ハリコンドリンＢ類似体
本発明は、薬剤活性を持つハリコンドリンＢ類似体、あるいはそれらの結晶形、ならびに合成中間体としてさらなる有用性を持つハリコンドリンＢ類似体を含む。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願
本出願は、２００８年４月４日に出願された米国特許仮出願番号第６１／０４２，６４３号および２００８年４月１１日に出願された米国特許仮出願番号６１／０７１，１１１号の優先権を主張し、これらは、その全てが参照によりここに組み込まれる。
【０００２】
発明の分野
本発明は薬剤活性を持つハリコンドリンＢ類似体に関する。ある実施態様において、この類似体は結晶体を持ち、そして／あるいは、強力な抗癌活性を持つ化合物であるハリコンドリンＢ類似体Ｅ７３８９の合成における合成中間体としてのさらなる有用性を持つ。
【化１】
【背景技術】
【０００３】
背景技術
強力な抗癌剤であるハリコンドリンＢは、カイメン、Ｈａｌｉｃｈｏｎｄｒｉａ ｏｋａｄａｉより最初に単離された。それはまた、Ａｘｉｎｅｌｌａ ｓｐ．、Ｐｈａｋｅｌｌｉａ ｃａｒｔｅｒｉおよびＬｉｓｓｏｎｄｅｎｄｒｙｘ ｓｐ．においても発見された。ハリコンドリンＢは、インビトロ（ｉｎ ｖｉｔｒｏ）において、チューブリンの重合化、微小管重合、ベータ−チューブリン架橋、ＧＴＰおよびビンブラスチンのチューブリンへの結合、ならびにチューブリン依存性ＧＴＰ加水分解を阻害する事を示した。それはまた、インビトロ（ｉｎ ｖｉｔｒｏ）およびインビボ（ｉｎ ｖｉｖｏ）において抗癌活性を示した。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
Ａｉｃｈｅｒらは、１９９２年にハリコンドリンＢの全合成を発表した（Ａｉｃｈｅｒ，Ｔ．らのＪ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．１１４：３１６２−３１６４およびＺｈｅｎｇ，Ｗ．Ｊ．らのＪ．Ｂｉｏｏｒｇ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔ．、２００４、１４、５５５１を参照）。ハリコンドリンＢおよびさまざまな類似体の合成は、米国特許第６，２１４，８６５号、第６，３６５，７５９号、第６，４６９，１８２号および第６，６５３，３４１号；米国特許出願公開２００４／０１９８８０６、２００６／０１０４９８４：ならびに特許協力条約に基づく国際出願公開２００５／１１８５６５に記載され、それらすべては、参照によりその全体がここに組み入れられる。
【課題を解決するための手段】
【０００５】
本発明は薬剤活性を持つハリコンドリンＢ類似体に関する。類似体は結晶体を持ち、そして／あるいは強力な抗癌活性を持つ化合物であるハリコンドリンＢ類似体、Ｅ７３８９の合成における合成中間体としてのさらなる有用性を持つ。従って、本発明は、ＥＲ−０７６３４９一水和物の結晶体；ＥＲ−８０９６８１の結晶体；化合物ＥＲ−８２００５７もしくはＥＲ−８２００５７の結晶体；化合物ＥＲ−８１８９０６もしくはＥＲ−８１８９０６の結晶体；化合物ＥＲ−８１９５３１もしくはＥＲ−８１９５３１の結晶体；ならびに化合物ＥＲ−１１１１９７もしくはＥＲ−１１１１９７の結晶体に関する。本発明はまた、それらの化合物を含有する医薬組成物、その化合物を投与する事による癌の治療方法に関する。
【図面の簡単な説明】
【０００６】
【図１−Ａ】図１−Ａは、ＥＲ−０７６３４９−００一水和物の単結晶構造のＯＲＴＥＰ図である。
【図１−Ｂ】図１−Ｂは、ＥＲ−０７６３４９一水和物のｂ軸に沿った結晶パッキング図である。
【図１−Ｃ】図１−Ｃは、イソプロピルアルコールより結晶化されたＥＲ−０７６３４９一水和物の粉末Ｘ線回折（ＸＲＰＤ）パターンである。
【図１−Ｄ】図１−Ｄは、さまざまな溶媒からのＥＲ−０７６３４９一水和物のＸＲＰＤパターンの描画である。
【図１−Ｅ】図１−Ｅは、エタノールより結晶化されたＥＲ−０７６３４９一水和物のＤＳＣの描画である。
【図１−Ｆ】図１−Ｆは、イソプロパノールより結晶化されたＥＲ−０７６３４９一水和物のＤＳＣの描画である。
【図１−Ｇ】図１−Ｇは、プロピオニトリルより結晶化されたＥＲ−０７６３４９一水和物のＤＳＣの描画である。
【図２−Ａ】図２−Ａは、ＥＲ−８１８９０６モノ−アセトニトリル溶媒和物の単結晶構造のＯＲＴＥＰ図である。
【図２−Ｂ】図２−Ｂは、ＥＲ−８１８９０６モノ−アセトニトリル溶媒和物のｃ軸に沿った結晶パッキング図である。
【図２−Ｃ】図２−Ｃは、ＥＲ−８１８９０６（ｅｐｉ−Ｃ２０ジオール）モノ−アセトニトリル溶媒和物のＸＲＰＤパターンである。
【図３−Ａ】図３−Ａは、ＥＲ−８１９５３１（ｅｐｉ−Ｃ２３ジオール）一水和物の単結晶構造のＯＲＴＥＰ図である。
【図３−Ｂ】図３−Ｂは、ＥＲ−８１９５３１（ｅｐｉ−Ｃ２３ジオール）一水和物のｂ軸に沿った結晶パッキング図である。
【図３−Ｃ】図３−Ｃは、ＥＲ−８１９５３１（ｅｐｉ−Ｃ２３ジオール）のＸＲＰＤパターンである。
【図４−Ａ】図４−Ａは、ＥＲ−８２００５７（ｅｐｉ−Ｃ２３アミン）のＸＲＰＤパターンである。
【図５−Ａ】図５−Ａは、ＥＲ−１１１１０７（ｅｐｉ−Ｃ３４ジオール）一水和物の単結晶構造のＯＲＴＥＰ図である。
【図５−Ｂ】図５−Ｂは、ＥＲ−１１１１０７（ｅｐｉ−Ｃ３４ジオール）一水和物のａ軸に沿った結晶パッキング図である。
【図６−Ａ】図６−Ａは、ＥＲ−８０９６８１（エポキシド）の単結晶構造のＯＲＴＥＰ図である。
【図６−Ｂ】図６−Ｂは、ＥＲ−８０９６８１（エポキシド）のｂ軸に沿った結晶パッキング図である。
【図６−Ｃ】図６−Ｃは、ＥＲ−８０９６８１（エポキシド）のＸＲＰＤパターンである。
【図６−Ｄ】図６−Ｄは、ＥＲ−８０９６８１（エポキシド）の理論上のＸＲＰＤパターンである。
【発明を実施するための形態】
【０００７】
米国特許第６，２１４，８６５号に記載されるように、ハリコンドリンＢ類似体、ＥＲ−０８６５２６（化合物Ｂ−１９３９として認識される）は強力な抗癌剤である。ＥＲ−０８６５２６は、中間体であるジオール化合物、ＥＲ−０７６３４９（化合物Ｂ−１７９３として認識される）より調製される。米国特許第６，２１４，８６５号は、ＥＲ−０７６３４９（Ｂ−１７９３）の調製ならびに、いくつかの他のハリコンドリンＢ類似体の調製における使用について記載する。
【化２】
【化３】
【０００８】
ＥＲ−０７６３４９を介する、ＥＲ−０８６５２６への代替的な合成経路は、特許協力条約に基づく国際出願公開２００５／１１８５６５に記載される。国際出願公開２００５／１１８５６５によると、ＥＲ−０７６３４９は、ＥＲ−０８６５２６へと、以下のように転換される：
【化４】
【０００９】
国際出願公開２００５／１１８５６５の方法において、以下の図に示されるように、ＥＲ−０８６５２６を生成するまでに、ＥＲ−０７６３４９はその場でトシラート、ＥＲ−０８２８９２を生成するために反応し、それはそののち、その場でエポキシド、ＥＲ−８０９６８１へと転換される。
【化５】
【００１０】
ＥＲ−０７６３４９はさまざまな溶媒により一水和物として結晶化する。エポキシド、ＥＲ−８０９６８１はまた、結晶化合物として単離し得る。結晶のＥＲ−０７６３４９一水和物（実施例１）および結晶のＥＲ−８０９６８１（実施例６）は、本発明の別の実施態様を表わす。
【００１１】
米国特許第６，２１４，８６５号および国際特許出願公開２００５／１１８５６５に記載されるもののような多段階の合成において、中間体が調製され、望まない副産物もしくは不純物はより早いステップより持ち越される。しばしば、ろ過、分離および／もしくは精製ステップは望まない副産物もしくは不純物を除去するのに導入される。そのようなステップを組み入れることはコストの増大させるだけでなく、全体の合成の収率を下げることにもなる。多段階合成において結晶中間体を得ることはこれらの問題に対処し得る。結晶中間体は、高純度の中間体が他の精製ステップの必要性を減少させ得るし、そして合成プロセスのコストを減少させ得るといういくつかの利点をもたらす。ＥＲ−０８６５２６の調製において、高純度中間体として結晶体ＥＲ−０７６３４９一水和物を得る事は、そのＣ２５エピマーからの分離ができるようにする。バルクの結晶体ＥＲ−０７６３４９において、Ｃ２５エピマーの量は一般的に０．１重量％である。
【００１２】
本発明は、いくつかＥＲ−０７６３４９のジアステレオマーの結晶体に関する。一つもしくはそれ以上のジアステレオマーは、同一のキラル炭素原子を持つ化合物の多段階の合成を占める共通の不純物である。さまざまなジアステレオマーを分析する事は、所望の化合物の調製において発生する、もしくは発生し得るエピマーの不純物を同定するために、有用である。エピマーの不純物を同定する事で、不純物を減少させ、避け、定量し、もしくは除去するための方法の改善を導くことができる。さまざまなエピマーの結晶体は、特定のエピマーの詳細な分析およびその合成における同定をもたらす。さらに、特定のエピマーの結晶化は、その除去の手段であり得、そしてそれにより所望の化合物を精製し得る。ＥＲ−０７６３４９のエピマーの結晶体は、ＥＲ−０８６５２６の合成におけるそれらの必要性に対応する。ＥＲ−０７６２４９に関係する以下の化合物：ＥＲ−８０９６８１；ＥＲ−８２００５７；ＥＲ−８１８９０６；ＥＲ−８１９５３１；およびＥＲ−１１１１８７の結晶体は、本発明のさらなる実施態様を表わし、これらのすべては抗癌活性を示す。本開示のこの目的のために、化合物と化合物の結晶体とのこれらの群は集合的にハリコンドリンＢと呼ばれ、そして個別にはハリコンドリンＢ類似体と呼ばれる。
【００１３】
本発明によるハリコンドリンＢ類似体の治療と組み合わせて使用できる数多くの種類の抗癌のアプローチが存在する。それらは、例えば、化学療法剤（下記参照）、生物剤（例えば、ホルモン剤、サイトカイン（例えば、インターロイキン、インターフェロン、顆粒球コロニー刺激因子（Ｇ−ＣＳＦ）、マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ−ＣＳＦ）、ケモカイン、ワクチン抗原および抗体）、抗血管新生剤（例えば、アンジオスタチンおよびエンドスタチン）、放射線療法ならびに外科手術を含む。
【００１４】
当業者によって判定し得るように、当分野においてこれらのアプローチが使用されると知られているのと同じ種類の癌と同様に他のものを治療するために、本発明の方法を使用できる。さらにこれらのアプローチは、その使用において当分野において知られるものと同様のパラメータ（例えば投薬計画および投与量）に従って実施し得る。しかしながら、当分野に知られるように、これらのアプローチと併用する追加的なハリコンドリンＢ類似体の使用のために、これらのパラメータを補正する事が望ましいであろう。当業者が判定し得るように、例えば、薬剤が通常で単独の治療剤として投与されるとしたら、本発明によるハリコンドリンＢ類似体と組み合わせられるとき、薬剤の投与量を減らすことが望ましいであろう。本発明の方法ならびにそれらの方法において使用できる組成物の例は、以下に示される。
【００１５】
とりわけ、例えば、代謝拮抗物質、抗生剤、アルキル化剤、植物性アルカロイド、ホルモン剤、抗凝固剤、抗血栓剤、および他の天然性剤を含むいくつかの異なる種類の化学療法剤を、本発明によるハリコンドリンＢ治療と組み合わせて使用できる。これらの類の薬剤およびそれらの使用によって治療できる癌の具体的な非限定的例は、以下に示される。
【００１６】
ハリコンドリンＢ類似体と併用できる代謝拮抗剤は、例えば、メトレキサート、プリン代謝拮抗薬（例えば、メルカプトプリン、チオグアニン、リン酸フルダラビン、クラドリビン、およびペントスタチン）、ならびにピリミジン拮抗薬（例えば、ゲムシタビン、カペシタビン、フルオロウラシル（例えば５−ＦＵ）、シタラビンおよびアザシチジン）を含む。特定の種類の癌の治療でのこれらの薬剤の使用は、当分野で周知であり、これらの薬剤はハリコンドリンＢ類似体と組み合わせて、これらの種類の癌および他の種類の癌の治療に使用できる。具体的な非限定的例として、ハリコンドリンＢ類似体は、非小細胞肺癌、膵臓癌もしくは転移性乳癌の治療においてゲムシタビンと併用できる。さらなる例において、ハリコンドリンＢ類似体は、乳癌もしくは大腸癌においてカペシタビンと併用できる。
【００１７】
上述のように、ハリコンドリンＢ類似体と併用できる他の類の化学療法剤は、抗癌抗生剤を含む。これらは、例えば、アントラサイクリン（例えばドキソルビシン、エピルビシン、ダウノルビシンおよびイダルビシン）、アドリアマイシン、ダクチノマイシン、イダルビンシン（ｉｄａｒｕｂｉｎｃｉｎ）、プリカマイシン、マイトマイシンならびにブレオマイシンを含む。上述の薬剤と同様、特定の種類の癌の治療におけるこれらの薬剤の使用は当分野に周知であり、これらは、これらの種類の癌および他の種類の癌の治療のためにハリコンドリンＢ類似体と併用できる。具体的な非限定例として、ドキソルビシンのようなアントラサイクリンは、乳癌もしくは膵臓癌の治療のためにハリコンドリンＢ療法と併用できる。代替的に、第三の薬剤、シクロホスファミドもこの方法において使用できる。
【００１８】
アルキル化剤は、本発明によるハリコンドリンＢ類似体と組み合わせて投与できる他の類の化学療法剤からなる。そのような薬剤の例は、プロカルバジン、ダカルバジン、アルトレタミン、シスプラチン、カルボプラチンおよびニトロソウレアを含む。ハリコンドリンＢ類似体は、これらの薬剤を治療するのに使用すると当分野で知られている癌の治療、ならびに他の癌の治療においてこれらの薬剤を併用できる。例えば、ハリコンドリンＢ類似体は、非小細胞肺癌もしくは卵巣癌の治療においてカルボプラチンと併用できる。
【００１９】
本発明によるハリコンドリンＢ類似体と併用できるさらなる種類の化学療法剤は、ビンブラスチン、ビンクリスチン、エトポシド、テニポシド、トポテカン、イリノテカン、パクリタキセルおよびドセタキセルのような植物アルカロイドである。具体的な非限定例として、ハリコンドリンＢ類似体は結腸直腸癌の治療において、イリノテカンと併用でき、あるいは卵巣癌もしくは非小細胞肺癌の治療においてトポテカンと併用できる。
【００２０】
本発明によるハリコンドリンＢ類似体療法と併用できるさらなる種類の抗癌剤は、抗凝固剤および抗血栓剤である。例えば、ヘパリン（例えば低分子量ヘパリンもしくはヘパラン硫酸）もしくはワルファリンを使用できる。治療中の患者における、例えば注射もしくは経口によるこれらの薬剤の使用は当分野に周知であり、そして当業者によって本発明において使用するよう容易に適応できる。
【００２１】
抗癌剤を投与する数多くのアプローチは当分野に公知であり、本発明において使用するように容易に適応できる。ハリコンドリンＢ類似体と併用して投与できる一つもしくはそれ以上の薬剤の場合、例えば、総合的な治療の投薬計画の一部として、その薬剤を一つの組成物として一緒に、もしくは別々に投与できる。全身投与のために、その薬剤を例えば、静脈内注射（持続的もしくはボーラス）によって投与できる。そのような投与の適切なスケジュールや投与量は、たとえば動物における前臨床試験およびヒトにおける臨床試験（例えばフェーズＩ試験）に基づいて、当業者によって容易に決定できる。さらに、当分野に周知のように、同様の薬剤を用いる治療の分析、ならびに、患者における血球数（例えば好中球および血小板）および生体信号のような要素を観察することも利用できる。
【００２２】
化学療法剤を投与するのに使われる多くの投薬計画は、例えば、薬剤の静脈内注射、ならびに患者が治療の任意の副作用から復帰する期間を置いて（例えば１〜４週間）後に続くこの治療の繰り返しを含む。それぞれの投与において療法の薬剤を用いること、もしくは代替的に一つの薬剤のみ（もしくは薬剤の一部分）を含む地医療を施すことが望ましいであろう。
【００２３】
本発明に含まれる治療の投薬計画の具体的な非限定的例として、ハリコンドリンＢ類似体（例えば、０．０１〜５ｍｇ／ｍ２）を患者へと０．５〜３時間で静脈内注射によって投与でき、そして他の薬剤（例えばゲムシタビンを例えば５００〜９００ｍｇ／ｍ２）の０．５〜３時間かけての静脈内注射が後に続く。当業者によって許容できるか効果的であるか決定されるに従って、この治療のコースを２〜３週ごとに繰り返す事ができる。この方法の変法として、上述のように最初の日に両方の薬剤によって治療を実施し、しかしながらそのあと、次の週に第二の薬剤（例えばゲムシタビン）のみを用いての治療が後に続くようにできる。
【００２４】
さらに、当分野によく知られているように、本発明の方法を用いる治療は、癌化学療法剤の共通の副作用である吐き気および嘔吐を軽減するのに用いられる抗嘔吐剤の投与と組み合わせて実施できることができる。そのような薬剤の例は強トランキライザ（例えば、クロルプロマジンおよびプロクロルペラジンのようなフェノチアジン）、ドーパミン拮抗剤（例えば、メトクロプラミド）、セレトニン拮抗剤（例えばオンダンセトロンおよびグラニセトロン）、カンナビノイド（例えばドロナビノール）、ならびにベンゾジアゼピン系鎮静剤を含む。
【００２５】
上述の癌に加えて、本発明の方法及び組成物を、以下の種類の癌ならびに他のものの治療に用いる事ができる：皮膚（例えば、扁平上皮癌、基底細胞癌もしくはメラノーマ）、前立腺、脳および神経、頭頸部、精巣、肺、肝臓（例えば肝癌）、腎臓、膀胱、胃腸、骨、内分泌系（例えば、甲状腺および下垂体腫瘍）、ならびにリンパ系（例えばホジキンリンパ腫および非ホジキンリンパ腫）の癌。本発明の方法を用いて治療できる他の種類の癌は繊維肉種、神経外胚葉性腫瘍、中皮腫、類表皮癌、およびカポジ肉腫を含む。
【００２６】
本発明はまた、ハリコンドリンＢ類似体を、上述の任意の薬剤のようなさらなる治療薬剤と組み合わせて含む組成物をまた含む。それらの組成物における薬剤は、好ましくは患者へと投与できるように調合されている（例えば生理食塩水中に）か、あるいは代替的に投与の前にさらなる加工を必要とする形状であっても良い。例えば、組成物は凍結乾燥状態において、もしくは、希釈を必要とする濃縮状態において、薬剤を含む事ができる。化学療法において使用するための薬剤の調合は当分野における標準的な方法（例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅ（第１８版）、Ａ．Ｇｅｎｎａｒｏ編、１９９０、Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏ．， Ｅａｔｏｎ，Ｐａを参照）を用いて実施できる。
【実施例】
【００２７】
単結晶Ｘ線回析データ集積および構造解析
データはＯｘｆｏｒｄ Ｃｒｙｏｓｔｒｅａｍ低温装置を備えたＢｒｕｋｅｒ ＳＭＡＲＴ ＡＰＥＸ ＣＣＤ（電荷結合素子）系の回析計を用いて絶対温度１９３度で集積された。データは半球が集積されるように３０秒間、毎フレーム０．３°のオメガスキャンを用いて測定された。０．７６Åの最大解像度で、全部で１２７１フレームが集積された。最初の５０フレームは、減衰を監視するためにデータ集積の最後に再集積された。セル（ｃｅｌｌ）パラメータはＳＭＡＲＴソフトウェア（ＳＭＡＲＴ Ｖ５．６２５ （ＮＴ）ＣＣＤ検出系のためのソフトウェア；Ｂｒｕｋｅｒ Ａｎａｌｙｔｉｃａｌ Ｘ−ｒａｙ Ｓｙｓｔｅｍ、Ｍａｄｉｓｏｎ、ＷＩ（２００１））を用いて抽出された。データ整理は、Ｌｐおよび減衰を補正するＳＡＩＮＴソフトウェア（ＳＡＩＮＴ Ｖ６．２２（ＮＴ）ＣＣＤ検出系のためのソフトウェア；Ｂｒｕｋｅｒ Ａｎａｌｙｔｉｃａｌ Ｘ−ｒａｙ Ｓｙｓｔｅｍ、Ｍａｄｉｓｏｎ、ＷＩ（２００１））を用いて行われた。構造は、ＳＨＥＬＸＴＬ−ＰＣ Ｖ６．１０（ＳＨＥＬＸＴＬ ６．１（ＰＣ版）、構造解析および分子グラフィックスのためのプログラムライブラリ；Ｂｒｕｋｅｒ Ａｎａｌｙｔｉｃａｌ Ｘ−ｒａｙ Ｓｙｓｔｅｍ、Ｍａｄｉｓｏｎ、ＷＩ（２０００））に含まれるＳＨＥＬＸＳ−９７プログラム（Ｓｈｅｌｄｒｉｃ，Ｇ．Ｍ．ＳＨＥＬＸＳ−９０、結晶構造解析のためのプログラム、ゲッチンゲン大学、ドイツ、１９９０）を用いる直接法によって解析された。
【００２８】
粉末Ｘ線解析（ＸＲＰＤ）データ集積手順
少量の結晶化物質が下記のＸＲＰＤ回析試験のために用いられた。物質は粉砕されておらず、選択配向効果を有するかもしれない。Ｓｃｉｎｔａｇ Ｄｉｆｆｒａｃｔｏｍｅｔｅｒ上の水晶板を用いる。データは、銅放射線を用いて、５〜７０度の２シータレンジで通常の粉末回析条件によって取得された。バックグランド補正は実施されなかった。表１はデータ取得パラメータを列挙する。
【００２９】
【表１】
【００３０】
実施例１：結晶ＥＲ−０７６３４９一水和物の解析
エタノール、イソプロパノール（ＩＰＡ）、プロピオニトリルのＸＲＰＤパターンはアセトニトリル／水サンプルと同一である。一水和物としての解析はこの比較に基づく。アセトニトリル／水のＸ線ユニットセルの結晶は単一の水分子の存在を示した。
【００３１】
Ａ．ＥＲ−０７６３４９一水和物の結晶化の手順
エタノール、イソプロパノールおよびプロピオニトリルからのＥＲ−０７６３４９の結晶化（ＸＲＰＤサンプル）：ＥＲ−０７６３４９は溶媒（５倍容量）に溶解された。溶液は室温において蒸発され、ＸＲＰＤ試験に適した結晶は１６から２４時間かけて形成された。
【００３２】
アセトニトリル／水溶液からのＥＲ−０７６３４９の結晶化（ＸＲＰＤサンプル）：ＥＲ−０７６３４９はアセトニトリル（１倍容量）に溶解された。この溶液に水／アセトニトリル溶液（１０倍容量、２部の水、１部のアセトニトリル）がゆっくりと添加された；もし溶液が濁るときは、最小量のアセトニトリルを添加してもよい。溶液はＥＲ−０７６３４９（０．００４重量）を種子として入れられた。混合物は室温で攪拌され、溶液は不活性ガス流下において、アセトニトリルが５％以下になるまで蒸発された。固形物は水（５倍容量）の中でスラリー化され、混合物はろ過された。ろ過された固形物は高真空および不活性ガス流下で、１２から２４時間乾燥された。
【００３３】
アセトニトリル／水溶液からのＥＲ−０７６３４９の結晶化（単結晶）：ＥＲ−０７６３４９はアセトニトリル（５倍容量）に溶解された。水（０．５倍容量）がそののち添加された。コンテナは室温に保管され、４週間のゆっくりとした溶液の蒸発が発散され、Ｘ線構造解析に適した単結晶がゆっくりと形成された。
【００３４】
Ｂ．ＥＲ−０７６３４９一水和物の単結晶Ｘ線解析
０．１０×０．１０×０．０４ｍｍの寸法の無色のプレート結晶が非常に少量のパラトン油（ｐａｒａｔｏｎｅ ｏｉｌ）を用いて０．２ｎｍのナイロンループ上に取り付けられた。図１−Ａに示される単結晶構造は上述の手順を用いて測定された。表２は、結晶データおよびＥＲ−０７６３４９一水和物の単結晶構造を測定するのに用いられた構造精密化パラメータを列挙する。構造は消滅則の分析によってスペースグループＰ２１２１２１（＃１９）中で解析された。全ての非水素原子は異方的に精密化された。水素は幾何学的方法によって計算され、ライディングモデル（ｒｉｄｉｎｇ ｍｏｄｅｌ）として精密化された。回析試験に用いられる化粧はデータ集積の間、分解を示さなかった。全ての描写は５０％楕円において実施された。図１−ＢはＥＲ−０７６３４９一水和物のｂ軸に沿った結晶パッキング図であり、結晶中の水素結合、点線の最適の図を示す。
【００３５】
【表２】
【００３６】
Ｃ．ＥＲ−０７６３４９一水和物の粉末Ｘ線回析による解析
図１−Ｃは、上述のようにイソプロピルアルコールから結晶化されたＥＲ−０７６３４９一水和物のＸＲＰＤ図である。表３ＡはＸＲＰＤ図中の相対強度のピークのリストを示す。
【００３７】
【表３Ａ】
【００３８】
図１−ｄは、アセトニトリルおよび水、エタノール、イソプロパノール、ならびにプロピオニトリルを含むさまざまな再結晶化溶媒より得られたＥＲ−０７６３４９一水和物の個別のＸＲＰＤのプロットをまとめたものである。上述のものと同じパターン取得の方法が用いられた。
【００３９】
図１−Ｅ、１−Ｆおよび１−Ｇは、ＥＲ−０７６３４９一水和物の示差走査熱量計（ＤＳＣ）のサーモグラムを描写する。図１−Ｅはエタノール溶液より結晶化されたＥＲ−０７６３４９のＤＳＣのプロットを描写する。ＤＳＣは１６０℃において吸熱ピークを示す。図１−Ｆはイソプロパノール溶液から結晶化されたＥＲ−０７６３４９のＤＳＣのプロットを描写する。ＤＳＣは１５７℃において吸熱ピークを示す。図１−Ｇはプロピオニトリル溶液より結晶化されたＥＲ−０７６３４９のＤＳＣのプロットを描写する。ＤＳＣは１６１℃において吸熱ピークを示す。
【００４０】
実施例２：ＥＲ−８１８９０６（ｅｐｉ−Ｃ２０ジオール）、モノ−アセトニトリル溶媒和物
Ａ．Ｘ線およびＸＲＰＤ結晶サンプルの生成のための結晶化手順
Ｅ０８１８９０６（１重量）はアセトニトリル（１０倍容量）に懸濁され、完全に溶解するのを助けるためゆるやかに加熱された。溶液は室温に置かれ、３０分後に結晶成長が始まった。Ｘ線構造解析にふさわしい単結晶サンプルは１６から２４時間後に生成した。ＥＲ−８１８９０６（ｅｐｉ−Ｃ２０ジオール）の化学構造は以下に示される。
【化６】
【００４１】
Ｂ．ＥＲ−８１８９０６（ｅｐｉ−Ｃ２０ジオール）モノ−アセトニトリル溶媒和物の単結晶Ｘ線解析
０．１２×０．１２×０．１０ｍｍの寸法の無色のブロック結晶は非常に少量のパラトン油を用いて０．２ｎｍのナイロンループ上に取り付けられた。図２−Ａに示される単結晶構造は上述の手順を用いて測定された。表３Ｂは結晶データおよびＥＲ−８１８９０６モノ−アセトニトリル溶媒和物の単結晶構造を測定するのに用いられた構造精密化パラメータを列挙する。構造はスペースグループＰ２１（＃４）において解析された。全ての非水素原子は異方的に精密化された。水素は幾何学的方法によって計算され、ライディングモデルとして精密化された。フラック（Ｆｌａｃｋ）パラメータは結晶を分析するのに用いられた。もしフラックパラメータが０に近い時、構造要素精密化によって与えられる全体の構造がほぼ正しく；その値が１．０に近いとき、倒置構造（他の光学異生体）がほぼ正しく；もしその値が０．５に近い時、結晶はほぼラセミ体である。Ｆｌａｃｋ、Ｈ．Ｄ．Ａｃｔａ Ｃｒｙｓｔ． Ａ３９．１９８３、８７６−８８１を参照。フラックパラメータは０．３（４）へと精密化された。この化合物のキラリティはその合成の源により確かめられた。回析試験において用いられる結晶はデータ集積の間、分解を示さなかった。全ての描写は５０％楕円において実施された。図２−ＢはＥＲ−８１８９０６モノ−アセトニトリル溶媒和物のｃ軸に沿った結晶パッキング図である。
【００４２】
【表３Ｂ】
【００４３】
Ｃ．ＥＲ−８１８９０６（ｅｐｉ−Ｃ２０ジオール）モノ−アセトニトリル溶媒和物の粉末Ｘ線回析（ＸＲＰＤ）による解析
実施例２Ａにおける単結晶試験のサンプルを取り出したのち、少量の物質が残った。ＸＲＰＤパターンは上述のように取得された。ＸＲＰＤパターンは図２−Ｃに示される。表４はＸＲＰＤ中の相対強度のピークのリストを示す。
【００４４】
【表４】
【００４５】
実施例３：ＥＲ−８１９５３１（ｅｐｉ−Ｃ２３ジオール）一水和物の解析
Ａ．ＸＲＰＤ品質サンプルのための結晶化手順
ＥＲ−８１９５３１（１重量）はアセトニトリル（１０倍容量）に室温で溶解され、温度は−２０℃まで低下し、この温度は１６時間維持された。粉末ＸＲＰＤ試験に適した結晶のクラスターは１６時間後に生成した。ＥＲ−８１９５３１（ｅｐｉ−Ｃ２３ジオール）の化学構造は下に示される。
【化７】
【００４６】
Ｂ．ＥＲ−８１９５３１（ｅｐｉ−Ｃ２３ジオール）一水和物の単結晶Ｘ線解析
ＥＲ−８１９５３１サンプルの一部はアセトニトリル、数滴のトルエン、および１滴の水の混合物中に溶解された。これはのちに少量のバイアル中でゆっくりと蒸発された。これは単結晶を生じ、その一つはこの試験に用いられるよう選択された。０．１２×０．１２×０．０４ｍｍの寸法の無色のブロック結晶は非常に少量のパラトン油を用いてナイロンループ上に組み込まれた。図３−Ａに示される、この単結晶構造は上述の手順を用いて解析された。表５は結晶データおよびＥＲ−８１９５３１一水和物の単結晶構造を測定するのに用いられた構造精密化パラメータを列挙する。構造は消滅則の分析によってスペースグループＰ２１２１２１（＃１９）中で解析された。全ての非水素原子は異方的に精密化された。水素は幾何学的方法によって計算され、ライディングモデルとして精密化された。フラックパラメータは結晶を分析するのに用いられた。もしフラックパラメータが０に近い時、構造要素精密化によって与えられる全体の構造がほぼ正しく；その値が１．０に近いとき、倒置構造（他の光学異生体）がほぼ正しく；もしその値が０．５に近い時、結晶はほぼラセミ体である。Ｆｌａｃｋ、Ｈ．Ｄ．Ａｃｔａ Ｃｒｙｓｔ． Ａ３９．１９８３、８７６−８８１を参照。フラックパラメータは０．５０（１６）へと精密化された。この化合物のキラリティはその合成の源により確かめられた。回析試験において用いられる結晶はデータ集積の間、分解を示さなかった。全ての描写は５０％楕円において実施された。図３−Ｂはｂ軸に沿った結晶パッキング図であり、それは結晶中の水素結合を点線で示す。
【００４７】
【表５】
【００４８】
Ｃ．ＥＲ−８１９５３１（ｅｐｉ−Ｃ２３ジオール）一水和物の粉末Ｘ線回析（ＸＲＰＤ）による解析
ＥＲ−８１９５３１一水和物は上述のように得られた。ＸＲＰＤパターンは図３−Ｃに示される。表６はＸＲＰＤパターン中の相対強度のピークのリストを示す。
【００４９】
【表６】
【００５０】
実施例４：ＥＲ−８２００５７（ｅｐｉ−Ｃ２３アミン）の解析
Ａ．ＥＲ−８２００５７結晶サンプルの調製
ＥＲ８２００５７はアセトニトリル（１０倍容量）中に室温で溶解され、溶液は室温に置かれた。結晶成長は２時間後に観察された。粉末ＸＲＰＤ試験にふさわしい結晶サンプルは１６から２４時間後に単離された。ＥＲ−８２００５７（ｅｐｉ−Ｃ２３アミン）の化学構造は以下に示される。
【化８】
【００５１】
Ｂ．ＥＲ−８２００５７（ｅｐｉ−Ｃ２３アミン）の粉末Ｘ線回析（ＸＲＰＤ）による解析
ＥＲ−８２００５７のＸＲＰＤは上述のように得られた。ＸＲＰＤパターンは図４−Ａに示される。表７はＸＲＰＤパターンの相対強度のピークのリストを示す。
【００５２】
【表７】
【００５３】
実施例５：ＥＲ−１１１１９７（ｅｐｉ−Ｃ３４ジオール）一水和物の解析
Ａ．Ｘ線品質の結晶の生成のための結晶化手順
ＥＲ−１１１１９７（１重量）はアセトニトリル（８倍容量）に溶解された。水（０．８倍容量）が添加された。溶液は室温で２〜３日間蒸発するよう放置された。結晶が生成しない場合、溶液は乾燥するまで蒸発され、この手順が結晶が出来るまで繰り返された。ＥＲ−１１１１９７（ｅｐｉ−Ｃ３４ジオール）の化学構造は以下に示される。
【化９】
【００５４】
Ｂ．Ｒ−１１１１９７（ｅｐｉ−Ｃ３４ジオール）一水和物の単結晶Ｘ線解析
０．２２×０．１４×０．０４ｍｍの寸法の無色の針状結晶が、非常に少量のパラトン油を用いてナイロンループに組み込まれた。図５−Ａに示される単結晶構造は、上述の手順を用いて解析された。表７Ｂは結晶データおよびＥＲ−１１１１９７一水和物の単結晶構造を測定するのに用いられた構造精密化パラメータを列挙する。構造は消滅則の分析によってスペースグループＰ２１２１２１（＃１９）中で解析された。全ての非水素原子は異方的に精密化された。水素は幾何学的方法によって計算され、ライディングモデルとして精密化された。フラックパラメータは結晶を分析するのに用いられた。もしフラックパラメータが０に近い時、構造要素精密化によって与えられる全体の構造がほぼ正しく；その値が１．０に近いとき、倒置構造（他の光学異生体）がほぼ正しく；もしその値が０．５に近い時、結晶はほぼラセミ体である。Ｆｌａｃｋ、Ｈ．Ｄ．Ａｃｔａ Ｃｒｙｓｔ． Ａ３９．１９８３、８７６−８８１を参照。フラックパラメータは０．３（１３）へと精密化された。この化合物のキラリティはその合成の源により確かめられた。回析試験において用いられる結晶はデータ集積の間、分解を示さなかった。全ての描写は５０％楕円において実施された。図５−Ｂはａ軸に沿った結晶パッキング図であり、それは結晶中の水素結合を点線で示す。
【００５５】
【表７Ｂ】
【００５６】
Ｃ．ＥＲ−１１１１９７（ｅｐｉ−Ｃ３４ジオール）一水和物のシミュレートされた粉末Ｘ線解析スペクトル
単結晶のデータから生成されたＥＲ−１１１１９７のシミュレートされたＸＲＰＤスペクトルは図５−Ｃに示される。
【００５７】
実施例６：ＥＲ−８０９６８１（エポキシド）
Ａ．Ｘ線品質の結晶を生成するための結晶化手順
ＥＲ−８０９６８１−００（５０ｍｇ）はジクロロメタン（０．２５ｍｌ）に溶解された。ペンタン（０．５ｍｌ）が添加された。溶液は視覚的に均一になるまで攪拌された。溶液は室温で１８時間、ゆっくりと蒸発された。Ｘ線結晶学的試験にふさわしい結晶は上清の液体をデカントすることによって集められた。ＥＲ−８０９６８１（エポキシド）の化学構造は下に示される。
【化１０】
【００５８】
Ｂ．ＥＲ−８０９６８１（エポキシド）の単結晶Ｘ線解析
Ｘ線解析方法は上述のものから変更され、以下の節に詳細に説明される。
０．３０×０．１０×０．１０ｍｍのおおよその寸法を持つＣ４０Ｈ５６Ｏ１１の無色のブロック結晶はガラス線維上に組み込まれた。単結晶は図６−Ａに示される。すべての解析は、グラファイトで単色化されたＣｕ−Ｋα放射線を持つＲｉｇａｋｕ ＲＡＸＩＳ ＲＡＰＩＤ ｉｍａｇｉｎｇ ｐｌａｔｅ ａｒｅａ ｄｅｔｅｃｔｏｒ上で行われた。指数化は１５秒の曝露による３つの振動より実施された。結晶と検出器の距離は１２７．４０ｍｍであった。寸法を持つ一次斜方晶系のセルに対応するデータ集積のためのセル定数および配向マトリックス：ａ＝９．４７００（３）Å；ｂ＝１７．６３２７（５）Å；ｃ＝２３．１７９０（６）Å；Ｖ＝３８７９．４７（１９）Å３。Ｚ＝４でかつＦ．Ｗ．＝７１２．８８の時、計算上の密度は１．２２３ｇ／ｃｍ３である。ｈ００：ｈ±２ｎ；０ｋ０：ｋ±２ｎ；００１：１±２ｎの消滅則は特異的にスペースグループをｐ２１２１２１（＃１９）と定める。結晶パッケージ図は図６−Ｂに示される。
【００５９】
データは２３±１℃において１３６．５°の最大２θ値で集積された。全体で３０振幅の画像が集積された。χ＝５４．０°かつφ＝１５．０°において８０．０から２６０．０°の３０．０ステップのωスキャンを用いてデータのスイープ（ｓｗｅｅｐ）が実施された。χ＝５４．０°かつφ＝１０５．０°において８０．０から２６０．０°の３０．０ステップのωスキャンを用いて２度目のスイープが実施された。照射線量率は１５．０［秒／°］であった。χ＝５４．０°かつφ＝２７０．０°において８０．０から２６０．０°の３０．０ステップのωスキャンを用いて他のスイープが実施された。照射線量率は１５．０［秒／°］であった。χ＝０．０°かつφ＝０．０°において８０．０から２６０．０°の３０．０ステップのωスキャンを用いて他のスイープが実施された。照射線量率は１５．０［秒／°］であった。結晶と検出器の距離は１２７．４０ｍｍであった。読み出しは０．１００ｍｍピクセルモードで実施された。
【００６０】
データ解析：集積された１６４１２の反射のうち、９３４がユニークであった（Ｒｉｎｔ＝０．０４３）；同等の反射は融合された。Ｃｕ−Ｋα放射の線吸収係数、μは７．２２９ｃｍ−１であった。０．７４８から０．９３０の範囲の透過率が生じる実験的な吸収の補正が適応された。データはローレンツ偏光効果のために補正された。
【００６１】
構造解析と精密化：構造は直接方を用いて解析され（ＳＨＥＬＸ９７：Ｓｈｅｌｄｒｉｃ，Ｇ．Ｍ．（１９９７）、フーリエ法を用いて拡張された。ＤＩＲＤＩＦ９９：Ｂｅｕｒｓｋｅｎｓ，Ｐ．Ｔ．，Ａｄｍｉｒａａｌ，Ｇ．，Ｂｅｕｒｓｋｅｎｓ，Ｇ．，Ｂｏｓｍａｎ，Ｗ．Ｐ．，ｄｅ Ｇｅｌｄｅｒ，Ｒ．，Ｉｓｒａｅｌ，Ｒ． ａｎｄ Ｓｍｉｔｓ，Ｊ．Ｍ．Ｍ．（１９９９）、”Ｔｈｅ ＤＩＲＤＩＦ−９９プログラムシステム”、Ｔｅｃｈｎｉｃａｌ Ｒｅｐｏｒｔ ｏｆ ｔｈｅ Ｃｒｙｓｔａｌｌｏｇｒａｐｈｙ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，”Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ Ｎｉｊｍｅｇｅｎ， Ｔｈｅ Ｎｅｔｈｅｒｌａｎｄ．を参照。非水素原子は異方的に精密化された。水素原子はライディングモデルを用いて精密化された。Σｗ（Ｆｏ２−Ｆｃ２）２（式中、ｗ＝最小二乗重量）で表わされるＦ２のフルマトリックス最小二乗精密化の最後のサイクルは、７０４５の観察された反射と４６１の変数パラメータに基づく。それは、Ｒ１＝Σ||Ｆｏ｜−｜Ｆｃ||／Σ|Ｆｏ|＝０．０６３０かつｗＲ２＝［Σ（ｗ（Ｆｏ２−Ｆｃ２）２）／Σｗ（Ｆｏ２）２］１／２＝０．２１６８という計量されてないアグリーメント・ファクタ（ａｇｒｅｅｍｅｎｔ ｆａｃｔｏｒ）および計量されたアグリーメント・ファクタに収斂する。
【００６２】
単位重量の観測の標準偏差は１．１０であり、［Σｗ（Ｆｏ２−Ｆｃ２）２／（Ｎｏ−Ｎｖ）］１／２（式中、Ｎｏ＝観察の数およびＮｖ＝変数の数）として計算される理論上の単位重量の標準偏差はである。最終の差フーリエ図上の最大ピークおよび最小ピークは、それぞれ０．２０および−０．２８ｅ−／Å３に対応する。
【００６３】
中性子散乱因子は、ＣｒｏｍｅｒとＷａｂｅｒ，”Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｔａｂｌｅｓ ｆｏｒ Ｘ−ｒａｙ Ｃｒｙｓｔａｌｌｏｇｒａｐｈｙ”Ｖｏｌ．ＩＶ，Ｔｈｅ Ｋｙｎｏｃｈ Ｐｒｅｓｓ， Ｂｉｒｍｉｎｇｈａｍ，Ｅｎｇｌａｎｄ，表２．２Ａ（１９７４）より得た。異常分散効果はＦｃａｌｃ中に含まれ（Ｉｂｅｒｓ，Ｊ．Ａ．およびＨａｍｉｌｔｏｎ，Ｗ．Ｃ．；Ａｃｔａ Ｃｒｙｓｔａｌｌｏｇｒ．，１７，７８１（１９６４）を参照）、ΔｆおよびΔｆ’’の値はＣｒｅａｇｈ，Ｄ．Ｃ．およびＭｃＡｕｌｅｙ，Ｗ．Ｊ．” Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｔａｂｌｅｓ ｆｏｒ Ｃｒｙｓｔａｌｌｏｇｒａｐｈｙ”Ｖｏｌ．Ｃ，（Ａ．Ｊ．Ｃ．Ｗｉｌｓｏｎ編）、Ｋｌｕｗｅｒ Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ， Ｂｏｓｔｏｎ，表４．２．６．８、２１９〜２２２ページ（１９９２）より得られた。質量減衰係数の値はＣｒｅａｇｈ，Ｄ．Ｃ．およびＨｕｂｂｅｌｌ，Ｊ．Ｈ．；” Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｔａｂｌｅｓ ｆｏｒ Ｃｒｙｓｔａｌｌｏｇｒａｐｈｙ”Ｖｏｌ．Ｃ，（Ａ．Ｊ．Ｃ．Ｗｉｌｓｏｎ編）、Ｋｌｕｗｅｒ Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ， Ｂｏｓｔｏｎ，表４．２．４．３、２００〜２０６ページ（１９９２）より得られた。すべての計算はＣｒｙｓｔａｌＳｔｒｕｃｔｕｒｅ結晶学ソフトウェアパッケージを用いて実施された。ＣｒｙｓｔａｌＳｔｒｕｃｔｕｒｅ３．７．０：Ｃｒｙｓｔａｌ Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ Ａｎａｌｙｓｉｓ Ｐａｃｋａｇｅ，Ｒｉｇａｋｕ ａｎｄ Ｒｉｇａｋｕ／ＭＳＣ（２０００−２００５）、９００９ Ｎｅｗ Ｔｒａｉｌｓ Ｄｒ． Ｔｈｅ Ｗｏｏｄｌａｎｄｓ ＴＸ７７３８１米国；ならびにＣＲＹＳＴＡＬＳ Ｉｓｓｕｒｅ １０：Ｗａｔｋｉｎ， Ｄ．Ｊ．，Ｐｒｏｕｔ，Ｃ．Ｋ． Ｃａｒｒｕｔｈｅｒｓ， Ｊ．Ｒ．およびＢｅｔｔｅｒｉｄｇｅ， Ｐ．Ｗ．、Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃｒｙｓｔａｌｌｏｇｒａｐｈｙ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，Ｏｘｆｏｒｄ，英国（１９９６）を参照。これの例外は精密化の計算であり、ＳＨＥＬＸ９７：Ｓｈｅｌｄｒｉｃｋ，Ｇ．Ｍ．（１９９７）を用いて実施された。
【００６４】
【表７ｃ】
【表７ｄ】
【表７ｅ】
【００６５】
Ｃ．ＥＲ−８０９６８１（エポキシド）の粉末Ｘ線解析（ＸＲＰＤ）による解析
この化合ｂ通のＸＲＰＤ集積方法は上述のものとデータスキャンレンジが２−７０°である点でのみ異なる。ＸＲＰＤパターンは図６−Ｃに示される。
【００６６】
【表８】
【００６７】
Ｄ．シミュレートされたＸＲＰＤスペクトル
単結晶データより生成されるシミュレートされたＸＲＰＤパターンは図６Ｄに示される。
【００６８】
上述の化合物の、上述の結晶形における抗癌活性は、ＬｉｕＪ．らのＡｎｔｉｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ、２７：１５０９−１５１１（２００７）に記載されるような細胞増殖阻害試験を用いて測定された。ＩＣ５０ｎＭの単位での活性データは下の表９に記載される。ＭＥＳ−ＳＡおよびＭＥＳ−ＳＡ／Ｄｘ５−Ｒｘ１子宮肉腫はＡｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎより入手し、推奨される条件で増殖された。
【００６９】
細胞増殖阻害試験
細胞は９６穴プレートに１０％ＦＢＳならびにペニシリン、ストレプトマイシンおよびＬ−グルタミンを補った推奨される培地中に７．５×１０３細胞／ウェルで播種された。４時間の培養の後、試験化合物はそれぞれのウェルに０から１０μＭの範囲の一連の濃度になるように添加された。細胞は４日間３７℃で培養された。細胞増殖はメチレンブルーに基づいたマイクロ培養試験（Ｔｏｗｌｅ Ｍ．Ｊ．らの”Ｉｎ ｖｉｔｒｏ ａｎｄ ｉｎ ｖｉｖｏ ａｎｔｉｃａｎｃｅｒ ａｃｔｉｖｉｔｉｅｓ ｏｆ ｓｙｎｔｈｅｔｉｃ ｍａｃｒｏｃｙｃｌｉｃ ｋｅｔｏｎｅ ａｎａｌｏｇｕｅｓ ｏｆ ｈａｌｉｃｈｏｎｄｒｉｎ Ｂ．”Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ ６１：１０１３−１０２１、２００１を参照）の修正したもの（ＦｉｎｌａｙＧ．Ｊ．らの”Ａ ｓｅｍｉａｕｔｏｍａｔｅｄ ｍｉｃｒｏｃｕｌｔｕｒｅ ｍｅｔｈｏｄ ｆｏｒ ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｎｇ ｇｒｏｗｔｈ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ｃｙｔｏｔｏｘｉｃ ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ ｏｎ ｅｘｐｏｎｅｎｔｉａｌｌｙ ｇｒｏｗｉｎｇ ｃａｒｃｉｎｏｍａ ｃｅｌｌｓ”，Ａｎａｌ Ｂｉｏｃｈｅｍ １３９：２７２−２７７、１９８４を参照）を用いて測定された。培地は除去され細胞は１００μｌのメチレンブルー（５００μｇ／ｍｌ）で４５分間染色された。水で染色したあと、線食された細胞は１００μｌのサルコシン（１ｍｇ／ｍｌ）に溶解され、９０分間緩やかに攪拌された。このプレートはＡ６００−Ａ４０５で観測された。
【００７０】
Ｐ−グリコプロテイン介在多薬剤耐性（ＭＤＲ）に対する化合物の感受性
一対の子宮肉種の細胞株が用いられた：ＭＥＳ−ＳＡ（ＭＤＲのない親細胞株）、ＤＸ５−Ｒｘ１（長期間ドキソルビシンへと曝露されたＭＥＳ−ＳＡ由来の細胞株）。亜株はＰ−グリコプロテインを高発現している。療法の細胞株は１０％ＦＢＳならびにペニシリン、ストレプトマイシンおよびＬ−グルタミンを補ったＭｃＣｏｙ’ｓ５Ａ中に７．５×１０３細胞／ウェルで播種され、細胞増殖が上述のように測定された。親株および耐性細胞株において取得されたＩＣ５０値の比は耐性の倍数を意味し、それぞれ比較される二つの細胞株に対するＰ−グリコプロテイン介在ＭＤＲへの化合物の感受性の指標をもたらす。
【００７１】
【表９】
【技術分野】
【０００１】
関連出願
本出願は、２００８年４月４日に出願された米国特許仮出願番号第６１／０４２，６４３号および２００８年４月１１日に出願された米国特許仮出願番号６１／０７１，１１１号の優先権を主張し、これらは、その全てが参照によりここに組み込まれる。
【０００２】
発明の分野
本発明は薬剤活性を持つハリコンドリンＢ類似体に関する。ある実施態様において、この類似体は結晶体を持ち、そして／あるいは、強力な抗癌活性を持つ化合物であるハリコンドリンＢ類似体Ｅ７３８９の合成における合成中間体としてのさらなる有用性を持つ。
【化１】
【背景技術】
【０００３】
背景技術
強力な抗癌剤であるハリコンドリンＢは、カイメン、Ｈａｌｉｃｈｏｎｄｒｉａ ｏｋａｄａｉより最初に単離された。それはまた、Ａｘｉｎｅｌｌａ ｓｐ．、Ｐｈａｋｅｌｌｉａ ｃａｒｔｅｒｉおよびＬｉｓｓｏｎｄｅｎｄｒｙｘ ｓｐ．においても発見された。ハリコンドリンＢは、インビトロ（ｉｎ ｖｉｔｒｏ）において、チューブリンの重合化、微小管重合、ベータ−チューブリン架橋、ＧＴＰおよびビンブラスチンのチューブリンへの結合、ならびにチューブリン依存性ＧＴＰ加水分解を阻害する事を示した。それはまた、インビトロ（ｉｎ ｖｉｔｒｏ）およびインビボ（ｉｎ ｖｉｖｏ）において抗癌活性を示した。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
Ａｉｃｈｅｒらは、１９９２年にハリコンドリンＢの全合成を発表した（Ａｉｃｈｅｒ，Ｔ．らのＪ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．１１４：３１６２−３１６４およびＺｈｅｎｇ，Ｗ．Ｊ．らのＪ．Ｂｉｏｏｒｇ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔ．、２００４、１４、５５５１を参照）。ハリコンドリンＢおよびさまざまな類似体の合成は、米国特許第６，２１４，８６５号、第６，３６５，７５９号、第６，４６９，１８２号および第６，６５３，３４１号；米国特許出願公開２００４／０１９８８０６、２００６／０１０４９８４：ならびに特許協力条約に基づく国際出願公開２００５／１１８５６５に記載され、それらすべては、参照によりその全体がここに組み入れられる。
【課題を解決するための手段】
【０００５】
本発明は薬剤活性を持つハリコンドリンＢ類似体に関する。類似体は結晶体を持ち、そして／あるいは強力な抗癌活性を持つ化合物であるハリコンドリンＢ類似体、Ｅ７３８９の合成における合成中間体としてのさらなる有用性を持つ。従って、本発明は、ＥＲ−０７６３４９一水和物の結晶体；ＥＲ−８０９６８１の結晶体；化合物ＥＲ−８２００５７もしくはＥＲ−８２００５７の結晶体；化合物ＥＲ−８１８９０６もしくはＥＲ−８１８９０６の結晶体；化合物ＥＲ−８１９５３１もしくはＥＲ−８１９５３１の結晶体；ならびに化合物ＥＲ−１１１１９７もしくはＥＲ−１１１１９７の結晶体に関する。本発明はまた、それらの化合物を含有する医薬組成物、その化合物を投与する事による癌の治療方法に関する。
【図面の簡単な説明】
【０００６】
【図１−Ａ】図１−Ａは、ＥＲ−０７６３４９−００一水和物の単結晶構造のＯＲＴＥＰ図である。
【図１−Ｂ】図１−Ｂは、ＥＲ−０７６３４９一水和物のｂ軸に沿った結晶パッキング図である。
【図１−Ｃ】図１−Ｃは、イソプロピルアルコールより結晶化されたＥＲ−０７６３４９一水和物の粉末Ｘ線回折（ＸＲＰＤ）パターンである。
【図１−Ｄ】図１−Ｄは、さまざまな溶媒からのＥＲ−０７６３４９一水和物のＸＲＰＤパターンの描画である。
【図１−Ｅ】図１−Ｅは、エタノールより結晶化されたＥＲ−０７６３４９一水和物のＤＳＣの描画である。
【図１−Ｆ】図１−Ｆは、イソプロパノールより結晶化されたＥＲ−０７６３４９一水和物のＤＳＣの描画である。
【図１−Ｇ】図１−Ｇは、プロピオニトリルより結晶化されたＥＲ−０７６３４９一水和物のＤＳＣの描画である。
【図２−Ａ】図２−Ａは、ＥＲ−８１８９０６モノ−アセトニトリル溶媒和物の単結晶構造のＯＲＴＥＰ図である。
【図２−Ｂ】図２−Ｂは、ＥＲ−８１８９０６モノ−アセトニトリル溶媒和物のｃ軸に沿った結晶パッキング図である。
【図２−Ｃ】図２−Ｃは、ＥＲ−８１８９０６（ｅｐｉ−Ｃ２０ジオール）モノ−アセトニトリル溶媒和物のＸＲＰＤパターンである。
【図３−Ａ】図３−Ａは、ＥＲ−８１９５３１（ｅｐｉ−Ｃ２３ジオール）一水和物の単結晶構造のＯＲＴＥＰ図である。
【図３−Ｂ】図３−Ｂは、ＥＲ−８１９５３１（ｅｐｉ−Ｃ２３ジオール）一水和物のｂ軸に沿った結晶パッキング図である。
【図３−Ｃ】図３−Ｃは、ＥＲ−８１９５３１（ｅｐｉ−Ｃ２３ジオール）のＸＲＰＤパターンである。
【図４−Ａ】図４−Ａは、ＥＲ−８２００５７（ｅｐｉ−Ｃ２３アミン）のＸＲＰＤパターンである。
【図５−Ａ】図５−Ａは、ＥＲ−１１１１０７（ｅｐｉ−Ｃ３４ジオール）一水和物の単結晶構造のＯＲＴＥＰ図である。
【図５−Ｂ】図５−Ｂは、ＥＲ−１１１１０７（ｅｐｉ−Ｃ３４ジオール）一水和物のａ軸に沿った結晶パッキング図である。
【図６−Ａ】図６−Ａは、ＥＲ−８０９６８１（エポキシド）の単結晶構造のＯＲＴＥＰ図である。
【図６−Ｂ】図６−Ｂは、ＥＲ−８０９６８１（エポキシド）のｂ軸に沿った結晶パッキング図である。
【図６−Ｃ】図６−Ｃは、ＥＲ−８０９６８１（エポキシド）のＸＲＰＤパターンである。
【図６−Ｄ】図６−Ｄは、ＥＲ−８０９６８１（エポキシド）の理論上のＸＲＰＤパターンである。
【発明を実施するための形態】
【０００７】
米国特許第６，２１４，８６５号に記載されるように、ハリコンドリンＢ類似体、ＥＲ−０８６５２６（化合物Ｂ−１９３９として認識される）は強力な抗癌剤である。ＥＲ−０８６５２６は、中間体であるジオール化合物、ＥＲ−０７６３４９（化合物Ｂ−１７９３として認識される）より調製される。米国特許第６，２１４，８６５号は、ＥＲ−０７６３４９（Ｂ−１７９３）の調製ならびに、いくつかの他のハリコンドリンＢ類似体の調製における使用について記載する。
【化２】
【化３】
【０００８】
ＥＲ−０７６３４９を介する、ＥＲ−０８６５２６への代替的な合成経路は、特許協力条約に基づく国際出願公開２００５／１１８５６５に記載される。国際出願公開２００５／１１８５６５によると、ＥＲ−０７６３４９は、ＥＲ−０８６５２６へと、以下のように転換される：
【化４】
【０００９】
国際出願公開２００５／１１８５６５の方法において、以下の図に示されるように、ＥＲ−０８６５２６を生成するまでに、ＥＲ−０７６３４９はその場でトシラート、ＥＲ−０８２８９２を生成するために反応し、それはそののち、その場でエポキシド、ＥＲ−８０９６８１へと転換される。
【化５】
【００１０】
ＥＲ−０７６３４９はさまざまな溶媒により一水和物として結晶化する。エポキシド、ＥＲ−８０９６８１はまた、結晶化合物として単離し得る。結晶のＥＲ−０７６３４９一水和物（実施例１）および結晶のＥＲ−８０９６８１（実施例６）は、本発明の別の実施態様を表わす。
【００１１】
米国特許第６，２１４，８６５号および国際特許出願公開２００５／１１８５６５に記載されるもののような多段階の合成において、中間体が調製され、望まない副産物もしくは不純物はより早いステップより持ち越される。しばしば、ろ過、分離および／もしくは精製ステップは望まない副産物もしくは不純物を除去するのに導入される。そのようなステップを組み入れることはコストの増大させるだけでなく、全体の合成の収率を下げることにもなる。多段階合成において結晶中間体を得ることはこれらの問題に対処し得る。結晶中間体は、高純度の中間体が他の精製ステップの必要性を減少させ得るし、そして合成プロセスのコストを減少させ得るといういくつかの利点をもたらす。ＥＲ−０８６５２６の調製において、高純度中間体として結晶体ＥＲ−０７６３４９一水和物を得る事は、そのＣ２５エピマーからの分離ができるようにする。バルクの結晶体ＥＲ−０７６３４９において、Ｃ２５エピマーの量は一般的に０．１重量％である。
【００１２】
本発明は、いくつかＥＲ−０７６３４９のジアステレオマーの結晶体に関する。一つもしくはそれ以上のジアステレオマーは、同一のキラル炭素原子を持つ化合物の多段階の合成を占める共通の不純物である。さまざまなジアステレオマーを分析する事は、所望の化合物の調製において発生する、もしくは発生し得るエピマーの不純物を同定するために、有用である。エピマーの不純物を同定する事で、不純物を減少させ、避け、定量し、もしくは除去するための方法の改善を導くことができる。さまざまなエピマーの結晶体は、特定のエピマーの詳細な分析およびその合成における同定をもたらす。さらに、特定のエピマーの結晶化は、その除去の手段であり得、そしてそれにより所望の化合物を精製し得る。ＥＲ−０７６３４９のエピマーの結晶体は、ＥＲ−０８６５２６の合成におけるそれらの必要性に対応する。ＥＲ−０７６２４９に関係する以下の化合物：ＥＲ−８０９６８１；ＥＲ−８２００５７；ＥＲ−８１８９０６；ＥＲ−８１９５３１；およびＥＲ−１１１１８７の結晶体は、本発明のさらなる実施態様を表わし、これらのすべては抗癌活性を示す。本開示のこの目的のために、化合物と化合物の結晶体とのこれらの群は集合的にハリコンドリンＢと呼ばれ、そして個別にはハリコンドリンＢ類似体と呼ばれる。
【００１３】
本発明によるハリコンドリンＢ類似体の治療と組み合わせて使用できる数多くの種類の抗癌のアプローチが存在する。それらは、例えば、化学療法剤（下記参照）、生物剤（例えば、ホルモン剤、サイトカイン（例えば、インターロイキン、インターフェロン、顆粒球コロニー刺激因子（Ｇ−ＣＳＦ）、マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ−ＣＳＦ）、ケモカイン、ワクチン抗原および抗体）、抗血管新生剤（例えば、アンジオスタチンおよびエンドスタチン）、放射線療法ならびに外科手術を含む。
【００１４】
当業者によって判定し得るように、当分野においてこれらのアプローチが使用されると知られているのと同じ種類の癌と同様に他のものを治療するために、本発明の方法を使用できる。さらにこれらのアプローチは、その使用において当分野において知られるものと同様のパラメータ（例えば投薬計画および投与量）に従って実施し得る。しかしながら、当分野に知られるように、これらのアプローチと併用する追加的なハリコンドリンＢ類似体の使用のために、これらのパラメータを補正する事が望ましいであろう。当業者が判定し得るように、例えば、薬剤が通常で単独の治療剤として投与されるとしたら、本発明によるハリコンドリンＢ類似体と組み合わせられるとき、薬剤の投与量を減らすことが望ましいであろう。本発明の方法ならびにそれらの方法において使用できる組成物の例は、以下に示される。
【００１５】
とりわけ、例えば、代謝拮抗物質、抗生剤、アルキル化剤、植物性アルカロイド、ホルモン剤、抗凝固剤、抗血栓剤、および他の天然性剤を含むいくつかの異なる種類の化学療法剤を、本発明によるハリコンドリンＢ治療と組み合わせて使用できる。これらの類の薬剤およびそれらの使用によって治療できる癌の具体的な非限定的例は、以下に示される。
【００１６】
ハリコンドリンＢ類似体と併用できる代謝拮抗剤は、例えば、メトレキサート、プリン代謝拮抗薬（例えば、メルカプトプリン、チオグアニン、リン酸フルダラビン、クラドリビン、およびペントスタチン）、ならびにピリミジン拮抗薬（例えば、ゲムシタビン、カペシタビン、フルオロウラシル（例えば５−ＦＵ）、シタラビンおよびアザシチジン）を含む。特定の種類の癌の治療でのこれらの薬剤の使用は、当分野で周知であり、これらの薬剤はハリコンドリンＢ類似体と組み合わせて、これらの種類の癌および他の種類の癌の治療に使用できる。具体的な非限定的例として、ハリコンドリンＢ類似体は、非小細胞肺癌、膵臓癌もしくは転移性乳癌の治療においてゲムシタビンと併用できる。さらなる例において、ハリコンドリンＢ類似体は、乳癌もしくは大腸癌においてカペシタビンと併用できる。
【００１７】
上述のように、ハリコンドリンＢ類似体と併用できる他の類の化学療法剤は、抗癌抗生剤を含む。これらは、例えば、アントラサイクリン（例えばドキソルビシン、エピルビシン、ダウノルビシンおよびイダルビシン）、アドリアマイシン、ダクチノマイシン、イダルビンシン（ｉｄａｒｕｂｉｎｃｉｎ）、プリカマイシン、マイトマイシンならびにブレオマイシンを含む。上述の薬剤と同様、特定の種類の癌の治療におけるこれらの薬剤の使用は当分野に周知であり、これらは、これらの種類の癌および他の種類の癌の治療のためにハリコンドリンＢ類似体と併用できる。具体的な非限定例として、ドキソルビシンのようなアントラサイクリンは、乳癌もしくは膵臓癌の治療のためにハリコンドリンＢ療法と併用できる。代替的に、第三の薬剤、シクロホスファミドもこの方法において使用できる。
【００１８】
アルキル化剤は、本発明によるハリコンドリンＢ類似体と組み合わせて投与できる他の類の化学療法剤からなる。そのような薬剤の例は、プロカルバジン、ダカルバジン、アルトレタミン、シスプラチン、カルボプラチンおよびニトロソウレアを含む。ハリコンドリンＢ類似体は、これらの薬剤を治療するのに使用すると当分野で知られている癌の治療、ならびに他の癌の治療においてこれらの薬剤を併用できる。例えば、ハリコンドリンＢ類似体は、非小細胞肺癌もしくは卵巣癌の治療においてカルボプラチンと併用できる。
【００１９】
本発明によるハリコンドリンＢ類似体と併用できるさらなる種類の化学療法剤は、ビンブラスチン、ビンクリスチン、エトポシド、テニポシド、トポテカン、イリノテカン、パクリタキセルおよびドセタキセルのような植物アルカロイドである。具体的な非限定例として、ハリコンドリンＢ類似体は結腸直腸癌の治療において、イリノテカンと併用でき、あるいは卵巣癌もしくは非小細胞肺癌の治療においてトポテカンと併用できる。
【００２０】
本発明によるハリコンドリンＢ類似体療法と併用できるさらなる種類の抗癌剤は、抗凝固剤および抗血栓剤である。例えば、ヘパリン（例えば低分子量ヘパリンもしくはヘパラン硫酸）もしくはワルファリンを使用できる。治療中の患者における、例えば注射もしくは経口によるこれらの薬剤の使用は当分野に周知であり、そして当業者によって本発明において使用するよう容易に適応できる。
【００２１】
抗癌剤を投与する数多くのアプローチは当分野に公知であり、本発明において使用するように容易に適応できる。ハリコンドリンＢ類似体と併用して投与できる一つもしくはそれ以上の薬剤の場合、例えば、総合的な治療の投薬計画の一部として、その薬剤を一つの組成物として一緒に、もしくは別々に投与できる。全身投与のために、その薬剤を例えば、静脈内注射（持続的もしくはボーラス）によって投与できる。そのような投与の適切なスケジュールや投与量は、たとえば動物における前臨床試験およびヒトにおける臨床試験（例えばフェーズＩ試験）に基づいて、当業者によって容易に決定できる。さらに、当分野に周知のように、同様の薬剤を用いる治療の分析、ならびに、患者における血球数（例えば好中球および血小板）および生体信号のような要素を観察することも利用できる。
【００２２】
化学療法剤を投与するのに使われる多くの投薬計画は、例えば、薬剤の静脈内注射、ならびに患者が治療の任意の副作用から復帰する期間を置いて（例えば１〜４週間）後に続くこの治療の繰り返しを含む。それぞれの投与において療法の薬剤を用いること、もしくは代替的に一つの薬剤のみ（もしくは薬剤の一部分）を含む地医療を施すことが望ましいであろう。
【００２３】
本発明に含まれる治療の投薬計画の具体的な非限定的例として、ハリコンドリンＢ類似体（例えば、０．０１〜５ｍｇ／ｍ２）を患者へと０．５〜３時間で静脈内注射によって投与でき、そして他の薬剤（例えばゲムシタビンを例えば５００〜９００ｍｇ／ｍ２）の０．５〜３時間かけての静脈内注射が後に続く。当業者によって許容できるか効果的であるか決定されるに従って、この治療のコースを２〜３週ごとに繰り返す事ができる。この方法の変法として、上述のように最初の日に両方の薬剤によって治療を実施し、しかしながらそのあと、次の週に第二の薬剤（例えばゲムシタビン）のみを用いての治療が後に続くようにできる。
【００２４】
さらに、当分野によく知られているように、本発明の方法を用いる治療は、癌化学療法剤の共通の副作用である吐き気および嘔吐を軽減するのに用いられる抗嘔吐剤の投与と組み合わせて実施できることができる。そのような薬剤の例は強トランキライザ（例えば、クロルプロマジンおよびプロクロルペラジンのようなフェノチアジン）、ドーパミン拮抗剤（例えば、メトクロプラミド）、セレトニン拮抗剤（例えばオンダンセトロンおよびグラニセトロン）、カンナビノイド（例えばドロナビノール）、ならびにベンゾジアゼピン系鎮静剤を含む。
【００２５】
上述の癌に加えて、本発明の方法及び組成物を、以下の種類の癌ならびに他のものの治療に用いる事ができる：皮膚（例えば、扁平上皮癌、基底細胞癌もしくはメラノーマ）、前立腺、脳および神経、頭頸部、精巣、肺、肝臓（例えば肝癌）、腎臓、膀胱、胃腸、骨、内分泌系（例えば、甲状腺および下垂体腫瘍）、ならびにリンパ系（例えばホジキンリンパ腫および非ホジキンリンパ腫）の癌。本発明の方法を用いて治療できる他の種類の癌は繊維肉種、神経外胚葉性腫瘍、中皮腫、類表皮癌、およびカポジ肉腫を含む。
【００２６】
本発明はまた、ハリコンドリンＢ類似体を、上述の任意の薬剤のようなさらなる治療薬剤と組み合わせて含む組成物をまた含む。それらの組成物における薬剤は、好ましくは患者へと投与できるように調合されている（例えば生理食塩水中に）か、あるいは代替的に投与の前にさらなる加工を必要とする形状であっても良い。例えば、組成物は凍結乾燥状態において、もしくは、希釈を必要とする濃縮状態において、薬剤を含む事ができる。化学療法において使用するための薬剤の調合は当分野における標準的な方法（例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅ（第１８版）、Ａ．Ｇｅｎｎａｒｏ編、１９９０、Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏ．， Ｅａｔｏｎ，Ｐａを参照）を用いて実施できる。
【実施例】
【００２７】
単結晶Ｘ線回析データ集積および構造解析
データはＯｘｆｏｒｄ Ｃｒｙｏｓｔｒｅａｍ低温装置を備えたＢｒｕｋｅｒ ＳＭＡＲＴ ＡＰＥＸ ＣＣＤ（電荷結合素子）系の回析計を用いて絶対温度１９３度で集積された。データは半球が集積されるように３０秒間、毎フレーム０．３°のオメガスキャンを用いて測定された。０．７６Åの最大解像度で、全部で１２７１フレームが集積された。最初の５０フレームは、減衰を監視するためにデータ集積の最後に再集積された。セル（ｃｅｌｌ）パラメータはＳＭＡＲＴソフトウェア（ＳＭＡＲＴ Ｖ５．６２５ （ＮＴ）ＣＣＤ検出系のためのソフトウェア；Ｂｒｕｋｅｒ Ａｎａｌｙｔｉｃａｌ Ｘ−ｒａｙ Ｓｙｓｔｅｍ、Ｍａｄｉｓｏｎ、ＷＩ（２００１））を用いて抽出された。データ整理は、Ｌｐおよび減衰を補正するＳＡＩＮＴソフトウェア（ＳＡＩＮＴ Ｖ６．２２（ＮＴ）ＣＣＤ検出系のためのソフトウェア；Ｂｒｕｋｅｒ Ａｎａｌｙｔｉｃａｌ Ｘ−ｒａｙ Ｓｙｓｔｅｍ、Ｍａｄｉｓｏｎ、ＷＩ（２００１））を用いて行われた。構造は、ＳＨＥＬＸＴＬ−ＰＣ Ｖ６．１０（ＳＨＥＬＸＴＬ ６．１（ＰＣ版）、構造解析および分子グラフィックスのためのプログラムライブラリ；Ｂｒｕｋｅｒ Ａｎａｌｙｔｉｃａｌ Ｘ−ｒａｙ Ｓｙｓｔｅｍ、Ｍａｄｉｓｏｎ、ＷＩ（２０００））に含まれるＳＨＥＬＸＳ−９７プログラム（Ｓｈｅｌｄｒｉｃ，Ｇ．Ｍ．ＳＨＥＬＸＳ−９０、結晶構造解析のためのプログラム、ゲッチンゲン大学、ドイツ、１９９０）を用いる直接法によって解析された。
【００２８】
粉末Ｘ線解析（ＸＲＰＤ）データ集積手順
少量の結晶化物質が下記のＸＲＰＤ回析試験のために用いられた。物質は粉砕されておらず、選択配向効果を有するかもしれない。Ｓｃｉｎｔａｇ Ｄｉｆｆｒａｃｔｏｍｅｔｅｒ上の水晶板を用いる。データは、銅放射線を用いて、５〜７０度の２シータレンジで通常の粉末回析条件によって取得された。バックグランド補正は実施されなかった。表１はデータ取得パラメータを列挙する。
【００２９】
【表１】
【００３０】
実施例１：結晶ＥＲ−０７６３４９一水和物の解析
エタノール、イソプロパノール（ＩＰＡ）、プロピオニトリルのＸＲＰＤパターンはアセトニトリル／水サンプルと同一である。一水和物としての解析はこの比較に基づく。アセトニトリル／水のＸ線ユニットセルの結晶は単一の水分子の存在を示した。
【００３１】
Ａ．ＥＲ−０７６３４９一水和物の結晶化の手順
エタノール、イソプロパノールおよびプロピオニトリルからのＥＲ−０７６３４９の結晶化（ＸＲＰＤサンプル）：ＥＲ−０７６３４９は溶媒（５倍容量）に溶解された。溶液は室温において蒸発され、ＸＲＰＤ試験に適した結晶は１６から２４時間かけて形成された。
【００３２】
アセトニトリル／水溶液からのＥＲ−０７６３４９の結晶化（ＸＲＰＤサンプル）：ＥＲ−０７６３４９はアセトニトリル（１倍容量）に溶解された。この溶液に水／アセトニトリル溶液（１０倍容量、２部の水、１部のアセトニトリル）がゆっくりと添加された；もし溶液が濁るときは、最小量のアセトニトリルを添加してもよい。溶液はＥＲ−０７６３４９（０．００４重量）を種子として入れられた。混合物は室温で攪拌され、溶液は不活性ガス流下において、アセトニトリルが５％以下になるまで蒸発された。固形物は水（５倍容量）の中でスラリー化され、混合物はろ過された。ろ過された固形物は高真空および不活性ガス流下で、１２から２４時間乾燥された。
【００３３】
アセトニトリル／水溶液からのＥＲ−０７６３４９の結晶化（単結晶）：ＥＲ−０７６３４９はアセトニトリル（５倍容量）に溶解された。水（０．５倍容量）がそののち添加された。コンテナは室温に保管され、４週間のゆっくりとした溶液の蒸発が発散され、Ｘ線構造解析に適した単結晶がゆっくりと形成された。
【００３４】
Ｂ．ＥＲ−０７６３４９一水和物の単結晶Ｘ線解析
０．１０×０．１０×０．０４ｍｍの寸法の無色のプレート結晶が非常に少量のパラトン油（ｐａｒａｔｏｎｅ ｏｉｌ）を用いて０．２ｎｍのナイロンループ上に取り付けられた。図１−Ａに示される単結晶構造は上述の手順を用いて測定された。表２は、結晶データおよびＥＲ−０７６３４９一水和物の単結晶構造を測定するのに用いられた構造精密化パラメータを列挙する。構造は消滅則の分析によってスペースグループＰ２１２１２１（＃１９）中で解析された。全ての非水素原子は異方的に精密化された。水素は幾何学的方法によって計算され、ライディングモデル（ｒｉｄｉｎｇ ｍｏｄｅｌ）として精密化された。回析試験に用いられる化粧はデータ集積の間、分解を示さなかった。全ての描写は５０％楕円において実施された。図１−ＢはＥＲ−０７６３４９一水和物のｂ軸に沿った結晶パッキング図であり、結晶中の水素結合、点線の最適の図を示す。
【００３５】
【表２】
【００３６】
Ｃ．ＥＲ−０７６３４９一水和物の粉末Ｘ線回析による解析
図１−Ｃは、上述のようにイソプロピルアルコールから結晶化されたＥＲ−０７６３４９一水和物のＸＲＰＤ図である。表３ＡはＸＲＰＤ図中の相対強度のピークのリストを示す。
【００３７】
【表３Ａ】
【００３８】
図１−ｄは、アセトニトリルおよび水、エタノール、イソプロパノール、ならびにプロピオニトリルを含むさまざまな再結晶化溶媒より得られたＥＲ−０７６３４９一水和物の個別のＸＲＰＤのプロットをまとめたものである。上述のものと同じパターン取得の方法が用いられた。
【００３９】
図１−Ｅ、１−Ｆおよび１−Ｇは、ＥＲ−０７６３４９一水和物の示差走査熱量計（ＤＳＣ）のサーモグラムを描写する。図１−Ｅはエタノール溶液より結晶化されたＥＲ−０７６３４９のＤＳＣのプロットを描写する。ＤＳＣは１６０℃において吸熱ピークを示す。図１−Ｆはイソプロパノール溶液から結晶化されたＥＲ−０７６３４９のＤＳＣのプロットを描写する。ＤＳＣは１５７℃において吸熱ピークを示す。図１−Ｇはプロピオニトリル溶液より結晶化されたＥＲ−０７６３４９のＤＳＣのプロットを描写する。ＤＳＣは１６１℃において吸熱ピークを示す。
【００４０】
実施例２：ＥＲ−８１８９０６（ｅｐｉ−Ｃ２０ジオール）、モノ−アセトニトリル溶媒和物
Ａ．Ｘ線およびＸＲＰＤ結晶サンプルの生成のための結晶化手順
Ｅ０８１８９０６（１重量）はアセトニトリル（１０倍容量）に懸濁され、完全に溶解するのを助けるためゆるやかに加熱された。溶液は室温に置かれ、３０分後に結晶成長が始まった。Ｘ線構造解析にふさわしい単結晶サンプルは１６から２４時間後に生成した。ＥＲ−８１８９０６（ｅｐｉ−Ｃ２０ジオール）の化学構造は以下に示される。
【化６】
【００４１】
Ｂ．ＥＲ−８１８９０６（ｅｐｉ−Ｃ２０ジオール）モノ−アセトニトリル溶媒和物の単結晶Ｘ線解析
０．１２×０．１２×０．１０ｍｍの寸法の無色のブロック結晶は非常に少量のパラトン油を用いて０．２ｎｍのナイロンループ上に取り付けられた。図２−Ａに示される単結晶構造は上述の手順を用いて測定された。表３Ｂは結晶データおよびＥＲ−８１８９０６モノ−アセトニトリル溶媒和物の単結晶構造を測定するのに用いられた構造精密化パラメータを列挙する。構造はスペースグループＰ２１（＃４）において解析された。全ての非水素原子は異方的に精密化された。水素は幾何学的方法によって計算され、ライディングモデルとして精密化された。フラック（Ｆｌａｃｋ）パラメータは結晶を分析するのに用いられた。もしフラックパラメータが０に近い時、構造要素精密化によって与えられる全体の構造がほぼ正しく；その値が１．０に近いとき、倒置構造（他の光学異生体）がほぼ正しく；もしその値が０．５に近い時、結晶はほぼラセミ体である。Ｆｌａｃｋ、Ｈ．Ｄ．Ａｃｔａ Ｃｒｙｓｔ． Ａ３９．１９８３、８７６−８８１を参照。フラックパラメータは０．３（４）へと精密化された。この化合物のキラリティはその合成の源により確かめられた。回析試験において用いられる結晶はデータ集積の間、分解を示さなかった。全ての描写は５０％楕円において実施された。図２−ＢはＥＲ−８１８９０６モノ−アセトニトリル溶媒和物のｃ軸に沿った結晶パッキング図である。
【００４２】
【表３Ｂ】
【００４３】
Ｃ．ＥＲ−８１８９０６（ｅｐｉ−Ｃ２０ジオール）モノ−アセトニトリル溶媒和物の粉末Ｘ線回析（ＸＲＰＤ）による解析
実施例２Ａにおける単結晶試験のサンプルを取り出したのち、少量の物質が残った。ＸＲＰＤパターンは上述のように取得された。ＸＲＰＤパターンは図２−Ｃに示される。表４はＸＲＰＤ中の相対強度のピークのリストを示す。
【００４４】
【表４】
【００４５】
実施例３：ＥＲ−８１９５３１（ｅｐｉ−Ｃ２３ジオール）一水和物の解析
Ａ．ＸＲＰＤ品質サンプルのための結晶化手順
ＥＲ−８１９５３１（１重量）はアセトニトリル（１０倍容量）に室温で溶解され、温度は−２０℃まで低下し、この温度は１６時間維持された。粉末ＸＲＰＤ試験に適した結晶のクラスターは１６時間後に生成した。ＥＲ−８１９５３１（ｅｐｉ−Ｃ２３ジオール）の化学構造は下に示される。
【化７】
【００４６】
Ｂ．ＥＲ−８１９５３１（ｅｐｉ−Ｃ２３ジオール）一水和物の単結晶Ｘ線解析
ＥＲ−８１９５３１サンプルの一部はアセトニトリル、数滴のトルエン、および１滴の水の混合物中に溶解された。これはのちに少量のバイアル中でゆっくりと蒸発された。これは単結晶を生じ、その一つはこの試験に用いられるよう選択された。０．１２×０．１２×０．０４ｍｍの寸法の無色のブロック結晶は非常に少量のパラトン油を用いてナイロンループ上に組み込まれた。図３−Ａに示される、この単結晶構造は上述の手順を用いて解析された。表５は結晶データおよびＥＲ−８１９５３１一水和物の単結晶構造を測定するのに用いられた構造精密化パラメータを列挙する。構造は消滅則の分析によってスペースグループＰ２１２１２１（＃１９）中で解析された。全ての非水素原子は異方的に精密化された。水素は幾何学的方法によって計算され、ライディングモデルとして精密化された。フラックパラメータは結晶を分析するのに用いられた。もしフラックパラメータが０に近い時、構造要素精密化によって与えられる全体の構造がほぼ正しく；その値が１．０に近いとき、倒置構造（他の光学異生体）がほぼ正しく；もしその値が０．５に近い時、結晶はほぼラセミ体である。Ｆｌａｃｋ、Ｈ．Ｄ．Ａｃｔａ Ｃｒｙｓｔ． Ａ３９．１９８３、８７６−８８１を参照。フラックパラメータは０．５０（１６）へと精密化された。この化合物のキラリティはその合成の源により確かめられた。回析試験において用いられる結晶はデータ集積の間、分解を示さなかった。全ての描写は５０％楕円において実施された。図３−Ｂはｂ軸に沿った結晶パッキング図であり、それは結晶中の水素結合を点線で示す。
【００４７】
【表５】
【００４８】
Ｃ．ＥＲ−８１９５３１（ｅｐｉ−Ｃ２３ジオール）一水和物の粉末Ｘ線回析（ＸＲＰＤ）による解析
ＥＲ−８１９５３１一水和物は上述のように得られた。ＸＲＰＤパターンは図３−Ｃに示される。表６はＸＲＰＤパターン中の相対強度のピークのリストを示す。
【００４９】
【表６】
【００５０】
実施例４：ＥＲ−８２００５７（ｅｐｉ−Ｃ２３アミン）の解析
Ａ．ＥＲ−８２００５７結晶サンプルの調製
ＥＲ８２００５７はアセトニトリル（１０倍容量）中に室温で溶解され、溶液は室温に置かれた。結晶成長は２時間後に観察された。粉末ＸＲＰＤ試験にふさわしい結晶サンプルは１６から２４時間後に単離された。ＥＲ−８２００５７（ｅｐｉ−Ｃ２３アミン）の化学構造は以下に示される。
【化８】
【００５１】
Ｂ．ＥＲ−８２００５７（ｅｐｉ−Ｃ２３アミン）の粉末Ｘ線回析（ＸＲＰＤ）による解析
ＥＲ−８２００５７のＸＲＰＤは上述のように得られた。ＸＲＰＤパターンは図４−Ａに示される。表７はＸＲＰＤパターンの相対強度のピークのリストを示す。
【００５２】
【表７】
【００５３】
実施例５：ＥＲ−１１１１９７（ｅｐｉ−Ｃ３４ジオール）一水和物の解析
Ａ．Ｘ線品質の結晶の生成のための結晶化手順
ＥＲ−１１１１９７（１重量）はアセトニトリル（８倍容量）に溶解された。水（０．８倍容量）が添加された。溶液は室温で２〜３日間蒸発するよう放置された。結晶が生成しない場合、溶液は乾燥するまで蒸発され、この手順が結晶が出来るまで繰り返された。ＥＲ−１１１１９７（ｅｐｉ−Ｃ３４ジオール）の化学構造は以下に示される。
【化９】
【００５４】
Ｂ．Ｒ−１１１１９７（ｅｐｉ−Ｃ３４ジオール）一水和物の単結晶Ｘ線解析
０．２２×０．１４×０．０４ｍｍの寸法の無色の針状結晶が、非常に少量のパラトン油を用いてナイロンループに組み込まれた。図５−Ａに示される単結晶構造は、上述の手順を用いて解析された。表７Ｂは結晶データおよびＥＲ−１１１１９７一水和物の単結晶構造を測定するのに用いられた構造精密化パラメータを列挙する。構造は消滅則の分析によってスペースグループＰ２１２１２１（＃１９）中で解析された。全ての非水素原子は異方的に精密化された。水素は幾何学的方法によって計算され、ライディングモデルとして精密化された。フラックパラメータは結晶を分析するのに用いられた。もしフラックパラメータが０に近い時、構造要素精密化によって与えられる全体の構造がほぼ正しく；その値が１．０に近いとき、倒置構造（他の光学異生体）がほぼ正しく；もしその値が０．５に近い時、結晶はほぼラセミ体である。Ｆｌａｃｋ、Ｈ．Ｄ．Ａｃｔａ Ｃｒｙｓｔ． Ａ３９．１９８３、８７６−８８１を参照。フラックパラメータは０．３（１３）へと精密化された。この化合物のキラリティはその合成の源により確かめられた。回析試験において用いられる結晶はデータ集積の間、分解を示さなかった。全ての描写は５０％楕円において実施された。図５−Ｂはａ軸に沿った結晶パッキング図であり、それは結晶中の水素結合を点線で示す。
【００５５】
【表７Ｂ】
【００５６】
Ｃ．ＥＲ−１１１１９７（ｅｐｉ−Ｃ３４ジオール）一水和物のシミュレートされた粉末Ｘ線解析スペクトル
単結晶のデータから生成されたＥＲ−１１１１９７のシミュレートされたＸＲＰＤスペクトルは図５−Ｃに示される。
【００５７】
実施例６：ＥＲ−８０９６８１（エポキシド）
Ａ．Ｘ線品質の結晶を生成するための結晶化手順
ＥＲ−８０９６８１−００（５０ｍｇ）はジクロロメタン（０．２５ｍｌ）に溶解された。ペンタン（０．５ｍｌ）が添加された。溶液は視覚的に均一になるまで攪拌された。溶液は室温で１８時間、ゆっくりと蒸発された。Ｘ線結晶学的試験にふさわしい結晶は上清の液体をデカントすることによって集められた。ＥＲ−８０９６８１（エポキシド）の化学構造は下に示される。
【化１０】
【００５８】
Ｂ．ＥＲ−８０９６８１（エポキシド）の単結晶Ｘ線解析
Ｘ線解析方法は上述のものから変更され、以下の節に詳細に説明される。
０．３０×０．１０×０．１０ｍｍのおおよその寸法を持つＣ４０Ｈ５６Ｏ１１の無色のブロック結晶はガラス線維上に組み込まれた。単結晶は図６−Ａに示される。すべての解析は、グラファイトで単色化されたＣｕ−Ｋα放射線を持つＲｉｇａｋｕ ＲＡＸＩＳ ＲＡＰＩＤ ｉｍａｇｉｎｇ ｐｌａｔｅ ａｒｅａ ｄｅｔｅｃｔｏｒ上で行われた。指数化は１５秒の曝露による３つの振動より実施された。結晶と検出器の距離は１２７．４０ｍｍであった。寸法を持つ一次斜方晶系のセルに対応するデータ集積のためのセル定数および配向マトリックス：ａ＝９．４７００（３）Å；ｂ＝１７．６３２７（５）Å；ｃ＝２３．１７９０（６）Å；Ｖ＝３８７９．４７（１９）Å３。Ｚ＝４でかつＦ．Ｗ．＝７１２．８８の時、計算上の密度は１．２２３ｇ／ｃｍ３である。ｈ００：ｈ±２ｎ；０ｋ０：ｋ±２ｎ；００１：１±２ｎの消滅則は特異的にスペースグループをｐ２１２１２１（＃１９）と定める。結晶パッケージ図は図６−Ｂに示される。
【００５９】
データは２３±１℃において１３６．５°の最大２θ値で集積された。全体で３０振幅の画像が集積された。χ＝５４．０°かつφ＝１５．０°において８０．０から２６０．０°の３０．０ステップのωスキャンを用いてデータのスイープ（ｓｗｅｅｐ）が実施された。χ＝５４．０°かつφ＝１０５．０°において８０．０から２６０．０°の３０．０ステップのωスキャンを用いて２度目のスイープが実施された。照射線量率は１５．０［秒／°］であった。χ＝５４．０°かつφ＝２７０．０°において８０．０から２６０．０°の３０．０ステップのωスキャンを用いて他のスイープが実施された。照射線量率は１５．０［秒／°］であった。χ＝０．０°かつφ＝０．０°において８０．０から２６０．０°の３０．０ステップのωスキャンを用いて他のスイープが実施された。照射線量率は１５．０［秒／°］であった。結晶と検出器の距離は１２７．４０ｍｍであった。読み出しは０．１００ｍｍピクセルモードで実施された。
【００６０】
データ解析：集積された１６４１２の反射のうち、９３４がユニークであった（Ｒｉｎｔ＝０．０４３）；同等の反射は融合された。Ｃｕ−Ｋα放射の線吸収係数、μは７．２２９ｃｍ−１であった。０．７４８から０．９３０の範囲の透過率が生じる実験的な吸収の補正が適応された。データはローレンツ偏光効果のために補正された。
【００６１】
構造解析と精密化：構造は直接方を用いて解析され（ＳＨＥＬＸ９７：Ｓｈｅｌｄｒｉｃ，Ｇ．Ｍ．（１９９７）、フーリエ法を用いて拡張された。ＤＩＲＤＩＦ９９：Ｂｅｕｒｓｋｅｎｓ，Ｐ．Ｔ．，Ａｄｍｉｒａａｌ，Ｇ．，Ｂｅｕｒｓｋｅｎｓ，Ｇ．，Ｂｏｓｍａｎ，Ｗ．Ｐ．，ｄｅ Ｇｅｌｄｅｒ，Ｒ．，Ｉｓｒａｅｌ，Ｒ． ａｎｄ Ｓｍｉｔｓ，Ｊ．Ｍ．Ｍ．（１９９９）、”Ｔｈｅ ＤＩＲＤＩＦ−９９プログラムシステム”、Ｔｅｃｈｎｉｃａｌ Ｒｅｐｏｒｔ ｏｆ ｔｈｅ Ｃｒｙｓｔａｌｌｏｇｒａｐｈｙ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，”Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ Ｎｉｊｍｅｇｅｎ， Ｔｈｅ Ｎｅｔｈｅｒｌａｎｄ．を参照。非水素原子は異方的に精密化された。水素原子はライディングモデルを用いて精密化された。Σｗ（Ｆｏ２−Ｆｃ２）２（式中、ｗ＝最小二乗重量）で表わされるＦ２のフルマトリックス最小二乗精密化の最後のサイクルは、７０４５の観察された反射と４６１の変数パラメータに基づく。それは、Ｒ１＝Σ||Ｆｏ｜−｜Ｆｃ||／Σ|Ｆｏ|＝０．０６３０かつｗＲ２＝［Σ（ｗ（Ｆｏ２−Ｆｃ２）２）／Σｗ（Ｆｏ２）２］１／２＝０．２１６８という計量されてないアグリーメント・ファクタ（ａｇｒｅｅｍｅｎｔ ｆａｃｔｏｒ）および計量されたアグリーメント・ファクタに収斂する。
【００６２】
単位重量の観測の標準偏差は１．１０であり、［Σｗ（Ｆｏ２−Ｆｃ２）２／（Ｎｏ−Ｎｖ）］１／２（式中、Ｎｏ＝観察の数およびＮｖ＝変数の数）として計算される理論上の単位重量の標準偏差はである。最終の差フーリエ図上の最大ピークおよび最小ピークは、それぞれ０．２０および−０．２８ｅ−／Å３に対応する。
【００６３】
中性子散乱因子は、ＣｒｏｍｅｒとＷａｂｅｒ，”Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｔａｂｌｅｓ ｆｏｒ Ｘ−ｒａｙ Ｃｒｙｓｔａｌｌｏｇｒａｐｈｙ”Ｖｏｌ．ＩＶ，Ｔｈｅ Ｋｙｎｏｃｈ Ｐｒｅｓｓ， Ｂｉｒｍｉｎｇｈａｍ，Ｅｎｇｌａｎｄ，表２．２Ａ（１９７４）より得た。異常分散効果はＦｃａｌｃ中に含まれ（Ｉｂｅｒｓ，Ｊ．Ａ．およびＨａｍｉｌｔｏｎ，Ｗ．Ｃ．；Ａｃｔａ Ｃｒｙｓｔａｌｌｏｇｒ．，１７，７８１（１９６４）を参照）、ΔｆおよびΔｆ’’の値はＣｒｅａｇｈ，Ｄ．Ｃ．およびＭｃＡｕｌｅｙ，Ｗ．Ｊ．” Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｔａｂｌｅｓ ｆｏｒ Ｃｒｙｓｔａｌｌｏｇｒａｐｈｙ”Ｖｏｌ．Ｃ，（Ａ．Ｊ．Ｃ．Ｗｉｌｓｏｎ編）、Ｋｌｕｗｅｒ Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ， Ｂｏｓｔｏｎ，表４．２．６．８、２１９〜２２２ページ（１９９２）より得られた。質量減衰係数の値はＣｒｅａｇｈ，Ｄ．Ｃ．およびＨｕｂｂｅｌｌ，Ｊ．Ｈ．；” Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｔａｂｌｅｓ ｆｏｒ Ｃｒｙｓｔａｌｌｏｇｒａｐｈｙ”Ｖｏｌ．Ｃ，（Ａ．Ｊ．Ｃ．Ｗｉｌｓｏｎ編）、Ｋｌｕｗｅｒ Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ， Ｂｏｓｔｏｎ，表４．２．４．３、２００〜２０６ページ（１９９２）より得られた。すべての計算はＣｒｙｓｔａｌＳｔｒｕｃｔｕｒｅ結晶学ソフトウェアパッケージを用いて実施された。ＣｒｙｓｔａｌＳｔｒｕｃｔｕｒｅ３．７．０：Ｃｒｙｓｔａｌ Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ Ａｎａｌｙｓｉｓ Ｐａｃｋａｇｅ，Ｒｉｇａｋｕ ａｎｄ Ｒｉｇａｋｕ／ＭＳＣ（２０００−２００５）、９００９ Ｎｅｗ Ｔｒａｉｌｓ Ｄｒ． Ｔｈｅ Ｗｏｏｄｌａｎｄｓ ＴＸ７７３８１米国；ならびにＣＲＹＳＴＡＬＳ Ｉｓｓｕｒｅ １０：Ｗａｔｋｉｎ， Ｄ．Ｊ．，Ｐｒｏｕｔ，Ｃ．Ｋ． Ｃａｒｒｕｔｈｅｒｓ， Ｊ．Ｒ．およびＢｅｔｔｅｒｉｄｇｅ， Ｐ．Ｗ．、Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃｒｙｓｔａｌｌｏｇｒａｐｈｙ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，Ｏｘｆｏｒｄ，英国（１９９６）を参照。これの例外は精密化の計算であり、ＳＨＥＬＸ９７：Ｓｈｅｌｄｒｉｃｋ，Ｇ．Ｍ．（１９９７）を用いて実施された。
【００６４】
【表７ｃ】
【表７ｄ】
【表７ｅ】
【００６５】
Ｃ．ＥＲ−８０９６８１（エポキシド）の粉末Ｘ線解析（ＸＲＰＤ）による解析
この化合ｂ通のＸＲＰＤ集積方法は上述のものとデータスキャンレンジが２−７０°である点でのみ異なる。ＸＲＰＤパターンは図６−Ｃに示される。
【００６６】
【表８】
【００６７】
Ｄ．シミュレートされたＸＲＰＤスペクトル
単結晶データより生成されるシミュレートされたＸＲＰＤパターンは図６Ｄに示される。
【００６８】
上述の化合物の、上述の結晶形における抗癌活性は、ＬｉｕＪ．らのＡｎｔｉｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ、２７：１５０９−１５１１（２００７）に記載されるような細胞増殖阻害試験を用いて測定された。ＩＣ５０ｎＭの単位での活性データは下の表９に記載される。ＭＥＳ−ＳＡおよびＭＥＳ−ＳＡ／Ｄｘ５−Ｒｘ１子宮肉腫はＡｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎより入手し、推奨される条件で増殖された。
【００６９】
細胞増殖阻害試験
細胞は９６穴プレートに１０％ＦＢＳならびにペニシリン、ストレプトマイシンおよびＬ−グルタミンを補った推奨される培地中に７．５×１０３細胞／ウェルで播種された。４時間の培養の後、試験化合物はそれぞれのウェルに０から１０μＭの範囲の一連の濃度になるように添加された。細胞は４日間３７℃で培養された。細胞増殖はメチレンブルーに基づいたマイクロ培養試験（Ｔｏｗｌｅ Ｍ．Ｊ．らの”Ｉｎ ｖｉｔｒｏ ａｎｄ ｉｎ ｖｉｖｏ ａｎｔｉｃａｎｃｅｒ ａｃｔｉｖｉｔｉｅｓ ｏｆ ｓｙｎｔｈｅｔｉｃ ｍａｃｒｏｃｙｃｌｉｃ ｋｅｔｏｎｅ ａｎａｌｏｇｕｅｓ ｏｆ ｈａｌｉｃｈｏｎｄｒｉｎ Ｂ．”Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ ６１：１０１３−１０２１、２００１を参照）の修正したもの（ＦｉｎｌａｙＧ．Ｊ．らの”Ａ ｓｅｍｉａｕｔｏｍａｔｅｄ ｍｉｃｒｏｃｕｌｔｕｒｅ ｍｅｔｈｏｄ ｆｏｒ ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｎｇ ｇｒｏｗｔｈ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ｃｙｔｏｔｏｘｉｃ ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ ｏｎ ｅｘｐｏｎｅｎｔｉａｌｌｙ ｇｒｏｗｉｎｇ ｃａｒｃｉｎｏｍａ ｃｅｌｌｓ”，Ａｎａｌ Ｂｉｏｃｈｅｍ １３９：２７２−２７７、１９８４を参照）を用いて測定された。培地は除去され細胞は１００μｌのメチレンブルー（５００μｇ／ｍｌ）で４５分間染色された。水で染色したあと、線食された細胞は１００μｌのサルコシン（１ｍｇ／ｍｌ）に溶解され、９０分間緩やかに攪拌された。このプレートはＡ６００−Ａ４０５で観測された。
【００７０】
Ｐ−グリコプロテイン介在多薬剤耐性（ＭＤＲ）に対する化合物の感受性
一対の子宮肉種の細胞株が用いられた：ＭＥＳ−ＳＡ（ＭＤＲのない親細胞株）、ＤＸ５−Ｒｘ１（長期間ドキソルビシンへと曝露されたＭＥＳ−ＳＡ由来の細胞株）。亜株はＰ−グリコプロテインを高発現している。療法の細胞株は１０％ＦＢＳならびにペニシリン、ストレプトマイシンおよびＬ−グルタミンを補ったＭｃＣｏｙ’ｓ５Ａ中に７．５×１０３細胞／ウェルで播種され、細胞増殖が上述のように測定された。親株および耐性細胞株において取得されたＩＣ５０値の比は耐性の倍数を意味し、それぞれ比較される二つの細胞株に対するＰ−グリコプロテイン介在ＭＤＲへの化合物の感受性の指標をもたらす。
【００７１】
【表９】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
化合物：
【化１１】
の一水和物結晶。
【請求項２】
９．３°２θ±０．２°２θ、１０．４°２θ±０．２°２θ、および１３．０°２θ±０．２°２θにピークを持つ粉末Ｘ線回析パターンによって特徴付けられる、請求項１に記載の一水和物結晶。
【請求項３】
約１５７から約１６１℃の範囲の開始温度を持つ示差走査熱量計サーモグラムによってさらに特徴付けられる、請求項２に記載の一水和物結晶。
【請求項４】
治療に効果的な量の請求項１に記載の一水和物結晶および医薬として許容できる担体を含有する医薬組成物。
【請求項５】
化学療法剤を更に含有する請求項４に記載の組成物。
【請求項６】
前記化学療法剤が、代謝拮抗物質、抗生剤、アルキル化剤、植物性アルカロイドおよびホルモン剤からなる群より選択される、請求項５に記載の組成物。
【請求項７】
化合物：
【化１２】
の結晶形。
【請求項８】
６．５°２θ±０．２°２θ、９．３°２θ±０．２°２θ、および１７．１°２θ±０．２°２θにピークを持つ粉末Ｘ線回析パターンによって特徴付けられる、請求項７に記載の結晶形。
【請求項９】
化合物：
【化１３】
の結晶形。
【請求項１０】
１３．０°２θ±０．２°２θ、１５．０°２θ±０．２°２θ、および１５．９°２θ±０．２°２θにピークを持つ粉末Ｘ線回析パターンによって特徴付けられる、請求項９に記載の結晶形。
【請求項１１】
治療に効果的な量の請求項９に記載の化合物の結晶形および医薬として許容できる担体を含有する医薬組成物。
【請求項１２】
化合物：
【化１４】
のモノ−アセトニトリル溶媒和物結晶。
【請求項１３】
７．９°２θ±０．２°２θ、２３．７°２θ±０．２°２θ、３２．８°２θ±０．２°２θおよび４０．０°２θ±０．２°２θにピークを持つ粉末Ｘ線回析パターンによって特徴付けられる、請求項１２に記載の溶媒和物結晶。
【請求項１４】
化合物：
【化１５】
の一水和物結晶。
【請求項１５】
前記一水和物結晶がラセミ体である、請求項１４に記載の一水和物結晶。
【請求項１６】
８．１°２θ±０．２°２θ、１３．１°２θ±０．２°２θおよび１４．３°２θ±０．２°２θにピークを持つ粉末Ｘ線回析パターンによって特徴付けられる、請求項１４に記載の一水和物結晶。
【請求項１７】
治療に効果的な量の請求項１４に記載の化合物の一水和物結晶および医薬として許容できる担体を含有する医薬組成物。
【請求項１８】
化合物：
【化１６】
の一水和物結晶。
【請求項１９】
８．３°２θ±０．２°２θ、１５．８°２θ±０．２°２θおよび１６．６°２θ±０．２°２θにピークを持つ粉末Ｘ線回析パターンによって特徴付けられる、請求項１８に記載の一水和物結晶。
【請求項２０】
治療に効果的な量の請求項１８に記載の化合物の一水和物結晶および医薬として許容できる担体を含有する医薬組成物。
【請求項１】
化合物：
【化１１】
の一水和物結晶。
【請求項２】
９．３°２θ±０．２°２θ、１０．４°２θ±０．２°２θ、および１３．０°２θ±０．２°２θにピークを持つ粉末Ｘ線回析パターンによって特徴付けられる、請求項１に記載の一水和物結晶。
【請求項３】
約１５７から約１６１℃の範囲の開始温度を持つ示差走査熱量計サーモグラムによってさらに特徴付けられる、請求項２に記載の一水和物結晶。
【請求項４】
治療に効果的な量の請求項１に記載の一水和物結晶および医薬として許容できる担体を含有する医薬組成物。
【請求項５】
化学療法剤を更に含有する請求項４に記載の組成物。
【請求項６】
前記化学療法剤が、代謝拮抗物質、抗生剤、アルキル化剤、植物性アルカロイドおよびホルモン剤からなる群より選択される、請求項５に記載の組成物。
【請求項７】
化合物：
【化１２】
の結晶形。
【請求項８】
６．５°２θ±０．２°２θ、９．３°２θ±０．２°２θ、および１７．１°２θ±０．２°２θにピークを持つ粉末Ｘ線回析パターンによって特徴付けられる、請求項７に記載の結晶形。
【請求項９】
化合物：
【化１３】
の結晶形。
【請求項１０】
１３．０°２θ±０．２°２θ、１５．０°２θ±０．２°２θ、および１５．９°２θ±０．２°２θにピークを持つ粉末Ｘ線回析パターンによって特徴付けられる、請求項９に記載の結晶形。
【請求項１１】
治療に効果的な量の請求項９に記載の化合物の結晶形および医薬として許容できる担体を含有する医薬組成物。
【請求項１２】
化合物：
【化１４】
のモノ−アセトニトリル溶媒和物結晶。
【請求項１３】
７．９°２θ±０．２°２θ、２３．７°２θ±０．２°２θ、３２．８°２θ±０．２°２θおよび４０．０°２θ±０．２°２θにピークを持つ粉末Ｘ線回析パターンによって特徴付けられる、請求項１２に記載の溶媒和物結晶。
【請求項１４】
化合物：
【化１５】
の一水和物結晶。
【請求項１５】
前記一水和物結晶がラセミ体である、請求項１４に記載の一水和物結晶。
【請求項１６】
８．１°２θ±０．２°２θ、１３．１°２θ±０．２°２θおよび１４．３°２θ±０．２°２θにピークを持つ粉末Ｘ線回析パターンによって特徴付けられる、請求項１４に記載の一水和物結晶。
【請求項１７】
治療に効果的な量の請求項１４に記載の化合物の一水和物結晶および医薬として許容できる担体を含有する医薬組成物。
【請求項１８】
化合物：
【化１６】
の一水和物結晶。
【請求項１９】
８．３°２θ±０．２°２θ、１５．８°２θ±０．２°２θおよび１６．６°２θ±０．２°２θにピークを持つ粉末Ｘ線回析パターンによって特徴付けられる、請求項１８に記載の一水和物結晶。
【請求項２０】
治療に効果的な量の請求項１８に記載の化合物の一水和物結晶および医薬として許容できる担体を含有する医薬組成物。
【図１−Ａ】
【図１−Ｂ】
【図１−Ｃ】
【図１−Ｄ】
【図１−Ｅ】
【図１−Ｆ】
【図１−Ｇ】
【図２−Ａ】
【図２−Ｂ】
【図２−Ｃ】
【図３−Ａ】
【図３−Ｂ】
【図３−Ｃ】
【図４−Ａ】
【図５−Ａ】
【図５−Ｂ】
【図５−Ｃ】
【図６−Ａ】
【図６−Ｂ】
【図６−Ｃ】
【図６−Ｄ】
【図１−Ｂ】
【図１−Ｃ】
【図１−Ｄ】
【図１−Ｅ】
【図１−Ｆ】
【図１−Ｇ】
【図２−Ａ】
【図２−Ｂ】
【図２−Ｃ】
【図３−Ａ】
【図３−Ｂ】
【図３−Ｃ】
【図４−Ａ】
【図５−Ａ】
【図５−Ｂ】
【図５−Ｃ】
【図６−Ａ】
【図６−Ｂ】
【図６−Ｃ】
【図６−Ｄ】
【公表番号】特表２０１１−５１６４９３（Ｐ２０１１−５１６４９３Ａ）
【公表日】平成２３年５月２６日（２０１１．５．２６）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２０１１−５０３２０３（Ｐ２０１１−５０３２０３）
【出願日】平成２１年４月３日（２００９．４．３）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＵＳ２００９／０３９４３２
【国際公開番号】ＷＯ２００９／１２４２３７
【国際公開日】平成２１年１０月８日（２００９．１０．８）
【出願人】（５０６１３７１４７）エーザイ・アール・アンド・ディー・マネジメント株式会社 (215)
【Ｆターム（参考）】
【公表日】平成２３年５月２６日（２０１１．５．２６）
【国際特許分類】
【出願日】平成２１年４月３日（２００９．４．３）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＵＳ２００９／０３９４３２
【国際公開番号】ＷＯ２００９／１２４２３７
【国際公開日】平成２１年１０月８日（２００９．１０．８）
【出願人】（５０６１３７１４７）エーザイ・アール・アンド・ディー・マネジメント株式会社 (215)
【Ｆターム（参考）】
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