セフェム化合物の無機酸塩の結晶
式：
で示される化合物（Ｉ）の２塩酸、２臭化水素酸、および２硝酸からなる群から選択される酸の付加塩またはそれらの溶媒和物の、結晶は、注射剤等の医薬として有用である。
で示される化合物（Ｉ）の２塩酸、２臭化水素酸、および２硝酸からなる群から選択される酸の付加塩またはそれらの溶媒和物の、結晶は、注射剤等の医薬として有用である。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
本発明は、医薬として有用なセフェム化合物の種々の無機酸塩の結晶、およびその製造方法に関する。
【背景技術】
一般に抗菌剤として有用なセフェム化合物は、医薬、特に注射剤として開発する上で極めて高品質のものが要求され、好ましくは結晶として単離する必要があった。特に注射剤として開発する場合には、できるだけ水溶解性、保存安定性等に優れた結晶が求められていた。
本発明に係るセフェム化合物は式：
で示される（以下、化合物（Ｉ）という）。その対応１塩酸塩は公知であるが、非結晶としてしか単離されていない（特許文献１参照）。また化合物（Ｉ）の結晶としては、対応の硫酸塩結晶が単離されているだけである（非特許文献１、特許文献４参照）。また化合物（Ｉ）以外のセフェム化合物の無機酸塩結晶の例としては、２硫酸塩、２硝酸塩、２塩酸塩、リン酸塩の各結晶が公知である（特許文献２、３参照）。
（特許文献１） ＷＯ００／３２６０６号（実施例６−２）
（特許文献２） 特開昭６２−１０３０９０号公報
（特許文献３） 特開平２−９８８５号公報
（特許文献４） ＷＯ０２／０８８１４７号
（非特許文献１）第４１回、ＩＣＡＡＣプログラム集（２００１年１２月１６日〜１９日、アメリカ合衆国、シカゴ，講演Ｎｏ．Ｆ−３７０）
【発明の開示】
化合物（Ｉ）を医薬、特に注射剤として開発するために、さらに水溶解性および／または保存安定性等に優れた結晶が求められていた。
本発明者らは鋭意検討した結果、化合物（Ｉ）の硫酸塩をその他の無機酸塩の結晶に変換することに成功し、以下に示す本発明を完成した。
（１）式：
で示される化合物（Ｉ）の、２塩酸、２臭化水素酸、および２硝酸からなる群から選択される酸の付加塩またはそれらの溶媒和物の、結晶。
（２）２塩酸塩またはその水和物である、上記（１）記載の結晶。
（３）２塩酸塩の０．５〜５水和物である、上記（１）記載の結晶。
（４）２塩酸塩の５水和物である、上記（１）記載の結晶。
（５）粉末Ｘ線回折パターンにおいて、面間隔（ｄ）が、４．９９，４．８９，４．６７，４．５７，４．４５，４．１８，３．７０，３．５８，３．４３，３．３９および３．３４（単位：Å）付近に主なピークを示す、上記（１）記載の２塩酸塩またはその水和物の結晶。
（６）２塩酸塩の５水和物である、上記（５）記載の結晶。
（７）２塩酸塩の０．５水和物である、上記（１）記載の結晶。
（８）粉末Ｘ線回折パターンにおいて、面間隔（ｄ）が、９．５２，５．１０，４．４９，３．８７，３．６６，３．５６，３．４７，３．４０，３．３７，３．３０，３．２４，３．１８，３．１１，および２．７９（単位：Å）付近に主なピークを示す、上記（１）記載の２塩酸塩またはその水和物の結晶。
（９）２塩酸塩の０．５水和物である、上記（８）記載の結晶。
（１０）２臭化水素酸塩またはその水和物である、上記（１）記載の結晶。
（１１）２臭化水素酸塩の０．５〜５水和物である、上記（１）記載の結晶。
（１２）２臭化水素酸塩の４水和物である、上記（１）記載の結晶。
（１３）粉末Ｘ線回折パターンにおいて、面間隔（ｄ）が、５．２９，４．４５，４．２８，３．６５，３．５２，３．４２，３．３５および３．１２（単位：Å）付近に主なピークを示す、上記（１）記載の２臭化水素酸塩またはその水和物の結晶。
（１４）２臭化水素酸塩の４水和物である、上記（１３）記載の結晶。
（１５）２臭化水素酸塩の０．５水和物である、上記（１）記載の結晶。
（１６）２硝酸塩またはその水和物である、上記（１）記載の結晶。
（１７）２硝酸塩の０．５〜５水和物である、上記（１）記載の結晶。
（１８）２硝酸塩の３水和物である、上記（１）記載の結晶。
（１９）粉末Ｘ線回折パターンにおいて、面間隔（ｄ）が、５．３４，５．１３，５．０１，４．８３，４．６４，４．５７，４．４３，４．１６，４．０６，３．７１，３．４０，３．３９，３．３３（単位：Å）付近に主なピークを示す、上記（１）記載の２硝酸塩またはその水和物の結晶。
（２０）２硝酸塩の３水和物である、上記（１９）記載の結晶。
（２１）２硝酸塩の０．５水和物である、上記（１）記載の結晶。
（２２）粉末Ｘ線回折パターンにおいて、面間隔（ｄ）が、９．６０，９．２４，６．８９，５．１５，５．０５，４．５２，４．０５，３．９８，３．９４，３．６８，３．５１，３．３３，３．２５，２．８９，および２．８８（単位：Å）付近に主なピークを示す、上記（１）記載の２硝酸塩またはその水和物の結晶。
（２３）２硝酸塩の０．５水和物である、上記（２２）記載の結晶。
（２４）上記（１）〜（２３）のいずれかに記載の結晶を含有する医薬組成物。
（２５）抗菌剤および／または注射剤である上記（２４）記載の医薬組成物。
（２６）上記（１）〜（２３）のいずれかに記載の結晶を投与することを特徴とする、細菌性感染症の予防または治療方法。
（２７）細菌性感染症の予防または治療剤を製造するための、上記（１）〜（２３）のいずれかに記載の結晶の使用。
（２８）化合物（Ｉ）の１硫酸塩と酸を混合後、アルコールを加えて析出させることを特徴とする、上記（１）記載の化合物（Ｉ）の酸付加塩またはそれらの溶媒和物の結晶の製造方法。
（２９）化合物（Ｉ）の１硫酸塩水溶液に、塩化バリウム、硝酸バリウム、臭化バリウム、または水酸化バリウムを、所望により酸存在下で、加えて硫酸バリウムを析出および除去した後、残留物にアルコールを加えることを特徴とする、上記（１）に記載の化合物（Ｉ）の酸付加塩またはそれらの溶媒和物の結晶の製造方法。
【図面の簡単な説明】
（図１）実施例１で得られた２塩酸塩結晶の粉末Ｘ線回折のグラフである。縦軸はピーク強度（単位：ｃｐｓ）、横軸は回折角２θ（単位：°）を表わす。
（図２）実施例２で得られた２臭化水素酸塩結晶の粉末Ｘ線回折のグラフである。
（図３）実施例３で得られた２硝酸塩結晶の粉末Ｘ線回折のグラフである。
（図４）実施例４（２）で得られた２塩酸塩結晶の粉末Ｘ線回折のグラフである。
（図５）実施例６（２）で得られた２硝酸塩結晶の粉末Ｘ線回折のグラフである。
【発明を実施するための最良の形態】
本発明の化合物（Ｉ）の酸付加塩としては、２塩酸塩、２臭化水素酸塩、および２硝酸塩が例示される。本発明は、これら無機酸塩またはその溶媒和物の結晶、より好ましくは水和物結晶を提供する。
溶媒和物の溶媒としては、水、アルコール（例：メタノール、エタノール、イソプロパノール等）、テトラヒドロフラン、アセトン、ジオキサンまたはその混合物等が挙げられる。溶媒和数は、製造方法、保存条件等により異なり必ずしも限定されないが、医薬品として使用する場合には有機溶媒の含量は少ない方が好ましい。該溶媒和物は、好ましくは水和物である。水和数は、好ましくは０．５〜６、より好ましくは０．５〜５である。
以下、各塩ごとに説明する。
（１）２塩酸塩結晶
２塩酸塩結晶は、好ましくは水和物である。水分含量は、化合物（Ｉ）に対して好ましくは０．５〜６当量、より好ましくは０．５〜５当量、さらに好ましくは０．５〜４当量、または０．５〜３当量である。
該結晶としては、粉末Ｘ線回折パターンが、以下に示す付近に代表的ピークを含む結晶が例示される。本発明の結晶は、好ましくは単一の結晶であるが、その混合物であってもよい。
１−Ａ型：
面間隔（ｄ）＝４．９９，４．８９，４．６７，４．５７，４．４５，４．１８，３．７０，３．５８，３．４３，３．３９および３．３４（単位：Å）
１−Ａ型結晶は、好ましくは５水和物である。
１−Ｂ型：
面間隔（ｄ）＝９．５２，５．１０，４．４９，３．８７，３．６６，３．５６，３．４７，３．４０，３．３７，３．３０，３．２４，３．１８，３．１１，および２．７９（単位：Å）
１−Ｂ型結晶は、好ましくは０．５水和物である。
化合物（Ｉ）は、従来、１塩酸塩としては非結晶状態で単離されていたが、今回、２塩酸塩とすることで結晶化できた。
（２）２臭化水素酸塩結晶
２臭化水素酸塩結晶は、好ましくは水和物である。水分含量は、化合物（Ｉ）に対して好ましくは０．５〜６当量、より好ましくは０．５〜５当量、さらに好ましくは０．５〜４当量または０．５〜３当量である。
該結晶としては、粉末Ｘ線回折パターンが、以下に示す付近に代表的ピークを含む結晶が例示される。本発明の結晶は、好ましくは単一の結晶であるが、その混合物であってもよい。
２−Ａ型：
面間隔（ｄ）＝が、５．２９，４．４５，４．２８，３．６５，３．５２，３．４２，３．３５および３．１２（単位：Å）。
２−Ａ型結晶は、好ましくは４水和物である。
また別の結晶として０．５水和物結晶も好ましい。
（３）２硝酸塩結晶
２硝酸塩結晶は、好ましくは水和物である。水分含量は、化合物（Ｉ）に対して好ましくは０．５〜６当量、より好ましくは０．５〜５当量、さらに好ましくは０．５〜４当量である。
該結晶としては、粉末Ｘ線回折パターンが、以下に示す付近に代表的ピークを含む結晶が例示される。本発明の結晶は、好ましくは単一の結晶であるが、その混合物であってもよい。
３−Ａ型：
面間隔（ｄ）＝５．３４，５．１３，５．０１，４．８３，４．６４，４．５７，４．４３，４．１６，４．０６，３．７１，３．４０，３．３９，３．３３（単位：Å）
３−Ａ型結晶は、好ましくは３水和物である。
３−Ｂ型：
面間隔（ｄ）＝９．６０，９．２４，６．８９，５．１５，５．０５，４．５２，４．０５，３．９８，３．９４，３．６８，３．５１，３．３３，３．２５，２．８９，および２．８８（単位：Å）
３−Ｂ型結晶は、好ましくは０．５水和物である。
なお上記面間隔（ｄ）値は、各結晶のＸ線ピークのうち代表的なピークを選択したものであり、各結晶構造は必ずしもこれらの値だけによって限定されるものではない。即ち、これら以外のピークが含まれていてもよい。また一般に結晶をＸ線回折により測定した場合、そのピークは、測定機器、測定条件、付着溶媒の存在等により、多少の測定誤差を生じることがある。よって、実質的に上記同様のＸ線パターンによって特徴付けられる結晶はすべて本発明の範囲内である。
化合物（Ｉ）の無機酸塩またはその溶媒和物の結晶の製造方法は特に限定されないが、好ましくは以下に示す方法に準じて製造すればよい。
（方法１）
化合物（Ｉ）の硫酸塩（例：１硫酸塩）と酸を混合後、アルコール（例：メタノール、エタノール、イソプロパノール等）等の有機溶媒を加えることにより、硫酸塩以外の無機酸塩の結晶が析出する。
酸の量は、通常、１硫酸塩に対して約２モル当量以上、好ましくは約５モル当量以上、より好ましくは約１０モル当量以上である。
晶析は、好ましくは、種晶を加えて行われ、約０℃〜室温、好ましくは約１０℃前後で静置することにより行われる。
酸の濃度は好ましくは約１〜１０％である。特に塩酸の場合には約１〜５％が好ましい。臭化水素酸の場合には約１〜５％が好ましい。硝酸の場合は約１〜５％が好ましい。
１硫酸塩と酸の混合方法、順序は特に制限されないが、酸の種類等に応じて適宜され得る。
（方法２）
化合物（Ｉ）の硫酸塩（例：１硫酸塩）水溶液に、塩化バリウム、硝酸バリウム、臭化バリウム、または水酸化バリウム等のバリウム塩を、所望により前記酸存在下で、加えて硫酸バリウムを析出させ、濾過等によりこれを除去する。次に、濾液、洗液等の残留物にアルコールおよび所望により水を加えることにより、硫酸塩以外の無機酸塩の結晶が析出する。
ここで「酸存在下」における酸の添加は、バリウム塩を加えるのと同時でもまたその前後でもよい。また析出した硫酸バリウムを濾過して、酸で洗浄してもよい。またバリウム塩の水溶液をあらかじめ調製しておいてから、化合物（Ｉ）の１硫酸塩を投入してもよい。
バリウム塩は、化合物（Ｉ）の１硫酸塩に対して好ましくは約１〜２モル当量、より好ましくは約１〜１．５モル当量使用される。
酸を使用する場合、酸は化合物（Ｉ）の１硫酸塩に対して好ましくは約２モル当量以上、より好ましくは約５モル当量以上使用される。
なお好ましくは、上記（１）または（２）の各結晶化方法を繰り返すことにより、より純度の高い結晶が得られる。原料に使用する化合物（Ｉ）の硫酸塩は、結晶でも非結晶でもよく、また水和物でも無水和物でもよい。
上記製法により得られた結晶は、定法により室温での乾燥や減圧乾燥を行うことにより、溶媒数を調節することができ、所望の水和物等を得ることができる。
本発明の化合物（Ｉ）の前記無機酸塩の結晶は、水溶解性、保存安定性、乾燥の容易性、製剤化上の取扱い性等に優れており、それ自体医薬活性成分として有用である。また化合物（Ｉ）の硫酸塩の製造中間体としても使用可能である。
本発明はさらに、前記化合物（Ｉ）の無機酸塩またはその溶媒和物の結晶を有効成分として含有する医薬組成物を提供する。該医薬組成物は好ましくは抗菌剤である。また医薬組成物の剤形としては、錠剤、顆粒剤、カプセル剤、注射剤等が例示されるが、好ましくは注射剤である。本発明の結晶が高い水溶解性を有することは、医療現場で注射剤を用時調製する上で、濁りを生じる恐れもなく非常に有利である。また注射する上で弱酸性〜中性付近（例：ｐＨ４〜７）にｐＨ調整する場合、所望により塩基等のｐＨ調整剤（例：ＮａＯＨ、ＮａＨＣＯ３、Ｎａ２ＣＯ３、アミノ酸等）を併用し得るが、例えば本発明の塩酸塩の中和によって生成するＮａＣｌは、対応の硫酸塩を中和した場合に生じるＮａ２ＳＯ４に比べて生体への影響が緩和である。よって、本発明の塩酸塩結晶は特に注射剤として好適である。
上記注射剤は、粉末充填製剤または凍結乾燥製剤として調製できる。
上記医薬組成物は適宜、医薬品用添加剤（例：賦形剤、崩壊剤、溶解剤、乳化剤、安定化剤等）を含有していてもよい。特に注射剤として使用する場合には、蒸留水や生理食塩水等と共に、ｐＨ調節剤（例：ＮａＯＨ、ＮａＨＣＯ３、Ｎａ２ＣＯ３、アミノ酸等）を配合してもよい。
化合物（Ｉ）の無機酸塩またはその溶媒和物の結晶の投与量は、患者の年齢や疾患の種類・状態等により異なるが、通常、患者の体重１ｋｇ当たり、約０．１〜１００ｍｇ／日、好ましくは約０．５〜５０ｍｇ／日を、所望により１日２〜４回に分割して投与すればよい。
さらに本発明は、本発明結晶を、人を含む動物に投与することを特徴とする、細菌性感染症の予防または治療方法を提供する。
また、細菌性感染症の予防または治療剤を製造するための、本発明結晶の使用方法も提供する。この場合、本発明結晶自体が、医薬活性成分であってもよく、また硫酸塩等の他の塩を含む医薬製剤の中間体としても使用してもよい。
以下に実施例、試験例を示す。Ｘ線測定条件は：ＣｕＫα線（波長λ＝１．５４Å）、管電圧４０ｋＶ、管電流３０ｍＡ、スキャンスピード：４．０００°／ｍｉｎ、サンプリング幅：０．０２０°である。
実施例１（２塩酸塩・５水和物）
（１）種晶の調製
ＷＯ０２／０８８１４７号に記載の方法に準じて得られた化合物（Ｉ）の１硫酸塩・２水和物（２ｇ，２．７２ｍｍｏｌｅ）を１Ｎ塩酸３０ｍｌ（１１モル当量）に溶解後、エタノール７０ｍｌを加えて１０℃で静置した。一夜後、析出した結晶をスパーテルで採取し、風乾し、以後、２塩酸塩の種晶として使用した。
（２）塩交換法
化合物（Ｉ）の１硫酸塩・３水和物（１０ｇ，１３．３ｍｍｏｌｅ）を２Ｎ塩酸８５ｍｌ（１２．８ｍｏｌｅ当量）に溶解、氷冷下、エタノール５１０ｍｌを加え、（１）で得た２塩酸塩の種晶を加え、１０℃で一夜攪拌した。析出した結晶を濾取、９０％エタノール２５ｍｌで２回、エタノール２５ｍｌで２回、順次洗浄後、室温で風乾すると、６．３５ｇの結晶が得られた。この結晶の組成は元素分析値より２塩酸塩／２硫酸塩＝７５／２５（５水和物）であった。得られた結晶６ｇを同法で再結晶すると２塩酸塩／１硫酸塩＝９５／５（５水和物）の結晶が４．１４ｇ得られた。更に、この結晶３．１ｇを同法で再結晶すると２塩酸塩／１硫酸塩＝１００／０（５水和物）の結晶が４．１４ｇ得られた。
（３）ＢａＣｌ２法
化合物（Ｉ）の１硫酸塩（９．１％含水）（６０ｇ，７８ｍｍｏｌｅ）を６Ｎ塩酸１３０ｍｌ（１０ｍｏｌｅ当量）に溶解、氷冷下、塩化バリウム２水和物１９．０７ｇ（１ｍｏｌｅ当量）の水５５ｍｌ溶液を滴下した。室温にて３０分間攪拌した後、析出した硫酸バリウムを濾過、水６０ｍｌ洗浄によって除いた。濾液、洗液を集めて氷冷下、エタノール８７５ｍｌと水１５ｍｌを加えた後、（１）で得た２塩酸塩の種晶を加え、１０℃で一夜攪拌した。析出した結晶を濾取、８５％エタノール１００ｍｌで２回、エタノール１００ｍｌで２回、順次洗浄後、室温で風乾すると、４０．２９ｇの結晶が得られた。この結晶は元素分析値より２塩酸塩・５水和物であった。
２塩酸塩５水和物結晶の粉末Ｘ線回折パターンを図１および表１に示す。
実施例２（２臭化水素酸塩・４水和物）
（１）Ｂａ（ＯＨ）２法
化合物（Ｉ）の１硫酸塩（３水和物）２ｇ（２．６６ｍｍｏｌｅ）の水３ｍｌ溶液に４７％臭化水素酸１．５４ｍｌ（５ｍｏｌｅ当量）を加えた後、水酸化バリウム（８水和物）０．８３８ｇ（１ｍｏｌｅ当量）の水４ｍｌ溶液を注入した。析出した硫酸バリウムを濾過、水２ｍｌで洗浄して除いた。濾液、洗液を集めて氷冷下、イソプロパノール２４ｍｌを加えた後、１０℃で一夜攪拌した。析出した結晶を濾取、８０％イソプロパノール１０ｍｌ、イソプロパノール１０ｍｌで順次洗浄後、室温で風乾すると、１．５０ｇの結晶が得られた。
この内、０．５０ｇ（０．５９ｍｍｏｌｅ）を水１．６ｍｌと４７％臭化水素酸０．４ｍｌ（５ｍｏｌｅ当量）の混液に溶解、極微量の不溶物を濾過後、水１ｍｌで洗浄した。濾液、洗液を集めて氷冷下、イソプロパノール６ｍｌを加え、上で得た結晶を種晶として加えた後、１０℃で一夜攪拌した。析出した結晶を濾取、８０％イソプロパノール６ｍｌ、イソプロパノール６ｍｌで順次洗浄後、室温で風乾すると、０．２８ｇの結晶が得られた。この結晶は元素分析値より２臭化水素酸塩・４水和物であった。
実施例３（２硝酸塩・３水和物）
（１）種晶の調製
化合物（Ｉ）の１硫酸塩・３水和物（２ｇ，２．６６ｍｍｏｌｅ）を水８ｍｌに溶解、室温にて硝酸バリウム６９５ｍｇ（１モル当量）の水８ｍｌ溶液を滴下した後、室温にて３０分間攪拌した。析出した硫酸バリウムの沈殿物を濾別、水２ｍｌで洗浄した。濾液、洗液を集めて氷冷下エタノール５０ｍｌを加えた。調製液がやや濁ったため、水２ｍｌを更に加えて透明溶液とした。調製液を１０℃で一夜攪拌したが結晶の析出は確認されなかった。更に６０％硝酸２．０２ｍｌ（１０モル当量）とエタノール４０ｍｌを氷冷下に加えて１０℃で７日間、攪拌と静置を繰り返した。析出晶を濾取、８０％エタノール水５ｍｌで２回洗浄し、結晶０．３０ｇを得た。本結晶は元素分析値より２硝酸塩・３．１水和物に一致した。
（２）Ｂａ（ＮＯ３）２法
硝酸バリウム２０．８３ｇ（１ｍｏｌｅ当量）の水２４０ｍｌ溶液に、室温下、化合物（Ｉ）の１硫酸塩・３水和物（６０ｇ，７８ｍｍｏｌｅ）を５分間で投入した。室温にて３０分間攪拌した後、析出した硫酸バリウムを濾過、水２９．７ｍｌと６０％硝酸３０．３ｍｌ（５ｍｏｌｅ当量）の混液で洗浄して除いた。濾液、洗液を集めて氷冷下、エタノール５１０ｍｌを加えた後、（１）で得た硝酸塩の種晶を加え、１０℃で一夜攪拌した。析出した結晶を濾取、８０％エタノール６０ｍｌで２回、エタノール６０ｍｌで２回、順次洗浄後、室温で風乾すると、２８．９５ｇの結晶が得られた。この結晶は元素分析値より２硝酸塩・３水和物であった。
この結晶の粉末Ｘ線回折パターンを図３および表３に示す。
実施例４（２塩酸塩・０．５水和物）
（１） 実施例１（３）で得られた２塩酸塩・５水和物の結晶４０ｇ（５２．４ｍｍｏｌｅ）を２Ｎ塩酸１００ｍｌに溶解、濾過後、２Ｎ塩酸３１ｍｌ（計１３１ｍｌ，５モル当量）で洗浄した。濾液、洗液を集めて氷冷下、エタノール４３５ｍｌを加え、種晶を加えた後、１０℃で一夜攪拌した。析出した結晶を濾取、８５％エタノール５０ｍｌで２回、エタノール５０ｍｌで２回、順次洗浄後、室温で風乾すると、３０．５９ｇの結晶が得られた。この結晶は元素分析値より２塩酸塩・５水和物であった。
上記の２塩酸塩・５水和物８．００ｇを室温下、５時間、減圧乾燥し、化合物（Ｉ）の２塩酸塩・０．５水和物結晶７．１７ｇを得た。
（２）化合物（Ｉ）の１硫酸塩・４水和物の結晶６０ｇ（７８．０ｍｍｏｌｅ）を６Ｎ塩酸１３０ｍｌ（１０モル当量）に溶解、氷冷下、２塩化バリウム・２水和物１９．０７ｇ（１モル当量）の水５５ｍｌ溶液を少量ずつ加え、室温下、３０分攪拌した。析出した硫酸バリウムを濾過、水６０ｍｌで洗浄して除去した。濾液、洗液を集めて氷冷下、エタノール８７５ｍｌと水１５ｍｌを加えた後、先に得た種晶を加えて１０℃で一夜攪拌した。析出した結晶を濾取、８５％エタノール１００ｍｌで２回、エタノール１００ｍｌで２回洗浄後、室温で風乾すると、４０．２９ｇの結晶が得られた。この結晶は元素分析値より２塩酸塩・５水和物であった。
上記の２塩酸塩・５水和物１．００ｇを室温下、１０時間、減圧乾燥し、化合物（Ｉ）の２塩酸塩・０．５水和物０．９０ｇを得た。粉末Ｘ線回折パターン（相対湿度５％中測定）を図４および表４に示す。
実施例５（２臭化水素酸塩・０．５水和物）
（１）２臭化バリウム・２水和物８．８６ｇ（１モル当量）の水５０ｍｌ溶液に化合物（Ｉ）の１硫酸塩，３水和物２０ｇ（２６．６ｍｍｏｌｅ）を少量ずつ投入し、室温下、３０分攪拌した。析出した硫酸バリウムを濾過、４７％臭化水素酸１５．４ｍｌ（５モル当量）の水５５ｍｌ溶液で洗浄して除去した。濾液、洗液を集めて氷冷下、イソプロパノール２１０ｍｌを加えた後、１０℃で一夜攪拌した。析出した結晶を濾取、８０％イソプロパノール６０ｍｌ、イソプロパノール６０ｍｌで順次洗浄後、室温で風乾すると、１２．５０ｇの結晶が得られた。この結晶１２．５０ｇ（１４．９８ｍｍｏｌｅ）を水２９ｍｌと４７％臭化水素酸８．７１ｍｌ（５モル当量）の混液に溶解、極微量の不溶物を濾過後、水２５ｍｌで洗浄した。濾液、洗液を集めて氷冷下、イソプロパノール１２５ｍｌを加え、上で得た結晶を種晶として加えた後、１０℃で一夜攪拌した。析出した結晶を濾取、８０％イソプロパノール６０ｍｌ、イソプロパノール６０ｍｌで順次洗浄後、室温で風乾すると、９．１４ｇの結晶が得られた。この結晶は元素分析値より２臭化水素酸塩・４水和物であった。
上記の２臭化水素酸塩・４水和物８．１４ｇを室温下、４時間、減圧乾燥し、化合物（Ｉ）の２臭化水素塩・０．５水和物結晶７．５１ｇを得た。
実施例６（２硝酸塩・０．５水和物）
（１）実施例３（２）で得られた２硝酸塩・３水和物の結晶２８．５ｇ（３６．５ｍｍｏｌｅ）を８．４％硝酸８０ｍｌに溶解、濾過後、８．４％硝酸１９．４ｍｌ（計９９．４ｍｌ，５モル当量）で洗浄した。濾液、洗液を集めて氷冷下、エタノール１６８ｍｌを加え、先に得た結晶を種晶として加えた後、１０℃で一夜攪拌した。析出した結晶を濾取、８０％エタノール３０ｍｌで２回、エタノール３０ｍｌで２回、順次洗浄後、室温で風乾すると、２３．０３ｇの結晶が得られた。この結晶は元素分析値より２硝酸塩・３水和物であった。
上記の２硝酸塩・３水和物８．００ｇを室温下、５時間、減圧乾燥し、化合物（Ｉ）の２硝酸塩・０．５水和物結晶７．５１ｇを得た。
（２）２硝酸バリウム２０．８３ｇ（１モル当量）の水２４０ｍｌ溶液に１硫酸塩・３水和物の結晶６０ｇ（７９．７ｍｍｏｌｅ）を少量ずつ加え、室温下、３０分攪拌した。析出した硫酸バリウムを濾過、６０％硝酸３０．３ｍｌ（５モル当量）と水２９．７ｍｌの混液で洗浄して除去した。濾液、洗液を集めて氷冷下、エタノール５１０ｍｌを加えた後、先に得た種晶を加えて１０℃で一夜攪拌した。析出した結晶を濾取、８０％エタノール６０ｍｌで２回、エタノール６０ｍｌで２回洗浄後、室温で風乾すると、２８．９５ｇの結晶が得られた。この結晶２８．５ｇ（３６．５ｍｍｏｌｅ）を８．４％硝酸８０ｍｌに溶解、濾過後、８．４％硝酸１９．４ｍｌ（計９９．４ｍｌ，５モル当量）で洗浄した。濾液、洗液を集めて氷冷下、エタノール１６８ｍｌを加え、先に得た結晶を種晶として加えた後、１０℃で一夜攪拌した。析出した結晶を濾取、８０％エタノール３０ｍｌで２回、エタノール３０ｍｌで２回、順次洗浄後、室温で風乾すると、２３．０３ｇの結晶が得られた。この結晶は元素分析値より２硝酸塩・３水和物であった。
上記の２硝酸塩・３水和物１．００ｇを室温下、１０時間、減圧乾燥し、化合物（Ｉ）の２硝酸塩・０．５水和物０．９４ｇを得た。粉末Ｘ線回折パターン（相対湿度５％中測定）を図５および表５に示す。
試験例１（溶解度）
前記実施例で得られた化合物（Ｉ）の各無機酸塩結晶の溶解性を調べた。溶媒に過剰量の結晶を投入して室温（２５℃）で３時間攪拌した後、溶液部をＨＰＬＣ定量する方法で調べた。対照として対応の１硫酸塩結晶（２水和物）を使用した。
化合物（Ｉ）の２塩酸塩および２硝酸塩の各結晶は、いずれも対応の１硫酸塩結晶よりも、水または生理食塩水中で高い溶解性を示した。
試験例２（保存安定性）
本発明の化合物（Ｉ）の各結晶について５０℃における安定性試験を行った。対照として対応の１硫酸塩結晶（０．５および１水和物）を使用した。
（試験方法）
１．原末を封入するＢＶＫ−１４号バイアルおよびＣＢ−９ゴム栓を精秤する。
２．原末約１００ｍｇ（力価）ずつを、ＲＨ５％以下に調湿したドライボックス内でバイアルに秤量し、栓をする。
３．原末を封入したバイアルを精秤し、原末量を算出する。
４．検量線に凍結乾燥品を用い、初期含量測定を行う。
定量はＨＰＬＣにより行う。
カラム：ＹＭＣ−Ｐａｃｋ ＯＤＳ−ＡＭ−３０２（４．６ｍｍＩＤ×１５０ｍｍＬ），移動相：０．１％ＴＦＡ／アセトニトリル＝９３／７，流速：１ｍｌ／ｍｉｎ，検出波長：２４０ｎｍ，注入量：１５ｕｌ
原末は、まず１０ｍｌ生理食塩水をバイアルに添加して溶解させ、注射用蒸留水で１０倍希釈を２回行って定量に供する。
５．１０ｍｌの生理食塩水に溶解させた状態で１時間室温放置し、濁度測定を行う。測定は６００ｎｍで行う。
６．原末を封入したバイアルを所定温度の保管庫にて保存し、所定期間保存後に取り出す。上記と同様の手順で含量測定、濁度測定を行う。含量測定には凍結乾燥品を検量線に用い、初期含量を１００％として残存率を算出する。
（結果）
本発明の結晶、特に２塩酸塩や２臭化水素酸塩は、硫酸塩結晶に比べて高い安定性を示した。
製剤例１
実施例１で得られた化合物（Ｉ）の２塩酸塩とｐＨ調整用の塩基を蒸留水に溶解させることにより、注射液を調製する。
製剤例２
実施例２で得られた化合物（Ｉ）の２臭化水素酸塩とｐＨ調整用の塩基をバイアル中で蒸留水に溶解し、凍結乾燥して、注射剤を調製する。
製剤例３
実施例３で得られた化合物（Ｉ）の２硝酸塩とｐＨ調整用の塩基を粉末充填して注射剤を調製する。
【産業上の利用可能性】
本発明のセフェム化合物（Ｉ）の各種無機酸塩またはその溶媒和物の結晶は、溶解性、保存安定性、製剤化する際の取扱い性等に優れ、特に注射剤の活性成分として使用され得る。また本発明の製造方法によれば、これら結晶を高収率、高純度で効率よく工業的に製造することが可能である。
【図１】
【図２】
【図３】
【図４】
【図５】
【技術分野】
本発明は、医薬として有用なセフェム化合物の種々の無機酸塩の結晶、およびその製造方法に関する。
【背景技術】
一般に抗菌剤として有用なセフェム化合物は、医薬、特に注射剤として開発する上で極めて高品質のものが要求され、好ましくは結晶として単離する必要があった。特に注射剤として開発する場合には、できるだけ水溶解性、保存安定性等に優れた結晶が求められていた。
本発明に係るセフェム化合物は式：
で示される（以下、化合物（Ｉ）という）。その対応１塩酸塩は公知であるが、非結晶としてしか単離されていない（特許文献１参照）。また化合物（Ｉ）の結晶としては、対応の硫酸塩結晶が単離されているだけである（非特許文献１、特許文献４参照）。また化合物（Ｉ）以外のセフェム化合物の無機酸塩結晶の例としては、２硫酸塩、２硝酸塩、２塩酸塩、リン酸塩の各結晶が公知である（特許文献２、３参照）。
（特許文献１） ＷＯ００／３２６０６号（実施例６−２）
（特許文献２） 特開昭６２−１０３０９０号公報
（特許文献３） 特開平２−９８８５号公報
（特許文献４） ＷＯ０２／０８８１４７号
（非特許文献１）第４１回、ＩＣＡＡＣプログラム集（２００１年１２月１６日〜１９日、アメリカ合衆国、シカゴ，講演Ｎｏ．Ｆ−３７０）
【発明の開示】
化合物（Ｉ）を医薬、特に注射剤として開発するために、さらに水溶解性および／または保存安定性等に優れた結晶が求められていた。
本発明者らは鋭意検討した結果、化合物（Ｉ）の硫酸塩をその他の無機酸塩の結晶に変換することに成功し、以下に示す本発明を完成した。
（１）式：
で示される化合物（Ｉ）の、２塩酸、２臭化水素酸、および２硝酸からなる群から選択される酸の付加塩またはそれらの溶媒和物の、結晶。
（２）２塩酸塩またはその水和物である、上記（１）記載の結晶。
（３）２塩酸塩の０．５〜５水和物である、上記（１）記載の結晶。
（４）２塩酸塩の５水和物である、上記（１）記載の結晶。
（５）粉末Ｘ線回折パターンにおいて、面間隔（ｄ）が、４．９９，４．８９，４．６７，４．５７，４．４５，４．１８，３．７０，３．５８，３．４３，３．３９および３．３４（単位：Å）付近に主なピークを示す、上記（１）記載の２塩酸塩またはその水和物の結晶。
（６）２塩酸塩の５水和物である、上記（５）記載の結晶。
（７）２塩酸塩の０．５水和物である、上記（１）記載の結晶。
（８）粉末Ｘ線回折パターンにおいて、面間隔（ｄ）が、９．５２，５．１０，４．４９，３．８７，３．６６，３．５６，３．４７，３．４０，３．３７，３．３０，３．２４，３．１８，３．１１，および２．７９（単位：Å）付近に主なピークを示す、上記（１）記載の２塩酸塩またはその水和物の結晶。
（９）２塩酸塩の０．５水和物である、上記（８）記載の結晶。
（１０）２臭化水素酸塩またはその水和物である、上記（１）記載の結晶。
（１１）２臭化水素酸塩の０．５〜５水和物である、上記（１）記載の結晶。
（１２）２臭化水素酸塩の４水和物である、上記（１）記載の結晶。
（１３）粉末Ｘ線回折パターンにおいて、面間隔（ｄ）が、５．２９，４．４５，４．２８，３．６５，３．５２，３．４２，３．３５および３．１２（単位：Å）付近に主なピークを示す、上記（１）記載の２臭化水素酸塩またはその水和物の結晶。
（１４）２臭化水素酸塩の４水和物である、上記（１３）記載の結晶。
（１５）２臭化水素酸塩の０．５水和物である、上記（１）記載の結晶。
（１６）２硝酸塩またはその水和物である、上記（１）記載の結晶。
（１７）２硝酸塩の０．５〜５水和物である、上記（１）記載の結晶。
（１８）２硝酸塩の３水和物である、上記（１）記載の結晶。
（１９）粉末Ｘ線回折パターンにおいて、面間隔（ｄ）が、５．３４，５．１３，５．０１，４．８３，４．６４，４．５７，４．４３，４．１６，４．０６，３．７１，３．４０，３．３９，３．３３（単位：Å）付近に主なピークを示す、上記（１）記載の２硝酸塩またはその水和物の結晶。
（２０）２硝酸塩の３水和物である、上記（１９）記載の結晶。
（２１）２硝酸塩の０．５水和物である、上記（１）記載の結晶。
（２２）粉末Ｘ線回折パターンにおいて、面間隔（ｄ）が、９．６０，９．２４，６．８９，５．１５，５．０５，４．５２，４．０５，３．９８，３．９４，３．６８，３．５１，３．３３，３．２５，２．８９，および２．８８（単位：Å）付近に主なピークを示す、上記（１）記載の２硝酸塩またはその水和物の結晶。
（２３）２硝酸塩の０．５水和物である、上記（２２）記載の結晶。
（２４）上記（１）〜（２３）のいずれかに記載の結晶を含有する医薬組成物。
（２５）抗菌剤および／または注射剤である上記（２４）記載の医薬組成物。
（２６）上記（１）〜（２３）のいずれかに記載の結晶を投与することを特徴とする、細菌性感染症の予防または治療方法。
（２７）細菌性感染症の予防または治療剤を製造するための、上記（１）〜（２３）のいずれかに記載の結晶の使用。
（２８）化合物（Ｉ）の１硫酸塩と酸を混合後、アルコールを加えて析出させることを特徴とする、上記（１）記載の化合物（Ｉ）の酸付加塩またはそれらの溶媒和物の結晶の製造方法。
（２９）化合物（Ｉ）の１硫酸塩水溶液に、塩化バリウム、硝酸バリウム、臭化バリウム、または水酸化バリウムを、所望により酸存在下で、加えて硫酸バリウムを析出および除去した後、残留物にアルコールを加えることを特徴とする、上記（１）に記載の化合物（Ｉ）の酸付加塩またはそれらの溶媒和物の結晶の製造方法。
【図面の簡単な説明】
（図１）実施例１で得られた２塩酸塩結晶の粉末Ｘ線回折のグラフである。縦軸はピーク強度（単位：ｃｐｓ）、横軸は回折角２θ（単位：°）を表わす。
（図２）実施例２で得られた２臭化水素酸塩結晶の粉末Ｘ線回折のグラフである。
（図３）実施例３で得られた２硝酸塩結晶の粉末Ｘ線回折のグラフである。
（図４）実施例４（２）で得られた２塩酸塩結晶の粉末Ｘ線回折のグラフである。
（図５）実施例６（２）で得られた２硝酸塩結晶の粉末Ｘ線回折のグラフである。
【発明を実施するための最良の形態】
本発明の化合物（Ｉ）の酸付加塩としては、２塩酸塩、２臭化水素酸塩、および２硝酸塩が例示される。本発明は、これら無機酸塩またはその溶媒和物の結晶、より好ましくは水和物結晶を提供する。
溶媒和物の溶媒としては、水、アルコール（例：メタノール、エタノール、イソプロパノール等）、テトラヒドロフラン、アセトン、ジオキサンまたはその混合物等が挙げられる。溶媒和数は、製造方法、保存条件等により異なり必ずしも限定されないが、医薬品として使用する場合には有機溶媒の含量は少ない方が好ましい。該溶媒和物は、好ましくは水和物である。水和数は、好ましくは０．５〜６、より好ましくは０．５〜５である。
以下、各塩ごとに説明する。
（１）２塩酸塩結晶
２塩酸塩結晶は、好ましくは水和物である。水分含量は、化合物（Ｉ）に対して好ましくは０．５〜６当量、より好ましくは０．５〜５当量、さらに好ましくは０．５〜４当量、または０．５〜３当量である。
該結晶としては、粉末Ｘ線回折パターンが、以下に示す付近に代表的ピークを含む結晶が例示される。本発明の結晶は、好ましくは単一の結晶であるが、その混合物であってもよい。
１−Ａ型：
面間隔（ｄ）＝４．９９，４．８９，４．６７，４．５７，４．４５，４．１８，３．７０，３．５８，３．４３，３．３９および３．３４（単位：Å）
１−Ａ型結晶は、好ましくは５水和物である。
１−Ｂ型：
面間隔（ｄ）＝９．５２，５．１０，４．４９，３．８７，３．６６，３．５６，３．４７，３．４０，３．３７，３．３０，３．２４，３．１８，３．１１，および２．７９（単位：Å）
１−Ｂ型結晶は、好ましくは０．５水和物である。
化合物（Ｉ）は、従来、１塩酸塩としては非結晶状態で単離されていたが、今回、２塩酸塩とすることで結晶化できた。
（２）２臭化水素酸塩結晶
２臭化水素酸塩結晶は、好ましくは水和物である。水分含量は、化合物（Ｉ）に対して好ましくは０．５〜６当量、より好ましくは０．５〜５当量、さらに好ましくは０．５〜４当量または０．５〜３当量である。
該結晶としては、粉末Ｘ線回折パターンが、以下に示す付近に代表的ピークを含む結晶が例示される。本発明の結晶は、好ましくは単一の結晶であるが、その混合物であってもよい。
２−Ａ型：
面間隔（ｄ）＝が、５．２９，４．４５，４．２８，３．６５，３．５２，３．４２，３．３５および３．１２（単位：Å）。
２−Ａ型結晶は、好ましくは４水和物である。
また別の結晶として０．５水和物結晶も好ましい。
（３）２硝酸塩結晶
２硝酸塩結晶は、好ましくは水和物である。水分含量は、化合物（Ｉ）に対して好ましくは０．５〜６当量、より好ましくは０．５〜５当量、さらに好ましくは０．５〜４当量である。
該結晶としては、粉末Ｘ線回折パターンが、以下に示す付近に代表的ピークを含む結晶が例示される。本発明の結晶は、好ましくは単一の結晶であるが、その混合物であってもよい。
３−Ａ型：
面間隔（ｄ）＝５．３４，５．１３，５．０１，４．８３，４．６４，４．５７，４．４３，４．１６，４．０６，３．７１，３．４０，３．３９，３．３３（単位：Å）
３−Ａ型結晶は、好ましくは３水和物である。
３−Ｂ型：
面間隔（ｄ）＝９．６０，９．２４，６．８９，５．１５，５．０５，４．５２，４．０５，３．９８，３．９４，３．６８，３．５１，３．３３，３．２５，２．８９，および２．８８（単位：Å）
３−Ｂ型結晶は、好ましくは０．５水和物である。
なお上記面間隔（ｄ）値は、各結晶のＸ線ピークのうち代表的なピークを選択したものであり、各結晶構造は必ずしもこれらの値だけによって限定されるものではない。即ち、これら以外のピークが含まれていてもよい。また一般に結晶をＸ線回折により測定した場合、そのピークは、測定機器、測定条件、付着溶媒の存在等により、多少の測定誤差を生じることがある。よって、実質的に上記同様のＸ線パターンによって特徴付けられる結晶はすべて本発明の範囲内である。
化合物（Ｉ）の無機酸塩またはその溶媒和物の結晶の製造方法は特に限定されないが、好ましくは以下に示す方法に準じて製造すればよい。
（方法１）
化合物（Ｉ）の硫酸塩（例：１硫酸塩）と酸を混合後、アルコール（例：メタノール、エタノール、イソプロパノール等）等の有機溶媒を加えることにより、硫酸塩以外の無機酸塩の結晶が析出する。
酸の量は、通常、１硫酸塩に対して約２モル当量以上、好ましくは約５モル当量以上、より好ましくは約１０モル当量以上である。
晶析は、好ましくは、種晶を加えて行われ、約０℃〜室温、好ましくは約１０℃前後で静置することにより行われる。
酸の濃度は好ましくは約１〜１０％である。特に塩酸の場合には約１〜５％が好ましい。臭化水素酸の場合には約１〜５％が好ましい。硝酸の場合は約１〜５％が好ましい。
１硫酸塩と酸の混合方法、順序は特に制限されないが、酸の種類等に応じて適宜され得る。
（方法２）
化合物（Ｉ）の硫酸塩（例：１硫酸塩）水溶液に、塩化バリウム、硝酸バリウム、臭化バリウム、または水酸化バリウム等のバリウム塩を、所望により前記酸存在下で、加えて硫酸バリウムを析出させ、濾過等によりこれを除去する。次に、濾液、洗液等の残留物にアルコールおよび所望により水を加えることにより、硫酸塩以外の無機酸塩の結晶が析出する。
ここで「酸存在下」における酸の添加は、バリウム塩を加えるのと同時でもまたその前後でもよい。また析出した硫酸バリウムを濾過して、酸で洗浄してもよい。またバリウム塩の水溶液をあらかじめ調製しておいてから、化合物（Ｉ）の１硫酸塩を投入してもよい。
バリウム塩は、化合物（Ｉ）の１硫酸塩に対して好ましくは約１〜２モル当量、より好ましくは約１〜１．５モル当量使用される。
酸を使用する場合、酸は化合物（Ｉ）の１硫酸塩に対して好ましくは約２モル当量以上、より好ましくは約５モル当量以上使用される。
なお好ましくは、上記（１）または（２）の各結晶化方法を繰り返すことにより、より純度の高い結晶が得られる。原料に使用する化合物（Ｉ）の硫酸塩は、結晶でも非結晶でもよく、また水和物でも無水和物でもよい。
上記製法により得られた結晶は、定法により室温での乾燥や減圧乾燥を行うことにより、溶媒数を調節することができ、所望の水和物等を得ることができる。
本発明の化合物（Ｉ）の前記無機酸塩の結晶は、水溶解性、保存安定性、乾燥の容易性、製剤化上の取扱い性等に優れており、それ自体医薬活性成分として有用である。また化合物（Ｉ）の硫酸塩の製造中間体としても使用可能である。
本発明はさらに、前記化合物（Ｉ）の無機酸塩またはその溶媒和物の結晶を有効成分として含有する医薬組成物を提供する。該医薬組成物は好ましくは抗菌剤である。また医薬組成物の剤形としては、錠剤、顆粒剤、カプセル剤、注射剤等が例示されるが、好ましくは注射剤である。本発明の結晶が高い水溶解性を有することは、医療現場で注射剤を用時調製する上で、濁りを生じる恐れもなく非常に有利である。また注射する上で弱酸性〜中性付近（例：ｐＨ４〜７）にｐＨ調整する場合、所望により塩基等のｐＨ調整剤（例：ＮａＯＨ、ＮａＨＣＯ３、Ｎａ２ＣＯ３、アミノ酸等）を併用し得るが、例えば本発明の塩酸塩の中和によって生成するＮａＣｌは、対応の硫酸塩を中和した場合に生じるＮａ２ＳＯ４に比べて生体への影響が緩和である。よって、本発明の塩酸塩結晶は特に注射剤として好適である。
上記注射剤は、粉末充填製剤または凍結乾燥製剤として調製できる。
上記医薬組成物は適宜、医薬品用添加剤（例：賦形剤、崩壊剤、溶解剤、乳化剤、安定化剤等）を含有していてもよい。特に注射剤として使用する場合には、蒸留水や生理食塩水等と共に、ｐＨ調節剤（例：ＮａＯＨ、ＮａＨＣＯ３、Ｎａ２ＣＯ３、アミノ酸等）を配合してもよい。
化合物（Ｉ）の無機酸塩またはその溶媒和物の結晶の投与量は、患者の年齢や疾患の種類・状態等により異なるが、通常、患者の体重１ｋｇ当たり、約０．１〜１００ｍｇ／日、好ましくは約０．５〜５０ｍｇ／日を、所望により１日２〜４回に分割して投与すればよい。
さらに本発明は、本発明結晶を、人を含む動物に投与することを特徴とする、細菌性感染症の予防または治療方法を提供する。
また、細菌性感染症の予防または治療剤を製造するための、本発明結晶の使用方法も提供する。この場合、本発明結晶自体が、医薬活性成分であってもよく、また硫酸塩等の他の塩を含む医薬製剤の中間体としても使用してもよい。
以下に実施例、試験例を示す。Ｘ線測定条件は：ＣｕＫα線（波長λ＝１．５４Å）、管電圧４０ｋＶ、管電流３０ｍＡ、スキャンスピード：４．０００°／ｍｉｎ、サンプリング幅：０．０２０°である。
実施例１（２塩酸塩・５水和物）
（１）種晶の調製
ＷＯ０２／０８８１４７号に記載の方法に準じて得られた化合物（Ｉ）の１硫酸塩・２水和物（２ｇ，２．７２ｍｍｏｌｅ）を１Ｎ塩酸３０ｍｌ（１１モル当量）に溶解後、エタノール７０ｍｌを加えて１０℃で静置した。一夜後、析出した結晶をスパーテルで採取し、風乾し、以後、２塩酸塩の種晶として使用した。
（２）塩交換法
化合物（Ｉ）の１硫酸塩・３水和物（１０ｇ，１３．３ｍｍｏｌｅ）を２Ｎ塩酸８５ｍｌ（１２．８ｍｏｌｅ当量）に溶解、氷冷下、エタノール５１０ｍｌを加え、（１）で得た２塩酸塩の種晶を加え、１０℃で一夜攪拌した。析出した結晶を濾取、９０％エタノール２５ｍｌで２回、エタノール２５ｍｌで２回、順次洗浄後、室温で風乾すると、６．３５ｇの結晶が得られた。この結晶の組成は元素分析値より２塩酸塩／２硫酸塩＝７５／２５（５水和物）であった。得られた結晶６ｇを同法で再結晶すると２塩酸塩／１硫酸塩＝９５／５（５水和物）の結晶が４．１４ｇ得られた。更に、この結晶３．１ｇを同法で再結晶すると２塩酸塩／１硫酸塩＝１００／０（５水和物）の結晶が４．１４ｇ得られた。
（３）ＢａＣｌ２法
化合物（Ｉ）の１硫酸塩（９．１％含水）（６０ｇ，７８ｍｍｏｌｅ）を６Ｎ塩酸１３０ｍｌ（１０ｍｏｌｅ当量）に溶解、氷冷下、塩化バリウム２水和物１９．０７ｇ（１ｍｏｌｅ当量）の水５５ｍｌ溶液を滴下した。室温にて３０分間攪拌した後、析出した硫酸バリウムを濾過、水６０ｍｌ洗浄によって除いた。濾液、洗液を集めて氷冷下、エタノール８７５ｍｌと水１５ｍｌを加えた後、（１）で得た２塩酸塩の種晶を加え、１０℃で一夜攪拌した。析出した結晶を濾取、８５％エタノール１００ｍｌで２回、エタノール１００ｍｌで２回、順次洗浄後、室温で風乾すると、４０．２９ｇの結晶が得られた。この結晶は元素分析値より２塩酸塩・５水和物であった。
２塩酸塩５水和物結晶の粉末Ｘ線回折パターンを図１および表１に示す。
実施例２（２臭化水素酸塩・４水和物）
（１）Ｂａ（ＯＨ）２法
化合物（Ｉ）の１硫酸塩（３水和物）２ｇ（２．６６ｍｍｏｌｅ）の水３ｍｌ溶液に４７％臭化水素酸１．５４ｍｌ（５ｍｏｌｅ当量）を加えた後、水酸化バリウム（８水和物）０．８３８ｇ（１ｍｏｌｅ当量）の水４ｍｌ溶液を注入した。析出した硫酸バリウムを濾過、水２ｍｌで洗浄して除いた。濾液、洗液を集めて氷冷下、イソプロパノール２４ｍｌを加えた後、１０℃で一夜攪拌した。析出した結晶を濾取、８０％イソプロパノール１０ｍｌ、イソプロパノール１０ｍｌで順次洗浄後、室温で風乾すると、１．５０ｇの結晶が得られた。
この内、０．５０ｇ（０．５９ｍｍｏｌｅ）を水１．６ｍｌと４７％臭化水素酸０．４ｍｌ（５ｍｏｌｅ当量）の混液に溶解、極微量の不溶物を濾過後、水１ｍｌで洗浄した。濾液、洗液を集めて氷冷下、イソプロパノール６ｍｌを加え、上で得た結晶を種晶として加えた後、１０℃で一夜攪拌した。析出した結晶を濾取、８０％イソプロパノール６ｍｌ、イソプロパノール６ｍｌで順次洗浄後、室温で風乾すると、０．２８ｇの結晶が得られた。この結晶は元素分析値より２臭化水素酸塩・４水和物であった。
実施例３（２硝酸塩・３水和物）
（１）種晶の調製
化合物（Ｉ）の１硫酸塩・３水和物（２ｇ，２．６６ｍｍｏｌｅ）を水８ｍｌに溶解、室温にて硝酸バリウム６９５ｍｇ（１モル当量）の水８ｍｌ溶液を滴下した後、室温にて３０分間攪拌した。析出した硫酸バリウムの沈殿物を濾別、水２ｍｌで洗浄した。濾液、洗液を集めて氷冷下エタノール５０ｍｌを加えた。調製液がやや濁ったため、水２ｍｌを更に加えて透明溶液とした。調製液を１０℃で一夜攪拌したが結晶の析出は確認されなかった。更に６０％硝酸２．０２ｍｌ（１０モル当量）とエタノール４０ｍｌを氷冷下に加えて１０℃で７日間、攪拌と静置を繰り返した。析出晶を濾取、８０％エタノール水５ｍｌで２回洗浄し、結晶０．３０ｇを得た。本結晶は元素分析値より２硝酸塩・３．１水和物に一致した。
（２）Ｂａ（ＮＯ３）２法
硝酸バリウム２０．８３ｇ（１ｍｏｌｅ当量）の水２４０ｍｌ溶液に、室温下、化合物（Ｉ）の１硫酸塩・３水和物（６０ｇ，７８ｍｍｏｌｅ）を５分間で投入した。室温にて３０分間攪拌した後、析出した硫酸バリウムを濾過、水２９．７ｍｌと６０％硝酸３０．３ｍｌ（５ｍｏｌｅ当量）の混液で洗浄して除いた。濾液、洗液を集めて氷冷下、エタノール５１０ｍｌを加えた後、（１）で得た硝酸塩の種晶を加え、１０℃で一夜攪拌した。析出した結晶を濾取、８０％エタノール６０ｍｌで２回、エタノール６０ｍｌで２回、順次洗浄後、室温で風乾すると、２８．９５ｇの結晶が得られた。この結晶は元素分析値より２硝酸塩・３水和物であった。
この結晶の粉末Ｘ線回折パターンを図３および表３に示す。
実施例４（２塩酸塩・０．５水和物）
（１） 実施例１（３）で得られた２塩酸塩・５水和物の結晶４０ｇ（５２．４ｍｍｏｌｅ）を２Ｎ塩酸１００ｍｌに溶解、濾過後、２Ｎ塩酸３１ｍｌ（計１３１ｍｌ，５モル当量）で洗浄した。濾液、洗液を集めて氷冷下、エタノール４３５ｍｌを加え、種晶を加えた後、１０℃で一夜攪拌した。析出した結晶を濾取、８５％エタノール５０ｍｌで２回、エタノール５０ｍｌで２回、順次洗浄後、室温で風乾すると、３０．５９ｇの結晶が得られた。この結晶は元素分析値より２塩酸塩・５水和物であった。
上記の２塩酸塩・５水和物８．００ｇを室温下、５時間、減圧乾燥し、化合物（Ｉ）の２塩酸塩・０．５水和物結晶７．１７ｇを得た。
（２）化合物（Ｉ）の１硫酸塩・４水和物の結晶６０ｇ（７８．０ｍｍｏｌｅ）を６Ｎ塩酸１３０ｍｌ（１０モル当量）に溶解、氷冷下、２塩化バリウム・２水和物１９．０７ｇ（１モル当量）の水５５ｍｌ溶液を少量ずつ加え、室温下、３０分攪拌した。析出した硫酸バリウムを濾過、水６０ｍｌで洗浄して除去した。濾液、洗液を集めて氷冷下、エタノール８７５ｍｌと水１５ｍｌを加えた後、先に得た種晶を加えて１０℃で一夜攪拌した。析出した結晶を濾取、８５％エタノール１００ｍｌで２回、エタノール１００ｍｌで２回洗浄後、室温で風乾すると、４０．２９ｇの結晶が得られた。この結晶は元素分析値より２塩酸塩・５水和物であった。
上記の２塩酸塩・５水和物１．００ｇを室温下、１０時間、減圧乾燥し、化合物（Ｉ）の２塩酸塩・０．５水和物０．９０ｇを得た。粉末Ｘ線回折パターン（相対湿度５％中測定）を図４および表４に示す。
実施例５（２臭化水素酸塩・０．５水和物）
（１）２臭化バリウム・２水和物８．８６ｇ（１モル当量）の水５０ｍｌ溶液に化合物（Ｉ）の１硫酸塩，３水和物２０ｇ（２６．６ｍｍｏｌｅ）を少量ずつ投入し、室温下、３０分攪拌した。析出した硫酸バリウムを濾過、４７％臭化水素酸１５．４ｍｌ（５モル当量）の水５５ｍｌ溶液で洗浄して除去した。濾液、洗液を集めて氷冷下、イソプロパノール２１０ｍｌを加えた後、１０℃で一夜攪拌した。析出した結晶を濾取、８０％イソプロパノール６０ｍｌ、イソプロパノール６０ｍｌで順次洗浄後、室温で風乾すると、１２．５０ｇの結晶が得られた。この結晶１２．５０ｇ（１４．９８ｍｍｏｌｅ）を水２９ｍｌと４７％臭化水素酸８．７１ｍｌ（５モル当量）の混液に溶解、極微量の不溶物を濾過後、水２５ｍｌで洗浄した。濾液、洗液を集めて氷冷下、イソプロパノール１２５ｍｌを加え、上で得た結晶を種晶として加えた後、１０℃で一夜攪拌した。析出した結晶を濾取、８０％イソプロパノール６０ｍｌ、イソプロパノール６０ｍｌで順次洗浄後、室温で風乾すると、９．１４ｇの結晶が得られた。この結晶は元素分析値より２臭化水素酸塩・４水和物であった。
上記の２臭化水素酸塩・４水和物８．１４ｇを室温下、４時間、減圧乾燥し、化合物（Ｉ）の２臭化水素塩・０．５水和物結晶７．５１ｇを得た。
実施例６（２硝酸塩・０．５水和物）
（１）実施例３（２）で得られた２硝酸塩・３水和物の結晶２８．５ｇ（３６．５ｍｍｏｌｅ）を８．４％硝酸８０ｍｌに溶解、濾過後、８．４％硝酸１９．４ｍｌ（計９９．４ｍｌ，５モル当量）で洗浄した。濾液、洗液を集めて氷冷下、エタノール１６８ｍｌを加え、先に得た結晶を種晶として加えた後、１０℃で一夜攪拌した。析出した結晶を濾取、８０％エタノール３０ｍｌで２回、エタノール３０ｍｌで２回、順次洗浄後、室温で風乾すると、２３．０３ｇの結晶が得られた。この結晶は元素分析値より２硝酸塩・３水和物であった。
上記の２硝酸塩・３水和物８．００ｇを室温下、５時間、減圧乾燥し、化合物（Ｉ）の２硝酸塩・０．５水和物結晶７．５１ｇを得た。
（２）２硝酸バリウム２０．８３ｇ（１モル当量）の水２４０ｍｌ溶液に１硫酸塩・３水和物の結晶６０ｇ（７９．７ｍｍｏｌｅ）を少量ずつ加え、室温下、３０分攪拌した。析出した硫酸バリウムを濾過、６０％硝酸３０．３ｍｌ（５モル当量）と水２９．７ｍｌの混液で洗浄して除去した。濾液、洗液を集めて氷冷下、エタノール５１０ｍｌを加えた後、先に得た種晶を加えて１０℃で一夜攪拌した。析出した結晶を濾取、８０％エタノール６０ｍｌで２回、エタノール６０ｍｌで２回洗浄後、室温で風乾すると、２８．９５ｇの結晶が得られた。この結晶２８．５ｇ（３６．５ｍｍｏｌｅ）を８．４％硝酸８０ｍｌに溶解、濾過後、８．４％硝酸１９．４ｍｌ（計９９．４ｍｌ，５モル当量）で洗浄した。濾液、洗液を集めて氷冷下、エタノール１６８ｍｌを加え、先に得た結晶を種晶として加えた後、１０℃で一夜攪拌した。析出した結晶を濾取、８０％エタノール３０ｍｌで２回、エタノール３０ｍｌで２回、順次洗浄後、室温で風乾すると、２３．０３ｇの結晶が得られた。この結晶は元素分析値より２硝酸塩・３水和物であった。
上記の２硝酸塩・３水和物１．００ｇを室温下、１０時間、減圧乾燥し、化合物（Ｉ）の２硝酸塩・０．５水和物０．９４ｇを得た。粉末Ｘ線回折パターン（相対湿度５％中測定）を図５および表５に示す。
試験例１（溶解度）
前記実施例で得られた化合物（Ｉ）の各無機酸塩結晶の溶解性を調べた。溶媒に過剰量の結晶を投入して室温（２５℃）で３時間攪拌した後、溶液部をＨＰＬＣ定量する方法で調べた。対照として対応の１硫酸塩結晶（２水和物）を使用した。
化合物（Ｉ）の２塩酸塩および２硝酸塩の各結晶は、いずれも対応の１硫酸塩結晶よりも、水または生理食塩水中で高い溶解性を示した。
試験例２（保存安定性）
本発明の化合物（Ｉ）の各結晶について５０℃における安定性試験を行った。対照として対応の１硫酸塩結晶（０．５および１水和物）を使用した。
（試験方法）
１．原末を封入するＢＶＫ−１４号バイアルおよびＣＢ−９ゴム栓を精秤する。
２．原末約１００ｍｇ（力価）ずつを、ＲＨ５％以下に調湿したドライボックス内でバイアルに秤量し、栓をする。
３．原末を封入したバイアルを精秤し、原末量を算出する。
４．検量線に凍結乾燥品を用い、初期含量測定を行う。
定量はＨＰＬＣにより行う。
カラム：ＹＭＣ−Ｐａｃｋ ＯＤＳ−ＡＭ−３０２（４．６ｍｍＩＤ×１５０ｍｍＬ），移動相：０．１％ＴＦＡ／アセトニトリル＝９３／７，流速：１ｍｌ／ｍｉｎ，検出波長：２４０ｎｍ，注入量：１５ｕｌ
原末は、まず１０ｍｌ生理食塩水をバイアルに添加して溶解させ、注射用蒸留水で１０倍希釈を２回行って定量に供する。
５．１０ｍｌの生理食塩水に溶解させた状態で１時間室温放置し、濁度測定を行う。測定は６００ｎｍで行う。
６．原末を封入したバイアルを所定温度の保管庫にて保存し、所定期間保存後に取り出す。上記と同様の手順で含量測定、濁度測定を行う。含量測定には凍結乾燥品を検量線に用い、初期含量を１００％として残存率を算出する。
（結果）
本発明の結晶、特に２塩酸塩や２臭化水素酸塩は、硫酸塩結晶に比べて高い安定性を示した。
製剤例１
実施例１で得られた化合物（Ｉ）の２塩酸塩とｐＨ調整用の塩基を蒸留水に溶解させることにより、注射液を調製する。
製剤例２
実施例２で得られた化合物（Ｉ）の２臭化水素酸塩とｐＨ調整用の塩基をバイアル中で蒸留水に溶解し、凍結乾燥して、注射剤を調製する。
製剤例３
実施例３で得られた化合物（Ｉ）の２硝酸塩とｐＨ調整用の塩基を粉末充填して注射剤を調製する。
【産業上の利用可能性】
本発明のセフェム化合物（Ｉ）の各種無機酸塩またはその溶媒和物の結晶は、溶解性、保存安定性、製剤化する際の取扱い性等に優れ、特に注射剤の活性成分として使用され得る。また本発明の製造方法によれば、これら結晶を高収率、高純度で効率よく工業的に製造することが可能である。
【図１】
【図２】
【図３】
【図４】
【図５】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
式：
で示される化合物（Ｉ）の、２塩酸、２臭化水素酸、および２硝酸からなる群から選択される酸の付加塩またはそれらの溶媒和物の、結晶。
【請求項２】
２塩酸塩またはその水和物である、請求項１記載の結晶。
【請求項３】
２塩酸塩の０．５〜５水和物である、請求項１記載の結晶。
【請求項４】
２塩酸塩の５水和物である、請求項１記載の結晶。
【請求項５】
粉末Ｘ線回折パターンにおいて、面間隔（ｄ）が、４．９９，４．８９，４．６７，４．５７，４．４５，４．１８，３．７０，３．５８，３．４３，３．３９および３．３４（単位：Å）付近に主なピークを示す、請求項１記載の２塩酸塩またはその水和物の結晶。
【請求項６】
２塩酸塩の５水和物である、請求項５記載の結晶。
【請求項７】
２塩酸塩の０．５水和物である、請求項１記載の結晶。
【請求項８】
粉末Ｘ線回折パターンにおいて、面間隔（ｄ）が、９．５２，５．１０，４．４９，３．８７，３．６６，３．５６，３．４７，３．４０，３．３７，３．３０，３．２４，３．１８，３．１１，および２．７９（単位：Å）付近に主なピークを示す、請求項１記載の２塩酸塩またはその水和物の結晶。
【請求項９】
２塩酸塩の０．５水和物である、請求項８記載の結晶。
【請求項１０】
２臭化水素酸塩またはその水和物である、請求項１記載の結晶。
【請求項１１】
２臭化水素酸塩の０．５〜５水和物である、請求項１記載の結晶。
【請求項１２】
２臭化水素酸塩の４水和物である、請求項１記載の結晶。
【請求項１３】
紛末Ｘ線回折パターンにおいて、面間隔（ｄ）が、５．２９，４．４５，４．２８，３．６５，３．５２，３．４２，３．３５および３．１２（単位：Å）付近に主なピークを示す、請求項１記載の２臭化水素酸塩またはその水和物の結晶。
【請求項１４】
２臭化水素酸塩の４水和物である、請求項１３記載の結晶。
【請求項１５】
２臭化水素酸塩の０．５水和物である、請求項１記載の結晶。
【請求項１６】
２硝酸塩またはその水和物である、請求項１記載の結晶。
【請求項１７】
２硝酸塩の０．５〜５水和物である、請求項１記載の結晶。
【請求項１８】
２硝酸塩の３水和物である、請求項１記載の結晶。
【請求項１９】
粉末Ｘ線回折パターンにおいて、面間隔（ｄ）が、５．３４，５．１３，５．０１，４．８３，４．６４，４．５７，４．４３，４．１６，４．０６，３．７１，３．４０，３．３９，３．３３（単位：Å）付近に主なピークを示す、請求項１記載の２硝酸塩またはその水和物の結晶。
【請求項２０】
２硝酸塩の３水和物である、請求項１９記載の結晶。
【請求項２１】
２硝酸塩の０．５水和物である、請求項１記載の結晶。
【請求項２２】
粉末Ｘ線回折パターンにおいて、面間隔（ｄ）が、９．６０，９．２４，６．８９，５．１５，５．０５，４．５２，４．０５，３．９８，３．９４，３．６８，３．５１，３．３３，３．２５，２．８９，および２．８８（単位：Å）付近に主なピークを示す、請求項１記載の２硝酸塩またはその水和物の結晶。
【請求項２３】
２硝酸塩の０．５水和物である、請求項２２記載の結晶。
【請求項２４】
請求項１〜２３のいずれかに記載の結晶を含有する医薬組成物。
【請求項２５】
抗菌剤および／または注射剤である請求項２４記載の医薬組成物。
【請求項２６】
請求項１〜２３のいずれかに記載の結晶を投与することを特徴とする、細菌性感染症の予防または治療方法。
【請求項２７】
細菌性感染症の予防または治療剤を製造するための、請求項１〜２３のいずれかに記載の結晶の使用。
【請求項２８】
化合物（Ｉ）の１硫酸塩と酸を混合後、アルコールを加えて析出させることを特徴とする、請求項１記載の化合物（Ｉ）の酸付加塩またはそれらの溶媒和物の結晶の製造方法。
【請求項２９】
化合物（Ｉ）の１硫酸塩水溶液に、塩化バリウム、硝酸バリウム、臭化バリウム、または水酸化バリウムを、所望により酸存在下で、加えて硫酸バリウムを析出および除去した後、残留物にアルコールを加えることを特徴とする、請求項１に記載の化合物（Ｉ）の酸付加塩またはそれらの溶媒和物の結晶の製造方法。
【請求項１】
式：
で示される化合物（Ｉ）の、２塩酸、２臭化水素酸、および２硝酸からなる群から選択される酸の付加塩またはそれらの溶媒和物の、結晶。
【請求項２】
２塩酸塩またはその水和物である、請求項１記載の結晶。
【請求項３】
２塩酸塩の０．５〜５水和物である、請求項１記載の結晶。
【請求項４】
２塩酸塩の５水和物である、請求項１記載の結晶。
【請求項５】
粉末Ｘ線回折パターンにおいて、面間隔（ｄ）が、４．９９，４．８９，４．６７，４．５７，４．４５，４．１８，３．７０，３．５８，３．４３，３．３９および３．３４（単位：Å）付近に主なピークを示す、請求項１記載の２塩酸塩またはその水和物の結晶。
【請求項６】
２塩酸塩の５水和物である、請求項５記載の結晶。
【請求項７】
２塩酸塩の０．５水和物である、請求項１記載の結晶。
【請求項８】
粉末Ｘ線回折パターンにおいて、面間隔（ｄ）が、９．５２，５．１０，４．４９，３．８７，３．６６，３．５６，３．４７，３．４０，３．３７，３．３０，３．２４，３．１８，３．１１，および２．７９（単位：Å）付近に主なピークを示す、請求項１記載の２塩酸塩またはその水和物の結晶。
【請求項９】
２塩酸塩の０．５水和物である、請求項８記載の結晶。
【請求項１０】
２臭化水素酸塩またはその水和物である、請求項１記載の結晶。
【請求項１１】
２臭化水素酸塩の０．５〜５水和物である、請求項１記載の結晶。
【請求項１２】
２臭化水素酸塩の４水和物である、請求項１記載の結晶。
【請求項１３】
紛末Ｘ線回折パターンにおいて、面間隔（ｄ）が、５．２９，４．４５，４．２８，３．６５，３．５２，３．４２，３．３５および３．１２（単位：Å）付近に主なピークを示す、請求項１記載の２臭化水素酸塩またはその水和物の結晶。
【請求項１４】
２臭化水素酸塩の４水和物である、請求項１３記載の結晶。
【請求項１５】
２臭化水素酸塩の０．５水和物である、請求項１記載の結晶。
【請求項１６】
２硝酸塩またはその水和物である、請求項１記載の結晶。
【請求項１７】
２硝酸塩の０．５〜５水和物である、請求項１記載の結晶。
【請求項１８】
２硝酸塩の３水和物である、請求項１記載の結晶。
【請求項１９】
粉末Ｘ線回折パターンにおいて、面間隔（ｄ）が、５．３４，５．１３，５．０１，４．８３，４．６４，４．５７，４．４３，４．１６，４．０６，３．７１，３．４０，３．３９，３．３３（単位：Å）付近に主なピークを示す、請求項１記載の２硝酸塩またはその水和物の結晶。
【請求項２０】
２硝酸塩の３水和物である、請求項１９記載の結晶。
【請求項２１】
２硝酸塩の０．５水和物である、請求項１記載の結晶。
【請求項２２】
粉末Ｘ線回折パターンにおいて、面間隔（ｄ）が、９．６０，９．２４，６．８９，５．１５，５．０５，４．５２，４．０５，３．９８，３．９４，３．６８，３．５１，３．３３，３．２５，２．８９，および２．８８（単位：Å）付近に主なピークを示す、請求項１記載の２硝酸塩またはその水和物の結晶。
【請求項２３】
２硝酸塩の０．５水和物である、請求項２２記載の結晶。
【請求項２４】
請求項１〜２３のいずれかに記載の結晶を含有する医薬組成物。
【請求項２５】
抗菌剤および／または注射剤である請求項２４記載の医薬組成物。
【請求項２６】
請求項１〜２３のいずれかに記載の結晶を投与することを特徴とする、細菌性感染症の予防または治療方法。
【請求項２７】
細菌性感染症の予防または治療剤を製造するための、請求項１〜２３のいずれかに記載の結晶の使用。
【請求項２８】
化合物（Ｉ）の１硫酸塩と酸を混合後、アルコールを加えて析出させることを特徴とする、請求項１記載の化合物（Ｉ）の酸付加塩またはそれらの溶媒和物の結晶の製造方法。
【請求項２９】
化合物（Ｉ）の１硫酸塩水溶液に、塩化バリウム、硝酸バリウム、臭化バリウム、または水酸化バリウムを、所望により酸存在下で、加えて硫酸バリウムを析出および除去した後、残留物にアルコールを加えることを特徴とする、請求項１に記載の化合物（Ｉ）の酸付加塩またはそれらの溶媒和物の結晶の製造方法。
【国際公開番号】ＷＯ２００４／０３９８１６
【国際公開日】平成１６年５月１３日（２００４．５．１３）
【発行日】平成１８年３月２日（２００６．３．２）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００４−５４８０４２（Ｐ２００４−５４８０４２）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＪＰ２００３／０１３７１２
【国際出願日】平成１５年１０月２７日（２００３．１０．２７）
【出願人】（０００００１９２６）塩野義製薬株式会社 (229)
【Ｆターム（参考）】
【国際公開日】平成１６年５月１３日（２００４．５．１３）
【発行日】平成１８年３月２日（２００６．３．２）
【国際特許分類】
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＪＰ２００３／０１３７１２
【国際出願日】平成１５年１０月２７日（２００３．１０．２７）
【出願人】（０００００１９２６）塩野義製薬株式会社 (229)
【Ｆターム（参考）】
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