スピロアミノジヒドロチアジン誘導体
一般式
［式中、環ＡはＣ６−１０アリール基等であり、Ｌは単結合、式−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲＬ−（ＲＬは水素原子又は置換基αから選択される置換基を有していてもよいＣ１−６アルキル基である。）又は、それぞれ置換基群αから選ばれる１乃至３の置換基を有していてもよいＣ２−６アルキニレン基等であり、環ＢはＣ６−１０アリール基等であり、ＸはＣ１−３アルキレン基等であり、Ｙは、酸素原子、硫黄原子等であり、ＺはＣ１−３アルキレン基等であり、Ｒ１及びＲ２は各々独立して水素原子、ハロゲン原子等であり、Ｒ３は、水素原子又は置換基群αから選ばれる１乃至３の置換基を有していてもよいＣ１−６アルキル基であり、Ｒ４及びＲ５は各々独立して水素、ハロゲン等であり、Ｒ６、Ｒ７及びＲ８は各々独立して水素原子、ハロゲン原子、ヒドロキシ基若しくはシアノ基等であり、ｎは１から３の整数である。］で示される化合物若しくはその医薬上許容される塩は、Ａβ産生抑制作用又はＢＡＣＥ１阻害作用を有し、Ａβに起因する、アルツハイマー型痴呆に代表される神経変性疾患の予防剤または治療剤として有用である。
［式中、環ＡはＣ６−１０アリール基等であり、Ｌは単結合、式−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲＬ−（ＲＬは水素原子又は置換基αから選択される置換基を有していてもよいＣ１−６アルキル基である。）又は、それぞれ置換基群αから選ばれる１乃至３の置換基を有していてもよいＣ２−６アルキニレン基等であり、環ＢはＣ６−１０アリール基等であり、ＸはＣ１−３アルキレン基等であり、Ｙは、酸素原子、硫黄原子等であり、ＺはＣ１−３アルキレン基等であり、Ｒ１及びＲ２は各々独立して水素原子、ハロゲン原子等であり、Ｒ３は、水素原子又は置換基群αから選ばれる１乃至３の置換基を有していてもよいＣ１−６アルキル基であり、Ｒ４及びＲ５は各々独立して水素、ハロゲン等であり、Ｒ６、Ｒ７及びＲ８は各々独立して水素原子、ハロゲン原子、ヒドロキシ基若しくはシアノ基等であり、ｎは１から３の整数である。］で示される化合物若しくはその医薬上許容される塩は、Ａβ産生抑制作用又はＢＡＣＥ１阻害作用を有し、Ａβに起因する、アルツハイマー型痴呆に代表される神経変性疾患の予防剤または治療剤として有用である。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、スピロアミノジヒドロチアジン誘導体及びその医薬用途に関する。更に詳細には、アミロイドβ（以下、Ａβという。）タンパク産生抑制作用又はベータサイトアミロイドβ前駆体タンパク質開裂酵素１（以下、ＢＡＣＥ１という）阻害作用を有し、Ａβタンパクが原因となる神経変性疾患、特にアルツハイマー型痴呆、ダウン症等の治療に有効なスピロアミノジヒドロチアジン誘導体及びそれを有効成分として含有する医薬組成物に関する。
【背景技術】
【０００２】
アルツハイマー病は、神経細胞の変性や、脱落とともに、老人班の形成および神経原繊維変化を特徴とする疾患である。現在、アルツハイマー病の治療は、アセチルコリンエステラーゼ阻害剤に代表される症状改善剤による対症療法に限られていて、病気の進行を抑制する根本療法剤は開発されていない。アルツハイマー病の根本療法剤の創出には、病態の発症原因を制御する方法の開発が必要である。
アミロイド前駆体タンパク（以下、ＡＰＰという。）の代謝産物であるＡβタンパクは、神経細胞の変性・脱落、さらには痴呆症状の発現に大きくかかわると考えられている（例えば、非特許文献３、４参照）。Ａβタンパクの主成分は、アミノ酸４０個からなるＡβ４０とＣ末が２アミノ酸増えたＡβ４２である。これらのＡβ４０および４２は、凝集性が高く（例えば、非特許文献５参照）、老人班の主要構成成分であり（例えば、非特許文献５、６、７参照）、さらに、家族性アルツハイマー病で見られるＡＰＰおよびプレセネリン遺伝子の変異は、これらのＡβ４０および４２を増加させることが知られている（例えば、非特許文献８、９、１０参照）。したがって、Ａβ４０および４２の産生を低下させる化合物は、アルツハイマー病の進行抑制剤または予防薬として期待されている。
Ａβは、ＡＰＰがベータセクレターゼ（ＢＡＣＥ１）により切断され、続いてガンマセクレターゼにより切り出されることにより産生する。このことより、Ａβ産生抑制を目的として、ガンマセクレターゼおよびベータセクレターゼの阻害剤の創出が試みられている。既に知られているベータセクレターゼ阻害剤は、以下に示す特許文献１〜１５、非特許文献１および２等で報告されており、中でも特許文献１、特許文献１４および特許文献１５にはアミノジヒドロチアジン誘導体およびベータセクレターゼの阻害活性、すなわちＢＡＣＥ１阻害活性を有する化合物が記載されている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００３】
【特許文献１】国際公開第２００７／０４９５３２号パンフレット
【特許文献２】米国特許第３２３５５５１号明細書
【特許文献３】米国特許第３２２７７１３号明細書
【特許文献４】特開平９−０６７３５５号公報
【特許文献５】国際公開第０１／０８７２９３号パンフレット
【特許文献６】国際公開第０４／０１４８４３号パンフレット
【特許文献７】特開２００４−１４９４２９号公報
【特許文献８】国際公開第０２／９６８９７号パンフレット
【特許文献９】国際公開第０４／０４３９１６号パンフレット
【特許文献１０】国際公開第２００５／０５８３１１号パンフレット
【特許文献１１】国際公開第２００５／０９７７６７号パンフレット
【特許文献１２】国際公開第２００６／０４１４０４号パンフレット
【特許文献１３】国際公開第２００６／０４１４０５号パンフレット
【特許文献１４】国際公開第２００８／１３３２７３号パンフレット
【特許文献１５】国際公開第２００８／１３３２７４号パンフレット
【非特許文献】
【０００４】
【非特許文献１】ジャーナル・オブ・ヘテロサイクリック・ケミストリー（Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｈｅｔｅｒｏｃｙｃｌｉｃ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ）、１４巻、７１７頁〜７２３頁（１９７７年）
【非特許文献２】ジャーナル・オブ・オーガニック・ケミストリー（Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ）、３３巻、３１２６頁〜３１３２頁（１９６８年）
【非特許文献３】Ｋｌｅｉｎ ＷＬ，外７名，Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ´ｓ ｄｉｓｅａｓｅ−ａｆｆｅｃｔｅｄ ｂｒａｉｎ： Ｐｒｅｓｅｎｃｅ ｏｆ ｏｌｉｇｏｍｅｒｉｃ Ａβ ｌｉｇａｎｄｓ（ＡＤＤＬｓ）ｓｕｇｇｅｓｔｓ ａ ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｂａｓｉｓ ｆｏｒ ｒｅｖｅｒｓｉｂｌｅ ｍｅｍｏｒｙ ｌｏｓｓ，Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ Ｎａｔｉｏｎａｌ Ａｃａｄｅｍｙ ｏｆ Ｓｃｉｅｎｃｅ ＵＳＡ ２００３，Ｓｅｐ ２；１００（１８），ｐ．１０４１７−１０４２２．
【非特許文献４】Ｎｉｔｓｃｈ ＲＭ，外１６名，Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ａｇａｉｎｓｔ β−ａｍｙｌｏｉｄ ｓｌｏｗ ｃｏｇｎｉｔｉｖｅ ｄｅｃｌｉｎｅ ｉｎ Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ´ｓ ｄｉｓｅａｓｅ，Ｎｅｕｒｏｎ，２００３，Ｍａｙ ２２；３８，ｐ．５４７−５５４．
【非特許文献５】Ｊａｒｒｅｔｔ ＪＴ，外２名，Ｔｈｅ ｃａｒｂｏｘｙ ｔｅｒｍｉｎｕｓ ｏｆ ｔｈｅ β ａｍｙｌｏｉｄ ｐｒｏｔｅｉｎ ｉｓ ｃｒｉｔｉｃａｌ ｆｏｒ ｔｈｅ ｓｅｅｄｉｎｇ ｏｆ ａｍｙｌｏｉｄ ｆｏｒｍａｔｉｏｎ： Ｉｍｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ ｆｏｒ ｔｈｅ ｐａｔｈｏｇｅｎｅｓｉｓ ｏｆ Ａｌｚｈｅｉｍｅｒｓ´ ｄｉｓｅａｓｅ，Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，１９９３，３２（１８），ｐ．４６９３−４６９７．
【非特許文献６】Ｇｌｅｎｎｅｒ ＧＧ，外１名，Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ´ｓ ｄｉｓｅａｓｅ： ｉｎｉｔｉａｌ ｒｅｐｏｒｔ ｏｆ ｔｈｅ ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ ａｎｄ ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ａ ｎｏｖｅｌ ｃｅｒｅｂｒｏｖａｓｃｕｌａｒ ａｍｙｌｏｉｄ ｐｒｏｔｅｉｎ，Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ ａｎｄ ｂｉｏｐｈｙｓｉｃａｌ ｒｅｓｅａｒｃｈ ｃｏｍｍｕｎｉｃａｔｉｏｎｓ，１９８４，Ｍａｙ １６，１２０（３），ｐ．８８５−８９０．
【非特許文献７】Ｍａｓｔｅｒｓ ＣＬ，外５名，Ａｍｙｌｏｉｄ ｐｌａｑｕｅ ｃｏｒｅ ｐｒｏｔｅｉｎ ｉｎ Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ ｄｉｓｅａｓｅ ａｎｄ Ｄｏｗｎ ｓｙｎｄｒｏｍｅ，Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ Ｎａｔｉｏｎａｌ Ａｃａｄｅｍｙ ｏｆ Ｓｃｉｅｎｃｅ ＵＳＡ，１９８５，Ｊｕｎ，８２（１２），ｐ．４２４５−４２４９．
【非特許文献８】Ｇｏｕｒａｓ ＧＫ，外１１名，Ｉｎｔｒａｎｅｕｒｏｎａｌ Ａβ４２ ａｃｃｕｍｕｌａｔｉｏｎ ｉｎ ｈｕｍａｎ ｂｒａｉｎ，Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｐａｔｈｏｌｏｇｙ，２０００，Ｊａｎ，１５６（１），ｐ．１５−２０．
【非特許文献９】Ｓｃｈｅｕｎｅｒ Ｄ，外２０名，Ｓｅｃｒｅｔｅｄ ａｍｙｌｏｉｄ β−ｐｒｏｔｅｉｎ ｓｉｍｉｌａｒ ｔｏ ｔｈａｔ ｉｎ ｔｈｅ ｓｅｎｉｌｅ ｐｌａｑｕｅｓ ｏｆ Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ´ｓ ｄｉｓｅａｓｅ ｉｓ ｉｎｃｒｅａｓｅｄ ｉｎ ｖｉｖｏ ｂｙ ｔｈｅ ｐｒｅｓｅｎｉｌｉｎ １ ａｎｄ ２ ａｎｄ ＡＰＰ ｍｕｔａｔｉｏｎｓ ｌｉｎｋｅｄ ｔｏ ｆａｍｉｌｉａｌ Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ´ｓ ｄｉｓｅａｓｅ，Ｎａｔｕｒｅ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，１９９６，Ａｕｇ，２（８），ｐ．８６４−８７０．
【非特許文献１０】Ｆｏｒｍａｎ ＭＳ，外４名，Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌ ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ｔｈｅ ｓｗｅｄｉｓｈ ｍｕｔａｎｔ ａｍｙｌｏｉｄ ｐｒｅｃｕｒｓｏｒ ｐｒｏｔｅｉｎ ｏｎ β−ａｍｙｌｏｉｄ ａｃｃｕｍｕｌａｔｉｏｎ ａｎｄ ｓｅｃｒｅｔｉｏｎ ｉｎ ｎｅｕｒｏｎｓ ａｎｄ ｎｏｎｎｅｕｒｏｎａｌ ｃｅｌｌｓ，Ｔｈｅ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，１９９７，Ｄｅｃ １９，２７２（５１），ｐ．３２２４７−３２２５３．
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
本発明の課題は、特許文献１に記載のアミノジヒドロチアジン誘導体およびＢＡＣＥ１阻害活性を有する化合物とは相違する化合物であって、Ａβ産生抑制作用又はＢＡＣＥ１阻害作用を有し、Ａβに起因する、アルツハイマー型痴呆に代表される神経変性疾患の予防剤または治療剤として有用なスピロアミノジヒドロチアジン化合物及びその医薬用途を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
本発明は、
[１] 式（Ｉ）：
【化１】
［式中、
環ＡはＣ６−１０アリール基又は５−１０員複素環基であり、
Ｌは単結合、酸素原子若しくは式−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲＬ−（ＲＬは水素原子又は置換基αから選択される１乃至３の置換基を有していてもよいＣ１−６アルキル基である。）又は、それぞれ置換基群αから選ばれる１乃至３の置換基を有していてもよい、Ｃ１−６アルキレン基、Ｃ２−６アルケニレン基若しくはＣ２−６アルキニレン基であり、
環ＢはＣ３−８シクロアルキル基、Ｃ６−１０アリール基又は５−１０員複素環基であり、
Ｘは、それぞれ置換基群αから選ばれる１乃至３の置換基を有していてもよい、Ｃ１−３アルキレン基又はＣ２−３アルケニレン基であり、
Ｙは、酸素原子、硫黄原子、スルホキシド基、スルホン基又は式−ＮＲＹ−（ＲＹは水素原子又はそれぞれ置換基群αから選ばれる１乃至３の置換基を有していてもよい、Ｃ１−６アルキル基、Ｃ１−６アルキルカルボニル基、Ｃ３−８シクロアルキルカルボニル基、Ｃ６−１０アリールカルボニル基、Ｃ１−６アルキルスルホニル基、Ｃ６−１０アリールスルホニル基、Ｃ６−１０アリール基若しくは５−６員へテロアリール基である。）で示される基であり、
Ｚは単結合又はＣ１−３アルキレン基であり、
Ｒ１及びＲ２は各々独立して水素原子、ハロゲン原子、ヒドロキシ基若しくはシアノ基又はそれぞれ置換基群αから選ばれる１乃至３の置換基を有していてもよい、Ｃ１−６アルキル基若しくはＣ１−６アルコキシ基であり、
Ｒ３は、水素原子又はそれぞれ置換基群αから選ばれる１乃至３の置換基を有していてもよい、Ｃ１−６アルキル基、Ｃ１−６アルキルカルボニル基、Ｃ６−１０アリールカルボニル基、Ｃ１−６アルキルスルホニル基、Ｃ６−１０アリールスルホニル基、Ｃ３−８シクロアルキル基、Ｃ６−１０アリール基若しくは５−１０員複素環基であり、
Ｒ４及びＲ５は各々独立して水素原子、ハロゲン原子若しくはヒドロキシ基又はそれぞれ置換基群αから選ばれる１乃至３の置換基を有していてもよい、Ｃ１−６アルキル基、Ｃ１−６アルキルオキシ基、Ｃ３−８シクロアルキル基、Ｃ３−８シクロアルキルオキシ基、Ｃ６−１０アリール基若しくは５−１０員複素環基であり、
Ｒ６、Ｒ７及びＲ８は各々独立して水素原子、ハロゲン原子、ヒドロキシ基若しくはシアノ基又はそれぞれ置換基群αから選ばれる１乃至３の置換基を有していてもよい、Ｃ１−６アルキル基、Ｃ２−６アルケニル基、Ｃ２−６アルキニル基、Ｃ１−６アルコキシ基、Ｃ３−８シクロアルキル基、Ｃ３−８シクロアルキルオキシ基、Ｃ６−１０アリール基若しくは５−１０員複素環基であり、
ｎは１から３の整数である。
置換基群α：水素原子、ハロゲン原子、ヒドロキシ基、オキソ基、シアノ基、Ｃ１−６アルキル基、トリフルオロメチル基、トリフルオロメトキシ基、Ｃ１−６アルコキシ基、Ｃ３−８シクロアルキル基、Ｃ３−８シクロアルキルオキシ基、Ｃ６−１０アリール基及び５−１０員複素環基。］
で示される化合物又はその医薬上許容される塩；
[２] Ｘが置換基群αから選択される１乃至３の置換基を有していてもよいＣ１−３アルキレン基である、上記[１]の化合物又はその医薬上許容される塩；
[３] Ｙが酸素原子である、上記[１]又は[２]記載の化合物又はその医薬上許容される塩；
[４] Ｙが硫黄原子またはスルホン基である、上記[１]又は[２]記載の化合物又はその医薬上許容される塩；
[５] Ｙが式−ＮＲＹ−（ＲＹは水素原子又はそれぞれ置換基群αから選ばれる１乃至３の置換基を有していてもよい、Ｃ１−６アルキル基、Ｃ１−６アルキルカルボニル基、Ｃ３−８シクロアルキルカルボニル基、Ｃ６−１０アリールカルボニル基、Ｃ１−６アルキルスルホニル基、Ｃ６−１０アリールスルホニル基、Ｃ６−１０アリール基若しくは５−６員へテロアリール基である。）で示される基である、上記[１]又は[２]記載の化合物又はその医薬上許容される塩；
[６] Ｌが式−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲＬ−（ＲＬは水素原子又は置換基αから選択される１乃至３の置換基を有していてもよいＣ１−６アルキル基である。）で示される基である、上記[１]から[５]のいずれかに記載の化合物又はその医薬上許容される塩；
[７] 以下の化合物から選ばれる、上記［１］から[６]の何れかに記載の化合物若しくはその医薬上許容される塩又はそれらの溶媒和物：１）（−）−Ｎ−（２´−アミノ−２，３，５´，６´−テトラヒドロスピロ［クロメン−４，４´−［１，３］チアジン］−６−イル）−５−シアノピリジン−２−カルボキサミド、
２）Ｎ−（２´−アミノ−２，３，５´，６´−テトラヒドロスピロ［クロメン−４，４´−［１，３］チアジン］−６−イル）−５−トリフルロメチルピリジン−２−カルボキサミド、
３）Ｎ−（２´−アミノ−２，３，５´，６´−テトラヒドロスピロ［クロメン−４，４´−［１，３］チアジン］−６−イル）−３，５−ジフルオロピリジン−２−カルボキサミド、
４）Ｎ−（２´−アミノ−２，３，５´，６´−テトラヒドロスピロ［クロメン−４，４´−［１，３］チアジン］−６−イル）−５−ブロモピリミジン−２−カルボキサミド、
５）Ｎ−（２´−アミノ−２，３，５´，６´−テトラヒドロスピロ［クロメン−４，４´−［１，３］チアジン］−６−イル）−５−ブロモピリジン−２−カルボキサミド、
６）Ｎ−（２´−アミノ−２，３，５´，６´−テトラヒドロスピロ［クロメン−４，４´−［１，３］チアジン］−６−イル）−３，５−ジクロロピリジン−２−カルボキサミド；
[８] 上記[１]から[７]のいずれかに記載の化合物又はその医薬上許容される塩を有効成分として含有する医薬組成物；
[９] アミロイドβタンパク質産生を抑制するための上記[８]に記載の医薬組成物1;
[１０] ベータサイトアミロイドβ前駆体タンパク質開裂酵素１（ＢＡＣＥ１）を阻害するための上記[８]に記載の医薬組成物；
[１１] 神経変性疾患治療のための上記[８]から[１０]のいずれかに記載の医薬組成物；
[１２] 神経変性疾患がアルツハイマー型痴呆又はダウン症である上記[１１]に記載の医薬組成物
に関する。
【０００７】
以下に、本願明細書において記載する記号、用語等の意義を説明し、本発明を詳細に説明する。
【０００８】
本願明細書中においては、化合物の構造式が便宜上一定の異性体を表すことがあるが、本発明には化合物の構造上生ずる総ての幾何異性体、不斉炭素に基づく光学異性体、立体異性体、互変異性体等の異性体及び異性体混合物を含み、便宜上の式の記載に限定されるものではなく、いずれか一方の異性体でも混合物でもよい。したがって、分子内に不斉炭素原子を有し光学活性体及びラセミ体が存在することがあり得るが、本発明においてはそれらに限定されず、いずれもが含まれる。さらに結晶多形が存在することもあるが同様に限定されず、いずれかの単一結晶形またはそれらの混合物であってもよく、無水物以外に水和物であってもよく、いずれも本願の請求の範囲に含まれる。
【０００９】
本明細書において、「ハロゲン原子」とは、フッ素原子、塩素原子、臭素原子、ヨウ素原子等を示し、好ましくはフッ素原子、塩素原子である。
【００１０】
「Ｃ１−６アルキル基」とは、炭素数が１乃至６個のアルキル基を示し、好ましい基としては、例えばメチル基、エチル基、ｎ−プロピル基、イソプロピル基、ｎ−ブチル基、イソブチル基、ｔ−ブチル基、ｎ−ペンチル基、イソペンチル基、ネオペンチル基、ｎ−ヘキシル基、１−メチルプロピル基、１，２−ジメチルプロピル基、１−エチルプロピル基、１−メチル−２−エチルプロピル基、１−エチル−２−メチルプロピル基、１，１，２−トリメチルプロピル基、１−メチルブチル基、２−メチルブチル基、１，１−ジメチルブチル基、２，２−ジメチルブチル基、２−エチルブチル基、１，３−ジメチルブチル基、２−メチルペンチル基、３−メチルペンチル基等の直鎖又は分枝状アルキル基が挙げられ、より好ましくは、メチル基、エチル基、ｎ−プロピル基が挙げられる。
【００１１】
「Ｃ２−６アルケニル基」とは、炭素数が２乃至６個のアルケニル基を示し、好ましい基としては、例えばビニル基、アリル基、１−プロペニル基、イソプロペニル基、１−ブテン−１−イル基、１−ブテン−２−イル基、１−ブテン−３−イル基、２−ブテン−１−イル基、２−ブテン−２−イル基等の直鎖状又は分枝鎖状のアルケニル基が挙げられる。
【００１２】
「Ｃ２−６アルキニル基」とは、炭素数が２乃至６個のアルキニル基を示し、好ましい基としては、例えばエチニル基、１−プロピニル基、２−プロピニル基、ブチニル基、ペンチニル基、ヘキシニル基等の直鎖状又は分子鎖状のアルキニル基が挙げられる。
【００１３】
「Ｃ１−６アルキレン基」とは前記定義「Ｃ１−６アルキル基」からさらに任意の水素原子を１個除いて誘導される二価の基を意味し、例えばメチレン基、１，２−エチレン基、１，１−エチレン基、１，３−プロピレン基、テトラメチレン基、ペンタメチレン基、ヘキサメチレン基等が挙げられる。
【００１４】
「Ｃ２−６アルケニレン基」とは前記定義「Ｃ２−６アルケニル基」からさらに任意の水素原子を１個除いて誘導される二価の基を意味し、例えば１，２−ビニレン基（エテニレン基）、プロペニレン基、ブテニレン基、ペンテニレン基、ヘキセニレン基等が挙げられる。
【００１５】
「Ｃ２−６アルキニレン基」とは前記定義の「Ｃ２−６アルキニル基」からさらに任意の水素原子を１個除いて誘導される二価の基を意味し、例えばエチニレン基、プロピニレン基、ブチニレン基、ペンチニレン基、ヘキシニレン基等が挙げられる。
【００１６】
「Ｃ１−６アルキルオキシ基」とは、炭素数１乃至は６個のアルキル基において、一つの水素原子が酸素原子に置換された基を示し、例えばメトキシ基、エトキシ基、ｎ−プロポキシ基、イソプロポキシ基、ｎ−ブトキシ基、イソブトキシ基、ｓｅｃ−ブトキシ基、ｔ−ブトキシ基、ｎ−ペントキシ基、イソペントキシ基、ｓｅｃ−ペントキシ基、ｔ−ペントキシ基、ｎ−ヘキソキシ基、イソヘキソキシ基、１，２−ジメチルプロポキシ基、２−エチルプロポキシ基、１−メチル−２−エチルプロポキシ基、１−エチル−２−メチルプロポキシ基、１，１，２−トリメチルプロポキシ基、１，１，２−トリメチルプロポキシ基、１，１−ジメチルブトキシ基、２，２−ジメチルブトキシ基、２−エチルブトキシ基、１，３−ジメチルブトキシ基、２−メチルペントキシ基、３−メチルペントキシ基、ヘキシルオキシ基等が挙げられる。
【００１７】
「Ｃ１−６アルキルスルホニル基」とは、炭素数１乃至は６のアルキル基において、１つの水素原子がスルホニル基に置換された基を示し、例えばメチルスルホニル基、エチルスルホニル基、ｎ−プロピルスルホニル基、イソプロピルスルホニル基、ｎ−ブチルスルホニル基、イソブチルスルホニル基、ｔ−ブチルスルホニル基、ｎ−ペンチルスルホニル基、イソペンチルスルホニル基、ネオペンチルスルホニル基、ｎ−ヘキシルスルホニル基、１−メチルプロピルスルホニル基等が挙げられる。
【００１８】
「Ｃ１−６アルキルカルボニル基」とは、炭素数１乃至６個のアルキル基において一つの水素原子がカルボニル基で置換された基を示し、好ましくは、例えばアセチル基、プロピオニル基、ブチリル基などが挙げられる。
【００１９】
「Ｃ６−１０アリール基」とは、炭素数６乃至１０の芳香族炭化水素環基を示し、例えばフェニル基、ナフチル基等が挙げられ、なかでもフェニル基が好ましい。
【００２０】
「Ｃ６−１０アリールカルボニル基」とは、炭素数６乃至１０の芳香族炭化水素環基にカルボニル基が結合した基を示し、好ましくはベンゾイル基、ナフトイル基等が挙げられ、より好ましくはベンゾイル基である。
【００２１】
「Ｃ６−１０アリールスルホニル基」とは、炭素数６乃至１０の芳香族炭化水素環基にスルホニル基が結合した基を示し、好ましくはベンジルスルホニル基、ナフチルスルホニル基等が挙げられ、より好ましくはベンジルスルホニ基である。
【００２２】
「Ｃ３−８シクロアルキル基」とは、炭素数３乃至８の環状アルキル基を示し、当該基における好ましい基としては、例えばシクロプロピル基、シクロブチル基、シクロペンチル基、シクロヘキシル基、シクロヘプチル基、シクロオクチル基等が挙げられる。
【００２３】
「Ｃ３−８シクロアルキルオキシ基」とは、炭素数３乃至８の環状アルキル基において、一つの水素原子が酸素原子に置換された基を示し、例えばシクロプロポキシ基、シクロブトキシ基、シクロペントキシ基、シクロヘキソキシ基、シクロヘプチロキシ基、シクロオクチロキシ基等が挙げられる。
【００２４】
「Ｃ３−８シクロアルキルカルボニル基」とは、炭素数３乃至８の環状アルキル基において、一つの水素原子がカルボニル基に置換された基を示し、例えばシクロプロピルカルボニル基、シクロブチルカルボニル基、シクロペンチルカルボニル基、シクロヘキシルカルボニル基、シクロヘプチルカルボニル基、シクロオクチルカルボニル基等が挙げられる。
【００２５】
「５−１０員複素環基」とは、総員数５ないし１０員複素原子含有環状基を示し、好ましくは、例えばピペリジニル基、ピロリジニル基、アゼピニル基、アゾカニル基、ピペラジニル基、１，４−ジアゼパニル基、モルホリニル基、チオモルホリニル基、ピロリル基、イミダゾリル基、ピラゾリル基、ピリジニル基、ピリダジニル基、ピリミジニル基、ピラジニル基、トリアゾリル基、トリアジニル基、テトラゾリル基、イソオキサゾリル基、オキサゾリル基、オキサジアゾリル基、イソチアゾリル基、チアゾリル基、チアジアゾリル基、フリル基、チエニル基、キノリニル基、イソキノリニル基、ベンゾフリル基、ベンゾピラニル基、ベンズイミダゾリル基、ベンゾトリアゾリル基、ベンゾイソチアゾリル基、インドリニル基、イソインドリニル基、クロマニル基、イソクロマニル基、１，３−ジオキサインダニル基、１，４−ジオキサテトラリニル基等が挙げられる。
【００２６】
「５−６員ヘテロアリール基」とは、前記「５−１０員複素環基」のうち、総員数５ないし６員複素原子含有芳香族環状基を示し、例えば、ピロリル基、イミダゾリル基、ピラゾリル基、ピリジニル基、ピリダジニル基、ピリミジニル基、ピラジニル基、トリアゾリル基、トリアジニル基、テトラゾリル基、イソオキサゾリル基、オキサゾリル基、オキサジアゾリル基、イソチアゾリル基、チアゾリル基、チアジアゾリル基、フリル基、チエニル基等が挙げられる。
【００２７】
「Ｃ１−３アルキレン基」とは、例えば、メチレン基、エチレン基、プロピレン基等を挙げることがきる。
【００２８】
「Ｃ２−３アルケニレン基」とは、ビニレン基、プロペニレン基を挙げることがきる。
【００２９】
「置換基群α」とは、水素原子、ハロゲン原子、ヒドロキシ基、オキソ基、シアノ基、Ｃ１−６アルキル基、トリフルオロメチル基、トリフルオロメトキシ基、Ｃ１−６アルコキシ基、Ｃ３−８シクロアルキル基、Ｃ３−８シクロアルキルオキシ基、Ｃ６−１０アリール基及び５−１０員複素環基を意味する。
【００３０】
本発明の式（Ｉ）のスピロアミノジヒドロチアジン誘導体は、医薬上許容される塩でもよい。医薬上許容される塩としては、具体的には、例えば無機酸塩（例えば硫酸塩、硝酸塩、過塩素酸塩、リン酸塩、炭酸塩、重炭酸塩、フッ化水素酸塩、塩酸塩、臭化水素酸塩、ヨウ化水素酸塩など）、有機カルボン酸塩（例えば酢酸塩、シュウ酸塩、マレイン酸塩、酒石酸塩、フマル酸塩、クエン酸塩など）、有機スルホン酸塩（例えばメタンスルホン酸塩、トリフルオロメタンスルホン酸塩、エタンスルホン酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、トルエンスルホン酸塩、カンファースルホン酸塩など）、アミノ酸塩（例えばアスパラギン酸塩、グルタミン酸塩など）、四級アミン塩、アルカリ金属塩（例えばナトリウム塩、カリウム塩など）、アルカリ土類金属塩（例えばマグネシウム塩、カルシウム塩など）などが挙げられる。
【００３１】
本発明の式（Ｉ）のスピロアミノジヒドロチアジン誘導体又は医薬上許容される塩は、それらの溶媒和物であってもよく、溶媒和物としては、例えば、水和物などが挙げられる。また、化合物（I）は特定の異性体に限定するものではなく、全ての可能な異性体（ケト−エノール異性体、イミン−エナミン異性体、ジアステレオ異性体、光学異性体および回転異性体等）やラセミ体を含むものである。例えば化合物（I）は以下のような互変異性体を包含する。
【化２】
【００３２】
本発明の式（Ｉ）のスピロアミノジヒドロチアジン誘導体としては、式（Ｉ）において、Ｘが、置換基群αから選択される１乃至３の置換基を有していてもよいＣ１−３アルキレン基、特に、置換基群αから選択される１乃至３の置換基を有していてもよいメチレン又はエチレンである化合物が好ましい。
また、式（Ｉ）において、Ｙが酸素原子、硫黄原子、スルホン基または式−ＮＲＹ−（ＲＹは前記定義に同じである。）で示される基である、化合物が好ましい。
また、式（Ｉ）において、Ｌが式−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲＬ−（ＲＬは前記定義に同じである。）で示される基である、化合物が好ましい。
特に、式（Ｉ）においてＹが酸素原子であり、Ｚが単結合である化合物；Ｙが酸素原子であり、Ｚが置換基群αから選択される１乃至３の置換基を有していてもよいＣ１−３アルキレンである化合物；Ｙが硫黄原子またはスルホンであり、Ｚが単結合である化合物が好ましい。
【００３３】
本発明において好ましい化合物としては、以下の化合物が挙げられる。
１）（−）−Ｎ−（２´−アミノ−２，３，５´，６´−テトラヒドロスピロ［クロメン−４，４´−［１，３］チアジン］−６−イル）−５−シアノピリジン−２−カルボキサミド、
２）Ｎ−（２´−アミノ−２，３，５´，６´−テトラヒドロスピロ［クロメン−４，４´−［１，３］チアジン］−６−イル）−５−トリフルロメチルピリジン−２−カルボキサミド、
３）Ｎ−（２´−アミノ−２，３，５´，６´−テトラヒドロスピロ［クロメン−４，４´−［１，３］チアジン］−６−イル）−３，５−ジフルオロピリジン−２−カルボキサミド、
４）Ｎ−（２´−アミノ−２，３，５´，６´−テトラヒドロスピロ［クロメン−４，４´−［１，３］チアジン］−６−イル）−５−フルオロピリジン−２−カルボキサミド、
５）Ｎ−（２´−アミノ−２，３，５´，６´−テトラヒドロスピロ［クロメン−４，４´−［１，３］チアジン］−６−イル）−５−ブロモピリミジン−２−カルボキサミド、
６）Ｎ−（２´−アミノ−２，３，５´，６´−テトラヒドロスピロ［クロメン−４，４´−［１，３］チアジン］−６−イル）−５−ブロモピリジン−２−カルボキサミド、
７）Ｎ−（２´−アミノ−２，３，５´，６´−テトラヒドロスピロ［クロメン−４，４´−［１，３］チアジン］−６−イル）−５−メトキシピラジン−２−カルボキサミド、
８）Ｎ−（２´−アミノ−２，３，５´，６´−テトラヒドロスピロ［クロメン−４，４´−［１，３］チアジン］−６−イル）−３，５−ジクロロピリジン−２−カルボキサミド、
９）Ｎ−（２´−アミノ−２，３，５´，６´−テトラヒドロスピロ［クロメン−４，４´−［１，３］チアジン］−６−イル）−３−フルオロピリジン−２−カルボキサミド、
１０）６−（５−メトキシピリジン−３−イル）−２，３，５´，６´−テトラヒドロスピロ［クロメン−４，４´−［１，３］チアジン］−２´−アミン、
１１）６−（３，５−ジクロロフェニル）−２，３，５´，６´−テトラヒドロスピロ［クロメン−４，４´−［１，３］チアジン］−２´−アミン、
１２）６−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾル−４−イル）−２，３，５´，６´−テトラヒドロスピロ［クロメン−４，４´−［１，３］チアジン］−２´−アミン、
１３）６−（２−フルオロピリジン−３−イル）−２，３，５´，６´−テトラヒドロスピロ［クロメン−４，４´−［１，３］チアジン］−２´−アミン、
１４）６−［（２−アミノピリジン−３−イル）エチニル］−２，３，５´，６´−テトラヒドロスピロ［クロメン−４，４´−［１，３］チアジン］−２´−アミン、
１５）７−フルオロ−６−（２−フルオロピリジン−３−イル）−２，３，５´，６´−テトラヒドロスピロ［クロメン−４，４´−［１，３］チアジン］−２´−アミン、
より好ましくは、以下の化合物が挙げられる。
１）（−）−Ｎ−（２´−アミノ−２，３，５´，６´−テトラヒドロスピロ［クロメン−４，４´−［１，３］チアジン］−６−イル）−５−シアノピリジン−２−カルボキサミド、
２）Ｎ−（２´−アミノ−２，３，５´，６´−テトラヒドロスピロ［クロメン−４，４´−［１，３］チアジン］−６−イル）−５−トリフルロメチルピリジン−２−カルボキサミド、
３）Ｎ−（２´−アミノ−２，３，５´，６´−テトラヒドロスピロ［クロメン−４，４´−［１，３］チアジン］−６−イル）−３，５−ジフルオロピリジン−２−カルボキサミド、
４）Ｎ−（２´−アミノ−２，３，５´，６´−テトラヒドロスピロ［クロメン−４，４´−［１，３］チアジン］−６−イル）−５−ブロモピリミジン−２−カルボキサミド、
５）Ｎ−（２´−アミノ−２，３，５´，６´−テトラヒドロスピロ［クロメン−４，４´−［１，３］チアジン］−６−イル）−５−ブロモピリジン−２−カルボキサミド、
６）Ｎ−（２´−アミノ−２，３，５´，６´−テトラヒドロスピロ［クロメン−４，４´−［１，３］チアジン］−６−イル）−３，５−ジクロロピリジン−２−カルボキサミド。
【００３４】
次に、本発明の式（Ｉ）の化合物［以下、化合物（Ｉ）という、他式で表される化合物についても同様に表記する］又はその医薬上許容される塩の製造法について説明する。
【００３５】
以下に説明する本発明の式（Ｉ）の化合物を製造する際に用いる原料化合物における「脱離基」とは、求核置換反応に利用される脱離基であればいずれでもよく、好ましくは、例えばハロゲン原子；上記の置換基群αから選択される１乃至３の置換基で置換されてもよいＣ１−６アルキルスルホニルオキシ基；上記の置換基群αから選択される１乃至３の置換基で置換されてもよいＣ１−６アルキルカルボニルオキシ基；上記の置換基群αから選択される１乃至３の置換基で置換されてもよいアリールスルホニルオキシ基等が挙げられ、具体的には、塩素原子、臭素原子、ヨウ素原子、メタンスルホニルオキシ基、トリフルオロカルボニルオキシ基、トリフルオロメタンスルホニルオキシ基、ｐ−トルエンスルホニルオキシ基等が挙げられる。
【００３６】
一般的製造法１：
【化３】
［式中、環Ａ、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｘ、ＹおよびＺは前記と同じ意味を示す。］
本工程は、化合物（ａ−１）を酸により閉環し、化合物（ＩＩ）を得る方法である。
本反応は、反応を阻害せず出発物質をある程度溶解するものであれば特に限定されないが、例えば、ベンゼン、トルエン、ジクロロメタン等の溶媒の存在下または非存在下に適当な酸を１当量〜大過剰作用させて行うことができる。さらに酸を溶媒として用いることもできる。使用する酸としては、例えば硫酸、トリフルオロ酢酸、メタンスルホン酸、トリフルオロメタンスルホン酸またはそれらの混合物等があげられる。反応時間は、特に限定されないが、通常、１から７２時間であり、好ましくは１から４８時間である。反応温度は、通常、氷冷〜溶媒の還流温度である。
【００３７】
化合物（ＩＩ）の合成法
一般的製造法１で用いる化合物（ａ−１）は化合物（ａ−２）から、方法１又は方法２によって合成することができる。
方法１：
【化４】
［式中、各記号は前記と同じ意味を示す。］
方法１は、化合物（ａ−２）を原料として２工程で化合物（ａ−１）を製造する方法である。化合物（ａ−２）は、市販品をそのまま用いることもでき、市販品から公知の方法で製造することもでき、更に実施例中の製造例の記載の方法を用いて製造することもできる。
【００３８】
工程１：
本工程は、市販または公知の方法で調整することができるビニルリチウム試薬、ビニルグリニヤール（Ｇｒｉｇｎａｒｄ）試薬と化合物（ａ−２）の付加反応により化合物（ａ−３）を得る工程である。この反応は、例えば、Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．２００６、１２８、９９９８−９９９９、Ｊ．Ｈｅｔｅｒｏｃｙｃｌｉｃ Ｃｈｅｍ．１９８２、１９、１０４１−１０４４、等に記載の条件と同様の条件で反応を行うことができる。反応に用いる溶媒は、出発原料、使用する試薬により異なり、また反応を阻害せず出発物質をある程度溶解し反応中常に不活性なものであれば特に限定されないが、好適には、例えばジエチルエーテル、テトラヒドロフラン、１，４−ジオキサン、１，２−ジメトキシエタン、ベンゼン、トルエン等の有機溶媒、或いはその混合溶媒である。反応時間は、特に限定されないが、通常、０．１〜４８時間であり、好ましくは０．１〜１２時間である。反応温度は、出発原料、使用する試薬等により異なるが、副生成物の形成を最小限に抑えるために温度を低く、例えば、−７８℃から室温等に保つことが好ましい。
また、添加剤として、例えば塩化亜鉛等のルイス酸、或いは、ＴＭＥＤＡ（テトラメチルエチレンジアミン）、ＨＭＰＡ（ヘキサメチルホスホロアミド）を添加することにより収率の向上や反応時間の短縮等に良好な結果を与えることがある。
【００３９】
工程２：
本工程は、化合物（ａ−３）にチオウレアまたはＮ−置換チオウレアを酸存在下に反応させて、化合物（ａ−１）を得る工程である。
本工程における反応は、例えば、Ｒｕｓｓ．Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．，２００６、４２（１）、４２−４７に記載の条件と同様の条件で反応を行うことができる。
本反応で用いる酸は例えば酢酸、トリフルオロ酢酸、塩化水素、硫酸またはそれらの混合物である。反応は無溶媒またはトルエン等の有機溶媒中で（ａ−３）に対して１当量以上のチオウレア誘導体を作用させて反応を行うことができる。反応時間は、特に限定されないが、通常、５分から２４時間であり、好ましくは５分から１２時間である。反応温度は、通常、０℃〜１５０℃であり、より好ましくは０℃〜１００℃である。
【００４０】
方法２：
【化５】
［式中、環Ａ、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｘ、Ｙ、Ｚは前記と同じ意味を示す。ＬＶは脱離基を、Ｒ１０はＣ１−６アルキル基を示す。］
方法２は、化合物（ａ−２）を原料として４工程で化合物（ａ−１）を製造する方法である。
【００４１】
工程１：
本工程は、公知の方法と同様の条件でピーターソン試薬、ホーナー・ワズワース・エモンズ試薬と化合物（ａ−２）の付加反応により化合物（ａ−４）を得る工程である。
ピーターソン試薬、ホーナー・ワズワース・エモンズ試薬は、市販品をそのまま用いることもでき、当業者に公知の方法で調整することができる。具体的には、例えば、トリアルキルシリル酢酸アルキル化合物、またはホスホノ酢酸トリアルキル化合物に対し、市販の有機金属試薬、例えばブチルリチウム等のアルキルリチウム試薬、またはｔｅｒｔ−ブトキシカリウム等のアルコキシカリウム、アルコキシナトリウム試薬、または金属マグネシウムや金属リチウムを用いるプロトン金属交換を行って対応するリチウムアルキルアミド試薬もしくはマグネシウムアルキルアミド試薬により調製することができる。
本工程において用いる溶媒は、出発原料、使用する試薬により異なり、また反応を阻害せず出発物質をある程度溶解し反応中常に不活性なものであれば特に限定されないが、好適には、例えばジエチルエーテル、テトラヒドロフラン、１，４−ジオキサン、１，２−ジメトキシエタン、ベンゼン、トルエン、メタノール、エタノール等の有機溶媒、或いはその混合溶媒である。反応時間は、特に限定されないが、通常、０．１〜４８時間であり、好ましくは０．１〜１２時間である。反応温度は、出発原料、使用する試薬等により異なるが、副生成物の形成を最小限に抑えるために温度を低く、例えば、−７８℃から室温等に保つことが好ましい。
【００４２】
工程２：
本工程は、エステル化合物（ａ−４）を還元反応に付し、アルコール化合物（ａ−５）を得る工程である。
反応に使用される還元剤としては、例えば水素化リチウムアルミニウム、水素化ホウ素リチウム、水素化ジイソブチルアルミニウム等が挙げられる。反応温度は特に限定されないが、通常、−７８℃〜溶媒の還流温度であり、好ましくは−７８℃〜室温である。反応に使用される溶媒は、反応を阻害せず出発物質をある程度溶解するものであれば特に限定されないが、好適には、例えばテトラヒドロフラン、ジエチルエーテル、トルエン、ジクロロメタン等があげられる。
【００４３】
工程３：
本工程は、化合物（ａ−５）の水酸基を脱離基に変換し、化合物（ａ−６）を得る工程である。
脱離基としては、前記した脱離基をあげることができる。水酸基をこれらの脱離基に変換する反応に通常用いられる条件と同様の条件で反応を行うことができる。例えば脱離基がハロゲン原子の場合には、化合物（ａ−５）を、例えば塩酸、臭酸、塩化チオニル、臭化チオニル、三臭化リンまたテトラハロゲノメタン−トリフェニルホスフィンと反応させることにより製造することができる。反応に使用する溶媒としては、反応を阻害せず出発物質をある程度溶解するものであれば特に限定されないが、好ましくは、例えばベンゼン、トルエン、キシレン、ジクロロメタン、クロロホルム等があげられる。反応温度は、通常、−７８℃〜溶媒の還流温度であり、好ましくは氷冷〜溶媒の還流温度である。反応時間は、特に限定されないが、通常、５分〜４８時間であり、好ましくは５分〜１２時間である。
【００４４】
また、脱離基がＣ１−６アルキルカルボニルオキシ基の場合には、化合物（ａ−５）を、例えば塩化トリフルオロ酢酸、無水トリフルオロ酢酸等と反応させて、製造することができる。
また、脱離基がＣ１−６アルキルスルホニルオキシ基又はアリールスルホニルオキシ基の場合には、化合物（ａ−５）を、例えば塩化メタンスルホニル、塩化ｐ−トルエンスルホニル、無水トリフルオロメタンスルホン酸等と反応させて、製造することができる。
反応に使用する溶媒としては、反応を阻害せず出発物質をある程度溶解するものであれば特に限定されないが、好ましくは、例えばテトラヒドロフラン、トルエン、キシレン、ジクロロメタン、クロロホルム、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド等があげられる。反応温度は、通常、−７８℃〜溶媒の還流温度であり、好ましくは−７８℃〜室温である。さらに塩基の添加により収率向上等の良好な結果を得ることがある。用いる塩基は反応を阻害しない限りにおいて特に限定されないが、好ましくは、例えば炭酸ナトリウム、炭酸カリウム、トリエチルアミン、ピリジン、ジイソプロピルエチルアミン等があげられる。
【００４５】
工程４：
本工程は、化合物（ａ−６）にチオウレアまたはＮ−置換チオウレアを反応させて、化合物（ａ−１）を得る工程である。
具体的には、本反応は、例えばメタノール、エタノール、１−プロパノール、２−プロパノール、１−ブタノール、テトラヒドロフラン、１，４−ジオキサン、Ｎ，Ｎ‐ジメチルホルムアミド等の有機溶媒中、または臭酸等の無機酸中、化合物（ａ−６）に対して１当量以上のチオウレアまたはＮ−メチルチオウレアを作用させて反応を行うことができる。反応時間は、特に限定されないが、通常、５分から２４時間であり、好ましくは５分から１２時間である。反応温度は、通常、０℃〜１５０℃であり、より好ましくは室温〜１００℃である。
【００４６】
２．一般的製造法２：
【化６】
［式中、環Ａ、環Ｂ、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｘ、Ｙ、Ｚは前記と同じ意味を示す。］
一般的製造法２は、一般的製造法１で得られた化合物（ＩＩ）から６工程で本発明にかかる一般式（Ｉ）において、Ｌが−ＮＨＣＯ−である化合物を製造する方法である。
化合物（ＩＩ）は、市販品から前記一般的製造法１により製造することができ、更に実施例中の製造例の記載の方法を用いて製造することもできる。また、化合物（ｂ−５）および（ｂ−６）は、市販品をそのまま用いることもでき、市販品から当業者に公知の方法で製造することもでき、更に実施例中の製造例の記載の方法を用いて製造することもできる。
【００４７】
工程１：
本工程は、化合物（ＩＩ）から化合物（ｂ−１）を製造する工程である。
この反応は、以下の公知の方法１又は方法２で行うことができる。
【００４８】
方法１：化合物（ＩＩ）にアセチル化とニトロ化反応を系内で同時に行う方法
本反応は、当業者に公知の方法により反応することができ、反応に使用される条件としては、例えば濃硝酸／無水酢酸、発煙硝酸／無水酢酸等が挙げられる。反応温度は特に限定されないが、通常、−２０℃から５０℃であり、好ましくは−２０℃〜室温である。
【００４９】
方法２：化合物（ＩＩ）のアセチル化体を単離した後、ニトロ化を行う方法
工程２−１：本工程は、化合物（ＩＩ）のアセチル化反応により対応するアセチル化合物を得る工程である。アミノ化合物のアセチル化に一般に用いられる条件、例えばＴ．Ｗ．Ｔ．Ｗ．Ｇｒｅｅｎ ａｎｄ Ｐ．Ｇ．Ｍ．Ｗｕｔｓ，“Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ Ｇｒｏｕｐｓ ｉｎ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，Ｓｅｃｏｎｄ Ｅｄｉｔｉｏｎ”，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ（１９９１），Ｐ．３５１−３５２等の文献記載の条件と同様の条件で反応を行うことができる。反応に使用されるアセチル化剤としては、例えば塩化アセチル、無水酢酸等が挙げられる。反応温度は特に限定されないが、通常、−２０℃〜１５０℃である。
【００５０】
工程２−２：本工程は、前記工程２−１で合成したアセチル化合物をニトロ化することにより化合物（ｂ−１）を得る工程である。本ニトロ化反応は、ニトロ化に一般に用いられる条件、例えば日本化学会編、第４版 実験化学講座２０巻、Ｐ．３９４−４０４、（１９９２）等の文献記載の条件と同様の条件で反応を行うことができる。反応に使用されるニトロ化剤としては、例えば濃硝酸、濃硝酸／酢酸、濃硝酸／濃硫酸、硝酸カリウム／濃硫酸、発煙硝酸／無水酢酸等が挙げられる。反応温度は特に限定されないが、通常、−２０℃〜７０℃である。
【００５１】
工程２：
本工程は、化合物（ｂ−１）の脱アセチル化反応により化合物（ｂ−２）を得る工程である。本反応は、アセチル基の脱保護反応に一般に用いられる条件、例えばＴ．Ｗ．Ｇｒｅｅｎ ａｎｄ Ｐ．Ｇ．Ｍ．Ｗｕｔｓ，“Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ Ｇｒｏｕｐｓ ｉｎ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，Ｓｅｃｏｎｄ Ｅｄｉｔｉｏｎ”，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ（１９９１），Ｐ．３５１−３５２等の文献記載の条件と同様の条件で反応を行うことができる。反応は、例えば塩酸、硫酸、臭化水素酸等の酸存在下行うことができる。反応溶媒はメタノール、エタノール、トルエン、プロパノール等であり、反応温度は特に限定されないが、通常、−２０℃から１５０℃であり、好ましくは室温から溶媒還流温度である。
【００５２】
工程３：
本工程は、化合物（ｂ−２）のアミノ基をｔ−ブトキシカルボニル化させることにより化合物（ｂ−３）を得る工程である。
アミノ化合物のｔ−ブトキシカルボニル化に一般に用いられる条件、例えばＴ．Ｗ．Ｇｒｅｅｎ ａｎｄ Ｐ．Ｇ．Ｍ．Ｗｕｔｓ，“Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ Ｇｒｏｕｐｓ ｉｎ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，Ｓｅｃｏｎｄ Ｅｄｉｔｉｏｎ”，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ（１９９１），Ｐ．３２７−３３０等の文献記載の条件と同様の条件で反応を行うことができる。例えばテトラヒドロフラン等の溶媒中でトリエチルアミンを塩基として化合物（ｂ−２）とジ−ｔｅｒｔ−ブチル ジカーボネートを反応させることで化合物（ｂ−３）を得ることができる。
【００５３】
工程４：
本工程は、化合物（ｂ−３）を還元して、化合物（ｂ−４）を得る工程である。
本反応は、ニトロ化合物の還元反応に一般的に用いられる条件で反応を行うことができ、例えばラネーニッケル、パラジウム、ルテニウム、ロジウムまたは白金等の貴金属触媒を使用する接触水素化による還元、鉄等を用いた金属による還元、亜二チオン酸ナトリウムによる還元等が挙げられる。この場合に好ましいのは、例えば、塩化アンモニウムを用いる中性条件下での鉄による還元反応等が挙げられる。
【００５４】
工程５：
本工程は化合物（ｂ−４）から化合物（ｂ−７）を得る工程である。
この反応は、（１）化合物（ｂ−４）と化合物（ｂ−５）とを縮合剤を用いて直接縮合させる方法（方法（１））、（２）化合物（ｂ−５）の混合酸無水物と化合物（ｂ−４）とを反応させる方法（方法（２））、（３）化合物（ｂ−５）の活性エステルと化合物（ｂ−４）とを反応させる方法（方法（３））、または（４）酸クロリド化合物（ｂ−６）と化合物（ｂ−４）とを反応させる方法（方法（４））等の公知の方法で行うことができる。
これらの反応に用いる化合物（ｂ−４）はフリー体であっても塩であってもよい。
【００５５】
方法（１）：
化合物（ｂ−４）と化合物（ｂ−５）とを縮合剤を用いて直接縮合させて化合物（ｂ−７）を得ることができる。
本反応は公知の方法で反応することができ、縮合剤としては、ＣＤＩ（Ｎ，Ｎ´−カルボニルジイミダゾール）、Ｂｏｐ（１Ｈ−１，２，３−ベンゾトリアゾール−１−イルオキシ（トリ（ジメチルアミノ））ホスホニウム ヘキサフルオロホスフェ−ト）、ＷＳＣ（１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド・塩酸塩）、ＤＣＣ（Ｎ，Ｎ−ジシクロヘキシルカルボジイミド）、ジエチルホスホリルシアニド、ＰｙＢＯＰ（ベンゾトリアゾール−１−イルオキシトリス（ピロリジノ）ホスホニウムヘキサフルオロホスフェート）、ＥＤＣ・ＨＣｌ（１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド塩酸塩）等が挙げられる。
本反応の溶媒は、反応を阻害しないものであれば特に限定されないが、例えばテトラヒドロフラン、１，４−ジオキサン、酢酸エチル、酢酸メチル、ジクロロメタン、クロロホルム、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド、トルエン、キシレン等があげられる。
化合物（ｂ−５）は化合物（ｂ−４）に対して１当量から大過剰用いる。また必要に応じて１当量から大過剰の有機塩基、例えばトリエチルアミン等を加えてもよい。
反応時間は、特に限定されないが、通常、０．５から４８時間であり、好ましくは０．５から２４時間である。反応温度は、使用する原料、溶媒等により異なり特に限定されないが、好ましくは氷冷〜溶媒の還流温度である。
【００５６】
方法（２）：
化合物（ｂ−５）を混合酸無水物とした後、該混合酸無水物と化合物（ｂ−４）とを反応させて化合物（ｂ−７）を得ることができる。混合酸無水物は、公知の方法により合成できるが、例えばトリエチルアミン等の塩基存在下、化合物（ｂ−５）および例えばクロロギ酸エチル等のクロロギ酸エステル類を反応させることで行われる。クロロギ酸エステル類および塩基は、化合物（ｂ−５）に対して１当量から２当量用いる。反応温度は−３０℃〜室温であり、好ましくは−２０℃〜室温である。
混合酸無水物と化合物（ｂ−４）を縮合させる工程は、例えばジクロロメタン、テトラヒドロフラン、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド等の溶媒中、混合酸無水物と化合物（ｂ−４）とを反応させることにより行われる。化合物（ｂ−４）は、混合酸無水物に対して１当量から大過剰を用いる。
反応時間は、特に限定されないが、通常、０．５から４８時間であり、好ましくは０．５から１２時間である。反応温度は−２０℃〜５０℃であり、好ましくは−２０℃から室温である。
【００５７】
方法（３）：
化合物（ｂ−５）を活性エステルとした後、該活性エステルと化合物（ｂ−４）とを反応させて化合物（ｂ−７）を得ることができる。活性エステルを得る工程は、例えば１，４−ジオキサン、テトラヒドロフラン、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド等の溶媒中、例えばＤＣＣ等の縮合剤存在下、化合物（ｂ−５）および活性エステル合成試薬を反応させることにより行われる。活性エステル合成試薬としては、例えばＮ−ヒドロキシスクシンイミド等が挙げられる。活性エステル合成試薬および縮合剤は化合物（ｂ−５）に対して１当量から１．５当量用いる。反応時間は、特に限定されないが、通常、０．５から４８時間であり、好ましくは０．５から２４時間である。
反応温度は−２０℃〜５０℃であり、好ましくは−２０℃から室温である。
活性エステルと化合物（ｂ−４）を縮合させる工程は、例えばジクロロメタン、テトラヒドロフラン、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド等の溶媒中、活性エステルと化合物（ｂ−４）とを反応させることにより行われる。化合物（ｂ−４）は、活性エステルに対して１当量から大過剰を用いる。反応時間は、特に限定されないが、通常、０．５から４８時間であり、好ましくは０．５から２４時間である。反応温度は−２０℃〜５０℃であり、好ましくは−２０℃から室温である。
【００５８】
方法（４）：
化合物（ｂ−４）と化合物（ｂ−６）から化合物（ｂ−７）を得るアシル化反応は、公知の一般的に用いられる条件と同様の条件で行うことができる。
反応に使用される塩基としては、例えばトリエチルアミン、ピリジン、炭酸カリウム、ジイソプロピルエチルアミン等が挙げられる。反応温度は特に限定されないが、通常、−７８℃〜溶媒の還流温度であり、好ましくは−２０℃〜室温である。反応に使用される溶媒は、反応を阻害せず出発物質をある程度溶解するものであれば特に限定されないが、好適には、例えば、テトラヒドロフラン、エーテル、トルエン、ジクロロメタン等があげられる。
【００５９】
工程６：
本工程は、化合物（ｂ−７）のｔ−ブトキシカルボニル基の脱保護反応により化合物（Ｉ−ａ）を得る工程である。
ｔ−ブトキシカルボニル基の脱保護反応に一般に用いられる条件、例えばＴ．Ｗ．Ｇｒｅｅｎ ａｎｄ Ｐ．Ｇ．Ｍ．Ｗｕｔｓ，“Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ Ｇｒｏｕｐｓ ｉｎ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，Ｓｅｃｏｎｄ Ｅｄｉｔｉｏｎ”，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ（１９９１），Ｐ．３２７−３３０等の文献記載の条件と同様の条件で反応を行うことができる。例えばジクロロメタン等の溶媒中でトリフルオロ酢酸と化合物（ｂ−７）を反応させることで化合物（Ｉ−ａ）を得ることができる。
【００６０】
かくして得られる、本発明にかかる一般式（Ｉ）において、Ｌが−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ−である化合物に、更に、対応するＣ１−６アルキルハライドを通常の方法で反応させることにより、本発明にかかる一般式（Ｉ）において、Ｌが−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲＬ−（ＲＬは置換基αから選択される１乃至３の置換基を有していてもよいＣ１−６アルキル基である。）である化合物を得ることができる。
【００６１】
一般式（Ｉ）において、Ｒ３が水素原子の場合、一般的製造法２において得られる化合物（Ｉ−ａ）を、更に、Ｃ１−６アルキルハライド、Ｃ１−６アルキルカルボニルハライド、Ｃ６−１０アリールカルボニルハライド、Ｃ１−６アルキルスルホニルハライド、Ｃ６−１０アリールスルホニルハライド、Ｃ３−１０員炭素環ハライド、５−１０員複素環ハライドなどの対応するハロゲン化化合物などと反応させることにより、式（Ｉ）において、Ｒ３が置換基群αから選択される１乃至３の置換基を有していてもよいＣ１−６アルキル基、置換基群αから選択される置換基を有していてもよいＣ１−６アルキルカルボニル基、置換基群αから選択される１乃至３の置換基を有していてもよいＣ６−１０アリールカルボニル基、置換基群αから選択される１乃至３の置換基を有していてもよいＣ１−６アルキルスルホニル基、置換基群αから選択される１乃至３の置換基を有していてもよいＣ６−１０アリールスルホニル基、置換基群αから選択される１乃至３の置換基を有していてもよいＣ３−１０員炭素環基又は置換基群αから選択される１乃至３の置換基を有していてもよい５−１０員複素環基である本発明の化合物を得ることができる。
【００６２】
３．一般製造法３：
【化７】
［式中、Ｌ１は、化合物（ｃ−４）、（ｃ−５）及び（ｃ−６）においては、単結合又はＣ１−６アルキレン基を示し、化合物（ｃ−８）及び（ｃ−９）においては、単結合又はＣ１−４アルキレン基を示し、Ｌは単結合、酸素原子、Ｃ１−６アルキレン基、Ｃ２−６アルケニレン基またはＣ２−６アルキニレン基を示し、環Ａ、環Ｂ、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｘ、Ｙ、Ｚは前記と同じ意味を示す。］
一般的製造法３は、化合物（ＩＩ）から３工程で一般式（Ｉ）において、Ｌが単結合、二重結合、三重結合である化合物（Ｉ−ｂ）を製造する方法である。
化合物（ＩＩ）は、市販品から前記一般製造法１により製造することができ、更に実施例中の製造例の記載の方法を用いて製造することもできる。また、化合物（ｃ−４）、（ｃ−５）、（ｃ−６）、（ｃ−７）および（ｃ−８）は、市販品をそのまま用いることもでき、市販品から公知の方法で製造することもでき、更に実施例中の製造例の記載の方法を用いて製造することもできる。
【００６３】
工程１：
本工程は、化合物（ＩＩ）の臭素化反応を系内で行うことにより化合物（ｃ−１）を得る工程である。本反応は、例えば、Ｈｏｌｍｂｅｒｇ，Ｐ．；Ｔｅｄｅｎｂｏｒｇ， Ｐ．；Ｒｏｓｑｕｖｉｓｔ， Ｓ．；Ｈｏｈａｎｓｓｏｎ， Ａ．Ｍ．，Ｂｉｏｏｒｇ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔ．；１５（３），７４７−７５０（２００５）等の文献記載の方法と同様の方法で行うことができる。反応に使用される条件としては、例えば臭素／酢酸、臭素／炭酸ナトリウム／ヘキサン、Ｎ−ブロモスクシンイミド／塩化メチレン等が挙げられる。反応温度は特に限定されないが、通常、−２０℃から５０℃であり、好ましくは−２０℃〜室温である。
【００６４】
工程２：
本工程は、化合物（ｃ−１）をｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル化することにより化合物（ｃ−２）、或いはＲ３が水素原子の場合に化合物（ｃ−３）を得る工程である。本反応は、アミド化合物のｔ−ブトキシカルボニル化に一般に用いられる条件、例えば、ＴＨＦ等の溶媒中で４−ジメチルアミノピリジンを塩基として化合物（ｃ−１）とジ−ｔｅｒｔ−ブチル ジカーボネートを反応させることで化合物（ｃ−２）或いは（ｃ−３）を得ることができる。
本反応に用いられる溶媒は、反応を阻害しないものであれば特に限定されないが、好ましくは、例えば、テトラヒドロフラン、１，４−ジオキサン、１，２−ジメトキシエタン、ジクロロメタン、ＤＭＦ、アセトニトリル等の有機溶媒、或いは、これらの混合溶媒が挙げられる。使用する塩基としては、例えば、トリエチルアミン、４−ジメチルアミノピリジン、ＤＢＵ、或いは、これらの混合物等があげられる。これらの塩基は、化合物（ｃ−１）に対して、触媒量から過剰量用いられ、より好ましくは０．１−５当量である。ジ−ｔｅｒｔ−ブチル ジカーボネートは、化合物（ｃ−１）に対して２当量から過剰量用いられ、より好ましくは、２−１０当量用いられる。反応時間は、特に限定されないが、通常、５分から２４時間であり、好ましくは５分から１２時間である。反応温度は、通常、−２０℃〜溶媒の還流温度であり、より好ましくは０℃〜溶媒の還流温度である。
【００６５】
工程３：
本工程は、化合物（ｃ−２）或いは（ｃ−３）と、化合物（ｃ−４）、（ｃ−５）、（ｃ−６）、（ｃ−７）、（ｃ−８）或いは（ｃ−９）との遷移金属を用いたカップリング反応により、ｔ−ブトキシカルボニル基の脱保護を伴って化合物（Ｉ−ｂ）を得る工程である。本反応は、遷移金属を用いたカップリング反応（例えば、鈴木−宮浦反応、スティル反応（Ｓｔｉｌｌｅ反応）、園頭反応、ヘック反応（Ｈｅｃｋ反応）、Ｂｕｃｋｗａｌｄ、Ｓ．Ｌ．ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ａｍ Ｃｈｅｍ Ｓｏｃ（１９９９）１２１（１８），４３６９−４３７８等に記載の方法等）に通常用いられている条件で反応を行うことができる。
【００６６】
本反応に用いられる有機金属触媒としては特に限定されないが、好ましくは、例えばテトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（０）、ジクロロビス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（ＩＩ）、［１，１´−ビス（ジフェニルホスフィノ）フェロセン］パラジウム（ＩＩ）ジクロリド、ビス（ｔｅｒｔ−ブチルホスフィン）パラジウム（０）、酢酸パラジウム（ＩＩ）、［１，３−ビス（ジフェニルホスフィノ）プロパン］ニッケル（ＩＩ）等の金属触媒或いは、これら金属触媒の混合物をあげることができる。有機金属触媒の使用量は、原料に対して約０．００１〜０．５当量である。化合物（ｃ−４）、（ｃ−５）、（ｃ−６）、（ｃ−７）或いは（ｃ−８）の使用量は、特に限定されないが、通常、化合物（ｃ−２）或いは（ｃ−３）に対して１〜６当量である。本反応に用いられる溶媒は、反応を阻害しないものであれば特に限定されないが、好ましくは、例えばベンゼン、トルエン、キシレン、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド、１−メチル−２−ピロリドン、テトラヒドロフラン、１，２−ジメトキシエタン、１，４−ジオキサン、アセトニトリル、プロピオニトリル等をあげることができる。反応温度は特に限定されないが、通常、氷冷〜溶媒の還流温度であり、好ましくは、例えば、室温〜溶媒の還流温度である。反応時間は、特に限定されないが、通常、０．５〜４８時間であり、好ましくは０．５〜２４時間である。
【００６７】
さらに本反応を塩基或いは塩の共存下に行うことで収率向上等のより好ましい結果を得ることがある。かかる塩基或いは塩としては特に限定はされないが、好ましくは炭酸ナトリウム、炭酸カリウム、水酸化バリウム、炭酸セシウム、リン酸カリウム、フッ化カリウム、或いはそれらの水溶液、およびトリエチルアミン、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン、塩化リチウム、ヨウ化銅（Ｉ）等の塩基、或いは塩があげられる。
【００６８】
工程３において、化合物（ｃ−１）でＲ３が水素原子である場合には、アミノ基をｔ−ブトキシカルボニル基等で保護することなく、化合物（ｃ−７）とカップリング反応を行い、化合物（Ｉ−ｂ）を合成することができる。
【００６９】
一般式（Ｉ）において、Ｒ３が水素原子の場合、一般的製造法３において得られる化合物（Ｉ−ｂ）を、更に、Ｃ１−６アルキルハライド、Ｃ１−６アルキルカルボニルハライド、Ｃ６−１０アリールカルボニルハライド、Ｃ１−６アルキルスルホニルハライド、Ｃ６−１０アリールスルホニルハライド、Ｃ３−１０員炭素環ハライド、５−１０員複素環ハライドなどの対応するハロゲン化化合物などと反応させることにより、式（Ｉ）において、Ｒ３が置換基群αから選択される１乃至３の置換基を有していてもよいＣ１−６アルキル基、置換基群αから選択される置換基を有していてもよいＣ１−６アルキルカルボニル基、置換基群αから選択される１乃至３の置換基を有していてもよいＣ６−１０アリールカルボニル基、置換基群αから選択される１乃至３の置換基を有していてもよいＣ１−６アルキルスルホニル基、置換基群αから選択される１乃至３の置換基を有していてもよいＣ６−１０アリールスルホニル基、置換基群αから選択される１乃至３の置換基を有していてもよいＣ３−１０員炭素環基又は置換基群αから選択される１乃至３の置換基を有していてもよい５−１０員複素環基である本発明の化合物を得ることができる。
【００７０】
一般製造法３において得られる化合物（Ｉ−ｂ）のＬがＣ１−６アルキレン基である化合物は、化合物（ｃ−２）或いは（ｃ−３）と（ｃ−８）或いは（ｃ−９）との遷移金属を用いたカップリング反応により、生成したＬがＣ２−６アルケニレン基又はＣ２−６アルキニレン基を還元反応に通常用いられている条件、例えば、パラジウム等の触媒を用いる反応で製造することもできる。
【００７１】
かくして得られる本発明の式（Ｉ）の化合物は、必要に応じて、常法により、医薬上許容される塩とすることができる。その製造法は、有機合成化学分野で通常用いられる方法などを適宜組み合わせて行うことができる。具体的には、本発明化合物の遊離型の溶液を酸溶液で中和滴定することなどが挙げられる。また、必要に応じて、それ自体周知の溶媒和物形成反応に付すことにより、本発明の式（Ｉ）の化合物を溶媒和物に変換することができる。
【００７２】
本発明に係るスピロアミノジヒドロチアジン誘導体又はその医薬上許容される塩は、極めて優れたＡβ産生抑制作用又はＢＡＣＥ１阻害作用を有し、Ａβに起因する、アルツハイマー型痴呆に代表される神経変性疾患の予防剤または治療剤として極めて有用である。
【００７３】
本発明に係るスピロアミノジヒドロチアジン誘導体又はその医薬上許容される塩は、通常の方法により製剤化が可能であり、好ましい剤形としては、例えば、錠剤、フィルム錠や糖衣錠等の被覆錠剤、細粒剤、顆粒剤、散剤、カプセル剤、シロップ剤、トローチ剤、吸入剤、坐剤、注射剤、軟膏剤、点眼剤、点鼻剤、点耳剤、パップ剤、ローション剤等が挙げられる。
これらの錠剤、カプセル剤、顆粒剤、粉末などの固形製剤は、一般的には０．０１〜１００重量％、好ましくは０．１〜１００重量％の有効成分である本発明に係るスピロアミノジヒドロチアジン誘導体又はその医薬上許容される塩を含むことができる。
【００７４】
製剤化には、一般に医薬品製剤の原料として用いられる成分を配合し、例えば、通常用いられる賦形剤、崩壊剤、結合剤、滑沢剤、着色剤、矯味矯臭剤や、必要により安定化剤、乳化剤、吸収促進剤、界面活性剤、ｐＨ調整剤、防腐剤、抗酸化剤等を添加して常法により製剤化を行う。これらの成分としては、例えば、大豆油、牛脂、合成グリセライド等の動植物油；流動パラフィン、スクワラン、固形パラフィン等の炭化水素；ミリスチン酸オクチルドデシル、ミリスチン酸イソプロピル等のエステル油；セトステアリルアルコール、ベヘニルアルコール等の高級アルコール；シリコン樹脂；シリコン油；ポリオキシエチレン脂肪酸エステル、ソルビタン脂肪酸エステル、グリセリン脂肪酸エステル、ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル、ポリオキシエチレン硬化ひまし油、ポリオキシエチレンポリオキシプロピレンブロックコポリマー等の界面活性剤；ヒドロキシエチルセルロース、ポリアクリル酸、カルボキシビニルポリマー、ポリエチレングリコール、ポリビニルピロリドン、メチルセルロース等の水溶性高分子；エタノール、イソプロパノール等の低級アルコール；グリセリン、プロピレングリコール、ジプロピレングリコール、ソルビトール等の多価アルコール；グルコース、ショ糖等の糖；無水ケイ酸、ケイ酸アルミニウムマグネシウム、ケイ酸アルミニウム等の無機粉体、精製水等が挙げられる。賦形剤としては、例えば乳糖、コーンスターチ、白糖、ブドウ糖、マンニトール、ソルビット、結晶セルロース、二酸化ケイ素等が、結合剤としては、例えばポリビニルアルコール、ポリビニルエーテル、メチルセルロース、エチルセルロース、アラビアゴム、トラガント、ゼラチン、シェラック、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、ポリビニルピロリドン、ポリプロピレングリコール・ポリオキシエチレン・ブロックポリマー、メグルミン等が、崩壊剤としては、例えば澱粉、寒天、ゼラチン末、結晶セルロース、炭酸カルシウム、炭酸水素ナトリウム、クエン酸カルシウム、デキストリン、ペクチン、カルボキシメチルセルロース・カルシウム等が、滑沢剤としては、例えばステアリン酸マグネシウム、タルク、ポリエチレングリコール、シリカ、硬化植物油等が、着色剤としては医薬品に添加することが許可されているものが、矯味矯臭剤としては、ココア末、ハッカ脳、芳香散、ハッカ油、竜脳、桂皮末等が用いられる。もちろん、これらの添加剤成分に限定される訳ではないことは言うまでもない。
【００７５】
例えば経口製剤は、有効成分である本発明に係るスピロアミノジヒドロチアジン誘導体又はその医薬上許容される塩と賦形剤、さらに必要に応じて結合剤、崩壊剤、滑沢剤、着色剤、矯味矯臭剤等を加えた後、常法により散剤、細粒剤、顆粒剤、錠剤、被覆錠剤、カプセル剤等とする。錠剤・顆粒剤の場合には、糖衣、その他必要により適宜コーティングすることはもちろん差支えない。
例えばシロップ剤や注射用製剤等の場合は、ｐＨ調整剤、溶解剤、等張化剤等と、必要に応じて溶解補助剤、安定化剤等を加えて、常法により製剤化する。また、これらの注射剤は予め溶解したものの他、粉末のまままたは適当な添加物を加えたものを用時溶解する形態も取ることができる。これらの注射液は、通常０．０１〜１００重量％、好ましくは０．１〜１００重量％等の有効成分を含むことができる。さらには、経口投与の懸濁剤またはシロップ剤等の液剤は、通常０．０１〜１００重量％、好ましくは０．１〜１００重量％等の有効成分を含むことができる。
例えば、外用剤の場合は、特に製法が限定されず、常法により製造することができる。使用する基剤原料としては、医薬品、医薬部外品、化粧品等に通常使用される各種原料を用いることが可能で、例えば動植物油、鉱物油、エステル油、ワックス類、高級アルコール類、脂肪酸類、シリコン油、界面活性剤、リン脂質類、アルコール類、多価アルコール類、水溶性高分子類、粘土鉱物類、精製水等の原料が挙げられ、必要に応じ、ｐＨ調整剤、抗酸化剤、キレート剤、防腐防黴剤、着色料、香料等を添加することができる。さらに、必要に応じて分化誘導作用を有する成分、血流促進剤、殺菌剤、消炎剤、細胞賦活剤、ビタミン類、アミノ酸、保湿剤、角質溶解剤等の成分を配合することもできる。
【００７６】
本発明に係るスピロアミノジヒドロチアジン誘導体又はその医薬上許容される塩の投与量は、症状の程度、年齢、性別、体重、投与形態・塩の種類、疾患の具体的な種類等に応じて異なるが、通常、成人の場合は１日あたり経口投与で約３０μｇ〜１０ｇ、好ましくは１００μｇ〜５ｇ、さらに好ましくは１００μｇ〜１ｇを、注射投与で約３０μｇ〜１ｇ、好ましくは１００μｇ〜５００ｍｇ、さらに好ましくは１００μｇ〜３００ｍｇをそれぞれ１回又は数回に分けて投与する。
【００７７】
本発明の化合物は生理活性低分子化合物の標的タンパクを捕捉するためのケミカルプローブとすることができる。すなわち、本発明の化合物は、当該化合物の活性発現に必須な構造部分とは異なる部分に、Ｊ． Ｍａｓｓ Ｓｐｅｃｔｒｕｍ．Ｓｏｃ．Ｊｐｎ．Ｖｏｌ．５１，Ｎｏ．５，２００３，ｐ４９２−４９８またはＷＯ２００７／１３９１４９等に記載の手法で標識基、リンカー等を導入することでアフィニティークロマトグラフィープローブ、フォトアフィニティープローブ等に変換することができる。
ケミカルプローブに用いる標識基、リンカー等は、例えば以下の（１）ないし（５）からなる群に示される基が挙げられる。
（１）光親和性標識基（例えば、ベンゾイル基、ベンゾフェノン基、アジド基、カルボニルアジド基、ジアジリジン基、エノン基、ジアゾ基およびニトロ基等）および化学親和性基（例えば、アルファー炭素原子がハロゲン原子で置換されたケトン基、カルバモイル基、エステル基、アルキルチオ基、α、β−不飽和ケトン、エステル等のマイケル受容体、およびオキシラン基等）等のタンパク質標識基、
（２）−Ｓ−Ｓ−、−Ｏ−Ｓｉ−Ｏ−、単糖（グルコース基、ガラクトース基等）または二糖（ラクトース等）等の開裂可能なリンカー、および酵素反応で開裂可能なオリゴペプチドリンカー、
（３）ビオチン、３−（４，４−ジフルオロ−５，７−ジメチル−４Ｈ−３ａ，４ａ−ジアザ−４−ボラ−ｓ−インダセン−３−イル）プロピオニル基等のフィッシングタグ基、
（４）１２５Ｉ、３２Ｐ、３Ｈ、１４Ｃなどの放射性標識基；フルオレセイン、ローダミン、ダンシル、ウンベリフェロン、７−ニトロフラザニル、３−（４，４−ジフルオロ−５，７−ジメチル−４Ｈ−３ａ，４ａ−ジアザ−４−ボラ−ｓ−インダセン−３−イル）プロピオニル基等の蛍光標識基；ルミフェリン、ルミノール等の化学発光基；ランタノイド金属イオン、ラジウムイオン等の重金属イオン等の検出可能なマーカー、または
（５）ガラスビーズ、ガラスベット、マイクロタイタープレート、アガロースビーズ、アガロースベッド、ポリスチレンビーズ、ポリスチレンベッド、ナイロンビーズ、ナイロンベッド等の固相担体と結合させる基等。
上記の（１）ないし（５）からなる群より選択される標識基等を上記文献に記載の方法等に準じて本発明の化合物に導入して調製されるプローブは、新たな創薬ターゲットの探索等に有用な標識タンパクの同定のためのケミカルプローブとして用いることができる。
【発明を実施するための形態】
【００７８】
以下、本発明を製造例、実施例及び試験例により詳細に説明する。しかし、本発明はこれらに限定されることはない。また、製造例および実施例において使用される略語は当業者に周知の慣用的な略語である、いくつかの略語は以下に示す。
ＴＨＦ；テトラヒドロフラン
ＤＭＦ；Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド
ＴＦＡ；トリフルオロ酢酸
ＥＤＣ・ＨＣｌ；１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド塩酸塩
ｐＴＬＣ；分取薄層クロマトグラフィー
ＬＣ−ＭＳ；液体クロマトグラフィー−マススペクトルメトリー
ＰｙＢＯＰ；ベンゾトリアゾール−１−イルオキシトリス（ピロリジノ）ホスホニウムヘキサフルオロホスフェート
プロトン核磁気共鳴スペクトルの化学シフトは、テトラメチルシランに対するδ単位（ｐｐｍ）で記録、カップリング定数はヘルツ（Ｈｚ）で記録されている。パターンは、ｓ；シングレット、ｄ；ダブレット、ｔ；トリプレット、ｂｒ；ブロード。
【００７９】
以下の実施例及び製造例中の「室温」は通常約１０℃から約３５℃を示す。％は特記しない限り重量パーセントを示す。
【００８０】
製造例１
８−フルオロクロマン−４−オン（化合物１−３）の合成
【化８】
（１）３−（２−フルオロフェノキシ）プロピオン酸(化合物１−２)の合成
（１−１）窒素雰囲気下、５０％水素化ナトリウム（３．２２ｇ）のＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（１００ｍｌ）溶液に、氷浴にて冷却しながら、２−フルオロフェノール（化合物１−１、３．０ｇ）のＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（７．０ｍｌ）溶液を加えた。同温度にて３０分間撹拌した後、３−ブロモ−プロピオン酸（４．９１ｇ）のＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（８．０ｍｌ）溶液を加えた。室温に戻し、同温度にて２４時間撹拌した。１Ｎ塩酸（１００ｍｌ）を加え、ｐＨ１−２に調整して反応停止させた。水層を酢酸エチルで抽出し、有機層を飽和食塩水で洗浄した。有機層を無水硫酸マグネシウムで乾燥し、溶媒を減圧留去した。残渣に２０％酢酸エチル−ヘキサン混合溶媒を加えて結晶化し標題化合物を得た（１．５３ｇ）。
【００８１】
（１−２）別法として、以下の方法により標題化合物を合成した。
化合物１−１（２．２０ｇ）のテトラヒドロフラン（１００ｍｌ）溶液に、室温にてカリウム−ｔ−ブトキシド（２．４２ｇ）を加えた。同温度にて５分間撹拌した後、ｂｅｔａ−プロピオラクトン（２．７１ｍｌ）を加えた。発熱したため、氷浴に移し、同温度にて１時間撹拌した。さらに室温にて４時間撹拌した後に、１Ｎ塩酸を加えて酸性とし、反応停止させた。水層を酢酸エチルで抽出し、有機層を飽和食塩水で洗浄した。有機層を無水硫酸マグネシウムで乾燥し、溶媒を減圧留去した。残渣に２０％酢酸エチル−ヘキサン混合溶媒を加えて結晶化し標題化合物を得た（１．４４ｇ）。
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）（ｐｐｍ）：２．７３（ｔ，Ｊ＝６．０Ｈｚ，２Ｈ），４．２４（ｔ，Ｊ＝６．０Ｈｚ，２Ｈ），６．９０−７．００（ｍ，１Ｈ），７．０９−７．２４（ｍ，３Ｈ），１２．４１（ｂｒ．ｓ．，１Ｈ）．
【００８２】
（２）化合物１−３の合成
化合物１−２（４５０ｍｇ）にポリリン酸（７．０ｇ）を加え、１００度で３．５時間撹拌した。熱源を切り、７５度まで温度を下げたところで、激しく撹拌しながら、砕氷を反応混合物に少しずつ加えた。室温に戻ったところで、反応液を氷水に加えた。水層をジエチルエーテルで抽出し、有機層を重曹水、続いて飽和食塩水で洗浄した。有機層を無水硫酸マグネシウムで乾燥し、溶媒を減圧留去した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製し標題化合物を得た（２７３ｍｇ）。
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）（ｐｐｍ）：２．８９（ｔ，Ｊ＝６．４Ｈｚ，２Ｈ），４．６６（ｔ，Ｊ＝６．４Ｈｚ，２Ｈ），６．９８（ｔｄ，Ｊ＝４．４，８．０Ｈｚ，１Ｈ），７．２９−７．３４（ｍ，１Ｈ），７．７１（ｄｔ，Ｊ＝１．５，８．０Ｈｚ，１Ｈ）．
【００８３】
同様にして表１に記載の化合物を合成した。表１に構造式及び１Ｈ−ＮＭＲデータを示す。
【００８４】
【表１】
【００８５】
製造例２
２，３，５´，６´−テトラヒドロスピロ［クロメン−４，４´−［１，３］ チアジン］−２´−アミン（化合物１）の合成
【化９】
（１）４−ビニル−クロマン−４−オール（化合物２−２）の合成
ビニルマグネシウムクロライド（１．４８Ｍテトラヒドロフラン溶液；２９．７ｍｌ）に塩化亜鉛（４６１ｍｇ）を加え室温で１時間撹拌した。反応液を０度に冷却した後、化合物２−１（５．００ｇ）のテトラヒドロフラン（２０．０ｍｌ）溶液を滴下した。反応液を同温で５時間撹拌した。原料の消失を確認した後、反応混合物に塩化アンモニウム水溶液を加えた。水層を酢酸エチルで抽出し、有機層を飽和食塩水で洗浄した。有機層を無水硫酸マグネシウムで乾燥し、溶媒を減圧留去した。得られた粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製することで標題化合物を得た（５．３７ｇ）。
１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ（ｐｐｍ）：１．９９（ｄｄｄ，Ｊ＝２．４，４．８，１３．６Ｈｚ，１Ｈ），２．１２（ｍ，１Ｈ），４．２６（ｄｄｄ，Ｊ＝４．０，４．８，８．８Ｈｚ，１Ｈ），４．３５（ｄｔ，Ｊ＝２．８，１０．８Ｈｚ，１Ｈ），５．３１（ｄｄ，Ｊ＝１．６，１０．６Ｈｚ，１Ｈ），５．４７（ｄｄ，Ｊ＝１．６，１６．８Ｈｚ，１Ｈ），６．０１（ｄｄ，１０．６，１６．８Ｈｚ，１Ｈ），６．８５（ｄｄ，Ｊ＝１．２，８．４Ｈｚ，１Ｈ），６．９０（ｄｔ，Ｊ＝１．２，７．６Ｈｚ，１Ｈ），７．２０（ｄｄｄ，Ｊ＝１．６，７．６，８．４Ｈｚ，１Ｈ），７．２８（ｄｄ，Ｊ＝１．６，７．６Ｈｚ，１Ｈ）．
【００８６】
（２）２−［２−クロマン−（４Ｅ）−イリデンエチル］−イソチオウレア（化合物２−３）の合成
化合物２−２（５．３０ｇ）の酢酸（２８．０ｍｌ）溶液に、チオウレア（２．７５ｇ）を加えた。室温で４時間撹拌した後、不溶物を綿栓濾過で除き、濾液をエーテル（２００ｍｌ）に滴下した。０度に冷却し、４時間撹拌した。固体をさらに一晩静置した。グラスフィルターで生成した固体を除き、濾液の溶媒を減圧留去した。残渣の油状物質に酢酸エチルを加え、重曹水で中和した後、生じた白色固体をグラスフィルターで回収し、水で洗浄した。得られた固体を乾燥させることで標題化合物を得た（３．１０ｇ）。
１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ（ｐｐｍ）：２．７４（ｍ，２Ｈ），３．７４（ｍ，２Ｈ），４．１７（ｍ，２Ｈ），６．１８（ｍ，１Ｈ），６．８３（ｍ，１Ｈ），６．９０（ｍ，１Ｈ），７．１６（ｍ，１Ｈ），７．５９（ｍ，１Ｈ）．
【００８７】
（３）化合物１の合成
化合物２−３（１．００ｇ）のトリフルオロ酢酸（５．００ｍｌ）溶液に氷浴下、トリフルオロメタンスルホン酸（１．００ｍｌ）を滴下した。室温まで昇温し、２時間撹拌した。反応混合物を氷浴下、重曹水に滴下し、中和した。水層を酢酸エチルで抽出し、有機層を重曹水および飽和食塩水で洗浄した。有機層を無水硫酸マグネシウムで乾燥させ、溶媒を減圧留去した。残渣をＮＨ−シリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製し標題化合物を得た（３００ｍｇ）。
１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ（ｐｐｍ）：１．９２（ｄｄｄ，Ｊ＝３．０，４．８，１４．０Ｈｚ，１Ｈ），１．９５（ｄｄｄ，Ｊ＝４．０，６．６，１４．０Ｈｚ，１Ｈ），２．０７（ｄｄｄ，Ｊ＝４．２，９．６，１４．０Ｈｚ，１Ｈ），２．２３（ｄｄｄ，Ｊ＝４．２，１０．８，１４．０Ｈｚ，１Ｈ），３．０４（ｄｄｄ，Ｊ＝４．２，６．６，１２．８Ｈｚ，１Ｈ），３．１１（ｄｄｄ，Ｊ＝４．０，９．６，１２．８Ｈｚ，１Ｈ），４．２４（ｄｄｄ，Ｊ＝３．０，１０．８，１１．６Ｈｚ，１Ｈ），４．３３（ｄｄｄ，Ｊ＝４．２，４．８，１１．６Ｈｚ，１Ｈ），６．８１（ｄｄ，Ｊ＝１．４，８．１Ｈｚ，１Ｈ），６．８９（ｄｔ，Ｊ＝１．４，７．２Ｈｚ，１Ｈ），７．１２（ｄｄｄ，Ｊ＝１．６，７．２，８．１Ｈｚ，１Ｈ），７．１５（ｄｄ，Ｊ＝１．６，７．６Ｈｚ，１Ｈ）．
【００８８】
製造例３
Ｎ−（２´−アミノ（６−ニトロ−２，３，５´，６´−テトラヒドロスピロ［クロメン−４，４´−［１，３］チアジン］−６−イル）トリフルオロアセトアミド（化合物２）の合成
【化１０】
（１）２，２，２−トリフルオロ−Ｎ−（４−オキソクロマン−６−イル）アセタミド（化合物３−３）の合成
化合物３−１（１．０ｇ）をアセトン（５０ｍｌ）に溶解した。二塩化スズ−２水和物（３．６６ｇ）を加え、終夜加熱還流した。反応の完結を確認した後、反応混合物を室温まで冷却した。溶媒を減圧下留去した後、反応混合物に重曹水を加え、塩化メチレンにて抽出した。水槽を酢酸エチルにて再度抽出した。有機層を無水硫酸マグネシウムで乾燥し、溶媒を減圧留去した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製した。得られた生成物（４６４ｍｇ）を、塩化メチレン（１４ｍｌ）に溶解し、氷浴下においてトリエチルアミン（０．５７ｍｌ）と無水トリフルオロ酢酸（０．５７ｍｌ）を加え、同温度で２０分間撹拌した。トリエチルアミン（０．５９５ｍｌ）を加え、さらに氷浴下４０分間撹拌した。原料の消失を確認したら反応混合物に塩化アンモニウム水溶液を加え反応停止させた。水層を塩化メチレンで抽出した。水槽をさらに酢酸エチルで抽出し、併せた有機層を無水硫酸マグネシウムで乾燥した。溶媒を減圧留去時に生じた淡黄色固体を桐山ロートで回収し、粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製することで標題化合物を得た（６４４ｍｇ）。
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）（ｐｐｍ）：２．８２（ｔ，Ｊ＝６．５Ｈｚ，２Ｈ），４．５５（ｔ，Ｊ＝６．５Ｈｚ，２Ｈ），７．１１（ｄ，Ｊ＝９．０Ｈｚ，１Ｈ），７．７９（ｄｄ，Ｊ＝９．０，２．８Ｈｚ，１Ｈ），８．１０（ｄ，Ｊ＝２．８Ｈｚ，１Ｈ），１１．３０（ｓ，１Ｈ）．
【００８９】
（２）Ｎ−｛４−［２−カルバミミドイルスルファニル−エチ−（Ｅ）−リデン］−クロマン−６−イル｝２，２，２−トリフルオロアセトアミド（化合物３−５）の合成
化合物３−３（１５０ｍｇ）のテトラヒドロフラン（１０．０ｍｌ）を−７８度に冷却し、ビニルマグネシウムクロライド（１．６Ｍテトラヒドロフラン溶液；１．０９ｍｌ）を滴下した。同温で１時間撹拌後、室温にて５時間撹拌した。原料の消失を確認後、反応混合物に塩化アンモニウム水溶液を加え反応停止させた。水層を酢酸エチルで抽出し、有機層を飽和食塩水で洗浄した。有機層を無水硫酸マグネシウムで乾燥し、溶媒を減圧留去した。得られた粗生成物３−４（１７８ｍｇ）は精製することなく、次反応に用いた。
化合物３−４（１７８ｍｇ）の酢酸（２．０ｍｌ）溶液に、チオウレア（６６ｍｇ）を加えた。５０度で５時間撹拌した後、室温にて終夜撹拌した。溶媒を減圧留去した後に、残渣の油状物質に酢酸エチルを加え、重曹水で中和した。水層を酢酸エチルで抽出し、有機層を重曹水および飽和食塩水で洗浄した。有機層を無水硫酸マグネシウムで乾燥させ、溶媒を減圧留去した。残渣に酢酸エチルとジエチルエーテルを加え、生じた淡黄色固体を桐山ロートで回収し、酢酸エチルとジエチルエーテル混合溶媒にて洗浄した。得られた固体を乾燥させることで標題化合物を得た（２６ｍｇ）。
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）（ｐｐｍ）：２．７４（ｍ，２Ｈ），４．１１（ｄ，Ｊ＝７．７Ｈｚ，２Ｈ），４．１８（ｍ， ，２Ｈ），６．０７（ｔ，Ｊ＝７．７Ｈｚ，１Ｈ），６．８９（ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，１Ｈ），７．４５（ｄｄ，Ｊ＝２．４，８．８Ｈｚ，１Ｈ），７．９２（ｄ，Ｊ＝２．４Ｈｚ，１Ｈ）．
【００９０】
（３）化合物２の合成
化合物（３−５）（２５．０ｍｇ）のトリフルオロ酢酸（０．４５９ｍｌ）溶液に、氷浴下トリフルオロメタンスルホン酸（０．０４５９ｍｌ）を加えた。同温度にて１．５時間撹拌した後、室温にて１．５時間撹拌した。原料の消失を確認した後、反応混合物を、氷浴にて冷却した重曹水に加え中和した。水層を酢酸エチルで抽出し、有機層を飽和食塩水で洗浄した。有機層を無水硫酸ナトリウムで乾燥し、溶媒を減圧留去した。得られた粗生成物を塩化メチレン溶液から結晶化することで標題化合物を得た（６．６ｍｇ）。
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）（ｐｐｍ）：２．０７−２．１４（ｍ，１Ｈ），２．２６（ｄｄｄ，Ｊ＝３．９，７．９，１４．４Ｈｚ，１Ｈ），２．４２−２．５３（ｍ，２Ｈ），３．１４−３．２９（ｍ，２Ｈ），４．２３−４．３２（ｍ，１Ｈ），４．３４−４．４６（ｍ，１Ｈ），６．８７（ｄ，Ｊ＝８．９Ｈｚ，１Ｈ），７．３５（ｄ，Ｊ＝２．６Ｈｚ，１Ｈ），７．５３（ｄｄ，Ｊ＝８．９，２．６Ｈｚ，１Ｈ）．
【００９１】
製造例４
８−フルオロ−２，３，５´，６´−テトラヒドロスピロ［クロメン−４，４´−［１，３］チアジン］−２´−アミン（化合物３）の合成
【化１１】
（１）（８−フルオロクロマン−４−イリデン）酢酸エチル（化合物４−２）の合成
ドライアイス−アセトン浴にて−７８度に冷却した、ジシクロヘキシルアミン（５４５．７ｍｇ）のテトラヒドロフラン（１３．０ｍｌ）溶液に、Ｎ−ブチルリチウム−ヘキサン溶液（１．６Ｎ、１．８８ｍｌ）を加えた。同温度にて１０分間撹拌した後に、エチル（トリメチルシリル）アセテート（４８２．３ｍｇ）のテトラヒドロフラン（２．５ｍｌ）溶液を加えた。−７８度にて１０分間撹拌した後に、化合物４−１（２５０．０ｍｇ）のテトラヒドロフラン（２．５ｍｌ）溶液を加えた。−７８度にて１時間撹拌した後、室温に戻しさらに３時間撹拌した。原料の消失を確認した後、反応混合物を、飽和食塩水に加えた。水層を酢酸エチルで抽出、有機層を無水硫酸ナトリウムで乾燥し、溶媒を減圧留去した。得られた粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製することで標題化合物を得た（１６２ｍｇ）。
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）（ｐｐｍ）：１．２９（ｔ，Ｊ＝７．１Ｈｚ，３Ｈ），２．６７（ｔｄ，Ｊ＝１．３，５．９Ｈｚ，２Ｈ），４．２２（ｑ，Ｊ＝７．１Ｈｚ，２Ｈ），４．４４−４．４９（ｍ，２Ｈ），５．７６（ｓ，１Ｈ），６．７８（ｔｄ，Ｊ＝５．１，８．１Ｈｚ，１Ｈ），７．０６（ｄｄｄ，Ｊ＝１．５，８．１，１０．９Ｈｚ，１Ｈ），７．５７（ｄｔ，Ｊ＝１．５，８．１Ｈｚ，１Ｈ）．
【００９２】
（２）（８−フルオロクロマン−４−イリデン）エタノール（化合物４−３）の合成
窒素雰囲気下、氷浴にて冷却した水素化リチウムアルミニウム（５２．１ｍｇ）のジエチルエーテル（８．０ｍｌ）溶液に、化合物４−２（１６２ｍｇ）のジエチルエーテル（４．０ｍｌ）溶液を２分間かけて滴下した。同温度にて２時間撹拌した後、反応混合物に酢酸エチルをゆっくりと滴下した。次に、水を加え１時間撹拌した。水層を酢酸エチルで抽出し、有機層を重曹水、続いて飽和食塩水で洗浄した。有機層を無水硫酸マグネシウムで乾燥し、溶媒を減圧留去した。得られた粗生成物は精製することなく、次反応に用いた。
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）（ｐｐｍ）：２．６１−２．６５（ｍ，２Ｈ），４．４３（ｂｒｔ，Ｊ＝５．２Ｈｚ，２Ｈ），４．５２（ｄ，Ｊ＝６．４Ｈｚ，２Ｈ），５．６５（ｔ，Ｊ＝６．４Ｈｚ，１Ｈ），６．７８−６．８５（ｍ，１Ｈ），６．９４（ｂｒｄ，Ｊ＝７．６Ｈｚ，１Ｈ），７．０２（ｂｒｔ，Ｊ＝９．５Ｈｚ，１Ｈ）．
【００９３】
（３）化合物３の合成
化合物４−３（１９．６ｍｇ）の４８％臭化水素（２．０ｍｌ）溶液に、室温にてチオウレア（７．７ｍｇ）を加え、５０度にて２時間撹拌した。原料の消失を確認した後、反応混合物を、氷浴にて冷却した重曹水に加え中和した。水層を酢酸エチルで抽出し、有機層を飽和食塩水で洗浄した。有機層を無水硫酸ナトリウムで乾燥し、溶媒を減圧留去した。得られた残渣をトリフルオロ酢酸（０．４９ｍｌ）に溶解した後に、氷浴下トリフルオロメタンスルホン酸（０．１ｍｌ）を加えた。同温度にて１．５時間撹拌した後、室温にて１．５時間撹拌した。原料の消失を確認した後、反応混合物を、氷浴にて冷却した重曹水に加え中和した。水層を酢酸エチルで抽出し、有機層を飽和食塩水で洗浄した。有機層を無水硫酸ナトリウムで乾燥し、溶媒を減圧留去した。残渣をＮＨ−シリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製し標題化合物を得た（５８．５ｍｇ）。
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）（ｐｐｍ）：１．９３−２．０１（ｍ，２Ｈ），２．０５−２．１４（ｍ，１Ｈ），２．２８（ｄｄｄ，Ｊ＝４．２，１０．５，１４．２Ｈｚ，１Ｈ），３．０２−３．０９（ｍ，１Ｈ），３．０９−３．１７（ｍ，１Ｈ），４．３２（ｔｄ，Ｊ＝２．９，１１．０Ｈｚ，１Ｈ），４．４５（ｔｄ，Ｊ＝４．５，１１．０Ｈｚ，１Ｈ），６．７９−６．８６（ｍ，１Ｈ），６．９２−６．９９（ｍ，２Ｈ）．
【００９４】
製造例５
Ｎ−｛４−［７−フルオロクロマン−（４Ｅ）−イリデン］エチル｝イソチオウレア（化合物５−３）の合成
【化１２】
（１）４−クロロ−７−フルオロ−４−ビニルクロマン（化合物５−２）の合成
氷浴にて冷却された、実施例４に準じて７−フルオロクロマン−４−オンから合成した化合物５−１（２００ｍｇ）のテトラヒドロフラン（３．０ｍｌ）溶液に、トリエチルアミン（０．１９ｍｌ）を加えた。同温度にて、メタンスルホニルクロリド（１７７ｍｇ）のテトラヒドロフラン（２．０ｍｌ）溶液を滴下し、１．５時間撹拌した。原料の消失を確認したら反応混合物を重曹水に加え反応停止させた。水層を酢酸エチルで抽出した。水槽をさらに酢酸エチルで抽出し、併せた有機層を無水硫酸マグネシウムで乾燥した。溶媒を減圧留去して得られた標題化合物（２１４ｍｇ）は粗生成物のまま、次反応に用いた。
【００９５】
（２）２−｛２−［７−フルオロクロマン−（４Ｅ）−イリデン］エチル｝−イソチオウレア（化合物５−３）の合成
（２−１）化合物５−２（２１４ｍｇ）をエタノール（６．０ｍｌ）に溶解した。チオウレア（１５３ｍｇ）を加えて、１０時間加熱還流した。原料の消失を確認したら、溶媒を減圧留去した。残渣をＬＣＭＳで精製し、標題化合物を得た（３３ｍｇ）。
１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）（ｐｐｍ）：２．７４（ｍ，２Ｈ），４．０５（ｄ，Ｊ＝７．９Ｈｚ，２Ｈ），４．２０（ｔ，Ｊ＝５．８Ｈｚ，２Ｈ），６．１３（ｔ，Ｊ＝７．９Ｈｚ，１Ｈ），６．７２（ｄｄ，Ｊ＝２．７，１０．３Ｈｚ，１Ｈ），６．７８（ｄｄｄ，Ｊ＝２．７，８．６，９．０Ｈｚ，１Ｈ），７．６７（ｄｄ，Ｊ＝６．７，８．９Ｈｚ，１Ｈ）．
【００９６】
（２−２）別法として、化合物５−３は以下に示す方法でも合成することができる。
【化１３】
（３）２−（７−フルオロクロマン−４−イリデン）エチル−２，２，２−トリフルオロアセテート（化合物５−４）の合成
氷浴にて冷却された、化合物５−１（１．０ｇ）のテトラヒドロフラン（２０ｍｌ）溶液に、トリエチルアミン（１．１５ｍｌ）を加えた。無水トリフルオロ酢酸（１．６２ｇ）のテトラヒドロフラン（２．５ｍｌ）溶液を滴下し、同温度にて１時間撹拌した。原料の消失を確認したら反応混合物を重曹水に加え反応停止させた。水層を酢酸エチルで抽出した。水槽をさらに酢酸エチルで抽出し、併せた有機層を無水硫酸マグネシウムで乾燥した。溶媒を減圧留去して得られた標題化合物（１．４２ｇ）は精製せずに次反応に用いた。
１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）（ｐｐｍ）：２．６４（ｍ，２Ｈ），４．３６（ｍ，２Ｈ），５．１５（ｄ，Ｊ＝７．１Ｈｚ，２Ｈ），５．５５（ｔ，Ｊ＝７．１Ｈｚ，１Ｈ），５．６０（ｄｄ，Ｊ＝２，７，１０．１Ｈｚ，１Ｈ），６．６６（ｄｄｄ，Ｊ＝２．６，８．３，８．７Ｈｚ，１Ｈ），７．０８（ｄｄ，Ｊ＝６．４，８．７Ｈｚ，１Ｈ）．
【００９７】
（４）化合物５−３の合成
化合物５−４（１．４１ｇ）をエタノール（２０ｍｌ）に溶解した。チオウレア（０．９２ｇ）を加えて、１時間加熱還流した。原料の消失を確認したら、溶媒を減圧留去した。残渣をＬＣＭＳで精製し、化合物５−３を化合物５−５との混合物（９：１）として得た（０．９６ｇ）。
１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）（ｐｐｍ）：２．７４（ｍ，２Ｈ），４．０５（ｄ，Ｊ＝７．９Ｈｚ，２Ｈ），４．２０（ｔ，Ｊ＝５．８Ｈｚ，２Ｈ），６．１３（ｔ，Ｊ＝７．９Ｈｚ，１Ｈ），６．７２（ｄｄ，Ｊ＝２．７，１０．３Ｈｚ，１Ｈ），６．７８（ｄｄｄ，Ｊ＝２．７，８．６，９．０Ｈｚ，１Ｈ），７．６７（ｄｄ，Ｊ＝６．７，８．９Ｈｚ，１Ｈ）．
【００９８】
製造例２から４に記載の方法と同様にして表２に記載の化合物を合成した。表２に構造式及び１Ｈ−ＮＭＲデータを示す。
【００９９】
【表２】
【０１００】
実施例１
（±）−Ｎ−［２´−アミノ−２，３，５´，６´−テトラヒドロスピロ［クロメン−４，４´−［１，３］チアジン］−６−イル］−５−クロロピリジン−２−カルボキサミド（化合物８）の合成
【化１４】
（１−１）６−ニトロ−２，３，５´，６´−テトラヒドロスピロ［クロメン−４，４´−［１，３］チアジン］−２´−アミン（化合物６−２）
化合物１（２８０ｍｇ）の無水酢酸（１０．０ｍｌ）溶液に氷浴下、発煙硝酸（比重１．５３、４９．５μｌ）を滴下した。反応液を同温で１時間撹拌した後、室温まで昇温し３時間撹拌した。反応液に無水酢酸（１０．０ｍｌ）を追加した後、発煙硝酸（比重１．５３、４００μｌ）を加えた。反応の完結を確認した後、反応液をエーテルで希釈し重曹水を加えて１時間撹拌した。水層を酢酸エチルで抽出し、有機層を重曹水および飽和食塩水で洗浄した。有機層を無水硫酸マグネシウムで乾燥させ、溶媒を減圧留去した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製し化合物６−１を８−ニトロ体との混合物として得た（３６０ｍｇ）。
得られたニトロ体の混合物（３３０ｍｇ）にエタノール（１０．０ｍｌ）および濃硫酸（３３０μｌ）を加え、８時間加熱還流した。反応の完結を確認した後、反応混合物を室温まで冷却した。反応混合物に重曹水を加えて中和し、酢酸エチルで抽出した。有機層を無水硫酸マグネシウムで乾燥し、溶媒を減圧留去した。残渣をＮＨ−シリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製し、標題化合物を得た（８２．０ｍｇ）。
１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ（ｐｐｍ）：２．０２（ｍ，３Ｈ），２．２２（ｍ，１Ｈ），３．０５（ｍ，１Ｈ），３．１５（ｍ，１Ｈ），４．３２（ｍ，１Ｈ），４．４５（ｍ，１Ｈ），６．８９（ｄ，Ｊ＝９．０Ｈｚ，１Ｈ），８．０３（ｄ，Ｊ＝９．０Ｈｚ，１Ｈ），８．１３（ｓ，１Ｈ）．
【０１０１】
（１−２）別法として、化合物６−１は以下の方法によっても合成することができる。
化合物１（１．１ｇ）のピリジン（６ｍｌ）溶液に、室温で無水酢酸（０．８８６ｍｌ）を加え、混合物を室温で１２時間攪拌した。反応液を氷−重曹水に注ぎ、酢酸エチルで抽出した。抽出液を無水硫酸マグネシウムで乾燥させた。乾燥剤を濾去し、ろ液を減圧下濃縮した。得られた粗生成物をＮＨ−シリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製し化合物１のＮ−アセチル体（N−（２，３，５´，６´−テトラヒドロスピロ［クロメン−４，４´−［１，３］チアジン］−２´−イル）アセトアミド）（１．１ｇ）を得た。
上記のように得られるＮ−アセチル体（１．３ｇ）の酢酸（０．２ｍｌ）溶液に室温で、硝酸（比重１．４２、１．０ｍｌ）を加えた。混合物を５０℃で３０分攪拌した。この溶液に５０℃で硝酸（３．０ｍｌ）を加え、混合物を５０℃で３０分攪拌した。さらに５０℃で硝酸（２．０ｍｌ）を加え、５０℃で３０分攪拌した。反応液を氷−重曹水にゆっくり加え、酢酸エチルで抽出した。抽出液を無水硫酸マグネシウムで乾燥させた。乾燥剤を濾去し、ろ液を減圧下濃縮した。粗生成物をＮＨ−シリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製し、化合物６−１（０．９３ｇ）を８−ニトロ体との混合物として得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ：２．００−２．４０（ｍ，４Ｈ），２．０３（ｓ，３Ｈ，８−異性体），２．０６（ｓ，３Ｈ，６−異性体），２．９５−３．１０（ｍ，２Ｈ），４．１３−４．６０（ｍ，２Ｈ），６．９０−６．９５（ｍ，１Ｈ，６−異性体），６．９９（ｔ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，１Ｈ，８−異性体），７．３６（ｄｄ，Ｊ＝１．６，８．０Ｈｚ，１Ｈ，８−異性体），７．７４（ｄｄ，Ｊ＝１．６，８．０Ｈｚ，１Ｈ，８−異性体），８．０３−８．１０（ｍ，２Ｈ，６−異性体）．
【０１０２】
（２）（６−ニトロ−２，３，５´，６´−テトラヒドロスピロ［クロメン−４，４´−［１，３］チアジン］−２´−イル）カルバミン酸ｔ−ブチルエステル（化合物６−３）
化合物６−２（８２．０ｍｇ）をテトラヒドロフラン（５．００ｍｌ）に溶解し、トリエチルアミン（６３１μｌ）を加えた。次いで反応液に二炭酸ジ−ｔ−ブチル（１９２ｍｇ）を加え、室温で４日間撹拌した。反応の完結を確認したら反応液を減圧留去し、残渣をＮＨ−シリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製することで標題化合物を得た（１１０ｍｇ）。
１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ（ｐｐｍ）：１．４８（ｓ，９Ｈ），２．００−２．３０（ｍ，４Ｈ），３．０２（ｍ，１Ｈ），３．１４（ｍ，１Ｈ），４．３９（ｍ，２Ｈ），６．９３（ｄ，Ｊ＝９．２Ｈｚ，１Ｈ），８．０８（ｄｄ，Ｊ＝２．８，９．２Ｈｚ，１Ｈ），８．１４（ｍ，１Ｈ）．
【０１０３】
（３−１）（±）−（６−アミノ−２，３，５´，６´−テトラヒドロスピロ［クロメン−４，４´−［１，３］チアジン］−２´−イル）カルバミン酸ｔ−ブチルエステル（化合物６−４）
化合物６−３（１１０ｍｇ）をエタノール（２０．０ｍｌ）に溶解し、亜二チオン酸ナトリウム（２５３ｍｇ）の水溶液を室温で滴下した。反応液に、更に亜二チオン酸ナトリウム（２５３ｍｇ）の水溶液を加えて室温で撹拌した。さらにＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（２０．０ｍｌ）を加えた。反応の完結を確認した後、余剰のエタノールを減圧留去した。残渣に水を加え、水層を酢酸エチルで抽出した。有機層を水および飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥させた。溶媒を減圧留去し、残渣をＮＨ−シリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製することで標題化合物を得た（１０．０ｍｇ）。
１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ（ｐｐｍ）：１．４６（ｓ，９Ｈ），２．０５（ｍ，１Ｈ），２．１５（ｄｄｄ，Ｊ＝４．０，６．４，１４．０Ｈｚ，１Ｈ），２．２６（ｍ，１Ｈ），２．３８（ｄｄｄ，Ｊ＝４．０，１０．０，１４．０Ｈｚ，１Ｈ）、３．１０（ｍ，２Ｈ），４．２０（ｍ，２Ｈ），６．５９（ｍ，２Ｈ），６．６８（ｍ，１Ｈ）．
【０１０４】
（３−２）別法として、化合物６−４は以下の方法によっても合成できる。
化合物６−３（５１０ｍｇ）のエタノール（１８ｍｌ）−塩化アンモニウム水溶液（１．８ｍｌ）に、鉄（１．０５ｇ）を加え、８７℃で０．５時間加熱攪拌した。反応液を室温に戻し、反応液を酢酸エチルに注ぎ、不溶物をろ去した。濾液を減圧下濃縮した。残渣に水を加え、酢酸エチルで抽出した。抽出液を飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥した。乾燥剤を濾去し、ろ液を減圧下濃縮し、標記化合物（０．４０ｇ）を得た。。
１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ（ｐｐｍ）：１．４６（ｓ，９Ｈ），２．０５（ｍ，１Ｈ），２．１５（ｄｄｄ，Ｊ＝４．０，６．４，１４．０Ｈｚ，１Ｈ），２．２６（ｍ，１Ｈ），２．３８（ｄｄｄ，Ｊ＝４．０，１０．０，１４．０Ｈｚ，１Ｈ）、３．１０（ｍ，２Ｈ），４．２０（ｍ，２Ｈ），６．５９（ｍ，２Ｈ），６．６８（ｍ，１Ｈ）．
【０１０５】
（４）化合物８の合成
５−クロロピリジン−２−カルボン酸（５．８６ｍｇ）にトルエン（３．００ｍｌ）を加えて懸濁させた。Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミドを一滴加えた後、塩化チオニル（１．００ｍｌ）を加えた。反応混合物を１２０℃まで加温し、同温で１時間撹拌した。室温まで冷却した後、溶媒を減圧留去することで５−クロロピリジン−２−カルボン酸クロライドを得た。得られた酸クロライドをテトラヒドロフラン（１．００ｍｌ）に懸濁させ、化合物６−４（１０．０ｍｇ）のテトラヒドロフラン（２．００ｍｌ）溶液に、氷浴下滴下した。同温でピリジン（１１．３μｌ）を滴下した後、室温まで昇温し３０分間撹拌した。反応の完結を確認した後、重曹水を加えて反応を停止させた。水層を酢酸エチルで抽出し、有機層を飽和食塩水で洗浄した。有機層を無水硫酸マグネシウムで乾燥させ、溶媒を減圧留去した。得られた残渣をジクロロメタン（２．００ｍｌ）に溶解し、トリフルオロ酢酸（０．４０ｍｌ）を加えて室温で３時間撹拌した。反応の完結を確認した後、ジエチルエーテルで希釈し、重曹水を加えて反応を停止させた。水層を酢酸エチルで抽出し、有機層を無水硫酸マグネシウムで乾燥させた。溶媒を減圧留去し、残渣をＮＨ−シリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製することで標題化合物を得た（７．８ｍｇ）。
１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ（ｐｐｍ）：１．９５（ｄｄｄ，Ｊ＝２．８，５．２，１４．０Ｈｚ，１Ｈ），２．０２（ｄｄｄ，Ｊ＝４．４，６．２，１４．０Ｈｚ，１Ｈ），２．１１（ｄｄｄ，Ｊ＝４．４，９．６，１４．０Ｈｚ，１Ｈ），２．２４（ｄｄｄ，Ｊ＝４．０，１０．０，１４．０Ｈｚ，１Ｈ），３．０８−３．２０（ｍ，２Ｈ），４．２４（ｄｔ，Ｊ＝２．８，１１．２Ｈｚ，１Ｈ），４．３４（ｄｔ，Ｊ＝４．８，１０．８Ｈｚ，１Ｈ），６．８５（ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，１Ｈ），７．５０（ｄ，Ｊ＝２．４Ｈｚ，１Ｈ），７．５７（ｄｄ，Ｊ＝２．４，８．８Ｈｚ，１Ｈ），７．８６（ｄｄ，Ｊ＝２．０，８．４Ｈｚ，１Ｈ），８．２４（ｄｄ，Ｊ＝０．８，８．４Ｈｚ，１Ｈ），８．５５（ｄｄ，Ｊ＝０．８，２．０Ｈｚ，１Ｈ），９．７０（ｓ，１Ｈ）．
【０１０６】
実施例２
（−）−Ｎ−［２´−アミノ−２，３，５´，６´−テトラヒドロスピロ［クロメン−４，４´−［１，３］チアジン］−６−イル］−５−クロロピリジン−２−カルボキサミド （化合物９）の合成
【化１５】
化合物８（６ｍｇ）をダイセル製ＣＨＩＲＡＬＰＡＫＴＭ ＯＤ−Ｈ（２ｃｍ×２５ｃｍ，移動相；ヘキサン：エタノール＝８：２，流速：２０ｍｌ／分）で分取した。保持時間２２．５分から２５．０分の成分を回収した後、ＮＨ−シリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製することで標題化合物を得た（２．０ｍｇ；＞９９％ｅｅ）。
ＥＳＩ−ＭＳ；ｍ／ｚ３８９［Ｍ＋ ＋Ｈ］．１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ（ｐｐｍ）：１．９５（ｄｄｄ，Ｊ＝２．８，５．２，１４．０Ｈｚ，１Ｈ），２．０２（ｄｄｄ，Ｊ＝４．４，６．２，１４．０Ｈｚ，１Ｈ），２．１１（ｄｄｄ，Ｊ＝４．４，９．６，１４．０Ｈｚ，１Ｈ），２．２４（ｄｄｄ，Ｊ＝４．０，１０．０，１４．０Ｈｚ，１Ｈ），３．０８−３．２０（ｍ，２Ｈ），４．２４（ｄｔ，Ｊ＝２．８，１１．２Ｈｚ，１Ｈ），４．３４（ｄｔ，Ｊ＝４．８，１０．８Ｈｚ，１Ｈ），６．８５（ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，１Ｈ），７．５０（ｄ，Ｊ＝２．４Ｈｚ，１Ｈ），７．５７（ｄｄ，Ｊ＝２．４，８．８Ｈｚ，１Ｈ），７．８６（ｄｄ，Ｊ＝２．０，８．４Ｈｚ，１Ｈ），８．２４（ｄｄ，Ｊ＝０．８，８．４Ｈｚ，１Ｈ），８．５５（ｄｄ，Ｊ＝０．８，２．０Ｈｚ，１Ｈ），９．７０（ｓ，１Ｈ）．
【０１０７】
実施例３
（−）−（６−アミノ−２，３，５´，６´−テトラヒドロスピロ［クロメン−４，４´−［１，３］チアジン］−２´−イル）カルバミン酸ｔ−ブチル（化合物１０）の合成
【化１６】
実施例１の（３）で得られた化合物６−４（０．５７ｇ）をダイセル製ＣＨＩＲＡＬＰＡＫＴＭ ＯＪ−Ｈ（２ｃｍ×２５ｃｍ，移動相；ヘキサン：エタノール＝６：４，流速：１０ｍｌ／分）で分取した。保持時間２８−３４分の成分を集め、標題化合物（０．２２ｇ，９７％ｅｅ）を得た。
【０１０８】
実施例４
（−）−Ｎ−（２´−アミノ−２，３，５´，６´−テトラヒドロスピロ［クロメン−４，４´−［１，３］チアジン］−６−イル）−５−シアノピリジン−２−カルボキサミド（化合物１１）の合成
【化１７】
（１）メチル ５−シアノピリジン−２−カルボキシラート（化合物９−２）の合成
化合物９−１（２．８ｇ）とシアン化銅（３．６ｇ）のＮＭＰ（３０ｍｌ）混合液を１７０度で１．５時間加熱攪拌した。反応液に室温で、水を加え、不溶物を濾過で除いた。濾液を酢酸エチルで抽出した。抽出液を飽和食塩水で洗浄後、無水硫酸マグネシウムで乾燥した。乾燥剤を濾去し、ろ液を減圧下濃縮した。得られた粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製し標題化合物（９２０ｍｇ）を得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ（ｐｐｍ）：４．０６（ｓ，３Ｈ），８．１６（ｄｄ，Ｊ＝２．０，８．０Ｈｚ，１Ｈ），８．２７（ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，１Ｈ），９．０１（ｄ，Ｊ＝２．０Ｈｚ，１Ｈ）．
【０１０９】
（２）５−シアノピリジン−２−カルボン酸（化合物９−３）の合成
化合物９−２（９２０ｍｇ）と５Ｎ水酸化ナトリウム水溶液（２．２６ｍｌ）のエタノール（３０ｍｌ）溶液を室温で１０分間攪拌した。反応液に室温で、５Ｎ塩酸（５．２ｍｌ）を加え、酢酸エチルで抽出した。抽出液を無水硫酸マグネシウムで乾燥した。乾燥剤を濾去し、ろ液を減圧下濃縮し標題化合物（８００ｍｇ）を得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯｄ６）δ（ｐｐｍ）：８．１８（ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，１Ｈ），８．５１（ｄｄ，Ｊ＝２．０，８．０Ｈｚ，１Ｈ），９．１２−９．１８（ｍ，１Ｈ）．
【０１１０】
（３）｛６−［（５−シアノピリジン−２−カルボニル）アミノ］−２，３，５´，６´−テトラヒドロスピロ［クロメン−４，４´−［１，３］チアジン］−２´−イル｝カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル（化合物９−４）の合成
実施例３で得た化合物１０（２５．０ｍｇ）、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（０．０６２４ｍｌ）、５−シアノピリジン−２−カルボン酸（化合物９−３）（１６．９ｍｇ）のジクロロメタン（５．０ｍｌ）溶液に、ＰｙＢＯＰ（７４．５ｍｇ）を室温で加えた。混合物を室温で１時間攪拌した。反応液を重曹水に注ぎ、酢酸エチルで抽出した。抽出液を飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥した。乾燥剤を濾去し、ろ液を減圧下濃縮した。粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製し、標題化合物（３５ｍｇ）を得た。
ＥＳＩ−ＭＳ；ｍ／ｚ４８０［Ｍ＋＋Ｈ］．
【０１１１】
（４）化合物１１の合成
化合物９−４（３５ｍｇ）のジクロロメタン（３．０ｍｌ）溶液に、トリフルオロ酢酸（１．０ｍｌ）を加え、反応液を室温で１．５時間撹拌した。反応液を重曹水に注ぎ、酢酸エチルで抽出した。抽出液を飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥した。乾燥剤を濾去し、ろ液を減圧下濃縮した。粗生成物をＮＨ−シリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製し、標題化合物（２６．１ｍｇ）を得た。
ＥＳＩ−ＭＳ；ｍ／ｚ３８０［Ｍ＋＋Ｈ］．
１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ（ｐｐｍ）：１．９０−２．１５（ｍ，３Ｈ），２．２４（ｄｄｄ，Ｊ＝４．０，１０．４，１４．０Ｈｚ，１Ｈ），３．０５−３．２（ｍ，２Ｈ），４．２５（ｄｔ，Ｊ＝３．２，１０．８Ｈｚ，１Ｈ），４．３５（ｄｔ，Ｊ＝４．８，１０．８Ｈｚ，１Ｈ），６．８６（ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，１Ｈ），７．５０（ｄ，Ｊ＝２．８Ｈｚ，１Ｈ），７．５８（ｄｄ，Ｊ＝２．８，８．８Ｈｚ，１Ｈ），８．１９（ｄｄ，Ｊ＝２．０，８．０Ｈｚ，１Ｈ），８．４２（ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，１Ｈ），８．８８（ｄ，Ｊ＝２．０Ｈｚ，１Ｈ），９．７４（ｓ，１Ｈ）．
【０１１２】
実施例５
Ｎ−（２´−アミノ−２，３，５´，６´−テトラヒドロスピロ［クロメン−４，４´−［１，３］チアジン］−６−イル）−５−トリフルロメチルピリジン−２−カルボキサミド（化合物１２）の合成
【化１８】
（１）｛６−［（５−トリフルオロメチルピリジン−２−カルボニル）アミノ］−２，３，５´，６´−テトラヒドロスピロ［クロメン−４，４´−［１，３］チアジン］−２´−イル｝カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチル（化合物１０−１）の合成
化合物１０（２０．０ｍｇ）、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（０．０４９９ｍｌ）、５−トリフルオロメチルピリジン−２−カルボン酸（１３．５ｍｇ）のジクロロメタン（３．０ｍｌ）溶液に、ＰｙＢＯＰ（５９．６ｍｇ）を室温で加えた。混合物を室温で１時間攪拌した。反応液を重曹水に注ぎ、酢酸エチルで抽出した。抽出液を飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥した。乾燥剤を濾去し、ろ液を減圧下濃縮した。粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製し、標題化合物（３０ｍｇ）を得た。
ＥＳＩ−ＭＳ；ｍ／ｚ５２３［Ｍ＋＋Ｈ］．
【０１１３】
（２）化合物１２の合成
化合物１０−１（３０ｍｇ）のジクロロメタン（３．０ｍｌ）溶液に、トリフルオロ酢酸（０．８５７ｍｌ）を加え、反応液を室温で１．５時間撹拌した。反応液を重曹水に注ぎ、酢酸エチルで抽出した。抽出液を飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥した。乾燥剤を濾去し、ろ液を減圧下濃縮した。粗生成物をＮＨ−シリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製し、標題化合物（１３．０ｍｇ）を得た。
ＥＳＩ−ＭＳ；ｍ／ｚ４２３［Ｍ＋＋Ｈ］．
１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ（ｐｐｍ）：１．９０−２．１６（ｍ，３Ｈ），２．２４（ｄｄｄ，Ｊ＝４．４，１０．４，１４．０Ｈｚ，１Ｈ），３．０６−３．２２（ｍ，２Ｈ），４．２５（ｄｔ，Ｊ＝２．８，１１．２Ｈｚ，１Ｈ），４．３５（ｄｔ，Ｊ＝４．８，１１．２Ｈｚ，１Ｈ），６．８６（ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，１Ｈ），７．５３（ｄ，Ｊ＝２．４Ｈｚ，１Ｈ），７．５８（ｄｄ，Ｊ＝２．４，８．８Ｈｚ，１Ｈ），８．１５（ｄｄ，Ｊ＝１．６，８．０Ｈｚ，１Ｈ），８．４２（ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，１Ｈ），８．８７（ｓ，１Ｈ），９．８０（ｓ，１Ｈ）．
【０１１４】
実施例５と同様にして表３に記載の化合物を合成した。表３に構造式及び１Ｈ−ＮＭＲデータを示す。
【０１１５】
【表３】
【０１１６】
実施例６
６−（５−メトキシピリジン−３−イル）−２，３，５´，６´−テトラヒドロスピロ［クロメン−４，４´−［1，3］チアジン］−２´−アミン（化合物２１）の合成
【化１９】
（１）６−ブロモ−２，３，５´，６´−テトラヒドロスピロ［クロメン−４，４´−［１，３］チアジン］−２´−アミン（化合物２０）の合成
化合物１（５６０ｍｇ）の酢酸（１２．０ｍｌ）溶液に、室温にて臭素（３８２ｍｇ）を加えて３０分間撹拌した。原料の消失を確認した後、反応混合物を氷浴にて冷却した１０％水酸化ナトリウム水溶液に加え中和した。水層を酢酸エチルで抽出し、有機層を飽和食塩水で洗浄した。有機層を無水硫酸マグネシウムで乾燥し、溶媒を減圧留去した。得られた粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製することで標題化合物を得た（５８０ｍｇ）。
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）（ｐｐｍ）：１．９３（ｄｄｄ，Ｊ＝３．０，５．０，１４．１Ｈｚ，１Ｈ），２．００−２．０５（ｍ，２Ｈ），２．２２（ｄｄｄ，Ｊ＝４．１，１０．３，１４．１Ｈｚ，１Ｈ），３．０２−３．０９（ｍ，１Ｈ），３．１０−３．１８（ｍ，１Ｈ），４．１８−４．２５（ｍ，１Ｈ），４．３３（ｄｄｄ，Ｊ＝４．４，４．７，１１．３Ｈｚ，１Ｈ），６．７０（ｄ，Ｊ＝８．６Ｈｚ，１Ｈ），７．２０−７．２４（ｍ，１Ｈ），７．２５（ｄ，Ｊ＝２．４Ｈｚ，１Ｈ）．
【０１１７】
（２）ジ−ｔｅｒｔ−ブチル（６−ブロモ−２，３，５´，６´−テトラヒドロスピロ［クロメン−４，４−［1，3］チアジン］−２´−イル）イミダゾジカルボネート（化合物１１−１）、およびｔｅｒｔ−ブチル（６−ブロモ−２，３，５´，６´−テトラヒドロスピロ［クロメン−４，４−［1，3］チアジン］−２´−イル）カルボネート（化合物１１−２）の合成
化合物２０（１３９mg) を塩化メチレン（１５ｍｌ）に溶解し、二炭酸ジ−ｔ−ブチル（３８７ｍｇ）を加えた。次いでＮ，Ｎ−ジメチルアミノピリジン（２１７ｍｇ）を加え、室温で３．５時間間撹拌した。原料の消失を確認した後、反応混合物を飽和塩化アンモニウム水溶液に加えた。水層を塩化メチレンで抽出し、有機層を無水硫酸マグネシウムで乾燥した。溶媒を減圧留去し、残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製することで化合物１１−１と１１−２を得た［（１１−１）１４４ｍｇ、（１１−２）５２．３ｍｇ］。
化合物１１−１の１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＭＥＴＨＡＮＯＬ−ｄ４）（ｐｐｍ）：１．５９（ｓ，１８Ｈ），１．８７−１．９８（ｍ，２Ｈ），２．０６−２．１７（ｍ，２Ｈ），２．３７（ｔｄ，Ｊ＝４．０，１４．６Ｈｚ，１Ｈ），３．２１（ｔｄ，Ｊ＝４．２，１２．９Ｈｚ，１Ｈ），３．４５（ｄｔ，Ｊ＝３．６，１２．９Ｈｚ，１Ｈ），４．２８−４．３７（ｍ，１Ｈ），６．８０（ｄ，Ｊ＝８．７Ｈｚ，１Ｈ），７．２８（ｄ，Ｊ＝２．４Ｈｚ，１Ｈ），７．２６（ｄｄ，Ｊ＝２．４，８．７Ｈｚ，１Ｈ）．
化合物１１−２の１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＭＥＴＨＡＮＯＬ−ｄ４）（ｐｐｍ）：１．６０（ｓ，９Ｈ），２．０３−２．１２（ｍ，１Ｈ），２．１８−２．２９（ｍ，１Ｈ），３．１６−３．２３（ｍ，１Ｈ），３．３６−３．４３（ｍ，１Ｈ），４．３１−４．３７（ｍ，２Ｈ），６．８０（ｄ，Ｊ＝８．７Ｈｚ，１Ｈ），７．２６（ｄ，Ｊ＝２．４Ｈｚ，１Ｈ），７．３２（ｄｄ，Ｊ＝２．４，８．７Ｈｚ，１Ｈ）．
【０１１８】
（３）化合物２１の合成
化合物１１−１（２５ｍｇ）のＮ，Ｎ−ジメチルホルムアルデヒド（２ｍｌ）溶液に、３−メトキシ−５−（４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラン−２−イル）ピリジン（１４．９ｍｇ）を加えた。続いて１Ｍ重曹水溶液（０．１２ｍｌ）と、パラジウム−トリフェニルホスフィン（２．８ｍｇ）を加え、窒素雰囲気下、１００度で１２時間撹拌した。原料の消失を確認した後、反応混合物に水を加えた。水層を酢酸エチルで抽出し、有機層を飽和食塩水で洗浄した。有機層を無水硫酸マグネシウムで乾燥し、溶媒を減圧留去した。得られた粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製することで標題化合物を得た（８．６ｍｇ）。
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）（ｐｐｍ）：２．１１−２．２６（ｍ，２Ｈ），２．３７−２．５３（ｍ，２Ｈ），３．１３−３．２９（ｍ，２Ｈ），３．９２（ｓ，３Ｈ），４．２７−４．３６（ｍ，１Ｈ），４．４０−４．４７（ｍ，１Ｈ），６．９３−６．９８（ｍ，１Ｈ），７．３６−７．４４（ｍ，３Ｈ），８．２３（ｂｒ．ｓ．，１Ｈ），８．３７（ｂｒ．ｓ．，１Ｈ）．
【０１１９】
実施例６の（３）と同様にして表４に記載の化合物を合成した。表４に構造式及び１Ｈ−ＮＭＲデータを示す。
【０１２０】
【表４】
【０１２１】
実施例７
６−（２−フルオロピリジン−３−イル）−２，３，５´，６´−テトラヒドロスピロ［クロメン−４，４´−［1，3］チアジン］−２´−アミン（化合物２４）の合成
【化２０】
化合物１１−２（２６．３ｍｇ）のＮ，Ｎ−ジメチルホルムアルデヒド（０．９５ｍｌ）溶液に、２−フルオロピリジン−３−ボロン酸（１４．９ｍｇ）を加えた。続いて１Ｍ重曹水溶液（０．１４ｍｌ）と、パラジウム−トリフェニルホスフィン（７．８ｍｇ）を加え、窒素雰囲気下、１００度で１２時間撹拌した。原料の消失を確認した後、反応混合物に水を加えた。水層を酢酸エチルで抽出し、有機層を飽和食塩水で洗浄した。有機層を無水硫酸マグネシウムで乾燥し、溶媒を減圧留去した。得られた粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製することで標題化合物を得た（１３．０ｍｇ）。
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）（ｐｐｍ）：２．０４−２．１８（ｍ，２Ｈ），２．２９−２．３７（ｍ，１Ｈ），２．４６（ｄｄｄ，Ｊ＝４．０，１０．７，１４．４Ｈｚ，１Ｈ），３．１８−３．２４（ｍ，２Ｈ），４．３１（ｄｔ，Ｊ＝２．８，１１．４Ｈｚ，１Ｈ），４．４４−４．４７（ｍ，１Ｈ），６．９５（ｄ，Ｊ＝８．６Ｈｚ，１Ｈ），７．２４−７．２６（ｍ，１Ｈ），７．３６−７．４２（ｍ，２Ｈ），７．８８（ｄｄｄ，Ｊ＝１．７，７．６，９．９Ｈｚ，１Ｈ），８．１５（ｄｔ，Ｊ＝１．７，４．６Ｈｚ、１Ｈ）．
【０１２２】
実施例８
７−フルオロ−６−（２−フルオロピリジン−３−イル）−２，３，５´，６´−テトラヒドロスピロ［クロメン−４，４´−［1、3］チアジン］−２´−アミン（化合物２６）の合成
【化２１】
（１）６−ブロモ−７−フルオロ−２，３，５´，６´−テトラヒドロスピロ［クロメン−４，４´−［１，３］チアジン］−２´−アミン（化合物２５）の合成
化合物６（２０ｍｇ）の酢酸（１．０ｍｌ）溶液に、室温にて臭素（１２．７ｍｇ）を加えて３０分間撹拌した。原料の消失を確認した後、反応混合物を重曹水に加え中和した。水層を酢酸エチルで抽出し、有機層を飽和食塩水で洗浄した。有機層を無水硫酸マグネシウムで乾燥し、溶媒を減圧留去した。得られた粗生成物２５（１４．４ｍｇ）は精製することなく、次の反応に用いた。
１Ｈ ＮＭＲ （４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）（ｐｐｍ）：１．８７−１．９９（ｍ，２Ｈ），１．９９−２．２８（ｍ，２Ｈ），２．９７−３．０８（ｍ，１Ｈ），３．０８−３．１７（ｍ，１Ｈ），４．１６−４．２８（ｍ，１Ｈ），４．３０−４．３９（ｍ，１Ｈ），６．６２（ｄ，Ｊ＝９．７Ｈｚ，１Ｈ），７．２９（ｄ，Ｊ＝７．８Ｈｚ，１Ｈ）．
【０１２３】
（２）化合物２６の合成
化合物２５（１４．４mg) を塩化メチレン（３．０ｍｌ）に溶解し、二炭酸ジ−ｔ−ブチル（４７．５ｍｇ）を加えた。次いでＮ，Ｎ−ジメチルアミノピリジン（２６．５ｍｇ）を加え、室温で６時間間撹拌した。原料の消失を確認した後、反応混合物を飽和塩化アンモニウム水溶液に加えた。水層を塩化メチレンで抽出し、有機層を無水硫酸マグネシウムで乾燥した。溶媒を減圧留去し、得られた粗生成物１３−１（１７ｍｇ）は精製することなく、次の反応に用いた。
上記反応で得られた粗生成物１３−１（１７ｍｇ）のＮ，Ｎ−ジメチルホルムアルデヒド（０．５ｍｌ）溶液に、２−フルオロピリジン−３−ボロン酸（７．２ｍｇ）を加えた。続いて１Ｍ重曹水溶液（０．０５ｍｌ）と、パラジウム−トリフェニルホスフィン（３．８ｍｇ）を加え、窒素雰囲気下、１００度で終夜撹拌した。原料の消失を確認した後、反応混合物に水を加えた。水層を酢酸エチルで抽出し、有機層を飽和食塩水で洗浄した。有機層を無水硫酸マグネシウムで乾燥し、溶媒を減圧留去した。得られた粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製することで標題化合物を得た（１．７ｍｇ）。
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）（ｐｐｍ）：２．００−２．１８（ｍ，２Ｈ），２．２６−２．５１（ｍ，２Ｈ），３．１４−３．２５（ｍ，２Ｈ），４．２７−４．３６（ｍ，１Ｈ），４．４２−４．４８（ｍ，１Ｈ），６．７０（ｄ，Ｊ＝１１．１Ｈｚ，１Ｈ），７．２２（ｄ，Ｊ＝９．１Ｈｚ，１Ｈ），７．２５−７．３４（ｍ，１Ｈ），７．８６−７．９２（ｍ，１Ｈ），８．２１（ｂｒｄ，Ｊ＝４．９Ｈｚ，１Ｈ）．
【０１２４】
実施例９
６−［（２−アミノピリジン−３−イル）エチニル］−２，３，５´，６´−テトラヒドロスピロ［クロメン−４，４´−［1，3］チアジン］−２´−アミン（化合物２７）の合成
【化２２】
（１）３−［（トリメチルシリル）エチニル］ピリジン−２−アミン（化合物１４−２）の合成
化合物１４−１（２００ｍｇ）をテトラヒドロフラン（１．２ｍｌ）とトリエチルアミン（７ｍｌ）の混合溶媒に溶解した。エチニル（トリメチル）シラン（２２７ｍｇ）、ヨウ化銅（Ｉ）（８．８ｍｇ）と、ジクロロパラジウム−トリフェニルホスフィン（３２．５ｍｇ）を加えて封管した。混合物を９０度にて２２時間撹拌した後に、反応混合物を水に加えて反応を停止した。水層を酢酸エチルで抽出し、有機層を飽和食塩水で洗浄した。有機層を無水硫酸マグネシウムで乾燥し、溶媒を減圧留去した。得られた粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製することで標題化合物を得た（２４４ｍｇ）。
１Ｈ ＮＭＲ （４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）（ｐｐｍ）：０．２６（ｓ，９Ｈ），５．０８（ｂｒ．ｓ．，２Ｈ），６．６２（ｂｒ．ｓ．，１Ｈ），７．５４ｄ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，１Ｈ），８．０５（ｂｒ．ｓ．，１Ｈ）．
【０１２５】
（２）３−エチニルピリジン−２−アミン（化合物１４−３）の合成
化合物１４−２（２４４ｍｇ）をメタノール（１５．０ｍｌ）に溶解した。炭酸カリウム（２１２．６ｍｇ）を加え、室温にて２時間撹拌した。反応混合物を水に加えて、水層を酢酸エチルで抽出し、有機層を飽和食塩水で洗浄した。有機層を無水硫酸マグネシウムで乾燥し、溶媒を減圧留去した。得られた粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製することで標題化合物を得た（９３．５ｍｇ）。
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）（ｐｐｍ）：３．４２（ｓ，１Ｈ），５．０８（ｂｒ．ｓ．，２Ｈ），６．６３（ｄｄ，Ｊ＝５．２，７．４Ｈｚ，１Ｈ），７．５８（ｄｄ，Ｊ＝７．４，１．６Ｈｚ，１Ｈ），８．０８（ｂｒ．ｓ．，１Ｈ）．
【０１２６】
（３）化合物２７の合成
化合物１４−３（３０ｍｇ）と実施例１１−１で得られた化合物２０（４０ｍｇ）をテトラヒドロフラン（２ｍｌ）とトリエチルアミン（２ｍｌ）の混合溶媒に溶解した。ヨウ化銅（Ｉ）（１．２ｍｇ）と、ジクロロパラジウム−トリフェニルホスフィン（４．５ｍｇ）を加えて封管し、９０度にて２２時間撹拌した。反応混合物を水に加えて反応を停止した。水層を酢酸エチルで抽出し、有機層を飽和食塩水で洗浄した。有機層を無水硫酸マグネシウムで乾燥し、溶媒を減圧留去した。得られた粗生成物をＮＨ−シリカゲルカラムクロマトグラフィーとＮＨ−シリカゲルＴＬＣで精製することで標題化合物を得た（１２．５ｍｇ）。
ＥＳＩ−ＭＳ；ｍ／ｚ ３５１［Ｍ＋＋Ｈ］
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）（ｐｐｍ）：１．９２−２．１２（ｍ，３Ｈ），２．２５（ｄｄｄ，Ｊ＝４．０，１０．５，１４．２Ｈｚ，１Ｈ），３．０２−３．１０（ｍ，１Ｈ），３．１１−３．２０（ｍ，１Ｈ），４．２６（ｔｄ，Ｊ＝２．９，１１．２Ｈｚ，１Ｈ），４．３８（ｄｔ，Ｊ＝４．６，１１．２Ｈｚ，１Ｈ），５．０５（ｂｒ．ｓ．，２Ｈ），６．６３（ｄｄ，Ｊ＝５．０，７．５Ｈｚ，１Ｈ），６．８１（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，１Ｈ），７．２９（ｄｄ，Ｊ＝２．０，８．４Ｈｚ，１Ｈ），７．３４（ｄ，Ｊ＝２．０Ｈｚ，１Ｈ），７．５７（ｄｄ、Ｊ＝１．６，７．５Ｈｚ，１Ｈ），７．９７-８．０５（ｍ，１Ｈ）．
【０１２７】
実施例１０
２，３，５´，６´−テトラヒドロスピロ［１，３−チアジン−４，４´−チオクロメン］−２−アミン（化合物２８）の合成
【化２３】
（１）（２Ｅ）−２−（２，３−ジヒドロ−４Ｈ−チオクロメン−４−イリデン）エチル カルバミミドチオエート（化合物１５−３）の合成
ビニルマグネシウムクロライド（１．６Ｍテトラヒドロフラン溶液；２．７５ｍｌ）に塩化亜鉛（４６．１ｍｇ）を加え室温で１時間撹拌した。混合物を０度に冷却し、化合物１５−１（５５５ｍｇ）のテトラヒドロフラン（２．０ｍｌ）を滴下した。同温で５時間撹拌した。原料の消失を確認したら反応混合物に塩化アンモニウム水溶液を加え反応停止させた。水層を酢酸エチルで抽出し、有機層を飽和食塩水で洗浄した。有機層を無水硫酸マグネシウムで乾燥し、溶媒を減圧留去して粗生成物を得た（６６５ｍｇ）。この粗生成物を酢酸（５．０ｍｌ）に溶解した後に、チオウレア（３３４ｍｇ）を加えた。室温で終夜撹拌した後、不溶物を綿栓濾過で除き、濾液をジエチルエーテルに滴下した。０度に冷却し撹拌した。グラスフィルターで固体を除き、濾液の溶媒を減圧留去した。残渣の油状物質に酢酸エチルを加え、重曹水で中和した。水層を酢酸エチルで抽出し、有機層を飽和食塩水で洗浄した。有機層を無水硫酸マグネシウムで乾燥した。溶媒を減圧留去している間に、固体が生じた。濃縮を止めて、ヘキサン・ジエチルエーテル混合溶媒を加え、生じた固体を桐山ロートで回収し、ジエチルエーテルで洗浄した。得られた固体を乾燥させることで標題化合物を得た（６６．５ｍｇ）。
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＭｅＯＤ）（ｐｐｍ）：２．９６−３．０１（ｍ，２Ｈ），３．０５−３．１０（ｍ，２Ｈ），４．０８（ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，２Ｈ），６．０９（ｔ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，１Ｈ），７．０７−７．２０（ｍ，３Ｈ），７．５０（ｄｄ，Ｊ＝１．３，７．９Ｈｚ，１Ｈ）．
【０１２８】
（２）化合物２８の合成
化合物１５−３（５０ｍｇ）をトリフルオロ酢酸（０．４６ｍｌ）に溶解した後に、氷浴下トリフルオロメタンスルホン酸（０．１ｍｌ）を加えた。同温度にて０．５時間撹拌した後、室温にて３．０時間撹拌した。原料の消失を確認した後、反応混合物を、氷浴にて冷却した重曹水に加え中和した。水層を酢酸エチルで抽出し、有機層を飽和食塩水で洗浄した。有機層を無水硫酸ナトリウムで乾燥し、溶媒を減圧留去した。残渣をＮＨ−シリカゲルカラムクロマトグラフィー、次にシリカゲルＴＬＣで精製し標題化合物を得た（１．６ｍｇ）。
ＥＳＩ−ＭＳ；ｍ／ｚ ２５１［Ｍ＋＋Ｈ］
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）（ｐｐｍ）：１．８７−１．９５（ｍ，１Ｈ），２．２４−２．３５（ｍ，３Ｈ），２．９２−２．９８（ｍ，２Ｈ），３．０７−３．１３（ｍ，１Ｈ），３．１４−３．２４（ｍ，１Ｈ），７．０７−７．１２（ｍ，１Ｈ），７．１３−７．１５（ｍ，２Ｈ），７．１９（ｂｒｄ，Ｊ＝１．３Ｈｚ，１Ｈ）．
【０１２９】
試験例１
ラット胎仔脳由来神経細胞培養におけるＡβペプチド定量
（１）ラット初代神経細胞培養
胎生１８日齢のＷｉｓｔａｒ系ラット（Ｃｈａｒｌｅｓ Ｒｉｖｅｒ Ｊａｐａｎ，Ｙｏｋｏｈａｍａ，Ｊａｐａｎ）より大脳皮質を単離し培養に供した。具体的には、エーテル麻酔下、妊娠ラットより無菌的に胎仔を摘出した。胎仔より脳を摘出し、氷冷Ｌ−１５ｍｅｄｉｕｍ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ Ｃｏｒｐ． Ｃａｔ ＃１１４１５−０６４，Ｃａｒｌｓｂａｄ，ＣＡ ＵＳＡ あるいは ＳＩＧＭＡ Ｌ１５１８など）に浸した。その摘出脳から、実体顕微鏡下で大脳皮質を採取した。採取した大脳皮質断片を、０．２５％ｔｒｙｐｓｉｎ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ Ｃｏｒｐ． Ｃａｔ ＃１５０５０−０６５，Ｃａｒｌｓｂａｄ，ＣＡ ＵＳＡ）および０．０１％ＤＮａｓｅ）Ｓｉｇｍａ Ｄ５０２５，Ｓｔ． Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ，ＵＳＡ）を含有した酵素溶液中、３７℃下３０分間の酵素処理することにより、細胞を分散させた。この際、酵素反応は非働化済みウマ血清を加えることで停止させた。この酵素処理溶液を１５００ｒｐｍにて５分間遠心分離し、上清を除いた。得られた細胞塊に培地を５〜１０ｍｌ加えた。培地にはＮｅｕｒｏｂａｓａｌ ｍｅｄｉｕｍ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ Ｃｏｒｐ． Ｃａｔ ＃２１１０３−０４９，Ｃａｒｌｓｂａｄ，ＣＡ ＵＳＡ）に、２％ Ｂ２７ ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ Ｃｏｒｐ． Ｃａｔ ＃１７５０４−０４４，Ｃａｒｌｓｂａｄ，ＣＡ ＵＳＡ）と２５μＭ２−ｍｅｒｃａｐｔｏｅｔｈａｎｏｌ（２−ＭＥ，ＷＡＫＯ Ｃａｔ ＃１３９−０６８６１，Ｏｓａｋａ，Ｊａｐａｎ）と０．５ｍＭＬ−ｇｌｕｔａｍｉｎｅ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ Ｃｏｒｐ． Ｃａｔ ＃２５０３０−０８１，Ｃａｒｌｓｂａｄ，ＣＡ ＵＳＡ）およびＡｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓ−Ａｎｔｉｍｙｃｏｔｉｃｓ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ Ｃｏｒｐ． Ｃａｔ ＃１５２４０−０６２，Ｃａｒｌｓｂａｄ，ＣＡ ＵＳＡ）を添加したもの（Ｎｅｕｒｏｂａｓａｌ／Ｂ２７／２−ＭＥ）を用いた。但し、アッセイの際は、２−ＭＥのみを添加しない培地（Ｎｅｕｒｏｂａｓａｌ／Ｂ２７）を用いた。培地が加えられた細胞塊を、緩やかなピペッティング操作により細胞を再分散させた。この細胞分散液を、４０μｍナイロンメッシュ（セルストレーナー、Ｃａｔ ＃．３５−２３４０，Ｂｅｃｔｏｎ Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ Ｌａｂｗａｒｅ，Ｆｒａｎｋｌｉｎ Ｌａｋｅｓ，ＮＪ、ＵＳＡ）でろ過し、細胞塊を除くことにより、神経細胞懸濁液を得た。この神経細胞懸濁液を培地にて希釈し、予めｐｏｌｙ−ＬあるいはＤ−ｌｙｓｉｎｅにてコーティングされた９６ｗｅｌｌポリスチレン製培養器（Ｆａｌｃｏｎ Ｃａｔ ＃．３５−３０７５，Ｂｅｃｔｏｎ Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ Ｌａｂｗａｒｅ，Ｆｒａｎｋｌｉｎ Ｌａｋｅｓ，ＮＪ，ＵＳＡを以下の方法でｐｏｌｙ−Ｌ−ｌｙｓｉｎｅコートを施したもの、あるいはＢＩＯＣＯＡＴＴＭ ｃｅｌｌ ｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔｓ Ｐｏｌｙ−Ｄ−ｌｙｓｉｎｅ ｃｅｌｌ ｗａｒｅ ９６−ｗｅｌｌ ｐｌａｔｅ，Ｃａｔ ＃．３５−６４６１，Ｂｅｃｔｏｎ Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ Ｌａｂｗａｒｅ，Ｆｒａｎｋｌｉｎ Ｌａｋｅｓ，ＮＪ，ＵＳＡ）に初期細胞密度が５ｘ１０５ ｃｅｌｌｓ／ｃｍ２になるように１００μｌ／ｗｅｌｌにて播種した。Ｐｏｌｙ−Ｌ−ｌｙｓｉｎｅコーティングは以下のように行った。０．１５Ｍ Ｂｏｒａｔｅ ｂｕｆｆｅｒ（ｐＨ８．５）を用いて１００μｇ／ｍｌのｐｏｌｙ−Ｌ−ｌｙｓｉｎｅ（ＳＩＧＭＡ Ｐ２６３６，Ｓｔ． Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ，ＵＳＡ）溶液を無菌的に調製した。その溶液を１００μｇ／ｗｅｌｌにて９６ｗｅｌｌポリスチレン製培養器に添加し、室温１時間以上、あるいは４℃一晩以上、インキュベートした。その後、コーティングした９６ｗｅｌｌポリスチレン製培養器は、滅菌水を用いて４回以上洗浄した後、乾燥させるか、あるいは無菌ＰＢＳあるいは培地などを用いてすすいだ後に、細胞播種に用いた。播種した細胞は、５％ＣＯ２−９５％ａｉｒ下、３７℃インキュベーター中にて一日培養した後、培地全量を新鮮なＮｅｕｒｏｂａｓａｌ／Ｂ２７／２−ＭＥ培地と交換し、引き続き３日間培養した。
【０１３０】
（２）化合物添加
培養４日目に薬物添加を以下の通りに行った。培地全量を抜き取り、２−ＭＥを含まない、２％Ｂ−２７を含有するＮｅｕｒｏｂａｓａｌ ｍｅｄｉｕｍ（Ｎｅｕｒｏｂａｓａｌ／Ｂ２７）を１８０μｌ／ｗｅｌｌ加えた。試験化合物のジメチルスルホキシド（以下ＤＭＳＯと略す）溶液をＮｅｕｒｏｂａｓａｌ／Ｂ２７にて最終濃度の１０倍になるように希釈した。この希釈液を２０μｌ／ｗｅｌｌ添加し、よく混和した。最終ＤＭＳＯ濃度は１％以下とした。また対照群にはＤＭＳＯのみを添加した。
【０１３１】
（３）サンプリング
化合物添加後３日間培養し、培地全量を回収した。得られた培地は、ＥＬＩＳＡサンプルとした。Ａβｘ−４２測定には希釈せずに、Ａβｘ−４０測定にはＥＬＩＳＡキット付属の希釈液にて５倍希釈して各ＥＬＩＳＡに供した。
【０１３２】
（４）細胞生存の評価
細胞生存は以下の方法でＭＴＴアッセイにより評価した。培地回収後のｗｅｌｌに温めた培地を１００μｌ／ｗｅｌｌ加え、さらにＤ−ＰＢＳ（−）（ＤＵＬＢＥＣＣＯ´Ｓ ＰＨＯＳＰＨＡＴＥ ＢＵＦＦＥＲＥＤ ＳＡＬＩＮＥ、ＳＩＧＭＡ Ｄ８５３７、Ｓｔ． Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ，ＵＳＡ）に溶解した８ ｍｇ／ｍｌのＭＴＴ（ＳＩＧＭＡ Ｍ２１２８，Ｓｔ． Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ，ＵＳＡ）溶液を８ μｌ／ｗｅｌｌにて添加した。この９６ ｗｅｌｌポリスチレン製培養器を、５％ＣＯ２−９５％ａｉｒ下、３７℃インキュベーター中にて２０分間インキュベートした。そこへＭＴＴ溶解バッファーを１００μｌ／ｗｅｌｌ加え、５％ＣＯ２−９５％ａｉｒ下、３７℃インキュベーター中にてＭＴＴフォルマザン結晶をよく溶解させた後、各Ｗｅｌｌの５５０ｎｍの吸光度を測定した。ＭＴＴ溶解バッファーは以下の通りに調製した。Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＷＡＫＯ ０４５−０２９１６，Ｏｓａｋａ，Ｊａｐａｎ）と蒸留水を２５０ｍＬずつ混合した溶液に、１００ｇＳＤＳ（ドデシル硫酸ナトリウム（ラウリル硫酸ナトリウム）、ＷＡＫＯ １９１−０７１４５，Ｏｓａｋａ，Ｊａｐａｎ）を溶解した。さらに、この溶液に濃塩酸および酢酸を各３５０μｌ添加することにより、溶液の最終ｐＨを４．７程度にした。
測定の際、細胞を播種しないｗｅｌｌに培地とＭＴＴ溶液のみを加えたものをバックグラウンド（ｂｋｇ）として設定した。各測定値は、以下の数式に従い、ｂｋｇを差し引き、対照群（薬物処理しなかった群、ＣＴＲＬ）に対する比率（％ｏｆＣＴＲＬ）を算出し、細胞生存活性を比較・評価した。
％ ｏｆ ＣＴＲＬ ＝） Ａ５５０＿ｓａｍｐｌｅ − Ａ５５０＿ｂｋｇ）／）Ａ５５０＿ＣＴＲＬ −ｂｋｇ） ｘ １００
（Ａ５５０＿ｓａｍｐｌｅ： サンプルｗｅｌｌの５５０ ｎｍ吸光度、Ａ５５０＿ｂｋｇ： バックグラウンドｗｅｌｌの５５０ ｎｍ吸光度、Ａ５５０＿ＣＴＲＬ：対照群ｗｅｌｌの５５０ ｎｍ吸光度）
【０１３３】
（５）Ａβ ＥＬＩＳＡ
Ａβ ＥＬＩＳＡは和光純薬工業株式会社（Ｗａｋｏ Ｐｕｒｅ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｉｎｄｕｓｔｒｉｅｓ，Ｌｔｄ．）のヒト／ラットβアミロイド（４２）ＥＬＩＳＡキットワコー（＃２９０−６２６０１）、およびヒト／ラットβアミロイド（４０）ＥＬＩＳＡキットワコー（＃２９４−６２５０１）を用いた。方法はメーカー推奨のプロトコール（添付文書に記載の方法）にて行った。但しＡβ検量線は、ｂｅｔａ−ａｍｙｌｏｉｄ ｐｅｐｔｉｄｅ １−４２，ｒａｔおよびｂｅｔａ−ａｍｙｌｏｉｄ ｐｅｐｔｉｄｅ １−４０，ｒａｔ（Ｃａｌｂｉｏｃｈｅｍ． ＃１７１５９６［Ａβ４２］，１７１５９３［Ａβ４０］）を用いて作製した。結果は、結果は培地中のＡβ４２濃度低下のためのＩＣ５０値（μＭ）にて表５に示した。
【０１３４】
【表５】
【０１３５】
表５の結果から明らかなように、本発明化合物は、Ａβ４２産生低下作用が確認された。
【産業上の利用可能性】
【０１３６】
本発明の一般式（Ｉ）の化合物またはその医薬上許容される塩は、Ａβ４２産生低下作用を有するので、本発明によれば、特にアルツハイマー型痴呆、ダウン症等のＡβが原因となる神経変性疾患の治療剤または予防剤を提供することができる。
【技術分野】
【０００１】
本発明は、スピロアミノジヒドロチアジン誘導体及びその医薬用途に関する。更に詳細には、アミロイドβ（以下、Ａβという。）タンパク産生抑制作用又はベータサイトアミロイドβ前駆体タンパク質開裂酵素１（以下、ＢＡＣＥ１という）阻害作用を有し、Ａβタンパクが原因となる神経変性疾患、特にアルツハイマー型痴呆、ダウン症等の治療に有効なスピロアミノジヒドロチアジン誘導体及びそれを有効成分として含有する医薬組成物に関する。
【背景技術】
【０００２】
アルツハイマー病は、神経細胞の変性や、脱落とともに、老人班の形成および神経原繊維変化を特徴とする疾患である。現在、アルツハイマー病の治療は、アセチルコリンエステラーゼ阻害剤に代表される症状改善剤による対症療法に限られていて、病気の進行を抑制する根本療法剤は開発されていない。アルツハイマー病の根本療法剤の創出には、病態の発症原因を制御する方法の開発が必要である。
アミロイド前駆体タンパク（以下、ＡＰＰという。）の代謝産物であるＡβタンパクは、神経細胞の変性・脱落、さらには痴呆症状の発現に大きくかかわると考えられている（例えば、非特許文献３、４参照）。Ａβタンパクの主成分は、アミノ酸４０個からなるＡβ４０とＣ末が２アミノ酸増えたＡβ４２である。これらのＡβ４０および４２は、凝集性が高く（例えば、非特許文献５参照）、老人班の主要構成成分であり（例えば、非特許文献５、６、７参照）、さらに、家族性アルツハイマー病で見られるＡＰＰおよびプレセネリン遺伝子の変異は、これらのＡβ４０および４２を増加させることが知られている（例えば、非特許文献８、９、１０参照）。したがって、Ａβ４０および４２の産生を低下させる化合物は、アルツハイマー病の進行抑制剤または予防薬として期待されている。
Ａβは、ＡＰＰがベータセクレターゼ（ＢＡＣＥ１）により切断され、続いてガンマセクレターゼにより切り出されることにより産生する。このことより、Ａβ産生抑制を目的として、ガンマセクレターゼおよびベータセクレターゼの阻害剤の創出が試みられている。既に知られているベータセクレターゼ阻害剤は、以下に示す特許文献１〜１５、非特許文献１および２等で報告されており、中でも特許文献１、特許文献１４および特許文献１５にはアミノジヒドロチアジン誘導体およびベータセクレターゼの阻害活性、すなわちＢＡＣＥ１阻害活性を有する化合物が記載されている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００３】
【特許文献１】国際公開第２００７／０４９５３２号パンフレット
【特許文献２】米国特許第３２３５５５１号明細書
【特許文献３】米国特許第３２２７７１３号明細書
【特許文献４】特開平９−０６７３５５号公報
【特許文献５】国際公開第０１／０８７２９３号パンフレット
【特許文献６】国際公開第０４／０１４８４３号パンフレット
【特許文献７】特開２００４−１４９４２９号公報
【特許文献８】国際公開第０２／９６８９７号パンフレット
【特許文献９】国際公開第０４／０４３９１６号パンフレット
【特許文献１０】国際公開第２００５／０５８３１１号パンフレット
【特許文献１１】国際公開第２００５／０９７７６７号パンフレット
【特許文献１２】国際公開第２００６／０４１４０４号パンフレット
【特許文献１３】国際公開第２００６／０４１４０５号パンフレット
【特許文献１４】国際公開第２００８／１３３２７３号パンフレット
【特許文献１５】国際公開第２００８／１３３２７４号パンフレット
【非特許文献】
【０００４】
【非特許文献１】ジャーナル・オブ・ヘテロサイクリック・ケミストリー（Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｈｅｔｅｒｏｃｙｃｌｉｃ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ）、１４巻、７１７頁〜７２３頁（１９７７年）
【非特許文献２】ジャーナル・オブ・オーガニック・ケミストリー（Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ）、３３巻、３１２６頁〜３１３２頁（１９６８年）
【非特許文献３】Ｋｌｅｉｎ ＷＬ，外７名，Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ´ｓ ｄｉｓｅａｓｅ−ａｆｆｅｃｔｅｄ ｂｒａｉｎ： Ｐｒｅｓｅｎｃｅ ｏｆ ｏｌｉｇｏｍｅｒｉｃ Ａβ ｌｉｇａｎｄｓ（ＡＤＤＬｓ）ｓｕｇｇｅｓｔｓ ａ ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｂａｓｉｓ ｆｏｒ ｒｅｖｅｒｓｉｂｌｅ ｍｅｍｏｒｙ ｌｏｓｓ，Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ Ｎａｔｉｏｎａｌ Ａｃａｄｅｍｙ ｏｆ Ｓｃｉｅｎｃｅ ＵＳＡ ２００３，Ｓｅｐ ２；１００（１８），ｐ．１０４１７−１０４２２．
【非特許文献４】Ｎｉｔｓｃｈ ＲＭ，外１６名，Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ａｇａｉｎｓｔ β−ａｍｙｌｏｉｄ ｓｌｏｗ ｃｏｇｎｉｔｉｖｅ ｄｅｃｌｉｎｅ ｉｎ Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ´ｓ ｄｉｓｅａｓｅ，Ｎｅｕｒｏｎ，２００３，Ｍａｙ ２２；３８，ｐ．５４７−５５４．
【非特許文献５】Ｊａｒｒｅｔｔ ＪＴ，外２名，Ｔｈｅ ｃａｒｂｏｘｙ ｔｅｒｍｉｎｕｓ ｏｆ ｔｈｅ β ａｍｙｌｏｉｄ ｐｒｏｔｅｉｎ ｉｓ ｃｒｉｔｉｃａｌ ｆｏｒ ｔｈｅ ｓｅｅｄｉｎｇ ｏｆ ａｍｙｌｏｉｄ ｆｏｒｍａｔｉｏｎ： Ｉｍｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ ｆｏｒ ｔｈｅ ｐａｔｈｏｇｅｎｅｓｉｓ ｏｆ Ａｌｚｈｅｉｍｅｒｓ´ ｄｉｓｅａｓｅ，Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，１９９３，３２（１８），ｐ．４６９３−４６９７．
【非特許文献６】Ｇｌｅｎｎｅｒ ＧＧ，外１名，Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ´ｓ ｄｉｓｅａｓｅ： ｉｎｉｔｉａｌ ｒｅｐｏｒｔ ｏｆ ｔｈｅ ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ ａｎｄ ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ａ ｎｏｖｅｌ ｃｅｒｅｂｒｏｖａｓｃｕｌａｒ ａｍｙｌｏｉｄ ｐｒｏｔｅｉｎ，Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ ａｎｄ ｂｉｏｐｈｙｓｉｃａｌ ｒｅｓｅａｒｃｈ ｃｏｍｍｕｎｉｃａｔｉｏｎｓ，１９８４，Ｍａｙ １６，１２０（３），ｐ．８８５−８９０．
【非特許文献７】Ｍａｓｔｅｒｓ ＣＬ，外５名，Ａｍｙｌｏｉｄ ｐｌａｑｕｅ ｃｏｒｅ ｐｒｏｔｅｉｎ ｉｎ Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ ｄｉｓｅａｓｅ ａｎｄ Ｄｏｗｎ ｓｙｎｄｒｏｍｅ，Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ Ｎａｔｉｏｎａｌ Ａｃａｄｅｍｙ ｏｆ Ｓｃｉｅｎｃｅ ＵＳＡ，１９８５，Ｊｕｎ，８２（１２），ｐ．４２４５−４２４９．
【非特許文献８】Ｇｏｕｒａｓ ＧＫ，外１１名，Ｉｎｔｒａｎｅｕｒｏｎａｌ Ａβ４２ ａｃｃｕｍｕｌａｔｉｏｎ ｉｎ ｈｕｍａｎ ｂｒａｉｎ，Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｐａｔｈｏｌｏｇｙ，２０００，Ｊａｎ，１５６（１），ｐ．１５−２０．
【非特許文献９】Ｓｃｈｅｕｎｅｒ Ｄ，外２０名，Ｓｅｃｒｅｔｅｄ ａｍｙｌｏｉｄ β−ｐｒｏｔｅｉｎ ｓｉｍｉｌａｒ ｔｏ ｔｈａｔ ｉｎ ｔｈｅ ｓｅｎｉｌｅ ｐｌａｑｕｅｓ ｏｆ Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ´ｓ ｄｉｓｅａｓｅ ｉｓ ｉｎｃｒｅａｓｅｄ ｉｎ ｖｉｖｏ ｂｙ ｔｈｅ ｐｒｅｓｅｎｉｌｉｎ １ ａｎｄ ２ ａｎｄ ＡＰＰ ｍｕｔａｔｉｏｎｓ ｌｉｎｋｅｄ ｔｏ ｆａｍｉｌｉａｌ Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ´ｓ ｄｉｓｅａｓｅ，Ｎａｔｕｒｅ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，１９９６，Ａｕｇ，２（８），ｐ．８６４−８７０．
【非特許文献１０】Ｆｏｒｍａｎ ＭＳ，外４名，Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌ ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ｔｈｅ ｓｗｅｄｉｓｈ ｍｕｔａｎｔ ａｍｙｌｏｉｄ ｐｒｅｃｕｒｓｏｒ ｐｒｏｔｅｉｎ ｏｎ β−ａｍｙｌｏｉｄ ａｃｃｕｍｕｌａｔｉｏｎ ａｎｄ ｓｅｃｒｅｔｉｏｎ ｉｎ ｎｅｕｒｏｎｓ ａｎｄ ｎｏｎｎｅｕｒｏｎａｌ ｃｅｌｌｓ，Ｔｈｅ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，１９９７，Ｄｅｃ １９，２７２（５１），ｐ．３２２４７−３２２５３．
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
本発明の課題は、特許文献１に記載のアミノジヒドロチアジン誘導体およびＢＡＣＥ１阻害活性を有する化合物とは相違する化合物であって、Ａβ産生抑制作用又はＢＡＣＥ１阻害作用を有し、Ａβに起因する、アルツハイマー型痴呆に代表される神経変性疾患の予防剤または治療剤として有用なスピロアミノジヒドロチアジン化合物及びその医薬用途を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
本発明は、
[１] 式（Ｉ）：
【化１】
［式中、
環ＡはＣ６−１０アリール基又は５−１０員複素環基であり、
Ｌは単結合、酸素原子若しくは式−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲＬ−（ＲＬは水素原子又は置換基αから選択される１乃至３の置換基を有していてもよいＣ１−６アルキル基である。）又は、それぞれ置換基群αから選ばれる１乃至３の置換基を有していてもよい、Ｃ１−６アルキレン基、Ｃ２−６アルケニレン基若しくはＣ２−６アルキニレン基であり、
環ＢはＣ３−８シクロアルキル基、Ｃ６−１０アリール基又は５−１０員複素環基であり、
Ｘは、それぞれ置換基群αから選ばれる１乃至３の置換基を有していてもよい、Ｃ１−３アルキレン基又はＣ２−３アルケニレン基であり、
Ｙは、酸素原子、硫黄原子、スルホキシド基、スルホン基又は式−ＮＲＹ−（ＲＹは水素原子又はそれぞれ置換基群αから選ばれる１乃至３の置換基を有していてもよい、Ｃ１−６アルキル基、Ｃ１−６アルキルカルボニル基、Ｃ３−８シクロアルキルカルボニル基、Ｃ６−１０アリールカルボニル基、Ｃ１−６アルキルスルホニル基、Ｃ６−１０アリールスルホニル基、Ｃ６−１０アリール基若しくは５−６員へテロアリール基である。）で示される基であり、
Ｚは単結合又はＣ１−３アルキレン基であり、
Ｒ１及びＲ２は各々独立して水素原子、ハロゲン原子、ヒドロキシ基若しくはシアノ基又はそれぞれ置換基群αから選ばれる１乃至３の置換基を有していてもよい、Ｃ１−６アルキル基若しくはＣ１−６アルコキシ基であり、
Ｒ３は、水素原子又はそれぞれ置換基群αから選ばれる１乃至３の置換基を有していてもよい、Ｃ１−６アルキル基、Ｃ１−６アルキルカルボニル基、Ｃ６−１０アリールカルボニル基、Ｃ１−６アルキルスルホニル基、Ｃ６−１０アリールスルホニル基、Ｃ３−８シクロアルキル基、Ｃ６−１０アリール基若しくは５−１０員複素環基であり、
Ｒ４及びＲ５は各々独立して水素原子、ハロゲン原子若しくはヒドロキシ基又はそれぞれ置換基群αから選ばれる１乃至３の置換基を有していてもよい、Ｃ１−６アルキル基、Ｃ１−６アルキルオキシ基、Ｃ３−８シクロアルキル基、Ｃ３−８シクロアルキルオキシ基、Ｃ６−１０アリール基若しくは５−１０員複素環基であり、
Ｒ６、Ｒ７及びＲ８は各々独立して水素原子、ハロゲン原子、ヒドロキシ基若しくはシアノ基又はそれぞれ置換基群αから選ばれる１乃至３の置換基を有していてもよい、Ｃ１−６アルキル基、Ｃ２−６アルケニル基、Ｃ２−６アルキニル基、Ｃ１−６アルコキシ基、Ｃ３−８シクロアルキル基、Ｃ３−８シクロアルキルオキシ基、Ｃ６−１０アリール基若しくは５−１０員複素環基であり、
ｎは１から３の整数である。
置換基群α：水素原子、ハロゲン原子、ヒドロキシ基、オキソ基、シアノ基、Ｃ１−６アルキル基、トリフルオロメチル基、トリフルオロメトキシ基、Ｃ１−６アルコキシ基、Ｃ３−８シクロアルキル基、Ｃ３−８シクロアルキルオキシ基、Ｃ６−１０アリール基及び５−１０員複素環基。］
で示される化合物又はその医薬上許容される塩；
[２] Ｘが置換基群αから選択される１乃至３の置換基を有していてもよいＣ１−３アルキレン基である、上記[１]の化合物又はその医薬上許容される塩；
[３] Ｙが酸素原子である、上記[１]又は[２]記載の化合物又はその医薬上許容される塩；
[４] Ｙが硫黄原子またはスルホン基である、上記[１]又は[２]記載の化合物又はその医薬上許容される塩；
[５] Ｙが式−ＮＲＹ−（ＲＹは水素原子又はそれぞれ置換基群αから選ばれる１乃至３の置換基を有していてもよい、Ｃ１−６アルキル基、Ｃ１−６アルキルカルボニル基、Ｃ３−８シクロアルキルカルボニル基、Ｃ６−１０アリールカルボニル基、Ｃ１−６アルキルスルホニル基、Ｃ６−１０アリールスルホニル基、Ｃ６−１０アリール基若しくは５−６員へテロアリール基である。）で示される基である、上記[１]又は[２]記載の化合物又はその医薬上許容される塩；
[６] Ｌが式−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲＬ−（ＲＬは水素原子又は置換基αから選択される１乃至３の置換基を有していてもよいＣ１−６アルキル基である。）で示される基である、上記[１]から[５]のいずれかに記載の化合物又はその医薬上許容される塩；
[７] 以下の化合物から選ばれる、上記［１］から[６]の何れかに記載の化合物若しくはその医薬上許容される塩又はそれらの溶媒和物：１）（−）−Ｎ−（２´−アミノ−２，３，５´，６´−テトラヒドロスピロ［クロメン−４，４´−［１，３］チアジン］−６−イル）−５−シアノピリジン−２−カルボキサミド、
２）Ｎ−（２´−アミノ−２，３，５´，６´−テトラヒドロスピロ［クロメン−４，４´−［１，３］チアジン］−６−イル）−５−トリフルロメチルピリジン−２−カルボキサミド、
３）Ｎ−（２´−アミノ−２，３，５´，６´−テトラヒドロスピロ［クロメン−４，４´−［１，３］チアジン］−６−イル）−３，５−ジフルオロピリジン−２−カルボキサミド、
４）Ｎ−（２´−アミノ−２，３，５´，６´−テトラヒドロスピロ［クロメン−４，４´−［１，３］チアジン］−６−イル）−５−ブロモピリミジン−２−カルボキサミド、
５）Ｎ−（２´−アミノ−２，３，５´，６´−テトラヒドロスピロ［クロメン−４，４´−［１，３］チアジン］−６−イル）−５−ブロモピリジン−２−カルボキサミド、
６）Ｎ−（２´−アミノ−２，３，５´，６´−テトラヒドロスピロ［クロメン−４，４´−［１，３］チアジン］−６−イル）−３，５−ジクロロピリジン−２−カルボキサミド；
[８] 上記[１]から[７]のいずれかに記載の化合物又はその医薬上許容される塩を有効成分として含有する医薬組成物；
[９] アミロイドβタンパク質産生を抑制するための上記[８]に記載の医薬組成物1;
[１０] ベータサイトアミロイドβ前駆体タンパク質開裂酵素１（ＢＡＣＥ１）を阻害するための上記[８]に記載の医薬組成物；
[１１] 神経変性疾患治療のための上記[８]から[１０]のいずれかに記載の医薬組成物；
[１２] 神経変性疾患がアルツハイマー型痴呆又はダウン症である上記[１１]に記載の医薬組成物
に関する。
【０００７】
以下に、本願明細書において記載する記号、用語等の意義を説明し、本発明を詳細に説明する。
【０００８】
本願明細書中においては、化合物の構造式が便宜上一定の異性体を表すことがあるが、本発明には化合物の構造上生ずる総ての幾何異性体、不斉炭素に基づく光学異性体、立体異性体、互変異性体等の異性体及び異性体混合物を含み、便宜上の式の記載に限定されるものではなく、いずれか一方の異性体でも混合物でもよい。したがって、分子内に不斉炭素原子を有し光学活性体及びラセミ体が存在することがあり得るが、本発明においてはそれらに限定されず、いずれもが含まれる。さらに結晶多形が存在することもあるが同様に限定されず、いずれかの単一結晶形またはそれらの混合物であってもよく、無水物以外に水和物であってもよく、いずれも本願の請求の範囲に含まれる。
【０００９】
本明細書において、「ハロゲン原子」とは、フッ素原子、塩素原子、臭素原子、ヨウ素原子等を示し、好ましくはフッ素原子、塩素原子である。
【００１０】
「Ｃ１−６アルキル基」とは、炭素数が１乃至６個のアルキル基を示し、好ましい基としては、例えばメチル基、エチル基、ｎ−プロピル基、イソプロピル基、ｎ−ブチル基、イソブチル基、ｔ−ブチル基、ｎ−ペンチル基、イソペンチル基、ネオペンチル基、ｎ−ヘキシル基、１−メチルプロピル基、１，２−ジメチルプロピル基、１−エチルプロピル基、１−メチル−２−エチルプロピル基、１−エチル−２−メチルプロピル基、１，１，２−トリメチルプロピル基、１−メチルブチル基、２−メチルブチル基、１，１−ジメチルブチル基、２，２−ジメチルブチル基、２−エチルブチル基、１，３−ジメチルブチル基、２−メチルペンチル基、３−メチルペンチル基等の直鎖又は分枝状アルキル基が挙げられ、より好ましくは、メチル基、エチル基、ｎ−プロピル基が挙げられる。
【００１１】
「Ｃ２−６アルケニル基」とは、炭素数が２乃至６個のアルケニル基を示し、好ましい基としては、例えばビニル基、アリル基、１−プロペニル基、イソプロペニル基、１−ブテン−１−イル基、１−ブテン−２−イル基、１−ブテン−３−イル基、２−ブテン−１−イル基、２−ブテン−２−イル基等の直鎖状又は分枝鎖状のアルケニル基が挙げられる。
【００１２】
「Ｃ２−６アルキニル基」とは、炭素数が２乃至６個のアルキニル基を示し、好ましい基としては、例えばエチニル基、１−プロピニル基、２−プロピニル基、ブチニル基、ペンチニル基、ヘキシニル基等の直鎖状又は分子鎖状のアルキニル基が挙げられる。
【００１３】
「Ｃ１−６アルキレン基」とは前記定義「Ｃ１−６アルキル基」からさらに任意の水素原子を１個除いて誘導される二価の基を意味し、例えばメチレン基、１，２−エチレン基、１，１−エチレン基、１，３−プロピレン基、テトラメチレン基、ペンタメチレン基、ヘキサメチレン基等が挙げられる。
【００１４】
「Ｃ２−６アルケニレン基」とは前記定義「Ｃ２−６アルケニル基」からさらに任意の水素原子を１個除いて誘導される二価の基を意味し、例えば１，２−ビニレン基（エテニレン基）、プロペニレン基、ブテニレン基、ペンテニレン基、ヘキセニレン基等が挙げられる。
【００１５】
「Ｃ２−６アルキニレン基」とは前記定義の「Ｃ２−６アルキニル基」からさらに任意の水素原子を１個除いて誘導される二価の基を意味し、例えばエチニレン基、プロピニレン基、ブチニレン基、ペンチニレン基、ヘキシニレン基等が挙げられる。
【００１６】
「Ｃ１−６アルキルオキシ基」とは、炭素数１乃至は６個のアルキル基において、一つの水素原子が酸素原子に置換された基を示し、例えばメトキシ基、エトキシ基、ｎ−プロポキシ基、イソプロポキシ基、ｎ−ブトキシ基、イソブトキシ基、ｓｅｃ−ブトキシ基、ｔ−ブトキシ基、ｎ−ペントキシ基、イソペントキシ基、ｓｅｃ−ペントキシ基、ｔ−ペントキシ基、ｎ−ヘキソキシ基、イソヘキソキシ基、１，２−ジメチルプロポキシ基、２−エチルプロポキシ基、１−メチル−２−エチルプロポキシ基、１−エチル−２−メチルプロポキシ基、１，１，２−トリメチルプロポキシ基、１，１，２−トリメチルプロポキシ基、１，１−ジメチルブトキシ基、２，２−ジメチルブトキシ基、２−エチルブトキシ基、１，３−ジメチルブトキシ基、２−メチルペントキシ基、３−メチルペントキシ基、ヘキシルオキシ基等が挙げられる。
【００１７】
「Ｃ１−６アルキルスルホニル基」とは、炭素数１乃至は６のアルキル基において、１つの水素原子がスルホニル基に置換された基を示し、例えばメチルスルホニル基、エチルスルホニル基、ｎ−プロピルスルホニル基、イソプロピルスルホニル基、ｎ−ブチルスルホニル基、イソブチルスルホニル基、ｔ−ブチルスルホニル基、ｎ−ペンチルスルホニル基、イソペンチルスルホニル基、ネオペンチルスルホニル基、ｎ−ヘキシルスルホニル基、１−メチルプロピルスルホニル基等が挙げられる。
【００１８】
「Ｃ１−６アルキルカルボニル基」とは、炭素数１乃至６個のアルキル基において一つの水素原子がカルボニル基で置換された基を示し、好ましくは、例えばアセチル基、プロピオニル基、ブチリル基などが挙げられる。
【００１９】
「Ｃ６−１０アリール基」とは、炭素数６乃至１０の芳香族炭化水素環基を示し、例えばフェニル基、ナフチル基等が挙げられ、なかでもフェニル基が好ましい。
【００２０】
「Ｃ６−１０アリールカルボニル基」とは、炭素数６乃至１０の芳香族炭化水素環基にカルボニル基が結合した基を示し、好ましくはベンゾイル基、ナフトイル基等が挙げられ、より好ましくはベンゾイル基である。
【００２１】
「Ｃ６−１０アリールスルホニル基」とは、炭素数６乃至１０の芳香族炭化水素環基にスルホニル基が結合した基を示し、好ましくはベンジルスルホニル基、ナフチルスルホニル基等が挙げられ、より好ましくはベンジルスルホニ基である。
【００２２】
「Ｃ３−８シクロアルキル基」とは、炭素数３乃至８の環状アルキル基を示し、当該基における好ましい基としては、例えばシクロプロピル基、シクロブチル基、シクロペンチル基、シクロヘキシル基、シクロヘプチル基、シクロオクチル基等が挙げられる。
【００２３】
「Ｃ３−８シクロアルキルオキシ基」とは、炭素数３乃至８の環状アルキル基において、一つの水素原子が酸素原子に置換された基を示し、例えばシクロプロポキシ基、シクロブトキシ基、シクロペントキシ基、シクロヘキソキシ基、シクロヘプチロキシ基、シクロオクチロキシ基等が挙げられる。
【００２４】
「Ｃ３−８シクロアルキルカルボニル基」とは、炭素数３乃至８の環状アルキル基において、一つの水素原子がカルボニル基に置換された基を示し、例えばシクロプロピルカルボニル基、シクロブチルカルボニル基、シクロペンチルカルボニル基、シクロヘキシルカルボニル基、シクロヘプチルカルボニル基、シクロオクチルカルボニル基等が挙げられる。
【００２５】
「５−１０員複素環基」とは、総員数５ないし１０員複素原子含有環状基を示し、好ましくは、例えばピペリジニル基、ピロリジニル基、アゼピニル基、アゾカニル基、ピペラジニル基、１，４−ジアゼパニル基、モルホリニル基、チオモルホリニル基、ピロリル基、イミダゾリル基、ピラゾリル基、ピリジニル基、ピリダジニル基、ピリミジニル基、ピラジニル基、トリアゾリル基、トリアジニル基、テトラゾリル基、イソオキサゾリル基、オキサゾリル基、オキサジアゾリル基、イソチアゾリル基、チアゾリル基、チアジアゾリル基、フリル基、チエニル基、キノリニル基、イソキノリニル基、ベンゾフリル基、ベンゾピラニル基、ベンズイミダゾリル基、ベンゾトリアゾリル基、ベンゾイソチアゾリル基、インドリニル基、イソインドリニル基、クロマニル基、イソクロマニル基、１，３−ジオキサインダニル基、１，４−ジオキサテトラリニル基等が挙げられる。
【００２６】
「５−６員ヘテロアリール基」とは、前記「５−１０員複素環基」のうち、総員数５ないし６員複素原子含有芳香族環状基を示し、例えば、ピロリル基、イミダゾリル基、ピラゾリル基、ピリジニル基、ピリダジニル基、ピリミジニル基、ピラジニル基、トリアゾリル基、トリアジニル基、テトラゾリル基、イソオキサゾリル基、オキサゾリル基、オキサジアゾリル基、イソチアゾリル基、チアゾリル基、チアジアゾリル基、フリル基、チエニル基等が挙げられる。
【００２７】
「Ｃ１−３アルキレン基」とは、例えば、メチレン基、エチレン基、プロピレン基等を挙げることがきる。
【００２８】
「Ｃ２−３アルケニレン基」とは、ビニレン基、プロペニレン基を挙げることがきる。
【００２９】
「置換基群α」とは、水素原子、ハロゲン原子、ヒドロキシ基、オキソ基、シアノ基、Ｃ１−６アルキル基、トリフルオロメチル基、トリフルオロメトキシ基、Ｃ１−６アルコキシ基、Ｃ３−８シクロアルキル基、Ｃ３−８シクロアルキルオキシ基、Ｃ６−１０アリール基及び５−１０員複素環基を意味する。
【００３０】
本発明の式（Ｉ）のスピロアミノジヒドロチアジン誘導体は、医薬上許容される塩でもよい。医薬上許容される塩としては、具体的には、例えば無機酸塩（例えば硫酸塩、硝酸塩、過塩素酸塩、リン酸塩、炭酸塩、重炭酸塩、フッ化水素酸塩、塩酸塩、臭化水素酸塩、ヨウ化水素酸塩など）、有機カルボン酸塩（例えば酢酸塩、シュウ酸塩、マレイン酸塩、酒石酸塩、フマル酸塩、クエン酸塩など）、有機スルホン酸塩（例えばメタンスルホン酸塩、トリフルオロメタンスルホン酸塩、エタンスルホン酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、トルエンスルホン酸塩、カンファースルホン酸塩など）、アミノ酸塩（例えばアスパラギン酸塩、グルタミン酸塩など）、四級アミン塩、アルカリ金属塩（例えばナトリウム塩、カリウム塩など）、アルカリ土類金属塩（例えばマグネシウム塩、カルシウム塩など）などが挙げられる。
【００３１】
本発明の式（Ｉ）のスピロアミノジヒドロチアジン誘導体又は医薬上許容される塩は、それらの溶媒和物であってもよく、溶媒和物としては、例えば、水和物などが挙げられる。また、化合物（I）は特定の異性体に限定するものではなく、全ての可能な異性体（ケト−エノール異性体、イミン−エナミン異性体、ジアステレオ異性体、光学異性体および回転異性体等）やラセミ体を含むものである。例えば化合物（I）は以下のような互変異性体を包含する。
【化２】
【００３２】
本発明の式（Ｉ）のスピロアミノジヒドロチアジン誘導体としては、式（Ｉ）において、Ｘが、置換基群αから選択される１乃至３の置換基を有していてもよいＣ１−３アルキレン基、特に、置換基群αから選択される１乃至３の置換基を有していてもよいメチレン又はエチレンである化合物が好ましい。
また、式（Ｉ）において、Ｙが酸素原子、硫黄原子、スルホン基または式−ＮＲＹ−（ＲＹは前記定義に同じである。）で示される基である、化合物が好ましい。
また、式（Ｉ）において、Ｌが式−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲＬ−（ＲＬは前記定義に同じである。）で示される基である、化合物が好ましい。
特に、式（Ｉ）においてＹが酸素原子であり、Ｚが単結合である化合物；Ｙが酸素原子であり、Ｚが置換基群αから選択される１乃至３の置換基を有していてもよいＣ１−３アルキレンである化合物；Ｙが硫黄原子またはスルホンであり、Ｚが単結合である化合物が好ましい。
【００３３】
本発明において好ましい化合物としては、以下の化合物が挙げられる。
１）（−）−Ｎ−（２´−アミノ−２，３，５´，６´−テトラヒドロスピロ［クロメン−４，４´−［１，３］チアジン］−６−イル）−５−シアノピリジン−２−カルボキサミド、
２）Ｎ−（２´−アミノ−２，３，５´，６´−テトラヒドロスピロ［クロメン−４，４´−［１，３］チアジン］−６−イル）−５−トリフルロメチルピリジン−２−カルボキサミド、
３）Ｎ−（２´−アミノ−２，３，５´，６´−テトラヒドロスピロ［クロメン−４，４´−［１，３］チアジン］−６−イル）−３，５−ジフルオロピリジン−２−カルボキサミド、
４）Ｎ−（２´−アミノ−２，３，５´，６´−テトラヒドロスピロ［クロメン−４，４´−［１，３］チアジン］−６−イル）−５−フルオロピリジン−２−カルボキサミド、
５）Ｎ−（２´−アミノ−２，３，５´，６´−テトラヒドロスピロ［クロメン−４，４´−［１，３］チアジン］−６−イル）−５−ブロモピリミジン−２−カルボキサミド、
６）Ｎ−（２´−アミノ−２，３，５´，６´−テトラヒドロスピロ［クロメン−４，４´−［１，３］チアジン］−６−イル）−５−ブロモピリジン−２−カルボキサミド、
７）Ｎ−（２´−アミノ−２，３，５´，６´−テトラヒドロスピロ［クロメン−４，４´−［１，３］チアジン］−６−イル）−５−メトキシピラジン−２−カルボキサミド、
８）Ｎ−（２´−アミノ−２，３，５´，６´−テトラヒドロスピロ［クロメン−４，４´−［１，３］チアジン］−６−イル）−３，５−ジクロロピリジン−２−カルボキサミド、
９）Ｎ−（２´−アミノ−２，３，５´，６´−テトラヒドロスピロ［クロメン−４，４´−［１，３］チアジン］−６−イル）−３−フルオロピリジン−２−カルボキサミド、
１０）６−（５−メトキシピリジン−３−イル）−２，３，５´，６´−テトラヒドロスピロ［クロメン−４，４´−［１，３］チアジン］−２´−アミン、
１１）６−（３，５−ジクロロフェニル）−２，３，５´，６´−テトラヒドロスピロ［クロメン−４，４´−［１，３］チアジン］−２´−アミン、
１２）６−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾル−４−イル）−２，３，５´，６´−テトラヒドロスピロ［クロメン−４，４´−［１，３］チアジン］−２´−アミン、
１３）６−（２−フルオロピリジン−３−イル）−２，３，５´，６´−テトラヒドロスピロ［クロメン−４，４´−［１，３］チアジン］−２´−アミン、
１４）６−［（２−アミノピリジン−３−イル）エチニル］−２，３，５´，６´−テトラヒドロスピロ［クロメン−４，４´−［１，３］チアジン］−２´−アミン、
１５）７−フルオロ−６−（２−フルオロピリジン−３−イル）−２，３，５´，６´−テトラヒドロスピロ［クロメン−４，４´−［１，３］チアジン］−２´−アミン、
より好ましくは、以下の化合物が挙げられる。
１）（−）−Ｎ−（２´−アミノ−２，３，５´，６´−テトラヒドロスピロ［クロメン−４，４´−［１，３］チアジン］−６−イル）−５−シアノピリジン−２−カルボキサミド、
２）Ｎ−（２´−アミノ−２，３，５´，６´−テトラヒドロスピロ［クロメン−４，４´−［１，３］チアジン］−６−イル）−５−トリフルロメチルピリジン−２−カルボキサミド、
３）Ｎ−（２´−アミノ−２，３，５´，６´−テトラヒドロスピロ［クロメン−４，４´−［１，３］チアジン］−６−イル）−３，５−ジフルオロピリジン−２−カルボキサミド、
４）Ｎ−（２´−アミノ−２，３，５´，６´−テトラヒドロスピロ［クロメン−４，４´−［１，３］チアジン］−６−イル）−５−ブロモピリミジン−２−カルボキサミド、
５）Ｎ−（２´−アミノ−２，３，５´，６´−テトラヒドロスピロ［クロメン−４，４´−［１，３］チアジン］−６−イル）−５−ブロモピリジン−２−カルボキサミド、
６）Ｎ−（２´−アミノ−２，３，５´，６´−テトラヒドロスピロ［クロメン−４，４´−［１，３］チアジン］−６−イル）−３，５−ジクロロピリジン−２−カルボキサミド。
【００３４】
次に、本発明の式（Ｉ）の化合物［以下、化合物（Ｉ）という、他式で表される化合物についても同様に表記する］又はその医薬上許容される塩の製造法について説明する。
【００３５】
以下に説明する本発明の式（Ｉ）の化合物を製造する際に用いる原料化合物における「脱離基」とは、求核置換反応に利用される脱離基であればいずれでもよく、好ましくは、例えばハロゲン原子；上記の置換基群αから選択される１乃至３の置換基で置換されてもよいＣ１−６アルキルスルホニルオキシ基；上記の置換基群αから選択される１乃至３の置換基で置換されてもよいＣ１−６アルキルカルボニルオキシ基；上記の置換基群αから選択される１乃至３の置換基で置換されてもよいアリールスルホニルオキシ基等が挙げられ、具体的には、塩素原子、臭素原子、ヨウ素原子、メタンスルホニルオキシ基、トリフルオロカルボニルオキシ基、トリフルオロメタンスルホニルオキシ基、ｐ−トルエンスルホニルオキシ基等が挙げられる。
【００３６】
一般的製造法１：
【化３】
［式中、環Ａ、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｘ、ＹおよびＺは前記と同じ意味を示す。］
本工程は、化合物（ａ−１）を酸により閉環し、化合物（ＩＩ）を得る方法である。
本反応は、反応を阻害せず出発物質をある程度溶解するものであれば特に限定されないが、例えば、ベンゼン、トルエン、ジクロロメタン等の溶媒の存在下または非存在下に適当な酸を１当量〜大過剰作用させて行うことができる。さらに酸を溶媒として用いることもできる。使用する酸としては、例えば硫酸、トリフルオロ酢酸、メタンスルホン酸、トリフルオロメタンスルホン酸またはそれらの混合物等があげられる。反応時間は、特に限定されないが、通常、１から７２時間であり、好ましくは１から４８時間である。反応温度は、通常、氷冷〜溶媒の還流温度である。
【００３７】
化合物（ＩＩ）の合成法
一般的製造法１で用いる化合物（ａ−１）は化合物（ａ−２）から、方法１又は方法２によって合成することができる。
方法１：
【化４】
［式中、各記号は前記と同じ意味を示す。］
方法１は、化合物（ａ−２）を原料として２工程で化合物（ａ−１）を製造する方法である。化合物（ａ−２）は、市販品をそのまま用いることもでき、市販品から公知の方法で製造することもでき、更に実施例中の製造例の記載の方法を用いて製造することもできる。
【００３８】
工程１：
本工程は、市販または公知の方法で調整することができるビニルリチウム試薬、ビニルグリニヤール（Ｇｒｉｇｎａｒｄ）試薬と化合物（ａ−２）の付加反応により化合物（ａ−３）を得る工程である。この反応は、例えば、Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．２００６、１２８、９９９８−９９９９、Ｊ．Ｈｅｔｅｒｏｃｙｃｌｉｃ Ｃｈｅｍ．１９８２、１９、１０４１−１０４４、等に記載の条件と同様の条件で反応を行うことができる。反応に用いる溶媒は、出発原料、使用する試薬により異なり、また反応を阻害せず出発物質をある程度溶解し反応中常に不活性なものであれば特に限定されないが、好適には、例えばジエチルエーテル、テトラヒドロフラン、１，４−ジオキサン、１，２−ジメトキシエタン、ベンゼン、トルエン等の有機溶媒、或いはその混合溶媒である。反応時間は、特に限定されないが、通常、０．１〜４８時間であり、好ましくは０．１〜１２時間である。反応温度は、出発原料、使用する試薬等により異なるが、副生成物の形成を最小限に抑えるために温度を低く、例えば、−７８℃から室温等に保つことが好ましい。
また、添加剤として、例えば塩化亜鉛等のルイス酸、或いは、ＴＭＥＤＡ（テトラメチルエチレンジアミン）、ＨＭＰＡ（ヘキサメチルホスホロアミド）を添加することにより収率の向上や反応時間の短縮等に良好な結果を与えることがある。
【００３９】
工程２：
本工程は、化合物（ａ−３）にチオウレアまたはＮ−置換チオウレアを酸存在下に反応させて、化合物（ａ−１）を得る工程である。
本工程における反応は、例えば、Ｒｕｓｓ．Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．，２００６、４２（１）、４２−４７に記載の条件と同様の条件で反応を行うことができる。
本反応で用いる酸は例えば酢酸、トリフルオロ酢酸、塩化水素、硫酸またはそれらの混合物である。反応は無溶媒またはトルエン等の有機溶媒中で（ａ−３）に対して１当量以上のチオウレア誘導体を作用させて反応を行うことができる。反応時間は、特に限定されないが、通常、５分から２４時間であり、好ましくは５分から１２時間である。反応温度は、通常、０℃〜１５０℃であり、より好ましくは０℃〜１００℃である。
【００４０】
方法２：
【化５】
［式中、環Ａ、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｘ、Ｙ、Ｚは前記と同じ意味を示す。ＬＶは脱離基を、Ｒ１０はＣ１−６アルキル基を示す。］
方法２は、化合物（ａ−２）を原料として４工程で化合物（ａ−１）を製造する方法である。
【００４１】
工程１：
本工程は、公知の方法と同様の条件でピーターソン試薬、ホーナー・ワズワース・エモンズ試薬と化合物（ａ−２）の付加反応により化合物（ａ−４）を得る工程である。
ピーターソン試薬、ホーナー・ワズワース・エモンズ試薬は、市販品をそのまま用いることもでき、当業者に公知の方法で調整することができる。具体的には、例えば、トリアルキルシリル酢酸アルキル化合物、またはホスホノ酢酸トリアルキル化合物に対し、市販の有機金属試薬、例えばブチルリチウム等のアルキルリチウム試薬、またはｔｅｒｔ−ブトキシカリウム等のアルコキシカリウム、アルコキシナトリウム試薬、または金属マグネシウムや金属リチウムを用いるプロトン金属交換を行って対応するリチウムアルキルアミド試薬もしくはマグネシウムアルキルアミド試薬により調製することができる。
本工程において用いる溶媒は、出発原料、使用する試薬により異なり、また反応を阻害せず出発物質をある程度溶解し反応中常に不活性なものであれば特に限定されないが、好適には、例えばジエチルエーテル、テトラヒドロフラン、１，４−ジオキサン、１，２−ジメトキシエタン、ベンゼン、トルエン、メタノール、エタノール等の有機溶媒、或いはその混合溶媒である。反応時間は、特に限定されないが、通常、０．１〜４８時間であり、好ましくは０．１〜１２時間である。反応温度は、出発原料、使用する試薬等により異なるが、副生成物の形成を最小限に抑えるために温度を低く、例えば、−７８℃から室温等に保つことが好ましい。
【００４２】
工程２：
本工程は、エステル化合物（ａ−４）を還元反応に付し、アルコール化合物（ａ−５）を得る工程である。
反応に使用される還元剤としては、例えば水素化リチウムアルミニウム、水素化ホウ素リチウム、水素化ジイソブチルアルミニウム等が挙げられる。反応温度は特に限定されないが、通常、−７８℃〜溶媒の還流温度であり、好ましくは−７８℃〜室温である。反応に使用される溶媒は、反応を阻害せず出発物質をある程度溶解するものであれば特に限定されないが、好適には、例えばテトラヒドロフラン、ジエチルエーテル、トルエン、ジクロロメタン等があげられる。
【００４３】
工程３：
本工程は、化合物（ａ−５）の水酸基を脱離基に変換し、化合物（ａ−６）を得る工程である。
脱離基としては、前記した脱離基をあげることができる。水酸基をこれらの脱離基に変換する反応に通常用いられる条件と同様の条件で反応を行うことができる。例えば脱離基がハロゲン原子の場合には、化合物（ａ−５）を、例えば塩酸、臭酸、塩化チオニル、臭化チオニル、三臭化リンまたテトラハロゲノメタン−トリフェニルホスフィンと反応させることにより製造することができる。反応に使用する溶媒としては、反応を阻害せず出発物質をある程度溶解するものであれば特に限定されないが、好ましくは、例えばベンゼン、トルエン、キシレン、ジクロロメタン、クロロホルム等があげられる。反応温度は、通常、−７８℃〜溶媒の還流温度であり、好ましくは氷冷〜溶媒の還流温度である。反応時間は、特に限定されないが、通常、５分〜４８時間であり、好ましくは５分〜１２時間である。
【００４４】
また、脱離基がＣ１−６アルキルカルボニルオキシ基の場合には、化合物（ａ−５）を、例えば塩化トリフルオロ酢酸、無水トリフルオロ酢酸等と反応させて、製造することができる。
また、脱離基がＣ１−６アルキルスルホニルオキシ基又はアリールスルホニルオキシ基の場合には、化合物（ａ−５）を、例えば塩化メタンスルホニル、塩化ｐ−トルエンスルホニル、無水トリフルオロメタンスルホン酸等と反応させて、製造することができる。
反応に使用する溶媒としては、反応を阻害せず出発物質をある程度溶解するものであれば特に限定されないが、好ましくは、例えばテトラヒドロフラン、トルエン、キシレン、ジクロロメタン、クロロホルム、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド等があげられる。反応温度は、通常、−７８℃〜溶媒の還流温度であり、好ましくは−７８℃〜室温である。さらに塩基の添加により収率向上等の良好な結果を得ることがある。用いる塩基は反応を阻害しない限りにおいて特に限定されないが、好ましくは、例えば炭酸ナトリウム、炭酸カリウム、トリエチルアミン、ピリジン、ジイソプロピルエチルアミン等があげられる。
【００４５】
工程４：
本工程は、化合物（ａ−６）にチオウレアまたはＮ−置換チオウレアを反応させて、化合物（ａ−１）を得る工程である。
具体的には、本反応は、例えばメタノール、エタノール、１−プロパノール、２−プロパノール、１−ブタノール、テトラヒドロフラン、１，４−ジオキサン、Ｎ，Ｎ‐ジメチルホルムアミド等の有機溶媒中、または臭酸等の無機酸中、化合物（ａ−６）に対して１当量以上のチオウレアまたはＮ−メチルチオウレアを作用させて反応を行うことができる。反応時間は、特に限定されないが、通常、５分から２４時間であり、好ましくは５分から１２時間である。反応温度は、通常、０℃〜１５０℃であり、より好ましくは室温〜１００℃である。
【００４６】
２．一般的製造法２：
【化６】
［式中、環Ａ、環Ｂ、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｘ、Ｙ、Ｚは前記と同じ意味を示す。］
一般的製造法２は、一般的製造法１で得られた化合物（ＩＩ）から６工程で本発明にかかる一般式（Ｉ）において、Ｌが−ＮＨＣＯ−である化合物を製造する方法である。
化合物（ＩＩ）は、市販品から前記一般的製造法１により製造することができ、更に実施例中の製造例の記載の方法を用いて製造することもできる。また、化合物（ｂ−５）および（ｂ−６）は、市販品をそのまま用いることもでき、市販品から当業者に公知の方法で製造することもでき、更に実施例中の製造例の記載の方法を用いて製造することもできる。
【００４７】
工程１：
本工程は、化合物（ＩＩ）から化合物（ｂ−１）を製造する工程である。
この反応は、以下の公知の方法１又は方法２で行うことができる。
【００４８】
方法１：化合物（ＩＩ）にアセチル化とニトロ化反応を系内で同時に行う方法
本反応は、当業者に公知の方法により反応することができ、反応に使用される条件としては、例えば濃硝酸／無水酢酸、発煙硝酸／無水酢酸等が挙げられる。反応温度は特に限定されないが、通常、−２０℃から５０℃であり、好ましくは−２０℃〜室温である。
【００４９】
方法２：化合物（ＩＩ）のアセチル化体を単離した後、ニトロ化を行う方法
工程２−１：本工程は、化合物（ＩＩ）のアセチル化反応により対応するアセチル化合物を得る工程である。アミノ化合物のアセチル化に一般に用いられる条件、例えばＴ．Ｗ．Ｔ．Ｗ．Ｇｒｅｅｎ ａｎｄ Ｐ．Ｇ．Ｍ．Ｗｕｔｓ，“Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ Ｇｒｏｕｐｓ ｉｎ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，Ｓｅｃｏｎｄ Ｅｄｉｔｉｏｎ”，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ（１９９１），Ｐ．３５１−３５２等の文献記載の条件と同様の条件で反応を行うことができる。反応に使用されるアセチル化剤としては、例えば塩化アセチル、無水酢酸等が挙げられる。反応温度は特に限定されないが、通常、−２０℃〜１５０℃である。
【００５０】
工程２−２：本工程は、前記工程２−１で合成したアセチル化合物をニトロ化することにより化合物（ｂ−１）を得る工程である。本ニトロ化反応は、ニトロ化に一般に用いられる条件、例えば日本化学会編、第４版 実験化学講座２０巻、Ｐ．３９４−４０４、（１９９２）等の文献記載の条件と同様の条件で反応を行うことができる。反応に使用されるニトロ化剤としては、例えば濃硝酸、濃硝酸／酢酸、濃硝酸／濃硫酸、硝酸カリウム／濃硫酸、発煙硝酸／無水酢酸等が挙げられる。反応温度は特に限定されないが、通常、−２０℃〜７０℃である。
【００５１】
工程２：
本工程は、化合物（ｂ−１）の脱アセチル化反応により化合物（ｂ−２）を得る工程である。本反応は、アセチル基の脱保護反応に一般に用いられる条件、例えばＴ．Ｗ．Ｇｒｅｅｎ ａｎｄ Ｐ．Ｇ．Ｍ．Ｗｕｔｓ，“Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ Ｇｒｏｕｐｓ ｉｎ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，Ｓｅｃｏｎｄ Ｅｄｉｔｉｏｎ”，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ（１９９１），Ｐ．３５１−３５２等の文献記載の条件と同様の条件で反応を行うことができる。反応は、例えば塩酸、硫酸、臭化水素酸等の酸存在下行うことができる。反応溶媒はメタノール、エタノール、トルエン、プロパノール等であり、反応温度は特に限定されないが、通常、−２０℃から１５０℃であり、好ましくは室温から溶媒還流温度である。
【００５２】
工程３：
本工程は、化合物（ｂ−２）のアミノ基をｔ−ブトキシカルボニル化させることにより化合物（ｂ−３）を得る工程である。
アミノ化合物のｔ−ブトキシカルボニル化に一般に用いられる条件、例えばＴ．Ｗ．Ｇｒｅｅｎ ａｎｄ Ｐ．Ｇ．Ｍ．Ｗｕｔｓ，“Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ Ｇｒｏｕｐｓ ｉｎ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，Ｓｅｃｏｎｄ Ｅｄｉｔｉｏｎ”，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ（１９９１），Ｐ．３２７−３３０等の文献記載の条件と同様の条件で反応を行うことができる。例えばテトラヒドロフラン等の溶媒中でトリエチルアミンを塩基として化合物（ｂ−２）とジ−ｔｅｒｔ−ブチル ジカーボネートを反応させることで化合物（ｂ−３）を得ることができる。
【００５３】
工程４：
本工程は、化合物（ｂ−３）を還元して、化合物（ｂ−４）を得る工程である。
本反応は、ニトロ化合物の還元反応に一般的に用いられる条件で反応を行うことができ、例えばラネーニッケル、パラジウム、ルテニウム、ロジウムまたは白金等の貴金属触媒を使用する接触水素化による還元、鉄等を用いた金属による還元、亜二チオン酸ナトリウムによる還元等が挙げられる。この場合に好ましいのは、例えば、塩化アンモニウムを用いる中性条件下での鉄による還元反応等が挙げられる。
【００５４】
工程５：
本工程は化合物（ｂ−４）から化合物（ｂ−７）を得る工程である。
この反応は、（１）化合物（ｂ−４）と化合物（ｂ−５）とを縮合剤を用いて直接縮合させる方法（方法（１））、（２）化合物（ｂ−５）の混合酸無水物と化合物（ｂ−４）とを反応させる方法（方法（２））、（３）化合物（ｂ−５）の活性エステルと化合物（ｂ−４）とを反応させる方法（方法（３））、または（４）酸クロリド化合物（ｂ−６）と化合物（ｂ−４）とを反応させる方法（方法（４））等の公知の方法で行うことができる。
これらの反応に用いる化合物（ｂ−４）はフリー体であっても塩であってもよい。
【００５５】
方法（１）：
化合物（ｂ−４）と化合物（ｂ−５）とを縮合剤を用いて直接縮合させて化合物（ｂ−７）を得ることができる。
本反応は公知の方法で反応することができ、縮合剤としては、ＣＤＩ（Ｎ，Ｎ´−カルボニルジイミダゾール）、Ｂｏｐ（１Ｈ−１，２，３−ベンゾトリアゾール−１−イルオキシ（トリ（ジメチルアミノ））ホスホニウム ヘキサフルオロホスフェ−ト）、ＷＳＣ（１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド・塩酸塩）、ＤＣＣ（Ｎ，Ｎ−ジシクロヘキシルカルボジイミド）、ジエチルホスホリルシアニド、ＰｙＢＯＰ（ベンゾトリアゾール−１−イルオキシトリス（ピロリジノ）ホスホニウムヘキサフルオロホスフェート）、ＥＤＣ・ＨＣｌ（１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド塩酸塩）等が挙げられる。
本反応の溶媒は、反応を阻害しないものであれば特に限定されないが、例えばテトラヒドロフラン、１，４−ジオキサン、酢酸エチル、酢酸メチル、ジクロロメタン、クロロホルム、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド、トルエン、キシレン等があげられる。
化合物（ｂ−５）は化合物（ｂ−４）に対して１当量から大過剰用いる。また必要に応じて１当量から大過剰の有機塩基、例えばトリエチルアミン等を加えてもよい。
反応時間は、特に限定されないが、通常、０．５から４８時間であり、好ましくは０．５から２４時間である。反応温度は、使用する原料、溶媒等により異なり特に限定されないが、好ましくは氷冷〜溶媒の還流温度である。
【００５６】
方法（２）：
化合物（ｂ−５）を混合酸無水物とした後、該混合酸無水物と化合物（ｂ−４）とを反応させて化合物（ｂ−７）を得ることができる。混合酸無水物は、公知の方法により合成できるが、例えばトリエチルアミン等の塩基存在下、化合物（ｂ−５）および例えばクロロギ酸エチル等のクロロギ酸エステル類を反応させることで行われる。クロロギ酸エステル類および塩基は、化合物（ｂ−５）に対して１当量から２当量用いる。反応温度は−３０℃〜室温であり、好ましくは−２０℃〜室温である。
混合酸無水物と化合物（ｂ−４）を縮合させる工程は、例えばジクロロメタン、テトラヒドロフラン、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド等の溶媒中、混合酸無水物と化合物（ｂ−４）とを反応させることにより行われる。化合物（ｂ−４）は、混合酸無水物に対して１当量から大過剰を用いる。
反応時間は、特に限定されないが、通常、０．５から４８時間であり、好ましくは０．５から１２時間である。反応温度は−２０℃〜５０℃であり、好ましくは−２０℃から室温である。
【００５７】
方法（３）：
化合物（ｂ−５）を活性エステルとした後、該活性エステルと化合物（ｂ−４）とを反応させて化合物（ｂ−７）を得ることができる。活性エステルを得る工程は、例えば１，４−ジオキサン、テトラヒドロフラン、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド等の溶媒中、例えばＤＣＣ等の縮合剤存在下、化合物（ｂ−５）および活性エステル合成試薬を反応させることにより行われる。活性エステル合成試薬としては、例えばＮ−ヒドロキシスクシンイミド等が挙げられる。活性エステル合成試薬および縮合剤は化合物（ｂ−５）に対して１当量から１．５当量用いる。反応時間は、特に限定されないが、通常、０．５から４８時間であり、好ましくは０．５から２４時間である。
反応温度は−２０℃〜５０℃であり、好ましくは−２０℃から室温である。
活性エステルと化合物（ｂ−４）を縮合させる工程は、例えばジクロロメタン、テトラヒドロフラン、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド等の溶媒中、活性エステルと化合物（ｂ−４）とを反応させることにより行われる。化合物（ｂ−４）は、活性エステルに対して１当量から大過剰を用いる。反応時間は、特に限定されないが、通常、０．５から４８時間であり、好ましくは０．５から２４時間である。反応温度は−２０℃〜５０℃であり、好ましくは−２０℃から室温である。
【００５８】
方法（４）：
化合物（ｂ−４）と化合物（ｂ−６）から化合物（ｂ−７）を得るアシル化反応は、公知の一般的に用いられる条件と同様の条件で行うことができる。
反応に使用される塩基としては、例えばトリエチルアミン、ピリジン、炭酸カリウム、ジイソプロピルエチルアミン等が挙げられる。反応温度は特に限定されないが、通常、−７８℃〜溶媒の還流温度であり、好ましくは−２０℃〜室温である。反応に使用される溶媒は、反応を阻害せず出発物質をある程度溶解するものであれば特に限定されないが、好適には、例えば、テトラヒドロフラン、エーテル、トルエン、ジクロロメタン等があげられる。
【００５９】
工程６：
本工程は、化合物（ｂ−７）のｔ−ブトキシカルボニル基の脱保護反応により化合物（Ｉ−ａ）を得る工程である。
ｔ−ブトキシカルボニル基の脱保護反応に一般に用いられる条件、例えばＴ．Ｗ．Ｇｒｅｅｎ ａｎｄ Ｐ．Ｇ．Ｍ．Ｗｕｔｓ，“Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ Ｇｒｏｕｐｓ ｉｎ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，Ｓｅｃｏｎｄ Ｅｄｉｔｉｏｎ”，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ（１９９１），Ｐ．３２７−３３０等の文献記載の条件と同様の条件で反応を行うことができる。例えばジクロロメタン等の溶媒中でトリフルオロ酢酸と化合物（ｂ−７）を反応させることで化合物（Ｉ−ａ）を得ることができる。
【００６０】
かくして得られる、本発明にかかる一般式（Ｉ）において、Ｌが−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ−である化合物に、更に、対応するＣ１−６アルキルハライドを通常の方法で反応させることにより、本発明にかかる一般式（Ｉ）において、Ｌが−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲＬ−（ＲＬは置換基αから選択される１乃至３の置換基を有していてもよいＣ１−６アルキル基である。）である化合物を得ることができる。
【００６１】
一般式（Ｉ）において、Ｒ３が水素原子の場合、一般的製造法２において得られる化合物（Ｉ−ａ）を、更に、Ｃ１−６アルキルハライド、Ｃ１−６アルキルカルボニルハライド、Ｃ６−１０アリールカルボニルハライド、Ｃ１−６アルキルスルホニルハライド、Ｃ６−１０アリールスルホニルハライド、Ｃ３−１０員炭素環ハライド、５−１０員複素環ハライドなどの対応するハロゲン化化合物などと反応させることにより、式（Ｉ）において、Ｒ３が置換基群αから選択される１乃至３の置換基を有していてもよいＣ１−６アルキル基、置換基群αから選択される置換基を有していてもよいＣ１−６アルキルカルボニル基、置換基群αから選択される１乃至３の置換基を有していてもよいＣ６−１０アリールカルボニル基、置換基群αから選択される１乃至３の置換基を有していてもよいＣ１−６アルキルスルホニル基、置換基群αから選択される１乃至３の置換基を有していてもよいＣ６−１０アリールスルホニル基、置換基群αから選択される１乃至３の置換基を有していてもよいＣ３−１０員炭素環基又は置換基群αから選択される１乃至３の置換基を有していてもよい５−１０員複素環基である本発明の化合物を得ることができる。
【００６２】
３．一般製造法３：
【化７】
［式中、Ｌ１は、化合物（ｃ−４）、（ｃ−５）及び（ｃ−６）においては、単結合又はＣ１−６アルキレン基を示し、化合物（ｃ−８）及び（ｃ−９）においては、単結合又はＣ１−４アルキレン基を示し、Ｌは単結合、酸素原子、Ｃ１−６アルキレン基、Ｃ２−６アルケニレン基またはＣ２−６アルキニレン基を示し、環Ａ、環Ｂ、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｘ、Ｙ、Ｚは前記と同じ意味を示す。］
一般的製造法３は、化合物（ＩＩ）から３工程で一般式（Ｉ）において、Ｌが単結合、二重結合、三重結合である化合物（Ｉ−ｂ）を製造する方法である。
化合物（ＩＩ）は、市販品から前記一般製造法１により製造することができ、更に実施例中の製造例の記載の方法を用いて製造することもできる。また、化合物（ｃ−４）、（ｃ−５）、（ｃ−６）、（ｃ−７）および（ｃ−８）は、市販品をそのまま用いることもでき、市販品から公知の方法で製造することもでき、更に実施例中の製造例の記載の方法を用いて製造することもできる。
【００６３】
工程１：
本工程は、化合物（ＩＩ）の臭素化反応を系内で行うことにより化合物（ｃ−１）を得る工程である。本反応は、例えば、Ｈｏｌｍｂｅｒｇ，Ｐ．；Ｔｅｄｅｎｂｏｒｇ， Ｐ．；Ｒｏｓｑｕｖｉｓｔ， Ｓ．；Ｈｏｈａｎｓｓｏｎ， Ａ．Ｍ．，Ｂｉｏｏｒｇ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔ．；１５（３），７４７−７５０（２００５）等の文献記載の方法と同様の方法で行うことができる。反応に使用される条件としては、例えば臭素／酢酸、臭素／炭酸ナトリウム／ヘキサン、Ｎ−ブロモスクシンイミド／塩化メチレン等が挙げられる。反応温度は特に限定されないが、通常、−２０℃から５０℃であり、好ましくは−２０℃〜室温である。
【００６４】
工程２：
本工程は、化合物（ｃ−１）をｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル化することにより化合物（ｃ−２）、或いはＲ３が水素原子の場合に化合物（ｃ−３）を得る工程である。本反応は、アミド化合物のｔ−ブトキシカルボニル化に一般に用いられる条件、例えば、ＴＨＦ等の溶媒中で４−ジメチルアミノピリジンを塩基として化合物（ｃ−１）とジ−ｔｅｒｔ−ブチル ジカーボネートを反応させることで化合物（ｃ−２）或いは（ｃ−３）を得ることができる。
本反応に用いられる溶媒は、反応を阻害しないものであれば特に限定されないが、好ましくは、例えば、テトラヒドロフラン、１，４−ジオキサン、１，２−ジメトキシエタン、ジクロロメタン、ＤＭＦ、アセトニトリル等の有機溶媒、或いは、これらの混合溶媒が挙げられる。使用する塩基としては、例えば、トリエチルアミン、４−ジメチルアミノピリジン、ＤＢＵ、或いは、これらの混合物等があげられる。これらの塩基は、化合物（ｃ−１）に対して、触媒量から過剰量用いられ、より好ましくは０．１−５当量である。ジ−ｔｅｒｔ−ブチル ジカーボネートは、化合物（ｃ−１）に対して２当量から過剰量用いられ、より好ましくは、２−１０当量用いられる。反応時間は、特に限定されないが、通常、５分から２４時間であり、好ましくは５分から１２時間である。反応温度は、通常、−２０℃〜溶媒の還流温度であり、より好ましくは０℃〜溶媒の還流温度である。
【００６５】
工程３：
本工程は、化合物（ｃ−２）或いは（ｃ−３）と、化合物（ｃ−４）、（ｃ−５）、（ｃ−６）、（ｃ−７）、（ｃ−８）或いは（ｃ−９）との遷移金属を用いたカップリング反応により、ｔ−ブトキシカルボニル基の脱保護を伴って化合物（Ｉ−ｂ）を得る工程である。本反応は、遷移金属を用いたカップリング反応（例えば、鈴木−宮浦反応、スティル反応（Ｓｔｉｌｌｅ反応）、園頭反応、ヘック反応（Ｈｅｃｋ反応）、Ｂｕｃｋｗａｌｄ、Ｓ．Ｌ．ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ａｍ Ｃｈｅｍ Ｓｏｃ（１９９９）１２１（１８），４３６９−４３７８等に記載の方法等）に通常用いられている条件で反応を行うことができる。
【００６６】
本反応に用いられる有機金属触媒としては特に限定されないが、好ましくは、例えばテトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（０）、ジクロロビス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（ＩＩ）、［１，１´−ビス（ジフェニルホスフィノ）フェロセン］パラジウム（ＩＩ）ジクロリド、ビス（ｔｅｒｔ−ブチルホスフィン）パラジウム（０）、酢酸パラジウム（ＩＩ）、［１，３−ビス（ジフェニルホスフィノ）プロパン］ニッケル（ＩＩ）等の金属触媒或いは、これら金属触媒の混合物をあげることができる。有機金属触媒の使用量は、原料に対して約０．００１〜０．５当量である。化合物（ｃ−４）、（ｃ−５）、（ｃ−６）、（ｃ−７）或いは（ｃ−８）の使用量は、特に限定されないが、通常、化合物（ｃ−２）或いは（ｃ−３）に対して１〜６当量である。本反応に用いられる溶媒は、反応を阻害しないものであれば特に限定されないが、好ましくは、例えばベンゼン、トルエン、キシレン、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド、１−メチル−２−ピロリドン、テトラヒドロフラン、１，２−ジメトキシエタン、１，４−ジオキサン、アセトニトリル、プロピオニトリル等をあげることができる。反応温度は特に限定されないが、通常、氷冷〜溶媒の還流温度であり、好ましくは、例えば、室温〜溶媒の還流温度である。反応時間は、特に限定されないが、通常、０．５〜４８時間であり、好ましくは０．５〜２４時間である。
【００６７】
さらに本反応を塩基或いは塩の共存下に行うことで収率向上等のより好ましい結果を得ることがある。かかる塩基或いは塩としては特に限定はされないが、好ましくは炭酸ナトリウム、炭酸カリウム、水酸化バリウム、炭酸セシウム、リン酸カリウム、フッ化カリウム、或いはそれらの水溶液、およびトリエチルアミン、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン、塩化リチウム、ヨウ化銅（Ｉ）等の塩基、或いは塩があげられる。
【００６８】
工程３において、化合物（ｃ−１）でＲ３が水素原子である場合には、アミノ基をｔ−ブトキシカルボニル基等で保護することなく、化合物（ｃ−７）とカップリング反応を行い、化合物（Ｉ−ｂ）を合成することができる。
【００６９】
一般式（Ｉ）において、Ｒ３が水素原子の場合、一般的製造法３において得られる化合物（Ｉ−ｂ）を、更に、Ｃ１−６アルキルハライド、Ｃ１−６アルキルカルボニルハライド、Ｃ６−１０アリールカルボニルハライド、Ｃ１−６アルキルスルホニルハライド、Ｃ６−１０アリールスルホニルハライド、Ｃ３−１０員炭素環ハライド、５−１０員複素環ハライドなどの対応するハロゲン化化合物などと反応させることにより、式（Ｉ）において、Ｒ３が置換基群αから選択される１乃至３の置換基を有していてもよいＣ１−６アルキル基、置換基群αから選択される置換基を有していてもよいＣ１−６アルキルカルボニル基、置換基群αから選択される１乃至３の置換基を有していてもよいＣ６−１０アリールカルボニル基、置換基群αから選択される１乃至３の置換基を有していてもよいＣ１−６アルキルスルホニル基、置換基群αから選択される１乃至３の置換基を有していてもよいＣ６−１０アリールスルホニル基、置換基群αから選択される１乃至３の置換基を有していてもよいＣ３−１０員炭素環基又は置換基群αから選択される１乃至３の置換基を有していてもよい５−１０員複素環基である本発明の化合物を得ることができる。
【００７０】
一般製造法３において得られる化合物（Ｉ−ｂ）のＬがＣ１−６アルキレン基である化合物は、化合物（ｃ−２）或いは（ｃ−３）と（ｃ−８）或いは（ｃ−９）との遷移金属を用いたカップリング反応により、生成したＬがＣ２−６アルケニレン基又はＣ２−６アルキニレン基を還元反応に通常用いられている条件、例えば、パラジウム等の触媒を用いる反応で製造することもできる。
【００７１】
かくして得られる本発明の式（Ｉ）の化合物は、必要に応じて、常法により、医薬上許容される塩とすることができる。その製造法は、有機合成化学分野で通常用いられる方法などを適宜組み合わせて行うことができる。具体的には、本発明化合物の遊離型の溶液を酸溶液で中和滴定することなどが挙げられる。また、必要に応じて、それ自体周知の溶媒和物形成反応に付すことにより、本発明の式（Ｉ）の化合物を溶媒和物に変換することができる。
【００７２】
本発明に係るスピロアミノジヒドロチアジン誘導体又はその医薬上許容される塩は、極めて優れたＡβ産生抑制作用又はＢＡＣＥ１阻害作用を有し、Ａβに起因する、アルツハイマー型痴呆に代表される神経変性疾患の予防剤または治療剤として極めて有用である。
【００７３】
本発明に係るスピロアミノジヒドロチアジン誘導体又はその医薬上許容される塩は、通常の方法により製剤化が可能であり、好ましい剤形としては、例えば、錠剤、フィルム錠や糖衣錠等の被覆錠剤、細粒剤、顆粒剤、散剤、カプセル剤、シロップ剤、トローチ剤、吸入剤、坐剤、注射剤、軟膏剤、点眼剤、点鼻剤、点耳剤、パップ剤、ローション剤等が挙げられる。
これらの錠剤、カプセル剤、顆粒剤、粉末などの固形製剤は、一般的には０．０１〜１００重量％、好ましくは０．１〜１００重量％の有効成分である本発明に係るスピロアミノジヒドロチアジン誘導体又はその医薬上許容される塩を含むことができる。
【００７４】
製剤化には、一般に医薬品製剤の原料として用いられる成分を配合し、例えば、通常用いられる賦形剤、崩壊剤、結合剤、滑沢剤、着色剤、矯味矯臭剤や、必要により安定化剤、乳化剤、吸収促進剤、界面活性剤、ｐＨ調整剤、防腐剤、抗酸化剤等を添加して常法により製剤化を行う。これらの成分としては、例えば、大豆油、牛脂、合成グリセライド等の動植物油；流動パラフィン、スクワラン、固形パラフィン等の炭化水素；ミリスチン酸オクチルドデシル、ミリスチン酸イソプロピル等のエステル油；セトステアリルアルコール、ベヘニルアルコール等の高級アルコール；シリコン樹脂；シリコン油；ポリオキシエチレン脂肪酸エステル、ソルビタン脂肪酸エステル、グリセリン脂肪酸エステル、ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル、ポリオキシエチレン硬化ひまし油、ポリオキシエチレンポリオキシプロピレンブロックコポリマー等の界面活性剤；ヒドロキシエチルセルロース、ポリアクリル酸、カルボキシビニルポリマー、ポリエチレングリコール、ポリビニルピロリドン、メチルセルロース等の水溶性高分子；エタノール、イソプロパノール等の低級アルコール；グリセリン、プロピレングリコール、ジプロピレングリコール、ソルビトール等の多価アルコール；グルコース、ショ糖等の糖；無水ケイ酸、ケイ酸アルミニウムマグネシウム、ケイ酸アルミニウム等の無機粉体、精製水等が挙げられる。賦形剤としては、例えば乳糖、コーンスターチ、白糖、ブドウ糖、マンニトール、ソルビット、結晶セルロース、二酸化ケイ素等が、結合剤としては、例えばポリビニルアルコール、ポリビニルエーテル、メチルセルロース、エチルセルロース、アラビアゴム、トラガント、ゼラチン、シェラック、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、ポリビニルピロリドン、ポリプロピレングリコール・ポリオキシエチレン・ブロックポリマー、メグルミン等が、崩壊剤としては、例えば澱粉、寒天、ゼラチン末、結晶セルロース、炭酸カルシウム、炭酸水素ナトリウム、クエン酸カルシウム、デキストリン、ペクチン、カルボキシメチルセルロース・カルシウム等が、滑沢剤としては、例えばステアリン酸マグネシウム、タルク、ポリエチレングリコール、シリカ、硬化植物油等が、着色剤としては医薬品に添加することが許可されているものが、矯味矯臭剤としては、ココア末、ハッカ脳、芳香散、ハッカ油、竜脳、桂皮末等が用いられる。もちろん、これらの添加剤成分に限定される訳ではないことは言うまでもない。
【００７５】
例えば経口製剤は、有効成分である本発明に係るスピロアミノジヒドロチアジン誘導体又はその医薬上許容される塩と賦形剤、さらに必要に応じて結合剤、崩壊剤、滑沢剤、着色剤、矯味矯臭剤等を加えた後、常法により散剤、細粒剤、顆粒剤、錠剤、被覆錠剤、カプセル剤等とする。錠剤・顆粒剤の場合には、糖衣、その他必要により適宜コーティングすることはもちろん差支えない。
例えばシロップ剤や注射用製剤等の場合は、ｐＨ調整剤、溶解剤、等張化剤等と、必要に応じて溶解補助剤、安定化剤等を加えて、常法により製剤化する。また、これらの注射剤は予め溶解したものの他、粉末のまままたは適当な添加物を加えたものを用時溶解する形態も取ることができる。これらの注射液は、通常０．０１〜１００重量％、好ましくは０．１〜１００重量％等の有効成分を含むことができる。さらには、経口投与の懸濁剤またはシロップ剤等の液剤は、通常０．０１〜１００重量％、好ましくは０．１〜１００重量％等の有効成分を含むことができる。
例えば、外用剤の場合は、特に製法が限定されず、常法により製造することができる。使用する基剤原料としては、医薬品、医薬部外品、化粧品等に通常使用される各種原料を用いることが可能で、例えば動植物油、鉱物油、エステル油、ワックス類、高級アルコール類、脂肪酸類、シリコン油、界面活性剤、リン脂質類、アルコール類、多価アルコール類、水溶性高分子類、粘土鉱物類、精製水等の原料が挙げられ、必要に応じ、ｐＨ調整剤、抗酸化剤、キレート剤、防腐防黴剤、着色料、香料等を添加することができる。さらに、必要に応じて分化誘導作用を有する成分、血流促進剤、殺菌剤、消炎剤、細胞賦活剤、ビタミン類、アミノ酸、保湿剤、角質溶解剤等の成分を配合することもできる。
【００７６】
本発明に係るスピロアミノジヒドロチアジン誘導体又はその医薬上許容される塩の投与量は、症状の程度、年齢、性別、体重、投与形態・塩の種類、疾患の具体的な種類等に応じて異なるが、通常、成人の場合は１日あたり経口投与で約３０μｇ〜１０ｇ、好ましくは１００μｇ〜５ｇ、さらに好ましくは１００μｇ〜１ｇを、注射投与で約３０μｇ〜１ｇ、好ましくは１００μｇ〜５００ｍｇ、さらに好ましくは１００μｇ〜３００ｍｇをそれぞれ１回又は数回に分けて投与する。
【００７７】
本発明の化合物は生理活性低分子化合物の標的タンパクを捕捉するためのケミカルプローブとすることができる。すなわち、本発明の化合物は、当該化合物の活性発現に必須な構造部分とは異なる部分に、Ｊ． Ｍａｓｓ Ｓｐｅｃｔｒｕｍ．Ｓｏｃ．Ｊｐｎ．Ｖｏｌ．５１，Ｎｏ．５，２００３，ｐ４９２−４９８またはＷＯ２００７／１３９１４９等に記載の手法で標識基、リンカー等を導入することでアフィニティークロマトグラフィープローブ、フォトアフィニティープローブ等に変換することができる。
ケミカルプローブに用いる標識基、リンカー等は、例えば以下の（１）ないし（５）からなる群に示される基が挙げられる。
（１）光親和性標識基（例えば、ベンゾイル基、ベンゾフェノン基、アジド基、カルボニルアジド基、ジアジリジン基、エノン基、ジアゾ基およびニトロ基等）および化学親和性基（例えば、アルファー炭素原子がハロゲン原子で置換されたケトン基、カルバモイル基、エステル基、アルキルチオ基、α、β−不飽和ケトン、エステル等のマイケル受容体、およびオキシラン基等）等のタンパク質標識基、
（２）−Ｓ−Ｓ−、−Ｏ−Ｓｉ−Ｏ−、単糖（グルコース基、ガラクトース基等）または二糖（ラクトース等）等の開裂可能なリンカー、および酵素反応で開裂可能なオリゴペプチドリンカー、
（３）ビオチン、３−（４，４−ジフルオロ−５，７−ジメチル−４Ｈ−３ａ，４ａ−ジアザ−４−ボラ−ｓ−インダセン−３−イル）プロピオニル基等のフィッシングタグ基、
（４）１２５Ｉ、３２Ｐ、３Ｈ、１４Ｃなどの放射性標識基；フルオレセイン、ローダミン、ダンシル、ウンベリフェロン、７−ニトロフラザニル、３−（４，４−ジフルオロ−５，７−ジメチル−４Ｈ−３ａ，４ａ−ジアザ−４−ボラ−ｓ−インダセン−３−イル）プロピオニル基等の蛍光標識基；ルミフェリン、ルミノール等の化学発光基；ランタノイド金属イオン、ラジウムイオン等の重金属イオン等の検出可能なマーカー、または
（５）ガラスビーズ、ガラスベット、マイクロタイタープレート、アガロースビーズ、アガロースベッド、ポリスチレンビーズ、ポリスチレンベッド、ナイロンビーズ、ナイロンベッド等の固相担体と結合させる基等。
上記の（１）ないし（５）からなる群より選択される標識基等を上記文献に記載の方法等に準じて本発明の化合物に導入して調製されるプローブは、新たな創薬ターゲットの探索等に有用な標識タンパクの同定のためのケミカルプローブとして用いることができる。
【発明を実施するための形態】
【００７８】
以下、本発明を製造例、実施例及び試験例により詳細に説明する。しかし、本発明はこれらに限定されることはない。また、製造例および実施例において使用される略語は当業者に周知の慣用的な略語である、いくつかの略語は以下に示す。
ＴＨＦ；テトラヒドロフラン
ＤＭＦ；Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド
ＴＦＡ；トリフルオロ酢酸
ＥＤＣ・ＨＣｌ；１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド塩酸塩
ｐＴＬＣ；分取薄層クロマトグラフィー
ＬＣ−ＭＳ；液体クロマトグラフィー−マススペクトルメトリー
ＰｙＢＯＰ；ベンゾトリアゾール−１−イルオキシトリス（ピロリジノ）ホスホニウムヘキサフルオロホスフェート
プロトン核磁気共鳴スペクトルの化学シフトは、テトラメチルシランに対するδ単位（ｐｐｍ）で記録、カップリング定数はヘルツ（Ｈｚ）で記録されている。パターンは、ｓ；シングレット、ｄ；ダブレット、ｔ；トリプレット、ｂｒ；ブロード。
【００７９】
以下の実施例及び製造例中の「室温」は通常約１０℃から約３５℃を示す。％は特記しない限り重量パーセントを示す。
【００８０】
製造例１
８−フルオロクロマン−４−オン（化合物１−３）の合成
【化８】
（１）３−（２−フルオロフェノキシ）プロピオン酸(化合物１−２)の合成
（１−１）窒素雰囲気下、５０％水素化ナトリウム（３．２２ｇ）のＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（１００ｍｌ）溶液に、氷浴にて冷却しながら、２−フルオロフェノール（化合物１−１、３．０ｇ）のＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（７．０ｍｌ）溶液を加えた。同温度にて３０分間撹拌した後、３−ブロモ−プロピオン酸（４．９１ｇ）のＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（８．０ｍｌ）溶液を加えた。室温に戻し、同温度にて２４時間撹拌した。１Ｎ塩酸（１００ｍｌ）を加え、ｐＨ１−２に調整して反応停止させた。水層を酢酸エチルで抽出し、有機層を飽和食塩水で洗浄した。有機層を無水硫酸マグネシウムで乾燥し、溶媒を減圧留去した。残渣に２０％酢酸エチル−ヘキサン混合溶媒を加えて結晶化し標題化合物を得た（１．５３ｇ）。
【００８１】
（１−２）別法として、以下の方法により標題化合物を合成した。
化合物１−１（２．２０ｇ）のテトラヒドロフラン（１００ｍｌ）溶液に、室温にてカリウム−ｔ−ブトキシド（２．４２ｇ）を加えた。同温度にて５分間撹拌した後、ｂｅｔａ−プロピオラクトン（２．７１ｍｌ）を加えた。発熱したため、氷浴に移し、同温度にて１時間撹拌した。さらに室温にて４時間撹拌した後に、１Ｎ塩酸を加えて酸性とし、反応停止させた。水層を酢酸エチルで抽出し、有機層を飽和食塩水で洗浄した。有機層を無水硫酸マグネシウムで乾燥し、溶媒を減圧留去した。残渣に２０％酢酸エチル−ヘキサン混合溶媒を加えて結晶化し標題化合物を得た（１．４４ｇ）。
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）（ｐｐｍ）：２．７３（ｔ，Ｊ＝６．０Ｈｚ，２Ｈ），４．２４（ｔ，Ｊ＝６．０Ｈｚ，２Ｈ），６．９０−７．００（ｍ，１Ｈ），７．０９−７．２４（ｍ，３Ｈ），１２．４１（ｂｒ．ｓ．，１Ｈ）．
【００８２】
（２）化合物１−３の合成
化合物１−２（４５０ｍｇ）にポリリン酸（７．０ｇ）を加え、１００度で３．５時間撹拌した。熱源を切り、７５度まで温度を下げたところで、激しく撹拌しながら、砕氷を反応混合物に少しずつ加えた。室温に戻ったところで、反応液を氷水に加えた。水層をジエチルエーテルで抽出し、有機層を重曹水、続いて飽和食塩水で洗浄した。有機層を無水硫酸マグネシウムで乾燥し、溶媒を減圧留去した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製し標題化合物を得た（２７３ｍｇ）。
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）（ｐｐｍ）：２．８９（ｔ，Ｊ＝６．４Ｈｚ，２Ｈ），４．６６（ｔ，Ｊ＝６．４Ｈｚ，２Ｈ），６．９８（ｔｄ，Ｊ＝４．４，８．０Ｈｚ，１Ｈ），７．２９−７．３４（ｍ，１Ｈ），７．７１（ｄｔ，Ｊ＝１．５，８．０Ｈｚ，１Ｈ）．
【００８３】
同様にして表１に記載の化合物を合成した。表１に構造式及び１Ｈ−ＮＭＲデータを示す。
【００８４】
【表１】
【００８５】
製造例２
２，３，５´，６´−テトラヒドロスピロ［クロメン−４，４´−［１，３］ チアジン］−２´−アミン（化合物１）の合成
【化９】
（１）４−ビニル−クロマン−４−オール（化合物２−２）の合成
ビニルマグネシウムクロライド（１．４８Ｍテトラヒドロフラン溶液；２９．７ｍｌ）に塩化亜鉛（４６１ｍｇ）を加え室温で１時間撹拌した。反応液を０度に冷却した後、化合物２−１（５．００ｇ）のテトラヒドロフラン（２０．０ｍｌ）溶液を滴下した。反応液を同温で５時間撹拌した。原料の消失を確認した後、反応混合物に塩化アンモニウム水溶液を加えた。水層を酢酸エチルで抽出し、有機層を飽和食塩水で洗浄した。有機層を無水硫酸マグネシウムで乾燥し、溶媒を減圧留去した。得られた粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製することで標題化合物を得た（５．３７ｇ）。
１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ（ｐｐｍ）：１．９９（ｄｄｄ，Ｊ＝２．４，４．８，１３．６Ｈｚ，１Ｈ），２．１２（ｍ，１Ｈ），４．２６（ｄｄｄ，Ｊ＝４．０，４．８，８．８Ｈｚ，１Ｈ），４．３５（ｄｔ，Ｊ＝２．８，１０．８Ｈｚ，１Ｈ），５．３１（ｄｄ，Ｊ＝１．６，１０．６Ｈｚ，１Ｈ），５．４７（ｄｄ，Ｊ＝１．６，１６．８Ｈｚ，１Ｈ），６．０１（ｄｄ，１０．６，１６．８Ｈｚ，１Ｈ），６．８５（ｄｄ，Ｊ＝１．２，８．４Ｈｚ，１Ｈ），６．９０（ｄｔ，Ｊ＝１．２，７．６Ｈｚ，１Ｈ），７．２０（ｄｄｄ，Ｊ＝１．６，７．６，８．４Ｈｚ，１Ｈ），７．２８（ｄｄ，Ｊ＝１．６，７．６Ｈｚ，１Ｈ）．
【００８６】
（２）２−［２−クロマン−（４Ｅ）−イリデンエチル］−イソチオウレア（化合物２−３）の合成
化合物２−２（５．３０ｇ）の酢酸（２８．０ｍｌ）溶液に、チオウレア（２．７５ｇ）を加えた。室温で４時間撹拌した後、不溶物を綿栓濾過で除き、濾液をエーテル（２００ｍｌ）に滴下した。０度に冷却し、４時間撹拌した。固体をさらに一晩静置した。グラスフィルターで生成した固体を除き、濾液の溶媒を減圧留去した。残渣の油状物質に酢酸エチルを加え、重曹水で中和した後、生じた白色固体をグラスフィルターで回収し、水で洗浄した。得られた固体を乾燥させることで標題化合物を得た（３．１０ｇ）。
１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ（ｐｐｍ）：２．７４（ｍ，２Ｈ），３．７４（ｍ，２Ｈ），４．１７（ｍ，２Ｈ），６．１８（ｍ，１Ｈ），６．８３（ｍ，１Ｈ），６．９０（ｍ，１Ｈ），７．１６（ｍ，１Ｈ），７．５９（ｍ，１Ｈ）．
【００８７】
（３）化合物１の合成
化合物２−３（１．００ｇ）のトリフルオロ酢酸（５．００ｍｌ）溶液に氷浴下、トリフルオロメタンスルホン酸（１．００ｍｌ）を滴下した。室温まで昇温し、２時間撹拌した。反応混合物を氷浴下、重曹水に滴下し、中和した。水層を酢酸エチルで抽出し、有機層を重曹水および飽和食塩水で洗浄した。有機層を無水硫酸マグネシウムで乾燥させ、溶媒を減圧留去した。残渣をＮＨ−シリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製し標題化合物を得た（３００ｍｇ）。
１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ（ｐｐｍ）：１．９２（ｄｄｄ，Ｊ＝３．０，４．８，１４．０Ｈｚ，１Ｈ），１．９５（ｄｄｄ，Ｊ＝４．０，６．６，１４．０Ｈｚ，１Ｈ），２．０７（ｄｄｄ，Ｊ＝４．２，９．６，１４．０Ｈｚ，１Ｈ），２．２３（ｄｄｄ，Ｊ＝４．２，１０．８，１４．０Ｈｚ，１Ｈ），３．０４（ｄｄｄ，Ｊ＝４．２，６．６，１２．８Ｈｚ，１Ｈ），３．１１（ｄｄｄ，Ｊ＝４．０，９．６，１２．８Ｈｚ，１Ｈ），４．２４（ｄｄｄ，Ｊ＝３．０，１０．８，１１．６Ｈｚ，１Ｈ），４．３３（ｄｄｄ，Ｊ＝４．２，４．８，１１．６Ｈｚ，１Ｈ），６．８１（ｄｄ，Ｊ＝１．４，８．１Ｈｚ，１Ｈ），６．８９（ｄｔ，Ｊ＝１．４，７．２Ｈｚ，１Ｈ），７．１２（ｄｄｄ，Ｊ＝１．６，７．２，８．１Ｈｚ，１Ｈ），７．１５（ｄｄ，Ｊ＝１．６，７．６Ｈｚ，１Ｈ）．
【００８８】
製造例３
Ｎ−（２´−アミノ（６−ニトロ−２，３，５´，６´−テトラヒドロスピロ［クロメン−４，４´−［１，３］チアジン］−６−イル）トリフルオロアセトアミド（化合物２）の合成
【化１０】
（１）２，２，２−トリフルオロ−Ｎ−（４−オキソクロマン−６−イル）アセタミド（化合物３−３）の合成
化合物３−１（１．０ｇ）をアセトン（５０ｍｌ）に溶解した。二塩化スズ−２水和物（３．６６ｇ）を加え、終夜加熱還流した。反応の完結を確認した後、反応混合物を室温まで冷却した。溶媒を減圧下留去した後、反応混合物に重曹水を加え、塩化メチレンにて抽出した。水槽を酢酸エチルにて再度抽出した。有機層を無水硫酸マグネシウムで乾燥し、溶媒を減圧留去した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製した。得られた生成物（４６４ｍｇ）を、塩化メチレン（１４ｍｌ）に溶解し、氷浴下においてトリエチルアミン（０．５７ｍｌ）と無水トリフルオロ酢酸（０．５７ｍｌ）を加え、同温度で２０分間撹拌した。トリエチルアミン（０．５９５ｍｌ）を加え、さらに氷浴下４０分間撹拌した。原料の消失を確認したら反応混合物に塩化アンモニウム水溶液を加え反応停止させた。水層を塩化メチレンで抽出した。水槽をさらに酢酸エチルで抽出し、併せた有機層を無水硫酸マグネシウムで乾燥した。溶媒を減圧留去時に生じた淡黄色固体を桐山ロートで回収し、粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製することで標題化合物を得た（６４４ｍｇ）。
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）（ｐｐｍ）：２．８２（ｔ，Ｊ＝６．５Ｈｚ，２Ｈ），４．５５（ｔ，Ｊ＝６．５Ｈｚ，２Ｈ），７．１１（ｄ，Ｊ＝９．０Ｈｚ，１Ｈ），７．７９（ｄｄ，Ｊ＝９．０，２．８Ｈｚ，１Ｈ），８．１０（ｄ，Ｊ＝２．８Ｈｚ，１Ｈ），１１．３０（ｓ，１Ｈ）．
【００８９】
（２）Ｎ−｛４−［２−カルバミミドイルスルファニル−エチ−（Ｅ）−リデン］−クロマン−６−イル｝２，２，２−トリフルオロアセトアミド（化合物３−５）の合成
化合物３−３（１５０ｍｇ）のテトラヒドロフラン（１０．０ｍｌ）を−７８度に冷却し、ビニルマグネシウムクロライド（１．６Ｍテトラヒドロフラン溶液；１．０９ｍｌ）を滴下した。同温で１時間撹拌後、室温にて５時間撹拌した。原料の消失を確認後、反応混合物に塩化アンモニウム水溶液を加え反応停止させた。水層を酢酸エチルで抽出し、有機層を飽和食塩水で洗浄した。有機層を無水硫酸マグネシウムで乾燥し、溶媒を減圧留去した。得られた粗生成物３−４（１７８ｍｇ）は精製することなく、次反応に用いた。
化合物３−４（１７８ｍｇ）の酢酸（２．０ｍｌ）溶液に、チオウレア（６６ｍｇ）を加えた。５０度で５時間撹拌した後、室温にて終夜撹拌した。溶媒を減圧留去した後に、残渣の油状物質に酢酸エチルを加え、重曹水で中和した。水層を酢酸エチルで抽出し、有機層を重曹水および飽和食塩水で洗浄した。有機層を無水硫酸マグネシウムで乾燥させ、溶媒を減圧留去した。残渣に酢酸エチルとジエチルエーテルを加え、生じた淡黄色固体を桐山ロートで回収し、酢酸エチルとジエチルエーテル混合溶媒にて洗浄した。得られた固体を乾燥させることで標題化合物を得た（２６ｍｇ）。
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）（ｐｐｍ）：２．７４（ｍ，２Ｈ），４．１１（ｄ，Ｊ＝７．７Ｈｚ，２Ｈ），４．１８（ｍ， ，２Ｈ），６．０７（ｔ，Ｊ＝７．７Ｈｚ，１Ｈ），６．８９（ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，１Ｈ），７．４５（ｄｄ，Ｊ＝２．４，８．８Ｈｚ，１Ｈ），７．９２（ｄ，Ｊ＝２．４Ｈｚ，１Ｈ）．
【００９０】
（３）化合物２の合成
化合物（３−５）（２５．０ｍｇ）のトリフルオロ酢酸（０．４５９ｍｌ）溶液に、氷浴下トリフルオロメタンスルホン酸（０．０４５９ｍｌ）を加えた。同温度にて１．５時間撹拌した後、室温にて１．５時間撹拌した。原料の消失を確認した後、反応混合物を、氷浴にて冷却した重曹水に加え中和した。水層を酢酸エチルで抽出し、有機層を飽和食塩水で洗浄した。有機層を無水硫酸ナトリウムで乾燥し、溶媒を減圧留去した。得られた粗生成物を塩化メチレン溶液から結晶化することで標題化合物を得た（６．６ｍｇ）。
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）（ｐｐｍ）：２．０７−２．１４（ｍ，１Ｈ），２．２６（ｄｄｄ，Ｊ＝３．９，７．９，１４．４Ｈｚ，１Ｈ），２．４２−２．５３（ｍ，２Ｈ），３．１４−３．２９（ｍ，２Ｈ），４．２３−４．３２（ｍ，１Ｈ），４．３４−４．４６（ｍ，１Ｈ），６．８７（ｄ，Ｊ＝８．９Ｈｚ，１Ｈ），７．３５（ｄ，Ｊ＝２．６Ｈｚ，１Ｈ），７．５３（ｄｄ，Ｊ＝８．９，２．６Ｈｚ，１Ｈ）．
【００９１】
製造例４
８−フルオロ−２，３，５´，６´−テトラヒドロスピロ［クロメン−４，４´−［１，３］チアジン］−２´−アミン（化合物３）の合成
【化１１】
（１）（８−フルオロクロマン−４−イリデン）酢酸エチル（化合物４−２）の合成
ドライアイス−アセトン浴にて−７８度に冷却した、ジシクロヘキシルアミン（５４５．７ｍｇ）のテトラヒドロフラン（１３．０ｍｌ）溶液に、Ｎ−ブチルリチウム−ヘキサン溶液（１．６Ｎ、１．８８ｍｌ）を加えた。同温度にて１０分間撹拌した後に、エチル（トリメチルシリル）アセテート（４８２．３ｍｇ）のテトラヒドロフラン（２．５ｍｌ）溶液を加えた。−７８度にて１０分間撹拌した後に、化合物４−１（２５０．０ｍｇ）のテトラヒドロフラン（２．５ｍｌ）溶液を加えた。−７８度にて１時間撹拌した後、室温に戻しさらに３時間撹拌した。原料の消失を確認した後、反応混合物を、飽和食塩水に加えた。水層を酢酸エチルで抽出、有機層を無水硫酸ナトリウムで乾燥し、溶媒を減圧留去した。得られた粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製することで標題化合物を得た（１６２ｍｇ）。
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）（ｐｐｍ）：１．２９（ｔ，Ｊ＝７．１Ｈｚ，３Ｈ），２．６７（ｔｄ，Ｊ＝１．３，５．９Ｈｚ，２Ｈ），４．２２（ｑ，Ｊ＝７．１Ｈｚ，２Ｈ），４．４４−４．４９（ｍ，２Ｈ），５．７６（ｓ，１Ｈ），６．７８（ｔｄ，Ｊ＝５．１，８．１Ｈｚ，１Ｈ），７．０６（ｄｄｄ，Ｊ＝１．５，８．１，１０．９Ｈｚ，１Ｈ），７．５７（ｄｔ，Ｊ＝１．５，８．１Ｈｚ，１Ｈ）．
【００９２】
（２）（８−フルオロクロマン−４−イリデン）エタノール（化合物４−３）の合成
窒素雰囲気下、氷浴にて冷却した水素化リチウムアルミニウム（５２．１ｍｇ）のジエチルエーテル（８．０ｍｌ）溶液に、化合物４−２（１６２ｍｇ）のジエチルエーテル（４．０ｍｌ）溶液を２分間かけて滴下した。同温度にて２時間撹拌した後、反応混合物に酢酸エチルをゆっくりと滴下した。次に、水を加え１時間撹拌した。水層を酢酸エチルで抽出し、有機層を重曹水、続いて飽和食塩水で洗浄した。有機層を無水硫酸マグネシウムで乾燥し、溶媒を減圧留去した。得られた粗生成物は精製することなく、次反応に用いた。
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）（ｐｐｍ）：２．６１−２．６５（ｍ，２Ｈ），４．４３（ｂｒｔ，Ｊ＝５．２Ｈｚ，２Ｈ），４．５２（ｄ，Ｊ＝６．４Ｈｚ，２Ｈ），５．６５（ｔ，Ｊ＝６．４Ｈｚ，１Ｈ），６．７８−６．８５（ｍ，１Ｈ），６．９４（ｂｒｄ，Ｊ＝７．６Ｈｚ，１Ｈ），７．０２（ｂｒｔ，Ｊ＝９．５Ｈｚ，１Ｈ）．
【００９３】
（３）化合物３の合成
化合物４−３（１９．６ｍｇ）の４８％臭化水素（２．０ｍｌ）溶液に、室温にてチオウレア（７．７ｍｇ）を加え、５０度にて２時間撹拌した。原料の消失を確認した後、反応混合物を、氷浴にて冷却した重曹水に加え中和した。水層を酢酸エチルで抽出し、有機層を飽和食塩水で洗浄した。有機層を無水硫酸ナトリウムで乾燥し、溶媒を減圧留去した。得られた残渣をトリフルオロ酢酸（０．４９ｍｌ）に溶解した後に、氷浴下トリフルオロメタンスルホン酸（０．１ｍｌ）を加えた。同温度にて１．５時間撹拌した後、室温にて１．５時間撹拌した。原料の消失を確認した後、反応混合物を、氷浴にて冷却した重曹水に加え中和した。水層を酢酸エチルで抽出し、有機層を飽和食塩水で洗浄した。有機層を無水硫酸ナトリウムで乾燥し、溶媒を減圧留去した。残渣をＮＨ−シリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製し標題化合物を得た（５８．５ｍｇ）。
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）（ｐｐｍ）：１．９３−２．０１（ｍ，２Ｈ），２．０５−２．１４（ｍ，１Ｈ），２．２８（ｄｄｄ，Ｊ＝４．２，１０．５，１４．２Ｈｚ，１Ｈ），３．０２−３．０９（ｍ，１Ｈ），３．０９−３．１７（ｍ，１Ｈ），４．３２（ｔｄ，Ｊ＝２．９，１１．０Ｈｚ，１Ｈ），４．４５（ｔｄ，Ｊ＝４．５，１１．０Ｈｚ，１Ｈ），６．７９−６．８６（ｍ，１Ｈ），６．９２−６．９９（ｍ，２Ｈ）．
【００９４】
製造例５
Ｎ−｛４−［７−フルオロクロマン−（４Ｅ）−イリデン］エチル｝イソチオウレア（化合物５−３）の合成
【化１２】
（１）４−クロロ−７−フルオロ−４−ビニルクロマン（化合物５−２）の合成
氷浴にて冷却された、実施例４に準じて７−フルオロクロマン−４−オンから合成した化合物５−１（２００ｍｇ）のテトラヒドロフラン（３．０ｍｌ）溶液に、トリエチルアミン（０．１９ｍｌ）を加えた。同温度にて、メタンスルホニルクロリド（１７７ｍｇ）のテトラヒドロフラン（２．０ｍｌ）溶液を滴下し、１．５時間撹拌した。原料の消失を確認したら反応混合物を重曹水に加え反応停止させた。水層を酢酸エチルで抽出した。水槽をさらに酢酸エチルで抽出し、併せた有機層を無水硫酸マグネシウムで乾燥した。溶媒を減圧留去して得られた標題化合物（２１４ｍｇ）は粗生成物のまま、次反応に用いた。
【００９５】
（２）２−｛２−［７−フルオロクロマン−（４Ｅ）−イリデン］エチル｝−イソチオウレア（化合物５−３）の合成
（２−１）化合物５−２（２１４ｍｇ）をエタノール（６．０ｍｌ）に溶解した。チオウレア（１５３ｍｇ）を加えて、１０時間加熱還流した。原料の消失を確認したら、溶媒を減圧留去した。残渣をＬＣＭＳで精製し、標題化合物を得た（３３ｍｇ）。
１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）（ｐｐｍ）：２．７４（ｍ，２Ｈ），４．０５（ｄ，Ｊ＝７．９Ｈｚ，２Ｈ），４．２０（ｔ，Ｊ＝５．８Ｈｚ，２Ｈ），６．１３（ｔ，Ｊ＝７．９Ｈｚ，１Ｈ），６．７２（ｄｄ，Ｊ＝２．７，１０．３Ｈｚ，１Ｈ），６．７８（ｄｄｄ，Ｊ＝２．７，８．６，９．０Ｈｚ，１Ｈ），７．６７（ｄｄ，Ｊ＝６．７，８．９Ｈｚ，１Ｈ）．
【００９６】
（２−２）別法として、化合物５−３は以下に示す方法でも合成することができる。
【化１３】
（３）２−（７−フルオロクロマン−４−イリデン）エチル−２，２，２−トリフルオロアセテート（化合物５−４）の合成
氷浴にて冷却された、化合物５−１（１．０ｇ）のテトラヒドロフラン（２０ｍｌ）溶液に、トリエチルアミン（１．１５ｍｌ）を加えた。無水トリフルオロ酢酸（１．６２ｇ）のテトラヒドロフラン（２．５ｍｌ）溶液を滴下し、同温度にて１時間撹拌した。原料の消失を確認したら反応混合物を重曹水に加え反応停止させた。水層を酢酸エチルで抽出した。水槽をさらに酢酸エチルで抽出し、併せた有機層を無水硫酸マグネシウムで乾燥した。溶媒を減圧留去して得られた標題化合物（１．４２ｇ）は精製せずに次反応に用いた。
１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）（ｐｐｍ）：２．６４（ｍ，２Ｈ），４．３６（ｍ，２Ｈ），５．１５（ｄ，Ｊ＝７．１Ｈｚ，２Ｈ），５．５５（ｔ，Ｊ＝７．１Ｈｚ，１Ｈ），５．６０（ｄｄ，Ｊ＝２，７，１０．１Ｈｚ，１Ｈ），６．６６（ｄｄｄ，Ｊ＝２．６，８．３，８．７Ｈｚ，１Ｈ），７．０８（ｄｄ，Ｊ＝６．４，８．７Ｈｚ，１Ｈ）．
【００９７】
（４）化合物５−３の合成
化合物５−４（１．４１ｇ）をエタノール（２０ｍｌ）に溶解した。チオウレア（０．９２ｇ）を加えて、１時間加熱還流した。原料の消失を確認したら、溶媒を減圧留去した。残渣をＬＣＭＳで精製し、化合物５−３を化合物５−５との混合物（９：１）として得た（０．９６ｇ）。
１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）（ｐｐｍ）：２．７４（ｍ，２Ｈ），４．０５（ｄ，Ｊ＝７．９Ｈｚ，２Ｈ），４．２０（ｔ，Ｊ＝５．８Ｈｚ，２Ｈ），６．１３（ｔ，Ｊ＝７．９Ｈｚ，１Ｈ），６．７２（ｄｄ，Ｊ＝２．７，１０．３Ｈｚ，１Ｈ），６．７８（ｄｄｄ，Ｊ＝２．７，８．６，９．０Ｈｚ，１Ｈ），７．６７（ｄｄ，Ｊ＝６．７，８．９Ｈｚ，１Ｈ）．
【００９８】
製造例２から４に記載の方法と同様にして表２に記載の化合物を合成した。表２に構造式及び１Ｈ−ＮＭＲデータを示す。
【００９９】
【表２】
【０１００】
実施例１
（±）−Ｎ−［２´−アミノ−２，３，５´，６´−テトラヒドロスピロ［クロメン−４，４´−［１，３］チアジン］−６−イル］−５−クロロピリジン−２−カルボキサミド（化合物８）の合成
【化１４】
（１−１）６−ニトロ−２，３，５´，６´−テトラヒドロスピロ［クロメン−４，４´−［１，３］チアジン］−２´−アミン（化合物６−２）
化合物１（２８０ｍｇ）の無水酢酸（１０．０ｍｌ）溶液に氷浴下、発煙硝酸（比重１．５３、４９．５μｌ）を滴下した。反応液を同温で１時間撹拌した後、室温まで昇温し３時間撹拌した。反応液に無水酢酸（１０．０ｍｌ）を追加した後、発煙硝酸（比重１．５３、４００μｌ）を加えた。反応の完結を確認した後、反応液をエーテルで希釈し重曹水を加えて１時間撹拌した。水層を酢酸エチルで抽出し、有機層を重曹水および飽和食塩水で洗浄した。有機層を無水硫酸マグネシウムで乾燥させ、溶媒を減圧留去した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製し化合物６−１を８−ニトロ体との混合物として得た（３６０ｍｇ）。
得られたニトロ体の混合物（３３０ｍｇ）にエタノール（１０．０ｍｌ）および濃硫酸（３３０μｌ）を加え、８時間加熱還流した。反応の完結を確認した後、反応混合物を室温まで冷却した。反応混合物に重曹水を加えて中和し、酢酸エチルで抽出した。有機層を無水硫酸マグネシウムで乾燥し、溶媒を減圧留去した。残渣をＮＨ−シリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製し、標題化合物を得た（８２．０ｍｇ）。
１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ（ｐｐｍ）：２．０２（ｍ，３Ｈ），２．２２（ｍ，１Ｈ），３．０５（ｍ，１Ｈ），３．１５（ｍ，１Ｈ），４．３２（ｍ，１Ｈ），４．４５（ｍ，１Ｈ），６．８９（ｄ，Ｊ＝９．０Ｈｚ，１Ｈ），８．０３（ｄ，Ｊ＝９．０Ｈｚ，１Ｈ），８．１３（ｓ，１Ｈ）．
【０１０１】
（１−２）別法として、化合物６−１は以下の方法によっても合成することができる。
化合物１（１．１ｇ）のピリジン（６ｍｌ）溶液に、室温で無水酢酸（０．８８６ｍｌ）を加え、混合物を室温で１２時間攪拌した。反応液を氷−重曹水に注ぎ、酢酸エチルで抽出した。抽出液を無水硫酸マグネシウムで乾燥させた。乾燥剤を濾去し、ろ液を減圧下濃縮した。得られた粗生成物をＮＨ−シリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製し化合物１のＮ−アセチル体（N−（２，３，５´，６´−テトラヒドロスピロ［クロメン−４，４´−［１，３］チアジン］−２´−イル）アセトアミド）（１．１ｇ）を得た。
上記のように得られるＮ−アセチル体（１．３ｇ）の酢酸（０．２ｍｌ）溶液に室温で、硝酸（比重１．４２、１．０ｍｌ）を加えた。混合物を５０℃で３０分攪拌した。この溶液に５０℃で硝酸（３．０ｍｌ）を加え、混合物を５０℃で３０分攪拌した。さらに５０℃で硝酸（２．０ｍｌ）を加え、５０℃で３０分攪拌した。反応液を氷−重曹水にゆっくり加え、酢酸エチルで抽出した。抽出液を無水硫酸マグネシウムで乾燥させた。乾燥剤を濾去し、ろ液を減圧下濃縮した。粗生成物をＮＨ−シリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製し、化合物６−１（０．９３ｇ）を８−ニトロ体との混合物として得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ：２．００−２．４０（ｍ，４Ｈ），２．０３（ｓ，３Ｈ，８−異性体），２．０６（ｓ，３Ｈ，６−異性体），２．９５−３．１０（ｍ，２Ｈ），４．１３−４．６０（ｍ，２Ｈ），６．９０−６．９５（ｍ，１Ｈ，６−異性体），６．９９（ｔ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，１Ｈ，８−異性体），７．３６（ｄｄ，Ｊ＝１．６，８．０Ｈｚ，１Ｈ，８−異性体），７．７４（ｄｄ，Ｊ＝１．６，８．０Ｈｚ，１Ｈ，８−異性体），８．０３−８．１０（ｍ，２Ｈ，６−異性体）．
【０１０２】
（２）（６−ニトロ−２，３，５´，６´−テトラヒドロスピロ［クロメン−４，４´−［１，３］チアジン］−２´−イル）カルバミン酸ｔ−ブチルエステル（化合物６−３）
化合物６−２（８２．０ｍｇ）をテトラヒドロフラン（５．００ｍｌ）に溶解し、トリエチルアミン（６３１μｌ）を加えた。次いで反応液に二炭酸ジ−ｔ−ブチル（１９２ｍｇ）を加え、室温で４日間撹拌した。反応の完結を確認したら反応液を減圧留去し、残渣をＮＨ−シリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製することで標題化合物を得た（１１０ｍｇ）。
１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ（ｐｐｍ）：１．４８（ｓ，９Ｈ），２．００−２．３０（ｍ，４Ｈ），３．０２（ｍ，１Ｈ），３．１４（ｍ，１Ｈ），４．３９（ｍ，２Ｈ），６．９３（ｄ，Ｊ＝９．２Ｈｚ，１Ｈ），８．０８（ｄｄ，Ｊ＝２．８，９．２Ｈｚ，１Ｈ），８．１４（ｍ，１Ｈ）．
【０１０３】
（３−１）（±）−（６−アミノ−２，３，５´，６´−テトラヒドロスピロ［クロメン−４，４´−［１，３］チアジン］−２´−イル）カルバミン酸ｔ−ブチルエステル（化合物６−４）
化合物６−３（１１０ｍｇ）をエタノール（２０．０ｍｌ）に溶解し、亜二チオン酸ナトリウム（２５３ｍｇ）の水溶液を室温で滴下した。反応液に、更に亜二チオン酸ナトリウム（２５３ｍｇ）の水溶液を加えて室温で撹拌した。さらにＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（２０．０ｍｌ）を加えた。反応の完結を確認した後、余剰のエタノールを減圧留去した。残渣に水を加え、水層を酢酸エチルで抽出した。有機層を水および飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥させた。溶媒を減圧留去し、残渣をＮＨ−シリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製することで標題化合物を得た（１０．０ｍｇ）。
１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ（ｐｐｍ）：１．４６（ｓ，９Ｈ），２．０５（ｍ，１Ｈ），２．１５（ｄｄｄ，Ｊ＝４．０，６．４，１４．０Ｈｚ，１Ｈ），２．２６（ｍ，１Ｈ），２．３８（ｄｄｄ，Ｊ＝４．０，１０．０，１４．０Ｈｚ，１Ｈ）、３．１０（ｍ，２Ｈ），４．２０（ｍ，２Ｈ），６．５９（ｍ，２Ｈ），６．６８（ｍ，１Ｈ）．
【０１０４】
（３−２）別法として、化合物６−４は以下の方法によっても合成できる。
化合物６−３（５１０ｍｇ）のエタノール（１８ｍｌ）−塩化アンモニウム水溶液（１．８ｍｌ）に、鉄（１．０５ｇ）を加え、８７℃で０．５時間加熱攪拌した。反応液を室温に戻し、反応液を酢酸エチルに注ぎ、不溶物をろ去した。濾液を減圧下濃縮した。残渣に水を加え、酢酸エチルで抽出した。抽出液を飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥した。乾燥剤を濾去し、ろ液を減圧下濃縮し、標記化合物（０．４０ｇ）を得た。。
１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ（ｐｐｍ）：１．４６（ｓ，９Ｈ），２．０５（ｍ，１Ｈ），２．１５（ｄｄｄ，Ｊ＝４．０，６．４，１４．０Ｈｚ，１Ｈ），２．２６（ｍ，１Ｈ），２．３８（ｄｄｄ，Ｊ＝４．０，１０．０，１４．０Ｈｚ，１Ｈ）、３．１０（ｍ，２Ｈ），４．２０（ｍ，２Ｈ），６．５９（ｍ，２Ｈ），６．６８（ｍ，１Ｈ）．
【０１０５】
（４）化合物８の合成
５−クロロピリジン−２−カルボン酸（５．８６ｍｇ）にトルエン（３．００ｍｌ）を加えて懸濁させた。Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミドを一滴加えた後、塩化チオニル（１．００ｍｌ）を加えた。反応混合物を１２０℃まで加温し、同温で１時間撹拌した。室温まで冷却した後、溶媒を減圧留去することで５−クロロピリジン−２−カルボン酸クロライドを得た。得られた酸クロライドをテトラヒドロフラン（１．００ｍｌ）に懸濁させ、化合物６−４（１０．０ｍｇ）のテトラヒドロフラン（２．００ｍｌ）溶液に、氷浴下滴下した。同温でピリジン（１１．３μｌ）を滴下した後、室温まで昇温し３０分間撹拌した。反応の完結を確認した後、重曹水を加えて反応を停止させた。水層を酢酸エチルで抽出し、有機層を飽和食塩水で洗浄した。有機層を無水硫酸マグネシウムで乾燥させ、溶媒を減圧留去した。得られた残渣をジクロロメタン（２．００ｍｌ）に溶解し、トリフルオロ酢酸（０．４０ｍｌ）を加えて室温で３時間撹拌した。反応の完結を確認した後、ジエチルエーテルで希釈し、重曹水を加えて反応を停止させた。水層を酢酸エチルで抽出し、有機層を無水硫酸マグネシウムで乾燥させた。溶媒を減圧留去し、残渣をＮＨ−シリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製することで標題化合物を得た（７．８ｍｇ）。
１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ（ｐｐｍ）：１．９５（ｄｄｄ，Ｊ＝２．８，５．２，１４．０Ｈｚ，１Ｈ），２．０２（ｄｄｄ，Ｊ＝４．４，６．２，１４．０Ｈｚ，１Ｈ），２．１１（ｄｄｄ，Ｊ＝４．４，９．６，１４．０Ｈｚ，１Ｈ），２．２４（ｄｄｄ，Ｊ＝４．０，１０．０，１４．０Ｈｚ，１Ｈ），３．０８−３．２０（ｍ，２Ｈ），４．２４（ｄｔ，Ｊ＝２．８，１１．２Ｈｚ，１Ｈ），４．３４（ｄｔ，Ｊ＝４．８，１０．８Ｈｚ，１Ｈ），６．８５（ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，１Ｈ），７．５０（ｄ，Ｊ＝２．４Ｈｚ，１Ｈ），７．５７（ｄｄ，Ｊ＝２．４，８．８Ｈｚ，１Ｈ），７．８６（ｄｄ，Ｊ＝２．０，８．４Ｈｚ，１Ｈ），８．２４（ｄｄ，Ｊ＝０．８，８．４Ｈｚ，１Ｈ），８．５５（ｄｄ，Ｊ＝０．８，２．０Ｈｚ，１Ｈ），９．７０（ｓ，１Ｈ）．
【０１０６】
実施例２
（−）−Ｎ−［２´−アミノ−２，３，５´，６´−テトラヒドロスピロ［クロメン−４，４´−［１，３］チアジン］−６−イル］−５−クロロピリジン−２−カルボキサミド （化合物９）の合成
【化１５】
化合物８（６ｍｇ）をダイセル製ＣＨＩＲＡＬＰＡＫＴＭ ＯＤ−Ｈ（２ｃｍ×２５ｃｍ，移動相；ヘキサン：エタノール＝８：２，流速：２０ｍｌ／分）で分取した。保持時間２２．５分から２５．０分の成分を回収した後、ＮＨ−シリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製することで標題化合物を得た（２．０ｍｇ；＞９９％ｅｅ）。
ＥＳＩ−ＭＳ；ｍ／ｚ３８９［Ｍ＋ ＋Ｈ］．１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ（ｐｐｍ）：１．９５（ｄｄｄ，Ｊ＝２．８，５．２，１４．０Ｈｚ，１Ｈ），２．０２（ｄｄｄ，Ｊ＝４．４，６．２，１４．０Ｈｚ，１Ｈ），２．１１（ｄｄｄ，Ｊ＝４．４，９．６，１４．０Ｈｚ，１Ｈ），２．２４（ｄｄｄ，Ｊ＝４．０，１０．０，１４．０Ｈｚ，１Ｈ），３．０８−３．２０（ｍ，２Ｈ），４．２４（ｄｔ，Ｊ＝２．８，１１．２Ｈｚ，１Ｈ），４．３４（ｄｔ，Ｊ＝４．８，１０．８Ｈｚ，１Ｈ），６．８５（ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，１Ｈ），７．５０（ｄ，Ｊ＝２．４Ｈｚ，１Ｈ），７．５７（ｄｄ，Ｊ＝２．４，８．８Ｈｚ，１Ｈ），７．８６（ｄｄ，Ｊ＝２．０，８．４Ｈｚ，１Ｈ），８．２４（ｄｄ，Ｊ＝０．８，８．４Ｈｚ，１Ｈ），８．５５（ｄｄ，Ｊ＝０．８，２．０Ｈｚ，１Ｈ），９．７０（ｓ，１Ｈ）．
【０１０７】
実施例３
（−）−（６−アミノ−２，３，５´，６´−テトラヒドロスピロ［クロメン−４，４´−［１，３］チアジン］−２´−イル）カルバミン酸ｔ−ブチル（化合物１０）の合成
【化１６】
実施例１の（３）で得られた化合物６−４（０．５７ｇ）をダイセル製ＣＨＩＲＡＬＰＡＫＴＭ ＯＪ−Ｈ（２ｃｍ×２５ｃｍ，移動相；ヘキサン：エタノール＝６：４，流速：１０ｍｌ／分）で分取した。保持時間２８−３４分の成分を集め、標題化合物（０．２２ｇ，９７％ｅｅ）を得た。
【０１０８】
実施例４
（−）−Ｎ−（２´−アミノ−２，３，５´，６´−テトラヒドロスピロ［クロメン−４，４´−［１，３］チアジン］−６−イル）−５−シアノピリジン−２−カルボキサミド（化合物１１）の合成
【化１７】
（１）メチル ５−シアノピリジン−２−カルボキシラート（化合物９−２）の合成
化合物９−１（２．８ｇ）とシアン化銅（３．６ｇ）のＮＭＰ（３０ｍｌ）混合液を１７０度で１．５時間加熱攪拌した。反応液に室温で、水を加え、不溶物を濾過で除いた。濾液を酢酸エチルで抽出した。抽出液を飽和食塩水で洗浄後、無水硫酸マグネシウムで乾燥した。乾燥剤を濾去し、ろ液を減圧下濃縮した。得られた粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製し標題化合物（９２０ｍｇ）を得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ（ｐｐｍ）：４．０６（ｓ，３Ｈ），８．１６（ｄｄ，Ｊ＝２．０，８．０Ｈｚ，１Ｈ），８．２７（ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，１Ｈ），９．０１（ｄ，Ｊ＝２．０Ｈｚ，１Ｈ）．
【０１０９】
（２）５−シアノピリジン−２−カルボン酸（化合物９−３）の合成
化合物９−２（９２０ｍｇ）と５Ｎ水酸化ナトリウム水溶液（２．２６ｍｌ）のエタノール（３０ｍｌ）溶液を室温で１０分間攪拌した。反応液に室温で、５Ｎ塩酸（５．２ｍｌ）を加え、酢酸エチルで抽出した。抽出液を無水硫酸マグネシウムで乾燥した。乾燥剤を濾去し、ろ液を減圧下濃縮し標題化合物（８００ｍｇ）を得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯｄ６）δ（ｐｐｍ）：８．１８（ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，１Ｈ），８．５１（ｄｄ，Ｊ＝２．０，８．０Ｈｚ，１Ｈ），９．１２−９．１８（ｍ，１Ｈ）．
【０１１０】
（３）｛６−［（５−シアノピリジン−２−カルボニル）アミノ］−２，３，５´，６´−テトラヒドロスピロ［クロメン−４，４´−［１，３］チアジン］−２´−イル｝カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル（化合物９−４）の合成
実施例３で得た化合物１０（２５．０ｍｇ）、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（０．０６２４ｍｌ）、５−シアノピリジン−２−カルボン酸（化合物９−３）（１６．９ｍｇ）のジクロロメタン（５．０ｍｌ）溶液に、ＰｙＢＯＰ（７４．５ｍｇ）を室温で加えた。混合物を室温で１時間攪拌した。反応液を重曹水に注ぎ、酢酸エチルで抽出した。抽出液を飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥した。乾燥剤を濾去し、ろ液を減圧下濃縮した。粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製し、標題化合物（３５ｍｇ）を得た。
ＥＳＩ−ＭＳ；ｍ／ｚ４８０［Ｍ＋＋Ｈ］．
【０１１１】
（４）化合物１１の合成
化合物９−４（３５ｍｇ）のジクロロメタン（３．０ｍｌ）溶液に、トリフルオロ酢酸（１．０ｍｌ）を加え、反応液を室温で１．５時間撹拌した。反応液を重曹水に注ぎ、酢酸エチルで抽出した。抽出液を飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥した。乾燥剤を濾去し、ろ液を減圧下濃縮した。粗生成物をＮＨ−シリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製し、標題化合物（２６．１ｍｇ）を得た。
ＥＳＩ−ＭＳ；ｍ／ｚ３８０［Ｍ＋＋Ｈ］．
１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ（ｐｐｍ）：１．９０−２．１５（ｍ，３Ｈ），２．２４（ｄｄｄ，Ｊ＝４．０，１０．４，１４．０Ｈｚ，１Ｈ），３．０５−３．２（ｍ，２Ｈ），４．２５（ｄｔ，Ｊ＝３．２，１０．８Ｈｚ，１Ｈ），４．３５（ｄｔ，Ｊ＝４．８，１０．８Ｈｚ，１Ｈ），６．８６（ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，１Ｈ），７．５０（ｄ，Ｊ＝２．８Ｈｚ，１Ｈ），７．５８（ｄｄ，Ｊ＝２．８，８．８Ｈｚ，１Ｈ），８．１９（ｄｄ，Ｊ＝２．０，８．０Ｈｚ，１Ｈ），８．４２（ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，１Ｈ），８．８８（ｄ，Ｊ＝２．０Ｈｚ，１Ｈ），９．７４（ｓ，１Ｈ）．
【０１１２】
実施例５
Ｎ−（２´−アミノ−２，３，５´，６´−テトラヒドロスピロ［クロメン−４，４´−［１，３］チアジン］−６−イル）−５−トリフルロメチルピリジン−２−カルボキサミド（化合物１２）の合成
【化１８】
（１）｛６−［（５−トリフルオロメチルピリジン−２−カルボニル）アミノ］−２，３，５´，６´−テトラヒドロスピロ［クロメン−４，４´−［１，３］チアジン］−２´−イル｝カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチル（化合物１０−１）の合成
化合物１０（２０．０ｍｇ）、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（０．０４９９ｍｌ）、５−トリフルオロメチルピリジン−２−カルボン酸（１３．５ｍｇ）のジクロロメタン（３．０ｍｌ）溶液に、ＰｙＢＯＰ（５９．６ｍｇ）を室温で加えた。混合物を室温で１時間攪拌した。反応液を重曹水に注ぎ、酢酸エチルで抽出した。抽出液を飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥した。乾燥剤を濾去し、ろ液を減圧下濃縮した。粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製し、標題化合物（３０ｍｇ）を得た。
ＥＳＩ−ＭＳ；ｍ／ｚ５２３［Ｍ＋＋Ｈ］．
【０１１３】
（２）化合物１２の合成
化合物１０−１（３０ｍｇ）のジクロロメタン（３．０ｍｌ）溶液に、トリフルオロ酢酸（０．８５７ｍｌ）を加え、反応液を室温で１．５時間撹拌した。反応液を重曹水に注ぎ、酢酸エチルで抽出した。抽出液を飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥した。乾燥剤を濾去し、ろ液を減圧下濃縮した。粗生成物をＮＨ−シリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製し、標題化合物（１３．０ｍｇ）を得た。
ＥＳＩ−ＭＳ；ｍ／ｚ４２３［Ｍ＋＋Ｈ］．
１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ（ｐｐｍ）：１．９０−２．１６（ｍ，３Ｈ），２．２４（ｄｄｄ，Ｊ＝４．４，１０．４，１４．０Ｈｚ，１Ｈ），３．０６−３．２２（ｍ，２Ｈ），４．２５（ｄｔ，Ｊ＝２．８，１１．２Ｈｚ，１Ｈ），４．３５（ｄｔ，Ｊ＝４．８，１１．２Ｈｚ，１Ｈ），６．８６（ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，１Ｈ），７．５３（ｄ，Ｊ＝２．４Ｈｚ，１Ｈ），７．５８（ｄｄ，Ｊ＝２．４，８．８Ｈｚ，１Ｈ），８．１５（ｄｄ，Ｊ＝１．６，８．０Ｈｚ，１Ｈ），８．４２（ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，１Ｈ），８．８７（ｓ，１Ｈ），９．８０（ｓ，１Ｈ）．
【０１１４】
実施例５と同様にして表３に記載の化合物を合成した。表３に構造式及び１Ｈ−ＮＭＲデータを示す。
【０１１５】
【表３】
【０１１６】
実施例６
６−（５−メトキシピリジン−３−イル）−２，３，５´，６´−テトラヒドロスピロ［クロメン−４，４´−［1，3］チアジン］−２´−アミン（化合物２１）の合成
【化１９】
（１）６−ブロモ−２，３，５´，６´−テトラヒドロスピロ［クロメン−４，４´−［１，３］チアジン］−２´−アミン（化合物２０）の合成
化合物１（５６０ｍｇ）の酢酸（１２．０ｍｌ）溶液に、室温にて臭素（３８２ｍｇ）を加えて３０分間撹拌した。原料の消失を確認した後、反応混合物を氷浴にて冷却した１０％水酸化ナトリウム水溶液に加え中和した。水層を酢酸エチルで抽出し、有機層を飽和食塩水で洗浄した。有機層を無水硫酸マグネシウムで乾燥し、溶媒を減圧留去した。得られた粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製することで標題化合物を得た（５８０ｍｇ）。
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）（ｐｐｍ）：１．９３（ｄｄｄ，Ｊ＝３．０，５．０，１４．１Ｈｚ，１Ｈ），２．００−２．０５（ｍ，２Ｈ），２．２２（ｄｄｄ，Ｊ＝４．１，１０．３，１４．１Ｈｚ，１Ｈ），３．０２−３．０９（ｍ，１Ｈ），３．１０−３．１８（ｍ，１Ｈ），４．１８−４．２５（ｍ，１Ｈ），４．３３（ｄｄｄ，Ｊ＝４．４，４．７，１１．３Ｈｚ，１Ｈ），６．７０（ｄ，Ｊ＝８．６Ｈｚ，１Ｈ），７．２０−７．２４（ｍ，１Ｈ），７．２５（ｄ，Ｊ＝２．４Ｈｚ，１Ｈ）．
【０１１７】
（２）ジ−ｔｅｒｔ−ブチル（６−ブロモ−２，３，５´，６´−テトラヒドロスピロ［クロメン−４，４−［1，3］チアジン］−２´−イル）イミダゾジカルボネート（化合物１１−１）、およびｔｅｒｔ−ブチル（６−ブロモ−２，３，５´，６´−テトラヒドロスピロ［クロメン−４，４−［1，3］チアジン］−２´−イル）カルボネート（化合物１１−２）の合成
化合物２０（１３９mg) を塩化メチレン（１５ｍｌ）に溶解し、二炭酸ジ−ｔ−ブチル（３８７ｍｇ）を加えた。次いでＮ，Ｎ−ジメチルアミノピリジン（２１７ｍｇ）を加え、室温で３．５時間間撹拌した。原料の消失を確認した後、反応混合物を飽和塩化アンモニウム水溶液に加えた。水層を塩化メチレンで抽出し、有機層を無水硫酸マグネシウムで乾燥した。溶媒を減圧留去し、残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製することで化合物１１−１と１１−２を得た［（１１−１）１４４ｍｇ、（１１−２）５２．３ｍｇ］。
化合物１１−１の１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＭＥＴＨＡＮＯＬ−ｄ４）（ｐｐｍ）：１．５９（ｓ，１８Ｈ），１．８７−１．９８（ｍ，２Ｈ），２．０６−２．１７（ｍ，２Ｈ），２．３７（ｔｄ，Ｊ＝４．０，１４．６Ｈｚ，１Ｈ），３．２１（ｔｄ，Ｊ＝４．２，１２．９Ｈｚ，１Ｈ），３．４５（ｄｔ，Ｊ＝３．６，１２．９Ｈｚ，１Ｈ），４．２８−４．３７（ｍ，１Ｈ），６．８０（ｄ，Ｊ＝８．７Ｈｚ，１Ｈ），７．２８（ｄ，Ｊ＝２．４Ｈｚ，１Ｈ），７．２６（ｄｄ，Ｊ＝２．４，８．７Ｈｚ，１Ｈ）．
化合物１１−２の１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＭＥＴＨＡＮＯＬ−ｄ４）（ｐｐｍ）：１．６０（ｓ，９Ｈ），２．０３−２．１２（ｍ，１Ｈ），２．１８−２．２９（ｍ，１Ｈ），３．１６−３．２３（ｍ，１Ｈ），３．３６−３．４３（ｍ，１Ｈ），４．３１−４．３７（ｍ，２Ｈ），６．８０（ｄ，Ｊ＝８．７Ｈｚ，１Ｈ），７．２６（ｄ，Ｊ＝２．４Ｈｚ，１Ｈ），７．３２（ｄｄ，Ｊ＝２．４，８．７Ｈｚ，１Ｈ）．
【０１１８】
（３）化合物２１の合成
化合物１１−１（２５ｍｇ）のＮ，Ｎ−ジメチルホルムアルデヒド（２ｍｌ）溶液に、３−メトキシ−５−（４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラン−２−イル）ピリジン（１４．９ｍｇ）を加えた。続いて１Ｍ重曹水溶液（０．１２ｍｌ）と、パラジウム−トリフェニルホスフィン（２．８ｍｇ）を加え、窒素雰囲気下、１００度で１２時間撹拌した。原料の消失を確認した後、反応混合物に水を加えた。水層を酢酸エチルで抽出し、有機層を飽和食塩水で洗浄した。有機層を無水硫酸マグネシウムで乾燥し、溶媒を減圧留去した。得られた粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製することで標題化合物を得た（８．６ｍｇ）。
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）（ｐｐｍ）：２．１１−２．２６（ｍ，２Ｈ），２．３７−２．５３（ｍ，２Ｈ），３．１３−３．２９（ｍ，２Ｈ），３．９２（ｓ，３Ｈ），４．２７−４．３６（ｍ，１Ｈ），４．４０−４．４７（ｍ，１Ｈ），６．９３−６．９８（ｍ，１Ｈ），７．３６−７．４４（ｍ，３Ｈ），８．２３（ｂｒ．ｓ．，１Ｈ），８．３７（ｂｒ．ｓ．，１Ｈ）．
【０１１９】
実施例６の（３）と同様にして表４に記載の化合物を合成した。表４に構造式及び１Ｈ−ＮＭＲデータを示す。
【０１２０】
【表４】
【０１２１】
実施例７
６−（２−フルオロピリジン−３−イル）−２，３，５´，６´−テトラヒドロスピロ［クロメン−４，４´−［1，3］チアジン］−２´−アミン（化合物２４）の合成
【化２０】
化合物１１−２（２６．３ｍｇ）のＮ，Ｎ−ジメチルホルムアルデヒド（０．９５ｍｌ）溶液に、２−フルオロピリジン−３−ボロン酸（１４．９ｍｇ）を加えた。続いて１Ｍ重曹水溶液（０．１４ｍｌ）と、パラジウム−トリフェニルホスフィン（７．８ｍｇ）を加え、窒素雰囲気下、１００度で１２時間撹拌した。原料の消失を確認した後、反応混合物に水を加えた。水層を酢酸エチルで抽出し、有機層を飽和食塩水で洗浄した。有機層を無水硫酸マグネシウムで乾燥し、溶媒を減圧留去した。得られた粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製することで標題化合物を得た（１３．０ｍｇ）。
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）（ｐｐｍ）：２．０４−２．１８（ｍ，２Ｈ），２．２９−２．３７（ｍ，１Ｈ），２．４６（ｄｄｄ，Ｊ＝４．０，１０．７，１４．４Ｈｚ，１Ｈ），３．１８−３．２４（ｍ，２Ｈ），４．３１（ｄｔ，Ｊ＝２．８，１１．４Ｈｚ，１Ｈ），４．４４−４．４７（ｍ，１Ｈ），６．９５（ｄ，Ｊ＝８．６Ｈｚ，１Ｈ），７．２４−７．２６（ｍ，１Ｈ），７．３６−７．４２（ｍ，２Ｈ），７．８８（ｄｄｄ，Ｊ＝１．７，７．６，９．９Ｈｚ，１Ｈ），８．１５（ｄｔ，Ｊ＝１．７，４．６Ｈｚ、１Ｈ）．
【０１２２】
実施例８
７−フルオロ−６−（２−フルオロピリジン−３−イル）−２，３，５´，６´−テトラヒドロスピロ［クロメン−４，４´−［1、3］チアジン］−２´−アミン（化合物２６）の合成
【化２１】
（１）６−ブロモ−７−フルオロ−２，３，５´，６´−テトラヒドロスピロ［クロメン−４，４´−［１，３］チアジン］−２´−アミン（化合物２５）の合成
化合物６（２０ｍｇ）の酢酸（１．０ｍｌ）溶液に、室温にて臭素（１２．７ｍｇ）を加えて３０分間撹拌した。原料の消失を確認した後、反応混合物を重曹水に加え中和した。水層を酢酸エチルで抽出し、有機層を飽和食塩水で洗浄した。有機層を無水硫酸マグネシウムで乾燥し、溶媒を減圧留去した。得られた粗生成物２５（１４．４ｍｇ）は精製することなく、次の反応に用いた。
１Ｈ ＮＭＲ （４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）（ｐｐｍ）：１．８７−１．９９（ｍ，２Ｈ），１．９９−２．２８（ｍ，２Ｈ），２．９７−３．０８（ｍ，１Ｈ），３．０８−３．１７（ｍ，１Ｈ），４．１６−４．２８（ｍ，１Ｈ），４．３０−４．３９（ｍ，１Ｈ），６．６２（ｄ，Ｊ＝９．７Ｈｚ，１Ｈ），７．２９（ｄ，Ｊ＝７．８Ｈｚ，１Ｈ）．
【０１２３】
（２）化合物２６の合成
化合物２５（１４．４mg) を塩化メチレン（３．０ｍｌ）に溶解し、二炭酸ジ−ｔ−ブチル（４７．５ｍｇ）を加えた。次いでＮ，Ｎ−ジメチルアミノピリジン（２６．５ｍｇ）を加え、室温で６時間間撹拌した。原料の消失を確認した後、反応混合物を飽和塩化アンモニウム水溶液に加えた。水層を塩化メチレンで抽出し、有機層を無水硫酸マグネシウムで乾燥した。溶媒を減圧留去し、得られた粗生成物１３−１（１７ｍｇ）は精製することなく、次の反応に用いた。
上記反応で得られた粗生成物１３−１（１７ｍｇ）のＮ，Ｎ−ジメチルホルムアルデヒド（０．５ｍｌ）溶液に、２−フルオロピリジン−３−ボロン酸（７．２ｍｇ）を加えた。続いて１Ｍ重曹水溶液（０．０５ｍｌ）と、パラジウム−トリフェニルホスフィン（３．８ｍｇ）を加え、窒素雰囲気下、１００度で終夜撹拌した。原料の消失を確認した後、反応混合物に水を加えた。水層を酢酸エチルで抽出し、有機層を飽和食塩水で洗浄した。有機層を無水硫酸マグネシウムで乾燥し、溶媒を減圧留去した。得られた粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製することで標題化合物を得た（１．７ｍｇ）。
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）（ｐｐｍ）：２．００−２．１８（ｍ，２Ｈ），２．２６−２．５１（ｍ，２Ｈ），３．１４−３．２５（ｍ，２Ｈ），４．２７−４．３６（ｍ，１Ｈ），４．４２−４．４８（ｍ，１Ｈ），６．７０（ｄ，Ｊ＝１１．１Ｈｚ，１Ｈ），７．２２（ｄ，Ｊ＝９．１Ｈｚ，１Ｈ），７．２５−７．３４（ｍ，１Ｈ），７．８６−７．９２（ｍ，１Ｈ），８．２１（ｂｒｄ，Ｊ＝４．９Ｈｚ，１Ｈ）．
【０１２４】
実施例９
６−［（２−アミノピリジン−３−イル）エチニル］−２，３，５´，６´−テトラヒドロスピロ［クロメン−４，４´−［1，3］チアジン］−２´−アミン（化合物２７）の合成
【化２２】
（１）３−［（トリメチルシリル）エチニル］ピリジン−２−アミン（化合物１４−２）の合成
化合物１４−１（２００ｍｇ）をテトラヒドロフラン（１．２ｍｌ）とトリエチルアミン（７ｍｌ）の混合溶媒に溶解した。エチニル（トリメチル）シラン（２２７ｍｇ）、ヨウ化銅（Ｉ）（８．８ｍｇ）と、ジクロロパラジウム−トリフェニルホスフィン（３２．５ｍｇ）を加えて封管した。混合物を９０度にて２２時間撹拌した後に、反応混合物を水に加えて反応を停止した。水層を酢酸エチルで抽出し、有機層を飽和食塩水で洗浄した。有機層を無水硫酸マグネシウムで乾燥し、溶媒を減圧留去した。得られた粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製することで標題化合物を得た（２４４ｍｇ）。
１Ｈ ＮＭＲ （４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）（ｐｐｍ）：０．２６（ｓ，９Ｈ），５．０８（ｂｒ．ｓ．，２Ｈ），６．６２（ｂｒ．ｓ．，１Ｈ），７．５４ｄ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，１Ｈ），８．０５（ｂｒ．ｓ．，１Ｈ）．
【０１２５】
（２）３−エチニルピリジン−２−アミン（化合物１４−３）の合成
化合物１４−２（２４４ｍｇ）をメタノール（１５．０ｍｌ）に溶解した。炭酸カリウム（２１２．６ｍｇ）を加え、室温にて２時間撹拌した。反応混合物を水に加えて、水層を酢酸エチルで抽出し、有機層を飽和食塩水で洗浄した。有機層を無水硫酸マグネシウムで乾燥し、溶媒を減圧留去した。得られた粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製することで標題化合物を得た（９３．５ｍｇ）。
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）（ｐｐｍ）：３．４２（ｓ，１Ｈ），５．０８（ｂｒ．ｓ．，２Ｈ），６．６３（ｄｄ，Ｊ＝５．２，７．４Ｈｚ，１Ｈ），７．５８（ｄｄ，Ｊ＝７．４，１．６Ｈｚ，１Ｈ），８．０８（ｂｒ．ｓ．，１Ｈ）．
【０１２６】
（３）化合物２７の合成
化合物１４−３（３０ｍｇ）と実施例１１−１で得られた化合物２０（４０ｍｇ）をテトラヒドロフラン（２ｍｌ）とトリエチルアミン（２ｍｌ）の混合溶媒に溶解した。ヨウ化銅（Ｉ）（１．２ｍｇ）と、ジクロロパラジウム−トリフェニルホスフィン（４．５ｍｇ）を加えて封管し、９０度にて２２時間撹拌した。反応混合物を水に加えて反応を停止した。水層を酢酸エチルで抽出し、有機層を飽和食塩水で洗浄した。有機層を無水硫酸マグネシウムで乾燥し、溶媒を減圧留去した。得られた粗生成物をＮＨ−シリカゲルカラムクロマトグラフィーとＮＨ−シリカゲルＴＬＣで精製することで標題化合物を得た（１２．５ｍｇ）。
ＥＳＩ−ＭＳ；ｍ／ｚ ３５１［Ｍ＋＋Ｈ］
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）（ｐｐｍ）：１．９２−２．１２（ｍ，３Ｈ），２．２５（ｄｄｄ，Ｊ＝４．０，１０．５，１４．２Ｈｚ，１Ｈ），３．０２−３．１０（ｍ，１Ｈ），３．１１−３．２０（ｍ，１Ｈ），４．２６（ｔｄ，Ｊ＝２．９，１１．２Ｈｚ，１Ｈ），４．３８（ｄｔ，Ｊ＝４．６，１１．２Ｈｚ，１Ｈ），５．０５（ｂｒ．ｓ．，２Ｈ），６．６３（ｄｄ，Ｊ＝５．０，７．５Ｈｚ，１Ｈ），６．８１（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，１Ｈ），７．２９（ｄｄ，Ｊ＝２．０，８．４Ｈｚ，１Ｈ），７．３４（ｄ，Ｊ＝２．０Ｈｚ，１Ｈ），７．５７（ｄｄ、Ｊ＝１．６，７．５Ｈｚ，１Ｈ），７．９７-８．０５（ｍ，１Ｈ）．
【０１２７】
実施例１０
２，３，５´，６´−テトラヒドロスピロ［１，３−チアジン−４，４´−チオクロメン］−２−アミン（化合物２８）の合成
【化２３】
（１）（２Ｅ）−２−（２，３−ジヒドロ−４Ｈ−チオクロメン−４−イリデン）エチル カルバミミドチオエート（化合物１５−３）の合成
ビニルマグネシウムクロライド（１．６Ｍテトラヒドロフラン溶液；２．７５ｍｌ）に塩化亜鉛（４６．１ｍｇ）を加え室温で１時間撹拌した。混合物を０度に冷却し、化合物１５−１（５５５ｍｇ）のテトラヒドロフラン（２．０ｍｌ）を滴下した。同温で５時間撹拌した。原料の消失を確認したら反応混合物に塩化アンモニウム水溶液を加え反応停止させた。水層を酢酸エチルで抽出し、有機層を飽和食塩水で洗浄した。有機層を無水硫酸マグネシウムで乾燥し、溶媒を減圧留去して粗生成物を得た（６６５ｍｇ）。この粗生成物を酢酸（５．０ｍｌ）に溶解した後に、チオウレア（３３４ｍｇ）を加えた。室温で終夜撹拌した後、不溶物を綿栓濾過で除き、濾液をジエチルエーテルに滴下した。０度に冷却し撹拌した。グラスフィルターで固体を除き、濾液の溶媒を減圧留去した。残渣の油状物質に酢酸エチルを加え、重曹水で中和した。水層を酢酸エチルで抽出し、有機層を飽和食塩水で洗浄した。有機層を無水硫酸マグネシウムで乾燥した。溶媒を減圧留去している間に、固体が生じた。濃縮を止めて、ヘキサン・ジエチルエーテル混合溶媒を加え、生じた固体を桐山ロートで回収し、ジエチルエーテルで洗浄した。得られた固体を乾燥させることで標題化合物を得た（６６．５ｍｇ）。
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＭｅＯＤ）（ｐｐｍ）：２．９６−３．０１（ｍ，２Ｈ），３．０５−３．１０（ｍ，２Ｈ），４．０８（ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，２Ｈ），６．０９（ｔ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，１Ｈ），７．０７−７．２０（ｍ，３Ｈ），７．５０（ｄｄ，Ｊ＝１．３，７．９Ｈｚ，１Ｈ）．
【０１２８】
（２）化合物２８の合成
化合物１５−３（５０ｍｇ）をトリフルオロ酢酸（０．４６ｍｌ）に溶解した後に、氷浴下トリフルオロメタンスルホン酸（０．１ｍｌ）を加えた。同温度にて０．５時間撹拌した後、室温にて３．０時間撹拌した。原料の消失を確認した後、反応混合物を、氷浴にて冷却した重曹水に加え中和した。水層を酢酸エチルで抽出し、有機層を飽和食塩水で洗浄した。有機層を無水硫酸ナトリウムで乾燥し、溶媒を減圧留去した。残渣をＮＨ−シリカゲルカラムクロマトグラフィー、次にシリカゲルＴＬＣで精製し標題化合物を得た（１．６ｍｇ）。
ＥＳＩ−ＭＳ；ｍ／ｚ ２５１［Ｍ＋＋Ｈ］
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）（ｐｐｍ）：１．８７−１．９５（ｍ，１Ｈ），２．２４−２．３５（ｍ，３Ｈ），２．９２−２．９８（ｍ，２Ｈ），３．０７−３．１３（ｍ，１Ｈ），３．１４−３．２４（ｍ，１Ｈ），７．０７−７．１２（ｍ，１Ｈ），７．１３−７．１５（ｍ，２Ｈ），７．１９（ｂｒｄ，Ｊ＝１．３Ｈｚ，１Ｈ）．
【０１２９】
試験例１
ラット胎仔脳由来神経細胞培養におけるＡβペプチド定量
（１）ラット初代神経細胞培養
胎生１８日齢のＷｉｓｔａｒ系ラット（Ｃｈａｒｌｅｓ Ｒｉｖｅｒ Ｊａｐａｎ，Ｙｏｋｏｈａｍａ，Ｊａｐａｎ）より大脳皮質を単離し培養に供した。具体的には、エーテル麻酔下、妊娠ラットより無菌的に胎仔を摘出した。胎仔より脳を摘出し、氷冷Ｌ−１５ｍｅｄｉｕｍ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ Ｃｏｒｐ． Ｃａｔ ＃１１４１５−０６４，Ｃａｒｌｓｂａｄ，ＣＡ ＵＳＡ あるいは ＳＩＧＭＡ Ｌ１５１８など）に浸した。その摘出脳から、実体顕微鏡下で大脳皮質を採取した。採取した大脳皮質断片を、０．２５％ｔｒｙｐｓｉｎ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ Ｃｏｒｐ． Ｃａｔ ＃１５０５０−０６５，Ｃａｒｌｓｂａｄ，ＣＡ ＵＳＡ）および０．０１％ＤＮａｓｅ）Ｓｉｇｍａ Ｄ５０２５，Ｓｔ． Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ，ＵＳＡ）を含有した酵素溶液中、３７℃下３０分間の酵素処理することにより、細胞を分散させた。この際、酵素反応は非働化済みウマ血清を加えることで停止させた。この酵素処理溶液を１５００ｒｐｍにて５分間遠心分離し、上清を除いた。得られた細胞塊に培地を５〜１０ｍｌ加えた。培地にはＮｅｕｒｏｂａｓａｌ ｍｅｄｉｕｍ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ Ｃｏｒｐ． Ｃａｔ ＃２１１０３−０４９，Ｃａｒｌｓｂａｄ，ＣＡ ＵＳＡ）に、２％ Ｂ２７ ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ Ｃｏｒｐ． Ｃａｔ ＃１７５０４−０４４，Ｃａｒｌｓｂａｄ，ＣＡ ＵＳＡ）と２５μＭ２−ｍｅｒｃａｐｔｏｅｔｈａｎｏｌ（２−ＭＥ，ＷＡＫＯ Ｃａｔ ＃１３９−０６８６１，Ｏｓａｋａ，Ｊａｐａｎ）と０．５ｍＭＬ−ｇｌｕｔａｍｉｎｅ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ Ｃｏｒｐ． Ｃａｔ ＃２５０３０−０８１，Ｃａｒｌｓｂａｄ，ＣＡ ＵＳＡ）およびＡｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓ−Ａｎｔｉｍｙｃｏｔｉｃｓ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ Ｃｏｒｐ． Ｃａｔ ＃１５２４０−０６２，Ｃａｒｌｓｂａｄ，ＣＡ ＵＳＡ）を添加したもの（Ｎｅｕｒｏｂａｓａｌ／Ｂ２７／２−ＭＥ）を用いた。但し、アッセイの際は、２−ＭＥのみを添加しない培地（Ｎｅｕｒｏｂａｓａｌ／Ｂ２７）を用いた。培地が加えられた細胞塊を、緩やかなピペッティング操作により細胞を再分散させた。この細胞分散液を、４０μｍナイロンメッシュ（セルストレーナー、Ｃａｔ ＃．３５−２３４０，Ｂｅｃｔｏｎ Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ Ｌａｂｗａｒｅ，Ｆｒａｎｋｌｉｎ Ｌａｋｅｓ，ＮＪ、ＵＳＡ）でろ過し、細胞塊を除くことにより、神経細胞懸濁液を得た。この神経細胞懸濁液を培地にて希釈し、予めｐｏｌｙ−ＬあるいはＤ−ｌｙｓｉｎｅにてコーティングされた９６ｗｅｌｌポリスチレン製培養器（Ｆａｌｃｏｎ Ｃａｔ ＃．３５−３０７５，Ｂｅｃｔｏｎ Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ Ｌａｂｗａｒｅ，Ｆｒａｎｋｌｉｎ Ｌａｋｅｓ，ＮＪ，ＵＳＡを以下の方法でｐｏｌｙ−Ｌ−ｌｙｓｉｎｅコートを施したもの、あるいはＢＩＯＣＯＡＴＴＭ ｃｅｌｌ ｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔｓ Ｐｏｌｙ−Ｄ−ｌｙｓｉｎｅ ｃｅｌｌ ｗａｒｅ ９６−ｗｅｌｌ ｐｌａｔｅ，Ｃａｔ ＃．３５−６４６１，Ｂｅｃｔｏｎ Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ Ｌａｂｗａｒｅ，Ｆｒａｎｋｌｉｎ Ｌａｋｅｓ，ＮＪ，ＵＳＡ）に初期細胞密度が５ｘ１０５ ｃｅｌｌｓ／ｃｍ２になるように１００μｌ／ｗｅｌｌにて播種した。Ｐｏｌｙ−Ｌ−ｌｙｓｉｎｅコーティングは以下のように行った。０．１５Ｍ Ｂｏｒａｔｅ ｂｕｆｆｅｒ（ｐＨ８．５）を用いて１００μｇ／ｍｌのｐｏｌｙ−Ｌ−ｌｙｓｉｎｅ（ＳＩＧＭＡ Ｐ２６３６，Ｓｔ． Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ，ＵＳＡ）溶液を無菌的に調製した。その溶液を１００μｇ／ｗｅｌｌにて９６ｗｅｌｌポリスチレン製培養器に添加し、室温１時間以上、あるいは４℃一晩以上、インキュベートした。その後、コーティングした９６ｗｅｌｌポリスチレン製培養器は、滅菌水を用いて４回以上洗浄した後、乾燥させるか、あるいは無菌ＰＢＳあるいは培地などを用いてすすいだ後に、細胞播種に用いた。播種した細胞は、５％ＣＯ２−９５％ａｉｒ下、３７℃インキュベーター中にて一日培養した後、培地全量を新鮮なＮｅｕｒｏｂａｓａｌ／Ｂ２７／２−ＭＥ培地と交換し、引き続き３日間培養した。
【０１３０】
（２）化合物添加
培養４日目に薬物添加を以下の通りに行った。培地全量を抜き取り、２−ＭＥを含まない、２％Ｂ−２７を含有するＮｅｕｒｏｂａｓａｌ ｍｅｄｉｕｍ（Ｎｅｕｒｏｂａｓａｌ／Ｂ２７）を１８０μｌ／ｗｅｌｌ加えた。試験化合物のジメチルスルホキシド（以下ＤＭＳＯと略す）溶液をＮｅｕｒｏｂａｓａｌ／Ｂ２７にて最終濃度の１０倍になるように希釈した。この希釈液を２０μｌ／ｗｅｌｌ添加し、よく混和した。最終ＤＭＳＯ濃度は１％以下とした。また対照群にはＤＭＳＯのみを添加した。
【０１３１】
（３）サンプリング
化合物添加後３日間培養し、培地全量を回収した。得られた培地は、ＥＬＩＳＡサンプルとした。Ａβｘ−４２測定には希釈せずに、Ａβｘ−４０測定にはＥＬＩＳＡキット付属の希釈液にて５倍希釈して各ＥＬＩＳＡに供した。
【０１３２】
（４）細胞生存の評価
細胞生存は以下の方法でＭＴＴアッセイにより評価した。培地回収後のｗｅｌｌに温めた培地を１００μｌ／ｗｅｌｌ加え、さらにＤ−ＰＢＳ（−）（ＤＵＬＢＥＣＣＯ´Ｓ ＰＨＯＳＰＨＡＴＥ ＢＵＦＦＥＲＥＤ ＳＡＬＩＮＥ、ＳＩＧＭＡ Ｄ８５３７、Ｓｔ． Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ，ＵＳＡ）に溶解した８ ｍｇ／ｍｌのＭＴＴ（ＳＩＧＭＡ Ｍ２１２８，Ｓｔ． Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ，ＵＳＡ）溶液を８ μｌ／ｗｅｌｌにて添加した。この９６ ｗｅｌｌポリスチレン製培養器を、５％ＣＯ２−９５％ａｉｒ下、３７℃インキュベーター中にて２０分間インキュベートした。そこへＭＴＴ溶解バッファーを１００μｌ／ｗｅｌｌ加え、５％ＣＯ２−９５％ａｉｒ下、３７℃インキュベーター中にてＭＴＴフォルマザン結晶をよく溶解させた後、各Ｗｅｌｌの５５０ｎｍの吸光度を測定した。ＭＴＴ溶解バッファーは以下の通りに調製した。Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＷＡＫＯ ０４５−０２９１６，Ｏｓａｋａ，Ｊａｐａｎ）と蒸留水を２５０ｍＬずつ混合した溶液に、１００ｇＳＤＳ（ドデシル硫酸ナトリウム（ラウリル硫酸ナトリウム）、ＷＡＫＯ １９１−０７１４５，Ｏｓａｋａ，Ｊａｐａｎ）を溶解した。さらに、この溶液に濃塩酸および酢酸を各３５０μｌ添加することにより、溶液の最終ｐＨを４．７程度にした。
測定の際、細胞を播種しないｗｅｌｌに培地とＭＴＴ溶液のみを加えたものをバックグラウンド（ｂｋｇ）として設定した。各測定値は、以下の数式に従い、ｂｋｇを差し引き、対照群（薬物処理しなかった群、ＣＴＲＬ）に対する比率（％ｏｆＣＴＲＬ）を算出し、細胞生存活性を比較・評価した。
％ ｏｆ ＣＴＲＬ ＝） Ａ５５０＿ｓａｍｐｌｅ − Ａ５５０＿ｂｋｇ）／）Ａ５５０＿ＣＴＲＬ −ｂｋｇ） ｘ １００
（Ａ５５０＿ｓａｍｐｌｅ： サンプルｗｅｌｌの５５０ ｎｍ吸光度、Ａ５５０＿ｂｋｇ： バックグラウンドｗｅｌｌの５５０ ｎｍ吸光度、Ａ５５０＿ＣＴＲＬ：対照群ｗｅｌｌの５５０ ｎｍ吸光度）
【０１３３】
（５）Ａβ ＥＬＩＳＡ
Ａβ ＥＬＩＳＡは和光純薬工業株式会社（Ｗａｋｏ Ｐｕｒｅ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｉｎｄｕｓｔｒｉｅｓ，Ｌｔｄ．）のヒト／ラットβアミロイド（４２）ＥＬＩＳＡキットワコー（＃２９０−６２６０１）、およびヒト／ラットβアミロイド（４０）ＥＬＩＳＡキットワコー（＃２９４−６２５０１）を用いた。方法はメーカー推奨のプロトコール（添付文書に記載の方法）にて行った。但しＡβ検量線は、ｂｅｔａ−ａｍｙｌｏｉｄ ｐｅｐｔｉｄｅ １−４２，ｒａｔおよびｂｅｔａ−ａｍｙｌｏｉｄ ｐｅｐｔｉｄｅ １−４０，ｒａｔ（Ｃａｌｂｉｏｃｈｅｍ． ＃１７１５９６［Ａβ４２］，１７１５９３［Ａβ４０］）を用いて作製した。結果は、結果は培地中のＡβ４２濃度低下のためのＩＣ５０値（μＭ）にて表５に示した。
【０１３４】
【表５】
【０１３５】
表５の結果から明らかなように、本発明化合物は、Ａβ４２産生低下作用が確認された。
【産業上の利用可能性】
【０１３６】
本発明の一般式（Ｉ）の化合物またはその医薬上許容される塩は、Ａβ４２産生低下作用を有するので、本発明によれば、特にアルツハイマー型痴呆、ダウン症等のＡβが原因となる神経変性疾患の治療剤または予防剤を提供することができる。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
式（Ｉ）：
【化１】
［式中、
環ＡはＣ６−１０アリール基又は５−１０員複素環基であり、
Ｌは単結合、酸素原子若しくは式−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲＬ−（ＲＬは水素原子又は置換基αから選択される１乃至３の置換基を有していてもよいＣ１−６アルキル基である。）又は、それぞれ置換基群αから選ばれる１乃至３の置換基を有していてもよい、Ｃ１−６アルキレン基、Ｃ２−６アルケニレン基若しくはＣ２−６アルキニレン基であり、
環ＢはＣ３−８シクロアルキル基、Ｃ６−１０アリール基又は５−１０員複素環基であり、
Ｘは、それぞれ置換基群αから選ばれる１乃至３の置換基を有していてもよい、Ｃ１−３アルキレン基又はＣ２−３アルケニレン基であり、
Ｙは、酸素原子、硫黄原子、スルホキシド基、スルホン基又は式―ＮＲＹ−（ＲＹは水素原子又はそれぞれ置換基群αから選ばれる１乃至３の置換基を有していてもよい、Ｃ１−６アルキル基、Ｃ１−６アルキルカルボニル基、Ｃ３−８シクロアルキルカルボニル基、Ｃ６−１０アリールカルボニル基、Ｃ１−６アルキルスルホニル基、Ｃ６−１０アリールスルホニル基、Ｃ６−１０アリール基若しくは５−６員へテロアリール基である。）で示される基であり、
Ｚは単結合又はＣ１−３アルキレン基であり、
Ｒ１及びＲ２は各々独立して水素原子、ハロゲン原子、ヒドロキシ基若しくはシアノ基又はそれぞれ置換基群αから選ばれる１乃至３の置換基を有していてもよい、Ｃ１−６アルキル基若しくはＣ１−６アルコキシ基であり、
Ｒ３は、水素原子又はそれぞれ置換基群αから選ばれる１乃至３の置換基を有していてもよい、Ｃ１−６アルキル基、Ｃ１−６アルキルカルボニル基、Ｃ６−１０アリールカルボニル基、Ｃ１−６アルキルスルホニル基、Ｃ６−１０アリールスルホニル基、、Ｃ３−８シクロアルキル基、Ｃ６−１０アリール基若しくは５−１０員複素環基であり、
Ｒ４及びＲ５は各々独立して水素原子、ハロゲン原子若しくはヒドロキシ基又はそれぞれ置換基群αから選ばれる１乃至３の置換基を有していてもよい、Ｃ１−６アルキル基、Ｃ１−６アルコキシ基、Ｃ３−８シクロアルキル基、Ｃ３−８シクロアルキルオキシ基、Ｃ６−１０アリール基若しくは５−１０員複素環基であり、
Ｒ６、Ｒ７及びＲ８は各々独立して水素原子、ハロゲン原子、ヒドロキシ基若しくはシアノ基又はそれぞれ置換基群αから選ばれる１乃至３の置換基を有していてもよい、Ｃ１−６アルキル基、Ｃ２−６アルケニル基、Ｃ２−６アルキニル基、Ｃ１−６アルコキシ基、Ｃ３−８シクロアルキル基、Ｃ３−８シクロアルキルオキシ基、Ｃ６−１０アリール基若しくは５−１０員複素環基であり、
ｎは１から３の整数である。
置換基群α：水素原子、ハロゲン原子、ヒドロキシ基、オキソ基、シアノ基、Ｃ１−６アルキル基、トリフルオロメチル基、トリフルオロメトキシ基、Ｃ１−６アルコキシ基、Ｃ３−８シクロアルキル基、Ｃ３−８シクロアルキルオキシ基、Ｃ６−１０アリール基及び５−１０員複素環基。］
で示される化合物又はその医薬上許容される塩。
【請求項２】
Ｘが置換基群αから選択される１乃至３の置換基を有していてもよいＣ１−３アルキレン基である、請求項１記載の化合物又はその医薬上許容される塩。
【請求項３】
Ｙが酸素原子である、請求項１又は２記載の化合物又はその医薬上許容される塩。
【請求項４】
Ｙが硫黄原子またはスルホン基である、請求項１又は２記載の化合物又はその医薬上許容される塩。
【請求項５】
Ｙが式―ＮＲＹ−（ＲＹは水素原子又はそれぞれ置換基群αから選ばれる１乃至３の置換基を有していてもよい、Ｃ１−６アルキル基、Ｃ１−６アルキルカルボニル基、Ｃ３−８シクロアルキルカルボニル基、Ｃ６−１０アリールカルボニル基、Ｃ１−６アルキルスルホニル基、Ｃ６−１０アリールスルホニル基、Ｃ６−１０アリール基若しくは５−６員へテロアリール基である。）で示される基である、請求項１又は２記載の化合物又はその医薬上許容される塩。
【請求項６】
Ｌが式−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲＬ−（ＲＬは水素原子又は置換基αから選択される１乃至３の置換基を有していてもよいＣ１−６アルキル基である。）で示される基である、請求項１から５のいずれかに記載の化合物又はその医薬上許容される塩。
【請求項７】
以下の化合物から選ばれる、請求項１から６の何れかに記載の化合物若しくはその医薬上許容される塩又はそれらの溶媒和物：
１）（−）−Ｎ−（２´−アミノ−２，３，５´，６´−テトラヒドロスピロ［クロメン−４，４´−［１，３］チアジン］−６−イル）−５−シアノピリジン−２−カルボキサミド、
２）Ｎ−（２´−アミノ−２，３，５´，６´−テトラヒドロスピロ［クロメン−４，４´−［１，３］チアジン］−６−イル）−５−トリフルロメチルピリジン−２−カルボキサミド、
３）Ｎ−（２´−アミノ−２，３，５´，６´−テトラヒドロスピロ［クロメン−４，４´−［１，３］チアジン］−６−イル）−３，５−ジフルオロピリジン−２−カルボキサミド、
４）Ｎ−（２´−アミノ−２，３，５´，６´−テトラヒドロスピロ［クロメン−４，４´−［１，３］チアジン］−６−イル）−５−ブロモピリミジン−２−カルボキサミド、
５）Ｎ−（２´−アミノ−２，３，５´，６´−テトラヒドロスピロ［クロメン−４，４´−［１，３］チアジン］−６−イル）−５−ブロモピリジン−２−カルボキサミド、
６）Ｎ−（２´−アミノ−２，３，５´，６´−テトラヒドロスピロ［クロメン−４，４´−［１，３］チアジン］−６−イル）−３，５−ジクロロピリジン−２−カルボキサミド。
【請求項８】
請求項１から７のいずれかに記載の化合物又はその医薬上許容される塩を有効成分として含有する医薬組成物。
【請求項９】
アミロイドβタンパク質産生を抑制するための請求項８に記載の医薬組成物。
【請求項１０】
ベータサイトアミロイドβ前駆体タンパク質開裂酵素１（ＢＡＣＥ１）を阻害するための請求項８に記載の医薬組成物。
【請求項１１】
神経変性疾患治療のための請求項８から１０のいずれかに記載の医薬組成物。
【請求項１２】
神経変性疾患がアルツハイマー型痴呆又はダウン症である請求項１１に記載の医薬組成物。
【請求項１】
式（Ｉ）：
【化１】
［式中、
環ＡはＣ６−１０アリール基又は５−１０員複素環基であり、
Ｌは単結合、酸素原子若しくは式−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲＬ−（ＲＬは水素原子又は置換基αから選択される１乃至３の置換基を有していてもよいＣ１−６アルキル基である。）又は、それぞれ置換基群αから選ばれる１乃至３の置換基を有していてもよい、Ｃ１−６アルキレン基、Ｃ２−６アルケニレン基若しくはＣ２−６アルキニレン基であり、
環ＢはＣ３−８シクロアルキル基、Ｃ６−１０アリール基又は５−１０員複素環基であり、
Ｘは、それぞれ置換基群αから選ばれる１乃至３の置換基を有していてもよい、Ｃ１−３アルキレン基又はＣ２−３アルケニレン基であり、
Ｙは、酸素原子、硫黄原子、スルホキシド基、スルホン基又は式―ＮＲＹ−（ＲＹは水素原子又はそれぞれ置換基群αから選ばれる１乃至３の置換基を有していてもよい、Ｃ１−６アルキル基、Ｃ１−６アルキルカルボニル基、Ｃ３−８シクロアルキルカルボニル基、Ｃ６−１０アリールカルボニル基、Ｃ１−６アルキルスルホニル基、Ｃ６−１０アリールスルホニル基、Ｃ６−１０アリール基若しくは５−６員へテロアリール基である。）で示される基であり、
Ｚは単結合又はＣ１−３アルキレン基であり、
Ｒ１及びＲ２は各々独立して水素原子、ハロゲン原子、ヒドロキシ基若しくはシアノ基又はそれぞれ置換基群αから選ばれる１乃至３の置換基を有していてもよい、Ｃ１−６アルキル基若しくはＣ１−６アルコキシ基であり、
Ｒ３は、水素原子又はそれぞれ置換基群αから選ばれる１乃至３の置換基を有していてもよい、Ｃ１−６アルキル基、Ｃ１−６アルキルカルボニル基、Ｃ６−１０アリールカルボニル基、Ｃ１−６アルキルスルホニル基、Ｃ６−１０アリールスルホニル基、、Ｃ３−８シクロアルキル基、Ｃ６−１０アリール基若しくは５−１０員複素環基であり、
Ｒ４及びＲ５は各々独立して水素原子、ハロゲン原子若しくはヒドロキシ基又はそれぞれ置換基群αから選ばれる１乃至３の置換基を有していてもよい、Ｃ１−６アルキル基、Ｃ１−６アルコキシ基、Ｃ３−８シクロアルキル基、Ｃ３−８シクロアルキルオキシ基、Ｃ６−１０アリール基若しくは５−１０員複素環基であり、
Ｒ６、Ｒ７及びＲ８は各々独立して水素原子、ハロゲン原子、ヒドロキシ基若しくはシアノ基又はそれぞれ置換基群αから選ばれる１乃至３の置換基を有していてもよい、Ｃ１−６アルキル基、Ｃ２−６アルケニル基、Ｃ２−６アルキニル基、Ｃ１−６アルコキシ基、Ｃ３−８シクロアルキル基、Ｃ３−８シクロアルキルオキシ基、Ｃ６−１０アリール基若しくは５−１０員複素環基であり、
ｎは１から３の整数である。
置換基群α：水素原子、ハロゲン原子、ヒドロキシ基、オキソ基、シアノ基、Ｃ１−６アルキル基、トリフルオロメチル基、トリフルオロメトキシ基、Ｃ１−６アルコキシ基、Ｃ３−８シクロアルキル基、Ｃ３−８シクロアルキルオキシ基、Ｃ６−１０アリール基及び５−１０員複素環基。］
で示される化合物又はその医薬上許容される塩。
【請求項２】
Ｘが置換基群αから選択される１乃至３の置換基を有していてもよいＣ１−３アルキレン基である、請求項１記載の化合物又はその医薬上許容される塩。
【請求項３】
Ｙが酸素原子である、請求項１又は２記載の化合物又はその医薬上許容される塩。
【請求項４】
Ｙが硫黄原子またはスルホン基である、請求項１又は２記載の化合物又はその医薬上許容される塩。
【請求項５】
Ｙが式―ＮＲＹ−（ＲＹは水素原子又はそれぞれ置換基群αから選ばれる１乃至３の置換基を有していてもよい、Ｃ１−６アルキル基、Ｃ１−６アルキルカルボニル基、Ｃ３−８シクロアルキルカルボニル基、Ｃ６−１０アリールカルボニル基、Ｃ１−６アルキルスルホニル基、Ｃ６−１０アリールスルホニル基、Ｃ６−１０アリール基若しくは５−６員へテロアリール基である。）で示される基である、請求項１又は２記載の化合物又はその医薬上許容される塩。
【請求項６】
Ｌが式−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲＬ−（ＲＬは水素原子又は置換基αから選択される１乃至３の置換基を有していてもよいＣ１−６アルキル基である。）で示される基である、請求項１から５のいずれかに記載の化合物又はその医薬上許容される塩。
【請求項７】
以下の化合物から選ばれる、請求項１から６の何れかに記載の化合物若しくはその医薬上許容される塩又はそれらの溶媒和物：
１）（−）−Ｎ−（２´−アミノ−２，３，５´，６´−テトラヒドロスピロ［クロメン−４，４´−［１，３］チアジン］−６−イル）−５−シアノピリジン−２−カルボキサミド、
２）Ｎ−（２´−アミノ−２，３，５´，６´−テトラヒドロスピロ［クロメン−４，４´−［１，３］チアジン］−６−イル）−５−トリフルロメチルピリジン−２−カルボキサミド、
３）Ｎ−（２´−アミノ−２，３，５´，６´−テトラヒドロスピロ［クロメン−４，４´−［１，３］チアジン］−６−イル）−３，５−ジフルオロピリジン−２−カルボキサミド、
４）Ｎ−（２´−アミノ−２，３，５´，６´−テトラヒドロスピロ［クロメン−４，４´−［１，３］チアジン］−６−イル）−５−ブロモピリミジン−２−カルボキサミド、
５）Ｎ−（２´−アミノ−２，３，５´，６´−テトラヒドロスピロ［クロメン−４，４´−［１，３］チアジン］−６−イル）−５−ブロモピリジン−２−カルボキサミド、
６）Ｎ−（２´−アミノ−２，３，５´，６´−テトラヒドロスピロ［クロメン−４，４´−［１，３］チアジン］−６−イル）−３，５−ジクロロピリジン−２−カルボキサミド。
【請求項８】
請求項１から７のいずれかに記載の化合物又はその医薬上許容される塩を有効成分として含有する医薬組成物。
【請求項９】
アミロイドβタンパク質産生を抑制するための請求項８に記載の医薬組成物。
【請求項１０】
ベータサイトアミロイドβ前駆体タンパク質開裂酵素１（ＢＡＣＥ１）を阻害するための請求項８に記載の医薬組成物。
【請求項１１】
神経変性疾患治療のための請求項８から１０のいずれかに記載の医薬組成物。
【請求項１２】
神経変性疾患がアルツハイマー型痴呆又はダウン症である請求項１１に記載の医薬組成物。
【公表番号】特表２０１１−５２９４４３（Ｐ２０１１−５２９４４３Ａ）
【公表日】平成２３年１２月８日（２０１１．１２．８）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２０１０−５３３３５７（Ｐ２０１０−５３３３５７）
【出願日】平成２１年７月２４日（２００９．７．２４）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＪＰ２００９／０６３６２７
【国際公開番号】ＷＯ２０１０／０１３７９４
【国際公開日】平成２２年２月４日（２０１０．２．４）
【出願人】（５０６１３７１４７）エーザイ・アール・アンド・ディー・マネジメント株式会社 (215)
【Ｆターム（参考）】
【公表日】平成２３年１２月８日（２０１１．１２．８）
【国際特許分類】
【出願日】平成２１年７月２４日（２００９．７．２４）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＪＰ２００９／０６３６２７
【国際公開番号】ＷＯ２０１０／０１３７９４
【国際公開日】平成２２年２月４日（２０１０．２．４）
【出願人】（５０６１３７１４７）エーザイ・アール・アンド・ディー・マネジメント株式会社 (215)
【Ｆターム（参考）】
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