ノロウイルスおよびサポウイルス抗原に対する免疫応答を誘発する免疫原性組成物を記載する。特に、本発明は、１種以上のノロウイルスおよび／またはサポウイルスウイルスに由来する１種以上のキャプシドタンパク質または他の免疫原性ウイルスポリペプチドをコードするポリヌクレオチド、このような免疫原性ウイルスポリペプチドとアジュバントの共発現、ならびに免疫原性ウイルスポリペプチドおよびウイルス様粒子（ＶＬＰ）の免疫化および産生を含めた用途におけるポリヌクレオチドの使用方法に関する。また、ノロウイルスまたはサポウイルス由来のマルチエピトープ融合抗原またはポリタンパク質の産生方法、ならびに１種以上の免疫原性ポリペプチド、ポリヌクレオチド、ＶＬＰ、および／またはアジュバントを含む免疫原性組成物も記載する。

【特許請求の範囲】
【請求項１】
ａ）配列番号１の配列を含むポリヌクレオチド；
ｂ）配列番号２の配列を含むポリヌクレオチド；および
ｃ）ノロウイルスまたはサポウイルス抗原をコードする配列、およびアジュバントをコードする配列を含む、ポリヌクレオチド
からなる群より選択されるヌクレオチド配列を含む、組換え型ポリヌクレオチド。
【請求項２】
請求項１に記載のポリヌクレオチドに作動可能に連結するプロモーターもさらに含む、請求項１に記載の組換え型ポリヌクレオチド。
【請求項３】
前記プロモーターがハイブリッドＡＤＨ２／ＧＡＰＤＨプロモーターである、請求項２に記載の組換え型ポリヌクレオチド。
【請求項４】
α因子ターミネーターもさらに含む、請求項１〜３のいずれか１項に記載の組換え型ポリヌクレオチド。
【請求項５】
アジュバントをコードする配列を含む、請求項１〜４のいずれか１項に記載の組換え型ポリヌクレオチド。
【請求項６】
前記アジュバントが、ＬＴ−Ｋ６３およびＬＴ−Ｒ７２からなる群より選択される、大腸菌熱不安定性毒素（ＬＴ）の解毒された突然変異体である、請求項５に記載の組換え型ポリヌクレオチド。
【請求項７】
前記ポリヌクレオチドが、
ａ）配列番号１を含むポリヌクレオチド；
ｂ）ウイルス様粒子を産生することができる、配列番号１と少なくとも９０％同一である配列を含むポリヌクレオチド；
ｃ）配列番号２を含むポリヌクレオチド；
ｄ）ウイルス様粒子を産生することができる、配列番号２と少なくとも９０％同一である配列を含むポリヌクレオチド；
ｅ）配列番号３の配列を含むポリペプチドをコードするポリヌクレオチド；
ｆ）ノーウォークウイルスの主要キャプシドタンパク質に対する免疫応答を誘発することができる、配列番号３の配列と少なくとも９０％同一である配列を含むポリペプチドをコードするポリヌクレオチド；
ｇ）配列番号４の配列を含むポリペプチドをコードするポリヌクレオチド；
ｈ）ノーウォークウイルスのマイナー構造タンパク質に対する免疫応答を誘発することができる、配列番号４の配列と少なくとも９０％同一である配列を含むポリペプチドをコードするポリヌクレオチド；
ｉ）配列番号３〜１２、配列番号１４〜１７、および配列番号１９からなる群より選択される少なくとも１つの配列を含むポリペプチドをコードするポリヌクレオチド；
ｊ）ノロウイルスまたはサポウイルスに対する免疫応答を誘発することができる、配列番号３〜１２、配列番号１４〜１７、および配列番号１９からなる群より選択される配列と少なくとも９０％同一である少なくとも１つの配列を含むポリペプチドをコードするポリヌクレオチド；
ｋ）ノロウイルスまたはサポウイルスに対する免疫応答を誘発することができる免疫原性断片をコードする配列を含む、ｊ）またはｋ）のポリヌクレオチドの断片
からなる群より選択される、請求項６に記載の組換え型ポリヌクレオチド。
【請求項８】
請求項１〜７のいずれか１項に記載の組換え型ポリヌクレオチドを含む、単離された細胞。
【請求項９】
（ａ）請求項１〜７のいずれか１項に記載の組換え型ポリヌクレオチド、および／またはノロウイルスもしくはサポウイルスの２種以上の株に由来する少なくとも２種のポリペプチド；ならびに
（ｂ）薬学的に許容される賦形剤
を含む、組成物。
【請求項１０】
請求項１に記載の組換え型ポリヌクレオチド、およびノロウイルスまたはサポウイルスに由来する少なくとも１種のポリペプチドを含む、請求項９に記載の組成物。
【請求項１１】
ａ）配列番号３〜１２、配列番号１４〜１７、および配列番号１９からなる群より選択される配列を含むポリペプチド；
ｂ）配列番号３〜１２、配列番号１４〜１７、および配列番号１９からなる群より選択される配列と少なくとも９０％同一である配列を含むポリペプチド；ならびに
ｃ）ａ）またはｂ）のポリペプチドの免疫原性断片
からなる群より選択されるポリペプチドを含む、請求項９または１０に記載の組成物。
【請求項１２】
ノロウイルスまたはサポウイルスの異なる分離株に由来する少なくとも２種のポリペプチドを含む、請求項９、１０または１１に記載の組成物。
【請求項１３】
少なくとも１種のポリペプチドが、ノーウォークウイルス（ＮＶ）、スノーマウンテンウイルス（ＳＭＶ）、ハワイウイルス（ＨＶ）、およびそれらの組み合わせからなる群より選択されるウイルスに由来する、請求項９〜１２のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項１４】
ＮＶ ＯＲＦ２にコードされるポリペプチド、ＳＭＶ ＯＲＦ２にコードされるポリペプチド、およびＨＶ ＯＲＦ２にコードされるポリペプチドを含む、請求項１３に記載の組成物。
【請求項１５】
サポウイルスのキャプシドポリペプチドもさらに含む、請求項９〜１４のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項１６】
ノロウイルスまたはサポウイルスに由来するＯＲＦ１配列を含むポリヌクレオチド、および／またはノロウイルスもしくはサポウイルスに由来するＯＲＦ１によってコードされるポリペプチド、またはそれらの断片もさらに含む、請求項９〜１５のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項１７】
ノロウイルスまたはサポウイルスに由来するＯＲＦ２配列を含むポリヌクレオチド、ＮＶ ＯＲＦ２にコードされるポリペプチド、ＳＭＶ ＯＲＦ２にコードされるポリペプチド、および／またはＨＶ ＯＲＦ２にコードされるポリペプチドもさらに含む、請求項９〜１５のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項１８】
ノロウイルスに由来するＯＲＦ３配列を含むポリヌクレオチド、および／またはノロウイルスに由来するＯＲＦ３によってコードされるポリペプチドもさらに含む、請求項９〜１７のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項１９】
ａ）配列番号４、配列番号７、および配列番号９からなる群より選択される配列を含むポリペプチド；
ｂ）ノロウイルスに対する免疫応答を誘発することができる、配列番号４、配列番号７、および配列番号９からなる群より選択される配列と少なくとも９０％同一である配列を含むポリペプチド；ならびに
ｃ）ノロウイルスに対する免疫応答を誘発することができる、ａ）またはｂ）のポリペプチドの免疫原性断片
からなる群より選択されるポリペプチドを含む、請求項１８に記載の組成物。
【請求項２０】
ノロウイルスまたはサポウイルスの２種以上の株に由来する少なくとも２種のキャプシドポリペプチドを含む、請求項９〜１９のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項２１】
少なくとも１種のキャプシドポリペプチドが、ノーウォークウイルス（ＮＶ）、スノーマウンテンウイルス（ＳＭＶ）、ハワイウイルス（ＨＶ）、およびそれらの組み合わせからなる群より選択されるウイルスに由来する、請求項２０に記載の組成物。
【請求項２２】
１種以上のノロウイルスまたはサポウイルス分離株に由来する少なくとも２種のポリペプチドを含むマルチエピトープ融合タンパク質もさらに含む、請求項９〜２１のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項２３】
前記融合タンパク質が、同一のノロウイルスまたはサポウイルス分離株に由来するポリペプチドを含む、請求項２２に記載の組成物。
【請求項２４】
前記融合タンパク質が、異なるノロウイルスまたはサポウイルス分離株に由来する少なくとも２種のポリペプチドを含む、請求項２３に記載の組成物。
【請求項２５】
前記融合タンパク質が、ノロウイルスまたはサポウイルスのポリタンパク質中に天然に存在する順番でない配列を含む、請求項２４に記載の組成物。
【請求項２６】
ウイルス様粒子（ＶＬＰ）もさらに含む、請求項９〜２５のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項２７】
前記ウイルス様粒子がノロウイルスまたはサポウイルスに由来する、請求項２６に記載の組成物。
【請求項２８】
前記ウイルス様粒子（ＶＬＰ）が、ノロウイルスまたはサポウイルスの異なる株に由来する少なくとも２種の抗原を含む、請求項２７に記載の組成物。
【請求項２９】
少なくとも１種の抗原が、ノーウォークウイルス（ＮＶ）、スノーマウンテンウイルス（ＳＭＶ）、ハワイウイルス（ＨＶ）、およびそれらの組み合わせからなる群より選択されるウイルスに由来する、請求項２８に記載の組成物。
【請求項３０】
すべての病原性ノロウイルスのすべてまたは成分を含む、請求項９〜２９のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項３１】
すべての病原性サポウイルスのすべてまたは成分を含む、請求項９〜３０のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項３２】
アジュバントもさらに含む、請求項９〜３１のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項３３】
前記アジュバントが、ＬＴ−Ｋ６３、ＬＴ−Ｒ７２、ＭＦ５９、およびミョウバンからなる群より選択される、請求項３３に記載の組成物。
【請求項３４】
微粒子もさらに含む、請求項９〜３３のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項３５】
前記微粒子が、ポリ（Ｌ−ラクチド）、ポリ（Ｄ，Ｌ−ラクチド）またはポリ（Ｄ，Ｌ−ラクチド−Ｃｏ−グリコリド）微粒子である、請求項３４に記載の組成物。
【請求項３６】
キトサンもさらに含む、請求項９〜３５のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項３７】
ノロウイルス抗原でもサポウイルス抗原でもない抗原もさらに含む、請求項９〜３６のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項３８】
前記抗原がロタウイルス抗原である、請求項３７に記載の組成物。
【請求項３９】
ウイルス様粒子（ＶＬＰ）を産生する方法であって、
ａ）請求項１〜７のいずれか１項に記載の組換え型ポリヌクレオチドを含む発現ベクターで宿主細胞を形質転換する工程；
ｂ）キャプシドタンパク質が発現し、ＶＬＰに構築する条件下において、該形質転換した宿主細胞を培養する工程
を含む、方法。
【請求項４０】
前記発現ベクターの１種以上が、２種以上のノロウイルスまたはサポウイルス分離株に由来するキャプシドタンパク質をコードする配列を含む、請求項３９に記載の方法。
【請求項４１】
前記宿主細胞を、ノロウイルスまたはサポウイルスに由来する構造タンパク質をコードする１種以上の配列で形質転換することもさらに含む、請求項３９または４０に記載の方法。
【請求項４２】
前記発現ベクターが、ノロウイルスまたはサポウイルスに由来する１種以上のＯＲＦ１−および／またはＯＲＦ−３コード配列を含む、請求項３９〜４１のいずれか１項に記載の方法。
【請求項４３】
アジュバントをコードする配列を含む発現ベクターで宿主細胞を形質転換することもさらに含む、請求項３９〜４２のいずれか１項に記載の方法。
【請求項４４】
前記アジュバントが、ＬＴ−Ｋ６３およびＬＴ−Ｒ７２からなる群より選択される、大腸菌熱不安定性毒素（ＬＴ）の解毒された突然変異体である、請求項４３に記載の方法。
【請求項４５】
ノロウイルスまたはサポウイルスの少なくとも２種のウイルス株に由来するキャプシドタンパク質を含むモザイクＶＬＰが構築する、請求項３９〜４４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項４６】
前記宿主細胞が酵母または昆虫細胞である、請求項３９〜４５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項４７】
前記発現ベクターがアルファウイルスベクターである、請求項３９〜４６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項４８】
被験体における免疫応答を誘発する方法であって、請求項９〜３８のいずれか１項に記載の組成物を該被験体に投与することを含む、方法。
【請求項４９】
前記組成物が局所、非経口または粘膜投与される、請求項４８に記載の方法。
【請求項５０】
ａ）１種以上のノロウイルスまたはサポウイルス抗原を含む第一の免疫原性組成物を粘膜投与する工程；および
ｂ）１種以上のノロウイルスまたはサポウイルス抗原を含む第二の免疫原性組成物を局所または非経口投与する工程
を含む、請求項４８または４９に記載の方法。
【請求項５１】
前記第一の免疫原性組成物および前記第二の免疫原性組成物が同一である、請求項５０に記載の方法。
【請求項５２】
前記第一の免疫原性組成物および前記第二の免疫原性組成物が異なる、請求項５０に記載の方法。
【請求項５３】
少なくとも１つの工程が２回以上実施される、請求項５０に記載の方法。
【請求項５４】
前記粘膜投与が、鼻腔内、経口、直腸内または膣内投与である、請求項５０に記載の方法。
【請求項５５】
前記非経口投与が経皮投与である、請求項５０に記載の方法。
【請求項５６】
ノロウイルスまたはサポウイルス感染症を治療するための治療有効量が前記被験体に投与される、請求項４８〜５５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項５７】
下痢性疾患を引き起こす病原体による感染症を治療するための治療有効量が前記被験体に投与される、請求項４８〜５５のいずれか１項に記載の方法。

【図１Ａ】

【図１Ｂ】

【図１Ｃ】

【図２Ａ】

【図２Ｂ】

【図２Ｃ】

【図２Ｄ】

【図２Ｅ】

【図２Ｆ】

【図３】

【図４】

【図５】

【図６】

【図７】

【図８】

【図９】

【図１０】

【図１１】

【図１２】

【図１３】

【図１４Ａ】

【図１４Ｂ】

【図１５Ａ】

【図１５Ｂ】

【図１６Ａ】

【図１６Ｂ】

【図１６Ｃ】

【図１６Ｄ】

【図１６Ｅ】

【図１６Ｆ】

【図１６Ｇ】

【図１６Ｈ】

【図１６Ｉ】

【図１７Ａ】

【図１７Ｂ】

【図１７Ｃ】

【図１８Ａ】

【図１８Ｂ】

【公表番号】特表２００９−５１６５２９（Ｐ２００９−５１６５２９Ａ）
【公表日】平成２１年４月２３日（２００９．４．２３）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００８−５４２４４９（Ｐ２００８−５４２４４９）
【出願日】平成１８年１１月２２日（２００６．１１．２２）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＵＳ２００６／０４５２８０
【国際公開番号】ＷＯ２００７／０８１４４７
【国際公開日】平成１９年７月１９日（２００７．７．１９）
【出願人】（５０７２５１９１８）ノバルティス　ヴァクシンズ　アンド　ダイアグノスティクス　インコーポレイテッド (17)
【Ｆターム（参考）】