タンパク質の分析、分離・精製用吸着剤
【課題】 各種タンパク質、特に免疫グロブリンの分析、分離・精製に利用可能なω−（３−アミノ−３−オキソプロピルチオ）アルキルアミノ基固定化不溶性担体を提供する。
【解決手段】 一般式（１）
【化１】
で表される、ω−（３−アミノ−３−オキソプロピルチオ）アルキルアミノ基を不溶性担体に固定化して得られるタンパク質の分析、分離・精製用吸着剤を提供するものである。
【解決手段】 一般式（１）
【化１】
で表される、ω−（３−アミノ−３−オキソプロピルチオ）アルキルアミノ基を不溶性担体に固定化して得られるタンパク質の分析、分離・精製用吸着剤を提供するものである。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、各種タンパク質、特に免疫グロブリンの分析、分離・精製に利用可能なω−（３−アミノ−３−オキソプロピルチオ）アルキルアミノ基を不溶性担体に固定化して得られる吸着剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
近年、医療用タンパク質の需要は拡大しつつあり、該タンパク質の精製を工業的に簡便かつ大規模に実施できる技術の確立が切望されている。一般にタンパク質精製技術には、ゲル透過クロマトグラフィー、イオン交換クロマトグラフィー、疎水性相互作用クロマトグラフィー、逆相クロマトグラフィー、およびアフィニティークロマトグラフィー等のクロマトグラフィー分離技術がある。しかしながら現状、これらの技術で医療用タンパク質の精製を工業的に実施する場合、経済性に乏しく、実用的とは言い難い。また、医療用タンパク質を工業的に製造する過程では多種類のタンパク質が混在しているため、これらの技術単独で目的とするタンパク質を純粋に得ることは困難である。そのため通常はいくつかの技術を複合させた精製プロセスが採用されている（特許文献１）。
【０００３】
近年、医療用タンパク質の一つである免疫グロブリンを精製するためのクロマトグラフィー用吸着剤として、有機化合物を不溶性担体に固定化して得られる吸着剤が注目されている。例えば、スルホン誘導体（特許文献２）、トリアジン誘導体（特許文献３）、メルカプト複素環式化合物（特許文献４）、４−（アルキルチオエチル）ピリジン誘導体（非特許文献１）を不溶性担体上に固定化して得られるタンパク質の分析、分離・精製用吸着剤が開示されている。一方、ω−（３−アミノ−３−オキソプロピルチオ）アルキルアミノ基を不溶性担体に固定化して得られる本発明の吸着剤についての報告例はこれまでない。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００４】
【特許文献１】ＷＯ２００４／０８７７６１号
【特許文献２】米国特許４６９６９８０号公報
【特許文献３】米国特許６１１７９９６号公報
【特許文献４】特許第３８４４４９６号公報
【非特許文献】
【０００５】
【非特許文献１】Ｂｉｏｓｅｐａｒａｔｉｏｎ，９（４），２１１−２２１，２０００
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
本発明が解決しようとする課題は、タンパク質、特に免疫グロブリンの分析、分離・精製に有用な低分子を不溶性担体に固定化して得られる吸着剤を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本発明者は、前記課題を解決すべく鋭意検討を重ねた結果、本発明の下記一般式（１）で示されるω−（３−アミノ−３−オキソプロピルチオ）アルキルアミノ基を不溶性担体に固定化して得られる吸着剤が、タンパク質、特に免疫グロブリンの簡便な分析、分離・精製に有用であることを見出し、本発明を完成するに至った。
【０００８】
すなわち本発明は、一般式（１）
【０００９】
【化１】
【００１０】
（式中、Ｒ１およびＲ２は各々独立に、水素原子；炭素数１から１２のアルキル基；炭素数１から６のアルキル基で置換されていてもよい炭素数３から６のシクロアルキル基；炭素数２から６のハロアルキル基；テトラヒドロフルフリル基；ピリジルメチル基；炭素数３から６のシクロアルキルチオ基で置換されている炭素数１から６のアルキル基；ハロゲン原子で置換されていてもよい炭素数７から１１のアラルキルチオ基で置換されている炭素数１から６のアルキル基；炭素数３から６のアルケニルチオ基で置換されている炭素数１から６のアルキル基；炭素数１から６のアルコキシカルボニル基もしくはカルボキシル基で置換されていてもよい炭素数７から１１のアラルキル基；炭素数１から６のアルキル基で置換されていてもよいフルフリル基；ハロゲン原子、炭素数１から６のアルキル基、炭素数１から６のハロアルキル基、炭素数１から６のアルコキシ基、フェノキシ基、炭素数７から１１のアラルキルオキシ基、炭素数１から６のアルキルチオ基、炭素数１から６のハロアルキルスルホニル基、炭素数１から６のアルコキシカルボニル基、カルボキシル基、ナフチル基およびピリジル基からなる群より選択される１つ以上の基で置換されていてもよいフェニル基；ハロゲン原子、炭素数１から６のアルキル基もしくは炭素数１から６のアルコキシ基で置換されていてもよいビフェニリル基；ナフチル基；炭素数１から６のアルコキシカルボニル基もしくはカルボキシル基で置換されていてもよいチエニル基；チアゾリル基；ベンゾチアゾリル基；キノリル基；またはターフェニル基を表す。Ｒ１とＲ２は結合する窒素原子と一体となって複素環を形成していてもよい。ｎは１から９の整数を表す。）で表されるω−（３−アミノ−３−オキソプロピルチオ）アルキルアミノ基を、不溶性担体に固定化して得られる、タンパク質の分析、分離・精製用吸着剤に関するものである。
【００１１】
その具体例として、活性基を有する不溶性担体と、一般式（１ａ）
【００１２】
【化２】
【００１３】
（式中、Ｒ１およびＲ２は各々独立に、水素原子；炭素数１から１２のアルキル基；炭素数１から６のアルキル基で置換されていてもよい炭素数３から６のシクロアルキル基；炭素数２から６のハロアルキル基；テトラヒドロフルフリル基；ピリジルメチル基；炭素数３から６のシクロアルキルチオ基で置換されている炭素数１から６のアルキル基；ハロゲン原子で置換されていてもよい炭素数７から１１のアラルキルチオ基で置換されている炭素数１から６のアルキル基；炭素数３から６のアルケニルチオ基で置換されている炭素数１から６のアルキル基；炭素数１から６のアルコキシカルボニル基もしくはカルボキシル基で置換されていてもよい炭素数７から１１のアラルキル基；炭素数１から６のアルキル基で置換されていてもよいフルフリル基；ハロゲン原子、炭素数１から６のアルキル基、炭素数１から６のハロアルキル基、炭素数１から６のアルコキシ基、フェノキシ基、炭素数７から１１のアラルキルオキシ基、炭素数１から６のアルキルチオ基、炭素数１から６のハロアルキルスルホニル基、炭素数１から６のアルコキシカルボニル基、カルボキシル基、ナフチル基およびピリジル基からなる群より選択される１つ以上の基で置換されていてもよいフェニル基；ハロゲン原子、炭素数１から６のアルキル基もしくは炭素数１から６のアルコキシ基で置換されていてもよいビフェニリル基；ナフチル基；炭素数１から６のアルコキシカルボニル基もしくはカルボキシル基で置換されていてもよいチエニル基；チアゾリル基；ベンゾチアゾリル基；キノリル基；またはターフェニル基を表す。Ｒ１とＲ２は結合する窒素原子と一体となって複素環を形成していてもよい。ｎは１から９の整数を表す。）で表されるω−（３−アミノ−３−オキソプロピルチオ）アルキルアミン誘導体と反応させて得られる、タンパク質の分析、分離・精製用吸着剤がある。
【００１４】
また本発明は、タンパク質の分析、分離・精製用吸着剤（１）を用いることを特徴とする、タンパク質の分析、分離・精製法に関するものである。
【００１５】
以下、本発明をさらに詳細に説明する。
【００１６】
はじめに本発明のタンパク質の分析、分離・精製用吸着剤（１）およびω−（３−アミノ−３−オキソプロピルチオ）アルキルアミン誘導体（１ａ）における、Ｒ１およびＲ２について説明する。
【００１７】
Ｒ１およびＲ２で表される炭素数１から１２のアルキル基としては、直鎖状または分枝状のいずれであってもよく、メチル基、エチル基、プロピル基、イソプロピル基、ブチル基、イソブチル基、ｓｅｃ−ブチル基、ｔｅｒｔ−ブチル基、ペンチル基、イソアミル基、ネオペンチル基、２−ペンチル基、３−ペンチル基、２−メチルブチル基、ｔｅｒｔ−ペンチル基、ヘキシル基、イソヘキシル基、２−エチルブチル基、４−メチルペンチル基、オクチル基、デシル基、ドデシル基が例示できる。
【００１８】
Ｒ１およびＲ２で表される炭素数１から６のアルキル基で置換されていてもよい炭素数３から６のシクロアルキル基としては、シクロプロピル基、シクロペンチル基、シクロヘキシル基、２−メチルシクロヘキシル基が例示できる。
【００１９】
Ｒ１およびＲ２で表される炭素数２から６のハロアルキル基としては、２，２，２−トリフルオロエチル基、２，２，３，３，３−ペンタオロプロピル基、３，３，３−トリフルオロプロパン−２−イル基が例示できる。
【００２０】
Ｒ１およびＲ２で表されるピリジルメチル基としては、２−ピリジルメチル基、３−ピリジルメチル基、４−ピリジルメチル基が例示できる。
【００２１】
Ｒ１およびＲ２で表される炭素数３から６のシクロアルキルチオ基で置換されている炭素数１から６のアルキル基としては、２−（シクロプロピルチオ）エチル基、３−（シクロプロピルチオ）プロピル基、４−（シクロプロピルチオ）ブチル基、２−（シクロペンチルチオ）エチル基、３−（シクロペンチルチオ）プロピル基、４−（シクロペンチルチオ）ブチル基、２−（シクロヘキシルチオ）エチル基、３−（シクロヘキシルチオ）プロピル基、４−（シクロヘキシルチオ）ブチル基が例示できる。
【００２２】
Ｒ１およびＲ２で表されるハロゲン原子で置換されていてもよい炭素数７から１１のアラルキルチオ基で置換されている炭素数１から６のアルキル基としては、２−（ベンジルチオ）エチル基、３−（ベンジルチオ）プロピル基、４−（ベンジルチオ）ブチル基、２−（３−フルオロベンジルチオ）エチル基、２−（４−フルオロベンジルチオ）エチル、２−（２，４−ジクロロベンジルチオ）エチル基が例示できる。
【００２３】
Ｒ１およびＲ２で表される炭素数３から６のアルケニルチオ基で置換されている炭素数１から６のアルキル基としては、２−（プロピレンチオ）エチル基、３−（プロピレンチオ）プロピル基、４−（プロピレンチオ）チオブチル基が例示できる。
【００２４】
Ｒ１およびＲ２で表される炭素数１から６のアルコキシカルボニル基もしくはカルボキシル基で置換されていてもよい炭素数７から１１のアラルキル基としては、ベンジル基、１−フェネチル基、２−フェネチル基、１−カルボキシ−２−フェニルエチル基、１―メトキシカルボニル−２−フェニルエチル基が例示できる。
【００２５】
Ｒ１およびＲ２で表される炭素数１から６のアルキル基で置換されていてもよいフルフリル基としては、フルフリル基、５−メチルフルフリル基、５−エチルフルフリル基、５−ヘキシルフルフリル基、３−メチルフルフリル基、４−メチルフルフリル基が例示できる。
【００２６】
Ｒ１およびＲ２で表されるハロゲン原子、炭素数１から６のアルキル基、炭素数１から６のハロアルキル基、炭素数１から６のアルコキシ基、フェノキシ基、炭素数７から１１のアラルキルオキシ基、炭素数１から６のアルキルチオ基、炭素数１から６のハロアルキルスルホニル基、炭素数１から６のアルコキシカルボニル基、カルボキシル基、ナフチル基およびピリジル基からなる群より選択される１つ以上の基で置換されていてもよいフェニル基としては、フェニル基、２−フルオロフェニル基、３−フルオロフェニル基、４−フルオロフェニル基、２，４−ジフルオロフェニル基、３，５−ジフルオロフェニル基、２−クロロフェニル基、３−クロロフェニル基、４−クロロフェニル基、２，４−ジクロロフェニル基、３，５−ジクロロフェニル基、２−ブロモフェニル基、４−ブロモフェニル基、４−ヨードフェニル基、３−クロロ−２，４−ジフルオロフェニル基、２，４，５−トリクロロフェニル基、２，４−ジクロロ−３−メチルフェニル基、２，４−ジクロロ−５−メトキシフェニル基、２，４−ジクロロ−５−イソプロピルオキシフェニル基、２−フルオロ−４−クロロ−５−メトキシフェニル基、２−フルオロ−４−クロロ−５−イソプロピルオキシフェニル基、２−フルオロ−４−（トリフルオロメチル）フェニル基、２−クロロ−４−（トリフルオロメチル）フェニル基、２−クロロ−５−（トリフルオロメチル）フェニル基、４−フルオロ−３−フェノキシフェニル基、２−メチルフェニル基、３−メチルフェニル基、４−メチルフェニル基、２，４−ジメチルフェニル基、２，４，６−トリメチルフェニル基、４−エチルフェニル基、４−イソプロピルフェニル基、２−ｔｅｒｔ−ブチルフェニル基、３−ｔｅｒｔ−ブチルフェニル基、４−ｔｅｒｔ−ブチルフェニル基、２−（トリフルオロメチル）フェニル基、３−（トリフルオロメチル）フェニル基、４−（トリフルオロメチル）フェニル基、２，４−ビス（トリフルオロメチル）フェニル基、３，５−ビス（トリフルオロメチル）フェニル基、２−メトキシフェニル基、３−メトキシフェニル基、４−メトキシフェニル基、３，４−ジメトキシフェニル基、２−エトキシフェニル基、３−エトキシフェニル基、４−エトキシフェニル基、４−イソプロピルオキシフェニル基、４−ｔｅｒｔ−ブチルオキシフェニル基、２−トリフルオロメトキシフェニル基、３−トリフルオロメトキシフェニル基、４−トリフルオロメトキシフェニル基、２−フェノキシフェニル基、３−フェノキシフェニル基、４−フェノキシフェニル基、２−ベンジルオキシフェニル基、３−ベンジルオキシフェニル基、４−ベンジルオキシフェニル基、２−メチルチオフェニル基、３−メチルチオフェニル基、４−メチルチオフェニル基、２−（トリフルオロメチル）スルホニルフェニル基、３−（トリフルオロメチル）スルホニルフェニル基、４−（トリフルオロメチル）スルホニルフェニル基、２−メトキシカルボニルフェニル基、３−メトキシカルボニルフェニル基、４−メトキシカルボニルフェニル基、２−エトキシカルボニルフェニル基、４−エトキシカルボニルフェニル基、２−カルボキシフェニル基、４−カルボキシフェニル基、２−（１−ナフチル）フェニル基、２−（２−ナフチル）フェニル基、２−（３−ピリジル）フェニル基が例示できる。
【００２７】
Ｒ１およびＲ２で表されるハロゲン原子、炭素数１から６のアルキル基もしくは炭素数１から６のアルコキシ基で置換されていてもよいビフェニリル基としては、２−ビフェニル基、３−ビフェニル基、４−ビフェニル基、４’−フルオロビフェニル−２−イル基、３’，４’−ジクロロビフェニル−２−イル基、４’−メチルビフェニル−２−イル基、４’−ｔｅｒｔ−ブチルビフェニル−２−イル基、２’−メトキシビフェニル−２−イル基、４’−メトキシビフェニル−２−イル基が例示できる。
【００２８】
Ｒ１およびＲ２で表されるナフチル基としては、１−ナフチル基、２−ナフチル基が例示できる。
【００２９】
Ｒ１およびＲ２で表される炭素数１から６のアルコキシカルボニル基もしくはカルボキシル基で置換されていてもよいチエニル基としては、２−チエニル基、３−チエニル基、３−メトキシカルボニル−２−チエニル基、３−エトキシカルボニル−２−チエニル基、２−メトキシカルボニル−３−チエニル基、２−エトキシカルボニル−３−チエニル基、３−カルボキシ−２−チエニル基、２−カルボキシ−３−チエニル基が例示できる。
【００３０】
Ｒ１およびＲ２で表されるチアゾリル基としては、２−チアゾリル基、４−チアゾリル基、５−チアゾリル基が例示できる。
【００３１】
Ｒ１およびＲ２で表されるベンゾチアゾリル基としては、２−ベンゾチアゾリル基、４−ベンゾチアゾリル基、５−ベンゾチアゾリル基が例示できる。
【００３２】
Ｒ１およびＲ２で表されるキノリル基としては、キノリン−２−イル基、キノリン−３−イル基、キノリン−４−イル基、キノリン−５−イル基、キノリン−６−イル基、キノリン−７−イル基、キノリン−８−イル基が例示できる。
【００３３】
Ｒ１およびＲ２で表されるターフェニル基としては、ターフェニル−２−イル基が例示できる。
【００３４】
Ｒ１とＲ２が結合する窒素原子と一体となって複素環を形成する置換基としては、モルホリノ基、チオモルホリノ基が例示できる。
【００３５】
特にタンパク質の分析、分離・精製の性能がよい点で、Ｒ１およびＲ２は水素原子；ベンジル基；フルフリル基；ハロゲン原子、メチルチオ基およびピリジル基からなる群より選択される基で置換されていてもよいフェニル基；ハロゲン原子で置換されていてもよいビフェニル基；ナフチル基；カルボキシル基で置換していてもよいチエニル基；またはキノリル基が好ましい。
【００３６】
本発明のタンパク質の分析、分離・精製用吸着剤（１）の製造原料であるω−（３−アミノ−３−オキソプロピルチオ）アルキルアミン誘導体（１ａ）は、市販品として入手可能な化合物や、既知の方法で合成できる化合物を用いることができる。また、必要に応じて、これらの塩酸塩を用いてもよい。
【００３７】
本発明のタンパク質の分析、分離・精製用吸着剤（１）の製造原料である不溶性担体に特に限定はなく、アガロース、アルギネート、カラゲナン、キチン、セルロース、デキストリン、デキストラン、デンプン等の多糖類、ポリビニルアルコール、ポリメタクリレート、ポリ（２−ヒドロキシエチルメタクリレート）、ポリウレタン等の合成高分子、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）センサーチップが例示できる。中でも、タンパク質の分析、分離・精製の性能が良い点で、ポリメタクリレート、アガロース、セルロース、キトサンまたは表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）センサーチップが不溶性担体として好ましい。不溶性担体として用いるポリメタクリレートとしてはトヨパール（商品名、東ソー製）が、アガロースとしてはＳｅｐｈａｒｏｓｅ ６ Ｆａｓｔ Ｆｌｏｗ（商品名、ＧＥヘルスケア製）が、セルロースとしてはセルファインＧＣＬ−２０００（商品名、ＪＮＣ製）が、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）センサーチップとしてはセンサーチップＣＭ５（商品名、ビアコア製）が、それぞれ例示できる。不溶性担体の形状、表面構造、細孔構造、重合度については特に限定はないが、オープンカラムに充填して使用する態様では、微粒子状とすると、分析、分離・精製性能が良い点で好ましい。また、粒子径を１から１０００μｍの範囲とすると、圧力損失を抑えつつタンパク質の吸着量を上げることができるため好ましい。
【００３８】
前記不溶性担体を、本発明のタンパク質の分析、分離・精製用吸着剤（１）の製造原料として用いる際は、該不溶性担体表面にあらかじめ活性基を導入する。導入する活性基としては、固定化効率がよい点で、スクシンイミドオキシカルボニル基、カルボキシル基、ホルミル基、２，２，２−トリフルオロエチルスルホニルオキシ基、エポキシ基が好ましい。不溶性担体（ｇｅｌ）表面に活性基を結合させる方法については特に限定はなく、例えば、文献：アフィニティークロマトグラフィー（東京化学同人、１９９１）に記載の方法に準じて実施することができる。なお、導入する活性基の量を１０μｍｏｌ／ｍＬ（ｇｅｌ）以上とすると、ω−（３−アミノ−３−オキソプロピルチオ）アルキルアミン誘導体（１ａ）の固定化量を多くできる点で好ましい。一方、ＨｉＴｒａｐ ＮＨＳ−ａｃｔｉｖａｔｅｄ ＨＰ（商品名、ＧＥヘルスケア製）、エポキシトヨパール（商品名、東ソー製）、ホルミルトヨパール（商品名、東ソー製）、トレシルトヨパール（商品名、東ソー製）、カルボキシトヨパール（商品名、東ソー製）、活性化キトパールＫ−６６（商品名、富士紡ホールディングス製）、ＢＩＯＡＣＴ ＥＰＯ（商品名、昭和電工製）、ＰＯＲＯＳ ＥＰ（商品名、ライフテクノロジーズ製）、セルファインホルミル（商品名、ＪＮＣ製）、Ｐｒｏｆｉｎｉｔｙ Ｅｐｏｘｉｄｅ（商品名、バイオラッド製）、Ｍ．Ｓ．ＧＥＬ Ｅｐｏｘｙ−Ｄ−５０−１０００ＡＷ（商品名、ＡＧＣエスアイテック製）等の市販の活性基を有する不溶性担体を、そのまま本発明のタンパク質の分析、分離・精製用吸着剤（１）の製造原料として用いてもよい。
【００３９】
活性基を有する不溶性担体にω−（３−アミノ−３−オキソプロピルチオ）アルキルアミン誘導体（１ａ）を固定化する方法については特に限定はなく、例えば、文献：アフィニティークロマトグラフィー（東京化学同人、１９９１）に記載の方法に準じて実施することができる。
【００４０】
次に、本発明のタンパク質の分析、分離・精製用吸着剤（１）を用いて、タンパク質の分析を行なう方法について説明する。
【００４１】
ω−（３−アミノ−３−オキソプロピルチオ）アルキルアミン誘導体（１ａ）とタンパク質との親和性は、例えば該誘導体をカルボキシルメチルデキストランに固定化した態様で、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）解析装置を用いて測定することができる。該ＳＰＲ解析装置としてはＢＩＡＣＯＲＥ２０００（ビアコア製）が例示できる。親和性の指標としては、結合速度定数ｋａ、解離速度定数ｋｄ、解離定数Ｋｄ＝ｋｄ／ｋａ、一定解離時間後のタンパク質結合量ＲＵ、またはこれらを組み合わせて用いることができる。
【００４２】
次に、本発明のタンパク質の分析、分離・精製用吸着剤（１）を用いてタンパク質を分析、分離・精製する方法について説明する。
【００４３】
本発明のタンパク質の分析、分離・精製用吸着剤（１）を用いる方法で分析、分離・精製することができるタンパク質としては、血漿タンパク質成分（例えば血漿中の免疫グロブリン）、血清アルブミン、血液凝固因子、ラクトアルブミンやラクトフェリン等の乳タンパク質成分、天然には微量しか存在しないペプチドホルモン、インターフェロン、インターロイキン、成長因子、成長抑制因子、ワクチンが例示できる。また、人工的に設計された遺伝子組換えタンパク質も含む。中でも免疫グロブリンが、本発明のタンパク質の分析、分離・精製用吸着剤（１）の特徴を活かせる点で好ましい。なお、ここでいう免疫グロブリンは、その類縁体、フラグメントまたは融合体を含んでもよい。ここでいう類縁体とは、免疫グロブリンの構造や機能が少なくとも部分的に保持された、天然もしくは人工的に作られたタンパク質またはタンパク質コンジュゲートを指し、フラグメントとは、酵素的な処理または遺伝子工学的な設計によって作製された、免疫グロブリンの部分構造を有したタンパク質を指し、免疫グロブリンの融合体とは各種サイトカインやサイトカイン受容体などの生物活性を有したタンパク質の機能部分を、免疫グロブリンの全部または一部と遺伝子工学的に融合させて作製したものを指す。
【００４４】
本発明のタンパク質の分析、分離・精製用吸着剤（１）をオープンカラムに充填し、緩衝液、金属塩溶液、アミノ酸溶液、アルコール溶液等の溶離液を通液することで、タンパク質の分析、分離・精製を行なうことができる。本発明のタンパク質の分析、分離・精製用吸着剤（１）を充填したカラムの溶離液として用いる緩衝液としては、リン酸緩衝液、クエン酸緩衝液、Ｔｒｉｓ、ＰＩＰＥＳ、ＡＣＥＳ、Ｃｈｏｌａｍｉｎｅ、ＢＥＳ、ＭＯＰＳ、ＴＥＳ、ＨＥＰＥＳを例示できる。溶離液として用いる金属塩溶液に含まれる金属塩としては、硫酸ナトリウム、硫酸カリウム、硫酸リチウム、硫酸マグネシウム、硫酸アンモニウム、クエン酸ナトリウム、クエン酸カリウム、塩化ナトリウム、塩化カリウムを例示できる。溶離液として用いるアミノ酸溶液に含まれるアミノ酸としては、グリシン、アルギニン、ベータアラニン、ガンマアミノ酪酸を例示できる。溶離液として用いるアルコール溶液に含まれるアルコールとしては、エタノール、イソプロピルアルコール、グリセロール、エチレングリコールを例示できる。なお、前述した溶液を混合した溶液も溶離液として用いることもできる。溶離液のｐＨは３から１１の範囲内であれば、目的とするタンパク質を分析、分離・精製できる。本発明のタンパク質の分析、分離・精製用吸着剤（１）を用いて免疫グロブリン、またはこの類縁体、フラグメントもしくは融合体を分離および精製する場合、例えば、ｐＨ３から８に調製した塩化ナトリウムを含むリン酸緩衝液を通液するクロマトグラフィーを実施すればよい。
【００４５】
本発明のタンパク質の分析、分離・精製用吸着剤（１）は、水酸化ナトリウム水溶液、水酸化カリウム水溶液等のアルカリ性水溶液、塩酸、硫酸、硝酸、リン酸等の無機酸の酸性水溶液、塩酸グアニジン水溶液、尿素水溶液等のタンパク変性剤水溶液、アルギニンやヒスチジン等のアミノ酸を含んだ水溶液、ドデシル硫酸ナトリウム、Ｔｗｅｅｎ（商品名）等の界面活性剤水溶液、メタノール、エタノール、イソプロパノール、グリセロール、エチレングリコール等のアルコール、またはこれら溶液を混合した溶液を用いて洗浄することによって、初期状態に復帰させることができ、繰り返し使用することができる。
【発明の効果】
【００４６】
本発明の、ω−（３−アミノ−３−オキソプロピルチオ）アルキルアミノ基を不溶性担体に固定化して得られる、タンパク質の分析、分離・精製用吸着剤（１）は、タンパク質、特に免疫グロブリンの分析、分離・精製に使用すると、耐久性に富む選択的な吸着剤となるため、医療用タンパク質、特に免疫グロブリンの工業的な精製において極めて有用である。
【図面の簡単な説明】
【００４７】
【図１】参考例８に記載のω−（３−アミノ−３−オキソプロピルチオ）アルキルアミン誘導体を固定化したセンサーチップ（実験１６３）と各種タンパク質との親和性解析結果（センサーグラム）。
【図２】参考例２に記載のω−（３−アミノ−３−オキソプロピルチオ）アルキルアミン誘導体を固定化したセンサーチップ（実験１９８）と各種タンパク質との親和性解析結果（センサーグラム）。
【図３】参考例４に記載のω−（３−アミノ−３−オキソプロピルチオ）アルキルアミン誘導体を固定化したセンサーチップ（実験２１２）と各種タンパク質との親和性解析結果（センサーグラム）。
【図４】参考例６に記載のω−（３−アミノ−３−オキソプロピルチオ）アルキルアミン誘導体を固定化したセンサーチップ（実験６７）と各種タンパク質との親和性解析結果（センサーグラム）。
【図５】参考例２、４、６、８、２３、６３に記載のω−（３−アミノ−３−オキソプロピルチオ）アルキルアミン誘導体を固定化したＨｉＴｒａｐカラムを用いた免疫グロブリンの吸脱着を表した図。
【図６】参考例２に記載のω−（３−アミノ−３−オキソプロピルチオ）アルキルアミン誘導体を固定化したＨｉＴｒａｐカラム（実験１９９）を用いた免疫グロブリンの吸脱着を表した図。
【図７】参考例６３に記載のω−（３−アミノ−３−オキソプロピルチオ）アルキルアミン誘導体を固定化したＨｉＴｒａｐカラム（実験１５３）を用いた免疫グロブリンおよびＢＳＡの吸脱着を表した図。
【図８】参考例８に記載のω−（３−アミノ−３−オキソプロピルチオ）アルキルアミン誘導体を固定化したキトサンゲルカラム（実験１６９）を用いた免疫グロブリンの吸脱着を表した図。
【図９】参考例８に記載のω−（３−アミノ−３−オキソプロピルチオ）アルキルアミン誘導体を固定化したセルロースゲルカラム（実験１６８）を用いた免疫グロブリンの吸脱着を表した図。
【図１０】参考例２３に記載のω−（３−アミノ−３−オキソプロピルチオ）アルキルアミン誘導体を固定化したトレシルトヨパールカラム（実験１５９）を用いた免疫グロブリンの吸脱着を表した図。
【図１１】参考例２３に記載のω−（３−アミノ−３−オキソプロピルチオ）アルキルアミン誘導体を固定化したエポキシトヨパールカラム（実験１６０）を用いた免疫グロブリンの吸脱着を表した図。
【発明を実施するための形態】
【００４８】
以下、実施例により本発明をさらに詳細に説明するが、本発明がこれらに限定されるものではない。
【００４９】
実施例１ ω−（３−アミノ−３−オキソプロピルチオ）アルキルアミン誘導体（１ａ）の表面プラズモンセンサーチップへの固定化
（１）後述の参考例に記載のω−（３−アミノ−３−オキソプロピルチオ）アルキルアミン誘導体のうち、参考例２、４、６、８、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５３、５４、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６６、６７、６８、６９、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７９、８０、８１、８２、８３に記載のω−（３−アミノ−３−オキソプロピルチオ）アルキルアミン誘導体（表１から６参照）をそれぞれ４ｍｇ秤量して１ｍＬのＤＭＳＯに溶解後、１ＭのＮａＣｌを含む１０ｍＭホウ酸緩衝液（ｐＨ８．５）で８倍に希釈することで、０．５ｍｇ／ｍＬの試料溶液を調製した。
【００５０】
【化３】
【００５１】
【表１】
【００５２】
【表２】
【００５３】
【表３】
【００５４】
【表４】
【００５５】
【表５】
【００５６】
【表６】
【００５７】
（２）表面プラズモン（ＳＰＲ）センサーチップ（ビアコア製ＣＭ５、以下単にセンサーチップと略記する）を、表面プラズモン（ＳＰＲ）解析装置であるＢＩＡＣＯＲＥ２０００（商品名、ビアコア製）に装備し、アミンカップリングキット（商品名、ビアコア製）を用いてＮ−ヒドロキシスキシニミド（ＮＨＳ）と１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド塩酸塩（ＥＤＣ）の混合溶液をセンサーチップに５分間通液させることによりセンサーチップの活性化を行なった。
（３）（２）で調製したセンサーチップに（１）で調製した試料溶液を５分間通液させることで、誘導体をセンサーチップに固定化した。固定化過程はセンサーチップ表面のＳＰＲの増減（共鳴単位：ＲＵ）によってモニタリングした。
【００５８】
実施例２ ＳＰＲ解析装置を用いた親和性解析（その１）
参考例８に記載のω−（３−アミノ−３−オキソプロピルチオ）アルキルアミン誘導体を固定化したセンサーチップ（実験１６３）に対して、マウスＩｇＧ（ポリクローナル、３２０μｇ／ｍＬ）、マウスＩｇＭ（ポリクローナル、１０μｇ／ｍＬ）、ニワトリＩｇＹ（ポリクローナル、４００μｇ／ｍＬ）、ヒト化ＩｇＧ（モノクローナル、３２０μｇ／Ｌ）、ヒト−マウスキメラＩｇＧ（モノクローナル、３２０μｇ／ｍＬ）をそれぞれ１２０秒間通液（結合相）後、標準緩衝液で２４０秒間置換（解離相）して親和性を解析した。なお、標準緩衝液としてはビアコア製ＨＢＳ−ＥＰ（組成：１５０ｍＭ ＮａＣｌ、３ｍＭ ＥＤＴＡ、０．００５％ＳＰ２０を含む１０ｍＭ ＨＥＰＥＳ緩衝液（ｐＨ７．４））を用い、分析終了ごとに１０ｍＭ水酸化ナトリウム水溶液を８０秒間通液することでセンサーチップの再生を行なった。
【００５９】
結果（センサーグラム）を図１に示す。図１のうち、ＡはマウスＩｇＧ（ポリクローナル）を、ＢはマウスＩｇＭ（ポリクローナル）を、ＣはニワトリＩｇＹ（ポリクローナル）を、Ｄはヒト化ＩｇＧ（モノクローナル）、Ｅはヒト−マウスキメラＩｇＧ（モノクローナル）を、それぞれ用いたときのセンサーグラムを表す。解離時間２４０秒後の残存ＲＵは、マウスＩｇＧ（ポリクローナル）の場合５５、マウスＩｇＭ（ポリクローナル）の場合２６８、ニワトリＩｇＹ（ポリクローナル）の場合２４、ヒト化ＩｇＧ（モノクローナル）の場合４４、ヒト−マウスキメラＩｇＧ（モノクローナル）の場合３４であった。
【００６０】
実施例３ ＳＰＲ解析装置を用いた親和性解析（その２）
実施例１で作製したω−（３−アミノ−３−オキソプロピルチオ）アルキルアミン誘導体（１a）を固定化したセンサーチップに対して、タンパク質濃度１６０μｇ／ｍＬまたは３２０μｇ／ｍＬのマウスＩｇＧ（ポリクローナル）、ヒト化ＩｇＧ（モノクローナル）、ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）をそれぞれ１２０秒間通液（結合相）後、標準緩衝液で２４０秒間置換（解離相）して親和性を解析した。用いた標準緩衝液およびセンサーチップの再生方法は実施例２と同様である。
【００６１】
参考例２、４および６で得られたω−（３−アミノ−３−オキソプロピルチオ）アルキルアミン誘導体を固定化したセンサーチップ（実験１９８、２１２、６７）での解析結果（センサーグラム）を図２から４に、それぞれ示す。図２から４において、ａは１６０μｇ／ｍＬのマウスＩｇＧ（ポリクローナル）を用いたときの、Ａは３２０μｇ／ｍＬのマウスＩｇＧ（ポリクローナル）を用いたときの、ｂは１６０μｇ／ｍＬのヒト化ＩｇＧ（モノクローナル）を用いたときの、Ｂは３２０μｇ／ｍＬのヒト化ＩｇＧ（モノクローナル）を用いたときの、ｃは１６０μｇ／ｍＬのＢＳＡを用いたときの、Ｃは３２０μｇ／ｍＬのＢＳＡを用いたときの結果（センサーグラム）をそれぞれ示す。また、解離時間２４０秒後の残存ＲＵを表７に示す。
【００６２】
【表７】
【００６３】
実施例４ ω−（３−アミノ−３−オキソプロピルチオ）アルキルアミノ基のアガロースゲルへの固定化
（１）参考例２、４、６、８、２３、６３で得られたω−（３−アミノ−３−オキソプロピルチオ）アルキルアミン誘導体（１ａ）１８μｍｏｌを、ＤＭＳＯ／（０．５Ｍ ＮａＣｌを含む０．２Ｍ炭酸水素ナトリウム水溶液）＝１／１（ｖ／ｖ）緩衝液（ｐＨ８．３）１．５ｍＬに溶解後、文献：はじめてのリガンドカップリングハンドブック（アマシャムバイオサイエンス株式会社、２００５）に記載された方法に従い、アガロースゲル充填カラム（ＨｉＴｒａｐ ＮＨＳ−ａｃｔｉｖａｔｅｄ ＨＰ １ｍｌ（商品名）、ゲル容量１ｍＬ、ＧＥヘルスケアバイオサイエンス製、以下ＨｉＴｒａｐカラムと略記する）に通液し、常温で２０分間反応させて固定化した。
（２）ω−（３−アミノ−３−オキソプロピルチオ）アルキルアミン誘導体の固定化量を、非特許文献３に記載された方法に従い、ＨｉＴｒａｐカラム通液前後における該誘導体溶液の吸光度を測定することで算出した。
【００６４】
ＨｉＴｒａｐカラムへのω−（３−アミノ−３−オキソプロピルチオ）アルキルアミン誘導体（１ａ）の固定化量は、それぞれ６．０μｍｏｌ／ｍＬ（ｇｅｌ）（参考例２、実験１９９）、７．２μｍｏｌ／ｍＬ（ｇｅｌ）（参考例４、実験２１３）、８．４μｍｏｌ／ｍＬ（ｇｅｌ）（参考例６、実験６８）、８．４μｍｏｌ／ｍＬ（ｇｅｌ）（参考例８、実験１６５）、８．４μｍｏｌ／ｍＬ（ｇｅｌ）（参考例２３、実験１６１）、７．２μｍｏｌ／ｍＬ（ｇｅｌ）（参考例６３、実験１５３）であった。
【００６５】
実施例５ ω−（３−アミノ−３−オキソプロピルチオ）アルキルアミノ基固定化アガロースゲルを用いたタンパク質の吸脱着（その１）
（１）実施例４で調製した、ω−（３−アミノ−３−オキソプロピルチオ）アルキルアミン誘導体（１ａ）固定化ＨｉＴｒａｐカラムを、０．６Ｍ硫酸ナトリウム、１ｍＭ ＥＤＴＡを含む２０ｍＭリン酸カリウム緩衝液（ｐＨ７．０）（緩衝液Ａ）で平衡化した。
（２）ヒト免疫グロブリン溶液（１５０ｍｇ／ｍＬ免疫グロブリンＧ、化血研製）を緩衝液Ａで３００倍に希釈し（ＯＤ２８０＝０．７）、希釈液５ｍＬをそれぞれのω−｛３−アミノ−３−オキソプロピルチオ）アルキルアミン誘導体（１ａ）固定化ＨｉＴｒａｐカラムへアプライした。
（３）緩衝液Ａ２５ｍＬで洗浄後、０．１５Ｍ ＮａＣｌおよび１ｍＭ ＥＤＴＡを含む２０ｍＭリン酸カリウム緩衝液（ｐＨ７．０）（緩衝液Ｂ）を２０ｍＬ通液した。
（４）ＨｉＴｒａｐカラムから回収した溶液を５ｍＬずつ分画し、２８０ｎｍにおける吸光度を測定した。
【００６６】
結果を図５に示す。図５においてＰはアプライ時の通過液を、Ｗ１からＷ５は洗浄液を、Ｅ１からＥ４は溶出液を、それぞれ表す。緩衝液Ｂを通液した直後の溶出画分（Ｅ１）の吸光度（ＯＤ２８０）はそれぞれ０．０２１（参考例２、実験１９９）、０．０６０（参考例４、実験２１３）、０．３２４（参考例６、実験６８）、０．４９３（参考例８、実験１６５）、０．０６２（参考例２３、実験１６１）、０．６７４（参考例６３、実験１５３）であった。
【００６７】
なお、分析終了ごとに１００ｍＭ水酸化ナトリウム水溶液を５ｍＬ通液することで固定化ＨｉＴｒａｐカラムの再生を行なったが、本実施例で使用した固定化ＨｉＴｒａｐカラムはいずれも前記再生処理により初期状態に復帰させることができ、繰り返し使用による特性変化も生じなかった。
【００６８】
実施例６ ω−（３−アミノ−３−オキソプロピルチオ）アルキルアミノ基固定化アガロースゲルを用いたタンパク質の吸脱着（その２）
（１）実施例４で調製した、参考例２に記載のω−（３−アミノ−３−オキソプロピルチオ）アルキルアミン誘導体を固定化したＨｉＴｒａｐカラム（実験１９９）を、１ｍＭ ＥＤＴＡを含む５０ｍＭ酢酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ７．０）（緩衝液Ｃ）で平衡化した。
（２）実施例５（２）と同様の方法（ただし希釈には緩衝液Ｃを使用）で調製した免疫グロブリン希釈液５ｍＬを、前記ＨｉＴｒａｐカラムへアプライした。
（３）緩衝液Ｃ３０ｍＬで洗浄後、０．１５Ｍ ＮａＣｌ、１ｍＭ ＥＤＴＡを含む５０ｍＭ酢酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ４．５）（緩衝液Ｄ）を２０ｍＬ通液した。
（４）続けて０．５Ｍ ＮａＣｌ、１ｍＭ ＥＤＴＡを含む５０ｍＭ酢酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ４．５）を１５ｍＬ通液した。
（５）ＨｉＴｒａｐカラムから回収された液体を５ｍＬずつ分画し、２８０ｎｍにおける吸光度を測定した。
【００６９】
結果を図６に示す。図６においてＰはアプライ時の通過液を、Ｗ１からＷ６は洗浄液を、Ｅ１からＥ４は（３）での溶出液を、Ｅ５からＥ７は（４）での溶出液を、それぞれ表す。緩衝液Ｄを通液した直後の画分（Ｅ１）の吸光度（ＯＤ２８０）は０．５７６であった。
【００７０】
実施例７ ω−（３−アミノ−３−オキソプロピルチオ）アルキルアミノ基固定化アガロースゲルを用いたタンパク質の吸脱着（その３）
（１）実施例４で調製した、参考例６３に記載のω−（３−アミノ−３−オキソプロピルチオ）アルキルアミン誘導体を固定化したＨｉＴｒａｐカラム（実験１５３）を、０．８Ｍ硫酸ナトリウム、１ｍＭ ＥＤＴＡを含む２０ｍＭリン酸カリウム緩衝液（ｐＨ７．０）（緩衝液Ｅ）で平衡化した。
（２）実施例５（２）と同様の方法（ただし希釈には緩衝液Ｅを使用）で調製した免疫グロブリン希釈液５ｍＬを、前記ＨｉＴｒａｐカラムへアプライした。
（３）緩衝液Ｅ２５ｍＬで洗浄後、０．１５Ｍ ＮａＣｌ、１ｍＭ ＥＤＴＡを含む２０ｍＭリン酸カリウム緩衝液（ｐＨ７．０）（緩衝液Ｂ）を２０ｍＬ通液した。
（４）ＨｉＴｒａｐカラムから回収された液体を５ｍＬずつ分画し、２８０ｎｍにおける吸光度を測定した。
（５）１００ｍＭ水酸化ナトリウム水溶液を５ｍＬ通液してＨｉＴｒａｐカラムの再生を行なった後、緩衝液Ｅで平衡化した。
（６）緩衝液Ｅで溶解した０．５ｍｇ／ｍＬのウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）５ｍＬをＨｉＴｒａｐカラムへアプライした。
（７）緩衝液Ｅ２５ｍＬで洗浄後、緩衝液Ｂを２０ｍＬ通液した。
（８）カラムから回収された液体を５ｍＬずつ分画し、２８０ｎｍにおける吸光度を測定した。
【００７１】
結果を図７に示す。図７において、Ｐは免疫グロブリンまたはＢＳＡアプライ時の通過液を、Ｗ１からＷ５は洗浄液を、Ｅ１からＥ４は溶出液を、それぞれ表す。緩衝液Ｂを通液した直後の画分（Ｅ１）の吸光度（ＯＤ２８０）は０．７１７（免疫グロブリン）、０．０４２（ＢＳＡ）であった。
【００７２】
実施例８ ω−（３−アミノ−３−オキソプロピルチオ）アルキルアミノ基のキトサンゲルへの固定化
（１）キトサンゲル（キトパールＫ−６６（商品名）、富士紡ホールディングス製）１ｍＬをイソプロピルアルコールに懸濁後、両端にフィルターを装備した円筒容器に充填してキトサンゲルカラムを作製し、１ｍＭ塩酸を５ｍＬ通液して洗浄した。
（２）参考例８に記載のω−（３−アミノ−３−オキソプロピルチオ）アルキルアミン誘導体４５μｍｏｌを、ＤＭＳＯ／（０．５Ｍ ＮａＣｌを含む０．２Ｍ炭酸水素ナトリウム緩衝液）＝１／１（ｖ／ｖ）（ｐＨ８．３）３ｍＬに溶解後、キトサンゲルカラムに３０分間循環通液することで固定化した。
（３）ω−（３−アミノ−３−オキソプロピルチオ）アルキルアミン誘導体の固定化量を、キトサンゲルカラム通液前後における該誘導体溶液の吸光度を測定することで算出した。
【００７３】
キトサンゲルへのω−（３−アミノ−３−オキソプロピルチオ）アルキルアミン誘導体の固定化量は８．１μｍｏｌ／ｍＬ（ｇｅｌ）となった。
【００７４】
実施例９ ω−（３−アミノ−３−オキソプロピルチオ）アルキルアミノ基固定化キトサンゲルを用いたタンパク質の吸脱着
（１）実施例８で調製した、参考例８に記載のω−（３−アミノ−３−オキソプロピルチオ）アルキルアミン誘導体を固定化したキトサンゲルカラム（実験１６９）を、０．６Ｍ硫酸ナトリウム、１ｍＭ ＥＤＴＡを含む２０ｍＭリン酸カリウム緩衝液（ｐＨ７．０）（緩衝液Ａ）で平衡化した。
（２）実施例５（２）で調製した免疫グロブリン希釈液５ｍＬを、前記キトサンゲルカラムへアプライした。
（３）緩衝液Ａ２５ｍＬで洗浄後、０．１５Ｍ ＮａＣｌ、１ｍＭ ＥＤＴＡを含む２０ｍＭリン酸カリウム緩衝液（ｐＨ７．０）（緩衝液Ｂ）を２０ｍＬ通液した。
（４）キトサンゲルカラムから回収された液体を５ｍＬずつ分画し、２８０ｎｍにおける吸光度を測定した。
【００７５】
結果を図８に示す。図８において、Ｐはアプライ時の通過液を、Ｗ１からＷ５は洗浄液を、Ｅ１からＥ４は溶出液を、それぞれ表す。緩衝液Ｂを通液した直後の溶出画分（Ｅ１）の吸光度（ＯＤ２８０）は０．２７１であった。
【００７６】
実施例１０ ω−（３−アミノ−３−オキソプロピルチオ）アルキルアミノ基のセルロースゲルへの固定化
（１）参考例８に記載のω−（３−アミノ−３−オキソプロピルチオ）アルキルアミン誘導体４５μｍｏｌをＤＭＳＯ／（０．５Ｍ ＮａＣｌを含む０．２Ｍ炭酸水素ナトリウム水溶液）＝１／１（ｖ／ｖ）緩衝液（ｐＨ８．３）２．５ｍＬに溶解した。
（２）前記溶液を、グラスフィルター上で水洗したセルロースゲル（セルファインホルミル（商品名）、ＪＮＣ製）２．１ｇに添加して４０℃で３時間振とうした。
（３）ピリジン−ボラン２０μＬを添加後、さらに４０℃で１時間振とうして固定化を行なった。なお、セルロースゲルへのω−（３−アミノ−３−オキソプロピルチオ）アルキルアミン誘導体の固定化量は算出できなかった。
【００７７】
実施例１１ ω−（３−アミノ−３−オキソプロピルチオ）アルキルアミノ基固定化セルロースゲルを用いたタンパク質の吸脱着
（１）実施例１０で調製した、参考例８に記載のω−（３−アミノ−３−オキソプロピルチオ）アルキルアミン誘導体を固定化したセルロースゲル（実験１６８）１ｍＬを、両端にフィルターを装備した円筒容器に充填してゲルカラムを作製し、０．６Ｍ硫酸ナトリウム、１ｍＭ ＥＤＴＡを含む２０ｍＭリン酸カリウム緩衝液（ｐＨ７．０）（緩衝液Ａ）で平衡化した。
（２）実施例５（２）で調製した免疫グロブリン希釈液５ｍＬを、前記セルロースゲルカラムへアプライした。
（３）緩衝液Ａ２５ｍＬで洗浄した後、０．１５Ｍ ＮａＣｌ、１ｍＭ ＥＤＴＡを含む２０ｍＭリン酸カリウム緩衝液（ｐＨ７．０）（緩衝液Ｂ）を２０ｍＬ通液した。
（４）セルロースゲルカラムから回収された液体を５ｍＬずつ分画し、２８０ｎｍにおける吸光度を測定した。
【００７８】
結果を図９に示す。図９において、Ｐはアプライ時の通過液を、Ｗ１からＷ５は洗浄液を、Ｅ１からＥ４は溶出液を、それぞれ表す。緩衝液Ｂを通液した直後の溶出画分（Ｅ１）の吸光度（ＯＤ２８０）は０．２１８であった。
【００７９】
実施例１２ ω−（３−アミノ−３−オキソプロピルチオ）アルキルアミノ基のポリメタクリレートゲルへの固定化（その１）
（１）参考例２３に記載のω−（３−アミノ−３−オキソプロピルチオ）アルキルアミン誘導体２００μｍｏｌをＤＭＳＯ／０．５Ｍ炭酸水素ナトリウム水溶液＝１／４（ｖ／ｖ）緩衝液２．５ｍＬに溶解した。
（２）グラスフィルター上で水洗したポリメタクリレートゲル（ＡＦ−Ｔｒｅｓｙｌ−６５０Ｍ（商品名）、東ソー製、以下トレシルトヨパールとする）０．５ｇに（１）の溶液を添加後、３７℃で１６時間振とうすることにより固定化を行なった。
（３）ω−（３−アミノ−３−オキソプロピルチオ）アルキルアミン誘導体の固定化量を、トレシルトヨパールカラム通液前後における該誘導体溶液の吸光度を測定することで算出した。
【００８０】
トレシルトヨパールへのω−（３−アミノ−３−オキソプロピルチオ）アルキルアミン誘導体の固定化量は８６μｍｏｌ／ｍＬ（ｇｅｌ）となった。
【００８１】
実施例１３ ω−（３−アミノ−３−オキソプロピルチオ）アルキルアミノ基固定化ポリメタクリレートゲルを用いたタンパク質の吸脱着（その１）
（１）実施例１２で調製した、参考例２３に記載のω−（３−アミノ−３−オキソプロピルチオ）アルキルアミン誘導体を固定化したトレシルトヨパールゲル（実験１５９）１ｍＬを、両端にフィルターを装備した円筒容器に充填してゲルカラムを作製し、０．８Ｍ硫酸ナトリウム、１ｍＭ ＥＤＴＡを含む２０ｍＭリン酸カリウム緩衝液（ｐＨ７．０）（緩衝液Ｅ）で平衡化した。
（２）実施例５（２）と同様の方法（ただし希釈には緩衝液Ｅを使用）で調製した免疫グロブリン希釈液５ｍＬを、前記トレシルトヨパールカラムへアプライした。
（３）緩衝液Ｅ２５ｍＬで洗浄後、０．１５Ｍ ＮａＣｌ、１ｍＭ ＥＤＴＡを含む２０ｍＭリン酸カリウム緩衝液（ｐＨ７．０）（緩衝液Ｂ）を２０ｍＬ通液した。
（４）トレシルトヨパールカラムから回収された液体を５ｍＬずつ分画し、２８０ｎｍにおける吸光度を測定した。
【００８２】
結果を図１０に示す。図１０において、Ｐはアプライ時の通過液、Ｗ１からＷ５は洗浄液、Ｅ１からＥ４は溶出液を表す。緩衝液Ｂを通液した直後の溶出画分（Ｅ１）の吸光度（ＯＤ２８０）は０．４７３であった。
【００８３】
実施例１４ ω−（３−アミノ−３−オキソプロピルチオ）アルキルアミノ基のポリメタクリレートゲルへの固定化（その２）
（１）参考例２３に記載のω−（３−アミノ−３−オキソプロピルチオ）アルキルアミン誘導体２００μｍｏｌをＤＭＳＯ／０．５Ｍ炭酸水素ナトリウム水溶液＝１／４（ｖ／ｖ）緩衝液２．５ｍＬに溶解した。
（２）前記溶液を、グラスフィルター上で水洗したポリメタクリレートゲル（ＡＦ−Ｅｐｏｘｙ−６５０Ｍ（商品名）、東ソー製、以下エポキシトヨパールとする）０．５ｇに添加し、３７℃で１６時間振とうすることにより固定化を行なった。
（３）ω−（３−アミノ−３−オキソプロピルチオ）アルキルアミン誘導体の固定化量を、エポキシトヨパールカラム通液前後における該誘導体溶液の吸光度を測定することで算出した。
【００８４】
エポキシトヨパールへのω−（３−アミノ−３−オキソプロピルチオ）アルキルアミン誘導体の固定化量は８４μｍｏｌ／ｍＬ（ｇｅｌ）となった。
【００８５】
実施例１５ ω−（３−アミノ−３−オキソプロピルチオ）アルキルアミノ基固定化ポリメタクリレートゲルを用いたタンパク質の吸脱着（その２）
（１）実施例１４で調製した、参考例２３に記載のω−（３−アミノ−３−オキソプロピルチオ）アルキルアミン誘導体を固定化したエポキシトヨパールゲル（実験１６０）１ｍＬを、両端にフィルターを装備した円筒容器に充填してゲルカラムを作製し、０．８Ｍ硫酸ナトリウム、１ｍＭ ＥＤＴＡを含む２０ｍＭリン酸カリウム緩衝液（ｐＨ７．０）（緩衝液Ｅ）で平衡化した。
（２）実施例５（２）と同様の方法（ただし希釈には緩衝液Ｅを使用）で調製した免疫グロブリン希釈液５ｍＬを、前記エポキシトヨパールカラムへアプライした。
（３）緩衝液Ｅ２５ｍＬで洗浄後、０．１５Ｍ ＮａＣｌ、１ｍＭ ＥＤＴＡを含む２０ｍＭリン酸カリウム緩衝液（ｐＨ７．０）（緩衝液Ｂ）を２０ｍＬ通液した。
（４）エポキシトヨパールカラムから回収された液体を５ｍＬずつ分画し、２８０ｎｍにおける吸光度を測定した。
【００８６】
結果を図１１に示す。図１１において、Ｐはアプライ時の通過液、Ｗ１からＷ５は洗浄液、Ｅ１からＥ４は溶出液を表す。緩衝液Ｂを通液した直後の溶出画分（Ｅ１）の吸光度（ＯＤ２８０）は０．３２５であった。
【００８７】
参考例１ ３−｛３−［２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）エチルチオ］プロピオニルアミノ｝チオフェン−２−カルボン酸エチルの合成
【００８８】
【化４】
【００８９】
２−ブトキシカルボニルアミノエタンチオール（１．４８ｇ，８．３５ｍｍｏｌ）のエタノール（１５ｍＬ）溶液に炭酸カリウム（１．２ｇ，８．７０ｍｍｏｌ）を添加し、３−（３−アクリロイルアミノ）チオフェン−２−カルボン酸エチル．３７ｇ，６．４８ｍｍｏｌ）を添加後、室温で４時間反応させた。反応終了後、溶媒を減圧留去し、反応混合物に水（２０ｍＬ）を添加し、酢酸エチル（８０ｍＬ）で抽出した。有機層を飽和食塩水（４０ｍＬ）で洗浄し、有機層を無水硫酸マグネシウムで乾燥後、乾燥剤を濾別し溶媒を減圧留去した。得られた混合物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（酢酸エチル：ヘキサン＝３：７）で精製することで、３−｛３−［２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）エチルチオ］プロピオニルアミノ｝チオフェン−２−カルボン酸エチルの褐色油状物（２．０９ｇ，８４％）を得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（２５０ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３，ＴＭＳ，ｐｐｍ）：δ １．３９（ｔ，Ｊ＝７．５Ｈｚ３Ｈ），１．４４（ｓ，９Ｈ），２．７２（ｍ，４Ｈ），２．９２（ｔ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，２Ｈ），３．３４（ｑ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，２Ｈ），４．３５（ｑ，Ｊ＝７．５ Ｈｚ，２Ｈ），５．０３（ｂｒ，１Ｈ），７．４６（ｄ，Ｊ＝２．５Ｈｚ，１Ｈ），８．２１（ｄ，Ｊ＝２．５Ｈｚ，１Ｈ），１０．２８（ｓ，１Ｈ）。
【００９０】
参考例２ ２−［３−（２−カルボキシ−３−チエニル）アミノ−３−オキソプロピルチオ］エチルアミン塩酸塩の合成
【００９１】
【化５】
【００９２】
３−｛３−［２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）エチルチオ］プロピオニルアミノ｝チオフェン−２−カルボン酸（０．３６ｇ，０．９４８ｍｍｏｌ）のクロロホルム（５ｍＬ）溶液に塩酸ガスを３０分間導入したところ反応系内に沈殿物が析出した。該沈殿物を濾取し、少量のクロロホルムとエーテルで洗浄後、充分に乾燥させることで、白色固体の２−［３−（２−カルボキシチオフェン−３−イル）アミノ−３−オキソプロピルチオ］エチルアミン塩酸塩（０．２５１ｇ，８５％）を得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（２５０ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６，ＴＭＳ，ｐｐｍ）：δ ２．７４−２．８６（ｍ，６Ｈ），２．９６−３．０２（ｍ，２Ｈ），７．８５（ｄ，Ｊ＝５．０Ｈｚ，１Ｈ），７．９６（ｄ，Ｊ＝５．０Ｈｚ，１Ｈ），８．０９（ｂｒｓ，３Ｈ），１０．２（ｓ，１Ｈ）。カルボキシル基のプロトンは帰属できなかった。
【００９３】
参考例３ Ｎ−（キノリン−８−イル）−３−｛２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）エチルチオ）プロピオナミドの合成
【００９４】
【化６】
【００９５】
２−ブトキシカルボニルアミノエタンチオール（０．９５ｇ，５．３５ｍｍｏｌ）のエタノール（１０ｍＬ）溶液に炭酸カリウム（０．７４ｇ，５．３６ｍｍｏｌ）を添加し、Ｎ−（キノリン−８−イル）アクリル酸アミド（０．８４ｇ，４．１６ｍｍｏｌ）を添加後、室温で４時間反応させた。反応終了後、溶媒を減圧留去し、反応混合物に水（２０ｍＬ）を添加後、酢酸エチル（４０ｍＬ）で抽出した。有機層を飽和食塩水（２０ｍＬ）で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥後、乾燥剤を濾別し溶媒を減圧留去した。得られた混合物をカラムクロマトグラフィー（酢酸エチル：ヘキサン＝１：３）で精製し、Ｎ−（キノリン−８−イル）−３−｛２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）エチルチオ）プロピオナミドの黄色油状物（１．４６ｇ，９３％）を得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（２５０ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３，ＴＭＳ，ｐｐｍ）：δ １．４３（ｓ，９Ｈ），２．７３（ｔ，Ｊ＝２．５Ｈｚ，２Ｈ），２．８３−２．８９（ｍ，２Ｈ），２．９８−３．０３（ｍ，２Ｈ），３．３７（ｍ，２Ｈ），５．０８（ｂｒｓ，１Ｈ），７．４３−７．５８（ｍ，３Ｈ），８．１６（ｄｄ，Ｊ＝１．８ ａｎｄ ８．３Ｈｚ，１Ｈ），８．７５−８．８２（ｍ，２Ｈ），９．９０（ｂｒｓ，１Ｈ）。
【００９６】
参考例４ ２−［３−オキソ−３−（キノリン−８−イル）アミノプロピルチオ］エチルアミン塩酸塩の合成
【００９７】
【化７】
【００９８】
Ｎ−（キノリン−８−イル）−３−｛２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）エチルチオ）プロピオナミド（０．５８２ｇ，１．５４ｍｍｏｌ）のクロロホルム（１０ｍＬ）溶液に塩酸ガスを６０分間導入したところ反応系内に沈殿物が析出した。該沈殿物を濾取し、少量のクロロホルムとエーテルで洗浄後、黄緑色固体２−［３−（キノリン−８−イル）アミノ−３−オキソプロピルチオ］エチルアミン塩酸塩（０．４４６ｇ，９３％）を得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（２５０ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６，ＴＭＳ，ｐｐｍ）：δ ２．８２−３．０４（ｍ，８Ｈ），７．６９（ｔ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，１Ｈ），７．７６−７．８５（ｍ，２Ｈ），８．２３（ｂｒ，３Ｈ），８．５４（ｄｄ，Ｊ＝１．０ ａｎｄ ７．５Ｈｚ，１Ｈ），８．６５（ｄｄ，Ｊ＝１．０ ａｎｄ １０Ｈｚ，１Ｈ），９．０４（ｄｄ，Ｊ＝１．０ ａｎｄ ５．０Ｈｚ，１Ｈ），１０．４（ｓ，１Ｈ）。
【００９９】
参考例５ Ｎ−フルフリル−Ｎ−フェニル−３−｛２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）エチルチオ）プロピオナミドの合成
【０１００】
【化８】
【０１０１】
２−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノエタンチオール（０．９５ｇ，５．３５ｍｍｏｌ）のメタノール（１０ｍＬ）溶液に炭酸カリウム（０．７４ｇ，５．３６ｍｍｏｌ）を添加し、Ｎ−フェニル−Ｎ−フルフリルアクリル酸アミド（０．７２ｇ，４．１６ｍｍｏｌ）を添加後、室温で４時間反応させた。反応終了後、溶媒を減圧留去し、反応混合物に水（２０ｍＬ）を添加後、酢酸エチル（４０ｍＬ）で抽出した。有機層を飽和食塩水（２０ｍＬ）で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥後、乾燥剤を濾別し溶媒を減圧留去した。得られた混合物をカラムクロマトグラフィー（酢酸エチル：ヘキサン＝１：３）で精製し、Ｎ−フルフリル−Ｎ−フェニル−３−｛２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）エチルチオ）プロピオナミドの黄色油状物（１．４０ｇ，６４％）を得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（２５０ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３，ＴＭＳ，ｐｐｍ）：δ １．４３（ｓ，９Ｈ），２．３２（ｔ，Ｊ＝２．５Ｈｚ，２Ｈ），２．５３（ｔ，Ｊ＝５．０Ｈｚ，２Ｈ），２．７８（ｔ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，１Ｈ），３．２５（ｍ，２Ｈ），４．８７（ｓ，１Ｈ），４．９３（ｂｒ，１Ｈ），６．１３（ｄ，Ｊ＝２．５Ｈｚ，１Ｈ），６．２５（ｄｄ，Ｊ＝２．５ ａｎｄ ５．０Ｈｚ，１Ｈ），６．２７（ｄｄ，Ｊ＝２．５ ａｎｄ ５．０Ｈｚ，１Ｈ），７．０３−７．０７（ｍ，２Ｈ），７．３３−７．３９（ｍ，５Ｈ）。
【０１０２】
参考例６ ２−｛３−［Ｎ−フルフリル−Ｎ−フェニル］アミノ−３−オキソプロピルチオ）エチルアミン塩酸塩の合成
【０１０３】
【化９】
【０１０４】
Ｎ−フルフリル−Ｎ−フェニル−３−｛２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）エチルチオ）プロピオナミド（０．４９ｇ，１．２１ｍｍｏｌ）のクロロホルム（１０ｍＬ）溶液に塩酸ガスを３０分間導入した。薄層クロマトグラフィーにて原料の消失を確認し、溶媒を減圧留去した。残渣の油状物に少量のエーテルを加え攪拌後、静沈し、上澄みのエーテルを除去した。得られた黄色油状物を充分に乾燥させることで、黄色油状物の２−｛３−［Ｎ−フルフリル−Ｎ−フェニル］アミノ−３−オキソプロピルチオ）エチルアミン塩酸塩（０．４２９ｇ，定量的）を得た。
潮解性；１Ｈ−ＮＭＲ（２５０ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６，ＴＭＳ，ｐｐｍ）：δ ２．２９（ｔ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，２Ｈ），２．６２−２．７４（ｍ，４Ｈ），２．８９−２．９４（ｔ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，２Ｈ），４．８６（ｓ，２Ｈ），６．１５（ｄ，Ｊ＝２．８Ｈｚ，１Ｈ），６，３４（ｄｄ，Ｊ＝１．８ ａｎｄ ２．８Ｈｚ，１Ｈ），７．１７（ｄ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，２Ｈ），７．３４−７．４６（ｍ，３Ｈ），７．５５（ｄ，Ｊ＝１．８Ｈｚ，１Ｈ），７．９８（ｂｒｓ，３Ｈ）。
【０１０５】
参考例７ Ｎ−（ビフェニル−２−イル）−３−｛５−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）ペンチルチオ）プロピオナミドの合成
【０１０６】
【化１０】
【０１０７】
５−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノペンタンチオール（０．５０ｇ，２．２８ｍｍｏｌ）のメタノール（１０ｍＬ）溶液に炭酸カリウム（０．３２ｇ，２．３２ｍｍｏｌ）を添加し、Ｎ−ビフェニ−２−イル−アクリル酸アミド（１．０ｇ，６．６２ｍｍｏｌ）を添加後、室温で４時間反応させた。反応終了後、溶媒を減圧留去し、反応混合物に水（２０ｍＬ）を加え、酢酸エチル（４０ｍＬ）で抽出した。有機層を飽和食塩水（２０ｍＬ）で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥後、乾燥剤を濾別し溶媒を減圧留去した。得られた混合物をカラムクロマトグラフィー（酢酸エチル：ヘキサン＝１：３）で精製し、Ｎ−（ビフェニル−２−イル）−３−｛５−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）ペンチルチオ）プロピオナミドの無色油状物（０．６１１ｇ，６１％）を得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（２５０ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３，ＴＭＳ，ｐｐｍ）：δ １．３６−１．６１（ｍ，１５Ｈ），２．４３−２．５４（ｍ，４Ｈ），２．７７（ｔ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，２Ｈ），３．０５−３．１１（ｍ，２Ｈ），４．５２（ｂｒ，１Ｈ），７．１５−７．５１（ｍ，９Ｈ），８．２６（ｄ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，１Ｈ）。
【０１０８】
参考例８ ５−［３−（ビフェニル−２−イル）アミノ−３−オキソプロピルチオ］ペンチルアミン塩酸塩の合成
【０１０９】
【化１１】
【０１１０】
Ｎ−（ビフェニル−２−イル）−３−｛５−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）ペンチルチオ）プロピオナミド（０．６１１ｇ，１．３８ｍｍｏｌ）のクロロホルム（１０ｍＬ）溶液に塩酸ガスを３０分間導入した。薄層クロマトグラフィーにて原料の消失を確認後、水１０ｍＬで抽出し、水を減圧留去した。油状物を減圧下で充分に乾燥させることで、無色油状物の５−［３−（ビフェニル−２−イル）アミノ−３−オキソプロピルチオ］ペンチルアミン塩酸塩（０．３８３ｇ，７３．２％）を得た。
褐色固体、潮解性；１Ｈ−ＮＭＲ（２５０ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６，ＴＭＳ，ｐｐｍ）：δ １．３５−１．４４（ｍ，２Ｈ），１．４８−１．６０（ｍ，４Ｈ），２．４２−２．５３（ｍ，４Ｈ），２．６７（ｔ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，２Ｈ），２．７７（ｔ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，２Ｈ），７．３０−７．４８（ｍ，９Ｈ），７．９２（ｂｒｓ，３Ｈ），９．３５（ｓ，１Ｈ）。
【０１１１】
参考例１１ ２−［３−オキソ−３−（２−チアゾリル）アミノプロピルチオ］エチルアミン塩酸塩
白色固体；１Ｈ−ＮＭＲ（２５０ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６，ＴＭＳ，ｐｐｍ）：δ ２．７８−２．８７（ｍ，６Ｈ），２．９８（ｍ，２Ｈ），７．２３（ｄ，Ｊ＝２．５Ｈｚ，１Ｈ），７．４８（ｄ，Ｊ＝２．５Ｈｚ，１Ｈ），８．２３（ｂｒｓ，３Ｈ）。アミドプロトンは帰属できなかった。
【０１１２】
参考例１２ ２−［３−（２−ベンゾチアゾリル）アミノ−３−オキソプロピルチオ］エチルアミン塩酸塩
白色固体；１Ｈ−ＮＭＲ（２５０ＭＨｚ，Ｄ２Ｏ，ＴＭＳ，ｐｐｍ）：δ ２．７６−２．８６（ｍ，６Ｈ），３．１８（ｔ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，２Ｈ），７．３１（ｄｄｄ，Ｊ＝１．０，７．５ ａｎｄ ７．５Ｈｚ，１Ｈ），７．４３（ｄｄｄ，Ｊ＝１．０，７．５ ａｎｄ ７．５Ｈｚ，１Ｈ），７．６１（ｍ，２Ｈ），７．７６（ｄ，Ｊ＝１．０ ａｎｄ ７．５Ｈｚ，１Ｈ），８．１２（ｂｒｓ，１Ｈ），８．２８（ｂｒｓ，１Ｈ）。
【０１１３】
参考例１３ ２−［３−オキソ−３−チオモルホリノ−プロピルチオ］エチルアミン塩酸塩
褐色油状物；１Ｈ−ＮＭＲ（２５０ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６，ＴＭＳ，ｐｐｍ）：δ ２．６０−２．８１（ｍ，８Ｈ），２．９５−２．９８（ｍ，２Ｈ），２．３４−３．７２（ｍ，６Ｈ），８．１８（ｂｒｓ，３Ｈ）。
【０１１４】
参考例１４ ２−［３−（３−クロロフェニル）アミノ−３−オキソプロピルチオ］エチルアミン塩酸塩
白色固体、潮解性；１Ｈ−ＮＭＲ（２５０ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６，ＴＭＳ，ｐｐｍ）：δ ２．６８（ｔ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，２Ｈ），２．９７−２．８６（ｍ，４Ｈ），３．００（ｍ，２Ｈ），７．０８（ｄｄｄ，Ｊ＝１．０，２．５ ａｎｄ ８．０Ｈｚ，１Ｈ），７．３２（ｄｄ，Ｊ＝８．０ ａｎｄ ８．３Ｈｚ，１Ｈ），７．５１（ｄｄ，Ｊ＝１．０，１．０ ａｎｄ ８．３Ｈｚ，１Ｈ），７．８６（ｄｄ，Ｊ＝１．０ ａｎｄ ２．５Ｈｚ，１Ｈ），８．１８（ｂｒｓ，３Ｈ）。アミドプロトンは帰属できなかった。
【０１１５】
参考例１５ ５−［３−（３−クロロフェニル）アミノ−３−オキソプロピルチオ］ペンチルアミン塩酸塩
白色固体；１Ｈ−ＮＭＲ（２５０ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６，ＴＭＳ，ｐｐｍ）：δ １．３８−１．４４（ｍ，２Ｈ），１．４９−１．６３（ｍ，４Ｈ），２．５２−２．８３（ｍ，８Ｈ），７．０８（ｄｄ，Ｊ＝１．０ ａｎｄ ７．５Ｈｚ，１Ｈ），７．３３（ｄｄ，Ｊ＝７．５ ａｎｄ ８．０Ｈｚ，１Ｈ），７．５０（ｄｄ，Ｊ＝１．０ ａｎｄ ８．０Ｈｚ，１Ｈ），７．８６（ｓ，１Ｈ），７．９３（ｂｒｓ，３Ｈ），１０．４（ｓ，１Ｈ）。
【０１１６】
参考例１６ ２−［３−フルフリルアミノ−３−オキソプロピルチオ］エチルアミン塩酸塩
褐色油状物；１Ｈ−ＮＭＲ（２５０ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６，ＴＭＳ，ｐｐｍ）：δ ２．４４（ｔ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，２Ｈ），２．７２−２．７９（ｍ，４Ｈ），２．９０−３．０７（ｍ，２Ｈ），４．２６（ｄ，Ｊ＝２．５Ｈｚ，２Ｈ），６．２５（ｄｄ，Ｊ＝０．８ ａｎｄ ２．５Ｈｚ，１Ｈ），６．３９（ｄｄ，Ｊ＝０．８ ａｎｄ ２．５Ｈｚ，１Ｈ），７．５７（ｄｄ，Ｊ＝０．８ ａｎｄ ２．５Ｈｚ，１Ｈ），８．２１（ｂｒｓ，３Ｈ），８．５１（ｔ，Ｊ＝２．５Ｈｚ，１Ｈ）。
【０１１７】
参考例１７ ２−［３−オキソ−３−（４−トリフルオロメトキシフェニル）アミノプロピルチオ］エチルアミン塩酸塩
白色固体；１Ｈ−ＮＭＲ（２５０ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６，ＴＭＳ，ｐｐｍ）：δ ２．６９（ｔ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，２Ｈ），２．７８−２．８３（ｍ，４Ｈ），２．９７−３．０２（ｍ，２Ｈ），７．３１（ｄｄ，Ｊ＝２．０ ａｎｄ ７．５Ｈｚ，２Ｈ），７．５６（ｄｄ，Ｊ＝２．０ ａｎｄ ７．５Ｈｚ，２Ｈ），８．１３（ｂｒｓ，３Ｈ）。アミドプロトンは帰属できなかった。
【０１１８】
参考例１８ ２−［３−｛３，５−ビス（トリフルオロメチル）フェニル｝アミノ−３−オキソプロピルチオ］エチルアミン塩酸塩
褐色固体；１Ｈ−ＮＭＲ（２５０ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６，ＴＭＳ，ｐｐｍ）：δ ２．７６（ｔ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，２Ｈ），２．８２−２．９０（ｍ，４Ｈ），３．０１−３．０３（ｍ，２Ｈ），７．７４（ｓ，１Ｈ），８．１０（ｂｒｓ，３Ｈ），８．３９（ｓ，２Ｈ），１１．２（ｓ，１Ｈ）。
【０１１９】
参考例１９ ２−［３−（２−ｔｅｒｔ−ブチルフェニル）アミノ−３−オキソプロピルチオ］エチルアミン塩酸塩
白色固体；１Ｈ−ＮＭＲ（２５０ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６，ＴＭＳ，ｐｐｍ）：δ １．３３（ｓ，９Ｈ），２．６７（ｔ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，２Ｈ），２．８０−２．８８（ｍ，４Ｈ），２．９７−３．００（ｍ，２Ｈ），７．０３（ｄｄ，２．５ ａｎｄ ７．５Ｈｚ，１Ｈ），７．２１（ｄｄｄ，Ｊ＝２．５，５．０ ａｎｄ ７．５Ｈｚ，２Ｈ），７．４０（ｄｄ，Ｊ＝２．５ ａｎｄ ５．０Ｈｚ，１Ｈ），８．１８（ｂｒｓ，３Ｈ），９．４３（ｓ，１Ｈ）。
【０１２０】
参考例２０ ２−［３−（４−エトキシフェニル）アミノ−３−オキソプロピルチオ］エチルアミン塩酸塩
白色固体；１Ｈ−ＮＭＲ（２５０ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６，ＴＭＳ，ｐｐｍ）：δ １．３１（ｔ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，３Ｈ），２．６２（ｔ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，２Ｈ），２．８２（ｍ，４Ｈ），２．９７−３．０４（ｍ，２Ｈ），３．９７（ｑ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，２Ｈ），６．８７（ｄ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，２Ｈ），７．５３（ｄ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，２Ｈ），８．１５（ｂｒｓ，３Ｈ），１０．１（ｓ，１Ｈ）。
【０１２１】
参考例２１ ５−［３−（２−メチルフェニル）アミノ−３−オキソプロピルチオ］ペンチルアミン塩酸塩
白色固体；１Ｈ−ＮＭＲ（２５０ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６，ＴＭＳ，ｐｐｍ）：δ １．４０−１．４６（ｍ，２Ｈ），１．５１−１．６５（ｍ，４Ｈ），２．２２（ｓ，３Ｈ），２．５１−２．６８（ｍ，４Ｈ），２．７２−２．８２（ｍ，２Ｈ），３．７２−３．８２（ｍ，２Ｈ），７．０５−７．２２（ｍ，３Ｈ），７．３６（ｄ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，１Ｈ），８．０１（ｂｒｓ，３Ｈ），９．４６（ｓ，１Ｈ）。
【０１２２】
参考例２２ ２−［３−（１−メチル−１−フェニルエチル）アミノ−３−オキソプロピルチオ］エチルアミン塩酸塩
白色固体；１Ｈ−ＮＭＲ（２５０ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６，ＴＭＳ，ｐｐｍ）：δ １．５５（ｓ，６Ｈ），２．４３−２．５２（ｍ，２Ｈ），２．６７−２．８１（ｍ，４Ｈ），２．９２−３．００（ｍ，２Ｈ），７．１３−７．１９（ｍ，１Ｈ），７．２４−７．３６（ｍ，４Ｈ），８．１９（ｂｒｓ，３Ｈ），８．２６（ｓ，１Ｈ）。
【０１２３】
参考例２３ ２−［３−（ビフェニル−２−イル）アミノ−３−オキソプロピルチオ］エチルアミン塩酸塩
白色固体；１Ｈ−ＮＭＲ（２５０ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６，ＴＭＳ，ｐｐｍ）：δ ２．４６−２．５２（ｍ，２Ｈ），２．７４（ｍ，４Ｈ），２．９７−３．０４（ｍ，２Ｈ），７．３１−７．４８（ｍ，９Ｈ），８．１４（ｂｒｓ，３Ｈ），９．４５（ｓ，１Ｈ）。
【０１２４】
参考例２４ ２−［３−（２−メチルシクロヘキシル）アミノ−３−オキソプロピルチオ］エチルアミン塩酸塩
白色固体；１Ｈ−ＮＭＲ（２５０ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６，ＴＭＳ，ｐｐｍ）：δ ０．８３（ｄ，Ｊ＝２．５Ｈｚ，３Ｈ），１．００−１．７３（ｍ，９Ｈ），２．３８（ｔ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，２Ｈ），２．７５（ｍ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，４Ｈ），２．９２−２．８０（ｍ，２Ｈ），３．１８−３．２６（ｍ，１Ｈ），７．８５（ｄ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，１Ｈ），８．１９（ｂｒｓ，３Ｈ）。
【０１２５】
参考例２５ ２−［３−（Ｎ−エチル−Ｎ−シクロヘキシル）アミノ−３−オキソプロピルチオ］エチルアミン塩酸塩
褐色油状物；１Ｈ−ＮＭＲ（２５０ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６，ＴＭＳ，ｐｐｍ）：δ １．０１−１．７７（ｍ，１３Ｈ），２．５９−２．８０（ｍ，６Ｈ），２．９５−２．９８（ｍ，２Ｈ），３．１８−３．２８（ｍ，２Ｈ），３．５９ ａｎｄ ４．１３（ｅａｃｈ ｍ，１Ｈ），８．１９（ｂｒｓ，３Ｈ）。
【０１２６】
参考例２６ ２−（３−ヘキシルアミノ−３−オキソプロピルチオ）エチルアミン塩酸塩
白色固体；１Ｈ−ＮＭＲ（２５０ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６，ＴＭＳ，ｐｐｍ）：δ ０．８７（ｄ，Ｊ＝６．２Ｈｚ，３Ｈ），１．２５−１．４１（ｍ，８Ｈ），２．３７（ｔ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，２Ｈ），２．７３（ｍ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，４Ｈ），２．９３−３．０７（ｍ，４Ｈ），８．００（ｔ，Ｊ＝５．０Ｈｚ，１Ｈ），８．１８（ｂｒｓ，３Ｈ）。
【０１２７】
参考例２７ ２−（３−デシルアミノ−３−オキソプロピルチオ）エチルアミン塩酸塩
白色固体；１Ｈ−ＮＭＲ（２５０ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６，ＴＭＳ，ｐｐｍ）：δ ０．８３（ｄ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，３Ｈ），１．２５−１．４１（ｍ，１６Ｈ），２．３７（ｔ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，２Ｈ），２．７３（ｑ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，４Ｈ），２．９３−３．０７（ｍ，４Ｈ），７．９７（ｔ，Ｊ＝５．０Ｈｚ，１Ｈ），８．１０（ｂｒｓ，３Ｈ）。
【０１２８】
参考例２８ ２−［３−オキソ−３−（２−トリフルオロメチルフェニル）アミノプロピルチオ］エチルアミン塩酸塩
褐色固体、潮解性；１Ｈ−ＮＭＲ（２５０ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６，ＴＭＳ，ｐｐｍ）：δ２．６４−２．７０（ｍ，２Ｈ），２．８１（ｍ，４Ｈ），２．９５−３．０４（ｍ，２Ｈ），７．４４−７．５０（ｍ，２Ｈ），７．６６−７．７６（ｍ，２Ｈ），８．０８（ｂｒｓ，３Ｈ），９．７６（ｓ，１Ｈ）。
【０１２９】
参考例２９ ２−［３−オキソ−３−（２，４，６−トリメチルフェニル）アミノプロピルチオ］エチルアミン塩酸塩
白色固体；１Ｈ−ＮＭＲ（２５０ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６，ＴＭＳ，ｐｐｍ）：δ ２．１１（ｓ，６Ｈ），２．１６（ｓ，３Ｈ），２．６４（ｔ，Ｊ＝５．０Ｈｚ，２Ｈ），２．７４（ｍ，４Ｈ），２．９８−３．０４（ｍ，２Ｈ），６．８７（ｓ，２Ｈ），８．０９（ｂｒｓ，３Ｈ），９．３６（ｓ，１Ｈ）。
【０１３０】
参考例３０ ２−［３−オキソ−（３−トリフルオロメチルスルホニルフェニル）アミノプロピルチオ］エチルアミン塩酸塩
白色固体；１Ｈ−ＮＭＲ（２５０ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６，ＴＭＳ，ｐｐｍ）：δ ２．６３−３．０３（ｍ，８Ｈ），７．７９−７．８１（ｍ，２Ｈ），８．１１（ｍ，４Ｈ），８．６１（ｓ，１Ｈ），１１．０（ｓ，１Ｈ）。
【０１３１】
参考例３１ ２−［３−（２−エトキシカルボニル−３−チエニル）アミノ−３−オキソプロピルチオ］エチルアミン塩酸塩
褐色固体；１Ｈ−ＮＭＲ（２５０ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６，ＴＭＳ，ｐｐｍ）：δ １．３１（ｔ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，３Ｈ），２．７−２．８４（ｍ，６Ｈ），２．９５−３．００（ｍ，２Ｈ），４．２８−４．３６（ｍ，２Ｈ），７．９０（ｄ，Ｊ＝５．０Ｈｚ，１Ｈ），７．９４（ｄ，Ｊ＝５．０Ｈｚ，１Ｈ），８．２２（ｂｒｓ，３Ｈ），１０．１（ｓ，１Ｈ）。
【０１３２】
参考例３２ ２−［３−（４−ベンジルオキシフェニル）アミノ−３−オキソプロピルチオ］エチルアミン塩酸塩
褐色固体；１Ｈ−ＮＭＲ（２５０ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６，ＴＭＳ，ｐｐｍ）：δ ２．６３（ｔ，Ｊ＝５．０Ｈｚ，２Ｈ），２．８０−２．８４（ｍ，４Ｈ），２．９８−３．０１（ｍ，２Ｈ），５．０６（ｓ，２Ｈ），６．９５（ｄ，Ｊ＝１０Ｈｚ，２Ｈ），７．３２−７．４５（ｍ，５Ｈ），７．５５（ｄ，Ｊ＝１０Ｈｚ，２Ｈ），８．２０（ｂｒｓ，３Ｈ），１０．１（ｓ，１Ｈ）。
【０１３３】
参考例３３ ２−［３−（４−カルボキシフェニル）アミノ−３−オキソプロピルチオ］エチルアミン塩酸塩
黄色固体；１Ｈ−ＮＭＲ（２５０ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６，ＴＭＳ，ｐｐｍ）：δ ２．６９−２．２８（ｍ，６Ｈ），２．９８−３．０３（ｍ，２Ｈ），７．７３−７．９１（ｍ，４Ｈ），８．１２（ｂｒｓ，３Ｈ），１０．６（ｓ，１Ｈ）。カルボキシル基のプロトンは帰属できなかった。
【０１３４】
参考例３４ ２−［３−（２−カルボキシフェニル）アミノ−３−オキソプロピルチオ］エチルアミン塩酸塩
白色固体；１Ｈ−ＮＭＲ（２５０ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６，ＴＭＳ，ｐｐｍ）：δ ２．７０−２．８６（ｍ，６Ｈ），２．９７−３．０２（ｍ，２Ｈ），７．２０（ｄｄｄ，Ｊ＝２．５，８．０ ａｎｄ ８．０Ｈｚ，１Ｈ），７．６０（ｄｄｄ，Ｊ＝２．５，８．０ ａｎｄ ８．０Ｈｚ，１Ｈ），７．９９（ｄｄ，Ｊ＝２．５ ａｎｄ ８．０Ｈｚ，１Ｈ），８．０９（ｂｒｓ，３Ｈ），８．４７（ｄｄ，Ｊ＝２．５ ａｎｄ ８．０Ｈｚ，１Ｈ），１１．２（ｓ，１Ｈ）。カルボキシル基のプロトンは帰属できなかった。
【０１３５】
参考例３５ ２−［３−（２−エトキシカルボニルフェニル）アミノ−３−オキソプロピルチオ］エチルアミン塩酸塩
白色固体；１Ｈ−ＮＭＲ（２５０ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６，ＴＭＳ，ｐｐｍ）：δ １．３４（ｔ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，３Ｈ），２．７２（ｔ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，２Ｈ），２．６９−２．８９（ｍ，４Ｈ），２．９７−３．０２（ｍ，２Ｈ），４．３２（ｑ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，２Ｈ），７．２１（ｄｄｄ，Ｊ＝２．５，７．５ ａｎｄ ７．５Ｈｚ，１Ｈ），７．６１（ｄｄｄ，Ｊ＝２．５，７．５ ａｎｄ ７．５Ｈｚ，１Ｈ），７．９２（ｄｄ，Ｊ＝２．５ ａｎｄ ７．５Ｈｚ，１Ｈ），８．１７（ｂｒｓ，３Ｈ），８．２３（ｄｄ，Ｊ＝２．５ ａｎｄ ７．５Ｈｚ，１Ｈ），１０．７（ｓ，１Ｈ）。
【０１３６】
参考例３７ ５−（３−フルフリルアミノ−３−オキソプロピルチオ）ペンチルアミン塩酸塩
白色固体、潮解性；１Ｈ−ＮＭＲ（２５０ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６，ＴＭＳ，ｐｐｍ）：δ １．３４−１．６３（ｍ，６Ｈ），２．４０（ｔ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，４Ｈ），２．６７−２．８０（ｍ，４Ｈ），４．２６（ｄ，Ｊ＝５．０Ｈｚ，２Ｈ），６．２５（ｄ，Ｊ＝３．０Ｈｚ，１Ｈ），６．３９（ｄｄ，Ｊ＝０．８ ａｎｄ ３．０Ｈｚ，１Ｈ），７．５７（ｄ，Ｊ＝０．８Ｈｚ，１Ｈ），７．９８（ｂｒｓ，３Ｈ），８．４２（ｔ，Ｊ＝５．０Ｈｚ，１Ｈ）。
【０１３７】
参考例３８ ２−［３−（３−メチルチオフェニル）アミノ−３−オキソプロピルチオ］エチルアミン塩酸塩
褐色固体；１Ｈ−ＮＭＲ（２５０ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６，ＴＭＳ，ｐｐｍ）：δ ２．４５（ｓ，３Ｈ），２．６９（ｔ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，２Ｈ），２．８２（ｍ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，４Ｈ），２．９７−３．０５（ｍ，２Ｈ），６．９３（ｄ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，１Ｈ），７．２４（ｔ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，１Ｈ），７．３９（ｄ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，１Ｈ），７．６８（ｓ，１Ｈ），８．１２（ｂｒｓ，３Ｈ），１０．３（ｓ，１Ｈ）。
【０１３８】
参考例３９ ２−［３−（５−メチルフルフリル）アミノ−３−オキソプロピルチオ］エチルアミン塩酸塩
褐色油状物；１Ｈ−ＮＭＲ（２５０ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６，ＴＭＳ，ｐｐｍ）：δ ２．２３（ｓ，３Ｈ），２．４３（ｔ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，２Ｈ），２．７５（ｔ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，４Ｈ），２．９６（ｍ，２Ｈ），４．２０（ｄ，Ｊ＝５．０Ｈｚ，２Ｈ），５．９８（ｄ，Ｊ＝２．５Ｈｚ，１Ｈ），６．１１（ｄ，Ｊ＝２．５Ｈｚ，１Ｈ），８．１１（ｂｒｓ，３Ｈ），８．４２（ｔ，Ｊ＝５．０Ｈｚ，１Ｈ）。
【０１３９】
参考例４０ ２−［３−オキソ−３−（テトラヒドロフルフリルアミノ）プロピルチオ］エチルアミン塩酸塩
褐色油状物；１Ｈ−ＮＭＲ（２５０ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６，ＴＭＳ，ｐｐｍ）：δ １．５０−１．８４（ｍ，４Ｈ），２．４０（ｔ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，２Ｈ），２．７０−２．７８（ｍ，４Ｈ），２．９２−３．００（ｍ，２Ｈ），３．１２（ｄ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，２Ｈ），３．３７−３．６２（ｍ，２Ｈ），３．７６−３．８５（ｍ，１Ｈ），８．１０−８．１５（ｍ，４Ｈ）。
【０１４０】
参考例４１ ２−［３−（４’−フルオロビフェニル−２−イル）アミノ−３−オキソプロピルチオ］エチルアミン塩酸塩
白色固体；１Ｈ−ＮＭＲ（２５０ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６，ＴＭＳ，ｐｐｍ）：δ ２．４６−２．５３（ｍ，２Ｈ），２．７１−２．７８（ｍ，４Ｈ），２．９５−３．０１（ｍ，２Ｈ），７．２３−７．４６（ｍ，８Ｈ），８．０７（ｂｒｓ，３Ｈ），９．４７（ｓ，１Ｈ）。
【０１４１】
参考例４２ ２−［３−オキソ−３−（ピリジン−４−イルメチル）アミノプロピルチオ］エチルアミン塩酸塩
白色固体；１Ｈ−ＮＭＲ（２５０ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６，ＴＭＳ，ｐｐｍ）：δ ２．５１−２．６０（ｍ，２Ｈ），２．８０（ｔ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，４Ｈ），２．９４−３．０２（ｍ，２Ｈ），４．５７（ｄ，Ｊ＝５．０Ｈｚ，２Ｈ），７．９７（ｄ，Ｊ＝６．５Ｈｚ，２Ｈ），８．２７（ｂｒｓ，３Ｈ），８．８８（ｄ，Ｊ＝６．５Ｈｚ，２Ｈ），９．１３（ｔ，Ｊ＝５．０Ｈｚ，１Ｈ）。
【０１４２】
参考例４３ ２−［３−オキソ−３−（２−フェノキシフェニル）アミノ−３−オキソプロピルチオ］エチルアミン塩酸塩
白色固体；１Ｈ−ＮＭＲ（２５０ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６，ＴＭＳ，ｐｐｍ）：δ ２．６１−２．８３（ｍ，６Ｈ），２．９５（ｍ，２Ｈ），６．８９−６．９２（ｍ，１Ｈ），６．９１−７．００（ｍ，２Ｈ），７．０８−７．１６（ｍ，３Ｈ），７．３６−７．４２（ｍ，２Ｈ），７．９６（ｄｄ，Ｊ＝２．０ ａｎｄ ４．８Ｈｚ，１Ｈ），８．１７（ｂｒｓ，３Ｈ），９．６０（ｓ，１Ｈ）。
【０１４３】
参考例４４ ２−［３−オキソ−３−（ピリジン−２−イルメチル）アミノプロピルチオ］エチルアミン塩酸塩
黄色固体；１Ｈ−ＮＭＲ（２５０ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６，ＴＭＳ，ｐｐｍ）：δ ２．５８（ｔ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，２Ｈ），２．７９（ｔ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，４Ｈ），２．９４−３．０１（ｍ，２Ｈ），４．６８（ｄ，Ｊ＝５．０Ｈｚ，２Ｈ），７．９４（ｄ，Ｊ＝５．０Ｈｚ，１Ｈ），８．２１（ｂｒｓ，３Ｈ），８．５４−８．５５（ｍ，１Ｈ），８．３２（ｄ，Ｊ＝５．０Ｈｚ，１Ｈ），９．１０（ｄ，Ｊ＝５．０Ｈｚ，２Ｈ）。
【０１４４】
参考例４５ ２−［３−オキソ−３−（２−チエニル）アミノプロピルチオ］エチルアミン塩酸塩
白色固体；１Ｈ−ＮＭＲ（２５０ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６，ＴＭＳ，ｐｐｍ）：δ ２．４４（ｔ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，２Ｈ），２．７６（ｔ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，４Ｈ），２．９１−３．０３（ｍ，２Ｈ），４．４４（ｄ，Ｊ＝５．０Ｈｚ，２Ｈ），６．９４−６．９７（ｍ，２Ｈ），７．３８（ｄｄ，Ｊ＝１．５ ａｎｄ ４．８Ｈｚ，１Ｈ），８．１３（ｂｒｓ，３Ｈ），８．６５（ｂｒｔ，Ｊ＝５．０Ｈｚ，１Ｈ）。
【０１４５】
参考例４６ ２−［３−（１−ナフチル）アミノ−３−オキソプロピルチオ］エチルアミン塩酸塩
白色固体；１Ｈ−ＮＭＲ（２５０ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６，ＴＭＳ，ｐｐｍ）：δ ２．８６−３．０６（ｍ，８Ｈ），７．４７−７．５７（ｍ，３Ｈ），７．６８（ｄ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，１Ｈ），７．７８（ｄ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，１Ｈ），７．９３−７．９６（ｍ，１Ｈ），８．１２−８．１４（ｍ，４Ｈ），１０．１５（ｓ，１Ｈ）。
【０１４６】
参考例４７ ２−［３−（１−カルボキシル−２−フェニルエチル）アミノ−３−オキソプロピルチオ］エチルアミン塩酸塩
褐色油状物；１Ｈ−ＮＭＲ（２５０ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６，ＴＭＳ，ｐｐｍ）：δ ２．３９（ｔ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，２Ｈ），２．６１−２．７０（ｍ，４Ｈ），２．７３−３．０８（ｍ，４Ｈ），４．４４−４．４７（ｍ，１Ｈ），７．１９−７．３３（ｍ，５Ｈ），７．９８（ｂｒｓ，３Ｈ），８．３３（ｄ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，１Ｈ）。カルボキシル基のプロトンは帰属できなかった。
【０１４７】
参考例４８ ２−［３−｛１−（メトキシカルボニル）−２−フェニルエチル｝アミノ−３−オキソプロピルチオ］エチルアミン塩酸塩
褐色油状物；１Ｈ−ＮＭＲ（２５０ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６，ＴＭＳ，ｐｐｍ）：δ ２．４０（ｔ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，２Ｈ），２．６２−２．７５（ｍ，４Ｈ），２．９２−３．０２（ｍ，４Ｈ），３．０６（ｓ，３Ｈ），４．４４−４．５３（ｍ，１Ｈ），７．１９−７．３３（ｍ，５Ｈ），８．０８（ｂｒｓ，３Ｈ），８．５１（ｄ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，１Ｈ）。
【０１４８】
参考例４９ ２−［３−｛（５−メチルフラン−２−イル）メチル｝アミノ−３−オキソペンチルチオ］エチルアミン塩酸塩
無色油状物；１Ｈ−ＮＭＲ（２５０ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６，ＴＭＳ，ｐｐｍ）：δ １．３８−１．６０（ｍ，６Ｈ），２．３６−２．７８（ｍ，８Ｈ），２．３１（ｓ，３Ｈ），４．１９（ｄ，Ｊ＝５．０Ｈｚ，２Ｈ），５．９９（ｓ，１Ｈ），６．１０（ｓ，１Ｈ），８．０３（ｂｒｓ，３Ｈ），８．３８（ｂｒｓ，１Ｈ）。
【０１４９】
参考例５０ ２−［３−（Ｎ−エチル−Ｎ−フルフリル）アミノ−３−オキソプロピルチオ］エチルアミン塩酸塩
無色油状物；１Ｈ−ＮＭＲ（２５０ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６，ＴＭＳ，ｐｐｍ）：δ ０．９４−１．０７（ｍ，３Ｈ），２．６６−２．８０（ｍ，６Ｈ），２．９４−２．９９（ｍ，２Ｈ），３．２６−３．３１（ｍ，２Ｈ），４．５２（ｄ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，２Ｈ），６．３１ ａｎｄ ６．４３（ｅａｃｈ ｄ，Ｊ＝２．５Ｈｚ，１Ｈ），６．４１（ｄ，Ｊ＝２．５Ｈｚ，１Ｈ），７．５８ ａｎｄ ７．５６（ｅａｃｈ ｓ，１Ｈ），８．１２（ｂｒｓ，３Ｈ）。
【０１５０】
参考例５１ ２−［３−（Ｎ，Ｎ−ビスフルフリル）アミノ−３−オキソプロピルチオ］エチルアミン塩酸塩
無色油状物；１Ｈ−ＮＭＲ（２５０ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６，ＴＭＳ，ｐｐｍ）：δ ２．７８−２．８７（ｍ，６Ｈ），２．９４−３．０１（ｍ，２Ｈ），４．５１（ｄ，Ｊ＝９．８Ｈｚ，４Ｈ），６．２９（ｄ，Ｊ＝３．０Ｈｚ，１Ｈ），６．４６（ｄ，Ｊ＝３．０Ｈｚ，１Ｈ），６．３９（ｄｄ，Ｊ＝１．８ ａｎｄ ３．０Ｈｚ，１Ｈ），６．４３（ｄｄ，Ｊ＝１．８ ａｎｄ ３．０Ｈｚ，１Ｈ），７．５７（ｄ，Ｊ＝１．８Ｈｚ，１Ｈ），７．６５（ｄ，Ｊ＝１．８Ｈｚ，１Ｈ），８．１６（ｂｒｓ，３Ｈ）。
【０１５１】
参考例５２ ２−［３−オキソ−３−（キノリン−８−イル）アミノプロピルチオ］エチルアミン塩酸塩
褐色固体；１Ｈ−ＮＭＲ（２５０ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６，ＴＭＳ，ｐｐｍ）：δ ２．８２−３．０４（ｍ，８Ｈ），７．６９−７．８５（ｍ，３Ｈ），８．２３（ｂｒｓ，３Ｈ），８．５４（ｄｄｄ，Ｊ＝１．０，７．５ ａｎｄ ７．５Ｈｚ，１Ｈ），８．６５（ｄ，Ｊ＝１．０ ａｎｄ ７．５Ｈｚ，１Ｈ），９．０４（ｄｄ，Ｊ＝１．０ ａｎｄ ５．０Ｈｚ，１Ｈ），１０．４（ｓ，１Ｈ）。
【０１５２】
参考例５３ ２−［３−（２−ベンジルチオエチル）アミノ−３−オキソプロピルチオ］エチルアミン塩酸塩
白色固体；１Ｈ−ＮＭＲ（２５０ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６，ＴＭＳ，ｐｐｍ）：δ ２．３５−２．５１（ｍ，４Ｈ），２．７０−２．７７（ｍ，４Ｈ），２．９７（ｍ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，２Ｈ），３．２４（ｑ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，２Ｈ），３．７６（ｓ，２Ｈ），７．２１−７．３４（ｍ，５Ｈ），８．０７（ｂｒｓ，３Ｈ），８．２０（ｔ，Ｊ＝５．０Ｈｚ，１Ｈ）。
【０１５３】
参考例５４ ２−［３−（Ｎ，Ｎ−ジベンジルアミノ）−３−オキソプロピルチオ］エチルアミン塩酸塩
無色油状物；１Ｈ−ＮＭＲ（２５０ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６，ＴＭＳ，ｐｐｍ）：δ ２．６９−２．７９（ｍ，６Ｈ），２．９６（ｔ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，２Ｈ），４．５３（ｄ，Ｊ＝５．０Ｈｚ，４Ｈ），７．１９−７．４１（ｍ，１０Ｈ），７．９７（ｂｒｓ，３Ｈ）。
【０１５４】
参考例５６ ２−［３−（Ｎ−ベンジル−Ｎ−フルフリル）アミノ−３−オキソプロピルチオ］エチルアミン塩酸塩
無色油状物；１Ｈ−ＮＭＲ（２５０ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６，ＴＭＳ，ｐｐｍ）：δ ２．６４−３．００（ｍ，８Ｈ），４．５０−４．５３（ｍ，４Ｈ），６．３０−６．４４（ｍ，２Ｈ），７．１７−７．３８（ｍ，５Ｈ），７．５８（ｄｄ，Ｊ＝２．５Ｈｚ，１Ｈ），８．０８（ｂｒｓ，３Ｈ）。
【０１５５】
参考例５７ ２−［３−｛Ｎ−（ビフェニル−２−イル）−Ｎ−フルフリル｝アミノ−３−オキソプロピルチオ］エチルアミン塩酸塩
褐色油状物；１Ｈ−ＮＭＲ（２５０ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６，ＴＭＳ，ｐｐｍ）：δ ２．４３−２．７９（ｍ，８Ｈ），３．７０ ａｎｄ ３．７７（ｅａｃｈ ｓ，１Ｈ），５．０７ ａｎｄ ５．１３（ｅａｃｈ ｓ，１Ｈ），６．１４（ｄｄ，Ｊ＝２．０ ａｎｄ ３．３Ｈｚ，１Ｈ），６．３３（ｄｄ，Ｊ＝２．０ ａｎｄ ３．３Ｈｚ，１Ｈ），７．１１（ｄ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，１Ｈ），７．３０−７．５２（ｍ，９Ｈ），８．０３（ｂｒｓ，３Ｈ）。
【０１５６】
参考例５８ ２−［３−｛Ｎ−フルフリル−Ｎ−（３−メチルチオフェニル）｝アミノ−３−オキソプロピルチオ］エチルアミン塩酸塩
褐色油状物；１Ｈ−ＮＭＲ（２５０ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６，ＴＭＳ，ｐｐｍ）：δ ２．３３−２．３５（ｍ，２Ｈ），２．４５（ｓ，３Ｈ），２．６２−２．７５（ｍ，４Ｈ），２．８９（ｔ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，２Ｈ），４．８５（ｓ，２Ｈ），６．１８（ｄ，Ｊ＝３．０Ｈｚ，１Ｈ），６．３５（ｄｄ，Ｊ＝２．５ ａｎｄ ３．０Ｈｚ，１Ｈ），６．９１（ｄ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，１Ｈ），７．０２（ｓ，１Ｈ），７．２２（ｄ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，１Ｈ），７．３２（ｔ，７．５Ｈｚ，１Ｈ），７．５８（ｄ，Ｊ＝２．５Ｈｚ，１Ｈ），８．３４（ｂｒｓ，３Ｈ）。
【０１５７】
参考例５９ ２−［３−｛Ｎ−フルフリル−Ｎ−（２−フルオロフェニル）｝アミノ−３−オキソプロピルチオ］エチルアミン塩酸塩
褐色油状物；１Ｈ−ＮＭＲ（２５０ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６，ＴＭＳ，ｐｐｍ）：δ ２．１７−２．５１（ｍ，２Ｈ），２．６２−２．９４（ｍ，６Ｈ），４．７０（ｄ，Ｊ＝１５．５Ｈｚ，１Ｈ），４．９５（ｄ，Ｊ＝１５．５Ｈｚ，１Ｈ），６．１５（ｄ，Ｊ＝１．５Ｈｚ，１Ｈ），６．３３（ｄｄ，Ｊ＝１．５ ａｎｄ ３．０Ｈｚ，１Ｈ），７．１６−７．４７（ｍ，４Ｈ），７．５４（ｄ，Ｊ＝１．５Ｈｚ，１Ｈ），８．０６（ｂｒｓ，３Ｈ）。
【０１５８】
参考例６０ ２−［３−｛Ｎ−フルフリル−Ｎ−（４−フルオロフェニル）｝アミノ−３−オキソプロピルチオ］エチルアミン塩酸塩
褐色油状物；１Ｈ−ＮＭＲ（２５０ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６，ＴＭＳ，ｐｐｍ）：δ ２．２９（ｔ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，２Ｈ），２．６０−２．７３（ｍ，４Ｈ），２．９１−２．９６（ｍ，２Ｈ），４．８４（ｓ，２Ｈ），６．１７（ｄ，Ｊ＝３．０Ｈｚ，１Ｈ），６．３５（ｄｄ，Ｊ＝１．８ ａｎｄ ３．０Ｈｚ，１Ｈ），７．２３−７．３０（ｍ，４Ｈ），７．５６（ｄ，Ｊ＝１．８Ｈｚ，１Ｈ），８．０４（ｂｒｓ，３Ｈ）。
【０１５９】
参考例６１ ２−［３−｛Ｎ−フルフリル−Ｎ−（３−フルオロフェニル）｝アミノ−３−オキソプロピルチオ］エチルアミン塩酸塩
褐色油状物；１Ｈ−ＮＭＲ（２５０ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６，ＴＭＳ，ｐｐｍ）：δ ２．３３−２．３９（ｍ，２Ｈ），２．８１−２．９５（ｍ，４Ｈ），３．２０−３．２９（ｍ，２Ｈ），４．８４（ｓ，２Ｈ），６．１３（ｄ，Ｊ＝２．５Ｈｚ，１Ｈ），６．２６（ｄｄ，Ｊ＝１．０ ａｎｄ ２．５Ｈｚ，１Ｈ），６．８０−６．９１（ｍ，２Ｈ），７．０３−７．０９（ｍ，１Ｈ），７．２７−７．７６（ｍ，２Ｈ），８．４５（ｂｒｓ，３Ｈ）。
【０１６０】
参考例６２ ２−［３−｛Ｎ−（４−エチルフェニル）−Ｎ−（１，１，１−トリフルオロイソプロピル）｝アミノ−３−オキソプロピルチオ］エチルアミン塩酸塩
黄色油状物；１Ｈ−ＮＭＲ（２５０ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６，ＴＭＳ，ｐｐｍ）：δ １．１４−１．２６（ｍ，６Ｈ），２．１６（ｔ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，２Ｈ），２．６０−２．７３（ｍ，６Ｈ），２．８７（ｔ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，２Ｈ），５．４７−５．５９（ｍ，１Ｈ），７．１２（ｄ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，１Ｈ），７．２５（ｄ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，１Ｈ），７．３４（ｄ，Ｊ＝８．５Ｈｚ，２Ｈ），８．３４（ｂｒｓ，３Ｈ）。
【０１６１】
参考例６３ ２−［３−オキソ−３−｛２−（ピリジン−３−イル）フェニル｝アミノプロピルチオ］エチルアミン塩酸塩
黄色固体、潮解性；１Ｈ−ＮＭＲ（２５０ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６，ＴＭＳ，ｐｐｍ）：δ ２．５６−２．６６（ｍ，２Ｈ），２．６９−２．８０（ｍ，４Ｈ），２．９１−２．９６（ｍ，２Ｈ），７．４０（ｔ，Ｊ＝５．０Ｈｚ，１Ｈ），７．６０（ｔ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，１Ｈ），７．６７−７．７４（ｍ，２Ｈ），７．９０（ｔ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，１Ｈ），８．０４（ｄ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，１Ｈ），８．２７（ｂｒｓ，３Ｈ），８．４９（ｔ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，１Ｈ），８．８８（ｄ，Ｊ＝５．０Ｈｚ，１Ｈ），１０．８（ｓ，１Ｈ）。
【０１６２】
参考例６４ ２−［３−｛Ｎ−フルフリル−Ｎ−４−トルイル｝アミノ−３−オキソプロピルチオ］エチルアミン塩酸塩
褐色油状物；１Ｈ−ＮＭＲ（２５０ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６，ＴＭＳ，ｐｐｍ）：δ ２．２８（ｔ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，２Ｈ），２．３１（ｓ，３Ｈ），２．６２−２．７３（ｍ，４Ｈ），２．８９−２．９１（ｍ，２Ｈ），４．８３（ｓ，２Ｈ），６．１５（ｄ，Ｊ＝２．８Ｈｚ，１Ｈ），６．３４（ｄｄ，Ｊ＝２．０ ａｎｄ ２．８Ｈｚ，１Ｈ），７．０４（ｄ，Ｊ＝８．２Ｈｚ，２Ｈ），７．２２（ｄ，Ｊ＝８．２Ｈｚ，２Ｈ），７．５６（ｄ，Ｊ＝２．０Ｈｚ，１Ｈ），８．１２（ｂｒｓ，３Ｈ）。
【０１６３】
参考例６６ ２−［３−（３’，４’−ジクロロビフェニル−２−イル）アミノ−３−オキソプロピルチオ］エチルアミン塩酸塩
無色油状物；１Ｈ−ＮＭＲ（２５０ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６，ＴＭＳ，ｐｐｍ）：δ ２．４７−２．５２（ｍ，２Ｈ），２．７１−２．７７（ｍ，４Ｈ），２．９１−２．９９（ｍ，２Ｈ），７．３０−７．４１（ｍ，５Ｈ），７．６２（ｄ，Ｊ＝２．０Ｈｚ，１Ｈ），７．６８（ｄ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，１Ｈ），８．０３（ｂｒｓ，３Ｈ），９．５９（ｓ，１Ｈ）。
【０１６４】
参考例６７ ２−［３−（２’−メトキシビフェニル−２−イル）アミノ−３−オキソプロピルチオ］エチルアミン塩酸塩
無色油状物；１Ｈ−ＮＭＲ（２５０ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６，ＴＭＳ，ｐｐｍ）：δ ２．４３（ｔ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，２Ｈ），２．６５−２．７５（ｍ，４Ｈ），２．９１−２．９９（ｍ，２Ｈ），３．７２（ｓ，３Ｈ），７．０２−７．２３（ｍ，５Ｈ），７．３２−７．３９（ｍ，２Ｈ），７．５７（ｄ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，１Ｈ），８．０８（ｂｒｓ，３Ｈ），８．８５（ｓ，１Ｈ）。
【０１６５】
参考例６８ ２−［３−（４’−ｔｅｒｔ−ブチル−ビフェニル−２−イル）アミノ−３−オキソプロピルチオ］エチルアミン塩酸塩
白色固体、潮解性；１Ｈ−ＮＭＲ（２５０ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６，ＴＭＳ，ｐｐｍ）：δ １．３３（ｓ，９Ｈ），２．４８−２．５３（ｍ，２Ｈ），２．７２−２．７６（ｍ，４Ｈ），２．９２−３．０１（ｍ，２Ｈ），７．３２−７．４８（ｍ，８Ｈ），８．１０（ｂｒｓ，３Ｈ），９．４３（ｓ，１Ｈ）。
【０１６６】
参考例６９ ２−［３−｛２−（１−ナフチル）フェニル｝アミノ−３−オキソプロピルチオ］エチルアミン塩酸塩
褐色油状物；潮解性；１Ｈ−ＮＭＲ（２５０ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６，ＴＭＳ，ｐｐｍ）：δ ２．１８−２．５１（ｍ，４Ｈ），２．６０（ｔ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，２Ｈ），２．８３−２．８８（ｍ，２Ｈ），７．３３−７．４８（ｍ，９Ｈ），８．２０（ｍ，５Ｈ），９．４３（ｍ，１Ｈ）。
【０１６７】
参考例７１ ２−［３−｛２−（４−フルオロベンジルチオ）エチルアミノ｝−３−オキソプロピルチオ］エチルアミン塩酸塩
白色固体；１Ｈ−ＮＭＲ（２５０ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６，ＴＭＳ，ｐｐｍ）：δ ２．３６−２．５１（ｍ，４Ｈ），２．７１−２．７８（ｍ，４Ｈ），２．９４−２．９８（ｍ，２Ｈ），３．１９（ｍ，２Ｈ），３．７６（ｓ，２Ｈ），７．１１−７．１８（ｍ，２Ｈ），７．３５−７．４０（ｍ，２Ｈ），８．０９（ｂｒｓ，３Ｈ），８．１９（ｂｒｔ，１Ｈ）。
【０１６８】
参考例７２ ２−［３−｛２−（３−フルオロベンジルチオ）エチルアミノ｝３−オキソプロピルチオ］エチルアミン塩酸塩
白色固体；１Ｈ−ＮＭＲ（２５０ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６，ＴＭＳ，ｐｐｍ）：δ ２．３６−２．５３（ｍ，４Ｈ），２．７０−２．７９（ｍ，４Ｈ），２．９２−２．９７（ｍ，２Ｈ），３．１９−３．２７（ｍ，２Ｈ），３．７８（ｓ，２Ｈ），７．０３−７．１２（ｍ，１Ｈ），７．１６−７．２０（ｍ，２Ｈ），７．３３−７．４１（ｍ，１Ｈ），８．２０（ｍ，４Ｈ）。
【０１６９】
参考例７３ ２−［３−｛２−（２，４−ジクロロベンジルチオ）エチルアミノ｝−３−オキソプロピルチオ］エチルアミン塩酸塩
白色固体；１Ｈ−ＮＭＲ（２５０ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６，ＴＭＳ，ｐｐｍ）：δ ２．３９（ｔ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，２Ｈ），２．４９−２．５４（ｍ，２Ｈ），２．７１−２．７９（ｍ，４Ｈ），２．９２−３．００（ｍ，２Ｈ），３．２１−３．２８（ｍ，２Ｈ），３．８３（ｓ，２Ｈ），７．３８−７．５３（ｍ，２Ｈ），７．６１（ｄ，Ｊ＝２．０Ｈｚ，１Ｈ），８．２０（ｂｒｓ，３Ｈ），８．２７（ｂｒｔ，Ｊ＝５．０Ｈｚ，１Ｈ）。
【０１７０】
参考例７４ ２−［３−オキソ−３−（ターフェニル２−イル）アミノプロピルチオ］エチルアミン塩酸塩
白色固体；潮解性；１Ｈ−ＮＭＲ（２５０ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６，ＴＭＳ，ｐｐｍ）：δ ２．５２−２．５６（ｍ，２Ｈ），２．７０−２．８０（ｍ，４Ｈ），２．９５−３．０１（ｍ，２Ｈ），７．３０−７．４８（ｍ，９Ｈ），７．７２−７．７５（ｍ，４Ｈ），８．２０（ｂｒｓ，３Ｈ），９．５０（ｍ，１Ｈ）。
【０１７１】
参考例７５ ２−［３−（２−（２−ナフチル）フェニル）アミノ−３−オキソプロピルチオ］エチルアミン塩酸塩
白色固体；１Ｈ−ＮＭＲ（２５０ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６，ＴＭＳ，ｐｐｍ）：δ ２．４５−２．５２（ｍ，２Ｈ），２．７０−２．７５（ｍ，４Ｈ），２．９１−２．９９（ｍ，２Ｈ），７．３２−７．５８（ｍ，７Ｈ），７．９６−８．０４（ｍ，７Ｈ），９．４７（ｓ，１Ｈ）。
【０１７２】
参考例７６ ２−［３−｛２−（シクロペンチルチオ）エチルアミノ｝−３−オキソプロピルチオ］エチルアミン塩酸塩
白色固体；１Ｈ−ＮＭＲ（２５０ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６，ＴＭＳ，ｐｐｍ）：δ １．５７−１．９８（ｍ，６Ｈ），２．３５−２．３９（ｍ，２Ｈ），２．５０（ｔ，Ｊ＝２．５Ｈｚ，２Ｈ），２．５３−２．６０（ｍ，２Ｈ），２．７０−２．７９（ｍ，４Ｈ），２．９５（ｍ，２Ｈ），３．１５−３．３８（ｍ，３Ｈ），８．１３（ｂｒｓ，３Ｈ），８．２２（ｔ，Ｊ＝５．０Ｈｚ，１Ｈ）。
【０１７３】
参考例７７ ２−［３−オキソ−３−｛２−（２−プロピレンチオ）エチルアミノ｝プロピルチオ］エチルアミン塩酸塩
白色固体；１Ｈ−ＮＭＲ（２５０ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６，ＴＭＳ，ｐｐｍ）：δ ２．３９（ｔ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，２Ｈ），２．４６−２．５２（ｍ，２Ｈ），２．７０−２．７９（ｍ，４Ｈ），２．９３−３．００（ｍ，２Ｈ），３．１６−３．２６（ｍ，４Ｈ），５．０７−５．１８（ｍ，２Ｈ），５．７１−５．８１（ｍ，１Ｈ），８．１９−８．２０（ｍ，４Ｈ）。
【０１７４】
参考例７９ ２−（３−オキソ−３−フェニルアミノプロピルチオ）エチルアミン塩酸塩
白色固体；１Ｈ−ＮＭＲ（２５０ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６，ＤＭＳＯ，ｐｐｍ）：δ ２．５８−２．７０（ｍ，２Ｈ），２．７２−２．９０（ｍ，４Ｈ），２．９１−３．１２（ｍ，２Ｈ），６．９６−７．１０（ｍ，１Ｈ），７．２０−７．３８（ｍ，３Ｈ），７．５６−７．７０（ｍ，２Ｈ），７．８０−８．２０（ｍ，３Ｈ）。
【０１７５】
参考例８０ ２−｛３−（４−メチルフェニル）アミノ−３−オキソプロピルチオ）エチルアミン塩酸塩
白色固体；１Ｈ−ＮＭＲ（２５０ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６，ＤＭＳＯ，ｐｐｍ）：δ ２．２６（ｓ，３Ｈ），２．６２（ｔ，Ｊ＝７．０Ｈｚ，２Ｈ），２．７６（ｔ，Ｊ＝７．０Ｈｚ，２Ｈ），２．８３（ｔ，Ｊ＝７．０Ｈｚ，２Ｈ），３．０２（ｔ，Ｊ＝７．０Ｈｚ，２Ｈ），７．１１（ｄ，Ｊ＝８．２Ｈｚ，２Ｈ），７．４９（ｄ，Ｊ＝８．２Ｈｚ，２Ｈ），７．８４（ｍ，３Ｈ），９．９６（ｓ，１Ｈ）。
【０１７６】
参考例８１ ２−｛３−（２−メチルフェニル）アミノ−３−オキソプロピルチオ）エチルアミン塩酸塩
白色固体；１Ｈ−ＮＭＲ（２５０ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６，ＤＭＳＯ，ｐｐｍ）：δ ２．２２（ｓ，３Ｈ），２．６８（ｔ，Ｊ＝７．１Ｈｚ，２Ｈ），２．７３−２．９３（ｍ，４Ｈ），３．０２（ｔ，Ｊ＝７．１Ｈｚ，２Ｈ），７．０２−７．２８（ｍ，３Ｈ），７．３８（ｄ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，１Ｈ），７．７２−７．３０（ｍ，３Ｈ），９．４６（ｓ，１Ｈ）。
【０１７７】
参考例８２ ２−｛３−（４−フルオロフェニル）アミノ−３−オキソプロピルチオ）エチルアミン塩酸塩
白色固体；１Ｈ−ＮＭＲ（２５０ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６，ＤＭＳＯ，ｐｐｍ）：δ ２．６４（ｔ，Ｊ＝７．３Ｈｚ，２Ｈ），２．７０−３．１０（ｍ，４Ｈ），２．９０−３．１０（ｍ，２Ｈ），７．０７−７．２５（ｍ，２Ｈ），７．５５−７．７０（ｍ，２Ｈ），７．８０−８．２０（ｍ，３Ｈ），１０．２４（ｂｒｓ，１Ｈ）。
【０１７８】
参考例８３ ２−（３−ベンジルアミノ−３−オキソプロピルチオ）エチルアミン塩酸塩
白色固体；１Ｈ−ＮＭＲ（２５０ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６，ＤＭＳＯ，ｐｐｍ）：δ ２．４８（ｔ，Ｊ＝７．３Ｈｚ，２Ｈ），２．６５−２．８５（ｍ，４Ｈ），２．９０−３．１０（ｍ，２Ｈ），４．２９（ｄ，Ｊ＝５．９Ｈｚ，２Ｈ），７．１６−７．４０（ｍ，５Ｈ），７．８０−８．３０（ｍ，３Ｈ），８．５５（ｂｒｔ，Ｊ＝５．９Ｈｚ，１Ｈ）。
【技術分野】
【０００１】
本発明は、各種タンパク質、特に免疫グロブリンの分析、分離・精製に利用可能なω−（３−アミノ−３−オキソプロピルチオ）アルキルアミノ基を不溶性担体に固定化して得られる吸着剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
近年、医療用タンパク質の需要は拡大しつつあり、該タンパク質の精製を工業的に簡便かつ大規模に実施できる技術の確立が切望されている。一般にタンパク質精製技術には、ゲル透過クロマトグラフィー、イオン交換クロマトグラフィー、疎水性相互作用クロマトグラフィー、逆相クロマトグラフィー、およびアフィニティークロマトグラフィー等のクロマトグラフィー分離技術がある。しかしながら現状、これらの技術で医療用タンパク質の精製を工業的に実施する場合、経済性に乏しく、実用的とは言い難い。また、医療用タンパク質を工業的に製造する過程では多種類のタンパク質が混在しているため、これらの技術単独で目的とするタンパク質を純粋に得ることは困難である。そのため通常はいくつかの技術を複合させた精製プロセスが採用されている（特許文献１）。
【０００３】
近年、医療用タンパク質の一つである免疫グロブリンを精製するためのクロマトグラフィー用吸着剤として、有機化合物を不溶性担体に固定化して得られる吸着剤が注目されている。例えば、スルホン誘導体（特許文献２）、トリアジン誘導体（特許文献３）、メルカプト複素環式化合物（特許文献４）、４−（アルキルチオエチル）ピリジン誘導体（非特許文献１）を不溶性担体上に固定化して得られるタンパク質の分析、分離・精製用吸着剤が開示されている。一方、ω−（３−アミノ−３−オキソプロピルチオ）アルキルアミノ基を不溶性担体に固定化して得られる本発明の吸着剤についての報告例はこれまでない。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００４】
【特許文献１】ＷＯ２００４／０８７７６１号
【特許文献２】米国特許４６９６９８０号公報
【特許文献３】米国特許６１１７９９６号公報
【特許文献４】特許第３８４４４９６号公報
【非特許文献】
【０００５】
【非特許文献１】Ｂｉｏｓｅｐａｒａｔｉｏｎ，９（４），２１１−２２１，２０００
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
本発明が解決しようとする課題は、タンパク質、特に免疫グロブリンの分析、分離・精製に有用な低分子を不溶性担体に固定化して得られる吸着剤を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本発明者は、前記課題を解決すべく鋭意検討を重ねた結果、本発明の下記一般式（１）で示されるω−（３−アミノ−３−オキソプロピルチオ）アルキルアミノ基を不溶性担体に固定化して得られる吸着剤が、タンパク質、特に免疫グロブリンの簡便な分析、分離・精製に有用であることを見出し、本発明を完成するに至った。
【０００８】
すなわち本発明は、一般式（１）
【０００９】
【化１】
【００１０】
（式中、Ｒ１およびＲ２は各々独立に、水素原子；炭素数１から１２のアルキル基；炭素数１から６のアルキル基で置換されていてもよい炭素数３から６のシクロアルキル基；炭素数２から６のハロアルキル基；テトラヒドロフルフリル基；ピリジルメチル基；炭素数３から６のシクロアルキルチオ基で置換されている炭素数１から６のアルキル基；ハロゲン原子で置換されていてもよい炭素数７から１１のアラルキルチオ基で置換されている炭素数１から６のアルキル基；炭素数３から６のアルケニルチオ基で置換されている炭素数１から６のアルキル基；炭素数１から６のアルコキシカルボニル基もしくはカルボキシル基で置換されていてもよい炭素数７から１１のアラルキル基；炭素数１から６のアルキル基で置換されていてもよいフルフリル基；ハロゲン原子、炭素数１から６のアルキル基、炭素数１から６のハロアルキル基、炭素数１から６のアルコキシ基、フェノキシ基、炭素数７から１１のアラルキルオキシ基、炭素数１から６のアルキルチオ基、炭素数１から６のハロアルキルスルホニル基、炭素数１から６のアルコキシカルボニル基、カルボキシル基、ナフチル基およびピリジル基からなる群より選択される１つ以上の基で置換されていてもよいフェニル基；ハロゲン原子、炭素数１から６のアルキル基もしくは炭素数１から６のアルコキシ基で置換されていてもよいビフェニリル基；ナフチル基；炭素数１から６のアルコキシカルボニル基もしくはカルボキシル基で置換されていてもよいチエニル基；チアゾリル基；ベンゾチアゾリル基；キノリル基；またはターフェニル基を表す。Ｒ１とＲ２は結合する窒素原子と一体となって複素環を形成していてもよい。ｎは１から９の整数を表す。）で表されるω−（３−アミノ−３−オキソプロピルチオ）アルキルアミノ基を、不溶性担体に固定化して得られる、タンパク質の分析、分離・精製用吸着剤に関するものである。
【００１１】
その具体例として、活性基を有する不溶性担体と、一般式（１ａ）
【００１２】
【化２】
【００１３】
（式中、Ｒ１およびＲ２は各々独立に、水素原子；炭素数１から１２のアルキル基；炭素数１から６のアルキル基で置換されていてもよい炭素数３から６のシクロアルキル基；炭素数２から６のハロアルキル基；テトラヒドロフルフリル基；ピリジルメチル基；炭素数３から６のシクロアルキルチオ基で置換されている炭素数１から６のアルキル基；ハロゲン原子で置換されていてもよい炭素数７から１１のアラルキルチオ基で置換されている炭素数１から６のアルキル基；炭素数３から６のアルケニルチオ基で置換されている炭素数１から６のアルキル基；炭素数１から６のアルコキシカルボニル基もしくはカルボキシル基で置換されていてもよい炭素数７から１１のアラルキル基；炭素数１から６のアルキル基で置換されていてもよいフルフリル基；ハロゲン原子、炭素数１から６のアルキル基、炭素数１から６のハロアルキル基、炭素数１から６のアルコキシ基、フェノキシ基、炭素数７から１１のアラルキルオキシ基、炭素数１から６のアルキルチオ基、炭素数１から６のハロアルキルスルホニル基、炭素数１から６のアルコキシカルボニル基、カルボキシル基、ナフチル基およびピリジル基からなる群より選択される１つ以上の基で置換されていてもよいフェニル基；ハロゲン原子、炭素数１から６のアルキル基もしくは炭素数１から６のアルコキシ基で置換されていてもよいビフェニリル基；ナフチル基；炭素数１から６のアルコキシカルボニル基もしくはカルボキシル基で置換されていてもよいチエニル基；チアゾリル基；ベンゾチアゾリル基；キノリル基；またはターフェニル基を表す。Ｒ１とＲ２は結合する窒素原子と一体となって複素環を形成していてもよい。ｎは１から９の整数を表す。）で表されるω−（３−アミノ−３−オキソプロピルチオ）アルキルアミン誘導体と反応させて得られる、タンパク質の分析、分離・精製用吸着剤がある。
【００１４】
また本発明は、タンパク質の分析、分離・精製用吸着剤（１）を用いることを特徴とする、タンパク質の分析、分離・精製法に関するものである。
【００１５】
以下、本発明をさらに詳細に説明する。
【００１６】
はじめに本発明のタンパク質の分析、分離・精製用吸着剤（１）およびω−（３−アミノ−３−オキソプロピルチオ）アルキルアミン誘導体（１ａ）における、Ｒ１およびＲ２について説明する。
【００１７】
Ｒ１およびＲ２で表される炭素数１から１２のアルキル基としては、直鎖状または分枝状のいずれであってもよく、メチル基、エチル基、プロピル基、イソプロピル基、ブチル基、イソブチル基、ｓｅｃ−ブチル基、ｔｅｒｔ−ブチル基、ペンチル基、イソアミル基、ネオペンチル基、２−ペンチル基、３−ペンチル基、２−メチルブチル基、ｔｅｒｔ−ペンチル基、ヘキシル基、イソヘキシル基、２−エチルブチル基、４−メチルペンチル基、オクチル基、デシル基、ドデシル基が例示できる。
【００１８】
Ｒ１およびＲ２で表される炭素数１から６のアルキル基で置換されていてもよい炭素数３から６のシクロアルキル基としては、シクロプロピル基、シクロペンチル基、シクロヘキシル基、２−メチルシクロヘキシル基が例示できる。
【００１９】
Ｒ１およびＲ２で表される炭素数２から６のハロアルキル基としては、２，２，２−トリフルオロエチル基、２，２，３，３，３−ペンタオロプロピル基、３，３，３−トリフルオロプロパン−２−イル基が例示できる。
【００２０】
Ｒ１およびＲ２で表されるピリジルメチル基としては、２−ピリジルメチル基、３−ピリジルメチル基、４−ピリジルメチル基が例示できる。
【００２１】
Ｒ１およびＲ２で表される炭素数３から６のシクロアルキルチオ基で置換されている炭素数１から６のアルキル基としては、２−（シクロプロピルチオ）エチル基、３−（シクロプロピルチオ）プロピル基、４−（シクロプロピルチオ）ブチル基、２−（シクロペンチルチオ）エチル基、３−（シクロペンチルチオ）プロピル基、４−（シクロペンチルチオ）ブチル基、２−（シクロヘキシルチオ）エチル基、３−（シクロヘキシルチオ）プロピル基、４−（シクロヘキシルチオ）ブチル基が例示できる。
【００２２】
Ｒ１およびＲ２で表されるハロゲン原子で置換されていてもよい炭素数７から１１のアラルキルチオ基で置換されている炭素数１から６のアルキル基としては、２−（ベンジルチオ）エチル基、３−（ベンジルチオ）プロピル基、４−（ベンジルチオ）ブチル基、２−（３−フルオロベンジルチオ）エチル基、２−（４−フルオロベンジルチオ）エチル、２−（２，４−ジクロロベンジルチオ）エチル基が例示できる。
【００２３】
Ｒ１およびＲ２で表される炭素数３から６のアルケニルチオ基で置換されている炭素数１から６のアルキル基としては、２−（プロピレンチオ）エチル基、３−（プロピレンチオ）プロピル基、４−（プロピレンチオ）チオブチル基が例示できる。
【００２４】
Ｒ１およびＲ２で表される炭素数１から６のアルコキシカルボニル基もしくはカルボキシル基で置換されていてもよい炭素数７から１１のアラルキル基としては、ベンジル基、１−フェネチル基、２−フェネチル基、１−カルボキシ−２−フェニルエチル基、１―メトキシカルボニル−２−フェニルエチル基が例示できる。
【００２５】
Ｒ１およびＲ２で表される炭素数１から６のアルキル基で置換されていてもよいフルフリル基としては、フルフリル基、５−メチルフルフリル基、５−エチルフルフリル基、５−ヘキシルフルフリル基、３−メチルフルフリル基、４−メチルフルフリル基が例示できる。
【００２６】
Ｒ１およびＲ２で表されるハロゲン原子、炭素数１から６のアルキル基、炭素数１から６のハロアルキル基、炭素数１から６のアルコキシ基、フェノキシ基、炭素数７から１１のアラルキルオキシ基、炭素数１から６のアルキルチオ基、炭素数１から６のハロアルキルスルホニル基、炭素数１から６のアルコキシカルボニル基、カルボキシル基、ナフチル基およびピリジル基からなる群より選択される１つ以上の基で置換されていてもよいフェニル基としては、フェニル基、２−フルオロフェニル基、３−フルオロフェニル基、４−フルオロフェニル基、２，４−ジフルオロフェニル基、３，５−ジフルオロフェニル基、２−クロロフェニル基、３−クロロフェニル基、４−クロロフェニル基、２，４−ジクロロフェニル基、３，５−ジクロロフェニル基、２−ブロモフェニル基、４−ブロモフェニル基、４−ヨードフェニル基、３−クロロ−２，４−ジフルオロフェニル基、２，４，５−トリクロロフェニル基、２，４−ジクロロ−３−メチルフェニル基、２，４−ジクロロ−５−メトキシフェニル基、２，４−ジクロロ−５−イソプロピルオキシフェニル基、２−フルオロ−４−クロロ−５−メトキシフェニル基、２−フルオロ−４−クロロ−５−イソプロピルオキシフェニル基、２−フルオロ−４−（トリフルオロメチル）フェニル基、２−クロロ−４−（トリフルオロメチル）フェニル基、２−クロロ−５−（トリフルオロメチル）フェニル基、４−フルオロ−３−フェノキシフェニル基、２−メチルフェニル基、３−メチルフェニル基、４−メチルフェニル基、２，４−ジメチルフェニル基、２，４，６−トリメチルフェニル基、４−エチルフェニル基、４−イソプロピルフェニル基、２−ｔｅｒｔ−ブチルフェニル基、３−ｔｅｒｔ−ブチルフェニル基、４−ｔｅｒｔ−ブチルフェニル基、２−（トリフルオロメチル）フェニル基、３−（トリフルオロメチル）フェニル基、４−（トリフルオロメチル）フェニル基、２，４−ビス（トリフルオロメチル）フェニル基、３，５−ビス（トリフルオロメチル）フェニル基、２−メトキシフェニル基、３−メトキシフェニル基、４−メトキシフェニル基、３，４−ジメトキシフェニル基、２−エトキシフェニル基、３−エトキシフェニル基、４−エトキシフェニル基、４−イソプロピルオキシフェニル基、４−ｔｅｒｔ−ブチルオキシフェニル基、２−トリフルオロメトキシフェニル基、３−トリフルオロメトキシフェニル基、４−トリフルオロメトキシフェニル基、２−フェノキシフェニル基、３−フェノキシフェニル基、４−フェノキシフェニル基、２−ベンジルオキシフェニル基、３−ベンジルオキシフェニル基、４−ベンジルオキシフェニル基、２−メチルチオフェニル基、３−メチルチオフェニル基、４−メチルチオフェニル基、２−（トリフルオロメチル）スルホニルフェニル基、３−（トリフルオロメチル）スルホニルフェニル基、４−（トリフルオロメチル）スルホニルフェニル基、２−メトキシカルボニルフェニル基、３−メトキシカルボニルフェニル基、４−メトキシカルボニルフェニル基、２−エトキシカルボニルフェニル基、４−エトキシカルボニルフェニル基、２−カルボキシフェニル基、４−カルボキシフェニル基、２−（１−ナフチル）フェニル基、２−（２−ナフチル）フェニル基、２−（３−ピリジル）フェニル基が例示できる。
【００２７】
Ｒ１およびＲ２で表されるハロゲン原子、炭素数１から６のアルキル基もしくは炭素数１から６のアルコキシ基で置換されていてもよいビフェニリル基としては、２−ビフェニル基、３−ビフェニル基、４−ビフェニル基、４’−フルオロビフェニル−２−イル基、３’，４’−ジクロロビフェニル−２−イル基、４’−メチルビフェニル−２−イル基、４’−ｔｅｒｔ−ブチルビフェニル−２−イル基、２’−メトキシビフェニル−２−イル基、４’−メトキシビフェニル−２−イル基が例示できる。
【００２８】
Ｒ１およびＲ２で表されるナフチル基としては、１−ナフチル基、２−ナフチル基が例示できる。
【００２９】
Ｒ１およびＲ２で表される炭素数１から６のアルコキシカルボニル基もしくはカルボキシル基で置換されていてもよいチエニル基としては、２−チエニル基、３−チエニル基、３−メトキシカルボニル−２−チエニル基、３−エトキシカルボニル−２−チエニル基、２−メトキシカルボニル−３−チエニル基、２−エトキシカルボニル−３−チエニル基、３−カルボキシ−２−チエニル基、２−カルボキシ−３−チエニル基が例示できる。
【００３０】
Ｒ１およびＲ２で表されるチアゾリル基としては、２−チアゾリル基、４−チアゾリル基、５−チアゾリル基が例示できる。
【００３１】
Ｒ１およびＲ２で表されるベンゾチアゾリル基としては、２−ベンゾチアゾリル基、４−ベンゾチアゾリル基、５−ベンゾチアゾリル基が例示できる。
【００３２】
Ｒ１およびＲ２で表されるキノリル基としては、キノリン−２−イル基、キノリン−３−イル基、キノリン−４−イル基、キノリン−５−イル基、キノリン−６−イル基、キノリン−７−イル基、キノリン−８−イル基が例示できる。
【００３３】
Ｒ１およびＲ２で表されるターフェニル基としては、ターフェニル−２−イル基が例示できる。
【００３４】
Ｒ１とＲ２が結合する窒素原子と一体となって複素環を形成する置換基としては、モルホリノ基、チオモルホリノ基が例示できる。
【００３５】
特にタンパク質の分析、分離・精製の性能がよい点で、Ｒ１およびＲ２は水素原子；ベンジル基；フルフリル基；ハロゲン原子、メチルチオ基およびピリジル基からなる群より選択される基で置換されていてもよいフェニル基；ハロゲン原子で置換されていてもよいビフェニル基；ナフチル基；カルボキシル基で置換していてもよいチエニル基；またはキノリル基が好ましい。
【００３６】
本発明のタンパク質の分析、分離・精製用吸着剤（１）の製造原料であるω−（３−アミノ−３−オキソプロピルチオ）アルキルアミン誘導体（１ａ）は、市販品として入手可能な化合物や、既知の方法で合成できる化合物を用いることができる。また、必要に応じて、これらの塩酸塩を用いてもよい。
【００３７】
本発明のタンパク質の分析、分離・精製用吸着剤（１）の製造原料である不溶性担体に特に限定はなく、アガロース、アルギネート、カラゲナン、キチン、セルロース、デキストリン、デキストラン、デンプン等の多糖類、ポリビニルアルコール、ポリメタクリレート、ポリ（２−ヒドロキシエチルメタクリレート）、ポリウレタン等の合成高分子、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）センサーチップが例示できる。中でも、タンパク質の分析、分離・精製の性能が良い点で、ポリメタクリレート、アガロース、セルロース、キトサンまたは表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）センサーチップが不溶性担体として好ましい。不溶性担体として用いるポリメタクリレートとしてはトヨパール（商品名、東ソー製）が、アガロースとしてはＳｅｐｈａｒｏｓｅ ６ Ｆａｓｔ Ｆｌｏｗ（商品名、ＧＥヘルスケア製）が、セルロースとしてはセルファインＧＣＬ−２０００（商品名、ＪＮＣ製）が、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）センサーチップとしてはセンサーチップＣＭ５（商品名、ビアコア製）が、それぞれ例示できる。不溶性担体の形状、表面構造、細孔構造、重合度については特に限定はないが、オープンカラムに充填して使用する態様では、微粒子状とすると、分析、分離・精製性能が良い点で好ましい。また、粒子径を１から１０００μｍの範囲とすると、圧力損失を抑えつつタンパク質の吸着量を上げることができるため好ましい。
【００３８】
前記不溶性担体を、本発明のタンパク質の分析、分離・精製用吸着剤（１）の製造原料として用いる際は、該不溶性担体表面にあらかじめ活性基を導入する。導入する活性基としては、固定化効率がよい点で、スクシンイミドオキシカルボニル基、カルボキシル基、ホルミル基、２，２，２−トリフルオロエチルスルホニルオキシ基、エポキシ基が好ましい。不溶性担体（ｇｅｌ）表面に活性基を結合させる方法については特に限定はなく、例えば、文献：アフィニティークロマトグラフィー（東京化学同人、１９９１）に記載の方法に準じて実施することができる。なお、導入する活性基の量を１０μｍｏｌ／ｍＬ（ｇｅｌ）以上とすると、ω−（３−アミノ−３−オキソプロピルチオ）アルキルアミン誘導体（１ａ）の固定化量を多くできる点で好ましい。一方、ＨｉＴｒａｐ ＮＨＳ−ａｃｔｉｖａｔｅｄ ＨＰ（商品名、ＧＥヘルスケア製）、エポキシトヨパール（商品名、東ソー製）、ホルミルトヨパール（商品名、東ソー製）、トレシルトヨパール（商品名、東ソー製）、カルボキシトヨパール（商品名、東ソー製）、活性化キトパールＫ−６６（商品名、富士紡ホールディングス製）、ＢＩＯＡＣＴ ＥＰＯ（商品名、昭和電工製）、ＰＯＲＯＳ ＥＰ（商品名、ライフテクノロジーズ製）、セルファインホルミル（商品名、ＪＮＣ製）、Ｐｒｏｆｉｎｉｔｙ Ｅｐｏｘｉｄｅ（商品名、バイオラッド製）、Ｍ．Ｓ．ＧＥＬ Ｅｐｏｘｙ−Ｄ−５０−１０００ＡＷ（商品名、ＡＧＣエスアイテック製）等の市販の活性基を有する不溶性担体を、そのまま本発明のタンパク質の分析、分離・精製用吸着剤（１）の製造原料として用いてもよい。
【００３９】
活性基を有する不溶性担体にω−（３−アミノ−３−オキソプロピルチオ）アルキルアミン誘導体（１ａ）を固定化する方法については特に限定はなく、例えば、文献：アフィニティークロマトグラフィー（東京化学同人、１９９１）に記載の方法に準じて実施することができる。
【００４０】
次に、本発明のタンパク質の分析、分離・精製用吸着剤（１）を用いて、タンパク質の分析を行なう方法について説明する。
【００４１】
ω−（３−アミノ−３−オキソプロピルチオ）アルキルアミン誘導体（１ａ）とタンパク質との親和性は、例えば該誘導体をカルボキシルメチルデキストランに固定化した態様で、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）解析装置を用いて測定することができる。該ＳＰＲ解析装置としてはＢＩＡＣＯＲＥ２０００（ビアコア製）が例示できる。親和性の指標としては、結合速度定数ｋａ、解離速度定数ｋｄ、解離定数Ｋｄ＝ｋｄ／ｋａ、一定解離時間後のタンパク質結合量ＲＵ、またはこれらを組み合わせて用いることができる。
【００４２】
次に、本発明のタンパク質の分析、分離・精製用吸着剤（１）を用いてタンパク質を分析、分離・精製する方法について説明する。
【００４３】
本発明のタンパク質の分析、分離・精製用吸着剤（１）を用いる方法で分析、分離・精製することができるタンパク質としては、血漿タンパク質成分（例えば血漿中の免疫グロブリン）、血清アルブミン、血液凝固因子、ラクトアルブミンやラクトフェリン等の乳タンパク質成分、天然には微量しか存在しないペプチドホルモン、インターフェロン、インターロイキン、成長因子、成長抑制因子、ワクチンが例示できる。また、人工的に設計された遺伝子組換えタンパク質も含む。中でも免疫グロブリンが、本発明のタンパク質の分析、分離・精製用吸着剤（１）の特徴を活かせる点で好ましい。なお、ここでいう免疫グロブリンは、その類縁体、フラグメントまたは融合体を含んでもよい。ここでいう類縁体とは、免疫グロブリンの構造や機能が少なくとも部分的に保持された、天然もしくは人工的に作られたタンパク質またはタンパク質コンジュゲートを指し、フラグメントとは、酵素的な処理または遺伝子工学的な設計によって作製された、免疫グロブリンの部分構造を有したタンパク質を指し、免疫グロブリンの融合体とは各種サイトカインやサイトカイン受容体などの生物活性を有したタンパク質の機能部分を、免疫グロブリンの全部または一部と遺伝子工学的に融合させて作製したものを指す。
【００４４】
本発明のタンパク質の分析、分離・精製用吸着剤（１）をオープンカラムに充填し、緩衝液、金属塩溶液、アミノ酸溶液、アルコール溶液等の溶離液を通液することで、タンパク質の分析、分離・精製を行なうことができる。本発明のタンパク質の分析、分離・精製用吸着剤（１）を充填したカラムの溶離液として用いる緩衝液としては、リン酸緩衝液、クエン酸緩衝液、Ｔｒｉｓ、ＰＩＰＥＳ、ＡＣＥＳ、Ｃｈｏｌａｍｉｎｅ、ＢＥＳ、ＭＯＰＳ、ＴＥＳ、ＨＥＰＥＳを例示できる。溶離液として用いる金属塩溶液に含まれる金属塩としては、硫酸ナトリウム、硫酸カリウム、硫酸リチウム、硫酸マグネシウム、硫酸アンモニウム、クエン酸ナトリウム、クエン酸カリウム、塩化ナトリウム、塩化カリウムを例示できる。溶離液として用いるアミノ酸溶液に含まれるアミノ酸としては、グリシン、アルギニン、ベータアラニン、ガンマアミノ酪酸を例示できる。溶離液として用いるアルコール溶液に含まれるアルコールとしては、エタノール、イソプロピルアルコール、グリセロール、エチレングリコールを例示できる。なお、前述した溶液を混合した溶液も溶離液として用いることもできる。溶離液のｐＨは３から１１の範囲内であれば、目的とするタンパク質を分析、分離・精製できる。本発明のタンパク質の分析、分離・精製用吸着剤（１）を用いて免疫グロブリン、またはこの類縁体、フラグメントもしくは融合体を分離および精製する場合、例えば、ｐＨ３から８に調製した塩化ナトリウムを含むリン酸緩衝液を通液するクロマトグラフィーを実施すればよい。
【００４５】
本発明のタンパク質の分析、分離・精製用吸着剤（１）は、水酸化ナトリウム水溶液、水酸化カリウム水溶液等のアルカリ性水溶液、塩酸、硫酸、硝酸、リン酸等の無機酸の酸性水溶液、塩酸グアニジン水溶液、尿素水溶液等のタンパク変性剤水溶液、アルギニンやヒスチジン等のアミノ酸を含んだ水溶液、ドデシル硫酸ナトリウム、Ｔｗｅｅｎ（商品名）等の界面活性剤水溶液、メタノール、エタノール、イソプロパノール、グリセロール、エチレングリコール等のアルコール、またはこれら溶液を混合した溶液を用いて洗浄することによって、初期状態に復帰させることができ、繰り返し使用することができる。
【発明の効果】
【００４６】
本発明の、ω−（３−アミノ−３−オキソプロピルチオ）アルキルアミノ基を不溶性担体に固定化して得られる、タンパク質の分析、分離・精製用吸着剤（１）は、タンパク質、特に免疫グロブリンの分析、分離・精製に使用すると、耐久性に富む選択的な吸着剤となるため、医療用タンパク質、特に免疫グロブリンの工業的な精製において極めて有用である。
【図面の簡単な説明】
【００４７】
【図１】参考例８に記載のω−（３−アミノ−３−オキソプロピルチオ）アルキルアミン誘導体を固定化したセンサーチップ（実験１６３）と各種タンパク質との親和性解析結果（センサーグラム）。
【図２】参考例２に記載のω−（３−アミノ−３−オキソプロピルチオ）アルキルアミン誘導体を固定化したセンサーチップ（実験１９８）と各種タンパク質との親和性解析結果（センサーグラム）。
【図３】参考例４に記載のω−（３−アミノ−３−オキソプロピルチオ）アルキルアミン誘導体を固定化したセンサーチップ（実験２１２）と各種タンパク質との親和性解析結果（センサーグラム）。
【図４】参考例６に記載のω−（３−アミノ−３−オキソプロピルチオ）アルキルアミン誘導体を固定化したセンサーチップ（実験６７）と各種タンパク質との親和性解析結果（センサーグラム）。
【図５】参考例２、４、６、８、２３、６３に記載のω−（３−アミノ−３−オキソプロピルチオ）アルキルアミン誘導体を固定化したＨｉＴｒａｐカラムを用いた免疫グロブリンの吸脱着を表した図。
【図６】参考例２に記載のω−（３−アミノ−３−オキソプロピルチオ）アルキルアミン誘導体を固定化したＨｉＴｒａｐカラム（実験１９９）を用いた免疫グロブリンの吸脱着を表した図。
【図７】参考例６３に記載のω−（３−アミノ−３−オキソプロピルチオ）アルキルアミン誘導体を固定化したＨｉＴｒａｐカラム（実験１５３）を用いた免疫グロブリンおよびＢＳＡの吸脱着を表した図。
【図８】参考例８に記載のω−（３−アミノ−３−オキソプロピルチオ）アルキルアミン誘導体を固定化したキトサンゲルカラム（実験１６９）を用いた免疫グロブリンの吸脱着を表した図。
【図９】参考例８に記載のω−（３−アミノ−３−オキソプロピルチオ）アルキルアミン誘導体を固定化したセルロースゲルカラム（実験１６８）を用いた免疫グロブリンの吸脱着を表した図。
【図１０】参考例２３に記載のω−（３−アミノ−３−オキソプロピルチオ）アルキルアミン誘導体を固定化したトレシルトヨパールカラム（実験１５９）を用いた免疫グロブリンの吸脱着を表した図。
【図１１】参考例２３に記載のω−（３−アミノ−３−オキソプロピルチオ）アルキルアミン誘導体を固定化したエポキシトヨパールカラム（実験１６０）を用いた免疫グロブリンの吸脱着を表した図。
【発明を実施するための形態】
【００４８】
以下、実施例により本発明をさらに詳細に説明するが、本発明がこれらに限定されるものではない。
【００４９】
実施例１ ω−（３−アミノ−３−オキソプロピルチオ）アルキルアミン誘導体（１ａ）の表面プラズモンセンサーチップへの固定化
（１）後述の参考例に記載のω−（３−アミノ−３−オキソプロピルチオ）アルキルアミン誘導体のうち、参考例２、４、６、８、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５３、５４、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６６、６７、６８、６９、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７９、８０、８１、８２、８３に記載のω−（３−アミノ−３−オキソプロピルチオ）アルキルアミン誘導体（表１から６参照）をそれぞれ４ｍｇ秤量して１ｍＬのＤＭＳＯに溶解後、１ＭのＮａＣｌを含む１０ｍＭホウ酸緩衝液（ｐＨ８．５）で８倍に希釈することで、０．５ｍｇ／ｍＬの試料溶液を調製した。
【００５０】
【化３】
【００５１】
【表１】
【００５２】
【表２】
【００５３】
【表３】
【００５４】
【表４】
【００５５】
【表５】
【００５６】
【表６】
【００５７】
（２）表面プラズモン（ＳＰＲ）センサーチップ（ビアコア製ＣＭ５、以下単にセンサーチップと略記する）を、表面プラズモン（ＳＰＲ）解析装置であるＢＩＡＣＯＲＥ２０００（商品名、ビアコア製）に装備し、アミンカップリングキット（商品名、ビアコア製）を用いてＮ−ヒドロキシスキシニミド（ＮＨＳ）と１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド塩酸塩（ＥＤＣ）の混合溶液をセンサーチップに５分間通液させることによりセンサーチップの活性化を行なった。
（３）（２）で調製したセンサーチップに（１）で調製した試料溶液を５分間通液させることで、誘導体をセンサーチップに固定化した。固定化過程はセンサーチップ表面のＳＰＲの増減（共鳴単位：ＲＵ）によってモニタリングした。
【００５８】
実施例２ ＳＰＲ解析装置を用いた親和性解析（その１）
参考例８に記載のω−（３−アミノ−３−オキソプロピルチオ）アルキルアミン誘導体を固定化したセンサーチップ（実験１６３）に対して、マウスＩｇＧ（ポリクローナル、３２０μｇ／ｍＬ）、マウスＩｇＭ（ポリクローナル、１０μｇ／ｍＬ）、ニワトリＩｇＹ（ポリクローナル、４００μｇ／ｍＬ）、ヒト化ＩｇＧ（モノクローナル、３２０μｇ／Ｌ）、ヒト−マウスキメラＩｇＧ（モノクローナル、３２０μｇ／ｍＬ）をそれぞれ１２０秒間通液（結合相）後、標準緩衝液で２４０秒間置換（解離相）して親和性を解析した。なお、標準緩衝液としてはビアコア製ＨＢＳ−ＥＰ（組成：１５０ｍＭ ＮａＣｌ、３ｍＭ ＥＤＴＡ、０．００５％ＳＰ２０を含む１０ｍＭ ＨＥＰＥＳ緩衝液（ｐＨ７．４））を用い、分析終了ごとに１０ｍＭ水酸化ナトリウム水溶液を８０秒間通液することでセンサーチップの再生を行なった。
【００５９】
結果（センサーグラム）を図１に示す。図１のうち、ＡはマウスＩｇＧ（ポリクローナル）を、ＢはマウスＩｇＭ（ポリクローナル）を、ＣはニワトリＩｇＹ（ポリクローナル）を、Ｄはヒト化ＩｇＧ（モノクローナル）、Ｅはヒト−マウスキメラＩｇＧ（モノクローナル）を、それぞれ用いたときのセンサーグラムを表す。解離時間２４０秒後の残存ＲＵは、マウスＩｇＧ（ポリクローナル）の場合５５、マウスＩｇＭ（ポリクローナル）の場合２６８、ニワトリＩｇＹ（ポリクローナル）の場合２４、ヒト化ＩｇＧ（モノクローナル）の場合４４、ヒト−マウスキメラＩｇＧ（モノクローナル）の場合３４であった。
【００６０】
実施例３ ＳＰＲ解析装置を用いた親和性解析（その２）
実施例１で作製したω−（３−アミノ−３−オキソプロピルチオ）アルキルアミン誘導体（１a）を固定化したセンサーチップに対して、タンパク質濃度１６０μｇ／ｍＬまたは３２０μｇ／ｍＬのマウスＩｇＧ（ポリクローナル）、ヒト化ＩｇＧ（モノクローナル）、ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）をそれぞれ１２０秒間通液（結合相）後、標準緩衝液で２４０秒間置換（解離相）して親和性を解析した。用いた標準緩衝液およびセンサーチップの再生方法は実施例２と同様である。
【００６１】
参考例２、４および６で得られたω−（３−アミノ−３−オキソプロピルチオ）アルキルアミン誘導体を固定化したセンサーチップ（実験１９８、２１２、６７）での解析結果（センサーグラム）を図２から４に、それぞれ示す。図２から４において、ａは１６０μｇ／ｍＬのマウスＩｇＧ（ポリクローナル）を用いたときの、Ａは３２０μｇ／ｍＬのマウスＩｇＧ（ポリクローナル）を用いたときの、ｂは１６０μｇ／ｍＬのヒト化ＩｇＧ（モノクローナル）を用いたときの、Ｂは３２０μｇ／ｍＬのヒト化ＩｇＧ（モノクローナル）を用いたときの、ｃは１６０μｇ／ｍＬのＢＳＡを用いたときの、Ｃは３２０μｇ／ｍＬのＢＳＡを用いたときの結果（センサーグラム）をそれぞれ示す。また、解離時間２４０秒後の残存ＲＵを表７に示す。
【００６２】
【表７】
【００６３】
実施例４ ω−（３−アミノ−３−オキソプロピルチオ）アルキルアミノ基のアガロースゲルへの固定化
（１）参考例２、４、６、８、２３、６３で得られたω−（３−アミノ−３−オキソプロピルチオ）アルキルアミン誘導体（１ａ）１８μｍｏｌを、ＤＭＳＯ／（０．５Ｍ ＮａＣｌを含む０．２Ｍ炭酸水素ナトリウム水溶液）＝１／１（ｖ／ｖ）緩衝液（ｐＨ８．３）１．５ｍＬに溶解後、文献：はじめてのリガンドカップリングハンドブック（アマシャムバイオサイエンス株式会社、２００５）に記載された方法に従い、アガロースゲル充填カラム（ＨｉＴｒａｐ ＮＨＳ−ａｃｔｉｖａｔｅｄ ＨＰ １ｍｌ（商品名）、ゲル容量１ｍＬ、ＧＥヘルスケアバイオサイエンス製、以下ＨｉＴｒａｐカラムと略記する）に通液し、常温で２０分間反応させて固定化した。
（２）ω−（３−アミノ−３−オキソプロピルチオ）アルキルアミン誘導体の固定化量を、非特許文献３に記載された方法に従い、ＨｉＴｒａｐカラム通液前後における該誘導体溶液の吸光度を測定することで算出した。
【００６４】
ＨｉＴｒａｐカラムへのω−（３−アミノ−３−オキソプロピルチオ）アルキルアミン誘導体（１ａ）の固定化量は、それぞれ６．０μｍｏｌ／ｍＬ（ｇｅｌ）（参考例２、実験１９９）、７．２μｍｏｌ／ｍＬ（ｇｅｌ）（参考例４、実験２１３）、８．４μｍｏｌ／ｍＬ（ｇｅｌ）（参考例６、実験６８）、８．４μｍｏｌ／ｍＬ（ｇｅｌ）（参考例８、実験１６５）、８．４μｍｏｌ／ｍＬ（ｇｅｌ）（参考例２３、実験１６１）、７．２μｍｏｌ／ｍＬ（ｇｅｌ）（参考例６３、実験１５３）であった。
【００６５】
実施例５ ω−（３−アミノ−３−オキソプロピルチオ）アルキルアミノ基固定化アガロースゲルを用いたタンパク質の吸脱着（その１）
（１）実施例４で調製した、ω−（３−アミノ−３−オキソプロピルチオ）アルキルアミン誘導体（１ａ）固定化ＨｉＴｒａｐカラムを、０．６Ｍ硫酸ナトリウム、１ｍＭ ＥＤＴＡを含む２０ｍＭリン酸カリウム緩衝液（ｐＨ７．０）（緩衝液Ａ）で平衡化した。
（２）ヒト免疫グロブリン溶液（１５０ｍｇ／ｍＬ免疫グロブリンＧ、化血研製）を緩衝液Ａで３００倍に希釈し（ＯＤ２８０＝０．７）、希釈液５ｍＬをそれぞれのω−｛３−アミノ−３−オキソプロピルチオ）アルキルアミン誘導体（１ａ）固定化ＨｉＴｒａｐカラムへアプライした。
（３）緩衝液Ａ２５ｍＬで洗浄後、０．１５Ｍ ＮａＣｌおよび１ｍＭ ＥＤＴＡを含む２０ｍＭリン酸カリウム緩衝液（ｐＨ７．０）（緩衝液Ｂ）を２０ｍＬ通液した。
（４）ＨｉＴｒａｐカラムから回収した溶液を５ｍＬずつ分画し、２８０ｎｍにおける吸光度を測定した。
【００６６】
結果を図５に示す。図５においてＰはアプライ時の通過液を、Ｗ１からＷ５は洗浄液を、Ｅ１からＥ４は溶出液を、それぞれ表す。緩衝液Ｂを通液した直後の溶出画分（Ｅ１）の吸光度（ＯＤ２８０）はそれぞれ０．０２１（参考例２、実験１９９）、０．０６０（参考例４、実験２１３）、０．３２４（参考例６、実験６８）、０．４９３（参考例８、実験１６５）、０．０６２（参考例２３、実験１６１）、０．６７４（参考例６３、実験１５３）であった。
【００６７】
なお、分析終了ごとに１００ｍＭ水酸化ナトリウム水溶液を５ｍＬ通液することで固定化ＨｉＴｒａｐカラムの再生を行なったが、本実施例で使用した固定化ＨｉＴｒａｐカラムはいずれも前記再生処理により初期状態に復帰させることができ、繰り返し使用による特性変化も生じなかった。
【００６８】
実施例６ ω−（３−アミノ−３−オキソプロピルチオ）アルキルアミノ基固定化アガロースゲルを用いたタンパク質の吸脱着（その２）
（１）実施例４で調製した、参考例２に記載のω−（３−アミノ−３−オキソプロピルチオ）アルキルアミン誘導体を固定化したＨｉＴｒａｐカラム（実験１９９）を、１ｍＭ ＥＤＴＡを含む５０ｍＭ酢酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ７．０）（緩衝液Ｃ）で平衡化した。
（２）実施例５（２）と同様の方法（ただし希釈には緩衝液Ｃを使用）で調製した免疫グロブリン希釈液５ｍＬを、前記ＨｉＴｒａｐカラムへアプライした。
（３）緩衝液Ｃ３０ｍＬで洗浄後、０．１５Ｍ ＮａＣｌ、１ｍＭ ＥＤＴＡを含む５０ｍＭ酢酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ４．５）（緩衝液Ｄ）を２０ｍＬ通液した。
（４）続けて０．５Ｍ ＮａＣｌ、１ｍＭ ＥＤＴＡを含む５０ｍＭ酢酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ４．５）を１５ｍＬ通液した。
（５）ＨｉＴｒａｐカラムから回収された液体を５ｍＬずつ分画し、２８０ｎｍにおける吸光度を測定した。
【００６９】
結果を図６に示す。図６においてＰはアプライ時の通過液を、Ｗ１からＷ６は洗浄液を、Ｅ１からＥ４は（３）での溶出液を、Ｅ５からＥ７は（４）での溶出液を、それぞれ表す。緩衝液Ｄを通液した直後の画分（Ｅ１）の吸光度（ＯＤ２８０）は０．５７６であった。
【００７０】
実施例７ ω−（３−アミノ−３−オキソプロピルチオ）アルキルアミノ基固定化アガロースゲルを用いたタンパク質の吸脱着（その３）
（１）実施例４で調製した、参考例６３に記載のω−（３−アミノ−３−オキソプロピルチオ）アルキルアミン誘導体を固定化したＨｉＴｒａｐカラム（実験１５３）を、０．８Ｍ硫酸ナトリウム、１ｍＭ ＥＤＴＡを含む２０ｍＭリン酸カリウム緩衝液（ｐＨ７．０）（緩衝液Ｅ）で平衡化した。
（２）実施例５（２）と同様の方法（ただし希釈には緩衝液Ｅを使用）で調製した免疫グロブリン希釈液５ｍＬを、前記ＨｉＴｒａｐカラムへアプライした。
（３）緩衝液Ｅ２５ｍＬで洗浄後、０．１５Ｍ ＮａＣｌ、１ｍＭ ＥＤＴＡを含む２０ｍＭリン酸カリウム緩衝液（ｐＨ７．０）（緩衝液Ｂ）を２０ｍＬ通液した。
（４）ＨｉＴｒａｐカラムから回収された液体を５ｍＬずつ分画し、２８０ｎｍにおける吸光度を測定した。
（５）１００ｍＭ水酸化ナトリウム水溶液を５ｍＬ通液してＨｉＴｒａｐカラムの再生を行なった後、緩衝液Ｅで平衡化した。
（６）緩衝液Ｅで溶解した０．５ｍｇ／ｍＬのウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）５ｍＬをＨｉＴｒａｐカラムへアプライした。
（７）緩衝液Ｅ２５ｍＬで洗浄後、緩衝液Ｂを２０ｍＬ通液した。
（８）カラムから回収された液体を５ｍＬずつ分画し、２８０ｎｍにおける吸光度を測定した。
【００７１】
結果を図７に示す。図７において、Ｐは免疫グロブリンまたはＢＳＡアプライ時の通過液を、Ｗ１からＷ５は洗浄液を、Ｅ１からＥ４は溶出液を、それぞれ表す。緩衝液Ｂを通液した直後の画分（Ｅ１）の吸光度（ＯＤ２８０）は０．７１７（免疫グロブリン）、０．０４２（ＢＳＡ）であった。
【００７２】
実施例８ ω−（３−アミノ−３−オキソプロピルチオ）アルキルアミノ基のキトサンゲルへの固定化
（１）キトサンゲル（キトパールＫ−６６（商品名）、富士紡ホールディングス製）１ｍＬをイソプロピルアルコールに懸濁後、両端にフィルターを装備した円筒容器に充填してキトサンゲルカラムを作製し、１ｍＭ塩酸を５ｍＬ通液して洗浄した。
（２）参考例８に記載のω−（３−アミノ−３−オキソプロピルチオ）アルキルアミン誘導体４５μｍｏｌを、ＤＭＳＯ／（０．５Ｍ ＮａＣｌを含む０．２Ｍ炭酸水素ナトリウム緩衝液）＝１／１（ｖ／ｖ）（ｐＨ８．３）３ｍＬに溶解後、キトサンゲルカラムに３０分間循環通液することで固定化した。
（３）ω−（３−アミノ−３−オキソプロピルチオ）アルキルアミン誘導体の固定化量を、キトサンゲルカラム通液前後における該誘導体溶液の吸光度を測定することで算出した。
【００７３】
キトサンゲルへのω−（３−アミノ−３−オキソプロピルチオ）アルキルアミン誘導体の固定化量は８．１μｍｏｌ／ｍＬ（ｇｅｌ）となった。
【００７４】
実施例９ ω−（３−アミノ−３−オキソプロピルチオ）アルキルアミノ基固定化キトサンゲルを用いたタンパク質の吸脱着
（１）実施例８で調製した、参考例８に記載のω−（３−アミノ−３−オキソプロピルチオ）アルキルアミン誘導体を固定化したキトサンゲルカラム（実験１６９）を、０．６Ｍ硫酸ナトリウム、１ｍＭ ＥＤＴＡを含む２０ｍＭリン酸カリウム緩衝液（ｐＨ７．０）（緩衝液Ａ）で平衡化した。
（２）実施例５（２）で調製した免疫グロブリン希釈液５ｍＬを、前記キトサンゲルカラムへアプライした。
（３）緩衝液Ａ２５ｍＬで洗浄後、０．１５Ｍ ＮａＣｌ、１ｍＭ ＥＤＴＡを含む２０ｍＭリン酸カリウム緩衝液（ｐＨ７．０）（緩衝液Ｂ）を２０ｍＬ通液した。
（４）キトサンゲルカラムから回収された液体を５ｍＬずつ分画し、２８０ｎｍにおける吸光度を測定した。
【００７５】
結果を図８に示す。図８において、Ｐはアプライ時の通過液を、Ｗ１からＷ５は洗浄液を、Ｅ１からＥ４は溶出液を、それぞれ表す。緩衝液Ｂを通液した直後の溶出画分（Ｅ１）の吸光度（ＯＤ２８０）は０．２７１であった。
【００７６】
実施例１０ ω−（３−アミノ−３−オキソプロピルチオ）アルキルアミノ基のセルロースゲルへの固定化
（１）参考例８に記載のω−（３−アミノ−３−オキソプロピルチオ）アルキルアミン誘導体４５μｍｏｌをＤＭＳＯ／（０．５Ｍ ＮａＣｌを含む０．２Ｍ炭酸水素ナトリウム水溶液）＝１／１（ｖ／ｖ）緩衝液（ｐＨ８．３）２．５ｍＬに溶解した。
（２）前記溶液を、グラスフィルター上で水洗したセルロースゲル（セルファインホルミル（商品名）、ＪＮＣ製）２．１ｇに添加して４０℃で３時間振とうした。
（３）ピリジン−ボラン２０μＬを添加後、さらに４０℃で１時間振とうして固定化を行なった。なお、セルロースゲルへのω−（３−アミノ−３−オキソプロピルチオ）アルキルアミン誘導体の固定化量は算出できなかった。
【００７７】
実施例１１ ω−（３−アミノ−３−オキソプロピルチオ）アルキルアミノ基固定化セルロースゲルを用いたタンパク質の吸脱着
（１）実施例１０で調製した、参考例８に記載のω−（３−アミノ−３−オキソプロピルチオ）アルキルアミン誘導体を固定化したセルロースゲル（実験１６８）１ｍＬを、両端にフィルターを装備した円筒容器に充填してゲルカラムを作製し、０．６Ｍ硫酸ナトリウム、１ｍＭ ＥＤＴＡを含む２０ｍＭリン酸カリウム緩衝液（ｐＨ７．０）（緩衝液Ａ）で平衡化した。
（２）実施例５（２）で調製した免疫グロブリン希釈液５ｍＬを、前記セルロースゲルカラムへアプライした。
（３）緩衝液Ａ２５ｍＬで洗浄した後、０．１５Ｍ ＮａＣｌ、１ｍＭ ＥＤＴＡを含む２０ｍＭリン酸カリウム緩衝液（ｐＨ７．０）（緩衝液Ｂ）を２０ｍＬ通液した。
（４）セルロースゲルカラムから回収された液体を５ｍＬずつ分画し、２８０ｎｍにおける吸光度を測定した。
【００７８】
結果を図９に示す。図９において、Ｐはアプライ時の通過液を、Ｗ１からＷ５は洗浄液を、Ｅ１からＥ４は溶出液を、それぞれ表す。緩衝液Ｂを通液した直後の溶出画分（Ｅ１）の吸光度（ＯＤ２８０）は０．２１８であった。
【００７９】
実施例１２ ω−（３−アミノ−３−オキソプロピルチオ）アルキルアミノ基のポリメタクリレートゲルへの固定化（その１）
（１）参考例２３に記載のω−（３−アミノ−３−オキソプロピルチオ）アルキルアミン誘導体２００μｍｏｌをＤＭＳＯ／０．５Ｍ炭酸水素ナトリウム水溶液＝１／４（ｖ／ｖ）緩衝液２．５ｍＬに溶解した。
（２）グラスフィルター上で水洗したポリメタクリレートゲル（ＡＦ−Ｔｒｅｓｙｌ−６５０Ｍ（商品名）、東ソー製、以下トレシルトヨパールとする）０．５ｇに（１）の溶液を添加後、３７℃で１６時間振とうすることにより固定化を行なった。
（３）ω−（３−アミノ−３−オキソプロピルチオ）アルキルアミン誘導体の固定化量を、トレシルトヨパールカラム通液前後における該誘導体溶液の吸光度を測定することで算出した。
【００８０】
トレシルトヨパールへのω−（３−アミノ−３−オキソプロピルチオ）アルキルアミン誘導体の固定化量は８６μｍｏｌ／ｍＬ（ｇｅｌ）となった。
【００８１】
実施例１３ ω−（３−アミノ−３−オキソプロピルチオ）アルキルアミノ基固定化ポリメタクリレートゲルを用いたタンパク質の吸脱着（その１）
（１）実施例１２で調製した、参考例２３に記載のω−（３−アミノ−３−オキソプロピルチオ）アルキルアミン誘導体を固定化したトレシルトヨパールゲル（実験１５９）１ｍＬを、両端にフィルターを装備した円筒容器に充填してゲルカラムを作製し、０．８Ｍ硫酸ナトリウム、１ｍＭ ＥＤＴＡを含む２０ｍＭリン酸カリウム緩衝液（ｐＨ７．０）（緩衝液Ｅ）で平衡化した。
（２）実施例５（２）と同様の方法（ただし希釈には緩衝液Ｅを使用）で調製した免疫グロブリン希釈液５ｍＬを、前記トレシルトヨパールカラムへアプライした。
（３）緩衝液Ｅ２５ｍＬで洗浄後、０．１５Ｍ ＮａＣｌ、１ｍＭ ＥＤＴＡを含む２０ｍＭリン酸カリウム緩衝液（ｐＨ７．０）（緩衝液Ｂ）を２０ｍＬ通液した。
（４）トレシルトヨパールカラムから回収された液体を５ｍＬずつ分画し、２８０ｎｍにおける吸光度を測定した。
【００８２】
結果を図１０に示す。図１０において、Ｐはアプライ時の通過液、Ｗ１からＷ５は洗浄液、Ｅ１からＥ４は溶出液を表す。緩衝液Ｂを通液した直後の溶出画分（Ｅ１）の吸光度（ＯＤ２８０）は０．４７３であった。
【００８３】
実施例１４ ω−（３−アミノ−３−オキソプロピルチオ）アルキルアミノ基のポリメタクリレートゲルへの固定化（その２）
（１）参考例２３に記載のω−（３−アミノ−３−オキソプロピルチオ）アルキルアミン誘導体２００μｍｏｌをＤＭＳＯ／０．５Ｍ炭酸水素ナトリウム水溶液＝１／４（ｖ／ｖ）緩衝液２．５ｍＬに溶解した。
（２）前記溶液を、グラスフィルター上で水洗したポリメタクリレートゲル（ＡＦ−Ｅｐｏｘｙ−６５０Ｍ（商品名）、東ソー製、以下エポキシトヨパールとする）０．５ｇに添加し、３７℃で１６時間振とうすることにより固定化を行なった。
（３）ω−（３−アミノ−３−オキソプロピルチオ）アルキルアミン誘導体の固定化量を、エポキシトヨパールカラム通液前後における該誘導体溶液の吸光度を測定することで算出した。
【００８４】
エポキシトヨパールへのω−（３−アミノ−３−オキソプロピルチオ）アルキルアミン誘導体の固定化量は８４μｍｏｌ／ｍＬ（ｇｅｌ）となった。
【００８５】
実施例１５ ω−（３−アミノ−３−オキソプロピルチオ）アルキルアミノ基固定化ポリメタクリレートゲルを用いたタンパク質の吸脱着（その２）
（１）実施例１４で調製した、参考例２３に記載のω−（３−アミノ−３−オキソプロピルチオ）アルキルアミン誘導体を固定化したエポキシトヨパールゲル（実験１６０）１ｍＬを、両端にフィルターを装備した円筒容器に充填してゲルカラムを作製し、０．８Ｍ硫酸ナトリウム、１ｍＭ ＥＤＴＡを含む２０ｍＭリン酸カリウム緩衝液（ｐＨ７．０）（緩衝液Ｅ）で平衡化した。
（２）実施例５（２）と同様の方法（ただし希釈には緩衝液Ｅを使用）で調製した免疫グロブリン希釈液５ｍＬを、前記エポキシトヨパールカラムへアプライした。
（３）緩衝液Ｅ２５ｍＬで洗浄後、０．１５Ｍ ＮａＣｌ、１ｍＭ ＥＤＴＡを含む２０ｍＭリン酸カリウム緩衝液（ｐＨ７．０）（緩衝液Ｂ）を２０ｍＬ通液した。
（４）エポキシトヨパールカラムから回収された液体を５ｍＬずつ分画し、２８０ｎｍにおける吸光度を測定した。
【００８６】
結果を図１１に示す。図１１において、Ｐはアプライ時の通過液、Ｗ１からＷ５は洗浄液、Ｅ１からＥ４は溶出液を表す。緩衝液Ｂを通液した直後の溶出画分（Ｅ１）の吸光度（ＯＤ２８０）は０．３２５であった。
【００８７】
参考例１ ３−｛３−［２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）エチルチオ］プロピオニルアミノ｝チオフェン−２−カルボン酸エチルの合成
【００８８】
【化４】
【００８９】
２−ブトキシカルボニルアミノエタンチオール（１．４８ｇ，８．３５ｍｍｏｌ）のエタノール（１５ｍＬ）溶液に炭酸カリウム（１．２ｇ，８．７０ｍｍｏｌ）を添加し、３−（３−アクリロイルアミノ）チオフェン−２−カルボン酸エチル．３７ｇ，６．４８ｍｍｏｌ）を添加後、室温で４時間反応させた。反応終了後、溶媒を減圧留去し、反応混合物に水（２０ｍＬ）を添加し、酢酸エチル（８０ｍＬ）で抽出した。有機層を飽和食塩水（４０ｍＬ）で洗浄し、有機層を無水硫酸マグネシウムで乾燥後、乾燥剤を濾別し溶媒を減圧留去した。得られた混合物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（酢酸エチル：ヘキサン＝３：７）で精製することで、３−｛３−［２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）エチルチオ］プロピオニルアミノ｝チオフェン−２−カルボン酸エチルの褐色油状物（２．０９ｇ，８４％）を得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（２５０ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３，ＴＭＳ，ｐｐｍ）：δ １．３９（ｔ，Ｊ＝７．５Ｈｚ３Ｈ），１．４４（ｓ，９Ｈ），２．７２（ｍ，４Ｈ），２．９２（ｔ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，２Ｈ），３．３４（ｑ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，２Ｈ），４．３５（ｑ，Ｊ＝７．５ Ｈｚ，２Ｈ），５．０３（ｂｒ，１Ｈ），７．４６（ｄ，Ｊ＝２．５Ｈｚ，１Ｈ），８．２１（ｄ，Ｊ＝２．５Ｈｚ，１Ｈ），１０．２８（ｓ，１Ｈ）。
【００９０】
参考例２ ２−［３−（２−カルボキシ−３−チエニル）アミノ−３−オキソプロピルチオ］エチルアミン塩酸塩の合成
【００９１】
【化５】
【００９２】
３−｛３−［２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）エチルチオ］プロピオニルアミノ｝チオフェン−２−カルボン酸（０．３６ｇ，０．９４８ｍｍｏｌ）のクロロホルム（５ｍＬ）溶液に塩酸ガスを３０分間導入したところ反応系内に沈殿物が析出した。該沈殿物を濾取し、少量のクロロホルムとエーテルで洗浄後、充分に乾燥させることで、白色固体の２−［３−（２−カルボキシチオフェン−３−イル）アミノ−３−オキソプロピルチオ］エチルアミン塩酸塩（０．２５１ｇ，８５％）を得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（２５０ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６，ＴＭＳ，ｐｐｍ）：δ ２．７４−２．８６（ｍ，６Ｈ），２．９６−３．０２（ｍ，２Ｈ），７．８５（ｄ，Ｊ＝５．０Ｈｚ，１Ｈ），７．９６（ｄ，Ｊ＝５．０Ｈｚ，１Ｈ），８．０９（ｂｒｓ，３Ｈ），１０．２（ｓ，１Ｈ）。カルボキシル基のプロトンは帰属できなかった。
【００９３】
参考例３ Ｎ−（キノリン−８−イル）−３−｛２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）エチルチオ）プロピオナミドの合成
【００９４】
【化６】
【００９５】
２−ブトキシカルボニルアミノエタンチオール（０．９５ｇ，５．３５ｍｍｏｌ）のエタノール（１０ｍＬ）溶液に炭酸カリウム（０．７４ｇ，５．３６ｍｍｏｌ）を添加し、Ｎ−（キノリン−８−イル）アクリル酸アミド（０．８４ｇ，４．１６ｍｍｏｌ）を添加後、室温で４時間反応させた。反応終了後、溶媒を減圧留去し、反応混合物に水（２０ｍＬ）を添加後、酢酸エチル（４０ｍＬ）で抽出した。有機層を飽和食塩水（２０ｍＬ）で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥後、乾燥剤を濾別し溶媒を減圧留去した。得られた混合物をカラムクロマトグラフィー（酢酸エチル：ヘキサン＝１：３）で精製し、Ｎ−（キノリン−８−イル）−３−｛２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）エチルチオ）プロピオナミドの黄色油状物（１．４６ｇ，９３％）を得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（２５０ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３，ＴＭＳ，ｐｐｍ）：δ １．４３（ｓ，９Ｈ），２．７３（ｔ，Ｊ＝２．５Ｈｚ，２Ｈ），２．８３−２．８９（ｍ，２Ｈ），２．９８−３．０３（ｍ，２Ｈ），３．３７（ｍ，２Ｈ），５．０８（ｂｒｓ，１Ｈ），７．４３−７．５８（ｍ，３Ｈ），８．１６（ｄｄ，Ｊ＝１．８ ａｎｄ ８．３Ｈｚ，１Ｈ），８．７５−８．８２（ｍ，２Ｈ），９．９０（ｂｒｓ，１Ｈ）。
【００９６】
参考例４ ２−［３−オキソ−３−（キノリン−８−イル）アミノプロピルチオ］エチルアミン塩酸塩の合成
【００９７】
【化７】
【００９８】
Ｎ−（キノリン−８−イル）−３−｛２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）エチルチオ）プロピオナミド（０．５８２ｇ，１．５４ｍｍｏｌ）のクロロホルム（１０ｍＬ）溶液に塩酸ガスを６０分間導入したところ反応系内に沈殿物が析出した。該沈殿物を濾取し、少量のクロロホルムとエーテルで洗浄後、黄緑色固体２−［３−（キノリン−８−イル）アミノ−３−オキソプロピルチオ］エチルアミン塩酸塩（０．４４６ｇ，９３％）を得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（２５０ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６，ＴＭＳ，ｐｐｍ）：δ ２．８２−３．０４（ｍ，８Ｈ），７．６９（ｔ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，１Ｈ），７．７６−７．８５（ｍ，２Ｈ），８．２３（ｂｒ，３Ｈ），８．５４（ｄｄ，Ｊ＝１．０ ａｎｄ ７．５Ｈｚ，１Ｈ），８．６５（ｄｄ，Ｊ＝１．０ ａｎｄ １０Ｈｚ，１Ｈ），９．０４（ｄｄ，Ｊ＝１．０ ａｎｄ ５．０Ｈｚ，１Ｈ），１０．４（ｓ，１Ｈ）。
【００９９】
参考例５ Ｎ−フルフリル−Ｎ−フェニル−３−｛２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）エチルチオ）プロピオナミドの合成
【０１００】
【化８】
【０１０１】
２−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノエタンチオール（０．９５ｇ，５．３５ｍｍｏｌ）のメタノール（１０ｍＬ）溶液に炭酸カリウム（０．７４ｇ，５．３６ｍｍｏｌ）を添加し、Ｎ−フェニル−Ｎ−フルフリルアクリル酸アミド（０．７２ｇ，４．１６ｍｍｏｌ）を添加後、室温で４時間反応させた。反応終了後、溶媒を減圧留去し、反応混合物に水（２０ｍＬ）を添加後、酢酸エチル（４０ｍＬ）で抽出した。有機層を飽和食塩水（２０ｍＬ）で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥後、乾燥剤を濾別し溶媒を減圧留去した。得られた混合物をカラムクロマトグラフィー（酢酸エチル：ヘキサン＝１：３）で精製し、Ｎ−フルフリル−Ｎ−フェニル−３−｛２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）エチルチオ）プロピオナミドの黄色油状物（１．４０ｇ，６４％）を得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（２５０ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３，ＴＭＳ，ｐｐｍ）：δ １．４３（ｓ，９Ｈ），２．３２（ｔ，Ｊ＝２．５Ｈｚ，２Ｈ），２．５３（ｔ，Ｊ＝５．０Ｈｚ，２Ｈ），２．７８（ｔ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，１Ｈ），３．２５（ｍ，２Ｈ），４．８７（ｓ，１Ｈ），４．９３（ｂｒ，１Ｈ），６．１３（ｄ，Ｊ＝２．５Ｈｚ，１Ｈ），６．２５（ｄｄ，Ｊ＝２．５ ａｎｄ ５．０Ｈｚ，１Ｈ），６．２７（ｄｄ，Ｊ＝２．５ ａｎｄ ５．０Ｈｚ，１Ｈ），７．０３−７．０７（ｍ，２Ｈ），７．３３−７．３９（ｍ，５Ｈ）。
【０１０２】
参考例６ ２−｛３−［Ｎ−フルフリル−Ｎ−フェニル］アミノ−３−オキソプロピルチオ）エチルアミン塩酸塩の合成
【０１０３】
【化９】
【０１０４】
Ｎ−フルフリル−Ｎ−フェニル−３−｛２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）エチルチオ）プロピオナミド（０．４９ｇ，１．２１ｍｍｏｌ）のクロロホルム（１０ｍＬ）溶液に塩酸ガスを３０分間導入した。薄層クロマトグラフィーにて原料の消失を確認し、溶媒を減圧留去した。残渣の油状物に少量のエーテルを加え攪拌後、静沈し、上澄みのエーテルを除去した。得られた黄色油状物を充分に乾燥させることで、黄色油状物の２−｛３−［Ｎ−フルフリル−Ｎ−フェニル］アミノ−３−オキソプロピルチオ）エチルアミン塩酸塩（０．４２９ｇ，定量的）を得た。
潮解性；１Ｈ−ＮＭＲ（２５０ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６，ＴＭＳ，ｐｐｍ）：δ ２．２９（ｔ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，２Ｈ），２．６２−２．７４（ｍ，４Ｈ），２．８９−２．９４（ｔ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，２Ｈ），４．８６（ｓ，２Ｈ），６．１５（ｄ，Ｊ＝２．８Ｈｚ，１Ｈ），６，３４（ｄｄ，Ｊ＝１．８ ａｎｄ ２．８Ｈｚ，１Ｈ），７．１７（ｄ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，２Ｈ），７．３４−７．４６（ｍ，３Ｈ），７．５５（ｄ，Ｊ＝１．８Ｈｚ，１Ｈ），７．９８（ｂｒｓ，３Ｈ）。
【０１０５】
参考例７ Ｎ−（ビフェニル−２−イル）−３−｛５−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）ペンチルチオ）プロピオナミドの合成
【０１０６】
【化１０】
【０１０７】
５−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノペンタンチオール（０．５０ｇ，２．２８ｍｍｏｌ）のメタノール（１０ｍＬ）溶液に炭酸カリウム（０．３２ｇ，２．３２ｍｍｏｌ）を添加し、Ｎ−ビフェニ−２−イル−アクリル酸アミド（１．０ｇ，６．６２ｍｍｏｌ）を添加後、室温で４時間反応させた。反応終了後、溶媒を減圧留去し、反応混合物に水（２０ｍＬ）を加え、酢酸エチル（４０ｍＬ）で抽出した。有機層を飽和食塩水（２０ｍＬ）で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥後、乾燥剤を濾別し溶媒を減圧留去した。得られた混合物をカラムクロマトグラフィー（酢酸エチル：ヘキサン＝１：３）で精製し、Ｎ−（ビフェニル−２−イル）−３−｛５−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）ペンチルチオ）プロピオナミドの無色油状物（０．６１１ｇ，６１％）を得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（２５０ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３，ＴＭＳ，ｐｐｍ）：δ １．３６−１．６１（ｍ，１５Ｈ），２．４３−２．５４（ｍ，４Ｈ），２．７７（ｔ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，２Ｈ），３．０５−３．１１（ｍ，２Ｈ），４．５２（ｂｒ，１Ｈ），７．１５−７．５１（ｍ，９Ｈ），８．２６（ｄ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，１Ｈ）。
【０１０８】
参考例８ ５−［３−（ビフェニル−２−イル）アミノ−３−オキソプロピルチオ］ペンチルアミン塩酸塩の合成
【０１０９】
【化１１】
【０１１０】
Ｎ−（ビフェニル−２−イル）−３−｛５−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）ペンチルチオ）プロピオナミド（０．６１１ｇ，１．３８ｍｍｏｌ）のクロロホルム（１０ｍＬ）溶液に塩酸ガスを３０分間導入した。薄層クロマトグラフィーにて原料の消失を確認後、水１０ｍＬで抽出し、水を減圧留去した。油状物を減圧下で充分に乾燥させることで、無色油状物の５−［３−（ビフェニル−２−イル）アミノ−３−オキソプロピルチオ］ペンチルアミン塩酸塩（０．３８３ｇ，７３．２％）を得た。
褐色固体、潮解性；１Ｈ−ＮＭＲ（２５０ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６，ＴＭＳ，ｐｐｍ）：δ １．３５−１．４４（ｍ，２Ｈ），１．４８−１．６０（ｍ，４Ｈ），２．４２−２．５３（ｍ，４Ｈ），２．６７（ｔ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，２Ｈ），２．７７（ｔ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，２Ｈ），７．３０−７．４８（ｍ，９Ｈ），７．９２（ｂｒｓ，３Ｈ），９．３５（ｓ，１Ｈ）。
【０１１１】
参考例１１ ２−［３−オキソ−３−（２−チアゾリル）アミノプロピルチオ］エチルアミン塩酸塩
白色固体；１Ｈ−ＮＭＲ（２５０ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６，ＴＭＳ，ｐｐｍ）：δ ２．７８−２．８７（ｍ，６Ｈ），２．９８（ｍ，２Ｈ），７．２３（ｄ，Ｊ＝２．５Ｈｚ，１Ｈ），７．４８（ｄ，Ｊ＝２．５Ｈｚ，１Ｈ），８．２３（ｂｒｓ，３Ｈ）。アミドプロトンは帰属できなかった。
【０１１２】
参考例１２ ２−［３−（２−ベンゾチアゾリル）アミノ−３−オキソプロピルチオ］エチルアミン塩酸塩
白色固体；１Ｈ−ＮＭＲ（２５０ＭＨｚ，Ｄ２Ｏ，ＴＭＳ，ｐｐｍ）：δ ２．７６−２．８６（ｍ，６Ｈ），３．１８（ｔ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，２Ｈ），７．３１（ｄｄｄ，Ｊ＝１．０，７．５ ａｎｄ ７．５Ｈｚ，１Ｈ），７．４３（ｄｄｄ，Ｊ＝１．０，７．５ ａｎｄ ７．５Ｈｚ，１Ｈ），７．６１（ｍ，２Ｈ），７．７６（ｄ，Ｊ＝１．０ ａｎｄ ７．５Ｈｚ，１Ｈ），８．１２（ｂｒｓ，１Ｈ），８．２８（ｂｒｓ，１Ｈ）。
【０１１３】
参考例１３ ２−［３−オキソ−３−チオモルホリノ−プロピルチオ］エチルアミン塩酸塩
褐色油状物；１Ｈ−ＮＭＲ（２５０ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６，ＴＭＳ，ｐｐｍ）：δ ２．６０−２．８１（ｍ，８Ｈ），２．９５−２．９８（ｍ，２Ｈ），２．３４−３．７２（ｍ，６Ｈ），８．１８（ｂｒｓ，３Ｈ）。
【０１１４】
参考例１４ ２−［３−（３−クロロフェニル）アミノ−３−オキソプロピルチオ］エチルアミン塩酸塩
白色固体、潮解性；１Ｈ−ＮＭＲ（２５０ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６，ＴＭＳ，ｐｐｍ）：δ ２．６８（ｔ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，２Ｈ），２．９７−２．８６（ｍ，４Ｈ），３．００（ｍ，２Ｈ），７．０８（ｄｄｄ，Ｊ＝１．０，２．５ ａｎｄ ８．０Ｈｚ，１Ｈ），７．３２（ｄｄ，Ｊ＝８．０ ａｎｄ ８．３Ｈｚ，１Ｈ），７．５１（ｄｄ，Ｊ＝１．０，１．０ ａｎｄ ８．３Ｈｚ，１Ｈ），７．８６（ｄｄ，Ｊ＝１．０ ａｎｄ ２．５Ｈｚ，１Ｈ），８．１８（ｂｒｓ，３Ｈ）。アミドプロトンは帰属できなかった。
【０１１５】
参考例１５ ５−［３−（３−クロロフェニル）アミノ−３−オキソプロピルチオ］ペンチルアミン塩酸塩
白色固体；１Ｈ−ＮＭＲ（２５０ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６，ＴＭＳ，ｐｐｍ）：δ １．３８−１．４４（ｍ，２Ｈ），１．４９−１．６３（ｍ，４Ｈ），２．５２−２．８３（ｍ，８Ｈ），７．０８（ｄｄ，Ｊ＝１．０ ａｎｄ ７．５Ｈｚ，１Ｈ），７．３３（ｄｄ，Ｊ＝７．５ ａｎｄ ８．０Ｈｚ，１Ｈ），７．５０（ｄｄ，Ｊ＝１．０ ａｎｄ ８．０Ｈｚ，１Ｈ），７．８６（ｓ，１Ｈ），７．９３（ｂｒｓ，３Ｈ），１０．４（ｓ，１Ｈ）。
【０１１６】
参考例１６ ２−［３−フルフリルアミノ−３−オキソプロピルチオ］エチルアミン塩酸塩
褐色油状物；１Ｈ−ＮＭＲ（２５０ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６，ＴＭＳ，ｐｐｍ）：δ ２．４４（ｔ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，２Ｈ），２．７２−２．７９（ｍ，４Ｈ），２．９０−３．０７（ｍ，２Ｈ），４．２６（ｄ，Ｊ＝２．５Ｈｚ，２Ｈ），６．２５（ｄｄ，Ｊ＝０．８ ａｎｄ ２．５Ｈｚ，１Ｈ），６．３９（ｄｄ，Ｊ＝０．８ ａｎｄ ２．５Ｈｚ，１Ｈ），７．５７（ｄｄ，Ｊ＝０．８ ａｎｄ ２．５Ｈｚ，１Ｈ），８．２１（ｂｒｓ，３Ｈ），８．５１（ｔ，Ｊ＝２．５Ｈｚ，１Ｈ）。
【０１１７】
参考例１７ ２−［３−オキソ−３−（４−トリフルオロメトキシフェニル）アミノプロピルチオ］エチルアミン塩酸塩
白色固体；１Ｈ−ＮＭＲ（２５０ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６，ＴＭＳ，ｐｐｍ）：δ ２．６９（ｔ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，２Ｈ），２．７８−２．８３（ｍ，４Ｈ），２．９７−３．０２（ｍ，２Ｈ），７．３１（ｄｄ，Ｊ＝２．０ ａｎｄ ７．５Ｈｚ，２Ｈ），７．５６（ｄｄ，Ｊ＝２．０ ａｎｄ ７．５Ｈｚ，２Ｈ），８．１３（ｂｒｓ，３Ｈ）。アミドプロトンは帰属できなかった。
【０１１８】
参考例１８ ２−［３−｛３，５−ビス（トリフルオロメチル）フェニル｝アミノ−３−オキソプロピルチオ］エチルアミン塩酸塩
褐色固体；１Ｈ−ＮＭＲ（２５０ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６，ＴＭＳ，ｐｐｍ）：δ ２．７６（ｔ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，２Ｈ），２．８２−２．９０（ｍ，４Ｈ），３．０１−３．０３（ｍ，２Ｈ），７．７４（ｓ，１Ｈ），８．１０（ｂｒｓ，３Ｈ），８．３９（ｓ，２Ｈ），１１．２（ｓ，１Ｈ）。
【０１１９】
参考例１９ ２−［３−（２−ｔｅｒｔ−ブチルフェニル）アミノ−３−オキソプロピルチオ］エチルアミン塩酸塩
白色固体；１Ｈ−ＮＭＲ（２５０ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６，ＴＭＳ，ｐｐｍ）：δ １．３３（ｓ，９Ｈ），２．６７（ｔ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，２Ｈ），２．８０−２．８８（ｍ，４Ｈ），２．９７−３．００（ｍ，２Ｈ），７．０３（ｄｄ，２．５ ａｎｄ ７．５Ｈｚ，１Ｈ），７．２１（ｄｄｄ，Ｊ＝２．５，５．０ ａｎｄ ７．５Ｈｚ，２Ｈ），７．４０（ｄｄ，Ｊ＝２．５ ａｎｄ ５．０Ｈｚ，１Ｈ），８．１８（ｂｒｓ，３Ｈ），９．４３（ｓ，１Ｈ）。
【０１２０】
参考例２０ ２−［３−（４−エトキシフェニル）アミノ−３−オキソプロピルチオ］エチルアミン塩酸塩
白色固体；１Ｈ−ＮＭＲ（２５０ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６，ＴＭＳ，ｐｐｍ）：δ １．３１（ｔ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，３Ｈ），２．６２（ｔ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，２Ｈ），２．８２（ｍ，４Ｈ），２．９７−３．０４（ｍ，２Ｈ），３．９７（ｑ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，２Ｈ），６．８７（ｄ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，２Ｈ），７．５３（ｄ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，２Ｈ），８．１５（ｂｒｓ，３Ｈ），１０．１（ｓ，１Ｈ）。
【０１２１】
参考例２１ ５−［３−（２−メチルフェニル）アミノ−３−オキソプロピルチオ］ペンチルアミン塩酸塩
白色固体；１Ｈ−ＮＭＲ（２５０ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６，ＴＭＳ，ｐｐｍ）：δ １．４０−１．４６（ｍ，２Ｈ），１．５１−１．６５（ｍ，４Ｈ），２．２２（ｓ，３Ｈ），２．５１−２．６８（ｍ，４Ｈ），２．７２−２．８２（ｍ，２Ｈ），３．７２−３．８２（ｍ，２Ｈ），７．０５−７．２２（ｍ，３Ｈ），７．３６（ｄ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，１Ｈ），８．０１（ｂｒｓ，３Ｈ），９．４６（ｓ，１Ｈ）。
【０１２２】
参考例２２ ２−［３−（１−メチル−１−フェニルエチル）アミノ−３−オキソプロピルチオ］エチルアミン塩酸塩
白色固体；１Ｈ−ＮＭＲ（２５０ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６，ＴＭＳ，ｐｐｍ）：δ １．５５（ｓ，６Ｈ），２．４３−２．５２（ｍ，２Ｈ），２．６７−２．８１（ｍ，４Ｈ），２．９２−３．００（ｍ，２Ｈ），７．１３−７．１９（ｍ，１Ｈ），７．２４−７．３６（ｍ，４Ｈ），８．１９（ｂｒｓ，３Ｈ），８．２６（ｓ，１Ｈ）。
【０１２３】
参考例２３ ２−［３−（ビフェニル−２−イル）アミノ−３−オキソプロピルチオ］エチルアミン塩酸塩
白色固体；１Ｈ−ＮＭＲ（２５０ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６，ＴＭＳ，ｐｐｍ）：δ ２．４６−２．５２（ｍ，２Ｈ），２．７４（ｍ，４Ｈ），２．９７−３．０４（ｍ，２Ｈ），７．３１−７．４８（ｍ，９Ｈ），８．１４（ｂｒｓ，３Ｈ），９．４５（ｓ，１Ｈ）。
【０１２４】
参考例２４ ２−［３−（２−メチルシクロヘキシル）アミノ−３−オキソプロピルチオ］エチルアミン塩酸塩
白色固体；１Ｈ−ＮＭＲ（２５０ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６，ＴＭＳ，ｐｐｍ）：δ ０．８３（ｄ，Ｊ＝２．５Ｈｚ，３Ｈ），１．００−１．７３（ｍ，９Ｈ），２．３８（ｔ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，２Ｈ），２．７５（ｍ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，４Ｈ），２．９２−２．８０（ｍ，２Ｈ），３．１８−３．２６（ｍ，１Ｈ），７．８５（ｄ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，１Ｈ），８．１９（ｂｒｓ，３Ｈ）。
【０１２５】
参考例２５ ２−［３−（Ｎ−エチル−Ｎ−シクロヘキシル）アミノ−３−オキソプロピルチオ］エチルアミン塩酸塩
褐色油状物；１Ｈ−ＮＭＲ（２５０ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６，ＴＭＳ，ｐｐｍ）：δ １．０１−１．７７（ｍ，１３Ｈ），２．５９−２．８０（ｍ，６Ｈ），２．９５−２．９８（ｍ，２Ｈ），３．１８−３．２８（ｍ，２Ｈ），３．５９ ａｎｄ ４．１３（ｅａｃｈ ｍ，１Ｈ），８．１９（ｂｒｓ，３Ｈ）。
【０１２６】
参考例２６ ２−（３−ヘキシルアミノ−３−オキソプロピルチオ）エチルアミン塩酸塩
白色固体；１Ｈ−ＮＭＲ（２５０ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６，ＴＭＳ，ｐｐｍ）：δ ０．８７（ｄ，Ｊ＝６．２Ｈｚ，３Ｈ），１．２５−１．４１（ｍ，８Ｈ），２．３７（ｔ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，２Ｈ），２．７３（ｍ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，４Ｈ），２．９３−３．０７（ｍ，４Ｈ），８．００（ｔ，Ｊ＝５．０Ｈｚ，１Ｈ），８．１８（ｂｒｓ，３Ｈ）。
【０１２７】
参考例２７ ２−（３−デシルアミノ−３−オキソプロピルチオ）エチルアミン塩酸塩
白色固体；１Ｈ−ＮＭＲ（２５０ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６，ＴＭＳ，ｐｐｍ）：δ ０．８３（ｄ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，３Ｈ），１．２５−１．４１（ｍ，１６Ｈ），２．３７（ｔ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，２Ｈ），２．７３（ｑ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，４Ｈ），２．９３−３．０７（ｍ，４Ｈ），７．９７（ｔ，Ｊ＝５．０Ｈｚ，１Ｈ），８．１０（ｂｒｓ，３Ｈ）。
【０１２８】
参考例２８ ２−［３−オキソ−３−（２−トリフルオロメチルフェニル）アミノプロピルチオ］エチルアミン塩酸塩
褐色固体、潮解性；１Ｈ−ＮＭＲ（２５０ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６，ＴＭＳ，ｐｐｍ）：δ２．６４−２．７０（ｍ，２Ｈ），２．８１（ｍ，４Ｈ），２．９５−３．０４（ｍ，２Ｈ），７．４４−７．５０（ｍ，２Ｈ），７．６６−７．７６（ｍ，２Ｈ），８．０８（ｂｒｓ，３Ｈ），９．７６（ｓ，１Ｈ）。
【０１２９】
参考例２９ ２−［３−オキソ−３−（２，４，６−トリメチルフェニル）アミノプロピルチオ］エチルアミン塩酸塩
白色固体；１Ｈ−ＮＭＲ（２５０ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６，ＴＭＳ，ｐｐｍ）：δ ２．１１（ｓ，６Ｈ），２．１６（ｓ，３Ｈ），２．６４（ｔ，Ｊ＝５．０Ｈｚ，２Ｈ），２．７４（ｍ，４Ｈ），２．９８−３．０４（ｍ，２Ｈ），６．８７（ｓ，２Ｈ），８．０９（ｂｒｓ，３Ｈ），９．３６（ｓ，１Ｈ）。
【０１３０】
参考例３０ ２−［３−オキソ−（３−トリフルオロメチルスルホニルフェニル）アミノプロピルチオ］エチルアミン塩酸塩
白色固体；１Ｈ−ＮＭＲ（２５０ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６，ＴＭＳ，ｐｐｍ）：δ ２．６３−３．０３（ｍ，８Ｈ），７．７９−７．８１（ｍ，２Ｈ），８．１１（ｍ，４Ｈ），８．６１（ｓ，１Ｈ），１１．０（ｓ，１Ｈ）。
【０１３１】
参考例３１ ２−［３−（２−エトキシカルボニル−３−チエニル）アミノ−３−オキソプロピルチオ］エチルアミン塩酸塩
褐色固体；１Ｈ−ＮＭＲ（２５０ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６，ＴＭＳ，ｐｐｍ）：δ １．３１（ｔ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，３Ｈ），２．７−２．８４（ｍ，６Ｈ），２．９５−３．００（ｍ，２Ｈ），４．２８−４．３６（ｍ，２Ｈ），７．９０（ｄ，Ｊ＝５．０Ｈｚ，１Ｈ），７．９４（ｄ，Ｊ＝５．０Ｈｚ，１Ｈ），８．２２（ｂｒｓ，３Ｈ），１０．１（ｓ，１Ｈ）。
【０１３２】
参考例３２ ２−［３−（４−ベンジルオキシフェニル）アミノ−３−オキソプロピルチオ］エチルアミン塩酸塩
褐色固体；１Ｈ−ＮＭＲ（２５０ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６，ＴＭＳ，ｐｐｍ）：δ ２．６３（ｔ，Ｊ＝５．０Ｈｚ，２Ｈ），２．８０−２．８４（ｍ，４Ｈ），２．９８−３．０１（ｍ，２Ｈ），５．０６（ｓ，２Ｈ），６．９５（ｄ，Ｊ＝１０Ｈｚ，２Ｈ），７．３２−７．４５（ｍ，５Ｈ），７．５５（ｄ，Ｊ＝１０Ｈｚ，２Ｈ），８．２０（ｂｒｓ，３Ｈ），１０．１（ｓ，１Ｈ）。
【０１３３】
参考例３３ ２−［３−（４−カルボキシフェニル）アミノ−３−オキソプロピルチオ］エチルアミン塩酸塩
黄色固体；１Ｈ−ＮＭＲ（２５０ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６，ＴＭＳ，ｐｐｍ）：δ ２．６９−２．２８（ｍ，６Ｈ），２．９８−３．０３（ｍ，２Ｈ），７．７３−７．９１（ｍ，４Ｈ），８．１２（ｂｒｓ，３Ｈ），１０．６（ｓ，１Ｈ）。カルボキシル基のプロトンは帰属できなかった。
【０１３４】
参考例３４ ２−［３−（２−カルボキシフェニル）アミノ−３−オキソプロピルチオ］エチルアミン塩酸塩
白色固体；１Ｈ−ＮＭＲ（２５０ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６，ＴＭＳ，ｐｐｍ）：δ ２．７０−２．８６（ｍ，６Ｈ），２．９７−３．０２（ｍ，２Ｈ），７．２０（ｄｄｄ，Ｊ＝２．５，８．０ ａｎｄ ８．０Ｈｚ，１Ｈ），７．６０（ｄｄｄ，Ｊ＝２．５，８．０ ａｎｄ ８．０Ｈｚ，１Ｈ），７．９９（ｄｄ，Ｊ＝２．５ ａｎｄ ８．０Ｈｚ，１Ｈ），８．０９（ｂｒｓ，３Ｈ），８．４７（ｄｄ，Ｊ＝２．５ ａｎｄ ８．０Ｈｚ，１Ｈ），１１．２（ｓ，１Ｈ）。カルボキシル基のプロトンは帰属できなかった。
【０１３５】
参考例３５ ２−［３−（２−エトキシカルボニルフェニル）アミノ−３−オキソプロピルチオ］エチルアミン塩酸塩
白色固体；１Ｈ−ＮＭＲ（２５０ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６，ＴＭＳ，ｐｐｍ）：δ １．３４（ｔ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，３Ｈ），２．７２（ｔ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，２Ｈ），２．６９−２．８９（ｍ，４Ｈ），２．９７−３．０２（ｍ，２Ｈ），４．３２（ｑ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，２Ｈ），７．２１（ｄｄｄ，Ｊ＝２．５，７．５ ａｎｄ ７．５Ｈｚ，１Ｈ），７．６１（ｄｄｄ，Ｊ＝２．５，７．５ ａｎｄ ７．５Ｈｚ，１Ｈ），７．９２（ｄｄ，Ｊ＝２．５ ａｎｄ ７．５Ｈｚ，１Ｈ），８．１７（ｂｒｓ，３Ｈ），８．２３（ｄｄ，Ｊ＝２．５ ａｎｄ ７．５Ｈｚ，１Ｈ），１０．７（ｓ，１Ｈ）。
【０１３６】
参考例３７ ５−（３−フルフリルアミノ−３−オキソプロピルチオ）ペンチルアミン塩酸塩
白色固体、潮解性；１Ｈ−ＮＭＲ（２５０ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６，ＴＭＳ，ｐｐｍ）：δ １．３４−１．６３（ｍ，６Ｈ），２．４０（ｔ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，４Ｈ），２．６７−２．８０（ｍ，４Ｈ），４．２６（ｄ，Ｊ＝５．０Ｈｚ，２Ｈ），６．２５（ｄ，Ｊ＝３．０Ｈｚ，１Ｈ），６．３９（ｄｄ，Ｊ＝０．８ ａｎｄ ３．０Ｈｚ，１Ｈ），７．５７（ｄ，Ｊ＝０．８Ｈｚ，１Ｈ），７．９８（ｂｒｓ，３Ｈ），８．４２（ｔ，Ｊ＝５．０Ｈｚ，１Ｈ）。
【０１３７】
参考例３８ ２−［３−（３−メチルチオフェニル）アミノ−３−オキソプロピルチオ］エチルアミン塩酸塩
褐色固体；１Ｈ−ＮＭＲ（２５０ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６，ＴＭＳ，ｐｐｍ）：δ ２．４５（ｓ，３Ｈ），２．６９（ｔ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，２Ｈ），２．８２（ｍ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，４Ｈ），２．９７−３．０５（ｍ，２Ｈ），６．９３（ｄ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，１Ｈ），７．２４（ｔ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，１Ｈ），７．３９（ｄ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，１Ｈ），７．６８（ｓ，１Ｈ），８．１２（ｂｒｓ，３Ｈ），１０．３（ｓ，１Ｈ）。
【０１３８】
参考例３９ ２−［３−（５−メチルフルフリル）アミノ−３−オキソプロピルチオ］エチルアミン塩酸塩
褐色油状物；１Ｈ−ＮＭＲ（２５０ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６，ＴＭＳ，ｐｐｍ）：δ ２．２３（ｓ，３Ｈ），２．４３（ｔ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，２Ｈ），２．７５（ｔ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，４Ｈ），２．９６（ｍ，２Ｈ），４．２０（ｄ，Ｊ＝５．０Ｈｚ，２Ｈ），５．９８（ｄ，Ｊ＝２．５Ｈｚ，１Ｈ），６．１１（ｄ，Ｊ＝２．５Ｈｚ，１Ｈ），８．１１（ｂｒｓ，３Ｈ），８．４２（ｔ，Ｊ＝５．０Ｈｚ，１Ｈ）。
【０１３９】
参考例４０ ２−［３−オキソ−３−（テトラヒドロフルフリルアミノ）プロピルチオ］エチルアミン塩酸塩
褐色油状物；１Ｈ−ＮＭＲ（２５０ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６，ＴＭＳ，ｐｐｍ）：δ １．５０−１．８４（ｍ，４Ｈ），２．４０（ｔ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，２Ｈ），２．７０−２．７８（ｍ，４Ｈ），２．９２−３．００（ｍ，２Ｈ），３．１２（ｄ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，２Ｈ），３．３７−３．６２（ｍ，２Ｈ），３．７６−３．８５（ｍ，１Ｈ），８．１０−８．１５（ｍ，４Ｈ）。
【０１４０】
参考例４１ ２−［３−（４’−フルオロビフェニル−２−イル）アミノ−３−オキソプロピルチオ］エチルアミン塩酸塩
白色固体；１Ｈ−ＮＭＲ（２５０ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６，ＴＭＳ，ｐｐｍ）：δ ２．４６−２．５３（ｍ，２Ｈ），２．７１−２．７８（ｍ，４Ｈ），２．９５−３．０１（ｍ，２Ｈ），７．２３−７．４６（ｍ，８Ｈ），８．０７（ｂｒｓ，３Ｈ），９．４７（ｓ，１Ｈ）。
【０１４１】
参考例４２ ２−［３−オキソ−３−（ピリジン−４−イルメチル）アミノプロピルチオ］エチルアミン塩酸塩
白色固体；１Ｈ−ＮＭＲ（２５０ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６，ＴＭＳ，ｐｐｍ）：δ ２．５１−２．６０（ｍ，２Ｈ），２．８０（ｔ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，４Ｈ），２．９４−３．０２（ｍ，２Ｈ），４．５７（ｄ，Ｊ＝５．０Ｈｚ，２Ｈ），７．９７（ｄ，Ｊ＝６．５Ｈｚ，２Ｈ），８．２７（ｂｒｓ，３Ｈ），８．８８（ｄ，Ｊ＝６．５Ｈｚ，２Ｈ），９．１３（ｔ，Ｊ＝５．０Ｈｚ，１Ｈ）。
【０１４２】
参考例４３ ２−［３−オキソ−３−（２−フェノキシフェニル）アミノ−３−オキソプロピルチオ］エチルアミン塩酸塩
白色固体；１Ｈ−ＮＭＲ（２５０ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６，ＴＭＳ，ｐｐｍ）：δ ２．６１−２．８３（ｍ，６Ｈ），２．９５（ｍ，２Ｈ），６．８９−６．９２（ｍ，１Ｈ），６．９１−７．００（ｍ，２Ｈ），７．０８−７．１６（ｍ，３Ｈ），７．３６−７．４２（ｍ，２Ｈ），７．９６（ｄｄ，Ｊ＝２．０ ａｎｄ ４．８Ｈｚ，１Ｈ），８．１７（ｂｒｓ，３Ｈ），９．６０（ｓ，１Ｈ）。
【０１４３】
参考例４４ ２−［３−オキソ−３−（ピリジン−２−イルメチル）アミノプロピルチオ］エチルアミン塩酸塩
黄色固体；１Ｈ−ＮＭＲ（２５０ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６，ＴＭＳ，ｐｐｍ）：δ ２．５８（ｔ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，２Ｈ），２．７９（ｔ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，４Ｈ），２．９４−３．０１（ｍ，２Ｈ），４．６８（ｄ，Ｊ＝５．０Ｈｚ，２Ｈ），７．９４（ｄ，Ｊ＝５．０Ｈｚ，１Ｈ），８．２１（ｂｒｓ，３Ｈ），８．５４−８．５５（ｍ，１Ｈ），８．３２（ｄ，Ｊ＝５．０Ｈｚ，１Ｈ），９．１０（ｄ，Ｊ＝５．０Ｈｚ，２Ｈ）。
【０１４４】
参考例４５ ２−［３−オキソ−３−（２−チエニル）アミノプロピルチオ］エチルアミン塩酸塩
白色固体；１Ｈ−ＮＭＲ（２５０ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６，ＴＭＳ，ｐｐｍ）：δ ２．４４（ｔ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，２Ｈ），２．７６（ｔ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，４Ｈ），２．９１−３．０３（ｍ，２Ｈ），４．４４（ｄ，Ｊ＝５．０Ｈｚ，２Ｈ），６．９４−６．９７（ｍ，２Ｈ），７．３８（ｄｄ，Ｊ＝１．５ ａｎｄ ４．８Ｈｚ，１Ｈ），８．１３（ｂｒｓ，３Ｈ），８．６５（ｂｒｔ，Ｊ＝５．０Ｈｚ，１Ｈ）。
【０１４５】
参考例４６ ２−［３−（１−ナフチル）アミノ−３−オキソプロピルチオ］エチルアミン塩酸塩
白色固体；１Ｈ−ＮＭＲ（２５０ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６，ＴＭＳ，ｐｐｍ）：δ ２．８６−３．０６（ｍ，８Ｈ），７．４７−７．５７（ｍ，３Ｈ），７．６８（ｄ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，１Ｈ），７．７８（ｄ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，１Ｈ），７．９３−７．９６（ｍ，１Ｈ），８．１２−８．１４（ｍ，４Ｈ），１０．１５（ｓ，１Ｈ）。
【０１４６】
参考例４７ ２−［３−（１−カルボキシル−２−フェニルエチル）アミノ−３−オキソプロピルチオ］エチルアミン塩酸塩
褐色油状物；１Ｈ−ＮＭＲ（２５０ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６，ＴＭＳ，ｐｐｍ）：δ ２．３９（ｔ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，２Ｈ），２．６１−２．７０（ｍ，４Ｈ），２．７３−３．０８（ｍ，４Ｈ），４．４４−４．４７（ｍ，１Ｈ），７．１９−７．３３（ｍ，５Ｈ），７．９８（ｂｒｓ，３Ｈ），８．３３（ｄ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，１Ｈ）。カルボキシル基のプロトンは帰属できなかった。
【０１４７】
参考例４８ ２−［３−｛１−（メトキシカルボニル）−２−フェニルエチル｝アミノ−３−オキソプロピルチオ］エチルアミン塩酸塩
褐色油状物；１Ｈ−ＮＭＲ（２５０ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６，ＴＭＳ，ｐｐｍ）：δ ２．４０（ｔ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，２Ｈ），２．６２−２．７５（ｍ，４Ｈ），２．９２−３．０２（ｍ，４Ｈ），３．０６（ｓ，３Ｈ），４．４４−４．５３（ｍ，１Ｈ），７．１９−７．３３（ｍ，５Ｈ），８．０８（ｂｒｓ，３Ｈ），８．５１（ｄ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，１Ｈ）。
【０１４８】
参考例４９ ２−［３−｛（５−メチルフラン−２−イル）メチル｝アミノ−３−オキソペンチルチオ］エチルアミン塩酸塩
無色油状物；１Ｈ−ＮＭＲ（２５０ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６，ＴＭＳ，ｐｐｍ）：δ １．３８−１．６０（ｍ，６Ｈ），２．３６−２．７８（ｍ，８Ｈ），２．３１（ｓ，３Ｈ），４．１９（ｄ，Ｊ＝５．０Ｈｚ，２Ｈ），５．９９（ｓ，１Ｈ），６．１０（ｓ，１Ｈ），８．０３（ｂｒｓ，３Ｈ），８．３８（ｂｒｓ，１Ｈ）。
【０１４９】
参考例５０ ２−［３−（Ｎ−エチル−Ｎ−フルフリル）アミノ−３−オキソプロピルチオ］エチルアミン塩酸塩
無色油状物；１Ｈ−ＮＭＲ（２５０ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６，ＴＭＳ，ｐｐｍ）：δ ０．９４−１．０７（ｍ，３Ｈ），２．６６−２．８０（ｍ，６Ｈ），２．９４−２．９９（ｍ，２Ｈ），３．２６−３．３１（ｍ，２Ｈ），４．５２（ｄ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，２Ｈ），６．３１ ａｎｄ ６．４３（ｅａｃｈ ｄ，Ｊ＝２．５Ｈｚ，１Ｈ），６．４１（ｄ，Ｊ＝２．５Ｈｚ，１Ｈ），７．５８ ａｎｄ ７．５６（ｅａｃｈ ｓ，１Ｈ），８．１２（ｂｒｓ，３Ｈ）。
【０１５０】
参考例５１ ２−［３−（Ｎ，Ｎ−ビスフルフリル）アミノ−３−オキソプロピルチオ］エチルアミン塩酸塩
無色油状物；１Ｈ−ＮＭＲ（２５０ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６，ＴＭＳ，ｐｐｍ）：δ ２．７８−２．８７（ｍ，６Ｈ），２．９４−３．０１（ｍ，２Ｈ），４．５１（ｄ，Ｊ＝９．８Ｈｚ，４Ｈ），６．２９（ｄ，Ｊ＝３．０Ｈｚ，１Ｈ），６．４６（ｄ，Ｊ＝３．０Ｈｚ，１Ｈ），６．３９（ｄｄ，Ｊ＝１．８ ａｎｄ ３．０Ｈｚ，１Ｈ），６．４３（ｄｄ，Ｊ＝１．８ ａｎｄ ３．０Ｈｚ，１Ｈ），７．５７（ｄ，Ｊ＝１．８Ｈｚ，１Ｈ），７．６５（ｄ，Ｊ＝１．８Ｈｚ，１Ｈ），８．１６（ｂｒｓ，３Ｈ）。
【０１５１】
参考例５２ ２−［３−オキソ−３−（キノリン−８−イル）アミノプロピルチオ］エチルアミン塩酸塩
褐色固体；１Ｈ−ＮＭＲ（２５０ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６，ＴＭＳ，ｐｐｍ）：δ ２．８２−３．０４（ｍ，８Ｈ），７．６９−７．８５（ｍ，３Ｈ），８．２３（ｂｒｓ，３Ｈ），８．５４（ｄｄｄ，Ｊ＝１．０，７．５ ａｎｄ ７．５Ｈｚ，１Ｈ），８．６５（ｄ，Ｊ＝１．０ ａｎｄ ７．５Ｈｚ，１Ｈ），９．０４（ｄｄ，Ｊ＝１．０ ａｎｄ ５．０Ｈｚ，１Ｈ），１０．４（ｓ，１Ｈ）。
【０１５２】
参考例５３ ２−［３−（２−ベンジルチオエチル）アミノ−３−オキソプロピルチオ］エチルアミン塩酸塩
白色固体；１Ｈ−ＮＭＲ（２５０ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６，ＴＭＳ，ｐｐｍ）：δ ２．３５−２．５１（ｍ，４Ｈ），２．７０−２．７７（ｍ，４Ｈ），２．９７（ｍ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，２Ｈ），３．２４（ｑ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，２Ｈ），３．７６（ｓ，２Ｈ），７．２１−７．３４（ｍ，５Ｈ），８．０７（ｂｒｓ，３Ｈ），８．２０（ｔ，Ｊ＝５．０Ｈｚ，１Ｈ）。
【０１５３】
参考例５４ ２−［３−（Ｎ，Ｎ−ジベンジルアミノ）−３−オキソプロピルチオ］エチルアミン塩酸塩
無色油状物；１Ｈ−ＮＭＲ（２５０ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６，ＴＭＳ，ｐｐｍ）：δ ２．６９−２．７９（ｍ，６Ｈ），２．９６（ｔ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，２Ｈ），４．５３（ｄ，Ｊ＝５．０Ｈｚ，４Ｈ），７．１９−７．４１（ｍ，１０Ｈ），７．９７（ｂｒｓ，３Ｈ）。
【０１５４】
参考例５６ ２−［３−（Ｎ−ベンジル−Ｎ−フルフリル）アミノ−３−オキソプロピルチオ］エチルアミン塩酸塩
無色油状物；１Ｈ−ＮＭＲ（２５０ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６，ＴＭＳ，ｐｐｍ）：δ ２．６４−３．００（ｍ，８Ｈ），４．５０−４．５３（ｍ，４Ｈ），６．３０−６．４４（ｍ，２Ｈ），７．１７−７．３８（ｍ，５Ｈ），７．５８（ｄｄ，Ｊ＝２．５Ｈｚ，１Ｈ），８．０８（ｂｒｓ，３Ｈ）。
【０１５５】
参考例５７ ２−［３−｛Ｎ−（ビフェニル−２−イル）−Ｎ−フルフリル｝アミノ−３−オキソプロピルチオ］エチルアミン塩酸塩
褐色油状物；１Ｈ−ＮＭＲ（２５０ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６，ＴＭＳ，ｐｐｍ）：δ ２．４３−２．７９（ｍ，８Ｈ），３．７０ ａｎｄ ３．７７（ｅａｃｈ ｓ，１Ｈ），５．０７ ａｎｄ ５．１３（ｅａｃｈ ｓ，１Ｈ），６．１４（ｄｄ，Ｊ＝２．０ ａｎｄ ３．３Ｈｚ，１Ｈ），６．３３（ｄｄ，Ｊ＝２．０ ａｎｄ ３．３Ｈｚ，１Ｈ），７．１１（ｄ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，１Ｈ），７．３０−７．５２（ｍ，９Ｈ），８．０３（ｂｒｓ，３Ｈ）。
【０１５６】
参考例５８ ２−［３−｛Ｎ−フルフリル−Ｎ−（３−メチルチオフェニル）｝アミノ−３−オキソプロピルチオ］エチルアミン塩酸塩
褐色油状物；１Ｈ−ＮＭＲ（２５０ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６，ＴＭＳ，ｐｐｍ）：δ ２．３３−２．３５（ｍ，２Ｈ），２．４５（ｓ，３Ｈ），２．６２−２．７５（ｍ，４Ｈ），２．８９（ｔ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，２Ｈ），４．８５（ｓ，２Ｈ），６．１８（ｄ，Ｊ＝３．０Ｈｚ，１Ｈ），６．３５（ｄｄ，Ｊ＝２．５ ａｎｄ ３．０Ｈｚ，１Ｈ），６．９１（ｄ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，１Ｈ），７．０２（ｓ，１Ｈ），７．２２（ｄ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，１Ｈ），７．３２（ｔ，７．５Ｈｚ，１Ｈ），７．５８（ｄ，Ｊ＝２．５Ｈｚ，１Ｈ），８．３４（ｂｒｓ，３Ｈ）。
【０１５７】
参考例５９ ２−［３−｛Ｎ−フルフリル−Ｎ−（２−フルオロフェニル）｝アミノ−３−オキソプロピルチオ］エチルアミン塩酸塩
褐色油状物；１Ｈ−ＮＭＲ（２５０ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６，ＴＭＳ，ｐｐｍ）：δ ２．１７−２．５１（ｍ，２Ｈ），２．６２−２．９４（ｍ，６Ｈ），４．７０（ｄ，Ｊ＝１５．５Ｈｚ，１Ｈ），４．９５（ｄ，Ｊ＝１５．５Ｈｚ，１Ｈ），６．１５（ｄ，Ｊ＝１．５Ｈｚ，１Ｈ），６．３３（ｄｄ，Ｊ＝１．５ ａｎｄ ３．０Ｈｚ，１Ｈ），７．１６−７．４７（ｍ，４Ｈ），７．５４（ｄ，Ｊ＝１．５Ｈｚ，１Ｈ），８．０６（ｂｒｓ，３Ｈ）。
【０１５８】
参考例６０ ２−［３−｛Ｎ−フルフリル−Ｎ−（４−フルオロフェニル）｝アミノ−３−オキソプロピルチオ］エチルアミン塩酸塩
褐色油状物；１Ｈ−ＮＭＲ（２５０ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６，ＴＭＳ，ｐｐｍ）：δ ２．２９（ｔ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，２Ｈ），２．６０−２．７３（ｍ，４Ｈ），２．９１−２．９６（ｍ，２Ｈ），４．８４（ｓ，２Ｈ），６．１７（ｄ，Ｊ＝３．０Ｈｚ，１Ｈ），６．３５（ｄｄ，Ｊ＝１．８ ａｎｄ ３．０Ｈｚ，１Ｈ），７．２３−７．３０（ｍ，４Ｈ），７．５６（ｄ，Ｊ＝１．８Ｈｚ，１Ｈ），８．０４（ｂｒｓ，３Ｈ）。
【０１５９】
参考例６１ ２−［３−｛Ｎ−フルフリル−Ｎ−（３−フルオロフェニル）｝アミノ−３−オキソプロピルチオ］エチルアミン塩酸塩
褐色油状物；１Ｈ−ＮＭＲ（２５０ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６，ＴＭＳ，ｐｐｍ）：δ ２．３３−２．３９（ｍ，２Ｈ），２．８１−２．９５（ｍ，４Ｈ），３．２０−３．２９（ｍ，２Ｈ），４．８４（ｓ，２Ｈ），６．１３（ｄ，Ｊ＝２．５Ｈｚ，１Ｈ），６．２６（ｄｄ，Ｊ＝１．０ ａｎｄ ２．５Ｈｚ，１Ｈ），６．８０−６．９１（ｍ，２Ｈ），７．０３−７．０９（ｍ，１Ｈ），７．２７−７．７６（ｍ，２Ｈ），８．４５（ｂｒｓ，３Ｈ）。
【０１６０】
参考例６２ ２−［３−｛Ｎ−（４−エチルフェニル）−Ｎ−（１，１，１−トリフルオロイソプロピル）｝アミノ−３−オキソプロピルチオ］エチルアミン塩酸塩
黄色油状物；１Ｈ−ＮＭＲ（２５０ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６，ＴＭＳ，ｐｐｍ）：δ １．１４−１．２６（ｍ，６Ｈ），２．１６（ｔ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，２Ｈ），２．６０−２．７３（ｍ，６Ｈ），２．８７（ｔ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，２Ｈ），５．４７−５．５９（ｍ，１Ｈ），７．１２（ｄ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，１Ｈ），７．２５（ｄ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，１Ｈ），７．３４（ｄ，Ｊ＝８．５Ｈｚ，２Ｈ），８．３４（ｂｒｓ，３Ｈ）。
【０１６１】
参考例６３ ２−［３−オキソ−３−｛２−（ピリジン−３−イル）フェニル｝アミノプロピルチオ］エチルアミン塩酸塩
黄色固体、潮解性；１Ｈ−ＮＭＲ（２５０ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６，ＴＭＳ，ｐｐｍ）：δ ２．５６−２．６６（ｍ，２Ｈ），２．６９−２．８０（ｍ，４Ｈ），２．９１−２．９６（ｍ，２Ｈ），７．４０（ｔ，Ｊ＝５．０Ｈｚ，１Ｈ），７．６０（ｔ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，１Ｈ），７．６７−７．７４（ｍ，２Ｈ），７．９０（ｔ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，１Ｈ），８．０４（ｄ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，１Ｈ），８．２７（ｂｒｓ，３Ｈ），８．４９（ｔ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，１Ｈ），８．８８（ｄ，Ｊ＝５．０Ｈｚ，１Ｈ），１０．８（ｓ，１Ｈ）。
【０１６２】
参考例６４ ２−［３−｛Ｎ−フルフリル−Ｎ−４−トルイル｝アミノ−３−オキソプロピルチオ］エチルアミン塩酸塩
褐色油状物；１Ｈ−ＮＭＲ（２５０ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６，ＴＭＳ，ｐｐｍ）：δ ２．２８（ｔ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，２Ｈ），２．３１（ｓ，３Ｈ），２．６２−２．７３（ｍ，４Ｈ），２．８９−２．９１（ｍ，２Ｈ），４．８３（ｓ，２Ｈ），６．１５（ｄ，Ｊ＝２．８Ｈｚ，１Ｈ），６．３４（ｄｄ，Ｊ＝２．０ ａｎｄ ２．８Ｈｚ，１Ｈ），７．０４（ｄ，Ｊ＝８．２Ｈｚ，２Ｈ），７．２２（ｄ，Ｊ＝８．２Ｈｚ，２Ｈ），７．５６（ｄ，Ｊ＝２．０Ｈｚ，１Ｈ），８．１２（ｂｒｓ，３Ｈ）。
【０１６３】
参考例６６ ２−［３−（３’，４’−ジクロロビフェニル−２−イル）アミノ−３−オキソプロピルチオ］エチルアミン塩酸塩
無色油状物；１Ｈ−ＮＭＲ（２５０ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６，ＴＭＳ，ｐｐｍ）：δ ２．４７−２．５２（ｍ，２Ｈ），２．７１−２．７７（ｍ，４Ｈ），２．９１−２．９９（ｍ，２Ｈ），７．３０−７．４１（ｍ，５Ｈ），７．６２（ｄ，Ｊ＝２．０Ｈｚ，１Ｈ），７．６８（ｄ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，１Ｈ），８．０３（ｂｒｓ，３Ｈ），９．５９（ｓ，１Ｈ）。
【０１６４】
参考例６７ ２−［３−（２’−メトキシビフェニル−２−イル）アミノ−３−オキソプロピルチオ］エチルアミン塩酸塩
無色油状物；１Ｈ−ＮＭＲ（２５０ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６，ＴＭＳ，ｐｐｍ）：δ ２．４３（ｔ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，２Ｈ），２．６５−２．７５（ｍ，４Ｈ），２．９１−２．９９（ｍ，２Ｈ），３．７２（ｓ，３Ｈ），７．０２−７．２３（ｍ，５Ｈ），７．３２−７．３９（ｍ，２Ｈ），７．５７（ｄ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，１Ｈ），８．０８（ｂｒｓ，３Ｈ），８．８５（ｓ，１Ｈ）。
【０１６５】
参考例６８ ２−［３−（４’−ｔｅｒｔ−ブチル−ビフェニル−２−イル）アミノ−３−オキソプロピルチオ］エチルアミン塩酸塩
白色固体、潮解性；１Ｈ−ＮＭＲ（２５０ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６，ＴＭＳ，ｐｐｍ）：δ １．３３（ｓ，９Ｈ），２．４８−２．５３（ｍ，２Ｈ），２．７２−２．７６（ｍ，４Ｈ），２．９２−３．０１（ｍ，２Ｈ），７．３２−７．４８（ｍ，８Ｈ），８．１０（ｂｒｓ，３Ｈ），９．４３（ｓ，１Ｈ）。
【０１６６】
参考例６９ ２−［３−｛２−（１−ナフチル）フェニル｝アミノ−３−オキソプロピルチオ］エチルアミン塩酸塩
褐色油状物；潮解性；１Ｈ−ＮＭＲ（２５０ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６，ＴＭＳ，ｐｐｍ）：δ ２．１８−２．５１（ｍ，４Ｈ），２．６０（ｔ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，２Ｈ），２．８３−２．８８（ｍ，２Ｈ），７．３３−７．４８（ｍ，９Ｈ），８．２０（ｍ，５Ｈ），９．４３（ｍ，１Ｈ）。
【０１６７】
参考例７１ ２−［３−｛２−（４−フルオロベンジルチオ）エチルアミノ｝−３−オキソプロピルチオ］エチルアミン塩酸塩
白色固体；１Ｈ−ＮＭＲ（２５０ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６，ＴＭＳ，ｐｐｍ）：δ ２．３６−２．５１（ｍ，４Ｈ），２．７１−２．７８（ｍ，４Ｈ），２．９４−２．９８（ｍ，２Ｈ），３．１９（ｍ，２Ｈ），３．７６（ｓ，２Ｈ），７．１１−７．１８（ｍ，２Ｈ），７．３５−７．４０（ｍ，２Ｈ），８．０９（ｂｒｓ，３Ｈ），８．１９（ｂｒｔ，１Ｈ）。
【０１６８】
参考例７２ ２−［３−｛２−（３−フルオロベンジルチオ）エチルアミノ｝３−オキソプロピルチオ］エチルアミン塩酸塩
白色固体；１Ｈ−ＮＭＲ（２５０ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６，ＴＭＳ，ｐｐｍ）：δ ２．３６−２．５３（ｍ，４Ｈ），２．７０−２．７９（ｍ，４Ｈ），２．９２−２．９７（ｍ，２Ｈ），３．１９−３．２７（ｍ，２Ｈ），３．７８（ｓ，２Ｈ），７．０３−７．１２（ｍ，１Ｈ），７．１６−７．２０（ｍ，２Ｈ），７．３３−７．４１（ｍ，１Ｈ），８．２０（ｍ，４Ｈ）。
【０１６９】
参考例７３ ２−［３−｛２−（２，４−ジクロロベンジルチオ）エチルアミノ｝−３−オキソプロピルチオ］エチルアミン塩酸塩
白色固体；１Ｈ−ＮＭＲ（２５０ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６，ＴＭＳ，ｐｐｍ）：δ ２．３９（ｔ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，２Ｈ），２．４９−２．５４（ｍ，２Ｈ），２．７１−２．７９（ｍ，４Ｈ），２．９２−３．００（ｍ，２Ｈ），３．２１−３．２８（ｍ，２Ｈ），３．８３（ｓ，２Ｈ），７．３８−７．５３（ｍ，２Ｈ），７．６１（ｄ，Ｊ＝２．０Ｈｚ，１Ｈ），８．２０（ｂｒｓ，３Ｈ），８．２７（ｂｒｔ，Ｊ＝５．０Ｈｚ，１Ｈ）。
【０１７０】
参考例７４ ２−［３−オキソ−３−（ターフェニル２−イル）アミノプロピルチオ］エチルアミン塩酸塩
白色固体；潮解性；１Ｈ−ＮＭＲ（２５０ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６，ＴＭＳ，ｐｐｍ）：δ ２．５２−２．５６（ｍ，２Ｈ），２．７０−２．８０（ｍ，４Ｈ），２．９５−３．０１（ｍ，２Ｈ），７．３０−７．４８（ｍ，９Ｈ），７．７２−７．７５（ｍ，４Ｈ），８．２０（ｂｒｓ，３Ｈ），９．５０（ｍ，１Ｈ）。
【０１７１】
参考例７５ ２−［３−（２−（２−ナフチル）フェニル）アミノ−３−オキソプロピルチオ］エチルアミン塩酸塩
白色固体；１Ｈ−ＮＭＲ（２５０ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６，ＴＭＳ，ｐｐｍ）：δ ２．４５−２．５２（ｍ，２Ｈ），２．７０−２．７５（ｍ，４Ｈ），２．９１−２．９９（ｍ，２Ｈ），７．３２−７．５８（ｍ，７Ｈ），７．９６−８．０４（ｍ，７Ｈ），９．４７（ｓ，１Ｈ）。
【０１７２】
参考例７６ ２−［３−｛２−（シクロペンチルチオ）エチルアミノ｝−３−オキソプロピルチオ］エチルアミン塩酸塩
白色固体；１Ｈ−ＮＭＲ（２５０ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６，ＴＭＳ，ｐｐｍ）：δ １．５７−１．９８（ｍ，６Ｈ），２．３５−２．３９（ｍ，２Ｈ），２．５０（ｔ，Ｊ＝２．５Ｈｚ，２Ｈ），２．５３−２．６０（ｍ，２Ｈ），２．７０−２．７９（ｍ，４Ｈ），２．９５（ｍ，２Ｈ），３．１５−３．３８（ｍ，３Ｈ），８．１３（ｂｒｓ，３Ｈ），８．２２（ｔ，Ｊ＝５．０Ｈｚ，１Ｈ）。
【０１７３】
参考例７７ ２−［３−オキソ−３−｛２−（２−プロピレンチオ）エチルアミノ｝プロピルチオ］エチルアミン塩酸塩
白色固体；１Ｈ−ＮＭＲ（２５０ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６，ＴＭＳ，ｐｐｍ）：δ ２．３９（ｔ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，２Ｈ），２．４６−２．５２（ｍ，２Ｈ），２．７０−２．７９（ｍ，４Ｈ），２．９３−３．００（ｍ，２Ｈ），３．１６−３．２６（ｍ，４Ｈ），５．０７−５．１８（ｍ，２Ｈ），５．７１−５．８１（ｍ，１Ｈ），８．１９−８．２０（ｍ，４Ｈ）。
【０１７４】
参考例７９ ２−（３−オキソ−３−フェニルアミノプロピルチオ）エチルアミン塩酸塩
白色固体；１Ｈ−ＮＭＲ（２５０ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６，ＤＭＳＯ，ｐｐｍ）：δ ２．５８−２．７０（ｍ，２Ｈ），２．７２−２．９０（ｍ，４Ｈ），２．９１−３．１２（ｍ，２Ｈ），６．９６−７．１０（ｍ，１Ｈ），７．２０−７．３８（ｍ，３Ｈ），７．５６−７．７０（ｍ，２Ｈ），７．８０−８．２０（ｍ，３Ｈ）。
【０１７５】
参考例８０ ２−｛３−（４−メチルフェニル）アミノ−３−オキソプロピルチオ）エチルアミン塩酸塩
白色固体；１Ｈ−ＮＭＲ（２５０ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６，ＤＭＳＯ，ｐｐｍ）：δ ２．２６（ｓ，３Ｈ），２．６２（ｔ，Ｊ＝７．０Ｈｚ，２Ｈ），２．７６（ｔ，Ｊ＝７．０Ｈｚ，２Ｈ），２．８３（ｔ，Ｊ＝７．０Ｈｚ，２Ｈ），３．０２（ｔ，Ｊ＝７．０Ｈｚ，２Ｈ），７．１１（ｄ，Ｊ＝８．２Ｈｚ，２Ｈ），７．４９（ｄ，Ｊ＝８．２Ｈｚ，２Ｈ），７．８４（ｍ，３Ｈ），９．９６（ｓ，１Ｈ）。
【０１７６】
参考例８１ ２−｛３−（２−メチルフェニル）アミノ−３−オキソプロピルチオ）エチルアミン塩酸塩
白色固体；１Ｈ−ＮＭＲ（２５０ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６，ＤＭＳＯ，ｐｐｍ）：δ ２．２２（ｓ，３Ｈ），２．６８（ｔ，Ｊ＝７．１Ｈｚ，２Ｈ），２．７３−２．９３（ｍ，４Ｈ），３．０２（ｔ，Ｊ＝７．１Ｈｚ，２Ｈ），７．０２−７．２８（ｍ，３Ｈ），７．３８（ｄ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，１Ｈ），７．７２−７．３０（ｍ，３Ｈ），９．４６（ｓ，１Ｈ）。
【０１７７】
参考例８２ ２−｛３−（４−フルオロフェニル）アミノ−３−オキソプロピルチオ）エチルアミン塩酸塩
白色固体；１Ｈ−ＮＭＲ（２５０ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６，ＤＭＳＯ，ｐｐｍ）：δ ２．６４（ｔ，Ｊ＝７．３Ｈｚ，２Ｈ），２．７０−３．１０（ｍ，４Ｈ），２．９０−３．１０（ｍ，２Ｈ），７．０７−７．２５（ｍ，２Ｈ），７．５５−７．７０（ｍ，２Ｈ），７．８０−８．２０（ｍ，３Ｈ），１０．２４（ｂｒｓ，１Ｈ）。
【０１７８】
参考例８３ ２−（３−ベンジルアミノ−３−オキソプロピルチオ）エチルアミン塩酸塩
白色固体；１Ｈ−ＮＭＲ（２５０ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６，ＤＭＳＯ，ｐｐｍ）：δ ２．４８（ｔ，Ｊ＝７．３Ｈｚ，２Ｈ），２．６５−２．８５（ｍ，４Ｈ），２．９０−３．１０（ｍ，２Ｈ），４．２９（ｄ，Ｊ＝５．９Ｈｚ，２Ｈ），７．１６−７．４０（ｍ，５Ｈ），７．８０−８．３０（ｍ，３Ｈ），８．５５（ｂｒｔ，Ｊ＝５．９Ｈｚ，１Ｈ）。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
一般式（１）
【化１】
（式中、Ｒ１およびＲ２は各々独立に、水素原子；炭素数１から１２のアルキル基；炭素数１から６のアルキル基で置換されていてもよい炭素数３から６のシクロアルキル基；炭素数２から６のハロアルキル基；テトラヒドロフルフリル基；ピリジルメチル基；炭素数３から６のシクロアルキルチオ基で置換されている炭素数１から６のアルキル基；ハロゲン原子で置換されていてもよい炭素数７から１１のアラルキルチオ基で置換されている炭素数１から６のアルキル基；炭素数３から６のアルケニルチオ基で置換されている炭素数１から６のアルキル基；炭素数１から６のアルコキシカルボニル基もしくはカルボキシル基で置換されていてもよい炭素数７から１１のアラルキル基；炭素数１から６のアルキル基で置換されていてもよいフルフリル基；ハロゲン原子、炭素数１から６のアルキル基、炭素数１から６のハロアルキル基、炭素数１から６のアルコキシ基、フェノキシ基、炭素数７から１１のアラルキルオキシ基、炭素数１から６のアルキルチオ基、炭素数１から６のハロアルキルスルホニル基、炭素数１から６のアルコキシカルボニル基、カルボキシル基、ナフチル基およびピリジル基からなる群より選択される１つ以上の基で置換されていてもよいフェニル基；ハロゲン原子、炭素数１から６のアルキル基もしくは炭素数１から６のアルコキシ基で置換されていてもよいビフェニリル基；ナフチル基；炭素数１から６のアルコキシカルボニル基もしくはカルボキシル基で置換されていてもよいチエニル基；チアゾリル基；ベンゾチアゾリル基；キノリル基；またはターフェニル基を表す。Ｒ１とＲ２は結合する窒素原子と一体となって複素環を形成していてもよい。ｎは１から９の整数を表す。）で表されるω−（３−アミノ−３−オキソプロピルチオ）アルキルアミノ基を、不溶性担体に固定化して得られる、タンパク質の分析、分離・精製用吸着剤。
【請求項２】
活性基を有する不溶性担体と、一般式（１ａ）
【化２】
（式中、Ｒ１およびＲ２は各々独立に、水素原子；炭素数１から１２のアルキル基；炭素数１から６のアルキル基で置換されていてもよい炭素数３から６のシクロアルキル基；炭素数２から６のハロアルキル基；テトラヒドロフルフリル基；ピリジルメチル基；炭素数３から６のシクロアルキルチオ基で置換されている炭素数１から６のアルキル基；ハロゲン原子で置換されていてもよい炭素数７から１１のアラルキルチオ基で置換されている炭素数１から６のアルキル基；炭素数３から６のアルケニルチオ基で置換されている炭素数１から６のアルキル基；炭素数１から６のアルコキシカルボニル基もしくはカルボキシル基で置換されていてもよい炭素数７から１１のアラルキル基；炭素数１から６のアルキル基で置換されていてもよいフルフリル基；ハロゲン原子、炭素数１から６のアルキル基、炭素数１から６のハロアルキル基、炭素数１から６のアルコキシ基、フェノキシ基、炭素数７から１１のアラルキルオキシ基、炭素数１から６のアルキルチオ基、炭素数１から６のハロアルキルスルホニル基、炭素数１から６のアルコキシカルボニル基、カルボキシル基、ナフチル基およびピリジル基からなる群より選択される１つ以上の基で置換されていてもよいフェニル基；ハロゲン原子、炭素数１から６のアルキル基もしくは炭素数１から６のアルコキシ基で置換されていてもよいビフェニリル基；ナフチル基；炭素数１から６のアルコキシカルボニル基もしくはカルボキシル基で置換されていてもよいチエニル基；チアゾリル基；ベンゾチアゾリル基；キノリル基；またはターフェニル基を表す。Ｒ１とＲ２は結合する窒素原子と一体となって複素環を形成していてもよい。ｎは１から９の整数を表す。）で表されるω−（３−アミノ−３−オキソプロピルチオ）アルキルアミン誘導体とを反応させて得られる、請求項１に記載のタンパク質の分析、分離・精製用吸着剤。
【請求項３】
不溶性担体が有する活性基がスクシンイミドオキシカルボニル基、カルボキシル基、ホルミル基、２，２，２−トリフルオロエチルスルホニルオキシ基またはエポキシ基である、請求項２に記載のタンパク質の分析、分離・精製用吸着剤。
【請求項４】
Ｒ１およびＲ２が各々独立に、水素原子；ベンジル基；フルフリル基；ハロゲン原子、メチルチオ基およびピリジル基からなる群より選択される基で置換されていてもよいフェニル基；ハロゲン原子で置換されていてもよいビフェニリル基；ナフチル基；カルボキシル基で置換されていてもよいチエニル基；またはキノリル基を表し、ｎが１から４の整数である、請求項１から３のいずれかに記載のタンパク質の分析、分離・精製用吸着剤。
【請求項５】
不溶性担体が、表面プラズモン共鳴測定センサーチップ、アガロース、キトサン、セルロースまたはポリメタクリレートである請求項１から４のいずれかに記載のタンパク質の分析、分離・精製用吸着剤。
【請求項６】
請求項１から５のいずれかに記載のタンパク質の分析、分離・精製用吸着剤を用いた、タンパク質の分析、分離・精製法。
【請求項７】
タンパク質が免疫グロブリンまたはこの類縁体、フラグメントもしくは融合体である、請求項６に記載のタンパク質の分析、分離・精製法。
【請求項１】
一般式（１）
【化１】
（式中、Ｒ１およびＲ２は各々独立に、水素原子；炭素数１から１２のアルキル基；炭素数１から６のアルキル基で置換されていてもよい炭素数３から６のシクロアルキル基；炭素数２から６のハロアルキル基；テトラヒドロフルフリル基；ピリジルメチル基；炭素数３から６のシクロアルキルチオ基で置換されている炭素数１から６のアルキル基；ハロゲン原子で置換されていてもよい炭素数７から１１のアラルキルチオ基で置換されている炭素数１から６のアルキル基；炭素数３から６のアルケニルチオ基で置換されている炭素数１から６のアルキル基；炭素数１から６のアルコキシカルボニル基もしくはカルボキシル基で置換されていてもよい炭素数７から１１のアラルキル基；炭素数１から６のアルキル基で置換されていてもよいフルフリル基；ハロゲン原子、炭素数１から６のアルキル基、炭素数１から６のハロアルキル基、炭素数１から６のアルコキシ基、フェノキシ基、炭素数７から１１のアラルキルオキシ基、炭素数１から６のアルキルチオ基、炭素数１から６のハロアルキルスルホニル基、炭素数１から６のアルコキシカルボニル基、カルボキシル基、ナフチル基およびピリジル基からなる群より選択される１つ以上の基で置換されていてもよいフェニル基；ハロゲン原子、炭素数１から６のアルキル基もしくは炭素数１から６のアルコキシ基で置換されていてもよいビフェニリル基；ナフチル基；炭素数１から６のアルコキシカルボニル基もしくはカルボキシル基で置換されていてもよいチエニル基；チアゾリル基；ベンゾチアゾリル基；キノリル基；またはターフェニル基を表す。Ｒ１とＲ２は結合する窒素原子と一体となって複素環を形成していてもよい。ｎは１から９の整数を表す。）で表されるω−（３−アミノ−３−オキソプロピルチオ）アルキルアミノ基を、不溶性担体に固定化して得られる、タンパク質の分析、分離・精製用吸着剤。
【請求項２】
活性基を有する不溶性担体と、一般式（１ａ）
【化２】
（式中、Ｒ１およびＲ２は各々独立に、水素原子；炭素数１から１２のアルキル基；炭素数１から６のアルキル基で置換されていてもよい炭素数３から６のシクロアルキル基；炭素数２から６のハロアルキル基；テトラヒドロフルフリル基；ピリジルメチル基；炭素数３から６のシクロアルキルチオ基で置換されている炭素数１から６のアルキル基；ハロゲン原子で置換されていてもよい炭素数７から１１のアラルキルチオ基で置換されている炭素数１から６のアルキル基；炭素数３から６のアルケニルチオ基で置換されている炭素数１から６のアルキル基；炭素数１から６のアルコキシカルボニル基もしくはカルボキシル基で置換されていてもよい炭素数７から１１のアラルキル基；炭素数１から６のアルキル基で置換されていてもよいフルフリル基；ハロゲン原子、炭素数１から６のアルキル基、炭素数１から６のハロアルキル基、炭素数１から６のアルコキシ基、フェノキシ基、炭素数７から１１のアラルキルオキシ基、炭素数１から６のアルキルチオ基、炭素数１から６のハロアルキルスルホニル基、炭素数１から６のアルコキシカルボニル基、カルボキシル基、ナフチル基およびピリジル基からなる群より選択される１つ以上の基で置換されていてもよいフェニル基；ハロゲン原子、炭素数１から６のアルキル基もしくは炭素数１から６のアルコキシ基で置換されていてもよいビフェニリル基；ナフチル基；炭素数１から６のアルコキシカルボニル基もしくはカルボキシル基で置換されていてもよいチエニル基；チアゾリル基；ベンゾチアゾリル基；キノリル基；またはターフェニル基を表す。Ｒ１とＲ２は結合する窒素原子と一体となって複素環を形成していてもよい。ｎは１から９の整数を表す。）で表されるω−（３−アミノ−３−オキソプロピルチオ）アルキルアミン誘導体とを反応させて得られる、請求項１に記載のタンパク質の分析、分離・精製用吸着剤。
【請求項３】
不溶性担体が有する活性基がスクシンイミドオキシカルボニル基、カルボキシル基、ホルミル基、２，２，２−トリフルオロエチルスルホニルオキシ基またはエポキシ基である、請求項２に記載のタンパク質の分析、分離・精製用吸着剤。
【請求項４】
Ｒ１およびＲ２が各々独立に、水素原子；ベンジル基；フルフリル基；ハロゲン原子、メチルチオ基およびピリジル基からなる群より選択される基で置換されていてもよいフェニル基；ハロゲン原子で置換されていてもよいビフェニリル基；ナフチル基；カルボキシル基で置換されていてもよいチエニル基；またはキノリル基を表し、ｎが１から４の整数である、請求項１から３のいずれかに記載のタンパク質の分析、分離・精製用吸着剤。
【請求項５】
不溶性担体が、表面プラズモン共鳴測定センサーチップ、アガロース、キトサン、セルロースまたはポリメタクリレートである請求項１から４のいずれかに記載のタンパク質の分析、分離・精製用吸着剤。
【請求項６】
請求項１から５のいずれかに記載のタンパク質の分析、分離・精製用吸着剤を用いた、タンパク質の分析、分離・精製法。
【請求項７】
タンパク質が免疫グロブリンまたはこの類縁体、フラグメントもしくは融合体である、請求項６に記載のタンパク質の分析、分離・精製法。
【図１】
【図２】
【図３】
【図４】
【図５】
【図６】
【図７】
【図８】
【図９】
【図１０】
【図１１】
【図２】
【図３】
【図４】
【図５】
【図６】
【図７】
【図８】
【図９】
【図１０】
【図１１】
【公開番号】特開２０１３−８３４４７（Ｐ２０１３−８３４４７Ａ）
【公開日】平成２５年５月９日（２０１３．５．９）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２０１１−２２１４２７（Ｐ２０１１−２２１４２７）
【出願日】平成２３年１０月５日（２０１１．１０．５）
【出願人】（０００００３３００）東ソー株式会社 (1,901)
【出願人】（０００１７３７６２）公益財団法人相模中央化学研究所 (151)
【Ｆターム（参考）】
【公開日】平成２５年５月９日（２０１３．５．９）
【国際特許分類】
【出願日】平成２３年１０月５日（２０１１．１０．５）
【出願人】（０００００３３００）東ソー株式会社 (1,901)
【出願人】（０００１７３７６２）公益財団法人相模中央化学研究所 (151)
【Ｆターム（参考）】
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