シンバイオティクスを利用した腸内環境調整方法
【課題】 プレバイオティクスとプロバイオティクスとを組み合わせたシンバイオティクスを利用した腸内環境調整方法を提供すること。
【解決手段】 （Ａ）プレバイオティクスとして、加水分解されたグァーの胚乳部分であって、次の性質を含むもの、（１）プルランを分子量マーカーとして用いた高速液体クロマトグラフィーによるゲルろ過で重量平均分子量が３〜５０ｋＤａと算出されるガラクトマンナン、（２）ケルダール法により窒素含量を測定し、係数６.２５を乗じて算出されたタンパク質含量が１.０％以下であるものと、（Ｂ）プロバイオティクスとして、ビィフィズス菌、乳酸菌、枯草菌、酪酸生成菌、乳酸利用菌、プロピオン酸生成菌の一種または二種以上からなり、さらに水分含量が２０％以下であるもの、の両者を含有するシンバイオティクスを経口投与することにより、腸管内で乳酸及び糖類から酪酸を生じさせて腸内環境を整えることを特徴とする腸内環境調整方法によって達成される。
【解決手段】 （Ａ）プレバイオティクスとして、加水分解されたグァーの胚乳部分であって、次の性質を含むもの、（１）プルランを分子量マーカーとして用いた高速液体クロマトグラフィーによるゲルろ過で重量平均分子量が３〜５０ｋＤａと算出されるガラクトマンナン、（２）ケルダール法により窒素含量を測定し、係数６.２５を乗じて算出されたタンパク質含量が１.０％以下であるものと、（Ｂ）プロバイオティクスとして、ビィフィズス菌、乳酸菌、枯草菌、酪酸生成菌、乳酸利用菌、プロピオン酸生成菌の一種または二種以上からなり、さらに水分含量が２０％以下であるもの、の両者を含有するシンバイオティクスを経口投与することにより、腸管内で乳酸及び糖類から酪酸を生じさせて腸内環境を整えることを特徴とする腸内環境調整方法によって達成される。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、腸内の健康に有用とされるプロバイオティクスを特定のプレバイオティクスを併用することにより、プロバイオティクスの胃酸耐性が向上し、ヒトや動物の大腸に効率よく到達し定着率を向上させる、かつプロバイオティクスの保存安定性を向上させることできるシンバイオティクスおよびこれを添加した飲食品、飼料およびペットフードに関する。さらに詳しくは、分子量が分子量マーカーとしてプルランを用いた高速液体クロマトグラフィーによるゲルろ過で重量平均分子量が３〜５０ｋＤａと算出されるガラクトマンナンであるプレバイオティクスとプロバイオティクスを併用するシンバイオティクスおよびこれを添加した飲食品、飼料およびペットフードに関する。
【背景技術】
【０００２】
プロバイオティクスとは、消化管内の細菌叢を改善して宿主に有益な作用をもたらし得る有用な微生物を意味している。プロバイオティクス機能を持つ微生物を摂取すると、それらが消化管内の細菌叢に作用し、細菌叢の健常化をはかりながら、疾病の予防・改善を行うことができると言われている。プロバイオティクスを応用した技術開発として、いくつかものが知られている（特許文献１）。
【０００３】
また、プレバイオティクスとは、上記プロバイオティクスに含まれる有用な細菌や常在の有用腸内細菌の増殖を助けて、腸内環境の改善を促進する物質のことを意味し、簡単に消化されない物質が多い。例えば、オリゴ糖、食物繊維などは、プレバイオティクスとして働く。オリゴ糖は、乳酸菌、ビフィズス菌などの栄養となり、食物繊維は、腸内細菌をとどめさせて、その増殖を助ける。プレバイオティクスを応用した技術開発として、いくつかのものが知られている（特許文献２）。
上記プロバイオティクスとプレバイオティクスとを組み合わせたものをシンバイオティクスと称しているが、このシンバイオティクスに関する技術開発については、十分に進んでいなかった。
【０００４】
【特許文献１】特開２００８−１０９９４５号公報
【特許文献２】特表２００７−５３７２２４号公報
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
本発明は、上記課題に鑑みてなされたものであり、その目的はシンバイオティクスを利用した腸内環境調整方法を提供することである。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
上記課題を解決するための発明に係る腸内環境調整方法は、（Ａ）プレバイオティクスとして、加水分解されたグァーの胚乳部分であって、次の性質を含むもの、（１）プルランを分子量マーカーとして用いた高速液体クロマトグラフィーによるゲルろ過で重量平均分子量が３〜５０ｋＤａと算出されるガラクトマンナン、（２）ケルダール法により窒素含量を測定し、係数６.２５を乗じて算出されたタンパク質含量が１.０％以下であるものと、（Ｂ）プロバイオティクスとして、ビィフィズス菌、乳酸菌、枯草菌、酪酸生成菌、乳酸利用菌、プロピオン酸生成菌の一種または二種以上からなり、さらに水分含量が２０％以下であるもの、の両者を含有するシンバイオティクスを経口投与することにより、腸管内で乳酸及び糖類から酪酸を生じさせて腸内環境を整えることを特徴とする。
本発明において、前記加水分解されたグァーの胚乳部分が、次の性質を含むもの、（３）固形分含量１５％水溶液の粘度が、回転式粘度計で回転数６０ｒｐｍ、２０℃で測定したときに２０ｍＰａ・ｓ以下であるもの、であることが好ましい。
また、前記加水分解されたグァーの胚乳部分が、次の性質を含むもの、（４）分解物の固形物含量が１.０％水溶液９９ｇに１.０ｇのポリオキシエチレン付加型界面活性剤（ＰＯＥ）を添加して測定した曇点が６０℃以下であるもの、（５）（Ａ）分解物１質量部に対して、１／５質量部のイソプロピルアルコールを加えてよく湿らせた後、激しくかき混ぜながら水１０質量部加えた溶液（溶液（５−１））の粘度がＢ型粘度計で２５℃、Ｎｏ．１ローター、１２ｒｐｍで測定したときに２０ｍＰａ・ｓ以下、（Ｂ）溶液（５−１）を沸騰水中で１０分間加熱し冷却後に同条件で測定した粘度が２０ｍＰａ・ｓ以下（溶液５−２）、（Ｃ）溶液（５−２）１質量部に５％ホウ酸ナトリウム水溶液１／５質量部を添加し、混和、放置したものを動的粘弾性測定装置で、２５℃、１Ｈｚでひずみ依存性測定をすると、線形領域で貯蔵弾性率（Ｇ‘）＞損失弾性率（Ｇ’‘）かつ線形領域から非線形領域を示す測定曲線を得るものであることが好ましい。
また、さらにツバキ科植物成分を経口投与することが好ましい。
本発明におけるプロバイオティクスとは、宿主の腸管内で有益な作用を発揮する微生物であり、好ましくは乳酸菌、ビフィズス菌、糖化菌、枯草菌、酪酸生成菌、乳酸利用菌、プロピオン酸生成菌、酵母である。
【０００７】
本発明における乳酸菌とは、乳酸桿菌および乳酸球菌であり、好ましくは、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ属細菌、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ属細菌、Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ属細菌、Ｌａｃｔｏｃｏｃｃｕｓ属細菌、Ｐｅｄｉｏｃｏｃｃｕｓ属細菌およびＬｅｕｃｏｎｏｓｔｏｃ属細菌である。
【０００８】
本発明におけるＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ属細菌は、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ａｃｉｄｏｐｈｉｌｕｓ、 Ｌ．ｇａｓｓｅｒｉ、 Ｌ．ｊｏｈｎｓｏｎｉｉ、Ｌ．ｄｅｌｂｒｕｅｃｋｉｉ、Ｌ．ｄｅｌｂｒｕｅｃｋｉｉ ｓｕｂｓｐ．ｂｕｌｇａｒｉｃｕｓ、Ｌ．ｂｕｌｇａｒｉｃｕｓ、Ｌ．ｈｅｌｖｅｔｉｃｕｓ、Ｌ．ｒｈａｍｎｏｓｕｓ、Ｌ．ｃａｓｅｉ、Ｌ．ｐｌａｎｔａｒｕｍ、Ｌ．ｒｅｕｔｅｒｉ、Ｌ．ｓａｌｉｖａｒｉｕｓ、Ｌ．ｓａｋｅ、Ｌ．ｓａｌｉｖａｒｉｕｓ、Ｌ．ｃｅｌｌｏｂｉｏｓｕｓおよびＬ．ｂｒｅｖｉｓが例示できる。
【０００９】
本発明におけるＳｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ属細菌は、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｕｓ、Ｓ．ｓａｎｇｕｉｓ、Ｓ．ｍｉｔｉｓ、Ｓ． ｐｓｅｕｄｏｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ、Ｓ．ｐａｓｔｅｕｒｉ、Ｓ．ｐａｒａｓａｎｇｕｉｎｉｓ、Ｓ．ｐａｒａｓａｎｇｕｉｎｉｓ、Ｓ．ｓａｌｉｖａｒｉｕｓ、Ｓ．ｖｅｓｔｉｂｕｌａｒｉｓ、Ｓ．ｐａｓｔｅｕｒｉ、およびＳ．ｏｒａｌｉｓが例示できる。
本発明におけるＥｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ属細菌は、Ｅ．ｍａｌｏｄｏｒａｔｕｓ、Ｅ．ｍａｌｏｄｏｒａｔｕｓ、Ｅ．ｆａｃｉａｌｉｓおよびＥ．ｆａｃｅｉｕｍが例示できる。
【００１０】
本発明におけるＬａｃｔｏｃｏｃｃｕｓ属細菌は、Ｌａｃｔｏｃｏｃｃｕｓ ｌａｃｔｉｓおよびＬａｃｔｏｃｏｃｃｕｓ ｌａｃｔｉｓ ｓｕｂｓｐ．ｃｒｅｍｏｒｉｓが例示できる。
本発明におけるＰｅｄｉｏｃｏｃｃｕｓ属細菌は、Ｐｅｄｉｏｃｏｃｃｕｓ ｄａｍｎｏｓｕｓおよびＰ．ａｃｉｄｉｌａｃｔｉｃｉが例示できる。
本発明におけるＬｅｕｃｏｎｏｓｔｏｃ属細菌は、Ｌ．ｍｅｓｅｎｔｅｒｏｉｄｅｓおよびＬ．ｓａｋｅが例示できる。
【００１１】
本発明におけるビィフィズス菌とは、Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ属細菌のことを指す。好ましくは、Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｂｉｆｉｄｕｍ、Ｂ．ａｄｏｌｅｓｃｅｎｔｉｓ、Ｂ．ｌｏｎｇｕｍ、Ｂ．ｉｎｆａｎｔｉｓ、Ｂ．ｂｒｅｖｅ、Ｂ．ａｎｉｍａｌｉｓ、Ｂ．ｐｓｅｕｄｏｌｏｎｇｕｍ、Ｂ．ｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｕｍ、Ｂ．ｂｏｕｍ、Ｂ．ｍａｇｕｎｕｍ、Ｂ．ｐｕｌｌｏｒｕｍ、Ｂ．ｃａｔｅｎｕｌａｔｕｍ、Ｂ．ｓｕｉｓ、Ｂ．ｐｓｅｕｄｏｃａｔｅｎｕｌａｔｕｍ、Ｂ．ｇａｌｌｉｎａｒｕｍ、Ｂ．ｄｅｎｔｉｕｍ、Ｂ．ｒｕｍｉｎａｎｔｉｕｍ、Ｂ．ａｎｇｕｌａｔｕｍ、Ｂ．ｍｅｒｙｃｉｃｕｍ、Ｂ．ｇａｌｌｉｃｕｍ、Ｂ．ｓａｅｃｕｌａｒｅ、Ｂ．ｉｎｏｐｉｎａｔｕｍ、Ｂ．ｍｉｎｉｍｕｍ、Ｂ．ｄｅｎｔｉｃｏｌｅｎｓ、Ｂ．ｓｕｂｔｉｌｅ、Ｂ．ｃｏｒｙｎｅｆｏｒｍｅ、Ｂ．ｃｕｎｉｃｕｌｉ、Ｂ．ａｓｔｅｒｏｉｄｅｓ、Ｂ．ｃｈｏｅｒｉｎｕｍおよびＢ．ｉｎｄｉｃｕｍである。
【００１２】
本発明における糖化菌とは、Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｍｅｓｅｎｔｅｒｉｃｕｓである。
本発明における枯草菌とは、Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌｉｓ、好ましくは、Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌｉｓ ｖａｒ． ｎａｔｔｏである。
本発明における酪酸生成菌とは、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｂｕｔｙｒｉｃｕｍおよびＴ−ＲＥＬＰ法による細菌解析でＣｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｓｕｂｃｌｕｓｔｅｒ ＸＩＶａに分類される細菌である。
【００１３】
本発明におけるＴ−ＲＥＬＰ法による細菌解析でＣｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｓｕｂｃｌｕｓｔｅｒ ＸＩＶａに分類される細菌は、Ｅｕｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｈａｌｌｉｉ、Ｅ．ｒａｍｕｌｕｓ、Ｅ．ｒｅｃｔａｌｅ、Ｅ．ｖｅｎｔｒｉｏｓｕｍおよびＲｏｓｅｂｕｒｉａ ｉｎｔｅｓｔｉｎａｌｉｓが例示できる。
【００１４】
本発明における乳酸利用菌とは、Ｍｅｇａｓｐｈａｅｒａ ｅｌｓｄｅｎｉｉである。
本発明におけるプロピオン酸生成菌とは、Ｐｒｏｐｉｏｎｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ属細菌のことであり、好ましくは、Ｐｒｏｐｉｏｎｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｆｒｅｕｄｅｎｒｅｉｃｈｉｉである。
【００１５】
本発明におけるガラクトマンナンとは、Ｄ−マンノースがβ−（１→４）結合したマンナン鎖を主鎖とし、Ｄ−マンノースのＯ−６位からα−ガラクトシル基が結合した櫛状の分岐構造を有し、分子量マーカーとしてプルランを用いた高速液体クロマトグラフィーによるゲルろ過で測定した重量平均分子量が３〜５０ｋＤａと算出される物質を指す。
本発明のガラクトマンナンのマンノース直鎖の鎖長は、３０単位〜２００単位の範囲内に８０％以上分布している。
本発明のガラクトマンナンの５％水溶液の粘度は、ブルックフィールド粘度計を用いて５℃，６０ｒｐｍで、Ｌｏｗローターにて測定したときに５〜２０ｍＰａ・ｓである。
【００１６】
本発明のガラクトマンナンの食物繊維含量は、ＡＯＡＣ ９８５．２９に記載の酵素重量法により測定したときに６５％以上である。
本発明のガラクトマンナンは、ガラクトマンナンを含有するマメ科植物種子の胚乳部分をヘミセルラーゼ製剤により酸性域で酵素的に加水分解することで得られた溶液の加水分解反応を停止させ、この溶液を遠心分離処理を行って未反応物を除去し、次いで精製処理、加熱殺菌処理及び冷却処理を行った後、中和処理を行うことによって得ることができる。
【００１７】
本発明のガラクトマンナンを含有するマメ科植物とは、グアー（Ｃｙａｍｏｐｓｉｓ ｔｅｔｒａｇｏｎｏｌｏｂｕｓ）、イナゴマメ（Ｃｅｒａｔｏｎｉａ ｓｉｌｉｑｕａ）、ケンタッキー・コーヒーマメ（Ｇｙｍｎｏｃｌａｄｕｓ ｄｉｏｉｃａ）、ムラサキウマゴヤシ（Ｍｅｄｉｃａｇｏ ｓａｔｉｖａ）、クローバ（Ｔｒｉｆｏｌｉｕｍ ｐｒａｔｅｎｓｅ）、ダイズサヤ（Ｇｌｙｃｉｎｅ ｈｉｓｐｉｄａ）、タラ（Ａｃｔｉｎｉｄｉａ ｃａｌｌｏｓａ ＬＩＮＤＬＥＹ）、セスバニア（Ｓｅｓｂａｎｉａ ｂｉｓｉｂｉｎｏｎｉａ）、カシア（Ｃａｓｓｉａ ｔｏｒａ Ｌｉｎｎ）およびフェヌグリーク（Ｔｒｉｇｏｎｅｌｌａ ｆｏｅｎｕｍ ｇｒａｅｃｕｍ Ｌ）が例示でき、資源の豊富さと味の観点からグアー（Ｃｙａｍｏｐｓｉｓ ｔｅｔｒａｇｏｎｏｌｏｂｕｓ）、フェヌグリーク（Ｔｒｉｇｏｎｅｌｌａ ｆｏｅｎｕｍ ｇｒａｅｃｕｍ Ｌ）及びイナゴマメ（Ｃｅｒａｔｏｎｉａ ｓｉｌｉｑｕａ）が好ましく、最も好ましくはグアー（Ｃｙａｍｏｐｓｉｓ ｔｅｔｒａｇｏｎｏｌｏｂｕｓ）である。
【００１８】
本発明のガラクトマンナンを得るときに実施される加水分解反応で用いるヘミセルラーゼ製剤は、ガラクトマンナナーゼ、α−ガラクトシダーゼ及びβ−マンノシダーゼを含有し、それら酵素の比活性の割合が１〜１００：１：０〜０.５、もしくはガラクトマンナナーゼ、α−ガラクトシダーゼ、酸性プロテアーゼ及びβ−マンノシダーゼを含有し、それら酵素の比活性の割合が１〜１００：１：０〜０.１５：０〜０.５、もしくはガラクトマンナナーゼ、α−ガラクトシダーゼ、酸性プロテアーゼ及びβ−マンノシダーゼを含有し、それら酵素の比活性の割合が１〜１０：１：０〜０.０５：０〜０.５である。ここで、本発明で酵素として用いるβ−ガラクトマンナナーゼの比活性とは、β−ガラクトマンナナーゼがガラクトマンナンであるローカストビーンガムに３７℃、ｐＨ５．０で作用するとき、反応初期の１分間に１マイクロモルのマンノースに相当する還元力の増加をもたらす試料１ｇ中の酵素量のことを指す。β−ガラクトマンナナーゼの分子量は、ＳＤＳ−ポリアクリルアミドゲル電気泳動後にクーマシーブルー染色（ＣＢＢ染色）した結果、２０ｋＤａ〜６０ｋＤａを示すことがよい。当該分子量のより好ましい範囲は３０ｋＤａ〜５０ｋＤａであり、最も好ましい範囲は３５ｋＤａ〜４５ｋＤａである。
【００１９】
本発明で酵素として用いるα−ガラクトシダーゼの比活性とは、当該α−ガラクトシダーゼがｐ−ニトロフェニル−α−ガラクシドに３７℃、ｐＨ５.５で作用するとき、反応初期の１分間に１マイクロモルのｐ−ニトロフェニルを遊離する試料１ｇ中の酵素量のことを指す。
本発明で酵素として使用する酸性プロテアーゼの比活性とは、当該酸性プロテアーゼが乳製カゼインに３０℃、ｐＨ３.０で作用するとき、反応初期の１分間に１マイクログラムのチロシンに相当する非蛋白性のフォリン試液呈色物質の増加をもたらす試料１ｇ中の酵素量のことを指す。
本発明で酵素として使用するβ−マンノシダーゼの比活性とは、当該β−マンノシダーゼがｐ−ニトロフェニル−β−マンノシドに３７℃、ｐＨ５.５で作用するとき、反応初期の１分間に１マイクロモルのｐ−ニトロフェニルを遊離する試料１ｇ中の酵素量のことを指す。
【００２０】
本発明のガラクトマンナンを得るときに実施される加水分解反応で用いるヘミセルラーゼ製剤は、Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ属細菌、Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ属細菌、Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ属細菌、Ｖｉｂｒｉｏ属細菌、Ａｅｒｏｍｏｎａｓ属細菌、Ｂａｃｉｌｌｕｓ属細菌、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ属細菌、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ属カビ、Ｒｈｉｚｏｐｕｓ属カビ及びＴｒｉｃｏｈｄｅｒｍａ属酵母の微生物群から選択される少なくとも１種に由来し、例えば、Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ属細菌はＰ．ｐｕｒｐｕｒｏｇｅｎａｍ、Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ属細菌はＥ．ｃａｓｅｌｉｆｌａｖａｓ、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ属細菌はＣ．ｔｅｒｔｉｕｍ、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ属カビはＡ．ｎｉｇｅｒ、Ｒｈｉｚｏｐｕｓ属カビはＲ．ｎｉｖｅｕｓ、Ｔｒｉｃｏｈｄｅｒｍａ属酵母はＴ．ｒｅｅｓｅｉが、それぞれ例示できる。
【００２１】
本発明のガラクトマンナンを得るときに実施される加水分解反応における酸性域は、ｐＨ２.０〜ｐＨ６.０である。
本発明のガラクトマンナンを得るときに実施される加水分解反応における温度および反応時間は、５０℃〜８０℃で８時間〜２４時間、または６０℃〜８０℃で３時間〜１２時間である。
本発明のガラクトマンナンを得るときに実施される加水分解反応の停止は、特に限定されないが、８５℃以上で１５分間〜６０分間加熱が好ましい。
【００２２】
本発明のツバキ科植物成分とは、水、アルコール、酢酸エチル、石油エーテル等の有機溶媒による溶剤抽出、水蒸気蒸留、圧搾、油脂吸着、液化ガス抽出、超臨界抽出、乾留により得られる成分を指す。好ましくは抽出効率の観点から溶剤抽出、最も好ましくは水及び酢酸エチルによる溶剤抽出である。このようにして得られた抽出物は、必要に応じて吸着樹脂、濾過膜等により精製しても問題はない。例えば、茶の場合では酢酸エチルにより抽出して得られたポリフェノール化合物を用いることも可能である。緑茶の場合、生葉又は乾燥葉から（＋）−カテキン、（＋）−ガロカテキン、（−）−ガロカテキンガレート、（−）−エピカテキン、（−）−エピカテキンガレート、（−）−エピガロカテキン、（−）−エピガロカテキンガレートのポリフェノール化合物が抽出され、これらポリフェノール化合物の１種または２種以上の混合物として用いることができが、好ましくは（−）−ガロカテキンガレート、（−）−エピカテキンガレート、（−）−エピガロカテキンガレートの１種または２種以上の混合物として用いることができる。単独で用いる場合、（＋）−カテキン、（＋）−ガロカテキン、（−）−ガロカテキンガレート、（−）−エピカテキン、（−）−エピカテキンガレート、（−）−エピガロカテキン又は（−）−エピガロカテキンガレートが好ましく、さらに好ましくは、（−）−エピガロカテキンガレート、（−）−エピカテキンガレート又は（−）−ガロカテキンガレートであり、最も好ましくは、（−）−エピガロカテキンガレートである。
【００２３】
実施例１
Ａ．ｎｉｇｅｒを所定期間培養し、加水分解反応に用いる酵素群をあらかじめ採取しておいた。このようにして採取したＡ． ｎｉｇｅｒ由来の酵素群は、β−ガラクトマンナナーゼ、α−ガラクトシダーゼ、酸性プロテアーゼ及びβ−マンノシダーゼの混合物であった。
次に、水９００部に塩酸を加えてｐＨを４.５に調整した後、その水に上記の酵素群０.２部とグアー豆（Ｃｙａｍｏｐｓｉｓ ｔｅｔｒａｇｏｎｏｌｏｂｕｓ）の胚乳１００部とを添加混合し、５５℃〜６５℃で２４時間酵素を作用させ、酵素的に加水分解した。
次に、反応液を９０℃，３０分間加熱することにより酵素を失活させ、加水分解反応を停止させた。
【００２４】
次に、加水分解物を含む反応液を遠心分離装置（石川島播磨重工業社製、商品名ＨＳ−５０Ｌ）で３０００ｒｐｍ，供給量６ｍ３／ｈで遠心分離処理し、反応液を未反応物と清澄液とに分離させるとともに、清澄液のみを採取した。
次に、採取した溶液（清澄液）に珪藻土系濾過助剤及び活性炭を添加して６０分間攪拌した後、第１濾過手段である濾過装置（昭和製作所社製、商品名２０２Ｂ、濾過圧：２５０ｋｇ／ｃｍ２）を用いて濾過する粗精製を行った。その結果、前記溶液中に含まれる不純物をある程度吸着除去した。さらに、粗精製された前記溶液に珪藻土系濾過助剤のみを添加して６０分間攪拌した後、第１濾過手段よりも目の細かい第２濾過手段である精密濾過装置（中央製作所社製、商品名ＦＳ−５０Ｂ、流量：３００Ｌ／ｈ）を用いて濾過する本精製を行った。その結果、前記溶液中に含まれる不純物をほぼ完全に吸着除去し、本発明のガラクトマンナンを含有する無色透明で臭いのない溶液を得た。
【００２５】
次に、ＵＨＴ殺菌装置（日阪製作所社製、商品名ＦＸ−０５）を用いて、前記溶液をＵＨＴ殺菌処理しかつ直ちに強制冷却した。なお、この処理では、入り口温度を１４０℃に設定し、出口温度を４℃に設定し、殺菌時間を４秒に設定した。
次に、ｐＨが酸性域に保持されていた溶液をＮａＯＨで中和してｐＨ＝約７．０にした。
さらに、得られた中性の溶液を遠心式薄膜濃縮装置（アルファ・ラバル社製、商品名ＣＴ−６）を用いて固形分として２０％になるように所定時間減圧濃縮した。
【００２６】
その後、噴霧乾燥装置（大川原化工機社製、商品名ＯＣ−３５）を用いて９０分間噴霧乾燥を行い、本発明のガラクトマンナンの白色粉末７０部を得た。
そして、得られた粉末状のガラクトマンナンをサンプルとして下記の測定を行った。具体的には、カラムにＧ３０００ＰＷ（東ソー株式会社製）を充填したものを固定相として用い、高速液体クロマトグラフィーを行った。このような測定の結果、マンナン主鎖の糖鎖の８０％以上はマンノースの重合度が３０〜４０単位の範囲内に包含されていた。なお、このとき糖鎖単位の標準試薬として、グルコース重合度が既知の直鎖デキストリン（グルコースの重合度：５０，１００，１５０）を用いた。
本実施例のガラクトマンナンの重量平均分子量、食物繊維含量、５％溶液の粘度を測定したところ、重量平均分子量が２０ｋＤａ、食物繊維含量が８２％、粘度が８ｍＰａ・ｓであった。
本実施例のガラクトマンナン０.４ｇにイソプロピルアルコール０.０８ｍｌを加えてよく湿らした後、厳しくかき混ぜながら水４ｍｌを加え、更に均一に分散するまで激しくかき混ぜ、粘度を測定した（均一分散後）。また、この液を沸騰した水浴上で約１０分間加熱した後に粘度を測定した（１０分加熱冷却後）。粘度計はＢ型粘度計を用い、ローター番号は Ｎｏ.１、測定温度は２５℃および粘度計の回転数は１２ｒｐｍとした。均一分散後の粘度は７.４ｍＰａ・ｓであり、１０分加熱冷却後粘度は７.４ｍＰａ・ｓであった。
【００２７】
１０分加熱冷却後の溶液３.５ｍｌに５％ホウ酸ナトリウム溶液０.７ｍｌを加え、混和して放置し、動的粘弾性の歪依存性測定に供した。尚、試験装置は、動的粘弾性物性計測装置ＡＲＥＳ（Ｔ．Ａインスツルメンツ株式会社製）を用いた。測定温度は２５℃、および測定周波数は１.０Ｈｚとした。その結果、図１に示したように、線形領域で貯蔵弾性率（Ｇ‘）＞損失弾性率（Ｇ’‘）かつ線形領域から非線形領域を示す測定曲線が得られた。
【００２８】
実施例２
Ａ．ｎｉｇｅｒを所定期間培養し、加水分解反応に用いる酵素群をあらかじめ採取しておいた。このようにして採取したＡ．ｎｉｇｅｒ由来の酵素群は、β−ガラクトマンナナーゼ、α−ガラクトシダーゼ、酸性プロテアーゼ及びβ−マンノシダーゼの混合物であった。
次に、水９００部に塩酸を加えてｐＨを４.５に調整した後、その水に上記の酵素群０.１部とグアー豆（Ｃ．ｔｅｔｒａｇｏｎｏｌｏｂｕｓ）の胚乳１００部とを添加混合し、７０℃〜７５℃で８時間酵素を作用させた。この後、実施例１と同様の方法を実施し、本発明のガラクトマンナンの白色粉末７０部を得た。
【００２９】
得られた粉末状のガラクトマンナンについて、実施例１と同様の測定及び評価を行った。その結果、マンナン主鎖の糖鎖の８０％以上は、マンノースの重合度が３０〜４０単位の範囲内に包含されていた。また、本実施例のガラクトマンナンの重量平均分子量は１６ｋＤａ、食物繊維含量は７６％、５％水溶液の粘度は５ｍＰａ・ｓ、であった。
【００３０】
本実施例のガラクトマンナン０.４ｇにイソプロピルアルコール０.０８ｍｌを加えてよく湿らした後、厳しくかき混ぜながら水４ｍｌを加え、更に均一に分散するまで激しくかき混ぜ、粘度を測定した（均一分散後）。また、この液を沸騰した水浴上で約１０分間加熱した後に粘度を測定した（１０分加熱冷却後）。粘度計はＢ型粘度計を用い、ローター番号は Ｎｏ.１、測定温度は２５℃および粘度計の回転数は１２ｒｐｍとした。均一分散後の粘度は４.９ｍＰａ・ｓであり、１０分加熱冷却後粘度は５.１ｍＰａ・ｓであった。
【００３１】
１０分加熱冷却後の溶液３.５ｍｌに５％ホウ酸ナトリウム溶液０.７ｍｌを加え、混和して放置し、動的粘弾性の歪依存性測定に供した。尚、試験装置は、動的粘弾性物性計測装置ＡＲＥＳ（Ｔ．Ａインスツルメンツ株式会社製）を用いた。測定温度は２５℃、および測定周波数は１.０Ｈｚとした。その結果、図２に示したように、線形領域で貯蔵弾性率（Ｇ‘）＞損失弾性率（Ｇ’‘）かつ線形領域から非線形領域を示す測定曲線が得られた。
【００３２】
比較例１
Ａ．ｎｉｇｅｒを所定期間培養し、加水分解反応に用いる酵素群をあらかじめ採取しておいた。このようにして採取したＡ．ｎｉｇｅｒ由来の酵素群は、β−ガラクトマンナナーゼ、α−ガラクトシダーゼ、酸性プロテアーゼ及びβ−マンノシダーゼの混合物であった。
次に、水９００部に塩酸を加えてｐＨを４.５に調整した後、その水に上記の酵素群０.２部とグアー豆（Ｃ．ｔｅｔｒａｇｏｎｏｌｏｂｕｓ）の胚乳１００部とを添加混合し、５５℃〜６５℃で７２時間酵素を作用させ、酵素的に加水分解した。
【００３３】
次に、反応液を９０℃，３０分間加熱することにより酵素を失活させ、加水分解反応を停止させた。
次に、加水分解物を含む反応液を遠心分離装置（石川島播磨重工業社製、商品名ＨＳ−５０Ｌ）で３０００ｒｐｍ，供給量６ｍ３／ｈで遠心分離処理し、反応液を未反応物と清澄液とに分離させるとともに、清澄液のみを採取した。
次に、採取した溶液（清澄液）に珪藻土系濾過助剤及び活性炭を添加して６０分間攪拌した後、第１濾過手段である濾過装置（昭和製作所社製、商品名２０２Ｂ、濾過圧：２５０ｋｇ／ｃｍ２）を用いて濾過する粗精製を行った。その結果、前記溶液中に含まれる不純物をある程度吸着除去した。さらに、粗精製された前記溶液に珪藻土系濾過助剤のみを添加して６０分間攪拌した後、第１濾過手段よりも目の細かい第２濾過手段である精密濾過装置（中央製作所社製、商品名ＦＳ−５０Ｂ、流量：３００Ｌ／ｈ）を用いて濾過した。その結果、前記溶液中に含まれる不純物をほぼ完全に吸着除去した。
【００３４】
次に、ＵＨＴ殺菌装置（日阪製作所社製、商品名ＦＸ−０５）を用いて、前記溶液をＵＨＴ殺菌処理しかつ直ちに強制冷却した。なお、この処理では、入り口温度を１４０℃に設定し、出口温度を４℃に設定し、殺菌時間を４秒に設定した。
次に、ｐＨが酸性域に保持されていた溶液をＮａＯＨで中和してｐＨ＝約７.０にした。
さらに、得られた中性の溶液を遠心式薄膜濃縮装置（アルファ・ラバル社製、商品名ＣＴ−６）を用いて固形分として２０％になるように所定時間減圧濃縮した。濃縮液を陰イオンカラムクロマトグラフィーおよび陽イオンカラムクロマトグラフィー処理し、除タンパク処理した。
その後、噴霧乾燥装置（大川原化工機社製、商品名ＯＣ−３５）を用いて９０分間噴霧乾燥を行い、比較品の白色粉末６５部を得た。
【００３５】
そして、得られた粉末状のガラクトマンナンをサンプルとして下記の測定を行った。具体的には、カラムにＧ３０００ＰＷ（東ソー株式会社製）を充填したものを固定相として用い、高速液体クロマトグラフィーを行った。このような測定の結果、マンナン主鎖の糖鎖の８０％以上はマンノースの重合度が３０〜４０単位の範囲内に包含されていなかった。なお、このとき糖鎖単位の標準試薬として、グルコース重合度が既知の直鎖デキストリン（グルコースの重合度：５０，１００，１５０）を用いた。
【００３６】
本比較例のガラクトマンナンの重量平均分子量、食物繊維含量、５％溶液の粘度を測定したところ、重量平均分子量が１.５ｋＤａ、食物繊維含量が５４％、粘度が３ｍＰａ・ｓであった。
【００３７】
本比較例のガラクトマンナン０.４ｇにイソプロピルアルコール０.０８ｍｌを加えてよく湿らした後、厳しくかき混ぜながら水４ｍｌを加え、更に均一に分散するまで激しくかき混ぜ、粘度を測定した（均一分散後）。また、この液を沸騰した水浴上で約１０分間加熱した後に粘度を測定した（１０分加熱冷却後）。粘度計はＢ型粘度計を用い、ローター番号は Ｎｏ.１、測定温度は２５℃および粘度計の回転数は１２ｒｐｍとした。均一分散後の粘度は２.５ｍＰａ・ｓであり、１０分加熱冷却後粘度は２.３ｍＰａ・ｓであった。
１０分加熱冷却後の溶液３.５ｍｌに５％ホウ酸ナトリウム溶液０.７ｍｌを加え、混和して放置し、動的粘弾性の歪依存性測定を供しようとしたところ、この溶液はゲル状態を呈しないために、測定することは不可能であった。このことより本発明のガラクトマンナンとは異なる性質のものであった。
【００３８】
比較例２
Ａ．ｎｉｇｅｒを所定期間培養し、加水分解反応に用いる酵素群をあらかじめ採取しておいた。このようにして採取したＡ．ｎｉｇｅｒ由来の酵素群は、β−ガラクトマンナナーゼ、α−ガラクトシダーゼ、酸性プロテアーゼ及びβ−マンノシダーゼの混合物であった。
次に、水９００部に塩酸を加えてｐＨを４.５に調整した後、その水に上記の酵素群０.２部とグアー豆（Ｃ．ｔｅｔｒａｇｏｎｏｌｏｂｕｓ）の胚乳１００部とを添加混合し、５５℃〜６５℃で３時間酵素を作用させ、酵素的に加水分解した。
【００３９】
次に、反応液を９０℃，３０分間加熱することにより酵素を失活させ、加水分解反応を停止させた。
次に、加水分解物を含む反応液を遠心分離装置（石川島播磨重工業社製、商品名ＨＳ−５０Ｌ）で３０００ｒｐｍ，供給量６ｍ３／ｈで遠心分離処理し、反応液を未反応物と清澄液とに分離させるとともに、清澄液のみを採取した。
【００４０】
次に、採取した溶液（清澄液）に珪藻土系濾過助剤及び活性炭を添加して６０分間攪拌した後、第１濾過手段である濾過装置（昭和製作所社製、商品名２０２Ｂ、濾過圧：２５０ｋｇ／ｃｍ２）を用いて濾過する粗精製を行った。その結果、前記溶液中に含まれる不純物をある程度吸着除去した。さらに、粗精製された前記溶液に珪藻土系濾過助剤のみを添加して６０分間攪拌した後、第１濾過手段よりも目の細かい第２濾過手段である精密濾過装置（中央製作所社製、商品名ＦＳ−５０Ｂ、流量：３００Ｌ／ｈ）を用いて濾過した。その結果、前記溶液中に含まれる不純物をほぼ完全に吸着除去した。
【００４１】
次に、ＵＨＴ殺菌装置（日阪製作所社製、商品名ＦＸ−０５）を用いて、前記溶液をＵＨＴ殺菌処理しかつ直ちに強制冷却した。なお、この処理では、入り口温度を１４０℃に設定し、出口温度を４℃に設定し、殺菌時間を４秒に設定した。
次に、ｐＨが酸性域に保持されていた溶液をＮａＯＨで中和してｐＨ＝約７.０にした。
さらに、得られた中性の溶液を遠心式薄膜濃縮装置（アルファ・ラバル社製、商品名ＣＴ−６）を用いて固形分として２０％になるように所定時間減圧濃縮した。濃縮液を陰イオンカラムクロマトグラフィーおよび陽イオンカラムクロマトグラフィー処理し、除タンパク処理した。
【００４２】
その後、噴霧乾燥装置（大川原化工機社製、商品名ＯＣ−３５）を用いて９０分間噴霧乾燥を行い、比較品の白色粉末３２部を得た。
そして、得られた粉末状のガラクトマンナンをサンプルとして下記の測定を行った。具体的には、カラムにＧ３０００ＰＷ（東ソー株式会社製）を充填したものを固定相として用い、高速液体クロマトグラフィーを行った。このような測定の結果、マンナン主鎖の糖鎖の８０％以上はマンノースの重合度が３０〜４０単位の範囲内に包含されていなかった。なお、このとき糖鎖単位の標準試薬として、グルコース重合度が既知の直鎖デキストリン（グルコースの重合度：５０，１００，１５０）を用いた。
本比較例のガラクトマンナンの重量平均分子量、食物繊維含量及び５％溶液の粘度を測定したところ、重量平均分子量が８３ｋＤａ、食物繊維含量が８２％、粘度が１５０ｍＰａ・ｓであった。
本比較例のガラクトマンナン０.４ｇにイソプロピルアルコール０.０８ｍｌを加えてよく湿らした後、厳しくかき混ぜながら水４ｍｌを加え、更に均一に分散するまで激しくかき混ぜ、粘度を測定しようとしたが、この溶液は高粘度を呈し、この条件では粘度測定が不可能であった。よって、以後の測定も実施不可能であった。このことより本発明のガラクトマンナンとは異なる性質のものであった。
【００４３】
実施例３
プレバイオティクスとして実施例１で調製したガラクトマンナン（Ａ）１０質量部およびプロバイオティクスとして、１.０×１０８個／ｇのＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ａｃｉｄｏｐｈｉｌｕｓ粉末１質量部を混合し、シンバイオティクスＬＡＣ−１（ＳＬＡＣ−１）を調製した。
同様に、Ａとプロバイオティクスとして、１×１０８個／ｇのＬ．ｇａｓｓｅｒｉ（２）、Ｌ．ｊｏｈｎｓｏｎｉｉ（３）、Ｌ．ｄｅｌｂｒｕｅｃｋｉｉ（４）、Ｌ．ｄｅｌｂｒｕｅｃｋｉｉ ｓｕｂｓｐ．ｂｕｌｇａｒｉｃｕｓ（５）、Ｌ．ｂｕｌｇａｒｉｃｕｓ（６）、Ｌ．ｈｅｌｖｅｔｉｃｕｓ（７）、Ｌ．ｒｈａｍｎｏｓｕｓ（８）、Ｌ．ｃａｓｅｉ（９）、Ｌ．ｐｌａｎｔａｒｕｍ（１０）、Ｌ．ｒｅｕｔｅｒｉ（１１）、Ｌ．ｓａｌｉｖａｒｉｕｓ（１２）、Ｌ．ｓａｋｅ（１３）、Ｌ．ｓａｌｉｖａｒｉｕｓ（１４）、Ｌ．ｃｅｌｌｏｂｉｏｓｕｓ（１５）およびＬ．ｂｒｅｖｉｓ（１６）を用いて、それぞれシンバイオティクスＬＡＣ−２〜１６（ＳＬＡＣ−２〜１６）を調製した。
【００４４】
比較例３
比較プレバイオティクスとして比較例１で調製したガラクトマンナン（ＣＡ）１０質量部およびプロバイオティクスとして、１.０×１０８個／ｇのＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ａｃｉｄｏｐｈｉｌｕｓ粉末１質量部を混合し、比較シンバイオティクス−１（ＣＳＬＡＣ−１）を調製した。
同様に、Ａとプロバイオティクスとして、１×１０８個／ｇのＬ． ｇａｓｓｅｒｉ（２）、Ｌ．ｊｏｈｎｓｏｎｉｉ（３）、Ｌ．ｄｅｌｂｒｕｅｃｋｉｉ（４）、Ｌ．ｄｅｌｂｒｕｅｃｋｉｉ ｓｕｂｓｐ．ｂｕｌｇａｒｉｃｕｓ（５）、Ｌ．ｂｕｌｇａｒｉｃｕｓ（６）、Ｌ．ｈｅｌｖｅｔｉｃｕｓ（７）、Ｌ．ｒｈａｍｎｏｓｕｓ（８）、Ｌ．ｃａｓｅｉ（９）、Ｌ．ｐｌａｎｔａｒｕｍ（１０）、Ｌ．ｒｅｕｔｅｒｉ（１１）、Ｌ．ｓａｌｉｖａｒｉｕｓ（１２）、Ｌ．ｓａｋｅ（１３）、Ｌ．ｓａｌｉｖａｒｉｕｓ（１４）、Ｌ．ｃｅｌｌｏｂｉｏｓｕｓ（１５）およびＬ．ｂｒｅｖｉｓ（１６）を用いて、それぞれ比較シンバイオティクスＬＡＣ−２〜１６（ＣＳＬＡＣ−２〜１６）を調製した。
【００４５】
試験例１
男性４名（平均年齢４３±５才）より新鮮糞便１５０ｇずつを集めた。これらの糞便を一つの３０００ｍＬの三角フラスコに注入した。４倍重量のリン酸緩衝液（ｐＨ７.０）を添加し、嫌気的に均一に懸濁した。試験管に９.５ｍＬずつ嫌気的に分注した後に、実施例３で調製したＳＬＡＣ−１〜１６、および比較例３で調製したＣＳＬＡＣ−１〜１６を、それぞれの試験管に０.５ｇずつ添加した。各試験管を３７℃で２４時間嫌気的に培養した。培養後に培養液をろ過し、得られたろ液中の酢酸、プロピオン酸及び酪酸を定量した。定量には、イオン排除高速液体クロマトグラフィー（Ｗａｔｅｒｓ 製、以下ＨＰＬＣ）を用いた。前処理およびＨＰＬＣの条件は、Ａｎｉｍ．Ｓｃｉ．Ｔｅｃｈｎｏｌ．６９：５７１−５７５（１９９８）に準拠した。
その結果を表１に示した。
【００４６】
【表１】
【００４７】
表１に示したように、比較例３で調製した比較シンパイオティクスと比較すると、実施例３で調製したシンバイオティクスは、糞便培養により酢酸、プロピオン酸および酪酸の産生が増加し、腸内環境が整えられたことが示された。
【００４８】
実施例４
実施例３と同様に、プレバイオティクスとして実施例２で調製したガラクトマンナン（Ｂ）１００質量部およびプロバイオティクスとして、１.２×１０８個／ｇのＳｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｕｓ（１）、Ｓ．ｓａｎｇｕｉｓ（２）、Ｓ．ｍｉｔｉｓ（３）、Ｓ．ｐｓｅｕｄｏｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ（４）、Ｓ．ｐａｓｔｅｕｒｉ（５）、Ｓ．ｐａｒａｓａｎｇｕｉｎｉｓ（６）、Ｓ．ｐａｒａｓａｎｇｕｉｎｉｓ（７）、Ｓ．ｓａｌｉｖａｒｉｕｓ（８）、Ｓ．ｖｅｓｔｉｂｕｌａｒｉｓ（９）、Ｓ．ｐａｓｔｅｕｒｉ（１０）、Ｓ．ｏｒａｌｉｓ（１１）１質量部より、それぞれシンバイオティクスＳ−１〜１１（ＳＳ−１〜１１）を調製した。
【００４９】
比較例４
実施例３と同様に、比較プレバイオティクスとして比較例２で調製したガラクトマンナン（ＣＢ）１００質量部およびプロバイオティクスとして、１.２×１０８個／ｇのＳｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｕｓ（１）、Ｓ．ｓａｎｇｕｉｓ（２）、Ｓ．ｍｉｔｉｓ（３）、Ｓ．ｐｓｅｕｄｏｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ（４）、Ｓ．ｐａｓｔｅｕｒｉ（５）、Ｓ．ｐａｒａｓａｎｇｕｉｎｉｓ（６）、Ｓ．ｐａｒａｓａｎｇｕｉｎｉｓ（７）、Ｓ．ｓａｌｉｖａｒｉｕｓ（８）、Ｓ．ｖｅｓｔｉｂｕｌａｒｉｓ（９）、Ｓ．ｐａｓｔｅｕｒｉ（１０）、Ｓ．ｏｒａｌｉｓ（１１）１質量部より、それぞれ比較シンバイオティクスＳ−１〜１１（ＣＳＳ−１〜１１）を調製した。
【００５０】
試験例２
試験例１と同様に、男性４名（平均年齢４３±５才）の新鮮糞便を用いた同様の試験を実施例４で調製したＳＳ−１〜１１および比較例４で調製したＣＳＳ−１〜１１で行った。
その結果を表２に示した。
【００５１】
【表２】
【００５２】
表２に示したように、比較例４で調製した比較シンパイオティクスと比較すると、実施例４で調製したシンバイオティクスは、糞便培養により酢酸、プロピオン酸および酪酸の産生が増加し、腸内環境が整えられたことが示された。
【００５３】
実施例５
実施例３と同様に、プレバイオティクスとして実施例１で調製したガラクトマンナン（Ａ）２００質量部およびプロバイオティクスとして、１.５×１０７個／ｇのＥｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ ｍａｌｏｄｏｒａｔｕｓ（１）、Ｅ． ｍａｌｏｄｏｒａｔｕｓ（２）、Ｅ．ｆａｃｉａｌｉｓ（３）およびＥ．ｆａｃｅｉｕｍ（４）１質量部より、それぞれシンバイオティクスＥ−１〜１１（ＳＥ−１〜４）を調製した。
【００５４】
比較例５
実施例３と同様に、比較プレバイオティクスとして比較例１で調製したガラクトマンナン（ＣＡ）２００質量部およびプロバイオティクスとして、１.５×１０７個／ｇのＥｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ ｍａｌｏｄｏｒａｔｕｓ（１）、Ｅ．ｍａｌｏｄｏｒａｔｕｓ（２）、Ｅ．ｆａｃｉａｌｉｓ（３）およびＥ．ｆａｃｅｉｕｍ（４）１質量部より、それぞれ比較シンバイオティクスＥ−１〜１１（ＣＳＥ−１〜４）を調製した。
【００５５】
試験例３
試験例１と同様に、男性４名（平均年齢４３±５才）の新鮮糞便を用いた同様の試験を、実施例５で調製したＳＥ−１〜４および比較例５で調製したＣＳＥ−１〜４で行った。
その結果を表３に示した。
【００５６】
【表３】
【００５７】
表３に示したように、比較例５で調製した比較シンパイオティクスと比較して、実施例５で調製したシンバイオティクスは糞便培養により酢酸、プロピオン酸および酪酸の産生が増加し、腸内環境が整えられたことが示された。
【００５８】
実施例６
実施例３と同様に、プレバイオティクスとして実施例２で調製したガラクトマンナン（Ｂ）１質量部およびプロバイオティクスとして、１.１×１０８個／ｇのＬａｃｔｏｃｏｃｃｕｓ ｌａｃｔｉｓ（１）およびＬ．ｌａｃｔｉｓ ｓｕｂｓｐ．ｃｒｅｍｏｒｉｓ（２）１質量部より、それぞれシンバイオティクスＬＣ−１および２（ＳＬＣ−１および２）を調製した。
【００５９】
比較例６
実施例３と同様に、比較プレバイオティクスとして比較例２で調製したガラクトマンナン（ＣＢ）１質量部およびプロバイオティクスとして、１.１×１０８個／ｇのＬａｃｔｏｃｏｃｃｕｓ ｌａｃｔｉｓ（１）およびＬ．ｌａｃｔｉｓ ｓｕｂｓｐ．ｃｒｅｍｏｒｉｓ（２）１質量部より、それぞれ比較シンバイオティクスＬＣ−１および２（ＣＳＬＣ−１および２）を調製した。
【００６０】
試験例４
試験例１と同様に、男性４名（平均年齢４３±５才）の新鮮糞便を用いた同様の試験を実施例６で調製したＳＬＣ−１および２と比較例６で調製したＣＳＬＣ−１および２で行った。
その結果を表４に示した。
【００６１】
【表４】
【００６２】
表４に示したように、比較例６で調製した比較シンパイオティクスと比較すると、実施例６で調製したシンバイオティクスは、糞便培養により酢酸、プロピオン酸および酪酸の産生が増加し、腸内環境が整えられたことが示された。
【００６３】
実施例７
実施例３と同様に、プレバイオティクスとして実施例１で調製したガラクトマンナン（Ａ）５００質量部およびプロバイオティクスとして、１.４×１０８個／ｇのＰｅｄｉｏｃｏｃｃｕｓ ｄａｍｎｏｓｕｓ（１）およびＰ．ａｃｉｄｉｌａｃｔｉｃｉ（２）１質量部より、それぞれシンバイオティクスＰ−１および２（ＳＰ−１および２）を調製した。
【００６４】
比較例７
実施例３と同様に比較プレバイオティクスとして比較例１で調製したガラクトマンナン（ＣＡ）５００質量部およびプロバイオティクスとして、１.４×１０８個／ｇのＰｅｄｉｏｃｏｃｃｕｓ ｄａｍｎｏｓｕｓ（１）およびＰ．ａｃｉｄｉｌａｃｔｉｃｉ（２）１質量部より、それぞれ比較シンバイオティクスＰ−１および２（ＣＳＰ−１および２）を調製した。
【００６５】
試験例５
試験例１と同様に、男性４名（平均年齢４３±５才）の新鮮糞便を用いた同様の試験を実施例７で調製したＳＰ−１および２と比較例７で調製したＣＳＰ−１および２で行った。
その結果を表５に示した。
【００６６】
【表５】
【００６７】
表５に示したように、比較例６で調製した比較シンパイオティクスと比較して、実施例７で調製したシンバイオティクスは糞便培養により酢酸、プロピオン酸および酪酸の産生が増加し、腸内環境が整えられたことが示された。
【００６８】
実施例８
実施例３と同様に、プレバイオティクスとして実施例１で調製したガラクトマンナン（Ａ）２００質量部およびプロバイオティクスとして、１.８×１０７個／ｇのＬｅｕｃｏｎｏｓｔｏｃ ｍｅｓｅｎｔｅｒｏｉｄｅｓ（１）およびＬ．ｓａｋｅ（２）１質量部より、それぞれシンバイオティクスＬＣＮ−１および２（ＳＬＣＮ−１および２）を調製した。
【００６９】
比較例８
実施例３と同様に比較プレバイオティクスとして比較例１で調製したガラクトマンナン（ＣＡ）２００質量部およびプロバイオティクスとして、１.８×１０７個／ｇのＬｅｕｃｏｎｏｓｔｏｃ ｍｅｓｅｎｔｅｒｏｉｄｅｓ（１）およびＬ．ｓａｋｅ（２）１質量部より、それぞれ比較シンバイオティクスＬＣＮ−１および２（ＣＳＬＣＮ−１および２）を調製した。
【００７０】
試験例６
試験例１と同様に、男性４名（平均年齢４３±５才）の新鮮糞便を用いた同様の試験を実施例８で調製したＳＬＣＮ−１および２と比較例８で調製したＣＳＬＣＮ−１および２で行った。
その結果を表６に示した。
【００７１】
【表６】
【００７２】
表６に示したように、比較例８で調製した比較シンパイオティクスと比較すると、実施例８で調製したシンバイオティクスは糞便培養により酢酸、プロピオン酸および酪酸の産生が増加し、腸内環境が整えられたことが示された。
【００７３】
実施例９
実施例３と同様にプレバイオティクスとして実施例１で調製したガラクトマンナン（Ａ）３００質量部およびプロバイオティクスとして、１.５×１０８個／ｇのＢｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｂｉｆｉｄｕｍ（１）、Ｂ．ａｄｏｌｅｓｃｅｎｔｉｓ（２）、Ｂ．ｌｏｎｇｕｍ（３）、Ｂ．ｉｎｆａｎｔｉｓ（４）、Ｂ．ｂｒｅｖｅ（４）、Ｂ．ａｎｉｍａｌｉｓ（５）、Ｂ．ｐｓｅｕｄｏｌｏｎｇｕｍ（６）、Ｂ．ｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｕｍ（７）、Ｂ．ｂｏｕｍ（８）、Ｂ．ｍａｇｕｎｕｍ（９）、Ｂ．ｐｕｌｌｏｒｕｍ（１０）、Ｂ．ｃａｔｅｎｕｌａｔｕｍ（１１）、Ｂ．ｓｕｉｓ（１２）、Ｂ．ｐｓｅｕｄｏｃａｔｅｎｕｌａｔｕｍ（１３）、Ｂ．ｇａｌｌｉｎａｒｕｍ（１４）、Ｂ．ｄｅｎｔｉｕｍ（１５）、Ｂ．ｒｕｍｉｎａｎｔｉｕｍ（１６）、Ｂ．ａｎｇｕｌａｔｕｍ（１７）、Ｂ．ｍｅｒｙｃｉｃｕｍ（１８）、Ｂ．ｇａｌｌｉｃｕｍ（１９）、Ｂ．ｓａｅｃｕｌａｒｅ（２０）、Ｂ．ｉｎｏｐｉｎａｔｕｍ（２１）、Ｂ．ｍｉｎｉｍｕｍ（２２）、Ｂ．ｄｅｎｔｉｃｏｌｅｎｓ（２３）、Ｂ．ｓｕｂｔｉｌｅ（２４）、Ｂ．ｃｏｒｙｎｅｆｏｒｍｅ（２５）、Ｂ．ｃｕｎｉｃｕｌｉ（２６）、Ｂ．ａｓｔｅｒｏｉｄｅｓ（２７）、Ｂ．ｃｈｏｅｒｉｎｕｍ（２８）、Ｂ．ｉｎｄｉｃｕｍ（２９）１質量部より、それぞれシンバイオティクスＢＩＦ−１〜２９（ＳＢＩＦ−１〜２９）を調製した。
【００７４】
比較例９
実施例３と同様に、比較プレバイオティクスとして比較例１で調製したガラクトマンナン（ＣＡ）３００質量部およびプロバイオティクスとして、１.５×１０８個／ｇのＢｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｂｉｆｉｄｕｍ（１）、Ｂ．ａｄｏｌｅｓｃｅｎｔｉｓ（２）、Ｂ．ｌｏｎｇｕｍ（３）、Ｂ．ｉｎｆａｎｔｉｓ（４）、Ｂ．ｂｒｅｖｅ（４）、Ｂ．ａｎｉｍａｌｉｓ（５）、Ｂ．ｐｓｅｕｄｏｌｏｎｇｕｍ（６）、Ｂ．ｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｕｍ（７）、Ｂ．ｂｏｕｍ（８）、Ｂ．ｍａｇｕｎｕｍ（９）、Ｂ．ｐｕｌｌｏｒｕｍ（１０）、Ｂ．ｃａｔｅｎｕｌａｔｕｍ（１１）、Ｂ．ｓｕｉｓ（１２）、Ｂ．ｐｓｅｕｄｏｃａｔｅｎｕｌａｔｕｍ（１３）、Ｂ．ｇａｌｌｉｎａｒｕｍ（１４）、Ｂ．ｄｅｎｔｉｕｍ（１５）、Ｂ．ｒｕｍｉｎａｎｔｉｕｍ（１６）、Ｂ．ａｎｇｕｌａｔｕｍ（１７）、Ｂ．ｍｅｒｙｃｉｃｕｍ（１８）、Ｂ．ｇａｌｌｉｃｕｍ（１９）、Ｂ．ｓａｅｃｕｌａｒｅ（２０）、Ｂ．ｉｎｏｐｉｎａｔｕｍ（２１）、Ｂ．ｍｉｎｉｍｕｍ（２２）、Ｂ．ｄｅｎｔｉｃｏｌｅｎｓ（２３）、Ｂ．ｓｕｂｔｉｌｅ（２４）、Ｂ．ｃｏｒｙｎｅｆｏｒｍｅ（２５）、Ｂ．ｃｕｎｉｃｕｌｉ（２６）、Ｂ．ａｓｔｅｒｏｉｄｅｓ（２７）、Ｂ．ｃｈｏｅｒｉｎｕｍ（２８）、Ｂ．ｉｎｄｉｃｕｍ（２９）１質量部より、それぞれシンバイオティクスＢＩＦ−１〜２９（ＣＳＢＩＦ−１〜２９）を調製した。
【００７５】
試験例７
試験例１と同様に、男性４名（平均年齢４３±５才）の新鮮糞便を用いた同様の試験を実施例９で調製したＳＢＩＦ−１〜２９および比較例９で調製したＣＳＢＩＦ−１〜２９で行った。
その結果を表７に示した。
【００７６】
【表７】
【００７７】
表７に示したように、比較例９で調製した比較シンパイオティクスと比較すると、実施例９で調製したシンバイオティクスは糞便培養により酢酸、プロピオン酸および酪酸の産生が増加し、腸内環境が整えられたことが示された。
【００７８】
実施例１０
実施例３と同様に、プレバイオティクスとして実施例２で調製したガラクトマンナン（Ｂ）５００質量部およびプロバイオティクスとして、３.８×１０６個／ｇのＢａｃｉｌｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌｉｓ（１）およびＢ．ｓｕｂｔｉｌｉｓ ｖａｒ．ｎａｔｔｏ（２）１質量部より、それぞれシンバイオティクスＢＡＣ−１および２（ＳＢＡＣ−１および２）を調製した。
【００７９】
比較例１０
実施例３と同様に、比較プレバイオティクスとして比較例２で調製したガラクトマンナン（ＣＢ）５００質量部およびプロバイオティクスとして、３.８×１０６個／ｇのＢａｃｉｌｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌｉｓ（１）およびＢ．ｓｕｂｔｉｌｉｓ ｖａｒ．ｎａｔｔｏ（２）１質量部より、それぞれ比較シンババイオティクスＢＡＣ−１および２（ＣＳＢＡＣ−１および２）を調製した。
【００８０】
試験例８
試験例１と同様に、男性４名（平均年齢４３±５才）の新鮮糞便を用いた同様の試験を実施例１０で調製したＳＢＡＣ−１および２と比較例１０で調製したＣＳＢＡＣ−１および２で行った。
その結果を表８に示した。
【００８１】
【表８】
【００８２】
表８に示したように、比較例１０で調製した比較シンパイオティクスと比較すると、実施例１０で調製したシンバイオティクスは糞便培養により酢酸、プロピオン酸および酪酸の産生が増加し、腸内環境が整えられたことが示された。
【００８３】
実施例１１
実施例３と同様に、プレバイオティクスとして実施例１で調製したガラクトマンナン（Ａ）１０００質量部およびプロバイオティクスとして、２.０×１０７個／ｇのＣｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｂｕｔｙｒｉｃｕｍ（１）、Ｅｕｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｈａｌｌｉｉ（２）、Ｅ．ｒａｍｕｌｕｓ（３）、Ｅ．ｒｅｃｔａｌｅ（４）、Ｅ．ｖｅｎｔｒｉｏｓｕｍ（５）およびＲｏｓｅｂｕｒｉａ ｉｎｔｅｓｔｉｎａｌｉｓ（６）１質量部より、それぞれシンバイオティクスＢＵＴ−１〜６（ＳＢＵＴ−１〜６）を調製した。
【００８４】
比較例１１
実施例３と同様に、比較プレバイオティクスとして比較例１で調製したガラクトマンナン（ＣＡ）１０００質量部およびプロバイオティクスとして、２.０×１０７個／ｇのＣｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｂｕｔｙｒｉｃｕｍ（１）、Ｅｕｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｈａｌｌｉｉ（２）、Ｅ．ｒａｍｕｌｕｓ（３）、Ｅ．ｒｅｃｔａｌｅ（４）、Ｅ．ｖｅｎｔｒｉｏｓｕｍ（５）およびＲｏｓｅｂｕｒｉａ ｉｎｔｅｓｔｉｎａｌｉｓ（６）１質量部より、それぞれ比較シンバイオティクスＢＵＴ−１〜６（ＣＳＢＵＴ−１〜６）を調製した。
【００８５】
試験例９
試験例１と同様に、男性４名（平均年齢４３±５才）の新鮮糞便を用いた同様の試験を実施例１１で調製したＳＢＵＴ−１〜６および比較例１１で調製したＣＳＢＵＴ−１〜６で行った。
その結果を表９に示した。
【００８６】
【表９】
【００８７】
表９に示したように、比較例１１で調製した比較シンパイオティクスと比較すると、実施例１１で調製したシンバイオティクスは糞便培養により酢酸、プロピオン酸および酪酸の産生が増加し、腸内環境が整えられたことが示された。
【００８８】
実施例１２
実施例３と同様に、プレバイオティクスとして実施例１で調製したガラクトマンナン（Ａ）２０００質量部およびプロバイオティクスとして、４.０×１０７個／ｇのＭｅｇａｓｐｈａｅｒａ ｅｌｓｄｅｎｉｉ（１）およびＰｒｏｐｉｏｎｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｆｒｅｕｄｅｎｒｅｉｃｈｉｉ（２）１質量部より、それぞれシンバイオティクスＡＵＢ−１および２（ＳＡＵＢ−１および２）を調製した。
【００８９】
比較例１２
実施例３と同様に、比較プレバイオティクスとして比較例１で調製したガラクトマンナン（ＣＡ）２０００質量部およびプロバイオティクスとして、４.０×１０７個／ｇのＭｅｇａｓｐｈａｅｒａ ｅｌｓｄｅｎｉｉ（１）およびＰｒｏｐｉｏｎｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｆｒｅｕｄｅｎｒｅｉｃｈｉｉ（２）１質量部より、それぞれ比較シンバイオティクスＡＵＢ−１および２（ＣＳＡＵＢ−１および２）を調製した。
【００９０】
試験例１０
試験例１と同様に、男性４名（平均年齢４３±５才）の新鮮糞便を用いた同様の試験を実施例１２で調製したＳＡＵＢ−１および２と比較例１２で調製したＣＳＡＵＢ−１および２で行った。
その結果を表１０に示した。
【００９１】
【表１０】
【００９２】
表１０に示したように、比較例１２で調製した比較シンパイオティクスと比較すると、実施例１２で調製したシンバイオティクスは糞便培養により酢酸、プロピオン酸および酪酸の産生が増加し、腸内環境が整えられたことが示された。
【００９３】
試験例１１
乳酸菌として、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ属細菌であるＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ａｃｉｄｏｐｈｉｌｕｓを用いた実施例３で調製したシンバイオティクスＬＡＣ−１（ＳＬＡＣ−１）と比較例３で調製した比較シンパイオティクス−１（ＣＳＬＡＣ−１）を、それぞれ１日３ｇずつ４週間、ローマ−ＩＩＩの基準で過敏性腸症候群（ＩＢＳ）と診断された男性５名、女性５名（平均年齢３５±７才）に投与する試験を実施した。試験は、二重盲検、クロスオーバー試験を実施した。ウォッシュアウトは４週間とした。
摂取前と摂取４週間目に、健康関連ＱＯＬをＳＦ−３６（３６−Ｉｔｅｍ Ｓｈｏｒｔ Ｆｏｒｍ）、胃腸症状をＧＳＲＳ（Ｇａｓｔｒｏｉｎｔｅｓｔｉｎａｌ ｓｙｍｐｔｏｍ Ｒａｔｉｎｇ Ｓｃａｌｅ）、不安・鬱をＨＡＤＳ（Ｈｏｓｐｉｔａｌ Ａｎｘｉｅｔｙ ａｎｄ Ｄｅｐｒｅｓｓｉｏｎ Ｓｃａｌｅ）により、それぞれ評価した。
その結果を表１１〜１３に示した。
【００９４】
【表１１】
【００９５】
【表１２】
【００９６】
【表１３】
【００９７】
表１１〜表１３に示したように、本実施形態のシンパイオティクスを摂取させることにより、健康関連ＱＯＬ、胃腸症状および不安・鬱の評価項目が改善され、腸内環境を整えることがわかった。
試験例１２
ビフィズス菌として、Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ属細菌であるＢｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｌｏｎｇｕｍを用いた実施例９で調製したシンバイオティクスＢＩＦ−３（ＳＢＩＦ−３）と比較例９で調製した比較シンパイオティクス−３（ＣＢＩＦ−３）を、それぞれ１日５ｇずつ２週間、ローマ−ＩＩＩの基準でＩＢＳと診断された男性４名、女性６名（平均年齢３８±７才）に投与する試験を実施した。試験は、二重盲検、クロスオーバー試験を実施した。ウォッシュアウトは４週間とした。
【００９８】
摂取前と摂取２週間目に、健康関連ＱＯＬをＳＦ−３６（３６−Ｉｔｅｍ Ｓｈｏｒｔ Ｆｏｒｍ）、胃腸症状をＧＳＲＳ（Ｇａｓｔｒｏｉｎｔｅｓｔｉｎａｌ ｓｙｍｐｔｏｍ Ｒａｔｉｎｇ Ｓｃａｌｅ）、不安・鬱をＨＡＤＳ（Ｈｏｓｐｉｔａｌ Ａｎｘｉｅｔｙ ａｎｄ Ｄｅｐｒｅｓｓｉｏｎ Ｓｃａｌｅ）により、それぞれ評価した。
その結果を表１４〜１６に示した。
【００９９】
【表１４】
【０１００】
【表１５】
【０１０１】
【表１６】
【０１０２】
表１４〜表１６に示したように、本実施形態のシンパイオティクスを摂取させることにより、健康関連ＱＯＬ、胃腸症状および不安・鬱の評価項目が改善され、腸内環境を整えることがわかった。
実施例１１
プレバイオティクスとして実施例１で調製したガラクトマンナン（Ａ）１０質量部およびプロバイオティクスとして、１.０×１０８個／ｇのＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ａｃｉｄｏｐｈｉｌｕｓ粉末１質量部、緑茶カテキン類（太陽化学（株）製、サンフェノン）０.０１質量部よりシンパイオティクスＬＡＣＣ−１（ＳＬＡＣＣ−１）を調製した。
同様に、Ａと緑茶カテキン類とプロバイオティクスとして、１×１０８個／ｇのＬ．ｇａｓｓｅｒｉ（２）、Ｌ．ｊｏｈｎｓｏｎｉｉ（３）、Ｌ．ｄｅｌｂｒｕｅｃｋｉｉ（４）、Ｌ．ｄｅｌｂｒｕｅｃｋｉｉ ｓｕｂｓｐ．ｂｕｌｇａｒｉｃｕｓ（５）、Ｌ．ｂｕｌｇａｒｉｃｕｓ（６）、Ｌ．ｈｅｌｖｅｔｉｃｕｓ（７）、Ｌ．ｒｈａｍｎｏｓｕｓ（８）、Ｌ．ｃａｓｅｉ（９）、Ｌ．ｐｌａｎｔａｒｕｍ（１０）、Ｌ．ｒｅｕｔｅｒｉ（１１）、Ｌ．ｓａｌｉｖａｒｉｕｓ（１２）、Ｌ．ｓａｋｅ（１３）、Ｌ．ｓａｌｉｖａｒｉｕｓ（１４）、Ｌ．ｃｅｌｌｏｂｉｏｓｕｓ（１５）およびＬ．ｂｒｅｖｉｓ（１６）を用いて、それぞれシンバイオティクスＬＡＣ−２〜１６（ＳＬＡＣＣ−２〜１６）を調製した。
【０１０３】
試験例１３
試験例１と同様に、男性４名（平均年齢４３±５才）の新鮮糞便を用いた同様の試験を実施例４で調製したＳＬＡＣＣ−１〜１１で行った。
その結果を表１７に示した。
【０１０４】
【表１７】
【０１０５】
表１７に示したように、試験例１の表１のＳＬＡＣ−１〜１１より実施例１２で調製したＳＬＡＣＣ−１〜１１では、糞便培養によりさらに酢酸、プロピオン酸および酪酸の産生が増加し、腸内環境が整えられたことが示された。
【０１０６】
試験例１４
シンパイオティクスとして実施例３で調製したＳＬＡＣ−９（実施例１で調製したガラクトマンナンとＬ．ｃａｓｅｉからなるシンパイオティクス）、特表２００７−５３７２２４号１４頁第０１００段〜第０１０１段に記載の方法のうち（ａ）で調製したコンニャク加水分解物１０質量部および１.０×１０８個／ｇのＬ．ｃａｓｅｉより調製した比較品Ａ、および市販のパラチニット（和光純薬（株）製、１，６−ＧＰＳ：４９質量％、１，１−ＧＰＭ：４９質量％）１０質量部および１.０×１０８個／ｇのＬ．ｃａｓｅｉより調製した比較品Ｂで試験例１と同様に男性４名（平均年齢４４±８才）の新鮮糞便を用いた同様の試験を実施した。
その結果を表１８に示した。
【０１０７】
【表１８】
【０１０８】
表１８に示したように、ＳＬＡＣ−９は、比較品ＡおよびＢと比較して、糞便培養によりさらに酢酸、プロピオン酸および酪酸の産生が増加し、腸内環境が整えられたことが示された。
【０１０９】
試験例１５
シンパイオティクスとして実施例９で調製したＳＢＩＦ−５（実施例１で調製したガラクトマンナンとＢ．ａｎｉｍａｌｉｓからなるシンパイオティクス）、特表２００７−５３７２２４号１４頁第０１００段〜第０１０１段に記載の方法のうち（ｂ）で調製したコンニャク加水分解物３００質量部および１.５×１０８個／ｇのＢ．ａｎｉｍａｌｉｓより調製した比較品ＡＡ、および市販のパラチニット（和光純薬（株）製、１，６−ＧＰＳ：４９質量％、１，１−ＧＰＭ：４９質量％）１０質量部および１.０×１０８個／ｇのＢ．ａｎｉｍａｌｉｓより調製した比較品ＢＢで試験例１と同様に男性４名（平均年齢４０±６才）の新鮮糞便を用いた同様の試験を実施した。
その結果を表１９に示した。
【０１１０】
【表１９】
【０１１１】
表１９に示したように、ＳＢＩＦ−５は、比較品ＡＡおよびＢＢと比較して、糞便培養によりさらに酢酸、プロピオン酸および酪酸の産生が増加し、腸内環境が整えられたことが示された。
【０１１２】
試験例１６
ＳＬＡＣ−９、比較品Ａを、それぞれ１日３ｇずつ４週間、ローマ−ＩＩＩの基準で過敏性腸症候群（ＩＢＳ）と診断された男性６名、女性４名（平均年齢３３±２才）に投与する試験を実施した。試験は、二重盲検、クロスオーバー試験を実施した。ウォッシュアウトは４週間とした。
摂取前と摂取４週間目に、健康関連ＱＯＬをＳＦ−３６（３６−Ｉｔｅｍ Ｓｈｏｒｔ Ｆｏｒｍ）、胃腸症状をＧＳＲＳ（Ｇａｓｔｒｏｉｎｔｅｓｔｉｎａｌ ｓｙｍｐｔｏｍ Ｒａｔｉｎｇ Ｓｃａｌｅ）、不安・鬱をＨＡＤＳ（Ｈｏｓｐｉｔａｌ Ａｎｘｉｅｔｙ ａｎｄ Ｄｅｐｒｅｓｓｉｏｎ Ｓｃａｌｅ）により、それぞれ評価した。
その結果を表２０〜２２に示した。
【０１１３】
【表２０】
【０１１４】
【表２１】
【０１１５】
【表２２】
【０１１６】
表２０〜表２２に示したように、本実施形態のシンパイオティクスを摂取させることにより、健康関連ＱＯＬ、胃腸症状および不安・鬱の評価項目が有意に改善され、腸内環境を整えることがわかった。しかしながら、比較品Ａを摂取した場合は、健康関連ＱＯＬ、胃腸症状および不安・鬱の評価項目は有意差はなく、改善される傾向であった。
【０１１７】
試験例１７
ＳＢＩＦ−５、比較品ＢＢを、それぞれ１日５ｇずつ２週間、ローマ−ＩＩＩの基準で過敏性腸症候群（ＩＢＳ）と診断された男性５名、女性３名（平均年齢３１±４才）に投与する試験を実施した。試験は、二重盲検、クロスオーバー試験を実施した。ウォッシュアウトは４週間とした。
摂取前と摂取２週間目に、健康関連ＱＯＬをＳＦ−３６（３６−Ｉｔｅｍ Ｓｈｏｒｔ Ｆｏｒｍ）、胃腸症状をＧＳＲＳ（Ｇａｓｔｒｏｉｎｔｅｓｔｉｎａｌ ｓｙｍｐｔｏｍ Ｒａｔｉｎｇ Ｓｃａｌｅ）、不安・鬱をＨＡＤＳ（Ｈｏｓｐｉｔａｌ Ａｎｘｉｅｔｙ ａｎｄ Ｄｅｐｒｅｓｓｉｏｎ Ｓｃａｌｅ）により、それぞれ評価した。
その結果を表２３〜２５に示した。
【０１１８】
【表２３】
【０１１９】
【表２４】
【０１２０】
【表２５】
【０１２１】
表２３〜表２５に示したように、本実施形態のシンパイオティクスを摂取させることにより、健康関連ＱＯＬ、胃腸症状および不安・鬱の評価項目が有意に改善され、腸内環境を整えることがわかった。しかしながら、比較品ＢＢを摂取した場合は、健康関連ＱＯＬ、胃腸症状および不安・鬱の評価項目は有意差はなく、改善される傾向であった。
【０１２２】
実施例Ａ
脱脂粉乳９.５ｋｇ、無塩バター３ｋｇ、上白糖１０.５ｋｇ、実施例１で調製したガラクトマンナン５ｋｇ及び水７２ｋｇをホモミキサーで混合し、原料ミックスを調製した。
この原料ミックスを５０℃まで加温し、８０ｋｇ／ｃｍ２で均質処理した後、プレート式殺菌機で９０℃、１０分間加熱殺菌し、プレート式熱交換機で４２℃まで冷却した。そして、発酵乳製造用のビフィドバクテリウム・ロンガムのスターター４質量％を添加した後、１００ｍｌ容の容器に充填し、４２℃で発酵を行い、乳酸酸度が０．７５％になったところで５℃まで冷却して、静置型発酵乳を製造した（実施例Ａ発酵乳）。
【０１２３】
比較例Ａ
脱脂粉乳９.５ｋｇ、無塩バター３ｋｇ、上白糖１０.５ｋｇ、比較例１で調製したガラクトマンナン５ｋｇ及び水７２ｋｇをホモミキサーで混合し、原料ミックスを調製した。
この原料ミックスを５０℃まで加温し、８０ｋｇ／ｃｍ２で均質処理した後、プレート式殺菌機で９０℃、１０分間加熱殺菌し、プレート式熱交換機で４２℃まで冷却した。そして、発酵乳製造用のビフィドバクテリウム・ロンガムのスターター４質量％を添加した後、１００ｍｌ容の容器に充填し、４２℃で発酵を行い、乳酸酸度が０.７５％になったところで５℃まで冷却して、静置型発酵乳を製造した（比較例Ａ発酵乳）。
【０１２４】
比較例Ｂ
脱脂粉乳９.５ｋｇ、無塩バター３ｋｇ、上白糖１０.５ｋｇ、比較例２で調製したガラクトマンナン５ｋｇ及び水７２ｋｇをホモミキサーで混合し、原料ミックスを調製した。
この原料ミックスを５０℃まで加温し、８０ｋｇ／ｃｍ２で均質処理した後、プレート式殺菌機で９０℃、１０分間加熱殺菌し、プレート式熱交換機で４２℃まで冷却した。そして、発酵乳製造用のビフィドバクテリウム・ロンガムのスターター４質量％を添加した後、１００ｍｌ容の容器に充填し、４２℃で発酵を行い、乳酸酸度が発酵乳１００ｇ当たり、０.７５％になったところで５℃まで冷却して、静置型発酵乳を製造した（比較例Ｂ発酵乳）。
【０１２５】
試験例Ａ
実施例Ａで調製した実施例Ａ発酵乳および比較例Ａで調製した比較例Ａ発酵乳を４℃で１４日間保存した。保存３、７および１４日目に乳酸酸度を測定することで保存中の発酵乳の過発酵を調べた。尚、乳酸酸度は、０.１Ｎ水酸化ナトリウム溶液による中和滴定法で測定した。製造直後の乳酸酸度を１００として、その上昇率で示した。その結果を表２６に示した。
【０１２６】
【表２６】
【０１２７】
表２６に示したように、実施例Ａ発酵乳は保存中に乳酸酸度が上昇せずに過発酵認められなかったが、比較例Ａ発酵乳は保存中に乳酸酸度が上昇し、過発酵が確認された。
【０１２８】
試験例Ｂ
実施例Ａで調製した実施例Ａ発酵乳および比較例Ｂで調製した比較例Ｂ発酵乳について、５人のパネラーを用いた官能評価を実施した。尚、評価項目及び評価基準は表２７に示した。
【０１２９】
【表２７】
【０１３０】
表２８に示したように実施例Ａ発酵乳は、比較例Ｂ発酵乳と比較して、おいしさ、のど越し、風味および総合評価のすべての官能評価項目において優れていることが確認された。
【０１３１】
【表２８】
【発明の効果】
【０１３２】
本発明によれば、プレバイオティクスとプロバイオティクスとを組み合わせたシンバイオティクスを利用した腸内環境調整方法を提供することができる。
【図面の簡単な説明】
【０１３３】
【図１】実施例１で得られたガラクトマンナンの歪依存性測定を行った結果を示すグラフである。グラフ中の●はＧ’‘を意味し、▲はＧ‘を意味する（図２においても同じ）。
【図２】実施例２で得られたガラクトマンナンの歪依存性測定を行った結果を示すグラフである。
【技術分野】
【０００１】
本発明は、腸内の健康に有用とされるプロバイオティクスを特定のプレバイオティクスを併用することにより、プロバイオティクスの胃酸耐性が向上し、ヒトや動物の大腸に効率よく到達し定着率を向上させる、かつプロバイオティクスの保存安定性を向上させることできるシンバイオティクスおよびこれを添加した飲食品、飼料およびペットフードに関する。さらに詳しくは、分子量が分子量マーカーとしてプルランを用いた高速液体クロマトグラフィーによるゲルろ過で重量平均分子量が３〜５０ｋＤａと算出されるガラクトマンナンであるプレバイオティクスとプロバイオティクスを併用するシンバイオティクスおよびこれを添加した飲食品、飼料およびペットフードに関する。
【背景技術】
【０００２】
プロバイオティクスとは、消化管内の細菌叢を改善して宿主に有益な作用をもたらし得る有用な微生物を意味している。プロバイオティクス機能を持つ微生物を摂取すると、それらが消化管内の細菌叢に作用し、細菌叢の健常化をはかりながら、疾病の予防・改善を行うことができると言われている。プロバイオティクスを応用した技術開発として、いくつかものが知られている（特許文献１）。
【０００３】
また、プレバイオティクスとは、上記プロバイオティクスに含まれる有用な細菌や常在の有用腸内細菌の増殖を助けて、腸内環境の改善を促進する物質のことを意味し、簡単に消化されない物質が多い。例えば、オリゴ糖、食物繊維などは、プレバイオティクスとして働く。オリゴ糖は、乳酸菌、ビフィズス菌などの栄養となり、食物繊維は、腸内細菌をとどめさせて、その増殖を助ける。プレバイオティクスを応用した技術開発として、いくつかのものが知られている（特許文献２）。
上記プロバイオティクスとプレバイオティクスとを組み合わせたものをシンバイオティクスと称しているが、このシンバイオティクスに関する技術開発については、十分に進んでいなかった。
【０００４】
【特許文献１】特開２００８−１０９９４５号公報
【特許文献２】特表２００７−５３７２２４号公報
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
本発明は、上記課題に鑑みてなされたものであり、その目的はシンバイオティクスを利用した腸内環境調整方法を提供することである。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
上記課題を解決するための発明に係る腸内環境調整方法は、（Ａ）プレバイオティクスとして、加水分解されたグァーの胚乳部分であって、次の性質を含むもの、（１）プルランを分子量マーカーとして用いた高速液体クロマトグラフィーによるゲルろ過で重量平均分子量が３〜５０ｋＤａと算出されるガラクトマンナン、（２）ケルダール法により窒素含量を測定し、係数６.２５を乗じて算出されたタンパク質含量が１.０％以下であるものと、（Ｂ）プロバイオティクスとして、ビィフィズス菌、乳酸菌、枯草菌、酪酸生成菌、乳酸利用菌、プロピオン酸生成菌の一種または二種以上からなり、さらに水分含量が２０％以下であるもの、の両者を含有するシンバイオティクスを経口投与することにより、腸管内で乳酸及び糖類から酪酸を生じさせて腸内環境を整えることを特徴とする。
本発明において、前記加水分解されたグァーの胚乳部分が、次の性質を含むもの、（３）固形分含量１５％水溶液の粘度が、回転式粘度計で回転数６０ｒｐｍ、２０℃で測定したときに２０ｍＰａ・ｓ以下であるもの、であることが好ましい。
また、前記加水分解されたグァーの胚乳部分が、次の性質を含むもの、（４）分解物の固形物含量が１.０％水溶液９９ｇに１.０ｇのポリオキシエチレン付加型界面活性剤（ＰＯＥ）を添加して測定した曇点が６０℃以下であるもの、（５）（Ａ）分解物１質量部に対して、１／５質量部のイソプロピルアルコールを加えてよく湿らせた後、激しくかき混ぜながら水１０質量部加えた溶液（溶液（５−１））の粘度がＢ型粘度計で２５℃、Ｎｏ．１ローター、１２ｒｐｍで測定したときに２０ｍＰａ・ｓ以下、（Ｂ）溶液（５−１）を沸騰水中で１０分間加熱し冷却後に同条件で測定した粘度が２０ｍＰａ・ｓ以下（溶液５−２）、（Ｃ）溶液（５−２）１質量部に５％ホウ酸ナトリウム水溶液１／５質量部を添加し、混和、放置したものを動的粘弾性測定装置で、２５℃、１Ｈｚでひずみ依存性測定をすると、線形領域で貯蔵弾性率（Ｇ‘）＞損失弾性率（Ｇ’‘）かつ線形領域から非線形領域を示す測定曲線を得るものであることが好ましい。
また、さらにツバキ科植物成分を経口投与することが好ましい。
本発明におけるプロバイオティクスとは、宿主の腸管内で有益な作用を発揮する微生物であり、好ましくは乳酸菌、ビフィズス菌、糖化菌、枯草菌、酪酸生成菌、乳酸利用菌、プロピオン酸生成菌、酵母である。
【０００７】
本発明における乳酸菌とは、乳酸桿菌および乳酸球菌であり、好ましくは、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ属細菌、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ属細菌、Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ属細菌、Ｌａｃｔｏｃｏｃｃｕｓ属細菌、Ｐｅｄｉｏｃｏｃｃｕｓ属細菌およびＬｅｕｃｏｎｏｓｔｏｃ属細菌である。
【０００８】
本発明におけるＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ属細菌は、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ａｃｉｄｏｐｈｉｌｕｓ、 Ｌ．ｇａｓｓｅｒｉ、 Ｌ．ｊｏｈｎｓｏｎｉｉ、Ｌ．ｄｅｌｂｒｕｅｃｋｉｉ、Ｌ．ｄｅｌｂｒｕｅｃｋｉｉ ｓｕｂｓｐ．ｂｕｌｇａｒｉｃｕｓ、Ｌ．ｂｕｌｇａｒｉｃｕｓ、Ｌ．ｈｅｌｖｅｔｉｃｕｓ、Ｌ．ｒｈａｍｎｏｓｕｓ、Ｌ．ｃａｓｅｉ、Ｌ．ｐｌａｎｔａｒｕｍ、Ｌ．ｒｅｕｔｅｒｉ、Ｌ．ｓａｌｉｖａｒｉｕｓ、Ｌ．ｓａｋｅ、Ｌ．ｓａｌｉｖａｒｉｕｓ、Ｌ．ｃｅｌｌｏｂｉｏｓｕｓおよびＬ．ｂｒｅｖｉｓが例示できる。
【０００９】
本発明におけるＳｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ属細菌は、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｕｓ、Ｓ．ｓａｎｇｕｉｓ、Ｓ．ｍｉｔｉｓ、Ｓ． ｐｓｅｕｄｏｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ、Ｓ．ｐａｓｔｅｕｒｉ、Ｓ．ｐａｒａｓａｎｇｕｉｎｉｓ、Ｓ．ｐａｒａｓａｎｇｕｉｎｉｓ、Ｓ．ｓａｌｉｖａｒｉｕｓ、Ｓ．ｖｅｓｔｉｂｕｌａｒｉｓ、Ｓ．ｐａｓｔｅｕｒｉ、およびＳ．ｏｒａｌｉｓが例示できる。
本発明におけるＥｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ属細菌は、Ｅ．ｍａｌｏｄｏｒａｔｕｓ、Ｅ．ｍａｌｏｄｏｒａｔｕｓ、Ｅ．ｆａｃｉａｌｉｓおよびＥ．ｆａｃｅｉｕｍが例示できる。
【００１０】
本発明におけるＬａｃｔｏｃｏｃｃｕｓ属細菌は、Ｌａｃｔｏｃｏｃｃｕｓ ｌａｃｔｉｓおよびＬａｃｔｏｃｏｃｃｕｓ ｌａｃｔｉｓ ｓｕｂｓｐ．ｃｒｅｍｏｒｉｓが例示できる。
本発明におけるＰｅｄｉｏｃｏｃｃｕｓ属細菌は、Ｐｅｄｉｏｃｏｃｃｕｓ ｄａｍｎｏｓｕｓおよびＰ．ａｃｉｄｉｌａｃｔｉｃｉが例示できる。
本発明におけるＬｅｕｃｏｎｏｓｔｏｃ属細菌は、Ｌ．ｍｅｓｅｎｔｅｒｏｉｄｅｓおよびＬ．ｓａｋｅが例示できる。
【００１１】
本発明におけるビィフィズス菌とは、Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ属細菌のことを指す。好ましくは、Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｂｉｆｉｄｕｍ、Ｂ．ａｄｏｌｅｓｃｅｎｔｉｓ、Ｂ．ｌｏｎｇｕｍ、Ｂ．ｉｎｆａｎｔｉｓ、Ｂ．ｂｒｅｖｅ、Ｂ．ａｎｉｍａｌｉｓ、Ｂ．ｐｓｅｕｄｏｌｏｎｇｕｍ、Ｂ．ｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｕｍ、Ｂ．ｂｏｕｍ、Ｂ．ｍａｇｕｎｕｍ、Ｂ．ｐｕｌｌｏｒｕｍ、Ｂ．ｃａｔｅｎｕｌａｔｕｍ、Ｂ．ｓｕｉｓ、Ｂ．ｐｓｅｕｄｏｃａｔｅｎｕｌａｔｕｍ、Ｂ．ｇａｌｌｉｎａｒｕｍ、Ｂ．ｄｅｎｔｉｕｍ、Ｂ．ｒｕｍｉｎａｎｔｉｕｍ、Ｂ．ａｎｇｕｌａｔｕｍ、Ｂ．ｍｅｒｙｃｉｃｕｍ、Ｂ．ｇａｌｌｉｃｕｍ、Ｂ．ｓａｅｃｕｌａｒｅ、Ｂ．ｉｎｏｐｉｎａｔｕｍ、Ｂ．ｍｉｎｉｍｕｍ、Ｂ．ｄｅｎｔｉｃｏｌｅｎｓ、Ｂ．ｓｕｂｔｉｌｅ、Ｂ．ｃｏｒｙｎｅｆｏｒｍｅ、Ｂ．ｃｕｎｉｃｕｌｉ、Ｂ．ａｓｔｅｒｏｉｄｅｓ、Ｂ．ｃｈｏｅｒｉｎｕｍおよびＢ．ｉｎｄｉｃｕｍである。
【００１２】
本発明における糖化菌とは、Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｍｅｓｅｎｔｅｒｉｃｕｓである。
本発明における枯草菌とは、Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌｉｓ、好ましくは、Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌｉｓ ｖａｒ． ｎａｔｔｏである。
本発明における酪酸生成菌とは、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｂｕｔｙｒｉｃｕｍおよびＴ−ＲＥＬＰ法による細菌解析でＣｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｓｕｂｃｌｕｓｔｅｒ ＸＩＶａに分類される細菌である。
【００１３】
本発明におけるＴ−ＲＥＬＰ法による細菌解析でＣｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｓｕｂｃｌｕｓｔｅｒ ＸＩＶａに分類される細菌は、Ｅｕｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｈａｌｌｉｉ、Ｅ．ｒａｍｕｌｕｓ、Ｅ．ｒｅｃｔａｌｅ、Ｅ．ｖｅｎｔｒｉｏｓｕｍおよびＲｏｓｅｂｕｒｉａ ｉｎｔｅｓｔｉｎａｌｉｓが例示できる。
【００１４】
本発明における乳酸利用菌とは、Ｍｅｇａｓｐｈａｅｒａ ｅｌｓｄｅｎｉｉである。
本発明におけるプロピオン酸生成菌とは、Ｐｒｏｐｉｏｎｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ属細菌のことであり、好ましくは、Ｐｒｏｐｉｏｎｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｆｒｅｕｄｅｎｒｅｉｃｈｉｉである。
【００１５】
本発明におけるガラクトマンナンとは、Ｄ−マンノースがβ−（１→４）結合したマンナン鎖を主鎖とし、Ｄ−マンノースのＯ−６位からα−ガラクトシル基が結合した櫛状の分岐構造を有し、分子量マーカーとしてプルランを用いた高速液体クロマトグラフィーによるゲルろ過で測定した重量平均分子量が３〜５０ｋＤａと算出される物質を指す。
本発明のガラクトマンナンのマンノース直鎖の鎖長は、３０単位〜２００単位の範囲内に８０％以上分布している。
本発明のガラクトマンナンの５％水溶液の粘度は、ブルックフィールド粘度計を用いて５℃，６０ｒｐｍで、Ｌｏｗローターにて測定したときに５〜２０ｍＰａ・ｓである。
【００１６】
本発明のガラクトマンナンの食物繊維含量は、ＡＯＡＣ ９８５．２９に記載の酵素重量法により測定したときに６５％以上である。
本発明のガラクトマンナンは、ガラクトマンナンを含有するマメ科植物種子の胚乳部分をヘミセルラーゼ製剤により酸性域で酵素的に加水分解することで得られた溶液の加水分解反応を停止させ、この溶液を遠心分離処理を行って未反応物を除去し、次いで精製処理、加熱殺菌処理及び冷却処理を行った後、中和処理を行うことによって得ることができる。
【００１７】
本発明のガラクトマンナンを含有するマメ科植物とは、グアー（Ｃｙａｍｏｐｓｉｓ ｔｅｔｒａｇｏｎｏｌｏｂｕｓ）、イナゴマメ（Ｃｅｒａｔｏｎｉａ ｓｉｌｉｑｕａ）、ケンタッキー・コーヒーマメ（Ｇｙｍｎｏｃｌａｄｕｓ ｄｉｏｉｃａ）、ムラサキウマゴヤシ（Ｍｅｄｉｃａｇｏ ｓａｔｉｖａ）、クローバ（Ｔｒｉｆｏｌｉｕｍ ｐｒａｔｅｎｓｅ）、ダイズサヤ（Ｇｌｙｃｉｎｅ ｈｉｓｐｉｄａ）、タラ（Ａｃｔｉｎｉｄｉａ ｃａｌｌｏｓａ ＬＩＮＤＬＥＹ）、セスバニア（Ｓｅｓｂａｎｉａ ｂｉｓｉｂｉｎｏｎｉａ）、カシア（Ｃａｓｓｉａ ｔｏｒａ Ｌｉｎｎ）およびフェヌグリーク（Ｔｒｉｇｏｎｅｌｌａ ｆｏｅｎｕｍ ｇｒａｅｃｕｍ Ｌ）が例示でき、資源の豊富さと味の観点からグアー（Ｃｙａｍｏｐｓｉｓ ｔｅｔｒａｇｏｎｏｌｏｂｕｓ）、フェヌグリーク（Ｔｒｉｇｏｎｅｌｌａ ｆｏｅｎｕｍ ｇｒａｅｃｕｍ Ｌ）及びイナゴマメ（Ｃｅｒａｔｏｎｉａ ｓｉｌｉｑｕａ）が好ましく、最も好ましくはグアー（Ｃｙａｍｏｐｓｉｓ ｔｅｔｒａｇｏｎｏｌｏｂｕｓ）である。
【００１８】
本発明のガラクトマンナンを得るときに実施される加水分解反応で用いるヘミセルラーゼ製剤は、ガラクトマンナナーゼ、α−ガラクトシダーゼ及びβ−マンノシダーゼを含有し、それら酵素の比活性の割合が１〜１００：１：０〜０.５、もしくはガラクトマンナナーゼ、α−ガラクトシダーゼ、酸性プロテアーゼ及びβ−マンノシダーゼを含有し、それら酵素の比活性の割合が１〜１００：１：０〜０.１５：０〜０.５、もしくはガラクトマンナナーゼ、α−ガラクトシダーゼ、酸性プロテアーゼ及びβ−マンノシダーゼを含有し、それら酵素の比活性の割合が１〜１０：１：０〜０.０５：０〜０.５である。ここで、本発明で酵素として用いるβ−ガラクトマンナナーゼの比活性とは、β−ガラクトマンナナーゼがガラクトマンナンであるローカストビーンガムに３７℃、ｐＨ５．０で作用するとき、反応初期の１分間に１マイクロモルのマンノースに相当する還元力の増加をもたらす試料１ｇ中の酵素量のことを指す。β−ガラクトマンナナーゼの分子量は、ＳＤＳ−ポリアクリルアミドゲル電気泳動後にクーマシーブルー染色（ＣＢＢ染色）した結果、２０ｋＤａ〜６０ｋＤａを示すことがよい。当該分子量のより好ましい範囲は３０ｋＤａ〜５０ｋＤａであり、最も好ましい範囲は３５ｋＤａ〜４５ｋＤａである。
【００１９】
本発明で酵素として用いるα−ガラクトシダーゼの比活性とは、当該α−ガラクトシダーゼがｐ−ニトロフェニル−α−ガラクシドに３７℃、ｐＨ５.５で作用するとき、反応初期の１分間に１マイクロモルのｐ−ニトロフェニルを遊離する試料１ｇ中の酵素量のことを指す。
本発明で酵素として使用する酸性プロテアーゼの比活性とは、当該酸性プロテアーゼが乳製カゼインに３０℃、ｐＨ３.０で作用するとき、反応初期の１分間に１マイクログラムのチロシンに相当する非蛋白性のフォリン試液呈色物質の増加をもたらす試料１ｇ中の酵素量のことを指す。
本発明で酵素として使用するβ−マンノシダーゼの比活性とは、当該β−マンノシダーゼがｐ−ニトロフェニル−β−マンノシドに３７℃、ｐＨ５.５で作用するとき、反応初期の１分間に１マイクロモルのｐ−ニトロフェニルを遊離する試料１ｇ中の酵素量のことを指す。
【００２０】
本発明のガラクトマンナンを得るときに実施される加水分解反応で用いるヘミセルラーゼ製剤は、Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ属細菌、Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ属細菌、Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ属細菌、Ｖｉｂｒｉｏ属細菌、Ａｅｒｏｍｏｎａｓ属細菌、Ｂａｃｉｌｌｕｓ属細菌、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ属細菌、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ属カビ、Ｒｈｉｚｏｐｕｓ属カビ及びＴｒｉｃｏｈｄｅｒｍａ属酵母の微生物群から選択される少なくとも１種に由来し、例えば、Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ属細菌はＰ．ｐｕｒｐｕｒｏｇｅｎａｍ、Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ属細菌はＥ．ｃａｓｅｌｉｆｌａｖａｓ、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ属細菌はＣ．ｔｅｒｔｉｕｍ、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ属カビはＡ．ｎｉｇｅｒ、Ｒｈｉｚｏｐｕｓ属カビはＲ．ｎｉｖｅｕｓ、Ｔｒｉｃｏｈｄｅｒｍａ属酵母はＴ．ｒｅｅｓｅｉが、それぞれ例示できる。
【００２１】
本発明のガラクトマンナンを得るときに実施される加水分解反応における酸性域は、ｐＨ２.０〜ｐＨ６.０である。
本発明のガラクトマンナンを得るときに実施される加水分解反応における温度および反応時間は、５０℃〜８０℃で８時間〜２４時間、または６０℃〜８０℃で３時間〜１２時間である。
本発明のガラクトマンナンを得るときに実施される加水分解反応の停止は、特に限定されないが、８５℃以上で１５分間〜６０分間加熱が好ましい。
【００２２】
本発明のツバキ科植物成分とは、水、アルコール、酢酸エチル、石油エーテル等の有機溶媒による溶剤抽出、水蒸気蒸留、圧搾、油脂吸着、液化ガス抽出、超臨界抽出、乾留により得られる成分を指す。好ましくは抽出効率の観点から溶剤抽出、最も好ましくは水及び酢酸エチルによる溶剤抽出である。このようにして得られた抽出物は、必要に応じて吸着樹脂、濾過膜等により精製しても問題はない。例えば、茶の場合では酢酸エチルにより抽出して得られたポリフェノール化合物を用いることも可能である。緑茶の場合、生葉又は乾燥葉から（＋）−カテキン、（＋）−ガロカテキン、（−）−ガロカテキンガレート、（−）−エピカテキン、（−）−エピカテキンガレート、（−）−エピガロカテキン、（−）−エピガロカテキンガレートのポリフェノール化合物が抽出され、これらポリフェノール化合物の１種または２種以上の混合物として用いることができが、好ましくは（−）−ガロカテキンガレート、（−）−エピカテキンガレート、（−）−エピガロカテキンガレートの１種または２種以上の混合物として用いることができる。単独で用いる場合、（＋）−カテキン、（＋）−ガロカテキン、（−）−ガロカテキンガレート、（−）−エピカテキン、（−）−エピカテキンガレート、（−）−エピガロカテキン又は（−）−エピガロカテキンガレートが好ましく、さらに好ましくは、（−）−エピガロカテキンガレート、（−）−エピカテキンガレート又は（−）−ガロカテキンガレートであり、最も好ましくは、（−）−エピガロカテキンガレートである。
【００２３】
実施例１
Ａ．ｎｉｇｅｒを所定期間培養し、加水分解反応に用いる酵素群をあらかじめ採取しておいた。このようにして採取したＡ． ｎｉｇｅｒ由来の酵素群は、β−ガラクトマンナナーゼ、α−ガラクトシダーゼ、酸性プロテアーゼ及びβ−マンノシダーゼの混合物であった。
次に、水９００部に塩酸を加えてｐＨを４.５に調整した後、その水に上記の酵素群０.２部とグアー豆（Ｃｙａｍｏｐｓｉｓ ｔｅｔｒａｇｏｎｏｌｏｂｕｓ）の胚乳１００部とを添加混合し、５５℃〜６５℃で２４時間酵素を作用させ、酵素的に加水分解した。
次に、反応液を９０℃，３０分間加熱することにより酵素を失活させ、加水分解反応を停止させた。
【００２４】
次に、加水分解物を含む反応液を遠心分離装置（石川島播磨重工業社製、商品名ＨＳ−５０Ｌ）で３０００ｒｐｍ，供給量６ｍ３／ｈで遠心分離処理し、反応液を未反応物と清澄液とに分離させるとともに、清澄液のみを採取した。
次に、採取した溶液（清澄液）に珪藻土系濾過助剤及び活性炭を添加して６０分間攪拌した後、第１濾過手段である濾過装置（昭和製作所社製、商品名２０２Ｂ、濾過圧：２５０ｋｇ／ｃｍ２）を用いて濾過する粗精製を行った。その結果、前記溶液中に含まれる不純物をある程度吸着除去した。さらに、粗精製された前記溶液に珪藻土系濾過助剤のみを添加して６０分間攪拌した後、第１濾過手段よりも目の細かい第２濾過手段である精密濾過装置（中央製作所社製、商品名ＦＳ−５０Ｂ、流量：３００Ｌ／ｈ）を用いて濾過する本精製を行った。その結果、前記溶液中に含まれる不純物をほぼ完全に吸着除去し、本発明のガラクトマンナンを含有する無色透明で臭いのない溶液を得た。
【００２５】
次に、ＵＨＴ殺菌装置（日阪製作所社製、商品名ＦＸ−０５）を用いて、前記溶液をＵＨＴ殺菌処理しかつ直ちに強制冷却した。なお、この処理では、入り口温度を１４０℃に設定し、出口温度を４℃に設定し、殺菌時間を４秒に設定した。
次に、ｐＨが酸性域に保持されていた溶液をＮａＯＨで中和してｐＨ＝約７．０にした。
さらに、得られた中性の溶液を遠心式薄膜濃縮装置（アルファ・ラバル社製、商品名ＣＴ−６）を用いて固形分として２０％になるように所定時間減圧濃縮した。
【００２６】
その後、噴霧乾燥装置（大川原化工機社製、商品名ＯＣ−３５）を用いて９０分間噴霧乾燥を行い、本発明のガラクトマンナンの白色粉末７０部を得た。
そして、得られた粉末状のガラクトマンナンをサンプルとして下記の測定を行った。具体的には、カラムにＧ３０００ＰＷ（東ソー株式会社製）を充填したものを固定相として用い、高速液体クロマトグラフィーを行った。このような測定の結果、マンナン主鎖の糖鎖の８０％以上はマンノースの重合度が３０〜４０単位の範囲内に包含されていた。なお、このとき糖鎖単位の標準試薬として、グルコース重合度が既知の直鎖デキストリン（グルコースの重合度：５０，１００，１５０）を用いた。
本実施例のガラクトマンナンの重量平均分子量、食物繊維含量、５％溶液の粘度を測定したところ、重量平均分子量が２０ｋＤａ、食物繊維含量が８２％、粘度が８ｍＰａ・ｓであった。
本実施例のガラクトマンナン０.４ｇにイソプロピルアルコール０.０８ｍｌを加えてよく湿らした後、厳しくかき混ぜながら水４ｍｌを加え、更に均一に分散するまで激しくかき混ぜ、粘度を測定した（均一分散後）。また、この液を沸騰した水浴上で約１０分間加熱した後に粘度を測定した（１０分加熱冷却後）。粘度計はＢ型粘度計を用い、ローター番号は Ｎｏ.１、測定温度は２５℃および粘度計の回転数は１２ｒｐｍとした。均一分散後の粘度は７.４ｍＰａ・ｓであり、１０分加熱冷却後粘度は７.４ｍＰａ・ｓであった。
【００２７】
１０分加熱冷却後の溶液３.５ｍｌに５％ホウ酸ナトリウム溶液０.７ｍｌを加え、混和して放置し、動的粘弾性の歪依存性測定に供した。尚、試験装置は、動的粘弾性物性計測装置ＡＲＥＳ（Ｔ．Ａインスツルメンツ株式会社製）を用いた。測定温度は２５℃、および測定周波数は１.０Ｈｚとした。その結果、図１に示したように、線形領域で貯蔵弾性率（Ｇ‘）＞損失弾性率（Ｇ’‘）かつ線形領域から非線形領域を示す測定曲線が得られた。
【００２８】
実施例２
Ａ．ｎｉｇｅｒを所定期間培養し、加水分解反応に用いる酵素群をあらかじめ採取しておいた。このようにして採取したＡ．ｎｉｇｅｒ由来の酵素群は、β−ガラクトマンナナーゼ、α−ガラクトシダーゼ、酸性プロテアーゼ及びβ−マンノシダーゼの混合物であった。
次に、水９００部に塩酸を加えてｐＨを４.５に調整した後、その水に上記の酵素群０.１部とグアー豆（Ｃ．ｔｅｔｒａｇｏｎｏｌｏｂｕｓ）の胚乳１００部とを添加混合し、７０℃〜７５℃で８時間酵素を作用させた。この後、実施例１と同様の方法を実施し、本発明のガラクトマンナンの白色粉末７０部を得た。
【００２９】
得られた粉末状のガラクトマンナンについて、実施例１と同様の測定及び評価を行った。その結果、マンナン主鎖の糖鎖の８０％以上は、マンノースの重合度が３０〜４０単位の範囲内に包含されていた。また、本実施例のガラクトマンナンの重量平均分子量は１６ｋＤａ、食物繊維含量は７６％、５％水溶液の粘度は５ｍＰａ・ｓ、であった。
【００３０】
本実施例のガラクトマンナン０.４ｇにイソプロピルアルコール０.０８ｍｌを加えてよく湿らした後、厳しくかき混ぜながら水４ｍｌを加え、更に均一に分散するまで激しくかき混ぜ、粘度を測定した（均一分散後）。また、この液を沸騰した水浴上で約１０分間加熱した後に粘度を測定した（１０分加熱冷却後）。粘度計はＢ型粘度計を用い、ローター番号は Ｎｏ.１、測定温度は２５℃および粘度計の回転数は１２ｒｐｍとした。均一分散後の粘度は４.９ｍＰａ・ｓであり、１０分加熱冷却後粘度は５.１ｍＰａ・ｓであった。
【００３１】
１０分加熱冷却後の溶液３.５ｍｌに５％ホウ酸ナトリウム溶液０.７ｍｌを加え、混和して放置し、動的粘弾性の歪依存性測定に供した。尚、試験装置は、動的粘弾性物性計測装置ＡＲＥＳ（Ｔ．Ａインスツルメンツ株式会社製）を用いた。測定温度は２５℃、および測定周波数は１.０Ｈｚとした。その結果、図２に示したように、線形領域で貯蔵弾性率（Ｇ‘）＞損失弾性率（Ｇ’‘）かつ線形領域から非線形領域を示す測定曲線が得られた。
【００３２】
比較例１
Ａ．ｎｉｇｅｒを所定期間培養し、加水分解反応に用いる酵素群をあらかじめ採取しておいた。このようにして採取したＡ．ｎｉｇｅｒ由来の酵素群は、β−ガラクトマンナナーゼ、α−ガラクトシダーゼ、酸性プロテアーゼ及びβ−マンノシダーゼの混合物であった。
次に、水９００部に塩酸を加えてｐＨを４.５に調整した後、その水に上記の酵素群０.２部とグアー豆（Ｃ．ｔｅｔｒａｇｏｎｏｌｏｂｕｓ）の胚乳１００部とを添加混合し、５５℃〜６５℃で７２時間酵素を作用させ、酵素的に加水分解した。
【００３３】
次に、反応液を９０℃，３０分間加熱することにより酵素を失活させ、加水分解反応を停止させた。
次に、加水分解物を含む反応液を遠心分離装置（石川島播磨重工業社製、商品名ＨＳ−５０Ｌ）で３０００ｒｐｍ，供給量６ｍ３／ｈで遠心分離処理し、反応液を未反応物と清澄液とに分離させるとともに、清澄液のみを採取した。
次に、採取した溶液（清澄液）に珪藻土系濾過助剤及び活性炭を添加して６０分間攪拌した後、第１濾過手段である濾過装置（昭和製作所社製、商品名２０２Ｂ、濾過圧：２５０ｋｇ／ｃｍ２）を用いて濾過する粗精製を行った。その結果、前記溶液中に含まれる不純物をある程度吸着除去した。さらに、粗精製された前記溶液に珪藻土系濾過助剤のみを添加して６０分間攪拌した後、第１濾過手段よりも目の細かい第２濾過手段である精密濾過装置（中央製作所社製、商品名ＦＳ−５０Ｂ、流量：３００Ｌ／ｈ）を用いて濾過した。その結果、前記溶液中に含まれる不純物をほぼ完全に吸着除去した。
【００３４】
次に、ＵＨＴ殺菌装置（日阪製作所社製、商品名ＦＸ−０５）を用いて、前記溶液をＵＨＴ殺菌処理しかつ直ちに強制冷却した。なお、この処理では、入り口温度を１４０℃に設定し、出口温度を４℃に設定し、殺菌時間を４秒に設定した。
次に、ｐＨが酸性域に保持されていた溶液をＮａＯＨで中和してｐＨ＝約７.０にした。
さらに、得られた中性の溶液を遠心式薄膜濃縮装置（アルファ・ラバル社製、商品名ＣＴ−６）を用いて固形分として２０％になるように所定時間減圧濃縮した。濃縮液を陰イオンカラムクロマトグラフィーおよび陽イオンカラムクロマトグラフィー処理し、除タンパク処理した。
その後、噴霧乾燥装置（大川原化工機社製、商品名ＯＣ−３５）を用いて９０分間噴霧乾燥を行い、比較品の白色粉末６５部を得た。
【００３５】
そして、得られた粉末状のガラクトマンナンをサンプルとして下記の測定を行った。具体的には、カラムにＧ３０００ＰＷ（東ソー株式会社製）を充填したものを固定相として用い、高速液体クロマトグラフィーを行った。このような測定の結果、マンナン主鎖の糖鎖の８０％以上はマンノースの重合度が３０〜４０単位の範囲内に包含されていなかった。なお、このとき糖鎖単位の標準試薬として、グルコース重合度が既知の直鎖デキストリン（グルコースの重合度：５０，１００，１５０）を用いた。
【００３６】
本比較例のガラクトマンナンの重量平均分子量、食物繊維含量、５％溶液の粘度を測定したところ、重量平均分子量が１.５ｋＤａ、食物繊維含量が５４％、粘度が３ｍＰａ・ｓであった。
【００３７】
本比較例のガラクトマンナン０.４ｇにイソプロピルアルコール０.０８ｍｌを加えてよく湿らした後、厳しくかき混ぜながら水４ｍｌを加え、更に均一に分散するまで激しくかき混ぜ、粘度を測定した（均一分散後）。また、この液を沸騰した水浴上で約１０分間加熱した後に粘度を測定した（１０分加熱冷却後）。粘度計はＢ型粘度計を用い、ローター番号は Ｎｏ.１、測定温度は２５℃および粘度計の回転数は１２ｒｐｍとした。均一分散後の粘度は２.５ｍＰａ・ｓであり、１０分加熱冷却後粘度は２.３ｍＰａ・ｓであった。
１０分加熱冷却後の溶液３.５ｍｌに５％ホウ酸ナトリウム溶液０.７ｍｌを加え、混和して放置し、動的粘弾性の歪依存性測定を供しようとしたところ、この溶液はゲル状態を呈しないために、測定することは不可能であった。このことより本発明のガラクトマンナンとは異なる性質のものであった。
【００３８】
比較例２
Ａ．ｎｉｇｅｒを所定期間培養し、加水分解反応に用いる酵素群をあらかじめ採取しておいた。このようにして採取したＡ．ｎｉｇｅｒ由来の酵素群は、β−ガラクトマンナナーゼ、α−ガラクトシダーゼ、酸性プロテアーゼ及びβ−マンノシダーゼの混合物であった。
次に、水９００部に塩酸を加えてｐＨを４.５に調整した後、その水に上記の酵素群０.２部とグアー豆（Ｃ．ｔｅｔｒａｇｏｎｏｌｏｂｕｓ）の胚乳１００部とを添加混合し、５５℃〜６５℃で３時間酵素を作用させ、酵素的に加水分解した。
【００３９】
次に、反応液を９０℃，３０分間加熱することにより酵素を失活させ、加水分解反応を停止させた。
次に、加水分解物を含む反応液を遠心分離装置（石川島播磨重工業社製、商品名ＨＳ−５０Ｌ）で３０００ｒｐｍ，供給量６ｍ３／ｈで遠心分離処理し、反応液を未反応物と清澄液とに分離させるとともに、清澄液のみを採取した。
【００４０】
次に、採取した溶液（清澄液）に珪藻土系濾過助剤及び活性炭を添加して６０分間攪拌した後、第１濾過手段である濾過装置（昭和製作所社製、商品名２０２Ｂ、濾過圧：２５０ｋｇ／ｃｍ２）を用いて濾過する粗精製を行った。その結果、前記溶液中に含まれる不純物をある程度吸着除去した。さらに、粗精製された前記溶液に珪藻土系濾過助剤のみを添加して６０分間攪拌した後、第１濾過手段よりも目の細かい第２濾過手段である精密濾過装置（中央製作所社製、商品名ＦＳ−５０Ｂ、流量：３００Ｌ／ｈ）を用いて濾過した。その結果、前記溶液中に含まれる不純物をほぼ完全に吸着除去した。
【００４１】
次に、ＵＨＴ殺菌装置（日阪製作所社製、商品名ＦＸ−０５）を用いて、前記溶液をＵＨＴ殺菌処理しかつ直ちに強制冷却した。なお、この処理では、入り口温度を１４０℃に設定し、出口温度を４℃に設定し、殺菌時間を４秒に設定した。
次に、ｐＨが酸性域に保持されていた溶液をＮａＯＨで中和してｐＨ＝約７.０にした。
さらに、得られた中性の溶液を遠心式薄膜濃縮装置（アルファ・ラバル社製、商品名ＣＴ−６）を用いて固形分として２０％になるように所定時間減圧濃縮した。濃縮液を陰イオンカラムクロマトグラフィーおよび陽イオンカラムクロマトグラフィー処理し、除タンパク処理した。
【００４２】
その後、噴霧乾燥装置（大川原化工機社製、商品名ＯＣ−３５）を用いて９０分間噴霧乾燥を行い、比較品の白色粉末３２部を得た。
そして、得られた粉末状のガラクトマンナンをサンプルとして下記の測定を行った。具体的には、カラムにＧ３０００ＰＷ（東ソー株式会社製）を充填したものを固定相として用い、高速液体クロマトグラフィーを行った。このような測定の結果、マンナン主鎖の糖鎖の８０％以上はマンノースの重合度が３０〜４０単位の範囲内に包含されていなかった。なお、このとき糖鎖単位の標準試薬として、グルコース重合度が既知の直鎖デキストリン（グルコースの重合度：５０，１００，１５０）を用いた。
本比較例のガラクトマンナンの重量平均分子量、食物繊維含量及び５％溶液の粘度を測定したところ、重量平均分子量が８３ｋＤａ、食物繊維含量が８２％、粘度が１５０ｍＰａ・ｓであった。
本比較例のガラクトマンナン０.４ｇにイソプロピルアルコール０.０８ｍｌを加えてよく湿らした後、厳しくかき混ぜながら水４ｍｌを加え、更に均一に分散するまで激しくかき混ぜ、粘度を測定しようとしたが、この溶液は高粘度を呈し、この条件では粘度測定が不可能であった。よって、以後の測定も実施不可能であった。このことより本発明のガラクトマンナンとは異なる性質のものであった。
【００４３】
実施例３
プレバイオティクスとして実施例１で調製したガラクトマンナン（Ａ）１０質量部およびプロバイオティクスとして、１.０×１０８個／ｇのＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ａｃｉｄｏｐｈｉｌｕｓ粉末１質量部を混合し、シンバイオティクスＬＡＣ−１（ＳＬＡＣ−１）を調製した。
同様に、Ａとプロバイオティクスとして、１×１０８個／ｇのＬ．ｇａｓｓｅｒｉ（２）、Ｌ．ｊｏｈｎｓｏｎｉｉ（３）、Ｌ．ｄｅｌｂｒｕｅｃｋｉｉ（４）、Ｌ．ｄｅｌｂｒｕｅｃｋｉｉ ｓｕｂｓｐ．ｂｕｌｇａｒｉｃｕｓ（５）、Ｌ．ｂｕｌｇａｒｉｃｕｓ（６）、Ｌ．ｈｅｌｖｅｔｉｃｕｓ（７）、Ｌ．ｒｈａｍｎｏｓｕｓ（８）、Ｌ．ｃａｓｅｉ（９）、Ｌ．ｐｌａｎｔａｒｕｍ（１０）、Ｌ．ｒｅｕｔｅｒｉ（１１）、Ｌ．ｓａｌｉｖａｒｉｕｓ（１２）、Ｌ．ｓａｋｅ（１３）、Ｌ．ｓａｌｉｖａｒｉｕｓ（１４）、Ｌ．ｃｅｌｌｏｂｉｏｓｕｓ（１５）およびＬ．ｂｒｅｖｉｓ（１６）を用いて、それぞれシンバイオティクスＬＡＣ−２〜１６（ＳＬＡＣ−２〜１６）を調製した。
【００４４】
比較例３
比較プレバイオティクスとして比較例１で調製したガラクトマンナン（ＣＡ）１０質量部およびプロバイオティクスとして、１.０×１０８個／ｇのＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ａｃｉｄｏｐｈｉｌｕｓ粉末１質量部を混合し、比較シンバイオティクス−１（ＣＳＬＡＣ−１）を調製した。
同様に、Ａとプロバイオティクスとして、１×１０８個／ｇのＬ． ｇａｓｓｅｒｉ（２）、Ｌ．ｊｏｈｎｓｏｎｉｉ（３）、Ｌ．ｄｅｌｂｒｕｅｃｋｉｉ（４）、Ｌ．ｄｅｌｂｒｕｅｃｋｉｉ ｓｕｂｓｐ．ｂｕｌｇａｒｉｃｕｓ（５）、Ｌ．ｂｕｌｇａｒｉｃｕｓ（６）、Ｌ．ｈｅｌｖｅｔｉｃｕｓ（７）、Ｌ．ｒｈａｍｎｏｓｕｓ（８）、Ｌ．ｃａｓｅｉ（９）、Ｌ．ｐｌａｎｔａｒｕｍ（１０）、Ｌ．ｒｅｕｔｅｒｉ（１１）、Ｌ．ｓａｌｉｖａｒｉｕｓ（１２）、Ｌ．ｓａｋｅ（１３）、Ｌ．ｓａｌｉｖａｒｉｕｓ（１４）、Ｌ．ｃｅｌｌｏｂｉｏｓｕｓ（１５）およびＬ．ｂｒｅｖｉｓ（１６）を用いて、それぞれ比較シンバイオティクスＬＡＣ−２〜１６（ＣＳＬＡＣ−２〜１６）を調製した。
【００４５】
試験例１
男性４名（平均年齢４３±５才）より新鮮糞便１５０ｇずつを集めた。これらの糞便を一つの３０００ｍＬの三角フラスコに注入した。４倍重量のリン酸緩衝液（ｐＨ７.０）を添加し、嫌気的に均一に懸濁した。試験管に９.５ｍＬずつ嫌気的に分注した後に、実施例３で調製したＳＬＡＣ−１〜１６、および比較例３で調製したＣＳＬＡＣ−１〜１６を、それぞれの試験管に０.５ｇずつ添加した。各試験管を３７℃で２４時間嫌気的に培養した。培養後に培養液をろ過し、得られたろ液中の酢酸、プロピオン酸及び酪酸を定量した。定量には、イオン排除高速液体クロマトグラフィー（Ｗａｔｅｒｓ 製、以下ＨＰＬＣ）を用いた。前処理およびＨＰＬＣの条件は、Ａｎｉｍ．Ｓｃｉ．Ｔｅｃｈｎｏｌ．６９：５７１−５７５（１９９８）に準拠した。
その結果を表１に示した。
【００４６】
【表１】
【００４７】
表１に示したように、比較例３で調製した比較シンパイオティクスと比較すると、実施例３で調製したシンバイオティクスは、糞便培養により酢酸、プロピオン酸および酪酸の産生が増加し、腸内環境が整えられたことが示された。
【００４８】
実施例４
実施例３と同様に、プレバイオティクスとして実施例２で調製したガラクトマンナン（Ｂ）１００質量部およびプロバイオティクスとして、１.２×１０８個／ｇのＳｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｕｓ（１）、Ｓ．ｓａｎｇｕｉｓ（２）、Ｓ．ｍｉｔｉｓ（３）、Ｓ．ｐｓｅｕｄｏｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ（４）、Ｓ．ｐａｓｔｅｕｒｉ（５）、Ｓ．ｐａｒａｓａｎｇｕｉｎｉｓ（６）、Ｓ．ｐａｒａｓａｎｇｕｉｎｉｓ（７）、Ｓ．ｓａｌｉｖａｒｉｕｓ（８）、Ｓ．ｖｅｓｔｉｂｕｌａｒｉｓ（９）、Ｓ．ｐａｓｔｅｕｒｉ（１０）、Ｓ．ｏｒａｌｉｓ（１１）１質量部より、それぞれシンバイオティクスＳ−１〜１１（ＳＳ−１〜１１）を調製した。
【００４９】
比較例４
実施例３と同様に、比較プレバイオティクスとして比較例２で調製したガラクトマンナン（ＣＢ）１００質量部およびプロバイオティクスとして、１.２×１０８個／ｇのＳｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｕｓ（１）、Ｓ．ｓａｎｇｕｉｓ（２）、Ｓ．ｍｉｔｉｓ（３）、Ｓ．ｐｓｅｕｄｏｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ（４）、Ｓ．ｐａｓｔｅｕｒｉ（５）、Ｓ．ｐａｒａｓａｎｇｕｉｎｉｓ（６）、Ｓ．ｐａｒａｓａｎｇｕｉｎｉｓ（７）、Ｓ．ｓａｌｉｖａｒｉｕｓ（８）、Ｓ．ｖｅｓｔｉｂｕｌａｒｉｓ（９）、Ｓ．ｐａｓｔｅｕｒｉ（１０）、Ｓ．ｏｒａｌｉｓ（１１）１質量部より、それぞれ比較シンバイオティクスＳ−１〜１１（ＣＳＳ−１〜１１）を調製した。
【００５０】
試験例２
試験例１と同様に、男性４名（平均年齢４３±５才）の新鮮糞便を用いた同様の試験を実施例４で調製したＳＳ−１〜１１および比較例４で調製したＣＳＳ−１〜１１で行った。
その結果を表２に示した。
【００５１】
【表２】
【００５２】
表２に示したように、比較例４で調製した比較シンパイオティクスと比較すると、実施例４で調製したシンバイオティクスは、糞便培養により酢酸、プロピオン酸および酪酸の産生が増加し、腸内環境が整えられたことが示された。
【００５３】
実施例５
実施例３と同様に、プレバイオティクスとして実施例１で調製したガラクトマンナン（Ａ）２００質量部およびプロバイオティクスとして、１.５×１０７個／ｇのＥｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ ｍａｌｏｄｏｒａｔｕｓ（１）、Ｅ． ｍａｌｏｄｏｒａｔｕｓ（２）、Ｅ．ｆａｃｉａｌｉｓ（３）およびＥ．ｆａｃｅｉｕｍ（４）１質量部より、それぞれシンバイオティクスＥ−１〜１１（ＳＥ−１〜４）を調製した。
【００５４】
比較例５
実施例３と同様に、比較プレバイオティクスとして比較例１で調製したガラクトマンナン（ＣＡ）２００質量部およびプロバイオティクスとして、１.５×１０７個／ｇのＥｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ ｍａｌｏｄｏｒａｔｕｓ（１）、Ｅ．ｍａｌｏｄｏｒａｔｕｓ（２）、Ｅ．ｆａｃｉａｌｉｓ（３）およびＥ．ｆａｃｅｉｕｍ（４）１質量部より、それぞれ比較シンバイオティクスＥ−１〜１１（ＣＳＥ−１〜４）を調製した。
【００５５】
試験例３
試験例１と同様に、男性４名（平均年齢４３±５才）の新鮮糞便を用いた同様の試験を、実施例５で調製したＳＥ−１〜４および比較例５で調製したＣＳＥ−１〜４で行った。
その結果を表３に示した。
【００５６】
【表３】
【００５７】
表３に示したように、比較例５で調製した比較シンパイオティクスと比較して、実施例５で調製したシンバイオティクスは糞便培養により酢酸、プロピオン酸および酪酸の産生が増加し、腸内環境が整えられたことが示された。
【００５８】
実施例６
実施例３と同様に、プレバイオティクスとして実施例２で調製したガラクトマンナン（Ｂ）１質量部およびプロバイオティクスとして、１.１×１０８個／ｇのＬａｃｔｏｃｏｃｃｕｓ ｌａｃｔｉｓ（１）およびＬ．ｌａｃｔｉｓ ｓｕｂｓｐ．ｃｒｅｍｏｒｉｓ（２）１質量部より、それぞれシンバイオティクスＬＣ−１および２（ＳＬＣ−１および２）を調製した。
【００５９】
比較例６
実施例３と同様に、比較プレバイオティクスとして比較例２で調製したガラクトマンナン（ＣＢ）１質量部およびプロバイオティクスとして、１.１×１０８個／ｇのＬａｃｔｏｃｏｃｃｕｓ ｌａｃｔｉｓ（１）およびＬ．ｌａｃｔｉｓ ｓｕｂｓｐ．ｃｒｅｍｏｒｉｓ（２）１質量部より、それぞれ比較シンバイオティクスＬＣ−１および２（ＣＳＬＣ−１および２）を調製した。
【００６０】
試験例４
試験例１と同様に、男性４名（平均年齢４３±５才）の新鮮糞便を用いた同様の試験を実施例６で調製したＳＬＣ−１および２と比較例６で調製したＣＳＬＣ−１および２で行った。
その結果を表４に示した。
【００６１】
【表４】
【００６２】
表４に示したように、比較例６で調製した比較シンパイオティクスと比較すると、実施例６で調製したシンバイオティクスは、糞便培養により酢酸、プロピオン酸および酪酸の産生が増加し、腸内環境が整えられたことが示された。
【００６３】
実施例７
実施例３と同様に、プレバイオティクスとして実施例１で調製したガラクトマンナン（Ａ）５００質量部およびプロバイオティクスとして、１.４×１０８個／ｇのＰｅｄｉｏｃｏｃｃｕｓ ｄａｍｎｏｓｕｓ（１）およびＰ．ａｃｉｄｉｌａｃｔｉｃｉ（２）１質量部より、それぞれシンバイオティクスＰ−１および２（ＳＰ−１および２）を調製した。
【００６４】
比較例７
実施例３と同様に比較プレバイオティクスとして比較例１で調製したガラクトマンナン（ＣＡ）５００質量部およびプロバイオティクスとして、１.４×１０８個／ｇのＰｅｄｉｏｃｏｃｃｕｓ ｄａｍｎｏｓｕｓ（１）およびＰ．ａｃｉｄｉｌａｃｔｉｃｉ（２）１質量部より、それぞれ比較シンバイオティクスＰ−１および２（ＣＳＰ−１および２）を調製した。
【００６５】
試験例５
試験例１と同様に、男性４名（平均年齢４３±５才）の新鮮糞便を用いた同様の試験を実施例７で調製したＳＰ−１および２と比較例７で調製したＣＳＰ−１および２で行った。
その結果を表５に示した。
【００６６】
【表５】
【００６７】
表５に示したように、比較例６で調製した比較シンパイオティクスと比較して、実施例７で調製したシンバイオティクスは糞便培養により酢酸、プロピオン酸および酪酸の産生が増加し、腸内環境が整えられたことが示された。
【００６８】
実施例８
実施例３と同様に、プレバイオティクスとして実施例１で調製したガラクトマンナン（Ａ）２００質量部およびプロバイオティクスとして、１.８×１０７個／ｇのＬｅｕｃｏｎｏｓｔｏｃ ｍｅｓｅｎｔｅｒｏｉｄｅｓ（１）およびＬ．ｓａｋｅ（２）１質量部より、それぞれシンバイオティクスＬＣＮ−１および２（ＳＬＣＮ−１および２）を調製した。
【００６９】
比較例８
実施例３と同様に比較プレバイオティクスとして比較例１で調製したガラクトマンナン（ＣＡ）２００質量部およびプロバイオティクスとして、１.８×１０７個／ｇのＬｅｕｃｏｎｏｓｔｏｃ ｍｅｓｅｎｔｅｒｏｉｄｅｓ（１）およびＬ．ｓａｋｅ（２）１質量部より、それぞれ比較シンバイオティクスＬＣＮ−１および２（ＣＳＬＣＮ−１および２）を調製した。
【００７０】
試験例６
試験例１と同様に、男性４名（平均年齢４３±５才）の新鮮糞便を用いた同様の試験を実施例８で調製したＳＬＣＮ−１および２と比較例８で調製したＣＳＬＣＮ−１および２で行った。
その結果を表６に示した。
【００７１】
【表６】
【００７２】
表６に示したように、比較例８で調製した比較シンパイオティクスと比較すると、実施例８で調製したシンバイオティクスは糞便培養により酢酸、プロピオン酸および酪酸の産生が増加し、腸内環境が整えられたことが示された。
【００７３】
実施例９
実施例３と同様にプレバイオティクスとして実施例１で調製したガラクトマンナン（Ａ）３００質量部およびプロバイオティクスとして、１.５×１０８個／ｇのＢｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｂｉｆｉｄｕｍ（１）、Ｂ．ａｄｏｌｅｓｃｅｎｔｉｓ（２）、Ｂ．ｌｏｎｇｕｍ（３）、Ｂ．ｉｎｆａｎｔｉｓ（４）、Ｂ．ｂｒｅｖｅ（４）、Ｂ．ａｎｉｍａｌｉｓ（５）、Ｂ．ｐｓｅｕｄｏｌｏｎｇｕｍ（６）、Ｂ．ｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｕｍ（７）、Ｂ．ｂｏｕｍ（８）、Ｂ．ｍａｇｕｎｕｍ（９）、Ｂ．ｐｕｌｌｏｒｕｍ（１０）、Ｂ．ｃａｔｅｎｕｌａｔｕｍ（１１）、Ｂ．ｓｕｉｓ（１２）、Ｂ．ｐｓｅｕｄｏｃａｔｅｎｕｌａｔｕｍ（１３）、Ｂ．ｇａｌｌｉｎａｒｕｍ（１４）、Ｂ．ｄｅｎｔｉｕｍ（１５）、Ｂ．ｒｕｍｉｎａｎｔｉｕｍ（１６）、Ｂ．ａｎｇｕｌａｔｕｍ（１７）、Ｂ．ｍｅｒｙｃｉｃｕｍ（１８）、Ｂ．ｇａｌｌｉｃｕｍ（１９）、Ｂ．ｓａｅｃｕｌａｒｅ（２０）、Ｂ．ｉｎｏｐｉｎａｔｕｍ（２１）、Ｂ．ｍｉｎｉｍｕｍ（２２）、Ｂ．ｄｅｎｔｉｃｏｌｅｎｓ（２３）、Ｂ．ｓｕｂｔｉｌｅ（２４）、Ｂ．ｃｏｒｙｎｅｆｏｒｍｅ（２５）、Ｂ．ｃｕｎｉｃｕｌｉ（２６）、Ｂ．ａｓｔｅｒｏｉｄｅｓ（２７）、Ｂ．ｃｈｏｅｒｉｎｕｍ（２８）、Ｂ．ｉｎｄｉｃｕｍ（２９）１質量部より、それぞれシンバイオティクスＢＩＦ−１〜２９（ＳＢＩＦ−１〜２９）を調製した。
【００７４】
比較例９
実施例３と同様に、比較プレバイオティクスとして比較例１で調製したガラクトマンナン（ＣＡ）３００質量部およびプロバイオティクスとして、１.５×１０８個／ｇのＢｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｂｉｆｉｄｕｍ（１）、Ｂ．ａｄｏｌｅｓｃｅｎｔｉｓ（２）、Ｂ．ｌｏｎｇｕｍ（３）、Ｂ．ｉｎｆａｎｔｉｓ（４）、Ｂ．ｂｒｅｖｅ（４）、Ｂ．ａｎｉｍａｌｉｓ（５）、Ｂ．ｐｓｅｕｄｏｌｏｎｇｕｍ（６）、Ｂ．ｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｕｍ（７）、Ｂ．ｂｏｕｍ（８）、Ｂ．ｍａｇｕｎｕｍ（９）、Ｂ．ｐｕｌｌｏｒｕｍ（１０）、Ｂ．ｃａｔｅｎｕｌａｔｕｍ（１１）、Ｂ．ｓｕｉｓ（１２）、Ｂ．ｐｓｅｕｄｏｃａｔｅｎｕｌａｔｕｍ（１３）、Ｂ．ｇａｌｌｉｎａｒｕｍ（１４）、Ｂ．ｄｅｎｔｉｕｍ（１５）、Ｂ．ｒｕｍｉｎａｎｔｉｕｍ（１６）、Ｂ．ａｎｇｕｌａｔｕｍ（１７）、Ｂ．ｍｅｒｙｃｉｃｕｍ（１８）、Ｂ．ｇａｌｌｉｃｕｍ（１９）、Ｂ．ｓａｅｃｕｌａｒｅ（２０）、Ｂ．ｉｎｏｐｉｎａｔｕｍ（２１）、Ｂ．ｍｉｎｉｍｕｍ（２２）、Ｂ．ｄｅｎｔｉｃｏｌｅｎｓ（２３）、Ｂ．ｓｕｂｔｉｌｅ（２４）、Ｂ．ｃｏｒｙｎｅｆｏｒｍｅ（２５）、Ｂ．ｃｕｎｉｃｕｌｉ（２６）、Ｂ．ａｓｔｅｒｏｉｄｅｓ（２７）、Ｂ．ｃｈｏｅｒｉｎｕｍ（２８）、Ｂ．ｉｎｄｉｃｕｍ（２９）１質量部より、それぞれシンバイオティクスＢＩＦ−１〜２９（ＣＳＢＩＦ−１〜２９）を調製した。
【００７５】
試験例７
試験例１と同様に、男性４名（平均年齢４３±５才）の新鮮糞便を用いた同様の試験を実施例９で調製したＳＢＩＦ−１〜２９および比較例９で調製したＣＳＢＩＦ−１〜２９で行った。
その結果を表７に示した。
【００７６】
【表７】
【００７７】
表７に示したように、比較例９で調製した比較シンパイオティクスと比較すると、実施例９で調製したシンバイオティクスは糞便培養により酢酸、プロピオン酸および酪酸の産生が増加し、腸内環境が整えられたことが示された。
【００７８】
実施例１０
実施例３と同様に、プレバイオティクスとして実施例２で調製したガラクトマンナン（Ｂ）５００質量部およびプロバイオティクスとして、３.８×１０６個／ｇのＢａｃｉｌｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌｉｓ（１）およびＢ．ｓｕｂｔｉｌｉｓ ｖａｒ．ｎａｔｔｏ（２）１質量部より、それぞれシンバイオティクスＢＡＣ−１および２（ＳＢＡＣ−１および２）を調製した。
【００７９】
比較例１０
実施例３と同様に、比較プレバイオティクスとして比較例２で調製したガラクトマンナン（ＣＢ）５００質量部およびプロバイオティクスとして、３.８×１０６個／ｇのＢａｃｉｌｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌｉｓ（１）およびＢ．ｓｕｂｔｉｌｉｓ ｖａｒ．ｎａｔｔｏ（２）１質量部より、それぞれ比較シンババイオティクスＢＡＣ−１および２（ＣＳＢＡＣ−１および２）を調製した。
【００８０】
試験例８
試験例１と同様に、男性４名（平均年齢４３±５才）の新鮮糞便を用いた同様の試験を実施例１０で調製したＳＢＡＣ−１および２と比較例１０で調製したＣＳＢＡＣ−１および２で行った。
その結果を表８に示した。
【００８１】
【表８】
【００８２】
表８に示したように、比較例１０で調製した比較シンパイオティクスと比較すると、実施例１０で調製したシンバイオティクスは糞便培養により酢酸、プロピオン酸および酪酸の産生が増加し、腸内環境が整えられたことが示された。
【００８３】
実施例１１
実施例３と同様に、プレバイオティクスとして実施例１で調製したガラクトマンナン（Ａ）１０００質量部およびプロバイオティクスとして、２.０×１０７個／ｇのＣｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｂｕｔｙｒｉｃｕｍ（１）、Ｅｕｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｈａｌｌｉｉ（２）、Ｅ．ｒａｍｕｌｕｓ（３）、Ｅ．ｒｅｃｔａｌｅ（４）、Ｅ．ｖｅｎｔｒｉｏｓｕｍ（５）およびＲｏｓｅｂｕｒｉａ ｉｎｔｅｓｔｉｎａｌｉｓ（６）１質量部より、それぞれシンバイオティクスＢＵＴ−１〜６（ＳＢＵＴ−１〜６）を調製した。
【００８４】
比較例１１
実施例３と同様に、比較プレバイオティクスとして比較例１で調製したガラクトマンナン（ＣＡ）１０００質量部およびプロバイオティクスとして、２.０×１０７個／ｇのＣｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｂｕｔｙｒｉｃｕｍ（１）、Ｅｕｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｈａｌｌｉｉ（２）、Ｅ．ｒａｍｕｌｕｓ（３）、Ｅ．ｒｅｃｔａｌｅ（４）、Ｅ．ｖｅｎｔｒｉｏｓｕｍ（５）およびＲｏｓｅｂｕｒｉａ ｉｎｔｅｓｔｉｎａｌｉｓ（６）１質量部より、それぞれ比較シンバイオティクスＢＵＴ−１〜６（ＣＳＢＵＴ−１〜６）を調製した。
【００８５】
試験例９
試験例１と同様に、男性４名（平均年齢４３±５才）の新鮮糞便を用いた同様の試験を実施例１１で調製したＳＢＵＴ−１〜６および比較例１１で調製したＣＳＢＵＴ−１〜６で行った。
その結果を表９に示した。
【００８６】
【表９】
【００８７】
表９に示したように、比較例１１で調製した比較シンパイオティクスと比較すると、実施例１１で調製したシンバイオティクスは糞便培養により酢酸、プロピオン酸および酪酸の産生が増加し、腸内環境が整えられたことが示された。
【００８８】
実施例１２
実施例３と同様に、プレバイオティクスとして実施例１で調製したガラクトマンナン（Ａ）２０００質量部およびプロバイオティクスとして、４.０×１０７個／ｇのＭｅｇａｓｐｈａｅｒａ ｅｌｓｄｅｎｉｉ（１）およびＰｒｏｐｉｏｎｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｆｒｅｕｄｅｎｒｅｉｃｈｉｉ（２）１質量部より、それぞれシンバイオティクスＡＵＢ−１および２（ＳＡＵＢ−１および２）を調製した。
【００８９】
比較例１２
実施例３と同様に、比較プレバイオティクスとして比較例１で調製したガラクトマンナン（ＣＡ）２０００質量部およびプロバイオティクスとして、４.０×１０７個／ｇのＭｅｇａｓｐｈａｅｒａ ｅｌｓｄｅｎｉｉ（１）およびＰｒｏｐｉｏｎｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｆｒｅｕｄｅｎｒｅｉｃｈｉｉ（２）１質量部より、それぞれ比較シンバイオティクスＡＵＢ−１および２（ＣＳＡＵＢ−１および２）を調製した。
【００９０】
試験例１０
試験例１と同様に、男性４名（平均年齢４３±５才）の新鮮糞便を用いた同様の試験を実施例１２で調製したＳＡＵＢ−１および２と比較例１２で調製したＣＳＡＵＢ−１および２で行った。
その結果を表１０に示した。
【００９１】
【表１０】
【００９２】
表１０に示したように、比較例１２で調製した比較シンパイオティクスと比較すると、実施例１２で調製したシンバイオティクスは糞便培養により酢酸、プロピオン酸および酪酸の産生が増加し、腸内環境が整えられたことが示された。
【００９３】
試験例１１
乳酸菌として、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ属細菌であるＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ａｃｉｄｏｐｈｉｌｕｓを用いた実施例３で調製したシンバイオティクスＬＡＣ−１（ＳＬＡＣ−１）と比較例３で調製した比較シンパイオティクス−１（ＣＳＬＡＣ−１）を、それぞれ１日３ｇずつ４週間、ローマ−ＩＩＩの基準で過敏性腸症候群（ＩＢＳ）と診断された男性５名、女性５名（平均年齢３５±７才）に投与する試験を実施した。試験は、二重盲検、クロスオーバー試験を実施した。ウォッシュアウトは４週間とした。
摂取前と摂取４週間目に、健康関連ＱＯＬをＳＦ−３６（３６−Ｉｔｅｍ Ｓｈｏｒｔ Ｆｏｒｍ）、胃腸症状をＧＳＲＳ（Ｇａｓｔｒｏｉｎｔｅｓｔｉｎａｌ ｓｙｍｐｔｏｍ Ｒａｔｉｎｇ Ｓｃａｌｅ）、不安・鬱をＨＡＤＳ（Ｈｏｓｐｉｔａｌ Ａｎｘｉｅｔｙ ａｎｄ Ｄｅｐｒｅｓｓｉｏｎ Ｓｃａｌｅ）により、それぞれ評価した。
その結果を表１１〜１３に示した。
【００９４】
【表１１】
【００９５】
【表１２】
【００９６】
【表１３】
【００９７】
表１１〜表１３に示したように、本実施形態のシンパイオティクスを摂取させることにより、健康関連ＱＯＬ、胃腸症状および不安・鬱の評価項目が改善され、腸内環境を整えることがわかった。
試験例１２
ビフィズス菌として、Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ属細菌であるＢｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｌｏｎｇｕｍを用いた実施例９で調製したシンバイオティクスＢＩＦ−３（ＳＢＩＦ−３）と比較例９で調製した比較シンパイオティクス−３（ＣＢＩＦ−３）を、それぞれ１日５ｇずつ２週間、ローマ−ＩＩＩの基準でＩＢＳと診断された男性４名、女性６名（平均年齢３８±７才）に投与する試験を実施した。試験は、二重盲検、クロスオーバー試験を実施した。ウォッシュアウトは４週間とした。
【００９８】
摂取前と摂取２週間目に、健康関連ＱＯＬをＳＦ−３６（３６−Ｉｔｅｍ Ｓｈｏｒｔ Ｆｏｒｍ）、胃腸症状をＧＳＲＳ（Ｇａｓｔｒｏｉｎｔｅｓｔｉｎａｌ ｓｙｍｐｔｏｍ Ｒａｔｉｎｇ Ｓｃａｌｅ）、不安・鬱をＨＡＤＳ（Ｈｏｓｐｉｔａｌ Ａｎｘｉｅｔｙ ａｎｄ Ｄｅｐｒｅｓｓｉｏｎ Ｓｃａｌｅ）により、それぞれ評価した。
その結果を表１４〜１６に示した。
【００９９】
【表１４】
【０１００】
【表１５】
【０１０１】
【表１６】
【０１０２】
表１４〜表１６に示したように、本実施形態のシンパイオティクスを摂取させることにより、健康関連ＱＯＬ、胃腸症状および不安・鬱の評価項目が改善され、腸内環境を整えることがわかった。
実施例１１
プレバイオティクスとして実施例１で調製したガラクトマンナン（Ａ）１０質量部およびプロバイオティクスとして、１.０×１０８個／ｇのＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ａｃｉｄｏｐｈｉｌｕｓ粉末１質量部、緑茶カテキン類（太陽化学（株）製、サンフェノン）０.０１質量部よりシンパイオティクスＬＡＣＣ−１（ＳＬＡＣＣ−１）を調製した。
同様に、Ａと緑茶カテキン類とプロバイオティクスとして、１×１０８個／ｇのＬ．ｇａｓｓｅｒｉ（２）、Ｌ．ｊｏｈｎｓｏｎｉｉ（３）、Ｌ．ｄｅｌｂｒｕｅｃｋｉｉ（４）、Ｌ．ｄｅｌｂｒｕｅｃｋｉｉ ｓｕｂｓｐ．ｂｕｌｇａｒｉｃｕｓ（５）、Ｌ．ｂｕｌｇａｒｉｃｕｓ（６）、Ｌ．ｈｅｌｖｅｔｉｃｕｓ（７）、Ｌ．ｒｈａｍｎｏｓｕｓ（８）、Ｌ．ｃａｓｅｉ（９）、Ｌ．ｐｌａｎｔａｒｕｍ（１０）、Ｌ．ｒｅｕｔｅｒｉ（１１）、Ｌ．ｓａｌｉｖａｒｉｕｓ（１２）、Ｌ．ｓａｋｅ（１３）、Ｌ．ｓａｌｉｖａｒｉｕｓ（１４）、Ｌ．ｃｅｌｌｏｂｉｏｓｕｓ（１５）およびＬ．ｂｒｅｖｉｓ（１６）を用いて、それぞれシンバイオティクスＬＡＣ−２〜１６（ＳＬＡＣＣ−２〜１６）を調製した。
【０１０３】
試験例１３
試験例１と同様に、男性４名（平均年齢４３±５才）の新鮮糞便を用いた同様の試験を実施例４で調製したＳＬＡＣＣ−１〜１１で行った。
その結果を表１７に示した。
【０１０４】
【表１７】
【０１０５】
表１７に示したように、試験例１の表１のＳＬＡＣ−１〜１１より実施例１２で調製したＳＬＡＣＣ−１〜１１では、糞便培養によりさらに酢酸、プロピオン酸および酪酸の産生が増加し、腸内環境が整えられたことが示された。
【０１０６】
試験例１４
シンパイオティクスとして実施例３で調製したＳＬＡＣ−９（実施例１で調製したガラクトマンナンとＬ．ｃａｓｅｉからなるシンパイオティクス）、特表２００７−５３７２２４号１４頁第０１００段〜第０１０１段に記載の方法のうち（ａ）で調製したコンニャク加水分解物１０質量部および１.０×１０８個／ｇのＬ．ｃａｓｅｉより調製した比較品Ａ、および市販のパラチニット（和光純薬（株）製、１，６−ＧＰＳ：４９質量％、１，１−ＧＰＭ：４９質量％）１０質量部および１.０×１０８個／ｇのＬ．ｃａｓｅｉより調製した比較品Ｂで試験例１と同様に男性４名（平均年齢４４±８才）の新鮮糞便を用いた同様の試験を実施した。
その結果を表１８に示した。
【０１０７】
【表１８】
【０１０８】
表１８に示したように、ＳＬＡＣ−９は、比較品ＡおよびＢと比較して、糞便培養によりさらに酢酸、プロピオン酸および酪酸の産生が増加し、腸内環境が整えられたことが示された。
【０１０９】
試験例１５
シンパイオティクスとして実施例９で調製したＳＢＩＦ−５（実施例１で調製したガラクトマンナンとＢ．ａｎｉｍａｌｉｓからなるシンパイオティクス）、特表２００７−５３７２２４号１４頁第０１００段〜第０１０１段に記載の方法のうち（ｂ）で調製したコンニャク加水分解物３００質量部および１.５×１０８個／ｇのＢ．ａｎｉｍａｌｉｓより調製した比較品ＡＡ、および市販のパラチニット（和光純薬（株）製、１，６−ＧＰＳ：４９質量％、１，１−ＧＰＭ：４９質量％）１０質量部および１.０×１０８個／ｇのＢ．ａｎｉｍａｌｉｓより調製した比較品ＢＢで試験例１と同様に男性４名（平均年齢４０±６才）の新鮮糞便を用いた同様の試験を実施した。
その結果を表１９に示した。
【０１１０】
【表１９】
【０１１１】
表１９に示したように、ＳＢＩＦ−５は、比較品ＡＡおよびＢＢと比較して、糞便培養によりさらに酢酸、プロピオン酸および酪酸の産生が増加し、腸内環境が整えられたことが示された。
【０１１２】
試験例１６
ＳＬＡＣ−９、比較品Ａを、それぞれ１日３ｇずつ４週間、ローマ−ＩＩＩの基準で過敏性腸症候群（ＩＢＳ）と診断された男性６名、女性４名（平均年齢３３±２才）に投与する試験を実施した。試験は、二重盲検、クロスオーバー試験を実施した。ウォッシュアウトは４週間とした。
摂取前と摂取４週間目に、健康関連ＱＯＬをＳＦ−３６（３６−Ｉｔｅｍ Ｓｈｏｒｔ Ｆｏｒｍ）、胃腸症状をＧＳＲＳ（Ｇａｓｔｒｏｉｎｔｅｓｔｉｎａｌ ｓｙｍｐｔｏｍ Ｒａｔｉｎｇ Ｓｃａｌｅ）、不安・鬱をＨＡＤＳ（Ｈｏｓｐｉｔａｌ Ａｎｘｉｅｔｙ ａｎｄ Ｄｅｐｒｅｓｓｉｏｎ Ｓｃａｌｅ）により、それぞれ評価した。
その結果を表２０〜２２に示した。
【０１１３】
【表２０】
【０１１４】
【表２１】
【０１１５】
【表２２】
【０１１６】
表２０〜表２２に示したように、本実施形態のシンパイオティクスを摂取させることにより、健康関連ＱＯＬ、胃腸症状および不安・鬱の評価項目が有意に改善され、腸内環境を整えることがわかった。しかしながら、比較品Ａを摂取した場合は、健康関連ＱＯＬ、胃腸症状および不安・鬱の評価項目は有意差はなく、改善される傾向であった。
【０１１７】
試験例１７
ＳＢＩＦ−５、比較品ＢＢを、それぞれ１日５ｇずつ２週間、ローマ−ＩＩＩの基準で過敏性腸症候群（ＩＢＳ）と診断された男性５名、女性３名（平均年齢３１±４才）に投与する試験を実施した。試験は、二重盲検、クロスオーバー試験を実施した。ウォッシュアウトは４週間とした。
摂取前と摂取２週間目に、健康関連ＱＯＬをＳＦ−３６（３６−Ｉｔｅｍ Ｓｈｏｒｔ Ｆｏｒｍ）、胃腸症状をＧＳＲＳ（Ｇａｓｔｒｏｉｎｔｅｓｔｉｎａｌ ｓｙｍｐｔｏｍ Ｒａｔｉｎｇ Ｓｃａｌｅ）、不安・鬱をＨＡＤＳ（Ｈｏｓｐｉｔａｌ Ａｎｘｉｅｔｙ ａｎｄ Ｄｅｐｒｅｓｓｉｏｎ Ｓｃａｌｅ）により、それぞれ評価した。
その結果を表２３〜２５に示した。
【０１１８】
【表２３】
【０１１９】
【表２４】
【０１２０】
【表２５】
【０１２１】
表２３〜表２５に示したように、本実施形態のシンパイオティクスを摂取させることにより、健康関連ＱＯＬ、胃腸症状および不安・鬱の評価項目が有意に改善され、腸内環境を整えることがわかった。しかしながら、比較品ＢＢを摂取した場合は、健康関連ＱＯＬ、胃腸症状および不安・鬱の評価項目は有意差はなく、改善される傾向であった。
【０１２２】
実施例Ａ
脱脂粉乳９.５ｋｇ、無塩バター３ｋｇ、上白糖１０.５ｋｇ、実施例１で調製したガラクトマンナン５ｋｇ及び水７２ｋｇをホモミキサーで混合し、原料ミックスを調製した。
この原料ミックスを５０℃まで加温し、８０ｋｇ／ｃｍ２で均質処理した後、プレート式殺菌機で９０℃、１０分間加熱殺菌し、プレート式熱交換機で４２℃まで冷却した。そして、発酵乳製造用のビフィドバクテリウム・ロンガムのスターター４質量％を添加した後、１００ｍｌ容の容器に充填し、４２℃で発酵を行い、乳酸酸度が０．７５％になったところで５℃まで冷却して、静置型発酵乳を製造した（実施例Ａ発酵乳）。
【０１２３】
比較例Ａ
脱脂粉乳９.５ｋｇ、無塩バター３ｋｇ、上白糖１０.５ｋｇ、比較例１で調製したガラクトマンナン５ｋｇ及び水７２ｋｇをホモミキサーで混合し、原料ミックスを調製した。
この原料ミックスを５０℃まで加温し、８０ｋｇ／ｃｍ２で均質処理した後、プレート式殺菌機で９０℃、１０分間加熱殺菌し、プレート式熱交換機で４２℃まで冷却した。そして、発酵乳製造用のビフィドバクテリウム・ロンガムのスターター４質量％を添加した後、１００ｍｌ容の容器に充填し、４２℃で発酵を行い、乳酸酸度が０.７５％になったところで５℃まで冷却して、静置型発酵乳を製造した（比較例Ａ発酵乳）。
【０１２４】
比較例Ｂ
脱脂粉乳９.５ｋｇ、無塩バター３ｋｇ、上白糖１０.５ｋｇ、比較例２で調製したガラクトマンナン５ｋｇ及び水７２ｋｇをホモミキサーで混合し、原料ミックスを調製した。
この原料ミックスを５０℃まで加温し、８０ｋｇ／ｃｍ２で均質処理した後、プレート式殺菌機で９０℃、１０分間加熱殺菌し、プレート式熱交換機で４２℃まで冷却した。そして、発酵乳製造用のビフィドバクテリウム・ロンガムのスターター４質量％を添加した後、１００ｍｌ容の容器に充填し、４２℃で発酵を行い、乳酸酸度が発酵乳１００ｇ当たり、０.７５％になったところで５℃まで冷却して、静置型発酵乳を製造した（比較例Ｂ発酵乳）。
【０１２５】
試験例Ａ
実施例Ａで調製した実施例Ａ発酵乳および比較例Ａで調製した比較例Ａ発酵乳を４℃で１４日間保存した。保存３、７および１４日目に乳酸酸度を測定することで保存中の発酵乳の過発酵を調べた。尚、乳酸酸度は、０.１Ｎ水酸化ナトリウム溶液による中和滴定法で測定した。製造直後の乳酸酸度を１００として、その上昇率で示した。その結果を表２６に示した。
【０１２６】
【表２６】
【０１２７】
表２６に示したように、実施例Ａ発酵乳は保存中に乳酸酸度が上昇せずに過発酵認められなかったが、比較例Ａ発酵乳は保存中に乳酸酸度が上昇し、過発酵が確認された。
【０１２８】
試験例Ｂ
実施例Ａで調製した実施例Ａ発酵乳および比較例Ｂで調製した比較例Ｂ発酵乳について、５人のパネラーを用いた官能評価を実施した。尚、評価項目及び評価基準は表２７に示した。
【０１２９】
【表２７】
【０１３０】
表２８に示したように実施例Ａ発酵乳は、比較例Ｂ発酵乳と比較して、おいしさ、のど越し、風味および総合評価のすべての官能評価項目において優れていることが確認された。
【０１３１】
【表２８】
【発明の効果】
【０１３２】
本発明によれば、プレバイオティクスとプロバイオティクスとを組み合わせたシンバイオティクスを利用した腸内環境調整方法を提供することができる。
【図面の簡単な説明】
【０１３３】
【図１】実施例１で得られたガラクトマンナンの歪依存性測定を行った結果を示すグラフである。グラフ中の●はＧ’‘を意味し、▲はＧ‘を意味する（図２においても同じ）。
【図２】実施例２で得られたガラクトマンナンの歪依存性測定を行った結果を示すグラフである。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
（Ａ）プレバイオティクスとして、加水分解されたグァーの胚乳部分であって、次の性質を含むもの、（１）プルランを分子量マーカーとして用いた高速液体クロマトグラフィーによるゲルろ過で重量平均分子量が３〜５０ｋＤａと算出されるガラクトマンナン、（２）ケルダール法により窒素含量を測定し、係数６.２５を乗じて算出されたタンパク質含量が１.０％以下であるものと、（Ｂ）プロバイオティクスとして、ビィフィズス菌、乳酸菌、枯草菌、酪酸生成菌、乳酸利用菌、プロピオン酸生成菌の一種または二種以上からなり、さらに水分含量が２０％以下であるもの、の両者を含有するシンバイオティクスを経口投与することにより、腸管内で乳酸及び糖類から酪酸を生じさせて腸内環境を整えることを特徴とする腸内環境調整方法。
【請求項２】
前記加水分解されたグァーの胚乳部分が、次の性質を含むもの、（３）固形分含量１５％水溶液の粘度が、回転式粘度計で回転数６０ｒｐｍ、２０℃で測定したときに２０ｍＰａ・ｓ以下であるもの、であることを特徴とする請求項１に記載の腸内環境調整方法。
【請求項３】
前記加水分解されたグァーの胚乳部分が、次の性質を含むもの、（４）分解物の固形物含量が１.０％水溶液９９ｇに１.０ｇのポリオキシエチレン付加型界面活性剤（ＰＯＥ）を添加して測定した曇点が６０℃以下であるもの、であることを特徴とする請求項１又は２に記載の腸内環境調整方法。
【請求項４】
（Ａ）前記加水分解されたグァーの胚乳部分１質量部に対して、１／５質量部のイソプロピルアルコールを加えてよく湿らせた後、激しくかき混ぜながら水１０質量部加えた溶液（溶液（１））の粘度がＢ型粘度計で２５℃、Ｎｏ.１ローター、１２ｒｐｍで測定したときに２０ｍＰａ・ｓ以下、
（Ｂ）溶液（１）を沸騰水中で１０分間加熱し冷却後に同条件で測定した粘度が２０ｍＰａ・ｓ以下（溶液２）、
（Ｃ）溶液（２）１質量部に５％ホウ酸ナトリウム水溶液１／５質量部を添加し、混和、放置したものを動的粘弾性測定装置で、２５℃、１Ｈｚでひずみ依存性測定をすると、線形領域で貯蔵弾性率（Ｇ‘）＞損失弾性率（Ｇ’‘）かつ線形領域から非線形領域を示す測定曲線を得るものであることを特徴とする請求項１〜３に記載の腸内環境調整方法。
【請求項５】
さらにツバキ科植物成分を経口投与することを特徴とする請求項１〜４のいずれか一つに記載の腸内環境調整方法。
【請求項１】
（Ａ）プレバイオティクスとして、加水分解されたグァーの胚乳部分であって、次の性質を含むもの、（１）プルランを分子量マーカーとして用いた高速液体クロマトグラフィーによるゲルろ過で重量平均分子量が３〜５０ｋＤａと算出されるガラクトマンナン、（２）ケルダール法により窒素含量を測定し、係数６.２５を乗じて算出されたタンパク質含量が１.０％以下であるものと、（Ｂ）プロバイオティクスとして、ビィフィズス菌、乳酸菌、枯草菌、酪酸生成菌、乳酸利用菌、プロピオン酸生成菌の一種または二種以上からなり、さらに水分含量が２０％以下であるもの、の両者を含有するシンバイオティクスを経口投与することにより、腸管内で乳酸及び糖類から酪酸を生じさせて腸内環境を整えることを特徴とする腸内環境調整方法。
【請求項２】
前記加水分解されたグァーの胚乳部分が、次の性質を含むもの、（３）固形分含量１５％水溶液の粘度が、回転式粘度計で回転数６０ｒｐｍ、２０℃で測定したときに２０ｍＰａ・ｓ以下であるもの、であることを特徴とする請求項１に記載の腸内環境調整方法。
【請求項３】
前記加水分解されたグァーの胚乳部分が、次の性質を含むもの、（４）分解物の固形物含量が１.０％水溶液９９ｇに１.０ｇのポリオキシエチレン付加型界面活性剤（ＰＯＥ）を添加して測定した曇点が６０℃以下であるもの、であることを特徴とする請求項１又は２に記載の腸内環境調整方法。
【請求項４】
（Ａ）前記加水分解されたグァーの胚乳部分１質量部に対して、１／５質量部のイソプロピルアルコールを加えてよく湿らせた後、激しくかき混ぜながら水１０質量部加えた溶液（溶液（１））の粘度がＢ型粘度計で２５℃、Ｎｏ.１ローター、１２ｒｐｍで測定したときに２０ｍＰａ・ｓ以下、
（Ｂ）溶液（１）を沸騰水中で１０分間加熱し冷却後に同条件で測定した粘度が２０ｍＰａ・ｓ以下（溶液２）、
（Ｃ）溶液（２）１質量部に５％ホウ酸ナトリウム水溶液１／５質量部を添加し、混和、放置したものを動的粘弾性測定装置で、２５℃、１Ｈｚでひずみ依存性測定をすると、線形領域で貯蔵弾性率（Ｇ‘）＞損失弾性率（Ｇ’‘）かつ線形領域から非線形領域を示す測定曲線を得るものであることを特徴とする請求項１〜３に記載の腸内環境調整方法。
【請求項５】
さらにツバキ科植物成分を経口投与することを特徴とする請求項１〜４のいずれか一つに記載の腸内環境調整方法。
【図１】
【図２】
【図２】
【公開番号】特開２０１０−１２６４５７（Ｐ２０１０−１２６４５７Ａ）
【公開日】平成２２年６月１０日（２０１０．６．１０）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００８−３００３６５（Ｐ２００８−３００３６５）
【出願日】平成２０年１１月２６日（２００８．１１．２６）
【出願人】（０００２０４１８１）太陽化学株式会社 (244)
【Ｆターム（参考）】
【公開日】平成２２年６月１０日（２０１０．６．１０）
【国際特許分類】
【出願日】平成２０年１１月２６日（２００８．１１．２６）
【出願人】（０００２０４１８１）太陽化学株式会社 (244)
【Ｆターム（参考）】
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