スピノシン及びアゾール系殺虫剤からなる殺外部寄生虫性配合物
本発明は、活性成分としてアゾール殺虫剤とスピノシン類の組合せを含んでいる、マダニ又はノミなどの外部寄生虫を防除するための配合物、及び、該活性成分を組合せて同時に又は順次に投与することにより外部寄生虫の侵襲を防除するための薬物の製造方法に関する。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、外部寄生虫を防除するための抗寄生虫活性を有する異なった活性成分の組合せを含有している配合物、及び、該活性成分を組合せて同時に又は順次に投与することにより外部寄生虫の侵襲を防除するための薬物の製造方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
多くの害虫及び寄生虫が、ウシ、ウマ、ブタ及びヒツジなどの家畜や、さらにはネコ及びイヌなどのコンパニオン動物に、侵襲することができるか又は病気を移すことができる。これらの害虫及び寄生虫は、動物及びその所有者の両方にとって、非常に厄介なものである。マダニ（tick）類、ダニ（mite）類、シラミ類及びノミ類などの外部寄生虫は、動物を刺激し、また、それら自体により病気を引き起こし得るか、又は、ベクターにより伝染される病原体を運ぶことにより病気を引き起こし得る。
【０００３】
マダニ類は、血液を餌としている重要な節足動物の寄生虫であり、ダニ類と共に、ダニ目に属する。マダニ類には、充分に確立した２種類の科、Ｉｘｏｄｉｄａｅ（硬ダニ）（hard tick）及びＡｒｇａｓｉｄａｅ（軟ダニ）が存在している。
【０００４】
マダニ類は、動物に侵襲した後、３つの点で損傷を与える：局部的な損傷及び失血などの、寄生に起因する直接的な損傷、寄生虫により注入される毒素によるもの、及び、疾患の感染によるもの。特にコンパニオン動物において、マダニ類は、人畜共通感染性疾患の源であり得る。
【０００５】
Ｐｒｏｓｔｉｇｍａｔａ目及びＡｓｔｉｇｍａｔａ目の多くのダニ類は、それらが有する刺咬習性又は摂食習性の結果として、重い病気を引き起こす可能性があり、それらの宿主にとっては、非常に厄介である。
【０００６】
ノミ類、Ｃｔｅｎｏｃｅｐｈａｌｉｄｅｓ ｆｅｌｉｓ ｆｅｌｉｓ、及び、Ｃｔｅｎｏｃｅｐｈａｌｉｄｅｓ ｃａｎｉｓは、それぞれ、ネコ及びイヌの最も一般的な外部寄生虫である。しかしながら、ネコノミは、イヌにも侵襲する。ネコノミは、サナダムシなどの疾患を、イヌの間でも伝染させることができる。
【０００７】
これらの寄生虫を排除するための安全で効果的な方法は、コンパニオン動物の健康、及び、コンパニオン動物に関連しているヒトの健康と快適さにとって望ましいものであり、また、家畜における損害を防止する上でも望ましいものである。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００８】
かくして、外部寄生虫、特に、家畜を苦しめる外部寄生虫に対する活性剤として使用可能で、また、低施用量で有効であり、生物学的作用において選択性を有しており且つ毒性が低い化合物又は化合物の組合せが、引き続き求められている。
【課題を解決するための手段】
【０００９】
本発明は、外部寄生虫を防除するための、アゾール殺虫剤（pesticide）とスピノシン類の抗寄生虫性組合せを提供する。
【００１０】
スピノシン類（Ａ８３４５３因子としても知られている）は、サウザンアーミーワーム及びＬｅｐｉｄｏｐｈｔｅｒａ目の他の昆虫に対して活性を示し、また、ワタアブラムシ及びＨｏｍｏｐｔｈｅｒａ目の他のメンバーに対して活性を示す農業用殺虫剤である（例えば、米国特許第５，５７１，９０１号を参照されたい）。スピノシン類は、多少の殺外部寄生虫活性を示すこと、即ち、Ｄｉｐｔｅｒａ目の昆虫のメンバーである蚊の幼虫、クロバエ（black blowfly）の幼虫及びサシバエの成虫に対してインビトロ活性を示すこと、並びに、モルモット及びヒツジにおいてクロバエの幼虫及びサシバエの成虫に対して一過性の全身活性を示すことも知られていた（米国特許第５，５７１，９０１号を参照されたい）。
【００１１】
スピノシンとしても知られている発酵産物Ａ８３５４３は、Ｓａｃｃｈａｒｏｐｏｌｙｓｐｏｒａ ｓｐｉｎｏｓａにより産生される一群の関連化合物（スピノシン類）を含んでいる。これらは、明白な安全性プロフィールを有する天然の発酵産物であり、良好な殺虫活性を示すことが以前から知られていた。スピノシン類は、「Ａ８３５４３化合物」としても知られており、１２員大環状ラクトンに縮合した５，６，５−三環式環系と天然糖（２Ｎ，３Ｎ，４Ｎ−トリ−Ｏ−メチルラムノース）とアミノ糖（フルクトサミン）からなる化合物である。種々のスピノシンは、ホロサミン（forosamine）のアミノ基上の置換パターン並びに４環式環系上の選択された部位及び２Ｎ，３Ｎ，４Ｎ−（トリ−Ｏ−メチル）ラムノース基上の選択された部位における置換パターンの差異により特徴付けられる。
【００１２】
外部寄生虫（マダニ類）に対してイヌを治療するための経口用調製物においてスピノシンを使用することは、ＷＯ０１／１１９６３で言及されている。当該スピノシン類は、比較的高い投与量で使用されたが、マダニ類に対しては、ほんの限られた活性しか示さなかった。
【００１３】
アゾール殺虫剤は、ＥＰ−４１２８４９に開示されている。ＥＰ−４１２８４９においては、殺虫活性（pesticidal activity）を有する特定のアリール−１，２，３トリアゾール類及びアリールピラゾール類が開示されており、そこでは、イミダゾール（イミダゾリン）基は、その２位でトリアゾール環又はピラゾール環に直接的又は間接的に結合している。
【００１４】
ＥＰ−４１２８４９に記載されているタイプのアゾール殺虫剤とスピノシンタイプの殺虫剤を組合せることにより、スペクトラムが広く、低薬量で非常に高い効果を示す殺外部寄生虫性配合物を得ることができるということが見いだされた。
【００１５】
従って、本発明は、抗寄生虫配合物を提供し、ここで、該配合物は、式（Ｉ）：
【００１６】
【化２】
［式中、
Ａｒは、２，６−ジクロロ−４−トリフルオロメチルフェニル又は２−ニトロ−４−トリフルオロメチルフェニルであり；
Ａは、Ｓ（Ｏ）ｍ、−ＣＨ＝ＣＨ−、Ｏ又はＮＨであり；
ＷはＮであり且つＺはＣＲ５であるか、又は、ＷはＣＲ１であり且つＺはＮ又はＣＲ５であり；
Ｒ１は、水素、場合により置換されていてもよいアルキル、ハロゲン又はＲ２０Ｓ（Ｏ）ｑであり；
Ｒ２及びＲ３は、水素、アルキル、アルケニル若しくはアルキニル（ここで、これらの各々は、場合により置換されていてもよい）、アリール、シアノ、ハロゲン、ニトロ、ＹＲ２０、Ｓ（Ｏ）２ＮＲ８Ｒ９、ＣＨＯ、ＮＲ８Ｒ９又はＣＹＮＲ８Ｒ９であり；
Ｒ４は、水素、場合により置換されていてもよいアルキル、場合により置換されていてもよいアルケニル、アシル又は場合により置換されていてもよいアルコキシカルボニルであり；
Ｒ５は、水素、アルキル、場合により置換されていてもよいアミノ又はハロゲンであり；
Ｒ８及びＲ９は、同一であるか又は異なっていて、水素、場合により置換されていてもよいアルキル、アシル又はアリールであり；
Ｒ２０は、場合により置換されていてもよいアルキルであり；
Ｙは、Ｏ又はＳであり；
ｍは、０、１又は２であり；
ｐは、０又は１であり；
ｎは、０、１又は２であり；
及び
ｑは、０、１又は２であり；
また、ここで、（ａ）アルキル基、アルコキシ基及びアルキルチオ基は、いずれも、１〜４個の炭素原子からなり；（ｂ）アルケニル基又はアルキニル基は、いずれも、２〜５個の炭素原子からなり；（ｃ）置換されているアルキル基、アルコキシ基、アルキルチオ基、アルケニル基又はアルキニル基は、いずれも、ハロゲン、ＹＲ２０、ジハロシクロプロピル、シアノ、ニトロ、場合により置換されていてもよいアミノ、アシルオキシ及びアリールから選択される同一であるか又は異なっている１つ以上の基で置換されており；（ｄ）アリール基は、いずれも、ハロゲン、アルキル、ハロアルキル、アルコキシ、ハロアルコキシ、アルキルチオ、ハロアルキルチオ、ハロアルキルスルホニル、シアノ又はニトロで場合により置換されていてもよいフェニルであり；（ｅ）アシル基は、いずれも、１〜４個の炭素原子からなるアルカノイルであるか、又は、アルキルスルホニル若しくはハロアルキルスルホニルであり；及び、（ｆ）場合により置換されていてもよいアミノ基は、いずれも、式ＮＲ８Ｒ９で表されるが、但し、ＷがＣＲ１であり且つＺがＣＲ５であり、ｎ及びｐが共に０である場合、Ｒ４はアルキルではない］
で表される化合物及びその塩と１種類以上のスピノシンの組合せを含んでいることを特徴とする。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１７】
Ｒ４は、好ましくは、水素である。ＷがＣＲ１であり且つＺがＣＲ５であり、ｎ及びｐがいずれも０である場合、また、他の全ての化合物に関しても、Ｒ２とＲ３の少なくとも一方がシアノであることが好ましく、特に、Ｒ２とＲ３のいずれもシアノであるのが好ましい。ｎ及びｐは、好ましくは、０である。Ｒ５は、好ましくは、ハロゲンであり、特に、塩素である。
【００１８】
上記で記載したアゾール殺虫剤は、ＥＰ−４１２８４９に記載されている。それらの化合物をどのように調製することができるかの方法も、ＥＰ−４１２８４９に開示されている。
【００１９】
本発明の配合物中で使用するのに特に好ましい化合物は、５−クロロ−１−（２，６−ジクロロ−４−トリフルオロメチルフェニル）−４−（４，５−ジシアノ−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）−３−イソプロピル−１Ｈ−ピラゾールであり、これは、ＥＰ−４１２８４９において化合物２２ｃとして示されている化合物である。この化合物の合成については、ＥＰ−４１２８４９の実施例２２ｂで開示されている。本出願の残りの部分では、この化合物のことは、「化合物２２ｃ」と称する。
【００２０】
本発明の配合物中で使用するスピノシンに関する限り、スピノサド（例えば、以下の文献及びその中で引用されている文献を参照されたい：ＤｏｗＥｌａｎｃｏ ｔｒａｄｅ ｍａｇａｚｉｎｅ Ｄｏｗｎ ｔｏ ｅａｒｔｈ Ｖｏｌ． ５２， Ｎｏ．１， １９９７）を用いるのが特に好ましい。スピノサドは、本質的に、スピノシンＡとスピノシンＤの約８５：１５の比率の混合物からなる。特に、米国特許第５，３６２，６３４号により既知となっている発酵産物Ａ８３５４３を使用するが、これは、約８５〜９０％のスピノシンＡと約１０〜１５％のスピノシンＤと少量のスピノシンＢ、スピノシンＣ、スピノシンＥ、スピノシンＦ、スピノシンＧ、スピノシンＨ及びスピノシンＪを含んでいる。
【００２１】
上記スピノシン類は、反応して塩を形成することができるが、この塩も、本発明において有用である。そのような塩は、塩形成のための標準的な手順を用いて調製する。例えば、スピノシンＡを適切な酸で中和して、酸付加塩を形成させることができる。スピノシン類の酸付加塩は、特に有用である。代表的な適する酸付加塩には、有機酸又は無機酸のいずれかとの反応により形成される塩などがある。
【００２２】
最も好ましい組合せは、化合物２２ｃとスピノサドの組合せである。
【００２３】
当該活性成分は、必ずしも、１つの同一の物的調製物の一部である必要はない。それらは、別個の調製物の一部であることも可能である。
【００２４】
当該活性成分は、同時に投与することもできるが、それらは、順次に投与してもよい。順次に投与する場合、一方の活性成分は、他方の活性成分を投与するとき、宿主動物の体表面上／体内において、検出可能である。
【００２５】
かくして、別の実施形態において、本発明は、活性成分としての１種類以上のスピノシン及び式（Ｉ）で表される１種類以上の化合物を組み合わせて同時に又は順次に投与することにより外部寄生虫の侵襲を防除するための薬物の製造方法における、活性成分としての１種類以上のスピノシン及び式（Ｉ）で表される１種類以上の化合物の使用に関する。
【００２６】
当該活性成分は、好ましくは、同時に投与する。同時に投与する場合、当該組合せは、好ましくは、式（Ｉ）の化合物と１種類以上のスピノシンの両方を含んでいる単一の物的調製物である配合物として提供する。
【００２７】
本発明の配合物は、外部寄生虫の侵襲を防除するために使用することを意図している。用語「外部寄生虫の侵襲を防除する」は、外部寄生虫による侵襲を、防止すること、最小限度に抑えること又は排除することを意味する。用語「外部寄生虫」は、一般に、動物に侵襲するか又は動物に病気を移す昆虫の害虫及びダニの害虫を意味する。そのような外部寄生虫の例には、シラミ、ノミ、蚊、ダニ及びマダニ、並びに、ハエの吸血性種、サシバエ種又は不快な種類の、卵期、幼虫期、蛹期、若虫期及び成虫期などがある。
【００２８】
一般に、本発明の配合物は、有効量の活性成分を含有する。ここで、有効量とは、毒性は示さないが、所望の治療効果を提供するのに充分な量のことを意味する。当業者は、型にはまった実験を用いて、個々の場合の適切な「有効量」を決定することができる。そのような量は、対象の動物の年齢、状態、体重及び種類に依存する。
【００２９】
当該動物には、月１回、週１回又は１日に１回投与することが可能であるが、場合により、それらに先行して比較的高い用量（初回の高い用量）を投与してもよい。そのような処理は、例えば、永続的であることができるか、又は、季節的であることができる。
【００３０】
式（Ｉ）で表される化合物と１種類以上のスピノシンを組み合わせて使用する場合、それらの比率は、好ましくは、１：１０〜１０：１である。
【００３１】
好ましくは、当該処理は、体重１ｋｇ当たり、０．１〜１００ｍｇの用量、特に、１〜４０ｍｇの用量の式（Ｉ）の化合物、及び、体重１ｋｇ当たり、０．１〜１００ｍｇの用量、特に、１〜４０ｍｇの用量、最も好ましくは、３０ｍｇ未満の用量の１種類以上のスピノシン化合物を動物に投与することとなるように実施する。
【００３２】
これらの投与量は、有効であることが分かっており、特に、イヌなどのコンパニオン動物において有効であることが分かっている。
【００３３】
好ましくは、活性成分の上記組合せを、全身的に投与する。全身的な投与は、寄生虫が存在している部位から空間的に離れた部位における、該組合せの、動物への、例えば、経口投与、注射による投与、インプラントによる投与、又は、他の手段による投与、例えば、スポットオン若しくはポアオンなどによる経皮的送達による投与であり、それにより、当該動物の体表面上で摂食している寄生虫を殺すのに充分な当該薬剤が、組織又は体液中に存在する。
【００３４】
本発明の配合物は、好ましくは、経口用製剤として投与する。用語「経口用製剤」は、活性成分が、口を介して動物に投与するのに適した生成物として製剤されていることを意味する。そのような製剤としては、限定するものではないが、錠剤、カプセル剤、溶液剤、ゲル剤、ペースト剤、口腔スプレー剤、口腔用製剤（buccal formulation）、散剤、顆粒剤、チュアブルトリート（chewable treat）又は該活性成分を含んでいる動物用飼料などを挙げることができる。一般に、そのような製剤には、製薬上許容される担体を含有させる。そのような担体は、獣医学の技術分野ではよく知られている。
【００３５】
慣習的な錠剤は、一般に、活性成分と、粉末の量を都合の良い範囲にまで増量して圧縮性を改善するための希釈剤、圧縮された粉末をつなぎ合わせるための結合剤、並びに、高密度化及び錠剤金型からの取り出しを補助する滑沢剤を含んでいる。それらは、さらに、崩壊及び溶解を向上させるための崩壊剤や、安定化剤、着色剤及び矯味矯臭剤も含み得る。錠剤は、多くの場合、外観若しくは風味を改善するか、又は、溶解特性を変えるために、コーティングを施す。錠剤は、速く溶解するか又はゆっくりと溶解するように設計することが可能であり、また、薬物の実際の容積及び圧縮率に応じて、その大小にかかわらず設計することが可能である。それらは、咀嚼できるように調製することも可能であり、又は、舌下若しくは頬袋内で溶けるように調製することも可能である。
【００３６】
慣習的な液体製剤は、通常、当該成分の溶液、懸濁液又はエマルションであり、適切な希釈剤、溶媒、矯味矯臭剤及び着色剤を加えて風味がよい投与形態を形成している。好ましくは、本発明の配合物は、錠剤として、好ましくは、例えばイヌにトリート（treat）として与えることができる、チュアブル錠として提供する。錠剤は、特定の体重の範囲の動物に適合させた量の活性成分を含むように製剤することができる。
【００３７】
一般に、本発明の配合物は、外部寄生虫の侵襲を受ける全ての動物種に対して投与することができる。当該配合物のレシピエントは、家畜動物、例えば、ヒツジ、ウシ、ブタ、ヤギ、家禽、実験室試験用動物、例えば、モルモット、ラット若しくはマウス、又は、コンパニオン動物、例えば、イヌ、ネコ、ウサギ若しくはウマなどであり得る。本発明の配合物は、コンパニオン動物、例えば、イヌなどにおいて使用するのに特に適している。
【実施例】
【００３８】
実施例１：スピノサドと組み合わせた化合物２２ｃの効力及び耐容性
それぞれ６匹のイヌからなる２つの群（群Ａ及び群Ｂ）に、ノミ（Ｃｔｅｎｏｃｅｐｈａｌｉｄｅｓ ｆｅｌｉｓ）及びマダニ（Ｒｈｉｐｉｃｅｐｈａｌｕｓ ｓａｎｇｕｉｎｅｕｓ）を、処理前に侵襲させ、及び、処理後の異なった時点で繰り返し侵襲させた。
【００３９】
群Ｂのイヌは未処理対照とし、群Ａのイヌは、スピノサドと組み合わせた化合物２２ｃで経口的に処理した。化合物２２ｃに関しては、第０日（ｄ０）に、体重（ｂｗ）１ｋｇ当たり４ｍｇの初回量を使用し、その後、２ｍｇ／ｋｇ（ｂｗ）の用量を１週間に１回で３回使用した（ｄ＋７，ｄ＋１４，ｄ＋２１）。スピノサドは、（ｄ０）に、３０ｍｇ／ｋｇの初回量で投与し、その後、１５ｍｇ／ｋｇの用量で、１週間に１回、（ｄ＋７）、（ｄ＋１４）及び（ｄ＋２１）に投与した。
【００４０】
各侵襲の４８時間後に、マダニ及びノミを取り除いて数えることにより、個々のイヌの寄生虫の量について評価した。ノミ及びマダニは、活力（死／生存）及びマダニの寄生状態（充血状態／未充血状態；付着／遊離）に従って、分類した。寄生虫の数を用いて効力を計算した。化合物２２ｃとスピノサドの組合せは、研究を通して、充分に許容された。
【００４１】
研究手順の詳細について、以下に記載する。
【００４２】
研究手順（材料及び方法）
【００４３】
（薬品の明細）
【００４４】
化合物２２ｃ錠剤
活性成分： 化合物２２ｃ（Ｃｈ．ＨＴ／ａ ９９．１％）
薬品処方： 化合物２２ｃ １０．０％（ｗ／ｗ）
投与量： 経口；
体重１ｋｇ当たり４ｍｇの初回量；
体重１ｋｇ当たり２ｍｇの維持量；
投与： 経口
【００４５】
スピノサドカプセル剤
活性成分： ９９％
処方： ８７％ スピノシンＡ
１２％ スピノシンＤ
投与量： 経口；
体重１ｋｇ当たり３０ｍｇの初回量；
体重１ｋｇ当たり１５ｍｇの維持量；
投与： 経口（ゼラチンカプセル内）。
【００４６】
（研究対象動物）
種類： 家イヌ
数： １２
健康状態： イヌは、研究の開始時点で健康であった。これは、第−２日に獣医が確認した。全てのイヌは、該研究の前の少なくとも８週間は、殺ダニ剤／殺虫剤で処理しなかった。
識別： 耳及びチップ番号。
【００４７】
（動物の住居）
研究対象動物は、周囲の環境から寄生虫を集めることができるように、家の中で、コンクリートの床及び特別な休息場を有する個別の囲いの中で飼った。研究は、“Ｔｅｓｔｉｎｇ ａｎｄ ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ｅｆｆｉｃａｃｙ ｏｆ ａｎｔｉｐａｒａｓｉｔｉｃ ｓｕｂｓｔａｎｃｅｓ ｆｏｒ ｔｈｅ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ａｎｄ ｐｒｅｖｅｎｔｉｏｎ ｏｆ ｔｉｃｋ ａｎｄ ｆｌｅａ ｉｎｆｅｓｔａｔｉｏｎ ｉｎ ｄｏｇｓ ａｎｄ ｃａｔｓ”（ＥＭＥＡ／ＣＶＭＰ／００５／００）についての現在のガイドラインに従って実施し、それにより、当該イヌには、研究条件下での最大の快適さを与えた。
【００４８】
（寄生虫の侵襲）
表１に従い、Ｒｈｉｐｉｃｅｐｈａｌｕｓ ｓａｎｇｕｉｎｅｕｓの実験室系統（８０匹の未摂食成虫；性比 １：１）（マダニ）及びＣｔｅｎｏｃｅｐｈａｌｉｄｅｓ ｆｅｌｉｓ（齢が類似している１００匹の成虫；性比 約１：１）（ノミ）をイヌに実験的に侵襲させた。ノミとマダニは、当該動物の背中に直接適用した。マダニ（Ｒｈｉｐｉｃｅｐｈａｌｕｓ ｓａｎｇｕｉｎｅｕｓ）及びノミ（Ｃｔｅｎｏｃｅｐｈａｌｉｄｅｓ ｆｅｌｉｓ）は、第−２日、第＋３日、第＋５日、第＋７日、第＋１０日、第＋１２日、第＋１４日、第＋１７日、第＋１９日、第＋２１日、第＋２４日及び第＋２６日に侵襲させた。
【００４９】
（処理）
群Ａのイヌは、表１に記載してあるスケジュールに従って処理した。群Ｂのイヌは、侵襲はさせたが処理は行わず、未処理対照とした。
【００５０】
（投与経路及び投与方法）
化合物２２ｃについての用量を計算するために、体重を用いた。使用した最も小さな単位は、化合物２２ｃの錠剤の半分であった。錠剤には刻み目がついていなかったが、タブレットカッターを用いて等しい片に割った。必要に応じ、当該用量は、錠剤の半分を単位とした。スピノサドは、単一のカプセルとして投与した。各処理に先立ち、実際の体重に照らして各イヌについての個々の用量を秤り、カプセルの中に入れた。
【００５１】
両方の薬品は、少量のドッグフードの中に隠してイヌに与えた。薬品を適用する前に、個々のイヌがそのドッグフードを受け入れるかどうかについて試験した。イヌがそのドッグフードを拒んだときは、嚥下を誘発するように両方の薬品を舌の裏側に直接投与した。投与した用量を記録した。
【００５２】
【表１】
【００５３】
（マダニ及びノミの数についての評価）
イヌの体表面上の寄生虫の評価は、表１に示してあるように、最初の処理の４８時間後に実施し、また、それぞれの再侵襲の４８時間後に実施した。
【００５４】
各イヌの体表面上のノミは、少なくとも５分間にわたりノミを見いだすことができなくなるまで加え合わせることにより計数し、生存しているノミの数を記録した。イヌの体表面上のマダニは、触診により計数し、付着している場合には、取り除いて、表２に示してあるカテゴリーに従って分類した。
【００５５】
【表２】
【００５６】
（臨床症状についての評価）
日常における行動及び状態
【００５７】
（効力の計算）
効力の計算は、対照群と比較した、処理したイヌの体表面上のマダニ／ノミの数の算術平均に基づいている。効力（％）を計算するために、以下の式（Ａｂｂｏｔの式による）を使用する：
効力＝１００×（ｍｃ−ｍｔ）／ｍｃ
対照群（ｍｃ）：宿主動物の体表面上で生存しているノミの平均数
宿主動物の体表面上で生存しているマダニの平均数
処理群（ｍｔ）：宿主動物の体表面上で生存しているノミの平均数
宿主動物の体表面上で生存しているマダニ（カテゴリー１〜３）
又は充血して死亡しているマダニ（カテゴリー６）の平均数
【００５８】
結 果
計算した効力は、下記表（表３）に示してある。
【００５９】
【表３】
上記結果から、化合物２２ｃとスピノサドを併用処理することにより、マダニ及びノミに対して顕著な効果が得られるという結論を下すことができる。
【００６０】
実施例２：化合物２２ｃとスピノサド（の組合せ）の用量漸増法
インビトロモデルを用いて、化合物２２ｃ、スピノサド及びそれらの混合物を、寄生虫に摂取されたときの殺ダニ活性について数種類の濃度で評価した。試験系は、Ｏｒｎｉｔｈｏｄｏｒｕｓ ｍｏｕｂａｔａ（軟ダニ）の未摂食若虫（第３ステージ）である。
【００６１】
試験溶液の調製：
被験化合物を、以下のように、ＤＭＳＯ／Ｅｍｕｌｓｏｇｅｎ（標準的な調製）とヒツジの脱線維素血液に溶解させた：
【００６２】
【表４】
【００６３】
ＤＭＳＯ−化合物調製物にヒツジの脱線維素血液を添加して、充分に混合した。ヒツジの脱線維素血液中の１０００ｐｐｍのこの初期溶液を希釈することにより、適切な試験濃度とした。得られた希釈液を充分に混合して新たに調製した後、給餌手順を行った。
【００６４】
希釈範囲の濃度で、特異的活性を求めた。
【００６５】
給餌手順：
各濃度について、少なくとも２０匹のＯ．ｍｏｕｂａｔａの若虫（第３ステージ）に、パラフィルム膜を介して、適切な濃度の被験化合物を補足して３８〜４０℃に加熱した２ｍＬのヒツジの脱線維素血液を餌として与えた。給餌は、約３０分後に完了した。次いで、被験生物をペトリ皿に移し、２７〜２９℃、約８０％の相対湿度で最大で４週間にわたりインキュベーションした。
【００６６】
以下のパラメータについて評価した：
給餌（食餌の容認）
表現型（形態的損傷、行動）
発育障害（脱皮）
死亡率。
【００６７】
評価：
活性は、死亡率（％）及び第４ステージの若虫への成長の阻害により評価した。給餌は、マダニへの給餌手順の間モニタリングした。給餌中及び給餌後、給餌の２４時間後、並びに、給餌の約２８日後、２０匹の充血した若虫の表現型及び死亡率を評価した。死亡率は、投薬していない対照に関するパーセントで表す。そのパーセントは、表４に示してある。
【００６８】
表４から、当該混合物の抗寄生虫効果がその両方の化合物に帰するということが理解され得る。該混合物は、混合物中の化合物２２ｃについて化合物２２ｃ（及び、スピノサド）単独よりも濃度が低くても、まだ活性を有している。
【００６９】
【表５】
【００７０】
実施例３：マダニの防除におけるスピノサド単独の効力（比較例）
実施例１で記載した実験の設定と本質的に同じ設定で実施した実験。
【００７１】
群Ａは、２匹のイヌからなり、マダニ（Ｒｈｉｐｉｃｅｐｈａｌｕｓ ｓａｎｇｕｉｎｅｕｓ）による侵襲に対して、スピノサド単独で処理した。群Ａでは、１匹のイヌは、体重（ｂｗ）１ｋｇ当たり５０ｍｇのスピノサドで処理し、もう１匹のイヌは、１５ｍｇ／ｋｇ（ｂｗ）のスピノサドで処理した。
【００７２】
群Ｂの２匹のイヌは、未処理対照とした。
【００７３】
この実験に関するタイムプランは、表５に示してある。結果は、表６に示してある。
【００７４】
【表６】
【００７５】
結果：
【００７６】
【表７】
【００７７】
上記結果から、１５ｍｇ／ｋｇのスピノサドでの１週間の処理は、マダニを防除するのには不充分であり、また、５０ｍｇ／ｋｇのスピノサドで処理しても、マダニの再侵襲を予防するのには充分ではないということが分かる。
【技術分野】
【０００１】
本発明は、外部寄生虫を防除するための抗寄生虫活性を有する異なった活性成分の組合せを含有している配合物、及び、該活性成分を組合せて同時に又は順次に投与することにより外部寄生虫の侵襲を防除するための薬物の製造方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
多くの害虫及び寄生虫が、ウシ、ウマ、ブタ及びヒツジなどの家畜や、さらにはネコ及びイヌなどのコンパニオン動物に、侵襲することができるか又は病気を移すことができる。これらの害虫及び寄生虫は、動物及びその所有者の両方にとって、非常に厄介なものである。マダニ（tick）類、ダニ（mite）類、シラミ類及びノミ類などの外部寄生虫は、動物を刺激し、また、それら自体により病気を引き起こし得るか、又は、ベクターにより伝染される病原体を運ぶことにより病気を引き起こし得る。
【０００３】
マダニ類は、血液を餌としている重要な節足動物の寄生虫であり、ダニ類と共に、ダニ目に属する。マダニ類には、充分に確立した２種類の科、Ｉｘｏｄｉｄａｅ（硬ダニ）（hard tick）及びＡｒｇａｓｉｄａｅ（軟ダニ）が存在している。
【０００４】
マダニ類は、動物に侵襲した後、３つの点で損傷を与える：局部的な損傷及び失血などの、寄生に起因する直接的な損傷、寄生虫により注入される毒素によるもの、及び、疾患の感染によるもの。特にコンパニオン動物において、マダニ類は、人畜共通感染性疾患の源であり得る。
【０００５】
Ｐｒｏｓｔｉｇｍａｔａ目及びＡｓｔｉｇｍａｔａ目の多くのダニ類は、それらが有する刺咬習性又は摂食習性の結果として、重い病気を引き起こす可能性があり、それらの宿主にとっては、非常に厄介である。
【０００６】
ノミ類、Ｃｔｅｎｏｃｅｐｈａｌｉｄｅｓ ｆｅｌｉｓ ｆｅｌｉｓ、及び、Ｃｔｅｎｏｃｅｐｈａｌｉｄｅｓ ｃａｎｉｓは、それぞれ、ネコ及びイヌの最も一般的な外部寄生虫である。しかしながら、ネコノミは、イヌにも侵襲する。ネコノミは、サナダムシなどの疾患を、イヌの間でも伝染させることができる。
【０００７】
これらの寄生虫を排除するための安全で効果的な方法は、コンパニオン動物の健康、及び、コンパニオン動物に関連しているヒトの健康と快適さにとって望ましいものであり、また、家畜における損害を防止する上でも望ましいものである。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００８】
かくして、外部寄生虫、特に、家畜を苦しめる外部寄生虫に対する活性剤として使用可能で、また、低施用量で有効であり、生物学的作用において選択性を有しており且つ毒性が低い化合物又は化合物の組合せが、引き続き求められている。
【課題を解決するための手段】
【０００９】
本発明は、外部寄生虫を防除するための、アゾール殺虫剤（pesticide）とスピノシン類の抗寄生虫性組合せを提供する。
【００１０】
スピノシン類（Ａ８３４５３因子としても知られている）は、サウザンアーミーワーム及びＬｅｐｉｄｏｐｈｔｅｒａ目の他の昆虫に対して活性を示し、また、ワタアブラムシ及びＨｏｍｏｐｔｈｅｒａ目の他のメンバーに対して活性を示す農業用殺虫剤である（例えば、米国特許第５，５７１，９０１号を参照されたい）。スピノシン類は、多少の殺外部寄生虫活性を示すこと、即ち、Ｄｉｐｔｅｒａ目の昆虫のメンバーである蚊の幼虫、クロバエ（black blowfly）の幼虫及びサシバエの成虫に対してインビトロ活性を示すこと、並びに、モルモット及びヒツジにおいてクロバエの幼虫及びサシバエの成虫に対して一過性の全身活性を示すことも知られていた（米国特許第５，５７１，９０１号を参照されたい）。
【００１１】
スピノシンとしても知られている発酵産物Ａ８３５４３は、Ｓａｃｃｈａｒｏｐｏｌｙｓｐｏｒａ ｓｐｉｎｏｓａにより産生される一群の関連化合物（スピノシン類）を含んでいる。これらは、明白な安全性プロフィールを有する天然の発酵産物であり、良好な殺虫活性を示すことが以前から知られていた。スピノシン類は、「Ａ８３５４３化合物」としても知られており、１２員大環状ラクトンに縮合した５，６，５−三環式環系と天然糖（２Ｎ，３Ｎ，４Ｎ−トリ−Ｏ−メチルラムノース）とアミノ糖（フルクトサミン）からなる化合物である。種々のスピノシンは、ホロサミン（forosamine）のアミノ基上の置換パターン並びに４環式環系上の選択された部位及び２Ｎ，３Ｎ，４Ｎ−（トリ−Ｏ−メチル）ラムノース基上の選択された部位における置換パターンの差異により特徴付けられる。
【００１２】
外部寄生虫（マダニ類）に対してイヌを治療するための経口用調製物においてスピノシンを使用することは、ＷＯ０１／１１９６３で言及されている。当該スピノシン類は、比較的高い投与量で使用されたが、マダニ類に対しては、ほんの限られた活性しか示さなかった。
【００１３】
アゾール殺虫剤は、ＥＰ−４１２８４９に開示されている。ＥＰ−４１２８４９においては、殺虫活性（pesticidal activity）を有する特定のアリール−１，２，３トリアゾール類及びアリールピラゾール類が開示されており、そこでは、イミダゾール（イミダゾリン）基は、その２位でトリアゾール環又はピラゾール環に直接的又は間接的に結合している。
【００１４】
ＥＰ−４１２８４９に記載されているタイプのアゾール殺虫剤とスピノシンタイプの殺虫剤を組合せることにより、スペクトラムが広く、低薬量で非常に高い効果を示す殺外部寄生虫性配合物を得ることができるということが見いだされた。
【００１５】
従って、本発明は、抗寄生虫配合物を提供し、ここで、該配合物は、式（Ｉ）：
【００１６】
【化２】
［式中、
Ａｒは、２，６−ジクロロ−４−トリフルオロメチルフェニル又は２−ニトロ−４−トリフルオロメチルフェニルであり；
Ａは、Ｓ（Ｏ）ｍ、−ＣＨ＝ＣＨ−、Ｏ又はＮＨであり；
ＷはＮであり且つＺはＣＲ５であるか、又は、ＷはＣＲ１であり且つＺはＮ又はＣＲ５であり；
Ｒ１は、水素、場合により置換されていてもよいアルキル、ハロゲン又はＲ２０Ｓ（Ｏ）ｑであり；
Ｒ２及びＲ３は、水素、アルキル、アルケニル若しくはアルキニル（ここで、これらの各々は、場合により置換されていてもよい）、アリール、シアノ、ハロゲン、ニトロ、ＹＲ２０、Ｓ（Ｏ）２ＮＲ８Ｒ９、ＣＨＯ、ＮＲ８Ｒ９又はＣＹＮＲ８Ｒ９であり；
Ｒ４は、水素、場合により置換されていてもよいアルキル、場合により置換されていてもよいアルケニル、アシル又は場合により置換されていてもよいアルコキシカルボニルであり；
Ｒ５は、水素、アルキル、場合により置換されていてもよいアミノ又はハロゲンであり；
Ｒ８及びＲ９は、同一であるか又は異なっていて、水素、場合により置換されていてもよいアルキル、アシル又はアリールであり；
Ｒ２０は、場合により置換されていてもよいアルキルであり；
Ｙは、Ｏ又はＳであり；
ｍは、０、１又は２であり；
ｐは、０又は１であり；
ｎは、０、１又は２であり；
及び
ｑは、０、１又は２であり；
また、ここで、（ａ）アルキル基、アルコキシ基及びアルキルチオ基は、いずれも、１〜４個の炭素原子からなり；（ｂ）アルケニル基又はアルキニル基は、いずれも、２〜５個の炭素原子からなり；（ｃ）置換されているアルキル基、アルコキシ基、アルキルチオ基、アルケニル基又はアルキニル基は、いずれも、ハロゲン、ＹＲ２０、ジハロシクロプロピル、シアノ、ニトロ、場合により置換されていてもよいアミノ、アシルオキシ及びアリールから選択される同一であるか又は異なっている１つ以上の基で置換されており；（ｄ）アリール基は、いずれも、ハロゲン、アルキル、ハロアルキル、アルコキシ、ハロアルコキシ、アルキルチオ、ハロアルキルチオ、ハロアルキルスルホニル、シアノ又はニトロで場合により置換されていてもよいフェニルであり；（ｅ）アシル基は、いずれも、１〜４個の炭素原子からなるアルカノイルであるか、又は、アルキルスルホニル若しくはハロアルキルスルホニルであり；及び、（ｆ）場合により置換されていてもよいアミノ基は、いずれも、式ＮＲ８Ｒ９で表されるが、但し、ＷがＣＲ１であり且つＺがＣＲ５であり、ｎ及びｐが共に０である場合、Ｒ４はアルキルではない］
で表される化合物及びその塩と１種類以上のスピノシンの組合せを含んでいることを特徴とする。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１７】
Ｒ４は、好ましくは、水素である。ＷがＣＲ１であり且つＺがＣＲ５であり、ｎ及びｐがいずれも０である場合、また、他の全ての化合物に関しても、Ｒ２とＲ３の少なくとも一方がシアノであることが好ましく、特に、Ｒ２とＲ３のいずれもシアノであるのが好ましい。ｎ及びｐは、好ましくは、０である。Ｒ５は、好ましくは、ハロゲンであり、特に、塩素である。
【００１８】
上記で記載したアゾール殺虫剤は、ＥＰ−４１２８４９に記載されている。それらの化合物をどのように調製することができるかの方法も、ＥＰ−４１２８４９に開示されている。
【００１９】
本発明の配合物中で使用するのに特に好ましい化合物は、５−クロロ−１−（２，６−ジクロロ−４−トリフルオロメチルフェニル）−４−（４，５−ジシアノ−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）−３−イソプロピル−１Ｈ−ピラゾールであり、これは、ＥＰ−４１２８４９において化合物２２ｃとして示されている化合物である。この化合物の合成については、ＥＰ−４１２８４９の実施例２２ｂで開示されている。本出願の残りの部分では、この化合物のことは、「化合物２２ｃ」と称する。
【００２０】
本発明の配合物中で使用するスピノシンに関する限り、スピノサド（例えば、以下の文献及びその中で引用されている文献を参照されたい：ＤｏｗＥｌａｎｃｏ ｔｒａｄｅ ｍａｇａｚｉｎｅ Ｄｏｗｎ ｔｏ ｅａｒｔｈ Ｖｏｌ． ５２， Ｎｏ．１， １９９７）を用いるのが特に好ましい。スピノサドは、本質的に、スピノシンＡとスピノシンＤの約８５：１５の比率の混合物からなる。特に、米国特許第５，３６２，６３４号により既知となっている発酵産物Ａ８３５４３を使用するが、これは、約８５〜９０％のスピノシンＡと約１０〜１５％のスピノシンＤと少量のスピノシンＢ、スピノシンＣ、スピノシンＥ、スピノシンＦ、スピノシンＧ、スピノシンＨ及びスピノシンＪを含んでいる。
【００２１】
上記スピノシン類は、反応して塩を形成することができるが、この塩も、本発明において有用である。そのような塩は、塩形成のための標準的な手順を用いて調製する。例えば、スピノシンＡを適切な酸で中和して、酸付加塩を形成させることができる。スピノシン類の酸付加塩は、特に有用である。代表的な適する酸付加塩には、有機酸又は無機酸のいずれかとの反応により形成される塩などがある。
【００２２】
最も好ましい組合せは、化合物２２ｃとスピノサドの組合せである。
【００２３】
当該活性成分は、必ずしも、１つの同一の物的調製物の一部である必要はない。それらは、別個の調製物の一部であることも可能である。
【００２４】
当該活性成分は、同時に投与することもできるが、それらは、順次に投与してもよい。順次に投与する場合、一方の活性成分は、他方の活性成分を投与するとき、宿主動物の体表面上／体内において、検出可能である。
【００２５】
かくして、別の実施形態において、本発明は、活性成分としての１種類以上のスピノシン及び式（Ｉ）で表される１種類以上の化合物を組み合わせて同時に又は順次に投与することにより外部寄生虫の侵襲を防除するための薬物の製造方法における、活性成分としての１種類以上のスピノシン及び式（Ｉ）で表される１種類以上の化合物の使用に関する。
【００２６】
当該活性成分は、好ましくは、同時に投与する。同時に投与する場合、当該組合せは、好ましくは、式（Ｉ）の化合物と１種類以上のスピノシンの両方を含んでいる単一の物的調製物である配合物として提供する。
【００２７】
本発明の配合物は、外部寄生虫の侵襲を防除するために使用することを意図している。用語「外部寄生虫の侵襲を防除する」は、外部寄生虫による侵襲を、防止すること、最小限度に抑えること又は排除することを意味する。用語「外部寄生虫」は、一般に、動物に侵襲するか又は動物に病気を移す昆虫の害虫及びダニの害虫を意味する。そのような外部寄生虫の例には、シラミ、ノミ、蚊、ダニ及びマダニ、並びに、ハエの吸血性種、サシバエ種又は不快な種類の、卵期、幼虫期、蛹期、若虫期及び成虫期などがある。
【００２８】
一般に、本発明の配合物は、有効量の活性成分を含有する。ここで、有効量とは、毒性は示さないが、所望の治療効果を提供するのに充分な量のことを意味する。当業者は、型にはまった実験を用いて、個々の場合の適切な「有効量」を決定することができる。そのような量は、対象の動物の年齢、状態、体重及び種類に依存する。
【００２９】
当該動物には、月１回、週１回又は１日に１回投与することが可能であるが、場合により、それらに先行して比較的高い用量（初回の高い用量）を投与してもよい。そのような処理は、例えば、永続的であることができるか、又は、季節的であることができる。
【００３０】
式（Ｉ）で表される化合物と１種類以上のスピノシンを組み合わせて使用する場合、それらの比率は、好ましくは、１：１０〜１０：１である。
【００３１】
好ましくは、当該処理は、体重１ｋｇ当たり、０．１〜１００ｍｇの用量、特に、１〜４０ｍｇの用量の式（Ｉ）の化合物、及び、体重１ｋｇ当たり、０．１〜１００ｍｇの用量、特に、１〜４０ｍｇの用量、最も好ましくは、３０ｍｇ未満の用量の１種類以上のスピノシン化合物を動物に投与することとなるように実施する。
【００３２】
これらの投与量は、有効であることが分かっており、特に、イヌなどのコンパニオン動物において有効であることが分かっている。
【００３３】
好ましくは、活性成分の上記組合せを、全身的に投与する。全身的な投与は、寄生虫が存在している部位から空間的に離れた部位における、該組合せの、動物への、例えば、経口投与、注射による投与、インプラントによる投与、又は、他の手段による投与、例えば、スポットオン若しくはポアオンなどによる経皮的送達による投与であり、それにより、当該動物の体表面上で摂食している寄生虫を殺すのに充分な当該薬剤が、組織又は体液中に存在する。
【００３４】
本発明の配合物は、好ましくは、経口用製剤として投与する。用語「経口用製剤」は、活性成分が、口を介して動物に投与するのに適した生成物として製剤されていることを意味する。そのような製剤としては、限定するものではないが、錠剤、カプセル剤、溶液剤、ゲル剤、ペースト剤、口腔スプレー剤、口腔用製剤（buccal formulation）、散剤、顆粒剤、チュアブルトリート（chewable treat）又は該活性成分を含んでいる動物用飼料などを挙げることができる。一般に、そのような製剤には、製薬上許容される担体を含有させる。そのような担体は、獣医学の技術分野ではよく知られている。
【００３５】
慣習的な錠剤は、一般に、活性成分と、粉末の量を都合の良い範囲にまで増量して圧縮性を改善するための希釈剤、圧縮された粉末をつなぎ合わせるための結合剤、並びに、高密度化及び錠剤金型からの取り出しを補助する滑沢剤を含んでいる。それらは、さらに、崩壊及び溶解を向上させるための崩壊剤や、安定化剤、着色剤及び矯味矯臭剤も含み得る。錠剤は、多くの場合、外観若しくは風味を改善するか、又は、溶解特性を変えるために、コーティングを施す。錠剤は、速く溶解するか又はゆっくりと溶解するように設計することが可能であり、また、薬物の実際の容積及び圧縮率に応じて、その大小にかかわらず設計することが可能である。それらは、咀嚼できるように調製することも可能であり、又は、舌下若しくは頬袋内で溶けるように調製することも可能である。
【００３６】
慣習的な液体製剤は、通常、当該成分の溶液、懸濁液又はエマルションであり、適切な希釈剤、溶媒、矯味矯臭剤及び着色剤を加えて風味がよい投与形態を形成している。好ましくは、本発明の配合物は、錠剤として、好ましくは、例えばイヌにトリート（treat）として与えることができる、チュアブル錠として提供する。錠剤は、特定の体重の範囲の動物に適合させた量の活性成分を含むように製剤することができる。
【００３７】
一般に、本発明の配合物は、外部寄生虫の侵襲を受ける全ての動物種に対して投与することができる。当該配合物のレシピエントは、家畜動物、例えば、ヒツジ、ウシ、ブタ、ヤギ、家禽、実験室試験用動物、例えば、モルモット、ラット若しくはマウス、又は、コンパニオン動物、例えば、イヌ、ネコ、ウサギ若しくはウマなどであり得る。本発明の配合物は、コンパニオン動物、例えば、イヌなどにおいて使用するのに特に適している。
【実施例】
【００３８】
実施例１：スピノサドと組み合わせた化合物２２ｃの効力及び耐容性
それぞれ６匹のイヌからなる２つの群（群Ａ及び群Ｂ）に、ノミ（Ｃｔｅｎｏｃｅｐｈａｌｉｄｅｓ ｆｅｌｉｓ）及びマダニ（Ｒｈｉｐｉｃｅｐｈａｌｕｓ ｓａｎｇｕｉｎｅｕｓ）を、処理前に侵襲させ、及び、処理後の異なった時点で繰り返し侵襲させた。
【００３９】
群Ｂのイヌは未処理対照とし、群Ａのイヌは、スピノサドと組み合わせた化合物２２ｃで経口的に処理した。化合物２２ｃに関しては、第０日（ｄ０）に、体重（ｂｗ）１ｋｇ当たり４ｍｇの初回量を使用し、その後、２ｍｇ／ｋｇ（ｂｗ）の用量を１週間に１回で３回使用した（ｄ＋７，ｄ＋１４，ｄ＋２１）。スピノサドは、（ｄ０）に、３０ｍｇ／ｋｇの初回量で投与し、その後、１５ｍｇ／ｋｇの用量で、１週間に１回、（ｄ＋７）、（ｄ＋１４）及び（ｄ＋２１）に投与した。
【００４０】
各侵襲の４８時間後に、マダニ及びノミを取り除いて数えることにより、個々のイヌの寄生虫の量について評価した。ノミ及びマダニは、活力（死／生存）及びマダニの寄生状態（充血状態／未充血状態；付着／遊離）に従って、分類した。寄生虫の数を用いて効力を計算した。化合物２２ｃとスピノサドの組合せは、研究を通して、充分に許容された。
【００４１】
研究手順の詳細について、以下に記載する。
【００４２】
研究手順（材料及び方法）
【００４３】
（薬品の明細）
【００４４】
化合物２２ｃ錠剤
活性成分： 化合物２２ｃ（Ｃｈ．ＨＴ／ａ ９９．１％）
薬品処方： 化合物２２ｃ １０．０％（ｗ／ｗ）
投与量： 経口；
体重１ｋｇ当たり４ｍｇの初回量；
体重１ｋｇ当たり２ｍｇの維持量；
投与： 経口
【００４５】
スピノサドカプセル剤
活性成分： ９９％
処方： ８７％ スピノシンＡ
１２％ スピノシンＤ
投与量： 経口；
体重１ｋｇ当たり３０ｍｇの初回量；
体重１ｋｇ当たり１５ｍｇの維持量；
投与： 経口（ゼラチンカプセル内）。
【００４６】
（研究対象動物）
種類： 家イヌ
数： １２
健康状態： イヌは、研究の開始時点で健康であった。これは、第−２日に獣医が確認した。全てのイヌは、該研究の前の少なくとも８週間は、殺ダニ剤／殺虫剤で処理しなかった。
識別： 耳及びチップ番号。
【００４７】
（動物の住居）
研究対象動物は、周囲の環境から寄生虫を集めることができるように、家の中で、コンクリートの床及び特別な休息場を有する個別の囲いの中で飼った。研究は、“Ｔｅｓｔｉｎｇ ａｎｄ ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ｅｆｆｉｃａｃｙ ｏｆ ａｎｔｉｐａｒａｓｉｔｉｃ ｓｕｂｓｔａｎｃｅｓ ｆｏｒ ｔｈｅ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ａｎｄ ｐｒｅｖｅｎｔｉｏｎ ｏｆ ｔｉｃｋ ａｎｄ ｆｌｅａ ｉｎｆｅｓｔａｔｉｏｎ ｉｎ ｄｏｇｓ ａｎｄ ｃａｔｓ”（ＥＭＥＡ／ＣＶＭＰ／００５／００）についての現在のガイドラインに従って実施し、それにより、当該イヌには、研究条件下での最大の快適さを与えた。
【００４８】
（寄生虫の侵襲）
表１に従い、Ｒｈｉｐｉｃｅｐｈａｌｕｓ ｓａｎｇｕｉｎｅｕｓの実験室系統（８０匹の未摂食成虫；性比 １：１）（マダニ）及びＣｔｅｎｏｃｅｐｈａｌｉｄｅｓ ｆｅｌｉｓ（齢が類似している１００匹の成虫；性比 約１：１）（ノミ）をイヌに実験的に侵襲させた。ノミとマダニは、当該動物の背中に直接適用した。マダニ（Ｒｈｉｐｉｃｅｐｈａｌｕｓ ｓａｎｇｕｉｎｅｕｓ）及びノミ（Ｃｔｅｎｏｃｅｐｈａｌｉｄｅｓ ｆｅｌｉｓ）は、第−２日、第＋３日、第＋５日、第＋７日、第＋１０日、第＋１２日、第＋１４日、第＋１７日、第＋１９日、第＋２１日、第＋２４日及び第＋２６日に侵襲させた。
【００４９】
（処理）
群Ａのイヌは、表１に記載してあるスケジュールに従って処理した。群Ｂのイヌは、侵襲はさせたが処理は行わず、未処理対照とした。
【００５０】
（投与経路及び投与方法）
化合物２２ｃについての用量を計算するために、体重を用いた。使用した最も小さな単位は、化合物２２ｃの錠剤の半分であった。錠剤には刻み目がついていなかったが、タブレットカッターを用いて等しい片に割った。必要に応じ、当該用量は、錠剤の半分を単位とした。スピノサドは、単一のカプセルとして投与した。各処理に先立ち、実際の体重に照らして各イヌについての個々の用量を秤り、カプセルの中に入れた。
【００５１】
両方の薬品は、少量のドッグフードの中に隠してイヌに与えた。薬品を適用する前に、個々のイヌがそのドッグフードを受け入れるかどうかについて試験した。イヌがそのドッグフードを拒んだときは、嚥下を誘発するように両方の薬品を舌の裏側に直接投与した。投与した用量を記録した。
【００５２】
【表１】
【００５３】
（マダニ及びノミの数についての評価）
イヌの体表面上の寄生虫の評価は、表１に示してあるように、最初の処理の４８時間後に実施し、また、それぞれの再侵襲の４８時間後に実施した。
【００５４】
各イヌの体表面上のノミは、少なくとも５分間にわたりノミを見いだすことができなくなるまで加え合わせることにより計数し、生存しているノミの数を記録した。イヌの体表面上のマダニは、触診により計数し、付着している場合には、取り除いて、表２に示してあるカテゴリーに従って分類した。
【００５５】
【表２】
【００５６】
（臨床症状についての評価）
日常における行動及び状態
【００５７】
（効力の計算）
効力の計算は、対照群と比較した、処理したイヌの体表面上のマダニ／ノミの数の算術平均に基づいている。効力（％）を計算するために、以下の式（Ａｂｂｏｔの式による）を使用する：
効力＝１００×（ｍｃ−ｍｔ）／ｍｃ
対照群（ｍｃ）：宿主動物の体表面上で生存しているノミの平均数
宿主動物の体表面上で生存しているマダニの平均数
処理群（ｍｔ）：宿主動物の体表面上で生存しているノミの平均数
宿主動物の体表面上で生存しているマダニ（カテゴリー１〜３）
又は充血して死亡しているマダニ（カテゴリー６）の平均数
【００５８】
結 果
計算した効力は、下記表（表３）に示してある。
【００５９】
【表３】
上記結果から、化合物２２ｃとスピノサドを併用処理することにより、マダニ及びノミに対して顕著な効果が得られるという結論を下すことができる。
【００６０】
実施例２：化合物２２ｃとスピノサド（の組合せ）の用量漸増法
インビトロモデルを用いて、化合物２２ｃ、スピノサド及びそれらの混合物を、寄生虫に摂取されたときの殺ダニ活性について数種類の濃度で評価した。試験系は、Ｏｒｎｉｔｈｏｄｏｒｕｓ ｍｏｕｂａｔａ（軟ダニ）の未摂食若虫（第３ステージ）である。
【００６１】
試験溶液の調製：
被験化合物を、以下のように、ＤＭＳＯ／Ｅｍｕｌｓｏｇｅｎ（標準的な調製）とヒツジの脱線維素血液に溶解させた：
【００６２】
【表４】
【００６３】
ＤＭＳＯ−化合物調製物にヒツジの脱線維素血液を添加して、充分に混合した。ヒツジの脱線維素血液中の１０００ｐｐｍのこの初期溶液を希釈することにより、適切な試験濃度とした。得られた希釈液を充分に混合して新たに調製した後、給餌手順を行った。
【００６４】
希釈範囲の濃度で、特異的活性を求めた。
【００６５】
給餌手順：
各濃度について、少なくとも２０匹のＯ．ｍｏｕｂａｔａの若虫（第３ステージ）に、パラフィルム膜を介して、適切な濃度の被験化合物を補足して３８〜４０℃に加熱した２ｍＬのヒツジの脱線維素血液を餌として与えた。給餌は、約３０分後に完了した。次いで、被験生物をペトリ皿に移し、２７〜２９℃、約８０％の相対湿度で最大で４週間にわたりインキュベーションした。
【００６６】
以下のパラメータについて評価した：
給餌（食餌の容認）
表現型（形態的損傷、行動）
発育障害（脱皮）
死亡率。
【００６７】
評価：
活性は、死亡率（％）及び第４ステージの若虫への成長の阻害により評価した。給餌は、マダニへの給餌手順の間モニタリングした。給餌中及び給餌後、給餌の２４時間後、並びに、給餌の約２８日後、２０匹の充血した若虫の表現型及び死亡率を評価した。死亡率は、投薬していない対照に関するパーセントで表す。そのパーセントは、表４に示してある。
【００６８】
表４から、当該混合物の抗寄生虫効果がその両方の化合物に帰するということが理解され得る。該混合物は、混合物中の化合物２２ｃについて化合物２２ｃ（及び、スピノサド）単独よりも濃度が低くても、まだ活性を有している。
【００６９】
【表５】
【００７０】
実施例３：マダニの防除におけるスピノサド単独の効力（比較例）
実施例１で記載した実験の設定と本質的に同じ設定で実施した実験。
【００７１】
群Ａは、２匹のイヌからなり、マダニ（Ｒｈｉｐｉｃｅｐｈａｌｕｓ ｓａｎｇｕｉｎｅｕｓ）による侵襲に対して、スピノサド単独で処理した。群Ａでは、１匹のイヌは、体重（ｂｗ）１ｋｇ当たり５０ｍｇのスピノサドで処理し、もう１匹のイヌは、１５ｍｇ／ｋｇ（ｂｗ）のスピノサドで処理した。
【００７２】
群Ｂの２匹のイヌは、未処理対照とした。
【００７３】
この実験に関するタイムプランは、表５に示してある。結果は、表６に示してある。
【００７４】
【表６】
【００７５】
結果：
【００７６】
【表７】
【００７７】
上記結果から、１５ｍｇ／ｋｇのスピノサドでの１週間の処理は、マダニを防除するのには不充分であり、また、５０ｍｇ／ｋｇのスピノサドで処理しても、マダニの再侵襲を予防するのには充分ではないということが分かる。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
抗寄生虫配合物であって、活性成分として、式（Ｉ）：
【化１】
［式中、
Ａｒは、２，６−ジクロロ−４−トリフルオロメチルフェニル又は２−ニトロ−４−トリフルオロメチルフェニルであり；
Ａは、Ｓ（Ｏ）ｍ、−ＣＨ＝ＣＨ−、Ｏ又はＮＨであり；
ＷはＮであり且つＺはＣＲ５であるか、又は、ＷはＣＲ１であり且つＺはＮ又はＣＲ５であり；
Ｒ１は、水素、場合により置換されていてもよいアルキル、ハロゲン又はＲ２０Ｓ（Ｏ）ｑであり；
Ｒ２及びＲ３は、水素、アルキル、アルケニル若しくはアルキニル（ここで、これらの各々は、場合により置換されていてもよい）、アリール、シアノ、ハロゲン、ニトロ、ＹＲ２０、Ｓ（Ｏ）２ＮＲ８Ｒ９、ＣＨＯ、ＮＲ８Ｒ９又はＣＹＮＲ８Ｒ９であり；
Ｒ４は、水素、場合により置換されていてもよいアルキル、場合により置換されていてもよいアルケニル、アシル又は場合により置換されていてもよいアルコキシカルボニルであり；
Ｒ５は、水素、アルキル、場合により置換されていてもよいアミノ又はハロゲンであり；
Ｒ８及びＲ９は、同一であるか又は異なっていて、水素、場合により置換されていてもよいアルキル、アシル又はアリールであり；
Ｒ２０は、場合により置換されていてもよいアルキルであり；
Ｙは、Ｏ又はＳであり；
ｍは、０、１又は２であり；
ｐは、０又は１であり；
ｎは、０、１又は２であり；
及び
ｑは、０、１又は２であり；
また、ここで、（ａ）アルキル基、アルコキシ基及びアルキルチオ基は、いずれも、１〜４個の炭素原子からなり；（ｂ）アルケニル基又はアルキニル基は、いずれも、２〜５個の炭素原子からなり；（ｃ）置換されているアルキル基、アルコキシ基、アルキルチオ基、アルケニル基又はアルキニル基は、いずれも、ハロゲン、ＹＲ２０、ジハロシクロプロピル、シアノ、ニトロ、場合により置換されていてもよいアミノ、アシルオキシ及びアリールから選択される同一であるか又は異なっている１つ以上の基で置換されており；（ｄ）アリール基は、いずれも、ハロゲン、アルキル、ハロアルキル、アルコキシ、ハロアルコキシ、アルキルチオ、ハロアルキルチオ、ハロアルキルスルホニル、シアノ又はニトロで場合により置換されていてもよいフェニルであり；（ｅ）アシル基は、いずれも、１〜４個の炭素原子からなるアルカノイルであるか、又は、アルキルスルホニル若しくはハロアルキルスルホニルであり；及び、（ｆ）場合により置換されていてもよいアミノ基は、いずれも、式ＮＲ８Ｒ９で表されるが、但し、ＷがＣＲ１であり且つＺがＣＲ５であり、ｎ及びｐが共に０である場合、Ｒ４はアルキルではない］
で表される化合物及びその塩と組み合わせて１種類以上のスピノシンを含んでいることを特徴とする、前記抗寄生虫配合物。
【請求項２】
式（Ｉ）で表される前記化合物が、５−クロロ−１−（２，６−ジクロロ−４−トリフルオロメチルフェニル）−４−（４，５−ジシアノ−１Ｈ−イミダゾール−２−イル−３−メチル−１−Ｈピラゾール（化合物２２ｃ）であることを特徴とする、請求項１に記載の配合物。
【請求項３】
前記スピノシンが、任意の２種類以上のスピノシン化合物の混合物であることを特徴とする、請求項１又は２に記載の配合物。
【請求項４】
前記混合物がスピノサドであることを特徴とする、請求項３に記載の配合物。
【請求項５】
式（Ｉ）で表される前記化合物と１種類以上のスピノシンが、１：１０〜１０：１の比率で存在していることを特徴とする、請求項１〜４のいずれかに記載の配合物。
【請求項６】
活性成分としての１種類以上のスピノシン及び式（Ｉ）で表される１種類以上の化合物を組み合わせて同時に又は順次に投与することにより外部寄生虫の侵襲を防除するための薬物の製造における、活性成分としての１種類以上のスピノシン及び式（Ｉ）で表される１種類以上の化合物の使用。
【請求項７】
前記活性成分が、５−クロロ−１−（２，６−ジクロロ−４−トリフルオロメチルフェニル）−４−（４，５−ジシアノ−１Ｈ−イミダゾール−２−イル−３−メチル−１−Ｈピラゾール及びスピノサドである、請求項６に記載の使用。
【請求項８】
前記薬物が、該活性成分を同時に投与することにより外部寄生虫の侵襲を防除するためのものである、請求項６又は７に記載の使用。
【請求項９】
前記薬物が、前記活性成分を単一の調製物の中に含有している、請求項８に記載の使用。
【請求項１０】
前記外部寄生虫がマダニ類である、請求項６に記載の使用。
【請求項１１】
前記外部寄生虫がノミ類である、請求項６に記載の使用。
【請求項１】
抗寄生虫配合物であって、活性成分として、式（Ｉ）：
【化１】
［式中、
Ａｒは、２，６−ジクロロ−４−トリフルオロメチルフェニル又は２−ニトロ−４−トリフルオロメチルフェニルであり；
Ａは、Ｓ（Ｏ）ｍ、−ＣＨ＝ＣＨ−、Ｏ又はＮＨであり；
ＷはＮであり且つＺはＣＲ５であるか、又は、ＷはＣＲ１であり且つＺはＮ又はＣＲ５であり；
Ｒ１は、水素、場合により置換されていてもよいアルキル、ハロゲン又はＲ２０Ｓ（Ｏ）ｑであり；
Ｒ２及びＲ３は、水素、アルキル、アルケニル若しくはアルキニル（ここで、これらの各々は、場合により置換されていてもよい）、アリール、シアノ、ハロゲン、ニトロ、ＹＲ２０、Ｓ（Ｏ）２ＮＲ８Ｒ９、ＣＨＯ、ＮＲ８Ｒ９又はＣＹＮＲ８Ｒ９であり；
Ｒ４は、水素、場合により置換されていてもよいアルキル、場合により置換されていてもよいアルケニル、アシル又は場合により置換されていてもよいアルコキシカルボニルであり；
Ｒ５は、水素、アルキル、場合により置換されていてもよいアミノ又はハロゲンであり；
Ｒ８及びＲ９は、同一であるか又は異なっていて、水素、場合により置換されていてもよいアルキル、アシル又はアリールであり；
Ｒ２０は、場合により置換されていてもよいアルキルであり；
Ｙは、Ｏ又はＳであり；
ｍは、０、１又は２であり；
ｐは、０又は１であり；
ｎは、０、１又は２であり；
及び
ｑは、０、１又は２であり；
また、ここで、（ａ）アルキル基、アルコキシ基及びアルキルチオ基は、いずれも、１〜４個の炭素原子からなり；（ｂ）アルケニル基又はアルキニル基は、いずれも、２〜５個の炭素原子からなり；（ｃ）置換されているアルキル基、アルコキシ基、アルキルチオ基、アルケニル基又はアルキニル基は、いずれも、ハロゲン、ＹＲ２０、ジハロシクロプロピル、シアノ、ニトロ、場合により置換されていてもよいアミノ、アシルオキシ及びアリールから選択される同一であるか又は異なっている１つ以上の基で置換されており；（ｄ）アリール基は、いずれも、ハロゲン、アルキル、ハロアルキル、アルコキシ、ハロアルコキシ、アルキルチオ、ハロアルキルチオ、ハロアルキルスルホニル、シアノ又はニトロで場合により置換されていてもよいフェニルであり；（ｅ）アシル基は、いずれも、１〜４個の炭素原子からなるアルカノイルであるか、又は、アルキルスルホニル若しくはハロアルキルスルホニルであり；及び、（ｆ）場合により置換されていてもよいアミノ基は、いずれも、式ＮＲ８Ｒ９で表されるが、但し、ＷがＣＲ１であり且つＺがＣＲ５であり、ｎ及びｐが共に０である場合、Ｒ４はアルキルではない］
で表される化合物及びその塩と組み合わせて１種類以上のスピノシンを含んでいることを特徴とする、前記抗寄生虫配合物。
【請求項２】
式（Ｉ）で表される前記化合物が、５−クロロ−１−（２，６−ジクロロ−４−トリフルオロメチルフェニル）−４−（４，５−ジシアノ−１Ｈ−イミダゾール−２−イル−３−メチル−１−Ｈピラゾール（化合物２２ｃ）であることを特徴とする、請求項１に記載の配合物。
【請求項３】
前記スピノシンが、任意の２種類以上のスピノシン化合物の混合物であることを特徴とする、請求項１又は２に記載の配合物。
【請求項４】
前記混合物がスピノサドであることを特徴とする、請求項３に記載の配合物。
【請求項５】
式（Ｉ）で表される前記化合物と１種類以上のスピノシンが、１：１０〜１０：１の比率で存在していることを特徴とする、請求項１〜４のいずれかに記載の配合物。
【請求項６】
活性成分としての１種類以上のスピノシン及び式（Ｉ）で表される１種類以上の化合物を組み合わせて同時に又は順次に投与することにより外部寄生虫の侵襲を防除するための薬物の製造における、活性成分としての１種類以上のスピノシン及び式（Ｉ）で表される１種類以上の化合物の使用。
【請求項７】
前記活性成分が、５−クロロ−１−（２，６−ジクロロ−４−トリフルオロメチルフェニル）−４−（４，５−ジシアノ−１Ｈ−イミダゾール−２−イル−３−メチル−１−Ｈピラゾール及びスピノサドである、請求項６に記載の使用。
【請求項８】
前記薬物が、該活性成分を同時に投与することにより外部寄生虫の侵襲を防除するためのものである、請求項６又は７に記載の使用。
【請求項９】
前記薬物が、前記活性成分を単一の調製物の中に含有している、請求項８に記載の使用。
【請求項１０】
前記外部寄生虫がマダニ類である、請求項６に記載の使用。
【請求項１１】
前記外部寄生虫がノミ類である、請求項６に記載の使用。
【公表番号】特表２００７−５１０６３５（Ｐ２００７−５１０６３５Ａ）
【公表日】平成１９年４月２６日（２００７．４．２６）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００６−５３７３１０（Ｐ２００６−５３７３１０）
【出願日】平成１６年１１月３日（２００４．１１．３）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＥＰ２００４／０５２７６２
【国際公開番号】ＷＯ２００５／０４１９５０
【国際公開日】平成１７年５月１２日（２００５．５．１２）
【出願人】（５０６１９６２４７）インターベツト・インターナシヨナル・ベー・ベー (85)
【Ｆターム（参考）】
【公表日】平成１９年４月２６日（２００７．４．２６）
【国際特許分類】
【出願日】平成１６年１１月３日（２００４．１１．３）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＥＰ２００４／０５２７６２
【国際公開番号】ＷＯ２００５／０４１９５０
【国際公開日】平成１７年５月１２日（２００５．５．１２）
【出願人】（５０６１９６２４７）インターベツト・インターナシヨナル・ベー・ベー (85)
【Ｆターム（参考）】
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