ハイビスカスの新規使用、特に製薬的使用
本発明は、大腸菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ）及びカンジダ・アルビカンス（Ｃａｎｄｉｄａ ａｌｂｉｃａｎｓ）の存在と関連した尿感染を治療又は予防するための薬剤、特に膀胱炎を治療又は予防するための薬剤を製造するためのハイビスカス又は粗製若しくは精製されたハイビスカス抽出物の使用に関する。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、特に製薬分野でのハイビスカスの新規使用に関する。
【０００２】
ハイビスカス（Ｈｉｂｉｓｃｕｓ ｓａｂｄａｒｉｆｆａ）は、西アフリカで広く生育している植物であって、そこでは、ホットドリンク又はコールドドリンクの形（カルカデ（ｋａｒｋａｄｅ））で消費されている。
【０００３】
ハイビスカス花弁は、単一の形態であるか又は重合形態のフラボノール及びフラバノール型のポリフェノールを含んでいる。それらのポリフェノールの中で、モノマー形態又は二量体形態（プロシアニジンＡ又はＢ）及びフラボノイドにおいてカテキン誘導体が見つかっている。ハイビスカスは、特に、特定のフラボノイドであるゴシペチン（ｇｏｓｓｙｐｅｔｉｎ）（３，５，７，８，３’，４’−ヘキサヒドロキシ−フラボン）、及びそのグリコシル化形態であるゴシピン（ｇｏｓｓｙｐｉｎ）を含んでいる。そのフラボノイドは、インビトロにおいて、いくつかの微生物（Ｍｏｕｎｎｉｓｓａｍｙ ＶＭ；Ｋａｖｉｍａｎｉ Ｓ；Ｇｕｎａｓｅｇａｒａｎ Ｒ．Ａｎｔｉｂａｃｔｅｒｉａｌ ａｃｔｉｖｉｔｙ ｏｆ ｇｏｓｓｙｐｅｔｉｎ ｉｓｏｌａｔｅｄ ｆｒｏｍ ｈｉｂｉｓｃｕｓ ｓａｂｄａｒｉｆｆａ．Ｔｈｅ Ａｎｔｉｓｅｐｔｉｃ．２００２ Ｍａｒ；９９（３）：８１−２）、即ち、大腸菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ）、黄色ブドウ球菌（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓ）、枯草菌（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌｉｓ）、バシラス・プンピラス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｐｕｍｐｉｌｕｓ）、及び緑膿菌（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）に対して抗菌特性を示した。
【０００４】
疫学の研究は、２人の女性のうち１人以上が彼女の一生において尿感染に直面することを示す。そのような感染の原因となる微生物は、ほとんど常に大腸菌（ｃｏｌｉｂａｃｉｌｌｕｓ）であり、それは、何十億に近い数で大腸において自然とコロニーを形成する。女性は、泌尿器系解剖的な相違に起因して、男性よりそのような感染によってはるかに頻繁に影響される：女性の尿道は、より短く、細菌によって膀胱の汚染を促進する。若者は、この障害にめったに影響されない。しかしながら、前立腺問題を有する中年男性はより危険に晒されている。
【０００５】
膀胱炎、即ち、下部尿道感染症は、大腸菌型、ミラビリス変形菌（Ｐｒｏｔｅｕｓ ｍｉｒａｂｉｌｉｓ）型、腐生ブドウ球菌（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ｓａｐｒｏｐｈｙｔｉｃｕｓ）型などの微生物の増殖によって引き起こされる泌尿器系の炎症である。
【０００６】
この病理学は、大部分の症例において、抗生物質で治療される。感染が低い強度である場合、それは良好な衛生状態で素早く消失する；反対の場合では、抗生物質治療が必要である。しかしながら、薬剤に対する耐性の発生、特に可能な腎臓合併症に起因した頻繁な再発を回避することが、是非とも必要である。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
本発明の目的は、尿の快適さが回復されることを可能にする生産物を提供することである。
【０００８】
また、本発明の目的は、尿障害、より具体的には膀胱炎を治療するための新規な薬剤を提供することである。
【課題を解決するための手段】
【０００９】
本発明は、尿感染、より具体的には膀胱炎を治療又は予防するための薬剤の製造における、ハイビスカスの使用、又は粗製若しくは精製されたハイビスカス抽出物の使用に関する。
【００１０】
尿感染の予防及び治療は、尿感染が生じる頻度を制限し、病理学の消失の促進を意味するものとして理解される。
【００１１】
本明細書において言及される尿感染は、尿道の局所的な炎症に帰着する、ある種の病原性の植物相の増殖に関係している。より具体的には、それらは、特に大腸菌及びカンジダ・アルビカンスの増殖に関係している。
【００１２】
表現「尿感染」は、尿中の微生物の病原菌の異常な存在と関連した病理学を示す。
【００１３】
より具体的には、本発明は、膀胱炎を治療又は予防するための薬剤の製造における、ハイビスカスの使用、又は粗製若しくは精製されたハイビスカス抽出物の使用に関する。
【００１４】
用語「膀胱炎」は、感染源である膀胱の慢性又は急性炎症を示す。従って、この特定の尿感染は、膀胱に限定される（Ｂｅｒｇｏｇｎｅ−Ｂｅｚｅｒｉｎ Ｅ．ｅｔ ａｌ．，Ｌｅｓ ｉｎｆｅｃｔｉｏｎｓ ｕｒｉｎａｉｒｅｓ，ｑｕｅｓｔｉｏｎｓ ｄ’ａｃｔｕａｌｉｔｅ．Ｅｄ Ｐｈａｓｅ ５，２００２）。
【００１５】
急性の単純性膀胱炎及び合併性膀胱炎が区別される。
【００１６】
急性の非合併性膀胱炎は、特別な泌尿器科学の経歴がなく、及び免疫抑制なしに、妊娠しておらず、しかも糖尿病ではない６５歳未満の女性に影響する。繰り返される急性の非合併性膀胱炎が１年当たり最大４回生じる。１年当たり４回を超えて生じる場合、膀胱炎が再発する。
【００１７】
合併性膀胱炎が、危険要因（男性、妊娠、糖尿病、免疫抑制、尿腎臓学的な病理学など）を含む特定の状況において生じる。
【００１８】
大腸菌は、フランスの合併性尿感染又は非合併性尿感染、及び特に急性の非合併性膀胱炎の症例の８０〜９０％の原因となる細菌である。症例の残りの１０〜２０％に関与する他の細菌は、個別に低い有病率だけを有する。
【００１９】
大部分の他のヨーロッパ諸国では、急性の非合併性膀胱炎に関与する微生物の有病率は、フランスで見つかったものに類似している。大腸菌株の有病率は、スカンジナビア諸国及びポーランドなどの北方の国々において実質的により高い（８８％）。合併性尿感染では、関与する種の割合が著しく異なり、大腸菌株は、多くの場合、Ｐ．ミラビリス（ｍｉｒａｂｉｌｉｓ）、他の腸内細菌又は腸球菌より優先して、関与していない。従って、最近の研究（Ｈｒｙｎｉｅｗｉｃｋ Ｋ．ｅｔ ａｌ．，Ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃ ｓｕｓｃｅｐｔｉｂｉｌｉｔｙ ｏｆ ｂａｃｔｅｒｉａｌ ｓｔｒａｉｎｓ ｉｓｏｌａｔｅｄ ｆｒｏｍ ｕｒｉｎａｒｙ ｔｒａｃｔ ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ ｉｎ Ｐｏｌａｎｄ．Ｊ Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂ Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒ ２００１；４７：７７３−８０）では、２つのタイプの感染において同時に実施されたものであるが、大腸菌の有病率は、合併性尿感染の６６％と比較して、急性の非合併性膀胱炎で８８％であった。
【００２０】
カンジダ・アルビカンスは、膀胱炎などの尿感染の原因となる主な酵母である。カンジダ尿が続くか又は細菌尿と共存する。大規模な多角的な研究では、Ｃ．アルビカンスは、膀胱炎の症例で単離された酵母の５２％に相当する。Ｃ．アルビカンスは、最も頻繁に見出される種である。
【００２１】
尿感染の原因である主な微生物（細菌及び／又は酵母）の有病率は、検討中の感染のタイプによって変わる。
【００２２】
例えば、合併性膀胱炎を引き起こす尿道疾患性薬物のスペクトルは、非合併性膀胱炎に関与する薬物よりも広い。
【００２３】
結論として、いくつかの尿感染の治療に有効な化合物は、必ずしも急性の非合併性膀胱炎タイプのより特別な感染に対して同程度の有効性を有するとは限らない。
【００２４】
膀胱炎（急性の非合併性）の場合には、治療は、主に関与し得る微生物に対して特異的に指向されなければならない（活性分子への菌株の接着性、異なる感受性の特定のメカニズム）。
【００２５】
従って、次の病原菌大腸菌（細菌）及びＣ．アルビカンス（酵母）は、膀胱炎、特に急性の非合併性膀胱炎に特に関与する。
【００２６】
本発明は、ハイビスカス又はハイビスカスの抽出物がそれらの特定の抗菌作用により、膀胱炎の原因である２つの主な微生物に有効であるという発見に基づく。
【００２７】
ハイビスカス、具体的には花弁は、特にＡＨＡ型の有機酸（アルファヒドロキシ酸）の多くを含んでいる。このような酸は、尿のｐＨを酸性に保つことができ、従って、尿道中の細菌の増殖を調節することができる。
【００２８】
従って、本発明の範囲内で、ハイビスカス、又は粗製若しくは精製されたハイビスカス抽出物の使用によって、尿は、ｐＨを７未満、好ましくは６以下、特に約５〜約６のｐＨで、なおより好ましくは約５．５〜約６のｐＨで維持することができる。
【００２９】
ハイビスカス又は粗製若しくは精製されたハイビスカス抽出物は、尿の快適さを回復するために使用することができる。７未満の値で尿のｐＨを維持することは、細菌の発生を促進しない培地を作成することを可能にする。
【００３０】
好都合には、ハイビスカス又は粗製若しくは精製されたハイビスカス抽出物により、尿は、ハイビスカスに特有のポリフェノールで濃縮され、このポリフェノールは、抗菌作用をし、特にアントシアン又はプロアントシアニジンである。
【００３１】
ハイビスカスの化学組成は、有機酸、アントシアン、プロアントシアニジン型のポリフェノール及び抗菌性フラボノイドに富んでいる。ハイビスカスにあるアントシアンの中で、下記が言及されてもよい：デルフィニジン−３−Ｏ−サムブビオシド、デルフィニジン−３−Ｏ−グルコシド、シアニジン−３−Ｏ−サムブビオシド及びシアニジン−３−Ｏ−グルコシド。フラボノイドの中には、前記に言及されるゴシペチン及びそのグリコシル化形体であるゴシピンがあってもよい。
【００３２】
また、本発明は、前記で定義される使用に関し、その中で、ハイビスカス又は粗製若しくは精製されたハイビスカス抽出物は栄養補助食品の形体である。
【００３３】
このような栄養補助食品は、特に、ゼラチン・カプセル、錠剤、カプセル、可溶性粉末（サシェ若しくはスティック）又は飲料（濃縮形態、若しくは飲料として準備ができている）の形をすることができる。
【００３４】
従って、栄養補助食品は、例えば、尿の快適さを回復したい女性によって使用されてもよい。また、尿のトラブル及びその再発を防ぐために使用することができる。
【００３５】
本発明による有利な使用は、ハイビスカスが新鮮な形体若しくは乾燥した形式で植物全体に由来するか、又は花に由来することによって特徴付けられる。
【００３６】
従って、本発明の範囲内において、粒子サイズが何であっても、ハイビスカスは新鮮な形体又は乾燥した形式で使用することができる。従って、ハイビスカスは、例えば、（低温）粉砕形体又は微粉形式で使用することができる。
【００３７】
本発明による別の有利な使用は、粗製又は精製されたハイビスカス抽出物が、溶媒が何であれ（例えば、アルコール、水又は水性アルコール混合物）、液体形体の抽出物であるか、あるいは乾燥手段が何であれ（特に、熱風の流れにおける水の除去によって、噴霧化によって、蒸発によって、昇華によって、脱水によって、又は支持体への吸着によって）、乾燥形体の抽出物であることによって特徴付けられる。
【００３８】
ハイビスカス抽出物は、当業者の従来の手段によって粗製若しくは精製され、得ることができる。
【００３９】
粗製抽出物は、液体形体の粗製抽出物を得るために、抽出工程のために水などの溶媒の存在下に植物（ハイビスカス）を置き、植物と溶媒を分離することによって得られる。乾燥形体の粗製抽出物を得るために、液体形体の粗製抽出物は、例えば、熱風の流れにおける水の除去よって、噴霧化によって、蒸発によって、昇華によって、脱水によって、又は支持体への吸着によって乾燥される。
【００４０】
精製された抽出物は、有効成分の含有量を増大させるために、前述の工程において得られた粗製抽出物から得られる。その目的のために、前記粗製抽出物は、クロマトグラフィー、又は水に混ざらない有機溶媒を用いた液体／液体抽出のいずれかによって精製工程に晒される。
【００４１】
従って、水を用いて植物を粗製抽出し、又はアルコールを用いて粗製抽出してこの溶媒を除去することによって、あるいは水に粉末形体の粗製抽出物を再溶解させることによって得られる、水相中の液体形式の粗製抽出物から開始して、クロマトグラフィー技術による精製法を適用してもよい。
【００４２】
粗製抽出物はクロマトグラフィーレジンに置かれる。所望の有効成分（ポリフェノール）は、そのレジンに固定されたままであり、次に、水を用いて、又は所望の有効成分を再溶解しない水／有機溶媒混合物を用いて洗浄される。最後に、有効成分は、アルコール（例えば、メタノール若しくはエタノール）又はケトン型の有機溶媒を用いた溶出によってカラムから回収される。このプロセスは、水性開始相に存在する９０％を超える有効成分が回復されることを可能にする。
【００４３】
精製された抽出物は、アルコール相の液体形体で、溶媒の除去後の水相の液体形体で、又は濃縮された水相の液体形体で、あるいは乾燥形体（粉末形体）で、個々の方法において処置することができる。
【００４４】
使用されるクロマトグラフィーレジンは、イオン（陰イオン若しくは陽イオン）交換型又は吸着／脱着型のものであってもよく、例えば、ジビニルベンゼン／スチレン共重合体、ポリスチレン又はポリメタクリル型であり、特に、Ｒｏｈｍ ＆ Ｈａａｓ又はＭｉｔｓｕｂｉｓｈｉ Ｃｈｅｍｉｃａｌによって市販されている。
【００４５】
また、本発明は、尿障害の治療又は予防、特に膀胱炎を治療又は予防するためのハイビスカス又は粗製若しくは精製されたハイビスカス抽出物を含む薬剤に関する。
【００４６】
また、本発明は、ポリフェノール含有量が約５０％以上、好ましくは約５０％〜約１００％、なおより好ましくは約９０％〜約１００％である、液体又は乾燥形体の濃縮ハイビスカス抽出物に関する。
【００４７】
より具体的には、発明による濃縮抽出物は、少なくとも９０％の全ポリフェノール、より具体的には約２０〜約５０％のカテキンを含有する。
【００４８】
ポリフェノールは、溶離液として、溶媒Ａ：水／酢酸（９９／１）、Ｂ：水／酢酸（９４／６）及びＣ：水／アセトニトリル／酢酸（６５／３０／５）の勾配を用いたＨＰＬＣにより分析される。適用された勾配は下記のとおりである。
【００４９】
【表１】
【００５０】
適用された流速は、０．５ｍｌ／分（ＵＶ検知器：２８０ｎｍ；カラム：Ｃ１８グラフト化相）である。
【００５１】
ポリフェノールの中で、一方ではフラボノール及びフラボノイド、他方ではフラボンに言及されてもよい。
【００５２】
フラボノールとフラボノイドの中で、特に言及されてもよいのは次の化合物である：ハイビスセチン、ハイビスセトリン（ハイビスセチン−３−Ｏ−グルコシド）、ゴシペチン、ゴシペトリン（ゴシペチン−７−Ｏ−グルコシド）、ゴシピン（ゴシペチン−８−Ｏ−グルコシド）、ゴシトリン（ゴシペチン−３−Ｏ−グルコシド）、サブダリトリン（ｓａｂｄａｒｉｔｒｉｎ）及びその加水分解形サブダレチン（ｓａｂｄａｒｅｔｉｎ）（ヒドロキシフラボン）、ケルセチン（ｑｕｅｒｃｅｔｉｎ）又はミリセチン（ｍｙｒｉｃｅｔｉｎ）。
【００５３】
フラボンの中で、特に言及されてもよい化合物は、ルテオリン（ｌｕｔｅｏｌｉｎ）又はルテオリングリコシド（ｇｌｙｃｏｓｉｄｅ）である。
【００５４】
特定の態様によれば、本発明による濃縮ハイビスカス抽出物は、８％未満のアントシアン含有物を有する。
【００５５】
好ましくは、本発明の濃縮ハイビスカス抽出物は、８％以上、好ましくは約１０％〜約２０％、なおより好ましくは約１５〜約２０％のアントシアン含有物を有することによって特徴付けられる。
【００５６】
アントシアンは、溶離液として、溶媒Ｂ：超純水（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）中の３％リン酸（ｖ／ｖ）、及びＣ：メタノールの勾配を用いたＨＰＬＣにより分析される。適用された勾配は以下のとおりである。
【００５７】
【表２】
【００５８】
適用された流速は、１．０ｍｌ／分（検出：５２５ｎｍ；カラム：Ｃ１８グラフト化相）である。
【００５９】
より具体的には、本発明の濃縮ハイビスカス抽出物は、次の配分のアントシアン含有物を有することによって特徴付けられる：
デルフィニジン−３−Ｏ−サンブジオシド（ｓａｍｂｕｄｉｏｓｉｄｅ）（ハイビシン（ｈｉｂｉｓｃｉｎ）） ４〜６％
デルフィニジン−３−Ｏ−グルコシド ０〜２％
シアニジン−３−Ｏ−サンブジオシド（ゴシピシアニン） ０〜４％
シアニジン−３−Ｏ−グルコシド ０〜１％
【００６０】
さらに、本発明の濃縮ハイビスカス抽出物は、３０％以下の有機酸含有物を含むことによって特徴付けられる。
【００６１】
より具体的には、本発明の濃縮ハイビスカス抽出物は、１％を超える量のクロロゲン酸、及び５％未満の量のキナ酸を含むことができる。
【００６２】
また、有機酸のうち、言及されてもよい化合物は、プロトカテク酸、クエン酸、リンゴ酸、酒石酸、ハイビシン酸（ｈｉｂｉｓｃｉｃ ａｃｉｄ）、又はアスコルビン酸である。
【００６３】
また、本発明は、有効成分として、上記で定義された濃縮ハイビスカス抽出物、並びに医薬として許容される担体を含む医薬組成物に関する。
【００６４】
さらに、本発明は、上記で定義された濃縮ハイビスカス抽出物、並びに許容される担体を含む栄養補助食品に関する。
【実施例】
【００６５】
１）ハイビスカス抽出物の生産：
ａ）粗製ハイビスカス抽出物の生産：
１ｋｇの乾燥したハイビスカスの花は、水中、５０℃で２時間の浸軟によって抽出される。取り入れた溶媒は、懸濁した固体材料から分離され、ろ過され、次に濃縮される。濃縮物は、液体粗製抽出物を構成し、それは、例えば、真空中で乾燥させることによって、溶媒を除去することにより粉末形体の粗製抽出物に変換可能である。重量収率は、３０〜４０％ｗ／ｗのオーダーである。生産物の分析は、有機酸、プロアントシアニジン型ポリフェノール、フラボノイド及びアントシアンの存在を示す。その分析は、抽出物が２０％を超えるロアントシアニジン含有物を有することを示す。
【００６６】
ｂ）別の粗製ハイビスカス抽出物の生産：
１ｋｇの新鮮なハイビスカスの花は、９０％のエタノール中、２時間の浸軟によって抽出される。取り入れた溶媒は、懸濁した固体材料から分離され、次にろ過される。生産物は、液体粗製抽出物を構成し、その中では、所望の化合物がすべて同様に見出されるが、異なった配分である。また、液体生産物は、蒸留され、次に濃縮され、場合により、従来の手段、例えば、真空中で加熱して乾燥することができる。
【００６７】
ｃ）精製されたハイビスカス抽出物の生産：
１ｋｇの乾燥したハイビスカスの花は、９０％のエタノール中、２時間の浸軟によって抽出される。取り入れた溶媒は、懸濁した固体材料から分離され、ろ過され、次に蒸留及び濃縮される。濃縮物は、ポリフェノールに適している吸着／脱着レジン上のクロマトグラフィーによる精製工程に晒される。その後、溶離物は、精製された抽出物を構成し、それは液体形体又は乾燥形式で同様に保存することができる。ＨＰＬＣによって測定すると、最大９％のアントシアン及び最大５０％のポリフェノールを含む、精製されたハイビスカス抽出物が得られる。
【００６８】
ｄ）別の精製されたハイビスカス抽出物の生産：
例えば、上述されるように（ａ段落）、特に濃縮形体で得られた粗製抽出物から開始して、例えば、ｎ−ブタノール又は酢酸エチル型の水に混ざらない溶媒の酸を用いて液体／液体抽出物による精製工程を適用することができる。その後、最大６５％のポリフェノールを含む精製された画分から溶媒が除去される。分析は、抽出物が５０％を超えるプロアントシアニジン含有物を有することを示す。液体形体のハイビスカス抽出物のすべての場合において、グリセロール若しくはグリコール型、保存剤型の添加物を用いて、又は任意の他の製剤成分を用いて抽出物を安定化することができる。
【００６９】
２）生薬製剤の実施例：
ａ）飲む準備ができている飲料の生産：
【００７０】
【表３】
【００７１】
ハイビスカスは、尿道中の病原性の細菌叢の出現を調節することができる；他の抽出物は、利尿を増加させることにより水の除去を促し、それは、尿道の感染性病理学に対する飲料の一般的な肯定的な影響に寄与する。
【００７２】
ｂ）ゼラチンカプセルの生産：
【００７３】
【表４】
【００７４】
この種の生薬製剤は、ＡＦＳＳＡによって提案される１日当たり３６ｍｇのプロアントシアニジンが容易に提供されるようにする。
【００７５】
３）微生物学的な結果：
尿感染、より具体的には膀胱炎、特に急性の非合併性膀胱炎に対する本発明のハイビスカス抽出物（精製された又は精製されていない）の有効性を示すために、微生物学的研究を行った。
【００７６】
研究Ｎｏ．１−ハイビスカス抽出物（ＵｔｉＲｏｓｅ）の抗菌性保存の有効性評価−プロトコール米国薬局方ＸＸＶ−２つの菌株−７日間
この最初の研究の目的は、保存活性が保存期間中に変化しないことを確認するために、保存システムの可使間を評価することである。使用された菌株は、大腸菌及びカンジダ・アルビカンスである。培地は、新世代の培地（保存培地、菌株維持培地、有効なインキュベーション及び計数培地）であり、下記に言及される：
保存培地：
●脳／心臓ブロス
●ＬＴ１００ブロス
●トリプトン塩溶液
菌株維持培地：
●ＬＴ１００ゲロース（ｇｅｌｏｓｅ）
●トリプト−カゼイン大豆ゲロース
●サブロー・ゲロース（Ｓａｂｏｕｒａｕｄ ｇｅｌｏｓｅ）
インキュベーション及び計数培地（ペトリ皿）：
●細菌の菌株用のＬＴ１００ゲロース上
●真菌及び酵母用のサブロー・ゲロース上
【００７７】
この試験を行なうために使用される培地の各バッチの対照は、その滅菌性をチェックするために３２℃で５日間インキュベートされる。
【００７８】
方法：
分析される生産物は、適切な微生物で人為的に汚染される。各測定間で、接種された調製物は、２８日間、２２℃で、遮光されて維持される。４回の接種後の計算は、７日、１４日、２１日、２８日で実行される（汚染している植物相の計算は栄養ゲロース上の１ｇの生産物の連続稀釈によって実行された）。
【００７９】
各測定時間で：
○１ｇ（＋／−０．１ｇ）の汚染された生産物は、９ｍｌ（＋／−０．２ｍｌ）のＬＴ１００ブロス中で計量される。
○３０分間、周囲温度での回復
試験された生産物は、上記で定義された精製されたハイビスカス抽出物である。
【００８０】
対数減少の結果
【００８１】
【表５】
【００８２】
解釈と結論：
保存システムは、次の場合には有効である：
○細菌について：１４日では、開始の接種と比較して、少なくとも２ｌｏｇの減少がなければならない。１４日で得られた微生物の濃度は、残りの１４日と同一であるか、又は低くなければならない。
○かび（ｍｏｕｌｄ）／酵母について：１４日と２８日では、濃度は、接種の初期濃度以下でなければならない。
【００８３】
対数減少は７日において薬局方の要件に従う。この最初の研究は、本発明によるハイビスカス抽出物が、大腸菌とＣ．アルビカンスの両方において、初期の微生物汚染の減少（微生物集団の低下）に有意な効果を有することを示す。
【００８４】
研究Ｎｏ．２−ハイビスカス抽出物（ＵｔｉＲｏｓｅ）の抗菌的保存の有効性評価−プロトコール米国薬局方ＸＸＶ−１菌株
使用される菌株は大腸菌である。培地は研究Ｎｏ．１で使用されるものと同じである。
【００８５】
方法：
分析されるべき生産物は、適切な微生物で人為的に汚染される。各測定間で、接種された調製物は、４日間、２０℃で、遮光されて維持される。４回の接種後の計算は、１日、２日、３日、４日で実行される（汚染している植物相の計算は栄養ゲロース上の１ｇの生産物の連続稀釈によって実行された）。
【００８６】
各測定時間で：
○１ｇ（＋／−０．１ｇ）の汚染された生産物は、９ｍｌ（＋／−０．２ｍｌ）のＬＴ１００ブロス中で計量される。
○３０分間、周囲温度での回復
試験された生産品は、上記で定義された精製されたハイビスカス抽出物である。
【００８７】
対数減少の結果
【００８８】
【表６】
【００８９】
解釈と結論：
保存システムは、薬局方の推薦により試験された菌株に有効である。ハイビスカス抽出物は、大腸菌に有意な抗菌作用を示した。大腸菌に対する抗菌効果は、直ちに現われ、全汚染除去が処置開始後の２４時間で得られる：この処置は、２４時間以内に得られるべき初期の細菌集団の１０５の減少を可能にした。
【００９０】
研究Ｎｏ．３−尿の快適さにおける栄養補助食品の有効性及び容認性
１−プロトコールの要約
研究の目標：尿の快適さを改善し、尿感染を予防するために、食品成分（上記で定義されたハイビスカス抽出物）の有効性及び容認性を評価すること。該食品成分は、６０人の女性によって、２４週間、栄養補助食品の形体で接種され、女性らは３つのグループに配分され、有効成分なしの対照生産物（プラセボ）、又は該成分の投薬物Ｎｏ．１を含む試験生産物、又は該成分の投薬物Ｎｏ．２を含む別の試験生産物を試験する。生産物は、無作為に（２０人の３グループを無作為に配分する）配置されたグループに従って、医師によってコード化された中立な包装に分配される。
【００９１】
ボランティアの募集用の試験対象患者基準は以下のとおりである：
●１８〜５５歳の女性
●尿の不快について不平を言い、尿感染を繰り返していると述べる女性。
投薬：１日当たり２個のゼラチンカプセル
栄養補助食品１：ＵｔｉＲｏｓｅレギュラー（ハイビスカス抽出物）
栄養補助食品２：ＵｔｉＲｏｓｅプレミアム（精製されたハイビスカス抽出物）
対照生産物：マルトデキストリン
【００９２】
試験は、調節され、無作為化された二重盲検試験である。３グループは、並行して生産物をテストする。
【００９３】
２−評価基準
評価パラメーターは２つのタイプである：一方では客観的な測定、即ち、試験期間中に申告された尿のトラブルの出現数、他方では主観的な測定、生産物の把握された有効性、容認性及び寛容性の評価による。健康診断は、試験生産物の８４日及び１６８日の消費後に医療訪問によって実行される。尿の快適さは毎日モニターされ、観察記録に記され、尿のトラブル及び任意の申告された尿感染の発生すべてが記録されることを可能する。知覚された有効性を評価するためのアンケートが、４日と１６８日にボランティアに配布される。それは、尿の快適さ及び尿感染の予防における試験生産物の有効性が評価されることを可能にする。試験生産物に対する寛容性は、栄養補助食品の消費に関連した任意の望ましくない効果も記録するために医者によって評価される。研究の最終では、ボランティアは、この生産物の使用の容易さを評価し、栄養補助食品で知覚した、主な特質及び主な欠点を通じて一般的な印象を報告した。
【００９４】
３−結果
客観的データ
尿感染の数は、精製された又は精製されていない有効成分を消費した２つのグループにおいて顕著に減少し、一方、対照グループでは顕著に減少しなかった。
【００９５】
自動評価
尿のトラブルにおける顕著な減少は、頻度、疼痛、持続、尿意頻度、尿の臭気の点から２つのハイビスカス抽出物に関して観察された。また、粘膜の状態における顕著な改善は、焦燥、炎症、そう痒、乾燥、健康又は不健康な粘膜の点で、２つのハイビスカスに関して観察された。
【００９６】
主観的データ
ハイビスカス抽出物の作用は、尿感染、及び感染が存在しなかった場合の尿のトラブルの程度における予防において、医師によって有効であると考えられた。一般に、ボランティアは、ハイビスカス抽出物を用いて処置を下記の局面で満足していると判断した：
●尿の快適さにおける改善
●天然の微生物叢に対する考慮
●尿のトラブル及び感染症の予防における有効性
●尿感染の顕著な減少
●感染中の疼痛の強度の減少
●尿感染の期間の短縮
●そう痒と焦燥の減少。
【技術分野】
【０００１】
本発明は、特に製薬分野でのハイビスカスの新規使用に関する。
【０００２】
ハイビスカス（Ｈｉｂｉｓｃｕｓ ｓａｂｄａｒｉｆｆａ）は、西アフリカで広く生育している植物であって、そこでは、ホットドリンク又はコールドドリンクの形（カルカデ（ｋａｒｋａｄｅ））で消費されている。
【０００３】
ハイビスカス花弁は、単一の形態であるか又は重合形態のフラボノール及びフラバノール型のポリフェノールを含んでいる。それらのポリフェノールの中で、モノマー形態又は二量体形態（プロシアニジンＡ又はＢ）及びフラボノイドにおいてカテキン誘導体が見つかっている。ハイビスカスは、特に、特定のフラボノイドであるゴシペチン（ｇｏｓｓｙｐｅｔｉｎ）（３，５，７，８，３’，４’−ヘキサヒドロキシ−フラボン）、及びそのグリコシル化形態であるゴシピン（ｇｏｓｓｙｐｉｎ）を含んでいる。そのフラボノイドは、インビトロにおいて、いくつかの微生物（Ｍｏｕｎｎｉｓｓａｍｙ ＶＭ；Ｋａｖｉｍａｎｉ Ｓ；Ｇｕｎａｓｅｇａｒａｎ Ｒ．Ａｎｔｉｂａｃｔｅｒｉａｌ ａｃｔｉｖｉｔｙ ｏｆ ｇｏｓｓｙｐｅｔｉｎ ｉｓｏｌａｔｅｄ ｆｒｏｍ ｈｉｂｉｓｃｕｓ ｓａｂｄａｒｉｆｆａ．Ｔｈｅ Ａｎｔｉｓｅｐｔｉｃ．２００２ Ｍａｒ；９９（３）：８１−２）、即ち、大腸菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ）、黄色ブドウ球菌（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓ）、枯草菌（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌｉｓ）、バシラス・プンピラス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｐｕｍｐｉｌｕｓ）、及び緑膿菌（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）に対して抗菌特性を示した。
【０００４】
疫学の研究は、２人の女性のうち１人以上が彼女の一生において尿感染に直面することを示す。そのような感染の原因となる微生物は、ほとんど常に大腸菌（ｃｏｌｉｂａｃｉｌｌｕｓ）であり、それは、何十億に近い数で大腸において自然とコロニーを形成する。女性は、泌尿器系解剖的な相違に起因して、男性よりそのような感染によってはるかに頻繁に影響される：女性の尿道は、より短く、細菌によって膀胱の汚染を促進する。若者は、この障害にめったに影響されない。しかしながら、前立腺問題を有する中年男性はより危険に晒されている。
【０００５】
膀胱炎、即ち、下部尿道感染症は、大腸菌型、ミラビリス変形菌（Ｐｒｏｔｅｕｓ ｍｉｒａｂｉｌｉｓ）型、腐生ブドウ球菌（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ｓａｐｒｏｐｈｙｔｉｃｕｓ）型などの微生物の増殖によって引き起こされる泌尿器系の炎症である。
【０００６】
この病理学は、大部分の症例において、抗生物質で治療される。感染が低い強度である場合、それは良好な衛生状態で素早く消失する；反対の場合では、抗生物質治療が必要である。しかしながら、薬剤に対する耐性の発生、特に可能な腎臓合併症に起因した頻繁な再発を回避することが、是非とも必要である。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
本発明の目的は、尿の快適さが回復されることを可能にする生産物を提供することである。
【０００８】
また、本発明の目的は、尿障害、より具体的には膀胱炎を治療するための新規な薬剤を提供することである。
【課題を解決するための手段】
【０００９】
本発明は、尿感染、より具体的には膀胱炎を治療又は予防するための薬剤の製造における、ハイビスカスの使用、又は粗製若しくは精製されたハイビスカス抽出物の使用に関する。
【００１０】
尿感染の予防及び治療は、尿感染が生じる頻度を制限し、病理学の消失の促進を意味するものとして理解される。
【００１１】
本明細書において言及される尿感染は、尿道の局所的な炎症に帰着する、ある種の病原性の植物相の増殖に関係している。より具体的には、それらは、特に大腸菌及びカンジダ・アルビカンスの増殖に関係している。
【００１２】
表現「尿感染」は、尿中の微生物の病原菌の異常な存在と関連した病理学を示す。
【００１３】
より具体的には、本発明は、膀胱炎を治療又は予防するための薬剤の製造における、ハイビスカスの使用、又は粗製若しくは精製されたハイビスカス抽出物の使用に関する。
【００１４】
用語「膀胱炎」は、感染源である膀胱の慢性又は急性炎症を示す。従って、この特定の尿感染は、膀胱に限定される（Ｂｅｒｇｏｇｎｅ−Ｂｅｚｅｒｉｎ Ｅ．ｅｔ ａｌ．，Ｌｅｓ ｉｎｆｅｃｔｉｏｎｓ ｕｒｉｎａｉｒｅｓ，ｑｕｅｓｔｉｏｎｓ ｄ’ａｃｔｕａｌｉｔｅ．Ｅｄ Ｐｈａｓｅ ５，２００２）。
【００１５】
急性の単純性膀胱炎及び合併性膀胱炎が区別される。
【００１６】
急性の非合併性膀胱炎は、特別な泌尿器科学の経歴がなく、及び免疫抑制なしに、妊娠しておらず、しかも糖尿病ではない６５歳未満の女性に影響する。繰り返される急性の非合併性膀胱炎が１年当たり最大４回生じる。１年当たり４回を超えて生じる場合、膀胱炎が再発する。
【００１７】
合併性膀胱炎が、危険要因（男性、妊娠、糖尿病、免疫抑制、尿腎臓学的な病理学など）を含む特定の状況において生じる。
【００１８】
大腸菌は、フランスの合併性尿感染又は非合併性尿感染、及び特に急性の非合併性膀胱炎の症例の８０〜９０％の原因となる細菌である。症例の残りの１０〜２０％に関与する他の細菌は、個別に低い有病率だけを有する。
【００１９】
大部分の他のヨーロッパ諸国では、急性の非合併性膀胱炎に関与する微生物の有病率は、フランスで見つかったものに類似している。大腸菌株の有病率は、スカンジナビア諸国及びポーランドなどの北方の国々において実質的により高い（８８％）。合併性尿感染では、関与する種の割合が著しく異なり、大腸菌株は、多くの場合、Ｐ．ミラビリス（ｍｉｒａｂｉｌｉｓ）、他の腸内細菌又は腸球菌より優先して、関与していない。従って、最近の研究（Ｈｒｙｎｉｅｗｉｃｋ Ｋ．ｅｔ ａｌ．，Ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃ ｓｕｓｃｅｐｔｉｂｉｌｉｔｙ ｏｆ ｂａｃｔｅｒｉａｌ ｓｔｒａｉｎｓ ｉｓｏｌａｔｅｄ ｆｒｏｍ ｕｒｉｎａｒｙ ｔｒａｃｔ ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ ｉｎ Ｐｏｌａｎｄ．Ｊ Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂ Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒ ２００１；４７：７７３−８０）では、２つのタイプの感染において同時に実施されたものであるが、大腸菌の有病率は、合併性尿感染の６６％と比較して、急性の非合併性膀胱炎で８８％であった。
【００２０】
カンジダ・アルビカンスは、膀胱炎などの尿感染の原因となる主な酵母である。カンジダ尿が続くか又は細菌尿と共存する。大規模な多角的な研究では、Ｃ．アルビカンスは、膀胱炎の症例で単離された酵母の５２％に相当する。Ｃ．アルビカンスは、最も頻繁に見出される種である。
【００２１】
尿感染の原因である主な微生物（細菌及び／又は酵母）の有病率は、検討中の感染のタイプによって変わる。
【００２２】
例えば、合併性膀胱炎を引き起こす尿道疾患性薬物のスペクトルは、非合併性膀胱炎に関与する薬物よりも広い。
【００２３】
結論として、いくつかの尿感染の治療に有効な化合物は、必ずしも急性の非合併性膀胱炎タイプのより特別な感染に対して同程度の有効性を有するとは限らない。
【００２４】
膀胱炎（急性の非合併性）の場合には、治療は、主に関与し得る微生物に対して特異的に指向されなければならない（活性分子への菌株の接着性、異なる感受性の特定のメカニズム）。
【００２５】
従って、次の病原菌大腸菌（細菌）及びＣ．アルビカンス（酵母）は、膀胱炎、特に急性の非合併性膀胱炎に特に関与する。
【００２６】
本発明は、ハイビスカス又はハイビスカスの抽出物がそれらの特定の抗菌作用により、膀胱炎の原因である２つの主な微生物に有効であるという発見に基づく。
【００２７】
ハイビスカス、具体的には花弁は、特にＡＨＡ型の有機酸（アルファヒドロキシ酸）の多くを含んでいる。このような酸は、尿のｐＨを酸性に保つことができ、従って、尿道中の細菌の増殖を調節することができる。
【００２８】
従って、本発明の範囲内で、ハイビスカス、又は粗製若しくは精製されたハイビスカス抽出物の使用によって、尿は、ｐＨを７未満、好ましくは６以下、特に約５〜約６のｐＨで、なおより好ましくは約５．５〜約６のｐＨで維持することができる。
【００２９】
ハイビスカス又は粗製若しくは精製されたハイビスカス抽出物は、尿の快適さを回復するために使用することができる。７未満の値で尿のｐＨを維持することは、細菌の発生を促進しない培地を作成することを可能にする。
【００３０】
好都合には、ハイビスカス又は粗製若しくは精製されたハイビスカス抽出物により、尿は、ハイビスカスに特有のポリフェノールで濃縮され、このポリフェノールは、抗菌作用をし、特にアントシアン又はプロアントシアニジンである。
【００３１】
ハイビスカスの化学組成は、有機酸、アントシアン、プロアントシアニジン型のポリフェノール及び抗菌性フラボノイドに富んでいる。ハイビスカスにあるアントシアンの中で、下記が言及されてもよい：デルフィニジン−３−Ｏ−サムブビオシド、デルフィニジン−３−Ｏ−グルコシド、シアニジン−３−Ｏ−サムブビオシド及びシアニジン−３−Ｏ−グルコシド。フラボノイドの中には、前記に言及されるゴシペチン及びそのグリコシル化形体であるゴシピンがあってもよい。
【００３２】
また、本発明は、前記で定義される使用に関し、その中で、ハイビスカス又は粗製若しくは精製されたハイビスカス抽出物は栄養補助食品の形体である。
【００３３】
このような栄養補助食品は、特に、ゼラチン・カプセル、錠剤、カプセル、可溶性粉末（サシェ若しくはスティック）又は飲料（濃縮形態、若しくは飲料として準備ができている）の形をすることができる。
【００３４】
従って、栄養補助食品は、例えば、尿の快適さを回復したい女性によって使用されてもよい。また、尿のトラブル及びその再発を防ぐために使用することができる。
【００３５】
本発明による有利な使用は、ハイビスカスが新鮮な形体若しくは乾燥した形式で植物全体に由来するか、又は花に由来することによって特徴付けられる。
【００３６】
従って、本発明の範囲内において、粒子サイズが何であっても、ハイビスカスは新鮮な形体又は乾燥した形式で使用することができる。従って、ハイビスカスは、例えば、（低温）粉砕形体又は微粉形式で使用することができる。
【００３７】
本発明による別の有利な使用は、粗製又は精製されたハイビスカス抽出物が、溶媒が何であれ（例えば、アルコール、水又は水性アルコール混合物）、液体形体の抽出物であるか、あるいは乾燥手段が何であれ（特に、熱風の流れにおける水の除去によって、噴霧化によって、蒸発によって、昇華によって、脱水によって、又は支持体への吸着によって）、乾燥形体の抽出物であることによって特徴付けられる。
【００３８】
ハイビスカス抽出物は、当業者の従来の手段によって粗製若しくは精製され、得ることができる。
【００３９】
粗製抽出物は、液体形体の粗製抽出物を得るために、抽出工程のために水などの溶媒の存在下に植物（ハイビスカス）を置き、植物と溶媒を分離することによって得られる。乾燥形体の粗製抽出物を得るために、液体形体の粗製抽出物は、例えば、熱風の流れにおける水の除去よって、噴霧化によって、蒸発によって、昇華によって、脱水によって、又は支持体への吸着によって乾燥される。
【００４０】
精製された抽出物は、有効成分の含有量を増大させるために、前述の工程において得られた粗製抽出物から得られる。その目的のために、前記粗製抽出物は、クロマトグラフィー、又は水に混ざらない有機溶媒を用いた液体／液体抽出のいずれかによって精製工程に晒される。
【００４１】
従って、水を用いて植物を粗製抽出し、又はアルコールを用いて粗製抽出してこの溶媒を除去することによって、あるいは水に粉末形体の粗製抽出物を再溶解させることによって得られる、水相中の液体形式の粗製抽出物から開始して、クロマトグラフィー技術による精製法を適用してもよい。
【００４２】
粗製抽出物はクロマトグラフィーレジンに置かれる。所望の有効成分（ポリフェノール）は、そのレジンに固定されたままであり、次に、水を用いて、又は所望の有効成分を再溶解しない水／有機溶媒混合物を用いて洗浄される。最後に、有効成分は、アルコール（例えば、メタノール若しくはエタノール）又はケトン型の有機溶媒を用いた溶出によってカラムから回収される。このプロセスは、水性開始相に存在する９０％を超える有効成分が回復されることを可能にする。
【００４３】
精製された抽出物は、アルコール相の液体形体で、溶媒の除去後の水相の液体形体で、又は濃縮された水相の液体形体で、あるいは乾燥形体（粉末形体）で、個々の方法において処置することができる。
【００４４】
使用されるクロマトグラフィーレジンは、イオン（陰イオン若しくは陽イオン）交換型又は吸着／脱着型のものであってもよく、例えば、ジビニルベンゼン／スチレン共重合体、ポリスチレン又はポリメタクリル型であり、特に、Ｒｏｈｍ ＆ Ｈａａｓ又はＭｉｔｓｕｂｉｓｈｉ Ｃｈｅｍｉｃａｌによって市販されている。
【００４５】
また、本発明は、尿障害の治療又は予防、特に膀胱炎を治療又は予防するためのハイビスカス又は粗製若しくは精製されたハイビスカス抽出物を含む薬剤に関する。
【００４６】
また、本発明は、ポリフェノール含有量が約５０％以上、好ましくは約５０％〜約１００％、なおより好ましくは約９０％〜約１００％である、液体又は乾燥形体の濃縮ハイビスカス抽出物に関する。
【００４７】
より具体的には、発明による濃縮抽出物は、少なくとも９０％の全ポリフェノール、より具体的には約２０〜約５０％のカテキンを含有する。
【００４８】
ポリフェノールは、溶離液として、溶媒Ａ：水／酢酸（９９／１）、Ｂ：水／酢酸（９４／６）及びＣ：水／アセトニトリル／酢酸（６５／３０／５）の勾配を用いたＨＰＬＣにより分析される。適用された勾配は下記のとおりである。
【００４９】
【表１】
【００５０】
適用された流速は、０．５ｍｌ／分（ＵＶ検知器：２８０ｎｍ；カラム：Ｃ１８グラフト化相）である。
【００５１】
ポリフェノールの中で、一方ではフラボノール及びフラボノイド、他方ではフラボンに言及されてもよい。
【００５２】
フラボノールとフラボノイドの中で、特に言及されてもよいのは次の化合物である：ハイビスセチン、ハイビスセトリン（ハイビスセチン−３−Ｏ−グルコシド）、ゴシペチン、ゴシペトリン（ゴシペチン−７−Ｏ−グルコシド）、ゴシピン（ゴシペチン−８−Ｏ−グルコシド）、ゴシトリン（ゴシペチン−３−Ｏ−グルコシド）、サブダリトリン（ｓａｂｄａｒｉｔｒｉｎ）及びその加水分解形サブダレチン（ｓａｂｄａｒｅｔｉｎ）（ヒドロキシフラボン）、ケルセチン（ｑｕｅｒｃｅｔｉｎ）又はミリセチン（ｍｙｒｉｃｅｔｉｎ）。
【００５３】
フラボンの中で、特に言及されてもよい化合物は、ルテオリン（ｌｕｔｅｏｌｉｎ）又はルテオリングリコシド（ｇｌｙｃｏｓｉｄｅ）である。
【００５４】
特定の態様によれば、本発明による濃縮ハイビスカス抽出物は、８％未満のアントシアン含有物を有する。
【００５５】
好ましくは、本発明の濃縮ハイビスカス抽出物は、８％以上、好ましくは約１０％〜約２０％、なおより好ましくは約１５〜約２０％のアントシアン含有物を有することによって特徴付けられる。
【００５６】
アントシアンは、溶離液として、溶媒Ｂ：超純水（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）中の３％リン酸（ｖ／ｖ）、及びＣ：メタノールの勾配を用いたＨＰＬＣにより分析される。適用された勾配は以下のとおりである。
【００５７】
【表２】
【００５８】
適用された流速は、１．０ｍｌ／分（検出：５２５ｎｍ；カラム：Ｃ１８グラフト化相）である。
【００５９】
より具体的には、本発明の濃縮ハイビスカス抽出物は、次の配分のアントシアン含有物を有することによって特徴付けられる：
デルフィニジン−３−Ｏ−サンブジオシド（ｓａｍｂｕｄｉｏｓｉｄｅ）（ハイビシン（ｈｉｂｉｓｃｉｎ）） ４〜６％
デルフィニジン−３−Ｏ−グルコシド ０〜２％
シアニジン−３−Ｏ−サンブジオシド（ゴシピシアニン） ０〜４％
シアニジン−３−Ｏ−グルコシド ０〜１％
【００６０】
さらに、本発明の濃縮ハイビスカス抽出物は、３０％以下の有機酸含有物を含むことによって特徴付けられる。
【００６１】
より具体的には、本発明の濃縮ハイビスカス抽出物は、１％を超える量のクロロゲン酸、及び５％未満の量のキナ酸を含むことができる。
【００６２】
また、有機酸のうち、言及されてもよい化合物は、プロトカテク酸、クエン酸、リンゴ酸、酒石酸、ハイビシン酸（ｈｉｂｉｓｃｉｃ ａｃｉｄ）、又はアスコルビン酸である。
【００６３】
また、本発明は、有効成分として、上記で定義された濃縮ハイビスカス抽出物、並びに医薬として許容される担体を含む医薬組成物に関する。
【００６４】
さらに、本発明は、上記で定義された濃縮ハイビスカス抽出物、並びに許容される担体を含む栄養補助食品に関する。
【実施例】
【００６５】
１）ハイビスカス抽出物の生産：
ａ）粗製ハイビスカス抽出物の生産：
１ｋｇの乾燥したハイビスカスの花は、水中、５０℃で２時間の浸軟によって抽出される。取り入れた溶媒は、懸濁した固体材料から分離され、ろ過され、次に濃縮される。濃縮物は、液体粗製抽出物を構成し、それは、例えば、真空中で乾燥させることによって、溶媒を除去することにより粉末形体の粗製抽出物に変換可能である。重量収率は、３０〜４０％ｗ／ｗのオーダーである。生産物の分析は、有機酸、プロアントシアニジン型ポリフェノール、フラボノイド及びアントシアンの存在を示す。その分析は、抽出物が２０％を超えるロアントシアニジン含有物を有することを示す。
【００６６】
ｂ）別の粗製ハイビスカス抽出物の生産：
１ｋｇの新鮮なハイビスカスの花は、９０％のエタノール中、２時間の浸軟によって抽出される。取り入れた溶媒は、懸濁した固体材料から分離され、次にろ過される。生産物は、液体粗製抽出物を構成し、その中では、所望の化合物がすべて同様に見出されるが、異なった配分である。また、液体生産物は、蒸留され、次に濃縮され、場合により、従来の手段、例えば、真空中で加熱して乾燥することができる。
【００６７】
ｃ）精製されたハイビスカス抽出物の生産：
１ｋｇの乾燥したハイビスカスの花は、９０％のエタノール中、２時間の浸軟によって抽出される。取り入れた溶媒は、懸濁した固体材料から分離され、ろ過され、次に蒸留及び濃縮される。濃縮物は、ポリフェノールに適している吸着／脱着レジン上のクロマトグラフィーによる精製工程に晒される。その後、溶離物は、精製された抽出物を構成し、それは液体形体又は乾燥形式で同様に保存することができる。ＨＰＬＣによって測定すると、最大９％のアントシアン及び最大５０％のポリフェノールを含む、精製されたハイビスカス抽出物が得られる。
【００６８】
ｄ）別の精製されたハイビスカス抽出物の生産：
例えば、上述されるように（ａ段落）、特に濃縮形体で得られた粗製抽出物から開始して、例えば、ｎ−ブタノール又は酢酸エチル型の水に混ざらない溶媒の酸を用いて液体／液体抽出物による精製工程を適用することができる。その後、最大６５％のポリフェノールを含む精製された画分から溶媒が除去される。分析は、抽出物が５０％を超えるプロアントシアニジン含有物を有することを示す。液体形体のハイビスカス抽出物のすべての場合において、グリセロール若しくはグリコール型、保存剤型の添加物を用いて、又は任意の他の製剤成分を用いて抽出物を安定化することができる。
【００６９】
２）生薬製剤の実施例：
ａ）飲む準備ができている飲料の生産：
【００７０】
【表３】
【００７１】
ハイビスカスは、尿道中の病原性の細菌叢の出現を調節することができる；他の抽出物は、利尿を増加させることにより水の除去を促し、それは、尿道の感染性病理学に対する飲料の一般的な肯定的な影響に寄与する。
【００７２】
ｂ）ゼラチンカプセルの生産：
【００７３】
【表４】
【００７４】
この種の生薬製剤は、ＡＦＳＳＡによって提案される１日当たり３６ｍｇのプロアントシアニジンが容易に提供されるようにする。
【００７５】
３）微生物学的な結果：
尿感染、より具体的には膀胱炎、特に急性の非合併性膀胱炎に対する本発明のハイビスカス抽出物（精製された又は精製されていない）の有効性を示すために、微生物学的研究を行った。
【００７６】
研究Ｎｏ．１−ハイビスカス抽出物（ＵｔｉＲｏｓｅ）の抗菌性保存の有効性評価−プロトコール米国薬局方ＸＸＶ−２つの菌株−７日間
この最初の研究の目的は、保存活性が保存期間中に変化しないことを確認するために、保存システムの可使間を評価することである。使用された菌株は、大腸菌及びカンジダ・アルビカンスである。培地は、新世代の培地（保存培地、菌株維持培地、有効なインキュベーション及び計数培地）であり、下記に言及される：
保存培地：
●脳／心臓ブロス
●ＬＴ１００ブロス
●トリプトン塩溶液
菌株維持培地：
●ＬＴ１００ゲロース（ｇｅｌｏｓｅ）
●トリプト−カゼイン大豆ゲロース
●サブロー・ゲロース（Ｓａｂｏｕｒａｕｄ ｇｅｌｏｓｅ）
インキュベーション及び計数培地（ペトリ皿）：
●細菌の菌株用のＬＴ１００ゲロース上
●真菌及び酵母用のサブロー・ゲロース上
【００７７】
この試験を行なうために使用される培地の各バッチの対照は、その滅菌性をチェックするために３２℃で５日間インキュベートされる。
【００７８】
方法：
分析される生産物は、適切な微生物で人為的に汚染される。各測定間で、接種された調製物は、２８日間、２２℃で、遮光されて維持される。４回の接種後の計算は、７日、１４日、２１日、２８日で実行される（汚染している植物相の計算は栄養ゲロース上の１ｇの生産物の連続稀釈によって実行された）。
【００７９】
各測定時間で：
○１ｇ（＋／−０．１ｇ）の汚染された生産物は、９ｍｌ（＋／−０．２ｍｌ）のＬＴ１００ブロス中で計量される。
○３０分間、周囲温度での回復
試験された生産物は、上記で定義された精製されたハイビスカス抽出物である。
【００８０】
対数減少の結果
【００８１】
【表５】
【００８２】
解釈と結論：
保存システムは、次の場合には有効である：
○細菌について：１４日では、開始の接種と比較して、少なくとも２ｌｏｇの減少がなければならない。１４日で得られた微生物の濃度は、残りの１４日と同一であるか、又は低くなければならない。
○かび（ｍｏｕｌｄ）／酵母について：１４日と２８日では、濃度は、接種の初期濃度以下でなければならない。
【００８３】
対数減少は７日において薬局方の要件に従う。この最初の研究は、本発明によるハイビスカス抽出物が、大腸菌とＣ．アルビカンスの両方において、初期の微生物汚染の減少（微生物集団の低下）に有意な効果を有することを示す。
【００８４】
研究Ｎｏ．２−ハイビスカス抽出物（ＵｔｉＲｏｓｅ）の抗菌的保存の有効性評価−プロトコール米国薬局方ＸＸＶ−１菌株
使用される菌株は大腸菌である。培地は研究Ｎｏ．１で使用されるものと同じである。
【００８５】
方法：
分析されるべき生産物は、適切な微生物で人為的に汚染される。各測定間で、接種された調製物は、４日間、２０℃で、遮光されて維持される。４回の接種後の計算は、１日、２日、３日、４日で実行される（汚染している植物相の計算は栄養ゲロース上の１ｇの生産物の連続稀釈によって実行された）。
【００８６】
各測定時間で：
○１ｇ（＋／−０．１ｇ）の汚染された生産物は、９ｍｌ（＋／−０．２ｍｌ）のＬＴ１００ブロス中で計量される。
○３０分間、周囲温度での回復
試験された生産品は、上記で定義された精製されたハイビスカス抽出物である。
【００８７】
対数減少の結果
【００８８】
【表６】
【００８９】
解釈と結論：
保存システムは、薬局方の推薦により試験された菌株に有効である。ハイビスカス抽出物は、大腸菌に有意な抗菌作用を示した。大腸菌に対する抗菌効果は、直ちに現われ、全汚染除去が処置開始後の２４時間で得られる：この処置は、２４時間以内に得られるべき初期の細菌集団の１０５の減少を可能にした。
【００９０】
研究Ｎｏ．３−尿の快適さにおける栄養補助食品の有効性及び容認性
１−プロトコールの要約
研究の目標：尿の快適さを改善し、尿感染を予防するために、食品成分（上記で定義されたハイビスカス抽出物）の有効性及び容認性を評価すること。該食品成分は、６０人の女性によって、２４週間、栄養補助食品の形体で接種され、女性らは３つのグループに配分され、有効成分なしの対照生産物（プラセボ）、又は該成分の投薬物Ｎｏ．１を含む試験生産物、又は該成分の投薬物Ｎｏ．２を含む別の試験生産物を試験する。生産物は、無作為に（２０人の３グループを無作為に配分する）配置されたグループに従って、医師によってコード化された中立な包装に分配される。
【００９１】
ボランティアの募集用の試験対象患者基準は以下のとおりである：
●１８〜５５歳の女性
●尿の不快について不平を言い、尿感染を繰り返していると述べる女性。
投薬：１日当たり２個のゼラチンカプセル
栄養補助食品１：ＵｔｉＲｏｓｅレギュラー（ハイビスカス抽出物）
栄養補助食品２：ＵｔｉＲｏｓｅプレミアム（精製されたハイビスカス抽出物）
対照生産物：マルトデキストリン
【００９２】
試験は、調節され、無作為化された二重盲検試験である。３グループは、並行して生産物をテストする。
【００９３】
２−評価基準
評価パラメーターは２つのタイプである：一方では客観的な測定、即ち、試験期間中に申告された尿のトラブルの出現数、他方では主観的な測定、生産物の把握された有効性、容認性及び寛容性の評価による。健康診断は、試験生産物の８４日及び１６８日の消費後に医療訪問によって実行される。尿の快適さは毎日モニターされ、観察記録に記され、尿のトラブル及び任意の申告された尿感染の発生すべてが記録されることを可能する。知覚された有効性を評価するためのアンケートが、４日と１６８日にボランティアに配布される。それは、尿の快適さ及び尿感染の予防における試験生産物の有効性が評価されることを可能にする。試験生産物に対する寛容性は、栄養補助食品の消費に関連した任意の望ましくない効果も記録するために医者によって評価される。研究の最終では、ボランティアは、この生産物の使用の容易さを評価し、栄養補助食品で知覚した、主な特質及び主な欠点を通じて一般的な印象を報告した。
【００９４】
３−結果
客観的データ
尿感染の数は、精製された又は精製されていない有効成分を消費した２つのグループにおいて顕著に減少し、一方、対照グループでは顕著に減少しなかった。
【００９５】
自動評価
尿のトラブルにおける顕著な減少は、頻度、疼痛、持続、尿意頻度、尿の臭気の点から２つのハイビスカス抽出物に関して観察された。また、粘膜の状態における顕著な改善は、焦燥、炎症、そう痒、乾燥、健康又は不健康な粘膜の点で、２つのハイビスカスに関して観察された。
【００９６】
主観的データ
ハイビスカス抽出物の作用は、尿感染、及び感染が存在しなかった場合の尿のトラブルの程度における予防において、医師によって有効であると考えられた。一般に、ボランティアは、ハイビスカス抽出物を用いて処置を下記の局面で満足していると判断した：
●尿の快適さにおける改善
●天然の微生物叢に対する考慮
●尿のトラブル及び感染症の予防における有効性
●尿感染の顕著な減少
●感染中の疼痛の強度の減少
●尿感染の期間の短縮
●そう痒と焦燥の減少。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
大腸菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ）及びカンジダ・アルビカンス（Ｃａｎｄｉｄａ ａｌｂｉｃａｎｓ）の存在に関連した尿感染を治療又は予防するための薬剤を製造するためのハイビスカス又は粗製若しくは精製されたハイビスカス抽出物の使用。
【請求項２】
膀胱炎を治療又は予防するための薬剤を製造するための請求項１に記載の使用。
【請求項３】
ハイビスカス又は粗製若しくは精製されたハイビスカス抽出物が栄養補助食品の形体であることを特徴とする、請求項１又は２に記載の使用。
【請求項４】
ハイビスカスが、新鮮形体若しくは乾燥形体で植物全体に由来するか、又は花に由来することを特徴とする、請求項１〜３のいずれか１項に記載の使用。
【請求項５】
粗製又は精製されたハイビスカス抽出物が液体形体又は乾燥形体の抽出物であることを特徴とする、請求項１〜４のいずれか１項に記載の使用。
【請求項６】
ポリフェノール含有量が５０％以上、好ましくは約５０％〜約１００％、なおより好ましくは約９０％〜約１００％である、液体形体又は乾燥形体の濃縮ハイビスカス抽出物。
【請求項７】
アントシアン含有量が８％以上、好ましくは約１０％〜約２０％、なおより好ましくは約１５％〜約２０％である、請求項６に記載の濃縮ハイビスカス抽出物。
【請求項８】
有効成分として、請求項６又は７に記載の濃縮ハイビスカス抽出物、並びに医薬として許容される担体を含む医薬組成物。
【請求項９】
請求項６又は７に記載の濃縮ハイビスカス抽出物、並びに許容される担体を含む栄養補助食品。
【請求項１０】
膀胱炎を治療又は予防するための薬剤を製造するための請求項６又は７に記載の濃縮ハイビスカス抽出物の使用。
【請求項１】
大腸菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ）及びカンジダ・アルビカンス（Ｃａｎｄｉｄａ ａｌｂｉｃａｎｓ）の存在に関連した尿感染を治療又は予防するための薬剤を製造するためのハイビスカス又は粗製若しくは精製されたハイビスカス抽出物の使用。
【請求項２】
膀胱炎を治療又は予防するための薬剤を製造するための請求項１に記載の使用。
【請求項３】
ハイビスカス又は粗製若しくは精製されたハイビスカス抽出物が栄養補助食品の形体であることを特徴とする、請求項１又は２に記載の使用。
【請求項４】
ハイビスカスが、新鮮形体若しくは乾燥形体で植物全体に由来するか、又は花に由来することを特徴とする、請求項１〜３のいずれか１項に記載の使用。
【請求項５】
粗製又は精製されたハイビスカス抽出物が液体形体又は乾燥形体の抽出物であることを特徴とする、請求項１〜４のいずれか１項に記載の使用。
【請求項６】
ポリフェノール含有量が５０％以上、好ましくは約５０％〜約１００％、なおより好ましくは約９０％〜約１００％である、液体形体又は乾燥形体の濃縮ハイビスカス抽出物。
【請求項７】
アントシアン含有量が８％以上、好ましくは約１０％〜約２０％、なおより好ましくは約１５％〜約２０％である、請求項６に記載の濃縮ハイビスカス抽出物。
【請求項８】
有効成分として、請求項６又は７に記載の濃縮ハイビスカス抽出物、並びに医薬として許容される担体を含む医薬組成物。
【請求項９】
請求項６又は７に記載の濃縮ハイビスカス抽出物、並びに許容される担体を含む栄養補助食品。
【請求項１０】
膀胱炎を治療又は予防するための薬剤を製造するための請求項６又は７に記載の濃縮ハイビスカス抽出物の使用。
【公表番号】特表２０１０−５２６１２５（Ｐ２０１０−５２６１２５Ａ）
【公表日】平成２２年７月２９日（２０１０．７．２９）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２０１０−５０６９８１（Ｐ２０１０−５０６９８１）
【出願日】平成２０年５月６日（２００８．５．６）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＦＲ２００８／０５０７９７
【国際公開番号】ＷＯ２００８／１４８９９５
【国際公開日】平成２０年１２月１１日（２００８．１２．１１）
【出願人】（５０９３０９７３２）
【Ｆターム（参考）】
【公表日】平成２２年７月２９日（２０１０．７．２９）
【国際特許分類】
【出願日】平成２０年５月６日（２００８．５．６）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＦＲ２００８／０５０７９７
【国際公開番号】ＷＯ２００８／１４８９９５
【国際公開日】平成２０年１２月１１日（２００８．１２．１１）
【出願人】（５０９３０９７３２）
【Ｆターム（参考）】
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