ナリンゲニンカルコンを有効成分とするヒスタミン遊離抑制剤又はロイコトリエン遊離抑制剤を含有する医薬品、飲食品又は化粧品
【課題】新規なヒスタミン遊離抑制剤又はロイコトリエン遊離抑制剤、それを含有する医薬品、飲食品又は化粧品を提供することを課題とする。
【解決手段】ナリンゲニンカルコン又はその塩を有効成分とするヒスタミン遊離抑制剤又はロイコトリエン遊離抑制剤、及び上記薬剤を含有することを特徴とする、医薬品、飲食品又は化粧品。
本発明のヒスタミン遊離抑制剤又はロイコトリエン遊離抑制剤は、種々のアレルギー性疾患の予防・治療剤、抗炎症剤として有用である。また、本発明のヒスタミン遊離抑制剤又はロイコトリエン遊離抑制剤は、Ｉ型アレルギー反応における、肥満細胞からのヒスタミン遊離を阻害することから、これに起因するアトピー性皮膚炎、アレルギー性鼻炎、花粉症お又はアレルギー性喘息等の予防、治療に、特に有用である。
【解決手段】ナリンゲニンカルコン又はその塩を有効成分とするヒスタミン遊離抑制剤又はロイコトリエン遊離抑制剤、及び上記薬剤を含有することを特徴とする、医薬品、飲食品又は化粧品。
本発明のヒスタミン遊離抑制剤又はロイコトリエン遊離抑制剤は、種々のアレルギー性疾患の予防・治療剤、抗炎症剤として有用である。また、本発明のヒスタミン遊離抑制剤又はロイコトリエン遊離抑制剤は、Ｉ型アレルギー反応における、肥満細胞からのヒスタミン遊離を阻害することから、これに起因するアトピー性皮膚炎、アレルギー性鼻炎、花粉症お又はアレルギー性喘息等の予防、治療に、特に有用である。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、新規なヒスタミン遊離抑制剤又はロイコトリエン遊離抑制剤を含有することを特徴とする医薬品、飲食品又は化粧品に関する。
【背景技術】
【０００２】
最近、花粉症やアトピー性皮膚炎などのアレルギー性疾患の患者が増大し、大きな社会問題になっている。一般的にアレルギー反応には、アナフィラキシー（Ｉ型）、細胞障害型（ＩＩ型）、アルサス型（ＩＩＩ型）及び細胞介在型（遅延型）（ＩＶ型）の４つの型があるが、最近特に問題になっている花粉症はＩ型アレルギーに分類される。また、アトピー性皮膚炎もＩ型アレルギー反応が主体といわれている。
【０００３】
このＩ型アレルギーにおいては、抗原の侵入により産生されたＩｇＥ抗体が肥満細胞上のＦｃレセプターに結合し、再び侵入した抗原がこのＩｇＥ抗体と結合すると肥満細胞内顆粒中のヒスタミン、マクロファージ中のロイコトリエンなどの化学物質が遊離され、直接的あるいは間接的に喘息や鼻炎などの症状を伴う急性炎症反応を引き起こす。従って、Ｉ型アレルギー反応を防ぐためには、上記経路のいずれかを切断すればよいことになる。
【０００４】
従来より、抗アレルギー作用を有する医薬成分の研究は数多く行われており、当作用を有する数多くの合成化合物が報告されている。しかし、ヒスタミン遊離抑制活性又はロイコトリエン遊離抑制活性を有する天然物質はあまり知られていない。さらに十分なヒスタミン遊離抑制活性又はロイコトリエン遊離抑制活性を有する安全な天然物質はほとんど得られていない。このため、特に医療の現場では、十分なヒスタミン遊離抑制活性又はロイコトリエン遊離抑制活性を有する化合物の探索及びヒスタミン遊離抑制剤又はロイコトリエン遊離抑制剤の開発が求められている。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
本発明の課題は、新規なヒスタミン遊離抑制剤又はロイコトリエン遊離抑制剤を含有する医薬品、飲食品又は化粧品を提供することを課題とする。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
本発明者等は、アレルギー性疾患の治療に有効となる指標を、ヒスタミン遊離抑制活性又はロイコトリエン遊離抑制活性とし、新規なヒスタミン遊離抑制剤又はロイコトリエン遊離抑制剤を探索するべく鋭意研究を重ねた。その結果、ナリンゲニンカルコンが、ヒスタミン遊離抑制活性又はロイコトリエン遊離抑制活性を有することを見出し、本発明を完成するに至った。
即ち、本発明は、
（１）ナリンゲニンカルコン若しくはその塩を有効成分とするヒスタミン遊離抑制剤又はロイコトリエン遊離抑制剤を含有することを特徴とする、医薬品、飲食品又は化粧品。
を提供するものである。
【発明の効果】
【０００７】
本発明により、ナリンゲニンカルコン若しくはその塩を有効成分とするヒスタミン遊離抑制剤又はロイコトリエン遊離抑制剤を含有することを特徴とする、医薬品、飲食品又は化粧品が提供された。
本発明のヒスタミン遊離抑制剤又はロイコトリエン遊離抑制剤を含有することを特徴とする、医薬品、飲食品又は化粧品は、種々のアレルギー性疾患の予防・治療剤、抗炎症剤として有用である。また、本発明のヒスタミン遊離抑制剤又はロイコトリエン遊離抑制剤を含有することを特徴とする、医薬品、飲食品又は化粧品は、Ｉ型アレルギー反応における、肥満細胞からのヒスタミン遊離を阻害することから、これに起因するアトピー性皮膚炎、アレルギー性鼻炎、花粉症お又はアレルギー性喘息等の予防、治療に、特に有用である。
【発明を実施するための最良の形態】
【０００８】
〔本発明のヒスタミン遊離抑制剤又はロイコトリエン遊離抑制剤〕
以下に本発明のヒスタミン遊離抑制剤又はロイコトリエン遊離抑制剤、その製造法及びその用途について説明する。
本発明のヒスタミン遊離抑制剤又はロイコトリエン遊離抑制剤は、ナリンゲニンカルコン若しくはその塩を有効成分とする。ナリンゲニンカルコン（２’４’６’４’−Ｔｅｔｒａｈｙｄｒｏｘｙｃｈａｌｃｏｎｅ）は、下記構造式（１）で示される物質である。
構造式（１）：
【０００９】
【化１】
【００１０】
実施例に示す通り、ナリンゲニンカルコンは、優れたヒスタミン遊離抑制活性、ロイコトリエン遊離抑制活性及びアナフィラキシー抑制活性を示す。したがって、ナリンゲニンカルコン若しくはその塩を有効成分とするヒスタミン遊離抑制剤又はロイコトリエン遊離抑制剤は、種々のアレルギー性疾患の予防剤又は治療剤、抗炎症剤として有用である。アレルギー性疾患とは、例えば、アトピー性皮膚炎、アレルギー性鼻炎、花粉症、アレルギー性喘息、食物アレルギー、炎症、アナフィラキシー等である。
【００１１】
本発明のヒスタミン遊離抑制剤又はロイコトリエン遊離抑制剤は、Ｉ型アレルギー反応における、肥満細胞からのヒスタミン遊離を抑制することから、これに起因するアトピー性皮膚炎、アレルギー性鼻炎、花粉症お又はアレルギー性喘息等の予防、治療に、特に有用である。
【００１２】
なお、ヒスタミン遊離抑制剤又はロイコトリエン遊離抑制剤としての活性を有する限り、ナリンゲニンカルコンは、その塩であってもよい。ナリンゲニンカルコンの塩としては、例えば、薬理上許容される塩が挙げられる。
【００１３】
薬理上許容される塩としては、特に限定されないが、例えば、アルカリ金属(ナトリウム、カリウム等)、アルカリ土類金属(マグネシウム、カルシウム等)。これらの水酸化物又は炭酸塩、アルカリ金属アルコキサイド(ナトリウムメトキサイド、カリウムt-プトキサイド等)との塩が挙げられる。また、塩としては、無機酸（塩酸、硫酸、リン酸）や有機酸（マレイン酸、クエン酸、フマル酸等）を付加した酸付加塩、更にはアミンの付加塩、アミノ酸の付加塩等が挙げられる。なお、上記の塩の水和物もここでいう塩に含まれる。
【００１４】
２．ヒスタミン遊離抑制剤又はロイコトリエン遊離抑制剤の製造法
本発明のヒスタミン遊離抑制剤又はロイコトリエン遊離抑制剤の有効成分であるナリンゲニンカルコンは、どのような方法で製造されたものであってもよく、ナリンゲニンカルコンを含有する生物から精製する方法、化学合成法、半合成法等が広く採用できる。
【００１５】
ナリンゲニンカルコンは植物、例えば柑橘類、野菜類、具体的にはトマトより抽出することができる。トマトよりナリンゲニンカルコンを精製する場合は、トマト果皮あるいは搾汁粕に、１０倍量の６０％エタノールを加え、６０度の温水中で３時間抽出を行う。ナリンゲニンカルコンを含む抽出物が得られるので、該抽出物を高速液体クロマトグラフィーに供する。ヒスタミン遊離抑制活性を示す画分を採取した後、各画分に含まれる化合物の構造を確認することにより、ナリンゲニンカルコンを精製することができる。
なお、本発明のヒスタミン遊離抑制剤又はロイコトリエン遊離抑制剤は、精製されたナリンゲニンカルコンのみを含むものに限定されず、ナリンゲニンカルコンを含む粗精製物であってもよい。
【００１６】
〔本発明のヒスタミン遊離抑制剤又はロイコトリエン遊離抑制剤の用途〕
本発明のヒスタミン遊離抑制剤又はロイコトリエン遊離抑制剤は、実施例に示す通り、ヒスタミン遊離抑制活性、ロイコトリエン遊離抑制活性及びアナフィラキシー抑制活性を示す。したがって、該ヒスタミン遊離抑制剤又はロイコトリエン遊離抑制剤は、種々のアレルギー性疾患の予防剤又は治療剤、抗炎症剤として有用である。本発明のヒスタミン遊離抑制剤又はロイコトリエン遊離抑制剤は、特にＩ型アレルギー反応に起因するアレルギー性疾患の予防、治療に有用である。
該ヒスタミン遊離抑制剤又はロイコトリエン遊離抑制剤は、ヒスタミン遊離抑制活性あるいはロイコトリエン遊離抑制活性を有する医薬品、飲食品又は化粧品として、これらの製品に添加して使用できる。
本発明のヒスタミン遊離抑制剤又はロイコトリエン遊離抑制剤を含有する医薬品、飲食品又は化粧品は、単独で医薬品、飲食品又は化粧品として使用してもよく、また、他の抗アレルギー剤と併用してもよい。
【００１７】
１．医薬品
本発明のヒスタミン遊離抑制剤又はロイコトリエン遊離抑制剤は、そのまま、若しくはこれを公知の医薬用担体と共に製剤化することにより医薬品として使用できる。本発明のヒスタミン遊離抑制剤又はロイコトリエン遊離抑制剤は、例えば、錠剤、顆粒剤、粉剤、シロップ剤等の経口剤や、坐剤、外用剤等の非経口剤として製剤化できる。医薬用担体としては、特に制限はなく、例えば、固形担体（デンプン、乳糖、カルボキシメチルセルロース等）、液体担体（蒸留水、生理食塩水、ブドウ糖水溶液、エタノール、プロピレングリコール等）、油性担体（各種の動植物油、白色ワセリン、パラフィン等）が挙げられる。
上記医薬品は、人及び人以外の動物（ペット、家畜）用として使用できる。上記医薬の服用量は、それを使用する患者等の症状、性別、年齢に応じて適宜設定すればよいが、例えば、成人一人あたり一日に０．１〜１，０００ｍｇ程度摂取できるよう服用すればよい。
【００１８】
２．飲食品
本発明のヒスタミン遊離抑制剤又はロイコトリエン遊離抑制剤を飲食品に添加することにより、その飲食品に、ヒスタミン遊離抑制活性又はロイコトリエン遊離抑制活性を付与することができる。
添加されるべき飲食品は特に限定されないが、肉製品、加工野菜、惣菜類、乳製品、菓子、パン、清涼飲料、果実飲料、酒類等が挙げられる。飲食品に対する本発明のヒスタミン遊離抑制剤又はロイコトリエン遊離抑制剤の配合率も特に限定されない。
また、本発明のヒスタミン遊離抑制剤又はロイコトリエン遊離抑制剤とその他の飲食品素材を混合して、顆粒状・粉末状・錠剤状あるいはブロック状などに成形し、飲食品素材や健康食品等としてもよい。その他の飲食品素材とは、例えば、糖類、食用たんぱく質、アルコール、ビタミン、増粘多糖類、アミノ酸、カルシウム塩類、色素、香料、保存剤等である。
【００１９】
３．化粧品
本発明のヒスタミン遊離抑制剤又はロイコトリエン遊離抑制剤は、化粧品に添加し、その化粧品にヒスタミン遊離抑制活性又はロイコトリエン遊離抑制活性を付与することができる。化粧品とは、特に限定されないが、例えば、化粧水、化粧クリーム、乳液、ファンデーション、口紅、整髪料、ヘアトニック、育毛料、歯磨き、洗口料、シャンプー、リンス等である。化粧品を調製する場合には、植物油等の油脂類、ラノリンやミツロウ等のロウ類、炭化水素類、脂肪酸、高級アルコール類、種々の界面活性剤、色素、香料、ビタミン類、植物・動物抽出成分、紫外線吸収剤、抗酸化剤、保存剤等、通常の化粧品原料として使用されているものを適宜配合して製造することができる。
【００２０】
以下に、本発明のヒスタミン遊離抑制剤又はロイコトリエン遊離抑制剤の製造方法、ヒスタミン遊離抑制試験、ロイコトリエン遊離抑制試験、アナフィラキシー抑制活性試験、並びに本発明のヒスタミン遊離抑制剤又はロイコトリエン遊離抑制剤を含有する医薬品・飲食品・化粧品の製造に関する実施例を示す。
【実施例１】
【００２１】
本発明のヒスタミン遊離抑制剤又はロイコトリエン遊離抑制剤の製造方法：
１．ナリンゲニンカルコンの精製法
トマトの果皮を６０％エタノール、６０度の温水中で2時間抽出を行った。これをろ過し、得たろ液を減圧濃縮した後、高速液体クロマトグラフィー（カラムＳＨＩＳＥＩＤＯ ＣＡＰＣＥＬＬ ＰＡＫ Ｃ１８ １５ ｍｍφ×２５０ ｍｍ； 溶離液， ０．１％ トリフルオロ酢酸を含むアセトニトリル／水＝４０／６０）で分画して、ヒスタミン遊離抑制成分を得た。上記成分をＬＣ−ＭＳ、ＮＭＲなどを駆使して同定を行った。１Ｈ−ＮＭＲスペクトルを図１、１３Ｃ−ＮＭＲスペクトルを図２、ＬＣ−ＭＳを図３に示した。以上により、該化合物がナリンゲニンカルコンであることを確認した。なお、精製の各段階で得られた画分のヒスタミン遊離抑制活性は、実施例２記載の方法により行なった。
【実施例２】
【００２２】
ラット肥満細胞からのヒスタミン遊離抑制活性の測定：
ナリンゲニンカルコンについて、下記方法でヒスタミン遊離抑制活性を測定した。その結果を表１に示した。
（１）ラットを放血致死後直ちに腹腔よりヘパリン含有肥満細胞用緩衝液（組成：０．１５０Ｍ ＮａＣｌ、３．７ｍＭ ＫＣｌ、３．０ｍＭ Ｎａ２ＨＰＯ４、３．５ｍＭ ＫＨ２ＰＯ４、０．９ｍＭ ＣａＣｌ２、５．６ｍＭ Ｄ−ｇｌｕｃｏｓｅ、０．１％ （ｗ／ｖ） ｇｅｌａｔｉｎ）を用いて細胞を採取した（生物薬科学実験講座１２ 炎症とアレルギーＩＩ、大内和雄 編集、廣川書店、１９９３年、３７２ページ）。細胞を洗浄後、２．０×１０５個／ ｍｌ になるよう上記ヘパリン含有肥満細胞用緩衝液を加え、細胞浮遊液とした。
一方、実施例１で得たナリンゲニンカルコン、ヒスタミン遊離抑制活性を有することが知られているフマル酸ケトチフェンを、それぞれ０．１５％ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ，終濃度）を含有するヘパリン含有肥満細胞用緩衝液に溶解し、２５〜２５０μｇ／ｍｌの濃度の試料溶液とした。
【００２３】
試料溶液２０μｌに、細胞浮遊液８０μｌを加えて３７℃１０分間インキュベートした。次いで、脱顆粒誘発剤としてコンパウンド４８／８０（５μｇ／ｍｌ）を２０μｌ加えて１０分インキュベートした。その後いったん氷冷して遠心分離（１，５００×ｇ、５分、４℃）し、上清中に遊離されたヒスタミンを蛍光検出器付き高速液体クロマトグラフィーにより測定した。
【００２４】
ヒスタミン遊離抑制活性は、測定されたヒスタミン値から下記の計算式（1）を用いて算出した。
ヒスタミン遊離抑制率（％）＝（１−（Ｓ−Ｂ）／（Ｃ−Ｂ））×１００ ・・・（１）
Ｂ：誘発剤を加えない対照の細胞から遊離されるヒスタミン量
Ｃ：誘発剤を加えたときに細胞から遊離されるヒスタミン量
Ｓ：被験試料を共存させて誘発剤を加えたときに細胞から遊離されるヒスタミン量
【００２５】
【表１】
【００２６】
表1の結果から明らかなように、ナリンゲニンカルコンは、公知のヒスタミン遊離抑制剤であるフマル酸ケトチフェンよりも強い、ヒスタミン遊離抑制活性を示した。すなわち、ナリンゲニンカルコンが、ヒスタミン遊離抑制剤として有用であることが示された。
また、ナリンゲニンカルコンのＩＣ５０（５０％阻害率）は約７０μｇ／ｍｌ、フマル酸ケトチフェンは約２５０μｇ／ｍｌであり、その活性は約３．５倍であった。
【実施例３】
【００２７】
細胞毒性試験：
実施例２と同様の方法で調製した細胞浮遊液（１〜２×１０６個／ｍｌ）８０μｌに、各濃度のナリンゲニンカルコンを含有する試料溶液２０μｌを加え、３７℃で培養した。培養開始から、０，１０，２０，６０，１２０分後に各１０μｌずつ取り出し、予め用意しておいた２０μｌの０．４％トリパンブルー液に加えた。青色色素で染まる細胞を死細胞と判定し、血球計算盤を用いて、顕微鏡下で細胞数を測定し、ｃｅｌｌ ｖｉａｂｉｌｉｔｙ（全細胞数に対する生存細胞数の割合）と生存細胞数を測定した。その結果、ナリンゲニンカルコンには細胞毒性は見られなかった。
【実施例４】
【００２８】
マウス耳介浮腫モデルにおけるアナフィラキシー抑制活性の評価：
実施例１で得たナリンゲニンカルコンについて、下記方法でアナフィラキシー抑制活性を測定した。その結果を図４に示した。
マウスは１５〜２０ｇの体重のＣ３Ｈ／Ｈｅｃｒｊ、７週齢、雌を一群当り５匹用いた。ナリンゲニンカルコンは０．５％ＣＭＣ−Ｎａ（カルボキシメチルセルロースナトリウム）溶液に懸濁したものを調製し、対照として０．５％ ＣＭＣ−Ｎａを投与した。なお、ナリンゲニンカルコンの投与量は、体重１ｋｇ当たり０．８ｍｇ、０．１６ｍｇ、０．０３２ｍｇ、０．００６４ｍｇとした。試料の投与は５日間かけて６回行い、５日目に測定を行った。１日目から４日目までは１日一回投与し、５日目のみ抗ＴＮＰ−ＩｇＥ溶液投与４時間前と３０分後の２回試料を経口投与した。
【００２９】
１％の抗ＴＮＰ−ＩｇＥ溶液を眼底静脈から０．２ｍｌ投与し、３０分後に試料溶液を経口投与した。さらに３０分後に左右の耳の厚さを測定し、この直後に塩化ピクリルの０．８％アセトン・オリーブオイル（１：１）溶液を各耳１０μｌずつ塗布した。塗布２時間後にマウスの左右の耳の厚さを測定し、塗布前後の耳の厚さの差をアナフィラキシーによる浮腫とした。有意差の検定はＳｔｕｄｅｎｔのｔ検定によった。
図４の結果から明らかなように、ナリンゲニンカルコンは、容量依存的なアナフィラキシー抑制活性を示した。ナリンゲニンカルコンがアナフィラキシー抑制剤として有用であることがさらに示された。
【実施例５】
【００３０】
ラットマクロファージからのロイコトリエン遊離抑制活性の測定：
実施例１で得たナリンゲニンカルコンを被験試料として、下記方法でラットマクロファージからのロイコトリエンＢ４遊離抑制活性を測定し、その結果を表２に示した。
可溶性でんぷん（和光、一級）及びバクトペプトン（ＤＩＦＣＯ社製）を生理食塩水（０．９％ＮａＣｌ、大塚製薬社製）にそれぞれが５％になるように懸濁した。オートクレーブにて滅菌（１２１℃、２０分）した後、室温に冷却した。エーテル麻酔下のラットに体重１００ｇあたり５ｍＬ腹腔内投与した（２１Ｇ針使用）。
４日後、エーテル麻酔下のラットの頚動脈を切断し放血した。十分に放血した後、ラットにエタノールを噴霧し、クリーンベンチに入れた。ＣＭＦ−ＨＢＳＳ（Ｃａ，Ｍｇ ｆｒｅｅ ＨＢＳＳ）を腹腔内に２５ｍＬ投与し、腹部をよくもんだ。滅菌した器具を用いてラットの腹部を開き、腹腔内の溶液を回収した。回収した溶液は３枚重ねのガーゼを用いてろ過した。再びＣＭＦ−ＨＢＳＳ（Ｃａ，Ｍｇ ｆｒｅｅ ＨＢＳＳ）２５ｍＬにて腹腔内を洗浄し、同様に回収した。採取した細胞を氷冷０．１％ＢＳＡ−ＰＢＳにて3回洗浄した後、細胞を１０％ＦＢＳ−ＲＰＭＩ１６４０培地に懸濁し、６ｃｍシャーレに４．５ｘ１０６ ｃｅｌｌｓ／３ｍＬ／シャーレになるようにまきこみ、５％ＣＯ２、３７℃インキュベータ内で２時間培養した。
その後、上清を捨て、ＰＢＳにてシャーレ内を３回洗浄して非付着性細胞を洗い流し、シャーレ内に付着した細胞をマクロファージとして用いた。１％ＦＢＳ−ＲＰＭＩ１６４０培地にて２０分間プレインキュベートした後、ラットの血清を用いてオプソニン化したザイモサンを添加し、５％ＣＯ２、３７℃インキュベータ内で一定時間培養した。また、サンプルはザイモサンを加える３０分前に添加した。培養終了後、培養上清を回収ＥＬＩＳＡ ｋｉｔ（Ｌｅｕｋｏｔｒｉｅｎｅ Ｂ４ ＥＩＡ Ｋｉｔ Ｃａｙｍａｎ）を用いて上清中のＬＴＢ４量を測定した。ロイコトリエンＢ４遊離抑制活性は、測定されたロイコトリエンＢ４値から下記の計算式（２）を用いて算出した。結果を表２に示す。
ロイコトリエンＢ４遊離抑制率（％）＝（１−（Ｓ−Ｂ）／（Ｃ−Ｂ））×１００ ・・・（２）
Ｂ：誘発剤を加えない対照の細胞から遊離されるロイコトリエンＢ４量
Ｃ：誘発剤を加えたときに細胞から遊離されるロイコトリエンＢ４量
Ｓ：被験試料を共存させて誘発剤を加えたときに細胞から遊離されるロイコトリエンＢ４量
【００３１】
【表２】
表２に示す通り、ナリンゲニンカルコンは、用量依存的に、ロイコトリエン遊離抑制活性を示した。
【実施例６】
【００３２】
本発明のヒスタミン遊離抑制剤又はロイコトリエン遊離抑制剤を含有する医薬品
実施例１で精製したナリンゲニンカルコンを、以下の方法で製剤化し、医薬品とした。
（１）ナリンゲニンカルコン１００ｇに同量の乳糖及びステアリン酸マグネシウム５ｇと混合し、この混合物を単発式打錠機にて打錠し、直径１０ｍｍ、重量３００ｍｇの錠剤を製造した。
（２）上記（１）で得た錠剤を粉砕、整粒し、篩別して２０〜５０メッシュの顆粒剤を得た。
【実施例７】
【００３３】
本発明のヒスタミン遊離抑制剤又はロイコトリエン遊離抑制剤を含有する飲食品
本発明のヒスタミン遊離抑制剤又はロイコトリエン遊離抑制剤を含有する食品として、以下の組成（重量部）のキャンデーを製造した。
砂糖（４７.０）、水飴（４９.７６）、香料（１.０）、水（２.０）、ナリンゲニンカルコン（０.２４）。
【実施例８】
【００３４】
本発明のヒスタミン遊離抑制剤又はロイコトリエン遊離抑制剤を含有する化粧品
（１）以下の組成（重量部）の歯磨き粉を製造した。
第二リン酸カルシウム（４２）、グリセリン（１８）、カラギーナン（０.９）、ラウリル硫酸ナトリウム（１.２）、サッカリンナトリウム（０.０９）、パラオキシ安息香酸ブチル（０.００５）、ナリンゲニンカルコン（０.０５）、香料（１）、水を加え１００とした。
【００３５】
（２）以下の組成（重量部）の化粧水を製造した。
リセリン（５.０）、プロピレングリコール（４.０）、ナリンゲニンカルコン（０.１５）、ポリオキシエチレンソルビタン モノラウリン酸エステル（２．０）、エタノール（１０.０）、香料（０.１）、精製水を加え１００とした。
【００３６】
（３）以下の組成（重量部）のヘアーリンスを製造した。
化ステアリルジメチル（１.４）、ベンジルアンモニウムステアリルアルコール（０.６）、グリセリンモノステアレート（１.５）、食塩（０.１）、ナリンゲニンカルコン１（０.１）、精製水を加え１００とした。
【図面の簡単な説明】
【００３７】
【図１】実施例１で得られたヒスタミン遊離抑制成分の１Ｈ−ＮＭＲスペクトル
【図２】実施例１で得られたヒスタミン遊離抑制成分の１３Ｃ−ＮＭＲスペクトル
【図３】実施例１で得られたヒスタミン遊離抑制成分のＬＣ−ＭＳ
【図４】マウス耳介浮腫モデルにおける、ナリンゲニンカルコンのアナフィラキシー抑制活性を示す図。
【技術分野】
【０００１】
本発明は、新規なヒスタミン遊離抑制剤又はロイコトリエン遊離抑制剤を含有することを特徴とする医薬品、飲食品又は化粧品に関する。
【背景技術】
【０００２】
最近、花粉症やアトピー性皮膚炎などのアレルギー性疾患の患者が増大し、大きな社会問題になっている。一般的にアレルギー反応には、アナフィラキシー（Ｉ型）、細胞障害型（ＩＩ型）、アルサス型（ＩＩＩ型）及び細胞介在型（遅延型）（ＩＶ型）の４つの型があるが、最近特に問題になっている花粉症はＩ型アレルギーに分類される。また、アトピー性皮膚炎もＩ型アレルギー反応が主体といわれている。
【０００３】
このＩ型アレルギーにおいては、抗原の侵入により産生されたＩｇＥ抗体が肥満細胞上のＦｃレセプターに結合し、再び侵入した抗原がこのＩｇＥ抗体と結合すると肥満細胞内顆粒中のヒスタミン、マクロファージ中のロイコトリエンなどの化学物質が遊離され、直接的あるいは間接的に喘息や鼻炎などの症状を伴う急性炎症反応を引き起こす。従って、Ｉ型アレルギー反応を防ぐためには、上記経路のいずれかを切断すればよいことになる。
【０００４】
従来より、抗アレルギー作用を有する医薬成分の研究は数多く行われており、当作用を有する数多くの合成化合物が報告されている。しかし、ヒスタミン遊離抑制活性又はロイコトリエン遊離抑制活性を有する天然物質はあまり知られていない。さらに十分なヒスタミン遊離抑制活性又はロイコトリエン遊離抑制活性を有する安全な天然物質はほとんど得られていない。このため、特に医療の現場では、十分なヒスタミン遊離抑制活性又はロイコトリエン遊離抑制活性を有する化合物の探索及びヒスタミン遊離抑制剤又はロイコトリエン遊離抑制剤の開発が求められている。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
本発明の課題は、新規なヒスタミン遊離抑制剤又はロイコトリエン遊離抑制剤を含有する医薬品、飲食品又は化粧品を提供することを課題とする。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
本発明者等は、アレルギー性疾患の治療に有効となる指標を、ヒスタミン遊離抑制活性又はロイコトリエン遊離抑制活性とし、新規なヒスタミン遊離抑制剤又はロイコトリエン遊離抑制剤を探索するべく鋭意研究を重ねた。その結果、ナリンゲニンカルコンが、ヒスタミン遊離抑制活性又はロイコトリエン遊離抑制活性を有することを見出し、本発明を完成するに至った。
即ち、本発明は、
（１）ナリンゲニンカルコン若しくはその塩を有効成分とするヒスタミン遊離抑制剤又はロイコトリエン遊離抑制剤を含有することを特徴とする、医薬品、飲食品又は化粧品。
を提供するものである。
【発明の効果】
【０００７】
本発明により、ナリンゲニンカルコン若しくはその塩を有効成分とするヒスタミン遊離抑制剤又はロイコトリエン遊離抑制剤を含有することを特徴とする、医薬品、飲食品又は化粧品が提供された。
本発明のヒスタミン遊離抑制剤又はロイコトリエン遊離抑制剤を含有することを特徴とする、医薬品、飲食品又は化粧品は、種々のアレルギー性疾患の予防・治療剤、抗炎症剤として有用である。また、本発明のヒスタミン遊離抑制剤又はロイコトリエン遊離抑制剤を含有することを特徴とする、医薬品、飲食品又は化粧品は、Ｉ型アレルギー反応における、肥満細胞からのヒスタミン遊離を阻害することから、これに起因するアトピー性皮膚炎、アレルギー性鼻炎、花粉症お又はアレルギー性喘息等の予防、治療に、特に有用である。
【発明を実施するための最良の形態】
【０００８】
〔本発明のヒスタミン遊離抑制剤又はロイコトリエン遊離抑制剤〕
以下に本発明のヒスタミン遊離抑制剤又はロイコトリエン遊離抑制剤、その製造法及びその用途について説明する。
本発明のヒスタミン遊離抑制剤又はロイコトリエン遊離抑制剤は、ナリンゲニンカルコン若しくはその塩を有効成分とする。ナリンゲニンカルコン（２’４’６’４’−Ｔｅｔｒａｈｙｄｒｏｘｙｃｈａｌｃｏｎｅ）は、下記構造式（１）で示される物質である。
構造式（１）：
【０００９】
【化１】
【００１０】
実施例に示す通り、ナリンゲニンカルコンは、優れたヒスタミン遊離抑制活性、ロイコトリエン遊離抑制活性及びアナフィラキシー抑制活性を示す。したがって、ナリンゲニンカルコン若しくはその塩を有効成分とするヒスタミン遊離抑制剤又はロイコトリエン遊離抑制剤は、種々のアレルギー性疾患の予防剤又は治療剤、抗炎症剤として有用である。アレルギー性疾患とは、例えば、アトピー性皮膚炎、アレルギー性鼻炎、花粉症、アレルギー性喘息、食物アレルギー、炎症、アナフィラキシー等である。
【００１１】
本発明のヒスタミン遊離抑制剤又はロイコトリエン遊離抑制剤は、Ｉ型アレルギー反応における、肥満細胞からのヒスタミン遊離を抑制することから、これに起因するアトピー性皮膚炎、アレルギー性鼻炎、花粉症お又はアレルギー性喘息等の予防、治療に、特に有用である。
【００１２】
なお、ヒスタミン遊離抑制剤又はロイコトリエン遊離抑制剤としての活性を有する限り、ナリンゲニンカルコンは、その塩であってもよい。ナリンゲニンカルコンの塩としては、例えば、薬理上許容される塩が挙げられる。
【００１３】
薬理上許容される塩としては、特に限定されないが、例えば、アルカリ金属(ナトリウム、カリウム等)、アルカリ土類金属(マグネシウム、カルシウム等)。これらの水酸化物又は炭酸塩、アルカリ金属アルコキサイド(ナトリウムメトキサイド、カリウムt-プトキサイド等)との塩が挙げられる。また、塩としては、無機酸（塩酸、硫酸、リン酸）や有機酸（マレイン酸、クエン酸、フマル酸等）を付加した酸付加塩、更にはアミンの付加塩、アミノ酸の付加塩等が挙げられる。なお、上記の塩の水和物もここでいう塩に含まれる。
【００１４】
２．ヒスタミン遊離抑制剤又はロイコトリエン遊離抑制剤の製造法
本発明のヒスタミン遊離抑制剤又はロイコトリエン遊離抑制剤の有効成分であるナリンゲニンカルコンは、どのような方法で製造されたものであってもよく、ナリンゲニンカルコンを含有する生物から精製する方法、化学合成法、半合成法等が広く採用できる。
【００１５】
ナリンゲニンカルコンは植物、例えば柑橘類、野菜類、具体的にはトマトより抽出することができる。トマトよりナリンゲニンカルコンを精製する場合は、トマト果皮あるいは搾汁粕に、１０倍量の６０％エタノールを加え、６０度の温水中で３時間抽出を行う。ナリンゲニンカルコンを含む抽出物が得られるので、該抽出物を高速液体クロマトグラフィーに供する。ヒスタミン遊離抑制活性を示す画分を採取した後、各画分に含まれる化合物の構造を確認することにより、ナリンゲニンカルコンを精製することができる。
なお、本発明のヒスタミン遊離抑制剤又はロイコトリエン遊離抑制剤は、精製されたナリンゲニンカルコンのみを含むものに限定されず、ナリンゲニンカルコンを含む粗精製物であってもよい。
【００１６】
〔本発明のヒスタミン遊離抑制剤又はロイコトリエン遊離抑制剤の用途〕
本発明のヒスタミン遊離抑制剤又はロイコトリエン遊離抑制剤は、実施例に示す通り、ヒスタミン遊離抑制活性、ロイコトリエン遊離抑制活性及びアナフィラキシー抑制活性を示す。したがって、該ヒスタミン遊離抑制剤又はロイコトリエン遊離抑制剤は、種々のアレルギー性疾患の予防剤又は治療剤、抗炎症剤として有用である。本発明のヒスタミン遊離抑制剤又はロイコトリエン遊離抑制剤は、特にＩ型アレルギー反応に起因するアレルギー性疾患の予防、治療に有用である。
該ヒスタミン遊離抑制剤又はロイコトリエン遊離抑制剤は、ヒスタミン遊離抑制活性あるいはロイコトリエン遊離抑制活性を有する医薬品、飲食品又は化粧品として、これらの製品に添加して使用できる。
本発明のヒスタミン遊離抑制剤又はロイコトリエン遊離抑制剤を含有する医薬品、飲食品又は化粧品は、単独で医薬品、飲食品又は化粧品として使用してもよく、また、他の抗アレルギー剤と併用してもよい。
【００１７】
１．医薬品
本発明のヒスタミン遊離抑制剤又はロイコトリエン遊離抑制剤は、そのまま、若しくはこれを公知の医薬用担体と共に製剤化することにより医薬品として使用できる。本発明のヒスタミン遊離抑制剤又はロイコトリエン遊離抑制剤は、例えば、錠剤、顆粒剤、粉剤、シロップ剤等の経口剤や、坐剤、外用剤等の非経口剤として製剤化できる。医薬用担体としては、特に制限はなく、例えば、固形担体（デンプン、乳糖、カルボキシメチルセルロース等）、液体担体（蒸留水、生理食塩水、ブドウ糖水溶液、エタノール、プロピレングリコール等）、油性担体（各種の動植物油、白色ワセリン、パラフィン等）が挙げられる。
上記医薬品は、人及び人以外の動物（ペット、家畜）用として使用できる。上記医薬の服用量は、それを使用する患者等の症状、性別、年齢に応じて適宜設定すればよいが、例えば、成人一人あたり一日に０．１〜１，０００ｍｇ程度摂取できるよう服用すればよい。
【００１８】
２．飲食品
本発明のヒスタミン遊離抑制剤又はロイコトリエン遊離抑制剤を飲食品に添加することにより、その飲食品に、ヒスタミン遊離抑制活性又はロイコトリエン遊離抑制活性を付与することができる。
添加されるべき飲食品は特に限定されないが、肉製品、加工野菜、惣菜類、乳製品、菓子、パン、清涼飲料、果実飲料、酒類等が挙げられる。飲食品に対する本発明のヒスタミン遊離抑制剤又はロイコトリエン遊離抑制剤の配合率も特に限定されない。
また、本発明のヒスタミン遊離抑制剤又はロイコトリエン遊離抑制剤とその他の飲食品素材を混合して、顆粒状・粉末状・錠剤状あるいはブロック状などに成形し、飲食品素材や健康食品等としてもよい。その他の飲食品素材とは、例えば、糖類、食用たんぱく質、アルコール、ビタミン、増粘多糖類、アミノ酸、カルシウム塩類、色素、香料、保存剤等である。
【００１９】
３．化粧品
本発明のヒスタミン遊離抑制剤又はロイコトリエン遊離抑制剤は、化粧品に添加し、その化粧品にヒスタミン遊離抑制活性又はロイコトリエン遊離抑制活性を付与することができる。化粧品とは、特に限定されないが、例えば、化粧水、化粧クリーム、乳液、ファンデーション、口紅、整髪料、ヘアトニック、育毛料、歯磨き、洗口料、シャンプー、リンス等である。化粧品を調製する場合には、植物油等の油脂類、ラノリンやミツロウ等のロウ類、炭化水素類、脂肪酸、高級アルコール類、種々の界面活性剤、色素、香料、ビタミン類、植物・動物抽出成分、紫外線吸収剤、抗酸化剤、保存剤等、通常の化粧品原料として使用されているものを適宜配合して製造することができる。
【００２０】
以下に、本発明のヒスタミン遊離抑制剤又はロイコトリエン遊離抑制剤の製造方法、ヒスタミン遊離抑制試験、ロイコトリエン遊離抑制試験、アナフィラキシー抑制活性試験、並びに本発明のヒスタミン遊離抑制剤又はロイコトリエン遊離抑制剤を含有する医薬品・飲食品・化粧品の製造に関する実施例を示す。
【実施例１】
【００２１】
本発明のヒスタミン遊離抑制剤又はロイコトリエン遊離抑制剤の製造方法：
１．ナリンゲニンカルコンの精製法
トマトの果皮を６０％エタノール、６０度の温水中で2時間抽出を行った。これをろ過し、得たろ液を減圧濃縮した後、高速液体クロマトグラフィー（カラムＳＨＩＳＥＩＤＯ ＣＡＰＣＥＬＬ ＰＡＫ Ｃ１８ １５ ｍｍφ×２５０ ｍｍ； 溶離液， ０．１％ トリフルオロ酢酸を含むアセトニトリル／水＝４０／６０）で分画して、ヒスタミン遊離抑制成分を得た。上記成分をＬＣ−ＭＳ、ＮＭＲなどを駆使して同定を行った。１Ｈ−ＮＭＲスペクトルを図１、１３Ｃ−ＮＭＲスペクトルを図２、ＬＣ−ＭＳを図３に示した。以上により、該化合物がナリンゲニンカルコンであることを確認した。なお、精製の各段階で得られた画分のヒスタミン遊離抑制活性は、実施例２記載の方法により行なった。
【実施例２】
【００２２】
ラット肥満細胞からのヒスタミン遊離抑制活性の測定：
ナリンゲニンカルコンについて、下記方法でヒスタミン遊離抑制活性を測定した。その結果を表１に示した。
（１）ラットを放血致死後直ちに腹腔よりヘパリン含有肥満細胞用緩衝液（組成：０．１５０Ｍ ＮａＣｌ、３．７ｍＭ ＫＣｌ、３．０ｍＭ Ｎａ２ＨＰＯ４、３．５ｍＭ ＫＨ２ＰＯ４、０．９ｍＭ ＣａＣｌ２、５．６ｍＭ Ｄ−ｇｌｕｃｏｓｅ、０．１％ （ｗ／ｖ） ｇｅｌａｔｉｎ）を用いて細胞を採取した（生物薬科学実験講座１２ 炎症とアレルギーＩＩ、大内和雄 編集、廣川書店、１９９３年、３７２ページ）。細胞を洗浄後、２．０×１０５個／ ｍｌ になるよう上記ヘパリン含有肥満細胞用緩衝液を加え、細胞浮遊液とした。
一方、実施例１で得たナリンゲニンカルコン、ヒスタミン遊離抑制活性を有することが知られているフマル酸ケトチフェンを、それぞれ０．１５％ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ，終濃度）を含有するヘパリン含有肥満細胞用緩衝液に溶解し、２５〜２５０μｇ／ｍｌの濃度の試料溶液とした。
【００２３】
試料溶液２０μｌに、細胞浮遊液８０μｌを加えて３７℃１０分間インキュベートした。次いで、脱顆粒誘発剤としてコンパウンド４８／８０（５μｇ／ｍｌ）を２０μｌ加えて１０分インキュベートした。その後いったん氷冷して遠心分離（１，５００×ｇ、５分、４℃）し、上清中に遊離されたヒスタミンを蛍光検出器付き高速液体クロマトグラフィーにより測定した。
【００２４】
ヒスタミン遊離抑制活性は、測定されたヒスタミン値から下記の計算式（1）を用いて算出した。
ヒスタミン遊離抑制率（％）＝（１−（Ｓ−Ｂ）／（Ｃ−Ｂ））×１００ ・・・（１）
Ｂ：誘発剤を加えない対照の細胞から遊離されるヒスタミン量
Ｃ：誘発剤を加えたときに細胞から遊離されるヒスタミン量
Ｓ：被験試料を共存させて誘発剤を加えたときに細胞から遊離されるヒスタミン量
【００２５】
【表１】
【００２６】
表1の結果から明らかなように、ナリンゲニンカルコンは、公知のヒスタミン遊離抑制剤であるフマル酸ケトチフェンよりも強い、ヒスタミン遊離抑制活性を示した。すなわち、ナリンゲニンカルコンが、ヒスタミン遊離抑制剤として有用であることが示された。
また、ナリンゲニンカルコンのＩＣ５０（５０％阻害率）は約７０μｇ／ｍｌ、フマル酸ケトチフェンは約２５０μｇ／ｍｌであり、その活性は約３．５倍であった。
【実施例３】
【００２７】
細胞毒性試験：
実施例２と同様の方法で調製した細胞浮遊液（１〜２×１０６個／ｍｌ）８０μｌに、各濃度のナリンゲニンカルコンを含有する試料溶液２０μｌを加え、３７℃で培養した。培養開始から、０，１０，２０，６０，１２０分後に各１０μｌずつ取り出し、予め用意しておいた２０μｌの０．４％トリパンブルー液に加えた。青色色素で染まる細胞を死細胞と判定し、血球計算盤を用いて、顕微鏡下で細胞数を測定し、ｃｅｌｌ ｖｉａｂｉｌｉｔｙ（全細胞数に対する生存細胞数の割合）と生存細胞数を測定した。その結果、ナリンゲニンカルコンには細胞毒性は見られなかった。
【実施例４】
【００２８】
マウス耳介浮腫モデルにおけるアナフィラキシー抑制活性の評価：
実施例１で得たナリンゲニンカルコンについて、下記方法でアナフィラキシー抑制活性を測定した。その結果を図４に示した。
マウスは１５〜２０ｇの体重のＣ３Ｈ／Ｈｅｃｒｊ、７週齢、雌を一群当り５匹用いた。ナリンゲニンカルコンは０．５％ＣＭＣ−Ｎａ（カルボキシメチルセルロースナトリウム）溶液に懸濁したものを調製し、対照として０．５％ ＣＭＣ−Ｎａを投与した。なお、ナリンゲニンカルコンの投与量は、体重１ｋｇ当たり０．８ｍｇ、０．１６ｍｇ、０．０３２ｍｇ、０．００６４ｍｇとした。試料の投与は５日間かけて６回行い、５日目に測定を行った。１日目から４日目までは１日一回投与し、５日目のみ抗ＴＮＰ−ＩｇＥ溶液投与４時間前と３０分後の２回試料を経口投与した。
【００２９】
１％の抗ＴＮＰ−ＩｇＥ溶液を眼底静脈から０．２ｍｌ投与し、３０分後に試料溶液を経口投与した。さらに３０分後に左右の耳の厚さを測定し、この直後に塩化ピクリルの０．８％アセトン・オリーブオイル（１：１）溶液を各耳１０μｌずつ塗布した。塗布２時間後にマウスの左右の耳の厚さを測定し、塗布前後の耳の厚さの差をアナフィラキシーによる浮腫とした。有意差の検定はＳｔｕｄｅｎｔのｔ検定によった。
図４の結果から明らかなように、ナリンゲニンカルコンは、容量依存的なアナフィラキシー抑制活性を示した。ナリンゲニンカルコンがアナフィラキシー抑制剤として有用であることがさらに示された。
【実施例５】
【００３０】
ラットマクロファージからのロイコトリエン遊離抑制活性の測定：
実施例１で得たナリンゲニンカルコンを被験試料として、下記方法でラットマクロファージからのロイコトリエンＢ４遊離抑制活性を測定し、その結果を表２に示した。
可溶性でんぷん（和光、一級）及びバクトペプトン（ＤＩＦＣＯ社製）を生理食塩水（０．９％ＮａＣｌ、大塚製薬社製）にそれぞれが５％になるように懸濁した。オートクレーブにて滅菌（１２１℃、２０分）した後、室温に冷却した。エーテル麻酔下のラットに体重１００ｇあたり５ｍＬ腹腔内投与した（２１Ｇ針使用）。
４日後、エーテル麻酔下のラットの頚動脈を切断し放血した。十分に放血した後、ラットにエタノールを噴霧し、クリーンベンチに入れた。ＣＭＦ−ＨＢＳＳ（Ｃａ，Ｍｇ ｆｒｅｅ ＨＢＳＳ）を腹腔内に２５ｍＬ投与し、腹部をよくもんだ。滅菌した器具を用いてラットの腹部を開き、腹腔内の溶液を回収した。回収した溶液は３枚重ねのガーゼを用いてろ過した。再びＣＭＦ−ＨＢＳＳ（Ｃａ，Ｍｇ ｆｒｅｅ ＨＢＳＳ）２５ｍＬにて腹腔内を洗浄し、同様に回収した。採取した細胞を氷冷０．１％ＢＳＡ−ＰＢＳにて3回洗浄した後、細胞を１０％ＦＢＳ−ＲＰＭＩ１６４０培地に懸濁し、６ｃｍシャーレに４．５ｘ１０６ ｃｅｌｌｓ／３ｍＬ／シャーレになるようにまきこみ、５％ＣＯ２、３７℃インキュベータ内で２時間培養した。
その後、上清を捨て、ＰＢＳにてシャーレ内を３回洗浄して非付着性細胞を洗い流し、シャーレ内に付着した細胞をマクロファージとして用いた。１％ＦＢＳ−ＲＰＭＩ１６４０培地にて２０分間プレインキュベートした後、ラットの血清を用いてオプソニン化したザイモサンを添加し、５％ＣＯ２、３７℃インキュベータ内で一定時間培養した。また、サンプルはザイモサンを加える３０分前に添加した。培養終了後、培養上清を回収ＥＬＩＳＡ ｋｉｔ（Ｌｅｕｋｏｔｒｉｅｎｅ Ｂ４ ＥＩＡ Ｋｉｔ Ｃａｙｍａｎ）を用いて上清中のＬＴＢ４量を測定した。ロイコトリエンＢ４遊離抑制活性は、測定されたロイコトリエンＢ４値から下記の計算式（２）を用いて算出した。結果を表２に示す。
ロイコトリエンＢ４遊離抑制率（％）＝（１−（Ｓ−Ｂ）／（Ｃ−Ｂ））×１００ ・・・（２）
Ｂ：誘発剤を加えない対照の細胞から遊離されるロイコトリエンＢ４量
Ｃ：誘発剤を加えたときに細胞から遊離されるロイコトリエンＢ４量
Ｓ：被験試料を共存させて誘発剤を加えたときに細胞から遊離されるロイコトリエンＢ４量
【００３１】
【表２】
表２に示す通り、ナリンゲニンカルコンは、用量依存的に、ロイコトリエン遊離抑制活性を示した。
【実施例６】
【００３２】
本発明のヒスタミン遊離抑制剤又はロイコトリエン遊離抑制剤を含有する医薬品
実施例１で精製したナリンゲニンカルコンを、以下の方法で製剤化し、医薬品とした。
（１）ナリンゲニンカルコン１００ｇに同量の乳糖及びステアリン酸マグネシウム５ｇと混合し、この混合物を単発式打錠機にて打錠し、直径１０ｍｍ、重量３００ｍｇの錠剤を製造した。
（２）上記（１）で得た錠剤を粉砕、整粒し、篩別して２０〜５０メッシュの顆粒剤を得た。
【実施例７】
【００３３】
本発明のヒスタミン遊離抑制剤又はロイコトリエン遊離抑制剤を含有する飲食品
本発明のヒスタミン遊離抑制剤又はロイコトリエン遊離抑制剤を含有する食品として、以下の組成（重量部）のキャンデーを製造した。
砂糖（４７.０）、水飴（４９.７６）、香料（１.０）、水（２.０）、ナリンゲニンカルコン（０.２４）。
【実施例８】
【００３４】
本発明のヒスタミン遊離抑制剤又はロイコトリエン遊離抑制剤を含有する化粧品
（１）以下の組成（重量部）の歯磨き粉を製造した。
第二リン酸カルシウム（４２）、グリセリン（１８）、カラギーナン（０.９）、ラウリル硫酸ナトリウム（１.２）、サッカリンナトリウム（０.０９）、パラオキシ安息香酸ブチル（０.００５）、ナリンゲニンカルコン（０.０５）、香料（１）、水を加え１００とした。
【００３５】
（２）以下の組成（重量部）の化粧水を製造した。
リセリン（５.０）、プロピレングリコール（４.０）、ナリンゲニンカルコン（０.１５）、ポリオキシエチレンソルビタン モノラウリン酸エステル（２．０）、エタノール（１０.０）、香料（０.１）、精製水を加え１００とした。
【００３６】
（３）以下の組成（重量部）のヘアーリンスを製造した。
化ステアリルジメチル（１.４）、ベンジルアンモニウムステアリルアルコール（０.６）、グリセリンモノステアレート（１.５）、食塩（０.１）、ナリンゲニンカルコン１（０.１）、精製水を加え１００とした。
【図面の簡単な説明】
【００３７】
【図１】実施例１で得られたヒスタミン遊離抑制成分の１Ｈ−ＮＭＲスペクトル
【図２】実施例１で得られたヒスタミン遊離抑制成分の１３Ｃ−ＮＭＲスペクトル
【図３】実施例１で得られたヒスタミン遊離抑制成分のＬＣ−ＭＳ
【図４】マウス耳介浮腫モデルにおける、ナリンゲニンカルコンのアナフィラキシー抑制活性を示す図。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ナリンゲニンカルコン若しくはその塩を有効成分とするヒスタミン遊離抑制剤又はロイコトリエン遊離抑制剤を含有することを特徴とする、医薬品、飲食品又は化粧品。
【請求項１】
ナリンゲニンカルコン若しくはその塩を有効成分とするヒスタミン遊離抑制剤又はロイコトリエン遊離抑制剤を含有することを特徴とする、医薬品、飲食品又は化粧品。
【図１】
【図２】
【図３】
【図４】
【図２】
【図３】
【図４】
【公開番号】特開２００８−２８０３５０（Ｐ２００８−２８０３５０Ａ）
【公開日】平成２０年１１月２０日（２００８．１１．２０）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００８−１５２４７６（Ｐ２００８−１５２４７６）
【出願日】平成２０年６月１１日（２００８．６．１１）
【分割の表示】特願２００１−１９７８３２（Ｐ２００１−１９７８３２）の分割
【原出願日】平成１３年６月２９日（２００１．６．２９）
【出願人】（０００００４４７７）キッコーマン株式会社 (212)
【Ｆターム（参考）】
【公開日】平成２０年１１月２０日（２００８．１１．２０）
【国際特許分類】
【出願日】平成２０年６月１１日（２００８．６．１１）
【分割の表示】特願２００１−１９７８３２（Ｐ２００１−１９７８３２）の分割
【原出願日】平成１３年６月２９日（２００１．６．２９）
【出願人】（０００００４４７７）キッコーマン株式会社 (212)
【Ｆターム（参考）】
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