１個〜３個の非反復（ＮＲ）単位、例えば配列番号４１によるアミノ酸配列で表される非反復（ＮＲ）単位ＮＲ３又は配列番号４２によるアミノ酸配列で表される非反復（ＮＲ）単位ＮＲ４と組み合わせられ、
（ｖｉ）式ＮＲｚ（ＡＱ）ｎでは、数「ｚ」の非反復（ＮＲ）単位、すなわち１個〜３個の非反復（ＮＲ）単位、例えば配列番号４１によるアミノ酸配列で表される非反復（ＮＲ）単位ＮＲ３又は配列番号４２によるアミノ酸配列で表される非反復（ＮＲ）単位ＮＲ４が存在し（ｚ＝１）、又は互いに組み合わせられ（ｚ＝２又は３）、上記非反復（ＮＲ）単位（複数も可）はさらに、数「ｎ」のＡモジュールとＱモジュールとの組み合わせ、すなわち６個〜２４個のＡモジュールとＱモジュールとの組み合わせ（ここでモジュールＡは配列番号２０によるアミノ酸配列により表され、モジュールＱは配列番号２２によるアミノ酸配列により表される）と組み合わせられ、
（ｖｉｉ）式（ＱＡＱ）ｏでは、数「ｏ」のＱモジュールと、Ａモジュールと、Ｑモジュールとの組み合わせ、すなわち８個〜１６個のＱモジュールと、Ａモジュールと、Ｑモジュールとの組み合わせ（ここでモジュールＱは配列番号２２によるアミノ酸配列で表され、モジュールＡは配列番号２０によるアミノ酸配列で表される）が互いに組み合わされ、
（ｖｉｉｉ）式（ＱＡＱ）ｏＮＲｚでは、数「ｏ」のＱモジュールと、Ａモジュールと、Ｑモジュールとの組み合わせ、すなわち８個〜１６個のＱモジュールと、Ａモジュールと、Ｑモジュールとの組み合わせ（ここでモジュールＱは配列番号２２によるアミノ酸配列で表され、モジュールＡは配列番号２０によるアミノ酸配列で表される）が互いに組み合わされ、上記Ｑモジュールと、Ａモジュールと、Ｑモジュールとの組み合わせはさらに、数「ｚ」の非反復（ＮＲ）単位、すなわち１個〜３個の非反復（ＮＲ）単位、例えば配列番号４１によるアミノ酸配列で表される非反復（ＮＲ）単位ＮＲ３又は配列番号４２によるアミノ酸配列で表される非反復（ＮＲ）単位ＮＲ４と組み合わせられ、
（ｉｘ）式ＮＲｚ（ＱＡＱ）ｏでは、数「ｚ」の非反復（ＮＲ）単位、すなわち１個〜３個の非反復（ＮＲ）単位、例えば配列番号４１によるアミノ酸配列で表される非反復（ＮＲ）単位ＮＲ３又は配列番号４２によるアミノ酸配列で表される非反復（ＮＲ）単位ＮＲ４が存在し（ｚ＝１）、又は互いに組み合わせられ（ｚ＝２又は３）、上記非反復（ＮＲ）単位（複数も可）はさらに、数「ｏ」のＱモジュールと、Ａモジュールと、Ｑモジュールとの組み合わせ、すなわち８個〜１６個のＱモジュールと、Ａモジュールと、Ｑモジュールとの組み合わせ（ここでモジュールＱは配列番号２２によるアミノ酸配列で表され、モジュールＡは配列番号２０によるアミノ酸配列で表される）と組み合わせられ、
（ｘ）式Ｙｐでは、配列番号２８によるアミノ酸配列で表される、数「ｐ」のＹモジュール、すなわち８個〜１６個のＹモジュールが互いに組み合わされ、
（ｘｉ）式Ｘｐでは、配列番号２７によるアミノ酸配列で表される、数「ｐ」のＸモジュール、すなわち８個〜１６個のＸモジュールが互いに組み合わされ、
（ｘｉｉ）式Ｋｐでは、配列番号２３によるアミノ酸配列で表される、数「ｐ」のＫモジュール、すなわち８個〜１６個のＫモジュールが互いに組み合わされる。
【０１０４】
最も好ましくは、本発明の方法に使用されるシルクポリペプチドは、Ｃ１６ＮＲ４、Ｃ３２ＮＲ４、（ＡＱ）１２、（ＡＱ）２４、（ＡＱ）１２ＮＲ３、（ＡＱ）２４ＮＲ３、Ｃ１６、Ｃ３２、Ｙ８、Ｙ１６、Ｘ８、Ｘ１６、Ｋ８又はＫ１６である。
【０１０５】
ＡＤＦ−３、ＡＤＦ−４、ＭａＳｐ Ｉ又はＭａＳｐ ＩＩの変異体は、参照（野生型）ＡＤＦ−３（配列番号１）、ＡＤＦ−４（配列番号２）、ＭａＳｐ Ｉ（配列番号４３）、又はＭａＳｐ ＩＩ（配列番号４４）のポリペプチドとは異なり、該変異体はそれらからアミノ酸配列における最大１５０個（最大１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１１個、１２個、１３個、１４個、１５個、１６個、１７個、１８個、１９個、２０個、２５個、３０個、３５個、４０個、４５個、５０個、５５個、６０個、６５個、７０個、７５個、８０個、８５個、９０個、９５個、１００個、１１０個、１２０個、１３０個、１４０個又は１５０個）のアミノ酸変化（すなわち置換、挿入、欠失、Ｎ末端切断及び／又はＣ末端切断）により誘導される。代替的に又は付加的に、このような変異体は、変異体の誘導元である参照（野生型）ポリペプチドに対する或る特定の程度の配列同一性を特徴とし得る。このため、ＡＤＦ−３、ＡＤＦ−４、ＭａＳｐ Ｉ又はＭａＳｐ ＩＩの変異体は、各参照（野生型）ＡＤＦ−３、ＡＤＦ−４、ＭａＳｐ Ｉ又はＭａＳｐ ＩＩのポリペプチドに対する少なくとも５０％、５１％、５２％、５３％、５４％、５５％、５６％、５７％、５８％、５９％、６０％、６１％、６２％、６３％、６４％、６５％、６６％、６７％、６８％、６９％、７０％、７１％、７２％、７３％、７４％、７５％、７６％、７７％、７８％、７９％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は更には９９．９％の配列同一性を有する。好ましくは配列同一性は、各参照（野生型）ＡＤＦ−３、ＡＤＦ−４、ＭａＳｐ Ｉ又はＭａＳｐ ＩＩのポリペプチドの少なくとも２０個、２５個、３０個、３５個、４０個、５０個、６０個、７０個、８０個、９０個、１００個、１２０個、１５０個、１８０個、２００個、２５０個、３００個、３５０個、４００個又はそれ以上のアミノ酸の連続ストレッチにわたる、好ましくは全長にわたるものである。
【０１０６】
配列同一性は、各参照（野生型）ＡＤＦ−３、ＡＤＦ−４、ＭａＳｐ Ｉ又はＭａＳｐ ＩＩのポリペプチドの全長にわたって少なくとも８０％、全長にわたって少なくとも８５％、全長にわたって少なくとも９０％、全長にわたって少なくとも９５％、全長にわたって少なくとも９８％、又は全長にわたって少なくとも９９％であるのが特に好ましい。配列同一性は、各参照（野生型）ＡＤＦ−３、ＡＤＦ−４、ＭａＳｐ Ｉ又はＭａＳｐ ＩＩのポリペプチドのうちの少なくとも２０個、３０個、５０個、１００個、１５０個、２００個、２５０個若しくは３００個のアミノ酸の連続ストレッチにわたって少なくとも８０％、少なくとも２０個、３０個、５０個、１００個、１５０個、２００個、２５０個若しくは３００個のアミノ酸の連続ストレッチにわたって少なくとも８５％、少なくとも２０個、３０個、５０個、１００個、１５０個、２００個、２５０個若しくは３００個のアミノ酸の連続ストレッチにわたって少なくとも９０％、少なくとも２０個、３０個、５０個、１００個、１５０個、２００個、２５０個若しくは３００個のアミノ酸の連続ストレッチにわたって少なくとも９５％、少なくとも２０個、３０個、５０個、１００個、１５０個、２００個、２５０個若しくは３００個のアミノ酸の連続ストレッチにわたって少なくとも９８％、又は少なくとも２０個、３０個、５０個、１００個、１５０個、２００個、２５０個若しくは３００個のアミノ酸の連続ストレッチにわたって少なくとも９９％であるのが更に特に好ましい。
【０１０７】
ＡＤＦ−３（配列番号１）ポリペプチドの断片（又は欠失変異体）は好ましくは、そのＮ末端に及び／又はそのＣ末端に最大１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１５個、２０個、２５個、３０個、３５個、４０個、４５個、５０個、５５個、６０個、６５個、７０個、７５個、８０個、８５個、９０個、９５個、１００個、１２０個、１５０個、１７０個、２００個、２２０個、２５０個、２７０個、３００個、３２０個、３５０個、３７０個、４００個、４２０個、４５０個、４７０個、５００個、５２０個、５５０個、５７０個、６００個又は６１０個のアミノ酸の欠失を有する。欠失は内部にあってもよい。
【０１０８】
ＡＤＦ−４（配列番号２）ポリペプチドの断片（又は欠失変異体）は好ましくは、そのＮ末端に及び／又はそのＣ末端に最大１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１５個、２０個、２５個、３０個、３５個、４０個、４５個、５０個、５５個、６０個、６５個、７０個、７５個、８０個、８５個、９０個、９５個、１００個、１２０個、１５０個、１７０個、２００個、２２０個、２５０個、２７０個、３００個、３２０個、３３０個、３４０個、３５０個、３６０個、３７０個、３８０個又は３９０個のアミノ酸の欠失を有する。欠失は内部にあってもよい。
【０１０９】
ＭａＳｐ 1（配列番号４３）ポリペプチドの断片（又は欠失変異体）は好ましくは、そのＮ末端に及び／又はそのＣ末端に最大１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１５個、２０個、２５個、３０個、３５個、４０個、４５個、５０個、５５個、６０個、６５個、７０個、７５個、８０個、８５個、９０個、９５個、１００個、１５０個、２００個、２５０個、３００個、３５０個、４００個、４５０個、５００個、５５０個、６００個、６２０個、６４０個、６６０個、６７０個、６８０個又は６９０個のアミノ酸の欠失を有する。欠失は内部にあってもよい。
【０１１０】
ＭａＳｐ 11（配列番号４４）ポリペプチドの断片（又は欠失変異体）は好ましくは、そのＮ末端に及び／又はそのＣ末端に最大１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１５個、２０個、２５個、３０個、３５個、４０個、４５個、５０個、５５個、６０個、６５個、７０個、７５個、８０個、８５個、９０個、９５個、１００個、１５０個、２００個、２５０個、３００個、３５０個、４００個、４５０個、５００個、５２０個、５４０個、５６０個又は５７０個のアミノ酸の欠失を有する。欠失は内部にあってもよい。
【０１１１】
さらに、ＡＤＦ−３、ＡＤＦ−４、ＭａＳｐ Ｉ又はＭａＳｐ ＩＩの変異体又は断片は、変異体又は断片の元となるアミノ酸配列に対する修飾が、ポリペプチドのケブラー又は綿等の不活性材料又は自然発生的な材料をコーティングする、好ましくは均一にコーティングする能力に負の影響を与えない場合にのみ、本発明との関連内においてＡＤＦ−３、ＡＤＦ−４、ＭａＳｐ Ｉ又はＭａＳｐ ＩＩの変異体又は断片とみなされる。好ましくは、ＡＤＦ−３、ＡＤＦ−４、ＭａＳｐ Ｉ又はＭａＳｐ ＩＩの変異体又は断片は、各参照（野生型）ＡＤＦ−３、ＡＤＦ−４、ＭａＳｐ Ｉ又はＭａＳｐ ＩＩのポリペプチドを用いて形成することができるのと同様に、１ｎｍ〜５０μｍ、好ましくは４０ｎｍ〜５０μｍ、より好ましくは０．５μｍ〜１０μｍ、最も好ましくは１．０μｍ〜５μｍの厚さのコーティングを形成することが可能である。ＡＤＦ−３、ＡＤＦ−４、ＭａＳｐ Ｉ又はＭａＳｐ ＩＩの変異体又は断片で作られたコーティングは、各参照（野生型）ＡＤＦ−３、ＡＤＦ−４、ＭａＳｐ Ｉ又はＭａＳｐ ＩＩのポリペプチドで作られたコーティングと比較して類似の表面構造（表面起伏）、例えば粗度又は多孔性を有するのも好ましい。ＡＤＦ−３、ＡＤＦ−４、ＭａＳｐ Ｉ又はＭａＳｐ ＩＩの変異体又は断片で作られたコーティングは、各参照（野生型）ＡＤＦ−３、ＡＤＦ−４、ＭａＳｐ Ｉ又はＭａＳｐ ＩＩのポリペプチドで作られたコーティングに類似の表面構造及び厚さを示すのが特に好ましい。当業者は電子顕微鏡検査を用いて、コーティングの厚さ又は表面構造（表面起伏）を容易に評価することができる。
【０１１２】
別の実施の形態では、シルクポリペプチドは、
（ｉ）アミノ酸配列ＧＣＧＧＧＧＧＧＳＧＧＧＧ（配列番号３５）からなるＴＡＧＣＹＳ１、
（ｉｉ）アミノ酸配列ＧＣＧＧＧＧＧＧ（配列番号３６）からなるＴＡＧＣＹＳ２、
（ｉｉｉ）アミノ酸配列ＧＣＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧ（配列番号３７）からなるＴＡＧＣＹＳ３、
（ｉｖ）アミノ酸配列ＧＫＧＧＧＧＧＧＳＧＧＧＧ（配列番号３８）からなるＴＡＧＬＹＳ１、及び
（ｖ）アミノ酸配列ＧＫＧＧＧＧＧＧ（配列番号３９）からなるＴＡＧＬＹＳ２
からなる群から選択されるアミノ末端及び／又はカルボキシ末端ＴＡＧを含む。
【０１１３】
これらのＴＡＧは、システイン及び／又はリジンを含有し、下記のように、シルクポリペプチドと不活性材料とを共有結合的に連結するのに、又は物質とシルクポリペプチドとを連結するのに使用することができる。
【０１１４】
最も好ましくは、本発明の方法に使用されるシルクポリペプチドは、ＴＡＧＣＹＳ１Ｃ１６、Ｃ１６ＴＡＧＣＹＳ１、ＴＡＧＣＹＳ１Ｃ１６ＴＡＧＣＹＳ１、ＴＡＧＣＹＳ２Ｃ１６、Ｃ１６ＴＡＧＣＹＳ２、ＴＡＧＣＹＳ２Ｃ１６ＴＡＧＣＹＳ２、ＴＡＧＣＹＳ３Ｃ１６、Ｃ１６ＴＡＧＣＹＳ３、ＴＡＧＣＹＳ３Ｃ１６ＴＡＧＣＹＳ３、ＴＡＧＬＹＳ１Ｃ１６、Ｃ１６ＴＡＧＬＹＳ１、ＴＡＧＬＹＳ１Ｃ１６ＴＡＧＬＹＳ１、ＴＡＧＬＹＳ２Ｃ１６、Ｃ１６ＴＡＧＬＹＳ２、又はＴＡＧＬＹＳ２Ｃ１６ＴＡＧＬＹＳ２を含む又はこれからなる。
【０１１５】
好ましくは、本発明の方法で提供される溶液中のシルクポリペプチドの濃度は、０．１ｗｔ％／ｖｏｌ〜３０ｗｔ％／ｖｏｌの範囲、好ましくは１ｗｔ％／ｖｏｌ〜１０ｗｔ％／ｖｏｌの範囲、最も好ましくは２ｗｔ％／ｖｏｌ〜８ｗｔ％／ｖｏｌ又は４ｗｔ％／ｖｏｌ〜６ｗｔ％／ｖｏｌの範囲である。このため例えば、本発明の方法で提供される溶液中のシルクポリペプチドの濃度は、０．１ｗｔ％／ｖｏｌ、０．４ｗｔ％／ｖｏｌ、０．
．６ｗｔ％／ｖｏｌ、０．８ｗｔ％／ｖｏｌ、１．０ｗｔ％／ｖｏｌ、１．２ｗｔ％／ｖｏｌ、１．４ｗｔ％／ｖｏｌ、１．６ｗｔ％／ｖｏｌ、１．８ｗｔ％／ｖｏｌ、２．０ｗｔ％／ｖｏｌ、２．２ｗｔ％／ｖｏｌ、２．４ｗｔ％／ｖｏｌ、２．６ｗｔ％／ｖｏｌ、２．８ｗｔ％／ｖｏｌ、３．０ｗｔ％／ｖｏｌ、３．５ｗｔ％／ｖｏｌ、４．０ｗｔ％／ｖｏｌ、４．５ｗｔ％／ｖｏｌ、５．０ｗｔ％／ｖｏｌ、５．５ｗｔ％／ｖｏｌ、６．０ｗｔ％／ｖｏｌ、６．５ｗｔ％／ｖｏｌ、７．０ｗｔ％／ｖｏｌ、７．５ｗｔ％／ｖｏｌ、８．０ｗｔ％／ｖｏｌ、９．０ｗｔ％／ｖｏｌ、１０．０ｗｔ％／ｖｏｌ、１２．０ｗｔ％／ｖｏｌ、１５．０ｗｔ％／ｖｏｌ、１８．０ｗｔ％／ｖｏｌ、２０．０ｗｔ％／ｖｏｌ、２５．０ｗｔ％／ｖｏｌ又は３０．０ｗｔ％／ｖｏｌである。
【０１１６】
好ましくは、本発明の方法で提供される溶媒は、ファンデルワールス力を不安定化する溶媒（van der Waals forces destabilisingsolvent）、ギ酸、水溶液、好ましくはＨ２Ｏ若しくは緩衝水溶液（例えばトリス緩衝水溶液）、又はそれらの混合物である。最も好ましくは、ファンデルワールス力を不安定化する溶媒は、ヘキサフルオロイソプロパノール（ＨＦＩＰ）、トリクロロ酢酸（Trichloroacetic acid）（ＴＣＡ）、トリフルオロ酢酸（Trifluoroacetic acid）（ＴＦＡ）及び臭化リチウム（ＬｉＢｒ）からなる群から選択される。水はその良好な入手可能性及び非毒性のために最も好ましい。これらの溶媒中に、シルクポリペプチドが溶解又は懸濁化する。本発明に関連して「懸濁液」という用語は、液体中での固体粒子の分散液を表す。粒径が約１００ｎｍである場合、懸濁液はコロイド状である。
【０１１７】
本発明の方法でコーティングされる不活性材料又は自然発生的な材料は、繊維、繊維を含む糸、繊維を含む撚糸、繊維を含む織布、及び繊維を含む不織布からなる群から選択されるのが好ましい。
【０１１８】
織布のコーティングはより実用的であり、費やされる時間がより短く、かつコーティング材の必要量がより小さい。繊維のコーティング、及び続く布地の製織はより複雑であるとともに、より費用がかかるが、再現性がより高く価値がより高い。シルクポリペプチドＣ１６による綿織布のコーティングを実施例ＩＶで例示する。図４は、未処理の製織済みの布地と、コーティングされた製織済みの布地との比較を示す。
【０１１９】
不活性材料が不活性合成材料又は不活性無機材料であるのが好ましい。好ましくは、不活性材料は、
（ｉ）ポリエステル（Ｄｉｏｌｅｎ、Trevira）、ポリアミド（ＰＡ、例えばナイロン又はＰｅｒｌｏｎ）、ポリアラミド（例えばケブラー、Ｔｗａｒｏｎ又はＮｏｍｅｘ）、ポリテトラフルオロエチレン（ＰＴＦＥ、例えばテフロン登録商標）、ポリエチレン（ＰＥ、例えばＤｙｎｅｅｍａ）、ポリプロピレン（ＰＰ）、ポリウレタン（ＰＵ、例えばＬｙｃｒａ）、シリコーン、ポリウレタンとポリエチレングリコールとの混合物（エラスタン）、超高分子量ポリエチレン（ＵＨＭＷＰＥ）及び高性能ポリエチレン（ＨＰＰＥ）からなる群から選択される不活性合成材料、又は
（ｉｉ）ガラス、炭素、セラミック、金属、（金属）合金、サファイア、ダイアモンド及び半導体からなる群から選択される不活性無機材料
である。
【０１２０】
本発明者らは驚くべきことに、コーティング材としてのシルクポリペプチドの使用が最も穏やかな条件下での効率性の高いコーティングを提供し、特定用途に合わせたシルクでコーティングされた不活性な無機材料の製造を可能とすることを見出している。今日までは、（たとえ可能であったとしても）プラズマ処理のような非常に厳しい条件が不活性無機材料、例えば不活性無機繊維に変更を加えるのに必要であった。
【０１２１】
不活性合成材料であるポリエステル、ポリアミド（ＰＡ）及びポリアラミドは重縮合材料（例えば重縮合繊維）である。すなわち上記材料は重縮合反応により生成される。重縮合反応により、モノマー分子同士が連結し、水又は類似の物質を放出することでポリマーが形成される。不活性合成材料であるポリテトラフルオロエチレン（ＰＴＦＥ）、ポリエチレン（ＰＥ）及びポリプロピレン（ＰＰ）は重合材料（例えば重合繊維）である。すなわち上記材料は重合反応により生成される。重合反応は、化学反応においてモノマー分子同士を反応させ、三次元ネットワーク又はポリマー鎖を形成するプロセスである。不活性合成材料ポリウレタン（ＰＵ）及びポリウレタンとポリエチレングリコールとの混合物は重付加材料（例えば重付加繊維）である。すなわち上記材料は重付加反応により作製される。重付加反応では、多くのモノマー同士がいかなる原子又は分子をも失うことなく、結合の転位により結合する。このことは形成中に分子（通常は水）が失われる縮合反応により形成される縮合ポリマーとは対照的である。
【０１２２】
不活性無機材料としての金属は、白金（Ｐｔ）、クロム（Ｃｒ）、銀（Ａｇ）、金（Ａｕ）及びそれらの組成物／合金からなる群から選択されるのが好ましい。好ましくは、無機材料は半導体であり、鉄（Ｆｅ）、銅（Ｃｕ）、ゲルマニウム（Ｇｅ）、ケイ素（Ｓｉ）、 セレン（Ｓｅ）、テルル（Ｔｅ）及びそれらの組成物／合金からなる群から選択される。（金属）合金は鋼であるのが更に好ましい。
【０１２３】
好ましくは、自然発生的な材料は、絹、綿、セルロース、亜麻、羊毛、麻、竹、ゴム、本物の毛（例えば人毛又は獣毛）又は人工毛等の毛、及び人の皮膚又は動物の皮膚等の皮膚からなる群から選択される。本物の毛（例えば人毛）又は人工毛は、ヘアーエクステンション、ウィッグ（periwigs）、ヘアーピース（hair pieces）又はかつら用の毛であり得る。本物の毛（例えば人毛）又は人工毛はウィッグ、ヘアーピース又はかつらの一部であってもよい。
【０１２４】
本発明の方法が、毛、特に本物の毛（例えば人毛又は獣毛）、又は皮膚（例えば人又は動物の皮膚）等の自然発生的な材料のシルクポリペプチドによるコーティングに関する限りにおいて、上記方法は美容上の目的のためのもの、例えば毛の粗さを低減するためのもの、並びに／又は毛の輝きを改善するためのもの、又は皮膚の湿潤性及び／若しくは柔軟性を改善するためのものであるのが好ましい。
【０１２５】
このため例えばポリアラミド繊維、ポリアラミド糸、ポリテトラフルオロエチレン繊維、ポリテトラフルオロエチレン糸、炭素繊維、炭素糸、ガラス繊維、ガラス糸、ナイロン繊維、ナイロン糸、綿繊維、綿糸、綿織布、綿の不織布、羊毛織布、又は羊毛の不織布を本発明の方法においてシルクポリペプチドでコーティングすることができる。
【０１２６】
シルクポリペプチドによるコーティングのための不活性基材又は自然発生的な基材の選択は、コーティングされた不活性材料又は自然発生的な材料の続く用途によって様々である。例えば、表面の感触が改善された不活性合成材料の糸（例えばポリアラミド糸）が望まれる場合、まず不活性合成材料の繊維（例えばポリアラミド繊維）をシルクポリペプチドでコーティングし、続いて上記繊維から糸を作製する必要はない。加えて、シルクポリペプチドによる織布の直接コーティングにより、既にシルクポリペプチドでコーティングされた繊維から作製した織布と比較して同程度ではあるが、異なるコーティングパターンがもたらされる。これは、織布コーティングでは、隙間にシルクポリペプチドを充填することができるのに対して、既にシルクポリペプチドでコーティングされた繊維から作製した織布では、隙間にはシルクポリペプチドコーティングが含まれていないことを意味する。したがって、隙間が充填された織布材料のコーティングが望まれる場合、本発明のコーティング方法のための基材として織布を使用することが有益である。
【０１２７】
例として、本発明の方法は、
ｉ）反復単位としてのＣ１６からなるシルクポリペプチドと、溶媒としてＨ２Ｏとを含む溶液を準備する工程と、
ｉｉ）不活性合成材料としてのポリアラミド（ケブラー）繊維上に溶液を塗布することより該ポリアラミド繊維を反復単位としてのＣ１６からなるシルクポリペプチドでコーティングする、塗布することによりコーティングする工程と、
を含むことができる。
【０１２８】
本発明の方法は、
ｉ）反復単位としてのＣ１６からなるシルクポリペプチドを含む水溶液を準備する工程と、
ｉｉ）該溶液を不活性合成材料としてのポリテトラフルオロエチレン（テフロン登録商標）糸上に塗布することにより該ポリテトラフルオロエチレン糸を反復単位としてのＣ１６からなるシルクポリペプチドでコーティングする、塗布することによりコーティングする工程と、
を更に含むことができる。
【０１２９】
本発明の方法は、
ｉ）反復単位としての（ＡＱ）２４ＮＲ３からなるシルクポリペプチドと、溶媒としてギ酸とを含む溶液を準備する工程と、
ｉｉ）該溶液を不活性合成材料としてのポリテトラフルオロエチレン（テフロン登録商標）糸上に塗布することにより該ポリテトラフルオロエチレン糸を反復単位としての（ＡＱ）２４ＮＲ３からなるシルクポリペプチドでコーティングする、塗布することによりコーティングする工程と、
を更に含むことができる。
【０１３０】
本発明の方法は、
ｉ）反復単位としてのＣ１６からなるシルクポリペプチドと、溶媒としてヘキサフルオロイソプロパノール（ＨＦＩＰ）とを含む溶液を準備する工程と、
ｉｉ）自然発生的な材料としての亜麻繊維上に溶液を塗布することにより該亜麻繊維を反復単位としてのＣ１６からなるシルクポリペプチドでコーティングする、塗布することによりコーティングする工程と、
を含むこともできる。
【０１３１】
加えて、本発明の方法は、
ｉ）反復単位としてのＣ３２からなるシルクポリペプチドを含む水溶液を準備する工程と、
ｉｉ）該溶液を自然発生的な材料としての羊毛織布上に塗布することにより該羊毛織布を反復単位としてのＣ３２からなるシルクポリペプチドでコーティングする、塗布することによりコーティングする工程と、
を含むことができる。
【０１３２】
上述の例に関しては、Ｃ１６はモジュールＣの１６個の反復単位を意味し、Ｃ３２はモジュールＣの１６個又は３２個の反復単位を意味する。
【０１３３】
好ましくは、コーティングにおけるシルクポリペプチドは、不活性材料と、又は自然発生的な材料と共有結合的に及び／又は非共有結合的に連結している。「共有結合的な連結」という用語は、結合対の各原子が１つの電子を提供し、化学結合において電子対を形成するタイプの化学的な連結を意味する。シルクポリペプチドは、
（ａ）シルクポリペプチドのシステイン残基、リジン残基、アミノ末端、カルボキシ末端、アミノ末端ＴＡＧ若しくはカルボキシ末端ＴＡＧを介して、及び／又は
（ｂ）架橋を介して
不活性材料又は自然発生的な材料と共有結合的に連結するのが好ましい。
【０１３４】
本発明の方法において、シルクポリペプチドは、アミド結合又はジスルフィド結合の形成を介して自然発生的な材料（例えば羊毛又は亜麻）と共有結合的に連結することができる。「アミド結合」（アミド連結）という用語は、１つの分子のカルボキシル基が他の分子のアミン基と反応し、それにより水分子（Ｈ２Ｏ）が放出される際に２つの分子（例えばポリペプチド）間で形成される化学結合を表す。「ジスルフィド結合」（ジスルフィド連結）という用語は、通常システイン残基の２つのチオール基のカップリングにより誘導される化学結合を表す。該連結はＳＳ−結合又はジスルフィド架橋とも呼ばれる。
【０１３５】
このため例えば、本発明の方法に使用されるシルクポリペプチド（例えばＣ１６を含むシルクポリペプチド）は、アミド結合を形成することによりそのアミノ末端を介して又はそのカルボキシ末端を介して自然発生的な材料（例えば亜麻又は羊毛）と共有結合的に連結することができる。シルクポリペプチドは、ジスルフィド結合を形成することによりそのアミノ末端ＴＡＧ（例えばＴＡＧＣＹＳ１Ｃ１６）を介して又はそのカルボキシ末端ＴＡＧ（例えばＣ１６ＴＡＧＣＹＳ１）を介して自然発生的な材料（例えば亜麻又は羊毛）と共有結合的に連結することもできる。加えて、シルクポリペプチド（例えばＡＫＱ４）は、アミド結合を形成することによりそのリジン残基（例えばシルクポリペプチドＡＫＱ４の反復単位ＡＫにおけるリジン残基）を介して自然発生的な材料（例えば亜麻又は羊毛）と共有結合的に連結することができる。さらに、シルクポリペプチドは、ジスルフィド結合を形成することによりそのシステイン残基（例えばシルクポリペプチドＡＣＱ４の反復単位ＡＣにおけるシステイン残基）を介して自然発生的な材料（例えば亜麻又は羊毛）と共有結合的に連結することができる。
【０１３６】
（ａ）で言及されるようなシルクポリペプチドと自然発生的な材料との共有結合的な連結の組み合わせも好ましい。このため例えば、シルクポリペプチド（例えばＣ１６ＴＡＧＣＹＳ１）は、（ｉ）ジスルフィド結合を形成することによりそのシステイン残基（例えばシルクポリペプチドＣ１６ＴＡＧＣＹＳ１のカルボキシ末端ＴＡＧＣＹＳ１におけるシステイン残基）を介して自然発生的な材料（例えば亜麻又は羊毛）と、及び（ｉｉ）アミド結合を形成することによりそのアミノ末端（例えばシルクポリペプチドＣ１６ＴＡＧＣＹＳ１のＣ１６のアミノ末端）を介して自然発生的な材料（例えば亜麻又は羊毛）と共有結合的に連結することができる。シルクポリペプチド（例えばＡＣ４ＴＡＧＬＹＳ１）は、（ｉ）アミド結合を形成することによりそのリジン残基（例えばシルクポリペプチドＡＣ４ＴＡＧＬＹＳ１のカルボキシ末端ＴＡＧＬＹＳ１におけるリジン残基）を介して自然発生的な材料（例えば亜麻又は羊毛）と、及び（ｉｉ）ジスルフィド結合を形成することによりそのシステイン残基（例えばシルクポリペプチドＡＣ４ＴＡＧＬＹＳ１の反復単位ＡＣにおけるシステイン残基）を介して自然発生的な材料（例えば亜麻又は羊毛）と共有結合的に連結することもできる。
【０１３７】
シルクポリペプチドは不活性材料又は自然発生的な材料と非共有結合的に連結することもできる。「非共有結合的な連結」という用語は、電子対の共有を伴わないが、電磁相互作用、疎水性相互作用又はファンデルワールス相互作用のより分散したバリエーションを伴うタイプの連結（相互作用）を意味する。
【０１３８】
シルクポリペプチドは、イオン（静電）連結（相互作用）を介して又は疎水性連結（相互作用）を介して不活性材料（例えばポリエステル、ポリアラミド又はポリテトラフルオロエチレン）、又は自然発生的な材料（例えば羊毛、亜麻又は綿）と非共有結合的に連結するのが特に好ましい。「疎水性連結」（疎水性相互作用）という用語は、炭化水素が水性媒体中で分子間凝集体を形成する傾向に依存する連結（相互作用）を表す。「イオン（静電）連結」（イオン（静電）相互作用）という用語は、１つの原子が電子を失って陽イオンを形成し、他の原子が電子を得て陰イオンを形成する非共有結合（イオン（静電）結合）を表す。
【０１３９】
シルクポリペプチドＣ１６によるアラミド（ケブラー）繊維のコーティングを実施例Ｉで説明する。シルクポリペプチドＣ１６でコーティングされたアラミドフィラメントを図２に示す。
【０１４０】
不活性材料又は自然発生的な材料をシルクポリペプチド層でコーティングすることができるという予期せぬ発見が、様々な用途に関する新たな機会を与える。一般的にタンパク質は特に不活性材料の存在下で非特異的に凝集する傾向があることは周知の事実である。ヘモグロビン、ＢＳＡ又はシトクロムＣのような標準タンパク質は単に凝集し、このためこれらが表面に全体的に（at all）固着する場合に平坦ではない表面が生じる。驚くべきことに、シルクポリペプチド（例えばスパイダーシルクポリペプチド）は、特にポリアラミド又は炭素材料（例えばポリアラミド又は炭素糸）のような剛性であり、かつ粗い不活性合成材料上で平坦でかつ平滑な表面層を形成する。光学的利点及び触感的利点とは別に、シルクポリペプチドコーティングは、更なる改良、またこれによりコーティングされた不活性材料又は自然発生的な材料に関する新たな範囲の用途の可能性をもたらす。
【０１４１】
このため、本発明の好ましい実施の形態では、シルクポリペプチドは、シルクポリペプチドと共有結合的に及び／又は非共有結合的に連結する、少なくとも１つの物質、すなわち１個、２個、３個、４個、５個、６個又はそれ以上の物質、好ましくは１個又は２個の物質を更に含む。
【０１４２】
好ましくは、該物質は本発明の方法の工程ｉ）の前に、工程ｉ）の後に、及び／又は工程ｉｉ）の後にシルクポリペプチドと共有結合的に及び／又は非共有結合的に連結する。
【０１４３】
該物質とシルクポリペプチドとのカップリング／連結を、不活性材料又は自然発生的な材料上へのシルクポリペプチドの塗布の前に（すなわち本発明の方法の工程ｉ）の前に又は工程ｉ）の後に）行うか、塗布の後に（すなわち本発明の方法の工程ｉｉ）の後に）行うか、又は複数回（すなわち本発明の方法の工程ｉ）の前と、工程ｉ）の後と、工程ｉｉ）の後とで；工程ｉ）の前と、工程ｉｉ）の後とで；工程ｉ）の前と、工程ｉ）の後とで；又は工程ｉ）の後と、工程ｉｉ）の後とで）行うかは、接着させる物質、接着のタイプ及びコーティングされた材料の所望の用途に依存する。シルクポリペプチドの複数回のカップリングは、様々な材料がシルクポリペプチドとカップリングする場合に有益である。
【０１４４】
物質の非共有結合的な連結は本発明の方法の工程ｉｉ）の後に行うのが好ましい。大量の共有結合的に連結した物質を有するコーティングされた製品が望まれる場合、物質の連結は数回、例えば工程ｉ）の後と、工程ｉｉ）の後とで行うのが好ましい。好ましくは、該物質が、
（ａ）該シルクポリペプチドのシステイン残基、リジン残基、該アミノ末端、該カルボキシ末端、該アミノ末端ＴＡＧ若しくは該カルボキシ末端ＴＡＧを介して、及び／又は
（ｂ）架橋を介して
シルクポリペプチドと共有結合的に連結する。
【０１４５】
該物質は本発明のプロセスにおいて架橋を介してシルクポリペプチドと共有結合的に連結することができる。「架橋」という用語は、共有結合により２つの分子を化学的に結び付けるプロセスを表す。架橋試薬又はカップリング試薬は、ポリペプチド上に又は他の分子上に特定の官能基に対する反応性末端（第１級アミン、スルフヒドリル等）を含有する。好ましくは、本発明の方法に使用される架橋試薬又はカップリング試薬は、１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）−カルボジイミド塩酸塩（ＥＤＣ）又はグルタルアルデヒドである。
【０１４６】
したがって例えば、本発明の方法に使用される該物質（例えば酵素、抗体又は抗体断片）は、アミド結合を形成することによりシルクポリペプチドのアミノ末端を介して又はカルボキシ末端を介してシルクポリペプチド（例えばＣ１６を含むシルクポリペプチド）と共有結合的に連結することができる。該物質（例えば酵素又は抗体）は、ジスルフィド結合を形成することによりシルクポリペプチドのアミノ末端ＴＡＧ（例えばＴＡＧＣＹＳ１Ｃ１６）を介して又はカルボキシ末端ＴＡＧ（例えばＣ１６ＴＡＧＣＹＳ１）を介してシルクポリペプチドと共有結合的に連結することもできる。加えて、該物質（例えば酵素又は抗体）は、アミド結合を形成することによりシルクポリペプチドのリジン残基（例えばシルクポリペプチドＡＫＱ４の反復単位ＡＫにおけるリジン残基）を介してシルクポリペプチド（例えばＡＫＱ４）と共有結合的に連結することができる。さらに、該物質（例えば酵素又は抗体）は、ジスルフィド結合を形成することによりシルクポリペプチドのシステイン残基（例えばシルクポリペプチドＡＣＱ４の反復単位ＡＣにおけるシステイン残基）を介してシルクポリペプチド（例えばＡＣＱ４）と共有結合的に連結することができる。
【０１４７】
（ａ）で言及されるような該物質とシルクポリペプチドとの共有結合的な連結の組み合わせも好ましい。このため例えば、該物質（例えば酵素又は抗体）は、アミド結合を形成することによりシルクポリペプチドの（ｉ）アミノ末端を介して、及び（ｉｉ）カルボキシ末端を介してシルクポリペプチド（例えばＣ１６を含むシルクポリペプチド）と共有結合的に連結することができる。該物質（例えば酵素又は抗体）は、（ｉ）ジスルフィド結合を形成することによりシルクポリペプチドのシステイン残基（例えばシルクポリペプチドＣ１６ＴＡＧＣＹＳ１のカルボキシ末端ＴＡＧＣＹＳ１におけるシステイン残基）を介してシルクポリペプチド（例えばＣ１６ＴＡＧＣＹＳ１）と、及び（ｉｉ）アミド結合を形成することによりシルクポリペプチドのアミノ末端（例えばシルクポリペプチドＣ１６ＴＡＧＣＹＳ１のＣ１６のアミノ末端）を介してシルクポリペプチド（例えばＣ１６ＴＡＧＣＹＳ１）と共有結合的に連結することもできる。該物質（例えば酵素又は抗体）は、（ｉ）アミド結合を形成することによりシルクポリペプチドのリジン残基（例えばシルクポリペプチドＡＣ４ＴＡＧＬＹＳ１のカルボキシ末端ＴＡＧＬＹＳ１におけるリジン残基）を介してシルクポリペプチド（例えばＡＣ４ＴＡＧＬＹＳ１）と、及び（ｉｉ）ジスルフィド結合を形成することによりシルクポリペプチドのシステイン残基（例えばシルクポリペプチドＡＣ４ＴＡＧＬＹＳ１の反復単位ＡＣにおけるシステイン残基）を介してシルクポリペプチド（例えばＡＣ４ＴＡＧＬＹＳ１）と共有結合的に連結することもできる。
【０１４８】
上述のように、該物質（例えば色素又は酵素）は本発明のプロセスにおいて架橋を介してシルクポリペプチドと共有結合的に連結することができる。好ましくは、本発明の方法に使用される架橋試薬又はカップリング試薬は、１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）−カルボジイミド塩酸塩（ＥＤＣ）又はグルタルアルデヒドである。酵素β−ガラクトシダーゼ及びフルオレセイン色素と、シルクポリペプチドＣ１６でコーティングされたポリアラミド繊維との架橋を実施例ＩＩで説明する。
【０１４９】
好ましくは、共有結合的に連結／カップリングする物質は、ポリペプチド、脂質、色素、共役金属、活性炭、及び作用物質からなる群から選択される。最も好ましくは、
（ｉ）ポリペプチドが酵素、好ましくはβ−ガラクトシダーゼ、抗体、ホルモン、好ましくはインスリン、又は抗原であり、
（ｉｉ）脂質がコレステロール、ステロイド、ワックス、又はオイルであり、
（ｉｉｉ）色素が合成色素、好ましくはアゾ化合物、無機色素、好ましくは金属塩、又は有機色素、好ましくはフルオレセイン色素若しくはローダミン色素であり、
（ｉｖ）共役金属がナノゴールド（商標）であり、
（ｖ）活性炭が粉末活性炭（ＰＡＣ）、粒状活性炭（ＧＡＣ）及び押出成形活性炭（ＥＡＣ）からなる群から選択され、
（ｖｉ）作用物質が医薬品、止血剤、成長刺激剤、抗炎症剤、防汚剤（anti-fouling）、抗微生物剤、抗細菌剤、抗真菌剤、農薬及びＵＶ保護剤からなる群から選択される。
【０１５０】
組み込まれる物質は限定されるものではないが、固体、半固体又は液体であり得る。該物質はシルクポリペプチドと非共有結合的に連結することもできる。該物質がイオン（静電）連結（相互作用）を介して、疎水性連結（相互作用）を介して又は付着を介してシルクポリペプチドと非共有結合的に連結するのが特に好ましい。
【０１５１】
好ましくは、非共有結合的に連結／カップリングする物質は、ポリペプチド、脂質、色素、共役金属、活性炭、金属塩、及び作用物質からなる群から選択される。最も好ましくは、
（ｉ）ポリペプチドが酵素、好ましくはβ−ガラクトシダーゼ、抗体、ホルモン、好ましくはインスリン、又は抗原であり、
（ｉｉ）脂質がコレステロール、ステロイド、ワックス、又はオイルであり、
（ｉｉｉ）色素が合成色素、好ましくはアゾ化合物、無機色素、好ましくは金属塩、又は有機色素、好ましくはフルオレセイン色素若しくはローダミン色素であり、
（ｉｖ）共役金属がナノゴールド（商標）であり、
（ｖ）活性炭が粉末活性炭（ＰＡＣ）、粒状活性炭（ＧＡＣ）及び押出成形活性炭（ＥＡＣ）からなる群から選択され、
（ｖｉ）金属塩が銅、コバルト、ニッケル又は銀からなる群から選択されるカチオンであり、
（ｖｉｉ）作用物質が医薬品、止血剤、成長刺激剤、抗炎症剤、防汚剤、抗微生物剤、抗細菌剤、抗真菌剤、農薬及びＵＶ保護剤からなる群から選択される。
【０１５２】
塩化銅又は塩化コバルトのいずれかと、シルクポリペプチドＣ１６でコーティングされたアラミド繊維との非共有結合的な連結を実施例ＩＩＩで説明する。
【０１５３】
非共有結合的なカップリングは、或る特定期間にわたり該物質の規定の放出を行わせるための金属塩又は作用物質のコーティングへの導入に好適である。これは、幾つかの目的、すなわち医薬技術におけるポリアラミド糸コーティングで必要とされる。現在ではこれにより、コーティングされた不活性な合成材料又は無機材料、例えばポリアラミド糸又は布地からの塩又は作用物質の制御放出を達成することが初めて可能となる。不活性な合成材料又は無機材料、例えばポリアラミド糸又は布地をかかる便利な方法で改良を加えることができることは全く予見不可能であった。
【０１５４】
他の用途、例えば撥水性布地の製造には、物質とシルクポリペプチドとの共有結合的な連結がより好適である。降雨中、組み込まれた物質はシルクでコーティングされた不活性合成材料、不活性無機材料又は自然発生的な材料から洗い流されることはないものとする。加えて、殺菌効果又は発散防止効果を有する布地の製造には、物質、例えば銀又は静菌性化合物と、シルクでコーティングされた不活性合成材料、不活性無機材料又は自然発生的な材料とを共有結合的に連結することも好まれる。
【０１５５】
本発明の方法の工程ｉｉ）を、４℃〜８０℃、好ましくは４℃〜４０℃の温度で行うのが好ましい。例えば、本発明の方法の工程ｉｉ）を、４℃、８℃、１０℃、１２℃、１５℃、１８℃、２０℃、２１℃、２２℃、２３℃、２４℃、２５℃、２８℃、３０℃、３５℃、４０℃、４５℃、５０℃、５５℃、６０℃、６５℃、７０℃、７５℃又は８０℃で行うことができる。最も好ましくは、本発明の方法の工程ｉｉ）を２０℃〜２５℃で行う。
【０１５６】
本発明者らは驚くべきことに、不活性材料又は自然発生的な材料を、穏やかな反応条件、すなわち４℃〜８０℃の温度等の穏やかな温度下でコーティングすることができることを見出している。コーティングされた製品は改善された触感特性及び光学特性を有する。好ましくは、該方法は、
ｉｉｉ）少なくとも２つの同一の反復単位及び任意選択的に少なくとも１つの非反復（ＮＲ）単位を含む少なくとも１つのシルクポリペプチドと溶媒とを含む溶液を準備する工程と、
ｉｖ）不活性材料又は自然発生的な材料上に該溶液を塗布することにより２回目として該不活性材料又は該自然発生的な材料をシルクポリペプチドでコーティングする、塗布することによりコーティングする工程と、
を更に含み、工程（ｉｉｉ）の該シルクポリペプチドが工程（ｉ）の該シルクポリペプチドと同一である又は異なる。このため例えば、本発明の好ましい実施の形態では、該方法は、
ｉｉｉ）シルクポリペプチドＣ１６と、溶媒としてギ酸とを含む溶液を準備する工程と、
ｉｖ）ポリアラミド繊維上に該溶液を塗布することにより２回目として該ポリアラミド繊維をシルクポリペプチドでコーティングする、塗布することによりコーティングする工程と、
を更に含み、工程（ｉｉｉ）のシルクポリペプチドＣ１６は工程（ｉ）のシルクポリペプチドＣ１６と同一である。本発明の別の好ましい実施の形態では、該方法は、
ｉｉｉ）シルクポリペプチド（ＡＱ）２４ＮＲ４と、溶媒としてヘキサフルオロイソプロパノール（ＨＦＩＰ）とを含む溶液を準備する工程と、
ｉｖ）ポリテトラフルオロエチレン糸上に該溶液を塗布することにより２回目としてポリテトラフルオロエチレン糸をシルクポリペプチドでコーティングする、塗布することによりコーティングする工程と、
を更に含み、工程（ｉｉｉ）のシルクポリペプチド（ＡＱ）２４ＮＲ４は工程（ｉ）のシルクポリペプチドＣ１６とは異なる。本発明の更に好ましい実施の形態では、該方法は、
ｉｉｉ）シルクポリペプチドＣ１６を含む水溶液を準備する工程と、
ｉｖ）ポリアラミド繊維上に該溶液を塗布することにより２回目としてポリアラミド繊維をシルクポリペプチドでコーティングする、塗布することによりコーティングする工程と、
を更に含み、工程（ｉｉｉ）のシルクポリペプチドＣ１６は工程（ｉ）のシルクポリペプチドＣ１６と同一である。
【０１５７】
本発明の方法の工程（ｉｉｉ）及び工程（ｉｖ）は、様々な厚さ及び多重層のコーティングされた不活性材料又は自然発生的な材料を得るために数回、好ましくは３回〜１０回、すなわち３回、４回、５回、６回、７回、８回、９回又は１０回繰り返すのが好ましい。
【０１５８】
好ましくは、不活性材料又は自然発生的な材料のコーティングは、１ｎｍ〜５０μｍ、好ましくは４０ｎｍ〜５０μｍ、より好ましくは０．５μｍ〜１０μｍ、より好ましくは０．８μｍ〜８μｍ、最も好ましくは１．０μｍ〜５．０μｍ、すなわち１．０μｍ、１．１μｍ、１．２μｍ、１．３μｍ、１．４μｍ、１．５μｍ、１．６μｍ、１．７μｍ、１．８μｍ、１．９μｍ、２．０μｍ、２．１μｍ、２．２μｍ、２．３μｍ、２．４μｍ、２．５μｍ、２．６μｍ、２．７μｍ、２．８μｍ、２．９μｍ、３．０μｍ、３．１μｍ、３．２μｍ、３．３μｍ、３．４μｍ、３．５μｍ、３．６μｍ、３．７μｍ、３．８μｍ、３．９μｍ、４．０μｍ、４．１μｍ、４．２μｍ、４．３μｍ、４．４μｍ、４．５μｍ、４．６μｍ、４．７μｍ、４．８μｍ、４．９μｍ又は５．０μｍの厚さを有する。
【０１５９】
コーティングされた不活性材料又は自然発生的な材料は、３層、４層、５層、６層、７層、８層、９層又は１０層の異なる又は同一のシルクポリペプチド、好ましくは異なるシルクポリペプチドを含むのが好ましい。
【０１６０】
このため例えば本発明の好ましい実施の形態では、該方法は、
ｉ）シルクポリペプチドＣ１６を含む水溶液を準備する工程と、
ｉｉ）ポリアラミド糸上に溶液を塗布することによりポリアラミド糸をシルクポリペプチドＣ１６でコーティングする、塗布することによりコーティングする工程と、
ｉｉｉ）シルクポリペプチド（ＡＱ）２４ＮＲ４を含む水溶液を準備する工程と、
ｉｖ）ポリアラミド糸上に溶液を塗布することにより２回目としてポリアラミド糸をシルクポリペプチドでコーティングする、塗布することによりコーティングする工程と、
を含み、工程（ｉｉｉ）のシルクポリペプチド（ＡＱ）２４ＮＲ４は工程（ｉ）のシルクポリペプチドＣ１６とは異なり、ポリアラミド糸のコーティングは２つの異なる層（すなわち第１の層：シルクポリペプチドＣ１６及び第２の層：シルクポリペプチド（ＡＱ）２４ＮＲ４）を有し、０．０５μｍの厚さを有する。
【０１６１】
本発明の方法は工程ｉｉ）、工程ｉｉｉ）、及び／又は工程ｉｖ）の後に、可視光、紫外線若しくは耐水性、摩耗、機械的応力、酸及び／又は塩基に対する保護を与える染色／仕上げ加工により、コーティングされた又は非処理材料に事後改良を加える工程を含むのが更に好ましい。
【０１６２】
第２の態様では、本発明は、第１の態様の方法により入手可能なコーティングされた不活性材料又は自然発生的な材料を提供する。
【０１６３】
第３の態様では、本発明は、
（ｉ）繊維、
（ｉｉ）（ｉ）の繊維を含む糸、又は
（ｉｉｉ）（ｉ）の繊維を含む撚糸、織布若しくは不織布
等の第２の態様のコーティングされた不活性材料又は自然発生的な材料を含む製品を提供する。
【０１６４】
第４の態様では、本発明は、或る特定の期間にわたる、好ましくは６時間から最大８日間にわたる、より好ましくは２４時間から最大５日間にわたる、最も好ましくは１２時間、２４時間、４８時間、７２時間、９６時間若しくは１２０時間にわたる少なくとも１つの物質、すなわち１個、２個、３個、４個、５個、６個若しくはそれ以上の物質、好ましくは１個若しくは２個の物質の制御放出のための、又は防護服若しくは撥水性の服の製造のための第２の態様のコーティングされた不活性材料又は自然発生的な材料の使用に関する。
【０１６５】
第５の態様では、本発明は、不活性材料を染色するためのシルクポリペプチドの使用に関する。不活性材料は合成不活性材料又は無機不活性材料であるのが好ましい。好ましくは、不活性材料が、
（ｉ）ポリエステル、ポリアミド（ＰＡ）、ポリアラミド、ポリテトラフルオロエチレン（ＰＴＦＥ）、ポリエチレン（ＰＥ）、ポリプロピレン（ＰＰ）、ポリウレタン（ＰＵ）、シリコーン、ポリウレタンとポリエチレングリコールとの混合物（エラスタン）、超高分子量ポリエチレン（ＵＨＭＷＰＥ）、及び高性能ポリエチレン（ＨＰＰＥ）からなる群から選択される合成不活性材料、又は
（ｉｉ）ガラス、炭素、セラミック、金属、サファイア、ダイアモンド及び半導体からなる群から選択される無機不活性材料
である。
【０１６６】
更なる態様では、本発明は、アレルギー、発疹、湿疹皮膚炎、疱疹、皮膚感染症、乾癬、座瘡、日焼け及び疣贅からなる群から選択される皮膚疾患の治療又は予防のためのシルクポリペプチドに関する。好ましくは、皮膚疾患の予防は保湿効果及びＵＶ線に対する保護に関する。
【０１６７】
別の態様では、本発明は、アレルギー、発疹、湿疹皮膚炎、疱疹、皮膚感染症、乾癬、座瘡、日焼け及び疣贅からなる群から選択される皮膚疾患の治療又は予防のための薬物の製造のためのシルクポリペプチドの使用に関する。好ましくは、皮膚疾患の予防は保湿効果及びＵＶ線に対する保護に関する。
【０１６８】
添付の図面及び以下の実施例は本発明を単に説明するものであり、添付の特許請求の範囲により示されるような本発明の範囲を限定するものとは決して解釈されないものとする。
【図面の簡単な説明】
【０１６９】
【図１】糸をシルクポリペプチドでコーティングする技術プロセスを示す図である。図１によると、シルクポリペプチドをスプレーコーティングにより又はディップコーティングにより糸上に塗布することができる。
【図２】スパイダーシルクでコーティングされたアラミド（ケブラー）フィラメントの電子顕微鏡写真を示す図である。図２は、スパイダーシルクコーティングがアラミド（ケブラー）フィラメント全体にわたって均一に分布していることを示す。
【図３】分子をスパイダーシルクコーティングに共有結合的に接着させる技術プロセスを示す図である。図３は、スパイダーシルクポリペプチドによる未処理の不活性合成繊維のコーティングと、その後の作用物質又は化学分子によるコーティングされた不活性合成繊維のコーティングとを示す。
【図４】未処理の製織済みの布地及びコーティングされた製織済みの布地の異なる倍率での電子顕微鏡写真を示す図である。
【図５】金色に脱色した欧州人の毛（Ａ、Ｂ）のスパイダーシルクポリペプチドＣ１６（３％）によるコーティング前（Ａ）及びコーティング後（Ｂ）の、並びに脱色したことのない（virgin）欧州人の毛（Ｃ、Ｄ）のＡＱ２４ＮＲ３（０．８５％）によるコーティング前（Ｃ）及びコーティング後（Ｄ）のレーザー走査顕微鏡画像（レーザー強度倍率５０×）を示す図である。図５Ａ及び図５Ｂに示される四方形はコーティングの前後での同じセクションの毛サンプルの比較を可能にするために毛サンプル上の特定の特徴的なスポットを指定したものである。
【図６】Ｃ１６（３％）によるコーティング前（Ａ）及びコーティング後（Ｂ）のナイロン（ＰＡ）繊維のレーザー走査顕微鏡画像（レーザー強度倍率１５０×）を示す図である。
【図７】蛍光（EpiVax）及びＣｙ５フィルター下での蛍光画像（Ｐｒｏｘｉｍａ−Ｉｍａｇｅｒ）を示す図である。図７Ａでは、Ｃｙ５を用いた又は用いないＡＱ２４ＮＲ３のウェスタンブロット分析を示す。Ｃｙ５で標識化したＡＱ２４ＮＲ３でコーティングされた人毛を図７Ｂ及び図７Ｃに示す。
【図８】未処理の人の皮膚（図８Ａ）及びシルクタンパク質でのコーティング後の人の皮膚（図８Ｂ）を示す図である。シルクタンパク質によるコーティング後、皮膚の疎水性が大幅に低減し、これにより水滴の濡れ挙動が極めて大きくなる。図中の英語図１thread 糸spray スプレーbath 溶液槽coated thread コーティングされた糸 図２Spider Silk Coating スパイダーシルクコーティングKevlar ケブラーKevlar Filament ケブラーフィラメントCoated Kevlar Filament コーティングされたケブラーフィラメント 図３untreated synthetic fiber 未処理の合成繊維coating process with spider silk proteins スパイダーシルクタンパク質によるコーティングプロセスcoated fiber コーティングされた繊維agent/chemical molecule 作用物質／化学的分子coated fiber with attached molecules 接着した分子を有するコーティングされた繊 図４untreated 未処理coated fabric コーティングされた繊維
【発明を実施するための形態】
【実施例】
【０１７０】
コーティング反応を行うために、本発明者らは例示的に、ニワオニグモ（European gardencross spider Araneus diadematus）由来のドラグラインシルクタンパク質ＡＤＦ−３及びＡＤＦ−４から誘導される合成シルクポリペプチドＣ１６、Ｃ３２、Ｃ１６ＮＲ４、（ＡＱ）２４及び（ＡＱ）２４ＮＲ３を設計した。これらのタンパク質は、ＡＤＦ−３及びＡＤＦ−４、並びにそれらの変異体が効率的な集合挙動を示すというこれまでの観察結果に基づき選択された。
【０１７１】
実施例Ｉ：スパイダーシルクポリペプチドＣ１６によるアラミド繊維のコーティング
単一のアラミド（ケブラー）繊維を、室温（２５℃）で２ｗｔ％／ｖｏｌのスパイダーシルクポリペプチドＣ１６を含有するＨＦＩＰ（ヘキサフルオロイソプロパノール）溶液中で５秒間インキュベートした。溶媒を蒸発させた後、スパイダーシルクポリペプチドＣ１６がアラミド繊維の周りに透明な膜を形成した。電子顕微鏡検査により測定された膜の厚さは３μｍであった（図２を参照されたい）。
【０１７２】
同じ結果を、ギ酸及び水等の他の溶媒を用いて得ることができる。同様の実験を、ナイロン繊維、ガラス繊維、炭素繊維、セルロース繊維、ＰＴＦＥ（テフロン登録商標）繊維、エラスタン（スパンデックス）繊維及び人毛を用いて行った。したがって記載の方法を用いて全ての試験繊維をコーティングすることができた。
【０１７３】
コーティングされた繊維の化学安定性を試験するために、スパイダーシルクポリペプチドＣ１６コーティングを、８Ｍの尿素、６Ｍの塩酸グアニジン及び６Ｍのチオシアン酸グアニジン中で２４時間インキュベートした。１Ｍのリン酸カリウム又は１００％メタノールで処理したスパイダーシルクポリペプチドＣ１６コーティングはチオシアン酸グアニジン中にだけ溶解することができた。スパイダーシルクポリペプチドＣ１６コーティングのこの顕著な化学安定性は天然のドラグラインシルクの化学安定性と、及び組換えにより作製した集合化したＡＤＦ−４の化学安定性と同程度である。これまでの研究から、集合化した構造体の集合性及び安定性をシルクタンパク質のアミノ酸配列と直接相関させることができた。このため、スパイダーシルクコーティングの特性は、対応するシルク遺伝子の操作を介してシルクタンパク質の一次構造を変えることにより直接修飾することができる。
【０１７４】
実施例ＩＩ：物質とアラミド繊維上にコーティングしたシルクポリペプチドＣ１６との化学架橋を介した共有結合的なカップリング
繊維の多くの用途には繊維表面上の特定の官能基の存在が必要とされる。スパイダーシルクコーティングに続いて物質を用いて改良を加えることができることを実証するために、原理の証明として、発色団フルオレセインと酵素β−ガラクトシダーゼとを、アラミド繊維上にコーティングしたシルクポリペプチドＣ１６と化学的にカップリングさせた（図３を参照されたい)。カップリングは、１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド（ＥＤＣ）を用いてスパイダーシルクポリペプチドＣ１６の表面に曝されたカルボキシル基を活性化することにより達成された。スパイダーシルクポリペプチドＣ１６でコーティングされたアラミド繊維をエチレンジアミンとともに更にインキュベートし、アミドを形成させた。続いてエチレンジアミンの残りの遊離アミノ基をイソチオシアン酸フルオレセインとカップリングさせ、それにより安定したチオ尿素誘導体の形成を介したフルオレセインの効率的な共有結合的な連結がもたらされた。
【０１７５】
同様に、β−ガラクトシダーゼとＥＤＣにより活性化されたＣ１６膜とのインキュベーションにより、シルクポリペプチドＣ１６のカルボキシル基と、β−ガラクトシダーゼの酵素表面でアクセス可能であった第１級アミン（例えばリジン残基由来）との間でアミド結合が形成された。かかる改良を加えた繊維を繰り返し洗浄した後でも、β−ガラクトシダーゼの活性を、基質として５−ブロモ−４−クロロ−３−インドリル−β−Ｄ−ガラクトピラノシド（Ｘ−Ｇａｌ）を用いて検出することができた。
【０１７６】
実施例ＩＩＩ：物質とアラミド繊維上にコーティングしたシルクポリペプチドＣ１６との非共有結合的なカップリング
物質とスパイダーシルクポリペプチドＣ１６でコーティングされたアラミド繊維との上述の共有結合的なカップリングに加えて、非共有結合的なカップリングも行った。単一のアラミド繊維を２ｗｔ％／ｖｏｌのスパイダーシルクポリペプチドＣ１６と塩化銅又は塩化コバルトとを含有するギ酸中で室温（２５℃）で５秒間インキュベートした。溶液槽から取り出し、溶媒を蒸発させた後、塩化コバルト又は塩化銅がスパイダーシルクポリペプチドＣ１６でコーティングされたアラミド繊維の周りに色の付いた膜を形成した。
【０１７７】
実施例ＩＶ：スパイダーシルクポリペプチドＣ１６による綿織布のコーティング
単繊維だけではなく、製織済みの布地もスパイダーシルクによるコーティングに好適なテンプレートである。綿の製織済みの布地及び綿繊維を２ｗｔ％／ｖｏｌのスパイダーシルクポリペプチドＣ１６溶液中で別々にインキュベートした。乾燥した後、綿織布及び綿繊維は同程度のコーティング挙動を示した（図４を参照されたい）。
【０１７８】
このため既製の布地の直接コーティングにより、既にシルクでコーティングされた繊維で作られた布地と比較して同程度であるが、異なるコーティングパターンがもたらされる。例えば布地のコーティングにより、隙間をコーティングすることができるが、布地のコーティングでなければスパイダーシルクコーティングによって繊維及び交差箇所だけしかコーティングされ（engulfed）ず、隙間はコーティングされない。これは製織前の繊維のコーティング又は製織済みの布地の処理のいずれによっても、様々な用途に好適なむらなくコーティングされた材料がもたらされることを示している。
【０１７９】
実施例Ｖ：スパイダーシルクポリペプチドＣ１６によるアラミド糸のディップコーティング
スパイダーシルクポリペプチドＣ１６によるアラミド糸のディップコーティングを行うために、スパイダーシルクポリペプチドＣ１６を水溶液（１０ｍＭのトリス、ｐＨ７．５）に溶解した。水溶液中のシルクポリペプチドＣ１６の濃度は２ｗｔ％／ｖｏｌであった。ディップコーティング手法（図１も参照されたい）には、以下のものが含まれていた。
ｉ）浸漬：アラミド糸を５ｍ／ｓの一定速度でスパイダーシルクポリペプチドＣ１６溶液中に浸漬し、
ｉｉ）インキュベーション：基材をコーティング溶液中で２分間インキュベートし、コーティング材を基材に付着させ、
ｉｉｉ）引き揚げ：アラミド糸から余分な基材を５ｍ／ｓの一定速度で取り除き、
ｉｖ）後処理：コーティングを室温（２５℃）で乾燥した。
【０１８０】
実施例ＶＩ：スパイダーシルクポリペプチドＣ１６によるアラミド糸のスプレーコーティング
スパイダーシルクポリペプチドＣ１６によるアラミド糸のスプレーコーティングを行うために、スパイダーシルクポリペプチドＣ１６を水溶液（１０ｍＭのトリス、ｐＨ７．５）に溶解した。水溶液中のシルクポリペプチドＣ１６の濃度は２ｗｔ％／ｖｏｌであった。スプレーコーティング手法（図１も参照されたい）には、以下のものが含まれていた。
ｉ）準備：スパイダーシルクポリペプチドＣ１６溶液をスプレー缶又は噴霧装置に移し、
ｉｉ）コーティング：シルクポリペプチドＣ１６溶液をスプレー缶によりアラミド糸上に均一に分配させ、
ｉｉｉ）後処理：コーティングを室温（２５℃）で乾燥した。
【０１８１】
実施例ＶＩＩ：スパイダーシルクポリペプチドＣ１６によるアラミド糸のパディング
スパイダーシルクポリペプチドＣ１６をギ酸中に溶解した。ギ酸中のシルクポリペプチドＣ１６の濃度は１０ｍｇ／ｍｌであった。異なるタイプの糸（テフロン登録商標（Goodfellow、繊維径：０．０２１１ｍｍ）、セルロース（Goodfellow、繊維径：０．０１５ｍｍ）、原綿、ケブラー（Goodfellow、繊維径：０．０１７ｍｍ）、エラスタン（スパンデックス）、未処理の人毛及び処理済みの（フケを含まない）人毛）をディップコーティング方法に従ってコーティングした。スパンデックス及び原綿糸は脱イオンＨ２Ｏで洗浄し、乾燥した後にコーティングした。糸をスパイダーシルクポリペプチドＣ１６／ギ酸溶液中で５秒間インキュベートし、コーティング材を基材に付着させた。コーティングを室温（２５℃）で乾燥した。
【０１８２】
実施例ＶＩＩＩ：スパイダーシルクポリペプチドＣ１６によるナイロン糸のコーティング
スパイダーシルクポリペプチドＣ１６を水溶液（１０ｍＭのトリス、ｐＨ７．５）に溶解した。ギ酸中のシルクポリペプチドＣ１６の濃度は１ｗｔ％／ｖｏｌであった。ナイロン糸（Goodfellow、繊維径：０．０１ｍｍ）をコーティング溶液中で５秒間インキュベートし、コーティング材を基材に付着させた。コーティングを室温（２５℃）で乾燥した。
【０１８３】
実施例ＩＸ：様々なスパイダーシルクタンパク質による材料のコーティング
材料（コーティングされたスライドガラス、特にシリコンマトリクス（Sciences Services,Munich, Germany）を有するコーティング材でコーティングされたスライドガラス）をコーティングするために様々なタンパク質Ｃ１６、ＡＱ２４ＮＲ３、Ｃ１６ＮＲ４、ＡＱ２４、Ｃ８及びＣ３２を使用した。様々なタンパク質Ｃ１６、ＡＱ２４ＮＲ３、Ｃ１６ＮＲ４、ＡＱ２４、Ｃ８及びＣ３２によるスライドガラスのコーティングは、コーティングされたスライドガラス、特にシリコンマトリクスでコーティングされたスライドガラスとともに例示的に示されている。様々なタンパク質Ｃ１６、ＡＱ２４ＮＲ３、Ｃ１６ＮＲ４、ＡＱ２４、Ｃ８及びＣ３２による、コーティングされたスライドガラス、特にシリコンマトリクスでコーティングされたスライドガラスのコーティングの結果は、様々なタンパク質Ｃ１６、ＡＱ２４ＮＲ３、Ｃ１６ＮＲ４、ＡＱ２４、Ｃ８及びＣ３２による他のスライドガラス（コーティングされていない、特にシリコンマトリクスを有するコーティング材ではコーティングされていない）のコーティングの結果と類似している。トリス緩衝水溶液中のＣ１６、ＡＱ２４ＮＲ３及びＣ１６ＮＲ４の最終タンパク質濃度はそれぞれ、３％、０．５％及び２．１％であった。ディップコーティング方法を使用した。上記方法には以下の工程が含まれていた：溶液中への６０秒のディッピング、溶液から取り出して３０秒の乾燥、溶液中への材料の３０回の再浸、及び精製水（Ｍｉｌｌｉ−Ｑ）によるすすぎ。ＡＱ２４、Ｃ８及びＣ３２を２％の濃度でギ酸中に溶解した。スピンコーティング方法を１０００ｒｐｍで１分間使用した。それから材料（コーティングされたスライドガラス、特にシリコンマトリクスを有するコーティング材でコーティングされたスライドガラス）の表面を小さい針を用いて削った。コーティングされた材料と非コーティング（raw）材料との高さの差異をレーザー走査顕微鏡（ＶＫ ９７００ Keyence, NeuIsenburg, Germany）を用いて様々なスポットで分析した。
【０１８４】
表１は、材料（スライドガラス）を様々なスパイダーシルクタンパク質で均質にコーティングすることができたことを示している。コーティングの厚さはタンパク質の性質（親水性及び電荷）、溶媒の湿潤性及びコーティング方法によって変わる。
【０１８５】
【表１】
「＊＊」:高度に均質なコーティング 「＊」 :均質なコーティング
表１の英語
Spider silk protein:スパイダーシルクタンパク質
coating:コーティング
Coating thickness:コーティングの厚さ
Homogeneity:均質性
yes:あり
【０１８６】
実施例Ｘ：様々な溶媒を用いるスパイダーシルクポリペプチドＣ１６による材料のコーティング
様々な溶媒（１００ｍＭのトリス、ｐＨ８；トリフルオロ酢酸；ギ酸；ヘキサフルオロイソプロパノール）を、Ｃ１６を溶解し、材料（コーティングされたスライドガラス、特にシリコンマトリクス（Sciences Services, Munich, Germany）を有するコーティング材でコーティングされたスライドガラス）をコーティングするために使用した。様々なタンパク質Ｃ１６、ＡＱ２４ＮＲ３、Ｃ１６ＮＲ４、ＡＱ２４、Ｃ８及びＣ３２によるスライドガラスのコーティングは、コーティングされたスライドガラス、特にシリコンマトリクスでコーティングされたスライドガラスとともに例示的に示されている。様々なタンパク質Ｃ１６、ＡＱ２４ＮＲ３、Ｃ１６ＮＲ４、ＡＱ２４、Ｃ８及びＣ３２による、コーティングされたスライドガラス、特にシリコンマトリクスでコーティングされたスライドガラスのコーティングの結果は、様々なタンパク質Ｃ１６、ＡＱ２４ＮＲ３、Ｃ１６ＮＲ４、ＡＱ２４、Ｃ８及びＣ３２による他のスライドガラス（コーティングされていない、特にシリコンマトリクスを有するコーティング材ではコーティングされていない）のコーティングの結果と類似している。コーティングには、水溶液（トリス（１００ｍＭ、ｐＨ８））を使用した。上記溶液中のＣ１６の最終タンパク質濃度は３％であった。ディップコーティング方法を使用した。上記方法には以下の工程が含まれていた：溶液中への６０秒のディッピング、溶液から取り出して３０秒の乾燥、溶液中への材料の３０回の再浸、及びミリポア水によるすすぎ。またＣ１６を１％の最終濃度でトリフルオロ酢酸、ギ酸及びヘキサフルオロイソプロパノール中に直接溶解した。スピンコーティング方法を１０００ｒｐｍで１分間使用した。それからコーティングされた材料（コーティングされたスライドガラス、特にシリコンマトリクスを有するコーティング材でコーティングされたスライドガラス）の表面を小さい針を用いて削った。コーティングされた材料と非コーティング材料との高さの差異をレーザー走査顕微鏡（ＶＫ ９７００ Keyence, Neu-Isenburg, Germany）を用いて様々なスポットで分析した。
【０１８７】
表２は、材料（スライドガラス）をＣ１６でコーティングすることができたことを示している。厚さはタンパク質の性質、溶媒の湿潤性及びコーティング方法によって変わる。
【０１８８】
【表２】
＊＊：高度に均質なコーティング ＊：均質なコーティング
表中英語
Solvent:溶媒
Coating:コーティング
Coating thickness:コーティングの厚さ
Homogeneity:均質性
溶媒名上から順次：１００ｍＭのトリス、ｐＨ８、トリフルオロ酢酸、ギ酸、ヘキサフルオロイソプロパノール
【０１８９】
実施例ＸＩ：Ｃ１６による自然発生的な材料のコーティング
Ｃ１６及びＡＱ２４ＮＲ３を用いて、人毛、綿（「Ｏｂｅｒｇａｒｎ」繊維）、ゴム、羊毛及びセルロース（Good fellow、ｄ＝０．０１５ｍｍ、Huntington, GreatBritain）等の様々な自然発生的な材料（有機材料）をコーティングした。金色に脱色した欧州人の毛を３％のタンパク質濃度でＣ１６のトリス緩衝水溶液（１００ｍＭ、ｐＨ８）を用いてドロップコーティングし（drop-coated）、その後乾燥して（until drying）、精製水（Ｍｉｌｌｉ Ｑ）ですすいだ。脱色したことのない欧州人の毛を０．８５％のタンパク質濃度で精製水（Ｍｉｌｌｉ Ｑ）に溶解したＡＱ２４ＮＲ３の溶液を用いてドロップコーティングし、その後乾燥した。綿、ゴム、羊毛及びセルロースを、１．３５％のタンパク質濃度でＣ１６のトリス緩衝水溶液（１００ｍＭ、ｐＨ８）を用いてコーティングした。ディップコーティング方法を使用した。上記方法には以下の工程が含まれていた：溶液中への１２０秒のディッピング、溶液から取り出して１２０秒の乾燥、溶液中への材料の１０回の再浸、及び精製水（Ｍｉｌｌｉ Ｑ）によるすすぎ。それぞれのコーティングされた繊維（コーティング）をコーティングされていない参照繊維（参照）と比較した。人毛、綿、羊毛及びセルロースのコーティングされた繊維とコーティングされてない繊維の半径を比較して、コーティングの厚さを定量化した。コーティングをレーザー走査顕微鏡（ＶＫ ９７００ Keyence, Neu-Isenburg, Germany）を用いて様々なスポットで分析した。結果を表３にまとめる。
【０１９０】
【表３】
Ｒａ＠：計算による中間の高さ ＊＊：高度に均質なコーティング
＊：均質なコーティング Ｘ：僅かに均質なコーティング
表中英語
Material:材料
Coating:コーティング
radius References:半径（参照）
Radius Coating:半径（コーティング）
Coating thickness:コーティングの厚さ
Roughness Ra@:粗度
Coating:コーティング
Reference:参照
Homogeneity:均質性
Treated Hair:処理した毛
Virgin Hair:脱色したことのない毛
Cotton:綿
Rubber:ゴム
Wool:羊毛
Cellulose:セルロース
Yes:あり
【０１９１】
表３は、様々な自然発生的な材料（有機材料）のコーティングを示している。これらの材料はコーティング後に厚さの増大を示した。処理した毛及び脱色したことのない毛は粗度の低減を示した。綿繊維は撚り合わされ、より大きい繊維を形成した。そのため単繊維を画像化し、直径の差異を推測することは困難であった。繊維は長さ全体にわたって一定の直径を有していなかったため、厚さを正確に推測することはできなかったが、コーティングははっきりと見て取れた。羊毛はＣ１６で均質にコーティングすることができた。セルロースはＣ１６でコーティングすることができた。セルロースの特質のために、この実験では該コーティング方法による均質なコーティングを検出することはできなかった。セルロースはおおよそ平滑な繊維ではないため、均質とするにはコーティングの厚さが十分ではなかった。しかしながら、コーティングサイクルの回数の増大により、コーティングの均質性を増大させることができる。
【０１９２】
図５におけるレーザー走査画像は、ヘアケラチン繊維のコーティングの差異を示している。脱色した毛及び脱色したことのない毛の両方で、コーティングの際にキューティクルが消失し、繊維表面がより均質になった。粗度がコーティングの厚さに伴い低減した。コーティング材の添加により毛繊維が平滑になった。光反射はレーザー強度として測定することができた。参照となる脱色した毛では、全長にわたる平均値は１３１９８であり、コーティングされた毛では、（１６３８４のグレイステップ（grey steps）に対して）平均値は約１３６３２であった。参照となる脱色したことのない毛では、平均値は約１３５１７であったが、コーティングされた毛の平均値は１３７４６であった。レーザー強度はグレイステップで特定する。最小値は０の値を示し、最大値は１６３８４の値を示す。値が高くなると、サンプル／材料の反射／輝度が高くなる。脱色した毛及び脱色したことのない毛の場合、コーティングされた毛の値はそれぞれ参照と比較して高かった。コーティングは繊維の輝度を高めた。
【０１９３】
実施例ＸＩＩ：スパイダーシルクポリペプチドＣ１６による無機不活性材料のコーティング
Ｃ１６を用いて、ガラス（スライドガラス、Roth; Karlsruhe,Germany）、炭素（炭素繊維プレート、R&G GmbH）及び金属（金属プレート）等の様々な無機不活性材料をコーティングした。スライドガラスでは，Ｃ１６をギ酸中に直接溶解した（最終タンパク質濃度１％）。スピンコーティング方法を１０００ｒｐｍで１分間使用した。炭素及び金属プレートでは、コーティングをＣ１６の水溶液（１００ｍＭのトリス、ｐＨ８）を用いて行った。最終濃度は１．３５％であった。炭素プレートでのディップコーティング方法には以下の工程が含まれていた：溶液中への１２０秒のディッピング、溶液から取り出して１２０秒の乾燥、溶液中への材料の１０回の再浸、及びミリポア水によるすすぎ。金属プレートでのディップコーティング方法には以下の工程が含まれていた：溶液中への１２０秒のディッピング、溶液から取り出して１２０秒の乾燥、溶液中への材料の１０００回の再浸、及び精製水（Ｍｉｌｌｉ Ｑ）によるすすぎ。それからコーティングされた材料（金属プレート、炭素プレート）の表面を小さい針を用いて削った。コーティングされた材料（金属プレート、炭素プレート）の表面をレーザー走査顕微鏡（ＶＫ ９７００ Keyence, Neu-Isenburg, Germany）を用いて様々なスポットで分析した。コーティングされた材料とコーティングされてない材料とを比較した。コーティング材料と非コーティング材料との間の高さの差異により、コーティングの厚さを推測した。コーティングは基材表面を平滑にした。結果を表４にまとめる。
【０１９４】
【表４】
Ｒａ：計算による中間の高さ Ｒｑ：二次高さ平均 ＊：均質なコーティング
Ｘ：僅かに均質なコーティング
表中英語
Inorganic inert material:無機不活性材料
Coating:コーティング
Coating thickness:コーティングの厚さ
Roughness:粗度
Reference:参照
Homogeneity:均質性
Carbon fiber plate:炭素繊維プレート
Yes:あり
【０１９５】
表４は、無機材料上のＣ１６コーティングの厚さを示している。ガラス、炭素及び金属をコーティングすることができた。ガラスの場合、均質なコーティングを検出することができた。コーティングされたガラスはコーティングされていないガラス（参照）と比較して粗度の低減を示した。
【０１９６】
実施例ＸＩＩＩ：スパイダーシルクポリペプチドＣ１６による合成不活性材料のコーティング
Ｃ１６を用いて、ポリエステル（ＰＥＴ、Ｓｙｎｇａｒｎ繊維）、ポリアミド（ＰＡ、Goodfellow、ｄ＝０．０１ｍｍ）、ポリテトラフルオロエチレン（ＰＴＦＥ、Good Fellow、ｄ＝０．０２１１ｍｍ）、ポリプロピレン（ＰＰ、Good Fellow製のプレート）、超高分子量ポリエチレン（ＵＨＭＷ ＰＥ、GoodFellow製のプレート）、エラスタン及びポリアラミド等の様々な合成不活性材料をコーティングした。ポリエステル、ポリアミド、ＰＴＦＥ、ポリプロピレン、ＵＨＭＷポリエチレンのコーティングはＣ１６の水溶液（１００ｍＭのトリス、ｐＨ８）を用いて行った。最終タンパク質濃度は１．３５％であった。ディップコーティング方法を使用した。上記方法には以下の工程が含まれていた：溶液中への６０秒のディッピング、溶液から取り出して３０秒の乾燥、溶液中へのサンプルの３０回の再浸、及びミリポア水によるすすぎ。エラスタン及びポリアラミドを１４％の最終タンパク質濃度でＣ１６のトリス緩衝溶液（１００ｍＭ、ｐＨ８）を用いてコーティングした。繊維を溶液中に３回ディッピングし、ミリポア水ですすいだ。各材料をコーティングされていない参照と比較した。ＰＥ、ＰＡ、ＰＴＦＥ、エラスタン及びポリアラミドは繊維の形態であった。コーティングの厚さを推測するために、繊維の半径を比較することができる。繊維の全長にわたるコーティングの厚さを推測することは不可能であった。このため、繊維をレーザー走査顕微鏡（ＶＫ ９７００ Keyence, Neu-Isenburg, Germany）を用いて様々なスポットで分析した。結果を表５にまとめる。
【０１９７】
【表５】
表中英語
Synthetic inert material:合成不活性材料
Coating:コーティング
Radius ref:半径（参照）
Radius coated:半径（コーティング）
Coating thickness:コーティングの厚さ
Homogeneity:均質性
Yes:あり
【０１９８】
表５は合成不活性材料上のＣ１６コーティングの厚さを示している。全ての材料をコーティングすることができた。ＰＥＴ、ＰＡ、ＰＴＦＥ、エラスタン及びポリアラミドの場合、コーティングされていない参照と比較したコーティングされた合成不活性材料の厚さの増大が検出された。ＰＴＦＥ繊維の場合、コーティングは僅かに均質であった。４．３μｍというコーティングの厚さの値は平均である。ＰＰ及びＵＨＭＷ ＰＥプレートでは、コーティングをはっきりと検出することができた。エラスタンは撚り合わされた多くの繊維からなる。このため、測定した厚さの値は撚り合わされた幾つかの繊維上のコーティングの厚さを表す。ポリアミド（ＰＡ）繊維の平滑表面のコーティングでは、均質性の低い表面が生じた。これはポリアミド（ＰＡ、ナイロン）繊維のレーザー走査顕微鏡画像（図６）によって示される。Ｃ１６によるコーティング前（図６Ａ）及びコーティング後（図６Ｂ）の繊維が示される。コーティングは繊維全体にわたって検出可能であった。コーティング後、繊維表面の均質性は低かった（図６Ｂ）。
【０１９９】
実施例ＸＩＶ：Ｃｙ５蛍光タグと架橋したＡＱ２４ＮＲ３による人毛のコーティング
ＡＱ２４ＮＲ３（タンパク質濃度４ｍｇ／ｍｌ）のチオシアン酸グアニジン溶液（５Ｍ）を調製し、ｐＨ８で１００ｍＭのトリス緩衝液に対して透析し、１ｍｇ／ｍｌのタンパク質溶液を得た（このタンパク質によるコーティングを図７Ｂに示す）。更なる実験で、ＡＱ２４ＮＲ３（タンパク質濃度２ｍｇ／ｍｌ）の５Ｍ尿素溶液を調製し、ｐＨ８で１００ｍＭのトリス緩衝液に対して透析した（このタンパク質によるコーティングを図７Ｃに示す）。タンパク質溶液をＡｍｅｒｓｈａｍ（商標）Ｃｙ（商標）５ Ｍａｌｅｉｍｉｄｅ Ｍｏｎｏ−Ｒｅａｃｔｉｖｅ Ｄｙｅ（GE Healthcare、カタログ番号ＰＡ２５０３１）で標識化した。蛍光タグによるバイオコンジュゲーション（bioconjugation）をシステインのスルフヒドリル基（１分子あたり１つ）を用いて行った。ジスルフィド結合を低減するのに使用する１８ｍｇ／ｍｌのＴＣＥＰのトリス溶液（１０μＬ、トリス（２−カルボキシエチル）ホスフィン）（ｐＨ７）をタンパク質溶液に添加した。タンパク質溶液を室温（ＲＴ）で１０分間インキュベートした。Ｃｙ５−マレイミド（GE Healthcare）の色素溶液を５０μＬの無水ジメチルホルムアミド（Dimethylformamide）（ＤＭＦ）と混合し、そのうち４０μＬをタンパク質溶液に添加した。溶液を室温で２時間及び４℃で終夜インキュベートした。タンパク質溶液（３μｇ）をウェスタンブロット分析に直接使用した。
【０２００】
未処理の人毛をタンパク質溶液中に１０分間入れ、純水（ｍｉｌｌｉ Ｑ）ですすいだ（図７Ｂ）。インド人の毛先を標的化したタンパク質溶液中に１０分間入れ、それから空気乾燥した（図７Ｃ）。毛及びゲルを、Ｅｐｉ−Ｖｅｘ光とＣｙ５フィルターを有するＰｒｏｘｉｍａを用いて画像化した（図７Ａ）。ウェスタンブロットゲル上で、標識化したＡＱ２４ＮＲ３タンパク質と標識化していないＡＱ２４ＮＲ３タンパク質とを比較した。標識化したタンパク質だけをＣｙ５フィルター下で検出することができる。結果として、蛍光標識化したタンパク質が発光し、標識化していないものは見ることができなかった。タンパク質は蛍光色素と共有結合した。溶液中のシルクを、様々なアドレス可能なアミノ基を用いて化学的に修飾することができる。Ｃｙ５で標識化したＡＱ２４ＮＲ３タンパク質を用いて、コーティング特質及び蛍光特質を変えることなく毛等の様々な基材をコーティングすることができる。毛のコーティングはＣｙ５フィルター下で見ることができる（図７）。
【０２０１】
全体的な結論として、実験により、本発明の方法が合成不活性材料、無機不活性材料及び自然発生的な材料のコーティングを可能にすることが例示的に示される。コーティングの均質性はシルクの化学的性質（親水性及び電荷）、材料の化学的性質、材料の形状、選択される溶媒及びコーティング方法によって変わる。化学的に修飾されたシルクタンパク質を様々な基材上にコーティングすることもできる。
【０２０２】
実施例ＸＶ：ＡＱ２４ＮＲ３によるインド人の毛及び脱色したことのない人毛のコーティング
実験により、欧州人の脱色したことのない毛（一度も化学物質で処理していない）及びインド人の毛（化学物質で処理し、エクステンションに使用する）に対するタンパク質コーティングの効果が示される。タンパク質ＡＱ２４ＮＲ３を毛の処理のために様々なタンパク質濃度で使用した。０．２％タンパク質溶液では、ＡＱ２４ＮＲ３を５Ｍの尿素に溶解し、純水（Ｍｉｌｌｉ Ｑ）に対して透析した。０．６％及び０．８５％タンパク質溶液では、ＡＱ２４ＮＲ３を任意の透析工程を用いずに純水（Ｍｉｌｌｉ Ｑ）に直接溶解した。欧州人の脱色したことのない毛又はインド人の毛を上述のタンパク質溶液中に約１０分間入れ、それから空気乾燥した。欧州人の脱色したことのない毛又はインド人の毛上の全く同じスポット（粘着テープ（adhesive strip）及び油性マーカーで印を付ける）を、上述のタンパク質溶液による処理の前後でレーザー走査顕微鏡（ＶＫ ９７００ Keyence, Neu Isenburg, Germany）を用いて分析した。結果を表６〜表９に示す。分析をKeyenceのＶＫアナライザを用いて行った。
【０２０３】
【表６】
表中英語
表６．Thickness coating on Indian hair:インド人の毛上のコーティングの厚さ
Conditioner concentration:コンディショナーの濃度
Radius untreated hair:未処理の毛の半径
Radius treated hair:処理した毛の半径
Coating thickness:コーティングの厚さ
表７．Average surfeace roughness(Ra) of indian hair:インド人の毛の平均表面粗度（Ｒａ）
Conditioner concentration::コンディショナーの濃度
Ra untreated hair:未処理の毛のＲａ
Ra treated hair:処理した毛のＲａ
Roughness reduction:粗度の低減
表８．Thickness coating on European virgin hair:欧州人の脱色したことのない毛上のコーティングの厚さ
Conditioner concentration:コンディショナーの濃度
Radius untreated hair:未処理の毛の半径
Radius treated hair:処理した毛の半径
Coating thickness:コーティングの厚さ
表９．Average surface roughness(Ra) of European virgin hair:欧州人の脱色したことのない毛の平均表面粗度（Ｒａ）
Conditioner concentration:コンディショナーの濃度
Ra untreated hair:未処理の毛のＲａ
Ra treated hair:処理した毛のＲａ
Roughness reduction:粗度の低減
【０２０４】
タンパク質溶液の濃度の増大（すなわち０．２％から０．８５％への）により、コーティングされた毛の半径の増大がもたらされた。毛表面の粗度がコーティングの厚さの増大に伴い低減した。加えて、毛表面の平滑性がコーティングの厚さの増大に伴い増大した。
【０２０５】
実施例ＸＶＩ：スパイダーシルクタンパク質Ｃ１６による人の皮膚のコーティング
未処理の人の皮膚（図８Ａ）及びシルクタンパク質によるコーティング後の人の皮膚（図８Ｂ）。水滴（明確にするために染色した）は通常、無傷の皮膚の疎水性の性質により人の皮膚を湿らせることはない。シルクタンパク質によるコーティング後、皮膚の疎水性が大幅に低減し、水滴の極めて高い濡れ挙動がもたらされる。
【０２０６】
詳細には、スパイダーシルクタンパク質Ｃ１６（１ｍｇ／ｍｌ）の尿素溶液（５％）を調製した。ラウリル硫酸ナトリウム無含有石鹸で手の皮膚を洗浄し、続いて空気乾燥した後、４０μlのタンパク質−尿素溶液（Ｂ）及び４０μlの尿素（５％）対照溶液（タンパク質なし）（Ａ）を規定の皮膚領域上に塗布した（図８を参照されたい）。シルクコーティングにより、間断ない不可視膜が生じ、これにより皮膚の親水性が増大し、皮膚の保護がもたらされる。乾燥後、４０μlの純水を皮膚上に塗布した（図８）。シルクでコーティングされた皮膚の親水性の増大により、水を皮膚に即座に浸透させることが可能であったが（図８Ｂ）、図８Ａでは水滴はコーティングされていない皮膚に浸透しなかった。図８Ｂ（シルクでコーティングされた皮膚）は、はっきりした水滴を示す図８Ａ（コーティングされていない皮膚）に比して広領域にわたり広がる水滴を示す。コーティング不可視膜の保護特性は、水／石鹸による洗浄と乾燥とのサイクルに数回耐えた。
【技術分野】
【０００１】
本発明は、不活性材料又は自然発生的な材料をシルクポリペプチドでコーティングする方法に関する。本発明は更に、上記方法により入手可能なコーティングされた不活性材料又は自然発生的な材料に、及びその使用に関する。本発明は、上記コーティングされた材料を含む製品にも関する。
【背景技術】
【０００２】
スパイダーシルクは、特別な物理特性を示すタンパク質ポリマーである。様々なタイプのスパイダーシルクの中でも、ドラグラインが最も広く研究されている。ドラグラインシルクは円網を張るクモにより、それらの網の縦糸及び横糸を構築するのに、並びに命綱として利用されている。これらの目的のために、高い引張強度及び弾性が要求される。かかる特性の組み合わせにより、ほとんどの他の既知の材料よりも大きい靭性が得られる。例えばニワオニグモ（Araneus diadematus）のドラグラインシルクは、鋼（１．３ＧＰａ）及びアラミド繊維の引張強度とほぼ同等の１．９ＧＰａと高い引張強度を示す。
【０００３】
大腸菌におけるスパイダーシルクタンパク質の組換えによる生成のための系が過去に開発されている（特許文献１、特許文献２）。例として、特許文献１（特許文献３に対する優先権を主張している）に言及される。この発現系では、単一構成要素（＝モジュール）を自由に変えることができ、そのため具体的な事例の要件に適合させることができる。このタイプのモジュールは、非特許文献１にも開示される。更なるモジュールは特許文献４に記載される。スパイダーシルクタンパク質を糸に加工することができることは自然と知られている。クモは様々なタイプのタンパク質を用いて、シルク糸及びクモの巣を形成するエキスパートである。スパイダーシルクタンパク質を糸へと変形させる技術的プロセスが、例えば特許文献５で説明されている。
【０００４】
合成材料又は無機材料、例えば合成繊維又は無機繊維は、何十年にわたり産業的に重要なものとなっている。これらの中でも、例えばアラミド糸ケブラーは、等重量ベースで鋼の５倍の強度があり、同時に軽量である。また該アラミド糸ケブラーは、低い導電率を示し、非常に高い耐薬品性を有する、すなわち不活性である。一方で、この条件は例えば防護服に望ましい。しかしながら他方では、アラミド糸は製造後に改良を加えるのが非常に困難である。効率良くアラミド糸を染色する、又はアラミド糸の表面に分子を接着させるのはほぼ不可能である。またアラミド糸は可湿性を僅かしか有しない。このことは、他の不活性な合成材料又は無機材料でも当てはまる、すなわち該他の不活性な合成材料又は無機材料は、高い耐薬品性を有し、可湿性を僅かしか有さず、穏やかな条件下で、すなわち低温下でかつ毒性溶媒を用いずに重合後に改良を加えることができない。一般的なコーティングは不活性な合成材料又は無機材料、例えば不活性な合成繊維又は無機繊維の表面に十分に密着せず、また一般的なコーティングはあまり耐久性を有さず、又は厳しい条件、すなわち高温及び／若しくは毒性溶媒下で塗布しなければならない。
【０００５】
このため、好ましくは低温下でかつ毒性溶媒を用いずに製造後に不活性な合成材料又は無機材料、例えば不活性な合成糸又は無機糸に改良を加える新規の好適な方法が必要とされている。
【０００６】
本発明者らは驚くべきことに、コーティング材としてのシルクポリペプチドの使用が最も穏やかな条件下での効率性の高いコーティングを提供し、特定用途に合わせたシルクでコーティングされた不活性な合成材料又は無機材料の製造を可能にすることを見出している。今日までは、（たとえ可能であったとしても）プラズマ処理のような非常に厳しい条件が不活性な合成材料又は無機材料、例えば不活性な合成繊維又は無機繊維に変更を加えるのに必要であった。またシルクポリペプチドを用いることで利用可能となる不活性な合成材料又は無機材料をコーティングする方法は存在せず、より重要なことには、これまで完全に不可能であると思われてきたために、既存の不活性な合成繊維又は無機繊維を純粋なシルクの層でコーティングすることについて考える人はいなかった。
【０００７】
本発明のコーティングにより、穏やかな条件下で、すなわち低温下でかつ毒性溶媒を用いずに、分子を不活性な合成材料又は無機材料に接着させることが可能になる。例えば医療技術では、医薬品等の作用物質を非破壊条件下でシルクに覆われた不活性材料に効率的に連結させることができる。
【０００８】
加えて、不活性な合成材料又は無機材料は幾つかの制限を示す。ほとんどの不活性な合成材料又は無機材料、例えばアラミド繊維又は炭素繊維等の不活性な合成繊維は、例えば昆虫シルク等の天然繊維と比較すると表面の感触が望ましくない。これは、ほとんどの不活性な合成材料又は無機材料がザラザラしており（harsh）、粗く脆弱であり、そのため触り心地が良くないことを意味する。他方で、昆虫シルク繊維は不活性な合成繊維又は無機繊維の特質を共有しておらず、はるかに高価であることが多い。
【０００９】
したがって、改善された表面の感触、すなわち改善された触感を有する新規の不活性な合成材料又は無機材料が必要とされている。
【００１０】
本発明者らは驚くべきことに、シルクでコーティングされた不活性な合成材料又は無機材料、例えばシルクでコーティングされたアラミド繊維又は炭素繊維は、不活性な合成材料又は無機材料の利点と、天然材料の利点とを兼ね揃えることを見出している。シルクでコーティングされた不活性な合成材料又は無機材料は改善された表面の感触（触感）を有し、このことがこれらの材料の触り心地をより良くしている。この効果はシルク表面によりもたらされる光沢により達成され、該シルク表面はアラミド繊維の無光沢の外観、又は炭素繊維の黒色の表面よりも魅力的である。例として、ケブラー布は粗く不快な表面の感触により皮膚の付近での又は皮膚での適用にとって最適レベルに到達しない。しかしながらシルクでコーティングされたケブラー布は快適である。
【００１１】
また、産業は、新規の大幅に改善された物理的、化学的及び生物学的な特性及び機能性を示すように、綿又は羊毛等の自然発生的な材料を改良しようと常に試みている。さらに、繊維産業では、綿又は羊毛等の自然発生的な材料に、通気性及び着用の快適性を保持しながら、改善された強度、弾性、曲げ剛性及び／又は運動に対する抵抗性を与えることが望まれる。
【００１２】
本発明者らは驚くべきことに、シルクポリペプチドの使用により、上述の所望の特性を有するコーティングされた自然発生的な材料の製造を可能にする効率性の高いコーティング反応がもたらされることを見出している。
【００１３】
シルクポリペプチドを用いる本発明のコーティング反応により、分子を自然発生的な材料に効率的に接着させ、具体的な用途に合わせた材料、例えばコーティングされた繊維製品、衣類、並びにＵＶ遮断性、抗微生物性及び自浄性を与える活性の高い表面を有する履物用の繊維製品を製造することも可能になる。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００１４】
【特許文献１】国際公開第２００６／００８１６３号
【特許文献２】国際公開第２００６／００２８２７号
【特許文献３】米国仮出願第６０／５９０，１９６号
【特許文献４】国際公開第２００７／０２５７１９号
【特許文献５】国際公開第２００７／０３１３０１号
【非特許文献】
【００１５】
【非特許文献１】Hummerich, D., Helsen, C.W., Oschmann, J., Rudolph, R. &Scheibel, T. （2004）: "Primarystructure elements of dragline silks and their contribution to proteinsolubility and assembly, Biochemistry 43, 13604-13612"
【発明の概要】
【００１６】
第１の態様では、本発明は、不活性材料又は自然発生的な材料をシルクポリペプチドでコーティングする方法であって、
ｉ）少なくとも２つの同一の反復単位を含む少なくとも１つのシルクポリペプチドと溶媒とを含む溶液を準備する工程と、
ｉｉ）不活性材料又は自然発生的な材料上に該溶液を塗布することにより該不活性材料又は該自然発生的な材料を該シルクポリペプチドでコーティングする、塗布することによりコーティングする工程と、
を含む、不活性材料又は自然発生的な材料をシルクポリペプチドでコーティングする方法を提供する。
【００１７】
第２の態様では、本発明は、第１の態様の方法により入手可能なコーティングされた不活性材料又は自然発生的な材料を提供する。
【００１８】
第３の態様では、本発明は、第２の態様のコーティングされた材料を含む製品を提供する。
【００１９】
第４の態様では、本発明は、第２の態様のコーティングされた不活性材料又は自然発生的な材料の使用に関する。
【００２０】
第５の態様では、本発明は、不活性材料を染色するためのシルクポリペプチドの使用に関する。この発明の概要は必ずしも本発明の特徴を全て記載しているわけではない。
【００２１】
本発明を以下で詳細に説明する前に、本発明は本明細書に記載の特定の方法論、プロトコル及び試薬に限定されない（なぜなら、これらの方法論、プロトコル及び試薬は変化し得るものであるためである）ことを理解するべきである。本明細書で用いられる専門用語は特定の実施の形態を説明するためのものにすぎず、本発明の範囲を限定することは意図されず、該範囲は添付の特許請求の範囲でのみ限定されることも理解すべきである。本明細書で他に特に規定されない限り、本明細書で用いられる技術用語及び科学用語は全て、当業者が一般的に理解するものと同じ意味を有する。
【００２２】
好ましくは、本明細書で用いられる用語は、"A multilingual glossary ofbiotechnological terms: （IUPAC Recommendations）", Leuenberger, H.G.W, Nagel, B. and Kolbl, H.編（1995）, Helvetica Chimica Acta, CH-4010 Basel, Switzerland）で記載されるように定義される。
【００２３】
幾つかの文献が本明細書の本文全体を通して引用されている。本明細書で引用される文献（全ての特許、特許出願、科学刊行物、製造業者の仕様書、取扱説明書、ＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号配列寄託書等を含む）の各々が、上記又は下記に関わらず、その全体が参照により本明細書に援用される。本発明が先行発明のためにかかる開示に先行する権利がないことの承認として解釈されるものは本明細書には存在しない。
【００２４】
以下で本発明の要素を説明する。これらの要素を特定の実施の形態とともに挙げるが、付加的な実施の形態を作成するために任意の様式で及び任意の数で該要素を組み合わせることができることを理解すべきである。様々に記載された実施例及び好ましい実施の形態は、本発明を明示的に記載された実施の形態のみに限定するものとは解釈されるべきではない。本記載は明示的に記載された実施の形態を任意の数の開示された及び／又は好ましい要素と組み合わせる実施の形態を支持及び包含するものと理解されるべきである。さらに、本願において記載されたあらゆる要素の任意の並べ替え及び組み合わせは、文脈上他の意味を示していない限り、本願の記載により開示されているとみなすものとする。
【００２５】
本明細書及び添付の特許請求の範囲を通じて、文脈上他の意味に解する必要がある場合を除き、「含む（comprise）」という言葉、及びその変化形（variations such as "comprises"and "comprising"）は、記載の整数若しくは工程、又は整数若しくは工程の群の包含の意図はあるが、任意の他の整数若しくは工程、又は整数若しくは工程の群の排除の意図はないと理解される。
【００２６】
本明細書及び添付の特許請求の範囲に使用される場合、単数形（the singular forms "a","an", and "the"）は、他に文脈上明確に示されていない限り複数の対象を含む。
【００２７】
２つ以上のポリペプチドにおける残基は、該残基がポリペプチド構造において類似の位置を占める場合、互いに「対応する」といわれる。２つ以上のポリペプチドにおける類似の位置は、アミノ酸配列又は構造類似性に基づきポリペプチド配列をアラインメントすることにより決定することができることが当該技術分野で既知である。かかるアラインメントツールは当業者にとって既知であり、例えばワールドワイドウェブ上で入手することができる（例えば、標準的な設定、好ましくはＡｌｉｇｎでは、ＥＭＢＯＳＳ：ｎｅｅｄｌｅ、行列：Ｂｌｏｓｕｍ６２、ギャップ開始（Gap Open）１０．０、ギャップ伸長（Gap Extend）０．５を用いるＣｌｕｓｔａｌＷ（www.ebi.ac.uk/clustalw）又はＡｌｉｇｎ（http://www.ebi.ac.uk/emboss/align/index.html））。
【００２８】
本発明との関連では、「不活性材料」という用語は、高い耐薬品性を有し、僅かに可湿性であるか、若しくは可湿性ではなく、及び／又は穏やかな条件下で、すなわち低温下でかつ毒性溶媒を用いずに重合後に改良を加えることができない材料を表す。
【００２９】
「合成材料」という用語は、本発明との関連で使用される場合、自然において発生するものに対して、人間が製造する又はそうでなければ作り出す材料を表す。「合成」という言葉は、本発明との関連では、人工的に組み立てられることも意味する。
【００３０】
「無機材料」という用語は、本発明との関連で使用される場合、主要素として炭化水素（カーボネート、シアニド及びシアネートを除く）を含有しない材料、つまり植物又は動物以外の、すなわち生体起源ではないものを表す。
【００３１】
「自然発生的な材料」という用語は、本発明との関連で使用される場合、自然に存在する材料を表すが、該自然発生的な材料は改良を加えることが材料のポリマー骨格を著しく変えない限り、例えば漂白、洗浄、伸張、回転等により改良を加え、更には処理することができる。
【００３２】
本発明との関連では、「コーティング」という用語は、コーティング対象の不活性材料又は自然発生的な材料に塗布される被覆を表す。好ましくは、上記「コーティング」は不活性材料又は自然発生的な材料を完全に覆う又は取り囲む。「コーティング」は１ｎｍ〜５０μｍ、好ましくは４０ｎｍ〜５０μｍ、より好ましくは０．５μｍ〜１０μｍ、最も好ましくは１．０μｍ〜５μｍの厚さを有するのが好ましい。
【００３３】
他に示されていない限り、「ポリペプチド」及び「タンパク質」という用語は、本明細書で区別なく使用され、長さ又は翻訳後修飾に関わらず、アミノ酸の任意のペプチド結合した鎖を意味する。
【００３４】
本発明との関連では、「シルクポリペプチド」という用語は、組換え（例えば微生物、昆虫、植物又は哺乳動物の）発現系（すなわちその自然環境から切り離された系）で発現されるシルクポリペプチド若しくはシルクタンパク質（組換えシルクポリペプチド又は組換えシルクタンパク質）、又は天然供給源（例えばクモ、カイコ、イガイ又はハエの幼虫）から採取されるシルクポリペプチド又はタンパク質を表す（他に示されていない限り、これら２つの用語は本明細書で使用される場合、区別されないことに留意する）。好ましくは、「シルクポリペプチド」は単離又は精製される。特に、「精製シルクポリペプチド」又は「単離シルクポリペプチド」は該タンパク質が単離又は誘導される細胞源又は組織源由来の細胞材料又は他の夾雑タンパク質を含まない又は実質的に含まない。「細胞材料を実質的に含まない」シルクポリペプチドという語句は、組換えによる産生の元となる細胞の細胞成分から切り離されたシルクポリペプチドの調製物を含む。このため、細胞材料を実質的に含まないシルクポリペプチドは、約３０％、２０％、１０％、５％又は１％（乾燥重量により）未満の夾雑タンパク質を有するシルクポリペプチドの調製物を含む。
【００３５】
「シルクポリペプチド」は本発明との関連で使用される場合、少なくとも５０％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、好ましくは少なくとも９５％、最も好ましくは１００％の１つの同一の反復単位の多重コピー（例えばＡ２、Ｑ６又はＣ１６（ここで２、６又は１６は反復単位の数を表す））、又は２つ以上の異なる反復単位の多重コピー（例えば（ＡＱ）２４又は（ＡＱ）１２Ｃ１６）を含む又はこれからなるアミノ酸配列を有するポリペプチドを更に表す。シルクポリペプチドは上記タンパク質の検出又は精製を容易にする人工タグ（例えばＴ７タグ）を付加することにより更に改変することができる。
【００３６】
「反復単位」及び「繰り返し単位」という用語は本発明との関連では区別なく使用され得る。
【００３７】
本発明との関連では、「シルクポリペプチド」という用語は、自然発生的なシルクポリペプチドのアミノ酸配列の同一コピー又は自然発生的なシルクポリペプチドのアミノ酸配列の変異体の同一コピー又は両方の組み合わせを含む又はこれからなる少なくとも２つの同一の反復単位を含む又はこれからなるシルクポリペプチドも表す。
【００３８】
本発明との関連では、「反復単位」は、アミノ酸配列において、自然発生的なシルクポリペプチド（例えばＭａＳｐＩ、ＡＤＦ−３、ＡＤＦ−４又はＦｌａｇ）内で反復して発生する少なくとも１つのペプチドモチーフ（例えばＡＡＡＡＡＡ（配列番号１３）又はＧＰＧＱＱ（配列番号４））を含む若しくはこれからなる領域（すなわち同一のアミノ酸配列）、又はそれと実質的に類似のアミノ酸配列（すなわち変動アミノ酸配列）に対応する領域を表す。この点で、「実質的に類似の」は、好ましくはそれぞれの参照となる自然発生的なアミノ酸配列の全長にわたる少なくとも５０％、５１％、５２％、５３％、５４％、５５％、５６％、５７％、５８％、５９％、６０％、６１％、６２％、６３％、６４％、６５％、６６％、６７％、６８％、６９％、７０％、７１％、７２％、７３％、７４％、７５％、７６％、７７％、７８％、７９％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は更には９９．９％のアミノ酸同一性の程度を意味する。自然発生的なシルクポリペプチド内の対応するアミノ酸配列と「実質的に類似の」アミノ酸配列を有する「反復単位」（すなわち野生型反復単位）はその機能特性に関しても類似している。例えば「実質的に類似の反復単位」を含むシルクポリペプチドは依然としてケブラー、羊毛等の合成材料又は自然発生的な材料上にコーティングを形成する能力を有する。好ましくは、「実質的に類似の反復単位」を含むシルクポリペプチドは、各参照（野生型）反復単位を含むシルクポリペプチドを用いて形成することができるのと同様に、１ｎｍ〜５０μｍ、好ましくは４０ｎｍ〜５０μｍ、より好ましくは０．５μｍ〜１０μｍ、最も好ましくは１．０μｍ〜５μｍの厚さのコーティングを形成することが可能である。「実質的に類似の反復単位」を含むシルクポリペプチドで作られたコーティングは、各参照（野生型）反復単位を含むシルクポリペプチドで作られたコーティングと比較して類似の（similar）表面構造（表面起伏）、例えば粗度又は多孔性を有するのも好ましい。「実質的に類似の反復単位」を含むシルクポリペプチドで作られたコーティングは、各参照（野生型）反復単位を含むシルクポリペプチドで作られたコーティングと類似の表面構造及び厚さを示すのが特に好ましい。当業者は電子顕微鏡検査を用いて、コーティングの厚さ又は表面構造（表面起伏）を容易に評価することができる。
【００３９】
自然発生的なシルクポリペプチドのアミノ酸配列と「同一の」アミノ酸配列を有する「反復単位」は例えば、ＭａＳｐ Ｉ（配列番号４３）、ＭａＳｐ ＩＩ（配列番号４４）、ＡＤＦ−３（配列番号１）及び／又はＡＤＦ−４（配列番号２）の１つ又は複数のペプチドモチーフに対応するシルクポリペプチドの一部であり得る。自然発生的なシルクポリペプチドのアミノ酸配列と「実質的に類似の」アミノ酸配列を有する「反復単位」は例えば、ＭａＳｐＩ（配列番号４３）、ＭａＳｐＩＩ（配列番号４４）、ＡＤＦ−３（配列番号１）及び／又はＡＤＦ−４（配列番号２）の１つ又は複数のペプチドモチーフに対応するが、特定のアミノ酸位置に１つ又は複数のアミノ酸置換を有するシルクポリペプチドの一部であり得る。
【００４０】
「反復単位」は、一般的に自然発生的なシルクポリペプチドのカルボキシル末端に存在すると考えられている非反復的な親水性アミノ酸ドメインを含まない。
【００４１】
本発明による「反復単位」は、３個〜２００個又は５個〜１５０個のアミノ酸長、好ましくは１０個〜１００個又は１５個〜８０個のアミノ酸長、より好ましくは１８個〜６０個又は２０個〜４０個のアミノ酸長のアミノ酸配列を更に表す。例えば、本発明による反復単位は、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１１個、１２個、１３個、１４個、１５個、１６個、１７個、１８個、１９個、２０個、２１個、２２個、２３個、２４個、２５個、２６個、２７個、２８個、２９個、３０個、３１個、３２個、３３個、３４個、３５個、３６個、３７個、３８個、３９個、４０個、４１個、４２個、４３個、４４個、４５個、４６個、４７個、４８個、４９個、５０個、５１個、５２個、５３個、５４個、５５個、５６個、５７個、５８個、５９個、６０個、６１個、６２個、６３個、６４個、６５個、６６個、６７個、６８個、６９個、７０個、７１個、７２個、７３個、７４個、７５個、７６個、７７個、７８個、７９個、８０個、８１個、８２個、８３個、８４個、８５個、８６個、８７個、８８個、８９個、９０個、９１個、９２個、９３個、９４個、９５個、９６個、９７個、９８個、９９個、１００個、１０５個、１１０個、１１５個、１２０個、１２５個、１３０個、１３５個、１４０個、１４５個、１５０個、１５５個、１６０個、１６５個、１７０個、１７５個、１８０個、１８５個、１９０個、１９５個又は２００個のアミノ酸長を有し得る。最も好ましくは、本発明による反復単位は、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１２個、１５個、１８個、２０個、２４個、２７個、２８個、３０個、３４個、３５個又は３９個のアミノ酸からなる。
【００４２】
第１の態様では、本発明は、不活性材料又は自然発生的な材料をシルクポリペプチドでコーティングする方法であって、
ｉ）少なくとも２つの同一の反復単位を含む少なくとも１つのシルクポリペプチドと溶媒とを含む溶液を準備する工程と、
ｉｉ）不活性材料又は自然発生的な材料上に該溶液を塗布することにより該不活性材料又は該自然発生的な材料を該シルクポリペプチドでコーティングする、塗布することによりコーティングする工程と、
を含む、これから本質的になる、又はこれからなる、不活性材料又は自然発生的な材料をシルクポリペプチドでコーティングする方法を提供する。
【００４３】
本発明者らは驚くべきことに、シルクポリペプチドが、厳しい反応条件（すなわち高温の適用及び／又は毒性溶媒の使用）を用いることなく、穏やかな反応条件（すなわち低温及び毒性溶媒の不使用）を用いることにより、合成不活性材料又は無機不活性材料（例えばケブラー等のポリアラミド、ポリテトラフルオロエチレン（テフロン登録商標）又は炭素）等の既存の不活性材料に安定して付着することを見出している。上述の方法によるシルクポリペプチドでコーティングされた不活性材料は、コーティングされていない不活性材料と比較して改善された表面の感触（すなわち改善された触感及び／又は平滑表面）を有し、このことが上記材料の人による触り心地をよくしていることも本発明者らにとっては驚くべきことであった。本発明者らは更に驚くべきことに、上述の方法によるシルクポリペプチドでコーティングされた自然発生的な材料が、通気性及び着用の快適性を保持しながら、改善された強度、弾性、曲げ剛性、改善された表面の感触（すなわち改善された触感）及び／又は運動に対する抵抗性を有することを見出している。
【００４４】
好ましくは、本発明の方法ではディップコーティング、スプレーコーティング及び／又はパディングを用いて該溶液を塗布する。
【００４５】
「ディップコーティング」は、（ｉ）不活性材料又は自然発生的な材料を、コーティング材として少なくとも１つのシルクポリペプチド溶液の入ったタンクに浸漬し、（ｉｉ）少なくとも１つのシルクポリペプチドの入ったタンク内で、例えば０．１秒〜１０分の期間、不活性材料又は自然発生的な材料をインキュベートし、（ｉｉｉ）コーティングされた不活性材料又は自然発生的な材料を溶液から取り出し、（ｉｖ）タンクを排水することを意味する。それから、コーティングされた不活性材料又は自然発生的な材料を、（ｖ）例えば加熱チャンバ、放射又はファンを用いて、強制乾燥、ベーキングにより（室温で又は高温で）乾燥することができる。ディップコーティングにより、例えばスピンコーティング手法と同様に薄膜でコーティングされた不活性材料又は自然発生的な材料が作り出される。スピンコーティングは均一な薄膜を不活性材料又は自然発生的な材料に塗布するのに使用される手法である。要するに、過剰量の溶液を上記材料上に配置し、それから遠心力によりシルクポリペプチドを展開させるために、該材料を一定速度、好ましくは１ｍ／分〜１０ｍ／秒で回転させる。スピンコーティングに用いられる機械はスピンコーター、又は単にスピナーと呼ばれる。ディップコーティングの方法は実施例Ｖで例示されるとともに、図１で説明される。
【００４６】
「スプレーコーティング」は、（ｉ）少なくとも１つのシルクポリペプチドを含む溶液をスプレー缶又は噴霧装置に移し、（ｉｉ）不活性材料又は自然発生的な材料上に少なくとも１つのシルクポリペプチドを含む溶液を均一に分配させ、（ｉｉｉ）例えば加熱チャンバ、放射又はファンを用いて、強制乾燥、ベーキングによりコーティングを（室温で又は高温で）乾燥することを意味する。スプレーコーティングの方法は実施例ＶＩで記載されるとともに、図１で説明される。
【００４７】
「パディング」は、（ｉ）不活性材料又は自然発生的な材料を、コーティング材として少なくとも１つのシルクポリペプチドを含有する溶液に浸漬し又は漬け込み、（ｉｉ）少なくとも１つのシルクポリペプチドを有する溶液中で、例えば０．１秒〜１０分の期間、不活性材料又は自然発生的な材料をインキュベートし、（ｉｉｉ）コーティングされた不活性材料又は自然発生的な材料を溶液から取り出し、（ｉｖ）コーティングされた不活性材料又は自然発生的な材料を１対のローラーに通し、余分なシルクポリペプチド（溶液）を搾り出すことを意味する。それから、コーティングされた不活性材料又は自然発生的な材料を、（ｖ）例えば加熱チャンバ、放射又はファンを用いて、強制乾燥、ベーキングにより（室温で又は高温で）乾燥することができる。
【００４８】
本発明の方法に使用されるシルクポリペプチドは好ましくは、６個〜１５００個のアミノ酸、又は２００個〜１３００個のアミノ酸、最も好ましくは２５０個〜１２００個のアミノ酸、又は５００個〜１０００個のアミノ酸からなる。
【００４９】
好ましくは、本発明の方法に使用されるシルクポリペプチドは、２個〜８０個の反復単位、３個〜８０個の反復単位若しくは４個〜６０個の反復単位、より好ましくは８個〜４８個の反復単位、又は１０個〜４０個の反復単位、最も好ましくは１６個〜３２個の反復単位を含む、本質的にこれからなる又はこれからなる。例えば、本発明の方法に使用されるシルクポリペプチドは、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１１個、１２個、１３個、１４個、１５個、１６個、１７個、１８個、１９個、２０個、２１個、２２個、２３個、２４個、２５個、２６個、２７個、２８個、２９個、３０個、３１個、３２個、３３個、３４個、３５個、３６個、３７個、３８個、３９個、４０個、４１個、４２個、４３個、４４個、４５個、４６個、４７個、４８個、４９個、５０個、５１個、５２個、５３個、５４個、５５個、５６個、５７個、５８個、５９個、６０個、６１個、６２個、６３個、６４個、６５個、６６個、６７個、６８個、６９個、７０個、７１個、７２個、７３個、７４個、７５個、７６個、７７個、７８個、７９個又は８０個の反復単位を含み得る又はこれからなり得る。最も好ましくは、シルクポリペプチドは、４個、８個、１２個、１６個、２４個、３２個又は４８個の反復単位を含む。上述のように、本発明の方法に使用されるシルクポリペプチドに含まれる反復単位のうち少なくとも２つが同一の反復単位である。このため、本発明の方法に使用されるシルクポリペプチドは、１つの同一の反復単位の多重コピー（例えばＡ２又はＣ１６（ここで２又は６は反復単位の数を表す））、又は２つ以上の異なる反復単位の多重コピー（例えば（ＡＱ）２４又は（ＱＡＱ）８）を含み得る。例えば、本発明の方法に使用されるシルクポリペプチドに含まれ得る８０個の反復単位のうち２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１１個、１２個、１３個、１４個、１５個、１６個、１７個、１８個、１９個、２０個、２１個、２２個、２３個、２４個、２５個、２６個、２７個、２８個、２９個、３０個、３１個、３２個、３３個、３４個、３５個、３６個、３７個、３８個、３９個、４０個、４１個、４２個、４３個、４４個、４５個、４６個、４７個、４８個、４９個、５０個、５１個、５２個、５３個、５４個、５５個、５６個、５７個、５８個、５９個、６０個、６１個、６２個、６３個、６４個、６５個、６６個、６７個、６８個、６９個、７０個、７１個、７２個、７３個、７４個、７５個、７６個、７７個、７８個、７９個又は８０個が、同一の反復単位であり得る。
【００５０】
本発明の方法に使用されるシルクポリペプチドは、当業者に既知の任意のシルクポリペプチドのアミノ酸配列を含み得る又はこれからなり得る。本発明の方法に使用されるシルクポリペプチドは、節足動物シルクポリペプチド、好ましくはスパイダーシルクポリペプチド、又は昆虫シルクポリペプチドのアミノ酸配列を含む又はこれからなるのが好ましい。また本発明の方法に使用されるシルクポリペプチドは、イガイシルクポリペプチドのアミノ酸配列を含み得る又はこれからなり得る。
【００５１】
スパイダーシルクポリペプチドは、大瓶状腺（major ampullate gland）ポリペプチド（ＭａＳｐ）、例えばドラグラインスパイダーシルクポリペプチド、小瓶状腺（minor ampullate gland）ポリペプチド（ＭｉＳｐ）、鞭毛状ポリペプチド、凝集スパイダーシルクポリペプチド、房状スパイダーシルクポリペプチド、又は梨状スパイダーシルクポリペプチドのアミノ酸配列を含む又はこれからなることが好ましい。最も好ましくは、スパイダーシルクポリペプチドは、ドラグラインスパイダーシルクポリペプチド又は鞭毛状スパイダーシルクポリペプチドのアミノ酸配列を含む又はこれからなる。概してコガネグモ科及びコガネグモ上科（Araneoids）の円網を張るクモのドラグラインポリペプチド又は鞭毛状ポリペプチドのドラグラインポリペプチド又は鞭毛状ポリペプチドのアミノ酸配列を選択するのが好ましい。
【００５２】
昆虫のシルクポリペプチドは、鱗翅目の昆虫のシルクポリペプチドのアミノ酸配列を含む又はこれからなることが好ましい。より好ましくは、昆虫のシルクポリペプチドは、カイコガ科の、最も好ましくはカイコのシルクポリペプチドのアミノ酸配列を含む又はこれからなる。
【００５３】
好ましくは、上述のシルクポリペプチドは組換えにより生成される、すなわち組換え型のシルクポリペプチドである。例えば本発明の方法に使用されるシルクポリペプチドは組換え型のスパイダーシルクポリペプチド（ドラグラインスパイダーシルクポリペプチド若しくは鞭毛状スパイダーシルクポリペプチド等）、組換え型の昆虫シルクポリペプチド、又は組換え型のイガイシルクポリペプチドである。
【００５４】
本発明との関連では、「溶液」という用語は、シルクポリペプチドと溶媒とを含有し、コーティングに適した任意の液体混合物を意味する。
【００５５】
本発明の方法で提供される溶液は、少なくとも一種類のシルクポリペプチドを含む。好ましくは、本発明の方法で提供される溶液は、２種類、３種類、４種類、５種類、６種類、７種類、８種類、９種類又は１０種類の異なるシルクポリペプチド、最も好ましくは２種類の異なるシルクポリペプチドを含む。例えば、該溶液はそのアミノ酸配列が互いに異なる２種類のドラグラインスパイダーシルクポリペプチドを含むことができる。本発明の方法で提供される溶液は、その天然起源が互いに異なるドラグラインスパイダーシルクポリペプチド及び鞭毛状スパイダーシルクポリペプチドも含むことができる。ドラグラインスパイダーシルクポリペプチドは大瓶状腺由来であり、鞭毛状ポリペプチドは鞭状腺由来である。
【００５６】
本発明の方法に使用されるシルクポリペプチド反復単位は、当業者に既知の自然発生的なシルクポリペプチド内で繰り返し生じる少なくとも１つのペプチドモチーフを含む又はこれからなる任意の領域のアミノ酸配列を含み得る又はこれからなり得る。好ましくは、本発明の方法に使用されるシルクポリペプチドの反復単位は、節足動物シルクポリペプチド内で、より好ましくはスパイダーシルクポリペプチド又は昆虫シルクポリペプチド内で繰り返し生じる少なくとも１つのペプチドモチーフを含む又はこれからなる領域のアミノ酸配列を含む又はこれからなる。また本発明の方法に使用されるシルクポリペプチドの反復単位は、イガイシルクポリペプチド内で繰り返し生じる少なくとも１つのペプチドモチーフを含む又はこれからなる領域のアミノ酸配列を含み得る又はこれからなり得る。
【００５７】
スパイダーシルクの反復単位は、自然発生的な大瓶状腺ポリペプチド（ＭａＳｐ）、例えばドラグラインスパイダーシルクポリペプチド、小瓶状腺ポリペプチド（ＭｉＳｐ）、鞭毛状ポリペプチド、凝集スパイダーシルクポリペプチド、房状スパイダーシルクポリペプチド、又は梨状スパイダーシルクポリペプチド内で繰り返し生じる少なくとも１つのペプチドモチーフを含む又はこれからなる領域のアミノ酸配列を含む又はこれからなるのが好ましい。最も好ましくは、反復単位は自然発生的なドラグラインスパイダーシルクポリペプチド又は鞭毛状スパイダーシルクポリペプチド内で繰り返し生じる少なくとも１つのペプチドモチーフを含む又はこれからなる領域のアミノ酸配列を含む又はこれからなる。
【００５８】
昆虫シルクの反復単位は、鱗翅目の昆虫の自然発生的なシルクポリペプチド内で繰り返し生じる少なくとも１つのペプチドモチーフを含む又はこれからなる領域のアミノ酸配列を含む又はこれからなるのが好ましい。より好ましくは、昆虫シルクの反復単位は、カイコガ科の昆虫、最も好ましくはカイコガ（Bombyx mori）の自然発生的な昆虫シルクポリペプチド内で繰り返し生じる少なくとも１つのペプチドモチーフを含む又はこれからなる領域のアミノ酸配列を含む又はこれからなる。
【００５９】
「コンセンサス配列」という用語は本発明との関連で使用する場合、或る特定の位置における発生頻度が高いアミノ酸（例えば「Ｇ」）を含有し、更に決定されていない他のアミノ酸をプレースホルダー「Ｘ」に置き換えたアミノ酸配列を表す。
【００６０】
好ましくは、本発明の方法に使用されるシルクポリペプチドは、各々が、
ｉ）ＧＰＧＸＸ（配列番号３）（ここでＸは任意のアミノ酸であり、好ましくはそれぞれの場合で独立してＡ、Ｓ、Ｇ、Ｙ、Ｐ及びＱから選択される任意のアミノ酸である）、
ｉｉ）ＧＧＸ（ここでＸは任意のアミノ酸であり、好ましくはそれぞれの場合で独立してＹ、Ｐ、Ｒ、Ｓ、Ａ、Ｔ、Ｎ及びＱから選択され、より好ましくはそれぞれの場合で独立してＹ、Ｐ及びＱから選択される任意のアミノ酸である）、
ｉｉｉ）Ａｘ（ここでｘは５〜１０の整数である）
からなる群から選択されるコンセンサス配列を少なくとも１つ、好ましくは１つ含む、少なくとも２つの同一の反復単位を含む、これから本質的になる、又はこれからなる。
【００６１】
本発明の方法に使用されるシルクポリペプチドが、各々がＧＧＲＰＳＤＴＹＧ（配列番号１８）及びＧＧＲＰＳＳＳＹＧ（配列番号１９）からなる群から選択されるアミノ酸配列を少なくとも１つ、好ましくは１つ含む少なくとも２つの同一の反復単位を含む、又はこれからなることも好ましい。
【００６２】
反復（ペプチド）モチーフＧＰＧＸＸ（配列番号３）及びＧＧＸ、すなわち高グリシンモチーフは、シルクポリペプチドに、このため上記モチーフを含有するシルクタンパク質から形成される糸に柔軟性を与える。詳細には、反復ＧＰＧＸＸ（配列番号３）モチーフはβ−ターンらせん構造を形成し、シルクポリペプチドに弾性を付与する。大瓶状腺シルク及び鞭毛状シルクは両方ともＧＰＧＸＸ（配列番号３）モチーフを有する。反復ＧＧＸモチーフは１つのターン当たり３つのアミノ酸を有するヘリックス構造に関連し、ほとんどのスパイダーシルクで見られる。ＧＧＸモチーフはシルクに付加的な弾性を与えることができる。反復ポリアラニンＡｘ（ペプチド）モチーフはシルクポリペプチドに強度を与える結晶性β−シート構造を形成する（国際公開第０３／０５７７２７号）。ＧＧＲＰＳＤＴＹＧ（配列番号１８）及びＧＧＲＰＳＳＳＹＧ（配列番号１９）（ペプチド）モチーフは、レジリン（国際公開第０８／１５５３０４号）から選択されている。レジリンはほとんどの節足動物（節足動物門）で見られる弾性タンパク質である。レジリンは角皮の特定領域に位置しており、低剛性及び高強度を与える（Elvin et al., Nature（437）: 999-1002, 2005）。
【００６３】
このため本発明の好ましい実施の形態では、シルクポリペプチドは、各々がＧＰＧＡＳ（配列番号５）、ＧＰＧＳＧ（配列番号６）、ＧＰＧＧＹ（配列番号７）、ＧＰＧＧＰ（配列番号８）、ＧＰＧＧＡ（配列番号９）、ＧＰＧＱＱ（配列番号４）、ＧＰＧＧＧ（配列番号１０）、ＧＰＧＱＧ（配列番号４０）及びＧＰＧＧＳ（配列番号１１）からなる群から選択されるアミノ酸配列を少なくとも１つ（例えば１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、６つ、７つ、８つ又は９つ）、好ましくは１つ含む反復単位を含む、又はこれからなる。本発明の別の好ましい実施の形態では、シルクポリペプチドは、各々がＧＧＹ、ＧＧＰ、ＧＧＡ、ＧＧＲ、ＧＧＳ、ＧＧＴ、ＧＧＮ及びＧＧＱからなる群から選択されるアミノ酸配列を少なくとも１つ（例えば１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、８つ、７つ又は８つ）、好ましくは１つ含む反復単位を含む、又はこれからなる。本発明の更に好ましい実施の形態では、シルクポリペプチドは、各々がＡＡＡＡＡ（配列番号１２）、ＡＡＡＡＡＡ（配列番号１３）、ＡＡＡＡＡＡＡ（配列番号１４）、ＡＡＡＡＡＡＡＡ（配列番号１５）、ＡＡＡＡＡＡＡＡＡ（配列番号１６）及びＡＡＡＡＡＡＡＡＡＡ（配列番号１７）からなる群から選択されるアミノ酸配列を少なくとも１つ（例えば１つ、２つ、３つ、４つ、５つ又は６つ）、好ましくは１つ含む反復単位を含む、又はこれからなる。
【００６４】
本発明の別の好ましい実施の形態では、シルクポリペプチドは、各々がＧＰＧＡＳ（配列番号５）、ＧＰＧＳＧ（配列番号６）、ＧＰＧＧＹ（配列番号７）、ＧＰＧＧＰ（配列番号８）、ＧＰＧＧＡ（配列番号９）、ＧＰＧＱＱ（配列番号４）、ＧＰＧＧＧ（配列番号１０）、ＧＰＧＱＧ（配列番号４０）、ＧＰＧＧＳ（配列番号１１）、ＧＧＹ、ＧＧＰ、ＧＧＡ、ＧＧＲ、ＧＧＳ、ＧＧＴ、ＧＧＮ、ＧＧＱ、ＡＡＡＡＡ（配列番号１２）、ＡＡＡＡＡＡ（配列番号１３）、ＡＡＡＡＡＡＡ（配列番号１４）、ＡＡＡＡＡＡＡＡ（配列番号１５）、ＡＡＡＡＡＡＡＡＡ（配列番号１６）、ＡＡＡＡＡＡＡＡＡＡ（配列番号１７）、ＧＧＲＰＳＤＴＹＧ（配列番号１８）、及びＧＧＲＰＳＳＳＹＧ（配列番号１９）からなる群から選択されるアミノ酸配列を少なくとも１つ（例えば１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１１個、１２個、１３個、１４個、１５個、１６個、１７個、１８個、１９個、２０個、２１個、２２個、２３個、２４個又は２５個）、好ましくは１つ含む反復単位を含む、又はこれからなる。
【００６５】
最も好ましくは、本発明の方法に使用されるシルクポリペプチドは、
（ｉ）アミノ酸配列として、好ましくはこの順番でＧＰＧＡＳ（配列番号５）、ＡＡＡＡＡＡ（配列番号１３）、ＧＧＹ及びＧＰＧＳＧ（配列番号６）、
（ｉｉ）アミノ酸配列として、好ましくはこの順番でＡＡＡＡＡＡＡＡ（配列番号１５）、ＧＰＧＧＹ（配列番号７）、ＧＰＧＧＹ（配列番号７）及びＧＰＧＧＰ（配列番号８）、
（ｉｉｉ）アミノ酸配列として、ＧＰＧＱＱ（配列番号４）、ＧＰＧＱＱ（配列番号４）、ＧＰＧＱＱ（配列番号４）及びＧＰＧＱＱ（配列番号４）、
（ｉｖ）アミノ酸配列として、好ましくはこの順番でＧＰＧＧＡ（配列番号９）、ＧＧＰ、ＧＰＧＧＡ（配列番号９）、ＧＧＰ、ＧＰＧＧＡ（配列番号９）及びＧＧＰ、
（ｖ）アミノ酸配列として、好ましくはこの順番でＡＡＡＡＡＡＡＡ（配列番号１５）、ＧＰＧＱＧ（配列番号４０）及びＧＧＲ、
（ｖｉ）アミノ酸配列として、好ましくはこの順番でＡＡＡＡＡＡＡＡ（配列番号１５）、ＧＰＧＧＧ（配列番号１０）、ＧＧＲ、ＧＧＮ及びＧＧＲ、
（ｖｉｉ）アミノ酸配列として、好ましくはこの順番でＧＧＡ、ＧＧＡ、ＧＧＡ、ＧＧＳ、ＧＧＡ及びＧＧＳ、並びに／又は
（ｖｉｉｉ）アミノ酸配列として、好ましくはこの順番でＧＰＧＧＡ（配列番号９）、ＧＰＧＧＹ（配列番号７）、ＧＰＧＧＳ（配列番号１１）、ＧＰＧＧＹ（配列番号７）、ＧＰＧＧＳ（配列番号１１）及びＧＰＧＧＹ（配列番号７）
を含むか又はこれからなる反復単位を含む、これから本質的になる、又はこれからなる。
【００６６】
上述のシルクポリペプチドに含まれる反復単位のうち少なくとも２つが同一の反復単位であることに留意すべきである。
【００６７】
好ましくは、本発明の方法に使用されるシルクポリペプチドは、２個〜８０個の反復単位、３個〜８０個の反復単位若しくは４個〜６０個の反復単位、より好ましくは８個〜４８個の反復単位、又は１０個〜４０個の反復単位、最も好ましくは１６個〜３２個の反復単位、すなわち２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１１個、１２個、１３個、１４個、１５個、１６個、１７個、１８個、１９個、２０個、２１個、２２個、２３個、２４個、２５個、２６個、２７個、２８個、２９個、３０個、３１個、３２個、３３個、３４個、３５個、３６個、３７個、３８個、３９個、４０個、４１個、４２個、４３個、４４個、４５個、４６個、４７個、４８個、４９個、５０個、５１個、５２個、５３個、５４個、５５個、５６個、５７個、５８個、５９個、６０個、６１個、６２個、６３個、６４個、６５個、６６個、６７個、６８個、６９個、７０個、７１個、７２個、７３個、７４個、７５個、７６個、７７個、７８個、７９個又は８０個の反復単位（各々が、
ｉ）ＧＰＧＸＸ（配列番号３）（ここでＸは任意のアミノ酸であり、好ましくはそれぞれの場合で独立してＡ、Ｓ、Ｇ、Ｙ、Ｐ及びＱから選択される任意のアミノ酸である）、
ｉｉ）ＧＧＸ（ここでＸは任意のアミノ酸であり、好ましくはそれぞれの場合で独立してＹ、Ｐ、Ｒ、Ｓ、Ａ、Ｔ、Ｎ及びＱから選択され、より好ましくはそれぞれの場合で独立してＹ、Ｐ及びＱから選択される任意のアミノ酸である）、及び
ｉｉｉ）Ａｘ（ここでｘは５〜１０の整数である）
からなる群から選択されるコンセンサス配列を少なくとも１つ、好ましくは１つ含む）を含む、これから本質的になる、又はこれからなる。上述のように、本発明の方法に使用されるシルクポリペプチドに含まれる反復単位のうち少なくとも２つが同一の反復単位である。
【００６８】
本発明の方法に使用されるシルクポリペプチドが、２個〜８０個の反復単位、３個〜８０個の反復単位若しくは４個〜６０個の反復単位、より好ましくは８個〜４８個の反復単位又は１０個〜４０個の反復単位、最も好ましくは１６個〜３２個の反復単位（各々がＧＧＲＰＳＤＴＹＧ（配列番号１８）及びＧＧＲＰＳＳＳＹＧ（配列番号１９）からなる群から選択されるアミノ酸配列を少なくとも１つ、好ましくは１つ含む）を含む、又はこれからなることも好ましい。
【００６９】
このため、本発明の方法に使用されるシルクポリペプチドは好ましくは、２個〜８０個の反復単位、３個〜８０個の反復単位若しくは４個〜６０個の反復単位、より好ましくは８個〜４８個の反復単位又は１０個〜４０個の反復単位、最も好ましくは１６個〜３２個の反復単位、すなわち２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１１個、１２個、１３個、１４個、１５個、１６個、１７個、１８個、１９個、２０個、２１個、２２個、２３個、２４個、２５個、２６個、２７個、２８個、２９個、３０個、３１個、３２個、３３個、３４個、３５個、３６個、３７個、３８個、３９個、４０個、４１個、４２個、４３個、４４個、４５個、４６個、４７個、４８個、４９個、５０個、５１個、５２個、５３個、５４個、５５個、５６個、５７個、５８個、５９個、６０個、６１個、６２個、６３個、６４個、６５個、６６個、６７個、６８個、６９個、７０個、７１個、７２個、７３個、７４個、７５個、７６個、７７個、７８個、７９個又は８０個の反復単位（各々がＧＰＧＡＳ（配列番号５）、ＧＰＧＳＧ（配列番号６）、ＧＰＧＧＹ（配列番号７）、ＧＰＧＧＰ（配列番号８）、ＧＰＧＧＡ（配列番号９）、ＧＰＧＱＱ（配列番号４）、ＧＰＧＱＧ（配列番号４０）、ＧＰＧＧＧ（配列番号１０）、ＧＰＧＧＳ（配列番号１１）、ＧＧＹ、ＧＧＰ、ＧＧＡ、ＧＧＲ、ＧＧＳ、ＧＧＴ、ＧＧＮ、ＧＧＱ、ＡＡＡＡＡ（配列番号１２）、ＡＡＡＡＡＡ（配列番号１３）、ＡＡＡＡＡＡＡ（配列番号１４）、ＡＡＡＡＡＡＡＡ（配列番号１５）、ＡＡＡＡＡＡＡＡＡ（配列番号１６）、ＡＡＡＡＡＡＡＡＡＡ（配列番号１７）、ＧＧＲＰＳＤＴＹＧ（配列番号１８）、及びＧＧＲＰＳＳＳＹＧ（配列番号１９）からなる群から選択されるアミノ酸配列を少なくとも１つ（例えば１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１１個、１２個、１３個、１４個、１５個、１６個、１７個、１８個、１９個、２０個、２１個、２２個、２３個、２４個又は２５個）、好ましくは１つ含む）を含む、又はこれからなる。
【００７０】
最も好ましくは、本発明の方法に使用されるシルクポリペプチドは、
（ｉ）アミノ酸配列として、好ましくはこの順番でＧＰＧＡＳ（配列番号５）、ＡＡＡＡＡＡ（配列番号１３）、ＧＧＹ及びＧＰＧＳＧ（配列番号６）を含む又はこれからなる反復単位、
（ｉｉ）アミノ酸配列として、好ましくはこの順番でＡＡＡＡＡＡＡＡ（配列番号１５）、ＧＰＧＧＹ（配列番号７）、ＧＰＧＧＹ（配列番号７）及びＧＰＧＧＰ（配列番号８）を含む又はこれからなる反復単位、
（ｉｉｉ）アミノ酸配列として、ＧＰＧＱＱ（配列番号４）、ＧＰＧＱＱ（配列番号４）、ＧＰＧＱＱ（配列番号４）及びＧＰＧＱＱ（配列番号４）を含む又はこれからなる反復単位、
（ｉｖ）アミノ酸配列として、好ましくはこの順番でＧＰＧＧＡ（配列番号９）、ＧＧＰ、ＧＰＧＧＡ（配列番号９）、ＧＧＰ、ＧＰＧＧＡ（配列番号９）及びＧＧＰを含む又はこれからなる反復単位、
（ｖ）アミノ酸配列として、好ましくはこの順番でＡＡＡＡＡＡＡＡ（配列番号１５）、ＧＰＧＱＧ（配列番号４０）及びＧＧＲを含む又はこれからなる反復単位、
（ｖｉ）アミノ酸配列として、好ましくはこの順番でＡＡＡＡＡＡＡＡ（配列番号１５）、ＧＰＧＧＧ（配列番号１０）、ＧＧＲ、ＧＧＮ及びＧＧＲを含む又はこれからなる反復単位、
（ｖｉｉ）アミノ酸配列として、好ましくはこの順番でＧＧＡ、ＧＧＡ、ＧＧＡ、ＧＧＳ、ＧＧＡ及びＧＧＳを含む又はこれからなる反復単位、並びに／又は
（ｖｉｉｉ）アミノ酸配列として、好ましくはこの順番でＧＰＧＧＡ（配列番号９）、ＧＰＧＧＹ（配列番号７）、ＧＰＧＧＳ（配列番号１１）、ＧＰＧＧＹ（配列番号７）、ＧＰＧＧＳ（配列番号１１）及びＧＰＧＧＹ（配列番号７）を含む又はこれからなる反復単位
を含む、これから本質的になる、又はこれからなる。
【００７１】
上述のシルクポリペプチドに含まれる反復単位のうち少なくとも２つが同一の反復単位であることに留意すべきである。
【００７２】
好ましくは、本発明の方法に使用されるシルクポリペプチドは、
（ｉ）反復単位として（ＧＰＧＸＸ）ｎ（配列番号３）（ここでＸは任意のアミノ酸であり、好ましくはそれぞれの場合で独立してＡ、Ｓ、Ｇ、Ｙ、Ｐ及びＱから選択され、ｎは２、３、４、５、６、７、８又は９である）、
ｉｉ）反復単位として（ＧＧＸ）ｎ（ここでＸは任意のアミノ酸であり、好ましくはそれぞれの場合で独立してＹ、Ｐ、Ｒ、Ｓ、Ａ、Ｔ、Ｎ及びＱから選択され、より好ましくはそれぞれの場合で独立してＹ、Ｐ及びＱから選択される任意のアミノ酸であり、ｎは２、３、４、５、６、７又は８である）、及び／又は
ｉｉｉ）反復単位として（Ａｘ）ｎ（ここでｘは５〜１０の整数であり、ｎは２、３、４、５、６、７、８、９又は１０である）
を含む、これから本質的になる、又はこれからなる。上述のように、本発明の方法に使用されるシルクポリペプチドに含まれる反復単位のうち少なくとも２つは同一の反復単位である。
【００７３】
反復単位は独立して、モジュールＡ（配列番号２０）、モジュールＣ（配列番号２１）、モジュールＱ（配列番号２２）、モジュールＫ（配列番号２３）、モジュールｓｐ（配列番号２４）、モジュールＳ（配列番号２５）、モジュールＲ（配列番号２６）、モジュールＸ（配列番号２７）若しくはモジュールＹ（配列番号２８）、又はその変異体（すなわちモジュールＡ変異体、モジュールＣ変異体、モジュールＱ変異体、モジュールＫ変異体、モジュールｓｐ変異体、モジュールＳ変異体、モジュールＲ変異体、モジュールＸ変異体又はモジュールＹ変異体）から選択されるのが好ましい。モジュールＡ（配列番号２０）及びモジュールＱ（配列番号２２）はニワオニグモのＡＤＦ−３のアミノ酸配列をベースにしている。モジュールＣ（配列番号２１）はニワオニグモのＡＤＦ−４のアミノ酸配列をベースにしている。モジュールＫ（配列番号２３）、モジュールｓｐ（配列番号２４）、モジュールＸ（配列番号２７）及びモジュールＹ（配列番号２８）はアメリカジョロウグモの鞭毛状タンパク質ＦＬＡＧのアミノ酸配列をベースにしている（国際公開第２００６／００８１６３号）。モジュールＳ（配列番号２５）及びモジュールＲ（配列番号２６）はレジリン（節足動物門）をベースにしている（国際公開第２００８／１５５３０４号）。
【００７４】
このため本発明の好ましい実施の形態では、シルクポリペプチドの反復単位は、モジュールＡ：ＧＰＹＧＰＧＡＳＡＡＡＡＡＡＧＧＹＧＰＧＳＧＱＱ（配列番号２０）、モジュールＣ：ＧＳＳＡＡＡＡＡＡＡＡＳＧＰＧＧＹＧＰＥＮＱＧＰＳＧＰＧＧＹＧＰＧＧＰ（配列番号２１）、モジュールＱ：ＧＰＧＱＱＧＰＧＱＱＧＰＧＱＱＧＰＧＱＱ（配列番号２２）、モジュールＫ：ＧＰＧＧＡＧＧＰＹＧＰＧＧＡＧＧＰＹＧＰＧＧＡＧＧＰＹ（配列番号２３）、モジュールｓｐ：ＧＧＴＴＩＩＥＤＬＤＩＴＩＤＧＡＤＧＰＩＴＩＳＥＥＬＴＩ（配列番号２４）、モジュールＳ：ＰＧＳＳＡＡＡＡＡＡＡＡＳＧＰＧＱＧＱＧＱＧＱＧＱＧＧＲＰＳＤＴＹＧ（配列番号２５）、モジュールＲ：ＳＡＡＡＡＡＡＡＡＧＰＧＧＧＮＧＧＲＰＳＤＴＹＧＡＰＧＧＧＮＧＧＲＰＳＳＳＹＧ（配列番号２６）、モジュールＸ：ＧＧＡＧＧＡＧＧＡＧＧＳＧＧＡＧＧＳ（配列番号２７）若しくはモジュールＹ：ＧＰＧＧＡＧＰＧＧＹＧＰＧＧＳＧＰＧＧＹＧＰＧＧＳＧＰＧＧＹ（配列番号２８）、又はそれらの変異体からなる。
【００７５】
好ましくは、本発明の方法に使用されるシルクポリペプチドは、２個〜８０個の反復単位、３個〜８０個の反復単位若しくは４個〜６０個の反復単位、より好ましくは８個〜４８個の反復単位又は１０個〜４０個の反復単位、最も好ましくは１６個〜３２個の反復単位、すなわち２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１１個、１２個、１３個、１４個、１５個、１６個、１７個、１８個、１９個、２０個、２１個、２２個、２３個、２４個、２５個、２６個、２７個、２８個、２９個、３０個、３１個、３２個、３３個、３４個、３５個、３６個、３７個、３８個、３９個、４０個、４１個、４２個、４３個、４４個、４５個、４６個、４７個、４８個、４９個、５０個、５１個、５２個、５３個、５４個、５５個、５６個、５７個、５８個、５９個、６０個、６１個、６２個、６３個、６４個、６５個、６６個、６７個、６８個、６９個、７０個、７１個、７２個、７３個、７４個、７５個、７６個、７７個、７８個、７９個又は８０個の反復単位（独立して、モジュールＡ（配列番号２０）、モジュールＣ（配列番号２１）、モジュールＱ（配列番号２２）、モジュールＫ（配列番号２３）、モジュールｓｐ（配列番号２４）、モジュールＳ（配列番号２５）、モジュールＲ（配列番号２６）、モジュールＸ（配列番号２７）若しくはモジュールＹ（配列番号２８）、又はその変異体（すなわちモジュールＡ変異体、モジュールＣ変異体、モジュールＱ変異体、モジュールＫ変異体、モジュールｓｐ変異体、モジュールＳ変異体、モジュールＲ変異体、モジュールＸ変異体又はモジュールＹ変異体）から選択される）を含む、これから本質的になる、又はこれからなる。本発明の方法に使用されるシルクポリペプチドに含まれる反復単位のうち少なくとも２つが同一の反復単位（モジュール）であることに留意すべきである。
【００７６】
このため、本発明の方法に使用されるシルクポリペプチドは、（ｉ）モジュールＡからなる反復単位（複数も可）及び／若しくはモジュールＡ変異体からなる反復単位（複数も可）、（ｉｉ）モジュールＣからなる反復単位（複数も可）及び／若しくはモジュールＣ変異体からなる反復単位（複数も可）、（ｉｉｉ）モジュールＱからなる反復単位（複数も可）及び／若しくはモジュールＱ変異体からなる反復単位（複数も可）、（ｉｖ）（ａ）モジュールＡからなる反復単位（複数も可）及びモジュールＱからなる反復単位（複数も可）、（ｂ）モジュールＡからなる反復単位（複数も可）及びモジュールＱ変異体からなる反復単位（複数も可）、（ｃ）モジュールＡ変異体からなる反復単位（複数も可）及びモジュールＱからなる反復単位（複数も可）、（ｄ）モジュールＡ変異体からなる反復単位（複数も可）及びモジュールＱ変異体からなる反復単位（複数も可）、（ｖ）（ａ）モジュールＡからなる反復単位（複数も可）及びモジュールＣからなる反復単位（複数も可）、（ｂ）モジュールＡからなる反復単位（複数も可）及びモジュールＣ変異体からなる反復単位（複数も可）、（ｃ）モジュールＡ変異体からなる反復単位（複数も可）及びモジュールＣからなる反復単位（複数も可）、（ｄ）モジュールＡ変異体からなる反復単位（複数も可）及びモジュールＣ変異体からなる反復単位（複数も可）、（ｖｉ）（ａ）モジュールＣからなる反復単位（複数も可）及びモジュールＱからなる反復単位（複数も可）、（ｂ）モジュールＣからなる反復単位（複数も可）及びモジュールＱ変異体からなる反復単位（複数も可）、（ｃ）モジュールＣ変異体からなる反復単位（複数も可）及びモジュールＱからなる反復単位（複数も可）、（ｄ）モジュールＣ変異体からなる反復単位（複数も可）及びモジュールＱ変異体からなる反復単位（複数も可）、又は（ｖｉｉ）（ａ）モジュールＡからなる反復単位（複数も可）、モジュールＱからなる反復単位（複数も可）及びモジュールＣからなる反復単位（複数も可）、（ｂ）モジュールＡからなる反復単位（複数も可）、モジュールＱからなる反復単位（複数も可）及びモジュールＣ変異体からなる反復単位（複数も可）、（ｃ）モジュールＡからなる反復単位（複数も可）、モジュールＱ変異体からなる反復単位（複数も可）及びモジュールＣからなる反復単位（複数も可）、（ｄ）モジュールＡ変異体からなる反復単位（複数も可）、モジュールＱからなる反復単位（複数も可）及びモジュールＣからなる反復単位（複数も可）、（ｅ）モジュールＡからなる反復単位（複数も可）、モジュールＱ変異体からなる反復単位（複数も可）及びモジュールＣ変異体からなる反復単位（複数も可）、（ｆ）モジュールＡ変異体からなる反復単位（複数も可）、モジュールＱ変異体からなる反復単位（複数も可）及びモジュールＣからなる反復単位（複数も可）、（ｇ）モジュールＡ変異体からなる反復単位（複数も可）、モジュールＱからなる反復単位（複数も可）及びモジュールＣ変異体からなる反復単位（複数も可）、（ｈ）モジュールＡ変異体からなる反復単位（複数も可）、モジュールＱ変異体からなる反復単位（複数も可）及びモジュールＣ変異体からなる反復単位（複数も可）を含む、これから本質的になる、又はこれからなるのが好ましい。
【００７７】
本発明の方法に使用されるシルクポリペプチドは少なくとも２つの同一の反復単位を含む又はこれからなるという条件で、モジュールＡ、モジュールＣ、モジュールＱ、モジュールＫ、モジュールｓｐ、モジュールＳ、モジュールＲ、モジュールＸ、モジュールＹ、又はその変異体（すなわちモジュールＡ変異体、モジュールＣ変異体、モジュールＱ変異体、モジュールＫ変異体、モジュールｓｐ変異体、モジュールＳ変異体、モジュールＲ変異体、モジュールＸ変異体又はモジュールＹ変異体）を各々の任意の組み合わせ及び任意の数で互いに組み合わせることもできる、すなわち例えば、モジュール（反復単位）Ａをモジュール（反復単位）Ｑと組み合わせることができ（すなわち組み合わせＡＱ）、モジュール（反復単位）Ｃをモジュール（反復単位）Ｑと組み合わせることができ（すなわち組み合わせＣＱ）、モジュール（反復単位）Ｑをモジュール（反復単位）Ａ及びモジュール（反復単位）Ｑと組み合わせることができ（すなわち組み合わせＱＡＱ）、モジュール（反復単位）Ａをモジュール（反復単位）Ａ及びモジュール（反復単位）Ｑと組み合わせることができる（すなわち組み合わせＡＡＱ）。例えば、本発明の方法に使用されるシルクポリペプチドは、Ａｎ、（ＡＡ）ｎ、（ＡＱ）ｎ、（ＱＡ）ｎ、Ｑｎ、（ＱＱ）ｎ、（ＱＡＱ）ｎ、（ＡＱＡ）ｎ、Ｃｎ、（ＣＣ）ｎ、（ＣＣＣ）ｎ、（ＣＱ）ｎ、（ＱＣ）ｎ、（ＱＣＱ）ｎ、（ＣＱＣ）ｎ、（ＡＡ）ｎＱｎ、（ＱＱ）ｎＡｎ、（ＡＡＡ）ｎＱｎ、（ＱＱＱ）ｎＡｎ、（ＡＱＱ）ｎ、（ＱＱＡ）ｎ、Ｋｎ、ｓｐｎ、Ｓｎ、Ｒｎ、Ｘｎ、Ｙｎ、（Ｋｓｐ）ｎ、（ｓｐＫ）ｎ、（ＸＹ）ｎ、（ＹＸ）ｎ、（ＸＸ）ｎ、（ＹＹ）ｎ、（ＸＸＸ）ｎ、（ＹＹＹ）ｎ、（ＡＸ）ｎ、（ＸＡ）ｎ、（ＣＸ）ｎ、（ＸＣ）ｎ、（ＱＸ）ｎ、（ＸＱ）ｎ、（ＹＱ）ｎ、（ＱＹ）ｎ、（ＳＳ）ｎ、（ＳＲ）ｎ、（ＲＳ）ｎ又は（ＲＲ）ｎ（ここでｎは少なくとも２、好ましくは４、８、９、１０、１２、１６、２０、２４又は３２である）を含み得る又はこれからなり得る。シルクポリペプチドが（ＡＱ）１２からなる場合、シルクポリペプチドには、モジュール（反復単位）Ａが１２回存在し、モジュール（反復単位）Ｑも１２回存在し、そのためシルクポリペプチドは２４個のモジュール（反復単位）からなることに留意する。（ＡＱ）１２からなるシルクポリペプチドのモジュール（繰り返し単位）の配置は以下のとおりである：ＡＱＡＱＡＱＡＱＡＱＡＱＡＱＡＱＡＱＡＱＡＱＡＱ。さらに、シルクポリペプチドのモジュール（繰り返し単位）のシルクポリペプチドが（ＱＡＱ）８からなる場合、シルクポリペプチドには、モジュール（繰り返し単位）Ａが８回存在し、モジュール（反復単位）Ｑが１６回存在し、そのためシルクポリペプチドは２４個のモジュール（反復単位）からなることに留意する。（ＱＡＱ）８からなるシルクポリペプチドのモジュール（繰り返し単位）の配置は以下のとおりである：ＱＡＱＱＡＱＱＡＱＱＡＱＱＡＱＱＡＱＱＡＱＱＡＱ。
【００７８】
本発明の方法に使用されるシルクポリペプチドはまた、（Ａ＊Ｑ）ｎ、（ＡＱ＊）ｎ、（Ａ＊Ｑ＊）ｎ、（Ｑ＊Ａ）ｎ、（ＱＡ＊）ｎ、（Ｑ＊Ａ＊）ｎ、（ＱＡＱ＊）ｎ、（ＱＡ＊Ｑ）ｎ、（Ｑ＊ＡＱ）ｎ、（ＱＡ＊Ｑ＊）ｎ、（Ｑ＊Ａ＊Ｑ）ｎ、（Ｑ＊ＡＱ＊）ｎ、（Ｑ＊Ａ＊Ｑ＊）ｎ、（ＡＱＡ＊）ｎ、（ＡＱ＊Ａ）ｎ、（Ａ＊ＱＡ）ｎ、（ＡＱ＊Ａ＊）ｎ、（Ａ＊Ｑ＊Ａ）ｎ、（Ａ＊ＱＡ＊）ｎ、（Ａ＊Ｑ＊Ａ＊）ｎ（ここでｎは少なくとも２、好ましくは４、８、９、１０、１２、１６、２０、２４又は３２であり、＊はモジュール変異体、すなわちモジュールＡ変異体又はモジュールＱ変異体を示す）を含み得る又はこれからなり得る。
【００７９】
「互いに組み合わせた」又は「互いに連結した」という用語は、本発明との関連では、複数のモジュール（反復単位）が互いに直接組み合わされている若しくは連結されていることを意味し得る、又は本発明との関連では、複数のモジュール（反復単位）が１つ又は複数のスペーサーアミノ酸を介して互いに組み合わされている若しくは連結されていることを意味し得る。好ましい実施の形態では、シルクポリペプチドに含まれるモジュール（反復単位）が互いに直接組み合わされている若しくは連結されている。他の好ましい実施の形態では、シルクポリペプチドに含まれるモジュール（反復単位）が、１個〜２５個又は１個〜２０個のスペーサーアミノ酸を介して、より好ましくは１個〜１５個又は１個〜１０個のスペーサーアミノ酸を介して、最も好ましくは１個〜５個のスペーサーアミノ酸を介して、すなわち１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１１個、１２個、１３個、１４個、１５個、１６個、１７個、１８個、１９個、２０個、２１個、２２個、２３個、２４個又は２５個のスペーサーアミノ酸を介して互いに組み合わされている又は連結されている。上記スペーサーアミノ酸はタンパク質において自然発生的な任意のアミノ酸であり得る。好ましくは、上記スペーサーアミノ酸はプロリンではない。スペーサーアミノ酸（複数も可）は荷電基を含有するのが好ましい。好ましくは、荷電基を含有するスペーサーアミノ酸（複数も可）は独立して、アスパラギン酸、グルタミン酸、ヒスチジン及びリジンからなる群から選択される。上記スペーサーアミノ酸は、シルクポリペプチドのケブラー又は羊毛等の不活性材料又は自然発生的な材料をコーティング、好ましくは均一にコーティングする能力に負の影響を与えないアミノ酸とする。さらに、上記スペーサーアミノ酸は、立体障害を引き起こさないアミノ酸、例えばリジン及びシステイン等のサイズが小さいアミノ酸とする。
【００８０】
より好ましい実施の形態では、シルクポリペプチドは、互いに直接組み合わせられるモジュール、及び１個〜２５個又は１個〜２０個のスペーサーアミノ酸を介して、より好ましくは１個〜１５個又は１個〜１０個のスペーサーアミノ酸を介して、最も好ましくは１個〜５個のスペーサーアミノ酸を介して、すなわち２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１１個、１２個、１３個、１４個、１５個、１６個、１７個、１８個、１９個、２０個、２１個、２２個、２３個、２４個又は２５個のスペーサーアミノ酸を介して互いに組み合わせられるモジュールを含む。
【００８１】
モジュールＡ、モジュールＣ、モジュールＱ、モジュールＫ、モジュールｓｐ、モジュールＳ、モジュールＲ、モジュールＸ又はモジュールＹの変異体は参照（野生型）モジュールＡ、モジュールＣ、モジュールＱ、モジュールＫ、モジュールｓｐ、モジュールＳ、モジュールＲ、モジュールＸ又はモジュールＹとは異なり、該変異体はそれらからアミノ酸配列における最大１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１１個、１２個、１３個、１４個又は１５個のアミノ酸変化（すなわち置換、付加、挿入、欠失、Ｎ末端切断及び／又はＣ末端切断）により誘導される。代替的に又は付加的に、このようなモジュール変異体は、変異体の誘導元である参照（野生型）モジュールに対する或る特定の程度の配列同一性を特徴とし得る。このため、モジュールＡ、モジュールＣ、モジュールＱ、モジュールＫ、モジュールｓｐ、モジュールＳ、モジュールＲ、モジュールＸ又はモジュールＹの変異体は、各参照（野生型）モジュールＡ、モジュールＣ、モジュールＱ、モジュールＫ、モジュールｓｐ、モジュールＳ、モジュールＲ、モジュールＸ又はモジュールＹに対する少なくとも５０％、５１％、５２％、５３％、５４％、５５％、５６％、５７％、５８％、５９％、６０％、６１％、６２％、６３％、６４％、６５％、６６％、６７％、６８％、６９％、７０％、７１％、７２％、７３％、７４％、７５％、７６％、７７％、７８％、７９％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は更には９９．９％の配列同一性を有する。好ましくは配列同一性は、各参照（野生型）モジュールＡ、モジュールＣ、モジュールＱ、モジュールＫ、モジュールｓｐ、モジュールＳ、モジュールＲ、モジュールＸ又はモジュールＹの少なくとも１０個、１５個、１８個、２０個、２４個、２７個、２８個、３０個、３４個、３５個又はそれ以上のアミノ酸の連続ストレッチにわたる、好ましくは全長にわたるものである。
【００８２】
配列同一性は、各参照（野生型）モジュールＡ、モジュールＣ、モジュールＱ、モジュールＫ、モジュールｓｐ、モジュールＳ、モジュールＲ、モジュールＸ又はモジュールＹの全長にわたって少なくとも８０％、全長にわたって少なくとも８５％、全長にわたって少なくとも９０％、全長にわたって少なくとも９５％、全長にわたって少なくとも９８％、又は全長にわたって少なくとも９９％であるのが特に好ましい。配列同一性は、各参照（野生型）モジュールＡ、モジュールＣ、モジュールＱ、モジュールＫ、モジュールｓｐ、モジュールＳ、モジュールＲ、モジュールＸ若しくはモジュールＹのうちの少なくとも１０個、１５個、１８個、２０個、２４個、２８個若しくは３０個のアミノ酸の連続ストレッチにわたって少なくとも８０％、少なくとも１０個、１５個、１８個、２０個、２４個、２８個若しくは３０個のアミノ酸の連続ストレッチにわたって少なくとも８５％、少なくとも１０個、１５個、１８個、２０個、２４個、２８個若しくは３０個のアミノ酸の連続ストレッチにわたって少なくとも９０％、少なくとも１０個、１５個、１８個、２０個、２４個、２８個若しくは３０個のアミノ酸の連続ストレッチにわたって少なくとも９５％、少なくとも１０個、１５個、１８個、２０個、２４個、２８個若しくは３０個のアミノ酸の連続ストレッチにわたって少なくとも９８％、又は少なくとも１０個、１５個、１８個、２０個、２４個、２８個若しくは３０個のアミノ酸の連続ストレッチにわたって少なくとも９９％であるのが特に好ましい。
【００８３】
モジュールＡ、モジュールＣ、モジュールＱ、モジュールＫ、モジュールｓｐ、モジュールＳ、モジュールＲ、モジュールＸ又はモジュールＹの断片（又は欠失変異体）は好ましくは、そのＮ末端に及び／又はそのＣ末端に最大１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１１個、１２個、１３個、１４個又は１５個のアミノ酸の欠失を有する。欠失は内部にあってもよい。
【００８４】
さらに、モジュールＡ、モジュールＣ、モジュールＱ、モジュールＫ、モジュールｓｐ、モジュールＳ、モジュールＲ、モジュールＸ又はモジュールＹの変異体又は断片は、変異体又は断片の元となるアミノ酸配列に対する修飾が、シルクポリペプチドのケブラー又は羊毛等の不活性材料又は自然発生的な材料をコーティングする、好ましくは均一にコーティングする能力に負の影響を与えない場合にのみ、本発明との関連内においてモジュールＡ、モジュールＣ、モジュールＱ、モジュールＫ、モジュールｓｐ、モジュールＳ、モジュールＲ、モジュールＸ又はモジュールＹの変異体又は断片とみなされる。好ましくは、モジュールＡ、モジュールＣ、モジュールＱ、モジュールＫ、モジュールｓｐ、モジュールＳ、モジュールＲ、モジュールＸ又はモジュールＹの変異体又は断片を含むシルクポリペプチドは、各参照（野生型）モジュールＡ、モジュールＣ、モジュールＱ、モジュールＫ、モジュールｓｐ、モジュールＳ、モジュールＲ、モジュールＸ又はモジュールＹを含むシルクポリペプチドを用いて形成可能であるように、１ｎｍ〜５０μｍ、好ましくは４０ｎｍ〜５０μｍ、より好ましくは０．５μｍ〜１０μｍ、最も好ましくは１．０μｍ〜５μｍの厚さのコーティングを形成することが可能である。モジュールＡ、モジュールＣ、モジュールＱ、モジュールＫ、モジュールｓｐ、モジュールＳ、モジュールＲ、モジュールＸ又はモジュールＹの変異体又は断片を含むシルクポリペプチドで作られたコーティングは、各参照（野生型）モジュールＡ、モジュールＣ、モジュールＱ、モジュールＫ、モジュールｓｐ、モジュールＳ、モジュールＲ、モジュールＸ又はモジュールＹを含むシルクポリペプチドで作られたコーティングと比較して類似の表面構造（表面起伏）、例えば粗度又は多孔性を有するのも好ましい。モジュールＡ、モジュールＣ、モジュールＱ、モジュールＫ、モジュールｓｐ、モジュールＳ、モジュールＲ、モジュールＸ又はモジュールＹの変異体又は断片を含むシルクポリペプチドで作られたコーティングが、各参照（野生型）モジュールＡ、モジュールＣ、モジュールＱ、モジュールＫ、モジュールｓｐ、モジュールＳ、モジュールＲ、モジュールＸ又はモジュールＹを含むシルクポリペプチドで作られたコーティングと類似の表面構造及び厚さを示すのが特に好ましい。当業者は電子顕微鏡検査を用いてコーティングの厚さ又は表面構造（表面起伏）を容易に評価することができる。
【００８５】
このため本発明の好ましい実施の形態では、反復単位は独立して、モジュールＡＣ（配列番号２９）、モジュールＡＫ（配列番号３０）、モジュールＣＣ（配列番号３１）、モジュールＣＫ１（配列番号３２）、モジュールＣＫ２（配列番号３３）又はモジュールＣＫＣ（配列番号３４）から選択される。モジュールＡＣ（配列番号２９）、モジュールＡＫ（配列番号３０）、モジュールＣＣ（配列番号３１）、モジュールＣＫ１（配列番号３２）、モジュールＣＫ２（配列番号３３）及びモジュールＣＫＣ（配列番号３４）は、ニワオニグモのＡＤＦ−３のアミノ酸配列をベースとするモジュールＡ、及びニワオニグモのＡＤＦ−４のアミノ酸配列をベースとするモジュールＣの変異体である（国際公開第２００７／０２５７１９号）。モジュールＡＣ（配列番号２９）では、２１位のアミノ酸Ｓ（セリン）がアミノ酸Ｃ（システイン）に置き換えられており、モジュールＡＫ（配列番号３０）では、２１位のアミノ酸Ｓがアミノ酸Ｋ（リジン）に置き換えられており、モジュールＣＣ（配列番号３１）では、２５位のアミノ酸Ｓがアミノ酸Ｃに置き換えられており、モジュールＣＫ１（配列番号３２）では、２５位のアミノ酸Ｓがアミノ酸Ｋに置き換えられており、モジュールＣＫ２（配列番号３３）では、２０位のアミノ酸Ｅ（グルタミン酸）がアミノ酸Ｋに置き換えられており、モジュールＣＫＣ（配列番号３４）では、２０位のアミノ酸Ｅがアミノ酸Ｋに置き換えられており、２５位のアミノ酸Ｓがアミノ酸Ｃに置き換えられている（国際公開第２００７／０２５７１９号）。
【００８６】
好ましくは、本発明の方法に使用されるシルクポリペプチドにおける反復単位は、モジュールＡＣ：ＧＰＹＧＰＧＡＳＡＡＡＡＡＡＧＧＹＧＰＧＣＧＱＱ（配列番号２９）、モジュールＡＫ：ＧＰＹＧＰＧＡＳＡＡＡＡＡＡＧＧＹＧＰＧＫＧＱＱ（配列番号３０）、モジュールＣＣ：ＧＳＳＡＡＡＡＡＡＡＡＳＧＰＧＧＹＧＰＥＮＱＧＰＣＧＰＧＧＹＧＰＧＧＰ（配列番号３１）、モジュールＣＫ１：ＧＳＳＡＡＡＡＡＡＡＡＳＧＰＧＧＹＧＰＥＮＱＧＰＫＧＰＧＧＹＧＰＧＧＰ（配列番号３２）、モジュールＣＫ２：ＧＳＳＡＡＡＡＡＡＡＡＳＧＰＧＧＹＧＰＫＮＱＧＰＳＧＰＧＧＹＧＰＧＧＰ（配列番号３３）、又はモジュールＣＫＣ：ＧＳＳＡＡＡＡＡＡＡＡＳＧＰＧＧＹＧＰＫＮＱＧＰＣＧＰＧＧＹＧＰＧＧＰ（配列番号３４）からなる。
【００８７】
本発明の方法に使用されるシルクポリペプチドが、２個〜８０個の反復単位、３個〜８０個の反復単位若しくは４個〜６０個の反復単位、好ましくは８個〜４８個の反復単位又は１０個〜４０個の反復単位、最も好ましくは１６個〜３２個の反復単位、すなわち２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１１個、１２個、１３個、１４個、１５個、１６個、１７個、１８個、１９個、２０個、２１個、２２個、２３個、２４個、２５個、２６個、２７個、２８個、２９個、３０個、３１個、３２個、３３個、３４個、３５個、３６個、３７個、３８個、３９個、４０個、４１個、４２個、４３個、４４個、４５個、４６個、４７個、４８個、４９個、５０個、５１個、５２個、５３個、５４個、５５個、５６個、５７個、５８個、５９個、６０個、６１個、６２個、６３個、６４個、６５個、６６個、６７個、６８個、６９個、７０個、７１個、７２個、７３個、７４個、７５個、７６個、７７個、７８個、７９個又は８０個の反復単位（独立して、モジュールＡＣ（配列番号２９）、モジュールＡＫ（配列番号３０）、モジュールＣＣ（配列番号３１）、モジュールＣＫ１（配列番号３２）、モジュールＣＫ２（配列番号３３）又はモジュールＣＫＣ（配列番号３４）から選択される）を含む、これから本質的になる、又はこれからなることも好ましい。本発明の方法に使用されるシルクポリペプチドに含まれる反復単位のうち少なくとも２つが同一の反復単位（モジュール）であることに留意すべきである。
【００８８】
例えば、本発明の方法に使用されるシルクポリペプチドは、モジュールＣＣ４、モジュールＣＣ８、モジュールＣＣ１６、モジュールＣＣ３２、モジュールＡＣ５、モジュールＡＣ８又はモジュールＡＣ１０を含み得る又はこれからなり得る。
【００８９】
本発明の方法に使用されるシルクポリペプチドは少なくとも２つの同一の反復単位を含む又はこれからなるという条件で、モジュールＡＫ、モジュールＣＣ、モジュールＣＫ１、モジュールＣＫ２及びモジュールＣＫＣを互いに組み合わせることもできる、すなわち例えば、モジュール（反復単位）ＡＫをモジュール（反復単位）ＣＣと組み合わせることができ（すなわち組み合わせＡＫＣＣ）、モジュール（反復単位）ＣＫ１をモジュール（反復単位）ＣＫ２及びモジュール（反復単位）ＣＫＣと組み合わせることができる（すなわち組み合わせＣＫ１ＣＫ２ＣＫＣ）。このため、本発明の方法に使用されるシルクポリペプチドはまた、モジュール（ＡＫ）ｎ、モジュール（ＣＣ）ｎ、モジュール（ＣＫ１）ｎ、モジュール（ＣＫ２）ｎ、モジュール（ＣＫＣ）ｎ、モジュール（ＡＫＡＣ）ｎ、モジュール（ＣＣＣＣ）ｎ、モジュール（ＣＫ１ＣＫ２）ｎ、モジュール（ＣＫ２ＣＫ１）ｎ、モジュール（ＣＫ１ＣＫ２ＣＫ１）ｎ、モジュール（ＣＫ２ＣＫ１ＣＫ２）ｎ、モジュール（ＣＫ１ＣＫ２ＣＫＣ）ｎ、モジュール（ＣＫＣＣＫ２ＣＫＣ）ｎ又はモジュール（ＣＫＣＣＫ２ＣＫ１）ｎ（ここでｎは少なくとも２、好ましくは４、５、６、７、８、１０、１２、１６又は２０である）を含み得る又はこれからなり得る。「互いに組み合わせた」という用語は上で定義される。
【００９０】
本発明の方法に使用されるシルクポリペプチドは、２個〜８０個の反復単位、３個〜８０個の反復単位若しくは４個〜６０個の反復単位、好ましくは８個〜４８個の反復単位又は１０個〜４０個の反復単位、最も好ましくは１６個〜３２個の反復単位、すなわち２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１１個、１２個、１３個、１４個、１５個、１６個、１７個、１８個、１９個、２０個、２１個、２２個、２３個、２４個、２５個、２６個、２７個、２８個、２９個、３０個、３１個、３２個、３３個、３４個、３５個、３６個、３７個、３８個、３９個、４０個、４１個、４２個、４３個、４４個、４５個、４６個、４７個、４８個、４９個、５０個、５１個、５２個、５３個、５４個、５５個、５６個、５７個、５８個、５９個、６０個、６１個、６２個、６３個、６４個、６５個、６６個、６７個、６８個、６９個、７０個、７１個、７２個、７３個、７４個、７５個、７６個、７７個、７８個、７９個又は８０個の反復単位（独立して、モジュールＡ（配列番号２０）若しくはその変異体、モジュールＣ（配列番号２１）若しくはその変異体、モジュールＱ（配列番号２２）若しくはその変異体、モジュールＫ（配列番号２３）若しくはその変異体、モジュールｓｐ（配列番号２４）若しくはその変異体、モジュールＳ（配列番号２５）若しくはその変異体、モジュールＲ（配列番号２６）若しくはその変異体、モジュールＸ（配列番号２７）若しくはその変異体、モジュールＹ（配列番号２８）若しくはその変異体、モジュールＡＣ（配列番号２９）、モジュールＡＫ（配列番号３０）、モジュールＣＣ（配列番号３１）、モジュールＣＫ１（配列番号３２）、モジュールＣＫ２（配列番号３３）、又はモジュールＣＫＣ（配列番号３４）から選択される）を含む、これから本質的になる、又はこれからなるのが更に好ましい。この場合も、本発明の方法に使用されるシルクポリペプチドに含まれる反復単位のうち少なくとも２つが同一の反復単位（モジュール）であることに留意すべきである。
【００９１】
本発明の方法に使用されるシルクポリペプチドは少なくとも２つの同一の反復単位を含む又はこれからなるという条件で、モジュールＡＫ、モジュールＣＣ、モジュールＣＫ１、モジュールＣＫ２及びモジュールＣＫＣを、モジュールＡ、モジュールＣ、モジュールＱ、モジュールＫ、モジュールｓｐ、モジュールＳ、モジュールＲ、モジュールＸ又はモジュールＹと互いに組み合わせることもできる、すなわち例えば、モジュール（反復単位）ＡＫをモジュール（反復単位）Ｃと組み合わせることができ（すなわち組み合わせＡＫＣ）、又はモジュール（反復単位）ＣＣをモジュール（反復単位）Ｃと組み合わせることができる（すなわち組み合わせＣＣＣ）。このため、本発明の方法に使用されるシルクポリペプチドはまた、モジュール（ＡＱＡＫ）ｎ、モジュール（ＱＡＫ）ｎ、モジュール（ＱＡＫＱ）ｎ、モジュール（ＡＫＱＡ）ｎ、モジュール（ＡＫＱＡＫ）ｎ、モジュール（ＣＣＣ）ｎ、モジュール（ＣＣＣＣ）ｎ、モジュール（ＣＣＣＣＣ）ｎ、モジュール（ＣＣＣＣＣ）ｎ、モジュール（ＣＣＱ）ｎ、モジュール（ＱＣＣ）ｎ、モジュール（ＱＣＣＱ）ｎ、モジュール（ＣＣＱＣ）ｎ、モジュール（ＣＱＣＣ）ｎ、モジュール（ＣＣＱＣＣ）ｎ、モジュール（ＣＣＫ１）ｎ、モジュール（ＣＫ１Ｃ）ｎ、モジュール（ＣＫ１ＣＣ）ｎ、モジュール（ＣＣＫ１Ｃ）ｎ、モジュール（ＣＫＣＣＫＣＣ）ｎ、モジュール（ＣＣＫＣＣＫＣ）ｎ、モジュール（ＣＫＣＱ）ｎ、モジュール（ＱＣＫＣ）ｎ、モジュール（ＱＣＫＣＱ）ｎ、モジュール（ＡＫＣＫ１Ｑ）ｎ、モジュール（ＱＣＫ２ＡＫ）ｎ、又はモジュール（ＣＫ１ＣＫ２Ｃ）ｎ（ここでｎは少なくとも２、好ましくは４、５、６、７、８、１０、１２、１６又は２０である）を含み得る又はこれからなり得る。「互いに組み合わせた」という用語は上で定義される。
【００９２】
例えば、本発明の方法に使用されるシルクポリペプチドは、モジュールＣ１６ＣＣ、モジュールＣＣＣ１６、モジュールＣ８ＣＣＣ８、モジュールＣ８ＣＣ８、モジュールＣＣ８Ｃ８、モジュールＣ４ＣＣ８Ｃ４、モジュールＣＣ４Ｃ８ＣＣ４、モジュールＣＣ（ＡＱ）２４又はモジュール（ＡＱ）２４ＣＣを含む又はこれからなる。
【００９３】
本発明の方法に使用されるシルクポリペプチドは、少なくとも１つの非反復（ＮＲ）単位、すなわち１個、２個、３個、４個、５個、６個又はそれ以上のＮＲ単位、好ましくは１個のＮＲ単位を更に含むことができる。本発明との関連では、「非反復（ＮＲ）単位」という用語は、明らかな反復パターンを示さない、自然発生的なシルクポリペプチドに存在するアミノ酸の領域（非反復単位又はＮＲ単位）を表す。好ましくは、非反復単位のアミノ酸配列は、自然発生的なドラグラインポリペプチド、好ましくはＡＤＦ−３（配列番号１）若しくはＡＤＦ−４（配列番号２）の非反復アミノ酸配列に、又はそれと実質的に類似のアミノ酸配列に相当する。
【００９４】
非反復単位のアミノ酸配列は、自然発生的なドラグラインポリペプチド、好ましくはＡＤＦ−３（配列番号１）若しくはＡＤＦ−４（配列番号２）の非反復カルボキシ末端アミノ酸配列に、又はそれと実質的に類似のアミノ酸配列に相当するのが特に好ましい。より好ましくは、非反復単位のアミノ酸配列は、アミノ酸５１３〜アミノ酸６３６を含むＡＤＦ−３（配列番号１）若しくはアミノ酸３０２〜アミノ酸４１０を含むＡＤＦ−４（配列番号２）の非反復カルボキシ末端アミノ酸配列に、又はそれと実質的に類似のアミノ酸配列に相当する。
【００９５】
この関連で「実質的に類似の」は、好ましくは２０個、３０個、４０個、５０個、６０個、７０個、８０個又はそれ以上のアミノ酸にわたる、より好ましくは自然発生的なドラグラインポリペプチド、好ましくはＡＤＦ−３（配列番号１）又はＡＤＦ−４（配列番号２）の各参照非反復（カルボキシ末端）アミノ酸配列の全長にわたる少なくとも５０％、５１％、５２％、５３％、５４％、５５％、５６％、５７％、５８％、５９％、６０％、６１％、６２％、６３％、６４％、６５％、６６％、６７％、６８％、６９％、７０％、７１％、７２％、７３％、７４％、７５％、７６％、７７％、７８％、７９％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は更には９９．９％のアミノ酸同一性の程度を意味する。
【００９６】
自然発生的なドラグラインポリペプチド（すなわち野生型非反復（カルボキシ末端）単位）内の、好ましくはＡＤＦ−３（配列番号１）又はＡＤＦ−４（配列番号２）内の対応する非反復（カルボキシ末端）アミノ酸配列と「実質的に類似の」アミノ酸配列を有する「非反復単位」は、その機能特性に関しても類似している。例えば「実質的に類似の非反復単位」を含むシルクポリペプチドは依然として、ケブラー又は羊毛等の合成材料又は自然発生的な材料上にコーティングを形成する能力を有する。好ましくは、「実質的に類似の非反復単位」を含むシルクポリペプチドは、各参照（野生型）非反復（カルボキシ末端）単位を含むシルクポリペプチドを用いて形成することができるのと同様に、１ｎｍ〜５０μｍ、好ましくは４０ｎｍ〜５０μｍ、より好ましくは０．５μｍ〜１０μｍ、最も好ましくは１．０μｍ〜５μｍの厚さのコーティングを形成することが可能である。「実質的に類似の非反復単位」を含むシルクポリペプチドで作られたコーティングは、各参照（野生型）非反復（カルボキシ末端）単位を含むシルクポリペプチドで作られたコーティングと比較して類似の（similar）表面構造（表面起伏）、例えば粗度又は多孔性を有するのも好ましい。「実質的に類似の反復単位」を含むシルクポリペプチドで作られたコーティングは、各参照（野生型）非反復（カルボキシ末端）単位を含むシルクポリペプチドで作られたコーティングに類似の表面構造及び厚さを示すのが特に好ましい。当業者は電子顕微鏡検査を用いて、コーティングの厚さ又は表面構造（表面起伏）を容易に評価することができる。
【００９７】
最も好ましくは、非反復（ＮＲ）単位は、ＮＲ３（配列番号４１）若しくはその変異体、又はＮＲ４（配列番号４２）若しくはその変異体である。ＮＲ３（配列番号４１）単位はニワオニグモのＡＤＦ−３のアミノ酸配列をベースとしており、ＮＲ４（配列番号４２）単位はニワオニグモのＡＤＦ−４のアミノ酸配列をベースとしている（国際公開第２００６／００８１６３号）。
【００９８】
ＮＲ３単位又はＮＲ４単位の変異体は、参照ＮＲ３（配列番号４１）単位又はＮＲ４（配列番号４２）単位とは異なり、該変異体はそれらからアミノ酸配列における最大１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１１個、１２個、１３個、１４個、１５個、１６個、１７個、１８個、１９個、２０個、２５個又は３０個のアミノ酸変化（すなわち置換（exchanges）、挿入、欠失、Ｎ末端切断及び／又はＣ末端切断）により誘導される。代替的に又は付加的に、このようなＮＲ３単位又はＮＲ４単位の変異体は、変異体の誘導元である参照ＮＲ３単位又はＮＲ４単位に対する或る特定の程度の配列同一性を特徴とし得る。このため、ＮＲ３単位又はＮＲ４単位の変異体は、各参照ＮＲ３単位又はＮＲ４単位に対する少なくとも５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、７６％、７７％、７８％、７９％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は更には９９．９％の配列同一性を有する。好ましくは配列同一性は、各参照ＮＲ３単位又はＮＲ４単位の少なくとも１０個、２０個、３０個、４０個、５０個、６０個、７０個、８０個、９０個又はそれ以上のアミノ酸の連続ストレッチにわたる、好ましくは全長にわたるものである。
【００９９】
配列同一性は各参照ＮＲ３単位又はＮＲ４単位の全長にわたって少なくとも８０％、全長にわたって少なくとも８５％、全長にわたって少なくとも９０％、全長にわたって少なくとも９５％、全長にわたって少なくとも９８％、又は全長にわたって少なくとも９９％であるのが特に好ましい。配列同一性は各参照ＮＲ３単位若しくはＮＲ４単位のうちの少なくとも２０個、３０個、４０個、５０個、６０個、７０個若しくは８０個のアミノ酸の連続ストレッチにわたって少なくとも８０％、少なくとも２０個、３０個、４０個、５０個、６０個、７０個若しくは８０個のアミノ酸の連続ストレッチにわたって少なくとも８５％、少なくとも２０個、３０個、４０個、５０個、６０個、７０個若しくは８０個のアミノ酸の連続ストレッチにわたって少なくとも９０％、少なくとも２０個、３０個、４０個、５０個、６０個、７０個若しくは８０個のアミノ酸の連続ストレッチにわたって少なくとも９５％、少なくとも２０個、３０個、４０個、５０個、６０個、７０個若しくは８０個のアミノ酸の連続ストレッチにわたって少なくとも９８％、又は少なくとも２０個、３０個、４０個、５０個、６０個、７０個若しくは８０個のアミノ酸の連続ストレッチにわたって少なくとも９９％であるのが更に特に好ましい。
【０１００】
ＮＲ３単位又はＮＲ４単位の断片（又は欠失変異体）は好ましくは、そのＮ末端に及び／又はそのＣ末端に最大１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１１個、１２個、１３個、１４個、１５個、１６個、１７個、１８個、１９個、２０個、２１個、２２個、２３個、２４個、２５個、３０個、３５個、４０個、４５個、５０個、５５個又は６０個のアミノ酸の欠失を有する。欠失は内部にあってもよい。
【０１０１】
さらに、ＮＲ３単位又はＮＲ４単位の変異体又は断片は、変異体又は断片の元となるアミノ酸配列に対する修飾が、シルクポリペプチドのケブラー又は綿等の不活性材料又は自然発生的な材料をコーティングする、好ましくは均一にコーティングする能力に負の影響を与えない場合にのみ、本発明との関連内においてＮＲ３単位又はＮＲ４単位の変異体又は断片とみなされる。好ましくは、ＮＲ３単位又はＮＲ４単位の変異体又は断片を含むシルクポリペプチドは、各参照ＮＲ３単位又はＮＲ４単位を含むシルクポリペプチドを用いて形成することができるのと同様に、１ｎｍ〜５０μｍ、好ましくは４０ｎｍ〜５０μｍ、より好ましくは０．５μｍ〜１０μｍ、最も好ましくは１．０μｍ〜５．０μｍの厚さのコーティングを形成することが可能である。ＮＲ３単位又はＮＲ４単位の変異体又は断片を含むシルクポリペプチドで作られたコーティングは、各参照ＮＲ３単位又はＮＲ４単位を含むシルクポリペプチドで作られたコーティングと比較して類似の表面構造（表面起伏）、例えば粗度又は多孔性を有するのも好ましい。ＮＲ３単位又はＮＲ４単位の変異体又は断片を含むシルクポリペプチドで作られたコーティングは、各参照ＮＲ３単位又はＮＲ４単位を含むシルクポリペプチドで作られたコーティングに類似の表面構造及び厚さを示すのが特に好ましい。当業者は電子顕微鏡検査を用いて、コーティングの厚さ又は表面構造（表面起伏）を容易に評価することができる。
【０１０２】
代替的には、ＮＲ３単位又はＮＲ４単位の変異体又は断片が依然として、それが含まれるシルクポリペプチドの重合を可能にするか、及び／又は可溶性を増大させるかを試験することができる。当業者は、ＮＲ３単位又はＮＲ４単位の変異体又は断片を含むシルクポリペプチドが、各参照ＮＲ３単位又はＮＲ４単位を含むシルクポリペプチドのように上述の機能特性を有するかを容易に評価することができる。好適なアッセイは当業者にとって既知である。例えば、ＮＲ３単位又はＮＲ４単位の変異体又は断片を含むシルクポリペプチドの重合、及び各参照ＮＲ３単位又はＮＲ４単位を含むシルクポリペプチドの重合を、ネイティブゲル電気泳動により容易に可視化することができる。ＮＲ３単位又はＮＲ４単位の変異体又は断片を含むシルクポリペプチドの可溶性、及び各参照ＮＲ３単位又はＮＲ４単位を含むシルクポリペプチドの可溶性を、水溶液中の上記シルクポリペプチドの飽和により単純に試験することができる。最終的に結果を互いに比較することができる。
【０１０３】
好ましくは、本発明の方法に使用されるシルクポリペプチドは、ＡＤＦ−３（配列番号１）又はその変異体、ＡＤＦ−４（配列番号２）又はその変異体、ＭａＳｐ Ｉ（配列番号４３）又はその変異体、ＭａＳｐ ＩＩ（配列番号４４）又はその変異体、（Ｃ）ｍ、（Ｃ）ｍＮＲｚ、ＮＲｚ（Ｃ）ｍ、（ＡＱ）ｎ、（ＡＱ）ｎＮＲｚ、ＮＲｚ（ＡＱ）ｎ、（ＱＡＱ）ｏ、ＮＲｚ（ＱＡＱ）ｏ、（ＱＡＱ）ｏＮＲｚ、Ｙｐ、Ｘｐ及びＫｐ（ここで、ｍは８〜４８（すなわち８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７又は４８）の整数であり、ｎは６〜２４（すなわち６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３又は２４）の整数であり、ｏは８〜１６（すなわち８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５又は１６）の整数であり、ｐは８〜１６（すなわち８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５又は１６）の整数であり、ｚは１〜３（すなわち１、２又は３）の整数であり、ＮＲは非反復単位を表す）からなる群から選択される。上述の式は以下のうちの１つにより定義される。
（ｉ）式（Ｃ）ｍでは、配列番号２１によるアミノ酸配列で表される、数「ｍ」のＣモジュール、すなわち８個〜４８個のＣモジュールが互いに組み合わせられ、
（ｉｉ）式（Ｃ）ｍＮＲｚでは、配列番号２１によるアミノ酸配列で表される、数「ｍ」のＣモジュール、すなわち８個〜４８個のＣモジュールが互いに組み合わせられ、上記Ｃモジュールはさらに、数「ｚ」の非反復（ＮＲ）単位、すなわち１個〜３個の非反復（ＮＲ）単位、例えば配列番号４１によるアミノ酸配列で表される非反復（ＮＲ）単位ＮＲ３又は配列番号４２によるアミノ酸配列で表される非反復（ＮＲ）単位ＮＲ４と組み合わせられ、
（ｉｉｉ）式ＮＲｚ（Ｃ）ｍでは、数「ｚ」の非反復（ＮＲ）単位、すなわち１個〜３個の非反復（ＮＲ）単位、例えば配列番号４１によるアミノ酸配列で表される非反復（ＮＲ）単位ＮＲ３又は配列番号４２によるアミノ酸配列で表される非反復（ＮＲ）単位ＮＲ４が存在し（ｚ＝１）、又は互いに組み合わせられ（ｚ＝２又は３）、上記非反復（ＮＲ）単位（複数も可）はさらに、配列番号２１によるアミノ酸配列で表される、数「ｍ」のＣモジュール、すなわち８個〜４８個のＣモジュールと組み合わせられ、
（ｉｖ）式（ＡＱ）ｎでは、数「ｎ」のＡモジュールとＱモジュールとの組み合わせ、すなわち６個〜２４個のＡモジュールとＱモジュールとの組み合わせ（ここでモジュールＡは配列番号２０によるアミノ酸配列により表され、モジュールＱは配列番号２２によるアミノ酸配列により表される）が互いに組み合わされ、
（ｖ）式（ＡＱ）ｎＮＲｚでは、数「ｎ」のＡモジュールとＱモジュールとの組み合わせ、すなわち６個〜２４個のＡモジュールとＱモジュールとの組み合わせ（ここでモジュールＡは配列番号２０によるアミノ酸配列により表され、モジュールＱは配列番号２２によるアミノ酸配列により表される）が互いに組み合わされ、上記ＡモジュールとＱモジュールとの組み合わせはさらに、数「ｚ」の非反復（ＮＲ）単位、すなわち１個〜３個の非反復（ＮＲ）単位、例えば配列番号４１によるアミノ酸配列で表される非反復（ＮＲ）単位ＮＲ３又は配列番号４２によるアミノ酸配列で表される非反復（ＮＲ）単位ＮＲ４と組み合わせられ、
（ｖｉ）式ＮＲｚ（ＡＱ）ｎでは、数「ｚ」の非反復（ＮＲ）単位、すなわち１個〜３個の非反復（ＮＲ）単位、例えば配列番号４１によるアミノ酸配列で表される非反復（ＮＲ）単位ＮＲ３又は配列番号４２によるアミノ酸配列で表される非反復（ＮＲ）単位ＮＲ４が存在し（ｚ＝１）、又は互いに組み合わせられ（ｚ＝２又は３）、上記非反復（ＮＲ）単位（複数も可）はさらに、数「ｎ」のＡモジュールとＱモジュールとの組み合わせ、すなわち６個〜２４個のＡモジュールとＱモジュールとの組み合わせ（ここでモジュールＡは配列番号２０によるアミノ酸配列により表され、モジュールＱは配列番号２２によるアミノ酸配列により表される）と組み合わせられ、
（ｖｉｉ）式（ＱＡＱ）ｏでは、数「ｏ」のＱモジュールと、Ａモジュールと、Ｑモジュールとの組み合わせ、すなわち８個〜１６個のＱモジュールと、Ａモジュールと、Ｑモジュールとの組み合わせ（ここでモジュールＱは配列番号２２によるアミノ酸配列で表され、モジュールＡは配列番号２０によるアミノ酸配列で表される）が互いに組み合わされ、
（ｖｉｉｉ）式（ＱＡＱ）ｏＮＲｚでは、数「ｏ」のＱモジュールと、Ａモジュールと、Ｑモジュールとの組み合わせ、すなわち８個〜１６個のＱモジュールと、Ａモジュールと、Ｑモジュールとの組み合わせ（ここでモジュールＱは配列番号２２によるアミノ酸配列で表され、モジュールＡは配列番号２０によるアミノ酸配列で表される）が互いに組み合わされ、上記Ｑモジュールと、Ａモジュールと、Ｑモジュールとの組み合わせはさらに、数「ｚ」の非反復（ＮＲ）単位、すなわち１個〜３個の非反復（ＮＲ）単位、例えば配列番号４１によるアミノ酸配列で表される非反復（ＮＲ）単位ＮＲ３又は配列番号４２によるアミノ酸配列で表される非反復（ＮＲ）単位ＮＲ４と組み合わせられ、
（ｉｘ）式ＮＲｚ（ＱＡＱ）ｏでは、数「ｚ」の非反復（ＮＲ）単位、すなわち１個〜３個の非反復（ＮＲ）単位、例えば配列番号４１によるアミノ酸配列で表される非反復（ＮＲ）単位ＮＲ３又は配列番号４２によるアミノ酸配列で表される非反復（ＮＲ）単位ＮＲ４が存在し（ｚ＝１）、又は互いに組み合わせられ（ｚ＝２又は３）、上記非反復（ＮＲ）単位（複数も可）はさらに、数「ｏ」のＱモジュールと、Ａモジュールと、Ｑモジュールとの組み合わせ、すなわち８個〜１６個のＱモジュールと、Ａモジュールと、Ｑモジュールとの組み合わせ（ここでモジュールＱは配列番号２２によるアミノ酸配列で表され、モジュールＡは配列番号２０によるアミノ酸配列で表される）と組み合わせられ、
（ｘ）式Ｙｐでは、配列番号２８によるアミノ酸配列で表される、数「ｐ」のＹモジュール、すなわち８個〜１６個のＹモジュールが互いに組み合わされ、
（ｘｉ）式Ｘｐでは、配列番号２７によるアミノ酸配列で表される、数「ｐ」のＸモジュール、すなわち８個〜１６個のＸモジュールが互いに組み合わされ、
（ｘｉｉ）式Ｋｐでは、配列番号２３によるアミノ酸配列で表される、数「ｐ」のＫモジュール、すなわち８個〜１６個のＫモジュールが互いに組み合わされる。
【０１０４】
最も好ましくは、本発明の方法に使用されるシルクポリペプチドは、Ｃ１６ＮＲ４、Ｃ３２ＮＲ４、（ＡＱ）１２、（ＡＱ）２４、（ＡＱ）１２ＮＲ３、（ＡＱ）２４ＮＲ３、Ｃ１６、Ｃ３２、Ｙ８、Ｙ１６、Ｘ８、Ｘ１６、Ｋ８又はＫ１６である。
【０１０５】
ＡＤＦ−３、ＡＤＦ−４、ＭａＳｐ Ｉ又はＭａＳｐ ＩＩの変異体は、参照（野生型）ＡＤＦ−３（配列番号１）、ＡＤＦ−４（配列番号２）、ＭａＳｐ Ｉ（配列番号４３）、又はＭａＳｐ ＩＩ（配列番号４４）のポリペプチドとは異なり、該変異体はそれらからアミノ酸配列における最大１５０個（最大１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１１個、１２個、１３個、１４個、１５個、１６個、１７個、１８個、１９個、２０個、２５個、３０個、３５個、４０個、４５個、５０個、５５個、６０個、６５個、７０個、７５個、８０個、８５個、９０個、９５個、１００個、１１０個、１２０個、１３０個、１４０個又は１５０個）のアミノ酸変化（すなわち置換、挿入、欠失、Ｎ末端切断及び／又はＣ末端切断）により誘導される。代替的に又は付加的に、このような変異体は、変異体の誘導元である参照（野生型）ポリペプチドに対する或る特定の程度の配列同一性を特徴とし得る。このため、ＡＤＦ−３、ＡＤＦ−４、ＭａＳｐ Ｉ又はＭａＳｐ ＩＩの変異体は、各参照（野生型）ＡＤＦ−３、ＡＤＦ−４、ＭａＳｐ Ｉ又はＭａＳｐ ＩＩのポリペプチドに対する少なくとも５０％、５１％、５２％、５３％、５４％、５５％、５６％、５７％、５８％、５９％、６０％、６１％、６２％、６３％、６４％、６５％、６６％、６７％、６８％、６９％、７０％、７１％、７２％、７３％、７４％、７５％、７６％、７７％、７８％、７９％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は更には９９．９％の配列同一性を有する。好ましくは配列同一性は、各参照（野生型）ＡＤＦ−３、ＡＤＦ−４、ＭａＳｐ Ｉ又はＭａＳｐ ＩＩのポリペプチドの少なくとも２０個、２５個、３０個、３５個、４０個、５０個、６０個、７０個、８０個、９０個、１００個、１２０個、１５０個、１８０個、２００個、２５０個、３００個、３５０個、４００個又はそれ以上のアミノ酸の連続ストレッチにわたる、好ましくは全長にわたるものである。
【０１０６】
配列同一性は、各参照（野生型）ＡＤＦ−３、ＡＤＦ−４、ＭａＳｐ Ｉ又はＭａＳｐ ＩＩのポリペプチドの全長にわたって少なくとも８０％、全長にわたって少なくとも８５％、全長にわたって少なくとも９０％、全長にわたって少なくとも９５％、全長にわたって少なくとも９８％、又は全長にわたって少なくとも９９％であるのが特に好ましい。配列同一性は、各参照（野生型）ＡＤＦ−３、ＡＤＦ−４、ＭａＳｐ Ｉ又はＭａＳｐ ＩＩのポリペプチドのうちの少なくとも２０個、３０個、５０個、１００個、１５０個、２００個、２５０個若しくは３００個のアミノ酸の連続ストレッチにわたって少なくとも８０％、少なくとも２０個、３０個、５０個、１００個、１５０個、２００個、２５０個若しくは３００個のアミノ酸の連続ストレッチにわたって少なくとも８５％、少なくとも２０個、３０個、５０個、１００個、１５０個、２００個、２５０個若しくは３００個のアミノ酸の連続ストレッチにわたって少なくとも９０％、少なくとも２０個、３０個、５０個、１００個、１５０個、２００個、２５０個若しくは３００個のアミノ酸の連続ストレッチにわたって少なくとも９５％、少なくとも２０個、３０個、５０個、１００個、１５０個、２００個、２５０個若しくは３００個のアミノ酸の連続ストレッチにわたって少なくとも９８％、又は少なくとも２０個、３０個、５０個、１００個、１５０個、２００個、２５０個若しくは３００個のアミノ酸の連続ストレッチにわたって少なくとも９９％であるのが更に特に好ましい。
【０１０７】
ＡＤＦ−３（配列番号１）ポリペプチドの断片（又は欠失変異体）は好ましくは、そのＮ末端に及び／又はそのＣ末端に最大１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１５個、２０個、２５個、３０個、３５個、４０個、４５個、５０個、５５個、６０個、６５個、７０個、７５個、８０個、８５個、９０個、９５個、１００個、１２０個、１５０個、１７０個、２００個、２２０個、２５０個、２７０個、３００個、３２０個、３５０個、３７０個、４００個、４２０個、４５０個、４７０個、５００個、５２０個、５５０個、５７０個、６００個又は６１０個のアミノ酸の欠失を有する。欠失は内部にあってもよい。
【０１０８】
ＡＤＦ−４（配列番号２）ポリペプチドの断片（又は欠失変異体）は好ましくは、そのＮ末端に及び／又はそのＣ末端に最大１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１５個、２０個、２５個、３０個、３５個、４０個、４５個、５０個、５５個、６０個、６５個、７０個、７５個、８０個、８５個、９０個、９５個、１００個、１２０個、１５０個、１７０個、２００個、２２０個、２５０個、２７０個、３００個、３２０個、３３０個、３４０個、３５０個、３６０個、３７０個、３８０個又は３９０個のアミノ酸の欠失を有する。欠失は内部にあってもよい。
【０１０９】
ＭａＳｐ 1（配列番号４３）ポリペプチドの断片（又は欠失変異体）は好ましくは、そのＮ末端に及び／又はそのＣ末端に最大１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１５個、２０個、２５個、３０個、３５個、４０個、４５個、５０個、５５個、６０個、６５個、７０個、７５個、８０個、８５個、９０個、９５個、１００個、１５０個、２００個、２５０個、３００個、３５０個、４００個、４５０個、５００個、５５０個、６００個、６２０個、６４０個、６６０個、６７０個、６８０個又は６９０個のアミノ酸の欠失を有する。欠失は内部にあってもよい。
【０１１０】
ＭａＳｐ 11（配列番号４４）ポリペプチドの断片（又は欠失変異体）は好ましくは、そのＮ末端に及び／又はそのＣ末端に最大１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１５個、２０個、２５個、３０個、３５個、４０個、４５個、５０個、５５個、６０個、６５個、７０個、７５個、８０個、８５個、９０個、９５個、１００個、１５０個、２００個、２５０個、３００個、３５０個、４００個、４５０個、５００個、５２０個、５４０個、５６０個又は５７０個のアミノ酸の欠失を有する。欠失は内部にあってもよい。
【０１１１】
さらに、ＡＤＦ−３、ＡＤＦ−４、ＭａＳｐ Ｉ又はＭａＳｐ ＩＩの変異体又は断片は、変異体又は断片の元となるアミノ酸配列に対する修飾が、ポリペプチドのケブラー又は綿等の不活性材料又は自然発生的な材料をコーティングする、好ましくは均一にコーティングする能力に負の影響を与えない場合にのみ、本発明との関連内においてＡＤＦ−３、ＡＤＦ−４、ＭａＳｐ Ｉ又はＭａＳｐ ＩＩの変異体又は断片とみなされる。好ましくは、ＡＤＦ−３、ＡＤＦ−４、ＭａＳｐ Ｉ又はＭａＳｐ ＩＩの変異体又は断片は、各参照（野生型）ＡＤＦ−３、ＡＤＦ−４、ＭａＳｐ Ｉ又はＭａＳｐ ＩＩのポリペプチドを用いて形成することができるのと同様に、１ｎｍ〜５０μｍ、好ましくは４０ｎｍ〜５０μｍ、より好ましくは０．５μｍ〜１０μｍ、最も好ましくは１．０μｍ〜５μｍの厚さのコーティングを形成することが可能である。ＡＤＦ−３、ＡＤＦ−４、ＭａＳｐ Ｉ又はＭａＳｐ ＩＩの変異体又は断片で作られたコーティングは、各参照（野生型）ＡＤＦ−３、ＡＤＦ−４、ＭａＳｐ Ｉ又はＭａＳｐ ＩＩのポリペプチドで作られたコーティングと比較して類似の表面構造（表面起伏）、例えば粗度又は多孔性を有するのも好ましい。ＡＤＦ−３、ＡＤＦ−４、ＭａＳｐ Ｉ又はＭａＳｐ ＩＩの変異体又は断片で作られたコーティングは、各参照（野生型）ＡＤＦ−３、ＡＤＦ−４、ＭａＳｐ Ｉ又はＭａＳｐ ＩＩのポリペプチドで作られたコーティングに類似の表面構造及び厚さを示すのが特に好ましい。当業者は電子顕微鏡検査を用いて、コーティングの厚さ又は表面構造（表面起伏）を容易に評価することができる。
【０１１２】
別の実施の形態では、シルクポリペプチドは、
（ｉ）アミノ酸配列ＧＣＧＧＧＧＧＧＳＧＧＧＧ（配列番号３５）からなるＴＡＧＣＹＳ１、
（ｉｉ）アミノ酸配列ＧＣＧＧＧＧＧＧ（配列番号３６）からなるＴＡＧＣＹＳ２、
（ｉｉｉ）アミノ酸配列ＧＣＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧ（配列番号３７）からなるＴＡＧＣＹＳ３、
（ｉｖ）アミノ酸配列ＧＫＧＧＧＧＧＧＳＧＧＧＧ（配列番号３８）からなるＴＡＧＬＹＳ１、及び
（ｖ）アミノ酸配列ＧＫＧＧＧＧＧＧ（配列番号３９）からなるＴＡＧＬＹＳ２
からなる群から選択されるアミノ末端及び／又はカルボキシ末端ＴＡＧを含む。
【０１１３】
これらのＴＡＧは、システイン及び／又はリジンを含有し、下記のように、シルクポリペプチドと不活性材料とを共有結合的に連結するのに、又は物質とシルクポリペプチドとを連結するのに使用することができる。
【０１１４】
最も好ましくは、本発明の方法に使用されるシルクポリペプチドは、ＴＡＧＣＹＳ１Ｃ１６、Ｃ１６ＴＡＧＣＹＳ１、ＴＡＧＣＹＳ１Ｃ１６ＴＡＧＣＹＳ１、ＴＡＧＣＹＳ２Ｃ１６、Ｃ１６ＴＡＧＣＹＳ２、ＴＡＧＣＹＳ２Ｃ１６ＴＡＧＣＹＳ２、ＴＡＧＣＹＳ３Ｃ１６、Ｃ１６ＴＡＧＣＹＳ３、ＴＡＧＣＹＳ３Ｃ１６ＴＡＧＣＹＳ３、ＴＡＧＬＹＳ１Ｃ１６、Ｃ１６ＴＡＧＬＹＳ１、ＴＡＧＬＹＳ１Ｃ１６ＴＡＧＬＹＳ１、ＴＡＧＬＹＳ２Ｃ１６、Ｃ１６ＴＡＧＬＹＳ２、又はＴＡＧＬＹＳ２Ｃ１６ＴＡＧＬＹＳ２を含む又はこれからなる。
【０１１５】
好ましくは、本発明の方法で提供される溶液中のシルクポリペプチドの濃度は、０．１ｗｔ％／ｖｏｌ〜３０ｗｔ％／ｖｏｌの範囲、好ましくは１ｗｔ％／ｖｏｌ〜１０ｗｔ％／ｖｏｌの範囲、最も好ましくは２ｗｔ％／ｖｏｌ〜８ｗｔ％／ｖｏｌ又は４ｗｔ％／ｖｏｌ〜６ｗｔ％／ｖｏｌの範囲である。このため例えば、本発明の方法で提供される溶液中のシルクポリペプチドの濃度は、０．１ｗｔ％／ｖｏｌ、０．４ｗｔ％／ｖｏｌ、０．
．６ｗｔ％／ｖｏｌ、０．８ｗｔ％／ｖｏｌ、１．０ｗｔ％／ｖｏｌ、１．２ｗｔ％／ｖｏｌ、１．４ｗｔ％／ｖｏｌ、１．６ｗｔ％／ｖｏｌ、１．８ｗｔ％／ｖｏｌ、２．０ｗｔ％／ｖｏｌ、２．２ｗｔ％／ｖｏｌ、２．４ｗｔ％／ｖｏｌ、２．６ｗｔ％／ｖｏｌ、２．８ｗｔ％／ｖｏｌ、３．０ｗｔ％／ｖｏｌ、３．５ｗｔ％／ｖｏｌ、４．０ｗｔ％／ｖｏｌ、４．５ｗｔ％／ｖｏｌ、５．０ｗｔ％／ｖｏｌ、５．５ｗｔ％／ｖｏｌ、６．０ｗｔ％／ｖｏｌ、６．５ｗｔ％／ｖｏｌ、７．０ｗｔ％／ｖｏｌ、７．５ｗｔ％／ｖｏｌ、８．０ｗｔ％／ｖｏｌ、９．０ｗｔ％／ｖｏｌ、１０．０ｗｔ％／ｖｏｌ、１２．０ｗｔ％／ｖｏｌ、１５．０ｗｔ％／ｖｏｌ、１８．０ｗｔ％／ｖｏｌ、２０．０ｗｔ％／ｖｏｌ、２５．０ｗｔ％／ｖｏｌ又は３０．０ｗｔ％／ｖｏｌである。
【０１１６】
好ましくは、本発明の方法で提供される溶媒は、ファンデルワールス力を不安定化する溶媒（van der Waals forces destabilisingsolvent）、ギ酸、水溶液、好ましくはＨ２Ｏ若しくは緩衝水溶液（例えばトリス緩衝水溶液）、又はそれらの混合物である。最も好ましくは、ファンデルワールス力を不安定化する溶媒は、ヘキサフルオロイソプロパノール（ＨＦＩＰ）、トリクロロ酢酸（Trichloroacetic acid）（ＴＣＡ）、トリフルオロ酢酸（Trifluoroacetic acid）（ＴＦＡ）及び臭化リチウム（ＬｉＢｒ）からなる群から選択される。水はその良好な入手可能性及び非毒性のために最も好ましい。これらの溶媒中に、シルクポリペプチドが溶解又は懸濁化する。本発明に関連して「懸濁液」という用語は、液体中での固体粒子の分散液を表す。粒径が約１００ｎｍである場合、懸濁液はコロイド状である。
【０１１７】
本発明の方法でコーティングされる不活性材料又は自然発生的な材料は、繊維、繊維を含む糸、繊維を含む撚糸、繊維を含む織布、及び繊維を含む不織布からなる群から選択されるのが好ましい。
【０１１８】
織布のコーティングはより実用的であり、費やされる時間がより短く、かつコーティング材の必要量がより小さい。繊維のコーティング、及び続く布地の製織はより複雑であるとともに、より費用がかかるが、再現性がより高く価値がより高い。シルクポリペプチドＣ１６による綿織布のコーティングを実施例ＩＶで例示する。図４は、未処理の製織済みの布地と、コーティングされた製織済みの布地との比較を示す。
【０１１９】
不活性材料が不活性合成材料又は不活性無機材料であるのが好ましい。好ましくは、不活性材料は、
（ｉ）ポリエステル（Ｄｉｏｌｅｎ、Trevira）、ポリアミド（ＰＡ、例えばナイロン又はＰｅｒｌｏｎ）、ポリアラミド（例えばケブラー、Ｔｗａｒｏｎ又はＮｏｍｅｘ）、ポリテトラフルオロエチレン（ＰＴＦＥ、例えばテフロン登録商標）、ポリエチレン（ＰＥ、例えばＤｙｎｅｅｍａ）、ポリプロピレン（ＰＰ）、ポリウレタン（ＰＵ、例えばＬｙｃｒａ）、シリコーン、ポリウレタンとポリエチレングリコールとの混合物（エラスタン）、超高分子量ポリエチレン（ＵＨＭＷＰＥ）及び高性能ポリエチレン（ＨＰＰＥ）からなる群から選択される不活性合成材料、又は
（ｉｉ）ガラス、炭素、セラミック、金属、（金属）合金、サファイア、ダイアモンド及び半導体からなる群から選択される不活性無機材料
である。
【０１２０】
本発明者らは驚くべきことに、コーティング材としてのシルクポリペプチドの使用が最も穏やかな条件下での効率性の高いコーティングを提供し、特定用途に合わせたシルクでコーティングされた不活性な無機材料の製造を可能とすることを見出している。今日までは、（たとえ可能であったとしても）プラズマ処理のような非常に厳しい条件が不活性無機材料、例えば不活性無機繊維に変更を加えるのに必要であった。
【０１２１】
不活性合成材料であるポリエステル、ポリアミド（ＰＡ）及びポリアラミドは重縮合材料（例えば重縮合繊維）である。すなわち上記材料は重縮合反応により生成される。重縮合反応により、モノマー分子同士が連結し、水又は類似の物質を放出することでポリマーが形成される。不活性合成材料であるポリテトラフルオロエチレン（ＰＴＦＥ）、ポリエチレン（ＰＥ）及びポリプロピレン（ＰＰ）は重合材料（例えば重合繊維）である。すなわち上記材料は重合反応により生成される。重合反応は、化学反応においてモノマー分子同士を反応させ、三次元ネットワーク又はポリマー鎖を形成するプロセスである。不活性合成材料ポリウレタン（ＰＵ）及びポリウレタンとポリエチレングリコールとの混合物は重付加材料（例えば重付加繊維）である。すなわち上記材料は重付加反応により作製される。重付加反応では、多くのモノマー同士がいかなる原子又は分子をも失うことなく、結合の転位により結合する。このことは形成中に分子（通常は水）が失われる縮合反応により形成される縮合ポリマーとは対照的である。
【０１２２】
不活性無機材料としての金属は、白金（Ｐｔ）、クロム（Ｃｒ）、銀（Ａｇ）、金（Ａｕ）及びそれらの組成物／合金からなる群から選択されるのが好ましい。好ましくは、無機材料は半導体であり、鉄（Ｆｅ）、銅（Ｃｕ）、ゲルマニウム（Ｇｅ）、ケイ素（Ｓｉ）、 セレン（Ｓｅ）、テルル（Ｔｅ）及びそれらの組成物／合金からなる群から選択される。（金属）合金は鋼であるのが更に好ましい。
【０１２３】
好ましくは、自然発生的な材料は、絹、綿、セルロース、亜麻、羊毛、麻、竹、ゴム、本物の毛（例えば人毛又は獣毛）又は人工毛等の毛、及び人の皮膚又は動物の皮膚等の皮膚からなる群から選択される。本物の毛（例えば人毛）又は人工毛は、ヘアーエクステンション、ウィッグ（periwigs）、ヘアーピース（hair pieces）又はかつら用の毛であり得る。本物の毛（例えば人毛）又は人工毛はウィッグ、ヘアーピース又はかつらの一部であってもよい。
【０１２４】
本発明の方法が、毛、特に本物の毛（例えば人毛又は獣毛）、又は皮膚（例えば人又は動物の皮膚）等の自然発生的な材料のシルクポリペプチドによるコーティングに関する限りにおいて、上記方法は美容上の目的のためのもの、例えば毛の粗さを低減するためのもの、並びに／又は毛の輝きを改善するためのもの、又は皮膚の湿潤性及び／若しくは柔軟性を改善するためのものであるのが好ましい。
【０１２５】
このため例えばポリアラミド繊維、ポリアラミド糸、ポリテトラフルオロエチレン繊維、ポリテトラフルオロエチレン糸、炭素繊維、炭素糸、ガラス繊維、ガラス糸、ナイロン繊維、ナイロン糸、綿繊維、綿糸、綿織布、綿の不織布、羊毛織布、又は羊毛の不織布を本発明の方法においてシルクポリペプチドでコーティングすることができる。
【０１２６】
シルクポリペプチドによるコーティングのための不活性基材又は自然発生的な基材の選択は、コーティングされた不活性材料又は自然発生的な材料の続く用途によって様々である。例えば、表面の感触が改善された不活性合成材料の糸（例えばポリアラミド糸）が望まれる場合、まず不活性合成材料の繊維（例えばポリアラミド繊維）をシルクポリペプチドでコーティングし、続いて上記繊維から糸を作製する必要はない。加えて、シルクポリペプチドによる織布の直接コーティングにより、既にシルクポリペプチドでコーティングされた繊維から作製した織布と比較して同程度ではあるが、異なるコーティングパターンがもたらされる。これは、織布コーティングでは、隙間にシルクポリペプチドを充填することができるのに対して、既にシルクポリペプチドでコーティングされた繊維から作製した織布では、隙間にはシルクポリペプチドコーティングが含まれていないことを意味する。したがって、隙間が充填された織布材料のコーティングが望まれる場合、本発明のコーティング方法のための基材として織布を使用することが有益である。
【０１２７】
例として、本発明の方法は、
ｉ）反復単位としてのＣ１６からなるシルクポリペプチドと、溶媒としてＨ２Ｏとを含む溶液を準備する工程と、
ｉｉ）不活性合成材料としてのポリアラミド（ケブラー）繊維上に溶液を塗布することより該ポリアラミド繊維を反復単位としてのＣ１６からなるシルクポリペプチドでコーティングする、塗布することによりコーティングする工程と、
を含むことができる。
【０１２８】
本発明の方法は、
ｉ）反復単位としてのＣ１６からなるシルクポリペプチドを含む水溶液を準備する工程と、
ｉｉ）該溶液を不活性合成材料としてのポリテトラフルオロエチレン（テフロン登録商標）糸上に塗布することにより該ポリテトラフルオロエチレン糸を反復単位としてのＣ１６からなるシルクポリペプチドでコーティングする、塗布することによりコーティングする工程と、
を更に含むことができる。
【０１２９】
本発明の方法は、
ｉ）反復単位としての（ＡＱ）２４ＮＲ３からなるシルクポリペプチドと、溶媒としてギ酸とを含む溶液を準備する工程と、
ｉｉ）該溶液を不活性合成材料としてのポリテトラフルオロエチレン（テフロン登録商標）糸上に塗布することにより該ポリテトラフルオロエチレン糸を反復単位としての（ＡＱ）２４ＮＲ３からなるシルクポリペプチドでコーティングする、塗布することによりコーティングする工程と、
を更に含むことができる。
【０１３０】
本発明の方法は、
ｉ）反復単位としてのＣ１６からなるシルクポリペプチドと、溶媒としてヘキサフルオロイソプロパノール（ＨＦＩＰ）とを含む溶液を準備する工程と、
ｉｉ）自然発生的な材料としての亜麻繊維上に溶液を塗布することにより該亜麻繊維を反復単位としてのＣ１６からなるシルクポリペプチドでコーティングする、塗布することによりコーティングする工程と、
を含むこともできる。
【０１３１】
加えて、本発明の方法は、
ｉ）反復単位としてのＣ３２からなるシルクポリペプチドを含む水溶液を準備する工程と、
ｉｉ）該溶液を自然発生的な材料としての羊毛織布上に塗布することにより該羊毛織布を反復単位としてのＣ３２からなるシルクポリペプチドでコーティングする、塗布することによりコーティングする工程と、
を含むことができる。
【０１３２】
上述の例に関しては、Ｃ１６はモジュールＣの１６個の反復単位を意味し、Ｃ３２はモジュールＣの１６個又は３２個の反復単位を意味する。
【０１３３】
好ましくは、コーティングにおけるシルクポリペプチドは、不活性材料と、又は自然発生的な材料と共有結合的に及び／又は非共有結合的に連結している。「共有結合的な連結」という用語は、結合対の各原子が１つの電子を提供し、化学結合において電子対を形成するタイプの化学的な連結を意味する。シルクポリペプチドは、
（ａ）シルクポリペプチドのシステイン残基、リジン残基、アミノ末端、カルボキシ末端、アミノ末端ＴＡＧ若しくはカルボキシ末端ＴＡＧを介して、及び／又は
（ｂ）架橋を介して
不活性材料又は自然発生的な材料と共有結合的に連結するのが好ましい。
【０１３４】
本発明の方法において、シルクポリペプチドは、アミド結合又はジスルフィド結合の形成を介して自然発生的な材料（例えば羊毛又は亜麻）と共有結合的に連結することができる。「アミド結合」（アミド連結）という用語は、１つの分子のカルボキシル基が他の分子のアミン基と反応し、それにより水分子（Ｈ２Ｏ）が放出される際に２つの分子（例えばポリペプチド）間で形成される化学結合を表す。「ジスルフィド結合」（ジスルフィド連結）という用語は、通常システイン残基の２つのチオール基のカップリングにより誘導される化学結合を表す。該連結はＳＳ−結合又はジスルフィド架橋とも呼ばれる。
【０１３５】
このため例えば、本発明の方法に使用されるシルクポリペプチド（例えばＣ１６を含むシルクポリペプチド）は、アミド結合を形成することによりそのアミノ末端を介して又はそのカルボキシ末端を介して自然発生的な材料（例えば亜麻又は羊毛）と共有結合的に連結することができる。シルクポリペプチドは、ジスルフィド結合を形成することによりそのアミノ末端ＴＡＧ（例えばＴＡＧＣＹＳ１Ｃ１６）を介して又はそのカルボキシ末端ＴＡＧ（例えばＣ１６ＴＡＧＣＹＳ１）を介して自然発生的な材料（例えば亜麻又は羊毛）と共有結合的に連結することもできる。加えて、シルクポリペプチド（例えばＡＫＱ４）は、アミド結合を形成することによりそのリジン残基（例えばシルクポリペプチドＡＫＱ４の反復単位ＡＫにおけるリジン残基）を介して自然発生的な材料（例えば亜麻又は羊毛）と共有結合的に連結することができる。さらに、シルクポリペプチドは、ジスルフィド結合を形成することによりそのシステイン残基（例えばシルクポリペプチドＡＣＱ４の反復単位ＡＣにおけるシステイン残基）を介して自然発生的な材料（例えば亜麻又は羊毛）と共有結合的に連結することができる。
【０１３６】
（ａ）で言及されるようなシルクポリペプチドと自然発生的な材料との共有結合的な連結の組み合わせも好ましい。このため例えば、シルクポリペプチド（例えばＣ１６ＴＡＧＣＹＳ１）は、（ｉ）ジスルフィド結合を形成することによりそのシステイン残基（例えばシルクポリペプチドＣ１６ＴＡＧＣＹＳ１のカルボキシ末端ＴＡＧＣＹＳ１におけるシステイン残基）を介して自然発生的な材料（例えば亜麻又は羊毛）と、及び（ｉｉ）アミド結合を形成することによりそのアミノ末端（例えばシルクポリペプチドＣ１６ＴＡＧＣＹＳ１のＣ１６のアミノ末端）を介して自然発生的な材料（例えば亜麻又は羊毛）と共有結合的に連結することができる。シルクポリペプチド（例えばＡＣ４ＴＡＧＬＹＳ１）は、（ｉ）アミド結合を形成することによりそのリジン残基（例えばシルクポリペプチドＡＣ４ＴＡＧＬＹＳ１のカルボキシ末端ＴＡＧＬＹＳ１におけるリジン残基）を介して自然発生的な材料（例えば亜麻又は羊毛）と、及び（ｉｉ）ジスルフィド結合を形成することによりそのシステイン残基（例えばシルクポリペプチドＡＣ４ＴＡＧＬＹＳ１の反復単位ＡＣにおけるシステイン残基）を介して自然発生的な材料（例えば亜麻又は羊毛）と共有結合的に連結することもできる。
【０１３７】
シルクポリペプチドは不活性材料又は自然発生的な材料と非共有結合的に連結することもできる。「非共有結合的な連結」という用語は、電子対の共有を伴わないが、電磁相互作用、疎水性相互作用又はファンデルワールス相互作用のより分散したバリエーションを伴うタイプの連結（相互作用）を意味する。
【０１３８】
シルクポリペプチドは、イオン（静電）連結（相互作用）を介して又は疎水性連結（相互作用）を介して不活性材料（例えばポリエステル、ポリアラミド又はポリテトラフルオロエチレン）、又は自然発生的な材料（例えば羊毛、亜麻又は綿）と非共有結合的に連結するのが特に好ましい。「疎水性連結」（疎水性相互作用）という用語は、炭化水素が水性媒体中で分子間凝集体を形成する傾向に依存する連結（相互作用）を表す。「イオン（静電）連結」（イオン（静電）相互作用）という用語は、１つの原子が電子を失って陽イオンを形成し、他の原子が電子を得て陰イオンを形成する非共有結合（イオン（静電）結合）を表す。
【０１３９】
シルクポリペプチドＣ１６によるアラミド（ケブラー）繊維のコーティングを実施例Ｉで説明する。シルクポリペプチドＣ１６でコーティングされたアラミドフィラメントを図２に示す。
【０１４０】
不活性材料又は自然発生的な材料をシルクポリペプチド層でコーティングすることができるという予期せぬ発見が、様々な用途に関する新たな機会を与える。一般的にタンパク質は特に不活性材料の存在下で非特異的に凝集する傾向があることは周知の事実である。ヘモグロビン、ＢＳＡ又はシトクロムＣのような標準タンパク質は単に凝集し、このためこれらが表面に全体的に（at all）固着する場合に平坦ではない表面が生じる。驚くべきことに、シルクポリペプチド（例えばスパイダーシルクポリペプチド）は、特にポリアラミド又は炭素材料（例えばポリアラミド又は炭素糸）のような剛性であり、かつ粗い不活性合成材料上で平坦でかつ平滑な表面層を形成する。光学的利点及び触感的利点とは別に、シルクポリペプチドコーティングは、更なる改良、またこれによりコーティングされた不活性材料又は自然発生的な材料に関する新たな範囲の用途の可能性をもたらす。
【０１４１】
このため、本発明の好ましい実施の形態では、シルクポリペプチドは、シルクポリペプチドと共有結合的に及び／又は非共有結合的に連結する、少なくとも１つの物質、すなわち１個、２個、３個、４個、５個、６個又はそれ以上の物質、好ましくは１個又は２個の物質を更に含む。
【０１４２】
好ましくは、該物質は本発明の方法の工程ｉ）の前に、工程ｉ）の後に、及び／又は工程ｉｉ）の後にシルクポリペプチドと共有結合的に及び／又は非共有結合的に連結する。
【０１４３】
該物質とシルクポリペプチドとのカップリング／連結を、不活性材料又は自然発生的な材料上へのシルクポリペプチドの塗布の前に（すなわち本発明の方法の工程ｉ）の前に又は工程ｉ）の後に）行うか、塗布の後に（すなわち本発明の方法の工程ｉｉ）の後に）行うか、又は複数回（すなわち本発明の方法の工程ｉ）の前と、工程ｉ）の後と、工程ｉｉ）の後とで；工程ｉ）の前と、工程ｉｉ）の後とで；工程ｉ）の前と、工程ｉ）の後とで；又は工程ｉ）の後と、工程ｉｉ）の後とで）行うかは、接着させる物質、接着のタイプ及びコーティングされた材料の所望の用途に依存する。シルクポリペプチドの複数回のカップリングは、様々な材料がシルクポリペプチドとカップリングする場合に有益である。
【０１４４】
物質の非共有結合的な連結は本発明の方法の工程ｉｉ）の後に行うのが好ましい。大量の共有結合的に連結した物質を有するコーティングされた製品が望まれる場合、物質の連結は数回、例えば工程ｉ）の後と、工程ｉｉ）の後とで行うのが好ましい。好ましくは、該物質が、
（ａ）該シルクポリペプチドのシステイン残基、リジン残基、該アミノ末端、該カルボキシ末端、該アミノ末端ＴＡＧ若しくは該カルボキシ末端ＴＡＧを介して、及び／又は
（ｂ）架橋を介して
シルクポリペプチドと共有結合的に連結する。
【０１４５】
該物質は本発明のプロセスにおいて架橋を介してシルクポリペプチドと共有結合的に連結することができる。「架橋」という用語は、共有結合により２つの分子を化学的に結び付けるプロセスを表す。架橋試薬又はカップリング試薬は、ポリペプチド上に又は他の分子上に特定の官能基に対する反応性末端（第１級アミン、スルフヒドリル等）を含有する。好ましくは、本発明の方法に使用される架橋試薬又はカップリング試薬は、１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）−カルボジイミド塩酸塩（ＥＤＣ）又はグルタルアルデヒドである。
【０１４６】
したがって例えば、本発明の方法に使用される該物質（例えば酵素、抗体又は抗体断片）は、アミド結合を形成することによりシルクポリペプチドのアミノ末端を介して又はカルボキシ末端を介してシルクポリペプチド（例えばＣ１６を含むシルクポリペプチド）と共有結合的に連結することができる。該物質（例えば酵素又は抗体）は、ジスルフィド結合を形成することによりシルクポリペプチドのアミノ末端ＴＡＧ（例えばＴＡＧＣＹＳ１Ｃ１６）を介して又はカルボキシ末端ＴＡＧ（例えばＣ１６ＴＡＧＣＹＳ１）を介してシルクポリペプチドと共有結合的に連結することもできる。加えて、該物質（例えば酵素又は抗体）は、アミド結合を形成することによりシルクポリペプチドのリジン残基（例えばシルクポリペプチドＡＫＱ４の反復単位ＡＫにおけるリジン残基）を介してシルクポリペプチド（例えばＡＫＱ４）と共有結合的に連結することができる。さらに、該物質（例えば酵素又は抗体）は、ジスルフィド結合を形成することによりシルクポリペプチドのシステイン残基（例えばシルクポリペプチドＡＣＱ４の反復単位ＡＣにおけるシステイン残基）を介してシルクポリペプチド（例えばＡＣＱ４）と共有結合的に連結することができる。
【０１４７】
（ａ）で言及されるような該物質とシルクポリペプチドとの共有結合的な連結の組み合わせも好ましい。このため例えば、該物質（例えば酵素又は抗体）は、アミド結合を形成することによりシルクポリペプチドの（ｉ）アミノ末端を介して、及び（ｉｉ）カルボキシ末端を介してシルクポリペプチド（例えばＣ１６を含むシルクポリペプチド）と共有結合的に連結することができる。該物質（例えば酵素又は抗体）は、（ｉ）ジスルフィド結合を形成することによりシルクポリペプチドのシステイン残基（例えばシルクポリペプチドＣ１６ＴＡＧＣＹＳ１のカルボキシ末端ＴＡＧＣＹＳ１におけるシステイン残基）を介してシルクポリペプチド（例えばＣ１６ＴＡＧＣＹＳ１）と、及び（ｉｉ）アミド結合を形成することによりシルクポリペプチドのアミノ末端（例えばシルクポリペプチドＣ１６ＴＡＧＣＹＳ１のＣ１６のアミノ末端）を介してシルクポリペプチド（例えばＣ１６ＴＡＧＣＹＳ１）と共有結合的に連結することもできる。該物質（例えば酵素又は抗体）は、（ｉ）アミド結合を形成することによりシルクポリペプチドのリジン残基（例えばシルクポリペプチドＡＣ４ＴＡＧＬＹＳ１のカルボキシ末端ＴＡＧＬＹＳ１におけるリジン残基）を介してシルクポリペプチド（例えばＡＣ４ＴＡＧＬＹＳ１）と、及び（ｉｉ）ジスルフィド結合を形成することによりシルクポリペプチドのシステイン残基（例えばシルクポリペプチドＡＣ４ＴＡＧＬＹＳ１の反復単位ＡＣにおけるシステイン残基）を介してシルクポリペプチド（例えばＡＣ４ＴＡＧＬＹＳ１）と共有結合的に連結することもできる。
【０１４８】
上述のように、該物質（例えば色素又は酵素）は本発明のプロセスにおいて架橋を介してシルクポリペプチドと共有結合的に連結することができる。好ましくは、本発明の方法に使用される架橋試薬又はカップリング試薬は、１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）−カルボジイミド塩酸塩（ＥＤＣ）又はグルタルアルデヒドである。酵素β−ガラクトシダーゼ及びフルオレセイン色素と、シルクポリペプチドＣ１６でコーティングされたポリアラミド繊維との架橋を実施例ＩＩで説明する。
【０１４９】
好ましくは、共有結合的に連結／カップリングする物質は、ポリペプチド、脂質、色素、共役金属、活性炭、及び作用物質からなる群から選択される。最も好ましくは、
（ｉ）ポリペプチドが酵素、好ましくはβ−ガラクトシダーゼ、抗体、ホルモン、好ましくはインスリン、又は抗原であり、
（ｉｉ）脂質がコレステロール、ステロイド、ワックス、又はオイルであり、
（ｉｉｉ）色素が合成色素、好ましくはアゾ化合物、無機色素、好ましくは金属塩、又は有機色素、好ましくはフルオレセイン色素若しくはローダミン色素であり、
（ｉｖ）共役金属がナノゴールド（商標）であり、
（ｖ）活性炭が粉末活性炭（ＰＡＣ）、粒状活性炭（ＧＡＣ）及び押出成形活性炭（ＥＡＣ）からなる群から選択され、
（ｖｉ）作用物質が医薬品、止血剤、成長刺激剤、抗炎症剤、防汚剤（anti-fouling）、抗微生物剤、抗細菌剤、抗真菌剤、農薬及びＵＶ保護剤からなる群から選択される。
【０１５０】
組み込まれる物質は限定されるものではないが、固体、半固体又は液体であり得る。該物質はシルクポリペプチドと非共有結合的に連結することもできる。該物質がイオン（静電）連結（相互作用）を介して、疎水性連結（相互作用）を介して又は付着を介してシルクポリペプチドと非共有結合的に連結するのが特に好ましい。
【０１５１】
好ましくは、非共有結合的に連結／カップリングする物質は、ポリペプチド、脂質、色素、共役金属、活性炭、金属塩、及び作用物質からなる群から選択される。最も好ましくは、
（ｉ）ポリペプチドが酵素、好ましくはβ−ガラクトシダーゼ、抗体、ホルモン、好ましくはインスリン、又は抗原であり、
（ｉｉ）脂質がコレステロール、ステロイド、ワックス、又はオイルであり、
（ｉｉｉ）色素が合成色素、好ましくはアゾ化合物、無機色素、好ましくは金属塩、又は有機色素、好ましくはフルオレセイン色素若しくはローダミン色素であり、
（ｉｖ）共役金属がナノゴールド（商標）であり、
（ｖ）活性炭が粉末活性炭（ＰＡＣ）、粒状活性炭（ＧＡＣ）及び押出成形活性炭（ＥＡＣ）からなる群から選択され、
（ｖｉ）金属塩が銅、コバルト、ニッケル又は銀からなる群から選択されるカチオンであり、
（ｖｉｉ）作用物質が医薬品、止血剤、成長刺激剤、抗炎症剤、防汚剤、抗微生物剤、抗細菌剤、抗真菌剤、農薬及びＵＶ保護剤からなる群から選択される。
【０１５２】
塩化銅又は塩化コバルトのいずれかと、シルクポリペプチドＣ１６でコーティングされたアラミド繊維との非共有結合的な連結を実施例ＩＩＩで説明する。
【０１５３】
非共有結合的なカップリングは、或る特定期間にわたり該物質の規定の放出を行わせるための金属塩又は作用物質のコーティングへの導入に好適である。これは、幾つかの目的、すなわち医薬技術におけるポリアラミド糸コーティングで必要とされる。現在ではこれにより、コーティングされた不活性な合成材料又は無機材料、例えばポリアラミド糸又は布地からの塩又は作用物質の制御放出を達成することが初めて可能となる。不活性な合成材料又は無機材料、例えばポリアラミド糸又は布地をかかる便利な方法で改良を加えることができることは全く予見不可能であった。
【０１５４】
他の用途、例えば撥水性布地の製造には、物質とシルクポリペプチドとの共有結合的な連結がより好適である。降雨中、組み込まれた物質はシルクでコーティングされた不活性合成材料、不活性無機材料又は自然発生的な材料から洗い流されることはないものとする。加えて、殺菌効果又は発散防止効果を有する布地の製造には、物質、例えば銀又は静菌性化合物と、シルクでコーティングされた不活性合成材料、不活性無機材料又は自然発生的な材料とを共有結合的に連結することも好まれる。
【０１５５】
本発明の方法の工程ｉｉ）を、４℃〜８０℃、好ましくは４℃〜４０℃の温度で行うのが好ましい。例えば、本発明の方法の工程ｉｉ）を、４℃、８℃、１０℃、１２℃、１５℃、１８℃、２０℃、２１℃、２２℃、２３℃、２４℃、２５℃、２８℃、３０℃、３５℃、４０℃、４５℃、５０℃、５５℃、６０℃、６５℃、７０℃、７５℃又は８０℃で行うことができる。最も好ましくは、本発明の方法の工程ｉｉ）を２０℃〜２５℃で行う。
【０１５６】
本発明者らは驚くべきことに、不活性材料又は自然発生的な材料を、穏やかな反応条件、すなわち４℃〜８０℃の温度等の穏やかな温度下でコーティングすることができることを見出している。コーティングされた製品は改善された触感特性及び光学特性を有する。好ましくは、該方法は、
ｉｉｉ）少なくとも２つの同一の反復単位及び任意選択的に少なくとも１つの非反復（ＮＲ）単位を含む少なくとも１つのシルクポリペプチドと溶媒とを含む溶液を準備する工程と、
ｉｖ）不活性材料又は自然発生的な材料上に該溶液を塗布することにより２回目として該不活性材料又は該自然発生的な材料をシルクポリペプチドでコーティングする、塗布することによりコーティングする工程と、
を更に含み、工程（ｉｉｉ）の該シルクポリペプチドが工程（ｉ）の該シルクポリペプチドと同一である又は異なる。このため例えば、本発明の好ましい実施の形態では、該方法は、
ｉｉｉ）シルクポリペプチドＣ１６と、溶媒としてギ酸とを含む溶液を準備する工程と、
ｉｖ）ポリアラミド繊維上に該溶液を塗布することにより２回目として該ポリアラミド繊維をシルクポリペプチドでコーティングする、塗布することによりコーティングする工程と、
を更に含み、工程（ｉｉｉ）のシルクポリペプチドＣ１６は工程（ｉ）のシルクポリペプチドＣ１６と同一である。本発明の別の好ましい実施の形態では、該方法は、
ｉｉｉ）シルクポリペプチド（ＡＱ）２４ＮＲ４と、溶媒としてヘキサフルオロイソプロパノール（ＨＦＩＰ）とを含む溶液を準備する工程と、
ｉｖ）ポリテトラフルオロエチレン糸上に該溶液を塗布することにより２回目としてポリテトラフルオロエチレン糸をシルクポリペプチドでコーティングする、塗布することによりコーティングする工程と、
を更に含み、工程（ｉｉｉ）のシルクポリペプチド（ＡＱ）２４ＮＲ４は工程（ｉ）のシルクポリペプチドＣ１６とは異なる。本発明の更に好ましい実施の形態では、該方法は、
ｉｉｉ）シルクポリペプチドＣ１６を含む水溶液を準備する工程と、
ｉｖ）ポリアラミド繊維上に該溶液を塗布することにより２回目としてポリアラミド繊維をシルクポリペプチドでコーティングする、塗布することによりコーティングする工程と、
を更に含み、工程（ｉｉｉ）のシルクポリペプチドＣ１６は工程（ｉ）のシルクポリペプチドＣ１６と同一である。
【０１５７】
本発明の方法の工程（ｉｉｉ）及び工程（ｉｖ）は、様々な厚さ及び多重層のコーティングされた不活性材料又は自然発生的な材料を得るために数回、好ましくは３回〜１０回、すなわち３回、４回、５回、６回、７回、８回、９回又は１０回繰り返すのが好ましい。
【０１５８】
好ましくは、不活性材料又は自然発生的な材料のコーティングは、１ｎｍ〜５０μｍ、好ましくは４０ｎｍ〜５０μｍ、より好ましくは０．５μｍ〜１０μｍ、より好ましくは０．８μｍ〜８μｍ、最も好ましくは１．０μｍ〜５．０μｍ、すなわち１．０μｍ、１．１μｍ、１．２μｍ、１．３μｍ、１．４μｍ、１．５μｍ、１．６μｍ、１．７μｍ、１．８μｍ、１．９μｍ、２．０μｍ、２．１μｍ、２．２μｍ、２．３μｍ、２．４μｍ、２．５μｍ、２．６μｍ、２．７μｍ、２．８μｍ、２．９μｍ、３．０μｍ、３．１μｍ、３．２μｍ、３．３μｍ、３．４μｍ、３．５μｍ、３．６μｍ、３．７μｍ、３．８μｍ、３．９μｍ、４．０μｍ、４．１μｍ、４．２μｍ、４．３μｍ、４．４μｍ、４．５μｍ、４．６μｍ、４．７μｍ、４．８μｍ、４．９μｍ又は５．０μｍの厚さを有する。
【０１５９】
コーティングされた不活性材料又は自然発生的な材料は、３層、４層、５層、６層、７層、８層、９層又は１０層の異なる又は同一のシルクポリペプチド、好ましくは異なるシルクポリペプチドを含むのが好ましい。
【０１６０】
このため例えば本発明の好ましい実施の形態では、該方法は、
ｉ）シルクポリペプチドＣ１６を含む水溶液を準備する工程と、
ｉｉ）ポリアラミド糸上に溶液を塗布することによりポリアラミド糸をシルクポリペプチドＣ１６でコーティングする、塗布することによりコーティングする工程と、
ｉｉｉ）シルクポリペプチド（ＡＱ）２４ＮＲ４を含む水溶液を準備する工程と、
ｉｖ）ポリアラミド糸上に溶液を塗布することにより２回目としてポリアラミド糸をシルクポリペプチドでコーティングする、塗布することによりコーティングする工程と、
を含み、工程（ｉｉｉ）のシルクポリペプチド（ＡＱ）２４ＮＲ４は工程（ｉ）のシルクポリペプチドＣ１６とは異なり、ポリアラミド糸のコーティングは２つの異なる層（すなわち第１の層：シルクポリペプチドＣ１６及び第２の層：シルクポリペプチド（ＡＱ）２４ＮＲ４）を有し、０．０５μｍの厚さを有する。
【０１６１】
本発明の方法は工程ｉｉ）、工程ｉｉｉ）、及び／又は工程ｉｖ）の後に、可視光、紫外線若しくは耐水性、摩耗、機械的応力、酸及び／又は塩基に対する保護を与える染色／仕上げ加工により、コーティングされた又は非処理材料に事後改良を加える工程を含むのが更に好ましい。
【０１６２】
第２の態様では、本発明は、第１の態様の方法により入手可能なコーティングされた不活性材料又は自然発生的な材料を提供する。
【０１６３】
第３の態様では、本発明は、
（ｉ）繊維、
（ｉｉ）（ｉ）の繊維を含む糸、又は
（ｉｉｉ）（ｉ）の繊維を含む撚糸、織布若しくは不織布
等の第２の態様のコーティングされた不活性材料又は自然発生的な材料を含む製品を提供する。
【０１６４】
第４の態様では、本発明は、或る特定の期間にわたる、好ましくは６時間から最大８日間にわたる、より好ましくは２４時間から最大５日間にわたる、最も好ましくは１２時間、２４時間、４８時間、７２時間、９６時間若しくは１２０時間にわたる少なくとも１つの物質、すなわち１個、２個、３個、４個、５個、６個若しくはそれ以上の物質、好ましくは１個若しくは２個の物質の制御放出のための、又は防護服若しくは撥水性の服の製造のための第２の態様のコーティングされた不活性材料又は自然発生的な材料の使用に関する。
【０１６５】
第５の態様では、本発明は、不活性材料を染色するためのシルクポリペプチドの使用に関する。不活性材料は合成不活性材料又は無機不活性材料であるのが好ましい。好ましくは、不活性材料が、
（ｉ）ポリエステル、ポリアミド（ＰＡ）、ポリアラミド、ポリテトラフルオロエチレン（ＰＴＦＥ）、ポリエチレン（ＰＥ）、ポリプロピレン（ＰＰ）、ポリウレタン（ＰＵ）、シリコーン、ポリウレタンとポリエチレングリコールとの混合物（エラスタン）、超高分子量ポリエチレン（ＵＨＭＷＰＥ）、及び高性能ポリエチレン（ＨＰＰＥ）からなる群から選択される合成不活性材料、又は
（ｉｉ）ガラス、炭素、セラミック、金属、サファイア、ダイアモンド及び半導体からなる群から選択される無機不活性材料
である。
【０１６６】
更なる態様では、本発明は、アレルギー、発疹、湿疹皮膚炎、疱疹、皮膚感染症、乾癬、座瘡、日焼け及び疣贅からなる群から選択される皮膚疾患の治療又は予防のためのシルクポリペプチドに関する。好ましくは、皮膚疾患の予防は保湿効果及びＵＶ線に対する保護に関する。
【０１６７】
別の態様では、本発明は、アレルギー、発疹、湿疹皮膚炎、疱疹、皮膚感染症、乾癬、座瘡、日焼け及び疣贅からなる群から選択される皮膚疾患の治療又は予防のための薬物の製造のためのシルクポリペプチドの使用に関する。好ましくは、皮膚疾患の予防は保湿効果及びＵＶ線に対する保護に関する。
【０１６８】
添付の図面及び以下の実施例は本発明を単に説明するものであり、添付の特許請求の範囲により示されるような本発明の範囲を限定するものとは決して解釈されないものとする。
【図面の簡単な説明】
【０１６９】
【図１】糸をシルクポリペプチドでコーティングする技術プロセスを示す図である。図１によると、シルクポリペプチドをスプレーコーティングにより又はディップコーティングにより糸上に塗布することができる。
【図２】スパイダーシルクでコーティングされたアラミド（ケブラー）フィラメントの電子顕微鏡写真を示す図である。図２は、スパイダーシルクコーティングがアラミド（ケブラー）フィラメント全体にわたって均一に分布していることを示す。
【図３】分子をスパイダーシルクコーティングに共有結合的に接着させる技術プロセスを示す図である。図３は、スパイダーシルクポリペプチドによる未処理の不活性合成繊維のコーティングと、その後の作用物質又は化学分子によるコーティングされた不活性合成繊維のコーティングとを示す。
【図４】未処理の製織済みの布地及びコーティングされた製織済みの布地の異なる倍率での電子顕微鏡写真を示す図である。
【図５】金色に脱色した欧州人の毛（Ａ、Ｂ）のスパイダーシルクポリペプチドＣ１６（３％）によるコーティング前（Ａ）及びコーティング後（Ｂ）の、並びに脱色したことのない（virgin）欧州人の毛（Ｃ、Ｄ）のＡＱ２４ＮＲ３（０．８５％）によるコーティング前（Ｃ）及びコーティング後（Ｄ）のレーザー走査顕微鏡画像（レーザー強度倍率５０×）を示す図である。図５Ａ及び図５Ｂに示される四方形はコーティングの前後での同じセクションの毛サンプルの比較を可能にするために毛サンプル上の特定の特徴的なスポットを指定したものである。
【図６】Ｃ１６（３％）によるコーティング前（Ａ）及びコーティング後（Ｂ）のナイロン（ＰＡ）繊維のレーザー走査顕微鏡画像（レーザー強度倍率１５０×）を示す図である。
【図７】蛍光（EpiVax）及びＣｙ５フィルター下での蛍光画像（Ｐｒｏｘｉｍａ−Ｉｍａｇｅｒ）を示す図である。図７Ａでは、Ｃｙ５を用いた又は用いないＡＱ２４ＮＲ３のウェスタンブロット分析を示す。Ｃｙ５で標識化したＡＱ２４ＮＲ３でコーティングされた人毛を図７Ｂ及び図７Ｃに示す。
【図８】未処理の人の皮膚（図８Ａ）及びシルクタンパク質でのコーティング後の人の皮膚（図８Ｂ）を示す図である。シルクタンパク質によるコーティング後、皮膚の疎水性が大幅に低減し、これにより水滴の濡れ挙動が極めて大きくなる。図中の英語図１thread 糸spray スプレーbath 溶液槽coated thread コーティングされた糸 図２Spider Silk Coating スパイダーシルクコーティングKevlar ケブラーKevlar Filament ケブラーフィラメントCoated Kevlar Filament コーティングされたケブラーフィラメント 図３untreated synthetic fiber 未処理の合成繊維coating process with spider silk proteins スパイダーシルクタンパク質によるコーティングプロセスcoated fiber コーティングされた繊維agent/chemical molecule 作用物質／化学的分子coated fiber with attached molecules 接着した分子を有するコーティングされた繊 図４untreated 未処理coated fabric コーティングされた繊維
【発明を実施するための形態】
【実施例】
【０１７０】
コーティング反応を行うために、本発明者らは例示的に、ニワオニグモ（European gardencross spider Araneus diadematus）由来のドラグラインシルクタンパク質ＡＤＦ−３及びＡＤＦ−４から誘導される合成シルクポリペプチドＣ１６、Ｃ３２、Ｃ１６ＮＲ４、（ＡＱ）２４及び（ＡＱ）２４ＮＲ３を設計した。これらのタンパク質は、ＡＤＦ−３及びＡＤＦ−４、並びにそれらの変異体が効率的な集合挙動を示すというこれまでの観察結果に基づき選択された。
【０１７１】
実施例Ｉ：スパイダーシルクポリペプチドＣ１６によるアラミド繊維のコーティング
単一のアラミド（ケブラー）繊維を、室温（２５℃）で２ｗｔ％／ｖｏｌのスパイダーシルクポリペプチドＣ１６を含有するＨＦＩＰ（ヘキサフルオロイソプロパノール）溶液中で５秒間インキュベートした。溶媒を蒸発させた後、スパイダーシルクポリペプチドＣ１６がアラミド繊維の周りに透明な膜を形成した。電子顕微鏡検査により測定された膜の厚さは３μｍであった（図２を参照されたい）。
【０１７２】
同じ結果を、ギ酸及び水等の他の溶媒を用いて得ることができる。同様の実験を、ナイロン繊維、ガラス繊維、炭素繊維、セルロース繊維、ＰＴＦＥ（テフロン登録商標）繊維、エラスタン（スパンデックス）繊維及び人毛を用いて行った。したがって記載の方法を用いて全ての試験繊維をコーティングすることができた。
【０１７３】
コーティングされた繊維の化学安定性を試験するために、スパイダーシルクポリペプチドＣ１６コーティングを、８Ｍの尿素、６Ｍの塩酸グアニジン及び６Ｍのチオシアン酸グアニジン中で２４時間インキュベートした。１Ｍのリン酸カリウム又は１００％メタノールで処理したスパイダーシルクポリペプチドＣ１６コーティングはチオシアン酸グアニジン中にだけ溶解することができた。スパイダーシルクポリペプチドＣ１６コーティングのこの顕著な化学安定性は天然のドラグラインシルクの化学安定性と、及び組換えにより作製した集合化したＡＤＦ−４の化学安定性と同程度である。これまでの研究から、集合化した構造体の集合性及び安定性をシルクタンパク質のアミノ酸配列と直接相関させることができた。このため、スパイダーシルクコーティングの特性は、対応するシルク遺伝子の操作を介してシルクタンパク質の一次構造を変えることにより直接修飾することができる。
【０１７４】
実施例ＩＩ：物質とアラミド繊維上にコーティングしたシルクポリペプチドＣ１６との化学架橋を介した共有結合的なカップリング
繊維の多くの用途には繊維表面上の特定の官能基の存在が必要とされる。スパイダーシルクコーティングに続いて物質を用いて改良を加えることができることを実証するために、原理の証明として、発色団フルオレセインと酵素β−ガラクトシダーゼとを、アラミド繊維上にコーティングしたシルクポリペプチドＣ１６と化学的にカップリングさせた（図３を参照されたい)。カップリングは、１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド（ＥＤＣ）を用いてスパイダーシルクポリペプチドＣ１６の表面に曝されたカルボキシル基を活性化することにより達成された。スパイダーシルクポリペプチドＣ１６でコーティングされたアラミド繊維をエチレンジアミンとともに更にインキュベートし、アミドを形成させた。続いてエチレンジアミンの残りの遊離アミノ基をイソチオシアン酸フルオレセインとカップリングさせ、それにより安定したチオ尿素誘導体の形成を介したフルオレセインの効率的な共有結合的な連結がもたらされた。
【０１７５】
同様に、β−ガラクトシダーゼとＥＤＣにより活性化されたＣ１６膜とのインキュベーションにより、シルクポリペプチドＣ１６のカルボキシル基と、β−ガラクトシダーゼの酵素表面でアクセス可能であった第１級アミン（例えばリジン残基由来）との間でアミド結合が形成された。かかる改良を加えた繊維を繰り返し洗浄した後でも、β−ガラクトシダーゼの活性を、基質として５−ブロモ−４−クロロ−３−インドリル−β−Ｄ−ガラクトピラノシド（Ｘ−Ｇａｌ）を用いて検出することができた。
【０１７６】
実施例ＩＩＩ：物質とアラミド繊維上にコーティングしたシルクポリペプチドＣ１６との非共有結合的なカップリング
物質とスパイダーシルクポリペプチドＣ１６でコーティングされたアラミド繊維との上述の共有結合的なカップリングに加えて、非共有結合的なカップリングも行った。単一のアラミド繊維を２ｗｔ％／ｖｏｌのスパイダーシルクポリペプチドＣ１６と塩化銅又は塩化コバルトとを含有するギ酸中で室温（２５℃）で５秒間インキュベートした。溶液槽から取り出し、溶媒を蒸発させた後、塩化コバルト又は塩化銅がスパイダーシルクポリペプチドＣ１６でコーティングされたアラミド繊維の周りに色の付いた膜を形成した。
【０１７７】
実施例ＩＶ：スパイダーシルクポリペプチドＣ１６による綿織布のコーティング
単繊維だけではなく、製織済みの布地もスパイダーシルクによるコーティングに好適なテンプレートである。綿の製織済みの布地及び綿繊維を２ｗｔ％／ｖｏｌのスパイダーシルクポリペプチドＣ１６溶液中で別々にインキュベートした。乾燥した後、綿織布及び綿繊維は同程度のコーティング挙動を示した（図４を参照されたい）。
【０１７８】
このため既製の布地の直接コーティングにより、既にシルクでコーティングされた繊維で作られた布地と比較して同程度であるが、異なるコーティングパターンがもたらされる。例えば布地のコーティングにより、隙間をコーティングすることができるが、布地のコーティングでなければスパイダーシルクコーティングによって繊維及び交差箇所だけしかコーティングされ（engulfed）ず、隙間はコーティングされない。これは製織前の繊維のコーティング又は製織済みの布地の処理のいずれによっても、様々な用途に好適なむらなくコーティングされた材料がもたらされることを示している。
【０１７９】
実施例Ｖ：スパイダーシルクポリペプチドＣ１６によるアラミド糸のディップコーティング
スパイダーシルクポリペプチドＣ１６によるアラミド糸のディップコーティングを行うために、スパイダーシルクポリペプチドＣ１６を水溶液（１０ｍＭのトリス、ｐＨ７．５）に溶解した。水溶液中のシルクポリペプチドＣ１６の濃度は２ｗｔ％／ｖｏｌであった。ディップコーティング手法（図１も参照されたい）には、以下のものが含まれていた。
ｉ）浸漬：アラミド糸を５ｍ／ｓの一定速度でスパイダーシルクポリペプチドＣ１６溶液中に浸漬し、
ｉｉ）インキュベーション：基材をコーティング溶液中で２分間インキュベートし、コーティング材を基材に付着させ、
ｉｉｉ）引き揚げ：アラミド糸から余分な基材を５ｍ／ｓの一定速度で取り除き、
ｉｖ）後処理：コーティングを室温（２５℃）で乾燥した。
【０１８０】
実施例ＶＩ：スパイダーシルクポリペプチドＣ１６によるアラミド糸のスプレーコーティング
スパイダーシルクポリペプチドＣ１６によるアラミド糸のスプレーコーティングを行うために、スパイダーシルクポリペプチドＣ１６を水溶液（１０ｍＭのトリス、ｐＨ７．５）に溶解した。水溶液中のシルクポリペプチドＣ１６の濃度は２ｗｔ％／ｖｏｌであった。スプレーコーティング手法（図１も参照されたい）には、以下のものが含まれていた。
ｉ）準備：スパイダーシルクポリペプチドＣ１６溶液をスプレー缶又は噴霧装置に移し、
ｉｉ）コーティング：シルクポリペプチドＣ１６溶液をスプレー缶によりアラミド糸上に均一に分配させ、
ｉｉｉ）後処理：コーティングを室温（２５℃）で乾燥した。
【０１８１】
実施例ＶＩＩ：スパイダーシルクポリペプチドＣ１６によるアラミド糸のパディング
スパイダーシルクポリペプチドＣ１６をギ酸中に溶解した。ギ酸中のシルクポリペプチドＣ１６の濃度は１０ｍｇ／ｍｌであった。異なるタイプの糸（テフロン登録商標（Goodfellow、繊維径：０．０２１１ｍｍ）、セルロース（Goodfellow、繊維径：０．０１５ｍｍ）、原綿、ケブラー（Goodfellow、繊維径：０．０１７ｍｍ）、エラスタン（スパンデックス）、未処理の人毛及び処理済みの（フケを含まない）人毛）をディップコーティング方法に従ってコーティングした。スパンデックス及び原綿糸は脱イオンＨ２Ｏで洗浄し、乾燥した後にコーティングした。糸をスパイダーシルクポリペプチドＣ１６／ギ酸溶液中で５秒間インキュベートし、コーティング材を基材に付着させた。コーティングを室温（２５℃）で乾燥した。
【０１８２】
実施例ＶＩＩＩ：スパイダーシルクポリペプチドＣ１６によるナイロン糸のコーティング
スパイダーシルクポリペプチドＣ１６を水溶液（１０ｍＭのトリス、ｐＨ７．５）に溶解した。ギ酸中のシルクポリペプチドＣ１６の濃度は１ｗｔ％／ｖｏｌであった。ナイロン糸（Goodfellow、繊維径：０．０１ｍｍ）をコーティング溶液中で５秒間インキュベートし、コーティング材を基材に付着させた。コーティングを室温（２５℃）で乾燥した。
【０１８３】
実施例ＩＸ：様々なスパイダーシルクタンパク質による材料のコーティング
材料（コーティングされたスライドガラス、特にシリコンマトリクス（Sciences Services,Munich, Germany）を有するコーティング材でコーティングされたスライドガラス）をコーティングするために様々なタンパク質Ｃ１６、ＡＱ２４ＮＲ３、Ｃ１６ＮＲ４、ＡＱ２４、Ｃ８及びＣ３２を使用した。様々なタンパク質Ｃ１６、ＡＱ２４ＮＲ３、Ｃ１６ＮＲ４、ＡＱ２４、Ｃ８及びＣ３２によるスライドガラスのコーティングは、コーティングされたスライドガラス、特にシリコンマトリクスでコーティングされたスライドガラスとともに例示的に示されている。様々なタンパク質Ｃ１６、ＡＱ２４ＮＲ３、Ｃ１６ＮＲ４、ＡＱ２４、Ｃ８及びＣ３２による、コーティングされたスライドガラス、特にシリコンマトリクスでコーティングされたスライドガラスのコーティングの結果は、様々なタンパク質Ｃ１６、ＡＱ２４ＮＲ３、Ｃ１６ＮＲ４、ＡＱ２４、Ｃ８及びＣ３２による他のスライドガラス（コーティングされていない、特にシリコンマトリクスを有するコーティング材ではコーティングされていない）のコーティングの結果と類似している。トリス緩衝水溶液中のＣ１６、ＡＱ２４ＮＲ３及びＣ１６ＮＲ４の最終タンパク質濃度はそれぞれ、３％、０．５％及び２．１％であった。ディップコーティング方法を使用した。上記方法には以下の工程が含まれていた：溶液中への６０秒のディッピング、溶液から取り出して３０秒の乾燥、溶液中への材料の３０回の再浸、及び精製水（Ｍｉｌｌｉ−Ｑ）によるすすぎ。ＡＱ２４、Ｃ８及びＣ３２を２％の濃度でギ酸中に溶解した。スピンコーティング方法を１０００ｒｐｍで１分間使用した。それから材料（コーティングされたスライドガラス、特にシリコンマトリクスを有するコーティング材でコーティングされたスライドガラス）の表面を小さい針を用いて削った。コーティングされた材料と非コーティング（raw）材料との高さの差異をレーザー走査顕微鏡（ＶＫ ９７００ Keyence, NeuIsenburg, Germany）を用いて様々なスポットで分析した。
【０１８４】
表１は、材料（スライドガラス）を様々なスパイダーシルクタンパク質で均質にコーティングすることができたことを示している。コーティングの厚さはタンパク質の性質（親水性及び電荷）、溶媒の湿潤性及びコーティング方法によって変わる。
【０１８５】
【表１】
「＊＊」:高度に均質なコーティング 「＊」 :均質なコーティング
表１の英語
Spider silk protein:スパイダーシルクタンパク質
coating:コーティング
Coating thickness:コーティングの厚さ
Homogeneity:均質性
yes:あり
【０１８６】
実施例Ｘ：様々な溶媒を用いるスパイダーシルクポリペプチドＣ１６による材料のコーティング
様々な溶媒（１００ｍＭのトリス、ｐＨ８；トリフルオロ酢酸；ギ酸；ヘキサフルオロイソプロパノール）を、Ｃ１６を溶解し、材料（コーティングされたスライドガラス、特にシリコンマトリクス（Sciences Services, Munich, Germany）を有するコーティング材でコーティングされたスライドガラス）をコーティングするために使用した。様々なタンパク質Ｃ１６、ＡＱ２４ＮＲ３、Ｃ１６ＮＲ４、ＡＱ２４、Ｃ８及びＣ３２によるスライドガラスのコーティングは、コーティングされたスライドガラス、特にシリコンマトリクスでコーティングされたスライドガラスとともに例示的に示されている。様々なタンパク質Ｃ１６、ＡＱ２４ＮＲ３、Ｃ１６ＮＲ４、ＡＱ２４、Ｃ８及びＣ３２による、コーティングされたスライドガラス、特にシリコンマトリクスでコーティングされたスライドガラスのコーティングの結果は、様々なタンパク質Ｃ１６、ＡＱ２４ＮＲ３、Ｃ１６ＮＲ４、ＡＱ２４、Ｃ８及びＣ３２による他のスライドガラス（コーティングされていない、特にシリコンマトリクスを有するコーティング材ではコーティングされていない）のコーティングの結果と類似している。コーティングには、水溶液（トリス（１００ｍＭ、ｐＨ８））を使用した。上記溶液中のＣ１６の最終タンパク質濃度は３％であった。ディップコーティング方法を使用した。上記方法には以下の工程が含まれていた：溶液中への６０秒のディッピング、溶液から取り出して３０秒の乾燥、溶液中への材料の３０回の再浸、及びミリポア水によるすすぎ。またＣ１６を１％の最終濃度でトリフルオロ酢酸、ギ酸及びヘキサフルオロイソプロパノール中に直接溶解した。スピンコーティング方法を１０００ｒｐｍで１分間使用した。それからコーティングされた材料（コーティングされたスライドガラス、特にシリコンマトリクスを有するコーティング材でコーティングされたスライドガラス）の表面を小さい針を用いて削った。コーティングされた材料と非コーティング材料との高さの差異をレーザー走査顕微鏡（ＶＫ ９７００ Keyence, Neu-Isenburg, Germany）を用いて様々なスポットで分析した。
【０１８７】
表２は、材料（スライドガラス）をＣ１６でコーティングすることができたことを示している。厚さはタンパク質の性質、溶媒の湿潤性及びコーティング方法によって変わる。
【０１８８】
【表２】
＊＊：高度に均質なコーティング ＊：均質なコーティング
表中英語
Solvent:溶媒
Coating:コーティング
Coating thickness:コーティングの厚さ
Homogeneity:均質性
溶媒名上から順次：１００ｍＭのトリス、ｐＨ８、トリフルオロ酢酸、ギ酸、ヘキサフルオロイソプロパノール
【０１８９】
実施例ＸＩ：Ｃ１６による自然発生的な材料のコーティング
Ｃ１６及びＡＱ２４ＮＲ３を用いて、人毛、綿（「Ｏｂｅｒｇａｒｎ」繊維）、ゴム、羊毛及びセルロース（Good fellow、ｄ＝０．０１５ｍｍ、Huntington, GreatBritain）等の様々な自然発生的な材料（有機材料）をコーティングした。金色に脱色した欧州人の毛を３％のタンパク質濃度でＣ１６のトリス緩衝水溶液（１００ｍＭ、ｐＨ８）を用いてドロップコーティングし（drop-coated）、その後乾燥して（until drying）、精製水（Ｍｉｌｌｉ Ｑ）ですすいだ。脱色したことのない欧州人の毛を０．８５％のタンパク質濃度で精製水（Ｍｉｌｌｉ Ｑ）に溶解したＡＱ２４ＮＲ３の溶液を用いてドロップコーティングし、その後乾燥した。綿、ゴム、羊毛及びセルロースを、１．３５％のタンパク質濃度でＣ１６のトリス緩衝水溶液（１００ｍＭ、ｐＨ８）を用いてコーティングした。ディップコーティング方法を使用した。上記方法には以下の工程が含まれていた：溶液中への１２０秒のディッピング、溶液から取り出して１２０秒の乾燥、溶液中への材料の１０回の再浸、及び精製水（Ｍｉｌｌｉ Ｑ）によるすすぎ。それぞれのコーティングされた繊維（コーティング）をコーティングされていない参照繊維（参照）と比較した。人毛、綿、羊毛及びセルロースのコーティングされた繊維とコーティングされてない繊維の半径を比較して、コーティングの厚さを定量化した。コーティングをレーザー走査顕微鏡（ＶＫ ９７００ Keyence, Neu-Isenburg, Germany）を用いて様々なスポットで分析した。結果を表３にまとめる。
【０１９０】
【表３】
Ｒａ＠：計算による中間の高さ ＊＊：高度に均質なコーティング
＊：均質なコーティング Ｘ：僅かに均質なコーティング
表中英語
Material:材料
Coating:コーティング
radius References:半径（参照）
Radius Coating:半径（コーティング）
Coating thickness:コーティングの厚さ
Roughness Ra@:粗度
Coating:コーティング
Reference:参照
Homogeneity:均質性
Treated Hair:処理した毛
Virgin Hair:脱色したことのない毛
Cotton:綿
Rubber:ゴム
Wool:羊毛
Cellulose:セルロース
Yes:あり
【０１９１】
表３は、様々な自然発生的な材料（有機材料）のコーティングを示している。これらの材料はコーティング後に厚さの増大を示した。処理した毛及び脱色したことのない毛は粗度の低減を示した。綿繊維は撚り合わされ、より大きい繊維を形成した。そのため単繊維を画像化し、直径の差異を推測することは困難であった。繊維は長さ全体にわたって一定の直径を有していなかったため、厚さを正確に推測することはできなかったが、コーティングははっきりと見て取れた。羊毛はＣ１６で均質にコーティングすることができた。セルロースはＣ１６でコーティングすることができた。セルロースの特質のために、この実験では該コーティング方法による均質なコーティングを検出することはできなかった。セルロースはおおよそ平滑な繊維ではないため、均質とするにはコーティングの厚さが十分ではなかった。しかしながら、コーティングサイクルの回数の増大により、コーティングの均質性を増大させることができる。
【０１９２】
図５におけるレーザー走査画像は、ヘアケラチン繊維のコーティングの差異を示している。脱色した毛及び脱色したことのない毛の両方で、コーティングの際にキューティクルが消失し、繊維表面がより均質になった。粗度がコーティングの厚さに伴い低減した。コーティング材の添加により毛繊維が平滑になった。光反射はレーザー強度として測定することができた。参照となる脱色した毛では、全長にわたる平均値は１３１９８であり、コーティングされた毛では、（１６３８４のグレイステップ（grey steps）に対して）平均値は約１３６３２であった。参照となる脱色したことのない毛では、平均値は約１３５１７であったが、コーティングされた毛の平均値は１３７４６であった。レーザー強度はグレイステップで特定する。最小値は０の値を示し、最大値は１６３８４の値を示す。値が高くなると、サンプル／材料の反射／輝度が高くなる。脱色した毛及び脱色したことのない毛の場合、コーティングされた毛の値はそれぞれ参照と比較して高かった。コーティングは繊維の輝度を高めた。
【０１９３】
実施例ＸＩＩ：スパイダーシルクポリペプチドＣ１６による無機不活性材料のコーティング
Ｃ１６を用いて、ガラス（スライドガラス、Roth; Karlsruhe,Germany）、炭素（炭素繊維プレート、R&G GmbH）及び金属（金属プレート）等の様々な無機不活性材料をコーティングした。スライドガラスでは，Ｃ１６をギ酸中に直接溶解した（最終タンパク質濃度１％）。スピンコーティング方法を１０００ｒｐｍで１分間使用した。炭素及び金属プレートでは、コーティングをＣ１６の水溶液（１００ｍＭのトリス、ｐＨ８）を用いて行った。最終濃度は１．３５％であった。炭素プレートでのディップコーティング方法には以下の工程が含まれていた：溶液中への１２０秒のディッピング、溶液から取り出して１２０秒の乾燥、溶液中への材料の１０回の再浸、及びミリポア水によるすすぎ。金属プレートでのディップコーティング方法には以下の工程が含まれていた：溶液中への１２０秒のディッピング、溶液から取り出して１２０秒の乾燥、溶液中への材料の１０００回の再浸、及び精製水（Ｍｉｌｌｉ Ｑ）によるすすぎ。それからコーティングされた材料（金属プレート、炭素プレート）の表面を小さい針を用いて削った。コーティングされた材料（金属プレート、炭素プレート）の表面をレーザー走査顕微鏡（ＶＫ ９７００ Keyence, Neu-Isenburg, Germany）を用いて様々なスポットで分析した。コーティングされた材料とコーティングされてない材料とを比較した。コーティング材料と非コーティング材料との間の高さの差異により、コーティングの厚さを推測した。コーティングは基材表面を平滑にした。結果を表４にまとめる。
【０１９４】
【表４】
Ｒａ：計算による中間の高さ Ｒｑ：二次高さ平均 ＊：均質なコーティング
Ｘ：僅かに均質なコーティング
表中英語
Inorganic inert material:無機不活性材料
Coating:コーティング
Coating thickness:コーティングの厚さ
Roughness:粗度
Reference:参照
Homogeneity:均質性
Carbon fiber plate:炭素繊維プレート
Yes:あり
【０１９５】
表４は、無機材料上のＣ１６コーティングの厚さを示している。ガラス、炭素及び金属をコーティングすることができた。ガラスの場合、均質なコーティングを検出することができた。コーティングされたガラスはコーティングされていないガラス（参照）と比較して粗度の低減を示した。
【０１９６】
実施例ＸＩＩＩ：スパイダーシルクポリペプチドＣ１６による合成不活性材料のコーティング
Ｃ１６を用いて、ポリエステル（ＰＥＴ、Ｓｙｎｇａｒｎ繊維）、ポリアミド（ＰＡ、Goodfellow、ｄ＝０．０１ｍｍ）、ポリテトラフルオロエチレン（ＰＴＦＥ、Good Fellow、ｄ＝０．０２１１ｍｍ）、ポリプロピレン（ＰＰ、Good Fellow製のプレート）、超高分子量ポリエチレン（ＵＨＭＷ ＰＥ、GoodFellow製のプレート）、エラスタン及びポリアラミド等の様々な合成不活性材料をコーティングした。ポリエステル、ポリアミド、ＰＴＦＥ、ポリプロピレン、ＵＨＭＷポリエチレンのコーティングはＣ１６の水溶液（１００ｍＭのトリス、ｐＨ８）を用いて行った。最終タンパク質濃度は１．３５％であった。ディップコーティング方法を使用した。上記方法には以下の工程が含まれていた：溶液中への６０秒のディッピング、溶液から取り出して３０秒の乾燥、溶液中へのサンプルの３０回の再浸、及びミリポア水によるすすぎ。エラスタン及びポリアラミドを１４％の最終タンパク質濃度でＣ１６のトリス緩衝溶液（１００ｍＭ、ｐＨ８）を用いてコーティングした。繊維を溶液中に３回ディッピングし、ミリポア水ですすいだ。各材料をコーティングされていない参照と比較した。ＰＥ、ＰＡ、ＰＴＦＥ、エラスタン及びポリアラミドは繊維の形態であった。コーティングの厚さを推測するために、繊維の半径を比較することができる。繊維の全長にわたるコーティングの厚さを推測することは不可能であった。このため、繊維をレーザー走査顕微鏡（ＶＫ ９７００ Keyence, Neu-Isenburg, Germany）を用いて様々なスポットで分析した。結果を表５にまとめる。
【０１９７】
【表５】
表中英語
Synthetic inert material:合成不活性材料
Coating:コーティング
Radius ref:半径（参照）
Radius coated:半径（コーティング）
Coating thickness:コーティングの厚さ
Homogeneity:均質性
Yes:あり
【０１９８】
表５は合成不活性材料上のＣ１６コーティングの厚さを示している。全ての材料をコーティングすることができた。ＰＥＴ、ＰＡ、ＰＴＦＥ、エラスタン及びポリアラミドの場合、コーティングされていない参照と比較したコーティングされた合成不活性材料の厚さの増大が検出された。ＰＴＦＥ繊維の場合、コーティングは僅かに均質であった。４．３μｍというコーティングの厚さの値は平均である。ＰＰ及びＵＨＭＷ ＰＥプレートでは、コーティングをはっきりと検出することができた。エラスタンは撚り合わされた多くの繊維からなる。このため、測定した厚さの値は撚り合わされた幾つかの繊維上のコーティングの厚さを表す。ポリアミド（ＰＡ）繊維の平滑表面のコーティングでは、均質性の低い表面が生じた。これはポリアミド（ＰＡ、ナイロン）繊維のレーザー走査顕微鏡画像（図６）によって示される。Ｃ１６によるコーティング前（図６Ａ）及びコーティング後（図６Ｂ）の繊維が示される。コーティングは繊維全体にわたって検出可能であった。コーティング後、繊維表面の均質性は低かった（図６Ｂ）。
【０１９９】
実施例ＸＩＶ：Ｃｙ５蛍光タグと架橋したＡＱ２４ＮＲ３による人毛のコーティング
ＡＱ２４ＮＲ３（タンパク質濃度４ｍｇ／ｍｌ）のチオシアン酸グアニジン溶液（５Ｍ）を調製し、ｐＨ８で１００ｍＭのトリス緩衝液に対して透析し、１ｍｇ／ｍｌのタンパク質溶液を得た（このタンパク質によるコーティングを図７Ｂに示す）。更なる実験で、ＡＱ２４ＮＲ３（タンパク質濃度２ｍｇ／ｍｌ）の５Ｍ尿素溶液を調製し、ｐＨ８で１００ｍＭのトリス緩衝液に対して透析した（このタンパク質によるコーティングを図７Ｃに示す）。タンパク質溶液をＡｍｅｒｓｈａｍ（商標）Ｃｙ（商標）５ Ｍａｌｅｉｍｉｄｅ Ｍｏｎｏ−Ｒｅａｃｔｉｖｅ Ｄｙｅ（GE Healthcare、カタログ番号ＰＡ２５０３１）で標識化した。蛍光タグによるバイオコンジュゲーション（bioconjugation）をシステインのスルフヒドリル基（１分子あたり１つ）を用いて行った。ジスルフィド結合を低減するのに使用する１８ｍｇ／ｍｌのＴＣＥＰのトリス溶液（１０μＬ、トリス（２−カルボキシエチル）ホスフィン）（ｐＨ７）をタンパク質溶液に添加した。タンパク質溶液を室温（ＲＴ）で１０分間インキュベートした。Ｃｙ５−マレイミド（GE Healthcare）の色素溶液を５０μＬの無水ジメチルホルムアミド（Dimethylformamide）（ＤＭＦ）と混合し、そのうち４０μＬをタンパク質溶液に添加した。溶液を室温で２時間及び４℃で終夜インキュベートした。タンパク質溶液（３μｇ）をウェスタンブロット分析に直接使用した。
【０２００】
未処理の人毛をタンパク質溶液中に１０分間入れ、純水（ｍｉｌｌｉ Ｑ）ですすいだ（図７Ｂ）。インド人の毛先を標的化したタンパク質溶液中に１０分間入れ、それから空気乾燥した（図７Ｃ）。毛及びゲルを、Ｅｐｉ−Ｖｅｘ光とＣｙ５フィルターを有するＰｒｏｘｉｍａを用いて画像化した（図７Ａ）。ウェスタンブロットゲル上で、標識化したＡＱ２４ＮＲ３タンパク質と標識化していないＡＱ２４ＮＲ３タンパク質とを比較した。標識化したタンパク質だけをＣｙ５フィルター下で検出することができる。結果として、蛍光標識化したタンパク質が発光し、標識化していないものは見ることができなかった。タンパク質は蛍光色素と共有結合した。溶液中のシルクを、様々なアドレス可能なアミノ基を用いて化学的に修飾することができる。Ｃｙ５で標識化したＡＱ２４ＮＲ３タンパク質を用いて、コーティング特質及び蛍光特質を変えることなく毛等の様々な基材をコーティングすることができる。毛のコーティングはＣｙ５フィルター下で見ることができる（図７）。
【０２０１】
全体的な結論として、実験により、本発明の方法が合成不活性材料、無機不活性材料及び自然発生的な材料のコーティングを可能にすることが例示的に示される。コーティングの均質性はシルクの化学的性質（親水性及び電荷）、材料の化学的性質、材料の形状、選択される溶媒及びコーティング方法によって変わる。化学的に修飾されたシルクタンパク質を様々な基材上にコーティングすることもできる。
【０２０２】
実施例ＸＶ：ＡＱ２４ＮＲ３によるインド人の毛及び脱色したことのない人毛のコーティング
実験により、欧州人の脱色したことのない毛（一度も化学物質で処理していない）及びインド人の毛（化学物質で処理し、エクステンションに使用する）に対するタンパク質コーティングの効果が示される。タンパク質ＡＱ２４ＮＲ３を毛の処理のために様々なタンパク質濃度で使用した。０．２％タンパク質溶液では、ＡＱ２４ＮＲ３を５Ｍの尿素に溶解し、純水（Ｍｉｌｌｉ Ｑ）に対して透析した。０．６％及び０．８５％タンパク質溶液では、ＡＱ２４ＮＲ３を任意の透析工程を用いずに純水（Ｍｉｌｌｉ Ｑ）に直接溶解した。欧州人の脱色したことのない毛又はインド人の毛を上述のタンパク質溶液中に約１０分間入れ、それから空気乾燥した。欧州人の脱色したことのない毛又はインド人の毛上の全く同じスポット（粘着テープ（adhesive strip）及び油性マーカーで印を付ける）を、上述のタンパク質溶液による処理の前後でレーザー走査顕微鏡（ＶＫ ９７００ Keyence, Neu Isenburg, Germany）を用いて分析した。結果を表６〜表９に示す。分析をKeyenceのＶＫアナライザを用いて行った。
【０２０３】
【表６】
表中英語
表６．Thickness coating on Indian hair:インド人の毛上のコーティングの厚さ
Conditioner concentration:コンディショナーの濃度
Radius untreated hair:未処理の毛の半径
Radius treated hair:処理した毛の半径
Coating thickness:コーティングの厚さ
表７．Average surfeace roughness(Ra) of indian hair:インド人の毛の平均表面粗度（Ｒａ）
Conditioner concentration::コンディショナーの濃度
Ra untreated hair:未処理の毛のＲａ
Ra treated hair:処理した毛のＲａ
Roughness reduction:粗度の低減
表８．Thickness coating on European virgin hair:欧州人の脱色したことのない毛上のコーティングの厚さ
Conditioner concentration:コンディショナーの濃度
Radius untreated hair:未処理の毛の半径
Radius treated hair:処理した毛の半径
Coating thickness:コーティングの厚さ
表９．Average surface roughness(Ra) of European virgin hair:欧州人の脱色したことのない毛の平均表面粗度（Ｒａ）
Conditioner concentration:コンディショナーの濃度
Ra untreated hair:未処理の毛のＲａ
Ra treated hair:処理した毛のＲａ
Roughness reduction:粗度の低減
【０２０４】
タンパク質溶液の濃度の増大（すなわち０．２％から０．８５％への）により、コーティングされた毛の半径の増大がもたらされた。毛表面の粗度がコーティングの厚さの増大に伴い低減した。加えて、毛表面の平滑性がコーティングの厚さの増大に伴い増大した。
【０２０５】
実施例ＸＶＩ：スパイダーシルクタンパク質Ｃ１６による人の皮膚のコーティング
未処理の人の皮膚（図８Ａ）及びシルクタンパク質によるコーティング後の人の皮膚（図８Ｂ）。水滴（明確にするために染色した）は通常、無傷の皮膚の疎水性の性質により人の皮膚を湿らせることはない。シルクタンパク質によるコーティング後、皮膚の疎水性が大幅に低減し、水滴の極めて高い濡れ挙動がもたらされる。
【０２０６】
詳細には、スパイダーシルクタンパク質Ｃ１６（１ｍｇ／ｍｌ）の尿素溶液（５％）を調製した。ラウリル硫酸ナトリウム無含有石鹸で手の皮膚を洗浄し、続いて空気乾燥した後、４０μlのタンパク質−尿素溶液（Ｂ）及び４０μlの尿素（５％）対照溶液（タンパク質なし）（Ａ）を規定の皮膚領域上に塗布した（図８を参照されたい）。シルクコーティングにより、間断ない不可視膜が生じ、これにより皮膚の親水性が増大し、皮膚の保護がもたらされる。乾燥後、４０μlの純水を皮膚上に塗布した（図８）。シルクでコーティングされた皮膚の親水性の増大により、水を皮膚に即座に浸透させることが可能であったが（図８Ｂ）、図８Ａでは水滴はコーティングされていない皮膚に浸透しなかった。図８Ｂ（シルクでコーティングされた皮膚）は、はっきりした水滴を示す図８Ａ（コーティングされていない皮膚）に比して広領域にわたり広がる水滴を示す。コーティング不可視膜の保護特性は、水／石鹸による洗浄と乾燥とのサイクルに数回耐えた。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
不活性材料又は自然発生的な材料をシルクポリペプチドでコーティングする方法であって、
ｉ）少なくとも２つの同一の反復単位を含む少なくとも１つのシルクポリペプチドと溶媒とを含む溶液を準備する工程と、
ｉｉ）不活性材料又は自然発生的な材料上に該溶液を塗布することにより該不活性材料又は該自然発生的な材料を該シルクポリペプチドでコーティングする、塗布することによりコーティングする工程と、
を含む、不活性材料又は自然発生的な材料をシルクポリペプチドでコーティングする方法。
【請求項２】
溶液を、ディップコーティング、スプレーコーティング及び／又はパディングを用いて塗布する、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
シルクポリペプチドが、各々が、
ｉ）ＧＰＧＸＸ（配列番号３）（ここでＸは任意のアミノ酸、又はそれぞれの場合で独立してＡ、Ｓ、Ｇ、Ｙ、Ｐ及びＱから選択される任意のアミノ酸である）、
ｉｉ）ＧＧＸ（ここでＸは任意のアミノ酸、又はそれぞれの場合で独立してＹ、Ｐ、Ｒ、Ｓ、Ａ、Ｔ、Ｎ及びＱから選択される任意のアミノ酸である）、及び
ｉｉｉ）Ａｘ（ここでｘは５〜１０の整数である）
からなる群から選択されるコンセンサス配列を少なくとも１つ含む少なくとも２つの同一の反復単位を含む、請求項１又は２に記載の方法。
【請求項４】
反復単位が独立して、モジュールＡ（配列番号２０）、モジュールＣ（配列番号２１）、モジュールＱ（配列番号２２）、モジュールＫ（配列番号２３）、モジュールｓｐ（配列番号２４）、モジュールＳ（配列番号２５）、モジュールＲ（配列番号２６）、モジュールＸ（配列番号２７）若しくはモジュールＹ（配列番号２８）、又はその変異体から選択される、請求項１〜３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５】
シルクポリペプチドが少なくとも１つの非反復（ＮＲ）単位を更に含む、請求項１〜４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６】
ＮＲ単位が、ＮＲ３（配列番号４１）若しくはその変異体、又はＮＲ４（配列番号４２）若しくはその変異体である、請求項５に記載の方法。
【請求項７】
シルクポリペプチドが、ＡＤＦ−３（配列番号１）又はその変異体、ＡＤＦ−４（配列番号２）又はその変異体、ＭａＳｐ Ｉ（配列番号４３）又はその変異体、ＭａＳｐ ＩＩ（配列番号４４）又はその変異体、（Ｃ）ｍ、（Ｃ）ｍＮＲｚ、ＮＲｚ（Ｃ）ｍ、（ＡＱ）ｎ、（ＡＱ）ｎＮＲｚ、ＮＲｚ（ＡＱ）ｎ、（ＱＡＱ）ｏ、ＮＲｚ（ＱＡＱ）ｏ、（ＱＡＱ）ｏＮＲｚ、Ｙｐ、Ｘｐ、及びＫｐ（ここで、ｍは８〜４８の整数であり、ｎは６〜２４の整数であり、ｏは８〜１６の整数であり、ｐは８〜１６の整数であり、ｚは１〜３の整数であり、ＮＲは非反復単位を表す）からなる群から選択される、請求項１〜６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８】
シルクポリペプチドが、Ｃ１６ＮＲ４、Ｃ３２ＮＲ４、（ＡＱ）１２ＮＲ３、（ＡＱ）２４ＮＲ３、（ＡＱ）１２、（ＡＱ）２４、Ｃ１６又はＣ３２である、請求項７に記載の方法。
【請求項９】
シルクポリペプチドが、ＴＡＧＣＹＳ１（配列番号３５）、ＴＡＧＣＹＳ２（配列番号３６）、ＴＡＧＣＹＳ３（配列番号３７）、ＴＡＧＬＹＳ１（配列番号３８）及びＴＡＧＬＹＳ２（配列番号３９）からなる群から選択されるアミノ末端及び／又はカルボキシ末端のＴＡＧを更に含む、請求項１〜８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１０】
溶液中の該シルクポリペプチドの濃度が、０．１ｗｔ％／ｖｏｌ〜３０ｗｔ％／ｖｏｌの範囲、又は１ｗｔ％／ｖｏｌ〜１０ｗｔ％／ｖｏｌの範囲である、請求項１〜９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１１】
溶媒がファンデルワールス力を不安定化する溶媒、ギ酸、水溶液若しくはＨ２Ｏ、又はそれらの混合物である、請求項１〜１０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１２】
ファンデルワールス力を不安定化する溶媒が、ヘキサフルオロイソプロパノール（ＨＦＩＰ）、トリクロロ酢酸（ＴＣＡ）、トリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）及び臭化リチウム（ＬｉＢｒ）からなる群から選択される、請求項１１に記載の方法。
【請求項１３】
不活性材料又は自然発生的な材料が、繊維、繊維を含む糸、繊維を含む撚糸、繊維を含む織布、及び繊維を含む不織布からなる群から選択される、請求項１〜１２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１４】
不活性材料が、
（ｉ）ポリエステル、ポリアミド（ＰＡ）、ポリアラミド、ポリテトラフルオロエチレン（ＰＴＦＥ）、ポリエチレン（ＰＥ）、ポリプロピレン（ＰＰ）、ポリウレタン（ＰＵ）、シリコーン、ポリウレタンとポリエチレングリコールとの混合物（エラスタン）、超高分子量ポリエチレン（ＵＨＭＷＰＥ）、及び高性能ポリエチレン（ＨＰＰＥ）からなる群から選択される合成不活性材料、又は
（ｉｉ）ガラス、炭素、セラミック、金属、サファイア、ダイアモンド及び半導体からなる群から選択される無機不活性材料
である、請求項１〜１３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１５】
自然発生的な材料が、絹、綿、亜麻、羊毛、麻、竹、ゴム、人毛及び獣毛からなる群から選択される、請求項１〜１３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１６】
コーティングにおける該シルクポリペプチドが該不活性材料又は該自然発生的な材料と共有結合的に及び／又は非共有結合的に連結する、請求項１〜１５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１７】
シルクポリペプチドが、
（ａ）該シルクポリペプチドのシステイン残基、リジン残基、該アミノ末端、該カルボキシ末端、該アミノ末端ＴＡＧ若しくは該カルボキシ末端ＴＡＧを介して、及び／又は
（ｂ）架橋を介して
該不活性材料又は該自然発生的な材料と共有結合的に連結する、請求項１６に記載の方法。
【請求項１８】
シルクポリペプチドが、イオン結合又は疎水結合を介して該不活性材料又は該自然発生的な材料と非共有結合的に連結する、請求項１６に記載の方法。
【請求項１９】
シルクポリペプチドが、該シルクポリペプチドと共有結合的に及び／又は非共有結合的に連結する少なくとも１つの物質を更に含む、請求項１〜１８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２０】
物質が工程ｉ）の前に、工程ｉ）の後に、及び／又は工程ｉｉ）の後に該シルクポリペプチドと共有結合的に及び／又は非共有結合的に連結する、請求項１９に記載の方法。
【請求項２１】
物質が、
（ａ）該シルクポリペプチドのシステイン残基、リジン残基、該アミノ末端、該カルボキシ末端、該アミノ末端ＴＡＧ若しくは該カルボキシ末端ＴＡＧを介して、及び／又は
（ｂ）架橋を介して
該シルクポリペプチドと共有結合的に連結する、請求項１９又は２０に記載の方法。
【請求項２２】
共有結合的に連結する物質が、ポリペプチド、脂質、色素、共役金属、活性炭及び作用物質からなる群から選択される、請求項１９〜２１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２３】
（ｉ）ポリペプチドが酵素若しくはβ−ガラクトシダーゼ、抗体、ホルモン若しくはインスリン、又は抗原であり、
（ｉｉ）脂質がコレステロール、ステロイド、ワックス、又はオイルであり、
（ｉｉｉ）色素が合成色素若しくはアゾ化合物、無機色素若しくは金属塩、又は有機色素、若しくはフルオレセイン色素若しくはローダミン色素であり、
（ｉｖ）共役金属がナノゴールド（商標）であり、
（ｖ）活性炭が粉末活性炭（ＰＡＣ）、粒状活性炭（ＧＡＣ）及び押出成形活性炭（ＥＡＣ）からなる群から選択され、
（ｖｉ）作用物質が医薬品、止血剤、成長刺激剤、抗炎症剤、防汚剤、抗微生物剤、抗細菌剤、抗真菌剤、農薬及びＵＶ保護剤からなる群から選択される、
請求項２２に記載の方法。
【請求項２４】
物質がイオン結合又は疎水結合を介して該シルクポリペプチドと非共有結合的に連結する、請求項１９又は２０に記載の方法。
【請求項２５】
非共有結合的に連結する物質が、ポリペプチド、脂質、色素、共役金属、活性炭、金属塩及び作用物質からなる群から選択される、請求項２４に記載の方法。
【請求項２６】
（ｉ）ポリペプチドが酵素若しくはβ−ガラクトシダーゼ、抗体、ホルモン若しくはインスリン、又は抗原であり、
（ｉｉ）脂質がコレステロール、ステロイド、ワックス、又はオイルであり、
（ｉｉｉ）色素が合成色素若しくはアゾ化合物、無機色素若しくは金属塩、又は有機色素、若しくはフルオレセイン色素若しくはローダミン色素であり、
（ｉｖ）共役金属がナノゴールド（商標）であり、
（ｖ）活性炭が粉末活性炭（ＰＡＣ）、粒状活性炭（ＧＡＣ）及び押出成形活性炭（ＥＡＣ）からなる群から選択され、
（ｖｉ）金属塩が銅、コバルト、ニッケル又は銀からなる群から選択されるカチオンであり、
（ｖｉｉ）作用物質が医薬品、止血剤、成長刺激剤、抗炎症剤、防汚剤、抗微生物剤、抗細菌剤、抗真菌剤、農薬及びＵＶ保護剤からなる群から選択される、
請求項２５に記載の方法。
【請求項２７】
工程ｉｉ）を４℃〜８０℃又は４℃〜４０℃の温度で行う、請求項１〜２６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２８】
工程ｉｉ）を２０℃〜２５℃で行う、請求項２７に記載の方法。
【請求項２９】
ｉｉｉ）少なくとも２つの同一の反復単位及び任意選択的に少なくとも１つの非反復（ＮＲ）単位を含む少なくとも１つのシルクポリペプチドと溶媒とを含む溶液を準備する工程と、
ｉｖ）不活性材料又は自然発生的な材料上に該溶液を塗布することにより２回目として該不活性材料又は該自然発生的な材料をシルクポリペプチドでコーティングする、塗布することによりコーティングする工程と、
を更に含み、工程（ｉｉｉ）の該シルクポリペプチドが工程（ｉ）の該シルクポリペプチドと同一である又は異なる、請求項１〜２８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３０】
工程（ｉｉｉ）と工程（ｉｖ）とを数回、又は３回〜１０回繰り返し、様々な厚さ及び多重層のコーティングされた不活性材料又は自然発生的な材料を得る、請求項２９に記載の方法。
【請求項３１】
工程ｉｉ）、工程ｉｉｉ）、及び／又は工程ｉｖ）の後に、可視光、紫外線若しくは耐水性、摩耗、機械的応力、酸及び／又は塩基に対する保護を与える染色／仕上げ加工により、該コーティングされた不活性材料又は自然発生的な材料に事後改良を加える工程を含む、請求項１〜３０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３２】
請求項１〜３１のいずれか一項に記載の方法により入手可能なコーティングされた不活性材料又は自然発生的な材料。
【請求項３３】
請求項３２に記載のコーティングされた不活性材料又は自然発生的な材料を含む繊維。
【請求項３４】
請求項３３に記載の繊維を含む糸。
【請求項３５】
請求項３３に記載の繊維を含む、撚糸、織布又は不織布。
【請求項３６】
或る特定の期間にわたる該少なくとも１つの物質の制御放出のための、又は防護服若しくは撥水性の服の製造のための請求項３２に記載のコーティングされた不活性材料又は自然発生的な材料の使用。
【請求項３７】
不活性材料を染色するためのシルクポリペプチドの使用。
【請求項１】
不活性材料又は自然発生的な材料をシルクポリペプチドでコーティングする方法であって、
ｉ）少なくとも２つの同一の反復単位を含む少なくとも１つのシルクポリペプチドと溶媒とを含む溶液を準備する工程と、
ｉｉ）不活性材料又は自然発生的な材料上に該溶液を塗布することにより該不活性材料又は該自然発生的な材料を該シルクポリペプチドでコーティングする、塗布することによりコーティングする工程と、
を含む、不活性材料又は自然発生的な材料をシルクポリペプチドでコーティングする方法。
【請求項２】
溶液を、ディップコーティング、スプレーコーティング及び／又はパディングを用いて塗布する、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
シルクポリペプチドが、各々が、
ｉ）ＧＰＧＸＸ（配列番号３）（ここでＸは任意のアミノ酸、又はそれぞれの場合で独立してＡ、Ｓ、Ｇ、Ｙ、Ｐ及びＱから選択される任意のアミノ酸である）、
ｉｉ）ＧＧＸ（ここでＸは任意のアミノ酸、又はそれぞれの場合で独立してＹ、Ｐ、Ｒ、Ｓ、Ａ、Ｔ、Ｎ及びＱから選択される任意のアミノ酸である）、及び
ｉｉｉ）Ａｘ（ここでｘは５〜１０の整数である）
からなる群から選択されるコンセンサス配列を少なくとも１つ含む少なくとも２つの同一の反復単位を含む、請求項１又は２に記載の方法。
【請求項４】
反復単位が独立して、モジュールＡ（配列番号２０）、モジュールＣ（配列番号２１）、モジュールＱ（配列番号２２）、モジュールＫ（配列番号２３）、モジュールｓｐ（配列番号２４）、モジュールＳ（配列番号２５）、モジュールＲ（配列番号２６）、モジュールＸ（配列番号２７）若しくはモジュールＹ（配列番号２８）、又はその変異体から選択される、請求項１〜３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５】
シルクポリペプチドが少なくとも１つの非反復（ＮＲ）単位を更に含む、請求項１〜４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６】
ＮＲ単位が、ＮＲ３（配列番号４１）若しくはその変異体、又はＮＲ４（配列番号４２）若しくはその変異体である、請求項５に記載の方法。
【請求項７】
シルクポリペプチドが、ＡＤＦ−３（配列番号１）又はその変異体、ＡＤＦ−４（配列番号２）又はその変異体、ＭａＳｐ Ｉ（配列番号４３）又はその変異体、ＭａＳｐ ＩＩ（配列番号４４）又はその変異体、（Ｃ）ｍ、（Ｃ）ｍＮＲｚ、ＮＲｚ（Ｃ）ｍ、（ＡＱ）ｎ、（ＡＱ）ｎＮＲｚ、ＮＲｚ（ＡＱ）ｎ、（ＱＡＱ）ｏ、ＮＲｚ（ＱＡＱ）ｏ、（ＱＡＱ）ｏＮＲｚ、Ｙｐ、Ｘｐ、及びＫｐ（ここで、ｍは８〜４８の整数であり、ｎは６〜２４の整数であり、ｏは８〜１６の整数であり、ｐは８〜１６の整数であり、ｚは１〜３の整数であり、ＮＲは非反復単位を表す）からなる群から選択される、請求項１〜６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８】
シルクポリペプチドが、Ｃ１６ＮＲ４、Ｃ３２ＮＲ４、（ＡＱ）１２ＮＲ３、（ＡＱ）２４ＮＲ３、（ＡＱ）１２、（ＡＱ）２４、Ｃ１６又はＣ３２である、請求項７に記載の方法。
【請求項９】
シルクポリペプチドが、ＴＡＧＣＹＳ１（配列番号３５）、ＴＡＧＣＹＳ２（配列番号３６）、ＴＡＧＣＹＳ３（配列番号３７）、ＴＡＧＬＹＳ１（配列番号３８）及びＴＡＧＬＹＳ２（配列番号３９）からなる群から選択されるアミノ末端及び／又はカルボキシ末端のＴＡＧを更に含む、請求項１〜８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１０】
溶液中の該シルクポリペプチドの濃度が、０．１ｗｔ％／ｖｏｌ〜３０ｗｔ％／ｖｏｌの範囲、又は１ｗｔ％／ｖｏｌ〜１０ｗｔ％／ｖｏｌの範囲である、請求項１〜９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１１】
溶媒がファンデルワールス力を不安定化する溶媒、ギ酸、水溶液若しくはＨ２Ｏ、又はそれらの混合物である、請求項１〜１０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１２】
ファンデルワールス力を不安定化する溶媒が、ヘキサフルオロイソプロパノール（ＨＦＩＰ）、トリクロロ酢酸（ＴＣＡ）、トリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）及び臭化リチウム（ＬｉＢｒ）からなる群から選択される、請求項１１に記載の方法。
【請求項１３】
不活性材料又は自然発生的な材料が、繊維、繊維を含む糸、繊維を含む撚糸、繊維を含む織布、及び繊維を含む不織布からなる群から選択される、請求項１〜１２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１４】
不活性材料が、
（ｉ）ポリエステル、ポリアミド（ＰＡ）、ポリアラミド、ポリテトラフルオロエチレン（ＰＴＦＥ）、ポリエチレン（ＰＥ）、ポリプロピレン（ＰＰ）、ポリウレタン（ＰＵ）、シリコーン、ポリウレタンとポリエチレングリコールとの混合物（エラスタン）、超高分子量ポリエチレン（ＵＨＭＷＰＥ）、及び高性能ポリエチレン（ＨＰＰＥ）からなる群から選択される合成不活性材料、又は
（ｉｉ）ガラス、炭素、セラミック、金属、サファイア、ダイアモンド及び半導体からなる群から選択される無機不活性材料
である、請求項１〜１３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１５】
自然発生的な材料が、絹、綿、亜麻、羊毛、麻、竹、ゴム、人毛及び獣毛からなる群から選択される、請求項１〜１３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１６】
コーティングにおける該シルクポリペプチドが該不活性材料又は該自然発生的な材料と共有結合的に及び／又は非共有結合的に連結する、請求項１〜１５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１７】
シルクポリペプチドが、
（ａ）該シルクポリペプチドのシステイン残基、リジン残基、該アミノ末端、該カルボキシ末端、該アミノ末端ＴＡＧ若しくは該カルボキシ末端ＴＡＧを介して、及び／又は
（ｂ）架橋を介して
該不活性材料又は該自然発生的な材料と共有結合的に連結する、請求項１６に記載の方法。
【請求項１８】
シルクポリペプチドが、イオン結合又は疎水結合を介して該不活性材料又は該自然発生的な材料と非共有結合的に連結する、請求項１６に記載の方法。
【請求項１９】
シルクポリペプチドが、該シルクポリペプチドと共有結合的に及び／又は非共有結合的に連結する少なくとも１つの物質を更に含む、請求項１〜１８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２０】
物質が工程ｉ）の前に、工程ｉ）の後に、及び／又は工程ｉｉ）の後に該シルクポリペプチドと共有結合的に及び／又は非共有結合的に連結する、請求項１９に記載の方法。
【請求項２１】
物質が、
（ａ）該シルクポリペプチドのシステイン残基、リジン残基、該アミノ末端、該カルボキシ末端、該アミノ末端ＴＡＧ若しくは該カルボキシ末端ＴＡＧを介して、及び／又は
（ｂ）架橋を介して
該シルクポリペプチドと共有結合的に連結する、請求項１９又は２０に記載の方法。
【請求項２２】
共有結合的に連結する物質が、ポリペプチド、脂質、色素、共役金属、活性炭及び作用物質からなる群から選択される、請求項１９〜２１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２３】
（ｉ）ポリペプチドが酵素若しくはβ−ガラクトシダーゼ、抗体、ホルモン若しくはインスリン、又は抗原であり、
（ｉｉ）脂質がコレステロール、ステロイド、ワックス、又はオイルであり、
（ｉｉｉ）色素が合成色素若しくはアゾ化合物、無機色素若しくは金属塩、又は有機色素、若しくはフルオレセイン色素若しくはローダミン色素であり、
（ｉｖ）共役金属がナノゴールド（商標）であり、
（ｖ）活性炭が粉末活性炭（ＰＡＣ）、粒状活性炭（ＧＡＣ）及び押出成形活性炭（ＥＡＣ）からなる群から選択され、
（ｖｉ）作用物質が医薬品、止血剤、成長刺激剤、抗炎症剤、防汚剤、抗微生物剤、抗細菌剤、抗真菌剤、農薬及びＵＶ保護剤からなる群から選択される、
請求項２２に記載の方法。
【請求項２４】
物質がイオン結合又は疎水結合を介して該シルクポリペプチドと非共有結合的に連結する、請求項１９又は２０に記載の方法。
【請求項２５】
非共有結合的に連結する物質が、ポリペプチド、脂質、色素、共役金属、活性炭、金属塩及び作用物質からなる群から選択される、請求項２４に記載の方法。
【請求項２６】
（ｉ）ポリペプチドが酵素若しくはβ−ガラクトシダーゼ、抗体、ホルモン若しくはインスリン、又は抗原であり、
（ｉｉ）脂質がコレステロール、ステロイド、ワックス、又はオイルであり、
（ｉｉｉ）色素が合成色素若しくはアゾ化合物、無機色素若しくは金属塩、又は有機色素、若しくはフルオレセイン色素若しくはローダミン色素であり、
（ｉｖ）共役金属がナノゴールド（商標）であり、
（ｖ）活性炭が粉末活性炭（ＰＡＣ）、粒状活性炭（ＧＡＣ）及び押出成形活性炭（ＥＡＣ）からなる群から選択され、
（ｖｉ）金属塩が銅、コバルト、ニッケル又は銀からなる群から選択されるカチオンであり、
（ｖｉｉ）作用物質が医薬品、止血剤、成長刺激剤、抗炎症剤、防汚剤、抗微生物剤、抗細菌剤、抗真菌剤、農薬及びＵＶ保護剤からなる群から選択される、
請求項２５に記載の方法。
【請求項２７】
工程ｉｉ）を４℃〜８０℃又は４℃〜４０℃の温度で行う、請求項１〜２６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２８】
工程ｉｉ）を２０℃〜２５℃で行う、請求項２７に記載の方法。
【請求項２９】
ｉｉｉ）少なくとも２つの同一の反復単位及び任意選択的に少なくとも１つの非反復（ＮＲ）単位を含む少なくとも１つのシルクポリペプチドと溶媒とを含む溶液を準備する工程と、
ｉｖ）不活性材料又は自然発生的な材料上に該溶液を塗布することにより２回目として該不活性材料又は該自然発生的な材料をシルクポリペプチドでコーティングする、塗布することによりコーティングする工程と、
を更に含み、工程（ｉｉｉ）の該シルクポリペプチドが工程（ｉ）の該シルクポリペプチドと同一である又は異なる、請求項１〜２８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３０】
工程（ｉｉｉ）と工程（ｉｖ）とを数回、又は３回〜１０回繰り返し、様々な厚さ及び多重層のコーティングされた不活性材料又は自然発生的な材料を得る、請求項２９に記載の方法。
【請求項３１】
工程ｉｉ）、工程ｉｉｉ）、及び／又は工程ｉｖ）の後に、可視光、紫外線若しくは耐水性、摩耗、機械的応力、酸及び／又は塩基に対する保護を与える染色／仕上げ加工により、該コーティングされた不活性材料又は自然発生的な材料に事後改良を加える工程を含む、請求項１〜３０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３２】
請求項１〜３１のいずれか一項に記載の方法により入手可能なコーティングされた不活性材料又は自然発生的な材料。
【請求項３３】
請求項３２に記載のコーティングされた不活性材料又は自然発生的な材料を含む繊維。
【請求項３４】
請求項３３に記載の繊維を含む糸。
【請求項３５】
請求項３３に記載の繊維を含む、撚糸、織布又は不織布。
【請求項３６】
或る特定の期間にわたる該少なくとも１つの物質の制御放出のための、又は防護服若しくは撥水性の服の製造のための請求項３２に記載のコーティングされた不活性材料又は自然発生的な材料の使用。
【請求項３７】
不活性材料を染色するためのシルクポリペプチドの使用。
【図１】
【図２】
【図３】
【図４】
【図５】
【図６】
【図７】
【図８】
【図２】
【図３】
【図４】
【図５】
【図６】
【図７】
【図８】
【公表番号】特表２０１３−５１２７７３（Ｐ２０１３−５１２７７３Ａ）
【公表日】平成２５年４月１８日（２０１３．４．１８）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２０１２−５４２３９２（Ｐ２０１２−５４２３９２）
【出願日】平成２２年１２月７日（２０１０．１２．７）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＥＰ２０１０／００７４４０
【国際公開番号】ＷＯ２０１１／０６９６４３
【国際公開日】平成２３年６月１６日（２０１１．６．１６）
【出願人】（５１２１４１６１１）アーエムシルク ゲーエムベーハー (3)
【Ｆターム（参考）】
【公表日】平成２５年４月１８日（２０１３．４．１８）
【国際特許分類】
【出願日】平成２２年１２月７日（２０１０．１２．７）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＥＰ２０１０／００７４４０
【国際公開番号】ＷＯ２０１１／０６９６４３
【国際公開日】平成２３年６月１６日（２０１１．６．１６）
【出願人】（５１２１４１６１１）アーエムシルク ゲーエムベーハー (3)
【Ｆターム（参考）】
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